▶ ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲーエムベーハーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-24
(54)【発明の名称】新規なネコヘルペスウイルスワクチン
(51)【国際特許分類】
A61K 35/763 20150101AFI20231116BHJP
A61K 39/245 20060101ALI20231116BHJP
A61P 31/22 20060101ALI20231116BHJP
C12N 15/38 20060101ALI20231116BHJP
C12N 15/869 20060101ALI20231116BHJP
【ＦＩ】
A61K35/763
A61K39/245
A61P31/22
C12N15/38 ZNA
C12N15/869 Z
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023528382
(86)(22)【出願日】2021-11-11
(85)【翻訳文提出日】2023-05-12
(86)【国際出願番号】 IB2021000814
(87)【国際公開番号】W WO2022101679
(87)【国際公開日】2022-05-19
(31)【優先権主張番号】63/113,398
(32)【優先日】2020-11-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】505258715
【氏名又は名称】ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲーエムベーハー
【氏名又は名称原語表記】Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｖｅｔｍｅｄｉｃａ ＧｍｂＨ
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100123777
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 さつき
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(72)【発明者】
【氏名】ヴィーシェク カリー アン
(72)【発明者】
【氏名】マンデル ロバート バリー
(72)【発明者】
【氏名】メバション テショメ
(72)【発明者】
【氏名】コウクントラ ラメシュ
(72)【発明者】
【氏名】ヴォーン エリック マーティン
【テーマコード（参考）】
4C085
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C085AA03
4C085BA78
4C085BB23
4C085CC08
4C085DD62
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG05
4C085GG08
4C085GG10
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC83
4C087CA12
4C087MA52
4C087MA55
4C087MA59
4C087MA66
4C087NA14
4C087ZB33
(57)【要約】
本発明は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含むＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）に関する。また、本発明は、ネコ科動物を免疫する方法に関し、前記方法は、本発明の免疫原性組成物を前記ネコ科動物に投与することを含む。さらに、本発明は、ネコヘルペスウイルスによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法に関する。
【選択図】 なし
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）。
【請求項2】
ＯＲＦ７０（ＵＳ４）に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列、及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）。
【請求項3】
ＦＨＶ抗原コード配列が、１４００個以下のアミノ酸をコードする、請求項１又は２に記載のＥＨＶ。
【請求項4】
ＦＨＶ抗原コード配列が、１つの、ＦＨＶ抗原コード配列である、請求項１又は３に記載のＥＨＶ。
【請求項5】
ＦＨＶ抗原コード配列が、糖タンパク質コード配列又はその断片である、請求項１～４のいずれか１項に記載のＥＨＶ。
【請求項6】
ＦＨＶ抗原コード配列が、ＦＨＶ ｇＤ（糖タンパク質Ｄ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＢ（糖タンパク質Ｂ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＣ（糖タンパク質Ｃ）コード配列若しくはその断片である、請求項１～５のいずれか１項に記載のＥＨＶ。
【請求項7】
ＦＨＶ抗原コード配列が、ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列であり、前記ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列が、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは前記核酸配列を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載のＥＨＶ。
【請求項8】
ＦＨＶ抗原コード配列が、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３%、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個若しくは少なくとも１０５０個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるｇＤ、ｇＢ又はｇＣであるか、或いは前記核酸配列、前記配列又は前記核酸配列の断片を含むｇＤ、ｇＢ又はｇＣである、請求項１～７のいずれか１項に記載のＥＨＶ。
【請求項9】
ＥＨＶが、弱毒化されている、及び／又は組換えられている、請求項１～８のいずれか１項に記載のＥＨＶ。
【請求項10】
ＥＨＶベクターが、ＥＨＶ－１及び／又はＲａｃＨ若しくはＲａｃＨ ＳＥである、請求項１～９のいずれか１項に記載のＥＨＶ。
【請求項11】
請求項１～１０のいずれか１項に記載のＥＨＶを含む、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチン。
【請求項12】
医薬上許容される担体を更に含む、請求項１１に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチン。
【請求項13】
ネコ科動物を免疫するための方法であって、請求項１１又は１２に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項14】
未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の請求項１１又は１２に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項15】
未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の請求項１１又は１２に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項16】
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンが、２回以上投与される、請求項１３～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンが、筋肉内、皮内、皮下、経口、又は経鼻で投与される、請求項１３～１６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
Ａ．本発明の分野
本発明は、ネコヘルペスウイルスワクチンの分野に関する。
本発明は、ネコヘルペスウイルスワクチンの分野に関する。
【背景技術】
【0002】
Ｂ．背景及び関連技術の説明
ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）
ＦＨＶは、ネコのネコ科動物ウイルス性鼻気管炎の病原体であり、この疾患は、世界中で見られる。ネコヘルペスウイルスは、鼻炎、発熱、くしゃみ、眼脂と鼻汁、結膜炎（目の周りの粘膜とまぶたの裏の炎症）、角膜の炎症（角膜炎）、及び嗜眠を伴う上気道感染症を引き起こす。
ＦＨＶの改変された生ワクチン及び不活化ワクチンが開発されている。
しかしながら、一般的に、改変された生ワクチンの株は、接種された動物の疾患及び病原体の他の動物への伝播可能性をもたらす病原性状態に復帰するおそれがある。
不活化ワクチンは、一般的に、低レベルの免疫しか誘発しない（細胞性免疫に対する刺激がないか、又は弱い刺激しかない）。
これに対して、ベクターワクチンにより、ＦＨＶの中和抗体もＦＨＶに対する細胞性免疫も誘発することができる。
別の問題は、ワクチンの製造のためのＦＨＶ培養がネコ科動物の腎臓細胞株で行われるという事実によって生じる。しかしながら、前記細胞の残存成分を含むワクチンは、ネコに、慢性腎臓病又は他の疾患を引き起こす自己抗体を産生させるおそれがある。したがって、ネコ科動物由来の細胞株での培養が行われていないＦＨＶワクチンのニーズがある。
ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）
ＦＨＶは、ネコのネコ科動物ウイルス性鼻気管炎の病原体であり、この疾患は、世界中で見られる。ネコヘルペスウイルスは、鼻炎、発熱、くしゃみ、眼脂と鼻汁、結膜炎（目の周りの粘膜とまぶたの裏の炎症）、角膜の炎症（角膜炎）、及び嗜眠を伴う上気道感染症を引き起こす。
ＦＨＶの改変された生ワクチン及び不活化ワクチンが開発されている。
しかしながら、一般的に、改変された生ワクチンの株は、接種された動物の疾患及び病原体の他の動物への伝播可能性をもたらす病原性状態に復帰するおそれがある。
不活化ワクチンは、一般的に、低レベルの免疫しか誘発しない（細胞性免疫に対する刺激がないか、又は弱い刺激しかない）。
これに対して、ベクターワクチンにより、ＦＨＶの中和抗体もＦＨＶに対する細胞性免疫も誘発することができる。
別の問題は、ワクチンの製造のためのＦＨＶ培養がネコ科動物の腎臓細胞株で行われるという事実によって生じる。しかしながら、前記細胞の残存成分を含むワクチンは、ネコに、慢性腎臓病又は他の疾患を引き起こす自己抗体を産生させるおそれがある。したがって、ネコ科動物由来の細胞株での培養が行われていないＦＨＶワクチンのニーズがある。
【0003】
自己抗体のこの問題は、Lappin et al 2005 (AJVR, Vol 66, No. 3)、Whittemore et al 2010 (J Vet Intern Med;24:306-313)及びSongaksorn et al 2019 (Vet Sci. 2019 Nov;20(6):e73)などの文献に既に議論されている。これらの文献は、ネコ科動物の腎臓由来（Crandell feline kidney）（ＣＲＦＫ）細胞株を使用してネコ科動物のウイルス、例えば、ネコヘルペスウイルス１（ＦＨＶ－１）、カリシウイルス、及び汎白血球減少症ウイルスを増殖すること、並びにワクチンの製造中に、あらゆるＣＲＦＫ細胞のタンパク質又は他の細胞構成物を取り除くことが不可能であろうことを述べている。結果として、定期的なワクチン接種の過程で、ネコは、ＣＲＦＫ細胞のタンパク質に曝され、かかるタンパク質に対する免疫応答が起こる。Lappin et al 2005及びWhittemore et al 2010に示されている研究結果は、ＣＲＦＫ細胞で増殖させたウイルスを含むワクチンの投与により、ネコにおいて、腎臓組織に対する自己抗体などの抗体が誘導されることを説明している。
さらに、現在投与されているＦＨＶの弱毒生ワクチン又は不活化ワクチンを使用すると、特定の動物がＦＨＶ分野のウイルスの保菌者であるか否か、又はその動物がワクチン接種を受けたか否かを判断することは不可能である。したがって、改変された生ワクチンも不活化ワクチンも、ワクチン接種を受けた動物と感染した動物とを区別する（ＤＩＶＡ）診断のための固有の特徴を欠いている。したがって、ＦＨＶのＤＩＶＡワクチンのニーズがある。
さらに、現在投与されているＦＨＶの弱毒生ワクチン又は不活化ワクチンを使用すると、特定の動物がＦＨＶ分野のウイルスの保菌者であるか否か、又はその動物がワクチン接種を受けたか否かを判断することは不可能である。したがって、改変された生ワクチンも不活化ワクチンも、ワクチン接種を受けた動物と感染した動物とを区別する（ＤＩＶＡ）診断のための固有の特徴を欠いている。したがって、ＦＨＶのＤＩＶＡワクチンのニーズがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0004】
上述した理由のために、新たなネコヘルペスウイルスワクチンのニーズがある。
【発明を実施するための形態】
【0005】
発明の詳細な説明
本発明の観点を説明する前に、本明細書及びその添付の特許請求の範囲において使用されているように、単数形の「１（a、an）」及び「該、前記（the）」は、文脈において特に明確に示されていない限り、複数形を含むことを留意すべきである。したがって、例えば、「抗原」への言及は、複数の抗原を含み、「ウイルス」への言及は、１種以上のウイルス、及び当業者に知られているウイルスの同等物等を指す。特に定義されていない限り、本明細書に使用されているすべての技術用語及び科学用語は、本発明の属する分野の当業者に一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。本発明の実施又は試験には、本明細書に記載の方法及び材料と同様又は同等の、あらゆる方法及び材料を使用することができるが、ここでは、好ましい方法、装置及び材料について説明する。本明細書において言及されているすべての刊行物は、本発明との関連で使用することができる、前記刊行物中に報告されている細胞株、ベクター及び方法について説明及び開示する目的で、参照により本明細書に含まれる。本明細書におけるいかなる内容も、本発明が、先行発明によるこのような開示に先行する権利を有しないことを認めるものとして解釈されるべきではない。
本発明の観点を説明する前に、本明細書及びその添付の特許請求の範囲において使用されているように、単数形の「１（a、an）」及び「該、前記（the）」は、文脈において特に明確に示されていない限り、複数形を含むことを留意すべきである。したがって、例えば、「抗原」への言及は、複数の抗原を含み、「ウイルス」への言及は、１種以上のウイルス、及び当業者に知られているウイルスの同等物等を指す。特に定義されていない限り、本明細書に使用されているすべての技術用語及び科学用語は、本発明の属する分野の当業者に一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。本発明の実施又は試験には、本明細書に記載の方法及び材料と同様又は同等の、あらゆる方法及び材料を使用することができるが、ここでは、好ましい方法、装置及び材料について説明する。本明細書において言及されているすべての刊行物は、本発明との関連で使用することができる、前記刊行物中に報告されている細胞株、ベクター及び方法について説明及び開示する目的で、参照により本明細書に含まれる。本明細書におけるいかなる内容も、本発明が、先行発明によるこのような開示に先行する権利を有しないことを認めるものとして解釈されるべきではない。
【0006】
本発明は、先行技術に内在する課題を解決し、技術水準における明らかな進歩を提供する。一般的に、本発明は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含むＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を提供する。
また、本発明は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列、及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含むＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を提供する。
さらに、本発明は、１４００個以下のアミノ酸をコードする、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含むＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）であって、前記ＦＨＶ抗原コード配列が、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された、前記ＥＨＶを提供する。
また、本発明は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列、及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含むＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を提供する。
さらに、本発明は、１４００個以下のアミノ酸をコードする、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含むＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）であって、前記ＦＨＶ抗原コード配列が、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された、前記ＥＨＶを提供する。
【0007】
有利なことには、本発明により提供される実験データは、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原を、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位を使用してＥＨＶに挿入すると、該抗原がうまく発現されることを開示している。したがって、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位を使用する場合のＥＨＶは、ＦＨＶ抗原を発現することに適している。
【0008】
「ＥＨＶ」という用語は、ウマヘルペスウイルス又はウマの病原体であるウマアルファヘルペスウイルス（Equid Alphaherpesvirus、Equine abortion virus）を意味し、ヘルペスウイルス目のヘルペスウイルス科のアルファヘルペスウイルス亜科のバリセロウイルス属に属する。
「ＯＲＦ７０」又は「ＵＳ４」という用語は、当業者によく知られており、国際公開２０１８／０５４８３７号公報などの先行技術に既に記載されている、ＥＨＶ内の挿入部位を定義する。ＯＲＦ７０への挿入は、ＤＮＡ断片が、ウマヘルペスウイルス１型のオープンリーディングフレーム７０をコードする位置で、ゲノムＤＮＡに挿入し、ｏｒｆ７０遺伝子産物である糖タンパク質Ｇの発現を停止させたことを意味する。しかしながら、好ましくは、ＯＲＦ７１は、機能を残しているか、又はインタクトである。
「ＯＲＦ１／３」という用語は、当業者によく知られており、国際公開２０１８／０５４８３７号公報又はSaid et al. 2013 （Virus Research 173: 371-376）などの先行技術に既に記載されている、ＥＨＶ内の別の挿入部位を定義する。この挿入部位を使用すると、ＯＲＦ１／ＯＲＦ２に影響を与え、したがって、この挿入部位は、ＯＲＦ１／ＯＲＦ２挿入部位とも称される。最初は、この挿入部位は偶然に同定された。この挿入部位は、ワクチン株ＥＨＶ－１ ＲａｃＨの弱毒化処置中の継代による偶発的な欠失によって、９０％のＯＲＦ１及び全ＯＲＦ２を含む１２８３ｂｐの断片が失われたことから見出された。
「ＯＲＦ７０」又は「ＵＳ４」という用語は、当業者によく知られており、国際公開２０１８／０５４８３７号公報などの先行技術に既に記載されている、ＥＨＶ内の挿入部位を定義する。ＯＲＦ７０への挿入は、ＤＮＡ断片が、ウマヘルペスウイルス１型のオープンリーディングフレーム７０をコードする位置で、ゲノムＤＮＡに挿入し、ｏｒｆ７０遺伝子産物である糖タンパク質Ｇの発現を停止させたことを意味する。しかしながら、好ましくは、ＯＲＦ７１は、機能を残しているか、又はインタクトである。
「ＯＲＦ１／３」という用語は、当業者によく知られており、国際公開２０１８／０５４８３７号公報又はSaid et al. 2013 （Virus Research 173: 371-376）などの先行技術に既に記載されている、ＥＨＶ内の別の挿入部位を定義する。この挿入部位を使用すると、ＯＲＦ１／ＯＲＦ２に影響を与え、したがって、この挿入部位は、ＯＲＦ１／ＯＲＦ２挿入部位とも称される。最初は、この挿入部位は偶然に同定された。この挿入部位は、ワクチン株ＥＨＶ－１ ＲａｃＨの弱毒化処置中の継代による偶発的な欠失によって、９０％のＯＲＦ１及び全ＯＲＦ２を含む１２８３ｂｐの断片が失われたことから見出された。
【0009】
一般的に、「オープンリーディングフレーム」又は「ＯＲＦ」は、翻訳開始シグナル又は開始コドン（例えば、ＡＴＧ又はＡＵＧ）と終止コドンとを含み、ポリペプチド配列に翻訳される可能性がある、ある長さの核酸配列（ＤＮＡ又はＲＮＡ）を指す。
本明細書において使用される「抗原」は、宿主において、抗原若しくはその免疫学的な活性成分を含有する、目的の免疫学的組成物又はワクチンに対して免疫学的応答を誘発する成分を指すが、これらに限定されない。「抗原」という用語は、全長タンパク質、及びその、１つ以上のエピトープを含むか、又はからなるペプチド断片を包含する。また、「抗原コード配列」という用語は、抗原をコードする配列に関する。好ましくは、抗原コード配列は、ｃＤＮＡ配列又はＤＮＡ配列などの核酸配列である。しかしながら、「核酸配列」という用語は、本明細書の別の箇所に定義されている。
「ネコヘルペスウイルス」又は「ＦＨＶ」という用語は、当業者によく知られている。ＦＨＶは、ネコにおけるネコ科動物ウイルス性鼻気管炎の病原体であり、上気道感染症を引き起こす。ＦＨＶは、ヘルペスウイルス科のアルファヘルペスウイルス亜科に属する。いくつかのＦＨＶの全ゲノムは既に配列決定された（例えば、野生型株Ｃ－２７、その配列が公衆に利用可能である（ＡＣＣＮ：ＦＪ４７８１５９））。好ましくは、ＦＨＶは、ＦＨＶ－１である。
本明細書において使用される「抗原」は、宿主において、抗原若しくはその免疫学的な活性成分を含有する、目的の免疫学的組成物又はワクチンに対して免疫学的応答を誘発する成分を指すが、これらに限定されない。「抗原」という用語は、全長タンパク質、及びその、１つ以上のエピトープを含むか、又はからなるペプチド断片を包含する。また、「抗原コード配列」という用語は、抗原をコードする配列に関する。好ましくは、抗原コード配列は、ｃＤＮＡ配列又はＤＮＡ配列などの核酸配列である。しかしながら、「核酸配列」という用語は、本明細書の別の箇所に定義されている。
「ネコヘルペスウイルス」又は「ＦＨＶ」という用語は、当業者によく知られている。ＦＨＶは、ネコにおけるネコ科動物ウイルス性鼻気管炎の病原体であり、上気道感染症を引き起こす。ＦＨＶは、ヘルペスウイルス科のアルファヘルペスウイルス亜科に属する。いくつかのＦＨＶの全ゲノムは既に配列決定された（例えば、野生型株Ｃ－２７、その配列が公衆に利用可能である（ＡＣＣＮ：ＦＪ４７８１５９））。好ましくは、ＦＨＶは、ＦＨＶ－１である。
【0010】
挿入部位
本発明のＥＨＶのある特定の観点において、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）に挿入される。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ１／３に挿入される。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及びＯＲＦ１／３に挿入される。
ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原の長さ
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、１４００個以下のアミノ酸をコードする。
有利なことには、本発明により提供される実験データは、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原を、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位を使用してＥＨＶに挿入すると、該抗原がうまく発現されることを開示している。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、１２００個以下のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、１０００個以下のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、２００～１２００個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、２００～１０００個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶのある特定の観点において、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）に挿入される。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ１／３に挿入される。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及びＯＲＦ１／３に挿入される。
ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原の長さ
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、１４００個以下のアミノ酸をコードする。
有利なことには、本発明により提供される実験データは、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原を、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位を使用してＥＨＶに挿入すると、該抗原がうまく発現されることを開示している。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、１２００個以下のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、１０００個以下のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、２００～１２００個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、２００～１０００個のアミノ酸をコードする。
【0011】
「タンパク質」、「アミノ酸」及び「ポリペプチド」という用語は、交換可能に使用される。「タンパク質」という用語は、天然に存在するアミノ酸及びその誘導体からなるアミノ酸の配列を指す。天然に存在するアミノ酸は、この分野においてよく知られており、生化学の標準教科書に記載されている。アミノ酸配列内で、アミノ酸は、ペプチド結合によってつながっている。また、アミノ酸配列の両端は、カルボキシル末端（Ｃ末端）及びアミノ末端（Ｎ末端）と称される。「タンパク質」という用語は、本質的に精製されたタンパク質又は他のタンパク質を更に含むタンパク質製剤を包含する。また、この用語は、タンパク質断片にも関する。さらに、この用語は、化学修飾されたタンパク質を含む。このような修飾は、人為的な修飾であってもよく、天然に起こる修飾（例えば、リン酸化、グリコシル化、ミリスチル化など）であってもよい。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、４２００個以下の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、３６００個以下の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、３０００個以下の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、６００～３６００個の核酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、６００～３０００個の核酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、４２００個以下の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、３６００個以下の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、３０００個以下の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、６００～３６００個の核酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、６００～３０００個の核酸をコードする。
【0012】
「核酸」、又は「核酸配列」、又は「ヌクレオチド配列」という用語は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ｃＤＮＡ分子又はこれらの誘導体を含むポリヌクレオチドを指す。この用語は、一本鎖ポリヌクレオチド及び二本鎖ポリヌクレオチドを包含する。本発明の核酸は、単離されたポリヌクレオチド（すなわち、その自然な状態からの単離）及び遺伝子改変された形態を包含する。さらに、化学修飾されたポリヌクレオチドも含まれ、グリコシル化若しくはメチル化ポリヌクレオチドなどの天然に存在する修飾ポリヌクレオチド、又はビオチン化ポリヌクレオチドなどの人為的に修飾されたポリヌクレオチドが挙げられる。また、「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、交換可能であり、任意の核酸を指す。「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語はまた、５種の生物学的に存在する塩基（アデニン、グアニン、チミン、シトシン及びウラシル）以外の塩基からなる核酸を特に含む。
【0013】
抗原、並びにｇＤ、ｇＢ及びｇＣの定義
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、１つの、ＦＨＶ抗原コード配列である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、単一のＦＨＶ抗原コード配列である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、２つ以上のＦＨＶ抗原コード配列ではない。
有利なことには、本発明により提供される実験データは、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原を、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位を使用してＥＨＶに挿入すると、該抗原がうまく発現されることを開示している。これは、ＯＲＦ１／３部位に挿入されたＦ２Ａを挟んだｇＤとｇＢに比べて、挿入部位当たり１つのＦＨＶ抗原のみが挿入された場合、発現がより優れていることを示している（実施例６、表５、７及び８に示されている）。
好ましくは、ＦＨＶ抗原は、糖タンパク質である。ヘルペスウイルス抗原は、ネコヘルペスウイルス由来の糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）又は糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）抗原であってもよい。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、糖タンパク質コード配列又はその断片である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤ（糖タンパク質Ｄ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＢ（糖タンパク質Ｂ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＣ（糖タンパク質Ｃ）コード配列若しくはその断片である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、１つの、ＦＨＶ抗原コード配列である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、単一のＦＨＶ抗原コード配列である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、２つ以上のＦＨＶ抗原コード配列ではない。
有利なことには、本発明により提供される実験データは、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原を、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位を使用してＥＨＶに挿入すると、該抗原がうまく発現されることを開示している。これは、ＯＲＦ１／３部位に挿入されたＦ２Ａを挟んだｇＤとｇＢに比べて、挿入部位当たり１つのＦＨＶ抗原のみが挿入された場合、発現がより優れていることを示している（実施例６、表５、７及び８に示されている）。
好ましくは、ＦＨＶ抗原は、糖タンパク質である。ヘルペスウイルス抗原は、ネコヘルペスウイルス由来の糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）又は糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）抗原であってもよい。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、糖タンパク質コード配列又はその断片である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤ（糖タンパク質Ｄ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＢ（糖タンパク質Ｂ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＣ（糖タンパク質Ｃ）コード配列若しくはその断片である。
【0014】
ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）は、ＦＨＶ－１（ネコヘルペスウイルス-1）の進入にとって不可欠であり、宿主細胞との相互作用（受容体への結合）に関与している。ｇＤタンパク質は、ネコ科動物の赤血球細胞に対する赤血球凝集活性を有する。ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）は、ＦＨＶの進入にとって不可欠であり、融合プロセスに関与している。両糖タンパク質は、中和抗体を誘導することができる。ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）は、ヘパリン硫酸との相互作用による細胞へのウイルス付着に関与している。糖タンパク質ｇＣも、中和抗体を誘導することができる。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＣコード配列又はその断片である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＣコード配列又はその断片である。
