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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-12-01
(54)【発明の名称】ナノ粒子の調製方法
(51)【国際特許分類】
A61K 49/18 20060101AFI20231124BHJP
A61K 51/06 20060101ALI20231124BHJP
B01J 13/00 20060101ALI20231124BHJP
【ＦＩ】
A61K49/18
A61K51/06 200
B01J13/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023530233
(86)(22)【出願日】2021-11-19
(85)【翻訳文提出日】2023-07-14
(86)【国際出願番号】 FR2021052041
(87)【国際公開番号】W WO2022106788
(87)【国際公開日】2022-05-27
(31)【優先権主張番号】2011904
(32)【優先日】2020-11-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】519433399
【氏名又は名称】エヌアッシュ テラギ
(71)【出願人】
【識別番号】511196870
【氏名又は名称】ユニベルシテ クロード ベルナール リヨン プルミエ
(71)【出願人】
【識別番号】513015441
【氏名又は名称】サントゥル ナシオナル ドゥ ラ ルシェルシュ シアンティフィック － セーエヌエールエス
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ － ＣＮＲＳ
【住所又は居所原語表記】３，ｒｕｅ Ｍｉｃｈｅｌ Ａｎｇｅ，Ｆ－７５０１６ Ｐａｒｉｓ １６，Ｆｒａｎｃｅ
(74)【代理人】
【識別番号】110000338
【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ
(72)【発明者】
【氏名】ティユモン，オリヴィエ
(72)【発明者】
【氏名】リュクス，フランソワ
(72)【発明者】
【氏名】ロスティ，ファビアン
(72)【発明者】
【氏名】ロッチ，ポール
(72)【発明者】
【氏名】ドゥシノ，トリスタン
【テーマコード（参考）】
4C085
4G065
【Ｆターム（参考）】
4C085HH07
4C085JJ03
4C085KA09
4C085KA28
4C085KA30
4C085KB12
4C085KB56
4C085LL18
4G065AA05
4G065AB28Y
4G065AB30Y
4G065AB38
4G065BB06
4G065CA01
4G065DA02
4G065EA02
4G065EA03
4G065EA06
(57)【要約】
本開示は、医薬における、特に腫瘍の治療のための、ナノ粒子およびその使用に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ナノ粒子のコロイド溶液を調製するための方法であって、各ナノ粒子がポリマーマトリックス上にグラフトされたキレート基を含み、前記キレート基の一部の部分のみが金属カチオンと錯化されており、他の部分が錯化されていない、以下を含む方法：（１）前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供であって、前記前駆体ナノ粒子は、式［Ｃｈ－Ｍ１］ｎ－ＰＳを有し、ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックスであり、
－［Ｃｈ－Ｍ１］は、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１と錯化されたキレート基であり、
－Ｃｈは、ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックス、の表面に共有結合的にグラフトされており、
－ｎは５～１００であり、および
－ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである、前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供、
（２）好ましくは２．０未満、好ましくは１．０未満のｐＨを得るために、前記金属カチオンＭ１の部分的放出を得るのに充分な時間をかけて、例えば塩酸溶液を添加することにより、前記コロイド溶液を酸性媒体中で処理する工程、
（３）必要に応じて、前記コロイド溶液を、例えば水で、希釈する工程、
（４）工程（２）で得られた前記ナノ粒子を、放出された前記金属カチオンＭ１から分離する精製工程、
（５）必要に応じて、工程（４）で得られたナノ粒子の溶液を濃縮する工程、
（６）必要に応じて、工程（３）、（４）および（５）の繰り返し、
（７）必要に応じて、工程（４）、（５）または（６）の１つにおいて得られたナノ粒子の溶液の、凍結および／または凍結乾燥。
【請求項2】
Ｍ１が、磁気共鳴イメージング法（ＭＲＩ）のための放射線増感剤および／または造影剤から選択される金属カチオンから選択され、例えば、Ｍ１がガドリニウムおよびビスマスから選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記キレート基Ｃｈが、大環状剤、好ましくは１，４，７－トリアザシクロノナン－トリ酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－テトラアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－ジ酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン，１－（グルタル酸）－４，７，１０－トリ酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）、２，２’，２’’，２’’’－（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライル）テトラアセトアミド（ＤＯＴＡＭ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン（Ｃｙｃｌａｍ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（Ｃｙｃｌｅｎ）、およびデフェロキサミン（ＤＦＯ）から選択されることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記キレート基Ｃｈが下記式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡであることを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。【化1】
【請求項5】
ＰＳがポリシロキサンマトリックスであることを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
前記前駆体ナノ粒子が以下の特徴を有することを特徴とする、請求項５に記載の方法：－前記ナノ粒子の総重量に対するシリコンの重量比が、５％～２５％であり、
－前記ポリマーにグラフトされたキレート基の総数ｎが、ナノ粒子あたり５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
－前記ナノ粒子が、２～８ｎｍの平均直径を有する。
【請求項7】
前記前駆体ナノ粒子が以下の特徴を有することを特徴とする、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法：（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈは、下記式のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
【化2】
Ｓｉ－Ｃ結合によって前記ポリシロキサンマトリックスにグラフトされており、
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋であり、
（ｉｖ）ｎは、５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
（ｖ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである。
【請求項8】
ナノ粒子のコロイド溶液を調製するための方法であって、各ナノ粒子がポリマーマトリックス上にグラフトされたキレート基を含み、前記キレート基の第１フラクションｆ１が金属カチオンＭ１と錯化されており、第２フラクションｆ２がカチオンＭ２と錯化されており、第３フラクションｆ３が錯化されていない、以下を含む方法：（１）前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供であって、前記前駆体ナノ粒子は、式［Ｃｈ－Ｍ１］ｎ－ＰＳを有し、ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックスであり、
－Ｃｈは、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１と錯化されたキレート基であり、
－Ｃｈは、ポリマーマトリックス上にグラフトされており、
－ｎは５～１００であり、および
－ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである、前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供、
（２）２．０未満、好ましくは１．０未満のｐＨを得るために、前記金属カチオンＭ１の部分的放出を得るのに充分な時間をかけて、例えば塩酸溶液を添加することにより、前記コロイド溶液を酸性媒体中で処理する工程、
（３）必要に応じて、溶液を、例えば水で、希釈する工程、
（４）工程（２）で得られた前記ナノ粒子を、放出された金属カチオンＭ１から分離する精製工程、
（５）必要に応じて、工程（４）で得られた前記ナノ粒子の溶液を濃縮する工程、
（６）必要に応じて、工程（３）、（４）および（５）の繰り返し、
（７）必要に応じて、金属カチオンＭ１と錯化されている所定量のキレート基Ｃｈを得るために、工程（２）、（３）、（４）、（５）または（６）で得られた前記ナノ粒子を、所定量の前記金属カチオンＭ１と部分的に再錯化する工程、
（８）工程（４）、（５）、（６）または（７）で得られた前記ナノ粒子の溶液を、好ましくは４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有し、例えば前記金属カチオンＭ１または放射性同位体とは別の金属カチオンである、充分な量のカチオンＭ２と接触させて、工程（２）で遊離したキレート基Ｃｈ１の少なくとも一部を錯化させる工程、および
（９）必要に応じて、工程（８）で得られたナノ粒子の溶液を凍結および／または凍結乾燥する、工程。
【請求項9】
