特表 2023-552462 半減期延長組成物および方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-12-15

(54)【発明の名称】半減期延長組成物および方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20231208BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20231208BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 7/06 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 7/08 20060101ALI20231208BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231208BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/13

C12N15/12

C07K19/00

C07K16/46

C07K16/28

C07K16/30

C07K7/06

C07K7/08

A61K39/395 D

A61K39/395 N

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023534636

(86)(22)【出願日】2021-12-07

(85)【翻訳文提出日】2023-08-07

(86)【国際出願番号】 US2021062238

(87)【国際公開番号】W WO2022125566

(87)【国際公開日】2022-06-16

(31)【優先権主張番号】63/122,818

(32)【優先日】2020-12-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523168825

【氏名又は名称】ジャナックス セラピューティクス，インク．

(74)【代理人】

【識別番号】110003797

【氏名又は名称】弁理士法人清原国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】キャンベル，デイビッド

(72)【発明者】

【氏名】ディライモンド，トーマス アール．

(72)【発明者】

【氏名】バット，ラメシュ

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA15

4H045BA16

4H045BA41

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

半減期延長抗体または抗体フラグメントを含む、ポリペプチドおよびポリペプチド複合体が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、半減期延長抗体または抗体フラグメントは単一ドメイン抗体である。
【選択図】図１２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長抗体（Ｈ_１）または抗体フラグメントを含む、単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体であって、Ｈ_１の前記ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、前記ＣＤＲは、前記ＨＣ－ＣＤＲ１、前記ＨＣ－ＣＤＲ２、または前記ＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む、単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項2】

Ｈ_１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１の前記ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項3】

Ｈ_１の前記抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体、単鎖可変フラグメント、Ｆａｂ、またはＦａｂ’を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項4】

前記Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、前記単一ドメイン抗体を含む、請求項３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項5】

Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項6】

Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項7】

Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項8】

Ｈ_１は、配列番号４によるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項9】

Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項10】

Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項11】

Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の前記少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項12】

Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の前記少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項13】

Ｈ_１は、式Ｉ：
Ａ_１－Ｌ_１－Ｐ_１－Ｈ_１（式Ｉ）
による構成において腫瘍特異的プロテアーゼの基質である切断可能なリンカー（Ｌ_１）を介して、第１の標的抗原への第１の抗原認識分子（Ａ_１）の結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結される、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項14】

Ａ_１は、第２の抗原認識分子（Ａ_２）にさらに連結される、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項15】

前記ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、式Ｉａ：
Ｐ_２－Ｌ_２－Ａ_２－Ａ_１－Ｌ_１－Ｐ_１－Ｈ_１（式Ｉａ）
によるものであり、
式中、Ｐ_２は、第２の標的抗原へのＡ_２の結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、Ａ_２をＰ_２に接続する第２の切断可能なリンカーを含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である、請求項１４に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項16】

Ｈ_１は、Ｈ_１をＰ_１に接続するリンカー部分（Ｌ_３）を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項17】

Ｌ_３は、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項18】

Ｌ_３は、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項19】

Ｌ_３は、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項20】

Ｌ_３は、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項21】

Ｌ_３は、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１６に記載の単離されたポリペプチド。

【請求項22】

Ｌ_３は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である、請求項１６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項23】

Ｌ_３は、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１９）を含む、請求項２２に記載の単離されたポリペプチド。

【請求項24】

Ａ_１は、抗体または抗体フラグメントを含む、請求項１４に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項25】

Ａ_１は、ヒトもしくはヒト化の抗体または抗体フラグメントを含む、請求項２４に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項26】

Ｌ_１は、Ａ_１の前記抗体または抗体フラグメントのＮ末端に結合される、請求項２４に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項27】

Ａ_２は、Ａ_１の前記抗体または抗体フラグメントのＮ末端に結合される、請求項２４に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項28】

Ｌ_１は、Ａ_１の前記抗体または抗体フラグメントのＣ末端に結合される、請求項２４に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項29】

Ａ_２は、Ａ_１の前記抗体または抗体フラグメントのＣ末端に結合される、請求項２４に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項30】

Ａ_１の前記抗体または抗体フラグメントは、単鎖可変フラグメント、単一ドメイン抗体、またはＦａｂフラグメントを含む、請求項２４に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項31】

Ａ_１は、前記単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項３０に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項32】

前記ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドおよびｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドを含む、請求項３１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項33】

Ａ_１は、前記単一ドメイン抗体である、請求項３０に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項34】

Ａ_１の前記抗体またはその抗体フラグメントは、ラクダ科動物由来の単一ドメイン抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、または可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む、請求項３０に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項35】

前記第１の標的抗原は、エフェクター細胞抗原を含む、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項36】

前記第１の標的抗原はＣＤ３である、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項37】

Ａ_１は、抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項38】

Ａ_１は、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対して１μＭ以下のＫＤ結合を有する抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項39】

Ａ_１は、それぞれがヒトＣＤ３に特異的に結合できる可変軽鎖および可変重鎖を含む、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項40】

Ａ_１は、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビジリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＳＰ３４、Ｘ３５、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ－Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆ１１１－４０９、ＣＬＢ－Ｔ３．４．２、ＴＲ－６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ－Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ－１４１、ＸＩＩＩ－４６、ＸＩＩＩ－８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２－８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２－４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ－Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、ＵＣＨＴ－１、ＷＴ－３１、１５８６５、１５８６５ｖ１２、１５８６５ｖ１６、および１５８６５ｖ１９からなる群から選択される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項41】

式Ｉの前記ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_１が前記腫瘍特異的プロテアーゼによって切断されると、エフェクター細胞に結合する、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項42】

式Ｉの前記ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_１が前記腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、Ａ_１がエフェクター細胞に結合すると、エフェクター細胞に結合する、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項43】

前記エフェクター細胞はＴ細胞である、請求項４２に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項44】

Ａ_１は、前記エフェクター細胞上のＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドに結合する、請求項４３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項45】

前記ＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドは、ヒトＣＤ３εである、請求項４４に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項46】

Ａ_２は、抗体または抗体フラグメントを含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項47】

Ａ_２の前記抗体またはその抗体フラグメントは、単鎖可変フラグメント、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ’、またはＦａｂを含む、請求項４６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項48】

Ａ_２の前記抗体またはその抗体フラグメントは、ラクダ科動物由来の単一ドメイン抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、または可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む、請求項４６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項49】

Ａ_２の前記抗体またはその抗体フラグメントは、ヒト化またはヒトである、請求項４６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項50】

Ａ_２は、前記ＦａｂまたはＦａｂ’である、請求項４７に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項51】

前記ＦａｂまたはＦａｂ’は、（ａ）Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよび（ｂ）Ｆａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ａ_１は、ｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドとｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドとを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、請求項５０に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項52】

前記第２の標的抗原は腫瘍抗原を含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項53】

Ａ_２の前記抗体またはその抗体フラグメントは、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）結合ドメイン、メソテリン結合ドメイン、ＰＳＭＡ結合ドメイン、またはＴＲＯＰ２結合ドメインを含む、請求項４６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項54】

Ａ_２の前記抗体または抗体フラグメントは、ＰＳＭＡ結合ドメインまたはＴＲＯＰ２結合ドメインを含む、請求項４６に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項55】

Ｐ_１は、前記第１の標的抗原へのＡ_１の結合を損なう、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項56】

Ｐ_１は、イオン相互作用、静電的相互作用、疎水的相互作用、Ｐｉ－スタッキング相互作用、またはＨ結合相互作用、あるいはそれらの組合せを介してＡ_１に結合される、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項57】

Ｐ_１は、前記第１の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項58】

Ｐ_２は、前記第２の標的抗原へのＡ_２の結合を損なう、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項59】

Ｐ_２は、イオン相互作用、静電的相互作用、疎水的相互作用、Ｐｉ－スタッキング相互作用、およびＨ結合相互作用、またはそれらの組合せを介してＡ_２に結合される、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項60】

Ｐ_２は、抗原結合部位またはその近傍でＡ_２に結合される、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項61】

Ｐ_２は、前記第２の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項62】

Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１０アミノ酸長のペプチド配列を含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項63】

Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１０アミノ酸長および２０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項64】

Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１６アミノ酸長のペプチド配列を含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項65】

Ｐ_１またはＰ_２は、４０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項66】

Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも２つのシステインアミノ酸残基を含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項67】

Ｐ_１またはＰ_２は、環状ペプチドまたは直鎖ペプチドを含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項68】

Ｐ_１またはＰ_２は、環状ペプチドを含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項69】

Ｐ_１またはＰ_２は、直鎖ペプチドを含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項70】

Ｌ_１は、Ａ_１のＮ末端に結合される、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項71】

Ｌ_１は、Ａ_１のＣ末端に結合される、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項72】

Ｌ_２は、Ａ_２のＮ末端に結合される、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項73】

Ｌ_２は、Ａ_２のＣ末端に結合される、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項74】

Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項75】

Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項76】

Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項77】

Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項78】

Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項79】

Ｌ_１またはＬ_２は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎを含む式を有し、ｎは１～３の整数である（配列番号２０）、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項80】

Ｌ_１は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項81】

Ｐ_１は、Ｌ_１が前記腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、これによりＡ_１が前記第１の標的抗原に曝露されると、Ａ_１から非結合となる、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項82】

Ｐ_２は、Ｌ_２が前記腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、これによりＡ_２が前記第２の標的抗原に曝露されると、Ａ_２から非結合となる、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項83】

前記腫瘍特異的プロテアーゼは、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、およびアスパラギン酸プロテアーゼからなる群から選択される、請求項１３に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項84】

Ｌ_１またはＬ_２は、ウロキナーゼ切断可能アミノ酸配列、マトリプターゼ切断可能アミノ酸配列、マトリックスメタロプロテアーゼ切断可能アミノ酸配列、またはレグマイン切断可能アミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項85】

Ｌ_１またはＬ_２は、ＧＧＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２１）、ＧＧＧＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２２）、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、ＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）、ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号２８）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２９）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＳＰＬＧＬＡＧＳ（配列番号３０）、ＳＰＬＧＬＡＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３１）、ＳＰＬＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３２）、ＬＡＧＲＳＤＮＨＳＰＬＧＬＡＧＳ（配列番号３３）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＶＰＬＳＬＫＭＧ（配列番号３４）、およびＬＳＧＲＳＤＮＨＶＰＬＳＬＳＭＧ（配列番号３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項86】

Ｌ_１またはＬ_２は、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、およびＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項87】

Ａ_２の前記Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＣ末端に結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項88】

Ａ_２の前記Ｆａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＣ末端に結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項89】

Ａ_２の前記Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＮ末端に結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項90】

Ａ_２の前記Ｆａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＮ末端に結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項91】

Ａ_２の前記Ｆａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記ｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項92】

Ａ_２の前記Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記ｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項93】

Ａ_２の前記Ｆａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記ｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項94】

Ａ_２の前記Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記ｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項95】

Ａ_２の前記Ｆａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記ｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２の前記Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドに結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項96】

Ａ_２の前記Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記ｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２の前記Ｆａｂ重鎖ポリペプチドに結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項97】

Ａ_２の前記Ｆａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記ｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２の前記Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドに結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項98】

Ａ_２の前記Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の前記ｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２の前記Ｆａｂ重鎖ポリペプチドに結合される、請求項５１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体。

【請求項99】

（ｉ）請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体、および
（ｉｉ）薬学的に許容可能な賦形剤
を含む医薬組成物。

【請求項100】

請求項１に記載の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体をコードする、単離された組換え核酸分子。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２０年１２月８日に出願された米国仮特許出願第６３／１２２，８１８号の利益を主張し、その全体は参照によって本明細書に援用される。

【0002】

配列表
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体は参照によって本明細書に援用される。２０２１年１１月３０日に作成された上記ＡＳＣＩＩのコピーは、５２４２６－７３１＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、３９，１６９バイトのサイズである。

