特表 2023-549814 銅代謝関連疾患又は障害を治療する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-29

(54)【発明の名称】銅代謝関連疾患又は障害を治療する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/28 20060101AFI20231121BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20231121BHJP

   G01N 33/84 20060101ALI20231121BHJP

【ＦＩ】

A61K31/28

A61P3/00

G01N33/84 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023528431

(86)(22)【出願日】2021-11-12

(85)【翻訳文提出日】2023-06-14

(86)【国際出願番号】 US2021059239

(87)【国際公開番号】W WO2022104135

(87)【国際公開日】2022-05-19

(31)【優先権主張番号】63/113,516

(32)【優先日】2020-11-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/242,722

(32)【優先日】2021-09-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】503102674

【氏名又は名称】アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】パン， ウェイ－ジアン

(72)【発明者】

【氏名】マ， マーク

(72)【発明者】

【氏名】メルツァー， ブライアン

(72)【発明者】

【氏名】スウェンソン， ユージーン スコット

(72)【発明者】

【氏名】モズリー， スコット エドワード

(72)【発明者】

【氏名】ペルト， ライアン

(72)【発明者】

【氏名】キックアロ， アダム

(72)【発明者】

【氏名】デル アンゲル， ギレルモ

(72)【発明者】

【氏名】チャマルティ， ハリーシュ

【テーマコード（参考）】

2G045

4C206

【Ｆターム（参考）】

2G045AA25

2G045CA26

2G045DB13

2G045FA40

4C206AA01

4C206AA02

4C206JB20

4C206MA01

4C206MA04

4C206MA72

4C206NA14

4C206ZC21

4C206ZC54

(57)【要約】

本開示は、ウィルソン病（ＷＤ）などの銅代謝関連疾患又は障害を診断及び治療する方法に関する。本開示の一態様は、対象における銅代謝関連疾患又は障害（ウィルソン病など）を治療する方法を提供する。このような方法は、対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及び不安定結合銅（ＬＢＣ）の濃度を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率が０．２１～０．２７以上である場合、治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリン（ＢＣ－ＴＴＭ）を対象に投与するステップとを含む。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象における銅代謝関連疾患又は障害を治療する方法であって、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及び不安定結合銅（ＬＢＣ）の濃度を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２１～０．２７以上である場合、治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンを前記対象に投与するステップと
を含む方法。

【請求項2】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンは、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２１以上である場合、前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンは、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２４以上である場合、前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンは、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２７以上である場合、前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記銅代謝関連疾患又は障害は、ウィルソン病である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記対象の生物学的サンプル中の前記総銅の濃度は、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ－ＭＳ）によって測定される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記対象の生物学的サンプル中の前記ＬＢＣの濃度は、ＬＢＣアッセイを使用して判定される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記対象は、ウィルソン病などの前記銅代謝関連疾患又は障害の治療を以前に受けていない（すなわち未治療の対象）、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日当たり約１５ｍｇ～約６０ｍｇの範囲である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約１５ｍｇである、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約３０ｍｇ（例えば、１日２×１５ｍｇ）である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約６０ｍｇ（例えば、１日４×１５ｍｇ）である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記対象への前記治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンの前記投与後、前記対象は、能力障害状態、精神症状、臨床症状又は治療満足度の改善を示す、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿又はヒト血清を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記生物学的サンプルは、ヒト血清を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

対象における銅代謝関連疾患又は障害を診断する方法であって、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及びＬＢＣの濃度を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２１～０．２７以上である場合、前記対象を銅代謝関連疾患又は障害と診断するステップと
を含む方法。

【請求項18】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２１以上である場合、前記銅代謝関連疾患又は障害と診断される、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２４以上である場合、前記銅代謝関連疾患又は障害と診断される、請求項１７に記載の方法。

【請求項20】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２７以上である場合、前記銅代謝関連疾患又は障害と診断される、請求項１７に記載の方法。

【請求項21】

前記銅代謝関連疾患又は障害は、ウィルソン病である、請求項１７～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記対象の生物学的サンプル中の前記総銅の濃度は、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ－ＭＳ）によって測定される、請求項１７～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記対象の生物学的サンプル中の前記ＬＢＣの濃度は、ＬＢＣアッセイを使用して判定される、請求項１７～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿又はヒト血清を含む、請求項１７～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿を含む、請求項１７～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記生物学的サンプルは、ヒト血清を含む、請求項１７～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

対象をテトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定する方法であって、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及び不安定結合銅（ＬＢＣ）の濃度を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２１～０．２７以上である場合、前記対象をテトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定するステップと、
任意選択的に、治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンを、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定された前記対象に投与するステップと
を含む方法。

【請求項28】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２１以上である場合、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定される、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２４以上である場合、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定される、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの前記比率が０．２７以上である場合、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定される、請求項２７に記載の方法。

【請求項31】

前記対象の生物学的サンプル中の前記総銅の濃度は、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ－ＭＳ）によって測定される、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記対象の生物学的サンプル中の前記ＬＢＣの濃度は、ＬＢＣアッセイを使用して判定される、請求項２７～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日当たり約１５ｍｇ～約６０ｍｇの範囲である、請求項２７～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約１５ｍｇである、請求項２７～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約３０ｍｇ（例えば、１日２×１５ｍｇ）である、請求項２７～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約６０ｍｇ（例えば、１日４×１５ｍｇ）である、請求項２７～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記対象への前記治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンの前記任意選択的な投与後、前記対象は、能力障害状態、精神症状、臨床症状又は治療満足度の改善を示す、請求項２７～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿又はヒト血清を含む、請求項２７～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿を含む、請求項２７～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記生物学的サンプルは、ヒト血清を含む、請求項２７～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

対象における銅代謝関連疾患又は障害を治療する方法であって、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及び直接測定された非セルロプラスミン結合銅（ｄＮＣＣ）の濃度を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの比率を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２４５～０．２９５以上である場合、治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンを前記対象に投与するステップと
を含む方法。

【請求項42】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンは、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２４５６以上である場合、前記対象に投与される、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンは、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２７６以上である場合、前記対象に投与される、請求項４１に記載の方法。

【請求項44】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンは、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２９５以上である場合、前記対象に投与される、請求項４１に記載の方法。

【請求項45】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日当たり約１５ｍｇ～約６０ｍｇの範囲である、請求項４１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約１５ｍｇである、請求項４１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約３０ｍｇ（例えば、１日２×１５ｍｇ）である、請求項４１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約６０ｍｇ（例えば、１日４×１５ｍｇ）である、請求項４１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記対象への前記治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンの前記投与後、前記対象は、能力障害状態、精神症状、臨床症状又は治療満足度の改善を示す、請求項４１～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

対象における銅代謝関連疾患又は障害を診断する方法であって、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及びｄＮＣＣの濃度を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの比率を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２４５～０．２９５以上である場合、前記対象を銅代謝関連疾患又は障害と診断するステップと
を含む方法。

【請求項51】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２４５６以上である場合、前記銅代謝関連疾患又は障害と診断される、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２７６以上である場合、前記銅代謝関連疾患又は障害と診断される、請求項５０に記載の方法。

【請求項53】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２９５以上である場合、前記銅代謝関連疾患又は障害と診断される、請求項５０に記載の方法。

【請求項54】

前記銅代謝関連疾患又は障害は、ウィルソン病である、請求項４１～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記対象の生物学的サンプル中の前記総銅の濃度は、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ－ＭＳ）によって測定される、請求項４１～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記対象の生物学的サンプル中の前記ｄＮＣＣの濃度は、ｄＮＣＣアッセイを使用して判定される、請求項４１～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記対象は、ウィルソン病などの前記銅代謝関連疾患又は障害の治療を以前に受けていない（すなわち未治療の対象）、請求項４１～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿又はヒト血清を含む、請求項４１～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項59】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿を含む、請求項４１～５８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項60】

前記生物学的サンプルは、ヒト血清を含む、請求項４１～５８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

対象をテトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定する方法であって、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及びｄＮＣＣの濃度を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの比率を判定するステップと、
前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２４５～０．２９５以上である場合、前記対象をテトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定するステップと、
任意選択的に、治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンを、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定された前記対象に投与するステップと
を含む方法。

【請求項62】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２４５以上である場合、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定される、請求項６１に記載の方法。

【請求項63】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２７６以上である場合、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定される、請求項６１に記載の方法。

【請求項64】

前記対象は、前記対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの前記比率が０．２９５以上である場合、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定される、請求項６１に記載の方法。

【請求項65】

前記対象の生物学的サンプル中の前記総銅の濃度は、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ－ＭＳ）によって測定される、請求項６１～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

前記対象の生物学的サンプル中の前記ｄＮＣＣの濃度は、ｄＮＣＣアッセイを使用して判定される、請求項６１～６５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日当たり約１５ｍｇ～約６０ｍｇの範囲である、請求項６１～６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項68】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約１５ｍｇである、請求項６１～６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項69】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約３０ｍｇ（例えば、１日２×１５ｍｇ）である、請求項６１～６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項70】

前記テトラチオモリブデン酸ビスコリンの治療有効量は、１日約６０ｍｇ（例えば、１日４×１５ｍｇ）である、請求項６１～６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項71】

前記対象への前記治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンの前記任意選択的な投与後、前記対象は、能力障害状態、精神症状、臨床症状又は治療満足度の改善を示す、請求項６１～７０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項72】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿又はヒト血清を含む、請求項６１～７１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項73】

