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▶ シーエスエル イノベーション プロプライアタリー リミティドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-12-08
(54)【発明の名称】炎症性皮膚状態を治療する方法
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20231201BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20231201BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20231201BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20231201BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231201BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20231201BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61P17/00
A61P37/08
A61P29/00
A61K39/395 D
A61K39/395 N
C07K16/28 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023533727
(86)(22)【出願日】2021-12-03
(85)【翻訳文提出日】2023-06-01
(86)【国際出願番号】 AU2021051442
(87)【国際公開番号】W WO2022115914
(87)【国際公開日】2022-06-09
(31)【優先権主張番号】2020904494
(32)【優先日】2020-12-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(31)【優先権主張番号】2021901818
(32)【優先日】2021-06-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521239819
【氏名又は名称】シーエスエル イノベーション プロプライアタリー リミティド
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(74)【代理人】
【識別番号】100170852
【弁理士】
【氏名又は名称】白樫 依子
(72)【発明者】
【氏名】キャサリン メアリー オークザレク
(72)【発明者】
【氏名】エンジェル フランシスコ ロペス
(72)【発明者】
【氏名】クォク ホ イプ
(72)【発明者】
【氏名】デーモン ジョン トゥームズ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA17
4C084NA14
4C084ZA89
4C084ZB11
4C084ZB13
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB41
4C085BB43
4C085BB44
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA10
4H045DA76
4H045EA28
(57)【要約】
本開示は、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５シグナル伝達を阻害する化合物を使用して炎症性皮膚状態を治療する方法に関する。本開示はまた、炎症性皮膚状態の治療又は予防に使用される化合物、並びに炎症性皮膚状態の治療又は予防のための医薬品の製造におけるそのような化合物の使用に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象における炎症性皮膚状態を治療するための方法であって、ＣＤ１３１に結合し、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及びインターロイキン（ＩＬ）５によるシグナル伝達を中和する化合物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項2】
前記炎症性皮膚状態が、過敏症である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記過敏症が、ＩＶ型過敏症である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記炎症性皮膚状態が、接触性皮膚炎である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記接触性皮膚炎が、アレルギー性接触性皮膚炎である、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する前記化合物の投与が、ａ）炎症部位の腫脹を低減させ、かつ／又は
ｂ）前記炎症部位における肥満細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｃ）前記炎症部位における好中球浸潤を低減させ、かつ／又は
ｄ）前記炎症部位におけるＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｅ）前記炎症部位における好中球浸潤を低減させる、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する前記化合物が、ＩＬ－３によるシグナル伝達も中和する、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する前記化合物が、ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、阻害する、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する前記化合物が、ＣＤ１３１に結合する抗原結合部位を含むタンパク質である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
配列番号５に記載の配列を含むポリペプチドに対する前記タンパク質のＫＤが、前記ポリペプチドが固体表面上に固定化され、前記ＫＤが表面プラズモン共鳴によって決定される場合、約１０ｎＭ以下である、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する前記化合物が、Ｆｖを含むタンパク質である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記タンパク質が、（ｉ）一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、又は
（ｉｉｉ）ダイアボディ、
（ｉｖ）トリアボディ、
（ｖ）テトラボディ、
（ｖｉ）Ｆａｂ、
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
（ｉｘ）抗体、Ｆｃ、又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／若しくはＣＨ３の定常領域に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、
（ｘ）アルブミン若しくはその機能的断片若しくは変異体、又はアルブミンに結合するタンパク質に連結されている（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、あるいは
（ｘｉ）抗体、を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記タンパク質が、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項14】
前記タンパク質が、ＣＤ１３１に結合し、配列番号６に記載の配列を含むＶＨと配列番号１８に記載の配列を含むＶＬとを含む抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害する抗体可変領域を含む、請求項９～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記抗原結合部位が、ＣＤ１３１の部位２内のエピトープに結合する、請求項９～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記抗原結合部位が、２つのＣＤ１３１ポリペプチドの二量体化の際にエピトープに結合する、請求項９～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記抗原結合部位が、ＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン１内の残基及び別のＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン４内の残基に結合する、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
前記ＣＤ１３１のドメイン１内の残基が、配列番号１の１０１～１０７の領域内の残基を含み、かつ／又は前記ＣＤ１３１のドメイン４内の残基が、配列番号１の３６４～３６７の領域内の残基を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記タンパク質が、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨの３つのＣＤＲを含むＶＨと、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬの３つのＣＤＲを含むＶＬとを含む、抗体可変領域を含む、請求項９～１２又は１４～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記タンパク質が、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、請求項９～１２又は１４～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記タンパク質が、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項９～１２又は１４～２０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願データ
本出願は、２０２０年１２月４日に出願された「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｋｉｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ」と題されたオーストラリア特許出願第２０２０／９０４４９４号、及び２０２１年６月１７日に出願された「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｋｉｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ」と題されたオーストラリア特許出願第２０２１／９０１８１８号の優先権を主張する。両方の出願の全体の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年１２月４日に出願された「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｋｉｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ」と題されたオーストラリア特許出願第２０２０／９０４４９４号、及び２０２１年６月１７日に出願された「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｋｉｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ」と題されたオーストラリア特許出願第２０２１／９０１８１８号の優先権を主張する。両方の出願の全体の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表
本出願は、電子形態の配列表とともに出願される。配列表の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、電子形態の配列表とともに出願される。配列表の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0003】
本開示は、対象の炎症性皮膚状態を治療する方法に関する。
【背景技術】
【0004】
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）及びアレルギー性接触性皮膚炎（ＡＣＤ）などの炎症性皮膚状態は、一般集団の大部分に影響を及ぼす。例えば、ＡＤは小児の１０～１５％に影響を及ぼし、ＡＣＤは世界中の一般集団の１５～２０％に影響を及ぼす。多くの患者は炎症性皮膚状態を成人期まで持ち込むため、一部の患者にとっては疾患は生涯にわたるものである。したがって、このような状態に対する効果的な治療法の開発は、公衆衛生上の重要な進歩となるであろう。
【0005】
炎症性皮膚状態の根本的な原因には、遺伝的要因と環境的要因との組み合わせが含まれ、いくつかの重複する免疫学的経路が疾患の発症に寄与すると考えられている。炎症性皮膚状態の多因子性のために、現在入手可能な薬物の有効性は限られている。治療の主力は、軽度の疾患における皮膚軟化剤、コルチコステロイド、及びカルシニューリン阻害剤を含む局所療法であった。しかしながら、これらの治療法は、中等度から重度の疾患を有する患者における治療抵抗性（ｒｅｃａｌｃｉｔｒａｎｔ）炎症には不十分であり、実質的な有害な副作用をもたらすことが知られている。証拠が不十分であるにもかかわらず、抗ヒスタミン薬と組み合わせた全身性コルチコステロイド又は時間のかかる光線療法の使用が使用されることがある。従来の治療に難治性の重症疾患を有する患者は、シクロスポリンＡ、メトトレキサート、アザチオプリン、及びミコフェノール酸モフェチルを含む様々なレベルの証拠を有する全身性非ステロイド治療選択肢で治療され得る。そのような薬物は非特異的免疫抑制剤であり、各々が独自の望ましくない副作用を有する。
【0006】
したがって、炎症性皮膚状態を治療するための新しい介入の必要性がある。
【発明の概要】
【0007】
本発明を作成するにあたり、本発明者らは、ＡＣＤのトランスジェニックマウスモデルを開発した。トランスジェニックマウスはヒトＣＤ１３１（βｃ）を発現し、ヒトＣＤ１３１を標的とすることの効果を調査するのに有用である。本発明者らは、ＣＤ１３１に結合する抗体を使用して、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及びインターロイキン（ＩＬ）５シグナル伝達の阻害が、炎症性細胞の蓄積を減少させ、疾患を改善することを見出した。これらの知見は、ＡＣＤなどの炎症性皮膚状態を治療する方法の基礎を提供する。
【0008】
したがって、一例では、本開示は、対象における炎症性皮膚状態を治療するための方法を提供し、本方法は、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する１つ以上の化合物を対象に投与することを含む。同様に、本開示は、対象の炎症性皮膚状態の治療に使用するために、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する１つ以上の化合物を提供する。本開示はまた、炎症性皮膚状態を治療するための医薬品の製造における、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する１つ以上の化合物の使用を提供する。
【0009】
別の例では、本開示は、対象における炎症性皮膚状態を治療するための方法を提供し、本方法は、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物を対象に投与することを含む。
【0010】
本開示はまた、対象における炎症性皮膚状態の治療に使用するために、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物を提供する。本開示はまた、炎症性皮膚状態を治療するための医薬品の製造において、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物の使用を提供する。
【0011】
本開示の方法は、任意のタイプの炎症性皮膚状態、特にＧＭ－ＣＳＦ及び／又はＩＬ－５シグナル伝達に関連するものの治療に好適である。いくつかの例では、炎症性皮膚状態は、過敏症、自己免疫状態、アレルギー状態、好中球性皮膚症、アトピー性状態、自己炎症性状態及び／又はＴ細胞媒介性状態である。
【0012】
一例では、炎症性皮膚状態は、ＡＣＤ、ＡＤ、慢性自発性蕁麻疹、結節性痒疹、乾癬、乾癬性胃腸炎、逆乾癬、膿疱性乾癬、プラーク乾癬、乾癬性赤血球皮症、襞の細菌性膿疱疹（ＡＰＦ）、ＣＡＲＤ１４媒介性膿疱性乾癬（ＣＡＭＰＳ）、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、インターロイキン－１受容体欠損症（ＤＩＲＡ）、インターロイキン－３６受容体アンタゴニスト欠損症（ＤＩＲＴＡ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、掌蹠膿疱症（ＰＰＰ）、化膿性無菌性関節炎・壊疽性膿皮症・アクネ症候群（ＰＡＰＡ）、壊疽性膿皮症（ＰＧ）、スティル病、スウィート症候群、角層下膿疱症（Ｓｎｅｄｄｏｎ－Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ）、急性汎発性発疹性膿疱症、乳児肢先端の膿疱症、滑膜炎・ざ瘡・膿疱症・骨化過剰・骨髄炎（ＳＡＰＨＯ）症候群、腸関連性皮膚症－関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）、背側の手の好中球性皮膚症、持久性隆起性紅斑、壊疽性膿皮性熱性好中球性皮膚症、乾燥性湿疹、異汗性湿疹、水疱性手掌湿疹、尋常性ざ瘡、接触性皮膚炎、メリスマ、皮膚筋炎、剥脱性皮膚炎、手湿疹、汗疱、水疱性類天疱瘡、天疱瘡酒さ、酒さ様皮膚炎、サルコイドーシスによる酒さ、強皮症による酒さ、スウィート症候群による酒さ、全身性エリテマトーデスによる酒さ、蕁麻疹による酒さ、ヘルペス後痛による酒さ、スウィート病、好中球性汗腺炎、無菌性膿疱、薬疹、蕁麻疹、脂漏性皮膚炎、ばら色粃糠疹、菊池皮膚病、妊娠性そう痒性蕁麻疹様丘疹、スティーブンス・ジョンソン症候群及び中毒性表皮壊死症、タトゥー反応、ウェルズ症候群（好酸球性蜂窩織炎）、反応性関節炎（ライター症候群）、腸関連性皮膚症－関節炎症候群、リウマチ様好中球性皮膚症、好中球性エクリン汗腺炎、背側の手の好中球性皮膚疾患、形質細胞性限局性亀頭包皮炎、亀頭包皮炎、ベーチェット病、遠心性環状紅斑、色素異常性固定紅斑、多形紅斑、環状肉芽腫、手の皮膚炎、光沢苔癬、扁平苔癬、硬化性萎縮性苔癬、慢性単純性苔癬、棘状苔癬、貨幣状湿疹、サルコイドーシス、角層下膿疱症、蕁麻疹、一過性棘融解性皮膚症、並びに漆瘡れである。
【0013】
一例では、炎症性皮膚状態は過敏症である。
【0014】
いくつかの例では、過敏症はＩ型過敏症である。いくつかの例では、Ｉ型過敏症は、血管性浮腫、蕁麻疹、蜂刺反応、又はラテックスアレルギーに関連する。
【0015】
いくつかの例では、過敏症はＩＩ型過敏症である。いくつかの例では、ＩＩ型過敏症は、水疱性類天疱瘡又は尋常性天疱瘡である。
【0016】
いくつかの例では、過敏症はＩＩＩ型過敏症である。いくつかの例では、ＩＩＩ型過敏症は、へノッホ・シェーンライン紫斑病、小血管の血管炎、又は全身性エリテマトーデスである。
【0017】
いくつかの例では、過敏症はＩＶ型過敏症である。
【0018】
いくつかの例では、ＩＶ型過敏症は、アレルギー性接触性皮膚炎、麻疹様薬物反応、薬物過敏症候群（以前は薬物による過敏症及び好酸球増多症［ＤＲＥＳＳ］を伴う薬物反応として知られていた）、多形性紅斑、苔癬様薬疹、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）又は中毒性上皮壊死症（ＴＥＮ）である。
【0019】
いくつかの例では、炎症性皮膚状態は接触性皮膚炎である。
【0020】
いくつかの例では、接触性皮膚炎は刺激性接触性皮膚炎（ＩＣＤ）である。
【0021】
いくつかの例では、接触性皮膚炎はアレルギー性接触性皮膚炎（ＡＣＤ）である。実施例に記載のように、本発明者らは、ＡＣＤのマウスモデルにおいて、抗ＣＤ１３１抗体によるＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５シグナル伝達の阻害が、炎症性細胞の蓄積を減少させ、疾患を改善することを見出した。したがって、本開示の方法は、ＡＣＤ及び他の細胞媒介性炎症状態の治療に特に適している。
【0022】
いくつかの例では、炎症性皮膚状態は、細胞媒介性状態である。一例では、炎症性皮膚状態は、Ｔ細胞媒介性状態である。いくつかの例では、炎症性皮膚状態は、炎症部位における肥満細胞及び／又は好中球浸潤に関連付けられる。
【0023】
いくつかの例では、炎症性皮膚状態は、抗体媒介性状態である。いくつかの例では、炎症性皮膚状態は、ＩｇＥ媒介性状態及び／又は血清ＩｇＥレベルの上昇に関連する状態（例えば、アトピー性皮膚炎）である。他の例では、炎症性皮膚状態は、ＩｇＥ媒介性状態ではなく、かつ／又は血清ＩｇＥレベルの上昇に関連する状態ではない。
【0024】
いくつかの例では、炎症性皮膚状態はアトピー性皮膚炎である。
【0025】
いくつかの例では、炎症性皮膚状態は自己免疫状態である。いくつかの例では、自己免疫状態は、乾癬、全身性硬化症、皮膚筋炎、白斑、円形脱毛症、硬化性苔癬である。一例では、自己免疫状態は、自己免疫水疱性疾患である。いくつかの例では、自己免疫水疱性疾患は、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、腫瘍随伴性天疱瘡、水疱性天疱瘡、粘膜天疱瘡、妊娠性類天疱瘡、ヘルペス状皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症、又は水疱性全身性エリテマトーデスである。
【0026】
いくつかの例では、炎症性皮膚状態は、自己炎症性皮膚疾患である。いくつかの例では、自己炎症性皮膚疾患は、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、腫瘍壊死因子受容体関連周期性発熱症候群（ＴＲＡＰＳ）、高ＩｇＤ症候群（ＨＩＤＳ）、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、家族性寒冷自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、マックルウェルズ症候群（ＭＷＳ）、新生児期発症多臓器系炎症性疾患／慢性乳児神経性皮膚関節症候群（ＮＯＭＩＤ／ＣＩＮＣＡ）、化膿性無菌性関節炎・壊疽性膿皮症・アクネ症候群（ＰＡＰＡ症候群、ＰＡＰＡＳ、ＰＡＰＧＡ症候群）、若年性全身肉芽腫症（Ｂｌａｕ症候群、若年発症サルコイドーシス）、インターロイキン－１受容体案タグにスト欠損症（ＤＩＲＡ）、メバロン酸尿症、マジィード症候群、シュニッツラー症候群、ベーチェット病、化膿性汗腺炎、又は周期性発熱症候群、アフタ性口内炎、咽頭炎、及び腺炎（ＰＡＰＡＳ、ＰＦＡＰＡ症候群）である。
【0027】
いくつかの例では、炎症性皮膚状態は好中球性皮膚症である。一例では、好中球性皮膚症は、襞の細菌性膿疱疹（ＡＰＦ）、プラーク乾癬、ＣＡＲＤ１４媒介性膿疱性乾癬（ＣＡＭＰＳ）、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、インターロイキン－１受容体欠損症（ＤＩＲＡ）、インターロイキン－３６受容体アンタゴニスト欠損症（ＤＩＲＴＡ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、掌蹠膿疱症、化膿性関節炎・壊疽性膿皮症・アクネ症候群（ＰＡＰＡ）、壊疽性膿皮症・アクネ・化膿性汗腺炎（ＰＡＳＨ）、壊疽性膿皮症（ＰＧ）、ベーチェット病の皮膚病変、スティル病、スウィート症候群、角層下膿疱症（Ｓｎｅｄｄｏｎ－Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ）、膿疱性乾癬、掌蹠膿疱症、急性汎発性発疹性膿疱症、乳児肢先端の膿疱症、滑膜炎・ざ瘡・膿疱症・骨化過剰・骨髄炎（ＳＡＰＨＯ）症候群、腸関連性皮膚症－関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）、背側の手の好中球性皮膚症、好中球性エクリン汗腺炎、持久性隆起性紅斑、又は壊疽性膿皮症である。一例では、好中球性皮膚症は、化膿性汗腺炎（ＨＳ）又は掌蹠膿疱症（ＰＰＰ）である。
【0028】
本発明者らは、ＡＣＤのマウスモデルにおいて、アイソタイプ対照抗体を投与したマウスと比較して、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する抗体の投与が、腫脹、肥満細胞浸潤、好酸球浸潤、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤、及び好中球浸潤を低減させることを見出した。したがって、いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物の投与は：
ａ）炎症部位の腫脹を低減させ、かつ／又は
ｂ）炎症部位における肥満細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｃ）炎症部位における好中球浸潤を低減させる。
ａ）炎症部位の腫脹を低減させ、かつ／又は
ｂ）炎症部位における肥満細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｃ）炎症部位における好中球浸潤を低減させる。
【0029】
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物の投与は：
ａ）炎症部位の腫脹を低減させ、かつ／又は
ｂ）炎症部位における肥満細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｃ）炎症部位における好中球浸潤を低減させ、かつ／又は
ｄ）炎症部位におけるＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｅ）炎症部位における好中球浸潤を低減させる。
ａ）炎症部位の腫脹を低減させ、かつ／又は
ｂ）炎症部位における肥満細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｃ）炎症部位における好中球浸潤を低減させ、かつ／又は
ｄ）炎症部位におけるＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｅ）炎症部位における好中球浸潤を低減させる。
【0030】
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物の投与は：
ａ）炎症部位におけるＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｂ）炎症部位における好中球浸潤を低減させる。
ａ）炎症部位におけるＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を減少させ、かつ／又は
ｂ）炎症部位における好中球浸潤を低減させる。
【0031】
上記を評価するための好適な方法は、本明細書に記載されており、当業者によって既知であろう。
【0032】
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物もまた、ＩＬ－３によるシグナル伝達を中和する。
【0033】
一例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物は、少なくとも６００ｎＭ又は５００ｎＭのＩＣ５０でＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を阻害する。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約４００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約３００ｎＭ又は２００ｎＭ又は１００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約５０ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約１０ｎＭ又は５ｎＭ又は１ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約１ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約０．９ｎＭ又は０．８ｎＭ又は０．６ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．５ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．４ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．３ｎＭである。