【発明の概要】

【0003】

相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長抗体または抗体フラグメント（Ｈ_１）を含む、単離されたポリペプチドあるいはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体、単鎖可変フラグメント、Ｆａｂ、またはＦａｂ’を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、式Ｉ：Ａ_１－Ｌ_１－Ｐ_１－Ｈ_１による構成において腫瘍特異的プロテアーゼの基質である切断可能なリンカー（Ｌ_１）を介して、第１の抗原認識分子（Ａ_１）の第１の標的抗原への結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結される。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、第２の抗原認識分子（Ａ_２）にさらに連結される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、式Ｉａ：Ｐ_２－Ｌ_２－Ａ_２－Ａ_１－Ｌ_１－Ｐ_１－Ｈ_１によるものであり、式中、Ｐ_２は、Ａ_２の第２の標的抗原への結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、Ａ_２をＰ_２に接続する第２の切断可能なリンカーを含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、Ｈ_１をＰ_１に接続するリンカー部分（Ｌ_３）を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_３は、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３は、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３は、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３は、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３は、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３は、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１９）を含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、ヒトもしくはヒト化抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントは、単鎖可変フラグメント、単一ドメイン抗体、またはＦａｂフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドおよびｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、Ａ_１の抗体またはその抗体フラグメントは、ラクダ科動物由来の単一ドメイン抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、または可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的抗原はエフェクター細胞抗原を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的抗原はＣＤ３である。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対して１μＭ以下のＫＤ結合を有する抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、それぞれがヒトＣＤ３に特異的に結合できる可変軽鎖および可変重鎖を含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビジリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＳＰ３４、Ｘ３５、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ－Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆ１１１－４０９、ＣＬＢ－Ｔ３．４．２、ＴＲ－６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ－Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ－１４１、ＸＩＩＩ－４６、ＸＩＩＩ－８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２－８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２－４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ－Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、ＵＣＨＴ－１、ＷＴ－３１、１５８６５、１５８６５ｖ１２、１５８６５ｖ１６、および１５８６５ｖ１９からなる群から選択される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、式Ｉのポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_１が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断されると、エフェクター細胞に結合する。いくつかの実施形態では、式Ｉのポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_１が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、Ａ_１がエフェクター細胞に結合すると、エフェクター細胞に結合する。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、エフェクター細胞上のＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドはヒトＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、単鎖可変フラグメント、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ’、またはＦａｂを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、ラクダ科動物由来の単一ドメイン抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、または可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、ヒト化またはヒトである。いくつかの実施形態では、Ａ_２はＦａｂまたはＦａｂ’である。いくつかの実施形態では、ＦａｂまたはＦａｂ’は、（ａ）Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよび（ｂ）Ｆａｂ重鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第２の標的抗原は腫瘍抗原を含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体または抗体フラグメントは、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体または抗体フラグメントは、メソテリン結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原へのＡ_１の結合を損なう。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、イオン相互作用、静電的相互作用、疎水的相互作用、Ｐｉ－スタッキング相互作用、およびＨ結合相互作用、またはそれらの組合せを介してＡ_１に結合される。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原へのＡ_２の結合を損なう。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、イオン相互作用、静電的相互作用、疎水的相互作用、Ｐｉ－スタッキング相互作用、およびＨ結合相互作用、またはそれらの組合せを介してＡ_２に結合される。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、抗原結合部位またはその近傍でＡ_２に結合される。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１０アミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１０アミノ酸長および２０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１６アミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は、４０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は少なくとも２つのシステインアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は環状ペプチドまたは直鎖ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は環状ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は直鎖ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_１はＡ_１のＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ｌ_１はＡ_１のＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ｌ_２はＡ_２のＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ｌ_２はＡ_２のＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列で
ある。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎを含む式を有し、ｎは１～３の整数である（配列番号２０）。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、Ｌ_１が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、これによりＡ_１が第１の標的抗原に曝露されると、Ａ_１から非結合となる。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、Ｌ_２が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、これによりＡ_２が第２の標的抗原に曝露されると、Ａ_２から非結合となる。いくつかの実施形態では、腫瘍特異的プロテアーゼは、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、およびアスパラギン酸プロテアーゼからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、ウロキナーゼ切断可能アミノ酸配列、マトリプターゼ切断可能アミノ酸配列、マトリックスメタロプロテアーゼ切断可能アミノ酸配列、またはレグマイン切断可能アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、ＧＧＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２１）、ＧＧＧＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２２）、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、ＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）、ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号２８）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２９）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＳＰＬＧＬＡＧＳ（配列番号３０）、ＳＰＬＧＬＡＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３１）、ＳＰＬＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３２）、ＬＡＧＲＳＤＮＨＳＰＬＧＬＡＧＳ（配列番号３３）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＶＰＬＳＬＫＭＧ（配列番号３４）、およびＬＳＧＲＳＤＮＨＶＰＬＳＬＳＭＧ（配列番号３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、およびＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドに結合される。

【0004】

（ｉ）前述の実施形態のいずれか１つのポリペプチドまたはポリペプチド複合体、および（ｉｉ）薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物が本明細書に開示される。

【0005】

前述の実施形態のいずれか１つのポリペプチドまたはポリペプチド複合体をコードする、単離された組換え核酸分子が本明細書に開示される。

【0006】

式ＩＩ：Ｌ_１ａ－Ｐ_１ａ－Ｈ_１ａによる単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、式中、Ｌ_１ａは、非切断時に第１の標的抗原と結合する第１の抗原認識分子にＰ_１ａを接続する、腫瘍特異的プロテアーゼに切断されたリンカー部分を含み、Ｐ_１ａは、Ｌ_１ａ非切断時に、第１の標的抗原への第１の抗原認識分子の結合を損なうペプチドを含み、Ｈ_１ａは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長分子を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体、単鎖可変フラグメント、Ｆａｂ、またはＦａｂ’を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４によるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｌ_１ａ非切断時、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原への第１の抗原認識分子の結合を損なう。いくつかの実施形態では、第１の抗原認識分子は、抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞抗原は抗ＣＤ３エフェクター細胞抗原である。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、少なくとも１０アミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、少なくとも１０アミノ酸長および２０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、少なくとも１６アミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、４０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、少なくとも２つのシステインアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは環状ペプチドまたは直鎖ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは環状ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは直鎖ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、Ｈ_１ａをＰ_１ａに接続するリンカー部分（Ｌ_３ａ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_３ａは、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３ａは、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３ａは、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３ａは、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３ａは、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３ａは、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３ａは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１９）によるアミノ酸配列を含む。

【図面の簡単な説明】

【0007】

本発明の新規な特徴は、とりわけ添付の特許請求の範囲とともに説明される。本発明の特徴と利点をより良く理解するには、本発明の原理が用いられる例示的な実施形態を説明する以下の詳細な説明と添付図面とを参照されたい。

【0008】

【図1A】単一ドメイン抗体のウシ血清アルブミンへの結合曲線を例示する。

【図1B】単一ドメイン抗体のマウス血清アルブミンへの結合曲線を例示する。

【図1C】単一ドメイン抗体のカニクイザル血清アルブミンへの結合曲線を例示する。

【図1D】単一ドメイン抗体のヒト血清アルブミンへの結合曲線を例示する。

【図2A】ｐＨ７．４でのＨＥ－１抗アルブミンの滴定データを例示する。

【図2B】ｐＨ５．５でのＨＥ－１抗アルブミンの滴定データを例示する。

【図3A】ｐＨ７．４でのカニクイザル血清アルブミンに結合する単一ドメイン抗体の滴定データを例示する。

【図3B】ｐＨ７．４でのヒト血清アルブミンに結合する単一ドメイン抗体の滴定データを例示する。

【図3C】ｐＨ５．５でのカニクイザル血清アルブミンに結合する単一ドメイン抗体の滴定データを例示する。

【図3D】ｐＨ５．５でのヒト血清アルブミンに結合する単一ドメイン抗体の滴定データを例示する。

【図4】ＦｃＲｎ認識を遮断しない単一ドメイン抗体のヒト血清アルブミンへの結合データを例示する。

【図5】ＥＬＩＳＡによって測定された、ポリペプチド複合体ＰＣ１およびＰＣ２のＰＳＭＡへの結合データを例示する。

【図6】ＥＬＩＳＡによって測定された、ポリペプチド複合体ＰＣ１およびＰＣ２のＣＤ３への結合データを例示する。

【図7】ＣＤ８＋ Ｔ細胞の存在下で、ポリペプチド複合体ＰＣ１およびＰＣ２によって媒介される２２Ｒｖ１腫瘍細胞の死滅を例示する。

【図8】単回ＩＶボーラス注射後のカニクイザルにおけるポリペプチド複合体ＰＣ１の薬物動態データを例示する。

【図9】単回ＩＶボーラス注射後のカニクイザルにおけるポリペプチド複合体ＰＣ２の薬物動態データを例示する。

【図10】ＥＬＩＳＡによって測定された、ポリペプチド複合体ＰＣ１およびＰＣ４のＴＲＯＰ２への結合データを例示する。

【図11】ＥＬＩＳＡによって測定された、ＣＤ３に結合するポリペプチド複合体ＰＣ１およびＰＣ４の結合データを例示する。

【図12】ＣＤ８＋ Ｔ細胞の存在下で、ポリペプチド複合体ＰＣ３およびＰＣ４によって媒介されるＨ２９２腫瘍細胞の死滅を例示する。

【図13】単回ＩＶボーラス注射後のカニクイザルにおけるポリペプチド複合体ＰＣ３の薬物動態データを例示する。

【図14】単回ＩＶボーラス注射後のカニクイザルにおけるポリペプチド複合体ＰＣ４の薬物動態データを例示する。

【発明を実施するための形態】

【0009】

抗体、およびＴ細胞エンゲージャーなどの二重特異性または多重特異性抗体などのタンパク質ベースの治療は、様々な疾患および障害に有効であることが証明されている。任意の治療と同様に、疾患組織中ではタンパク質ベースの治療の活性を維持しながら、健康な組織中ではタンパク質ベースの治療のオフターゲット効果を最小限に抑える必要がある。１つのそのような方策は、タンパク質ベースの治療上の必要な結合部位がタンパク質ベースの治療に連結されたペプチドで遮断され、これによって、健康な組織中にある場合に、タンパク質ベースの治療がその標的抗原に結合するかまたは相互作用するのを防ぐ、タンパク質ベースの治療の不活性の形態を作製することである。所望の疾患状態の微小環境中のタンパク質ベースの治療の活性化のために、ペプチドは、疾患状態の微小環境に特異的なプロテアーゼによる切断が可能であるリンカーを用いてタンパク質ベースの治療に連結されるる。その後、疾患状態の微小環境中にある場合、ペプチドはタンパク質ベースの治療から放出される。

【0010】

タンパク質ベースの治療の薬物動態特性を改善するために、半減期延長分子が治療に加えられる。タンパク質ベースの治療に半減期延長分子を加えるための１つのそのような位置は、健康な組織中にある場合に、タンパク質ベースの治療がその標的抗原に結合するかまたは相互作用するのを遮断するペプチドである。ペプチドが疾患状態の微小環境で切断される場合、半減期延長分子もタンパク質ベースの治療から放出される。

【0011】

相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長抗体または抗体フラグメント（Ｈ_１）を含む、単離されたポリペプチドあるいはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、半減期延長抗体または抗体フラグメント（Ｈ_１）を含む単離されたポリペプチドあるいはポリペプチド複合体は、癌の処置を必要とする対象の癌を処置する方法の中で使用される。いくつかの実施形態では、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長抗体または抗体フラグメント（Ｈ_１）を含む単離されたポリペプチドあるいはポリペプチドの複合体を、投与を必要とする対象に投与する工程を含む、癌を処置する方法であり、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、癌はＥＧＦＲを発現する細胞を有する。いくつかの例では、癌は固形腫瘍癌である。いくつかの実施形態では、癌は、肺癌、乳癌（例えば、ＨＥＲ２＋；ＥＲ／ＰＲ＋；ＴＮＢＣ）、子宮頸癌、卵巣癌、大腸癌、膵臓癌、または胃癌である。

【0013】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも２つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも３つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも２つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも３つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４によるアミノ酸配列を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。

【0020】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0021】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0022】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0023】

相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長抗体または抗体フラグメント（Ｈ_１）を含む、単離されたポリペプチドあるいはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、半減期延長抗体または抗体フラグメント（Ｈ_１）を含む単離されたポリペプチドあるいはポリペプチド複合体は、癌の処置を必要とする対象の癌を処置する方法の中で使用される。いくつかの実施形態では、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長抗体または抗体フラグメント（Ｈ_１）を含む単離されたポリペプチドあるいはポリペプチドの複合体を、投与を必要とする対象に投与する工程を含む、癌を処置する方法であり、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、癌はＥＧＦＲを発現する細胞を有する。いくつかの例では、癌は固形腫瘍癌である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌、乳癌（例えば、ＨＥＲ２＋；ＥＲ／ＰＲ＋；ＴＮＢＣ）、子宮頸癌、卵巣癌、大腸癌、膵臓癌、または胃癌である。

【0025】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも２つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0026】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも３つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0027】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0028】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含みＨ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも２つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0029】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも３つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0030】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６によるアミノ酸配列を含む。

【0031】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。

【0032】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0033】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0034】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0035】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体、単鎖可変フラグメント、Ｆａｂ、またはＦａｂ’を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、Ｆａｂを含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、Ｆａｂ’を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、ｓｃＦｖを含む。

【0036】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、ヒト血清アルブミン、カニクイザル血清アルブミン、およびマウス血清アルブミンから選択される血清アルブミンに結合する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、同等の結合親和性（Ｋｄ）を有するヒト血清アルブミンおよびカニクイザル血清アルブミンに結合する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、ヒトおよびカニクイザルの血清アルブミンに対する上記タンパク質の結合親和性（Ｋｄ）よりも約１．５倍～約２０倍弱い結合親和性（Ｋｄ）を有するマウス血清アルブミンに結合する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、約１ｎＭ～約１００ｎＭの間のヒトＫｄ（ｈＫｄ）を有するヒト血清アルブミンに結合し、１ｎＭ～１００ｎＭの間のカニクイザルＫｄ（ｃＫｄ）を有するカニクイザル血清アルブミンに結合する。いくつかの実施形態では、Ｈ１のｈＫｄおよびｃＫｄは、１ｎＭ～約５ｎＭの間、または約５ｎＭ～約１０ｎＭの間である。いくつかの実施形態では、Ｈ１のｈＫｄおよびｃＫｄは、約１ｎＭ～約２ｎＭ、約２ｎＭ～約３ｎＭ、約３ｎＭ～約４ｎＭ、約４ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約６ｎＭ、約６ｎＭ～約７ｎＭ、約７ｎＭ～約８ｎＭ、約８ｎＭ～約９ｎＭ、または約９ｎＭ～約１０ｎＭの間である。いくつかの実施形態では、Ｈ_１のｈＫｄとｃＫｄとの間の比率（ｈＫｄ：ｃＫｄ）は、約２０：１～約１：２に及ぶ。

【0037】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１タンパク質は、少なくとも１２時間、少なくとも２０時間、少なくとも２５時間、少なくとも３０時間、少なくとも３５時間、少なくとも４０時間、少なくとも４５時間、少なくとも５０時間、または少なくとも１００時間の消失半減期を含む。

【0038】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１の軽鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４軽鎖の可変ドメインを含む。

