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特表2023-549610食料製品及びその他の製品での使用のための組換え成分を産生するための方法及び組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-28
(54)【発明の名称】食料製品及びその他の製品での使用のための組換え成分を産生するための方法及び組成物
(51)【国際特許分類】
C12N 1/15 20060101AFI20231120BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20231120BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20231120BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20231120BHJP
C07K 14/47 20060101ALI20231120BHJP
A23L 33/17 20160101ALI20231120BHJP
A61K 8/97 20170101ALI20231120BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20231120BHJP
A61Q 11/00 20060101ALI20231120BHJP
A61Q 5/00 20060101ALI20231120BHJP
A61Q 1/00 20060101ALI20231120BHJP
C12N 9/99 20060101ALN20231120BHJP
C12N 9/20 20060101ALN20231120BHJP
【ＦＩ】
C12N1/15
C12N1/21
C12N1/19
C12P21/02 C
C07K14/47
A23L33/17
A61K8/97
A61Q19/00
A61Q11/00
A61Q5/00
A61Q1/00
C12N9/99
C12N9/20
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023528556
(86)(22)【出願日】2021-11-15
(85)【翻訳文提出日】2023-07-18
(86)【国際出願番号】 US2021059413
(87)【国際公開番号】W WO2022104227
(87)【国際公開日】2022-05-19
(31)【優先権主張番号】63/113,729
(32)【優先日】2020-11-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/175,278
(32)【優先日】2021-04-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517058738
【氏名又は名称】パーフェクト・デイ・インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001243
【氏名又は名称】弁理士法人谷・阿部特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ティモシー ガイストリンガー
(72)【発明者】
【氏名】ヘザー ジャンセン
(72)【発明者】
【氏名】ラビラジシン ジャラ
(72)【発明者】
【氏名】ヘンドリク マーマン
(72)【発明者】
【氏名】タイ ワゴナー
(72)【発明者】
【氏名】ティモシー スコット ジョンソン
(72)【発明者】
【氏名】ヴィンセント ウェイ－シアン ウー
(72)【発明者】
【氏名】フランセスカ マネア
(72)【発明者】
【氏名】バラクリシュナン ラメシュ
【テーマコード（参考）】
4B018
4B064
4B065
4C083
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B018LB07
4B018MD20
4B018MF01
4B064AG01
4B064CA05
4B064CA06
4B064CA19
4B064CE12
4B064DA10
4B065AA70X
4B065AA77X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA41
4C083AA031
4C083AA032
4C083CC01
4C083DD17
4C083EE11
4C083EE21
4C083EE31
4C083EE50
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045CA43
4H045EA01
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
本開示は、食料製品又は他の製品での使用のための組換え成分を産生するための方法及び組成物に関する。本開示は更に、かかる方法及び組成物によって産生された組換え成分を含む組成物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞であって、対応する組換え宿主細胞と比較して、前記組換え宿主細胞が、ＦＦＡ放出酵素の減少した産生及び／又は活性を含み、前記ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、若しくはＧ０ＲＭＩ３、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、若しくはＧ０ＲＭＩ３と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含む１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、組換え宿主細胞。
【請求項2】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項3】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項4】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項5】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、並びにＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項6】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、並びにＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項7】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、並びにＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項8】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、並びにＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項9】
前記ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含む第２のＦＦＡ放出酵素を更に含む、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項10】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項11】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項12】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項13】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、並びにＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項14】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、並びにＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項15】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、並びにＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項16】
前記１つ以上の第１のＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素、並びにＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３、又はＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３と少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項17】
前記組換え宿主細胞が、細菌、酵母、又は糸状真菌に由来する、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項18】
前記糸状真菌が、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ（例えば、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ）、又はＭｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ（例えば、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）から選択される、請求項１７に記載の組換え宿主細胞。
【請求項19】
前記組換え成分が、組換えタンパク質である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項20】
前記組換えタンパク質が、組換え乳タンパク質である、請求項１９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項21】
前記組換え乳タンパク質が、組換えカゼインである、請求項２０に記載の組換え宿主細胞。
【請求項22】
前記組換え乳タンパク質が、組換え乳清タンパク質である、請求項２０に記載の組換え宿主細胞。
【請求項23】
前記組換え乳タンパク質が、ウシ、ヒト、ヒツジ、ヤギ、又はウマに見出される天然乳タンパク質のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列、又はそのホモログを有する、請求項２０に記載の組換え宿主細胞。
【請求項24】
組換え成分を産生するための方法であって、前記組換え成分の産生に好適な条件下で、請求項１～２３のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を培養培地中で発酵させることを含む、方法。
【請求項25】
組換え成分を含む組成物を産生するための方法であって、請求項２４に記載の方法によって前記組換え成分を産生することを含む、方法。
【請求項26】
組換え成分を含む組成物を生産するための方法であって、発酵ブロス、調製物、又は組成物に、ＦＦＡ放出酵素の阻害剤を添加することを含み、前記ＦＦＡ放出酵素が、その触媒ドメイン中にセリン残基を含む、方法。
【請求項27】
組換え成分を含む組成物を生産するための方法であって、活性ベースのタンパク質プロファイリング（ＡＢＰＰ）小分子プローブを使用して、前記組換え成分からＦＦＡ放出酵素を精製することを含む、方法。
【請求項28】
組換え成分を含む組成物であって、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の方法によって生産される、組成物。
【請求項29】
前記組成物が、乾燥質量で約０．１％～約１００％の前記組換え成分を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項30】
前記組成物が、食料製品である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項31】
前記食料製品が、補助食料製品である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項32】
前記補助食料製品が、補助乳製品である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項33】
前記補助食料製品が、補助卵製品である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項34】
前記食料製品が、代用食料製品である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項35】
前記代用食料製品が、代用乳製品である、請求項３４に記載の組成物。
【請求項36】
前記代用食料製品が、代用卵製品である、請求項３４に記載の組成物。
【請求項37】
前記組成物が、化粧品又はパーソナルケア組成物である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項38】
前記組成物が、粉末である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項39】
前記組換え成分が、組換えタンパク質である、請求項２８～３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項40】
前記組成物が、前記組換えタンパク質以外のいずれのタンパク質も本質的に含まない、請求項３９に記載の組成物。
【請求項41】
前記組成物が、前記組換えタンパク質以外のいずれの組換えタンパク質も本質的に含まない、請求項３９に記載の組成物。
【請求項42】
前記組換えタンパク質が、組換え乳タンパク質である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項43】
前記組成物が、前記組換え乳タンパク質以外のいずれのタンパク質も本質的に含まない、請求項４２に記載の組成物。
【請求項44】
前記組成物が、前記組換え乳タンパク質以外のいずれの組換えタンパク質も本質的に含まない、請求項４２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本出願は、２０２０年１１月１３日に出願された米国仮特許出願第６３／１１３，７２９号、及び２０２１年４月１５日に出願された米国仮特許出願第６３／１７５，２７８号に対する優先権を主張するものであり、これらは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年１１月１３日に出願された米国仮特許出願第６３／１１３，７２９号、及び２０２１年４月１５日に出願された米国仮特許出願第６３／１７５，２７８号に対する優先権を主張するものであり、これらは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
本開示は、概して、食料製品又は他の製品での使用のための組換え成分を産生するための方法及び組成物に関する。本開示は更に、概して、かかる方法及び組成物によって産生された組換え成分を含む組成物に関する。
【背景技術】
【0003】
動物由来食料製品（例えば、肉、乳、卵）は、評判の良い栄養源である。動物由来食料製品は、高品質のタンパク質、必須ミネラル（例えば、カルシウム、リン、亜鉛、マグネシウム）、及びビタミン（例えば、リボフラビン、ビタミンＡ、ビタミンＢ１２）を含む。更に、多くのかかる食料製品は、多種多様な派生的食料製品（例えば、ヨーグルト、チーズ、クリーム、アイスクリーム、バター、マヨネーズ）の生産を可能にする有利な機能的特性を有する。
【0004】
しかしながら、動物由来食料製品は、ヒトで不健康な反応を引き起こすことがある成分（例えば、ラクトース、アレルゲン、飽和脂肪、コレステロール）を含む。更に、これらの食料製品の生産は、動物愛護及び環境に重大な影響を及ぼし、かつ残留農薬、重金属、アフラトキシンＭ１、及び病原体による汚染の可能性をもつ畜産を含む。
【0005】
これらの懸念は、動物由来食料製品及びその他の製品（例えば、化粧品、パーソナルケア製品）の代替物の開発を活性化させた。いくつかのかかる代替物は、植物由来成分（例えば、タンパク質、脂質、ビタミン）を含む。しかしながら、動物由来食料製品及び他の製品の代替物は、組換え的に（例えば、微生物宿主細胞を使用して）産生される成分（例えば、タンパク質、脂質）から生産されることが増えている。
【0006】
食料製品及び他の製品での組換え成分の使用は、新たな問題を引き起こしている。１つのかかる問題は、組換え成分から産生される食料製品及び他の製品が、相当量のそのような組換え成分を（組換え成分が利用された以前の製品では典型的であったよりも多く）含んでいることが多く、大量の組換え成分の使用は、組換え成分が得られる組換え宿主細胞により同時に産生され、かつ潜在的に、組換え成分と共精製する、他の望ましくないこともある成分による影響を受け得るという事実である。
【0007】
かかる他の成分の１つは、遊離脂肪酸（ＦＦＡ、すなわち、ＦＦＡ放出酵素）の放出につながる活性を有する酵素である。ＦＦＡ放出酵素は、ジグリセリド、トリグリセリド、リン脂質、リポタンパク質、及び他の分子の結合を加水分解して、ＦＦＡを放出することができる。ＦＦＡ放出酵素の基質は、組換え成分が使用され得る様々な食料製品及び他の製品に含まれる。いくつかのかかる食料製品及び他の製品では、ＦＦＡの放出は、例えば、嫌な香り及び／又は味を生じ、乳濁液の形成を妨げ、テクスチャに望ましくない効果を及ぼし、必須栄養素（例えば、ビタミン）と相互作用をして、それによって養分含量を減らし、貯蔵寿命を低減することにより有害効果を及ぼし得る。食料製品及び他の製品中のＦＦＡの産生は、例えば、所望の香味及び／又は芳香プロファイル（例えば、熟成チーズの香味プロファイル）を生じる、又はプロセスチーズで使用するための酵素処理チーズを作ることにより有益な効果を及ぼし得る。したがって、例えば、酸敗臭及び味覚の生成が遅延し、エマルション形成が影響を受けず、栄養含有量が維持され、テクスチャが調節されず、貯蔵寿命が短くならず、かつ／又は所望の風味及び／若しくは芳香プロファイルが産生されるように、特にＦＦＡ放出酵素活性に関して、動物由来食料製品及び他の製品の代替物を生産するための組換え成分の産生、加工、及び使用において、難題を克服してきた。
【0008】
したがって、動物由来食料製品及びその他の製品の代替物が、組換え成分から、並びにかかる方法において使用され、かつかかる方法から得られる組成物のために生産され得る方法に対するニーズが存在する。
【0009】
参照による組み込み
本明細書において述べられるすべての刊行物、特許、特許出願、配列、データベースエントリ、科学出版物、及び他の参考文献は、個々の文献、特許、特許出願、配列、データベースエントリ、科学出版物、又は他の参考文献がそれぞれ具体的にかつ個々に示された場合と同じ程度に参照によりそれらの全体が組み込まれるものとする。参照により組み込まれる材料が本開示と矛盾するか、又は一貫していない限りでは、本開示は、定義を含めて、任意のかかる材料に優先する。
本明細書において述べられるすべての刊行物、特許、特許出願、配列、データベースエントリ、科学出版物、及び他の参考文献は、個々の文献、特許、特許出願、配列、データベースエントリ、科学出版物、又は他の参考文献がそれぞれ具体的にかつ個々に示された場合と同じ程度に参照によりそれらの全体が組み込まれるものとする。参照により組み込まれる材料が本開示と矛盾するか、又は一貫していない限りでは、本開示は、定義を含めて、任意のかかる材料に優先する。
【発明の概要】
【0010】
様々な態様では、組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞が本明細書に提供され、組換え宿主細胞は、対応する組換え宿主細胞中に含まれるＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は活性と比較して、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含む。
【0011】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０Ｒ９Ｊ９、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＧ０、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＢＺ６、Ｇ０ＲＤ１６、Ｇ０ＲＤＫ５、Ｇ０ＲＤＵ７、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ０４、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＧＮ７、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＧＱ７、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＩＶ５、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＪＣ６、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＥ６、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＢ０、Ｇ０ＲＬＢ７、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭ１４、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＮＦ８、Ｇ０ＲＰＱ８、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＱＧ３、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＮ５、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＴＲ６、Ｇ０ＲＴＴ４、Ｇ０ＲＵＩ０、Ｇ０ＲＵＺ９、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＷ７３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＷＳ１、Ｇ０ＲＷＴ９、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｇ０ＲＶＤ２、若しくはＧ０Ｒ８Ａ６、又はそれらのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0012】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＧＤ５、若しくはＧ０ＲＫＨ７、又はそれらのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択されるＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0013】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、若しくはＧ０ＲＭＩ３、又はそれらのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択されるＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0014】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択されるＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0015】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択されるＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0016】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択されるＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0017】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択されるＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0018】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０Ｒ９Ｊ９、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＧ０、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＢＺ６、Ｇ０ＲＤ１６、Ｇ０ＲＤＫ５、Ｇ０ＲＤＵ７、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ０４、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＧＮ７、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＧＱ７、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＩＶ５、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＪＣ６、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＥ６、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＢ０、Ｇ０ＲＬＢ７、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭ１４、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＮＦ８、Ｇ０ＲＰＱ８、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＱＧ３、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＮ５、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＴＲ６、Ｇ０ＲＴＴ４、Ｇ０ＲＵＩ０、Ｇ０ＲＵＺ９、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＷ７３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＷＳ１、Ｇ０ＲＷＴ９、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｒ０ＲＶＤ２、若しくはＧ０Ｒ８Ａ６、又はそれらのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0019】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＧＤ５、若しくはＧ０ＲＫＨ７、又はそれらのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0020】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＷＴ９、若しくはＧ０ＲＸ８２、又はそれらのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0021】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、若しくはＧ０ＲＭＩ３、又はそれらのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0022】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３、若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0023】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0024】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0025】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第３のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0026】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第３のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0027】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第３のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0028】
ＦＦＡ放出酵素が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第１のＦＦＡ放出酵素、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第２のＦＦＡ放出酵素、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第３のＦＦＡ放出酵素、及びＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４若しくはそのホモログ、又はそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素から選択される第４のＦＦＡ放出酵素を含むか、又はそれらからなる、段落［００１０］の組換え宿主細胞。
【0029】
ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性が、ＦＦＡ放出酵素の減少された産生及び／又は活性を含む、段落［００１０］～［００２８］のうちのいずれかの組換え宿主細胞。
【0030】
ＦＦＡ放出酵素の減少された産生及び／又は活性が、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の減少した産生及び／又は活性である、段落［００２９］の組換え宿主細胞。
【0031】
組換え宿主細胞が、細菌、酵母、又は糸状真菌に由来する、段落［００１０］～［００３０］のうちのいずれかの組換え宿主細胞。
【0032】
糸状真菌が、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍ（例えば、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ）、又はＭｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ（例えば、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）から選択される、段落［００３１］の組換え宿主細胞。
【0033】
組換え成分が、組換えタンパク質である、段落［００１０］～［００３２］のうちのいずれかの組換え宿主細胞。
【0034】
組換えタンパク質が、組換え乳タンパク質である、段落［００３３］の組換え宿主細胞。
【0035】
組換え乳タンパク質が、組換えカゼインである、段落［００３４］の組換え宿主細胞。
【0036】
組換え乳タンパク質が、組換え乳清タンパク質である、段落［００３４］の組換え宿主細胞。
【0037】
組換え型乳タンパク質が、ウシ、ヒト、ヒツジ、ヤギ、又はウマに由来する、段落［００３４］の組換え型宿主細胞。
【0038】
様々な態様では、組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞によって産生された組換え成分を含む組成物を生産するための方法が本明細書に提供され、方法は、ＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は活性を調節することを含む。
【0039】
組換え宿主細胞が、段落［００１０］～［００３７］のうちのいずれかの組換え宿主細胞である、段落［００３８］の方法。
【0040】
ＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は活性を調節することが、ＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は活性を減少させることを含む、段落［００３８］の方法。
【0041】
ＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は活性を減少させることが、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である、段落［００４０］の方法。
【0042】
ＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は活性を減少させることが、発酵ブロス、調製物、又は組成物に、ＦＦＡ放出酵素の阻害剤を添加することを含む、段落［００４０］又は［００４１］の方法。
【0043】
ＦＦＡ放出酵素の阻害剤が、ＦＦＡ放出酵素の阻害剤であり、ＦＦＡ放出酵素が、その触媒ドメイン中にセリン残基を含む、段落［００４２］の方法。
【0044】
ＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は活性を減少させることが、ＦＦＡ放出酵素活性から組換え成分を精製すること、及び／又は組換え成分からＦＦＡ放出酵素を精製することを含む、段落［００４０］又は［００４１］の方法。
【0045】
組換え成分からＦＦＡ放出酵素を精製することが、活性ベースのタンパク質プロファイリング（ＡＢＰＰ）小分子プローブの使用を含む、段落［００４４］の方法。
【0046】
様々な態様では、組換え成分を産生するための方法が本明細書に提供され、方法は、組換え成分の産生に好適な条件下で、段落［００１０］～［００３７］のうちのいずれかの組換え宿主細胞を培養培地中で発酵させることを含む。
【0047】
方法が、組換え成分を精製して、組換え成分を含む調製物を得ること、及び／又は組換え成分を後処理することを更に含む、段落［００４６］の方法。
【0048】
精製することが、９０％超の純度で組換え成分を含む調製物を得ることを含む、段落［００４７］の方法。
【0049】
後処理することが、粉末を得るために組換え成分を噴霧乾燥又は濃縮することを含む、段落［００４７］の方法。
【0050】
様々な態様では、組換え成分を含む組成物が本明細書に提供され、組成物は、段落［００３８］～［００４５］のうちのいずれかの方法によって生産される。
【0051】
組成物が、乾燥質量で約０．１％～約１００％の組換え成分を含む、段落［００５０］の組成物。
【0052】
組成物が、食料製品である、段落［００５０］の組成物。
【0053】
