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特表2023-549272癌を治療するためのトランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］の使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-22
(54)【発明の名称】癌を治療するためのトランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］の使用
(51)【国際特許分類】
A61K 38/45 20060101AFI20231115BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231115BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231115BHJP
A61K 33/24 20190101ALI20231115BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20231115BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20231115BHJP
【ＦＩ】
A61K38/45
A61P35/00
A61P43/00 111
A61K33/24
A61K45/00
A61P43/00 121
A61K31/7105
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023529082
(86)(22)【出願日】2021-11-18
(85)【翻訳文提出日】2023-07-14
(86)【国際出願番号】 CA2021051639
(87)【国際公開番号】W WO2022104470
(87)【国際公開日】2022-05-27
(31)【優先権主張番号】63/115,587
(32)【優先日】2020-11-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/165,641
(32)【優先日】2021-03-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521478706
【氏名又は名称】ボールド セラピューティクス インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100114188
【弁理士】
【氏名又は名称】小野 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100119253
【弁理士】
【氏名又は名称】金山 賢教
(74)【代理人】
【識別番号】100124855
【弁理士】
【氏名又は名称】坪倉 道明
(74)【代理人】
【識別番号】100129713
【弁理士】
【氏名又は名称】重森 一輝
(74)【代理人】
【識別番号】100137213
【弁理士】
【氏名又は名称】安藤 健司
(74)【代理人】
【識別番号】100143823
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 英彦
(74)【代理人】
【識別番号】100183519
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻田 芳恵
(74)【代理人】
【識別番号】100196483
【弁理士】
【氏名又は名称】川嵜 洋祐
(74)【代理人】
【識別番号】100160749
【弁理士】
【氏名又は名称】飯野 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100160255
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 祐輔
(74)【代理人】
【識別番号】100172683
【弁理士】
【氏名又は名称】綾 聡平
(74)【代理人】
【識別番号】100219265
【弁理士】
【氏名又は名称】鈴木 崇大
(74)【代理人】
【識別番号】100203208
【弁理士】
【氏名又は名称】小笠原 洋平
(74)【代理人】
【識別番号】100146318
【弁理士】
【氏名又は名称】岩瀬 吉和
(74)【代理人】
【識別番号】100127812
【弁理士】
【氏名又は名称】城山 康文
(72)【発明者】
【氏名】バゼット，マーク
(72)【発明者】
【氏名】キャリー，アダム
(72)【発明者】
【氏名】パンコビッチ，ジェームズ
(72)【発明者】
【氏名】カーソン，ロビー
(72)【発明者】
【氏名】ヴァン・シェイブルック，サンドラ
(72)【発明者】
【氏名】ラハ，パロミータ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA23
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZC412
4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA16
4C086HA10
4C086HA28
4C086MA03
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZC41
4C086ZC75
(57)【要約】
有効量のトランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］（ＢＯＬＤ－１００）を投与することを含む、それを必要とする患者の癌を治療するための方法及び対応する使用が提供される。ＢＯＬＤ－１００は、有効量の毛細血管拡張性運動失調症変異の阻害剤及びＲａｄ３関連プロテインキナーゼ（ＡＴＲｉ）と組み合わせて使用され得る。
【選択図】図1
【選択図】図1
【特許請求の範囲】
【請求項1】
それを必要とするヒト患者の癌を治療するための方法であって、有効量のトランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］と、有効量の毛細血管拡張性運動失調症変異の阻害剤及びＲａｄ３関連プロテインキナーゼ（ＡＴＲｉ）と、を投与することを含む、方法。
【請求項2】
前記有効量のトランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］及び前記有効量のＡＴＲｉが、前記癌を治療するために相乗的に有効である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記癌が、トランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］単独での治療に抵抗性の癌であるか、又はＡＴＲｉ単独での治療に抵抗性の癌であるか、又は別の化学療法剤若しくは化学療法レジメンに抵抗性の癌である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記癌が、結腸直腸癌（ＣＲＣ）又は骨髄腫である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記ＣＲＣが腺癌であるか、又は前記骨髄腫が多発性骨髄腫である、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記癌が、ＢＲＡＦ変異（ＢＲＡＦＭＴ）を特徴とする、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記癌が、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）を特徴とする、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
それを必要とするヒト患者の癌を治療するための方法であって、有効量のトランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］を投与することを含み、前記癌が、ＢＲＡＦ変異（ＢＲＡＦＭＴ）又はコンセンサス分子サブタイプ（ＣＭＳ）ＣＭＳ１若しくはＣＭＳ４のＣＲＣを特徴とする結腸直腸癌（ＣＲＣ）である、方法。
【請求項9】
前記ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣが腺癌である、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣが、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）を特徴とする、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項11】
前記トランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、有効量の毛細血管拡張性運動失調症変異の阻害剤及びＲａｄ３関連プロテインキナーゼ（ＡＴＲｉ）と組み合わせて投与される、請求項８～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記有効量のトランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］及び前記有効量のＡＴＲｉが、前記癌を治療するために相乗的に有効である、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記癌が、トランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］単独での治療に抵抗性の癌であるか、又はＡＴＲｉ単独での治療に抵抗性の癌であるか、又は別の化学療法剤若しくは化学療法レジメンに抵抗性の癌である、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項14】
前記トランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］及び前記ＡＴＲｉが、任意の順序で、逐次的に投与される、請求項１～７又は１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記トランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］及び前記ＡＴＲｉが、組み合わせて、共製剤で、又は別々に投与される、請求項１～７又は１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
以下の遺伝子：ＡＴＲ（ＡＴＲセリン／トレオニンキナーゼ；ＣＹＢ５６１Ｄ２（シトクロムｂ５６１ファミリー、メンバーＤ２）；ＤＬＣ１（ＤＬＣ１ Ｒｈｏ ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質）；ＤＭＢＴ１（悪性脳腫瘍１において欠失）；Ｅ２Ｆ１（Ｅ２Ｆ転写因子１）；ＧＬＴＳＣＲ２（神経膠腫腫瘍抑制因子候補領域遺伝子２）；ＧＰＳ１（Ｇタンパク質経路抑制剤１）；ＨＳＰ９０Ｂ１（熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ（Ｇｒｐ９４）、メンバー１）；ＪＵＮＢ（ｊｕｎ Ｂ癌原遺伝子）；ＫＳＲ２（ｒａｓ２のキナーゼサプレッサー）；ＬＺＴＳ２（ロイシンジッパー、推定腫瘍抑制因子２）；ＭＥＮ１（多発性内分泌新生物Ｉ）；ＭＴＵＳ１（微小管関連腫瘍抑制因子１）；ＮＦ１（ニューロフィブロミン１）；ＮＰＲＬ２（窒素パーミアーゼレギュレーター様２（出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））；ＯＶＣＡ２（卵巣腫瘍抑制因子候補２）；ＲＡＤ５４Ｌ（ＲＡＤ５４様（出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））；ＲＳＰＨ１４（ラジアルスポーク頭部１４ホモログ（クラミドモナス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ））；ＳＡＣＭ１Ｌ（アクチン変異１様（酵母）のＳＡＣ１サプレッサー）；ＳＵＦＵ（融合ホモログ（ショウジョウバエ）のサプレッサー）；ＴＧＦＢＲ２（トランスフォーミング成長因子、ベータ受容体ＩＩ（７０／８０ｋＤａ））；ＴＮＦＳＦ１０（腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１０）；ＷＴＡＰ（ウィルムス腫瘍１関連タンパク質）のうちの１つ以上の発現の阻害剤を投与することをさらに含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記発現阻害剤が、ｓｉＲＮＡである、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
以下の遺伝子：ＡＴＲ（ＡＴＲセリン／トレオニンキナーゼ；ＣＹＢ５６１Ｄ２（シトクロムｂ５６１ファミリー、メンバーＤ２）；ＤＬＣ１（ＤＬＣ１ Ｒｈｏ ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質）；ＤＭＢＴ１（悪性脳腫瘍１において欠失）；Ｅ２Ｆ１（Ｅ２Ｆ転写因子１）；ＧＬＴＳＣＲ２（神経膠腫腫瘍抑制因子候補領域遺伝子２）；ＧＰＳ１（Ｇタンパク質経路抑制剤１）；ＨＳＰ９０Ｂ１（熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ（Ｇｒｐ９４）、メンバー１）；ＪＵＮＢ（ｊｕｎ Ｂ癌原遺伝子）；ＫＳＲ２（ｒａｓ２のキナーゼサプレッサー）；ＬＺＴＳ２（ロイシンジッパー、推定腫瘍抑制因子２）；ＭＥＮ１（多発性内分泌新生物Ｉ）；ＭＴＵＳ１（微小管関連腫瘍抑制因子１）；ＮＦ１（ニューロフィブロミン１）；ＮＰＲＬ２（窒素パーミアーゼレギュレーター様２（出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））；ＯＶＣＡ２（卵巣腫瘍抑制因子候補２）；ＲＡＤ５４Ｌ（ＲＡＤ５４様（出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））；ＲＳＰＨ１４（ラジアルスポーク頭部１４ホモログ（クラミドモナス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ））；ＳＡＣＭ１Ｌ（アクチン変異１様（酵母）のＳＡＣ１サプレッサー）；ＳＵＦＵ（融合ホモログ（ショウジョウバエ）のサプレッサー）；ＴＧＦＢＲ２（トランスフォーミング成長因子、ベータ受容体ＩＩ（７０／８０ｋＤａ））；ＴＮＦＳＦ１０（腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１０）；ＷＴＡＰ（ウィルムス腫瘍１関連タンパク質）；ＡＰＣ（大腸腺腫性ポリポーシス）；ＢＬＭ（ブルーム症候群、ＲｅｃＱヘリカーゼ様）；ＣＡＳＰ８（カスパーゼ８、アポトーシス関連システインペプチダーゼ）；ＣＤＫＮ１Ａ（サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１Ａ（ｐ２１、Ｃｉｐ１））；ＥＲＡＰ１（小胞体アミノペプチダーゼ１）；ＥＲＣＣ１（除去修復交差相補群１）；ＦＡＮＣＧ（ファンコニ貧血、相補群Ｇ）；ＧＬＴＳＣＲ１（神経膠腫腫瘍抑制因子候補領域遺伝子１）；ＰＡＬＢ２（ＢＲＣＡ２のパートナー及びローカライザー）；ＰＴＴＧ１ＩＰ（下垂体腫瘍形質転換１相互作用タンパク質）；ＰＴＴＧ２（下垂体腫瘍形質転換２）；ＲＢ１（網膜芽細胞腫１）；ＲＢ１ＣＣ１（ＲＢ１誘導性コイル状コイル１）；ＲＢＢＰ７（網膜芽細胞腫結合タンパク質７）；ＴＰ５３（腫瘍タンパク質ｐ５３）；ＴＰ５３Ｉ１１（腫瘍タンパク質ｐ５３誘導性タンパク質１１）；ＴＳＧ１０１（腫瘍感受性１０１）；ＴＵＳＣ３（腫瘍抑制因子候補３）；ＶＢＰ１（フォンヒッペル・リンダウ結合タンパク質１）；ＷＴ１（ウィルムス腫瘍１）；ＷＷＯＸ（酸化還元酵素を含有するＷＷドメイン）；ＸＰＡ（色素性乾皮症、相補群Ａ）；及び／又はＺＮＦ２８０Ｂ（ジンクフィンガータンパク質２８０Ｂ）のうちの１つ以上における変異について前記患者からのサンプルをアッセイすることをさらに含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、トランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］及び癌を治療するための他の治療薬の併用を含む治療化合物の分野にある。
