特表 2023-549736 コンジュゲートさせた莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-29

(54)【発明の名称】コンジュゲートさせた莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C08B 37/00 20060101AFI20231121BHJP

   A61K 39/09 20060101ALI20231121BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20231121BHJP

   G01N 33/50 20060101ALN20231121BHJP

【ＦＩ】

C08B37/00 K

A61K39/09

A61P37/04

G01N33/50 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023527280

(86)(22)【出願日】2021-11-04

(85)【翻訳文提出日】2023-06-23

(86)【国際出願番号】 IB2021060217

(87)【国際公開番号】W WO2022101745

(87)【国際公開日】2022-05-19

(31)【優先権主張番号】63/111,765

(32)【優先日】2020-11-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本 能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100147186

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 眞紀

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田 美幸

(74)【代理人】

【識別番号】100185960

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 理愛

(72)【発明者】

【氏名】ポール ウェイン ブラウン

(72)【発明者】

【氏名】カウシィク ダッタ

(72)【発明者】

【氏名】ジェイソン アーノルド ロットヴィン

(72)【発明者】

【氏名】ケリー ジェフリー サケット

【テーマコード（参考）】

2G045

4C085

4C090

【Ｆターム（参考）】

2G045AA40

2G045DA80

4C085AA03

4C085BA14

4C090BA61

4C090BA75

4C090BB20

4C090BB32

4C090BB33

4C090BB35

4C090BB36

4C090BB53

4C090BC15

4C090CA35

(57)【要約】

本発明は、コンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖抗原（複合糖質）を含む新規免疫原性組成物、前記免疫原性組成物を含むキット、およびその使用に関する。本発明の免疫原性組成物は、典型的には、ＰＲＥＶＮＡＲ（登録商標）、ＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（登録商標）、および／またはＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）中には見つからない肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型からの少なくとも１つの複合糖質を含むであろう。本発明はまた、前記新規免疫原性組成物を使用した、肺炎球菌感染症に対する、ヒト対象、具体的には乳児および高齢者のワクチン接種にも関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の反復単位を有する単離多糖：

【化1】

［式中、ｎは反復単位の数を表し、Ｘは、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたは４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミンのどちらかを表す］。

【請求項2】

前記単離多糖が、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、請求項１に記載の単離多糖。

【請求項3】

ａ）請求項１から２のいずれか一項に記載の単離多糖を活性化剤と反応させて活性糖を生成するステップと、ｂ）活性糖を担体タンパク質と反応させるステップとを含むプロセスによって調製した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【請求項4】

多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および／または約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【請求項5】

血清型１２Ｆ多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａである、請求項３から４のいずれか一項に記載の複合糖質。

【請求項6】

複合糖質中の血清型１２Ｆ多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）が０．５～３．０である、請求項３から５のいずれか一項に記載の複合糖質。

【請求項7】

複合糖質の担体タンパク質が、ＴＴ（破傷風トキソイド）、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）、ＤＴ突然変異体（ＣＲＭ_１９７など）、またはストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）からのＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）である、請求項３から６のいずれか一項に記載の複合糖質。

【請求項8】

複合糖質の担体タンパク質がＣＲＭ_１９７である、請求項３から６のいずれか一項に記載の複合糖質。

【請求項9】

ＣＲＭ_１９７が、３９個のうち１～１５個の糖と共有結合されたリシン残基を含む、請求項８に記載の複合糖質。

【請求項10】

還元的アミノ化を使用して調製する、請求項３から９のいずれか一項に記載の複合糖質。

【請求項11】

ａ）血清型１２Ｆ糖を安定ニトロキシルラジカル化合物および酸化剤と反応させて活性糖を生成するステップと、ｂ）活性糖を担体タンパク質と反応させるステップとを含むプロセスによって調製される、請求項３から１０のいずれか一項に記載の複合糖質。

【請求項12】

（ａ）単離した血清型１２Ｆ多糖を酸化剤と反応させるステップと、（ｂ）ステップ（ａ）の活性多糖を担体タンパク質と混ぜ合わせるステップと、（ｃ）混ぜ合わせた活性多糖および担体タンパク質を還元剤と反応させて複合糖質を形成するステップとを含むプロセスによって調製される、請求項３から１０のいずれか一項に記載の複合糖質。

【請求項13】

（ａ）単離した血清型１２Ｆ多糖を酸化剤と反応させるステップと、（ａ’）反応停止剤の添加によって酸化反応を反応停止させるステップと、（ｂ）ステップ（ａ’）の活性多糖を担体タンパク質と混ぜ合わせるステップと、（ｃ）混ぜ合わせた活性多糖および担体タンパク質を還元剤と反応させて複合糖質を形成するステップとを含むプロセスによって調製される、請求項３から１０のいずれか一項に記載の複合糖質。

【請求項14】

活性血清型１２Ｆ多糖の酸化度合が２～３０である、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の複合糖質。

【請求項15】

請求項１から２のいずれか一項に記載の多糖または請求項３から１４のいずれか一項に記載の複合糖質を含む免疫原性組成物。

【請求項16】

医薬品として使用するための、請求項１５に記載の免疫原性組成物。

【請求項17】

ワクチンとして使用するための、請求項１５に記載の免疫原性組成物。

【請求項18】

ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を単離するステップと、ｂ）前記多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在を検出するステップとを含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在を検出する方法。

【請求項19】

ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を単離するステップと、ｂ）前記多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量を測定するステップとを含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量を決定する方法。

【請求項20】

ａ）単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を還元剤と反応させるステップと、ｂ）前記還元多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、還元血清型１２Ｆ多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【請求項21】

ａ）単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を還元剤と反応させるステップと、ｂ）前記還元多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、還元血清型１２Ｆ多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【請求項22】

ａ）単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を還元剤と反応させるステップと、ｂ）前記還元多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、還元血清型１２Ｆ多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【請求項23】

ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【請求項24】

ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【請求項25】

ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、免疫原性組成物およびワクチン、その製造、ならびに医薬におけるそのような組成物の使用の分野に関する。

【0002】

より詳細には、本発明は、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ糖、その複合糖質、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を作製する方法、および肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。

【0003】

本発明はまた、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖、還元血清型１２Ｆ多糖、または肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を分析するための分析方法にも関する。

【0004】

本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ糖および複合糖質は、ワクチンとして使用することができる。

【背景技術】

【0005】

肺炎球菌によって引き起こされる感染症は、全世界にわたる罹患および死亡の主要な原因である。肺炎、熱性菌血症、および髄膜炎が浸潤性肺炎球菌疾患の最も一般的な徴候である一方で、気道内での細菌の拡大は中耳感染症、副鼻腔炎、または再発性気管支炎をもたらし得る。浸潤性疾患と比較して、非浸潤性徴候は通常は重篤度がより低いが、かなりより多く起こる。

【0006】

欧州および米国において、肺炎球菌性肺炎は最も一般的な市中感染の細菌性肺炎であり、毎年１００，０００人あたりおよそ１００人の成人が冒されると推定されている。熱性菌血症および髄膜炎の対応する数字は、それぞれ１０００００人あたり１５～１９人および１００，０００人あたり１～２である。これらの徴候の１つまたは複数のリスクは、乳児および高齢者、ならびに任意の年齢の免疫不全者においてはるかにより高い。経済的に発展した地域においてさえも、浸潤性肺炎球菌疾患は高い死亡率を有する。肺炎球菌性肺炎を有する成人では死亡率の平均が１０％～２０％である一方で、高リスク群では５０％を超え得る。肺炎は、群を抜いて、世界中で肺炎球菌性の死の最も一般的な原因である。

【0007】

肺炎球菌疾患の病原因子である肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌）は、多糖カプセルによって囲まれた、グラム陽性のカプセル封入された球菌である。このカプセルの組成の相違が約９１個の莢膜型間の血清学的の区別を可能にし、その一部は肺炎球菌疾患と頻繁に関連しており、他のものは稀にしか関連していない。浸潤性肺炎球菌感染症としては、肺炎、髄膜炎、および熱性菌血症が挙げられ、一般的な非浸潤性徴候は、とりわけ、中耳炎、副鼻腔炎、および気管支炎である。

【0008】

Ｔ非依存性抗原、たとえば糖類は、Ｔ細胞の関与なしにＢリンパ球を介して抗体産生を誘発する抗原である。Ｔ非依存性抗原と担体タンパク質とのコンジュゲーションは、Ｔ細胞の支援が、通常はＴ非依存性の抗原に対する免疫応答の一部となることができるようにする方法として確立されている。細菌莢膜糖を担体タンパク質（Ｔ非依存性糖抗原を、免疫記憶応答を始動させることができるＴ依存性抗原へと変える、既知の効果を有する担体タンパク質）とコンジュゲートさせることによって、成功した結合ワクチンが開発されている。いくつかの担体タンパク質が当分野で知られており、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ_１９７、およびインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）からのタンパク質Ｄが、市販ワクチン中における担体タンパク質として使用されている。肺炎球菌結合ワクチン（ＰＣＶ）は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌）によって引き起こされる疾患に対して保護するために使用する肺炎球菌ワクチンである。世界市場中では現在３つのＰＣＶワクチンが入手可能である：ＰＲＥＶＮＡＲ（登録商標）（一部の国ではＰＲＥＶＥＮＡＲ（登録商標））（７価ワクチン）、ＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（登録商標）（１０価ワクチン）、およびＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）（一部の国ではＰＲＥＶＥＮＡＲ１３（登録商標））（１３価ワクチン）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

安全かつ大量に生成することができる、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症に対する有効なワクチンの大きな必要性が依然として存在する。

【課題を解決するための手段】

【0010】

これらおよび他の要求を満たすために、本発明は、以下の反復単位を有する単離多糖に関する：

【0011】

【化1】

【0012】

［式中、ｎは反復単位の数を表し、Ｘは、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたは４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン（２－アセトアミド－２，６－ジデオキシ－キシロ－ヘキソス－４－ロース）のどちらかを表す］。

【0013】

一態様では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0014】

一態様では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖に関する。

【0015】

本発明は、ａ）前記単離多糖を活性化剤と反応させて活性糖を生成するステップと、ｂ）活性糖を担体タンパク質と反応させるステップとを含むプロセスによって調製した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質にさらに関する。

【0016】

別の態様では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質に関する。具体的な態様では本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質にさらに関する。

【0017】

一態様では、複合糖質は、還元的アミノ化を使用して調製する。

【0018】

本発明は、上記多糖または複合糖質を含む免疫原性組成物、ならびに医薬品として、具体的にはワクチンとしてのその使用にさらに関する。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1A】Ｌｅｏｎｔｅｉｎら（（１９８１）Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．５９：２０８１～２０８５）と整合した、約７５～８０ｍｏｌ％での一次集団（Ａ）と、ＧａｌＮＡｃのＳｕｇ（ケト糖）での置換えによって特徴づけられた、約２０～２５ｍｏｌ％での二次集団（Ｂ）とを含む、肺炎球菌多糖１２Ｆ反復単位の組織および集団を示す模式図である。二次スピン系では、Ｓｕｇ残基の取り込みによって有意に影響を受けた、主鎖および分枝残基の^１３Ｃおよび／または^１Ｈの部位特異的共鳴を網掛の丸で示す。

【図1B】Ｌｅｏｎｔｅｉｎら（（１９８１）Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．５９：２０８１～２０８５）と整合した、約７５～８０ｍｏｌ％での一次集団（Ａ）と、ＧａｌＮＡｃのＳｕｇ（ケト糖）での置換えによって特徴づけられた、約２０～２５ｍｏｌ％での二次集団（Ｂ）とを含む、肺炎球菌多糖１２Ｆ反復単位の組織および集団を示す模式図である。二次スピン系では、Ｓｕｇ残基の取り込みによって有意に影響を受けた、主鎖および分枝残基の^１３Ｃおよび／または^１Ｈの部位特異的共鳴を網掛の丸で示す。

【図1C】統計的平均（７５％／２５％）に基づいて中心主鎖残基をＧａｌＮＡｃまたはＳｕｇのどちらかとして示した、平均的な肺炎球菌多糖１２Ｆ反復単位を示す略図である。

【図2】水和物形態の肺炎球菌多糖１２Ｆ Ｓｕｇ残基の^１Ｈおよび^１３Ｃの化学シフトの割当てを示す図である。Ｓｕｇ（本文書中で４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン、２－アセトアミド－２，６－ジデオキシ－Ｄ－キシロ－４－ヘキスロース、または４ＫＱとも呼ぶ）は、ＧａｌＮＡｃ残基の置換えによって反復単位の主鎖中に取り込まれている。

【図3】ケトン／水和物の平衡を示す図である。

【図4】多糖１２Ｆ反復単位中においてＤ－ＳｕｇがＧａｌＮＡｃを置き換えることのさらなる支持を提供する、１１個のＮＯＥＳＹ相関を示す図である。

【図5】インソース衝突誘発解離（ＩＳ－ＣＩＤ）によって検出した、１２Ｆ多糖のＧａｌＮＡｃを含有する反復単位を示す図である。

【図6】水性溶媒中におけるケトン／水和物の平衡を示す血清型１２Ｆ Ｓｕｇ残基（４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン）、ならびにＮａＢＨ_４を使用した特異的ケトン還元が原因の変化を示す模式図である。

【図7】ＮａＢＤ_４を用いた還元後のＳｕｇ残基を含有する血清型１２Ｆ反復単位を示す模式図である。

【図8】１２Ｆコンジュゲートを含有する多価ワクチン（１２Ｆ ｃｏｎｊ．）、プレーンな１２Ｆを含有する多価ワクチン（１２Ｆ ｐｌａｉｎ）、または１２Ｆ多糖を含有しなかった多価ワクチンを用いて免疫化した対象からの免疫血清を、４ＫＱ修飾レベル１．９％～２７．５％を有する単離体の細菌殺滅応答を誘発するその能力に関して試験した。

【発明を実施するための形態】

【0020】

本発明は、部分的に、ＮＭＲ分光分析を使用することによる新規肺炎球菌多糖構造の同定に基づく。本明細書中に提供する構造は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ初めての同定または初めての正しい同定であると考えられる。

【0021】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を様々な株から生成させ、精製した。生成（および精製した）多糖を使用して、多糖－タンパク質コンジュゲート（複合糖質）を作製した。肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆはユニークな多糖構造を有しており、これはユニークなコンジュゲート生成プロセスをもたらす。