【0039】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、式Ｉ：
Ａ_１－Ｌ_１－Ｐ_１－Ｈ_１（式Ｉ）
による構成において腫瘍特異的プロテアーゼの基質である切断可能なリンカー（Ｌ_１）を介して、第１の抗原認識分子（Ａ_１）の第１の標的抗原への結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結される。

【0040】

いくつかの実施形態では、Ａ_１は、第２の抗原認識分子（Ａ_２）にさらに連結される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、式Ｉａ：
Ｐ_２－Ｌ_２－Ａ_２－Ａ_１－Ｌ_１－Ｐ_１－Ｈ_１（式Ｉａ）
によるものであり、式中、Ｐ_２は、Ａ_２の第２の標的抗原への結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、Ａ_２をＰ_２に接続する第２の切断可能なリンカーを含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である。

【0041】

いくつかの実施形態では、式ＩＩ：
Ｌ_１ａ－Ｐ_１ａ－Ｈ_１ａ（式ＩＩ）
によるポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、
式中、Ｌ_１ａは、非切断時に第１の標的抗原と結合する第１の抗原認識分子にＰ_１ａを接続する、腫瘍特異的プロテアーゼに切断されたリンカー部分を含み、Ｐ_１ａは、Ｌ_１ａ非切断時に、第１の標的抗原への第１の抗原認識分子の結合を損なうペプチドを含み、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長分子を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0042】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも２つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0043】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも３つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0044】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0045】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも２つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0046】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも３つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0047】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４によるアミノ酸配列を含む。

【0048】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。

【0049】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0050】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0051】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0052】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも２つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0053】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも３つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0054】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0055】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも２つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0056】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも３つに１個のアミノ酸修飾を含む。

【0057】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６によるアミノ酸配列を含む。

【0058】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。

【0059】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0060】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１１５個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0061】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0062】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体、単鎖可変フラグメント、Ｆａｂ、またはＦａｂ’を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの抗体または抗体フラグメントは、Ｆａｂを含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの抗体または抗体フラグメントは、Ｆａｂ’を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの抗体または抗体フラグメントは、ｓｃＦｖを含む。

【0063】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの抗体または抗体フラグメントは、重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの抗体または抗体フラグメントは、軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａの軽鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４軽鎖の可変ドメインを含む。

【0064】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、ヒト血清アルブミン、カニクイザル血清アルブミン、およびマウス血清アルブミンから選択される血清アルブミンに結合する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、同等の結合親和性（Ｋｄ）を有するヒト血清アルブミンおよびカニクイザル血清アルブミンに結合する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、ヒトおよびカニクイザルの血清アルブミンに対する上記タンパク質の結合親和性（Ｋｄ）よりも約１．５倍～約２０倍弱い結合親和性（Ｋｄ）を有するマウス血清アルブミンに結合する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、約１ｎＭ～約１００ｎＭの間のヒトＫｄ（ｈＫｄ）を有するヒト血清アルブミンに結合し、１ｎＭ～１００ｎＭの間のカニクイザルＫｄ（ｃＫｄ）を有するカニクイザル血清アルブミンに結合する。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａのｈＫｄおよびｃＫｄは、１ｎＭ～約５ｎＭの間、または約５ｎＭ～約１０ｎＭの間である。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａのｈＫｄおよびｃＫｄは、約１ｎＭ～約２ｎＭ、約２ｎＭ～約３ｎＭ、約３ｎＭ～約４ｎＭ、約４ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約６ｎＭ、約６ｎＭ～約７ｎＭ、約７ｎＭ～約８ｎＭ、約８ｎＭ～約９ｎＭ、または約９ｎＭ～約１０ｎＭの間である。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａのｈＫｄとｃＫｄとの間の比率（ｈＫｄ：ｃＫｄ）は、約２０：１～約１：２に及ぶ。

【0065】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａタンパク質は、少なくとも１２時間、少なくとも２０時間、少なくとも２５時間、少なくとも３０時間、少なくとも３５時間、少なくとも４０時間、少なくとも４５時間、少なくとも５０時間、または少なくとも１００時間の消失半減期を含む。

【0066】

いくつかの実施形態では、Ｈ_１またはＨ_１ａは、修飾されたアミノ酸もしくは非天然アミノ酸、または修飾された非天然アミノ酸、あるいはその組合せを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたアミノ酸または修飾された非天然アミノ酸は、翻訳後修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１またはＨ_１ａは、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合の架橋の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アミノ酸のタンパク質への転移ＲＮＡ媒介性の付加、例えば、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）、およびユビキチン化を含む修飾を含んでいるが、これらに限定されない。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、および末端を含むいかなる場所でＨ_１またはＨ_１ａに対してなされる。

【0067】

【表1】

【0068】

リンカー部分（Ｌ_３またはＬ４）
いくつかの実施形態では、Ｈ_１は、Ｈ_１をＰ_１に接続するリンカー部分（Ｌ５）を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ_１ａは、Ｈ_１ａをＰ_１ａに接続するリンカー部分（Ｌ_３ａ）を含む。

【0069】

いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0070】

いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ（配列番号２０）、（ＧＳ）_ｎ（配列番号３６）、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号３７）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３８）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３９）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号４０）からなる群から選択される式をＬ_３ａ有し、ｎは１～３の整数である。

【0071】

いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（Ｇ_２Ｓ）_ｎの式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＳ）_ｎの式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。

【0072】

いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（Ｇ_２Ｓ）_ｎの式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＳ）_ｎの式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）の式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）の式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）の式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）の式を有し、ｎは１の整数である。

【0073】

いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（Ｇ_２Ｓ）_ｎ（配列番号２０）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＳ）_ｎ（配列番号３６）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号３７）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３８）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３９）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_３またはＬ_３ａは（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号４０）の式を有し、ｎは１～３の整数である。

【0074】

第１の抗原分子認識（Ａ_１）
いくつかの実施形態では、Ａ_１は、抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、ヒトもしくはヒト化抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、抗体または抗体フラグメントは、単鎖可変フラグメント、単一ドメイン抗体、またはＦａｂフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドおよびｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗体フラグメントは、ラクダ科動物由来の単一ドメイン抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、または可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む。

【0075】

いくつかの実施形態では、第１の標的抗原はエフェクター細胞抗原を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的抗原は分化抗原群３（ＣＤ３）である。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対して１μＭ以下のＫＤ結合を有する抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、それぞれがヒトＣＤ３に特異的に結合できる可変軽鎖および可変重鎖を含む。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビジリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＳＰ３４、Ｘ３５、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ－Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆ１１１－４０９、ＣＬＢ－Ｔ３．４．２、ＴＲ－６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ－Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ－１４１、ＸＩＩＩ－４６、ＸＩＩＩ－８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２－８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２－４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ－Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、ＵＣＨＴ－１、ＷＴ－３１、１５８６５、１５８６５ｖ１２、１５８６５ｖ１６、および１５８６５ｖ１９からなる群から選択される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、式Ｉのポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_１が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断されると、エフェクター細胞に結合する。いくつかの実施形態では、式Ｉのポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_１が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、Ａ_１がエフェクター細胞に結合すると、エフェクター細胞に結合する。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、エフェクター細胞上のＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドはヒトＣＤ３εである。

【0076】

いくつかの実施形態では、第１の標的抗原は腫瘍抗原を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的抗原は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、メソテリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、または腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質２（ＴＲＯＰ２）である。いくつかの実施形態では、Ａ_１、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、ヒト化またはヒトである。いくつかの実施形態では、Ａ_１はＦａｂまたはＦａｂ’である。いくつかの実施形態では、Ａ_１は、ＦａｂまたはＦａｂ’が（ａ）Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよび（ｂ）Ｆａｂ重鎖ポリペプチドを含むものである。

【0077】

第２の抗原認識分子（Ａ_２）
いくつかの実施形態では、Ａ_２は、抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、単鎖可変フラグメント、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ’、またはＦａｂを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、ラクダ科動物由来の単一ドメイン抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、ヒト化またはヒトである。いくつかの実施形態では、ＦａｂまたはＦａｂ’である。いくつかの実施形態では、ＦａｂまたはＦａｂ’は、（ａ）Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよび（ｂ）Ｆａｂ重鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第２の標的抗原は腫瘍抗原を含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、メソテリン結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、ＰＳＭＡ結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、ＴＲＯＰ２結合ドメインを含む。

【0078】

いくつかの実施形態では、第２の標的抗原はエフェクター細胞抗原を含む。いくつかの実施形態では、第２の標的抗原はＣＤ３である。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対して１μＭ以下のＫＤ結合を有する抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、それぞれがヒトＣＤ３に特異的に結合できる可変軽鎖および可変重鎖を含む。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビジリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＳＰ３４、Ｘ３５、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ－Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆ１１１－４０９、ＣＬＢ－Ｔ３．４．２、ＴＲ－６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ－Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ－１４１、ＸＩＩＩ－４６、ＸＩＩＩ－８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２－８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２－４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ－Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、ＵＣＨＴ－１、ＷＴ－３１、１５８６５、１５８６５ｖ１２、１５８６５ｖ１６、および１５８６５ｖ１９からなる群から選択される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、式Ｉａのポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_２が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断されると、エフェクター細胞に結合する。いくつかの実施形態では、式Ｉのポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_２が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、Ａ_２がエフェクター細胞に結合すると、エフェクター細胞に結合する。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ａ_２は、エフェクター細胞上のＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドはヒトＣＤ３εである。

【0079】

ペプチド（Ｐ_１、Ｐ_１ａ、またはＰ_２）
いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原へのＡ_１の結合を損なう。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、イオン相互作用、静電的相互作用、疎水的相互作用、Ｐｉ－スタッキング相互作用、およびＨ結合相互作用、またはそれらの組合せを介してＡ_１に結合される。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して７５％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して８０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して８５％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して９０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して９５％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して９８％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して９９％未満の配列相同性を有する。

【0080】

いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原へのＡ_２の結合を損なう。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、イオン相互作用、静電的相互作用、疎水的相互作用、Ｐｉ－スタッキング相互作用、およびＨ結合相互作用、またはそれらの組合せを介してＡ_２に結合される。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、抗原結合部位またはその近傍でＡ_２に結合される。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して７５％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して８０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して８５％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して９０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して９５％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して９８％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して９９％未満の配列相同性を有する。

【0081】

いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１０アミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１０アミノ酸長および２０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１６アミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は、４０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は少なくとも２つのシステインアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は環状ペプチドまたは直鎖ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は環状ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１またはＰ_２は直鎖ペプチドを含む。

【0082】

いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、少なくとも１０アミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、少なくとも１０アミノ酸長および２０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、少なくとも１６アミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、４０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、少なくとも２つのシステインアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは環状ペプチドまたは直鎖ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは環状ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは直鎖ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して７０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して７５％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して８０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して８５％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して９０％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して９５％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して９８％未満の配列相同性を有する。いくつかの実施形態では、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して９９％未満の配列相同性を有する。

【0083】

いくつかの実施形態では、Ｐ_１、Ｐ_２、またはＰ_１ａは、修飾されたアミノ酸もしくは非天然アミノ酸、または修飾された非天然アミノ酸、あるいはその組合せを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたアミノ酸または修飾された非天然アミノ酸は、翻訳後修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ_１、Ｐ_２、またはＰ_１ａは、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合の架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アミノ酸のタンパク質への転移ＲＮＡ媒介性の付加、例えば、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）、およびユビキチン化を含む修飾を含んでいるが、これらに限定されない。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、および末端を含むいかなる場所でＰ_１、Ｐ_２、またはＰ_１ａに対してなされる。

【0084】

いくつかの実施形態では、Ｐ_１、Ｐ_２、またはＰ_１ａは、アルブミンまたはアルブミンフラグメントを含まない。いくつかの実施形態では、Ｐ_１、Ｐ_２、またはＰ_１ａは、アルブミン結合ドメインを含まない。

【0085】

切断可能リンカー（Ｌ_１またはＬ_２）
いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0086】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ（配列番号２０）、（ＧＳ）_ｎ（配列番号３６）、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号３７）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３８）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３９）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号４０）からなる群から選択される式を有し、ｎは１～３の整数である。

【0087】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（Ｇ_２Ｓ）_ｎの式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＳ）_ｎの式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。

【0088】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（Ｇ_２Ｓ）_ｎの式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＳ）_ｎの式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）の式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）の式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）の式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）の式を有し、ｎは１の整数である。

【0089】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（Ｇ_２Ｓ）_ｎ（配列番号２０）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＳ）_ｎ（配列番号３６）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号３７）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３８）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３９）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号４０）の式を有し、ｎは１～３の整数である。

【0090】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１は腫瘍特異的プロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、腫瘍特異的プロテアーゼは、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、およびアスパラギン酸プロテアーゼからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、ウロキナーゼ切断可能アミノ酸配列、マトリプターゼ切断可能アミノ酸配列、マトリックスメタロプロテアーゼ切断可能アミノ酸配列、またはレグマイン切断可能アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、ＧＧＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２１）、ＧＧＧＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２２）、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、ＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）、ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号２８）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２９）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＳＰＬＧＬＡＧＳ（配列番号３０）、ＳＰＬＧＬＡＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３１）、ＳＰＬＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３２）、ＬＡＧＲＳＤＮＨＳＰＬＧＬＡＧＳ（配列番号３３）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＶＰＬＳＬＫＭＧ（配列番号３４）、およびＬＳＧＲＳＤＮＨＶＰＬＳＬＳＭＧ（配列番号３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、およびＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0091】

いくつかの実施形態では、Ｌ_２は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ（配列番号２０）、（ＧＳ）_ｎ（配列番号３６）、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号３７）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３８）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３９）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号４０）からなる群から選択される式を有し、ｎは１～３の整数である。

