特表 2023-549140 操作されたキメラ融合タンパク質組成物およびその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-22

(54)【発明の名称】操作されたキメラ融合タンパク質組成物およびその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20231115BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20231115BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20231115BHJP

   C12N 15/88 20060101ALI20231115BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20231115BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20231115BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20231115BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231115BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20231115BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20231115BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231115BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20231115BHJP

   A61K 9/16 20060101ALI20231115BHJP

   A61K 47/44 20170101ALI20231115BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20231115BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20231115BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N15/88 Z

C07K19/00

C07K14/705

C07K16/28

A61P35/00

A61P35/02

A61K48/00

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61K31/7105

A61K9/16

A61K47/44

A61K35/28

A61K38/16

A61K39/395 C

A61K39/395 L

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023527407

(86)(22)【出願日】2021-11-04

(85)【翻訳文提出日】2023-07-04

(86)【国際出願番号】 US2021058104

(87)【国際公開番号】W WO2022098905

(87)【国際公開日】2022-05-12

(31)【優先権主張番号】63/109,445

(32)【優先日】2020-11-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/162,205

(32)【優先日】2021-03-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/196,994

(32)【優先日】2021-06-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/251,400

(32)【優先日】2021-10-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521475473

【氏名又は名称】マイエロイド・セラピューティクス，インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100135415

【弁理士】

【氏名又は名称】中濱 明子

(72)【発明者】

【氏名】ゲッツ，ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】ワーン，ユーシャオ

(72)【発明者】

【氏名】マクリーディ，ブルース，ジュニア

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C076AA31

4C076BB11

4C076CC27

4C076EE51

4C076FF70

4C084AA02

4C084AA13

4C084DC50

4C084MA41

4C084MA66

4C084NA05

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4C084ZB27

4C085AA13

4C085AA14

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4C085BB31

4C085BB41

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

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4C086MA05

4C086MA41

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZB27

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB44

4C087MA41

4C087NA05

4C087ZB26

4C087ZB27

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

(57)【要約】

罹患細胞などの標的細胞上の表面分子に結合することが可能な結合性ドメインを有するキメラ融合タンパク質を発現する操作された骨髄細胞などの操作された細胞を作製および使用するための組成物および方法。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または
（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
を含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および
（ｂ）標的細胞上のＣＤ１３７に特異的に結合しうるＣＤ１３７抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン
を含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【請求項2】

（ａ）標的細胞上のＣＤ１３７抗原に特異的に結合する第１のＣＤ１３７抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣＤ１３７抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【請求項3】

（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２に特異的に結合しうるＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【請求項4】

（ａ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原に特異的に結合する第１のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【請求項5】

（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ ３に特異的に結合しうるＣｌａｕｄｉｎ ３抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【請求項6】

（ａ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ ３抗原に特異的に結合する第１のＣｌａｕｄｉｎ ３抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【請求項7】

（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣＤ７０に特異的に結合しうるＣＤ７０抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【請求項8】

（ａ）標的細胞上のＣＤ７０抗原に特異的に結合する第１のＣＤ７０抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣＤ７０抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【請求項9】

（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＴＲＯＰ２に特異的に結合しうるＴＲＯＰ２抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【請求項10】

（ａ）標的細胞上のＴＲＯＰ２抗原に特異的に結合する第１のＴＲＯＰ２抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＴＲＯＰ２抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【請求項11】

（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＴＭＰＲＳＳに特異的に結合しうるＴＭＰＲＳＳ抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【請求項12】

（ａ）標的細胞上のＴＭＰＲＳＳ抗原に特異的に結合する第１のＴＭＰＲＳＳ抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＴＭＰＲＳＳ抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【請求項13】

（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット；ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に対する強力な結合親和性を有する、請求項１、３、５、７、９、または１１のいずれか一項に記載の抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；ＰＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＰＦＰを発現する細胞の殺滅または貪食活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％を超えて増大される、組成物。

【請求項14】

細胞内シグナル伝達ドメインが、貪食または繋留受容体に由来するか、または細胞内シグナル伝達ドメインが、貪食活性化ドメインを含む、請求項１、３、５、７、９、１１、または１３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

細胞内シグナル伝達ドメインが、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、請求項１、３、５、７、９、１１、１３、または１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

炎症促進性シグナル伝達ドメインが、キナーゼ活性化ドメインまたはキナーゼ結合性ドメインを含む、請求項１、３、５、７、９、１１、または１３～１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含む、請求項１１、３、５、７、９、１１、または１３～１６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項18】

炎症促進性シグナル伝達ドメインが、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む、請求項１、３、５、７、９、１１、または１３～１７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項19】

炎症促進性シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰファミリーメンバーであるＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ピリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、カスパーゼドメインもしくはプロカスパーゼ結合性ドメイン、またはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１、３、５、７、９、１１、または１３～１８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項20】

ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ２８、またはＣＤ６８のタンパク質ＴＭドメインに由来する膜貫通ドメインをさらに含む、請求項１、３、５、７、９、１１、および１３～１９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項21】

ヒンジドメインをさらに含む、請求項１、３、５、７、９、１１、および１３～２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

ＰＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＰＦＰを発現する細胞の殺滅活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％を超えて増大される、請求項１、３、５、７、９、１１、または１３から２１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項23】

ＰＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＰＦＰを発現する細胞の殺滅活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１．１倍増大される、請求項１、３、５、７、９、１１、または１３から２２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項24】

標的細胞上の抗原と特異的に相互作用する第１の抗体またはその機能的断片である、第１の結合性ドメイン、および
骨髄細胞と特異的に相互作用する第２の抗体またはその機能的断片である、第２の結合性ドメイン
を含む、第１の治療剤を含み；
（ｉ）第１の治療剤が、さらなる治療剤もしくは第３の結合性ドメインである、第１の構成要素とカップリングされるか、または
（ｉｉ）組成物がさらなる治療剤を含む、請求項２、４、６、８、１０、または１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項25】

治療剤が、（ａ）標的細胞の抗原と特異的に相互作用する第１の結合性ドメイン、（ｂ）骨髄細胞と特異的に相互作用する第２の結合性ドメイン、および（ｃ）骨髄細胞と特異的に相互作用する第３の結合性ドメインを含む、請求項２、４、６、８、１０、１２、または２４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項26】

治療剤の結合性ドメインのうちのいずれか１つが、抗体の結合性ドメイン、抗体の機能的断片、その可変ドメイン、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＮＡＲドメイン、ＶＨＨドメイン、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディー、二特異性抗体、ダイアボディー、またはこれらの機能的断片もしくは組合せを含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項27】

第１の結合性ドメインが結合する標的細胞上の抗原が、標的細胞上のがん抗原もしくは病原性抗原、または自己免疫性抗原である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項28】

第１の治療剤が、１０００アミノ酸または１０００ｎｍ未満の長さであるポリペプチドを含む、請求項２、４、６、８、１０、１２、または２４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項29】

第１の治療剤が、５００アミノ酸または５００ｎｍ未満の長さであるポリペプチドを含む、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項30】

第１の治療剤が、２００～１０００アミノ酸または２００～１０００ｎｍの長さであるポリペプチドを含む、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、２８、または２９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項31】

第１の治療剤の結合性ドメインの係合が、がん細胞を、骨髄細胞へと接触させる、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項32】

第２の結合性ドメインが、骨髄細胞と特異的に相互作用し、骨髄細胞の貪食活性を促進する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項33】

第２の結合性ドメインが、骨髄細胞と特異的に相互作用し、骨髄細胞の炎症性シグナル伝達を促進する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項34】

第２の結合性ドメインが、骨髄細胞または接着分子と特異的に相互作用し、骨髄細胞の標的細胞への接着を促進する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項35】

第２の結合性ドメインが、骨髄細胞と特異的に相互作用し、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗貪食活性を阻害する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項36】

第２の結合性ドメインが、骨髄細胞と特異的に相互作用し、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗炎症活性を阻害する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項37】

第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、骨髄細胞の貪食活性を促進する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項38】

第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、骨髄細胞の炎症性シグナル伝達を促進する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項39】

第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、骨髄細胞または接着分子と特異的に相互作用し、骨髄細胞の標的細胞への接着を促進する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項40】

第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗貪食活性を阻害する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項41】

第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗炎症活性を阻害する、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～４０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項42】

第３の結合性ドメインまたはさらなる治療剤が、ＣＤ４７アンタゴニスト、ＣＤ４７ブロッカー、抗体、キメラＣＤ４７受容体、シアリダーゼ、サイトカイン、炎症促進性遺伝子、プロカスパーゼ、または抗がん剤を含む、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～４１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項43】

第１の結合性ドメイン、第２の結合性ドメイン、および第３の結合性ドメインが、別個の同一ではない標的抗原に結合する、請求項１から４２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項44】

第１の結合性ドメイン、第２の結合性ドメイン、または第３の結合性ドメインが、リガンド結合性ドメインである、請求項２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～４３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項45】

第１、第２または第３の結合性ドメインが、１つまたは複数のリンカーにより作動可能に連結される、請求項１から４４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項46】

リンカーが、ポリペプチドである、請求項４５に記載の組成物。

【請求項47】

リンカーが、機能的ペプチドである、請求項４６に記載の組成物。

【請求項48】

リンカーが、受容体に対するリガンドである、請求項４５から４７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項49】

リンカーが、単球またはマクロファージ受容体に対するリガンドである、請求項４５に記載の組成物。

【請求項50】

リンカーが、受容体を活性化する、請求項４５から４９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項51】

リンカーが、受容体を阻害する、請求項４５から５０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項52】

リンカーが、マクロファージＭ２受容体に対するリガンドである、請求項５１に記載の組成物。

【請求項53】

リンカーが、ＴＬＲ４などのＴＬＲ受容体に対するリガンドである、請求項４８または４９に記載の組成物。

【請求項54】

リンカーが、ＴＬＲ受容体を活性化する、請求項４８、４９、または５０に記載の組成物。

【請求項55】

第１、第２および／または第３の結合性ドメインが、結合性ドメインに結合するマスクと会合する、請求項４５から５４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項56】

マスクがそれぞれの結合性ドメインと会合したままである場合に、マスクが、結合性ドメインのその標的との相互作用を阻害する阻害剤である、請求項５５に記載の組成物。

【請求項57】

マスクが、ペプチドリンカーを介して、結合性ドメインと会合する、請求項５６に記載の組成物。

【請求項58】

ペプチドリンカーが、切断可能部分を含む、請求項５７に記載の組成物。

【請求項59】

切断可能部分が、がんまたは腫瘍の部位において選択的に豊富であるタンパク質または酵素により切断される、請求項５８に記載の組成物。

【請求項60】

組換え核酸が、ＲＮＡである、請求項１から５９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項61】

組換え核酸が、ｍＲＮＡである、請求項１から６０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項62】

組換え核酸が、１つまたは複数の脂質と会合する、請求項１から６１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項63】

組換え核酸が、リポソーム内に封入される、請求項１から６２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項64】

リポソームが、ナノ粒子である、請求項６３に記載の組成物。

【請求項65】

組換え核酸が、ベクター内に含まれる、請求項１から６４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項66】

請求項１から６５のいずれか一項に記載の組成物の組換え核酸のうちのいずれか１つと、賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項67】

請求項１から６５のいずれか一項に記載の組換え核酸によりコードされるポリペプチドを含む医薬組成物。

【請求項68】

請求項１から６５のいずれか一項に記載の組換え核酸を含む細胞。

【請求項69】

骨髄細胞である、請求項６８に記載の細胞。

【請求項70】

ＣＤ１４＋、ＣＤ１６－である、請求項６９に記載の細胞。

【請求項71】

請求項１から６５のいずれか一項に記載の組換え核酸を含む細胞の集団を含み、細胞のうちの少なくとも５０％が、ＣＤ１４＋ＣＤ１６－である、医薬組成物。

【請求項72】

細胞のうちの１０％未満が、樹状細胞である、請求項７１に記載の医薬組成物。

【請求項73】

適切な賦形剤をさらに含む、請求項７１または７２に記載の医薬組成物。

【請求項74】

請求項１から７３に記載の組成物のうちのいずれか１つを作製する方法。

【請求項75】

対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、請求項７１から７３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項76】

対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、請求項６６、６７、および７１～７３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項77】

がんが、胃がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、および肺がんからなる群から選択される、請求項７５または７６に記載の方法。

【請求項78】

キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えポリ核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが
（ａ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および
（ｂ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含み；
膜貫通ドメインが、骨髄細胞内の内因性ＦｃＲガンマ受容体と二量体化するタンパク質に由来する膜貫通ドメインであり；組換えポリ核酸が、ナノ粒子送達媒体により封入され；組成物のヒト対象への投与の後に、ＣＦＰが、ヒト対象の骨髄細胞の表面上において発現される、組成物。

【請求項79】

抗原結合性ドメインが、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖドメイン、またはｓｄＡｂドメインを含む、請求項７８に記載の組成物。

【請求項80】

膜貫通ドメインが、ＣＤ８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、またはＣＤ８９に由来する膜貫通ドメインである、請求項７８に記載の組成物。

【請求項81】

細胞外ドメインが、ＣＤ８に由来するヒンジドメインをさらに含み、ヒンジドメインが、膜貫通ドメインおよび抗原結合性ドメインへと作動的に連結される、請求項７８に記載の組成物。

【請求項82】

膜貫通ドメインが、骨髄細胞、単球、またはマクロファージの内因性ＦｃＲガンマ受容体と二量体化するタンパク質に由来する膜貫通ドメインであり；医薬組成物のヒト対象への投与の後に、ＣＦＰが、ヒト対象の骨髄細胞、単球、またはマクロファージ内で特異的に発現される、請求項７８に記載の組成物。

【請求項83】

膜貫通ドメインが、ＣＤ１６ａ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、またはＣＤ８９に由来する膜貫通ドメインである、請求項７８に記載の組成物。

【請求項84】

ＣＦＰが、細胞内ドメインをさらに含む、請求項７８に記載の組成物。

【請求項85】

細胞内ドメインが、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃγＲ、ＦｃαＲ、ＦｃεＲ、ＣＤ４０、またはＣＤ３ゼータに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項８４に記載の組成物。

【請求項86】

１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインが、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインをさらに含む、請求項８４に記載の組成物。

【請求項87】

ＰＩ３Ｋ動員ドメインが、配列番号２６に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項８６に記載の組成物。

【請求項88】

細胞内ドメインが、ＣＤ１６ａ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、またはＣＤ８９に由来する細胞内ドメインを含む、請求項８４に記載の組成物。

【請求項89】

組換えポリ核酸が、ｍＲＮＡである、請求項７８に記載の組成物。

【請求項90】

ナノ粒子送達媒体が、脂質ナノ粒子を含む、請求項７８に記載の組成物。

【請求項91】

脂質ナノ粒子が、極性脂質を含む、請求項９０に記載の組成物。

【請求項92】

脂質ナノ粒子が、非極性脂質を含む、請求項９０に記載の組成物。

【請求項93】

脂質ナノ粒子が、１００～３００ｎｍの直径である、請求項９０に記載の組成物。

【請求項94】

抗原結合性ドメインが、ＴＲＯＰ２、ＧＰＣ３、ＣＤ５、ＨＥＲ２、ＣＤ１３７、ＣＤ７０、Ｃｌａｕｄｉｎ ３、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、ＴＭＰＲＳＳ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ７、およびＧＰ７５からなる群から選択される抗原に結合する、請求項７８から９３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項95】

請求項７８から９４のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項96】

がんを有するヒト対象へと投与された場合に、がんの増殖を阻害するのに有効な量の、請求項７８から９４のいずれか一項に記載の組成物を含む、請求項９５に記載の医薬組成物。

【請求項97】

それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、請求項９５または９６に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項98】

請求項７８から９４のいずれか一項に記載の組成物を、骨髄細胞へと導入する方法であって、（ａ）抗ＴＲＯＰ２結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および（ｂ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含むキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えリポ核酸の存在下で、骨髄細胞に電気穿孔するステップを含み；組換えリポ核酸が、（ｉ）骨髄細胞内に存在するか、または（ｉｉ）ナノ粒子送達媒体により封入され；組換えリポ核酸が、ヒト対象の骨髄細胞内における組換えポリ核酸の発現のために構成される、方法。

【請求項99】

（ａ）配列番号３４および配列番号３５に示された配列、または配列番号３４または配列番号３５と少なくとも８０％同一である配列のうちの少なくとも１つを含む、抗ＴＲＯＰ２結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）細胞外ドメインと作動可能に連結され、ＦｃγＲ１分子（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＩＡ分子（ＣＤ１６）、またはＦｃαＲ１分子（ＣＤ８９）の膜貫通ドメインに由来する配列を含む膜貫通ドメイン；ならびに
（ｃ）任意選択で、細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインへと作動可能に連結されたヒンジドメインであって、ＣＤ１６タンパク質、ＣＤ６４タンパク質、もしくはＣＤ８９タンパク質、またはＣＤ８αヒンジドメインに由来するアミノ酸配列を含むヒンジドメイン
を含むキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えポリ核酸を含む組成物。

【請求項100】

配列番号２６、２７、もしくは２８に示された配列；または配列番号２６、２７、もしくは２８に示された配列から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列から選択されるアミノ酸配列を含む細胞内ドメインと、任意選択で、ＣＤ１６タンパク質、ＣＤ６４タンパク質、もしくはＣＤ８９タンパク質、またはこれらの断片に由来する細胞内ドメインとをさらに含む、請求項９９に記載の組成物。

【請求項101】

組換えポリ核酸が、ｍＲＮＡである、請求項９９または１００に記載の組成物。

【請求項102】

請求項９９から１０１に記載の組成物を含み、ＣＤ１４＋細胞である細胞。

【請求項103】

疾患または障害の処置における、請求項１から６５、７８から９４、もしくは９９から１０１のいずれか一項に記載の組成物、または請求項６６から６７、７１から７３、もしくは９５から９６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項６８から７０もしくは１０２に記載の細胞の使用。

【請求項104】

対象におけるがんの処置における、請求項６６から６７、７１から７３、もしくは９５から９６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項６８から７０もしくは１０２に記載の細胞の使用。

【請求項105】

がんが、胃がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、および肺がんからなる群から選択される、請求項１０３または１０４に記載の医薬組成物の使用。

【請求項106】

胃がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、および肺がんからなる群から選択される、対象におけるがんを処置するための医薬の作製における、請求項１から６５、７８から９４、もしくは９９から１０１のいずれか一項に記載の組成物、または請求項６６から６７、７１から７３、もしくは９５から９６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項６８から７０もしくは１０２に記載の細胞の使用。

【請求項107】

チロシン残基を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達サブユニットが、少なくとも１つの免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）ドメインを含む、請求項１、３、５、７、９、１１、または１３から２２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項108】

少なくとも１つのＩＴＡＭドメインが、ＣＤ３ゼータＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタＴＣＲサブユニット、ＴＣＲゼータ鎖、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、これらの機能的断片、およびこれらに対する少なくとも１つであるが２０を超えない修飾を有するこれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質またはポリペプチドの細胞内ドメインに由来する、請求項１０７に記載の組成物。

【請求項109】

少なくとも１つのＩＴＡＭドメインが、Ｓｒｃファミリーキナーゼのリン酸化部位を含む、請求項１０７に記載の組成物。

【請求項110】

少なくとも１つのＩＴＡＭドメインが、Ｓｙｋ動員ドメインを含む、請求項１０７に記載の組成物。

【請求項111】

細胞内シグナル伝達サブユニットが、ＤＡＰ１２動員ドメインをさらに含む、請求項１０７から１１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項112】

細胞内ドメインが、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＩＴＡＭドメインを含む、請求項１０７から１１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項113】

（Ａ）外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列と；
（Ｂ）キメラ抗原受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする第２の核酸配列であって、
ＣＦＰが、
（ａ）受容体による抗原結合時にリン酸化される１つまたは複数のチロシン残基を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達サブユニット；
（ｂ）膜貫通ドメイン；
（ｃ）標的細胞の表面上の構成要素に対する結合特異性を有し、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結される細胞外結合性ドメイン；ならびに
（ｄ）プロテアーゼ切断配列により、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結され、外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列の転写を促進する転写活性化ドメイン
を含む、第２の核酸配列と；
（Ｃ）（ｉ）転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼ；（ｉｉ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインをコードし；プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼとチロシン残基に結合するドメインとが作動可能に連結された、第３の核酸配列と
を含む、１つまたは複数の組換え核酸配列を含む組成物。

【請求項114】

第３の核酸配列が、（ｉｉｉ）刺激応答性エレメントをさらにコードする、請求項１１３に記載の組成物。

【請求項115】

刺激応答性エレメント（ｉｉｉ）が、リン酸化チロシン残基に結合するドメインと融合される、請求項１１４に記載の組成物。

【請求項116】

刺激応答性エレメント（ｉｉｉ）が、核酸配列を発現する細胞の微小環境に対して、応答性である、請求項１１４または１１５に記載の組成物。

【請求項117】

１つまたは複数の組換え核酸が、骨髄細胞内で発現される、請求項１１６に記載の組成物。

【請求項118】

転写活性化ドメインが、ＤＮＡ結合性ドメインをさらに含む、請求項１１３に記載の組成物。

【請求項119】

ＤＮＡ結合性ドメインが、Ｇａｌ４、ＺＦＨＤ１、またはｔｅｔ－ＲのＤＮＡ結合性ドメイン（ＤＢ）から選択される、請求項１１８に記載の組成物。

【請求項120】

転写活性化ドメインが、ＶＰ６４トランス活性化ドメインを含む、請求項１１３に記載の組成物。

【請求項121】

転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼが、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ３プロテアーゼである、請求項１１３から１２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項122】

ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインが、ホスホチロシン結合性（ＰＴＢ）ドメインである、請求項１１３から１２１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項123】

ＰＴＢが、Ｓｈｃ ＰＴＢである、請求項１２２に記載の組成物。

【請求項124】

（ｃ）が、（ｂ）と作動可能に連結された、デグロンである、請求項１１３から１１７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項125】

デグロンが、ＨＩＦ－１ａデグロンである、請求項１２４に記載の組成物。

【請求項126】

請求項１１３から１２５のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項127】

請求項１１３から１２５のいずれか一項に記載の組成物を含む細胞。

【請求項128】

ＣＤ１４＋である、請求項１２８に記載の細胞。

【請求項129】

対象における疾患を処置する方法であって、対象へと、（ｉ）請求項１２６に記載の医薬組成物；または
（ｉｉ）請求項１２７または請求項１２８に記載の細胞
のうちのいずれか１つを投与するステップを含む方法。

【発明の詳細な説明】

【関連出願】

【0001】

関連出願の相互参照
[0001]本出願は、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、２０２０年１１月４日に出願された、米国特許仮出願第６３／１０９，４４５号；２０２１年１０月１日に出願された、米国特許仮出願第６３／２５１，４００号；２０２１年６月４日に出願された、米国特許仮出願第６３／１９６，９９４号；および２０２１年３月１７日に出願された、米国特許仮出願第６３／１６２，２０５号の利益を主張する。

【背景技術】

【0002】

[0002]細胞免疫療法は、がんおよび遷延性の感染症など、処置が困難な疾患に対抗し、また、他の処置形態に不応性である、ある特定の疾患にも対抗するための、有望な新技術である。ＣＡＲ－Ｔ細胞の発見、および免疫療法における、それらの潜在的な使用により、大きなブレークスルーが生じた。ＣＡＲ－Ｔ細胞とは、キメラ抗原受容体を発現するＴリンパ球であって、Ｔ細胞を、がん細胞など、特異的罹患細胞へと標的化する一助となり、援用される細胞内ドメイン、および共発現される免疫抑制性サイトカインに応じて、標的がん細胞を死滅させるように意図された細胞傷害性応答を誘導する場合もあり、免疫抑制および／または免疫寛容を誘導する場合もある、Ｔリンパ球である。しかし、途上における、いくつかの限界が、ＣＡＲ－Ｔ細胞における進歩を遅延させ、臨床試験におけるその有望性を減殺している。

【0003】

[0003]ＣＡＲ－Ｔ細胞の限界を理解することは、技術を利用し、良好な免疫療法モデルへの革新を持続するための鍵である。具体的には、Ｔ細胞悪性腫瘍において、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、大きな問題に直面していると考えられる。ＣＡＲ－Ｔ細胞と、悪性Ｔ細胞とは、大半のＴ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）において、表面抗原を共有するため、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、がん細胞と同様に、細胞傷害作用下に置かれる。一部の場合に、ＣＡＲ－Ｔ生成物は、悪性Ｔ細胞により夾雑される場合がある。加えて、Ｔ細胞無形成は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の存続の延長のために、潜在的な問題である。他の限界は、ＣＡＲ－Ｔ細胞が、それらの抗腫瘍潜勢力を下方調節するように作用する、充実性腫瘍および強力な腫瘍微小環境へと浸透する能力の乏しさを含む。ＣＡＲ－Ｔ細胞機能はまた、内因性Ｔ細胞の不活化および疲弊をもたらす、免疫抑制性腫瘍微小環境（ＴＭＥ）による負の影響も受ける。

【0004】

[0004]マクロファージを含む骨髄細胞は、骨髄系統に由来する細胞であり、自然免疫系に属する。骨髄細胞は、血液へと逸出し、組織へと遊走する、骨髄幹細胞に由来する。それらの主要な機能のうちの一部は、貪食、Ｔ細胞応答の活性化、ならびに細胞破砕物および細胞外マトリックスの除去を含む。骨髄細胞はまた、ホメオスタシスの維持、ならびに炎症の惹起および消失においても、重要な役割を果たす。さらに、骨髄細胞は、それらが、周囲の微小環境から受け取る刺激の種類に応じて、炎症促進性～抗炎症性の範囲にわたる、異なる応答を提示しうる、マクロファージを含む、多数の下流細胞へと分化しうる。さらに、組織マクロファージは、ＣＤＴエフェクター細胞、ＮＫ細胞、および制御性Ｔ細胞を含む、他の免疫細胞型に対して、広範な、調節および活性化の役割を果たすことが示されている。マクロファージは、悪性腫瘍内の、主要な免疫浸潤物であることが示されており、エフェクターの免疫浸潤および免疫機能に対して、広範な免疫抑制効果を及ぼすことも示されている。

【0005】

[0005]骨髄細胞は、単球、樹状細胞、組織マクロファージ、および顆粒球を含む、免疫系の、主要な細胞コンパートメントである。骨髄細胞の細胞個体発生、活性化、分化、および組織特異的機能についてのモデルは、過去数年間にわたり再検討され、驚くべき結果がもたらされている。しかし、ホメオスタシスおよび疾患の両方における、それらの巨大な可塑性および異種性は、理解からほど遠い。骨髄細胞は、貪食、およびＴ細胞、可溶性因子の産生を活性化するそれらの能力を含む、多くの機能を有するが、治療的使用のための、これらの機能の利用については、捉えどころがないままである。こうして、Ｔ細胞悪性腫瘍を含むがこれらに限定されない、改善された治療剤の開発に向けて、他の細胞型を使用するための、新規の方途が求められている。

【0006】

[0006]ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏにおける操作された骨髄細胞はまた、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて短命でもあり、表現型的に多様でもあり、高感受性でもあり、可塑性でもあり、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける操作が困難であると見出されることが多い。例えば、単球内の外因性遺伝子の発現は、非造血細胞内の外因性遺伝子の発現と比較して困難となっている。骨髄細胞（例えば、単球／マクロファージ）にトランスフェクトすることと関連する、著明な技術的困難が存在する。プロフェッショナル貪食細胞として、単球／マクロファージなどの骨髄細胞は、核酸の完全性を破壊しうる、多くの強力な分解酵素を含み、これらの細胞への遺伝子導入を、非効率的過程としている。これは、免疫刺激または炎症性刺激への曝露後における、それらの生理学の劇的な変化を経る活性化マクロファージにとりわけ当てはまる。マクロファージは、一般に、分裂しない最終段階の細胞であるため、これらの細胞へのウイルスによる形質導入は妨げられており；このため、複製性ゲノムへの組込みに依存する一部のベクターは、成功が限られている。さらに、マクロファージは、「危険信号」に対する反応性が大きいため、遺伝子導入のために使用された元のウイルスベクターのうちのいくつかは、これらの細胞内で強力な抗ウイルス反応を誘導し、これらのベクターを遺伝子送達に不適切なものとしている。

【発明の概要】

【0007】

[0007]骨髄細胞の多様な機能性は、骨髄細胞を、多数の治療効果を及ぼすように操作されうる、理想的な細胞治療剤候補とする。本開示は、免疫系の骨髄細胞（例えば、ＣＤ１４＋細胞）、特に、貪食細胞を使用する免疫療法に関する。骨髄細胞を使用する、多数の治療適応が想定されうるであろう。例えば、骨髄細胞による免疫療法は、がん、自己免疫、線維性疾患、および感染症において、極めて重要でありうるであろう。本開示は、免疫系の貪食細胞、特に、マクロファージを含む骨髄細胞を使用する免疫療法に関する。骨髄細胞のこれらの機能のうちの１つまたは複数を、治療的使用のために利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄細胞を含む骨髄細胞の貪食活性を、治療的使用のために利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄細胞を含む骨髄細胞が、Ｔ細胞の活性化を促進する能力を利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄細胞を含む骨髄細胞が、腫瘍殺滅分子の分泌を促進する能力を利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄細胞を含む骨髄細胞が、免疫細胞および免疫分子の動員および輸送を促進する能力を利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。本開示は、骨髄細胞の機能的側面を増強することに加えて、細胞の分化能、その成熟可能性、および／または可塑性を損なわないことを目的として、骨髄細胞にトランスフェクトもしくは形質導入するか、または骨髄細胞内の遺伝子改変を、他の形で誘導するのに成功しうる、新規の方法および組成物を提示する。骨髄細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏの体内に常在する場合もあり、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて操作される場合もある。

【0008】

[0008]本開示は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏにおける、骨髄細胞のプログラム化、がん細胞および感染細胞などの罹患細胞を、直接的に、かつ／または間接的に攻撃し、これらを死滅させうる（ＡＴＡＫ）、マクロファージまたは他の貪食細胞など、操作された骨髄細胞（例えば、ＣＤ１４＋細胞）の作製および使用を伴う。マクロファージおよび他の貪食細胞などの操作された骨髄細胞は、組換え核酸技術、合成核酸、遺伝子編集法（例えば、ＣＲＩＳＰＲ）、形質導入（例えば、ウイルス構築物を使用する）、電気穿孔、またはヌクレオフェクション、またはｉｎ ｖｉｖｏにおける、ＬＮＰ技術を含むがこれらに限定されない、ｍＲＮＡ送達技術の使用を使用して、例えば、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて使用して、疾患関連抗原（例えば、がん抗原）に特異的な細胞外結合性ドメインを有する、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ、プラスミド、ウイルス構築物）を、細胞へと組み込むことにより調製されうる。骨髄細胞は、広範かつ多様な範囲の活性を及ぼすように操作されうることが見出されている。例えば、骨髄細胞は、広範かつ多様な範囲の活性を及ぼすのに、抗原結合性ドメインを含有するキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）を発現するように操作されうることが見出されている。例えば、骨髄細胞は、ＣＦＰの標的細胞上の抗原への結合時に、細胞が、標的細胞の貪食の増大を呈するよう、貪食活性が増強されるように操作されうることが見出されている。また、骨髄細胞は、ＣＦＰの標的細胞上の抗原への結合時に、細胞が、腫瘍微小環境内のＴ細胞などのＴ細胞の活性化を促進するよう、Ｔ細胞の活性化を促進するように操作されうることも見出されている。骨髄細胞は、ＣＦＰの標的細胞上の抗原への結合時に、細胞が、近傍の細胞からの腫瘍殺滅分子の分泌を促進するよう、腫瘍殺滅分子の分泌を促進するように操作されうる。骨髄細胞は、ＣＦＰの標的細胞上の抗原への結合時に、細胞が、免疫細胞および免疫分子の、標的細胞または腫瘍微小環境への動員および輸送を促進するよう、免疫細胞および免疫分子の動員および輸送を促進するように操作されうる。

【0009】

[0009]本開示は、操作された骨髄細胞が、ＣＡＲ－Ｔ細胞の限界のうちの、少なくとも一部を克服する、重要な発見であって、充実性腫瘍へとたやすく動員されること；生存期間が短いほか、操作可能であること、したがって、無形成および免疫不全症を結果としてもたらす、存続の延長の危険性が小さいこと；骨髄細胞は、Ｔ細胞と夾雑される可能性がないこと；骨髄細胞は、少なくとも、悪性Ｔ細胞と同じ抗原を発現しないため、フラトリサイドを回避しうること；および骨髄細胞は、展開されうる、大量の抗腫瘍機能を有することを含む発見に基づく。一部の点では、操作された骨髄由来細胞は、罹患細胞を標的化し、破壊するための、より安全な免疫療法ツールでありうる。

【0010】

[0010]さらに、マクロファージなどの骨髄細胞は、腫瘍環境（ＴＭＥ）内において、遍在することが見出されており、とりわけ、一部の腫瘍型では、最も豊富な細胞である。免疫系における、それらの役割の一部として、マクロファージなどの骨髄細胞は、天然では、罹患細胞の除去に関与する。本発明は、骨髄細胞機能の利用に関し、とりわけ、罹患細胞の標的化、殺滅、ならびに直接的除去および／または間接的除去のほか、抗原およびサイトカインなどのペイロードの送達に関する。

【0011】

[0011]本開示はまた、操作された骨髄細胞が、内因性Ｔ細胞活性を促進しうることの、重要な発見にも基づく。本開示は、加えて、骨髄細胞のプログラム化を伴う。操作された骨髄細胞は、組換え核酸技術、合成核酸、遺伝子編集法（例えば、ＣＲＩＳＰＲ）、形質導入（例えば、ウイルス構築物を使用する）、電気穿孔、またはヌクレオフェクション、またはｉｎ ｖｉｖｏにおける、ＬＮＰ技術を含むがこれらに限定されない、ｍＲＮＡ送達技術の使用を使用する、例えば、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて使用する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける、疾患関連抗原（例えば、がん抗原）に特異的な細胞外結合性ドメインを有する、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ、プラスミド、ウイルス構築物）の、細胞への組込みを介して達成されうる。

【0012】

[0012]操作された骨髄細胞はまた、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて短命でもあり、表現型的に多様でもあり、高感受性でもあり、可塑性でもあり、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける操作が困難であると見出されることが多い。例えば、単球内の外因性遺伝子の発現は、非造血細胞内の外因性遺伝子の発現と比較して困難となっている。骨髄細胞（例えば、単球／マクロファージ）にトランスフェクトすることと関連する、著明な技術的困難が存在する。プロフェッショナル貪食細胞として、単球／マクロファージなどの骨髄細胞は、核酸の完全性を破壊しうる、多くの強力な分解酵素を含み、これらの細胞への遺伝子導入を、非効率的過程としている。これは、免疫刺激または炎症性刺激への曝露後における、それらの生理学の劇的な変化を経る活性化マクロファージにとりわけ当てはまる。マクロファージは、一般に、分裂しない最終段階の細胞であるため、これらの細胞へのウイルスによる形質導入は妨げられており；このため、複製性ゲノムへの組込みに依存する一部のベクターは、成功が限られている。さらに、マクロファージは、「危険信号」に対する反応性が大きいため、遺伝子導入のために使用された元のウイルスベクターのうちのいくつかは、これらの細胞内で強力な抗ウイルス反応を誘導し、これらのベクターを遺伝子送達に不適切なものとしている。本開示は、骨髄細胞の機能的側面を増強することに加えて、細胞の分化能、その成熟可能性、および／または可塑性を損なわないことを目的として、骨髄細胞にトランスフェクト形質導入するか、または骨髄細胞内の遺伝子改変を、他の形で誘導するのに成功しうる、新規の方法および組成物を提示する。

【0013】

[0013]本明細書では、罹患細胞、例えば、がん細胞上で発現された、ある特定の抗原に結合するように方向付けられた治療剤であって、治療剤（例えば、標的化「結合剤」）の、標的罹患細胞上の標的抗原への結合が、標的細胞の破壊過程を惹起する治療剤が提供される。本明細書で記載される治療剤は、ヒト細胞などの哺乳動物細胞など、適切な細胞内で発現されうる組換え核酸であることが可能であり、この場合、適切な細胞は、骨髄細胞でありうる。一部の実施形態では、本明細書で記載される治療剤は、標的細胞上の標的抗原に結合しうる組換えタンパク質でありうる。一部の実施形態では、本明細書で記載される治療剤は、細胞、例えば、骨髄細胞でありうるが、骨髄細胞は、骨髄細胞の、細胞表面上において標的抗原を発現する罹患細胞への標的化が可能であり；骨髄細胞が、罹患細胞を溶解するか、またはこれを貪食するように、本明細書で記載される組換え核酸を含み、かつ／または本明細書で記載される組換えタンパク質を発現する。

【0014】

[0014]一部の実施形態では、治療剤は、本明細書で記載される骨髄細胞などの骨髄細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞は、骨髄前駆細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞は、非分化骨髄細胞および／または非極性化骨髄細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞は、貪食細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞である。

【0015】

[0015]一部の実施形態では、治療剤は、組換え核酸または操作された核酸である。一部の実施形態では、核酸は、ＲＮＡである。

【0016】

[0016]一部の実施形態では、操作された核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸または操作された核酸である治療剤は、キメラ融合受容体タンパク質（ＣＦＰ）をコードする。

【0017】

[0017]一部の実施形態では、組換え核酸は、例えば、タンパク質の１つの末端に配置された、標的結合剤ドメインにより、罹患細胞上の標的抗原に結合し；骨髄細胞などのエフェクター細胞の構造上の分子に結合する、少なくとも別のドメインにより、エフェクター骨髄細胞、例えば、活性貪食細胞などのエフェクター細胞に結合することが可能である、「エンゲージャー」としてもまた公知である、細胞外タンパク質または可溶性タンパク質をコードする。例示的なエンゲージャーは、本明細書で記載される、二特異性エンゲージャー（ＢｉＭＥ）、または三特異性エンゲージャー（ＴＲｉＭＥ）である。

【0018】

[0018]本明細書の一態様では、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣＤ１３７に特異的に結合しうるＣＤ１３７抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物が開示される。

【0019】

[0019]本明細書の一態様では、（ａ）標的細胞上のＣＤ１３７抗原に特異的に結合する第１のＣＤ１３７抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣＤ１３７抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合が開示される。

【0020】

[0020]本明細書の一態様では、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２に特異的に結合しうるＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物が開示される。

【0021】

[0021]本明細書の一態様では、（ａ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原に特異的に結合する第１のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合が開示される。

【0022】

[0022]本明細書の一態様では、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ ３に特異的に結合しうるＣｌａｕｄｉｎ ３抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物が開示される。

【0023】

[0023]本明細書の一態様では、（ａ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ ３抗原に特異的に結合する第１のＣｌａｕｄｉｎ ３抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合が開示される。

【0024】

[0024]本明細書の一態様では、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣＤ７０に特異的に結合しうるＣＤ７０抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物が開示される。

【0025】

[0025]本明細書の一態様では、（ａ）標的細胞上のＣＤ７０抗原に特異的に結合する第１のＣＤ７０抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣＤ７０抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合が開示される。

【0026】

[0026]本明細書の一態様では、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＴＲＯＰ２に特異的に結合しうるＴＲＯＰ２抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物が開示される。

【0027】

[0027]本明細書の一態様では、（ａ）標的細胞上のＴＲＯＰ２抗原に特異的に結合する第１のＴＲＯＰ２抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＴＲＯＰ２抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合が開示される。

【0028】

[0028]本明細書の一態様では、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＴＭＰＲＳＳに特異的に結合しうるＴＭＰＲＳＳ抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物が開示される。

【0029】

[0029]本明細書の一態様では、（ａ）標的細胞上のＴＭＰＲＳＳ抗原に特異的に結合する第１のＴＭＰＲＳＳ抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＴＭＰＲＳＳ抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合が開示される。

【0030】

[0030]本明細書の一態様では、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット；ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に対する強力な結合親和性を有する、上記で記載されたもののいずれか１つの抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；ＰＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＰＦＰを発現する細胞の殺滅または貪食活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％を超えて増大される、組成物が開示される。

【0031】

[0031]一部の実施形態では、本明細書で記載されるＰＦＰのうちのいずれか１つの細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食または繋留受容体（ＰＲ）に由来するか、または細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食活性化ドメインを含む。

【0032】

[0032]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。

【0033】

[0033]一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、キナーゼ活性化ドメインまたはキナーゼ結合性ドメインを含む。

【0034】

[0034]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含む。

【0035】

[0035]一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む。

【0036】

[0036]一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰファミリーメンバーであるＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ピリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、カスパーゼドメインもしくはプロカスパーゼ結合性ドメイン、またはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0037】

[0037]一部の実施形態では、本明細書で記載されるＰＦＰのうちのいずれか１つは、ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ６４、またはＣＤ６８のタンパク質膜貫通ドメインに由来するＴＭドメインをさらに含む。

【0038】

[0038]一部の実施形態では、本明細書で記載されるＰＦＰのうちのいずれか１つは、ヒンジドメインをさらに含む。

【0039】

[0039]一部の実施形態では、ＰＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＰＦＰを発現する細胞の殺滅活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％を超えて増大される。

【0040】

[0040]一部の実施形態では、ＰＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＰＦＰを発現する細胞の殺滅活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１．１倍増大される。

【0041】

[0041]一部の実施形態では、組成物は、標的細胞上の抗原と特異的に相互作用する第１の抗体またはその機能的断片である、第１の結合性ドメイン、および骨髄細胞と特異的に相互作用する第２の抗体またはその機能的断片である、第２の結合性ドメインを含む、第１の治療剤を含み、この場合、（ｉ）第１の治療剤は、さらなる治療剤もしくは第３の結合性ドメインである、第１の構成要素とカップリングされるか、または（ｉｉ）一部の実施形態では、組成物は、さらなる治療剤を含む。

【0042】

[0042]一部の実施形態では、治療剤は、（ａ）標的細胞の抗原と特異的に相互作用する第１の結合性ドメイン、（ｂ）骨髄細胞と特異的に相互作用する第２の結合性ドメイン、および（ｃ）骨髄細胞と特異的に相互作用する第３の結合性ドメインを含む。

【0043】

[0043]一部の実施形態では、治療剤の結合性ドメインのうちのいずれか１つは、抗体の結合性ドメイン、抗体の機能的断片、その可変ドメイン、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、ＶＮＡＲドメイン、Ｖ_ＨＨドメイン、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディー、二特異性抗体、ダイアボディー、またはこれらの機能的断片もしくは組合せを含む。

【0044】

[0044]一部の実施形態では、第１の結合性ドメインが結合する標的細胞上の抗原は、標的細胞上のがん抗原もしくは病原性抗原、または自己免疫性抗原である。

【0045】

[0045]一部の実施形態では、第１の治療剤は、１０００アミノ酸または１０００ｎｍ未満の長さであるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、第１の治療剤は、５００アミノ酸または５００ｎｍ未満の長さであるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、第１の治療剤は、２００～１０００アミノ酸または２００～１０００ｎｍの長さであるポリペプチドを含む。

【0046】

[0046]一部の実施形態では、第１の治療剤の結合性ドメインの係合は、がん細胞を、骨髄細胞へと接触させる。

【0047】

[0047]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞と特異的に相互作用し、骨髄細胞の貪食活性を促進する。

【0048】

[0048]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞と特異的に相互作用し、骨髄細胞の炎症性シグナル伝達を促進する。

【0049】

[0049]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞または接着分子と特異的に相互作用し、骨髄細胞の標的細胞への接着を促進する。

【0050】

[0050]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞と特異的に相互作用し、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗貪食活性を阻害する。

【0051】

[0051]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞と特異的に相互作用し、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗炎症活性を阻害する。

【0052】

[0052]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、骨髄細胞の貪食活性を促進する。

【0053】

[0053]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、骨髄細胞の炎症性シグナル伝達を促進する。

【0054】

[0054]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、骨髄細胞または接着分子と特異的に相互作用し、骨髄細胞の標的細胞への接着を促進する。

【0055】

[0055]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗貪食活性を阻害する。

【0056】

[0056]一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗炎症活性を阻害する。

【0057】

[0057]一部の実施形態では、第３の結合性ドメインまたはさらなる治療剤は、ＣＤ４７アンタゴニスト、ＣＤ４７ブロッカー、抗体、キメラＣＤ４７受容体、シアリダーゼ、サイトカイン、炎症促進性遺伝子、プロカスパーゼ、または抗がん剤を含む。

【0058】

[0058]一部の実施形態では、第３の結合性ドメインまたはさらなる治療剤は、ＳＩＲＰアルファアンタゴニスト、ＳＩＲＰＡブロッカー、抗体、キメラＳＩＲＰＡ受容体、サイトカイン、炎症促進性遺伝子、プロカスパーゼ、または抗がん剤を含む。

【0059】

[0059]一部の実施形態では、第３の結合性ドメインまたはさらなる治療剤は、ＰＤ１アンタゴニスト、ＰＤ１ブロッカー、抗体、キメラＰＤ１受容体、サイトカイン、炎症促進性遺伝子、プロカスパーゼ、または抗がん剤を含む。

【0060】

[0060]一部の実施形態では、第２の結合性ドメイン、および第３の結合性ドメインは、別個の同一ではない標的抗原に結合する。

【0061】

[0061]一部の実施形態では、第１の結合性ドメイン、第２の結合性ドメイン、または第３の結合性ドメインは、リガンド結合性ドメインである。

【0062】

[0062]一部の実施形態では、第１、第２または第３の結合性ドメインは、１つまたは複数のリンカーにより作動可能に連結される。

【0063】

[0063]一部の実施形態では、リンカーは、ポリペプチドである。一部の実施形態では、リンカーは、機能的ペプチドである。一部の実施形態では、リンカーは、受容体に対するリガンドである。一部の実施形態では、リンカーは、単球またはマクロファージ受容体に対するリガンドである。一部の実施形態では、リンカーは、受容体を活性化する。一部の実施形態では、リンカーは、受容体を阻害する。

【0064】

[0064]一部の実施形態では、リンカーは、マクロファージＭ２受容体に対するリガンドである。一部の実施形態では、リンカーは、ＴＬＲ４などのＴＬＲ受容体に対するリガンドである。一部の実施形態では、リンカーは、ＴＬＲ受容体を活性化する。一部の実施形態では、第１、第２および／または第３の結合性ドメインは、結合性ドメインに結合するマスクと会合する。

【0065】

[0065]一部の実施形態では、マスクがそれぞれの結合性ドメインと会合したままである場合に、マスクは、結合性ドメインのその標的との相互作用を阻害する阻害剤である。一部の実施形態では、マスクは、ペプチドリンカーを介して、結合性ドメインと会合する。一部の実施形態では、リンカーは、切断可能部分を含む。

【0066】

[0066]一部の実施形態では、切断可能部分は、がんまたは腫瘍の部位において選択的に豊富であるタンパク質または酵素により切断される。

【0067】

[0067]一部の実施形態では、治療剤は、核酸、例えば、操作された核酸であり、この場合、核酸は、ＲＮＡである。

【0068】

[0068]一部の実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡである。

【0069】

[0069]一部の実施形態では、核酸は、骨髄細胞を標的化するようにデザインされた自己複製型ＲＮＡである。

【0070】

[0070]一部の実施形態では、操作された核酸である核酸は、骨髄細胞を標的化するようにデザインされたｃｉｒｃＲＮＡである。

【0071】

[0071]一部の実施形態では、操作された組換え核酸は、骨髄細胞を標的化するようにデザインされたＲＮＡである。

【0072】

[0072]一部の実施形態では、操作された核酸は、骨髄細胞を標的化するようにデザインされたｍＲＮＡである。

【0073】

[0073]一部の実施形態では、操作された核酸は、骨髄細胞を標的化するようにデザインされた自己複製型ＲＮＡである。

【0074】

[0074]一部の実施形態では、操作された核酸は、骨髄細胞を標的化するようにデザインされたｃｉｒｃＲＮＡである。

【0075】

[0075]一部の実施形態では、操作された組換え核酸は、１つまたは複数の脂質と会合する。

【0076】

[0076]一部の実施形態では、組換え核酸は、リポソーム内に封入される。

【0077】

[0077]一部の実施形態では、リポソームは、ナノ粒子である。

【0078】

[0078]一部の実施形態では、組換え核酸は、ベクター内に含まれる。

【0079】

[0079]本明細書では、上記で記載された実施形態による組成物の組換え核酸のうちのいずれか１つと、許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。

【0080】

[0080]本明細書では、上記で記載された組換えタンパク質のうちのいずれか１つをコードする組換え核酸によりコードされるポリペプチドを含む医薬組成物が提供される。

【0081】

[0081]本明細書では、上記で記載された組換えタンパク質のうちのいずれか１つをコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。

【0082】

[0082]一部の実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。

【0083】

[0083]一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ１４＋、ＣＤ１６－である。

【0084】

[0084]本明細書では、上記で記載された実施形態のうちのいずれか１つによる組換え核酸を含む細胞の集団を含み、細胞のうちの少なくとも５０％が、ＣＤ１４＋ＣＤ１６－である、医薬組成物が提供される。

【0085】

[0085]一部の実施形態では、医薬組成物の細胞のうちの１０％未満は、樹状細胞である。

【0086】

[0086]一部の実施形態では、医薬組成物は、適切な賦形剤をさらに含む。

【0087】

[0087]本明細書では、上記で記載された実施形態のうちのいずれか１つによる組成物のうちのいずれか１つを作製する方法が提供される。

【0088】

[0088]本明細書の一態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、上記で記載された実施形態のうちのいずれか１つによる医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。

【0089】

[0089]本明細書の一態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、上記で記載された実施形態のうちのいずれか１つによる医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。

【0090】

[0090]一部の実施形態では、がんは、胃がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、および肺がんからなる群から選択される。

【0091】

[0091]本明細書の一態様では、本明細書で記載された組成物のうちのいずれか１つを作製する方法が提供される。

【0092】

[0092]本明細書の一態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、本明細書で記載された医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。

【0093】

[0093]本明細書の一態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、本明細書で記載された医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。

【0094】

[0094]一部の実施形態では、がんは、胃がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、および肺がんからなる群から選択される。

【0095】

[0095]本明細書の一態様では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えポリ核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが（ａ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および（ｂ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含み；膜貫通ドメインが、骨髄細胞内の内因性ＦｃＲガンマ受容体と二量体化するタンパク質に由来する膜貫通ドメインであり；組換えポリ核酸が、ナノ粒子送達媒体により封入され；組成物のヒト対象への投与の後に、ＣＦＰが、ヒト対象の骨髄細胞の表面上において発現される、組成物が提供される。

【0096】

[0096]一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖドメイン、またはｓｄＡｂドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、またはＣＤ８９に由来する膜貫通ドメインである。

【0097】

[0097]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ８に由来するヒンジドメインをさらに含み、この場合、ヒンジドメインは、膜貫通ドメインおよび抗原結合性ドメインへと作動的に連結される。

