(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-24
(54)【発明の名称】注意欠陥／多動性障害の新規な治療
(51)【国際特許分類】
C07D 403/12 20060101AFI20231116BHJP
A61K 31/513 20060101ALI20231116BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231116BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20231116BHJP
A61P 25/14 20060101ALI20231116BHJP
A61P 25/20 20060101ALI20231116BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20231116BHJP
A61K 31/4458 20060101ALI20231116BHJP
A61K 31/137 20060101ALI20231116BHJP
A61K 31/155 20060101ALI20231116BHJP
A61K 31/165 20060101ALI20231116BHJP
【ＦＩ】
C07D403/12 CSP
A61K31/513
A61P43/00 105
A61P43/00 121
A61P25/00
A61P25/14
A61P25/20
A61P25/18
A61K31/4458
A61K31/137
A61K31/155
A61K31/165
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023528637
(86)(22)【出願日】2021-11-12
(85)【翻訳文提出日】2023-06-22
(86)【国際出願番号】 EP2021081567
(87)【国際公開番号】W WO2022101435
(87)【国際公開日】2022-05-19
(31)【優先権主張番号】2017858.8
(32)【優先日】2020-11-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(31)【優先権主張番号】2103400.4
(32)【優先日】2021-03-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523176196
【氏名又は名称】スリールセータ エーハゥーエッフ
【氏名又は名称原語表記】３Ｚ ＥＨＦ
(74)【代理人】
【識別番号】100073184
【弁理士】
【氏名又は名称】柳田 征史
(74)【代理人】
【識別番号】100175042
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 秀明
(72)【発明者】
【氏名】カールソン，カール エーギル
(72)【発明者】
【氏名】ソルスタインソン，ハラルドゥル
【テーマコード（参考）】
4C063
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C063AA01
4C063BB09
4C063CC29
4C063DD25
4C063EE01
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BC21
4C086BC42
4C086GA07
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA52
4C086MA55
4C086NA14
4C086ZA02
4C086ZA05
4C086ZA15
4C086ZA18
4C086ZC41
4C086ZC75
4C206AA01
4C206AA02
4C206FA09
4C206FA10
4C206GA19
4C206GA28
4C206HA31
4C206MA02
4C206MA04
4C206MA72
4C206MA75
4C206NA14
4C206ZA02
4C206ZA05
4C206ZA15
4C206ZA18
4C206ZC41
4C206ZC75
(57)【要約】
本発明は、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）の治療又は予防に使用するための、本明細書でより具体的に定義される式（Ｉ）に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を提供する。本発明はまた、本発明の化合物を含む薬学的組成物、及び本発明の化合物を使用する治療方法を提供する。
【化１】
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）の治療又は予防に使用するための、式（Ｉ）に記載の化合物【化1】
Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３が、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、及び３～５員の非芳香族炭素環から選択され、前記炭素環が、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、
Ｒ４が、Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｈ及びＣ（Ｏ）Ｃ１～４アルキルから選択され、
但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が全てＨではない）
又はその互変異性体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又はその互変異性体の薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項2】
Ｒ１が、メトキシ又はエトキシであり、Ｒ２が、Ｆ又はＣｌであり、Ｒ３が、メチル又はエチルであり、Ｒ４がＨである、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項3】
前記化合物が、【化2】
【請求項4】
前記化合物が、約１μｇ～１０００μｇ（任意の対イオン又は溶媒の質量を除く）の用量で投与される、請求項１、２、又は３に記載の使用のための化合物。
【請求項5】
前記化合物が、１００μｇ～６００μｇ（任意の対イオン又は溶媒の質量を除く）の用量で投与される、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項6】
前記化合物の用量が、２００μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、又は６００μｇ（任意の対イオン又は溶媒の質量を除く）の１日１回用量として投与される、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項7】
前記化合物の用量が、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、又は３００μｇ（任意の対イオン又は溶媒の質量を除く）、１日に２回、３回、又は４回の用量で投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項8】
前記化合物が、１つ以上の更なる療法的介入、例えば、食事療法的介入、心理学的介入、及び／又は薬理学的介入と同時に、連続的に、又は別個に投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項9】
前記化合物が、メチルフェニデート、デキサンフェタミン、リスデキサンフェタミン、アトモキセチン、及びグアンファシンから選択される１つ以上の更なる薬理学的介入と同時に、連続的に、又は別個に投与される、請求項８に記載の使用のための化合物。
【請求項10】
前記化合物が、ＡＤＨＤの治療又は予防のための別の医薬を以前に受けている対象に投与され、前記医薬が、睡眠関連の有害事象に起因して中断されたか、又は減薬された、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項11】
前記化合物が、注意のレベルの障害を伴わない、衝動性及び多動性の挙動を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「衝動型／多動型」ＡＤＨＤ）を有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象、又は多動性及び衝動性の挙動を伴う、注意のレベルの低下を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「複合型」ＡＤＨＤ）を有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象に投与される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項12】
ＡＤＨＤの治療又は予防のための方法であって、請求項１、２、又は３に記載の用量の化合物を、ＡＤＨＤを有することが知られているか、ＡＤＨＤを有することが疑われるか、又はＡＤＨＤを発症するリスクがある患者に投与するステップを含む、方法。
【請求項13】
前記患者が、ＡＤＨＤの治療又は予防のための別の医薬を以前に受けている患者であり、前記医薬が、睡眠関連の有害事象に起因して中断されたか、又は減薬された、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記患者が、注意のレベルの障害を伴わない、衝動性及び多動性の挙動を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「衝動型／多動型」ＡＤＨＤ）を有することが知られているか、若しくは有する疑いがあるか、又は多動性及び衝動性の挙動を伴う、注意のレベルの低下を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「複合型」ＡＤＨＤ）を有することが知られているか、若しくは有する疑いがある、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項15】
ＡＤＨＤの治療又は予防のための医薬の製造のための、請求項１、２、又は３に記載の化合物の使用。
【請求項16】
請求項１、２、又は３に記載の化合物と、１つ以上の更なる薬理学的介入と、食事療法的介入のための説明書及び／又は心理学的介入のための説明書と、を含む、キット。
【請求項17】
ＡＤＨＤの治療又は予防に使用するための、請求項１６に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）の治療及び／又は予防に関する。本発明はまた、ＡＤＨＤの治療及び／又は予防において有用性を見出す投薬レジメン及びキットに関する。
【背景技術】
【0002】
注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）は、注意、多動性、若しくは衝動性のレベルの障害、又はそれらの組み合わせを特徴とする。この状態は、世界中の１８歳未満の個人のおよそ５％に影響を及ぼし、症例のおよそ６５％が成人期まで症状が持続する。成人におけるＡＤＨＤの有病率は、世界中でおよそ２．５％であると推定されている（非特許文献１）。
【0003】
ＡＤＨＤの病因は複雑であり、完全には理解されていない。しかしながら、ドーパミン作動性神経伝達の障害は、ＡＤＨＤ患者の共通の特徴であると考えられている。近年の研究はまた、Ｌａｔｒｏｐｈｉｌｉｎ ３（ＬＰＨＮ３、ＡＤＧＲＬ３とも称される）遺伝子における遺伝子変異が、ＡＤＨＤと強く関連していることも見出している（非特許文献２）。ゼブラフィッシュにおける更なる研究は、ゼブラフィッシュＬＰＨＮ３ホモログであるｌａｔｒｏｐｈｉｌｉｎ３．１（ｌｐｈｎ３．１）の下方調節が、多動性を引き起こすことを示している（非特許文献３及び非特許文献４）。これらの研究はまた、ｌｐｈｎ３．１の下方調節が異常なドーパミン作動性神経伝達に関連していることを示唆している。
【0004】