【0015】
糖タンパク質の断片
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも３５０個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個、又は少なくとも８００個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１０５０個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００個、又は少なくとも２４００個の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、又は少なくとも３５０個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、又は少なくとも１０５０個の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＤコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも２５０個、少なくとも３００個、又は少なくとも３５０個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＤコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、６００個、７５０個、９００個、又は１０５０個の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＢコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個、又は少なくとも８００個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＢコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００個、又は少なくとも２４００個の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＣコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、又は少なくとも５００個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＣコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、又は少なくとも１５００個の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも３５０個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個、又は少なくとも８００個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１０５０個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００個、又は少なくとも２４００個の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、又は少なくとも３５０個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、又は少なくとも１０５０個の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＤコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも２５０個、少なくとも３００個、又は少なくとも３５０個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＤコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、６００個、７５０個、９００個、又は１０５０個の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＢコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個、又は少なくとも８００個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＢコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００個、又は少なくとも２４００個の核酸を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＣコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、又は少なくとも５００個のアミノ酸をコードする。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＣコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、又は少なくとも１５００個の核酸を含む。
【0016】
配列によるｇＢ、ｇＣ及びｇＤの定義
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、野生型ネコヘルペスウイルス株Ｃ－２７（ＡＣＣＮ：ＦＪ４７８１５９）に基づく、ＦＨＶ ｇＤコード配列、及び／又はＦＨＶ ｇＢコード配列、及び／又はＦＨＶ ｇＣコード配列である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤコード配列であり、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列は、ＡＡＢ３０９８０．１に示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、野生型ネコヘルペスウイルス株Ｃ－２７（ＡＣＣＮ：ＦＪ４７８１５９）に基づく、ＦＨＶ ｇＤコード配列、及び／又はＦＨＶ ｇＢコード配列、及び／又はＦＨＶ ｇＣコード配列である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤコード配列であり、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列は、ＡＡＢ３０９８０．１に示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0017】
「同一性」又は「配列同一性」という用語は、この分野において知られており、２つ以上のポリペプチド配列又は２つ以上のポリヌクレオチド配列、すなわち、参照配列と、該参照配列と比較される所定の配列との間の関係を指す。配列同一性は、配列の鎖（strings）間の一致によって決定される、最高の配列類似性を生じるように配列のアラインメントを最適に行った後に、所定の配列を参照配列と比較することによって決定される。このようなアラインメントによって、配列同一性は位置ごとに確認され、例えば、ある位置でのヌクレオチド又はアミノ酸残基が同一である場合、配列は、その特定の位置で「同一」である。次に、このような位置同一性の総数を、参照配列のヌクレオチド又は残基の総数で割り、配列同一性の％を与える。配列同一性は、既知の方法で容易に算出することができる。既知の方法として、Computational Molecular Biology, Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, New York (1988)、Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York (1993)、Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey (1994)、Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987)、Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York (1991)、及びCarillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988)に記載のものが挙げられるが、これらに限定されない。これらの教示は、参照として本明細書に含まれる。配列同一性を決定する好ましい方法は、試験した配列間の最大の一致を与えるように設計されている。配列同一性を決定する方法は、所定の配列間の配列同一性を決定する、公衆に利用可能なコンピュータープログラムに体系化されている（codified）。このようなプログラムの例として、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1):387 (1984)）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ及びＦＡＳＴＡ（Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990)）が挙げられるが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＮＣＢＩ及び他の供給元から公衆に利用可能である（BLAST Manual, Altschul, S. et al., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990)、これらの教示は、参照として本明細書に含まれる）。これらのプログラムは、所定の配列と参照配列との間に最高レベルの配列同一性をもたらすように、デフォルトのギャップ重みを使用して配列を最適にアラインメントする。例として、参照ヌクレオチド配列と少なくとも、例えば８５％、好ましくは９０％、さらにより好ましくは９５％の「配列同一性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドによる場合、所定のポリヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチド当たり１５個まで、好ましくは１０個まで、さらにより好ましくは５個までの点変異を含み得ることを除いて、該所定のポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列と同一であることを意図している。言い換えれば、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、好ましくは９０％、さらにより好ましくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドでは、参照配列のヌクレオチドの１５％まで、好ましくは１０％まで、さらにより好ましくは５％までが、欠失若しくは別のヌクレオチドで置換され得るか、又は参照配列の総ヌクレオチドの１５％まで、好ましくは１０％まで、さらにより好ましくは５％までのヌクレオチド数が、参照配列に挿入されていてもよい。参照配列のこれらの変異は、参照ヌクレオチド配列の５’若しくは３’末端位置、又は両末端位置の間の任意の位置で起こることができ、参照配列内のヌクレオチド間に個別に散在するか、又は参照配列内の１つ以上の隣接基（contiguous group）に散在する。同様に、参照アミノ酸配列と少なくとも、例えば８５％、好ましくは９０％、さらにより好ましくは９５％配列同一性を有する所定のアミノ酸配列を有するポリペプチドによる場合、所定のポリペプチド配列が、参照アミノ酸配列の各１００アミノ酸当たり１５個まで、好ましくは１０個まで、さらにより好ましくは５個までのアミノ酸変化を含み得ることを除いて、ポリペプチドの所定のアミノ酸配列が参照配列と同一であることを意図している。言い換えれば、参照アミノ酸配列と少なくとも８５％、好ましくは９０％、さらにより好ましくは９５％の配列同一性を有する所定のポリペプチド配列を得るために、参照配列のアミノ酸残基の１５％まで、好ましくは１０％まで、さらにより好ましくは５％までが、欠失若しくは別のアミノ酸で置換され得るか、又は参照配列のアミノ酸残基の総数の１５％まで、好ましくは１０％まで、さらにより好ましくは５％までのアミノ酸数が、参照配列に挿入されていてもよい。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸配列のアミノ若しくはカルボキシ末端位置、又は両末端位置の間の任意の位置で起こることができ、参照配列内の残基の間に個別に散在するか、又は参照配列内の１つ以上の隣接基に散在する。好ましくは、同一でない残基の位置は、保存的なアミノ酸置換によって異なる。しかしながら、配列同一性を決定するとき、保存的な置換は、一致として含まれない。
【0018】
本明細書において、「同一性」、「配列同一性」及び「同一性の％」という用語は、交換可能に使用される。本発明の目的のために、ここで、２つのアミノ酸配列又は２つの核酸配列の同一性の％を決定するために、配列を、最適な比較目的のためにアラインメントすることが定義されている（例えば、第２のアミノ酸配列又は核酸配列との最適なアラインメントのために、ギャップを第１のアミノ酸配列又は核酸配列に導入することができる）。次に、対応するアミノ酸又はヌクレオチド位置でのアミノ酸残基又はヌクレオチド残基を比較する。第１の配列のある位置が、第２の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチド残基で占められている場合、分子は、その位置で同一である。両配列間の同一性の％は、配列が共有している同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性の％＝同一の位置の数／位置の総数（すなわち、重なっている位置）×１００）。好ましくは、両配列の長さが同じである。
【0019】
配列比較は、比較される両配列の全長にわたって、又は両配列の断片にわたって行うことができる。典型的には、比較は、比較される両配列の全長にわたって行われるであろう。しかしながら、配列同一性は、例えば、２０、５０、１００又はそれ以上の隣接するアミノ酸残基の領域にわたって行うことができる。
当業者は、２つの配列間の相同性を決定するために、異なるコンピュータープログラムを利用できるという事実を認識しているであろう。例えば、２つの配列間の配列比較及び同一性の％の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸又は核酸配列間の同一性の％は、Ａｃｃｅｌｒｙｓ ＧＣＧソフトウェアパッケージ（http://www.accelrys.com/products/gcg/で入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれている、Needleman及びWunsch（J. Mol. Biol. (48): 444-453 (1970)）によるアルゴリズムを用いて、Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、並びに１６、１４、１２、１０、８、６又は４のギャップ重み、及び１、２、３、４、５又は６の長さ重みを使用して決定される。当業者は、これらすべての異なるパラメーターが、わずかに異なる結果をもたらすものの、異なるアルゴリズムを使用する場合、２つの配列の全体的な同一性％が、著しく変化しないことを理解するであろう。
当業者は、２つの配列間の相同性を決定するために、異なるコンピュータープログラムを利用できるという事実を認識しているであろう。例えば、２つの配列間の配列比較及び同一性の％の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸又は核酸配列間の同一性の％は、Ａｃｃｅｌｒｙｓ ＧＣＧソフトウェアパッケージ（http://www.accelrys.com/products/gcg/で入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれている、Needleman及びWunsch（J. Mol. Biol. (48): 444-453 (1970)）によるアルゴリズムを用いて、Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、並びに１６、１４、１２、１０、８、６又は４のギャップ重み、及び１、２、３、４、５又は６の長さ重みを使用して決定される。当業者は、これらすべての異なるパラメーターが、わずかに異なる結果をもたらすものの、異なるアルゴリズムを使用する場合、２つの配列の全体的な同一性％が、著しく変化しないことを理解するであろう。
【0020】
本発明のタンパク質配列又は核酸配列は、公共データベースに対して検索を行うための「問い合わせ（query）配列」として更に使用することができる（例えば、他のファミリーメンバー又は関連配列を同定するための検索）。このような検索は、Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10のＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＰプログラム（バージョン２．０）を使用して、行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＢＬＡＳＴＰプログラム（スコア＝５０、ワード長＝３）で行われ、本発明のタンパク質分子と相同のアミノ酸配列を得ることができる。比較目的ためのギャップ付きアラインメントを得るために、Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402に記載されているように、ギャップ付きＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びギャップ付きＢＬＡＳＴプログラムを利用するとき、それぞれのプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ及びＢＬＡＳＴＮ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。アメリカ国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology Information）のホームページhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/を参照されたい。
本明細書において使用する場合、「配列番号：Ｘの配列と同一」という用語は、「配列番号：Ｘの長さにわたって配列番号：Ｘの配列と同一」という用語、又は「配列番号：Ｘの全長にわたって配列番号：Ｘの配列と同一」という用語のいずれかに等しいことを特に理解されたい。この文脈において、「Ｘ」は、１～２４から選ばれる任意の整数であり、「配列番号：Ｘ」は、本明細書に言及されている配列番号のいずれかを表す。
本明細書において使用する場合、「配列番号：Ｘの配列と同一」という用語は、「配列番号：Ｘの長さにわたって配列番号：Ｘの配列と同一」という用語、又は「配列番号：Ｘの全長にわたって配列番号：Ｘの配列と同一」という用語のいずれかに等しいことを特に理解されたい。この文脈において、「Ｘ」は、１～２４から選ばれる任意の整数であり、「配列番号：Ｘ」は、本明細書に言及されている配列番号のいずれかを表す。
【0021】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＢコード配列であり、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列は、ＡＡＢ２８５５９．３に示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、糖タンパク質コード配列であり、前記糖タンパク質コード配列は、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列であり、前記ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列は、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、糖タンパク質コード配列であり、前記糖タンパク質コード配列は、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列であり、前記ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列は、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0022】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個若しくは少なくとも１０５０個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含む糖タンパク質である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個若しくは少なくとも１０５０個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含むｇＤ、ｇＢ又はｇＣである。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ抗原コード配列は、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個若しくは少なくとも１０５０個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含むｇＤ、ｇＢ又はｇＣである。
【0023】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0024】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0025】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＣコード配列は、配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個若しくは少なくとも５００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＣコード配列は、配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＣコード配列は、配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0026】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＤコード配列は、配列番号：４、若しくは配列番号：５で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個若しくは少なくとも１０５０個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＤコード配列は、配列番号：４、若しくは配列番号：５で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＤコード配列は、配列番号：４、若しくは配列番号：５で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
【0027】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＢコード配列は、配列番号：６、若しくは配列番号：７で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００若しくは少なくとも２４００個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＢコード配列は、配列番号：６、若しくは配列番号：７で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＢコード配列は、配列番号：６、若しくは配列番号：７で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
【0028】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＣコード配列は、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個若しくは少なくとも１５００個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＣコード配列は、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、前記ｇＣコード配列は、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
【0029】
ＥＨＶ
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ベクターである。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＥＨＶベクターである。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、弱毒化されている。
「弱毒化（されている、された）（attenuated）」という用語は、単離された野生型と比べて、病原性が低下した病原体を指す。本発明において、「弱毒化」は、「非病原性」と同義である。本発明において、弱毒化ウイルスは、感染症の臨床徴候を引き起こさないが、標的動物内の免疫応答を誘導することができるように、病原性が低減されたものである。しかしながら、弱毒化ウイルスは、弱毒化されていないウイルス又は病原体に感染し、かつ前記弱毒化ウイルスを受けていない動物の「対照群」と比較して、弱毒化ウイルス、特にＥＨＶ－１ ＲａｃＨウイルスベクターに感染した動物における臨床徴候の発生率又は重症度が低下することを意味することもある。この文脈において、「軽減（する、した）、低下（する、した）、減少（する、した）（reduce/reduced）」という用語は、上記で定義した対照群と比較して、少なくとも１０％、好ましくは２５％、さらにより好ましくは５０％、なおさらより好ましくは６０％、さらにより好ましくは７０％、なおさらより好ましくは８０％、さらにより好ましくは９０％、最も好ましくは１００％の低下を意味する。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ベクターである。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＥＨＶベクターである。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、弱毒化されている。
「弱毒化（されている、された）（attenuated）」という用語は、単離された野生型と比べて、病原性が低下した病原体を指す。本発明において、「弱毒化」は、「非病原性」と同義である。本発明において、弱毒化ウイルスは、感染症の臨床徴候を引き起こさないが、標的動物内の免疫応答を誘導することができるように、病原性が低減されたものである。しかしながら、弱毒化ウイルスは、弱毒化されていないウイルス又は病原体に感染し、かつ前記弱毒化ウイルスを受けていない動物の「対照群」と比較して、弱毒化ウイルス、特にＥＨＶ－１ ＲａｃＨウイルスベクターに感染した動物における臨床徴候の発生率又は重症度が低下することを意味することもある。この文脈において、「軽減（する、した）、低下（する、した）、減少（する、した）（reduce/reduced）」という用語は、上記で定義した対照群と比較して、少なくとも１０％、好ましくは２５％、さらにより好ましくは５０％、なおさらより好ましくは６０％、さらにより好ましくは７０％、なおさらより好ましくは８０％、さらにより好ましくは９０％、最も好ましくは１００％の低下を意味する。
【0030】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、遺伝子操作されている。
「遺伝子操作（されている、された）」という用語は、「逆遺伝学」アプローチを使用することにより変異されたＥＨＶを指す。好ましくは、本発明のＥＨＶは、遺伝子操作されている。しかしながら、「逆遺伝学」技術は、当業者によく知られている。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、組換えされている。
本明細書において使用される「組換え（されている、された）（recombinant）」という用語は、対応するウイルスゲノム又は核酸配列において天然に存在しない任意の改変を有するウイルスゲノム又は核酸配列に関する。例えば、人為的に（例えば、人間の介入によって）導入された挿入、欠失、逆位、再配置又は点変異を含む場合、ウイルスゲノム又は核酸配列は、「組換えされている」と考えられる。したがって、前記ウイルスゲノム又は核酸配列は、自然界で関連するウイルスゲノム又は核酸配列の全部又は一部と関連していない。「組換えウイルス」という用語は、遺伝子改変されたウイルスを包含する。また、異種配列、又は外因性抗原コード配列などの外因性配列（例えば、ネコ科動物抗原コード配列）を含むウイルスは、組換えウイルスである。組換えウイルスという用語及び天然に存在しないウイルスという用語は、交換可能に使用される。
「遺伝子操作（されている、された）」という用語は、「逆遺伝学」アプローチを使用することにより変異されたＥＨＶを指す。好ましくは、本発明のＥＨＶは、遺伝子操作されている。しかしながら、「逆遺伝学」技術は、当業者によく知られている。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、組換えされている。
本明細書において使用される「組換え（されている、された）（recombinant）」という用語は、対応するウイルスゲノム又は核酸配列において天然に存在しない任意の改変を有するウイルスゲノム又は核酸配列に関する。例えば、人為的に（例えば、人間の介入によって）導入された挿入、欠失、逆位、再配置又は点変異を含む場合、ウイルスゲノム又は核酸配列は、「組換えされている」と考えられる。したがって、前記ウイルスゲノム又は核酸配列は、自然界で関連するウイルスゲノム又は核酸配列の全部又は一部と関連していない。「組換えウイルス」という用語は、遺伝子改変されたウイルスを包含する。また、異種配列、又は外因性抗原コード配列などの外因性配列（例えば、ネコ科動物抗原コード配列）を含むウイルスは、組換えウイルスである。組換えウイルスという用語及び天然に存在しないウイルスという用語は、交換可能に使用される。
【0031】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＥＨＶ－１、ＥＨＶ－３、ＥＨＶ－４、ＥＨＶ－８及びＥＨＶ－９からなる群より選ばれる。
今までに、ウマヘルペスウイルスの８つの異なる種が同定され、５つはアルファヘルペスウイルス亜科に属し（ＥＨＶ－１、ＥＨＶ－３、ＥＨＶ－４、ＥＨＶ－８及びＥＨＶ－９）、３つはガンマヘルペスウイルス亜科に属する。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＥＨＶ－１である。
「ＥＨＶ－１」という用語は、当業者によく知られているが、ＥＨＶ－１の非限定的な参照配列として、例えば、野生型ＥＨＶ－１株ａｂ４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ６６５７１３．１）、又はＲａｃＨ（Hubert 1996. Journal of Veterinary Medicine, Series B, 43: 1-14.）が挙げられるであろう。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＲａｃＨ又はＲａｃＨ ＳＥである。
ＥＨＶ－１に対する２つの承認された改変された生ワクチン（ＭＬＶ）は、現在、米国及び欧州のそれぞれにおいて利用可能である（Rhinomune○（商標、ベーリンガーインゲルハイム）及びPrevaccinol○（商標、ＭＳＤ）。両ワクチンは、弱毒化のためにブタ上皮細胞で２５６回の継代を行った（Ma et al. 2013. Vet Microbiol. 167（1-2）:123-34）、古典的に弱毒化されたＥＨＶ－１ ＲａｃＨ株を含む。弱毒化の機序は、分子レベルで調べられている。また、ＲａｃＨは、非常に安全なワクチン株であり、なぜならワクチン接種動物での継代により、病原性復帰の可能性があるとしても非常に低いからである。
今までに、ウマヘルペスウイルスの８つの異なる種が同定され、５つはアルファヘルペスウイルス亜科に属し（ＥＨＶ－１、ＥＨＶ－３、ＥＨＶ－４、ＥＨＶ－８及びＥＨＶ－９）、３つはガンマヘルペスウイルス亜科に属する。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＥＨＶ－１である。
「ＥＨＶ－１」という用語は、当業者によく知られているが、ＥＨＶ－１の非限定的な参照配列として、例えば、野生型ＥＨＶ－１株ａｂ４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ６６５７１３．１）、又はＲａｃＨ（Hubert 1996. Journal of Veterinary Medicine, Series B, 43: 1-14.）が挙げられるであろう。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＲａｃＨ又はＲａｃＨ ＳＥである。
ＥＨＶ－１に対する２つの承認された改変された生ワクチン（ＭＬＶ）は、現在、米国及び欧州のそれぞれにおいて利用可能である（Rhinomune○（商標、ベーリンガーインゲルハイム）及びPrevaccinol○（商標、ＭＳＤ）。両ワクチンは、弱毒化のためにブタ上皮細胞で２５６回の継代を行った（Ma et al. 2013. Vet Microbiol. 167（1-2）:123-34）、古典的に弱毒化されたＥＨＶ－１ ＲａｃＨ株を含む。弱毒化の機序は、分子レベルで調べられている。また、ＲａｃＨは、非常に安全なワクチン株であり、なぜならワクチン接種動物での継代により、病原性復帰の可能性があるとしても非常に低いからである。
【0032】
ＯＲＦ７０挿入部位
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）への挿入は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）における部分欠失、トランケーション、置換又は改変により特徴付けられ、ＵＳ５（ＯＲＦ７１）は機能を維持する。
好ましくは、挿入により、ＯＲＦ７０の５’の８０１塩基対の欠失をもたらし、３’末端の残りの４２３ｂｐがインタクトであるが、ｏｒｆ７０遺伝子産物である糖タンパク質Ｇの発現を停止させる。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＯＲＦ７０への挿入は、野生型ＥＨＶ－１株ａｂ４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ６６５７１３．１）のＯＲＦ７０内のおおよそ８０１ｂｐ欠失という欠失により特徴付けられ、それによって、野生型ａｂ４のゲノム配列において欠失した部分は、ヌクレオチド１２７６８１と１２８４８２との間（配列番号：１０）に位置するか、又は配列番号：１０と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列である。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）への挿入は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）における部分欠失、トランケーション、置換又は改変により特徴付けられ、ＵＳ５（ＯＲＦ７１）は機能を維持する。