【0034】
一例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物は、少なくとも６００ｎＭ又は５００ｎＭのＩＣ５０でＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を阻害する。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約４００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約３００ｎＭ又は２００ｎＭ又は１００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約５０ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約１０ｎＭ又は５ｎＭ又は１ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約５ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約４ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約４．５ｎＭ又は少なくとも約４．６ｎＭ又は少なくとも約４．７ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約４．６ｎＭである。
【0035】
一例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物は、少なくとも６００ｎＭ又は５００ｎＭのＩＣ５０でＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を阻害する。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約４００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約３００ｎＭ又は２００ｎＭ又は１００ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約５０ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約１０ｎＭ又は５ｎＭ又は１ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約１ｎＭである。例えば、ＩＣ５０は、少なくとも約０．９ｎＭ又は０．８ｎＭ又は０．６ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．５ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．２ｎＭ又は少なくとも約０．１ｎＭである。一例では、ＩＣ５０は、少なくとも約０．１５ｎＭである。
【0036】
ＩＣ５０を決定するための方法は、本明細書に記載され、関連する増殖因子（ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３及び／又はＩＬ－５）を添加する前に、ＣＤ１３１に結合する化合物の存在下で（例えば、少なくとも約３分間又は１時間、例えば、約３０分間）ＴＦ－１細胞（例えば、約１×１０４個のＴＦ－１細胞）を培養し、細胞を更に（例えば、少なくとも約４８時間又は少なくとも約７２時間又は少なくとも約９６時間、例えば、約７２時間）培養し、次いで細胞増殖を決定することを含む。細胞増殖は、３［Ｈ］－チミジンの存在下で約６時間細胞を増殖させ、３［Ｈ］－チミジンの組み込みを決定することによって、例えば、液体シンチレーションカウントによって決定することができる。ＣＤ１３１に結合する化合物の様々な濃度における増殖を決定することによって、ＩＣ５０を決定することができる。
【0037】
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物は、
ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。
ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも１００ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。
【0038】
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物は、
ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも５０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも５０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも５０ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。
ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも５０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも５０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも５０ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。
【0039】
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物は、
ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも１０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも１０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも１０ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。
ａ）ＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ誘導増殖を少なくとも１０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｂ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－５誘導増殖を少なくとも１０ｎＭのＩＣ５０で、かつ／又は
ｃ）ＴＦ－１細胞のＩＬ－３誘導増殖を少なくとも１０ｎＭのＩＣ５０で、阻害する。
【0040】
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦ誘導のＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止する。
【0041】
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、約２０ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＩＬ－３誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止する。一例では、ｐＳｔａｔ－５ ＩＣ５０ ＩＬ－３は、約１０ｎＭ以下、又は約９ｎＭ以下、又は約８ｎＭ以下である。一例では、ｐＳｔａｔ－５ ＩＣ５０ ＩＬ－３は、約７．５ｎＭ以下、例えば７．３ｎＭである。
【0042】
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、約６０ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＧＭ－ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止する。一例では、ｐＳｔａｔ－５ ＩＣ５０ ＧＭ－ＣＳＦは、約５０ｎＭ以下、又は約４５ｎＭ以下、又は約４０ｎＭ以下である。一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、約４０ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＧＭ－ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止する。
【0043】
例えば、化合物は、ＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦの存在下で、インターフェロン調節因子１（ｉｒｆ１）応答エレメントの制御下でβ－ラクタマーゼレポーター遺伝子を含む細胞（例えば、ＴＦ－１細胞）に接触させることができる。細胞をまた、好適な基質（例えば、ＣＣＦ２又はＣＣＦ４などの負に帯電した蛍光β－ラクタマーゼ基質）と接触させ、決定されたシグナルの変化（例えば、蛍光）を決定する。陽性対照（すなわち、タンパク質又は抗体の非存在下でＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦと接触した細胞）におけるシグナルの変化の減少は、化合物がＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止することを示す。
【0044】
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、以下の活性のうちの１つ以上を有する：
（ｉ）好中球細胞サイズのＧＭ－ＣＳＦ誘導増加を低減若しくは阻害することによって決定される、ＧＭ－ＣＳＦによる単離されたヒト好中球の活性化を低減若しくは阻害すること、
（ｉｉ）ヒト好塩基球によるＩＬ－３誘導ＩＬ－８分泌を低減若しくは阻害すること、
（ｉｉｉ）ＩＬ－３媒介性生存若しくは形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を低減若しくは予防すること、
（ｉｖ）フローサイトメトリーによって評価された前方散乱の変化を評価することによって決定されるように、ＩＬ－５によるヒト末梢血好酸球の活性化を低減若しくは防止すること、
（ｖ）ＩＬ－５及び／若しくはＧＭ－ＣＳＦ及び／若しくはＩＬ－３の存在下でのヒト末梢血好酸球の生存を低下させるか若しくは防止することと、
（ｖｉ）ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導性腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αの放出を低減若しくは防止すること、
（ｖｉｉ）ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導ＩＬ－１３放出を低減若しくは防止すること、
（ｖｉｉｉ）ＩＬ－３及び／若しくはＩＬ－５及び／若しくはＧＭ－ＣＳＦによるヒト肥満細胞からのＩｇＥ媒介性ＩＬ－８放出の増強を低減若しくは防止すること、
（ｉｘ）幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３及びＩＬ－５の存在下で培養したＣＤ３４＋ヒト骨髄細胞によるコロニー形成単位－顆粒球－マクロファージ（ＣＦＵ－ＧＭ）の形成を低減若しくは防止すること、
（ｘ）ヒト鼻ポリープ症のマウス異種移植片モデルにおけるポリープのサイズ若しくは重量を減少させること、並びに／又は
（ｘｉ）ヒト鼻ポリープ症のマウス異種移植片モデルにおけるポリープ中のＢ細胞の数を減少させること。
（ｉ）好中球細胞サイズのＧＭ－ＣＳＦ誘導増加を低減若しくは阻害することによって決定される、ＧＭ－ＣＳＦによる単離されたヒト好中球の活性化を低減若しくは阻害すること、
（ｉｉ）ヒト好塩基球によるＩＬ－３誘導ＩＬ－８分泌を低減若しくは阻害すること、
（ｉｉｉ）ＩＬ－３媒介性生存若しくは形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を低減若しくは予防すること、
（ｉｖ）フローサイトメトリーによって評価された前方散乱の変化を評価することによって決定されるように、ＩＬ－５によるヒト末梢血好酸球の活性化を低減若しくは防止すること、
（ｖ）ＩＬ－５及び／若しくはＧＭ－ＣＳＦ及び／若しくはＩＬ－３の存在下でのヒト末梢血好酸球の生存を低下させるか若しくは防止することと、
（ｖｉ）ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導性腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αの放出を低減若しくは防止すること、
（ｖｉｉ）ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導ＩＬ－１３放出を低減若しくは防止すること、
（ｖｉｉｉ）ＩＬ－３及び／若しくはＩＬ－５及び／若しくはＧＭ－ＣＳＦによるヒト肥満細胞からのＩｇＥ媒介性ＩＬ－８放出の増強を低減若しくは防止すること、
（ｉｘ）幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３及びＩＬ－５の存在下で培養したＣＤ３４＋ヒト骨髄細胞によるコロニー形成単位－顆粒球－マクロファージ（ＣＦＵ－ＧＭ）の形成を低減若しくは防止すること、
（ｘ）ヒト鼻ポリープ症のマウス異種移植片モデルにおけるポリープのサイズ若しくは重量を減少させること、並びに／又は
（ｘｉ）ヒト鼻ポリープ症のマウス異種移植片モデルにおけるポリープ中のＢ細胞の数を減少させること。
【0045】
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、エリスロポエチン、ＩＬ－６、ＩＬ－４又は幹細胞因子のうちの１つ以上に応答して、ＴＦ－１細胞の増殖を実質的又は有意に阻害しない。ＣＤ１３１に結合して、サイトカイン又は増殖因子に関してＴＦ－１細胞の増殖を阻害する化合物の能力を決定するための方法が本明細書に記載され、本開示の本実施例に容易に適応可能である。
【0046】
いくつかの例では、ＣＤ１３１に結合し、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５によるシグナル伝達を中和する化合物は、ＣＤ１３１に結合する抗原結合部位を含むタンパク質である。いくつかの例では、抗原結合部位は、抗体又は単一ドメイン抗体の抗原結合部位である。いくつかの例では、抗原結合部位は、１つ以上のＣＤＲを含む。
【0047】
本明細書における、ＣＤ１３１に「結合する」化合物若しくはタンパク質又は抗体への言及は、ＣＤ１３１に「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」又は「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ）」化合物若しくはタンパク質又は抗体の文字どおりの支持体を提供する。
【0048】
一例では、配列番号５に記載の配列を含むポリペプチドに対するタンパク質のＫＤは、ポリペプチドが固体表面上に固定化され、ＫＤが表面プラズモン共鳴によって決定される場合、約１０ｎＭ以下である。
【0049】
一例では、ＫＤは、１０ｎＭ以下、例えば、５ｎＭ以下若しくは４ｎＭ以下、又は３ｎＭ以下若しくは２ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、１ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．９ｎＭ以下又は０．７ｎＭ以下又は０．８ｎＭ以下又は０．７ｎＭ以下又は０．６ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．５ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．４ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．３ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．２ｎＭ以下である。
【0050】
一例では、抗原結合部位を含むタンパク質は、例えば、標識及び非標識タンパク質又は抗体を用いた競合アッセイを使用して、約１０ｎＭ以下のＫＤでＣＤ１３１を発現する細胞（例えば、好中球、好酸球、又はＴＦ－１細胞）に結合する。一例では、ＫＤは、５ｎＭ以下若しくは４ｎＭ以下、又は３ｎＭ以下若しくは２ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、１ｎＭ以下である。一例では、ＫＤは、０．９ｎＭ以下又は０．７ｎＭ以下又は０．８ｎＭ以下又は０．７ｎＭ以下又は０．６ｎＭ以下である。
【0051】
一例では、ＫＤは、好中球に関して約３００ｎＭ以下である。
【0052】
一例では、ＫＤは、好酸球に関して約７００ｎＭ以下である。
【0053】
一例では、ＫＤは、ＴＦ－１細胞に関して約４００ｎＭ以下である。
【0054】
一例では、抗原結合部位を含むタンパク質は、１つ以上の抗体可変領域を含むタンパク質である。一例では、タンパク質は、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。一例では、タンパク質は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一例では、タンパク質は、ＶＨ及びＶＬを含む。いくつかの例では、ＶＨ及びＶＬは、同じポリペプチド鎖内にある。他の例では、ＶＨ及びＶＬは、別々のポリペプチド鎖内にある。
【0055】
いくつかの例では、タンパク質は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。
【0056】
いくつかの例では、タンパク質はＦｖを含む。
【0057】
いくつかの例では、タンパク質は、
（ｉ）一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、又は
（ｉｉｉ）ダイアボディ、
（ｉｖ）トリアボディ、
（ｖ）テトラボディ、
（ｖｉ）Ｆａｂ、
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
（ｉｘ）抗体、Ｆｃ、又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／若しくはＣＨ３の定常領域に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、
（ｘ）アルブミン若しくはその機能的断片若しくは変異体、又はアルブミンに結合するタンパク質に連結されている（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、あるいは
（ｘｉ）抗体、からなる群から選択される。
（ｉ）一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、又は
（ｉｉｉ）ダイアボディ、
（ｉｖ）トリアボディ、
（ｖ）テトラボディ、
（ｖｉ）Ｆａｂ、
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
（ｉｘ）抗体、Ｆｃ、又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／若しくはＣＨ３の定常領域に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、
（ｘ）アルブミン若しくはその機能的断片若しくは変異体、又はアルブミンに結合するタンパク質に連結されている（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、あるいは
（ｘｉ）抗体、からなる群から選択される。
【0058】
いくつかの例では、タンパク質は、
（ｉ）一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、又は
（ｉｉｉ）ダイアボディ、
（ｉｖ）トリアボディ、
（ｖ）テトラボディ、
（ｖｉ）Ｆａｂ、
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
（ｉｘ）抗体、Ｆｃ、又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／若しくはＣＨ３の定常領域に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、
（ｘ）アルブミン、その機能的断片若しくは変異体、又はアルブミンに結合するタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合断片）に連結されている（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、あるいは
（ｘｉ）抗体、からなる群から選択される。
（ｉ）一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、又は
（ｉｉｉ）ダイアボディ、
（ｉｖ）トリアボディ、
（ｖ）テトラボディ、
（ｖｉ）Ｆａｂ、
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
（ｉｘ）抗体、Ｆｃ、又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／若しくはＣＨ３の定常領域に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、
（ｘ）アルブミン、その機能的断片若しくは変異体、又はアルブミンに結合するタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合断片）に連結されている（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、あるいは
（ｘｉ）抗体、からなる群から選択される。
【0059】
一例で、タンパク質は、Ｆｃ領域を含む。
【0060】
一例では、タンパク質は、タンパク質の半減期を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。一例では、抗体は、胎児性Ｆｃ受容体ＦｃＲｎ）に対するＦｃ領域の親和性を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含む。
【0061】
一例では、タンパク質は、抗体、例えば、モノクローナル抗体である。一例では、抗体は、裸抗体である。
【0062】
一例では、タンパク質（又は抗体）は、キメラ、非免疫化、ヒト化、ヒト又は霊長類化である。
【0063】
一例では、タンパク質又は抗体は、ヒトである。
例示的な抗体としては、ＷＯ２０１７／０８８０２８に記載される９Ａ２－ＶＲ２４．２９（また、「ＣＳＬ３１１」とも称される）、及びＳｕｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｌｏｏｄ ９４：１９４３－１９５１に記載されるＢＩＯＮ－１が挙げられる。
例示的な抗体としては、ＷＯ２０１７／０８８０２８に記載される９Ａ２－ＶＲ２４．２９（また、「ＣＳＬ３１１」とも称される）、及びＳｕｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｌｏｏｄ ９４：１９４３－１９５１に記載されるＢＩＯＮ－１が挙げられる。
【0064】
一例では、タンパク質は、ヒト定常領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４定常領域、又はそれらの混合物などのＩｇＧ定常領域を含む。ＶＨ及びＶＬを含むタンパク質の場合、ＶＨは重鎖定常領域に連結され得、ＶＬは軽鎖定常領域に連結され得る。
【0065】
全抗体の重鎖定常領域（又は定常領域若しくはＣＨ３を含むタンパク質）のＣ末端リジンは、例えば、タンパク質若しくは抗体の産生若しくは精製中に、又は重鎖をコードする核酸を組換えて操作することによって除去され得る。したがって、全抗体（又はＣＤ１３１結合化合物）は、全てのＣ末端リジン残基が除去された集団、Ｃ末端リジン残基が除去されていない集団、及び／又はＣ末端リジン残基を含むか又は含まないタンパク質の混合物を有する集団を含み得る。いくつかの例では、集団は、重鎖定常領域のうちの１つにおいてＣ末端リジン残基が除去されるタンパク質を更に含んでもよい。同様に、全抗体の組成物は、Ｃ末端リジン残基を含むか又は含まない抗体集団の同一又は類似の混合物を含んでもよい。
【0066】
一例では、タンパク質は組成物中にある。例えば、組成物は、本明細書に記載の抗原結合部位又は抗体を含むタンパク質を含む。一例では、組成物は、タンパク質又は抗体の１つ以上の変異体を更に含む。例えば、コードされたＣ末端リジン残基を欠く変異体、脱アミド変異体及び／又はグリコシル化変異体及び／又はピログルタミン酸塩を含む変異体、例えば、タンパク質のＮ末端にある変異体及び／又はＮ末端残基を欠く変異体、例えば、抗体又はＶ領域におけるＮ末端グルタミン及び／又は分泌シグナルの全部若しくは一部を含む変異体を含む。コードされたアスパラギン残基の脱アミド変異体は、イソアスパラギン酸、及びアスパラギン酸アイソフォームが生成されるか、又は隣接するアミノ酸残基を伴うスクシンアミドをもたらし得る。コードされたグルタミン残基の脱アミド変異体は、グルタミン酸をもたらし得る。そのような配列と変異体との不均一な混合物を含む組成物は、特定のアミノ酸配列が参照されるときに含まれることが意図される。
【0067】
一例では、本明細書に記載のタンパク質又は抗体は、ＩｇＧ４抗体の定常領域又はＩｇＧ４抗体の安定化定常領域を含む。一例では、タンパク質又は抗体は、２４１位にプロリンを有するＩｇＧ４定常領域を含む（Ｋａｂａｔの番号付けシステムによる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８７ ａｎｄ／ｏｒ １９９１））。
【0068】
一例では、重鎖定常領域は、配列番号１６に記載の配列を含む。一例では、タンパク質、又はタンパク質を含む組成物は、Ｃ末端リジン残基を含むか又は含まない、完全に又は部分的に配列の混合物を含む、安定化重鎖定常領域を含む重鎖定常領域を含む。
【0069】
いくつかの例では、タンパク質は、ＣＤ１３１に結合し、配列番号６に記載の配列を含むＶＨと配列番号７に記載の配列を含むＶ Ｌとを含む抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害する抗体可変領域を含む。
【0070】
いくつかの例では、タンパク質は、ＣＤ１３１に結合し、配列番号６に記載の配列を含むＶＨと配列番号７に記載の配列を含む軽鎖と、を含む抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害する抗体可変領域を含む。
【0071】
いくつかの例では、タンパク質は、ＣＤ１３１に結合し、配列番号６に記載の配列を含むＶＨと配列番号１８に記載の配列を含むＶ Ｌとを含む抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害する抗体可変領域を含む。
【0072】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載の配列を含むＶＨと配列番号７に記載の配列を含むＶ Ｌとを含むＣＤ１３１に対する抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９と、ＣＤ１３１内の同じ又は重複するエピトープに結合する。
【0073】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載の配列を含むＶＨと配列番号７に記載の配列を含む軽鎖と、を含むＣＤ１３１に対する抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９と、ＣＤ１３１内の同じ又は重複するエピトープに結合する。
【0074】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載の配列を含むＶＨと配列番号１８に記載の配列を含むＶＬとを含むＣＤ１３１に対する抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９と、ＣＤ１３１内の同じ又は重複するエピトープに結合する。
【0075】
