特表 2023-552450 新生児低酸素性虚血性脳症における神経保護のための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-12-15

(54)【発明の名称】新生児低酸素性虚血性脳症における神経保護のための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/232 20060101AFI20231208BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20231208BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20231208BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20231208BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20231208BHJP

   A61K 47/14 20170101ALI20231208BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20231208BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20231208BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20231208BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20231208BHJP

【ＦＩ】

A61K31/232

A61P9/10

A61P25/00

A61K9/107

A61K47/12

A61K47/14

A61K47/24

A61K47/10

A61K47/26

A61K47/22

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023534312

(86)(22)【出願日】2021-12-07

(85)【翻訳文提出日】2023-08-04

(86)【国際出願番号】 US2021062102

(87)【国際公開番号】W WO2022125484

(87)【国際公開日】2022-06-16

(31)【優先権主張番号】63/122,198

(32)【優先日】2020-12-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】306018457

【氏名又は名称】ザ・トラスティーズ・オブ・コロンビア・ユニバーシティ・イン・ザ・シティ・オブ・ニューヨーク

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】デッケルバウム リチャード ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】ジルポリ ヒュルデ

(72)【発明者】

【氏名】ダール ソーレン ヴェイス

(72)【発明者】

【氏名】テン ヴァディム エス．

【テーマコード（参考）】

4C076

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C076AA17

4C076BB13

4C076BB25

4C076CC01

4C076CC11

4C076DD38D

4C076DD41

4C076DD41F

4C076DD43

4C076DD46

4C076DD49

4C076DD59S

4C076DD63F

4C076DD67D

4C076FF14

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4C076FF51

4C206AA01

4C206AA02

4C206DB09

4C206DB47

4C206DB48

4C206MA01

4C206MA04

4C206MA42

4C206MA79

4C206MA86

4C206NA14

4C206ZA02

4C206ZA36

(57)【要約】

本開示の様々な態様及び実施形態では、本発明は、低酸素性虚血性脳症（ＨＩＥ）に関連する脳損傷から保護するための医薬組成物及び方法を提供する。この組成物及び方法は、オメガ－３脂肪酸（ｎ－３ ＦＡ）ジグリセリド（ＤＧ）及び／またはトリグリセリド（ＴＧ）エマルジョンを使用し、単独でまたは治療的低体温療法（ＨＴ）と組み合わせて使用してもよい。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

新生児低酸素性虚血性脳症（ＨＩＥ）に関連する脳損傷から保護するための方法であって、オメガ３脂肪酸（ＦＡ）ジグリセリド（ＤＧ）エマルジョン及び／またはオメガ－３ＦＡトリグリセリド（ＴＧ）エマルジョンを必要とする対象に、オメガ３脂肪酸（ＦＡ）ジグリセリド（ＤＧ）エマルジョン及び／またはオメガ－３ＦＡトリグリセリド（ＴＧ）エマルジョンを投与することを含む前記方法。

【請求項2】

前記対象がＨＩＥの危険性がある出生前対象であり、前記ＤＧ及び／または前記ＴＧエマルジョンが妊娠中の母親に投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記対象が分娩中であり、前記ＤＧまたは前記ＴＧエマルジョンが、分娩開始前または分娩開始後に母親に静脈内または経鼻胃管によって投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記エマルジョンが、１回以上のボーラス注射として、もしくは連続注入により、または１回以上のボーラス負荷用量とそれに続く１回以上の追加の静脈内用量の注入の組み合わせとして静脈内投与される、請求項２または３に記載の方法。

【請求項5】

前記対象が新生児であり、前記ＤＧ及び／または前記ＴＧエマルジョンが分娩の約１２時間以内に前記新生児に最初に投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記新生児が早産児または正期新生児である、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記エマルジョンの少なくとも第１用量が、分娩の約６時間以内、または分娩の約４時間以内、分娩の約２時間以内に投与される、請求項５または６に記載の方法。

【請求項8】

前記エマルジョンが、１回以上のボーラス注射及び／または持続注入として、経鼻胃（ＮＧ）チューブを介して、または静脈内に投与される、請求項５～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記新生児が治療的低体温療法（ＨＴ）で処置される、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記エマルジョンが、ＨＴの前、最中、または後に最初に投与される、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記ＨＴが分娩の約１２時間以内に開始される、請求項９または１０に記載の方法。

【請求項12】

前記ＨＴが分娩の約１０時間以内に開始される、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記ＨＴが分娩の約８時間以内に開始される、請求項１１に記載の方法。

【請求項14】

前記ＨＴが分娩の約６時間以内に開始される、請求項１１に記載の方法。

【請求項15】

前記ＨＴが、分娩の約６時間後、または分娩の約８時間後、または分娩の約１０時間後、または分娩の約１２時間後に開始される、請求項１１に記載の方法。

【請求項16】

オメガ－３ ＦＡ ＴＧエマルジョンが投与される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

オメガ－３ ＦＡ ＤＧエマルジョンが投与される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記ＦＡが、前記脂肪酸の少なくとも約５０重量％のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及び／またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含む、請求項１６または１７に記載の方法。

【請求項19】

前記脂肪酸が少なくとも約６０重量％のＥＰＡ及び／またはＤＨＡを含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記脂肪酸が少なくとも約７０重量％のＥＰＡ及び／またはＤＨＡを含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項21】

前記脂肪酸がＥＰＡ及びＤＨＡの両方を含む、請求項１８～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

ＥＰＡ：ＤＨＡの比が約４：１～約１：４である、請求項２０に記載の方法。

【請求項23】

ＥＰＡ：ＤＨＡの比が約２：１～約１：２であり、任意選択で約１：１である、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記ＦＡがドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）をさらに含む、請求項１６～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

前記ＦＡがアラキドン酸（ＡＲＡ）をさらに含む、請求項１５～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記ＦＡが約１～約４０重量％のＡＲＡを含む、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記ＤＧもしくは前記ＴＧ、またはそれらのエマルジョンが、１つ以上の特殊な分解促進メディエーター（ＳＰＭ）をさらに含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記ＳＰＭ（複数可）が、１つ以上のリポキシン、（ニューロ）プロテクチン、レゾルビン、及びマレシンを含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記エマルジョンが、遊離ＦＡとして、またはＴＧ及び／またはＤＧとしてエステル化された中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）をさらに含む、請求項１５～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記ＭＣＦＡが、前記ＴＧ及び／または前記ＤＧエマルジョン中の前記脂肪酸の約１％～約２０％である、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記エマルジョンが、組成物の約１０重量％～約３０重量％のＴＧ及び／またはＤＧを含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

前記エマルジョンが、前記組成物の約１５重量％～約２５重量％のＤＧを含む、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記エマルジョンの平均粒径が２００ｎｍ以下である、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

前記エマルジョンが、約－４０ｍＶ以上のマイナスのゼータ電位を有する、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記対象が、前記エマルジョンの単回投与を受ける、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記対象が少なくとも２回、最大６回まで前記エマルジョンの投与を受ける、請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

前記エマルジョンが、１２時間ごとに約１回以下の頻度で投与される、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記エマルジョンが約１日～約１週間にわたって投与される、請求項３６に記載の方法。

【請求項39】

前記エマルジョンがほぼ毎日投与される、請求項３６に記載の方法。

【請求項40】

各投与が、体重１ｋｇ当たり約０．０５～約５ｇという乳化ＤＧまたは乳化ＴＧの用量である、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

各投与が体重１ｋｇ当たり約０．５～約４ｇという前記乳化ＤＧまたは前記乳化ＴＧである、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

新生児における低酸素性虚血性脳症（ＨＩＥ）に関連する脳損傷から保護するための方法であって、ＨＩＥの危険性がある子供を抱えている妊娠中の母親に、出生前または分娩中にオメガ３ ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンの静脈内注射を投与することと、任意選択で、治療的低体温療法（ＨＴ）レジメン及び／またはオメガ－３ ＦＡ ＤＧもしくはＴＧエマルジョン療法で分娩後の前記新生児を治療することとを含む、前記方法。

【請求項43】

前記ＤＧまたは前記ＴＧエマルジョンが、分娩開始後に前記母親に静脈内投与される、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

出産が正期産または早産である、請求項４２または請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記エマルジョンが、ボーラスとして、もしくは連続注入により、または１回以上のボーラス負荷用量とそれに続く１回以上の追加の静脈内用量の注入の組み合わせとして静脈内投与される、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

ｎ－３ ＦＡ ＤＧエマルジョンが分娩の約１２時間以内に前記新生児に投与される、請求項４２～４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

前記ｎ－３ ＦＡ ＤＧエマルジョンが、分娩の約６時間以内、または分娩の約４時間以内、分娩の約２時間以内に投与される、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記ｎ－３ＦＡ ＤＧまたは前記ＴＧエマルジョンが、ボーラス及び／または持続注入として、前記新生児にＮＧチューブを介してまたは静脈内に投与される、請求項４６または４７に記載の方法。

【請求項49】

前記新生児が治療的低体温療法（ＨＴ）で処置される、請求項４２～４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記ＨＴが分娩の約１２時間以内に開始される、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記ＨＴが分娩の約１０時間以内に開始される、請求項４９に記載の方法。

【請求項52】

前記ＨＴが分娩の約８時間以内に開始される、請求項４９に記載の方法。

【請求項53】

前記ＨＴが分娩の約６時間以内に開始される、請求項４９に記載の方法。

【請求項54】

前記ＨＴが、分娩の約６時間後、または分娩の約８時間後、または分娩の約１０時間後、または分娩の約１２時間後に開始される、請求項４９に記載の方法。

【請求項55】

脂肪酸が少なくとも約５０重量％のＥＰＡ及び／またはＤＨＡを含む、請求項４２～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

前記脂肪酸が少なくとも約６０重量％のＥＰＡ及び／またはＤＨＡを含む、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

前記脂肪酸が少なくとも約７０重量％のＥＰＡ及び／またはＤＨＡを含む、請求項５５に記載の方法。

【請求項58】

前記脂肪酸がＥＰＡ及びＤＨＡの両方を含む、請求項５５～５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

ＥＰＡ：ＤＨＡの比が約４：１～約１：４である、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

ＥＰＡ：ＤＨＡの比が約２：１～約１：２であり、任意選択で約１：１である、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記脂肪酸がＤＰＡをさらに含む、請求項５５～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記脂肪酸がＡＲＡをさらに含む、請求項５５～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記脂肪酸が約１重量％～約４０重量％のＡＲＡを含む、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記ＤＧもしくは前記ＴＧ、またはそれらのエマルジョンが、１つ以上のＳＰＭをさらに含む、請求項４２～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記ＳＰＭ（複数可）が、１つ以上のリポキシン、（ニューロ）プロテクチン、レゾルビン、及びマレシンを含む、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

前記エマルジョンが、遊離脂肪酸として、またはジグリセリドとしてエステル化された中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）をさらに含む、請求項４２～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記ＭＣＦＡが、前記エマルジョン中の前記脂肪酸の約１重量％～約２０重量％である、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

前記エマルジョンが、組成物の約１０重量％～約２０重量％のＤＧオイルを含む、請求項４２～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記エマルジョンが、前記組成物の約１５重量％～約２５重量％のＤＧまたはＴＧオイルを含む、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

前記エマルジョンの平均粒径が２００ｎｍ以下である、請求項４２～６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項71】

前記エマルジョンが、約－４０ｍＶ以上のマイナスのゼータ電位を有する、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記新生児が、前記エマルジョンの単回ボーラス注射または連続注入を受ける、請求項４２～７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記新生児が、少なくとも２回、及び最大６回の前記エマルジョンのボーラス注射またはボーラス注入を受ける、請求項４２～７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記ボーラス注射または前記ボーラス注入が、１２時間ごとに約１回以下の頻度で投与される、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

注射が約１日～約１週間にわたって投与される、請求項７３に記載の方法。

【請求項76】

前記注射がほぼ毎日投与される、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記ボーラス投与が、体重１ｋｇ当たり約０．０５～約５ｇの乳化ＤＧもしくは乳化ＴＧである、請求項４２～７６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項78】

前記ボーラス投与が体重１ｋｇ当たり約０．５～約４ｇの前記乳化ＤＧまたは前記乳化ＴＧである、請求項７７に記載の方法。

【請求項79】

低酸素性虚血性脳症（ＨＩＥ）に関連する脳損傷から保護するための方法であって、必要とする新生児対象に、分娩から約１２時間以内にオメガ－３ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンを投与することと、治療的低体温（ＨＴ）レジメンで前記対象を処置することとを含む前記方法。

【請求項80】

前記新生児対象が、ＨＴの前、最中、または後に前記エマルジョンで最初に処置される、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

前記新生児対象が早産児または正期産新生児である、請求項７９または８０に記載の方法。

【請求項82】

ＤＧまたはＴＧエマルジョンの少なくとも第１用量が、分娩の約６時間以内、または分娩の約４時間以内、分娩の約２時間以内に投与される、請求項７９～８１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項83】

前記ＤＧまたは前記ＴＧエマルジョンが、ボーラス及び／または持続注入として、ＮＧチューブを介して、または静脈内に投与される、請求項７９～８２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項84】

前記ＨＴが分娩の約１２時間以内に開始される、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項85】

前記ＤＧまたは前記ＴＧエマルジョンの用量が分娩の約４時間以内に送達され、前記ＨＴが分娩の約１０時間以内に開始される、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

前記ＤＧまたは前記ＴＧエマルジョンの用量が分娩の約４時間以内に送達され、前記ＨＴが分娩の約８時間以内に開始される、請求項８４に記載の方法。

【請求項87】

前記ＤＧエマルジョンの用量が分娩の約４時間以内に送達され、前記ＨＴが分娩の約６時間以内に開始される、請求項８４に記載の方法。

【請求項88】

前記ＤＧエマルジョンの用量が分娩の約２時間以内に送達され、前記ＨＴが分娩の約６時間後、または分娩の約８時間後、または分娩の約１０時間後、または分娩の約１２時間後に開始される、請求項８４に記載の方法。

【請求項89】

前記ＤＧまたは前記ＴＧエマルジョンが、ボーラスとして、もしくは連続注入により、またはボーラス負荷用量とそれに続く１回以上の追加の用量の注入の組み合わせとして静脈内投与される、請求項８０～８８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項90】

脂肪酸が少なくとも約５０重量％のＥＰＡ及び／またはＤＨＡを含む、請求項８０～８９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項91】

