知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-12-13
(54)【発明の名称】老化治療化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 311/30 20060101AFI20231206BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20231206BHJP
A61K 31/352 20060101ALI20231206BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231206BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20231206BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20231206BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20231206BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20231206BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20231206BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20231206BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20231206BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20231206BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20231206BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20231206BHJP
A61P 25/14 20060101ALI20231206BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20231206BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20231206BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20231206BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20231206BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20231206BHJP
A61P 9/06 20060101ALI20231206BHJP
A61P 9/12 20060101ALI20231206BHJP
A61P 27/12 20060101ALI20231206BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20231206BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20231206BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20231206BHJP
A61P 7/06 20060101ALI20231206BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20231206BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20231206BHJP
【ＦＩ】
C07D311/30 CSP
A61P3/00
A61K31/352
A61P43/00 121
A61K45/00
A61P11/00
A61P11/06
A61P13/12
A61P1/16
A61P29/00
A61P1/18
A61P25/28
A61P25/16
A61P25/00
A61P25/14
A61P31/18
A61P19/10
A61P19/02
A61P9/10
A61P9/00
A61P9/06
A61P9/12
A61P27/12
A61P17/00
A61P17/06
A61P27/06
A61P7/06
A61P17/14
A61P3/04
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023534066
(86)(22)【出願日】2021-11-30
(85)【翻訳文提出日】2023-07-18
(86)【国際出願番号】 IB2021061106
(87)【国際公開番号】W WO2022118186
(87)【国際公開日】2022-06-09
(31)【優先権主張番号】102020000029225
(32)【優先日】2020-12-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523205500
【氏名又は名称】ビオネクサ エス．アール．エル．
(74)【代理人】
【識別番号】110000877
【氏名又は名称】弁理士法人ＲＹＵＫＡ国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】コレアーレ、マリオ
(72)【発明者】
【氏名】ガンベラ、ジョバンニ
(72)【発明者】
【氏名】ピタリ、ジョバンニ マリオ
(72)【発明者】
【氏名】ルッソ、ベネラ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084NA14
4C084ZA02
4C084ZA16
4C084ZA36
4C084ZA42
4C084ZA45
4C084ZA55
4C084ZA59
4C084ZA61
4C084ZA70
4C084ZA81
4C084ZA89
4C084ZA92
4C084ZA96
4C084ZB15
4C084ZB33
4C084ZC21
4C084ZC35
4C084ZC55
4C084ZC75
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BA08
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA02
4C086ZA16
4C086ZA36
4C086ZA42
4C086ZA45
4C086ZA55
4C086ZA59
4C086ZA61
4C086ZA70
4C086ZA81
4C086ZA89
4C086ZA92
4C086ZA96
4C086ZB15
4C086ZB33
4C086ZC21
4C086ZC35
4C086ZC55
4C086ZC75
(57)【要約】