いくつかの例では、抗原結合部位は、ＣＤ１３１の部位２内のエピトープに結合する。この点に関して、当業者は、ＣＤ１３１の部位２が、二量体を形成する２つのＣＤ１３１ポリペプチドからの残基で構成され、例えば、部位２は、１つのＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン１のループＡ－Ｂ及びＥ－Ｆ内の残基、並びに別のＣＤ１３１ポリペプチドのループＢ－Ｃ及びＦ－Ｇ内の残基を含むことを認識するであろう。
【0076】
いくつかの例では、抗原結合部位は、２つのＣＤ１３１ポリペプチドの二量体化の際に形成されたエピトープに結合する。
【0077】
いくつかの例では、抗原結合部位は、ＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン１内の残基及び別のＣＤ１３１ポリペプチドのドメイン４内の残基に結合する。一例では、ＣＤ１３１のドメイン１内の残基は、配列番号１の１０１～１０７の領域内の残基を含み、かつ／又はＣＤ１３１のドメイン４内の残基は、配列番号１の３６４～３６７の領域内の残基を含む。
【0078】
いくつかの例では、タンパク質は、
ａ）配列番号１の３９、１０１、１０２、１０４、１０５、１０６、及び１０７位の１つ以上又は全てに対応する１つのＣＤ１３１ポリペプチド鎖内のアミノ酸と、
ｂ）配列番号１の３６４、３６５、３６６、３６７、４２０、及び４２１位の１つ以上又は全てに対応する別のＣＤ１３１ポリペプチド鎖内のアミノ酸と、を含むエピトープに結合する。
ａ）配列番号１の３９、１０１、１０２、１０４、１０５、１０６、及び１０７位の１つ以上又は全てに対応する１つのＣＤ１３１ポリペプチド鎖内のアミノ酸と、
ｂ）配列番号１の３６４、３６５、３６６、３６７、４２０、及び４２１位の１つ以上又は全てに対応する別のＣＤ１３１ポリペプチド鎖内のアミノ酸と、を含むエピトープに結合する。
【0079】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨの３つのＣＤＲを含むＶＨと、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬの３つのＣＤＲを含むＶＬとを含む、抗体可変領域を含む。
【0080】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨの３つのＣＤＲを含むＶＨと、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖の３つのＣＤＲを含むＶＬとを含む、抗体可変領域を含む。
【0081】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨの３つのＣＤＲを含むＶＨと、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬの３つのＣＤＲを含むＶＬとを含む、抗体可変領域を含む。
【0082】
いくつかの例では、タンパク質は、
ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列又は配列番号８に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号９に記載のアミノ酸配列又は配列番号９に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列又は配列番号１０に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
ｂ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列又は配列番号１１に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列又は配列番号１２に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列又は配列番号１３に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。
ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列又は配列番号８に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号９に記載のアミノ酸配列又は配列番号９に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列又は配列番号１０に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
ｂ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列又は配列番号１１に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列又は配列番号１２に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列又は配列番号１３に対して１、２、若しくは３個以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。
【0083】
いくつかの例では、タンパク質は、
ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号９に記載のアミノ酸配列含むか又はそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
ｂ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。
ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号９に記載のアミノ酸配列含むか又はそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＨＣＤＲ３を含むＶＨと、
ｂ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。
【0084】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【0085】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【0086】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１８に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【0087】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【0088】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｖ領域とを含む。
【0089】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【0090】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号１４に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【0091】
いくつかの例では、タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【0092】
配列表の鍵
配列番号１：ホモサピエンスＣＤ１３１のアミノ酸配列
配列番号２：ホモサピエンスＩＬ－３受容体αのアミノ酸配列
配列番号３：ホモサピエンスＧＭ－ＣＳＦ受容体のアミノ酸配列
配列番号４：ホモサピエンスＩＬ－５受容体のアミノ酸配列
配列番号５：Ｃ末端６×Ｈｉｓタグを含む可溶性ホモサピエンスＣＤ１３１のアミノ酸配列
配列番号６：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＶＨのアミノ酸配列
配列番号７：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＶＬのアミノ酸配列
配列番号８：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＨＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号９：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＨＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＨＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＬＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１２：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＬＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１３：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＬＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１４：９Ａ２－ＶＲ２４．２９の重鎖のアミノ酸配列
配列番号１５：９Ａ２－ＶＲ２４．２９の軽鎖のアミノ酸配列
配列番号１６：安定化ＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列
配列番号１７：カッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
配列番号１８：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＶＬのアミノ酸配列
配列番号１：ホモサピエンスＣＤ１３１のアミノ酸配列
配列番号２：ホモサピエンスＩＬ－３受容体αのアミノ酸配列
配列番号３：ホモサピエンスＧＭ－ＣＳＦ受容体のアミノ酸配列
配列番号４：ホモサピエンスＩＬ－５受容体のアミノ酸配列
配列番号５：Ｃ末端６×Ｈｉｓタグを含む可溶性ホモサピエンスＣＤ１３１のアミノ酸配列
配列番号６：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＶＨのアミノ酸配列
配列番号７：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＶＬのアミノ酸配列
配列番号８：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＨＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号９：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＨＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＨＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＬＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１２：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＬＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１３：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＬＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１４：９Ａ２－ＶＲ２４．２９の重鎖のアミノ酸配列
配列番号１５：９Ａ２－ＶＲ２４．２９の軽鎖のアミノ酸配列
配列番号１６：安定化ＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列
配列番号１７：カッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
配列番号１８：９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＶＬのアミノ酸配列
【図面の簡単な説明】
【0093】
【図1】実施例２に記載のＡＣＤマウスモデルにおける耳の厚さの変化を示すグラフである。ビヒクル及びＤＮＦＢで処置された耳の厚さを、ＤＮＦＢ再チャレンジ後１２日間毎日測定した。耳の腫脹は、各誘発の前後の耳の厚さの差として決定された。データ：平均値＋Ｓ．Ｅ．Ｍ；ｎ＝５～１１匹のマウスで、３つの独立した実験の結果を組み合わせた＊＊ｐ＜０．０１、示された比較のためのボンフェローニの事後検定を伴う二元配置分散分析。
【図2】実施例２に記載のＡＣＤマウスモデルにおける表皮の厚さの変化を示すグラフである。左パネル：耳の表皮の厚さの測定。右パネル：ＤＮＦＢ処置耳／ビヒクル処置耳における表皮の厚さの差。データ：平均値；ｎ＝５～１１匹のマウスで、３つの独立した実験の結果を組み合わせた＊＊＊ｐ＜０．００１、示された比較のためのボンフェローニの事後検定を伴う二元配置分散分析。＃＃ｐ＜０．０１、対応のないｔ検定。
【図3】実施例２に記載のＡＣＤマウスモデルにおける１２日目の肥満細胞数の変化を示すグラフである。左パネル：ＡＣＤ実験の完了時の耳組織における皮膚肥満細胞数を、トルイジンブルー染色で検出した。右パネル：個々のマウスにおけるＤＮＦＢ処置された耳／ビヒクル処置された耳における肥満細胞数の増加倍率。データ：平均値＋Ｓ．Ｅ．Ｍ；ｎ＝５～１１匹のマウスで、３つの独立した実験の結果を組み合わせた＊＊＊ｐ＜０．００１、示された比較のためのボンフェローニの事後検定を伴う二元配置分散分析。＃＃ｐ＜０．０１、対応のないｔ検定。
【図4】実施例２に記載のＡＣＤマウスモデルにおける１２日目の好中球細胞数の変化を示すグラフである。左パネル：ＡＣＤ実験の完了時に、異なる処置群のビヒクル及びＤＮＦＢ処置した耳における好中球の比率をフローサイトメトリーによって評価した。右パネル：個々のマウスにおける、ＤＮＦＢ処置された耳／ビヒクル処置された耳における好中球の比率の増加倍率。
【図5】実施例２に記載のＡＣＤマウスモデルにおける１２日目の好酸球細胞数の変化を示すグラフである。左パネル：ＡＣＤ実験の完了時に、異なる処置群のビヒクル及びＤＮＦＢ処置した耳における好酸球の比率をフローサイトメトリーによって評価した。右パネル：個々のマウスにおける、ＤＮＦＢ処置された耳／ビヒクル処置された耳における好酸球の比率の増加倍率。
【図6】実施例２に記載のＡＣＤマウスモデルにおける６日目のＣＤ８＋Ｔ細胞数の変化を示すグラフである。左パネル：ＡＣＤ実験の６日目での、異なる処置群のビヒクル及びＤＮＦＢ処置した耳におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の比率をフローサイトメトリーによって評価した。右パネル：個々のマウスにおける、ＤＮＦＢ処置された耳／ビヒクル処置された耳におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の比率の増加倍率。
【図7】実施例２に記載のＡＣＤマウスモデルにおける６日目の好中球細胞数の変化を示すグラフである。左パネル：ＡＣＤ実験の６日目での、異なる処置群のビヒクル及びＤＮＦＢ処置した耳における好中球の比率をフローサイトメトリーによって評価した。右パネル：個々のマウスにおける、ＤＮＦＢ処置された耳／ビヒクル処置された耳における好中球の比率の増加倍率。
【図8】実施例２に記載のＡＣＤマウスモデルにおける６日目の好酸球細胞数の変化を示すグラフである。左パネル：ＡＣＤ実験の６日目での、異なる処置群のビヒクル及びＤＮＦＢ処置した耳における好酸球の比率をフローサイトメトリーによって評価した。右パネル：個々のマウスにおける、ＤＮＦＢ処置された耳／ビヒクル処置された耳における好酸球の比率の増加倍率。
【図9】実施例２に記載のＡＣＤマウスモデルにおける６日目の肥満細胞数の変化を示すグラフである。左パネル：ＡＣＤ実験の６日目での、異なる処置群のビヒクル及びＤＮＦＢ処置した耳における肥満細胞の比率をフローサイトメトリーによって評価した。右パネル：個々のマウスにおける、ＤＮＦＢ処置された耳／ビヒクル処置された耳における肥満細胞の比率の増加倍率。
【図10】実施例３に記載されるような、ＡＤマウスモデルにおける耳の厚さの変化を示すグラフである。耳ピンナの厚さを、２４時間間隔で１０日間にわたって測定した。ＣＳＬ３１１又はアイソタイプｍＡｂ（１０ｍｇ／ｋｇ）を、矢印によって示されるように、１、３、５日目にｈβｃＴｇマウスの尾静脈に静脈内注射した。
【発明を実施するための形態】
【0094】
全般
本明細書全体を通して、特に別段の定めがない限り、又は文脈が別段の定めがない限り、単一のステップ、物質の組成物、ステップの群、又は物質の組成物の群への言及は、それらのステップ、物質の組成物、ステップの群、又は物質の組成物の群のうちの１つ及び複数（すなわち、１つ以上）を包含するように取られなければならない。
本明細書全体を通して、特に別段の定めがない限り、又は文脈が別段の定めがない限り、単一のステップ、物質の組成物、ステップの群、又は物質の組成物の群への言及は、それらのステップ、物質の組成物、ステップの群、又は物質の組成物の群のうちの１つ及び複数（すなわち、１つ以上）を包含するように取られなければならない。
【0095】
当業者は、本開示が、具体的に記載されるもの以外の変形及び修正の影響を受けやすいことを理解するであろう。本開示は、そのような全ての変形及び修正を含むことが理解されるべきである。本開示はまた、本明細書で個別に又は集合的に言及又は示される全てのステップ、特徴、組成物及び化合物、並びに当該ステップ又は特徴のいずれか及び全ての組み合わせ又は任意の２つ以上を含む。
【0096】
本開示は、例示のみを目的とする本明細書に記載の特定の実施例によって範囲が限定されるべきではない。機能的に等価な生成物、組成物、及び方法は、本開示の範囲内であることは明らかである。
【0097】
本明細書における本開示の任意の例は、特に明記しない限り、本開示の任意の他の例に準用するものとする。
【0098】
特に明確に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有すると解釈されるものとする（例えば、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、及び生化学）。
【0099】
別段の指示がない限り、本開示で利用される組換えタンパク質、細胞培養、及び免疫学的技術は、当業者に周知の標準的な手順である。かかる技法は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４），Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９），Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（ｅｄｉｔｏｒ），Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １ ａｎｄ ２，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９１），Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（ｅｄｉｔｏｒｓ），ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １－４，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９５ ａｎｄ １９９６）、及びＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての更新を含む），Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）、及びＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（現在までの全ての更新を含む）などのソースにおいて文献全体を通して記載され説明されている。
【0100】
本明細書の可変領域及びその一部、免疫グロブリン、抗体、並びにその断片の説明及び定義は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７ ａｎｄ １９９１、Ｂｏｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４２，３０９－３２０，１９９４、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４２，８７７－８８３，１９８９及び／又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３，９２７－９４８，１９９７における考察によって更に明確になり得る。
【0101】
「及び／又は」という用語、例えば、「Ｘ及び／又はＹ」は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれかを意味すると理解されなければならず、両方の意味又はいずれかの意味を明示的に支持すると解釈されるべきである。
【0102】
本明細書全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」若しくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、定められた要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップの群の除外を意味するものではないことが理解されるであろう。
【0103】
選択した定義
命名のみを目的として、限定を目的とせず、ヒトＣＤ１３１（ｐｒｅ－ＣＤ１３１）の例示的な配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００３８６．１及びＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｐ３２９２７に記載される（また配列番号１に記載される）。成熟ヒトＣＤ１３１の配列は、配列番号１のアミノ酸１～１６を欠く。アミノ酸の位置は、多くの場合、ｐｒｅ－ＣＤ１３１を参照して本明細書で言及される。成熟ＣＤ１３１中の位置は、シグナル配列（配列番号１の場合、アミノ酸１～１６）を考慮することによって容易に決定される。他の種由来のＣＤ１３１の配列は、本明細書及び／又は公的に入手可能なデータベース内で提供される配列を使用して決定することができ、かつ／又は標準的な技術を使用して決定することができる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての更新を含む）又はＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されるように）。ヒトＣＤ１３１への言及は、ｈＣＤ１３１と略され得る。可溶性ＣＤ１３１への言及は、ＣＤ１３１の細胞外領域、例えば、配列番号１のアミノ酸１７～４３８を含むポリペプチドを指す。
命名のみを目的として、限定を目的とせず、ヒトＣＤ１３１（ｐｒｅ－ＣＤ１３１）の例示的な配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００３８６．１及びＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｐ３２９２７に記載される（また配列番号１に記載される）。成熟ヒトＣＤ１３１の配列は、配列番号１のアミノ酸１～１６を欠く。アミノ酸の位置は、多くの場合、ｐｒｅ－ＣＤ１３１を参照して本明細書で言及される。成熟ＣＤ１３１中の位置は、シグナル配列（配列番号１の場合、アミノ酸１～１６）を考慮することによって容易に決定される。他の種由来のＣＤ１３１の配列は、本明細書及び／又は公的に入手可能なデータベース内で提供される配列を使用して決定することができ、かつ／又は標準的な技術を使用して決定することができる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての更新を含む）又はＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されるように）。ヒトＣＤ１３１への言及は、ｈＣＤ１３１と略され得る。可溶性ＣＤ１３１への言及は、ＣＤ１３１の細胞外領域、例えば、配列番号１のアミノ酸１７～４３８を含むポリペプチドを指す。
【0104】
本明細書におけるＣＤ１３１への言及は、ＣＤ１３１（例えば、ｈＣＤ１３１）に結合し、シグナル伝達を誘導する能力を保持する、ＣＤ１３１の天然形態及びその変異型を含む。ＣＤ１３１は、「ＣＳＦ２ＲＢ」及び「サイトカイン受容体共通サブユニットβ」及び「β（ベータ）共通受容体」（「βＣＲ」又は「βｃ」と略される）としても知られている。
【0105】
本開示によって企図される「化合物」は、天然化合物、化学的小分子化合物、又は生体化合物又は巨大分子を含む様々な形態のいずれかをとることができる。例示的な化合物には、抗体又は抗体の抗原結合断片、核酸、ポリペプチド、ペプチド、及び小分子を含むタンパク質が含まれる。
【0106】
本明細書で使用される場合、「疾患」又は「状態」という用語は、正常な機能の破壊又は干渉を指し、任意の特定の状態、疾患又は障害に限定されるものではない。
【0107】
本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」又は「治療」という用語は、指定された疾患又は状態の少なくとも１つの症状を軽減、予防、又は除去するために、本明細書に記載される化合物を投与することを含む。
【0108】
本明細書で使用される場合、「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、又は「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」という用語は、本明細書に記載の化合物を投与して、それによって、例えば、その症状が対象において完全に発症する前に、状態の少なくとも１つの症状の発症を停止又は阻害することを含む。
【0109】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒト、例えば哺乳類を含む任意の動物を意味すると解釈される。例示的な対象として、ヒト及び非ヒト霊長類が挙げられるが、これらに限定されない。一例では、対象は、ヒトである。
【0110】
「タンパク質」という用語は、単一のポリペプチド鎖、すなわち、ペプチド結合によって連結された一連の連続したアミノ酸、又は互いに共有結合又は非共有結合で連結された一連のポリペプチド鎖（すなわち、ポリペプチド複合体）を含むと解釈されなければならない。例えば、一連のポリペプチド鎖は、好適な化学的結合又はジスルフィド結合を使用して共有結合することができる。非共有結合の例としては、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力、及び疎水性相互作用が挙げられる。いくつかの例では、タンパク質は融合タンパク質である。本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」は、それらが単一のタンパク質を産生する単一の単位として翻訳されるように結合された少なくとも２つのドメインを含むタンパク質である。
【0111】
「ポリペプチド」又は「ポリペプチド鎖」という用語は、前項から、ペプチド結合によって連結された一連の連続アミノ酸を意味すると理解される。
【0112】
「単離されたタンパク質」又は「単離されたポリペプチド」という用語は、その起源又は誘導の供給源に基づいて、その天然状態でそれに付随する天然に関連する成分に関連付けられておらず、同じ供給源からの他のタンパク質を実質的に含まないタンパク質又はポリペプチドである。タンパク質は、当該技術分野で知られているタンパク質精製技法を使用して、天然に関連する成分を実質的に含まないか、又は単離によって実質的に精製され得る。「実質的に精製された」とは、タンパク質が、汚染物質を実質的に含まないこと、例えば、汚染物質を少なくとも約７０％又は７５％又は８０％又は８５％又は９０％又は９５％又は９６％又は９７％又は９８％又は９９％含まないことを意味する。
【0113】
「組換え」という用語は、人工遺伝子組換えの産物を意味すると理解されなければならない。したがって、抗体抗原結合ドメインを含む組換えタンパク質の関連では、この用語は、Ｂ細胞成熟中に発生する天然組換え産物である、対象の体内に天然に存在する抗体を包含しない。しかしながら、かかる抗体が単離される場合、それは、抗体抗原結合ドメインを含む単離されたタンパク質とみなされるべきである。同様に、タンパク質をコードする核酸を単離し、組換え手段を使用して発現する場合、得られるタンパク質は、抗体抗原結合ドメインを含む組換えタンパク質である。組換えタンパク質はまた、例えば、それが発現する細胞、組織又は対象内にあるときに、人工組換え手段によって発現されるタンパク質を包含する。