組成物が、補助食料製品である、段落［００５２］の組成物。
【0054】
組成物が、補助乳製品である、段落［００５３］の組成物。
【0055】
組成物が、補助卵製品である、段落［００５３］の組成物。
【0056】
組成物が、代用食料製品である、段落［００５２］の組成物。
【0057】
組成物が、代用乳製品である、段落［００５６］の組成物。
【0058】
組成物が、代用卵製品である、段落［００５７］の組成物。
【0059】
組成物が、化粧品又はパーソナルケア製品である、段落［００５０］の組成物。
【0060】
組換え成分が、組換えタンパク質である、段落［００５０］～［００５９］のうちのいずれかの組成物。
【0061】
組成物が、組換えタンパク質以外のいずれのタンパク質も本質的に含まない、段落［００６０］の組成物。
【0062】
組成物が、組換えタンパク質以外のいずれの組換えタンパク質も本質的に含まない、段落［００６０］の組成物。
【0063】
組換えタンパク質が、組換え乳タンパク質である、段落［００６０］の組成物。
【0064】
組成物が、組換え乳タンパク質以外のいずれのタンパク質も本質的に含まない、段落［００６３］の組成物。
【0065】
組成物が、組換え乳タンパク質以外のいずれの組換えタンパク質も本質的に含まない、段落［００６３］の組成物。
【0066】
様々な態様では、ＦＦＡ放出酵素をコードする組換え発現構築物を含み、かつ対応する宿主細胞と比較してＦＦＡ放出酵素の増加した産生及び／又は活性を含む、組換え型宿主細胞が本明細書に提供される。
【0067】
ＦＦＡ放出が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０Ｒ９Ｊ９、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＧ０、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＢＺ６、Ｇ０ＲＤ１６、Ｇ０ＲＤＫ５、Ｇ０ＲＤＵ７、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ０４、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＧＮ７、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＧＱ７、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＩＶ５、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＪＣ６、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＥ６、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＢ０、Ｇ０ＲＬＢ７、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭ１４、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＮＦ８、Ｇ０ＲＰＱ８、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＱＧ３、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＮ５、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＴＲ６、Ｇ０ＲＴＴ４、Ｇ０ＲＵＩ０、Ｇ０ＲＵＺ９、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＷ７３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＷＳ１、Ｇ０ＲＷＴ９、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｇ０ＲＶＤ２、若しくはＧ０Ｒ８Ａ６、又はそれらのホモログを含むＦＦＡ放出酵素から選択される、段落［００６６］の組換え宿主細胞。
【0068】
組換え宿主細胞が、細菌、酵母、又は糸状真菌に由来する、段落［００６６］又は［００６７］の組換え宿主細胞。
【0069】
糸状真菌が、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍ（例えば、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ）、又はＭｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ（例えば、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）から選択される、段落［００６８］の組換え宿主細胞。
【0070】
ＦＦＡ放出酵素の増加した産生及び／又は活性が、少なくとも５０％の産生及び／又は活性の増加である、段落［００６６］～［００６９］のうちのいずれかの組換え宿主細胞。
【0071】
様々な態様では、ＦＦＡ放出酵素を産生するための方法が本明細書に提供され、方法は、段落［００６６］～［００７０］のうちのいずれかの組換え宿主細胞を得ることと、ＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は分泌に好適な条件下で、組換え宿主細胞を培養培地中で培養することと、任意選択で、ＦＦＡ放出酵素を精製することとを含む。
【図面の簡単な説明】
【0072】
例示的な実施形態は、添付の図面を使用することによって、追加の特異性及び詳細とともに記載し、説明する。
【図1A】図１Ａ及び１Ｂは、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４転写物の存在のための組換えタンパク質（すなわち、組換えβ－ラクトグロブリン）を産生するＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞のＲＮＡｓｅｑ分析の結果を示す箱ひげ図を提供する図であり、図１Ｂは、本発明の様々な実施形態に従う、図１Ａに示されるＧ０ＲＧＱ０プロットの詳細図を提供する図である。ＦＰＫＭ＝１００万マッピングフラグメント当たりの転写物のキロベース当たりの断片。
【図1B】図１Ａ及び１Ｂは、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４転写物の存在のための組換えタンパク質（すなわち、組換えβ－ラクトグロブリン）を産生するＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞のＲＮＡｓｅｑ分析の結果を示す箱ひげ図を提供する図であり、図１Ｂは、本発明の様々な実施形態に従う、図１Ａに示されるＧ０ＲＧＱ０プロットの詳細図を提供する図である。ＦＰＫＭ＝１００万マッピングフラグメント当たりの転写物のキロベース当たりの断片。
【図2】図２は、Ｔｈｅｒｍｏ ＡｃｔｉｖＸ ＴＡＭＲＡ－ＦＰフルオロホスホネート（それらの触媒ドメイン中にセリン残基を含むヒドロラーゼの阻害剤）の不在下（試料１）又は存在下（試料２）での組換えタンパク質（すなわち、組換えβ－ラクトグロブリン）調製物中に含まれるパラ－フェニル（ｐＮＰ）アシルエステル加水分解活性を示す棒グラフであり、本発明の様々な代表的実施形態によるＦＦＡ放出活性の除去を示す図である。活性単位Ｕ／ｇ＝組換えタンパク質の１グラム当たりの１時間当たりのマイクロモルｐＮＰ形成、アシル基：Ｃ４＝ブチレート、Ｃ８＝オクタノエート、Ｃ１２＝ラウレート、及びＣ１６＝パルミテート。
【図5A】図５Ａは、４つの独立した組換えＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ形質転換体の発酵ブロス中に含まれる組換えＧ０ＲＭＩ３タンパク質のウェスタンブロットを示す図であり、図５Ｂは、３つの独立した組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ形質転換体によって産生された組換えＧ０ＲＧＱ０のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを示す図であり、図５Ｃは、本発明の様々な代表的実施形態による、３つの独立した組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ形質転換体によって産生された組換えＧ０ＲＬＨ４のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを示す図である。
【図5B】図５Ａは、４つの独立した組換えＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ形質転換体の発酵ブロス中に含まれる組換えＧ０ＲＭＩ３タンパク質のウェスタンブロットを示す図であり、図５Ｂは、３つの独立した組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ形質転換体によって産生された組換えＧ０ＲＧＱ０のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを示す図であり、図５Ｃは、本発明の様々な代表的実施形態による、３つの独立した組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ形質転換体によって産生された組換えＧ０ＲＬＨ４のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを示す図である。
【図5C】図５Ａは、４つの独立した組換えＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ形質転換体の発酵ブロス中に含まれる組換えＧ０ＲＭＩ３タンパク質のウェスタンブロットを示す図であり、図５Ｂは、３つの独立した組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ形質転換体によって産生された組換えＧ０ＲＧＱ０のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを示す図であり、図５Ｃは、本発明の様々な代表的実施形態による、３つの独立した組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ形質転換体によって産生された組換えＧ０ＲＬＨ４のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0073】
本発明のその後の議論は、例示及び説明の目的で提示されており、本発明の範囲を本明細書に開示される実施形態に限定することを意図するものではない。したがって、開示される実施形態の変形及び修飾は、例えば、本開示を理解した後の当業者の技術及び知識の範囲内であり得るように、本発明の範囲内である。これは、任意の特許適格性のある主題を公に献呈することを意図せずに、本明細書に開示されるものの代替的、互換的、及び／若しくは同等の構造、機能、範囲、又は工程を含む、許容される程度に代替的実施形態を含む権利を取得することを意図している。別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての専門及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者が一般に理解しているのと同じ意味を有する。更に、文脈によって別段要求されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【0074】
定義
本明細書で使用される場合、「１つ（ａ）」及び「１つ（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」という用語並びに類似の言及は、本明細書で別段指示されない限り、又は文脈と明白に矛盾していない限り、単数形及び複数形（例えば、「少なくとも１つ」又は「１つ以上」を意味する）の両方を指す。例えば、「化合物」という用語は、「少なくとも１つの化合物」及び「１つ以上の化合物」という用語と同義であり、単一の化合物又はその混合物を含む複数の化合物を指し得る。
本明細書で使用される場合、「１つ（ａ）」及び「１つ（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」という用語並びに類似の言及は、本明細書で別段指示されない限り、又は文脈と明白に矛盾していない限り、単数形及び複数形（例えば、「少なくとも１つ」又は「１つ以上」を意味する）の両方を指す。例えば、「化合物」という用語は、「少なくとも１つの化合物」及び「１つ以上の化合物」という用語と同義であり、単一の化合物又はその混合物を含む複数の化合物を指し得る。
【0075】
本明細書で使用される場合、「及び／又は」という用語は、互いに組み合わせた又は互いを排除した複数の構成要素を指す。例えば、「ｘ、ｙ、及び／又はｚ」は、「ｘ」単独、「ｙ」単独、「ｚ」単独、「ｘ、ｙ、及びｚ」、「（ｘ及びｙ）若しくはｚ」、「（ｘ及びｚ）若しくはｙ」、「（ｙ及びｚ）若しくはｙ」、「ｘ及びｙ」単独、「ｙ及びｚ」単独、又は「ｘ若しくはｙ若しくはｚ」を指し得る。
【0076】
本明細書で使用される場合、「少なくとも」又は「１つ以上」という用語は、その後に列挙される要素のうちの１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、又はすべてを指す。
【0077】
ポリヌクレオチドの文脈において本明細書で使用される場合、「コードする」という用語は、適切な調節配列の制御下に置かれたときに、ポリペプチドに翻訳され得るｍＲＮＡに転写されるコード配列を含むポリヌクレオチドを指す。コード配列は、一般に、開始コドン（例えば、ＡＴＧ）で始まり、終止コドン（例えば、ＵＡＡ、ＵＡＧ、及びＵＧＡ）で終わる。コード配列は、単一のオープンリーディングフレーム、又はいくつかのオープンリーディングフレーム（例えば、イントロンによって分離された）を含み得る。
【0078】
本明細書で使用される場合、「内因性」という用語は、記載される文脈において天然に存在するものを指す。細胞により産生されるタンパク質に関連して使用される場合、その用語は、タンパク質が細胞により天然に産生されることを暗示する。細胞内に含まれるポリヌクレオチドに関連して使用される場合、その用語は、ポリヌクレオチドが細胞内に天然に含まれること（例えば、天然細胞中に存在するか、又は天然細胞中の同じゲノム位置に位置する）を暗示する。
【0079】
本明細書で使用される場合、「ＦＦＡ放出酵素活性」又は「ＦＦＡ放出酵素の活性」という用語は、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の放出につながる結合（例えば、ヒドロラーゼエステル結合）を加水分解することができる酵素の活性を指す。ＦＦＡ放出酵素は、酵素コミッション番号（ＥＣ番号）３．１で指定される。その用語は、本明細書で互換的に使用される。
【0080】
本明細書で使用される用語「本質的に含まない」という用語は、示される成分が一般的な分析方法により示される組成物中で検出可能ではないこと、又は示される成分が機能的ではないほど微量にしか存在していないことを指す。この文脈で使用される場合、「機能的な」という用語は、指示された成分を微量に含む組成物の特性に物質的に寄与しないこと、又は指示された成分を微量に含む指示された組成物において物質活性（例えば、化学活性、酵素活性）をもたないこと、又は指示された成分を微量に含む組成物の使用又は消費について健康有害効果を有しないことを指す。本明細書で使用される場合、「物質的に寄与する」という用語は、成分の不在下（例えば、示される成分を欠くことを除いて、組成物と同一である参照組成物において）で、属性が、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、又は少なくとも５０％少ない存在／活性／測定可能である程度まで、組成物の属性に寄与する、示される成分を指す。
【0081】
本明細書で使用される場合、「発酵ブロス」という用語は、組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を含む培養物を指す。
【0082】
本明細書で使用される場合、「糸状真菌」という用語は、細区分Ｅｕｍｙｃｏｔａ及びＯｏｍｙｃｏｔａの任意の糸状形態由来の生物を指す（Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ，Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｔｈｅ Ｆｕｎｇｉ，８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，ＣＡＢ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫによって定義される）。糸状真菌は、栄養生長中のその菌糸の伸長により酵母とは区別される。
【0083】
本明細書で使用される場合、「真菌」という用語は、ｐｈｙｌａ Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａｓ、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ、Ｚｙｇｏｍｙｃｏｔａ、及びＣｈｙｔｈｒｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ、Ｏｏｍｙｃｏｔａ、及びＧｌｏｍｅｒｏｍｙｃｏｔａの生物を指す。しかしながら、真菌分類学は絶えず進化しており、したがって、真菌界のこの特定の定義は将来調整される可能性があることは理解されている。
【0084】
本明細書で使用される場合、「異種」という用語は、記載される文脈において天然に存在していないことを指す。細胞により産生されるタンパク質に関連して使用される場合、その用語は、タンパク質が細胞により天然には産生されないことを暗示する。細胞内に含まれるポリヌクレオチドに関連して使用される場合、その用語は、異種ポリペプチドがそれ自体内因性（同じ細胞又はその子孫に由来する）又は外因性（異なる細胞又はその子孫に由来する）であるかどうかにかかわらず、ポリヌクレオチドが細胞内に天然に含まれないこと（例えば、天然細胞中に存在しないか、又は天然細胞中のゲノム位置に位置しない）を暗示する。
【0085】
本明細書で使用される場合、「ホモログ」という用語は、参照タンパク質に含まれる同様の長さ（すなわち、クエリーアミノ酸配列の長さの＋／－２０％以内である長さ）のアミノ酸の配列と少なくとも４０％（例えば、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、又は１００％）同一であり、かつ参照タンパク質のものと同様（例えば、その５０％以内、４０％以内、３０％以内、２０％以内、又は１０％以内）又は同一である機能特性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質を指す。この用語は、タンパク質の多型バリアント、種間ホモログ（例えば、オルソログ）、パラログ、及び対立遺伝子、並びに遺伝子工学技術を使用する人工のバリアントを含む。
【0086】
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫も指す。ある特定の修飾が、変異又は環境の影響のいずれかに起因して後続の世代で起こり得るため、かかる子孫は実際には対象細胞と同一ではない場合があるが、本明細書で使用される用語「宿主細胞」の範囲内に依然として含まれる。
【0087】
本明細書で使用される場合、２つ以上のポリヌクレオチド又はポリペプチド配列の文脈における「同一性」又は「同一」という用語は、２つ以上のポリヌクレオチド又はポリペプチド配列が、それぞれ、最大の対応のために整列されたとき、同じであるヌクレオチド又はアミノ酸残基を指す。用途に応じて、「同一性」は、比較されている配列の領域にわたって（例えば、機能的ドメインの長さにわたって）、又は配列の全長にわたって存在し得る。「領域」は、少なくとも６個、９個、１４個、１９個、２４個、２９個、３４個、３９個、若しくはそれ以上のヌクレオチド、又は少なくとも２個、６個、１０個、１４個、１８個、２２個、２６個、３０個、若しくはそれ以上のアミノ酸の連続的な伸長であるとみなされる。比較のために、典型的には、１つの配列は、１つ以上の試験配列を比較する参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列がコンピュータに入力され、必要な場合、サブ配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。比較のための配列の最適な整列は、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所ホモロジーアルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）のホモロジー整列アルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（デフォルトパラメータとともに使用され得る、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ）におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＦＡＳＴＡ）、又は目視検査（一般にＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．下記を参照されたい）によって実施され得る。配列同一性及び配列類似性のパーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．［１９９０］Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０、Ｇｉｓｈ＆Ｓｔａｔｅｓ．［１９９３］Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６－２７２、Ｍａｄｄｅｎ ｅｔ ａｌ．［１９９６］Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１－１４１、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．［１９９７］Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２、Ｚｈａｎｇ ７ Ｍａｄｄｅｎ．［１９９７］Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９－６５６を参照されたい）。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、米国国立バイオテクノロジー情報センターを通じて公開されている。
【0088】
本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」という用語、又はそれらの変形は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語に類似する様式で包括的であることが意図されている。
【0089】
ＦＦＡ放出酵素活性に関連して本明細書で使用される場合、「調節されていない」という用語は、ＦＦＡ放出酵素の活性及び／又は発現の改変の欠如（例えば、ＦＦＡ放出酵素の濃度又は基質に対するその酵素活性の変化はない）を指す。
【0090】
本明細書で使用される場合、ＦＦＡ放出酵素活性に関連して「調節された」という用語は、ＦＦＡ放出酵素の活性の任意の改変を指す。かかる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、典型的には、ＦＦＡ放出酵素の濃度の増加若しくは減少、又は基質に対するＦＦＡ放出酵素の酵素活性の増加若しくは減少のいずれかに起因する。例えば、その用語は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の活性の減少を指し得る。あるいは、その用語は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％、少なくとも６００％、少なくとも７００％、少なくとも８００％、少なくとも９００％、又は少なくとも１，０００％の活性の増加を指し得る。
【0091】
本明細書で使用される場合、「天然」という用語は、その非修飾されていない状態で自然界に見出されるもの（例えば、ヒトによって遺伝子修飾されておらず、かつヒトによって定義されていない条件下［例えば、酸素化、ｐＨ、塩濃度、温度、及び栄養素（例えば、炭素、窒素、硫黄）のレベル］で維持される細胞）を指す。
【0092】
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」という用語は、それらが機能的に関連することを可能にする要素の配置を指す。例えば、プロモーター配列は、タンパク質コード配列の転写を制御する場合、タンパク質コード配列に作動可能に連結され、分泌シグナル配列が細胞の分泌系を通してタンパク質を指示する場合、分泌シグナル配列は、タンパク質に作動可能に連結される。「作動可能に連結された」要素は、別の要素と連続的に連結されていてもよいか、又はトランスで若しくは別の要素までの少し離れて作用してもよい。作動可能に連結され得る機能の非限定的な例としては、転写の制御、翻訳の制御、タンパク質フォールディング、及びタンパク質分泌が挙げられる。
【0093】
本明細書で使用される場合、用語「１つ以上」という用語は、その後に列挙される要素の１つ、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、若しくはそれ以上、又はすべてを指す。
【0094】
本明細書で使用される場合、「任意の」又は「任意選択で」という用語は、存在する若しくは存在しない特徴若しくは構造、又は生じている若しくは生じてない事象若しくは状況を指す。説明は、特徴又は構造が存在する場合、特徴又は構造が不在である場合、事象又は状況が生じる場合、及び事象又は状況が生じない場合を含む。
【0095】
本明細書で使用される場合、「植物性タンパク質」、「動物性タンパク質」、及び「微生物タンパク質」という用語は、それぞれ、植物、動物、又は微生物（すなわち、すべての細菌、古細菌、単細胞原生生物、単細胞動物、単細胞植物、単細胞真菌、単細胞藻類、原虫、及びクロミスタを含む、単細胞生物）中に天然に見出されるタンパク質（すなわち、それぞれ、植物細胞、動物細胞、又は微生物細胞に対して天然のタンパク質）中のアミノ酸の配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、１００％）同一である少なくとも２０個（例えば、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも６０個、少なくとも７０個、少なくとも８０個、少なくとも９０個、少なくとも１００個、又は少なくとも１５０個、及び通常は２５０個以下）のアミノ酸の配列を含むポリペプチドを指す。
【0096】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、少なくとも２個（例えば、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも１００個、少なくとも５００個、少なくとも１，０００個）のヌクレオチドのポリマー形態を指す。用語は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ）及びＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ、合成ＲＮＡ）のセンス鎖及びアンチセンス鎖、並びに非天然ヌクレオチド類似体、非天然核間結合、及び／又は化学修飾を含むＤＮＡ又はＲＮＡの類似体の両方を含む。ポリヌクレオチドは、化学的に若しくは生化学的に修飾され得るか、又は非天然若しくは誘導ヌクレオチド塩基を含み得る。かかる修飾は、例えば、標識、メチル化、天然に存在するヌクレオチドのうちの１つ以上の類似体での置換、無荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホロアミデート、カルバメート）、荷電結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート）、ペンダント部分（例えば、ポリペプチド）、インターカレータ（例えば、アクリジン、ソラレン）、キレータ、アルキル化剤、及び修飾された結合（例えば、アルファアノマー核酸）を含む。修飾されたヌクレオチドの例は、当該技術分野で説明されている（例えば、Ｍａｌｙｓｈｅｖ ｅｔ ａｌ．２０１４．Ｎａｔｕｒｅ ５０９：３８５、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．２０１４．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３６：８２６を参照されたい）。水素結合又は他の化学的相互作用を介して指定された配列に結合するその能力でポリヌクレオチドを模倣する合成分子も含まれる。かかる分子は当該技術分野で既知であり、例えば、ペプチド結合が分子の骨格中のリン酸結合の代わりをする分子を含む。他の修飾は、例えば、リボース環が架橋部分又は「ロックド」ポリヌクレオチドに見出される修飾などの他の構造体を含む類似体を含み得る。ポリヌクレオチドは、任意のトポロジカル立体配座であり得る。例えば、ポリヌクレオチドは、一本鎖、二本鎖、三本鎖、四本鎖、部分的に二本鎖、分岐、ヘアピン、円形、又は錠型であり得る。本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド配列」という用語は、ポリヌクレオチド中に含まれるか、又はポリヌクレオチドを構成するヌクレオチドの配列を指す。
【0097】
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、交換することができ、少なくとも２個（例えば、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも１００個）のアミノ酸の天然に発生する又は天然に発生しないポリマー形態を指し得る。「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、活性構造を有し得るか、又は機能的構造を欠く場合があり、コード及び／又は非コードアミノ酸を含み得、天然に発生するするアミノ酸及び／又は天然に発生しないアミノ酸を含み得、化学修飾及び／又は生化学的に修飾及び／又は誘導体化されたアミノ酸を含み得、修飾されていない及び／又は修飾されたペプチド骨格を含得、かつ／又は単量体（すなわち、一本鎖を有する）又はポリマー（すなわち、２つ以上の鎖を有し、それは共有結合又は非共有結合され得る）であり得る。本明細書で使用される場合、「アミノ酸配列」という用語は、ポリペプチド若しくはタンパク質に含まれるか、又はポリペプチド若しくはタンパク質を構成する、アミノ酸の配列を指す。
【0098】
本明細書で使用される場合、「調製物」という用語は、組換え成分が発酵ブロスの１つ以上の他の成分から分離されると得られる調製物を指す。例えば、調製物は、清澄化した発酵ブロス（すなわち、細胞及び細胞片が除去された発酵ブロス）であってもよい。
【0099】
本明細書で使用される場合、「プロモーター配列」という用語は、細胞内の下流ポリヌクレオチドの転写を指示するポリヌクレオチドを指す。プロモーター配列は、ポリメラーゼＩＩ型プロモーターの場合、ＴＡＴＡ要素など、転写開始部位の近くに必要なヌクレオチドを含み得る。プロモーター配列はまた、任意選択で、転写開始部位から数千塩基対ほどに位置し得る遠位エンハンサー又はリプレッサー要素を含み得る。
【0100】
本明細書で使用される場合、「精製すること」又は「精製された」又は「単離すること」又は「単離された」という用語は、成分が起源の供給源の化学物質、細胞成分、及び細胞（例えば、細胞壁、膜脂質、染色体、他のタンパク質、生物中の他の細胞）から実質的に分離された成分を指す。成分は、少なくとも６０％純粋、例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％超純粋であってもよい。用語は、成分がすべての化学物質、細胞成分、及び細胞から分離されることを必要としない（しかし、許容される）。
【0101】
本明細書で使用される場合、「組換え成分」という用語は、組換え的に産生される（すなわち、組換え宿主細胞で産生されるか、又は組換えポリヌクレオチドから合成される）成分を指す。組換え成分の非限定的な例としては、組換えタンパク質（例えば、微生物タンパク質、植物性タンパク質（例えば、えんどう豆タンパク質（例えば、レグミン、ビシリン、コビシリン）、ジャガイモタンパク質（例えば、ツベリン、プロテアーゼ阻害剤記号ＩＩ））、動物タンパク質（例えば、構造タンパク質（例えば、コラーゲン、トロポエラスチン、エラスチン）、乳タンパク質、卵タンパク質（例えば、オボアルブミン、本明細書でオボムコイド、オボアルブミン、オボトランスフェリン、Ｇ１６２Ｍ Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α－オボムシン、β－オボムシン、リゾザイム、オボインヒビター、オボグリコタンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ））、脂質、炭水化物、小分子、食品添加物（例えば、甘味剤）、食品補助剤（例えば、ビタミン）、栄養成分製品、及びプロバイオティクスが挙げられる。
【0102】
本明細書で使用される場合、「組換えタンパク質」という用語は、組換え宿主細胞で産生されるタンパク質、又は組換えポリヌクレオチドから合成されるタンパク質を指す。
【0103】
本明細書で使用される場合、「組換え宿主細胞」という用語は、組換えポリヌクレオチドを含む細胞を指す。したがって、例えば、組換え宿主細胞は、宿主細胞の天然（非組換え）形態で見出されないポリヌクレオチド又はポリペプチドを産生し得るか、又は組換え宿主細胞は、宿主細胞の天然（非組換え）形態とは異なるレベルでポリヌクレオチド又はポリペプチドを産生し得る。かかる用語は、特定の対象細胞だけではなく、かかる細胞の子孫も指すことが意図されていることは理解されるべきである。ある特定の修飾が、変異又は環境の影響のいずれかに起因して後続の世代で起こり得るため、かかる子孫は対象細胞と同一ではない場合があるが、本明細書で使用される用語「組換え宿主細胞」の範囲内に依然として含まれる。組換え宿主細胞は、培養物中で成長した単離細胞又は細胞株であり得るか、又は生体組織若しくは生物に常在する細胞であり得る。
【0104】
本明細書で使用される場合、「組換えポリヌクレオチド」という用語は、その天然に発生する環境から除去されるポリヌクレオチド、又は自然界で見出されたときにポリヌクレオチドに隣接している若しくは近位にあるポリヌクレオチドのすべて若しくは一部に会合しないポリヌクレオチド、又は自然界で連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結されたポリヌクレオチド、又は自然界では発生しないポリヌクレオチド、又は自然界でそのポリヌクレオチドに見出されない修飾（例えば、ヒトの介入による、例えば、人工的に導入される挿入、欠失、又は点変異）を含むポリヌクレオチド、又は異種部位で染色体に組み込まれるポリヌクレオチドを指す。用語は、例えば、クローニングされたＤＮＡ単離物、又は化学的に合成されたヌクレオチド類似体を含むポリヌクレオチドを説明するために使用され得る。ポリヌクレオチドはまた、それが天然に発生しない遺伝子修飾を含む場合には、「組換え」ともみなされる。例えば、内在性ポリヌクレオチドは、それが、例えば、人の介入により人工的に導入される１つ以上のヌクレオチドの挿入、欠失、又は置換を含む場合には、「組換えポリヌクレオチド」とみなされる。かかる修飾は、ポリヌクレオチドに点変異、置換変異、欠失変異、挿入変異、ミスセンス変異、フレームシフト変異、重複変異、増幅変異、転座変異、又は反転変異を導入することができる。用語は、宿主細胞の染色体中のポリヌクレオチド、並びに宿主細胞の染色体にないポリヌクレオチド（例えば、エピソームに含まれるポリヌクレオチド）を含む。宿主細胞又は生物中の組換えポリヌクレオチドは、宿主細胞のインビボ細胞機構を使用して複製することができるが、しかしながら、かかる組換えポリヌクレオチドは、その後細胞内に複製されるが、本発明の目的のためには依然として組換えであるとみなされる。