以下に示す、式（Ｉ）によるフラボンの合成誘導体を含む老化治療化合物が提供され、（Ｉ）
【化１】
式中Ｒ２～Ｒ６の少なくとも２つがＨであり、残りは個別にＨ、ＯＨ、Ｒ１、ＯＲ１、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＨＲ１、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉから選択され、Ｒ１はラジカルである。クラス：Ａ６１Ｋ３１／００
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）（Ｉ）
【化1】
Ｒ１はラジカルである、
によるフラボンの合成誘導体を含む、老化治療化合物。
【請求項2】
Ｒ１が、Ｈ；
Ｃ１～２４アルキル又はヘテロアルキル、Ｃ１～２４アルケニル又はヘテロアルケニル；Ｃ１～２４アルキニル又はヘテロアルキニル
脂肪酸のアシル残基
から選択される、
請求項１に記載の老化治療化合物。
【請求項3】
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、及びＲ８がＯＨであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６がＨである、
請求項１に記載の老化治療化合物。
【請求項4】
Ｒ１が、【化2】
請求項１から３のいずれか一項に記載の老化治療化合物。
【請求項5】
Ｒ１が、【化3】
請求項１から３のいずれか一項に記載の老化治療化合物。
【請求項6】
Ｒ１が【化4】
Ｒ'１が、
Ｈ；
Ｃ１～２４アルキル又はヘテロアルキル、Ｃ１～２４アルケニル又はヘテロアルケニル；Ｃ１～２４アルキニル又はヘテロアルキニル
脂肪酸のアシル残基、
リンカＬ
から選択され、
ａ、ｂ、ｃは各々０～１２であり、
Ｘ、Ｙ、及びＺは各々、ＣＨ２、Ｏ、Ｎ（Ｒ１）、Ｓ、ＮＨ、ＳＯ、ＳＯ２、ＯＣ（Ｏ）、ＣＯ、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ、ＮＨ－Ｃ（Ｓ）－ＮＨから個別に選択される、
請求項１から４のいずれか一項に記載の老化治療化合物。
【請求項7】
Ｒ'１がリンカＬであり、前記リンカが、【表1】
【請求項8】
特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、気管支拡張症、加齢に関連する肺機能の低下；慢性腎疾患（ＣＫＤ）、間質性腎炎、糸球体硬化症／糸球体腎炎、急性腎臓病（ＡＫＤ）、腎不全；肝線維症、慢性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；膵線維症、慢性膵炎；心筋線維症、梗塞；口腔粘膜下層の線維症；神経変性疾患：アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、軽度認知障害、運動ニューロンの機能不全、ハンチントン病、認知症；神経精神障害；化学療法、放射線治療、ＨＩＶ、幹細胞移植、その他の薬物などによって誘発される毒性又は炎症；骨粗鬆症、変形性関節症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、炎症性腸症候群（ＩＢＳ）、関節リウマチ、口腔粘膜炎、後弯症、椎間板変性、椎間板ヘルニア；脂肪萎縮；サルコペニア、加齢に起因する筋肉／可動性の低下、筋肉疲労；アテローム性動脈硬化症、狭心症、不整脈、心筋症、心筋細胞肥大、うっ血性心不全、冠動脈疾患、頸動脈疾患、心内膜炎、冠動脈血栓症、心筋梗塞、高血圧、大動脈瘤、心臓拡張機能障害、高コレステロール血症、僧帽弁逸脱、末梢血管疾患、心臓ストレス耐性、心臓線維症、脳動脈瘤、及び脳卒中；加齢と老化に関連する希少疾患、例えば再生不良性貧血、先天性角化異常症、レベッツ症候群、ホイエラール－フライダルソン症候群、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、アミロイドーシス、パジェット病、びまん性特発性骨格過骨症（ＤＩＳＨ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）など；糖尿病（２型、１型）、糖尿病性潰瘍、肥満、メタボリックシンドローム；創傷治癒；虚弱；緑内障、黄斑変性、白内障、老眼、及び視力喪失；難聴；加齢に起因する免疫機能の低下（免疫老化）；脱毛症、抜け毛；肝斑、皮膚の変色、湿疹、乾癬、色素沈着過剰、母斑、発疹、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、光線過敏症又は光老化に関連する疾患及び障害、湿疹、そう痒症、感覚異常、湿疹性発疹、好酸球性皮膚症、反応性好中球性皮膚症、天疱瘡皮膚症、皮膚の線維組織細胞増殖、皮膚リンパ腫、及び皮膚狼瘡；腎臓、肝臓、肺、心臓、膵臓又は他の器官の移植という障害のうちの１又は複数の治療のための、請求項１から７のいずれか一項に記載の老化治療化合物。
【請求項9】
請求項１から８のいずれか一項に記載の老化治療化合物を含む、いずれかの先行請求項に記載のセノリティック化合物。
【請求項10】
老化治療薬を製造するための、セノリティクス、セノモルフィック、セノスタティック、老化治療、細胞老化促進剤、及び組織の完全性を保護する化合物から選択される型の他の公知の薬物を併用する、請求項８に記載の老化治療化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、請求項１のプリアンブルに規定されている型の老化治療化合物に関する。
【0002】
老化治療として公知のクラスの薬物が最近開発され、特にセノリティクス、またセノモルフィック及びセノスタティックの薬物を含む。
【0003】
セノリティクスは、使用者に摂取されるときに、ヒト又は動物の身体の老化細胞を選択的に殺傷する物質である。セノモルフィック及びセノスタティックは、老化細胞の分泌に作用し、老化の過程を抑制する。
【0004】
老化細胞は、もはや分化も増殖もできない細胞である。それらはまた、生理学的機能の喪失、アポトーシスへの耐性及び様々な細胞の変化にさらされる。
【0005】
さらに、老化細胞は、虚弱の症状、サルコペニア及び加齢に関連する疾患を含む加齢の表現型に寄与する。老化したアストロサイト及びミクログリアは、神経変性に寄与する。
【0006】
したがって、老化治療、特にセノリティクスの目標は、可能な限り選択的に、老化細胞を排除することで、加齢関連疾患を遅らせ、予防し、軽減し、又は逆行させることである。
【0007】
セノリティック化合物は、例えばＭａｙｏ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ミネソタ州、米国）により、例えば特許出願ＷＯ２０１５１１６７３５Ａ１、ＷＯ２０１９１８３２８２Ａ１、及びＵＳ２０１５２９６７５５Ａ１において研究されてきた。他のセノリティック化合物は、Ｕｎｉｔｙ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社（カリフォルニア州、米国）により、例えば特許出願ＷＯ２０１９２４１５６７Ａ１、ＵＳ２０１９３３０１９９Ａ１、及びＣＡ３０４３１０３Ａ１において開発されてきた。