前記生物学的サンプルは、ヒト血漿を含む、請求項６１～７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

前記生物学的サンプルは、ヒト血清を含む、請求項６１～７２のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、それらの全体が参照により本明細書に援用される、２０２０年１１月１３日に出願された米国仮特許出願第６３／１１３，５１６号明細書及び２０２１年９月１０日に出願された米国仮特許出願第６３／２４２，７２２号明細書の優先権の利益を主張する。

【0002】

本開示は、ウィルソン病（ＷＤ）などの銅代謝関連疾患又は障害を診断及び治療する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

ウィルソン病（ＷＤ）は、銅（Ｃｕ）の輸送障害を引き起こす稀な常染色体劣性遺伝疾患であり、病的なＣｕの蓄積を引き起こす。ＷＤでは、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子の変異がアデノシントリホスファターゼ２（ＡＴＰａｓｅ２）の不十分な産生をもたらし、それは、次に、Ｃｕの胆汁中排泄障害と、健常人において血漿中に見出されるＣｕの９５％超を含有する血清フェロキシダーゼであるセルロプラスミン（Ｃｐ）中へのＣｕの取り込み障害とをもたらす。その結果、肝臓、脳及び他の組織中でＣｕが増加し、結果として臓器障害及び機能不全が生じる。ＷＤの初期の徴候及び症状は、主に肝臓、神経又は精神疾患であるが、患者は、多くの場合、肝臓疾患と神経精神疾患との複合疾患を発症する。未治療の又は不十分な治療を受けた患者は、罹患率が進行し、通常、肝硬変に続発して死亡する。ＷＤに関連する他の死因としては、肝悪性腫瘍及び重度の飢餓衰弱を伴う神経学的悪化が挙げられる。

【0004】

ＷＤの現在の治療法は、Ｃｕをキレート化して尿中Ｃｕ排泄を促進する一般的なキレート剤療法であるＤ－ペニシラミン及びトリエンチン並びに腸内メタロチオネインの上方制御を通して食餌性Ｃｕの取り込みをブロックする亜鉛（Ｚｎ）である。現在利用可能な薬物は、忍容性及び有効性の問題により、高い治療中止率を有する。これらは、頻繁な投薬（１日当たり２～４回）を必要とし、絶食状態で服用しなければならない。その有害事象（ＡＥ）プロファイル及び複雑な投薬レジメンは、低い治療コンプライアンス及び高い治療失敗率をもたらし、これは、生涯治療を必要とするＷＤでは大きい懸案事項である。

【0005】

テトラチオモリブデン酸ビスコリン（「ＢＣ－ＴＴＭ」；ＢＣ－ＴＴＭ；以前にはＷＴＸ１０１として知られていた）は、ＷＤの治療のために開発されている、研究中である経口のファーストインクラスの銅タンパク質結合分子である。ＢＣ－ＴＴＭは、以下の構造を有する。

【化1】

【0006】

これまでの研究では、ＢＣ－ＴＴＭは、Ｃｕ－テトラチオモリブデン酸－アルブミン三者複合体（ＴＰＣ）の迅速且つ不可逆的な形成によってＣｕの制御を改善し、神経学的劣化をはじめとする組織毒性を引き起こし得る遊離Ｃｕの動員なしに迅速な脱銅をもたらすことが示唆された。現在の治療の選択肢と比較した忍容性の向上及び簡略化された１日１回（ＱＤ）投薬レジメンの利便性を通して、ＢＣ－ＴＴＭ治療の長期服薬遵守の向上が達成されることが期待されている。

【0007】

ＷＤの効果的な治療は、食餌中の銅の吸収と、糞便及び尿からの銅の排出との間の正味の負のバランスを確立し、維持することを伴う。銅の制御の有効性をモニターすることは、多くの場合、血液及び尿中のバイオマーカーの定期的な測定を伴う。「遊離」銅レベルは、ＷＤにおける疾患負荷の概念的なバイオマーカーであり得る一方、血液及び尿中に存在する銅は、セルロプラスミン、メタロチオネイン、アルブミン、トランスキュプレインなどをはじめとする様々な親和性の担体が付随すると考えられる。銅管理に続いて、肝臓、神経、精神症状発現の安定化又は改善が期待され、これらの要因は、臨床医による治療応答の解釈に寄与する。血清又は血漿中の循環銅は、非セルロプラスミン結合銅（ＮＣＣ）の推定を通して評価され得るが、ＮＣＣの推定値は、間接的な推定であり、生理学的及び数値的に不可能な負のＮＣＣ結果を生成することもあるため、価値が限られている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

本開示は、概して、対象における例えばウィルソン病などの銅代謝関連疾患又は障害を治療するのに有用な方法を提供する。

【0009】

本開示の一態様は、対象における銅代謝関連疾患又は障害（ウィルソン病など）を治療する方法を提供する。このような方法は、対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及び不安定結合銅（ＬＢＣ）の濃度を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率が０．２１～０．２７以上である場合、治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリン（ＢＣ－ＴＴＭ）を対象に投与するステップとを含む。

【0010】

本開示の別の態様は、対象における銅代謝関連疾患又は障害を診断する方法であって、対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及びＬＢＣの濃度を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率が０．２１～０．２７以上である場合、対象を銅代謝関連疾患又は障害と診断するステップとを含む方法を提供する。

【0011】

本開示の別の態様は、対象をテトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定する方法であって、対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及び不安定結合銅（ＬＢＣ）の濃度を判定するステップと、対照の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するＬＢＣの比率が０．２１～０．２７以上である場合、対象をテトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定するステップと、任意選択的に、治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンを、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定された対象に投与するステップとを含む方法を提供する。

【0012】

本開示の別の態様は、対象における銅代謝関連疾患又は障害を治療する方法であって、対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及び直接測定された非セルロプラスミン結合銅（ｄＮＣＣ）の濃度を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの比率を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの比率が０．２４５～０．２９５以上である場合、治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンを対象に投与するステップとを含む方法を提供する。

【0013】

本開示の別の態様は、対象における銅代謝関連疾患又は障害を診断する方法であって、対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及びｄＮＣＣの濃度を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの比率を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの比率が０．２４５～０．２９５以上である場合、対象を銅代謝関連疾患又は障害と診断するステップとを含む方法を提供する。

【0014】

本開示の別の態様は、対象をテトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定する方法であって、対象の生物学的サンプル中の総銅の濃度及びｄＮＣＣの濃度を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの比率を判定するステップと、対象の生物学的サンプル中の総銅に対するｄＮＣＣの比率が０．２４５～０．２９５以上である場合、対象をテトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定するステップと、任意選択的に、治療有効量のテトラチオモリブデン酸ビスコリンを、テトラチオモリブデン酸ビスコリンによる治療に適すると同定された対象に投与するステップとを含む方法を提供する。

【0015】

本明細書に記載される本開示の方法の特定の実施形態では、対象は、ウィルソン病に罹患している。特定の実施形態では、対象は、以前にウィルソン病の治療を受けていない（すなわち未治療の対象）。特定の実施形態では、対象は、以前にウィルソン病の標準治療（ＳｏＣ）治療を受けている。本開示の方法の特定の実施形態では、対象は、以前にウィルソン病の治療を受けていないか、又は対象は、以前に４週間以下のウィルソン病の標準治療を受けている。

【0016】

特許請求される本発明のこれら及び他の特徴及び利点は、添付の特許請求の範囲と合わせて以下の詳細な説明からより詳細に理解されるであろう。特許請求の範囲は、その中の詳述によって定義され、本明細書に記載される特徴及び利点の具体的な考察によって定義されないことに留意されたい。

【0017】

添付図面は、本開示の組成物及び方法のさらなる理解を提供するために含まれ、本明細書に組み込まれてその一部を構成する。図面は、本開示の１つ又は複数の実施形態を示し、説明と共に本開示の原理及び動作を説明するのに役立つ。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1A】研究２０１（完全解析セット）で経時的に測定された総血漿銅、不安定結合銅及び２４時間尿銅の平均値（９５％信頼区間）を示す。

【図1B】研究２０３（完全解析セット）で経時的に測定された総血漿銅、不安定結合銅及び２４時間尿銅の平均値（９５％信頼区間）を示す。

【図2】健常参加者における平均（ＳＤ）血漿総モリブデン、総銅、不安定結合銅及びセルロプラスミン結合銅濃度の時間プロファイルを示す。

【図3】健常参加者対ウィルソン病参加者における平均（ＳＤ）血漿不安定結合銅／総銅比－時間プロファイルを示す。

【図4】健常患者とウィルソン病患者とを分類するためのＬＢＣ／総銅比（ＬＴＣ比）の最適な閾値を判定するための解析に用いた患者集団を示す。

【図5】健常患者対ウィルソン病患者のＬＴＣ比の分布を示す箱ひげ図を示す。

【図6】健常患者対ウィルソン病患者を分類するためのＬＴＣ比の性能を示す受信動作特性（ＲＯＣ）曲線を示す。

【図7】ｆスコア収量に基づく０．２４又は２４％のＬＴＣ比の最適閾値を示す。

【図8】ＬＴＣ比の閾値の範囲を示す。

【図9】健常患者とウィルソン病患者とのｄＮＣＣ／総銅比（ｄＮＣＣ比）の分布を示す箱ひげ図である。

【図10】健常患者とウィルソン病患者との分類にｄＮＣＣ比を使用することの性能を示す受信動作特性（ＲＯＣ）曲線である。

【図11】ｆスコア収量に基づく０．２７６又は２７．６％のｄＮＣＣ比の最適閾値を示す。

【図12】ｄＮＣＣ比の閾値の範囲を示す。

【図13】対象の血清ＬＢＣレベルと血漿ＬＢＣレベルとの差をＹ軸とし、２つのレベルの平均値をＸ軸とするブランド・アルトマン散布図を示す。

【発明を実施するための形態】

【0019】

開示されるプロセス及び材料を説明する前に、本明細書に記載される態様は、特定の実施形態に限定されず、当然のことながら、変化し得ることが理解されるべきである。本明細書で使用される用語は、特定の態様を説明することのみを目的とし、本明細書で特に定義されない限り、限定を意図されないことも理解されるべきである。