【0092】

いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（Ｇ_２Ｓ）_ｎの式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＳ）_ｎの式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）の式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。

【0093】

いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（Ｇ_２Ｓ）_ｎの式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＳ）_ｎの式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）の式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）の式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）の式を有し、ｎは１の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）の式を有し、ｎは１の整数である。

【0094】

いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（Ｇ_２Ｓ）_ｎ（配列番号２０）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＳ）_ｎ（配列番号３６）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号３７）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３８）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３９）の式を有し、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号４０）の式を有し、ｎは１～３の整数である。

【0095】

いくつかの実施形態では、Ｌ_２は腫瘍特異的プロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、腫瘍特異的プロテアーゼは、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、およびアスパラギン酸プロテアーゼからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は、ウロキナーゼ切断可能アミノ酸配列、マトリプターゼ切断可能アミノ酸配列、マトリックスメタロプロテアーゼ切断可能アミノ酸配列、またはレグマイン切断可能アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は、ＧＧＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２１）、ＧＧＧＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２２）、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、ＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）、ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号２８）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２９）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＳＰＬＧＬＡＧＳ（配列番号３０）、ＳＰＬＧＬＡＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３１）、ＳＰＬＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３２）、ＬＡＧＲＳＤＮＨＳＰＬＧＬＡＧＳ（配列番号３３）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＶＰＬＳＬＫＭＧ（配列番号３４）、およびＬＳＧＲＳＤＮＨＶＰＬＳＬＳＭＧ（配列番号３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_２は、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、およびＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0096】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、修飾されたアミノ酸もしくは非天然アミノ酸、または修飾された非天然アミノ酸、あるいはその組合せを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたアミノ酸または修飾された非天然アミノ酸は、翻訳後修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ_１またはＬ_２は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合の架橋の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アミノ酸のタンパク質への転移ＲＮＡ媒介性の付加、例えば、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）、およびユビキチン化を含む修飾を含んでいるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、修飾は、ペプチド骨格またはアミノ酸側鎖を含むいかなる場所でＬ_１またはＬ_２に対してなされる。

【0097】

構成
いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＣ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＮ末端に結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態では、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドに結合される。

【0098】

いくつかの実施形態では、構成１：

【0099】

【化1】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結され、Ｐ_１は、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分（Ｌ_１）でｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結され、Ｐ_１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む、単鎖可変フラグメントと、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂ重鎖ポリペプチドは、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインのＣ末端に連結され、Ｆａｂは、Ｐ_２およびＬ_２に連結され、Ｐ_２は、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドをＰ_２に接続するリンカー部分を含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である、Ｆａｂとを含む。

【0100】

いくつかの実施形態では、構成２：

【0101】

【化2】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチドに連結され、ペプチドは、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分でｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結され、ペプチドは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、単鎖可変フラグメントと、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチド鎖およびＦａｂ重鎖ポリペプチド鎖を含み、Ｆａｂ重鎖ポリペプチド鎖は、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインのＣ末端に連結される、Ｆａｂとを含む。

【0102】

いくつかの実施形態では、構成３：

【0103】

【化3】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結され、Ｐ_１は、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分でｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結され、Ｐ_１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、単鎖可変フラグメントと、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドは、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインのＣ末端に連結され、Ｆａｂは、Ｐ_２およびＬ_２に連結され、Ｐ_２は、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、Ｆａｂ重鎖ポリペプチドをＰ_２に接続するリンカー部分を含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である、Ｆａｂとを含む。

【0104】

いくつかの実施形態では、構成４：

【0105】

【化4】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチドにさらに連結され、ペプチドは、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分でｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結され、ペプチドは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、単鎖可変フラグメントと、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドは、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインのＣ末端に連結される、Ｆａｂとを含む。

【0106】

いくつかの実施形態では、構成５：

【0107】

【化5】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結され、Ｐ_１は、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分（Ｌ_１）でｓｃＦｖの重鎖可変ドメインのＮ末端に連結され、Ｐ_１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、単鎖可変フラグメントと、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂ重鎖ポリペプチドは、ｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインのＣ末端に連結され、Ｆａｂは、Ｐ_２およびＬ_２に連結され、Ｐ_２は、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドをＰ_２に接続するリンカー部分を含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である、Ｆａｂとを含む。

【0108】

いくつかの実施形態では、構成６：

【0109】

【化6】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチドに連結され、ペプチドは、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分でｓｃＦｖの重鎖可変ドメインに連結され、ペプチドは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、単鎖可変フラグメントと、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチド鎖およびＦａｂ重鎖ポリペプチド鎖を含み、Ｆａｂ重鎖ポリペプチド鎖は、ｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインのＣ末端に連結される、Ｆａｂとを含む。

【0110】

いくつかの実施形態では、構成７：

【0111】

【化7】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結され、Ｐ_１は、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分（Ｌ_１）でｓｃＦｖの重鎖可変ドメインのＮ末端に連結され、Ｐ_１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、単鎖可変フラグメントと、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドは、ｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインのＣ末端に連結され、Ｆａｂは、Ｐ_２およびＬ_２に連結され、Ｐ_２は、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、Ｆａｂ重鎖ポリペプチドをＰ_２に接続するリンカー部分を含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である、Ｆａｂとを含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、構成８：

【0113】

【化8】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチドにさらに連結され、ペプチドは、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分でｓｃＦｖの重鎖可変ドメインのＮ末端に連結され、ペプチドは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、単鎖可変フラグメントと、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチド鎖は、ｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインのＣ末端に連結される、Ｆａｂとを含む。

【0114】

いくつかの実施形態では、構成９：

【0115】

【化9】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂは、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結され、Ｐ_１は、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分（Ｌ_１）でＦａｂ軽鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、Ｐ_１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、Ｆａｂと、エフェクター細胞抗原に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含み、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインは、Ｆａｂ重鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、ｓｃＦｖは、Ｐ_２およびＬ_２に連結され、Ｐ_２は、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、ｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインをＰ_２に接続するリンカー部分を含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である、単鎖可変フラグメントとを含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、構成１０：

【0117】

【化10】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂは、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチドに連結され、ペプチドは、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分でＦａｂ軽鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、ペプチドは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、Ｆａｂと、エフェクター細胞抗原に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含み、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインは、Ｆａｂ重鎖ポリペプチドのＮ末端に連結される、単鎖可変フラグメントとを含む。

【0118】

いくつかの実施形態では、構成１１：

【0119】

【化11】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂは、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結され、Ｐ_１は、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分（Ｌ_１）でＦａｂ重鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、Ｐ_１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、Ｆａｂと、エフェクター細胞抗原に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含み、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、ｓｃＦｖは、Ｐ_２およびＬ_２にさらに連結され、Ｐ_２は、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、ｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインをＰ_２に接続するリンカー部分を含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である、単鎖可変フラグメントとを含む。

【0120】

いくつかの実施形態では、構成１２：

【0121】

【化12】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂは、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチドに連結され、ペプチドは、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分でＦａｂ重鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、ペプチドは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、Ｆａｂと、エフェクター細胞抗原に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含み、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドのＮ末端に連結される、単鎖可変フラグメントとを含む。

【0122】

いくつかの実施形態では、構成１３：

【0123】

【化13】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂは、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結され、Ｐ_１は、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分（Ｌ_１）でＦａｂ軽鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、Ｐ_１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、Ｆａｂと、エフェクター細胞抗原に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含み、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインは、Ｆａｂ重鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、ｓｃＦｖは、Ｐ_２およびＬ_２に連結され、Ｐ_２は、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインをＰ_２に接続するリンカー部分を含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である、単鎖可変フラグメントとを含む。

【0124】

いくつかの実施形態では、構成１４：

【0125】

【化14】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂは、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチドに連結され、ペプチドは、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分でＦａｂ軽鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、ペプチドは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、Ｆａｂと、エフェクター細胞抗原に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含み、ｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインは、Ｆａｂ重鎖ポリペプチドのＮ末端に連結される、単鎖可変フラグメントとを含む。

【0126】

いくつかの実施形態では、構成１５：

【0127】

【化15】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂは、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なう（Ｐ_１）に連結され、Ｐ_１は、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分（Ｌ_１）でＦａｂ重鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、Ｐ_１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、Ｆａｂと、エフェクター細胞抗原に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含み、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、ｓｃＦｖは、Ｐ_２およびＬ_２に連結され、Ｐ_２は、エフェクター細胞抗原へのｓｃＦｖの結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインをＰ_２に接続するリンカー部分を含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である、単鎖可変フラグメントとを含む。

【0128】

いくつかの実施形態では、構成１６：

【0129】

【化16】

による構造的な配置を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体が本明細書に開示され、ここで、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、腫瘍細胞抗原に結合するＦａｂであって、Ｆａｂは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよびＦａｂ重鎖ポリペプチドを含み、Ｆａｂは、腫瘍細胞抗原へのＦａｂの結合を損なうペプチドに連結され、ペプチドは、腫瘍特異的プロテアーゼの基質であるリンカー部分でＦａｂ重鎖ポリペプチドのＮ末端に連結され、ペプチドは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長単一ドメイン抗体（Ｈ_１）にさらに連結され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む、Ｆａｂと、エフェクター細胞抗原に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であって、ｓｃＦｖは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含み、ｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインは、Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドのＮ末端に連結される、単鎖可変フラグメントとを含む。

【0130】

ポリペプチドまたはポリペプチド複合体をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるポリペプチドまたはポリペプチド複合体をコードする単離された組換え核酸分子が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、抗体または抗体フラグメントを含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長抗体または抗体フラグメント（Ｈ_１）を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体をコードする単離された組換え核酸分子が本明細書に開示され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0132】

いくつかの実施形態では、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号４によるアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。

【0133】

いくつかの実施形態では、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列をコードし、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列をコードし、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、単離された核酸である。

【0134】

いくつかの実施形態では、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長抗体もしくは抗体フラグメント（Ｈ_１）を含むポリペプチドまたはポリペプチド複合体をコードする単離された組換え核酸分子が本明細書に開示され、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号５を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0135】

いくつかの実施形態では、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号６によるアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。

【0136】

いくつかの実施形態では、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列をコードする単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列をコードし、配列番号６の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、単離された核酸である。いくつかの実施形態では、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列をコードし、配列番号６の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、単離された核酸である。

【0137】

医薬組成物
いくつかの実施形態では、（ａ）本明細書に開示されるポリペプチドまたはポリペプチド複合体、および（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物が本明細書に開示される。

【0138】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、検出可能な標識、治療剤、または薬物動態学的修飾部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、蛍光標識、放射性標識、酵素、核酸プローブ、または造影剤を含む。

【0139】

対象への投与のために、本明細書に開示されるポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体または賦形剤とともに、医薬組成物で提供され得る。「薬学的に許容可能な担体」という用語は、限定されないが、成分の生物活性の有効性に干渉せず、および投与される患者に対して毒性ではない担体を含む。適切な医薬担体の例は、当該技術分野で周知であり、リン酸緩衝食塩水、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、様々なタイプの湿潤剤、無菌液などが挙げられる。このような担体は、従来の方法によって製剤化することができ、適切な用量で対象に投与することができる。好ましくは、組成物は無菌性である。これらの組成物は、防腐剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントも含有し得る。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤を含めることによって確実なものとすることができる。

【0140】

医薬組成物は、（所望の投与方法に応じて）任意の適切な形態であってよい。医薬組成物は、単位剤形で提供されてもよく、密封された容器で提供されてもよく、キットの一部分として提供されてもよい。そのようなキットは、使用説明書を含んでもよい。それは複数の上記単位剤形を含んでもよい。

【0141】

医薬組成物は、非経口経路（例えば、皮下、筋肉内、または静脈内）経路を含む、任意の適切な経路による投与に適合させることができる。そのような組成物は、例えば、無菌条件下で活性成分を担体または賦形剤と混合することによって、薬学の技術分野で知られている任意の方法によって調製することができる。

【0142】

本開示の物質の用量は、処置される疾患または障害、処置される個体の年齢および状態などに応じて、広範な限界の間で変化し得、最終的に医師が使用すべき適切な用量を決定する。

【0143】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチド（例えば、抗体とその結合フラグメント）は、とりわけ、化学合成によって、または組換え発現によって、ポリペプチド（例えば、抗体）の合成に役立つように当該技術分野で知られている任意の方法を使用して生成され、および、好ましくは組換え発現技術によって生成される。

【0144】

いくつかの例では、抗体またはその結合フラグメントは組換え発現され、抗体またはその結合フラグメントをコードする核酸は、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２に記載されるように）組み立てられ、これは、抗体をコードする配列の一部を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングとライゲーション、および、その後のＰＣＲによるライゲートされたオリゴヌクレオチドの増幅を含む。

【0145】

代替的に、抗体をコードする核酸分子は、配列の３’末端と５’末端へハイブリダイズすることができる合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、あるいは特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用してクローンを作ることによって、適切なソース（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、または免疫グロブリンを発現する任意の組織もしくは細胞から生成されたｃＤＮＡライブラリー）から任意選択的に生成される。

【0146】

いくつかの例では、抗体またはその結合フラグメントは、ポリクローナル抗体を産生するためにマウスなどの動物を免疫化することにより、または、より好ましくは、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７）によって記載されるように、または、Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２）、あるいはＣｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８５ ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６）によって記載されるように、モノクローナル抗体を産生することによって、任意選択的に生成される。代替的に、抗体の少なくともＦａｂ部分をコードするクローンは、特異的抗原に結合するＦＡｂフラグメントのクローンについてＦａｂ発現ライブラリー（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１に記載される）をスクリーニングすることにより、または抗体ライブラリー（Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４；Ｈａｎｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：４９３７を参照）をスクリーニングすることにより、任意選択的に得られる。