【0008】
しかしながら、より正確で高性能、又はより安価な老化治療に対する需要が高まっている。
【0009】
この状況下で、本発明の基礎にある技術的課題は、前述の欠点の少なくとも一部を十分に回避することができる老化治療化合物を考案することである。
【0010】
前記技術的課題の範囲で、本発明の重要な目的は、選択的に老化細胞又はその分泌物に対して機能する老化治療化合物を取得することである。
【0011】
別の重要な技術的課題は、その製造が経済的な老化治療化合物を作製することである。
【0012】
技術的課題及び規定されている目的は、添付の請求項１で特許請求されている老化治療化合物により達成される。
【0013】
好ましい実施形態の例が、従属請求項に記載されている。
【0014】
本発明の特徴及び利点は、添付図面を参照して、本発明の好ましい実施形態の詳細な説明によって下記に明らかにされる。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【図1】ａ：本発明に係る化合物によって取得された結果を示す第１のグラフを示す。 ｂ：本発明に係る化合物によって取得された結果を示す第２のグラフを示す。
【図2】ａ：本発明に係る化合物によって取得された結果を示す第３のグラフを示す。 ｂ：本発明に係る化合物によって取得された結果を示す第４のグラフを示す。
【0016】
【図3】ａ：本発明に係る化合物によって取得された結果を示す第５のグラフを示す。 ｂ：本発明に係る化合物によって取得された結果を示す第６のグラフを示す。 ｃ：本発明に係る化合物によって取得された結果を示す第７のグラフを示す。
【0017】
本文書において、測定値、値、形状及び幾何学的言及（例えば、垂直性及び平行性）は、「約」のような単語又は「おおよそ」もしくは「実質的に」などの他の類似の用語と関連付けられる場合、生産及び／又は製造誤差に起因した測定誤差又は不正確を除くと考えられるべきであり、とりわけ関連付けられる値、測定値、形状、又は幾何学的言及からの僅かな逸脱を除くと考えられるべきである。例えば、これらの用語は、値と関連付けられる場合、好ましくは値の１０％以下の逸脱を示す。
【0018】
また、使用される場合、「第１」、「第２」、「より高い」、「より低い」、「主な」及び「二次的な」などの用語は、順序、関係又は相対位置の優先順位を必ずしも特定せず、それらの異なるコンポーネントを単に明確に区別するのに使用することができる。
【0019】
この本文で報告されている測定値及びデータは、特に示していない限り、ＩＣＡＯ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ａｔｍｏｓｐｈｅｒｅ（ＩＳＯ ２５３３）で実行されているものとして検討されるべきである。
【0020】
本発明に係る老化治療化合物は、好ましくは可能な限り選択的な、老化細胞の治療の医療目的のための物質である。
【0021】
老化治療化合物は、好ましくは、セノリティックな作用を有し、したがってセノリティック化合物である。セノリティック化合物は、老化細胞を好ましくは選択的に排除するために使用される。
【0022】
代替的に、老化治療化合物は、セノスタティック作用、すなわち老化の過程を抑制する作用を有することができる。
【0023】
老化治療化合物は、代替的に、依然としてセノモルフィック作用、すなわち老化細胞の分泌に対する作用を有することができる。
【0024】
老化治療は、分子及び細胞内プロセス、及び放出された分泌物質を含む老化細胞を特異的に標的とする治療用薬剤及び方法である。老化細胞は、多くの生物学的ストレッサーの結果として生物（ヒトを含む）のすべての組織に生じる独自及び変性した細胞の表現型を示す。とりわけ、細胞老化は老化及び加齢関連疾患に関連付けることができる。
【0025】
老化治療は、さらに、少なくとも２つの主なカテゴリーに分類され得る。
【0026】
－セノリティクス：老化細胞を特異的に排除する薬剤。セノリティクスは、アポトーシス、オートファジー、ネクローシス、ネクロトーシス、又は他の形態の非アポトーシスプログラム細胞死（例えば、フェロトーシス、パイロトーシスなど）を含む特定の細胞死機構を誘導することにより、老化細胞を排除し得る。いくつかの構成では、セノリティクスは、老化細胞抗アポトーシス（ＳＣＡＰ）経路として知られている老化細胞の生存及び抗アポトーシス経路に標的化することができる。
【0027】
－セノモルフィック：必ずしも老化細胞を排除又は殺傷するわけではない老化細胞の表現型を特異的に抑圧する薬剤。セノモルフィックは、老化細胞の機能及び形態を調節し、したがって潜在的にその形成、蓄積、及び病理学的作用を遅らせる／予防する／阻害する。いくつかの構成では、セノモルフィックは、分泌に関連する老化表現型（ＳＡＳＰ）の阻害剤及び細胞老化を特異的に予防する薬剤を含む。
【0028】
化合物は、以下にどの言語の当業者にとっても明らかである英語の科学用語で示す、以下のリストに示す分野において、より具体的な利点を有し、結果的に使用される可能性があり、より好ましくは、病理又は美的障害、又は好ましくは老化に関連するその他であり得る障害を治療する。
－特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、気管支拡張症、加齢に伴う肺機能の低下；
－慢性腎疾患（ＣＫＤ）、間質性腎炎、糸球体硬化症／糸球体腎炎、急性腎臓病（ＡＫＤ）、腎不全；
－肝線維症、慢性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；
－膵線維症、慢性膵炎；
－心筋線維症、梗塞；
－口腔粘膜下層の線維症；
－アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、軽度認知障害、運動ニューロンの機能不全、ハンチントン病、認知症などの神経変性疾患；
－神経精神障害；
－化学療法、放射線治療、又は治療、診断、美容目的などのその他いずれかの医療処置によって誘発される毒性又は炎症；
－ＨＩＶ、Ｃｏｖｉｄ－１９などの急性及び慢性のウイルス疾患；
－骨粗鬆症、変形性関節症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、炎症性腸症候群（ＩＢＳ）、関節リウマチ、口腔粘膜炎、後弯症、椎間板変性、椎間板ヘルニア；
－脂肪萎縮；
－サルコペニア、加齢による筋肉／可動性の低下、筋肉疲労；
－アテローム性動脈硬化症、狭心症、不整脈、心筋症、心筋細胞肥大、うっ血性心不全、冠動脈疾患、頸動脈疾患、心内膜炎、冠動脈血栓症、心筋梗塞、高血圧、大動脈瘤、心臓拡張機能障害、高コレステロール血症、高脂血症、僧帽弁逸脱、末梢血管疾患、心臓ストレス耐性、心臓線維症、脳動脈瘤、及び脳卒中；
