特表 2023-552375 血清学的アッセイにおいてＣＤ４７に結合する薬物の干渉を低減するための多量体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-12-15

(54)【発明の名称】血清学的アッセイにおいてＣＤ４７に結合する薬物の干渉を低減するための多量体

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/48 20060101AFI20231208BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 17/14 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20231208BHJP

   G01N 33/80 20060101ALI20231208BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20231208BHJP

【ＦＩ】

G01N33/48 B

C07K19/00

C07K17/14

C07K14/705

C07K16/28

G01N33/80

G01N33/53 K

G01N33/53 N

G01N33/53 R

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023533847

(86)(22)【出願日】2021-12-06

(85)【翻訳文提出日】2023-07-25

(86)【国際出願番号】 US2021062065

(87)【国際公開番号】W WO2022120286

(87)【国際公開日】2022-06-09

(31)【優先権主張番号】63/121,964

(32)【優先日】2020-12-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516237639

【氏名又は名称】エーエルエックス オンコロジー インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ポンズ， ジャウメ

(72)【発明者】

【氏名】シム， バン ジャネット

(72)【発明者】

【氏名】チェン， エイミー ショー－ルー

(72)【発明者】

【氏名】サンガラング， エマ ルース

【テーマコード（参考）】

2G045

4H045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA09

2G045BB45

2G045CA02

2G045CA24

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA41

4H045BA50

4H045BA61

4H045BA62

4H045BA63

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

血清学的アッセイにおいて、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物による干渉を低減及び／または防止する方法が提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

試薬赤血球（ＲＢＣ）または試薬血小板を使用する血清学的アッセイの薬物干渉を低減する方法であって、前記方法が、
（ａ）前記薬物に結合し且つ前記薬物が前記試薬ＲＢＣまたは前記試薬血小板に結合するのを遮断するＣＤ４７多量体を、前記薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に添加すること、及び
（ｂ）ステップ（ａ）の後に、前記試薬ＲＢＣまたは前記試薬血小板を使用して、前記血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、
を含み、
前記薬物が、（ｉ）ヒト抗体Ｆｃ領域またはそのバリアント及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分、を含み、
前記ＣＤ４７多量体が、少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、前記方法。

【請求項2】

前記ＣＤ４７多量体が、２～１００のＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ＣＤ４７多量体が、前記薬物に結合可能な野生型ＣＤ４７またはそのフラグメントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記ＣＤ４７多量体が、前記薬物に結合可能な、野生型ヒトＣＤ４７、野生型マウスＣＤ４７、野生型ラットＣＤ４７、野生型アカゲザルＣＤ４７、野生型カニクイザルＣＤ４７、または前記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記ＣＤ４７多量体が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記ＣＤ４７多量体が、前記薬物に結合可能な野生型ＣＤ４７またはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＣＤ４７バリアントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＣＤ４７多量体が、配列番号２～６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記ＣＤ４７多量体が、融合ポリペプチドを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記融合ポリペプチドが、多量体化ドメインを含む、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記多量体化ドメインが、Ｆｃ単量体、ｃ－Ｊｕｎロイシンジッパードメイン、またはｃ－Ｆｏｓロイシンジッパードメインを含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記Ｆｃ単量体が、マウスＦｃ単量体である、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記マウスＦｃ単量体が、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記融合ポリペプチドが、配列番号８４～８６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項８～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記ＣＤ４７多量体が、エピトープタグまたはリガンドを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のいずれか１つを含むか、または前記リガンドが、ビオチンを含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記ＣＤ４７多量体が、可溶性ＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体が、ペプチド結合を介して連結されている、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体が、リンカーペプチドを介して連結されている、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記リンカーペプチドが、配列番号８５～１０９、１２７～１３０、１４０、及び１４１のいずれか１つを含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記リンカーペプチドが、１つ以上のスペーサーを含む、請求項１８または１９に記載の方法。

【請求項21】

前記スペーサーが、ＧＳ、ＧＧＳ、または配列番号５２～７０のいずれか１つを含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体が、固体支持体に結合している、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記固体支持体が、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体のそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、前記エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、前記固体支持体上に固定されており、前記ＣＤ４７ポリペプチド単量体が、前記捕捉剤による前記エピトープタグまたはリガンドの特異的結合により、前記固体支持体に結合している、請求項２２または２３に記載の方法。

【請求項25】

前記リガンドが、ビオチンであり、前記捕捉剤が、ストレプトアビジンである、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つが、配列番号６を含む、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記ＣＤ４７多量体が、２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つが、配列番号６を含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記ＣＤ４７多量体が、ホモ多量体である、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記ＣＤ４７多量体が、ヘテロ多量体である、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを使用する血清学的アッセイの薬物干渉を低減する方法であって、前記方法が、
（ａ）ヒトＣＤ４７に特異的に結合するＳＩＲＰ多量体を試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせに添加すること、及び
（ｂ）ステップ（ａ）の前記試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを使用して、血漿試料の血清学的アッセイを実行すること、
を含み、
前記血漿試料が、薬物による処置を受けている対象由来のものであり、
前記薬物が、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含み、
前記ＳＩＲＰ多量体が、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、前記方法。

【請求項32】

試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを使用する血清学的アッセイの薬物干渉を低減する方法であって、前記方法が、
（ａ）ヒトＣＤ４７に特異的に結合するＳＩＲＰ多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に添加すること、及び
（ｂ）ステップ（ａ）の後に、前記試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを使用して、前記血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、
を含み、
前記薬物が、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含み、
前記ＳＩＲＰ多量体が、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、前記方法。

【請求項33】

試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを含有する血液試料の血清学的アッセイの薬物干渉を低減する方法であって、前記方法が、
（ａ）ヒトＣＤ４７に特異的に結合するＳＩＲＰ多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血液試料に添加すること、及び
（ｂ）ステップ（ａ）の後に、前記血液試料の血清学的アッセイを実施すること、
を含み、
前記薬物が、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含み、
前記ＳＩＲＰ多量体が、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、前記方法。

【請求項34】

前記ＳＩＲＰ多量体が、２～１００個のＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３１～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ヒトＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰαまたはそのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３１～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ヒトＣＤ４７に結合可能な、野生型ヒトＳＩＲＰα、野生型マウスＳＩＲＰα、野生型ラットＳＩＲＰα、野生型アカゲザルＳＩＲＰα、野生型カニクイザルＳＩＲＰα、または前記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰαまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰαバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３１～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ヒトＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰγまたはそのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３１～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ヒトＣＤ４７に結合可能な、野生型ヒトＳＩＲＰγ、野生型マウスＳＩＲＰγ、野生型ラットＳＩＲＰγ、野生型アカゲザルＳＩＲＰγ、野生型カニクイザルＳＩＲＰγ、または前記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰγまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰγバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３１～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記ＳＩＲＰ多量体が、野生型ＳＩＲＰβまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰβバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含み、前記ＳＩＲＰβバリアントまたはそのフラグメントが、ＣＤ４７に結合可能である、請求項３１～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

ＳＩＲＰ多量体が、配列番号３３～４５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３１～３４、３７、４０、及び４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記ＳＩＲＰ多量体が、融合ポリペプチドを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記融合ポリペプチドが、多量体化ドメインを含む、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記多量体化ドメインが、Ｆｃ単量体、ｃ－Ｊｕｎロイシンジッパードメイン、またはｃ－Ｆｏｓロイシンジッパードメインを含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記Ｆｃ単量体が、マウスＦｃ単量体である、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記マウスＦｃ単量体が、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記融合ポリペプチドが、配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４３～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記ＳＩＲＰ多量体が、エピトープタグまたはリガンドを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３１～４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のいずれか１つを含むか、または前記リガンドが、ビオチンを含む、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記ＳＩＲＰ多量体が、可溶性ＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項３４～５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体が、ペプチド結合を介して連結されている、請求項３１～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体が、リンカーペプチドを介して連結されている、請求項３１～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

前記リンカーペプチドが、配列番号８５～１０９、１２７～１３０、１４０、及び１４１のいずれか１つを含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記リンカーペプチドが、１つ以上のスペーサーを含む、請求項５３または５４に記載の方法。

【請求項56】

前記スペーサーが、ＧＳ、ＧＧＳ、または配列番号５２～７０のいずれか１つを含む、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体が、固体支持体に結合している、請求項３１～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項58】

前記固体支持体が、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体のそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、前記エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、前記固体支持体上に固定されており、前記ＳＩＲＰポリペプチド単量体が、前記捕捉剤による前記エピトープタグまたはリガンドの特異的結合により、前記固体支持体に結合している、請求項５７または５８に記載の方法。

【請求項60】

前記リガンドが、ビオチンであり、前記捕捉剤が、ストレプトアビジンである、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つが、配列番号１１１を含む、請求項５７～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記ＳＩＲＰ多量体が、２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む、請求項３１～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つが、配列番号１１１を含む、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ホモ多量体である、請求項３１～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ヘテロ多量体である、請求項３１～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

試薬赤血球（ＲＢＣ）または試薬血小板を使用する血清学的アッセイの薬物干渉を低減する方法であって、前記方法が、
（ａ）前記薬物に結合し且つ前記薬物が前記試薬ＲＢＣまたは前記試薬血小板に結合するのを遮断する抗ＳＩＲＰ多量体を、前記薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に添加すること、及び
（ｂ）ステップ（ａ）の後に、前記試薬ＲＢＣまたは前記試薬血小板を使用して、前記血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、
を含み、
前記薬物が、（ｉ）ヒト抗体Ｆｃ領域またはそのバリアント及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分、を含み、
前記抗ＳＩＲＰ多量体が、１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む、前記方法。

【請求項67】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、１～１００の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰβバリアント、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または前記のうちのいずれか２つ以上に結合する抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む、請求項６６または６７に記載の方法。

【請求項69】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、
（ａ）配列番号４６を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
（ｂ）配列番号４８を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号４９を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
（ｃ）配列番号５０を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
（ｄ）配列番号１１３を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１１４を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
（ｅ）配列番号１１５を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１１６を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、及び／または
（ｆ）配列番号１３３を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１３４を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
を含む、抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む、請求項６６～６８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項70】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、全長抗ＳＩＲＰ抗体を含む、請求項６６～６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項71】

前記抗ＳＩＲＰ抗体が、マウスＦｃドメインを含む、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記マウスＦｃドメインが、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項７１に記載の方法。

【請求項73】

前記抗ＳＩＲＰ抗体が、
（ａ）配列番号１１７を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖、
（ｂ）配列番号１１９を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖、
（ｃ）配列番号１２０を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖、または
（ｄ）配列番号１２２を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖、
を含む、請求項７０～７２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記抗ＳＩＲＰ抗体の前記薬物結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ダイアボディ、ワンアーム抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、単一ドメイン抗体、または単一重鎖抗体である、請求項６６～６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項75】

前記薬物結合フラグメントが、Ｆ（ａｂ’）２を含み、前記Ｆ（ａｂ’）２が、配列番号１３１及び１３２を含む、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

前記抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントが、エピトープタグまたはリガンドを含む、請求項６６～７５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項77】

前記エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のいずれか１つを含むか、または前記リガンドが、ビオチンを含む、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

前記エピトープタグが、ＨＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１３５）またはＧＳＧＳＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１２６）を含む、請求項７４に記載の方法。

【請求項79】

前記１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントが、固体支持体に結合している、請求項６６～７８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項80】

前記固体支持体が、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

前記１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントのそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、前記エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、前記固体支持体上に固定されており、前記抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントが、前記捕捉剤による前記エピトープタグまたはリガンドの特異的結合により固体支持体に結合している、請求項７９または８０に記載の方法。

【請求項82】

前記リガンドが、ビオチンであり、前記捕捉剤が、ストレプトアビジンである、請求項８１に記載の方法。

【請求項83】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、２、３、または４つのビオチン化抗ＳＩＲＰ抗体またはそのフラグメントに結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む、請求項６６～７８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項84】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、２、３、または４つのビオチン化Ｆ（ａｂ’）２フラグメントに結合している前記ストレプトアビジンまたは前記アビジンを含み、前記ビオチン化Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの２つ以上が、配列番号１３１及び１３２を含む、請求項８２に記載の方法。

【請求項85】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、ホモ多量体である、請求項６６～８４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項86】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、ヘテロ多量体である、請求項６６～８４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項87】

前記薬物が、抗ＣＤ４７抗体を含む、請求項１～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項88】

ヒトＣＤ４７に結合する前記薬物の前記部分が、野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、または前記野生型ＳＩＲＰαもしくは前記ＳＩＲＰαバリアントのフラグメントを含む、請求項１～８６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項89】

ヒトＣＤ４７に結合する前記薬物の前記部分が、ＳＩＲＰαバリアントを含み、前記ＳＩＲＰαバリアントが、前記野生型ＳＩＲＰαと比較して、１つ以上のアミノ酸置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、及び／またはＣ末端伸長（複数可）を含む、請求項８８に記載の方法。

【請求項90】

ヒトＣＤ４７に結合する前記薬物の前記部分が、前記ＳＩＲＰαバリアントのフラグメントを含み、前記フラグメントが、前記ＳＩＲＰαバリアントの細胞外ドメインを含む、請求項８８または８９に記載の方法。

【請求項91】

ヒトＣＤ４７に結合する前記薬物の前記部分が、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または前記野生型ＳＩＲＰγもしくは前記ＳＩＲＰγバリアントのフラグメントを含む、請求項１～８６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項92】

ヒトＣＤ４７に結合する前記薬物の前記部分が、前記ＳＩＲＰγバリアントを含み、前記ＳＩＲＰγバリアントが、前記野生型ＳＩＲＰγと比較して、１つ以上のアミノ酸置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または前記のうちのいずれかの組み合わせを含む、請求項９１に記載の方法。

【請求項93】

ヒトＣＤ４７に結合する前記薬物の前記部分が、前記ＳＩＲＰγバリアントのフラグメントを含み、前記フラグメントが、前記ＳＩＲＰγバリアントの細胞外ドメインを含む、請求項９１または９２に記載の方法。

【請求項94】

ヒトＣＤ４７に結合する前記薬物の前記部分が、ＳＩＲＰβバリアントまたは前記ＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含む、請求項１～８６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項95】

ヒトＣＤ４７に結合する前記薬物の前記部分が、前記ＳＩＲＰβバリアントを含み、前記ＳＩＲＰβバリアントが、前記野生型ＳＩＲＰβと比較して、１つ以上のアミノ酸置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または前記のうちのいずれかの組み合わせを含む、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

ヒトＣＤ４７に結合する前記薬物の前記部分が、前記ＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含み、前記フラグメントが、前記ＳＩＲＰβバリアントの細胞外ドメインを含む、請求項９４または９５に記載の方法。

【請求項97】

前記薬物の前記抗体Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域またはそのバリアントである、請求項１～９６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項98】

前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４Ｆｃ領域、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４ Ｆｃ領域のバリアントである、請求項９７に記載の方法。

【請求項99】

前記血清学的アッセイが、ＡＢＯ／Ｒｈ型判定アッセイである、請求項１～９８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項100】

前記血清学的アッセイが、即時スピン（ＩＳ）アッセイである、請求項１～９８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項101】

前記血清学的アッセイが、ＩｇＧ及び補体Ｃ３を検出する多重特異性試薬を使用する直接抗グロブリン（ＤＡＴ）アッセイである、請求項１～９８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項102】

前記血清学的アッセイが、補体Ｃ３を検出する単一特異性試薬を使用する直接抗グロブリン（ＤＡＴ）アッセイである、請求項１～９８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項103】

前記血清学的アッセイが、ＰＥＧ増強血清学的アッセイである、請求項１～９９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項104】

前記血清学的アッセイが、前記ＤＡＴアッセイの後に実施される溶出液試験である、請求項１０３に記載の方法。

【請求項105】

前記血清学的アッセイが、試験管アッセイまたは固相赤血球アッセイ（ＳＰＲＣＡ）である、請求項１～１０４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項106】

前記血清学的アッセイが、ゲルカードアッセイである、請求項１～１０４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項107】

前記血清学的アッセイが、固相アッセイである、請求項１～１０４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項108】

少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、ＣＤ４７多量体。

【請求項109】

２～１００のＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１０８に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項110】

前記薬物に結合可能な野生型ＣＤ４７またはそのフラグメントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１０８または１０９に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項111】

前記薬物に結合可能な、野生型ヒトＣＤ４７、野生型マウスＣＤ４７、野生型ラットＣＤ４７、野生型アカゲザルＣＤ４７、野生型カニクイザルＣＤ４７、または前記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１１０に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項112】

配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１０８～１１１のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項113】

前記薬物に結合可能な野生型ＣＤ４７またはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＣＤ４７バリアントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１０８～１１２のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項114】

配列番号２～６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１１３に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項115】

融合ポリペプチドを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１０８～１１４のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項116】

前記融合ポリペプチドが、多量体化ドメインを含む、請求項１１５に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項117】

前記多量体化ドメインが、Ｆｃ単量体、ｃ－Ｊｕｎロイシンジッパードメイン、またはｃ－Ｆｏｓロイシンジッパードメインを含む、請求項１１６に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項118】

前記Ｆｃ単量体が、マウスＦｃ単量体である、請求項１１７に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項119】

前記マウスＦｃ単量体が、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１１８に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項120】

前記融合ポリペプチドのＣＤ４７ポリペプチド単量体が、配列番号８４～８６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１１５～１１９のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項121】

前記ＣＤ４７多量体が、エピトープタグまたはリガンドを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１０８～１２０のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項122】

前記エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のいずれか１つを含むか、または前記リガンドが、ビオチンを含む、請求項１２１に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項123】

前記ＣＤ４７多量体が、可溶性ＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１０８～１２２のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項124】

前記少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体が、ペプチド結合を介して連結されている、請求項１０８～１２３のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項125】

前記少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体が、リンカーペプチドを介して連結されている、請求項１０８～１２１のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項126】

前記リンカーペプチドが、配列番号８５～１０９、１２７～１３０、１４０、及び１４１のいずれか１つを含む、請求項１２５に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項127】

前記リンカーペプチドが、１つ以上のスペーサーを含む、請求項１２５または１２６に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項128】

前記スペーサーが、ＧＳ、ＧＧＳ、または配列番号５２～７０のいずれか１つを含む、請求項１２７に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項129】

前記少なくとも２つのＣＤ４７多量体が、固体支持体に結合している複数のＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む、請求項１０８～１２３のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項130】

前記固体支持体が、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである、請求項１２９に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項131】

前記少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体のそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、前記エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、前記固体支持体上に固定されており、前記ＣＤ４７ポリペプチド単量体が、前記捕捉剤による前記エピトープタグまたはリガンドの特異的結合により、前記固体支持体に結合している、請求項１２９または１３０に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項132】

前記リガンドが、ビオチンであり、前記捕捉剤が、ストレプトアビジンである、請求項１３１に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項133】

前記少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つが、配列番号６を含む、請求項１２９～１３２のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項134】

２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む、請求項１０８～１２３のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項135】

前記２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つが、配列番号６を含む、請求項１３４に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項136】

前記ＣＤ４７多量体が、ホモ多量体である、請求項１０８～１３５のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項137】

前記ＣＤ４７多量体が、ヘテロ多量体である、請求項１０８～１３５のいずれか１項に記載のＣＤ４７多量体。

【請求項138】

少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、ＳＩＲＰ多量体。

【請求項139】

前記ＳＩＲＰ多量体が、２～１００のＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１３８に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項140】

ヒトＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰαまたはそのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１３８または１３９に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項141】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ヒトＣＤ４７に結合可能な、野生型ヒトＳＩＲＰα、野生型マウスＳＩＲＰα、野生型ラットＳＩＲＰα、野生型アカゲザルＳＩＲＰα、野生型カニクイザルＳＩＲＰα、または前記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１４０に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項142】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰαまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰαバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１３８～１４１のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項143】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ヒトＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰγまたはそのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１３８～１４２のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項144】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ヒトＣＤ４７に結合可能な、野生型ヒトＳＩＲＰγ、野生型マウスＳＩＲＰγ、野生型ラットＳＩＲＰγ、野生型アカゲザルＳＩＲＰγ、野生型カニクイザルＳＩＲＰγ、または前記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１４３のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項145】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰγまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰγバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１３８～１４３のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項146】

前記ＳＩＲＰ多量体が、野生型ＳＩＲＰβまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰβバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含み、前記ＳＩＲＰβバリアントまたはそのフラグメントが、ＣＤ４７に結合可能である、請求項１３８～１４５のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項147】

ＳＩＲＰ多量体が、配列番号３３～４５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１３８～１３９、１４２、１４５、及び１４６のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項148】

前記ＳＩＲＰ多量体が、融合ポリペプチドを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１３８～１４７のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項149】

前記融合ポリペプチドが、多量体化ドメインを含む、請求項１４８に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項150】

前記多量体化ドメインが、Ｆｃ単量体、ｃ－Ｊｕｎロイシンジッパードメイン、またはｃ－Ｆｏｓロイシンジッパードメインを含む、請求項１４９に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項151】

前記Ｆｃ単量体が、マウスＦｃ単量体である、請求項１５０に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項152】

前記マウスＦｃ単量体が、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１５１に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項153】

前記融合ポリペプチドが、配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１４８～１５２のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項154】

前記ＳＩＲＰ多量体が、エピトープタグまたはリガンドを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１３８～１５３のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項155】

前記エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のいずれか１つを含むか、または前記リガンドが、ビオチンを含む、請求項１５４に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項156】

前記ＳＩＲＰ多量体が、可溶性ＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む、請求項１３８～１５５のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項157】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体が、ペプチド結合を介して連結されている、請求項１３８～１５６のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項158】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体が、リンカーペプチドを介して連結されている、請求項１３８～１５６のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項159】

前記リンカーペプチドが、配列番号８５～１０９、１２７～１３０、１４０、及び１４１のいずれか１つを含む、請求項１５８に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項160】

前記リンカーペプチドが、１つ以上のスペーサーを含む、請求項１５８または１５９に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項161】

前記スペーサーが、ＧＳ、ＧＧＳ、または配列番号５２～７０のいずれか１つを含む、請求項１６０に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項162】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体が、固体支持体に結合している、請求項１３８～１５６のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項163】

前記固体支持体が、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである、請求項１６２に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項164】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体のそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、前記エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、前記固体支持体上に固定されており、前記ＳＩＲＰポリペプチド単量体が、前記捕捉剤による前記エピトープタグまたはリガンドの特異的結合により、前記固体支持体に結合している、請求項１６２または１６３に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項165】

前記リガンドが、ビオチンであり、前記捕捉剤が、ストレプトアビジンである、請求項１６４に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項166】

前記少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つが、配列番号１１１を含む、請求項１６２～１６５のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項167】

前記ＳＩＲＰ多量体が、２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む、請求項１３８～１５６のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項168】

前記２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つが、配列番号１１１を含む、請求項１６７に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項169】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ホモ多量体である、請求項１３８～１６８のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項170】

前記ＳＩＲＰ多量体が、ヘテロ多量体である、請求項１３８～１６８のいずれか１項に記載のＳＩＲＰ多量体。

【請求項171】

１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む、抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項172】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、１～１００の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む、請求項１７１に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項173】

野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰβバリアント、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または前記のうちのいずれか２つ以上に結合する抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む、請求項１７１または１７２に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項174】

（ａ）配列番号４６を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
（ｂ）配列番号４８を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号４９を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
（ｃ）配列番号５０を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
（ｄ）配列番号１１３を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１１４を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
（ｅ）配列番号１１５を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１１６を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、ならびに／または
（ｆ）配列番号１３３を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１３４を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、
を含む抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む、請求項１７１～１７３のいずれか１項に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項175】