【0098】

[0098]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、骨髄細胞、単球、またはマクロファージ内の内因性ＦｃＲガンマ受容体と二量体化するタンパク質に由来する膜貫通ドメインであり；この場合、医薬組成物のヒト対象への投与の後に、ＣＦＰは、ヒト対象の骨髄細胞、単球、またはマクロファージ内で特異的に発現される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１６ａ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、またはＣＤ８９に由来する膜貫通ドメインである。一部の実施形態では、ＣＦＰは、細胞内ドメインをさらに含み、この場合、細胞内ドメインは、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＦｃγＲ、ＦｃαＲ、ＦｃεＲ、ＣＤ４０、またはＣＤ３ゼータに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ＰＩ３Ｋ動員ドメインは、配列番号２６に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ１６ａ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、またはＣＤ８９に由来する細胞内ドメインを含む。

【0099】

[0099]一部の実施形態では、本明細書で記載されるＣＦＰの細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＣＦＰの細胞内ドメインは、１つを超えるＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、ＩＴＡＭドメインは、ＣＤ３ゼータＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタＴＣＲサブユニット、ＴＣＲゼータ鎖、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、これらの機能的断片、およびこれらに対する少なくとも１つであるが２０を超えない修飾を有する、これらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質またはポリペプチドの細胞内ドメインに由来する。

【0100】

[00100]一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｒｃファミリーキナーゼのリン酸化部位を含む。

【0101】

[00101]一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｙｋ動員ドメインを含む。

【0102】

[00102]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達サブユニットは、ＤＡＰ１２動員ドメインをさらに含む。

【0103】

[00103]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＩＴＡＭドメインを含む。

【0104】

[00104]一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ナノ粒子送達媒体を介して、細胞へと送達される。一部の実施形態では、ナノ粒子送達媒体は、脂質ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、極性脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、非極性脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１００～３００ｎｍの直径である。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ＴＲＯＰ２、ＧＰＣ３、ＣＤ５、ＨＥＲ２、ＣＤ１３７、ＣＤ７０、Ｃｌａｕｄｉｎ ３、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、ＴＭＰＲＳＳ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ７、およびＧＰ７５からなる群から選択される抗原に結合する。

【0105】

[00105]本明細書では、上記で記載された組成物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、がんを有するヒト対象へと投与された場合に、がんの増殖を阻害するのに有効な量の、本明細書で記載される組成物を含む。

【0106】

[00106]本明細書の一態様では、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、本明細書で記載される医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。

【0107】

[00107]本明細書の一態様では、本明細書で記載される組成物を、骨髄細胞へと導入する方法であって、（ａ）抗ＴＲＯＰ２結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および（ｂ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含むキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えリポ核酸の存在下で、骨髄細胞に電気穿孔するステップを含み；組換えリポ核酸が、（ｉ）骨髄細胞内に存在するか、または（ｉｉ）ナノ粒子送達媒体により封入され；組換えリポ核酸が、ヒト対象の骨髄細胞内における組換えポリ核酸の発現のために構成される、方法が提供される。

【0108】

[00108]本明細書の一態様では、（ａ）配列番号３４および配列番号３５に示された配列、または配列番号３４もしくは配列番号３５と少なくとも８５％同一である配列のうちの少なくとも１つを含む抗ＴＲＯＰ２結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；（ｂ）細胞外ドメインと作動可能に連結され、ＦｃγＲ１分子（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＩＡ分子（ＣＤ１６）、またはＦｃαＲ１分子（ＣＤ８９）の膜貫通ドメインに由来する配列を含む膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）任意選択で、細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインへと作動可能に連結されたヒンジドメインであって、ＣＤ８αヒンジドメインに由来するアミノ酸配列を含むヒンジドメインを含むキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えポリ核酸を含む組成物が提供される。

【0109】

[00109]一部の実施形態では、組成物は、配列番号２６、２７、もしくは２８に示された配列；または配列番号２６、２７、もしくは２８に示された配列から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列から選択されるアミノ酸配列を含む細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ｍＲＮＡである。

【0110】

[00110]本明細書では、抗ＴＲＯＰ２結合性ドメインを含む細胞外ドメインとのキメラ融合タンパク質をコードする配列を含む組換えポリ核酸を含み、ＣＤ１４＋細胞である細胞が提供される。

【0111】

[00111]本明細書では、疾患または障害の処置における、本明細書で記載される組成物、または本明細書における医薬組成物、または本明細書で記載される細胞のうちのいずれか１つの使用が提供される。

【0112】

[00112]本明細書では、胃がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、および肺がんからなる群から選択される、対象におけるがんの処置における、本明細書で記載される医薬組成物の使用が提供される。

【0113】

[00113]本明細書では、胃がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、および肺がんからなる群から選択される、対象におけるがんを処置するための医薬の作製における、本明細書で記載される組成物、または本明細書で記載される医薬組成物、または本明細書で記載される細胞のうちのいずれか１つの使用が提供される。

【0114】

[00114]本明細書ではまた、（Ａ）外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列と；（Ｂ）キメラ抗原受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする第２の核酸配列であって、ＣＦＰが、（ａ）受容体による抗原への結合時にリン酸化される１つまたは複数のチロシン残基を有す細胞内シグナル伝達ドメインを含む、細胞内シグナル伝達サブユニット；（ｂ）膜貫通ドメイン；（ｃ）標的細胞の表面上の構成要素に対する結合特異性を有し、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結される細胞外結合性ドメイン；ならびに（ｄ）プロテアーゼ切断配列により、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結され、外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列の転写を促進する転写活性化ドメインを含む、第２の核酸配列と；（Ｃ）（ｉ）転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼ；（ｉｉ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインをコードし；プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼとチロシン残基に結合するドメインとが作動可能に連結された、第３の核酸配列とを含む、１つまたは複数の組換え核酸配列を含む組成物も提供される。

【0115】

[00115]一部の実施形態では、第３の核酸配列は、（ｉｉｉ）刺激応答性エレメントをさらにコードする。

【0116】

[00116]一部の実施形態では、刺激応答性エレメント（ｉｉｉ）は、リン酸化チロシン残基に結合するドメインと融合される。

【0117】

[00117]一部の実施形態では、刺激応答性エレメント（ｉｉｉ）は、核酸配列を発現する細胞の微小環境に対して、応答性である。

【0118】

[00118]一部の実施形態では、１つまたは複数の組換え核酸は、骨髄細胞内で発現される。

【0119】

[00119]一部の実施形態では、転写活性化ドメインは、ＤＮＡ結合性ドメインをさらに含む。

【0120】

[00120]一部の実施形態では、ＤＮＡ結合性ドメインは、Ｇａｌ４、ＺＦＨＤ１、またはｔｅｔ－ＲのＤＮＡ結合性ドメイン（ＤＢ）から選択される。

【0121】

[00121]一部の実施形態では、転写活性化ドメインは、ＶＰ６４トランス活性化ドメインを含む。

【0122】

[00122]一部の実施形態では、転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ３プロテアーゼである。

【0123】

[00123]一部の実施形態では、ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインは、ホスホチロシン結合性（ＰＴＢ）ドメインである。

【0124】

[00124]一部の実施形態では、ＰＴＢは、Ｓｈｃ ＰＴＢである。

【0125】

[00125]一部の実施形態では、（ｉｉｉ）は、（ｉｉ）と作動可能に連結されたデグロンである。

【0126】

[00126]一部の実施形態では、デグロンは、ＨＩＦ－１ａデグロンである。

【0127】

[00127]本明細書では、段落［００１１４］～［００１２６］に列挙された組成物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。本明細書では、段落［００１１４］～［００１２６］に列挙された組成物を含む細胞が提供される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ１４＋である。本明細書では、対象における疾患を処置する方法であって、対象へと、（ｉ）医薬組成物；または（ｉｉ）段落［００１２７］に列挙された細胞のうちのいずれか１つを投与するステップを含む方法が提供される。

【0128】

参照による組込み
[00128]本明細書で言及される、全ての刊行物、特許、および特許出願は、各個別の刊行物、特許、または特許出願が、参照により組み込まれることが、具体的に、かつ、個別に指し示された場合と同じ程度において、参照により本明細書に組み込まれる。

【0129】

[00129]本発明の新規の特色は、付属の特許請求の範囲において、詳細に示される。本発明の原理が利用される、例示的な実施形態を示す以下の詳細な説明および添付した図面を参照することにより、本発明の特色および利点についての良好な理解が得られるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0130】

【図1】[00130]左側のＣＦＰが、細胞外結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含有し、右側のＣＦＰが、細胞外結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、第３の細胞内シグナル伝達ドメイン、および１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインを含有する、２つの例示的ＣＦＰを示す概略を描示する図である。シグナル伝達ドメインは、他の受容体に由来する場合があり、任意の数の細胞機能を誘発するようにデザインされうる。例示的な結合性ドメインは、ＣＤ１３７結合性ドメインである。例示的な結合性ドメインは、ＴＲＯＰ２結合性ドメインである。

【図2A】[00131]抗ＣＤ１３７細胞外結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＰＩ３Ｋ動員ドメインへと融合された、ＦｃＲγに由来する細胞内ドメインを含有する、細胞内シグナル伝達ドメインを含有する例示的なＣＦＰ二量体を示す概略を描示する図である。

【図2B】[00132]抗ＣＤ１３７細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに貪食ドメイン、ＰＩ３Ｋ動員ドメイン、および炎症促進性ドメインを含有する、細胞内シグナル伝達ドメインを含有する例示的なＣＦＰ二量体を示す概略を描示する図である。

【図3】[00133]各サブユニットが、単一の標的に結合するｓｃＦｖへと融合された細胞外ドメインを含有する、例示的ＣＦＰのホモ二量体（左）、およびヘテロ二量体の第１のサブユニットが、第１の標的に結合するｓｃＦｖへと融合された細胞外ドメインを含有し、ヘテロ二量体の第２のサブユニットが、第２の標的に結合するｓｃＦｖへと融合された細胞外ドメインを含有する、例示的ＣＦＰのヘテロ二量体（右）を描示する概略図である。

【図4A】[00134]細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）、ならびにシグナル伝達ドメイン１、シグナル伝達ドメイン２、およびシグナル伝達ドメイン３を伴う、スカベンジャー受容体の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）と融合された、抗原特異的ｓｃＦｖへと融合されたシグナルペプチドを含有するＣＦＰをコードする、例示的組換え核酸を描示する概略図である。加えて、例示的組換え核酸は、５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲを伴うｍＲＮＡである。

【図4B】[00135]ウイルスによる遺伝子送達（左パネル）では、一部の細胞型は、形質導入不良および細胞分化を示し、これは、治療的細胞機能および細胞寿命の潜在的効果に負の影響を及ぼすが；プラスミド媒介送達（右上）は、分化および細胞（ｅｌｌ）死を誘導することが可能であり；この場合、ｍＲＮＡの送達は、安全であり、かつ、送達後に細胞内で引き起こす免疫応答がほとんど無視できることのデータを裏付ける図である（右下）。

【図5】[00136]上方の略式図に描示される通り、空ベクター（対照）、または抗原でコーティングされたビーズと共に共培養されたＣＦＰをコードするベクターにより形質導入された、ヒト初代骨髄細胞内における、相対貪食についての予測結果を描示する、例示的データを示す図である。貪食は、フローサイトメトリーを使用して定量される。

【図6A】[00137]上方の略式図に描示される通り、空ベクター（対照）、または蛍光染料で標識された標的細胞を発現する抗原と共に共培養されたＣＦＰをコードするベクターにより形質導入された、ヒト初代骨髄細胞内における、相対貪食についての予測結果を描示する、例示的データを示す図である。貪食は、フローサイトメトリーを使用して定量される。異なる骨髄細胞対標的比の効果は、予測された通りに描示される。

【図6B】[00138]ＣＦＰ結合性ドメイン（結合剤）の特異性を裏付けるデータを示す図であり、ＣＤ１９に結合するＣＦＰ構築物を発現する細胞（ＣＤ１９－ＡＴＡＫ）は、ＣＤ１９＋標的の存在下に限り、高度の貪食を示し、表面上に、ＣＤ１９を保有しない、ＣＤ２２＋標的の存在下では、これを示さず、この逆もまた成り立つ。

【図6C】[00139]腫瘍内で、蛍光ＣＦＰ構築物を発現する骨髄細胞の走化性および局在化の成功を示すデータを示す図であり（イメージングによる；左パネル）；右側のグラフは、ｉｎ ｖｉｔｒｏの、濃度を変動させるＣＣＬ２の存在下における走化性を示す。

【図7A】[00140]抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する、初代ヒト単球であって、異なる極性化条件下で（上パネルに示された）、例えば、ＭＣＳＦ単独の存在下で（Ｍ０条件）；またはＩＬ－１０、ＩＬ－４、およびＴＧＦβと共に（Ｍ２条件）；またはＩＦＮおよびＬＰＳの存在下で、２４時間にわたりインキュベートされ、次いで、Ｈ９ Ｔ細胞リンパ腫細胞と共にインキュベートされた、初代ヒト単球における、フローサイトメトリー解析による、例示的グラフを描示する図であり、結果は、細胞が、これらの条件下で極性化される能力を、ＣＦＰの発現が、変更しなかったことを指し示す。加えて、腫瘍細胞との共インキュベーションも、極性化を変更しなかった。さらに、同じ培養条件を使用して、抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する、初代ヒト単球が、Ｍ２環境において、強力な腫瘍細胞貪食／殺滅活性を有することについて調べ、これを裏付けた（本明細書では、図示しない）。同じ手法は、本明細書で記載される結合剤のうちのいずれかの、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける効能を、Ｍ１促進環境またはＭ２促進環境において調べるのに使用されうる。

【図7B】[00141]末梢Ｔ細胞リンパ腫処置の動物モデル実験についての例示的な実験フローチャートを示す概略図を描示する図である。ＣＤ５－ＨＵ９セザリー症候群腫瘍株細胞１×１０^６個を、マウスへと、皮下注入した。表示量の、抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現するヒト初代単球による処置は、腫瘍株細胞の注射後１１日目に開始した。３日ごとに１回ずつ、合計５回の注入を実施した。同じ手法は、本明細書で記載される結合剤のうちのいずれかの、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける効能を、ｉｎ ｖｉｖｏの、適切な実験的腫瘍モデルにおいて調べるのに使用されうる。

【図7C】[00142]相対腫瘍サイズ（放射輝度）における、相対腫瘍サイズ（放射輝度）についてのグラフを描示する図である。

【図8】[00143]単球特異的発現のための、ＣＦＰ構築物についての、例示的モジュラーデザイン（ＥＣＤ＝細胞外ドメイン；Ｈ＝ヒンジ；ＴＭＤ＝膜貫通ドメイン；ＩＣＤ＝細胞内ドメインである）を示す図である。

【図9】[00144]抗ＧＰＣ３抗体ドメインまたは抗ＴＲＯＰ２抗体ドメイン、ＦＬＡＧ細胞外ドメイン、ヒトＣＤ１６膜貫通（ＴＭ）ドメインまたはヒトＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒトＣＤ１６細胞内（ｃｙｔｏ）ドメインまたはヒトＣＤ８９細胞内ドメインを伴う、抗ＧＰＣ３ ＣＦＰ構築物および抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物を含む、例示的ＣＦＰ構築物の発現についての、代表的ワークフローおよび機能的解析を示す図である。描示される通り、構築物をコードする、２００ｕｇ／ｍＬのＲＮＡを、ＰＢＭＣへと電気穿孔（ＥＰ）し、発現、標的腫瘍細胞の殺滅、およびサイトカイン／ケモカインの産生について解析することができる。

【図10A】[00145]多様な細胞型における、表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物の発現を解析する、フローサイトメトリーデータを描示する図である。下パネルに示される通り、ＣＤ１４＋骨髄細胞内では、表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物の発現が観察されたが、ＣＤ１９＋ Ｂ細胞内、ＣＤ３＋ Ｔ細胞内、またはＣＤ５６＋ ＮＫ細胞内では観察されなかった。

【図10B】[00146]多様な細胞型における、表示の抗ＧＰＣ３ ＣＦＰ構築物の発現を解析する、フローサイトメトリーデータを描示する図である。下パネルに示される通り、ＣＤ１４＋骨髄細胞内では、表示の抗ＧＰＣ３ ＣＦＰ構築物の発現が観察されたが、ＣＤ１９＋ Ｂ細胞内、ＣＤ３＋ Ｔ細胞内、またはＣＤ５６＋ ＮＫ細胞内では観察されなかった。

【図11A】[00147]表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をトランスフェクトされたＰＢＭＣによる、ＳＫＯＶ３細胞の殺滅を測定するルシフェラーゼアッセイによるデータを描示する図である。表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をトランスフェクトされたＰＢＭＣを、ＳＫＯＶ３－Ｌｕｃ細胞と共に、５：１のエフェクター細胞：標的細胞で、３日間にわたり共培養した。表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をトランスフェクトされたＰＢＭＣは、ＳＫＯＶ３細胞の、対照と比較した、特異的殺滅を裏付けた。

【図11B】[00148]表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触された骨髄細胞を使用して、発現、腫瘍特異的貪食、および抗腫瘍サイトカイン産生について解析するデータを描示する図である。左パネルは、表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触された、多様な細胞型における、表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物の発現を解析する、フローサイトメトリーデータを描示する。表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物の発現は、ＣＤ１４＋骨髄細胞内では観察されるが、ＣＤ１９＋ Ｂ細胞内、ＣＤ３＋ Ｔ細胞内、またはＣＤ５６＋ ＮＫ細胞内では観察されない。中パネルは、表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触されたＰＢＭＣによる、ＳＫＯＶ３細胞の殺滅を測定する、ルシフェラーゼアッセイからのデータについてのグラフを描示する。表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触され、ＳＫＯＶ３－Ｌｕｃ細胞と共に共培養されたＰＢＭＣは、ＳＫＯＶ３細胞の、対照と比較した、特異的殺滅を裏付けた。右パネルは、中パネルに由来する試料による、ＴＮＦアルファの産生についてのグラフを描示する。

【図12A】[00149]表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触された骨髄細胞を使用する、サイトカイン産生についてのデータを描示する図である。表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触されたＰＢＭＣを、単独で培養するか、またはＳＫＯＶ３細胞と共に共培養した試料からの、ＩＬ－１ベータおよびＩＬ－１８の産生についてのグラフを示す。

【図12B】[00150]表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触された骨髄細胞を使用する、サイトカイン産生についてのデータを描示する図である。表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触されたＰＢＭＣを、単独で培養するか、またはＳＫＯＶ３細胞と共に共培養した試料からの、ＣＣＬ２およびＴＮＦアルファの産生についてのグラフを示す。

【図12C】[00151]ｉｎ ｖｉｖｏにおける骨髄細胞特異的プログラム化を駆動する、ＣＤ８９（ＦｃＲアルファ鎖）の利用の成功についての概略を示す図である。ＣＤ８９へと接合されたｓｃＦｖを伴うＣＦＰをコードするｍＲＮＡを、ＬＮＰ内で製剤化し、マウスへと注射した。ＣＦＰを発現する、骨髄細胞およびリンパ球の百分率についてのグラフを示す。対照と比較したＣＤ１４＋骨髄細胞では、ＣＦＰの発現が観察されたが、リンパ球では、観察されなかった。

【図13A】[00152]ｓｃＦｖを伴う、２つの例示的抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物のための、異なるＶＨドメイン構成およびＶＬドメイン構成についての例示的概略を描示する図である。

【図13B】[00153]図１３Ａに示された、ｓｃＦｖを伴う、２つの例示的抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物のための、異なるＶＨドメイン構成およびＶＬドメイン構成の、表示のＣＦＰ構築物をコードするＲＮＡを電気穿孔されたＴＨＰ－１細胞内の発現に対する効果を示す、例示的フローサイトメトリーデータを描示する図である。

【図13C】[00154]表示のエフェクター：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比における、ｐＨｒｈｏｄｏ Ｒｅｄシグナルの増大により定量される、Ｘ軸に表示の構築物を発現するＴＨＰ－１細胞による、ＳＫＯＶ３細胞の貪食を示す、例示的グラフを描示する図である。

【図13D】[00155]表示の、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとの組合せによる、表示の抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物の発現を示す、例示的フローサイトメトリーデータを描示する図である。モックトランスフェクトセットおよび抗ＨＥＲ２ ＣＦＰ構築物トランスフェクトセットは、それぞれ、陰性対照および陽性対照として用いられる。

【図13E】[00156]こと表示の、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとの組合せによる、表示の、抗ＨＥＲ２ ＣＦＰ構築物（右）、および抗ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物（左）の発現を示す、例示的データを描示する図である。

【図14A】[00157]例示的抗ＧＰ７５（αＧＰ７５）ＣＦＰ構築物についての概略を描示する図である。例示的抗ＧＰ７５－ＦＬＡＧ－ｈＣＤ８－Ｆｃｇ－ＰＩ３Ｋ構築物（第一世代のＡＴＡＫ受容体）を、上方に示す。描示された、他の抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物の各々は、表示のドメインをコードする配列を含有し、Ｔ２Ａペプチドをコードするコード配列により、細胞内ドメインをコードする配列から隔てられた、ＧＦＰをコードする配列も描示される。左側の概略図は、内因性Ｆｃγ受容体タンパク質を伴う、抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物の、ＣＤ１６膜貫通ドメインまたはＣＤ８９膜貫通ドメインの多量体化、および抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物の、腫瘍細胞上のＧＰ７５抗原への結合を描示する。

【図14B】[00158]表示のＣＦＰ構築物をコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの注射の後の、ｉｎ ｖｉｖｏの多様な種類のマウス肺細胞内における、表示のＣＦＰ構築物の発現について解析するのに使用された、例示的なフローサイトメトリーによるゲーティング戦略を描示する図である。

【図14C】[00159]ＣＦＰ構築物をコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの単回または二回の注射の後の、ｉｎ ｖｉｖｏの表示の種類のマウス肺細胞内におけるイムノアッセイ、および図１４Ｂに描示されたゲーティング戦略に従うフローサイトメトリー解析により測定される、ＧＦＰ蛍光またはｆｌａｇ発現について陽性である細胞のパーセントにより測定される、ＣＦＰ発現構築物についてのグラフを描示する図である。発現は、肺の骨髄細胞内では観察されるが、リンパ球内またはＣＤ４５－細胞内では観察されない。

【図14D】[00160]表示のＣＦＰ構築物をコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの注射の後の、ｉｎ ｖｉｖｏの多様な種類のマウス肝細胞内における、表示のＣＦＰ構築物の発現について解析するのに使用された、例示的なフローサイトメトリーによるゲーティング戦略を描示する図である。

【図14E】[00161]ＣＦＰ構築物をコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの単回または二回の注射の後の、ｉｎ ｖｉｖｏの表示の種類のマウス肝細胞内におけるイムノアッセイ、および図１４Ｄに描示されたゲーティング戦略に従うフローサイトメトリー解析により測定される、ＧＦＰ蛍光またはｆｌａｇ発現について陽性である細胞のパーセントにより測定される、ＣＦＰ発現構築物についてのグラフを描示する図である。発現は、肝臓の骨髄細胞内で観察された。

【図14F】[00162]ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触された、マウス単球内における、表示の抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物の発現を示す、例示的フローサイトメトリーデータを描示する図である。

【図15A】[00163]抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を発現する骨髄細胞による、ｐＨｒｈｏｄｏＲｅｄ標識化Ｂ１６細胞の貪食を測定する、例示的ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを描示する図である。骨髄細胞を、ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触させた（例えば、骨髄細胞に、ＬＮＰを電気穿孔した）。描示されたフローサイトメトリーデータは、ＣＤ１１ｂ陽性単球による、ｐＨｒｈｏｄｏＲｅｄ標識化Ｂ１６細胞の貪食を示す。

【図15B】[00164]図１５Ａに記載されたアッセイを使用して、ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰが電気穿孔された後における、表示の抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を発現する単球を使用する、例示的データを描示する図である。貪食指数およびフローサイトメトリーデータについてのグラフを示す。ＭＹＬ１５７構築物＝ＧＰ７５－ＦＬＡＧ－マウスＣＤ１６ ＴＭＤ－マウスＣＤ１６ ＩＣＤ－Ｔ２Ａ－ＧＦＰ（また、ＧＰ７５－ＣＤ１６ａとしても描示される）である。ＭＹＬ１５８構築物＝ＧＰ７５－ＦＬＡＧ－マウスＣＤ８９ ＴＭＤ－マウスＣＤ８９ ＩＣＤ－Ｔ２Ａ－ＧＦＰ（また、ＧＰ７５－ＣＤ８９としても描示される）である。

【図15C】[00165]図１５Ａに記載されたアッセイを使用して、ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰが電気穿孔された後における、表示の抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を発現する単球を使用する、例示的データを描示する図である。構築物を、上パネルにグラフ表示する。フローサイトメトリー解析に基づき、貪食指数を描示するデータを、グラフに示す。ＣＤ８ヒンジを含む構築物は、わずかに良好な発現を示した。

【図15D】[00166]図１５Ａに記載されたアッセイを使用して、表示の抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰが電気穿孔された骨髄細胞によるサイトカイン産生についてのデータを描示する図である。Ｂ１６細胞単独、または表示の抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰと接触され、Ｂ１６細胞と共に共培養された単球からの、ＴＮＦアルファ、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、およびＣＣＬ７の産生についてのグラフを示す。

【図16】[00167]ｉｎ ｖｉｖｏ送達のための、多様なＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰの調製についての例示的概略を描示する図である。

【図17A】[00168]Ｂ１６同系マウスモデルにおける、腫瘍の増殖を確立し、モニタリングするための、例示的ＬＮＰ投与スケジュールを描示する図である。０日目に、腫瘍細胞を注入し、マウスにおける注入後１０日間にわたり、腫瘍の確立が生じることを可能とした。腫瘍の確立後、マウスに、ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰ製剤を、複数回にわたり注射し、腫瘍サイズをモニタリングする。

【図17B】[00169]多様なＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有する、ｊｅｔ ＰＥＩ媒介型トランスフェクション複合体の調製、および注射を介する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける、複合体の送達についての、例示的概略を描示する図である。

【図18A】[00170]ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰの尾静脈注射の後の、ｉｎ ｖｉｖｏの肺、肝臓、および脾臓の骨髄細胞内における、表示のＣＦＰ構築物の陽性発現を裏付ける、表示のＣＦＰ構築物の発現データを描示する図である。肺、肝臓、および脾臓の、非骨髄細胞型では、発現が観察されなかった。

【図18B】[00171]ＣＦＰ構築物をコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの単回または二回の注射の後の、ｉｎ ｖｉｖｏの表示の種類のマウス肺細胞およびマウス肝細胞内におけるイムノアッセイ、および図１４Ｂまたは図１４Ｄに描示されたゲーティング戦略に従うフローサイトメトリー解析により測定される、ＧＦＰ蛍光またはＦＬＡＧ発現について陽性である細胞のパーセントにより測定される、例示的ＣＦＰ構築物（上方にグラフ表示された）の発現についてのグラフを描示する図である。

【図18C】[00172]単球内および好中球内における、明確なＧＦＰ発現を示す、ＧＦＰおよびＦＬＡＧについてのオフセットヒストグラムを描示する図である。

【図18D】[00173]ＣＦＰ構築物をコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの注射の後の、ｉｎ ｖｉｖｏの表示の種類のマウス肺細胞およびマウス肝細胞内におけるイムノアッセイ、および図１４Ｂまたは図１４Ｄに描示されたゲーティング戦略に従うフローサイトメトリー解析により測定される、ＧＦＰ蛍光またはＦＬＡＧ発現について陽性である細胞のパーセントにより測定される、ＣＦＰ発現構築物についてのフローサイトメトリーデータを描示する図である。

【図19】[00174]抗ＧＰ７５構築物をコードするＲＮＡを含有するＬＮＰで処置されたＢ１６マウスにおける、腫瘍についての組織病理学的解析を描示する図である。４匹中２匹のマウスは、完全な抗腫瘍応答を示し、腫瘍は、検出されなかった。

【図20A】[00175]媒体または抗ＧＰ７５－ＡＴＡＫ ＣＦＰ構築物を発現する骨髄細胞で処置された、ナイーブマウスまたはマウス腫瘍モデルに由来する細胞による、サイトカイン産生についてのデータを描示する図である。マウスからの、ＣＣＬ２およびＩＬ－１アルファの産生についてのグラフを示す。処置マウスでは、腫瘍の進行を促進するＣＣＬ７が低減されるのに対し、腫瘍細胞死と関連するＩＬ－１アルファは、増大される。ＡＴＡＫ：抗原標的化および殺滅（ａｎｔｉｇｅｎ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｄ ｋｉｌｌｉｎｇ）の頭字語である。

【図20B】[00176]媒体または抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を発現する骨髄細胞で処置された、ナイーブマウスまたはマウス腫瘍モデルに由来する細胞による、サイトカイン産生についてのデータを描示する図である。マウスからの、ＩＬ２３、エオタキシン、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ａ、Ｇ－ＣＳＦ、およびＣＸＣＬ５の産生についてのグラフが示され、Ｔ細胞および骨髄細胞の活性化の増大を指し示す。

【図20C】[00177]刺激時に、ＣＡＲ発現単球が、Ｔ細胞を動員することを示す図である。ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイでは、ＣＤ５－ＡＴＡＫ細胞は、Ｔ細胞の走化性を誘導する。

【図21】[00178]媒体または抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を発現する骨髄細胞で処置された、ナイーブマウスまたはマウス腫瘍モデルに由来する細胞による、サイトカイン産生についてのデータを描示する図である。それぞれのマウスから単離された細胞からの、ＩＦＮガンマ、ＴＮＦアルファ、およびＩＬ－２の産生についてのフローサイトメトリーデータを示す。ＩＦＮガンマ、ＴＮＦアルファ、およびＩＬ－２産生をもたらすＣＤ４＋ Ｔ細胞の百分率についてのグラフもまた示される。

【図22】[00179]表示の時点（Ｘ軸の下方の矢印により示される）における、表示の抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰによる処置後の時間経過にわたる、腫瘍体積についてのグラフを描示する図である。処置後９日目に、各群から、５匹ずつのマウスを選び出した。フローサイトメトリー解析のために、臓器：腫瘍を有する臓器である、肺、肝臓、および脾臓を摘出した。ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ遺伝子発現解析のために、腫瘍試料に由来するＲＮＡ試料を保存した。Ｏｖａペプチドによる、Ｔ細胞再刺激アッセイもまた、実施した。

【図23】[00180]ＬＮＰ処置が、免疫細胞の腫瘍浸潤を変化させたことを示す図である。腫瘍微小環境内の、全てのＣＤ４５＋免疫細胞のうちの、表示の細胞型の百分率で処置されたマウスの、腫瘍微小環境内の、全てのＣＤ４５＋免疫細胞のうちの、表示の細胞型の百分率についてのグラフが描示される。処置は、腫瘍内の炎症性単球の明確な増大、ならびにマクロファージおよびＴ細胞のわずかな増大を結果としてもたらした。

【図24】[00181]ＬＮＰ処置が、ＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞の有意な増大、およびＴｒｅｇ細胞の低減を結果としてもたらしたことを示す図である。全てのＣＤ４５＋免疫細胞のうちの、表示の細胞型の百分率で処置されたマウスの、全てのＣＤ４５＋免疫細胞のうちの、表示の細胞型の百分率についてのグラフが描示される。処置は、免疫抑制性Ｔｒｅｇを低減しながら、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞の存在を増大させた。

【図25】[00182]ＬＮＰ処置が、ＣＤ８ Ｔ細胞による、免疫チェックポイント発現の低減を結果としてもたらしたことを示す図である。表示の抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰで処置されたマウスの腫瘍微小環境に由来する、ＣＤ８＋ Ｔ細胞による、表示の免疫チェックポイント分子の発現レベルについてのグラフが描示される。処置は、ＰＤ１発現レベルの低減、およびＬＡＧ３発現のわずかな増大を結果としてもたらした。

【図26】[00183]ＬＮＰ組成物中のＣＦＰをコードする核酸の、ｉｎ ｖｉｖｏ投与時における、腫瘍微小環境の、炎症性表現型への転換を示す図である。

【図27】[00184]ＬＮＰ処置が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞内における、Ｋｉ－６７およびパーフォリンの発現の低減を結果としてもたらしたことを示す図である。表示の抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物をコードするｍＲＮＡを含有するＬＮＰで処置されたマウスの腫瘍微小環境に由来する、ＣＤ８＋ Ｔ細胞による、表示の分子の発現レベルについてのグラフが描示される。

【図28】[00185]ＣＦＰをコードするｍＲＮＡが電気穿孔されたＴＨＰ－１細胞内のＣＦＰ発現構築物を示すフローサイトメトリーデータを示す図である。

【図29】[00186]マウス抗ＧＰ７５（Ｔｒｐ－１）ＣＦＰ ＡＴＡＫ細胞の作出を示す図解を示す図である。抗ＧＰ７５ ＣＦＰは、マウス単球内で、抗ＧＰ７５ ＣＦＰをコードするｍＲＮＡの電気穿孔を介して、効率的に発現され、抗ＧＰ７５ ＣＦＰを発現する細胞は、貪食活性を有する。

【図30】[00187]抗ＧＰ７５ ＡＴＡＫ単球が、同系Ｂ１６マウスモデルにおける腫瘍を抑制することを裏付けるデータを示す図である。データは、ＣＡＲ Ｔおよびチェックポイント阻害剤に対して不応性である、マウス腫瘍モデルにおける、抗ＧＰ７５ ＣＦＰを発現するマウス単球による処置後の時間経過にわたる、腫瘍体積についてのグラフを示す。マウスに、媒体と対比される、ＡＴＡＫ細胞２×１０^６個ずつ、８回の注入を投与した（毎日１回×４日間の注入、３日間の休薬、毎日１回×４日間の注入；±ＳＤ（マン－ホイットニー検定））。

【図31】[00188]マウス腫瘍モデルへの注入の後に、抗ＧＰ７５ ＣＦＰを発現するマウス単球が、腫瘍へと浸透し、ＣＦＰの発現を維持し、炎症細胞、樹状細胞、およびマクロファージなどのエフェクター細胞へと分化することを裏付けるグラフを示す図である。左グラフは、抗ＧＰ７５ ＣＦＰを発現するマウス単球のうちの、約４０％が、注入後５日間にわたり、ＣＦＰの発現を維持したことを示す。右上グラフは、ＡＴＡＫ細胞（ＣＦＰを発現する細胞）が、腫瘍および脾臓に浸透し、樹状細胞となることを示す。右下グラフは、ＡＴＡＫ細胞が、腫瘍および脾臓に浸透し、マクロファージ細胞となることを示す。

【図32】[00189]媒体または抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を発現する骨髄細胞で処置された、ナイーブマウスまたはマウス腫瘍モデルに由来する細胞による、サイトカイン産生についてのデータを描示する図である。表示のサイトカイン／ケモカインの産生についてのグラフが示される。処置に対する応答は、抗腫瘍血清中のサイトカインプロファイルと相関した。解析は、研究終了時における、処置群内のレスポンダー動物を含む。

【図33】[00190]抗ＧＰ７５ ＣＦＰを発現するマウス単球による、腫瘍抗原の交差提示を示すデータを描示する図である。抗ＧＰ７５ ＣＦＰを発現するマウス単球が、この場合には、ＯＶＡタンパク質に由来する、サロゲートの腫瘍ネオ抗原を貪食し、プロセシングし、ＯＶＡに由来するクラスＩ制限ペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）に対してコグネイトであるＴＣＲを保有するＴ細胞へと提示することが可能であり、Ｔ細胞の活性化が、ＩＬ２（左）またはインターフェロン（右）の産出により決定されるのに対し；同じマウスに由来し、ＡＴＡＫ受容体を発現しない単球は、これが可能でない。これは、抗ＧＰ７５ ＣＦＰを発現するマウス単球が、抗原をプロセシングし、ＣＤ８ Ｔ細胞などの獲得免疫細胞へと交差提示しうることを実証する。ＡＴＡＫ－ＧＰ７５（別称：ＴＲＰ－１ ＡＴＡＫ）構築物である。

【図34】[00191]ＣＦＰを発現するヒト単球が、自然免疫を利用し、抗腫瘍獲得免疫応答を刺激することを示すデータを描示する図である。データは、ＣＦＰを発現するヒト単球が、腫瘍に浸透し、腫瘍内に蓄積され、腫瘍を認識することを裏付ける（左上）。データは、ＣＦＰを発現するヒト単球が、骨髄細胞の活性化、サイトカインの産生、ケモカインの産生、および炎症性極性化を結果としてもたらすことを裏付ける（右上グラフ）。データは、ＣＦＰを発現するヒト単球が、貪食（左下）、サイトカイン、および死受容体（ＣＤ９５Ｌ）により、腫瘍細胞を直接死滅させることを裏付ける。データは、ＣＦＰを発現するヒト単球が、抗原提示、エピトープの拡散、およびＴ細胞係合（右下グラフ）を介して、長期にわたる腫瘍のコントロールを裏付け、これにより、免疫レパートリーの完全な活性化を確保することを裏付ける。

【図35】[00192]抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現するヒト単球が、ｉｎ ｖｉｔｒｏの、抑制性腫瘍微小環境（ＴＭＥ）状態において、強力な活性を示すことを示すデータを描示する図である。抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現するヒト単球を、ＩＬ１０、ＩＬ４、およびＴＧＦ－ｂを含有する培地中、コグネイト抗原の非存在下または存在下で、一晩にわたりインキュベートした。細胞の貪食活性を、上方左端のグラフに示す。表示のサイトカイン／ケモカインは、培養物上清中で測定した。

【図36】[00193]抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現するヒト単球が、獲得免疫系を有さないにも拘わらず、ＣＤ５＋ ＣＴＣＬ異種移植モデルにおいて、増殖を阻害し、生存を延長することを示すデータを描示する図である。

【図37】[00194]抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を、ＣＤ８９（ＦｃＲアルファ）鎖と共にコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの注射が、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、骨髄細胞を選択的にプログラム化し、結果として、強力な抗腫瘍活性をもたらすことを示すデータを描示する図である。確立されたコールド腫瘍モデルにおける、腫瘍量（体積：ｍｍ^３単位の尺度）の、７５％の低減が観察された。

【図38】[00195]抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を、ＣＤ８９（ＦｃＲアルファ）鎖と共にコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの注射が、ＴＭＥ内の炎症性単球による、ＣＦＰの発現を結果としてもたらすことを示すデータを描示する図である。腫瘍内骨髄細胞のうちの、＞１５％は、抗ＧＰ７５ ＣＦＰを発現することが観察された。

【図39】[00196]抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を、ＣＤ８９（ＦｃＲアルファ）鎖と共にコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの注射が、炎症性細胞の蓄積により特徴付けられる、ＴＭＥの修飾を結果としてもたらすことを示すデータを描示する図である。処置は、処置動物の死後に測定される通り、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、腫瘍内の炎症性単球（左）および樹状細胞（右）を誘導する。処置は、自然免疫と、獲得免疫との橋渡しと関連する免疫細胞を増大させた。

【図40】[00197]抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を、ＣＤ８９（ＦｃＲアルファ）鎖と共にコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの注射が、ＣＴＬの増大、およびＴｒｅｇの減少により特徴付けられる、ＴＭＥの修飾を結果としてもたらすことを示すデータを描示する図である。処置は、抗腫瘍ＣＤ８ Ｔ細胞を促進し、腫瘍関連Ｔｒｅｇを低減した。

【図41】[00198]抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を、ＣＤ８９（ＦｃＲアルファ）鎖と共にコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの注射の前、およびこれらの２回にわたる注射の２４時間後、およびこれらの４回にわたる注射の７２時間後における、表示の炎症促進性血清サイトカインの産生についてのデータを描示する図である。

【図42】[00199]抗ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物を、ＣＤ８９（ＦｃＲアルファ）鎖と共にコードするＲＮＡを含有するＬＮＰの、マウスへの注射の前、およびこれらの２回にわたる注射の２４時間後、およびこれらの４回にわたる注射の７２時間後における、表示の血清ケモカインの産生についてのデータを描示する図である。

【図43】[00200]実験的デザインおよび腫瘍の増殖を描示する図である。０日目に、腫瘍を接種し、７５ｍｍ^３へと増殖させた。ＬＮＰ－ｍＲＮＡは、２ｍｇ／ｋｇで投与した。

【図44】[00201]腫瘍内のＴ細胞のサブセットおよび表現型についての探索を描示する図である。

【図45】[00202]ｍＲＮＡ－ＬＮＰ処置が、腫瘍内における、Ｔ細胞サブセット頻度の変化を誘導するデータを描示する図である。処置は、腫瘍内のＴｒｅｇ％の低減を引き起こした。

【図46A】[00203]ＧＰ７５－ＣＤ８９－ＬＮＰを注射されたマウスにおける、ＣＤ８＋ Ｔ細胞％による、ＣＤ８疲弊マーカー（ＰＤ１）およびＣＤ８成熟／エフェクターＴ細胞マーカー（ＣＤ４４）についてのフローサイトメトリー解析を示すグラフを描示する図である。

【図46B】[00204]Ｔ細胞内のＰＤ１およびＣＤ４４の発現についてのフローサイトメトリーデータを描示する図である。

【図47A】[00205]ＧＰ７５－ＣＤ８９－ＬＮＰを注射されたマウスにおける、ＣＤ８＋ Ｔ細胞％による、ＣＤ８疲弊マーカー（ＴＩＭ３およびＴＯＸ）についてのフローサイトメトリー解析を示すグラフを描示する図である。

【図47B】[00206]Ｔ細胞内のＴＩＭ３およびＴＯＸの発現についてのフローサイトメトリーデータを描示する図である。

【図48A】[00207]ＧＰ７５－ＣＤ８９－ＬＮＰを注射されたマウスにおける、ＣＤ８＋ Ｔ細胞％による、細胞増殖マーカーであるＫｉ６７、およびＴ細胞の活性化マーカーであるグランザイムＢについてのフローサイトメトリー解析を示すグラフを描示する図である。

【図48B】[00208]ＧＰ７５－ＣＤ８９－ＬＮＰを注射されたマウスに由来するＣＤ８Ｔ細胞内のＫｉ６７およびグランザイムＢについてのフローサイトメトリーデータを描示する図である。

【図49】[00209]細胞系統についての探索についてのデータを示す図であり；マーカーおよびフルオロフォアについてのパネルを、左図に指し示す。

【図50】[00210]ｍＲＮＡ／ＬＮＰ処置が、免疫細胞集団の有意なシフトを誘導しなかったことを指し示すデータを描示する図である。

【図51】[00211]受容体の発現についてのデータを示す図である。

【図52】[00212]（すなわち、受容体）内の、ＦＬＡＧ（すなわち、受容体）の発現を示すドットプロットを示す図である。

【図53】[00213]Ｌｙ６Ｃ^ｈｉ炎症性単球内の、ＦＬＡＧ発現を示すドットプロットを示す図である。

【図54】[00214]Ｌｙ６Ｃ^ｌｏ常在骨髄細胞内のＦＬＡＧ発現を示すドットプロットを示す図である。

【図55】[00215]マウスにおける処置が、Ｌｙ６Ｃ^ｈｉ炎症性単球内およびＣＣＲ２^ｈｉ炎症性単球内の、ＣＤ４０レベルおよびＣＤ２０６レベルを、有意に上昇させたことを指し示すデータを描示する図である。

【図56】[00216]Ｌｙ６Ｃ^ｌｏ常在骨髄細胞内およびＣＣＲ２^ｌｏ常在骨髄細胞内のＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＣＤ８６、およびＣＤ２０６のレベルを描示する図である。データは、マウスにおける処置が、ＣＤ４０レベルおよびＣＤ２０６レベルを、有意に上昇させたことを指し示す。

【図57】[00217]ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＣＤ８６、およびＣＤ２０６のレベルを示す図であり；結果は、処置が、腫瘍内常在マクロファージ内のＰＤＬ１レベルを、わずかに低減したことを指し示す。

【図58】[00218]処置は、ＭＨＣＩＩ、ＣＤ８６、およびＣＤ４０を含むＤＣ活性化マーカーを、有意に増大させたが、また、脾臓の、表現型をＣＤ１０３＋ ＣＤ１１ｂ－とする樹状細胞内のＰＤ－Ｌ１レベルも増大させたことを示す図である。

【図59】[00219]処置は、ＭＨＣＩＩ、ＣＤ８６、およびＣＤ４０を含むＤＣ活性化マーカーを、有意に増大させたが、また、脾臓の、表現型をＣＤ１０３－ ＣＤ１１ｂ＋とする樹状細胞内のＰＤ－Ｌ１レベルも増大させたことを示す図である。

【図60】[00220]骨髄細胞内で、骨髄細胞が、がん細胞と接触されると、特異的に活性化される、プロテアーゼ切断可能、誘導性の、遺伝子転写活性化タンパク質を含む、キメラ受容体タンパク質をコードする、第１のベクターと；第１のベクターによりコードされる、遺伝子転写活性化因子により誘導される標的遺伝子を発現する、第２のベクターとを発現させるための、例示的発現ベクターデザインについてのグラフ表示を示す図である。

【図61A】[00221]図６０のベクターの発現により作出される、例示的キメラタンパク質についてのグラフ表示を示す図である。図６１Ａはまた、ＰＴＢが、キメラ受容体の細胞内ドメインのＩＴＡＭモチーフのホスホチロシン残基に結合しない場合に、ＰＴＢへと融合されたデグロン複合体により惹起されて、ＰＴＢ－ＨＩＦ－デグロンへと融合されたプロテアーゼが、たやすく分解されることも具体的に裏付ける。

【図61B】[00222]図６１Ａのキメラタンパク質について予測される作用方式が、標的遺伝子の発現をもたらすことを例示する図である。ＨＩＦ－デグロンプロテアーゼの、受容体のリン酸化ＩＴＡＭモチーフへの結合時に、プロテアーゼは活性化され、転写活性化因子である、ＧＡＬ－ＶＰ６４を切断する。

【図62A】[00223]誘導的細胞傷害性タンパク質をコードする核酸構築物についての、グラフによる例示を示す図である。構築物は、骨髄（例えば、マクロファージ）細胞による、発現および分泌のためにデザインした。構築物は、ヒト好酸球主要塩基性タンパク質の、酸性ドメインおよび細胞傷害性ドメインを含む。２つのドメインは、ＭＭＰ認識ペプチドをコードする配列と共に散在されており；ＭＭＰ認識ペプチドは、腫瘍微小環境内に豊富に存在するＭＭＰにより切断可能である。ＭＭＰの非存在下において、分泌された細胞傷害性タンパク質は、酸性ドメインとの会合により、不活性形態で維持され、ＭＭＰ認識ペプチドにより、一緒に保持される。

【図62B】[00224]腫瘍微小環境内において、ＭＭＰによる、ＭＭＰ認識配列の切断時に、細胞傷害性ドメインタンパク質による、腫瘍細胞の溶解をもたらす、細胞傷害性ドメインタンパク質の活性化についてのグラフ表示を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0131】

[00225]全ての用語は、それらが、当業者により理解される通りに理解されることが意図される。そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。

【0132】

[00226]本明細書で使用される節の見出しは、構成的目的のためだけのものであり、記載される対象物を限定するものとしては解釈されないものとする。

【0133】

[00227]本開示の多様な特色は、単一の実施形態の文脈で記載されうるが、特色はまた、個別に提供される場合もあり、任意の適切な組合せで提供される場合もある。逆に、本明細書では、明確さのために、本開示は、個別の実施形態の文脈で記載されうるが、本開示はまた、単一の実施形態でも、実施されうる。

【0134】

[00228]本明細書における、「一部の実施形態」、「ある実施形態」、「一実施形態」、または「他の実施形態」への言及は、実施形態との関連で記載される、特色、構造、または特徴が、本開示の、少なくとも一部の実施形態には含まれるが、全ての実施形態には、必ずしも含まれないことを意味する。

【0135】

[00229]本明細書および特許請求の範囲で使用される、「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含まれた（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」など、「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の任意の形態）、「～を有すること」（ならびに「～を有する（ｈａｖｅ）」および「～を有する（ｈａｓ）」など、「～を有すること」の任意の形態）、「～を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」など、「～を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の任意の形態）、または「～を含有すること」（ならびに「～を含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」および「～を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」など、「～を含有すること」の任意の形態）という用語は、包含的またはオープンエンドであり、さらなる、列挙されていない要素または方法ステップを除外しない。本明細書で論じられる任意の実施形態は、本開示の任意の方法または組成物に関して実施される場合があり、この逆も成り立つことが想定される。さらに、本開示の組成物は、本開示の方法を達成するのに使用されうる。本発明の方法を達成することができる。

【0136】

[00230]パラメータ、量、時間的持続など、測定可能な値に言及する場合に、本明細書で使用される、「約」または「およそ」という用語は、そのような変動が、本開示において実施するのに適切である限りにおいて、指定された値の±３０％またはこれ未満、±２０％またはこれ未満、±１０％もしくはこれ未満、±５％もしくはこれ未満、または±１％もしくはこれ未満の変動、および指定された値からこれらの変動を包摂することが意図される。「約」または「およそ」という修飾語が言及する値はまた、具体的に開示される場合もあることが理解されるものとする。

【0137】

[00231]「薬剤」とは、任意の細胞、低分子化合物、抗体、もしくこれらの断片、核酸分子、またはポリペプチドを指す場合がある。

【0138】

[00232]「変更」または「変化」とは、増大または減少を指す場合がある。例えば、変更は、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、または４０％、５０％、６０％、なおまたは７０％、７５％、８０％、９０％、もしくは１００％までの増大または減少でありうる。例えば、変更は、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、または４０倍、５０倍、６０倍、なおまたは７０倍、７５倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍までの増大または減少でありうる。

【0139】

[00233]本明細書で使用される、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、プロフェッショナル抗原提示細胞（例えば、Ｂリンパ球、マクロファージ、単球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞）のほか、他の抗原提示細胞（例えば、ケラチノサイト、内皮細胞、星状膠細胞、線維芽細胞、希突起膠細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、神経膠細胞（脳）、膵ベータ細胞、および血管内皮細胞）を含む。ＡＰＣは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子を発現することが可能であり、その表面上に、Ｔ細胞による認識が可能であり、Ｔ細胞の活性化および免疫応答を誘発しうる、ＭＨＣと複合体化された抗原を提示しうる。プロフェッショナル抗原提示細胞、とりわけ、樹状細胞は、ナイーブＴ細胞の刺激において、鍵となる役割を果たす。線維芽細胞などの非プロフェッショナル抗原提示細胞もまた、この過程に寄与しうる。ＡＰＣはまた、外因性抗原をプロセシングし、プロセシングされた抗原を、クラスＩＭＨＣ分子上に提示することにより、ペプチド抗原も交差提示しうる。クラスＩ ＭＨＣ分子との会合時に認識されるタンパク質をもたらす抗原は、一般に、細胞内で産生されるタンパク質であり、これらの抗原は、プロセシングされ、クラスＩＭＨＣ分子と会合する。