前記脂肪酸が少なくとも約６０重量％のＥＰＡ及び／またはＤＨＡを含む、請求項９０に記載の方法。

【請求項92】

前記脂肪酸が少なくとも約７０重量％のＥＰＡ及び／またはＤＨＡを含む、請求項９１に記載の方法。

【請求項93】

前記脂肪酸がＥＰＡ及びＤＨＡの両方を含む、請求項９０～９２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項94】

ＥＰＡ：ＤＨＡの比が約４：１～約１：４である、請求項９３に記載の方法。

【請求項95】

ＥＰＡ：ＤＨＡの比が約２：１～約１：２であり、任意選択で約１：１である、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

前記脂肪酸がＤＰＡをさらに含む、請求項９０～９５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項97】

前記脂肪酸がＡＲＡをさらに含む、請求項９０～９６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項98】

前記脂肪酸が約１重量％～約４０重量％のＡＲＡを含む、請求項９７に記載の方法。

【請求項99】

前記ＤＧもしくは前記ＴＧ、またはそれらのエマルジョンが、１つ以上のＳＰＭをさらに含む、請求項９０～９８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項100】

前記ＳＰＭ（複数可）が、１つ以上のリポキシン、（ニューロ）プロテクチン、レゾルビン、及びマレシンを含む、請求項９９に記載の方法。

【請求項101】

前記エマルジョンが、遊離ＦＡとして、またはＤＧもしくはＴＧとしてエステル化されたＭＣＦＡをさらに含む、請求項９０～１００のいずれか１項に記載の方法。

【請求項102】

前記ＭＣＦＡが、前記ＤＧもしくは前記ＴＧエマルジョン中の前記脂肪酸の約１重量％～約２０重量％である、請求項１０１に記載の方法。

【請求項103】

前記エマルジョンが、約１０重量％～約３０重量％のＤＧオイルまたはＴＧオイルを含む、請求項７９～１０２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項104】

前記エマルジョンが、約１５重量％～約２５重量％のＤＧまたはＴＧオイルを含む、請求項１０３に記載の方法。

【請求項105】

前記エマルジョンの平均粒径が２００ｎｍ以下である、請求項７９～１０４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項106】

前記エマルジョンが、約－４０ｍＶ以上のマイナスのゼータ電位を有する、請求項１０５に記載の方法。

【請求項107】

前記対象が、前記エマルジョンの単回ボーラス注射または注入を受ける、請求項７９～１０６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項108】

前記対象が、少なくとも２回、及び最大６回の前記エマルジョンのボーラス注射またはボーラス注入を受ける、請求項７９～１０６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項109】

前記ボーラス注射または前記ボーラス注入が、１２時間ごとに約１回以下の頻度で投与される、請求項１０８に記載の方法。

【請求項110】

前記ボーラス注射または前記ボーラス注入が、約１日～約１週間の経過にわたって投与される、請求項１０８に記載の方法。

【請求項111】

前記ボーラス注射または前記ボーラス注入がほぼ毎日投与される、請求項１０８に記載の方法。

【請求項112】

単回投与が体重１ｋｇ当たり約０．０５～約５ｇの乳化ＤＧまたは乳化ＴＧを含む、請求項７９～１１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項113】

単回投与が体重１ｋｇ当たり約２ｇ～約４ｇの前記乳化ＤＧまたは前記乳化ＴＧを含む、請求項１１２に記載の方法。

【請求項114】

１つ以上の乳化剤で乳化された有効量のオメガ－３ ＤＧまたはＴＧオイルを含む医薬組成物であって、前記ＤＧまたは前記ＴＧオイルが、少なくとも約５０重量％のＥＰＡ及びＤＨＡ、及び１重量％～約３０重量％のＡＲＡであるエステル化ＦＡを含む、前記医薬組成物。

【請求項115】

前記ＦＡが少なくとも約６０重量％のＥＰＡ及びＤＨＡを含む、請求項１１４に記載の医薬組成物。

【請求項116】

前記ＦＡが少なくとも約７０重量％のＥＰＡ及びＤＨＡを含む、請求項１１４に記載の医薬組成物。

【請求項117】

ＥＰＡ：ＤＨＡの比が約４：１～約１：４である、請求項１１４～１１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項118】

ＥＰＡ：ＤＨＡの比が約２：１～約１：２であり、任意選択で約１：１である、請求項１１７に記載の医薬組成物。

【請求項119】

前記ＦＡがＤＰＡをさらに含む、請求項１１４～１１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項120】

前記ＤＧもしくは前記ＴＧ、またはそれらのエマルジョンが、１つ以上のＳＰＭをさらに含む、請求項１１４～１１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項121】

前記ＳＰＭ（複数可）が、１つ以上のリポキシン、（ニューロ）プロテクチン、レゾルビン、及びマレシンを含む、請求項１２０に記載の方法。

【請求項122】

前記エマルジョンが、遊離ＦＡとして、またはＤＧもしくはＴＧ中でエステル化されたＭＣＦＡをさらに含む、請求項１１４～１２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項123】

前記ＭＣＦＡが、前記エマルジョン中の前記ＦＡの約１重量％～約２０重量％である、請求項１２２に記載の医薬組成物。

【請求項124】

前記エマルジョンが、約１０重量％～約３０重量％のＤＧまたはＴＧオイルを含む、請求項１１４～１２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項125】

前記エマルジョンが約１５重量％～約２５重量％のＤＧまたはＴＧオイルを含む、請求項１２４に記載の医薬組成物。

【請求項126】

前記エマルジョンの平均粒径が２００ｎｍ以下である、請求項１１４～１２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項127】

前記エマルジョンが、約－４０ｍＶ以上のマイナスのゼータ電位を有する、請求項１２６に記載の医薬組成物。

【請求項128】

前記乳化剤が、リン脂質乳化剤、ホスホグリセリド乳化剤、ならびに中鎖及び／または長鎖ＦＡ乳化剤のうちの１つ以上を含む、請求項１１４～１２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項129】

前記乳化剤が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、及びホスファチジン酸から選択される少なくとも１つを含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。

【請求項130】

前記乳化剤が、１つ以上の中鎖または長鎖ＦＡをさらに含む、請求項１２８に記載の医薬組成物。

【請求項131】

前記乳化剤が、任意選択でラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、及びステアリン酸から選択される飽和ＦＡを含む；ならびに／または任意選択でオレイン酸もしくはリノレン酸から選択される不飽和ＦＡを含む、請求項１３０に記載の医薬組成物。

【請求項132】

前記乳化剤がホスファチジルコリン及びオレイン酸ナトリウムを含む、請求項１３１に記載の医薬組成物。

【請求項133】

前記組成物がヒトの血液とほぼ等張であり、任意選択でグリセロール、ソルビトール、キシリトール、及び／またはグルコースなどの１つ以上のポリオールを含む、請求項１１４～１３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項134】

α－トコフェロール、β－トコフェロール、γ－トコフェロール、及びアスコルビルエステルのうちの１つ以上など、１つ以上の抗酸化剤を含む、請求項１１４～１３３のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項135】

任意選択でＥＤＴＡまたはＥＧＴＡである金属キレート剤をさらに含む、請求項１１４～１３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項136】

本質的にＤＧオイル、水、グリセロール、ＥＤＴＡまたはＥＧＴＡ、ホスファチジルコリン、及びオレイン酸ナトリウムからなる、請求項１３５に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

低酸素性虚血性脳症（ＨＩＥ）は、新生児に発生する重篤な疾患であり、死亡または脳性麻痺などの長期にわたる重大な発達障害及び神経障害を引き起こすことがよくある。ＨＩＥは、出生前、出生中、出生後など、新生児の脳に酸素欠乏をもたらすさまざまな状態によって引き起こされる。現在、ＨＩＥに対して確立された唯一の治療法は治療的低体温療法（ＨＴ）である。ＨＴでは、新生児の全身または脳を７２時間、約３３～３４℃に冷却することを含む。前臨床研究及び小規模臨床試験では、ＨＴが神経損傷の程度を軽減し、死亡率を低下させ、神経機能の回復を改善し得ることが示されている。

【0002】

しかし、ＨＴは少数のＨＩＥ患者（約８人に１人）の長期的な神経障害の軽減にしか成功しておらず、その使用は一般に三次医療施設に限定されている。したがって、ＨＴでは新生児の搬送が必要となり、重要な時期に処置が遅れる場合がある。ＨＴは通常、虚血事象から６時間以内に開始する必要がある。

【背景技術】

【0003】

したがって、ＨＩＥを経験している新生児、またはＨＩＥの危険性がある新生児に神経保護を提供する組成物及び方法が喫緊に必要とされている。

【発明の概要】

【0004】

様々な態様及び実施形態では、本発明は、低酸素性虚血性脳症（ＨＩＥ）に関連する脳損傷から保護するための医薬組成物及び方法を提供する。この組成物及び方法は、エマルジョンに配合可能であるオメガ－３脂肪酸（ｎ－３ ＦＡ）ジグリセリド（ＤＧ）及び／またはトリグリセリド（ＴＧ）を使用する。様々な態様及び実施形態に従って、本開示は、出生前、分娩中、または出生後の期間中の酸素欠乏及び／または血流制限によって引き起こされる乳児の脳損傷を予防または軽減するための組成物及び方法を提供する。

【0005】

様々な実施形態では、赤ん坊は出生前または分娩中であり、ＨＩＥの危険性があり、ｎ－３ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンが妊娠中の母親に静脈内投与される。例えば、いくつかの実施形態では、ＨＩＥを誘発する可能性のある虚血性事象が予測または検出される場合、例えば、子癇前症またはＨＩＥリスクに関連する他の妊娠状態の検出時に、ｎ－３ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンが母親に静脈内投与される。いくつかの実施形態では、エマルジョンは、長期分娩を含む分娩中、または臍帯圧迫により新生児がＨＩＥの危険にさらされていると判断された場合、または胎盤早期剥離など胎盤への血流が障害されている場合に投与される。

【0006】

他の実施形態では、投与対象は、ＨＩＥが疑われる新生児（すなわち、新生児）である。ｎ－３ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンは、分娩の約１２時間以内、または分娩の約１０時間以内、または分娩の約８時間以内、または分娩の約６時間以内、または分娩の約４時間以内、または分娩の約２時間以内に新生児に投与される。新生児への送達の場合、エマルジョンは経鼻胃（ＮＧ）チューブを介して投与されても、または静脈内に投与されてもよい。

【0007】

様々な実施形態では、新生児は、ｎ－３ＦＡ ＴＧまたはＤＧエマルジョンでの処置の前、処置の間、または処置後のいずれかに、ＨＴでさらに処置される。ＨＴは通常、分娩の約６時間以内など、できるだけ早く開始する必要がある。しかし、いくつかの実施形態では、ＨＴは、分娩の約１２時間以内、または分娩の約１０時間以内、または分娩の約８時間以内に開始される。いくつかの実施形態では、出生直後のＴＧまたはＤＧエマルジョンの投与によって、ＨＴが脳損傷ならびに長期及び／または生涯にわたるＨＩＥの合併症を回避するために利益をもたらす範囲が拡大され得る。

【0008】

本発明によれば、ＤＧまたはＴＧの脂肪酸は主にｎ－３ ＦＡである。いくつかの実施形態では、ｎ－３ ＦＡは、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）のうちの１つ以上を含む長鎖ｎ－３ ＦＡである。いくつかの実施形態では、ｎ－３ ＦＡは、ＤＨＡ及びＥＰＡを含む。ＥＰＡ及びＤＨＡは、任意選択で、約４：１～約１：４（例えば、約１：１）の比で存在してもよい。さらに他の実施形態では、ＦＡは、アラキドン酸（ＡＲＡ）または中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧ（またはエマルジョン）は、主にＡＡ、ＥＰＡ、ＤＰＡ、及びＤＨＡに由来する酸素化代謝産物である、１つ以上の特殊な分解促進メディエーター（ＳＰＭ）をさらに含む。それらとしては、リポキシン、（ニューロ）プロテクチン、レゾルビン、及びマレシンが含まれ、ナノモルからピコモルの範囲の濃度で強力な抗アポトーシス効果、抗炎症効果、及び免疫調節効果を有し得る。

【0009】

様々な実施形態では、エマルジョンは、１つ以上の乳化剤とともに、組成物全体の約１０重量％～約３０重量％のＴＧオイル及び／またはＤＧオイルを含む。例えば、エマルジョンは、１つ以上の乳化剤とともに、全組成物の約１５重量％～約３０重量％のＤＧオイル、または約１５重量％～約２５重量％のＤＧオイル（例えば、約２０％のＤＧオイル）を含んでもよい。

【0010】

様々な実施形態では、対象（例えば、ＨＩＥを経験しているまたはＨＩＥの危険性がある新生児対象など）は、エマルジョンの１回以上のボーラス注射もしくは注入、または経鼻胃（ＮＧ）チューブを介して受ける。いくつかの実施形態では、対象は少なくとも２回、最大６回のエマルジョンの投与を受けてもよい。様々な実施形態では、エマルジョンは、１日～約１週間にわたって投与され、１日１回以上（例えば、ほぼ毎日）投与されてもよい。

【0011】

例示的な実施形態として、本開示は、新生児におけるＨＩＥに関連する脳損傷に対して防御するための方法を提供し、この方法は、ＨＩＥの危険性がある子供を抱えている妊娠中の母親に、出生前または分娩中に、ｎ－３ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンの静脈内注射を投与することを含む。分娩後、新生児は任意選択で、ＨＴ療法及び／またはＤＧもしくはＴＧエマルジョン療法でさらに処置されてもよい。いくつかの実施形態では、一旦、ＨＩＥが予想されるか、または重大な危険性がある場合、ＤＧまたはＴＧエマルジョンは、分娩前または分娩中に母親に静脈内投与される。

【0012】

他の例示的な実施形態では、神経保護のための方法は、必要とする新生児対象に、分娩の約１２時間以内、または分娩の約１０時間以内、または分娩の約８時間もしくは６時間以内（またはそれ未満）以内にｎ－３ＦＡ ＤＧエマルジョンを投与すること、及びＨＴレジメンで新生児対象を処置することを含む。エマルジョンは、ＨＴレジメンの前、最中、及び／または後に投与してもよい。例えば、エマルジョンの少なくとも最初の用量は、分娩の約６時間以内、または分娩の約４時間以内、分娩の約２時間以内に投与されてもよく、それによって新生児がＨＴを開始するために輸送されている間に神経保護を提供し得る。このエマルジョンは、経鼻胃（ＮＧ）チューブまたは静脈内に投与される。これらの実施形態によれば、ＨＴは、一般に望まれるよりも遅く開始されてもよく、それでも予想外の治療効果を提供し得る。さらに他の実施形態では、ＨＴが最初に開始され、続いてｎ－３ＦＡ ＴＧまたはＤＧエマルジョンが投与される。