全長抗ＳＩＲＰ抗体を含む、請求項１７１～１７４のいずれか１項に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項176】

前記抗ＳＩＲＰ抗体が、マウスＦｃドメインを含む、請求項１７５に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項177】

前記マウスＦｃドメインが、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１７６に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項178】

前記抗ＳＩＲＰ抗体が、
（ａ）配列番号１１７を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖、
（ｂ）配列番号１１９を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖、
（ｃ）配列番号１２０を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖、または
（ｄ）配列番号１２２を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖、
を含む、請求項１７５～１７６のいずれか１項に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項179】

前記抗ＳＩＲＰ抗体の前記薬物結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ダイアボディ、ワンアーム抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、単一ドメイン抗体、または単一重鎖抗体である、請求項１６４～１６７のいずれか１項に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項180】

前記薬物結合フラグメントが、Ｆ（ａｂ’）２を含み、前記Ｆ（ａｂ’）２が、配列番号１３１及び１３２を含む、請求項１７９に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項181】

前記抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントが、エピトープタグまたはリガンドを含む、請求項１７１～１８０のいずれか１項に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項182】

前記エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のいずれか１つを含むか、または前記リガンドが、ビオチンを含む、請求項１８１に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項183】

前記エピトープタグが、ＨＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１３５）またはＧＳＧＳＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１２６）を含む、請求項１８２に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項184】

前記１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントが、固体支持体に結合している、請求項１７１～１８３のいずれか１項に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項185】

前記固体支持体が、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである、請求項１８４に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項186】

前記１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントのそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、前記エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、前記固体支持体上に固定されており、前記抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントが、前記捕捉剤による前記エピトープタグまたはリガンドの特異的結合により固体支持体に結合している、請求項１８４または１８５に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項187】

前記リガンドが、ビオチンであり、前記捕捉剤が、ストレプトアビジンである、請求項１８６に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項188】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、２、３、または４つのビオチン化抗ＳＩＲＰ抗体またはそのフラグメントに結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む、請求項１７１～１８３のいずれか１項に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項189】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、２、３、または４つのビオチン化Ｆ（ａｂ’）２フラグメントに結合している前記ストレプトアビジンまたは前記アビジンを含み、前記ビオチン化Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの２つ以上が、配列番号１３１及び１３２を含む、請求項１８８に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項190】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、ホモ多量体である、請求項１７１～１８９のいずれか１項に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【請求項191】

前記抗ＳＩＲＰ多量体が、ヘテロ多量体である、請求項１７１～１８９のいずれか１項に記載の抗ＳＩＲＰ多量体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願との相互参照
本出願は、２０２０年１２月６日に出願された米国仮出願第６３／１２１，９６４号の優先権の利益を主張し、この内容は、全体が参照により組み込まれる。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピューター可読形式（ＣＲＦ）（ファイル名：７５７９７２００１４４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年１２月３日、サイズ：９６ＫＢ））。

【0003】

発明の分野
本発明は、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物による血清学的アッセイの干渉を低減するのに使用される方法及び試薬に関する。

【背景技術】

【0004】

がんを含む多種多様な疾患の処置として開発されている抗体系薬物の数は増加の一途をたどっている。治療用抗体の標的が、血球、例えば、赤血球（ＲＢＣ）、白血球（ＷＢＣ）、及び／または血小板にも発現している場合、そのような処置は、血液型判定及び血清学的アッセイに干渉する可能性がある。

【0005】

例えば、シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）に結合し且つ貪食を阻害する、広く発現している細胞表面タンパク質であるＣＤ４７（Ｊａｉｓｗａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１０）３１（６）：２１２－２１９；Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ（２００１）１１（３）：１３０－１３５）は、血液及び固形腫瘍を含む多種多様な悪性腫瘍上に高レベルで発現している。ＣＤ４７発現の上昇は、進行性疾患とも相関する（Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ（２０１２）１０９（１７）：６６６２－６６６７）。ＣＤ４７を標的とするいくつかのがん治療法、例えば、抗体Ｆｃ領域を含む抗体及び融合タンパク質は、ＳＩＲＰα－ＣＤ４７相互作用を遮断するために開発されており、それにより、マクロファージが食細胞機能を実行して腫瘍細胞を除去することが可能になる。

【0006】

ＣＤ４７は、赤血球（ＲＢＣ）及び血小板などの血液細胞の表面にも発現しており（Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）２８８（５４７３）：２０５１－２０５４）、ＣＤ４７を標的とする抗体Ｆｃ領域を含む薬物は、血液型判定及び血清学的試験に干渉し得る。さらに、ＣＤ４７標的薬（例えば、がんの処置用）を受けている患者が、多くの場合、同時に生じる貧血及び／または血小板減少症を処置するために輸血を必要とするので、抗ＣＤ４７薬による血清学的及び血液型判定アッセイへの干渉は、患者の重大な安全性の懸念材料である。従って、当該技術分野では、抗体Ｆｃ領域を含むＣＤ４７標的薬の血清学的アッセイへの干渉を低減する方法及び試薬を開発する必要がある。

【発明の概要】

【0007】

いくつかの実施形態では、試薬赤血球（ＲＢＣ）または試薬血小板を使用する血清学的アッセイの薬物干渉を低減する方法が提供され、該方法は、（ａ）薬物に結合し且つ薬物が試薬ＲＢＣまたは試薬血小板に結合するのを遮断するＣＤ４７多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に添加すること、ならびに、（ｂ）ステップ（ａ）の後に、試薬ＲＢＣまたは試薬血小板を使用して、血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、薬物は、（ｉ）ヒト抗体Ｆｃ領域またはそのバリアント及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分、を含み、ＣＤ４７多量体は、少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。

【0008】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、２～１００のＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、薬物に結合可能な野生型ＣＤ４７またはそのフラグメントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、薬物に結合可能な、野生型ヒトＣＤ４７、野生型マウスＣＤ４７、野生型ラットＣＤ４７、野生型アカゲザルＣＤ４７、野生型カニクイザルＣＤ４７、または上記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、薬物に結合可能な野生型ＣＤ４７またはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＣＤ４７バリアントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、配列番号２～６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、融合ポリペプチドを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、多量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、多量体化ドメインは、Ｆｃ単量体、ｃ－Ｊｕｎロイシンジッパードメイン、またはｃ－Ｆｏｓロイシンジッパードメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ単量体は、マウスＦｃ単量体である。いくつかの実施形態では、マウスＦｃ単量体は、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号８４～８６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、エピトープタグまたはリガンドを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む（例えば、さらに含む）。いくつかの実施形態では、エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のうちのいずれか１つを含むか、または、リガンドが、ビオチンを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、可溶性ＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。

【0009】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、ペプチド結合を介して連結されている少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体は、リンカーペプチドを介して連結されている。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、配列番号８５～１０９、１２７～１３０、１４０、及び１４１のいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、１つ以上のスペーサーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＳ、ＧＧＳ、または、配列番号５２～７０のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、固体支持体に結合している少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体のそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、固体支持体上に固定されており、ＣＤ４７ポリペプチド単量体が、捕捉剤によるエピトープタグまたはリガンドの特異的結合により、固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つは、配列番号６を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。いくつかの実施形態では、２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つは、配列番号６を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、ホモ多量体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、ヘテロ多量体である。

【0010】

いくつかの実施形態では、試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを使用する血清学的アッセイの薬物干渉を低減する方法が提供され、該方法は、（ａ）ヒトＣＤ４７に特異的に結合するＳＩＲＰ多量体を、試薬の赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせに添加すること；及び、（ｂ）ステップ（ａ）の試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを使用して、血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、血漿試料が、薬物による処置を受けている対象由来のものであり、薬物が、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含み、ＳＩＲＰ多量体が、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを使用する血清学的アッセイの薬物干渉を低減する方法が提供され、該方法は、（ａ）ヒトＣＤ４７に特異的に結合するＳＩＲＰ多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に添加すること、及び、ステップ（ａ）の後に、試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを使用して、血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、薬物が、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含み、ＳＩＲＰ多量体が、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、試薬赤血球（ＲＢＣ）、試薬血小板、またはそれらの組み合わせを含有する血液試料の血清学的アッセイにおいて薬物干渉を低減する方法が提供され、該方法は、（ａ）ヒトＣＤ４７に特異的に結合するＳＩＲＰ多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血液試料に添加すること、及び、（ｂ）ステップ（ａ）の後に、血液試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、薬物が、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含み、ＳＩＲＰ多量体が、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。

【0011】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、２～１００のＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰαまたはそのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合可能な、野生型ヒトＳＩＲＰα、野生型マウスＳＩＲＰα、野生型ラットＳＩＲＰα、野生型アカゲザルＳＩＲＰα、野生型カニクイザルＳＩＲＰα、または上記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰαまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰαバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰγまたはそのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合可能な、野生型ヒトＳＩＲＰγ、野生型マウスＳＩＲＰγ、野生型ラットＳＩＲＰγ、野生型アカゲザルＳＩＲＰγ、野生型カニクイザルＳＩＲＰγ、または上記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰγまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰγバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、野生型ＳＩＲＰβまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰβバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含み、ＳＩＲＰβバリアントまたはそのフラグメントは、ＣＤ４７に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、配列番号３３～４５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、融合ポリペプチドを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、多量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、多量体化ドメインは、Ｆｃ単量体、ｃ－Ｊｕｎロイシンジッパードメイン、またはｃ－Ｆｏｓロイシンジッパードメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ単量体は、マウスＦｃ単量体である。いくつかの実施形態では、マウスＦｃ単量体は、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、エピトープタグまたはリガンドを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のうちのいずれか１つを含むか、または、リガンドが、ビオチンを含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、可溶性ＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ペプチド結合を介して連結されている少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、リンカーペプチドを介して連結されている少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、配列番号８５～１０９、１２７～１３０、１４０、及び１４１のいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、１つ以上のスペーサーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＳ、ＧＧＳ、または、配列番号５２～７０のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、固体支持体に結合している少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体のそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、固体支持体上に固定されており、ＳＩＲＰポリペプチド単量体が、捕捉剤によるエピトープタグまたはリガンドの特異的結合により、固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つは、配列番号１１１を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。いくつかの実施形態では、２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つは、配列番号１１１を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ホモ多量体である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヘテロ多量体である。

【0013】

いくつかの実施形態では、試薬赤血球（ＲＢＣ）または試薬血小板を使用する血清学的アッセイの薬物干渉を低減する方法が提供され、該方法は、（ａ）薬物に結合し且つ薬物が試薬ＲＢＣまたは試薬血小板に結合するのを遮断する抗ＳＩＲＰ多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に添加すること、ならびに、（ｂ）ステップ（ａ）の後に、試薬ＲＢＣまたは試薬血小板を使用して、血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、薬物は、（ｉ）ヒト抗体Ｆｃ領域またはそのバリアント及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分、を含み、抗ＳＩＲＰ多量体は、１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、１～１００の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰβバリアント、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または上記のうちのいずれか２つ以上に結合する抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、以下を含む抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む：（ａ）配列番号４６を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；（ｂ）配列番号４８を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号４９を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；（ｃ）配列番号５０を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；（ｄ）配列番号１１３を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１１４を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；（ｅ）配列番号１１５を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１１６を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；ならびに／または、（ｆ）配列番号１３３を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１３４を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、全長抗ＳＩＲＰ抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、マウスＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、マウスＦｃドメインは、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、以下を含む：（ａ）配列番号１１７を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖；（ｂ）配列番号１１９を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖；（ｃ）配列番号１２０を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖；または（ｄ）配列番号１２２を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体の薬物結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ダイアボディ、ワンアーム抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、単一ドメイン抗体、または単一重鎖抗体である。いくつかの実施形態では、薬物結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２を含み、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１３１及び１３２を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントは、エピトープタグまたはリガンドを含む。いくつかの実施形態では、エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のうちのいずれか１つを含むか、または、リガンドが、ビオチンを含む。いくつかの実施形態では、エピトープタグは、ＨＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１３５）またはＧＳＧＳＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１２６）を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、固体支持体に結合している１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントは、エピトープタグまたはリガンドを含み、エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、固体支持体上に固定されており、抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントが、捕捉剤によるエピトープタグまたはリガンドの特異的結合により固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、２、３、または４つのビオチン化抗ＳＩＲＰ抗体またはそのフラグメントに結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、２、３、または４つのビオチン化Ｆ（ａｂ’）２フラグメントに結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含み、ビオチン化Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの２つ以上は、配列番号１３１及び１３２を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、ホモ多量体である。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、ヘテロ多量体である。

【0016】

本明細書の方法のいずれかの、いくつかの実施形態では、薬物は、抗ＣＤ４７抗体を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、または、野生型ＳＩＲＰαもしくはＳＩＲＰαバリアントのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰαバリアントを含み、ＳＩＲＰαバリアントは、野生型ＳＩＲＰαと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、及び／またはＣ末端伸長（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰαバリアントのフラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰαバリアントの細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または、野生型ＳＩＲＰγもしくはＳＩＲＰγバリアントのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰγバリアントを含み、ＳＩＲＰγバリアントは、野生型ＳＩＲＰγと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または上記のうちのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰγバリアントのフラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰγバリアントの細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰβバリアント、またはＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰβバリアントを含み、ＳＩＲＰβバリアントは、野生型ＳＩＲＰβと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または上記のうちのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰβバリアントの細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、薬物の抗体Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域またはそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４Ｆｃ領域、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４ Ｆｃ領域のバリアントである。

【0017】

本明細書の方法のいずれかの、いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、ＡＢＯ／Ｒｈ型判定アッセイである。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、即時スピン（ＩＳ）アッセイである。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、ＩｇＧ及び補体Ｃ３を検出する多重特異性試薬を使用する直接抗グロブリン（ＤＡＴ）アッセイである。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、補体Ｃ３を検出する単一特異性試薬を使用する直接抗グロブリン（ＤＡＴ）アッセイである。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、ＰＥＧ増強血清学的アッセイである。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、ＤＡＴアッセイの後に実施される溶出液試験である。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、試験管アッセイまたは固相赤血球アッセイ（ＳＰＲＣＡ）である。

【0018】

少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含むＣＤ４７多量体が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、２～１００のＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、薬物に結合可能な野生型ＣＤ４７またはそのフラグメントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、薬物に結合可能な、野生型ヒトＣＤ４７、野生型マウスＣＤ４７、野生型ラットＣＤ４７、野生型アカゲザルＣＤ４７、野生型カニクイザルＣＤ４７、または上記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、薬物に結合可能な野生型ＣＤ４７またはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＣＤ４７バリアントを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、配列番号２～６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、融合ポリペプチドを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、多量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、多量体化ドメインは、Ｆｃ単量体、ｃ－Ｊｕｎロイシンジッパードメイン、またはｃ－Ｆｏｓロイシンジッパードメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ単量体は、マウスＦｃ単量体である。いくつかの実施形態では、マウスＦｃ単量体は、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドＣＤ４７ポリペプチド単量体は、配列番号８４～８６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、エピトープタグまたはリガンドを含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のうちのいずれか１つを含むか、または、リガンドが、ビオチンを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、可溶性ＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、ペプチド結合を介して連結されている少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、リンカーペプチドを介して連結されている少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、配列番号８５～１０９、１２７～１３０、１４０、及び１４１のいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、１つ以上のスペーサーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＳ、ＧＧＳ、または、配列番号５２～７０のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、固体支持体に結合している複数のＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む少なくとも２つのＣＤ４７多量体を含む。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体のそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、固体支持体上に固定されており、ＣＤ４７ポリペプチド単量体が、捕捉剤によるエピトープタグまたはリガンドの特異的結合により、固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つは、配列番号６を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。いくつかの実施形態では、２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つは、配列番号６を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、ホモ多量体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、ヘテロ多量体である。

【0020】

いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含むＳＩＲＰ多量体が提供される。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、２～１００のＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰαまたはそのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合可能な、野生型ヒトＳＩＲＰα、野生型マウスＳＩＲＰα、野生型ラットＳＩＲＰα、野生型アカゲザルＳＩＲＰα、野生型カニクイザルＳＩＲＰα、または上記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰαまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰαバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰγまたはそのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合可能な、野生型ヒトＳＩＲＰγ、野生型マウスＳＩＲＰγ、野生型ラットＳＩＲＰγ、野生型アカゲザルＳＩＲＰγ、野生型カニクイザルＳＩＲＰγ、または上記のうちのいずれか１つのフラグメントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ＣＤ４７に結合可能な野生型ＳＩＲＰγまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰγバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、野生型ＳＩＲＰβまたはそのフラグメントと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端伸長、またはＣ末端伸長を含むＳＩＲＰβバリアントを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含み、ＳＩＲＰβバリアントまたはそのフラグメントは、ＣＤ４７に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、配列番号３３～４５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、融合ポリペプチドを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、多量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、多量体化ドメインは、Ｆｃ単量体、ｃ－Ｊｕｎロイシンジッパードメイン、またはｃ－Ｆｏｓロイシンジッパードメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ単量体は、マウスＦｃ単量体である。いくつかの実施形態では、マウスＦｃ単量体は、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、エピトープタグまたはリガンドを含むＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のうちのいずれか１つを含むか、または、リガンドが、ビオチンを含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、可溶性ＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。

【0021】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ペプチド結合を介して連結されている少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、リンカーペプチドを介して連結されている少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、配列番号８５～１０９、１２７～１３０、１４０、及び１４１のいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、１つ以上のスペーサーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＳ、ＧＧＳ、または、配列番号５２～７０のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、固体支持体に結合している少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体のそれぞれが、エピトープタグまたはリガンドを含み、エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、固体支持体上に固定されており、ＳＩＲＰポリペプチド単量体が、捕捉剤によるエピトープタグまたはリガンドの特異的結合により、固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つは、配列番号１１１を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。いくつかの実施形態では、２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体のうちの少なくとも１つは、配列番号１１１を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ホモ多量体である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヘテロ多量体である。

【0022】

いくつかの実施形態では、１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む抗ＳＩＲＰ多量体が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、１～１００の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰβバリアント、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または上記のうちのいずれか２つ以上に結合する抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、以下を含む抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む：（ａ）配列番号４６を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；（ｂ）配列番号４８を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号４９を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；（ｃ）配列番号５０を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；（ｄ）配列番号１１３を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１１４を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；（ｅ）配列番号１１５を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１１６を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；ならびに／または、（ｆ）配列番号１３３を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号１３４を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、全長抗ＳＩＲＰ抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、マウスＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、マウスＦｃドメインは、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、以下を含む：（ａ）配列番号１１７を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖；（ｂ）配列番号１１９を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖；（ｃ）配列番号１２０を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖；または（ｄ）配列番号１２２を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体の薬物結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ダイアボディ、ワンアーム抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、単一ドメイン抗体、または単一重鎖抗体である。いくつかの実施形態では、薬物結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２を含み、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１３１及び１３２を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントは、エピトープタグまたはリガンドを含む。いくつかの実施形態では、エピトープタグが、配列番号７～３２及び１２６のうちのいずれか１つを含むか、または、リガンドが、ビオチンを含む。いくつかの実施形態では、エピトープタグは、ＨＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１３５）またはＧＳＧＳＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１２６）を含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、固体支持体に結合している１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントのそれぞれは、エピトープタグまたはリガンドを含み、エピトープタグまたはリガンドに特異的に結合する捕捉剤が、固体支持体上に固定されており、抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントが、捕捉剤によるエピトープタグまたはリガンドの特異的結合により固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、２、３、または４つのビオチン化抗ＳＩＲＰ抗体またはそのフラグメントに結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、２、３、または４つのビオチン化Ｆ（ａｂ’）２フラグメントに結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含み、ビオチン化Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの２つ以上は、配列番号１３１及び１３２を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、ホモ多量体である。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、ヘテロ多量体である。

【0024】

特許出願、特許公報、及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号を含む、本明細書に引用されている全ての参考文献は、あたかも個々の参考文献が、参照により組み込まれることが具体的且つ個別に示されているかのように、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1A】ＲＢＣ表面抗原に結合する血漿試料中の抗体の存在を検出するために、対象から得られた血漿試料が試薬赤血球（すなわち、特定の細胞表面抗原、または細胞表面抗原群を発現することが既知の赤血球（「ＲＢＣ」））と混合される血清学的アッセイを示す。あるいは、そのような血清学的アッセイは、試薬ＲＢＣの代わりに、試薬血小板（すなわち、特定の細胞表面抗原、または細胞表面抗原群を発現することが既知の血小板）を使用して実施することができる。

【0026】

【図1B】血漿試料中の（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分、を含む薬物の存在が、図１Ａのアッセイにどのように干渉するかを示す。

【0027】

【図1C】対象のＲＢＣ及び／または血小板上の抗原の存在を検出するための、試薬血漿／抗血清（すなわち、特定のＲＢＣ表面抗原（複数可）または血小板表面抗原（複数可）に対する抗体を含有することが既知の血漿または抗血清）と、対象から得られた血液試料が混合される血清学的アッセイを示す。

【0028】

【図1D】血液試料中の（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分、を含む薬物の存在が、図１Ｃのアッセイにどのように干渉するかを示す。

【0029】

【図2】ＣＤ４７多量体を、薬物で処置されている対象から得られた血漿試料に添加することを含む、血清学的アッセイの干渉を低減する方法を示す。要約すると、ＣＤ４７多量体は、血漿試料中の薬物と結合し、その結果、試薬ＲＢＣまたは試薬血小板の表面上のＣＤ４７に結合するために利用可能な薬物はほとんどないか、または全くない。

【0030】

【図3A】ＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体を試薬ＲＢＣまたは試薬血小板に添加することを含む、血清学的アッセイの干渉を低減する方法を示す。要約すると、ＳＩＲＰ多量体は、試薬ＲＢＣまたは試薬血小板の表面上のＣＤ４７に結合する。ＳＩＲＰ多量体による試薬ＲＢＣ（または試薬血小板）の結合は、薬物が試薬ＲＢＣ（または試薬血小板）に結合するのを遮断する。

【0031】

【図3B】薬物による処置を受けている対象由来の血漿に、ＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体を添加することを含む、血清学的アッセイの干渉を低減する方法を示す。要約すると、ＳＩＲＰ多量体は、試薬ＲＢＣまたは試薬血小板の表面に発現しているＣＤ４７への結合に関して薬物と競合し、アッセイにおける薬物結合試薬ＲＢＣもしくは薬物結合試薬血小板の量を最小限に抑える（またはアッセイにおける薬物結合試薬ＲＢＣ及び／もしくは薬物結合試薬血小板を除去する）。

【0032】

【図3C】薬物による処置を受けている対象由来の血液試料に、ＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体を添加することを含む、血清学的アッセイの干渉を低減する方法を示す。要約すると、ＳＩＲＰ多量体は、対象のＲＢＣ及び／または血小板の表面に発現しているＣＤ４７への結合に関して薬物と競合し、アッセイにおける薬物結合ＲＢＣ及び／または薬物結合血小板の量を最小限に抑える（または除去する）。

【0033】

【図3D】薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に、薬物に結合するＳＩＲＰ多量体を添加することを含む、血清学的アッセイの干渉を低減する方法を示す。要約すると、ＳＩＲＰ多量体は、血漿試料中の薬物と結合し、その結果、試薬ＲＢＣまたは試薬血小板の表面上のＣＤ４７に結合するために利用可能な薬物はほとんどないか、または全くない。