【0140】

[00234]「生体試料」とは、生物に由来する、任意の組織、細胞、体液、または他の素材を指す場合がある。

【0141】

[00235]「エピトープ」という用語は、抗体もしくはその結合性断片、Ｔ細胞受容体、および／または抗体様分子に結合することが可能である、配列または構造またはアミノ酸残基など、任意のタンパク質決定基を指す場合がある。エピトープ決定基は、典型的に、アミノ酸または糖の側鎖などの分子の、化学的に活性の表面基からなり、一般に、特異的三次元構造特徴のほか、特異的電荷特徴を有する。「Ｔ細胞エピトープ」とは、Ｔ細胞受容体により認識される、ペプチドまたはペプチド－ＭＨＣ複合体を指す場合がある。

【0142】

[00236]操作された骨髄細胞などの操作された細胞は、一過性に発現された場合であってもなお、細胞内で、少なくとも１つの外因性核酸配列を有する細胞を指す場合がある。外因性核酸の発現は、他の箇所に記載される、多様な方法により実施される場合があり、当技術分野で公知の方法を包摂する。本開示は、操作された細胞、例えば、操作された貪食細胞などの操作された骨髄細胞の調製および使用に関する。本開示は、とりわけ、例えば、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする、外因性核酸を含む操作された細胞に関する。

【0143】

[00237]「免疫応答」という用語は、Ｔ細胞媒介性免疫応答、ＮＫ細胞媒介性免疫応答、および／またはＢ細胞媒介性免疫応答を含むがこれらに限定されない。これらの応答は、Ｔ細胞共刺激およびＮＫ細胞共刺激のモジュレーションにより影響される場合がある。例示的な免疫応答は、Ｔ細胞応答、例えば、サイトカイン産生および細胞媒介性細胞傷害作用を含む。加えて、免疫応答は、ＮＫ細胞の活性化、Ｂ細胞の活性化、および／またはＴ細胞の活性化の影響を間接的に受けた免疫応答、例えば、抗体産生（体液性応答）、およびサイトカイン応答性細胞、例えば、マクロファージの活性化を含む。免疫応答は、獲得免疫応答を含む。獲得免疫系は、侵入生物の抗原など、外来分子構造に対して反応しうる。自然免疫系と異なり、獲得免疫系は、病原体に対して、高度に特異的である。獲得免疫はまた、長期持続性の保護ももたらしうる。獲得免疫反応は、体液性免疫反応および細胞媒介性免疫反応を含む。体液性免疫反応では、Ｂ細胞により、体液へと分泌された抗体は、病原体由来抗原に結合し、様々な機構、例えば、補体媒介性溶解を介して、病原体の消失をもたらす。細胞媒介性免疫反応では、他の細胞を破壊することが可能なＴ細胞が活性化される。例えば、疾患と関連するタンパク質が、細胞内に存在する場合、これらは、細胞内で、タンパク質分解により、ペプチドへと断片化される。次いで、特異的細胞タンパク質は、このようにして形成された抗原またはペプチドへと接合し、これらを、細胞の表面へと移送し、ここで、抗原またはペプチドは、Ｔ細胞などの分子的防御機構により提示される。細胞傷害性Ｔ細胞は、これらの抗原を認識し、これらの抗原を保有する細胞を死滅させうる。

【0144】

[00238]「リガンド」とは、受容体など、別の分子に結合するか、またはこれらと複合体を形成することが可能である分子を指す場合がある。リガンドは、タンパク質、糖タンパク質、炭水化物、リポタンパク質、ホルモン、脂肪酸、リン脂質、または受容体に結合する、任意の構成要素を含みうるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、受容体は、特異的リガンドを有する。一部の実施形態では、受容体は、リガンドに広域的に結合する場合があり、この場合、受容体は、構造的構成、電荷分布、または他の任意の物理化学的特徴において、少なくとも１つの類似性を共有する、いくつかのリガンドに結合しうる。リガンドは、生体分子でありうる。リガンドは、非生体材料でありうる。例えば、リガンドは、スカベンジャー受容体ＭＡＲＣＯである、負帯電粒子に対するリガンドでありうる。例えば、リガンドは、スカベンジャー受容体ＳＲＡ１である、ＴｉＯ_２に対するリガンドでありうる。

【0145】

[00239]「主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）」、「ＭＨＣ分子」、または「ＭＨＣタンパク質」という用語は、抗原性ペプチドに結合し、抗原性ペプチドを、Ｔリンパ球へと提示することが可能なタンパク質を指す。このような抗原性ペプチドは、Ｔ細胞エピトープを表酢場合がある。ヒトＭＨＣはまた、ＨＬＡ複合体とも呼ばれる場合がある。したがって、「ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）」、「ＨＬＡ分子」、または「ＨＬＡタンパク質」という用語は、「主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）」、「ＭＨＣ分子」、および「ＭＨＣタンパク質」という用語と、互換的に使用される。ＨＬＡタンパク質は、ＨＬＡクラスＩと分類される場合もあり、ＨＬＡクラスＩＩと分類される場合もある。２つのＨＬＡクラスのタンパク質の構造な、極めて類似するが；これらは、全く異なる機能を有する。クラスＩのＨＬＡタンパク質は、大半の腫瘍細胞を含む、体内のほぼ全ての細胞の表面上に存在する。クラスＩのＨＬＡタンパク質は、通例、細胞内に存在する、内因性タンパク質または病原体由来する抗原をロードされ、次いで、ナイーブまたは細胞傷害性Ｔ－リンパ球（ＣＴＬ）へと提示される。ＨＬＡクラスＩＩタンパク質は、樹状細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージを含むがこれらに限定されない、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に存在する。ＨＬＡクラスＩＩタンパク質は、主に、外部、例えば、細胞の外部の抗原供給源からプロセシングされたペプチドを、ヘルパーＴ細胞へと提示する。

【0146】

[00240]ＨＬＡクラスＩＩ系では、マクロファージおよび未成熟樹状細胞などの貪食細胞は、貪食により、実体を、その酸性酵素が、取り込まれたタンパク質を、多くの異なるペプチドへと切断するリソソーム融合するファゴソーム（ただし、Ｂ細胞は、エンドソームへの、より一般的なエンドサイトーシスを呈する）へと取り込みうる。オートファジーは、ＨＬＡクラスＩＩペプチドの、別の供給源である。最も研究が進んだ、サブクラスＩＩのＨＬＡ遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＬＡ－ＤＱＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＡ、およびＨＬＡ－ＤＲＢ１である。

【0147】

[00241]ＨＬＡクラスＩＩ分子による、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞への、ペプチドの提示は、外来抗原に対する免疫応答をもたらす。活性化されると、ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、Ｂ細胞分化および抗体産生のほか、ＣＤ８＋ Ｔ細胞（ＣＴＬ）応答を促進しうる。ＣＤ４＋ Ｔ細胞はまた、他の免疫細胞の分化を活性化し、これらを誘導する、サイトカインおよびケモカインも分泌しうる。ＨＬＡクラスＩＩ分子は、典型的に、クラスＩペプチド結合溝より開放的なペプチド結合溝を形成するように相互作用する、α鎖と、β鎖とによるヘテロニ量体である。

【0148】

[00242]ＨＬＡ対立遺伝子は、典型的に、共優性的な形で発現される。例えば、各人が、３つのクラスＩ遺伝子（ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、およびＨＬＡ－Ｃ）の各々の、２つずつの対立遺伝子を保有するので、６つの異なる種類のクラスＩＩ ＨＬＡを発現しうる。クラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子座では、各人は、ＨＬＡ－ＤＰ遺伝子（α鎖およびβ鎖をコードする、ＤＰＡ１およびＤＰＢ１）、ＨＬＡ－ＤＱ（αおよびβ鎖についての、ＤＱＡ１およびＤＱＢ１）、１つの遺伝子である、ＨＬＡ－ＤＲα（ＤＲＡ１）、および１つまたは複数の遺伝子である、ＨＬＡ－ＤＲβ（ＤＲＢ１およびＤＲＢ３、ＤＲＢ４、またはＤＲＢ５）の対を継承する。ＨＬＡ－ＤＲＢ１は、例えば、約４００種を超える、公知の対立遺伝子を有する。これは、１つのヘテロ接合性個体が、６つまたは８つの機能的クラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子：各親から、３つまたはこれを超える対立遺伝子を継承しうることを意味する。したがって、ＨＬＡ遺伝子は、高度に多型的であり；多くの異なる対立遺伝子が、集団内の異なる個体に存在する。ＨＬＡタンパク質をコードする遺伝子は、多くの可能なバリエーションを有し、各人の免疫系が、広範にわたる外来侵入物に反応することを可能とする。一部のＨＬＡ遺伝子は、それらの各々が、特定の番号を与えられた、数百に及ぶバージョン（対立遺伝子）を同定されている。一部の実施形態では、クラスＩ ＨＬＡ対立遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ－Ｂ＊１４：０２、ＨＬＡ－Ａ＊２３：０１、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０１（非古典的）である。一部の実施形態では、クラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＲＢ＊０１：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ＊０１：０２、ＨＬＡ－ＤＲＢ＊１１：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ＊１５：０１、およびＨＬＡ－ＤＲＢ＊０７：０１である。

【0149】

[00243]「骨髄細胞」とは、広く、造血細胞系のうちの、骨髄系統の細胞を指し、例えば、リンパ球系統を除外する場合がある。骨髄細胞は、例えば、顆粒球系統および単球系統の細胞を含む。骨髄細胞は、骨髄中の造血幹細胞に由来する、共通の前駆細胞から分化される。骨髄細胞系統への拘束は、別個の転写因子の活性化により統御される場合があり、したがって、骨髄細胞は、細胞外刺激および細胞内刺激に基づき、末端の細胞型へと、さらに分化する能力として記載されうるレベルの可塑性を有する細胞として特徴付けられうる。骨髄細胞は、それらの表面上における、多様なケモカイン受容体を介して、局所組織へと、急速に動員されうる。骨髄細胞は、多様なサイトカインおよびケモカインに対して応答性である。

【0150】

[00244]骨髄細胞は、例えば、骨髄内で、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、ＣＣＬ２、ＶＥＧＦ、およびＳ１００Ａ８／９など、１つまたは複数のサイトカインおよびケモカインの影響下において、造血幹細胞由来する細胞でありうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、前駆細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞は、共通の骨髄前駆細胞、または顆粒球前駆細胞、骨髄芽細胞、または単球－樹状細胞前駆細胞、またはこれらの組合せの特徴を有する細胞でありうる。骨髄は、顆粒球もしくは単球、またはこれらの前駆細胞を含みうる。骨髄は、未成熟顆粒球、未成熟単球、未成熟マクロファージ、未成熟好中球、および未成熟樹状細胞を含みうる。骨髄は、単球または前単球性細胞または単球前駆体を含みうる。場合によって、本明細書で使用される骨髄細胞は、Ｍ０表現型、Ｍ１表現型、またはＭ２表現型を有する単球を指す場合がある。骨髄は、樹状細胞（ＤＣ）、成熟ＤＣ、単球由来ＤＣ、形質細胞様ＤＣ、前樹状細胞、またはＤＣ前駆体を含みうる。骨髄は、成熟好中球、好中球前駆体、または多形核球（ＰＭＮ）でありうる、好中球を含みうる。骨髄は、マクロファージ、単球由来マクロファージ、組織マクロファージ、Ｍ０表現型、Ｍ１表現型、またはＭ２表現型のマクロファージを含みうる。骨髄は、腫瘍浸潤単球（ＴＩＭ）を含みうる。骨髄は、腫瘍関連単球（ＴＡＭ）を含みうる。骨髄は、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を含みうる。骨髄は、組織内常在マクロファージを含みうる。骨髄は、腫瘍関連ＤＣ（ＴＡＤＣ）を含みうる。したがって、骨髄細胞は、１つまたは複数の細胞表面マーカー、例えば、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ３８、ＣＣＲ５、ＣＤ６６、Ｌｏｘ－１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ８３、ＣＤ１４１、ＣＤ２０９、ＣＤ２０５、Ｐセレクチン、インテグリン、ＩＣＡＭＳ、ＶＣＡＭＳ、ＭＨＣ－ＩＩ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＳＩＧＬＥＣファミリータンパク質、およびＣＬＥＣファミリータンパク質を発現しうる。場合によって、骨髄細胞は、細胞表面マーカー、例えば、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ６６、Ｌｏｘ－１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ８３、ＣＤ１４１、ＣＤ２０９、ＭＨＣ－ＩＩ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、またはこれらの組合せのうちの１つまたは複数の、高度の発現または低度の発現により特徴付けられうる。

【0151】

[00245]「貪食」は、「飲作用」と互換的に使用され、細胞が、がん細胞または感染細胞などの粒子を飲み込む過程を指す場合がある。この過程は、粒子を含有する、内部コンパートメント（ファゴソーム）をもたらしうる。この過程は、がん細胞または感染細胞などの粒子を取り込み、かつ／またはこれらを、体内から除去するのに使用されうる。貪食受容体は、貪食過程に関与しうる。貪食過程は、免疫応答および抗原提示と緊密に連関しうる。外因性抗原のプロセシングは、一部の種類のエンドサイトーシスイベントによる、それらの、プロフェッショナル抗原提示細胞への取込みを後続させる。貪食はまた、抗原提示も容易としうる。例えば、貪食された細胞または病原体に由来する抗原であって、がん抗原を含む抗原は、プロセシングされ、ＡＰＣの細胞表面上に提示されうる。

【0152】

[00246]「ポリペプチド」とは、糖タンパク質、リポタンパク質、細胞タンパク質、または膜タンパク質など、ペプチド結合を介して、一緒に連結されたアミノ酸を含有する分子を指す場合がある。ポリペプチドは、タンパク質の、１つまたは複数のサブユニットを含みうる。ポリペプチドは、組換え核酸によりコードされうる。一部の実施形態では、ポリペプチドは、単一のアミノ酸鎖内に、スペーサー、リンカーまたはペプチド切断配列により隔てられうる、１つを超えるペプチド配列を含みうる。ポリペプチドは、融合ポリペプチドでありうる。ポリペプチドは、１つまたは複数のドメイン、モジュール、または部分を含みうる。

【0153】

[00247]「受容体」とは、細胞外シグナルを、細胞へと伝達するポリペプチドなど、シグナルを伝達するポリペプチドから構成される化学構造を指す場合がある。受容体は、細胞内の情報、細胞または生物の形成を伝えるのに用いられる。受容体は、少なくとも１つの受容体ユニットを含み、２つまたはこれを超える受容体ユニットを含有する場合があり、この場合、各受容体ユニットは、タンパク質分子、例えば、糖タンパク質分子を含む。受容体は、リガンドに結合し、リガンドと複合体を形成しうる構造を含有しうる。シグナル伝達情報は、細胞の表面上のリガンドへの結合に続く、受容体のコンフォメーション変化により伝えられる場合がある。

【0154】

[00248]「抗体」という用語は、免疫グロブリンとして一般に公知である、タンパク質のクラスであって、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、およびＩｇＹを含むがこれらに限定されないタンパク質のクラスを指す。「抗体」という用語は、全長抗体、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、およびこれらの抗原結合性断片を含むがこれらに限定されない。抗原結合性抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ（Ｖ_ＨおよびＣ_Ｈ１からなる）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド連結された可変断片（ｄｓＦｖ）、およびＶ_Ｌドメインおよび／またはＶ_Ｈドメインを含む断片を含むがこれらに限定されない。抗体は、任意の動物に由来しうる。単鎖抗体を含む、抗原結合性抗体断片は、単独における可変領域（複数可）を含む場合もあり、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインのうちの１つまたは複数と組み合わせられた可変領域（複数可）を含む場合もある。また、可変領域（複数可）と、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインとの、任意の組合せも含まれる。抗体は、例えば、ＨＬＡ関連ポリペプチドまたはＨＬＡ－ペプチド複合体に特異的に結合する、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ならびにヒトモノクローナル抗体およびヒトポリクローナル抗体でありうる。本明細書で使用される、「結合剤」とは、標的に結合しうる結合性ドメインを含むポリペプチドを表し、この場合、結合剤に対する標的は、タンパク質、例えば、がん抗原、糖タンパク質などでありうる。結合剤は、ＣＦＰ、例えば、ＣＡＲを表すのに使用されることが多く、それが結合する標的により命名される（例えば、ＣＤ５抗原に対する結合性ドメインを含むＣＤ５結合剤）。場合によって、同じ結合剤が、代替的に、または互換的に称される（抗ＣＤ５結合剤または抗ＴＲＯＰ２結合剤）。一般に使用される、結合剤という用語は、結合性ドメインを有する、任意の分子を指す。場合によって、記載される文脈により、結合剤は、ＢｉＭＥの場合もあり、ＴＲｉＭＥの場合もある。

【0155】

[00249]「組換え核酸」という用語は、組換え手段により調製されるか、発現されるか、創出されるか、または分離された核酸を指す。組換え核酸は、自然発生ではないヌクレオチド配列を含有しうる。組換え核酸は、実験室で合成されうる。組換え核酸は、組換えＤＮＡ技術、例えば、酵素制限消化、ライゲーション、およびＤＮＡクローニングなど、ＤＮＡの酵素修飾を使用することにより調製されうる。組換え核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、これらの類似体、またはこれらの組合せでありうる。組換えＤＮＡは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を作出することなどのために、ｅｘ ｖｉｖｏで転写される場合もあり、ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写される場合もある。組換えｍＲＮＡは、分離され、精製され、細胞にトランスフェクトするのに使用されうる。組換え核酸は、タンパク質またはポリペプチドをコードしうる。

【0156】

[00250]核酸を、細胞へと導入するか、または組み込む過程は、形質転換、トランスフェクション、または形質導入を介しうる。形質転換とは、細菌細胞による、外来核酸の取込みの過程である。この工程は、プラスミドＤＮＡの繁殖、タンパク質の作製、および他の適用に適合される。形質転換は、細胞外ＤＮＡを、環境から取り込む、コンピテントの細菌細胞へと、組換えプラスミドＤＮＡを導入する。一部の細菌種は、ある特定の環境条件下で、天然でコンピテントであるが、コンピテンスは、実験室状況において、人工的に誘導される。トランスフェクションとは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または抗体などの低分子の、真核細胞への導入である。トランスフェクションはまた、バクテリオファージの、細菌細胞への導入も指す場合がある。「形質導入」が、多くの場合、組換えウイルスベクター粒子の、標的細胞への導入について記載するのに使用されるのに対し、「感染」とは、ヒトまたは動物への、野生型ウイルスの天然の感染を指す。

【0157】

[00251]「ベクター」という用語は、宿主細胞内の自律的複製が可能であり、核酸分子のクローニングを可能とする核酸分子を指す場合がある。当業者公知の通り、ベクターは、プラスミド、コスミド、ファージミド、ウイルスベクター、ファージベクター、酵母ベクター、哺乳動物ベクターなどを含むがこれらに限定されない。例えば、外因性遺伝子を形質転換するためのベクターは、プラスミドでありうる。ある特定の実施形態では、ベクターは、複製起点、ならびに宿主細胞内の核酸配列の複製および／または維持に必要な他のエレメントを含有する核酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるベクターまたはプラスミドは、発現ベクターである。発現ベクターは、それらが作動的に連結された、遺伝子および／または核酸配列の発現を方向付けることが可能である。一部の実施形態では、発現ベクターまたはプラスミドは、環状二本鎖ＤＮＡ分子の形態にある。ベクターまたはプラスミドは、宿主細胞のゲノムへと組み込まれる場合もあり、組み込まれない場合もある。一部の実施形態では、プラスミドの核酸配列は、導入の後で、宿主細胞のゲノム内または染色体内に組み込まれない。例えば、プラスミドは、宿主細胞内における核酸配列、例えば、プラスミドにより保有される遺伝子またはオープンリーディングフレームの一過性発現または安定的発現のためのエレメントを含みうる。一部の実施形態では、ベクターは、一過性発現ベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、宿主細胞内で自律的に複製される、安定発現ベクターである。一部の実施形態では、プラスミドの核酸配列は、宿主細胞への導入時に、宿主細胞のゲノムまたは染色体へと組み込まれる。本明細書で開示される方法において使用されうる発現ベクターは、プラスミド、エピソーム、細菌人工染色体、酵母人工染色体、バクテリオファージ、またはウイルスベクターを含むがこれらに限定されない。ベクターは、ＤＮＡベクターの場合もあり、ＲＮＡベクターの場合もある。一部の実施形態では、本明細書で提供されるベクターは、宿主細胞への導入時に、宿主細胞のゲノムへとの統合（例えば、逆転写を介する）が可能である、ＲＮＡベクター、例えば、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。当業者により公知である、同等の機能を果たす、他の形態の発現ベクター、例えば、自己複製型染色体外ベクター、または宿主ゲノムへの統合が可能であるベクターもまた、使用されうる。例示的なベクターは、それらが連結された核酸の、自律的複製および／または自律的発現が可能であるベクターである。

【0158】

[00252]融合タンパク質に言及して使用される、「スペーサー」または「リンカー」という用語は、融合タンパク質の、他の２つのペプチド配列を接続するペプチド配列を指す。一部の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、タンパク質もしくはＲＮＡ配列を接続するか、またはタンパク質もしくはＲＮＡ配列の間の、何らかの最小限の距離または他の空間関係を保存すること以外に、具体的生体活性を有さない。一部の実施形態では、スペーサーの構成要素であるアミノ酸は、分子のフォールディング、可撓性、正味の電荷、または疎水性など、一部の分子特性に影響を与えるように選択されうる。本開示の実施形態における使用に適するリンカーは、当業者に周知であり、直鎖状または分枝鎖状である炭素リンカー、複素環式炭素リンカー、またはペプチドリンカーを含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、リンカーは、２つまたはこれを超えるポリペプチド、例えば、２つの抗原性ペプチドを、各抗原性ペプチドが、適正にフォールディングすることを確保するのに十分な距離だけ隔てるのに使用される。例示的なペプチドリンカー配列は、可撓性の伸展型コンフォメーションを取り、秩序化二次構造の発生への傾向を呈さない。可撓性のリンカータンパク質領域内のアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、およびＳｅｒ、またはＧｌｙ、Ａｓｎ、およびＳｅｒを含有するアミノ酸配列の、任意の並べ替えを含みうる。ＴｈｒおよびＡｌａなど、他の中性近傍のアミノ酸もまた、リンカー配列内で使用されうる。

【0159】

[00253]「～を処置する」、「処置された」、「～を処置すること」、「処置」などの用語は、障害および／またはこれと関連する症状（例えば、新生物もしくは腫瘍、または感染作用物質、または自己免疫疾患）を低減、防止、または改善することを指すように意図される。「～を処置すること」とは、疾患（例えば、がん、または感染作用物質による感染、または自己免疫疾患）の発症、または発症の疑いの後における対象への、治療の投与を指す場合がある。「～を処置すること」は、疾患と関連する任意の症状もしくは他の疾病の影響、および／または治療と関連する副作用の発生もしくは再発の頻度、または重症度を低下させることを指す場合がある、「～を緩和すること」の概念「～を処置すること」という用語はまた、も包摂する。患者における、疾患または障害の重症度を軽減すること、例えば、疾患を伴う患者の寿命を伸ばすか、もしくは生存性を延長すること、またはその再発を遅延させること、例えば、疾患を患ったことがある患者における寛解期間を延ばすことを指す、「～を管理すること」の概念を含む。障害または状態の処置が、障害、状態、またはこれと関連する症状が、完全に消失されることが、除外されるわけではないが、これを要求するわけではないことが察知される。本明細書で使用される、「～を防止する」、「～を防止すること」、「防止」という用語、およびこれらの文法的同等物は、薬剤または化合物の投与が始まる時点において、このような症状を発症していない対象において、疾患または状態と関連する症状の発症を回避するか、またはこれを遅延させることを指す場合がある。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される、対象または患者の処置は、薬物、代謝物、防止的成分、核酸、ペプチド、またはタンパク質などの治療用組成物であって、薬物、代謝物、または防止的成分をコードするか、または他の形で形成する、治療用組成物の投与を含む。一部の実施形態では、処置は、細胞または細胞集団を、それを必要とする対象へと投与するステップを含む。一部の実施形態では、処置は、対象へと、本明細書で記載される、操作された細胞のうちの１つまたは複数、例えば、１つまたは複数の操作された貪食細胞などの骨髄細胞を投与するステップを含む。処置は、病理学的な疾患、状態、または症候群の場合もあり、潜在的疾患、状態、または症候群の場合もある、疾患または状態または症候群の処置を含む。場合によって、本明細書で使用される処置は、治療用ワクチンを投与するステップを含みうる。一部の実施形態では、操作された貪食細胞が、患者または対象へと投与される。一部の実施形態では、ヒト対象へと投与される細胞は、免疫原性の低減を結果としてもたらす。例えば、操作された貪食細胞は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）またはフラトリサイド効果をもたらさないか、またはこれらの低減をもたらしうる。一部の実施形態では、ヒト対象へと投与される操作された細胞は、対象に対して、免疫適合性である（すなわち、対象において、天然で発現されるＨＬＡ亜型とのマッチングを有する）。対象特異的ＨＬＡ対立遺伝子、または対象のＨＬＡ遺伝子型は、当技術分野で公知の任意の方法により決定されうる。例示的実施形態では、方法は、遺伝子多型を決定するステップであって、遺伝子多型を有する対立遺伝子変異体を含む、遺伝子参照セットに照らした、データセットのシーケンシングから抽出されるリードのアライメントを生成するステップ、アライメントにおいて、各対立遺伝子変異体についての、第１の事後確率または事後確率から導出されるスコアを決定するステップ、第１の事後確率または事後確率から導出されるスコアが最大である対立遺伝子変異体を、第１の対立遺伝子変異体として同定するステップ、第１の対立遺伝子変異体、および１つまたは複数の他の対立遺伝子変異体によりアライメントされた、１つまたは複数の重複リードを同定するステップ、重み付け係数を使用して、１つまたは複数の他の対立遺伝子変異体についての、第２の事後確率または事後確率から導出されるスコアを決定するステップ、第１の対立遺伝子変異体および第２の対立遺伝子変異体が、遺伝子多型の遺伝子型を規定する場合に、第２の事後確率または事後確率から導出されるスコアが最大である対立遺伝子変異体を選択することにより、第２の対立遺伝子変異体を同定するステップ、ならびに第１の対立遺伝子変異体および第２の対立遺伝子変異体についてのアウトプットを与えるステップを含みうるステップを含む。

【0160】

[00254]「断片」とは、タンパク質または核酸の部分を指す場合がある。一部の実施形態では、断片は、参照タンパク質または参照核酸の生体活性のうちの、少なくとも５０％、７５％、または８０％、または９０％、９５％、なおまたは９９％を保持する。

【0161】

[00255]「単離された」、「精製された」、「生物学的に純粋である」という用語、およびこれらの文法的同等物は、その天然状態で見出される通り、通常、これに随伴する構成要素が、多様な程度で非含有である素材を指す。「～を単離する」とは、元の供給源または環境からの単離の程度を表す。「～を精製する」とは、単離より高度である、単離の程度を表す。「精製された」タンパク質または「生物学的に純粋である」タンパク質は、不純物が、タンパク質の生物学的特性に、実質的な影響を及ぼさないか、または他の有害な帰結を引き起こさないように、他の素材が、十分に非含有である。すなわち、本開示の核酸またはペプチドは、組換えＤＮＡ法により作製される場合に、細胞素材、ウイルス素材、もしくは培養培地が、実質的に非含有であるか、または化学合成される場合に、化学的前駆体もしくは他の化学物質が、実質的に非含有である場合に、精製されている。純度および均一性は、典型的に、分析化学法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。「精製された」という用語は、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲル内で、本質的に１つのバンドをもたらすことを表す場合がある。修飾、例えば、リン酸化またはグリコシル化にかけられうるタンパク質について、異なる修飾は、個別に精製されうる、異なる単離タンパク質をもたらしうる。

【0162】

[00256]「新生物」または「がん」という用語は、不適切に高レベルの細胞分裂、不適切に低レベルのアポトーシス、またはこれらの両方により引き起こされるか、またはこれらの結果としてもたらされる、任意の疾患を指す。神経膠芽腫は、新生物またはがんの、１つの非限定例である。「がん」または「腫瘍」または「過剰増殖性障害」という用語は、コントロール不能の増殖、不死性、転移の可能性、急速な増殖、および増殖率、ならびにある特定の特徴的な形状特色など、がん原因細胞に典型的な特徴を保有する細胞の存在を指す。がん細胞は、腫瘍形態であることが多いが、このような細胞は、動物において、単独で存在する場合もあり、白血病細胞など、非腫瘍原性のがん細胞の場合もある。

【0163】

[00257]「ワクチン」という用語とは、疾患（例えば、新生物／腫瘍／感染作用物質／自己免疫疾患）の予防および／または処置のために、免疫を発生させるための組成物を意味するものとして理解されるべきである。したがって、本明細書で使用されるワクチンとは、組換え核酸、または組換え核酸を含み、これを発現する細胞を含み、ワクチン接種により、特異的防御および保護物質を作出するために、ヒトまたは動物において使用されることが意図される薬剤である。「ワクチン組成物」は、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤を含みうる。本開示の態様は、貪食細胞ベースワクチンの調製における、技術の使用に関する。

【0164】

[00258]「薬学的に許容される」という用語とは、ヒトを含む動物における使用について、米国連邦政府もしくは米国州政府の規制機関により承認されているか、もしくは承認可能であるか、または米国薬局方もしくは他の一般に認識された薬局方に収載されていることを指す。「薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤」とは、薬剤と一緒に対象に投与することが可能であり、その薬理学的活性を破壊せず、治療量の薬剤を送達するのに十分な用量で投与された場合に、非毒性である、賦形剤、担体、または希釈剤を指す。

【0165】

[00259]本開示の方法において有用な核酸分子は、活性を有するまたはポリペプチドをコードする任意の核酸分子を含むがこれらに限定されない。内因性配列に対する実質的な同一性を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子のうちの、少なくとも一方の鎖とハイブリダイズすることが可能である。「ハイブリダイズする」とは、多様な厳密性の条件下で、核酸分子が、相補的なポリヌクレオチド配列、またはそれらの部分の間で対合して、二本鎖分子を形成する場合を指す（例えば、Ｗａｈｌ，Ｇ．Ｍ．およびＳ Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５２：５０７を参照されたい）。例えば、厳密な塩濃度は、通例、約７５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、約５００ｍＭ未満のＮａＣｌおよび５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、または約２５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび２５ｍＭのクエン酸三ナトリウムでありうる。低厳密性のハイブリダイゼーションが、有機溶媒、例えば、ホルムアミドの非存在下で得られうるのに対し、高厳密性のハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミドの存在下で、または少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得られうる。厳密な温度条件は、通例、少なくとも約３０℃、少なくとも約３７℃、または少なくとも約４２℃の温度を含みうる。当業者には、ハイブリダイゼーション時間、洗浄剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、および担体ＤＮＡの組入れまたは除外など、さらなるパラメータの変動も周知である。必要に応じて、これらの多様な条件を組み合わせることにより、多様なレベルの厳密性が達せられる。例示的実施形態では、ハイブリダイゼーションは、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１％のＳＤＳ中、３０℃で生じうる。別の例示的実施形態では、ハイブリダイゼーションは、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、３５％のホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中、３７℃で生じうる。別の例示的実施形態では、ハイブリダイゼーションは、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、５０％のホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌのｓｓＤＮＡ中、４２℃で生じうる。当業者には、これらの条件における、有用な変動がたやすく明らかであろう。大半の適用では、ハイブリダイゼーションに後続する洗浄ステップもまた、厳密性が変動しうる。洗浄の厳密性条件は、塩濃度および温度により規定されうる。上記の通り、洗浄の厳密性は、塩濃度を減少させることにより増大される場合もあり、温度を上昇させることにより増大される場合もある。例えば、洗浄ステップのための厳密な塩濃度は、約３０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび３ｍＭのクエン酸三ナトリウムの場合もあり、約１５ｍＭ未満のＮａＣｌおよび１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウムの場合もある。洗浄ステップのための厳密な温度条件は、少なくとも約２５℃、少なくとも約４２℃、または少なくとも約６８℃の温度を含みうる。例示的実施形態では、洗浄ステップは、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中、２５℃で生じうる。他の例示的実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中、４２℃で生じうる。別の例示的実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中、６８℃で生じるであろう。当業者には、これらの条件における、さらなる変動がたやすく明らかであろう。当業者には、ハイブリダイゼーション法が周知であり、例えば、ＢｅｎｔｏｎおよびＤａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９６：１８０、１９７７）；ＧｒｕｎｓｔｅｉｎおよびＨｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、７２：３９６１、１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌら（「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１）；ＢｅｒｇｅｒおよびＫｉｍｍｅｌ（「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、１９８７、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；ならびにＳａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋにおいて記載されている。

【0166】

[00260]「実質的に相同な」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書で記載されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つ）または参照核酸配列（例えば、本明細書で記載される核酸配列のうちのいずれか１つ）に対する少なくとも５０％の同一性を呈示する、ポリペプチドまたは核酸分子を指す。このような配列は、アミノ酸レベルまたは核酸レベルにおいて、比較のために使用される配列と少なくとも６０％、８０％、もしくは８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、なおもしくは９９％、またはこれを超えて同一でありうる。配列相同性は、典型的に、配列解析ソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴプログラム、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム、ＧＡＰプログラム、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用して測定される。このようなソフトウェアは、相同性の程度を、多様な置換、欠失、および／または他の修飾へと割り当てることにより、同一な配列または同様の配列をマッチさせる。保存的置換は、典型的に、以下の群：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン内に置換を含む。同一性の程度を決定する、例示的手法では、ＢＬＡＳＴプログラムが使用される場合があり、ｅ－３～ｅ－ｍの間の確率スコアが、近縁配列を指し示しうる。「参照」とは、比較の基準である。それぞれの配列内の、特異的位置または残基の番号付けは、特定のタンパク質、および使用される番号付けスキームに依存することが理解されるであろう。番号付けは、例えば、成熟タンパク質の前駆体と、成熟タンパク質自体とで異なる場合があり、種間の配列の差違は、番号付けに影響を及ぼしうる。当業者は、当技術分野で周知の方法により、例えば、参照配列に照らした配列アライメント、および相同な残基の決定により、任意の相同なタンパク質内、およびそれぞれをコードする核酸内において、それぞれの残基を同定することが可能であろう。

【0167】

[00261]「対象」という用語または「患者」とは、処置、観察、または実験を目的とする、動物（例えば、ヒト）などの生物を指す。例だけを目的として述べると、対象は、非ヒト霊長動物、ネズミ科動物、ウシ科動物、ウマ科動物、イヌ科動物、ヒツジ科動物、またはネコ科動物など、ヒトまたは非ヒト哺乳動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物を含むがこれらに限定されない。

【0168】

[00262]「治療効果」という用語とは、障害（例えば、新生物、腫瘍、または感染作用物質による感染、または自己免疫性疾患）またはその関連病態の症状のうちの１つまたは複数に対するある程度の緩和を指す。本明細書で使用される、「治療有効量」とは、単回投与用量または複数回投与用量における、細胞または対象への投与時に、このような処置の非存在下で予測される場合を越えて、このような障害を伴う患者の生存性を延長するか、障害の１つもしくは複数の徴候もしくは症状を軽減するか、障害を防止するか、または遅延させるのに有効である薬剤の量を指す。「治療有効量」は、治療効果を達成するのに要求される量を定量することが意図される。医療技術分野における当業者である主治医または獣医は、要求される、医薬組成物の「治療有効量」（例えば、ＥＤ５０）を、たやすく決定し、これを処方することができる。

【0169】

[00263]本明細書では、標的細胞に特異的に結合するようにデザインされた、操作された骨髄細胞（好中球、単球、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）、マスト細胞、およびマクロファージを含むがこれらに限定されない）が提供される。操作された骨髄細胞は、標的細胞を、直接的に（例えば、貪食により）攻撃し、これを死滅させる場合もあり、かつ／または間接的に（例えば、Ｔ細胞を活性化することにより）攻撃し、これを死滅させる場合もある。一部の実施形態では、標的細胞は、がん細胞である。

【0170】

[00264]がんは、本開示において、詳細に記載される、１つの例示的実施形態であるが、本明細書で記載される方法および技術は、体内の感染細胞または他の形で罹患した細胞の標的化において有用であることが想定される。同様に、本明細書では、操作された細胞を使用する、治療用組成物およびワクチン組成物について記載される。

【0171】

[00265]本明細書では、がんなどの疾患または状態を処置するための組成物および方法が提供される。本明細書で提供される組成物および方法は、好中球、単球、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）、マスト細胞、およびマクロファージを含むがこれらに限定されない、ヒト骨髄細胞を利用して、がん細胞などの罹患細胞を標的化する。本明細書で提供される組成物および方法は、Ｔ細胞の活性化および動員、エフェクター免疫細胞の活性化（例えば、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化）、抗原の交差提示、炎症応答の増強、制御性Ｔ細胞の低減、および貪食を含む、様々な機構により、がん細胞などの罹患細胞、および／または罹患組織を消失させるのに使用されうる。例えば、骨髄細胞は、がん細胞に対する免疫応答を維持するのに使用されうる。

【0172】

[00266]本明細書では、貪食受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）、スカベンジャー受容体（ＳＲ）融合タンパク質（ＳＦＰ）、インテグリン受容体（ＩＲ）融合タンパク質（ＩＦＰ）、またはカスパーゼ動員受容体（カスパーゼ－ＣＡＲ）融合タンパク質などのキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする、組換え核酸を含む組成物が提供される。組換え核酸によりコードされるＣＦＰは、標的細胞の抗原に結合する抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含みうる。細胞外ドメインは、ヒンジドメインまたは細胞外ドメインなどの受容体に由来する、ヒンジドメインまたは細胞外ドメインへと融合されうる。組換え核酸によりコードされるＣＦＰは、ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ６８、貪食受容体、スカベンジャー受容体、またはインテグリン受容体に由来する膜貫通ドメインなどの膜貫通ドメインをさらに含みうる。一部の実施形態では、組換え核酸によりコードされるＣＦＰは、貪食受容体、スカベンジャー受容体、またはインテグリン受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインをさらに含む。例えば、細胞内ドメインは、貪食受容体、スカベンジャー受容体、またはインテグリン受容体に由来する、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、貪食活性、炎症応答、一酸化窒素の産生、インテグリンの活性化、エフェクター細胞遊走の増強（例えば、ケモカイン受容体の発現を介する）、抗原提示、および／または交差提示の増強を促進する、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含みうる。一部の実施形態では、ＣＦＰは、貪食受容体融合タンパク質（ＰＦＰ）である。一部の実施形態では、ＣＦＰは、貪食スカベンジャー受容体融合タンパク質（ＰＦＰ）である。一部の実施形態では、ＣＦＰは、インテグリン受容体融合タンパク質（ＩＦＰ）である。一部の実施形態では、ＣＦＰは、炎症性受容体融合タンパク質である。一部の実施形態では、組換え核酸によりコードされるＣＦＰは、動員ドメインを含む細胞内ドメインをさらに含む。例えば、細胞内ドメインは、１つまたは複数のＰＩ３Ｋ動員ドメイン、カスパーゼ動員ドメイン、またはカスパーゼ活性化／動員ドメイン（ＣＡＲＤ）を含みうる。

【0173】

[00267]本明細書では、（ｉ）膜貫通ドメインおよび（ｉｉ）貪食受容体細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；ならびに抗原、例えば、標的細胞の抗原、または標的細胞上に提示される抗原に特異的である細胞外抗原結合性ドメインを含み；融合受容体の細胞外抗原結合性ドメインによる標的への抗原結合が、貪食受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化するように、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合性ドメインが作動的に連結されたＣＦＰ（例えば、貪食受容体融合タンパク質（ＰＦＰ））をコードする組換え核酸を含む組成物が提供される。

【0174】

[00268]一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外ドメインは、Ｉｇ結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＦｃＲγＩ、ＦｃＲγＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＢ、ＦｃＲγＩＩＣ、ＦｃＲγＩＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＩＢ、ＦｃＲｎ、ＴＲＩＭ２１、ＦｃＲＬ５結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外ドメインは、ＦｃＲ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外ドメインは、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲε、またはＦｃＲγの細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲα（ＦＣＡＲ）細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲβ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦＣＥＲ１Ａ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦＣＧＲ１Ａ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ２Ｃ、ＦＣＧＲ３Ａ、またはＦＣＧＲ３Ｂの細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、インテグリンドメインまたはインテグリン受容体ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、１つまたは複数のインテグリンドメインである、α１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、またはβ８を含む。

【0175】

[00269]一部の実施形態では、ＣＦＰは、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合性ドメインへと作動的に連結された細胞外ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、受容体の細胞外ドメイン、ヒンジ、スペーサー、および／またはリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、貪食受容体の細胞外部分を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外部分は、細胞内シグナル伝達ドメインが由来する受容体と同じ受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、スカベンジャー受容体の細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、免疫グロブリンのドメインを含む。一部の実施形態では、免疫グロブリンのドメインは、免疫グロブリンの細胞外ドメインまたは免疫グロブリンのヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、食細胞貪食ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体アセンブリーが可能な構造を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体化のための土台を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、最大で、５００、４００、３００、２００、または１００アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、標的細胞の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、抗体ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、受容体ドメイン、抗体ドメインを含み、この場合、抗体ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディー、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、ＶＮＡＲドメイン、Ｖ_ＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、またはこれらの機能的断片もしくは組合せである、機能的抗体断片を含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、リガンド、受容体の細胞外ドメイン、またはアダプターを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、単一の抗原に特異的である、単一の細胞外抗原結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、少なくとも２つの細胞外抗原結合性ドメインを含み、この場合、少なくとも２つの細胞外抗原結合性ドメインの各々は、異なる抗原に特異的である。

【0176】

[00270]一部の実施形態では、抗原は、がん関連抗原、系統関連抗原、病原性抗原、または自己免疫性抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ウイルス抗原を含む。一部の実施形態では、抗原は、Ｔリンパ球抗原である。一部の実施形態では、抗原は、細胞外抗原である。一部の実施形態では、抗原は、細胞内抗原である。一部の実施形態では、抗原は、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、表皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト表皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、濾胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）群リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン受容体、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲβ、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、Ｄｓｇ１、Ｄｓｇ３、ＩＧＬＬ１、およびこれらの組合せに由来する抗原からなる群から選択される。一部の実施形態では、抗原は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、およびＣＤ５６からなる群から選択されるタンパク質の抗原である。一部の実施形態では、抗原は、卵巣がん抗原またはＴリンパ腫抗原である。一部の実施形態では、抗原は、インテグリン受容体の抗原である。一部の実施形態では、抗原は、α１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、およびβ８からなる群から選択される、インテグリン受容体またはインテグリンの抗原である。一部の実施形態では、抗原は、インテグリン受容体リガンドの抗原である。一部の実施形態では、抗原は、フィブロネクチン、ビトロネクチン、コラーゲン、またはラミニンの抗原である。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、２つまたはこれを超える、異なる抗原に結合しうる。

【0177】

[00271]一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、Ｄｓｇ１またはＤｓｇ３など、自己抗原またはその断片を含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、受容体ドメインまたは抗体ドメインを含み、この場合、抗体ドメインは、Ｄｓｇ１またはＤｓｇ３などの自己抗原に結合する。

【0178】

[00272]一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合性ドメインは、リンカーを介して作動的に連結される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合性ドメインは、ＣＤ８α、ＩｇＧ１、またはＩｇＧ４のヒンジ領域などのリンカーを介して作動的に連結される。

【0179】

[00273]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体化土台を含む。

【0180】

[00274]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ６８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲγ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲα膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲβ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲε膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、シンタキシン３またはシンタキシン４またはシンタキシン５などのシンタキシンに由来する膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、内因性受容体の膜貫通ドメインと共にオリゴマー化する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、外因性受容体の膜貫通ドメインと共にオリゴマー化する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、内因性受容体の膜貫通ドメインと共に二量体化する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、外因性受容体の膜貫通ドメインと共に二量体化する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインが由来するタンパク質と異なるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインが由来するタンパク質と異なるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、貪食受容体の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインは、同じタンパク質に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインと同じタンパク質に由来する。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＤＡＰ１２動員ドメインをコードする。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２と共にオリゴマー化する膜貫通ドメインを含む。

【0181】

[00275]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくとも１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、最大で、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２アミノ酸の長さである。

【0182】

[00276]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、またはＢａｉ１から選択される貪食受容体以外の貪食受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃアルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される貪食受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、スカベンジャー受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ４７阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメイン、またはＧＴＰアーゼ阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメイン、またはＧＴＰアーゼ阻害ドメインは、ＰＦＰを発現する細胞の貪食カップにおいて、Ｒａｃ、Ｃｄｃ４２、またはＧＴＰアーゼを阻害する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｆ－アクチンディスアセンブリー活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ１２活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ２５活性化ドメイン、またはＳＨ３ＢＰ１活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ホスファターゼ阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＡＲＰ２／３阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはこれを超えるＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、これらの機能的断片、およびこれらに対する少なくとも１つであるが２０を超えない修飾を有するこれらのアミノ酸配列のＩＴＡＭドメインから選択される、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｒｃファミリーキナーゼのリン酸化部位を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｙｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｆ－アクチン脱重合活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、酵素活性を欠く。

【0183】

[00277]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータ細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＭｅｒＴＫ細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＬＲ４細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ４７阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＳＧＬ－１の細胞内領域など、インテグリンを活性化するドメインを含む。

【0184】

[00278]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＥＰＡＣおよびＣ３Ｇに由来するドメインなど、ＧＴＰアーゼであるＲａｐ１を活性化するドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、パキシリンに由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、接着斑キナーゼを活性化する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、単一の貪食受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、単一のスカベンジャー受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、貪食増強ドメインを含む。

【0185】

[00279]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、キナーゼ活性化ドメインまたはキナーゼ結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＳＴＩＮＧ、ＮＬＲＰファミリーメンバーであるＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ピリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、Ｔａｎｋ１結合性キナーゼ（ＴＢＫ）、カスパーゼドメイン、プロカスパーゼ結合性ドメイン、またはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0186】

[00280]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、コネキシン（Ｃｘ）タンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、Ｃｘ４３、Ｃｘ４６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ３３、Ｃｘ５０、Ｃｘ５９、Ｃｘ６２、Ｃｘ３２、Ｃｘ２６、Ｃｘ３１、Ｃｘ３０．３、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３０、Ｃｘ２５、Ｃｘ４５、Ｃｘ４７、Ｃｘ３１．３、Ｃｘ３６、Ｃｘ３１．９、Ｃｘ３９、Ｃｘ４０．１、またはＣｘ２３に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、Ｃｘ４３に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。

【0187】

[00281]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＳＩＧＬＥＣタンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、Ｓｉｇｌｅｃ－１（シアロアデシン）、Ｓｉｇｌｅｃ－２（ＣＤ２２）、Ｓｉｇｌｅｃ－３（ＣＤ３３）、Ｓｉｇｌｅｃ－４（ＭＡＧ）、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－６、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－８、Ｓｉｇｌｅｃ－９、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、Ｓｉｇｌｅｃ－１１、Ｓｉｇｌｅｃ－１２、Ｓｉｇｌｅｃ－１３、Ｓｉｇｌｅｃ－１４、Ｓｉｇｌｅｃ－１５、Ｓｉｇｌｅｃ－１６、またはＳｉｇｌｅｃ－１７に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。

【0188】

[00282]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｃ型レクチンタンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、マンノース受容体タンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、アシアロ糖タンパク質受容体タンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ）、ＤＣ－ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランジェリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）１（ＣＬＥＣ５Ａ）、ＤＣ関連Ｃ型レクチン１（デクチン１）サブファミリータンパク質、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂ）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣ免疫受容体（ＤＣＩＲ）サブファミリータンパク質、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血中ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、Ｍｉｎｃｌｅ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｃ ｔｙｐｅ ｌｅｃｔｉｎ）（ＣＬＥＣ４Ｅ）、ＮＯＤ様受容体タンパク質、ＮＯＤ様受容体ＭＨＣクラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）、ＩＰＡＦ、ＢＩＲＣ１、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）タンパク質、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ５、ＬＧＰ２、ＮＡＩＰ５／Ｂｉｒｃ１ｅ、ＮＬＲＰタンパク質、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ２、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ４、ＮＬＲＰ５、ＮＬＲＰ６、ＮＬＲＰ７、ＮＬＲＰ８９、ＮＬＲＰ９、ＮＬＲＰ１０、ＮＬＲＰ１１、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＰ１３、ＮＬＲＰ１４、ＮＬＲタンパク質、ＮＯＤ１もしくはＮＯＤ２、またはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。

【0189】

[00283]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、細胞接着分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、分子である、ＩｇＣＡＭ、カドヘリン、インテグリン、Ｃ型レクチン様ドメインタンパク質（ＣＴＬＤ）、および／またはプロテオグリカンに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、Ｅ－カドヘリン、Ｐ－カドヘリン、Ｎ－カドヘリン、Ｒ－カドヘリン、Ｂ－カドヘリン、Ｔ－カドヘリン、またはＭ－カドヘリンに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、Ｅ－セレクチン、Ｌ－セレクチン、またはＰ－セレクチンなどのセレクチンに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。

【0190】

[00284]一部の実施形態では、ＣＦＰは、全長細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、最大で、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸の長さである。

【0191】

[00285]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＦｃＲα鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲα鎖膜貫通ドメイン、および／またはＦｃＲα鎖細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＦｃＲβ鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲβ鎖膜貫通ドメイン、および／またはＦｃＲβ鎖細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、細胞内で発現されると、ＦｃＲγと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、細胞内で発現されると、内因性ＦｃＲγと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、ＦｃＲγを発現しない細胞膜へと組み込まれない。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＦｃＲα鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＦｃＲβ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＴＲＥＭ細胞外ドメイン、ＴＲＥＭ膜貫通ドメイン、および／またはＴＲＥＭ細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、ＴＲＥＭは、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、またはＴＲＥＭ３である。

【0192】

[00286]本明細書では、がん細胞などの罹患細胞を標的化し、これらを死滅させるように操作された治療用骨髄細胞などの治療用骨髄細胞を作出するための方法および組成物が提供される。本開示は、がんまたは腫瘍細胞を死滅させるための組成物および方法を、豊富に例示するが、当業者は、不要な実験を伴わずに、感染細胞など、別の罹患細胞を標的化するように、このようなマクロファージをデザインすることが可能であろう。

【0193】

[00287]一部の実施形態では、マクロファージは、それを必要とする対象から単離され、目的の、１つまたは複数のタンパク質を発現するように操作され、対象へと投与される。一部の実施形態では、対象は、がんまたは腫瘍を有する。対象から単離され、目的の、１つまたは複数のタンパク質を発現するように操作され、次いで、対象へと投与されるマクロファージは、対象のがん細胞または腫瘍細胞を標的化し、これらを死滅させうる、治療用マクロファージである。

【0194】

[00288]本明細書の一態様では、（Ａ）外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列と；（Ｂ）骨髄細胞キメラ抗原受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする第２の核酸配列であって、ＣＦＰが、（ａ）受容体による抗原への結合時にリン酸化されるチロシン残基を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達サブユニット；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）標的細胞の表面上の構成要素に対する結合特異性を有し、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結される細胞外結合性ドメイン；ならびに（ｄ）プロテアーゼ切断配列により、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結され、外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列の転写を促進する転写活性化ドメインを含む、第２の核酸配列と；（Ｃ）（ａ）転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼ；（ｂ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインをコードし；プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼとチロシン残基に結合するドメインとが作動可能に連結された、第３の核酸配列とを含む、１つまたは複数の組換え核酸配列を含む組成物が提供される。