【0114】
本明細書で使用される場合、「抗原結合部位」という用語は、抗原に結合又は特異的に結合することができるタンパク質によって形成される構造を意味すると解釈される。抗原結合部位は、一連の連続したアミノ酸、又は単一のポリペプチド鎖内のアミノ酸である必要はない。例えば、２つの異なるポリペプチド鎖から産生されるＦｖでは、抗原結合部位は、抗原と相互作用するＶＬ及びＶＨの一連のアミノ酸で構成され、これらは、一般的にはあるが、必ずしも各可変領域の１つ以上のＣＤＲに存在するとは限らない。いくつかの例では、抗原結合部位は、ＶＨ若しくはＶＬ又はＦｖであるか、あるいはＶＨ若しくはＶＬ又はＦｖを含む。いくつかの例では、抗原結合部位は、抗体の１つ以上のＣＤＲを含む。
【0115】
当業者は、「抗体」が、複数のポリペプチド鎖からなる可変領域、例えば、ＶＬを含むポリペプチド及びＶＨを含むポリペプチドを含むタンパク質であると一般的に考えられることを認識するであろう。抗体はまた、一般に、定常ドメインを含み、そのうちのいくつかは、重鎖の場合、定常断片又は断片結晶性（Ｆｃ）を含む定常領域に配置することができる。ＶＨ及びＶＬは相互作用して、１つ又はいくつかの密接に関連する抗原に特異的に結合することができる抗原結合領域を含むＦｖを形成する。一般に、哺乳類由来の軽鎖は、κ軽鎖又はλ軽鎖のいずれかであり、哺乳類由来の重鎖は、α、δ、ε、γ、又はμである。抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであり得る。「抗体」という用語はまた、ヒト化抗体、霊長類化抗体、ヒト抗体及びキメラ抗体を包含する。
【0116】
「完全長抗体」、「インタクト抗体」又は「全抗体」という用語は、抗体の抗原結合断片とは対照的に、実質的にインタクトな形態の抗体を指すために互換的に使用される。具体的には、全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものが含まれる。定常ドメインは、野生型配列定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体であり得る。
【0117】
本明細書で使用される場合、「可変領域」は、抗原に特異的に結合することが可能であり、相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列、すなわち、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む、本明細書で定義される抗体の軽鎖及び／又は重鎖の部分を指す。例示的な可変領域は、３つ又は４つのＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び任意選択でＦＲ４）を、３つのＣＤＲとともに含む。ＩｇＮＡＲに由来するタンパク質の場合、タンパク質はＣＤＲ２を欠くことがある。ＶＨは、重鎖の可変領域を指す。ＶＬは、軽鎖の可変領域を指す。
【0118】
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」という用語（同義語ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、抗原結合に必要な抗体可変領域のアミノ酸残基を指す。各可変領域は、典型的には、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として特定された３つのＣＤＲ領域を有する。ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられたアミノ酸位置は、ＫａｂａｔのＳｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７及び１９９１又は本開示の実施における他の番号付けシステム、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７の古典的な番号付けシステム、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４２，８７７－８８３，１９８９、及び／若しくはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８，１９９７、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌ．Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７，２００３のＩＭＧＴ番号付けシステム；又はＨｏｎｎｅｇｈｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｋｔｈｕｎ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０，２００１のＡＨＯ番号付けシステムに従って定義され得る。例えば、Ｋａｂａｔの番号付けシステムによれば、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）及びＣＤＲは、残基１～３０（ＦＲｌ）、３１～３５（ＣＤＲ１）、３６～４９（ＦＲ２）、５０～６５（ＣＤＲ２）、６６～９４（ＦＲ３）、９５～１０２（ＣＤＲ３）、及び１０３～１１３（ＦＲ４）のように配置される。Ｋａｂａｔの番号付けシステムによれば、ＶＬＦＲ及びＣＤＲは、残基１～２３（ＦＲｌ）、２４～３４（ＣＤＲ１）、３５～４９（ＦＲ２）、５０～５６（ＣＤＲ２）、５７～８８（ＦＲ３）、８９～９７（ＣＤＲ３）、及び９８～１０７（ＦＲ４）のように配置される。本開示は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって定義されるＦＲ及びＣＤＲに限定されないが、上記で考察されたものを含む全ての番号付けシステムを含む。一例では、本明細書におけるＣＤＲ（又はＦＲ）への言及は、Ｋａｂａｔ付番システムによるこれらの領域に関するものである。
【0119】
「フレームワーク領域」（ＦＲ）は、ＣＤＲ残基以外の可変領域残基である。
【0120】
本明細書で使用される場合、「Ｆｖ」という用語は、複数のポリペプチド又は単一のポリペプチドからなるかどうかにかかわらず、ＶＬ及びＶＨが会合し、抗原結合部位を有する複合体を形成し、すなわち、抗原に特異的に結合することができる任意のタンパク質を意味すると解釈される。抗原結合部位を形成するＶＨ及びＶＬは、単一ポリペプチド鎖内又は異なるポリペプチド鎖内にあり得る。更に、本開示のＦｖ（並びに本開示の任意のタンパク質）は、同じ抗原に結合しても結合しなくてもよい複数の抗原結合部位を有してもよい。この用語は、抗体に直接由来する断片、並びに組換え手段を使用して産生されるそのような断片に対応するタンパク質を包含するものと理解されるべきである。いくつかの例では、ＶＨは、重鎖定常ドメイン（ＣＨ）１に連結されておらず、かつ／又はＶＬは、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）には連結されていない。ポリペプチド又はタンパク質を含有する例示的なＦｖは、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ若しくは高次複合体、又は定常領域若しくはそのドメイン、例えば、ＣＨ２若しくはＣＨ３ドメイン、例えば、ミニボディに連結された前述のいずれかを含む。「Ｆａｂ断片」は、免疫グロブリンの一価の抗原結合断片からなり、抗体全体を酵素パパインで消化することによって産生し、インタクトな軽鎖及び重鎖の一部からなる断片を産生し、又は組換え手段を用いて産生し得る。抗体の「Ｆａｂ’断片」は、抗体全体をペプシンで処理し、続いて還元して、インタクトな軽鎖と、ＶＨ及び単一の定常ドメインを含む重鎖の一部とからなる分子を得ることによって得ることができる。２つのＦａｂ’断片が、この様式で処置された抗体ごとに得られる。Ｆａｂ’断片は、組換え手段によっても産生することができる。抗体の「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２つのジスルフィド結合によって一緒に保持される２つのＦａｂ’断片の二量体からなり、後続の還元なしに、抗体分子全体を酵素ペプシンで処理することによって得られる。「Ｆａｂ２」断片は、例えば、ロイシンジッパー又はＣＨ３ドメインを使用して連結された２つのＦａｂ断片を含む組換え断片である。「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は、抗体の可変領域断片（Ｆｖ）を含有する組換え分子であり、軽鎖の可変領域及び重鎖の可変領域は、好適な可撓性ポリペプチドリンカーによって共有結合されている。
【0121】
本明細書で使用される場合、化合物又はその抗原結合部位と抗原との相互作用に関して「結合する」という用語は、相互作用が、抗原上の特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は、一般的にタンパク質ではなく、特定のタンパク質構造を認識して結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に結合する場合、「Ａ」と標識されたタンパク質を含有する反応において、エピトープ「Ａ」（又は遊離の、非標識の「Ａ」）を含有する分子の存在は、抗体に結合した標識された「Ａ」の量を減少させる。
【0122】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」又は「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」という用語は、本開示の化合物が、代替の抗原又は細胞と同じものを発現する特定の抗原又は細胞とより頻繁に、より迅速に、より長期間及び／又はより高い親和性で反応又は会合することを意味すると解釈されるべきである。例えば、化合物は、他のサイトカイン受容体又は多反応性天然抗体（すなわち、ヒトに天然に見出される様々な抗原に結合することが知られている天然に存在する抗体）によって一般的に認識される抗原に対して結合するよりも、実質的に高い親和性（例えば、２０倍又は４０倍又は６０倍又は８０倍から１００倍又は１５０倍又は２００倍）でＣＤ１３１に結合する。一般に、必ずしもそうではないが、結合への言及は、特異的結合を意味し、各用語は、他の用語に対して明示的な支持を提供するものと理解されなければならない。
【0123】
タンパク質又は抗体は、別のポリペプチドについてタンパク質又は抗体のＫＤよりも小さい解離定数（ＫＤ）でそのポリペプチドに結合する場合、ポリペプチドに「優先的に結合する」と考えられ得る。一例では、タンパク質又は抗体は、別のポリペプチドについて、タンパク質又は抗体のＫＤよりも少なくとも約２０倍又は４０倍又は６０倍又は８０倍又は１００倍又は１２０倍又は１４０倍又は１６０倍多い親和性（すなわち、ＫＤ）でポリペプチドに結合する場合、ポリペプチドに優先的に結合するとみなされる。
【0124】
明確化の目的のために、及び本明細書の例示的な主題に基づいて当業者に明白であろうように、本明細書における「親和性」への言及は、タンパク質又は抗体のＫＤへの言及である。
【0125】
明確化の目的のために、かつ本明細書の説明に基づいて当業者に明らかになるように、「ＸｎＭ以下のＫＤ」への言及は、ＫＤの数値がＸｎＭに等しいか、又は数値が低いことを意味すると理解されるであろう。当業者が理解するように、ＫＤのより低い数値は、より高い（すなわち、より強い）親和性に対応し、すなわち、２ｎＭの親和性は、３ｎＭの親和性よりも強い。
【0126】
「少なくとも約～のＩＣ５０」は、ＩＣ５０が、列挙された値以上（すなわち、ＩＣ５０が低いときに列挙された数値）であること、すなわち、２ｎＭのＩＣ５０が、３ｎＭのＩＣ５０よりも大きいことを意味すると理解されるであろう。別の言い方をすると、この用語は、「Ｘ以下のＩＣ５０」であり得、ここで、Ｘは、本明細書に列挙される値である。
【0127】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語（同義語「抗原決定基」）は、抗体の抗原結合部位を含むタンパク質が結合するＣＤ１３１の領域を意味すると理解されなければならない。この用語は、必ずしもタンパク質が接触する特定の残基又は構造に限定されない。例えば、この用語は、タンパク質及び／又は５～１０個又は２～５個又は１～３個のアミノ酸が接触する領域を含む。いくつかの例では、エピトープは、ＣＤ１３１が折り畳まれたときに互いに近くに配置される一連の不連続なアミノ酸、すなわち、「立体構造エピトープ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ）」を含む。当業者はまた、「エピトープ」という用語がペプチド又はポリペプチドに限定されないことを認識するであろう。例えば、「エピトープ」という用語は、糖側鎖、ホスホリル側鎖、又はスルホニル側鎖などの分子の化学的に活性な表面分類を含み、特定の例では、特定の三次元構造特性、及び／又は特異的電荷特性を有し得る。
【0128】
「競合的に阻害する」という用語は、本開示のタンパク質（又はその抗原結合部位）が、列挙された抗体又はタンパク質のＣＤ１３１への結合を低減又は防止することを意味すると理解されなければならない。これは、タンパク質（又は抗原結合部位）及び同じ又は重複するエピトープへの抗体結合によるものであり得る。上記から、タンパク質が抗体の結合を完全に阻害する必要はなく、むしろ、統計的に有意な量、例えば、少なくとも約１０％又は２０％又は３０％又は４０％又は５０％又は６０％又は７０％又は８０％又は９０％又は９５％だけ結合を減少させる必要があることが明らかになる。好ましくは、タンパク質は、抗体の結合を少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも約５０％、より好ましくは少なくとも約７０％、なおより好ましくは少なくとも約７５％、更により好ましくは少なくとも約８０％又は８５％、更により好ましくは少なくとも約９０％低下させる。結合の競合的阻害を判定するための方法は、当該技術分野で既知であり、かつ／又は本明細書に記載される。例えば、抗体は、タンパク質の存在下又は非存在下のいずれかで、ＣＤ１３１に曝露される。タンパク質の不在下よりもタンパク質の存在下で結合する抗体が少ない場合、タンパク質は、抗体の結合を競合的に阻害すると考えられる。一例では、競合的阻害は、立体障害によるものではない。
【0129】
２つのエピトープの文脈における「重複」とは、１つのエピトープに結合するタンパク質（又はその抗原結合部位）が他のエピトープに結合するタンパク質（又は抗原結合部位）の結合を競合的に阻害することを可能にするのに十分な数のアミノ酸残基を２つのエピトープが共有することを意味するものとする。例えば、「重複」エピトープは、少なくとも１又は２又は３又は４又は５又は６又は７又は８又は９又は２０個のアミノ酸を共有する。
【0130】
炎症性皮膚状態
本明細書に記載される方法は、本明細書及び他の場所で「炎症性皮膚疾患」又は「炎症性皮膚障害」とも称される炎症性皮膚状態を治療するために使用することができる。いくつかの例では、炎症は非感染性炎症であり、例えば、炎症は感染性因子に関連付けられないか、又は感染性因子によって引き起こされない。炎症性皮膚疾患又は皮膚病変の症状は、対象の単一の部位（位置）で発生し得るか、又は複数の部位で発生し得る。いくつかの例では、１つ以上の炎症性皮膚状態及び１つ以上の皮膚病変の両方が、皮膚又は膜の連続したセクションのいずれかで、又は個体上の別個の部位で、対象に発生し得る。
本明細書に記載される方法は、本明細書及び他の場所で「炎症性皮膚疾患」又は「炎症性皮膚障害」とも称される炎症性皮膚状態を治療するために使用することができる。いくつかの例では、炎症は非感染性炎症であり、例えば、炎症は感染性因子に関連付けられないか、又は感染性因子によって引き起こされない。炎症性皮膚疾患又は皮膚病変の症状は、対象の単一の部位（位置）で発生し得るか、又は複数の部位で発生し得る。いくつかの例では、１つ以上の炎症性皮膚状態及び１つ以上の皮膚病変の両方が、皮膚又は膜の連続したセクションのいずれかで、又は個体上の別個の部位で、対象に発生し得る。
【0131】
炎症性皮膚状態は、典型的には、例えば、発赤、かゆみ、乾燥、荒れた、薄片状、炎症性、及び炎症を起こした皮膚を特徴とし、皮膚はまた、水疱、鱗状プラークなどを示し得る。いくつかの例では、炎症性皮膚状態は急性であり、一般に、未処置であっても数日又は数週間以内に解消し、本開示の組成物及び方法は、疾患が解消する間の症状（例えば、かゆみ、発赤など）を改善し、かつ／又は症状の消失を早める。代替的に、いくつかの例では、皮膚炎症性疾患／障害は、慢性であり、例えば、処置なしで、又は従来の処置であっても、症状は数週間、数ヶ月、又は数年、又は無期限に持続する。本開示の方法の使用は、疾患が持続する間の慢性皮膚炎症の症状（例えば、かゆみ、発赤、皮膚のひび割れ及び剥離の緩和、皮膚病変の治癒の促進など）を改善（緩和）し、かつ／又は本来存在するであろう症状を部分的又は完全に治癒する（完全又はほぼ完全に消失する）。
【0132】
「炎症性皮膚状態」は、特定の、既知の又は識別可能な病因物質への曝露によって引き起こされる疾患及び状態、並びに原因が明確に定義されていない疾患／状態、例えば、免疫障害又は機能不全（例えば、自己免疫反応）、ストレス、未確認のアレルギー、遺伝的素因など、及び／又は複数の要因に起因する疾患／状態を包含することが意図される。「炎症性皮膚状態」は、皮膚の炎症だけでなく、それに関連する１つ以上の他の症状を有し得る疾患及び状態を包含することを意図する。
【0133】
炎症性皮膚状態（特に慢性炎症性皮膚疾患）には、例えば、過敏症、自己免疫疾患（自己免疫性水疱性疾患を含む）、アレルギー性疾患及び反応、好中球性皮膚病、アトピー性疾患、自己炎症性疾患、抗体媒介性疾患及び／又は細胞（例えば、Ｔ細胞）媒介性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
【0134】
アトピー性皮膚炎
アトピー性皮膚炎（ＡＤ、同義語：神経皮膚炎、アトピー性湿疹、ベニエー痒疹、内因性湿疹）は、表皮炎症、かゆみ、乾燥肌（細かい鱗屑を伴う）及び滲出（急性病変）を特徴とする炎症性、慢性再発性、非伝染性及び重度の掻痒性皮膚症である。成人集団では２～３％、小児集団では最大２０％の罹患率を有し、３０年以上にわたって西側諸国で罹患率が増加している最も一般的な皮膚疾患の１つである。ＡＤは通常、再発経過に従い、血清免疫グロブリン（ＩｇＥ）レベルの上昇に関連する。この点で、ＡＤの１つの主要な特徴は、総血清ＩｇＥのレベルの上昇であり、オマリズマブなどのＩｇＥを標的とするいくつかの治療薬が開発されている。現在の理解によれば、ＡＤの病態は、様々な感受性遺伝子、宿主環境、感染性因子、皮膚バリア機能の欠陥、及び免疫学的応答の間の複雑な相互作用の産物である。ほとんどの場合、喘息気管支、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、及び／又はアトピー性皮膚炎などのアトピー性疾患の陽性家族歴がある。これらの疾患はまた、しばしば、対象においてＡＤの発生と関連している。
アトピー性皮膚炎（ＡＤ、同義語：神経皮膚炎、アトピー性湿疹、ベニエー痒疹、内因性湿疹）は、表皮炎症、かゆみ、乾燥肌（細かい鱗屑を伴う）及び滲出（急性病変）を特徴とする炎症性、慢性再発性、非伝染性及び重度の掻痒性皮膚症である。成人集団では２～３％、小児集団では最大２０％の罹患率を有し、３０年以上にわたって西側諸国で罹患率が増加している最も一般的な皮膚疾患の１つである。ＡＤは通常、再発経過に従い、血清免疫グロブリン（ＩｇＥ）レベルの上昇に関連する。この点で、ＡＤの１つの主要な特徴は、総血清ＩｇＥのレベルの上昇であり、オマリズマブなどのＩｇＥを標的とするいくつかの治療薬が開発されている。現在の理解によれば、ＡＤの病態は、様々な感受性遺伝子、宿主環境、感染性因子、皮膚バリア機能の欠陥、及び免疫学的応答の間の複雑な相互作用の産物である。ほとんどの場合、喘息気管支、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、及び／又はアトピー性皮膚炎などのアトピー性疾患の陽性家族歴がある。これらの疾患はまた、しばしば、対象においてＡＤの発生と関連している。
【0135】
ＡＤの診断は臨床的に行われ、歴史的特徴、形態及び皮膚病変の分布、並びに関連する臨床徴候に基づいている。分類を助けるために、様々なグループによって正式な基準が策定されてきた。最もよく知られている診断基準の１つは、１９８０年のＨａｎｉｆｉｎ及びＲａｊｋａの基準であり、診断を下すためには４つの大基準のうち３つと２３の小基準のうち３つを満たす必要がある。ＡＤの湿疹性発疹の好発部位は、顔、首、及び四肢の屈曲褶曲部である。好発部位は存在するが、皮膚病変は明確な境界なしに現れ、身体の事実上全ての部位が関与する－表皮全体まで関与する（紅皮症）可能性がある。ＡＤの臨床パターンも年齢によって異なる。この疾患は頭皮から始まり、その後、幼児の顔並びに腕及び脚伸側面に広がり、時には広範囲の滲出及び痂皮形成を示すことがある。その後、典型的な優先パターンは、屈曲部、首及び手の湿疹性併発を伴って発現する。これは、非病変性皮膚を含む経皮的水分損失の増加及び刺激性皮膚応答の増加によって反映される乾燥皮膚及び皮膚バリア機能障害を伴う。苔癬化は、引っ掻き及びこすることの結果である。成人で最も頻繁に起こるこれは、主に悪化した結節病変を伴うＡＤの痒疹型をもたらし得る。悪化はしばしば目に見える皮膚病変なしでかゆみの増加として開始する。次いで、これは、紅斑、丘疹、及び急性皮膚病変における浸潤が続く。慢性ＡＤ皮膚病変は、慢性炎症によって引き起こされる組織のリモデリングを受けている。
【0136】
アトピー性皮膚炎に罹患している患者の正常な皮膚又は関与していない皮膚と比較して、アトピー性皮膚炎の急性皮膚病変は、ＩＬ－４、ＩＬ－５、及びＩＬ－１３ ｍＲＮＡ発現細胞の数が著しく多い。疾患に罹患している患者の病変及び非病変皮膚における樹状細胞は、ＩｇＥ分子を有し、肥満細胞とともに、ＩＬ－４及びＩＬ－１３ｍＲＮＡを発現するＴｈ２細胞、Ｔ細胞のサブセットを含む混合リンパ球浸潤反応の発生に寄与する。主にＩＬ－４産生Ｔｈ２細胞を伴う初期相の後、ＩＦＮ－γ産生Ｔｈｌ細胞を特徴とする後続期が開始すると考えられる。このスイッチは、好酸球及び／又は樹状細胞への浸潤からのＩＬ－１２の局所産生によって開始されると考えられる。Ｆａｓリガンドを発現する活性化Ｔ細胞はまた、急性ＡＤに見出される海綿状態に寄与するケラチノサイトのアポトーシスを誘導することが示されている。
【0137】
アトピー性皮膚炎の場合、現時点では利用可能な治療法はない。管理は、アジュバント基本療法（皮膚軟化剤使用）及び抗炎症測定を組み合わせた疾患適応治療を含む。非常に重篤な症例では、薬物（例えば、全身グルココルチコイド、シクロスポリン）又は紫外線による全身治療が限られた期間にわたって適応され得るが、局所グルココルチコイドが治療またＡＤの主力であり、その使用は十分に確立されている。しかしながら、それらの使用に関連するかなりの安全性の懸念があり、特にそれらが連続的に適用される場合及び／又はグルココルチコイドの副作用に更に感受性のある若年の患者には、局所的な皮膚の副作用（例えば、皮膚萎縮、毛細血管拡張症、色素沈着減少）又は全身的な影響（視床下部－下垂体－副腎系（ＨＰＡ）軸抑制、成長遅延、クッシング症候群）がある。
【0138】
アレルギー性接触性皮膚炎
アレルギー性接触性皮膚炎（ＡＣＤ）は、ＩＶ型過敏症反応の古典的な例と考えられている。ＡＤとは異なり、ＡＣＤは接触性皮膚炎の一形態であり、すなわち、それは、異種化学物質が皮膚に浸透し、タンパク質と化学的に反応し、最終的にハプテン特異的なＴ細胞媒介性免疫応答をもたらす結果として発症する。したがって、ＡＤとは異なり、ＡＣＤはＩｇＥの上昇とは関連しておらず、「アレルギー」という指定の使用における例外となっている。ＡＣＤの特徴であるアレルギー徴候及び症状が起こるのは、その明確に定義された局所的な免疫応答：皮膚の発赤、浮腫、暖かさ及び掻痒のためである。診断は、ＡＣＤの誘発段階を繰り返す臨床的に有用な検査である診断パッチテストによって確認される。この疾患の求心性段階は、有害な化学物質への患者の繰り返しの低悪性度の曝露の結果として、時間の経過とともに徐々に発症する。
アレルギー性接触性皮膚炎（ＡＣＤ）は、ＩＶ型過敏症反応の古典的な例と考えられている。ＡＤとは異なり、ＡＣＤは接触性皮膚炎の一形態であり、すなわち、それは、異種化学物質が皮膚に浸透し、タンパク質と化学的に反応し、最終的にハプテン特異的なＴ細胞媒介性免疫応答をもたらす結果として発症する。したがって、ＡＤとは異なり、ＡＣＤはＩｇＥの上昇とは関連しておらず、「アレルギー」という指定の使用における例外となっている。ＡＣＤの特徴であるアレルギー徴候及び症状が起こるのは、その明確に定義された局所的な免疫応答：皮膚の発赤、浮腫、暖かさ及び掻痒のためである。診断は、ＡＣＤの誘発段階を繰り返す臨床的に有用な検査である診断パッチテストによって確認される。この疾患の求心性段階は、有害な化学物質への患者の繰り返しの低悪性度の曝露の結果として、時間の経過とともに徐々に発症する。
【0139】
ＡＣＤは明確な疾患実体であり、開始、増幅、プラトー相及び疾患分解の明確に定義されたメカニズムを有するが、ほとんどの環境因子は角質層を通って皮膚に浸透するには大きすぎるが、いくつかはこの障壁を通過するのに十分に低い分子量である。これらの分子は、ポイズンアイビーの樹脂中に見出されるウルシオール、合成化合物及び重金属イオンなどの天然に存在する物質に由来し得る。これらの化合物はしばしばハプテンとみなされ、したがってそれ自体でアレルギー反応を引き起こすことはできない。感作反応が起こるためには、ハプテンが皮膚内の内因性化合物（すなわち、タンパク質）と相互作用することが必要である。このような感作反応は、「変化した自己」の免疫認識と称されてきた。すなわち、異種生物学的ハプテンによる自己分子の化学的変化は、この新しく生成された抗原（ハプテン修飾自己分子）が特異的免疫応答を誘発することができるという点で、そのような自己分子を抗原性にする。
【0140】
ＡＣＤのメカニズムには、環境化学物質への曝露に応答して２つの異なる段階で構成される複雑な免疫媒介プロセスのカスケード、１）誘導段階（求心性又は一次段階としても知られてる）、２）誘発段階（遠心性又は二次段階としても知られる）が含まれる。
【0141】
ＡＣＤの誘導相の間、皮膚に適用されるハプテンは、細胞タンパク質と相互作用して、免疫系によって認識される抗原性部分であるハプテン－タンパク質複合体を形成する。これらの複合体は、樹状細胞などの抗原提示細胞によって飲み込まれ、ＭＨＣクラスＩＩの関連において提示される。これは、メモリＴ細胞に増殖する抗原特異的Ｔ細胞を活性化する。更に、ＮＫＴ細胞が活性化され、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α及びＩＬ－４を含むサイトカインの放出につながる。ＩＬ－４及び抗原の存在下で、Ｂ細胞も活性化され、循環ＩｇＭを放出する。
【0142】
誘発段階中、ＩｇＭはハプテン－タンパク質複合体と相互作用して補体活性化を誘導し、肥満細胞及び内皮細胞からの様々な炎症性及び化学的方向性因子の放出につながる。したがって、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ハプテン適用部位に移行し、局所抗原提示細胞と相互作用し、ＡＣＤの臨床的発現をもたらす。結果的に観察され得る混合リンパ球浸潤は、炎症性サイトカイン、並びに細胞媒介性細胞傷害の結果である。抗原の強制的な回避とは別に、局所グルココルチコイドは、アレルギー性接触性皮膚炎の治療の中心であり、その使用は十分に確立されている。しかしながら、それらの使用に関連するかなりの安全性の懸念があり、特にグルココルチコイドの副作用に感受性のある（若年のために）患者にそれらが適用される場合は、局所的な皮膚の副作用（例えば、皮膚萎縮、毛細血管拡張症、色素沈着減少）又は全身的な影響（ＨＰＡ軸抑制、成長遅延、クッシング症候群）がある。
【0143】
乾癬
いくつかの例では、処置される疾患／状態は、プラーク屈曲性乾癬、液滴乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、感光性乾癬、及び赤皮性乾癬を含む乾癬である。乾癬は一般的に免疫疾患として認識されており、感染症（例えば、連鎖球菌性咽頭炎又は鵞口瘡）、ストレス、皮膚への損傷（切り傷、擦り傷、虫刺され、重度の日焼け）、特定の薬（リチウム、抗マラリア薬、キニジン、インドメタシンを含む）などの要因によって引き起こされるか、又は２型糖尿病、心血管疾患、高血圧、クローン病、高コレステロール、うつ病、潰瘍性大腸炎などの他の免疫状態を併発する可能性がある。これらの原因のいずれかに起因する乾癬、又は任意の他の原因又は未知の原因は、本明細書に記載の製剤及び方法によって治療され得る。
【0144】