【0020】

本開示に鑑みて、本明細書に記載される方法及び組成物は、所望の必要性を満たすように当業者によって構成され得る。本開示は、銅代謝関連疾患又は障害の治療における改善を提供する。

【0021】

本明細書に記載される本開示の方法の特定の実施形態では、銅代謝関連疾患又は障害は、ウィルソン病である。

【0022】

特定の実施形態では、銅代謝関連疾患又は障害は、銅毒性である（例えば、硫酸銅殺真菌剤への大量曝露、銅を多く含む飲料水の摂取、銅補給剤の過使用などによる）。特定の実施形態では、銅代謝関連する疾患又は障害は、銅欠乏症、メンケス病又は無セルロプラスミン血症である。特定の実施形態では、銅代謝関連疾患又は障害は、学業不振、座瘡、注意力欠陥／多動性障害、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アテローム性動脈硬化症、自閉症、アルツハイマー病、カンジダ菌の過剰繁殖、慢性疲労、肝硬変、鬱病、アドレナリン活性上昇、銅タンパク質上昇、ノルエピネフリン活性上昇、感情的メルトダウン線維筋痛症、頻繁な怒り、老人性の銅排泄障害、強い不安、脱毛、肝疾患、活動亢進、甲状腺機能低下症、エストロゲンに対する不耐性、避妊薬に対する不耐性、カイザー・フライシャー環、学習障害、ドーパミン活性低下、多発性硬化症、神経学的問題、酸化ストレス、パーキンソン病、集中力低下（ｐｏｏｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）、集中力低下（ｐｏｏｒ ｆｏｃｕｓ）、免疫機能低下耳鳴り、アレルギー、食用色素に対する過敏症、甲殻類に対する過敏症、皮膚金属不耐症、皮膚過敏症、睡眠障害、爪の白斑から選択される少なくとも１つである。

【0023】

本明細書の用法では、「治療」及び「治療する」という用語は、（ｉ）言及された疾病状態、病状又は障害（又はその症状）を改善し、例えば疾患、病状又は障害の病態又は総体症状を経験しているか又は示している個人における疾患、病状又は障害を改善し（すなわち病態及び／又は総体症状を逆転させるか又は改善し）、例えば疾患又はその症状の重症度を軽減するか、又は疾患の進行を抑制するなど、又は（ｉｉ）言及された生物学的効果を引き出すことを意味する。

【0024】

上記のように、テトラチオモリブデン酸ビスコリン（ＢＣ－ＴＴＭ、ＡＬＸＮ１８４０、コリンチオモリブデン酸、チオモリブデン酸及びＷＴＸ１０１としても知られている）が本開示の方法において投与される。

【0025】

ＢＣ－ＴＴＭは、ＷＤの治療のために開発中のファーストインクラスのＣｕタンパク質結合剤であり、国際公開第２０１９／１１０６１９号パンフレット（その全体が参照により本明細書に援用される）に詳細に記載されている。ＢＣ－ＴＴＭ単剤療法は、２８人のＷＤ患者で評価されており、ＢＣ－ＴＴＭは、ベースラインと比較して、２４週目の平均血清非セルロプラスミン結合Ｃｕ（ＮＣＣ）を７２％減少させることが示された。ＢＣ－ＴＴＭによる治療は、一般に、忍容性が良好であり、報告された有害事象（ＡＥ）のほとんどは、軽度（グレード１）～中等度（グレード２）であった。最も頻繁に報告された薬物関連ＡＥは、血液学的パラメータの変化、疲労、硫黄性おくび及び他の胃腸症状であった。可逆的な肝機能検査値の上昇が患者の３９％で観察され；これらの上昇は、軽度～中等度で無症候性であり、ビリルビンの顕著な増加を伴わず、用量の低減又は治療の中断により正常化された。ＢＣ－ＴＴＭによる治療開始時、逆説的な神経学的悪化は、観察されなかった。

【0026】

ＢＣ－ＴＴＭの治療有効量は、以前に確立されている。例えば、特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、１日当たり約１５～６０ｍｇの範囲で投与され得る。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、１日約１５ｍｇの量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、１日約３０ｍｇの量で投与される（例えば、１日２回服用される約１５ｍｇ又は１日１回服用される２錠の１５ｍｇ錠剤）。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、１日約４５ｍｇの量で投与される（例えば、１日３回服用される約１５ｍｇ又は１日１回服用される３錠の１５ｍｇ錠剤）。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、１日約６０ｍｇの量で投与される（例えば、１日４回服用される約１５ｍｇ又は１日１回服用される４錠の１５ｍｇ錠剤）。

【0027】

特定の他の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、約１５～６０ｍｇの範囲で１日おきに投与され得る。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、約６０ｍｇの量で１日おきに投与される。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、約１５ｍｇの量で１日おきに投与される。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、約３０ｍｇの量で１日おきに投与される。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、約４５ｍｇの量で１日おきに投与される。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭは、約６０ｍｇの量で１日おきに投与される。

【0028】

本開示の特定の実施形態では、治療中にＢＣ－ＴＴＭの治療有効量を増加させることでさらなる利益が提供され得る。したがって、特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの治療有効量は、治療の６週間後（すなわち４２日後）に増加される。例えば、特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの初期治療有効量（すなわち１日目～４２日目）は、１日約１５ｍｇである。ＢＣ－ＴＴＭの引き続く治療有効量の増加（すなわち例えば４３日目など、４２日目後）は、特定の実施形態では、１日約３０ｍｇである。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの引き続く治療有効量の増加は、１日約４５ｍｇである。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの引き続く治療有効量の増加は、１日約６０ｍｇである。例えば、特定の他の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの初期治療有効量は、１日約３０ｍｇである。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの引き続く治療有効量の増加は、１日約４５ｍｇである。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの引き続く治療有効量の増加は、１日約６０ｍｇである。

【0029】

本開示の特定の実施形態では、治療中にＢＣ－ＴＴＭの治療有効量を低減することでさらなる利益が提供され得る。したがって、特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの治療有効量は、治療の６週間後（すなわち４２日後）に低減される。例えば、特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの初期治療有効量（すなわち１日目～４２日目）は、１日約６０ｍｇである。ＢＣ－ＴＴＭの引き続く治療有効量の低減（すなわち例えば４３日目など、４２日目以降）は、特定の実施形態では、１日約４５ｍｇである。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの引き続く治療有効量の低減は、１日約３０ｍｇである。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの引き続く治療有効量の低減は、１日約１５ｍｇである。例えば、特定の他の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの初期治療有効量は、１日約３０ｍｇである。特定の実施形態では、ＢＣ－ＴＴＭの引き続く治療有効量の低減は、１日約１５ｍｇである。

【0030】

本明細書の用法では、「個人」、「患者」又は「対象」という用語は、同義的に使用され、哺乳類をはじめとする任意の動物を指し、少なくとも１つの実施形態ではヒトを指す。特定の実施形態では、対象は、健常対象である。特定の実施形態では、対象は、ＷＤに罹患している。本明細書に記載される本開示の方法の特定の実施形態では、対象は、肝硬変を有する。特定の他の実施形態では、対象は、肝硬変を有しない。

【0031】

本開示の方法は、第一選択治療として有用である。したがって、本開示の方法の特定の実施形態では、対象は、以前にウィルソン病の治療を受けていない（すなわち未治療の対象）。

【0032】

本開示の方法の特定の実施形態では、対象は、以前にＷＤの標準治療（ＳｏＣ）治療を受けている。例えば、特定の実施形態では、対象は、以前にトリエンチン（トリエチレンタトラミンとしても知られている；Ｎ’－［２－（２－アミノエチルアミノ）エチル］エタン－１，２－ジアミン）を投与されたことがある。トリエンチンは、ＣＵＰＲＩＯＲ（登録商標）（ＧＭＰ－Ｏｒｐｈａｎ Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ Ｌｔｄ）、ＳＹＰＲＩＮＥ（登録商標）（Ａｔｏｎ Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．）又はＣｕｆｅｎｃｅ（Ｕｎｉｖａｒ，Ｉｎｃ．）という名称の下で販売されることもある。特定の実施形態では、対象は、Ｄ－ペニシラミン（ペニシラミン酸としても知られている；（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－３－スルファニルブタン）を以前に投与されたことがある。Ｄ－ペニシラミンは、ＣＵＰＲＩＭＩＮＥ（登録商標）（Ｖａｌｅａｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）又はＤＥＰＥＮ（登録商標）（Ｍｅｄａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）という名称の下で販売されることもある。特定の実施形態では、対象は、以前に亜鉛を投与されている。特定の実施形態では、対象は、以前にトリエンチン、Ｄ－ペニシラミン及び／又は亜鉛を投与されている。特定の他の実施形態では、対象は、以前にトリエンチン及び／又はＤ－ペニシラミンを投与されている。