Ｍ１及び／又はＭ２が、磁気共鳴イメージング法（ＭＲＩ）のための放射線増感剤および／または造影剤、例えばガドリニウム又はビスマス、から選択される金属カチオンから選択されることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記キレート基Ｃｈが、大環状剤、好ましくは１，４，７－トリアザシクロノナン－トリ酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－テトラアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－ジ酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン，１－（グルタル酸）－４，７，１０－トリ酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）、２，２’，２’’，２’’’－（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライル）テトラアセトアミド（ＤＯＴＡＭ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン（Ｃｙｃｌａｍ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（Ｃｙｃｌｅｎ）、およびデフェロキサミン（ＤＦＯ）から選択されることを特徴とする、請求項８または９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、ナノ粒子を調製するためのプロセス、ナノ粒子、および医薬の分野における、特に腫瘍の治療のためのその方法に関する。
【背景技術】
【0002】
癌との闘いは、現在、３つの主要な治療方法：手術、化学療法、および放射線療法に基づいている。現在、研究はこれらの３つのタイプの治療を改善する能力のためにナノ粒子の使用にますます焦点を当てているが、イメージング技術の改善を提供するか、またはイメージングと治療とを組み合わせて治療診断の概念を導くことさえも提供する。したがって、放射線療法の場合、高い原子番号を有する元素の存在のために、周囲の健康な組織を節約しながら、局所的に線量の効果を増加させることが可能である。
【0003】
それらの有利なマルチモード性および強力な前臨床研究にもかかわらず、現在臨床段階に達しているのは少数のナノ粒子のみである（Lux et al., 2018, Br. J. Radiology, 2018, 91, 20180365）。
【0004】
この数は、静脈内注射されたナノ粒子についてはさらに少なく、約１５５ｎｍのシリカコアおよび金シェルを有するＡｕｒｏＳｈｅｌｌ、薬物送達のためのペグ化金コアからなるＣＵＴ－６０９１、核酸送達のための金ナノ粒子からなるＮＵ－１２９、メラノーマターゲティングのための蛍光ポリシロキサンからなるＣｏｒｎｅｌｌ Ｄｏｔｓ、ならびに放射線療法およびＭＲＩイメージングのためのポリシロキサンおよびガドリニウムキレートに基づくナノ粒子からなるＡＧｕＩＸが挙げられ得る。
【0005】
これらのナノ粒子のうち、２つ（ＡＧｕＩＸおよびＣｏｒｎｅｌｌ Ｄｏｔｓ）は１０ｎｍ未満の流体力学的直径を有し、静脈内投与後にその腎排泄を可能にする。超微細ナノ粒子は、可能性のある毒性を制限する一方で、より良好な腫瘍浸透、および、放射線増感の場合には送達される線量の有効性を局所的に増加させる「ナノスケール線量沈着」効果、にも起因する、この急速な腎排泄のために、臨床用途に特に適している。
【0006】
ナノ粒子の表面上のキレートの存在はしばしば、イメージングまたは治療に有用な金属イオンのキレート化に必要である。これは、近接照射療法またはシンチグラフィーで使用される放射性金属イオン、またはＭＲＩで使用される磁気イオンの場合である。ナノ粒子の表面で金属キレートまたは遊離キレートを得るための２つの主要な戦略が、現在、文献に存在する。
【0007】
このタイプのナノ粒子を得るための第１の戦略は、ナノ粒子形成工程中にキレートを直接組み込むことによって合成を実施することである。これは、例えば、ガドリニウム錯体によって、および光線力学療法およびＭＲＩのためのポルフィリンによって官能化された金ナノ粒子を得るために、N. G Chabloz et al.（Chem. Eur. J., 2020, 26, 4552-4566）によって採用された戦略である。この戦略は、V. L. Tran et al. 2018（Mt. Chem. B, 2018, 6, 4821-4834）によって提案されているポリシロキサンナノ粒子のワンポット合成にも使用され得る。
【0008】
次いでこれらのナノ粒子は、遊離キレート、または使用される出発シランに応じてガドリニウムを含むキレートを有する。しかしながら、この方法論にはいくつかの欠点があり、再現可能なナノ粒子を得るためには、比率および添加時間を非常に高い精度で決定しなければならず、これは臨床使用のためのスケールアップの試みを困難にする。
【0009】
第２の戦略は、所望のナノ粒子を得、次いで、後官能化工程を介して、遊離キレートまたはすでに金属を含むキレートを添加することにある。これは、P. Bouziotis et al.（Nanomedicine, 2017, 12, 1561-1574）によって、ＡＧｕＩＸポリシロキサン系ナノ粒子上で使用された戦略である。ＮＯＤＡＧＡ無水物は、ナノ粒子の表面上で無水物と表面アミンとの反応によって官能化された。次いでガリウム６８が添加され、前臨床ＰＥＴイメージングを行うことが可能となった。M. Pretze et al. （Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals, 2019, 62, 471-482）は、リガンド交換反応によってマレイミド官能基を導入し次いでＮＯＤＡＧＡを添加する前に合成された金ナノ粒子に対して、同じタイプの戦略を使用した。銅６４での放射性標識は、最終工程で行った。この戦略の主な難点は、表面電荷および親水性／親油性に関して、ナノ粒子およびそれらの表面のサイズを大幅に変化させ、出発ナノ粒子の異なる生体内分布をもたらし得ることである。
【0010】
したがって、特にＡＧｕＩＸナノ粒子などの、すでに臨床段階に存在し、適切な生体内分布特性を有するナノ粒子の場合、出発ナノ粒子の特性の変化をできるだけ少なくする、ナノ粒子の表面上に遊離キレートを生成するための方法を開発することが必要であると思われる。それゆえ、本発明の別の目的は、出発ナノ粒子と同等であるが、元のキレートの一部が放出され、次いで、遊離したままであるか、または対象となる別の金属とキレート化することができる、ナノ粒子へのアクセスを提供することである。
【0011】
本開示は、これらの上述の目的の１つ以上に関する状況を改善する。
【0012】
腫瘍、特に原発性および／または転移性腫瘍の治療において適切な生体内分布を有するキレート化ナノ粒子を使用することも提案されている。
【発明の概要】
【0013】
本発明は、以下に記載される実施形態のうちの１つ、またはそれらの組み合わせに関する：
実施形態１：ナノ粒子のコロイド溶液を調製するための方法であって、各ナノ粒子がポリマーマトリックス上にグラフトされたキレート基を含み、キレート基の一部の部分のみが金属カチオンと錯化されており、他の部分が錯化されていない、以下を含む方法：
（１）前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供であって、前駆体ナノ粒子は式［Ｃｈ－Ｍ１］ｎ－ＰＳを有し、ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックスであり、
－［Ｃｈ－Ｍ１］は、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１と錯化されたキレート基であり、
－Ｃｈは、ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックス、の表面に共有結合的にグラフトされており、
－ｎは５～１００であり、および
－ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである、前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供、
（２）好ましくは２．０未満、好ましくは１．０未満のｐＨを得るために、金属カチオンＭ１の部分的放出を得るのに充分な時間をかけて、例えば塩酸溶液を添加することにより、コロイド溶液を酸性媒体中で処理する工程、
（３）必要に応じて、コロイド溶液を、例えば水で、希釈する工程、
（４）工程（２）で得られたナノ粒子を、放出された金属カチオンＭ１から分離する精製工程、
（５）必要に応じて、工程（４）で得られたナノ粒子の溶液を濃縮する工程、
（６）必要に応じて、工程（３）、（４）および（５）の繰り返し、
（７）必要に応じて、工程（４）、（５）または（６）の１つにおいて得られたナノ粒子溶液の、凍結および／または凍結乾燥。
実施形態１：ナノ粒子のコロイド溶液を調製するための方法であって、各ナノ粒子がポリマーマトリックス上にグラフトされたキレート基を含み、キレート基の一部の部分のみが金属カチオンと錯化されており、他の部分が錯化されていない、以下を含む方法：
（１）前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供であって、前駆体ナノ粒子は式［Ｃｈ－Ｍ１］ｎ－ＰＳを有し、ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックスであり、
－［Ｃｈ－Ｍ１］は、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１と錯化されたキレート基であり、
－Ｃｈは、ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックス、の表面に共有結合的にグラフトされており、
－ｎは５～１００であり、および
－ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである、前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供、
（２）好ましくは２．０未満、好ましくは１．０未満のｐＨを得るために、金属カチオンＭ１の部分的放出を得るのに充分な時間をかけて、例えば塩酸溶液を添加することにより、コロイド溶液を酸性媒体中で処理する工程、
（３）必要に応じて、コロイド溶液を、例えば水で、希釈する工程、
（４）工程（２）で得られたナノ粒子を、放出された金属カチオンＭ１から分離する精製工程、
（５）必要に応じて、工程（４）で得られたナノ粒子の溶液を濃縮する工程、
（６）必要に応じて、工程（３）、（４）および（５）の繰り返し、
（７）必要に応じて、工程（４）、（５）または（６）の１つにおいて得られたナノ粒子溶液の、凍結および／または凍結乾燥。
【0014】
実施形態２：Ｍ１が４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンから選択され、特に磁気共鳴イメージング法（ＭＲＩ）のための放射線増感剤および／または造影剤から選択され、例えばＭ１がガドリニウムおよびビスマスから選択されることを特徴とする、実施形態１に記載の方法。
【0015】
実施形態３：キレート基Ｃｈが、大環状剤、好ましくは１，４，７－トリアザシクロノナン－トリ酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－テトラアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－ジ酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン，１－（グルタル酸）－４，７，１０－トリ酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）、２，２’，２’’，２’’’－（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライル）テトラアセトアミド（ＤＯＴＡＭ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン（Ｃｙｃｌａｍ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（Ｃｙｃｌｅｎ）、およびデフェロキサミン（ＤＦＯ）から選択されることを特徴とする、実施形態１または２に記載の方法。
【0016】