【背景技術】
【0002】
トランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］は、抗癌活性を有するルテニウムの配位錯体（ＢＯＬＤ－１００、ＫＰ１３３９、ＮＫＰ－１３３９、ＩＴ－１３９、及びＮａ［ＲｕＩＩＩＣｌ４（Ｈｉｎｄ）２］としても知られている）である。トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸塩（ＩＩＩ）］のアルカリ金属塩を作製する方法は、例えばＰＣＴ特許公開ＷＯ２０１８２０４９３０に記載されており、そのような化合物は、式Ｉを有する：
（式中、Ｍは、以下のナトリウム塩を含むアルカリ金属カチオンである）
ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ）経路は、細胞増殖、分化、生存及びアポトーシスに関与するＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル伝達カスケードを伴う。このカスケード内で、ＲＡＳ及びＲＡＦにおける変異は、ヒト癌における一般的な癌遺伝子である。複数のシグナルがＧＴＰアーゼのＲＡＳファミリー（ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ及びＨＲＡＳ）を活性化し、これが次に下流のＲＡＦプロテインキナーゼ（ＡＲＡＦ、ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦ）を活性化する。プロテインキナーゼのＲＡＦファミリー内で、ＢＲＡＦは、ＭＥＫの頻繁に変異した強力な活性化因子である。ＢＲＡＦ変異（ＢＲＡＦＭＴ）は、転移性結腸直腸癌（ｍＣＲＣ）の約１０～１５％で発生し、臨床転帰不良、特にマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を特徴とする疾患とは異なるマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）疾患を有するものと相関する。これらの理由から、ＲＡＳ（ＫＲＡＳ及びＮＲＡＳ）及びＢＲＡＦ遺伝子のプロファイリング並びにミスマッチ修復（ＭＭＲ）／ＭＳＩの状態の評価は、ＣＲＣにおける診断及び治療の指標として有用であり得る。
【化1】
【化2】
【0003】
ＡＴＲ（毛細血管拡張性運動失調症変異（ＡＴＭ）及びＲａｄ３関連プロテインキナーゼ）は、細胞ＤＮＡ損傷応答（ＤＤＲ）の中心的構成要素である。ＤＮＡ損傷又はストレスを受けた複製フォークの部位での複製タンパク質Ａ被覆一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）は、ＡＴＲを活性化し、次いでこれは細胞周期チェックポイントを活性化し、複製ストレスを抑制するように機能する。癌細胞は、ＡＴＲチェックポイント機能への依存を引き起こす、複製ストレスなどの特徴によって特徴付けられることが多い。この文脈内で、ＡＴＲ阻害剤（ＡＴＲｉ）は、癌治療薬として有望であることが示されている（国際公開第２０１７１１８７３４号、米国特許出願公開第２０１９０３６５７４５号、国際公開第２０１６１１２３７４号、国際公開第２０１７１８０７２３号、国際公開第２０１８０２９１１７号）。市販のＡＴＲｉには、ＡＺＤ６７８３、Ｍ４３４４（以前はＶＸ－８０３）、ＶＥ－８２１、Ｍ６６２０（以前はＶＸ－９７０、ベルゾセルチブ又はＶＥ－８２２）、及びＢＡＹ１８９５３４４が含まれる（Ｍｅｉ，Ｌ．，Ｚｈａｎｇ，Ｊ．，Ｈｅ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ａｔａｘｉａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ ａｎｄ Ｒａｄ３－ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ：ｗｈｅｒｅ ｗｅ ｓｔａｎｄ．ＪＨｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １２，４３（２０１９））。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【特許文献1】国際公開第２０１８２０４９３０号
【特許文献2】国際公開第２０１７１１８７３４号
【特許文献3】米国特許出願公開第２０１９０３６５７４５号
【特許文献4】国際公開第２０１６１１２３７４号
【特許文献5】国際公開第２０１７１８０７２３号
【特許文献6】国際公開第２０１８０２９１１７号
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】Ｍｅｉ，Ｌ．，Ｚｈａｎｇ，Ｊ．，Ｈｅ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ａｔａｘｉａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ ａｎｄ Ｒａｄ３－ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ：ｗｈｅｒｅ ｗｅ ｓｔａｎｄ．ＪＨｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １２，４３（２０１９）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
有効量のトランス－［テトラクロリドビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］（ＢＯＬＤ－１００）を投与することを含む、それを必要とする患者、例えばヒト患者の癌を治療するための方法及び対応する使用が提供される。ＢＯＬＤ－１００は、有効量の毛細血管拡張性運動失調症変異の阻害剤及びＲａｄ３関連プロテインキナーゼ（ＡＴＲｉ）と組み合わせて使用され得る。有効量のＢＯＬＤ－１００及び有効量のＡＴＲｉは、例えば、癌の治療に相乗的に有効であり得る。癌は、ＢＯＬＤ－１００単独での治療に抵抗性の癌であり得るか、又はＡＴＲｉ単独での治療に抵抗性の癌、又は別の化学療法剤若しくは化学療法レジメンに抵抗性の癌であり、例えば転移性癌であり得る。癌は、ＣＲＣ腺癌などの結腸直腸癌（ＣＲＣ）であり得る。癌は、ＢＲＡＦ変異（ＢＲＡＦＭＴ）を特徴とし得る。癌は、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）をさらに特徴とし得る。したがって、選択された実施形態は、転移性ＭＳＳ ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣなどのＭＳＳ ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣの治療において、ＢＯＬＤ－１００による単独療法、又はＢＯＬＤ－１００とＡＴＲｉとの併用療法を伴う。併用療法では、ＢＯＬＤ－１００及びＡＴＲｉは、任意の順序で、逐次的に投与されてもよく、又は組み合わせて、共製剤で、若しくは別々に投与されてもよい。
【図面の簡単な説明】
【0007】
【図1】２つのヒートマップを含む図であり、各々がＸ軸に沿ってコンセンサス分子サブタイプ（ＣＭＳ）プロファイルを有し、右側のヒートマップでは、Ｙ軸に沿った経路名（Ｈａｌｌｍａｒｋ）を有し、小胞体タンパク質応答（ＵＰＲ）及びＤＮＡ修復が、最も不良な転帰を有するＣＭＳ１／ＢＲＡＦＭＴサブグループにおいて調節解除された主要な経路であることを示している。
【図2】（Ａ）ウェスタンブロット画像、及び（Ｂ）３つの棒グラフ、を有する上部パネル、並びに２つの棒グラフ（Ａ及びＢ）、を有する下部パネルを含む図であり、一緒になって、ＢＲＡＦＭＴ、ＭＳＳ ＣＲＣ細胞がＢＯＬＤ－１００による処理に対して感受性であることを示している。
【図3】（Ａ）ブロット画像の上の折れ線グラフ、（Ｂ）ブロット画像、並びに（Ｃ）ブロット画像及び散布図、を有する３つのパネルを含む図であり、一緒になって、発癌性ＢＲＡＦがＢＯＬＤ－１００処理に対する応答の決定因子であることを示している。
【図4】（Ａ）２つの表、（Ｂ）散布図、（Ｃ）棒グラフの上のブロット画像、（Ｄ）２つの棒グラフに隣接する２つのブロット画像、を含む図であり、一緒になって、ＢＯＬＤ－１００誘導性細胞死がカスパーゼ８に依存することを示している。
【図5】（Ａ）ヒートマップ及び（Ｂ）２つの概略図、を含む図であり、一緒になって、ＢＯＬＤ－１００処理がＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＤＮＡ損傷修復経路活性化をもたらすことを示している。
【図6】（Ａ）２つのヒートマップ及び棒グラフ、（Ｂ）２つのヒートマップ及び棒グラフ、並びに（Ｃ）細胞培養物の画像及び３つの棒グラフ、を有する３つのパネルを含む図であり、一緒になって、ＡＴＲ阻害がＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞におけるＢＯＬＤ－１００処理に対する応答を著しく増加させることを示している。
【図7】（Ａ）２つのブロット画像、（Ｂ）２つの棒グラフ、及び（Ｃ）３つの棒グラフ、を有する３つのパネルを含む図であり、一緒になって、ＡＴＲｉ化合物ＡＺＤ６７３８、Ｍ４３４４及びベルゾセルチブが、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＢＯＬＤ－１００処理後に細胞死を増加させることを示している。
【図8】（Ａ）２つのブロット画像、（Ｂ）２つのブロット画像、（Ｃ）２つの棒グラフ、並びに（Ｄ）ブロット画像及び棒グラフ、を有する４つのパネルを含む図であり、一緒になって、ＢＯＬＤ－１００がＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞においてＲＯＳ依存性ＡＴＲ／ＣＨＫ１キナーゼ活性化及び細胞死を誘導することを示している。
【図9】ＢＯＬＤ－１００が困難なＣＭＳ１及びＣＭＳ４ ＣＲＣの治療に最も効果的であることを示す棒グラフである。
【図10】（Ａ）対応する散布図に対する棒グラフ、及び（Ｂ）散布図、を有する２つのパネルを含む図であり、ＡＴＲ阻害が多発性骨髄腫におけるＢＯＬＤ－１００処理に対する応答を著しく増加させることを示している。
【発明を実施するための形態】
【0008】
本明細書に開示されるように、ＢＯＬＤ－１００は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞の生存に劇的な影響を及ぼすことが示されている。したがって、ＢＯＬＤ－１００でＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣを治療するための療法が提供される。さらに、毛細血管拡張性運動失調症変異の阻害剤及びＲａｄ３関連プロテインキナーゼ（ＡＴＲｉ）と組み合わせたＢＯＬＤ－１００による、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞によって例示される癌細胞の処理において相乗効果が開示される。したがって、ＡＴＲｉと組み合わせたＢＯＬＤ－１００を用いて、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣを含む癌を治療するための療法が提供される。
【0009】
同質遺伝子対及び非同質遺伝子対のＶ６００Ｅ ＢＲＡＦＭＴ及びＢＲＡＦＷＴ細胞のパネルを使用して、インビトロＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（登録商標）及びアネキシンＶ／ＰＩ感受性試験は、ＢＲＡＦＭＴ、ＭＳＳ ＣＲＣ細胞が、９．２５～３１μＭのＩＣ５０値でＢＯＬＤ－１００に対して非常に感受性であることを示した。ＢＯＬＤ－１００による処理は、ＧＲＰ７８レベルの早期低下及び小胞体ストレスタンパク質ＣＨＯＰの発現レベルの増加をもたらした。これは、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞におけるカスパーゼ－８依存性細胞死に関連していた。注目すべきことに、ＣＨＯＰのサイレンシングは、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞におけるＢＯＬＤ－１００誘導性細胞死を抑止しなかったことから、小胞体タンパク質応答（ＵＰＲ）経路が、ＢＯＬＤ－１００後の細胞死において役割を果たさなかったことが示された。ＲＮＡ配列及びＩＰＡバイオインフォマティクス分析は、細胞周期調節及びＤＮＡ修復がＢＯＬＤ－１００処理後の最も有意な脱調節経路であることを示した。さらなる機構的研究により、ＢＯＬＤ－１００が、ＢＲＡＦＭＴ細胞におけるｐＡＴＲＴ１９８９、ｐＣｈｋ１Ｓ３４５及びγＨ２ＡＸ発現レベルの急速かつ強力な増加を誘導することが明らかになった。
【0010】
ＡＴＲｉ化合物ＡＺＤ６７８３及びＭ４３４４は、ＢＯＬＤ－１００と組み合わせた場合、特にＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞において、強い相乗作用及びアポトーシスをもたらした。注目すべきことに、ＲＯＳスカベンジャーＮＡＣは、ＢＯＬＤ－１００誘導性ＣＨＯＰ、ｐＡＴＲＴ１９８９、ｐＣｈｋ１Ｓ３４５及びγＨ２ＡＸレベルを抑止し、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞におけるＢＯＬＤ－１００処理後の細胞死を救済した。
【0011】
本発明のさらなる実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸塩（ＩＩＩ）］のナトリウム塩（すなわち、ＢＯＬＤ－１００）を含有する医薬品を調製するための方法を提供する。
【0012】
本発明の一態様は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］を含有する滅菌凍結乾燥医薬品を調製するための方法を提供する。この製剤は、患者への投与に好適である。この製剤は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、ｐＨ緩衝液及び凍結保護剤から構成される。前記製剤を提供するための一般的な方法は、緩衝水溶液を調製するステップ、凍結保護剤水溶液を調製するステップ、緩衝溶液中のトランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］の溶解、凍結保護剤溶液の添加、滅菌濾過（例えば無菌濾過）、滅菌条件下でバイアルに充填するステップ、及び滅菌条件下で凍結乾燥するステップを含む。好適な緩衝液には、クエン酸塩、ＴＲＩＳ、酢酸塩、ＥＤＴＡ、ＨＥＰＥＳ、トリシン及びイミダゾールが含まれるが、これらに限定されない。リン酸緩衝液の使用は、可能であるが、好ましくない。本発明の好ましい態様は、クエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液の使用である。好適な凍結保護剤には、糖、モノサッカライド、二糖類、ポリアルコール、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、デキストラン及びデキストロースが含まれるが、これらに限定されない。本発明の好ましい態様は、凍結防止剤としてのマンニトールの使用である。
【0013】
上記のように、本明細書において、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］は、水中で化合物Ａに分解することができる（スキームＩＩ）。当業者は、この分解反応を制限することが最高純度の生成物を得るのに有利であることを認識するであろう。製剤化プロセス中にトランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］溶液を冷却すると、凍結乾燥生成物中に存在する化合物Ａの量が大幅に減少することが分かった。本発明の一態様では、製剤化プロセス中にトランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］溶液を４℃に冷却する。本発明の別の態様では、製剤化プロセス中にトランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］溶液を２～８℃に冷却する。本発明の別の態様では、製剤化プロセス中にトランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］溶液を２～１５℃に冷却する。