【0013】

他の態様では、本開示は、本明細書に記載の様々な方法に使用され得る医薬組成物を提供する。様々な実施形態では、医薬組成物は、有効量のｎ－３ＦＡ ＤＧエマルジョンを含み、ここで、ＤＧは、少なくとも約５０％のＥＰＡ及びＤＨＡを含み、（重量による総ＦＡ含量に対して）１％～約４０％のアラキドン酸（ＡＲＡ）及び／または中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）、ならびに１つ以上の乳化剤を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、エマルジョンは、約１０重量％～約３０重量％のジグリセリドオイルを含む。いくつかの実施形態では、エマルジョンは、約１５重量％～約２５重量％のジグリセリドオイルを含む。組成物は、所望の物理的特性を得るために、１つ以上の乳化剤をさらに含む。様々な実施形態では、乳化剤には、リン脂質乳化剤、ホスホグリセリド乳化剤、及び中鎖及び／または長鎖脂肪酸乳化剤のうちの１つ以上を含んでもよい。ホスホグリセリド乳化剤は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、及びホスファチジン酸から選択され得る。共乳化剤としての中鎖または長鎖ＦＡは、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノレン酸から選択され得る。例示的な共乳化剤はオレイン酸ナトリウムである。

【0015】

様々な実施形態では、組成物は、任意選択で、グリセロールなどの１つ以上のポリオールを含む。例えば、組成物は、組成物の約２重量％～約１０重量％のグリセロールを含んでもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、α－トコフェロール、β－トコフェロール、γ－トコフェロール、及びアスコルビルエステルのうちの１つ以上など、１つ以上の抗酸化剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物は、任意選択でＥＤＴＡまたはＥＧＴＡである金属キレート剤をさらに含む。

【0016】

本開示のさらなる態様及び実施形態は、以下の詳細な説明によってここに記載される。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1A】梗塞容積に対する低体温（ＨＴ）及びｔｒｉ－ＤＨＡの影響：低酸素虚血（ＨＩ）損傷直後（０時間）から開始する正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝２１）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２０）、ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝２１）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝１１）で処置したマウスの梗塞容積（Ａ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｂ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３３．２±４．８、ＨＴ＋生理食塩水－１４．９±４．８、０時間ｔｒｉ－ＤＨＡ－１４．９±４．５、０時間ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－１５．０±７．０）；ＨＩ損傷直後（０時間）から開始してＮＴ＋生理食塩水、ＨＴ＋生理食塩水またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡで処置したマウスの代表的なニッスル染色大脳冠状切片（Ｃ）。値は平均値±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、ＮＴ＋生理食塩水群と比較。

【図1B】梗塞容積に対する低体温（ＨＴ）及びｔｒｉ－ＤＨＡの影響：低酸素虚血（ＨＩ）損傷直後（０時間）から開始する正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝２１）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２０）、ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝２１）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝１１）で処置したマウスの梗塞容積（Ａ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｂ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３３．２±４．８、ＨＴ＋生理食塩水－１４．９±４．８、０時間ｔｒｉ－ＤＨＡ－１４．９±４．５、０時間ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－１５．０±７．０）；ＨＩ損傷直後（０時間）から開始してＮＴ＋生理食塩水、ＨＴ＋生理食塩水またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡで処置したマウスの代表的なニッスル染色大脳冠状切片（Ｃ）。値は平均値±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、ＮＴ＋生理食塩水群と比較。

【図1C】梗塞容積に対する低体温（ＨＴ）及びｔｒｉ－ＤＨＡの影響：低酸素虚血（ＨＩ）損傷直後（０時間）から開始する正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝２１）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２０）、ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝２１）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝１１）で処置したマウスの梗塞容積（Ａ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｂ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３３．２±４．８、ＨＴ＋生理食塩水－１４．９±４．８、０時間ｔｒｉ－ＤＨＡ－１４．９±４．５、０時間ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－１５．０±７．０）；ＨＩ損傷直後（０時間）から開始してＮＴ＋生理食塩水、ＨＴ＋生理食塩水またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡで処置したマウスの代表的なニッスル染色大脳冠状切片（Ｃ）。値は平均値±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、ＮＴ＋生理食塩水群と比較。

【図2A】低体温（ＨＴ）及びｔｒｉ－ＤＨＡの治療範囲：低酸素虚血（ＨＩ）損傷の２時間後から開始した、正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝２２）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２２）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝２１）で処置したマウスの梗塞容積（Ａ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｂ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３１．４±４．１、２時間遅延ＨＴ＋生理食塩水－１８．８±４．６、２時間遅延ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－１２．７±４．０）；低酸素虚血（ＨＩ）傷害の４時間後に開始して正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝１９）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２３）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝１０）で処置したマウスの梗塞容積（Ｃ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｄ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３０．７±５．０、４時間遅延ＨＴ＋生理食塩水－３１．３±５．６、４時間遅延ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－４１．３±５．５）。値は平均値±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、ＮＴ＋生理食塩水群と比較。

【図2B】低体温（ＨＴ）及びｔｒｉ－ＤＨＡの治療範囲：低酸素虚血（ＨＩ）損傷の２時間後から開始した、正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝２２）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２２）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝２１）で処置したマウスの梗塞容積（Ａ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｂ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３１．４±４．１、２時間遅延ＨＴ＋生理食塩水－１８．８±４．６、２時間遅延ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－１２．７±４．０）；低酸素虚血（ＨＩ）傷害の４時間後に開始して正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝１９）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２３）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝１０）で処置したマウスの梗塞容積（Ｃ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｄ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３０．７±５．０、４時間遅延ＨＴ＋生理食塩水－３１．３±５．６、４時間遅延ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－４１．３±５．５）。値は平均値±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、ＮＴ＋生理食塩水群と比較。

【図2C】低体温（ＨＴ）及びｔｒｉ－ＤＨＡの治療範囲：低酸素虚血（ＨＩ）損傷の２時間後から開始した、正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝２２）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２２）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝２１）で処置したマウスの梗塞容積（Ａ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｂ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３１．４±４．１、２時間遅延ＨＴ＋生理食塩水－１８．８±４．６、２時間遅延ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－１２．７±４．０）；低酸素虚血（ＨＩ）傷害の４時間後に開始して正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝１９）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２３）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝１０）で処置したマウスの梗塞容積（Ｃ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｄ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３０．７±５．０、４時間遅延ＨＴ＋生理食塩水－３１．３±５．６、４時間遅延ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－４１．３±５．５）。値は平均値±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、ＮＴ＋生理食塩水群と比較。

【図2D】低体温（ＨＴ）及びｔｒｉ－ＤＨＡの治療範囲：低酸素虚血（ＨＩ）損傷の２時間後から開始した、正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝２２）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２２）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝２１）で処置したマウスの梗塞容積（Ａ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｂ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３１．４±４．１、２時間遅延ＨＴ＋生理食塩水－１８．８±４．６、２時間遅延ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－１２．７±４．０）；低酸素虚血（ＨＩ）傷害の４時間後に開始して正常体温（ＮＴ）＋生理食塩水（ｎ＝１９）、ＨＴ＋生理食塩水（ｎ＝２３）またはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ（ｎ＝１０）で処置したマウスの梗塞容積（Ｃ）及び代表的なＴＴＣ染色大脳切片（Ｄ）（梗塞容積％：ＮＴ＋生理食塩水－３０．７±５．０、４時間遅延ＨＴ＋生理食塩水－３１．３±５．６、４時間遅延ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ－４１．３±５．５）。値は平均値±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、ＮＴ＋生理食塩水群と比較。

【図3】低酸素性虚血（ＨＩ）損傷を受け、ビヒクルとして生理食塩水、ｎ－３ トリグリセリド（ＴＧ）、ｎ－３ ジグリセリド（ＤＧ）エマルジョンで処置された新生仔マウス（１０日齢）の梗塞容積。ｎ＝１５～１７。値はＳＤ付きの平均値である。用量＝０．３７５ｍｇ／ｇ（体重）。

【図4】低酸素性虚血（ＨＩ）損傷を与え、ビヒクルとして生理食塩水、または１匹あたり１０もしくは２０ｎｇの濃度のＤＨＡ（ＰＤ１）由来のニューロプロテクチン と、比較した１匹あたり１０ｎｇのＤＰＡ由来のニューロプロテクチン（ＰＤ１ ｎ－３ ＤＰＡ）で処置した新生仔マウス（生後１０日）の梗塞容積（ｎ＝１５－１７）。値はＳＤ付きの平均値である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

様々な態様及び実施形態では、本発明は、低酸素性虚血性脳症（ＨＩＥ）に関連する脳損傷から保護するための医薬組成物及び方法を提供する。この組成物及び方法は、エマルジョンに配合されるオメガ－３脂肪酸（ｎ－３ ＦＡ）ジグリセリド（ＤＧ）及び／またはトリグリセリド（ＴＧ）を使用する。

【0019】

様々な態様及び実施形態に従って、本開示は、出産前、分娩中、または出生後の期間中の酸素欠乏及び／または血流制限によって引き起こされる脳損傷を予防または軽減するための組成物及び方法を提供する。このような状態は、臨床的には（新生児）低酸素性虚血性脳症（ＨＩＥ）として説明される場合が多く、これには新生児脳症出生時仮死、分娩中仮死及び周産期仮死が挙げられる。ＨＩＥはさまざまな種類の組織損傷を引き起こす可能性があり、とりわけ脳性麻痺、認知障害、てんかん、聴覚障害、及び視覚障害などの長期障害を引き起こし得る。

【0020】

妊娠中のＨＩＥの原因（すなわち、新生児がＨＩＥのリスクにさらされる）としては、子癇前症、子癇、妊娠糖尿病、及び感染症が挙げられる。新生児がＨＩＥのリスクにさらされる妊娠中または分娩中のその他の状態としては、常位胎盤早期剥離、前置胎盤、胎盤機能不全、子宮破裂、及び臍帯合併症が挙げられる。臍帯合併症には臍帯の圧迫が含まれ、これは、例えば長時間の分娩中に発生し得る。分娩前の胎児心拍数または子宮頻収縮の変化は、ＨＩＥの予測因子であり得る。新生児期の未熟児は肺が未発達である場合があるので、特にＨＩＥのリスクが高い。一般に、新生児におけるＨＩＥのリスクを示す症状には、呼吸困難、黄疸、及び新生児低血糖が挙げられる。ＨＩＥの兆候としては、呼吸障害、摂食障害、反射神経の欠如、発作、及び意識レベルの低下が挙げられる。

【0021】

新生児のＨＩＥまたはＨＩＥのリスクは、アプガースコアを使用して診断または評価され得る。Ａｐｇａｒスコアで評価される５つの基準は次のとおりである：（１）外観（すなわち、肌の色／色合い）；（２）パルス；（３）しかめっ面（すなわち、刺激に対する反応）；（４）活動（すなわち、筋緊張／活動レベル）、及び（５）呼吸。一般に、５つの基準はそれぞれ０、１、または２（２つが最高）としてスコア付けされ、合計スコアは５の値を加算することによって計算される。０～３のスコアは、特に正期産または正期産間近に生まれた赤ちゃんでは重要とみなされる。特に５分後のスコアが４～６の場合は、正常以下とみなされ、ＨＩＥのリスクを示す場合があり、医療介入が必要になる場合がある。７＋のスコアは正常とみなされる。

【0022】

あるいは、またはさらに、ＨＩＥのリスクは、出生直後に臍帯血を採取することによって評価され得る。血液のｐＨ及び塩基欠損（ＢＤ）は、虚血性事象が発生したか否かを評価するための公知の手段である。ＨＩＥの他の予測因子としては、脳特異的クレアチンキナーゼ（ＣＫ－ＢＢ）、プロテイン Ｓ－１００Ｂ、ニューロン特異的エンドラーゼ、及び他の炎症性マーカー、例えば、インターロイキンなどの脳損傷の公知の血清マーカーが挙げられる。Ｎａｇｄｙｍａｎ Ｎ．，ｅｔ ａｌ．Ｅａｒｌｙ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ ａｆｔｅｒ ｂｉｒｔｈ ａｓｐｈｙｘｉａ．Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ．２００１ Ａｐｒ；４９（４）：５０２－６。他の画像検査及び神経生理学的検査も、早期リスク評価を決定し、長期予後を提供するために使用可能であり、これらとしては、振幅積分脳波（ Ａｍｐｌｉｔｕｄｅ－ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＥＥＧ）、Ｔ１強調ＭＲＩ（Ｔ１－ｗｅｉｇｈｔｅｄ ＭＲＩ）及びＴ２強調ＭＲＩ（Ｔ２－ｗｅｉｇｈｔｅｄ ＭＲＩ）、視床磁気共鳴分光法（Ｔｈａｌａｍｉｃ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）（ＭＲＳ）、及び深部灰白質乳酸塩／Ｎ－アセチルアスパラギン酸（Ｌａｃ／ＮＡＡ）ピーク／面積比が挙げられる。Ｐａｎｇ Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｏｎ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ Ｌａｃｔａｔｅ／Ｎ－Ａｃｅｔｙｌａｓｐａｒｔａｔｅ ｗｉｔｈｉｎ ４８ ｈ Ｐｒｅｄｉｃｔｓ Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ Ｖａｒｉｅｄ Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ｉｎ ａ Ｐｉｇｌｅｔ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｈｙｐｏｘｉａ－Ｉｓｃｈｅｍｉａ Ｗｉｔｈ ａｎｄ Ｗｉｔｈｏｕｔ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ－Ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ．Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒｏｌ．２０２０；１１：８８３．

【0023】

いくつかの実施形態における本開示は、急性治療のための安定なオメガ３ＤＧまたはＴＧ水中油型エマルジョンを使用する医薬組成物及び方法を提供する。様々な実施形態におけるＤＧまたはＴＧエマルジョンは、ＤＨＡ及びＥＰＡ、及び任意選択でＤＰＡを含む、約５０％～約１００％のオメガ３脂肪酸（脂肪酸の総重量に対して）を含む。いくつかの実施形態では、総脂肪酸には、ＡＲＡまたはＭＣＦＡがさらに含まれる。ＤＧエマルジョンは、静脈内（ｉｖ）経路などの非経口送達に適しており、ＤＧ及びＴＧエマルジョンの物理的特性により、損傷した脳組織へのオメガ３脂肪酸の迅速な送達が促進される。いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧエマルジョンは、一般に、組成物の約１０重量％～約３０重量％である。すなわち、１００ｍＬのエマルジョン当たり約１０～約３０ｇのＤＧオイルまたはＴＧオイルが存在する。エマルジョンの例示的な組成物は、本明細書の他の箇所に記載されている。