【0033】

本開示の方法の特定の実施形態では、対象は、２４週間以下のＷＤの標準治療を受けている。特定の実施形態では、標準治療は、１２週間以下、又は６週間以下、又は４週間以下であった。標準治療は、継続的である必要はない。例えば、対象は、合計２４週間以下（例えば、１２週間以下、又は６週間以下、又は４週間以下）の治療を断続的に受け得る。しかしながら、特定の実施形態では、標準治療は、継続的である。

【0034】

本開示の方法の特定の実施形態では、対象は、４週間以下のＷＤの標準治療を受けている。

【0035】

本開示の方法の特定の実施形態では、対象は、少なくとも４週間のＷＤの標準治療を受けている。特定の実施形態では、標準治療は、少なくとも６週間、又は少なくとも１２週間、又は少なくとも２４週間、又は少なくとも３６週間、又は少なくとも４８週間、又は少なくとも５２週間の長さであった。標準治療は、継続的である必要はない。例えば、対象は、合計少なくとも４週間（例えば、少なくとも６週間、又は少なくとも１２週間、又は少なくとも２４週間、又は少なくとも３６週間、又は少なくとも４８週間、又は少なくとも５０週間、又は少なくとも５２週間、又は少なくとも１０３週間）の治療を断続的に受け得る。しかしながら、特定の実施形態では、標準治療は、継続的である。

【0036】

本開示の方法の特定の実施形態では、対象は、ウィルソン病などの銅代謝関連疾患又は障害に関して以前に治療を受けていないか、又は４週間以下の標準治療受けている。

【0037】

本明細書に記載される本開示の方法において、対象は、テトラチオモリブデン酸ビスコリンを投与する少なくとも２週間前に標準治療を完了していた。特定の実施形態では、対象は、テトラチオモリブデン酸ビスコリンを投与する少なくとも３週間前、少なくとも４週間又は少なくとも６週間前に標準治療を完了していた。

【0038】

特定の実施形態では、先行詞「約」を使用して値が近似値として表現される場合、特定の値が１つの可能な実施形態を形成し、所与の値の変動が可能であることが理解されるであろう（例えば、約８０は、８０±１０％を含み得る）。さらに、各範囲の端点は、他の端点との関係においても、他の端点から独立しても重要であることが理解されるであろう。

【0039】

本明細書の用法では、「総銅」とは、生物学的サンプル（例えば、全血、血清又は血漿）中の全ての銅種の合計を指す。総銅には、セルロプラスミン（Ｃｐ）結合銅及び全種の非セルロプラスミン結合銅の両方が含まれる。一般に、総銅は、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ－ＭＳ）などの質量分析法により、高い感度及び特異性で直接測定され得る。

【0040】

「ＮＣＣ」という用語は、セルロプラスミンに結合していない総銅の割合（すなわち「非セルロプラスミン結合銅」）を指す。現在利用可能な推定方法の下では、ＮＣＣは、血液（例えば、血清又は血漿など）中の総銅及びＣｐの直接測定並びに以下の式を使用して推定される。

【数1】

【0041】

この計算は、６つの銅原子が常に１つのＣｐ分子に結合しており、ＮＣＣ及びセルロプラスミンの濃度が直接相関しているという仮定を前提とする。実際には、Ｃｐは、１つのＣｐ１分子当たりの銅原子の数にかなりの不均一性を示し得る。実際には、６～８個の銅原子がＣｐに結合し得、ＷＤでは、通常、１つのＣｐ１分子当たり６個未満の銅原子が結合する。さらに、研究１０８における健常対象からの臨床データは、１つのＣｐ１分子当たり平均しておよそ４．６個のＣｕ原子が結合していることを示した。

【0042】

新たに利用可能な直接測定法の下では、ＮＣＣは、ＮＣＣアッセイを使用して直接測定される（このような直接測定されたＮＣＣは、本明細書では「ｄＮＣＣ」と称され、ＮＣＣの直接測定を伴うこのようなＮＣＣアッセイは、本明細書では「ｄＮＣＣアッセイ」と称される）。したがって、本明細書で開示される特定の実施形態では、ＮＣＣは、ｄＮＣＣアッセイを使用して直接測定される。例えば、特定の実施形態では、ＮＣＣは、その全体が参照により本明細書に援用される、２０２１年３月１８日に公開されたＰＣＴ特許出願公開国際公開第２０２１／０５０８５０号パンフレットにおいて「ＮＣＣアッセイ」として記載されているｄＮＣＣアッセイを使用して直接測定される。さらなる特定の実施形態では、ＮＣＣを直接測定するために使用されるｄＮＣＣアッセイは、これもその全体が参照により援用される、２０２０年９月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／０７７，１５５号明細書で開示されている抗体又は抗体混合物を使用する。

【0043】

ＢＣ－ＴＴＭで治療された対象では、非セルロプラスミン結合銅としては、アルブミン、トランスキュプレイン及び他の量が少ない血漿タンパク質に結合している（集合的にＬＢＣと称される）か、又はテトラチオモリブデン酸－Ｃｕ－アルブミン三者複合体（ＴＰＣ）中にある総銅の画分が挙げられる。ＴＰＣの濃度は、直接測定され得ないが、特定の実施形態ではモリブデン濃度をサロゲートとして使用し、ＴＰＣの濃度を推定し得る。

【0044】

「ＮＣＣ_{ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ}」という用語は、セルロプラスミンと結合していないか又はＴＰＣ中にない総銅（すなわちＬＢＣ）の画分を指し、血液（例えば、血清又は血漿など）中のモリブデンの直接測定値をＮＣＣ値から差し引くことによって計算される。したがって、「ＮＣＣ_{ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ}」は、ＢＣ－ＴＴＭで治療された対象の血液中のモリブデン－銅－アルブミン三者複合体の存在を考慮したＮＣＣ値の補正である。

【0045】

「ＬＢＣ」又は「不安定結合銅」という用語は、アルブミン、トランスキュプレイン及び他の量が少ない血漿タンパク質に結合する総銅の画分を指す。したがって、ＬＢＣは、セルロプラスミンにもＴＰＣにも結合していない総銅の画分を含む。特定の実施形態では、ＬＢＣ画分は、ＬＢＣアッセイを使用して直接測定される。例えば、特定の実施形態では、ＬＢＣは、その全体が参照により本明細書に援用される、２０２１年３月１８日に公開されたＰＣＴ特許出願公開国際公開第２０２１／０５０８５０号パンフレットにおいて「ＬＢＣアッセイ」として記載されているＬＢＣアッセイを使用して直接測定される。さらなる特定の実施形態では、ＬＢＣを直接測定するために使用されるＬＢＣアッセイは、これもその全体が参照により援用される、２０２０年９月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／０７７，１５５号明細書で開示されている抗体又は抗体混合物を使用する。その中にＴＰＣが存在しない生物学的サンプル（血液、血清又は血漿など）では、ＮＣＣ及びＬＢＣの画分は、同じである。

【0046】

特定の実施形態では、ＬＴＣ比は、健常対象と銅代謝関連疾患又は障害の対象とを分類するための最適な閾値を特定するために使用される。特定の実施形態では、ＬＴＣ比の最適閾値は、０．２１～０．２７である。特定の実施形態では、ＬＴＣ比の最適閾値は、０．２４である。例えば、ＬＴＣ比は、銅代謝関連疾患又は障害の診断法に使用され得る。特定の実施形態では、対象の生物学的サンプル（例えば、血液、血清、血漿など）のＬＴＣ比が０．２１～０．２７以上であることは、対象が銅代謝関連疾患又は障害を有することを示す。特定の実施形態では、対象の生物学的サンプルのＬＴＣ比が０．２４以上であることは、対象が銅代謝関連疾患又は障害を有することを示す。

【0047】

特定の実施形態では、ｄＮＣＣ比は、健常対象と銅代謝関連疾患又は障害の対象とを分類するための最適な閾値を特定するために使用される。特定の実施形態では、ｄＮＣＣ比の最適閾値は、０．２４５～０．２９５である。特定の実施形態では、ｄＮＣＣ比の最適閾値は、０．２７６である。例えば、ｄＮＣＣ比は、銅代謝関連疾患又は障害の診断法に使用され得る。特定の実施形態では、対象の生物学的サンプル（例えば、血液、血清、血漿など）のｄＮＣＣ比が０．２４５～０．２９５以上であることは、対象が銅代謝関連疾患又は障害を有することを示す。特定の実施形態では、対象の生物学的サンプルのｄＮＣＣ比が０．２７６以上であることは、対象が銅代謝関連疾患又は障害を有することを示す。

【0048】

特定の実施形態では、有効量は、以下に適した量であり得る：
（ｉ）疾患の進行を抑制すること；
（ｉｉ）予防的使用、例えば疾患、病状又は障害の素因があるか又はそのリスクがあるが、依然としてその疾患の病態又は総体症状を経験又は示していない個人における疾患、病状又は障害の発症を予防又は抑制すること；
（ｉｉｉ）疾患を抑制すること；例えば、疾患、病状又は障害の病態又は総体症状を経験しているか又は示している個人における疾患、病状又は障害を抑制すること；
（ｉｖ）言及された疾病状態を改善すること、例えば疾患、病状又は障害の病態又は総体症状を経験しているか又は示している個人における疾患、状態又は障害を改善する（すなわち病態及び／又は総体症状を逆転させるか又は改善する）こと、例えば疾患の重症度を軽減すること；又は
（ｖ）言及された生物学的効果を引き出すこと。