【0034】

【図4】ＩＡＴ試験管アッセイにおいて、ＣＤ４７ポリペプチド単量体、ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、及び抗ＳＩＲＰ多量体Ｄが薬物Ａによる干渉を阻害する程度を比較するために実施された実験の結果を提供する。

【0035】

【図5】ＩＡＴ試験管アッセイにおいて、ＣＤ４７ポリペプチド単量体、ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、及び抗ＳＩＲＰ多量体Ｄが薬物Ａによる干渉を阻害する程度を比較するために実施された、さらなる実験の結果を提供する。

【0036】

【図6】ＩＡＴ試験管アッセイにおいて、ＣＤ４７ポリペプチド単量体、ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、及び抗ＳＩＲＰ多量体Ｄが薬物Ａによる干渉を阻害する程度を比較するために実施された、さらなる実験の結果を提供する。

【0037】

【図7】固相赤血球接着アッセイ（ＳＰＲＣＡ）において、ＣＤ４７ポリペプチド単量体、ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、及び抗ＳＩＲＰ多量体Ｄが薬物Ａによる干渉を阻害する程度を比較するために実施された実験の結果を提供する。

【0038】

【図8】固相赤血球接着アッセイ（ＳＰＲＣＡ）において、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃまたは抗ＳＩＲＰ多量体Ｆが薬物Ａによる干渉を阻害するかどうかを試験するために実施された実験の結果を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0039】

Ｉ．輸血前の血清学的アッセイの干渉を軽減する方法
ＣＤ４７は、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ－１）及びシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）を含む免疫細胞上のいくつかの分子と相互作用する膜貫通タンパク質である。ＣＤ４７に結合する際に、ＳＩＲＰαは、貪食を阻害し且つ免疫系による健康な細胞の食細胞による除去を防止するシグナル伝達カスケードを開始する。しかし、多くのがんは、ＣＤ４７を過剰発現し、食細胞によるクリアランスを回避する。従って、ＣＤ４７を標的とする薬物（例えば、抗ＣＤ４７抗体と、抗体Ｆｃ領域及びＣＤ４７に結合する部分を含む融合タンパク質）には、治療上重要な関心がある。ＣＤ４７は、ヒトの赤血球（ＲＢＣ）及び血小板の表面にも発現する。従って、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物を対象に投与した後、対象の血漿中に存在する薬物、または対象のＲＢＣ及び／もしくは血小板に結合している薬物により、所定の輸血前の血清学的アッセイの干渉が引き起こされ得る。

【0040】

例えば、図１Ａは、対象から得られた血漿試料が、試薬ＲＢＣもしくは「参照ＲＢＣ」（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知であるＲＢＣ）、または、試薬血小板もしくは「参照血小板」（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知である血小板）と混合されている血清学的アッセイを示す。これは、試薬ＲＢＣまたは試薬血小板上に発現されることが既知である細胞表面抗原に結合する抗体の血漿試料中における存在を検出する。血漿試料及び試薬ＲＢＣ（または試薬血小板）が混合された後に、抗ヒトグロブリン（ＡＨＧ）が添加され、血漿試料が、ＲＢＣ表面抗原（または血小板表面抗原）に結合する抗体を含有する場合、試薬ＲＢＣ（または試薬血小板）の凝集（例えば、凝集）が生じる。しかし、対象の血漿中に（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物が存在すると、アッセイが干渉され、偽陽性結果が生じ得る。図１Ｂに示されているように、対象の血漿及び試薬ＲＢＣ（または試薬血小板）が混合された後に、薬物は、試薬ＲＢＣ（または試薬血小板）の表面に発現されているＣＤ４７に結合し得る。混合物にＡＨＧを添加すると、試薬ＲＢＣ（または試薬血小板）の凝集が生じる。

【0041】

図１Ｃは、対象のＲＢＣ及び／または血小板上の抗原の存在を検出する血清学的アッセイ（対象由来の血液試料を試薬血漿／抗血清（すなわち、既知のＲＢＣ表面抗原（複数可）または既知の血小板表面抗原（複数可）に対する抗体を含有する血漿または抗血清）と混合している）を示す。試薬血漿／抗血清及び対象由来の試料を混合した後に、試薬血漿／抗血清中の抗体により認識される抗原が、対象のＲＢＣ及び／または血小板上で発現している場合、ＡＨＧの添加により凝集が生じる。対象のＲＢＣ及び／または血小板を含む試料中に、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物が存在すると、アッセイに干渉し、偽陽性結果が生じ得る。図１Ｄに示されているように、対象の血液試料及び試薬血漿／抗血清を含む混合物にＡＨＧが添加された後に、対象のＲＢＣまたは血小板上のＣＤ４７に結合している薬物が凝集を引き起こすであろう。

【0042】

以下に記載の方法は、すなわち、図１Ｂ及び１Ｄに示されているように、薬物により引き起こされる干渉を低減する（いくつかの実施形態では、除去する）。

【0043】

ＩＩ．輸血前の血清学的アッセイの干渉を軽減する、薬物に結合するＣＤ４７多量体を使用する方法
いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）薬物（すなわち、ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物の部分）に結合するＣＤ４７多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に添加すること、ならびに、（ｂ）ステップ（ａ）の後に、試薬ＲＢＣ（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知のＲＢＣ）及び／または試薬血小板（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知の血小板）を使用して、血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、薬物は、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む。そのような実施形態は、一般に、図２に示されている。図２に示されているように、ＣＤ４７多量体は、対象の血漿試料中の薬物（例えば、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分）に結合し、薬物が試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板に結合するのを遮断する。試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板の表面上のＣＤ４７に結合する遊離薬物は、ほとんどないか、または全くない。試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板への薬物の結合から生じる干渉（図１Ｂに示されている）が最小限に抑えられ（または、いくつかの実施形態では、除去され）、それにより、血清学的アッセイにおける偽陽性結果が防止される。いくつかの実施形態では、血漿中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１０．５倍、１１倍、１１．５倍、１２倍、１２．５倍、１３倍、１３．５倍、１４倍、１４．５倍、または１５倍モル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体のうちのいずれか１つを得るために、ＣＤ４７多量体が、血漿試料に添加される。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイが実施される前に、ＣＤ４７多量体も、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板に添加される。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイが実施される前に、ＣＤ４７多量体が、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板（例えば、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板のみ）に添加される。

【0044】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、ＣＤ４７多量体が可溶性である、溶液中で実施される。いくつかの実施形態では、本方法がマトリックスまたは表面への吸着、共有結合、または非共有結合を介して実施される前に、ＣＤ４７多量体が、固相に固定される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、固相または固体支持体への固定化後に、薬物に結合可能である。固定化に使用される固相または固体支持体は、本質的に非水溶性で、イムノアッセイに有用な任意の不活性支持体、表面、または担体であり得、これは、例えば、表面、粒子、多孔質マトリックス、セルロースポリマースポンジ（ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ（登録商標）、Ｐｈａｄｉａ）などの形態の支持体を含む。一般に使用された支持体の例としては、小さなシート、Ｓｅｐｈａｄｅｘ、ポリ塩化ビニル、プラスチックビーズ、金ビーズ、微粒子、アッセイプレート、またはポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレンなどから製造された試験管が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、複数の試料を同時に分析するために使用することができるマルチウェルマイクロタイタープレートなどのマイクロタイタープレート上にコーティングされる。

【0045】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、または、野生型ＳＩＲＰαもしくはＳＩＲＰαバリアントのＣＤ４７結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰαバリアント（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）を含み、ＳＩＲＰαバリアント（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）は、野生型ＳＩＲＰα（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、及び／またはＣ末端伸長（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰαバリアントのフラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰαバリアントの細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、または、野生型ＳＩＲＰαもしくはＳＩＲＰαバリアントのフラグメントに結合可能である。

【0046】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または、野生型ＳＩＲＰγもしくはＳＩＲＰγバリアントのＣＤ４７結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰγバリアントを含み、ＳＩＲＰγバリアントは、野生型ＳＩＲＰγと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または上記のうちのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰγバリアントのＣＤ４７結合フラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰγバリアントの細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または、野生型ＳＩＲＰγもしくはＳＩＲＰγバリアントのフラグメントに結合可能である。

【0047】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能なＳＩＲＰβバリアント、またはＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能なＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰβバリアントを含み、ＳＩＲＰβバリアントは、野生型ＳＩＲＰβと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または上記のうちのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰβバリアントの細胞外ドメインを含み、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、ＳＩＲＰβバリアント、またはＳＩＲＰβバリアントのＣＤ４７結合フラグメントに結合可能である。

【0048】

いくつかの実施形態では、薬物は、抗ＣＤ４７抗体（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）を含み、ＣＤ４７多量体は、抗ＣＤ４７抗体（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）に結合可能である。

【0049】

（ａ）ＣＤ４７ポリペプチド単量体を含むＣＤ４７多量体
いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、複数のＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または最大１００（これらの値の間の任意の範囲を含む）のうちの少なくともいずれか１つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、薬物に結合して、薬物が試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板に結合するのを遮断することが可能な野生型ＣＤ４７（「ＷＴＣＤ４７－ＥＣＤ」）の細胞外ドメイン、またはＷＴ ＣＤ４７－ＥＣＤの部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、ＣＤ４７の膜貫通ドメインまたはその任意の部分を含まない可溶性ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、融合ポリペプチド、例えば、ＣＤ４７（またはそのフラグメント）を含む融合ポリペプチド、を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤ４７ポリペプチド単量体（またはそのフラグメント）と、例えば、抗体Ｆｃドメイン、例えば、マウスＦｃドメイン、を含む。本明細書の他の箇所でさらに詳細に考察されているように、いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤ４７ポリペプチド単量体及び多量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、薬物に結合して、薬物が試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板に結合するのを遮断することが可能な、ヒトＣＤ４７、マウスＣＤ４７、ラットＣＤ４７、アカゲザルＣＤ４７、カニクイザルＣＤ４７、または任意の起源のＣＤ４７を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、ヒトＣＤ４７、マウスＣＤ４７、ラットＣＤ４７、アカゲザルＣＤ４７、カニクイザルＣＤ４７、または任意の起源のＣＤ４７のフラグメントを含む。但し、フラグメントは、薬物に結合して、薬物が試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板に結合するのを遮断することが可能である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、野生型ＣＤ４７のバリアント（またはそのフラグメント、例えば、ＣＤ４７の膜貫通ドメインまたはその任意の部分を含まないＷＴ ＣＤ４７－ＥＣＤのバリアントもしくはＣＤ４７のバリアント）を含む。但し、そのバリアントは、薬物に結合可能である。いくつかの実施形態では、バリアント（またはそのフラグメント）は、野生型ＣＤ４７（例えば、野生型ヒト、ラット、マウス、アカゲザル、またはカニクイザルＣＤ４７）と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、バリアント（すなわち、「ＣＤ４７バリアント」）に存在する１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）が、野生型ＣＤ４７（例えば、野生型ヒト、ラット、マウス、アカゲザル、またはカニクイザルＣＤ４７）と比較して、ＣＤ４７バリアントのグリコシル化パターンを変化させる。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７バリアントに存在する１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）は、野生型ＣＤ４７（例えば、野生型ヒト、ラット、マウス、アカゲザル、またはカニクイザルＣＤ４７）と比較して、ＣＤ４７バリアントの薬物に対する親和性を増加させる。いくつかの実施形態では、薬物のＣＤ４７ポリペプチド単量体に対する親和性は、薬物のヒトＣＤ４７に対する親和性よりも大きい。

【0050】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、以下の配列番号１～６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤ４７バリアントを含む：
ＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶ ＥＦＴＦＳＮＤＴＶＶ ＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡ ＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷ ＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦ ＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰ ＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶ ＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬ ＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨ ＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥ ＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥ ＬＫＹＲＶＶＳ（配列番号１）
ＷＱＬＰＬＬＦＮＫＴ ＫＳＶＥＦＴＦＧＮＤ ＴＶＶＩＰＣＦＶＴＮ ＭＥＡＱＮＴＴＥＶＹ ＶＫＷＫＦＫＧＲＤＩ ＹＴＦＤＧＤＫＮＫＳ ＴＶＰＴＤＦＳＳＡＫ ＩＥＶＳＱＬＬＫＧＤ ＡＳＬＫＭＤＫＳＤＡ ＶＳＨＴＧＮＹＴＣＥ ＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴ ＩＩＥＬＫＹＲＶＶＳ（配列番号２）
ＷＱＰＰＬＬＦＮＫＴ ＫＳＶＥＦＴＦＧＮＤ ＴＶＶＩＰＣＦＶＴＮ ＭＥＡＱＮＴＴＥＶＹ ＶＫＷＫＦＫＧＲＤＩ ＹＴＦＤＧＱＡＮＫＳ ＴＶＰＴＤＦＳＳＡＫ ＩＥＶＳＱＬＬＫＧＤ ＡＳＬＫＭＤＫＳＤＡ ＶＳＨＴＧＮＹＴＣＥ ＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴ ＩＩＥＬＫＹＲＶＶＳ（配列番号３）
ＷＱＰＰＬＬＦＮＫＴ ＫＳＶＥＦＴＦＣＮＤ ＴＶＶＩＰＣＦＶＴＮ ＭＥＡＱＮＴＴＥＶＹ ＶＫＷＫＦＫＧＲＤＩ ＹＴＦＤＧＱＡＮＫＳ ＴＶＰＴＤＦＳＳＡＫ ＩＥＶＳＱＬＬＫＧＤ ＡＳＬＫＭＤＫＳＤＡ ＶＳＨＴＧＮＹＴＣＥ ＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴ ＩＩＥＬＫＹＲＶＶＳ（配列番号４）
ＷＱＰＰＬＬＦＮＫＴ ＫＳＶＥＦＴＣＧＮＤ ＴＶＶＩＰＣＦＶＴＮ ＭＥＡＱＮＴＴＥＶＹ ＶＫＷＫＦＫＧＲＤＩ ＹＴＦＤＧＱＡＮＫＳ ＴＶＰＴＤＦＳＳＡＫ ＩＥＶＳＱＬＬＫＧＤ ＡＳＬＫＭＤＫＳＤＡ ＶＳＨＴＧＮＹＴＣＥ ＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴ ＩＩＥＬＫＹＲＶＶＳ（配列番号５）
ＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶ ＥＦＴＦＳＮＤＴＶＶ ＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡ ＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷ ＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦ ＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰ ＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶ ＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬ ＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨ ＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥ ＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥ ＬＫＹＲＶＶＳＨＨＨ ＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥ ＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号６）

【0051】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、配列番号６を含む。いくつかの実施形態では、血漿中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または１０倍モル過剰のＣＤ４７多量体のうちのいずれか１つを得るために、ＣＤ４７多量体が、血漿試料（例えば、薬物による処置を受けている対象から得られた血漿試料）に添加される。

【0052】

多量体化して本明細書に記載の方法で使用することができる例示的なＣＤ４７ポリペプチド単量体（例えば、ＣＤ４７バリアントを含む）に関するさらなる詳細は、Ｈｏ ｅｔ ａｌ．（２０１５）“‘Ｖｅｌｃｒｏ’Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ ＣＤ４７ Ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ ａｓ Ｓｉｇｎａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａ（ＳＩＲＰα）Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ Ｔｈａｔ Ｅｎｈａｎｃｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ．”Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２９０：１２６５０－１２６６３及びＷＯ２０１６／１７９３９９で提供されており、これらの内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0053】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、多量体化ドメインを含む融合ポリペプチドを含む。例示的な多量体化ドメインとしては、例えば、マウスＦｃ単量体などのＦｃ単量体、ｃ－Ｊｕｎロイシンジッパードメイン、及びｃ－Ｆｏｓロイシンジッパードメインが挙げられるが、これらに限定されない。これらの多量体化ドメインのそれぞれは、二量体を形成可能である。いくつかの実施形態では、多量体化は、ＧＶＧＶＰ（配列番号７１）、ＶＰＧＧ（配列番号１４２）、ＡＰＧＶＧＶ（配列番号７２）、ＧＡＧＡＧＳ（配列番号７３）、ＧＰＧＧＧ（配列番号７４）、ＧＰＧＧＸ（式中、Ｘは、任意のアミノ酸（配列番号１２３）である）、ＧＰＧＱＱ（配列番号１２４）、ＧＰＧＧＹ（配列番号１２５）、ＧＧＹＧＰＧＳ（配列番号７５）、ＧＡＰＧＡＰＧＳＱＧＡＰＧＬＱ（配列番号７６）、ＧＡＰＧＴＰＧＰＱＧＬＰＧＳＰ（配列番号７７）、ＡＫＬＫＬＡＥＡＫＬＥＬＡ（配列番号７８）、ＰＰＡＫＶＰＥＶＰＥＰＫＫＰＶＰＥＥＫＶＰＶＰＫＫＰＥＡ（配列番号７９）、及び／またはＧＧＦＧＧＭＧＧＧＸ（式中、Ｘは、任意のアミノ酸（配列番号８０）である）の反復単位を含む。例えば、以下を参照のこと：Ｔａｔｈａｍ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２５，５６７－５７１；Ｓａｎｆｏｒｄ ａｎｄ Ｋｕｍａｒ（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１６，４１６－４２１；及びＣａｓａｌ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｆｕｔｕｒｅ Ｔｒｅｎｄｓ ｆｏｒ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｂａｓｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ：Ｔｈｅ Ｃａｓｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｌｋ－Ｅｌａｓｔｉｎ－Ｌｉｋｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ．Ｉｎ Ｋａｂａｓｃｉ（Ｅｄ．）Ｂｉｏ－Ｂａｓｅｄ Ｐｌａｓｔｉｃｓ：Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ｐｐ．３１１－３２）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｌｔｄ．。

【0054】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、配列番号１～６のいずれか１つ及び配列番号８１～８３のいずれか１つを含む融合ポリペプチドを含む。配列番号８１～８３のアミノ酸配列が以下に記載される。配列番号８１は、マウスＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。配列番号８２は、マウスＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含み、ＣＨ３ドメインは、Ｎ２９７Ａ置換を含み、アミノ酸番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う。配列番号８３は、マウスＩｇＧ２ａのＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
ＶＰＲＤＳＧＣＫＰＣ ＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶ ＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶ ＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴ ＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤ ＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤ ＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱ ＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦ ＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨ ＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫ ＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡ ＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫ ＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴ ＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫ ＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴ ＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥ ＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮ ＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴ ＤＧＳＹＦＩＹＳＫＬ ＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧ ＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥ ＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳ ＬＳＨＳＰＧ（配列番号８１）
ＶＰＲＤＳＧＣＫＰＣ ＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶ ＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶ ＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴ ＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤ ＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤ ＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱ ＰＲＥＥＱＦＡＳＴＦ ＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨ ＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫ ＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡ ＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫ ＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴ ＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫ ＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴ ＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥ ＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮ ＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴ ＤＧＳＹＦＩＹＳＫＬ ＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧ ＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥ ＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳ ＬＳＨＳＰＧ （配列番号８２）
ＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣ ＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬ ＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰ ＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳ ＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶ ＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱ ＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶ ＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥ ＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳ ＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭ ＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮ ＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲ ＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲ ＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰ ＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴ ＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰ ＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮ ＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴ ＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹ ＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫ ＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳ ＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮ ＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴ ＰＧ（配列番号８３）

【0055】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、そのアミノ酸配列が以下の配列番号８４～８６のいずれか１つに記載の融合ポリペプチドを含む。
ＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶ ＥＦＴＦＳＮＤＴＶＶ ＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡ ＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷ ＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦ ＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰ ＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶ ＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬ ＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨ ＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥ ＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥ ＬＫＹＲＶＶＳＶＰＲ ＤＳＧＣＫＰＣＩＣＴ ＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦ ＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩ ＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶ ＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶ ＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥ ＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥ ＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶ ＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷ ＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶ ＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥ ＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰ ＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰ ＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶ ＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦ ＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷ ＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮ ＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳ ＹＦＩＹＳＫＬＮＶＱ ＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦ ＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨ ＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨ ＳＰＧ（配列番号８４）
ＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶ ＥＦＴＦＳＮＤＴＶＶ ＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡ ＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷ ＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦ ＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰ ＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶ ＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬ ＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨ ＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥ ＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥ ＬＫＹＲＶＶＳＶＰＲ ＤＳＧＣＫＰＣＩＣＴ ＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦ ＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩ ＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶ ＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶ ＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥ ＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥ ＥＱＦＡＳＴＦＲＳＶ ＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷ ＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶ ＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥ ＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰ ＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰ ＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶ ＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦ ＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷ ＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮ ＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳ ＹＦＩＹＳＫＬＮＶＱ ＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦ ＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨ ＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨ ＳＰＧ（配列番号８５）
ＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶ ＥＦＴＦＳＮＤＴＶＶ ＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡ ＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷ ＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦ ＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰ ＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶ ＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬ ＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨ ＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥ ＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥ ＬＫＹＲＶＶＳＥＰＲ ＧＰＴＩＫＰＳＰＰＣ ＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧ ＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩ ＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰ ＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳ ＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷ ＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡ ＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮ ＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰ ＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫ ＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤ ＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳ ＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱ ＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥ ＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣ ＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩ ＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴ ＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶ ＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹ ＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷ ＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶ ＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴ ＴＫＳＦＳＲＴＰＧ（配列番号８６）

【0056】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体（例えば、融合ポリペプチド）は、エピトープタグを含む（例えば、さらに含む）。いくつかの実施形態では、エピトープタグにより、ＣＤ４７ポリペプチド単量体の多量体化が促進される。いくつかの実施形態では、タグにより、ＣＤ４７ポリペプチド単量体の固体支持体（例えば、ビーズ、スライドガラスなど）への固定化が促進される。例示的なエピトープタグとしては、例えば、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号７）、ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号８）、ＳＲＬＥＥＥＬＲＲＲＬＴＥ（配列番号９）、ＫＲＲＷＫＫＮＦＩＡＶＳＡＡＮＲＦＫＫＩＳＳＳＧＡＬ（配列番号１０）、ポリグルタミン酸タグ、例えば、ＥＥＥＥＥＥ（配列番号１１）、ＧＡＰＶＰＹＰＤＰＬＥＰＲ（配列番号１２）、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号１３）、ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号１４）、ＴＫＥＮＰＲＳＮＱＥＥＳＹＤＤＮＥＳ（配列番号１５）、ＴＥＴＳＱＶＡＰＡ（配列番号１６）、ＫＥＴＡＡＡＫＦＥＲＱＨＭＤＳ（配列番号１７）、ＭＤＥＫＴＴＧＷＲＧＧＨＶＶＥＧＬＡＧＥＬＥＱＬＲＡＲＬＥＨＨＰＱＧＱＲＥＰ（配列番号１８）、ＳＬＡＥＬＬＮＡＧＬＧＧＳ（配列番号１９）、ＴＱＤＰＳＲＶＧ（配列番号２０）、ＷＳＨＰＱＦＥＫ（配列番号２１）、ＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧ（配列番号２２）、ＥＶＨＴＮＱＤＰＬＤ（配列番号２３）；ＧＫＰＩＰＮＰＬＬＧＬＤＳＴ（配列番号２４）、ＹＴＤＩＥＭＮＲＬＧＫ（配列番号２５）、ＤＬＹＤＤＤＤＫ（配列番号２６）、ＴＤＫＤＭＴＩＴＦＴＮＫＫＤＡＥ（配列番号２７）、ＡＨＩＶＭＶＤＡＹＫＰＴＫ（配列番号２８）、ＫＬＧＤＩＥＦＩＫＶＮＫ（配列番号２９）、ＫＬＧＳＩＥＦＩＫＶＮＫ（配列番号３０）、ＤＩＰＡＴＹＥＦＴＤＧＫＨＹＩＴＮＥＰＩＰＰＫ（配列番号３１）、及びＤＰＩＶＭＩＤＮＤＫＰＩＴ（配列番号３２）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0057】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、リガンドを含む（例えば、リガンドに結合している）。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンである。

【0058】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む（上を参照）。配列番号６は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＷＴヒトＣＤ４７のアミノ酸配列、ヘキサヒスチジンペプチド（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号７））、及び１５アミノ酸のタグＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号８）を含む。ＡＶＩＴＡＧ（商標）としても既知のＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号８）は、Ｅ．ｃｏｌｉビオチンリガーゼＢｉｒＡにより特異的にビオチン化される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＷＴヒトＣＤ４７のアミノ酸配列及びヘキサヒスチジンペプチド（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号７））を含む、配列番号Ｇのアミノ酸配列を含む。