【0024】

本明細書に記載のエマルジョン（例えば、ｎ－３ ＦＡ ＤＧエマルジョン）の投与は、治療的低体温療法（ＨＴ）との相乗的保護を提供し得るか、またはＨＴの代替として作用し得る。ＨＴは現在 ＨＩＥの治療法として受け入れられている。ＨＴは、ＨＩＥに関連する損傷プロセスを遅らせるために使用される手順である。ＨＴには、赤ん坊を約３３．５～３４．５℃に約７２時間冷却することが含まれる。理想的には、出生後または酸素欠乏事象の約６時間以内に開始される。ＨＴでは、脳を選択的に冷却するために冷却キャップを使用してもよく、全身を冷却するために冷却ブランケットを使用してもよい。処置中は、呼吸、酸素化、心拍数、及び脳波活動などのバイタルサインが監視される。ＨＴの後、身体は１時間あたり約０．５℃の速度でゆっくりと（少なくとも ４時間かけて）再加温される。

【0025】

本開示は、新生児マウスモデルにおいて、ＨＴ及びトリグリセリド－ＤＨＡ（ｔｒｉ－ＤＨＡ）による同時治療が、ＨＩ損傷から脳を保護する際に相乗効果を達成するか否かを調査する。ＨＩ損傷直後に開始したＨＴは、ｔｒｉ－ＤＨＡ処置と同様に脳梗塞容積を減少させた（約５０％）ことが観察された。これらの結果、ＨＴがｔｒｉ－ＤＨＡ処置と比較して、ＨＩ損傷に対して同程度の神経保護を提供することが示される。ＨＴは三次医療センターでのみ提供可能であり、徹底したモニタリングが必要であり、悪影響を及ぼし得る。対照的に、ｔｒｉ－ＤＨＡ処置は、ＨＩ損傷直後の新生児に実行可能かつ効果的な代替戦略を提供するのに有利であり得、新生児を病院から専門施設に搬送する必要がない。したがって、いくつかの実施形態では、対象はＨＴ療法を受けず、ＴＧまたはＤＧエマルジョンが代替療法として提供される。他の実施形態では、ＴＧまたはＤＧエマルジョンは、ＨＴの前、例えばＨＴの準備中、またはＨＴを実施できる専門施設への対象の搬送前もしくは搬送中に対象に提供される。ＤＧエマルジョンは、ＴＧよりも驚くほど効果的な処置を提供し、その高レベルの有効性を考慮すれば、ＨＴと比較して改善された効果、またはＨＴとの相乗効果をもたらす。他の実施形態では、ＴＧまたはＤＧエマルジョンは、ＨＴ中またはＨＴ後に最初に投与される。

【0026】

ＨＩＥの機構的経路の一部は成人の脳卒中と類似しているが、ＨＩＥ損傷の病理生物学は成人の脳卒中の病理生物学とは異なると考えられている。実際、成人の脳損傷を改善するように設計された治療法は、おそらくアポトーシスを促進することにより、新生児の転帰を悪化させる場合がある。

【0027】

例えば、新生児の脳では髄鞘形成がまだ起こっており、新生児の脳の水分含有量が成熟した脳の水分含有量よりも多いので、新生児の脳では損傷の外観及び時間経過が成人の脳とは異なる。細胞死の機構は、成人の脳と比較して発達中の脳では異なることが示されている（Ｚｈｕ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｇｅ ｏｎ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｆｔｅｒ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．２００５，１２，１６２－１７６）。ミトコンドリアの透過化の機構は年齢に依存しており、成人の脳ではシクロフィリンＤが重要であるが、未熟な脳ではＢａｘ関連の機構が支配的である（Ｗａｎｇ Ｘ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｈｉｆｔ ｏｆ ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ Ｄ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ）。Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００９，２９，２５８８－２５９６）。成人と比較して、未熟な脳では多くのアポトーシス促進タンパク質（Ｂａｘ、カスパーゼ－２、－３、－８、及び－９を含む）の発現が高く、アポトーシスがミトコンドリア外膜透過化（ＭＯＭＰ）後に起こる。アポトーシス誘導因子（ＡＩＦ）に依存する経路（Ｚｈｕ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅａｔｈ ａｆｔｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｓｃｈｅｍｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔ ｂｒａｉｎ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００３，８６，３０６－３１７）、及びカスパーゼは成人の脳よりも未熟な脳でより強く活性化されるようであり（Ｈｕ ＢＲ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｓｐａｓｅ－３ ｉｎ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｆｔｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｓｃｈｅｍｉａ ｄｅｃｌｉｎｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｂｒａｉｎ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｃｅｒｅｂ． Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．２０００，２０，１２９４－１３００）、ミトコンドリアの透過性化は、未熟な脳の低酸素性虚血性損傷における復帰不能点を知らせると提唱されている（Ｈａｇｂｅｒｇ Ｈ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｂｒａｉｎ ａｆｔｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｓｃｈｅｍｉａ，Ｊ．Ｂｉｏｅｎｅｒｇ． Ｂｉｏｍｅｍｂｒ．２００４，３６，３６９－３７３）。未熟な脳では、シクロフィリンＤ遺伝子欠損は、成体マウスと比較して低酸素性－虚血性損傷を軽減するどころか悪化させる（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｓｃｈｉｎｚｅｌ ＡＣ，ｅｔ ａｌ．Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ Ｄ ｉｓ ａ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｆｔｅｒ ｆｏｃａｌ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００５，１０２，１２００５－１２０１０）。代わりに、ＢＡＸ阻害ペプチド（Ｗａｎｇ Ｘ．ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｂａｘ－ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｏｎ ｎｅｏｎａｔａｌ Ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ．２０１０，Ｓｔｒｏｋｅ ４１，２０５０－２０５５）及びＢＡＸ欠損症（Ｇｉｂｓｏｎ ＭＥ，ｅｔ ａｌ．ＢＡＸ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ－ｌｉｋｅ ｄｅａｔｈ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｎｅｏｎａｔａｌ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｓｃｈｅｍｉａ： ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２００１，７，６４４－６５５）は、新生児マウスの未熟な脳を実質的に保護する。

【0028】

さらに、脳卒中は成人と新生児の両方の脳で強力な炎症反応を引き起こす。成人モデルからの実験的証拠によって、脳損傷によりミクログリアが急速に活性化され、貪食活動の増加ならびにサイトカイン及び活性酸素代謝物の産生の変化を引き起こすことが示されており（Ｈａｎｉｓｃｈ ＵＫ．Ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ａｓ ａ ｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．２００２，Ｇｌｉａ ４０，１４０－１５５）、これは、新生児の低酸素性虚血（ＨＩ）損傷でもよく記録されている特徴である（Ｈｅｄｔｊａｒｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｇｅｎｅ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｍｏｕｓｅ ｂｒａｉｎ ａｆｔｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｊ．Ｃｅｒｅｂ． Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．２００４，２４，１３３３－１３５１。しかし、成人と比較して、新生児におけるミクログリアの活性化は、虚血性損傷後の方がはるかに急速である。成人の脳では、脳卒中損傷後の脳への末梢免疫細胞の浸潤も大きく寄与している（Ｉａｄｅｃｏｌａ Ｃ ａｎｄ Ａｎｒａｔｈｅｒ Ｊ．Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｔｒｏｋｅ：ｆｒｏｍ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ．２０１１，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７，７９６－８０８）。対照的に、新生児脳卒中後の急性では末梢細胞の浸潤はほとんど見られない（Ｄｅｎｋｅｒ ＳＰ，ｅｔ ａｌ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｒｅ ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ ｒｅｓｉｄｅｎｔ ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ｎｏｔ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ａｃｕｔｅｌｙ ａｆｔｅｒ ｎｅｏｎａｔａｌ ｓｔｒｏｋｅ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００７，１００，８９３－９０４）。したがって、これらの発見は、損傷に対する新生児と成人の中枢神経系免疫反応の違いを示唆している。

【0029】

さらに、急性虚血性脳損傷後の新生児の血液脳関門は、成体動物よりも著しくインタクトであるが、その理由の一部は、基底層及び密着結合タンパク質の示差的発現及び好中球の挙動によるものである（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｌｏｐｅｚ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｆｔｅｒ ａｃｕｔｅ ａｄｕｌｔ ｓｔｒｏｋｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｎｅｏｎａｔａｌ ｓｔｒｏｋｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１２ ７ １１；３２（２８）：９５８８－６００）。

【0030】

したがって、様々な実施形態では、対象は出生前または分娩中であり、ＨＩＥの危険性があり（すなわち、ＨＩＥが予想される）、ｎ－３ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンを妊娠中の母親に、例えば静脈内に投与する。例えば、ｎ－３ ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンは、子癇前症またはＨＩＥリスクに関連する他の妊娠状態の検出時に母親に静脈内投与され得る（既に記載したように）。いくつかの実施形態では、エマルジョンは、長時間の分娩を含む分娩前もしくは分娩中、または臍帯圧迫により新生児がＨＩＥの危険にさらされていると判断される場合に投与される。本明細書でより詳細に記載されるように、エマルジョンは、１回以上のボーラス用量として、もしくは連続注入によって、または１回以上のボーラス負荷用量とその後の１回以上の追加用量の注入の組み合わせとして静脈内投与されてもよい。例えば、静脈内投与される用量（複数可）は、ボーラスとして（０～６０分間にわたって）、もしくは注入によって（６０分～２４時間にわたって）、または１つ以上のボーラス負荷用量とそれに続く１つ以上の追加用量の注入の組み合わせとして投与され得る。あるいは、エマルジョンはＮＧチューブによって投与してもよい。

【0031】

他の実施形態では、対象は新生児（ｎｅｏｎａｔｅ）（すなわち、新生児（ｎｅｗｂｏｒｎ））であり、ＨＩＥが疑われる。様々な実施形態では、新生児は早産児または正期産である。ｎ－３ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンは、分娩の約１２時間以内、または分娩の約１０時間以内、または分娩の約８時間以内、または分娩の約６時間以内、または分娩の約４時間以内、または分娩の約２時間以内に新生児に投与される。新生児への送達の場合、エマルジョンはＮＧチューブを介して投与してもよいし、またはボーラス投与量及び／もしくは持続注入として静脈内投与してもよい。

【0032】

様々な実施形態では、新生児は、ｎ－３ＦＡ ＤＧまたはＴＧの投与前、投与中、または投与後のいずれかに、ＨＴでさらに治療される。ＨＴは一般に、分娩の約６時間以内、または分娩の約４時間以内など、できるだけ早く開始されるべきである。しかし、いくつかの実施形態では、ＨＴは、分娩の約１２時間以内、または分娩の約１０時間以内、または分娩の約８時間以内に開始される。いくつかの実施形態では、特にＤＧまたはＴＧエマルジョンの投与によって、ＨＴが脳損傷ならびに長期及び／または生涯にわたるＨＩＥの合併症を回避するために利益をもたらす範囲が拡大され得る。したがって、そのような実施形態では、ＨＴは、分娩の約６時間後、または分娩の約８時間後、または分娩の約１０時間後、または分娩の約１２時間後に開始されるが、これは、ＨＩＥの検出、または病院からＨＴ用の設備を備えた三次医療施設への新生児の搬送の遅れに起因する場合がある。

【0033】

様々な実施形態では、ＤＧもしくはＴＧエマルジョン及び／またはＨＴによる処置後、新生児患者は、オメガ３ＦＡを含む非経口栄養でさらに処置され得る。これらとしては、約１ｇ／ｋｇ／日のＴＧエマルジョンの注入が含まれ得、これは約１０％の魚油（例えば、約２５％～約６０％のＥＰＡ及びＤＨＡ）から調製され得る。このようなエマルジョンは、オメガベン（Ｏｍｅｇａｖｅｎ）という名前で市販されている。オメガベンは、非経口栄養関連胆汁うっ滞、すなわちＰＮＡＣの小児患者にカロリーと抗炎症効果のある脂肪酸を提供する静脈内脂質エマルジョンである。このような非経口栄養は、数週間から数ヶ月、例えば２週間～約２０週間、または約４週間～約１６週間提供してもよい。

【0034】

様々な実施形態では、本発明は、ｎ－３ ＦＡを安定なＤＧまたはＴＧエマルジョンとして細胞に送達する。「ｎ－３ ＦＡ」という用語は、炭素－炭素二重結合の１つが炭化水素鎖の遠位端から３番目と４番目の炭素原子の間にある多価不飽和ＦＡを意味する。ｎ－３ ＦＡの例としては、α－リノレン酸（１８：３ｎ－３；α－ＡＬＡ；Δ^{３、６、９}）、エイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３；ＥＰＡ；Δ^{５、８、１１、１４、１７}）、ドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３；ＤＨＡ；Δ^{４、７、１０、１３、１６、１９}）及びドコサペンタエン酸（２２：５ｎ－３；ＤＰＡ；Δ^{７、１０、１３、１６、１９}）が挙げられる。少なくとも２０個の炭素原子を有するｎ－３ ＦＡは、「長鎖ｎ－３ ＦＡ」と呼ばれる。ｎ－３ ＦＡの供給源は、魚油、藻類油及び他の油などの任意の適切な供給源に由来する場合があり、または合成してもよい。

【0035】

ＤＧは、三価アルコールグリセロールにエステル化された２つのＦＡで構成される。ＤＧ分子の合成方法の例は、ｎ－３長鎖ＦＡを用いたリパーゼ触媒グリセロール分解（すなわち、エステル交換）によるものである。ＤＧオイルを調製するための例示的なプロセスは、国際公開第２０１９／２３４０５７号に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用する場合、ＤＧオイルとは、グリセリドの少なくとも約７５％がジアシルグリセリドであるオイルを指す。しかし、いくつかの実施形態では、グリセリドの少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％（例えば、約１００％）がジアシルグリセリドである。同様に、ＴＧエマルジョンが使用される場合、ＴＧオイルとは、グリセリドの少なくとも約７５％がトリアシルグリセリドであるオイルを指す。しかし、いくつかの実施形態では、グリセリドの少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％（例えば、約１００％）がトリアシルグリセリドである。