【0147】

いくつかの実施形態では、適切な生物学的活性のヒト抗体分子からの遺伝子と一緒に、適切な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子をスプライシングすることにより、「キメラ抗体」の産生のために開発された技術（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１－８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４－６０８；Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２－４５４）が使用される。キメラ抗体は、異なる部分が、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域、およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する動物種などの様々な動物種に由来する分子である。

【0148】

いくつかの実施形態では、一本鎖抗体の産生について記載された技術（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，６９４，７７８；Ｂｉｒｄ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；ａｎｄ Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４４－５４）は、一本鎖抗体を産生するために適合される。一本鎖抗体は、アミノ酸架橋によってＦｖ領域の重鎖および軽鎖のフラグメントを結合することによって形成され、結果として一本鎖ポリペプチドを生じさせる。大腸菌中の機能的なＦｖフラグメントの組み立てのための技術も任意選択で使用される（Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８－１０４１）。

【0149】

いくつかの実施形態では、抗体のヌクレオチド配列を含む発現ベクターまたは抗体のヌクレオチド配列は、従来の技術（例えば、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、および、リン酸カルシウム沈澱反応）によって宿主細胞に導入され、トランスフェクトされた細胞はその後、従来の技術によって培養されて、抗体を産生する。特定の実施形態では、抗体の発現は、構成的な、誘導可能な、または組織特異的なプロモーターによって調節される。

【0150】

いくつかの実施形態では、様々な宿主発現ベクター系が、本明細書に記載される抗体またはその結合フラグメントを発現するために利用される。そのような宿主発現系は、抗体のコード配列が生成され、その後精製されるビヒクルを表すだけでなく、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換されるか、またはトランスフェクトされるときに、抗体またはその結合フラグメントをｉｎ ｓｉｔｕで発現する細胞も表す。これらは、限定されないが、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、または抗体またはその結合フラグメントコード配列を含むコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、大腸菌と枯草菌）などの微生物、抗体またはその結合フラグメントコード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、サッカロミケス・ピキア）、抗体またはその結合フラグメントコード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系、組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））に感染した、あるいは、抗体またはその結合フラグメントコード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系、あるいは、哺乳動物細胞のゲノム（例えば、メタロチオネインプロモーター）、または、哺乳動物ウイルス（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）に由来するプロモーターを含む、組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨ、２９３、２９３Ｔ、３Ｔ３細胞）を含む。

【0151】

組換えタンパク質の長期的かつ高収率の生成のためには、安定した発現が好ましい。いくつかの例では、安定して抗体を発現する細胞株が任意選択で操作される。ウイルスの複製開始点を含む発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞は、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）および選択可能なマーカーによって制御されたＤＮＡで形質転換される。外来性ＤＮＡの導入後に、操作した細胞を富化培地で１～２日間成長させ、その後、選択培地に切り替える。組換えプラスミドにおける選択可能なマーカーは、選択に対する耐性を与え、細胞がプラスミドをその染色体に安定的に統合し、成長してフォーカスを形成することをできるようにし、フォーカスはクローン化されて細胞株へと拡大する。この方法は、抗体またはその結合フラグメントを発現する細胞株を操作するために有利に使用することができる。

【0152】

いくつかの例では、限定されないが、それぞれｔｋ細胞、ｈｇｐｒｔ細胞、またはａｐｒｔ細胞で利用される、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ １１：２２３）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，１９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０２）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２２：８１７）遺伝子を含む多くの選択系が使用される。同様に、代謝拮抗薬の耐性は、以下の遺伝子の選定基準として使用される：メトトレキサートに対する耐性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７；Ｏ’Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２７）、ミコフェノール酸に対する耐性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０７２）、アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を与えるｎｅｏ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８－５０５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３－５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；ａｎｄ Ｍｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１－２１７；Ｍａｙ １９９３，ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５－２１５）、およびヒグロマイシンに対する耐性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｇｅｎｅ ３０：１４７）。使用可能な組換えＤＮＡ技術の技術分野で一般的に知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；ａｎｄ ｉｎ Ｃｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ），１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ．；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１）に記載される。

【0153】

いくつかの例では、抗体の発現レベルは、ベクター増幅によって増加する（検討には、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤のレベルが増加すると、マーカー遺伝子のコピーの数が増加する。増幅領域が抗体のヌクレオチド配列に関連しているため、抗体の産生も増加する（Ｃｒｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３：２５７）。

【0154】

いくつかの例では、当該技術分野で知られている抗体の精製のための任意の方法は、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、とりわけ、プロテインＡの後の特異的な抗原への親和性、および、サイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差次的溶解性によって、またはタンパク質の精製のための他の標準的な技術によって使用される。

【0155】

発現ベクター
いくつかの実施形態では、ベクターは、真核生物または原核生物の供給源に由来するあらゆる適切なベクターを含む。場合によっては、ベクターは、細菌（例えば大腸菌）、昆虫、酵母（例えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、藻類、または哺乳動物の供給源から得られる。例示的な細菌ベクターは、ｐＡＣＹＣ１７７、ｐＡＳＫ７５、ｐＢＡＤベクター系、ｐＢＡＤＭベクター系、ｐＥＴベクター系、ｐＥＴＭベクター系、ｐＧＥＸベクター系、ｐＨＡＴ、ｐＨＡＴ２、ｐＭａｌ－ｃ２、ｐＭａｌ－Ｐ_２、ｐＱＥベクター系、ｐＲＳＥＴ Ａ、ｐＲＳＥＴ Ｂ、ｐＲＳＥＴ Ｃ、ｐＴｒｃＨｉｓ２系、ｐＺＡ３１－Ｌｕｃ、ｐＺＥ２１－ＭＣＳ－１、ｐＦＬＡＧ ＡＴＳ、ｐＦＬＡＧ ＣＴＳ、ｐＦＬＡＧ ＭＡＣ、ｐＦＬＡＧ Ｓｈｉｆｔ－１２ｃ、ｐＴＡＣ－ＭＡＴ－１、ｐＦＬＡＧ ＣＴＣ、またはｐＴＡＣ－ＭＡＴ－２を含む。

【0156】

例示的な昆虫ベクターは、ｐＦａｓｔＢａｃ１、ｐＦａｓｔＢａｃ ＤＵＡＬ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＥＴ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴａ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴｃ、ｐＦａｓｔＢａｃ Ｍ３０ａ、ｐＦａｓｔＢａｃｔ Ｍ３０ｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ、Ｍ３０ｃ、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１０、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１１、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１２、ＦＬＡＧベクター、例えば、ｐＰｏｌｈ－ＦＬＡＧ１またはｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ ２、あるいはＭＡＴベクター、例えば、ｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ１、またはｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ２を含む。

【0157】

場合によっては、酵母ベクターは、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１５ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１７ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）２４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＹＥＳ－ＤＥＳＴ５２ベクター、ｐＢＡＤ－ＤＥＳＴ４９ Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）デスティネーションベクター、ｐＡＯ８１５ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＦＬＤ１ Ｐｉｃｈｉ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター、ｐＧＡＰＺ Ａ、Ｂ、およびＣのＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター、ｐＰＩＣ３．５Ｋ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＰＩＣ６ Ａ、Ｂ、およびＣのＰｉｃｈｉａベクター、ｐＰＩＣ９Ｋ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＣＴ酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＮＴ Ａ、Ｂ、およびＣの酵母ベクター、またはｐＹＥＳ３／ＣＴ酵母ベクターを含む。

【0158】

例示的な藻類ベクターはｐＣｈｌａｍｙ－４ベクターまたはＭＣＳベクターを含む。

【0159】

哺乳動物ベクターの例は、一過性発現ベクターまたは安定した発現ベクターを含む。哺乳動物の一過性発現ベクターは、ｐＲＫ５、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ８、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ １９、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２３、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ２、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ６ａ，ｂ，ｃ、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ５．１、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ５ａ，ｂ，ｃ、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ７．１、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ２０、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２４、ｐＣＭＶ－ＦＬＡＧ－ＭＡＴ１、ｐＣＭＶ－ＦＬＡＧ－ＭＡＴ２、ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ３、またはｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ４を含み得る。哺乳動物の安定した発現ベクターは、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ３、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ９、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １３、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２１、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２５、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ４、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １０、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １４、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２２、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２６、ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ １、またはｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ２を含み得る。

【0160】

いくつかの例では、無細胞系は、細胞からの細胞質成分および／または核成分の混合物であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの核酸合成に使用される。場合によっては、無細胞系は原核細胞成分または真核細胞成分のいずれかを利用する。しばしば、核酸合成は、例えば、ショウジョウバエ細胞（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｃｅｌｌ）、ツメガエル卵子（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｅｇｇ）、またはＨｅＬａ細胞に基づいた無細胞系において得られる。例示的な無細胞系は、限定されないが、大腸菌Ｓ３０抽出物系、大腸菌Ｔ７ Ｓ３０系、またはＰＵＲＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）を含む。

【0161】

宿主細胞
いくつかの実施形態では、宿主細胞は、任意の適切な細胞、例えば、天然由来の細胞または遺伝子組換えされた細胞を含む。いくつかの例では、宿主細胞は産生宿主細胞である。いくつかの例では、宿主細胞は真核細胞である。他の例では、宿主細胞は原核細胞である。場合によっては、真核細胞は真菌（例えば、酵母菌）、動物細胞、または植物細胞を含む。場合によっては、原核細胞は細菌細胞である。細菌細胞の例はグラム陽性菌またはグラム陰性菌を含む。しばしば、グラム陰性菌は嫌気性、桿状、またはその両方である。

【0162】

いくつかの例では、グラム陽性菌は放線菌門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、またはテネリクテス門（Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ）を含む。場合によっては、グラム陰性菌は、アクウィフェクス門（Ａｑｕｉｆｉｃａｅ）、デイノコッカス－サーマス門（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ－Ｔｈｅｒｍｕｓ）、フィブロバクター門（Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒｅｓ）－クロロビウム門（Ｃｈｌｏｒｏｂｉ）／バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）（ＦＣＢ群）、フソバクテリウム門（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ゲンマティモナス門（Ｇｅｍｍａｔｉｍｏｎａｄｅｔｅｓ）、ニトロスピラ門（Ｎｉｔｒｏｓｐｉｒａｅ）、プランクトミケス門（Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ）－ベルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）／クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｅ）（ＰＶＣ群）、プロテオバクテリア（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、スピロヘータ門（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ）、またはシネルギステス門（Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｅｔｅｓ）を含む。他の細菌は、アシドバクテリウム門（Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）、緑色非硫黄細菌門（Ｃｈｌｏｒｏｆｌｅｘｉ）、クリシオゲネス門（Ｃｈｒｙｓｉｏｇｅｎｅｔｅｓ）、シアノバクテリア（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、デフェリバクター門（Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ）、ディクチオグロムス門（Ｄｉｃｔｙｏｇｌｏｍｉ）、サーモデスルフォバクテリア門（Ｔｈｅｒｍｏｄｅｓｕｌｆｏｂａｃｔｅｒｉａ）、またはテルモトガ門（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａｅ）であり得る。細菌細胞は大腸菌、ボツリヌス菌、または大腸菌であり得る。

【0163】

例示的な原核生物宿主細胞は、限定されないが、ＢＬ２１、Ｍａｃｈ１（商標）、ＤＨ１０Ｂ（商標）、ＴＯＰ１０、ＤＨ５α、ＤＨ１０Ｂａｃ（商標）、ＯｍｎｉＭａｘ（商標）、ＭｅｇａＸ（商標）、ＤＨ１２Ｓ（商標）、ＩＮＶ１１０、ＴＯＰ１０Ｆ’、ＩＮＶαＦ、ＴＯＰ１０／Ｐ３、ｃｃｄＢ Ｓｕｒｖｉｖａｌ、ＰＩＲ１、ＰＩＲ２、Ｓｔｂｌ２（商標）、Ｓｔｂｌ３（商標）、またはＳｔｂｌ４（商標）を含む。

【0164】

いくつかの例では、動物細胞は脊椎動物または無脊椎動物からの細胞を含む。場合によっては、動物細胞は、海洋無脊椎動物、魚、昆虫、両生類、爬虫類、または哺乳動物からの細胞を含む。場合によっては、真菌細胞は、ビール酵母、パン酵母、またはワイン酵母などの酵母菌を含む。

【0165】

真菌は子嚢菌、例えば、酵母菌、カビ、糸状菌、担子菌、または接合菌を含む。いくつかの例では、酵母菌は子嚢菌または担子菌を含む。場合によっては、子嚢菌は、サッカロミケス亜門（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ）（真正酵母菌、例えば、ビール酵母菌）（パン酵母））またはタフリナ菌亜門（Ｔａｐｈｒｉｎｏｍｙｃｏｔｉｎａ）（例えば、シゾサッカロミセス綱（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔｅｓ）（分裂酵母））を含む。場合によっては、担子菌はハラタケ亜門（Ａｇａｒｉｃｏｍｙｃｏｔｉｎａ）（例えば、シロキクラゲ綱（Ｔｒｅｍｅｌｌｏｍｙｃｅｔｅｓ））またはサビキン亜門（Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｏｔｉｎａ）（例えば、ミクロボトリウム菌綱（Ｍｉｃｒｏｂｏｔｒｙｏｍｙｃｅｔｅｓ））を含む。