【0059】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、同一のＣＤ４７ポリペプチド単量体（例えば、本明細書に記載の２～１００の同一のＣＤ４７ポリペプチド単量体）を含むホモ多量体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、少なくとも２つの異なるＣＤ４７ポリペプチド単量体（例えば、本明細書に記載のＣＤ４７ポリペプチド単量体）を含むヘテロ多量体である。２つ以上の異なるＣＤ４７ポリペプチド単量体の任意の組み合わせを含むＣＤ４７ヘテロ多量体が企図される。

【0060】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体中のＣＤ４７ポリペプチド単量体は、例えば、ＣＤ４７ポリペプチド単量体の連結鎖を形成するように、ペプチド結合を介して連結されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体中のＣＤ４７ポリペプチド単量体は、リンカーペプチドを介して連結されている。例示的なリンカーペプチドは、例えば、以下を含むが、これに限定されない：ＬＳＧＸ_１ＲＸ_２Ｘ_３ＳＸ_４ＤＮＨ（配列番号１２７）（式中、Ｘ_１～Ｘ_４のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；Ｘ_１ＳＧＳＲＫＸ_２ＲＶＸ_３Ｘ_４Ｘ_５（配列番号１２８）（式中、Ｘ_１～Ｘ_５のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＳＧＲＸＳＡ（配列番号１２９）（式中、Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＬＳＧＸ_１ＲＸ_２Ｘ_３ＳＸ_４ＤＮＨ（配列番号１３０）（式中、Ｘ_１～Ｘ_４のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＲＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＲＫＸ_４ＶＸ_５Ｘ_６ＧＸ_７（配列番号１３７）（式中、Ｘ_１～Ｘ_７のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＲＱＡＲＸＶＶ（配列番号１３８）（式中、Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＲＸ_１Ｘ_２ＲＫＶＸ_３Ｇ（配列番号８７）（式中、Ｘ_１～Ｘ_３のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＫＲＲＫＱＧＡＳＲＫＡ（配列番号：８８）；ＬＳＧＸ_１ＲＸ_２Ｘ_３ＳＸ_４ＤＮＨ（配列番号８９）（式中、Ｘ_１～Ｘ_４のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＮＸ_７Ｘ_８Ｘ_９（配列番号９０）（式中、Ｘ_１～Ｘ_９のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＡＡＮＸＬ（配列番号９１）（式中、Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＡＴＮＸＬ（配列番号１３９）（式中、Ｘは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＳＩＳＱＸ_１ＹＱＲＳＳＸ_２Ｘ_３（配列番号９２）（式中、Ｘ_１～Ｘ_３のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＳＳＫＬＱ（配列番号９３）；Ｘ_１ＰＸ_２Ｘ_３ＬＩＸ_４Ｘ_５Ｘ_６（配列番号９４）（式中、Ｘ_１～Ｘ_６のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＧＰＡＸ_１ＧＬＸ_２ＧＸ_３（配列番号９５）（式中、Ｘ_１～Ｘ_３のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＧＰＬＧＩＡＧＱ（配列番号９６）；ＰＶＧＬＩＧ（配列番号９７）；ＨＰＶＧＬＬＡＲ（配列番号９８）；Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＶＩＡＴＸ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７（配列番号９９）（式中、Ｘ_１～Ｘ_７のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；Ｘ_１ＹＹＶＴＡＸ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５（配列番号１００）（式中、Ｘ_１～Ｘ_５のそれぞれは、任意の天然に存在するアミノ酸である）；ＰＲＦＫＩＩＧＧ（配列番号１０１）；ＰＲＦＲＩＩＧＧ（配列番号１０２）；ＳＳＲＨＲＲＡＬＤ（配列番号１０３）；ＲＫＳＳＩＩＩＲＭＲＤＶＶＬ（配列番号１０４）；ＳＳＳＦＤＫＧＫＹＫＧＤＤＡ（配列番号１０５）；ＳＳＳＦＤＫＧＫＹＫＲＧＤＤＡ（配列番号１０６）；ＩＥＧＲ（配列番号１４１）；ＩＤＧＲ（配列番号１４０）；ＧＧＳＩＤＧＲ（配列番号１０７）；ＰＬＧＬＷＡ（配列番号１０８）；及びＤＶＡＱＦＶＬＴ（配列番号１０９）。

【0061】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体中のＣＤ４７ポリペプチド単量体は、リンカーペプチド及び少なくとも１つのスペーサーを介して連結されている。いくつかの実施形態では、スペーサーは、３～２００のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、１つ以上のグリシン及び／またはセリン残基を含む。特定の実施形態では、スペーサーは、ＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＧＳ（配列番号５２）、ＧＧＳＧ（配列番号５３）、またはＳＧＧＧ（配列番号５４）を含む複数のモチーフまたは反復モチーフを含む。特定の実施形態では、スペーサーは、ＧＳＧＳ（配列番号５５）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号５６）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号５７）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号５８）、またはＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号５９）を含む複数または反復モチーフを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＧＳ、例えば、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号６０）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号６１）、及びＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１３６）を含む複数または反復モチーフを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＧＳＧ（配列番号５３）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号６２）、またはＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号６３）を含む複数または反復モチーフを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、配列番号５２の複数の反復、例えば、２～１０の反復、を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ＧＥＮＬＹＦＱＳＧＧ（配列番号６４）、ＳＡＣＹＣＥＬＳ（配列番号６５）、ＲＳＩＡＴ（配列番号６６）、ＲＰＡＣＫＩＰＮＤＬＫＱＫＶＭＮＨ（配列番号６７）、ＧＧＳＡＧＧＳＧＳＧＳＳＧＧＳＳＧＡＳＧＴＧＴＡＧＧＴＧＳＧＳＧＴＧＳＧ（配列番号６８）、ＡＡＡＮＳＳＩＤＬＩＳＶＰＶＤＳＲ（配列番号６９）、またはＧＧＳＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号７０）を含む。

【0062】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、固体支持体に結合している複数のＣＤ４７ポリペプチド単量体（例えば、２～１００のＣＤ４７ポリペプチド単量体）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、共有結合または非共有結合的捕捉を介して固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、複数のＣＤ４７ポリペプチド単量体（例えば、２つ以上のＣＤ４７ポリペプチド単量体）及び固体支持体を含み、ＣＤ４７ポリペプチド単量体のそれぞれは、（例えば、上記の）エピトープタグまたはリガンドを含み、捕捉剤は、固体支持体上に固定され、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、固体支持体上に固定されている捕捉剤によるエピトープタグまたはリガンドの特異的結合を介して固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）は、２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。いくつかの実施形態では、ビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、例えば、実施例に記載されるように、配列番号６をビオチン化することにより生成される。

【0063】

（ｂ）ＣＤ４７多量体の作製方法
（ｉ）組み換え生成
いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体（例えば、ペプチド結合またはリンカーペプチドを介して連結されている少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含むホモ多量体またはヘテロ多量体）は、組み換え宿主細胞により生成される。宿主細胞は、対応する核酸から本明細書に記載のＣＤ４７多量体を発現するために必要な必要な細胞の構成要素、例えば、細胞小器官、が含まれるビヒクルを指す。核酸は、当該技術分野で既知の従来手法（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染など）により宿主細胞に導入することができる核酸ベクターに含まれ得る。核酸ベクターの選択は、使用されるべき宿主細胞に部分的に依存する。一般に、宿主細胞は、原核生物（例えば、細菌）または真核生物（例えば、哺乳動物）起源のいずれかである。

【0064】

（Ａ）核酸、ベクター、及び宿主細胞
ＣＤ４７多量体のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列は、当該技術分野で既知の様々な方法で調製され得る。これらの方法には、オリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）変異導入及びＰＣＲ変異導入が含まれるが、これらに限定されない。ＣＤ４７多量体をコードするポリヌクレオチド分子は、標準的な手法、例えば、遺伝子合成、を使用して得られ得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体をコードするポリヌクレオチド分子は、当該技術分野の標準的手法、例えば、ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（商標）変異導入、を使用して、特定の置換を含有するように変異され得る。ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド合成装置またはＰＣＲ手法を使用して合成することができる。ＣＤ４７多量体をコードするポリヌクレオチド配列は、原核生物または真核生物の宿主細胞においてポリヌクレオチドを複製及び発現可能なベクターに挿入され得る。多くのベクターが、当該技術分野で利用可能である。各ベクターは、特定の宿主細胞との適合性を調整及び最適化され得る様々な構成要素を含有してもよい。例えば、ベクター構成要素には、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位、シグナル配列、ＣＤ４７多量体をコードするポリヌクレオチド配列、及び転写終結配列が含まれてもよいが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ベクターには、複数のＣＤ４７多量体の発現を可能にする内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）が含まれ得る。細菌発現ベクターのいくつかの例としては、ｐＧＥＸシリーズのベクター（例えば、ｐＧＥＸ－２Ｔ、ｐＧＥＸ－３Ｘ、ｐＧＥＸ－４Ｔ、ｐＧＥＸ－５Ｘ、ｐＧＥＸ－６Ｐ）、ｐＥＴシリーズのベクター（例えば、ｐＥＴ－２１、ｐＥＴ－２１ａ、ｐＥＴ－２１ｂ、ｐＥＴ－２３、ｐＥＴ－２４）、ｐＡＣＹＣシリーズのベクター（例えば、ｐＡＣＹＤｕｅｔ－１）、ｐＤＥＳＴシリーズのベクター（例えば、ｐＤＥＳＴ１４、ｐＤＥＳＴ１５、ｐＤＥＳＴ２４、ｐＤＥＳＴ４２）、ならびにｐＢＲ３２２及びその誘導体（例えば、米国特許第５，６４８，２３７号を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物発現ベクターのいくつかの例としては、ｐＣＤＮＡ３、ｐＣＤＮＡ４、ｐＮＩＣＥ、ｐＳＥＬＥＣＴ、及びｐＦＬＡＧ－ＣＭＶが挙げられるが、これらに限定されない。他のタイプの核酸ベクターには、宿主細胞内でタンパク質を発現させるためのウイルスベクター（例えば、昆虫宿主細胞内でタンパク質を発現させるためのバキュロウイルスベクター）が含まれる。

【0065】

いくつかの実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が、宿主細胞として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ株の例としては、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ λ １７７６（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，５３７）、Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＢＡＡ－１０２５）、及びＥ．ｃｏｌｉ ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，６０８）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞が、宿主細胞として使用される。哺乳動物細胞型の例としては、例えば、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＰＣ３細胞、Ｖｅｒｏ細胞、及びＭＣ３Ｔ３細胞が挙げられるが、これらに限定されない。異なる宿主細胞は、タンパク質生成物の翻訳後プロセシング及び修飾のための特徴的且つ特異的な機序を有する。発現されたタンパク質の適切な修飾及びプロセシングを確実に行うために、適切な細胞株または宿主系が選択され得る。上記の発現ベクターは、当該技術分野における従来の手法、例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、及び直接マイクロインジェクションを使用して、適切な宿主細胞に導入され得る。タンパク質生成のためにベクターが宿主細胞に導入されると、宿主細胞は、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適切に改変された従来の栄養培地で培養される。

【0066】

（Ｂ）タンパク質の生成、回収、及び精製
ＣＤ４７多量体を生成するために使用される宿主細胞は、当該技術分野で既知の且つ選択された宿主細胞の培養に適した培地中で成長され得る。細菌宿主細胞に適した培地の例としては、ルリアブロス（ＬＢ）及び必要な補助剤、例えば、選択剤、例えば、アンピシリン、が挙げられる。哺乳動物宿主細胞に適した培地の例としては、最小必須培地（ＭＥＭ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）が補充されたＤＭＥＭ、及びＲＰＭＩ－１６４０が挙げられる。宿主細胞は、好適な温度、例えば、約２０℃～約３９℃、例えば、２５℃～約３７℃、で培養される。培地のｐＨは、一般に、主に宿主生物に応じて、約６．８～約７．４、例えば、約７．０、である。誘導性プロモーターが発現ベクターに使用される場合、プロモーターの活性化に適した条件下で、タンパク質発現が誘導される。いくつかの実施形態では、宿主細胞により生成されたＣＤ４７多量体の回収は、通常は、一般に、浸透圧衝撃、超音波処理、または溶解のような手段による宿主細胞の破壊を含む。細胞が破壊されると、細胞破片は、遠心分離または濾過で除去され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、培地中に分泌される。そのような発現系の上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して最初に濃縮される。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤は、タンパク質分解を阻害する上記ステップのいずれかに含まれてもよく、外来性汚染物質の成長を防止する抗生物質が含まれてもよい。ＣＤ４７多量体は、例えば、アフィニティー樹脂クロマトグラフィーで、さらに精製されてもよい。当該技術分野で既知の標準的なタンパク質精製方法を使用することができる。以下の手順は、好適な精製手順の例示である：免疫親和性またはイオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカまたは陽イオン交換樹脂でのクロマトグラフィー、ＳＯＳ－ＰＡＧＥ、及びゲル濾過。

【0067】

（ｉｉ）固体支持体への非共有結合的捕捉
いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体（例えば、ＣＤ４７ホモ多量体またはＣＤ４７ヘテロ多量体）は、非共有結合的捕捉を介して、複数のＣＤ４７ポリペプチド単量体（例えば、２～１００のＣＤ４７ポリペプチド単量体）を固体支持体に結合させることにより生成される。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、マイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、例えば、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルもしくはポリプロピレンを含むか、またはそれらから作製される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、それぞれ、リガンドを含み、捕捉剤は、固体支持体上に固定されており、ＣＤ４７多量体は、固体支持体上に固定されている捕捉剤によるリガンドの特異的結合を介して、ＣＤ４７ポリペプチド単量体を固体支持体に結合させることにより生成される。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。固相または固体支持体（例えば、本明細書に記載の固相または固体支持体）上に固定されている少なくとも２つのＣＤ４７ポリペプチド単量体を含むＣＤ４７多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、それぞれ、ビオチン化され、ストレプトアビジン分子は、固体支持体上に固定されており、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、アビジンへのビオチンの特異的結合を介して固体支持体に結合している。

【0068】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、配列番号６を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体をコードする核酸を含む宿主細胞を、ＣＤ４７ポリペプチド単量体の発現を引き起こす適切な条件下で培養し、ＣＤ４７ポリペプチド単量体を回収することにより調製される。ビオチン受容体ペプチドのアミノ酸配列を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体は、Ｅ．ｃｏｌｉビオチンリガーゼ（ＢｉｒＡ）を使用してビオチン化される。ストレプトアビジン及びアビジンは、四量体のビオチン結合糖タンパク質である。ストレプトアビジン及びアビジンの各サブユニットは、高い特異性及び高い親和性（Ｋ_Ｄ＝約１０^－１５）でビオチンに結合可能である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、ビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体を、ストレプトアビジンまたはアビジン分子が固定されている固体支持体に結合させることにより生成される。いくつかの実施形態では、例えば、ストレプトアビジンまたはアビジンコンジュゲート固体支持体に結合している複数のＣＤ４７ポリペプチド単量体（例えば、２～１００のＣＤ４７ポリペプチド単量体）を含むＣＤ４７多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）が提供される。例示的なストレプトアビジンまたはアビジンコンジュゲート固体支持体としては、例えば、金ビーズ（例えば、Ｎａｎｏｃｓ、Ｎａｎｏｃｏｍｐｏｓｉｘ、及びＣｙｔｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから入手可能）、金ナノシェル（例えば、Ｎａｎｏｃｓ、Ｎａｎｏｃｏｍｐｏｓｉｘ、及びＣｙｔｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから入手可能）、デキストランポリマー（例えば、ＦｉｎａＢｉｏｓｏｌｔｉｏｎｓから入手可能）、シリカビーズ（例えば、ＢａｎｇｓＬａｂｓ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＶｅｃｔｏｒＬａｂｓから入手可能）、磁気ビーズ（例えば、ＣＤ Ｂｉｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈから入手可能）、ならびにセファロースビーズ（例えば、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ及びＣｅｌｌＳｉｇｎａｌから入手可能）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、２、３、または４つのビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含むＣＤ４７多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）が提供される。

【0069】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、例えば、二官能性タンパク質カップリング剤を介して２つ以上のＣＤ４７ポリペプチド単量体を互いに連結することにより生成される。例示的な二官能性タンパク質カップリング剤としては、例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミダートＨＣｌ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアナート（例えば、トリエン２，６－ジイソシアナート）、及びビス活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0070】

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７多量体は、例えば、二官能性薬物を介して２つ以上のＣＤ４７ポリペプチド単量体を固体支持体に連結することにより生成される。一般に使用された架橋剤としては、例えば、１，１－ビス（ジアゾアセチル）－２－フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば、４－アジドサリチル酸とのエステル、３，３’－ジチオビス（スクシンイミジル－プロピオナート）などのジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、二官能性マレイミド、例えばビス－Ｎ－マレイミド－１，８－オクタン、及びメチル－３－［（ｐ－アジドフェニル）－ジチオ］プロピオイミダートなどの薬物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0071】

次に、上記のように生成されたＣＤ４７多量体は、血清学的アッセイにおいてＣＤ４７に結合する薬物による干渉を防止するために、本明細書で提供される方法で使用される。

【0072】

ＩＩＩ．輸血前血清学的アッセイの干渉を軽減するためにＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体を使用する方法
（ａ）ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体を使用する方法
いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）ヒトＣＤ４７に結合し且つ抗ヒトグロブリン（ＡＨＧ）に結合する抗体Ｆｃ領域を含まないＳＩＲＰ多量体を、試薬ＲＢＣ（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知のＲＢＣ）及び／または試薬血小板（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知の血小板）に添加すること、ならびに、（ｂ）ステップ（ａ）の後に、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板を使用して、血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、血漿試料は、薬物による処置を受けている対象に由来するものであり、薬物は、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む。そのような実施形態は、一般に、図３Ａに示されている。図３Ａに示されているように、ＳＩＲＰ多量体は、試薬ＲＢＣ（及び／または試薬血小板）の表面上に発現しているＣＤ４７に結合し、薬物が試薬ＲＢＣ（及び／または試薬血小板）に結合するのを遮断し、それにより、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板への薬物の結合から生じる干渉（図１Ｂに示されている）が最小限に抑えられる（または、いくつかの実施形態では、除去される）。いくつかの実施形態では、対象由来の血漿試料中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１０．５倍、１１倍、１１．５倍、１２倍、１２．５倍、１３倍、１３．５倍、１４倍、１４．５倍、または１５倍モル過剰のＳＩＲＰ多量体のうちのいずれか１つを得るために、ＣＤ４７多量体が、血漿試料に添加される。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイが実施される前に、ＳＩＲＰ多量体が、対象の血漿、ならびに試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板に添加される。いくつかの実施形態では、血漿中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１０．５倍、１１倍、１１．５倍、１２倍、１２．５倍、１３倍、１３．５倍、１４倍、１４．５倍、または１５倍モル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体のうちのいずれか１つを得るために、ＳＩＲＰ多量体が、血漿試料に添加される。

【0073】

いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）ヒトＣＤ４７に結合し且つ抗ヒトグロブリン（ＡＨＧ）に結合する抗体Ｆｃ領域を含まないＳＩＲＰ多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に添加すること、ならびに、（ｂ）ステップ（ａ）の後に、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板を使用して、血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、薬物は、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む。図３Ｂに示されているように、ＳＩＲＰ多量体は、試薬ＲＢＣ（及び／または試薬血小板）の表面上に発現しているＣＤ４７への結合に関して薬物と競合し、それにより、薬物の試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板への結合から生じる干渉（図１Ｂに示されている）が最小限に抑えられる（または、いくつかの実施形態では、除去される）。

【0074】

いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）ヒトＣＤ４７に結合するが、抗ヒトグロブリン（ＡＨＧ）に結合する抗体Ｆｃ領域を含まないＳＩＲＰ多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血液試料に添加すること、及び、（ｂ）ステップ（ａ）の後に、試薬血漿／抗血清を使用して、血液試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、薬物が、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む。図３Ｃに示されているように、ＳＩＲＰ多量体は、対象のＲＢＣ及び／または血小板の表面に発現しているＣＤ４７への結合に関して薬物と競合し、それにより、対象のＲＢＣ及び／または血小板への薬物の結合から生じる干渉（図１Ｄに示されている）が最小限に抑えられる（または、いくつかの実施形態では、除去される）。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、血清学的アッセイが実施される前に、試薬血漿／抗血清、及び対象由来の血液試料に添加される。

【0075】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、ＳＩＲＰ多量体が可溶性である、溶液中で実施される。いくつかの実施形態では、本方法がマトリックスまたは表面への吸着、共有結合、または非共有結合を介して実施される前に、ＳＩＲＰ多量体が、固相に固定される。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、固相または固体支持体への固定化後に、ＣＤ４７に結合可能である。固定化に使用される固相または固体支持体は、本質的に非水溶性で、イムノアッセイに有用な任意の不活性支持体、表面、または担体であり得、これは、例えば、表面、粒子、多孔質マトリックス、セルロースポリマースポンジ（ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ（登録商標）、Ｐｈａｄｉａ）などの形態の支持体を含む。一般に使用された支持体の例としては、小さなシート、Ｓｅｐｈａｄｅｘ、ポリ塩化ビニル、プラスチックビーズ、金ビーズ、微粒子、アッセイプレート、またはポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレンなどから製造された試験管が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、複数の試料を同時に分析するために使用することができるマルチウェルマイクロタイタープレートなどのマイクロタイタープレート上にコーティングされる。

【0076】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、または、野生型ＳＩＲＰαもしくはＳＩＲＰαバリアントのＣＤ４７結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰαバリアント（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）を含み、ＳＩＲＰαバリアント（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）は、野生型ＳＩＲＰα（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、及び／またはＣ末端伸長（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰαバリアントのフラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰαバリアントの細胞外ドメインを含む。

【0077】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または、野生型ＳＩＲＰγもしくはＳＩＲＰγバリアントのＣＤ４７結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰγバリアントを含み、ＳＩＲＰγバリアントは、野生型ＳＩＲＰγと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または上記のうちのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰγバリアントのＣＤ４７結合フラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰγバリアントの細胞外ドメインを含む。

【0078】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能なＳＩＲＰβバリアント、またはＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能なＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰβバリアントを含み、ＳＩＲＰβバリアントは、野生型ＳＩＲＰβと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または上記のうちのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰβバリアントの細胞外ドメインを含み、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能である。

【0079】

いくつかの実施形態では、薬物は、抗ＣＤ４７抗体を含む。

【0080】

（ｂ）ＣＤ４７に結合するＳＩＲＰポリペプチド単量体を含むＳＩＲＰ多量体
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体は、複数のＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能な少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または最大１００のＳＩＲＰポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、「ＳＩＲＰポリペプチド単量体」は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能なＳＩＲＰαポリペプチド単量体、ＳＩＲＰγポリペプチド単量体、またはＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体を指す。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、抗体Ｆｃ領域を含まない。例示的なＳＩＲＰαポリペプチド単量体、ＳＩＲＰγポリペプチド単量体、及びＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体は、さらに詳細に、以下に記載される。