好ましくは、挿入により、ＯＲＦ７０の５’の８０１塩基対の欠失をもたらし、３’末端の残りの４２３ｂｐがインタクトであるが、ｏｒｆ７０遺伝子産物である糖タンパク質Ｇの発現を停止させる。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＯＲＦ７０への挿入は、野生型ＥＨＶ－１株ａｂ４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ６６５７１３．１）のＯＲＦ７０内のおおよそ８０１ｂｐ欠失という欠失により特徴付けられ、それによって、野生型ａｂ４のゲノム配列において欠失した部分は、ヌクレオチド１２７６８１と１２８４８２との間（配列番号：１０）に位置するか、又は配列番号：１０と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列である。
【0033】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＯＲＦ７０挿入部位は、野生型ＥＨＶ－１株ａｂ４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ６６５７１３．１）のＯＲＦ７０内の理論上の８０１ｂｐ欠失を包含する。欠失した部分は、野生型ａｂ４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ６６５７１３．１）のゲノム配列のヌクレオチド１２７６８１と１２８４８２との間（配列番号：１０）に位置する。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）への挿入は、ＲａｃＨのＯＲＦ７０（ＵＳ４）内のおおよそ８０１ｂｐ部分の欠失（配列番号：１１）、又は配列番号：１１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列の欠失により特徴付けられる。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、及び配列番号：１７からなる群より選ばれる少なくとも１つの隣接領域、並びに前記隣接領域と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）への挿入は、ＲａｃＨのＯＲＦ７０（ＵＳ４）内のおおよそ８０１ｂｐ部分の欠失（配列番号：１１）、又は配列番号：１１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列の欠失により特徴付けられる。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、及び配列番号：１７からなる群より選ばれる少なくとも１つの隣接領域、並びに前記隣接領域と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
【0034】
本発明において、「隣接領域」は、ＦＨＶ抗原コード配列を含む発現カセットの、ＥＨＶ－１ゲノムへの組換えを指示する。これらの隣接領域は、ＥＨＶ－１に天然に存在する。隣接領域は、国際公開２０１８／０５４８３７号公報に既に記載されている。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、（ｉ）配列番号：１２、配列番号：１４、及び配列番号：１６からなる群より選ばれる少なくとも１つのＵＳ４左隣接領域と、（ｉｉ）配列番号：１３、配列番号：１５、及び配列番号：１７からなる群より選ばれる少なくとも１つのＵＳ４右隣接領域とを含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、（ｉ）配列番号：１２、配列番号：１４、及び配列番号：１６からなる群より選ばれる少なくとも１つのＵＳ４左隣接領域と、（ｉｉ）配列番号：１３、配列番号：１５、及び配列番号：１７からなる群より選ばれる少なくとも１つのＵＳ４右隣接領域とを含む。
【0035】
プロモーター配列及び調節配列
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ｇＤコード配列及び／又はｇＢコード配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている。
本明細書において使用する場合、「プロモーター」又は「プロモーター配列」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼの結合を許し、遺伝子の転写を指示するヌクレオチド配列を意味する。典型的には、プロモーターは、遺伝子の転写開始部位に近い、遺伝子の５’非翻訳領域に位置する。転写の開始において機能するプロモーター内の配列エレメントは、多くの場合、コンセンサスヌクレオチド配列により特徴付けられる。プロモーターの例として、細菌、酵母、植物、ウイルス、及び哺乳動物（ウマ、ブタ、ウシ及びヒトが挙げられる）などの動物、鳥類又は昆虫に由来するプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。プロモーターは、誘導性、抑制性、及び／又は構成的であってもよい。誘導性プロモーターは、温度変化などの培養条件での何らかの変化に応じて、そのプロモーターの制御下で、ＤＮＡからの転写レベルの増加を開始する（Ptashne, 2014. The Journal of Biological Chemistry Vol. 289, 9, 5417-5435）。当業者によく知られているプロモーターの例として、例えば、ＳＶ４０ラージＴ、ＨＣＭＶ及びＭＣＭＶ前初期遺伝子１、ヒト伸長因子αプロモーター、バキュロウイルスのポリヘドリンプロモーターが挙げられる。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ｇＤコード配列及び／又はｇＢコード配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている。
本明細書において使用する場合、「プロモーター」又は「プロモーター配列」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼの結合を許し、遺伝子の転写を指示するヌクレオチド配列を意味する。典型的には、プロモーターは、遺伝子の転写開始部位に近い、遺伝子の５’非翻訳領域に位置する。転写の開始において機能するプロモーター内の配列エレメントは、多くの場合、コンセンサスヌクレオチド配列により特徴付けられる。プロモーターの例として、細菌、酵母、植物、ウイルス、及び哺乳動物（ウマ、ブタ、ウシ及びヒトが挙げられる）などの動物、鳥類又は昆虫に由来するプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。プロモーターは、誘導性、抑制性、及び／又は構成的であってもよい。誘導性プロモーターは、温度変化などの培養条件での何らかの変化に応じて、そのプロモーターの制御下で、ＤＮＡからの転写レベルの増加を開始する（Ptashne, 2014. The Journal of Biological Chemistry Vol. 289, 9, 5417-5435）。当業者によく知られているプロモーターの例として、例えば、ＳＶ４０ラージＴ、ＨＣＭＶ及びＭＣＭＶ前初期遺伝子１、ヒト伸長因子αプロモーター、バキュロウイルスのポリヘドリンプロモーターが挙げられる。
【0036】
本明細書において使用する場合、「作動可能に連結されている」という用語は、調節エレメントと核酸配列（例えば、遺伝子又は抗原コード配列）との間の繋がりを説明することに使用されている。典型的には、核酸配列は、１つ以上の調節エレメント（例えば、構成的又は誘導性プロモーター、組織特異性調節エレメント、及びエンハンサーが挙げられるが、これらに限定されない）の制御下に置かれる。核酸配列、遺伝子又はコーディング領域は、調節エレメントに「作動可能に連結されている」か、又は調節エレメントに「作動的に連結されている」か、又は調節エレメントに「作動可能的に関連している」と称され、遺伝子又はコーティング領域が調節エレメントによって制御又は影響されることを意味する。例えば、プロモーターがコーティング配列の転写又は発現に影響を与える場合、プロモーターは、コーティング配列に作動可能に連結されている。連結は、この技術分野において既知の組換え方法、例えば、適切な制限部位若しくは平滑末端でのライゲーションにより、又は融合ＰＣＲ法（fusion PCR methodology）を使用することにより達成される。適切な制限部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドリンカー又はアダプターを、従来の慣行に従って使用することができる。
【0037】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、プロモーター配列は、以下からなる群より選ばれる：ＳＶ４０ラージＴ、ＨＣＭＶ及びＭＣＭＶ前初期遺伝子１、ヒト伸長因子αプロモーター、バキュロウイルスのポリヘドリンプロモーター、ｐ４３０（配列番号：１８）、又は配列番号：１８と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１８の少なくとも３５０個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーター、ｐ４５５（配列番号：１９）、又は配列番号：１９と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１９の少なくとも３５０個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーター、及び切り詰めたＦＨＶ－１ ｇＢプロモーター（配列番号：２４）、又は配列番号：２４と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：２４の少なくとも３００個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーター。
【0038】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、プロモーター配列は、ｐ４３０（配列番号：１８）、又は配列番号：１８と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１８の少なくとも４００個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーターである。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、プロモーター配列は、ｐ４５５（配列番号：１９）、又は配列番号：１９と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１９の少なくとも４００個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーターである。
ＥＨＶの上述した内容のいずれにおいて、前記プロモーター配列は、切り詰めたＦＨＶ－１ ｇＢプロモーター（配列番号：２４）、又は配列番号：２４と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：２４の少なくとも３５０個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーターである。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、１種以上の更なる調節配列、例えば、終結シグナル、ポリアデニル化シグナル、又はＩＲＥＳのような調節エレメントを含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、プロモーター配列は、ｐ４５５（配列番号：１９）、又は配列番号：１９と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１９の少なくとも４００個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーターである。
ＥＨＶの上述した内容のいずれにおいて、前記プロモーター配列は、切り詰めたＦＨＶ－１ ｇＢプロモーター（配列番号：２４）、又は配列番号：２４と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：２４の少なくとも３５０個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーターである。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、１種以上の更なる調節配列、例えば、終結シグナル、ポリアデニル化シグナル、又はＩＲＥＳのような調節エレメントを含む。
【0039】
「終結シグナル」若しくは「ターミネーター」、又は「ポリアデニル化シグナル」若しくは「ポリＡ」、又は「転写終結部位」若しくは「転写終結エレメント」は、真核生物ｍＲＮＡの３’末端の特定部位での切断、及び切断された３’末端への約１００～２００アデニンヌクレオチドの配列（ポリＡテール）の転写後組み込みをもたらし、したがってＲＮＡポリメラーゼに転写を終結させるシグナル配列である。ポリアデニル化シグナルは、切断部位の約１０～３０ヌクレオチド上流に配列ＡＡＴＡＡＡ及び下流に位置する配列を含む。様々なポリアデニル化エレメントが知られており、例えば、ｔｋポリＡ、ＳＶ４０後期及び初期ポリＡ、ＢＧＨポリＡ（例えば、米国特許第５，１２２，４５８号に記載されている）、又はハムスター成長ホルモンポリＡ（国際公開第２０１００１０１０７号公報）が挙げられる。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ポリアデニル化シグナルを含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ポリアデニル化シグナルＢＧＨｐＡを含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ポリアデニル化シグナルを含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ポリアデニル化シグナルＢＧＨｐＡを含む。
【0040】
「配列内リボソーム進入部位」又は「ＩＲＥＳ」は、ＩＲＥＳの５’側遺伝子に依存しない翻訳開始を機能的に促進し、細胞内の単一の転写物から２つのシストロン（オープンリーディングフレーム）に翻訳されることを可能にする配列を記載する。真核細胞の中に、転写物の２番目以降のオープンリーディングフレームに作動可能に連結されているＩＲＥＳを有するポリシストロン性転写物は、その下流のオープンリーディングフレームの逐次翻訳を可能にし、同じ転写物によってコードされる２つ以上のポリペプチドを生成する。ＩＲＥＳは、長さが変動してもよく、様々な由来、例えば、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）、ピコルナウイルス（例えば、口蹄疫ウイルス、ＦＭＤＶ若しくはポリオウイルス（ＰＶ））、又はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）由来のものであってもよい。様々なＩＲＥＳ配列及びそれらのベクター構築での使用が説明されており、この技術分野においてよく知られている。
【0041】
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＩＲＥＳエレメントを含む。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＩＲＥＳエレメントを挟んだ２つのＦＨＶコード配列は、１つの挿入部位に挿入される。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＩＲＥＳ及びｇＢを有するＦＨＶ ｇＤは、ＯＲＦ１／３部位に挿入される。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、Ｆ２Ａペプチドなどの２Ａペプチドを含まない。
「２ａ」又は「２ａペプチド」という用語は、２ａ及び「２ａ様」と記載される短いオリゴペプチド配列を意味し、リボソームスキッピングと定義されるプロセスによるタンパク質間の、翻訳と同時に行う切断（co-translational cleavage）を媒介することができるリンカーとして機能する。このような２ａ及び「２ａ様」配列（ピコルナウイルス科及び他のウイルス、又は細胞性配列由来）は、複数の遺伝子配列を、単一の遺伝子に連結し（concatenate）、同じ細胞内のそれらの共発現を確実にするのに使用することができる。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＩＲＥＳエレメントを挟んだ２つのＦＨＶコード配列は、１つの挿入部位に挿入される。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＩＲＥＳ及びｇＢを有するＦＨＶ ｇＤは、ＯＲＦ１／３部位に挿入される。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＥＨＶは、Ｆ２Ａペプチドなどの２Ａペプチドを含まない。
「２ａ」又は「２ａペプチド」という用語は、２ａ及び「２ａ様」と記載される短いオリゴペプチド配列を意味し、リボソームスキッピングと定義されるプロセスによるタンパク質間の、翻訳と同時に行う切断（co-translational cleavage）を媒介することができるリンカーとして機能する。このような２ａ及び「２ａ様」配列（ピコルナウイルス科及び他のウイルス、又は細胞性配列由来）は、複数の遺伝子配列を、単一の遺伝子に連結し（concatenate）、同じ細胞内のそれらの共発現を確実にするのに使用することができる。
【0042】
特定の構築物
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片は、ＯＲＦ１／３に挿入されており、ＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片は、ＯＲＦ７０に挿入されている。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、
ｉ）ＦＨＶ ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含み、ＯＲＦ１／３に挿入されており、及び
ｉｉ）ＦＨＶ ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含み、ＯＲＦ７０に挿入されている。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片は、ＯＲＦ１／３に挿入されており、ＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片は、ＯＲＦ７０に挿入されている。
本発明のＥＨＶの別の特定の観点において、
ｉ）ＦＨＶ ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含み、ＯＲＦ１／３に挿入されており、及び
ｉｉ）ＦＨＶ ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含み、ＯＲＦ７０に挿入されている。
【0043】
免疫原性組成物又はワクチン
本発明は、本明細書に記載のＥＨＶを含む免疫原性組成物を提供する。
「免疫原性組成物」という用語は、少なくとも１種の抗原を含み、投与された免疫原性組成物に対して、宿主内の免疫学的応答を誘発する組成物を指す。このような免疫学的応答は、本発明の免疫原性組成物に対する細胞性免疫応答及び／又は抗体媒介性免疫応答であり得る。好ましくは、免疫原性組成物は、免疫応答を誘導し、より好ましくはＦＨＶ感染症の１種以上の臨床徴候に対する防御免疫を付与する。宿主はまた、「対象」と記載される。好ましくは、本明細書に記載又は言及される任意の宿主又は対象は、ネコ科動物又はネコである。
通常、「免疫学的応答」は、以下の１つ以上の作用が挙げられるが、これらに限定されない：本発明の免疫原性組成物に含まれる１種以上の抗原に対して特異的である、抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、及び／若しくは細胞傷害性Ｔ細胞、及び／若しくはガンマ・デルタＴ細胞の産生又は活性化。好ましくは、宿主は、防御的な免疫学的応答又は治療的な応答を示すであろう。
「防御的な（protective）免疫学的応答」又は「防御（protective）免疫」は、感染した宿主が通常示す臨床徴候の軽減若しくは欠如のどちらか、より速い回復期間、及び／又は感染した宿主の組織、体液若しくは排泄物内の病原体力価の減少又は感染力を有する期間の短縮によって示されるであろう。
本発明は、本明細書に記載のＥＨＶを含む免疫原性組成物を提供する。
「免疫原性組成物」という用語は、少なくとも１種の抗原を含み、投与された免疫原性組成物に対して、宿主内の免疫学的応答を誘発する組成物を指す。このような免疫学的応答は、本発明の免疫原性組成物に対する細胞性免疫応答及び／又は抗体媒介性免疫応答であり得る。好ましくは、免疫原性組成物は、免疫応答を誘導し、より好ましくはＦＨＶ感染症の１種以上の臨床徴候に対する防御免疫を付与する。宿主はまた、「対象」と記載される。好ましくは、本明細書に記載又は言及される任意の宿主又は対象は、ネコ科動物又はネコである。
通常、「免疫学的応答」は、以下の１つ以上の作用が挙げられるが、これらに限定されない：本発明の免疫原性組成物に含まれる１種以上の抗原に対して特異的である、抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、及び／若しくは細胞傷害性Ｔ細胞、及び／若しくはガンマ・デルタＴ細胞の産生又は活性化。好ましくは、宿主は、防御的な免疫学的応答又は治療的な応答を示すであろう。
「防御的な（protective）免疫学的応答」又は「防御（protective）免疫」は、感染した宿主が通常示す臨床徴候の軽減若しくは欠如のどちらか、より速い回復期間、及び／又は感染した宿主の組織、体液若しくは排泄物内の病原体力価の減少又は感染力を有する期間の短縮によって示されるであろう。
【0044】
新たな感染に対する抵抗力が強化される、及び／又は疾患の臨床重症度が軽減されるような、宿主が防御的な免疫学的応答を表す場合において、免疫原性組成物は、「ワクチン」と説明される。
また、本発明は、本明細書に記載のＥＨＶを含むワクチンを提供する。
さらに、本発明は、本明細書に記載のＥＨＶを含むＤＩＶＡワクチンを提供する。
「ＤＩＶＡ（differentiation between infected and vaccinated animals（感染した動物とワクチン接種を受けた動物との間の区別））」という用語は、自然に感染した動物とワクチン接種を受けた動物とを区別するために使用できるワクチンを指す。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、二価性である。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、多価性である。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、医薬上許容される担体を更に含む。
「医薬上許容される担体」という用語は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、安定化剤、希釈剤、保存剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、吸着遅延剤、アジュバント、免疫賦活剤、並びにこれらの組み合わせを含む。
また、本発明は、本明細書に記載のＥＨＶを含むワクチンを提供する。
さらに、本発明は、本明細書に記載のＥＨＶを含むＤＩＶＡワクチンを提供する。
「ＤＩＶＡ（differentiation between infected and vaccinated animals（感染した動物とワクチン接種を受けた動物との間の区別））」という用語は、自然に感染した動物とワクチン接種を受けた動物とを区別するために使用できるワクチンを指す。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、二価性である。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、多価性である。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、医薬上許容される担体を更に含む。
「医薬上許容される担体」という用語は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、安定化剤、希釈剤、保存剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、吸着遅延剤、アジュバント、免疫賦活剤、並びにこれらの組み合わせを含む。
【0045】
「希釈剤」としては、水、生理食塩水、ブドウ糖（ｄｅｘｔｒｏｓｅ）、エタノール、グリセロール等を挙げることができる。等張剤としては、とりわけ塩化ナトリウム、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトール、及びラクトースなどを挙げることができる。安定化剤としては、中でも、アルブミン、及びエチレンジアミン四酢酸のアルカリ塩が挙げられる。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、前記医薬上許容される担体は、注射用水（aqua ad injectionem）、細胞培養培地又は再懸濁緩衝液である。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、前記再懸濁緩衝液は、生理的な溶液又はリン酸緩衝食塩水である。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＥＨＶの１ｘ１０4～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50、好ましくは１ｘ１０4～１ｘ１０8のＴＣＩＤ50、さらにより好ましくは１ｘ１０4～１ｘ１０7のＴＣＩＤ50を含む。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、前記医薬上許容される担体は、注射用水（aqua ad injectionem）、細胞培養培地又は再懸濁緩衝液である。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、前記再懸濁緩衝液は、生理的な溶液又はリン酸緩衝食塩水である。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＥＨＶの１ｘ１０4～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50、好ましくは１ｘ１０4～１ｘ１０8のＴＣＩＤ50、さらにより好ましくは１ｘ１０4～１ｘ１０7のＴＣＩＤ50を含む。
【0046】
キット
組成物は、必要に応じて、有効成分を含む剤形の１単位以上を含み得る、パック又はディスペンサ装置の中に存在してもよい。パックは、例えば、金属又はプラスチックホイルから構成され得る（例えば、ブリスターパック）。パック又はディスペンサ装置に、投与、好ましくは動物への投与、特にネコ科動物（好ましくはネコ）への投与についての指示書を添付してもよい。このような容器に、医薬品又は生物学的製剤の製造、使用又は販売を規制している政府機関が定めた形式の注意事項を添付してもよく、該注意事項は、動物への投与についての製造、使用又は販売に関する政府機関による承認を反映している。
さらに、本発明は、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを含むキットを提供する。
本明細書のキットの別の特定の観点において、キットは、ネコ科動物の疾患の治療及び／又は予防についての指示書を更に含む。
本明細書のキットの別の特定の観点において、キットは、ＦＨＶの治療及び／又は予防についての指示書を更に含む。
本明細書のキットの別の特定の観点において、キットは、ワクチンを動物又はネコ科動物に投与できるディスペンサを更に含む。
組成物は、必要に応じて、有効成分を含む剤形の１単位以上を含み得る、パック又はディスペンサ装置の中に存在してもよい。パックは、例えば、金属又はプラスチックホイルから構成され得る（例えば、ブリスターパック）。パック又はディスペンサ装置に、投与、好ましくは動物への投与、特にネコ科動物（好ましくはネコ）への投与についての指示書を添付してもよい。このような容器に、医薬品又は生物学的製剤の製造、使用又は販売を規制している政府機関が定めた形式の注意事項を添付してもよく、該注意事項は、動物への投与についての製造、使用又は販売に関する政府機関による承認を反映している。
さらに、本発明は、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを含むキットを提供する。
本明細書のキットの別の特定の観点において、キットは、ネコ科動物の疾患の治療及び／又は予防についての指示書を更に含む。
本明細書のキットの別の特定の観点において、キットは、ＦＨＶの治療及び／又は予防についての指示書を更に含む。
本明細書のキットの別の特定の観点において、キットは、ワクチンを動物又はネコ科動物に投与できるディスペンサを更に含む。
【0047】
治療方法
本発明は、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、免疫方法を提供する。
本発明は、ネコ科動物の免疫方法であって、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む前記方法を提供する。
好ましくは、免疫化は、集団内の特定のネコヘルペスウイルス感染症の発生率の減少をもたらすか、又は特定のネコヘルペスウイルス感染症に起因するか又は関連する臨床徴候の重症度の低減をもたらす。
また、本明細書で提供される免疫原性組成物によるネコ科動物の免疫化は、ネコヘルペスウイルス感染によるネコ科動物の感染症の予防をもたらす。さらにより好ましくは、免疫化は、ネコヘルペスウイルス感染症に対して、効果的で、持続性の免疫学的応答をもたらす。前記期間は、２か月より長く、好ましくは３か月より長く、より好ましくは４か月より長く、より好ましくは５か月より長く、より好ましくは６か月より長く持続すると理解されるであろう。免疫化は、免疫されたすべての動物に効果があるとは限らないことを理解されたい。しかしながら、動物の群の大部分が効果的に免疫された期間が必要である。
本発明は、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、免疫方法を提供する。
本発明は、ネコ科動物の免疫方法であって、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む前記方法を提供する。
好ましくは、免疫化は、集団内の特定のネコヘルペスウイルス感染症の発生率の減少をもたらすか、又は特定のネコヘルペスウイルス感染症に起因するか又は関連する臨床徴候の重症度の低減をもたらす。
また、本明細書で提供される免疫原性組成物によるネコ科動物の免疫化は、ネコヘルペスウイルス感染によるネコ科動物の感染症の予防をもたらす。さらにより好ましくは、免疫化は、ネコヘルペスウイルス感染症に対して、効果的で、持続性の免疫学的応答をもたらす。前記期間は、２か月より長く、好ましくは３か月より長く、より好ましくは４か月より長く、より好ましくは５か月より長く、より好ましくは６か月より長く持続すると理解されるであろう。免疫化は、免疫されたすべての動物に効果があるとは限らないことを理解されたい。しかしながら、動物の群の大部分が効果的に免疫された期間が必要である。
【0048】
好ましくは、通常、すなわち、免疫されていない場合において、ネコ科動物の群は、通常ネコヘルペスウイルス感染症に起因するか又は関連する臨床徴候を発症すると想定される。ネコ科動物の群が効果的に免疫されたか否かは、当業者であれば困難なく決定することができる。好ましくは、動物の所定の群の少なくとも３３％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％において、免疫されていないか、又は本発明より前に利用可能な免疫原性組成物で免疫されたが、その後特定のネコヘルペスウイルスに感染したネコ科動物と比べて、臨床徴候の、発生率又は重症度の少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、なおさらより好ましくは少なくとも３０％、さらにより好ましくは少なくとも４０％、なおさらより好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、なおさらより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、なおさらより好ましくは少なくとも９０％、なおさらより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％が低減した場合、免疫化は有効である。
【0049】
本発明は、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を提供する。
本発明は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を提供する。
有利なことには、本発明により提供される実験データは、本明細書で提供される免疫原性組成物をネコ科動物に投与したときの、前記免疫原性組成物の安全性及び効力を開示する。実際、本明細書で提供される免疫原性組成物によるワクチン接種を受けたネコ科動物は、ワクチン接種を受けていないネコ科動物と比べて、チャレンジウイルス感染後、鼻炎、眼脂又は結膜炎の軽減など、疾患に伴う臨床徴候が軽減した。
好ましくは、処置されていない（免疫されていない）が、その後特定のネコヘルペスウイルスに感染したネコ科動物と比べて、臨床徴候は、少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、なおさらより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、なおさらより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％減少した。
本発明は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を提供する。
有利なことには、本発明により提供される実験データは、本明細書で提供される免疫原性組成物をネコ科動物に投与したときの、前記免疫原性組成物の安全性及び効力を開示する。実際、本明細書で提供される免疫原性組成物によるワクチン接種を受けたネコ科動物は、ワクチン接種を受けていないネコ科動物と比べて、チャレンジウイルス感染後、鼻炎、眼脂又は結膜炎の軽減など、疾患に伴う臨床徴候が軽減した。
好ましくは、処置されていない（免疫されていない）が、その後特定のネコヘルペスウイルスに感染したネコ科動物と比べて、臨床徴候は、少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、なおさらより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、なおさらより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％減少した。
【0050】