【0022】

１．本発明の単離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ糖
多糖に関連して本明細書中で使用する用語「単離した」とは、遠心分離、デプス濾過、沈殿、限外濾過、活性炭素を用いた処理、ダイアフィルトレーション、および／またはカラムクロマトグラフィーの使用を含む当分野で知られている精製技法を使用した、精製した多糖からの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型特異的莢膜多糖の単離をいう。一般に、単離多糖とは、タンパク質、核酸、および非特異的内在性多糖（Ｃ－多糖）の部分的除去をいう。単離多糖は、１０％、８％、６％、４％、または２％未満のタンパク質不純物および／または核酸を含有する。単離多糖は、型特異的多糖に関して２０％未満のＣ－多糖を含有する。

【0023】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖の構造は以前に公開されている（Ｌｅｏｎｔｅｉｎら（１９８１）Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．５９：２０８１～２０８５）。

【0024】

Ｌｅｏｎｔｅｉｎらによれば、血清型１２Ｆの多糖反復単位は、直鎖状の三糖の主鎖（１個のＮ－アセチルフコサミン（ＦｕｃｐＮＡｃ）、１個のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌｐＮＡｃ）、および１個のＮ－アセチルマンヌロン酸（ＭａｎｐＮＡｃＡ））からなり、２つの分枝、すなわち、ＦｕｃｐＮＡｃのＣ３で連結されたペンダントα－ガラクトピラノース（Ｇａｌｐ）およびＭａｎｐＮＡｃＡのＣ３で連結されたα－Ｇｌｃｐ－（１→２）－α－Ｇｌｃｐ二糖分枝を有する。

【0025】

本発明者らによって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆの構造が異なることが驚くべきことに見出された。今回初めて、本発明者らは、血清型１２Ｆ多糖が実際にＮ－アセチル－ガラクトサミンの４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン（本文書中でＳｕｇ、Ｄ－Ｓｕｇ、２－アセトアミド－２，６－ジデオキシ－Ｄ－キシロ－４－ヘキスロース、または４ＫＱとも呼ぶ）による部分的置換を含有することを見出した。

【0026】

様々な臨床血清型１２Ｆ単離体および様々な血清型１２Ｆ株において、４ＫＱの取り込みの存在を検査した。研究したすべての臨床単離体がある程度のレベルの４ＫＱの取り込みを有しており、これは、４ＫＱ置換が臨床血清型１２Ｆ単離体において一般的であることを示している。

【0027】

したがって、一実施形態では、本発明は、以下の反復単位を有する単離多糖を提供する：

【0028】

【化2】

【0029】

［式中、ｎは反復単位の数を表し、Ｘは、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたは４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミンのどちらかを表す］。
一実施形態では、本発明は、以下の反復単位を有する単離多糖を提供する：

【0030】

【化3】

【0031】

［式中、ｎは反復単位の数を表し、Ｘは、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたは４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミンのどちらかを表し、多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む］。

【0032】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．１～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．９～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0033】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0034】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９８～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約２～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９７～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約３～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９６～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約４～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９４～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約６～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９３～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約７～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９２～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約８～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９１～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約９～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0035】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．１～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．９～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0036】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0037】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９８～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約２～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９７～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約３～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９６～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約４～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９４～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約４～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９３～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約７～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９２～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約８～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９１～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約９～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0038】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0039】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．１～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．９～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0040】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0041】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９８～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約２～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９７～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約３～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９６～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約４～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９４～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約４～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９３～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約７～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９２～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約８～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９１～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約９～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0042】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0043】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0044】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0045】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0046】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９８個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約２個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0047】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９７個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約３個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0048】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９６個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約４個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0049】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0050】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９４個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約６個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0051】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９３個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約７個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0052】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９２個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約８個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0053】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９１個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約９個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0054】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0055】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約８５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0056】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約８０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約２０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0057】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0058】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約３０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0059】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約６５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約３５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0060】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約６０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約４０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0061】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0062】

ある特定の実施形態では、単離多糖は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む。

【0063】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0064】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0065】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0066】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0067】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0068】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0069】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0070】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0071】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0072】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0073】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９９．５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約０．５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0074】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９９個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約１個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0075】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９８個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約２個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0076】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９７個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約３個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0077】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0078】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８～約９９．５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２～約０．５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0079】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８～約９９個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２～約１個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0080】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８～約９８個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２～約２個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0081】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８～約９７個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２～約３個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0082】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８～約９５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２～約５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0083】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．５～約９９個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．５～約１個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0084】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．５～約９８個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．５～約２個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0085】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．５～約９７個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．５～約３個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0086】

一実施形態では、本発明は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．５～約９５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．５～約５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖を提供する。

【0087】

ある特定の実施形態では、単離多糖は１０～５，０００個の反復単位を有する。特定の態様では、単離多糖は５０～４，５００個の反復単位を有する。特定の態様では、単離多糖は１００～４，５００個の反復単位を有する。特定の態様では、単離多糖は１５０～２，０００個の反復単位を有する。

【0088】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆからの単離莢膜糖は、当業者に知られている標準技法によって調製する。典型的には、莢膜多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ株を培地中（たとえばダイズベースの培地中）で成長させることによって生成され、その後、多糖を細菌培養物から調製する。血清型１２Ｆ肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株は、確立された培養物保存機関（たとえば連鎖球菌レファレンス研究所（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）（疾病管理予防センター（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、ジョージア州Ａｔｌａｎｔａ）など）または臨床検体から得られ得る。

【0089】

生物（肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ）の集団は、しばしば種バイアルから種ボトルへと拡大させ、生産規模の発酵体積に達するまで、漸増体積の１つまたは複数の種発酵層を通じて継代する。成長サイクルの終わりに細胞を溶解し、その後、溶解物ブロスを下流（精製）の加工のために収穫する（たとえば、ＷＯ２００６／１１０３８１およびＷＯ２００８／１１８７５２、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０、第２００６／０２２８３８１、第２００８／０１０２４９８、ならびにＵＳ２００８／０２８６８３８を参照）。多糖は、典型的には遠心分離、沈殿、限外濾過、および／またはカラムクロマトグラフィーを通じて精製する（たとえば、ＷＯ２００６／１１０３５２、ＷＯ２００８／１１８７５２、およびＷＯ２０２０／１７０１９０を参照）。

【0090】

単離多糖は、たとえば重量平均分子量（Ｍｗ）を含む様々なパラメータによって特徴づけることができる。

【0091】

多糖の分子量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）と多角度レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）との組合せによって測定することができる。

【0092】

一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離莢膜多糖は重量平均分子量５ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５ｋＤａ～３００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５ｋＤａ～２００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５ｋＤａ～１００ｋＤａを有する。

【0093】

一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５０ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５０ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５０ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５０ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離莢膜多糖は重量平均分子量５０ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５０ｋＤａ～３００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５０ｋＤａ～２００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５０ｋＤａ～１００ｋＤａを有する。

【0094】

一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量１００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量１００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量１００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量１００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量１００ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量１００ｋＤａ～３００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量１００ｋＤａ～２００ｋＤａを有する。

【0095】

一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量２００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量２００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量２００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量２００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量２００ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量２００ｋＤａ～３００ｋＤａを有する。

【0096】

一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量３００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量３００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量３００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量３００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量３００ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。

【0097】

一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離多糖は重量平均分子量５００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。好ましい実施形態では、単離多糖は重量平均分子量１００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。

【0098】

２．本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質
本明細書中にさらに記載するように、上述の単離多糖は、それらを反応可能（たとえば、リンカーを用いて、または担体タンパク質と直接）にするために、活性化（たとえば化学的活性化）させ、その後、複合糖質内に取り込ませ得る。

【0099】

本発明の目的のために、用語「複合糖質」とは、担体タンパク質と共有結合された糖を示す。一実施形態では、糖は担体タンパク質と直接連結している。第２の実施形態では、糖はスペーサー／リンカーを通じて担体タンパク質と連結している。

【0100】

一般に、糖類の担体との共有的コンジュゲーションは、これらをＴ非依存性抗原からＴ依存性抗原へと変換し、したがって免疫記憶のためのプライミングを可能にするため、糖類の免疫原性を増強させる。コンジュゲーションは小児ワクチンのために特に有用である。

【0101】

活性化の前に、多糖の構造の重要な特長を保存しつつ、単離多糖の大きさを減らすことができる。機械的または化学的サイジングを用い得る。一実施形態では、単離多糖の大きさは、化学的加水分解によって減らす。単離多糖の大きさは、機械的ホモジナイゼーションによって減らすこともできる。一実施形態では、単離多糖の大きさは、高圧ホモジナイゼーションによって減らす。高圧ホモジナイゼーションでは、プロセス流を、十分に小さな寸法を有する流路を通してポンピングすることによって、高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より高いホモジナイゼーション加圧力を使用することによって増加させ、曝露時間は、供給流を、ホモジナイザーを通して再循環させることによって増加させることができる。

【0102】

一実施形態では、本発明は、ａ）上記セクション１の単離多糖を活性化剤と反応させて活性糖を生成するステップと、ｂ）活性糖を担体タンパク質と反応させるステップとを含むプロセスによって調製した、血清型１２Ｆ複合糖質に関する。

【0103】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は血清型１２Ｆ多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）は５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。

【0104】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は血清型１２Ｆ多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）は１００ｋＤａ～６００ｋＤａである。

【0105】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は血清型１２Ｆ多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）は１５０ｋＤａ～４００ｋＤａである。

【0106】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は血清型１２Ｆ多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）は１５０ｋＤａ～３００ｋＤａである。

【0107】

一部の実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、２５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。

【0108】

他の実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質は、５００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。

【0109】

さらに他の実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質は、７５０ｋＤａ～２，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。

【0110】

好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質は、１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。

【0111】

本発明の血清型１２Ｆ複合糖質を特徴づけるための別の方法は、糖とコンジュゲートされる担体タンパク質（たとえばＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものであり、これはコンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度合）として特徴づけることができる。多糖との共有結合が原因の、担体タンパク質のリシン修飾の証拠は、当業者に知られているルーチン方法を使用したアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を作製するために使用した担体タンパク質出発物質と比較して、回収されたリシン残基の数の低下をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質のコンジュゲーション度合は２～１５である。一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質のコンジュゲーション度合は２～１０である。一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質のコンジュゲーション度合は３～５である。一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質のコンジュゲーション度合は２～６である。一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質のコンジュゲーション度合は４～１０である。

【0112】

本発明の血清型１２Ｆ複合糖質はまた、糖対担体タンパク質の比（重量／重量）によっても特徴づけ得る。一部の実施形態では、複合糖質中の血清型１２Ｆ多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は０．５～３．０である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は０．５～２．０である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は０．５～１．５である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は０．８～１．２である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は０．５～１．０である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は１．０～１．５である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１２Ｆ莢膜多糖対担体タンパク質の比は０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ_１９７である。

【0113】

本発明の血清型１２Ｆ複合糖質を調製するためのプロセスは、還元剤の使用を含み得る。具体的には、酸化（具体的には還元的アミノ化を使用する場合、以下を参照）後の未反応のアルデヒド基は、適切なキャッピング剤（還元剤）を使用してキャッピングし得る。一実施形態では、このキャッピング剤は水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である。

【0114】

実施例２に示すように、４ＫＱ（４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン）残基は、ＮａＢＨ_４を使用した還元に対して感受性がある。ＮａＢＨ_４を用いた血清型１２Ｆ多糖の処理は、４ＫＱ残基の位置４をケトン／水和物からアルコールへと特異的に還元し、残基４ＫＱをＤ－ＦｕｃＮＡｃおよびＤ－ＱｕｉＮＡｃの混合物へと変換し、それぞれ図６に例示するように、軸および赤道配向での位置４のヒドロキシルによって特徴づけられる。

【0115】

したがって、一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0116】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0117】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0118】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0119】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0120】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0121】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0122】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0123】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0124】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0125】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0126】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0127】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0128】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0129】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0130】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0131】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0132】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0133】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0134】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0135】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0136】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0137】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0138】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0139】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0140】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0141】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0142】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0143】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0144】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0145】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0146】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0147】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0148】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0149】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0150】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0151】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0152】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0153】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0154】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0155】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0156】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0157】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0158】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0159】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0160】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0161】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0162】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0163】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0164】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0165】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0166】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0167】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0168】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0169】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0170】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0171】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0172】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0173】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0174】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0175】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0176】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0177】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0178】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0179】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0180】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0181】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0182】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0183】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0184】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0185】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0186】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0187】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0188】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0189】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0190】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0191】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0192】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0193】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0194】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0195】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0196】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0197】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0198】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0199】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0200】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0201】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0202】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0203】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0204】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0205】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0206】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0207】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0208】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0209】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0210】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0211】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約４～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0212】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約４～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0213】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約４～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0214】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約４～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0215】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0216】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0217】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0218】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0219】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0220】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0221】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0222】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0223】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１０～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0224】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１０～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0225】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１０～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0226】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約０．１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約０．１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0227】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0228】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0229】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約０．２個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約０．２個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0230】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0231】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0232】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0233】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0234】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0235】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0236】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0237】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0238】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0239】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0240】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１２個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１２個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0241】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0242】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１３個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１３個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0243】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１４個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１４個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0244】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0245】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0246】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む。

【0247】

本発明の血清型１２Ｆ複合糖質および免疫原性組成物は、担体タンパク質と共有的コンジュゲートされていないが、それにもかかわらず複合糖質組成物中に存在する遊離糖を含有し得る。遊離糖は、複合糖質と非共有的に会合（すなわち、非共有的に結合、吸着、またはそれ中もしくはそれを用いて補足）されていてよい。

【0248】

好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質は、血清型１２Ｆ多糖の総量と比較して約５０％未満の遊離血清型１２Ｆ多糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質は、血清型１２Ｆ多糖の総量と比較して約２５％未満の遊離血清型１２Ｆ多糖を含む。さらに好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質は、血清型１２Ｆ多糖の総量と比較して約２０％未満の遊離血清型１２Ｆ多糖を含む。さらに好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質は、血清型１２Ｆ多糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型１２Ｆ多糖を含む。

【0249】

血清型１２Ｆ複合糖質はまた、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によっても特徴づけ得る。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対的分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を重力送りのカラム中において使用して、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングする。媒体中の孔から排除された大分子は小分子よりも素早く溶出される。画分収集器を使用してカラム溶出液を収集する。画分を糖アッセイによって比色試験する。Ｋ_ｄの決定には、カラムを較正して、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を表す画分を確立する。指定した試料特質に到達した画分（Ｖ_ｅ）は、式、Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄに関連する。

【0250】

好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質の少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫ_ｄを有する。好ましい実施形態では、複合糖質の少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫ_ｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質の少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫ_ｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質の５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫ_ｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ複合糖質の６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫ_ｄを有する。

【0251】

担体タンパク質
本開示の複合糖質の別の構成成分は、糖がコンジュゲートされている担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」とは、それに対する免疫応答が所望される抗原（莢膜多糖など）とコンジュゲートさせ得る、任意のタンパク質分子をいう。