－加齢と老化に関連する希少疾患、例えば再生不良性貧血、先天性角化異常症、レベッツ症候群、ホイエラール－フライダルソン症候群、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、アミロイドーシス、パジェット病、びまん性特発性骨格過骨症（ＤＩＳＨ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）など；
－糖尿病（２型、１型）、糖尿病性潰瘍、肥満、メタボリックシンドローム；
－創傷治癒；
－虚弱；
－緑内障、黄斑変性、白内障、老眼、視力喪失；
－難聴；
－加齢による免疫機能の低下（免疫老化）；
－脱毛症、抜け毛；
－肝斑、皮膚の変色、湿疹、乾癬、色素沈着過剰、母斑、発疹、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、光線過敏症又は光老化に関連する疾患及び障害、湿疹、そう痒症、感覚異常、湿疹性発疹、好酸球性皮膚症、反応性好中球性皮膚症、天疱瘡、類天疱瘡、免疫水疱性皮膚炎、皮膚の線維組織細胞増殖、皮膚リンパ腫、及び皮膚狼瘡；
－腎臓、肝臓、肺、心臓、膵臓又は他の器官、及び幹細胞又は他の細胞の移植に関連する疾患又は病理学的変化又は灌流状態。
－特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、気管支拡張症、加齢に伴う肺機能の低下；
－慢性腎疾患（ＣＫＤ）、間質性腎炎、糸球体硬化症／糸球体腎炎、急性腎臓病（ＡＫＤ）、腎不全；
－肝線維症、慢性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；
－膵線維症、慢性膵炎；
－心筋線維症、梗塞；
－口腔粘膜下層の線維症；
－アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、軽度認知障害、運動ニューロンの機能不全、ハンチントン病、認知症などの神経変性疾患；
－神経精神障害；
－化学療法、放射線治療、又は治療、診断、美容目的などのその他いずれかの医療処置によって誘発される毒性又は炎症；
－ＨＩＶ、Ｃｏｖｉｄ－１９などの急性及び慢性のウイルス疾患；
－骨粗鬆症、変形性関節症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、炎症性腸症候群（ＩＢＳ）、関節リウマチ、口腔粘膜炎、後弯症、椎間板変性、椎間板ヘルニア；
－脂肪萎縮；
－サルコペニア、加齢による筋肉／可動性の低下、筋肉疲労；
－アテローム性動脈硬化症、狭心症、不整脈、心筋症、心筋細胞肥大、うっ血性心不全、冠動脈疾患、頸動脈疾患、心内膜炎、冠動脈血栓症、心筋梗塞、高血圧、大動脈瘤、心臓拡張機能障害、高コレステロール血症、高脂血症、僧帽弁逸脱、末梢血管疾患、心臓ストレス耐性、心臓線維症、脳動脈瘤、及び脳卒中；
－加齢と老化に関連する希少疾患、例えば再生不良性貧血、先天性角化異常症、レベッツ症候群、ホイエラール－フライダルソン症候群、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、アミロイドーシス、パジェット病、びまん性特発性骨格過骨症（ＤＩＳＨ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）など；
－糖尿病（２型、１型）、糖尿病性潰瘍、肥満、メタボリックシンドローム；
－創傷治癒；
－虚弱；
－緑内障、黄斑変性、白内障、老眼、視力喪失；
－難聴；
－加齢による免疫機能の低下（免疫老化）；
－脱毛症、抜け毛；
－肝斑、皮膚の変色、湿疹、乾癬、色素沈着過剰、母斑、発疹、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、光線過敏症又は光老化に関連する疾患及び障害、湿疹、そう痒症、感覚異常、湿疹性発疹、好酸球性皮膚症、反応性好中球性皮膚症、天疱瘡、類天疱瘡、免疫水疱性皮膚炎、皮膚の線維組織細胞増殖、皮膚リンパ腫、及び皮膚狼瘡；
－腎臓、肝臓、肺、心臓、膵臓又は他の器官、及び幹細胞又は他の細胞の移植に関連する疾患又は病理学的変化又は灌流状態。
【0029】
前記化合物は、単独、又はセノリティクス、セノモルフィック、セノスタティック、老化治療、細胞老化促進剤、及び組織の完全性を保護する化合物から選択される型の他の公知の薬物を併用して使用できる。
【0030】
本発明に係る化合物は、好ましくは、以下に示しているような式（Ｉ）によるフラボンの合成誘導体である。
Ｒ２～Ｒ８の少なくとも２つはＨであり、残りはＨ、ＯＨ、Ｒ１、ＯＲ１、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＨＲ１、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉから個別に選択され、より好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６はＨであり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、及びＲ８はＯＨであり、
Ｒ１はラジカルであり、好ましくは、
Ｈ；
Ｃ１～２４アルキル又はヘテロアルキル、Ｃ１～２４アルケニル又はヘテロアルケニル；Ｃ１～２４アルキニル又はヘテロアルキニル
脂肪酸のアシル残基、合成及び天然の両方の起源の、飽和、不飽和、多価不飽和であり得る脂肪酸
から選択される。
【化1】
Ｒ１はラジカルであり、好ましくは、
Ｈ；
Ｃ１～２４アルキル又はヘテロアルキル、Ｃ１～２４アルケニル又はヘテロアルケニル；Ｃ１～２４アルキニル又はヘテロアルキニル
脂肪酸のアシル残基、合成及び天然の両方の起源の、飽和、不飽和、多価不飽和であり得る脂肪酸
から選択される。
【0031】
より好ましくは、Ｒ１は、
であり、
代替的に、Ｒ１は、
であり、
さらに代替的に、Ｒ１は、
であり、
Ｒ１は、Ｒ１が選択されるのと同じ化合物の中から選択され、
ａ、ｂ、ｃは各々０～１２の間で、
Ｘ、Ｙ、及びＺは各々ＣＨ２、Ｏ、Ｎ、（Ｒ１）、Ｓ、ＮＨ、ＳＯ、ＳＯ２、ＯＣ（Ｏ）、ＣＯ、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ、ＮＨ－Ｃ（Ｓ）－ＮＨから個別に選択される。
【化2】
代替的に、Ｒ１は、
【化3】
さらに代替的に、Ｒ１は、
【化4】
Ｒ１は、Ｒ１が選択されるのと同じ化合物の中から選択され、
ａ、ｂ、ｃは各々０～１２の間で、
Ｘ、Ｙ、及びＺは各々ＣＨ２、Ｏ、Ｎ、（Ｒ１）、Ｓ、ＮＨ、ＳＯ、ＳＯ２、ＯＣ（Ｏ）、ＣＯ、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ、ＮＨ－Ｃ（Ｓ）－ＮＨから個別に選択される。
【0032】
Ｒ１はリンカＬであり得、前記リンカは以下の化合物から選択される。
記載されている化合物の好ましい合成プロセスは後続のものである。
【表1】
【0033】
概して、錯体又は雑種の分子が合成され、それにおいて、ファーマコフォアの付属物が、以下に図示されている、スペーサ橋を介してケルセチンの３位の酸素に結合し、それにおいて一般的なファーマコフォアで３位が官能基化されたケルセチンの一般構造が示されている。