「治療及び／又は予防」という用語は、群内の特定のネコヘルペスウイルス感染症の発生率の低下、又は特定のネコヘルペスウイルス感染症に起因するか又は関連する臨床徴候の重症度の低下を指す。したがって、「治療及び／又は予防」という用語はまた、群内の特定のネコヘルペスウイルスに感染した動物の数の減少（＝特定のネコヘルペスウイルス感染症の発生率の低下）を指すか、又は本明細書で提供される免疫原性組成物を受けていない動物の群と比べて、本明細書に記載の免疫原性組成物の有効量を受けた動物の群における、ＦＨＶ感染症に通常関連するか又は起因とする臨床徴候の重症度の低下を指す。
「治療及び／又は予防」は、一般に、有効量の本発明の免疫原性組成物の投与を必要とする動物若しくは動物の群、又はこのような治療／予防から利益を受けることができる動物若しくは動物の群への、有効量の本発明の免疫原性組成物の投与を含む。「治療」という用語は、群内のある動物又は少なくともいくつかの動物が、一旦このようなＦＨＶに既に感染した場合（前記動物は、前記ＦＨＶ感染症に起因するか又は関連するくつかの臨床徴候が既に示している）の、有効量の免疫原性組成物の投与を指す。「予防」という用語は、ＦＨＶによるあらゆる感染の前の動物への投与、又は少なくともこの動物が、若しくは群内のどの動物も、前記ＦＨＶに起因するか又は関連するいかなる臨床徴候が出ていない場合の投与を指す。「予防」及び「予防する」という用語は、本願において交換可能に使用される。
「治療及び／又は予防」は、一般に、有効量の本発明の免疫原性組成物の投与を必要とする動物若しくは動物の群、又はこのような治療／予防から利益を受けることができる動物若しくは動物の群への、有効量の本発明の免疫原性組成物の投与を含む。「治療」という用語は、群内のある動物又は少なくともいくつかの動物が、一旦このようなＦＨＶに既に感染した場合（前記動物は、前記ＦＨＶ感染症に起因するか又は関連するくつかの臨床徴候が既に示している）の、有効量の免疫原性組成物の投与を指す。「予防」という用語は、ＦＨＶによるあらゆる感染の前の動物への投与、又は少なくともこの動物が、若しくは群内のどの動物も、前記ＦＨＶに起因するか又は関連するいかなる臨床徴候が出ていない場合の投与を指す。「予防」及び「予防する」という用語は、本願において交換可能に使用される。
【0051】
本明細書において使用される「臨床徴候」という用語は、ＦＨＶに感染した動物の徴候を指す。このような臨床徴候の例として、呼吸促迫、鼻炎、微熱、うつ状態及び食欲不振が挙げられるが、これらに限定されない。しかしながら、臨床徴候は、生きている動物から直接に観察可能な臨床徴候も挙げられるが、これらに限定されない。生きている動物から直接に観察可能な臨床徴候の例としては、鼻汁と眼脂、結膜炎、嗜眠、咳、喘鳴、動悸（thumping）、体温上昇、体重減少、脱水症、跛行、るい痩（wasting）、皮膚の蒼白、発育不全（unthriftiness）等が挙げられる。
本明細書において使用する場合、「有効量」という用語は、組成物の文脈では、動物における感染症若しくは付随する疾患の発生率を低下させるか、又はその重症度を低減させる、免疫応答を誘導できる免疫原性組成物の用量を意味する。このような有効量によれば、集団内の特定のネコヘルペスウイルス感染症の発生率を低減できるか、又は特定のネコヘルペスウイルス感染症の臨床徴候の重症度を低下できる。特に、有効量は、用量当たりコロニー形成単位（ＣＦＵ）を指す。或いは、療法の文脈では、「有効量」という用語は、疾患若しくは障害、若しくは１種以上のその症状の重症度又は持続期間を軽減若しくは改善させるために、疾患若しくは障害の進行を防ぐために、疾患若しくは障害の退行を引き起こすために、疾患若しくは障害に伴う１種以上の症状の再発、発展、発症、若しくは進行を防ぐために、又は別の療法若しくは治療剤による予防若しくは治療を増強若しくは改善させるために十分である療法の用量を指す。
本明細書において使用する場合、「有効量」という用語は、組成物の文脈では、動物における感染症若しくは付随する疾患の発生率を低下させるか、又はその重症度を低減させる、免疫応答を誘導できる免疫原性組成物の用量を意味する。このような有効量によれば、集団内の特定のネコヘルペスウイルス感染症の発生率を低減できるか、又は特定のネコヘルペスウイルス感染症の臨床徴候の重症度を低下できる。特に、有効量は、用量当たりコロニー形成単位（ＣＦＵ）を指す。或いは、療法の文脈では、「有効量」という用語は、疾患若しくは障害、若しくは１種以上のその症状の重症度又は持続期間を軽減若しくは改善させるために、疾患若しくは障害の進行を防ぐために、疾患若しくは障害の退行を引き起こすために、疾患若しくは障害に伴う１種以上の症状の再発、発展、発症、若しくは進行を防ぐために、又は別の療法若しくは治療剤による予防若しくは治療を増強若しくは改善させるために十分である療法の用量を指す。
【0052】
本発明は、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を提供する。
本発明は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法であって、本明細書に記載の治療上有効量の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を提供する。
「呼吸器疾患」という用語は、呼吸器系の感染症を指し、眼脂と鼻汁、結膜炎、鼻炎、くしゃみ、咳及び発熱などの臨床徴候を包含する。
好ましくは、未免疫対照群のネコ科動物と同種の、その後特定のネコヘルペスウイルスで感染したネコ科動物と比べて、呼吸器疾患は、少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、なおさらより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、なおさらより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％減少する。
本発明は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法であって、本明細書に記載の治療上有効量の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を提供する。
「呼吸器疾患」という用語は、呼吸器系の感染症を指し、眼脂と鼻汁、結膜炎、鼻炎、くしゃみ、咳及び発熱などの臨床徴候を包含する。
好ましくは、未免疫対照群のネコ科動物と同種の、その後特定のネコヘルペスウイルスで感染したネコ科動物と比べて、呼吸器疾患は、少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、なおさらより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、なおさらより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％減少する。
【0053】
本発明は、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法であって、本明細書に記載の治療上有効量の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を提供する。
本発明は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法であって、本明細書に記載の治療上有効量の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を提供する。
「排出」という用語は、鼻汁又は眼脂などの分泌物を指し、また、咳又はくしゃみによって発生するエアロゾルを指す。したがって、排出は、鼻若しくは目を綿棒でウイルス力価を、又は肺内のウイルス力価を検査することによって決定することができる。「排出」という用語は、感受性動物（すなわち、歩哨動物）へのウイルスの移行を更に包含する。ウイルス排出をどの方法で測定するかについは、当業者の通常知識である。
「減少（させる、した）」という用語は、処置されていない（免疫されていない）が、その後特定のネコヘルペスウイルスに感染したネコ科動物と比べて、排出が、少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、なおさらより好ましくは少なくとも３０％、さらにより好ましくは少なくとも４０％、なおさらより好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、なおさらより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、なおさらより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％減少したことを意味する。
本発明は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法であって、本明細書に記載の治療上有効量の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を提供する。
「排出」という用語は、鼻汁又は眼脂などの分泌物を指し、また、咳又はくしゃみによって発生するエアロゾルを指す。したがって、排出は、鼻若しくは目を綿棒でウイルス力価を、又は肺内のウイルス力価を検査することによって決定することができる。「排出」という用語は、感受性動物（すなわち、歩哨動物）へのウイルスの移行を更に包含する。ウイルス排出をどの方法で測定するかについは、当業者の通常知識である。
「減少（させる、した）」という用語は、処置されていない（免疫されていない）が、その後特定のネコヘルペスウイルスに感染したネコ科動物と比べて、排出が、少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、なおさらより好ましくは少なくとも３０％、さらにより好ましくは少なくとも４０％、なおさらより好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、なおさらより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、なおさらより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％減少したことを意味する。
【0054】
ＥＰ型式
本発明は、ネコ科動物を免疫するための方法に使用するための本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供する。
本発明は、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法に使用するための本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供する。
本発明は、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法に使用するための本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供する。
本発明は、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法に使用するための本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供する。
本発明は、ネコ科動物を免疫するための方法に使用するための本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供する。
本発明は、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法に使用するための本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供する。
本発明は、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法に使用するための本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供する。
本発明は、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法に使用するための本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供する。
【0055】
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、ネコ科動物は、チーター、ピューマ、ジャガー、ヒョウ、ライオン、オオヤマネコ、トラ、ネコ及びイエネコからなる群より選ばれる。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、ネコ科動物は、ネコ又はイエネコである。
しかしながら、免疫原性組成物は、ネコ科動物に２回以上投与することができ、１回目の投与量は、２回目（ブースター）の投与量の投与前に投与する。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、２回以上投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、２回投与される。
実施例に示すように、本明細書で提供される免疫原性組成物は、２回投与後、効果があることが証明されている。
１回目及び２回目の投与計画に加えて、代わりの実施形態は、その後の投与量を更に含む。例えば、この観点において、３回目、４回目又は５回目の投与量が投与されてもよい。好ましくは、その後の３回目、４回目又は５回目の投与計画は、１回目の投与量と同量で投与され、これらの投薬間の区間（time frame）は、後述する１回目と２回目の投薬間の時間と一致する。本発明のある観点において、ネコ科動物は、ネコである。
好ましくは、投与量は、約０．２５ｍＬ～２．５ｍＬ、より好ましくは約０．２５ｍＬ～１．５ｍＬ、さらにより好ましくは約０．５ｍＬ～１ｍＬの総容量を有する。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、ネコ科動物は、ネコ又はイエネコである。
しかしながら、免疫原性組成物は、ネコ科動物に２回以上投与することができ、１回目の投与量は、２回目（ブースター）の投与量の投与前に投与する。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、２回以上投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、２回投与される。
実施例に示すように、本明細書で提供される免疫原性組成物は、２回投与後、効果があることが証明されている。
１回目及び２回目の投与計画に加えて、代わりの実施形態は、その後の投与量を更に含む。例えば、この観点において、３回目、４回目又は５回目の投与量が投与されてもよい。好ましくは、その後の３回目、４回目又は５回目の投与計画は、１回目の投与量と同量で投与され、これらの投薬間の区間（time frame）は、後述する１回目と２回目の投薬間の時間と一致する。本発明のある観点において、ネコ科動物は、ネコである。
好ましくは、投与量は、約０．２５ｍＬ～２．５ｍＬ、より好ましくは約０．２５ｍＬ～１．５ｍＬ、さらにより好ましくは約０．５ｍＬ～１ｍＬの総容量を有する。
【0056】
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、４、５又は６週齢以上のネコ科動物に投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、６週齢以上のネコ科動物に投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、４週齢～２５週齢内のネコ科動物に初めて投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、６週齢～２０週齢内のネコ科動物に初めて投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１回目の投与量は、４、５又は６週齢以上のネコ科動物に投与され、２回目の投与量は、２～８週間後に投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１回目の投与量は、６週齢以上のネコ科動物に投与され、２回目の投与量は、２～８週間後に投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、２回目（ブースター）のワクチン接種後、更なるワクチン接種が、年１回で行われる（年１回のブースター接種）。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、６週齢以上のネコ科動物に投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、４週齢～２５週齢内のネコ科動物に初めて投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、６週齢～２０週齢内のネコ科動物に初めて投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１回目の投与量は、４、５又は６週齢以上のネコ科動物に投与され、２回目の投与量は、２～８週間後に投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１回目の投与量は、６週齢以上のネコ科動物に投与され、２回目の投与量は、２～８週間後に投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、２回目（ブースター）のワクチン接種後、更なるワクチン接種が、年１回で行われる（年１回のブースター接種）。
【0057】
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、好ましくは局所投与又は全身投与する。従来使用されている適切な投与経路として、経口投与又は非経口投与、例えば、鼻腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、皮下投与、及び吸入が挙げられる。しかしながら、化合物の性質及び作用機序に応じて、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、他の投与経路により投与されてもよい。しかしながら、最も好ましいのは、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンが、筋肉内、皮下又は鼻腔内で投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、筋肉内、皮内、皮下、経口又は経鼻で投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、１ｍＬ当たり１ｘ１０4～１ｘ１０10のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、１ｍＬ当たり１ｘ１０6～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１投与量は、１ｍＬ当たり１ｘ１０4～１ｘ１０10のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１投与量は、１ｍＬ当たり１ｘ１０6～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、筋肉内、皮内、皮下、経口又は経鼻で投与される。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、１ｍＬ当たり１ｘ１０4～１ｘ１０10のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、１ｍＬ当たり１ｘ１０6～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１投与量は、１ｍＬ当たり１ｘ１０4～１ｘ１０10のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１投与量は、１ｍＬ当たり１ｘ１０6～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
【0058】
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、前記方法により、ネコ科動物と同種の未免疫対照群と比べて、体重減少の低下、肺内のウイルス量の低下、ウイルス血症の減少、肺病変の減少、呼吸器病変及び肺胞上皮病変の減少、眼脂の減少、結膜炎の減少、鼻炎の減少、ウイルス排出の減少及び／又は短縮、直腸温の減少、臨床症状（特に、呼吸器の症状）の減少、抗ＦＨＶウイルス抗体の（中和）誘導の増大、ＦＨＶに対するＴ細胞への刺激の増大、ＦＨＶウイルスに対するＢ細胞への刺激の増大、及び肺内の炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ１β）の減少、又はこれらの組み合わせからなる群より選ばれる有効性評価基準（efficacy parameter）の改善をもたらす。
【0059】
「ウイルス量（virus load）」という用語は、当業者によく知られている。「ウイルス量」という用語は、本明細書における「ウイルス力価」という用語と交換可能に使用される。ウイルス量又はウイルス力価は、活動性ウイルス感染症の重症度の尺度であり、当業者に既知の方法で判定することができる。判定は、ウイルスタンパク質の検出（例えば、ウイルスタンパク質と結合する抗体により）及び更なる検出、又は、代わりに、ＲＴ－ＰＣＲなどの増幅方法によるウイルス核酸の検出に基づくことができる。核酸の増幅方法による、血漿中のウイルスＲＮＡと関連するビリオンのモニタリングは、レトロウイルス性疾患の状態及び進行の評価、及び予防的又は治療的介入の有効性の評価のために、広く使用されているパラメーターである。例示的に、ウイルス量又はウイルス力価は、関与する体液中のウイルスの生存量（例えば、血漿１ミリリットル当たりＲＮＡのコピー数）を推定することにより算出することができる。好ましくは、「ウイルス量」又は「ウイルス力価」という用語は、ウイルス調製物の容積当たりの感染単位の尺度である。ウイルス力価は、生物学的手順のエンドポイントであり、並行して行った特定の割合の試験が効果を示す希釈度として定義される（Reed and Muench, 1938）。具体的には、１ミリリットル当たりの５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ５０／ｍＬ）は、その希釈度で並行して接種した細胞培養物の数の５０％が感染するウイルス調製物の希釈度を示す。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＦＨＶによる同種及び／又は異種チャレンジから保護する。
実験は、ＦＨＶ抗原を持つＥＨＶワクチン（ワクチン株Ｃ－２７）が、異種ＥＨＶワクチン（ＳＧＥ株、ＦＶＲ ９６－１３と命名）から保護することを示している。
本発明の方法又は使用の別の特定の観点において、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＦＨＶによる同種及び／又は異種チャレンジから保護する。
実験は、ＦＨＶ抗原を持つＥＨＶワクチン（ワクチン株Ｃ－２７）が、異種ＥＨＶワクチン（ＳＧＥ株、ＦＶＲ ９６－１３と命名）から保護することを示している。
【0060】
ＥＨＶの全体像
本発明は、ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片、及びＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片を含むＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を提供する。
本発明は、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を提供し、前記ＥＨＶが、
ｉ）ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列であり、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列と、
ｉｉ）ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列であり、配列番号：５で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む。
本発明は、ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片、及びＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片を含むＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を提供する。
本発明は、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を提供し、前記ＥＨＶが、
ｉ）ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列であり、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列と、
ｉｉ）ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列であり、配列番号：５で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む。
【0061】
本発明は、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）であって、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有する配列をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列と、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性配列を有する配列をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む、前記ＥＨＶを提供する。
本発明は、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を含む免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供し、前記ＥＨＶが、
ｉ）ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列であり、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列と、
ｉｉ）ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列であり、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む。
本発明は、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を含む免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを提供し、前記ＥＨＶが、
ｉ）ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列であり、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列と、
ｉｉ）ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列であり、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む。
【0062】
本発明は、治療用の、本明細書に記載のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に提供する。
本発明は、免疫原又はワクチンとしての使用のための、本明細書に記載のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に提供する。
本発明は、医薬としての使用のための、本明細書に記載のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に提供する。
本発明は、医薬の製造のための、本明細書に記載のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に提供する。
本発明は、ネコ科動物のＦＨＶ感染症の治療及び／又は予防のための、本明細書に記載のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの使用を更に提供する。
本発明は、免疫原又はワクチンとしての使用のための、本明細書に記載のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に提供する。
本発明は、医薬としての使用のための、本明細書に記載のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に提供する。
本発明は、医薬の製造のための、本明細書に記載のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に提供する。
本発明は、ネコ科動物のＦＨＶ感染症の治療及び／又は予防のための、本明細書に記載のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの使用を更に提供する。
【0063】
製造方法
本発明は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を調製する方法を更に提供し、前記方法が、
ｉ）ＥＨＶを提供することと、
ｉｉ）ＦＨＶ抗原コード配列を提供することと、
ｉｉｉ）工程ｉｉ）から得られた前記ＦＨＶ抗原コード配列を、工程ｉ）のＥＨＶのＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位に挿入することと、
ｉｖ）ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ抗原コード配列を含む、前記ＥＨＶを得ることとを含む。
本発明は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を調製する方法を更に提供し、前記方法が、
ｉ）ＥＨＶを提供することと、
ｉｉ）ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列であって、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を提供することと、
ｉｉｉ）工程ｉｉ）から得られた前記ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を、工程ｉ）のＥＨＶのＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位に挿入することと、
ｉｖ）ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を含む前記ＥＨＶを得ることとを含む。
本発明は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を調製する方法を更に提供し、前記方法が、
ｉ）ＥＨＶを提供することと、
ｉｉ）ＦＨＶ抗原コード配列を提供することと、
ｉｉｉ）工程ｉｉ）から得られた前記ＦＨＶ抗原コード配列を、工程ｉ）のＥＨＶのＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位に挿入することと、
ｉｖ）ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ抗原コード配列を含む、前記ＥＨＶを得ることとを含む。
本発明は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を調製する方法を更に提供し、前記方法が、
ｉ）ＥＨＶを提供することと、
ｉｉ）ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列であって、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を提供することと、
ｉｉｉ）工程ｉｉ）から得られた前記ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を、工程ｉ）のＥＨＶのＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位に挿入することと、
ｉｖ）ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を含む前記ＥＨＶを得ることとを含む。
【0064】
「得る」という用語は、ＦＨＶ抗原コード配列を有する前記ＥＨＶの収集、単離、精製並びに／又は製剤化（例えば、仕上げ、不活化及び／若しくはブレンド）を含む。
「収集」という用語は、形質移入又は感染させた細胞、細菌又は細胞株から、ＦＨＶ抗原コード配列を有する前記ＥＨＶを集めるか、又は回収することを指す。この技術分野において知られている任意の従来方法、例えば、任意の分離方法を使用することができる。この技術分野においてよく知られている方法は、遠心分離又はろ過（例えば、ある一定の孔径を有する半透膜を使用するろ過）を含む。
「単離」という用語は、ＦＨＶ抗原コード配列を有する前記ＥＨＶの単離工程を含む。形質移入又は感染された細胞、細菌又は細胞株からの単離方法は、当業者に知られている。これらの方法は、物理的及び／又は化学的方法を含み、凍結融解サイクル、超音波処理等が挙げられるが、これらに限定されない。
「収集」という用語は、形質移入又は感染させた細胞、細菌又は細胞株から、ＦＨＶ抗原コード配列を有する前記ＥＨＶを集めるか、又は回収することを指す。この技術分野において知られている任意の従来方法、例えば、任意の分離方法を使用することができる。この技術分野においてよく知られている方法は、遠心分離又はろ過（例えば、ある一定の孔径を有する半透膜を使用するろ過）を含む。
「単離」という用語は、ＦＨＶ抗原コード配列を有する前記ＥＨＶの単離工程を含む。形質移入又は感染された細胞、細菌又は細胞株からの単離方法は、当業者に知られている。これらの方法は、物理的及び／又は化学的方法を含み、凍結融解サイクル、超音波処理等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0065】
ＦＨＶ抗原コード配列を有する前記ＥＨＶを単離物から「精製」する方法は、当業者に知られており、例えば、Protein purification methods - a practical approach（E.L.V. Harris and S. Angel, eds., IRL Press at Oxford University Press）に記載の方法による。これらの方法は、遠心分離及び／又はろ過、沈殿、サイズ排除（ゲルろ過）クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、金属キレートクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、共有結合型クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー等による分離が挙げられるが、これらに限定されない。ベクターは、精製された純粋な形態で、或いは他の細胞物質若しくは培地等を含まないか、又は実質的に含まずに得ることができる。前記単離及び／又は精製の後、抗原は、汚染のない絶対的に純粋な形態まで、少なくとも８０％、好ましくは８０％～９０％、より好ましくは９０％～９７％、最も好ましくは９７％以上の純度を示す。