【0166】

例示的な酵母菌または糸状菌は、例えば、属、すなわち、サッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、分裂酵母、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）、ハンゼヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、クルイベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、チゴサッカロミセス属（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、トリコスポロン属（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）、ロドスポリジウム属（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、またはトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）を含む。例示的な酵母菌または糸状菌は、例えば、種、すなわち、ビール酵母菌、分裂酵母、カンジダ・ユチリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ）、カンジダ・ボイジニ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・ステラトイデア（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラプシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・ギリエルモンジイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）、カンジダ・ビスワナチイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ）、カンジダ・ルシタニエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、ロドトルラ・ムチラギノーザ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔａｎｏｌｉｃａ）、ピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・アノマラ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クルイベロマイセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）、チゴサッカロミセス・ローキシ（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ）、ヤロウイア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、トリコスポロン・プルランス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）、ロスポリジウム・トル－アスペルギルス・ニガー（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕ－Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・ニードランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）、ヤロウイア・リポティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、ブレタノミセス・ブルセレンシス（Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ ｂｒｕｘｅｌｌｅｎｓｉｓ）、カンジダ・ステラータ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔａ）、分裂酵母、トルラスポラ・デルブルッキィ（Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、チゴサッカロミセス・バイリィ（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、クリプトコッカス・ガッティ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）、またはサッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）を含む。

【0167】

例示的な酵母宿主細胞としては、ＧＳ１１５、ＫＭ７１Ｈ、ＳＭＤ１１６８、ＳＭＤ１１６８Ｈ、およびＸ－３３などのピキア・パストリス酵母菌株、ならびにＩＮＶＳｃ１などのサッカロミセス・セレビシエ酵母菌株が挙げられるが、これらに限定されない。

【0168】

いくつかの実施態様では、追加の動物細胞は、軟体動物、節足動物、環形動物、または海綿動物から得られる細胞を含む。いくつかの実施態様では、追加の動物細胞は、例えば、霊長類、類人猿、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、またはげっ歯類からの哺乳動物細胞である。場合によっては、げっ歯類は、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、ハムスター、チンチラ、ファンシーラット、またはモルモットを含む。

【0169】

例示的な哺乳動物宿主細胞としては、２９３Ａ細胞株、２９３ＦＴ細胞株、２９３Ｆ細胞、２９３ Ｈ細胞、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＦＵＴ８ ＫＯ ＣＨＯＫ１、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）Ｔ－ＲＥｘ（商標）２９３細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－２９３細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－３Ｔ３細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＢＨＫ細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＣＨＯ細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＣＶ－１細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－Ｊｕｒｋａｔ細胞株、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ細胞、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＧｒｉｐＴｉｔｅ（商標）２９３ ＭＳＲ細胞株、ＧＳ－ＣＨＯ細胞株、ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞、Ｔ－ＲＥｘ（商標）Ｊｕｒｋａｔ細胞株、Ｐｅｒ．Ｃ６細胞、Ｔ－ＲＥｘ（商標）－２９３細胞株、Ｔ－ＲＥｘ（商標）－ＣＨＯ細胞株、およびＴ－ＲＥｘ（商標）－ＨｅＬａ細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。

【0170】

いくつかの例では、哺乳動物宿主細胞は、安定した細胞株であるか、または目的の遺伝物質をそれ自体のゲノムに組み込み、細胞分裂の多くの世代後に遺伝物質の生成物を発現する能力を有する細胞株である。場合によっては、哺乳動物宿主細胞は、一過性の細胞株であるか、または対象の遺伝物質をそれ自体のゲノムに組み込んでおらず、細胞分裂の多くの世代後に遺伝物質の生成物を発現する能力を有していない細胞株である。

【0171】

例示的な昆虫宿主細胞としては、ショウジョウバエＳ２細胞、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ（商標）細胞、およびｅｘｐｒｅｓＳＦ＋（登録商標）細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0172】

場合によっては、植物細胞は藻類からの細胞を含む。例示的な昆虫細胞株としては、コナミドリムシ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）１３７ｃまたはシネココッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｅｌｏｎｇａｔｕｓ）ＰＰＣ ７９４２からの株が挙げられるが、これらに限定されない。

【0173】

製品
本発明の別の態様では、上記の障害の処置、予防、および／または診断に役立つ材料を含む製品が提供される。製品は、容器、および容器上のまたは容器に付属のラベルまたは添付文書を含む。適切な容器は例えば、瓶、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどを含む。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、疾病を処置、予防、および／または診断するのに有効な組成物を単独でまたは別の組成物と組み合わせて保持し、無菌アクセスポート（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈用注射液バッグまたはバイアルであってもよい）を有し得る。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位および本明細書中で先に定義された腫瘍抗原に特異的に結合する第２の抗原結合部位を含む二重特異性抗体である。

【0174】

ラベルまたは添付文書は、選択された疾病を処置するために組成物が使用されることを示している。さらに、製品は、（ａ）その中に組成物を含有する第１の容器であって、組成物は本発明の二重特異性抗体を含む、第１の容器と、（ｂ）その中に組成物を含有する第２の容器であって、組成物はさらに細胞毒性剤またはそうでなければ治療剤を含む、第２の容器とを含み得る。本発明のこの実施形態における製品は、特定の疾病を処置するために上記組成物を使用することができるということを示す添付文書をさらに含み得る。

【0175】

代替的にまたは付加的に、製品はさらに、注射用の静菌性の水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液、およびデキストロース溶液などの薬学的に許容可能な緩衝液を含む、第２の（または第３の）容器を含んでもよい。それはさらに、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的かつユーザー寄りの観点から望ましい他の材料を含んでもよい。

【0176】

特定の定義
本明細書で使用される用語は、特定の事例のみを記載することを目的としており、本発明を限定することを意図していない。本明細書で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が他に明白に示していない限り、複数形を同様に含むことが意図されている。さらに、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「とともに（ｗｉｔｈ）」という用語またはその変形が、詳細な記載および／または請求項のいずれかで使用される程度まで、そのような用語は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」に類似した方法で含まれるように意図されている。

【0177】

「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、完全に組み立てられた抗体、抗原を結合することができる抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、抗体キメラ、ハイブリッド抗体、二重特異性抗体などを包含する。

【0178】

「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、抗体が結合するエピトープに対して構造が相補的であり、可変領域の残りよりも可変度が高い抗体の可変領域のセグメントである。これに応じて、ＣＤＲはしばしば超可変領域と呼ばれる。可変領域は３つのＣＤＲを含む。ＣＤＲペプチドは目的の抗体のＣＤＲをコードする遺伝子の構築により得ることができる。そのような遺伝子は、例えば、抗体産生細胞のＲＮＡからの可変領域を合成するためにポリメラーゼ連鎖反応を使用することにより、調製される。例えば、Ｌａｒｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２：１０６（１９９１）；Ｃｏｕｒｔｅｎａｙ－Ｌｕｃｋ，“Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ、Ｒｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ １６６－１７９（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ １９９５）、およびＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．，“Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｉｒｃｈ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ １３７－１８５（Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９９５）を参照されたい。

【0179】

「Ｆａｂ」という用語は、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含むタンパク質を指す。Ｆａｂフラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に少数の残基を加えることでＦａｂ’フラグメントとは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有しているＦａｂ’に関する本明細書での命名である。Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖ジスルフィド架橋の還元により生成される。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。

【0180】

「単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）」とは、１０～約２５個のアミノ酸の短いリンカーペプチドと接続した、抗体の重鎖（ＶＨ）と軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質である。リンカーは通常、柔軟性のためにグリシンが豊富であり、溶解性のためにセリンまたはスレオニンが豊富であり、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端に接続するか、またはその逆を接続することができる。このタンパク質は、定常領域を取り除いてリンカーを導入したにもかかわらず、元の抗体の特異性を保持している。ｓｃＦｖ抗体は、例えば、Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３（１９９１）４６－９６）に記載されている。加えて、抗体フラグメントは、ＶＨドメインの特徴を有する、すなわち、ＶＬドメインとともに組み立てることができる、またはＶＬドメインの特徴を有する、すなわち、ＶＨドメインとともに機能的な抗原結合部位に組み立てることができ、それによって完全長の抗体の抗原結合特性を提供する、単鎖ポリペプチドを含む。

【0181】

本明細書で使用されるとき、配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」という用語は、最大のパーセント配列同一性を達成するために、必要に応じて配列をアラインメントしてギャップを導入した後に、かつ、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮することなく、特定の配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野内の様々な方法で、例えば、ＥＭＢＯＳＳ ＭＡＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＷＡＴＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＳＴＲＥＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＮＥＥＤＬＥ、ＥＭＢＯＳＳ ＬＡＬＩＧＮ、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて達成可能である。当業者は、比較されている配列の完全長での最大のアラインメントを達成するために必要とされるあらゆるアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。

【0182】

ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に使用される状況では、所与のアミノ酸配列Ｂ（所与のアミノ酸配列Ｂに対する％アミノ酸配列同一性を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａとして代替的に表現され得る）に対する、所与のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性は、以下のように計算される：画分Ｘ／Ｙを１００倍し、ここで、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって、そのプログラムのＡとＢの配列において同一マッチとしてスコアリングされたアミノ酸残基の数であり、ここで、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の合計数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ａ対Ｂの％アミノ酸配列同一性は、Ｂ対Ａの％アミノ酸配列同一性と等しくないことを理解されたい。特段の定めのない限り、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して、直前のパラグラフに記載されているように、本明細書で使用される％アミノ酸配列同一性の値がすべて得られる。

【0183】

本開示の好ましい実施形態が本明細書中で示され、記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されているに過ぎないことが当業者に明らかであろう。多くの変形、変更、および置き換えは、本開示から逸脱することなく、当業者によって想到されるものである。本明細書に記載される本開示の実施形態の様々な代案が、本開示の実施に際して利用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本開示の範囲を定義するものであり、ならびに、この特許請求の範囲およびその同等物の範囲内の方法および構造はそれによって包含されることが、意図されている。

【0184】

実施形態
実施形態１は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長抗体または抗体フラグメント（Ｈ_１）を含む、単離されたポリペプチドあるいはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0185】

実施形態２は、実施形態１の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む。

【0186】

実施形態３は、実施形態１または２の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体、単鎖可変フラグメント、Ｆａｂ、またはＦａｂ’を含む。

【0187】

実施形態４は、実施形態３の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体を含む。

【0188】

実施形態５は、実施形態１～４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0189】

実施形態６は、実施形態１～５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0190】

実施形態７は、実施形態１～６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は、配列番号４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0191】

実施形態８は、実施形態１～７のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は、配列番号４によるアミノ酸配列を含む。

【0192】

実施形態９は、実施形態１～４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。

【0193】

実施形態１０は、実施形態１～４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。

【0194】

実施形態１１は、実施形態１～４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0195】

実施形態１２は、実施形態１～４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0196】

実施形態１３は、実施形態１～１２のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１は、式Ｉ：Ａ_１－Ｌ_１－Ｐ_１－Ｈ_１による構成において腫瘍特異的プロテアーゼの基質である切断可能なリンカー（Ｌ_１）を介して、第１の抗原認識分子（Ａ_１）の第１の標的抗原への結合を損なうペプチド（Ｐ_１）に連結される。

【0197】

実施形態１４は、実施形態１３の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、第２の抗原認識分子（Ａ_２）にさらに連結される。

【0198】

実施形態１５は、実施形態１４の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、式Ｉａ：Ｐ_２－Ｌ_２－Ａ_２－Ａ_１－Ｌ_１－Ｐ_１－Ｈ_１によるものであり、式中、Ｐ_２は、Ａ_２の第２の標的抗原への結合を損なうペプチドを含み、Ｌ_２は、Ａ_２をＰ_２に接続する第２の切断可能なリンカーを含み、腫瘍特異的プロテアーゼの基質である。

【0199】

実施形態１６は、実施形態１～１５のいずれか１つの単離されたポリペプチドを含み、Ｈ_１は、Ｈ_１をＰ_１に接続するリンカー部分（Ｌ_３）を含む。

【0200】

実施形態１７は、実施形態１６の単離されたポリペプチドを含み、Ｌ_３は、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0201】

実施形態１８は、実施形態１６の単離されたポリペプチドを含み、Ｌ_３は、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0202】

実施形態１９は、実施形態１６の単離されたポリペプチドを含み、Ｌ_３は、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0203】

実施形態２０は、実施形態１６の単離されたポリペプチドを含み、Ｌ_３は、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0204】

実施形態２１は、実施形態１６の単離されたポリペプチドを含み、Ｌ_３は、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0205】

実施形態２２は、実施形態１６の単離されたポリペプチドを含み、Ｌ_３は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。

【0206】

実施形態２３は、実施形態２２の単離されたポリペプチドを含み、Ｌ_３は、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１９）を含む。

【0207】

実施形態２４は、実施形態１３～２３のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、抗体または抗体フラグメントを含む。

【0208】

実施形態２５は、実施形態２４の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、ヒトもしくはヒト化抗体または抗体フラグメントを含む。

【0209】

実施形態２６は、実施形態１３～２５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＮ末端に結合される。

【0210】

実施形態２７は、実施形態１５～２５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＮ末端に結合される。

【0211】

実施形態２８は、実施形態１３～２５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＣ末端に結合される。

【0212】

実施形態２９は、実施形態１５～２５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２は、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントのＣ末端に結合される。

【0213】

実施形態３０は、実施形態１３～２９の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１の抗体または抗体フラグメントは、単鎖可変フラグメント、単一ドメイン抗体、またはＦａｂフラグメントを含む。

【0214】

実施形態３１は、実施形態３０の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。

【0215】

実施形態３２は、実施形態３１の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドおよびｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドを含む。

【0216】

実施形態３３は、実施形態３０の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、単一ドメイン抗体である。