【0252】

担体とのコンジュゲーションは、抗原の免疫原性を増強させることができる。抗原のためのタンパク質担体は、毒素、トキソイド、または、破傷風、ジフテリア、百日咳、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、およびストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）からの毒素の任意の突然変異交差反応性材料（ＣＲＭ）であり得る。一実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７タンパク質を産生するジフテリア菌（Ｃ． ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）株Ｃ７（β１９７）由来のＣＲＭ_１９７である。この株はＡＴＣＣ受託番号５３２８１を有する。ＣＲＭ_１９７を生成する方法は、米国特許第５，６１４，３８２に記載されている。あるいは、タンパク質担体または他の免疫原性タンパク質の断片またはエピトープを使用することができる。たとえば、ハプテン抗原を細菌毒素、トキソイド、またはＣＲＭのＴ細胞エピトープとカップリングさせることができる。他の適切な担体タンパク質としては、コレラトキソイド（たとえば国際特許出願ＷＯ２００４／０８３２５１中に記載）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）からの外毒素Ａなどの、失活させた細菌毒素が挙げられる。外膜複合体ｃ（ＯＭＰＣ）、ポリン、トランスフェリン結合タンパク質、ニューモリシン、肺炎球菌表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、またはインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄなどの細菌外膜タンパク質も使用することができる。卵白アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）などの他のタンパク質も、担体タンパク質として使用することができる。

【0253】

好ましい実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質の担体タンパク質は、ＴＴ（破傷風トキソイド）、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）、ＤＴ突然変異体（ＣＲＭ１９７など）、またはストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）からのＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）である。

【0254】

好ましい実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質の担体タンパク質は、ＴＴ（破傷風トキソイド）、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）、ＤＴ突然変異体（ＣＲＭ１９７など）、およびストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）からのＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）からなる群から選択される。

【0255】

一実施形態では、血清型１２Ｆ莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＤＴ（ジフテリアトキソイド）である。別の実施形態では、血清型１２Ｆ莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＴＴ（破傷風トキソイド）である。

【0256】

別の実施形態では、血清型１２Ｆ莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、たとえばＥＰ０５９４６１０ Ｂを参照）である。

【0257】

好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＣＲＭ_１９７である。

【0258】

本明細書中に上述したように、糖とコンジュゲートされる担体タンパク質中のリシン残基の数は、コンジュゲートされたリシンの範囲として特徴づけることができる。たとえば、所定の免疫原性組成物中において、ＣＲＭ_１９７は、３９個のうち１～１５個の糖と共有結合されたリシン残基を含み得る。このパラメータを表す別の方法は、ＣＲＭ_１９７リシンの約２．５％～約４０％が糖と共有結合されていることである。たとえば、所定の免疫原性組成物中において、ＣＲＭ_１９７は、３９個のうち１～２０個の１２Ｆ糖と共有結合されたリシン残基を含み得る。このパラメータを表す別の方法は、ＣＲＭ_１９７リシンの約２．５％～約５０％が１２Ｆ糖と共有結合されていることである。

【0259】

３．本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を作製する方法
一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、還元的アミノ化を使用して調製する。

【0260】

還元的アミノ化は、２つのステップ、すなわち、（１）精製糖を酸化（活性化）するステップと、（２）活性糖および担体タンパク質（たとえば、ＣＲＭ_１９７、ＴＴ、またはＳＣＰ）を還元して複合糖質を形成するステップを含む（たとえば、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／０７９６５３、ＷＯ２００８／１４３７０９、ＷＯ２００８／０７９７３２、ＷＯ２０１１／１１０５３１、ＷＯ２０１２／１１９９７２、ＷＯ２０１５１１０９４１、ＷＯ２０１５１１０９４０、ＷＯ２０１８／１４４４３９、ＷＯ２０１８／１５６４９１を参照）。

【0261】

上述のように、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への多糖のサイジングを行うことができる。

【0262】

したがって、一実施形態では、単離した１２Ｆ多糖を酸化の前にサイジングする。一実施形態では、単離した１２Ｆ多糖を、上記定義した標的分子量（ＭＷ）範囲のうちの任意のものにサイジングする。

【0263】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、ａ）血清型１２Ｆ糖を安定ニトロキシルラジカル化合物および酸化剤と反応させて活性糖を生成するステップと、ｂ）活性糖を担体タンパク質と反応させるステップとを含むプロセスによって調製される。

【0264】

一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯまたはＰＲＯＸＹＬ（２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ）部分を保有する分子である。好ましくは、前記分子は、第二級ヒドロキシル基に影響を与えずに、酸化剤の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化してアルデヒド基を生じる能力を有する。より好ましくは、前記分子は、カルボキシル基への過酸化なしに、酸化剤の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化してアルデヒド基を生じる能力を有する。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ、２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ、４－ホスホノオキシ－ＴＥＭＰＯ、４－オキソ－ＴＥＭＰＯ、４－メトキシ－ＴＥＭＰＯ、４－イソチオシアナト－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ヨードアセトアミド）－ＴＥＭＰＯフリーラジカル、４－ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ、４－シアノ－ＴＥＭＰＯ、４－カルボキシ－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ブロモアセトアミド）－ＴＥＭＰＯまたは４－アミノ－ＴＥＭＰＯ、４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシルである。好ましくは、前記安定ニトロキシルラジカル化合物はＴＥＭＰＯである。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ、２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ、４－ホスホノオキシ－ＴＥＭＰＯ、４－オキソ－ＴＥＭＰＯ、４－メトキシ－ＴＥＭＰＯ、４－イソチオシアナト－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ヨードアセトアミド）－ＴＥＭＰＯフリーラジカル、４－ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ、４－シアノ－ＴＥＭＰＯ、４－カルボキシ－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ブロモアセトアミド）－ＴＥＭＰＯ、４－アミノ－ＴＥＭＰＯ、４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシルからなる群から選択される。好ましくは、前記安定ニトロキシルラジカル化合物はＴＥＭＰＯである。さらなる一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、３β－ＤＯＸＹＬ－５α－コレスタン、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸メチル、３－（アミノメチル）－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－３－ピロリン－１－オキシル、３－カルボキシ－ＰＲＯＸＹＬ、または３－シアノ－ＰＲＯＸＹＬである。さらなる一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、３β－ＤＯＸＹＬ－５α－コレスタン、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸メチル、３－（アミノメチル）－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－３－ピロリン－１－オキシル、３－カルボキシ－ＰＲＯＸＹＬ、３－シアノ－ＰＲＯＸＹＬからなる群から選択される。一態様では、酸化剤は、Ｎ－ハロ部分を保有する分子である。好ましくは、前記分子は、ニトロキシルラジカル化合物の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化する能力を有する。一態様では、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、または１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンである。一態様では、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、および１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンからなる群から選択される。好ましくは、前記酸化剤はＮ－クロロスクシンイミドである。

【0265】

一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ）であり、前記酸化剤はＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である。

【0266】

一態様では、反応のステップａ）は水性溶媒中で実施する。別の態様では、ステップａ）は非プロトン溶媒中で実施する。一態様では、ステップａ）は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、スルホラン、Ｎ－メチル－２－ピロリドン（ＮＭＰ）、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）、またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実施する。一態様では、ステップａ）はＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中で実施する。

【0267】

一態様では、糖を０．１～１０モル当量の酸化剤と反応させる。好ましくは、糖を０．２～５、０．５～２．５、または０．５～１．５モル当量の酸化剤と反応させる。一態様では、多糖を約０．２、０．４、０．６、０．８、１、１．２、１．４、１．６、１．８、２、２．２、２．４、２．６、２．８、３、３．２、３．４、３．６、３．８、４、４．２、４．４、４．６、４．８、または５モル当量の酸化剤と反応させる。

【0268】

一態様では、安定ニトロキシルラジカル化合物は触媒量で存在する。一態様では、糖を約０．３モル当量未満の安定ニトロキシルラジカル化合物と反応させる。一態様では、糖を約０．００５モル当量未満の安定ニトロキシルラジカル化合物と反応させる。一態様では、糖を約０．００５、０．０１、０．０５、または０．１モル当量の安定ニトロキシルラジカル化合物と反応させる。

【0269】

還元反応の終わりに、未反応のアルデヒド基がコンジュゲート中に残っている場合があり、これらは、適切なキャッピング剤を使用してキャッピングし得る。一実施形態では、このキャッピング剤は水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である。

【0270】

一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を０．５～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を１～１５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を０．５～５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を０．７５～３モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を１モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を２モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を３モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。

【0271】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、
（ａ）単離した血清型１２Ｆ多糖を酸化剤と反応させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性多糖を担体タンパク質と混ぜ合わせるステップと、
（ｃ）混ぜ合わせた活性多糖および担体タンパク質を還元剤と反応させて複合糖質を形成するステップと
を含むプロセスによって調製される。

【0272】

一実施形態では、本発明の血清型１２Ｆ複合糖質は、
（ａ）単離した血清型１２Ｆ多糖を酸化剤と反応させるステップと、
（ａ’）反応停止剤の添加によって酸化反応を反応停止させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ’）の活性多糖を担体タンパク質と混ぜ合わせるステップと、
（ｃ）混ぜ合わせた活性多糖および担体タンパク質を還元剤と反応させて複合糖質を形成するステップと
を含むプロセスによって調製される。

【0273】

酸化ステップ（ａ）の後、糖は活性化されたと言われ、「活性多糖」と呼ぶ。

【0274】

一実施形態では、酸化剤は、末端ヒドロキシル基をアルデヒドへと酸化する任意の酸化剤である。一実施形態では、酸化剤はペリオデートである。本発明の目的のために、用語「ペリオデート」はペリオデートおよび過ヨウ素酸をどちらも含む。この用語はまた、メタペリオデート（ＩＯ_４ ^－）およびオルトペリオデート（ＩＯ_６ ^５－）の両方、ならびにペリオデートの様々な塩（たとえば過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。

【0275】

一実施形態では、酸化剤はオルトペリオデートである。

【0276】

好ましい実施形態では、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムである。一実施形態では、酸化に使用するペリオデートはメタペリオデートである。一実施形態では、酸化に使用するペリオデートはメタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0277】

多糖がペリオデートと反応する際、ペリオデートは近接ヒドロキシル基を酸化してカルボニルまたはアルデヒド基を形成し、Ｃ－Ｃ結合の切断を引き起こす。このため、用語「多糖をペリオデートと反応させること」は、ペリオデートによる近接ヒドロキシル基の酸化を含む。

【0278】

一実施形態では、ステップａ）は、多糖を０．０１～２モル当量のペリオデートと反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を０．０５～１．５モル当量のペリオデートと反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を０．１～１．０モル当量のペリオデートと反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を０．０１～０．５モル当量のペリオデートと反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を０．１～０．５モル当量のペリオデートと反応させることを含む。

【0279】

一実施形態では、ステップａ’）の反応停止剤は、近接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、サルファイト、ビサルフェート、ジチオナイト、メタビサルファイト、チオサルフェート、ホスファイト、ハイポホスファイト、または亜リン酸から選択される。

【0280】

一実施形態では、反応停止剤は式（Ｉ）の１，２－アミノアルコールである：

【0281】

【化4】

【0282】

［式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、またはイソプロピルから選択される］。

【0283】

一実施形態では、反応停止剤は、サルファイト、ビサルフェート、ジチオナイト、メタビサルファイト、チオサルフェート、ホスファイト、ハイポホスファイト、または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。

【0284】

一実施形態では、反応停止剤はアミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸は、セリン、スレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択され得る。

【0285】

一実施形態では、反応停止剤は、ビサルフェート、ジチオナイト、メタビサルファイト、チオサルフェートなどのサルファイトである。

【0286】

一実施形態では、反応停止剤は、２つの近接ヒドロキシル基（近接ジオール）、すなわち２つの隣接する炭素原子と共有結合された２つのヒドロキシル基を含む化合物である。

【0287】

好ましくは、反応停止剤は式（ＩＩ）の化合物である：

【0288】

【化5】

【0289】

［式中、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立してＨ、メチル、エチル、プロピル、またはイソプロピルから選択される］。

【0290】

好ましい実施形態では、反応停止剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオール、もしくはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。さらに好ましい実施形態では、反応停止剤はブタン－２，３－ジオールである。

【0291】

好ましい実施形態では、活性血清型１２Ｆ多糖の酸化度合は２～３０である。

【0292】

一実施形態では、還元反応（ｃ）は水性溶媒中で実施する。一実施形態では、還元反応（ｃ）は非プロトン溶媒中で実施する。

【0293】

一実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実施する。一実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実施する。一実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の存在下で実施する。

【0294】

一実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実施する。一実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実施する。一実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実施する。

【0295】

一実施形態では、還元反応（ｃ）はＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド））溶媒中で実施する。一実施形態では、還元反応（ｃ）はＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）溶媒中で実施する。

【0296】

一実施形態では、還元剤は、シアノボロ水素化ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ブロンステッドもしくはルイス酸の存在下における水素化ホウ素ナトリウムもしくは亜鉛、ピリジンボランなどのアミンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅ^ｉＰｒＮ－ＢＨ_３、ベンジルアミン－ＢＨ_３、または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）である。一実施形態では、還元剤はトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムである。好ましい実施形態では、還元剤はシアノボロ水素化ナトリウムである。一実施形態では、還元剤は、ニッケルの存在下におけるシアノボロ水素化ナトリウムである（ＷＯ２０１８１４４４３９を参照）。

【0297】

一実施形態では、１．０～２０モル当量の還元剤をステップｃ）において使用する。一実施形態では、２～１５モル当量の還元剤をステップｃ）において使用する。一実施形態では、５～１５モル当量の還元剤をステップｃ）において使用する。

【0298】

還元反応の終わりに、未反応のアルデヒド基がコンジュゲート中に残っている場合があり、これらは、適切なキャッピング剤を使用してキャッピングし得る。一実施形態では、このキャッピング剤は水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である。

【0299】

一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を１～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を２～１５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。一実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を５～１０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することによって達成する。

【0300】

担体タンパク質とのコンジュゲーションに続いて、複合糖質を、当業者に知られている様々な技法によって精製することができる（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化させる）。これらの技法としては、透析、濃縮／ダイアフィルトレーション操作、接線流濾過沈殿／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、およびデプス濾過が挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明の複合糖質を生成するプロセスは、複合糖質が生成された後にそれを精製するステップを含む。

【0301】

４．免疫原性組成物
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ糖を含む免疫原性組成物に関する。

【0302】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。

【0303】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含み、１～２５個の異なる複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。