【0105】
本明細書で使用される場合、「調節要素」という用語は、調節要素が作動可能に連結されるポリヌクレオチドの発現（例えば、転写、転写後事象、翻訳）を媒介、調節、又は調節するポリヌクレオチド配列を指す。調節要素の非限定的な例としては、プロモーター配列、末端配列、転写開始配列、翻訳開始配列、翻訳停止配列、エンハンサー配列、アクチベーター配列、反応要素、タンパク質認識部位、誘導性要素、タンパク質結合配列、５’及び３’非翻訳領域、上流活性化配列（ＵＡＳ）、イントロン、オペレーター（すなわち、リプレッサータンパク質がプロモーターに結合し、プロモーターの活性を低減又は除去し得るタンパク質結合ドメインを含む、プロモーターに隣接した核酸の配列）、効率的なＲＮＡプロセシングシグナル（例えば、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル）、細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列、翻訳効率を高める配列（例えば、リボソーム結合部位［例えば、シャイン・ダルガノ配列）、タンパク質の安定性を高める配列、タンパク質分泌を高める配列、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。
【0106】
本明細書で使用される場合、「分泌する」、「分泌」、及び「分泌された」という用語は、タンパク質を細胞外環境へ産生する細胞の細胞膜及び／又は細胞壁を横断するタンパク質の輸送プロセスを指す。本明細書に提供されるように、かかる分泌は、能動的又は受動的に発生し得る。
【0107】
本明細書で使用される場合、「分泌シグナル」という用語は、タンパク質のＮ末端に作動可能に連結され、かつタンパク質が産生される（すなわち、合成される）宿主細胞の細胞内分泌経路を介して、宿主細胞の外部へのタンパク質の送達を媒介するペプチドを指す。典型的には、分泌シグナルとの組換えタンパク質の作動可能な連結は、組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の開始コドンの除去を必要とする。
【0108】
本明細書で使用される場合、「２つ以上」という用語は、その後に列挙される要素のうちの２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又はそれ以上、又はすべてを指す。
【0109】
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、宿主細胞に導入されるポリヌクレオチド配列を担持することができる核酸を指す。ベクターの非限定的な例としては、クローニングベクター、発現ベクター、シャトルベクター、プラスミド、ファージ粒子、ウイルスベクター、コスミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、ウイルス粒子（例えば、異種ポリヌクレオチドを含む）、ＤＮＡ構築物（例えば、クローニング又はＰＣＲ増幅によって産生される）、及び線形二本鎖分子（例えば、ＰＣＲ断片）が挙げられる。ある特定のベクターは、それが導入されている宿主細胞において自律増殖することができる（例えば、宿主細胞において機能する複製起点を有するベクター）。他のベクターは、宿主細胞中に導入されると宿主細胞のゲノム中に組み込まれてもよく、それによって宿主ゲノムと一緒に複製される。
【0110】
本明細書で使用される場合、「酵母」という用語は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ目の任意の生物を指す。酵母の栄養成長は、単細胞葉状体の出芽／小疱形成によるものであり、炭素異化は発酵性であり得る。
【0111】
本明細書の値の範囲の列挙は、本明細書に別段の指示がない限り、単に、列挙された最小値及び最大値を含む範囲内にある各別個の値（分数又は整数）を個別に参照する簡易的な方法として役立つことを意図しており、各別個の値は、本明細書に個別に列挙されたかのように本明細書に組み込まれる。また、本明細書に列挙される任意の数値範囲は、その中に包含されるすべての部分範囲を含むことが意図されることが理解されるべきである。例えば、「１～１０」の範囲は、列挙された最小値１と、列挙された最大値１０との間の（及びそれらを含む）すべての部分範囲、すなわち、１以上の最小値及び１０以下の最大値を有することを意図している。以下に記載されるすべての範囲及び量は、近似であり、本発明を制限することを意図していないことが更に理解されるべきである。
【0112】
本明細書に開示される任意の方法では、本発明が作動可能なままである限り、ある特定の動作を行うための工程又は指示の順序は重要ではないことが理解されるべきである。更に、２つ以上の工程又は作用が同時に行われてもよい。
【0113】
組換え成分を含む組成物を生産するための方法
様々な態様では、組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞によって産生された組換え成分（例えば、本明細書に開示される組換え成分のうちのいずれか）を含む組成物を生産するための方法が本明細書に提供され、方法は、ＦＦＡ放出酵素の活性（例えば、本明細書に開示される任意の１つのＦＦＡ放出酵素の活性、又は本明細書に開示される２つ以上のＦＦＡ放出酵素の任意の組み合わせの活性）を調節することを含む。
様々な態様では、組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞によって産生された組換え成分（例えば、本明細書に開示される組換え成分のうちのいずれか）を含む組成物を生産するための方法が本明細書に提供され、方法は、ＦＦＡ放出酵素の活性（例えば、本明細書に開示される任意の１つのＦＦＡ放出酵素の活性、又は本明細書に開示される２つ以上のＦＦＡ放出酵素の任意の組み合わせの活性）を調節することを含む。
【0114】
本明細書に提供される方法においてＦＦＡ放出酵素の活性を調節することは、任意の単一の工程、又は調節されたＦＦＡ放出酵素活性を提供する２つ以上の工程の任意の組み合わせで発生し得る。好適な工程の非限定的な例としては、ｉ）ＦＦＡ放出酵素活性を調節するのに好適な発酵条件下で組換え宿主細胞を培養すること、ｉｉ）発酵ブロス、調製物、若しくは組成物中のＦＦＡ放出酵素活性を調節すること、ｉｉｉ）組換え宿主細胞によって産生されるＦＦＡ放出酵素活性から組換え成分を精製すること及び／若しくは組換え成分からＦＦＡ放出酵素活性を精製すること、並びに／又はｉｖ）調節されたＦＦＡ放出酵素活性を含む組換え宿主細胞によって産生された組換え成分を得ることが挙げられる。
【0115】
ＦＦＡ放出酵素活性を調節するのに好適な発酵条件
上記のうちのいずれかによる方法は、ａ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ることと、ｂ）組換え成分の産生及び／又は分泌、並びにＦＦＡ放出酵素活性の調節に好適な発酵条件下で、培養培地中で組換え宿主細胞を培養することとを含み得る。
上記のうちのいずれかによる方法は、ａ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ることと、ｂ）組換え成分の産生及び／又は分泌、並びにＦＦＡ放出酵素活性の調節に好適な発酵条件下で、培養培地中で組換え宿主細胞を培養することとを含み得る。
【0116】
ＦＦＡ放出酵素活性を調節するのに好適な条件は、例えば、組換え宿主細胞がＦＦＡ放出酵素活性のその産生を調節する条件であり得る。かかる条件の非限定的な例としては、好適なｐＨ、好適な温度、好適な供給量、好適な圧力、好適な流体せん断応力、栄養素の好適な種類及び／若しくは量（例えば、好適な炭素含有量、好適な窒素含有量、好適なリン含有量）、培養補助剤の好適な種類及び／若しくは量、微量金属の好適な種類及び／若しくは量、並びに／又は好適な酸素化レベルが挙げられる。
【0117】
好適なｐＨは、２～７．５、６．５、６、５．５、５、４．５、４、３．５、３、若しくは２．５；２．５～７．５、６．５、６、５，５、５、４．５、４、３．５、若しくは３；３～７．５、６．５、６、５．５、５、４．５、４、若しくは３．５；３．５～７．５、６．５、６、５．５、５、４．５、４；４～７．５、６．５、６、５，５、５、４．５；４．５～７．５、６．５、６、５．５、５；５～７．５、６．５、６、５．５；５．５～７．５、６．５、６；６～７．５、６．５；６．５～７．５、若しくは７；又は７～７．５のｐＨであり得る。
【0118】
好適な種類の培養補助剤は、消泡剤であり得る。好適な消泡剤の非限定的な例としては、Ｓｔｒｕｋｔｏｌ Ｊ ６７３ Ａ（Ｓｃｈｉｌｌ＆Ｓｅｉｌａｃｈｅｒ ＧｍｂＨ、Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｉｎｄｕｓｔｒｏｌ ＤＦ２０４（ＢＡＳＦ Ｃａｎａｄａ，Ｉｎｃ．、Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ，Ｃａｎａｄａ）、Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌ Ｐ－２０００（Ｄｏｗ、Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）、Ｈｏｄａｇ Ｋ－６０Ｋ（Ｈｏｄａｇ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．、Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）、及びＥｒｏｌ ＤＦ６０００Ｋ（ＰＭＣ Ｏｕｖｒｉｅ、Ｃａｒｖｉｎ，Ｆｒａｎｃｅ）、ＡＣＰ １５００（Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）、Ａｎｔｉｆｏａｍ ２０４（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、ＳＡＧ ４７１（Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｗａｔｅｒｆｏｒｄ，ＮＹ）、ＳＡＧ ５６９３（Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｗａｔｅｒｆｏｒｄ，ＮＹ）、ＳＡＧ ７１０（Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｗａｔｅｒｆｏｒｄ，ＮＹ）、ＳＡＧ ７３０（Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｗａｔｅｒｆｏｒｄ，ＮＹ）、シリコーン消泡剤、Ｓｔｒｕｋｔｏｌ Ｊ６４７（Ｓｃｈｉｌｌ＆Ｓｅｉｌａｃｈｅｒ、Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、並びにヒマワリオイルが挙げられる。
【0119】
発酵ブロス、調製物、又は組成物におけるＦＦＡ放出酵素活性の調節
上記のうちのいずれかによる方法は、ｉ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ることと、ｉｉ）組換え成分の産生及び／又は分泌に好適な条件下で、培養培地中で組換え宿主細胞を培養して、組換え成分を含む発酵ブロスを得ることと、ｉｉｉ）任意選択で、発酵ブロスから組換え成分を精製して、組換え成分を含む調製物を得ることと、ｉｖ）組換え成分を含む発酵ブロス、調製物、又は組成物中のＦＦＡ放出酵素活性を調節することとを含み得る。
上記のうちのいずれかによる方法は、ｉ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ることと、ｉｉ）組換え成分の産生及び／又は分泌に好適な条件下で、培養培地中で組換え宿主細胞を培養して、組換え成分を含む発酵ブロスを得ることと、ｉｉｉ）任意選択で、発酵ブロスから組換え成分を精製して、組換え成分を含む調製物を得ることと、ｉｖ）組換え成分を含む発酵ブロス、調製物、又は組成物中のＦＦＡ放出酵素活性を調節することとを含み得る。
【0120】
発酵ブロス、調製物、又は組成物中のＦＦＡ放出酵素活性は、例えば、発酵ブロス、調製物、又は組成物にＦＦＡ放出酵素阻害剤を添加することによって調節され得る。好適なＦＦＡ放出酵素阻害剤の非限定的な例としては、合成阻害剤（例えば、ホスホネート、ボロン酸、脂質類似体）並びに例えば、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ、Ｉｌｌｉｃｉｕｍ ｒｅｌｉｇｉｏｓｕｍ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ ｒｈｉｚｏｍｅｓ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ、Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｖａｒ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｖａｒ．ａｓｓａｍｉｃａ、Ｋｏｃｈｉａ ｓｃｏｐａｒｉａ、Ｐｌａｔｙｃｏｄｉ ｒａｄｉｘ、Ｓａｌａｃｉａ ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅ、Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ、Ｓａｌｉｘ ｍａｔｓｕｄａｎａ、Ｅｒｉｏｃｈｌｏａ ｖｉｌｌｏｓａ、Ｓａｌａｃｉａ ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅ、Ｓｃａｂｉｏｓａ ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ Ｇｒｕｎ、及びＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｓｓｉｌｉｆｌｏｒｏｕｓなどの供給源から単離された天然の阻害剤（例えば、β－ラクトン（バリラクトン、エベラクトンＡ及びＢ、及びビブララクトンなど）、マンノ－オリゴ糖、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、コリンエステラーゼ阻害剤、ポリフェノール、サポニン、パンクリシン、ヘスペリジン、カウレルペニン、プロアントシアニジン、オルリスタット（ゼニカル）、カルノシン酸、エスチン、クロシン、クロセチン、クロロゲン酸、ネオクロロゲン酸、フェルロイルキナ酸、ｅ－ポリリジン、キトサン、キチン）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＦＡ放出酵素活性は、それらの触媒ドメイン中にセリン残基を含むＦＦＡ放出酵素の阻害剤（例えば、阻害剤Ｔｈｅｒｍｏ ＡｃｔｉｖＸ ＴＡＭＲＡ－ＦＰフルオロホスホネート）の発酵ブロス、調製物、又は組成物への添加によって調節される。それらの触媒ドメイン中にセリン残基を含むＦＦＡＦＦＡ放出酵素の非限定的な例としては、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＧＤ５、及びＧ０ＲＫＨ７が挙げられる。
【0121】
発酵ブロス、調製物、又は組成物中のＦＦＡ放出酵素活性はまた、例えば、発酵ブロス、調製物、若しくは組成物から除去することによって、並びに／又は発酵ブロス、調製物、若しくは組成物に、それぞれ、ＦＦＡ放出酵素の活性に必要とされる補因子及び／若しくはＦＦＡ放出酵素阻害剤の活性に必要とされる補因子を添加することによって調節され得る。かかる補因子の非限定的な例としては、金属（例えば、カルシウムなどの二価カチオン）が挙げられるが、これは、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤で除去され得る。
【0122】
発酵ブロス、調製物、又は組成物中のＦＦＡ放出酵素活性はまた、例えば、熱処理又は非熱処理によって調節され得る。熱処理の非限定的な例としては、低温殺菌及び無菌化を含む。非熱処理の非限定的な例としては、高圧低温殺菌（すなわち、高圧処理、ＨＰＰ）、超音波処理、パルス電界処理、及び照射が挙げられる。いくつかの実施形態では、発酵ブロス、調製物、又は組成物中のＦＦＡ放出酵素活性は、発酵ブロス、調製物、又は組成物を、高温で比較的短時間の期間（例えば、８５℃から９０℃の温度で５～１０分間）インキュベートすることにより本質的に除去又は低減される。
【0123】
ＦＦＡ放出酵素活性からの組換え成分の精製
上記のうちのいずれかによる方法は、ｉ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ることと、ｉｉ）組換え成分の産生及び／又は分泌に好適な条件下で、培養培地中で組換え宿主細胞を培養して、組換え成分を含む発酵ブロスを得ることと、ｉｉｉ）ＦＦＡ放出酵素活性から組換え成分を精製し、かつ／又は組換え成分からＦＦＡ放出酵素を精製して、組換え成分を含む調製物を得ることとを含み得る。
上記のうちのいずれかによる方法は、ｉ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ることと、ｉｉ）組換え成分の産生及び／又は分泌に好適な条件下で、培養培地中で組換え宿主細胞を培養して、組換え成分を含む発酵ブロスを得ることと、ｉｉｉ）ＦＦＡ放出酵素活性から組換え成分を精製し、かつ／又は組換え成分からＦＦＡ放出酵素を精製して、組換え成分を含む調製物を得ることとを含み得る。
【0124】
ＦＦＡ放出酵素活性から組換え成分を精製することは、組換え成分をＦＦＡ放出酵素と区別する任意の１つの特性に基づいて、又は連続して（例えば、電荷に基づく分離とそれに続く疎水性に基づく分離、疎水性に基づく分離とそれに続くｐＨ安定性に基づく分離）若しくは並行して（例えば、ｐＨ安定性及び熱不安定性／熱安定性に基づく分離、ｐＨ安定性及び特定の分子との親和性に基づく分離、溶解性及びｐＨ安定性及び／又は熱不安定性／熱安定性及び／又はｐＩに基づく分離）使用される２つ以上のかかる特性の組み合わせに基づいて達成され得る。
【0125】
例えば、組換え成分を含む発酵ブロス又は調製物は、ＦＦＡ放出酵素が変性され、かつ溶液から沈殿するが、組換え成分が構造的にインタクト及び可溶性のままである温度に加熱され得る。沈澱したＦＦＡ放出酵素はそれに続いて、１－ｇ沈降、遠心分離による加速沈降、及び／又はフィルターパッド、シート、若しくは膜を使用するデプス濾過若しくはタンジェンシャルフロー濾過を含むがこれらに限定されない種々の濾過技法を含む、いずれかの好適な方法によって可溶性組換え成分から分離され得る。
【0126】
更なる例として、好適なクロマトグラフィー支持体は、組換え成分を含む発酵ブロス又は調製物に添加されてもよく、ＦＦＡ放出酵素又は組換え成分（両方ではない）がクロマトグラフィー支持体に結合する（例えば、電荷又は疎水性に基づいて）ように、条件（例えば、ｐＨ及び／又はイオン強度）が調整されてもよく、可溶性組換え成分又はＦＦＡ放出酵素が非結合部分にそれぞれ残る。好適なクロマトグラフィー保持体の非限定的な例としては、フェニルセファロース、ブチルセファロース、及びオクチルセファロースが挙げられる。結合したＦＦＡ放出酵素又は組換え成分を有するクロマトグラフィー支持体は、それに続いて、１－ｇ沈降、遠心分離、又は濾過を含むがこれらに限定されない当該技術分野で既知のいずれかの好適な方法によって、それぞれ、可溶性の組換え成分又はＦＦＡ放出酵素から分離され得る。あるいは、クロマトグラフィー支持体は、組換え成分を含む発酵ブロス又は調製物を移動させる静止支持体（例えば、カラム中の吸着剤）であってもよく、組換え成分は、非結合部分で得られるが、ＦＦＡ放出酵素は、クロマトグラフィー支持体に結合するか、又は組換え成分は、クロマトグラフィー支持体に結合されるが、ＦＦＡ放出酵素は、非結合部分にあるままであり、結合した組換え成分はそれに続いて、調整条件によってクロマトグラフィー支持体から放出される。
【0127】
更なる例として、対イオン若しくはイオン交換樹脂又はナトリウム酸性塩は、組換え成分を含む発酵ブロス又は調製物に添加されてもよく、発酵ブロス又は調製物のｐＨ及び／又はイオン強度は、対イオン若しくはイオン交換樹脂又はナトリウム酸性塩が組換え成分又はＦＦＡ放出酵素と複合体を形成するように調整されてもよく、それぞれ、可溶性ＦＦＡ放出酵素又は組換え成分が残る。複合体は、それに続いて、１－ｇ沈降、遠心分離による加速沈降、及び／又はフィルターパッド、シート、若しくは膜を使用するデプス濾過若しくはタンジェンシャルフロー濾過を含むがこれらに限定されない種々の濾過技法を含む、当該技術分野で既知のいずれかの好適な方法によって単離され得る。組換え成分が対イオン若しくはイオン交換樹脂又はナトリウム酸性塩に複合体化される実施形態では、組換え成分は、条件を調節すること（例えば、ｐＨ及び／又はイオン強度を調節すること）によって複合体から抽出され得る。
【0128】
更なる例として、組換え成分を含む発酵ブロス又は調製物のｐＨは、ＦＦＡ放出酵素が変性され、かつ溶液から沈殿するように調整されてもよく、可溶性組換え成分が残る。沈澱したＦＦＡ放出酵素はそれに続いて、これらに限定されないが、１－ｇ沈降、遠心分離による加速沈降、及び／又はフィルターパッド、シート、若しくは膜を使用するデプス濾過若しくはタンジェンシャルフロー濾過を含むがこれらに限定されない種々の濾過技法を含む、いずれかの好適な方法によって可溶性組換え成分から分離され得る。
【0129】
更なる例として、活性ベースのタンパク質プロファイリング（ＡＢＰＰ）小分子プローブは、組換え成分を含む発酵ブロス又は調製物に添加され得る。プローブは、その触媒ドメイン中にセリン残基を含むＦＦＡ放出酵素に結合してもよい。ＡＢＰＰがＦＦＡ放出酵素に結合すると、結合したＦＦＡ放出酵素は、第２の特異的親和性結合を介して固定化されてもよく、これは、組換え成分からのＦＦＡ放出酵素の除去をもたらし得る。ＡＢＰＰの非限定的な例としては、ビオチン化フルオロホスホネート（例えば、ＡｃｔｉｖＸ（商標）デスチオビオチン－フルオロホスホネートセリンヒドロラーゼプローブ（ＤＴＢ－ＦＰ））が挙げられ、ホスホネート部分は、ＦＦＡ放出酵素の触媒ドメイン中の求核セリンに共有結合してもよく、ビオチン部分は、アビジン化アガロースと相互作用し、それによって、反応したＦＦＡ放出酵素の固定化（例えば、アガロースビーズへの）並びに遠心分離、濾過、及び／又は他の可溶性－不溶性分離方法による物理的分離を可能にし得る。
【0130】
ＦＦＡ放出酵素活性
本明細書に提供される調節されたＦＦＡ放出酵素活性（例えば、組換え成分を含む発酵ブロス若しくは調製物中に含まれるか、又は組換え成分を産生することができる本明細書に提供される組換え宿主細胞中に含まれる、調節されたＦＦＡ放出酵素活性）は、任意の１つのＦＦＡ放出酵素又は２つ以上のＦＦＡ放出酵素の任意の組み合わせの調節された活性であり得る。
本明細書に提供される調節されたＦＦＡ放出酵素活性（例えば、組換え成分を含む発酵ブロス若しくは調製物中に含まれるか、又は組換え成分を産生することができる本明細書に提供される組換え宿主細胞中に含まれる、調節されたＦＦＡ放出酵素活性）は、任意の１つのＦＦＡ放出酵素又は２つ以上のＦＦＡ放出酵素の任意の組み合わせの調節された活性であり得る。
【0131】
好適なＦＦＡ放出酵素の非限定的な例としては、カルボン酸エステルヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．１．１）、ホスホジエステルヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．１．４）、エクソリボヌクレアーゼ（ＥＣ番号３．１．１３）、カルボキシルエステラーゼ（ＥＣ番号３．１．１．１）、アリールエステラーゼ（ＥＣ番号３．１．１．２）、トリアシルグリセロールリパーゼ（ＥＣ番号３．１．１．３）、ホスホリパーゼＡ２（ＥＣ番号３．１．１．４）、リゾホスホリパーゼ（ＥＣ番号３．１．１．５）、アセチルエステラーゼ（ＥＣ番号３．１．１．６）、アセチルコリンエステラーゼ（ＥＣ番号３．１．１．７）、グリセロホスホコリンホスホジエステラーゼ（ＥＣ番号３．１．４．２）、ホスホリパーゼＣ（ＥＣ番号３．１．４．３）、ホスホリパーゼＤ（ＥＣ番号３．１．４．４）、ホスホイノシチドホスホリパーゼＣ（ＥＣ番号３．１．４．１１）、グリコシルホスファチジルイノシトールホスホリパーゼＤ（ＥＣ番号３．１．４．５０）、Ｎ－アセチルホスファチジルエタノールアミン－加水分解ホスホリパーゼＤ（ＥＣ番号３．１．４．５４）、ペクチンエステラーゼ（ＥＣ番号３．１．１．１１）、グルコノラクトナーゼ（ＥＣ番号３．１．１．１７）、アシルグリセロールリパーゼ（ＥＣ番号３．１．１．２３）、３－オキソアジピン酸エノール－ラクトナーゼ（ＥＣ番号３．１．１．２４）、１，４－ラクトナーゼ（ＥＣ番号３．１．１．２５）、ガラクトリパーゼ（ＥＣ番号３．１．１．２６）、ホスホリパーゼＡ１（ＥＣ番号３．１．１．３２）、リポタンパク質リパーゼ（ＥＣ番号３．１．１．３４）、セファロスポリン－Ｃデアセチラーゼ（ＥＣ番号３．１．１．４１）、カルボキシメチレンブテノリダーゼ（ＥＣ番号３．１．１．４５）、２－ピロン－４，６－ジカルボン酸ラクトナーゼ（ＥＣ番号３．１．１．５７）、アセチルキシランエステラーゼ（ＥＣ番号３．１．１．７２）、フェルロイルエステラーゼ（ＥＣ番号３．１．１．７３）、クチナーゼ（ＥＣ番号３．１．１．７４）、ホルモン感受性リパーゼ（ＥＣ番号３．１．１．７９）、パルミトイル－タンパク質ヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．１．２．２２）、エポキシドヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．３．２．３）、セラミダーゼ（ＥＣ番号３．５．１．２３）、ロイコトリエン－Ａ４ヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．３．２．６）、ヘポキシリン－エポキシドヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．３．２．７）、リモネン－１，２－エポキシドヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．３．２．８）、ミクロソームエポキシドヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．３．２．９）、可溶性エポキシドヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．３．２．１０）、コレステロール－５，６－オキシドヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．３．２．１１）、脂肪酸アミドヒドロラーゼ（ＥＣ番号３．５．１．９９）、及びリポキシゲナーゼ（Ｅ．Ｃ．１．１３．１１．）が挙げられる。
【0132】
好適なＦＦＡ放出酵素の非限定的な例としては、表１に列挙されるＦＦＡ放出酵素、及びそのホモログ、並びに表２に列挙されるＩｎｔｅｒＰｒｏドメインのうちのいずれか１つを含むＦＦＡ放出酵素のうちのいずれかが挙げられる。
【0133】
【表1-1】
【0134】
【表1-2】
【0135】
【表1-3】
【0136】
【表2】
【0137】
２つ以上のＦＦＡ放出酵素の組み合わせの非限定的な例としては、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、ＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルエステラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のリゾホスホリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＡ２及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のホスホリパーゼＣ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアセチルエステラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒ
ドロラーゼ、１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、並びに１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼフォールドドメイン含有タンパク質及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子が挙げられる。
ドロラーゼ、１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子及び１つ以上の他のカルボン酸エステルヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のリゾホスホリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のトリアシルグリセロールリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のホスホリパーゼＣ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＡ２及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のホスホリパーゼＣ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルキシランエステラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上のアセチルエステラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上の細胞外リパーゼ様タンパク質及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアセチルエステラーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼ、１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のＧＤＳＬリパーゼ及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子、並びに１つ以上のクチナーゼ及び１つ以上のアルファ／ベータヒドロラーゼフォールドドメイン含有タンパク質及びＦＦＡ放出酵素の発現を調節する１つ以上の転写因子が挙げられる。
【0138】
上記のうちのいずれかによる方法において、組換え成分を含む発酵ブロス若しくは調製物、又は組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞は、所望の組成物の生産に有用なＦＦＡ放出酵素活性の所望のプロファイル（すなわち、ＦＦＡ放出酵素活性プロファイル）を提供するＦＦＡ放出酵素活性の組み合わせ及び／又はレベルであり得る。いくつかのかかる実施形態では、ＦＦＡ放出酵素活性プロファイルは、組成物の所望の風味、芳香、テクスチャ、乳化、栄養内容物、及び／又は貯蔵寿命を提供するよう最適化され得る。
【0139】
上記のうちのいずれかによる方法において活性が調節されなければならないＦＦＡ放出酵素の好適な数及び／又は組み合わせは、当該技術分野で既知の方法によって同定され得る。例えば、ＦＦＡは、当該技術分野で既知の方法（例えば、アフィニティークロマトグラフィー、ザイモグラムアッセイ、ゲル電気泳動）により単離し、インビトロで試験して、２つ以上のＦＦＡ放出酵素のうちのどちらの１つが又はどの組合せが、特定のジグリセリド、トリグリセリド、リン脂質、又はリポタンパク質の相当量の分解を提供するのかを判定することができる。その上、組換え成分（例えば、本明細書で開示される任意の組換え成分）を産生することができ、２つ以上のＦＦＡ放出酵素のうちのいずれか１つ又は任意の組合せにおいて調節された活性を含む組換え宿主細胞を得ることができ、それぞれのかかる組換え宿主細胞により産生された組換え成分を含む組成物の脂質分解の低減又は除去の程度は、当該技術分野で既知の方法により測定することができる。
【0140】
ＦＦＡ放出酵素活性は、酵素アッセイを使用して測定され得る。例えば、酵素活性は、比色反応生成物又は、例えば、ＰＡＧＥゲル、分光光度計、画像化、ＵＶ／Ｖｉｓ、光、及びＨＰＬＣを使用して検出され得る生成物（例えば、トリグリセリドのエステラーゼ触媒加水分解から産生されるＦＦＡ及び／又はグリセロール）の産生により決定され得る。