【0195】

[00289]一部の実施形態では、第３の核酸配列は、（ｃ）刺激応答性エレメントをさらにコードする。一部の実施形態では、刺激応答性エレメント（ｃ）は、リン酸化チロシン残基に結合するドメインと融合される。一部の実施形態では、刺激応答性エレメントは、核酸配列を発現する細胞の微小環境に対して、応答性である。一部の実施形態では、（ｃ）は、（ｂ）と作動可能に連結された、デグロンである。一部の実施形態では、デグロンは、ＨＩＦ－１ａデグロンである。

【0196】

[00290]一部の実施形態では、１つまたは複数の組換え核酸は、骨髄細胞内で発現される。一部の実施形態では、骨髄細胞は、マクロファージ細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、がん細胞である。

【0197】

[00291]一部の実施形態では、第１の核酸は、貪食促進性ポリペプチドもしくは炎症促進性ポリペプチド、またはこれらの両方をコードする。一部の実施形態では、ＣＦＰは、１つもしくは複数の貪食受容体ドメイン、またはこれらの断片を有する、貪食受容体融合タンパク質である。一部の実施形態では、１つもしくは複数の貪食受容体ドメイン、またはこれらの断片は、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃアルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される。

【0198】

[00292]一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、貪食受容体に由来する。

【0199】

[00293]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲアルファ、またはＢａｉ１から選択される貪食受容体以外の受容体に由来する。一部の実施形態では、チロシン残基を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達サブユニットは、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達サブユニットは、１つを超えるＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、ＣＤ３ゼータＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタＴＣＲサブユニット、ＴＣＲゼータ鎖、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、これらの機能的断片、およびこれらに対する少なくとも１つであるが２０を超えない修飾を有するこれらのアミノ酸配列からなる群から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｒｃファミリーキナーゼのリン酸化部位を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｙｋ動員ドメインを含む。

【0200】

[00294]本明細書で記載される多様な態様についての、一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達サブユニットは、ＤＡＰ１２動員ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＩＴＡＭドメインを含む。

【0201】

[00295]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達サブユニットは、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む炎症促進性シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰファミリーメンバーであるＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ピリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、カスパーゼドメインもしくはプロカスパーゼ結合性ドメイン、またはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0202】

[00296]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＳＧＬ－１の細胞内領域など、インテグリンを活性化するドメインをさらに含む。

【0203】

[00297]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＥＰＡＣおよびＣ３Ｇに由来するドメインなど、ＧＴＰアーゼであるＲａｐ１を活性化するドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、パキシリンに由来するドメインをさらに含む。

【0204】

[00298]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、接着斑キナーゼを活性化する。

【0205】

[00299]一部の実施形態では、標的細胞の表面上の構成要素に対する結合特異性を有する細胞外結合性ドメインは、抗体またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、細胞外結合性ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。

【0206】

[00300]一部の実施形態では、標的細胞の表面上の構成要素は、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、表皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト表皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、濾胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）群リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン受容体、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ＩＧＬＬ１、およびこれらの組合せからなる群から選択される抗原である。

【0207】

[00301]一部の実施形態では、標的細胞の表面上の構成要素は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ５６からなる群から選択される抗原である。

【0208】

[00302]一部の実施形態では、標的細胞の表面上の構成要素は、卵巣がん抗原またはＴリンパ腫抗原である。

【0209】

[00303]一部の実施形態では、標的細胞の表面上の構成要素は、インテグリン受容体である。

【0210】

[00304]一部の実施形態では、標的細胞の表面上の構成要素は、α１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、およびβ８からなる群から選択される、インテグリン受容体である。

【0211】

[00305]一部の実施形態では、標的細胞の表面上の構成要素は、２つまたはこれを超える別個の抗原を含む。

【0212】

[00306]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくとも１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、最大で、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２と共にオリゴマー化する膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合性ドメインは、リンカーを介して作動的に連結される。一部の実施形態では、リンカーは、ペプチドを含む。一部の実施形態では、リンカーは、ＣＤ８α、ＩｇＧ１、またはＩｇＧ４のヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、リンカーは、合成リンカーである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲ膜貫通ドメインを含む。

【0213】

[00307]転写活性化ドメインが、ＤＮＡ結合性ドメインをさらに含む、上記で記載された任意の実施形態による組成物。一部の実施形態では、ＤＮＡ結合性ドメインは、Ｇａｌ４、ＺＦＨＤ１、またはｔｅｔ－ＲのＤＮＡ結合性ドメイン（ＤＢ）から選択される。一部の実施形態では、転写活性化ドメインは、ＶＰ６４トランス活性化ドメインを含む。

【0214】

[00308]一部の実施形態では、転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ３プロテアーゼである。一部の実施形態では、ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインは、ホスホチロシン結合性（ＰＴＢ）ドメインである。一部の実施形態では、ＰＴＢは、Ｓｈｃ ＰＴＢである。

【0215】

[00309]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＤＮＡである。

【0216】

[00310]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｃｉｒｃＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、レプリコンＲＮＡと会合する。

【0217】

[00311]本明細書の一態様では、上記で記載された実施形態のうちのいずれか１つによる、１つまたは複数の組換え核酸をコードするベクターが提供される。

【0218】

[00312]本明細書の一態様では、上記で記載された実施形態によるベクターを発現する骨髄細胞が提供される。

【0219】

[00313]本明細書の一態様では、上記で記載された実施形態の骨髄細胞を含む医薬組成物が提供される。

【0220】

[00314]本明細書の一態様では、（ａ）細胞傷害性ポリペプチド；（ｂ）プロテアーゼ切断配列；および（ｃ）阻害性ポリペプチドドメインを含み、阻害性ポリペプチドドメインが、細胞傷害性ポリペプチドを阻害し；この場合、細胞傷害性ポリペプチドと、プロテアーゼ切断配列と、阻害性ポリペプチドドメインとが、作動可能に連結された、キメラタンパク質をコードする、組換え核酸を含む細胞が提供される。

【0221】

[00315]一部の実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。

【0222】

[00316]一部の実施形態では、細胞傷害性ポリペプチドは、ヒト好酸球主要塩基性タンパク質細胞傷害性ドメインである。一部の実施形態では、細胞傷害性ポリペプチドは、ヒト好酸球主要塩基性タンパク質酸性ドメインである。

【0223】

[00317]一部の実施形態では、プロテアーゼ切断配列は、ＭＭＰ認識配列である。

【0224】

[00318]一部の実施形態では、プロテアーゼ切断配列は、ＭＭＰにより切断される。

【0225】

[00319]本明細書の一態様では、本明細書で記載される実施形態による細胞のうちのいずれか１つを含む医薬組成物が提供される。

【0226】

[00320]本明細書の一態様では、本明細書で記載される実施形態のうちのいずれか１つによる組換え核酸が提供される。

【0227】

[00321]本明細書の一態様では、本明細書で記載される実施形態による組換え核酸をコードするベクターが提供される。

【0228】

[00322]本明細書の一態様では、がんに対して治療的である骨髄細胞を調製するための方法であって、骨髄細胞内で、（Ａ）外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列と；（Ｂ）骨髄細胞キメラ抗原受容体（ＣＦＰ）をコードする、第２の核酸配列であって、ＣＦＰが、（ａ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達サブユニット；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）標的細胞の表面上の構成要素に対する結合特異性を有し、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結される細胞外結合性ドメイン；ならびに（ｄ）プロテアーゼ切断配列により、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結され、外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列の転写を促進する転写活性化ドメインを含む、第２の核酸配列と；（Ｃ）（ａ）転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼ；（ｂ）ＣＡＲの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインをコードし；プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼとチロシン残基に結合するドメインとが作動可能に連結された、第３の核酸配列とを含む組換え核酸を発現させるステップを含む方法が提供される。

【0229】

[00323]本明細書の一態様では、がんに対して治療的である骨髄細胞を調製するための方法であって、骨髄細胞内で、（ａ）ヒト好酸球主要塩基性タンパク質酸性ドメイン；（ｂ）ＭＭＰ認識配列；および（ｃ）ヒト好酸球主要塩基性タンパク質細胞傷害性ドメインを含むキメラタンパク質をコードする、組換え核酸を発現させるステップを含む方法が提供される。

【0230】

[00324]本明細書の一態様では、がんを有する対象を処置するための方法であって、それを必要とする対象へと、本明細書で記載される実施形態のうちのいずれか１つによる医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。

【0231】

[00325]本明細書の一態様では、それを必要とする対象において、腫瘍の退縮を誘導する方法であって、対象へと、骨髄細胞を含む医薬組成物を静脈内投与するステップを含み、骨髄細胞が、１つまたは複数のポリペプチドをコードする、１つまたは複数の組換え核酸を発現し、１つまたは複数のポリペプチドのうちの少なくとも１つが、腫瘍微小環境内では、機能的に活性であるが、非腫瘍環境内では、機能的に活性でない方法が提供される。本明細書で記載される、いくつかの態様についての、一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書で記載される実施形態による医薬組成物である。本明細書で記載される、いくつかの態様についての、一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書で記載される実施形態による医薬組成物である。

【0232】

[00326]本明細書で記載される、いくつかの態様についての、一部の実施形態では、標的細胞は、神経膠芽腫細胞であるがん細胞である。

【0233】

[00327]本明細書では、がんを有する対象を処置するための方法であって、それを必要とする対象へと、上記で記載された医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。

【0234】

[00328]一部の実施形態では、組換え核酸は、炎症促進性ポリペプチドをコードする配列を含む。一部の実施形態では、組成物は、組換え核酸内の、炎症促進性ヌクレオチドまたはヌクレオチド、例えば、ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＵＴＰ、ＵＤＰ、および／またはＵＤＰ－グルコースをさらに含む。一部の実施形態では、転写活性化ドメインは、ＶＰ６４トランス活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ３プロテアーゼである。一部の実施形態では、ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインは、ホスホチロシン結合性（ＰＴＢ）ドメインである。一部の実施形態では、ＰＴＢは、Ｓｈｃ ＰＴＢである。一部の実施形態では、第３の核酸は、ＣＦＰへと作動可能に連結されうるデグロンをコードする。一部の実施形態では、デグロンは、ＨＩＦ－１ａデグロンである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＤＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｃｉｒｃＲＮＡである。

【0235】

[00329]一部の実施形態では、組換え核酸は、レプリコンＲＮＡと会合する。本明細書では、がんに対して治療的である骨髄細胞を調製するための方法であって、骨髄細胞内で、（Ａ）外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列と；（Ｂ）骨髄細胞キメラ抗原受容体（ＣＦＰ）をコードする第２の核酸配列であって、ＣＦＰが、（ａ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達サブユニット；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）標的細胞の表面上の構成要素に対する結合特異性を有し、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結される細胞外結合性ドメイン；ならびに（ｄ）プロテアーゼ切断配列により、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結され、外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列の転写を促進する転写活性化ドメインを含む、第２の核酸配列と；（Ｃ）（ａ）転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼ；（ｂ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインをコードし；プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼとチロシン残基に結合するドメインとが作動可能に連結された、第３の核酸配列とを含む組換え核酸を発現させるステップを含む方法が提供される。本明細書では、がんに対して治療的である骨髄細胞を調製するための方法であって、骨髄細胞内で、（ａ）ヒト好酸球主要塩基性タンパク質酸性ドメイン；（ｂ）ＭＭＰ認識配列；および（ｃ）ヒト好酸球主要塩基性タンパク質細胞傷害性ドメインを含むキメラタンパク質をコードする、組換え核酸を発現させるステップを含む方法が提供される。

【0236】

[00330]本明細書では、がんを有する対象を処置するための方法であって、それを必要とする対象へと、上記で記載された医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。本明細書では、がんを有する対象を処置するための方法であって、それを必要とする対象へと、本明細書で記載される医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。本明細書では、それを必要とする対象において、腫瘍の退縮を誘導する方法であって、対象へと、骨髄細胞を含む医薬組成物を静脈内投与するステップを含み、骨髄細胞が、１つまたは複数のポリペプチドをコードする、１つまたは複数の組換え核酸を発現し、１つまたは複数のポリペプチドのうちの少なくとも１つが、腫瘍微小環境内では、機能的に活性であるが、非腫瘍環境内では、機能的に活性でない方法が提供される。

【0237】

[00331]一部の実施形態では、組成物は、炎症促進性ポリペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性ポリペプチドは、ケモカイン、サイトカインである。一部の実施形態では、ケモカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、およびインターフェロンからなる群から選択される。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、およびインターフェロンからなる群から選択される。

【0238】

[00332]一部の実施形態では、骨髄細胞は、送達のために、特異的に標的化される。骨髄細胞は、ＰＬＧＡ（ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸））および／またはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）などの特化生体分解性ポリマーを使用して標的化されうる。一部の実施形態では、骨髄細胞機能に影響を及ぼすように、１つまたは複数の化合物を、このようなポリマー構造内に、選択的に組み込むことができる。一部の実施形態では、標的化構造は、例えば、１つまたは複数のＰＬＧＡ層および１つまたは複数のＰＶＡ層により多層化される。一部の実施形態では、標的化構造は、層化活性のための秩序にアセンブルされる。一部の実施形態では、標的化ポリマー構造は、骨髄細胞表面に付着し、骨髄細胞を、特異的極性化を付与する微小環境内に維持することなどのために、増殖因子およびサイトカインなど、１つまたは複数の構成要素を送達しうる、柔軟構造など、特異的形状の構成要素に組織化される。一部の実施形態では、ポリマー構造は、骨髄細胞により貪食されず、表面上の付着を維持しうるような構造である。一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子は、サイトカインなどのＭ１極性化因子でありうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子は、サイトカインなどのＭ２極性化因子でありうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子は、ＩＦＮγなど、マクロファージ活性化サイトカインでありうる。一部の実施形態では、ポリマー構造は、充実性腫瘍内などのｉｎ ｖｉｖｏ環境において、１つまたは複数の増殖因子の持続放出が可能なである。

【0239】

[00333]一部の実施形態では、組換え核酸は、炎症のホメオスタシス調節因子をコードする配列を含む。一部の実施形態では、炎症のホメオスタシス調節因子は、ｍＲＮＡの非翻訳領域（ＵＴＲ）内の配列である。一部の実施形態では、ＵＴＲ内の配列は、ＲＮＡ結合性タンパク質に結合する配列である。一部の実施形態では、翻訳は、ＲＮＡ結合性タンパク質の、非翻訳領域（ＵＴＲ）内の配列への結合時に、阻害または阻止される。一部の実施形態では、ＵＴＲ内の配列は、ＷＷＷＵ（ＡＵＵＵＡ）ＵＵＵＷ［配列中、Ｗは、ＡまたはＵである］のコンセンサス配列を含む。一部の実施形態では、組換え核酸は、バイシストロニックベクター上で発現される。

【0240】

[00334]一部の実施形態では、標的細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、ヒト細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、病原体により感染された細胞を含む。一部の実施形態では、標的細胞は、がん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、リンパ球であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、卵巣がん細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、乳腺細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、膵細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、神経膠芽腫細胞であるがん細胞である。

【0241】

[00335]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＤＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、非修飾ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、修飾ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｃｉｒｃＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｔＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、マイクロＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、自己複製型ＲＮＡである。

【0242】

[00336]本明細書ではまた、本明細書で記載されるＣＦＰをコードする、組換え核酸配列を含むベクターも提供される。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のポリペプチドをコードする、少なくとも１つの核酸配列へと作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、ポリシストロニックベクターである。一部の実施形態では、少なくとも１つの核酸配列の各々は、個別のプロモーターへと作動可能に連結される。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数の内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）をさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のポリペプチドをコードする、少なくとも１つの核酸配列に隣接する、５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲをさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数の調節領域をさらに含む。

【0243】

[00337]本明細書ではまた、本明細書で記載される組成物の組換え核酸によりコードされるポリペプチドも提供される。

【0244】

[00338]本明細書では、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＦＰ（例えば、貪食受容体融合タンパク質（ＰＦＰ））をコードする組換え核酸配列を含む組成物であって、膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する、好中球、単球、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）、マスト細胞、またはマクロファージなどの骨髄細胞の殺滅または貪食活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％を超えて増大される、組成物が提供される。

【0245】

[00339]表１は、開示について非限定的であることが意図される、キメラ融合タンパク質ドメインおよび／またはその断片の例示的配列を示す。

【0246】

【表1-1】

【0247】

【表1-2】

【0248】

【表1-3】

【0249】

【表1-4】

【0250】

【表1-5】

【0251】

【表1-6】

【0252】

【表1-7】

【0253】

【表1-8】

[00340]本明細書では、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＦＰ（例えば、貪食受容体融合タンパク質（ＰＦＰ））をコードする組換え核酸配列を含む組成物であって、膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する、好中球、単球、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）、マスト細胞、またはマクロファージなどの骨髄細胞の殺滅または貪食活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１．１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、または１００倍に増大される、組成物が提供される。

【0254】

ＣＤ１３７結合タンパク質およびＣＤ１３７結合ドメイン
[00341]一態様では、本明細書では、標的細胞上のＣＤ１３７に結合しうる組換えタンパク質が提供される。本明細書で使用された、標的細胞上のＣＤ１３７に結合することが可能な、このような組換えタンパク質は、ＣＤ１３７結合剤と称される。一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合剤は、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）の細胞外ドメインを含む。本明細書の一部の実施形態では、本明細書で使用される、ＣＤ１３７－ＣＦＰと称される、キメラＣＤ１３７結合受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸配列が提供される。一部の実施形態では、キメラ受容体融合タンパク質、例えば、ＣＤ１３７結合受容体融合タンパク質をコードする組換え核酸は、骨髄細胞など、適切な細胞内で発現されうる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７－ＣＦＰが、骨髄細胞など、適切な細胞上で発現されると、ＣＤ１３７結合剤は、ＣＤ１３７を発現する標的細胞に結合することが可能であり、結合剤を発現する骨髄細胞が活性化される。一部の実施形態では、ＣＤ１３７－ＣＦＰは、ＣＤ１３７との係合時に、ＣＤ１３７－ＣＦＰの細胞内シグナル伝達ドメインを活性化し、これが、ＣＤ１３７－ＣＦＰをコードする組換え核酸を発現する骨髄細胞を活性化する。一部の実施形態では、骨髄細胞は、貪食細胞である。一部の実施形態では、貪食細胞であり、ＣＤ１３７結合剤を発現する骨髄細胞は、ＣＤ１３７結合剤が、別の細胞（標的細胞）上で発現されたＣＤ１３７に結合すると、活性化され、標的細胞を貪食することが可能である。一部の実施形態では、標的細胞は、ＣＤ１３７を発現する、任意の細胞でありうる。一部の実施形態では、標的細胞は、リンパ球である。一部の実施形態では、標的細胞は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）である。一部の実施形態では、標的細胞は、悪性細胞でありうる。一部の実施形態では、標的細胞は、悪性Ｔ細胞でありうる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰを発現する骨髄細胞は、Ｔ細胞リンパ腫に対する治療用組成物を作出するのに使用されうる。

【0255】

[00342]本明細書では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含み、ＣＦＰタンパク質が、Ｔリンパ球上のＣＤ１３７に結合しうる組換えポリ核酸が提供される。本明細書の一部の実施形態では、Ｔ細胞上の標的に結合しうるＣＦＰであって、標的がＣＤ１３７であるＣＦＰが提供される。一部の実施形態では、標的Ｔ細胞は、活性化Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＣＦＰは、Ｔ細胞リンパ腫内で発現される、活性化Ｔ細胞を標的化する。本明細書では、ＣＤ１３７を標的化するＣＦＰをコードする、組換え核酸であって、ＣＦＰが、（ｉ）抗ＣＤ１３７結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および（ｉｉ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメイン；ならびに（ｂ）薬学的に許容される担体を含み；骨髄細胞が、ＣＦＰを発現し、ＣＤ１３７を発現する標的細胞の貪食の、ＣＦＰを発現しない骨髄細胞と比較した、少なくとも１．１倍の増大を呈する組換え核酸が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性ドメインは、抗体の抗原結合性断片である、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖドメイン、またはｓｄＡｂドメインを含む、ＣＤ１３７結合性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性ドメインは、配列番号３１の配列、または配列番号３１に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＣＤ１３７リガンド配列を含む。

【0256】

[00343]本明細書では、ＣＤ１３７に結合しうるキメラ融合タンパク質である、組換えタンパク質が提供される。ＣＤ１３７は、活性化Ｔ細胞の表面マーカーである。したがって、ＣＤ１３７に結合しうるキメラ融合タンパク質は、活性化Ｔ細胞に特異的に結合することが可能であり、この場合、ＣＦＰは、（ｉ）抗ＣＤ１３７結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および（ｉｉ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性ドメインは、抗体の抗原結合性断片である、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖドメイン、またはｓｄＡｂドメインを含むＣＤ１３７結合性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性ドメインは、ｓｃＦｖを含む。本明細書では、Ｔ細胞上で発現されるＣＤ１３７に結合しうるキメラ融合タンパク質である組換えタンパク質を発現する骨髄細胞であって、ＣＦＰが、（ｉ）抗ＣＤ１３７結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および（ｉｉ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含み；ＣＤ１３７発現Ｔ細胞を特異的に標的化することが可能であり、ＣＤ１３７発現Ｔ細胞を貪食し、溶解し、これにより、溶解する骨髄細胞が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１３７に結合しうるキメラ融合タンパク質である、組換えタンパク質を発現する骨髄細胞は、Ｔ細胞リンパ腫などのＣＤ１３７陽性がんのための治療剤である。

【0257】

[00344]一般に、ＣＤ１３７は、活性化免疫細胞上で発現される。ＣＤ１３７は、免疫カスケードのうちの、自然細胞および獲得細胞のいずれにおいても発現される。健常個体では、Ｔ細胞は、リンパ節（例えば、Ｔ細胞が活性化状態で見出される、扁桃腺）内で豊富でありうる。ＣＤ１３７陽性Ｔ細胞はまた、腫瘍内でも、豊富でありうる。

【0258】

[00345]ＣＤ１３７陽性Ｔ細胞は、移植片対宿主拒絶および宿主対移植片拒絶の一因でありうることが注目される。加えて、同種細胞療法の場合にも、ＣＤ１３７は、宿主対移植片拒絶を低減するように、破壊について標的化されうる。一部の実施形態では、本明細書で記載される方法および組成物は、（ｉ）がん抗原に結合し、がん抗原を発現するがん細胞を溶解するキメラ受容体を発現する同種骨髄細胞を使用するステップ；および（ｉｉ）ＣＤ１３７に結合しうるキメラ抗原を発現し、ＣＤ１３７陽性Ｔ細胞を溶解する骨髄細胞を投与し、これにより、宿主のＣＤ１３７陽性Ｔリンパ球による、同種骨髄細胞の殺滅を低減するステップを含む。

【0259】

[00346]本明細書の一態様では、ＣＤ１３７に結合しうるキメラ融合タンパク質であり、また、第２の細胞外部分、第３の細胞外部分、またはさらなる細胞外部分に結合する、第２の結合性ドメイン、第３の結合性ドメイン、またはさらなる結合性ドメインをも含み、細胞外部分が細胞表面分子でありうる、組換えタンパク質が提供される。一部の実施形態では、第２の結合性ドメイン、または第３の結合性ドメイン、またはさらなる結合性ドメインのうちのいずれか１つは、標的細胞上の、さらなる細胞表面分子、例えば、がん細胞または活性化Ｔ細胞上の細胞表面分子など、ＣＤ１３７以外の細胞表面分子に対する結合性ドメインを含みうる。第２の結合性ドメイン、または第３の結合性ドメイン、またはさらなる結合性ドメインは、ＣＤ５、または本明細書中の任意の箇所に記載された、他の任意の標的細胞上の抗原など、標的細胞上の、任意のさらなる細胞表面分子に対する結合性ドメインを含みうる。

【0260】

[00347]一部の実施形態では、第２の結合性ドメイン、または第３の結合性ドメイン、またはさらなる結合性ドメインのうちのいずれか１つは、骨髄細胞上の、細胞表面分子に対する結合性ドメインを含みうる。一部の実施形態では、骨髄細胞に対する結合性ドメインを含む、第２の結合性ドメイン、または第３の結合性ドメイン、またはさらなる結合性ドメインのうちのいずれか１つは、結合時に、骨髄細胞を活性化しうる。

【0261】

[00348]一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性タンパク質は、ＣＤ１３７に結合することが可能な細胞外ドメインを含むキメラ融合タンパク質であり、ＣＤ８に由来するヒンジドメインをさらに含み、この場合、ヒンジドメインは、細胞質側において、膜貫通ドメインへと作動的に連結され、細胞外側において、ＣＤ１３７結合性ドメインへと作動的に連結される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５、１６、１７、１８、または１９の配列のうちのいずれか１つに示された配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８アルファ（ＣＤ８ａ）膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５に示された配列、または配列番号１５に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１６に示された配列、または配列番号１６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１７に示された配列、または配列番号１７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１８に示された配列、または配列番号１８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ６８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１９に示された配列、または配列番号１９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰのＥＣＤは、配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９に示された配列のうちのいずれか１つから選択される膜貫通ドメイン、または配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する膜貫通ドメインへと融合された；配列番号３１に描示されたアミノ酸配列、または３１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0262】

[00349]一部の実施形態では、細胞外ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインは、配列番号２０もしくは配列番号２１の配列、または配列番号２０もしくは配列番号２１のそれぞれに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０の膜貫通ドメイン、または配列番号２０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２１の膜貫通ドメイン、または配列番号２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０または２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインへと融合された；配列番号３１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＥＣＤ結合ドメインを含む。

【0263】

[00350]一部の実施形態では、ＣＦＰは、表４に示された、ＣＤ１６膜貫通ドメイン（例えば、短鎖ヒンジドメインを含む）の配列を含むＴＭドメインへと作動可能に連結された；配列番号３１に示された配列、または配列番号３１に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＣＤ６４膜貫通ドメイン配列を含むＴＭドメインへと作動可能に連結された；配列番号３１に示された配列、または配列番号３１に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、表４に示された、ＣＤ８９膜貫通ドメイン（例えば、短鎖ヒンジドメインを含む）の配列を含むＴＭドメインへと作動可能に連結された；配列番号３１に示された配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３１に示された配列、または配列番号３１に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を伴うＥＣＤ；ＣＤ１６タンパク質のＴＭドメイン、またはＣＤ６４タンパク質のＴＭＤ、またはＣＤ８９タンパク質のＴＭＤに由来する配列を含むＴＭドメイン；および、任意選択で、本明細書で記載される、他の別個のＩＣＤに加えて、例えば、ＣＤ１６タンパク質、ＣＤ６４タンパク質、またはＣＤ８９タンパク質のそれぞれに由来する、対応する細胞内ドメイン（ＩＣＤ）またはその部分を含む。ＣＤ１６およびＣＤ８９の、例示的ＩＣＤ配列は、表４に提示される。

【0264】

[00351]一部の実施形態では、ＣＦＰは、１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ以外の受容体に由来するドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、またはＦｃＲεに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0265】

[00352]一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つ、または配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列のアミノ酸配列を含む、ＦｃＲガンマタンパク質（ＦｃＲγ鎖）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２６の配列、または配列番号２６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＣＤ４０の細胞内シグナル伝達ドメインに由来する。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２７の配列、または配列番号２７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２８の配列、または配列番号２８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２９の配列、または配列番号２９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３０の配列、または配列番号３０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0266】

[00353]一部の実施形態では、ＣＦＰは、（ａ）（ｉ）ＣＤ１３７に特異的に結合するｓｃＦｖ、および（ｉｉ）ＣＤ８に由来するヒンジドメイン；ＣＤ２８に由来するヒンジドメイン；またはＣＤ６８に由来する細胞外ドメインの、少なくとも一部を含む細胞外ドメイン；（ｂ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインが、（ｉ）ＦｃＲα、ＦｃＲγ、またはＦｃＲεに由来する、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン：ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む（Ａ）、またはＣＤ４０に由来する（Ｂ）を含む、細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、上記に対する代替物（ｃ）として、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインが、（ｉ）貪食受容体の細胞内ドメインに由来する、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉ）貪食受容体のスカベンジャー受容体の細胞内ドメインに由来し、ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む（Ａ）、またはＣＤ４０に由来する（Ｂ）を含む、第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、自然免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0267】

[00354]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、１つを超える、細胞外抗原結合性ドメインを有しうる。

【0268】

[00355]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、ＣＤ１３７結合性ドメインおよび細胞外タンパク質または糖タンパク質、がん細胞または標的細胞の表面上に存在する、膜タンパク質または糖タンパク質など、第２の細胞表面分子に対する第２の結合性ドメインを含みうる。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、本明細書で記載される、任意の標的に結合する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、第２の結合性ドメインが、標的細胞または近傍細胞の細胞外マトリックス上のタンパク質に結合するようにデザインされうる。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、近傍細胞または標的細胞の細胞外腔内に放出される分子などの可溶性標的に結合しうる第２の結合性ドメインを含みうる。

【0269】

[00356]本明細書の一態様では、標的細胞上のＣＤ１３７（また、４－１ＢＢとしても公知である）に結合しうるキメラ融合タンパク質が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１３７に結合しうるＣＦＰをコードする組換え核酸は、骨髄細胞が、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰを発現するように、骨髄細胞内に組み込まれうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ１４＋細胞でありうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－でありうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６ｌｏｗでありうる。ＣＤ１３７に結合するＣＦＰを発現する骨髄細胞は、多様な方式で使用されうる：単独で使用される場合もあり；ＣＦＰを発現する、他の骨髄細胞と、治療用組成物中で組み合わせて使用される場合もあり；組合せ療法レジメンにおいて、個別に使用される場合もあり；単独で使用される場合もあり、他の核酸治療剤、ペプチド治療剤、タンパク質治療剤、または低分子治療剤を含む、他の治療剤と組み合わせて使用される場合もある。

【0270】

[00357]ＣＤ１３７は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９）のメンバーであり、ある特定の免疫細胞の表面上で発現される。ＣＤ１３７は、活性化Ｔ細胞上で発現される、細胞表面タンパク質である。ＣＤ１３７の、活性化抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の、そのリガンド（ＣＤ１３７Ｌ；また、ＴＮＦＳＦ９または４－１ＢＢＬとしても公知である）との相互作用は、がんに対する免疫を促進する、双方向性の活性化をもたらしうる。例えば、ＣＤ１３７受容体を介するシグナルは、Ｔ細胞の活性化および生存をもたらしうることが示されている。逆に、係合されたＣＤ１３７Ｌは、骨髄細胞、樹状細胞など、それを発現する細胞に影響を与え、それらの活性化および成熟をもたらしうる。ウレルマブおよびウトミルマブなど、アゴニスト性ＣＤ１３７抗体の使用は、多様な種類の腫瘍を処置するのに、有望な免疫療法であると考えられる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７Ｌを含むＣＦＰは、骨髄細胞内で発現され、抗腫瘍治療のために使用される場合があり、ＣＤ１３７Ｌの、単球へのシグナル伝達は、それらの、ＣＤ１３７Ｌ－ＤＣへの分化を誘導する。ＣＤ１３７Ｌ－ＤＣは、１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）細胞への極性化、および腫瘍に対する強力な１型ＣＤ８＋ Ｔ細胞（Ｔｃ１）応答を優先的に誘導する。

【0271】

[00358]ＣＤ１３７アゴニスト性抗体、またはそのＣＤ１３７結合性領域は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける免疫応答を活性化するように、ＣＦＰをデザインするのに使用されうる。代替的に、ＣＤ１３７Ｌまたはその断片は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける免疫応答を活性化するように、ＣＦＰをデザインするのに使用されうる。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７アゴニスト抗体もしくはその断片またはＣＤ１３７Ｌを、細胞外ドメインとして含む、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰは、免疫応答を活性化するのに使用される場合もあり、抗新生物剤として使用される場合もある。本明細書では、ＣＤ１３７アゴニスト性抗体またはその断片を含む、ＣＤ１３７結合性細胞外ドメインを含み、抗体が、ｓｃＦｖ、二特異性抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一価抗体、ｓｃＦｖ断片、ｓｃＲｖ－Ｆｃ断片、ＩｇＮＡＲ、ｈｃＩｇＧ、Ｖ_ＨＨ抗体、ナノボディー、およびアルファボディーでありうる、キメラ融合タンパク質が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１３７アゴニスト性抗体は、ヒト抗体もしくはヒト化抗体、またはこれらの断片である。一部の実施形態では、ＣＤ１３７アゴニスト性抗体は、ウレルマブまたはその断片である。本明細書では、ＣＤ１３７アゴニスト性抗体またはその断片を含む、ＣＤ１３７結合性細胞外ドメインを含み、抗体が、ｓｃＦｖ、二特異性抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一価抗体、ｓｃＦｖ断片、ｓｃＲｖ－Ｆｃ断片、ＩｇＮＡＲ、ｈｃＩｇＧ、Ｖ_ＨＨ抗体、ナノボディー、およびアルファボディーでありうる、キメラ融合タンパク質をコードする核酸構築物が提供される。本明細書では、ＣＤ１３７Ｌまたはその断片を含む、ＣＤ１３７結合性細胞外ドメインを含むキメラ融合タンパク質が提供される。一部の実施形態では、治療用細胞は、骨髄細胞が、リンパ球に結合し、これを活性化するように、骨髄細胞などの細胞内で発現されうる、全長ＣＤ１３７Ｌタンパク質を発現させることにより作出されうる。一部の実施形態では、治療用細胞は、ＣＤ１３７Ｌの、少なくとも１つの細胞外断片を発現するＣＦＰをデザインし、これを発現させることにより作出されうる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７Ｌを、細胞外ドメインとして含むＣＦＰは、ＣＤ１３７Ｌの細胞内ドメインをさらに含みうる。本段落において記載されるＣＦＰは、ＣＦＰ、またはＣＦＰをコードする核酸構築物を発現する治療用細胞として、対象に投与される場合に、免疫応答を刺激する、任意の治療目的で使用される場合があり、この場合、核酸構築物は、ｉｎ ｖｉｖｏの細胞により取り込まれ、細胞が、ＣＦＰを発現するように投与される。一部の実施形態では、投与される核酸構築物は、標的に対する標的化部分を含む場合があり、特異的細胞型または特異的組織により取り込まれうる。一部の実施形態では、核酸構築物は、細胞外可溶性タンパク質など、ＣＤ１３７結合性ドメインを含む、細胞外タンパク質をコードしうる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性ドメインを含むＣＦＰは、細胞外可溶性タンパク質であり、免疫刺激性ＣＤ１３７アゴニスト性タンパク質として機能し、このため、ｉｎ ｖｉｖｏの対象に投与され、発現される場合、リンパ球を活性化しうる。一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、受容体タンパク質である。したがって、ＣＤ１３７結合性細胞外ドメインを含むＣＦＰ受容体は、膜貫通ドメインを含み、任意選択で、細胞内ドメインを含む。ＣＤ１３７アゴニスト結合性ドメインおよび／または膜貫通ドメインを有する、融合タンパク質を発現する細胞は、Ｔリンパ球を活性化し、ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗腫瘍応答を活性化するのに使用されうる。

【0272】

[00359]一部の実施形態では、抗がんＤＣワクチンなどのＤＣワクチンを作出するように、ＣＤ１３７結合性融合タンパク質がデザインされ、ＤＣ細胞などの骨髄細胞内で発現されうる。本明細書では、ヒトＣＤ１３７Ｌまたはその結合性断片などのＣＤ１３７結合性リガンドを含む細胞外ドメインを含むＣＦＰを発現する骨髄細胞（例えば、ＤＣ）が提供される。

【0273】

[00360]しかし、ＣＤ１３７は、Ｔ細胞リンパ腫などのＣＤ１３７陽性がんにおいても標的化されうる。本明細書で記載される、ＣＤ１３７結合性キメラ融合タンパク質を発現するようにデザインされた、ＣＤ１３７標的化骨髄細胞は、ＣＤ１３７＋腫瘍において、強力で、安全で、かつ効果的な腫瘍殺滅薬剤として作用することが可能であり、Ｔ細胞リンパ腫のほか、肺がん、膵がん、白血病、および他のがんなど、他のがんにおける、養子細胞療法に使用されうる。

【0274】

[00361]一部の実施形態では、本明細書で記載される、キメラ融合タンパク質は、リンパ球上およびＮＫ細胞上のＣＤ１３７受容体に結合するように標的化される。適切な骨髄細胞内で発現されると、細胞を、適切な培養条件下で、限定的期間にわたり、さらに養生することにより、キラー骨髄細胞の作出、およびｅｘ ｖｉｖｏにおける、治療剤としての細胞の開発が可能となる。ＣＤ１３７結合性ＣＦＰを発現する、本明細書で記載されるキラー骨髄細胞は、ＣＤ１３７細胞悪性腫瘍を有するか、またはＣＤ１３７細胞機能から生じる疾患もしくは状態の可能性がある対象における治療のために使用されうる。

【0275】

[00362]一部の実施形態では、本明細書で記載される、キメラ融合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、適切な細胞が、核酸を取り込むと、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、細胞により、キメラ融合タンパク質が発現され、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、細胞が、ＣＤ１３７を発現する細胞に結合しうるように、治療用組成物中の核酸構築物の形態で投与されうる治療剤である。ＣＤ１３７結合性ＣＦＰ融合タンパク質内の、さらなるドメイン（例えば、細胞内シグナル伝達ドメイン）は、タンパク質が発現される細胞を、強力な細胞傷害性細胞、例えば、貪食活性が増強された細胞とし、これにより、タンパク質を発現する細胞を、リンパ球またはＮＫ細胞など、ＣＤ１３７を発現する細胞の破壊に標的化された、「攻撃細胞」またはキラー細胞としうる。

【0276】

[00363]一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性キメラ融合タンパク質は、異種膜貫通ドメイン、および／または１つもしくは複数の異種細胞内ドメインを含むことが可能であり、強力な免疫反応細胞を作出するように、骨髄細胞など、適切な細胞内で発現されうる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合剤を有するＣＦＰの結合は、ＣＦＰ発現細胞が、ＣＤ１３７を発現する標的細胞を破壊するように、ＣＦＰを発現する細胞内における貪食応答、炎症応答、および／または細胞傷害性応答を活性化する、キメラ融合タンパク質（受容体）の細胞内ドメインを活性化する。ＣＤ１３７を発現する標的細胞の例は、ＣＤ１３７陽性細胞がん、例えば、肺がん、白血病、膵臓がん、結腸直腸がん、およびリンパ腫などにおける、Ｔリンパ球またはＮＫ細胞などのリンパ球でありうる。

【0277】

[00364]一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰは、ＣＤ１３７発現細胞が、活性化ＣＤ１３７＋リンパ球に結合し、これを殺滅することにより、免疫応答の調節因子として作用しうるように、適切な細胞（例えば、骨髄細胞）内で発現されうる。このような実施形態では、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰは、同種免疫応答などの活性化免疫応答を低減するように、治療的に使用される。

【0278】

[00365]一部の実施形態では、抗ＣＤ１３７細胞外部分を発現するように操作された、活性貪食細胞などのキラー細胞は、いくつかの非自家細胞ベース免疫療法に対する補助療法として使用されうる。このような組合せ療法は、黒色腫、神経膠芽腫、肉腫、腎細胞癌、卵巣がん、肺がん、膵がん、乳がん、および他の多くのがんを含むがこれらに限定されない、多種多様ながんにおいて援用されうる。

【0279】

[00366]一部の実施形態では、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰの核酸構築物は、ＣＦＰを発現させるための骨髄細胞内に組み込まれ、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰを発現する骨髄細胞は、ＣＤ１３７ ＣＦＰを発現する細胞が、ＣＤ１３７を発現する腫瘍抑制性リンパ球を低減し、がん標的化ＣＡＲを発現する細胞（ＣＡＲ－ＰまたはＣＡＲ－Ｔ）の腫瘍殺滅機能を増強するように、ＣＡＲを発現する細胞が、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ４０など、ＣＤ１３７以外のがん抗原を標的化する、ＣＡＲ－Ｐ（例えば、ＣＡＲまたはＣＦＰを発現する貪食細胞）療法、またはＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ発現Ｔ細胞）療法におけるヘルパー細胞として使用されうる。したがって、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰは、ヘルパー細胞が、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰをコードする核酸構築物が組み込まれ、細胞が、ＣＤ１３７結合剤である、ＣＦＰの細胞外ドメインを発現する、細胞傷害性細胞である、任意の養子細胞療法における共投与のためのヘルパー細胞を開発するのに使用されうる。ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰを発現する細胞は、骨髄細胞でありうる。ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰを発現する細胞は、貪食骨髄細胞でありうる。ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰを発現する細胞は、リンパ系細胞でありうる。ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰを発現する細胞は、細胞傷害性細胞でありうる。

【0280】

[00367]一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰは、ＣＤ１３７発現細胞が、同種細胞療法応答、宿主対移植片病、または自己免疫疾患もしくは自己免疫状態などにおける、免疫応答の調節因子として作用しうるように、適切な細胞（例えば、骨髄細胞）内で発現されうる。例えば、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰは、ＣＡＲ－ＰまたはＣＡＲ－Ｔが、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ４０など、ＣＤ１３７以外のがん抗原を発現するがん細胞などの罹患細胞を標的化する同種細胞である、ＣＡＲ－Ｐ療法またはＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせて使用されうる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰは、ヘルパー細胞が、ＣＤ１３７結合性ＣＦＰを含み、ＣＤ１３７結合剤である、ＣＦＰの細胞外ドメインを発現する、細胞傷害性細胞である、任意の養子細胞療法における共投与のためのヘルパー細胞を開発するのに使用されうる。ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰを発現する細胞は、骨髄細胞でありうる。ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰを発現する細胞は、貪食骨髄細胞でありうる。ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰを発現する細胞は、リンパ系細胞でありうる。ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰを発現する細胞は、細胞傷害性細胞でありうる。

【0281】

[00368]一部の実施形態では、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰは、骨髄細胞内で発現され、ＣＡＲＴ療法と共に使用されうるが、この場合、ＣＡＲＴ細胞は、同種細胞の場合もあり、自家細胞の場合もある。一部の実施形態では、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰは、骨髄細胞内で発現され、ＣＤ１３７＋細胞以外のがん細胞を標的化するＣＡＲＴ療法と共に使用されうるが、この場合、ＣＡＲＴ細胞は、同種細胞の場合もあり、自家細胞の場合もある。一部の実施形態では、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰは、骨髄細胞内で発現され、ＣＡＲＴ療法と共に使用されうるが、この場合、ＣＡＲＴ細胞および／または骨髄細胞は、同種細胞の場合もあり、自家細胞の場合もある。一部の実施形態では、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰを発現する細胞は、細胞が、治療として投与される対象と比べて、同種細胞の場合もあり、自家細胞の場合もある。

【0282】

[00369]一部の実施形態では、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰは、ＣＤ１３７アゴニスト抗体またはその断片から構成される、ＣＤ１３７結合性細胞外ドメインを含みうる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７アゴニスト抗体またはその断片から構成される、ＣＤ１３７結合性細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ、ＶＨＨ、ダイアボディー、二特異性抗体、もしくはＣＤ１３７のリガンドまたはその断片を含みうる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰは、ＣＤ３ｚ、ＣＤ２、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＤ６８、ＦｃｇＲ、ＦｃＧ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲアルファの膜貫通ドメイン、または他の任意の適切なドメインに由来する膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）をさらに含みうる。一部の実施形態では、上記で記載されたＣＤ１３７標的化ＣＦＰは、１つまたは複数のシグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインをさらに含みうる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰは、ＰＩ３Ｋ動員ドメイン、スカベンジャー受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０細胞内ドメイン、ＦｃＲ由来シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ細胞内ドメイン、ＮＬＲＰ３細胞内ドメイン、ＣＤ３由来細胞内ドメイン、および他の細胞内ドメインに由来する細胞内ドメインを含みうる。表１および４において、本開示は、本明細書の多様な実施形態において記載される、多様な個別のドメインについての配列情報を掲載するが、これらの多様な組合せは、表１および４における配列情報を使用し、当技術分野で公知の分子生物学法を活用して、キメラ融合タンパク質を開発するように、単一の生体分子へと組み込まれうることは、本開示の範囲内にあることが想定される。

【0283】

[00370]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）は、ＣＤ１３７に結合するように標的化された、細胞外ドメイン（ＥＣＤ）であって、配列番号３１のアミノ酸配列、または配列番号３１に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する配列を含みうるＥＣＤを含む。
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ（配列番号３１）。

【0284】

[00371]一態様では、キメラ融合タンパク質は、ＣＤ１３７に結合する結合性ドメインを有する、可溶性タンパク質を含みうる。一実施形態では、キメラ融合タンパク質は、ＣＤ１３７に結合する、少なくとも１つの結合性ドメインと、それらのうちの少なくとも１つが、骨髄細胞上の細胞表面分子に結合する、１つまたは複数のさらなる結合性ドメインとを有する、可溶性タンパク質を含みうる。一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、ＣＤ１３７に結合しうる結合性ドメインと、骨髄細胞上の細胞表面分子に結合しうる結合性ドメインとを含む。一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、ＣＤ１３７に結合しうる結合性ドメインと、骨髄細胞上の細胞表面分子に結合しうる結合性ドメインとを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰはまた、第３の細胞外部分、またはさらなる細胞外部分に結合する、第３の結合性ドメイン、または任意の数の、さらなる結合性ドメインも含み、この場合、細胞外部分は、細胞表面分子の場合もあり、細胞外環境内の可溶性成分の場合もある。一部の実施形態では、本明細書で記載される、キメラ融合タンパク質は、二特異性エンゲージャー（例えば、二特異性骨髄細胞エンゲージャー：ＢｉＭＥ）と称される場合があり、この場合、二特異性エンゲージャーは、２つの「エンゲージャー」部分を含み、エンゲージャー部分は、２つの異なる標的に対する結合性ドメインであり、第１の結合性ドメインは、例えば、活性化Ｔ細胞上、活性化ＮＫ細胞上、またはがん細胞上など、任意のＣＤ１３７＋細胞上のＣＤ１３７に結合し、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞上の表面分子に結合する。一部の態様では、本明細書で記載される、キメラ融合タンパク質は、三特異性エンゲージャー（三特異性骨髄細胞エンゲージャー、ＴＲｉＭＥ）と称され、この場合、三特異性エンゲージャーは、３つの異なる標的に対する結合性ドメインである、３つのエンゲージャー部分を含み、第１の結合性ドメインは、例えば、活性化Ｔ細胞、活性化ＮＫ細胞、またはＣＤ１３７発現がん細胞など、任意のＣＤ１３７＋細胞上のＣＤ１３７に結合し、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞上の細胞表面分子に結合し、第３の結合性ドメインは、第３のエレメントに結合し、第３のエレメントは、ＣＤ１３７、または第２の結合性ドメインが結合する骨髄細胞上の細胞表面分子以外の異なる細胞表面分子でありうる。一部の実施形態では、第３の結合性ドメインは、ＣＤ１３７＋細胞上の、ＣＤ１３７以外の細胞表面分子に結合する。一部の実施形態では、第３の結合性ドメインは、骨髄細胞上の細胞表面分子に結合し、かつ、第２の結合性ドメインが結合する分子以外の分子に結合する。一部の実施形態では、ＢｉＭＥまたはＴｒｉＭＥは、骨髄細胞が、標的細胞を攻撃し、貪食し、溶解しうるように、標的細胞を、骨髄細胞と並置する。一部の実施形態では、ＢｉＭＥまたはＴＲｉＭＥの、骨髄細胞への係合は、骨髄細胞と、標的細胞とを近接させるだけではなく、また、標的細胞に、効率的に係合し、これを、効率的に死滅させるようにも、骨髄細胞を活性化しうる。一部の実施形態では、本明細書で記載される、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、結合時において、骨髄細胞を活性化する。一部の実施形態では、ＢｉＭＥまたはＴｒｉＭＥは、分泌型融合タンパク質である。一部の実施形態では、本明細書で記載されるエンゲージャー、または任意の結合性ドメインは、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディー、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶ_ＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、もしくはこれらのいずれかの機能的断片でありうる。一部の実施形態では、エンゲージャーは、ＣＤ１３７のリガンド（配列番号３１）、またはＣＤ１３７に結合する、その断片などのリガンドでありうる。

【0285】

[00372]一部の実施形態では、腫瘍細胞上のＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含むＣＦＰは、抗腫瘍活性における使用のためにデザインされる。ＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含む融合タンパク質をコードする組換え核酸は、骨髄細胞内で発現されるが、この場合、キメラ融合タンパク質は、膜貫通タンパク質であり、骨髄細胞は、貪食細胞であり；ＣＦＰの、細胞上、例えば、腫瘍細胞上で発現された標的であるＣＤ１３７への係合時に、骨髄細胞は、活性化され、標的細胞、例えば、腫瘍細胞を貪食し、これを溶解し、これにより、腫瘍の増殖を緩徐化または失速させ、腫瘍のサイズを低減し、かつ／または腫瘍を消失させる。

【0286】

[00373]一部の実施形態では、活性化ＣＤ１３７発現細胞上の、ＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含むＣＦＰは、宿主対移植片病（ｈｏｓｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｇｒａｐｈ－ｄｉｓｅａｓｅ）（ＨＶＧＤ）、あるいは同種反応、または急性もしくは持続性の重度炎症と関連する状態の処置など、免疫の抑制における使用のためにデザインされる。一部の実施形態では、ＣＤ１３７発現細胞は、活性化Ｔ細胞または活性化ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞内で発現される、ＣＦＰの細胞外ドメイン上の、ＣＤ１３７のリガンドまたはその断片は、活性化Ｔ細胞上または活性化ＮＫ細胞上のＣＤ１３７への結合時に、骨髄細胞を活性化し、貪食を活性化し、活性化Ｔ細胞または活性化ＮＫ細胞を溶解し、炎症を低減する。

【0287】

[00374]本明細書の一部の実施形態では、医薬組成物などの治療剤について記載され、この場合、医薬組成物は、（ｉ）ＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含むＣＦＰ；（ｉｉ）ＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含むＣＦＰをコードする組換え核酸；または（ｉｉｉ）ＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含むＣＦＰを発現する細胞を含みうる。

【0288】

[00375]一部の実施形態では、ＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含むＣＦＰ；ＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含むＣＦＰをコードする組換え核酸を含む本明細書で記載される医薬組成物；またはＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含むＣＦＰを発現する細胞などの治療剤は、（ｉ）１つもしくは複数のさらなるＣＦＰ；または（ｉｉ）１つもしくは複数のさらなるＣＦＰをコードする組換え核酸；または（ｉｉｉ）１つもしくは複数のさらなるＣＦＰを発現する細胞のそれぞれ、あるいはこれらの任意の組合せと組み合わせて使用されうる。上記についての、１つの例として述べると、ＣＤ１３７に結合することが可能である結合性ドメインを含むＣＦＰを発現する骨髄細胞を含む、本明細書で記載される医薬組成物は、ＣＤ５、または本明細書中の任意の箇所に記載された、他の任意の結合性ドメインに結合することが可能である、結合性ドメインを含むＣＦＰを発現する骨髄細胞と組み合わせて使用されうる。同様に、本明細書で記載される組成物の任意の組合せは、治療剤中で組み合わされるか、または混合されることが想定され、本開示の範囲内にあるであろう。