【0304】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の様々な血清型（１～２５個の肺炎球菌コンジュゲート）からの１～２５個の複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個の異なる血清型からの複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の１６または２０個の異なる血清型からの複合糖質を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、１４、１５、１６、１７、１８、または１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。

【0305】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の様々な血清型（２６～４５個の肺炎球菌コンジュゲート）からの２６～４５個の複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５個の異なる血清型からの複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の３５または４５個の異なる血清型からの複合糖質を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、４０、４１、４２、４３、４４、または４５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、４０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、４１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、４２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、４３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、４４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、４５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。

【0306】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。

【0307】

一実施形態では、前記免疫原性組成物は、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆからの複合糖質を含む。

【0308】

一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質を含む。

【0309】

一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａからの複合糖質を含む。

【0310】

一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３３Ｆからの複合糖質を含む。

【0311】

一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、および１５Ｂからの複合糖質を含む。

【0312】

一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２からの複合糖質を含む。

【0313】

一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎからの複合糖質を含む。

【0314】

一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆからの複合糖質を含む。

【0315】

一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０からの複合糖質を含む。

【0316】

一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃからの複合糖質を含む。

【0317】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、８価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。

【0318】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。

【0319】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。

【0320】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。

【0321】

一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１４、１５Ｃ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。

【0322】

好ましい実施形態では、糖類は、タンパク質担体の異なる分子とそれぞれ個々にコンジュゲートされている（タンパク質担体のそれぞれの分子は、１種類のみの糖がそれとコンジュゲートされている）。前記実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質と個々にコンジュゲートされていると言われる。好ましくは、上記免疫原性組成物のすべての複合糖質が、担体タンパク質と個々にコンジュゲートされている。

【0323】

上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。

【0324】

上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８からの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃからの複合糖質はＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。

【0325】

上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの複合糖質は、すべて個々にＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている。

【0326】

一実施形態では、上記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の８～２０個の異なる血清型を含む。一実施形態では、上記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の２１～４５個の異なる血清型を含む。

【0327】

本発明の組成物は少量の遊離担体を含み得る。所定の担体タンパク質が本発明の組成物中において遊離およびコンジュゲートされた形態の両方で存在する場合、コンジュゲートされていない形態は、好ましくは、組成物全体中の担体タンパク質の総量５％を超えず、より好ましくは２重量％未満で存在する。

【0328】

本開示の免疫原性組成物は、免疫原性組成物を全身性、真皮、もしくは粘膜の経路を介して投与することによって、たとえば肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細菌による細菌感染症に感染し易いヒトを保護もしくは処置するために使用することができる、または、別の対象に対して受動免疫を与えるために使用することができるポリクローナルもしくはモノクローナル抗体調製物を作製するために使用することができる。これらの投与としては、筋肉内、腹腔内、皮内、もしくは皮下経路を介した注射、または経口／食事性、呼吸器、もしくは尿生殖路への粘膜投与を介したものを挙げることができる。また、免疫原性組成物を使用して、動物有効性モデルまたはオプソニン化貪食作用殺滅アッセイを介したもののいずれかにおける細菌の殺滅によって測定して機能的である抗体も作製し得る。

【0329】

特定の免疫原性組成物のための最適量の構成成分は、対象における適切な免疫応答の観察を含む、標準の研究によって確認することができる。初期ワクチン接種に続いて、対象は、十分な間隔をあけた１回または数回の追加免疫化を受けることができる。

【0330】

一部の実施形態では、本明細書中に開示する免疫原性組成物は、少なくとも１つのアジュバントをさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に開示する免疫原性組成物は、１つのアジュバントをさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に開示する免疫原性組成物は、２つのアジュバントをさらに含み得る。用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫応答を増強させる化合物または混合物をいう。抗原は、主に送達系として作用する、主に免疫モジュレーターとして作用する、または両方の強力な特長を有し得る。適切なアジュバントとしては、ヒトを含む哺乳動物における使用に適したものが挙げられる。

【0331】

ヒトにおいて使用することができる既知の適切な送達系型のアジュバントの例としては、それだけには限定されないが、ミョウバン（たとえば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、ＭＦ５９などの水中油乳濁液（４．３％ｗ／ｖのスクアレン、０．５％ｗ／ｖのポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、０．５％ｗ／ｖのトリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ８５））、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅなどの油中水乳濁液、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子またはナノ粒子が挙げられる。

【0332】

一実施形態では、本明細書中に開示する免疫原性組成物は、アルミニウム塩（ミョウバン）をアジュバントとして含む（たとえば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）。好ましい実施形態では、本明細書中に開示する免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムをアジュバントとして含む。好ましい実施形態では、本明細書中に開示する免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムをアジュバントとして含む。

【0333】

本明細書中に開示した免疫原性組成物の有効性を増強させるための、さらなる例示的なアジュバントとしては、それだけには限定されないが、（１）水中油乳濁液配合物（ムラミルペプチド（以下を参照）または細菌細胞壁構成成分などの他の特異的免疫賦活剤を有するまたは有さない）、たとえば、（ａ）サブミクロン乳濁液へと微小流動化した、または渦攪拌してより大きな粒径の乳濁液を作製したかのどちらかの、１０％のスクアレン、０．４％のＴｗｅｅｎ ８０、５％のプルロニック（登録商標）－ブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ、ならびに（ｂ）２％のスクアレン、０．２％のＴｗｅｅｎ ８０、および、モノホスホリリピドＡ（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｉｐｉｄ Ａ）（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））などの１つまたは複数の細菌細胞壁構成成分を含有する、ＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、モンタナ州Ｈａｍｉｌｔｏｎ）、（２）ＱＳ２１、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、マサチューセッツ州Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ）、ＡＢＩＳＣＯ（登録商標）（スウェーデンＩｓｃｏｎｏｖａ）、またはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（登録商標）（Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｓｅｒｕｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、オーストラリア）などのサポニンアジュバントを使用し得る、またはＩＳＣＯＭ（免疫賦活複合体）などのそれから作製した粒子（ＩＳＣＯＭＳは追加の洗剤を欠き得る）（たとえばＷＯ００／０７６２１）、（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、（４）インターロイキン（たとえば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２（たとえばＷＯ９９／４４６３６））、インターフェロン（たとえばガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカイン、（５）モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（たとえば、ＧＢ－２２２０２２１、ＥＰ０６８９４５４を参照）、任意選択で、肺炎球菌糖類と共に使用した場合はミョウバンの実質的な非存在下（たとえばＷＯ００／５６３５８を参照）、（６）３ｄＭＰＬとたとえばＱＳ２１および／または水中油乳濁液との組合せ（たとえば、ＥＰ０８３５３１８、ＥＰ０７３５８９８、ＥＰ０７６１２３１を参照）、（７）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（たとえばＷＯ９９／５２５４９を参照）、（８）ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤とオクトキシノールとの組合せ（たとえばＷＯ０１／２１２０７）またはポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤とオクトキシノールなどの少なくとも１つの追加の非イオン性界面活性剤との組合せ（たとえばＷＯ０１／２１１５２）、（９）サポニンおよび免疫賦活性オリゴヌクレオチド（たとえばＣｐＧオリゴヌクレオチド）（たとえばＷＯ００／６２８００）、（１０）免疫賦活剤および金属塩粒子（たとえばＷＯ００／２３１０５を参照）、（１１）サポニンおよび水中油乳濁液（たとえばＷＯ９９／１１２４１）、（１２）サポニン（たとえばＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（任意選択で＋ステロール）（たとえばＷＯ９８／５７６５９）、（１３）組成物の有効性を増強させるための免疫賦活剤として作用する他の物質が挙げられる。ムラミルペプチドとしては、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－２５アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミンＭＴＰ－ＰＥ）などが挙げられる。

【0334】

本発明の一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドをアジュバントとして含む。本明細書中で使用するＣｐＧオリゴヌクレオチドとは免疫賦活性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）をいい、したがって、別段に指定しない限りは、これらの用語は互換性があるように使用される。免疫賦活性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、非メチル化シトシン－グアニンジヌクレオチドである１つまたは複数の免疫賦活性ＣｐＧモチーフを含有し、任意選択で特定の好ましい塩基コンテキスト内である。ＣｐＧ免疫賦活性モチーフのメチル化状態とは、一般に、ジヌクレオチド中のシトシン残基をいう。少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、リン酸結合によって３’グアニンと連結された５’非メチル化シトシンを含有し、トール様受容体９（ＴＬＲ－９）との結合を通じて免疫系を活性化させる、オリゴヌクレオチドである。別の実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ９を通じて免疫系を活性化させるが、ＣｐＧモチーフがメチル化されていない場合ほどは活性化が強力でない、１つまたは複数のメチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有し得る。ＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の回文構造を含む場合があり、立ち代ってこれがＣｐＧジヌクレオチドを包含する場合がある。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、米国特許第６，１９４，３８８、第６，２０７，６４６、第６，２１４，８０６、第６，２１８，３７１、第６，２３９，１１６、および第６，３３９，０６８を含む、いくつかの発行された特許、公開された特許出願、および他の刊行物中に記載されている。

【0335】

５．本発明の免疫原性組成物の使用
本明細書中に開示する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ糖または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質は抗原として使用し得る。たとえば、これらはワクチンの一部であり得る。

【0336】

したがって、一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、医薬品として使用するためのものである。

【0337】

一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。

【0338】

したがって、一実施形態では、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において免疫応答を生じさせることにおいて使用するためのものである。一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象はヒトである。

【0339】

本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において細菌感染症、疾患、または状態を防止、処置、または軽快させるための治療的または予防的方法において使用し得る。具体的には、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ感染症、疾患、または状態を防止、処置、または軽快させるために使用し得る。

【0340】

したがって、一態様では、本開示は、対象に、免疫学的に有効な量の本開示の免疫原性組成物を投与することを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに関連する感染症、疾患、または状態を防止、処置、または軽快させる方法を提供する。

【0341】

一部のそのような実施形態では、感染症、疾患、または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、または脳膿瘍である。

【0342】

一部のそのような実施形態では、感染症、疾患、または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、および脳膿瘍からなる群から選択される。

【0343】

一実施形態では、本開示は、対象に、免疫学的に有効な量の本発明の免疫原性組成物を投与することを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに対する免疫応答を誘導する方法を提供する。一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象はヒトである。

【0344】

一実施形態では、本明細書中に開示する免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。そのような実施形態では、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ感染症を防止するために使用し得る。したがって、一態様では、本発明は、対象に、免疫学的に有効な量の本開示の免疫原性組成物を投与することを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆによる感染症を防止する方法を提供する。一部のそのような実施形態では、感染症は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、または脳膿瘍である。一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象はヒトである。一部のそのような実施形態では、感染症は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、および脳膿瘍からなる群から選択される。一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象はヒトである。

【0345】

本開示の免疫原性組成物は、免疫原性組成物を全身性または粘膜の経路を介して投与することによって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ感染症に感染し易いヒトを保護または処置するために使用することができる。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内、または皮下経路によって投与する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内、または皮下注射によって投与する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内または皮下注射によって投与する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は筋肉内注射によって投与する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は皮下注射によって投与する。

【0346】

６．分析方法
一実施形態では、本発明は、ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を単離するステップと、ｂ）前記多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在を検出するステップとを含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在を検出する方法に関する。

【0347】

一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、ＮＭＲまたは質量分析（ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、１Ｄ ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、１Ｄ ^１Ｈまたは１Ｄ ^１３Ｃ ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、２Ｄ ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、異核種単一量子コヒーレンス分光法（ＨＳＱＣ）、異核種多量子相関分光法（ＨＭＢＣ）、核オーバーハウザー効果分光法（ＮＯＥＳＹ）、相関分光法（ＣＯＳＹ）、全相関分光法（ＴＯＣＳＹ）、または異核種単一量子コヒーレンス分光法－全相関分光法（ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ）によって検出する。

【0348】

一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、１Ｄ ^１Ｈ、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス分光法（ＨＳＱＣ）、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ異核種多量子相関分光法（ＨＭＢＣ）、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ核オーバーハウザー効果分光法（ＮＯＥＳＹ）、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ相関分光法（ＣＯＳＹ）、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ全相関分光法（ＴＯＣＳＹ）、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス分光法－全相関分光法（ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ）、または１Ｄ ^１３Ｃ ＮＭＲによって検出する。

【0349】

好ましい実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、１Ｄ ^１Ｈ、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス分光法（ＨＳＱＣ）、または１Ｄ ^１３Ｃ ＮＭＲによって検出する。

【0350】

一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス分光法（ＨＳＱＣ）によって検出する。

【0351】

一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、質量分析（ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、タンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）、またはイオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳもしくはＩＭＭＳ）によって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、サイズ排除クロマトグラフィーと質量分析（ＳＥＣ／ＭＳ）との組合せによって検出する。

【0352】

一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、イオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＩＬＩＣ－ＬＣ／ＭＳ）によって検出する。

【0353】

一実施形態では、本発明は、ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を単離するステップと、ｂ）前記多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量を測定するステップとを含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量を決定する方法に関する。

【0354】

一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、ＮＭＲによって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、１Ｄ ＮＭＲによって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、１Ｄ ^１Ｈまたは１Ｄ ^１３Ｃ ＮＭＲによって決定する。好ましい実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、１Ｄ ^１Ｈ ＮＭＲによって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、１Ｄ ^１Ｈスペクトルの積分または逆重畳によって決定する。

【0355】

一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、２Ｄ ＮＭＲによって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣスペクトルのクロスピーク積分によって決定する。

【0356】

一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、質量分析（ＭＳ）によって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、タンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）によって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）、またはイオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳもしくはＩＭＭＳ）によって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、サイズ排除クロマトグラフィーと質量分析（ＳＥＣ／ＭＳ）との組合せによって決定する。

【0357】

一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）によって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）によって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、イオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳ）によって決定する。一実施形態では、４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＩＬＩＣ－ＬＣ／ＭＳ）によって決定する。

【0358】

一実施形態では、本発明は、ａ）単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を還元剤と反応させるステップと、ｂ）前記還元多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、還元血清型１２Ｆ多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出する方法に関する。

【0359】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ＮＭＲによって検出する。

【0360】

好ましい実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ ＮＭＲによって検出する。

【0361】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、質量分析（ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、タンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）、またはイオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳもしくはＩＭＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、サイズ排除クロマトグラフィーと質量分析（ＳＥＣ／ＭＳ）との組合せによって検出する。

【0362】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、イオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＩＬＩＣ－ＬＣ／ＭＳ）によって検出する。