【0036】

本発明によれば、ＤＧまたはＴＧのＦＡは主にｎ－３ ＦＡであり得る。様々な実施形態では、ＤＧまたはＴＧは、少なくとも約５０％のｎ－３ ＦＡ（総脂肪酸の重量で）、または少なくとも約７５％のｎ－３ ＦＡ、または少なくとも約９０％のｎ－３ ＦＡ、または約１００％のｎ－３ ＦＡを含む。いくつかの実施形態では、ｎ－３ ＦＡは、ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＤＰＡのうちの１つ以上を含む長鎖ｎ－３ ＦＡである。興味深いことに、ＤＰＡ由来の神経保護Ｄ１は、ＤＨＡ由来の神経保護Ｄ１よりも低い濃度で神経保護的である（低酸素性虚血性脳損傷後の梗塞サイズの減少によって測定される）（図４）。

【0037】

様々な実施形態では、ｎ－３ ＦＡはＤＨＡを含む。いくつかの実施形態では、ｎ－３ ＦＡは、少なくとも約５０％のＤＨＡ、または少なくとも約６０％のＤＨＡ、または少なくとも約７５％のＤＨＡ、または少なくとも約９０％のＤＨＡである。いくつかの実施形態では、ｎ－３ ＦＡは、ＥＰＡを含む。例えば、ｎ－３ ＦＡは、少なくとも約５０％のＥＰＡ、または少なくとも約６０％のＥＰＡ、または少なくとも約７５％のＥＰＡ、または少なくとも約９０％のＥＰＡであり得る。いくつかの実施形態では、ｎ－３ ＦＡはＤＨＡ及びＥＰＡを含む。例えば、ＦＡは、少なくとも約５０％のＥＰＡ及びＤＨＡ、または少なくとも約６０％のＥＰＡ及びＤＨＡ、または少なくとも約７０％のＥＰＡ及びＤＨＡ、または少なくとも約８０％のＥＰＡ及びＤＨＡ、または少なくとも約９０％のＥＰＡ及びＤＨＡを含んでもよい。ＥＰＡ及びＤＨＡは、任意選択で、約４：１～約１：４、例えば、約３：１～約１：３、または約２：１～約１：２（例えば、約１：１）の比で存在してもよい。様々な実施形態では、ＤＧ分子は、１，２－ＤＧまたは１，３－ＤＧのうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、ＤＧは主に１，３－ＤＧである。

【0038】

さらに他の実施形態では、脂肪酸は、ＡＲＡ、例えば、約１％～約４０％のＡＲＡ（グリセリド中の全脂肪酸の重量基準）、またはいくつかの実施形態では、約１％～約３０％、または約５％～約２５％、または約５％～約２０％、または約１０％～約２０％のＡＲＡをさらに含む。ＡＲＡは、乳児の脳の成長に重要な肝要なｎ－６脂肪酸である。これらまたは他の実施形態では、エマルジョンは、遊離ＦＡとして、またはＴＧ及び／もしくはＤＧとしてエステル化されたＭＣＦＡをさらに含む。ＭＣＦＡが豊富なＴＧは、細胞膜へのオメガ３脂肪酸の効率を高める。いくつかの実施形態では、ＭＣＦＡは、ＴＧ及び／またはＤＧエマルジョン中の脂肪酸の約１重量％～約２０重量％の範囲で存在する。いくつかの実施形態では、組成物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，６７５，５７２号に記載されている中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）を含む。

【0039】

いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧ（またはそれらのエマルジョン）は、１つ以上のＳＰＭを含む。ＳＰＭは、主にＡＡ、ＥＰＡ、ＤＰＡ、及びＤＨＡに由来する酸素化代謝産物である。それらとしては、リポキシン、（ニューロ）プロテクチン、レゾルビン、及びマレシンが挙げられ、ナノモルからピコモルの範囲の濃度で強力な抗アポトーシス効果、抗炎症効果、及び免疫調節効果を有し得る。ＳＰＭは、ｎ－３ ＦＡ及びｎ－６ ＦＡ前駆体からの二酸素依存性酸化によって生成される。ＳＰＭとしては、特定のＡＡ由来リポキシン（ＬＸＡ４及びＬＸＢ４）、ＥＰＡ由来Ｅシリーズレゾルビン（ＲｖＥ１～３）、ＤＨＡ由来Ｄシリーズレゾルビン（ＲｖＤ１～６）、プロテクチン／ニューロプロテクチン（ＰＤ１／ＮＰＤ１及びＰＤＸ）、マレシン（ＭａＲ１及びＭａＲ２）、及びＤＰＡ由来１３シリーズレゾルビン（ＲｖＴ１～４）が挙げられる。ＳＰＭは免疫溶媒として機能し得る。

【0040】

いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧ（またはそのエマルジョン）は、レゾルビンＥ１、レゾルビンＥ２、及びレゾルビンＥ３などのＥＰＡ由来の少なくとも１つのＳＰＭを含む。いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧ（またはそのエマルジョン）は、ＤＨＡ由来の少なくとも１つのＳＰＭ、例えば、レゾルビンＤ１、レゾルビンＤ２、レゾルビンＤ３、レゾルビンＤ４、レゾルビンＤ５、レゾルビンＤ６、またはそれらの立体異性体を含む。いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧ（またはそのエマルジョン）は、レゾルビンＴ１、レゾルビンＴ２、レゾルビンＴ３、レゾルビンＴ４、レゾルビン１ｎ－３ＤＰＡ、レゾルビン２ｎ－３ＤＰＡ、レゾルビン５ｎ－３ＤＰＡ、プロテクチン１ｎ－３ＤＰＡ、プロテクチン２ｎ－３ＤＰＡ、マレシン１ｎ－３ＤＰＡ、マレシン２ ｎ－３ ＤＰＡ、及びマレシン３ ｎ－３ ＤＰＡなどのＤＰＡに由来する少なくとも１つのＳＰＭを含む。いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧ（またはそのエマルジョン）は、リポキシンＡ４、リポキシンＢ４、またはそれらの立体異性体などのアラキドン酸（ＡＡ）に由来する少なくとも１つの生理活性脂質を含む。

【0041】

様々な実施形態では、エマルジョンは、組成物全体の重量あたり約１０重量％～約３０重量％のＴＧオイル及び／またはＤＧオイルを含む。例えば、エマルジョンは、全組成物の約１５重量％～約２５重量％（例えば、約１５重量％、約２０重量％、または約２５重量％）のＤＧオイルを含んでもよい。エマルジョンの他の成分（例えば、乳化剤）は、本明細書の他の箇所に記載されている。

【0042】

様々な実施形態では、対象（例えば、ＨＩＥを経験しているまたはＨＩＥの危険性がある新生児対象など）は、エマルジョンの単回ボーラス注射もしくは注入、またはＮＧを介して投与される。例えば、対象は、エマルジョンのボーラス注射または注入を少なくとも２回、及び最大６回（例えば、２回から４回）受けてもよい。様々な実施形態では、ボーラス注射または注入は、１２時間ごとに約１回以下の頻度で投与される。しかし、様々な実施形態では、投与は、約１時間、約２時間、約３時間、約６時間、約１２時間、または約２４時間から独立して選択される間隔で行うことができる。様々な実施形態では、エマルジョンは、１日～約１週間にわたって投与され、ほぼ毎日投与されてもよい。様々な実施形態では、ボーラス投与は、体重１ｋｇ当たり約０．０５ｇ～約５ｇの乳化ＤＧもしくはＴＧ、または体重１ｋｇ当たり約０．５～約５ｇである。例えば、ボーラス投与は、体重１ｋｇ当たり約２ｇ～約４ｇの乳化ＤＧまたはＴＧであり得る。

【0043】

例示的な実施形態として、本開示は、新生児における低酸素性虚血性脳症（ＨＩＥ）に関連する脳損傷に対して防御するための方法を提供し、この方法は、ＨＩＥの危険性がある子供を抱えている妊娠中の母親に、出生前または分娩時に、ｎ－３ＦＡ ＤＧまたはＴＧエマルジョンの静脈内注射を投与することを含む。分娩後、新生児は任意選択で、ＨＴ療法及び／またはＤＧもしくはＴＧ療法でさらに処置されてもよい。いくつかの実施形態では、一旦、ＨＩＥが予想されるか、または重大な危険性がある場合、エマルジョンは、分娩前または分娩中に母親に静脈内投与される。投与及びエマルジョンの組成は、本明細書の他の箇所に記載されている通りである。新生児は早産児であっても正期産新生児であってもよい。

【0044】

いくつかの実施形態では、出生後、分娩（すなわち出生）の約１２時間以内もしくは約１０時間以内、または分娩の約６時間以内もしくは約８時間以内、または分娩の約４時間以内、分娩の約２時間以内に、さらなるｎ－３ＤＧまたはＴＧエマルジョン用量が新生児に投与される。分娩後のＨＴのタイミングは、一般にできるだけ早く、既に述べた通りである。様々な実施形態では、新生児は、エマルジョンの単回ボーラス注射または注入を受ける（またはＮＧ経路による）。しかし、いくつかの実施形態では、新生児は、少なくとも２回、最大６回（例えば、２～４回）のエマルジョンのボーラス注射または注入を受ける。これらは一般に約１週間にわたって投与され、静脈内及び／またはＮＧ経路によりほぼ毎日投与されてもよい。

【0045】

他の例示的な実施形態では、神経保護のための方法は、必要とする新生児対象に、分娩から約１０時間以内にｎ－３ ＤＧまたはＴＧエマルジョンを投与すること、及び新生児対象をＨＴレジメンで処置することを含む。Ｎ－３ ＤＧまたはＴＧエマルジョンは、ＨＴの前、最中、または後に最初に投与される。例えば、エマルジョンの少なくとも最初の用量は、分娩の約６時間以内、または分娩の約４時間以内、分娩の約２時間以内に投与され、それによって新生児がＨＴを開始するため専門施設に輸送されている間に神経保護を提供し得る。ＤＧまたはＴＧエマルジョンは、既に記載したように、ボーラス及び／または持続注入として、経鼻胃（ＮＧ）チューブを介して、または静脈内に投与される。

【0046】

これらの実施形態によれば、ＨＴは、一般に望まれるよりも遅く開始してもよく、それでも予想外の治療効果を提供し得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧエマルジョンの用量は分娩の約４時間以内に投与され、ＨＴは分娩の約１０時間以内に開始される。いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧエマルジョンの用量は分娩の約４時間以内に投与され、ＨＴは分娩の約８時間以内または分娩の約６時間以内に開始される。

【0047】

さらに他の実施形態では、ＤＧまたはＴＧエマルジョンの用量は、分娩の約２時間以内（または分娩の約１時間以内）に投与され、ＨＴは、分娩の約６時間後、または分娩の約８時間後、または分娩の約１０時間後、または分娩の約１２時間後に開始される。様々な実施形態では、対象は、エマルジョンの単回のボーラス注射または注入を受けるが、他の実施形態では、対象は、エマルジョンの少なくとも２回及び最大６回（例えば、２～４回）のボーラス注射または注入を受ける。これらは一般に、約１日～１週間にわたって、例えばほぼ毎日投与されてもよい。

【0048】

他の態様では、本開示は、本明細書に記載の様々な方法に使用できる医薬組成物を提供する。様々な実施形態では、医薬組成物は、有効量のｎ－３ ＤＧまたはＴＧエマルジョンを含み、ここで、ＤＧまたはＴＧは、少なくとも約５０％のＥＰＡ及びＤＨＡ、ならびに１％～約４０％、または１％～約３０％、または１％～約２０％、または１％～約１０％のＡＲＡ（重量による総ＦＡ含量に対して）、及び１つ以上の乳化剤を含む。いくつかの実施形態では、ＤＧまたはＴＧは、ＦＡの約５重量％～約２５重量％、または約５重量％～約２０重量％、または約１０重量％～約２０重量％のＡＲＡを含む。いくつかの実施形態では、ＦＡは、少なくとも約６０％のＥＰＡ及びＤＨＡ、または少なくとも約７０％のＥＰＡ及びＤＨＡ、または少なくとも約８０％のＥＰＡ及びＤＨＡを含む。いくつかの実施形態では、ＥＰＡ：ＤＨＡの比は、約４：１～約１：４、または約３：１～約１：３、または約２：１～約１：２、及び任意選択で約１：１である。一般に、組成物は、モノアシルグリセリド、ジアシルグリセリド、及びトリアシルグリセリドの合計に対して、少なくとも約７５％のＤＧまたはＴＧを含む。

【0049】

いくつかの実施形態では、脂肪酸は、遊離ＦＡとして、またはＤＧもしくはＴＧとしてエステル化された、ＤＰＡ及び／またはＭＣＦＡをさらに含む。様々な実施形態では、ＭＣＦＡは、ジグリセリドエマルジョン中の脂肪酸の約１％～約２０％（総ＦＡ重量に対して）である。いくつかの実施形態では、エマルジョンは、約１０重量％～約３０重量％のＤＧまたはＴＧオイルを含む。いくつかの実施形態では、エマルジョンは、約１５重量％～約２５重量％（例えば、約１５％、約２０％、または約２５％）のＤＧまたはＴＧオイルを含む。

【0050】

本明細書に記載の組成物及び方法によれば、組成物は、緊急時に使用するために安定な形態で保存できる安定なエマルジョンである。本明細書に記載されるエマルジョンは、４℃で少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間、実質的に安定である。様々な実施形態では、このエマルジョンは、４℃で、またはいくつかの実施形態では、室温（すなわち、約２２℃）で、約１年を超えて（例えば、約１８ヶ月または約２年）安定である。この組成物は、静脈内または動脈内送達などの非経口送達経路、またはＮＧ経路を介するのに適している。さらに、いくつかの実施形態では、エマルジョンの物理的特性は、脳組織へのｎ－３ ＦＡの送達及び／または脳組織による取り込みを促進する。

【0051】

エマルジョンは本質的に不安定であるため、自然には形成されない。エマルジョンを形成するには、例えば、振盪、撹拌、均質化などによるエネルギーの投入が必要である。時間が経つと、エマルジョンはエマルジョンを構成する相の安定した状態に戻る傾向がある。ただし、ナノエマルジョンは速度論的に安定している場合がある。