インビトロの実験研究において有望な老化治療薬として、特にセノリティックにおいて選択された本発明に係る化合物である、ビフェニル誘導体の合成は元来、Ｒ１における芳香族部分の重要性を評価する目的で調製された。
【化5】
【0034】
３位のヒドロキシが遊離しているケルセチンテトラベンジル化７は、２－［２－（Ｂｏｃ－アミノ）エトキシ］臭化エチル、末端アミノ基がブチルオキシ基カルボニル（ｂｏｃ）で保護されているエーテル性スペーサの臭化物と反応する。したがって、取得される化合物１１ｂは、ＴＨＦ／Ｈ２ＯのＨＣｌで処置されてｂｏｃ除去され、次にパラジウム活性化された炭素（Ｐｄ－Ｃ）による接触水素化により脱ベンジルされてケルセチン２７が得られる。この産物は、合成方策の中心点を表す、なぜならば、アミノ基のおかげで、これは例えばカルボキシル官能基を有する分子で容易に官能化してアミドを形成することができるからである。この方策に従い、ケルセチン２７は、以前ＥＤＣ・ＨＣｌ及びＨＯＢｔと活性化したジフェニル酸２８ｇと反応され、所望のアミド（２９ｇ；方式１）を取得する。
方式１：２９ｇの合成。
【化6】
【0035】
このように取得される化合物２９ｇは、ケルセチンの３位にアミノエーテルスペーサによって接続されているジフェニル系からなるセノリティックである。
【0036】
材料及び方法について、使用されているすべての化学的試薬は、分析的な性質を備えており、受領したまま使用される。
【0037】
１Ｈ及び１３Ｃ－ＮＭＲ実験が、重水素化溶媒中、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００Ｓ（登録商標）分光計で示され、それぞれ４００．１３及び１００．６２ＭＨｚで記録された。結合定数はヘルツで報告され、０．１Ｈｚに四捨五入されている。必要な場合、クロマトグラフィー精製が、規定されている溶離液を使用して、フラッシュクロマトグラフィー（７０－２３０メッシュ）についてシリカゲルで実行された。
【0038】
規定されている場合、反応はＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロウェーブリアクターを使用して実行された。
【0039】
５，７－ビス（ベンジルオキシ）－２－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェニル）－３－ヒドロキシ－４Ｈ－クロメン－４－オン：７の合成は、好ましくは、以下に記載されているように生じる。
【0040】
ＤＭＦ（１２ｍｌ）における２－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－４，５－ジヒドロキシ－３－［３，４，５－トリヒドロキシ－６－［（３，４，５－トリヒドロキシ－６－メチル－オキサン－２－イル）オキシメチル］オキサン－２－イル］オキシ－クロメン－７－オン６（１ｇ；１．６ｍｍｏｌ）の溶液に、無水Ｋ２ＣＯ３（１．８１ｇ；１３．１ｍｍｏｌ）、及び臭化ベンジル（２．２４ｇ；１３．１ｍｍｏｌ）を順次加えた。反応混合物がアルゴン雰囲気及び室温で撹拌されて、残された。完了すると（おおよそ２４時間）、反応混合物はＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）で希釈され、Ｈ２Ｏ（２×３０ｍＬ）で洗浄された。有機相が無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥され、濾過され、溶媒が減圧下で除去された。残留物は、ＨＣｌ（３７％）／ＭｅＯＨ＝２／９８ｖ／ｖの混合物が加えられ、還流下（Ｔ°＝６５℃）で２時間加熱した。
【0041】
完了すると、混合物は、室温に冷却させ、次にブフナー漏斗で濾過し、最後にオレンジ色の固体を冷メタノールで洗浄した。したがって、取得される最終産物７は、さらなる最終的な精製を必要としていない（４５０ｍｇ；４２．４５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：７．８８（ｓ， １Ｈ）， ７．７５（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ７．６５－７．２５（ｍ， ２１Ｈ， Ｐｈ）， ７．０１（ｄ， ２Ｈ）， ６．５６（ｓ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ６．４５（ｓ， １Ｈ）， ５．２６（ｓ， ２Ｈ， ＣＨ２Ｐｈ）， ５．２３（ｓ， ２Ｈ， ＣＨ２Ｐｈ）， ５．２１（ｓ， ２Ｈ， ＣＨ２Ｐｈ）， ５．１１（ｓ， ２Ｈ， ＣＨ２Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：１７１．７０， １６３．１９， １５９．３３， １５８．６３， １５０．１４， １４８．５８， １４１．８３， １３７．６８， １３７．１３， １３６．８２， １３６．１５， １３５．５９， １２８．７４， １２８．６２， １２８．５３， １２８．４５， １２７．８９， １２７．８５， １２７．７７， １２７．６２， １２７．５３， １２７．１８， １２６．６３， １２４．２６， １２１．２０， １１４．１７， １０６．６８， ９７．５２， ９３．６６， ７１．５２， ７０．９３， ７０．６７， ７０．５３．
【化7】
【0042】
化合物１１ｂの合成は、好ましくは、以下の記載のように生じる。
【0043】
無水ＤＭＦ（４ｍｌ）における５，７－ビス（ベンジルオキシ）－２－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェニル）－３－ヒドロキシ－４Ｈ－クロメン－４－オン７（５００ｍｇ；０．７５４ｍｍｏｌ）の溶液に、２－［２－（Ｂｏｃ－アミノ）エトキシ］臭化エチル（４０４ｍｇ；１．５０８ｍｍｏｌ）、無水Ｋ２ＣＯ３（２５０ｍｇ；１．８１０ｍｍｏｌ）及びＫＩ（３６ｍｇ；０．２２６ｍｍｏｌ）が順次加えられた。反応混合物は、６５℃の温度で１２時間撹拌させて残されている。完遂のため、混合物は、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に仕切られた。有機相は、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、水相をＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）で抽出した。結合された有機相は、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水させ、溶媒が減圧下で除去された。黄色い油として取得された残留物は、フラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ／ｎ－ヘキサン２５％）で精製された。産物１１ｂは、白色の油として単離された（４６０ｍｇ；７２％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）：７．８３（ｂｓ， １Ｈ）， ７．