【実施例】

【0049】

本開示の方法は、以下の実施例によってさらに説明されるが、これは、本開示の範囲又は趣旨を、そこに記載された特定の手順及び化合物に限定するものとして解釈されるものではない。

【0050】

背景
血液中の総銅の濃度は、一般に、ＷＤにおける治療応答のモニタリングに有益でないと考えられてきた。血清又は血漿中の総銅濃度は、セルロプラスミンの濃度に大きく依存するが、ＡＴＰ７Ｂの遺伝的機能欠損により、ほとんどのＷＤ患者ではセルロプラスミンの濃度が異常に低いことが知られている。したがって、ＷＤ患者の血清又は血漿中の総銅レベルは、逆説的に低いことになる。成功した治療は、総銅濃度をさらに低下させることが予想されるが、これを解釈するのは困難である。治療を受けたＷＤ患者の血液中の総銅の最適な目標濃度は、不明であるが、セルロプラスミンが正常な健常人の間で確立された検査基準範囲を大幅に下回る可能性が高い。

【0051】

研究２０３（ＳｏＣで治療されたＷＤを有する参加者）及び研究２０１（ＢＣ－ＴＴＭで治療されたＷＤを有する参加者）が開始された時点で、それぞれＮＣＣとＮＣＣ_{ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ}が主要な有効性結果の尺度のサロゲートとして選択された。その理論的根拠は、ＮＣＣが、緩く結合しているか又は「交換可能な」銅の画分を表し、これがＷＤにおける臓器障害を説明するということであった。尿中銅排泄量は、ＢＣ－ＴＴＭ治療によって変化すると予想されなかったため、２４時間の尿中銅排泄量の変化を測定しても情報価値があるとは期待されなかった。

【0052】

新たに開発され、技術的に検証されたＬＢＣアッセイを使用して、以下の研究から第２相臨床サンプルを再分析し、ＢＣ－ＴＴＭ投与時の血漿「遊離」ＮＣＣ又はＮＣＣ_{ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ}を直接定量した：
・研究２０１、ＷＤを有する患者におけるＢＣ－ＴＴＭの有効性及び安全性の非盲検試験、及び
・研究２０３、ＷＤを有する患者の自然経過／標準治療研究。

【0053】

ＢＣ－ＴＴＭ又は標準治療で治療された参加者の血漿中の総モリブデン、総銅、ＮＣＣ及びＬＢＣ（ＬＢＣは、最終的にＮＣＣ_{ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ}を置き換える）の統合解析から、ＢＣ－ＴＴＭ治療中の総銅及びＬＢＣの両方におけるこれまで認識されていなかった動的変化が明らかになった。総銅及びＬＢＣのこれらの動的変化は、ＳｏＣ治療で観察されなかった。各ＳｏＣ治療並びにＢＣ－ＴＴＭの主要特性を表１に示す。

【0054】

【表1】

【0055】

研究２０１
研究２０１は、１８歳以上の新たにＷＤと診断された参加者においてＢＣ－ＴＴＭを２４週間投与し、３６か月の延長期間でＢＣ－ＴＴＭの有効性及び安全性を評価する第２相多施設共同非盲検試験であった。この研究は、米国及び欧州の施設で実施された。参加者は、１５～１２０ｍｇ／日の個別化された用量でＢＣ－ＴＴＭの投与を受けた。合計２８人の参加者が登録され、治療を受けた（コホート１の１０人［治療経験がある］、コホート２の１８人［未治療であるか又は最小限の治療のみ受けている］）。参加者１名は、コホート２に登録されたが、治療を受けなかった。

【0056】

この研究の主要目的は、１８歳以上のＷＤの参加者におけるモリブデン血漿濃度について調整されたＮＣＣレベルに対する２４週間のＢＣ－ＴＴＭの有効性を評価することであった。登録時における正常な基準範囲内又はそれを超えるＮＣＣレベルが必要であった。副次的な目的としては、安全性及び忍容性、肝測定値、能力障害、神経学的状態に対するＢＣ－ＴＴＭの効果並びにＰＫデータの収集が挙げられる。３６か月の延長段階では、ＢＣ－ＴＴＭの忍容性並びに長期安全性及び有効性を評価した。投薬は、ＮＣＣレベル（モリブデン血漿濃度に合わせて調整）及び安全性データに基づいて個別化した。有効性の主要評価項目は、成功した参加者の割合、すなわち血漿「遊離」銅の制御又はベースラインからの改善を達成した参加者の割合に関連していた。事後解析では、セルロプラスミンにもＴＰＣにも結合していない血漿中の「遊離」銅を定量化するためのＬＢＣアッセイの結果を使用して、血漿銅の制御も評価した。

【0057】

研究２０１の過程で、最初に観察された薬物関連肝酵素の上昇に対処するため、ＢＣ－ＴＴＭの最大許容量を減量した。参加者は、最初の４～８週間、ベースラインＮＣＣ濃度に基づいて１５～１２０ｍｇ／日のＢＣ－ＴＴＭの開始用量を投与され、続いて残りの研究期間にわたって応答に応じて個別化投薬を受けた。ＢＣ－ＴＴＭの投薬は、当初１日２回（ＢＩＤ）与えられたが、大多数の登録が行われる前の２０１６年３月のプロトコル改正により、（治験責任医師が適切と判断した場合）１日１回の投薬が実施された。１２０ｍｇ／日の投与を受けた参加者において、治療中にアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）が顕著に上昇した後、用量レジメンが最大用量の３００ｍｇ／日から６０ｍｇ／日に修正された。サンプルサイズが小さく、データにばらつきがあるため、全体を通して用量の加重平均の中央値を引用する。

【0058】

研究２０１の主要評価項目は、ベースラインから２４週目までのＮＣＣ／ＮＣＣ_{ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ}の変化であった。ＢＣ－ＴＴＭでの治療により、４週目からＮＣＣ_{ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ}で測定／計算される「遊離」銅濃度が急速に減少した（ｐ＝０．０１９９）。ＮＣＣ濃度の平均減少もベースラインと対比して２４週目に統計的に有意であった（ｐ＜０．０００１）。２４週目までに、前回の治療時間に関係なく、ほぼ全ての参加者が成功裏にＢＣ－ＴＴＭによる治療を受けたと見なされた（参加者の９０．０％がコホート１に含まれ、参加者の８３．３％がコホート２に含まれていた）。これらの結果は、長期の延長期間を通して維持され；最終評価時点では、２４人（８５．７％［コホート１の９人（９０．０％）、コホート２の１５人（８３．３％）］）が、前向きに定義された研究主要評価項目に従い、ＢＣ－ＴＴＭによる治療に関して成功したと見なされた。

【0059】

研究２０３
研究２０３は、ＳｏＣ薬剤（キレート化剤であるペニシラミン及びトリエンチン並びに亜鉛）で治療されたＷＤを有する参加者の銅パラメータを評価するための２４ヶ月の多施設共同観察研究であった。以前のＷＤ治療の期間に応じて、参加者を２つのコホートに割り当てた（コホート１：２８日を超える以前のＷＤ治療；コホート２：未治療であるか又は２８日以下の以前のＷＤ治療）。本研究の参加者は、既存の薬物療法を継続し、ＢＣ－ＴＴＭ又は他の治験薬の投与を受けなかった。

【0060】

本研究の主要目的は、ＳｏＣで治療を受けたＷＤの参加者の血漿及び尿中の銅パラメータを評価することであった。本研究の副次目的は、銅パラメータを、病歴及び投薬歴、臨床検査結果、ＷＤ薬物療法及び臨床の全体的印象（ＣＧＩ）をはじめとする対応する臨床データと比較することであった。有効性の主要評価項目は、ＮＣＣの正規化濃度（０．８μＭ～２．３μＭ）を達成若しくは維持したか、又は登録時に基準範囲を超えていた場合、６ヶ月の治療中にＮＣＣの少なくとも２５％の減少に達した参加者の割合であった。事後解析では、セルロプラスミンに結合していない血漿中の銅を定量化するためのＬＢＣアッセイの結果を使用して、血漿銅の制御も評価した。

【0061】

合計６４人の参加者が登録され、そのうちの５７人が研究を完了し、７人が研究を中止した。合計３３人（５１．６％）の参加者が６ヶ月目までＮＣＣの正常な基準範囲を達成及び／又は維持することに成功した。

【0062】

主要有効性解析は、ＬＢＣデータを使用して反復した。全体として、６２人（９６．９％）の参加者が６ヶ月目までＬＢＣを基準範囲内（男性：０．９～４．４μｍｏｌ／Ｌ、女性：０．７～５．９μｍｏｌ／Ｌ）に達成及び／又は維持することに成功した。研究２０３の血漿サンプルの分析では、研究２０１の分析（図１Ａ）と比較して、組織からの銅の動員が最小限であることが明らかになった（図１Ｂ）。

【0063】

研究２０３では、採血の頻度が減少したが、研究２０１と比較した傾向の違いは、非常に明確である。コホート２（未治療）参加者では、ベースラインから４週目までに総銅及びＬＢＣが非常にわずかに減少したが、これは、組織からの測定可能な動員なしの血漿中の控えめな脱銅効果と一致する。その後、総銅量又はＬＢＣのいずれにも変化がなかった。治療経験のある参加者の間では、総銅及びＬＢＣの両方がベースラインで低く、４８週間を通して実質的に変化がなかった。ベースラインの２４時間尿中の銅排泄量は、コホート２の方が数値的に大きかった（左パネル）が、２４時間尿中の銅排泄量は、時間の経過と共にほとんど変化せず、コホート２の未治療参加者では４８週目にわずかな減少が認められた。