場合によっては、以下のうちの１つを示す場合、対象は乾癬を有すると定義される：１）銀白色の鱗屑で覆われた炎症を起こした皮膚病変（プラーク乾癬又は尋常性乾癬）；２）胴体、腕又は脚に現れる小さな赤い点（腹部乾癬）；３）皮膚の屈曲面に鱗屑状の剥がれなく滑らかな炎症を起こした病変（逆乾癬）；４）かゆみ及び腫脹を伴うか又は伴わない、細かい鱗屑の広範な発赤及び剥離（赤血球性乾癬）；５）水疱様病変（膿疱性乾癬）；６）銀白色の鱗屑で覆われた炎症を起こした頭皮病変（頭皮乾癬）；７）黄化変色、潰れた爪、又は爪の炎症及び爪床からの剥離を伴うか又は伴わない、爪の点状陥凹。
【0145】
抗体
一例では、任意の例による本明細書に記載の化合物は、抗体の抗原結合部位を含むタンパク質である。いくつかの例では、ＣＤ１３１と結合する化合物は、抗体である。
一例では、任意の例による本明細書に記載の化合物は、抗体の抗原結合部位を含むタンパク質である。いくつかの例では、ＣＤ１３１と結合する化合物は、抗体である。
【0146】
抗体を生成するための方法は、当該技術分野で既知であり、かつ／又はＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）に記載されている。一般に、そのような方法では、任意選択で任意の好適又は所望の担体、アジュバント、又は薬学的に許容される賦形剤で製剤化されたＣＤ１３１又はその領域（例えば、細胞外ドメイン）若しくはその免疫原性断片若しくはエピトープ、又はそれを発現及び表示する細胞（すなわち、免疫原）が、非ヒト動物、例えば、マウス、ニワトリ、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ウマ、ヤギ、又はブタに投与される。免疫原は、鼻腔内、筋肉内、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、又は他の既知の経路によって投与し得る。
【0147】
モノクローナル抗体は、本開示によって企図される抗体の１つの例示的形態である。「モノクローナル抗体」又は「ｍＡｂ」という用語は、同じ抗原に、例えば、抗原内の同じエピトープに結合することができる均一抗体集団を指す。この用語は、抗体の供給源又はそれが作製される方法に関して限定されることを意図するものではない。
【0148】
ｍＡｂの産生には、例えば、ＵＳ４１９６２６５又はＨａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）（上記）に例示される手順など、いくつかの既知の技法のうちのいずれか１つを使用してよい。
【0149】
代替的に、ＡＢＬ－ＭＹＣ技術（ＮｅｏＣｌｏｎｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ ５３７１３，ＵＳＡ）を使用して、ＭＡｂを分泌する細胞株を産生する（例えば、Ｌａｒｇａｅｓｐａｄａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９７：８５－９５，１９９６に記載されるように）。
【0150】
抗体はまた、例えば、ＵＳ６３０００６４及び／又はＵＳ５８８５７９３に記載されるように、ディスプレイライブラリ、例えば、ファージディスプレイライブラリをスクリーニングすることによって、産生又は単離され得る。例えば、本発明者らは、ファージディスプレイライブラリから完全ヒト抗体を単離した。
【0151】
本開示の抗体は、合成抗体であってもよい。例えば、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、又は脱免疫化抗体である。
【0152】
一例では、本明細書に記載の抗体は、キメラ抗体である。「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種（例えば、マウスなどのネズミ）に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか又は相同である一方で、鎖の残りの部分は、別の種（例えば、ヒトなどの霊長類）に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか又は相同である抗体を指す。キメラ抗体の作製方法は、例えば、ＵＳ４８１６５６７及びＵＳ５８０７７１５に記載されている。
【0153】
本開示の抗体は、ヒト化抗体であっても、ヒト抗体であってもよい。
【0154】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種由来の抗体に由来する抗原結合部位又は可変領域を有し、ヒト抗体の構造及び／又は配列に基づいて残りの抗体構造を有するキメラ抗体のサブクラスを指すと理解されなければならない。ヒト化抗体において、抗原結合部位は、一般に、ヒト抗体の可変領域内の適切なＦＲに接合された非ヒト抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）、及びヒト抗体からの残りの領域を含む。抗原結合部位は、野生型（すなわち、非ヒト抗体のものと同一である）であってもよく、１つ以上のアミノ酸置換によって改変されてもよい。場合によっては、ヒト抗体のＦＲ残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。
【0155】
非ヒト抗体又はその部分（例えば、可変領域）をヒト化するための方法は、当該技術分野において既知である。ヒト化は、ＵＳ５２２５５３９、又はＵＳ５５８５０８９の方法に従って行うことができる。抗体をヒト化するための他の方法は、除外されないものとする。
【0156】
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、可変領域（例えば、ＶＨ、ＶＬ）、及びヒト、例えば、ヒト生殖細胞又は体細胞に見出される配列に由来するか、又はそれに対応する任意選択で一定の領域を有する抗体を指す。
【0157】
例示的なヒト抗体は本明細書に記載されており、ＷＯ２０１７／０８８０２８に記載される９Ａ２－ＶＲ２４．２９（また、「ＣＳＬ３１１」とも称される）、及びＳｕｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｌｏｏｄ ９４：１９４３－１９５１に記載されるＢＩＯＮ－１、並びに／又はその可変領域を含むタンパク質若しくはその誘導体が挙げられる。これらのヒト抗体は、非ヒト抗体と比較して、ヒトにおける免疫原性の低下という利点を提供する。
【0158】
一例では、抗体は、多重特異性抗体である。例えば、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＣＤ１３１に結合する抗原結合部位と、異なる抗原に結合する更なる抗原結合部位とを含むタンパク質であり得る。したがって、いくつかの例では、抗体は二重特異性抗体である。
【0159】
抗体結合ドメイン含有タンパク質
単一ドメイン抗体
いくつかの例では、本開示の化合物は、単一ドメイン抗体（「ドメイン抗体」又は「ｄＡｂ」又は「ナノボディ」という用語と互換的に使用される）であるか、又はそれを含むタンパク質である。単一ドメイン抗体は、単一のモノマー可変抗体ドメインからなる抗体断片である。抗体全体と同様に、これは特定の抗原に選択的に結合することができる。わずか１２～１５ｋＤａの分子量で、単一ドメイン抗体は、２本の重タンパク質鎖及び２本の軽鎖からなる一般的な抗体（１５０～１６０ｋＤａ）よりもはるかに小さく、Ｆａｂ断片（約５０ｋＤａ、１本の軽鎖と半分の重鎖）及び単鎖可変断片（約２５ｋＤａ、２つの可変ドメイン、１つは軽鎖から、もう１つは重鎖から）よりも更に小さい。ある特定の例では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、ＵＳ６２４８５１６を参照されたい）。
単一ドメイン抗体
いくつかの例では、本開示の化合物は、単一ドメイン抗体（「ドメイン抗体」又は「ｄＡｂ」又は「ナノボディ」という用語と互換的に使用される）であるか、又はそれを含むタンパク質である。単一ドメイン抗体は、単一のモノマー可変抗体ドメインからなる抗体断片である。抗体全体と同様に、これは特定の抗原に選択的に結合することができる。わずか１２～１５ｋＤａの分子量で、単一ドメイン抗体は、２本の重タンパク質鎖及び２本の軽鎖からなる一般的な抗体（１５０～１６０ｋＤａ）よりもはるかに小さく、Ｆａｂ断片（約５０ｋＤａ、１本の軽鎖と半分の重鎖）及び単鎖可変断片（約２５ｋＤａ、２つの可変ドメイン、１つは軽鎖から、もう１つは重鎖から）よりも更に小さい。ある特定の例では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、ＵＳ６２４８５１６を参照されたい）。
【0160】
いくつかの例では、単一ドメイン抗体は、ＶＨＨ断片である。ＶＨＨ断片は、以下に記載のラクダ科重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨ）からなる。
【0161】
いくつかの例では、単一ドメイン抗体は、ＶＮＡＲ断片である。ＶＮＡＲ断片は、以下に記載の、軟骨魚類由来の重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨ）からなる。
【0162】
ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ
いくつかの例では、本開示のタンパク質は、ＷＯ９８／０４４００１及び／又はＷＯ９４／００７９２１に記載されるものなどの、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ若しくはより高次元のタンパク質複合体であるか、又はそれらを含む。
いくつかの例では、本開示のタンパク質は、ＷＯ９８／０４４００１及び／又はＷＯ９４／００７９２１に記載されるものなどの、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ若しくはより高次元のタンパク質複合体であるか、又はそれらを含む。
【0163】
一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）
当業者は、ｓｃＦｖが、単一のポリペプチド鎖内のＶＨ及びＶＬ領域、並びにＶＨ及びＶＬの間のポリペプチドリンカーを含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にすること（すなわち、単一のポリペプチド鎖のＶＨ及びＶＬが互いに会合してＦｖを形成すること）を認識するであろう。例えば、リンカーは、１２個を超えるアミノ酸残基を含み、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３は、ｓｃＦｖにとってより好ましいリンカーの１つである。
当業者は、ｓｃＦｖが、単一のポリペプチド鎖内のＶＨ及びＶＬ領域、並びにＶＨ及びＶＬの間のポリペプチドリンカーを含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にすること（すなわち、単一のポリペプチド鎖のＶＨ及びＶＬが互いに会合してＦｖを形成すること）を認識するであろう。例えば、リンカーは、１２個を超えるアミノ酸残基を含み、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３は、ｓｃＦｖにとってより好ましいリンカーの１つである。
【0164】
重鎖抗体
重鎖抗体は、重鎖を含むが、軽鎖を含まない限り、他の多くの形態の抗体と構造的に異なる。したがって、これらの抗体は、「重鎖のみ抗体」とも称される。重鎖抗体は、例えば、ラクダ科及び軟骨魚類（ＩｇＮＡＲとも呼ばれる）に見出される。
重鎖抗体は、重鎖を含むが、軽鎖を含まない限り、他の多くの形態の抗体と構造的に異なる。したがって、これらの抗体は、「重鎖のみ抗体」とも称される。重鎖抗体は、例えば、ラクダ科及び軟骨魚類（ＩｇＮＡＲとも呼ばれる）に見出される。
【0165】
ラクダ科及びその可変領域由来の重鎖抗体及びそれらの産生及び／又は単離及び／又は使用方法の一般的な説明は、とりわけ、以下の参考文献ＷＯ９４／０４６７８、ＷＯ９７／４９８０５及びＷＯ９７／４９８０５に見出される。
【0166】
軟骨魚類及びその可変領域由来の重鎖抗体並びにそれらの産生方法及び／又は単離方法及び／又は使用方法の一般的な説明は、とりわけ、ＷＯ２００５／１１８６２９に見出される。
【0167】
他の抗体及び抗体断片
本開示はまた、他の抗体及び抗体断片、例えば、
（ｉ）ＵＳ５，７３１，１６８に記載の「鍵及び穴」二重特異性タンパク質、
（ｉｉ）例えば、ＵＳ４，６７６，９８０に記載のヘテロ共役タンパク質、
（ｉｉｉ）例えば、ＵＳ４，６７６，９８０に記載の化学架橋剤を使用して産生されるヘテロ共役タンパク質、及び
（ｉｖ）Ｆａｂ３（例えば、ＥＰ１９９３／０３０２８９４に記載の）を企図する。
本開示はまた、他の抗体及び抗体断片、例えば、
（ｉ）ＵＳ５，７３１，１６８に記載の「鍵及び穴」二重特異性タンパク質、
（ｉｉ）例えば、ＵＳ４，６７６，９８０に記載のヘテロ共役タンパク質、
（ｉｉｉ）例えば、ＵＳ４，６７６，９８０に記載の化学架橋剤を使用して産生されるヘテロ共役タンパク質、及び
（ｉｖ）Ｆａｂ３（例えば、ＥＰ１９９３／０３０２８９４に記載の）を企図する。
【0168】
Ｖ様タンパク質
本開示の化合物の例は、Ｔ細胞受容体である。Ｔ細胞受容体は、抗体のＦｖモジュールと同様の構造に結合する２つのＶドメインを有する。Ｎｏｖｏｔｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：８６４６－８６５０，１９９１は、Ｔ細胞受容体の２つのＶドメイン（α及びβと称される）が、どのように融合され、一本鎖ポリペプチドとして発現され得るか、更に、抗体ｓｃＦｖに直接類似する疎水性を低減するために表面残基をどのように変化させるかを記載している。２つのＶ－α及びＶ－βドメインを含む一本鎖Ｔ細胞受容体又は多量体Ｔ細胞受容体の産生を記載する他の刊行物としては、ＷＯ１９９９／０４５１１０又はＷＯ２０１１／１０７５９５が挙げられる。
本開示の化合物の例は、Ｔ細胞受容体である。Ｔ細胞受容体は、抗体のＦｖモジュールと同様の構造に結合する２つのＶドメインを有する。Ｎｏｖｏｔｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：８６４６－８６５０，１９９１は、Ｔ細胞受容体の２つのＶドメイン（α及びβと称される）が、どのように融合され、一本鎖ポリペプチドとして発現され得るか、更に、抗体ｓｃＦｖに直接類似する疎水性を低減するために表面残基をどのように変化させるかを記載している。２つのＶ－α及びＶ－βドメインを含む一本鎖Ｔ細胞受容体又は多量体Ｔ細胞受容体の産生を記載する他の刊行物としては、ＷＯ１９９９／０４５１１０又はＷＯ２０１１／１０７５９５が挙げられる。
【0169】
抗原結合ドメインを含む他の非抗体タンパク質としては、一般に単量体であるＶ様ドメインを有するタンパク質が挙げられる。かかるＶ様ドメインを含むタンパク質の例としては、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２８、及びＩＣＯＳが挙げられる。かかるＶ様ドメインを含むタンパク質の更なる開示は、ＷＯ１９９９／０４５１１０に含まれる。
【0170】
アドネクチン
一例では、本開示の化合物は、アドネクチンである。アドネクチンは、ループ領域が抗原結合を付与するように変更されるヒトフィブロネクチンの第１０のフィブロネクチンＩＩＩ型（１０Ｆｎ３）ドメインに基づく。例えば、１０Ｆｎ３ドメインのβサンドイッチの一端にある３つのループを操作して、アドネクチンが抗原を特異的に認識できるようにすることができる。更なる詳細については、ＵＳ２００８／０１３９７９１又はＷＯ２００５／０５６７６４を参照されたい。
一例では、本開示の化合物は、アドネクチンである。アドネクチンは、ループ領域が抗原結合を付与するように変更されるヒトフィブロネクチンの第１０のフィブロネクチンＩＩＩ型（１０Ｆｎ３）ドメインに基づく。例えば、１０Ｆｎ３ドメインのβサンドイッチの一端にある３つのループを操作して、アドネクチンが抗原を特異的に認識できるようにすることができる。更なる詳細については、ＵＳ２００８／０１３９７９１又はＷＯ２００５／０５６７６４を参照されたい。
【0171】
アンチカリン
更なる例では、本開示の化合物は、アンチカリンである。アンチカリンは、ステロイド、ビリン、レチノイド及び脂質などの小さな疎水性分子を輸送する細胞外タンパク質のファミリーであるリポカリンに由来する。リポカリンは、抗原に結合するように操作することができる円錐構造の開放端に複数のループを有する剛性βシート二次構造を有する。そのような操作されたリポカリンは、アンチカリンとして知られている。アンチカリンの更なる説明については、ＵＳ７２５０２９７Ｂ１又はＵＳ２００７／０２２４６３３を参照されたい。
更なる例では、本開示の化合物は、アンチカリンである。アンチカリンは、ステロイド、ビリン、レチノイド及び脂質などの小さな疎水性分子を輸送する細胞外タンパク質のファミリーであるリポカリンに由来する。リポカリンは、抗原に結合するように操作することができる円錐構造の開放端に複数のループを有する剛性βシート二次構造を有する。そのような操作されたリポカリンは、アンチカリンとして知られている。アンチカリンの更なる説明については、ＵＳ７２５０２９７Ｂ１又はＵＳ２００７／０２２４６３３を参照されたい。
【0172】
アフィボディ
更なる例では、本開示の化合物は、アフィボディである。アフィボディは、抗原に結合するように操作され得る黄色ブドウ球菌のプロテインＡのＺドメイン（抗原結合ドメイン）に由来する足場である。Ｚドメインは、約５８個のアミノ酸の３ヘリカルバンドルからなる。ライブラリは、表面残基のランダム化によって生成されてきた。詳細については、ＥＰ１６４１８１８を参照されたい。
更なる例では、本開示の化合物は、アフィボディである。アフィボディは、抗原に結合するように操作され得る黄色ブドウ球菌のプロテインＡのＺドメイン（抗原結合ドメイン）に由来する足場である。Ｚドメインは、約５８個のアミノ酸の３ヘリカルバンドルからなる。ライブラリは、表面残基のランダム化によって生成されてきた。詳細については、ＥＰ１６４１８１８を参照されたい。
【0173】
アビマー
更なる例では、本開示の化合物は、アビマーである。アビマーは、Ａドメイン足場ファミリーに由来するマルチドメインタンパク質である。約３５個のアミノ酸の天然ドメインは、定義されたジスルフィド結合構造を採用する。多様性は、Ａドメインファミリーによって示される自然変動のシャッフルによって生成される。詳細については、ＷＯ２００２／０８８１７１を参照されたい。
更なる例では、本開示の化合物は、アビマーである。アビマーは、Ａドメイン足場ファミリーに由来するマルチドメインタンパク質である。約３５個のアミノ酸の天然ドメインは、定義されたジスルフィド結合構造を採用する。多様性は、Ａドメインファミリーによって示される自然変動のシャッフルによって生成される。詳細については、ＷＯ２００２／０８８１７１を参照されたい。
【0174】
ＤＡＲＰｉｎ
更なる例では、本開示の化合物は、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）である。ＤＡＲＰｉｎは、細胞骨格への一体膜タンパク質の結合を媒介するタンパク質のファミリーであるアンキリンに由来する。単一のアンキリン反復は、２つのαヘリックスとβターンからなる３３残基モチーフである。それらは、第１のαヘリックス及び各反復のβターン内の残基をランダム化することによって、異なる標的抗原に結合するように操作することができる。それらの結合界面は、モジュールの数を増やすことによって増加させることができる（親和性成熟の方法）。詳細については、ＵＳ２００４０１３２０２８を参照されたい。
更なる例では、本開示の化合物は、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）である。ＤＡＲＰｉｎは、細胞骨格への一体膜タンパク質の結合を媒介するタンパク質のファミリーであるアンキリンに由来する。単一のアンキリン反復は、２つのαヘリックスとβターンからなる３３残基モチーフである。それらは、第１のαヘリックス及び各反復のβターン内の残基をランダム化することによって、異なる標的抗原に結合するように操作することができる。それらの結合界面は、モジュールの数を増やすことによって増加させることができる（親和性成熟の方法）。詳細については、ＵＳ２００４０１３２０２８を参照されたい。
【0175】
脱免疫化タンパク質
本開示はまた、脱免疫化抗体又はタンパク質を企図する。脱免疫化抗体及びタンパク質は、１つ以上のエピトープ、例えば、Ｂ細胞エピトープ又は除去された（すなわち、変異した）Ｔ細胞エピトープを有し、それによって、哺乳動物が抗体又はタンパク質に対する免疫応答を上昇させる可能性を低下させる。脱免疫化抗体及びタンパク質を産生するための方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＷＯ２０００／３４３１７、ＷＯ２００４／１０８１５８及びＷＯ２００４／０６４７２４に記載されている。
本開示はまた、脱免疫化抗体又はタンパク質を企図する。脱免疫化抗体及びタンパク質は、１つ以上のエピトープ、例えば、Ｂ細胞エピトープ又は除去された（すなわち、変異した）Ｔ細胞エピトープを有し、それによって、哺乳動物が抗体又はタンパク質に対する免疫応答を上昇させる可能性を低下させる。脱免疫化抗体及びタンパク質を産生するための方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＷＯ２０００／３４３１７、ＷＯ２００４／１０８１５８及びＷＯ２００４／０６４７２４に記載されている。
【0176】
好適な変異を導入し、得られたタンパク質を発現及びアッセイするための方法は、本明細書の説明に基づいて当業者には明白であろう。
【0177】
タンパク質への突然変異
本開示はまた、本開示のタンパク質の変異型を企図する。例えば、かかる変異タンパク質は、本明細書に記載される配列と比較して、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの例では、タンパク質は、３０個以下又は２０個以下又は１０個以下、例えば、９個又は８個又は７個又は６個又は５個又は４個又は３個又は２個の保存的アミノ酸置換を含む。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖及び／又は親水性及び／又は親水性を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。
本開示はまた、本開示のタンパク質の変異型を企図する。例えば、かかる変異タンパク質は、本明細書に記載される配列と比較して、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの例では、タンパク質は、３０個以下又は２０個以下又は１０個以下、例えば、９個又は８個又は７個又は６個又は５個又は４個又は３個又は２個の保存的アミノ酸置換を含む。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖及び／又は親水性及び／又は親水性を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。
【0178】
一例では、突然変異タンパク質は、天然に存在するタンパク質と比較して、１個又は２個又は３個又は４個又は５個又は６個の保存的アミノ酸変化のみを有するか、又はそれ以下である。保存的アミノ酸変化の詳細を以下に提供する。当業者は、例えば、本明細書の開示から認識するであろうように、そのようなわずかな変化は、タンパク質の活性を改変しないように合理的に予測され得る。
【0179】
類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含み、当該技術分野において定義されている。
【0180】
本開示はまた、本開示のタンパク質、例えば、ＣＤＲ３などのＣＤＲにおける非保存的アミノ酸変化（例えば、置換）を企図する。一例では、タンパク質は、例えば、ＣＤＲ３中、例えばＣＤＲ３中に、６個未満又は５個未満又は４個未満又は３個未満又は２個未満又は１個未満の非保存的アミノ酸置換を含む。
【0181】
本開示はまた、本明細書に記載の配列と比較した１つ以上の挿入又は欠失を企図する。いくつかの例では、タンパク質は、１０個以下、例えば、９個又は８個又は７個又は６個又は５個又は４個又は３個又は２個の挿入及び／又は欠失を含む。
【0182】
定常領域
本開示は、抗体の定常領域を含む、本明細書に記載のタンパク質及び／又は抗体を包含する。これには、Ｆｃに融合された抗体の抗原結合断片が含まれる。
本開示は、抗体の定常領域を含む、本明細書に記載のタンパク質及び／又は抗体を包含する。これには、Ｆｃに融合された抗体の抗原結合断片が含まれる。
【0183】
本開示のタンパク質の産生に有用な定常領域の配列は、いくつかの異なる供給源から入手することができる。いくつかの例では、タンパク質の定常領域又はその一部は、ヒト抗体に由来する。定常領域又はその一部は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む任意の抗体クラス、並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む任意の抗体アイソタイプに由来し得る。一例では、定常領域は、ヒトアイソタイプＩｇＧ４又は安定化ＩｇＧ４定常領域である。
【0184】
一例では、定常領域のＦｃ領域は、例えば、天然又は野生型ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３ Ｆｃ領域と比較して、エフェクター機能を誘導する能力が低下している。一例では、エフェクター機能は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）である。タンパク質を含有するＦｃ領域のエフェクター機能のレベルを評価するための方法は、当該技術分野において既知であり、かつ／又は本明細書に記載される。
【0185】
一例では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域（すなわち、ＩｇＧ４定常領域からの）、例えば、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。好適なＩｇＧ４ Ｆｃ領域の配列は、当業者には明白であり、かつ／又は公的に入手可能なデータベースにおいて入手可能であろう（例えば、国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）から入手可能であろう）。
【0186】
一例では、定常領域は、安定化ＩｇＧ４定常領域である。「安定化ＩｇＧ４定常領域」という用語は、Ｆａｂアーム交換、又はＦａｂアーム交換若しくは半抗体の形成を受ける傾向、又は半抗体を形成する傾向を低減するように改変されたＩｇＧ４定常領域を意味すると理解されるであろう。「Ｆａｂアーム交換」とは、ヒトＩｇＧ４のタンパク質修飾の種類を指し、ここで、ＩｇＧ４重鎖及び結合軽鎖（半分分子）は、別のＩｇＧ４分子からの重軽鎖対に交換される。したがって、ＩｇＧ４分子は、（二重特異性分子をもたらす） ２つの異なる抗原を認識する２つの異なるＦａｂアームを獲得し得る。Ｆａｂアーム交換は、インビボで天然に生じ、精製された血液細胞又は還元されたグルタチオンなどの還元剤によってインビトロで誘導され得る。「半抗体」は、ＩｇＧ４抗体が解離して、各々が単一の重鎖及び単一の軽鎖を含む２つの分子を形成するときに形成される。
【0187】
一例では、安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８７ ａｎｄ／ｏｒ １９９１）に従うヒンジ領域の２４１位にプロリンを含む。この位置は、ＥＵ番号付けシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，２００１及びＥｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５，１９６９）に従うヒンジ領域の２２８位に対応する。ヒトＩｇＧ４において、この残基は、一般に、セリンである。プロリンに対するセリンの置換の後、ＩｇＧ４ヒンジ領域は、配列ＣＰＰＣを含む。この点において、当業者は、「ヒンジ領域」が、抗体の２つのＦａｂアームに可動性を付与するＦｃ及びＦａｂ領域を連結する抗体重鎖定常領域のプロリンが豊富な部分であることを認識するであろう。ヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド結合に関与するシステイン残基を含む。これは、一般に、Ｋａｂａｔの番号付けシステムに従って、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２２６からＰｒｏ２４３まで伸張させることとして定義される。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド（Ｓ－Ｓ）結合を形成する第１及び最後のシステイン残基を同じ位置に配置することによって、ＩｇＧ１配列と整列され得る（例えば、ＷＯ２０１０／０８０５３８を参照されたい）。
【0188】