実施形態４：キレート基Ｃｈが下記式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡであることを特徴とする、実施形態１～３のいずれか１つに記載の方法：
【0017】
【化1】
【0018】
実施形態５：ＰＳがポリシロキサンマトリックスであることを特徴とする、実施形態１～４のいずれか１つに記載の方法。
【0019】
実施形態６：前駆体ナノ粒子が以下の特徴を有することを特徴とする、実施形態５に記載の方法：
－ナノ粒子総重量に対するシリコンの重量比が、５％～２５％であり、
－ポリマーにグラフトされたキレート基の総数ｎが、ナノ粒子あたり５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
－ナノ粒子が、２～８ｎｍの平均直径を有する。
－ナノ粒子総重量に対するシリコンの重量比が、５％～２５％であり、
－ポリマーにグラフトされたキレート基の総数ｎが、ナノ粒子あたり５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
－ナノ粒子が、２～８ｎｍの平均直径を有する。
【0020】
実施形態７：前駆体ナノ粒子が以下の特徴を有することを特徴とする、実施形態１～６のいずれか１つに記載の方法：
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈは、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈは、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
【0021】
【化2】
【0022】
Ｓｉ－Ｃ結合によってポリシロキサンマトリックスにグラフトされ、
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋であり、
（ｉｖ）ｎは、５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
（ｖ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである。
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋であり、
（ｉｖ）ｎは、５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
（ｖ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである。
【0023】
実施形態８：ナノ粒子のコロイド溶液を調製するための方法であって、各ナノ粒子がポリマーマトリックス上にグラフトされたキレート基を含み、キレート基の第１フラクションｆ１が金属カチオンＭ１と錯化されており、第２フラクションｆ２がカチオンＭ２と錯化されており、第３フラクションｆ３が錯化されていない、以下を含む方法：
（１）前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供であって、前駆体ナノ粒子は、式［Ｃｈ－Ｍ１］ｎ－ＰＳを有し、ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックスであり、
－Ｃｈは、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１と錯化されたキレート基であり、
－Ｃｈは、ポリマーマトリックス上にグラフトされており、
－ｎは５～１００であり、および
－ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである、前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供と、
（２）２．０未満、好ましくは１．０未満のｐＨを得るために、金属カチオンＭ１の部分的放出を得るのに充分な時間をかけて、例えば塩酸溶液を添加することにより、コロイド溶液を酸性媒体中で処理する工程、
（３）必要に応じて、溶液を、例えば水で、希釈する工程、
（４）工程（２）で得られたナノ粒子を、放出された金属カチオンＭ１から分離する精製工程、
（５）必要に応じて、工程（４）で得られたナノ粒子の溶液を濃縮する工程、
（６）必要に応じて、工程（３）、（４）および（５）の繰り返し、
（７）必要に応じて、金属カチオンＭ１と錯化されている所定量のキレート基Ｃｈを得るために、工程（２）、（３）、（４）、（５）または（６）で得られたナノ粒子を、所定量の金属カチオンと部分的に再錯化する工程、
（８）工程（４）、（５）、（６）または（７）で得られたナノ粒子の溶液を、例えば金属カチオンＭ１または放射性同位体とは別の金属カチオンである、充分な量のカチオンＭ２と接触させて、工程（２）で遊離したキレート基Ｃｈ１の少なくとも一部を錯化させる工程、および
（９）必要に応じて、工程（８）で得られたナノ粒子の溶液を凍結および／または凍結乾燥する、工程。
（１）前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供であって、前駆体ナノ粒子は、式［Ｃｈ－Ｍ１］ｎ－ＰＳを有し、ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックスであり、
－Ｃｈは、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１と錯化されたキレート基であり、
－Ｃｈは、ポリマーマトリックス上にグラフトされており、
－ｎは５～１００であり、および
－ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである、前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供と、
（２）２．０未満、好ましくは１．０未満のｐＨを得るために、金属カチオンＭ１の部分的放出を得るのに充分な時間をかけて、例えば塩酸溶液を添加することにより、コロイド溶液を酸性媒体中で処理する工程、
（３）必要に応じて、溶液を、例えば水で、希釈する工程、
（４）工程（２）で得られたナノ粒子を、放出された金属カチオンＭ１から分離する精製工程、
（５）必要に応じて、工程（４）で得られたナノ粒子の溶液を濃縮する工程、
（６）必要に応じて、工程（３）、（４）および（５）の繰り返し、
（７）必要に応じて、金属カチオンＭ１と錯化されている所定量のキレート基Ｃｈを得るために、工程（２）、（３）、（４）、（５）または（６）で得られたナノ粒子を、所定量の金属カチオンと部分的に再錯化する工程、
（８）工程（４）、（５）、（６）または（７）で得られたナノ粒子の溶液を、例えば金属カチオンＭ１または放射性同位体とは別の金属カチオンである、充分な量のカチオンＭ２と接触させて、工程（２）で遊離したキレート基Ｃｈ１の少なくとも一部を錯化させる工程、および
（９）必要に応じて、工程（８）で得られたナノ粒子の溶液を凍結および／または凍結乾燥する、工程。
【0024】
実施形態９：Ｍ１および／またはＭ２が、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンから選択され、特に磁気共鳴イメージング法（ＭＲＩ）のための放射線増感剤および／または造影剤、例えばガドリニウムまたはビスマス、から選択されることを特徴とする、実施形態８に記載の方法。
【0025】
実施形態１０：キレート基Ｃｈが、大環状剤、好ましくは１，４，７－トリアザシクロノナン－トリ酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－テトラアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－ジ酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン，１－（グルタル酸）－４，７，１０－トリ酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）、２，２’，２’’，２’’’－（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライル）テトラアセトアミド（ＤＯＴＡＭ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン（Ｃｙｃｌａｍ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（Ｃｙｃｌｅｎ）、およびデフェロキサミン（ＤＦＯ）から選択されることを特徴とする、実施形態８または９に記載の方法。
【0026】
実施形態１１：キレート基Ｃｈが下記式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡであることを特徴とする、実施形態８～１０のいずれか１つに記載の方法：
【0027】
【化3】
【0028】
実施形態１２：ＰＳがポリシロキサンマトリックスであることを特徴とする、実施形態８～１１のうちの１つに記載の方法。
【0029】
実施形態１３：前駆体ナノ粒子が以下の特徴を有することを特徴とする、実施形態１２に記載の方法：
－ナノ粒子の総重量に対するシリコンの重量比が、５％～２５％であり、
－ポリマーにグラフトされたキレート基の総数ｎが、ナノ粒子あたり５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
－ナノ粒子が、２～８ｎｍの平均直径を有する。
－ナノ粒子の総重量に対するシリコンの重量比が、５％～２５％であり、
－ポリマーにグラフトされたキレート基の総数ｎが、ナノ粒子あたり５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
－ナノ粒子が、２～８ｎｍの平均直径を有する。
【0030】
実施形態１４：前駆体ナノ粒子が以下の特徴を有することを特徴とする、実施形態８～１３のいずれか１つに記載の方法：
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈは、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈは、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
【0031】
【化4】
【0032】
Ｓｉ－Ｃ結合によってポリシロキサンマトリックスにグラフトされ、
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋であり、
（ｉｖ）ｎは、５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
（ｖ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである。
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋であり、
（ｉｖ）ｎは、５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
（ｖ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである。
【0033】
実施形態１５：カチオンＭ２がシンチグラフィー造影剤、例えば、４４Ｓｃ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃから選択されることを特徴とする、実施形態８～１４のいずれか１つに記載の方法。
【0034】
実施形態１６：カチオンＭ２が近接照射療法のための治療剤、例えば、９０Ｙ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔから選択されることを特徴とする、実施形態８～１５のいずれか１つに記載の方法。
【0035】