【0289】

ＣＤ７０結合タンパク質およびＣＤ７０結合ドメイン
[00376]ＣＤ７０は、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肺がん、Ｔ細胞リンパ腫、神経膠腫、甲状腺がん、頭頸部がん、胃がん、肝がん、膵がん、尿路上皮がん、卵巣がん、および黒色腫を含むがこれらに限定されない、ある特定のがんにおいて高度に発現されうる。本明細書では、がん細胞上のＣＤ７０に結合することが可能であり、がんなど、ＣＤ７０の過剰発現を伴う疾患に対する治療的使用のためにデザインされた、キメラ融合タンパク質が提供される。

【0290】

[00377]本明細書の一態様では、ＣＤ７０（ＣＤ７０結合剤であるＣＦＰ）に結合しうる細胞外結合性ドメインを有するキメラ融合タンパク質が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ７０結合剤であるＣＦＰは、配列番号３２のアミノ酸配列、または配列番号３２のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有する、細胞外結合性ドメインを含みうる。ＣＤ７０結合性ドメインは、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディー、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶ_ＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、もしくはこれらのいずれかの機能的断片を含みうる。

【0291】

[00378]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ８に由来するヒンジドメインをさらに含み、この場合、ヒンジドメインは、細胞質側において、膜貫通ドメインへと作動的に連結され、細胞外側において、ＣＤ７０結合性ドメインへと作動的に連結される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５、１６、１７、１８、または１９の配列のうちのいずれか１つに示された配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８アルファ（ＣＤ８ａ）膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５に示された配列、または配列番号１５に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１６に示された配列、または配列番号１６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１７に示された配列、または配列番号１７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１８に示された配列、または配列番号１８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ６８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１９に示された配列、または配列番号１９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰのＥＣＤは、配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９に示された配列のうちのいずれか１つから選択される膜貫通ドメイン、または配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する膜貫通ドメインへと融合された；配列番号３２に描示されたアミノ酸配列、または３２に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0292】

[00379]一部の実施形態では、細胞外ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインは、配列番号２０もしくは配列番号２１の配列、または配列番号２０もしくは配列番号２１のそれぞれに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０の膜貫通ドメイン、または配列番号２０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２１の膜貫通ドメイン、または配列番号２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０または２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインへと融合された；配列番号３２に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＥＣＤ結合ドメインを含む。

【0293】

[00380]一部の実施形態では、ＣＦＰは、表４に示された、ＣＤ１６膜貫通ドメイン（例えば、短鎖ヒンジドメインを含む）の配列を含む膜貫通ドメインへと作動可能に連結された；配列番号３２に示された配列、または配列番号３２に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＣＤ６４膜貫通ドメイン配列を含む膜貫通ドメインへと作動可能に連結された；配列番号３２に示された配列、または配列番号３２に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、表４に示された、ＣＤ８９膜貫通ドメイン（例えば、短鎖ヒンジドメインを含む）の配列を含む膜貫通ドメインへと作動可能に連結された；配列番号３２に示された配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３２に示された配列、または配列番号３２に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を伴うＥＣＤ；ＣＤ１６タンパク質の膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４タンパク質のＴＭＤ、またはＣＤ８９タンパク質のＴＭＤに由来する配列を含む膜貫通ドメイン；および、任意選択で、本明細書で記載される、他の別個のＩＣＤに加えて、例えば、ＣＤ１６タンパク質、ＣＤ６４タンパク質、またはＣＤ８９タンパク質のそれぞれに由来する、対応する細胞内ドメイン（ＩＣＤ）またはその部分を含む。ＣＤ１６およびＣＤ８９の、例示的ＩＣＤ配列は、表４に提示される。

【0294】

[00381]一部の実施形態では、ＣＦＰは、１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ以外の受容体に由来するドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、またはＦｃＲεに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0295】

[00382]一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つ、または配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列のアミノ酸配列を含む、ＦｃＲガンマタンパク質（ＦｃＲγ鎖）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２６の配列、または配列番号２６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＣＤ４０の細胞内シグナル伝達ドメインに由来する。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２７の配列、または配列番号２７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２８の配列、または配列番号２８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２９の配列、または配列番号２９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３０の配列、または配列番号３０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0296】

[00383]本明細書では、骨髄細胞など、適切な細胞内で発現されうる、上記で記載されたＣＤ７０結合性ドメイン（ＣＤ７０結合剤）を含むＣＦＰをコードする、組換え核酸が提供される。骨髄細胞は、貪食細胞でありうる。一部の実施形態では、ＣＤ７０結合剤は、細胞上のＣＤ７０への結合時に、ＣＤ７０結合性ＣＦＰを発現する骨髄細胞を活性化する。本明細書では、本明細書で使用される、ＣＤ７０－ＣＦＰと称される、キメラＣＤ７０結合受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸配列が提供される。一部の実施形態では、キメラ受容体融合タンパク質、例えば、ＣＤ７０結合受容体融合タンパク質をコードする組換え核酸は、骨髄細胞など、適切な細胞内で発現されうる。一部の実施形態では、ＣＤ７０－ＣＦＰが、骨髄細胞など、適切な細胞上で発現されると、ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０を発現する標的細胞に結合することが可能であり、結合剤を発現する骨髄細胞が活性化される。一部の実施形態では、ＣＤ７０－ＣＦＰは、ＣＤ７０との係合時に、ＣＤ７０－ＣＦＰの細胞内シグナル伝達ドメインを活性化し、これが、ＣＤ７０－ＣＦＰをコードする組換え核酸を発現する骨髄細胞を活性化する。一部の実施形態では、骨髄細胞は、貪食細胞である。一部の実施形態では、貪食細胞であり、ＣＤ７０結合剤を発現する骨髄細胞は、ＣＤ７０結合剤が、別の細胞（標的細胞）上で発現されたＣＤ７０に結合すると、活性化され、標的細胞を貪食することが可能である。一部の実施形態では、標的細胞は、ＣＤ７０を発現する、任意の細胞でありうる。一部の実施形態では、標的細胞は、リンパ球である。一部の実施形態では、標的細胞は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）である。一部の実施形態では、標的細胞は、悪性細胞でありうる。一部の実施形態では、標的細胞は、悪性Ｔ細胞でありうる。一部の実施形態では、ＣＤ７０結合性ＣＦＰを発現する骨髄細胞は、Ｔ細胞リンパ腫に対する治療用組成物を作出するのに使用されうる。

【0297】

[00384]別の実施形態では、本明細書では、ＣＤ７０の細胞外ドメインに結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質などの組換えタンパク質が提供される。一部の実施形態では、本明細書で記載される、可溶性タンパク質などのキメラ融合タンパク質は、二特異性エンゲージャー（例えば、二特異性骨髄細胞エンゲージャー：ＢｉＭＥ）と称される場合があり、この場合、二特異性エンゲージャーは、２つの「エンゲージャー」部分を含み、エンゲージャー部分は、２つの異なる標的に対する結合性ドメインであり、第１の結合性ドメインは、例えば、活性化Ｔ細胞上、活性化ＮＫ細胞上、またはがん細胞上など、任意のＣＤ７０＋細胞上のＣＤ７０に結合し、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞上の表面分子に結合する。一部の態様では、本明細書で記載される、キメラ融合タンパク質は、三特異性エンゲージャー（三特異性骨髄細胞エンゲージャー、ＴＲｉＭＥ）と称され、この場合、三特異性エンゲージャーは、３つの異なる標的に対する結合性ドメインである、３つのエンゲージャー部分を含み、第１の結合性ドメインは、ＣＤ７０に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ７０に結合しうるドメインを有する、組換え細胞外タンパク質（ＢｉＭＥまたはＴＲｉＭＥ）は、貪食細胞などの骨髄細胞の表面タンパク質に結合しうる第２のドメインをさらに含む。骨髄細胞の表面タンパク質は、骨髄細胞の膜上で発現されるタンパク質、例えば、貪食受容体、パターン認識分子、またはスカベンジャー受容体でありうる。本明細書では、本明細書で記載された、ＣＤ７０の細胞外ドメインに結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質をコードする組換え核酸が提供される。

【0298】

[00385]本明細書では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ＣＤ７０タンパク質過剰発現と関連し、上記で記載された、ＣＤ７０結合タンパク質のうちのいずれかなどのＣＤ７０に結合しうる細胞外結合性ドメインを有する、少なくとも１つの組換えタンパク質を含む治療剤が提供される。本明細書の一部の実施形態では、ＣＤ７０結合タンパク質を発現する細胞が提供される。本明細書の一部の実施形態では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ＣＤ７０過剰発現と関連し、本明細書で記載されたＣＤ７０結合剤をコードする、少なくとも１つの組換え核酸を含む治療剤が提供される。本明細書の一部の実施形態では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ＣＤ７０タンパク質過剰発現と関連し、本明細書で記載されたＣＤ７０結合剤をコードする、組換え核酸を含む細胞を含む治療剤が提供される。一部の実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。一部の実施形態では、疾患は、がん、例えば、Ｔ細胞リンパ腫または結腸直腸がん（ＣＲＣ）である。

【0299】

[00386]例示的なＣＤ７０結合剤の配列は、配列番号３２：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＡＦＫＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＧＤＹＧＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＳＥＧＳＴＫＧＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３２）
である。

【0300】

[00387]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）は、配列番号３２のアミノ酸配列、または配列番号３２に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する配列を含む、ＣＤ７０に結合するように標的化された細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。

【0301】

ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合タンパク質およびｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合ドメイン、ならびにｃｌａｕｄｉｎ ３結合タンパク質およびｃｌａｕｄｉｎ ３結合ドメイン
[00388]タンパク質のｃｌａｕｄｉｎファミリーは、密着結合の構成要素であり、細胞間の分子の流動を制御する、傍細胞障壁を確立する。ｃｌａｕｄｉｎの膜貫通ドメインは、細胞質内の、Ｎ末端およびＣ末端を含む。ｃｌａｕｄｉｎタンパク質は、組織特異的発現を呈し、それらの機能の変更は、特異的組織のがんと関連することが多い。ｃｌａｕｄｉｎ－１の発現は、結腸がんにおいて、予後診断価値を有することが示されている。ｃｌａｕｄｉｎ－１は、病期ＩＩの結腸がんにおける、強力な予後診断指標であり、ｃｌａｕｄｉｎ－１８は、胃がんにおける、強力な予後診断指標である。腸表現型を伴う胃がんでは、遺伝子発現データの連続解析を介して、ｃｌａｕｄｉｎ－１８遺伝子の下方調節が裏付けられており、肝細胞癌では、ｃｌａｕｄｉｎ－１０の下方調節が裏付けられている。表面タンパク質であるｃｌａｕｄｉｎは、多様な治療戦略に有用な標的を表す。

【0302】

[00389]ｃｌａｕｄｉｎ １８アイソフォーム２（ｃｌａｕｄｉｎ １８．２）は、高度に選択的な系統マーカーである。ｃｌａｕｄｉｎ－１８スプライス変異体２は、治療用抗体の開発に適する、汎がん標的であり、正常組織内では、高度に限定的な発現パターンを呈する一方、胃がん、卵巣がん、および膵臓がんを含む、多様なヒトがんでは、高頻度の異所性活性化を伴う。

【0303】

[00390]ｃｌａｕｄｉｎ－３は、密着結合内で発現され、乳腺、卵巣、子宮、前立腺、および食道など、多数の臓器内および組織内の腫瘍形成時に調節されることが示される。ｃｌａｕｄｉｎ ３（ｃａｕｄｉｎ ３）の過剰発現が、傍細胞抵抗により測定される、経上皮抵抗を増大させるのに対し、経細胞抵抗は、著明には変化しなかった。ｃｌａｕｄｉｎ－３の過剰発現は、ナトリウムおよび塩化物の両方対する透過性の低下を結果としてもたらし、Ｃｌａｕｄｉｎ ３分子の発現は、卵巣がん組織、前立腺がん組織、乳がん組織、子宮がん組織、肝がん組織、肺がん組織、膵がん組織、胃がん組織、膀胱がん組織、および結腸がん組織など、多くのがん組織内で上昇される。Ｃｌａｕｄｉｎ ３およびＣｌａｕｄｉｎ ４の発現は、化学療法耐性子宮がんにおいて、特に、上昇されることが示されている。Ｃｌａｕｄｉｎ ３は、４回膜貫通領域を伴うタンパク質であり、２つのペプチドループを、細胞の外部へと露出させる構造を有する。

【0304】

[00391]本明細書の一態様では、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２（Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合剤であるＣＦＰ）に結合しうる細胞外結合性ドメインを有するキメラ融合タンパク質が提供される。

【0305】

[00392]別の態様では、本明細書では、ｃｌａｕｄｉｎ ３．０に結合しうる細胞外結合性ドメインを有する、キメラ融合タンパク質が提供される。

【0306】

[00393]一実施形態では、細胞外結合性ドメインは、ヒトｃｌａｕｄｉｎ １８．２、またはその断片に特異的であるｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、キメラ融合受容体タンパク質のＥＣＤは、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２の細胞外ループに結合する結合性ドメインを含む。

【0307】

[00394]一部の実施形態では、例示的Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合ドメインは、配列番号３３の配列；または配列番号３３に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する配列を含みうる。
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＹＮＷＨＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＨＹＴＧＳＴＮＹＮＰＡＬＲＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＩＹＮＧＮＳＦＰＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＹＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＦＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＩＦＩＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＡＹＳＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号３３）
[00395]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）は、配列番号３３のアミノ酸配列、または配列番号３３に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する配列を含む、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２に結合するように標的化された細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。

【0308】

[00396]一部の実施形態では、ＣＦＰは、表４に示された、ＣＤ１６膜貫通ドメイン（例えば、短鎖ヒンジドメインを含む）の配列を含むＴＭドメインへと作動可能に連結された；配列番号３３に示された配列、または配列番号３３に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＣＤ６４膜貫通ドメイン配列を含むＴＭドメインへと作動可能に連結された；配列番号３３に示された配列、または配列番号３３に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、表４に示された、ＣＤ８９膜貫通ドメイン（例えば、短鎖ヒンジドメインを含む）の配列を含むＴＭドメインへと作動可能に連結された；配列番号３３に示された配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３３に示された配列、または配列番号３３に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を伴うＥＣＤ；ＣＤ１６タンパク質のＴＭドメイン、またはＣＤ６４タンパク質のＴＭＤ、またはＣＤ８９タンパク質のＴＭＤに由来する配列を含むＴＭドメイン；および、任意選択で、本明細書で記載される、他の別個のＩＣＤに加えて、例えば、ＣＤ１６タンパク質、ＣＤ６４タンパク質、またはＣＤ８９タンパク質のそれぞれに由来する、対応する細胞内ドメイン（ＩＣＤ）またはその部分を含む。ＣＤ１６およびＣＤ８９の、例示的ＩＣＤ配列は、表４に提示される。

【0309】

[00397]一実施形態では、細胞外結合性ドメインは、ヒトｃｌａｕｄｉｎ ３．０に特異的なｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、細胞外結合性ドメインは、表２において示される配列を含む、ｃｌａｕｄｉｎ ３結合性ドメインを含む。表２は、開示について非限定的であることが意図される、ヒトｃｌａｕｄｉｎ ３．０結合性ドメインおよび／またはその断片の例示的配列を示す。

【0310】

【表2-1】

【0311】

【表2-2】

【0312】

【表2-3】

[00398]ｃｌａｕｄｉｎ ３結合性ドメインは、表２による配列のうちの１つまたは複数を含みうる。一部の実施形態では、ｃｌａｕｄｉｎ ３結合性ドメインは、表２の配列を含むＳｃＦｖを含む。一部の実施形態では、結合性ドメインは、表２の配列を含む、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディー、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、もしくはこれらのいずれかの機能的断片を含む。一部の実施形態では、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディー、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、もしくはこれらのいずれかの機能的断片は、１つまたは複数の抗原に特異的に結合する。

【0313】

[00399]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、抗原結合性ドメインなどの細胞外結合性ドメインを含み；細胞外結合性ドメインが、本明細書で記載されるｃｌａｕｄｉｎ １８．２タンパク質に結合する場合もあり；本明細書で記載されるｃｌａｕｄｉｎ ３タンパク質に結合する場合もあり；細胞外抗原結合性ドメインと、細胞内ドメインとの間に、ヒンジドメインを伴うか、またはこれを伴わない、膜貫通ドメインをさらに含みうる配列を含みうる受容体である。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ８に由来するヒンジドメインをさらに含み、この場合、ヒンジドメインは、細胞質側において、膜貫通ドメインへと作動的に連結され、細胞外側において、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合性ドメインへと作動的に連結される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５、１６、１７、１８、または１９の配列のうちのいずれか１つに示された配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８アルファ（ＣＤ８ａ）膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５に示された配列、または配列番号１５に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１６に示された配列、または配列番号１６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１７に示された配列、または配列番号１７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１８に示された配列、または配列番号１８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ６８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１９に示された配列、または配列番号１９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰのＥＣＤは、配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９に示された配列のうちのいずれか１つから選択される膜貫通ドメイン、または配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する膜貫通ドメインへと融合された；表２における配列に描示されたアミノ酸配列、または表２における配列のうちのいずれかに対する７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0314】

[00400]一部の実施形態では、細胞外ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインは、配列番号２０もしくは配列番号２１の配列、または配列番号２０もしくは配列番号２１のそれぞれに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０の膜貫通ドメイン、または配列番号２０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２１の膜貫通ドメイン、または配列番号２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０または２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインへと融合された；表２における配列のうちのいずれかに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＥＣＤ結合ドメインを含む。

【0315】

[00401]一部の実施形態では、ＣＦＰは、１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ以外の受容体に由来するドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、またはＦｃＲεに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0316】

[00402]一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つ、または配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列のアミノ酸配列を含む、ＦｃＲガンマタンパク質（ＦｃＲγ鎖）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２６の配列、または配列番号２６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＣＤ４０の細胞内シグナル伝達ドメインに由来する。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２７の配列、または配列番号２７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２８の配列、または配列番号２８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２９の配列、または配列番号２９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３０の配列、または配列番号３０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0317】

[00403]本明細書では、骨髄細胞など、適切な細胞内で発現されうる、上記で記載されたＣｌａｕｄｉｎ １８．２結合性ドメイン（Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合剤）を含むＣＦＰをコードする組換え核酸が提供される。骨髄細胞は、貪食細胞でありうる。一部の実施形態では、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合剤は、細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２への結合時に、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合性ＣＦＰを発現する骨髄細胞を活性化する。本明細書では、キメラＣｌａｕｄｉｎ １８．２結合受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸配列が提供される。一部の実施形態では、キメラ受容体融合タンパク質、例えば、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合受容体融合タンパク質をコードする組換え核酸は、骨髄細胞など、適切な細胞内で発現されうる。一部の実施形態では、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２－ＣＦＰが、骨髄細胞など、適切な細胞上で発現されると、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合剤は、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２を発現する標的細胞に結合することが可能であり、結合剤を発現する骨髄細胞が活性化される。一部の実施形態では、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２－ＣＦＰは、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２との係合時に、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２－ＣＦＰの細胞内シグナル伝達ドメインを活性化し、これが、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２－ＣＦＰをコードする組換え核酸を発現する骨髄細胞を活性化する。一部の実施形態では、骨髄細胞は、貪食細胞である。一部の実施形態では、貪食細胞であり、ＣＤ１３７結合剤を発現する骨髄細胞は、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合剤が、別の細胞（標的細胞）上で発現されたＣｌａｕｄｉｎ １８．２に結合すると、活性化され、標的細胞を貪食することが可能である。一部の実施形態では、標的細胞は、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２を発現する、任意の細胞でありうる。一部の実施形態では、標的細胞は、リンパ球である。一部の実施形態では、標的細胞は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）である。一部の実施形態では、標的細胞は、悪性細胞でありうる。一部の実施形態では、標的細胞は、悪性Ｔ細胞でありうる。一部の実施形態では、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合性ＣＦＰを発現する骨髄細胞は、Ｔ細胞リンパ腫に対する治療用組成物を作出するのに使用されうる。

【0318】

[00404]一部の実施形態では、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合剤である、キメラ融合タンパク質は、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２に結合する抗原結合性ドメインを含む細胞外タンパク質である。本明細書では、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２に結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質などの組換えタンパク質が提供される。一部の実施形態では、細胞外タンパク質は、上記で記載された、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２に結合しうるその断片の抗体を含む。一部の実施形態では、細胞外タンパク質または可溶性タンパク質は、貪食細胞などの骨髄細胞の表面タンパク質に結合しうる第２のドメインをさらに含む。骨髄細胞の表面タンパク質は、骨髄細胞の膜上で発現されるタンパク質、例えば、貪食受容体、パターン認識分子、またはスカベンジャー受容体でありうる。

【0319】

[00405]本明細書では、本明細書で記載された、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２の細胞外ドメインに結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質をコードする組換え核酸が提供される。

【0320】

[00406]一部の実施形態では、ｃｌａｕｄｉｎ ３結合剤は、細胞外タンパク質である。本明細書では、ｃｌａｕｄｉｎ ３に結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質などの組換えタンパク質が提供される。一部の実施形態では、細胞外タンパク質は、表２に描示された配列のうちの、いずれか１つまたは複数など、ｃｌａｕｄｉｎ ３に結合しうるその断片の抗体を含む。一部の実施形態では、ｃｌａｕｄｉｎ ３結合剤である、細胞外タンパク質は、貪食細胞などの骨髄細胞の表面タンパク質に結合しうる第２のドメインをさらに含む。骨髄細胞の表面タンパク質は、骨髄細胞の膜上で発現されるタンパク質、例えば、貪食受容体、パターン認識分子、またはスカベンジャー受容体でありうる。本明細書では、本明細書で記載された、ｃｌａｕｄｉｎ ３の細胞外ドメインに結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質をコードする組換え核酸が提供される。

【0321】

[00407]本明細書では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ｃｌａｕｄｉｎタンパク質、例えば、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２タンパク質またはｃｌａｕｄｉｎ ３タンパク質過剰発現と関連し、上記で記載された、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合タンパク質またはｃｌａｕｄｉｎ ３結合タンパク質のうちのいずれかなど、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２またはｃｌａｕｄｉｎ ３のそれぞれに結合しうる細胞外結合性ドメインを有する、少なくとも１つの組換えタンパク質を含む治療剤が提供される。本明細書の一部の実施形態では、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合剤またはｃｌａｕｄｉｎ ３結合剤（ｂｉｎｄｉｎｇ）を発現する細胞が提供される。本明細書の一部の実施形態では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ｃｌａｕｄｉｎタンパク質、例えば、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２タンパク質またはｃｌａｕｄｉｎ ３タンパク質過剰発現と関連し、本明細書で記載されたｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合剤またはｃｌａｕｄｉｎ ３結合剤をコードする、少なくとも１つの組換え核酸を含む治療剤が提供される。本明細書の一部の実施形態では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ｃｌａｕｄｉｎタンパク質、例えば、ｃｌａｕｄｉｎ １８．２タンパク質またはｃｌａｕｄｉｎ ３タンパク質過剰発現と関連し、本明細書で記載されたｃｌａｕｄｉｎ １８．２結合剤またはｃｌａｕｄｉｎ ３結合剤をコードする、組換え核酸を含む細胞を含む治療剤が提供される。一部の実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。

【0322】

ＴＲＯＰ２結合タンパク質およびＴＲＯＰ２結合ドメイン
[00408]上皮糖タンパク質１、消化器抗原７３３－１、膜成分表面マーカー１、および腫瘍関連カルシウムシグナル伝達因子２としてもまた公知のＴＲＯＰ２は、ＴＡＣＳＴＤ２遺伝子のタンパク質産物である。ＴＲＯＰ２は、様々な細胞シグナル伝達経路内で機能する、膜貫通糖タンパク質であり、当初、細胞内カルシウムシグナルの伝達因子として解明された。ＴＲＯＰ２の発現は、多種多様な転写因子に依存することが裏付けられている。ＴＲＯＰ２は、ｂ－カテニンシグナル伝達を介して、増殖および自己再生を調節し、ＴＲＯＰ２シグナル伝達は、がん細胞の幹細胞様特性を増強する。ＴＲＯＰ２は、従来、がんの発症と関連する、いくつかの分子経路への関与を踏まえると、腫瘍の進行において、役割を果たしうる。高度のＴＲＯＰ２発現は、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ）、肝門部胆管癌、子宮頸がん、胃がん、および他のがん（Ｆｏｎｇ Ｄら、Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ、２００８、９９（８）：１２９０～１２９５；Ｎｉｎｇ Ｓ．ら、Ｊ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｓｕｒｇ．、２０１３、１７（２）：３６０～３６８；Ｌｉｕ Ｔら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、２０１３、８（９）：ｅ７５８６４；Ｚｈａｏ Ｗら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．、２０１６、７（５）：６１３６～６１４５）における予後不良と相関する。ＴＲＯＰ２は、多種多様な腫瘍上で過剰発現され、正常細胞と比べて発現が上方調節されるので、新規の治療剤の開発のために標的化されうる。

【0323】

[00409]本明細書では、ＴＲＯＰ２を発現するがん細胞に結合しうるキメラタンパク質が提供される。本明細書では、ＴＲＯＰ２の細胞外ドメインに結合するキメラタンパク質（ＴＲＯＰ２結合剤）が提供される。一部の実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＲＯＰ２の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および／または細胞質ドメインに結合することが可能な細胞外タンパク質を伴う、キメラ受容体タンパク質である。一部の実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＲＯＰ２の細胞外ドメインに結合しうる細胞外可溶性タンパク質であるタンパク質である。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２の細胞外ドメインに結合することが可能である、細胞外可溶性キメラタンパク質は、貪食細胞などの骨髄細胞の表面上に発現されるタンパク質の細胞外ドメインに結合することが可能である、別のドメインを含みうる。本明細書で記載されるキメラタンパク質（ＴＲＯＰ２結合剤）は、がんなど、ＴＲＯＰ２タンパク質の過剰発現と関連する疾患を処置するための、ＴＲＯＰ２結合剤を含む医薬組成物を含む治療剤を調製するのに使用されうる。このようながんは、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ）、肝門部胆管癌、子宮頸がん、および胃がんを含むがこれらに限定されない。

【0324】

[00410]本明細書の一態様では、細胞外ＴＲＯＰ２結合性ドメインを有する、キメラ融合受容体（ＣＦＰ）タンパク質（ＴＲＯＰ２結合剤であるＣＦＰ）が提供される。一部の実施形態では、細胞外結合性ドメインは、ＴＲＯＰ２に結合することが可能である、抗体の抗原結合性ドメイン、または抗原結合性断片（Ｆａｂ）（ｆｒａｇｍｅｎｔ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディー、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、もしくはこれらのいずれかの機能的断片である。一部の実施形態では、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディー、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、もしくはこれらのいずれかの機能的断片は、１つまたは複数の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、結合剤は、ＴＲＯＰ２受容体に対する天然リガンドである。

【0325】

[00411]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ８に由来するヒンジドメインをさらに含み、この場合、ヒンジドメインは、細胞質側において、膜貫通ドメインへと作動的に連結され、細胞外側において、ＴＲＯＰ２結合性ドメインへと作動的に連結される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５、１６、１７、１８、または１９の配列のうちのいずれか１つに示された配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８アルファ（ＣＤ８ａ）膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５に示された配列、または配列番号１５に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１６に示された配列、または配列番号１６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１７に示された配列、または配列番号１７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１８に示された配列、または配列番号１８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ６８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１９に示された配列、または配列番号１９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰのＥＣＤは、配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９に示された配列のうちのいずれか１つから選択される膜貫通ドメイン、または配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する膜貫通ドメインへと融合された；表２における配列に描示されたアミノ酸配列、または表２における配列のうちのいずれかに対する７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0326】

[00412]一部の実施形態では、細胞外ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインは、配列番号２０もしくは配列番号２１の配列、または配列番号２０もしくは配列番号２１のそれぞれに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０の膜貫通ドメイン、または配列番号２０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２１の膜貫通ドメイン、または配列番号２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０または２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインへと融合された；表２における配列のうちのいずれかに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＥＣＤ結合ドメインを含む。

【0327】

[00413]一部の実施形態では、ＣＦＰは、表４に示された、ＣＤ１６膜貫通ドメイン（例えば、短鎖ヒンジドメインを含む）の配列を含むＴＭドメインへと作動可能に連結された；配列番号３４もしくは配列番号３５に示された配列またはこれらの両方、あるいは配列番号３４もしくは配列番号３５に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＣＤ６４膜貫通ドメイン配列を含むＴＭドメインへと作動可能に連結された；配列番号３４もしくは３５に示された配列、または配列番号３４もしくは３５に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、表４に示された、ＣＤ８９膜貫通ドメイン（例えば、短鎖ヒンジドメインを含む）の配列を含むＴＭドメインへと作動可能に連結された；配列番号３４または３５に示された配列を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３４もしくは３５に示された配列、または配列番号３４もしくは３５に示された配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を伴うＥＣＤ；ＣＤ１６タンパク質のＴＭドメイン、またはＣＤ６４タンパク質のＴＭＤ、またはＣＤ８９タンパク質のＴＭＤに由来する配列を含むＴＭドメイン；および、任意選択で、本明細書で記載される、他の別個のＩＣＤに加えて、例えば、ＣＤ１６タンパク質、ＣＤ６４タンパク質、またはＣＤ８９タンパク質のそれぞれに由来する、対応する細胞内ドメイン（ＩＣＤ）またはその部分を含む。ＣＤ１６およびＣＤ８９の、例示的ＩＣＤ配列は、表４に提示される。

【0328】

[00414]一部の実施形態では、ＣＦＰは、１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ以外の受容体に由来するドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、またはＦｃＲεに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0329】

[00415]一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つ、または配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列のアミノ酸配列を含む、ＦｃＲガンマタンパク質（ＦｃＲγ鎖）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２６の配列、または配列番号２６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＣＤ４０の細胞内シグナル伝達ドメインに由来する。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２７の配列、または配列番号２７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２８の配列、または配列番号２８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２９の配列、または配列番号２９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３０の配列、または配列番号３０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0330】

[00416]本明細書では、骨髄細胞など、適切な細胞内で発現されうる、上記で記載されたＴＲＯＰ２結合性ドメイン（ＴＲＯＰ２結合剤）を含むＣＦＰをコードする組換え核酸が提供される。骨髄細胞は、貪食細胞でありうる。一部の実施形態では、組換え核酸は、上記で記載されたＴＲＯＰ２結合性ドメイン；配列番号２１～３０に由来する配列のうちの１つまたは複数を含む、細胞内ドメイン；および配列番号１５～２１のうちのいずれか１つから選択される配列を有する配列を含む膜貫通ドメインを含むＣＦＰをコードする。

【0331】

[00417]別の実施形態では、本明細書では、ＴＲＯＰ２の細胞外ドメインに結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質などの組換えタンパク質が提供される。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２に結合しうるドメインを有する、組換え細胞外タンパク質、例えば、ＴＲＯＰ２の細胞外ドメインに結合しうるドメインは、貪食細胞などの骨髄細胞の表面タンパク質に結合しうる第２のドメインをさらに含む。骨髄細胞の表面タンパク質は、骨髄細胞の膜上で発現されるタンパク質、例えば、貪食受容体、パターン認識分子、またはスカベンジャー受容体でありうる。本明細書では、本明細書で記載された、ＴＲＯＰ２の細胞外ドメインに結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質をコードする組換え核酸が提供される。

【0332】

[00418]本明細書では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ＴＲＯＰ２タンパク質過剰発現と関連し、上記で記載された、ＴＲＯＰ２結合タンパク質のうちのいずれかなどのＴＲＯＰ２に結合しうる細胞外結合性ドメインを有するタンパク質をコードする、少なくとも１つの組換えポリ核酸を含む治療剤が提供される。一部の実施形態では、タンパク質をコードする組換えポリ核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、タンパク質をコードする組換えポリ核酸は、ＤＮＡである。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ＴＲＯＰ２結合性細胞外ドメイン、任意選択の膜貫通ドメイン、および１つまたは複数の細胞内ドメインを含む、キメラ融合受容体タンパク質（ＣＦＰ）である、ＴＲＯＰ２結合タンパク質をコードする。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内ドメインは、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、本明細書で記載された、ＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、ＣＤ４０細胞内ドメイン、ＦｃＲドメインを含む。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、細胞内に含まれる。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合剤であるＣＦＰをコードする配列を含む、組換えｍＲＮＡは、骨髄細胞内で発現される。本明細書の一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合タンパク質を発現する細胞が提供される。本明細書の一部の実施形態では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ＴＲＯＰ２過剰発現と関連し、本明細書で記載されたＴＲＯＰ２結合剤をコードする、少なくとも１つの組換え核酸を含む治療剤が提供される。本明細書の一部の実施形態では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ＴＲＯＰ２タンパク質過剰発現と関連し、本明細書で記載されたＴＲＯＰ２結合剤をコードする、組換え核酸を含む細胞を含む治療剤が提供される。一部の実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。一部の実施形態では、疾患は、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ）、肝門部胆管癌、子宮頸がん、胃がん、肺がんを含むがこれらに限定されないがんである。一部の実施形態では、疾患は、非小細胞肺癌である。

【0333】

[00419]一部の実施形態では、本明細書で記載される治療剤は、ＴＲＯＰ２に結合しうる細胞外結合性ドメインと、任意選択で、ＣＤ８ヒンジドメインと、骨髄細胞の膜上に適正に発現し局在化させるために骨髄細胞内の内因性タンパク質に結合しうる膜貫通ドメインとを有する、少なくとも１つの組換えキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）、またはこの組換えＣＦＰをコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合剤は、骨髄細胞の別の膜貫通タンパク質と二量体化するか、またはオリゴマー化する膜貫通領域を含む。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合剤は、骨髄細胞膜上のＦｃガンマ受容体と二量体化し、これにより、骨髄細胞内だけで発現しうる、膜貫通タンパク質を含む。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合剤は、タンパク質が、骨髄細胞内だけで発現される、内因性タンパク質と二量体化する（またはオリゴマー化する）場合に限り、機能的であるようにデザインされる。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合剤は、Ｆｃアルファ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合剤は、ＣＤ６４（ＦｃγＲ１）タンパク質膜貫通ドメイン、ＣＤ８９（ＦｃαＲ１）タンパク質膜貫通ドメイン、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合剤は、Ｆｃイプシロン膜貫通ドメインを含む。本明細書の一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合性細胞外ドメインと、任意選択で、例えば、ＣＤ８ヒンジドメインを含む、短鎖ヒンジ領域と、ＣＤ８９膜貫通ドメインと、任意選択で、ＣＤ４０細胞内ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインなど、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインへと融合された、ＣＤ８９細胞内領域とを含む、ＴＲＯＰ２結合性ＣＦＰ（ＴＲＯＰ２結合剤）が提供される。本明細書の一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合性細胞外ドメインと、任意選択で、例えば、ＣＤ８ヒンジドメインを含む、短鎖ヒンジ領域と、ＣＤ６４膜貫通ドメインと、任意選択で、ＣＤ４０細胞内ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインなど、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインへと融合された、ＣＤ６４細胞内領域とを含む、ＴＲＯＰ２結合性ＣＦＰ（ＴＲＯＰ２結合剤）が提供される。ＴＲＯＰ２ ＣＦＰは、１つまたは複数の、ヒトドメインまたはヒト化ドメインを含みうる。本明細書では、ＣＤ８９膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインへと作動可能に連結された、ＣＤ８ヒンジドメインへと融合された、抗ＴＲＯＰ２ ＳｃＦｖ（ＴＲＯＰ２抗原結合剤）を含む、ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードする配列を含む、ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡまたはＤＮＡが提供される。

【0334】

[00420]一部の実施形態では、本明細書で記載されるＴＲＯＰ２ ＣＦＰは、骨髄細胞特異的発現を示す。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＴＲＯＰ２ ＣＦＰは、Ｆｃガンマ依存性発現を示す。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＴＲＯＰ２ ＣＦＰは、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、Ｔ細胞、Ｂ細胞、上皮細胞、筋細胞、神経細胞、または任意の非骨髄細胞において検出不能な発現を呈する。一実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドによりコードされる、本明細書で記載される、ＣＤ１６膜貫通ドメイン、ＣＤ８９膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインを有する、ＴＲＯＰ２結合剤は、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、主に、ＣＤ１４＋細胞内において発現する。一実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドによりコードされる、ＣＤ１６膜貫通ドメイン、ＣＤ８９膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインを有する、ＴＲＯＰ２結合剤は、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、ＣＤ１４＋細胞内だけにおいて発現する。

【0335】

[00421]本明細書では、ＴＲＯＰ２結合性ドメインを有するＣＦＰを発現するＣＤ１４＋細胞を含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも５０％の細胞が、ＴＲＯＰ２結合剤であるＣＦＰを発現するＣＤ１４＋細胞である細胞集団を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＣＤ１４＋およびＣＤ１６－である少なくとも５０％の細胞を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＣＤ１６－である、ＣＤ１４＋細胞を発現し、ＴＲＯＰ２－ＣＦＰ（ＴＲＯＰ２結合性細胞外ドメインを有するＣＦＰ）を発現する、少なくとも５０％の細胞を含む。

【0336】

[00422]本明細書では、ＣＤ６４膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、またはＣＤ１６ａ膜貫通ドメインを含む、膜貫通ポリペプチドをコードする、組換えポリヌクレオチド（ポリ核酸）を含み、組換えポリヌクレオチドが、ＬＮＰ内に封入された医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、膜貫通ポリペプチドは、がん細胞上の抗原への結合に特異的な、細胞外結合性ドメインを有するＣＦＰである。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＴＲＯＰ２への結合に特異的な、細胞外結合性ドメインを含む。

【0337】

[00423]本明細書では、ヒト対象におけるがんを処置するための医薬組成物であって、本明細書で記載される、ＴＲＯＰ２結合剤であるＣＦＰを発現する細胞、例えば、ＣＤ１４＋骨髄細胞を含み、がんが、肺がんである組成物が提供される。一部の実施形態では、肺がんは、ＮＳＣＬＣである。

【0338】

[00424]本明細書では、ヒト対象におけるがんを処置するための医薬組成物であって、ｉｎ ｖｉｖｏの骨髄細胞内における発現が可能である、ＴＲＯＰ２結合性細胞外ドメインを含むＣＦＰをコードする、組換えポリ核酸を含み；ＴＲＯＰ２結合性細胞外ドメインを含むＣＦＰが、本明細書で記載される、ＣＤ６４膜貫通ドメイン、ＣＤ１６ａ膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメインを含み、組換えポリ核酸が、ＬＮＰ内に封入され、がんが、肺がんである組成物が提供される。一部の実施形態では、肺がんは、ＮＳＣＬＣである。

【0339】

[00425]例示的なＴＲＯＰ２結合性ドメインの配列は、配列番号３４のアミノ酸配列、または配列番号３４に対する少なくとも８０％の配列同一性を共有する配列でありうる。
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４）。

【0340】

[00426]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）は、配列番号３４のアミノ酸配列、または配列番号３４に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する配列を含む、ＴＲＯＰ２に結合するように標的化された細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。

【0341】

[00427]例示的ＴＲＯＰ２結合性ドメインは、配列番号３５に描示された配列でありうる。

【0342】

[00428]ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号３５）。

【0343】

[00429]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）は、配列番号３５のアミノ酸配列、または配列番号３５に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する配列を含む、ＴＲＯＰ２に結合するように標的化された細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。

【0344】

ＴＭＰＲＳＳ３結合タンパク質およびＴＭＰＲＳＳ３結合ドメイン
[00430]前立腺がんのうちの約５０％は、アンドロゲン調節型遺伝子である、膜貫通プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）を、赤芽球症ウイルスＥ２６形質転換配列（ＥＴＳ）ファミリーの転写因子、典型的には赤芽球形質転換特異的関連遺伝子（ＥＲＧ）と連結する遺伝子融合を有する。近年、ＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ融合は、典型的に、腫瘍発生の早期に生じ、がんの塊にわたり、均一に分布することが多いことが裏付けられている。近年の研究では、前立腺がん８４例のうちの３０％のリンパ節内で、ＥＲＧ所見の不具合が観察された。ＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ融合タンパク質は、前立腺がん細胞に高度に特異的であるので、新規の治療に最適の標的でありうる。本明細書の一態様では、細胞外ＴＭＰＲＳＳ結合性ドメイン（ＴＭＰＲＳＳ結合剤であるＣＦＰ）を有する、キメラ融合受容体（ＣＦＰ）タンパク質が提供される。

【0345】

[00431]一部の実施形態では、細胞外結合性ドメインは、ＴＭＰＲＳＳに結合することが可能である、抗体の抗原結合性ドメイン、または抗原結合性断片（Ｆａｂ）（ｆｒａｇｍｅｎｔ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディー、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、もしくはこれらのいずれかの機能的断片である。一部の実施形態では、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディー、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、もしくはこれらのいずれかの機能的断片は、１つまたは複数の抗原に特異的に結合する。

【0346】

[00432]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ８に由来するヒンジドメインをさらに含み、この場合、ヒンジドメインは、細胞質側において、膜貫通ドメインへと作動的に連結され、細胞外側において、ＴＭＰＲＳＳ結合性ドメインへと作動的に連結される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５、１６、１７、１８、または１９の配列のうちのいずれか１つに示された配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８アルファ（ＣＤ８ａ）膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５に示された配列、または配列番号１５に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１６に示された配列、または配列番号１６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１７に示された配列、または配列番号１７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１８に示された配列、または配列番号１８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ６８膜貫通ドメインに由来する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１９に示された配列、または配列番号１９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰのＥＣＤは、配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９に示された配列のうちのいずれか１つから選択される膜貫通ドメイン、または配列番号１５、１６、１７、１８、もしくは１９のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する膜貫通ドメインへと融合された；表２における配列に描示されたアミノ酸配列、または表２における配列のうちのいずれかに対する７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0347】

[00433]一部の実施形態では、細胞外ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインは、配列番号２０もしくは配列番号２１の配列、または配列番号２０もしくは配列番号２１のそれぞれに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０の膜貫通ドメイン、または配列番号２０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２１の膜貫通ドメイン、または配列番号２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインへと融合させた細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２０または２１に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインへと融合された；表２における配列のうちのいずれかに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＥＣＤ結合ドメインを含む。

【0348】

[00434]一部の実施形態では、ＴＭＰＲＳＳタンパク質またはその部分に結合しうるＥＣＤドメインを含むＣＦＰは、ＴＭＤおよびヒンジドメイン、任意選択で、本明細書で記載される、１つまたは複数の他のＩＣＤを伴う、ＣＤ１６タンパク質、ＣＤ６４タンパク質、またはＣＤ８９タンパク質の、任意選択で、短鎖細胞質ドメインを含む。

【0349】

[00435]一部の実施形態では、ＣＦＰは、１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ以外の受容体に由来するドメインを含む。一部の実施形態では、貪食シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、またはＦｃＲεに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0350】

[00436]一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つ、または配列番号２２、２３、２４、もしくは２５のうちのいずれか１つに対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列のアミノ酸配列を含む、ＦｃＲガンマタンパク質（ＦｃＲγ鎖）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２６の配列、または配列番号２６に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＣＤ４０の細胞内シグナル伝達ドメインに由来する。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号２７の配列、または配列番号２７に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２８の配列、または配列番号２８に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２９の配列、または配列番号２９に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３０の配列、または配列番号３０に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0351】

[00437]本明細書では、骨髄細胞など、適切な細胞内で発現されうる、上記で記載されたＴＭＰＲＳＳ結合性ドメイン（ＴＭＰＲＳＳ２結合剤）を含むＣＦＰをコードする組換え核酸が提供される。骨髄細胞は、貪食細胞でありうる。一部の実施形態では、組換え核酸は、上記で記載されたＴＭＰＲＳＳ結合性ドメイン；配列番号２１～３０に由来する配列のうちの１つまたは複数を含む、細胞内ドメイン；および配列番号１５～２１のうちのいずれか１つから選択される配列を有する配列を含む膜貫通ドメインを含むＣＦＰをコードする。

【0352】

[00438]別の実施形態では、本明細書では、ＴＭＰＲＳＳの細胞外ドメインに結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質などの組換えタンパク質が提供される。一部の実施形態では、ＴＭＰＲＳＳに結合しうるドメインを有する、組換え細胞外タンパク質、例えば、ＴＭＰＲＳＳの細胞外ドメインに結合しうるドメインは、貪食細胞などの骨髄細胞の表面タンパク質に結合しうる第２のドメインをさらに含む。骨髄細胞の表面タンパク質は、骨髄細胞の膜上で発現されるタンパク質、例えば、貪食受容体、パターン認識分子、またはスカベンジャー受容体でありうる。本明細書では、本明細書で記載された、ＴＭＰＲＳＳの細胞外ドメインに結合しうる可溶性タンパク質などの細胞外タンパク質をコードする組換え核酸が提供される。

【0353】

[00439]本明細書では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ＴＭＰＲＳＳタンパク質の過剰発現と関連し、上記で記載された、ＴＭＰＲＳＳ結合タンパク質のうちのいずれかなどのＴＭＰＲＳＳに結合しうる細胞外結合性ドメインを有する、少なくとも１つの組換えタンパク質を含む治療剤が提供される。本明細書の一部の実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ結合タンパク質を発現する細胞が提供される。本明細書の一部の実施形態では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ＴＭＰＲＳＳの過剰発現と関連し、本明細書で記載されたＴＭＰＲＳＳ結合剤をコードする、少なくとも１つの組換え核酸を含む治療剤が提供される。本明細書の一部の実施形態では、対象における疾患を処置するための治療剤であって、疾患が、ＴＭＰＲＳＳタンパク質の過剰発現と関連し、本明細書で記載されたＴＭＰＲＳＳ結合剤をコードする、組換え核酸を含む細胞を含む治療剤が提供される。一部の実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。一部の実施形態では、疾患は、前立腺がんなどのがんである。

【0354】

ＢｉＭＥ構造およびＴＲｉＭＥ構造
[00440]本明細書では、上記で記載された、治療剤の結合性ドメインのうちのいずれか１つを含み、結合性ドメインが、抗体の結合性ドメイン、抗体の機能的断片、その可変ドメイン、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、ＶＮＡＲドメイン、Ｖ_ＨＨドメイン、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディー、二特異性抗体、ダイアボディー、またはこれらの機能的断片もしくは組合せを含む、二特異性エンゲージャー（ＢｉＭＥ）または三特異性エンゲージャー（ＴＲｉＭＥ）が提供される。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインが結合する標的細胞上の抗原は、標的細胞上のがん抗原もしくは病原性抗原、または自己免疫性抗原である。一部の実施形態では、第１の治療剤は、１０００アミノ酸または１０００ｎｍ未満の長さであるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、第１の治療剤は、５００アミノ酸または５００ｎｍ未満の長さであるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、第１の治療剤は、２００～１０００アミノ酸または２００～１０００ｎｍの長さであるポリペプチドを含む。

【0355】

[00441]一部の実施形態では、第１の治療剤の結合性ドメインの係合は、がん細胞を、骨髄細胞へと接触させる。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞と特異的に相互作用し、骨髄細胞の貪食活性を促進する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞と特異的に相互作用し、骨髄細胞の炎症性シグナル伝達を促進する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞または接着分子と特異的に相互作用し、骨髄細胞の標的細胞への接着を促進する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞と特異的に相互作用し、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗貪食活性を阻害する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、骨髄細胞と特異的に相互作用し、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗炎症活性を阻害する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、骨髄細胞の貪食活性を促進する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、骨髄細胞の炎症性シグナル伝達を促進する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、骨髄細胞または接着分子と特異的に相互作用し、骨髄細胞の標的細胞への接着を促進する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗貪食活性を阻害する。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインは、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗炎症活性を阻害する。

【0356】

[00442]一部の実施形態では、第３の結合性ドメインまたはさらなる治療剤は、ＣＤ４７アンタゴニスト、ＣＤ４７ブロッカー、抗体、キメラＣＤ４７受容体、シアリダーゼ、サイトカイン、炎症促進性遺伝子、プロカスパーゼ、または抗がん剤を含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメイン、第２の結合性ドメイン、および第３の結合性ドメインは、別個の同一ではない標的抗原に結合する。一部の実施形態では、第１の結合性ドメイン、第２の結合性ドメイン、または第３の結合性ドメインは、リガンド結合性ドメインである。

【0357】

[00443]一部の実施形態では、第１、第２または第３の結合性ドメインは、１つまたは複数のリンカーにより作動可能に連結される。一部の実施形態では、リンカーは、ポリペプチドである。一部の実施形態では、リンカーは、機能的ペプチドである。一部の実施形態では、リンカーは、受容体に対するリガンドである。一部の実施形態では、リンカーは、単球またはマクロファージ受容体に対するリガンドである。一部の実施形態では、リンカーは、受容体を活性化する。一部の実施形態では、リンカーは、受容体を阻害する。一部の実施形態では、リンカーは、マクロファージＭ２受容体に対するリガンドである。一部の実施形態では、リンカーは、ＴＬＲ４などのＴＬＲ受容体に対するリガンドである。一部の実施形態では、リンカーは、ＴＬＲ受容体を活性化する。一部の実施形態では、第１、第２および／または第３の結合性ドメインは、結合性ドメインに結合するマスクと会合する。一部の実施形態では、マスクがそれぞれの結合性ドメインと会合したままである場合に、マスクは、結合性ドメインのその標的との相互作用を阻害する阻害剤である。一部の実施形態では、マスクは、ペプチドリンカーを介して、結合性ドメインと会合する。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、切断可能部分を含む。一部の実施形態では、切断可能部分は、がんまたは腫瘍の部位において選択的に豊富であるタンパク質または酵素により切断される。

【0358】

治療用組成物
[00444]本明細書の一態様では、ＣＤ１４＋細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６－細胞、樹状細胞、Ｍ０マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、またはモザイク骨髄細胞／マクロファージ／樹状細胞などの骨髄細胞が提供される。本明細書の一部の実施形態では、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％のＣＤ１４＋細胞を含む治療用組成物が提供される。一部の実施形態では、治療用組成物は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％のＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞を含む。本明細書の一部の実施形態では、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満の樹状細胞を含む治療用組成物が提供される。本明細書で記載される治療用組成物のための骨髄細胞は、キメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、本明細書で記載される、ＣＦＰ受容体タンパク質またはエンゲージャータンパク質をコードする組換え核酸を含む。本明細書で記載される治療用組成物のための骨髄細胞は、組換え核酸によりコードされるＣＦＰを発現するか、または本明細書で記載される組換え核酸によりコードされるエンゲージャータンパク質を発現する。

【0359】

[00445]本明細書の一部の実施形態では、キメラ融合受容体タンパク質（ＣＦＰ）などのキメラ融合タンパク質を含み、ＣＦＰが、（ａ）（ｉ）本明細書で開示される標的のうちのいずれか１つに特異的に結合するｓｃＦｖ、および（ｉｉ）ＣＤ８に由来するヒンジドメイン、ＣＤ２８に由来するヒンジドメイン；またはＣＤ６８に由来する細胞外ドメインの、少なくとも一部を含む細胞外ドメイン；（ｂ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインが、（ｉ）ＦｃＲγまたはＦｃＲεに由来する、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉ）（Ａ）が、ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含むか、または（Ｂ）が、ＣＤ４０に由来する、第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む治療用組成物が提供される。