更なる観点に基づいて、本明細書において使用される「得る」はまた、最終製剤化プロセスの一部としての更なる仕上げ工程、例えば、緩衝剤の添加工程、不活化工程、中和工程等を含んでもよい。
本発明の、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ抗原コード配列を含むＥＨＶを調製する方法の別の特定の観点において、ＥＨＶは、弱毒化されている。
本発明の、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ抗原コード配列を含むＥＨＶを調製する方法の別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＲａｃＨ又はＲａｃＨ ＳＥである。
更なる観点に基づいて、本明細書において使用される「得る」はまた、最終製剤化プロセスの一部としての更なる仕上げ工程、例えば、緩衝剤の添加工程、不活化工程、中和工程等を含んでもよい。
本発明の、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ抗原コード配列を含むＥＨＶを調製する方法の別の特定の観点において、ＥＨＶは、弱毒化されている。
本発明の、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ抗原コード配列を含むＥＨＶを調製する方法の別の特定の観点において、ＥＨＶは、ＲａｃＨ又はＲａｃＨ ＳＥである。
【0066】
ＤＩＶＡ
ＤＩＶＡワクチンは、迅速かつ効果的な投与を容易にし、（疾患に関連する）フィールドウイルスに感染した動物とワクチン接種を受けた動物との間の識別を可能にする。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、いかなるＦＨＶ ｇＧ抗原コード配列を含まない。
これに対して、動物が、野生型ネコヘルペスウイルスに感染した後、又は改変された生ワクチンを受けた後、若しくは全ウイルス不活化ワクチンを受けた後、感染した動物／ワクチン接種を受けた動物は、ＦＨＶ ｇＧに対する特異的抗体を産生する／有する。しかしながら、本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物では、このようなＦＨＶ ｇＧに対する特異的抗体を検出することができない。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＥＨＶ、並びにＥＨＶ ｇＤコード配列及びＥＨＶ ｇＣコード配列をそれぞれ含む。そのため、本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物では、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣに対する抗体などのＥＨＶに対する特異的抗体を検出することができる。
これに対して、動物が、野生型ネコヘルペスウイルスに感染した後、又は改変された生ワクチンを受けた後、若しくは全ウイルス不活化ワクチンを受けた後、動物は、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣに対する抗体などのＥＨＶ特異的抗体に対して陰性であろう。一方、本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物では、このようなＥＨＶ ｇＤ及びＥＨＶ ｇＣに対する特異的抗体を検出することができる。
ＤＩＶＡワクチンは、迅速かつ効果的な投与を容易にし、（疾患に関連する）フィールドウイルスに感染した動物とワクチン接種を受けた動物との間の識別を可能にする。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、いかなるＦＨＶ ｇＧ抗原コード配列を含まない。
これに対して、動物が、野生型ネコヘルペスウイルスに感染した後、又は改変された生ワクチンを受けた後、若しくは全ウイルス不活化ワクチンを受けた後、感染した動物／ワクチン接種を受けた動物は、ＦＨＶ ｇＧに対する特異的抗体を産生する／有する。しかしながら、本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物では、このようなＦＨＶ ｇＧに対する特異的抗体を検出することができない。
本発明の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＥＨＶ、並びにＥＨＶ ｇＤコード配列及びＥＨＶ ｇＣコード配列をそれぞれ含む。そのため、本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物では、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣに対する抗体などのＥＨＶに対する特異的抗体を検出することができる。
これに対して、動物が、野生型ネコヘルペスウイルスに感染した後、又は改変された生ワクチンを受けた後、若しくは全ウイルス不活化ワクチンを受けた後、動物は、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣに対する抗体などのＥＨＶ特異的抗体に対して陰性であろう。一方、本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物では、このようなＥＨＶ ｇＤ及びＥＨＶ ｇＣに対する特異的抗体を検出することができる。
【0067】
例示的な免疫試験及び／又はゲノム解析試験により、本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物は、野生型ネコヘルペスウイルスに感染した動物、又は改変された生ワクチンを受けた動物若しくは全ウイルス不活化ワクチンを受けた動物と区別することができ、なぜなら、ａ）本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物は、ＦＨＶ ｇＤ及び任意のＦＨＶ ｇＤコード配列のそれぞれに対して、いかなる特異的抗体を有しないか、或いはｂ）本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物は、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣ、並びにＥＨＶ ｇＤコード配列及び／又はＥＨＶ ｇＣコード配列のそれぞれに対して、特異的抗体を有するからである。
「免疫試験」及び「ゲノム解析試験」という用語は、本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物とＦＨＶに感染した動物とを区別するための根拠である。
「免疫試験」及び「ゲノム解析試験」という用語は、本発明の免疫原性組成物によるワクチン接種を受けた動物とＦＨＶに感染した動物とを区別するための根拠である。
【0068】
免疫試験の例として、任意の酵素免疫学的又は免疫化学的検出方法、例えば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）、ＥＩＡ（酵素イムノアッセイ）、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）、サンドイッチ酵素免疫試験、蛍光抗体試験（ＦＡＴ）、電気化学発光サンドイッチイムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）、解離－増強ランタニド蛍光イムノアッセイ（ＤＥＬＦＩＡ）若しくは固相免疫試験、免疫蛍光試験（ＩＦＴ）、免疫組織染色、ウエスタンブロット解析、又は当業者が利用可能なあらゆる他の適切な方法が挙げられる。使用するアッセイに応じて、抗原又は抗体は、酵素、フルオロフォア又は放射性同位体によって標識することができる。例えば、Coligan et al. Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons Inc., New York, N.Y. （1994）、及びFrye et al., Oncogen 4: 1153-1157, 1987を参照されたい。
「ゲノム解析試験」という用語は、ポリメラーゼ及び特定のオリゴヌクレオチドをプライマーとして使用する、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）法、リアルタイムＰＣＲ（ｒ－ＰＣＲ）法又はリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ｒＲＴ－ＰＣＲ）法、Ｔｅｍｐｌｅｘ－ＰＣＲ法、核酸配列ベース増幅（ＮＡＳＢＡ）法、等温増幅法に基づくゲノム解析法を指す。上述した増幅方法は、この技術分野においてよく知られている。
「ゲノム解析試験」という用語は、ポリメラーゼ及び特定のオリゴヌクレオチドをプライマーとして使用する、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）法、リアルタイムＰＣＲ（ｒ－ＰＣＲ）法又はリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ｒＲＴ－ＰＣＲ）法、Ｔｅｍｐｌｅｘ－ＰＣＲ法、核酸配列ベース増幅（ＮＡＳＢＡ）法、等温増幅法に基づくゲノム解析法を指す。上述した増幅方法は、この技術分野においてよく知られている。
【0069】
本発明は、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けたネコ科動物とＦＨＶに感染したネコ科動物とを区別する方法を提供し、前記方法が、
ａ）ネコ科動物から試料を得ることと、
ｂ）免疫試験、細胞培養に基づくアッセイ及び／又はゲノム解析試験で、前記試料を分析することとを含む。
有利なことには、本願の実験は、試料のこのような分析がどのように行われたかを既に説明している。実施例３及び４は、ｇＤ及びｇＢの発現(免疫試験)を測定するためのＩＦＡ(免疫蛍光アッセイ)を説明している。実施例４及び５では、ＦＨＶ ＳＮ及びＥＨＶ ＳＮのアッセイの読み取りが、細胞培養に基づくアッセイ、ＣＰＥ(細胞変性効果（Cytopathic effect or cytopathogenic effect）)アッセイに基づく。
ａ）ネコ科動物から試料を得ることと、
ｂ）免疫試験、細胞培養に基づくアッセイ及び／又はゲノム解析試験で、前記試料を分析することとを含む。
有利なことには、本願の実験は、試料のこのような分析がどのように行われたかを既に説明している。実施例３及び４は、ｇＤ及びｇＢの発現(免疫試験)を測定するためのＩＦＡ(免疫蛍光アッセイ)を説明している。実施例４及び５では、ＦＨＶ ＳＮ及びＥＨＶ ＳＮのアッセイの読み取りが、細胞培養に基づくアッセイ、ＣＰＥ(細胞変性効果（Cytopathic effect or cytopathogenic effect）)アッセイに基づく。
【0070】
また、Maes 2012（ISRN Veterinary Science. （2-3）:495830）は、ＦＨＶ感染症を診断する色々な方法をレビューする。組織ホモジネート又は綿棒（スワブ（swab））にあるＦＨＶ又はウイルス成分を証明するための最も一般的な検査室診断法として、直接蛍光抗体（ＦＡ）試験、ウイルス単離（ＶＩ）、及びＰＣＲが挙げられる。直接蛍光抗体試験は、結膜又は角膜組織に対して行われる。ウイルス単離（ＶＩ）又はＰＣＲは、口腔鼻及び結膜の綿棒の抽出物を試料として使用する。ＶＩは、感染性ウイルスを検出し、検査室診断のゴールドスタンダードとなっている。しかしながら、複数のＰＣＲアッセイが、ＦＨＶの検出にも使用されることが記載されている。
【0071】
「試料」という用語は、体液の試料、分離された細胞の試料、又は組織若しくは臓器から得られた試料を指す。体液の試料は、よく知られている技術により得ることができ、好ましくは血液、血漿、血清又は尿の試料、より好ましくは血液、血漿又は血清の試料が挙げられる。組織若しくは臓器の試料は、例えば、生検により、任意の組織若しくは臓器から得ることができる。分離された細胞は、遠心分離又は細胞選別などの分離技術により、体液又は組織若しくは臓器から得ることができる。しかしながら、「試料」という用語は、中咽頭、結膜又は鼻のスワブも包含する。
「得られた」という用語は、当業者に知られている単離及び／又は精製工程、好ましくは沈殿、カラム等を使用することを含んでもよい。
「得られた」という用語は、当業者に知られている単離及び／又は精製工程、好ましくは沈殿、カラム等を使用することを含んでもよい。
【0072】
本発明の区別方法のある特定の観点において、免疫試験は、試料がＦＨＶ ｇＧを特異的に認識する抗体を含むか否かを検査することを含む。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＧを特異的に認識する抗体が検出された場合、ネコ科動物は、ＦＨＶに感染している。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ゲノム解析試験は、試料がＦＨＶ ｇＧコード配列を含むか否かを検査することを含む。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＧコード配列が検出された場合、ネコ科動物は、ＦＨＶに感染している。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、免疫試験は、試料がＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣを特異的に認識する抗体を含むか否かを検査することを含む。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣを特異的に認識する抗体が検出された場合、ネコ科動物は、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けている。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ゲノム解析試験は、試料がＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣコード配列を含むか否かを検査することを含む。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣコード配列が検出された場合、ネコ科動物は、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けている。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＧを特異的に認識する抗体が検出された場合、ネコ科動物は、ＦＨＶに感染している。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ゲノム解析試験は、試料がＦＨＶ ｇＧコード配列を含むか否かを検査することを含む。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＦＨＶ ｇＧコード配列が検出された場合、ネコ科動物は、ＦＨＶに感染している。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、免疫試験は、試料がＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣを特異的に認識する抗体を含むか否かを検査することを含む。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣを特異的に認識する抗体が検出された場合、ネコ科動物は、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けている。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ゲノム解析試験は、試料がＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣコード配列を含むか否かを検査することを含む。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣコード配列が検出された場合、ネコ科動物は、本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けている。
【0073】
本発明の区別方法の別の特定の観点において、免疫試験は、ＥＩＡ（酵素イムノアッセイ）若しくはＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）であるか、又はゲノム解析試験は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）又はリアルタイムＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）である。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ネコ科動物は、ネコである。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、試料は、血清試料である。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＥＬＩＳＡは、間接ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ又はブロッキングＥＬＩＳＡである。
したがって、試験は、例えば、ＦＨＶ ｇＧ（或いは、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣ）エピトープを有するウェルが、マイクロウェルアッセイプレートに架橋されることを含み得る。前記架橋は、好ましくはアンカータンパク質（例えば、ポリ－Ｌ－リジンなど）を介して行われる。ＦＨＶ ｇＧ（或いはＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣ）エピトープを得るための発現系は、当業者によく知られている。或いは、前記ＦＨＶ ｇＧ（或いは、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣ）エピトープは、化学的に合成されたものであってもよい。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ネコ科動物は、ネコである。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、試料は、血清試料である。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ＥＬＩＳＡは、間接ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ又はブロッキングＥＬＩＳＡである。
したがって、試験は、例えば、ＦＨＶ ｇＧ（或いは、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣ）エピトープを有するウェルが、マイクロウェルアッセイプレートに架橋されることを含み得る。前記架橋は、好ましくはアンカータンパク質（例えば、ポリ－Ｌ－リジンなど）を介して行われる。ＦＨＶ ｇＧ（或いはＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣ）エピトープを得るための発現系は、当業者によく知られている。或いは、前記ＦＨＶ ｇＧ（或いは、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣ）エピトープは、化学的に合成されたものであってもよい。
【0074】
本発明のワクチンによるワクチン接種を受けただけの動物は、ＦＨＶ ｇＧエピトープに対して抗体を産生しなかった。しかしながら、このような動物は、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣに対して抗体を産生した。その結果は、ＦＨＶ ｇＧエピトープでコーティングされたウェルに結合する抗体はない。しかしながら、このようなワクチン接種を受けた動物は、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣに対して抗体を産生した。したがって、ウェルがＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣエピトープでコーティングされた場合、抗体は、このようなエピトープと結合し、陽性の検出シグナルを与えるであろう。
しかしながら、異なるＥＬＩＳＡ技術は、当業者によく知られている。ＥＬＩＳＡは、Wensvoort G. et al., 1988 （Vet. Microbiol. 17（2）: 129-140）、Robiolo B. et al., 2010 （J. Virol. Methods. 166（1 -2）: 21-27）、及びColijn, E.O. et al., 1997 （Vet. Microbiology 59: 15-25）によって例示的に記載されている。
しかしながら、異なるＥＬＩＳＡ技術は、当業者によく知られている。ＥＬＩＳＡは、Wensvoort G. et al., 1988 （Vet. Microbiol. 17（2）: 129-140）、Robiolo B. et al., 2010 （J. Virol. Methods. 166（1 -2）: 21-27）、及びColijn, E.O. et al., 1997 （Vet. Microbiology 59: 15-25）によって例示的に記載されている。
【0075】
好ましくは、ＦＨＶに感染した動物、改変された生ワクチンによるワクチン接種を受けた動物、又は全ウイルス不活化ワクチンによるワクチン接種を受けた動物と、本発明のワクチンのみによるワクチン接種を受けた動物たちとを区別するための試験は、上記で定義される試料から得られた細胞からＲＮＡを単離し、逆転写酵素、及びその後にｃＤＮＡを増幅することによって提供される。ＦＨＶ ｇＧについての特異的プライマーを使用して、ＰＣＲを行うことができる。そのような場合には、陽性のＰＣＲシグナルがある場合、ネコ科動物は、ＦＨＶに感染している。しかしながら、ＦＨＶ ｇＧの特異的配列を増幅できない場合、ネコ科動物は、ＦＨＶに感染していないが、本発明のワクチンによるワクチン接種を受けた可能性がある。ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣについての特異的プライマーを使用して、ＰＣＲを行うことができる。そのような場合には、陽性のＰＣＲシグナルがある場合、ネコ科動物は、本発明のワクチンによるワクチン接種を受けている。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ゲノム解析試験は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）又はリアルタイムＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）である。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、細胞培養に基づくアッセイは、ＣＰＥ（細胞変性効果）アッセイである。
しかしながら、「細胞培養に基づくアッセイ」又は「ＣＰＥアッセイ」の技術は、当業者によく知られている。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、ゲノム解析試験は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）又はリアルタイムＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）である。
本発明の区別方法の別の特定の観点において、細胞培養に基づくアッセイは、ＣＰＥ（細胞変性効果）アッセイである。
しかしながら、「細胞培養に基づくアッセイ」又は「ＣＰＥアッセイ」の技術は、当業者によく知られている。
【0076】
開示
本開示は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
本開示は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列、及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
本開示は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された、１４００個以下のアミノ酸をコードするネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）に挿入されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ１／３に挿入されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及びＯＲＦ１／３に挿入されている。
本開示は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
本開示は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列、及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された単一のネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
本開示は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入された、１４００個以下のアミノ酸をコードするネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）に挿入されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ１／３に挿入されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及びＯＲＦ１／３に挿入されている。
【0077】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、１４００個以下のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、１２００個以下のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、１０００個以下のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、２００～１２００個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、２００～１０００個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、４２００個以下の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、３６００個以下の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、３０００個以下の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、６００～３６００個の核酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、６００～３０００個の核酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、１２００個以下のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、１０００個以下のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、２００～１２００個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、２００～１０００個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、４２００個以下の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、３６００個以下の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、３０００個以下の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、６００～３６００個の核酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、６００～３０００個の核酸をコードする。
【0078】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、１つのＦＨＶ抗原コード配列である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、単一のＦＨＶ抗原コード配列である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、２つ以上のＦＨＶ抗原コード配列ではない。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、糖タンパク質コード配列又はその断片である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤ（糖タンパク質Ｄ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＢ（糖タンパク質Ｂ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＣ（糖タンパク質Ｃ）コード配列若しくはその断片である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＣコード配列又はその断片である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、単一のＦＨＶ抗原コード配列である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、２つ以上のＦＨＶ抗原コード配列ではない。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、糖タンパク質コード配列又はその断片である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤ（糖タンパク質Ｄ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＢ（糖タンパク質Ｂ）コード配列若しくはその断片、及び／又はＦＨＶ ｇＣ（糖タンパク質Ｃ）コード配列若しくはその断片である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＣコード配列又はその断片である。
【0079】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも３５０個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個、又は少なくとも８００個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１０５０個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００個、又は少なくとも２４００個の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、又は少なくとも３５０個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、又は少なくとも１０５０個の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＤコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも２５０個、少なくとも３００個、又は少なくとも３５０個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＤコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、６００個、７５０個、９００個、又は１０５０個の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１０５０個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００個、又は少なくとも２４００個の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、又は少なくとも３５０個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、糖タンパク質コード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、又は少なくとも１０５０個の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＤコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも２５０個、少なくとも３００個、又は少なくとも３５０個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＤコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、６００個、７５０個、９００個、又は１０５０個の核酸を含む。
【0080】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＢコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個、又は少なくとも８００個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＢコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００個、又は少なくとも２４００個の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＣコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、又は少なくとも５００個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＣコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、又は少なくとも１５００個の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、野生型ネコヘルペスウイルス株Ｃ－２７（ＡＣＣＮ：ＦＪ４７８１５９）に基づく、ＦＨＶ ｇＤコード配列、及び／又はＦＨＶ ｇＢコード配列、及び／又はＦＨＶ ｇＣコード配列である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＢコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００個、又は少なくとも２４００個の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＣコード配列の前記断片は、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、又は少なくとも５００個のアミノ酸をコードする。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＣコード配列の前記断片は、少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、又は少なくとも１５００個の核酸を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、野生型ネコヘルペスウイルス株Ｃ－２７（ＡＣＣＮ：ＦＪ４７８１５９）に基づく、ＦＨＶ ｇＤコード配列、及び／又はＦＨＶ ｇＢコード配列、及び／又はＦＨＶ ｇＣコード配列である。