実施形態１７：ｆ１が０．１～０．９であり、ｆ２が０．１～０．９であり、ｆ３が０～０．５であり、典型的にはｆ１が０．２５～０．３５であり、ｆ２が０．６５～０．７５であり、ｆ３が実質的にゼロであることを特徴とする、実施形態８～１６のいずれか１つに記載の方法。
【0036】
実施形態１８：各ナノ粒子が、ターゲティング剤、特にペプチド、免疫グロブリン、ナノボディ、抗体、アプタマーまたはターゲティングタンパク質でさらに官能化されることを特徴とする、実施形態８～１７のいずれか１つに記載の方法。
【0037】
実施形態１９：実施形態１～１８のいずれか１つに記載の方法によって得られるナノ粒子またはナノ粒子の凍結乾燥物の溶液。
【0038】
実施形態２０：以下の式（ＩＩ）のナノ粒子：
【0039】
【化5】
【0040】
ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックスであり、
－［Ｃｈ－Ｍ１］は、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１、例えばガドリニウムカチオンと錯化されているキレート基Ｃｈであり、
－［Ｃｈ－Ｍ２］は、例えば４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンから選択されるか、または放射性同位体から選択される、金属カチオンＭ１とは別のカチオンＭ２と錯化されているキレート基Ｃｈであり、好ましくはＭ２はビスマスカチオンであり、
－［Ｃｈ］は、錯化されていないＣｈキレート基であり、
（ｉ）キレート剤Ｃｈは、ポリマーマトリックスの表面に共有結合的にグラフトされ、
（ｉｉ）モル比ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは２５％～３５％であり、モル比ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは６５％～７５％であり、モル比ｐ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は実質的にゼロであり、
（ｉｉｉ）ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである、ことを特徴とする。
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックスであり、
－［Ｃｈ－Ｍ１］は、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１、例えばガドリニウムカチオンと錯化されているキレート基Ｃｈであり、
－［Ｃｈ－Ｍ２］は、例えば４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンから選択されるか、または放射性同位体から選択される、金属カチオンＭ１とは別のカチオンＭ２と錯化されているキレート基Ｃｈであり、好ましくはＭ２はビスマスカチオンであり、
－［Ｃｈ］は、錯化されていないＣｈキレート基であり、
（ｉ）キレート剤Ｃｈは、ポリマーマトリックスの表面に共有結合的にグラフトされ、
（ｉｉ）モル比ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは２５％～３５％であり、モル比ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは６５％～７５％であり、モル比ｐ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は実質的にゼロであり、
（ｉｉｉ）ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである、ことを特徴とする。
【0041】
実施形態２１：金属カチオンＭ１、および必要に応じてＭ２が、磁気共鳴イメージング法のための放射線増感剤および／または造影剤、特にガドリニウムまたはビスマスから選択されることを特徴とする、実施形態２０に記載のナノ粒子。
【0042】
実施形態２２：キレート基Ｃｈが、大環状剤、好ましくは１，４，７－トリアザシクロノナン－トリ酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－テトラアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－ジ酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン，１－（グルタル酸）－４，７，１０－トリ酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）、２，２’，２’’，２’’’－（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライル）テトラアセトアミド（ＤＯＴＡＭ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン（Ｃｙｃｌａｍ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（Ｃｙｃｌｅｎ）、およびデフェロキサミン（ＤＦＯ）から選択されることを特徴とする、実施形態２０および２１のいずれか１に記載のナノ粒子。
【0043】
実施形態２３：キレート基Ｃｈが、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡであることを特徴とする、実施形態２０～２２のいずれか１つに記載のナノ粒子。
【0044】
【化6】
【0045】
実施形態２４：ＰＳがポリシロキサンマトリックスであることを特徴とする、実施形態２０～２３のうちの１つに記載のナノ粒子。
【0046】
実施形態２５：以下を特徴とする、実施形態２４に記載のナノ粒子。
－ナノ粒子の総重量に対するシリコンの重量比が、５％～２５％であり、
－ポリマーにグラフトされたキレート基の総数ｎ＋ｍ＋ｐが、ナノ粒子あたり５～５０、好ましくは１０～３０であり、
－平均直径は２～８ｎｍである。
－ナノ粒子の総重量に対するシリコンの重量比が、５％～２５％であり、
－ポリマーにグラフトされたキレート基の総数ｎ＋ｍ＋ｐが、ナノ粒子あたり５～５０、好ましくは１０～３０であり、
－平均直径は２～８ｎｍである。
【0047】
実施形態２６：金属カチオンＭ２がシンチグラフィーイメージング剤、例えば、４４Ｓｃ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃから選択されることを特徴とする、実施形態２０～２５のいずれか１つに記載のナノ粒子。
【0048】
実施形態２７：金属カチオンＭ２が近接照射療法のための治療剤、例えば、９０Ｙ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔから選択されることを特徴とする、実施形態２０～２５のいずれか１つに記載のナノ粒子。
【0049】
実施形態２８：（ｉ）ＰＳがポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈが、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
（ｉｉ）Ｃｈが、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
【0050】
【化7】
【0051】
Ｓｉ－Ｃ結合によってポリシロキサンマトリックスにグラフトされ、
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋であり、
（ｉｖ）ｐはゼロであり、ｍ＋ｎは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／ｎ＋ｐは０．１～０．９、例えば、０．２５～０．３５、または０．６５～０．７５、または０．４５～０．５５であり
（ｖｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことを特徴とする、実施形態２０～２７のいずれか１つに記載のナノ粒子。
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋であり、
（ｉｖ）ｐはゼロであり、ｍ＋ｎは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／ｎ＋ｐは０．１～０．９、例えば、０．２５～０．３５、または０．６５～０．７５、または０．４５～０．５５であり
（ｖｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことを特徴とする、実施形態２０～２７のいずれか１つに記載のナノ粒子。
【0052】
実施形態２９：（ｉ）ＰＳがポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈ１は、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
（ｉｉ）Ｃｈ１は、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
【0053】
【化8】
【0054】
Ｓｉ－Ｃ結合によってポリシロキサンマトリックスにグラフトされ、
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋、Ｍ２はビスマスカチオンＢｉ３＋であり、
（ｉｖ）ｎ＋ｍ＋ｐは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは４５％～５５％であり、
（ｖｉ）ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは４５％～５５％であり、
（ｖｉｉ）ｐは実質的にゼロであり、
（ｖｉｉｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことを特徴とする、実施形態２０～２８のいずれか１つに記載のナノ粒子。
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋、Ｍ２はビスマスカチオンＢｉ３＋であり、
（ｉｖ）ｎ＋ｍ＋ｐは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは４５％～５５％であり、
（ｖｉ）ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは４５％～５５％であり、
（ｖｉｉ）ｐは実質的にゼロであり、
（ｖｉｉｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことを特徴とする、実施形態２０～２８のいずれか１つに記載のナノ粒子。
【0055】
実施形態３０：実施形態２０～２９のいずれか１つに記載のナノ粒子のコロイド溶液。
【0056】
実施形態３１：実施形態２０～２９のいずれか１つに記載のナノ粒子のコロイド溶液と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【0057】
実施形態３２：対象における癌の検出および／または治療におけるその使用のための、実施形態３１に記載の医薬組成物であって、組成物が有効な量の、金属カチオンＭ１、および必要に応じて放射線増感剤としてカチオンＭ２を含み、好ましくはＭ１がガドリニウムであり、
対象が組成物の投与後に放射線療法で治療されることを特徴とする、医薬組成物。
対象が組成物の投与後に放射線療法で治療されることを特徴とする、医薬組成物。
【0058】
他の特徴、詳細、および利点は以下の詳細な説明を読み、添付の図面を分析することによって明らかになるのであろう：
【図面の簡単な説明】
【0059】
【図1】Ｇｄ／Ｂｉナノ粒子形成方法全体を通しての、遊離ＤＯＴＡの中間滴定の結果を示す：１００／０（Ａ．）、７０／３０（Ｂ．）、５０／５０（Ｃ．）、３０／７０（Ｄ．）。