【0363】

一実施形態では、前記還元剤は水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である。

【0364】

一実施形態では、前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖は、酸化剤で前もって処理されている。一実施形態では、酸化剤は、末端ヒドロキシル基をアルデヒドへと酸化する任意の酸化剤である。一実施形態では、酸化剤はペリオデートである。一実施形態では、酸化剤はオルトペリオデートである。好ましい実施形態では、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムである。一実施形態では、酸化剤はメタペリオデートである。好ましい実施形態では、酸化剤はメタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0365】

一実施形態では、前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖は、安定ニトロキシルラジカル化合物および酸化剤で前もって処理されている。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯまたはＰＲＯＸＹＬ（２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ）部分を保有する分子である。好ましくは、前記分子は、第二級ヒドロキシル基に影響を与えずに、酸化剤の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化してアルデヒド基を生じる能力を有する。より好ましくは、前記分子は、カルボキシル基への過酸化なしに、酸化剤の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化してアルデヒド基を生じる能力を有する。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ、２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ、４－ホスホノオキシ－ＴＥＭＰＯ、４－オキソ－ＴＥＭＰＯ、４－メトキシ－ＴＥＭＰＯ、４－イソチオシアナト－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ヨードアセトアミド）－ＴＥＭＰＯフリーラジカル、４－ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ、４－シアノ－ＴＥＭＰＯ、４－カルボキシ－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ブロモアセトアミド）－ＴＥＭＰＯ、４－アミノ－ＴＥＭＰＯ、または４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシルである。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ、２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ、４－ホスホノオキシ－ＴＥＭＰＯ、４－オキソ－ＴＥＭＰＯ、４－メトキシ－ＴＥＭＰＯ、４－イソチオシアナト－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ヨードアセトアミド）－ＴＥＭＰＯフリーラジカル、４－ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ、４－シアノ－ＴＥＭＰＯ、４－カルボキシ－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ブロモアセトアミド）－ＴＥＭＰＯ、４－アミノ－ＴＥＭＰＯ、４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシルからなる群から選択される。好ましくは、前記安定ニトロキシルラジカル化合物はＴＥＭＰＯである。さらなる一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、３β－ＤＯＸＹＬ－５α－コレスタン、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸メチル、３－（アミノメチル）－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－３－ピロリン－１－オキシル、３－カルボキシ－ＰＲＯＸＹＬ、または３－シアノ－ＰＲＯＸＹＬである。さらなる一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、３β－ＤＯＸＹＬ－５α－コレスタン、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸メチル、３－（アミノメチル）－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－３－ピロリン－１－オキシル、３－カルボキシ－ＰＲＯＸＹＬ、３－シアノ－ＰＲＯＸＹＬからなる群から選択される。一態様では、酸化剤は、Ｎ－ハロ部分を保有する分子である。好ましくは、前記分子は、ニトロキシルラジカル化合物の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化する能力を有する。一態様では、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、または１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンである。一態様では、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、および１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンからなる群から選択される。好ましくは、前記酸化剤はＮ－クロロスクシンイミドである。

【0366】

一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ）であり、前記酸化剤はＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である。

【0367】

一実施形態では、本発明は、ａ）単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を還元剤と反応させるステップと、ｂ）前記還元多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、還元血清型１２Ｆ多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法に関する。

【0368】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ＮＭＲによって検出する。

【0369】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、異核種単一量子コヒーレンス分光法（ＨＳＱＣ）、異核種多量子相関分光法（ＨＭＢＣ）、相関分光法（ＣＯＳＹ）、および／または異核種単一量子コヒーレンス分光法－全相関分光法（ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ）によって検出する。

【0370】

好ましい実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ ＮＭＲによって検出する。

【0371】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、質量分析（ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、タンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）、またはイオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳもしくはＩＭＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、サイズ排除クロマトグラフィーと質量分析（ＳＥＣ／ＭＳ）との組合せによって検出する。

【0372】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、イオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＩＬＩＣ－ＬＣ／ＭＳ）によって検出する。

【0373】

一実施形態では、前記還元剤は水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である。

【0374】

一実施形態では、前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖は、酸化剤で前もって処理されている。一実施形態では、酸化剤は、末端ヒドロキシル基をアルデヒドへと酸化する任意の酸化剤である。一実施形態では、酸化剤はペリオデートである。一実施形態では、酸化剤はオルトペリオデートである。好ましい実施形態では、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムである。一実施形態では、酸化剤はメタペリオデートである。好ましい実施形態では、酸化剤はメタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0375】

一実施形態では、前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖は、安定ニトロキシルラジカル化合物および酸化剤で前もって処理されている。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯまたはＰＲＯＸＹＬ（２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ）部分を保有する分子である。好ましくは、前記分子は、第二級ヒドロキシル基に影響を与えずに、酸化剤の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化してアルデヒド基を生じる能力を有する。より好ましくは、前記分子は、カルボキシル基への過酸化なしに、酸化剤の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化してアルデヒド基を生じる能力を有する。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ、２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ、４－ホスホノオキシ－ＴＥＭＰＯ、４－オキソ－ＴＥＭＰＯ、４－メトキシ－ＴＥＭＰＯ、４－イソチオシアナト－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ヨードアセトアミド）－ＴＥＭＰＯフリーラジカル、４－ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ、４－シアノ－ＴＥＭＰＯ、４－カルボキシ－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ブロモアセトアミド）－ＴＥＭＰＯ、４－アミノ－ＴＥＭＰＯ、または４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシルである。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ、２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ、４－ホスホノオキシ－ＴＥＭＰＯ、４－オキソ－ＴＥＭＰＯ、４－メトキシ－ＴＥＭＰＯ、４－イソチオシアナト－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ヨードアセトアミド）－ＴＥＭＰＯフリーラジカル、４－ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ、４－シアノ－ＴＥＭＰＯ、４－カルボキシ－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ブロモアセトアミド）－ＴＥＭＰＯ、４－アミノ－ＴＥＭＰＯ、４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシルからなる群から選択される。好ましくは、前記安定ニトロキシルラジカル化合物はＴＥＭＰＯである。さらなる一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、３β－ＤＯＸＹＬ－５α－コレスタン、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸メチル、３－（アミノメチル）－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－３－ピロリン－１－オキシル、３－カルボキシ－ＰＲＯＸＹＬ、または３－シアノ－ＰＲＯＸＹＬである。さらなる一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、３β－ＤＯＸＹＬ－５α－コレスタン、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸メチル、３－（アミノメチル）－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－３－ピロリン－１－オキシル、３－カルボキシ－ＰＲＯＸＹＬ、３－シアノ－ＰＲＯＸＹＬからなる群から選択される。一態様では、酸化剤は、Ｎ－ハロ部分を保有する分子である。好ましくは、前記分子は、ニトロキシルラジカル化合物の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化する能力を有する。一態様では、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、または１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンである。一態様では、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、および１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンからなる群から選択される。好ましくは、前記酸化剤はＮ－クロロスクシンイミドである。

【0376】

一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ）であり、前記酸化剤はＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である。

【0377】

一実施形態では、本発明は、ａ）単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を還元剤と反応させるステップと、ｂ）前記還元多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、還元血清型１２Ｆ多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法に関する。

【0378】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ＮＭＲによって検出する。

【0379】

好ましい実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ－ＮＭＲによって検出する。

【0380】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、質量分析（ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、タンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）、またはイオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳもしくはＩＭＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、サイズ排除クロマトグラフィーと質量分析（ＳＥＣ／ＭＳ）との組合せによって検出する。

【0381】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、イオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＩＬＩＣ－ＬＣ／ＭＳ）によって検出する。

【0382】

一実施形態では、前記還元剤は水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である。

【0383】

一実施形態では、前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖は、酸化剤で前もって処理されている。一実施形態では、酸化剤は、末端ヒドロキシル基をアルデヒドへと酸化する任意の酸化剤である。一実施形態では、酸化剤はペリオデートである。一実施形態では、酸化剤はオルトペリオデートである。好ましい実施形態では、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムである。一実施形態では、酸化剤はメタペリオデートである。好ましい実施形態では、酸化剤はメタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0384】

一実施形態では、前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖は、安定ニトロキシルラジカル化合物および酸化剤で前もって処理されている。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯまたはＰＲＯＸＹＬ（２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ）部分を保有する分子である。好ましくは、前記分子は、第二級ヒドロキシル基に影響を与えずに、酸化剤の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化してアルデヒド基を生じる能力を有する。より好ましくは、前記分子は、カルボキシル基への過酸化なしに、酸化剤の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化してアルデヒド基を生じる能力を有する。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ、２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ、４－ホスホノオキシ－ＴＥＭＰＯ、４－オキソ－ＴＥＭＰＯ、４－メトキシ－ＴＥＭＰＯ、４－イソチオシアナト－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ヨードアセトアミド）－ＴＥＭＰＯフリーラジカル、４－ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ、４－シアノ－ＴＥＭＰＯ、４－カルボキシ－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ブロモアセトアミド）－ＴＥＭＰＯ、４－アミノ－ＴＥＭＰＯ、または４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシルである。一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ、２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ、４－ホスホノオキシ－ＴＥＭＰＯ、４－オキソ－ＴＥＭＰＯ、４－メトキシ－ＴＥＭＰＯ、４－イソチオシアナト－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ヨードアセトアミド）－ＴＥＭＰＯフリーラジカル、４－ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ、４－シアノ－ＴＥＭＰＯ、４－カルボキシ－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ブロモアセトアミド）－ＴＥＭＰＯ、４－アミノ－ＴＥＭＰＯ、４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシルからなる群から選択される。好ましくは、前記安定ニトロキシルラジカル化合物はＴＥＭＰＯである。さらなる一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、３β－ＤＯＸＹＬ－５α－コレスタン、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸メチル、３－（アミノメチル）－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－３－ピロリン－１－オキシル、３－カルボキシ－ＰＲＯＸＹＬ、または３－シアノ－ＰＲＯＸＹＬである。さらなる一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は、３β－ＤＯＸＹＬ－５α－コレスタン、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸、５－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸メチル、３－（アミノメチル）－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－ＰＲＯＸＹＬ、３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－３－ピロリン－１－オキシル、３－カルボキシ－ＰＲＯＸＹＬ、３－シアノ－ＰＲＯＸＹＬからなる群から選択される。一態様では、酸化剤は、Ｎ－ハロ部分を保有する分子である。好ましくは、前記分子は、ニトロキシルラジカル化合物の存在下で第一級アルコールを選択的に酸化する能力を有する。一態様では、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、または１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンである。一態様では、前記酸化剤は、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、および１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンからなる群から選択される。好ましくは、前記酸化剤はＮ－クロロスクシンイミドである。

【0385】

一態様では、前記安定ニトロキシルラジカル化合物は２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ）であり、前記酸化剤はＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である。

【0386】

一実施形態では、本発明は、ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法に関する。

【0387】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ＮＭＲによって検出する。

【0388】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、異核種単一量子コヒーレンス分光法（ＨＳＱＣ）、異核種多量子相関分光法（ＨＭＢＣ）、相関分光法（ＣＯＳＹ）、および／または異核種単一量子コヒーレンス分光法－全相関分光法（ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ）によって検出する。

【0389】

好ましい実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ ＮＭＲによって検出する。

【0390】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、質量分析（ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、タンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）、またはイオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳもしくはＩＭＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、サイズ排除クロマトグラフィーと質量分析（ＳＥＣ／ＭＳ）との組合せによって検出する。

【0391】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、イオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＩＬＩＣ－ＬＣ／ＭＳ）によって検出する。

【0392】

一実施形態では、本発明は、ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法に関する。

【0393】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ＮＭＲによって検出する。

【0394】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、異核種単一量子コヒーレンス分光法（ＨＳＱＣ）、異核種多量子相関分光法（ＨＭＢＣ）、相関分光法（ＣＯＳＹ）、および／または異核種単一量子コヒーレンス分光法－全相関分光法（ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ）によって検出する。

【0395】

好ましい実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ ＮＭＲによって検出する。

【0396】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、質量分析（ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、タンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）、またはイオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳもしくはＩＭＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、サイズ排除クロマトグラフィーと質量分析（ＳＥＣ／ＭＳ）との組合せによって検出する。

【0397】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、イオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＩＬＩＣ－ＬＣ／ＭＳ）によって検出する。

【0398】

一実施形態では、本発明は、ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出する方法に関する。

【0399】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ＮＭＲによって検出する。

【0400】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、異核種単一量子コヒーレンス分光法（ＨＳＱＣ）、異核種多量子相関分光法（ＨＭＢＣ）、相関分光法（ＣＯＳＹ）、および／または異核種単一量子コヒーレンス分光法－全相関分光法（ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ）によって検出する。

【0401】

好ましい実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ ＮＭＲによって検出する。

【0402】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、質量分析（ＭＳ）によって検出する。Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、タンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）、またはイオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳもしくはＩＭＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、サイズ排除クロマトグラフィーと質量分析（ＳＥＣ／ＭＳ）との組合せによって検出する。

【0403】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、イオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＩＬＩＣ－ＬＣ／ＭＳ）によって検出する。

【0404】

一実施形態では、本発明は、ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法に関する。

【0405】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ＮＭＲによって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ＮＭＲによって検出する。

【0406】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、異核種単一量子コヒーレンス分光法（ＨＳＱＣ）、異核種多量子相関分光法（ＨＭＢＣ）、相関分光法（ＣＯＳＹ）、および／または異核種単一量子コヒーレンス分光法－全相関分光法（ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ）によって検出する。

【0407】

好ましい実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、２Ｄ ^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ ＮＭＲによって検出する。

【0408】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、質量分析（ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、タンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）、またはイオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳもしくはＩＭＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、サイズ排除クロマトグラフィーと質量分析（ＳＥＣ／ＭＳ）との組合せによって検出する。

【0409】

一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、キャピラリー電気泳動質量分析（ＣＥ－ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、イオン移動度分光測定－質量分析（ＩＭＳ／ＭＳ）によって検出する。一実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＩＬＩＣ－ＬＣ／ＭＳ）によって検出する。

【0410】

７．本発明はまた、以下の付番された段落１～２９６中に定義される以下の実施形態も提供する。
１．以下の反復単位を有する単離多糖：

【0411】

【化6】

［式中、ｎは反復単位の数を表し、Ｘは、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたは４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミンのどちらかを表す］。

【0412】

２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0413】

３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0414】

４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．１～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．９～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0415】

５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0416】

６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0417】

７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0418】

８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0419】

９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．１～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．９～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0420】

１０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0421】

１１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0422】

１２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0423】

１３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0424】

１４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９９．５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約０．５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0425】

１５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９９個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約１個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0426】

１６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９８個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約２個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0427】

１７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８～約９９．５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２～約０．５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0428】

１８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８～約９９個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２～約１個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0429】

１９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0430】

２０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0431】

２１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約８０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約２０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0432】