【0014】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、好適な緩衝液及びマンニトールを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、好適な緩衝液は、クエン酸緩衝液を含む。例えば、いくつかの実施形態では、クエン酸緩衝液は、クエン酸ナトリウム及びクエン酸を含む。
【0015】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸及びマンニトールを含む組成物を提供する。
【0016】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール及びｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］を含む組成物を提供する。
【0017】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物を提供する。
【0018】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸及びマンニトールナトリウムを含む組成物であって、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が非晶質である、組成物を提供する。
【0019】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール及びｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］を含む組成物であって、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が非晶質である、組成物を提供する。
【0020】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が非晶質である、組成物を提供する。
【0021】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．４重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１パーセントである、組成物を提供する。
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．４重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１パーセントである、組成物を提供する。
【0022】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．４重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１重量パーセントである、組成物を提供する。
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．４重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１重量パーセントである、組成物を提供する。
【0023】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．２重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１重量パーセントである、組成物を提供する。
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．２重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１重量パーセントである、組成物を提供する。
【0024】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．４０重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１重量パーセントである、組成物を提供する。
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．４０重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１重量パーセントである、組成物を提供する。
【0025】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．４０重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１重量パーセントである、組成物を提供する。
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．４０重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．０１重量パーセントである、組成物を提供する。
【0026】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．３重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．３重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
【0027】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．３重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１～約０．３重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
【0028】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約１１．５～約１４．０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約４３．９～約５３．７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約２５．７～約２３．１重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約１１．５～約１４．０重量パーセントであり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１及び約０．３重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約１１．５～約１４．０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約４３．９～約５３．７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約２５．７～約２３．１重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約１１．５～約１４．０重量パーセントであり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１及び約０．３重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
【0029】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約１０．２～約１５．３重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約３９．０～約５８．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約２０．５～約３０．８重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約１０．２～約１５．３重量パーセントであり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１及び約０．３重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約１０．２～約１５．３重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約３９．０～約５８．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約２０．５～約３０．８重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約１０．２～約１５．３重量パーセントであり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、組成物の約０．０１及び約０．３重量パーセントであり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
【0030】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、ｍｅｒ，トランス［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］及びセシウム塩を含む組成物であって、
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約１０．２～約１５．３重量パーセントであり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、約０．０１及び約０．３重量パーセントの組成であり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
組成物が、凍結乾燥粉末であり、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約１０．２～約１５．３重量パーセントであり、
ｍｅｒ，トランス－［ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）］が、約０．０１及び約０．３重量パーセントの組成であり、
セシウムが、組成物の約０．００００１～約０．１重量パーセントである、組成物を提供する。
【0031】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、及びクエン酸ナトリウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0032】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、及びクエン酸ナトリウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０１～約０．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００１～約０．２５重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０１～約０．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００１～約０．２５重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0033】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸及びクエン酸ナトリウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．００１～約１重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０００１～約１重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．００１～約１重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０００１～約１重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0034】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム及びＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）を含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の０．５重量百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の０．５重量百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0035】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム及びＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）を含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０１～約０．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００１～約０．２５重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の約０～約０．５重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０１～約０．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００１～約０．２５重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の約０～約０．５重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0036】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）及びセシウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．００１～約１重量百分率であり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０００１～約１重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の０．５重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５重量パーセント以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．００１～約１重量百分率であり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０００１～約１重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の０．５重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５重量パーセント以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0037】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム及びセシウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４９．６１重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率であり、
セシウムが、組成物の約０．２５重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４９．６１重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率であり、