【0081】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰαポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαポリペプチド単量体は、ＣＤ４７に結合可能なＳＩＲＰαのフラグメント（例えば、野生型ＳＩＲＰαの細胞外ドメイン（「ＷＴ ＳＩＲＰα－ＥＣＤ」）またはそのＤ１ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７に結合可能なＳＩＲＰαのフラグメントは、可溶性フラグメント（例えば、膜貫通ドメインまたはその任意の部分が含まれないＳＩＲＰαのフラグメント）である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαポリペプチド単量体は、ヒトＳＩＲＰα、マウスＳＩＲＰα、ラットＳＩＲＰα、アカゲザルＳＩＲＰα、カニクイザルＳＩＲＰα、または任意の起源のＳＩＲＰαを含む。但し、ＳＩＲＰαは、ＣＤ４７（例えば、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板の表面上に発現されているヒトＣＤ４７）に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαポリペプチド単量体は、ヒトＳＩＲＰα、マウスＳＩＲＰα、ラットＳＩＲＰα、アカゲザルＳＩＲＰα、カニクイザルＳＩＲＰα、または任意の起源のＳＩＲＰαのフラグメントを含む。但し、フラグメントは、ＣＤ４７（例えば、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板の表面に発現しているヒトＣＤ４７）に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαポリペプチド単量体は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能なＳＩＲＰαバリアント（またはそのフラグメント、例えば、ＷＴ ＳＩＲＰα－ＥＣＤのバリアントもしくはそのＤ１ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７に結合可能なＳＩＲＰαバリアント（またはそのフラグメント）は、野生型ＳＩＲＰαと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαバリアント（またはそのフラグメント（ＣＤ４７に結合可能））に存在する、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）は、野生型ＳＩＲＰαと比較して、ＳＩＲＰαバリアントのグリコシル化パターンを変化させる。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαバリアント（またはそのフラグメント（ＣＤ４７に結合可能））に存在する、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）は、野生型ＳＩＲＰαと比較して、ＳＩＲＰαバリアント（またはそのフラグメント（ＣＤ４７に結合可能））のヒトＣＤ４７に対する親和性を増加させる。

【0082】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰγポリペプチド単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγポリペプチド単量体は、ＣＤ４７に結合可能なＳＩＲＰγのフラグメント（例えば、野生型ＳＩＲＰγの細胞外ドメイン（「ＷＴ ＳＩＲＰγ－ＥＣＤ」）またはそのＤ１ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７に結合可能なＳＩＲＰγのフラグメントは、可溶性フラグメント（例えば、膜貫通ドメインまたはその任意の部分が含まれないＳＩＲＰγのフラグメント）である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγポリペプチド単量体は、ヒトＳＩＲＰγ、マウスＳＩＲＰγ、ラットＳＩＲＰγ、アカゲザルＳＩＲＰγ、カニクイザルＳＩＲＰγ、または任意の起源のＳＩＲＰγを含む。但し、ＳＩＲＰγは、ＣＤ４７（例えば、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板の表面上に発現されているヒトＣＤ４７）に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγポリペプチド単量体は、ヒトＳＩＲＰγ、マウスＳＩＲＰγ、ラットＳＩＲＰγ、アカゲザルＳＩＲＰγ、カニクイザルＳＩＲＰγ、または任意の起源のＳＩＲＰγのフラグメントを含む。但し、フラグメントは、ＣＤ４７（例えば、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板の表面に発現しているヒトＣＤ４７）に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγポリペプチド単量体は、ＣＤ４７（例えば、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板の表面上に発現しているヒトＣＤ４７）に結合可能なＳＩＲＰγバリアント（またはそのフラグメント、例えば、ＷＴ ＳＩＲＰγ－ＥＣＤのバリアントもしくはそのＤ１ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγバリアント（またはそのフラグメント（ＣＤ４７に結合可能））は、野生型ＳＩＲＰγと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγバリアント（またはそのフラグメント（ＣＤ４７に結合可能））に存在する、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）は、野生型ＳＩＲＰγと比較して、ＳＩＲＰγバリアントのグリコシル化パターンを変化させる。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγバリアント（またはそのフラグメント（ＣＤ４７に結合可能））に存在する、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）は、野生型ＳＩＲＰγと比較して、ＳＩＲＰγバリアントのヒトＣＤ４７に対する親和性を増加させる。

【0083】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体、またはヒトＣＤ４７に結合する、そのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７に結合可能なＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体のフラグメントは、可溶性フラグメント（例えば、膜貫通ドメインまたはその任意の部分が含まれないＳＩＲＰβバリアントポリペプチドのフラグメント）である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体は、野生型ＳＩＲＰβと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）を含み、これは、野生型ＳＩＲＰβと比較して、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体のヒトＣＤ４７に対する親和性を増加させる。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体は、ＣＤ４７に結合可能なＳＩＲＰβバリアントのフラグメント（例えば、ＳＩＲＰβバリアントの細胞外ドメインまたはそのＤ１ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７に結合可能なＳＩＲＰβバリアントのフラグメントは、可溶性フラグメント（例えば、膜貫通ドメインまたはその任意の部分が含まれないＳＩＲＰβバリアントのフラグメント）である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体は、野生型ヒトＳＩＲＰβのバリアント、野生型マウスＳＩＲＰβのバリアント、野生型ラットＳＩＲＰβのバリアント、野生型アカゲザルＳＩＲＰβのバリアント、野生型カニクイザルＳＩＲＰβのバリアント、または任意の起源のＳＩＲＰβバリアントを含む。但し、そのＳＩＲＰβバリアントは、ＣＤ４７（例えば、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板の表面上に発現しているヒトＣＤ４７）に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体は、野生型ヒトＳＩＲＰβのバリアント、野生型マウスＳＩＲＰβのバリアント、野生型ラットＳＩＲＰβのバリアント、野生型のバリアント、野生型アカゲザルＳＩＲＰβのバリアント、野生型カニクイザルＳＩＲＰβのバリアント、または任意の起源のＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含む。但し、フラグメントは、ＣＤ４７（例えば、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板の表面上に発現しているヒトＣＤ４７）に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体（またはそのフラグメント（ＣＤ４７に結合可能））に存在する、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）は、野生型ＳＩＲＰβと比較して、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体のグリコシル化パターンを変化させる。

【0084】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαポリペプチド単量体、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体、またはＳＩＲＰγポリペプチド単量体は、以下の配列番号３３～４１のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤ ＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴ ＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＧＡ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３３）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤ ＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴ ＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹ ＮＱＲＥＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＧＡ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３４）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤ ＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴ ＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＥＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＧＡ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３５）
ＥＤＥＬＱＩＩＱＰＥ ＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳ ＡＴＬＲＣＡＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＡＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＥＴＴＫＲＮ ＮＬＤＦＳＩＳＩＳＮ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３６）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤ ＫＳＩＳＶＡＡＧＥＳ ＡＴＬＨＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３７）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＥ ＫＬＬＬＶＴＶＧＫＴ ＡＴＬＨＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＶＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＤＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＧＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＳＳ ＩＴＰＡＤＶＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＴＰＥ ＤＶＥＦＫＳＧＰＧＴ ＥＭＡＬＧＡＫＰＳ（配列番号３８）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＥ ＫＬＬＬＶＴＶＧＫＴ ＡＴＬＨＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＶＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＫＤＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＧＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＳＳ ＩＴＰＡＤＶＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＥ ＤＶＥＦＫＳＧＰＧＴ ＥＭＡＬＧＡＫＰＳ（配列番号３９）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＥ ＫＬＬＬＶＴＶＧＫＴ ＡＴＬＨＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＶＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＫＤＧＨＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＧＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＳＳ ＩＴＰＡＤＶＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＥ ＤＶＥＦＫＳＧＰＧＴ ＥＭＡＬＧＡＫＰＳ（配列番号４０）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＥ ＫＬＬＬＶＴＶＧＫＴ ＡＴＬＨＣＴＩＴＳＨ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＶＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＫＤＧＨＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＧＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＳＳ ＩＴＰＡＤＶＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＥ ＤＶＥＦＫＳＧＰＧＴ ＥＭＡＬＧＡＫＰＳ（配列番号４１）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＥ ＫＬＬＬＶＴＶＧＫＴ ＡＴＬＨＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＶＬＷＦＲ ＧＶＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＳＳ ＩＴＰＡＤＶＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＴＰＥ ＤＶＥＦＫＳＧＰＧＴ ＥＭＡＬＧＡＫＰＳ（配列番号４２）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＥ ＫＬＬＬＶＴＶＧＫＴ ＡＴＬＨＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＶＧＰＧＲＥＬＩＹ ＮＡＲＥＧＲＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＳＳ ＩＴＰＡＤＶＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＥ ＤＶＥＦＫＳＧＰＧＴ ＥＭＡＬＧＡＫＰＳ（配列番号４３）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＥ ＫＬＬＬＶＴＶＧＫＴ ＡＴＬＨＣＴＩＴＳＬ ＬＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＶＧＰＧＲＥＬＩＹ ＮＱＲＤＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＧＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＳＳ ＩＴＰＡＤＶＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＴＰＥ ＤＶＥＦＫＳＧＰＧＴ ＥＭＡＬＧＡＫＰＳ（配列番号４４）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤ ＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴ ＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４５）

【0085】

本明細書に記載の方法で多量体化及び使用することができる例示的なＳＩＲＰαポリペプチド単量体（例えば、ＳＩＲＰαバリアント）、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体、及びＳＩＲＰγポリペプチド単量体（例えば、ＳＩＲＰγバリアント）に関するさらなる詳細は、ＷＯ２０１３／１０９７５２；ＵＳ２０１５／００７１９０５；ＵＳＰ９，９４４，９１１；ＷＯ２０１６／０２３０４０；ＷＯ２０１７／０２７４２２；ＵＳ２０１７／０１０７２７０；ＵＳＰ１０，２５９，８５９；ＵＳ９８４５３４５；ＷＯ２０１６１８７２２６；ＵＳ２０１８０１５５４０５；ＷＯ２０１７１７７３３３；ＷＯ２０１４０９４１２２；ＵＳ２０１５３２９６１６；ＵＳ２０１８０３１２５６３；ＷＯ２０１８１７６１３２；ＷＯ２０１８０８１８９８；ＷＯ２０１８０８１８９７；ＵＳ２０１８０１４１９８６Ａ１；及びＥＰ３２８７４７０Ａ１で提供され、これらの内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0086】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、例えば、限定されないが、ＣＤ４７ポリペプチド単量体に対する上記の例示的な多量体化ドメインを含む、多量体化ドメインを含む融合ポリペプチドを含む。

【0087】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、配列番号３３～４５のいずれか１つ及び配列番号８１～８３のいずれか１つに記載の多量体化ドメインを含む融合ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、ＷＯ２０１３／１０９７５２；ＵＳ２０１５／００７１９０５；ＵＳＰ９，９４４，９１１；ＷＯ２０１６／０２３０４０；ＷＯ２０１７／０２７４２２；ＵＳ２０１７／０１０７２７０；ＵＳＰ１０，２５９，８５９；ＵＳ９８４５３４５；ＷＯ２０１６１８７２２６；ＵＳ２０１８０１５５４０５；ＷＯ２０１７１７７３３３；ＷＯ２０１４０９４１２２；ＵＳ２０１５３２９６１６；ＵＳ２０１８０３１２５６３；ＷＯ２０１８１７６１３２；ＷＯ２０１８０８１８９８；ＷＯ２０１８０８１８９７；ＵＳ２０１８０１４１９８６Ａ１；及びＥＰ３２８７４７０Ａ１のいずれか１つに開示されたＳＩＲＰポリペプチド単量体、ならびに配列番号８１～８３のいずれか１つに記載の多量体化ドメイン、を含む融合ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含む融合ポリペプチドを含む。
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤ ＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴ ＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳＡ ＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬ ＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳ ＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧ ＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷ ＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨ ＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬ ＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴ ＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴ ＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴ ＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧ ＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫ ＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰ ＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫ ＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩ ＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥ ＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦ ＶＮＮＶＥＶＨＴＡ ＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮ ＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰ ＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫ ＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤ ＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳ ＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱ ＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥ ＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣ ＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩ ＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴ ＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶ ＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹ ＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷ ＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶ ＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴ ＴＫＳＦＳＲＴＰＧ（配列番号１１０）。

【0088】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体（例えば、融合ポリペプチド）は、エピトープタグを含む（例えば、さらに含む）。いくつかの実施形態では、エピトープタグにより、ＳＩＲＰポリペプチド単量体の多量体化が促進される。いくつかの実施形態では、タグにより、ＳＩＲＰポリペプチド単量体の固体支持体（例えば、ビーズ、ガラス面など）への固定化が促進される。例示的なエピトープタグには、ＣＤ４７ポリペプチド単量体に対する上記の配列番号７～３２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0089】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、リガンドを含む（例えば、これに結合される）。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンである。

【0090】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む（以下を参照）。配列番号１１１は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、配列番号４５のアミノ酸配列、ヘキサヒスチジンペプチド（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号７））、及び１５アミノ酸のタグＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号８）を含む。ＡＶＩＴＡＧ（商標）としても既知のＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号８）は、Ｅ．ｃｏｌｉビオチンリガーゼＢｉｒＡにより特異的にビオチン化される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、配列番号４５のアミノ酸配列及びヘキサヒスチジンペプチド（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号７））を含む、配列番号１１２のアミノ酸配列（以下を参照）を含む。
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤ ＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴ ＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳＨ ＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩ ＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１１１）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤ ＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴ ＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬ ＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹ ＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶ ＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳＨ ＨＨＨＨＨ（配列番号１１２）

【0091】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体は、同一のＳＩＲＰポリペプチド単量体（例えば、同一のＳＩＲＰαポリペプチド単量体、同一のＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体、または同一のＳＩＲＰγポリペプチド単量体、例えば、本明細書に記載のＳＩＲＰポリペプチド単量体）を含むホモ多量体である。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体は、少なくとも２つの異なるＳＩＲＰαポリペプチド単量体、２つの異なるＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体、２つの異なるＳＩＲＰγポリペプチド単量体、または上記のうちのいずれかの組み合わせを含むヘテロ多量体である。２つ以上の異なるＳＩＲＰαポリペプチド単量体、ＳＩＲＰβバリアントポリペプチド単量体、及び／またはＳＩＲＰγポリペプチド単量体（例えば、本明細書に記載のＳＩＲＰポリペプチド単量体）の任意の組み合わせを含むＳＩＲＰヘテロ多量体が企図される。

【0092】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体中のＳＩＲＰポリペプチド単量体は、例えば、ＳＩＲＰポリペプチド単量体の連結鎖を形成するように、ペプチド結合またはリンカーペプチドを介して連結されている。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体中のＳＩＲＰポリペプチド単量体は、リンカーペプチドを介して連結されている。例示的なリンカーペプチドは、配列番号８５～１０９、１２７～１３０、１４０、及び１４１に記載のもの、ならびにＣＤ４７多量体で使用される他のリンカーを含むが、これらに限定されない（上を参照）。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体中のＳＩＲＰポリペプチド単量体は、ペプチドリンカー及び少なくとも１つのスペーサーを介して連結されている。例示的なペプチドスペーサーとしては、配列番号５２～７０、及びＣＤ４７多量体で使用される他のスペーサーが挙げられるが、これらに限定されない（上を参照）。

【0093】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体は、固体支持体に結合している複数のＳＩＲＰポリペプチド単量体（例えば、２～１００のＳＩＲＰポリペプチド単量体）を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、共有結合または非共有結合的捕捉を介して固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、例えば、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルもしくはポリプロピレンを含むか、またはそれらから作製される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ多量体は、複数のＳＩＲＰポリペプチド単量体（例えば、２つ以上のＳＩＲＰポリペプチド単量体）及び固体支持体を含み、ＳＩＲＰポリペプチド単量体のそれぞれは、（例えば、上記の）エピトープタグまたはリガンドを含み、捕捉剤は、固体支持体上に固定され、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、固体支持体上に固定されている捕捉剤によるエピトープタグまたはリガンドの特異的結合を介して固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）は、２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。

【0094】

（ｃ）ＳＩＲＰ多量体を作製する方法。
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体（例えば、ペプチド結合またはリンカーペプチドを介して連結されている少なくとも２つのＳＩＲＰポリペプチド単量体を含むホモ多量体またはヘテロ多量体）は、組み換え宿主細胞により生成される。組み換え手法を使用してＣＤ４７多量体を生成する、本明細書に記載の方法のいずれも、同様に、ＳＩＲＰポリペプチド単量体を含むＳＩＲＰ多量体の生成に適用可能である。

【0095】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）は、非共有結合的捕捉を介して、複数のＳＩＲＰポリペプチド単量体（例えば、２～１００のＳＩＲＰポリペプチド単量体）を固体支持体に結合させることにより生成される。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰポリペプチド単量体は、それぞれ、リガンドを含み、捕捉剤は、固体支持体上に固定されており、ＳＩＲＰ多量体は、固体支持体上に固定されている捕捉剤によるリガンドの特異的結合を介して、ＳＩＲＰポリペプチド単量体を固体支持体に結合させることにより生成される。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。

【0096】

ＣＤ４７ポリペプチド単量体を固体支持体に結合させてＣＤ４７多量体を生成する本明細書の他の箇所に記載の方法のいずれも、同様に、ＳＩＲＰポリペプチド単量体を固体支持体に結合させてＳＩＲＰ多量体を生成するのに適用可能である。例えば、いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、配列番号１１１を含むＳＩＲＰポリペプチド単量体をコードする核酸を含む宿主細胞を、ＳＩＲＰポリペプチド単量体の発現を引き起こす適切な条件下で培養し、ＳＩＲＰポリペプチド単量体を回収することにより調製される。ビオチン受容体ペプチドのアミノ酸配列を含むＳＩＲＰポリペプチド単量体は、Ｅ．ｃｏｌｉビオチンリガーゼ（ＢｉｒＡ）を使用してビオチン化される。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、ビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体を、ストレプトアビジンまたはアビジン分子が固定されている固体支持体に結合させることにより生成される。いくつかの実施形態では、例えば、ストレプトアビジンまたはアビジンコンジュゲート固体支持体に結合している複数のＳＩＲＰポリペプチド単量体（例えば、２～１００のＳＩＲＰポリペプチド単量体）を含むＳＩＲＰ多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）が提供される。例示的なストレプトアビジンまたはアビジンコンジュゲート固体支持体は、本明細書の他の箇所でさらに詳細に記載される。いくつかの実施形態では、２、３、または４つのビオチン化ＳＩＲＰポリペプチド単量体に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含むＳＩＲＰ多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）が提供される。

【0097】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、（例えば、本明細書の他の箇所に記載されるような）二官能性架橋剤を使用して、１つ以上のＳＩＲＰ単量体ポリペプチドを、例えば、固体支持体に、または、例えば、相互に結合させることにより生成される。

【0098】

次に、このように生成されたＳＩＲＰ多量体は、血清学的アッセイにおいてＣＤ４７に結合する薬物による干渉を防止するために、本明細書で提供される方法で使用される。

【0099】

ＩＶ．輸血前血清学的アッセイの干渉を軽減するために抗ＳＩＲＰ多量体を使用する方法
（ａ）薬物に結合する抗ＳＩＲＰ多量体を使用する方法
いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）薬物（すなわち、ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物の部分）に結合する抗ＳＩＲＰ多量体を、薬物による処置を受けている対象由来の血漿試料に添加すること、ならびに、（ｂ）ステップ（ａ）の後に、試薬ＲＢＣ（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知のＲＢＣ）及び／または試薬血小板（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知の血小板）を使用して、血漿試料の血清学的アッセイを実施すること、を含み、薬物は、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む。そのような実施形態は、一般に、図３Ｄに示されている。図３Ｄに示されているように、抗ＳＩＲＰ多量体は、対象の血漿試料中の薬物（例えば、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分）に結合し、薬物が試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板に結合するのを遮断する。試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板の表面上のＣＤ４７に結合できる薬物は、ほとんど、または全くない。試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板への薬物の結合から生じる干渉（図１Ｂに示されている）が最小限に抑えられ（または、いくつかの実施形態では、除去され）、それにより、血清学的アッセイにおける偽陽性結果が防止される。いくつかの実施形態では、血漿中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１０．５倍、１１倍、１１．５倍、１２倍、１２．５倍、１３倍、１３．５倍、１４倍、１４．５倍、または１５倍モル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体のうちのいずれか１つを得るために、抗ＳＩＲＰ多量体が、血漿試料に添加される。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイが実施される前に、薬物に結合する抗ＳＩＲＰ多量体も、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板に添加される。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイが実施される前に、抗ＳＩＲＰ多量体が、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板（例えば、試薬ＲＢＣ及び／または試薬血小板のみ）に添加される。

【0100】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、薬物に結合する抗ＳＩＲＰ多量体が可溶性である、溶液中で実施される。いくつかの実施形態では、薬物に結合する抗ＳＩＲＰ多量体は、マトリックスまたは表面への吸着、共有結合、または非共有結合を介して方法が実施される前に、固相に固定される。いくつかの実施形態では、薬物に結合する抗ＳＩＲＰ多量体は、固相または固体支持体への固定化後に、薬物に結合可能である。固定化に使用される固相または固体支持体は、本質的に非水溶性で、イムノアッセイに有用な任意の不活性支持体、表面、または担体であり得、これは、例えば、表面、粒子、多孔質マトリックス、セルロースポリマースポンジ（ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ（登録商標）、Ｐｈａｄｉａ）などの形態の支持体を含む。一般に使用された支持体の例としては、小さなシート、Ｓｅｐｈａｄｅｘ、ポリ塩化ビニル、プラスチックビーズ、金ビーズ、微粒子、アッセイプレート、またはポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレンなどから製造された試験管が挙げられる。いくつかの実施形態では、薬物に結合する抗ＳＩＲＰ多量体は、複数の試料を同時に分析するために使用することができるマルチウェルマイクロタイタープレートなどのマイクロタイタープレート上にコーティングされる。

【0101】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、野生型ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、または、野生型ＳＩＲＰαもしくはＳＩＲＰαバリアントのＣＤ４７結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰαバリアント（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）を含み、ＳＩＲＰαバリアント（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）は、野生型ＳＩＲＰα（またはそのＣＤ４７結合フラグメント）と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、及び／またはＣ末端伸長（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰαバリアントのフラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰαバリアントの細胞外ドメインを含む。

【0102】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、野生型ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、または、野生型ＳＩＲＰγもしくはＳＩＲＰγバリアントのＣＤ４７結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰγバリアントを含み、ＳＩＲＰγバリアントは、野生型ＳＩＲＰγと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または上記のうちのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰγバリアントのＣＤ４７結合フラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰγバリアントの細胞外ドメインを含む。

【0103】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能なＳＩＲＰβバリアント、またはＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能なＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰβバリアントを含み、ＳＩＲＰβバリアントは、野生型ＳＩＲＰβと比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、挿入（複数可）、欠失（複数可）、Ｎ末端伸長（複数可）、Ｃ末端伸長（複数可）、または上記のうちのいずれかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する薬物の部分は、ＳＩＲＰβバリアントのフラグメントを含み、フラグメントは、ＳＩＲＰβバリアントの細胞外ドメインを含み、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合可能である。

【0104】

（ｂ）抗ＳＩＲＰ多量体
いくつかの実施形態では、薬物に結合する抗ＳＩＲＰ多量体は、薬物のＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰβバリアント、ＳＩＲＰγ、またはＳＩＲＰγバリアント部分に結合可能な抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）を含む。いくつかの実施形態では、薬物に結合する抗ＳＩＲＰ多量体は、薬物のＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰβバリアント、ＳＩＲＰγ、またはＳＩＲＰγバリアント部分に結合可能な１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または最大１００の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、二価の抗ＳＩＲＰ抗体を含む（例えば、それである）。いくつかの実施形態では、「抗ＳＩＲＰ抗体」は、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、またはＳＩＲＰβバリアントに特異的に結合する抗体またはその薬物結合フラグメント（例えば、その抗原結合フラグメント）を指す。ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ、及びＳＩＲＰγの細胞外ドメインは、高い相同性を有する。従って、いくつかの実施形態では、「抗ＳＩＲＰ抗体」は、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバリアント、及び／またはＳＩＲＰβバリアントのうちの１つ以上と交差反応する可能な抗体またはその薬物結合フラグメントを指す。