【0141】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０Ｒ９Ｊ９、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＧ０、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＢＺ６、Ｇ０ＲＤ１６、Ｇ０ＲＤＫ５、Ｇ０ＲＤＵ７、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ０４、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＧＮ７、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＧＱ７、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＩＶ５、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＪＣ６、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＥ６、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＢ０、Ｇ０ＲＬＢ７、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭ１４、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＮＦ８、Ｇ０ＲＰＱ８、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＱＧ３、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＮ５、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＴＲ６、Ｇ０ＲＴＴ４、Ｇ０ＲＵＩ０、Ｇ０ＲＵＺ９、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＷ７３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＷＳ１、Ｇ０ＲＷＴ９、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｇ０ＲＶＤ２、及びＧ０Ｒ８Ａ６、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得るか、又はそれらからなり得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0142】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＧＤ５、及びＧ０ＲＫＨ７、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得るか、又はそれらからなり得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0143】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、及びＧ０ＲＭＩ３、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得るか、又はそれらからなり得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0144】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得るか、又はそれらからなり得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0145】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得るか、又はそれらからなり得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0146】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得るか、又はそれらからなり得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0147】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得るか、又はそれらからなり得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0148】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせ含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０Ｒ９Ｊ９、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＧ０、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＢＺ６、Ｇ０ＲＤ１６、Ｇ０ＲＤＫ５、Ｇ０ＲＤＵ７、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ０４、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＧＮ７、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＧＱ７、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＩＶ５、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＪＣ６、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＥ６、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＢ０、Ｇ０ＲＬＢ７、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭ１４、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＮＦ８、Ｇ０ＲＰＱ８、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＱＧ３、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＮ５、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＴＲ６、Ｇ０ＲＴＴ４、Ｇ０ＲＵＩ０、Ｇ０ＲＵＺ９、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＷ７３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＷＳ１、Ｇ０ＲＷＴ９、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｒ０ＲＶＤ２、及びＧ０Ｒ８Ａ６、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0149】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＧＤ５、及びＧ０ＲＫＨ７、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0150】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＷＴ９、及びＧ０ＲＸ８２、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0151】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、及びＧ０ＲＭＩ３、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0152】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＷＴ９、及びＧ０ＲＸ８２、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＸ９０、及びＧ０ＲＷ７７、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節されていない産生及び／又は活性を含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0153】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＩＵ１及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨＪ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０ＲＶＤ２、Ｇ０Ｒ８Ａ６、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＲＫ３、及びＧ０ＲＬＢ０、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第４のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0154】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0155】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0156】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0157】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0158】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0159】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0160】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第４のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第４のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0161】
上記のうちのいずれかによる調節されたＦＦＡ放出酵素活性は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、及びＧ０ＲＭＩ３、並びにそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＴ８３、Ｇ０ＲＲＲ１、Ｇ０ＲＩＦ９、Ｇ０Ｒ７６５、Ｇ０ＲＲＪ７、Ｇ０Ｒ９３２、Ｇ０ＲＢＶ８、Ｇ０ＲＥＥ８、Ｇ０ＲＬＦ０、及びＧ０ＲＢＨ２、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含む転写因子からなる群から選択される転写因子の調節された産生及び／又は活性とを含み得るか、又はそれらからなり得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、転写因子の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0162】
調節されたＦＦＡ放出酵素活性を含む組換え宿主細胞
上記のいずれかによる方法は、ｉ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ることであって、組換え宿主細胞が、対応する組換え宿主細胞（すなわち、「対応する組換え宿主細胞」のＦＦＡ放出酵素活性が調節されていないことを除いて、「対応する組換え宿主細胞」と比較されている組換え宿主細胞と同一である組換え宿主細胞）に含まれるＦＦＡ放出酵素活性と比較して、調節されたＦＦＡ放出酵素活性を含む、得ることと、ｉｉ）組換え成分の産生及び／又は分泌に好適な条件下で、組換え宿主細胞を培養培地中で培養することとを含み得る。
上記のいずれかによる方法は、ｉ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ることであって、組換え宿主細胞が、対応する組換え宿主細胞（すなわち、「対応する組換え宿主細胞」のＦＦＡ放出酵素活性が調節されていないことを除いて、「対応する組換え宿主細胞」と比較されている組換え宿主細胞と同一である組換え宿主細胞）に含まれるＦＦＡ放出酵素活性と比較して、調節されたＦＦＡ放出酵素活性を含む、得ることと、ｉｉ）組換え成分の産生及び／又は分泌に好適な条件下で、組換え宿主細胞を培養培地中で培養することとを含み得る。
【0163】
したがって、様々な態様では、組換え成分を産生することができ（すなわち、本明細書に提供される構築された発現を含む）、かつ対応する組換え宿主細胞中に含まれるＦＦＡ放出酵素活性と比較して、調節されたＦＦＡ放出酵素活性（例えば、本明細書に開示される任意の１つのＦＦＡ放出酵素の活性、又は本明細書に開示される２つ以上のＦＦＡ放出酵素の任意の組み合わせの活性）を含む、組換え宿主細胞が本明細書に提供される。
【0164】
組換え宿主細胞中に含まれるＦＦＡ放出酵素活性は、任意の手段によって調節され得る。例えば、ＦＦＡ放出酵素活性は、ＦＦＡ放出酵素の発現（すなわち、活性タンパク質の産生）を調節するか、若しくは本質的に排除する、又はＦＦＡ放出酵素の活性を調節するか、若しくは本質的に排除する、組換え宿主細胞中の遺伝子修飾によって調節され得る。上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞に含まれ得る遺伝子修飾の非限定的な例としては、ｉ）遺伝子修飾が、内因性ＦＦＡ放出酵素の活性を調節するか、又は本質的に排除する、内因性ＦＦＡ放出酵素若しくはその機能的部分（例えば、触媒ドメイン）をコードするポリヌクレオチド配列の遺伝子修飾、ｉｉ）遺伝子修飾が、異種ＦＦＡ放出酵素の活性を調節するか、又は本質的に排除する、異種ＦＦＡ放出酵素をコードするポリヌクレオチド配列を導入する遺伝子修飾、ｉｉｉ）遺伝子修飾が、ＦＦＡ放出酵素の発現を調節するか、又は本質的に排除する、ＦＦＡ放出酵素の発現を駆動する調節要素若しくはその機能的部分（すなわち、調節要素の機能に十分である部分）の遺伝子修飾、ｉｖ）遺伝子修飾が、ＦＦＡ放出酵素の発現又は活性に必要とされるタンパク質の活性を調節するか、又は本質的に排除し、それによって、ＦＦＡ放出酵素の発現を調節するか、又は本質的に排除する、ＦＦＡ放出酵素（例えば、転写因子［例えば、表３に示される転写因子、又はそのホモログのうちのいずれか］、ＦＦＡ放出酵素の活性形態の産生に必要とされる翻訳後修飾酵素）の発現、又はＦＦＡ放出酵素（例えば、阻害剤、アクチベーター、補酵素）、又はその機能的部分（例えば、転写因子のＤＮＡ結合ドメイン、翻訳後修飾酵素の触媒ドメイン）の活性に必要とされるタンパク質をコードするコード配列の遺伝子修飾、ｖ）遺伝子修飾が、ＦＦＡ放出酵素の発現又は活性に必要とされるタンパク質の発現を調節するか、又は本質的に排除し、それによって、ＦＦＡ放出酵素の発現を調節するか、又は本質的に排除する、ＦＦＡ放出酵素の発現又は活性に必要とされるタンパク質の発現を駆動する調節要素若しくはその機能的部分の遺伝子修飾、及び／又はｖｉ）遺伝子修飾が、異種タンパク質の産生を提供し、それによって、ＦＦＡ放出酵素の活性を調節するか、又は本質的に排除するＦＦＡ放出酵素（例えば、転写因子［例えば、表３に示される転写因子、又はそのホモログのうちのいずれか］、ＦＦＡ放出酵素の活性形態の産生に必要とされる翻訳後修飾酵素）の発現又はＦＦＡ放出酵素（例えば、阻害剤、アクチベーター、補酵素）の活性を調節する異種タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を導入する遺伝子修飾が挙げられる。
【0165】
【表3】
【0166】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、任意の細菌、酵母、糸状真菌、古細菌、単細胞原生生物、単細胞動物、単細胞植物、単細胞藻類、原虫、及びクロミスタを含む任意の野生型単細胞生物、又はその遺伝的バリアント（例えば、変異体）、並びにいずれかの安全と一般的に認められている（ＧＲＡＳ）産業宿主細胞に由来し得る。
【0167】
好適な細菌の非限定的な例としては、ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ、ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ（ラン藻）、ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉｏｐｈｃｉｄｅａｅ、ｂａｃｉｌｌａｌｅｓ、ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｌｅｓ、ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａｌｅｓ、ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ、ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ、並びに以下の属のうちのいずれかのメンバー、及びそれらの誘導体と交差が挙げられる：Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ（例えば、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｕｂｏｘｙｄａｎｓ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕｍ）、Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅ（例えば、Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅ ｍｉｓｓｏｕｒｉｅｎｓｉｓ）、Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ（例えば、Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ、Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ ｍａｘｉｍａ）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ（例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ Ｌａｎｃｅｆｉｅｌｄ Ｇｒｏｕｐ Ｎ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ（例えば、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｃｉｔｒｏｖｏｒｕｍ、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｄｅｘｔｒａｎｉｃｕｍ、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｙｓｏｄｅｉｋｔｉｃｕｓ）、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｏｐａｃｕｓ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｏｐａｃｕｓ ｓｔｒａｉｎ ＰＤ６３０）、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｈａｔｔａｎｏｏｇｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｏｌｉｖａｃｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｏｌｉｖｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｕｂｉｇｉｎｏｓｕｓ）、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ（例えば、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅ、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｈｅｇｅｗｉｓｃｈｉ、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｈｙｐｅｒａｎｇｕｌａｒｉｓ、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｍａｌａｃｃｅｎｓｉｓ、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｐｙｒｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｖｏｒａｘ ）、及びＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ（例えば、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）。
【0168】
好適な酵母の非限定的な例としては、以下の属のうちのいずれかのメンバー、並びにその誘導体及び交差が挙げられる：Ｃａｎｄｉｄａ（例えば、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｅｔｃｈｅｌｌｓｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｈｕｍｉｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｏｒｔｈｏｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｌｍｉｏｌｅｏｐｈｉｌａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．、Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｖｅｒｓａｔｉｌｉｓ）、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｅｒｒｉｃｏｌｕｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｈａｎｓｅｎｉｉ）、Ｅｎｄｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｅｎｄｏｍｙｃｅｓ ｖｅｒｎａｌｉｓ）、Ｅｎｄｏｍｙｃｏｐｓｉｓ（例えば、Ｅｎｄｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｖｅｒｎａｌｉｓ）、Ｅｒｅｍｏｔｈｅｃｉｕｍ（例えば、Ｅｒｅｍｏｔｈｅｃｉｕｍ ａｓｈｂｙｉｉ）、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ（例えば、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｓｐ．、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ ｖａｒ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｓｔａｒｋｅｙｉ、Ｌｉｐｏｍｙｅｃｓ ｌｉｐｏｆｅｒ）、Ｏｇａｔａｅａ（例えば、Ｏｇａｔａｅａ ｍｉｎｕｔａ）、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ｋｏｃｌａｍａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｉｎｕｔａ、Ｐｉｃｈｉａ ｌｉｎｄｎｅｒｉ）、Ｐｉｃｈｉａ ｏｐｕｎｔｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｓａｌｉｃｔａｒｉａ、Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｅｒｃｕｕｍ、Ｐｉｃｈｉａ ｐｉｊｐｅｒｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｔｉｐｔｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ（例えば、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ）、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ（例えば、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｓｐ．、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｒａｃｉｌｉｓ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｒａｍｉｎｉｓ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｙａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｅｔｉｃｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｈｅｖａｌｉｅｒｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｅｘｉｇｕｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｆｌｏｒｅｎｔｉｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓａｋｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｕｖａｒｕｍ）、Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ ｒｏｓｅｕｓ）、Ｓｐｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓ（例えば、Ｓｐｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｓｐｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓａｌｍｏｎｉｃｏｌｏｒ）、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ（例えば、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃａｃａｏｌｉｐｏｓｉｍｉｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｏｌｅａｇｉｎｏｓｕｓ ｓｐ．ｎｏｖ．、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃａｃａｏｌｉｐｏｓｉｍｉｌｉｓ ｓｐ．ｎｏｖ．、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｇｒａｃｉｌｅ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｄｕｌｃｉｔｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｉｎｓｅｃｔｏｒｕｍ）、Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｌｌｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｌｌｏｍｙｃｅｓ ｄｅｎｄｒｏｒｈｏｕｓ）、Ｙａｒｒｏｗｉａ（例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、及びＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ）。
【0169】
好適な糸状真菌の非限定的な例としては、以下の属のうちのいずれかのメンバー、並びにその誘導体及び交差を含む、ホロモルフィック、テレオモルフィック、及びアナモルフィックの形態の菌類が挙げられる：Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ（例えば、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ａｌａｂａｍｅｎｓｅ）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｃｌａｖａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｏｅｔｉｄｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｖａｒ．ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｃｈｒａｃｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ、並びにＥｍｅｒｉｃｅｌｌａ、Ｎｅｏｓａｒｔｏｒｙａ、及びＰｅｔｒｏｍｙｃｅｓ種）、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ、Ｃａｎａｒｉｏｍｙｃｅｓ、Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ、Ｃｈａｅｔｏｍｉｄｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎａｓｃｕｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ（例えば、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｂｏｔｒｙｏｉｄｅｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｍｉｃｈａｅｌｉ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｒａｓｓｉｔｕｎｉｃａｔｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｅｕｒｏｐａｅ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｅｖｏｌｃｅａｎｎｕｉ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｆａｒｉｎｉｃｏｌａ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｆａｓｔｉｄｉｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｆｉｌｉｆｏｒｍｅ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｇｅｏｒｇｉａｅ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｇｌｏｂｉｆｅｒｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｇｌｏｂｉｆｅｒｕｍ ｖａｒ．ａｒｔｉｃｕｌａｔｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｇｌｏｂｉｆｅｒｕｍ ｖａｒ．ｎｉｖｅｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｈｉｒｕｎｄｏ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｈｉｓｐａｎｉｃｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｈｏｌｍｉｉ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｉｏｐｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｋｅｒａｔｉｎｏｐｈｉｌｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｋｒｅｉｓｅｌｉｉ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｋｕｚｕｒｏｖｉａｎｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｉｇｎｏｒｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｏｂａｔｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ Ｇａｒｇ ２７Ｋ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｅｄｉｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｅｄｉｕｍ ｖａｒ．ｓｐｉｓｓｅｓｃｅｎｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｅｐｈｉｔｉｃｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｅｒｄａｒｉｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｅｒｄａｒｉｕｍ ｖａｒ．ｒｏｓｅｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｉｎｏｒ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐａｎｎｉｃｏｌａ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ ｖａｒ．ｃｒｅｓｃｅｎｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐｉｌｏｓｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｍｅｒｄａｒｉｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐｙｒｉｆｏｒｍｉｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｉｇｌｅｒｉ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｕｌｆｕｒｅｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｙｎｃｈｒｏｎｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｔｒｏｐｉｃｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｕｎｄｕｌａｔｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｖａｌｌｅｎａｒｅｎｓｅ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｖｅｓｐｅｒｔｉｌｉｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｚｏｎａｔｕｍ）、Ｃｏｏｎｅｍｅｒｉａ、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ（例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ ｅｈｉｎｕｌａｔａ）、Ｄａｃｔｙｌｏｍｙｃｅｓ、Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌａ、Ｆｉｌｉｂａｓｉｄｉｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ（例えば、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｒｔｉｃｉｏｌｌｉｏｉｄｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐｏａｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓａｍｂｕｃｃｉｎｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ、及びそれらの関連するＧｉｂｂｅｒｅｌｌａのテレオモルフの形態）、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ、Ｈｕｍｉｃｏｌａ、Ｈｙｐｏｃｒｅａ、Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ、Ｍａｌｂｒａｎｃｈｅａ（例えば、Ｍａｌｂｒａｎｃｈｅａ ｆｉｌａｍｅｎｔｏｓａ）、Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ、Ｍａｌｂｒａｎｃｈｉｕｍ、Ｍｅｌａｎｏｃａｒｐｕｓ、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ（例えば、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ １Ｓ－４、Ｍｏｒｔｉｅｒａｌｌａ ｉｓａｂｅｌｌｉｎｅ、Ｍｏｒｔｉｅｒｒｌａ ｖｉｎａｃｅａ、Ｍｏｒｔｉｅｒａｌｌａ ｖｉｎａｃｅａｅ ｖａｒ．ｒａｆｆｉｎｏｓｅｕｔｉｌｉｚｅｒ）、Ｍｕｃｏｒ（例えば、Ｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ Ｃｏｏｎｅｙ ｅｔ Ｅｍｅｒｓｏｎ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ（Ｃｏｏｎｅｙ＆Ｒ．Ｅｍｅｒｓｏｎ））Ｓｃｈｉｐｐｅｒ、Ｍｕｃｏｒ ｐｕｓｉｌｌｕｓ Ｌｉｎｄｔ、Ｍｕｃｏｒ ｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄｅｓ Ｍｕｃｏｒ ｍｕｃｅｄｏ）、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ（例えば、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ、Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ（例えば、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ（例えば、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ、Ｐｅｎｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｉｉｌａｃｉｎｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉｉ）、Ｐｈｅｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ、Ｐｈｌｅｂｉａ、Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ（例えば、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｎｉｖｅｕｓ）、Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ、Ｓｃｙｔａｌｉｄｉｕｍ、Ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｕｍ（例えば、Ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｅｌｌｕｌｏｐｈｉｌｕｍ）、Ｓｔｅｒｅｕｍ、Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ、Ｔｈｉｅｌａｖｉａ（例えば、Ｔｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ、ａｎｄ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ（例えば、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｎｇｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）。