ＡＤＨＤのための確立された治療としては、精神刺激薬（例えば、メチルフェニデート、デキサンフェタミン及びリスデキサンフェタミン）、ノルエピネフリン再取り込み阻害薬（例えば、アトモキセチン）、並びにα２－アドレナリンアゴニスト（例えば、グアンファシン及びクロニジン）等の薬理学的治療が挙げられる。ＡＤＨＤの治療には、単剤療法として、又は薬理学的治療と組み合わせてのいずれかの非薬理学的療法の使用も含まれ得る。ＡＤＨＤを有する患者に有益となり得る非薬理学的治療の例としては、認知行動療法（ＣＢＴ）、食事治療（例えば、補助脂肪酸、及び人工食品色素の除外）、並びに運動プログラムが挙げられる。
【0005】
ＵＫ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｃａｒｅ Ｅｘｃｅｌｌｅｎｃｅ（ＮＩＣＥ）ガイドライン等の臨床ガイドラインは、小児又は青年期におけるＡＤＨＤの治療にはメチルフェニデート、アトモキセチン及びデキサンフェタミンの使用を推奨し、成人におけるＡＤＨＤの治療にはリスデキサンフェタミン又はメチルフェニデートを推奨する。しかしながら、ＡＤＨＤのためのこのような治療の承認された使用にもかかわらず、それらの限られた有効性及び／又は有害作用に起因して、依然として論争の的となっている（非特許文献５）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Ｔｈａｐａｒ ＆ Ｃｏｏｐｅｒ，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ，２０１６，３８７（１００２４），１２４０－１２５０
【非特許文献2】Ａｒｃｏｓ－Ｂｕｒｇｏｓ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，１５，１０５３－１０６６
【非特許文献3】Ｌａｎｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０１２，１７，９４６－９５４
【非特許文献4】Ｌａｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｐｒｏｇ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈ，８４，１８１－１８９
【非特許文献5】Ｃｏｒｔｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ，Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，５（９），７２７－７３８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
したがって、良好な臨床的忍容性を示す一方で、臨床上の利益を提供するＡＤＨＤのための更なる治療に対する必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明は、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）の治療又は予防に使用するための、式（Ｉ）に記載の化合物
【0009】
【化1】
Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３が、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、及び３～５員の非芳香族炭素環から選択され、上述の炭素環が、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、
Ｒ４が、Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｈ及びＣ（Ｏ）Ｃ１～４アルキルから選択され、
但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が全てＨではない）
又はその互変異性体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又はその互変異性体の薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を提供する。
【0010】
本発明は更に、ＡＤＨＤの治療又は予防のための方法であって、ある用量の式（Ｉ）の化合物を、ＡＤＨＤを有することが知られているか、ＡＤＨＤを有することが疑われるか、又はＡＤＨＤを発症するリスクがある患者に投与するステップを含む、方法を提供する。
【0011】
本願発明者らは、ＡＤＨＤのゼブラフィッシュ（Ｄａｎｉｏ ｒｅｒｉｏ）モデルにおいて、式（Ｉ）の化合物が、Ｌｐｈｎ３．１ノックアウトゼブラフィッシュ幼生における多動性及び運動衝動性等のＡＤＨＤ症状を減少させるのに驚くほど効果的であることを見出した。本願発明者らはまた、マウスにおけるスコポラミン誘導性認知機能障害モデルにおいて、式（Ｉ）の化合物が、注意及び作業記憶の低下等のＡＤＨＤと関連する認知障害の改善に驚くほど効果的であることを見出した。本願発明者らはまた、式（Ｉ）の化合物が、睡眠断片化、睡眠比、睡眠中の速度、覚醒エピソードの持続時間及び睡眠エピソードの持続時間等の睡眠パラメータに影響を及ぼすことなく、ＡＤＨＤ症状の減少に著しく効果的であることを見出した。
【0012】
本発明はまた、ＡＤＨＤの治療及び／又は予防のための医薬の製造のための、式（Ｉ）に記載の化合物の使用を提供する。
【0013】
本発明は、式（Ｉ）に記載の化合物と、１つ以上の更なる薬理学的介入と、食事療法的介入のための説明書及び／又は心理学的介入のための説明書と、を含む、キットを更に提供する。本発明のキットは、ＡＤＨＤの治療又は予防における用途を見出す。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1】Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のホモ接合性ノックアウトを有するゼブラフィッシュ幼生（本明細書では「Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ」と称される）及び野生型Ｌｐｈｎ３．１遺伝子を有するゼブラフィッシュ幼生（本明細書では「Ｌｐｈｎ３．１ ＷＴ」と称される）の速度（ｍｍ／秒）の２４時間の記録のスペクトログラムを示す。両方の幼生群に、ビヒクル対照（すなわち、試験化合物を含まないＤＭＳＯ）を投与した。スペクトログラムに示されている灰色の領域は、実験の消灯フェーズを示す（５回の３０分間のフェーズ、第１のフェーズは、午後１時３０分に開始し、その後、午後１０時に開始し、明朝の午前８時に終了する、消灯された１０時間の夜期間が続く）。
【図2】５回の３０分間の点灯フェーズ中にＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ及びＬｐｈｎ３．１ ＷＴ幼生が移動した平均距離の差を示す棒グラフを示す。遺伝子型とビヒクル（すなわちＤＭＳＯ）との間で、有意な相互作用は観察されなかった（ｆ＝１，００３、ｄｆ＝１、ｐ＝０．３１７）。Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭとＬｐｈｎ３．１ ＷＴ幼生との間で、移動した距離に対する遺伝子型の有意な効果が観察された（ｆ＝１１７，６７、ｄｆ＝１、ｐ＜０．００１）。ナイーブ（すなわち、試験化合物又はビヒクル対照のいずれも受けなかった幼生）とＤＭＳＯ治療された幼生との間で、ビヒクルの有意ではない効果が示された（ｆ＝０，２２２ ｄｆ＝１、ｐ＝０．６３８）。
【図3】モキソニジン、アトモキセチン（図３ではトモキセチン塩酸塩と称される）、又はビヒクル対照（すなわち、ＤＭＳＯ）を受けたＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生が移動した距離の比較を示す。プロット上の破線は、ビヒクル対照による治療後の５回の点灯フェーズにわたってＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生が移動した平均距離を示す（ｎ＝１８９）。点線は、１μＭアトモキセチン塩酸塩による治療後の５回の点灯フェーズにわたってＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生が移動した平均距離を示す（ｎ＝２４）。点は、５回の点灯フェーズにわたってＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生が移動した平均距離に対する、１μＭ、１０μＭ又は３０μＭの投薬量でのモキソニジンの効果を示す（ｎ＝２４）（全てのデータは±ＳＥＭで示される）。モキソニジンで治療された幼生とビヒクル対照を受けた幼生との間で、統計的に有意な差が認められた（ｆ＝３７，２７６、ｄｆ＝３、ｐ＜０．００１、第２のラウンド：ｆ＝３９，６３７、ｄｆ＝３、ｐ＜０．００１）。
【図4】スコポラミンへの曝露及びドネペジル、アトモキセチン、モキソニジン、又は生理食塩水による治療の後のＴ－迷路アッセイにおけるマウスの自発的交替（％）を示す。データは、実験群当たりｎ＝１０のマウスの平均±ＳＥＭとして表される。＊＊＊Ｐ＜０．００１＝ビヒクル／生理食塩水マウスと比較して、ビヒクル／スコポラミンマウスとは有意に異なる（ダネット事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ）。
【図5】Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のホモ接合性ノックアウトを有するゼブラフィッシュ幼生（本明細書では「Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ」と称される）及び野生型Ｌｐｈｎ３．１遺伝子を有するゼブラフィッシュ幼生（本明細書では「Ｌｐｈｎ３．１ ＷＴ」と称される）の速度（ｍｍ／秒）の２４時間の記録のスペクトログラムを示す。両幼生群に、１０μＭのモキソニジンを投与した。図において、治療後のＬｐｈｎ３．１ ＷＴ群を「ＷＴ １０μＭ」と称し、治療後のＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ群を「ＨＯＭ １０μＭ」と称する）。ビヒクルのみ（すなわち、試験化合物を含まないＤＭＳＯ）で治療されたＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ群を、この図で「ＨＯＭ ＤＭＳＯ」と称する。スペクトログラムに示されている灰色の領域は、実験の消灯フェーズを示す（５回の３０分間のフェーズ、第１のフェーズは、午後１時３０分に開始し、その後、午後１０時に開始し、明朝の午前８時に終了する、消灯された１０時間の夜期間が続く）。
【図6A】ゼブラフィッシュにおける睡眠断片化、睡眠比、睡眠中の速度、覚醒エピソードの持続時間及び睡眠エピソードの持続時間に対する１μＭ、１０μＭ、又は３０μＭのモキソニジンの効果を示す。これらの図に示されるデータ点は、表１Ａ～１Ｄに含まれる。
【図6B】ゼブラフィッシュにおける睡眠断片化、睡眠比、睡眠中の速度、覚醒エピソードの持続時間及び睡眠エピソードの持続時間に対する１μＭ、１０μＭ、又は３０μＭのクロニジンの効果を示す。これらの図に示されるデータ点は、表１Ａ～１Ｄに含まれる。
【図6C】ゼブラフィッシュにおける睡眠断片化、睡眠比、睡眠中の速度、覚醒エピソードの持続時間及び睡眠エピソードの持続時間に対する１μＭ、１０μＭ、又は３０μＭのアトモキセチンの効果を示す。これらの図に示されるデータ点は、表１Ａ～１Ｄに含まれる。
【図6D】ゼブラフィッシュにおける睡眠断片化、睡眠比、睡眠中の速度、覚醒エピソードの持続時間及び睡眠エピソードの持続時間に対する１μＭ、１０μＭ、又は３０μＭのグアンファシンの効果を示す。これらの図に示されるデータ点は、表１Ａ～１Ｄに含まれる。