セシウムが、組成物の約０．２５重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0038】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム及びセシウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０１～約０．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００１～約０．２５重量百分率であり、
セシウムが、組成物の約０．１～約０．５重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０１～約０．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００１～約０．２５重量百分率であり、
セシウムが、組成物の約０．１～約０．５重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0039】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム及びセシウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．００１～約１重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０００１～約１重量百分率であり、
セシウムが、組成物の約０．０１～約１重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．００１～約１重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０００１～約１重量百分率であり、
セシウムが、組成物の約０．０１～約１重量百分率である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0040】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）及びセシウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４６．６１重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５重量百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４６．６１重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５重量百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0041】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）及びセシウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４６．６１重量パーセントの間であり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５重量百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４６．６１重量パーセントの間であり、
マンニトールが、組成物の約４９．８６重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．１８７重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０９３重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５重量百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0042】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）及びセシウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０１～約０．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００１～約０．２５重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の約１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約４０～約６０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０１～約０．５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００１～約０．２５重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の約１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0043】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）及びセシウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．００１～約１重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０００１～約１重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の約１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約３０～約７０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．００１～約１重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．０００１～約１重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の約１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0044】
本発明の一実施形態は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）及びセシウムを含む組成物であって、
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約２０～約８０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約２０～約８０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０００１～約５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００００１～約５重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の約１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］が、組成物の約２０～約８０重量パーセントであり、
マンニトールが、組成物の約２０～約８０重量パーセントであり、
クエン酸が、組成物の約０．０００１～約５重量パーセントであり、
クエン酸ナトリウムが、組成物の約０．００００１～約５重量百分率であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）が、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）が、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）が、組成物の約１．０重量百分率以下であり、
セシウムが、組成物の０．２５百分率以下である、組成物を提供する。いくつかのそのような実施形態では、組成物は、凍結乾燥粉末である。
【0045】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の製剤又は組成物を含む単位剤形を提供する。本明細書で使用される「単位剤形」という表現は、治療される対象に適切な提供される製剤の物理的に別個の単位を指す。しかしながら、提供される製剤の１日の総使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決められることが理解されよう。任意の特定の対象又は生物に対する具体的な有効用量レベルは、治療される障害及び障害の重症度；用いられる特定の活性剤の活性；用いられる特定の製剤；対象の年齢、体重、全身の健康状態、性別及び食事；用いられる特定の活性剤の投与時間及び排泄速度；治療期間；用いられる特定の（１又は複数の）化合物と組み合わせて又は同時に使用される薬物及び／又は追加の療法、並びに医学分野で周知の同様の要因を含む種々の因子に依存するであろう。
【0046】
本発明の組成物は、単位剤形として提供することができる。いくつかの実施形態では、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウムを含むバイアルが単位剤形である。
【0047】
いくつかの実施形態では、本発明は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム及びセシウムを含むバイアルが単位剤形である。
【0048】
いくつかの実施形態では、本発明は、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）及びセシウムを含むバイアルが単位剤形である。
【0049】
本発明によってさらに包含されるのは、本明細書に記載の組成物を含む医薬パック及び／若しくはキット、又は提供される組成物を含む単位剤形、並びに容器（例えば、箔若しくはプラスチックパッケージ、又は他の好適な容器）である。使用説明書がそのようなキットにさらに提供されていてもよい。
【0050】
いくつかの実施形態では、本発明は、単位剤形として提供することができる。実際、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウムを含むバイアルは、表３に示す単位剤形である
いくつかの実施形態では、表３に記載の医薬成分は、セシウムをさらに含み、
セシウムは、組成物の０．２５重量百分率以下である。
【表1】
セシウムは、組成物の０．２５重量百分率以下である。
【0051】
いくつかの実施形態では、表３に記載の医薬成分は、セシウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）及びＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）をさらに含み、
セシウムは、組成物の約０．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）は、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）は、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）は、組成物の約１．０重量百分率以下である。
セシウムは、組成物の約０．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）は、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）は、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）は、組成物の約１．０重量百分率以下である。
【0052】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、表４のものから選択される：
いくつかの実施形態では、表４に記載の医薬成分は、セシウムをさらに含み、
セシウムは、組成物の０．２５重量百分率以下である。
【表2】
セシウムは、組成物の０．２５重量百分率以下である。
【0053】
いくつかの実施形態では、表４に記載の医薬成分は、セシウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）及びＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）をさらに含み、
セシウムは、組成物の約０．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）は、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）は、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）は、組成物の約１．０重量百分率以下である。
セシウムは、組成物の約０．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）は、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）は、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）は、組成物の約１．０重量百分率以下である。
【0054】
いくつかの実施形態では、本発明は、単位剤形として提供することができる。実際、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテニウム酸ナトリウム（ＩＩＩ）］、マンニトール、クエン酸、クエン酸ナトリウムを含むバイアルは、表５に示す単位剤形である：
いくつかの実施形態では、表５に記載の医薬成分は、セシウムをさらに含み、
セシウムは、組成物の０．２５重量百分率以下である。
【表3】
セシウムは、組成物の０．２５重量百分率以下である。
【0055】
いくつかの実施形態では、表５に記載の医薬成分は、セシウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）及びＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）をさらに含み、
セシウムは、組成物の約０．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）は、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）は、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）は、組成物の約１．０重量百分率以下である。
セシウムは、組成物の約０．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）は、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）は、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）は、組成物の約１．０重量百分率以下である。
【0056】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、表６のものから選択される：
いくつかの実施形態では、表６に記載の医薬成分は、セシウムをさらに含み、
セシウムは、組成物の０．２５重量百分率以下である。
【表4】
セシウムは、組成物の０．２５重量百分率以下である。
【0057】
いくつかの実施形態では、表６に記載の医薬成分は、セシウム、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）、ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）及びＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）をさらに含み、