【0217】

実施形態３４は、実施形態３０の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１の抗体またはその抗体フラグメントは、ラクダ科動物由来の単一ドメイン抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、または可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む。

【0218】

実施形態３５は、実施形態１３～３４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、第１の標的抗原はエフェクター細胞抗原を含む。

【0219】

実施形態３６は、実施形態１３～３５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、第１の標的抗原はＣＤ３である。

【0220】

実施形態３７は、実施形態１３～３６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む。

【0221】

実施形態３８は、実施形態１３～３７のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対して１μＭ以下のＫＤ結合を有する抗ＣＤ３ｅ単鎖可変フラグメントを含む。

【0222】

実施形態３９は、実施形態１３～３８のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、それぞれがヒトＣＤ３に特異的に結合できる可変軽鎖および可変重鎖を含む。

【0223】

実施形態４０は、実施形態１３～３９のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビジリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＳＰ３４、Ｘ３５、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ－Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆ１１１－４０９、ＣＬＢ－Ｔ３．４．２、ＴＲ－６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ－Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ－１４１、ＸＩＩＩ－４６、ＸＩＩＩ－８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２－８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２－４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ－Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、ＵＣＨＴ－１、ＷＴ－３１、１５８６５、１５８６５ｖ１２、１５８６５ｖ１６、および１５８６５ｖ１９からなる群から選択される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。

【0224】

実施形態４１は、実施形態１３～４０のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、式Ｉのポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_１が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断されると、エフェクター細胞に結合する。

【0225】

実施形態４２は、実施形態１３～４０のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、式Ｉのポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、Ｌ_１が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、Ａ_１がエフェクター細胞に結合すると、エフェクター細胞に結合する。

【0226】

実施形態４３は、実施形態４２の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、エフェクター細胞はＴ細胞である。

【0227】

実施形態４４は、実施形態４３の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_１は、エフェクター細胞上のＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドに結合する。

【0228】

実施形態４５は、実施形態４４の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、ＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部であるポリペプチドは、ヒトＣＤ３εである。

【0229】

実施形態４６は、実施形態１５～４５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２は、抗体または抗体フラグメントを含む。

【0230】

実施形態４７は、実施形態４６の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、単鎖可変フラグメント、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ’、またはＦａｂを含む。

【0231】

実施形態４８は、実施形態４６の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、ラクダ科動物由来の単一ドメイン抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、または可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む。

【0232】

実施形態４９は、実施形態４６～４８のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、ヒト化またはヒトである。

【0233】

実施形態５０は、実施形態４７の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２は、ＦａｂまたはＦａｂ’である。

【0234】

実施形態５１は、実施形態５０の単離したポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、ＦａｂまたはＦａｂ’は、（ａ）Ｆａｂ軽鎖ポリペプチドおよび（ｂ）Ｆａｂ重鎖ポリペプチドを含む。

【0235】

実施形態５２は、実施形態１５～５１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、第２の標的抗原は腫瘍抗原を含む。

【0236】

実施形態５３は、実施形態４６～５２のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２の抗体またはその抗体フラグメントは、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）結合ドメイン、メソテリン結合ドメイン、ＰＳＭＡ結合ドメイン、またはＴＲＯＰ２結合ドメインを含む。

【0237】

実施形態５４は、実施形態４６～５２のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、抗体または抗体フラグメントは、ＰＳＭＡ結合ドメインまたはＴＲＯＰ２結合ドメインを含む。

【0238】

実施形態５５は、実施形態１３～５４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１は、第１の標的抗原へのＡ_１の結合を損なう。

【0239】

実施形態５６は、実施形態１３～５５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１は、イオン相互作用、静電的相互作用、疎水的相互作用、Ｐｉ－スタッキング相互作用、およびまたはＨ結合相互作用、あるいはそれらの組合せを介してＡ_１に結合される。

【0240】

実施形態５７は、実施形態１３～５６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１は、第１の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を含む。

【0241】

実施形態５８は、実施形態１５～５７のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_２は、第２の標的抗原へのＡ_２の結合を損なう。

【0242】

実施形態５９は、実施形態１５～５８のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_２は、イオン相互作用、静電的相互作用、疎水的相互作用、Ｐｉ－スタッキング相互作用、またはＨ結合相互作用、あるいはそれらの組合せを介してＡ_２に結合される。

【0243】

実施形態６０は、実施形態１５～５９のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_２は、抗原結合部位またはその近傍でＡ_２に結合される。

【0244】

実施形態６１は、実施形態１５～６０のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_２は、第２の標的抗原に対して７０％未満の配列相同性を含む。

【0245】

実施形態６２は、実施形態１３～６１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１０アミノ酸長のペプチド配列を含む。

【0246】

実施形態６３は、実施形態１３～６１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１０アミノ酸および２０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。

【0247】

実施形態６４は、実施形態１３～６１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも１６アミノ酸長のペプチド配列を含む。

【0248】

実施形態６５は、実施形態１３～６１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１またはＰ_２は、４０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。

【0249】

実施形態６６は、実施形態１３～６１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１またはＰ_２は、少なくとも２つのシステインアミノ酸残基を含む。

【0250】

実施形態６７は、実施形態１３～６１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１またはＰ_２は、環状ペプチドまたは直鎖ペプチドを含む。

【0251】

実施形態６８は、実施形態１３～６１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１またはＰ_２は、環状ペプチドを含む。

【0252】

実施形態６９は、実施形態１３～６１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１またはＰ_２は、直鎖ペプチドを含む。

【0253】

実施形態７０は、実施形態１３～６９のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１は、Ａ_１のＮ末端に結合される。

【0254】

実施形態７１は、実施形態１３～６９のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１は、Ａ_１のＣ末端に結合される。

【0255】

実施形態７２は、実施形態１５～６９のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_２は、Ａ_２のＮ末端に結合される。

【0256】

実施形態７３は、実施形態１５～６９のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_２は、Ａ_２のＣ末端に結合される。

【0257】

実施形態７４は、実施形態１３～７３のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0258】

実施形態７５は、実施形態１３～７３のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0259】

実施形態７６は、実施形態１３～７３のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0260】

実施形態７７は、実施形態１３～７３のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0261】

実施形態７８は、実施形態１３～７３のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１またはＬ_２は、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0262】

実施形態７９は、実施形態１３～７３のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１またはＬ_２は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ（配列番号２０）を含む式を有し、ｎは１～３の整数である。

【0263】

実施形態８０は、実施形態１３～７３のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１は、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。

【0264】

実施形態８１は、実施形態１３～８０のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１は、Ｌ_１が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、これによりＡ_１が第１の標的抗原に曝露されると、Ａ_１から非結合となる。

【0265】

実施形態８２は、実施形態１５～８１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_２は、Ｌ_２が腫瘍特異的プロテアーゼによって切断され、これによりＡ_２が第２の標的抗原に曝露されると、Ａ_２から非結合となる。

【0266】

実施形態８３は、実施形態１３～８２のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、腫瘍特異的プロテアーゼは、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、およびアスパラギン酸プロテアーゼからなる群から選択される。

【0267】

実施形態８４は、実施形態１３～８２のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１またはＬ_２は、ウロキナーゼ切断可能アミノ酸配列、マトリプターゼ切断可能アミノ酸配列、マトリックスメタロプロテアーゼ切断可能アミノ酸配列、またはレグマイン切断可能アミノ酸配列を含む。

【0268】

実施形態８５は、実施形態１３～８４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１またはＬ_２は、ＧＧＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２１）、ＧＧＧＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＳＳＧＴ（配列番号２２）、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、ＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）、ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号２８）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２９）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＳＰＬＧＬＡＧＳ（配列番号３０）、ＳＰＬＧＬＡＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３１）、およびＳＰＬＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0269】

実施形態８６は、実施形態１３～８４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１またはＬ_２は、ＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２３）、ＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２４）、ＩＳＳＧＬＡＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２５）、およびＩＳＳＧＬＬＡＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0270】

実施形態８７は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＣ末端に結合される。

【0271】

実施形態８８は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＣ末端に結合される。

【0272】

実施形態８９は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＮ末端に結合される。

【0273】

実施形態９０は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＮ末端に結合される。

【0274】

実施形態９１は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合される。

【0275】

実施形態９２は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合される。

【0276】

実施形態９３は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合される。

【0277】

実施形態９４は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合される。

【0278】

実施形態９５は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドに結合される。

【0279】

実施形態９６は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ重鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドに結合される。

【0280】

実施形態９７は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドに結合される。

【0281】

実施形態９８は、実施形態４７～８６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ａ_２のＦａｂ軽鎖ポリペプチドは、Ａ_１のｓｃＦｖ軽鎖ポリペプチドに結合され、Ｌ_２は、Ａ_２のＦａｂ重鎖ポリペプチドに結合される。

【0282】

実施形態９９は、（ａ）実施形態１～３３のいずれか１つのバクテリオファージおよび（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を含む。

【0283】

実施形態１００は、実施形態１～９８のいずれか１つのポリペプチドまたはポリペプチド複合体をコードする、単離された組換え核酸分子を含む。

【0284】

実施形態１０１は、式ＩＩ：Ｌ_１ａ－Ｐ_１ａ－Ｈ_１ａによる単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、式中、Ｌ_１ａは、非切断時に第１の標的抗原と結合する第１の抗原認識分子にＰ_１ａを接続する、腫瘍特異的プロテアーゼに切断されたリンカー部分を含み、Ｐ_１ａは、Ｌ_１ａ非切断時に、第１の標的抗原への第１の抗原認識分子の結合を損なうペプチドを含み、Ｈ_１ａは、相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む半減期延長分子を含み、Ｈ_１のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含み、ＣＤＲは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、またはＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つに０～２個のアミノ酸修飾を含む。

【0285】

実施形態１０２は、実施形態１０１の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｈ_１ａのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１では配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２では配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３では配列番号３を含む。

【0286】

実施形態１０３は、実施形態１０１または１０２の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａの抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体、単鎖可変フラグメント、Ｆａｂ、またはＦａｂ’を含む。

【0287】

実施形態１０４は、実施形態１０３の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１の抗体または抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体を含む。

【0288】

実施形態１０５は、実施形態１０１～１０４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0289】

実施形態１０６は、実施形態１０１～１０５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0290】

実施形態１０７は、実施形態１０１～１０６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは、配列番号４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0291】

実施形態１０８は、実施形態１０１～１０７のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは、配列番号４によるアミノ酸配列を含む。

【0292】

実施形態１０９は、実施形態１０１～１０４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。

【0293】

実施形態１１０は、実施形態１０１～１０４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。

【0294】

実施形態１１１は、実施形態１０１～１０４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１１０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0295】

実施形態１１２は、実施形態１０１～１０４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号４の少なくとも１２０個の連続するアミノ酸残基に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0296】

実施形態１１３は、実施形態１０１～１０４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_１ａ非切断時、Ｐ_１ａは、第１の抗原認識分子のエフェクター細胞抗原への結合を損なう。

【0297】

実施形態１１４は、実施形態１０１～１０４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、第１の抗原認識分子は、抗体または抗体フラグメントを含む。

【0298】

実施形態１１５は、実施形態１１３の単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、エフェクター細胞抗原は抗ＣＤ３エフェクター細胞抗原である。

【0299】

実施形態１１６は、実施形態１１３～１１５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１ａは、エフェクター細胞抗原に対して７０％未満の配列相同性を含む。

【0300】

実施形態１１７は、実施形態１０１～１１６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１ａは、少なくとも１０アミノ酸長のペプチド配列を含む。

【0301】

実施形態１１８は、実施形態１０１～１１６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１ａは、少なくとも１０アミノ酸および２０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。

【0302】

実施形態１１９は、実施形態１０１～１１６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１ａは、少なくとも１６アミノ酸長のペプチド配列を含む。

【0303】

実施形態１２０は、実施形態１０１～１１６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１ａは、４０以下のアミノ酸長のペプチド配列を含む。

【0304】

実施形態１２１は、実施形態１０１～１２０のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１ａは、少なくとも２つのシステインアミノ酸残基を含む。

【0305】

実施形態１２２は、実施形態１０１～１２１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１ａは、環状ペプチドまたは直鎖ペプチドを含む。

【0306】

実施形態１２３は、実施形態１０１～１２２のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１ａは、環状ペプチドを含む。

【0307】

実施形態１２４は、実施形態１０１～１２２のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｐ_１ａは、直鎖ペプチドを含む。

【0308】

実施形態１２５は、実施形態１０１～１２４のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｈ_１ａは、Ｈ_１ａをＰ_１ａに接続するリンカー部分（Ｌ_３ａ）を含む。

【0309】

実施形態１２６は、実施形態１０１～１２５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_３ａは、少なくとも５～５０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0310】

実施形態１２７は、実施形態１０１～１２６のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_３ａは、少なくとも１０～３０個以下のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0311】

実施形態１２８は、実施形態１０１～１２５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_３ａは、少なくとも１０個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0312】

実施形態１２９は、実施形態１０１～１２５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_３ａは、少なくとも１８個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0313】

実施形態１３０は、実施形態１０１～１２５のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_３ａは、少なくとも２６個のアミノ酸を有するペプチド配列である。

【0314】

実施形態１３１は、実施形態１０１～１３０のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_３ａは、（Ｇ_２Ｓ）_ｎ、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７）、および（ＧＳＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１８）からなる群から選択される式を有し、ｎは少なくとも１の整数である。

【0315】

実施形態１３２は、実施形態１０１～１３１のいずれか１つの単離されたポリペプチドまたはポリペプチド複合体を含み、Ｌ_３ａは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号９）によるアミノ酸配列を含む。