６３（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．０ Ｈｚ）， ７．４６－７．１８（ｍ， ２１Ｈ）， ６．９５（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ）， ６．７６（ｂｔ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ）， ６．７０（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ）， ５．２５（ｍ， ８Ｈ）， ４．１２（ｍ， ２Ｈ）， ３．６０（ｍ， ２Ｈ）， ３．３２（ｍ， ２Ｈ）， ３．０３（ｍ， ２Ｈ）， １．３５（ｓ， ９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）：１７３．２， １６３．６， １５９．０， １５６．５， １５２．５， １５１．２， １４８．６， １４０．３， １３８．１， １３７．８， １３７．７， １３７．０， １２９．５， １２９．４， １２９．３， １２９．２， １２９．０， １２８．９， １２８．８， １２８．６， １２８．５， １２７．８， １２３．９， １２３．３， １１５．１， １１４．６， １０９．８， ９８．７， ９５．１， ７８．６， ７１．６， ７１．４， ７１．０， ７０．９， ７０．３， ７０．０， ２９．１．
【化8】
【0044】
化合物１６の合成は、好ましくは、以下の記載のように生じる。
【0045】
４ＮのＨＣｌ（４ｍｌ）の水溶液が、ＴＨＦ（６ｍｌ）の１１ａの溶液（４６０ｍｇ；０．５４１ｍｍｏｌ）に加えられた。反応混合物は、５０℃の温度で６時間撹拌させて残されている。完了させるために、反応混合物は、減圧下で乾燥させ、残留物である白色固体を、さらにクロマトグラフィー精製することなく、１６（定量的）で、次の反応に使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：７．６６－７．３０（ｍ， ２２Ｈ）， ７．０５（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ）， ６．５７（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ）， ６．５１（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ）， ５．２７（ｓ， ２Ｈ）， ５．２５（ｓ， ２Ｈ）， ５．１７（ｓ， ２Ｈ）， ５．１２（２Ｈ）， ３．８３－３．７４（ｍ， ２Ｈ， ３．７２－３．６４（ｍ， ２Ｈ）， ３．６０－３．５３（ｍ， ２Ｈ）， ３．２２－３．１２（ｍ， ２Ｈ）．
【化9】
【0046】
化合物２７の合成は、好ましくは、以下の記載のように生じる。
【0047】
ＥｔＯＨ／ＴＨＦ（１：２％ｖ／ｖ）混合物における１６（０．０１ｍｍｏｌ）の溶液。混合物にＰｄ／Ｃ触媒（１０％）を添加した。反応混合物を３回真空にさらした。
－系から両方の空気を除去する窒素サイクル；最後にもう一度真空を施し、フラスコを圧力１．２バールまで水素で満たした。最後に、反応混合物は、所望の産物の脱ベンジル化の完了（約１２時間）まで、室温で撹拌されて残された。完了するために、反応混合物から触媒を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去し、残留物をｎ－ヘキサン／Ｅｔ２Ｏ ７０：３０の混合物（３×１０ｍｌ）で洗浄した。
－系から両方の空気を除去する窒素サイクル；最後にもう一度真空を施し、フラスコを圧力１．２バールまで水素で満たした。最後に、反応混合物は、所望の産物の脱ベンジル化の完了（約１２時間）まで、室温で撹拌されて残された。完了するために、反応混合物から触媒を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去し、残留物をｎ－ヘキサン／Ｅｔ２Ｏ ７０：３０の混合物（３×１０ｍｌ）で洗浄した。
【0048】
産物２７は、黄色の無定形の固体として単離された（７４ｍｇ；９５．０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：７．６７（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ）， ７．５２（ｄｄ， １Ｈ， Ｊ１ ＝ ８．４ Ｈｚ， Ｊ２ ＝ ２．０ Ｈｚ）， ６．３９（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ ）， ６．１９（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ）， ４．１０－４．０１（ｍ， ２Ｈ）， ３．８３－３．７５（２Ｈ， ｍ）， ３．７４－３．６７（２Ｈ， ｍ）， ３．１９－３．１０（２Ｈ， ｍ）； １３Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：１７９．９， １６６．０， １６３．０， １５８．５， １５８．４， １５０．０， １４６．３， １３８．３， １２２．８， １２２．５， １１７．０， １１６．４， １０５．８， ９９．９， ９４．８， ７２．９， ７１．２， ６７．８， ４０．６．
【化10】
【0049】
化合物２９ｇの合成は、好ましくは、以下の記載のように生じる。
【0050】
ＥＤＣ・ＨＣｌ（１９．８ｍｇ；０．１０ｍｍｏｌ）が、酸２８ｇ（１５．８ｍｇ；０．０６９ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２ｍｌ）溶液に、アルゴン雰囲気下、磁気撹拌しながら加えられた。そして、３０分後ＨＯＢｔ（１１．２ｍｇ；０．０８３ｍｍｏｌ）を加えた。さらに３０分後、取得された溶液は、化合物２７（３２ｍｇ；０．０６３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１００μｌ；０．５７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍｌ）溶液に、シリンジを使用して５分間滴下して加え、撹拌しながら０℃、アルゴン雰囲気下で保持した。
【0051】
このようにして取得された反応物は、室温にして撹拌してアルゴン雰囲気で２４時間保持させ、その後、反応物は、ＥｔＯＡｃ（２５ｍｌ）で希釈し、水（２回）及び飽和ＮａＣｌ溶液（１回）で抽出した。有機相は、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水して、濾過して、真空下で濃縮乾燥して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２→４％）で精製して、化合物２９ｇを黄色固体として得た（９ｍｇ；２２％）。
【化11】