安定化ＩｇＧ４抗体の更なる例は、ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域における４０９位のアルギニン（ＥＵ番号付けシステムによる）が、リジン、スレオニン、メチオニン、又はロイシン（例えば、ＷＯ２００６／０３３３８６に記載される）で置換される抗体である。定常領域のＦｃ領域は、追加的又は代替的に、アラニン、バリン、グリシン、イソロイシン、及びロイシンからなる群から選択される残基を、４０５に対応する位置（ＥＵ番号付けシステムによる）に含むことができる。任意選択で、ヒンジ領域は、位置２４１にプロリン（すなわち、ＣＰＰＣ配列）を含む（上記のように）。
【0189】
別の例では、Ｆｃ領域は、低減されたエフェクター機能を有するように改変された領域、すなわち、「非免疫刺激性Ｆｃ領域」である。例えば、Ｆｃ領域は、２６８、３０９、３３０、及び３３１からなる群から選択される１つ以上の位置での置換を含むＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。別の例では、Ｆｃ領域は、以下の変更Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失のうちの１つ以上、並びに／又は以下の変更Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓのうちの１つ以上を含むＩｇＧ１ Ｆｃ領域であるＡｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２６１３－２６２４，１９９９；Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４，２００１）。非免疫刺激性Ｆｃ領域の更なる例は、例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７：１１２９－１１３８ ２００６、及び／又はＨｅｚａｒｅｈ Ｊ Ｖｉｒｏｌ；７５：１２１６１－１２１６８，２００１）に記載されている。
【0190】
別の例では、Ｆｃ領域は、例えば、ＩｇＧ４抗体由来の少なくとも１つのＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ１抗体由来の少なくとも１つのＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域であり、Ｆｃ領域は、２４０、２６２、２６４、２６６、２９７、２９９、３０７、３０９、３２３、３９９、４０９及び４２７（ＥＵ番号付け）からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置での置換を含む（例えば、ＷＯ２０１０／０８５６８２に記載される）。例示的な置換としては、２４０Ｆ、２６２Ｌ、２６４Ｔ、２６６Ｆ、２９７Ｑ、２９９Ａ、２９９Ｋ、３０７Ｐ、３０９Ｋ、３０９Ｍ、３０９Ｐ、３２３Ｆ、３９９Ｓ、及び４２７Ｆが挙げられる。
【0191】
追加の改変
本開示はまた、本開示の抗体又はタンパク質への追加の改変を企図する。
本開示はまた、本開示の抗体又はタンパク質への追加の改変を企図する。
【0192】
例えば、抗体は、タンパク質の半減期を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。例えば、抗体は、胎児性Ｆｃ受容体ＦｃＲｎ）に対するＦｃ領域の親和性を増加させる１つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含む。例えば、Ｆｃ領域は、エンドソームにおけるＦｃ／ＦｃＲｎ結合を容易にするために、より低いｐＨ、例えば、約ｐＨ６．０でのＦｃＲｎに対する親和性を増加させた。一例では、Ｆｃ領域は、約ｐＨ７．４でのその親和性と比較して、約ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する親和性を増加させており、これは細胞リサイクル後の血液中へのＦｃの再放出を促進する。これらのアミノ酸置換は、血液からのクリアランスを減少させることによって、タンパク質の半減期を延長するのに有用である。
【0193】
例示的なアミノ酸置換としては、ＥＵ番号付けシステムによるＴ２５０Ｑ及び／又はＭ４２８Ｌ若しくはＴ２５２Ａ、Ｔ２５４Ｓ及びＴ２６６Ｆ又はＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ又はＨ４３３Ｋ及びＮ４３４Ｆが挙げられる。追加の又は代替のアミノ酸置換は、例えば、ＵＳ２００７／０１３５６２０又はＵＳ７０８３７８４に記載されている。
【0194】
タンパク質は、融合タンパク質であり得る。したがって、一例では、タンパク質は、アルブミン、その機能的断片又は変異型を更に含む。一例では、アルブミン、その機能的断片又は変異型は、ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミンである。一例では、アルブミン、その機能的断片又は変異型は、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、又は挿入、例えば、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、又は１個以下の置換を含む。本開示での使用に好適なアミノ酸置換は、当業者には明らかであり、天然に存在する置換及び例えば、ＷＯ２０１１／０５１４８９、ＷＯ２０１４／０７２４８１、ＷＯ２０１１／１０３０７６、ＷＯ２０１２／１１２１８８、ＷＯ２０１３／０７５０６６、ＷＯ２０１５／０６３６１１及びＷＯ２０１４／１７９６５７に記載されるものなどの操作された置換を含む。
【0195】
一例では、本開示のタンパク質は、可溶性補体受容体又はその機能的断片若しくは変異型を更に含む。一例では、タンパク質は更に補体阻害剤を含む。
【0196】
タンパク質産生
一例では、任意の例に従う本明細書に記載のタンパク質は、タンパク質を産生するのに十分な条件下で、例えば、本明細書に記載されるように、かつ／又は当該技術分野において既知であるように、ハイブリドーマを培養することによって産生される。
一例では、任意の例に従う本明細書に記載のタンパク質は、タンパク質を産生するのに十分な条件下で、例えば、本明細書に記載されるように、かつ／又は当該技術分野において既知であるように、ハイブリドーマを培養することによって産生される。
【0197】
組換え発現
別の例では、任意の例による本明細書に記載されるタンパク質は、組換えである。
別の例では、任意の例による本明細書に記載されるタンパク質は、組換えである。
【0198】
組換えタンパク質の場合、それをコードする核酸を発現構築物又はベクターにクローニングすることができ、その後、大腸菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、又は哺乳動物細胞、例えばサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）細胞、又はそれ以外の場合にはタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトする。タンパク質を発現するために使用される例示的な細胞は、ＣＨＯ細胞、骨髄腫細胞又はＨＥＫ細胞である。これらの目的を達成するための分子クローニング技術が当該技術分野において既知であり、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までに更新されたものを含む）又はＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されている。多種多様なクローニング及びインビトロ増幅方法は、組換え核酸の構築に好適である。組換え抗体の産生方法もまた当該技術分野で既知であり、例えば、ＵＳ４８１６５６７又はＵＳ５５３０１０１を参照されたい。
【0199】
単離後、核酸は、更なるクローニング（ＤＮＡの増幅）のために、又は無細胞系若しくは細胞内での発現のために、発現構築物若しくは発現ベクター中のプロモーターに作動可能に連結された挿入される。
【0200】
本明細書で使用する場合、「プロモーター」という用語は、その最も広い文脈でとられるべきであり、核酸の発現を、例えば、発達及び／又は外部刺激に応答して、又は組織特異的な様式で変化させる追加の調節エレメント（例えば、上流活性化配列、転写因子結合部位、エンハンサー及びサイレンサー）を伴うか伴わない、正確な転写開始に必要なＴＡＴＡボックス又は開始剤エレメントを含む、ゲノム遺伝子の転写調節配列を含む。本文脈において、「プロモーター」という用語は、それが作動可能に連結した核酸の発現を付与、活性化又は増強する組換え、合成若しくは融合核酸、又は誘導体を説明するためにも使用される。例示的なプロモーターは、１つ以上の特定の調節エレメントの追加のコピーを含有して、発現を更に増強し、かつ／又は当該核酸の空間的発現及び／若しくは時間的発現を変化させることができる。
【0201】
本明細書で使用される場合、「に作動可能に連結される」という用語は、核酸の発現がプロモーターによって制御されるように、核酸に対してプロモーターを配置することを意味する。
【0202】
細胞内で発現するための多くのベクターが利用可能である。ベクター成分には、一般に、シグナル配列、タンパク質をコードする配列（例えば、本明細書に提供される情報に由来する）、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、タンパク質を発現させるための好適な配列を認識するであろう。例示的なシグナル配列としては、原核分泌シグナル（例えば、ｐｅｌＢ、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、又は熱安定性エンテロトキシンＩＩ）、酵母分泌シグナル（例えば、インバーターゼリーダー、α因子リーダー、又は酸ホスファターゼリーダー）、又は哺乳動物分泌シグナル（例えば、単純ヘルペスｇＤシグナル）が挙げられる。
【0203】
哺乳類細胞において活性な例示的なプロモーターとしては、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ－ＩＥ）、ヒト伸長因子１－αプロモーター（ＥＦ１）、小核ＲＮＡプロモーター（Ｕ１ａ及びＵ１ｂ）、α－ミオシン重鎖プロモーター、シミアンウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＲＳＶ）、アデノウイルス主要後期プロモーター、β－アクチンプロモーター、ＣＭＶエンハンサー／β－アクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター若しくはその活性断片を含むハイブリッド調節エレメントが挙げられる。有用な哺乳類宿主細胞株の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６５１）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚性腎臓株（浮遊培養中での成長のためにサブクローニングされた２９３又は２９３細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０）、又はチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）である。
【0204】
例えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、サッカロマイセス・セレヴィシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、及びシゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）を含む群から選択される酵母細胞などの酵母細胞における発現に好適な典型的なプロモーターとしては、ＡＤＨ１プロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ｎｍｔプロモーター、ＲＰＲ１プロモーター、又はＴＥＦ１プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。
【0205】
発現のために単離された核酸又はそれを含む発現構築物を細胞に導入するための手段は、当業者に既知である。所与の細胞に使用される技術は、既知の成功した技術に依存する。組換えＤＮＡを細胞内に導入するための手段としては、とりわけ、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥ－デキストランによって媒介されるトランスフェクション、リポソームによって媒介されるトランスフェクション（例えば、リポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ、ＭＤ，ＵＳＡ）及び／又はセルフェクチン（Ｇｉｂｃｏ、ＭＤ，ＵＳＡ）を使用することによって）、ＰＥＧ媒介性ＤＮＡ取り込み、エレクトロポレーション、並びにＤＮＡコーティングされたタングステン又は金粒子（Ａｇｒａｃｅｔｕｓ Ｉｎｃ．、ＷＩ，ＵＳＡ）を使用することによってなどの微粒子衝突が挙げられる。
【0206】
タンパク質を産生するために使用される宿主細胞は、使用される細胞型に応じて、様々な培地中で培養され得る。Ｈａｍ’ｓ Ｆｌ０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭｌー１６４０（Ｓｉｇｍａ）、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）Ｓｉｇｍａ）、などの市販の培地は、哺乳類細胞の培養に好適である。本明細書で考察される他の細胞型を培養するための培地は、当該技術分野において既知である。
【0207】
タンパク質の単離
タンパク質を単離するための方法は、当該技術分野において既知であり、かつ／又は本明細書に記載される。
タンパク質を単離するための方法は、当該技術分野において既知であり、かつ／又は本明細書に記載される。
【0208】
タンパク質が培地中に分泌される場合、かかる発現系からの上清は、まず、市販のタンパク質濃度フィルター、例えば、アミコン又はミリポアペリコン限外濾過ユニットを使用して濃縮され得る。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤は、タンパク質分解を阻害するための前述のステップのいずれかに含まれてもよく、外来性汚染物質の増殖を防止するために抗生物質が含まれてもよい。代替的に、又は追加的に、上清を、例えば連続遠心分離を使用して、タンパク質を発現する細胞から濾過及び／又は分離することができる。
【0209】
細胞から調製したタンパク質は、例えば、イオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー又はプロテインＧクロマトグラフィー）、又は前述のものの任意の組み合わせを使用して精製することができる。これらの方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、ＷＯ１９９９／５７１３４又はＥｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）に記載されている。
【0210】
当業者はまた、タンパク質が、精製又は検出を容易にするためのタグ、例えば、ポリヒスチジンタグ、例えば、ヘキサヒスチジンタグ、インフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、サルウイルス５（Ｖ５）タグ、フラッグタグ、又はグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグを含むように修飾することができることを認識するであろう。得られたタンパク質を、親和性精製などの当該技術分野で既知の方法を使用して精製する。例えば、ヘキサ－ｈｉｓタグを含むタンパク質は、タンパク質を含む試料を、固体又は半固体支持体上に固定化されたヘキサ－ｈｉｓタグに特異的に結合するニッケル－ニトリロ三酢酸（Ｎｉ－ＮＴＡ）と接触させ、試料を洗浄して非結合タンパク質を除去し、その後、結合タンパク質を溶出することによって精製される。代替的に、又は加えて、タグに結合するリガンド又は抗体が、親和性精製方法で使用される。
【0211】
ＣＤ１３１に結合する核酸化合物
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、核酸アプタマー（適応性オリゴマー）である。アプタマーは、特定の標的分子、例えば、タンパク質又は小分子、例えば、ＣＤ１３１に結合する能力を提供する二次及び／又は三次構造を形成することができる一本鎖オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド類似体である。したがって、アプタマーは、抗体に対するオリゴヌクレオチド類似体である。一般に、アプタマーは、約１５～約１００ヌクレオチド、例えば、約１５～約４０ヌクレオチド、例えば、約２０～約４０ヌクレオチドを含み、なぜなら、これらの範囲内にある長さのオリゴヌクレオチドは、従来の技術によって調製することができるからである。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、核酸アプタマー（適応性オリゴマー）である。アプタマーは、特定の標的分子、例えば、タンパク質又は小分子、例えば、ＣＤ１３１に結合する能力を提供する二次及び／又は三次構造を形成することができる一本鎖オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド類似体である。したがって、アプタマーは、抗体に対するオリゴヌクレオチド類似体である。一般に、アプタマーは、約１５～約１００ヌクレオチド、例えば、約１５～約４０ヌクレオチド、例えば、約２０～約４０ヌクレオチドを含み、なぜなら、これらの範囲内にある長さのオリゴヌクレオチドは、従来の技術によって調製することができるからである。
【0212】
アプタマーは、アプタマーのライブラリから単離され得るか、又はアプタマーのライブラリから同定され得る。アプタマーライブラリは、例えば、ランダムオリゴヌクレオチドをベクター（又はＲＮＡアプタマーの場合には発現ベクター）にクローニングすることによって産生され、ランダム配列は、ＰＣＲプライマーの結合部位を提供する既知の配列に隣接する。所望の生物活性を提供する（例えば、ＣＤ１３１に特異的に結合する）アプタマーが選択される。活性が増加したアプタマーは、例えば、ＳＥＬＥＸ（指数関数的増加によるリガンドの系統的展開）を使用して選択される。アプタマーライブラリの作製及び／又はスクリーニングのための好適な方法は、例えば、Ｅｌｌｏｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｎａｔｕｒｅ ３４６：８１８－２２，１９９０、ＵＳ５２７０１６３、及び／又はＵＳ５４７５０９６に記載されている。
【0213】
化合物のアッセイ活性
ＣＤ１３１への結合
タンパク質（例えば、ＣＤ１３１）への候補化合物の結合を評価するための方法は、例えば、Ｓｃｏｐｅｓに（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１９９４に）記載されているように、当該技術分野において既知である。そのような方法は、一般に、タンパク質を標識し、固定化された化合物と接触させることを伴う。非特異的結合タンパク質を除去するために洗浄した後、標識の量、及び結果として、結合タンパク質が検出される。当然ながら、タンパク質は固定化され、化合物は標識されることができる。パンニング型アッセイも使用することができる。代替的に、又は追加的に、表面プラズモン共鳴アッセイを使用することができる。結合のレベルは、バイオセンサーを使用して好都合に決定することもできる。
ＣＤ１３１への結合
タンパク質（例えば、ＣＤ１３１）への候補化合物の結合を評価するための方法は、例えば、Ｓｃｏｐｅｓに（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１９９４に）記載されているように、当該技術分野において既知である。そのような方法は、一般に、タンパク質を標識し、固定化された化合物と接触させることを伴う。非特異的結合タンパク質を除去するために洗浄した後、標識の量、及び結果として、結合タンパク質が検出される。当然ながら、タンパク質は固定化され、化合物は標識されることができる。パンニング型アッセイも使用することができる。代替的に、又は追加的に、表面プラズモン共鳴アッセイを使用することができる。結合のレベルは、バイオセンサーを使用して好都合に決定することもできる。
【0214】
任意選択で、ＣＤ１３１の化合物又はそのエピトープの解離定数（Ｋｄ）を決定する。ＣＤ１３１に結合する化合物の「Ｋｄ」又は「Ｋｄ値」は、一例では、放射性標識又は蛍光標識ＣＤ１３１結合アッセイによって測定される。このアッセイは、非標識ＣＤ１３１の滴定シリーズの存在下で、化合物を最小濃度の標識ＣＤ１３１で平衡化させる。非結合ＣＤ１３１を除去するために洗浄した後、標識の量が決定され、これは、タンパク質のＫｄを示す。
【0215】
別の例によれば、Ｋｄ又はＫｄ値は、例えば、固定化ＣＤ１３１又はその領域を有するＢＩＡｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して、表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによって測定される。
【0216】
エピトープマッピング
別の例では、本明細書に記載されるタンパク質によって結合されるエピトープがマッピングされる。エピトープマッピング方法は、当業者には明白であろう。例えば、目的のエピトープを含むＣＤ１３１配列又はその領域にまたがる一連の重複ペプチド、例えば、１０～１５個のアミノ酸を含むペプチドが作製される。次に、タンパク質を各ペプチド及びそれが結合するペプチドに接触させる。これにより、タンパク質が結合するエピトープを含むペプチドの決定が可能になる。複数の非連続ペプチドがタンパク質に結合している場合、タンパク質は立体構造エピトープに結合し得る。
別の例では、本明細書に記載されるタンパク質によって結合されるエピトープがマッピングされる。エピトープマッピング方法は、当業者には明白であろう。例えば、目的のエピトープを含むＣＤ１３１配列又はその領域にまたがる一連の重複ペプチド、例えば、１０～１５個のアミノ酸を含むペプチドが作製される。次に、タンパク質を各ペプチド及びそれが結合するペプチドに接触させる。これにより、タンパク質が結合するエピトープを含むペプチドの決定が可能になる。複数の非連続ペプチドがタンパク質に結合している場合、タンパク質は立体構造エピトープに結合し得る。
【0217】
代替的に、又は加えて、ＣＤ１３１内のアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャン突然変異誘発によって突然変異され、タンパク質結合を低減又は防止する突然変異が決定される。タンパク質の結合を低減又は防止する任意の変異は、タンパク質によって結合されたエピトープ内にある可能性が高い。
【0218】
更なる方法は本明細書に例示され、本開示の固定化タンパク質にＣＤ１３１又はその領域を結合させ、得られる複合体をプロテアーゼで消化することを含む。固定化されたタンパク質に結合したままのペプチドを単離し、例えば質量分析を用いて分析して、それらの配列を決定する。
【0219】
更なる方法は、ＣＤ１３１又はその領域の水素を重水素に変換し、得られたタンパク質を本開示の固定化タンパク質に結合することを含む。次いで、重水素を水素に変換し、ＣＤ１３１又はその領域を単離し、酵素で消化し、例えば、質量分析を用いて、本明細書に記載のタンパク質の結合によって水素への変換から保護されていたであろう重水素を含むそれらの領域を特定するために分析する。
【0220】
代替的に、タンパク質が結合するエピトープは、Ｘ線結晶構造解析によって決定することができる。例えば、タンパク質とＣＤ１３１との間に複合体が形成され、次いで結晶化される。次いで、得られた結晶をＸ線回折分析に供して、複合体中のアミノ酸の原子座標を決定する。エピトープは、Ｘ線回折から決定された原子座標に従って、タンパク質と接触するＣＤ１３１中のアミノ酸を含む。
【0221】
競合的結合の決定
抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９の結合を競合的に阻害するタンパク質を決定するためのアッセイは、当業者には明白であろう。例えば、９Ａ２－ＶＲ２４．２９は、検出可能な標識、例えば、蛍光標識又は放射性標識にコンジュゲートされる。次いで、標識された抗体及び試験タンパク質を混合し、ＣＤ１３１又はその領域（例えば、配列番号１又は５を含むポリペプチド）又はそれを発現する細胞と接触させる。次いで、標識された９Ａ２－ＶＲ２４．２９のレベルを決定し、標識された抗体がタンパク質の非存在下でＣＤ１３１、領域又は細胞と接触させられたときに決定されたレベルと比較する。標識された９Ａ２－ＶＲ２４．２９のレベルが、タンパク質の不在下と比較して試験タンパク質の存在下で低下する場合、タンパク質は、９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害すると考えられる。
抗体９Ａ２－ＶＲ２４．２９の結合を競合的に阻害するタンパク質を決定するためのアッセイは、当業者には明白であろう。例えば、９Ａ２－ＶＲ２４．２９は、検出可能な標識、例えば、蛍光標識又は放射性標識にコンジュゲートされる。次いで、標識された抗体及び試験タンパク質を混合し、ＣＤ１３１又はその領域（例えば、配列番号１又は５を含むポリペプチド）又はそれを発現する細胞と接触させる。次いで、標識された９Ａ２－ＶＲ２４．２９のレベルを決定し、標識された抗体がタンパク質の非存在下でＣＤ１３１、領域又は細胞と接触させられたときに決定されたレベルと比較する。標識された９Ａ２－ＶＲ２４．２９のレベルが、タンパク質の不在下と比較して試験タンパク質の存在下で低下する場合、タンパク質は、９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害すると考えられる。
【0222】
任意選択で、試験タンパク質は、９Ａ２－ＶＲ２４．２９に異なる標識にコンジュゲートされる。この代替標識は、ＣＤ１３１又はその領域若しくは細胞への試験タンパク質の結合のレベルの検出を可能にする。
【0223】
別の例では、タンパク質は、ＣＤ１３１又はその領域（例えば、配列番号１又は５を含むポリペプチド）、又はＣＤ１３１、領域若しくは細胞を９Ａ２－ＶＲ２４．２９と接触させる前に、それを発現する細胞に結合することが許される。タンパク質の非存在下と比較して、タンパク質の存在下での結合した９Ａ２－ＶＲ２４．２９の量の減少は、タンパク質が、ＣＤ１３１への９Ａ２－ＶＲ２４．２９の結合を競合的に阻害することを示す。相互アッセイは、標識されたタンパク質を使用して行うこともでき、最初に９Ａ２－ＶＲ２４．２９がＣＤ１３１に結合することを可能にする。この場合、９Ａ２－ＶＲ２４．２９の不在下と比較して、９Ａ２－ＶＲ２４．２９の存在下でＣＤ１３１に結合した標識タンパク質の減少した量は、タンパク質が、９Ａ２－ＶＲ２４．２９のＣＤ１３１への結合を競合的に阻害することを示す。
【0224】
前述のアッセイのうちのいずれも、例えば、本明細書に記載されるように、ＣＤ１３１及び／又は配列番号１又は５の変異型及び／又は９Ａ２－ＶＲ２４．２９が結合するＣＤ１３１のリガンド結合領域を用いて実行することができる。
【0225】
中和の決定
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＩＬ－３、ＩＬ－５、及び／又はＧＭ－ＣＳＦのＣＤ１３１を含む受容体（例えば、それぞれ、ＩＬ－３Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、及び／又はＧＭ－ＣＳＦ－Ｒ）への結合を低減又は防止する。これらのアッセイは、標識されたＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦ及び／又は標識された化合物を使用して、競合的結合アッセイとして行うことができる。例えば、関連する受容体を発現する細胞を、ＣＤ１３１結合化合物の存在下又は非存在下でＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦと接触させ、結合標識の量を検出する。化合物の非存在下と比較して、ＣＤ１３１結合化合物の存在下での結合標識の量の減少は、化合物が、ＣＤ１３１を含む受容体へのＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦの結合を低減又は防止することを示す。化合物の複数の濃度を試験することによって、ＩＣ５０を決定することができる。すなわち、ＣＤ１３１又はＥＣ５０を含む受容体に結合するＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦの量を減少させる化合物の濃度、すなわち、化合物によって達成されるＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦのＣＤ１３１への結合の最大阻害の５０％を達成するタンパク質の濃度を決定することができる。