【0052】

エマルジョンの液滴のサイズ及び分散が、所望の期間（少なくとも約６ヶ月など）にわたって実質的にまたは顕著に変化しない場合、エマルジョンは安定であると言われる。すなわち、エマルジョンの安定性とは、時間の経過に伴う特性の変化に耐えるエマルジョンの能力を指す。エマルジョンの不安定性は、例えば、凝集、クリーミング／沈降、及び合体として観察され得る。凝集は、液滴間に引力があり、凝集を形成するときに発生する。合体は、液滴が結合してより大きな液滴を形成するときに発生し、その結果、時間の経過とともに平均液滴サイズが増加する。エマルジョンは、たとえば浮力の影響で、液滴がエマルジョンの上部に上昇するクリーミングも受ける場合がある。沈降はクリーミングの逆の現象であり、油中水型エマルジョンで通常観察される。沈降は、分散相が連続相よりも密度が高く、重力によって密度の高い小球がエマルジョンの底部に向かって引っ張られるときに発生する。クリーミングと同様に、沈降はストークスの法則に従う。安定性に関するその他の指標としては、エマルジョン中の遊離ＦＡ量または酸化生成物の増加がないこと、または長期間（たとえば、６～２４か月）にわたりトコフェロール濃度の減少がないことが含まれる。

【0053】

乳化剤とは、エマルジョンの動力学的安定性を高めることによりエマルジョンを安定化させる物質である。乳化剤には、表面活性剤またはサーファクタントが挙げられる。サーファクタントは、液滴のサイズが時間の経過とともに有意に変化しないように、エマルジョンの速度論的安定性を高め得る。エマルジョンの安定性は、液滴または粒子間の反発力を示すゼータ電位の観点から評価され得る。乳化剤とは、通常、極性または親水性（すなわち、水溶性）部分と、非極性（すなわち、疎水性または親油性）部分とを有する化合物である。界面活性剤は乳化剤の一種であり、油と水の両方と物理的に相互作用し、懸濁液中の油と水の液滴間の界面を安定化させる。

【0054】

様々な実施形態では、エマルジョンは、２００ｎｍ以下の平均粒径、及び約－４０ｍＶ以上のマイナスのゼータ電位を有する。いくつかの実施形態では、エマルジョンの平均粒子サイズは、約１８０ｎｍ以下、または約１５０ｎｍ以下、または約１２０ｎｍ以下、または約１００ｎｍ以下、または約９０ｎｍ以下、または約８０ｎｍ以下である。いくつかの実施形態では、平均粒径は約１２０ｎｍ、または約１１０ｎｍ、または約１００ｎｍであり、多分散指数は約０．３未満または約０．２未満である。様々な実施形態では、エマルジョンのゼータ電位は、少なくとも約－４５ｍＶと同じくらいマイナス、または少なくとも約－５０ｍＶと同じくらいマイナス、または少なくとも約－５５ｍＶと同じくらいマイナス、または少なくとも約－６０ｍＶと同じくらいマイナスである。これらの実施形態によるエマルジョンは安定であり、これは、これらのパラメータが少なくとも６か月間、またはいくつかの実施形態では少なくとも１年間維持されることを意味する。この開示によれば、安定性は、約５℃または室温（すなわち、約２５℃）での保存により測定される。

【0055】

安定したエマルジョンは、例えば、ｎ－３ ＦＡを脳に迅速に送達するための静脈内投与に適している。脂質相は一般に、組成物の約１０重量％～約５０重量％である。いくつかの実施形態では、脂質相は、組成物の約１０重量％～約４０重量％、または組成物の約１５重量％～約４０重量％、または約１５重量％～約３０重量％、または約１５重量％～約２５重量％、または約２０重量％～約２５重量％である。例えば、脂質相は、組成物の約２０重量％、または組成物の約２５重量％、または組成物の約３０重量％であり得る。いくつかの実施形態では、脂質相の少なくとも約１０重量％がＤＧもしくはＴＧであるか、または脂質相の少なくとも約１５重量％がＤＧもしくはＴＧであるか、または脂質相の少なくとも約２０重量％がＤＧもしくはＴＧであるか、または脂質相の約３０重量％がＤＧもしくはＴＧであるか、または脂質相の少なくとも約４０重量％がＤＧもしくはＴＧであるか、または脂質相の少なくとも約５０％がＤＧもしくはＴＧである。いくつかの実施形態では、ＤＧ自体が乳化特性を提供するため、ＴＧエマルジョンと比較して必要な乳化剤が少なくなる。例えば、いくつかの実施形態では、乳化剤は、組成物の約０．５～約２重量％、例えば、組成物の約１．２重量％、または組成物の約１重量％、または約０．８％、または約０．６重量％である。

【0056】

多分散指数（ＰＤＩ）は、所定のサンプル内の粒子サイズ分布の尺度である。ＰＤＩの数値の範囲は、０．０（完全に均一な粒子サイズ分布を有するサンプルの場合）から１．０（複数の粒子サイズ集団を有する高度に多分散のサンプルの場合）におよぶ。エマルジョンなどの脂質ベースの担体では、０．３のＰＤＩが望ましく、これは十分に均一な粒径分布を示している。いくつかの実施形態では、エマルジョンのＰＤＩは約０．３未満、例えば約０．２以下、または約０．１以下である。

【0057】

組成物は、所望の物理的特性を得るために、１つ以上の乳化剤をさらに含む。様々な実施形態では、乳化剤には、リン脂質乳化剤、ホスホグリセリド乳化剤、ならびに中鎖及び／または長鎖脂肪酸乳化剤のうちの１つ以上が含まれ得る。様々な実施形態では、組成物は、約０．６重量％～約１０重量％の乳化剤、及び任意選択で約０．６重量％～約７重量％の乳化剤、及び任意選択で約０．６重量％～約５重量％の乳化剤、及び任意選択で約０．６重量％～約３重量％の乳化剤を含む。

【0058】

いくつかの実施形態では、エマルジョンは、１つ以上のリン脂質乳化剤及び／または１つ以上のホスホグリセリド乳化剤を含む。ホスホグリセリド乳化剤は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、及びホスファチジン酸から選択され得る。いくつかの実施形態では、組成物はホスファチジルコリン乳化剤を含む。

【0059】

様々な実施形態では、リン脂質及び／またはホスホグリセリド乳化剤対ＤＧまたはＴＧの比は、約１：４～約１：１２であり、いくつかの実施形態では、約１：１０以下である。いくつかの実施形態では、乳化剤は少なくとも約７０％のホスファチジルコリンを含むか、または少なくとも約８０％のホスファチジルコリンを含む。例えば、乳化剤（任意の共乳化剤を含む）は、約６０％～約８０％のホスファチジルコリンを含み得る。

【0060】

この組成物はさらに、共乳化剤として１つ以上の中鎖または長鎖ＦＡを含んでもよい。例えば、組成物は、任意選択でＣ１６～Ｃ２４ ＦＡから選択され、任意選択でＣ１８ ＦＡである長鎖ＦＡを含んでもよい。いくつかの実施形態では、共乳化剤は、任意選択でラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、及びステアリン酸から選択される飽和ＦＡを含む。いくつかの実施形態では、共乳化剤は、任意選択でオレイン酸またはリノレン酸から選択される不飽和ＦＡを含む。この共乳化剤は、任意選択でオレイン酸ナトリウムを含むアルカリ金属塩として添加されてもよい。例示的な実施形態では、共乳化剤は、組成物の総重量の約０．０１％～５％で存在する。例えば、共乳化剤は、組成物の総重量の約０．０１～２重量％、または組成物の総重量の約０．０１重量％～約１重量％、または組成物の約０．０１重量％～約０．０５重量％で存在し得る。

【0061】

様々な実施形態では、組成物はヒトの血液とほぼ等張であり、任意選択でグリセロール、ソルビトール、キシリトール、及び／またはグルコースなどの１つ以上のポリオールを含む。例えば、組成物は、組成物の約２重量％～約１０重量％、または組成物の約２重量％～約７重量％のグリセロールを含んでもよい。

【0062】

いくつかの実施形態では、この組成物は、α－トコフェロール、β－トコフェロール、γ－トコフェロール、及びアスコルビルエステルのうちの１つ以上など、１つ以上の抗酸化剤を含む。例示的な実施形態では、抗酸化剤は、α－トコフェロール及び／またはアスコルビルエステルを含み、これは任意選択でパルミチン酸アスコルビルである。

【0063】

いくつかの実施形態では、この組成物は、任意選択でＥＤＴＡまたはＥＧＴＡである金属キレート剤を含む。例えば、エマルジョンは、約０．１ｍＭ～約５ｍＭ、または約０．１ｍＭ～約１ｍＭのＥＤＴＡまたはＥＧＴＡを含んでもよい。例えば、いくつかの実施形態では、エマルジョンは約０．２５ｍＭのＥＤＴＡを含む。

【0064】

様々な実施形態では、安定なエマルジョンは、以下を含むプロセスに従って調製され得る：（１）約５０℃～約８０℃（例えば、約６０℃）の温度を有する水、グリセロール、及びＥＤＴＡの混合物を調製すること；（２）ホスファチジルコリン乳化剤（例えば、卵黄レシチンに由来し得る少なくとも約７５％のＰＣ）、共乳化剤（例えばオレイン酸ナトリウム）、及びＤＧまたはＴＧオイルを添加する；（３）約５０℃～約８０℃（例えば、約６０℃）の温度で均質化する；（４）マイクロフルイダイザーによるプロセス。このプロセス中に適用される圧力は、３００～２０００バールの範囲であり得、いくつかの実施形態では、約６００～約９００バールなど、約５００～約１０００バールの範囲であり得る。例えば、混合物は、約６０℃で約８００バールの圧力でマイクロフルイダイザーを通して処理され得る。エマルジョンは、目標の粒子サイズを満たすために必要な時間の長さ及び条件下で処理され得る。

【0065】

様々な実施形態では、組成物のｐＨは、約６～約９、及び任意選択で約６．５～約８．５、及び任意選択で約７～約８である。

【0066】

様々な実施形態では、組成物は、約５００ｍＬ以下の容積、または約３００ｍＬ以下の容積、または約５０ｍＬ以下の容積、または約２５ｍＬ以下の容積を有する。様々な実施形態では、組成物は、必要に応じて約１ｍＬ～約５０ｍＬの注射用容積を有する、プレフィルドシリンジ内に含まれる。

【0067】

組成物は一般に、静脈内または動脈内などの非経口的に送達される。いくつかの実施形態では、組成物は鼻腔内に投与され、脳への迅速な送達を可能にする。

【0068】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、関連数値の±１０％を意味する。

【0069】

例示的な実施形態を以下の実施例によって説明する。

【実施例】

【0070】

実施例１：オメガ３トリグリセリドエマルジョンの急性注射は、新生児マウスモデルにおける脳低酸素性虚血性損傷に対する低体温療法と同様の神経保護を提供する
低酸素性虚血性（ＨＩ）脳損傷は、新生児と成人の両方において、頻繁に死亡または長期にわたる重大な神経学的障害を引き起こす重篤な出来事である（１－３）。現在、治療的低体温療法（ＨＴ）は、ＨＩ脳症の新生児に対する唯一確立された処置である（４）。前臨床研究及び小規模臨床試験では、ＨＴが神経損傷の程度を軽減し、死亡率を低下させ、神経機能の回復を改善し得ることが示されている（７、８）。

【0071】

ＨＴの影響を受ける主な分子機構としては、フリーラジカル生成の減少、血液脳関門破壊の制限、興奮性アミノ酸放出の減少、及び脳虚血に対する細胞媒介炎症反応の減弱が挙げられる（９、１０）。さらに、ＨＴは、ミトコンドリアに基づく内因性経路と受容体媒介外因性経路の両方を介してニューロンのアポトーシスの阻害を誘導する（１１）。しかし、ＨＴは厳密なモニタリングが必要であり、三次医療センターでのみ利用できるので、依然として複雑な医療アプローチである（１２）。脳卒中におけるＨＴに関するパイロット研究では、成人患者は新生児よりも冷却に対する耐性が低く、ＨＴは震え、免疫抑制、及び肺炎などの好ましくない全身作用も誘発し得ることが示されている（１３、１４）。ＨＴを他の処置と組み合わせることで、ＨＴによる悪影響を軽減するだけでなく、ＨＩ傷害の状況において複数の分子標的に到達して、治療時間範囲の増加及び長期回復における修復の強化を図ることが目的となり得る（１５）。

【0072】

脳内の主要なオメガ３多価不飽和ＦＡの１つとして、ＤＨＡは、脳の発達及び機能に不可欠である（１６）。ＤＨＡは、ＨＩ損傷のさまざまな動物モデルにおいて、炎症、興奮毒性を軽減し、脳容積の減少を防ぐことが示されている（１７～１９）。この実施例は、ＨＴ及びトリグリセリドＤＨＡ（「ｔｒｉ－ＤＨＡ」）エマルジョンによる同時処置が、ＨＩ損傷から脳を保護する際に相乗効果を達成するか否かを調査する。この実施例では、ｔｒｉ－ＤＨＡとは、ＴＧ脂肪酸の＞９８％がＤＨＡであるトリグリセリドオイルである。本発明者らは、以前に記載された新生児モデルにおけるＨＩ損傷に対するＨＴの神経保護効果を確認した（２０、２２）。これらの結果によって、ｔｒｉ－ＤＨＡがＨＴと同程度の神経保護を提供し、ＨＴとｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョンを組み合わせても ＨＩ損傷に追加の治療効果が得られないことが示されている。

【0073】

材料及び方法
ＤＨＡ ＴＧオイルは、Ｎｕ－Ｃｈｅｋ Ｐｒｅｐ，Ｉｎｃ．（Ｅｌｙｓｉａｎ，ＭＮ）から購入した。卵黄ホスファチジルコリンは、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ－Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ）から入手した。放射性標識［^３Ｈ］－コレステリルヘキサデシルエーテルは、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）から購入した（［^３Ｈ］ＣＥｔ）（ＮＥＴ ８５９００）。

【0074】

ｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョン（ＴＧ重量で１０ｇ／エマルジョン１００ｍＬ）は、ＤＨＡ ＴＧオイルと卵黄リン脂質（ＰＬ）を用いて、以前に詳述したように超音波処理によって作成した（２０）。市販のキット（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＵＳＡ，Ｉｎｃ．，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡ）を使用して、エマルジョンのＴＧ及びＰＬの量を分析した。ＴＧ：ＰＬ質量比は５．０±１．０で、ＶＬＤＬサイズの粒子と同様であった。放射性標識エマルジョンを調製するために、超音波処理の前に［^３Ｈ］ＣＥｔをＴＧ－ＰＬ混合物に添加した（２２）。