【0360】

[00446]本明細書の一部の実施形態では、本明細書で開示される、二特異性エンゲージャーまたは三特異性エンゲージャーを含む治療用組成物が提供される。

【0361】

[00447]本明細書の一態様では、本明細書で記載される、受容体またはエンゲージャーなどのキメラ融合タンパク質でありうる、１つまたは複数の組換えタンパク質をコードする、１つまたは複数の組換えポリ核酸（複数可）が提供される。一部の実施形態では、組換えポリ核酸（複数可）は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ｃｉｒｃＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ウイルスベクター内に組み入れられる。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ウイルスベクターを介して送達される。

【0362】

[00448]本明細書の一部の実施形態では、キメラ融合受容体タンパク質（ＣＦＰ）などのキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含み、ＣＦＰが、（ａ）（ｉ）本明細書で開示される標的のうちのいずれか１つに特異的に結合するｓｃＦｖ、および（ｉｉ）ＣＤ８に由来するヒンジドメイン、ＣＤ２８に由来するヒンジドメイン；またはＣＤ６８に由来する細胞外ドメインの、少なくとも一部を含む細胞外ドメイン；（ｂ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインが、（ｉ）ＦｃＲγまたはＦｃＲεに由来する、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉ）（Ａ）が、ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含むか、または（Ｂ）が、ＣＤ４０に由来する、第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む治療用組成物が提供される。

【0363】

[00449]本明細書の一部の実施形態では、本明細書で開示される、二特異性エンゲージャーまたは三特異性エンゲージャーをコードする組換え核酸を含む治療用組成物が提供される。

【0364】

共投与のための、他の治療用組成物
[00450]一部の実施形態では、治療用組成物は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰアーゼを阻害する薬剤、Ｆ－アクチンのディスアセンブリーを促進する薬剤、ＰＩ３ＫのＰＦＰへの動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋの活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２の活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５の活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１の活性を促進する薬剤、一次リンパ系臓器内および／または二次リンパ系臓器内におけるリンパ球の封鎖を促進する薬剤、二次リンパ系臓器内の、ナイーブＴ細胞およびセントラルメモリーＴ細胞の濃度を増大させる薬剤、ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される、さらなる治療剤をさらに含む。

【0365】

[00451]一部の実施形態では、骨髄細胞は、（ａ）ＣＦＰと二量体化する、内因性ペプチドまたは内因性タンパク質；（ｂ）ＣＦＰと二量体化する、非内因性ペプチドまたは非内因性タンパク質；および／または（ｃ）第２の組換えポリ核酸配列をさらに含み、この場合、第２の組換えポリ核酸配列は、ＣＦＰと相互作用するペプチドまたはタンパク質をコードする配列を含み；二量体化または相互作用は、ＣＦＰを発現する骨髄細胞による貪食を、ＣＦＰを発現しない骨髄細胞と比較して強化する。

【0366】

[00452]一部の実施形態では、骨髄細胞は、（ｉ）エフェクター活性、交差提示、呼吸バースト、ＲＯＳの産生、ｉＮＯＳの産生、炎症性メディエーター、細胞外小胞の産生、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生、抗原を発現する標的細胞との齧作用、貪食のＣＤ４７媒介性阻害に対する抵抗性、貪食のＬＩＬＲＢ１媒介性阻害に対する抵抗性、もしくはこれらの任意の組合せの増大；および／または（ｉｉ）ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦα、サイトカインのＴＮＦファミリー、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ－１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロン、ＭＨＣクラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦファミリーの死受容体、ＴＧＦβ、Ｂ７－ＤＣ、Ｂ７－Ｈ２、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＴＬ１Ａ、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＰＤＬ１、ＭＭＰ（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、およびＭＭＰ９）、またはこれらの任意の組合せの発現の増大を呈する。

【0367】

[00453]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食または繋留受容体（ＰＲ）に由来するか、または細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲアルファ、またはＢａｉ１から選択される貪食受容体以外の受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃα受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、補体受容体、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される受容体（例えば、貪食受容体）などのタンパク質に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。

【0368】

[00454]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭドメインを含有する受容体に由来する。一部の実施形態では、組換え細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食受容体に由来する、第１の部分と、非貪食受容体に由来する、第２の部分とを含み、この場合、非貪食受容体に由来する、第２の部分は、リン酸化部位を含む。一部の実施形態では、リン酸化部位は、自己リン酸化部位に適するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リン酸化されるアミノ酸残基は、チロシンである。一部の実施形態では、リン酸化部位は、Ｓｒｃファミリーキナーゼによるリン酸化に適するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リン酸化部位は、リン酸化時に、キナーゼ内のＳＨ２ドメインに結合することが可能であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、受容体チロシンキナーゼドメインは、キメラ受容体の細胞質末端部において、第１の細胞質部分に加えて融合される。

【0369】

[00455]一部の実施形態では、リン酸化部位は、チロシンリン酸化部位である。

【0370】

[00456]一部の実施形態では、第２の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）である。例示的なＩＴＡＭモチーフは、哺乳動物の免疫グロブリンαタンパク質内および免疫グロブリンβタンパク質内、ＴＣＲγ受容体内、ＦＣＲγ受容体サブユニット内、ＣＤ３鎖受容体内、およびＮＦＡＴ活性化分子内に存在する。

【0371】

[00457]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、１つのＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、１つを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、２つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、３つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、４つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、５つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、６つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、７つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、８つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、９つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、１０またはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。

【0372】

[00458]本明細書では、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット；ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、またはＢａｉ１から選択される貪食受容体以外の貪食受容体に由来する、貪食または繋留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）などのＣＦＰをコードする組換え核酸を含む組成物が提供される。

【0373】

459. 一部の実施形態では、ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する細胞の殺滅活性は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％を超えて増大される。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、細胞の細胞膜へと機能的に組み込まれる。一部の実施形態では、ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する細胞の殺滅活性は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１．１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、または１００倍に増大される。

【0374】

[00460]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃα受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される貪食受容体などの受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。

【0375】

[00461]本明細書では、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット；ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃα受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される貪食受容体などの受容体に由来する、貪食または繋留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）などのＣＦＰをコードする組換え核酸を含む組成物が提供される。

【0376】

[00462]一部の実施形態では、ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する細胞の殺滅活性は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％を超えて増大される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、またはＢａｉ１から選択される貪食受容体以外の貪食受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１９に由来するＰＩ３Ｋ動員ドメインなどのＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。

【0377】

[00463]一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、抗原を発現する標的細胞の貪食の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、抗原を発現する標的細胞の貪食の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した、少なくとも１．１倍の増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、抗原を発現する標的細胞の貪食の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、または５０倍の増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、サイトカインの産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロン、およびこれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、エフェクター活性の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、交差提示の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ８０の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ８６の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦファミリーの死受容体の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、Ｂ７－Ｈ２の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＬＩＧＨＴの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＨＶＥＭの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ４０の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＴＬ１Ａの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、４１ＢＢＬの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＯＸ４０Ｌの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＧＩＴＲＬ死受容体の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ３０Ｌの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＴＩＭ４の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＴＩＭ１のリガンドの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＳＬＡＭの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ４８の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ５８の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ１５５の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ１１２の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＰＤＬ１の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、Ｂ７－ＤＣの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、呼吸バーストの、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＲＯＳの産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ｉＮＯＳの産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ｉＮＯＳの産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、細胞外小胞の産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、抗原を発現する標的細胞との齧作用の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、貪食のＣＤ４７媒介性阻害に対する抵抗性の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、貪食のＬＩＬＲＢ１媒介性阻害に対する抵抗性の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生の増大を呈する。

【0378】

[00464]本明細書ではまた、本明細書で記載される組換え核酸、本明細書で記載されるベクター、本明細書で記載されるポリペプチド、または本明細書で記載される細胞など、本明細書で記載される組成物と；薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物も提供される。

【0379】

[00465]一部の実施形態では、医薬組成物は、さらなる治療剤をさらに含む。一部の実施形態では、さらなる治療剤は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰアーゼを阻害する薬剤、Ｆ－アクチンのディスアセンブリーを促進する薬剤、ＰＩ３ＫのＰＦＰへの動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋの活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２の活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５の活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１の活性を促進する薬剤、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、無血清培地、脂質、またはナノ粒子を含む。

【0380】

[00466]一部の実施形態では、組換え核酸は、ｍＲＮＡまたはｃｉｒｃＲＮＡである。

【0381】

[00467]本明細書の一部の実施形態では、本明細書中の任意の箇所に記載された、細胞を含む治療用組成物、組換え核酸を含む細胞が提供される。一部の実施形態では、治療用組成物は、本明細書中の任意の箇所に記載された、キメラタンパク質を発現する組換え核酸を含む。一部の実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ１４＋細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６－細胞、樹状細胞、Ｍ０マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、またはモザイク骨髄細胞／マクロファージ／樹状細胞である。

【0382】

新規のキメラ受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）構築物を作出するための方法
[00468]本明細書の一態様では、新規のキメラ受容体タンパク質を作出するための方法であって、融合受容体が、骨髄細胞内で発現されると、本明細書で記載されるエフェクター骨髄細胞として機能するように、例えば、骨髄細胞機能の増強において有用でありうる、新規のドメインの同定を含む方法が提供される。本明細書で記載される融合タンパク質の作出は、周知の分子クローニング法を使用して実施される場合があり、配列は、組換え核酸を作出した後で検証されうる。

【0383】

[00469]ＣＡＲをコードする組換え核酸の調製：キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、組換え核酸構築物が調製され、真核細胞内の増幅および／または発現についての試験のために、プラスミドベクター内に組み込まれる。組換えＣＡＲは、当技術分野で公知の分子クローニング法を使用して構築される。組換えＣＡＲタンパク質は、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞外ドメインを含む。各ドメイン、またはドメインのサブセクションは、異種供給源配列から、ＰＣＲにより作出される、核酸配列によりコードされる場合があり、クローニングにより、ベクターへと、個別につなぎ合わされる場合もあり、長鎖核酸へとライゲーションされ、次いで、これが、増幅に適するプロモーターおよび３’側調節エレメントと共に、適切なプラスミドまたはベクターの、マルチクローニング部位へと挿入される場合もある。略述すると、例示的ＣＡＲは、１つまたは複数のシグナル伝達ドメイン（例えば、ＰＩ３キナーゼ動員ドメイン）をコードする核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ）配列、ＣＤ８ヒンジドメインおよびＣＤ８膜貫通ドメインをコードする核酸配列、細胞外末端において、標的抗原結合性ｓｃＦｖをコードする配列を有する、細胞外ドメインをコードする核酸配列を組み込むことにより調製される。ある特定の構築物は、細胞外末端において、その標的抗原に結合するｓｃＦｖに対して、立体障害をもたらさないようにデザインされた、ＦＬＡＧペプチド配列を含む。これらの構成要素は、完全に機能的な膜貫通ＣＡＲをコードする配列へと、一緒にライゲーションされる。組換えタンパク質の個別のドメインをコードする核酸サブユニットは、２つのドメイン間に介在する、可撓性の短鎖リンカー配列を含むようにデザインされる。プロモーターおよび３’側安定化構造ユニットを有する構築物は、プラスミド内でライゲーションされる。１つの変形形態では、構築物は、ＯＲＦ２ｐをコードし、それぞれの５’－ＵＴＲ配列および３’－ＵＴＲ配列、ＣＭＶプロモーターを有する、レトロトランスポゾンＡｌｕエレメント内に配置される。プラスミドは、Ｅ．ｃｏｌｉ内で増幅され、シーケンシングにより検証されるか、または－８０℃で保管される。

【0384】

ｍＲＮＡの調製：ｍＲＮＡは、消化されたプラスミドを、鋳型として使用する、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写により調製され、夾雑ＤＮＡを除去するように精製され、ポリアデニル化されうる。ＲＮＡ産物は、精製され、ＲＮアーゼ非含有水中に、１ｍｇ／ｍｌまで再懸濁され、クライオバイアル内で保管される。

【0385】

[00470]新規のＣＦＰを作出するために有用な、ＣＦＰのＥＣＤ、ＴＭ、ＩＣＤ、および抗原結合性ドメインの同定は、本明細書で記載される方法を使用してなされうる。略述すると、多数の、潜在的な候補タンパク質が、貪食特性、およびそれらのそれぞれの貪食関連細胞内シグナル伝達の増強についてスクリーニングされうる。次いで、有用ドメインは、新規のＣＦＰを作出するために使用されうる。スクリーンは、２つの部分：Ａ．貪食受容体（ＰＲ）ドメインのスクリーニング；Ｂ．細胞外抗原結合性ドメインについてのスクリーニングに分けられうる。

【0386】

ＰＲドメインについてのスクリーニング：
[00471]一実施形態では、約５，８００種の細胞膜タンパク質を、本明細書で記載される一般的方法に従い、それらの貪食可能性についてスクリーニングした。Ｊ７７４マクロファージ細胞に、５，８００種の細胞膜タンパク質のライブラリーを、一過性にトランスフェクトした。細胞膜の、多様な潜在的機能を査定するのに、ハイスループットマルチプレックスアッセイ（ロボット操作を伴う、６ウェルプレートアッセイセットアップ～３８４ウェルプレートアッセイの範囲の）が設定されうる。例示的なアッセイは、貪食アッセイ、サイトカイン産生アッセイ、インフラマソーム活性化アッセイ、およびｉＮＯＳ活性化アッセイを含むがこれらに限定されない。例示的な略式法については、以下の段落で記載されうる。各方法の変形形態も使用することができ、当業者により理解されうる。例示的な被験細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ４０－ＦｃＲγ；ＦｃＲγ－ＣＤ４０；ＮＬＲＰ３；ＦｃＲγ－ＳＨ２－Ｐｒｏカスパーゼ；ＦｃＲγ－Ｍｙｄ８８；ＦｃＲγ－ＩＦＮ受容体；ＦｃＲ－ＴＮＦＲ１；ＦｃＲγ－ＴＮＦＲ２；ＦｃＲ－ＡＩＭ２；ＦｃＲγ－ＴＲＩＦＮ；ＦｃＲγ－Ｐｒｏカスパーゼ；ＴＲＩＦＣ；ＲＩＧ１；ＭＤＡ５；ＴＢＫ；ＣＤ６４；ＣＤ１６Ａ；ＣＤ８９；ＦｃＲε；ＳＩＲＰβ（２つの連続細胞内ドメインは、ハイフンでつながれた用語により表されうる、例えば、ＦｃＲγ－Ｍｙｄ８８とは、シグナル伝達ドメイン１としてのＦｃＲγ細胞内シグナル伝達ドメインと；シグナル伝達ドメイン２としてのＭｙｄ８８細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、細胞内ドメインを指す）を含むがこれらに限定されない。スクリーニングされる細胞外リンカードメインは、ＣＤ６４、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ８９、ＳＩＲＰα、ＦｃＲε、ＣＤ８ヒンジを含むがこれらに限定されない。被験膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＣＤ６４、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ８９、ＦｃＲε、ＳＩＲＰα、ＴＮＦＲ１、およびＣＤ４０を含むがこれらに限定されない。ＭＤＡ５ドメインについてもまた、スクリーニングした。

【0387】

貪食アッセイ：
[00472]直径１ｎｍ、５ｎｍ、または１０ｎｍの範囲の、抗原へと連結された、シリカビーズまたはポリスチレンビーズを、マクロファージのスクリーンのために使用した。不活性ビーズは、支持体つき脂質二重層でコーティングすることができ、抗原を、脂質二重層へとライゲーションすることができる。各細胞系が、クローニングされた組換え細胞膜タンパク質を発現する、Ｊ７７４マクロファージ細胞系を調製することができる。組換え細胞膜タンパク質はまた、蛍光タグも発現しうる。細胞系は、熱不活化血清および抗生剤（ペニシリン／ストレプトマイシン）を伴う完全ＲＰＭＩ培地中で維持し、繁殖させることができる。アッセイの当日、細胞を、６ウェルプレート内のウェル１つ当たり１ｍｌ当たりの細胞１×１０^６個の密度、または１２もしくは２４ウェルプレート内の、これに比例する密度で播種し、２～６分間にわたりインキュベートすることができる。次いで、細胞を、リン酸緩衝生理食塩液中で１回洗浄し、ビーズを、血清枯渇培地中または補体枯渇栄養培地中に添加することができる。細胞は、ビーズを添加した３０分間後および２時間後に、光学顕微鏡により視覚化することができる。タグ付け抗体を使用して、免疫蛍光反応を実施することができ、蛍光共焦点顕微鏡は、飲作用時の相互作用および細胞タンパク質の共局在を検出するのに使用される。信頼水準は、ダネットの多重比較補正を伴う、クルスカル－ワリス検定により決定されうる。

【0388】

[00473]一部の例では、染料をロードした腫瘍細胞を、マクロファージ細胞系へとフィードすることができ、貪食について、顕微鏡により評価する。

【0389】

サイトカイン産生：
[00474]マクロファージ細胞系は、上記で記載された通りに培養することができる。一アッセイでは、細胞膜タンパク質を発現する、各Ｊ７７４細胞系を、マルチウェルに播種し、抗原連結ビーズで抗原投与し、４時間後および２４時間後において、上清を回収することにより、サイトカイン産生についてアッセイした。サイトカインは、ＥＬＩＳＡにより、上清からアッセイすることができる。別の画分では、細胞は、インキュベーションの４時間後および２４時間後に、ビーズにより回収することができ、サイトカインを検出するために、フローサイトメトリーを実施する。各場合に、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＴＮＦ－α、ＧＭＣＳＦ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ－１０、ＭＩＰ１－α、およびＭＩＰ－２から選択されうる、複数のサイトカインは、マルチプレックスフォーマットでアッセイすることができる。マクロファージ炎症性サイトカインアレイキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用する。

【0390】

[00475]炎症性遺伝子およびサイトカイン活性化のための細胞内シグナル伝達経路は、ＭＡＰキナーゼのリン酸化、ＪＮＫシグナル伝達経路、Ａｋｔシグナル伝達経路、ＳＴＡＴ－１のリン酸化および活性化を含む、インターフェロン活性化経路についてのウェスタンブロット解析により同定することができる。

【0391】

機能的アッセイ
インフラマソーム活性化アッセイ：
[00476]ＮＬＲＰ３インフラマソームの活性化は、ＩＬ－１の産生の増大の、ＥＬＩＳＡによる検出、および短鎖カスパーゼを作出する、プロカスパーゼの切断を検出する、カスパーゼ－１の活性化の、ウェスタンブロットによる検出によりアッセイする。マイクロウェルプレートによるマルチプレックス設定では、カスパーゼ１活性化の迅速な読取りのために、Ｃａｓｐａｓｅ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用する。

【0392】

ｉＮＯＳ活性化アッセイ：
[00477]酸化バーストの潜在的可能性の活性化は、蛍光測定アッセイＮＯＳ活性アッセイキット（ＡｂＣＡＭ）を使用して、ｉＮＯＳの活性化およびＮＯの産生により測定することができる。

【0393】

がん細胞殺滅アッセイ：
[00478]Ｒａｊｉ Ｂ細胞は、がん抗原提示細胞として使用されうる。Ｒａｊｉ細胞を、がん細胞の全細胞粗抽出物とインキュベートし、Ｊ７７４マクロファージ細胞系と共に共インキュベートすることができる。マクロファージは、感染の１時間後に、細胞を破壊する場合があり、これは、顕微鏡により検出される場合もあり、細胞死アッセイにより検出される場合もある。

【0394】

高アフィニティー抗原結合性ドメインについてのスクリーニング：
[00479]ＣＦＰのための細胞外結合性ドメインを作出するために、がんリガンドを、抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインについてのスクリーニングにかけることができる。ヒト全長抗体ライブラリーまたはヒトｓｃＦｖライブラリーをスクリーニングすることができる。また、ラマにおける新規の免疫グロブリン結合性ドメインの開発、および単一ドメイン抗体の調製のために、ラマを免疫化するための、潜在的なリガンドも使用することができる。

【0395】

[00480]次いで、スクリーンから同定された、特異的な有用ドメインを逆転写し、レンチウイルス発現ベクターへとクローニングして、ＣＦＰ構築物を作出することができる。スクリーンから作出された、高度な貪食受容体の、細胞外領域、膜貫通領域、および細胞質領域に由来する、１つまたは複数のドメインを使用して、ＣＦＰをコードする組換え核酸を作出することができる。略述すると、炎症促進性サイトカイン産生およびインフラマソーム活性化の、高度な活性化因子を示す細胞膜受容体を、同定することができる。バイオインフォマティクス研究を実施して、細胞外活性化ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、特異的キナーゼ活性化部位、ＳＨ２動員部位を含む、機能的ドメインを同定することができる。次いで、これらのスクリーニングされた機能的ドメインを、新規のＣＦＰを作出するための、モジュラー構築物内でクローニングすることができる。これらは、候補ＣＦＰの場合があり、これらのキメラ構築物の各々を、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏにおける、貪食増強、サイトカイン産生、およびケモカイン、ならびに／または腫瘍細胞殺滅について調べる。マイクロ粒子ベース貪食アッセイを使用して、貪食の変化について検討した。略述すると、ストレプトアビジンカップリング蛍光ポリスチレン微粒子（直径６μｍ）を、ビオチニル化組換え発現／精製がんリガンドとコンジュゲートさせることができる。新規のＣＦＰを発現する骨髄細胞を、リガンドでコーティングされた微粒子と共に、１～４時間にわたりインキュベートし、フローサイトメトリーを使用して、貪食量について解析し、定量した。次いで、デザイナーＣＦＰによるプラスミド構築物またはレンチウイルス構築物を調製し、マクロファージ細胞内で、がん細胞の溶解について調べることができる。

【0396】

細胞標的化ＣＦＰのための、具体的デザイン
[00481]ｉｎ ｖｉｖｏにおける送達のために、キメラ抗原受容体をコードする組換え核酸を開発する、一態様は、単球性細胞内のＣＦＰの取込み、発現、および機能を、マクロファージ特異的とし、貪食能を有さない非骨髄細胞内の発現を回避することである。したがって、一態様では、ＣＦＰは、ＣＦＰの発現が、骨髄特異的タンパク質に依存性であるようにデザインされる。例として述べると、本明細書では、骨髄特異的プロモーターの、ＣＦＰの発現への適合という概念が想定される。骨髄特異的プロモーターは、ベクター内でコードされる場合もあり、そうでなければ、ＣＦＰをコードすること配列の上流の位置における組換え核酸内でコードされる場合もあり、この配列へと作動的に連結された組換え核酸内でコードされる場合もある。当技術分野では、ある特定の骨髄細胞特異的プロモーターについて開示されている。例えば、ＣＤ６８Ｓプロモーターは、骨髄特異的プロモーターである。（Ｓｃｈａｒｅｎｂｅｒｇら、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ、１１，３３２７（２０２０）。）
[00482]一態様では、組換え核酸は、ｍＲＮＡである。本明細書では、核酸が、ｍＲＮＡとして送達されるのか、ＤＮＡとして送達されるのかに関わらず活用されうる、骨髄特異的発現のための方法が想定される。したがって、一態様では、ＣＦＰは、その固有の発現および機能性のために、骨髄内因性タンパク質の存在を利用するようにデザインされる。一態様では、ＣＦＰの骨髄特異的発現は、ＣＦＰが、１つの単球特異的タンパク質と二量体化する（または多量体化する）場合に限り、膜内で発現されるデザインを介して達成される。一部の実施形態では、ＣＦＰの骨髄特異的機能性は、ＣＦＰが、単球特異的タンパク質と二量体化する（または多量体化する）場合に限り、膜上で発現されるデザインを介して達成される。ＦｃＲアルファ受容体は、骨髄細胞上の膜発現および／または機能のために、ＦｃＲガンマ受容体とオリゴマー化する。いくつかのＦｃ受容体（ＦｃＲ）は、単球内および骨髄細胞内で、内因的に発現される。免疫複合体による、それらの架橋後、ＦｃＲは、放出されたサイトカインによる免疫応答のモジュレーションまたは貪食のモジュレーションなど、多様な役割を果たす。ＦｃＲアルファ受容体と、ＦｃＲガンマ受容体とは、膜貫通ドメインを介してオリゴマー化する。

【0397】

[00483]一部の実施形態では、ＣＦＰは、内因性ＦｃＲと共にオリゴマー化する、Ｆｃ受容体に由来する膜貫通ドメインおよび／または細胞内ドメインを含む。

【0398】

[00484]ＦｃＲおよびそれらの細胞内発現パターンは、下記の表３に示される：

【0399】

【表3】

[00485]本明細書で開示される、キメラ受容体融合タンパク質の構築において使用される、例示的なＦｃＲドメイン配列は、表４に提示される。

【0400】

【表4】

[00487]一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインに由来する膜貫通ドメインを含むようにデザインされる。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインに由来する膜貫通ドメインを含むようにデザインされる。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインに由来する膜貫通ドメインを含むようにデザインされる。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインに由来する膜貫通ドメインを含むようにデザインされる。本明細書で記載されるＣＦＰ内のドメインのうちのいずれかは、他の任意の隣接するドメインの由来に応じて、またはこれらに関わらず、適切な哺乳動物由来のドメインに由来しうる。非ヒト哺乳動物の膜貫通ドメインは、本開示の範囲内にあることが想定される。

【0401】

[00488]一部の実施形態では、ＣＦＰは、細胞外ドメイン内の、ＴＭＤが由来するタンパク質に由来する２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸残基を含みうる。一部の実施形態では、ＣＦＰは、細胞内ドメイン内の、ＴＭＤが由来するタンパク質に由来する２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０個、またはこれを超えるアミノ酸残基を含みうる。

【0402】

[00489]一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＴＭＤが由来する、タンパク質である、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）、またはＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）に由来する細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＭＤは、タンパク質である、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）、またはＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）のＴＭＤの配列と同一である配列を有する。

【0403】

[00490]骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、骨髄細胞内で、特異的に発現され、これにより、二量体化の結果として、機能的に活性となる、内因性Ｆｃガンマ受容体と二量体化する膜貫通ドメインを含むようにデザインされる。

【0404】

[00491]一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ヒトＦｃαＲ１（ＣＤ８９）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、マウスＦｃαＲ１（ＣＤ８９）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、齧歯動物ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ウマ科動物ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ブタ科動物ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ヒツジ科動物ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８９ ＴＭＤは、ヒトまたはマウスのＣＤ８９ ＴＭＤと少なくとも８０％相同である。一部の実施形態では、ＣＤ８９ ＴＭＤは、ヒトまたはマウスのＣＤ８９ ＴＭＤと少なくとも８５％相同である。一部の実施形態では、ＣＤ８９ ＴＭＤは、ヒトまたはマウスのＣＤ８９ ＴＭＤと少なくとも９０％相同である。一部の実施形態では、ＣＤ８９ ＴＭＤは、ヒトまたはマウスのＣＤ８９ ＴＭＤと少なくとも９５％相同である。

【0405】

[00492]一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ヒトＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、マウスＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、齧歯動物ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ウマ科動物ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ブタ科動物ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、ヒツジ科動物ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６ ＴＭＤは、ヒトまたはマウスのＣＤ１６ ＴＭＤと少なくとも８０％相同である。一部の実施形態では、ＣＤ１６ ＴＭＤは、ヒトまたはマウスのＣＤ１６ ＴＭＤと少なくとも８５％相同である。一部の実施形態では、ＣＤ１６ ＴＭＤは、ヒトまたはマウスのＣＤ１６ ＴＭＤと少なくとも９０％相同である。一部の実施形態では、ＣＤ１６ ＴＭＤは、ヒトまたはマウスのＣＤ１６ ＴＭＤと少なくとも９５％相同である。一実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩは、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）である。

【0406】

[00493]本明細書では、任意の骨髄細胞特異的ＣＦＰが、ＣＤ８９分子、ＣＤ１６分子、ＣＤ６４分子、またはＣＤ３２ａ分子に由来するＴＭＤを使用してデザインまたは作出され、所望の抗原結合性ドメインを有する、骨髄細胞特異的ＣＦＰが、本開示で記載される組成物および方法に基づき創出されうることが想定される。一部の実施形態では、ＣＦＰは、骨髄細胞特異的発現を呈する。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的発現は、Ｆｃガンマ依存性発現である、すなわち、ＣＦＰ構築物を含む核酸を含む細胞が、Ｆｃガンマを、内因的に発現する場合、ＣＦＰは、細胞内で共発現する。一部の実施形態では、ＣＦＰは、骨髄細胞以外の細胞内でも発現するが、一過性に限り発現し、検出可能ではない場合がある。一部の実施形態では、骨髄細胞だけが、Ｆｃガンマ依存的に機能的であるＣＦＰを発現する、すなわち、ＣＦＰは、Ｆｃガンマを、内因的に発現しない細胞内で、機能的ではない。一部の実施形態では、骨髄細胞特異的ＣＦＰは、がん細胞特異的標的抗原に結合する、抗原結合性ドメイン、および１つ、２つ、３つ、またはこれを超えるドメイン、例えば、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含む、細胞内領域を含む。例えば、骨髄細胞特異的ＣＦＰは、標的抗原であるＣＤ５に結合する、抗原結合性ドメインを含む。本明細書では、抗ＣＤ５抗体またはその一部、例えば、抗ＣＤ５ ＳｃＦｖを含む細胞外ドメイン、ヒンジドメイン、例えば、ＣＤ８ヒンジドメイン、骨髄細胞により、内因的に発現されたＦｃガンマ受容体と二量体化することが可能である膜貫通ドメイン、および１つ、２つ、３つ、またはこれを超えるドメイン、例えば、ＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、および／またはＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含む、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内領域を含む、それぞれのＣＦＰがデザインされる。

【0407】

[00494]本明細書の一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合性細胞外ドメインと、任意選択で、例えば、ＣＤ８ヒンジドメインを含む、短鎖ヒンジ領域と、ＣＤ８９膜貫通ドメインと、任意選択で、ＣＤ４０細胞内ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインなど、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインへと融合された、ＣＤ８９細胞内領域とを含む、ＴＲＯＰ２結合性ＣＦＰ（ＴＲＯＰ２結合剤）が提供される。本明細書の一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合性細胞外ドメインと、任意選択で、例えば、ＣＤ８ヒンジドメインを含む、短鎖ヒンジ領域と、ＣＤ１６膜貫通ドメインと、任意選択で、ＣＤ４０細胞内ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインなど、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインへと融合された、ＣＤ１６細胞内領域とを含む、ＴＲＯＰ２結合性ＣＦＰ（ＴＲＯＰ２結合剤）が提供される。ＴＲＯＰ２ ＣＦＰは、１つまたは複数の、ヒトドメインまたはヒト化ドメインを含みうる。本明細書では、ＣＤ１６、またはＣＤ８９膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインへと作動可能に連結された、ＣＤ８ヒンジドメインへと融合された、抗ＴＲＯＰ２ ＳｃＦｖ（ＴＲＯＰ２抗原結合剤）を含む、ＴＲＯＰ２ ＣＦＰ構築物をコードする配列を含む、ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡまたはＤＮＡが提供される。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＴＲＯＰ２ ＣＦＰは、骨髄細胞特異的発現を示す。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＴＲＯＰ２ ＣＦＰは、Ｆｃガンマ依存性発現を示す。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＴＲＯＰ２ ＣＦＰは、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、Ｔ細胞、Ｂ細胞、上皮細胞、筋細胞、神経細胞、または任意の非骨髄細胞において検出不能な発現を呈する。一実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドによりコードされる、本明細書で記載される、ＣＤ１６膜貫通ドメイン、ＣＤ８９膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインを有する、ＴＲＯＰ２結合剤は、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、主に、ＣＤ１４＋細胞内において発現する。一実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドによりコードされる、ＣＤ１６膜貫通ドメイン、ＣＤ８９膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインを有する、ＴＲＯＰ２結合剤は、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、ＣＤ１４＋細胞内だけにおいて発現する。

【0408】

[00495]本明細書の一部の実施形態では、ＧＰＣ３結合性細胞外ドメインと、任意選択で、例えば、ＣＤ８ヒンジドメインを含む、短鎖ヒンジ領域と、ＣＤ８９膜貫通ドメインと、任意選択で、ＣＤ４０細胞内ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインなど、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインへと融合された、ＣＤ８９細胞内領域とを含む、ＧＰＣ３に結合するＣＦＰ（ＧＰＣ３結合剤）が提供される。本明細書の一部の実施形態では、ＧＰＣ３結合性細胞外ドメインと、任意選択で、例えば、ＣＤ８ヒンジドメインを含む、短鎖ヒンジ領域と、ＣＤ１６膜貫通ドメインと、任意選択で、ＣＤ４０細胞内ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインなど、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインへと融合された、ＣＤ１６細胞内領域とを含む、ＧＰＣ３に結合するＣＦＰ（ＧＰＣ３結合剤）が提供される。ＧＰＣ３ ＣＦＰは、１つまたは複数の、ヒトドメインまたはヒト化ドメインを含みうる。一部の実施形態では、ＧＰＣ３－ＣＦＰは、インターフェロン誘導性細胞内ドメインをさらに含む。

【0409】

[00496]本明細書では、ＣＤ１６、またはＣＤ８９膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインへと作動可能に連結された、ＣＤ８ヒンジドメインへと融合された、抗ＧＰＣ３ ＳｃＦｖ（ＧＰＣ３抗原結合剤）を含む、ＧＰＣ３ ＣＦＰ構築物をコードする配列を含む、ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡまたはＤＮＡが提供される。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＧＰＣ３ ＣＦＰは、骨髄細胞特異的発現を示す。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＧＰＣ３ ＣＦＰは、Ｆｃガンマ依存性発現を示す。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＧＰＣ３ ＣＦＰは、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、Ｔ細胞、Ｂ細胞、上皮細胞、筋細胞、神経細胞、または任意の非骨髄細胞において検出不能な発現を呈する。一実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドによりコードされる、本明細書で記載される、ＣＤ１６膜貫通ドメイン、ＣＤ８９膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインを有する、ＧＰＣ３結合剤は、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、主に、ＣＤ１４＋細胞内において発現する。一実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドによりコードされる、ＣＤ１６膜貫通ドメイン、ＣＤ８９膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインを有する、ＧＰＣ３結合剤は、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、ＣＤ１４＋細胞内だけにおいて発現する。一部の実施形態では、ＧＰＣ３ ＣＦＰは、インターフェロン誘導性細胞内ドメインをさらに含む。

【0410】

[00497]本明細書では、を含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＧＰＣ３結合剤は、ヒト対象におけるがんを処置するのに使用される。一部の実施形態では、ＧＰＣ３結合剤は、肝細胞癌（ＨＣＣ）の処置のために使用される。

【0411】

[00498]本明細書の一部の実施形態では、ＧＰ７５結合性細胞外ドメインと、任意選択で、例えば、ＣＤ８ヒンジドメインを含む、短鎖ヒンジ領域と、ＣＤ８９膜貫通ドメインと、任意選択で、ＣＤ４０細胞内ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインなど、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインへと融合された、ＣＤ８９細胞内領域とを含む、ＧＰ７５に結合するＣＦＰ（ＧＰ７５結合剤）が提供される。本明細書の一部の実施形態では、ＧＰ７５結合性細胞外ドメインと、任意選択で、例えば、ＣＤ８ヒンジドメインを含む、短鎖ヒンジ領域と、ＣＤ１６膜貫通ドメインと、任意選択で、ＣＤ４０細胞内ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインなど、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインへと融合された、ＣＤ１６細胞内領域とを含む、ＧＰ７５に結合するＣＦＰ（ＧＰ７５結合剤）が提供される。ＧＰ７５ ＣＦＰは、１つまたは複数の、ヒトドメインまたはヒト化ドメインを含みうる。本明細書では、ＣＤ１６、またはＣＤ８９膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインへと作動可能に連結された、ＣＤ８ヒンジドメインへと融合された、抗ＧＰ７５ ＳｃＦｖ（ＧＰ７５抗原結合剤）を含む、ＧＰ７５ ＣＦＰ構築物をコードする配列を含む、ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡまたはＤＮＡが提供される。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＧＰ７５ ＣＦＰは、骨髄細胞特異的発現を示す。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＧＰ７５ ＣＦＰは、Ｆｃガンマ依存性発現を示す。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＧＰ７５ ＣＦＰは、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、Ｔ細胞、Ｂ細胞、上皮細胞、筋細胞、神経細胞、または任意の非骨髄細胞において検出不能な発現を呈する。一実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドによりコードされる、本明細書で記載される、ＣＤ１６膜貫通ドメイン、ＣＤ８９膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインを有する、ＧＰ７５結合剤は、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、主に、ＣＤ１４＋細胞内において発現する。一実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドによりコードされる、ＣＤ１６膜貫通ドメイン、ＣＤ８９膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインを有する、ＧＰ７５結合剤は、ポリヌクレオチドが、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された場合に、ＣＤ１４＋細胞内だけにおいて発現する。

【0412】

[00499]一部の実施形態では、本節で記載されるＣＦＰ構築物のうちのいずれか１つは、少なくとも、ＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、本節で記載されるＣＦＰ構築物のうちのいずれか１つは、少なくとも、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、本節で記載されるＣＦＰ構築物のうちのいずれか１つは、少なくとも、ＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、本節で記載される、骨髄細胞特異的ＣＦＰ構築物は、例えば、ＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインおよび第３の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、少なくとも３つの細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本節で記載されるＣＦＰ構築物のうちのいずれか１つは、受容体活性化時に、ＮＦ－カッパＢの活性化を誘導する、少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本節で記載されるＣＦＰ構築物のうちのいずれか１つは、受容体活性化時に、インターフェロンの産生を刺激する、少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本節で記載されるＣＦＰ構築物のうちのいずれか１つは、ＮＦ－カッパＢの活性化を誘導する、少なくとも１つの細胞内ドメインを含み、受容体活性化時に、インターフェロンの産生を刺激する、少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。

【0413】

対象に由来する骨髄細胞を作製する方法
ＰＢＭＣからの、骨髄細胞の単離：
[00500]末梢血単核細胞は、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｓｉｇｍａ）を使用する、密度遠心分離により、正常ドナー軟膜から分離することができる。洗浄の後、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＧＭＰグレードＣＤ１４マイクロビーズおよびＬＳ磁気分離カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、ＣＤ１４＋単球を、単核細胞画分から分離することができる。略述すると、細胞を、ＰＥＡ緩衝液（リン酸緩衝生理食塩液［ＰＢＳ］＋１Ｌ当たり２．５ミリモルのエチレンジアミン四酢酸［ＥＤＴＡ］、およびヒト血清アルブミン［２０％のＡｌｂｕｒｅｘ、Ｏｃｔｏｐｈａｒｍａのうちの、最終容量０．５％］）中、適切な濃度まで再懸濁させ、製造元の指示書に従い、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＣＤ１４ビーズと共にインキュベートし、次いで、洗浄し、磁化ＬＳカラムを流過させた。洗浄の後、精製された単球を、脱磁化カラムから溶出させ、洗浄し、培養に関連する培地中に再懸濁させることができる。ＣＤ１４＋細胞の、白血球アファレーシスからの分離：ＰＢＭＣは、研究に参加する旨の説明同意文書を提出した肝硬変ドナーから、白血球アファレーシスにより回収することができる。末梢血の、単核細胞（ＭＮＣ）についての白血球アファレーシスは、Ｏｐｔｉａアファレーシスを使用する、滅菌回収により実行する。ＭＮＣのための、標準的回収プログラムを使用し、２．５倍の血液量を処理する。ＣＤ１４細胞の分離は、ＧＭＰ準拠機能閉鎖系（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙシステム、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して実行する。略述すると、細胞カウントのために、白血球アファレーシス生成物をサンプリングし、分離前フローサイトメトリーのために、アリコートを採取する。単球（ＣＤ１４＋）の百分率および細胞の絶対数を決定することができ、要求される場合は、容量を、選択のための要求基準（全白血球２０×１０^９個以下；１ｍＬ当たりの白血球４００×１０^６個未満；ＣＤ１４細胞３．５×１０^９個以下、容量：５０～３００ｍＬ）を満たすように調整する。ＣＤ１４細胞の単離および分離は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙを、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＣＤ１４マイクロビーズ（医療機器分類ＩＩＩ）、ＴＳ５１０チュービングセット、およびＬＰ－１４プログラムと共に使用して実行する。処理の終了時に、選択されたＣＤ１４＋陽性単球を、医薬のグレードの０．５％ヒトアルブミン（Ａｌｂｕｒｅｘ）を含有する、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ緩衝液、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）中で洗浄し、次いで、培養のためのＴｅｘＭＡＣＳ（または同等物）培地中で再懸濁させることができる。

【0414】

細胞のカウントおよび純度：
[00501]Ｓｙｓｍｅｘ ＸＰ－３００自動式解析器（Ｓｙｓｍｅｘ）を使用して、全ＭＮＣおよび分離単球画分の細胞カウントを実施することができる。Ｓｙｓｍｅｘは、単球数を、一貫して過小評価したので、マクロファージ数の評価は、絶対細胞数を決定するのに、ＴｒｕＣｏｕｎｔチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を伴う、フローサイトメトリーにより実行する。フローサイトメトリー（ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、ヒト白血球に対する抗体パネル（ＣＤ４５－ＶｉｏＢｌｕｅ、ＣＤ１５－ＦＩＴＣ、ＣＤ１４－ＰＥ、ＣＤ１６－ＡＰＣ）と共に使用して、分離の純度について評価し、好中球の夾雑（ＣＤ４５ｉｎｔ、ＣＤ１５ｐｏｓ）量を決定することにより、生成物の品質について評価する。

【0415】

細胞培養物：健常ドナー試料による培養物の養生
[00502]マクロファージの分化に最適の培養培地を探索し、３つの候補を、細胞生成物のために使用して調べた。加えて、単球の低温保存の、治療的使用のための、骨髄細胞およびマクロファージの導出に対する影響について検討した。本開示の他の箇所で記載される通りに、機能的アッセイを行って、骨髄細胞およびマクロファージの貪食能力、ならびにさらなる極性化に対するそれらの能力、および貪食可能性を定量した。

【0416】

対象試料による、フルスケールの工程検証
[00503]Ｐｒｏｄｉｇｙによる分離物に由来する、白血球アファレーシスから培養される単球は、ＧＭＰグレードのＴｅｘＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）および１００ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦを伴う培養バッグ（ＭＡＣＳ ＧＭＰ分化バッグ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）中に、１ｍＬ当たり、１ｃｍ^２当たりの単球２×１０^６個で培養することができる。単球は、１００ｎｇ／ｍＬの、ＧＭＰ準拠組換えヒトＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と共に培養することができる。細胞は、５％のＣＯ_２を伴う加湿雰囲気中、３７℃で、７日間にわたり培養することができる。５０％の培養培地を除去し、次いで、２００ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦを補充された、新鮮培地をフィードして（１００ｎｇ／ｍＬの最終濃度を回復させるために）、培養（２および４日目）期間中、２回にわたり、５０％容量の培地交換を実行する。

【0417】

細胞の採取：
[00504]正常ドナー由来マクロファージのために、７日目に、細胞解離緩衝液（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）およびｐａｓｔｅｔｔｅを使用して、細胞を、ウェルから採取することができる。細胞を、ＰＥＡ緩衝液中に再懸濁させ、カウントし、次いで、フローサイトメトリーのために、試験１回当たりの細胞約１×１０^６個を、染色することができる。７日目に、血清に由来する、医薬グレードの０．５％ヒトアルブミン（ＨＡＳ；Ａｌｂｕｒｅｘ）を含有する、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ緩衝液、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、白血球アファレーシス由来マクロファージを、培養バッグから採取することができる。採取された細胞は、２つの認可生成物：０．５％ヒトアルブミン（Ａｌｂｕｒｅｘ）を伴う、注入用の０．９％生理食塩液（Ｂａｘｔｅｒ）から構成される賦形剤中に再懸濁させることができる。

【0418】

フローサイトメトリーによる特徴付け：
[00505]フローサイトメーターである、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはＭＡＣＳＱｕａｎｔ １０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、単球およびマクロファージ細胞の表面マーカー発現について解析することができる。典型的に、各試料について、約２０，０００例ずつの事象を収集することができる。分離したての細胞および成熟７日目の細胞における、白血球マーカーの細胞表面発現は、細胞を、特異的抗体（最終希釈率：１：１００）と共にインキュベートすることにより実行する。細胞を、ＦｃＲブロッキング剤（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）と共に、５分間にわたりインキュベートし、次いで、抗体カクテルと共に、４℃で２０分間にわたりインキュベートする。細胞を、ＰＥＡ中で洗浄することができ、死細胞除外染料である、ＤＲＡＱ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を、１：１００で添加する。細胞は、以下：ＣＤ４５－ＶｉｏＢｌｕｅ、ＣＤ１４－ＰＥ、またはＣＤ１４－ＰｅｒＣＰ－Ｖｉｏ７００、ＣＤ１６３－ＦＩＴＣ、ＣＤ１６９－ＰＥおよびＣＤ１６－ＡＰＣ（全て、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製）、ＣＣＲ２－ＢＶ４２１、ＣＤ２０６－ＦＩＴＣ、ＣＸＣＲ４－ＰＥ、およびＣＤ１１５－ＡＰＣ（全て、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製）、ならびに２５Ｆ９－ＡＰＣおよびＣＤ１１５－ＡＰＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の範囲の表面マーカーについて染色することができる。前方散乱および側方散乱、ならびにＤＲＡＱ７死細胞弁別器（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を使用して、破砕物、ダブレット、および死細胞を除外するように、単球およびマクロファージの両方にゲートをかけ、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して、解析することができる。初期の詳細な表現型解析から、単球からの、機能的マクロファージの作出について規定するパネルを、出荷判定基準（ＣＤ４５－ＶＢ／ＣＤ２０６－ＦＩＴＣ／ＣＤ１４－ＰＥ／２５Ｆ９ ＡＰＣ／ＤＲＡＱ７）として開発した。マクロファージは、平均値蛍光強度（ＭＦＩ）が、２５Ｆ９およびＣＤ２０６の両方について、５つの時点において、０日目における単球より高レベルである細胞として決定することができる。他のマーカーについて、拡張パネル（ＣＣＲ２－ＢＶ４２１／ＣＤ１６３－ＦＩＴＣ／ＣＤ１６９－ＰＥ／ＣＤ１４－ＰｅｒＣＰ－Ｖｉｏ７００／ＣＤ１６－ＡＰＣ／ＤＲＡＱ７から構成される）の一部として評価する、第２のパネルも開発するが、細胞生成物のための出荷判定基準の一部としては使用しない。

【0419】

[00506]単球およびマクロファージは、分離された末梢血細胞の、スクロース勾配遠心分離試料中で形成された軟膜層を回収することにより分離することができる。酸性エンドソームへと取り込まれた場合に限り蛍光発光する、ｐＨＲｏｄｏビーズを使用して、ＣＤ１４細胞を、貪食性取込みについて調べることができる。略述すると、単球またはマクロファージを、１～２ｕＬのｐＨＲｏｄｏ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｂｉｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）と共に、１時間にわたり培養し、次いで、培地を採取し、細胞を洗浄して、貪食されなかった粒子を除去することができる。ＥＶＯＳ顕微鏡（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して、貪食について評価し、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ）を使用して、画像を捕捉し、細胞内へのビーズの取込みを定量した。７日目のマクロファージを、Ｍ１表現型またはＭ２表現型（または、それぞれ、Ｍ［ＩＦＮγ］表現型対Ｍ［ＩＬ－４］表現型）への極性化を誘導するように、ＩＦＮγ（５０ｎｇ／ｍＬ）またはＩＬ－４（２０ｎｇ／ｍＬ）で、４８時間にわたりで処理することにより、規定された分化マクロファージへと極性化する能力を検討する。４８時間後に、ＥＶＯＳ明視野顕微鏡により、細胞を視覚化することができ、次いで、前述と同様に、採取し、表現型解析することができる。作出後におけるマクロファージ、および炎症性刺激に応答するマクロファージの、サイトカイン／増殖因子分泌プロファイルについて、さらなる解析を実施する。前述と同様に、マクロファージは、健常ドナー軟膜から作出することができ、非処理のまま放置するか、または炎症肝内に存在する状態を模倣するように、ＴＮＦα（５０ｎｇ／ｍＬ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、およびポリイノシン酸：ポリシチジン酸（ｐｏｌｙＩ：Ｃ、ＴＬＲ３に結合するウイルス相同体、１ｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ）、もしくは最大限のマクロファージ活性化をもたらすように、リポ多糖（ＬＰＳ、１００ｎｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ）＋ＩＦＮγ（５０ＩＵ／ｍＬ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）で刺激した。７日目のマクロファージを、一晩にわたりインキュベートし、上清を回収し、スピンダウンして、破砕物を除去し、次いで、試験まで、－８０℃で保管した。Ｍａｇｐｉｘマルチプレックス酵素免疫測定プレートリーダー（ＢｉｏＲａｄ）上で試行された、２７プレックスヒトサイトカインキットおよび９プレックスマトリックスメタロプロテアーゼキットを使用して、セクレトーム解析を実施する。

【0420】

生成物の安定性：
[00507]工程開発時に、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液；０．５％ＨＡＳ（Ａｌｂｕｒｅｘ）を伴うＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液、０．９％生理食塩液単独または０．５％ＨＡＳを伴う生理食塩液を含む、多様な賦形剤について調べることができる。０．５％ＨＡＳ賦形剤を伴う、０．９％の生理食塩液（Ｂａｘｔｅｒ）が、最適の細胞生存率および表現型を維持することが見出される（データは示さない）。肝硬変ドナーに由来するマクロファージの、採取後における安定性について、３工程の最適化試行において探索し、工程検証試行では、より限定的な範囲の時点について評価した（ｎ＝３）。採取および賦形剤（注入用の０．９％生理食塩液、０．５％ヒト血清アルブミン）中の再懸濁後、バッグは、周囲温度（２１℃～２２℃）で保管することができ、採取の０、２、４、６、８、１２、２４、３０、および４８時間後に、サンプリングする。出荷判定基準のための抗体パネルを、各試料について試行し、２５Ｆ９およびＣＤ２０６についての幾何ＭＦＩにより、生存率および０日目からの平均値倍数変化を測定する。

【0421】

統計学的解析：
[00508]結果は、平均値±ＳＤとして発現されうる。対応のない両側ｔ検定による評価が可能な場合、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６を使用して、差違の統計学的有意性について評価する。Ｐ値が、＜０．０５である場合に、結果を、統計学的に有意であると考えることができる。

【0422】

[00509]本明細書ではまた、本明細書で記載される組成物、本明細書で記載されるベクター、または本明細書で記載されるポリペプチドを含む細胞も提供される。一部の実施形態では、細胞は、貪食細胞である。一部の実施形態では、細胞は、幹細胞由来細胞、骨髄細胞、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球、マスト細胞、単球、好中球、小膠細胞、または星状膠細胞である。一部の実施形態では、細胞は、自家細胞である。一部の実施形態では、細胞は、同種細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ１細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ２細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ１マクロファージ細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ２マクロファージ細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ１骨髄細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ２骨髄細胞である。