【0170】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＦＦＡ放出酵素又は２つ以上のＦＦＡ放出酵素の組み合わせの調節された活性を含む組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞（すなわち、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ株に由来する組換え宿主細胞）、ＦＦＡ放出酵素又は２つ以上のＦＦＡ放出酵素の組み合わせの調節された活性を含む組換えＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ宿主細胞（すなわち、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ株に由来する組換え宿主細胞）、ＦＦＡ放出酵素又は２つ以上のＦＦＡ放出酵素の組み合わせの調節された活性を含む組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ宿主細胞（すなわち、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ株に由来する組換え宿主細胞）、及びＦＦＡ放出酵素又は２つ以上のＦＦＡ放出酵素の組み合わせの調節された活性を含む組換えＭｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ宿主細胞（すなわち、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ株に由来する組換え宿主細胞）からなる群から選択され得る。
【0171】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０Ｒ９Ｊ９、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＧ０、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＢＺ６、Ｇ０ＲＤ１６、Ｇ０ＲＤＫ５、Ｇ０ＲＤＵ７、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ０４、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＧＮ７、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＧＱ７、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＩＶ５、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＪＣ６、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＥ６、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＢ０、Ｇ０ＲＬＢ７、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭ１４、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＮＦ８、Ｇ０ＲＰＱ８、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＱＧ３、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＮ５、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＴＲ６、Ｇ０ＲＴＴ４、Ｇ０ＲＵＩ０、Ｇ０ＲＵＺ９、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＷ７３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＷＳ１、Ｇ０ＲＷＴ９、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｇ０ＲＶＤ２、及びＧ０Ｒ８Ａ６、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0172】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＧＤ５、及びＧ０ＲＫＨ７、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0173】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、及びＧ０ＲＭＩ３、並びにそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0174】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0175】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0176】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0177】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性を含み得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0178】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせ含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０Ｒ９Ｊ９、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＧ０、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＢＺ６、Ｇ０ＲＤ１６、Ｇ０ＲＤＫ５、Ｇ０ＲＤＵ７、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ０４、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＧＮ７、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＧＱ７、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＩＶ５、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＪＣ６、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＥ６、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＢ０、Ｇ０ＲＬＢ７、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭ１４、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＮＦ８、Ｇ０ＲＰＱ８、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＱＧ３、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＮ５、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＴＲ６、Ｇ０ＲＴＴ４、Ｇ０ＲＵＩ０、Ｇ０ＲＵＺ９、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＷ７３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＷＳ１、Ｇ０ＲＷＴ９、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｒ０ＲＶＤ２、及びＧ０Ｒ８Ａ６、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0179】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＧＤ５、及びＧ０ＲＫＨ７、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0180】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＷＴ９、及びＧ０ＲＸ８２、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0181】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、及びＧ０ＲＭＩ３、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0182】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＷＴ９、及びＧ０ＲＸ８２、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＸ９０、及びＧ０ＲＷ７７、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節されていない産生及び／又は活性を含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0183】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＩＵ１及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨＪ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０ＲＶＤ２、Ｇ０Ｒ８Ａ６、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０Ｒ８Ｎ５、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＲＫ３、及びＧ０ＲＬＢ０、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第４のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0184】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0185】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0186】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0187】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0188】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0189】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0190】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第４のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第４のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0191】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＬＨ４、及びＧ０ＲＭＩ３、並びにそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＴ８３、Ｇ０ＲＲＲ１、Ｇ０ＲＩＦ９、Ｇ０Ｒ７６５、Ｇ０ＲＲＪ７、Ｇ０Ｒ９３２、Ｇ０ＲＢＶ８、Ｇ０ＲＥＥ８、Ｇ０ＲＬＦ０、及びＧ０ＲＢＨ２、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含む転写因子からなる群から選択される転写因子の調節された産生及び／又は活性とを含み得、ＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、転写因子の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0192】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0193】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0194】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0195】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＧＱ０及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＬＨ４及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性と、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＭＩ３及びそのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択される第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性とを含み得、第１のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第２のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少であり、第３のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の産生及び／又は活性の減少である。
【0196】
組換え宿主細胞を得るための方法
様々な態様では、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞を得るための方法が本明細書に提供され、方法は、任意の順序で、ｉ）以下のうちのいずれかによるポリヌクレオチド、若しくは以下のうちのいずれかによる組換え発現構築物、若しくは以下のうちのいずれかによる組換えベクターを得ること、ｉｉ）ポリヌクレオチド、発現構築物、若しくは組換えベクターを宿主細胞（例えば、本明細書に開示される宿主細部のうちのいずれか）に導入して、組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ること、ｉｉｉ）宿主細胞（例えば、本明細書に開示される宿主細胞のうちのいずれか）を遺伝子修飾して、ＦＦＡ放出酵素（例えば、本明細書に開示されるＦＦＡ放出酵素のうちのいずれか１つ又は本明細書に開示される２つ以上のＦＦＡ放出酵素）の産生及び／若しくは活性を調節するか、若しくは本質的に排除し、調節された若しくは本質的に排除されたＦＦＡ放出酵素活性を含む組換え宿主細胞を得ること、ｉｖ）ポリヌクレオチド、発現構築物、若しくは組換えベクターを、調節された若しくは本質的に排除されたＦＦＡ放出酵素活性を含む組換え宿主細胞に導入すること、並びに／又はｖ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を遺伝子修飾して、ＦＦＡ放出酵素（例えば、本明細書に開示されるＦＦＡ放出酵素のうちのいずれか１つ又は本明細書に開示される２つ以上のＦＦＡ放出酵素の任意の組み合わせ）の産生及び／若しくは活性を調節するか、若しくは本質的に排除することの任意の組み合わせを含む。
様々な態様では、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞を得るための方法が本明細書に提供され、方法は、任意の順序で、ｉ）以下のうちのいずれかによるポリヌクレオチド、若しくは以下のうちのいずれかによる組換え発現構築物、若しくは以下のうちのいずれかによる組換えベクターを得ること、ｉｉ）ポリヌクレオチド、発現構築物、若しくは組換えベクターを宿主細胞（例えば、本明細書に開示される宿主細部のうちのいずれか）に導入して、組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を得ること、ｉｉｉ）宿主細胞（例えば、本明細書に開示される宿主細胞のうちのいずれか）を遺伝子修飾して、ＦＦＡ放出酵素（例えば、本明細書に開示されるＦＦＡ放出酵素のうちのいずれか１つ又は本明細書に開示される２つ以上のＦＦＡ放出酵素）の産生及び／若しくは活性を調節するか、若しくは本質的に排除し、調節された若しくは本質的に排除されたＦＦＡ放出酵素活性を含む組換え宿主細胞を得ること、ｉｖ）ポリヌクレオチド、発現構築物、若しくは組換えベクターを、調節された若しくは本質的に排除されたＦＦＡ放出酵素活性を含む組換え宿主細胞に導入すること、並びに／又はｖ）組換え成分を産生することができる組換え宿主細胞を遺伝子修飾して、ＦＦＡ放出酵素（例えば、本明細書に開示されるＦＦＡ放出酵素のうちのいずれか１つ又は本明細書に開示される２つ以上のＦＦＡ放出酵素の任意の組み合わせ）の産生及び／若しくは活性を調節するか、若しくは本質的に排除することの任意の組み合わせを含む。
【0197】
ポリヌクレオチド
ポリヌクレオチド、発現構築物、及び／又は組換えベクターは、限定するものではないが、直接的化学合成及びクローニングを含む、当該技術分野で既知の任意の好適な方法によっても得ることができる。
ポリヌクレオチド、発現構築物、及び／又は組換えベクターは、限定するものではないが、直接的化学合成及びクローニングを含む、当該技術分野で既知の任意の好適な方法によっても得ることができる。
【0198】
ポリヌクレオチドは、ｉ）任意の分泌シグナル配列（すなわち、新生タンパク質が合成される細胞の外部への、ペプチドに結合された新生タンパク質の送達を媒介するペプチドをコードする配列、例えば、本明細書に開示される分泌シグナルのうちのいずれかをコードするポリヌクレオチド配列）と、ｉｉ）組換えタンパク質コード配列（すなわち、任意選択で、タグポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるタグポリペプチドのうちのいずれか）を含む、組換えタンパク質（例えば、本明細書に提供される組換えタンパク質のうちのいずれか）をコードするポリヌクレオチド配列）とを含んでもよく、ａ）任意の分泌シグナル配列は、組換えタンパク質コード配列にセンス配向で作動可能に連結される（すなわち、任意の分泌シグナル配列及び組換えタンパク質コード配列は、転写及び翻訳が、任意の分泌シグナルを含む組換えタンパク質を産生するように位置付けられる）。
【0199】
分泌シグナル配列
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物は、任意選択で、以下のうちのいずれかによる組換え宿主細胞中で活性である任意の分泌シグナル配列を含み得る。
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物は、任意選択で、以下のうちのいずれかによる組換え宿主細胞中で活性である任意の分泌シグナル配列を含み得る。
【0200】
任意の分泌シグナル配列は、翻訳後に（すなわち、タンパク質合成は、新生組換えタンパク質が、ＥＲへの転座の前に細胞サイトゾル中に存在するように転座に先行する）、又は共翻訳で（すなわち、タンパク質合成及びＥＲへの転座が、同時に起こる）、新生組換えタンパク質のＥＲへの転座を媒介する分泌シグナルをコードし得る。
【0201】
好適な分泌シグナル配列の非限定的な例としては、以下のタンパク質のうちのいずれかをコードする遺伝子の分泌シグナル配列を含む、細菌宿主細胞において機能的である分泌シグナル配列が挙げられる：ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡ、Ｂｌａ、ＰｈｏＡ、ＰｈｏＳ、ＭａｌＥ、ＬｉｖＫ、ＬｉｖＪ、ＭｇｌＢ、ＡｒａＦ、ＡｍｐＣ、ＲｂｓＢ、ＭｅｒＰ、ＣｐｄＢ、Ｌｐｐ、ＬａｍＢ、ＯｍｐＣ、ＰｈｏＥ、ＯｍｐＦ、ＴｏｌＣ、ＢｔｕＢ、及びＬｕｔＡ、並びにそれらの機能的部分及び組み合わせ。
【0202】
好適な分泌シグナル配列の非限定的な例としては、以下のタンパク質のうちのいずれかをコードする遺伝子の分泌シグナル配列を含む、真菌宿主細胞において機能的である分泌シグナル配列が挙げられる：ＣＢＨ１、ＣＢＨ２、ＥＧＬ１、ＥＧＬ２、ＸＹＮ１、ＸＹＮ２、ＢＸＬ１、ＨＦＢ１、ＨＦＢ２、ＧＬＡＡ、ＡＭＹＡ、ＡＭＹＣ、ＡＡＭＡ、アルファ接合因子、ＳＵＣ２、ＰＨＯ５、ＩＮＶ、ＡＭＹ、ＬＩＰ、ＰＩＲ、ＯＳＴ１、及びβ－グルコシダーゼ、並びにそれらの機能的部分及び組み合わせ。
【0203】
組換えタンパク質コード配列
組換えタンパク質コード配列は、任意の組換えタンパク質をコードし得る。
組換えタンパク質コード配列は、任意の組換えタンパク質をコードし得る。
【0204】
組換えタンパク質の非限定的な例としては、乳タンパク質が挙げられる。
【0205】
本明細書で使用される場合、「乳タンパク質」という用語は、乳清タンパク質又はカゼインを指す。
【0206】
本明細書で使用される場合、「カゼイン」という用語は、哺乳類産生乳に天然に見出されるカゼイン（すなわち、哺乳動物によって産生される乳に天然であるカゼイン、例えば、天然カゼイン）中のアミノ酸の配列と少なくとも４０％（例えば、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、１００％）同一である少なくとも２０（例えば、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０）個のアミノ酸の配列を含むポリペプチドを指す。カゼインの非限定的例としては、β－カゼイン、κ－カゼイン、α－Ｓ１－カゼイン、及びα－Ｓ２－カゼインが挙げられる。したがって、本明細書で使用される場合、「β－カゼイン」、「κ－カゼイン」、「α－Ｓ１－カゼイン」、及び「α－Ｓ２－カゼイン」という用語は、哺乳類産生乳に天然に見出される、それぞれβ－カゼイン、κ－カゼイン、α－Ｓ１－カゼイン、及びα－Ｓ２－カゼイン（例えば、それぞれ、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ β－カゼイン（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ０２６６６のアミノ酸１６～２２４）、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ κ－カゼイン（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ０２６６８のアミノ酸２２～１９０）、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ α－Ｓ１－カゼイン（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ０２６６２のアミノ酸１６～２１４）、及びＢｏｓ ｔａｕｒｕｓ α－Ｓ２－カゼイン（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ０２６６３のアミノ酸１６～２２２））中のアミノ酸の配列と少なくとも４０％（例えば、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、１００％）同一である少なくとも２０（例えば、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０）個のアミノ酸の配列を含むポリペプチドを指す。
【0207】
本明細書で使用される場合、「乳清タンパク質」という用語は、哺乳類産生乳に天然に見出される乳清タンパク質（すなわち、哺乳動物によって産生される乳に天然である乳清タンパク質、例えば、天然乳清タンパク質）中のアミノ酸の配列と少なくとも４０％（例えば、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、１００％）同一である少なくとも２０（例えば、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０）個のアミノ酸の配列を含むポリペプチドを指す。乳清タンパク質の非限定的な例としては、α－ラクトアルブミン、β－ラクトグロブリン、ラクトトランスフェリン、ラクトフェリシン、血清アルブミンタンパク質、ラクトペルオキシダーゼタンパク質、及びグリコマクロペプチドが挙げられる。したがって、本明細書で使用される場合、「α－ラクトアルブミン」、「β－ラクトグロブリン」、「ラクトトランスフェリン」、「ラクトフェリシン」、「血清アルブミン」、「ラクトペルオキシダーゼ」、及び「グリコマクロペプチド」という用語は、哺乳動物産生乳に天然に見出される、それぞれα－ラクトアルブミン、β－ラクトグロブリン、ラクトトランスフェリン、ラクトフェリシン、血清アルブミン、ラクトペルオキシダーゼ、及びグリコマクロペプチド（ＧＭＰ）（例えば、それぞれＢｏｓ ｔａｕｒｕｓ α－ラクトアルブミン（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ００７１１のアミノ酸２０～１４２）、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ β－ラクトグロブリン（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ０２７５４のアミノ酸１７～１７８）、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓラクトトランスフェリン（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ２４６２７のアミノ酸２０～７０８）、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓラクトフェリシン（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ２４６２７のアミノ酸３６～６０）、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ血清アルブミン（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ０２７６９のアミノ酸２５～６０７）、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓラクトペルオキシダーゼ（ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ８００２５のアミノ酸１０１～７１２）、及びＢｏｓ ｔａｕｒｕｓグリコマクロペプチド（ＧＭＰ、ＵｎｉＰｒｏｔ配列Ｐ０２６６８のアミノ酸１２７～１９０））のアミノ酸の配列と少なくとも４０％（例えば、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、１００％）同一である少なくとも２０（例えば、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０）個のアミノ酸の配列を含むポリペプチドを指す。
【0208】
乳タンパク質は、これらに限定されないが、ウシ、ヒト、ヒツジ、ムフロン、ヤギ、バッファロー、ラクダ、ウマ、ロバ、アルパカ、ヤク、ラマ、キツネザル、パンダ、モルモット、リス、クマ、マカク、ゴリラ、チンパンジー、シロイワヤギ、サル、類人猿、ネコ、イヌ、ワラビー、ラット、マウス、ゾウ、オポッサム、ウサギ、クジラ、ヒヒ、テナガザル、オランウータン、マンドリル、ブタ、オオカミ、キツネ、ライオン、トラ、及びハリモグラを含む任意の哺乳動物種に見出される天然乳タンパク質のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列、又はアミノ酸配列のホモログを有し得る。
【0209】
組換え発現構築物
組換え発現構築物は、ｉ）プロモーター配列（例えば、本明細書に開示されるプロモーターのうちのいずれかのポリヌクレオチド配列）、ｉｉ）上記のうちのいずれかのポリヌクレオチド、及びｉｉｉ）終結配列（例えば、本明細書に開示されるターミネーターのうちのいずれかのポリヌクレオチド配列）を含んでもよく、ａ）プロモーター配列は、ポリヌクレオチドの任意の分泌シグナル配列及び組換えタンパク質コード配列にセンス配向で作動可能に連結され（すなわち、プロモーター配列並びにポリヌクレオチドの任意の分泌シグナル配列及び組換えタンパク質コード配列は、プロモーター配列が、任意の分泌シグナル配列及び組換えタンパク質コード配列の転写を媒介又は調節することにおいて効果的であるように位置付けられる）、かつｂ）１つ以上のターミネーター配列は、組換えタンパク質コード配列に作動可能に連結される（すなわち、組換えタンパク質コード配列及び１つ以上のターミネーター配列は、組換えタンパク質コード配列の転写を終結することにおいて効果的であるように位置付けられる）。
組換え発現構築物は、ｉ）プロモーター配列（例えば、本明細書に開示されるプロモーターのうちのいずれかのポリヌクレオチド配列）、ｉｉ）上記のうちのいずれかのポリヌクレオチド、及びｉｉｉ）終結配列（例えば、本明細書に開示されるターミネーターのうちのいずれかのポリヌクレオチド配列）を含んでもよく、ａ）プロモーター配列は、ポリヌクレオチドの任意の分泌シグナル配列及び組換えタンパク質コード配列にセンス配向で作動可能に連結され（すなわち、プロモーター配列並びにポリヌクレオチドの任意の分泌シグナル配列及び組換えタンパク質コード配列は、プロモーター配列が、任意の分泌シグナル配列及び組換えタンパク質コード配列の転写を媒介又は調節することにおいて効果的であるように位置付けられる）、かつｂ）１つ以上のターミネーター配列は、組換えタンパク質コード配列に作動可能に連結される（すなわち、組換えタンパク質コード配列及び１つ以上のターミネーター配列は、組換えタンパク質コード配列の転写を終結することにおいて効果的であるように位置付けられる）。
【0210】
組換え発現構築物は、発現された組換えタンパク質が、親和性精製のためのペプチド配列を含むように、親和性精製タグをコードする作動可能に連結された配列を更に含み得る。かかる親和性精製タグは、発現されたときに、親和性精製タグが、アミノ末端、カルボキシ末端、又はその両方に若しくはそれらのいずれかに対して存在するように、作動可能に連結され得る。かかる親和性精製タグは、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ、ポリ（Ｈｉｓ）タグ、ヘキサ（Ｈｉｓ）タグ、ＦＬＡＧ－タグ、Ｖ５－ｔａｇ、ＶＳＶ－タグ、Ｅ－タグ、ＮＥ－タグ、ヘマグルチニン（Ｈａ）タグ、及びＭｙｃ－タグであり得る。
【0211】
組換え発現構築物は、相同（すなわち、標的化された組み込み）又は非相同組換えによる宿主細胞のゲノム内への組み込みのための配列を更に含み得る。組換え発現構築物は、組換え発現構築物の相同組換えの確率を高めるために、宿主細胞のゲノム内の標的配列と十分な同一性を有する少なくとも１０、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、又は少なくとも１０，０００塩基対を含み得る。かかる相同配列は、非コード配列又はコード配列であり得る。
【0212】
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物中に含まれる任意の分泌シグナル配列及び／又は組換えタンパク質コード配列は、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞における発現のためにコドン最適化されてもよい。
【0213】