【0075】

生後３日のＣ５７ＢＬ／６Ｊ新生仔マウスを、生みの母とともにＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ）から購入した。雄マウスと雌マウスの両方を実験に使用した。本発明者らは、以前に記載されているように（２０）、生後１０日（ｐ１０）マウスの軽度のＨＩ脳損傷というＲｉｃｅ－Ｖａｎｎｕｃｉ法を使用した。簡単に言うと、ＨＩ脳損傷は、右総頚動脈の永久結紮によって誘発した。１．５時間の回復後、マウスを ３７±０．３℃で１５分間、低酸素傷害（加湿８％Ｏ_２／ ９２％Ｎ_２、Ｔｅｃｈ Ａｉｒ Ｉｎｃ．，ＮＹ）に曝露した。

【0076】

ＨＩ損傷の直後、子犬をＨＴまたは正常体温（ＮＴ）の温度制御室で４時間飼育し、直腸温はそれぞれ３１～３２℃または３７℃に達した（２３）。２７℃に設定された循環空気室に入れられた子犬は、目標の直腸温を３１～３２℃に維持していることが観察された。ＮＴ群の場合、以前の研究（２０、２１）のプロトコルに基づいて、子犬を３２℃に設定したチャンバーに入れた。新生マウスのＨＩ脳損傷は、内因性の中核体温の低下と関連している（２３）。したがって、低酸素状態の間に３７℃に保たれた子犬は低体温には供されていない。新生仔げっ歯類の中核体温は母犬からの距離によって影響を受ける可能性があるので（２４）、４時間のＨＴまたはＮＴ処置期間中、子犬は母犬から離して保管した。低酸素状態（０時間）の直後、続いてＨＴ中の１、２、３及び４時間に連続的な温度測定を取得した（プローブタイプ：ＲＥＴ－４；Ｐｈｙｓｉｔｅｍｐ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｌｉｆｔｏｎ，ＮＪ）。ｔｒｉ－ＤＨＡ処置（０．３７５ｇ ｔｒｉ－ＤＨＡ／ｋｇ 体重、腹腔内（ｉ．ｐ．）、１時間間隔で２回の注射）は以前のプロトコルに基づいていた（２０、２１）。

【0077】

ｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョンによるＨＴの併用治療がＨＩ障害における神経保護を強化するか否かを調べるために、ＨＴを受けた動物に、ＨＴの開始時とＨＴ開始１時間後にｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョン（０．３７５ｇ ｔｒｉ－ＤＨＡ／ｋｇ 体重、２回注射、腹腔内）を投与した。ＮＴまたはＨＴ対照動物には生理食塩水を注射した。４時間のＮＴ後、対照群の子犬を母犬に戻した。ＨＴ群の子犬は、直腸温が３７℃に達するまで部屋の温度を１分あたり０．１～０．２℃の速度で上昇させることによってゆっくりと再加温を受け、その後母犬に戻された。

【0078】

放射性標識したｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョンを使用して、ＨＴが腹腔内注射後のエマルジョン粒子の吸収及び分布に影響を与えるか否かを決定した。放射性標識ｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョン（０．３７５ｇ ｔｒｉ－ＤＨＡ／ｋｇ 体重、腹腔内、単回注射）を注射したナイーブ新生仔マウスを、直ちにＨＴ（ｎ＝３）またはＮＴ（ｎ＝７）のいずれかに４時間供した。エマルジョンの分布を研究するための単回ボーラス注射の使用は、以前に確立されたプロトコルに基づいていた（２２、２５）。４時間のＨＴまたはＮＴ後に動物を屠殺し、腹水、血液、器官及び組織中の放射能を［^３Ｈ］ＣＥｔのレベルを測定することによって評価した。

【0079】

組織及び器官は、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｄｉｓｒｕｐｔｏｒ（Ｏｍｎｉ ＴＨ，Ｋｅｎｎｅｓｗａ，ＧＡ）を使用して均質化し、放射能を液体シンチレーション分光法で測定した（２６）。サンプルをシンチレーション流体（Ｕｌｔｉｍａ Ｇｏｌｄ シンチレーション流体、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）に懸濁し、混合し、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｔｒｉ－Ｃａｒｂ液体シンチレーション分光計５１１０ ＴＲで３Ｈ ｄｐｍアッセイした。組織取り込みは、分析したすべての臓器について、臓器あたりの総回収量のパーセントとして表した。

【0080】

本発明者らは、マウスにおけるＨＩ損傷後のＨＴの治療範囲を決定した：（１）２時間遅延ＨＴ－ＨＩ後２時間母犬と一緒に置かれ、その後ＨＴを受けた子犬；（２）４時間遅延ＨＴ－ＨＩ後４時間母犬と一緒に置かれ、その後ＨＴを受けた子犬。ｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョンによるＨＴの併用治療がＨＩ損傷の治療範囲を延長するか否かを調べるために、ＨＴを行った動物（ＨＩ後２時間または４時間遅らせる）に、ＨＴの開始時及びＨＴ開始の１時間後にｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョン（０．３７５ ｇ ｔｒｉ－ＤＨＡ／ｋｇ 体重、２回注射、腹腔内）を投与した。ＮＴまたはＨＴ対照動物には生理食塩水を投与した。処置期間後、ＮＴまたはＨＴ群の子犬を上記のように母犬に戻した。

【0081】

ＨＩ傷害の２４時間後、動物を屠殺し、脳を採取した。ブレインスライサーマトリックスを使用して、１ｍｍの冠状スライスを切断した。スライスを２％塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）を含むＰＢＳ溶液に３７℃で２５分間浸漬した。ＴＴＣは生きたミトコンドリアに取り込まれ、赤色に変わる。白く見える非染色領域は梗塞領域として定義され、一方、生存領域は赤く見える。Ａｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ及びＮＩＨ Ｉｍａｇｅ Ｊ イメージングアプリケーションを使用して、連続切片上の梗塞の平面領域を合計して、梗塞組織の容積（ｍｍ３）を求めた。梗塞面積は、同側半球の総面積の％として表した（２１）。ＨＩ直後にＨＴまたはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡで処置したマウスの別のコホートでは、ＨＩ損傷後７日目に脳萎縮がニッスル染色によって検出された。脳全体を２００μｍごとに切断し、各冠状スライスの厚さは５０μｍであった。次に、切片を０．１％のクレシルバイオレット（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）の溶液中で７分間インキュベートした。Ｈ_２Ｏで素早くすすいだ後、スライドを数滴の酢酸を含む７０％（ｖ／ｖ）エタノールで分化し、続いて段階的エタノールで脱水し、キシレンを２回交換した。次に、切片をＦｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（商標）Ｐｅｒｍｏｕｎｔ（商標）Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉａでマウントした。結果は、対側半球と比較した同側半球容積（脳残存組織）の％として表した（２７）。

【0082】

値は平均値±ＳＥＭである。一元配置ＡＮＯＶＡに続いて事後Ｎｅｗｍａｎ－Ｋｅｕｌｓ多重比較検定を適用して、群間の相違を評価した。

【0083】

結果
ＮＴまたはＨＴプロトコルを受けた動物には死亡はなかった。表１は、ＨＴ動物の連続的な体温測定の結果をまとめたものである。放射性標識実験では、腹腔内注射後４時間で、注射されたエマルジョンの約９６％がＮＴマウスとＨＴマウスの両方で腹腔から出たことが示された。さらに、ＮＴ対ＨＴマウスにおけるｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョン粒子の器官分布に有意差は観察されなかった。ＮＴマウスとＨＴマウスの両方において、エマルジョン粒子の最も高い取り込みは肝臓（放射性標識エマルジョンの回収用量の４４～４７％）で、次いで筋肉（２０～２３％）と心臓（８～９％）であった。エマルジョン粒子の取り込みが最も低かったのは、ＮＴ動物とＨＴ動物の両方で脳であった（回収用量の０．３％未満）。

【0084】

本発明者らは、ＨＩ損傷直後から開始するＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ処置の神経保護効果を評価した。ＨＴまたはｔｒｉ－ＤＨＡは、生理食塩水で処置したＮＴ動物と比較して、脳梗塞容積の有意な減少（約５０％）を示した（図１Ａ及び１Ｂ）。ＨＩ損傷直後のＨＴ及びｔｒｉ－ＤＨＡによる処置の併用は、ＨＴ処置療単独と比較して追加の利点をもたらさなかった。

【0085】

ＨＩ損傷直後に開始したＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡの投与による神経保護は、虚血性傷害後７日目でも維持された。ニッスル染色は、対照群と比較して、ＨＴまたはＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ処置マウスにおける同側半球のより良好な保存を示した。しかし、この併用は、ＨＴ治療単独と比較して治療上の利点を提供しなかった。代表的なニッスル染色切片を図１Ｃに示す。

【0086】

この実施例では、虚血性損傷後の神経保護の治療範囲を決定するために、遅延型ＨＴ処置プロトコルを実行した。ＨＩ後２時間遅延したＨＴは、ＮＴ動物と比較して脳梗塞容積の減少を示した。さらに、ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ処置は、ＨＩ損傷の２時間後から始まるＨＴ単独によって提供される保護よりも有意な追加の保護を提供しなかったが、梗塞サイズがわずかにさらに減少する傾向であった（梗塞容積％：３１．４±４．１ＮＴ＋生理食塩水対１８．８±４．６ＨＴ＋生理食塩水対１２．７±４．０ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ）（図２Ａ及び２Ｂ）。ＨＩ傷害後４時間後にＨＴ処置を遅らせても、虚血性損傷に対する保護は得られなかった。ＨＩ損傷後４時間遅れてＨＴとｔｒｉ－ＤＨＡ処置とを組み合わせても、ＨＴの治療範囲は拡張されなかった。４時間遅延ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡの組み合わせで処置した動物では梗塞容積の増加が観察されたが、その差はＮＴまたはＨＴ単独と比較して有意ではなかった（図２Ｃ及び２Ｄ）。したがって、本発明者らの結果によって、ｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョンとＨＴとの併用処置は、虚血性損傷における神経保護において追加の有意な利点をもたらさないことが示される。

【0087】

考察
この研究では、ＨＴ投与がｔｒｉ－ＤＨＡと同程度の神経保護を発揮するという結果が示されている。さらに、ｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョンとＨＴの併用処置では、追加の神経保護は得られない。

【0088】

治療的ＨＴは、心停止後の酸素欠乏性脳症及び周産期仮死などの急性虚血性脳損傷の管理において十分に確立された神経保護手段である（２８）。無作為化治験では、ＨＴが外傷性脳損傷患者の神経学的転帰の改善にも有効であることが示されている（２９）。虚血性脳卒中後の全身性ＨＴの神経保護の利点が臨床試験で報告されている（７）。しかし、急性脳卒中処置におけるＨＴの使用には依然として議論の余地があり、ロジスティックな課題によって制限されている（７、３０）。

【0089】

ＨＩ傷害の直後に開始されるＨＴには神経保護作用があり、神経保護の程度は冷却開始の遅れに伴って直線的に減少する（３１、３２）。ＨＩ損傷の新生児マウスモデルでは、ＨＩの０時間後または２時間後に始まるＨＴが神経保護を提供し（２３）、一方で、マウスで２時間を超えて遅れた場合のＨＴの効果を評価した研究はなかった。ここで示した結果によって、ＨＴはＨＩ損傷後２時間までは神経保護作用があり、処置が４時間遅れると保護が失われることが示される。新生児ラットモデルでは、Ｓａｂｉｒ ｅｔ ａｌ．（３２）によって、ＨＩ傷害後最大６時間遅延ＨＴは、神経保護を提供することが示された。これは、マウス対ラットにおける虚血性損傷の進行及び神経保護の経路の違い、ならびに／または代謝率の違いに関連している場合がある（３３）。本発明者らは、ＨＩ損傷後２時間までにｔｒｉ－ＤＨＡを投与すると脳梗塞容積が有意に（約５０％）減少したが、ＨＩ損傷後４時間遅れて投与したｔｒｉ－ＤＨＡでは予防効果が認められなかったことを報告した（２０）。これらの本発明の結果によって、ＨＴがｔｒｉ－ＤＨＡ処置と非常によく似た治療範囲を提供することが示唆される。ＨＩ脳症の新生児では、冷却キャップを使用した選択的頭部冷却、または受動冷却（放射加温器／保育器をオフにする）による全身冷却、クールパック及び／または市販の冷却ブランケットが処置に使用される（３４、３５）。新生児ＨＩ脳症の治療範囲は６時間未満であることが示唆されている。（３６、３７）。しかし、出生後６～２４時間以内に開始されたＨＴには効果がある可能性があるが、その有効性には不確実性がある（３８）。体重１ｋｇあたりの基礎代謝率はマウスではヒトの７倍であり（３９）、これがＨＩ損傷に対するヒトのＨＴの処置範囲を長くする上で重要な役割を果たしている場合がある。したがって、マウスにおける本発明者らのプロトコルにおける２時間遅延処置による神経保護は、ヒトにおけるＨＴではより長い時間範囲に変換され得る。

【0090】

本発明者らは、ＨＩ損傷後のＨＴの有効性を高めるための補助療法として、ＤＨＡがより優れた神経保護を追加する可能性があるか否かを試験した。本発明者らの結果によって、ＨＴとｔｒｉ－ＤＨＡとを組み合わせても、神経保護を強化することもなく、ＨＩ損傷後の処置の治療範囲を拡大することもないことが示唆される。これは、ＨＩ損傷の新生児子豚モデルの研究で得られた最近の発見と同様であり、ＨＴとＤＨＡとの併用処置は、ＨＩ傷害後の脳損傷及び炎症マーカーの減少において、個別の処置よりも追加の利点がないことが示された（４０）。しかし、ＨＩ損傷の新生児ラットモデルを用いた別の研究では、ＨＴ＋ＤＨＡが相乗的に脳梗塞容積を減少させ、行動能力を改善することが示された（４１）。興味深いことに、本発明者らの放射性標識実験で実証されたように、ＨＴ＋ｔｒｉ－ＤＨＡ処置によって神経保護を顕著に強化できないのは、ｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョン粒子の吸収及び分布の減少に起因するものではなかった。さらに、脳内でのｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョン粒子の取り込みが低いことは、ＨＩ神経保護を提供する際のｔｒｉ－ＤＨＡの有効性を説明するものではなかった。最近のデータでは、注射されたｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョンが肝臓に取り込まれ、代謝されてリゾホスファチジルコリンと非エステル化脂肪酸の血漿プールに分泌され、ＤＨＡの脳輸送が促進されることが示されている（２２）。