【図7】既知の高度に選択的なＩ１－イミダゾリン受容体アゴニストを受けたか、又はアトモキセチン（図７ではトモキセチン塩酸塩と称される）、又はビヒクル対照（すなわち、ＤＭＳＯ）を受けたＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生が移動した距離の比較を示す。プロット上の破線は、ビヒクル対照による治療後の５回の点灯フェーズにわたってＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生が移動した平均距離を示す（ｎ＝１８９）。点線は、１μＭアトモキセチン塩酸塩による治療後の５回の点灯フェーズにわたってＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生が移動した平均距離を示す（ｎ＝２４）。点は、５回の点灯フェーズにわたってＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生が移動した平均距離に対する、０，１μＭ、１μＭ、１０μＭ、３０μＭ、又は１００μＭの投薬量での既知のＩ１－イミダゾリン受容体アゴニストの効果を示す（第１のラウンド：ｎ＝２４、第２のラウンド：ｎ＝７２）（全てのデータは±ＳＥＭで示される）。Ｉ１－イミダゾリン受容体アゴニストで治療された幼生とビヒクル対照を受けた幼生との間で、統計的に有意な差が認められた（Ｆ（５，１３２）＝２１．３３、ｄｆ＝５、ｐ＜０．００１、第２のラウンド：Ｆ（３，２７６）＝４４．４０、ｄｆ＝３、ｐ＜０．００１）。
【発明を実施するための形態】
【0015】
本発明の発明者らは、式（Ｉ）に記載の化合物が、ＡＤＨＤの治療又は予防に驚くほど効果的であることを見出した。
【0016】
以下でより詳細に考察されるように、本願発明者らは、モキソニジンが、ＡＤＨＤのモデルにおいてゼブラフィッシュ幼生の活動の減少に驚くほど効果的であることを見出した。本願発明者らによって使用されるＡＤＨＤモデルは、Ｌａｔｒｏｐｈｉｌｉｎ ３（ｌｐｈｎ．３．１）遺伝子のホモ接合性ノックアウトを保有するゼブラフィッシュを使用する。ヒトにおける対応するｌｐｈｎ．３．１遺伝子（すなわち、ＬＰＨＮ３）における変異は、ヒトにおけるＡＤＨＤのリスク要因として強く関与している（Ａｒｃｏｓ－Ｂｕｒｇｏｓ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｍｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ １５，１０５３－１０６６、及びＬａｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１８，８４（Ａ），１８１－１８９）。ゼブラフィッシュにおけるｌｐｈｎ．３．１遺伝子の機能は、ヒトにおいて観察された機能と相関関係にあることがわかっている。本願発明者らによって使用されるゼブラフィッシュモデルにおいて、ＡＤＨＤ様挙動表現型（例えば、多動性及び運動衝動性）は、ｌｐｈｎ３．１遺伝子のホモ接合性ノックアウトを保有するゼブラフィッシュ幼生において観察される。ＡＤＨＤのゼブラフィッシュモデルを使用して、本願発明者らは、モキソニジンが、多動性及び運動衝動性等のＡＤＨＤ挙動の減少に驚くほど効果的であると特定した。本願発明者らはまた、モキソニジンが、マウスにおけるスコポラミン誘導性認知機能障害モデルにおける認知機能の回復に効果的であることも見出している。ＡＤＨＤは、それ自体が注意力及び作業記憶の低下等の認知障害として現れる可能性があるため、これらのデータは、ＡＤＨＤ症状を減少させるモキソニジンの有効性を更に示している。
【0017】
モキソニジンと構造的に類似しているか、又は重要ではない構造変動が異なる化合物は、本明細書に記載のＡＤＨＤモデルにおいてモキソニジンと類似する特性を示すと予想される。
【0018】
したがって、本発明は、ＡＤＨＤの治療又は予防に使用するための、式（Ｉ）に記載の化合物
【0019】
【化2】
【0020】
式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、及び３～５員の非芳香族炭素環から選択されてもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。例えば、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩ、メチル、エチル、－ＳＣＨ３、－ＳＣＨ２ＣＨ３、メトキシ、エトキシ、シクロプロピル、シクロブチル、又はシクロペンチルであってもよい。好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｆ、Ｃｌ、メチル、－ＳＣＨ３、メトキシ又はエトキシである。より好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｆ、Ｃｌ、メチル、エチル、メトキシ又はエトキシである。例えば、Ｒ１は、メトキシ又はエトキシであってもよく、Ｒ２は、Ｆ又はＣｌであってもよく、Ｒ３は、メチル又はエチルであってもよい。
【0021】
式（Ｉ）の化合物において、Ｒ４は、水素、Ｃ（Ｏ）Ｈ及びＣ（Ｏ）Ｃ１～４アルキルから選択される。例えば、Ｒ４は、水素、Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、又はＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３であってもよい。好ましくは、Ｒ４は、水素、Ｃ（Ｏ）Ｈ又はＣ（Ｏ）ＣＨ３である。より好ましくは、Ｒ４は、水素である。
【0022】
式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は全て水素ではない。例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。又は、例えば、Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。又は、例えば、Ｒ２は、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。又は、例えば、Ｒ３は、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。又は、例えば、Ｒ４は、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、及び３～５員の非芳香族炭素環から選択されてもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。
【0023】
好ましくは、式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であり、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であり、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。例えば、式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１は、ハロゲンであってもよく、Ｒ２は、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。又は、例えば、Ｒ１は、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、Ｒ２は、ハロゲンであってもよく、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であってもよく、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。又は、例えば、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ水素であり（例えば、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩであり）、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、及び３～５員の非芳香族炭素環から選択され、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。
【0024】
好ましくは、Ｒ１は、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、又は３～５員の非芳香族炭素環であり、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換され、Ｒ２は、ハロゲンであり、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルキルチオ－、Ｃ１～４アルキルオキシ－、及び３～５員の非芳香族炭素環であり、上述の炭素環は、１つ以上のＣ１～４アルキルで任意選択的に置換される。より好ましくは、Ｒ１は、メトキシ又はエトキシであり、Ｒ２は、Ｆ又はＣｌであり、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、メチル又はエチルである。更により好ましくは、Ｒ１は、メトキシ又はエトキシであり、Ｒ２は、Ｆ又はＣｌであり、Ｒ３は、メチル又はエチルであり、Ｒ４は、水素であり、例えば、Ｒ１は、メトキシであってもよく、Ｒ２は、Ｆ又はＣｌであってもよく、Ｒ３は、メチルであってもよく、Ｒ４は、Ｈである。
【0025】
好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）の化合物
【0026】
【化3】
【0027】
モキソニジンは、Ｉ１－イミダゾリン受容体の高度に選択的なアゴニストであることが知られている。いずれか１つの理論に拘束されることを望むものではないが、本願発明者らは、Ｉ１－イミダゾリン受容体に対するモキソニジンの高い選択性が、オフターゲット効果を減少させつつ、ＡＤＨＤの効果的な治療をもたらし、したがって、確立された治療と比較して、モキソニジンをＡＤＨＤに対するより忍容性の高い治療にすると考えられる。
【0028】
疑義を避けるために、本文書では、式（Ｉ）の化合物は、別段の記載がない限り、その全ての互変異性形態、塩、及び溶媒和物を含むことが意図される。
【0029】
本発明に従った使用のための化合物は、有機化学分野の当業者に既知の方法を使用して調製されてもよく、本発明に従う特定の化合物を調製するための特定の方法は、当該技術分野で既知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ４，３２３，５７０に記載されるように、本発明に従った使用のための様々な化合物は、好適な５－アミノピリミジンを好適な２－イミダゾリジノンと反応させることによって調製され得る。ＵＳ４，３２３，５７０に記載される式（Ｉ）の化合物を調製するための１つの特定の方法は、塩化ホスホリル（ＰＯＣｌ３）等の脱水剤の存在下で、好適な５－アミノピリミジンを好適な２－イミダゾリジノンと反応させることを含む。好適な５－アミノピリミジン及び２－イミダゾリジノンは、当該技術分野で既知の方法を使用して容易に入手可能であり、多くの場合、市販の供給源から出発物質として入手することができる。
【0030】
本発明での使用に好適な式（Ｉａ）の化合物の薬学的調製物は、市販の供給源から入手可能である。例えば、式（Ｉａ）の化合物の薬学的調製物は、ＰＨＹＳＩＯＴＥＮＳ（登録商標）の名称で上市される。式（Ｉａ）の化合物のジェネリック薬学的調製物も利用可能である。
【0031】
式（Ｉ）の化合物中に存在する置換基に応じて、化合物は、塩又は溶媒和物を形成し得る。本発明での使用に好適な式（Ｉ）の化合物の塩は、対イオンが薬学的に許容されるものである。しかしながら、薬学的に許容されない対イオンを有する塩は、例えば、式（Ｉ）の化合物及びその薬学的に許容される塩、並びに生理学的に機能的な誘導体の調製において中間体として使用するために、本発明の範囲内である。本発明に従った使用に好適な塩としては、有機酸又は無機酸で形成されたものが挙げられる。具体的には、本発明に従って酸で形成される好適な塩には、鉱酸、非置換若しくは（例えば、ハロゲンによる）置換である１～４個の炭素原子のアルカンカルボン酸等の強力な有機カルボン酸、例えば、飽和若しくは不飽和ジカルボン酸、例えば、ヒドロキシカルボン酸、例えば、アミノ酸で形成される塩、又は有機スルホン酸、例えば、非置換若しくは（例えば、ハロゲンによる）置換である（Ｃ１～Ｃ４）－アルキル－若しくはアリール－スルホン酸で形成される塩が挙げられる。薬学的に許容される酸付加塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、クエン酸、酒石酸、酢酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、コハク酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、シュウ酸、オキサロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、イセチオン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、フタル酸、アスパラギン酸、並びにグルタミン酸、リジン、及びアルギニン酸から形成される酸付加塩が含まれる。塩に存在し得る好適なカチオンとしては、アルカリ金属カチオン、特にナトリウム、カリウム及びカルシウム、並びにアンモニウム又はアミノカチオンが挙げられる。