【0105】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、全長抗ＳＩＲＰ抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、抗ヒトグロブリン試薬（ＡＨＧ）に結合しないＦｃ領域（またはその部分）を含む。（血清学的アッセイ及びそのようなアッセイで使用される試薬に関するさらなる詳細は、本明細書の他の箇所で提供される）。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、マウスＦｃ領域（またはその部分）を含む。いくつかの実施形態では、マウスＦｃ領域は、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体の薬物結合フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、例えば、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ダイアボディ、ワンアーム抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、単一ドメイン抗体、単一重鎖抗体などである。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、薬物（すなわち、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰβバリアント、ＳＩＲＰγ、またはＳＩＲＰγバリアントを含む薬物の部分）に結合するＡＤＡ（抗薬物抗体）またはＮＡｂ（中和抗体）である。いくつかの実施形態では、薬物の抗ＳＩＲＰ抗体に対する親和性は、薬物のヒトＣＤ４７に対する親和性よりも大きい。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び配列番号１１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むマウスＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体の薬物結合フラグメントは、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ダイアボディ、ワンアーム抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、単一ドメイン抗体、単一重鎖抗体などを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体の薬物結合フラグメントは、配列番号１３１及び配列番号１３２を含むＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２を含む。
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳ ＳＹＡＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＥＧＬＥＷＶＳＲ ＩＮＳＧＧＧＧＴＤＹ ＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＥＮＴＬＹ ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＫＱＹ ＤＷＮＳＦＦＤＹＷＧ ＬＧＡＬＶＴＶＳＳ（配列番号４６）
ＥＴＶＬＴＱＳＰＡＴ ＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴ ＬＳＣＲＡＳＱＴＶＧ ＳＫＬＡＷＨＱＱＫＰ ＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤ ＡＴＮＲＡＴＧＩＳＤ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＴ ＥＤＳＡＶＹＹＣＱＱ ＹＹＹＷＰＰＹＲＦＧ ＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号４７）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧ ＩＳＳＧＳＤＴＹＹＧ ＤＳＶＫＧＲＬＴＩＳ ＲＤＮＳＫＮＩＬＹＬ ＱＭＮＳＬＴＡＥＤＴ ＡＶＹＹＣＡＲＥＴＷ ＮＨＬＦＤＹＷＧＱＧ ＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４８）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶ ＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩ ＴＣＳＧＧＳＹＳＳＹ ＹＹＡＷＹＱＱＫＰＧ ＱＡＰＶＴＬＩＹＳＤ ＤＫＲＰＳＮＩＰＥＲ ＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶ ＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥ ＤＥＡＤＹＹＣＧＧＹ ＤＱＳＳＹＴＮＰＦＧ ＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号４９）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＹＤＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＥＧＬＥＷＶＳＬ ＩＳＧＳＧＥＩＩＹＹ ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＫＥＮ ＮＲＹＲＦＦＤＤＷＧ ＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５０）
ＥＴＶＬＴＱＳＰＧＴ ＬＴＬＳＰＧＥＲＡＴ ＬＴＣＲＡＳＱＳＶＹ ＴＹＬＡＷＹＱＥＫＰ ＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧ ＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳ ＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱ ＹＹＤＲＰＰＬＴＦＧ ＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＩＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＰＫＮＳＬＹ ＬＱＭＳＳＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１３）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＮＰＧＥＴＶＫＩＴＣ ＳＧＧＤＹＹＳＴＹＹ ＡＷＹＱＱＫＳＰＧＳ ＡＰＶＴＶＩＨＳＤＤ ＫＲＰＳＤＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＡＡＴ ＬＩＩＴＧＶＲＶＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＧＲＴＹＩＮＴＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬ（配列番号１１４）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＰＡＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ ＬＱＭＮＴＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１５）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＮＰＧＥＴＶＫＩＡＣ ＳＧＧＤＹＹＳＹＹＹ ＧＷＹＱＱＫＡＰＧＳ ＡＬＶＴＶＩＹＳＤＤ ＫＲＰＳＤＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＴＡＴ ＬＴＩＴＧＶＲＡＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＹＳＴＹＡＮＡＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬ（配列番号１１６）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧ ＩＳＳＧＳＤＴＹＹＧ ＤＳＶＫＧＲＬＴＩＳ ＲＤＮＳＫＮＩＬＹＬ ＱＭＮＳＬＴＡＥＤＴ ＡＶＹＹＣＡＲＥＴＷ ＮＨＬＦＤＹＷＧＬＧ ＴＬＶＴＶＳ（配列番号１３３）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＳＰＧＥＴＶＥＩＴＣ ＳＧＧＳＤＳＳＹＹＹ ＧＷＹＱＱＫＳＰＧＳ ＡＰＶＴＶＩＹＳＤＮ ＫＲＰＳＮＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＴＡＴ ＬＴＩＴＧＶＲＶＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＹＳＴＹＴＮＰＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬ（配列番号１３４）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧ ＩＳＳＧＳＤＴＹＹＧ ＤＳＶＫＧＲＬＴＩＳ ＲＤＮＳＫＮＩＬＹＬ ＱＭＮＳＬＴＡＥＤＴ ＡＶＹＹＣＡＲＥＴＷ ＮＨＬＦＤＹＷＧＬＧ ＴＬＶＴＶＳＳＡＫＴ ＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ ＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶ ＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦ ＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳ ＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦ ＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴ ＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳ ＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮ ＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶ ＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴ ＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰ ＧＳＧＳＨＨＨＨＨＨ ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫ ＩＥＷＨＥ（配列番号１３１）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＳＰＧＥＴＶＥＩＴＣ ＳＧＧＳＤＳＳＹＹＹ ＧＷＹＱＱＫＳＰＧＳ ＡＰＶＴＶＩＹＳＤＮ ＫＲＰＳＮＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＴＡＴ ＬＴＩＴＧＶＲＶＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＹＳＴＹＴＮＰＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬＲＴＶ ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ ＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹ ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ ＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴ ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ ＲＧＥＣ（配列番号１３２）

【0106】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、配列番号１１７を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、配列番号１１９を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、配列番号１２０を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体は、配列番号１２２を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖を含む。配列番号１１７～１２２のアミノ酸配列は、以下で提供される。
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＰＡＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ ＬＱＭＮＴＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫ ＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡ ＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭ ＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹ ＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮ ＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹ ＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳ ＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣ ＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫ ＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣ ＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰ ＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰ ＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬ ＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤ ＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦ ＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨ ＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱ ＦＡＳＴＦＲＳＶＳＥ ＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮ ＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳ ＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴ ＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡ ＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫ ＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬ ＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥ ＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧ ＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱ ＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦ ＩＹＳＫＬＮＶＱＫＳ ＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣ ＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨ ＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰ Ｇ （配列番号１１７）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＮＰＧＥＴＶＫＩＡＣ ＳＧＧＤＹＹＳＹＹＹ ＧＷＹＱＱＫＡＰＧＳ ＡＬＶＴＶＩＹＳＤＤ ＫＲＰＳＤＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＴＡＴ ＬＴＩＴＧＶＲＡＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＹＳＴＹＡＮＡＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬＧＱＰ ＫＳＳＰＳＶＴＬＦＰ ＰＳＳＥＥＬＥＴＮＫ ＡＴＬＶＣＴＩＴＤＦ ＹＰＧＶＶＴＶＤＷＫ ＶＤＧＴＰＶＴＱＧＭ ＥＴＴＱＰＳＫＱＳＮ ＮＫＹＭＡＳＳＹＬＴ ＬＴＡＲＡＷＥＲＨＳ ＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧ ＨＴＶＥＫＳＬＳＲＡ ＤＣＳ（配列番号１１８）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＰＡＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ ＬＱＭＮＴＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫ ＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡ ＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳ ＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹ ＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮ ＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹ ＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳ ＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣ ＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫ ＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰ ＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣ ＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳ ＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤ ＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶ ＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤ ＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶ ＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴ ＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴ ＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱ ＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦ ＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰ ＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰ ＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹ ＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴ ＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶ ＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶ ＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬ ＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤ ＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫ ＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥ ＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨ ＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫ ＳＦＳＲＴＰＧ（配列番号１１９）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＩＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＰＫＮＳＬＹ ＬＱＭＳＳＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫ ＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡ ＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭ ＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹ ＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮ ＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹ ＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳ ＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣ ＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫ ＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣ ＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰ ＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰ ＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬ ＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤ ＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦ ＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨ ＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱ ＦＡＳＴＦＲＳＶＳＥ ＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮ ＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳ ＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴ ＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡ ＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫ ＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬ ＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥ ＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧ ＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱ ＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦ ＩＹＳＫＬＮＶＱＫＳ ＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣ ＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨ ＨＴＥＫＳＬＳＨＳ ＰＧ（配列番号１２０）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＮＰＧＥＴＶＫＩＴＣ ＳＧＧＤＹＹＳＴＹＹ ＡＷＹＱＱＫＳＰＧＳ ＡＰＶＴＶＩＨＳＤＤ ＫＲＰＳＤＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＡＡＴ ＬＩＩＴＧＶＲＶＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＧＲＴＹＩＮＴＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬＧＱＰ ＫＳＳＰＳＶＴＬＦＰ ＰＳＳＥＥＬＥＴＮＫ ＡＴＬＶＣＴＩＴＤＦ ＹＰＧＶＶＴＶＤＷＫ ＶＤＧＴＰＶＴＱＧＭ ＥＴＴＱＰＳＫＱＳＮ ＮＫＹＭＡＳＳＹＬＴ ＬＴＡＲＡＷＥＲＨＳ ＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧ ＨＴＶＥＫＳＬＳＲＡ ＤＣＳ（配列番号１２１）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＩＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＰＫＮＳＬＹ ＬＱＭＳＳＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫ ＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡ ＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳ ＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹ ＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮ ＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹ ＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳ ＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣ ＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫ ＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰ ＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣ ＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳ ＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤ ＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶ ＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤ ＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶ ＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴ ＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴ ＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱ ＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦ ＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰ ＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰ ＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹ ＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴ ＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶ ＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶ ＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬ ＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤ ＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫ ＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥ ＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨ ＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫ ＳＦＳＲＴＰＧ（配列番号１２２）

【0107】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、配列番号１１５を含むＶＨ及び配列番号１１６を含むＶＬを含む抗ＳＩＲＰ抗体を含む。いくつかの実施形態では、血漿中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または１０倍のうちのいずれか１つのモル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体を得るために、抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、抗ＳＩＲＰ抗体）が、血漿試料（例えば、薬物による処置を受けている対象から得られた血漿試料）に添加される。

【0108】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、配列番号１１９を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖を含む抗ＳＩＲＰ抗体を含む。いくつかの実施形態では、血漿中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または１０倍のうちのいずれか１つのモル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体を得るために、抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、抗ＳＩＲＰ抗体）が、血漿試料（例えば、薬物による処置を受けている対象から得られた血漿試料）に添加される。

【0109】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、配列番号１１７を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖を含む抗ＳＩＲＰ抗体を含む。いくつかの実施形態では、血漿中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または１０倍のうちのいずれか１つのモル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体を得るために、抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、抗ＳＩＲＰ抗体）が、血漿試料（例えば、薬物による処置を受けている対象から得られた血漿試料）に添加される。

【0110】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、配列番号１２０を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖を含む抗ＳＩＲＰ抗体を含む。いくつかの実施形態では、血漿中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または１０倍のうちのいずれか１つのモル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体を得るために、抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、抗ＳＩＲＰ抗体）が、血漿試料（例えば、薬物による処置を受けている対象から得られた血漿試料）に添加される。

【0111】

本明細書に記載の方法で使用されるＳＩＲＰ多量体に含まれ得る他の例示的な抗ＳＩＲＰ抗体（例えば、ＳＩＲＰαと交差反応する抗ＳＩＲＰα抗体、抗ＳＩＲＰβ抗体、及び／もしくは抗ＳＩＲＰγ抗体）またはその薬物結合フラグメントは、当該技術分野で既知である。そのような抗体に関するさらなる詳細は、例えば、ＷＯ２０１８／０５７６６９；ＵＳ－２０１８－０１０５６００－Ａ１；ＵＳ２０１８０３１２５８７；ＷＯ２０１８１０７０５８；ＷＯ２０１９０２３３４７；ＵＳ２０１８００３７６５２；ＷＯ２０１８２１０７９５；ＷＯ２０１７１７８６５３；ＷＯ２０１８１４９９３８；ＷＯ２０１７０６８１６４；及びＷＯ２０１６０６３２３３で提供され、この内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、上記参考文献のうちの１つに開示されている抗ＳＩＲＰ抗体は、マウスＦｃドメイン（またはその部分）を含む。いくつかの実施形態では、マウスＦｃドメインは、配列番号８１～８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、同一の抗ＳＩＲＰ抗体（例えば、同一の抗ＳＩＲＰα抗体、抗ＳＩＲＰαバリアント抗体、抗ＳＩＲＰβバリアント抗体、抗ＳＩＲＰγ抗体、抗ＳＩＲＰγバリアント抗体、またはＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰβバリアント、ＳＩＲＰγ、及び／もしくはＳＩＲＰγバリアントのうちの１つ以上と交差反応することが可能な抗体）を含むホモ多量体あるいはその薬物結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、単一特異性二価抗ＳＩＲＰ抗体を含むホモ多量体である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体は、少なくとも２つの異なる抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントを任意の組み合わせで含むヘテロ多量体である。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、多重特異性抗ＳＩＲＰ抗体（すなわち、第１のＶＨ／ＶＬ対及び第２のＶＨ／ＶＬ対を含む多重特異性抗ＳＩＲＰ抗体（第１及び第２のＶＨ／ＶＬ対が、異なるアミノ酸配列を含み、第１及び第２のＶＨ／ＶＬ対が、それぞれ、薬物のＣＤ４７結合部分に結合する））を含むヘテロ多量体である。

【0113】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントは、例えば、限定されないが、ＣＤ４７ポリペプチド単量体及びＳＩＲＰポリペプチド単量体に対する上記の例示的な多量体化ドメインを含む、多量体化ドメインを含む。

【0114】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体またはその薬物結合フラグメントは、エピトープタグを含む（例えば、さらに含む）。いくつかの実施形態では、エピトープタグにより、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）の多量体化が促進される。いくつかの実施形態では、タグにより、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）の固体支持体（例えば、ビーズ、ガラス面など）への固定化が促進される。例示的なエピトープタグとしては、本明細書の他の箇所に記載の配列番号７～３２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0115】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、リガンドを含む（例えば、それに結合されている）。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンである。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント、例えば、ＦａｂもしくはＦ（ａｂ’）２）は、ＨＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１３５）またはＧＳＧＳＨＨＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号１２６）を含む。ＡＶＩＴＡＧ（商標）としても既知のＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号８）は、Ｅ．ｃｏｌｉビオチンリガーゼＢｉｒＡにより特異的にビオチン化される。いくつかの実施形態では、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２は、配列番号１３１及び１３２を含む。いくつかの実施形態では、血漿中の薬物の量と比較して、約１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または１０倍モル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体のうちのいずれか１つを得るために、抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、配列番号１３１及び１３２を含むＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）が、血漿試料（例えば、薬物による処置を受けている対象から得られた血漿試料）に添加される。

【0116】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）の連結鎖を形成するように、例えば、ペプチド結合を介して、連結されている。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ多量体中の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、リンカーペプチドを介して連結されている。例示的なリンカーペプチドとしては、配列番号８５～１０９、１２７～１３０に記載のもの、ＩＥＧＲ（配列番号１４１）、ＩＤＧＲ（配列番号１４０）、ならびにＣＤ４７多量体及び／またはＳＩＲＰ多量体と共に使用される他のリンカーが挙げられるが、これらに限定されない（上を参照）。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、リンカーペプチド及び少なくとも１つのスペーサーを介して連結されている。例示的なペプチドスペーサーとしては、配列番号５２～７０、ならびにＣＤ４７多量体及び／またはＳＩＲＰ多量体と共に使用される他のスペーサーが挙げられるが、これらに限定されない（上を参照）。

【0117】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、固体支持体に結合している少なくとも１つ（例えば、１～１００）の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体、または抗ＳＩＲＰ抗体もしくはその薬物結合フラグメントは、共有結合または非共有結合的捕捉を介して固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、例えば、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、もしくはポリプロピレンを含むか、またはそれから作製される。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、抗ＳＩＲＰ抗体、または複数の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）、及び固体支持体を含み、抗ＳＩＲＰ抗体、または抗ＳＩＲＰ抗体もしくはその薬物結合フラグメントは、（例えば、上記の）エピトープタグまたはリガンドを含み、捕捉剤は、固体支持体上に固定されており、抗ＳＩＲＰ抗体、または抗ＳＩＲＰ抗体もしくはその薬物結合フラグメントは、固体支持体上に固定されている捕捉剤によるエピトープタグまたはリガンドの特異的結合を介して固体支持体に結合している。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体、または抗ＳＩＲＰ抗体もしくはその薬物結合フラグメントは、配列番号１１１を含む。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）は、２、３、または４つのビオチン化抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、配列番号１１１を含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、２、３、または４つのＦ（ａｂ’）２フラグメントに結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む。いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの２つ以上は、配列番号１３１及び配列番号１３２を含む。

【0118】

（ｃ）抗ＳＩＲＰ多量体を作製する方法
いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、ペプチド結合またはリンカーペプチドを介して連結されている、例えば、２つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）を含む、例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）は、組み換え宿主細胞により生成される。組み換え手法を使用してＣＤ４７多量体またはＳＩＲＰ多量体を生成する、本明細書に記載の方法のいずれも、同様に、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその抗原結合フラグメント）を含む抗ＳＩＲＰ多量体の生成に適用可能である。

【0119】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）は、非共有的捕獲を介して、１つ以上（例えば、１～１００）の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）を固体支持体に結合させることにより生成される。いくつかの実施形態では、固体支持体は、金ナノスフィア、金ナノシェル、磁気ビーズ、シリカビーズ、デキストランポリマー、試験管、スライド、ゲルカラム、またはマイクロタイターウェルである。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体、または抗ＳＩＲＰ抗体（もしくはその薬物結合フラグメント）は、それぞれ、リガンドを含み、捕捉剤は、固体支持体上に固定されており、抗ＳＩＲＰ多量体は、抗ＳＩＲＰ抗体、または抗ＳＩＲＰ抗体（もしくはその薬物結合フラグメント）を、固体支持体上に固定されている捕捉剤によるリガンドの特異的結合を介して固体支持体に結合させることにより生成される。いくつかの実施形態では、リガンドは、ビオチンであり、捕捉剤は、ストレプトアビジンである。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ抗体（複数可）（またはその薬物結合フラグメント）は、配列番号１１１または配列番号１２６を含む。

【0120】

ＣＤ４７ポリペプチド単量体を固体支持体に結合させてＣＤ４７多量体を生成する、本明細書の他の箇所に記載の方法のいずれも、同様に、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）を固体支持体に結合させて抗ＳＩＲＰ多量体を生成するのに適用できる。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、配列番号１１１または配列番号１２６を含む抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）の発現を引き起こす適切な条件下で培養し、抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）を回収することにより調製される。ビオチン受容体ペプチドアミノ酸配列を含む抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）は、Ｅ．ｃｏｌｉビオチンリガーゼ（ＢｉｒＡ）を使用してビオチン化される。いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、ストレプトアビジンまたはアビジン分子が固定されている固体支持体にビオチン化抗ＳＩＲＰ抗体（複数可）（またはその薬物結合フラグメント）を結合させることにより生成される。いくつかの実施形態では、例えば、ストレプトアビジンまたはアビジンコンジュゲート固体支持体に結合している１つ以上（例えば、１～１００）の抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）を含む抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）が提供される。例示的なストレプトアビジンまたはアビジンコンジュゲート固体支持体は、本明細書の他の箇所でさらに詳細に記載される。いくつかの実施形態では、２、３、または４つのビオチン化抗ＳＩＲＰ抗体（またはその薬物結合フラグメント）に結合しているストレプトアビジンまたはアビジンを含む抗ＳＩＲＰ多量体（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）が提供される。

【0121】

いくつかの実施形態では、抗ＳＩＲＰ多量体は、（例えば、本明細書の他の箇所に記載されるような）二官能性架橋剤を使用して、１つ以上の抗ＳＩＲＰ抗体（または、その薬物結合フラグメント）を、例えば、固体支持体に、または、例えば、互いに、連結することにより生成される。

【0122】

次に、このように生成された抗ＳＩＲＰ多量体は、血清学的アッセイにおいてＣＤ４７に結合する薬物による干渉を防止するために、本明細書で提供される方法で使用される。

【0123】

Ｖ．例示的な薬物
本明細書で提供される方法は、血清学的アッセイの干渉を低減する（または、いくつかの実施形態では、除去する）。これは、薬物による処置を受けている対象から得られている血漿またはＲＢＣ／血小板を含む試料中の（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物の存在により引き起こされる。いくつかの実施形態では、薬物は、ＩｇＧ Ｆｃ領域、例えば、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域、を含む。いくつかの実施形態では、薬物は、改変Ｆｃ領域（例えば、改変ＩｇＧ Ｆｃ領域）を含み、これは、野生型ヒトＦｃ領域（例えば、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域）と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）を含む。例示的なＦｃ領域は、ＷＯ２０１７１７７３３３；ＷＯ２０１４０９４１２２；ＵＳ２０１５３２９６１６、ＷＯ２０１７／０２７４２２；ＵＳ２０１７／０１０７２７０；及びＵＳＰ１０，２５９，８５９に記載され、この内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0124】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する部分は、膜貫通ドメイン（例えば、ヒトＣＤ４７に結合可能な任意の野生型ＳＩＲＰαの細胞外ドメイン）を欠く野生型ＳＩＲＰαである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する部分は、ヒトＣＤ４７に結合可能であり且つ膜貫通ドメインを欠くＳＩＲＰαバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαバリアントは、野生型ＳＩＲＰαの細胞外ドメインと比較して、１つ以上のアミノ酸置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαバリアントは、ＳＩＲＰα－ｄ１ドメインバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαバリアントのヒトＣＤ４７に対する親和性は、野生型ＳＩＲＰαのヒトＣＤ４７に対する親和性よりも高い。

【0125】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する部分は、膜貫通ドメイン（例えば、ヒトＣＤ４７に結合可能な任意の野生型ＳＩＲＰγの細胞外ドメイン）を欠く野生型ＳＩＲＰγである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する部分は、ヒトＣＤ４７に結合可能であり且つ膜貫通ドメインを欠くＳＩＲＰγバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγバリアントは、野生型ＳＩＲＰγの細胞外ドメインと比較して、１つ以上のアミノ酸置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγバリアントは、ＳＩＲＰγ－ｄ１ドメインバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰγバリアントのヒトＣＤ４７に対する親和性は、野生型ＳＩＲＰγのヒトＣＤ４７に対する親和性よりも高い。

【0126】

いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に結合する部分は、ヒトＣＤ４７に結合可能であり且つ膜貫通ドメインを欠くＳＩＲＰβバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰβバリアントは、野生型ＳＩＲＰβの細胞外ドメインと比較して、１つ以上のアミノ酸置換（複数可）、欠失（複数可）、挿入（複数可）、Ｎ末端付加（複数可）、及び／またはＣ末端付加（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰβバリアントは、ＳＩＲＰβ－ｄ１ドメインバリアントである。