２２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、段落１に記載の単離多糖。

【0433】

２３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0434】

２４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0435】

２５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0436】

２６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0437】

２７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0438】

２８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0439】

２９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９５～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約５～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0440】

３０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約５０個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約５０個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0441】

３１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約５５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約４５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0442】

３２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９０～約７５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約１０～約２５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0443】

３３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９９．５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約０．５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0444】

３４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．９～約９９個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．１～約１個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0445】

３５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約９９．８～約９９．５個のＮ－アセチルガラクトサミン残基および約０．２～約０．５個の４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基を含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ莢膜多糖。

【0446】

３６．１０～５，０００個の反復単位を有する、段落１～３５のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0447】

３７．５０～４，５００個の反復単位を有する、段落１～３５のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0448】

３８．１００～４，５００個の反復単位を有する、段落１～３５のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0449】

３９．１５０～２，０００個の反復単位を有する、段落１～３５のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0450】

４０．重量平均分子量５ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0451】

４１．重量平均分子量５ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0452】

４２．重量平均分子量５０ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0453】

４３．重量平均分子量５０ｋＤａ～３００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0454】

４４．重量平均分子量１００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0455】

４５．重量平均分子量１００ｋＤａ～３００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0456】

４６．重量平均分子量２００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0457】

４７．重量平均分子量２００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0458】

４８．前記単離した莢膜多糖が重量平均分子量３００ｋＤａ～４００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0459】

４９．前記単離した莢膜多糖が重量平均分子量１００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する、段落１～３９のいずれか一項に記載の単離多糖。

【0460】

５０．ａ）段落１～４９のいずれか一項に記載の単離多糖を活性化剤と反応させて活性糖を生成するステップと、ｂ）活性糖を担体タンパク質と反応させるステップとを含むプロセスによって調製した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0461】

５１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0462】

５２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0463】

５３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0464】

５４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0465】

５５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0466】

５６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0467】

５７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0468】

５８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0469】

５９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0470】

６０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0471】

６１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0472】

６２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0473】

６３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0474】

６４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0475】

６５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0476】

６６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0477】

６７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0478】

６８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0479】

６９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0480】

７０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0481】

７１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0482】

７２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0483】

７３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0484】

７４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0485】

７５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0486】

７６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0487】

７７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0488】

７８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0489】

７９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0490】

８０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0491】

８１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0492】

８２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0493】

８３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0494】

８４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0495】

８５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0496】

８６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0497】

８７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0498】

８８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0499】

８９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0500】

９０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0501】

９１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0502】

９２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0503】

９３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0504】

９４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0505】

９５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0506】

９６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0507】

９７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0508】

９８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0509】

９９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0510】

１００．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0511】

１０１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0512】

１０２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0513】

１０３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0514】

１０４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0515】

１０５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0516】

１０６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0517】

１０７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0518】

１０８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む血清型１２Ｆ複合糖質。

【0519】

１０９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0520】

１１０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0521】

１１１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0522】

１１２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0523】

１１３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0524】

１１４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0525】

１１５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0526】

１１６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0527】

１１７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0528】

１１８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0529】

１１９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0530】

１２０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0531】

１２１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0532】

１２２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0533】

１２３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0534】

１２４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0535】

１２５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0536】

１２６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0537】

１２７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0538】

１２８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0539】

１２９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0540】

１３０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0541】

１３１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0542】

１３２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0543】

１３３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0544】

１３４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0545】

１３５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0546】

１３６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0547】

１３７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0548】

１３８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0549】

１３９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0550】

１４０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0551】

１４１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0552】

１４２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0553】

１４３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0554】

１４４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0555】

１４５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0556】

１４６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0557】

１４７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約４～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0558】

１４８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約４～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0559】

１４９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約４～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0560】

１５０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約４～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約４～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0561】

１５１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0562】

１５２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0563】

１５３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0564】

１５４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0565】

１５５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７．５～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0566】

１５６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７．５～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0567】

１５７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７．５～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0568】

１５８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７．５～約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0569】

１５９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１０～約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0570】

１６０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１０～約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0571】

１６１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１０～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１０～約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0572】

１６２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約０．１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約０．１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0573】

１６３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0574】

１６４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５～約１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５～約１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0575】

１６５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約０．２個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約０．２個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0576】

１６６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0577】

１６７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１～約１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１～約１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0578】

１６８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．０５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．０５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0579】

１６９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0580】

１７０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約０．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0581】

１７１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0582】

１７２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0583】

１７３．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約３個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約３個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0584】

１７４．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0585】

１７５．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約７個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約７個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0586】

１７６．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１２個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１２個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0587】

１７７．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0588】

１７８．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１３個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１３個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0589】

１７９．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１４個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１４個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0590】

１８０．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約１５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0591】

１８１．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２２．５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0592】

１８２．多糖の１００個の糖反復単位ごとに約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基および約２５個のＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）を含む血清型１２Ｆ莢膜多糖を含む肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質。

【0593】

１８３．血清型１２Ｆ多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａである、段落５０～１８２のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0594】

１８４．血清型１２Ｆ多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１００ｋＤａ～６００ｋＤａである、段落５０～１８２のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0595】

１８５．血清型１２Ｆ多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１５０ｋＤａ～４００ｋＤａである、段落５０～１８２のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0596】

１８６．２５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、段落５０～１８５のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0597】

１８７．５００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、段落５０～１８５のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0598】

１８８．１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、段落５０～１８５のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0599】

１８９．コンジュゲーション度合が２～１５である、段落５０～１８８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0600】

１９０．コンジュゲーション度合が２～１０である、段落５０～１８８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0601】

１９１．コンジュゲーション度合が２～６である、段落５０～１８８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0602】

１９２．コンジュゲーション度合が３～５である、段落５０～１８８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0603】

１９３．コンジュゲーション度合が４～１０である、段落５０～１８８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0604】

１９４．複合糖質中の血清型１２Ｆ多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）が０．５～３．０である、段落５０～１９３のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0605】

１９５．複合糖質中の血清型１２Ｆ多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）が０．５～２．０である、段落５０～１９３のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0606】

１９６．複合糖質中の血清型１２Ｆ多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）が０．５～１．５である、段落５０～１９３のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0607】

１９７．複合糖質中の血清型１２Ｆ多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）が０．８～１．２である、段落５０～１９３のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0608】

１９８．複合糖質中の血清型１２Ｆ多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）が０．５～１．０である、段落５０～１９３のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0609】

１９９．複合糖質中の血清型１２Ｆ多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）が１．０～１．５である、段落５０～１９３のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0610】

２００．複合糖質中の血清型１２Ｆ多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）が０．９～１．１である、段落５０～１９３のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0611】

２０１．血清型１２Ｆ多糖の総量と比較して約５０％未満の遊離血清型１２Ｆ多糖を含む、段落５０～２００のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0612】

２０２．血清型１２Ｆ多糖の総量と比較して約２５％未満の遊離血清型１２Ｆ多糖を含む、段落５０～２００のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0613】

２０３．血清型１２Ｆ多糖の総量と比較して約２０％未満の遊離血清型１２Ｆ多糖を含む、段落５０～２００のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0614】

２０４．血清型１２Ｆ多糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型１２Ｆ多糖を含む、段落５０～２００のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0615】

２０５．血清型１２Ｆ複合糖質の少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫ_ｄを有する、段落５０～２０４のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0616】

２０６．血清型１２Ｆ複合糖質の少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫ_ｄを有する、段落５０～２０４のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0617】

２０７．血清型１２Ｆ複合糖質の５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫ_ｄを有する、段落５０～２０４のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0618】

２０８．血清型１２Ｆ複合糖質の６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫ_ｄを有する、段落５０～２０４のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0619】

２０９．複合糖質の担体タンパク質が、ＴＴ（破傷風トキソイド）、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）、ＤＴ突然変異体（ＣＲＭ_１９７など）、およびストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）からのＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）からなる群から選択される、段落５０～２０８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0620】

２１０．複合糖質の担体タンパク質がＤＴ（ジフテリアトキソイド）である、段落５０～２０８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0621】

２１１．複合糖質の担体タンパク質がＴＴ（破傷風トキソイド）である、段落５０～２０８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0622】

２１２．複合糖質の担体タンパク質がＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ）である、段落５０～２０８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0623】

２１３．複合糖質の担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、段落５０～２０８のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0624】

２１４．ＣＲＭ_１９７が、３９個のうち１～１５個の糖と共有結合されたリシン残基を含む、段落２１３に記載の複合糖質。

【0625】

２１５．ＣＲＭ_１９７が、３９個のうち１～２０個の糖と共有結合されたリシン残基を含む、段落２１３に記載の複合糖質。

【0626】

２１６．還元的アミノ化を使用して調製する、段落５０～２１５のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0627】

２１７．酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への多糖のサイジングを行う、段落２１６に記載の複合糖質。

【0628】

２１８．ａ）血清型１２Ｆ糖を安定ニトロキシルラジカル化合物および酸化剤と反応させて活性糖を生成するステップと、ｂ）活性糖を担体タンパク質と反応させるステップとを含むプロセスによって調製される、段落５０～２１７のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0629】

２１９．前記安定ニトロキシルラジカル化合物が、ＴＥＭＰＯまたはＰＲＯＸＹＬ（２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ）部分を保有する分子である、段落２１８に記載の複合糖質。

【0630】

２２０．前記安定ニトロキシルラジカル化合物が、ＴＥＭＰＯ、２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ、４－ホスホノオキシ－ＴＥＭＰＯ、４－オキソ－ＴＥＭＰＯ、４－メトキシ－ＴＥＭＰＯ、４－イソチオシアナト－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ヨードアセトアミド）－ＴＥＭＰＯフリーラジカル、４－ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ、４－シアノ－ＴＥＭＰＯ、４－カルボキシ－ＴＥＭＰＯ、４－（２－ブロモアセトアミド）－ＴＥＭＰＯ、４－アミノ－ＴＥＭＰＯ、４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシルからなる群から選択される、段落２１８に記載の複合糖質。

【0631】

２２１．前記安定ニトロキシルラジカル化合物がＴＥＭＰＯである、段落２１８に記載の複合糖質。

【0632】

２２２．前記酸化剤が、Ｎ－ハロ部分を保有する分子である、段落２１８～２２１のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0633】

２２３．前記酸化剤が、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸、および１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンからなる群から選択される、段落２１８～２２１のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0634】

２２４．前記酸化剤がＮ－クロロスクシンイミドである、段落２１８～２２１のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0635】

２２５．前記安定ニトロキシルラジカル化合物が２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ）であり、前記酸化剤がＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である、段落２１８に記載の複合糖質。

【0636】

２２６．還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残っている未反応のアルデヒド基を、キャッピング剤を使用してキャッピングする、段落２１８～２２５のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0637】

２２７．前記キャッピング剤が水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である、段落２２６に記載の複合糖質。

【0638】

２２８．（ａ）単離した血清型１２Ｆ多糖を酸化剤と反応させるステップと、（ｂ）ステップ（ａ）の活性多糖を担体タンパク質と混ぜ合わせるステップと、（ｃ）混ぜ合わせた活性多糖および担体タンパク質を還元剤と反応させて複合糖質を形成するステップとを含むプロセスによって調製される、段落５０～２１７のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0639】

２２９．（ａ）単離した血清型１２Ｆ多糖を酸化剤と反応させるステップと、（ａ’）反応停止剤の添加によって酸化反応を反応停止させるステップと、（ｂ）ステップ（ａ’）の活性多糖を担体タンパク質と混ぜ合わせるステップと、（ｃ）混ぜ合わせた活性多糖および担体タンパク質を還元剤と反応させて複合糖質を形成するステップとを含むプロセスによって調製される、段落５０～２１７のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0640】

２３０．前記酸化剤がペリオデートである、段落２２８～２２９のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0641】

２３１．活性血清型１２Ｆ多糖の酸化度合が２～３０である、段落２２８～２３０のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0642】

２３２．還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残っている未反応のアルデヒド基を、キャッピング剤を使用してキャッピングする、段落２２８～２３１のいずれか一項に記載の複合糖質。

【0643】

２３３．前記キャッピング剤が水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である、段落２３２に記載の複合糖質。

【0644】

２３４．段落１～４９のいずれか一項に記載の多糖を含む免疫原性組成物。

【0645】

２３５．段落５０～２３４のいずれか一項に記載の複合糖質を含む免疫原性組成物。

【0646】

２３６．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の様々な血清型からの１～２５個の複合糖質を含む、段落２３５に記載の免疫原性組成物。

【0647】

２３７．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の様々な血清型からの２０個の複合糖質を含む、段落２３５に記載の免疫原性組成物。

【0648】

２３８．２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、段落２３５に記載の免疫原性組成物。

【0649】

２３９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質をさらに含む、段落２３５に記載の免疫原性組成物。

【0650】

２４０．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆからの複合糖質をさらに含む、段落２３９に記載の免疫原性組成物。

【0651】

２４１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質をさらに含む、段落２４０に記載の免疫原性組成物。

【0652】

２４２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａからの複合糖質をさらに含む、段落２４１に記載の免疫原性組成物。

【0653】

２４３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３３Ｆからの複合糖質をさらに含む、段落２４２に記載の免疫原性組成物。

【0654】

２４４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、および１５Ｂからの複合糖質をさらに含む、段落２４３に記載の免疫原性組成物。

【0655】

２４５．２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、段落２４４に記載の免疫原性組成物。

【0656】

２４６．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆからの複合糖質がＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている、段落２３５～２４５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0657】

２４７．複合糖質が、すべて個々にＣＲＭ_１９７とコンジュゲートされている、段落２３５～２４６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0658】

２４８．医薬品として使用するための、段落２３５～２４７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0659】

２４９．ワクチンとして使用するための、段落２３５～２４７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0660】

２５０．ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を単離するステップと、ｂ）前記多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在を検出するステップとを含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在を検出する方法。

【0661】

２５１．４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在をＮＭＲまたは質量分析（ＭＳ）によって検出する、段落２５０に記載の方法。

【0662】

２５２．４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在をＮＭＲによって検出する、段落２５０に記載の方法。

【0663】

２５３．４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の存在を質量分析（ＭＳ）によって検出する、段落２５０に記載の方法。

【0664】

２５４．ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を単離するステップと、ｂ）前記多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量を測定するステップとを含む、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖中における４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量を決定する方法。

【0665】

２５５．４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量をＮＭＲによって決定する、段落２５４に記載の方法。

【0666】

２５６．４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン残基の量を質量分析（ＭＳ）によって決定する、段落２５４に記載の方法。

【0667】

２５７．ａ）単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を還元剤と反応させるステップと、ｂ）前記還元多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、還元血清型１２Ｆ多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【0668】