【0032】
有機化学の当業者は、多くの有機化合物が、溶媒と複合体を形成し、それらが反応するか、又はそこから沈殿若しくは結晶化し得ることを理解するであろう。これらの複合体は、「溶媒和物」として知られている。例えば、水との複合体は、「水和物」として知られている。複合体は、化学量論量又は非化学量論量で溶媒を組み込んでもよい。溶媒和物は、Ｗａｔｅｒ－Ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ Ｄｒｕｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２ｎｄｅｄ Ｒ．Ｌｕｉ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ｐａｇｅ ５５３、及びＢｙｒｎ ｅｔ ａｌ Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １２（７），１９９５，９４５－９５４に記載されている。溶液中で構成される前に、式（Ｉ）の化合物は、溶媒和物の形態にあってもよい。本発明に従った医薬としての使用に好適な式（Ｉ）の化合物の溶媒和物は、会合する溶媒が薬学的に許容されるものである溶媒和物である。例えば、水和物は、薬学的に許容される溶媒和物である。
【0033】
レシピエントに投与されると、式（Ｉ）の化合物、又はその活性代謝産物若しくは残基に変換可能である化合物は、「プロドラッグ」として知られる。したがって、特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、プロドラッグの形態で提供され得る。プロドラッグは、例えば、体内で、例えば血液中での加水分解によって、医療効果を有するその活性形態に変換され得る。薬学的に許容されるプロドラッグは、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ ａｎｄ Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｖｏｌ．１４ ｏｆ ｔｈｅ Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ（１９７６）；“Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５、及びＥｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，ｅｄ．，Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９８７に記載され、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【0034】
薬学的組成物
式（Ｉ）の化合物を単独で投与することが可能であるが、組成物中に、特に、薬学的組成物中に存在することが好ましい。本発明の薬学的組成物は、式（Ｉ）の化合物と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と、を含む。
式（Ｉ）の化合物を単独で投与することが可能であるが、組成物中に、特に、薬学的組成物中に存在することが好ましい。本発明の薬学的組成物は、式（Ｉ）の化合物と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と、を含む。
【0035】
薬学的組成物としては、経口、非経口（皮下、皮内、骨内注入、筋肉内、血管内（ボーラス若しくは注入）、及び髄内を含む）、腹腔内、経粘膜、経皮、直腸及び局所（皮膚、口腔、舌下及び眼内を含む）投与に好適なものが挙げられるが、最も好適な経路は、治療中の対象の特徴、例えば、人種、年齢、体重、性別、医学的状態、ＡＤＨＤの特定の型（例えば、「衝動型／多動型」、「不注意型」及び「複合型」ＡＤＨＤ）及びその重症度、並びに他の関連する医学的要因及び物理的要因に依存し得る。
【0036】
非経口投与のための製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、バクテリオスタット、及び製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性の滅菌注射溶液、並びに懸濁剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。製剤は、単位用量又は複数用量の容器、例えば、密封アンプル及びバイアル中に提示されてもよく、使用直前に、滅菌液体担体（例えば、生理食塩水又は注射用水）の添加のみを必要とする凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅｄ））状態で保管することができる。即時注射溶液及び懸濁液は、前述の種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製され得る。非経口投与のための例示的な組成物には、注射用の溶液又は懸濁液が含まれ、これには、例えば、好適な非毒性の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒（例えば、マンニトール、１，３－ブタンジオール、水、リンゲル溶液、等張塩化ナトリウム溶液）、又は他の好適な分散剤若しくは湿潤剤及び懸濁剤（合成モノグリセリド若しくはジグリセリドを含む）、並びに脂肪酸（オレイン酸を含む）、又はＣｒｅｍａｐｈｏｒが含有され得る。
【0037】
経鼻投与、エアロゾル投与又は吸入投与のための組成物としては、生理食塩水中の溶液が含まれ、これには、例えば、ベンジルアルコール若しくは他の好適な防腐剤、バイオアベイラビリティを増強するための吸収促進剤、及び／又は当該技術分野で知られているもの等の他の可溶化剤若しくは分散剤が含有され得る。
【0038】
直腸投与用の製剤は、担体（例えば、ココアバター、合成グリセリドエステル、又はポリエチレングリコール）と共に、坐薬として提示されてもよい。このような担体は、典型的には、常温では固体であるが、直腸腔内で液化及び／又は溶解して、薬物を放出する。
【0039】
口内の局所投与（例えば、頬側投与又は舌下投与）のための製剤には、例えば、ロゼンジ（スクロース又はアカシア又はトラガカント等の風味付け基剤中に活性成分を含む）、及びパスティル（ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシア等の基材中に活性成分を含む）が含まれる。局所投与のための例示的な組成物には、プラスチベース（ポリエチレンでゲル化した鉱油）等の局所担体が含まれる。
【0040】
経口投与に好適な薬学的組成物は、各々が所定量の活性成分を含有するカプセル、カシェ若しくは錠剤等の別個の単位として、粉末若しくは顆粒として、水性液体若しくは非水性液体の溶液若しくは懸濁液として、又は水中油の液体エマルション若しくは油中水の液体エマルションとして、提示され得る。式（Ｉ）の化合物はまた、ボーラス、舐剤、又はペーストとして提示され得る。薬学的組成物は、対象に投与されると、式（Ｉ）の化合物のゆっくりとした放出又は制御された放出をもたらす形態で任意選択的に存在し得る。様々な薬学的に許容される担体及びその製剤は、標準的な製剤化の論文、例えば、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。また、Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｊ．ａｎｄ Ｈａｎｓｏｎ，Ｍ．Ａ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ Ｎｏ．１０，Ｓｕｐｐ．４２：２Ｓ，１９８８も参照されたい。
【0041】
好ましい単位投薬量組成物は、探索用量若しくは治療用量、又はその適切な一部の式（Ｉ）の化合物を含有する組成物である。
【0042】
好ましい実施形態では、本発明に従った使用のための組成物は、式（Ｉ）の化合物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とから本質的になる。本発明に従った使用のための例示的な組成物は、クロスポビドン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン（例えば、ポビドンＫ２５）、ヒプロメロース、エチルセルロース、ポリエチレングリコール、タルク、赤色酸化鉄及び二酸化チタン等の薬学的に許容される賦形剤のうちの１つ以上を含む。本発明に従った使用のための更なる例示的な組成物は、コアとコーティングとを有する錠剤であり、コアは、クロスポビドン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、ポビドンを含み、コーティングは、ヒプロメロース、ポリエチレングリコール、赤色酸化鉄、及び二酸化チタンを含む。
【0043】
特に上述の成分に加えて、本発明における使用のための製剤は、問題となる製剤のタイプを考慮して、当該技術分野の従来の他の薬剤を含み得ることを理解すべきである。
【0044】
本発明の組成物は、１つ以上の更なる治療剤を含んでもよい。本発明の組成物中に存在し得る更なる治療剤の例としては、限定されないが、メチルフェニデート、アンフェタミン（例えば、デキサンフェタミン）、リスデキサンフェタミン、アトモキセチン、ビロキサジン、クロニジン、及びグアンファシンが挙げられる。典型的には、１つ以上の更なる治療剤は、アンフェタミン、メチルフェニデート、及びリスデキサンフェタミン等の精神刺激薬である。
【0045】
注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）
本願発明者らは、式（Ｉ）の化合物、及びその薬学的組成物が、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象においてＡＤＨＤの症状を減少させること、又はその発生を遅らせること、ＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある対象においてＡＤＨＤを予防することに特に効果的であることを見出した。
本願発明者らは、式（Ｉ）の化合物、及びその薬学的組成物が、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象においてＡＤＨＤの症状を減少させること、又はその発生を遅らせること、ＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある対象においてＡＤＨＤを予防することに特に効果的であることを見出した。
【0046】
したがって、本発明に従って使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的組成物を、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象、又はＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある対象に投与し得る。対象は、ヒト対象、例えば、ヒト患者であり得る。ヒト対象は、小児（例えば、約１０歳未満）、青年期（例えば、約１０～１９歳の年齢）であってもよく、成人（例えば、約１８～２１歳の年齢より上）であってもよい。
【0047】
ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象は、注意のレベルの障害を伴わない、衝動性及び多動性の挙動を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「衝動型／多動型」ＡＤＨＤ）を有し得る。又は、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象は、多動性又は衝動性を伴わない、注意のレベルの障害を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「不注意型」ＡＤＨＤ）を有し得る。又は、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象は、多動性及び衝動性の挙動を伴う、注意のレベルの低下を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「複合型」ＡＤＨＤ）を有し得る。
【0048】
ＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある対象は、ＡＤＨＤの発症についての既知若しくは疑いがある遺伝的素因を有する対象であってもよく、例えば、対象は、Ｌａｔｒｏｐｈｉｌｉｎ ３（ＬＰＨＮ３）遺伝子中に変異を有していてもよい。ＡＤＨＤに関与する更なる遺伝子変異の例が報告されており（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＦａｒａｏｎｅ ａｎｄ Ｌａｒｓｓｏｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１９，２４，５６２－５７５を参照されたい）、例えば、セロトニントランスポーター（５ＨＴＴ）遺伝子、ドーパミントランスポーター（ＤＡＴ１）遺伝子、Ｄ４ドーパミン受容体（ＤＲＤ４）遺伝子、Ｄ５ドーパミン受容体（ＤＲＤ５）遺伝子、セロトニン１Ｂ受容体遺伝子（ＨＴＲ１Ｂ）、及びシナプトソーム関連タンパク質（ＳＮＡＰ２５）遺伝子のうちの１つ以上の遺伝子の変異が挙げられる。加えて、又はその代わりに、ＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある対象は、妊産婦の妊娠前肥満、子癇前症、高血圧、アセトアミノフェン曝露、及び妊娠中の喫煙、及び小児アトピー性疾患等のＡＤＨＤと関連する１つ以上の潜在的な環境リスク要因に曝露されている対象であり得る。
【0049】
加えて、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象、又はＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある対象は、うつ病、不安障害、反抗挑戦性障害（ＯＤＤ）、行為障害、睡眠の問題（例えば、不眠症の入眠障害）、自閉スペクトラム症（ＡＳＤ）、双極性障害、てんかん、トゥレット症候群、及び／又はディスレクシア等の傾斜困難（ｌｅａｎｉｎｇ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｉｅｓ）等の他の状態の徴候又は症状も有する場合がある。典型的には、対象は、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｎｔａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ（ＤＳＭ）又はＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（ＩＣＤ）に定められたＡＤＨＤについての診断基準を満たす対象である。
【0050】
加えて、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象、又はＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある対象は、物質乱用障害、例えば、アンフェタミン等の精神刺激薬の中毒及び／又は乱用にも罹患している場合がある。例えば、本発明に従って使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその組成物を、１つ以上の確立された精神刺激薬ベースのＡＤＨＤ治療（例えば、メチルフェニデート、デキサンフェタミン、及びリスデキサンフェタミン）が、物質乱用障害のリスクがある対象、その病歴を有する対象、又は現在罹患している対象であるために不適切であるとみなされる対象に投与し得る。
【0051】
本願発明者らは、ＡＤＨＤのゼブラフィッシュモデルを使用して、式（Ｉａ）の化合物が、多動性及び運動衝動性の減少に驚くほど効果的であることを示している。本願発明者らはまた、式（Ｉａ）の化合物が、マウスにおけるスコポラミン誘導性認知機能障害モデルにおける認知機能の回復に驚くほど効果的であることを示している。したがって、特定の実施形態では、本発明に従って使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的組成物を、注意のレベルの低下、多動性及び／又は衝動性の挙動を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「衝動型／多動型」ＡＤＨＤ、「不注意型」ＡＤＨＤ、及び／又は「複合型」ＡＤＨＤ）を有することが知られているか、又は有する疑いがある対象に投与し得る。
【0052】
ＡＤＨＤのゼブラフィッシュモデルにおける多動性及び運動衝動性の低減への式（Ｉａ）の化合物の有効性は、式（Ｉ）の化合物を、多動性及び／又は衝動性の挙動を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「衝動型／多動型」ＡＤＨＤ又は「複合型」ＡＤＨＤ）のための特に魅力的な治療にする。したがって、特定の実施形態では、本発明に従って使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的組成物を、注意のレベルの障害を伴わない、衝動性及び多動性の挙動を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「衝動型／多動型」ＡＤＨＤ）、又は多動性及び衝動性の挙動を伴う、注意のレベルの低下を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「複合型」ＡＤＨＤ）を有することが知られているか、又は有する疑いがある対象に投与し得る。
【0053】
スコポラミン誘導性認知機能障害モデルにおける認知機能の回復への式（Ｉａ）の化合物の有効性は、式（Ｉ）の化合物を、多動性又は衝動性を伴わない、注意のレベルの障害を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「不注意型」ＡＤＨＤ）、又は多動性及び衝動性の挙動を伴う、注意のレベルの低下を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「複合型」ＡＤＨＤ）のための特に魅力的な治療にする。したがって、特定の実施形態では、本発明に従って使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的組成物を、多動性又は衝動性を伴わない、注意のレベルの障害を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「不注意型」ＡＤＨＤ）、又は多動性及び衝動性の挙動を伴う、注意のレベルの低下を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「複合型」ＡＤＨＤ）を有することが知られているか、又は有する疑いがある対象に投与し得る。
【0054】
本発明に従って使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその組成物を、１つ以上の確立されたＡＤＨＤ治療（例えば、メチルフェニデート、デキサンフェタミン、リスデキサンフェタミン、アトモキセチン、ビロキサジン、グアンファシン、及びクロニジン）がＡＤＨＤの症状及び／又は誘導された耐えがたい有害作用のうちの１つ以上の減少に効果的ではなかった対象に投与し得る。確立されたＡＤＨＤ治療によって引き起こされることが知られているか、又は引き起こされる疑いがある有害作用の例としては、睡眠障害、食欲不振、血圧上昇、発育阻害、概日リズムの破壊、及び神経毒性が挙げられる。
【0055】
入眠困難、夜間覚醒、朝の目覚めの困難さ、睡眠呼吸障害、過度の日中の眠気、及び睡眠スケジュールの変動等の睡眠の問題は、ＡＤＨＤを有する患者において一般的であり、ＡＤＨＤの多くの確立された治療は、既に存在する睡眠の問題を悪化させるか、又は患者において睡眠の問題を引き起こすことが報告されている。
【0056】
睡眠関連の有害作用は、特に長期的には、患者にとって管理が非常に困難な場合があり、患者の生活の質に劇的な悪影響を及ぼす場合もある。したがって、睡眠関連の有害作用は、注意のレベルの低下、多動性、及び衝動性挙動等のＡＤＨＤ症状の制御に有益であった治療を患者に中止させる場合がある。
【0057】
本願発明者らはまた、ＡＤＨＤのゼブラフィッシュアッセイにおいて、式（Ｉａ）の化合物が、睡眠断片化、睡眠比、睡眠中の速度、覚醒エピソードの持続時間及び睡眠エピソードの持続時間等の睡眠パラメータに影響を及ぼすことなく、ＡＤＨＤ症状の減少に著しく効果的であることを見出した。したがって、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的組成物は、ＡＤＨＤのための他の治療、例えば、メチルフェニデート、デキサンフェタミン、リスデキサンフェタミン、アトモキセチン、グアンファシン、及びクロニジンと関連する睡眠関連の有害作用を経験した患者のためのセカンドライン治療として特に有用な場合がある。したがって、特定の実施形態では、本発明に従って使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的組成物を、ＡＤＨＤの治療又は予防のための別の医薬を以前に受けている対象に投与してもよく、上述の医薬は、睡眠関連の有害事象に起因して中断されたか、又は減薬された。
【0058】
式（Ｉａ）の化合物が、睡眠パラメータに影響を及ぼすことなく、ＡＤＨＤ症状を減少させる能力はまた、ＡＤＨＤと関連する睡眠の問題を有する患者において、又はＡＤＨＤに加えて睡眠障害を罹患している患者において、これらの化合物を、ＡＤＨＤのための有望な治療にする。したがって、特定の実施形態では、本発明に従って使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的組成物を、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象、又はＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある対象、更にまた、睡眠の問題若しくは睡眠障害を有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象に投与し得る。
【0059】
本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物及びその組成物は、ＡＤＨＤを治療又は予防する方法において有用性を見出し、上述の方法は、式（Ｉ）の化合物及びその組成物を、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある患者、又はＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある患者に投与するステップを含む。
【0060】