セシウムは、組成物の約０．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）は、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）は、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）は、組成物の約１．０重量百分率以下である。
セシウムは、組成物の約０．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（Ｈ２Ｏ）は、組成物の約０．５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）２（ＣＨ３ＣＮ）は、組成物の約１．２５重量百分率以下であり、
ＲｕＩＩＩＣｌ３（Ｈｉｎｄ）（ＨＮ＝Ｃ（Ｍｅ）ｉｎｄ）は、組成物の約１．０重量百分率以下である。
【0058】
いくつかの実施形態では、医薬成分は、表３～６のいずれかに記載の通りであり、セシウムをさらに含む。いくつかの実施形態では、セシウムは、組成物の約０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１０、０．０１５、０．０２０、０．０２５、０．０３０、０．０３５、０．０４０、０．０４５、０．０５０、０．０５５、０．０６０、０．０６５、０．０７０、０．０７５、０．０８０、０．０８５、０．０９０、０．０９５、０．１０、０．１５、０．２０、０．２５、０．３０、０．３５、０．４０、０．４５、０．５０、０．５５、０．６０、０．６５、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９５又は１．０重量百分率の量で存在する。
【0059】
いくつかの実施形態では、本発明は、有効量のＢＯＬＤ－１００を対象に投与することを含む、それを必要とする対象において癌を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト患者である。いくつかの実施形態では、癌は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）であり、ＢＲＡＦ変異（ＢＲＡＦＭＴ）を特徴とし得、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）をさらに特徴とし得る。いくつかの実施形態では、ＢＯＬＤ－１００は、免疫腫瘍剤などの化学療法剤、例えば毛細血管拡張性運動失調症変異の阻害剤及びＲａｄ３関連プロテインキナーゼ（ＡＴＲｉ）と組み合わせて使用され得る。
【0060】
いくつかの実施形態では、有効量のＢＯＬＤ－１００は、単独で、又は組み合わせてのいずれか、例えばＡＴＲｉと組み合わせて、ＢＯＬＤ－１００を投与した後の癌細胞中のＧＲＰ７８の量を減少させるのに有効であり得る。
【0061】
本発明の一実施形態によれば、それを必要とする患者において癌を治療するための方法であって、
１）患者に化学療法剤（ＡＴＲｉなど）を投与するステップと、
２）続いて、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物を患者に投与するステップと、
３）任意選択で、ステップ１及び２を繰り返すステップと、を含む、方法を提供する。
１）患者に化学療法剤（ＡＴＲｉなど）を投与するステップと、
２）続いて、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物を患者に投与するステップと、
３）任意選択で、ステップ１及び２を繰り返すステップと、を含む、方法を提供する。
【0062】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の１日後に投与される。他の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の１週間後に患者に投与される。さらに他の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の１～７日後に患者に投与される。
【0063】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）と同時に投与される。特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物及び化学療法剤（ＡＴＲｉなど）は、互いに約２０～２８時間以内、又は互いに約２２～２６時間以内、又は互いに約２４時間以内に投与される。
【0064】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の前に投与される。特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約８～１６時間前、又は化学療法剤（例えば、ＡＴＲｉ）の少なくとも約１０～１４時間前、又は化学療法剤（例えば、ＡＴＲｉ）の少なくとも約１２時間前に投与される。
【0065】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約２０～２８時間前、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約２２～２６時間前、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約２４時間前に投与される。
【0066】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約４４～５２時間前、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約４６～５０時間前、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約４８時間前に投与される。
【0067】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約６４～８０時間前、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約７０～７４時間前、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約７２時間前に投与される。
【0068】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の前に投与される。特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約８～１６時間後、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約１０～１４時間後、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約１２時間後に投与される。
【0069】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約２０～２８時間後、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約２２～２６時間後、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約２４時間後に投与される。
【0070】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約４４～５２時間後、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約４６～５０時間後、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約４８時間後に投与される。
【0071】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約６４～８０時間後、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約７０～７４時間後、又は化学療法剤（ＡＴＲｉなど）の少なくとも約７２時間後に投与される。
【0072】
ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ患者（転移性疾患を有する患者など）を含む特定の実施形態では、化学療法剤レジメンは、５フルオロウラシル、ロイコボリン及びオキサリプラチン（ＦＯＬＦＯＸ）；又は５－フルオロウラシル、ロイコボリン及びイリノテカン（ＦＯＬＦＩＲＩ）；又はカペシタビン＋オキサリプラチン；又はベバシズマブと共に５－フルオロウラシル、ロイコボリン、オキサリプラチン及びイリノテカン（ＦＯＬＦＯＸＩＲＩ＋ｂｅｖ）の使用を伴い得る。
【0073】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、ＡＴＲｉと同時に投与される。特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物及びＡＴＲｉが組み合わせて投与される場合、２つの治療薬は、互いに約２０～２８時間以内、又は互いに約２２～２６時間以内、又は互いに約２４時間以内に投与され得る。
【0074】
特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、ＡＴＲｉの前に投与される。特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、ＡＴＲｉの少なくとも約８～１６時間前、又はＡＴＲｉの少なくとも約１０～１４時間前、又はＡＴＲｉの少なくとも約１２時間前に投与される。特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、ＡＴＲｉの少なくとも約２０～２８時間前、又はＡＴＲｉの少なくとも約２２～２６時間前、又はＡＴＲｉの少なくとも約２４時間前に投与される。特定の実施形態では、ＢＯＬＤ－１００又はその薬学的に許容され得る組成物は、ＡＴＲｉの少なくとも約４４～５２時間前、又はＡＴＲｉの少なくとも約４６～５０時間前、又はＡＴＲｉの少なくとも約４８時間前に投与される。
【0075】
滴定可能な投薬量は、例えば、患者が単位用量よりも少ない用量で薬剤を摂取することを可能にするように適合させることができ、「単位用量」は、任意の時点又は特定の投薬期間内に摂取することができる薬剤の最大用量として定義される。すべての患者が同じ利益を達成するために同じ用量を必要とするわけではないので、用量の滴定は、異なる患者が薬剤が有効であると感じるまで用量を漸増的に増加させることを可能にする。より大きい体格又はより速い代謝を有する人は、より小さい体格又はより遅い代謝を有する人と同じ効果を達成するために、より大きい用量を必要とし得る。したがって、滴定可能な投薬量は、標準的な投薬形態を超える利点を有する。
【0076】
選択された実施形態では、製剤は、以下の舌下、頬側、経口、直腸、鼻、非経口及び肺系を介してのうちの１つ以上を標的とするように送達されるように適合され得る。製剤は、例えば、以下のゲル、ゲルスプレー、錠剤、液体、カプセル、注射による、又は気化のための形態のうちの１つ以上であり得る。
【0077】
従来の薬学的実務を用いて、対象に製剤を投与するのに好適な製剤又は組成物を提供し得る。投与経路には、例えば、非経口、静脈内、皮内、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、眼内、脳室内、嚢内、脊髄内、髄腔内、嚢内、腹腔内、鼻腔内、吸入、エアロゾル、局所、舌下又は経口投与が含まれ得る。治療用製剤は、液体溶液又は懸濁液の形態であり得；経口投与の場合、製剤は、錠剤又はカプセル剤の形態であり得、鼻腔内製剤の場合、製剤は、散剤、点鼻薬又はエアロゾルの形態であり得、舌下製剤の場合、製剤は、滴剤、エアゾール剤又は錠剤の形態であり得る。
【0078】
製剤を作製するための当技術分野で周知の方法は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」（第２１版）、ｅｄ．Ｄａｖｉｄ Ｔｒｏｙ，２００６，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓに見られる。非経口投与のための製剤は、例えば、賦形剤、滅菌水若しくは生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物起源の油又は水素化ナフタレンを含有し得る。生体適合性の生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、又はポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマーを使用して、化合物の放出を制御し得る。他の潜在的に有用な非経口送達系には、エチレン－酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み型注入系及びリポソームが含まれる。吸入のための製剤は、賦形剤、例えばラクトースを含有し得るか、又は例えばポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル、グリココール酸及びデオキシコール酸を含有する水溶液であり得るか、又は点鼻薬の形態で若しくはゲルとして投与するための油性溶液であり得る。
【0079】
本発明の医薬組成物は、組成物を患者に投与することを可能にする任意の形態であり得る。例えば、組成物は、固体、液体又は気体（エアロゾル）の形態であり得る。本発明の医薬組成物は、その中に含有される有効成分が患者への組成物の投与時に生物学的に利用可能であるように製剤化される。患者に投与される組成物は、１つ以上の投与単位の形態をとることができ、例えば、錠剤、カプセル又はカシェは、単一の投薬単位であり得、エアロゾル形態の化合物の容器は、複数の投薬単位を保持し得る。
【0080】
医薬組成物の調製に使用される材料は、使用される量で薬学的に純粋で無毒であるべきである。本発明の組成物は、特に望ましい効果が知られている１つ以上の化合物（有効成分）を含み得る。医薬組成物中の（１又は複数の）有効成分の最適な投薬量は、種々の要因に依存することが当業者には明らかであろう。関連因子には、対象の種類（例えば、ヒト）、有効成分の特定の形態、投与様式及び用いられる組成物が含まれるが、これらに限定されない。
【0081】
一般に、医薬組成物は、１つ以上の担体と混合した、本明細書に記載の本発明の製剤を含む。（１又は複数の）担体は、組成物が例えば錠剤又は粉末形態であるように、粒子状であり得る。（１又は複数の）担体は、液体であり得、組成物は、例えば、経口シロップ又は注射可能な液体である。加えて、（１又は複数の）担体は、例えば吸入投与に有用なエアロゾル組成物を提供するために、気体であり得る。
【0082】
経口投与を意図する場合、組成物は、好ましくは固体又は液体形態のいずれかであり、半固体、半液体、懸濁液及びゲル形態は、本明細書で固体又は液体のいずれかと見なされる形態に含まれる。
【0083】
経口投与のための固体製剤として、組成物は、粉末、顆粒、圧縮錠剤、丸剤、カプセル、カシェ、チューインガム、ウェハー、ロゼンジなどの形態に製剤化され得る。そのような固体組成物は、典型的には、１つ以上の不活性希釈剤又は食用担体を含有する。加えて、以下のアジュバント：シロップ、アカシア、ソルビトール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶セルロース、トラガカントゴム又はゼラチン、及びそれらの混合物などの結合剤；デンプン、ラクトース又はデキストリンなどの賦形剤、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、プリモゲル、コーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はＳｔｅｒｏｔｅｘなどの潤滑剤；ラクトース、マンニトール、デンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール、メチルセルロース及びそれらの混合物などの充填剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、ポリエチレングリコールなどの高分子量ポリマー、ステアリン酸などの高分子量脂肪酸、シリカ、ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤、コロイド状二酸化ケイ素などの流動化剤；ショ糖又はサッカリンなどの甘味剤、ペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ香料などの香料、着色剤、並びに着色剤のうちの１つ以上が存在してもよい。組成物がカプセル、例えばゼラチンカプセルの形態である場合、組成物は、上記の種類の材料に加えて、ポリエチレングリコール又は脂肪油などの液体担体を含有し得る。