【発明を実施するための形態】
【0060】
超微細ナノ粒子およびＡＧｕＩＸナノ粒子
特により好適な実施形態において、特にそれらの非常に小さいサイズ、それらの安定性およびそれらの生体内分布のために、本開示の方法において使用することができる前駆体ナノ粒子は、金属酸化物に基づくコアおよびポリシロキサンコーティングを含むコア－シェルナノ粒子（特にＷＯ２００５／０８８３１４およびＷＯ２００９／０５３６４４に記載）とは異なり、ポリシロキサンマトリックスＰＳを含み、金属酸化物に基づくコアを含まないナノ粒子である。
特により好適な実施形態において、特にそれらの非常に小さいサイズ、それらの安定性およびそれらの生体内分布のために、本開示の方法において使用することができる前駆体ナノ粒子は、金属酸化物に基づくコアおよびポリシロキサンコーティングを含むコア－シェルナノ粒子（特にＷＯ２００５／０８８３１４およびＷＯ２００９／０５３６４４に記載）とは異なり、ポリシロキサンマトリックスＰＳを含み、金属酸化物に基づくコアを含まないナノ粒子である。
【0061】
また、具体的な実施形態では、本発明の方法に従って使用することができる前駆物質ナノ粒子は、式［Ｃｈ－Ｍ１］ｎ－ＰＳのポリシロキサン系ガドリニウムキレート化ナノ粒子であり、ここで：
（ｉ）ＰＳは、ポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈは、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
（ｉ）ＰＳは、ポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈは、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
【0062】
【化9】
【0063】
共有結合によってポリシロキサンマトリックスにグラフトされ、
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋であり、
（ｉｖ）ｎは５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
（ｖ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである。
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋であり、
（ｉｖ）ｎは５～５０、好ましくは１０～３０であり、および
（ｖ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである。
【0064】
より具体的には、これらのポリシロキサン系ガドリニウムキレート化ナノ粒子は、ＡＧｕＩＸナノ粒子から出発材料として得られる超微細ナノ粒子である。
【0065】
このような超微細ＡＧｕＩＸナノ粒子は、特に、Mignot et al., Chem. Eur. J. 2013 “A Top-Down Synthesis Route to Ultrasmall Multifunctional Gd-Based Silica Nanoparticles for Theranostic Applications” DOI: 10.1002/chem.201203003に記載されているトップダウン合成法によって得ることができる。。
【0066】
他の超微細ナノ粒子合成方法も、ＷＯ２０１１／１３５１０１、ＷＯ２０１８／２２４６８４およびＷＯ２０１９／００８０４０に記載されている。
【0067】
本開示による方法において、出発材料として使用することができるＡＧｕＩＸナノ粒子は特に、以下の式（ＩＩＩ）を有し、
【0068】
【化10】
【0069】
ここで、ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、ｎは平均で約１０±２であり、ナノ粒子は４±２ｎｍの平均流体力学的直径および約１０ｋＤａの質量を有する。
【0070】
ＡＧｕＩＸナノ粒子は、以下の式（ＩＶ）によっても特徴付けることができる。
（ＧｄＳｉ４－７Ｃ２４－３０Ｎ５－８Ｏ１５－２５Ｈ４０－６０， ５－１０ Ｈ２Ｏ）ｘ
(IV)
好ましい実施形態では、前駆体ナノ粒子は、前のセクションで定義された超微細またはＡＧｕＩＸナノ粒子であり、ガドリニウムカチオンと錯化される。
（ＧｄＳｉ４－７Ｃ２４－３０Ｎ５－８Ｏ１５－２５Ｈ４０－６０， ５－１０ Ｈ２Ｏ）ｘ
(IV)
好ましい実施形態では、前駆体ナノ粒子は、前のセクションで定義された超微細またはＡＧｕＩＸナノ粒子であり、ガドリニウムカチオンと錯化される。
【0071】
上記の方法にしたがって得られたナノ粒子は、次いで有利には、Ｃｈおよび／またはターゲティング剤または親水性分子とは異なる他のキレート基で官能化され得る。したがって、本開示の方法の態様の１つは、有利な特性を有するナノ粒子を得るための方法、特に、以下に記載されるような、薬物または診断薬もしくは治療診断薬としてのその使用のための方法を提供する。
［キレート基Ｃｈと錯化された金属カチオンＭ１およびＭ２を含むナノ粒子の生産方法の変形］
一実施形態において、処理工程（２）の後に遊離したキレート基Ｃｈの少なくともいくつかの錯化を得るために、上記の方法に従って得られたナノ粒子は、金属カチオンＭ１とは別のカチオンＭ２、例えば金属カチオンまたは目的の放射性同位体と接触させられる。
［キレート基Ｃｈと錯化された金属カチオンＭ１およびＭ２を含むナノ粒子の生産方法の変形］
一実施形態において、処理工程（２）の後に遊離したキレート基Ｃｈの少なくともいくつかの錯化を得るために、上記の方法に従って得られたナノ粒子は、金属カチオンＭ１とは別のカチオンＭ２、例えば金属カチオンまたは目的の放射性同位体と接触させられる。
【0072】
それゆえ、本発明は、ナノ粒子のコロイド溶液を調製する方法であって、各々のナノ粒子は、ポリマーマトリックス上にグラフトされたキレート基を含み、キレート基の第１フラクションｆ１が金属カチオンＭ１と錯化され、第２フラクションｆ２がカチオンＭ２と錯化され、第３フラクションｆ３が錯化されていない、以下を含む方法に関する：
（１）前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供であって、前駆体ナノ粒子は、式［Ｃｈ－Ｍ１］ｎ－ＰＳを有し、ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックスであり、
－Ｃｈは、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１と錯化されたキレート基であり、
－Ｃｈは、ポリマーマトリックス上にグラフトされており、
－ｎは５～１００であり、
－前駆体ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より優先的には２～８ｎｍである、前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供、
（２）好ましくは２．０未満のｐＨを得るために、金属カチオンＭ１の部分的放出を得るのに充分な時間をかけて、塩酸溶液を添加することにより、コロイド溶液を酸性媒体中で処理する工程、
（３）必要に応じて、溶液を、例えば水で、希釈する工程、
（４）工程（２）で得られたナノ粒子を、放出された金属カチオンＭ１から分離する精製工程、
（５）必要に応じて、工程（４）で得られたナノ粒子の溶液を濃縮する工程、
（６）必要に応じて、工程（３）、（４）および（５）の繰り返し、
（７）必要に応じて、金属カチオンＭ１と錯化されている所定量のキレート基Ｃｈを得るために、工程（２）、（３）、（４）、（５）または（６）で得られたナノ粒子を、所定量の金属カチオンＭ１と部分的に再錯化する工程、
（８）工程（２）、（３）、（４）、（５）または（６）で得られたナノ粒子の溶液を、例えば金属カチオンＭ１または目的の放射性同位体とは別の金属カチオンである、充分な量のカチオンＭ２と接触させて、工程（２）で遊離したキレート基Ｃｈ１の少なくとも一部を錯化させ、ナノ粒子のコロイド溶液を得る工程であって、それぞれのナノ粒子はポリマーマトリックス上にグラフトされたキレート基を含み、キレート基の第１フラクションｆ１は金属カチオンＭ１と錯化され、第２フラクションｆ２はカチオンＭ２と錯化され、第３フラクションｆ３は錯化されていない、工程、および
（９）必要に応じて、工程（８）で得られたナノ粒子の溶液を凍結および／または凍結乾燥する、工程。
（１）前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供であって、前駆体ナノ粒子は、式［Ｃｈ－Ｍ１］ｎ－ＰＳを有し、ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックスであり、
－Ｃｈは、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１と錯化されたキレート基であり、
－Ｃｈは、ポリマーマトリックス上にグラフトされており、
－ｎは５～１００であり、
－前駆体ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より優先的には２～８ｎｍである、前駆体ナノ粒子のコロイド溶液の合成または提供、
（２）好ましくは２．０未満のｐＨを得るために、金属カチオンＭ１の部分的放出を得るのに充分な時間をかけて、塩酸溶液を添加することにより、コロイド溶液を酸性媒体中で処理する工程、
（３）必要に応じて、溶液を、例えば水で、希釈する工程、
（４）工程（２）で得られたナノ粒子を、放出された金属カチオンＭ１から分離する精製工程、
（５）必要に応じて、工程（４）で得られたナノ粒子の溶液を濃縮する工程、
（６）必要に応じて、工程（３）、（４）および（５）の繰り返し、
（７）必要に応じて、金属カチオンＭ１と錯化されている所定量のキレート基Ｃｈを得るために、工程（２）、（３）、（４）、（５）または（６）で得られたナノ粒子を、所定量の金属カチオンＭ１と部分的に再錯化する工程、
（８）工程（２）、（３）、（４）、（５）または（６）で得られたナノ粒子の溶液を、例えば金属カチオンＭ１または目的の放射性同位体とは別の金属カチオンである、充分な量のカチオンＭ２と接触させて、工程（２）で遊離したキレート基Ｃｈ１の少なくとも一部を錯化させ、ナノ粒子のコロイド溶液を得る工程であって、それぞれのナノ粒子はポリマーマトリックス上にグラフトされたキレート基を含み、キレート基の第１フラクションｆ１は金属カチオンＭ１と錯化され、第２フラクションｆ２はカチオンＭ２と錯化され、第３フラクションｆ３は錯化されていない、工程、および
（９）必要に応じて、工程（８）で得られたナノ粒子の溶液を凍結および／または凍結乾燥する、工程。
【0073】
本開示による方法の具体的な実施形態は、実施例において与えられる。典型的には当該方法の２つの実施形態において、工程（２）中で、金属Ｍ２（実施形態８）との再錯化があるか、または再錯化がないか（実施形態１）にかかわらず、当業者は金属カチオンＭ１の所望の放出量に応じて、ｐＨおよび／または処理時間を適合させることができる。工程（２）～（６）において、より多量の金属カチオンＭ１を放出し、金属カチオンＭ１との部分的再錯化の工程（７）を用いて所望のフラクションｆ１を調整することもできる。実際、脱錯化されるべきＣｈグループの所望の割合に特に応じて、工程（２）の酸処理の持続時間は、当業者によって調整されなければならない。典型的には、当業者は、当業者に選択された分析方法、例えばＨＰＬＣ－ＩＣＰ／ＭＳによって、脱錯化をモニターすることができる。換言すれば、工程（２）の間、十分な持続時間は、ＨＰＬＣ－ＩＣＰ／ＭＳなどの分析技術によって放出をモニターすることによって決定することができる。
【0074】
具体的な実施形態では、特に前駆体ナノ粒子としてのＡＧｕＩＸナノ粒子の使用において、工程（２）における処理時間は２．０未満、好ましくは１．０未満のｐＨにおいて、０．５～９０時間、例えば１～７２時間、特に少なくとも４、５、２４または７２時間である。