式（Ｉ）の化合物はまた、ＡＤＨＤの治療又は予防のための医薬の製造において用途を見出す。例示的な実施形態では、式（Ｉ）の化合物を、注意のレベルの障害を伴わない、衝動性及び多動性の挙動を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「衝動型／多動型」ＡＤＨＤ）、又は多動性及び衝動性の挙動を伴う、注意のレベルの低下を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「複合型」ＡＤＨＤ）、又は多動性又は衝動性を伴わない、注意のレベルの障害を特徴とするＡＤＨＤ（すなわち、「不注意型」ＡＤＨＤ）の治療又は予防のための医薬の製造に使用してもよい。更なる例示的な実施形態では、式（Ｉ）の化合物を、ＡＤＨＤの治療又は予防のための医薬の製造に使用してもよく、上述の医薬は、睡眠関連の有害事象に起因して中断されたか、又は減薬されたＡＤＨＤの治療又は予防のための別の医薬を以前に受けている対象に使用するためのものである。更なる例示的な実施形態では、式（Ｉ）の化合物を、ＡＤＨＤの治療又は予防のための医薬の製造に使用してもよく、上述の医薬は、ＡＤＨＤを有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象、又はＡＤＨＤを発症するリスクがあることが知られているか、若しくはその疑いがある対象、更にまた、睡眠の問題若しくは睡眠障害を有することが知られているか、若しくは有する疑いがある対象に使用するためのものである。
【0061】
投薬レジメン
治療効果を達成するために必要とされる式（Ｉ）の化合物の量は、特定の投与経路、及び治療中の対象の特徴、例えば、人種、年齢、体重、性別、医学的状態、ＡＤＨＤの特定の型（例えば、「衝動型／多動型」、「不注意型」及び「複合型」ＡＤＨＤ）及びその重症度、並びに他の関連する医学的要因及び物理的要因に応じて変化する。通常の熟練した医師は、ＡＤＨＤの治療又は予防に必要な式（Ｉ）の化合物の有効量を容易に決定し、投与することができる。
治療効果を達成するために必要とされる式（Ｉ）の化合物の量は、特定の投与経路、及び治療中の対象の特徴、例えば、人種、年齢、体重、性別、医学的状態、ＡＤＨＤの特定の型（例えば、「衝動型／多動型」、「不注意型」及び「複合型」ＡＤＨＤ）及びその重症度、並びに他の関連する医学的要因及び物理的要因に応じて変化する。通常の熟練した医師は、ＡＤＨＤの治療又は予防に必要な式（Ｉ）の化合物の有効量を容易に決定し、投与することができる。
【0062】
式（Ｉ）の化合物は、対象及び治療されるＡＤＨＤの特徴に応じて、毎日（１日数回を含む）、２日毎又は３日毎、毎週、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎、あるいは更なる多くの単回用量として投与され得る。
【0063】
式（Ｉ）の化合物（任意の対イオン又は溶媒の質量を除く）は、投与当たり約１μｇ～１０００μｇの量で投与され得る。例えば、少なくとも１μｇ、少なくとも５μｇ、少なくとも１０μｇ、少なくとも１５μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも２５μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも９０μｇ、少なくとも１００μｇ、少なくとも１１０μｇ、少なくとも１２０μｇ、少なくとも１３０μｇ、少なくとも１４０μｇ、少なくとも１５０μｇ、少なくとも２００μｇ、少なくとも３００μｇ、少なくとも４００μｇ、少なくとも５００μｇ、少なくとも６００μｇ、少なくとも７００μｇ、少なくとも８００μｇ、少なくとも９００μｇ、又は１０００μｇが対象に投与され得る。
【0064】
典型的には、式（Ｉ）の化合物は、１００μｇ、２００μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、又は６００μｇ（任意の対イオン又は溶媒の質量を除く）の１日１回用量として投与される。代替的に、式（Ｉ）の化合物は、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、又は３００μｇ（任意の対イオン又は溶媒の質量を除く）、１日に２回、３回、又は４回の用量として投与される。例えば、１日当たり１００μｇの１日用量は、５０μｇの２回の別個の用量として投与されてもよく、１回目の用量は、午前中に投与され、２回目の用量は、午後に投与される（例えば、午後６時以降）。又は、例えば、１日当たり２００μｇの１日用量は、１００μｇの２回の別個の用量として投与されてもよく、１回目の用量は、午前中に投与され、２回目の用量は、午後に投与される。又は、例えば、１日当たり３００μｇの１日用量は、２回の別個の用量として投与されてもよく、１００μｇの１回目の用量は、午前中に投与され、２００μｇの２回目の用量は、午後に投与される。又は、例えば、１日当たり４００μｇの１日用量は、２回の別個の用量として投与されてもよく、２００μｇの１回目の用量は、午前中に投与され、２００μｇの２回目の用量は、午後に投与される。
【0065】
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、組成物として投与される。好ましくは、組成物は、本発明に従った使用のための薬学的組成物である。
【0066】
式（Ｉ）の化合物を本発明において唯一の活性成分として使用してもよいが、それを１つ以上の更なる療法的介入と組み合わせて使用することも可能であり、このような組み合わせの使用は、本発明の一実施形態を提供する。更なる療法的介入の例としては、薬理学的介入、食事療法的介入、及び心理学的介入が挙げられる。
【0067】
更なる薬理学的介入は、ＡＤＨＤの治療若しくは予防に有用な治療剤、又は他の薬理学的に活性な物質であり得る。そのような薬剤は、当該技術分野において既知である。本発明で使用するための更なる治療剤の例としては、本明細書に記載されるものが挙げられる。典型的には、更なる治療剤は、アンフェタミン、メチルフェニデート、及びリスデキサンフェタミン等の精神刺激薬である。好適な食事療法的介入の例としては、例えば、補助脂肪酸、及び食事からの人工食品色素の除外が挙げられる。好適な心理学的介入の例として、例えば、認知行動療法（ＣＢＴ）が挙げられる。
【0068】
１つ以上の更なる療法的介入を、式（Ｉ）の化合物の投与と同時に、連続的に、又は別個に使用し得る。そのような組み合わせの個々の構成要素は、療法の経過中の異なる時間に別個に、又は分割された組み合わせ形態若しくは単一の組み合わせ形態で同時に、投与され得る。通常の熟練した医師は、所望の治療効果を有するために必要な１つ以上の療法的介入の有効量を容易に決定し、投与することができる。
【0069】
本発明に従った使用のための好ましい単位投薬量組成物は、有効用量、又はその適切な一部の式（Ｉ）の化合物を含有するものである。特定の組成物からの式（Ｉ）の化合物の放出はまた、例えば、組成物が好適な制御放出賦形剤を含有する場合、持続型であってもよい。
【0070】
キット
本発明は、式（Ｉ）の化合物と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と、任意選択的に、ＡＤＨＤの治療又は予防に有用な１つ以上の更なる治療剤と、を含むキットを提供する。そのような更なる治療剤の例としては、本発明での使用に好適であり、任意選択的に更なる治療剤として本発明の薬学的組成物中に存在するものが挙げられる。
本発明は、式（Ｉ）の化合物と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と、任意選択的に、ＡＤＨＤの治療又は予防に有用な１つ以上の更なる治療剤と、を含むキットを提供する。そのような更なる治療剤の例としては、本発明での使用に好適であり、任意選択的に更なる治療剤として本発明の薬学的組成物中に存在するものが挙げられる。
【0071】
本発明のキットはまた、ＡＤＨＤに好適な食事療法的介入のための説明書及び／又は心理学的介入のための説明書を含有し得る。例えば、キットは、治療を受ける対象に好適な栄養計画のための説明書を含んでいてもよく、及び／又はキットは、認知行動療法（ＣＢＴ）のための説明書／ガイダンスを含んでいてもよい。
【0072】
本発明のキットは、ＡＤＨＤの治療及び予防における使用を見出す。
【0073】
疑義を避けるために、本発明に従ったキット中に存在する式（Ｉ）の化合物は、本発明に従った使用に好適な形態及び量である。好適な薬学的組成物及び製剤が本明細書に記載される。当業者は、本発明のキットに含まれ、本発明に従った使用に好適な式（Ｉ）の化合物の量を容易に決定することができる。
【0074】
均等物
本発明は、本明細書において広範かつ包括的に説明されている。当業者は、本明細書に記載されている全てのパラメータ、寸法、材料、及び構成が、例示的であることを意図しており、実際のパラメータ、寸法、材料、及び／又は構成が、本発明の教示が使用される特定の１つ又は複数の用途に依存するであろうことを容易に理解するであろう。当業者であれば、通常範囲を超えない実験を使用して、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、又は確定することができるであろう。したがって、前述の実施形態は、単なる例として提示され、添付の特許請求の範囲及びそれと均等物の範囲内で、本発明は、具体的に記載されるか、特許請求されるもの以外で実施されてもよいことを理解されたい。本発明は、本明細書に記載の各個々の特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法に関する。加えて、２つ以上のこのような特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法の任意の組み合わせは、このような特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法が、相互に矛盾しない場合、本発明の範囲内に含まれる。更に、包括的な開示に含まれる、より狭い種及び亜属の群の各々も、本発明の一部を形成する。これは、除去された材料が本明細書に具体的に記載されているかどうかにかかわらず、その属から任意の主題を除去する但し書き又は負の制限を伴う本発明の包括的な明細書を含む。
本発明は、本明細書において広範かつ包括的に説明されている。当業者は、本明細書に記載されている全てのパラメータ、寸法、材料、及び構成が、例示的であることを意図しており、実際のパラメータ、寸法、材料、及び／又は構成が、本発明の教示が使用される特定の１つ又は複数の用途に依存するであろうことを容易に理解するであろう。当業者であれば、通常範囲を超えない実験を使用して、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、又は確定することができるであろう。したがって、前述の実施形態は、単なる例として提示され、添付の特許請求の範囲及びそれと均等物の範囲内で、本発明は、具体的に記載されるか、特許請求されるもの以外で実施されてもよいことを理解されたい。本発明は、本明細書に記載の各個々の特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法に関する。加えて、２つ以上のこのような特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法の任意の組み合わせは、このような特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法が、相互に矛盾しない場合、本発明の範囲内に含まれる。更に、包括的な開示に含まれる、より狭い種及び亜属の群の各々も、本発明の一部を形成する。これは、除去された材料が本明細書に具体的に記載されているかどうかにかかわらず、その属から任意の主題を除去する但し書き又は負の制限を伴う本発明の包括的な明細書を含む。
【0075】
参照による組み込み
本明細書で言及又は引用される文献、特許、及び特許出願、並びに他の全ての文書及び電子的に入手可能な情報の内容は、各個々の刊行物が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されるのと同じ程度に、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。出願人らは、任意のそのような文献、特許、特許出願、又は他の物理的文書及び電子的文書からのありとあらゆる資料及び情報を本出願に物理的に組み込む権利を留保する。
本明細書で言及又は引用される文献、特許、及び特許出願、並びに他の全ての文書及び電子的に入手可能な情報の内容は、各個々の刊行物が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されるのと同じ程度に、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。出願人らは、任意のそのような文献、特許、特許出願、又は他の物理的文書及び電子的文書からのありとあらゆる資料及び情報を本出願に物理的に組み込む権利を留保する。