【0081】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＤコード配列であり、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列は、ＡＡＢ３０９８０．１に示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＢコード配列であり、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列は、ＡＡＢ２８５５９．３に示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ＦＨＶ ｇＢコード配列であり、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列は、ＡＡＢ２８５５９．３に示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0082】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、糖タンパク質コード配列であり、前記糖タンパク質コード配列は、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列であり、前記ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列は、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列であり、前記ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列は、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0083】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個若しくは少なくとも１０５０個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含む糖タンパク質である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個若しくは少なくとも１０５０個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含むｇＤ、ｇＢ又はｇＣである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ抗原コード配列は、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個若しくは少なくとも１０５０個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含むｇＤ、ｇＢ又はｇＣである。
【0084】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0085】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0086】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＣコード配列は、配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個若しくは少なくとも５００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＣコード配列は、配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＣコード配列は、配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む。
【0087】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＤコード配列は、配列番号：４若しくは配列番号：５で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも６００個、少なくとも９００個若しくは少なくとも１０５０個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＤコード配列は、配列番号：４若しくは配列番号：５で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＤコード配列は、配列番号：４若しくは配列番号：５で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
【0088】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＢコード配列は、配列番号：６若しくは配列番号：７で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個、少なくとも１５００個、少なくとも１８００個、少なくとも２１００個若しくは少なくとも２４００個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＢコード配列は、配列番号：６若しくは配列番号：７で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＢコード配列は、配列番号：６若しくは配列番号：７で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
【0089】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＣコード配列は、配列番号：８若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも３００個、少なくとも４５０個、少なくとも６００個、少なくとも９００個、少なくとも１２００個若しくは少なくとも１５００個の連続核酸を有する前記核酸配列の断片からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＣコード配列は、配列番号：８若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＣコード配列は、配列番号：８若しくは配列番号：９で示される核酸配列、又は前記核酸配列と少なくとも少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列からなるか、或いは含む。
【0090】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ベクターである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＥＨＶベクターである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、弱毒化されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、遺伝子操作されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、組換えされている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＥＨＶ－１、ＥＨＶ－３、ＥＨＶ－４、ＥＨＶ－８及びＥＨＶ－９からなる群より選ばれる。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＥＨＶ－１である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＲａｃＨ又はＲａｃＨ ＳＥである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＯＲＦ７０（ＵＳ４）への挿入は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）における部分欠失、トランケーション、置換又は改変により特徴付けられ、ＵＳ５（ＯＲＦ７１）は機能を維持する。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＥＨＶベクターである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、弱毒化されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、遺伝子操作されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、組換えされている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＥＨＶ－１、ＥＨＶ－３、ＥＨＶ－４、ＥＨＶ－８及びＥＨＶ－９からなる群より選ばれる。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＥＨＶ－１である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＲａｃＨ又はＲａｃＨ ＳＥである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＯＲＦ７０（ＵＳ４）への挿入は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）における部分欠失、トランケーション、置換又は改変により特徴付けられ、ＵＳ５（ＯＲＦ７１）は機能を維持する。
【0091】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＯＲＦ７０への挿入は、野生型ＥＨＶ－１株ａｂ４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ６６５７１３．１）のＯＲＦ７０内のおおよそ８０１ｂｐ欠失という欠失により特徴付けられ、それによって、野生型ａｂ４のゲノム配列において欠失した部分は、ヌクレオチド１２７６８１と１２８４８２の間（配列番号：１０）に位置するか、又は配列番号：１０と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列である。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＯＲＦ７０（ＵＳ４）への挿入は、ＲａｃＨのＯＲＦ７０（ＵＳ４）内のおおよそ８０１ｂｐ欠失という欠失（配列番号：１１）、又は配列番号：１１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列により特徴付けられる。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＯＲＦ７０（ＵＳ４）への挿入は、ＲａｃＨのＯＲＦ７０（ＵＳ４）内のおおよそ８０１ｂｐ欠失という欠失（配列番号：１１）、又は配列番号：１１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列により特徴付けられる。
【0092】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、及び配列番号：１７からなる群より選ばれる少なくとも１つの隣接領域、並びに前記隣接領域と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、（ｉ）配列番号：１２、配列番号：１４、及び配列番号：１６からなる群より選ばれる少なくとも１つのＵＳ４左隣接領域と、（ｉｉ）配列番号：１３、配列番号：１５、及び配列番号：１７からなる群より選ばれる少なくとも１つのＵＳ４右隣接領域とを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＤコード配列及び／又はｇＢコード配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、（ｉ）配列番号：１２、配列番号：１４、及び配列番号：１６からなる群より選ばれる少なくとも１つのＵＳ４左隣接領域と、（ｉｉ）配列番号：１３、配列番号：１５、及び配列番号：１７からなる群より選ばれる少なくとも１つのＵＳ４右隣接領域とを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ｇＤコード配列及び／又はｇＢコード配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている。
【0093】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記プロモーター配列は、以下からなる群より選ばれる：ＳＶ４０ラージＴ、ＨＣＭＶ及びＭＣＭＶ前初期遺伝子１、ヒト伸長因子αプロモーター、バキュロウイルスのポリヘドリンプロモーター、ｐ４３０（配列番号：１８）、又は配列番号：１８と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１８の少なくとも３５０個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーター、ｐ４５５（配列番号：１９）、又は配列番号：１９と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１９の少なくとも３５０個の隣接ヌクレオチドの断片からなるか、或いは含むプロモーター、及び切り詰めたＦＨＶ－１ ｇＢプロモーター（配列番号：２４）、又は配列番号：２４と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：２４の少なくとも３００個の隣接ヌクレオチドからなるか、或いは含むプロモーター。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記プロモーター配列は、ｐ４３０（配列番号：１８）、又は配列番号：１８と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１８の少なくとも４００個の隣接ヌクレオチドからなるか、或いは含むプロモーターである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記プロモーター配列は、ｐ４３０（配列番号：１８）、又は配列番号：１８と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１８の少なくとも４００個の隣接ヌクレオチドからなるか、或いは含むプロモーターである。
【0094】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、 前記プロモーター配列は、ｐ４５５（配列番号：１９）、又は配列番号：１９と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：１９の少なくとも４００個の隣接ヌクレオチドからなるか、或いは含むプロモーターである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、切り詰めたＦＨＶ－１ ｇＢプロモーター（配列番号：２４）、又は配列番号：２４と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：２４の少なくとも３５０個の隣接ヌクレオチドからなるか、或いは含むプロモーターである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、１種以上の更なる調節配列、例えば、終結シグナル、ポリアデニル化シグナル、又はＩＲＥＳのような調節エレメントを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ポリアデニル化シグナルを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ポリアデニル化シグナルＢＧＨｐＡを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＩＲＥＳエレメントを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＩＲＥＳエレメントを挟んだ２つのＦＨＶコード配列は、１つの挿入部位に挿入される。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＩＲＥＳ及びｇＢを有するＦＨＶ ｇＤは、ＯＲＦ１／３部位に挿入される。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、Ｆ２Ａペプチドなどの２Ａペプチドを含まない。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片は、ＯＲＦ１／３に挿入されており、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片は、ＯＲＦ７０に挿入されている。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、切り詰めたＦＨＶ－１ ｇＢプロモーター（配列番号：２４）、又は配列番号：２４と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列、又は配列番号：２４の少なくとも３５０個の隣接ヌクレオチドからなるか、或いは含むプロモーターである。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、１種以上の更なる調節配列、例えば、終結シグナル、ポリアデニル化シグナル、又はＩＲＥＳのような調節エレメントを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ポリアデニル化シグナルを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ポリアデニル化シグナルＢＧＨｐＡを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＩＲＥＳエレメントを含む。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＩＲＥＳエレメントを挟んだ２つのＦＨＶコード配列は、１つの挿入部位に挿入される。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、ＩＲＥＳ及びｇＢを有するＦＨＶ ｇＤは、ＯＲＦ１／３部位に挿入される。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、Ｆ２Ａペプチドなどの２Ａペプチドを含まない。
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片は、ＯＲＦ１／３に挿入されており、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片は、ＯＲＦ７０に挿入されている。
【0095】
ＥＨＶの上記開示のいずれかにおいて、
ｉ）ＦＨＶ ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含み、ＯＲＦ１／３に挿入されており、及び
ｉｉ）ＦＨＶ ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含み、ＯＲＦ７０に挿入されている。
ｉ）ＦＨＶ ｇＤコード配列は、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含み、ＯＲＦ１／３に挿入されており、及び
ｉｉ）ＦＨＶ ｇＢコード配列は、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含み、ＯＲＦ７０に挿入されている。
【0096】
本開示は、本開示のＥＨＶを含む免疫原性組成物を更に含む。
本開示は、本開示のＥＨＶを含むワクチンを更に含む。
本開示は、本開示のＥＨＶを含むＤＩＶＡワクチンを更に含む。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、二価性である。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、多価性である。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、医薬上許容される担体を更に含む。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記医薬上許容される担体は、注射用水、細胞培養培地又は再懸濁緩衝液である。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記再懸濁緩衝液は、生理的な溶液又はリン酸緩衝食塩水である。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＥＨＶの１ｘ１０4～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50、好ましくは１ｘ１０4～１ｘ１０8のＴＣＩＤ50、さらにより好ましくは１ｘ１０4～１ｘ１０7のＴＣＩＤ50を含む。
本開示は、本開示のＥＨＶを含むワクチンを更に含む。
本開示は、本開示のＥＨＶを含むＤＩＶＡワクチンを更に含む。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、二価性である。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、多価性である。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、医薬上許容される担体を更に含む。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記医薬上許容される担体は、注射用水、細胞培養培地又は再懸濁緩衝液である。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記再懸濁緩衝液は、生理的な溶液又はリン酸緩衝食塩水である。
免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＥＨＶの１ｘ１０4～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50、好ましくは１ｘ１０4～１ｘ１０8のＴＣＩＤ50、さらにより好ましくは１ｘ１０4～１ｘ１０7のＴＣＩＤ50を含む。
【0097】
本開示は、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを含むキットを更に含む。
キットの上記開示のいずれかにおいて、前記キットは、ネコ科動物の疾患の治療及び／又は予防についての指示書を更に含む。
キットの上記開示のいずれかにおいて、前記キットは、ＦＨＶの治療及び／又は予防についての指示書を更に含む。
キットの上記開示のいずれかにおいて、前記キットは、ワクチンを動物又はネコ科動物に投与できるディスペンサを更に含む。
本開示は、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、免疫方法を更に含む。
本開示は、ネコ科動物の免疫方法であって、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
キットの上記開示のいずれかにおいて、前記キットは、ネコ科動物の疾患の治療及び／又は予防についての指示書を更に含む。
キットの上記開示のいずれかにおいて、前記キットは、ＦＨＶの治療及び／又は予防についての指示書を更に含む。
キットの上記開示のいずれかにおいて、前記キットは、ワクチンを動物又はネコ科動物に投与できるディスペンサを更に含む。
本開示は、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、免疫方法を更に含む。
本開示は、ネコ科動物の免疫方法であって、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
【0098】
本開示は、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法であって、治療上有効量の本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法であって、治療上有効量の本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法であって、治療上有効量の本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法であって、治療上有効量の本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
本開示は、未免疫対照群のネコ科動物と比べて、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法であって、治療上有効量の本明細書に記載の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記方法を更に含む。
【0099】
本開示は、ネコ科動物を免疫するための方法に使用するための本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを前記ネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法に使用するための本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法に使用するための本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法に使用するための本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、ＦＨＶによるネコ科動物の臨床徴候を治療又は予防するための方法に使用するための本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、ＦＨＶによるネコ科動物の呼吸器疾患を治療又は予防するための方法に使用するための本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、ネコ科動物のＦＨＶの排出を減少させるための方法に使用するための本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンであって、前記方法が、治療上有効量の前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンをネコ科動物に投与することを含む、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
【0100】
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記ネコ科動物は、チーター、ピューマ、ジャガー、ヒョウ、ライオン、オオヤマネコ、トラ、ネコ及びイエネコからなる群より選ばれる。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記ネコ科動物は、ネコ又はイエネコである。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、２回以上投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、２回投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、４、５又は６週齢以上のネコ科動物に投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、６週齢以上のネコ科動物に投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、４週齢～２５週齢内のネコ科動物に初めて投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、６週齢～２０週齢内のネコ科動物に初めて投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記ネコ科動物は、ネコ又はイエネコである。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、２回以上投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、２回投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、４、５又は６週齢以上のネコ科動物に投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、６週齢以上のネコ科動物に投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、４週齢～２５週齢内のネコ科動物に初めて投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、６週齢～２０週齢内のネコ科動物に初めて投与される。
【0101】
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１回目の投与量は、４、５又は６週齢以上のネコ科動物に投与され、２回目の投与量は、２～８週間後に投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１回目の投与量は、６週齢以上のネコ科動物に投与され、２回目の投与量は、２～８週間後に投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、２回目（ブースター）のワクチン接種後、更なるワクチン接種は、年１回で行われる（年１回のブースター接種）。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、筋肉内、皮内、皮下、経口又は経鼻で投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、１ｍＬ当たり１ｘ１０4～１ｘ１０10のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、１ｍＬ当たり１ｘ１０6～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１投与量は、１ｍＬ当たり１ｘ１０4～１ｘ１０10のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１投与量は、１ｍＬ当たり１ｘ１０6～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１回目の投与量は、６週齢以上のネコ科動物に投与され、２回目の投与量は、２～８週間後に投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、２回目（ブースター）のワクチン接種後、更なるワクチン接種は、年１回で行われる（年１回のブースター接種）。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、筋肉内、皮内、皮下、経口又は経鼻で投与される。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、１ｍＬ当たり１ｘ１０4～１ｘ１０10のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、１ｍＬ当たり１ｘ１０6～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１投与量は、１ｍＬ当たり１ｘ１０4～１ｘ１０10のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの１投与量は、１ｍＬ当たり１ｘ１０6～１ｘ１０9のＴＣＩＤ50のＥＨＶを含む。
【0102】
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記方法により、ネコ科動物と同種の未免疫対照群と比べて、体重減少の低下、肺内のウイルス量の低下、ウイルス血症の減少、肺病変、呼吸器病変及び肺胞上皮病変の減少、眼脂の減少、結膜炎の減少、鼻炎の減少、ウイルス排出の減少及び／又は短縮、直腸温の減少、臨床症状（特に、呼吸器の症状）の減少、抗ＦＨＶウイルス抗体の（中和）誘導の増大、ＦＨＶに対するＴ細胞への刺激の増大、ＦＨＶウイルスに対するＢ細胞への刺激の増大、及び肺内の炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ１β）の減少、又はこれらの組み合わせからなる群より選ばれる有効性評価基準の改善をもたらす。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＦＨＶによる同種及び／又は異種チャレンジから保護する。
本開示は、ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片、及びＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
本開示は、ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片、及びＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
方法又は使用の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンは、ＦＨＶによる同種及び／又は異種チャレンジから保護する。
本開示は、ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片、及びＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
本開示は、ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列又はその断片、及びＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列又はその断片を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含む。
【0103】
本開示は、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含み、前記ＥＨＶが、
ｉ）ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列であって、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列と、
ｉｉ）ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列であって、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む。
ｉ）ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列であって、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列と、
ｉｉ）ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列であって、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む。