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物は、組換え発現構築物の断片を宿主細胞のゲノム（例えば、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞のゲノム）内に組み込んだときに生成され得る。例えば、上記のうちのいずれかによるポリヌクレオチドは、内因性遺伝子座位の１つ以上の調節要素が、組換えタンパク質コード配列に作動可能に連結されるように、宿主細胞のゲノム内に安定的に組み込まれてもよく、それによって、上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物を生成する。
【0214】
プロモーター配列
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物は、以下のうちのいずれかによる組換え宿主細胞中で活性である任意のプロモーター配列を含み得る。
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物は、以下のうちのいずれかによる組換え宿主細胞中で活性である任意のプロモーター配列を含み得る。
【0215】
プロモーター配列は、構成的プロモーター配列（すなわち、ほとんどの環境及び発達条件下で活性であるプロモーター配列）、又は誘導性若しくは抑制性プロモーター配列（すなわち、ある特定の環境条件又は発達条件下のみ［例えば、これらに限定されないが、炭素（例えば、グルコース、ガラクトース、ラクトース、スクロース、セルロース、ソフォロース、ゲンチオビオース、ソルボース、セルラーゼプロモーターを誘導する二糖類、デンプン、トリプトファン、チアミン、メタノール）、ホスフェート、窒素、又は他の栄養素；温度；ｐＨ；オスモル濃度；重金属又は重金属イオン；阻害剤；ストレス；異化代謝産物；及びそれらの組み合わせなどのある特定の要因の存在又は不在下］で活性であるプロモーター配列）であり得る。
【0216】
プロモーター配列は、単一のプロモーター配列、又は２つ以上のプロモーター配列（例えば、配列で配置された２つ以上のプロモーター又はその機能的部分の組み合わせ、誘導性プロモーター及び構成的プロモーターの組み合わせ）からなってもよい。２つ以上のプロモーター配列は、同一であり得るか、又は２つ以上のプロモーター配列のうちの少なくとも２つは、同一であることはできない。
【0217】
プロモーター配列は、双方向性プロモーター配列（すなわち、例えば、逆方向に２つの同一又は異なるプロモーターを融合することによって生成される、転写因子を動員することによって両方の配向で転写を開始するポリヌクレオチド）を含み得るか、又はそれからなり得る。
【0218】
好適なプロモーター配列の非限定的な例としては、Ｔ７プロモーター、Ｔ５プロモーター、Ｔａｃプロモーター、ｐＬ／ｐＲプロモーター、ｐｈｏＡプロモーター、ｌａｃＵＶ５プロモーター、ｔｒｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ｃｓｔＡプロモーター、ｘｙｌＡプロモーター、ｍａｎＰプロモーター、ｍａｌＡプロモーター、ｌａｃＡプロモーター、ａｐｒＥプロモーター、ΔａｐｒＥプロモーター、ｓｒｆＡプロモーター、ｐ４３プロモーター、ｙｌｂＡプロモーター、σＢロモーター、ｖｅｇプロモーター、ＰＧ１プロモーター、ＰＧ６プロモーター、λＰＬプロモーター、λＰＲプロモーター、及びｓｐａプロモーター、並びにそれらの機能的部分及び組み合わせを含む、細菌宿主細胞において機能的であるプロモーター配列が挙げられる。
【0219】
好適なプロモーター配列の非限定的な例としては、ｘｌｎＡプロモーター、ｘｙｎ１プロモーター、ｘｙｎ２プロモーター、ｘｙｎ３プロモーター、ｘｙｎ４プロモーター、ｂｘｌ１プロモーター、ｃｂｈ１プロモーター、ｃｂｈ２プロモーター、ｅｇｌ１プロモーター、ｅｇｌ２プロモーター、ｅｇｌ３プロモーター、ｅｇｌ４プロモーター、ｅｇｌ５プロモーター、ｇｌａＡプロモーター、ａｇｄＡプロモーター、ｇｐｄＡプロモーター、ｇｐｄ１プロモーター、ＡＯＸ１プロモーター、ＧＡＰ１プロモーター、ＭＥＴ３プロモーター、ＥＮＯ１プロモーター、ＧＰＤ１プロモーター、ＰＤＣ１プロモーター、ＴＥＦ１プロモーター、ＡＸＥ１プロモーター、ＣＩＰ１プロモーター、ＧＨ６１プロモーター、ＰＫＩ１プロモーター、ＲＰ２プロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、ＹＰＴ１プロモーター、ＬＡＣ４プロモーター、ＬＡＣ４－ＰＢ１プロモーター、ＦＬＤ１プロモーター、ＭＯＸプロモーター、ＤＡＳ１プロモーター、ＤＡＳ２プロモーター、ＧＡＰ１プロモーター、ＳＴＲ３プロモーター、ＡＤＨ３プロモーター、ＧＵＴ２プロモーター、ＣＹＣ１プロモーター、ＴＤＨ３プロモーター、ＰＧＬ１プロモーター、ＡＤＨ２プロモーター、ＨＸＴ７プロモーター、ＣＬＢ１プロモーター、及びＰＨＯ５プロモーター、並びにそれらの機能的部分及び組み合わせを含む、真菌宿主細胞において機能的であるプロモーター配列が挙げられる。
【0220】
終結配列
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物は、以下のうちのいずれかによる組換え宿主細胞中で活性である任意の終結配列を含み得る。
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物は、以下のうちのいずれかによる組換え宿主細胞中で活性である任意の終結配列を含み得る。
【0221】
好適な終結配列の非限定的な例としては、ａｄｈ１、ａｍａＡ、ａｍｄＳ、ａｍｙＡ、ａｏｘ１、ｃｂｈ１、ｃｂｈ２、ｃｙｃ２、ｅｇｌ１、ｅｇｌ２、ｇａｌ１、ｇａｐ１、ｇｌａＡ、ｇｐｄ１、ｇｐｄＡ、ｐｄｃ１、ｐｇｋ１、ｔｅｆ１、ｔｐｓ１、ｔｒｐＣ、ｘｙｎ１、ｘｙｎ２、ｘｙｎ３、及びｘｙｎ４遺伝子、並びにそれらの機能的部分及び組み合わせの終結配列が挙げられる。
【0222】
終結配列は、単一の終結配列、又は２つ以上の終結配列からなってもよく、２つ以上の終結配列は、同一であってもよいか、又は２つ以上の終結配列のうちの少なくとも２つは、同一でなくてもよい。終結配列は、双方向性終結配列からなってもよい。
【0223】
追加の調節要素
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物は、追加の調節要素を更に含み得る。
上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物は、追加の調節要素を更に含み得る。
【0224】
調節要素の非限定的な例としては、プロモーター配列、末端配列、転写開始配列、翻訳開始配列、翻訳停止配列、エンハンサー配列、アクチベーター配列、反応要素、タンパク質認識部位、誘導性要素、タンパク質結合配列、５’及び３’非翻訳領域（例えば、ポリ－アデニル化シグナルを含む３’非翻訳領域）、上流活性化配列（ＵＡＳ）、イントロン、オペレーター（すなわち、リプレッサータンパク質がプロモーターに結合し、プロモーターの活性を低減又は除去し得るタンパク質結合ドメインを含む、プロモーターに隣接した核酸の配列）、効率的なＲＮＡプロセシングシグナル（例えば、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル）、細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列、翻訳効率を高める配列（例えば、リボソーム結合部位［例えば、シャイン・ダルガノ配列）、タンパク質の安定性を高める配列、タンパク質分泌を高める配列、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。
【0225】
組換えベクター
組換えベクターは、上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物を含み得る。
組換えベクターは、上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物を含み得る。
【0226】
組換え型ベクターは、上記のうちのいずれかによる単一の組換え発現構築物、又は上記のうちのいずれかによる２つ以上の組換え発現構築物を含んでもよく、それらは同一であってもよいか、又はそれらのうちの少なくとも２つは同一でなくてもよい（例えば、プロモーター配列、分泌シグナル、タンパク質コード配列、終結配列、及び／又は追加の調節要素が互いに異なっている）。組換えベクターが２つ以上の組換え発現構築物を含む実施形態では、２つ以上の組換え発現構築物は、同じ組換えタンパク質をコードし得る。いくつかのかかる実施形態では、同じ組換えタンパク質をコードする２つ以上の組換え発現構築物は、プロモーター配列、分泌シグナル配列、終結配列、及び／又は追加の調節要素が互いに異なっている。
【0227】
組換えベクターは、組換え宿主細胞における組換えベクターの増殖に好適な１つ以上の他の要素を更に含み得る。かかる他の要素の非限定的な例としては、複製の起源及び選択マーカーが挙げられる。複製の起源及び選択マーカーは、当該技術分野で既知であり、細菌及び真菌の複製起源（例えば、ＡＭＡ１、ＡＮＳＩ）を含む。選択マーカーは、耐性遺伝子（すなわち、宿主細胞が外因的に添加された化合物［例えば、抗生物質化合物］を解毒することを可能にするタンパク質をコードするポリヌクレオチド）、栄養要求性マーカー（すなわち、必須成分を欠く培地中で成長しながら宿主細胞が必須成分（通常はアミノ酸）を合成することを可能にするタンパク質をコードするポリヌクレオチド）、又はカラーマーカー（すなわち、色を産生することができるタンパク質をコードする遺伝子）であり得る。好適な選択マーカーの非限定的な例としては、ａｍｄＳ（アセトアミダーゼ（ａｃｅｔａｍｉｄａｓｅ））、ａｒｇＢ（オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ）、ｂａｒ（ホスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼ）、ｈｐｈ（ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ）、ｎｉａＤ（硝酸レダクターゼ）、ｐｙｒＧ（オロチジン５’－リン酸デカルボキシラーゼ）、ｓＣ（硫酸アデニルトランスフェラーゼ）、ｔｒｐＣ（アントラニル酸シンターゼ）、及びｂｌｅ（ブレオマイシンタイプ抗生物質耐性）、並びにそれらの誘導体が挙げられる。選択マーカーは、選択マーカーの産生を減少させる改変を含んでもよく、それによって、選択下で組換えベクターを含む組換え宿主細胞が生存することを可能にするために必要なコピー数が増加する。選択はまた、共形質転換によって達成されてもよく、形質転換は、２つのベクターの混合物を用いて実施され、選択は、１つのベクターのみに対して行われる。
【0228】
組換えベクターは、相同（すなわち、標的化された組み込み）又は非相同組換えによる宿主細胞のゲノム内への組み込みのための配列を更に含み得る。組換え発現構築物は、組換え発現構築物の相同組換えの確率を高めるために、宿主細胞のゲノム内の標的配列と十分な同一性を有する少なくとも１０、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、又は少なくとも１０，０００塩基対を含み得る。かかる相同配列は、非コード配列又はコード配列であり得る。
【0229】
遺伝子修飾
遺伝子修飾は、例えば、細胞のゲノム中の１つ以上のヌクレオチドの挿入、置換、重複、再配置、及び／又は欠失からなり得る。遺伝子修飾は、例えば、停止コドンを導入する；開始コドンを移動させる；オープンリーディングフレームのフレームシフトを挿入する；又は点変異、ミスセンス変異、置換変異、欠失変異、フレームシフト変異、挿入変異、重複変異、増殖変異、転座変異、若しくは反転変異を作成し得る。
遺伝子修飾は、例えば、細胞のゲノム中の１つ以上のヌクレオチドの挿入、置換、重複、再配置、及び／又は欠失からなり得る。遺伝子修飾は、例えば、停止コドンを導入する；開始コドンを移動させる；オープンリーディングフレームのフレームシフトを挿入する；又は点変異、ミスセンス変異、置換変異、欠失変異、フレームシフト変異、挿入変異、重複変異、増殖変異、転座変異、若しくは反転変異を作成し得る。
【0230】
宿主細胞を遺伝子修飾するための方法は当該技術分野で既知であり、限定するものではないが、ランダム変異誘発及びスクリーニング、部位特異的変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、挿入変異誘発、化学的変異誘発（例えば、ヒドロキシルアミン、Ｎ－メチル－Ｎ’－ニトロ－Ｎ－ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）、Ｎ－メチル－Ｎ’－ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）、Ｏ－メチルヒドロキシルアミン、亜硝酸、エチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）、重亜硫酸ナトリウム、蟻酸、ヌクレオチド類似物を使用して）、照射（例えば、紫外線（ＵＶ）照射）、コード若しくは非コードヌクレオチド配列の欠失、相同組換え、ＦＬＰ／ＦＲＴ組換え、遺伝子破壊、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集、及び遺伝子変換を含む。かかる方法は、目的のタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（例えば、ＦＦＡ放出酵素、ＦＦＡ放出酵素の発現を駆動し、かつ／又はＦＦＡ放出酵素の活性を調節するタンパク質）に相補的であるか、目的のタンパク質に特異的であるＲＮＡｉ構築物をコードするか、又はＦＦＡ放出酵素の異種阻害剤若しくはアクチベーターをコードする、ポリヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチドの宿主細胞内への導入を含む。
【0231】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞中のＦＦＡ放出酵素の調節された産生及び／又は活性は、ＲＮＡレベルで、及び最も好適にはタンパク質レベルで実施されるアッセイ、又は分泌関連タンパク質の産生若しくは活性を測定する機能的バイオアッセイの使用など、当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して評価され得る。かかるアッセイの非限定的な例としては、ノーザンブロッティング、ドットブロッティング（ＤＮＡ又はＲＮＡ）、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）、インサイチュハイブリダイゼーション、サザンブロッティング、酵素活性アッセイ、免疫学的アッセイ（例えば、免疫組織化学染色、免疫アッセイ、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ）、及び遊離チオールアッセイ（例えば、遊離システイン残基を含むタンパク質の産生を測定するため）が挙げられる。上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞中のＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は活性は、同じ方法によって評価される対応する組換え宿主細胞（すなわち、組換え成分を産生することもできる（すなわち、同じ発現構築物を含む）が、ＦＦＡ放出酵素活性を調節する又は本質的に排除する遺伝子修飾を含まない、同一の組換え宿主細胞）のものと比較され得る。
【0232】
ポリヌクレオチド、組換え発現構築物、又は組換えベクターの宿主細胞への導入
ポリヌクレオチド、組換え発現構築物、又は組換えベクターを宿主細胞に導入するための方法は、当該技術分野で周知である。かかる方法の非限定的な例としては、リン酸カルシウムトランスフェクション、デンドリマートランスフェクション、リポソームトランスフェクション（例えば、カチオン性リポソームトランスフェクション）、カチオン性ポリマートランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラントランスフェクション、細胞スクイージング（ｃｅｌｌ ｓｑｕｅｅｚｉｎｇ）、ソノポレーション、光トランスフェクション、プロトプラスト融合、プロトプラスト形質転換、インペールフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）、ハイドロダイナミック送達、遺伝子銃、マグネトフェクション、ウイルス形質導入、電気穿孔及び化学的形質転換（例えば、ＰＥＧを使用して）が挙げられる。
ポリヌクレオチド、組換え発現構築物、又は組換えベクターを宿主細胞に導入するための方法は、当該技術分野で周知である。かかる方法の非限定的な例としては、リン酸カルシウムトランスフェクション、デンドリマートランスフェクション、リポソームトランスフェクション（例えば、カチオン性リポソームトランスフェクション）、カチオン性ポリマートランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラントランスフェクション、細胞スクイージング（ｃｅｌｌ ｓｑｕｅｅｚｉｎｇ）、ソノポレーション、光トランスフェクション、プロトプラスト融合、プロトプラスト形質転換、インペールフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）、ハイドロダイナミック送達、遺伝子銃、マグネトフェクション、ウイルス形質導入、電気穿孔及び化学的形質転換（例えば、ＰＥＧを使用して）が挙げられる。
【0233】
組換え宿主細胞を同定するための方法は、当該技術分野で周知であり、細胞の成長の選択若しくはそれに対する選択を可能にするポリヌクレオチド、組換え発現構築物、若しくは組換えベクターによってコードされる、薬物耐性若しくは栄養要求性マーカーの発現のスクリーニング、又は他の手段（例えば、ポリヌクレオチド、組換え発現構築物、又は組換えベクター中に含まれる発光ペプチドの検出、個々の組換え宿主細胞コロニーの分子分析［例えば、単離された染色体外ベクター若しくは染色体統合部位の制限酵素マッピング、ＰＣＲ増幅、サザン分析、又は配列分析によって］）によるものを含む。
【0234】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞による組換えタンパク質の産生は、ＲＮＡレベルで、及び最も好適にはタンパク質レベルで実施されるアッセイ、又は組換えタンパク質の産生若しくは活性を測定する機能的バイオアッセイの使用など、当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して評価され得る。かかるアッセイの非限定的な例としては、ノーザンブロッティング、ドットブロッティング（ＤＮＡ又はＲＮＡ）、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＮＡ－Ｓｅｑ、インサイチュハイブリダイゼーション、サザンブロッティング、酵素活性アッセイ、免疫学的アッセイ（例えば、免疫組織化学染色、免疫アッセイ、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ）、及び遊離チオールアッセイ（例えば、遊離システイン残基を含むタンパク質の産生を測定するため）が挙げられる。
【0235】
組換え成分を産生するための方法
様々な態様では、上記のうちのいずれかによる組換え成分を産生するための方法が本明細書に提供され、方法は、組換え成分の産生に好適な条件下で、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞を培養培地中で発酵させることを含む。
様々な態様では、上記のうちのいずれかによる組換え成分を産生するための方法が本明細書に提供され、方法は、組換え成分の産生に好適な条件下で、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞を培養培地中で発酵させることを含む。
【0236】
方法は、発酵ブロスから組換え成分を精製して、組換え成分を含む調製物を得ること、及び／又は組換え成分を後処理することを更に含み得る。
【0237】
発酵
組換え成分を産生するための好適な条件は、典型的には、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞が成長及び／又は生存可能なままであり、かつ組換え成分を産生し得る条件である。
組換え成分を産生するための好適な条件は、典型的には、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞が成長及び／又は生存可能なままであり、かつ組換え成分を産生し得る条件である。
【0238】
好適な条件の非限定的な例としては、好適な培養培地（例えば、好適な栄養素含量［例えば、好適な炭素含量、好適な窒素含量、好適なリン含量］、好適な補助剤含量、好適な微量金属含量、好適なｐＨ）、好適な温度、好適な供給速度、好適な圧力、好適なレベルの酸素化、好適な発酵持続時間（すなわち、組換え宿主細胞を含む培養培地の体積）、好適な発酵体積（すなわち、組換え宿主細胞を含む培養培地の体積）、及び好適な発酵容器が挙げられる。
【0239】
好適な培養培地は、組換え宿主細胞が成長及び／又は生存可能なままであり、かつ組換え成分を産生し得るすべての培養培地を含む。典型的には、培養培地は、炭素源、同化性窒素源（すなわち、組換え宿主細胞による代謝利用に好適な形態で窒素を放出することができる窒素含有化合物）、及びリン酸源を含む水性培地である。
【0240】
炭素源の非限定的な例として、単糖、二糖、多糖、アセテート、エタノール、メタノール、グリセロール、メタン、及びそれらの組合せが挙げられる。単糖の非限定的な例としては、ブドウ糖（グルコース）、フルクトース、ガラクトース、キシロース、アラビノース、及びそれらの組合せが挙げられる。二糖の非限定的な例としては、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、及びそれらの組合せが挙げられる。多糖の非限定的な例としては、デンプン、グリコーゲン、セルロース、アミロース、ヘミセルロース、マルトデキストリン、及びそれらの組合せが挙げられる。
【0241】
同化性窒素源の非限定的な例としては、無水アンモニア、硫酸アンモニウム、水酸化アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸二アンモニウム、リン酸一アンモニウム、ピロリン酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素、ペプトン、タンパク質加水分解物、コーンスティープリカー、コーンスティープ固形分、使用済み穀物、使用済み穀物抽出物、及び酵母抽出物が挙げられる。アンモニアガスの使用は、大規模な操作に好都合であり、好適な量の水性発酵物（発酵培地）によりバブリングすることによって用いられてもよい。同時に、かかるアンモニアは、ｐＨ調整を支援するためにも用いられてもよい。
【0242】
培養培地は、無機塩、鉱物（例えば、マグネシウム、カルシウム、カリウム、ナトリウム；例えば、好適な可溶性同化性イオン形態及び複合形態で）、金属又は遷移金属（例えば、銅、マンガン、モリブデン、亜鉛、鉄、ホウ素、ヨウ素；例えば、好適な可溶性同化性形態で）、ビタミン、及び任意の他の栄養素又は機能性成分（例えば、組換え成分の分解を防止することができるプロテアーゼ［例えば、植物ベースのプロテアーゼ］、組換え成分を分解することができるプロテアーゼの活性を低減することができるプロテアーゼ阻害剤、及び／又はプロテアーゼ活性を取り除くことができる犠牲タンパク質、消泡剤、抗微生物剤、界面活性剤、乳化オイル）を更に含み得る。
【0243】
好適な培養培地は、商業供給元から入手可能である又は公表されている組成物（例えば、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）の目録で）に従って調製してもよい。
【0244】
好適なｐＨは、約２～約８のｐＨ（例えば、２～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５、４．９、４．８、４．７、４．６、４．５、４、３．５、３、若しくは２．５；２．５～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５、４．９、４．８、４．７、４．６、４．５、４、３．５、若しくは３；３～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５、４．９、４．８、４．７、４．６、４．５、４、若しくは３．５；３．５～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５、４．９、４．８、４．７、４．６、４．５、若しくは４；４～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５、４．９、４．８、４．７、４．６、若しくは４．５；４．５～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５、４．９、４．８、４．７、若しくは４．６；４．６～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５、４．９、４．８、若しくは４．７；４．７～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５、４．９、若しくは４．８；４．８～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、５、若しくは４．９；４．９～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、若しくは５；５～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、５．２、若しくは５．１；５．１～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、５．３、若しくは５．２；５．２～８、７．５、７、６．５、６、５．５、５．４、若しくは５．３；５．３～８、７．５、７、６．５、６、５．５、若しくは５．４；５．４～８、７．５、７、６．５、６、若しくは５．５；５．５～８、７．５、７、６．５、若しくは６；６～８、７．５、７、若しくは６．５；６．５～８、７．５、若しくは７；７～８、若しくは７．５；又は７．５～８のｐＨ）であり得る。
【0245】
好適な温度は、約２０℃～約４６℃（例えば、２０℃～４６℃、４４℃、４２℃、４０℃、３８℃、３６℃、３４℃、３２℃、３０℃、２８℃、２６℃、２４℃、若しくは２２℃；２２℃～４６℃、４４℃、４２℃、４０℃、３８℃、３６℃、３４℃、３２℃、３０℃、２８℃、２６℃、若しくは２４℃；２４℃～４６℃、４４℃、４２℃、４０℃、３８℃、３６℃、３４℃、３２℃、３０℃、２８℃、若しくは２６℃；２６℃～４６℃、４４℃、４２℃、４０℃、３８℃、３６℃、３４℃、３２℃、３０℃、若しくは２８℃；２８℃～４６℃、４４℃、４２℃、４０℃、３８℃、３６℃、３４℃、３２℃、若しくは３０℃；３０℃～４６℃、４４℃、４２℃、４０℃、３８℃、３６℃、３４℃、若しくは３２℃；３２℃～４６℃、４４℃、４２℃、４０℃、３８℃、３６℃、若しくは３４℃；３６℃～４６℃、４４℃、４２℃、４０℃、若しくは３８℃；３８℃～４６℃、４４℃、４２℃、若しくは４０℃；４０℃～４６℃、４４℃、若しくは４２℃；４２℃～４６℃若しくは４４℃；又は４４℃～４６℃）であり得る。
【0246】
好適な供給速度は、１時間当たりの乾燥細胞重量（ＤＣＷ）当たり、ｇ当たり約０．０１ｇ～約０．２ｇのグルコース当量の供給速度であり得る。
【0247】
好適な圧力は、０ｐｓｉｇ～約５０ｐｓｉｇ（例えば、０ｐｓｉｇ～５０ｐｓｉｇ、４０ｐｓｉｇ、３０ｐｓｉｇ、２０ｐｓｉｇ、若しくは１０ｐｓｉｇ；１０ｐｓｉｇ～５０ｐｓｉｇ、４０ｐｓｉｇ、３０ｐｓｉｇ、若しくは２０ｐｓｉｇ；２０ｐｓｉｇ～５０ｐｓｉｇ、４０ｐｓｉｇ、若しくは３０ｐｓｉｇ；３０ｐｓｉｇ～５０ｐｓｉｇ、若しくは４０ｐｓｉｇ；又は４０ｐｓｉｇ～５０ｐｓｉｇ）の圧力であり得る。
【0248】
好適な酸素化は、１分間当たりの発酵器中の液体体積当たり約０．１体積の酸素（ｖｖｍ）～約２．１ｖｖｍ（例えば、０．１ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ、１．９ｖｖｍ、１．７ｖｖｍ、１．５ｖｖｍ、１．３ｖｖｍ、１．１ｖｖｍ、０．９ｖｖｍ、０．７ｖｖｍ、０．５ｖｖｍ、若しくは０．３ｖｖｍ；０．３ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ、１．９ｖｖｍ、１．７ｖｖｍ、１．５ｖｖｍ、１．３ｖｖｍ、１．１ｖｖｍ、０．９ｖｖｍ、０．７ｖｖｍ、若しくは０．５ｖｖｍ；０．５ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ、１．９ｖｖｍ、１．７ｖｖｍ、１．５ｖｖｍ、１．３ｖｖｍ、１．１ｖｖｍ、０．９ｖｖｍ、若しくは０．７ｖｖｍ；０．７ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ、１．９ｖｖｍ、１．７ｖｖｍ、１．５ｖｖｍ、１．３ｖｖｍ、１．１ｖｖｍ、若しくは０．９ｖｖｍ；０．９ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ、１．９ｖｖｍ、１．７ｖｖｍ、１．５ｖｖｍ、１．３ｖｖｍ、若しくは１．１ｖｖｍ；１．１ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ、１．９ｖｖｍ、１．７ｖｖｍ、１．５ｖｖｍ、若しくは１．３ｖｖｍ；１．３ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ、１．９ｖｖｍ、１．７ｖｖｍ、若しくは１．５ｖｖｍ；１．５ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ、１．９ｖｖｍ、若しくは１．７ｖｖｍ；１．７ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ若しくは１．９ｖｖｍ；又は１．９ｖｖｍ～２．１ｖｖｍ）の通気速度であり得る。
【0249】
好適な発酵持続時間は、約１０時間～約５００時間（例えば、１０時間～５００時間、４００時間、３００時間、２００時間、１００時間、５０時間、４０時間、３０時間、若しくは２０時間；２０時間～５００時間、４００時間、３００時間、２００時間、１００時間、５０時間、４０時間、若しくは３０時間；３０時間～５００時間、４００時間、３００時間、２００時間、１００時間、５０時間、若しくは４０時間；４０時間～５００時間、４００時間、３００時間、２００時間、１００時間、若しくは５０時間；５０時間～５００時間、４００時間、３００時間、２００時間、若しくは１００時間；１００時間～５００時間、４００時間、３００時間、若しくは２００時間；２００時間～５００時間、４００時間、若しくは３００時間；３００時間～５００時間、若しくは４００時間；又は４００時間～５００時間）の発酵持続時間であり得る。
【0250】
好適な発酵体積は、約１Ｌ～約１０，０００，０００Ｌ（例えば、１Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、５００，０００Ｌ，１００，０００Ｌ、５０，０００Ｌ、１０，０００Ｌ、５，０００Ｌ、１，０００Ｌ、５００Ｌ、１００Ｌ、５０Ｌ、若しくは１０ Ｌ；１０Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、５００，０００Ｌ，１００，０００Ｌ、５０，０００Ｌ、１０，０００Ｌ、５，０００Ｌ、１，０００Ｌ、５００Ｌ、１００Ｌ、若しくは５０Ｌ；５０Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、５００，０００Ｌ，１００，０００Ｌ、５０，０００Ｌ、１０，０００Ｌ、５，０００Ｌ、１，０００Ｌ、５００Ｌ、若しくは１００Ｌ；１００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、５００，０００Ｌ，１００，０００Ｌ、５０，０００Ｌ、１０，０００Ｌ、５，０００Ｌ、１，０００Ｌ、若しくは５００Ｌ；５００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、５００，０００Ｌ，１００，０００Ｌ、５０，０００Ｌ、１０，０００Ｌ、５，０００Ｌ、若しくは１，０００Ｌ；１，０００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、５００，０００Ｌ，１００，０００Ｌ、５０，０００Ｌ、１０，０００Ｌ、若しくは５，０００Ｌ；５，０００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、５００，０００Ｌ，１００，０００Ｌ、５０，０００Ｌ、若しくは１０，０００ Ｌ；１０，０００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、５００，０００Ｌ，１００，０００Ｌ、若しくは５０，０００Ｌ；５０，０００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、５００，０００Ｌ、若しくは１００，０００Ｌ；１００，０００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、１，０００，０００Ｌ、若しくは５００，０００Ｌ；５００，０００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、５，０００，０００Ｌ、若しくは１，０００，０００Ｌ；１，０００，０００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ、若しくは５，０００，０００Ｌ；又は５，０００，０００Ｌ～１０，０００，０００Ｌ）であり得る。
【0251】
好適な発酵容器は、当該技術分野で既知の任意の発酵容器であってもよい。適切な発酵容器の非限定的な例としては、任意の好適な規模（例えば、小規模、大規模）で、任意のプロセス（例えば、固体培養、液内培養、バッチ、フェッドバッチ、又は連続フロー）で使用される、培養プレート、振とうフラスコ、発酵器（例えば、撹拌タンク発酵器、エアリフト発酵器、バブルカラム発酵器、固定床バイオリアクター、実験室用発酵器、工業用発酵器、又はそれらの任意の組み合わせ）が挙げられる。
【0252】
精製及び後処理
組換え成分を精製して（例えば、発酵ブロスから）、組換え成分を含む調製物を得るための方法は、当該技術分野で周知であり、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞によって産生される組換え物を精製するように適合されてもよい。
組換え成分を精製して（例えば、発酵ブロスから）、組換え成分を含む調製物を得るための方法は、当該技術分野で周知であり、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞によって産生される組換え物を精製するように適合されてもよい。
【0253】
組換え成分は、その分子量に基づいて、例えば、サイズ排除／交換クロマトグラフィー、膜に通過させる限外濾過、ゲル浸透クロマトグラフィー（例えば、分取ディスクゲル電気泳動）、又は密度遠心分離によって精製してもよい。
【0254】
組換え成分はまた、その表面電荷又は疎水性／親水性に基づいて、例えば、等電沈殿、アニオン／カチオン交換クロマトグラフィー、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、又は逆相クロマトグラフィーによって精製してもよい。