【0076】
以下の実施例は、本発明を例示する。
【実施例】
【0077】
Ｄａｎｉｏ ｒｅｒｉｏは、生物学的精神医学での人気を得ている。その豊富な挙動レパートリー、十分に確立された挙動及び自動化された挙動アッセイの利用可能性は、ゼブラフィッシュを様々なヒト脳障害の有用なモデルにする。脳生理学に関与する神経経路は、全ての主要な神経伝達物質系及び高い遺伝的相同性を含め、高度に保存されている。遺伝子編集技術は、ヒトの障害の正確なモデリングを可能にする。本明細書に記載のＡＤＨＤのｌｐｈｎ３．１ノックアウトモデルは、ヒトＡＤＨＤの特徴、すなわち、多動性、既知のドーパミンアゴニストに対する過敏症、及び既知のＡＤＨＤ化合物の投与後の表現型のレスキューを強固に示す。
【0078】
材料及び方法：
Ｌａｔｒｏｐｈｉｌｉｎ３（Ｌｐｈｎ３．１）遺伝子のノックアウトを保有するゼブラフィッシュ幼生を、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９によって生成した。ゼブラフィッシュは、３Ｌ又は１０Ｌのマルチタンク定流システム（Ａｑｕａｔｉｃ Ｈａｂｉｔａｔｓ、Ａｐｏｐｋａ，ＦＬ，ＵＳＡ）中、１４：１０の明：暗サイクルに維持した。挙動解析のために、Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のホモ接合性ノックアウトを保有する総数８８１の受精後（ｄｐｆ）６日の胚を試験に使用した。Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のホモ接合性ノックアウトを保有する成体ゼブラフィッシュ、及び野生型Ｌｐｈｎ３．１遺伝子を有する成体ゼブラフィッシュに、ＴｅｔｒａＭｉｎフレーク（Ｔｅｔｒａ Ｈｏｌｄｉｎｇ ＧｍｂＨ、Ｍｅｌｌｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）及び生きているアルテミアといった様々な餌を１日に３回与えた。水温を２８．５℃の一定に保持し、１日当たり１０％の率で交換した。卵は午前１０時００分～午前１２時００分の間に収集され、２Ｌタンクに入れられた。次の日に、死亡した卵を除去し、タンクを清掃した。卵を、メチレンブルーと混合した系の水中、２８．５℃で４日間インキュベートした。本試験の全ての手順は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｉｃｅｌａｎｄの規則（規則４６０／２０１７）に厳密に準拠して実施され、承認された。
Ｌａｔｒｏｐｈｉｌｉｎ３（Ｌｐｈｎ３．１）遺伝子のノックアウトを保有するゼブラフィッシュ幼生を、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９によって生成した。ゼブラフィッシュは、３Ｌ又は１０Ｌのマルチタンク定流システム（Ａｑｕａｔｉｃ Ｈａｂｉｔａｔｓ、Ａｐｏｐｋａ，ＦＬ，ＵＳＡ）中、１４：１０の明：暗サイクルに維持した。挙動解析のために、Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のホモ接合性ノックアウトを保有する総数８８１の受精後（ｄｐｆ）６日の胚を試験に使用した。Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のホモ接合性ノックアウトを保有する成体ゼブラフィッシュ、及び野生型Ｌｐｈｎ３．１遺伝子を有する成体ゼブラフィッシュに、ＴｅｔｒａＭｉｎフレーク（Ｔｅｔｒａ Ｈｏｌｄｉｎｇ ＧｍｂＨ、Ｍｅｌｌｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）及び生きているアルテミアといった様々な餌を１日に３回与えた。水温を２８．５℃の一定に保持し、１日当たり１０％の率で交換した。卵は午前１０時００分～午前１２時００分の間に収集され、２Ｌタンクに入れられた。次の日に、死亡した卵を除去し、タンクを清掃した。卵を、メチレンブルーと混合した系の水中、２８．５℃で４日間インキュベートした。本試験の全ての手順は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｉｃｅｌａｎｄの規則（規則４６０／２０１７）に厳密に準拠して実施され、承認された。
【0079】
遺伝子型決定
ウエスタンブロットを使用して、Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のノックダウンについて株を検証した。
ウエスタンブロットを使用して、Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のノックダウンについて株を検証した。
【0080】
挙動記録
５ｄｐｆで、幼生を、水系中の９６マイクロウェルプレート（Ｎｕｎｃ、Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）の個々のウェルに配置した。マイクロウェルプレートを、２４個の赤外線カメラ（Ｉｋｅｇａｍｉ，ＩＣＤ－４９Ｅ、Ｉｋｅｇａｍｉ Ｔｓｕｓｈｉｎｋｉ Ｃｏ，Ｊａｐａｎ）が取り付けられ、２８．５℃に熱制御され、日光から遮断され、下方から白色光（２５５ｌｘ、明フェーズ）及び赤外光（０ｌｘ、暗フェーズ）を照射される特注の活動モニタリングシステムに移した。幼生の挙動を、５Ｈｚで、二次元で追跡した。幼生を、記録前の２４時間前、活動モニタリングシステムに放置して順応させた。除外基準は、幼生が追跡されなかった記録中の試料の割合に基づいていた。閾値を１０％に設定したため、総記録時間の９０％未満しか追跡されなかった幼生を試験から除外した。
５ｄｐｆで、幼生を、水系中の９６マイクロウェルプレート（Ｎｕｎｃ、Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）の個々のウェルに配置した。マイクロウェルプレートを、２４個の赤外線カメラ（Ｉｋｅｇａｍｉ，ＩＣＤ－４９Ｅ、Ｉｋｅｇａｍｉ Ｔｓｕｓｈｉｎｋｉ Ｃｏ，Ｊａｐａｎ）が取り付けられ、２８．５℃に熱制御され、日光から遮断され、下方から白色光（２５５ｌｘ、明フェーズ）及び赤外光（０ｌｘ、暗フェーズ）を照射される特注の活動モニタリングシステムに移した。幼生の挙動を、５Ｈｚで、二次元で追跡した。幼生を、記録前の２４時間前、活動モニタリングシステムに放置して順応させた。除外基準は、幼生が追跡されなかった記録中の試料の割合に基づいていた。閾値を１０％に設定したため、総記録時間の９０％未満しか追跡されなかった幼生を試験から除外した。
【0081】
運動アッセイ
２４時間の順応期間の後、挙動記録を行った。運動活動を、３０分間の間隔で提示された交互の明条件及び暗条件の間に、６ｄｐｆで午後１時００分～午後６時００分の間に記録した。この期間に、幼生が移動した平均距離（ｍｍ）を、明条件に移行直後の５回の別個の３０分間隔中の総遊泳距離の平均として計算した。
２４時間の順応期間の後、挙動記録を行った。運動活動を、３０分間の間隔で提示された交互の明条件及び暗条件の間に、６ｄｐｆで午後１時００分～午後６時００分の間に記録した。この期間に、幼生が移動した平均距離（ｍｍ）を、明条件に移行直後の５回の別個の３０分間隔中の総遊泳距離の平均として計算した。
【0082】
実施例１：ＡＤＨＤのゼブラフィッシュモデルにおける、アトモキセチンと比較したモキソニジンの有効性
Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のホモ接合性ノックアウトを有するゼブラフィッシュ幼生（本明細書では「Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ」と称される）及び野生型Ｌｐｈｎ３．１遺伝子を有するゼブラフィッシュ幼生（本明細書では「Ｌｐｈｎ３．１ ＷＴ」と称される）を、挙動記録が開始される前に、市販のＡＤＨＤ薬物アトモキセチン塩酸塩（トモキセチン塩酸塩）、モキソニジン（Ｐｒｅｓｔｗｉｃｋ、６７４００ Ｉｌｌｋｉｒｃｈ，Ｆｒａｎｃｅ）、又はビヒクル対照に曝露した。
Ｌｐｈｎ３．１遺伝子のホモ接合性ノックアウトを有するゼブラフィッシュ幼生（本明細書では「Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ」と称される）及び野生型Ｌｐｈｎ３．１遺伝子を有するゼブラフィッシュ幼生（本明細書では「Ｌｐｈｎ３．１ ＷＴ」と称される）を、挙動記録が開始される前に、市販のＡＤＨＤ薬物アトモキセチン塩酸塩（トモキセチン塩酸塩）、モキソニジン（Ｐｒｅｓｔｗｉｃｋ、６７４００ Ｉｌｌｋｉｒｃｈ，Ｆｒａｎｃｅ）、又はビヒクル対照に曝露した。
【0083】
記録当日に、薬物の調製を行った。蒸留水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐａｉｓｌｅｙ，ＰＡ４ ９ＲＦ，ＵＫ）を使用して、ストック溶液から薬物を希釈した。各薬物の３つの異なる濃度１μＭ、１０μＭ及び３０μＭを使用した。加えて、ビヒクル対照群に対して、０．０３％ ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）溶液を調製した。記録当日の午前１１時３０分～午後１２時３０分の間に、薬物及びビヒクル対照をマイクロウェルに追加した。
【0084】
データを、ＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎ ＸＴ（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１．５．２０１６、Ｎｏｌｄｕｓ）を使用して取得し、解析のためにＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにエクスポートした。統計解析は、ＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ，ｖｅｒｓｉｏｎ ２６（ＩＢＭ ｃｏｒｐ．、Ａｒｍｏｎｋ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ）を使用して行った。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ及びＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０１、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）を使用して図を製作した。データは、平均±平均の標準誤差（ｓ．ｅ．ｍ）として示される。Ｌｐｈｎ ３．１ナイーブ（すなわち、試験化合物又はビヒクル対照を受けていない未治療幼生）及びＤＭＳＯ幼生（すなわち、ＤＭＳＯビヒクル対照のみを受けている幼生）の解析のために、二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、統計的差異を評価した。モキソニジンで治療されたＬｐｈｎ ３．１幼生の解析のために、ダネット両側事後解析を伴う一元配置ＡＮＯＶＡを使用して、統計的差異を評価した。Ｐ＜０．０５は、統計的に有意と考えられた。
【0085】
結果：
記録の２４時間後、Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生は、顕著な多動性表現型を示すことが明らかになった。Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生について、消灯後のより高いピーク速度（ゼブラフィッシュの活動の典型的な短い増加を引き起こす）、及び点灯期間中のより高い総平均速度が観察された（図１）。図１では、Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生の活動が、上側の線で示され、Ｌｐｈｎ３．１ ＷＴ幼生の活動が、下側の線で示されている。幼生の全体的な活動パターンは、あらゆる期間を統計解析のために選択することができることを示唆していた。