【0052】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：７．８２－７．７７（ｍ， ２Ｈ）， ７．６８（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ）， ７．５９－７．４７（ｍ， ５Ｈ）， ６．９９－６．９３（ｍ， ２Ｈ）， ６．８９（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ）， ６．３４（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １．６Ｈｚ）， ６．１６（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ）， ４．１５－４．０９（ｍ， ２Ｈ）， ３．８１（ｓ， ３Ｈ ）， ３．７９－３．７３（ｍ， ２Ｈ）， ３．６６－３．６１（ｍ， ２Ｈ）， ３．６１－３．５５（ｍ， ２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：１７９．９， １７０．３， １６５．８， １６３．０， １６１．２， １５８．３， １５８．０， １４９．９， １４６．３， １４５．２， １３８．３， １３３．５２， １３３．４８， １２９．１， １２８．８， １２７．３， １２３．０， １２２．６， １１７．０， １１６．３， １１５．３， １０５．８， ９９．８， ９４．７， ７２．８， ７１．３， ７０．６， ５５．７， ４１．１．
【0053】
本発明はまた、ケルセチンのエーテル１、２及び３の合成に関連し、その合成方策は、Ｒｏｌａｎｄｏ及び同僚（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ２０１１， ５２， ４７３８）により報告されたようなケルセチンの直交する保護をもたらす。ケルセチンのエーテル１、２及び３の合成は、商業的ルーチンである６から開始され、遊離ヒドロキシル基の徹底的なベンジル化、続いて３位の二糖の選択的加水分解、その後の適切な臭化アルキルによるアルキル化、また最後にＰｄ／Ｃの触媒による水素化によるベンジル基の除去が関与する。方策は、以下に簡素化される：
さらに、本発明はまた、ケルセチンのエステル４及び５の合成に関し、Ｄ． Ｌａｍｂｕｓｔａ及び同僚により報告された酵素による方策により実行された（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｃａｔａｌ． Ｂ－Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ， ２００３， ２２， ２７１）。方策は、以下の方式に示すように、５つすべてのヒドロキシル基におけるケルセチン９のエステル化と、その結果として生じる、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ（ＣＡＬ）及び Ｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ（ＭＭＬ）リパーゼの適切な選択によって媒介される選択的アルコリシスに関与する。
産物８の合成で記載したのと同様、本発明者らは、以下の方式に示すように、１１シリーズの産物の合成を報告する。
本発明に係る化合物はまた、以下に報告されているように、二量体、三量体、及び四量体分子を含み、ここで２つ又はそれより多いケルセチン単位が３位及びスペーサを介して適切な中央リンカ（足場）に結合している。
スペーサ及び中央足場の選択は、ケルセチン単位間の柔軟性と距離に起因する効果を研究を試みることによって作成された。
【化12】
【化13】
【化14】
【化15】
【0054】
二量体分子の最初のグループは、以下の方式で報告される方策によって合成され、それにおいて中間体１１ａのエチルエステルは、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏの中で水酸化ナトリウム及び対応するカルボン酸１２で処置することによって加水分解され、ＥＤＣ／ＨＯＢｔで活性化され、それは適切なジアミン（Ｈ２Ｎ－リンカ－ＮＨ２）１３と縮合される。最後に、最終産物１５は、古典的な接触水素化によって実行される中間体１４を徹底的に脱ベンジル化することによって取得される。
本発明に係る化合物はまた、Ｖｅｒａ Ｓａｌｕｓ Ｒｉｃｅｒｃａ Ｓｒｌの名で２０１７年５月７日に出願された特許出願ＷＯ２０１９／００８５３７Ａ１の８ページ１０行目から９０ページの最終行に記載されている１又は複数のプロセスによって製造され得る。このような方法及び分子はまた、本文書の参照により含まれ、二次的な技術的問題の解決に寄与し、したがって本発明の一部に含まれる。
【化16】
【0055】
前記化合物はまた、国立研究評議会及びＲａｏ ＦｅｌｉｃｅのＲａｏ－Ｅｒｂｅの特許出願ＷＯ－Ａ－９９／６６０６２の３ページ８行目から、９ページの２２行目に記載されているプロセスによって製造することができ、これらは参照により本明細書に組み込まれる。しかしながら、他の類似の方法を使用し得る。
【0056】
したがって、本発明はまた、記載された物質、及び前述の問題を治療するための薬物又は化合物又は物質を製造するための新しいプロセスを採用することによって、老化細胞を排除するため、又は老化に関連する問題の解決のための新しいプロセスを定義する。
【0057】
出願人の実験によると、本発明に係る化合物は、様々な細胞モデルで、様々な器官のヒトの組織に対応する、老化治療活性、特に特定のセノリティック活性を有することを示している。アポトーシスを誘導しない濃度（１００～２００ｎＭ）のドキソルビシンで（２４時間）処置することにより、インビトロでヒト細胞の老化を誘導し、その後１０～１２日間（最適な培地で、処置なしで）細胞を回復させた。老化細胞の表現型への成功裏の転換は、形態学的変化（平坦化及び細胞拡大）及びリソソームベータガラクトシダーゼ（β－ＧＡＬ）陽性によって確認される。ＳＡ－β－ＧＡＬ（老化関連β－ＧＡＬ）老化アッセイが、ＳＡ－β－Ｇａｌ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ．， Ｄａｎｖｅｒｓ、マサチューセッツ州）で実行された。簡潔に、２０％ホルムアルデヒドで、室温で１５分間固定した後、位相差顕微鏡ＥＶＯＳ ＸＬ Ｃｅｌｌ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ；レンズ４０Ｘ）で１ウェルあたり２００個以上の細胞を調べ、培養物に存在する ＳＡ－β－ＧＡＬ陽性（青色に染色された）細胞の割合を計算することで老化細胞を定量化した。
【0058】