【0255】
組換え成分はまた、その溶解度に基づいて、例えば、硫酸アンモニウム沈殿、等電沈殿、界面活性剤、デタージェント、又は溶媒抽出によって精製してもよい。
【0256】
組換え成分はまた、別の分子に対するその親和性に基づいて、例えば、親和性クロマトグラフィー、反応性色素、又はヒドロキシアパタイトによって精製してもよい。親和性クロマトグラフィーは、組換え成分に対して特異的結合親和性を有する抗体、又はＨｉｓ標識組換えタンパク質に対するニッケルＮＴＡ、又は組換えタンパク質の糖部分に結合するためのレクチン、又は組換え成分に特に結合する任意の他の分子の使用を含んでいてもよい。組換え成分は、精製を容易にするエピトープ又はペプチドタグを担持してもよい。エピトープ又はペプチドタグは、組換え成分の単離後に（例えば、プロテアーゼ切断を介して）除去してもよい。
【0257】
上記のうちのいずれかによる組換え成分が、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞によって分泌される実施形態では、組換え成分は、培養培地から直接精製されてもよい。他の実施形態では、組換え成分は、細胞溶解物から精製されてもよい。
【0258】
組換え成分は、発酵ブロスに含まれる他の成分に対して３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、９７％超、若しくは９９％超の純度で、又は発酵ブロスに含まれる他の成分に対して少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、若しくは少なくとも１０倍高い存在量まで、又は質量で３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、９７％超、若しくは９９％超の純度まで、組換え成分を含む調製物を得るために精製されてもよい。
【0259】
組換え成分の同一性は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ウェスタンブロット分析、イースタンブロット分析、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動、酵素産物の形成、酵素基質の消失、及び二次元質量分光法（２Ｄ－ＭＳ／ＭＳ）配列同定によって確認及び／又は定量化してもよい。
【0260】
組換え成分は、蒸発を介して噴霧乾燥又は濃縮されてもよい（例えば、粉末を得るため）。
【0261】
組換え成分を含む組成物
様々な態様では、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞によって産生される組換え成分を含むか若しくは本質的にそれからなる組成物及び／又は上記のうちのいずれかによる方法が本明細書に提供され、組成物は、対応する組成物（すなわち、「対応する組成物」が生産される方法が、ＦＦＡ放出酵素活性が本明細書に提供されるように調節される少なくとも１つの工程を含まないことを除いて、「対応する組成物」と比較される組成物と同一である組成物）中のＦＦＡ放出酵素活性と比較して、調節されたＦＦＡ放出酵素活性（例えば、本明細書に開示される任意の１つのＦＦＡ放出酵素の活性、又は本明細書に開示される２つ以上のＦＦＡ放出酵素の任意の組み合わせの活性）を含む。
様々な態様では、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞によって産生される組換え成分を含むか若しくは本質的にそれからなる組成物及び／又は上記のうちのいずれかによる方法が本明細書に提供され、組成物は、対応する組成物（すなわち、「対応する組成物」が生産される方法が、ＦＦＡ放出酵素活性が本明細書に提供されるように調節される少なくとも１つの工程を含まないことを除いて、「対応する組成物」と比較される組成物と同一である組成物）中のＦＦＡ放出酵素活性と比較して、調節されたＦＦＡ放出酵素活性（例えば、本明細書に開示される任意の１つのＦＦＡ放出酵素の活性、又は本明細書に開示される２つ以上のＦＦＡ放出酵素の任意の組み合わせの活性）を含む。
【0262】
組成物は、乾燥質量で約０．１％～約１００％（例えば、０．１％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、若しくは０．２％；０．２％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、若しくは０．３％；０．３％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、若しくは０．４％；０．４％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、若しくは０．５％；０．５％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．９％、０．８％、０．７％、若しくは０．６％；０．６％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．９％、０．８％、若しくは０．７％；０．７％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．９％、若しくは０．８％；０．８％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、若しくは０．９％；０．９％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、若しくは１％；１％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、若しくは２％；２％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、若しくは３％；３％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、若しくは４％；４％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、若しくは５％；５％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、若しくは６％；６％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、若しくは７％；７％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、若しくは８％；８％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、若しくは９％；９％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、若しくは１０％；１０％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、若しくは１１％；１１％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、若しくは１２％；１２％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、若しくは１３％；１３％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、若しくは１４％；１４％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、若しくは１５％；１５％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、若しくは２０％；２０％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、若しくは２５％；２５％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、若しくは３０％；３０％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、若しくは３５％；３５％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、若しくは４０％；４０％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、若しくは４５％；４５％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、若しくは５０％；５０％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、若しくは５５％；５５％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、若しくは６０％；６０％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、若しくは６５％；６５％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、若しくは７０％；７０％～１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、若しくは７５％；７５％～１００％、９５％、９０％、８５％、若しくは８０％；８０％～１００％、９５％、９０％、若しくは８５％；又は８５％～１００％、９５％、９０％；９０％～１００％若しくは９５％、又は９５％～１００％）の組換え成分を含み得る。
【0263】
標準的な周囲温度及び条件（すなわち、２０～３０℃及び０．９５～１．０５気圧）では、上記のうちのいずれかによる組成物は、流体、半固体（例えば、ゼラチン状）、固体、又は粉末であってもよい。粉末は、２０％未満、１５％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、３％未満、若しくは１％未満；又は約０．１％～約２０％（例えば、０．１％～２０％、１５％、１０％、５％、若しくは１％；１％～２０％、１５％、１０％、若しくは５％；５％～２０％、１５％、若しくは１０％；１０％～２０％、若しくは１５％；又は１５％～２０％）の水分含量を含み得る。粉末は、粉末形態で使用され得るか、又は粉末は、使用前に水和剤で再構成され得るか、又は粉末は、混合物に水和剤が添加される前に、他の乾燥成分（例えば、小麦粉、糖、ミネラル、ｐＨ又はイオン強度調整剤）と混合され得る。
【0264】
上記のうちのいずれかによる組成物は、例えば、カプセル封入体（例えば、送達のために治療的又は栄養補助物をカプセル封入する製品）［例えば、マイクロ粒子又はナノ粒子］（例えば、ビーズ、ミセル、カプセル、ハイドロゲル）、産業利用性を有する組成物（例えば、誘電体）、接着剤（すなわち、接着剤結合を形成する材料；例えば、のり、壁紙接着剤、木材接着剤、紙接着剤、コルク接着剤、チップボード接着剤、外科手術／医療用接着剤、セメント、粘質物、ペースト）、コーティング又はフェイシング（例えば、光沢のあるコーティング、保護コーティング、ワニス、医療用錠剤のコーティング、紙コーティング、塗装、革仕上げ、テキスタイルコーティング）、スプレー、インク用の塗料又はインク又は顔料結合剤、硬質プラスチック（例えば、ボトル、ボタン、窓、ペン）、中硬質プラスチック（例えば、ボトル、ファイバー［例えば、糸］）、軟質プラスチック（例えば、バッグ、ラップ、食用フィルム、防水フィルム、コンタクトレンズ、包装材料）、布地（例えば、テキスタイル、カーペット、カーテン、衣服）、産業用ポリマー（すなわち、合成産業材料の製造に使用される化合物）、医学的診断（例えば、それぞれＪ．Ｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．２００４．Ｅｕｒｏｐ Ｊ ｏｆ Ｐｈａｒｍ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈａｒｍ ５７：１９を参照されたい）、ゲル（例えば、治療用の制御された放出のためのハイドロゲル、タンパク質（例えば、酵素）を固定化するためのハイドロゲル）、インプラント（例えば、骨置換複合材料、神経修復をサポートする材料、細胞を成長させるための足場、補綴インプラント）、衣料品（例えば、靴）、潤滑剤、１つの家具、紙（例えば、紙のシート、紙のラベル、包装紙、写真サポート）、家庭用品（例えば、ポット、ボウル、プレート、カップ）、及び生物学的足場（すなわち、生物学的マトリックスを模倣する構造、縫合糸、骨置換材料、神経修復をサポートする材料、細胞を成長させるための足場、補綴インプラント、創傷治癒を促進する膜、創傷包帯、組織工学足場）を含む、様々な製品であり得る。
【0265】
食料製品
上記のうちのいずれかによる組成物は、食料製品であってもよい。
上記のうちのいずれかによる組成物は、食料製品であってもよい。
【0266】
本明細書で使用される場合、「食料製品」という用語は、食事目的でヒト又は動物によって摂取され得る組成物（すなわち、健康への影響はないが、消化管内の消化された物質の取り込みによる著しい栄養及び／又はカロリー摂取量を有する）を指し、これには、家畜化された動物（例えば、イヌ、ネコ）、家畜動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ）、及び野生動物（例えば、非家畜化された捕食動物）が含まれる。用語は、１つ以上の他の成分と組み合わせるか又はそれに添加して、ヒト又は動物によって摂取され得る食料製品を作製することができる組成物を含む。
【0267】
食料製品は、米国国民健康栄養調査（ＮＨＡＮＥＳ）により定義される食料製品カテゴリーのうちのいずれかから選択される、補充された食料製品（すなわち、上記のうちのいずれかによる組換え成分で補充される従来の食料製品）であり得るか、又は代用食料製品（すなわち、従来の食料製品に類似し、かつ従来の食料製品の代わりに使用され得る食料製品）であり得る。
【0268】
ＮＨＡＮＥＳ食料製品カテゴリーの非限定的な例としては、スナック食料及びガム（例えば、スナックバー、クラッカー、穀物製品からの塩味スナック、チューインガム）；パン、穀物、及びパスタ（例えば、オート麦パン及びロール、トウモロコシパン、トウモロコシマフィン、トルティーヤ、小麦粉及びドライミックス、ビスケット、マルチグレインパン及びロール、全粒粉パン及びロール、パスタ、ライ麦パン及びロール、粗挽き小麦パン及びロール、白パン及びロール）；飲料（例えば、ビール及びエール、濃縮飲料、飲料、エネルギードリンク、スポーツドリンク、補液、ソフトドリンク、炭酸飲料、ジュース、ワイン、ビール、カクテル、栄養ドリンク、栄養粉末、タンパク質が豊富な飲料、コーヒー、茶）；菓子及びデザート（例えば、ケーキ、キャンディー、チップス、クッキー、コブラー、ペストリー、アイス又は棒付きアイス、マフィン、パイ、糖代替品又は代用品、シロップ、ハチミツ、ゼリー、ジャム、プリザーブ、サラダ、クレープ、デニッシュ、朝食用ペストリー、ドーナツ）；朝食用食料製品（例えば、穀物粒、シリアル、米、フレンチトースト、パンケーキ、ワッフル、コーヒーケーキ）；サラダドレッシング、油、ソース、調味料（例えば、調理用脂肪、植物油、サラダドレッシング、トマトソース、グレービー）；ポテト（例えば、ポテトサラダ、ポテトスープ、チップス及びスティック、フライドポテト、マッシュポテト、スタッフドポテト、パフ）；並びにスープ（例えば、野菜スープ、野菜ブロス）、食事、メイン料理、タンパク質（例えば、肉代用品）、及びシーフードが挙げられる。
【0269】
上記のうちのいずれかによる食料製品は、補充乳製品（すなわち、上記のうちのいずれかによる組換え成分で補充される従来の乳製品）又は代用乳製品（すなわち、従来の乳製品に似た食料製品）であってもよい。本明細書で使用される場合、「乳製品」という用語は、乳（例えば、全乳［少なくとも３．２５％の乳脂肪］、部分脱脂乳［１％～２％の乳脂肪］、脱脂乳［０．２％未満の乳脂肪］、調理用乳、練乳、フレーバーミルク、ヤギ乳、ヒツジ乳、乾燥乳、無糖練乳、ミルクフォーム）、並びにこれらに限定されないが、ヨーグルト（例えば、全乳ヨーグルト［１７０ｇ当たり少なくとも６グラムの脂肪］、低脂肪ヨーグルト［１７０ｇ当たり２～５グラムの脂肪］、無脂肪ヨーグルト［１７０ｇ当たり０．５グラム以下の脂肪］、ギリシャヨーグルト［乳清が除去された水切りヨーグルト（ｓｔｒａｉｎｅｄ ｙｏｇｕｒｔ）］、ホイップヨーグルト、ヤギ乳ヨーグルト、レブネ（ｌａｂｎｅｈ）［レブネ（ｌａｂｎｅ）］、ヒツジ乳ヨーグルト、ヨーグルト飲料［例えば、全乳ケフィア、低脂肪乳ケフィア）、ラッシー）、チーズ（例えば、乳清チーズ、例えば、リコッタ；パスタフィラータチーズ、例えば、モツァレラ；セミソフトチーズ、例えば、ハバーティ及びミュエンスター；セミハードチーズ、例えば、スイス及びヤールスベルグ及びハルーミ；ハードチーズ、例えば、チェダー及びパルメザン；ウォッシュドカードチーズ、例えば、コルビー及びモントレージャック；ソフト熟成チーズ、例えば、ブリー及びカマンベール；フレッシュチーズ、例えば、カッテージチーズ、フェタチーズ、クリームチーズ、パニール、及びカード）、プロセスチーズ、プロセスチーズ食料、プロセスチーズ製品、プロセスチーズスプレッド、酵素修飾チーズ；コールドパックチーズ）、乳ベースのソース（例えば、サラダドレッシング、ベシャメルソース、フレッシュソース、冷凍ソース、冷蔵ソース、常温保存可能なソース）、デイリースプレッド（例えば、低脂肪スプレッド、低脂肪バター）、クリーム（例えば、ドライクリーム、ヘビークリーム、ライトクリーム、ホイップクリーム、ハーフアンドハーフ、コーヒーホワイトナー、コーヒークリーム、サワークリーム、クレームフレーシュ（ｃｒｅｍｅ ｆｒａｉｃｈｅ））、冷凍菓子（例えば、アイスクリーム、スムージー、ミルクシェイク、フローズンヨーグルト、サンデー、ジェラート、カスタード）、乳デザート（例えば、生、冷蔵、又は冷凍）、バター（例えば、ホイップバター、発酵バター）、乳製品粉末（例えば、全乳粉末、脱脂乳粉末、脂肪添加（ｆａｔ－ｆｉｌｌｅｄ）乳粉末（すなわち、すべての又は一部の動物脂肪の代わりに植物脂肪を含む乳粉末）、乳児用調製粉乳、乳タンパク質濃縮物（例えば、乳タンパク質濃縮物、乳清タンパク質濃縮物、脱塩乳清タンパク質濃縮物、β－ラクトグロブリン濃縮物、α－ラクトアルブミン濃縮物、グリコマクロペプチド濃縮物、カゼイン濃縮物）、乳タンパク質単離物（例えば、乳タンパク質単離物、乳清タンパク質単離物、脱塩乳清タンパク質単離物、β－ラクトグロブリンタンパク単離物、カゼインタンパク質単離物）、栄養サプリメント、テクスチャーライジング（ｔｅｘｔｕｒｉｚｉｎｇ）ブレンド、香味料ブレンド、着色料ブレンド、すぐに飲める又はすぐに混ぜられる製品（例えば、生、冷蔵、又は常温保存可能な乳タンパク質飲料、減量用飲料、栄養飲料、スポーツ回復飲料、及びエネルギードリンク）、プリン、ゲル、チュアブル、クリスプ、バー（例えば、栄養バー、プロテインバー）、及び発酵乳製品（例えば、ヨーグルト、チーズ、サワークリーム、培養したバターミルク、培養したバター、培養したバターオイル）を含む乳由来の製品を指す。
【0270】
上記のうちのいずれかによる食料製品は、補充された動物肉若しくは動物肉製品（すなわち、上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞及び／又は上記のうちのいずれかによる方法によって産生された上記のうちのいずれかによる組換え成分で補充される従来の動物肉又は動物肉製品）、又は代用動物肉若しくは動物肉製品（すなわち、従来の動物肉又は動物肉製品に似た食料製品）であり得る。動物肉及び動物肉製品の非限定的な例としては、動物から得られる、骨格筋から、又は他の臓器（例えば、腎臓、心臓、肝臓、胆嚢、腸、胃、骨髄、脳、胸腺、肺、舌）若しくはその一部から得られる肉が挙げられる。動物肉は、ダークミート又はホワイトミートであってもよい。動物肉又は動物肉製品を得ることができる動物の非限定的な例としては、ウシ、ラム、マトン、ウマ、家禽（例えば、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、七面鳥）、鳥（例えば、ハト、ギンバト、ライチョウ、ヤマウズラ、オーストリッチ、エミュー、キジ、ウズラ）、新鮮な魚又は海水魚（例えば、ナマズ、マグロ、フウライカジキ、サメ、オヒョウ、チョウザメ、サーモン、スズキ、マスキー、パイク、ボーフィン、ガー、ウナギ、ヘラチョウザメ、タイ、コイ、マス、スケトウダラ、ライギョ、クラッピー、シスター（ｓｉｓｔｅｒ）、ムール貝、ホタテ貝、アワビ、イカ（ｓｑｕｉｄ）、タコ、ウニ、イカ（ｃｕｔｔｌｅｆｉｓｈ）、ホヤ）、甲殻類（例えば、カニ、ロブスター、エビ、フジツボ）、狩猟動物（例えば、シカ、キツネ、野生ブタ、エルク、ムース、トナカイ、カリブー、アンテロープ、シマウマ、リス、マーモット、ウサギ、クマ、ビーバー、マスクラット、オポッサム、アライグマ、アルマジロ、ヤマアラシ、バイソン、バッファロー、イノシシ、オオヤマネコ、ボブキャット、コウモリ）、爬虫類（例えば、ヘビ、カメ、トカゲ、アリゲーター、クロコダイル）、いずれかの昆虫又は他の節足動物、げっ歯類（ヌートリア、モルモット、ラット、マウス、野ネズミ、ウッドチャック、カピバラ）、カンガルー、クジラ、及びアザラシが挙げられる。動物肉又は動物肉製品は、粉砕、刻む、細断する、又は他の方法で処理し、未調理、調理中、又は調理済であってもよい。
【0271】
上記のうちのいずれかによる食料製品は、補充卵製品（すなわち、上記のうちのいずれかによる組換え成分で補充される従来の卵又は卵製品）又は代用卵若しくは卵製品（すなわち、従来の卵又は卵製品に似た食料製品）であってもよい。卵又は卵製品の非限定的な例としては、全卵（例えば、液体全卵、噴霧乾燥全卵、凍結全卵）、卵白（例えば、液体卵白、噴霧乾燥卵白、凍結卵白）、卵黄、卵料理、卵スープ、卵白で作製された混合物、卵代用品で作製された混合物、マヨネーズ、カスタード、及びサラダドレッシングが挙げられる。
【0272】
本明細書に提供される代替食料製品の、従来の食料製品への類似度は、任意の物理的属性、化学的／生物学的属性、知覚属性、及び機能的属性、並びにそれらの任意の組み合わせに起因し得る。
【0273】
上記のうちのいずれかによる食料製品は、ペットフード又は動物飼料であってもよい。
【0274】
上記のうちのいずれかによる食料製品は、上記のうちのいずれかによる組成物中に含まれる組換えタンパク質以外の任意のタンパク質又は組換えタンパク質を本質的に含まない場合がある。
【0275】
上記のうちのいずれかによる食料製品は、上記のうちのいずれかによる組成物中に含まれる組換えタンパク質以外の任意の組換えタンパク質又は組換えタンパク質を本質的に含まない場合がある。
【0276】
上記のうちのいずれかによる食料製品は、上記のうちのいずれかによる組成物中に含まれる組換えタンパク質以外の任意の組換え乳タンパク質又は組換えタンパク質を本質的に含まない場合がある。
【0277】
上記のうちのいずれかによる食料製品は、哺乳動物産生乳（例えば、牛乳、ヤギ乳、ヒツジ乳、人乳、バッファロー乳、ヤク乳、ラクダ乳、ラマ乳、アルパカ乳、馬乳、ロバ乳）に見出される成分を本質的に含まないか、又は哺乳動物産生乳に見出される少なくとも１つの成分のより低い濃度を含み得る。哺乳動物由来乳に見出される成分の非限定的な例としては、ラクトース、飽和脂肪、コレステロール、天然乳タンパク質、及び天然乳脂質が挙げられる。食料製品は、上記のうちのいずれかによる組成物中に含まれる組換え乳タンパク質以外のいずれかの乳タンパク質又は組換え乳タンパク質を本質的に含まない場合がある。
【0278】
上記のうちのいずれかによる食料製品は、動物（すなわち、動物産物［すなわち、消費物であるか、又は典型的にはヒトによる消費のために調製される動物の一部、例えば、動物の肉、動物の脂肪、動物の血液］、動物副産物［すなわち、典型的にはそれ自体が消費物ではないが、消費のために屠殺される動物の副産物である産物、例えば、動物の骨、動物の死骸、及びそれらから単離された構成要素］、動物によって産生される産物［例えば、哺乳動物由来乳、ニワトリの卵、ハチミツ］、及びそれらから産生された消費物［例えば、ゼラチン、レンネット、哺乳動物由来乳から抽出された乳清、哺乳動物由来乳から抽出されたカゼイン、哺乳動物由来乳から抽出された乳脂質、動物脂質、動物性タンパク質］を含む、動物に天然である成分）から得られる成分を本質的に含まない場合があるか、又は質量で２％以下のかかる成分を含み得る。
【0279】
食料製品を調製するための様々なレシピが存在し、任意のかかるレシピを使用して、上記のうちのいずれかによる食料製品を生産することができる。組換え成分は、精製／単離形態のかかるレシピで使用されてもよいか、又は上記のうちのいずれかによる方法によって得られた発酵ブロス若しくは調製物に含まれてもよい。
【0280】
化粧品又はパーソナルケア製品
上記のうちのいずれかによる組成物は、化粧品又はパーソナルケア製品であってもよい。
上記のうちのいずれかによる組成物は、化粧品又はパーソナルケア製品であってもよい。
【0281】
本明細書で使用される場合、「化粧品又はパーソナルケア製品」という用語は、体表面（すなわち、皮膚、髪、爪、歯、及び口腔の組織［例えば、歯茎］などの人体の露出領域）への塗布時に、知覚される若しくは実際の美化又は衛生化効果を付与する組成物を指す。化粧品又はパーソナルケア製品の非限定的な例としては、しわ予防治療（すなわち、張り［例えば、皮膚を滑らかにし、皮膚のしわを低減し、皮膚の小じわを除去する］に使用される組成物）、アンチエイジング治療（すなわち、老化の徴候［例えば、しわ、小じわ、光損傷の現れ（例えば、しみ）］を除去するために使用される組成物）、日光保護（すなわち、ＵＶ曝露から保護するために使用される組成物）、抗火傷用治療（すなわち、火傷［例えば、日焼け］を鎮静するために使用される組成物）、抗にきび治療（すなわち、にきび及び／又はそれに関連する症状の治療に効果的である組成物）、皮膚洗浄剤（すなわち、皮膚及び／又は皮膚毛穴をきれいにするために使用される組成物［例えば、毛穴をきれいにするためのノーズストリップ］）、抗ふけ治療（すなわち、ふけを低減又は排除するために使用される組成物）、抗体臭治療（すなわち、体臭を低減又は排除するために使用される組成物）、セルフタンニング治療（すなわち、皮膚の色を暗くするために使用される組成物）、皮膚美白治療（すなわち、皮膚の色の漂白／脱色に使用される組成物）、ヘアカラーリング処置（すなわち、髪を染めるために使用される組成物）、ローション（例えば、皮膚ローション、ボディケアローション、洗浄ローション、保湿（ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）ローション、シェービング前用ローション、シェービング後用ローション）、ペースト（例えば、洗浄ペースト）、軟膏、バーム、サルブ、マスク、クリーム（例えば、油中水型クリーム、水中油型クリーム、デイクリーム、ナイトクリーム、アイクリーム、皮膚クリーム、フェイスクリーム、しわ防止クリーム、日焼け止めクリーム、保湿（ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）クリーム、シェービング後用クリーム、皮膚漂白クリーム、セルフタンニングクリーム、ビタミンクリーム、保湿（ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ）クリーム、マッサージクリーム）、乳液（例えば、ボディミルク、クレンジングミルク）、ゲル（例えば、無水ジェル、シャワージェル）、オードトワレ、石鹸（例えば、透明石鹸、高級石鹸、体臭防止石鹸、クリーム石鹸、ベビー用石鹸、皮膚保護石鹸、研磨石鹸、合成洗剤、ペースト状の石鹸、柔らかい石鹸、ピーリング石鹸）、皮膚ピーリング治療、液体洗浄液、シャワー及び入浴調製物（例えば、洗浄ローション、シャワーバス、シャワージェル、フォームバス浴、オイルバス、スクラブ調製物）、フォーム（例えば、シェービング用フォーム、フォームバス）、体臭防止剤、ヘアケア製品（例えば、シャンプー、コンディショナー、ヘアムース、ヘアカラー剤、ヘアスプレー、洗い流し用ローション、ヘアジェル、ヘアエマルジョン、ヘアラッカー、ヘアトニック）、リップグロス、スプレー（例えば、ヘアスプレー、ポンプスプレー、発泡剤を含むスプレー）、皮膚欠陥の治療（例えば、皮膚炎、膨疹、あかぎれ、傷、ひび割れ、傷跡、そばかす、ほくろ、発疹、水疱、膿疱）、トナー、洗浄ティッシュペーパー、衛生タオル、タンポン、おむつ、防虫剤、メイクアップ製品（例えば、スタジオ顔料、マスカラ、アイシャドウ、アイライナー、アイライナーペン、ルージュ、フェイスパウダー、アイブロウペンシル、口紅、ファンデーション、色付きクリーム、コンシーラースティック、ブレミッシュスティック、頬紅）スティック（例えば、口紅、コンシーラースティック、ブレミッシュスティック）、除毛剤、ハンドクリーニング製品、インティメイト衛生用品、フットケア製品、ベビーケア用品、並びに口腔衛生用品（例えば、チューインガム、口内洗浄液、歯磨き粉、歯茎洗浄剤、入れ歯接着剤、入れ歯固定剤）が挙げられる。
【0282】
上記のうちのいずれかによる化粧品又はパーソナルケア製品は、上記のうちのいずれかによる組成物中に含まれる組換えタンパク質以外のいずれかの組換えタンパク質又は組換えタンパク質を本質的に含まない場合がある。
【0283】
上記のうちのいずれかによる化粧品又はパーソナルケア製品は、上記のうちのいずれかによる組成物中に含まれる組換えタンパク質以外のいずれかの組換えタンパク質又は組換えタンパク質を本質的に含まない場合がある。
【0284】
上記のうちのいずれかによる化粧品又はパーソナルケア製品は、上記のうちのいずれかによる組成物中に含まれる組換えタンパク質以外のいずれかの組換え乳タンパク質又は組換えタンパク質を本質的に含まない場合がある。
【0285】
上記のうちのいずれかによる化粧品又はパーソナルケア製品は、哺乳動物産生乳（例えば、牛乳、ヤギ乳、ヒツジ乳、人乳、バッファロー乳、ヤク乳、ラクダ乳、ラマ乳、アルパカ乳、馬乳、ロバ乳）に見出される成分を本質的に含まないか、又は哺乳動物産生乳に見出される少なくとも１つの成分のより低い濃度を含み得る。哺乳動物由来乳に見出される成分の非限定的な例としては、ラクトース、飽和脂肪、コレステロール、天然乳タンパク質、及び天然乳脂質が挙げられる。化粧品又はパーソナルケア製品は、組換えタンパク質中に含まれる乳タンパク質以外のいずれかの乳タンパク質、又は上記のうちのいずれかによる組成物中に含まれる組換えタンパク質を本質的に含まない場合がある。
【0286】
上記のうちのいずれかによる化粧品又はパーソナルケア製品は、動物（すなわち、動物産物［すなわち、消費物であるか、又は典型的にはヒトによる消費のために調製される動物の一部、例えば、動物の肉、動物の脂肪、動物の血液］、動物副産物［すなわち、典型的にはそれ自体が消費物ではないが、消費のために屠殺される動物の副産物である産物、例えば、動物の骨、動物の死骸、及びそれらから単離された構成要素］、動物によって産生される産物［例えば、哺乳動物由来乳、ニワトリの卵、ハチミツ］、及びそれらから産生された消費物［例えば、ゼラチン、レンネット、哺乳動物由来乳から抽出された乳清、哺乳動物由来乳から抽出されたカゼイン、哺乳動物由来乳から抽出された乳脂質、動物脂質、動物性タンパク質］を含む、動物に天然である成分）から得られる成分を本質的に含まない場合があるか、又は質量で２％以下のかかる成分を含み得る。
【0287】
上記のうちのいずれかによる化粧品又はパーソナルケア製品は、石油由来の成分を本質的に含まない場合がある。
【0288】
ＦＦＡ放出酵素活性を産生する組換え宿主細胞
様々な態様では、ＦＦＡ放出酵素をコードする組換え発現構築物を含み、かつ対応する宿主細胞（すなわち、ＦＦＡ放出酵素をコードする組換え発現構築物を含まないことを除いて、組換え宿主細胞と本質的に同一である宿主細胞）と比較してＦＦＡ放出酵素の増加した産生及び／又は活性を含む、組換え型宿主細胞が本明細書に提供される。
様々な態様では、ＦＦＡ放出酵素をコードする組換え発現構築物を含み、かつ対応する宿主細胞（すなわち、ＦＦＡ放出酵素をコードする組換え発現構築物を含まないことを除いて、組換え宿主細胞と本質的に同一である宿主細胞）と比較してＦＦＡ放出酵素の増加した産生及び／又は活性を含む、組換え型宿主細胞が本明細書に提供される。
【0289】
組換え宿主細胞は、任意の細菌、酵母、糸状真菌、古細菌、単細胞原生生物、単細胞動物、単細胞植物、単細胞藻類、原虫、及びクロミスタを含む任意の野生型単細胞生物、又はその遺伝的バリアント（例えば、変異体）、並びにいずれかの安全と一般的に認められている（ＧＲＡＳ）産業宿主細胞に由来し得、本明細書に開示される任意の生物（例えば、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）を含む。
【0290】
上記のうちのいずれかによる組換え宿主細胞は、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０Ｒ９Ｊ９、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＧ０、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＢＺ６、Ｇ０ＲＤ１６、Ｇ０ＲＤＫ５、Ｇ０ＲＤＵ７、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ０４、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＧＮ７、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＧＱ７、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＩＶ５、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＪＣ６、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＥ６、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＢ０、Ｇ０ＲＬＢ７、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭ１４、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＮＦ８、Ｇ０ＲＰＱ８、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＱＧ３、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＮ５、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＴＲ６、Ｇ０ＲＴＴ４、Ｇ０ＲＵＩ０、Ｇ０ＲＵＺ９、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＷ７３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＷＳ１、Ｇ０ＲＷＴ９、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｇ０ＲＶＤ２、及びＧ０Ｒ８Ａ６、並びにそれらのホモログ、並びにそれらの組み合わせを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素活性の増加した産生及び／又は活性を含み得、ＦＦＡ放出酵素の増加した産生及び／又は活性は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％、少なくとも６００％、少なくとも７００％、少なくとも８００％、少なくとも９００％、又は少なくとも１，０００％の産生及び／又は活性の増加である。