記録の２４時間後、Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生は、顕著な多動性表現型を示すことが明らかになった。Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生について、消灯後のより高いピーク速度（ゼブラフィッシュの活動の典型的な短い増加を引き起こす）、及び点灯期間中のより高い総平均速度が観察された（図１）。図１では、Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生の活動が、上側の線で示され、Ｌｐｈｎ３．１ ＷＴ幼生の活動が、下側の線で示されている。幼生の全体的な活動パターンは、あらゆる期間を統計解析のために選択することができることを示唆していた。
【0086】
点灯期間の平均速度を使用して、第１に、ホモ接合型幼生が、野生型と比較して、実際に統計的に有意に高運動性であること、第２に、ビヒクル（ＤＭＳＯ）が、挙動に影響を与えなかったことを示した（図２）。
【0087】
アトモキセチン及びモキソニジンの両方が、野生型幼生において速度を増加させることがわかった。モキソニジンの効果を、最適用量のアトモキセチンと比較した（図３を参照されたい）。ビヒクル対照を投与されたＬｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生と比較して、全ての用量のモキソニジンが、ビヒクル対照及び未治療幼生とは有意に異なることが明らかになった（用量依存性の様式で）。これらのデータは、モキソニジンが、Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生においてＡＤＨＤ様表現型の減少に効果的であることを示す。
【0088】
更に、モキソニジンは、図５のスペクトログラムによって示されるように、Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生においてＡＤＨＤ様表現型を特定の様式で減少させることがわかり、１０μＭの用量のモキソニジンは、Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生の挙動欠陥を修正するが、野生型幼生の挙動パラメータに影響を及ぼさないことを示す。
【0089】
実施例２：認知機能障害モデルにおける、ドネペジル及びアトモキセチンと比較したモキソニジンの有効性
ゼブラフィッシュ幼生での実験は、モキソニジンによる治療後に、多動性の有意な低下を示す。ＡＤＨＤは、それ自体が注意力及び作業記憶の低下等の認知障害として更に現れるにつれて、モキソニジンの効果を、マウスにおけるスコポラミン誘導性認知機能障害モデルを使用した認知アッセイで試験した。
ゼブラフィッシュ幼生での実験は、モキソニジンによる治療後に、多動性の有意な低下を示す。ＡＤＨＤは、それ自体が注意力及び作業記憶の低下等の認知障害として更に現れるにつれて、モキソニジンの効果を、マウスにおけるスコポラミン誘導性認知機能障害モデルを使用した認知アッセイで試験した。
【0090】
４～５週齢の雄ＣＤ－１マウスを、Ｔ－迷路に割り当て、Ａｎｄｒｉａｍｂｅｌｏｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４（Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｓ Ｐｅｒ，２（４），２０１４，ｅ０００４８、参照により本明細書に含まれる）に記載されるように、Ｔ－迷路交替試験を行った。簡潔に言うと、各マウスを、基部及び２本のアームからなるＴ－迷路に配置した。この実験は、自発的交替の数を評価するための１回の「強制選択（ｆｏｒｃｅｄ－ｃｈｏｉｃｅ）」試行と１４回の「自由選択（ｆｒｅｅ－ｃｈｏｉｃｅ）」試行からなっていた。一元配置ＡＮＯＶＡは、スコポラミンへの曝露及び３つの異なる薬物による治療後の群間で有意差を示した（ｆ＝１７．０８、ｄｆ＝６、ｐ＜０．０００１）。ダネットの多重比較事後検定から、生理食塩水に曝露されたマウスと比較して、認知障害を確認するスコポラミンへの曝露後の自発的交替の有意な減少が認められた（ｐ＜０．０００１）。この効果は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤ドネペジル（ｐ＜０．０００１）及び既知のＡＤＨＤ薬物アトモキセチン（ｐ＜０．０００１）による治療によってレスキューされた。この試験では、モキソニジン（０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ）について、自発的交替の用量依存的な有意な増加が観察され、０．３ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．００１）及び１ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０００１）であり、このことは、スコポラミンに曝露されたマウスと比較して、自発的交替の有意な増加を示している（図４を参照されたい）。
【0091】
実施例３：睡眠行動に対するモキソニジンの効果
モキソニジンは、他の部分的なα２－アドレナリンアゴニストと比較して、より低いレベルの鎮静をもたらすことが以前に示されている。特に、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００２ Ｓｅｐ １７；９９（１９）：１２４７１－６）は、ロータロッドアッセイにおいて、モキソニジンが、クロニジン及びブリモニジンと比較して、より少ない鎮静をもたらすことを観察した。このアッセイは、筋力低下及び／又は運動協調性の尺度を提供し、これらは特定の睡眠状態と共に起こるが、睡眠と無関係に起こる場合もある。ロータロッドアッセイは、睡眠挙動の尺度を提供しない。したがって、睡眠挙動に対するモキソニジンの効果を評価するために、モキソニジン、比較化合物、又は陰性対照（すなわち、生理食塩水若しくはビヒクル対照）による治療後の自由に移動するゼブラフィッシュ（Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生）における睡眠挙動を、Ｌｅｖｉｔａｓ－Ｄｊｅｒｂｉ ｅｔ ａｌ．，（Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２０１７；４４：８９－９３）及びＳｏｒｒｉｂｅｓ ｅｔ ａｌ．，（Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒａｌ Ｃｉｒｃｕｉｔｓ．２０１３ Ｎｏｖ １３；７：１７８）によって記載される基準に沿って評価した。
モキソニジンは、他の部分的なα２－アドレナリンアゴニストと比較して、より低いレベルの鎮静をもたらすことが以前に示されている。特に、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００２ Ｓｅｐ １７；９９（１９）：１２４７１－６）は、ロータロッドアッセイにおいて、モキソニジンが、クロニジン及びブリモニジンと比較して、より少ない鎮静をもたらすことを観察した。このアッセイは、筋力低下及び／又は運動協調性の尺度を提供し、これらは特定の睡眠状態と共に起こるが、睡眠と無関係に起こる場合もある。ロータロッドアッセイは、睡眠挙動の尺度を提供しない。したがって、睡眠挙動に対するモキソニジンの効果を評価するために、モキソニジン、比較化合物、又は陰性対照（すなわち、生理食塩水若しくはビヒクル対照）による治療後の自由に移動するゼブラフィッシュ（Ｌｐｈｎ３．１ ＨＯＭ幼生）における睡眠挙動を、Ｌｅｖｉｔａｓ－Ｄｊｅｒｂｉ ｅｔ ａｌ．，（Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２０１７；４４：８９－９３）及びＳｏｒｒｉｂｅｓ ｅｔ ａｌ．，（Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒａｌ Ｃｉｒｃｕｉｔｓ．２０１３ Ｎｏｖ １３；７：１７８）によって記載される基準に沿って評価した。
【0092】
簡潔に言うと、睡眠挙動を９６ウェルプレート中で記録し、消灯期間（２２：００～０８：００）中に解析した。まず、全ての挙動を、移動又は非移動の１ｓのビン（ｂｉｎ）に二分した。以前、３名の独立した評価者によるフレーム毎の詳細なビデオ解析により、幼生ゼブラフィッシュの移動の閾値として、１．０ｍｍ／秒の速度が採用された。その閾値よりも遅い全ての活動は、非移運として計算された。したがって、移動又は非移動のいずれかの挙動の二分化された記録をレンダリングする。次に、二分化された記録を、睡眠及び覚醒のビンに変換した。以前に成体で確立され、幼生魚に適応させた睡眠基準（Ｙｏｋｏｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ．２００７；５（１０）：２３７９－９７、Ｓｏｒｒｉｂｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒａｌ Ｃｉｒｃｕｉｔｓ．２０１３；７：１７８、及びＳｉｇｕｒｇｅｉｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２０１３；２５６：３７７－９０）に従って、非移動の６以上の連続した１ｓビンを睡眠としてカウントし、他の全てを覚醒としてカウントした。すなわち、７番目の秒及びそれより上の秒は、睡眠として分類され、他の全てのエピソードは、覚醒として分類された。睡眠エピソード及び覚醒エピソードの数が計算されると、５つの異なる睡眠パラメータ（すなわち、睡眠断片化、睡眠比、睡眠中の速度、覚醒エピソードの持続時間、及び睡眠エピソードの持続時間）を評価した。睡眠断片化は、１時間当たりの睡眠エピソードと覚醒エピソードとの間の移行の数として定義された。睡眠比は、魚が眠っているとみなされた総夜間時間の割合として計算された。睡眠中の速度（ｍｍ／秒）は、夜間の平均速度として定義された。覚醒エピソードの持続時間は、覚醒エピソードの平均長さとして定義された。睡眠エピソードの持続時間は、睡眠エピソードの平均長さとして定義された。
【0093】
結果：
モキソニジン、クロニジン、アトモキセチン、又はグアンファシンによる治療の後の各睡眠パラメータについての読み取りは、以下の表１Ａ～１Ｄに含まれる。
モキソニジン、クロニジン、アトモキセチン、又はグアンファシンによる治療の後の各睡眠パラメータについての読み取りは、以下の表１Ａ～１Ｄに含まれる。
【表1A】
【表1B】
【表1C】
【表1D】
【0094】
全ての睡眠パラメータを比較すると、モキソニジンと、３つの他の抗ＡＤＨＤ化合物（クロニジン、アトモキセチン、及びグアンファシン）との間には、明らかな対比がみられた。高用量のモキソニジンは、速度のみをわずかに増加させたが、一方で、比較薬物は、試験された用量の大部分で全ての睡眠パラメータを劇的に変化させた（図６Ａ～６Ｄを参照されたい）。
【0095】
実施例４：ＡＤＨＤのゼブラフィッシュモデルにおけるモキソニジンの効果と、高度に選択的なＩ１－イミダゾリン受容体アゴニストの効果との比較
本明細書に記載のＡＤＨＤのゼブラフィッシュモデルにおいて、既知の高度に選択的なＩ１－イミダゾリン受容体アゴニストがＡＤＨＤ様表現型を減少させる能力を評価し、モキソニジンと比較した。図７に示すように、既知のＩ１－イミダゾリン受容体アゴニストは、ＡＤＨＤモデルにおいてモキソニジンと同様の活性を示すため、ＡＤＨＤモデルにおけるモキソニジンの効果の中心的なものであるモキソニジンによるα２－アドレナリン作動性受容体の部分的な活性化ではなく、Ｉ１－イミダゾリン受容体でのモキソニジンのアゴニスト活性であることを示している。
本明細書に記載のＡＤＨＤのゼブラフィッシュモデルにおいて、既知の高度に選択的なＩ１－イミダゾリン受容体アゴニストがＡＤＨＤ様表現型を減少させる能力を評価し、モキソニジンと比較した。図７に示すように、既知のＩ１－イミダゾリン受容体アゴニストは、ＡＤＨＤモデルにおいてモキソニジンと同様の活性を示すため、ＡＤＨＤモデルにおけるモキソニジンの効果の中心的なものであるモキソニジンによるα２－アドレナリン作動性受容体の部分的な活性化ではなく、Ｉ１－イミダゾリン受容体でのモキソニジンのアゴニスト活性であることを示している。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図7】
【国際調査報告】