２５８．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在をＮＭＲによって検出する、段落２５７に記載の方法。

【0669】

２５９．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を質量分析（ＭＳ）によって検出する、段落２５４に記載の方法。

【0670】

２６０．前記還元剤が水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である、段落２５４～２５９のいずれか一項に記載の方法。

【0671】

２６１．前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖が、酸化剤で前もって処理されている、段落２５４～２６０のいずれか一項に記載の方法。

【0672】

２６２．酸化剤が、末端ヒドロキシル基をアルデヒドへと酸化する任意の酸化剤である、段落２６１に記載の方法。

【0673】

２６３．酸化剤がペリオデートである、段落２６１に記載の方法。

【0674】

２６４．前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖が、安定ニトロキシルラジカル化合物および酸化剤で前もって処理されている、段落２５４～２６０のいずれか一項に記載の方法。

【0675】

２６５．前記安定ニトロキシルラジカル化合物が２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ）であり、前記酸化剤がＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である、段落２６３に記載の方法。

【0676】

２６６．ａ）単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を還元剤と反応させるステップと、ｂ）前記還元多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、還元血清型１２Ｆ多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【0677】

２６７．Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在をＮＭＲによって検出する、段落２６６に記載の方法。

【0678】

２６８．Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を質量分析（ＭＳ）によって検出する、段落２６６に記載の方法。

【0679】

２６９．前記還元剤が水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である、段落２６６～２６８のいずれか一項に記載の方法。

【0680】

２７０．前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖が、酸化剤で前もって処理されている、段落２６６～２６９のいずれか一項に記載の方法。

【0681】

２７１．酸化剤が、末端ヒドロキシル基をアルデヒドへと酸化する任意の酸化剤である、段落２７０に記載の方法。

【0682】

２７２．酸化剤がペリオデートである、段落２７０に記載の方法。

【0683】

２７３．前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖が、安定ニトロキシルラジカル化合物および酸化剤で前もって処理されている、段落２６６～２６９のいずれか一項に記載の方法。

【0684】

２７４．前記安定ニトロキシルラジカル化合物が２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ）であり、前記酸化剤がＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である、段落２７３に記載の方法。

【0685】

２７５．ａ）単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖を還元剤と反応させるステップと、ｂ）前記還元多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、還元血清型１２Ｆ多糖中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【0686】

２７６．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在をＮＭＲによって検出する、段落２７５に記載の方法。

【0687】

２７７．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を質量分析（ＭＳ）によって検出する、段落２７５に記載の方法。

【0688】

２７８．一実施形態では、前記還元剤は水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である。

【0689】

２７９．前記還元剤が水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である、段落２７５～２７８のいずれか一項に記載の方法。

【0690】

２８０．前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖が、酸化剤で前もって処理されている、段落２７５～２７９のいずれか一項に記載の方法。

【0691】

２８１．酸化剤が、末端ヒドロキシル基をアルデヒドへと酸化する任意の酸化剤である、段落２８０に記載の方法。

【0692】

２８２．酸化剤がペリオデートである、段落２８０に記載の方法。

【0693】

２８３．前記単離した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ多糖が、安定ニトロキシルラジカル化合物および酸化剤で前もって処理されている、段落２７５～２７９のいずれか一項に記載の方法。

【0694】

２８４．前記安定ニトロキシルラジカル化合物が２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ）であり、前記酸化剤がＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である、段落２８３に記載の方法。

【0695】

２８５．ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【0696】

２８６．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在をＮＭＲによって検出する、段落２８５に記載の方法。

【0697】

２８７．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）および／またはＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を質量分析（ＭＳ）によって検出する、段落２８５に記載の方法。

【0698】

２８８．ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【0699】

２８９．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在をＮＭＲによって検出する、段落２８８に記載の方法。

【0700】

２９０．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）およびＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を質量分析（ＭＳ）によって検出する、段落２８８に記載の方法。

【0701】

２９１．ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【0702】

２９２．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在をＮＭＲによって検出する、段落２９１に記載の方法。

【0703】

２９３．Ｎ－アセチル－Ｄ－フコサミン（Ｄ－ＦｕｃＮＡｃ）残基の存在を質量分析（ＭＳ）によって検出する、段落２９１に記載の方法。

【0704】

２９４．ａ）肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質を調製するステップと、ｂ）前記複合糖質におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出するステップとを含む、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ複合糖質中におけるＮ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を検出する方法。

【0705】

２９５．Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在をＮＭＲによって検出する、段落２９４に記載の方法。

【0706】

２９６．Ｎ－アセチル－Ｄ－キノボサミン（Ｄ－ＱｕｉＮＡｃ）残基の存在を質量分析（ＭＳ）によって検出する、段落２９４に記載の方法。

【0707】

本明細書中で使用する用語「約」とは、記述した濃度範囲、タイムフレーム、分子量、温度、またはｐＨなどの、統計的に有意義な値の範囲内を意味する。そのような範囲は、所定の値または範囲の一桁以内、典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、さらにより典型的には５％以内または１％以内であり得る。場合によっては、そのような範囲は、所定の値または範囲の測定および／または決定に使用される標準方法に典型的な実験誤差以内であり得る。用語「約」によって包含される許容される変動は、研究下の具体的なシステムに依存し、当業者によって容易に理解することができるであろう。本明細書内に範囲が列挙されている場合はいつでも、範囲内のすべての数も、本開示の実施形態として企図される。

【0708】

すべての場合において、本明細書中における用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、それぞれ用語「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」、および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」と任意選択で置換可能であることが、本発明者らによって意図される。

【0709】

そのそれぞれが本明細書中で互換性があるように使用される「免疫原性量」、「免疫学的に有効な量」、「治療上有効な量」、「予防上有効な量」、または「用量」とは、一般に、当業者に知られている標準アッセイによって測定して、細胞性（Ｔ細胞）または液性（Ｂ細胞もしくは抗体）の応答のいずれか、あるいは両方の免疫応答を誘発するために十分な、抗原または免疫原性組成物の量をいう。

【0710】

本文書の範囲のうちの任意のもの内の任意の整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0711】

本特許明細書内に引用したすべての参考文献または特許出願は、本明細書中に参考として組み込まれている。

【0712】

本発明を添付の実施例中に例示する。以下の実施例は、そうでないと詳述されていない限りは、当業者に周知かつルーチン的である標準技法を使用して実施されている。実施例は例示的であるが、本発明を限定しない。

【実施例】

【0713】

（実施例１）
血清型１２Ｆ莢膜多糖は４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン（４ＫＱ）を含有する
Ｌｅｏｎｔｅｉｎら（Ｌｅｏｎｔｅｉｎら（１９８１）Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．５９：２０８１～２０８５）によれば、血清型１２Ｆの多糖反復単位は、直鎖状の三糖の主鎖（１個のＮ－アセチルフコサミン（ＦｕｃｐＮＡｃ）、１個のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌｐＮＡｃ）、および１個のＮ－アセチルマンヌロン酸（ＭａｎｐＮＡｃＡ））からなり、２つの分枝、すなわち、ＦｕｃｐＮＡｃのＣ３で連結されたペンダントα－ガラクトピラノース（Ｇａｌｐ）およびＭａｎｐＮＡｃＡのＣ３で連結されたα－Ｇｌｃｐ－（１→２）－α－Ｇｌｃｐ二糖分枝を有する。

【0714】

肺炎球菌多糖１２Ｆを２Ｄ ＮＭＲおよび質量分析によって研究して、ポリマー反復単位を特徴づけた。血清型１２Ｆ多糖が実際にＮ－アセチル－ガラクトサミンの４－ケト－Ｎ－アセチル－キノボサミン（本文書中で２－アセトアミド－２，６－ジデオキシ－Ｄ－キシロ－４－ヘキスロースおよびＳｕｇとも呼ぶ）による部分的置換を含有することが、驚くべきことに見出された。このケト糖変異体（４ＫＱ）は、最初の株中の１２Ｆ反復単位間で、ＧａｌＮＡｃ残基を約２０～２５ｍｏｌ％の統計的平均で置き換えたものとして同定された。

【0715】

方法
ＮＭＲ。ＮＭＲ分析には、試料を典型的にはチップ超音波処理で処理し、水性溶媒中に溶かした１２Ｆ多糖を９０分間まで、氷浴上でチップ超音波処理した。０．２２ミクロンのフィルターを用いて試料を濾過してチップ粒子を除去し、一部の場合では、固定ＭＷＣＯ孔径のスピンカラムを使用してサイズ分離した。サイズ分離ありまたはなしの超音波処理した試料を、３ｋＤａのＭＷＣＯの透析カセットを使用して水に対して透析し、凍結し、凍結乾燥し、約０．５５ｍＭのＴＳＰ－ｄ_４を含むＤ_２Ｏ中に再溶解した。試料のｐＨは約６～７であり、主鎖ＭａｎｎＮＡｃＡ残基中のカルボン酸の酸度が原因で、高濃度試料のために少量のＮａＯＤで調節した。ＮＭＲデータは、５００ＭＨｚで操作するＢｒｕｋｅｒ－Ｂｉｏｓｐｉｎ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ＮＭＲ分光計上のＢｒｕｋｅｒの５ｍｍ ＤＣＨ 凍結プローブ上で収集した。データ処理はＭ－Ｎｏｖａ ｖ１２．０を使用して実施した。化学シフト参照は、それぞれ０および－１．８ｐｐｍのＴＳＰ－ｄ_４の^１Ｈおよび^１３Ｃであった。

【0716】

１Ｄ ^１Ｈスペクトル処理には、０．５ＨｚのＥＭ線幅拡大を使用し、手動の三次スプラインベースライン補正を適用した。１Ｄ ^１３Ｃスペクトルを、０．５秒間の走査間リサイクルのディレイを用いたパワーゲーティングを使用して収集した。２Ｄ 分析は、^１Ｈ－^１Ｈ ＣＯＳＹ、^１Ｈ－^１Ｈ ＮＯＥＳＹ、^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ、^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＭＢＣ、^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹを含んでいた。

【0717】

ＬＣ－ＭＳ。ＬＣ－ＭＳおよびＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータは、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣを備えたＴｈｅｒｍｏ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ Ｌｕｍｏｓ Ｔｒｉｂｒｉｄ質量分析装置上で、陽イオン化モードで収集した。試料をＷａｔｅｒｓ親水性相互作用（ＨＩＬＩＣ）ＢＥＨ球状ハイブリッドカラム上に注入して分離した。移動相（ＭＰ）Ａは０．１％のギ酸（ＦＡ）を含む水であり、ＭＰＢは０．１％のＦＡを含むアセトニトリル（ＡＣＮ）である。溶出勾配を２００μＬ／分で送達し、３５分間で１０～９５％のＭＰＡにし、１分間で１０％のＭＰＡに戻し、１５分間平衡化した。ＲＦレンズ電位を７０Ｖまで増加させて、多糖のインソース断片化を誘導した。ＭＳ／ＭＳデータは、高エネルギー衝突解離（ＨＣＤ）を使用して獲得した。

【0718】

ＳＥＣ／ＭＳ。部分的酸加水分解実験からのＳＥＣ／ＭＳデータは、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣを備えたＴｈｅｒｍｏ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ質量分析装置上で収集した。試料をＢＥＨ２００ ＳＥＣカラム上に注入して分離した。移動相（ＭＰ）Ａは０．０５％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む水であり、ＭＰＢは０．０５％のＴＦＡを含むアセトニトリル（ＡＣＮ）である。均一濃度勾配を２００μＬ／分：８０％のＭＰＡおよび２０％のＭＰＢで送達した。

【0719】

部分的酸加水分解。水に６．３ｍｇ／ｍｌのネイティブ１２Ｆ多糖をＴＦＡで処理した。ＨＰＬＣバイアルに、１００μｌの１２Ｆ試料および２μｌのニートＴＦＡを加えた。混合物を渦攪拌し、６０℃に設定したホットプレート上に１００分間、その後７０℃に１２０分間、その後８０℃に６０分間置いた。試料はＳＥＣ／ＭＳによりＴｈｅｒｍｏ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ質量分析装置上で分析した。

【0720】

結果
ＮＭＲデータは、２つの明確に異なる反復単位集団を有する単一の異種血清型１２Ｆ多糖と整合している。主な反復単位集団（約７５～８０ｍｏｌ％）は、Ｌｅｏｎｔｅｉｎら（Ｌｅｏｎｔｅｉｎら（１９８１）Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．５９：２０８１～２０８５）によって公開されている構成糖および組織と整合している。二番目の反復単位集団（約２０～２５ｍｏｌ％）は、主鎖ＧａｌＮＡｃ残基のＳｕｇ残基（２－アセトアミド－２，６ジデオキシ－Ｄ－キシロ－ヘキソス－４－ロース）での置換えによって特徴づけられており、これは、アッセイした典型的な温度およびｐＨ条件下（すなわち７５℃およびｐＨ約６～７）では、バルク水性溶媒中で主に水和物形態である。図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃは、２つの反復単位集団（ＳｕｇによるＧａｌＮＡｃの置換えなし（図１Ａ）およびＳｕｇによるＧａｌＮＡｃの置換えあり（図１Ｂ））を例示する。２つの明確に異なる血清型１２Ｆ多糖の証拠はなく、ＮＭＲデータは、平均２０～２５％のＧａｌＮＡｃのＳｕｇ（ケト糖）での置換えを有する単一の血清型１２Ｆ多糖に最も良好に当てはまる（図１Ｃ）。Ｓｕｇ残基の取り込みが原因の、血清型１２Ｆ反復単位糖残基の^１Ｈおよび／または^１３Ｃの化学シフトにおける部位特異的な分解された変化は、図１Ｂ中の網掛の丸によって例示する。

【0721】

Ｓｕｇ残基が原因の良好に分解されたシフトとしては、Ｓｕｇの位置６のＣＨ３の^１Ｈシグナル、およびＳｕｇの取り込みが原因の隣接ＦｕｃＮＡｃの位置６のＣＨ３の^１Ｈシグナルの修飾が挙げられる。Ｓｕｇ残基のユニークな特長は、約１２．３６ｐｐｍでの顕著に遮蔽された位置６のＣＨ３の^１３Ｃシグナルであり、対応するプロトン化学シフト１．３ｐｐｍを有する。これは、この種のメチル炭素について予想されるよりも強力な遮蔽であり、位置４での隣接の水和したケトンが原因である。水和したケトンはｓｐ３であり、結合したプロトンを有さず、したがって、約９４ｐｐｍの鋭い分解された^１３Ｃ共鳴は、ＨＭＢＣ相関によって、Ｓｕｇ残基の位置４の水和したケトンの炭素であることが確認された（図２）。約９４ｐｐｍでの、位置４のｓｐ３の水和したケトンの^１３Ｃ共鳴は、Ｓｕｇ残基にユニークな血清型１２Ｆシグナルを表す。