一例では、ＣＤ１３１に結合する化合物は、ＩＬ－３、ＩＬ－５、及び／又はＧＭ－ＣＳＦのＣＤ１３１を含む受容体（例えば、それぞれ、ＩＬ－３Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、及び／又はＧＭ－ＣＳＦ－Ｒ）への結合を低減又は防止する。これらのアッセイは、標識されたＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦ及び／又は標識された化合物を使用して、競合的結合アッセイとして行うことができる。例えば、関連する受容体を発現する細胞を、ＣＤ１３１結合化合物の存在下又は非存在下でＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦと接触させ、結合標識の量を検出する。化合物の非存在下と比較して、ＣＤ１３１結合化合物の存在下での結合標識の量の減少は、化合物が、ＣＤ１３１を含む受容体へのＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦの結合を低減又は防止することを示す。化合物の複数の濃度を試験することによって、ＩＣ５０を決定することができる。すなわち、ＣＤ１３１又はＥＣ５０を含む受容体に結合するＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦの量を減少させる化合物の濃度、すなわち、化合物によって達成されるＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦのＣＤ１３１への結合の最大阻害の５０％を達成するタンパク質の濃度を決定することができる。
【0226】
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、白血病細胞株ＴＦ－１のＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦ媒介性増殖を低減又は防止する。例えば、ＴＦ－１細胞は、増殖を停止するのに十分な時間（例えば、２４～４８時間）、ＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦなしで培養される。次いで、細胞を、ＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦ及び様々な濃度のＣＤ１３１結合化合物の存在下で培養する。対照細胞は、化合物（陽性対照）又はＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦ（陰性対照）と接触しない。細胞増殖は、次いで、標準的な技法、例えば、３Ｈ－チミジンの組み込みを使用して評価される。ＩＬ－３の存在下で細胞増殖を陽性対照未満のレベルに減少又は防止するＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－３シグナル伝達を中和すると考えられる。複数の濃度のＣＤ１３１結合化合物を試験することによって、ＩＣ５０を決定する。
【0227】
別の例では、ＣＤ１３１結合化合物は、ＳＴＡＴ－５活性化を阻害又は防止する。例えば、ＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦの存在下でインターフェロン調節因子１（ｉｒｆ１）応答エレメントの制御下にあるβ－ラクタマーゼレポーター遺伝子を含む細胞（例えば、ＴＦ－１細胞）。好適な細胞は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能である。細胞をまた、好適な基質（例えば、ＣＣＦ２又はＣＣＦ４などの負に帯電した蛍光β－ラクタマーゼ基質）と接触させ、決定されたシグナルの変化（例えば、蛍光）を決定する。陽性対照（すなわち、化合物の非存在下でＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦと接触した細胞）におけるシグナルの変化の減少は、化合物がＩＬ－３及び／又はＧＭ－ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ－５シグナル伝達を低減又は防止することを示す。
【0228】
更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、免疫細胞である。例えば、ＣＤ１３１結合化合物は、好中球細胞サイズのＧＭ－ＣＳＦ誘導増加を低減又は阻害することによって決定される、ＧＭ－ＣＳＦによる単離されたヒト好中球の活性化を低減又は阻害する。例えば、好中球（例えば、約１×１０５細胞）を、ＣＤ－１３１結合タンパク質及びＧＭ－ＣＳＦの存在下で好適な時間（例えば、約２４時間）培養する。次いで、細胞を固定し（例えば、ホルムアルデヒドで）、フローサイトメトリーを使用して前方散乱について分析する。
【0229】
一例では、ＣＤ１３１結合化合物は、ヒト好塩基球によるＩＬ－３誘導ＩＬ－８分泌を低減又は阻害する。例えば、好塩基球（例えば、約１×１０５細胞）を、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３の存在下で、好適な時間（例えば、２４時間）培養する。ＩＬ－８分泌は、次いで、例えば、例えば、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから入手可能であるように、ＥＬＩＳＡを使用して評価される。
【0230】
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－３媒介性生存又はｐＤＣを低減又は予防する。例えば、ｐＤＣを、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３の存在下で、好適な時間（例えば、２４時間）培養する。次いで、細胞生存を、例えば、ＬｏｎｚａからのＶｉａＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓ Ｋｉｔなどの標準的な方法を使用して評価する。
【0231】
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、フローサイトメトリーによって評価された前方散乱の変化を評価することによって決定されるように、ＩＬ－５によるヒト末梢血好酸球の活性化を低減又は防止する。例えば、好酸球（例えば、約１×１０５細胞）を、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－５の存在下で、好適な時間（例えば、約２４時間）培養する。次いで、細胞を固定し（例えば、ホルムアルデヒドで）、フローサイトメトリーを使用して前方散乱における変化について評価する。
【0232】
更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－５及び／又はＧＭ－ＣＳＦ及び／又はＩＬ－３の存在下でのヒト末梢血好酸球の生存を低下させるか又は防止する。例えば、好酸球（例えば、約１×１０４細胞）を、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－５及び／又はＧＭ－ＣＳＦ及び／又はＩＬ－３の存在下で、好適な時間（例えば、約５日間）、並びに標準方法（例えば、ＬｏｎｚａからのＶｉａＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓ Ｋｉｔ）を使用して評価された細胞数の存在下で培養する。
【0233】
なおも更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導性ＴＮＦα放出を低減又は防止する。例えば、ヒト培養肥満細胞（例えば、１０週齢の末梢血由来細胞）は、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３の存在下で培養される。次いで、ＴＮＦα分泌のレベルを、例えば、ＥＬＩＳＡによって評価する。
【0234】
更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、ヒト肥満細胞からのＩＬ－３誘導性ＩＬ－１３放出を低減又は防止する。例えば、ヒト培養肥満細胞（例えば、１０週齢の末梢血由来細胞）は、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３の存在下で培養される。次いで、ＩＬ－１３分泌のレベルを、例えば、ＥＬＩＳＡによって評価する。
【0235】
更なる例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－３及び／又はＩＬ－５及び／又はＧＭ－ＣＳＦによるヒト肥満細胞からのＩｇＥ媒介性ＩＬ－８放出の増強を低減又は防止する。例えば、ヒト培養肥満細胞（例えば、１０週齢の末梢血由来細胞）は、ＣＤ１３１結合化合物及びＩＬ－３／ＩＬ－５／ＧＭ－ＣＳＦの存在下で培養される（例えば、約４８時間）。次いで、細胞を、ＩｇＥ（例えば、ヒト骨髄腫ＩｇＥ）とともに、好適な時間（例えば、約２４時間）培養し、ＩＬ－８分泌を、例えばＥＬＩＳＡによって評価する。
【0236】
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、及びＩＬ－５の存在下で培養されたＣＤ３４＋ヒト骨髄細胞（又は臍帯血細胞）によるＣＦＵ－ＧＭの形成を低減又は防止する。例えば、ＣＤ３４＋細胞（例えば、約１×１０３細胞）を、ＣＤ１３１結合化合物の存在下で（例えば、ウシのウシ血清アルブミン、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、及びＩＬ－５を補充したメチルセルロース（例えば、１％メチルセルロース）上で）培養する。細胞を好適な時間（例えば、約１６日間）培養し、その後に形成されたコロニーの数を列挙する。
【0237】
更なる例では、ＣＤ１３１結合化合物は、炎症性気道疾患又は鼻ポリープ症に罹患している対象からの痰又は鼻ポリープ組織からの免疫細胞（例えば、好酸球）の生存を低下させるか、又は死を誘導する。例えば、免疫細胞は、ＩＬ－３及び／又はＩＬ－５及び／又はＧＭ－ＣＳＦ及びタンパク質又は抗体の存在下で培養される。次いで、標準的な方法を用いて、例えば、アネキシン－Ｖ発現を検出することによって、例えば、蛍光活性化細胞選別を用いて、細胞死を評価する。
【0238】
別の例では、ＣＤ１３１結合化合物は、好塩基球からのＩＬ－３媒介性ヒスタミン放出を低減又は防止する。例えば、好塩基球を含む低密度白血球を、ＩｇＥ、ＩＬ－３、及び様々な濃度の抗体又は抗原結合断片とインキュベートする。対照細胞は、免疫グロブリン（陽性対照）又はＩＬ－３（陰性対照）を含まない。次いで、放出されたヒスタミンのレベルを、標準的な技法、例えば、ＲＩＡを使用して評価する。ＩＬ－３シグナル伝達を中和するために、陽性対照よりも低いレベルにヒスタミン放出のレベルを低下させるＣＤ１３１結合化合物が考えられる。一例では、減少のレベルは、タンパク質濃度と相関する。ＩＬ－３媒介性ヒスタミン放出を評価するための例示的な方法は、例えば、Ｌｏｐｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１４５：６９，１９９０に記載されている。
【0239】
ＩＬ－３シグナル伝達中和を評価するための別のアッセイは、ＣＤ１３１結合化合物が内皮細胞に対するＩＬ－３媒介作用を低減又は防止するか否かを決定することを含む。例えば、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、ＩＬ－３（任意選択で、ＩＦＮ－γを用いて）及び様々な濃度のＣＤ１３１結合化合物の存在下で培養される。次いで、分泌されたＩＬ－６の量を、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価する。対照培養物は、ＣＤ１３１結合化合物（陽性対照）又はＩＬ－３（陰性対照）を含まない。ＩＬ－３の存在下でＩＬ－６産生を陽性対照未満のレベルに減少又は防止するＣＤ１３１結合化合物は、ＩＬ－３シグナル伝達を中和すると考えられる。
【0240】
本開示では、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－５又はＩＬ－３シグナル伝達の中和を評価するための他の方法が企図される。
【0241】
エフェクター機能の決定
本明細書で考察されるように、いくつかのＣＤ１３１結合化合物は、エフェクター機能が低減されているか、又はエフェクター機能（又はエフェクター機能が強化されている）を有する。ＡＤＣＣ活性を評価する方法は当該技術分野において既知である。
本明細書で考察されるように、いくつかのＣＤ１３１結合化合物は、エフェクター機能が低減されているか、又はエフェクター機能（又はエフェクター機能が強化されている）を有する。ＡＤＣＣ活性を評価する方法は当該技術分野において既知である。
【0242】
一例では、ＡＤＣＣ活性のレベルは、５１Ｃｒ放出アッセイ、ユーロピウム放出アッセイ、又は３５Ｓ放出アッセイを使用して評価される。これらのアッセイの各々において、ＣＤ１３１を発現する細胞を、列挙された化合物のうちの１つ以上とともに、かつ化合物が細胞に取り込まれるのに十分な条件下で培養する。３５Ｓ放出アッセイの場合、ＣＤ１３１を発現する細胞を、３５Ｓ標識メチオニン及び／又はシステインで、標識アミノ酸が新たに合成されたタンパク質に組み込まれるのに十分な時間培養することができる。次いで、細胞を、ＣＤ１３１結合化合物の存在下又は非存在下、並びに免疫エフェクター細胞、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及び／又はＮＫ細胞の存在下で培養する。細胞培養培地中の５１Ｃｒ、ユーロピウム放出アッセイ、及び／又は３５Ｓ放出の量が、次いで検出され、ＣＤ１３１結合化合物の非存在下と比較して、ＣＤ１３１結合化合物の存在におけるほとんど又は全くの変化は、タンパク質が、エフェクター機能又は増強されたエフェクター機能を示すＣＤ１３１結合化合物の非存在下と比較して（又はＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含むＣＤ１３１結合化合物の存在下と比較して増加して）、低減されたエフェクター機能及び増加した量を有することを示す。タンパク質によって誘導されるＡＤＣＣのレベルを評価するためのアッセイを開示する例示的な刊行物には、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３，１９８６及びＢｒｕｇｇｅｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１，１９８７が挙げられる。
【0243】
タンパク質によって誘導されるＡＤＣＣのレベルを評価するための他のアッセイとしては、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．ＣＡ，ＵＳＡ）又はＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＷＩ，ＵＳＡ）が挙げられる。
【0244】
Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、ＣＤ１３１結合化合物がＣ１ｑに結合することができ、ＣＤＣを誘導し得ることを確認してもよい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３，１９９６を参照されたい）。
【0245】
半減期の決定
本開示によって包含されるいくつかのタンパク質は、改善された半減期を有し、例えば、非改変タンパク質と比較して、その半減期を延長するように修飾される。改善された半減期を有するタンパク質を決定するための方法は、当業者には明白であろう。
本開示によって包含されるいくつかのタンパク質は、改善された半減期を有し、例えば、非改変タンパク質と比較して、その半減期を延長するように修飾される。改善された半減期を有するタンパク質を決定するための方法は、当業者には明白であろう。
【0246】
本開示のタンパク質の半減期は、例えば、インビボ薬物動態研究によって、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：５４２，１９９４に記載される方法に従って測定することができる。この方法によれば、放射性標識タンパク質をマウスに静脈内注射し、その血漿濃度を、時間の関数として、例えば注射後３分～７２時間で定期的に測定する。代替的に、又は追加的に、他の種、例えば、カニクイザル及びヒトを使用することができ、並びに／又は放射標識されていないタンパク質を注入し、その後、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して検出することができる。このようにして得られるクリアランス曲線は、二相性、すなわち、α相及びβ相であるべきである。タンパク質のインビボ半減期の決定のために、β相におけるクリアランス率を計算し、野生型又は非改変タンパク質のクリアランス率と比較する。
【0247】
タンパク質の胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合の相対的親和性はまた、その相対的なインビボ半減期を示すことができる（例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：２４２９，１９９４を参照されたい）。
【0248】
治療有効性
ＣＤ１３１に結合する化合物の治療有効性は、化合物を投与されていない対象と比較して、化合物を投与された対象における疾患又は症状の重症度を比較することによって評価することができる。代替的に、又は追加的に、候補化合物の治療有効性は、動物モデルで評価することができる。治療有効性を評価するための好適なアッセイは、ＣＤ１３１結合化合物による中和を決定することに関連して、上記に記載されている。
ＣＤ１３１に結合する化合物の治療有効性は、化合物を投与されていない対象と比較して、化合物を投与された対象における疾患又は症状の重症度を比較することによって評価することができる。代替的に、又は追加的に、候補化合物の治療有効性は、動物モデルで評価することができる。治療有効性を評価するための好適なアッセイは、ＣＤ１３１結合化合物による中和を決定することに関連して、上記に記載されている。
【0249】
一例では、状態を治療するためのタンパク質の有効性は、インビボアッセイを使用して評価される。
【0250】
一例では、ＣＤ１３１結合化合物は、非ヒト動物（例えば、非ヒト霊長類）に投与され、循環中又は組織若しくは他の試料（例えば、炎症部位の皮膚組織）中の免疫細胞（例えば、好酸球）の数／レベルが評価される。投与前及び／又はタンパク質が投与されていない対照哺乳類と比較して、免疫細胞の数／レベルを低下させるＣＤ１３１結合化合物は、疾患又は状態の治療に好適であると考えられる。
【0251】
一例では、ＣＤ１３１結合化合物は、アレルギー性接触性皮膚炎のモデルにおいて試験される。そのようなモデルでは、非ヒト哺乳動物（例えば、マウスなどのげっ歯類）は、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン（ＤＮＦＢ）を腹部に上皮塗布することによって感作される。その後、哺乳類は、耳の各側面にＤＮＦＢを上皮塗布することによって（例えば、５日後に）刺激される。哺乳動物にＣＤ１３１結合化合物を投与し、炎症部位における、ベースラインからの（すなわち、投与前の）耳の厚さの変化、及び／又は免疫細胞、例えば、好中球、肥満細胞若しくはＴ細胞のレベルを、標準的な技法を使用して評価又は推定する。化合物が投与されていない対照哺乳動物と比較して、耳の厚さの変化を低下させ、かつ／又は免疫細胞のレベルを低下させるＣＤ１３１結合化合物は、疾患又は状態の治療に好適であると考えられる。
【0252】
別の例では、ＣＤ１３１結合化合物は、受動的皮膚アナフィラキシーのモデルで試験され、例えば、抗ジニトロフェニル（ＤＮＰ）－ＩｇＥに感作され、その後ＤＮＰ－ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）によって刺激された非ヒト哺乳類（例えば、マウスなどのげっ歯類）に、ＣＤ１３１結合化合物を投与し、ベースライン（すなわち、投与前）からの耳の厚さの変化及び／又はサイトカイン（ＴＮＦ又はＩＬ－１３）のレベルの変化を、標準的な技術を使用して評価又は推定する。化合物が投与されていない対照哺乳動物と比較して、耳の厚さの変化を低下させ、かつ／又はサイトカインのレベルを低下させるＣＤ１３１結合化合物は、疾患又は状態の治療に好適であると考えられる。
【0253】
別の例では、ＩＦＮα又はＴＮＦαなどの炎症性サイトカインのレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して、哺乳動物の循環中に検出される。化合物が投与されていない対照哺乳類と比較して、サイトカインのレベルを低下させるＣＤ１３１結合化合物は、疾患又は状態の治療に好適であると考えられる。
【0254】
組成物
いくつかの例では、本明細書に記載のＣＤ１３１結合化合物は、経口、非経口、吸入スプレーによる、吸着、吸収、局所、直腸、経鼻、経口、膣、脳室内、従来の無毒の薬学的に許容される担体を含有する投与製剤中に埋め込まれたリザーバを介して、又は任意の他の好都合な投与形態によって投与され得る。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、くも膜下腔内、心室内、胸骨内、ポリップ内、並びに頭蓋内注射又は輸注技術を含む。
いくつかの例では、本明細書に記載のＣＤ１３１結合化合物は、経口、非経口、吸入スプレーによる、吸着、吸収、局所、直腸、経鼻、経口、膣、脳室内、従来の無毒の薬学的に許容される担体を含有する投与製剤中に埋め込まれたリザーバを介して、又は任意の他の好都合な投与形態によって投与され得る。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、くも膜下腔内、心室内、胸骨内、ポリップ内、並びに頭蓋内注射又は輸注技術を含む。
【0255】
ＣＤ１３１結合化合物を、対象に投与するための好適な形態（例えば、医薬組成物）に調製するための方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０）及びＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８４）に記載される方法などが挙げられる。
【0256】
本開示の医薬組成物は、非経口投与、例えば、静脈内投与、又は臓器若しくは関節の体腔若しくは管腔への投与に特に有用である。投与用組成物は、一般に、薬学的に許容される担体、例えば水性担体中に溶解したＣＤ１３１結合化合物の溶液を含む。様々な水性担体、例えば、緩衝生理食塩水などを使用することができる。組成物は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤などの生理学的条件、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを近似するために必要に応じて、薬学的に許容される補助物質を含有し得る。これらの製剤中の本開示のＣＤ１３１結合化合物の濃度は、広範囲に変化し得、主に、選択される特定の投与様式及び患者のニーズに応じて、流体体積、粘度、体重などに基づいて選択される。例示的な担体として、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。混合油及びエチルオレイン酸などの非水ビヒクルも使用し得る。リポソームはまた、担体として使用してもよい。ビヒクルは、等張性及び化学的安定性を向上させる少量の添加剤、例えば、緩衝剤及び防腐剤を含有し得る。
【0257】
製剤化に際して、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、投薬製剤に適合する方法で、治療／予防的に有効な量で投与される。製剤は、上述の注射用溶液の種類などの様々な剤形で容易に投与されるが、他の薬学的に許容される形態、例えば、経口投与のための錠剤、丸剤、カプセル剤又は他の固体、坐剤、ペッサリー、鼻液又はスプレー、エアロゾル、吸入剤、リポソーム形態なども企図される。医薬「徐放」カプセル又は組成物も使用してもよい。徐放製剤は、一般に、長期間にわたって一定の薬物レベルを与えるように設計されており、本開示のＣＤ１３１結合化合物を送達するために使用され得る。
【0258】
併用療法
一例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、本明細書に記載の状態を治療するのに有用な別の化合物と組み合わせて、併用又は追加の治療ステップとして、又は治療用製剤の追加の成分として投与される。
一例では、本開示のＣＤ１３１結合化合物は、本明細書に記載の状態を治療するのに有用な別の化合物と組み合わせて、併用又は追加の治療ステップとして、又は治療用製剤の追加の成分として投与される。
【0259】
例えば、他の化合物は、抗炎症化合物である。代替的に、又は追加的に、他の化合物は免疫抑制剤である。代替的に、又は追加的に、他の化合物は、プレドニゾン及び／又はプレドニゾロンなどのコルチコステロイドである。代替的に、又は追加的に、他の化合物はメトトレキサートである。代替的に、又は追加的に、他の化合物は、シクロホスファミドである。代替的に、又は追加的に、他の化合物は、ミコフェノール酸モフェチルである。代替的に、又は追加的に、他の化合物は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ又はオファツムマブ）である。代替的に、又は追加的に、他の化合物は、抗ＣＤ２２抗体（例えば、エプラツズマブ）である。代替的に、又は追加的に、他の化合物は、抗ＴＮＦ抗体（例えば、インフリキシマブ又はアダリムマブ又はゴリムマブ）若しくは可溶性ＴＮＦ受容体（例えば、エタネルセプト）である。代替的に、又は追加的に、他の化合物は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、アバタセプト、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ）である。代替的に、又は追加的に、他の化合物は、抗ＩＬ－６抗体である。代替的に、又は追加的に、他の化合物は、ＢＬｙｓアンタゴニスト、例えば、抗ＢＬｙｓ抗体（例えば、ベリムマブ）である。
【0260】
本開示はまた、炎症性皮膚状態を有する対象を治療するために必要なコルチコステロイドの投与量を低減するための方法を提供し、この方法は、本明細書に記載のＣＤ１３１結合化合物とコルチコステロイドとを同時投与することを含み、コルチコステロイドは、単独で又はＣＤ１３１結合化合物の不在下で投与された場合よりも低用量で投与される。ＣＤ１３１結合化合物及びコルチコステロイドは、対象に重複する効果を有する（例えば、両方が同時に対象内で活性である）ような方法でのみ、同時に投与される必要はない。
【0261】
一例では、ＣＤ１３１結合化合物は、他の療法と同時に投与される。一例では、ＣＤ１３１結合化合物は、他の療法の前に投与される。一例では、ＣＤ１３１結合化合物は、他の療法後に投与される。
【0262】
いくつかの例では、ＣＤ１３１結合化合物は、細胞と組み合わせて投与される。いくつかの例では、細胞は、幹細胞、例えば間葉系幹細胞である。いくつかの例では、ＣＤ１３１結合化合物シグナル伝達は、遺伝子療法と組み合わせて投与される。
【0263】
投与量及び投与時期
本開示のＣＤ１３１結合化合物の好適な投与量は、特定のＣＤ１３１結合化合物、治療されるべき状態、及び／又は治療される対象に応じて変化する。例えば、準最適投与量から開始し、最適又は有用な投与量を決定するために投与量を漸増的に修正することによって、好適な投与量を決定することは、熟練した医師の能力の範囲内である。代替的に、治療／予防のための適切な投与量を決定するために、細胞培養アッセイ又は動物研究からのデータを使用し、好適な用量は、毒性がほとんど又はまったくない活性化合物のＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、用いられる投与形態及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で変化し得る。治療的／予防的な有効量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。用量は、細胞培養において決定されるＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する化合物の濃度又は量）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルにおいて製剤化されてもよい。そのような情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