【0104】
本開示は、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を更に含み、前記ＥＨＶが、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列と、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む。
本開示は、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を含む免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含み、前記ＥＨＶが、
ｉ）ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列であって、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列と、
ｉｉ）ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列であって、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む。
本開示は、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を含む免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含み、前記ＥＨＶが、
ｉ）ＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤコード配列であって、配列番号：１で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤコード配列と、
ｉｉ）ＯＲＦ７０に挿入されたＦＨＶ ｇＢコード配列であって、配列番号：２で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個若しくは少なくとも８００個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＢコード配列とを含む。
【0105】
本開示は、治療用の、本開示のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、免疫原又はワクチンとしての使用のための、本開示のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、医薬としての使用のための、本開示のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、医薬の製造のための、本開示のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、ネコ科動物のＦＨＶ感染症の治療及び／又は予防のための、本開示のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの使用を更に含む。
本開示は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を調製する方法を更に含み、前記方法が、
ｉ）ＥＨＶを提供することと、
ｉｉ）ＦＨＶ抗原コード配列を提供することと、
ｉｉｉ）工程ｉｉ）から得られた前記ＦＨＶ抗原コード配列を、工程ｉ）のＥＨＶのＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位に挿入することと、
ｉｖ）ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ抗原コード配列を含む、前記ＥＨＶを得ることとを含む。
本開示は、免疫原又はワクチンとしての使用のための、本開示のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、医薬としての使用のための、本開示のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、医薬の製造のための、本開示のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンを更に含む。
本開示は、ネコ科動物のＦＨＶ感染症の治療及び／又は予防のための、本開示のＥＨＶ、免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンの使用を更に含む。
本開示は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を調製する方法を更に含み、前記方法が、
ｉ）ＥＨＶを提供することと、
ｉｉ）ＦＨＶ抗原コード配列を提供することと、
ｉｉｉ）工程ｉｉ）から得られた前記ＦＨＶ抗原コード配列を、工程ｉ）のＥＨＶのＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位に挿入することと、
ｉｖ）ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ抗原コード配列を含む、前記ＥＨＶを得ることとを含む。
【0106】
本開示は、ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）抗原コード配列を含む、ＥＨＶ（ウマヘルペスウイルス）を調製する方法を更に含み、前記方法が、
ｉ）ＥＨＶを提供することと、
ｉｉ）ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列であって、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を提供することと、
ｉｉｉ）工程ｉｉ）から得られた前記ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を、工程ｉ）のＥＨＶのＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位に挿入することと、
ｉｖ）ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を含む前記ＥＨＶを得ることとを含む。
ｉ）ＥＨＶを提供することと、
ｉｉ）ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列であって、配列番号：１、配列番号：２、若しくは配列番号：３で示されるアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、少なくとも９９．９５％、少なくとも９９．９８％若しくは少なくとも９９．９９％の配列同一性を有する配列、又は少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個若しくは少なくとも３５０個の連続アミノ酸を有する前記アミノ酸配列の断片、をコードする核酸配列からなるか、或いは含む、前記ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を提供することと、
ｉｉｉ）工程ｉｉ）から得られた前記ＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を、工程ｉ）のＥＨＶのＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３挿入部位に挿入することと、
ｉｖ）ＯＲＦ７０（ＵＳ４）及び／又はＯＲＦ１／３に挿入されたＦＨＶ ｇＤ、ｇＢ又はｇＣコード配列を含む前記ＥＨＶを得ることとを含む。
【0107】
ＥＨＶを調製する方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、弱毒化されている。
ＥＨＶを調製する方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＲａｃＨ又はＲａｃＨ ＳＥである。
本開示は、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けたネコ科動物とＦＨＶに感染したネコ科動物とを区別する方法を更に含み、前記方法が、
ａ）ネコ科動物から試料を得ることと、
ｂ）免疫試験、細胞培養に基づくアッセイ及び／又はゲノム解析試験で、前記試料を分析することとを含む。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫試験は、試料がＦＨＶ ｇＧを特異的に認識する抗体を含むか否かを検査することを含む。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＧを特異的に認識する抗体が検出された場合、前記ネコ科動物は、ＦＨＶに感染している。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ゲノム解析試験は、試料がＦＨＶ ｇＧコード配列を含むか否かを検査することを含む。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＧコード配列が検出された場合、前記ネコ科動物は、ＦＨＶに感染している。
ＥＨＶを調製する方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＨＶは、ＲａｃＨ又はＲａｃＨ ＳＥである。
本開示は、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けたネコ科動物とＦＨＶに感染したネコ科動物とを区別する方法を更に含み、前記方法が、
ａ）ネコ科動物から試料を得ることと、
ｂ）免疫試験、細胞培養に基づくアッセイ及び／又はゲノム解析試験で、前記試料を分析することとを含む。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫試験は、試料がＦＨＶ ｇＧを特異的に認識する抗体を含むか否かを検査することを含む。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＧを特異的に認識する抗体が検出された場合、前記ネコ科動物は、ＦＨＶに感染している。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ゲノム解析試験は、試料がＦＨＶ ｇＧコード配列を含むか否かを検査することを含む。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、ＦＨＶ ｇＧコード配列が検出された場合、前記ネコ科動物は、ＦＨＶに感染している。
【0108】
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫試験は、試料が、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣを特異的に認識する抗体を含むか否かを検査することを含む。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣを特異的に認識する抗体が検出された場合、前記ネコ科動物は、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けている。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ゲノム解析試験は、試料が、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣコード配列を含むか否かを検査することを含む。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣコード配列が検出された場合、前記ネコ科動物は、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けている。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫試験は、ＥＩＡ（酵素イムノアッセイ）若しくはＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）であるか、又は前記ゲノム解析試験は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）又はリアルタイムＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）である。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ネコ科動物は、ネコである。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記試料は、血清試料である。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＬＩＳＡは、間接ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ又はブロッキングＥＬＩＳＡである。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ゲノム解析試験は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）又はリアルタイムＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）である。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記細胞培養に基づくアッセイは、ＣＰＥ（細胞変性効果）アッセイである。
以下の図面は、本明細書の一部であり、本発明のいくつかの観点を更に裏付けるために含まれる。これらの図面のうちの１つ以上を、本明細書に示される特定の実施形態についての詳細な説明と組み合わせて参照することにより、本発明をより理解できる。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣを特異的に認識する抗体が検出された場合、前記ネコ科動物は、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けている。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ゲノム解析試験は、試料が、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣコード配列を含むか否かを検査することを含む。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、ＥＨＶ ｇＤ及び／又はＥＨＶ ｇＣコード配列が検出された場合、前記ネコ科動物は、本開示の免疫原性組成物、ワクチン又はＤＩＶＡワクチンによるワクチン接種を受けている。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記免疫試験は、ＥＩＡ（酵素イムノアッセイ）若しくはＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）であるか、又は前記ゲノム解析試験は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）又はリアルタイムＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）である。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ネコ科動物は、ネコである。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記試料は、血清試料である。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ＥＬＩＳＡは、間接ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ又はブロッキングＥＬＩＳＡである。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記ゲノム解析試験は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）又はリアルタイムＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）である。
区別方法の上記開示のいずれかにおいて、前記細胞培養に基づくアッセイは、ＣＰＥ（細胞変性効果）アッセイである。
以下の図面は、本明細書の一部であり、本発明のいくつかの観点を更に裏付けるために含まれる。これらの図面のうちの１つ以上を、本明細書に示される特定の実施形態についての詳細な説明と組み合わせて参照することにより、本発明をより理解できる。
【図面の簡単な説明】
【0109】
【図1】ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）の模式図
【図2】ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）の模式図
【図3】ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）の模式図
【図4】ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）の模式図
【図5】ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）の模式図
【図6】ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）の模式図
【図7】ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤの模式図
【図8】ｒＥＨＶ－１－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）の模式図
【図9】ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ）の模式図
【図10】ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ）の模式図
【図11】ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ）の模式図
【図12】ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ）の模式図
【図13】処置群の幾何平均抗体価を使用したブタ血清学試験によるＦＨＶ－１のＳＮ結果
【図14】処置群の幾何平均抗体価を使用したブタ血清学試験によるＥＨＶ－１のＳＮ結果
【図15】中等度から重度の徴候が２日以上続いたネコの、ネコ科動物チャレンジ試験における臨床徴候の結果（スコア＞１）
【図16】ネコ科動物チャレンジ試験における群別の平均体重（ｋｇ）
【図17】ネコ科動物チャレンジ試験における、ワクチン接種群のみの平均ＥＨＶ－１のＳＮ抗体価の幾何平均及び個々の動物のＥＨＶ－１のＳＮ抗体価（×＝群内の個々の動物の５０％エンドポイント抗体価）
【図18】ネコ科動物チャレンジ試験における、群１及び２についての、ＦＶＲのＳＮ抗体価の群の幾何平均及び個々の動物のＦＶＲのＳＮ抗体価（×＝群１の動物の個体値；黒丸＝群２の動物の個体値）
【0110】
配列の概要
本発明における以下の配列を、ここで詳細に説明し、開示する。
糖タンパク質：
配列番号：１ 株Ｃ－２７から得られたＦＨＶｇＤアミノ酸配列
配列番号：２ 株Ｃ－２７から得られたＦＨＶｇＢアミノ酸配列
配列番号：３ 株Ｃ－２７から得られたＦＨＶｇＣアミノ酸配列
配列番号：４ ＦＨＶ－１株Ｃ－２７から得られた、コドン最適化ＦＨＶｇＤヌクレオチド配列
配列番号：５ ＦＨＶ－１株Ｃ－２７から得られた、ネイティブＦＨＶｇＤヌクレオチド配列
配列番号：６ ＦＨＶ－１株Ｃ－２７から得られた、コドン最適化ＦＨＶｇＢヌクレオチド配列
配列番号：７ 株Ｃ－２７から得られた、ネイティブＦＨＶｇＢヌクレオチド配列
配列番号：８ ＦＨＶ－１株Ｃ－２７から得られた、コドン最適化ＦＨＶｇＣヌクレオチド配列
配列番号：９ 株Ｃ－２７から得られた、ネイティブＦＨＶｇＣヌクレオチド配列
本発明における以下の配列を、ここで詳細に説明し、開示する。
糖タンパク質：
配列番号：１ 株Ｃ－２７から得られたＦＨＶｇＤアミノ酸配列
配列番号：２ 株Ｃ－２７から得られたＦＨＶｇＢアミノ酸配列
配列番号：３ 株Ｃ－２７から得られたＦＨＶｇＣアミノ酸配列
配列番号：４ ＦＨＶ－１株Ｃ－２７から得られた、コドン最適化ＦＨＶｇＤヌクレオチド配列
配列番号：５ ＦＨＶ－１株Ｃ－２７から得られた、ネイティブＦＨＶｇＤヌクレオチド配列
配列番号：６ ＦＨＶ－１株Ｃ－２７から得られた、コドン最適化ＦＨＶｇＢヌクレオチド配列
配列番号：７ 株Ｃ－２７から得られた、ネイティブＦＨＶｇＢヌクレオチド配列
配列番号：８ ＦＨＶ－１株Ｃ－２７から得られた、コドン最適化ＦＨＶｇＣヌクレオチド配列
配列番号：９ 株Ｃ－２７から得られた、ネイティブＦＨＶｇＣヌクレオチド配列
【0111】
ＯＲＦ７０挿入部位：
配列番号：１０ 野生型ＥＨＶ－１株ａｂ４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ６６５７１３．１）のＯＲＦ７０内の８０１ｂｐ欠失
配列番号：１１ ＲａｃＨのＯＲＦ７０（ＵＳ４）内の８０１ｂｐ部分
配列番号：１２ ＵＳ４左隣接領域（４１７ｂｐ）
配列番号：１３ ＵＳ４右隣接領域（４３１ｂｐ）
配列番号：１４ ＵＳ４左隣接領域（４１７ｂｐ）
配列番号：１５ ＵＳ４右隣接領域（４３１ｂｐ）
配列番号：１６ ＵＳ４左隣接領域（２８３ｂｐ）
配列番号：１７ ＵＳ４右隣接領域（１４４ｂｐ）
プロモーター：
配列番号：１８ ｐ４３０プロモーター
配列番号：１９ ｐ４５５プロモーター
配列番号：２４ 切り詰めたＦＨＶ－１ ｇＢプロモーター
プライマー
配列番号：２０～配列番号：２３ プライマー
配列番号：１０ 野生型ＥＨＶ－１株ａｂ４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ６６５７１３．１）のＯＲＦ７０内の８０１ｂｐ欠失
配列番号：１１ ＲａｃＨのＯＲＦ７０（ＵＳ４）内の８０１ｂｐ部分
配列番号：１２ ＵＳ４左隣接領域（４１７ｂｐ）
配列番号：１３ ＵＳ４右隣接領域（４３１ｂｐ）
配列番号：１４ ＵＳ４左隣接領域（４１７ｂｐ）
配列番号：１５ ＵＳ４右隣接領域（４３１ｂｐ）
配列番号：１６ ＵＳ４左隣接領域（２８３ｂｐ）
配列番号：１７ ＵＳ４右隣接領域（１４４ｂｐ）
プロモーター：
配列番号：１８ ｐ４３０プロモーター
配列番号：１９ ｐ４５５プロモーター
配列番号：２４ 切り詰めたＦＨＶ－１ ｇＢプロモーター
プライマー
配列番号：２０～配列番号：２３ プライマー
【実施例】
【0112】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を裏付けるために含まれる。当業者には、以下の実施例に開示されている技術は、本発明の実施において良好に機能することが本発明者らによって発見された代表的な技術であり、したがって本発明の実施のための好ましい態様を構成すると考えるとできることを理解されたい。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、開示されている特定の実施形態に多くの変更を行うことができ、それでもなお、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく同様又は類似の結果を得ることができることを理解するべきである。
【0113】
実施例１：
ＯＲＦ１／３挿入部位にＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄを有し、かつＯＲＦ７０挿入部位にＦＨＶ－１糖タンパク質Ｂを有する、組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ））の生成
合成のコドン最適化ＦＨＶｇＤコード配列（配列番号：４）を、制限エンドヌクレアーゼで消化し、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化された、ｍＣＭＶプロモーター及びＥＨＶ－１のＯＲＦ１／３相同組換えのための隣接領域（flanks）を含む、ｐ１＿３－ｍＣＭＶ（Dorsch-Hasler et al. 1985に記載のマウスＣＭＶプロモーター）ベクターにライゲートし、ｐ１＿３－ｍＣＭＶ-ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）を得た。ＭｌｕＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＥｃｏＲＩ制限エンドヌクレアーゼを使用して、ＥＨＶ－４のｇＧ４３０プロモーターｐ４３０（配列番号：１８）をｐｇＧ４３０－ＭＣＳ１ベクターから切り取り、ｐ１＿３－ｍＣＭＶ－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）にライゲートし、ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）（図１）を得た。合成のコドン最適化ＦＨＶｇＢコード配列（配列番号：６）を、ＦｓｅＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＫｐｎＩ制限エンドヌクレアーゼで消化し、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化された、ＥＨＶ－４の主要カプシドタンパク質（ＭＣＰ）プロモーターｐ４５５（配列番号：１９）及びＥＨＶ－１のＯＲＦ７０相同組換えのための隣接領域を含む、ｐ４５５シャトルベクターにクローニングし、ｐ４５５-ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）（図２）を得た。２つの異なる挿入部位にある２種のＦＨＶ－１抗原を有する組換えＥＨＶ－１ウイルスを生成するために、ＲＥＤ組換え系を使用し、コドン最適化ＦＨＶ－１ｇＤ 及びコドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＢの発現カセットのそれぞれを、ＯＲＦ１／３挿入部位及びＯＲＦ７０挿入部位に挿入し、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）（図３）を生成した。カナマイシン選択後、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ） ＢＡＣ ＤＮＡをＡ１－ＳＴ細胞に形質移入して、組換えウイルス－ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）をレスキューした。
ＯＲＦ１／３挿入部位にＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄを有し、かつＯＲＦ７０挿入部位にＦＨＶ－１糖タンパク質Ｂを有する、組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ））の生成
合成のコドン最適化ＦＨＶｇＤコード配列（配列番号：４）を、制限エンドヌクレアーゼで消化し、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化された、ｍＣＭＶプロモーター及びＥＨＶ－１のＯＲＦ１／３相同組換えのための隣接領域（flanks）を含む、ｐ１＿３－ｍＣＭＶ（Dorsch-Hasler et al. 1985に記載のマウスＣＭＶプロモーター）ベクターにライゲートし、ｐ１＿３－ｍＣＭＶ-ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）を得た。ＭｌｕＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＥｃｏＲＩ制限エンドヌクレアーゼを使用して、ＥＨＶ－４のｇＧ４３０プロモーターｐ４３０（配列番号：１８）をｐｇＧ４３０－ＭＣＳ１ベクターから切り取り、ｐ１＿３－ｍＣＭＶ－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）にライゲートし、ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）（図１）を得た。合成のコドン最適化ＦＨＶｇＢコード配列（配列番号：６）を、ＦｓｅＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＫｐｎＩ制限エンドヌクレアーゼで消化し、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化された、ＥＨＶ－４の主要カプシドタンパク質（ＭＣＰ）プロモーターｐ４５５（配列番号：１９）及びＥＨＶ－１のＯＲＦ７０相同組換えのための隣接領域を含む、ｐ４５５シャトルベクターにクローニングし、ｐ４５５-ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）（図２）を得た。２つの異なる挿入部位にある２種のＦＨＶ－１抗原を有する組換えＥＨＶ－１ウイルスを生成するために、ＲＥＤ組換え系を使用し、コドン最適化ＦＨＶ－１ｇＤ 及びコドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＢの発現カセットのそれぞれを、ＯＲＦ１／３挿入部位及びＯＲＦ７０挿入部位に挿入し、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）（図３）を生成した。カナマイシン選択後、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ） ＢＡＣ ＤＮＡをＡ１－ＳＴ細胞に形質移入して、組換えウイルス－ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）をレスキューした。
【0114】
実施例２：
ＯＲＦ１／３挿入部位にＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄ及びＢを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ））の生成
ｐ１＿３－ｍＣＭＶ－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）に対し、プライマーであるＦ２Ａオリゴ（表１；配列番号：２０）及びＦＨＶｇＤ－Ｆ（表１；配列番号：２１）で、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行い、ＦＨＶ ｇＤ（ｃｏ）コード配列の３’末端の２７０ｂｐと、終止コドンのボイドと、コドン最適化口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａペプチド配列（Ｆ２Ａ）と、ＦＨＶ ｇＢ（co）コード配列の５’末端の２３ｂｐとを含む３４７ｂｐ断片を増幅した。
表１：ｐ１＿３－ｍＣＭＶ－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）の構築のためのプライマー
ＯＲＦ１／３挿入部位にＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄ及びＢを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ））の生成
ｐ１＿３－ｍＣＭＶ－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）に対し、プライマーであるＦ２Ａオリゴ（表１；配列番号：２０）及びＦＨＶｇＤ－Ｆ（表１；配列番号：２１）で、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行い、ＦＨＶ ｇＤ（ｃｏ）コード配列の３’末端の２７０ｂｐと、終止コドンのボイドと、コドン最適化口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａペプチド配列（Ｆ２Ａ）と、ＦＨＶ ｇＢ（co）コード配列の５’末端の２３ｂｐとを含む３４７ｂｐ断片を増幅した。
表１：ｐ１＿３－ｍＣＭＶ－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）の構築のためのプライマー
【0115】
プライマーであるＦＨＶｇＢ－Ｆ（表１；配列番号：２２）及び３’－ＦＨＶｇＢ－Ｒ（表１；配列番号：２３）で第２のＰＣＲを行い、ｐ４５５-ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）から得られた完全なＦＨＶ ｇＢ（ｃｏ）コード配列（長さ２，４８７ｂｐ）を増幅した。その後、オーバーラップ伸長ＰＣＲ（ＯＥ－ＰＣＲ）により両ＰＣＲ断片を連結し、５’末端にＸｂａＩ部位を有し、かつ３’末端にＳａｌＩ部位を有する断片を生成した。融合コード配列を、ＸｂａＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＳａｌＩ制限エンドヌクレアーゼで消化し、ＸｂａＩ制限部位及びＳａｌＩ制限部位を介してｐ１＿３－ｍＣＭＶ－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）のマルチクローニングサイト１（ＭＣＳ１）にクローニングし、ｐ１＿３－ｍＣＭＶ－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）を得た。ＭｌｕＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＥｃｏＲＩ制限エンドヌクレアーゼを使用して、ＥＨＶ－４のｇＧ４３０プロモーターを、ｐｇＧ４３０－ＭＣＳ１ベクターから切り取り、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化されたｐ１＿３－ｍＣＭＶ－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）にライゲートし、ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）（図４）を得た。ＲＥＤ組換え系（Tischer et al. 2006. Biotechnol. Tech. 40, 191-197）を使用したｅｎ ｐａｓｓａｎｔ変異誘発により、コドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＤ及びコドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＢの発現カセットを、ＯＲＦ１／３挿入部位に挿入し、Ｆ２Ａ切断部位によって連結し、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）（図５）を生成した。カナマイシン選択後、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ） ＢＡＣ ＤＮＡをＡ１－ＳＴ細胞に形質移入して、組換えウイルス－ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）をレスキューした。
【0116】
実施例３：
ＯＲＦ１／３挿入部位にコドン最適化ＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ））、又はＯＲＦ７０挿入部位にネイティブＦＨＶ－１糖タンパク質Ｂを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ））の生成