【0084】
製剤は、液体、例えばエリキシル、シロップ、溶液、水性若しくは油性エマルジョン若しくは懸濁液、又は使用前に水及び／若しくは他の液体媒体で再構成され得る乾燥粉末の形態であり得る。液体は、２つの例として、経口投与用又は注射による送達用であり得る。経口投与を意図する場合、好ましい組成物は、本発明の化合物に加えて、甘味剤、増粘剤、保存剤（例えば、ｐ－ヒドロキシ安息香酸アルキル）、染料／着色剤及び風味増強剤（着香剤）のうちの１つ以上を含有する。注射によって投与されることが意図される組成物には、界面活性剤、保存剤（例えば、ｐ－ヒドロキシ安息香酸アルキル）、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤（例えば、ソルビトール、グルコース、又は他の糖シロップ）、緩衝剤、安定剤及び等張剤のうちの１つ以上が含まれ得る。乳化剤は、レシチン又はソルビトールモノオレエートから選択され得る。
【0085】
本発明の液体医薬製剤は、それらが溶液、懸濁液又は他の同様の形態であるかどうかにかかわらず、以下のアジュバント：注射用水、生理食塩水、好ましくは生理食塩水、リンガー液、等張塩化ナトリウムなどの滅菌希釈剤、溶媒又は懸濁媒体として機能し得る合成モノグリセリド又はジグリセリドなどの固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の溶媒；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウムなどの酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝剤、及び塩化ナトリウム又はデキストロースなどの等張性を調整するための薬剤のうちの１つ以上を含み得る。非経口製剤は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ又は複数回投与バイアルに封入することができる。生理食塩水は、好ましいアジュバントである。注射可能な医薬組成物は、好ましくは滅菌されている。
【0086】
医薬製剤は、局所投与を意図してもよく、その場合、担体は、溶液、エマルジョン、軟膏、クリーム又はゲル基剤を好適に含み得る。基剤は、例えば、以下のワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、鉱油、水及びアルコールなどの希釈剤、並びに乳化剤及び安定剤のうちの１つ以上を含み得る。増粘剤は、局所投与用の医薬組成物中に存在し得る。経皮投与を意図する場合、組成物は、経皮パッチ又はイオン導入装置を含み得る。
【0087】
製剤は、例えば、直腸内で融解して薬物を放出する坐剤の形態での直腸投与を意図し得る。直腸投与用組成物は、好適な非刺激性賦形剤として油性基剤を含有し得る。そのような基剤には、ラノリン、ココアバター及びポリエチレングリコールが含まれるが、これらに限定されない。低融点ワックスは、脂肪酸グリセリド及び／又はココアバターの混合物が好適なワックスである坐剤の調製に好ましい。ワックスを融解させ、撹拌することによって、アミノシクロヘキシルエーテル化合物をその中に均一に分散させてもよい。次いで、溶融した均一な混合物を好都合な大きさの型に注ぎ、冷却し、それによって固化させる。
【0088】
製剤は、固体又は液体投薬単位の物理的形態を改変する様々な材料を含み得る。例えば、組成物は、有効成分の周りにコーティングシェルを形成する材料を含み得る。コーティングシェルを形成する材料は、典型的には不活性であり、例えば、糖、シェラック及び他の腸溶性コーティング剤から選択され得る。あるいは、有効成分をゼラチンカプセル又はカシェに入れてもよい。
【0089】
医薬製剤は、気体投薬単位からなっていてもよく、例えば、エアロゾルの形態であってもよい。エアロゾルという用語は、コロイド性のものから加圧パッケージからなるシステムに及ぶ種々のシステムを示すために使用される。送達は、液化ガス若しくは圧縮ガス、又は有効成分を分注する好適なポンプシステムによるものであり得る。本発明の化合物のエアロゾルは、（１又は複数の）有効成分を送達するために、単相、二相又は三相系で送達され得る。エアロゾルの送達には、必要な容器、活性化剤、弁、サブ容器などが含まれ、これらが一緒になってキットを形成してもよい。
【0090】
いくつかの生物学的に活性な化合物は、遊離塩基の形態又は薬学的に許容され得る塩の形態、例えば塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩及び当技術分野で公知の他の塩であり得る。適切な塩は、適切な使用様式（例えば、経口又は非経口投与経路）のための化合物の生物学的利用能又は安定性を高めるように選定されるであろう。
【0091】
本発明はまた、製剤の使用説明書と共に医薬製剤を収容するキットを提供する。好ましくは、市販のパッケージは、製剤の１つ以上の単位用量を収容する。光及び／又は空気に敏感な製剤は、特別な包装及び／又は製剤を必要とし得る。例えば、光に対して不透明である、及び／又は周囲空気との接触から密封されている、及び／又は好適なコーティング若しくは賦形剤と共に製剤化されている包装が使用され得る。
【0092】
本発明の製剤は、単独で、又は他の化合物（例えば、小分子、核酸分子、ペプチド若しくはペプチド類似体）と組み合わせて、担体又は任意の薬学的若しくは生物学的に許容され得る担体の存在下で提供することができる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容され得る担体」又は「賦形剤」は、生理学的に適合性であるありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、並びに吸収遅延剤などを含む。担体は、任意の適切な投与形態に好適であり得る。薬学的に許容され得る担体には、一般に、滅菌水溶液又は分散液及び滅菌粉末が含まれる。補足的な活性化合物も製剤に組み込むことができる。
【0093】
本発明による製剤の「有効量」は、治療有効量又は予防有効量を含む。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。製剤の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する化合物の能力などの要因に応じて変動し得る。投薬レジメンは、最適な治療応答を提供するように調整され得る。治療有効量はまた、製剤又は活性化合物のいかなる毒性又は有害作用にも治療的に有益な作用が上回る量であり得る。「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために、必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。典型的には、予防有効量が治療有効量よりも少なくなり得るように、予防用量が疾患の前又は初期段階で対象に使用される。任意の特定の対象について、治療のタイミング及び用量は、個々の必要性及び組成物の投与を管理又は監督する人の専門的判断に従って、経時的に（例えば、タイミングは、毎日、１日おき、毎週、毎月であってもよい）調整され得る。
【0094】
治療用途では、観察された併用治療効果が個々の有効成分の治療効果の合計よりも大きい場合、又は有効成分が単独では生じることができない新しい治療効果が生じる場合、有効成分間の相乗効果が発生する。したがって、製剤の成分が相乗的に有効な量で存在する場合、製剤は、同等の投薬量で単独で投与された個々の有効成分によって達成されるよりも大きい治療効果をもたらす。これに関連して、治療効果の増強は、有効性若しくは効力の増加及び／又は有害作用の減少の形態をとり得る。相乗効果は、対象における有効成分の薬物動態及び／又は薬力学によって全体的又は部分的に媒介され得、その結果、製剤中の成分の量及び割合は、インビボで相乗的であり得る。このインビボ相乗効果は、有効性のインビトロアッセイにおいても相乗的である量及び割合で有効成分を含む製剤を用いて行われ得る。したがって、本明細書で使用される場合、「相乗的に有効な量」という用語は、インビボ及び／又はインビトロで相乗的な量を指す。相乗効果の数値定量化は、多くの場合、試験した各薬物の部分阻害濃度（ＦＩＣ）の合計を表す部分阻害濃度指数（ＦＩＣＩ）として表され、ＦＩＣは、組み合わせて使用した場合の各薬物の最小阻害濃度（ＭＩＣ、標準的なインビトロアッセイ－レサズリンに基づく標準的な比色アッセイで細菌の目に見える増殖を防ぐ薬物の最低濃度）を単独で使用した場合の各薬物のＭＩＣで割ることによって薬物ごとに決定される。非常に一般的な用語では、１より低い又は高いＦＩＣＩは、それぞれ正の相関のある活性（少なくとも相加的な相乗効果）又は正の相互作用の欠如を示す。より明確には、２つの化合物の相乗効果は、≦０．５のＦＩＣＩとして保守的に定義され得る（Ｏｄｄｓ，２００３；ｗｉｔｈ ａｄｄｉｔｉｖｉｔｙ ｏｒ ａｄｄｉｔｉｖｅ ｓｙｎｅｒｇｙ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｏ ａ ＦＩＣＩ ｏｆ ＞０．５ ｔｏ ≦１；ｎｏ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ（ｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｏ ａ ＦＩＣＩ ｏｆ ＞１ ｔｏ≦４；ａｎｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｏ ａ ＦＩＣＩ ｏｆ ＞＞４を参照されたい）。３つの化合物の相乗効果は、≦１．０のＦＩＣＩと定義されている（Ｂｅｒｅｎｂａｕｍ，１９７８；Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，１９８０）。
【0095】
［実施例］
以下の実施例に示すように、ＢＲＡＦＭＴ ＭＳＳ細胞株は、ＤＮＡ複製ストレス及びＵＰＲ活性化の誘導物質であるＢＯＬＤ－１００に対する感受性の増加を示す。ＢＯＬＤ－１００は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞においてＲＯＳの急激な増加及びＡＴＲ／ＣＨＫＤＮＡ損傷シグナル伝達キナーゼの活性化をもたらす。ＡＴＲ阻害は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおいてＢＯＬＤ－１００と組み合わせた場合、細胞生存率を有意に低下させ、細胞死を増加させる。
以下の実施例に示すように、ＢＲＡＦＭＴ ＭＳＳ細胞株は、ＤＮＡ複製ストレス及びＵＰＲ活性化の誘導物質であるＢＯＬＤ－１００に対する感受性の増加を示す。ＢＯＬＤ－１００は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞においてＲＯＳの急激な増加及びＡＴＲ／ＣＨＫＤＮＡ損傷シグナル伝達キナーゼの活性化をもたらす。ＡＴＲ阻害は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおいてＢＯＬＤ－１００と組み合わせた場合、細胞生存率を有意に低下させ、細胞死を増加させる。
【0096】
［実施例１］
小胞体タンパク質応答（ＵＰＲ）及びＤＮＡ修復は、最も悪い結果を伴うＣＭＳ１／ＢＲＡＦＭＴサブグループにおいて調節解除された主要な経路である。
小胞体タンパク質応答（ＵＰＲ）及びＤＮＡ修復は、最も悪い結果を伴うＣＭＳ１／ＢＲＡＦＭＴサブグループにおいて調節解除された主要な経路である。
【0097】
ＧＳＥ５９８５７データセットのデータ分析：ヒートマップは、Ｒ Ｓｔｕｄｉｏバージョン１．３．９５９を使用したＣＭＳｃａｌｌｅｒアプリケーションの使用によって作成した。ＣＭＳｃａｌｌｅｒアプリケーションは、ＣＲＣ前臨床モデルのコンセンサス分子サブタイプ（ＣＭＳ）分類を提供する（Ｇｕｉｎｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ．２０１５年１１月；２１（１１）：１３５０－６；ＣＭＳ１「ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｍｍｕｎｅ」、超変異、マイクロサテライト不安定性及び強い免疫活性化；ＣＭＳ２「ｃａｎｏｎｉｃａｌ」、上皮、顕著なＷＮＴ及びＭＹＣシグナル伝達活性化；ＣＭＳ３「ｍｅｔａｂｏｌｉｃ」、上皮及び明らかな代謝調節不全；並びにＣＭＳ４「ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ」、顕著な形質転換成長因子β活性化、間質浸潤及び血管新生を参照されたい。）。
【0098】
材料：同質遺伝子対及び非同質遺伝子Ｖ６００Ｅ ＢＲＡＦＭＴ及びＢＲＡＦＷＴ細胞のパネルを使用した。ルテニウムベースの小分子阻害剤であるＢＯＬＤ－１００は、ＢＯＬＤ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから入手した。ＦＤＡ承認化合物ライブラリーを使用した。
【0099】
方法：Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｒｅ Ｇｌｏ、アネキシンＶ／ＰＩ高含有量スクリーニング、フローサイトメトリー、ウェスタンブロッティング、カスパーゼ８、３／７活性、ＲＯＳ－ＧｌｏａＨ２Ｏ２、ＲＮＡｉアッセイを使用した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｎｏｖｏｓｅｑプラットフォーム及びＲｅａｃｔｏｍｅ Ｐａｔｈｗａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓを使用して、ＢＯＬＤ－１００で処理したＢＲＡＦＭＴ／ＷＴＣＲＣ細胞に対してＲＮＡｓｅｑ及び生物情報学的分析を実行した。
【0100】
図１に示すように、ＧＳＥ５９８５７データセットは、その作成時にプラットフォームに埋め込まれ、したがって、ＣＭＳｃａｌｌｅｒの実装のためにＲの「Ｂｉｏｂａｓｅ」及び「ｌｉｍｍａ」パッケージを使用して、Ｌｏｇ２正規化されたこのデータセットからヒートマップを作成した。ＣＭＳｃａｌｌｅｒプログラム内の「サブカメラ」機能は、ＣＭＳプロファイルによる遺伝子セット分析及び層別化後に作成されたヒートマップを視覚化するために利用される。次いで、これらのヒートマップは、Ｘ軸に沿ったＣＭＳプロファイル及びＹ軸に沿ったホールマークによる経路名を収容する。
【0101】
［実施例２］
ＢＲＡＦＭＴ、ＭＳＳ ＣＲＣ細胞は、ＢＯＬＤ－１００による処理に対して感受性である
図２に例示されるように、ＢＲＡＦＭＴ、ＣＭＳ１ ＣＲＣ細胞は、ＢＯＬＤ－１００による処理に対して増大した感受性を示す。上部：Ａ．ＢＲＡＦＭＴ Ｖ６００Ｅ ＨＴ－２９細胞を指示された時間ＢＯＬＤ－１００で処理し、ＧＲＰ７８、ＣＨＯＰ及びＰＡＲＰレベルをウェスタンブロッティング（ＷＢ）によって決定した。Ｂ．ＨＴ－２９細胞を指示された時間ＢＯＬＤ－１００で処理し、ＨＳＰＡ５、ＡＴＦ４及びＤＤＩＴ３ｍＲＮＡレベルをＲＴ－ＰＣＲを使用して定量した。生の値をハウスキーピング遺伝子ＡＣＴＢ及びＧＡＰＤＨの発現に対して正規化し、ΔΔＣＴ法を使用して分析した。下部：Ａ．ＣＲＣ細胞を漸増濃度のＢＯＬＤ－１００で処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して細胞生存率を決定した。Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージを使用してＩＣ５０を計算した。Ｂ．ＣＲＣ細胞をＢＯＬＤ－１００で４８時間処理した。アネキシンＶ／ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色を使用してハイコンテンツスクリーニングによりアポトーシスを評価した。グラフは、１００μＭのＢＯＬＤ－１００で処理した後の陽性染色細胞の百分率を示す。３回の独立した実験の平均値を示す。