【0075】
工程（７）および（８）は、６．０～８．０のｐＨ、好ましくは中性ｐＨ、を回復させること、および／またはナノ粒子の溶液を十分な温度および時間で加熱し錯化物を得ることを必要とし得る。例えば、工程（７）または（８）は、６０℃～９５℃、典型的には８０℃の温度で、２４～７２時間、例えば４８時間行うことができる。
【0076】
当業者はまた、工程（８）におけるカチオンＭ２の量を、遊離キレート基の量、ならびに金属カチオンＭ２または放射性同位体と錯化されたキレート剤の割合および錯化されていないままのキレート剤の量をそれぞれ表す所望のフラクションｆ２およびｆ３に応じて適合させることができる。
【0077】
一実施形態において、当業者は、本質的に全ての遊離キレート剤を錯化するためにＭ２な過量のカチオンを使用するのであろう。したがって、フラクションｆ３は実質的にゼロである。
【0078】
別の実施形態では、もしカチオンＭ２との錯化の工程（８）の後に遊離キレート基が残っている場合、所望のフラクションｆ２およびｆ３を適合させるために、金属カチオン錯化の別の工程を実施することもできる。
［ナノ粒子をターゲティング分子で官能化する方法の変形］
キレート官能化に加えて、本開示による方法で得られるナノ粒子は任意に、親水性化合物（ＰＥＧ）によって表面で修飾（官能化）され得、および／または別々に荷電させて、本体内での生体内分布および／またはターゲティング分子を適合させ、特定の細胞のターゲッティング、特に特定の腫瘍細胞または組織のターゲティングを可能にし得る。ターゲティング剤は、ポリマーマトリックスにグラフトされ、ナノ粒子あたり１～２０のターゲティング剤、好ましくは１～５のターゲティング剤の割合で優先的に存在する。
［ナノ粒子をターゲティング分子で官能化する方法の変形］
キレート官能化に加えて、本開示による方法で得られるナノ粒子は任意に、親水性化合物（ＰＥＧ）によって表面で修飾（官能化）され得、および／または別々に荷電させて、本体内での生体内分布および／またはターゲティング分子を適合させ、特定の細胞のターゲッティング、特に特定の腫瘍細胞または組織のターゲティングを可能にし得る。ターゲティング剤は、ポリマーマトリックスにグラフトされ、ナノ粒子あたり１～２０のターゲティング剤、好ましくは１～５のターゲティング剤の割合で優先的に存在する。
【0079】
ターゲティング分子の表面グラフトのために、存在する反応基との従来のカップリングを使用することができ、必要に応じて活性化工程が先行する。カップリング反応は当業者に公知であり、ナノ粒子の表面層の構造およびターゲティング分子の官能基の構造に応じて選択される。例えば、“Bioconjugate Techniques”, G.T Hermanson, Academic Press, 1996, in “Fluorescent and Luminescent Probes for Biological Activity”, Second Edition, W.T. Mason, ed. Academic Press, 1999.を参照されたい。好ましいカップリング方法は以下に記載されている。好ましくは、これらのターゲティング分子は、前述の段落に記載された超微細またはＡＧｕＩＸナノ粒子の変異体などに応じて、ナノ粒子のアミン結合にグラフトされる。ターゲティング分子は、意図される用途に応じて選択される。
【0080】
具体的な実施形態において、前駆体ナノ粒子は、例えばペプチド、免疫グロブリン、ナノボディ、抗体、アプタマー、もしくは例えば腫瘍領域をターゲッティングする任意の他のタンパク質、典型的には抗体、免疫グロブリンもしくはナノボディなどのターゲッティング剤、ＶＨＨ断片、または当業者に公知の腫瘍関連抗原もしくは特定の癌マーカーをターゲッティングする「単一ドメイン」、によって官能化される。
［キレート基Ｃｈと錯化されたカチオンＭ１およびＭ２を含むナノ粒子］
本開示はまた、前述の段落に記載の方法によって得られるか、または前述の段落に記載の方法によって得られる可能性がある、ナノ粒子およびナノ粒子の溶液に関する。
［キレート基Ｃｈと錯化されたカチオンＭ１およびＭ２を含むナノ粒子］
本開示はまた、前述の段落に記載の方法によって得られるか、または前述の段落に記載の方法によって得られる可能性がある、ナノ粒子およびナノ粒子の溶液に関する。
【0081】
したがって、本開示は、以下の式（ＩＩ）のナノ粒子に関し、
【0082】
【化11】
【0083】
ここで：
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックスであり、
－［Ｃｈ－Ｍ１］は、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１、例えばガドリニウムカチオンと錯化されたキレート基Ｃｈであり、
－［Ｃｈ－Ｍ２］は金属カチオンＭ１と同一または異種のカチオンＭ２、例えば４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオン、または放射性同位体と錯化されたキレート基Ｃｈであって、例えばＭ２はビスマスカチオンであり
－［Ｃｈ］は、錯化されていないＣｈキレート基であり、
以下によって特徴づけられる：
（ｉ）キレート剤Ｃｈは、ポリマーマトリックスの表面に共有結合的にグラフトされ、
（ｉｉ）モル比ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは２５％～３５％、典型的には３０％であり、モル比ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは６５％～７５％であり、
（ｉｉｉ）ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである。
－ＰＳは有機または無機ポリマーマトリックス、例えばポリシロキサンマトリックスであり、
－［Ｃｈ－Ｍ１］は、４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオンＭ１、例えばガドリニウムカチオンと錯化されたキレート基Ｃｈであり、
－［Ｃｈ－Ｍ２］は金属カチオンＭ１と同一または異種のカチオンＭ２、例えば４０を超える、好ましくは５０を超える高原子番号Ｚを有する金属カチオン、または放射性同位体と錯化されたキレート基Ｃｈであって、例えばＭ２はビスマスカチオンであり
－［Ｃｈ］は、錯化されていないＣｈキレート基であり、
以下によって特徴づけられる：
（ｉ）キレート剤Ｃｈは、ポリマーマトリックスの表面に共有結合的にグラフトされ、
（ｉｉ）モル比ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは２５％～３５％、典型的には３０％であり、モル比ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは６５％～７５％であり、
（ｉｉｉ）ナノ粒子の平均流体力学的直径は、１～５０ｎｍ、好ましくは２～２０ｎｍ、より好ましくは２～８ｎｍである。
【0084】
前述の実施形態と優先的に組み合わせることができる一実施形態では、モル比ｐ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は実質的にゼロである。
【0085】
前述の２つの実施形態と組み合わせることができる別の好ましい実施形態では、モル比ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は４５％～５５％、典型的には５０％であり、モル比ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は４５％～５５％、典型的には５０％であり、モル比ｐ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は実質的にゼロである。
【0086】
特に、ポリマーマトリックスＰＳの化学的性質、平均流体力学的直径、キレート基Ｃｈ、およびナノ粒子当たりのキレート基の数、すなわちｎ＋ｍ＋ｐに関する特性は本質的に、前述の段落に記載された方法における前駆体ナノ粒子の選択と関連する。したがって、本発明は、当該方法によって得られるか、または当該方法によって得られる可能性があるナノ粒子にも適用される。
【0087】
ナノ粒子は、好ましくは非常に小さい直径、例えば１～１０ｎｍ、好ましくは２～８ｎｍを有する。
【0088】
ナノ粒子はまた、好ましくはポリシロキサンマトリックスを含むナノ粒子である。
【0089】
好ましい実施形態において、キレート基Ｃｈは、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡである：
【0090】
【化12】
【0091】
より詳細には、金属カチオンＭ１およびＭ２は重金属から独立して選択され、好ましくはＰｔ、Ｐｄ、Ｓｎ、Ｔａ、Ｚｒ、Ｔｂ、Ｔｍ、Ｃｅ、Ｄｙ、Ｅｒ、Ｅｕ、Ｌａ、Ｎｄ、Ｐｒ、Ｌｕ、Ｌｕ、Ｙｂ、Ｂｉ、Ｈｆ、Ｈｏ、Ｓｍ、ＩｎおよびＧｄからなる群から選択される。好ましくは、金属カチオンＭ１およびＭ２（またはＭ２およびＭ１）はそれぞれＧｄおよびＢｉである。
【0092】
特定の実施形態では、ナノ粒子が３～１００個、好ましくは５～５０個の金属カチオンＭ１およびＭ２、例えば１０～３０個、特にＧｄおよびＢｉを含む。
【0093】
別の実施形態では、Ｍ１が上記の重金属から選択され、Ｍ２は放射性同位体から選択され、特に、シンチグラフィーイメージングまたは近接照射療法のためのその使用のために選択される。
【0094】
当業者は所望の効果に応じて、特に、所望の治療、患者のタイプ、使用される線量、および／または治療される患者に応じて、ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）およびｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）モル比を選択するのであろう。例えば、特定の実施形態では、（ｎ＋ｍ）／（ｎ＋ｍ＋ｐ）比率が８０％以上、特に９０～１００である。
【0095】
好ましい実施形態において、上記式（２）のナノ粒子は、
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈ１は、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈ１は、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
【0096】
【化13】
【0097】
Ｓｉ－Ｃ結合によってポリシロキサンマトリックスにグラフトされ、
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋、Ｍ２はビスマスカチオンＢｉ３＋であり、
（ｉｖ）ｎ＋ｍ＋ｐは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは４５％～５５％であり、
（ｖｉ）ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは４５％～５５％であり、
（ｖｉｉ）ｐは実質的にゼロであり、および
（ｖｉｉｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことによって特徴づけられる。
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋、Ｍ２はビスマスカチオンＢｉ３＋であり、
（ｉｖ）ｎ＋ｍ＋ｐは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは４５％～５５％であり、
（ｖｉ）ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は１０％～９０％、好ましくは４５％～５５％であり、