本開示のＣＤ１３１結合化合物の好適な投与量は、特定のＣＤ１３１結合化合物、治療されるべき状態、及び／又は治療される対象に応じて変化する。例えば、準最適投与量から開始し、最適又は有用な投与量を決定するために投与量を漸増的に修正することによって、好適な投与量を決定することは、熟練した医師の能力の範囲内である。代替的に、治療／予防のための適切な投与量を決定するために、細胞培養アッセイ又は動物研究からのデータを使用し、好適な用量は、毒性がほとんど又はまったくない活性化合物のＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、用いられる投与形態及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で変化し得る。治療的／予防的な有効量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。用量は、細胞培養において決定されるＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する化合物の濃度又は量）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルにおいて製剤化されてもよい。そのような情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【0264】
いくつかの例では、本開示の方法は、予防又は治療有効量の本明細書に記載のタンパク質を投与することを含む。
【0265】
「治療有効量」という用語は、治療を必要とする対象に投与されると、対象の予後及び／又は状態を改善し、かつ／又は本明細書に記載の臨床状態の１つ以上の症状を、その状態の臨床診断又は臨床的特徴として観察され、受け入れられるレベルよりも低いレベルまで低減又は阻害する量である。対象に投与される量は、一般的な健康、他の疾患、年齢、性別、遺伝子型、及び体重などの、治療される状態の特定の特性、治療される状態の種類及び段階、投与方法、及び対象の特性に依存する。当業者であれば、これら及び他の因子に応じて適切な用量を決定することができるであろう。したがって、この用語は、本開示を特定の量、例えば、タンパク質の重量又は量に限定するものではなく、本開示は、対象において記載された結果を達成するのに十分な量のＣＤ１３１結合化合物を包含する。
【0266】
本明細書で使用される場合、「予防有効量」という用語は、臨床状態の１つ以上の検出可能な症状の発症を予防又は阻害又は遅延させるのに十分な量のタンパク質を意味すると解釈される。当業者は、そのような量が、例えば、投与される特定のＣ１３１結合タンパク質及び／又は特定の対象及び／又は状態の種類若しくは重症度若しくは状態のレベル及び／又は状態に対する素因（遺伝的又はその他の場合）に応じて変化することを認識するであろう。したがって、この用語は、本開示を特定の量、例えば、ＣＤ１３１結合化合物の重量又は量に限定するものではなく、本開示は、対象において記載された結果を達成するのに十分な量のＣ１３１結合タンパク質を包含する。
【0267】
本明細書に記載のＣＤ１３１結合化合物のインビボ投与について、通常の投薬量は、１日当たり固体の体重の約１０ｎｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上であってもよい。治療する疾患又は障害の重症度に応じて、数日間以上にわたって繰り返し投与する場合、症状の所望の抑制が達成されるまで治療を維持することができる。
【0268】
いくつかの例では、ＣＤ１３１結合化合物は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ若しくは約２ｍｇ／ｋｇ若しくは５ｍｇ／ｋｇの初期（又は負荷）用量で投与される。次いで、ＣＤ１３１結合化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ又は０．５ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇの低い維持用量で投与され得る。維持用量は、７～３０日ごと、例えば、１０～１５日ごと、例えば、１０日又は１１日又は１２日又は１３日又は１４日又は１５日ごとに投与されてもよい。
【0269】
いくつかの例では、ＣＤ１３１結合化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。例えば、ＣＤ１３１結合化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．２ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．５ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇ又は１．５ｍｇ／ｋｇの用量で（例えば、より高い負荷用量又はより低い維持用量なしで）投与される。いくつかの例では、多数の用量が、例えば、７～３０日ごと、例えば、１０～２２日ごと、例えば、１０～１５日ごと、例えば、１０日又は１１日又は１２日又は１３日又は１４日又は１５日又は１６日又は１７日又は１８日又は１９日又は２０日又は２１日又は２２日ごとに投与される。例えば、ＣＤ１３１結合化合物は、７日ごと、又は１４日ごと、又は２１日ごとに投与される。
【0270】
いくつかの例では、治療を開始する時点で、哺乳動物に、連続７日以内、又は連続６日以内、又は連続５日以内、又は連続４日以内でＣＤ１３１結合化合物を投与する。
【0271】
治療に適切に応答しない哺乳動物の場合、１週間に複数回投与してもよい。代替的に、又は加えて、増加する用量が投与され得る。
【0272】
別の例では、有害反応を経験している哺乳類の場合、初期（又は負荷）用量は、１週間に数日にわたって、又は多数の連続した日にわたって分割され得る。
【0273】
本開示の方法によるＣＤ１３１結合化合物の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的又は予防的であるかどうか、及び当業者に既知の他の要因に応じて、連続的又は断続的であり得る。ＣＤ１３１結合化合物の投与は、事前に選択された期間にわたって本質的に連続的であってもよく、又は一連の間隔をあけた用量であってもよく、例えば、状態の発症中又は発症後のいずれかであってもよい。
【0274】
キット
本開示の別の例は、上記のような炎症性皮膚状態の治療又は予防に有用な化合物を含有するキットを提供する。
本開示の別の例は、上記のような炎症性皮膚状態の治療又は予防に有用な化合物を含有するキットを提供する。
【0275】
一例では、キットは、（ａ）本明細書に記載の化合物を任意選択で薬学的に許容される担体又は希釈剤中に含む容器と、（ｂ）対象における炎症性皮膚状態の効果の治療、予防、又は低減のための説明書を含む添付文書と、を含む。
【0276】
本開示のこの例によれば、添付文書は容器上に表示されているか、又は容器に添付されている。好適な容器として、例えば、ボトル、バイアル、注射器などが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、炎症性皮膚状態の治療又は予防に有効であり、かつ滅菌アクセスポートを有し得る組成物を保持又は含有する（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、ＣＤ１３１に結合する化合物である。標識又は添付文書は、組成物が、治療の対象、例えば、炎症性皮膚状態を発症しているか又は発症の危険性がある対象に投与され、化合物及び任意の他の医薬品の投与量及び間隔に関する特定のガイダンスが提供されることを示す。キットは、薬学的に許容される希釈剤緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及び／又はデキストロース溶液を含む追加の容器を更に含んでもよい。キットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及び注射器を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含み得る。
【0277】
本開示は、以下の非限定的な実施例を含む。
【実施例】
【0278】
実施例１：材料及び方法
抗体
ＣＳＬ３１１（ａｈｕ９Ａ２－Ｇ４ｐＫ－ＶＲ２４－２９）は、ヒトβｃ（ＣＤ１３１）ホモ二量体の共通サイトカイン結合部位（部位２）を標的とするヒト化抗体である。重鎖アミノ酸配列は配列番号１４に提供され、軽鎖アミノ酸配列は配列番号１５に提供される。ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（例えば、ｃｈＢＭ４－Ｇ４ｐＫ）を比較のために使用した。
抗体
ＣＳＬ３１１（ａｈｕ９Ａ２－Ｇ４ｐＫ－ＶＲ２４－２９）は、ヒトβｃ（ＣＤ１３１）ホモ二量体の共通サイトカイン結合部位（部位２）を標的とするヒト化抗体である。重鎖アミノ酸配列は配列番号１４に提供され、軽鎖アミノ酸配列は配列番号１５に提供される。ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（例えば、ｃｈＢＭ４－Ｇ４ｐＫ）を比較のために使用した。
【0279】
ＡＣＤ（接触過敏症）モデル
野生型（ＷＴ）マウス、βｃノックアウト（βｃ－／－／βＩＬ－３ －／－）マウス、並びに（ｉ）ヒトβｃ受容体導入遺伝子、及び（ｉｉ）両方の内因性βサブユニットのノックアウト（βｃ－／－／βＩＬ－３ －／－）に対してホモ接合性のトランスジェニックマウス（「ｈβｃＴｇ」と称される）を用いた。マウスコロニーは、Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙ，ＵｎｉＳＡ ＣＲＩ，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ＨＢ（Ａｄｅｌａｉｄｅ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に収容された。１６～２８週齢のマウスを、オーストラリア国立衛生医学研究評議会の倫理ガイドラインに準拠し、南オーストラリア大学動物倫理委員会の承認（動物倫理承認番号Ｕ２１／１７／）を得て実施した実験に使用した。
野生型（ＷＴ）マウス、βｃノックアウト（βｃ－／－／βＩＬ－３ －／－）マウス、並びに（ｉ）ヒトβｃ受容体導入遺伝子、及び（ｉｉ）両方の内因性βサブユニットのノックアウト（βｃ－／－／βＩＬ－３ －／－）に対してホモ接合性のトランスジェニックマウス（「ｈβｃＴｇ」と称される）を用いた。マウスコロニーは、Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙ，ＵｎｉＳＡ ＣＲＩ，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ＨＢ（Ａｄｅｌａｉｄｅ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に収容された。１６～２８週齢のマウスを、オーストラリア国立衛生医学研究評議会の倫理ガイドラインに準拠し、南オーストラリア大学動物倫理委員会の承認（動物倫理承認番号Ｕ２１／１７／）を得て実施した実験に使用した。
【0280】
最初にマウスを麻酔し、電気シェーバーで後腹側に剃った約３ｃｍ２の面積。ピペットを使用して、３０μｌの０．５％の１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン（ＤＮＦＢ）溶液をマウスの腹部に上皮に塗布した。溶液を乾燥させるために、マウスを５～１０秒間拘束した。アレルゲン感作の５日後、両耳のベースラインの耳介厚さを、ダイヤル厚さゲージ（モデルＧ－１Ａ；Ｏｚａｋｉ ＭＦＧ．Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を使用して測定した。測定直後に、０．２％のＤＮＦＢ溶液１０μｌを右耳介の両側に上皮塗布した（合計２０μｌ）。代替的に、１００％アセトン（ビヒクル）の１０μｌを左耳介の両側に上皮塗布した（合計２０μｌ）。誘発から２４時間後、耳介の厚さを１２日間にわたって２４時間間隔で測定した。耳介の厚さの変化（Δ耳腫脹、ｍｍ）を以下の式によって計算した：（誘発後の毎日の耳の厚さ）－（ベースラインの耳の厚さ）。ＣＳＬ３１１又はアイソタイプｍＡｂ（１０ｍｇ／ｋｇ）を、誘発後１、３、５日目にｈβｃＴｇマウスの尾静脈に静脈内注射した（合計で３回の注射）。実験終了時にマウスを殺処分し、更なる解析のために耳及びリンパ節の両方を収集した。
【0281】
組織学－組織処理
ＤＮＦＢ処置及びビヒクル処置した耳の皮膚試料を組織学的に検査した。組織試料を１０％緩衝ホルマリン中に固定し、処理し、パラフィン中に包埋し、４μｍ切片に切断した。組織脱蝋及び水和のために、組織切片をキシレン（５分×２）、１００％エタノール（４分×２）、７０％エタノール（４分）及び５０％エタノール（４分）中に順次配置し、次いで脱イオン水中で洗浄した。
ＤＮＦＢ処置及びビヒクル処置した耳の皮膚試料を組織学的に検査した。組織試料を１０％緩衝ホルマリン中に固定し、処理し、パラフィン中に包埋し、４μｍ切片に切断した。組織脱蝋及び水和のために、組織切片をキシレン（５分×２）、１００％エタノール（４分×２）、７０％エタノール（４分）及び５０％エタノール（４分）中に順次配置し、次いで脱イオン水中で洗浄した。
【0282】
トルイジンブルー染色
脱蝋した組織切片を、室温で０．２％のトルイジンブルー（ｐＨ１．０、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で９０秒間染色し、次いで水道水ですすいだ。切片をキシレンで脱水し、ＤＰＸ取り付け媒体で取り付けた。Ｈａｍａｍａｔｓｕ ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒ（４０倍、Ａｄｅｌａｉｄｅ顕微鏡検査施設）を使用して耳切片の画像を撮影し、ＮＤＰ Ｖｉｅｗソフトウェア（ｖ２）でエクスポートした。ポリープ全体の面積（ｍｍ２）当たりの肥満細胞（細胞質顆粒が紫色に見える）を、Ｆｕｊｉ Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェア（１．５０ｅ、国立衛生研究所）を使用して評価した。
脱蝋した組織切片を、室温で０．２％のトルイジンブルー（ｐＨ１．０、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で９０秒間染色し、次いで水道水ですすいだ。切片をキシレンで脱水し、ＤＰＸ取り付け媒体で取り付けた。Ｈａｍａｍａｔｓｕ ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒ（４０倍、Ａｄｅｌａｉｄｅ顕微鏡検査施設）を使用して耳切片の画像を撮影し、ＮＤＰ Ｖｉｅｗソフトウェア（ｖ２）でエクスポートした。ポリープ全体の面積（ｍｍ２）当たりの肥満細胞（細胞質顆粒が紫色に見える）を、Ｆｕｊｉ Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェア（１．５０ｅ、国立衛生研究所）を使用して評価した。
【0283】
ヘマトキシリン及びエオシン染色
脱蝋した組織切片を、ヘマトキシリンで３分間染色し、次いで流れる水道水で５分間洗浄した。切片を１％酸エタノール（７０％エタノール中の１％ＨＣｌ）中で５分間区別化させた後、流れる水道水で洗浄し、続いて１％エオシンＹ溶液中で１０分間染色した。切片を水道水で５分間洗浄した後、キシレンで脱水し、ＤＰＸ取り付け媒体で取り付けた。Ｈａｍａｍａｔｓｕ Ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒ（４０倍、Ａｄｅｌａｉｄｅ顕微鏡検査施設）を使用して耳切片の画像を撮影し、ＮＤＰ Ｖｉｅｗソフトウェア（ｖ２）でエクスポートした。
脱蝋した組織切片を、ヘマトキシリンで３分間染色し、次いで流れる水道水で５分間洗浄した。切片を１％酸エタノール（７０％エタノール中の１％ＨＣｌ）中で５分間区別化させた後、流れる水道水で洗浄し、続いて１％エオシンＹ溶液中で１０分間染色した。切片を水道水で５分間洗浄した後、キシレンで脱水し、ＤＰＸ取り付け媒体で取り付けた。Ｈａｍａｍａｔｓｕ Ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒ（４０倍、Ａｄｅｌａｉｄｅ顕微鏡検査施設）を使用して耳切片の画像を撮影し、ＮＤＰ Ｖｉｅｗソフトウェア（ｖ２）でエクスポートした。
【0284】
耳組織のフローサイトメトリー分析
耳組織を背側切片及び腹側切片に分割し、ＲＰＭＩ１６４０培地中のディスパーゼＩＩ溶液（最終濃度２Ｕ／ｍｌ）で３７℃で６０分間消化した。真皮を次いで、鉗子を使用して表皮から分離し、組織をはさみで小片に切断した後、コラゲナーゼＩＶ（最終濃度０．２ｍｇ／ｍＬ）及びＤＮａｓｅＩ（最終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬ）とともに、ＲＰＭＩ１６４０培地中で３７℃で６０分間インキュベートした。消化した組織を７０μｍのナイロン細胞ストレーナー（Ｆａｌｃｏｎ）に通して、単一細胞懸濁液を得た。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％のＦＢＳを有するＰＢＳ）中で洗浄した後、１５分間、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ Ａｑｕａ染色（１／１０００希釈、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅ）及び抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）でインキュベートした。マウスＴ細胞サブセットの検出のために、細胞を、ラット抗マウスＬｙ６Ｃ及びＬｙ６Ｇ（Ｇｒ－１）ＰＥ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＲＢ６－８Ｃ５、１：２００希釈）及びラット抗マウスＦ４／８０ＡＰＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＢＭ８、１：２００希釈）で３０分間、氷上で３０分間インキュベートした。データは上記のように取得した。
耳組織を背側切片及び腹側切片に分割し、ＲＰＭＩ１６４０培地中のディスパーゼＩＩ溶液（最終濃度２Ｕ／ｍｌ）で３７℃で６０分間消化した。真皮を次いで、鉗子を使用して表皮から分離し、組織をはさみで小片に切断した後、コラゲナーゼＩＶ（最終濃度０．２ｍｇ／ｍＬ）及びＤＮａｓｅＩ（最終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬ）とともに、ＲＰＭＩ１６４０培地中で３７℃で６０分間インキュベートした。消化した組織を７０μｍのナイロン細胞ストレーナー（Ｆａｌｃｏｎ）に通して、単一細胞懸濁液を得た。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％のＦＢＳを有するＰＢＳ）中で洗浄した後、１５分間、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ Ａｑｕａ染色（１／１０００希釈、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅ）及び抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）でインキュベートした。マウスＴ細胞サブセットの検出のために、細胞を、ラット抗マウスＬｙ６Ｃ及びＬｙ６Ｇ（Ｇｒ－１）ＰＥ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＲＢ６－８Ｃ５、１：２００希釈）及びラット抗マウスＦ４／８０ＡＰＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＢＭ８、１：２００希釈）で３０分間、氷上で３０分間インキュベートした。データは上記のように取得した。
【0285】
統計分析
正規分布データについては、対応のないｔ検定を使用して異なる群を比較し、ボンフェローニ事後検定を使用した二元配置分散分析を使用して複数の比較を行った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０ｄを使用した。群の上のアスタリスクは、対照に対するその群の有意性のレベルを示し、＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１である。
正規分布データについては、対応のないｔ検定を使用して異なる群を比較し、ボンフェローニ事後検定を使用した二元配置分散分析を使用して複数の比較を行った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０ｄを使用した。群の上のアスタリスクは、対照に対するその群の有意性のレベルを示し、＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１である。
【0286】
ＭＣ－９０３誘発性アトピー性皮膚炎モデル
８～９週齢の雄雌混合のマウスを本研究に使用した。両耳のベースライン耳介厚さを、ダイヤル厚さ計を用いて０日目に測定し、続いて、１００％エタノール２０μｌ又は１００％エタノール中に溶解した２ｎＭのＭＣ－９０３の２０μｌを９日間皮下に処置した。耳介の厚さを、２４時間間隔で１０日間にわたって測定した。耳介の厚さの変化（Δ耳腫脹、ｍｍ）を以下の式によって計算した：（誘発後の毎日の耳の厚さ）－（ベースラインの耳の厚さ）。ＣＳＬ３１１又はアイソタイプｍＡｂ（１０ｍｇ／ｋｇ）を、１、３、５日目にｈβｃＴｇマウスの尾静脈に静脈内注射した（合計で３回の注射）。実験終了時にマウスは安楽死処分された。
８～９週齢の雄雌混合のマウスを本研究に使用した。両耳のベースライン耳介厚さを、ダイヤル厚さ計を用いて０日目に測定し、続いて、１００％エタノール２０μｌ又は１００％エタノール中に溶解した２ｎＭのＭＣ－９０３の２０μｌを９日間皮下に処置した。耳介の厚さを、２４時間間隔で１０日間にわたって測定した。耳介の厚さの変化（Δ耳腫脹、ｍｍ）を以下の式によって計算した：（誘発後の毎日の耳の厚さ）－（ベースラインの耳の厚さ）。ＣＳＬ３１１又はアイソタイプｍＡｂ（１０ｍｇ／ｋｇ）を、１、３、５日目にｈβｃＴｇマウスの尾静脈に静脈内注射した（合計で３回の注射）。実験終了時にマウスは安楽死処分された。
【0287】
実施例２：ＣＳＬ３１１は、接触性皮膚炎のｈβｃＴｇマウスモデルにおける細胞炎症及び組織病理を低減する
ＡＣＤの治療のためのＣＳＬ３１１の治療可能性を確立するために、上皮に塗布されたハプテン、２，４－ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）に対する接触過敏性反応を調べた。ＷＴ、βｃ－／－／βＩＬ－３ －／－、及びｈβｃＴｇマウスを、まず、剃った腹部にＤＮＦＢを塗布することによって感作させ、５日後に、ＤＮＦＢを右耳に塗布し、各マウスの左耳にビヒクル対照を塗布した。耳の厚さ（腫脹）の変化を１２日間毎日測定し、１２日目に細胞の炎症、組織の視覚化、及び上皮の厚さを測定した。ＷＴマウスは、７～８日目にピークに達し、その後落ち着いた耳の厚さの実質的な増加を発現した。しかしながら、βｃサイトカインのいずれにも応答できないβｃ－／－／βＩＬ－３ －／－マウスのＤＮＦＢ処置耳においては、耳の腫脹応答の大きさが著しく低下した（図１）。ビヒクル対照の塗布は、ＤＮＦＢ感作マウスにおいて炎症性応答を誘導しなかった。
ＡＣＤの治療のためのＣＳＬ３１１の治療可能性を確立するために、上皮に塗布されたハプテン、２，４－ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）に対する接触過敏性反応を調べた。ＷＴ、βｃ－／－／βＩＬ－３ －／－、及びｈβｃＴｇマウスを、まず、剃った腹部にＤＮＦＢを塗布することによって感作させ、５日後に、ＤＮＦＢを右耳に塗布し、各マウスの左耳にビヒクル対照を塗布した。耳の厚さ（腫脹）の変化を１２日間毎日測定し、１２日目に細胞の炎症、組織の視覚化、及び上皮の厚さを測定した。ＷＴマウスは、７～８日目にピークに達し、その後落ち着いた耳の厚さの実質的な増加を発現した。しかしながら、βｃサイトカインのいずれにも応答できないβｃ－／－／βＩＬ－３ －／－マウスのＤＮＦＢ処置耳においては、耳の腫脹応答の大きさが著しく低下した（図１）。ビヒクル対照の塗布は、ＤＮＦＢ感作マウスにおいて炎症性応答を誘導しなかった。
【0288】
ＣＳＬ３１１又はアイソタイプ対照抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）を、第２のＤＮＦＢチャレンジの２４時間後にｈβｃＴｇマウスに静脈内注射し、次いで５日目まで隔日注射した（合計３回の注射）。アイソタイプ対照抗体で処置したマウスは、ＷＴマウスと同様の耳腫脹応答を発現した（図１）。対照的に、ＣＳＬ３１１を用いたｈβｃＴｇマウスの処置は、耳の腫脹をβｃ－／－／βＩＬ－３
－／－マウスと同様のレベルまで有意に低下させた（図１）。アイソタイプ対照とＣＳＬ３１１処置のｈβｃＴｇマウスとの間で、感作部位のビヒクル処置された耳又は皮膚に差は認められなかった。ＷＴマウス及びアイソタイプ対照抗体処置ｈβｃＴｇマウスの両方のＤＮＦＢ処置耳は、実質的な皮膚浮腫、細胞浸潤、角化症及び上皮肥大によって特徴付けられた。これらの特徴は、ＣＳＬ３１１で処置したβｃ－／－／βＩＬ－３
－／－マウス及びｈβｃＴｇマウスの両方のＤＮＦＢ処置した耳にほとんど存在しなかった（図２）。これらのデータは、βｃサイトカインシグナル伝達の遮断がこのモデルにおけるＡＣＤの有効な治療法であることが示している。
【0289】
応答のピーク時（６日目）（図６～９）及び応答の回復期中（１２日目）（図３～５）の両方で、非ＤＮＦＢ処置のＷＴマウスと比較して、ＤＮＦＢ処置のＷＴマウスの耳組織で、ＣＤ８＋Ｔ細胞、肥満細胞、好中球、好酸球及びマクロファージの著しい増加が検出された。βｃ－／－／βＩＬ－３
－／－マウスにおけるβｃサイトカインシグナル伝達の欠如は、ＤＮＦＢ処置耳におけるマクロファージを除くこれら全ての細胞型の浸潤を減少させた。アイソタイプ対照抗体で処置したｈβｃＴｇマウスからの耳組織の分析は、ＷＴマウスと同様に、６日目（図６～９）及び１２日目（図３～５）の両方の時点で、ＤＮＦＢ処置耳におけるＣＤ８＋Ｔ細胞、肥満細胞、好中球及び好酸球の著しい増加を明らかにした。ＣＳＬ３１１によるｈβｃＴｇマウスの処置は、ＤＮＦＢ処置後６日目のＣＤ８＋Ｔ細胞（図６）、好中球（図７）、好酸球（図８）、及び肥満細胞（図９）の耳組織蓄積、並びに１２日目の還元された肥満細胞（図３）、好中球（図４）、及び好酸球（図５）を廃止した。したがって、これらのデータは、ＣＳＬ３１１によるＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５シグナル伝達の遮断が、アレルゲン曝露部位における免疫細胞蓄積を制限し、このｈβｃＴｇモデルのＡＣＤにおける病理を効果的に減少させることを示している。
【0290】
ＣＳＬ３１１の効果は、ｈβｃＴｇマウスがＩＬ－３に応答しないため、ＧＭ－ＣＳＦ又はＩＬ－５のいずれかの遮断によって媒介される可能性が高い。更に、これらのデータは、ＣＳＬ３１１がβｃ－／－／βＩＬ－３
－／－マウスに匹敵するレベルに耳腫脹を軽減することができるため、このＡＣＤモデルではβｃサイトカイン駆動の耳腫脹がＧＭ－ＣＳＦ及び／又はＩＬ－５に完全に依存することを示している（図１）。このモデルでＩＬ－３が接触過敏反応に寄与するかどうかを決定的に決定するために、ＩＬ－３－／－マウスにおける耳の厚さの変化を、上述の同じモデルを使用して測定した。ＷＴとＩＬ－３－／－マウスとの間の耳の腫脹応答及び肥満細胞浸潤の差は観察されず、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－５がこのモデルにおけるＡＣＤの主要な調節因子であることを示す。
【0291】
実施例３：ＣＳＬ３１１は、アトピー性皮膚炎のｈβｃＴｇマウスモデルにおける炎症を軽減する
よく特徴付けられたアトピー性皮膚炎（ＡＤ）モデルにおいてＣＳＬ３１１治療の効果を調査した。このモデル（実施例１に記載）では、ビタミンＤ３アナログＭＣ９０３（カルシポトリオールとしても知られる）の毎日の塗布を使用して、皮膚の炎症を誘発させる。得られる表現型には、表皮肥厚、皮膚過形成、及び皮膚における炎症性細胞、特に肥満細胞、好酸球、好塩基球及びＴヘルパータイプ２細胞の増加が含まれる。
よく特徴付けられたアトピー性皮膚炎（ＡＤ）モデルにおいてＣＳＬ３１１治療の効果を調査した。このモデル（実施例１に記載）では、ビタミンＤ３アナログＭＣ９０３（カルシポトリオールとしても知られる）の毎日の塗布を使用して、皮膚の炎症を誘発させる。得られる表現型には、表皮肥厚、皮膚過形成、及び皮膚における炎症性細胞、特に肥満細胞、好酸球、好塩基球及びＴヘルパータイプ２細胞の増加が含まれる。
【0292】
このＭＣ９０３誘導アトピー性皮膚炎モデルにおけるｈβｃＴｇマウスにおけるＣＳＬ３１１の投与は、耳の皮膚肥厚を著しく軽減した（図１０）。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【配列表】
【国際調査報告】