【0064】

４８週目までに、総銅濃度は、およそ４μＭの最下点に達した。これは、正常な基準範囲を下回る一方、セルロプラスミンが相対的に欠乏しているため、ＷＤを有する参加者は、ほぼ常に総銅の基準範囲を大幅に下回ることが予想される。上記のように、総銅の正常な基準範囲は、ＷＤでは当てはまらない。

【0065】

ペニシラミン、トリエンチン及び／又は亜鉛で治療を受けた参加者では、５１．６％の参加者が、６ヶ月の終わりまでに基準範囲内の目標ＮＣＣ濃度を達成することによって定義される「成功」を達成した。事後解析では、参加者の９６．９％が、６ヶ月の終わりまでに基準範囲内の目標ＬＢＣ濃度を達成することによって定義される成功としての成功を達成した。いずれの測定値も、銅の制御又はＷＤの臨床症状に関して情報価値があるかどうかは明らかでない。血漿中のＮＣＣ、総銅又はＬＢＣ濃度のベースラインから４８週目までの変化（又は変化率）を測定しても、銅のコントロールに関する知見は、ほとんど得られなかった。対照的に、研究２０１における最初の２４週間の治療中のＢＣ－ＴＴＭの顕著な銅動員効果は、この違いを非常に明確にする。

【0066】

研究１０６
研究１０６は、単回投与ＢＣ－ＴＴＭ ＰＫと安全性が、健康な日本人参加者と外国人参加者との間で同等であるかどうかを評価するための非盲検、２期間、並行群間、第１相試験であった。この研究は、現在進行中の第３相の研究３０１への日本人患者の登録及び日本でのＢＣ－ＴＴＭの新薬申請を支援するために、英国の単一センターで実施された。

【0067】

参加者は、２４人（日本人１２人、外国人１２人）であった。投薬期間１では、参加者は、一晩の絶食に続いて、１日目の０時間目に１錠の１５ｍｇのＢＣ－ＴＴＭ ＥＣ錠剤を単回投与された。投薬期間２では、参加者は、一晩の絶食に続いて、１日目の０時間目に４錠の１５ｍｇのＢＣ－ＴＴＭ ＥＣ錠剤（合計６０ｍｇ）を単回投与された。参加者は、各投薬期間中に投薬後１０日間追跡され、投薬期間の間隔は、最低１４日間（＋２日間）空けられた。ＰＫ及びＰＤ濃度を初日には数時間にわたって測定し、次の９日間では１日１回測定した。したがって、研究１０６では、薬物投与後数時間以内のＰＫ及びＰＤプロファイルの変化を調べることができる。これらのＰＫ／ＰＤプロファイルは、研究２０１の１日目、１２週目及び２４週目の受診時に得られた１２時間の高密度ＰＫ／ＰＤプロファイルと比較され得る。

【0068】

考察
ＢＣ－ＴＴＭのＰＫパラメータ及びＰＤプロファイルを日本人及び外国人の参加者間で比較したところ、絶食条件下でＢＣ－ＴＴＭ１５ｍｇ又は６０ｍｇを単回経口投与した後に有意差はなかった。したがって、本明細書では解析の目的で民族コホートを統合した。図２は、研究１０６の健常参加者の平均（ＳＤ）ＰＫ／ＰＤプロファイルを示す。これらのデータ提示及び他の情報の詳細は、研究１０６のＣＳＲに見出され得る。

【0069】

ＷＤを有する参加者をＢＣ－ＴＴＭで治療するための治療モニタリングツールの選択を促進するために、研究１０６について評価を実施し、研究２０１と比較した。これは、脱銅期から維持期への用量漸増時、ＷＤを有する参加者が治療不足又は治療過多にならないように、研究２０１の血漿中の総モリブデン、総銅、ＬＢＣ及びＬＢＣ／総銅比、セルロプラスミン結合銅（ＣｐＣ）及びＴＰＣなどのＰＫ／ＰＤデータで達成され、確認され得る。ＢＣ－ＴＴＭ臨床開発プログラムでは、疾患並びに参加者の不均一性及び対応する個別化された投薬の実施により、各参加者は、治療に対する応答が時間的及び規模的に異なり得る。したがって、上記のＰＫ／ＰＤパラメータの包括的及び／又は組み合わせについて提案された調査は、ＷＤを有する参加者において最適な有効性及び安全性の治療結果を達成するための時間枠及びパラメータ範囲を定義するうえで重要である。

【0070】

総モリブデン：ＢＣ－ＴＴＭの単回１５ｍｇ又は単回６０ｍｇのいずれかの投与後、総モリブデンの血漿濃度－時間プロファイルは、同様であり、ＰＫパラメータについても同様であった。血漿モリブデンが最大になるまでの時間（Ｔ_ｍａｘ）は、５時間であり、推定ｔ_１／２は、６４～８４時間又は２．７～３．５日であった。血漿総モリブデンＣ_ｍａｘとＡＵＣは、１５ｍｇから６０ｍｇまでの用量比例未満の増加であり、より高い用量のＢＣ－ＴＴＭに対応する用量比例（線形）増加は、観察されなかった（図２）。平均用量で正規化された血漿総モリブデンＡＵＣ及び限外濾過モリブデンＡＵＣに基づいて、血漿モリブデンのおよそ９６％は、ＴＰＣの形態であることが予想された。

【0071】

総銅：総合された民族データは、投与前のベースラインで１３．１μＭ（範囲：６．２～１９．２μＭ）の血漿総銅の平均値を有した。ＢＣ－ＴＴＭの１５ｍｇ及び６０ｍｇの単回投与後、それぞれ２３．０及び２１．７μＭの最大個別血漿総銅濃度が観察された。これらの値は、正常な健常対象の血清又は血漿総銅の基準範囲内にあり、ＩＣＰ－ＭＳアッセイ（ＬａｂＣｏｒｐ．銅、血清又は血漿［インターネット］．２０２０ａ．［２０２０年７月１６日引用］．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｌａｂｃｏｒｐ．ｃｏｍ／ｔｅｓｔｓ／００１５８６／ｃｏｐｐｅｒ－ｓｅｒｕｍ－ｏｒ－ｐｌａｓｍａから入手可能）を使用することで１１．３～２６．１μＭであると報告されている。

【0072】

血漿総銅濃度は、投与後８～１２時間で最大値に達し、ベースラインからの最大中央値増加は、およそ２６～３４％であった（図２）。投与後８～１２時間の時点後、銅濃度は、徐々に減少し、ベースラインからの変化率の中央値は、投与前のベースラインのおよそ１０％未満内に達した。投与後２４０時間目に、総銅濃度は、投与前のベースラインに戻った。

【0073】

血漿中の総銅の早期増加は、総モリブデンの出現と密接に並行しており、ＢＣ－ＴＴＭの吸収直後のＴＰＣの急速な形成と一致した。総銅の最大血漿濃度は、投与後約３～７時間までに総モリブデンの最大血漿濃度に続いた。

【0074】

ＬＢＣ及びＬＢＣ／総銅比：統合された民族データは、投与前のベースラインで０．８０５μＭ（範囲：０．４８～１．４９μＭ）の血漿ＬＢＣ平均値を有した。ベースラインにおける全参加者の平均血漿ＬＢＣ濃度は、血漿総銅濃度（ＬＢＣ／総銅比）の約６％（±２％）であった。最初の３時間で一時的な減少があり（一方で血漿総モリブデン濃度が増加していた）、その後、増加し（図２の挿入図）、１５ｍｇ又は６０ｍｇのいずれかの投与後、時間の経過と共に最終的に血漿ＬＢＣの投与前のベースライン濃度に戻った（図２）。単回の１５ｍｇ及び６０ｍｇのＢＣ－ＴＴＭ投与後、それぞれ２．７９及び２．９３μＭの最大個別血漿ＬＢＣ濃度が観察された。これらの値は、正常な健常対象の血漿ＬＢＣの基準範囲内にある（表２を参照されたい）。

【0075】

【表2】

【0076】

統合された民族性及び用量データからの血漿ＬＢＣ濃度の中央値は、投与後３時間で投与前ベースライン濃度のおよそ５０～７０％の最下点に達し、続いて投与後１２～２４時間で投与前ベースライン濃度のおよそ８０～９０％に増加し、投与後１０日目にベースラインに戻った（図２）。血漿中の総モリブデンがＣ_ｍａｘに向かってなおも増加し続けている間、最初の３時間では血漿中のＬＢＣが減少したことから、ＢＣ－ＴＴＭは、血漿中の「遊離」銅又はＬＢＣを低減する初期能力を有することが暗示される。引き続くＬＢＣの増加は、ＢＣ－ＴＴＭの全体的な肝臓脱銅効果又は銅動員効果に関連し得、投与後約１２時間でほぼ同時に最大血漿総銅濃度及びＬＢＣ濃度に達する。投薬後の最初の１２時間の時間枠内では、比較的少量の動員された銅分子は、安定したＴＰＣに完全に捕捉されず、ＬＢＣとして測定可能になった可能性がある。ＢＣ－ＴＴＭがＣｕと結合するのは、Ｃｕがアルブミン分子のＮ末端ヒスチジンのような特定の位置に存在する場合であり、それ以外の場所に結合した銅分子は、ＢＣ－ＴＴＭと結合せず、ＴＰＣを形成しないこともある。別の可能性として、研究１０６からの投与後サンプルでは、ＢＣ－ＴＴＭ治療後１２～２４時間以内にトランスキュプレインレベルが増加したことを示すデータがあり、これも血漿ＬＢＣ濃度のピーク時間を説明し得る。