ＢＲＡＦＭＴ、ＭＳＳ ＣＲＣ細胞は、ＢＯＬＤ－１００による処理に対して感受性である
図２に例示されるように、ＢＲＡＦＭＴ、ＣＭＳ１ ＣＲＣ細胞は、ＢＯＬＤ－１００による処理に対して増大した感受性を示す。上部：Ａ．ＢＲＡＦＭＴ Ｖ６００Ｅ ＨＴ－２９細胞を指示された時間ＢＯＬＤ－１００で処理し、ＧＲＰ７８、ＣＨＯＰ及びＰＡＲＰレベルをウェスタンブロッティング（ＷＢ）によって決定した。Ｂ．ＨＴ－２９細胞を指示された時間ＢＯＬＤ－１００で処理し、ＨＳＰＡ５、ＡＴＦ４及びＤＤＩＴ３ｍＲＮＡレベルをＲＴ－ＰＣＲを使用して定量した。生の値をハウスキーピング遺伝子ＡＣＴＢ及びＧＡＰＤＨの発現に対して正規化し、ΔΔＣＴ法を使用して分析した。下部：Ａ．ＣＲＣ細胞を漸増濃度のＢＯＬＤ－１００で処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して細胞生存率を決定した。Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージを使用してＩＣ５０を計算した。Ｂ．ＣＲＣ細胞をＢＯＬＤ－１００で４８時間処理した。アネキシンＶ／ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色を使用してハイコンテンツスクリーニングによりアポトーシスを評価した。グラフは、１００μＭのＢＯＬＤ－１００で処理した後の陽性染色細胞の百分率を示す。３回の独立した実験の平均値を示す。
【0102】
［実施例３］
発癌性ＢＲＡＦは、ＢＯＬＤ－１００処理に対する応答の決定因子である
図３に示すように、発癌性ＢＲＡＦは、ＢＯＬＤ－１００処理に対する応答の決定因子である。Ａ．上：同質遺伝子型ＢＲＡＦＭＴ及びＢＲＡＦＷＴ ＣＲＣ細胞を漸増濃度のＢＯＬＤ－１００で７２時間処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して細胞生存率を決定した。Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージを使用してＩＣ５０を計算した。下部：ＢＯＬＤ－１００で４８時間処理したＣＲＣ細胞中のＰＡＲＰ。Ｂ．１μｇのＢＲＡＦＶ６００Ｅ発現構築物で１２時間一過性にトランスフェクトし、続いてＢＯＬＤ－１００で２４時間処理したＶＴ１ＣＲＣ細胞におけるＢＲＡＦ、ｐＭＥＫ１／２、ＭＥＫ１／２、ＡＴＦ４、ＣＨＯＰ、ＰＡＲＰ及び切断型Ｃ３の発現。Ｃ．左：ＣＲＣ細胞をベムラフェニブ及びＢＯＬＤ－１００で４８時間共処理し、ＰＡＲＰ、ＧＲＰ７８、ＣＨＯＰ、ｐＭＥＫ１／２、ＭＥＫ１／２レベルをＷＢによって決定した。右：ＣＲＣ細胞を、ＢＯＬＤ－１００と組み合わせて、薬物なし（対照）、ベムラフェニブ、ＢＯＬＤ－１００又はベムラフェニブで７２時間共処理した。ＣＩ値は、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法を使用して計算し、ＣＩ＜０．３、０．３＜ＣＩ＜０．７、０．７＜ＣＩ＜０．８５、０．８５＜ＣＩ＜１、ＣＩ＝１、及びＣＩ＞１は、それぞれ非常に強い相乗作用、強い相乗作用、中程度の相乗作用、わずかな相乗作用、相加的相互作用、及び拮抗作用を示す。
発癌性ＢＲＡＦは、ＢＯＬＤ－１００処理に対する応答の決定因子である
図３に示すように、発癌性ＢＲＡＦは、ＢＯＬＤ－１００処理に対する応答の決定因子である。Ａ．上：同質遺伝子型ＢＲＡＦＭＴ及びＢＲＡＦＷＴ ＣＲＣ細胞を漸増濃度のＢＯＬＤ－１００で７２時間処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して細胞生存率を決定した。Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージを使用してＩＣ５０を計算した。下部：ＢＯＬＤ－１００で４８時間処理したＣＲＣ細胞中のＰＡＲＰ。Ｂ．１μｇのＢＲＡＦＶ６００Ｅ発現構築物で１２時間一過性にトランスフェクトし、続いてＢＯＬＤ－１００で２４時間処理したＶＴ１ＣＲＣ細胞におけるＢＲＡＦ、ｐＭＥＫ１／２、ＭＥＫ１／２、ＡＴＦ４、ＣＨＯＰ、ＰＡＲＰ及び切断型Ｃ３の発現。Ｃ．左：ＣＲＣ細胞をベムラフェニブ及びＢＯＬＤ－１００で４８時間共処理し、ＰＡＲＰ、ＧＲＰ７８、ＣＨＯＰ、ｐＭＥＫ１／２、ＭＥＫ１／２レベルをＷＢによって決定した。右：ＣＲＣ細胞を、ＢＯＬＤ－１００と組み合わせて、薬物なし（対照）、ベムラフェニブ、ＢＯＬＤ－１００又はベムラフェニブで７２時間共処理した。ＣＩ値は、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法を使用して計算し、ＣＩ＜０．３、０．３＜ＣＩ＜０．７、０．７＜ＣＩ＜０．８５、０．８５＜ＣＩ＜１、ＣＩ＝１、及びＣＩ＞１は、それぞれ非常に強い相乗作用、強い相乗作用、中程度の相乗作用、わずかな相乗作用、相加的相互作用、及び拮抗作用を示す。
【0103】
［実施例４］
ＢＯＬＤ－１００誘導性細胞死は、カスパーゼ８に依存する
図４に示すように、このモデルにおけるＢＯＬＤ－１００誘導性細胞死は、カスパーゼ８に依存する。Ａ．：１７８個の標的ＴＳＧに対する一次ｓｉＲＮＡスクリーニングの陽性ヒット。ｓＲＮＡをＢＯＬＤ－１００での処理を２４時間実施し、続いてＢＯＬＤ－１００での処理を４８時間実施した。４６個の標的を同定し、その結果、ＢＯＬＤ－１００に対する感受性又は抵抗性のいずれかが増加した（ロバストｚ－スコア±１に基づく）。Ｂ．４６個の標的に対する２つのさらなるｓｉＲＮＡ配列を使用した二次ｓｉＲＮＡスクリーニングからの陽性ヒット。Ｃ．ＣＲＣ細胞をＤＭＳＯ又は２０μＭの汎カスパーゼ阻害剤、ｚ－ＶＡＤ－ＦＭＫと３時間プレインキュベートし、続いてＢＯＬＤ－１００で４８時間処理し、その後ＰＡＲＰ（上）及びカスパーゼ－３／７活性アッセイ（下）についてＷＢ分析によってアポトーシスを評価した。Ｄ．上：ＣＲＣ細胞を１０ｎＭのＣ８、Ｃ９又はＣ８／Ｃ９ｓｉＲＮＡで２４時間トランスフェクトし、その後、ＢＯＬＤ－１００で４８時間処理した。アポトーシスを、ＰＡＲＰ（左）及びカスパーゼ－３／７活性（右）についてＷＢ分析によって評価した。下：対になったＣＲＩＳＰＲ ＨＣＴ１１６ Ｃ８ＷＴ及びＨＣＴ１１６ Ｃ８ｎｕｌｌ細胞をＢＯＬＤ－１００で４８時間処理した。アポトーシスを、ＰＡＲＰ（左）及びカスパーゼ－３／７活性レベル（右）についてＷＢによって決定した。
ＢＯＬＤ－１００誘導性細胞死は、カスパーゼ８に依存する
図４に示すように、このモデルにおけるＢＯＬＤ－１００誘導性細胞死は、カスパーゼ８に依存する。Ａ．：１７８個の標的ＴＳＧに対する一次ｓｉＲＮＡスクリーニングの陽性ヒット。ｓＲＮＡをＢＯＬＤ－１００での処理を２４時間実施し、続いてＢＯＬＤ－１００での処理を４８時間実施した。４６個の標的を同定し、その結果、ＢＯＬＤ－１００に対する感受性又は抵抗性のいずれかが増加した（ロバストｚ－スコア±１に基づく）。Ｂ．４６個の標的に対する２つのさらなるｓｉＲＮＡ配列を使用した二次ｓｉＲＮＡスクリーニングからの陽性ヒット。Ｃ．ＣＲＣ細胞をＤＭＳＯ又は２０μＭの汎カスパーゼ阻害剤、ｚ－ＶＡＤ－ＦＭＫと３時間プレインキュベートし、続いてＢＯＬＤ－１００で４８時間処理し、その後ＰＡＲＰ（上）及びカスパーゼ－３／７活性アッセイ（下）についてＷＢ分析によってアポトーシスを評価した。Ｄ．上：ＣＲＣ細胞を１０ｎＭのＣ８、Ｃ９又はＣ８／Ｃ９ｓｉＲＮＡで２４時間トランスフェクトし、その後、ＢＯＬＤ－１００で４８時間処理した。アポトーシスを、ＰＡＲＰ（左）及びカスパーゼ－３／７活性（右）についてＷＢ分析によって評価した。下：対になったＣＲＩＳＰＲ ＨＣＴ１１６ Ｃ８ＷＴ及びＨＣＴ１１６ Ｃ８ｎｕｌｌ細胞をＢＯＬＤ－１００で４８時間処理した。アポトーシスを、ＰＡＲＰ（左）及びカスパーゼ－３／７活性レベル（右）についてＷＢによって決定した。
【0104】
［実施例５］
ＢＯＬＤ－１００処理は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＤＮＡ損傷修復経路の調節解除をもたらす
図５に示すように、ＢＯＬＤ－１００処理は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＤＮＡ損傷修復経路活性化をもたらす：Ａ．同質遺伝子型ＢＲＡＦＭＴ及びＷＴＣＲＣ細胞におけるＢＯＬＤ－１００による３時間及び２４時間の処理後の有意に（ｐ＜０．０５；１．５倍変化）ダウンレギュレートされた遺伝子及びアップレギュレートされた遺伝子のヒートマップ。Ｂ．ＢＲＡＦＭＴ ＶＡＣＯ４３２細胞株における有意にダウンレギュレートされた遺伝子及びアップレギュレートされた遺伝子のメタコア経路分析。
ＢＯＬＤ－１００処理は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＤＮＡ損傷修復経路の調節解除をもたらす
図５に示すように、ＢＯＬＤ－１００処理は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＤＮＡ損傷修復経路活性化をもたらす：Ａ．同質遺伝子型ＢＲＡＦＭＴ及びＷＴＣＲＣ細胞におけるＢＯＬＤ－１００による３時間及び２４時間の処理後の有意に（ｐ＜０．０５；１．５倍変化）ダウンレギュレートされた遺伝子及びアップレギュレートされた遺伝子のヒートマップ。Ｂ．ＢＲＡＦＭＴ ＶＡＣＯ４３２細胞株における有意にダウンレギュレートされた遺伝子及びアップレギュレートされた遺伝子のメタコア経路分析。
【0105】
［実施例６］
ＡＴＲ阻害は、ＢＯＬＤ－１００処理に対する応答を著しく増加させる
図６に示されるように、ＡＴＲ阻害は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞におけるＢＯＬＤ－１００処理に対する応答を著しく増加させる。ＦＤＡは、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＢＯＬＤ－１００処理後に調節解除された有意な経路を標的とする薬物スクリーニングを承認した。ＢＲＡＦＭＴ ＨＴ－２９（Ａ）及びＶＡＣＯ４３２（Ｂ）細胞を、単独で、又はＢＯＬＤ－１００と組み合わせて、６０個のＦＤＡ承認薬のＢＯＬＤ－１００、ＩＣ１０、ＩＣ２０、ＩＣ３０用量で７２時間共処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して細胞生存率を決定した。組み合わせ処理についてロバストｚスコアを計算し、５０μＭ ＢＯＬＤ－１００の効果に対して正規化した。＜－１のｒ－Ｚスコアを有する組み合わせは、ＢＯＬＤ－１００処理に対する感受性を高めると考えられた。組み合わせたＢＯＬＤ－１００／ＡＺＤ６７３８処理の細胞生存率を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８．０を使用してグラフ化した。Ｃ．ＢＯＬＤ－１００及びＡＺＤ６７３８による１４日間の共処理後のＢＲＡＦＭＴ ＬＩＭ２４０５、ＶＡＣＯ４３２及びＲＫＯ ＣＲＣ細胞におけるクローン原性生存アッセイ。生存を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８．０を使用してグラフ化した。
ＡＴＲ阻害は、ＢＯＬＤ－１００処理に対する応答を著しく増加させる
図６に示されるように、ＡＴＲ阻害は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞におけるＢＯＬＤ－１００処理に対する応答を著しく増加させる。ＦＤＡは、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＢＯＬＤ－１００処理後に調節解除された有意な経路を標的とする薬物スクリーニングを承認した。ＢＲＡＦＭＴ ＨＴ－２９（Ａ）及びＶＡＣＯ４３２（Ｂ）細胞を、単独で、又はＢＯＬＤ－１００と組み合わせて、６０個のＦＤＡ承認薬のＢＯＬＤ－１００、ＩＣ１０、ＩＣ２０、ＩＣ３０用量で７２時間共処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して細胞生存率を決定した。組み合わせ処理についてロバストｚスコアを計算し、５０μＭ ＢＯＬＤ－１００の効果に対して正規化した。＜－１のｒ－Ｚスコアを有する組み合わせは、ＢＯＬＤ－１００処理に対する感受性を高めると考えられた。組み合わせたＢＯＬＤ－１００／ＡＺＤ６７３８処理の細胞生存率を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８．０を使用してグラフ化した。Ｃ．ＢＯＬＤ－１００及びＡＺＤ６７３８による１４日間の共処理後のＢＲＡＦＭＴ ＬＩＭ２４０５、ＶＡＣＯ４３２及びＲＫＯ ＣＲＣ細胞におけるクローン原性生存アッセイ。生存を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８．０を使用してグラフ化した。
【0106】
［実施例７］
ＡＴＲ小分子阻害剤ＡＺＤ６７３８、Ｍ４３４４及びベルゾセルチブは、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＢＯＬＤ－１００処理後に細胞死を増加させる
図７に示されるように、ＡＴＲ ＳＭＩ ＡＺＤ６７３８、Ｍ４３４４及びベルゾセルチブは、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＢＯＬＤ－１００処理後に細胞死を増加させる。ＨＴ－２９及びＶＡＣＯ４３２ ＣＲＣ細胞を、ＢＯＬＤ－１００及びＡＴＲｉ ＡＺＤ６７３８、Ｍ４３４４又はベルゾセルチブで４８時間共処理し、アポトーシスを、ＰＡＲＰ並びに切断型カスパーゼ－３（Ａ）及びカスパーゼ３／７活性アッセイ（Ｂ）についてＷＢ分析を使用して評価した。Ｃ．ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞ＶＡＣＯ４３２、ＣＯＬＯ２０５及びＬＩＭ２４０５を、ＢＯＬＤ－１００及びＡＴＲｉ ＡＺＤ６７３８、Ｍ４３４４又はベルゾセルチブで４８時間共処理し、アポトーシスをＰＩフローサイトメトリーによって評価した。
ＡＴＲ小分子阻害剤ＡＺＤ６７３８、Ｍ４３４４及びベルゾセルチブは、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＢＯＬＤ－１００処理後に細胞死を増加させる
図７に示されるように、ＡＴＲ ＳＭＩ ＡＺＤ６７３８、Ｍ４３４４及びベルゾセルチブは、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣにおけるＢＯＬＤ－１００処理後に細胞死を増加させる。ＨＴ－２９及びＶＡＣＯ４３２ ＣＲＣ細胞を、ＢＯＬＤ－１００及びＡＴＲｉ ＡＺＤ６７３８、Ｍ４３４４又はベルゾセルチブで４８時間共処理し、アポトーシスを、ＰＡＲＰ並びに切断型カスパーゼ－３（Ａ）及びカスパーゼ３／７活性アッセイ（Ｂ）についてＷＢ分析を使用して評価した。Ｃ．ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞ＶＡＣＯ４３２、ＣＯＬＯ２０５及びＬＩＭ２４０５を、ＢＯＬＤ－１００及びＡＴＲｉ ＡＺＤ６７３８、Ｍ４３４４又はベルゾセルチブで４８時間共処理し、アポトーシスをＰＩフローサイトメトリーによって評価した。
【0107】
［実施例８］
ＢＯＬＤ－１００は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞においてＲＯＳ依存性ＡＴＲ／ＣＨＫ１キナーゼ活性化及び細胞死を誘導する
図８に示すように、ＢＯＬＤ－１００は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞においてＲＯＳ依存性ＡＴＲ／ＣＨＫ１キナーゼ活性化及び細胞死を誘導する。Ａ．ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞を指示された時間ＢＯＬＤ－１００で処理し、ＡＴＲ／ＫＡＰ１／ＣＫＨ１／ＣＨＫ２発現／活性をＷＢによって測定した。Ｂ．ＣＲＣ細胞をＢＯＬＤ－１００及びＡＺＤ６７３８で４８時間共処理し、ＡＴＲ／ＫＡＰ１及び下流キナーゼのリン酸化／発現を測定した。Ｃ．ＣＲＣ細胞を指示された時間ＢＯＬＤ－１００で処理し、ＲＯＳ－Ｇｌｏ（商標）Ｈ２Ｏ２アッセイを使用してＲＯＳの作成を測定した。Ｄ．及びＥ．ＮＡＣで３時間前処理し、続いてＢＯＬＤ－１００でさらに２４時間処理した細胞におけるＷＢ及びカスパーゼ３／７活性。