（ｖｉｉ）ｐは実質的にゼロであり、および
（ｖｉｉｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことによって特徴づけられる。
【0098】
好ましい実施形態において、上記式（２）のナノ粒子は、
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈ１は、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈ１は、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
【0099】
【化14】
【0100】
Ｓｉ－Ｃ結合によってポリシロキサンマトリックスにグラフトされ、
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋、Ｍ２がビスマスカチオンＢｉ３＋であり、
（ｉｖ）ｎ＋ｍ＋ｐは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は２５％～３５％であり、
（ｖｉ）ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は６５％～７５％であり、
（ｖｉｉ）ｐは実質的にゼロであり、および
（ｖｉｉｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことによって特徴づけられる。
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋、Ｍ２がビスマスカチオンＢｉ３＋であり、
（ｉｖ）ｎ＋ｍ＋ｐは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は２５％～３５％であり、
（ｖｉ）ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は６５％～７５％であり、
（ｖｉｉ）ｐは実質的にゼロであり、および
（ｖｉｉｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことによって特徴づけられる。
【0101】
好ましい実施形態において、上記式（２）のナノ粒子は、
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈ１は、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
（ｉ）ＰＳはポリシロキサンマトリックスであり、
（ｉｉ）Ｃｈ１は、以下の式（Ｉ）のＤＯＴＡＧＡキレート基であり、
【0102】
【化15】
【0103】
Ｓｉ－Ｃ結合によってポリシロキサンマトリックスにグラフトされ、
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋、Ｍ２がビスマスカチオンＢｉ３＋であり、
（ｉｖ）ｎ＋ｍ＋ｐは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は６５％～７５％であり、
（ｖｉ）ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は２５％～３５％であり、
（ｖｉｉ）ｐは実質的にゼロであり、および
（ｖｉｉｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことによって特徴づけられる。
［本開示によるナノ粒子の医薬製剤］
本開示によるナノ粒子を含む組成物は、ナノ粒子のコロイド懸濁液の形態で投与される。それらは、本明細書に記載されるように、または当業者に公知の他の方法に従って調製され得、治療および治療される領域に応じて、異なる経路、局所または全身を介して投与され得る。
（ｉｉｉ）Ｍ１はガドリニウムカチオンＧｄ３＋、Ｍ２がビスマスカチオンＢｉ３＋であり、
（ｉｖ）ｎ＋ｍ＋ｐは５～５０、好ましくは１０～３０であり、
（ｖ）ｎ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は６５％～７５％であり、
（ｖｉ）ｍ／（ｎ＋ｍ＋ｐ）は２５％～３５％であり、
（ｖｉｉ）ｐは実質的にゼロであり、および
（ｖｉｉｉ）平均流体力学的直径は２～８ｎｍである、ことによって特徴づけられる。
［本開示によるナノ粒子の医薬製剤］
本開示によるナノ粒子を含む組成物は、ナノ粒子のコロイド懸濁液の形態で投与される。それらは、本明細書に記載されるように、または当業者に公知の他の方法に従って調製され得、治療および治療される領域に応じて、異なる経路、局所または全身を介して投与され得る。
【0104】
また本開示は、前述のセクションに記載された式（２）のナノ粒子のコロイド懸濁液、および必要に応じて、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせられたこれらのコロイド懸濁液を含む医薬組成物に関する。
【0105】
医薬組成物は特に、凍結乾燥粉末、または静脈内注射用の水溶液の形態で製剤化され得る。好ましい実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の前述のセクションに記載された式（２）のナノ粒子、特にガドリニウムおよび少なくとも１つの他の金属カチオン、例えばビスマス、でキレート化された、より具体的には上記のＡＧｕＩＸナノ粒子から得られるような、ポリシロキサン系ナノ粒子、を含むコロイド溶液を含む。
【0106】
いくつかの実施形態において、それは、バイアル当たり２００ｍｇ～１５ｇ、好ましくは２５０～１２５０ｍｇのナノ粒子を含む凍結乾燥粉末である。粉末はまた、他の賦形剤、特にＣａＣｌ２を含んでもよい。
【0107】
凍結乾燥粉末は、水溶液、典型的には注射用の滅菌水中で再構成され得る。それゆえ本開示は、前述のセクションに記載される式（２）のナノ粒子、特にポリシロキサン系ガドリニウムキレート化ナノ粒子、より具体的には上記のＡＧｕＩＸナノ粒子から得られるようなナノ粒子を活性成分として含む、注射用溶液としてのその使用のための医薬組成物に関する。
［ナノ粒子の使用］
遊離した、または金属カチオンＭ１と錯化したキレート基Ｃｈ１の存在、および必要に応じてカチオンＭ２のために、本発明によるナノ粒子は、Ｍ１および／またはＭ２が放射線増感剤としての使用のために慎重に選択される場合、放射線増感剤としての使用を可能にし、当該方法は組成物の投与後に、放射線療法による腫瘍の治療のために有効な線量で対象を照射する工程を含む。
［ナノ粒子の使用］
遊離した、または金属カチオンＭ１と錯化したキレート基Ｃｈ１の存在、および必要に応じてカチオンＭ２のために、本発明によるナノ粒子は、Ｍ１および／またはＭ２が放射線増感剤としての使用のために慎重に選択される場合、放射線増感剤としての使用を可能にし、当該方法は組成物の投与後に、放射線療法による腫瘍の治療のために有効な線量で対象を照射する工程を含む。
【0108】
いくつかの実施形態では、本発明によるナノ粒子は、造影剤として医療用造影、例えば磁気共鳴造影（ＭＲＩ）のために、特に対象における腫瘍の検出のために、Ｍ１および／またはＭ２が造影剤、例えばＭＲＩのための造影剤として使用するために慎重に選択される場合において、造影剤としての使用を可能にし、また当該方法は、組成物の投与後に、関心領域を造影するために有効な線量で対象を造影する工程、特に腫瘍検出のための対象内のＭＲＩ造影を含む。
【0109】
「患者」または「対象」は、好ましくは例えば腫瘍を有する対象を含む哺乳類またはヒトを意味すると理解される。
【0110】
「治療（treatment）」および「治療（therapy）」という用語は、患者の健康を改善することを目的とする任意の行為、例えば、治療、防止、予防、および疾患の減速を指す。場合によってはこれらの用語は、疾患または疾患に関連する症状の改善または根絶を指す。他の実施形態ではこれらの用語は、そのような疾患に罹患している対象への１つ以上の治療薬の投与からもたらされる、疾患の広がりまたは悪化の低減を指す。腫瘍の治療の文脈において、用語「治療（treatment）」は、典型的には腫瘍の成長を停止させるため、腫瘍のサイズを縮小させるため、および／または腫瘍を排除するための治療を含み得る。
【0111】
特に、ナノ粒子は固形腫瘍、例えば脳腫瘍（原発性および続発性、神経膠芽腫など）、肝臓癌（原発性および続発性）、骨盤腫瘍（子宮頸癌、前立腺癌、肛門直腸癌、結腸直腸癌）、上部気道消化管癌、肺癌、食道癌、乳癌、膵癌の検出および／または治療に使用される。
【0112】
ナノ粒子の「有効量」は、患者に投与された場合に、腫瘍に局在化され、放射線治療による放射線増感効果による腫瘍の検出および／または治療を可能にするのに十分である、上記のナノ粒子の量を指す。
【0113】
この量は、対象の年齢、性別、および体重などの因子にしたがって、決定されかつ調整される。
【0114】
上記のナノ粒子の投与は、腫瘍内、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、腹腔内、経口、舌下、直腸、膣または鼻腔内経路によって、吸入によってまたは経皮適用によって実施され得る。好ましくは、それは腫瘍内および／または静脈内で実施される。
【0115】
放射線増感剤としてのナノ粒子投与後における腫瘍の治療のための照射方法は、当業者に周知であり、特に以下の刊行物に記載されている：ＷＯ２０１８／２２４６８４、ＷＯ２０１９／００８０４０の他、C. Verry, et al., Science Advances, 2020, 6, eaay5279；およびC. Verry, et al, NANO-RAD, a phase I study protocol, BMJ Open, 2019, 9, e023591。
【0116】
放射線療法中の照射の総線量は、癌の種類、病期および治療される対象に応じて調整されるであろう。治癒線量については、固形腫瘍の典型的な総線量は２０～１２０Ｇｙのオーダーである。他の因子として化学療法による治療、併存疾患、および／または放射線治療が手術の前または後に行われるかどうか、などが考慮され得る。総線量は通常、分割される。本開示による方法における放射線治療工程は例えば、１日当たり２～６Ｇｙの数フラクション、例えば１週間当たり５日であり、特に２～８週間以上連続して、総線量は２０～４０Ｇｙ、例えば３０Ｇｙであり得る。
【0117】
また、本発明は腫瘍、特に固形腫瘍を治療するための方法であって、それを必要とする対象において、上記の式（２）のナノ粒子の有効量を対象に投与することを含み、Ｍ１およびＭ２が、磁気共鳴イメージング剤および放射線増感剤、特にガドリニウムおよびビスマスから選択される方法に関する。
【0118】
本開示によるナノ粒子は、単独で、または１つ以上の他の活性成分、特に細胞毒性もしくは抗増殖剤または他の抗癌剤、特に免疫チェックポイント阻害剤などの他の薬物と組み合わせて投与することができる。併用投与は、同時投与または（異なる時点での）連続投与を意味すると理解される。
【実施例】
【0119】
［材料及び方法］
酸性製品は、Ｎｈ Ｔｈｅｒａｇｕｉｘ（フランス）によって供給される出発製品ＡＧｕＩＸ（登録商標）を、ＣａｒｌＲｏｔｈ製の超純粋３７％塩酸から得られる強酸性媒質に導入することによって得られる。
酸性製品は、Ｎｈ Ｔｈｅｒａｇｕｉｘ（フランス）によって供給される出発製品ＡＧｕＩＸ（登録商標）を、ＣａｒｌＲｏｔｈ製の超純粋３７％塩酸から得られる強酸性媒質に導入することによって得られる。
【0120】
濾過工程は、蠕動ポンプおよびＳａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ（フランス）製のＶｉｖａｆｌｏｗ ２００（登録商標）－５ｋＤａカセットを用いて、Ｖｉｖａｆｌｏｗ ２００（登録商標）製品に連動された説明書に記載された条件下で行われる。
【0121】