老化したヒトの細胞におけるセノリティック活性（９６ウェルプレート）は、特定の処置（７２時間）の後評価され、ビヒクル（ＤＭＳＯ；陰性対照）、ケルセチン（Ｑｕｅ；陽性対照）、又はＶｅｒａ Ｓａｌｕｓ Ｒｉｃｅｒｃａ Ｓｒｌの名のもと２０１７年５月７日に出願された特許出願ＷＯ２０１９／００８５３７Ａ１において９１ページから１０６ページまで（図１、図２、図３）及び関連する図面にも十分に例示されている識別コードを有する、本発明に係る異なる化合物を含む。処置の終わりに、細胞の生存はクリスタルバイオレット染色により定量化された。簡潔には、細胞はＰＢＳのパラホルムアルデヒド（４％）で２０分間固定し、洗浄し（蒸留水で２回）、１％クリスタルバイオレットで染色した（２０分間）。水（３回）でのさらなる洗浄後、１００μｌの酢酸（１０％）をウェルごとに加え、吸光度（λ＝５９０ｎｍ）をＳｙｎｅｒｇｙ分光光度計（ＡＨＳＩ）で測定した。各実験が異なる３日に４回実行され、少なくとも３回繰り返された。セノリティック活性が対照条件（ＤＭＳＯ）に関して除去された老化細胞の割合として表された。結果は、平均値±ＳＥＭ（平均値の標準誤差）として表示され、関連する分析はＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（登録商標）６．０ソフトウェア（カリフォルニア州、米国）を使用して実行された。
【0059】
最初の段階で、本発明に係る化合物のセノリティック活性が、ヒトＷＳ１線維芽細胞（皮膚由来の正常線維芽細胞、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１５０２（商標））で調査された。
ＷＳ１細胞老化が１００ｎＭのドキソルビシン（２４時間）で誘導され、１２日間回復させながら、セノリティック活性が、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、ケルセチン（Ｑｕｅ、２０μＭ）、ケルセチン（２０μＭ）及びダサチニブ（ＤＡＳ、２００ｎＭ；他の陽性対照）、又は２０μＭの濃度で使用された本発明に係る１８の異なる化合物の、単独（図１のａ）又は２００ｎＭのダサチニブの存在下（図１のｂ）での処置の後に定量化された。
ＷＳ１細胞老化が１００ｎＭのドキソルビシン（２４時間）で誘導され、１２日間回復させながら、セノリティック活性が、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、ケルセチン（Ｑｕｅ、２０μＭ）、ケルセチン（２０μＭ）及びダサチニブ（ＤＡＳ、２００ｎＭ；他の陽性対照）、又は２０μＭの濃度で使用された本発明に係る１８の異なる化合物の、単独（図１のａ）又は２００ｎＭのダサチニブの存在下（図１のｂ）での処置の後に定量化された。
【0060】
本発明に係る、調べられた概ねすべての化合物は、ＷＳ１ヒト老化細胞に対する阻害活性を示す（図１のａ、ｂ）。ケルセチン、又はケルセチン及びダサチニブの組み合わせ（既知のヒトの選択的セノリティクス）と比較した場合、本発明に係る化合物の大部分は、同様又は優れたセノリティック効果を有することが示されている（図１のａ、ｂ）。ケルセチンと比較して、実際、本発明に係るテストされた化合物のほぼすべては、より高い阻害活性を示し、多くの場合で２倍を超えるセノリティック効果がある（図１のａ）。しかしながら、ケルセチン及びダサチニブの組み合わせと比較すると、調べた化合物の多くは老化したＷＳ１線維芽細胞に対して同様のセノリティック作用を発揮し、化合物（２９ｇ、図ではＶＳＲ－０１７として示されている）の方が効果的であった（図１のｂ）。留意されたいことに、本発明２９ｇに係る化合物は、単独で使用すると、単独（図１のａ）及びダサチニブとの併用（図１のｂ）の両方での他のすべての化合物よりも高いセノリティック効果を示した。特に、２９ｇ（約６０％）のセノリティックな作用は、ケルセチンの約３倍大きく（図１ａ）、またケルセチン及びダサチニブの組み合わせよりも大きかった（図１のｂ）。
【0061】
後続的に、本発明に係る化合物のセノリティック活性が、他の細胞モデルで調ベられ、ヒト腸上皮細胞ＨＣＴ１１６（結腸直腸腺癌細胞、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－２４７）、ヒト腎上皮細胞７８６－Ｏ（腎腺癌細胞、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１９３２）、ヒト膵臓上皮細胞ＰＡＮＣ－１（膵臓癌細胞、ＡＴＣＣ（登録商標））ＣＲＬ－１４６９）、ヒト肝上皮細胞ＨｅｐＧ２（肝細胞癌細胞、ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＢ－８０６５）、及びヒト肺上皮細胞Ａ５４９（肺腺癌細胞、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－１８５）を含む。これらの細胞において、老化は、２００ｎｍのドキソルビシン（２４時間）、１０（ＨＣＴ１１６及びＡ５４９について）又は１２（７８６－Ｏ、ＰＡＮＣ－１、及びＨｅｐＧ２について）日の回復が誘発されたが、セノリティック活性が、ビヒクル（ＤＭＳＯ）又はスカラー濃度（範囲、１～６０μＭ）のケルセチン（Ｑｕｅ；陽性対照）又は本発明に係る調査した化合物のそれぞれでの処置後に定量化された（図２ａ～図３ｃ）。
【0062】
本発明に係るすべての化合物が、調べられたヒト老化細胞の５つの組織の型のそれぞれでセノリティック活性を示し、効果は、１０μＭ以上の濃度の特定の化合物により誘発されたケルセチンよりも大幅に高かった（図２ａ～図３ｃ）。この状況で、本発明に係る以下の化合物（別個の科学的クラスに属する）は、以下のヒト細胞株においてケルセチンよりも有意に高いセノリティック活性を示した：老化腸細胞ＨＣＴ１１６における化合物２９ｇ、１５ｃ及び１９ｂ（図２ａ）；老化腎臓細胞７８６－Ｏ（図２ｂ）及び老化膵臓細胞ＰＡＮＣ－１（図３ａ）における化合物２９ｇ及び１５ｃ；老化肝細胞ＨｅｐＧ２の化合物２９ｇ及び３（図３ｂ）、及び老化肺細胞Ａ５４９の化合物２９ｇ、１５ｃ、３及び３１（図３ｃ）。留意されたいことに、本発明２９ｇによる化合物は、調べたすべての細胞株で最大のセノリティック効果を示し（図１～図３）、組織に関係なく、調べた他のすべての治療法と比較して、この化合物が有する特異性及び優れたセノリティック効力を示している。老化細胞（パンセノリティック活性）の起源。化合物１５ｃはまた、老化肝臓細胞を例外として（図３ｂ）、有効なパンセノリティックを証明した（図１～図３）。さらに、本発明に係るいくつかの化合物は、選択的なセノリティックな効果を有することが示され、特定の組織の状況における高度な老化細胞に対する阻害効力を特徴とし、例えば、腸細胞における化合物１９ｂ（図２、左側のグラフ）、肺細胞における化合物３１（図３のｃ）、及び肝臓細胞（図３のｂ）及び肺細胞における化合物３（図３のｃ）である。
【0063】
これらの結果は、本発明に係る化合物が非常に有望な特異的、上昇、及び／又は選択的なセノリティック活性を示すことを証明し、それらが新たな老化治療薬として、また加齢に関連するヒトの病理の予防又は治療のための特定の用途に開発される可能性があることを示している。
【0064】
したがって、これらの結果は、本発明に係る化合物が特異的で、重要な、非常に有望である老化治療、特にセノリティック活性を示すことを証明し、それらが人間用の新しい老化治療の薬物として開発され得ることを示している。
【図1】
【図2】
【図3】
【国際調査報告】