ＢＯＬＤ－１００は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞においてＲＯＳ依存性ＡＴＲ／ＣＨＫ１キナーゼ活性化及び細胞死を誘導する
図８に示すように、ＢＯＬＤ－１００は、ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞においてＲＯＳ依存性ＡＴＲ／ＣＨＫ１キナーゼ活性化及び細胞死を誘導する。Ａ．ＢＲＡＦＭＴ ＣＲＣ細胞を指示された時間ＢＯＬＤ－１００で処理し、ＡＴＲ／ＫＡＰ１／ＣＫＨ１／ＣＨＫ２発現／活性をＷＢによって測定した。Ｂ．ＣＲＣ細胞をＢＯＬＤ－１００及びＡＺＤ６７３８で４８時間共処理し、ＡＴＲ／ＫＡＰ１及び下流キナーゼのリン酸化／発現を測定した。Ｃ．ＣＲＣ細胞を指示された時間ＢＯＬＤ－１００で処理し、ＲＯＳ－Ｇｌｏ（商標）Ｈ２Ｏ２アッセイを使用してＲＯＳの作成を測定した。Ｄ．及びＥ．ＮＡＣで３時間前処理し、続いてＢＯＬＤ－１００でさらに２４時間処理した細胞におけるＷＢ及びカスパーゼ３／７活性。
【0108】
［実施例９］
ＢＯＬＤ－１００は、困難なＣＭＳ１及びＣＭＳ４ ＣＲＣの処理において最も効果的である
この実施例では、２０個の結腸癌細胞株を漸増濃度のＢＯＬＤ－１００で７２時間処理し、生存率を標準的なＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）発光細胞生存率アッセイによって測定した。Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージを使用して、用量応答曲線から各細胞株のＩＣ５０を決定した。結腸癌細胞株を、ＣＲＣ前臨床モデルのコンセンサス分子サブタイプ（ＣＭＳ）分類に基づいて異なるサブタイプに分類した。図９に示すように、ＣＭＳ１及びＣＭＳ４サブタイプは、ＢＯＬＤ－１００単独療法処理に対して最も応答性が高いことが示された。最小から最大へのＩＣ５０の分布を２方向バーで示し、中央値を水平バーで示す。ＢＲＡＦ変異を有するＣＭＳ１サブタイプ及びＣＭＳ４サブタイプは、最悪の全生存率及び奏効率を有し、これはＢＯＬＤ－１００が治療困難なサブタイプの結腸癌の治療に驚くほど有効であることを実証している。
ＢＯＬＤ－１００は、困難なＣＭＳ１及びＣＭＳ４ ＣＲＣの処理において最も効果的である
この実施例では、２０個の結腸癌細胞株を漸増濃度のＢＯＬＤ－１００で７２時間処理し、生存率を標準的なＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）発光細胞生存率アッセイによって測定した。Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージを使用して、用量応答曲線から各細胞株のＩＣ５０を決定した。結腸癌細胞株を、ＣＲＣ前臨床モデルのコンセンサス分子サブタイプ（ＣＭＳ）分類に基づいて異なるサブタイプに分類した。図９に示すように、ＣＭＳ１及びＣＭＳ４サブタイプは、ＢＯＬＤ－１００単独療法処理に対して最も応答性が高いことが示された。最小から最大へのＩＣ５０の分布を２方向バーで示し、中央値を水平バーで示す。ＢＲＡＦ変異を有するＣＭＳ１サブタイプ及びＣＭＳ４サブタイプは、最悪の全生存率及び奏効率を有し、これはＢＯＬＤ－１００が治療困難なサブタイプの結腸癌の治療に驚くほど有効であることを実証している。
【0109】
［実施例１０］
ＡＴＲ阻害は、多発性骨髄腫におけるＢＯＬＤ－１００処理に対する応答を著しく増加させる
骨髄腫は、主に骨髄に常在する形質細胞に関与するリンパ系悪性腫瘍であるが、悪性形質細胞は、末梢血、軟部組織及び器官にも見られ得る。したがって、骨髄腫は、罹患部位によって区別され得る形態で現れる形質細胞障害であり、多発性骨髄腫では、いくつかの異なる領域が罹患しており、形質細胞腫では、１つの部位のみが罹患しており、限局性骨髄腫では、隣接する部位が罹患しており、髄外骨髄腫では、骨髄以外の組織の関与がある。したがって、本明細書で使用される場合、「骨髄腫」という用語は、それ自体当技術分野で認識されている疾患の範囲を指す。この疾患の範囲内で、再発性ＭＭは、一般に、典型的には客観的臨床基準に基づいて、以前の奏効後の疾患の再発と見なされ、再発性／難治性ＭＭ（ＲＲＭＭ）は、一般に、以前の療法で最小応答（ＭＲ）以上を達成した患者の療法又は最後の治療の６０日以内に非応答性又は進行性になる疾患と定義される。ＲＲＭＭの処理は、特定の課題をもたらす。
ＡＴＲ阻害は、多発性骨髄腫におけるＢＯＬＤ－１００処理に対する応答を著しく増加させる
骨髄腫は、主に骨髄に常在する形質細胞に関与するリンパ系悪性腫瘍であるが、悪性形質細胞は、末梢血、軟部組織及び器官にも見られ得る。したがって、骨髄腫は、罹患部位によって区別され得る形態で現れる形質細胞障害であり、多発性骨髄腫では、いくつかの異なる領域が罹患しており、形質細胞腫では、１つの部位のみが罹患しており、限局性骨髄腫では、隣接する部位が罹患しており、髄外骨髄腫では、骨髄以外の組織の関与がある。したがって、本明細書で使用される場合、「骨髄腫」という用語は、それ自体当技術分野で認識されている疾患の範囲を指す。この疾患の範囲内で、再発性ＭＭは、一般に、典型的には客観的臨床基準に基づいて、以前の奏効後の疾患の再発と見なされ、再発性／難治性ＭＭ（ＲＲＭＭ）は、一般に、以前の療法で最小応答（ＭＲ）以上を達成した患者の療法又は最後の治療の６０日以内に非応答性又は進行性になる疾患と定義される。ＲＲＭＭの処理は、特定の課題をもたらす。
【0110】
この実施例では、多発性骨髄腫細胞株を、２４時間（図１０（Ａ）左パネル）又は４８時間（図１０（Ａ）右パネル）のいずれかの間、漸増用量のＡＴＲ阻害剤ＢＡＹ １８９５３４４と組み合わせた漸増用量のＢＯＬＤ－１００で処理し、細胞生存率を、標準的なＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）発光細胞生存率アッセイによって測定した。図１０（Ａ）は、多発性骨髄腫細胞株ＭＭ．１Ｓにおける応答を示し、一方、図１０（Ｂ）は、多発性骨髄腫細胞株ＫＭＳ１８における応答を示す。棒グラフは、ビヒクル対照と比較して、ＭＭ．１Ｓ細胞を用いたアッセイで生存している細胞の数を表す。散布図は、異なる用量レベルでの薬物組み合わせ間の相乗効果の程度を表す。散布図では、化合物相互作用を、Ｃｏｍｐｕｓｙｎソフトウェア、バージョン１．０を使用して、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙによって記載された方法論に従って、中央方程式原理によって実行された多重薬物効果分析による組み合わせ指数（ＣＩ）として計算した（Ｃｈｏｕ ＴＣ．「Ｄｒｕｇ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｙｎｅｒｇｙ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｈｏｕ－Ｔａｌａｌａｙ ｍｅｔｈｏｄ．」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１０ Ｊａｎ １５；７０（２）：４４０－６を参照されたい）。ＣＩ値は、薬物組み合わせの相乗的、相加的又は拮抗的挙動を示す１つの方法である。この方法を使用して、ＣＩ＜１、＝１、及び＞１は、相乗作用、相加効果及び拮抗作用をそれぞれ示す。細胞生存率を低下させるための２つの薬物の相乗的相互作用が観察された。
【0111】
参考文献
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Ｇｕｉｎｎｅｙ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｕｂｔｙｐｅｓ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２１，１３５０－１３５６（２０１５）．
Ｍｅｄｉｃｏ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｕｎｖｅｉｌｓ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｏｎａｂｌｅ ｋｉｎａｓｅ ｔａｒｇｅｔｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ．６，７００２（２０１５）．
Ｂｕｒｒｉｓ，Ｈ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＩＴ－１３９，ａ ｒｕｔｈｅｎｉｕｍ－ｂａｓｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ，ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：ａ ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ，ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌ，ｄｏｓｅ－ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｐｈａｓｅ Ｉ ｓｔｕｄｙ ｗｉｔｈ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｃｏｈｏｒｔ．ＥＳＭＯ ｏｐｅｎ．１，ｅ０００１５４（２０１６）．
本発明の様々な実施形態が本明細書に開示されているが、当業者の共通の一般知識に従って、本発明の範囲内で多くの適合及び修正を行うことができる。そのような修正は、実質的に同じ方法で同じ結果を達成するために、本発明の任意の態様の既知の均等物の置換を含む。「例示的」又は「例示された」などの用語は、本明細書では「例、事例、又は例示としての役割を果たす」を意味するために使用される。「例示的」また「例示された」として本明細書に記載された実施態様は、それに応じて、必ずしも他の実施態様よりも好ましい又は有利であると解釈されるべきではなく、そのような実施態様はすべて独立した実施形態である。特に明記しない限り、数値範囲は範囲を定義する数を含み、数値は必ず所与の小数への近似値である。「を含み、」という単語は、本明細書では「～を含むが、これらに限定されない」という句と実質的に同等のオープンエンド用語として使用され、「含む」という単語は対応する意味を有する。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「物」への言及は、２つ以上のそのようなものを含む。本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本発明の先行技術であることを認めるものではない。本明細書で引用された特許及び特許出願、並びにそのような文献及び刊行物で引用されたすべての文献を含むがこれらに限定されない任意の（１又は複数の）優先文献及びすべての刊行物は、あたかも個々の各刊行物が参照により本明細書に組み込まれることが具体的かつ個別に示され、本明細書に完全に記載されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。本発明は、実施例及び図面を参照して実質的に上述したすべての実施形態及び変形を含む。
Ｖｅｎｄｅｒｂｏｓｃｈ Ｓ，Ｎａｇｔｅｇａａｌ ＩＤ，Ｍａｕｇｈａｎ ＴＳ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１４；２０（２０）：５３２２－３０．
Ｌｏｃｈｈｅａｄ Ｐ，Ｋｕｃｈｉｂａ Ａ，Ｉｍａｍｕｒａ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．２０１３；１０５（１５）：１１５１－６．
Ｋｏｐｅｔｚ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｅｎｃｏｒａｆｅｎｉｂ，Ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ，ａｎｄ Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ－Ｍｕｔａｔｅｄ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３８１，１６３２－１６４３（２０１９）．
Ｇｕｉｎｎｅｙ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｕｂｔｙｐｅｓ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２１，１３５０－１３５６（２０１５）．
Ｍｅｄｉｃｏ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｕｎｖｅｉｌｓ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｏｎａｂｌｅ ｋｉｎａｓｅ ｔａｒｇｅｔｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ．６，７００２（２０１５）．
Ｂｕｒｒｉｓ，Ｈ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＩＴ－１３９，ａ ｒｕｔｈｅｎｉｕｍ－ｂａｓｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ，ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：ａ ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ，ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌ，ｄｏｓｅ－ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｐｈａｓｅ Ｉ ｓｔｕｄｙ ｗｉｔｈ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｃｏｈｏｒｔ．ＥＳＭＯ ｏｐｅｎ．１，ｅ０００１５４（２０１６）．
本発明の様々な実施形態が本明細書に開示されているが、当業者の共通の一般知識に従って、本発明の範囲内で多くの適合及び修正を行うことができる。そのような修正は、実質的に同じ方法で同じ結果を達成するために、本発明の任意の態様の既知の均等物の置換を含む。「例示的」又は「例示された」などの用語は、本明細書では「例、事例、又は例示としての役割を果たす」を意味するために使用される。「例示的」また「例示された」として本明細書に記載された実施態様は、それに応じて、必ずしも他の実施態様よりも好ましい又は有利であると解釈されるべきではなく、そのような実施態様はすべて独立した実施形態である。特に明記しない限り、数値範囲は範囲を定義する数を含み、数値は必ず所与の小数への近似値である。「を含み、」という単語は、本明細書では「～を含むが、これらに限定されない」という句と実質的に同等のオープンエンド用語として使用され、「含む」という単語は対応する意味を有する。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「物」への言及は、２つ以上のそのようなものを含む。本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本発明の先行技術であることを認めるものではない。本明細書で引用された特許及び特許出願、並びにそのような文献及び刊行物で引用されたすべての文献を含むがこれらに限定されない任意の（１又は複数の）優先文献及びすべての刊行物は、あたかも個々の各刊行物が参照により本明細書に組み込まれることが具体的かつ個別に示され、本明細書に完全に記載されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。本発明は、実施例及び図面を参照して実質的に上述したすべての実施形態及び変形を含む。
【0112】
いくつかの実施形態では、本発明は、医学的又は外科的治療を伴うステップを除外する。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4A-1】
【図4A-2】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5A-1】
【図5A-2】
【図5B-1】
【図5B-2】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【国際調査報告】