【0423】

[00510]本明細書ではまた、それを必要とする対象における疾患を処置する方法であって、対象へと、本明細書で記載される医薬組成物を投与するステップを含む方法も提供される。一部の実施形態では、疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、固形がんである。一部の実施形態では、固形がんは、卵巣がんであり、適切ながんは、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、肺がんを含む。一部の実施形態では、がんは、液性がんである。一部の実施形態では、液性がんは、白血病またはリンパ腫である。一部の実施形態では、液性がんは、Ｔ細胞リンパ腫である。一部の実施形態では、疾患は、Ｔ細胞悪性腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、ＮＳＣＬＣである。一部の実施形態では、がんは、ＨＣＣである。

【0424】

[00511]一部の実施形態では、方法は、さらなる治療剤を、対象へと投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、さらなる治療剤は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰアーゼを阻害する薬剤、Ｆ－アクチンのディスアセンブリーを促進する薬剤、ＰＩ３ＫのＰＦＰへの動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋの活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２の活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５の活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１の活性を促進する薬剤、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。

【0425】

[00512]一部の実施形態では、投与するステップは、注入または注射を含む。一部の実施形態では、投与するステップは、固形がんへの直接的投与を含む。一部の実施形態では、投与するステップは、ｃｉｒｃＲＮＡベース送達手順、非粒子封入型ｍＲＮＡベース送達手順、ｍＲＮＡベース送達手順、ウイルスベース送達手順、粒子ベース送達手順、リポソームベース送達手順、またはエクソソームベース送達手順を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答またはＣＤ８＋ Ｔ細胞応答が、対象において誘発される。

【0426】

[00513]本明細書ではまた、細胞を調製する方法であって、細胞を、本明細書で記載される組成物、本明細書で記載されるベクター、または本明細書で記載されるポリペプチドと接触させるステップを含む方法も提供される。一部の実施形態では、接触させるステップは、形質導入を含む。一部の実施形態では、接触させるステップは、化学的トランスフェクション、電気穿孔、ヌクレオフェクション、またはウイルスによる感染もしくは形質導入を含む。

【0427】

[00514]本明細書では、上記で記載された組成物のうちのいずれか１つを含む治療剤を投与するための方法が提供される。一部の実施形態では、治療的は、非経口投与経路を介して投与される。

【0428】

[00515]一部の実施形態では、治療的は、筋内投与経路を介して投与される。一部の実施形態では、治療的は、静脈内投与経路を介して投与される。一部の実施形態では、治療的は、皮下投与経路を介して投与される。

【0429】

[00516]本明細書ではまた、本明細書で記載される、１つまたは複数の組換え核酸と、脂質とを、本明細書で記載される水性組成物中に含む、医薬組成物を調製する方法も提供される。一部の実施形態では、組成物は、本明細書で記載されるベクターを含む。一部の実施形態では、脂質は、脂質ナノ粒子の形成を含む。

【0430】

組換え核酸の、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏにおける送達
[00517]一態様では、キメラ抗原受容体をコードする組換え核酸は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける送達のための治療用組成物である、適切な脂質ナノ粒子内に封入される。組換え核酸は、ＤＮＡ、ｃｉｒｃＲＮＡ、またはｍＲＮＡでありうる。一部の実施形態では、ネイキッドＤＮＡまたはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、核酸を、細胞内に導入するのに使用されうる。一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質をコードする、ＤＮＡまたはｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）封入法により、貪食細胞へと導入される。ｍＲＮＡは、コドン最適化されうる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、５’－メチルシトシンまたはシュードウリジンなど、１つまたは複数の修飾塩基または非天然塩基を含みうる。ｍＲＮＡは、５０～１０，０００塩基長でありうる。一態様では、トランス遺伝子は、ｍＲＮＡとして送達される。ｍＲＮＡは、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００を超える塩基を含みうる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１０，０００塩基長を超える場合がある。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、約１１，０００塩基長でありうる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、約１２，０００塩基長でありうる。

【0431】

[00518]一部の実施形態では、対象に局所送達または全身送達される医薬組成物は、１つまたは複数の脂質成分と会合された、本明細書で記載される、キメラ融合タンパク質をコードする、メッセンジャーＲＮＡを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の脂質成分は、カチオン性脂質を含みうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の脂質成分は、非カチオン性脂質を含みうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の脂質成分は、極性脂質および／または非極性脂質を含みうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の脂質成分は、中性脂質を含みうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の脂質成分は、コンジュゲート脂質を含みうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の脂質成分は、ｍＲＮＡの周囲に、リポソームを含みうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の脂質成分は、ｍＲＮＡを封入する脂質ナノ粒子を含みうる。

【0432】

[00519]ＬＮＰに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡは、単球またはマクロファージなどの骨髄細胞にトランスフェクトするために使用される場合もあり、対象へと投与される場合もある。ＬＮＰは、対象へと、局所送達または全身送達される場合に、骨髄細胞による取込みのための標的化送達のためにデザインされうる。一部の実施形態では、ＬＮＰは、骨髄細胞の表面エレメントに結合し、骨髄細胞による、ｍＲＮＡが封入されたＬＮＰの取込みを容易とする、抗体もしくはリガンド、または生体分子もしくはその一部など、１つまたは複数の標的化部分を含みうる。一部の実施形態では、ＬＮＰは、ＬＮＰと会合する場合もあり、ＬＮＰへと組み込まれる場合もある、１つまたは複数の抗体、リガンド、結合剤、アプタマーにより、組織へと標的化されうる。

【0433】

[00520]一実施形態では、ＬＮＰは、１つまたは複数のポリマーを含む。

【0434】

[00521]一実施形態では、ＬＮＰは、合成ポリマーを含む。

【0435】

[00522]一部の実施形態では、ＬＮＰは、カチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、ＬＮＰは、非カチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、ＬＮＰは、中性脂質を含む。一部の実施形態では、ＬＮＰは、１つまたは複数のＰＥＧ化脂質を含む。一部の実施形態では、ＬＮＰは、約１００ｎｍ～約２００ｎｍの直径である。一部の実施形態では、ＬＮＰは、８０～１２０ｎｍ、１００～１４０ｎｍ、１００～１３０ｎｍ、７０～１４０ｎｍ、８０～１５０ｎｍ、または９０～１８０ｎｍの直径など、約１５０ｎｍの直径である。一部の実施形態では、ＬＮＰは、９０ｎｍ未満、または８０ｎｍ未満の直径など、１００ｎｍ未満である。

【0436】

[00523]一部の実施形態では、送達媒体は、上記で記載された脂質媒体のうちのいずれか１つ、例えば、組換え核酸と自由に会合した脂質成分であって、リポソームまたはＬＮＰを封入する脂質成分であり、この場合、ｍＲＮＡは、本明細書中の他の箇所記載された、骨髄細胞内の優先的発現のためにデザインされる。

【0437】

[00524]一部の実施形態では、本明細書中の任意の箇所に記載された送達媒体を伴うｍＲＮＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、ＣＦＰをコードするｍＲＮＡの、単球を含む細胞集団内の単球など、骨髄細胞内への送達のための組成物を製剤化するために使用されるが、この場合、ＣＦＰをコードするｍＲＮＡを含む骨髄細胞は、ヒト対象などの哺乳動物対象への送達のための医薬組成物へと製剤化される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、本明細書で記載される、ＴＲＯＰ２に結合する細胞外抗原結合性ドメインを含むＣＦＰを含む。一部の実施形態では、本明細書中の任意の箇所に記載された送達媒体を伴うｍＲＮＡは、ヒト対象などの哺乳動物対象への送達のための医薬組成物を製剤化するために使用される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、本明細書で記載される、ＴＲＯＰ２に結合する細胞外抗原結合性ドメインを含むＣＦＰをコードする配列を含む。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合性ＣＦＰをコードする配列を含むｍＲＮＡと、送達媒体とは、異種細胞集団内の骨髄細胞により特異的に取り込まれる。一部の実施形態では、ＴＲＯＰ２結合性ＣＦＰをコードする配列を含むｍＲＮＡは、異種細胞集団内の骨髄細胞および非骨髄細胞により、特異的に取り込まれるが、異種細胞集団内の骨髄細胞内だけで発現され、かつ／または機能的となる。

【0438】

[00525]一部の実施形態では、上記で記載されたｍＲＮＡは、細胞へと電気穿孔される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを含む組成物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、細胞へと電気穿孔される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、例えば、ＬＮＰ内で、上記で記載された、１つまたは複数の脂質成分と会合される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを含む組成物（例えば、１つまたは複数の脂質成分を含む）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、骨髄細胞への送達のためにデザインされ、最適化された、異種細胞集団内の骨髄細胞へと電気穿孔される。

【0439】

機能的増強のための、ＣＦＰデザインの改変
[00526]本明細書の一態様では、（Ａ）外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列と；（Ｂ）キメラ抗原受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする第２の核酸配列であって、ＣＦＰが、（ａ）受容体による抗原への結合時にリン酸化される１つまたは複数のチロシン残基を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達サブユニット；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）標的細胞の表面上の構成要素に対する結合特異性を有し、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結される細胞外結合性ドメイン；ならびに（ｄ）プロテアーゼ切断配列により、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結され、外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列の転写を促進する転写活性化ドメインを含む、第２の核酸配列と；（Ｃ）（ｉ）転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼ；（ｉｉ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインをコードし；プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼとチロシン残基に結合するドメインとが作動可能に連結された、第３の核酸配列とを含む、１つまたは複数の組換え核酸配列を含む組成物が提供される。一部の実施形態では、第３の核酸配列は、（ｉｉｉ）刺激応答性エレメントをさらにコードする。一部の実施形態では、刺激応答性エレメント（ｉｉｉ）は、リン酸化チロシン残基に結合するドメインと融合される。一部の実施形態では、刺激応答性エレメント（ｉｉｉ）は、核酸配列を発現する細胞の微小環境に対して、応答性である。一部の実施形態では、１つまたは複数の組換え核酸は、骨髄細胞内で発現される。

【0440】

[00527]一部の実施形態では、刺激応答性エレメント（ｉｉｉ）は、リン酸化チロシン残基に結合するドメインと融合される。一部の実施形態では、刺激応答性エレメントは、核酸配列を発現する細胞の微小環境に対して、応答性である。一部の実施形態では、（ｉｉｉ）は、（ｉｉ）と作動可能に連結されたデグロンである。一部の実施形態では、デグロンは、ＨＩＦ－１ａデグロンである。

【0441】

[00528]一部の実施形態では、転写活性化ドメインは、ＶＰ６４トランス活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ３プロテアーゼである。一部の実施形態では、ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインは、ホスホチロシン結合性（ＰＴＢ）ドメインである。一部の実施形態では、ＰＴＢは、Ｓｈｃ ＰＴＢである。

【0442】

[00529]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＤＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｃｉｒｃＲＮＡである。

【0443】

[00530]一部の実施形態では、組換え核酸は、レプリコンＲＮＡと会合する。本明細書では、がんに対して治療的である骨髄細胞を調製するための方法であって、骨髄細胞内で、（Ａ）外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列と；（Ｂ）骨髄細胞キメラ抗原受容体（ＣＦＰ）をコードする第２の核酸配列であって、ＣＦＰが、（ａ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達サブユニット；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）標的細胞の表面上の構成要素に対する結合特異性を有し、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結される細胞外結合性ドメイン；ならびに（ｄ）プロテアーゼ切断配列により、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結され、外因性ポリペプチドをコードする、第１の核酸配列の転写を促進する転写活性化ドメインを含む、第２の核酸配列と；（Ｃ）（ｉ）転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼ；（ｉｉ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインをコードし；プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼとチロシン残基に結合するドメインとが作動可能に連結された、第３の核酸配列とを含む組換え核酸を発現させるステップを含む方法が提供される。

【0444】

[00531]本明細書では、がんに対して治療的である骨髄細胞を調製するための方法であって、骨髄細胞内で、（ａ）ヒト好酸球主要塩基性タンパク質酸性ドメイン；（ｂ）ＭＭＰ認識配列；および（ｃ）ヒト好酸球主要塩基性タンパク質細胞傷害性ドメインを含むキメラタンパク質をコードする、組換え核酸を発現させるステップを含む方法が提供される。

【0445】

[00532]本明細書では、がんを有する対象を処置するための方法であって、それを必要とする対象へと、上記で記載された医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。本明細書では、がんを有する対象を処置するための方法であって、それを必要とする対象へと、本明細書で記載される医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。本明細書では、それを必要とする対象において、腫瘍の退縮を誘導する方法であって、対象へと、骨髄細胞を含む医薬組成物を静脈内投与するステップを含み、骨髄細胞が、１つまたは複数のポリペプチドをコードする、１つまたは複数の組換え核酸を発現し、１つまたは複数のポリペプチドのうちの少なくとも１つが、腫瘍微小環境内では、機能的に活性であるが、非腫瘍環境内では、機能的に活性でない方法が提供される。

【0446】

モジュラーセンシングおよび内部プログラム化可能スイッチを伴う、キメラ抗原受容体
[00533]免疫療法剤のデザインにおける、際だった目的は、（１）治療剤が、疾患部位において活性であり、罹患細胞に対して、特異的に作用することを含む、疾患特異性；（２）治療剤が、プログラム化される場合もあり、または所望の時点および位置において、その所望の機能を果たすように意図される場合もあることを含む、プログラム化可能性を包摂する。

【0447】

[00534]一態様では、本開示は、疾患微小環境を感知し、これを利用し、疾患に対抗する、アウトプット機能の発生へと転換する、キメラ抗原受容体の開発を包摂する。一実施形態では、これは、スイッチ機能と称される。主に、本明細書で開示される、目的の組換えタンパク質は、スイッチを切り替えるために、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）など、疾患系内のシグナル伝達を利用する。例えば、ＴＭＥは、キメラタンパク質の構成要素を活性化し、その機能を可能とするペプチドを切断する誘因として使用される、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）に富む。これは、免疫療法細胞が、特異的であり、体内の全ての細胞へと適用されるわけではなく、これにより、免疫療法と関連する毒性の可能性を低減することを確保する。

【0448】

骨髄細胞治療剤のための、標的特異的、プログラム可能キメラ構築物の作出
[00535]本明細書では、免疫療法のための骨髄細胞を作製するための方法であって、骨髄細胞が、腫瘍微小環境内で誘導製である、キメラ融合タンパク質をコードする、外因性組換え核酸を発現する方法が提供される。例えば、免疫療法のための骨髄細胞は、その少なくとも一部が、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）内で活性化される、キメラ受容体を発現する、組換え核酸を含む。一部の実施形態では、免疫療法のための骨髄細胞は、それらの発現が、誘導性転写活性化因子の制御下にある、炎症促進性タンパク質、またはアポトーシス促進性タンパク質もしくは溶解タンパク質をコードする、組換え核酸を含む。休眠状態下で、転写活性化因子は、非核タンパク質との融合を維持する。腫瘍環境への到達時に、転写活性化因子は、炎症促進性タンパク質、またはアポトーシス促進性タンパク質もしくは溶解タンパク質をコードする核酸の、核内局在およびトランス活性化のために、融合タンパク質からの切断を介して放出される。このような機能的転帰は、組換えタンパク質のモジュラーデザインおよび骨髄細胞内におけるそれらの発現により達成されうる。

【0449】

[00536]一実施形態では、切断可能転写活性化因子は、非内因性プロテアーゼにより切断される、切断可能配列を挿入することによりデザインされうる。一部の実施形態では、転写活性化因子は、膜貫通タンパク質、例えば、キメラ抗原受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）と融合される。一部の実施形態では、ＣＦＰは、受容体の活性化時に活性化される、１つまたは複数のチロシン残基を含む、１つまたは複数のＩＴＡＭドメインを伴うＩＣＤを含む。受容体の活性化は、細胞外結合性ドメインを介する、受容体の、がん細胞との係合時に生じると理解される。一部の実施形態では、誘導性転写活性化因子の、例示的なモジュラーデザインは、以下の通りに達成されうる：転写活性化ドメインは、非内因性プロテアーゼ切断配列により、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結され；この場合、非内因性プロテアーゼは、同じ細胞内において発現される、組換え核酸によりコードされる。非内因性プロテアーゼは、それが融合され、活性化のために、ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合する、別のタンパク質ドメインへと作動可能に連結されるようにデザインされうる。リン酸化チロシン残基に結合するドメインは、ホスホチロシン結合性ドメイン（ＰＴＢ）である。ＣＦＰの活性化時に、ＩＴＡＭは、リン酸化され、ＰＴＢドメインは、ＩＴＡＭドメインにより活性化され、活性化ＰＴＢドメインは、転写活性化ドメインを、ＣＦＰの細胞質末端から切断し、これにより、核局在化転写活性化因子を放出しうる、プロテアーゼを活性化しうる。

【0450】

[00537]加えて、プロテアーゼ－ＰＴＢ融合タンパク質は、不活性状態にあるＰＴＢおよびプロテアーゼの分解を惹起する、デグロンへと融合されうる。一実施形態では、デグロンは、天然では、正常酸素状態下で分解される、ＨＩＦ１アルファ（ＨＩＦ１－ａ）のデグロン配列である。したがって、ＰＴＢ－プロテアーゼは、循環中または正常（非腫瘍）組織内である、正常酸素状態下にある細胞内で分解されるであろう。他方、タンパク質を発現する細胞が、低酸素性の組織環境内にある場合、ＰＴＢ－プロテアーゼは、もはや分解されず、活性化ＣＦＰ細胞内配列内に存在する、コグネイトのリン酸化残基を見出す。さらに、デグロン－ＰＴＢ複合体の、ＣＦＰ－ＩＣＤ内の、細胞内ホスホチロシン残基への結合時に、デグロンは、ＩＣＤの部分との接触により不活化される（図２Ｂを参照されたい）。したがって、組換えタンパク質は、以下の通りにデザインされうる：組換えタンパク質は、（ｉ）がん細胞または腫瘍細胞の表面上の構成要素に結合する、細胞外ドメインを含み、結合が、受容体（ＣＦＰ）を活性化し、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメイン（ＩＣＤ）を含み、ＩＣＤが、受容体の活性化時に活性化され、リン酸化される、ＩＴＡＭドメインを含むＣＦＰ；（ｉｉ）任意選択で、組換え核酸をコードする、同じベクターによりコードされる場合があり、デグロン－ＰＴＢ－プロテアーゼが、Ｔ２Ａ自己切断可能配列により挟まれた、プレタンパク質をもたらす、デグロン－ＰＴＢ－プロテアーゼ複合体；（ｉｉｉ）プロテアーゼの基質である、切断可能配列により、ＣＦＰの細胞内ドメインへと作動可能に連結された、転写活性化因子を含む。加えて、骨髄細胞は、切断可能配列により、ＣＦＰの細胞内ドメインへと作動可能に連結された、転写活性化因子に対して応答性である、プロモーターまたは転写活性化因子の影響下にある核酸も共発現する。がん細胞との係合を介する、ＣＦＰの活性化時に、ＩＣＤ内のＩＴＡＭは、リン酸化され、活性化ＩＴＡＭドメインは、ＰＴＢの結合およびその活性化を、同時に容易とし、結合は、そうでなければ、遊離（ＩＴＡＭ内のホスホチロシン残基に結合されていない；不活性）デグロン－ＰＴＢ－プロテアーゼを分解する、デグロンを不活化する。活性化ＰＴＢは、プロテアーゼを活性化し、これを安定化させ（デグロン活性の非存在下において）、これが、核内局在化のための転写活性化因子を切断する。

【0451】

[00538]第１の融合タンパク質内で使用されうる、例示的なプロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルスプロテアーゼ（例えば、ＮＳ３およびＮＳ２～３）；シグナルペプチダーゼ；スブチリシン／ケキシンファミリーのプロタンパク質コンベルターゼ（フーリン、ＰＣ１、ＰＣ２、ＰＣ４、ＰＡＣＥ４、ＰＣＳ、ＰＣ）；疎水性残基（例えば、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、またはＭｅｔ）において切断するプロタンパク質コンベルターゼ；ＡｌａまたはＴｈｒなど、小型アミノ酸残基において切断するプロタンパク質コンベルターゼ；プロオピオメラノコルチン転換酵素（ＰＣＥ）；クロマフィン顆粒アスパラギン酸プロテアーゼ（ＣＧＡＰ）；プロホルモンチオールプロテアーゼ；カルボキシペプチダーゼ（例えば、カルボキシペプチダーゼＥ／Ｈ、カルボキシペプチダーゼＤ、およびカルボキシペプチダーゼＺ）；アミノペプチダーゼ（例えば、アルギニンアミノペプチダーゼ、リシンアミノペプチダーゼ、アミノペプチダーゼＢ）；プロピルエンドペプチダーゼ；アミノペプチダーゼＮ；インスリン分解酵素；カルパイン；高分子量プロテアーゼ；ならびにカスパーゼ１、２、３、４、５、６、７、８、および９を含む。他のプロテアーゼは、アミノペプチダーゼＮ；ピューロマイシン感受性アミノペプチダーゼ；アンジオテンシン転換酵素；ピログルタミルペプチダーゼＩＩ；ジペプチジルペプチダーゼＩＶ；Ｎ－アルギニン二塩基性コンベルターゼ；エンドペプチダーゼ２４．１５；エンドペプチダーゼ２４．１６；アミロイド前駆体タンパク質セクレターゼアルファ、同ベータ、および同ガンマ；アンジオテンシン転換酵素セクレターゼ；ＴＧＦアルファセクレターゼ；ＴＮＦアルファセクレターゼ；ＦＡＳリガンドセクレターゼ；ＴＮＦ受容体ＩおよびＴＮＦ受容体ＩＩセクレターゼ；ＣＤ３０セクレターゼ；ＫＬ１セクレターゼおよびＫＬ２セクレターゼ；ＩＬ６受容体セクレターゼ；ＣＤ４３、ＣＤ４４セクレターゼ；ＣＤ１６－ＩセクレターゼおよびＣＤ１６－ＩＩセクレターゼ；Ｌ－セレクチンセクレターゼ；葉酸受容体セクレターゼ；ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、およびＭＭＰ１５；ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子；組織プラスミノーゲン活性化因子；プラスミン；トロンビン；ＢＭＰ－１（プロコラーゲンＣペプチダーゼ）；ＡＤＡＭ１、ＡＤＡＭ２、ＡＤＡＭ３、ＡＤＡＭ４、ＡＤＡＭ５、ＡＤＡＭ６、ＡＤＡＭ７、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１０、およびＡＤＡＭ１１；ならびにグランザイムＡ、グランザイムＢ、グランザイムＣ、グランザイムＤ、グランザイムＥ、グランザイムＦ、グランザイムＧ、およびグランザイムＨを含むがこれらに限定されない。

【0452】

[00539]一部の実施形態では、プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３プロテアーゼＮＳ３である。一部の実施形態では、ＮＳ３切断可能配列は、ＥＤＶＶＣＣである。一部の実施形態では、ＮＳ３切断可能配列は、ＤＥＭＥＥＣである。

【0453】

[00540]一部の実施形態では、転写活性化因子は、ＤＮＡ結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＤＮＡ結合性ドメインは、ＧＡＬ４ドメインである。一部の実施形態では、ＤＮＡ結合性ドメインは、ＺＦＨＤ１またはｔｅｔＲのＤＮＡ結合性ドメインである。一部の実施形態では、転写活性化因子は、ＶＰ６４トランス活性化ドメイン（単純ヘルペスウイルスタンパク質ＶＰ１６の、四量体リピート最小活性化ドメイン（アミノ酸４３７～４４７））を含む。

【0454】

[00541]一部の実施形態では、デグロンは、ＨＩＦ－デグロンである。

【0455】

[00542]本明細書の一部の実施形態では、（Ａ）外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列と；（Ｂ）キメラ抗原受容体（ＣＦＰ）をコードする第２の核酸配列であって、ＣＦＰが、（ａ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達サブユニット；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）標的細胞の表面上の構成要素に対する結合特異性を有し、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結される細胞外結合性ドメイン；ならびに（ｄ）プロテアーゼ切断配列により、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結され、外因性ポリペプチドをコードする第１の核酸配列の転写を促進する転写活性化ドメインを含む、第２の核酸配列と；（Ｃ）（ｉ）転写活性化ドメインを、細胞内シグナル伝達サブユニットへと作動可能に連結する、プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼ；（ｉｉ）ＣＦＰの活性化時にリン酸化されるチロシン残基に結合するドメインをコードし；プロテアーゼ切断配列を切断するプロテアーゼとチロシン残基に結合するドメインとが作動可能に連結された、第３の核酸配列とを含む、１つまたは複数の組換え核酸が提供される。

【0456】

[00543]一部の実施形態では、本明細書では、免疫療法における使用のために、骨髄細胞内で発現されうる、モジュラーポリペプチドのための組換え核酸が提供される。組換え核酸は、（ａ）細胞傷害性ポリペプチド；（ｂ）プロテアーゼ切断配列；および（ｃ）阻害性ポリペプチドドメインを含み、阻害性ポリペプチドドメインが、細胞傷害性ポリペプチドを阻害し；この場合、細胞傷害性ポリペプチドと、プロテアーゼ切断配列と、阻害性ポリペプチドドメインとが、作動可能に連結された、キメラタンパク質をコードする。一部の実施形態では、細胞傷害性ポリペプチドは、ヒト好酸球主要塩基性タンパク質細胞傷害性ドメインである。一部の実施形態では、細胞傷害性ポリペプチドは、ヒト好酸球主要塩基性タンパク質酸性ドメインである。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断配列は、ＭＭＰ認識配列である。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断配列は、ＭＭＰにより切断される。

【0457】

[00544]一部の実施形態では、第１の貪食ＩＣＤ内の、１つまたは複数のドメインは、突然変異を含む。

【0458】

[00545]一部の実施形態では、第２のＩＣＤ内の、１つまたは複数のドメインは、キナーゼ結合性ドメインを増強する突然変異、リン酸化部位を作出する突然変異、ＳＨ２ドッキング部位を作出する突然変異、またはこれらの組合せを含む。

【0459】

炎症性遺伝子の共発現
[00546]一態様では、組換え核酸は、操作された細胞内のキメラ受容体と共に、共発現される、炎症促進性遺伝子のコード配列を含む。一部の実施形態では、炎症促進性遺伝子は、サイトカインである。例は、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、またはＩＬ－１２もしくはインターフェロンを含むがこれらに限定されない。

【0460】

[00547]炎症促進性遺伝子をコードする組換え核酸は、モノシストロニック核酸の場合があり、この場合、（ａ）ＣＦＰおよび（ｂ）炎症促進性遺伝子の、２つのコード配列は、独立の発現のために、転写後または翻訳後に切断される。

【0461】

[00548]一部の実施形態では、２つのコード配列は、例えば、Ｐ２Ａ配列をコードする、自己切断ドメインを含む。

【0462】

[00549]一部の実施形態では、２つのコード領域は、ＩＲＥＳ部位により隔てられる。

【0463】

[00550]一部の実施形態では、２つのコード配列は、バイシストロニックの遺伝子エレメントによりコードされる。（ａ）ＣＦＰおよび（ｂ）炎症促進性遺伝子のコード領域は、各々が、個別の調節制御下にある、単一方向性のコード領域でありうる。一部の実施形態では、（ａ）および（ｂ）のいずれのコード領域も双方向性であり、反対方向に駆動される。各コード配列は、個別の調節制御下にある。

【0464】

[00551]炎症促進性遺伝子の共発現は、マクロファージの強力な炎症性刺激を付与し、周囲の組織を、炎症のために活性化するようにデザインされる。

【0465】

細胞内シグナル伝達および炎症活性化を増強するためのキメラ抗原受容体
[00552]一態様では、組換え核酸は、細胞外結合性ドメイン、膜貫通ドメインに加えて、キメラ細胞内ドメインをコードし、場合によって、受容体の細胞内ドメインの一部または全部をコードする。細胞内ドメインは、マクロファージが、感染への対抗に関与する場合など、強力な炎症促進性免疫活性化の能力を伴うようにデザインされる。キメラ細胞内ドメイン（または、場合により、第２のＩＣＤ）は、ＩＣＤが、細胞外ドメインへと作動可能に連結され、細胞外ドメインの活性化が、融合ＩＣＤを活性化しうるように、キメラ受容体の細胞質側末端と融合される。このＩＣＤは、炎症促進性シグナルを誘発するのに必要である、第２のシグナルをもたらす。一実施形態では、炎症促進性シグナルは、インフラマソームの活性化のためのシグナルである。Ｎｏｄ様受容体（ＮＬＲ）は、インフラマソーム経路の構成要素を形成する受容体のサブセットである。これらの受容体は、自然免疫応答において活性化され、炎症促進性カスパーゼを動員し、それらの切断および活性化を誘導するプラットフォームとして用いられる、多タンパク質複合体を形成するようにオリゴマー化する。これは、ＲＯＳの直接的な活性化をもたらし、パイロトーシスとして公知である、激烈な細胞死を結果としてもたらすことが多い。ＮＬＲＰ１ｍ、ＮＬＲＰ３、ＩＰＡＦ、およびＡＩＭ２の、４つのインフラマソーム複合体が存在する。

【0466】

[00553]腫瘍微小環境（ＴＭＥ）は、免疫抑制性環境を構成する。ＩＬ－１０、ホルモンであるグルココルチコイド、アポトーシス細胞、および免疫複合体の影響は、自然免疫細胞機能に干渉しうる。貪食細胞を含む免疫細胞は、寛容原性表現型へと確定する。マクロファージでは、Ｍ２表現型として一般に公知であるこの表現型は、マクロファージが強力であり、病原体を死滅させることが可能であるＭ１表現型と異なる。ＬＰＳまたはＩＦＮガンマへと曝露されたマクロファージが、例えば、Ｍ１（Ｍｌ）表現型へと極性化しうるのに対し、ＩＬ－４またはＩＬ－１３へと曝露されたマクロファージは、Ｍ２表現型へと極性化するであろう。ＬＰＳまたはＩＦＮガンマは、マクロファージの表面上の、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）と相互作用し、Ｔｒｉｆ／ＭｙＤ８８経路を誘導することから、転写因子である、ＩＲＦ３、ＡＰ－１、およびＮＦＫＢの活性化を誘導し、これにより、炎症促進性Ｍ１（Ｍｌ）マクロファージ応答において必要である、ＴＮＦ遺伝子、インターフェロン遺伝子、ＣＸＣＬ１０、ＮＯＳ２、ＩＬ－１２などを活性化しうる。同様に、ＩＬ－４およびＩＬ－１３は、ＩＬ－４Ｒに結合し、Ｊａｋ／Ｓｔａｔ６経路を活性化し、これは、抗炎症応答（Ｍ２応答）と関連する遺伝子である、ＣＣＬ１７、ＡＲＧ１、ＩＲＦ４、ＩＬ－１０、ＳＯＣＳ３などの発現を調節する。ＣＤ１４、ＣＤ８０、Ｄ２０６の発現、およびＣＤ１６３の低度の発現は、マクロファージの、Ｍ１表現型への極性化の指標である。

【0467】

[00554]一部の実施形態では、組換え核酸は、炎症応答のための細胞質ドメインを含む、１つまたは複数のさらなる細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、操作されたマクロファージ内に、炎症応答のための細胞質ドメインを含む、キメラ受容体融合タンパク質をコードする組換え核酸の発現は、Ｍ１表現型と同様の、強力な炎症促進性応答を付与する。

【0468】

[00555]一部の実施形態では、炎症応答のための細胞質ドメインは、ＴＬＲ３、４、９、ＭＹＤ８８、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰ－１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ピリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＣＤ４０のシグナル伝達ドメインまたはシグナル伝達領域でありうる。

【0469】

[00556]一部の実施形態では、キメラ受容体融合タンパク質をコードする組換え核酸の発現は、ＩＬ－１シグナル伝達カスケードの活性化のための、炎症促進性細胞質ドメインを含む。

【0470】

[00557]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞質部分は、ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）、ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）、ｔｏｌｌ様受容体８（ＴＬＲ８）、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）の細胞内シグナル伝達ドメインなど、ｔｏｌｌ様受容体に由来する細胞質ドメインを含む。

【0471】

[00558]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞質部分は、インターロイキン１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）に由来する、適切な領域を含む。

【0472】

[00559]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞質部分は、分化初期応答タンパク質（ＭＹＤ８８）に由来する、適切な領域を含む。

【0473】

[00560]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞質部分は、ミエリンリンパ球タンパク質（ＭＡＬ）に由来する、適切な領域を含む。

【0474】

[00561]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞質部分は、レチノイン酸誘導遺伝子（ＲＩＧ－１）に由来する、適切な領域を含む。

【0475】

[00562]一部の実施形態では、キメラ受容体の膜貫通ドメインは、タンパク質である、ＭＹＤ８８、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１のうちのいずれか１つの膜貫通ドメインを含む。

【0476】

[00563]一部の実施形態では、組換え細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食受容体に由来する、第１の部分と、非貪食受容体に由来する、第２の部分とを含み、この場合、非貪食受容体に由来する、第２の部分は、リン酸化部位を含む。一部の実施形態では、リン酸化部位は、自己リン酸化部位に適するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リン酸化されるアミノ酸残基は、チロシンである。一部の実施形態では、リン酸化部位は、Ｓｒｃファミリーキナーゼによるリン酸化に適するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リン酸化部位は、リン酸化時に、キナーゼ内のＳＨ２ドメインに結合することが可能であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、受容体チロシンキナーゼドメインは、キメラ受容体の細胞質末端部において、第１の細胞質部分に加えて融合される。

【0477】

[00564]一部の実施形態では、リン酸化部位は、チロシンリン酸化部位である。

【0478】

[00565]一部の実施形態では、第２の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）である。例示的なＩＴＡＭモチーフは、哺乳動物の免疫グロブリンαタンパク質内および免疫グロブリンβタンパク質内、ＴＣＲγ受容体内、ＦＣＲγ受容体サブユニット内、ＣＤ３鎖受容体内、およびＮＦＡＴ活性化分子内に存在する。

【0479】

[00566]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、１つのＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、１つを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、２つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、３つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、４つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、５つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、６つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、７つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、８つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、９つまたはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、１０またはこれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。

【0480】

[00567]一部の実施形態では、第１の貪食ＩＣＤ内の、１つまたは複数のドメインは、突然変異を含む。

【0481】

[00568]一部の実施形態では、第２のＩＣＤ内の、１つまたは複数のドメインは、キナーゼ結合性ドメインを増強する突然変異、リン酸化部位を作出する突然変異、ＳＨ２ドッキング部位を作出する突然変異、またはこれらの組合せを含む。

【0482】

「市販」治療用組成物としての、骨髄細胞特異的キメラ抗原受容体をコードするポリ核酸
[00569]本明細書では、任意の時点の、それを必要とする対象における使用のために調製され、保管されうる、治療的に有効な組成物が、初めて提供される。治療的に有効な組成物は、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を有する核酸組成物を含む。ＣＦＰをコードするポリヌクレオチドは、（ｉ）細胞外抗原結合性ドメイン、例えば、ＳｃＦｖをコードする配列、（ｉｉ）細胞内における発現時に、Ｆｃガンマ受容体膜貫通ドメインと二量体化することが可能な膜貫通ドメインをコードする配列、および（ｉｉｉ）細胞内ドメインをコードする配列を含む。一部の実施形態では、治療的に有効な組成物は、上記に加えて、送達媒体を含む。一部の実施形態では、送達媒体は、脂質ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、核酸、すなわち、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。

【0483】

[00570]本明細書では、ＣＦＰをコードし、ＣＦＰが、（ｉ）標的抗原に結合する細胞外抗原結合性ドメインをコードする配列であって、結合性ドメインが、がん細胞上で発現された標的抗原に結合する標的特異的抗体またはその断片、例えば、ｓｃＦｖ、例えば、ｓｃＦｖを含む配列、（ｉｉ）細胞内における発現時に、Ｆｃガンマ受容体膜貫通ドメインと二量体化することが可能な膜貫通ドメインをコードする配列、および（ｉｉｉ）構築物を発現する細胞内における貪食の活性化、炎症性サイトカインの分泌、および／または免疫の活性化のための細胞内シグナル伝達を活性化しうる、シグナル伝達ドメインを含む、１つまたは複数の細胞内ドメインをコードする配列を含み；送達のための脂質ナノ粒子内に封入されたポリヌクレオチドである、骨髄細胞特異的発現構築物が提供される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。

【0484】

[00571]本明細書では、ＣＦＰをコードし、ＣＦＰが、（ｉ）標的抗原、例えば、がん細胞上で発現された標的抗原、例えば、ＣＤ５、ＨＥＲ２、ＴＲＯＰ２、ＧＰＣ３、ＧＰ７５、ＣＤ１９、ＣＤ７、ＣＤ２２、または他の任意の想定可能な標的抗原に結合する細胞外抗原結合性ドメインをコードする配列、（ｉｉ）細胞内における発現時に、Ｆｃガンマ受容体膜貫通ドメインと二量体化することが可能な膜貫通ドメインをコードする配列、例えば、ＣＤ８９ ＴＭＤ、ＣＤ１６ ＴＭＤ、ＣＤ６４ ＴＭＤ、またはＣＤ３２ａ ＴＭＤ、および（ｉｉｉ）構築物を発現する細胞内における貪食の活性化、炎症性サイトカインの分泌、および／または免疫の活性化のための細胞内シグナル伝達を活性化しうる、シグナル伝達ドメインを含む、１つまたは複数の細胞内ドメインをコードする配列を含み；ポリヌクレオチドであり、送達のための脂質ナノ粒子内に封入された、骨髄細胞特異的発現構築物が提供される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。

【0485】

[00572]治療的に有効な組成物は、医薬組成物である。医薬組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける送達に適する、例えば、それを必要とするヒトへの送達に適するである。

【0486】

[00573]一部の実施形態では、ＣＦＰをコードする、骨髄細胞特異的発現構築物を含む医薬組成物は、その中の組成物の保存に適正な温度および条件において保管されることが要求される。

【0487】

[00574]本明細書で記載される、治療的に有効な組成物は、静脈内投与経路、筋内投与経路、皮下投与経路、眼内投与経路、頭蓋内投与経路、髄腔内投与経路、鼻腔内投与経路、または任意の適切な投与経路により送達されうる。

【0488】

[00575]本明細書ではまた、ＣＦＰをコードする、骨髄細胞特異的発現構築物を含む骨髄細胞であって、それを必要とする対象のための「市販品」として製剤化されうる、治療用組成物としての骨髄細胞も想定される。一部の実施形態では、骨髄細胞は、ＣＦＰをコードし、ＣＦＰが、（ｉ）標的抗原、例えば、がん細胞上で発現された標的抗原、例えば、ＣＤ５、ＨＥＲ２、ＴＲＯＰ２、ＧＰＣ３、ＧＰ７５、ＣＤ１９、ＣＤ７、ＣＤ２２、または他の任意の想定可能な標的抗原に結合する細胞外抗原結合性ドメインをコードする配列、（ｉｉ）細胞内における発現時に、Ｆｃガンマ受容体膜貫通ドメインと二量体化することが可能な膜貫通ドメインをコードする配列、例えば、ＣＤ８９ ＴＭＤ、ＣＤ１６ ＴＭＤ、ＣＤ６４ ＴＭＤ、またはＣＤ３２ａ ＴＭＤ、および（ｉｉｉ）貪食の活性化、炎症性サイトカインの分泌、および／または免疫の活性化のための細胞内シグナル伝達を活性化しうる、シグナル伝達ドメインを含む、１つまたは複数の細胞内ドメインをコードする配列を含む構築物により電気穿孔される。骨髄細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける送達のための組成物中に製剤化される。一部の実施形態では、このような組成物は、それを必要とするヒトへの、ｉｎ ｖｉｖｏにおける送達に適するである。

【0489】

[00576]実施形態の列挙
１．（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または
（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
を含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および
（ｂ）標的細胞上のＣＤ１３７に特異的に結合しうるＣＤ１３７抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン
を含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【0490】

２．（ａ）標的細胞上のＣＤ１３７抗原に特異的に結合する第１のＣＤ１３７抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣＤ１３７抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【0491】

３．（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２に特異的に結合しうるＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【0492】

４．（ａ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原に特異的に結合する第１のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【0493】

５．（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ ３に特異的に結合しうるＣｌａｕｄｉｎ ３抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【0494】

６．（ａ）標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ ３抗原に特異的に結合する第１のＣｌａｕｄｉｎ ３抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【0495】

７．（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＣＤ７０に特異的に結合しうるＣＤ７０抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【0496】

８．（ａ）標的細胞上のＣＤ７０抗原に特異的に結合する第１のＣＤ７０抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＣＤ７０抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【0497】

９．（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＴＲＯＰ２に特異的に結合しうるＴＲＯＰ２抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【0498】

１０．（ａ）標的細胞上のＴＲＯＰ２抗原に特異的に結合する第１のＴＲＯＰ２抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＴＲＯＰ２抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【0499】

１１．（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、または（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；および（ｂ）標的細胞上のＴＭＰＲＳＳに特異的に結合しうるＴＭＰＲＳＳ抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；細胞外ドメインと膜貫通ドメインとが作動可能に連結されたキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物。

【0500】

１２．（ａ）標的細胞上のＴＭＰＲＳＳ抗原に特異的に結合する第１のＴＭＰＲＳＳ抗原結合性ドメイン、および（ｂ）骨髄細胞上の表面作用物質に特異的に結合する第２の結合性ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物；標的細胞上のＴＭＰＲＳＳ抗原への第１の抗原結合性ドメインの結合および骨髄細胞上の表面作用物質への第２の結合性ドメインの結合。

【0501】

１３．（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット；ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に対する強力な結合親和性を有する、実施形態１、３、５、７、９、または１１のいずれか一項に記載の抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；ＰＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＰＦＰを発現する細胞の殺滅または貪食活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％を超えて増大される、組成物。

【0502】

１４．細胞内シグナル伝達ドメインが、貪食または繋留受容体（ＰＲ）に由来するか、または細胞内シグナル伝達ドメインが、貪食活性化ドメインを含む、実施形態１、３、５、７、９、１１、または１３のいずれか一項に記載の組成物。

【0503】

１５．細胞内シグナル伝達ドメインが、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１、３、５、７、９、１１、１３、または１４のいずれか一項に記載の組成物。

【0504】

１６．炎症促進性シグナル伝達ドメインが、キナーゼ活性化ドメインまたはキナーゼ結合性ドメインを含む、実施形態１、３、５、７、９、１１、または１３～１５のいずれか一項に記載の組成物。

【0505】

１７．細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含む、実施形態１１、３、５、７、９、１１、または１３～１６のいずれか一項に記載の組成物。

【0506】

１８．炎症促進性シグナル伝達ドメインが、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む、実施形態１、３、５、７、９、１１、または１３～１７のいずれか一項に記載の組成物。

【0507】

１９．炎症促進性シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰファミリーメンバーであるＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ピリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、カスパーゼドメインもしくはプロカスパーゼ結合性ドメイン、またはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１、３、５、７、９、１１、または１３～１８のいずれか一項に記載の組成物。

【0508】

２０．ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ２８、またはＣＤ６８のタンパク質膜貫通ドメインに由来する膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態１、３、５、７、９、１１、および１３～１９のいずれか一項に記載の組成物。

【0509】

２１．ヒンジドメインをさらに含む、実施形態１、３、５、７、９、１１、および１３～２０のいずれか一項に記載の組成物。

【0510】

２２．ＰＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＰＦＰを発現する細胞の殺滅活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％を超えて増大される、実施形態１、３、５、７、９、１１、または１３から２１のいずれか一項に記載の組成物。

【0511】

２３．ＰＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＰＦＰを発現する細胞の殺滅活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１．１倍増大される、実施形態１、３、５、７、９、１１、または１３から２２のいずれか一項に記載の組成物。

【0512】

２４．治療剤が
ａ．標的細胞上の抗原と特異的に相互作用する第１の抗体またはその機能的断片である、第１の結合性ドメイン、および
ｂ．骨髄細胞と特異的に相互作用する第２の抗体またはその機能的断片である、第２の結合性ドメイン
を含む、第１の治療剤を含み；
（ｉ）第１の治療剤が、さらなる治療剤もしくは第３の結合性ドメインである、第１の構成要素とカップリングされるか、または
（ｉｉ）組成物がさらなる治療剤を含む、実施形態２、４、６、８、１０、または１２のいずれか一項に記載の組成物。

【0513】

２５．治療剤が、（ａ）標的細胞の抗原と特異的に相互作用する第１の結合性ドメイン、（ｂ）骨髄細胞と特異的に相互作用する第２の結合性ドメイン、および（ｃ）骨髄細胞と特異的に相互作用する第３の結合性ドメインを含む、実施形態２、４、６、８、１０、１２、または２４のいずれか一項に記載の組成物。

【0514】

２６．治療剤の結合性ドメインのうちのいずれか１つが、抗体の結合性ドメイン、抗体の機能的断片、その可変ドメイン、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、ＶＮＡＲドメイン、Ｖ_ＨＨドメイン、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディー、二特異性抗体、ダイアボディー、またはこれらの機能的断片もしくは組合せを含む、実施形態１から２５のいずれか一項に記載の組成物。

【0515】

２７．第１の結合性ドメインが結合する標的細胞上の抗原が、標的細胞上のがん抗原もしくは病原性抗原、または自己免疫性抗原である、実施形態１から２６のいずれか一項に記載の組成物。

【0516】

２８．第１の治療剤が、１０００アミノ酸または１０００ｎｍ未満の長さであるポリペプチドを含む、実施形態２、４、６、８、１０、１２、または２４のいずれか一項に記載の組成物。

【0517】

２９．第１の治療剤が、５００アミノ酸または５００ｎｍ未満の長さであるポリペプチドを含む、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８のいずれか一項に記載の組成物。

【0518】

３０．第１の治療剤が、２００～１０００アミノ酸または２００～１０００ｎｍの長さであるポリペプチドを含む、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、２８、または２９のいずれか一項に記載の組成物。

【0519】

３１．第１の治療剤の結合性ドメインの係合が、がん細胞を、骨髄細胞へと接触させる、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３０のいずれか一項に記載の組成物。

【0520】

３２．第２の結合性ドメインが、骨髄細胞と特異的に相互作用し、骨髄細胞の貪食活性を促進する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３１のいずれか一項に記載の組成物。

【0521】

３３．第２の結合性ドメインが、骨髄細胞と特異的に相互作用し、骨髄細胞の炎症性シグナル伝達を促進する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３２のいずれか一項に記載の組成物。

【0522】

３４．第２の結合性ドメインが、骨髄細胞または接着分子と特異的に相互作用し、骨髄細胞の標的細胞への接着を促進する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３３のいずれか一項に記載の組成物。

【0523】

３５．第２の結合性ドメインが、骨髄細胞と特異的に相互作用し、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗貪食活性を阻害する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３４のいずれか一項に記載の組成物。

【0524】

３６．第２の結合性ドメインが、骨髄細胞と特異的に相互作用し、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗炎症活性を阻害する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３５のいずれか一項に記載の組成物。

【0525】

３７．第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、骨髄細胞の貪食活性を促進する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３６のいずれか一項に記載の組成物。

【0526】

３８．第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、骨髄細胞の炎症性シグナル伝達を促進する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３７のいずれか一項に記載の組成物。

【0527】

３９．第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、骨髄細胞または接着分子と特異的に相互作用し、骨髄細胞の標的細胞への接着を促進する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３８のいずれか一項に記載の組成物。

【0528】

４０．第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗貪食活性を阻害する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～３９のいずれか一項に記載の組成物。

【0529】

４１．第２の結合性ドメインおよび／または第３の結合性ドメインが、標的細胞により媒介される、骨髄細胞の抗炎症活性を阻害する、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～４０のいずれか一項に記載の組成物。

【0530】

４２．第３の結合性ドメインまたはさらなる治療剤が、ＣＤ４７アンタゴニスト、ＣＤ４７ブロッカー、抗体、キメラＣＤ４７受容体、シアリダーゼ、サイトカイン、炎症促進性遺伝子、プロカスパーゼ、または抗がん剤を含む、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～４１のいずれか一項に記載の組成物。

【0531】

４３．第１の結合性ドメイン、第２の結合性ドメイン、および第３の結合性ドメインが、別個の同一ではない標的抗原に結合する、実施形態１から４２のいずれか一項に記載の組成物。

【0532】

４４．第１の結合性ドメイン、第２の結合性ドメイン、または第３の結合性ドメインが、リガンド結合性ドメインである、実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８～４３のいずれか一項に記載の組成物。

【0533】

４５．第１、第２または第３の結合性ドメインが、１つまたは複数のリンカーにより作動可能に連結される、実施形態１から４４のいずれか一項に記載の組成物。

【0534】

４６．リンカーが、ポリペプチドである、実施形態４５に記載の組成物。

【0535】

４７．リンカーが、機能的ペプチドである、実施形態４６に記載の組成物。

【0536】

４８．リンカーが、受容体に対するリガンドである、実施形態４５から４７のいずれか一項に記載の組成物。

【0537】

４９．リンカーが、単球またはマクロファージ受容体に対するリガンドである、実施形態４５に記載の組成物。

【0538】

５０．リンカーが、受容体を活性化する、実施形態４５から４９のいずれか一項に記載の組成物。

【0539】

５１．リンカーが、受容体を阻害する、実施形態４５から５０のいずれか一項に記載の組成物。

【0540】

５２．リンカーが、マクロファージＭ２受容体に対するリガンドである、実施形態５１に記載の組成物。

【0541】

５３．リンカーが、ＴＬＲ４などのＴＬＲ受容体に対するリガンドである、実施形態４８または４９に記載の組成物。

【0542】

５４．リンカーが、ＴＬＲ受容体を活性化する、実施形態４８、４９、または５０に記載の組成物。

【0543】

５５．第１、第２および／または第３の結合性ドメインが、結合性ドメインに結合するマスクと会合する、実施形態４５から５４のいずれか一項に記載の組成物。

【0544】

５６．マスクがそれぞれの結合性ドメインと会合したままである場合に、マスクが、結合性ドメインのその標的との相互作用を阻害する阻害剤である、実施形態５５に記載の組成物。

【0545】

５７．マスクが、ペプチドリンカーを介して、結合性ドメインと会合する、実施形態５６に記載の組成物。

【0546】

５８．ペプチドリンカーが、切断可能部分を含む、実施形態５７に記載の組成物。

【0547】

５９．切断可能部分が、がんまたは腫瘍の部位において選択的に豊富であるタンパク質または酵素により切断される、実施形態５７に記載の組成物。

【0548】

６０．組換え核酸が、ＲＮＡである、実施形態１から５９のいずれか一項に記載の組成物。

【0549】

６１．組換え核酸が、ｍＲＮＡである、実施形態１から６０のいずれか一項に記載の組成物。

【0550】

６２．組換え核酸が、１つまたは複数の脂質と会合する、実施形態１から６１のいずれか一項に記載の組成物。

【0551】

６３．組換え核酸が、リポソーム内に封入される、実施形態１から６１のいずれか一項に記載の組成物。

【0552】

６４．リポソームが、ナノ粒子である、実施形態６３に記載の組成物。

【0553】

６５．組換え核酸が、ベクター内に含まれる、実施形態１から６４のいずれか一項に記載の組成物。

【0554】

６６．実施形態１から６５のいずれか一項に記載の組成物の組換え核酸のうちのいずれか１つと、許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。