【0077】

研究１０６の平均（ＳＤ）血漿ＬＢＣ／総銅比－時間プロファイルは、血漿ＬＢＣプロファイルと同様の傾向を示す（図３、挿入図）。ＢＣ－ＴＴＭ投与後の効果（血漿総銅及びＬＢＣ）－時間曲線下の面積に基づくＡＵＥＣ計算（全参加者データをプール、民族及び用量の両方）は、血漿ＬＢＣの百分率が血漿総銅に対してとほとんど変化しない７％（±１％）ことを示す。これは、組織銅動員によって血漿総銅及び血漿ＬＢＣの両方の濃度に動的変化があったにもかかわらず、「遊離」銅の相対量が実質的に無変化であり、ＢＣ－ＴＴＭの単回投与後も正常な基準範囲内に十分に維持されていたことを示唆する。

【0078】

研究２０１では、血漿中の総モリブデン及び銅の１２時間の高密度ＰＫ／ＰＤサンプルを１日目、１２週目、２４週目に採取した。「遊離」銅を評価するための血漿サンプルも受診時の０、４及び８時間目に収集し、ＬＢＣ濃度について分析した。研究１０６と研究２０１との比較の目的のため、図３は、両方の研究の投薬後１２時間の時間窓内のＬＢＣ／総銅比－時間プロファイルを重ね合わせている。Ｃ_ｍａｘに貢献した全ての人々を使用して加重平均用量の計算を行い、１日目、１２週目及び２４週目では、対応する数値は、３０ｍｇ、３３．６ｍｇ及び３５．８ｍｇであった。図３（上）は、投与前１日目の平均血漿ＬＢＣ／総銅比－時間プロファイルが正常範囲の上限をわずかに下回り、ＳＤが正常を十分に上回っていたことを示す。加重平均用量３０ｍｇのＢＣ－ＴＴＭ後、ＬＴＣ比は、投与後４時間でベースラインから約３０％低下し、８時間後にわずかに回復した。１２週間の反復投与後、受診日に加重平均用量３３．６ｍｇのＢＣ－ＴＴＭ治療を行った後、平均ＬＢＣ／総銅比－時間プロファイルは、１日目と比較してわずかに低下し、脱銅期がなおも進行中であり得ることが示唆された。２４週目では、投与前のＬＴＣ比は、１日目の投与前のベースラインと比較して約３０％の大幅な減少を有し、投与後４時間では約５０％低下の最下点を有した。１５ｍｇ又は６０ｍｇのＢＣ－ＴＴＭの単回投与後、全体的なＬＢＣ／総銅比時間プロファイルは、研究１０６のものをなおも上回っていたにもかかわらず、ＢＣ－ＴＴＭの加重平均用量は、第２４週目の受診日に３５．８ｍｇとわずかに増加し、脱銅期が完了し得ることが示唆された（図３、下）。

【0079】

臨床的証拠は、ＷＤを有する参加者の診断のためのＬＴＣ比又はｄＮＣＣ比の使用を支持する。例えば、ＴＰＣが存在しない対象、すなわちＢＣ－ＴＴＭによる治療を受けていない対象では、ＮＣＣ及びＬＢＣの画分が同じであるため、ｄＮＣＣ比をこの目的に使用し得る。理論に束縛されるものではないが、ＬＢＣ（又はＢＣ－ＴＴＭによる治療を受けていない対象ではｄＮＣＣ）は、アルブミン及び銅特異的タンパク質であるＣｐ及びトランスキュプレイン以外のタンパク質に結合した循環銅の画分を表すと考えられている。ＬＢＣ値（ＢＣ－ＴＴＭによる治療を受けていない対象ではｄＮＣＣ値）は、総銅に対する百分率又は比率で表した場合、未治療のＷＤ患者の銅代謝の変化を反映し、１回の採血でＷＤを診断できる可能性を有する。例えば、健常患者について確立された正常な基準範囲と比較することにより、ＬＴＣ比値又はｄＮＣＣ比の上昇を独立検査として使用し、ＷＤを診断するか、又は対象をＢＣ－ＴＴＭによる治療に適すると同定し得る。

【0080】

メタ解析に基づいて、ＬＴＣ比の平均値及び範囲は、研究１０６、研究１０４、研究２０１、研究２０３、研究１０８及び研究３０１のデータに基づいて計算した。このデータを表３に示す。

【0081】

【表3】

【0082】

表３の値を取得するために使用した方法：表３の「参照」サンプルは、ＢｉｏＩＶＴ及びＬａｍｐｉｒｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した個々のロットの成人ヒトリチウムヘパリン血漿サンプルであった。血漿サンプルは、到着時に－７０℃で保存した。血漿サンプル中のセルロプラスミン結合銅（ＣｐＣ）及びＬＢＣの濃度は、検証済みのＩＣＰ－ＭＳ法を用いて測定した。アッセイでは、最初に抗Ｃｐ抗体を使用してＣｐを免疫捕捉し、ＩＣＰ－ＭＳ法によってＣｐＣ濃度を測定した。得られた非セルロプラスミン溶液に対してＥＤＴＡキレート処理と濾過を実行し、ＩＣＰ－ＭＳ分析のためのＬＢＣを血漿から単離した。総血清銅濃度は、ＣｐＣ及びＬＢＣで構成される。

【0083】

総銅に対するＬＢＣの比率は百分率で表され、以下のように計算される。

【数2】

平均値及び分散を性別間で比較した。正規性の仮定は、コルモゴロフ・スミルノフ検定及びアンダーソン・ダーリング検定を用いて検証した。次に、Ｂｏｘ－Ｃｏｘ法を適用して、正規化変換を同定した。Ｄｉｘｏｎ法及びＴｕｋｅｙ法を用いて、変換されたデータに対して外れ値検出を実行した。変換されたデータについて性別の平均値及び分散を比較し、ｚ検定の結果に基づいてデータを分配した。サブグループ基準範囲は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（２００８）で提案されているノンパラメトリック法を用いて取得した（ＥＰ２８－Ａ３ｃ：Ｄｅｆｉｎｉｎｇ，Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ，ａｎｄ Ｖｅｒｉｆｙｉｎｇ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｒｖａｌｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｗａｙｎｅ，ＰＡ）。

【0084】

表３の「基準」範囲の研究対象集団：上記の表３に記載される「基準」範囲のサンプルは、１２２人の女性対象及び１２６人の男性対象からのｎｇ／ｍＬで表されるＬＢＣ及び総銅濃度で構成された。対象の年齢中央値は、４０歳（Χ＝４１．３、範囲１８～７４）であった。女性の年齢中央値は、３９．０歳（Χ＝４０．６、範囲１８～７４）であり、男性の年齢中央値は、４２．０歳（Χ＝４１．９、範囲１８～７０）であった。全体及び男女別の％ＬＢＣの記述統計を表４に示す。ｔ検定から、％ＬＢＣの平均値が男女で異なることが明らかになった（Χ＝女性１０．０３％、Χ＝男性１４．９７％；ｐ＜０．０００１）。グループ分散も不等であった（Ｆｏｌｄｅｄ Ｆ検定、ｐ＝０．０００８）。

【0085】

【表4】

【0086】

健常患者とウィルソン病患者との分類のための計算されたＬＴＣ比の最適閾値
ＬＴＣ比を使用して、患者が健康であるか又はウィルソン病を有するかを分類するための最適な閾値を決定するために、３３７人の健常患者及び７０人のウィルソン病患者のＬＴＣ比を解析した（図４）。具体的には、研究１０４、研究１０６及び研究１０８からの２４８の「参照」サンプル（図４では「ＨＶ」として特定される）及び８９の健常患者サンプルを解析した。７０人のウィルソン病患者のコホートは、研究３０１、研究２０１及び研究２０３からのものである。解析は、以前の治療による潜在的な交絡効果のため、未治療の患者の治療に焦点を当てた。

【0087】

健常患者とウィルソン病患者との分布を箱ひげ図で表した（図５）。箱ひげ図を使用して、平均値を表示することで数値データの分布及び歪度を観察した。ｔ検定を実行し、健常患者とウィルソン病患者との間のＬＴＣ比の平均値の差の有意性（ｐ値＜２．２ｅ－１６）を示した。各ＬＴＣ比データでの性能を０～１で測定し、健常患者とウィルソン病患者とを分類した。

【0088】

このスコアリング分類子の性能を評価するＲパッケージ及び可視化するｇｇｐｌｏｔＲパッケージである、ＲＯＣＲ（Ｓｉｎｇ Ｔ，ｅｔ ａｌ．（２００５）ＲＯＣＲ：ｖｉｓｕａｌｉｚｉｎｇ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｉｎ Ｒ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２１（２０）：３９４０－１）を使用した（図６）。受信動作特性（ＲＯＣ）曲線をプロットし（図６）、健常患者とウィルソン病患者との分類にＬＴＣ比を使用した場合の性能を示す。データセットは、わずかに不均衡であったため、Ｆスコアを使用して最適な閾値値を定義した。さらに、ＲＯＣＲツール（Ｓｉｎｇ Ｔ ｅｔ ａｌ．（２００５））を使用してＦスコアを測定した。