【0127】

例示的なＳＩＲＰαバリアント、ＳＩＲＰβバリアント、及びＳＩＲＰγバリアントは、当該技術分野で既知であり、ＷＯ２０１３／１０９７５２；ＵＳ２０１５／００７１９０５；ＵＳＰ９，９４４，９１１；ＷＯ２０１６／０２３０４０；ＷＯ２０１７／０２７４２２；ＵＳ２０１７／０１０７２７０；ＵＳＰ１０，２５９，８５９；ＵＳ９８４５３４５；ＷＯ２０１６１８７２２６；ＵＳ２０１８０１５５４０５；ＷＯ２０１７１７７３３３；ＷＯ２０１４０９４１２２；ＵＳ２０１５３２９６１６；ＵＳ２０１８０３１２５６３；ＷＯ２０１８１７６１３２；ＷＯ２０１８０８１８９８；ＷＯ２０１８０８１８９７；ＵＳ２０１８０１４１９８６Ａ１；及びＥＰ３２８７４７０Ａ１に記載され、これらの内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0128】

上記の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、薬物は、抗ＣＤ４７抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、ＡＯ－１７６、ＣＣ－９０００２、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４（５Ｆ９とも呼ばれる）、ＳＨＲ－１６０３、ＮＩ－１７０１、ＳＲＦ２３１、ＴＪＣ４、またはＩＢＩ１８８である。これら及び他の治療用抗ＣＤ４７抗体に関する詳細は、ＷＯ２０１８１７５７９０Ａ１；ＵＳ２０１８０１４２０１９；ＵＳ２０１８０１７１０１４；ＵＳ２０１８００５７５９２；ＵＳ２０１７０２８３４９８，ＵＳ９，５１８，１１６；ＵＳ９，５１８，１１７；ＵＳ２０１５０２７４８２６；ＵＳ２０１６０１３７７３３；ＵＳ９，２２１，９０８；ＵＳ２０１４０１６１７９９；ＵＳ２０１６０１３７７３４；ＷＯ２０１５１９１８６１；ＷＯ２０１４０９３６７８；ＷＯ２０１４１２３５８０；ＷＯ２０１３１１９７１４；ＵＳ９，０４５，５４１；ＷＯ２０１６１０９４１５；ＷＯ２０１８１８３１８２；ＷＯ２０１８００９４９９；ＷＯ２０１７１９６７９３；ＵＳ９６６３５７５；ＵＳ２０１４０１４０９８９；ＷＯ２０１８２３７１６８；ＵＳ２０１８００３７６５２；ＵＳ２０１９００２３７８４；ＷＯ２０１８０９５４２８；ＥＰ３４１１０７１；ＷＯ２０１９０４２２８５；ＷＯ２０１６０８１４２３；ＷＯ２０１１０７６７８１；ＷＯ２０１２１７２５２１；ＷＯ２０１４０８７２４８；ＵＳ２０１４０３０３３５４；ＷＯ２０１６１５６５３７；ＵＳ２０１６０２８９７２７；ＵＳ２０１９００６２４２８；ＵＳ２０１８０２０１６７７；ＵＳ９３５２０３７；ＵＳ２０１７００４４２５８；ＵＳ９６５０４４１；及びＵＳ２０１８０１０５５９１で提供される。

【0129】

ＶＩ．輸血前試験のための例示的な血清学的アッセイ
輸血前試験は、輸血を目的とした血液製剤が対象（すなわち、輸血のレシピエント）の血液と適合することを確認するために実施される。輸血前試験は、ドナー血液及びレシピエント血液間のＡＢＯ適合性を確認するために使用される血清学的アッセイ、ならびに、ドナーＲＢＣ及び／またはドナー血小板上の抗原と反応する臨床的に最も重要なＲＢＣ／血小板同種抗体を検出するために使用されるものを包含する（Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｍａｎｕａｌ，１８ｔｈ ｅｄ，ＡＡＢＢ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，２０１４を参照）。ドナー／レシピエントの輸血適合性を決定するために血清学的アッセイが行われる他の例示的な血液型抗原としては、例えば、Ｋｅｌｌ血液型抗原、Ｄｕｆｆｙ血液型抗原、Ｋｎｏｐｓ血液型抗原、Ｃａｒｔｗｒｉｇｈｔ血液型抗原、Ｓｃｉａｎｎａ血液型抗原、Ｉｎｄｉａｎ血液型抗原、アカゲザル血液型抗原、Ｄｏｍｂｒｏｃｋ血液型抗原、Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ－Ｗｉｅｎｅｒ血液型抗原、及びＶＥＬ血液型抗原が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で提供される方法は、当該技術分野で既知の多くの血清学的アッセイにおける薬物干渉（例えば、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物による干渉）を低減または防止する。本方法を使用することができる例示的な血清学的アッセイとしては、以下でさらに詳細に記載するものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0130】

通常は、血清学的アッセイは、例えば、輸血を必要とする対象（例えば、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物による処置を受けている対象）由来の非溶血の血液、血漿（例えば、ＥＤＴＡ中で抗凝固処理されている血漿試料）、凝固した血液、または血清を含む試料を使用して実施される。一般に、対象のＡＢＯ型及びＲｈ型が最初に決定される。次に、抗体スクリーニング法は、対象の血漿中に存在し得る臨床的に重要な予想されない非ＡＢＯ血液型抗体を検出するために使用される。スクリーニング試験により、そのような抗体の存在が明らかになる場合、抗体同定パネルを使用して、その抗体の特異性が判定される。抗体の特異性が特定された後、適切なＡＢＯ型及びＲｈ型のドナーユニットが、対応する抗原についてスクリーニングされる。その抗原に対して陰性のユニットは、適合性を確保するために輸血を必要とする対象と交差適合される。

【0131】

血清学的アッセイを、試験管中、スライド上、ゲルカラム上、またはマイクロタイターウェルプレート中で実施することができ、溶血及び凝集は、陽性（不適合）試験結果を示すシグナルである。抗体でコーティングされた隣接するＲＢＣの連結を反映する反応である凝集は、最も一般に使用される試験管法で目視的に及び／または顕微鏡的に、スケール０～４＋でスコアリングすることができる。スコア０は、反応性がないことを示し、滑らかで容易に分散した細胞を特徴とする。スコア４＋は、強い反応性を示し、容易に分散しない１つの固体の凝集物を特徴とする。スコア１＋、２＋、または３＋は、中間レベルの反応性を示し、スコアが高くなるほど凝集体のサイズが徐々に大きくなるのが特徴である。カラム内の抗ＩｇＧ抗体を含むゲルカラム（ゲルカード）または結合している赤血球抗原を含むマイクロタイターウェルプレート（固相）を使用して、血清学的試験を実施した場合、凝集スコアリングの同様の原理を適用することができる。抗体－ＲＢＣ抗原の相互作用を様々な感度で検出するための様々な手法が現在利用可能である。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、手動で実施される。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、自動機械を介して実施される。

【0132】

例えば、即時スピン（ＩＳ）（「即時スピン交差適合」としても既知）は、例えば、試薬血漿／抗血清（すなわち、既知のＲＢＣ及び／または血小板表面抗原に対する抗体を含有する血漿）と対象の血球を混合すること、直ちに、混合物を室温または３７℃で約１５～３０秒間遠心分離すること、ならびに、直接凝集のために試験管を目視検査すること、を必要するアッセイである。直接凝集は、血漿中の抗体及びＲＢＣ表面抗原間に強い相互作用があることを示す。あるいは、対象の血漿及び試薬ＲＢＣ（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知のＲＢＣ）及び／または試薬血小板（すなわち、特定の細胞表面抗原、もしくは細胞表面抗原群を発現することが既知の血小板）を混合し、遠心分離し、直接凝集を視覚的に評価することができる。

【0133】

抗ヒトグロブリン（ＡＨＧ）は、直接凝集を生じない抗体結合ＲＢＣを検出するために使用される。ＡＨＧは、別の種で生成されている二次抗ヒトグロブリン抗体である。ＡＨＧ試薬は、単一クラスのヒトＩｇ（例えば、ＩｇＧ）に特異的であるか、または多重特異的、すなわち、複数のヒトＩｇクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ）及び補体に結合可能である。ＡＨＧ血清は、直接抗グロブリン試験（ＤＡＴ）及び／または間接抗グロブリン試験（ＩＡＴ）で使用され得る。ＤＡＴは、赤血球のｉｎ ｖｉｖｏ感作を実証し、洗浄した患者の赤血球試料をＡＨＧで直接試験することにより実施される。ＩＡＴは、赤血球及び抗体間のｉｎ ｖｉｔｒｏ反応を示す。ＩＡＴでは、血清（または血漿）を赤血球と共にインキュベートし、次に、これを洗浄して未結合のグロブリンを除去する。ＡＨＧの添加による凝集の存在は、抗体が特定の赤血球抗原に結合していることを示す。いくつかの方法は、増強試薬（増強）、例えば、生理食塩水、アルブミン、低イオン強度生理食塩水（ＬＩＳＳ）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の添加を含み、次に、試料は、ＡＨＧ試験前に、３７℃で１０～６０分間インキュベートされる。いくつかの実施形態では、アッセイは、試験管アッセイである。いくつかの実施形態では、アッセイは、固相赤血球接着アッセイ（ＳＰＲＣＡ）である。

【0134】

ＡＢＯ型判定には、抗Ａ及び抗Ｂ抗血清を使用して、レシピエントの赤血球をＡ及びＢ抗原の存在について試験すること（オモテ試験の型判定）が含まれる。既知のＡ型及びＢ型赤血球を使用したレシピエント血漿の抗Ａ及び抗Ｂの存在試験（ウラ試験の型判定）も、所定のＡＢＯ血液型試験の一部である。

【0135】

輸血レシピエントのＲｈ（Ｄ）型は、レシピエントの赤血球を抗Ｄで試験することにより決定される。ＡＢＯ型判定は、通常、即時スピン（ＩＳ）を使用して試験される。

【0136】

個体の赤血球には存在しない抗原に対する同種抗体は、妊娠または輸血により外来の赤血球抗原に曝露されている者に発生し得る。非ＡまたはＢ型抗原に対する抗体を検出するには、患者の血漿または血清の試料は、Ａ及びＢ以外の臨床的に重要な抗原の大部分を発現する選択された市販のＯ型赤血球に対して試験される。

【0137】

抗体スクリーニングが陽性の場合、さらなる血清学的試験は、臨床的に重要な抗体を同定するための市販のＯ型試薬ＲＢＣの拡張パネルを使用して行われる。次に、抗体の特異性が判明すると、抗原を欠くユニットを選択するために、ドナーユニットは、対応する抗原についてスクリーニングされなければならない。

【0138】

個体がどの赤血球抗体を生じさせる可能性が高いかを判定する、レシピエント赤血球の抗原型判定（表現型判定）も実施され得る。ＲＢＣ表現型判定のための血清学的アッセイは、レシピエント細胞を、特異的抗体を含有する市販試薬抗血清と混合することを含む。

【0139】

増強なし及び増強ありのＩＡＴ（例えば、生理食塩水、ＬＩＳＳ、ＰＥＧ）は、抗体の検出及び抗体の同定に使用される。

【0140】

「交差適合」は、患者の血液（血漿）及びドナー赤血球間の適合性を確認する方法を指す。交差適合は、主に、ＡＢＯ型不適合を検出して防止することを意味する。血清学的交差適合アッセイ（ＩＳ交差適合またはＡＨＧフェーズ交差適合のいずれか）は、ドナー赤血球をレシピエント血漿と直接混合すること、ならびに、即時スピン法またはＡＨＧ試験後に溶血及び凝集のスコアを含む。

【0141】

いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、ゲルカードを使用して実施される。ゲルカード試験の原理は、赤血球凝集反応の検出については、Ｌａｐｉｅｒｒｅ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）“Ｔｈｅ ｇｅｌ ｔｅｓｔ：ａ ｎｅｗ ｗａｙ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｒｅｄ ｃｅｌｌｓ ａｎｔｉｇｅｎ－ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，３０：１０９－１１３に記載のゲル手法に基づいている。プラスチックカードは、複数のマイクロチューブで構成されている。各マイクロチューブは、カラムの上部にインキュベーターチャンバーを含む。カード内の各マイクロチューブには、ＲＢＣまたは血小板表面抗原に対する特異的抗体を含む緩衝ゲル溶液があらかじめ充填されている。凝集は、対象のＲＢＣまたは血小板がゲル溶液中に存在する対応する抗体と反応した場合に生じる。あるいは、マイクロチューブには、対象の血清が充填されており、凝集は、試薬ＲＢＣまたは試薬血小板が患者の血清または血漿中に存在する抗体と反応する場合に生じる。ゲルカラムは、カードの遠心分離中に、凝集した赤血球がゲルカラムを通過するにつれて、それをトラップするフィルターとして機能する。ゲルカラムは、サイズに基づいて、凝集した赤血球を凝集していない赤血球から分離する。凝集した赤血球は、ゲルカラムの上部またはゲルカラムに沿って捕捉され、凝集していない赤血球は、マイクロチューブの底に到達してペレットを形成する。

【0142】

いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、固相アッセイ（例えば、本明細書に記載のＣＤ４７に結合する薬物、対象のＲＢＣ、試薬ＲＢＣ、または既知のＲＢＣ及び／もしくは血小板表面抗原に対する抗体の干渉を軽減／低減する多量体が固体支持体上に固定されている）である。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、手動で実施される。いくつかの実施形態では、血清学的アッセイは、自動システムを使用して実施される。いくつかの実施形態では、自動システムは、異なる対象から得られた複数のＲＢＣ、血小板、血清、または血漿試料の同時分析を可能にする多重化ハイスループットシステムである。いくつかの実施形態では、自動システムは、単一の対象から得られたＲＢＣ、血小板、血清、または血漿試料を使用する様々な血清学的アッセイの同時分析を可能にする多重化ハイスループットシステムである。通常、自動血液分析システムは、マイクロプロセッサー制御機器である。例示的な自動血液分析システムとしては、例えば、ＩｍｍｕｃｏｒのＮＥＯ（登録商標）システム（すなわち、固相プラットフォーム）及びＤｉａｇａｓｔのＱＷＡＬＹＳ（登録商標）３システムが挙げられる。Ｑｗａｌｙｓ（登録商標）は、ＡＢＯ／Ｄ型判定、Ｒｈ表現型判定、Ｋ型判定、及び抗体スクリーニング（ＡＢＳ）のための完全に自動化された赤血球磁化技術（ＥＭＴ）システムである。

【0143】

本明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分であると考えられる。本明細書に示され、記載されるものに加えて、本発明の様々な変更は、上記説明から当業者らには明らかであり、添付の特許請求の範囲内にある。本明細書で引用される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あらゆる目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0144】

本明細書に記載される各実施形態は、明確に反対の指示のない限り、他の任意の実施形態（複数可）と組み合わされ得る。特に、好ましいまたは有利であると示された任意の特徴または実施形態は、明確に反対の指示のない限り、好ましいまたは有利であると示された他の任意の特徴（複数可）または実施形態（複数可）と組み合わされ得る。

【実施例】

【0145】

以下の実施例は、当業者らに本発明の作製及び使用方法の完全な開示及び説明を提供するために記載され、本発明者らが発明とみなすものの範囲を限定することが意図されず、また、以下の実験が、実施された全ての実験または唯一の実験であることを表すことも意図されない。使用された数値（例えば、量、温度など）の正確性を確保する取り組みがなされているが、いくつかの実験誤差及び偏差は考慮する必要がある。別途指示のない限り、部は、重量部であり、分子量は、重量平均分子量であり、温度は、摂氏度であり、圧力は、大気圧または大気圧付近である。

【0146】

実施例１：例示的なＣＤ４７多量体の調製
ＣＤ４７多量体Ｂの調製
配列番号６（以下参照）を含むＣＤ４７ポリペプチド単量体を、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞で一過性発現させ、回収し、Ｎｉ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）６ ＦＡＳＴ ＦＬＯＷクロマトグラフィー樹脂を使用して精製し、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。
ＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶ ＥＦＴＦＳＮＤＴＶＶ ＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡ ＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷ ＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦ ＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰ ＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶ ＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬ ＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨ ＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥ ＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥ ＬＫＹＲＶＶＳＨＨＨ ＨＨＨＧＬＮＤＩＦＥ ＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号６）

【0147】

Ａｖｉｄｉｔｙ ＬＬＣから入手可能なＢｉｒＡビオチン化キットを使用して、精製ＣＤ４７ポリペプチド単量体をｉｎ ｖｉｔｒｏでビオチン化した。次に、ｉｎ ｖｉｔｒｏビオチン化反応混合物を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製して、混合物中に存在する過剰なビオチンからビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体を分離した。

【0148】

次に、ビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体を、ビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体：ストレプトアビジンのモル比４．５：１で、穏やかに撹拌しながら４℃で一晩、ストレプトアビジンタンパク質と共にインキュベートした。次に、反応混合物をサイズ排除クロマトグラフィーにより精製して、混合物中の他の種からＣＤ４７多量体（すなわち、ストレプトアビジンに結合している四量体化ビオチン化ＣＤ４７ポリペプチド単量体）を分離した。ＣＤ４７多量体（すなわち、四量体）を、ゲル濾過標準に対するサイズ排除クロマトグラフィーで確認した。

【0149】

実施例２：例示的な抗ＳＩＲＰ多量体の調製
抗ＳＩＲＰ八量体（抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ）の生成
配列番号１３１を含むＶＨ－ＣＨ１配列及び配列番号１３２を含むＶＬ－ＣＬ配列を含む抗ＳＩＲＰ Ｆ（ａｂ’）２を以下のように調製した。配列番号１３１のＣ末端は、配列番号１２６を含み、これは、ヘキサヒスチジンペプチドＨＨＨＨＨＨ（配列番号７）及び１５アミノ酸のタグＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号８）を含む。ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号８）、ＡＶＩＴＡＧ（商標）としても既知。配列番号８は、Ｅ．ｃｏｌｉビオチンリガーゼＢｉｒＡで特異的にビオチン化されている。
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧ ＩＳＳＧＳＤＴＹＹＧ ＤＳＶＫＧＲＬＴＩＳ ＲＤＮＳＫＮＩＬＹＬ ＱＭＮＳＬＴＡＥＤＴ ＡＶＹＹＣＡＲＥＴＷ ＮＨＬＦＤＹＷＧＬＧ ＴＬＶＴＶＳＳＡＫＴ ＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ ＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶ ＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦ ＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳ ＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦ ＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴ ＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳ ＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮ ＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶ ＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴ ＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰ ＧＳＧＳＨＨＨＨＨＨ ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫ ＩＥＷＨＥ（配列番号１３１）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＳＰＧＥＴＶＥＩＴＣ ＳＧＧＳＤＳＳＹＹＹ ＧＷＹＱＱＫＳＰＧＳ ＡＰＶＴＶＩＹＳＤＮ ＫＲＰＳＮＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＴＡＴ ＬＴＩＴＧＶＲＶＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＹＳＴＹＴＮＰＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬＲＴＶ ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ ＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹ ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ ＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴ ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ ＲＧＥＣ（配列番号１３２）

【0150】

配列番号１３１及び１３２は、Ｅｘｐｉ２９３細胞で一時的に発現していた。Ｎｉ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）６ ＦＡＳＴ ＦＬＯＷクロマトグラフィー樹脂を使用して、トランスフェクション上清を精製し、サイズ排除クロマトグラフィーで研磨した。Ａｖｉｄｉｔｙ ＬＬＣから入手可能なＢｉｒＡビオチン化キットを使用して、精製抗ＳＩＲＰ（Ｆａｂ’）２をｉｎ ｖｉｔｒｏでビオチン化した。次に、ｉｎ ｖｉｔｒｏビオチン化反応混合物をサイズ排除クロマトグラフィーで精製して、混合物中に存在する過剰なビオチンからビオチン化抗ＳＩＲＰ Ｆ（ａｂ’）２を分離した。

【0151】

次に、ビオチン化抗ＳＩＲＰ Ｆ（ａｂ’）２を、ビオチン化抗ＳＩＲＰ Ｆ（ａｂ’）２：ストレプトアビジンのモル比４．５：１で、穏やかに撹拌しながら４℃で一晩、ストレプトアビジンタンパク質と共にインキュベートした。次に、反応混合物をサイズ排除クロマトグラフィーで精製して、抗ＳＩＲＰ Ｆ（ａｂ’）２多量体（すなわち、ストレプトアビジンに結合している四量体化ビオチン化抗ＳＩＲＰ Ｆ（ａｂ’）２）を混合物中の他の種から分離した。抗ＳＩＲＰ Ｆ（ａｂ’）２多量体（すなわち、八量体）を、ゲル濾過標準に対するサイズ排除クロマトグラフィーで確認した。

【0152】

抗ＳＩＲＰ多量体Ｄの生成
配列番号１１５を含むＶＨ、配列番号１１６を含むＶＬ、及びマウスＦｃドメインを含む抗ＳＩＲＰ抗体は、Ｅｘｐｉ２９３細胞で一過性に発現していた。（配列番号１１５及び１１６は、以下で提供される）。抗ＳＩＲＰ抗体を、細胞培養上清からＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＬＸを介して精製し、１×リン酸緩衝生理食塩水中で透析した。
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＰＡＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ ＬＱＭＮＴＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１５）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＮＰＧＥＴＶＫＩＡＣ ＳＧＧＤＹＹＳＹＹＹ ＧＷＹＱＱＫＡＰＧＳ ＡＬＶＴＶＩＹＳＤＤ ＫＲＰＳＤＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＴＡＴ ＬＴＩＴＧＶＲＡＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＹＳＴＹＡＮＡＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬ（配列番号１１６）

【0153】

実施例３：ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、または抗ＳＩＲＰ多量体Ｄを使用した、所定の血清学的試験における、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物の干渉の軽減。
ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、または抗ＳＩＲＰ多量体Ｄが、試験管法を使用した間接抗グロブリン試験（ＩＡＴ）における薬物Ａの干渉を軽減するかどうかを評価する実験を実施した。薬物Ａは、ＳＩＲＰαバリアント（すなわち、ヒトＳＩＲＰαに由来するＣＤ４７結合ドメイン）及びヒト免疫グロブリンＩｇＧ１のＦｃ領域に由来するＦｃバリアントを含む例示的なＣＤ４７結合薬物であり、薬物Ａは、所定の血清学的アッセイに干渉することが以前に示されている（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．１－９を参照）。

【0154】

ドナー赤血球（ＲＢＣ）及びドナー血漿を調製するために、様々な血液型のドナーからのＨｅｍｅＱＣ全血試料（Ｂｉｏ－Ｒａｄから市販）を室温、１０００ｘｇで１０分間回転させて、赤血球から血漿を分離した。次に、ペレット化された赤血球を、ＭＬＢ２ ＬＩＳＳ（低イオン強度溶液）中で３．４％に再懸濁した。

【0155】

アッセイを実施するために、１３０ｎＭ（１０μｇ／ｍＬ）の薬物Ａ１００μＬを、各ドナー血漿中で薬物Ａのモル濃度の２０倍から開始して１：２希釈で、ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｄ、またはＣＤ４７ポリペプチド単量体（配列番号６）と共に室温（ＲＴ）で１０分間共インキュベートした。次に、各滴定条件の１００μＬを、それぞれのドナーからの３．４％のＲＢＣ ５０μＬを含有する捕捉ウェルに添加し、３７℃で４５分間インキュベートした。次に、ウェルを洗浄し、ＰＢＳを用いて、室温で５分間、４００×ｇで３回回転させた。２滴のＡＨＧ抗ＩｇＧ（すなわち、抗ヒトグロブリンＩｇＧ）を各ウェルに添加し、８００×ｇで３０秒間遠心分離した。画像を取得する前に、反応混合物を、ペレット化した細胞に対して穏やかに撹拌した。ＰＢＳを含有する捕捉ウェルは、アッセイの陰性対照として機能し、薬物Ａのみを含有するウェルは、陽性対照として機能した。