【0555】

６７．実施形態２、４、６、８、１０、１２、２４、または２８から５９のいずれか一項に記載の組換え核酸によりコードされるポリペプチドを含む医薬組成物。

【0556】

６８．実施形態１から６７のいずれか一項に記載の組換え核酸を含む細胞。

【0557】

６９．骨髄細胞、例えば、ＣＤ１４＋細胞である、実施形態６８に記載の細胞。

【0558】

７０．ＣＤ１４＋、ＣＤ１６－である、実施形態６９に記載の細胞。

【0559】

７１．実施形態１から６６のいずれか一項に記載の組換え核酸を含む細胞の集団を含み、細胞のうちの少なくとも５０％が、ＣＤ１４＋ＣＤ１６－である、医薬組成物。

【0560】

７２．細胞のうちの１０％未満が、樹状細胞である、実施形態７１に記載の医薬組成物。

【0561】

７３．適切な賦形剤をさらに含む、実施形態７１または７２に記載の医薬組成物。

【0562】

７４．実施形態１から７３に記載の組成物のうちのいずれか１つを作製する方法。

【0563】

７５．対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、実施形態７１から７３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。

【0564】

７６．対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、実施形態６６に記載の医薬組成物；または実施形態６７に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。

【0565】

７７．がんが、胃がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、および肺がんからなる群から選択される、実施形態７５または７６に記載の方法。

【0566】

７８．キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えポリ核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが（ａ）抗腫瘍関連抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；および（ｂ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含み；膜貫通ドメインが、骨髄細胞内の内因性ＦｃＲガンマ受容体と二量体化するタンパク質に由来する膜貫通ドメインであり、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えポリ核酸が、細胞内で発現されると、骨髄細胞内では機能的となり、非骨髄細胞内では機能的とならない、組成物。

【0567】

７９．ＣＦＰの発現が、ＣＦＰをコードする配列を含む組換え核酸によるトランスフェクションの２４、３６、４８、または７２時間後における、骨髄細胞内では検出可能であるが、同組換え核酸によるトランスフェクションの２４、３６、４８、または７２時間後における、非骨髄細胞内では検出可能でない、実施形態７８に記載の組成物。

【0568】

８０．キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えポリ核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが
（ａ）抗腫瘍関連抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および
（ｂ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含み；
組換えポリ核酸が、ナノ粒子送達媒体により封入され；組成物のヒト対象への投与の後に、ＣＦＰが、ヒト対象の骨髄細胞の表面上において発現される、組成物。

【0569】

８１．キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えポリ核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが
（ａ）抗腫瘍関連カルシウムシグナル伝達因子２（抗ＴＲＯＰ２）結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および
（ｂ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含み；
膜貫通ドメインが、骨髄細胞内の内因性ＦｃＲガンマ受容体と二量体化するタンパク質に由来する膜貫通ドメインであり；組換えポリ核酸が、ナノ粒子送達媒体により封入され；組成物のヒト対象への投与の後に、ＣＦＰが、ヒト対象の骨髄細胞の表面上において発現される、組成物。

【0570】

８２．抗ＴＲＯＰ２結合性ドメインが、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖドメイン、またはｓｄＡｂドメインを含む、実施形態１に記載の組成物。

【0571】

８３．細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインが、ＣＤ８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、またはＣＤ８９に由来する、細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインである、実施形態１に記載の組成物。

【0572】

８４．細胞外ドメインが、ＣＤ８に由来するヒンジドメインをさらに含み、ヒンジドメインが、膜貫通ドメインおよび抗ＴＲＯＰ２結合性ドメインへと作動的に連結される、実施形態１に記載の組成物。

【0573】

８５．膜貫通ドメインが、骨髄細胞、単球、またはマクロファージ内の内因性ＦｃＲガンマ受容体と二量体化するタンパク質に由来する膜貫通ドメインであり；医薬組成物のヒト対象への投与の後に、ＣＦＰが、ヒト対象の骨髄細胞、単球、またはマクロファージ内で特異的に発現される、実施形態７８に記載の組成物。

【0574】

８６．膜貫通ドメインが、ＣＤ１６ａ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、またはＣＤ８９に由来する膜貫通ドメインである、実施形態８５に記載の組成物。

【0575】

８７．ＣＦＰが、細胞内ドメインをさらに含む、実施形態７８に記載の組成物。

【0576】

８８．細胞内ドメインが、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃγＲ、ＦｃαＲ、ＦｃεＲ、ＣＤ４０、またはＣＤ３ゼータに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態８７に記載の組成物。

【0577】

８９．１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインが、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインをさらに含む、実施形態８７に記載の組成物。

【0578】

９０．ＰＩ３Ｋ動員ドメインが、配列番号２６に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態８９に記載の組成物。

【0579】

９１．細胞内ドメインが、ＣＤ１６ａ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、またはＣＤ８９に由来する細胞内ドメインを含む、実施形態８７に記載の組成物。

【0580】

９２．組換えポリ核酸が、ｍＲＮＡである、実施形態１に記載の組成物。

【0581】

９３．ナノ粒子送達媒体が、脂質ナノ粒子を含む、実施形態７８に記載の組成物。

【0582】

９４．脂質ナノ粒子が、極性脂質を含む、実施形態９３に記載の組成物。

【0583】

９５．脂質ナノ粒子が、非極性脂質を含む、実施形態９３に記載の組成物。

【0584】

９６．脂質ナノ粒子が、１００～３００ｎｍの直径である、実施形態９３に記載の組成物。

【0585】

９７．実施形態７８に記載の組成物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。

【0586】

９８．がんを有するヒト対象へと投与された場合に、がんの増殖を阻害するのに有効な量の、実施形態７８に記載の組成物を含む、実施形態９７に記載の医薬組成物。

【0587】

９９．それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、実施形態９７または９８に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。

【0588】

１００．実施形態７８に記載の組成物を、骨髄細胞へと導入する方法であって、
（ａ）抗ＴＲＯＰ２結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、および
（ｂ）細胞外ドメインへと作動的に連結された膜貫通ドメインを含むキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含む組換えリポ核酸の存在下で、骨髄細胞に電気穿孔するステップを含み；
組換えリポ核酸が、（ｉ）骨髄細胞内に存在するか、または
（ｉｉ）ナノ粒子送達媒体により封入され；
組換えリポ核酸が、ヒト対象の骨髄細胞内における組換えポリ核酸の発現のために構成される、方法。

【0589】

１０１．インターフェロン誘導性細胞内ドメインをさらに含む、実施形態８１から８４に記載の組成物。

【実施例】

【0590】

実施例１．ＣＤ１３７－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ ＣＦＰ構築物：
[00577]本節では、がん抗原、例えば、ＣＤ３７などの抗原に結合する、細胞外結合性ドメインを有する、例示的キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）受容体、すなわち、ＣＤ１３７結合剤であるＣＦＰ受容体タンパク質のデザインおよび機能的解析を、本明細書で記載される結合剤（図１、２Ａ、２Ｂ、および図３に図解される）についての例示的場合として提示する。手順および方法は、本明細書で記載される、他の構築物のうちのいずれか１つを作出するために必要な、一部の改変を伴って使用されうる。ＣＤ１３７標的化ＣＦＰは、公知の分子生物学法を使用して構築される。核酸構築物は、ヒトＣＤ１３７Ｌのリガンド結合性断片に由来する、ＣＤ１３７結合性細胞外ドメインをコードする配列の上流において融合された、シグナルペプチドをコードする配列を含む。ヒトＣＤ１３７Ｌのリガンド結合性ドメインを、ヒト相補性ＤＮＡライブラリーから、ＰＣＲ増幅し、短鎖リンカーを介して、ＣＤ８α鎖ヒンジドメインおよびＣＤ８α鎖ＴＭドメインへと接合された膜貫通領域を含有する骨格と融合させた。ＴＭドメインは、細胞質末端において、ＦｃＲγ細胞質部分、およびＰＩ３Ｋ動員ドメインと融合させる。グラフ表示を、図４Ａに提示する。蛍光マーカーおよび薬物（アンピシリン）耐性を有する構築物を、ベクター内で調製し、細菌宿主にトランスフェクトすることにより増幅する。

【0591】

[00578]構築物は、非分裂哺乳動物細胞へと、ｍＲＮＡとして送達され、送達媒体、例えば、脂質、リポソーム、脂質ナノ粒子、またはポリマーなどの合成化合物を伴う。研究者グループにより、骨髄細胞など、いくつかの細胞型が、ウイルス形質導入による場合であれ、プラスミド送達による場合であれ、外来ＤＮＡの導入の影響を受けることが見出され、既に報告された。骨髄細胞は、外来ＤＮＡの発現が不良であり、外来ＤＮＡの発現という単純な細胞操作時でも、成熟、分化など、細胞の形質転換を受けることが多い（図４Ｂ、左）。場合によって、細胞の生存率も影響を受ける（右上）。他方、図４Ｂの右下図に示される通り、ｍＲＮＡを介する送達は、細胞が、細胞活性化の指標である、ＴＮＦおよびＩＬ６などのサイトカインを放出しない点において、細胞の進行、老化、または形質転換をもたらさない。

【0592】

実施例２．ＣＤ１３７標的化キメラ抗原受容体を発現する単球の効能
[00579]本実施例では、本開示において記載される、例示的デザインを有する、細胞外ＣＤ１３７抗原結合性ドメインを有する、キメラ融合タンパク質（ＣＡＲ）を、潜在的な抗がん剤としての、機能的な効能について解析する。第一世代のレンチウイルスベクターを使用して、骨髄ＴＨＰ１細胞系へと形質導入するのに使用される、レンチウイルスを作出することができる。ＰＭＡ処理されたＴＨＰ１細胞内の形質導入効率は、ＣＦＰ構築物について、６７～９０％の範囲であり、他の結合性ドメインを伴う、ＣＤ１３７結合剤と同様である。実験の設定を、図５の上パネルの概略図に描示し、貪食について予測される結果を、図５の下パネルに描示する。標的細胞の死は、式：［（ＳＫＯＶ３単独の数－エフェクターを伴うＳＫＯＶ３の数）／ＳＫＯＶ３単独の数］×１００により計算することができる。

【0593】

[00580]健常ドナーから単離されたＣＤ１４＋細胞であって、ＦｃＲγ＋ ＰＩ３Ｋ細胞内ドメインをコードする、レンチウイルスＣＤ１３７標的化ＣＦＰ構築物を形質導入されたＣＤ１４＋細胞を、ＣＳＦＥ標識化ＳＣＯＶ３腫瘍細胞の貪食および殺滅について解析する（図６Ａ）。

【0594】

[00581]ＡＴＡＫ構築物は、構築物を発現する細胞に対して、標的を特異性とする（図６Ｂ）。例えば、ＣＤ１９結合剤を発現する細胞は、ＣＤ１９ではなく、ＣＤ２２を、それらの表面上に提示する標的を貪食しなかった。図６Ｃは、構築物の、骨髄細胞内への組込みが、細胞の、腫瘍部位（ｃｉｔｅ）への遊走に影響を及ぼさないことを例示する（例えば、左の画像：ＣＡＲを発現する細胞構築物は、腫瘍内では、ＧＦＰ＋であり、細胞は、ｍＲＮＡの、マウスへの導入後に、遊走した）。ＣＡＲを発現する細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ケモカインに対して応答性である（データ（右）に示される通りである）。

【0595】

[00582]これらのＣＤ１３７構築物を発現する細胞が、腫瘍環境内で、Ｍ０表現型、Ｍ１表現型、Ｍ２表現型へと、分化することが可能であるのかどうかについて調べるために、ＣＡＲを発現する骨髄細胞を、Ｍ０、Ｍ１またはＭ２の極性化シグナル下に置き、培養物中の、腫瘍細胞または非腫瘍対照細胞の存在下で、１８時間にわたりインキュベートした。Ｍ０（１００ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ）；Ｍ１（５ｎｇ／ｍｌのＬＰＳ＋１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ）；Ｍ２（１００ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ＋２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１０＋２０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ）；ＤＣ（１００ｎｇ／ｍｌのＧＭＣＳＦ＋２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４）；および対照であった。図７Ａは、記載された異なる条件下で予測される、ＣＤ８０およびＣＤ２０６の発現プロファイルを示すことから、これらの細胞の分化可能性を指し示す。これらの実験の一部のために、ＦＬＡＧペプチドをコードする配列を、キメラＣＤ１３７構築物の細胞外領域内の、ｓｃＦｖと、膜貫通ドメインとの間に組み込む。細胞を採取し、細胞生存率を調べ、８０％を超えることを見出すことができる。２４時間後に、フローサイトメトリーにより細胞の表現型を検討することができる。２４、４８、および７２時間後における、いくつかの細胞マーカーの発現を決定することができる。ＣＡＲの発現単独により、ＣＤ１６の発現が増大するわけではない。

【0596】

[00583]ＣＤ１３７を発現する腫瘍についてのｉｎ ｖｉｖｏモデルを活用して、ＣＤ１３７－ＣＦＰを発現する細胞の、腫瘍への浸透および活性化について探索することができる。実験デザインについての概略を、図７Ｂに示す。ＣＤ１３７標的化ＣＦＰを発現する細胞の遊走および浸透は、細胞質染料であるＣＳＦＥで標識化された、ＣＦＰを発現する細胞の単回注入の２４時間後に決定することができる。腫瘍は、摘出し、組織学のために処理することができる。図７Ｃの予測データに示される通り、ＣＤ１３７－ＣＦＰを発現する骨髄細胞は、腫瘍へと遊走し、腫瘍細胞の周囲に蓄積しうる。ＭＳＴＯ腫瘍を保有するＮＳＧマウスにおける、ＣＦＳＥで標識化された、ＣＤ１３７標的化ＣＦＰを発現する細胞投与の２４時間後に、脾臓を摘出し、組織学のために処理することができる。

【0597】

実施例３．骨髄特異的発現のための、キメラ抗原受容体
[00584]本実施例は、骨髄特異的発現のための、キメラ抗原受容体のデザインを示す。デザインによるキメラ融合タンパク質は、細胞膜内におけるその発現が、単球内で内因的に発現される、Ｆｃガンマ受容体と共に多量体化することに依存する、ＦｃＲ ＴＤＭからなる膜貫通ドメインを有する。本実施例では、単球特異的発現のためのＣＦＰ構築物は、ＣＤ１６またはＣＤ８９の膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）を伴ってデザインされる。具体的ＣＦＰは、図８に概括された一般的概略に基づきデザインされうる。例示的なデザインは、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩＡ）ＴＭＤおよびＣＤ１６細胞内ドメインと作動可能に連結された、細胞外がん抗原結合性ドメインを有するデザイン；またはＣＤ８９（ＦｃＲＩアルファ）ＴＭＤおよびＣＤ８９細胞内ドメインと作動可能に連結された、細胞外がん抗原結合性ドメインを有するデザインを含む。細胞外抗原結合性ドメインの間に、ヒンジ（Ｈ）を置くことができる。ある特定の構築物では、ＣＤ１６ ＴＭＤまたはＣＤ８９ ＴＭＤは、細胞外領域内で、可撓性のために、約１０アミノ酸にわたり広がり、個別のヒンジドメインを組み入れる場合もあり、組み入れない場合もある。ＥＣＤがん抗原結合性ドメインは、本明細書で想定される、多様な抗原のうちのいずれか１つに結合するｓｃＦｖの場合もあり、抗体またはその断片の場合もある。

【0598】

実施例４．ＴＲＯＰ２抗原特異的ＣＦＰ構築物
[00585]本実施例は、がん細胞上のＴＲＯＰ２を標的化し、骨髄細胞上で発現されるＣＦＰについてのデザインを裏付ける。図９には、ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験を目的として、細胞外ＦＬＡＧタグを有する、例示的なバージョンが示される。略述すると、１つの構築物は、この場合、ＦＬＡＧタグに続き、ＦｃＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）タンパク質の膜貫通ドメイン、および同じタンパク質に由来する細胞質ドメインへと融合された、細胞外抗ＴＲＯＰ２ ｓｃＦｖからなる。別の構築物は、この場合、ＦＬＡＧタグに続き、ＦｃアルファＲ（ＣＤ８９）タンパク質の膜貫通ドメイン、およびＣＤ８９細胞質ドメインへと融合された、細胞外抗ＴＲＯＰ２ ｓｃＦｖからなる。

【0599】

[00586]図ではまた、構築物の各々をコードする組換えｍＲＮＡの、ＰＢＭＣへの電気穿孔、ならびに貪食およびサイトカイン発生についてのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験の、略式実験的計画も示される。図１６は、ｉｎ ｖｉｖｏ送達のための、一般的ＬＮＰ製剤について、図解により示す。

【0600】

実施例５．ＴＲＯＰ２－ＣＤ１６構築物およびＴＲＯＰ２－ＣＤ８９構築物は、骨髄細胞／単球内の優先的発現をもたらす
[00587]フローサイトメトリーアッセイのために、ＦＬＡＧタグを使用して、ＣＤ１６ ＴＭＤおよびＣＤ８９ ＴＭＤ、ならびにＴＲＯＰ２結合剤を有する構築物を、異なる細胞型内の発現について調べた。他の箇所でもまた開示される通り、ＴＲＯＰ２結合剤は、抗ＴＲＯＰ２ ｓｃＦＶである。Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、および単球の供給源であるＰＢＭＣに、ＴＲＯＰ２－ＦＬＡＧ－ＣＤ１６ ｍＲＮＡおよびＴＲＯＰ２－ＦＬＡＧ－ＣＤ８９ ｍＲＮＡを電気穿孔し、２４時間後に、フローサイトメトリーを実施した。データを、構築物が、単球内の優先的な発現に成功し（右端）、ＣＤ１９＋細胞（Ｂ細胞）、ＣＤ３＋細胞（リンパ球）、またはＣＤ５６＋細胞（ＮＫ細胞）では、発現が検出されなかったことを示す、図１０に示す。ＣＤ８９ベース構築物は、ＣＤ１６ベース構築物より高度の発現を示し、ゲーティングされた細胞のうちの６０％を超える細胞が、ＴＲＯＰ２－ＦＬＡＧ－ＣＤ８９構築物を示した。

【0601】

実施例６．ＴＲＯＰ２－ＣＤ１６細胞およびＴＲＯＰ２－ＣＤ８９細胞は、標的細胞の貪食を示した
[00588]ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ＴＲＯＰ２構築物が電気穿孔されたＰＢＭＣを、腫瘍細胞の貪食に対する効果について調べた。使用された標的腫瘍細胞は、ルシフェラーゼを発現するＳＫＯＶ３細胞系であった。モックトランスフェクト単球、および非トランスフェクト単球は、ルシフェラーゼ活性の低減により決定される、貪食の基礎レベルを示した。２つのＴＲＯＰ２ ＣＦＰを発現する細胞は、ルシフェラーゼ活性の、これらの対照と比較した、統計学的に有意な低減を示したが、これは、構築物の発現が、細胞の貪食能力を増大させたたことを示す（図１１）。

【0602】

[00589]サイトカインの発現は、標的ＳＫＯＶ３細胞の存在下および非存在下の両方の、ＴＲＯＰ２－ＦＬＡＧ－ＣＤ１６発現細胞内およびＴＲＯＰ２－ＦＬＡＧ－ＣＤ８９発現細胞内において示される結果により検討した。図１２Ａおよび１２Ｂに描示されたデータは、ＴＲＯＰ２－ＣＤ１６構築物およびＴＲＯＰ２－ＣＤ８９構築物の発現が、単球内で、強力なシグナル伝達を呈さないことを示す。これは、サイトカインまたはケモカインの発現（ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－１８、もしくはＴＮＦアルファ、またはケモカインであるＣＣＬ２）が、標的細胞（ＳＫＯＶ３）の存在下で誘導され、これは、ＣＦＰのＥＣＤの、その標的との係合時であるという事実により裏付けられる。標的細胞の非存在では、サイトカインの誘導は、見られないか、または無視できることが明らかであった。これらの結果は、がん細胞上のＴＲＯＰ２に結合しうる特異的骨髄標的化ＣＦＰが作出され、骨髄細胞を、標的がん細胞の破壊の標的化のために活性化し、これらの構築物により、治療用組成物に向けた、さらなる開発が実行されうることを示唆する。

【0603】

[00590]次いで、ＴＲＯＰ２に結合する、ｓｃＦｖのＶＨおよびＶＬの配向性が、発現レベルの差違をもたらすのかどうかについて調べた。図１３Ａは、ＶＬ－ＶＨ配向性（左）およびＶＨ－ＶＬ配向性（右）を有する構築物を例示する。例示的なＶＬ－ＶＨ ｓｃＦｖは、配列番号３４の配列を有する。例示的なＶＨ－ＶＬ ｓｃＦｖは、配列番号３５の配列を有する。ＶＨ－ＶＬ構築物の発現は、ＴＨＰ－１細胞（図１３Ｂ）および初代単球（データは示さない）のいずれにおいても、高度の発現を示す。ＶＨ－ＶＬ構築物を発現するＴＨＰ－１細胞はまた、ＶＬ－ＶＨ構築物より、わずかに高度の貪食能も示した（図１３Ｃ）。膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとの組合せを含む、ＴＲＯＰ２結合性ＣＦＰ構築物を構築した。ＴＲＯＰ２－ＣＤ８ヒンジ－ＣＤ８ ＴＭ－ＦｃＲｇ－ＰＩ３Ｋ構築物は、膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）が、ＣＤ８ヒンジドメインと、ＣＤ８ＴＭドメインとを含むＴＭドメインであり、細胞内ドメインが、Ｆｃ受容体ｇ鎖と、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインとを含む細胞内ドメインであるように作出した。同様に、ＴＲＯＰ２－ＦｃＲ－４１ＢＢ構築物は、ＣＤ８ヒンジドメインおよびＣＤ８ＴＭドメインと、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメインとを有するものとして作出し；ＴＲＯＰ２－４１ＢＢ－ＦｃＲ構築物は、ＣＤ８ヒンジドメインおよびＣＤ８ＴＭドメインと、ＦｃＲｇ細胞内ドメインおよびＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメインとを有するものとして作出した。ＴＲＯＰ２－ＣＤ４０－ＦｃＲは、ＣＤ８ヒンジドメインおよびＣＤ８ＴＭドメインと、ＣＤ４０細胞内ドメインおよびＦｃＲ細胞内ドメインとを使用して構築した。ＴＲＯＰ２－ＦｃＲ－ＭＤＡ５は、ＣＤ８ヒンジドメインおよびＣＤ８ＴＭドメインと、ＦｃＲｇ細胞内ドメインおよびＭＤＡ５タンデムＣＡＲＤドメインと構築した。ＴＲＯＰ２－ＣＤ６４構築物およびＴＲＯＰ２ ＣＤ８９構築物は、ＣＤ６４ＴＭドメインまたはＣＤ８９ＴＭドメインと、細胞内ドメインとをものとして作出したが、細胞内シグナル伝達を伝えるのに、内因性ＦｃＲｇ鎖との二量体化または多量体化を要求する。ＴＨＰ－１－５６５細胞系は、ＨＥＲ２－ＣＤ８ヒンジ－ＣＤ８ ＴＭ－ＦｃＲｇ－ＰＩ３Ｋ、およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける貪食可能性について調べるための他の構築物を、安定的に発現する。

【0604】

[00591]図１３Ｄは、構築物の発現を指し示す、フローサイトメトリーデータを示す。ＴＲＯＰ２結合構築物の各々は、発現レベルが、ＨＥＲ２結合剤であるＣＦＰ構築物と比較して低度である。図１３Ｅは、各ＴＲＯＰ２結合構築物およびＨＥＲ２結合構築物の発現レベルの、フローサイトメトリー検出による、直接的な比較を示す。

【0605】

実施例７．ＧＰ７５標的化ＣＡＲ－Ｐ構築物およびその発現
[00592]ＧＰ７５は、黒色腫および正常メラノサイトのいずれにおいても発現される、メラノソーム糖タンパク質である。ＧＰ７５は、ヒト黒色腫およびマウス黒色腫の細胞表面上のほか、これらの細胞内で発現されうる。細胞および動物モデルにおける試験のために、ＧＰ７５結合性ドメインを有する、キメラ融合タンパク質を構築した。図１４Ａに示される通り、発現について調べるために、キメラ受容体の抗ＧＰ７５結合性細胞外ドメインに干渉しない、細胞外ＦＬＡＧドメインを有する、実験構築物をデザインした。一構築物では、ＣＤ８ヒンジドメインおよびＣＤ８膜貫通ドメインを、細胞外抗ＧＰ７５－ＳｃＦｖ－ＦＬＡＧ配列へと融合させる。Ｆｃγドメインは、ＩＣＤとして組み入れる。ＰＩ３キナーゼ動員ドメインは、ＩＣＤ内に組み込む。図１４Ａに示される通り、抗ＧＰ７５細胞外結合性ドメインを、ＣＤ１６膜貫通領域またはＣＤ８９膜貫通領域と共に有する、ＣＦＰ構築物の例示的セットを作出した。一部の構築物では、ＣＤ１６ドメインおよびＣＤ８９ドメインは、それらの全細胞質部分を有する。ＧＦＰをコードする配列は、自己切断可能ペプチドであるＴ２Ａをコードする配列により、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）の細胞質ドメインから隔てられた、細胞質側末端においてタグ付けされる。マウス特異的発現およびマウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏ実験のために、ヒト配列の代わりに、マウスＣＤ１６膜貫通ドメインまたはＣＤ８９膜貫通ドメインをコードする配列を組み込んだ。対応するヒトＣＤ８９を含む構築物もまた、デザインし、調製した。

【0606】

[00593]図１４Ａの下パネルに具体的に示される通り、実験に応じて、ヒンジ／ＴＭおよびＩＣＤを変動させる、一部の例示的ＣＤ１６ベース抗ＧＰ７５－ＦＬＡＧ構築物を作出して、ヒンジドメインの、発現レベルに対する効果について調べた。構築物は、ヒンジドメイン（ＭＹＬ１５７）を欠く構築物から、ＣＤ８ヒンジドメイン（ＭＹＬ１８４）を有する構築物、ＣＤ２８ヒンジドメイン（ＭＹＬ１８５）を有する構築物の範囲にわたった。本明細書に示されない、他の構築物は、抗ＧＰ７５－ＦＬＡＧ－ｈＣＤ８９ ＴＭ－ｈＣＤ８９ ＩＣＤ（ＭＹＬ１５８）を含む。

【0607】

[00594]単球は、マウス大腿骨から、陰性選択により単離し、ｍＲＮＡ構築物を電気穿孔し、一晩にわたり培養し、ＧＰ７５を発現するＢ１６腫瘍細胞と共にインキュベートした。構築物の発現の成功は、マウス細胞内で観察された（図１４Ｂ）。ＣＤ８ヒンジドメインの組込みは、構築物の、発現レベルにおける、わずかな利点を示した（図示しない）。図１５Ａ～１５Ｃに示される通り、頑健な腫瘍細胞特異的貪食が観察された。図１５Ｂに具体的に示される通り、抗ＧＰ７５ ＥＣＤおよびＣＤ８９ＴＭドメインを有する構築物である、ＭＹＬ１５８は、貪食の増大を示した。同様に、図１５Ｃに示される通り、ＧＰ７５細胞外抗原結合性ドメインおよびＣＤ８９ＴＭドメインを有する、ＭＹＬ１５８構築物およびＭＹＬ１８６構築物のいずれも、貪食の増大を示した。図中の陽性対照は、ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ動員ＩＣＤを有し、高貪食指数を示した、本発明者らによる、第一世代の骨髄細胞用ＣＦＰ構築物である。図１５Ｄは、表示の構築物を発現する単球による、サイトカイン放出データを示す。

【0608】

実施例８．同系マウス腫瘍モデルおよびＣＡＲ－Ｐ療法
[00595]本実施例では、ＨＥＲ２同系マウスモデルを使用して、ＣＦＰの内因性腫瘍に対する効果について調べた。乳清タンパク質プロモーター構築物により駆動されるヒトＥｒｂ Ｂ２を使用して、同系マウスの脳および乳腺において、ヒトＨＥＲ２を発現することから、拒絶を伴わずに、ｈＨＥＲ２腫瘍の確立を可能とした。完全な免疫コンピテント宿主において、ＨＥＲ２＋腫瘍を確立した。次いで、ｈＨＥＲ２を発現する、抗ＨＥＲ２ ＣＦＰの効果を、マウスモデルにおいて検討した。ＣＲＩＳＰＲ編集ＨＥＲ２－ＣＦＰを発現する単球を使用して、このモデルにおけるＨＥＲ２腫瘍を処置した。腫瘍の増殖、ＣＡＲ細胞の輸送、ＣＡＲ細胞の存続および腫瘍への浸潤、ならびに免疫解析を実施した。

【0609】

実施例９．ＣＦＰのｉｎ ｖｉｖｏ送達および骨髄特異的発現
[00596]図１６は、操作されたＣＦＰを、ＧＦＰタグおよび／またはＦＬＡＧタグと共にコードし、ＬＮＰ内に封入され、ｉｎ ｖｉｖｏにおける、骨髄細胞特異的発現および抗腫瘍活性について調べるために、注射により、マウス黒色腫モデルへと導入された（図１７Ａ）、組換えｍＲＮＡについてのグラフ表示を示す。

【0610】

[00597]図１７Ｂは、ＣＦＰをコードするｍＲＮＡの、ｉｎ ｖｉｖｏにおける送達のための、ＰＥＩ製剤を示す。

【0611】

[00598]ＣＦＰは、ＣＤ８９膜貫通ドメインを有する。臓器は、図１８Ａに表示の通りに、定期的に摘出し、ｍＲＮＡによりコードされるＣＦＰの臓器特異的発現についてアッセイした。非骨髄細胞（リンパ球など）は、ＣＦＰを発現しなかった。発現は、肺、肝臓、および脾臓の骨髄細胞内で、陽性であることが検証された。図１８Ｂは、細胞型特異的発現について、さらに解析する。ＣＦＰの１回目または２回目の注射の後で単離された細胞は、いずれの臓器内の、Ｌｙ６Ｃ＋／Ｆ４／８０＋マクロファージ内およびＬＹ６Ｃ＋ Ｌｙ６Ｇ－単球内でも、タグの発現の、統計学的に有意な増大が見られることを示した。好中球もまた、構築物の発現を示した。Ｔ細胞などの非骨髄細胞は、発現を示さなかった。図１８Ｃ～１８Ｊは、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの両方における、骨髄細胞特異的発現を可能とする、図に表示の、特異的膜貫通ドメインを有する構築物の、細胞特異的発見および組織特異的発見を、さらに例示する。

【0612】

実施例１０．マウスにおける、ＣＡＲ発現マクロファージ処置の免疫学的影響
[00599]腫瘍の組織病理学結果は、処置マウス４匹中２匹では、腫瘍の大幅な低減および消失が見られたが、非処置群では、低減が見られなかったことを指し示す。代表的結果を、図１９に示す。加えて、図２０Ａおよび２０Ｂは、腫瘍の殺滅に必要である、高度の骨髄細胞活性を指し示す、組織内における、サイトカインおよびケモカインのサインを示す。図２０Ｃは、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、操作された単球が、Ｔ細胞を動員することを裏付ける。図２１ならびに図４１および４２は、ＣＦＰ構築物を投与された、腫瘍を伴うマウスから単離された細胞による、炎症性サイトカインの分泌の増大を示す。このような炎症性サイトカインは、潜在的にコールドな腫瘍を、ホットなＴＭＥへと転換する。

【0613】

[00600]図２２は、ＣＦＰを含むＬＮＰの注射を施されたマウスにおける、腫瘍の低減を確認するデータを示す。同系マウスモデルは、ＧＰ７５に結合するＣＦＰを発現する骨髄細胞により作出した。マウス抗ＧＰ７５（Ｔｒｐ－１）ＡＴＡＫ細胞の作出を、図２９に示す。ＡＴＡＫ－ＧＰ７５受容体は、左下パネルのフローサイトメトリープロットに示された、ｍＲＮＡの電気穿孔を介して、マウス単球内で、効率的に発現される。これらの細胞は、ＧＰ７５を発現する腫瘍細胞を、効率的に貪食することが可能であった（図２９右下グラフ）。同様のデータは、それぞれのＣＦＰを発現するマウスにおける、腫瘍の低減および生存の利点を描示する、図３０および３６および３７におけるデータにより確証される。図３０は、ＡＴＡＫ骨髄細胞が、ＣＡＲ Ｔおよびチェックポイント阻害剤に対して不応性である、腫瘍モデルにおける腫瘍の増殖を阻止する効力についての、ｉｎ ｖｉｖｏにおける最初の例示を表す（媒体と対比される、ＡＴＡＫ細胞２×１０^６個ずつ、８回の注入；毎日１回×４日間の注入、３日間の休薬、毎日１回×４日間の注入；±ＳＤ（マン－ホイットニー検定））。ＧＰ－７５ ＡＴＡＫ単球を、皮下において植え込まれたＧＰ７５＋ Ｂ１６黒色腫を保有する、免疫コンピテントＣ５７Ｂｌ／６マウス（これらのマウスは、Ｂ１６同系腫瘍に対して寛容である）へと静脈内注射したところ、マウスは、腫瘍の増殖をコントロールすることが可能であり、媒体または対照単球を投与されたマウスと比較した、生存の有意な改善を経た。加えて、腫瘍を、動物から摘出し、免疫細胞含量について検討したところ、ＧＰ７５－ＡＴＡＫ単球で処置された動物は、炎症性単球／マクロファージおよび好中球による、腫瘍への、著明に高レベルの浸潤のほか、ＭＤＳＣと対比した、樹状細胞の増大を示した。これは、ＡＴＡＫ単球が、腫瘍部位へと輸送され、腫瘍の増殖を抑制し、他の免疫細胞集団を、ＴＭＥへと動員することを実証した。

【0614】

[00601]図２１は、ＣＦＰを発現する骨髄細胞によるマウスの処置が、脾臓再刺激培養物中の、広範なＴ細胞活性であって、ＣＤ４エピトープの拡散を含む、Ｔ細胞活性と関連したことを、具体的に示す。本実験では、脾臓細胞を、ＯＶＡ_{３２３＊３２９}ＳＩＮＦＥＣＫＥＬまたはＰＭＡ／イオノマイシンで、６時間にわたり刺激する、脾臓細胞リコール培養を行った。サイトカインは、フローサイトメトリーにより検出した。ＧＰ７５－ＡＴＡＫ細胞による処置は、非抗原特異的活性の増大と関連し、これは、交差提示を指し示した。

【0615】

[00602]ＣＦＰの陽性発現は、骨髄細胞内および一部のＣＤ３＋細胞内で同定された（図２３および図２４）。貪食およびサイトカイン分泌の増大はまた、図３１、３２、３３、および３５に示されるデータに明らかでもある。図３１に示される通り、単球は、腫瘍内および脾臓内において、さらに、ＤＣおよび成熟単球となった。図３２に示される血清サイトカインレベルは、レスポンダーにおける広範な骨髄活性を例示する。抗腫瘍血清サイトカインプロファイルと相関する処置応答：他の著明な観察は、ＡＴＡＫ単球による、腫瘍抗原の交差提示であった（図３３）。ＡＴＡＫ骨髄細胞は、ネオ抗原を貪食し、遊離させ、Ｔ細胞へと提示する結果として、Ｔ細胞性獲得免疫応答をもたらしうる。ＡＴＡＫ－ＧＰ７５（別称：ＴＲＰ－１ ＡＴＡＫ）単球が、この場合には、ＯＶＡタンパク質に由来する、サロゲートの腫瘍ネオ抗原を貪食し、プロセシングし、ＯＶＡに由来するクラスＩ制限ペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）に対してコグネイトであるＴＣＲを保有するＴ細胞へと提示することが可能であるのに対し、同じマウスに由来し、ＡＴＡＫ受容体を発現しない単球は、これが可能でない。これは、ＡＴＡＫ単球が、抗原をプロセシングし、ＣＤ８ Ｔ細胞などの獲得免疫細胞へと交差提示しうることを実証する。これは、Ｔ細胞の、潜在的に新規のサブセットが、ｉｎ ｖｉｖｏにおける、これらの骨髄細胞の機能を介して刺激されうることをさらに指し示し、これにより、Ｔ細胞など、他の免疫細胞型による処置と対比して、広範な免疫カバレッジを裏付ける。

【0616】

[00603]ｉｎ ｖｉｖｏの骨髄細胞内における構築物の優先的発現は、図３８に描示されるデータにおいて確証された。ＬＮＰ－ＦｃＲα鎖受容体は、ＴＭＥ内の炎症性単球により発現され腫瘍内骨髄細胞のうちの１５％を超える細胞は、ＧＰ－７５－ＦｃａＲ構築物を発現する。

【0617】

実施例１１．ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＣＦＰ発現の修飾による、微小環境の修飾
[00604]本実施例では、炎症性遺伝子発現を、ｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍試料からプロファイリングしたが、これは、炎症促進性のサイトカインおよびケモカインの発現（図２６）、およびＴＭＥの発熱（図３４、右上）により、ＣＦＰ構築物が、腫瘍微小環境を、活性の炎症性部位へと転換することを指し示す。図２７および図３４は、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＣＦＰ注射が、Ｔ細胞の誘導が可能であることを指し示すデータを示す。図３４は、本明細書で開示されるヒトＡＴＡＫ単球は、自然免疫を利用し、抗腫瘍獲得免疫応答を刺激することが可能であったことを裏付ける。操作されたヒト細胞産物が、鍵となる機能的機構を有することが確認されたことを指し示す、重要点の要約を、下記に列挙する：
[00605]腫瘍への浸透および腫瘍の認識
・浸透
・蓄積
・腫瘍の認識
[00606]シグナル伝達動態
・骨髄細胞の活性化
・サイトカインの産生
・ケモカインの産生
・炎症性の極性化
[00607]直接的な腫瘍殺滅
・貪食
・サイトカイン
・死受容体（ＣＤ９５Ｌ）
[00608]長期にわたる腫瘍のコントロール
・抗原提示
・エピトープの拡散
・Ｔ細胞の関与
[00609]示されたデータから、骨髄細胞は、腫瘍微小環境を変更する能力を有し、炎症性単球およびＤＣを増大させることが明らかであり、これを、図３９のデータに示す。図３９中のデータは、炎症性単球（左）および樹状細胞（右）の上方調節を示す。加えて、これらの細胞は、Ｔ細胞機能に影響を与える。まとめると、本出願者らの知る限りにおいて、かつて、治療的可能性および重要性を有する、このような劇的効果が達成され、かつ／または裏付けられたことはない。

【0618】

実施例１２．マウスにおける処置後のｉｎ ｖｉｖｏにおける、Ｔ細胞の特徴付け
[00610]図４０～図６０に示されるデータは、送達のための、ＬＮＰ組成物の使用に関する。図４０は、尾静脈注射を介する、マウスにおける、ＣＦＰ処置による、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の上方調節を裏付ける。サイトカインプロファイルを伴う、Ｔ細胞サブセット表現型の探索を、図４１に示す。ケモカインプロファイルを伴う、Ｔ細胞サブセット表現型の探索を、図４２に示す。本明細書で論じられる研究では、ＧＰ７５腫瘍を保有する同系マウスに、４日ごとに１回または隔日１回投与し、腫瘍のサイズを測定することにより、腫瘍の進行を決定した。図４３に示される通り、いずれの処置群も、腫瘍の進行の、対照と比較して効率的な阻害を示した。図４４は、Ｔ細胞亜型について研究するためのゲーティング戦略を示した。

【0619】

[00611]Ｔ細胞亜型についての解析は、ＣＤ８＋細胞の高度の誘導、および腫瘍内のＴｒｅｇの低減を明らかにした（図４５）。Ｔ細胞における、Ｔ細胞疲弊マーカー（ＰＤ１）の低下を伴う、Ｔ細胞の活性化マーカーの上昇が注目された（図４６Ａおよび４６Ｂ、図４７Ａおよび４７Ｂ、図４８Ａおよび４８Ｂ）。

【0620】

実施例１３．マウスにおける処置後のｉｎ ｖｉｖｏにおける、骨髄細胞の特徴付け
[00612]さらに、図４９に示されるゲーティング戦略図４９を使用して、処置ＧＰ７５マウスから単離された後における、リンパ球、ＤＣなどを含む、全ての細胞型を、非処置ＧＰ７５マウスと対比してプロファイリングした。全免疫細胞頻度は、顕著な変化を示さなかった（図５０）。骨髄細胞および樹状細胞は、受容体構築物の、高度の発現を示す。発現は、図５１～５３に示される、多様な細胞型において特徴付けられ、骨髄細胞が、ＬＮＰ調製物を介して送達される、顕著な発現構築物を示すことを指し示す。図５４は、５０％を超える常在骨髄（Ｌｙ６Ｃ^ｌｏ）細胞における、受容体の発現を示す。図５５は、マウスにおける処置が、Ｌｙ６Ｃ^ｈｉ炎症性単球内およびＣＣＲ２^ｈｉ炎症性単球内の、ＣＤ４０レベルおよびＣＤ２０６レベルを、有意に上昇させたことを指し示すデータを描示する。

【0621】

[00613]図５６に示される通り、ＣＤ４０レベルおよびＣＤ２０６レベルは、Ｌｙ６Ｃ^ｌｏ常在骨髄細胞内、およびＣＣＲ２^ｌｏ常在骨髄細胞内で、著明に増大され；ＰＤＬ１レベルは、腫瘍内常在マクロファージ内で、わずかに低減された（図５７）。図５８は、処置は、ＭＨＣＩＩ、ＣＤ８６、およびＣＤ４０を含むＤＣ活性化マーカーを、有意に増大させたが、また、脾臓の、表現型をＣＤ１０３＋ ＣＤ１１ｂ－とする樹状細胞内のＰＤ－Ｌ１レベルも増大させたことを示す。図５９は、処置は、ＭＨＣＩＩ、ＣＤ８６、およびＣＤ４０を含むＤＣ活性化マーカーを、有意に増大させたが、また、脾臓の、表現型をＣＤ１０３－ ＣＤ１１ｂ＋とする樹状細胞内のＰＤ－Ｌ１レベルも増大させたことを示す。

【0622】

実施例１４．プロテアーゼ動員チロシンリン酸化ドメイン、およびプロテアーゼ誘導性転写活性化因子を伴う、キメラ融合タンパク質ライブラリーの作出
[00614]本実施例では、マクロファージ内または骨髄細胞内で発現されると、骨髄細胞の標的細胞特異的活性化を可能とする、標的特異的、プログラム化可能発現ベクターをデザインすると、骨髄細胞が、その予測された機能を実施し、標的細胞に対する免疫原性応答および標的細胞の破壊をもたらす。ベクターは、レンチウイルスの場合もあり、アデノウイルス発現ベクターの場合もある。標的細胞は、がん細胞である。本実施例では、例示的骨髄細胞発現ベクターを作製するための組成物および方法であって、発現ベクターが、がん特異的細胞外結合性ドメインを有する膜タンパク質、膜貫通ドメイン、およびホスホチロシン結合性タンパク質（ＰＴＢ）を動員する、チロシンリン酸化／活性化部分を有する細胞内ドメイン（ＩＴＡＭドメイン）をコードし、細胞内ドメインが、ホスホチロシン結合性プロテアーゼ切断可能配列を介して、転写活性化ドメイン、およびＨＩＦ－デグロン配列へと融合されたプロテアーゼ（Ｔ２Ａ切断型プロテアーゼなど）（ＨＩＦ－デグロン－プロテアーゼ）へと連結される、組成物および方法を示す。発現ベクターは、転写活性化因子により活性化されうる、標的遺伝子配列をコードする。標的遺伝子またはその断片は、炎症促進性タンパク質もしくは貪食促進性タンパク質、またはこれらのタンパク質断片である。ベクターは、転写の活性化のために、任意の選り抜きの標的遺伝子を使用する柔軟性を保持するようにデザインされうる。例示的マクロファージ発現ベクターは、図６０に示される通りにデザインされる。

【0623】

[00615]ベクターは、５’側から、３’側へと、以下の各々をコードする核酸配列：（ａ）膜貫通局在を可能とする、Ｎ末端シグナル配列を有する、細胞外がん細胞結合性ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；（ｃ）ホスホチロシン活性化／動員ドメイン（例えば、ＩＴＡＭ）を含む細胞内ドメイン；（ｄ）ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合性配列およびＶＰ６４転写活性化因子を含み、ホスホチロシン結合性タンパク質（ＰＴＢ）依存性プロテアーゼの基質である、切断可能配列により、細胞内ドメインコード配列へと連結された、ＤＮＡ結合性ドメインおよび転写活性化因子；（ｅ）例示的構築物内では、ＰＴＢ－ＨＩＦデグロンへと融合された、ＨＣＶ非構造プロテアーゼ（ＮＳ３）である、ホスホチロシンＰＴＢ依存性プロテアーゼをコードする配列を含み；ＰＴＢ－ＨＩＦ－ＮＳ３配列は、Ｔ２Ａ切断可能配列である。ホスホチロシン結合性タンパク質（ＰＴＢ）依存性プロテアーゼの基質である、切断可能配列は、ＥＤＶＶＣＣまたはＤＥＭＥＥＣである。第２のベクター構築物は、その転写が、上流においてコードされる、転写活性化因子により活性化される、標的遺伝子をコードする配列を共発現するのに使用される。標的遺伝子は、上流にＧＡＬ４結合性／活性化ドメインを伴う、ＣＭＶミニプロモーターにより駆動される。細胞外がん細胞結合性部分をコードする核酸配列は、例示的構築物内では、ＣＤ１９結合性ｓｃｆｖであるが、がん細胞上または標的細胞上で特異的に発現される、別のタンパク質に特異的なｓｃｆｖでもありうる、ｓｃｆｖ抗体をコードする。転写結合性／活性化因子は、ＣＭＶプロモーターの上流における、ＧＡＬ－４ ＤＮＡ結合性領域を介して結合し、これにより、標的遺伝子の転写を活性化しうる、ＶＰ６４配列へと融合された、５×ＧＡＬ４配列を含む。ＰＴＢ－ＨＩＦおよび隣接プロテアーゼ配列は、Ｔ２Ａ切断可能配列により挟まれ、Ｔ２Ａプロテアーゼにより自己切断可能であり、これにより、翻訳後に、プロテアーゼを放出する。

【0624】

[00616]実施例において示される、多様な部分をコードするベクターデザインは、他の形で、様々にデザインされうる。例えば、本明細書では、ポリシストロニックデザインまたは多重ベクターデザインも同等に想定される。

【0625】

[00617]上記で記載された構成要素の共発現を伴う、モジュラーベクターデザインは、標的細胞のマクロファージ媒介性の貪食および殺滅の活性化および強化をもたらしうる、標的遺伝子の、ＣＭＶプロモーターの下流への、柔軟な組込みのための道を開く。例示的な標的遺伝子は、炎症性遺伝子、インフラマソーム活性化遺伝子、サイトカイン、ケモカイン、酸化還元遺伝子である。

【0626】

[00618]細胞外ドメインおよび細胞内ドメインならびに切断可能ユニットの基本構造レイアウトを、図６１Ａに示す。上記で記載された構築物は、マクロファージ細胞内で発現される。発現後、成熟タンパク質の翻訳および放出の後に予測される作用方式を、図６１Ｂに示す。ＨＩＦ－デグロンは、ＰＴＢと、ＩＴＡＭとの相互作用を介して、細胞内ドメイン上の、ホスホチロシン結合性エレメントに結合すると、不活化され、プロテアーゼの適正な機能を可能とし、これにより、転写因子の切断および放出を可能とする。ＩＴＡＭとの会合の非存在下において、デグロンは、図２Ｂに示される通り、ＨＩＦ－プロテアーゼエレメントの分解の一因をなす。こうして、ＩＴＡＭは、細胞外ドメイン、例えば、ｓｃｆｖ（がん細胞における、そのＣＤ１９標的へと結合された）からのシグナルを受け取る場合に限り、活性化され、ＰＴＢを動員するので、この機能は、転写因子のがん細胞特異的活性化を可能とし、これは、ＣＭＶプロモーターにより駆動される、特異的標的遺伝子の転写を可能とする。

【0627】

実施例１５．腫瘍活性化好酸球溶解タンパク質の作出
[00619]本実施例では、がん細胞などの標的細胞の溶解が可能である、操作されたマクロファージまたは骨髄細胞を調製するために、好酸球溶解タンパク質を活用する。前出の実施例で指し示された通り、マクロファージ内で、例示的発現ベクターを構築し、発現する一方；発現ベクターは、標的特異性を可能とし、細胞溶解機能の実行について、プログラム可能である。

【0628】

[00620]構築物のデザインを、図６２Ａに示す。本質的に、ベクターは、ヒト好酸球主要結合性タンパク質１の、酸性ドメイン（アミノ酸残基１７～１０５）をコードする配列を含み；ヒト好酸球主要結合性タンパク質１の、細胞傷害性ドメイン（アミノ酸残基１０６～２２２）をコードする配列；好酸球主要結合性タンパク質の２つのドメインの間には、インフレームで、コグネイトＭＭＰにより切断可能である、マトリックスメタロプロテアーゼタンパク質（ＭＭＰ）認識配列をコードする配列が散在されている、組換えキメラタンパク質をコードする。キメラタンパク質をコードする配列には、マクロファージ細胞の外部における、キメラタンパク質の分泌を可能とする、シグナルペプチドをコードする配列が前置される。マクロファージから分泌される、成熟キメラタンパク質を、例示的な図６２Ｂに示す。酸性ドメインと、細胞傷害性ドメインとは、ＭＭＰにより一緒に保持された、稠密な対構成を形成する一方、酸性ドメイン結合形態は、細胞傷害性ドメインを、不活性に保つ。

【0629】

[00621]腫瘍微小環境は、ＭＭＰに富むので、ＭＭＰ認識切断可能ドメインを有する、分泌型キメラタンパク質は、たやすく切断され、これにより、細胞傷害性ドメインから、酸性ドメインを放出し、これにより、細胞傷害性ドメインを遊離させて、溶解活性をもたらす。腫瘍細胞は、環境内で豊富であり、この結果、放出された好酸球主要塩基性タンパク質細胞傷害性ドメインタンパク質により、攻撃され、溶解され、損傷される一方、近傍のマクロファージは、これらを貪食し、溶解および／または損傷された細胞を、よりたやすく除去する。他方、マクロファージは、分泌された好酸球主要塩基性タンパク質の、がん細胞に対する効果を強化するように、さらなるタンパク質、キメラ受容体、および／または標的細胞テザリング部分をさらに発現しうる。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図13D】

【図13E】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図14E】

【図14F】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図15D】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図18D】

【図19】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42】

【図43】

【図44】

【図45】

【図46A】

【図46B】

【図47A】

【図47B】

【図48A】

【図48B】

【図49】

【図50】

【図51】

【図52】

【図53】

【図54】

【図55】

【図56】

【図57】

【図58】

【図59】

【図60】

【図61A】

【図61B】

【図62A】

【図62B】

【配列表】

2023549140000001.app

【国際調査報告】