【0089】

約０．７３のＦスコア最大値で、０．２４又はＬＴＣ比の２４％という最適閾値が観察された（図７）。特異性及び感度のトレードオフを考慮して、Ｆスコアが０．７を超える閾値の範囲を調査した。ＬＴＣ比の閾値の範囲は、図８に示すように定義された（すなわち両端を含めて０．２１～０．２７）。最後に、ＲのＣａｒｅｔ（Ｋｕｈｎ．（２００８），Ｊ．Ｓｔａｔ．Ｓｏｆｔ．，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｍｏｄｅｌｓ ｉｎ Ｒ ｕｓｉｎｇ ｃａｒｅｔ Ｐａｃｋａｇｅ ２８；１－２６）ライブラリからのｃｏｎｆｕｓｉｏｎＭａｔｒｉｘ関数を使用して、観測クラス及び予測クラスと関連統計とのクロス集計を計算した。

【0090】

健常患者とウィルソン病患者との分類のための計算されたｄＮＣＣ比の最適閾値
ｄＮＣＣ比を使用して、患者が健康であるか又はウィルソン病を有するかを分類するための最適な閾値を決定するために、１４９人の健常患者及び４１人のウィルソン病患者のｄＮＣＣ比を解析した。具体的には、研究１０４、研究１０６及び研究１０８からの６０の「参照」サンプル及び８９の健常患者サンプルを解析した。４１人のウィルソン病患者のコホートは、研究３０１及び研究２０１からのものである。解析は、以前の治療による潜在的な交絡効果のため、未治療の患者の治療に焦点を当てた。

【0091】

健常患者とウィルソン病患者との分布を箱ひげ図で表した（図９）。箱ひげ図を使用して、平均値を表示することで数値データの分布及び歪度を観察した。ｔ検定を実行し、健常患者とウィルソン病患者との間のｄＮＣＣ比の平均値の差の有意性（ｐ値＜６．０８２ｅ－１０）を示した。各ｄＮＣＣ比データでの性能を０～１で測定し、健常患者とウィルソン病患者とを分類した。

【0092】

このスコアリング分類子の性能を評価するＲパッケージ及び可視化するｇｇｐｌｏｔＲパッケージである、ＲＯＣＲ（Ｓｉｎｇ Ｔ，ｅｔ ａｌ．（２００５）ＲＯＣＲ：ｖｉｓｕａｌｉｚｉｎｇ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｉｎ Ｒ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２１（２０）：３９４０－１）を使用した。受信動作特性（ＲＯＣ）曲線をプロットし（図１０）、健常患者とウィルソン病患者との分類にｄＮＣＣ比を使用した場合の性能を示す。データセットは、わずかに不均衡であったため、Ｆスコアを使用して最適な閾値値を定義した。さらに、ＲＯＣＲツール（Ｓｉｎｇ Ｔ ｅｔ ａｌ．（２００５））を使用してＦスコアを測定した。

【0093】

約０．６９のＦスコア最大値で、０．２７６又はｄＮＣＣ比の２７．６％という最適閾値が観察された（図１１）。特異性及び感度のトレードオフを考慮して、Ｆスコアが０．６５を超える閾値の範囲を調査した。ｄＮＣＣ比閾値の範囲は、図１２に示すように定義された（すなわち両端を含めて０．２４５～０．２９５）。最後に、ＲのＣａｒｅｔ（Ｋｕｈｎ．（２００８），Ｊ．Ｓｔａｔ．Ｓｏｆｔ．，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｍｏｄｅｌｓ ｉｎ Ｒ ｕｓｉｎｇ ｃａｒｅｔ Ｐａｃｋａｇｅ ２８；１－２６）ライブラリからのｃｏｎｆｕｓｉｏｎＭａｔｒｉｘ関数を使用して、観測クラス及び予測クラスと関連統計とのクロス集計を計算した。

【0094】

血清及び血漿サンプル比較
５２人の健常人からのヒトリチウムヘパリン血漿及び血清の適合セットをＢＩＯＩＶＴから入手した。

【0095】

血漿及び血清サンプル中のＬＢＣ濃度は、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２１／４９８９０号明細書で開示される抗ＣＰ ｍＡｂ混合物（１、２、３）でヤギ抗ヒトＣＰ抗体を置き換えて、その全体が参照により本明細書に援用される、２０２０年１月８日に出願された米国仮出願第６２／９５８，４３２号明細書の実施例１０に記載されるような検証済みのＬＢＣ生物分析アッセイ法を実行した後、ＩＣＰ－ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ ８９００）によって判定した。

【0096】

簡潔に述べると、最初に抗ＣＰ ｍＡｂ混合物（１、２、３）を用いた免疫捕捉によってＣＰを除去してｄＮＣＣ画分を取得し、続いてＥＤＴＡでｄＮＣＣ溶液をキレート化し、その後、濾過して濾液中に銅の不安定結合型を収集した。

【0097】

より具体的には、約２０μＬの各生物学的サンプルを、抗ＣＰ ｍＡｂ混合物（１、２、３）（１サンプル当たり合計約９６μｇの抗ＣＰ ｍＡｂ）で被覆された約２００μＬのビーズと共にウェルに添加し、その後、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２１／４９８９０号明細書の実施例４で開示されている免疫捕捉ステップに供し、サンプル毎のｄＮＣＣ画分を生成した。

【0098】

サンプル毎に約２００μＬのｄＮＣＣ画分を、金属を含まない清浄なチューブに移し、その後、約６０μＬのキレートスパイク溶液（４５．５ｍＭのＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ ＢｉｏＵｌｔｒａ）及び４５６μＭのＬ－Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ（Ｓｉｇｍａ ＢｉｏＵｌｔｒａ））を各サンプルに添加した。サンプルを穏やかによく混合し、およそ３７℃で約１時間インキュベートした。任意選択的に、チューブを遠心分離し得る。

【0099】

インキュベートした各サンプルを、２％硝酸で洗浄した３０Ｋ ＭＷＣＯ遠心フィルター（再生セルロース膜）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ）に移し、約２５℃、約１４，０００×ｇで約３５分間遠心分離した。

【0100】

約２００μＬの濾液を、新しい清浄な金属を含まないプラスチックチューブに移し、約６００μＬの０．１％ＨＮＯ_３Ｈ_２Ｏ溶液を、金属を含まないプラスチックチューブに添加した。

【0101】

約１０μＬのロジウム内標準スパイク（１００ｎｇ／ｍＬ）を、上記の金属を含まないチューブのそれぞれに添加した。次に、各チューブをおよそ３５００ｒｐｍで約１分間遠心分離し、ボルテックス処理してよく混合した。

【0102】

ＬＢＣの定量は、内標準としてロジウムを使用し、表５及び６に要約される条件及びパラメータの下で操作されるＩＣＰ－ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ ８９００）によって実行した。同心マイクロミストネブライザーを使用して、スプレーチャンバーの温度を約２℃に維持した。分析は、Ｈｅ ＭＳＭＳガスモードで実行した。

【0103】

【表5】

【0104】

【表6】

【0105】

ＩＣＰ－ＭＳシステムのプラズマをオンにし、「はい」をクリックして自動調整を実行した。自動調整と調整チェックは、調整溶液（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して実行した。ＩＣＰ－ＭＳシステムは、デフォルト設定のウォームアップで平衡化した。次に、サンプルをＩＣＰ－ＭＳ測定に導入した。

【0106】

５２人の健常人からのヒト血漿及び血清におけるＬＢＣ濃度の結果を表７に示す。同じセットの５２人の健常人からのヒト血清及びヒトＬｉ－Ｈ血漿から得られたＬＢＣ濃度間の一致度は、ブランド・アルトマン法によって評価した（Ｇｉａｖａｒｉｎａ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉａ Ｍｅｄｉｃａ ２０１５；２５（２）：１４１－５１を参照されたい）。図１３は、血清ＬＢＣレベルと血漿ＬＢＣレベルとの間の差をＹ軸とし、両方の平均値をＸ軸とするブランド・アルトマン散布図を示す。２セットのＬＢＣ値の差の平均は、１０．１ｎｇ／ｍＬである。これは、血清ＬＢＣ値が血漿ＬＢＣよりも平均して１０．１ｎｇ／ｍＬ高いことを意味する。

【0107】

ブランド・アルトマン法では、データ点の９５％が、一致限界（ＬＯＡ）として定義される平均差の±１．９６標準偏差（ＳＤ）内に存在することが推奨される。このプロットでは、上限ＬＯＡ及び下限ＬＯＡは、それぞれ－２７．７及び４７．９として計算された。このプロットは、平均差及びＬＯＡの９５％信頼区間（ＣＩ）も示し、これは、推定値におけるサンプリング誤差の可能性を示す。要約すると、サンプル点全体の５％未満を占める、５２個のうちの２個がＬＯＡの９５％ＣＩから外れており、これは、血清及び血漿ＬＢＣ濃度が１０．１ｎｇ／ｍＬの偏りで互いに一致することを示唆し得る。

【0108】

【表7-1】

【0109】

【表7-2】

【0110】

本明細書に記載される実施例及び実施形態は、例示のみを目的とし、それに照らして様々な修正形態又は変更形態が当業者に示唆され、本出願の趣旨及び範囲並びに添付の特許請求の範囲に組み込まれることが理解される。本明細書で引用される全ての刊行物、特許及び特許出願は、あらゆる目的のために参照により本明細書に援用される。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【国際調査報告】