【0091】

ＤＨＡとＨＴとは両方とも、ＨＩ損傷に対する神経保護の共通の経路を共有している。ＤＨＡとＨＴは、アポトーシス促進性Ｂ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ－２）関連Ｘ（ＢＡＸ）を下方制御し、抗アポトーシスＢＣＬ－２を上方制御し、その結果、シトクロムｃ放出の減少及びカスパーゼ活性化の減少をもたらす（１７、４２）。さらに、ＤＨＡとＨＴは、細胞増殖を刺激するＡＫＴの活性化を促進する（４３、４４）。さらに、実験的な脳卒中において、ＤＨＡ及びＨＴ処置はミクログリアの活性化、ならびにインターロイキン１β（ＩＬ－１β）、ＩＬ－６、及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）などの炎症促進性サイトカインを減少し得ることが報告されている（４５、４６）。さらに、両方の処置とも、多くの炎症性シグナル伝達経路を活性化する転写因子である核因子カッパＢ（ＮＦ－κＢ）を阻害する（４７、４８）。さらに、ＤＨＡ及びＨＴは、グルタミン酸などの興奮毒性アミノ酸の蓄積または放出を防ぐことも示されている（４９、５０）。ＤＨＡとＨＴは両方とも、ミトコンドリアＲＯＳ放出の再灌流による加速を制限し、ミトコンドリア膜の透過性化を防ぐ（２１、５１）。したがって、ＨＴ及びＤＨＡは同様の神経保護経路を通じて作用しており、併用処置が脳損傷をさらに軽減する効果を無効にし得ると考えられる。

【0092】

現在、ＨＴは乳児の中等度から重度の脳症に対して確立された唯一の処置であり（５２）、成人の脳卒中治療に関してはまだ研究中の有望な戦略である（５３）。脳卒中に対するＨＴの臨床応用を成功させるには、発症時間、持続時間、ＨＴの深さ、復温速度などのＨＴ治療のさまざまな主要パラメータを制御する必要がある（１１）。患者の冷却は概念としては単純であるが、ＨＴで発生し得る管理上の問題への備えとともに、特別な訓練を受けた医療スタッフによる取り組みの調整が必要となる複雑な医療処置である（１２、５４）。脳卒中の処置としてＨＴを使用するには、通常、三次医療病院での治療が必要であり、高額な経済的コストを伴う（５５）。本発明者らの知見は、ＨＴまたはｔｒｉ－ＤＨＡエマルジョンの注射が梗塞容積を減少させ、神経保護の程度が両方の治療で同等であることを示している。オメガ３脂肪酸は安全であり、重大な副作用もなくヒトに十分に許容される（５６－５８）。静脈注射は一般的な実行可能な手順であり、プライマリケアの現場で簡単に実行され得る。

【0093】

実施例２：オメガ３ジグリセリドエマルジョンの急性注射は、オメガ３トリグリセリドエマルジョンよりも新生児マウスモデルにおける脳の低酸素性虚血性損傷に対して優れた保護を提供する。
ＥＰＡとＤＨＡの両方を含むトリグリセリド脂質エマルジョン、またはＤＨＡ単独（ｔｒｉ－ＤＨＡ）による急性処置は、再灌流の最初の数分／時間以内に作用することにより、低酸素性虚血性脳損傷後の神経保護を提供する。ｔｒｉ－ＤＨＡ及びその生理活性メディエーターによって影響を受ける生物学的機構としては、（ｉ）ミトコンドリア活性酸素種（ＲＯＳ）の生成の減少；（ｉｉ）Ｃａ２＋取り込み及び恒常性の維持によって実証されるミトコンドリア機能の保存；（ｉｉｉ）再灌流後３０分以内の脳ミトコンドリアにおけるフリーラジカル生成の遮断、及び（ｉｖ）ミトコンドリア関連のアポトーシス経路の阻害、が挙げられると考えられる。ｔｒｉ－ＤＨＡの急性投与によってもたらされる神経保護は、脳ミトコンドリア内のＤＨＡ含有量の増大、及び脳組織内のニューロプロテクチンＤ１（ＮＰＤ１）及びＤシリーズレゾルビンなどのＤＨＡ由来の生理活性メディエーターの含有量の増大とも関連していた。したがって、低酸素性虚血性傷害後のＮＰＤ１の直接投与によってもたらされる神経保護作用をさらに調査した。本発明者らは、ＮＰＤ１処置が対照群と比較して脳梗塞容積の有意な減少を誘導し、これがミトコンドリアＣａ２＋緩衝能の維持とミトコンドリア関連細胞死経路の減少との両方に関連していることを観察した。

【0094】

データによってさらに、ＤＧエマルジョン（総脂肪酸の９０％を超えるＥＰＡ及びＤＨＡを含む）に含まれるオメガ－３ ＦＡで治療された新生児マウスは、脳梗塞容積の有意な減少を示し、新生児ＨＩモデルにおいてオメガ－３ ＤＧエマルジョンがオメガ－３ ＴＧエマルジョンよりもはるかに効果的であることが示される。図３。

【0095】

本発明者らは、ＤＧエマルジョンに含まれるオメガ－３ ＦＡの化学物理的特性を特徴付け、それらをＴＧエマルジョンと比較した。本発明者らは、ＮＭＲ分光法によりＤＧと細胞膜のｉｎ ｖｉｔｒｏモデルとの相互作用を評価した。本発明者らは、（ｉ）ＤＧは膜構造に悪影響を及ぼさず、（ｉｉ）ＴＧ よりも効率的に生体膜系に取り込まれることを観察した。急速な加水分解がジグリセリドエマルジョンのクリアランスを促進するか否かを確立するために、リポタンパク質リパーゼ（ＬｐＬ）媒介加水分解による脂肪酸放出を評価することにより、インビトロ脂肪分解研究を実施した。オメガ－３ ＤＧエマルジョンは、オメガ－３ ＴＧと比較してより効率的に加水分解されることを本発明者らは、観察した。これは、虚血性脳損傷におけるＤＧのより速い取り込み及び迅速な神経保護を説明する／寄与する場合がある。これらの知見によって、乳児を含む低酸素性虚血性脳損傷における強力な神経保護剤として、脂質エマルジョン中で送達されるオメガ－３ ＦＡの可能性が強調される。

【0096】

さらなる研究では、図４に示すように、低酸素性虚血性（ＨＩ）損傷を与え、動物１匹あたり５、１０、または２０ｎｇの濃度のビヒクルとして生理食塩水またはＰＤ１ ｎ－３ ＤＰＡで処理した新生仔マウス（生後１０日）の梗塞容積を測定した（ｎ＝１５－１７）。値はＳＤ付きの平均値である。梗塞容積の減少は用量依存性であった。

【0097】

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３４．Ａｋｕｌａ ＶＰ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｍｏｄｅ ｄｕｒｉｎｇ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｆｏｒ ｎｅｏｎａｔａｌ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ．Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ（２０１５）１６６：８５６－８６１．ｅ２．
３５．Ｐｅｌｉｏｗｓｋｉ－Ｄａｖｉｄｏｖｉｃｈ Ａ．Ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｆｏｒ ｎｅｗｂｏｒｎｓ ｗｉｔｈ ｈｙｐｏｘｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ．Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｃｈｉｌｄ Ｈｅａｌｔｈ（２０１２）１７：４１－４３．
３６．Ｋｅｎｄａｌｌ ＧＳ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｏｌｉｎｇ ｏｎ ｒｅｔｒｉｅｖａｌ ｓｔｕｄｙ ｇｒｏｕｐ． Ｐａｓｓｉｖｅ ｃｏｏｌｉｎｇ ｆｏｒ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｉｎ ｎｅｏｎａｔａｌ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ．Ａｒｃｈ Ｄｉｓ Ｃｈｉｌｄ Ｆｅｔａｌ Ｎｅｏｎａｔａｌ Ｅｄ（２０１０）９５：Ｆ４０８－４１２．
３７．Ｇｕｎｎ ＡＪ，Ｇｒｏｅｎｅｎｄａａｌ Ｆ．Ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｅｒａ ｏｆ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ： Ｗｈａｔ ｃａｎ ｗｅ ａｄｄ？ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｅｏｎａｔｏｌ（２０１６）５：３．
３８．Ｌａｐｔｏｏｋ ＡＲ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ａｆｔｅｒ ６ ｈｏｕｒｓ ｏｆ ａｇｅ ｏｎ ｄｅａｔｈ ｏｒ ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ ａｍｏｎｇ ｎｅｗｂｏｒｎｓ ｗｉｔｈ ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ．ＪＡＭＡ（２０１７）３１８：１５５０－１５６０．
３９．Ｄｅｍｅｔｒｉｕｓ Ｌ．Ｏｆ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｍｅｎ．ＥＭＢＯ Ｒｅｐ（２００５）６：Ｓ３９－Ｓ４４．
４０．Ｈｕｕｎ ＭＵ，ｅｔ ａｌ．ＤＨＡ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｉｎ ａ ｓｈｏｒｔ－ｔｅｒｍ ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ ｐｉｇｌｅｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｓｃｈｅｍｉａ： Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｈ＋ＭＲＳ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ．ＰｌｏＳ Ｏｎｅ（２０１８）１３：ｅ０２０１８９５．
４１．Ｂｅｒｍａｎ ＤＲ，ｅｔ ａｌ．Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ ａｕｇｍｅｎｔｓ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉｃ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔ ａｓｐｈｙｘｉａ ｍｏｄｅｌ．Ｎｅｏｎａｔｏｌｏｇｙ（２０１３）１０４：７１－７８．
４２．Ａｎ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｐｈｅｎｏｔｈｉａｚｉｎｅｓ ｅｎｈａｎｃｅ ｍｉｌｄ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｖｉａ ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｒｏｋｅ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ（２０１７）７：７４６９．
４３．Ｅａｄｙ ＴＮ，ｅｔ ａｌ．Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ ｐｅｎｕｍｂｒａ ａｎｄ ｉｎｉｔｉａｔｅｓ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｙｏｕｎｇ ａｎｄ ａｇｅｄ ｒａｔｓ．ＰｌｏＳ Ｏｎｅ（２０１２）７：ｅ４６１５１．
４４．Ｚｈａｏ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ａｋｔ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ａｇａｉｎｓｔ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｏｆｆ Ｊ Ｓｏｃ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２００５）２５：９７９４－９８０６．
４５．Ｃａｉ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｐｏｓｔ－ｓｔｒｏｋｅ ＤＨＡ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ａｃｕｔｅ Ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｂｒａｉｎ Ｉｎｊｕｒｙ ｂｙ Ｓｋｅｗｉｎｇ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｐｏｌａｒｉｔｙ Ｔｏｗａｒｄ ｔｈｅ Ｍ２ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｔｒａｎｓｌ Ｓｔｒｏｋｅ Ｒｅｓ（２０１８）９：６６９－６８０．
４６．Ｌｅｅ ＪＨ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｏｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｆｔｅｒ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ（２０１６）９６：２４８－２６０．
４７．Ｚｈａｎｇ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｏｍｅｇａ－３ ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｆｅｒｓ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｎｅｏｎａｔａｌ ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｃｔｉｏｎｓ． Ｓｔｒｏｋｅ（２０１０）４１：２３４１－２３４７．
４８．Ｙｅｎａｒｉ ＭＡ，Ｈａｎ ＨＳ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｏｎ ｐｏｓｔ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ： ｒｏｌｅ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａ Ｂ（ＮＦｋａｐｐａＢ）．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ Ｉｎｔ（２００６）４９：１６４－１６９．
４９．Ｍｏｒｅｉｒａ ＪＤ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉｅｔａｒｙ ｏｍｅｇａ－３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｔｔｅｎｕａｔｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｄａｍａｇｅ ａｆｔｅｒ ａ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｉｎｓｕｌｔ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｒａｔｓ．Ｊ Ｎｕｔｒ Ｂｉｏｃｈｅｍ（２０１０）２１：３５１－３５６．
５０．Ｚｈａｎｇ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｏｓｔ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｉｎｊｕｒｙ．Ｎｅｕｒｏｌ Ｒｅｓ（２００８）３０：３３２－３３６．
５１．Ｇｏｎｇ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ａ ｓｗｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ａｒｒｅｓｔ．Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ Ｏｆｆ Ｊ Ｉｎｔ Ｓｏｃ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ（２０１３）３３：９２８－９３４．
５２．Ｏｏｒｓｃｈｏｔ ＤＥ，ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｏｎａｔａｌ ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ ｗｉｔｈ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ａｌｏｎｅ，ａｎｄ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ： ｈｉｓｔｏｒｙ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ． Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ（２０２０）２１：１４８７．
５３．Ｃｈｅｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｖａｓｃｕｌａｒ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ： ｐｉｌｏｔ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｔｒａ－ａｒｔｅｒｉａｌ ｃｏｌｄ ｓａｌｉｎｅ ｉｎｆｕｓｉｏｎ．Ｓｔｒｏｋｅ（２０１６）４７：１９３３－１９３５．
５４．Ｌｉ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｌｕｅ ａｎｄ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｉｎ ｇｌｏｂａｌ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ（２０１８）５５：２０４２－２０５５．
５５．Ｋｉｍ ＪＪ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｓｔ－ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｄｅｖｉｃｅ ｆｏｒ ｈｙｐｏｘｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ．Ｍｅｄ Ｄｅｖｉｃｅｓ（２０１３）６：１－１０．
５６．Ｚｈａｎｇ Ｍ－Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｏｍｅｇａ－３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｏｎ ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｉｎ ｐｅｒｉｎａｔａｌ ｗｏｍｅｎ： ａ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｐｌａｃｅｂｏ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌｓ．Ｔｒａｎｓｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ（２０２０）１０： ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１３９８－０２０－００８８６－３．
５７．Ｄｅｆｉｌｉｐｐｉｓ ＡＰ，ｅｔ ａｌ．Ｏｍｅｇａ－３ Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｆｏｒ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒ Ｔｒｅａｔ Ｏｐｔｉｏｎｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ（２０１０）１２：３６５－３８０．
５８．Ｃａｌｄｅｒ ＰＣ，Ｄｅｃｋｅｌｂａｕｍ ＲＪ．Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｆｉｓｈ ｏｉｌ ｉｎ ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚｅｄ ａｄｕｌｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ： ｒｅｖｉｅｗｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ Ｍｅｔａｂ Ｃａｒｅ（２０１３）１６：１１９－１２３．

【表1】

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3】

【図4】

【国際調査報告】