【0722】

典型的な分析条件下では（水性溶媒、ｐＨ約６～７、７５℃）、Ｓｕｇケトンは主に水和物形態であり、約２０３ｐｐｍの弱いシグナルが、血清型１２Ｆ多糖中のＳｕｇ残基の位置４でおよそ９：１の比（水和物：ケトン）のＳｕｇケトンに起因する（図３を参照）。

【0723】

血清型１２Ｆ多糖中の糖残基の正確なモル比は、１Ｄ ^１３Ｃスペクトルの逆重畳に基づいて確立されている。この逆重畳手法によって、血清型１２Ｆ多糖残基の比は、図１に示すように、α－Ｌ－ＦｕｃＮＡｃ：α－Ｄ－Ｇａｌ：β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ：Ｓｕｇ：β－Ｄ－ＭａｎｎＮＡｃＡ：α－Ｄ－Ｇｌｃ（１：１：０．７５：０．２５：１：２）であると判明している。

【0724】

血清型１２Ｆ多糖のＳｕｇ残基構成成分は、同じ株（以下の表３の株３）からの多糖の様々なロット中において約２０～２５ｍｏｌ％で系統的に存在し、発酵の産物である。

【0725】

多糖反復単位中におけるＳｕｇ残基の位置は、２Ｄ ^１Ｈ－^１Ｈ ＮＯＥＳＹ ＮＭＲスペクトルを使用して同定する。ＮＭＲ ＮＯＥＳＹデータは、反復単位中においてＳｕｇがＧａｌＮＡｃを置き換えることを示す（図４のＮＯＥＳＹ相関を参照）。

【0726】

また、ＮＭＲにおけるこのユニークなシグナルの構造をさらに解明することを助けるために、質量分析も使用した。多糖反復単位（ＲＵ）の偽分子イオンを生じさせるために質量分析実験を設計した。１２Ｆ多糖のｍ／ｚ１０９４．３８９２でのＲＵ偽分子イオンに対してＭＳ／ＭＳ実験を実施することによって、反復単位の全配列を得ることができる。

【0727】

図５は、質量分析を用いて達成することができる反復単位（ＲＵ）の配列決定の一例である。この図では、すべての糖環が検出および同定されている。図５は、１２ＦのＲＵ中の５個の糖環を表すＡ～Ｆの文字で標識されている。図５に示すように、反復単位の直鎖部分が環ＡＢＣを構成する。側鎖糖は、それらが接続されている糖の上部に配置されている。

【0728】

図５は、どのように質量分析データが解釈されるかの一例として、１２Ｆ多糖の構造を示す。環はＡ～Ｆで標識されており、環の順序の略記の立体配置も示す。表１に分子質量を提供する。

【0729】

【表1】

【0730】

１２Ｆのケト糖変異体が、血清型１２Ｆ多糖中に存在するユニークな多糖であったか、またはケト糖が、ＧａｌＮａｃを約２０％の確率で置換する１２Ｆ多糖の一部であったかを決定する試みとして、いくつかの実験を実施した。最初の実験は、ＨＩＬＩＣカラムを使用して２つの異なる多糖を分離することができるかどうかを見るためのものであった。ＧａｌＮＡｃおよびケト糖をどちらも含有する１種の多糖のみが見つかった。

【0731】

次の実験は、２つの異なる多糖の証拠を提供するであろう、多糖中ですべてのケト糖を有する二量体または三量体を探すことを含んでいた。

【0732】

部分的に加水分解した１２Ｆ多糖を分析した。部分的酸加水分解は、グリコシド結合を切断して様々な残基長の種を生じる。４ＫＱは、Ｎ－アセチルガラクトサミンと比較して－１８Ｄａであり、二量体および三量体は、１個の多糖のみがケト糖を含有する場合は１８Ｄａ低い加水分解産物を生じるであろう。第２の種の場合（ケト糖がすべてのＮ－アセチルガラクトサミンを置き換えている鎖が存在する場合）は、二量体および三量体は、それぞれ３６Ｄａおよび５４Ｄａ低い加水分解産物を生じるであろう。

【0733】

検出された種は、４個毎に約１個のＲＵがケト糖を有するという取り込みと整合している。このデータは、１２Ｆのすべての多糖鎖がケト糖を含有し、隣接する反復単位中に２個のケト糖が存在しないことを示す。すべてのＮ－アセチルガラクトサミンがケト糖によって置き換えられている鎖の証拠はない。

【0734】

これらのデータは、１２Ｆが、反復単位中において２０～２５％の確率でケト糖を含有する１つの多糖であることを支持している。

【0735】

総合すると、データは、血清型１２Ｆ多糖は単一の異種多糖鎖からなっており、２０～２５％の統計的平均でケト糖が反復単位主鎖中のＮ－アセチルガラクトサミンを置き換えていることを支持している（図１）。すべてのＮ－アセチルガラクトサミンがケト糖によって置き換えられている鎖の証拠はない。

【0736】

（実施例２）
還元血清型１２Ｆ莢膜多糖の構造
方法
還元１２Ｆ多糖。還元１２Ｆ多糖を以下のように生成した：６０ｍＬの水中に１５０ｍｇの加水分解した１２Ｆ（２．５ｍｇ／ｍＬ）、ｐＨ７．０を、２ｍＬのＮａＢＨ４溶液（水中に約８０７ｍＭ）と、１５０ｒｐｍで終夜、２３℃で混合し、その後、７ＫＤａのＭＷＣＯの透析カセットを使用して水に対して透析した。１Ｄ ^１Ｈスペクトル処理には、０．５ＨｚのＥＭ線幅拡大を使用し、手動の三次スプラインベースライン補正を適用した。１Ｄ ^１３Ｃスペクトルを、０．５秒間の走査間リサイクルのディレイを用いたパワーゲーティングを使用して収集した。２Ｄ 分析は、^１Ｈ－^１Ｈ ＣＯＳＹ、^１Ｈ－^１Ｈ ＮＯＥＳＹ、^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ、^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＭＢＣ、^１Ｈ－^１３Ｃ ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹを含んでいた。

【0737】

ＬＣ－ＭＳおよびＬＣ－ＭＳ／ＭＳ。ＮａＢＤ４を用いた１２Ｆの還元からのＬＣ－ＭＳおよびＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータは、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣを備えたＴｈｅｒｍｏ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析装置上で、陽イオン化モードで収集した。試料をＷａｔｅｒｓ親水性相互作用（ＨＩＬＩＣ）ＢＥＨ球状ハイブリッドカラム上に注入して分離した。移動相（ＭＰ）Ａは０．１％のＴＦＡを含む水であり、ＭＰＢは０．１％のＴＦＡを含むアセトニトリル（ＡＣＮ）である。溶出勾配を２００μＬ／分で送達し、３５分間で３０～７０％のＭＰＡにし、１分間で３０％のＭＰＡに戻し、１４分間平衡化した。ＲＦレンズ電位を６０Ｖまで増加させて、多糖のインソース断片化を誘導した。ＭＳ／ＭＳデータは、高エネルギー衝突解離（ＨＣＤ）を使用して獲得した。

【0738】

ＮａＢＤ４を用いた反応：６．７ｍｇ／ｍｌのＮａＢＤ４を水に溶かす。０．２７ｍｌの１２Ｆ多糖（水中に約３ｍｇ／ｍｌ）に、０．０３ｍｌのＮａＢＤ４を加え、３時間、室温でインキュベートした。その後、１μｌのニート酢酸を加えて反応を反応停止させた。

【0739】

結果
Ｓｕｇ残基のケトン／水和物は、ＮａＢＨ４を使用した還元に対して感受性がある。ＮａＢＨ４で処理した血清型１２Ｆ多糖は、位置６のメチル炭素の脱遮蔽、直接結合したプロトンのない約９４ｐｐｍでのｓｐ３炭素の損失、ならびにＤ－ＦｕｃＮＡｃおよびＤ－ＱｕｉＮＡｃと整合している２つのより弱い新規スピン系の出現を含む、Ｓｕｇ残基の特異的な変化によって特徴づけられている（図６）。還元で、主血清型１２Ｆ多糖スピン系は変化がなく（図１Ａ）、観察される取り込み部位に隣接する残基の異種性パターンは同じである。

【0740】

ＮａＢＨ４を用いた血清型１２Ｆ多糖の処理は、Ｓｕｇ残基の位置４をケトン／水和物からアルコールへと特異的に還元し、残基ＳｕｇをＤ－ＦｕｃＮＡｃおよびＤ－ＱｕｉＮＡｃの混合物へと変換し、それぞれ図６に例示するように、軸および赤道配向での位置４のヒドロキシルによって特徴づけられる。

【0741】

ＮａＢＤ４を用いた還元の後、ケト糖残基を含有するＲＵおよび断片イオンの質量は、３．０２１９Ｄａより高くシフトしている。重水素からのこの非定型質量シフトは非自然であり、^１２Ｃ、^１３Ｃ、^１Ｈ、^１６Ｏ、および^１４Ｎの天然同位体を含有する断片イオンからの妨害を有さない、ユニークなイオンを提供する。このデータは、ＮａＢＤ４を用いたケトンの還元を支持している（表２および図７を参照）。

【0742】

【表2】

【0743】

（実施例３）
循環臨床１２Ｆ単離体間の４ＫＱ置換のレベル
方法
１２Ｆ多糖の生成、精製、および分析。凍結細胞懸濁液としての培養物ストックを、ダイズ加水分解物培地中で後期対数期まで成長させ、－７０℃で凍結することによって調製した。発酵培地中における１２Ｆ多糖の生成は、最初にダイズ加水分解物培地中の凍結ストックから種培養を作ることによって行った。その後、開始培養物を使用して同じ培養培地に接種し、発酵を攪拌バイオリアクター中において３６℃で行った。その後、Ｎ－ラウリル－スルホネートを０．１％まで加えることによってブロスを溶解し、精製手順に供した。

【0744】

多糖の精製は、ＷＯ２０２０／１７０１９０中に記載されているように実施した。

【0745】

結果
４ＫＱ置換が循環臨床単離体間で一般的であったかどうかを決定するために、１７個の確認された１２Ｆ臨床単離体を分析した。１２Ｆ臨床単離体の１７個すべてが、反復単位の２．５～１０．２％の範囲の、この４ＫＱ置換の証拠を有していた（表３）。

【0746】

ＡＴＣＣ（アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ、米国バージニア州Ｍａｎａｓｓａｓ）、参照番号１９６－Ｘ）で利用可能な４つの培養株および精製した１２Ｆ肺炎球菌多糖も分析した（表３）。

【0747】

４－ＫＱ置換基の量は２Ｄ－ＮＭＲによって定量した（実施例１を参照）。Ｐｎ－１２Ｆ中の％ケト置換は、ＦｕｃＮＡｃに対する４ＫＱに対応するメチルピークの強度の比を使用して決定する。

【0748】

発酵中に起こる４ＫＱ置換のレベルは、使用する株に依存する（表３を参照）。

【0749】

【表3】

【0750】

（実施例４）
様々なレベルの４ＫＱを有する臨床単離体を使用したＯＰＡにおける、４ＫＱ含有１２Ｆ複合多糖の免疫原性
方法
肺炎連鎖球菌（Ｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）マイクロコロニーのオプソニン化貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）。オプソニン化貪食作用アッセイを記載されているように行った（たとえばＷＯ２０１８／１３４６９３を参照）。このアッセイは、連続希釈した試験血清、仔ウサギ補体、および分化エフェクター細胞（ＨＬ－６０）を含有する反応物中における細菌殺滅を測定することによって、機能的な抗肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗体を定量的に評価する。ＯＰＡ力価は、血清を用いない対照（バックグラウンドＣＦＵとして定義される）と比較した場合の、細菌コロニー形成単位の数（ＣＦＵ）の５０％の低下をもたらす血清希釈率の逆数である。力価は、この５０％の殺滅カットオフを包含する２つの希釈率から内挿する。１つの試料あたり複数の決定からの力価を相乗平均力価（ＧＭＴ）として報告する。

【0751】

結果
莢膜多糖の４ＫＱ含有量が、ワクチンで誘導された抗体の、肺炎連鎖球菌（Ｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ単離体と結合してそれを殺滅させる能力に影響を与えるかどうかを決定するために、１２Ｆコンジュゲートを含有する多価ワクチンおよびプレーンな１２Ｆ多糖を含有する多価ワクチンの免疫原性を、様々な範囲の４ＫＱ修飾レベルを有する一組の肺炎連鎖球菌（Ｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）１２Ｆ単離体に対して評価した。ＯＰＡアッセイを、様々な範囲の４ＫＱ修飾レベルを有する６個の１２Ｆ単離体について実施し、１２Ｆコンジュゲートを含有する多価ワクチン（ｎ＝４１人）、プレーンな１２Ｆ多糖を含有する多価ワクチン（ｎ＝２６人）、または１２Ｆ多糖を含有しなかった多価ワクチン（陰性対照として、ｎ＝２８人）を用いて免疫化した対象からの血清組について力価を生じさせた。プレーンな１２Ｆ多糖を含有する多価ワクチン中に含めた１２Ｆ多糖は非常に低い４ＫＱの取り込み（約０．２％）を有する一方で、１２Ｆコンジュゲートを含有する多価ワクチン中において使用した１２Ｆ多糖は約２５％の４ＫＱ修飾レベルを含有する。

【0752】

図８に示すように、１２Ｆコンジュゲートを含有するワクチン（１２Ｆ ｃｏｎｊ．）およびプレーンな１２Ｆ多糖を含有するワクチン（１２Ｆ ｐｌａｉｎ）のどちらも免疫血清も、４ＫＱ修飾レベル１．９％～２７．５％を有する単離体の細菌殺滅応答を誘発することができ、力価間に統計的に有意な相違は存在しない。これらのデータは、ワクチンが、低い４ＫＱ修飾レベルから高いレベルまでを発現する株間で同様のＯＰＡ力価を誘発することを示している。

【0753】

本明細書中で言及したすべての刊行物および特許出願は、本発明が関する分野の当業者のレベルの指標である。すべての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊行物または特許出願が参考として組み込まれていると具体的かつ個々に示されていたと場合と同じ程度まで、本明細書中に参考として組み込まれている。

【0754】

理解を明確にする目的で前述の発明を例示および実施例によってある程度詳細に記述したが、特定の変化および改変を、添付の特許請求の範囲の範囲内で実施し得る。

【受託番号】

【0755】

ＡＴＣＣ ５３２８１
ＡＴＣＣ １９６－Ｘ

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【国際調査報告】