【0291】
様々な態様では、ＦＦＡ放出酵素をコードする組換え発現構築物を含む組換え宿主細胞を得るための方法が本明細書に提供され、方法は、ｉ）ポリヌクレオチド、組換え発現構築物、又は組換えベクターの組換えタンパク質コード配列が、ＵｎｉＰｒｏｔ配列番号Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０Ｒ６Ｔ６、Ｇ０Ｒ６Ｘ２、Ｇ０Ｒ７０７、Ｇ０Ｒ７Ｋ１、Ｇ０Ｒ８１０、Ｇ０Ｒ９Ｄ１、Ｇ０Ｒ９Ｆ９、Ｇ０Ｒ９Ｊ９、Ｇ０Ｒ９Ｘ３、Ｇ０ＲＢＧ０、Ｇ０ＲＢＪ０、Ｇ０ＲＢＭ４、Ｇ０ＲＢＺ６、Ｇ０ＲＤ１６、Ｇ０ＲＤＫ５、Ｇ０ＲＤＵ７、Ｇ０ＲＥＭ９、Ｇ０ＲＥＺ４、Ｇ０ＲＦＲ３、Ｇ０ＲＦＴ３、Ｇ０ＲＧ０４、Ｇ０ＲＧ６０、Ｇ０ＲＧＤ５、Ｇ０ＲＧＮ７、Ｇ０ＲＧＱ０、Ｇ０ＲＧＱ７、Ｇ０ＲＨＪ４、Ｇ０ＲＩ２９、Ｇ０ＲＩＪ９、Ｇ０ＲＩＵ１、Ｇ０ＲＩＶ５、Ｇ０ＲＪ７６、Ｇ０ＲＪＣ６、Ｇ０ＲＪＹ０、Ｇ０ＲＫ８３、Ｇ０ＲＫＥ６、Ｇ０ＲＫＨ７、Ｇ０ＲＫＩ９、Ｇ０ＲＫＬ４、Ｇ０ＲＬ８７、Ｇ０ＲＬＢ０、Ｇ０ＲＬＢ７、Ｇ０ＲＬＨ４、Ｇ０ＲＬＬ０、Ｇ０ＲＬＲ３、Ｇ０ＲＭ１４、Ｇ０ＲＭＥ５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＮＦ８、Ｇ０ＲＰＱ８、Ｇ０ＲＱＤ１、Ｇ０ＲＱＧ３、Ｇ０ＲＱＪ５、Ｇ０ＲＱＮ５、Ｇ０ＲＲ４２、Ｇ０ＲＲＫ３、Ｇ０ＲＲＱ４、Ｇ０ＲＳＫ７、Ｇ０ＲＴＲ６、Ｇ０ＲＴＴ４、Ｇ０ＲＵＩ０、Ｇ０ＲＵＺ９、Ｇ０ＲＶ９３、Ｇ０ＲＷ７３、Ｇ０ＲＷ７７、Ｇ０ＲＷＳ１、Ｇ０ＲＷＴ９、Ｇ０ＲＷＹ５、Ｇ０ＲＸ８２、Ｇ０ＲＸ９０、Ｇ０ＲＨＱ７、Ｇ０ＲＶＤ２、及びＧ０Ｒ８Ａ６、並びにそれらのホモログを含むＦＦＡ放出酵素からなる群から選択されるＦＦＡ放出酵素活性をコードする、上記のうちのいずれかによるポリヌクレオチド、又は上記のうちのいずれかによる組換え発現構築物、又は上記のうちのいずれかによる組換えベクターを得ることと、ｉｉ）ポリヌクレオチド、発現構築物、又は組換えベクターを宿主細胞（例えば、本明細書に開示される宿主細胞のうちのいずれか；本明細書に開示される方法のうちのいずれかを使用する）内に導入して、ＦＦＡ放出酵素の増加した産生及び／又は活性を含む組換え宿主細胞を得ることとを含む。
【0292】
様々な態様では、ＦＦＡ放出酵素を産生するための方法が本明細書に提供され、方法は、ＦＦＡ放出酵素をコードする組換え発現構築物を含み、かつ対応する宿主細胞と比較してＦＦＡ放出酵素の増加した産生及び／又は活性を含む組換え宿主細胞を得ることと、ＦＦＡ放出酵素の産生及び／又は分泌に好適な条件下で、組換え宿主細胞を培養培地中で培養することと、任意選択で、ＦＦＡ放出酵素を精製することとを含む。
【実施例1】
【0293】
以下の実施例は、本開示の具体的な実施形態を例示するために含まれる。実施例で開示される技術は、本開示の方法及びプロセスにおいて十分に機能するために本発明者らによって発見された技術を表すが、しかしながら、当業者であれば、本開示を考慮して、開示される具体的な実施形態において多くの変更を行うことができ、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく類似の又は同様の結果を依然として得る点を理解するべきである。その結果、実施例で説明されるか又は示されるすべての事項は例示として判断されるべきであり、限定的な意味ではない。
【0294】
実施例１：組換えタンパク質調製物の発現分析
様々な組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞（すなわち、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ β－ラクトグロブリンをコードする組換え発現構築物を含む様々なＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞）におけるＧ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４ ｍＲＮＡ転写物の存在を、組換えβ－ラクトグロブリンの産生及び分泌に好適な様々な条件下で、組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞を２Ｌタンクで発酵することによって決定した。バイオマス試料を、発酵中の様々な時点で採取し、液体窒素中で急速凍結した。試料からＲＮＡを抽出し、アガロースゲル電気泳動によりＲＮＡの品質を確認し、ＲＮＡを、ＲＮＡシーケンシング及びリードプロセシング／分析のために提出した。Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質をコードする転写物について発現レベルを評価した。
様々な組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞（すなわち、Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ β－ラクトグロブリンをコードする組換え発現構築物を含む様々なＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞）におけるＧ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４ ｍＲＮＡ転写物の存在を、組換えβ－ラクトグロブリンの産生及び分泌に好適な様々な条件下で、組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞を２Ｌタンクで発酵することによって決定した。バイオマス試料を、発酵中の様々な時点で採取し、液体窒素中で急速凍結した。試料からＲＮＡを抽出し、アガロースゲル電気泳動によりＲＮＡの品質を確認し、ＲＮＡを、ＲＮＡシーケンシング及びリードプロセシング／分析のために提出した。Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質をコードする転写物について発現レベルを評価した。
【0295】
図１Ａ及び１Ｂに示されるように、組換えタンパク質を産生する組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞の発酵は、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４転写物の検出可能な発現を示した。
【0296】
実施例２：阻害を介したＦＦＡ放出活性の除去
組換えβ－ラクトグロブリンを産生することができ、かつ本質的に排除されたクチナーゼ（例えば、ｃｕｔ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｇ０ＲＨ８５））活性を含む組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞（「クチナーゼノックアウト組換え宿主細胞」）を、ＰＣＴ特許公開第２０２０／０８１７８９号に記載されるように生成し、発酵させた。組換えβ－ラクトグロブリンを、電荷（すなわち、静電相互作用）に基づいて組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞の清澄化した発酵ブロスから単離し、噴霧乾燥して、β－ラクトグロブリン粉末調製物を得た。
組換えβ－ラクトグロブリンを産生することができ、かつ本質的に排除されたクチナーゼ（例えば、ｃｕｔ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｇ０ＲＨ８５））活性を含む組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞（「クチナーゼノックアウト組換え宿主細胞」）を、ＰＣＴ特許公開第２０２０／０８１７８９号に記載されるように生成し、発酵させた。組換えβ－ラクトグロブリンを、電荷（すなわち、静電相互作用）に基づいて組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞の清澄化した発酵ブロスから単離し、噴霧乾燥して、β－ラクトグロブリン粉末調製物を得た。
【0297】
Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質などのセリン残基を含むＦＦＡ放出酵素のβ－ラクトグロブリン粉末調製物の活性から除去するために、粉末調製物を、４０ｇ／Ｌのタンパク質の最終濃度まで水中に溶解した。溶液の２つの１ｍＬ試料を、試料１及び試料２として取った。試料１に、２％の最終濃度まで２０μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加した。試料２に、２μＭのＴｈｅｒｍｏ ＡｃｔｉｖＸ ＴＡＭＲＡ－ＦＰフルオロホスホネート及び２％ＤＭＳＯの最終濃度まで、ＤＭＳＯ中の２０μＬの０．１ｍＭのホスホネート基質阻害剤Ｔｈｅｒｍｏ ＡｃｔｉｖＸ ＴＡＭＲＡ－ＦＰフルオロホスホネート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号８８３１８；その活性部位に求核セリンを含むヒドロラーゼのホスホネート阻害剤のメンバー（Ｓｉｍｏｎ＆Ｃｒａｖａｔｔ．２０１０．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（１５）：１１０５１－１１０５５））を添加した。試料を、２１℃で１８．５時間インキュベートした。
【0298】
試料１及び試料２に含まれるパラ－フェニル（ｐＮＰ）アシルエステル加水分解酵素活性を、最初に０．４Ｍの４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ｐＨ７の等しい体積で各試料を希釈し、次いで、０．２ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７で１／１２８倍まで連続的に希釈し、１０％ＤＭＳＯ中の０．３ｍＭのｐＮＰアシルエステル（ｐＮＰ－ブチレート、ｐＮＰ－オクタノエート、ｐＮＰ－ラウレート、又はｐＮＰ－パルミテート）の等しい体積と混合し、３０℃でインキュベートすることによって決定した。反応混合物を、Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－ｏｎｅ（Ｍｏｎｒｏｅ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ、カタログ番号Ｇ５５８０１）からのＵＶスタープレートで、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）からのＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ３プレートリーダーにより、３４８ｎｍでの吸光度について毎時間（１～６時間）測定した。
【0299】
図２に示されるように、試料１は、４つのｐＮＰアシルエステルの加水分解からパラ－ニトロフェノールを産生し、これは対応するＦＦＡを共産生し、試料１におけるリパーゼ（エステラーゼとして）活性の存在を示す。かかるＦＦＡの生成（すなわち、脂肪酸エステル加水分解酵素活性）は、試料２で本質的に排除された。
【0300】
実施例３：精製を介したエステラーゼ活性の除去
組換えβ－ラクトグロブリンを産生することができ、かつ本質的に排除されたクチナーゼ（例えば、ｃｕｔ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｇ０ＲＨ８５））活性を含む組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞（「クチナーゼノックアウト組換え宿主細胞」）を、ＰＣＴ特許公開第２０２０／０８１７８９号に記載されるように生成し、発酵させた。組換えβ－ラクトグロブリンを、電荷（すなわち、静電相互作用）に基づいて組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞の清澄化した発酵ブロスから単離し、噴霧乾燥して、組換えβ－ラクトグロブリン粉末調製物を得た。
組換えβ－ラクトグロブリンを産生することができ、かつ本質的に排除されたクチナーゼ（例えば、ｃｕｔ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｇ０ＲＨ８５））活性を含む組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞（「クチナーゼノックアウト組換え宿主細胞」）を、ＰＣＴ特許公開第２０２０／０８１７８９号に記載されるように生成し、発酵させた。組換えβ－ラクトグロブリンを、電荷（すなわち、静電相互作用）に基づいて組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞の清澄化した発酵ブロスから単離し、噴霧乾燥して、組換えβ－ラクトグロブリン粉末調製物を得た。
【0301】
組換えβ－ラクトグロブリン粉末調製物を、４０又は２００ｇ／Ｌの濃度まで水で再溶解し、それぞれ、２．５又は７．５ｍＬの溶液を、２１℃で、ＤＭＳＯ中の８０又は２０μＬの０．１ｍＭのＡｃｔｉｖＸ（商標）デスチオビオチン－フルオロホスホネートセリンヒドロラーゼプローブ（ＤＴＢ－ＦＰ、カタログ番号８８３１７、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）と反応させた。ＤＴＢ－ＦＰは、リン及びセリンの側鎖酸素に結合することによって、ＦＦＡ放出酵素に共有結合し、ＦＦＡ放出酵素は、その活性部位に求核セリンを含む。８時間後、１００μＬの水和したＰｉｅｒｃｅ（商標）大容量ストレプトアビジンアガロース（ＳＡ－Ａ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を添加し、反応懸濁液を、２１℃でインキュベートした（結合したＤＳＢ－ＦＰを有するＦＦＡ放出酵素は、ビオチン－アビジン結合を介してＳＡ－Ａに結合する）。２１時間後、懸濁液を、１，０００相対遠心力（ｒｃｆ）で２分間遠心分離し、上清（組換えβ－ラクトグロブリンを含む）を、ペレット（Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質などの触媒ドメイン中にセリン残基を含む結合したＦＦＡ放出酵素を含む）から分離した。
【0302】
実施例４：組換えＧ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質の産生
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉにおける組換えＧ０ＲＬＨ４及びＧ０ＲＧＱ０タンパク質産生については、当該技術分野で既知の遺伝子操作方法を使用して組換えベクターを構築した。組換えベクターの一般的な構造を図３に示す。組換えベクターは、それぞれ、Ｎ末端Ｇ０ＲＬＨ４又はＧ０ＲＧＱ０天然分泌シグナル配列に作動可能に連結され、かつｐＳＥＳプロモーター及びｐｄｃ１ターミネーターの制御下にある、Ｇ０ＲＬＨ４又はＧ０ＲＧＱ０タンパク質をコードするタンパク質コード配列を含む組換え発現構築物を含んでいた。組換え発現構築物は、合成転写因子をコードするポリヌクレオチドを更に含み、Ｇ０ＲＬＨ４又はＧ０ＲＧＱ０発現構築物の発現を駆動した。組換えベクターは、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞のゲノム中のｅｇｌ１遺伝子座での組換え発現構築物の組み込みを指示し得るポリヌクレオチド、細菌及び／又は真菌の形質転換体の選択のための選択マーカー、並びに細菌の複製起源を更に含んでいた。細菌の選択マーカー及び複製起源を、制限酵素消化を介して組換えベクターから除去し、その後、組換えベクターをＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞に形質転換した。
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉにおける組換えＧ０ＲＬＨ４及びＧ０ＲＧＱ０タンパク質産生については、当該技術分野で既知の遺伝子操作方法を使用して組換えベクターを構築した。組換えベクターの一般的な構造を図３に示す。組換えベクターは、それぞれ、Ｎ末端Ｇ０ＲＬＨ４又はＧ０ＲＧＱ０天然分泌シグナル配列に作動可能に連結され、かつｐＳＥＳプロモーター及びｐｄｃ１ターミネーターの制御下にある、Ｇ０ＲＬＨ４又はＧ０ＲＧＱ０タンパク質をコードするタンパク質コード配列を含む組換え発現構築物を含んでいた。組換え発現構築物は、合成転写因子をコードするポリヌクレオチドを更に含み、Ｇ０ＲＬＨ４又はＧ０ＲＧＱ０発現構築物の発現を駆動した。組換えベクターは、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞のゲノム中のｅｇｌ１遺伝子座での組換え発現構築物の組み込みを指示し得るポリヌクレオチド、細菌及び／又は真菌の形質転換体の選択のための選択マーカー、並びに細菌の複製起源を更に含んでいた。細菌の選択マーカー及び複製起源を、制限酵素消化を介して組換えベクターから除去し、その後、組換えベクターをＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞に形質転換した。
【0303】
Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓにおける組換えＧ０ＲＭＩ３タンパク質産生について、当該技術分野で既知の遺伝子操作方法を使用して組換えベクターを構築した。組換えベクターの一般的な構造を図４に示す。組換えベクターは、ＡＯＸ１メタノール誘導性プロモーター及びターミネーターの制御下で、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのアルファ接合因子のＮ末端のプレ－プロ分泌シグナル配列に、及びＣ末端６ｘ－Ｈｉｓタグに作動可能に連結された、Ｇ０ＲＭＩ３タンパク質をコードするタンパク質コード配列を含む組換え発現構築物を含んでいた。組換えベクターは、細菌及び／又は真菌の形質転換体の選択のための選択マーカー、並びに細菌の複製起源を更に含んでいた。細菌の選択マーカー及び複製起源を、制限酵素消化を介して組換えベクターから除去し、その後、組換えベクターをＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ宿主細胞に形質転換した。
【0304】
組換えベクターを、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ又はＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ宿主細胞に（例えば、ヒートショックプロトコルを使用することによって）形質転換し、形質転換体を、最小培地又は抗生物質上での成長により、陽性選択のために選択した。形質転換体を、２４ウェルプレート中の発現培地中で増殖させ、更なる分析のために上清を採取した。上記のいずれかによる組換え発現構築物の組み込まれたコピーを含み、その分泌された組換えＧ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＬＨ４、又はＧ０ＲＧＱタンパク質を、発酵ブロスサンプルのＳＤＳ－ＰＡＧＥ又はウェスタンブロットゲル分析により同定した組換え宿主細胞。
【0305】
組換えＧ０ＲＭＩ３タンパク質を、親和性カラム（例えば、ＨｉｓＴｒａｐ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ））を使用して発酵ブロスから精製し、次いで、ｐＨ８で、５０ｍＭのトリス－ＨＣＬ、１５０ｍＭのＮａＣＬ、１０％のグリセロールの緩衝溶液中、０．１６ｍｇ／ｍＬの濃度（Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイにより決定された場合）で溶出した。
【0306】
組換えＧ０ＲＧＱ０及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質は精製しなかったが、むしろ５日間の古い振とうフラスコからの上清をその後の実験で使用した。振とうフラスコを、１×１０８個の胞子で１００ｍｌの振とうフラスコ最小培地に接種した。
【0307】
図５Ａ～５Ｃに示されるように、組換え株は、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質を産生した。
【0308】
実施例５：脂肪分解アッセイを使用したＧ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質のＦＦＡ放出活性の分析
Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質のＦＦＡ放出活性を、ＦＦＡ結合によって引き起こされる蛍光シグナルの検出及びローダミンＢの濃度に基づく方法を使用して実証した（Ｋｏｕｇｅｒ＆Ｊａｅｇｅｒ．１９８７．Ａｐｐｌ Ｅｎｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５３（１）：２１１－２１３）。この目的のために、２４ウェル培養プレートのウェルに、それぞれ、１重量％体積の寒天を含む３ｍＬの寒天ゲル、１０ｍＬ／Ｌのヒマワリココナッツオイルブレンド、及び５ｍｇ／ＬのローダミンＢを充填した。次いで、寒天上に、実施例３のＧ０ＲＭＩ３タンパク質調製物の１０ｕＬの試料、実施例３のＧ０ＲＧＱ０若しくはＧ０ＲＬＨ４培養上清の２０ｕＬの試料、又は等しい体積の陰性対照（すなわち、実施例３の発現構築物のうちのいずれも含んでいなかったＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ株の上清）をピペッティングした。２４ウェルプレートを、３０℃で４８時間インキュベートし、次いで、ＵＶトランスイルミネーターで照射して、ＦＦＡが存在するかどうかを判定した。
Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質のＦＦＡ放出活性を、ＦＦＡ結合によって引き起こされる蛍光シグナルの検出及びローダミンＢの濃度に基づく方法を使用して実証した（Ｋｏｕｇｅｒ＆Ｊａｅｇｅｒ．１９８７．Ａｐｐｌ Ｅｎｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５３（１）：２１１－２１３）。この目的のために、２４ウェル培養プレートのウェルに、それぞれ、１重量％体積の寒天を含む３ｍＬの寒天ゲル、１０ｍＬ／Ｌのヒマワリココナッツオイルブレンド、及び５ｍｇ／ＬのローダミンＢを充填した。次いで、寒天上に、実施例３のＧ０ＲＭＩ３タンパク質調製物の１０ｕＬの試料、実施例３のＧ０ＲＧＱ０若しくはＧ０ＲＬＨ４培養上清の２０ｕＬの試料、又は等しい体積の陰性対照（すなわち、実施例３の発現構築物のうちのいずれも含んでいなかったＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ株の上清）をピペッティングした。２４ウェルプレートを、３０℃で４８時間インキュベートし、次いで、ＵＶトランスイルミネーターで照射して、ＦＦＡが存在するかどうかを判定した。
【0309】
図６に示されるように、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、又はＧ０ＲＬＨ４タンパク質を含むウェルについて蛍光シグナルが観察されたが、陰性対照ウェルからは観察されず、これはＧ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４タンパク質が、ヒマワリ／ココナッツオイル基質からのＦＦＡの酵素放出を引き起こし得ることを示す。
【0310】
実施例６：アイスクリーム酸敗度アッセイを使用したＧ０ＲＭＩ３タンパク質のＦＦＡ放出活性の分析
Ｇ０ＲＭＩ３タンパク質のＦＦＡ放出活性は、酸敗についてタンパク質を含む調製物から生産されたアイスクリームを評価することによって実証した。この目的のために、水に溶解された糖、マルトデキストリン、塩、ミネラル、ガム、及びＢｏｓ ｔａｕｒｕｓ乳清タンパク質単離物を含む、アイスクリーム混合物を生産した。この混合物に、質量で１６％の脂質（すなわち、大豆、溶融ココナッツオイル、及び溶融ヒマワリオイルから得られた乳化モノグリセリド及びジグリセリド）を添加し、混合物を、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）中で、２０，０００ｒｐｍで３０秒間混合した。ブレンドを、スクレープ表面パドル（ｓｃｒａｐｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｐａｄｄｌｅ）を備えたＨｏｔ Ｍｉｘ Ｐｒｏ容器に移し、９０ｒｐｍで、８２℃の保持温度及び２５秒の保持時間でインキュベートした。完成したアイスクリーム塩基を低温殺菌し、均質化（２段階：１８０／３０バール＝２１０バール）した後、その約２０７ｇを２５０ｍＬのＳｃｈｏｔｔボトルに添加し、５５℃の水浴中でインキュベートした。ブレンドに、１５ｕｇのＧ０ＲＭＩ３タンパク質を添加し、混合物を、１６，０００ｒｐｍで少なくとも６０秒間、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘを使用して混合し、次いで、５５℃の水浴中でインキュベートした。４時間後、試料を冷却し、４℃で７～８日間保存した。アイスクリームは、０時間、４時間、２４時間、及び６～８日間の時点で感覚専門家が評価した。Ｇ０ＲＭＩ３タンパク質を含んでいた試料は、酸敗臭及び／又は味があることが見出された。
Ｇ０ＲＭＩ３タンパク質のＦＦＡ放出活性は、酸敗についてタンパク質を含む調製物から生産されたアイスクリームを評価することによって実証した。この目的のために、水に溶解された糖、マルトデキストリン、塩、ミネラル、ガム、及びＢｏｓ ｔａｕｒｕｓ乳清タンパク質単離物を含む、アイスクリーム混合物を生産した。この混合物に、質量で１６％の脂質（すなわち、大豆、溶融ココナッツオイル、及び溶融ヒマワリオイルから得られた乳化モノグリセリド及びジグリセリド）を添加し、混合物を、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）中で、２０，０００ｒｐｍで３０秒間混合した。ブレンドを、スクレープ表面パドル（ｓｃｒａｐｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｐａｄｄｌｅ）を備えたＨｏｔ Ｍｉｘ Ｐｒｏ容器に移し、９０ｒｐｍで、８２℃の保持温度及び２５秒の保持時間でインキュベートした。完成したアイスクリーム塩基を低温殺菌し、均質化（２段階：１８０／３０バール＝２１０バール）した後、その約２０７ｇを２５０ｍＬのＳｃｈｏｔｔボトルに添加し、５５℃の水浴中でインキュベートした。ブレンドに、１５ｕｇのＧ０ＲＭＩ３タンパク質を添加し、混合物を、１６，０００ｒｐｍで少なくとも６０秒間、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘを使用して混合し、次いで、５５℃の水浴中でインキュベートした。４時間後、試料を冷却し、４℃で７～８日間保存した。アイスクリームは、０時間、４時間、２４時間、及び６～８日間の時点で感覚専門家が評価した。Ｇ０ＲＭＩ３タンパク質を含んでいた試料は、酸敗臭及び／又は味があることが見出された。
【0311】
実施例７：ヨーグルト酸敗度アッセイを使用したＧ０ＲＭＩ３タンパク質のＦＦＡ放出活性の分析
Ｇ０ＲＭＩ３タンパク質のＦＦＡ放出活性は、酸敗についてタンパク質を含む調製物から生産されたヨーグルトを評価することによって実証した。この目的のために、５０ｍｇのＹＣＸ－１１ヨーグルト培養物（Ｃｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ｉｎｃ．、Ｈｏｒｓｈｏｌｍ，Ｄｅｎｍａｒｋ）及び８０ｇの全乳の第１の混合物を、低速で少なくとも１０分間、又は顆粒が完全に水和されるまで、撹拌プレート上で混合した。２４ｕｇの精製されたＧ０ＲＭＩ３タンパク質及び３０ｇの全乳の第２の混合物を、ＩＫＡ Ｕｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ ＴｕｂｅＤｒｉｖｅ（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）中で、２，０００ｒｐｍで３分間混合した。第１の混合物の１８．５ｇアリコートを、第２の混合物（最終濃度０．０２５％ｗ／ｗ／ヨーグルト培養物）に添加し、合わせた混合物を、ＩＫＡ Ｕｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ ＴｕｂｌｅＤｒｉｖｅ中で、２０００ｒｐｍで１分間混合した。次いで、試料を、きれいな８０ｍＬのガラスのＷｅｃｋジャーに注ぎ入れ、６０ｍｍの蓋及びガスケットで密封し、４４℃で４時間（又は４．６＋／－０．１のｐＨに到達するまで）インキュベートして、ヨーグルトを得た。２４時間後、３～４日後、及び６～８日後、酸敗臭及び／又は味の存在について、感覚専門家がヨーグルトを評価した。２４時間の時点以降、Ｇ０ＲＭＩ３タンパク質粉末を使用して生産されたヨーグルトを、酸敗と判定した。
Ｇ０ＲＭＩ３タンパク質のＦＦＡ放出活性は、酸敗についてタンパク質を含む調製物から生産されたヨーグルトを評価することによって実証した。この目的のために、５０ｍｇのＹＣＸ－１１ヨーグルト培養物（Ｃｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ｉｎｃ．、Ｈｏｒｓｈｏｌｍ，Ｄｅｎｍａｒｋ）及び８０ｇの全乳の第１の混合物を、低速で少なくとも１０分間、又は顆粒が完全に水和されるまで、撹拌プレート上で混合した。２４ｕｇの精製されたＧ０ＲＭＩ３タンパク質及び３０ｇの全乳の第２の混合物を、ＩＫＡ Ｕｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ ＴｕｂｅＤｒｉｖｅ（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）中で、２，０００ｒｐｍで３分間混合した。第１の混合物の１８．５ｇアリコートを、第２の混合物（最終濃度０．０２５％ｗ／ｗ／ヨーグルト培養物）に添加し、合わせた混合物を、ＩＫＡ Ｕｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ ＴｕｂｌｅＤｒｉｖｅ中で、２０００ｒｐｍで１分間混合した。次いで、試料を、きれいな８０ｍＬのガラスのＷｅｃｋジャーに注ぎ入れ、６０ｍｍの蓋及びガスケットで密封し、４４℃で４時間（又は４．６＋／－０．１のｐＨに到達するまで）インキュベートして、ヨーグルトを得た。２４時間後、３～４日後、及び６～８日後、酸敗臭及び／又は味の存在について、感覚専門家がヨーグルトを評価した。２４時間の時点以降、Ｇ０ＲＭＩ３タンパク質粉末を使用して生産されたヨーグルトを、酸敗と判定した。
【0312】
実施例８：遺伝修飾を介したエステラーゼ活性の除去
組換えβ－ラクトグロブリンを産生することができ、かつＧ０ＲＨ８５及びＧ０ＲＭＩ３（二重欠損）；Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、及びＧ０ＲＧＱ０（三重欠損）；Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、及びＧ０ＲＬＨ４（三重欠損）；Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、及びＧ０ＲＬＨ４（三重欠損）；並びにＧ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４（四重欠損）の本質的に排除されたＦＦＡ放出活性を含む組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞は、Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及び／又はＧ０ＲＬＨ４タンパク質をコードする遺伝子への選択可能なマーカーを、相同組換えによって組み込むように操作されたポリヌクレオチド（標的ベクター）で組換えβ－ラクトグロブリン（「対応する組換え宿主細胞」）を産生することができるＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ株のプロトプラストを形質転換することによって生成した。標的ベクターの一般的な構造を図７に示す。標的ベクターは、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉゲノムにおける各遺伝子の遺伝子オープンリーディングフレームに隣接している上流及び下流ポリヌクレオチド配列と相同であるポリヌクレオチド配列に隣接した選択マーカー（ウラシル添加なしで成長を可能にするｐｙｒ４遺伝子）を含んでいた。複数の遺伝子置換を、遺伝子座を逐次的に標的化することによって、及び各ラウンド後にマーカーをリサイクルすることによって完了した。
組換えβ－ラクトグロブリンを産生することができ、かつＧ０ＲＨ８５及びＧ０ＲＭＩ３（二重欠損）；Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、及びＧ０ＲＧＱ０（三重欠損）；Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、及びＧ０ＲＬＨ４（三重欠損）；Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、及びＧ０ＲＬＨ４（三重欠損）；並びにＧ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及びＧ０ＲＬＨ４（四重欠損）の本質的に排除されたＦＦＡ放出活性を含む組換えＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ宿主細胞は、Ｇ０ＲＨ８５、Ｇ０ＲＭＩ３、Ｇ０ＲＧＱ０、及び／又はＧ０ＲＬＨ４タンパク質をコードする遺伝子への選択可能なマーカーを、相同組換えによって組み込むように操作されたポリヌクレオチド（標的ベクター）で組換えβ－ラクトグロブリン（「対応する組換え宿主細胞」）を産生することができるＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ株のプロトプラストを形質転換することによって生成した。標的ベクターの一般的な構造を図７に示す。標的ベクターは、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉゲノムにおける各遺伝子の遺伝子オープンリーディングフレームに隣接している上流及び下流ポリヌクレオチド配列と相同であるポリヌクレオチド配列に隣接した選択マーカー（ウラシル添加なしで成長を可能にするｐｙｒ４遺伝子）を含んでいた。複数の遺伝子置換を、遺伝子座を逐次的に標的化することによって、及び各ラウンド後にマーカーをリサイクルすることによって完了した。
【0313】
形質転換体を最小培地上で選択し、次いで、ＰＣＲによってスクリーニングして、リパーゼノックアウト組換え宿主細胞を同定した。リパーゼノックアウト組換え宿主細胞を、細胞を５－フルオロオロチン酸含有培地に播種することによって選択マーカーの「矯正（ｃｕｒｅｄ）」を行った。４つの遺伝子オープンリーディングフレームすべてがノックアウトされた株が得られるまで、形質転換／矯正の逐次的なラウンドのために「矯正」細胞を採取した。
【0314】
最終ノックアウト組換え宿主細胞及び対応する組換え宿主細胞を、組換え宿主細胞の成長、並びに組換えβ－ラクトグロブリンの産生及び分泌に好適な培養培地で発酵させた。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図6】
【図7】
【国際調査報告】