流体力学的直径の測定および等電点の滴定は、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（米国）製のＺｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ－Ｓ（６３３ｎｍＨｅ－Ｎｅレーザー）を用いて実施する。等電点の測定のために、この装置は、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（米国）製のＭＰＴ－２自動滴定装置に連結される。
【0122】
ＨＰＬＣ－ＵＶは、ＤＡＤ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２００を用いて実施される。使用される逆相カラムは、Ｊｕｐｉｔｅｒ社製のＣ４、５μｍ、３００Å、１５０×４．６ｍｍカラムである。検出は、２９５ｎｍの波長のＵＶ検出器によって行われる。Ａ相（Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ／ＴＦＡ：９８．９／１／０．１）およびＢ相（Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ／ＴＦＡ：１０／８９．９／０．１）のグラジエントは９５／５で５分であり、その後１０分以上線形グラジエントを続けることで１０／９０に到達することを可能にし、１５分間維持される。これらの１５分の終わりに、Ａの比率は、１分で９５％に戻され、９５／５で７分のプラトーが続く。溶出相の組成物に使用される生産物は、全てＨＰＬＣグレード認定されている。
【0123】
元素分析は、the Institut des Sciences Analytiques [Institute of Analytical Sciences], UMR 5280, Pole Isotopes & Organique, 5 rue de la Doua 69100 Villeurbanne．において実施された。
【0124】
ＨＰＬＣ－ＩＣＰ／ＭＳは、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ（米国）製のＮｅｘｉｏｎ ２０００を用いて実施される。媒体中の遊離要素の測定は９５％のＡ相および５％のＢ相の組成の溶出相を用いて、アイソクラティックモードで実施される。Ａ相およびＢ相の組成はＨＰＬＣ－ＵＶ法と同一である。使用された逆相カラムは、Ｊｕｐｉｔｅｒ製のＣ４、５μｍ、３００Å、１５０×４．６ｍｍカラムである。溶出相の組成物に使用される生産物は、全てＨＰＬＣグレード認定されている。
【0125】
粒子の凍結乾燥は、「主乾燥」プログラムに従って、Ｃｈｒｉｓｔ（ドイツ）製のＡｌｐｈａ ２－４ ＬＳＣ凍結乾燥機を用いて実施する。
【0126】
遊離ＤＯＴＡは、一定量の生産物に増加量のＣｕ２＋を添加することによって測定される。銅は、超純水に溶解したＣｕＣｌ２（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、９９％、粉末、２５ｇ）から予め調製したＣｕ２＋の１５ｍＭ溶液から得られる。次いで、試料の体積を、ｐＨ５の酢酸緩衝溶液で調整して、完全な錯化を確実にする。試料が調製されると、ＨＰＬＣ－ＵＶ測定が、先に指定されたように２９５ｎｍで実施される。全吸光度は、得られたクロマトグラムの０～１５分のセグメントを統合することによって測定される。吸光度シグナルの増大はＤＯＴＡ（Ｃｕ）錯体の形成に基づくので、遊離ＤＯＴＡと添加Ｃｕ２＋との間の化学量論的点に達したときに、媒体中の遊離ＤＯＴＡの含量を得ることができる。この点は、得られたグラフ上のグラジエントの急激な変化をもたらす。
［実施例１：媒体の酸性化およびＧｄ３＋イオンの放出］
当該方法によるナノ粒子を得るために、ＡＧｕＩＸ（登録商標）製品を酸性媒体中に入れて、ＤＯＴＡ基をプロトン化し、それにより最初に錯化したＧｄ３＋イオンの一部を放出させた。
［実施例１：媒体の酸性化およびＧｄ３＋イオンの放出］
当該方法によるナノ粒子を得るために、ＡＧｕＩＸ（登録商標）製品を酸性媒体中に入れて、ＤＯＴＡ基をプロトン化し、それにより最初に錯化したＧｄ３＋イオンの一部を放出させた。
【0127】
まず、ＡＧｕＩＸ（登録商標）の２００ｇ／Ｌ溶液は、５０ｍｌの超純水に１０ｇの製品を溶解することによって調製された。溶液は室温で１時間撹拌された。同時に、１０ｍｌの３７％塩酸（３７％塩酸、超純粋、２．５Ｌ、プラスチック、ＣａｒｌＲｏｔｈ）を５０ｍｌの超純水に添加することにより、２Ｍ塩酸溶液が調製された。
【0128】
１時間撹拌した後、５０ｍｌの２Ｍ塩酸溶液を５０ｍｌのＡＧｕＩＸ（登録商標）に添加する。次いで、ｐＨを測定すると０．５未満である。得られた溶液は褐色～橙色である。合わせた混合物を５０℃に予熱したオーブン中に４時間放置する。ＨＰＬＣ－ＩＣＰ／ＭＳによるガドリニウムイオンの放出を観察するために、サンプルを１時間ごとに採取した。保持時間Ｔｒ＝２．３ｍｉｎでの媒体中の遊離Ｇｄ３＋のピークは反応時間と共に増加することが観察される。
［実施例２：ガドリニウムを含まないナノ粒子を得ること］
ＡＧｕＩＸ（登録商標）の１００ｇ／Ｌ溶液は、５ｇの製品を５０ｍｌの超純水に溶解することによって調製される。溶液を室温で１時間撹拌したままにする。同時に、１０ｍｌの３７％塩酸（３７％塩酸、超純粋、２．５Ｌ、プラスチック、ＣａｒｌＲｏｔｈ）を５０ｍｌの超純水に添加することによって、２Ｍ塩酸溶液を調製する。
［実施例２：ガドリニウムを含まないナノ粒子を得ること］
ＡＧｕＩＸ（登録商標）の１００ｇ／Ｌ溶液は、５ｇの製品を５０ｍｌの超純水に溶解することによって調製される。溶液を室温で１時間撹拌したままにする。同時に、１０ｍｌの３７％塩酸（３７％塩酸、超純粋、２．５Ｌ、プラスチック、ＣａｒｌＲｏｔｈ）を５０ｍｌの超純水に添加することによって、２Ｍ塩酸溶液を調製する。
【0129】
１時間撹拌した後、５０ｍｌの２Ｍ塩酸溶液を、５０ｍｌのＡＧｕＩＸ（登録商標）を含有する溶液に添加する。合わせた混合物を５０℃で１時間加熱する。このようにして得られた１００ｍｌの溶液を、ペリスタルティックポンプおよびＳａｒｔｏｒｉｕｓ Ｖｉｖａｆｌｏｗの５０Ｒ～５ｋＤａカセットを用いて精製し、放出されたＧｄ３＋から微粒子を分離し、それによって、依然として複合体を形成しているＧｄ３＋の放出に向かって平衡を押し出す。したがって、初期溶液の体積を５０ｍｌに濃縮する。培地中にまだ存在するＧｄ３＋の量を推定するために、濾液をＩＣＰ－ＭＳによって直接的に分析する。ＡＧｕＩＸ溶液を、再度、５０ｍｌの１Ｍ塩酸溶液で再希釈する。同様に、溶液を５０℃で１時間放置し、次いで５０ｍｌに再濃縮する。測定されたＧｄ３＋が０になるまで、当該方法が繰り返される。このレベルに達したら、溶液は濃塩酸の使用による過剰な塩を排除するために、超純水を使用して１００００倍で精製される。当該方法の最後に、最終生産物についてのＩＣＰ－ＭＳ測定により、それがいかなるＧｄ３＋も含まないことを検証することができる。
【0130】
最終生産物が回収されたら、ボトル詰めし、－８０℃で凍結し、次いで凍結乾燥する。次いで、得られた粉末を超純水中に再分散させて、１００ｇ／Ｌの溶液を得る。遊離ＤＯＴＡの測定は、銅錯化および２９５ｎｍでの吸光度の測定によって行われる。この測定は、新規製品が７１μｍｏｌ／ｍｇの製品の遊離ＤＯＴＡ含有量を有することを示す。対照的に、この試験に使用したＡＧｕＩＸ（登録商標）のバッチは１２．７％（重量％）のＧｄ３＋、すなわち、８１μｍｏｌ／ｍｇのＡＧｕＩＸのＤＯＴＡ（Ｇｄ）含有量を含有していた。
【0131】
さらに、最終生産物のサンプルはサンプル中にまだ存在するＧｄの含有量をチェックするために専門の実験室に送られ、その結果は上述の初期バッチの１２．７％（ｗｔ％）と比較して０．１９％（ｗｔ％）のＧｄの重量含有量を示す（表１）。得られたナノ粒子のサイズは、ＤＬＳによって測定され、元のＡＧｕＩＸ（登録商標）製品と同じオーダーの、５．２ｎｍ±２．６ｎｍの平均流体力学的直径を有する。さらに、最終生産物の等電点が測定され、したがって、最終生産物は、ｐＨ５．２に対して中性電荷を有する。このｐＨは、約７であるＡＧｕＩＸ（登録商標）の等電点よりも低い。この低下は、表面上の遊離ＤＯＴＡの生成と一致する。
【0132】
【表1】
【0133】
［実施例３：複合体化Ｇｄの８０％の放出：７２時間］
前の実施例において提示された方法は、ガドリニウムの部分的かつ制御された放出のみを有するように適合された。まず、ＡＧｕＩＸ（登録商標）の２００ｇ／Ｌ溶液は、５０ｍｌの超純水に１０ｇの製品を溶解することによって調製された。溶液を室温で１時間撹拌したままにする。同時に、１０ｍｌの３７％塩酸（３７％塩酸、超純粋、２．５Ｌ、プラスチック、ＣａｒｌＲｏｔｈ）を５０ｍｌの超純水に添加することによって、２Ｍ塩酸溶液を調製する。
前の実施例において提示された方法は、ガドリニウムの部分的かつ制御された放出のみを有するように適合された。まず、ＡＧｕＩＸ（登録商標）の２００ｇ／Ｌ溶液は、５０ｍｌの超純水に１０ｇの製品を溶解することによって調製された。溶液を室温で１時間撹拌したままにする。同時に、１０ｍｌの３７％塩酸（３７％塩酸、超純粋、２．５Ｌ、プラスチック、ＣａｒｌＲｏｔｈ）を５０ｍｌの超純水に添加することによって、２Ｍ塩酸溶液を調製する。
【0134】
１時間撹拌した後、５０ｍｌの２Ｍ塩酸溶液を５０ｍｌのＡＧｕＩＸ（登録商標）に添加する。次いで、ｐＨを測定すると０．５未満である。合わせた混合物を５０℃に予熱したオーブン中に７２時間放置する。ＨＰＬＣ－ＩＣＰ／ＭＳによるＧｄ３＋イオンの最終放出を観察するために、４時間の反応後、また反応の終わりに試料を採取する。保持時間Ｔｒ＝２．３分での培地中の遊離Ｇｄ３＋のピークは反応時間と共に増加する。７２時間でのピークは１２ｐｐｍのＧｄ３＋基準ピークの７７．２％を占め、これは使用したＡＧｕＩＸ溶液の総Ｇｄ濃度に相当する。それゆえ、最初に存在するＤＯＴＡＧＡ（Ｇｄ）錯体の２２．７％が、発明者らの粒子中に残存する。
［実施例４：Ｇｄ／Ｂｉナノ粒子の形成および錯化モニタリング］
特定のＧｄ／Ｂｉ比率を有するナノ粒子を製造するために、遊離ＤＯＴＡの量を測定する。それゆえ、粒子形成のための出発生産物はＤＯＴＡの８０％が遊離であり、残りの２０％がＧｄ３＋と複合体を形成するナノ粒子である。
［実施例４：Ｇｄ／Ｂｉナノ粒子の形成および錯化モニタリング］
特定のＧｄ／Ｂｉ比率を有するナノ粒子を製造するために、遊離ＤＯＴＡの量を測定する。それゆえ、粒子形成のための出発生産物はＤＯＴＡの８０％が遊離であり、残りの２０％がＧｄ３＋と複合体を形成するナノ粒子である。
【0135】
以下の３つの３０／７０、５０／５０、および７０／３０のＧｄ／Ｂｉ（ｎＧｄ／ｎＢｉ）バッチを生産するために、Ｂｉ錯化を最初に行う。Ｂｉ３＋錯化は長いプロセスである。それゆえ、必要量のＢｉＣｌ３（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、試薬グレード、＞９８％）を添加して所望の比率に到達させ、ｐＨを１ＭのＮａＯＨ溶液で７に調整し、混合物を８０℃で４８時間置く。それぞれのＢｉ３＋錯化工程の後、錯化の進行を確認するために、残存する遊離ＤＯＴＡの個数を銅錯化によって測定する（図１）。遊離ＤＯＴＡの含有量がこの比率に適合すると、必要量のＧｄＣｌ３・６Ｈ２Ｏ（Ｍｅｒｃｋ、９９％）を添加して、残りのＤＯＴＡを複合化し、それにより所望の粒子を形成する。ＧｄＣｌ３を加えた後、ｐＨを７に再調整し、８０℃で２４時間行う。次いで、粒子を凍結乾燥する。生産物が得られたら、様々なバッチにおける各元素の実際の含有量を検証するために、各バッチのサンプルを、元素分析のために発明者らのパートナーに送る（表２）。
【0136】
【表2】
【産業上の利用可能性】
【0137】
本発明の技術的解決策は、特に医学の分野、特に腫瘍の治療に適用することができる。
【0138】
本開示は、単に例として、上記の例に限定されず、特許請求される保護の範囲内で、当業者が想定することができる任意の変形を包含する。
【図1】
【国際調査報告】