【0156】

図４は、血液型／血漿型ＡｓｕｂＢ ＲｈＤ＋を有するドナー由来の血液試料を使用した試験管アッセイを使用したＩＡＴの結果を示す。図５は、抗Ｆｙを含むＲＢＣ型／血漿Ｏ型ＲｈＤ＋Ｒ１ｒ ＤＣｃｅｅを有するドナー由来の血液試料を使用した試験管アッセイを使用したＩＡＴの結果を示す。図６は、抗Ｄを有する血液型／血漿型Ａ１ ＲｈＤ－ｒｒ ｃｃｅｅのドナー由来の血液試料を使用した試験管アッセイを使用したＩＡＴの結果を示す。ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｄ、及びＣＤ４７単量体の異なるモル滴定（２０ｘ、１０ｘ、５ｘ、２．５ｘ、１．２５ｘ、０．６３ｘ、０．３１ｘ）（すなわち、薬物Ａとの比較）を試験した。

【0157】

ＣＤ４７ポリペプチド単量体を使用したＩＡＴアッセイにおいて、全てのモル滴定にわたって、凝集が観察された（図４～６を参照）。対照的に、少なくとも５×モル比のＣＤ４７多量体Ｂ、２．５×モル比の抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、及び２．５×モル比の抗ＳＩＲＰ多量体Ｄを添加したＩＡＴアッセイにおいて、凝集が観察されなかった。ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、及び抗ＳＩＲＰ多量体Ｄは、試験管アッセイでＡＨＧ抗ＩｇＧ試薬を使用した場合に、薬物Ａが血液型判定に干渉するのを防止する能力を実証した。

【0158】

続く実験を実施して、ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、または抗ＳＩＲＰ多量体Ｄが固相赤血球接着アッセイ（ＳＰＲＣＡ）における薬物Ａの干渉を軽減するかどうかを評価する。

【0159】

要約すると、１３０ｎＭ（１０μｇ／ｍＬ）の薬物Ａ ５０μＬを、ＰＢＳ中で薬物Ａのモル濃度２０×から開始して１：２希釈で、ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、または抗ＳＩＲＰ多量体Ｄと共に室温（ＲＴ）で１０分間共インキュベートした。次に、各滴定条件の５０μＬを、Ｃａｐｔｕｒｅ Ｒウェルに添加し、これを、２人のＯ型ドナー由来の等しい割合の赤血球のプール懸濁液から調製された赤血球膜でコーティングした。次に、２滴の捕捉ＬＩＳＳ試薬を、各ウェルに添加し、ウェルを３７℃で４５分間インキュベートした。次に、ウェルを、ＰＢＳで６回洗浄した。洗浄後、Ｃａｐｔｕｒｅ－Ｒ Ｒｅａｄｙ Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ Ｒｅｄ ｃｅｌｌｓを１滴ずつ各ウェルに添加した。ウェルを、４５０ｘｇで１分間回転させ、その後画像を取得した。

【0160】

凝集は、ＣＤ４７ポリペプチド単量体を用いたＳＰＲＣＡアッセイで観察された（図７を参照）。対照的に、少なくとも０．３１ｘモル比のＣＤ４７多量体Ｂ、０．３１ｘモル比の抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、または０．６３ｘモル比の抗ＳＩＲＰ多量体Ｄを添加したＳＰＲＣＡアッセイでは、薬物Ａによる干渉は、観察されなかった。ＣＤ４７多量体Ｂ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｃ、及び抗ＳＩＲＰ多量体Ｄは、固相赤血球接着アッセイでＡＨＧ抗ＩｇＧ試薬を使用した場合に、薬物Ａが血液型判定に干渉するのを防止する能力を実証した。

【0161】

実施例４：例示的な抗ＳＩＲＰ多量体Ｅ及び抗ＳＩＲＰ多量体Ｆの調製
抗ＳＩＲＰ多量体Ｅは、配列番号１１７を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖を含む。抗ＳＩＲＰ多量体Ｆは、配列番号１２０を含む重鎖及び配列番号１２１を含む軽鎖を含む。
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＰＡＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ ＬＱＭＮＴＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫ ＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡ ＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭ ＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹ ＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮ ＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹ ＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳ ＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣ ＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫ ＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣ ＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰ ＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰ ＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬ ＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤ ＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦ ＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨ ＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱ ＦＡＳＴＦＲＳＶＳＥ ＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮ ＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳ ＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴ ＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡ ＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫ ＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬ ＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥ ＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧ ＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱ ＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦ ＩＹＳＫＬＮＶＱＫＳ ＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣ ＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨ ＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰ Ｇ （配列番号１１７）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＮＰＧＥＴＶＫＩＡＣ ＳＧＧＤＹＹＳＹＹＹ ＧＷＹＱＱＫＡＰＧＳ ＡＬＶＴＶＩＹＳＤＤ ＫＲＰＳＤＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＴＡＴ ＬＴＩＴＧＶＲＡＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＹＳＴＹＡＮＡＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬＧＱＰ ＫＳＳＰＳＶＴＬＦＰ ＰＳＳＥＥＬＥＴＮＫ ＡＴＬＶＣＴＩＴＤＦ ＹＰＧＶＶＴＶＤＷＫ ＶＤＧＴＰＶＴＱＧＭ ＥＴＴＱＰＳＫＱＳＮ ＮＫＹＭＡＳＳＹＬＴ ＬＴＡＲＡＷＥＲＨＳ ＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧ ＨＴＶＥＫＳＬＳＲＡ ＤＣＳ（配列番号１１８）
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＩＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＰＫＮＳＬＹ ＬＱＭＳＳＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫ ＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡ ＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭ ＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹ ＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮ ＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹ ＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳ ＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣ ＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫ ＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣ ＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰ ＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰ ＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬ ＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤ ＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦ ＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨ ＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱ ＦＡＳＴＦＲＳＶＳＥ ＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮ ＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳ ＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴ ＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡ ＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫ ＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬ ＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥ ＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧ ＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱ ＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦ ＩＹＳＫＬＮＶＱＫＳ ＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣ ＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨ ＨＴＥＫＳＬＳＨＳ ＰＧ（配列番号１２０）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＮＰＧＥＴＶＫＩＴＣ ＳＧＧＤＹＹＳＴＹＹ ＡＷＹＱＱＫＳＰＧＳ ＡＰＶＴＶＩＨＳＤＤ ＫＲＰＳＤＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＡＡＴ ＬＩＩＴＧＶＲＶＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＧＲＴＹＩＮＴＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬＧＱＰ ＫＳＳＰＳＶＴＬＦＰ ＰＳＳＥＥＬＥＴＮＫ ＡＴＬＶＣＴＩＴＤＦ ＹＰＧＶＶＴＶＤＷＫ ＶＤＧＴＰＶＴＱＧＭ ＥＴＴＱＰＳＫＱＳＮ ＮＫＹＭＡＳＳＹＬＴ ＬＴＡＲＡＷＥＲＨＳ ＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧ ＨＴＶＥＫＳＬＳＲＡ ＤＣＳ（配列番号１２１）

【0162】

抗ＳＩＲＰ多量体Ｅを調製するために、配列番号１１７及び１１８を２９３ＦＳ細胞で発現させた。多量体を、製造業者の推奨プロトコール（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＬＸ、Ｃｙｔｉｖａ）に従って、標準的なプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー法で精製し、１×リン酸緩衝生理食塩水中で透析した。配列番号１２０及び１２１を２９３Ｆ細胞で発現させ、抗ＳＩＲＰ多量体Ｅについて記載された多量体を精製することにより、抗ＳＩＲＰ多量体Ｆを調製した。

【0163】

実施例５：抗ＳＩＲＰ多量体Ｅまたは抗ＳＩＲＰ多量体Ｆを使用した日常的な血清学的試験における、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物の干渉の軽減。
実験を実施して、抗ＳＩＲＰ多量体Ｅ及び抗ＳＩＲＰ多量体Ｆが固相赤血球接着アッセイ（ＳＰＲＣＡ）において薬物Ａの干渉を軽減し得る程度を比較した。ＳＰＲＣＡアッセイを、実施例３に記載されているように実施した。図８に示されているように、抗ＳＩＲＰ多量体Ｅ及び抗ＳＩＲＰ多量体Ｆは、双方ともに、薬物Ａと比較して少なくとも１．２５倍のモル比を加えることにより、薬物Ａの干渉を同等に軽減することが可能である。

【0164】

実施例６：例示的な抗ＳＩＲＰ多量体Ｇの調製
抗ＳＩＲＰ多量体Ｇは、配列番号１１９を含む重鎖及び配列番号１１８を含む軽鎖を含む。
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＬＡＧ ＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹ ＰＡＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ ＬＱＭＮＴＬＴＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴ ＷＮＨＬＦＤＹＷＧＬ ＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫ ＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡ ＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳ ＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹ ＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮ ＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹ ＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳ ＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣ ＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫ ＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰ ＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣ ＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳ ＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤ ＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶ ＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤ ＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶ ＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴ ＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴ ＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱ ＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦ ＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰ ＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰ ＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹ ＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴ ＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶ ＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶ ＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬ ＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤ ＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫ ＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥ ＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨ ＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫ ＳＦＳＲＴＰＧ（配列番号１１９）
ＡＬＴＱＰＡＳＶＳＡ ＮＰＧＥＴＶＫＩＡＣ ＳＧＧＤＹＹＳＹＹＹ ＧＷＹＱＱＫＡＰＧＳ ＡＬＶＴＶＩＹＳＤＤ ＫＲＰＳＤＩＰＳＲＦ ＳＧＳＡＳＧＳＴＡＴ ＬＴＩＴＧＶＲＡＥＤ ＥＡＶＹＹＣＧＧＹＤ ＹＳＴＹＡＮＡＦＧＡ ＧＴＴＬＴＶＬＧＱＰ ＫＳＳＰＳＶＴＬＦＰ ＰＳＳＥＥＬＥＴＮＫ ＡＴＬＶＣＴＩＴＤＦ ＹＰＧＶＶＴＶＤＷＫ ＶＤＧＴＰＶＴＱＧＭ ＥＴＴＱＰＳＫＱＳＮ ＮＫＹＭＡＳＳＹＬＴ ＬＴＡＲＡＷＥＲＨＳ ＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧ ＨＴＶＥＫＳＬＳＲＡ ＤＣＳ（配列番号１１８）

【0165】

抗ＳＩＲＰ多量体Ｇを調製するために、配列番号１１８及び１１９を組み換え宿主細胞内で発現させた。多量体を標準的な方法で精製した。

【0166】

実施例７：薬物Ａは、様々なプラットフォームを使用して実施される血液型判定アッセイに干渉する。
薬物ＡがＲＢＣ抗体スクリーニングに干渉する可能性に関する以前の結果（例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．１－９；ｄｏｉ：１０．１１１１／ｔｒｆ．１６００９を参照）に基づいて、赤血球表面抗原に結合する抗体が含まれていないことが確認されている正常なプール血漿に、薬物Ａをスパイクした。この試験で使用された患者の血漿試料を、病院での日常ケアの一環として収集した。薬物Ａの最終濃度は、０．１、１、１０、１００、１０００、及び２０００μｇ／ｍＬであり、ゲルカードフォーマットでＢｉｏ－Ｒａｄ抗体スクリーニング細胞Ｉ及びＩＩ（表１）を使用して、固相でＩｍｍｕｃｏｒの自動ハイスループットＮＥＯ（登録商標）システム（表２）を使用して、抗体スクリーニング細胞Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩの場合、Ｄｉａｇａｓｔの自動ハイスループットＱｗａｌｙｓ３システム（表３）を使用して、これを試験した。表１～３に示されているように、凝集反応性は、（０～４＋のスケールで）２＋～４＋の範囲であり、試験された薬物Ａ濃度全体で観察された。これは、薬物ＡのＲＢＣへの結合及びＡＨＧ試薬による薬物ＡのＦｃ部分の相互作用が上記フォーマットを使用した上記アッセイを干渉することを示唆する。製造者のプロトコールに従って、試薬を使用した。Ｂｉｏ－Ｒａｄの試薬情報には、抗体スクリーニングＩセル及びＩＩセル：ＩＤ－ＤｉａＣｅｌｌ Ｉ－ＩＩ、ＩＤ細胞由来のｒｒ表現型：ＩＤ－ＤｉａＰａｎｅｌ：ゲルカード：ＩＤカードが含まれる。ゲルカードアッセイを、製造者のプロトコールに従って実施した。要約すると、０．８％のＲＢＣ懸濁液５０μＬ及び血漿２５μＬを利用し、３７℃で１５分間インキュベートし、Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＩＤ－Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅで１０分間遠心分離した。血漿は、ＡＢ型であることが確認された患者からプールされた血漿であり、同種抗体を含有していなかった。

【表1】

【0167】

ＮＥＯ（登録商標）システムで通常使用するためのＮＥＯ（登録商標）固相プラットフォーム用の試薬は、Ｉｍｍｕｃｏｒにより供給された。試薬には、Ｃａｐｔｕｒｅ－Ｒ Ｒｅａｄｙ－Ｓｃｒｅｅｎ（Ｉ及びＩＩ）が含まれていた。試薬赤血球（赤血球間質の形態）を、製造時に試験ウェルに結合させた。ウェル当たりの血漿量は、２５μＬであった。

【表2】

【0168】

ＱＷＡＬＹＳ３プラットフォーム（赤血球磁化技術（ＥＭＴ））で使用される所定の試薬は、Ｄｉａｇａｓｔにより供給された。１つの試薬は、Ｈｅｍａｓｃｒｅｅｎ Ｉ－ＩＩ－ＩＩＩ（１％の磁化赤血球）であった。１ウェル当たりの赤血球及び血漿の体積は、それぞれ、１５及び１５μＬであった。

【表3】

【0169】

表１のデータは、薬物Ａにより、ゲルカード試験（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）において２＋～３＋の凝集反応性が生じたことを示す。同等の凝集反応性は、Ｄ－ －、すなわち、ＣＤ４７発現が著しく減少したＲＢＣ、を使用したゲルカード試験、及び、ｒｒ、すなわち、ＣＤ４７発現が高いＲＢＣ、を使用したゲルカード、において観察された。表２及び３のデータは、薬物Ａが非常に低濃度であっても、薬物Ａにより、ハイスループット固相試験（ＮＥＯ（登録商標）、ＱＷＡＬＹＳ（登録商標））において４＋の凝集反応性が生じたことを示す。

【0170】

実施例８：抗ＳＩＲＰ多量体Ｇを使用した日常的な血清学的試験における、（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物の干渉の軽減。
抗ＳＩＲＰ多量体Ｇがゲルカードアッセイにおいて薬物Ａの干渉を軽減する程度を評価する実験を実施した。実施例７に記載されているように、アッセイを実施した。１つの一連の試験では、最終濃度０．１、１、１０、１００、１０００、または２０００μｇ／ｍＬを得るために、多量体Ｇを血漿試料に添加した。ゲルカード血清学的アッセイを実施した。表４に示されているように、薬物Ａが試料中に２０００μｇ／ｍＬの濃度で存在する場合、薬物Ａと比較して６倍モル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体Ｇは、薬物Ａの干渉を軽減した。薬物Ａが試料中に１０００μｇ／ｍＬの濃度で存在する場合、薬物Ａと比較して４倍モル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体Ｇは、薬物Ａの干渉を軽減した。薬物Ａが試料中に０．１～１００μｇ／ｍＬの濃度で存在する場合、３倍モル過剰の抗ＳＩＲＰ多量体Ｇは、薬物Ａの干渉を軽減した。

【表4】

【0171】

次に、薬物Ａを、抗Ｊｋａ抗体または抗Ｅ抗体（すなわち、既知の同種抗体）を含有する血漿試料に添加して、薬物Ａの最終濃度０．１、１、１０、１００、１０００、または２０００μｇ／ｍＬを得た。Ｇｅｌ Ｇａｒｄアッセイを実施した。表５に示されているように、血漿中に２０００μｇ／ｍＬの濃度で存在する薬物Ａは、抗Ｊｋａ及び抗Ｅ同種抗体の検出に干渉した。多量体Ｇは、抗Ｊｋａ及び抗Ｅ同種抗体の検出を干渉することなく、薬物Ａの干渉を中和した。

【表5】

【0172】

表４及び５のデータは、抗ＳＩＲＰ多量体Ｇが血漿中に存在する薬物Ａにより引き起こされた干渉を軽減するという結論を裏付けている。そのような軽減により、ゲルカードアッセイによる血漿中の同種異系抗体の検出が可能になる。

【0173】

実施例９：（ｉ）抗体Ｆｃ領域及び（ｉｉ）ヒトＣＤ４７に結合する部分を含む薬物により引き起こされる血清学的アッセイの干渉は、様々なプラットフォームにわたって多量体Ｇを使用することにより軽減され得る。
薬物Ａが試験管試験及びゲルカードフォーマットでの血清学的アッセイに干渉する程度を評価する、さらなる試験を実施した。血漿試料（ＡＢ不活性血漿）を薬物Ａでスパイクして、薬物Ａの最終濃度３１．２５、１２５、５００、または２０００μｇ／ｍｌを得た。試験管試験では、５００μｇ／ｍｌ及び２０００μｇ／ｍｌの濃度で血漿中に薬物Ａが存在すると、強力な陽性の直接抗グロブリン試験（ＤＡＴ）が生じた。試験された３１．２５μｇ／ｍｌ及び２０００μｇ／ｍｌの濃度の薬物Ａは、ＡＢＯ型判定（オモテ試験及びウラ試験）またはＲｈＤ型判定を干渉しなかった。陽性ＤＡＴにより、ＡＨＧでの弱いＤに対しＲｈＤ型判定で干渉が観察された。試験された全ての濃度（３１．２５μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、及び２０００μｇ／ｍｌ）の薬物Ａは、（従来のＡＢＯ不適合性が試験されていた）初期スピン時に抗体スクリーニングを干渉しなかったが、ＰＥＧならびに試験された両方のＡＨＧ試薬（Ｉｍｍｕｃｏｒ及びＯｒｔｈｏ）を使用した間接抗グロブリン試験（ＩＡＴ）で全ての細胞との強い凝集を引き起こした。ゲルカード試験では、薬物Ａは、薬物Ａの全ての濃度（すなわち、３１．２５μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌμｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、及び２０００μｇ／ｍｌ）で試験された全細胞と強い陽性凝集を引き起こした。（データは示されない）。

【0174】

多量体Ｇ（１００ｍｇ／ｍｌ）は、１：１０（ｖ／ｖ、多量体Ｇ：血漿）の比で血漿に添加され、室温で１５分間インキュベートされた場合、５００μｇ／ｍｌの濃度で血漿中に存在する薬物Ａの干渉が除去された。表６Ａを参照のこと。多量体Ｇ（１００ｍｇ／ｍｌ）は、１：１０（ｖ／ｖ、多量体Ｇ：血漿）の比で血漿に添加され、室温または３７℃で最大６０分間インキュベートされた場合のにより、薬物Ａによる干渉が部分的に軽減し（「ｖｗ＋」または「非常に弱い＋」であり、これは、０～１＋に入る）、血漿中に２０００μｇ／ｍｌの濃度で存在する場合、抗体スクリーニングは、陽性のままであった（「ｗ１＋」または「弱い１＋」であり、これは、０～１＋に入る）。表６Ｂを参照のこと。抗体スクリーニングにおける反応性は、大幅に低下したが、ＰＥＧ－ＩＡＴ及びＬＩＳＳ－ＩＡＴによる試験では弱い陽性のままであった。表６Ｃを参照のこと。

【表6】

【表7】

【表8】

【0175】

多量体Ｇを使用すると、ＬＩＳＳもしくはＰＥＧＩＡＴ、またはゲルカード試験による同種抗Ｄの反応性に影響はなかった。表７を参照のこと。多量体Ｇを使用すると、ＬＩＳＳもしくはＰＥＧＩＡＴ、またはゲルカード試験による同種抗Ｋの反応性に影響はなかった。表８を参照のこと。

【表9】

【表10】

【0176】

表９Ａに示されているように、薬物Ａは、ＬＩＳＳＩＡＴ、ＰＥＧＩＡＴ、及びゲルカード試験フォーマットにおいて凝集を引き起こす。

【表11】

【0177】

以下の結果が表９Ｂに示されている：多量体Ｇ（１５０ｍｇ／ｍｌ）を１：１０（ｖ／ｖ、多量体Ｇ：血漿）の比で血漿に添加した。３０分間のインキュベーション後、血漿中に７５０μｇ／ｍｌまたは１０００μｇ／ｍＬで存在する場合、薬物Ａによる干渉は、ＬＩＳＳ ＩＡＴ試験において多量体Ｇにより完全に軽減された。３０分間のインキュベーション後、血漿中に１２５０μｇ／ｍｌ、１５００μｇ／ｍｌ、または２０００μｇ／ｍＬで存在する場合、薬物Ａによる干渉は、ＬＩＳＳ ＩＡＴ試験において多量体Ｇにより実質的に消滅していた（マイクロ＋反応性）。３０分間のインキュベーション後、試験された全ての濃度（７５０μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬ、１２５０μｇ／ｍＬ、１５００μｇ／ｍＬ、及び２０００μｇ／ｍＬ）での薬物Ａによる干渉は、ＰＥＧ ＩＡＴ試験で多量体Ｇにより大幅に減少した（１＋またはｍｉｃｒｏ＋）。３０分間のインキュベーション後、血漿中に７５０μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍＬ、または１２５０μｇ／ｍＬで存在する場合、薬物Ａによる干渉は、ＩｇＧゲル試験において多量体Ｇにより完全に軽減された。３０分間のインキュベーション後、血漿中に１５００μｇ／ｍｌまたは２０００μｇ／ｍＬで存在する場合、薬物Ａによる干渉は、ＩｇＧゲル試験において多量体Ｇにより大幅に減少した（１＋または＋／－）。

【表12】

【0178】

以下の結果は、表９Ｃに示されている。多量体Ｇ（１５０ｍｇ／ｍｌ）を１：１０（ｖ／ｖ、多量体Ｇ：血漿）の比で血漿に添加した。６０分間のインキュベーション後、血漿中に７５０μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍＬ、または１２５０μｇ／ｍＬで存在する場合、薬物Ａによる干渉は、ＬＩＳＳ ＩＡＴ試験において多量体Ｇにより完全に軽減された。６０分間のインキュベーション後、血漿中に１５００μｇ／ｍＬで存在する場合、薬物Ａによる干渉は、ＬＩＳＳ ＩＡＴ試験において多量体Ｇにより実質的に消滅していた（マイクロ＋反応性）。薬物Ａによる干渉の多量体Ｇによる軽減は、血漿中に２０００μｇ／ｍＬで存在する場合、この実験のＬＩＳＳ ＩＡＴ試験では評価されなかった。６０分間のインキュベーション後、薬物Ａによる干渉は、血漿中に７５０μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬ、１２５０μｇ／ｍＬ、または１５００μｇ／ｍＬで存在する場合、ＰＥＧ ＩＡＴ試験において多量体Ｇにより実質的に消滅していた（マイクロ＋反応性）。薬物Ａによる干渉の多量体Ｇによる軽減は、血漿中に２０００μｇ／ｍＬで存在する場合、この実験のＰＥＧ ＩＡＴ試験では評価されなかった。６０分間のインキュベーション後、薬物Ａによる干渉は、血漿中に７５０μｇ／ｍＬまたは１０００μｇ／ｍＬで存在する場合、多量体Ｇにより完全に軽減され、血漿中に１２５０μｇ／ｍＬまたは１５００μｇ／ｍＬで存在する場合、ＩｇＧゲル試験において多量体Ｇにより大幅に減少した（弱い＋または＋／－）。薬物Ａによる干渉の多量体Ｇによる軽減は、血漿中に２０００μｇ／ｍＬで存在する場合、ＩｇＧゲル試験では評価されなかった。

【表13】

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【配列表】

2023552375000001.app

【国際調査報告】