合成のネイティブＦＨＶｇＢコード配列（配列番号：７）を、ＮｃｏＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＫｐｎＩ制限エンドヌクレアーゼで消化し、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化されたｐ４５５プラスミドにクローニングし、ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）（図６）を得た。ＲＥＤ組換え系（Tischer et al. 2006. Biotechnol. Tech. 40, 191-197）を使用したｅｎ ｐａｓｓａｎｔ変異誘発により、ｐ１＿３－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）から得られたコドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＤをＯＲＦ１／３挿入部位に挿入し（国際公開第２０１８／０５４８３７号公報に例示的に記載）、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）（図７）のＢＡＣ ＤＮＡを生成し、続いてＡ１－ＳＴ細胞に形質移入して、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ウイルスをレスキューした。同様に、ｅｎ ｐａｓｓａｎｔ変異誘発を使用して、ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）から得られたネイティブＦＨＶ－１ ｇＢをＯＲＦ７０挿入部位に挿入し（国際公開第２０１８／０５４８３７号公報に例示的に記載）、ｒＥＨＶ－１－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）（図８）の ＢＡＣ ＤＮＡを生成し、続いてＡ１－ＳＴ細胞に形質移入して、ｒＥＨＶ－１－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）ウイルスをレスキューした。
ＯＲＦ１／３挿入部位にコドン最適化ＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ））、又はＯＲＦ７０挿入部位にネイティブＦＨＶ－１糖タンパク質Ｂを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ））の生成
合成のネイティブＦＨＶｇＢコード配列（配列番号：７）を、ＮｃｏＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＫｐｎＩ制限エンドヌクレアーゼで消化し、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化されたｐ４５５プラスミドにクローニングし、ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）（図６）を得た。ＲＥＤ組換え系（Tischer et al. 2006. Biotechnol. Tech. 40, 191-197）を使用したｅｎ ｐａｓｓａｎｔ変異誘発により、ｐ１＿３－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）から得られたコドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＤをＯＲＦ１／３挿入部位に挿入し（国際公開第２０１８／０５４８３７号公報に例示的に記載）、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）（図７）のＢＡＣ ＤＮＡを生成し、続いてＡ１－ＳＴ細胞に形質移入して、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ウイルスをレスキューした。同様に、ｅｎ ｐａｓｓａｎｔ変異誘発を使用して、ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）から得られたネイティブＦＨＶ－１ ｇＢをＯＲＦ７０挿入部位に挿入し（国際公開第２０１８／０５４８３７号公報に例示的に記載）、ｒＥＨＶ－１－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）（図８）の ＢＡＣ ＤＮＡを生成し、続いてＡ１－ＳＴ細胞に形質移入して、ｒＥＨＶ－１－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）ウイルスをレスキューした。
【0117】
実施例４：
ｐ４３０プロモーターを有するＯＲＦ１／３挿入部位にコドン最適化ＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄを有し、かつネイティブＦＨＶ－１ ｇＢプロモーターを有するＯＲＦ７０挿入部位にネイティブＦＨＶ－１糖タンパク質Ｂを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ））の生成、並びにＯＲＦ１／３挿入部位にＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄ及び糖タンパク質Ｂを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ））の生成
Ｂｓｕ３６Ｉ制限エンドヌクレアーゼ及びＳａｌＩ制限エンドヌクレアーゼでの消化により生成したＦＨＶ ｇＢ（配列番号：２４）についてのネイティブプロモーターを含む合成の６７１ｂｐ断片を、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化されたｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）にライゲートし、ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ）（図９）を得た。ＲＥＤ組換え系（Tischer et al. 2006. Biotechnol. Tech. 40, 191-197）を使用したｅｎ ｐａｓｓａｎｔ変異誘発により、ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）から得られたコドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＤをＯＲＦ１／３挿入部位に挿入し（国際公開第２０１８／０５４８３７号公報に例示的に記載）、続いてＲＥＤ組換えを行い、ネイティブＦＨＶ－１ ｇＢプロモーターで駆動するネイティブＦＨＶ－１ ｇＢをＯＲＦ７０挿入部位に挿入し（国際公開第２０１８／０５４８３７号公報に例示的に記載）、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ）（図１０）のＢＡＣ ＤＮＡを生成した。このＢＡＣ ＤＮＡをＡ１－ＳＴ細胞に形質移入し、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ）ウイルスをレスキューした。コドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＤの３’末端と、ＥＭＣＶ ＩＲＥＳと、ネイティブＦＨＶ－１ ｇＢコード配列とを含む合成の３，６８７ｂｐ断片を、ＰａｃＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＸｂａＩ制限エンドヌクレアーゼで消化し、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化されたｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）にライゲートし、ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ）（図１１）を得た。ＲＥＤ組換え系（Tischer et al. 2006. Biotechnol. Tech. 40, 191-197）を使用したｅｎ ｐａｓｓａｎｔ変異誘発により、コドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＤ発現カセット及びネイティブＦＨＶ－１ ｇＢ発現カセットをＯＲＦ１／３挿入部位に挿入し、ＥＭＣＶ ＩＲＥＳによって連結し、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ）（図１２）のＢＡＣ ＤＮＡを生成した。このＢＡＣ ＤＮＡをＡ１－ＳＴ細胞に形質移入し、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ）ウイルスをレスキューした。
ｐ４３０プロモーターを有するＯＲＦ１／３挿入部位にコドン最適化ＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄを有し、かつネイティブＦＨＶ－１ ｇＢプロモーターを有するＯＲＦ７０挿入部位にネイティブＦＨＶ－１糖タンパク質Ｂを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ））の生成、並びにＯＲＦ１／３挿入部位にＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄ及び糖タンパク質Ｂを有する組換えＥＨＶ－１（ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ））の生成
Ｂｓｕ３６Ｉ制限エンドヌクレアーゼ及びＳａｌＩ制限エンドヌクレアーゼでの消化により生成したＦＨＶ ｇＢ（配列番号：２４）についてのネイティブプロモーターを含む合成の６７１ｂｐ断片を、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化されたｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）にライゲートし、ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ）（図９）を得た。ＲＥＤ組換え系（Tischer et al. 2006. Biotechnol. Tech. 40, 191-197）を使用したｅｎ ｐａｓｓａｎｔ変異誘発により、ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）から得られたコドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＤをＯＲＦ１／３挿入部位に挿入し（国際公開第２０１８／０５４８３７号公報に例示的に記載）、続いてＲＥＤ組換えを行い、ネイティブＦＨＶ－１ ｇＢプロモーターで駆動するネイティブＦＨＶ－１ ｇＢをＯＲＦ７０挿入部位に挿入し（国際公開第２０１８／０５４８３７号公報に例示的に記載）、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ）（図１０）のＢＡＣ ＤＮＡを生成した。このＢＡＣ ＤＮＡをＡ１－ＳＴ細胞に形質移入し、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐＦＨｇＢ－ＦＨＶｇＢ（ｎ）ウイルスをレスキューした。コドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＤの３’末端と、ＥＭＣＶ ＩＲＥＳと、ネイティブＦＨＶ－１ ｇＢコード配列とを含む合成の３，６８７ｂｐ断片を、ＰａｃＩ制限エンドヌクレアーゼ及びＸｂａＩ制限エンドヌクレアーゼで消化し、同じ制限エンドヌクレアーゼで消化されたｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）にライゲートし、ｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ）（図１１）を得た。ＲＥＤ組換え系（Tischer et al. 2006. Biotechnol. Tech. 40, 191-197）を使用したｅｎ ｐａｓｓａｎｔ変異誘発により、コドン最適化ＦＨＶ－１ ｇＤ発現カセット及びネイティブＦＨＶ－１ ｇＢ発現カセットをＯＲＦ１／３挿入部位に挿入し、ＥＭＣＶ ＩＲＥＳによって連結し、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ）（図１２）のＢＡＣ ＤＮＡを生成した。このＢＡＣ ＤＮＡをＡ１－ＳＴ細胞に形質移入し、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ＩＲＥＳｇＢ（ｎ）ウイルスをレスキューした。
【0118】
実施例５：
ＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄ及び／又は糖タンパク質Ｂを発現する組換えＥＨＶ－１ウイルス
ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）及びｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）を含むＡ１－ＳＴ細胞に対して限界希釈を行い、ウイルス由来のＧＦＰマーカーを取り除いて、ウイルスのクローン集団を得た。次世代（ＮｅｘｔＧｅｎ）シーケンシングにより、ＥＨＶ－１ ＲａｃＨバクミドの骨格への発現カセットの正しい挿入を検証した。免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）により、感染した細胞における導入遺伝子の発現を分析した。Ａ１－ＳＴ細胞におけるＴＣＩＤ50／ｍＬとして決定されるピーク力価は、親のウイルスｒＥＨＶ－１ ＲａｃＨの力価と同じ範囲内であり、導入遺伝子の発現がウイルスの複製に悪影響を与えなかったことを示している（表示なし）。
ＦＨＶ－１糖タンパク質Ｄ及び／又は糖タンパク質Ｂを発現する組換えＥＨＶ－１ウイルス
ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）及びｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）を含むＡ１－ＳＴ細胞に対して限界希釈を行い、ウイルス由来のＧＦＰマーカーを取り除いて、ウイルスのクローン集団を得た。次世代（ＮｅｘｔＧｅｎ）シーケンシングにより、ＥＨＶ－１ ＲａｃＨバクミドの骨格への発現カセットの正しい挿入を検証した。免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）により、感染した細胞における導入遺伝子の発現を分析した。Ａ１－ＳＴ細胞におけるＴＣＩＤ50／ｍＬとして決定されるピーク力価は、親のウイルスｒＥＨＶ－１ ＲａｃＨの力価と同じ範囲内であり、導入遺伝子の発現がウイルスの複製に悪影響を与えなかったことを示している（表示なし）。
【0119】
ｒＥＨＶ－１ ＦＨＶｇＤ／ＦＨＶｇＢウイルスのインビトロ特性評価－ＩＦＡ
組換えウイルスは、親のＥＨＶ－１ ＲａｃＨ株と比較して、プラークのサイズ、増殖の速度（growth kinetics）又は力価に顕著な差がなかった。ＥＨＶ－１ ＲａｃＨ、ＦＨＶ－１株Ｆ２、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）及びｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）に感染したＡ１－ＳＴ細胞のＩＦＡにより、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）ウイルス及びｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）ウイルスによるＦＨＶｇＤ及びＦＨＶｇＢの発現を評価した。マウス抗ＦＨＶｇＤモノクローナル抗体クローン２１５Ｃ１Ｍ、マウス抗ＦＨＶｇＢモノクローナル抗体クローン２１８Ｅ４Ｓ、ネコ抗ＦＶＲ血清及びマウス抗ＥＨＶ－１モノクローナル抗体クローン１６Ｈ９（すべて、ベーリンガーインゲルハイムが所有）で細胞を染色した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５９４ヤギ抗マウスＩｇＧ（ライフテクノロジーズ、カールスバッド、ＣＡ）をモノクローナル一次抗体の二次抗体として使用し、ＦＩＴＣ結合型ヤギ抗ネコＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、ウェスト・グロー、ＰＡ）をネコ抗ＦＶＲ血清の二次抗体として使用した。予想通り、ＦＨＶｇＤ及びＦＨＶｇＢの発現は、組換えウイルスに感染したＡ１－ＳＴ細胞にしか検出されなかった（表２）。ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）に感染した細胞におけるＦＨＶ ｇＤ発現の染色は、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）に感染した細胞におけるＦＨＶ ｇＤ発現の染色より弱かった。ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）及びｒＥＨＶ－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）に感染したＡ１－ＳＴ細胞のＩＦＡにより、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ウイルス及びｒＥＨＶ－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）ウイルスによるＦＨＶｇＤ及びＦＨＶｇＢの発現を評価した。マウス抗ＦＨＶｇＤモノクローナル抗体クローン２１５Ｃ１Ｍ（ベーリンガーインゲルハイムの所有）、マウス抗ＦＨＶｇＢモノクローナル抗体クローン２１８Ｅ４Ｓ（ベーリンガーインゲルハイムの所有）、及びすぐに使用できるＦＩＴＣコンジュゲート抗ＥＨＶ－１ヤギポリクローナル抗血清（FITC-conjugated anti-EHV-1 ready to use caprine polyclonal antiserum）（ＶＭＲＤ、プルマン、ＷＡ）で細胞を染色した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５９４ヤギ抗マウスＩｇＧ（ライフテクノロジーズ、カールスバッド、ＣＡ）をモノクローナル一次抗体の二次抗体として使用した。予想通り、ＦＨＶ ｇＤの発現は、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）に感染したＡ１－ＳＴ細胞にしか検出されず、ＦＨＶ ｇＢの発現は、ｒＥＨＶ－１－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）に感染したＡ１－ＳＴ細胞にしか検出されなかった（表２）。
組換えウイルスは、親のＥＨＶ－１ ＲａｃＨ株と比較して、プラークのサイズ、増殖の速度（growth kinetics）又は力価に顕著な差がなかった。ＥＨＶ－１ ＲａｃＨ、ＦＨＶ－１株Ｆ２、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）及びｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）に感染したＡ１－ＳＴ細胞のＩＦＡにより、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）ウイルス及びｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）ウイルスによるＦＨＶｇＤ及びＦＨＶｇＢの発現を評価した。マウス抗ＦＨＶｇＤモノクローナル抗体クローン２１５Ｃ１Ｍ、マウス抗ＦＨＶｇＢモノクローナル抗体クローン２１８Ｅ４Ｓ、ネコ抗ＦＶＲ血清及びマウス抗ＥＨＶ－１モノクローナル抗体クローン１６Ｈ９（すべて、ベーリンガーインゲルハイムが所有）で細胞を染色した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５９４ヤギ抗マウスＩｇＧ（ライフテクノロジーズ、カールスバッド、ＣＡ）をモノクローナル一次抗体の二次抗体として使用し、ＦＩＴＣ結合型ヤギ抗ネコＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、ウェスト・グロー、ＰＡ）をネコ抗ＦＶＲ血清の二次抗体として使用した。予想通り、ＦＨＶｇＤ及びＦＨＶｇＢの発現は、組換えウイルスに感染したＡ１－ＳＴ細胞にしか検出されなかった（表２）。ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）に感染した細胞におけるＦＨＶ ｇＤ発現の染色は、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）に感染した細胞におけるＦＨＶ ｇＤ発現の染色より弱かった。ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）及びｒＥＨＶ－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）に感染したＡ１－ＳＴ細胞のＩＦＡにより、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）ウイルス及びｒＥＨＶ－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）ウイルスによるＦＨＶｇＤ及びＦＨＶｇＢの発現を評価した。マウス抗ＦＨＶｇＤモノクローナル抗体クローン２１５Ｃ１Ｍ（ベーリンガーインゲルハイムの所有）、マウス抗ＦＨＶｇＢモノクローナル抗体クローン２１８Ｅ４Ｓ（ベーリンガーインゲルハイムの所有）、及びすぐに使用できるＦＩＴＣコンジュゲート抗ＥＨＶ－１ヤギポリクローナル抗血清（FITC-conjugated anti-EHV-1 ready to use caprine polyclonal antiserum）（ＶＭＲＤ、プルマン、ＷＡ）で細胞を染色した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５９４ヤギ抗マウスＩｇＧ（ライフテクノロジーズ、カールスバッド、ＣＡ）をモノクローナル一次抗体の二次抗体として使用した。予想通り、ＦＨＶ ｇＤの発現は、ｒＥＨＶ－１－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）に感染したＡ１－ＳＴ細胞にしか検出されず、ＦＨＶ ｇＢの発現は、ｒＥＨＶ－１－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｎ）に感染したＡ１－ＳＴ細胞にしか検出されなかった（表２）。
【0120】
表２：Ａ１－ＳＴ細胞におけるＦＨＶ ｇＤ及びＦＨＶ ｇＢの発現－ＩＦＡ結果
Ｎ＝陰性；Ｗ＋＝弱い染色；＋＝平均的な染色
実施例４の結論：
ＦＨＶ ｇＤ抗原及びＦＨＶ ｇＢ抗原を含む構築物は、両タンパク質の発現を示した。ＦＨＶ ｇＤ一価構築物は、ＦＨＶ ｇＤの発現を示し、ＦＨＶ ｇＢ一価構築物は、ＦＨＶ ｇＢの発現を示した。
実施例４の結論：
ＦＨＶ ｇＤ抗原及びＦＨＶ ｇＢ抗原を含む構築物は、両タンパク質の発現を示した。ＦＨＶ ｇＤ一価構築物は、ＦＨＶ ｇＤの発現を示し、ＦＨＶ ｇＢ一価構築物は、ＦＨＶ ｇＢの発現を示した。
【0121】
実施例６：
ＦＨＶ－１ ｇＤ及びｇＢをｉｎ ｖｉｖｏで発現する組換えＥＨＶ－１ベクターワクチンのブタにおける試験
ＦＨＶ－１ ｇＤ及びＦＨＶ－１ ｇＢを発現する組換えＥＨＶ－１ワクチンの血清学的反応を評価するために、ブタにおいて血清学試験を行った。おおよそ６～７週齢の、合計８匹のブタを無作為に３つの処置群に分けた（表３）。
表３：ブタ血清学試験の設計
ＦＨＶ－１ ｇＤ及びｇＢをｉｎ ｖｉｖｏで発現する組換えＥＨＶ－１ベクターワクチンのブタにおける試験
ＦＨＶ－１ ｇＤ及びＦＨＶ－１ ｇＢを発現する組換えＥＨＶ－１ワクチンの血清学的反応を評価するために、ブタにおいて血清学試験を行った。おおよそ６～７週齢の、合計８匹のブタを無作為に３つの処置群に分けた（表３）。
表３：ブタ血清学試験の設計
【0122】
処置は、２種の実験用ワクチンであるｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）（群１；ブタ３匹、力価：８．０２ ＴＣＩＤ50／ｍＬ）及びｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）（群２；ブタ３匹、力価：８．３０ ＴＣＩＤ50／ｍＬ）、並びに陰性対照としての非ＦＨＶ抗原を有する組換えＥＨＶ－１ウイルス（群３；ブタ２匹、力価：７．８０ ＴＣＩＤ50／ｍＬ）から構成された。０日目に、適切なワクチンの２ｍＬ筋肉内（ＩＭ）及び２ｍＬ鼻腔内（ＩＮ）投与量をブタに投与した。１４日目に、適切なワクチンの２ｍＬ ＩＭ 及び２ｍＬ ＩＮのブースター投与をすべての動物に受けさせた。試験スケジュールについては、表４を参照されたい。
表４：ブタ血清学試験のイベンドのスケジュール
表４：ブタ血清学試験のイベンドのスケジュール
【0123】
【0124】
【0125】
さらに、ＦＨＶｇＤ特異的抗体及びＦＨＶｇＢ特異的抗体の存在を示すために、ＦＨＶｇＤ抗体を確認するためのＨＩを行い、ＦＨＶｇＤ特異的抗体及びＦＨＶｇＢ特異的抗体を確認するためのＩＦＡを行った。
ＨＩ（赤血球凝集抑制）アッセイ
ＦＨＶ ｇＤは、ネコ科動物ＲＢＣの赤血球凝集を引き起こすことが知られている（Maeda et al. 1998. J Vet Med Sci;60:881-888）ため、ＦＨＶｇＤ特異的抗体の存在を検査するために、被験血清試料に対してＨＩアッセイを行った。赤血球凝集の抗原は、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）に感染させて、０．１％ＣＨＡＰＳで溶解させたＡ１－ＳＴ細胞から得られたＦＨＶｇＤであった。Ｄ１４でのブースター接種後、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）を接種したブタは、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）を接種したブタよりも２倍から４倍高いＨＩ抗体価を示し、より高い濃度の、ＦＨＶｇＤに対する特異的抗体を示した（表７）。群３の動物から得られた血清は、試験全体を通して、ＨＩ活性を示さなかった。
ＨＩ（赤血球凝集抑制）アッセイ
ＦＨＶ ｇＤは、ネコ科動物ＲＢＣの赤血球凝集を引き起こすことが知られている（Maeda et al. 1998. J Vet Med Sci;60:881-888）ため、ＦＨＶｇＤ特異的抗体の存在を検査するために、被験血清試料に対してＨＩアッセイを行った。赤血球凝集の抗原は、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）に感染させて、０．１％ＣＨＡＰＳで溶解させたＡ１－ＳＴ細胞から得られたＦＨＶｇＤであった。Ｄ１４でのブースター接種後、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）を接種したブタは、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）Ｆ２ＡｇＢ（ｃｏ）を接種したブタよりも２倍から４倍高いＨＩ抗体価を示し、より高い濃度の、ＦＨＶｇＤに対する特異的抗体を示した（表７）。群３の動物から得られた血清は、試験全体を通して、ＨＩ活性を示さなかった。
【0126】
表７：ブタ血清学試験によるＦＨＶ－１のＨＩ結果
ＩＦＡ（免疫蛍光アッセイ）
ＦＨＶｇＤ特異的抗体及びＦＨＶｇＢ特異的抗体の被験血清を検査するために、シャトルベクターであるｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）及びｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）のそれぞれをＡ１－ＳＴ細胞に形質移入した。第３のセットの細胞は、陰性の細胞対照として使用するために、形質移入しなかった。表８は、このアッセイの結果を示す。
表８：ブタ血清学試験の血清ＩＦＡ結果
Ｎ＝陰性；Ｗ＋＝弱い染色；＋＝平均的な染色；Ｓ＋＝強い染色
ＦＨＶｇＤ特異的抗体及びＦＨＶｇＢ特異的抗体の被験血清を検査するために、シャトルベクターであるｐ１＿３－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）及びｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）のそれぞれをＡ１－ＳＴ細胞に形質移入した。第３のセットの細胞は、陰性の細胞対照として使用するために、形質移入しなかった。表８は、このアッセイの結果を示す。
表８：ブタ血清学試験の血清ＩＦＡ結果
【0127】
群１のブタから観察されたＨＩ抗体価を補足するものとして、これらの同じ血清試料は、ＦＨＶ ｇＤシャトルベクターを形質移入した細胞においても強いＩＦＡ染色を示し、Ｄ１４での２回目のワクチン接種後に更に強いＩＦＡ染色を示すことが明らかになった。これに対して、同じ群１の血清は、ＦＨＶ ｇＢシャトルベクターを形質移入した細胞を、弱く染色しただけであった。群２のブタから得られた血清は、ｇＤに対して低いＨＩ抗体価を有した。同じ群２の血清試料は、ＦＨＶ ｇＤシャトルベクターを形質移入した細胞を適度に染色することが分かった。群１のブタから得られた血清で観察された抗ｇＢのＩＦＡ反応と同様、群２のブタから得られた血清試料は、染色が点状であったが、ＦＨＶ ｇＢシャトルベクターを形質移入した細胞を、弱く染色したことだけであった。関連性のないｒＥＨＶ－１ウイルスを接種した、群３のブタから得られた血清試料は、ＦＨＶ ｇＤシャトルベクター又はＦＨＶ ｇＢシャトルベクターのいずれかを形質移入した細胞において、陰性又は弱い非点状染色（バックグラウンド染色に起因する強度）しか示さなかった。群３のブタから観察されたバックグラウンド染色を、群１及び群２のブタの、陰性のＩＦＡ反応性の全体的なベースラインとみなした。
実施例５の結論：
まとめると、両構築物が機能し、ＦＨＶ－１の血清中和抗体、ＨＩ抗体価及びＩＦＡ染色を示した。
実施例５の結論：
まとめると、両構築物が機能し、ＦＨＶ－１の血清中和抗体、ＨＩ抗体価及びＩＦＡ染色を示した。
【0128】
実施例７：
ＦＨＶ－１ ｇＤ及びｇＢをｉｎ ｖｉｖｏで発現する組換えＥＨＶ－１ベクターワクチンのネコにおける試験
ＦＨＶ－１ ｇＤ及びＦＨＶ－１ ｇＢを発現する組換えＥＨＶ－１ワクチンの血清学的反応を評価するために、標的種であるネコにおいてチャレンジ試験を行った。
０日目に、おおよそ７～９週齢の、合計１０匹のネコを無作為に２つの処置群に分けた（表９）。
表９：ネコチャレンジ試験の設計
ＦＨＶ－１ ｇＤ及びｇＢをｉｎ ｖｉｖｏで発現する組換えＥＨＶ－１ベクターワクチンのネコにおける試験
ＦＨＶ－１ ｇＤ及びＦＨＶ－１ ｇＢを発現する組換えＥＨＶ－１ワクチンの血清学的反応を評価するために、標的種であるネコにおいてチャレンジ試験を行った。
０日目に、おおよそ７～９週齢の、合計１０匹のネコを無作為に２つの処置群に分けた（表９）。
表９：ネコチャレンジ試験の設計
【0129】
処置は、４４日目に、ネコ鼻気管炎ウイルス（ＦＶＲ）９６－１３としても知られているネコヘルペスウイルス１型（ＣＶＢ ＢＵＡ Ｎｏ．２０１９０２０、力価：６．５０ ＴＣＩＤ50／ｍＬ）でチャレンジした群１の対照ネコ５匹、及び０日目と２１日目に、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）（力価：７．８６ ＴＣＩＤ50／ｍＬ）で皮下接種され、続いて４４日目に、ＦＶＲ ９６－１３（ＣＶＢ ＢＵＡ Ｎｏ．２０１９０２０、力価：６．５０ ＴＣＩＤ50／ｍＬ）でチャレンジした群２のネコ５匹から構成された。０日目に、群２のネコに対し、０．５ｍＬ投与量のワクチンを皮下投与した後、試験の２１日目に同じ量及び投与経路でブースター接種を行った。４４日目に、試験のすべてのネコに対し、鼻腔内経路と中咽頭経路との間で、１ｍＬのチャレンジウイルスを等量で投与してチャレンジした。試験スケジュールについては、表１０を参照されたい。
【0130】
表１０：ネコチャレンジ試験のイベンドスケジュール
【0131】
一次変数は、疾患の臨床徴候であり、二次変数は、発熱、体重減少及び血清学である。一次変数の許容基準は、症例定義を満たすために、ワクチン接種を受けていない対照において、チャレンジ後の２日以上の臨床徴候があることと、＞８０％の対照が、成功したチャレンジについての症例定義を満たすこととを含む。二次変数の許容基準は、ワクチン接種を受けていない対照と比べて、ワクチン接種を受けた動物の発熱の低下と、ネコが、ワクチン接種前に血清陰性のままであり、ワクチン接種後にセロコンバージョンを示し、かつ対照ネコが、チャレンジまで血清陰性のままでなければならないこととを含む。チャレンジの後に臨床観察を毎日行った。試験前、チャレンジ前、及び試験終了時に、ネコの体重を測って、体重減少を判定した。すべてのネコで、直腸温は、ベースラインとしてチャレンジ前に２回、チャレンジ後の最初の７日間は毎日測定した。その後、３９．５℃を超えたネコで、回復まで直腸温を測定した。ネコ科動物の呼吸器パネルＰＣＲを使用したスクリーニングのために、チャレンジ前に採取したスワブをすべて、ジョージア大学アテネ獣医学診断研究室（University Georgia Athens Veterinary Diagnostic Laboratory、ＵＧＡ ＶＤＬ）に提出した。ＣＰＥに基づく読み取りを使用して、血清中和のＦＨＶ－１及びＥＨＶ－１抗体価について、試験から得られた血清試料を検査した。対照群のすべてのネコは、中等度から重度の臨床徴候が２日以上続いた（図１１）。鼻炎は、すべての群の中で認められる最も一般的な臨床徴候であった。ワクチン接種群では、目の徴候及び結膜炎が観察されなかった。群１の５匹の動物のうちの４匹は、他の臨床徴候、例えば、聞こえるラ音（audible rales）、口呼吸、及びくしゃみに起因する鼻出血（blood on nostrils）を示した。ワクチン接種を受けた動物のいずれにも、このような所見を示さなかった。ワクチン接種を受けたネコでは、局所的又は全身的な有害事象が認められなかった。対照ネコの体重がチャレンジ後に低下した一方で、ワクチン接種群は、同じ体重を維持したか、又は体重がわずかに増加した（図１２）。対照群の３匹のネコは、チャレンジ後の４日目に発熱した一方で、ワクチン接種を受けた動物のいずれも発熱しなかった（データは示していない）。ワクチン接種を受けた動物はすべて、１回目のワクチン接種後にＥＨＶ－１の血清中和抗体価を獲得し（develop）、２回目のワクチン接種後にブースター反応が見られた（図１３）。チャレンジ対照群は、試験期間を通してＥＨＶ－１の中和抗体に対して血清陰性であった（データは示していない）。ワクチン接種を受けた動物はすべて、２回目のワクチン接種後にＦＨＶ－１血清中和抗体価を獲得した（図１４）。チャレンジ後（５５日目）のワクチン接種を受けた動物の血清中和抗体価におけるスパイク（spike）によって示されているように、ワクチン接種により、中和抗体応答の良好なプライミングが誘導された。
【0132】
実施例６の結論：
全体として、ワクチン接種を受けていない対照動物と比べて、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）によるワクチン接種により、疾患の臨床徴候の重症度及び持続期間の軽減をもたらした。さらに、チャレンジの後、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）によるワクチン接種を受けた動物は、より高いＦＨＶ－１の血清中和抗体価を有し、陽性のワクチン効果を示した。
全体として、ワクチン接種を受けていない対照動物と比べて、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）によるワクチン接種により、疾患の臨床徴候の重症度及び持続期間の軽減をもたらした。さらに、チャレンジの後、ｒＥＨＶ－ｐ４３０－ＦＨＶｇＤ（ｃｏ）－ｐ４５５－ＦＨＶｇＢ（ｃｏ）によるワクチン接種を受けた動物は、より高いＦＨＶ－１の血清中和抗体価を有し、陽性のワクチン効果を示した。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【配列表】
【国際調査報告】