【実施例】

【0316】

実施例１：血清アルブミン結合のＥＬＩＳＡ
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって、単一ドメイン抗体の、マウス、ウシ、カニクイザル、およびヒトからの血清アルブミンを結合するそれらの能力について評価した。簡潔に言えば、単一ドメイン抗体を、アルブミンでコーティングしたＥＬＩＳＡプレート中に滴定した。洗浄後、結合した単一ドメイン抗体を、二次西洋ワサビペルオキシダーゼ抗体コンジュゲートを使用して検出した。再び洗浄した後、標準ＥＬＩＳＡ技術を使用してプレートを現像し、そして酸を使用して停止した。５０％最大シグナルを達成するのに必要な単一ドメイン抗体の濃度またはＥＣ５０を、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて計算した。データは、図１Ａ～図１Ｄに示される。

【0317】

実施例２：ヒト血清アルブミンのｐＨ依存性動態結合
ヒト血清アルブミンに対する単一ドメイン抗体結合速度を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６機器を使用して評価した。簡潔に言えば、ビオチン化したヒト血清アルブミンを、ストレプトアビジンバイオセンサー（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ）上で捕捉し、ビオシチンを用いてクエンチし、そして緩衝液中でベースライン測定した。緩衝液中に中性または酸性のｐＨで滴定した単一ドメイン抗体を、その後、アルブミンを負荷したバイオセンサー上に会合させた。会合後、バイオセンサーを中性また酸性のｐＨの緩衝液に移動させ、単一ドメイン抗体解離を測定した。会合および解離速度を実時間で測定し、１対１結合モデルに適合させた。オン速度、オフ速度、および親和性（ＫＤ）を、様々な単一ドメイン抗体にわたって比較した。データは、図２Ａ～図２Ｂに示される。

【0318】

【表2】

【0319】

【表3】

【0320】

【表4】

【0321】

【表5】

【0322】

実施例３：ＥＬＩＳＡによるカニクイザルおよびヒトのアルブミンへのｐＨ依存性結合
中性および酸性のｐＨで酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって、単一ドメイン抗体の、カニクイザルまたはヒト由来の血清アルブミンを結合するそれらの能力について評価した。簡潔に言えば、単一ドメイン抗体を、アルブミンでコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上の中性または酸性の緩衝液中に滴定した。洗浄後、結合した単一ドメイン抗体を、二次西洋ワサビペルオキシダーゼ抗体コンジュゲートを使用して検出した。再び洗浄した後、標準ＥＬＩＳＡ技術を使用してプレートを現像し、そして酸を使用して停止した。５０％最大シグナルを達成するのに必要な単一ドメイン抗体の濃度またはＥＣ５０を、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて計算した。その後、中性および酸性のｐＨにおける単一ドメイン抗体親和性を比較した。データは、図３Ａ～図３Ｄに示される。

【0323】

【表6】

【0324】

実施例４：ヒトアルブミンに対する単一ドメイン抗体およびＦｃＲｎの動態結合競合
単一ドメイン抗体の、ＦｃＲｎ認識を遮断せずにヒト血清アルブミンに結合するそれらの能力について評価した。簡潔に言えば、ビオチン化したヒト血清アルブミンを、ストレプトアビジンバイオセンサー上に負荷し、ビオシチン中でクエンチし、そして酸性緩衝液中でベースライン測定した。その後、飽和が生じるまで、単一ドメイン抗体をセンサー上で会合させた（会合１）。その後、センサーを、この時さらにＦｃＲｎを含有している、同じ濃度の単一ドメイン抗体に移動させた（会合２）。第２の会合工程の間のシグナルの増加は、ＦｃＲｎが、結合された単一ドメイン抗体で既に飽和したアルブミン中という状況下であってもヒトアルブミンをなお結合させることができることを示唆する。したがって、会合２では、単一ドメイン抗体がＦｃＲｎとアルブミン結合部位について競合するかどうかを試験する。最後に、バイオセンサーを緩衝液に移動させ、解離を観察した。アルブミンのＦｃＲｎ競合的結合を欠くことが知られている陽性対照単一ドメイン抗体を、比較に使用した。データは図４に示される。

【0325】

実施例５：ｉｎ ｖｉｖｏ半減期延長のためのポリペプチド配列
ポリペプチド複合体ＰＣ１、ＰＣ２、ＰＣ３、およびＰＣ４は、表７に開示される軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を有する。ＨＥ－１配列（配列番号４）を、ＰＣ２ ＬＣ中に、およびＰＣ４ ＨＣ中に取り込ませる。取り込まれたＨＥ－１配列を有するＰＣ２およびＰＣ４を、ＰＣ１およびＰＣ３とそれぞれ比較し、カニクイザルにおけるｉｎ ｖｉｖｏの半減期延長に対するＨＥ－１の効果を示した。配列番号７および配列番号８は、ＰＣ１のＬＣおよびＨＣそれぞれのアミノ酸配列である。配列番号９および配列番号１０は、ＰＣ２のＬＣおよびＨＣそれぞれのアミノ酸配列である。配列番号１１および配列番号１２は、ＰＣ３のＬＣおよびＨＣそれぞれのアミノ酸配列である。配列番号１３および配列番号１４は、ＰＣ４のＬＣおよびＨＣそれぞれのアミノ酸配列である。ＰＣ１およびＰＣ２はＰＳＭＡとＣＤ３標的領域とを含み、ＰＣ３およびＰＣ４はＴＲＯＰ２とＣＤ３標的領域とを含む。ＰＣ２は単一マスクを含み、ＰＣ４は二重マスクを含む。ＰＣ２は構成８による構成を有し、ＰＣ４は構成５による構成を有する。

【0326】

【表7-1】

【0327】

【表7-2】

【0328】

実施例６：ポリペプチド複合体（ＰＣ１およびＰＣ２）によるＰＳＭＡおよびＣＤ３ｅ結合
ＥＬＩＳＡを使用して、ポリペプチド複合体ＰＣ１およびＰＣ２を、ＰＳＭＡおよびＣＤ３ｅへの結合について評価した。また、ＰＣ２を用いた結合試験を、マスクの切断のためのマトリプターゼ酵素（ＭＴＳＰ１）の存在下で実施した。ＰＳＭＡおよびＣＤ３ｅの結合データは、図５および６でそれぞれ示される。

【0329】

実施例７：ポリペプチド複合体で媒介されたＣＤ８＋ Ｔ細胞の存在下の２２ＲＶ１腫瘍細胞の死滅
ＰＳＭＡ陽性腫瘍細胞株２２Ｒｖ１を使用して、ポリペプチド複合体ＰＣ１およびＰＣ２を機能的なｉｎ ｖｉｔｒｏ腫瘍細胞死滅アッセイで評価した。腫瘍細胞死滅は、腫瘍細胞がセンサーの表面に付着し、広がり、拡大するにつれて増加されるセンサーインピーダンス測定値（細胞指数）に依存するＡｇｉｌｅｎｔ製のｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅリアルタイム細胞アナライザーを使用して測定した。同様に、腫瘍細胞が死滅するにつれて、インピーダンスは減少した。９６ウェルＥ－プレート上に１ウェル当たり１０，０００個の腫瘍細胞を添加し、一晩付着させた。翌日、３０，０００個のＣＤ８＋ Ｔ細胞と共にヒト血清添加培地中に滴定されたポリペプチド複合体を、ウェルに添加した。細胞指数測定を１０分毎にさらに７２時間行った。次いで、細胞指数×時間数（腫瘍細胞増殖動態）をポリペプチド複合体の濃度に対してプロットし、ここで、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、腫瘍増殖を５０％減少させるのに必要な濃度（ＩＣ５０）を計算した。図７は、ＰＣ１、ＰＣ２、およびＭＴＳＰ１で切断されたＰＣ２を用いて処置された２２Ｒｖ１の代表的な細胞毒性データを示す。データは表８に要約され、ＰＣ１が、２２Ｒｖ１細胞に対してＰＣ２の３００倍を超える細胞毒性であることを示す。酵素的切断によるＰＣ２の脱マスキングによって、細胞毒性は１５０倍より大きく増加した。

【0330】

【表8】

【0331】

実施例８：カニクイザル中のＰＣ１およびＰＣ２の薬物動態
カニクイザルにおけるポリペプチド分子ＰＣ１およびＰＣ２の薬物動態ならびに予備的な安全性を評価した。簡潔に言えば、体重およそ３キログラム（ｋｇ）のカニクイザルにポリペプチドをＩＶボーラスで投与し、有害事象の徴候について毎日観察した。生存中の有害事象は観察されなかった。投与後、血液を特定の時点でＫ２ ＥＤＴＡチューブに採取し、血漿に処理した。分析まで血漿を凍結保存した。血漿中のポリペプチド分子の濃度を、標準ＥＬＩＳＡ技術を介して、対照カニクイザル血漿中に希釈した参照標準に対して測定した。血漿濃度曲線を、分布相と消失相を表す標準二相指数方程式に適合させた。薬物動態学の適合により、ＰＣ１については表９に、およびＰＣ２については表１０に示されるように、Ｃ_ＭＡＸ、半減期（ｔ_１／２）、分布容積（Ｖｄ）、クリアランス（ＣＬ）、および７日間の曲線下面積（ＡＵＣ）の計算が可能となった。ＰＣ１（１０μｇ／ｋｇ ＩＶ）の薬物動態データは図８に示される。ＰＣ２（８７μｇ／ｋｇ ＩＶ）の薬物動態データは図９に示される。測定されたカニクイザルの薬物動態は、ヒトにおける週１回投与を支持する。

【0332】

【表9】

【0333】

【表10】

【0334】

実施例９：ポリペプチド複合体（ＰＣ１およびＰＣ４）によるＴＲＯＰ２およびＣＤ３ｅ結合
ＥＬＩＳＡを使用して、ポリペプチド複合体ＰＣ１およびＰＣ４を、ＴＲＯＰ２およびＣＤ３ｅへの結合について評価した。また、ＰＣ４を用いた結合試験を、マスク切断のためのマトリプターゼ（ＭＴＳＰ１）の存在下で実施した。ＴＲＯＰ２とＣＤ３ｅの結合データは、図１０および１１でそれぞれ示される。

【0335】

実施例１０：ポリペプチド複合体で媒介されたＣＤ８＋ Ｔ細胞の存在下のＨ２９２細胞の死滅を媒介した
ＴＲＯＰ２陽性腫瘍細胞株ＨＣＴ１１６、ＮＣＩ－Ｈ２９２、およびＭＤＡＭＢ２３１を使用して、ポリペプチド複合体ＰＣ３およびＰＣ４を機能的なｉｎ ｖｉｔｒｏ腫瘍細胞死滅アッセイで評価した。腫瘍細胞死滅は、腫瘍細胞株がセンサーの表面に付着し、広がり、拡大するにつれて増加されるセンサーインピーダンス測定値（細胞指数）に依存するＡｇｉｌｅｎｔ製のｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅリアルタイム細胞アナライザーを使用して測定した。同様に、腫瘍細胞が死滅するにつれて、インピーダンスは減少した。９６ウェルＥ－プレート上に１ウェル当たり１０，０００個の腫瘍細胞を添加し、一晩付着させた。翌日、３０，０００個のＣＤ８＋ Ｔ細胞と共にヒト血清添加培地中に滴定されたポリペプチド複合体を、ウェルに添加した。細胞指数測定を１０分毎にさらに７２時間行った。次いで、細胞指数×時間数（腫瘍細胞増殖動態）をポリペプチド複合体の濃度に対してプロットし、ここで、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、腫瘍増殖を５０％減少させるのに必要な濃度（ＩＣ５０）を計算した。図１２は、ＰＣ３、ＰＣ４、およびＭＴＳＰ_１で切断されたＰＣ４を用いて処置されたＨ２９２細胞の代表的な細胞毒性データを示す。データが表１１に要約される。表１１を参照すると、ＰＣ３は、Ｈ２９２細胞に対してＰＣ４の４，０００倍を超える細胞毒性である。ＭＴＳＰ－１を用いたＰＣ４の切断によって、ポリペプチド複合体の細胞毒性は劇的に増加した。

【0336】

【表11】

【0337】

実施例１１：カニクイザル中のＰＣ３およびＰＣ４の薬物動態
カニクイザルにおけるポリペプチド分子ＰＣ３およびＰＣ４の薬物動態ならびに予備的な安全性を評価した。簡潔に言えば、体重およそ３キログラム（ｋｇ）のカニクイザルにポリペプチドをＩＶボーラスで投与し、有害事象の徴候について毎日観察した。生存中の有害事象は観察されなかった。投与後、血液を特定の時点でＫ２ ＥＤＴＡチューブに採取し、血漿に処理した。分析まで血漿を凍結保存した。血漿中のポリペプチド分子の濃度を、標準ＥＬＩＳＡ技術を介して、対照カニクイザル血漿中に希釈した参照標準に対して測定した。血漿濃度曲線を、分布相と消失相を表す標準二相指数方程式に適合させた。薬物動態学の適合により、ＰＣ３については表１２に、およびＰＣ４については表１３に示されるように、Ｃ_ＭＡＸ、半減期（ｔ_１／２）、分布容積（Ｖｄ）、クリアランス（ＣＬ）、および７日間の曲線下面積（ＡＵＣ）の計算が可能となった。ＰＣ３（３μｇ／ｋｇ ＩＶ）の薬物動態データは図１３に示される。ＰＣ４（１０００μｇ／ｋｇ ＩＶ）の薬物動態データは図１４に示される。測定されたカニクイザルの薬物動態は、ヒトにおける週１回投与を支持する。

【0338】

【表12】

【0339】

【表13】

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【配列表】

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【国際調査報告】