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特表2023-552664抗ＦＳＨＲ抗体及びその抗体－薬物複合体の製造並びに使用

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-12-18

(54)【発明の名称】抗ＦＳＨＲ抗体及びその抗体－薬物複合体の製造並びに使用

(51)【国際特許分類】

C12N 15/13 20060101AFI20231211BHJP

C12N 15/63 20060101ALI20231211BHJP

C12N 1/15 20060101ALI20231211BHJP

C12N 1/19 20060101ALI20231211BHJP

C12N 1/21 20060101ALI20231211BHJP

C12N 5/10 20060101ALI20231211BHJP

C07K 16/30 20060101ALI20231211BHJP

C12P 21/08 20060101ALI20231211BHJP

A61K 47/68 20170101ALI20231211BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20231211BHJP

A61K 38/07 20060101ALI20231211BHJP

A61K 45/00 20060101ALI20231211BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20231211BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20231211BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C07K16/30

C12P21/08

A61K47/68

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K38/07

A61K45/00

A61P35/00

A61P43/00 121

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023557475

(86)(22)【出願日】2021-11-18

(85)【翻訳文提出日】2023-06-02

(86)【国際出願番号】 CN2021131515

(87)【国際公開番号】W WO2022116853

(87)【国際公開日】2022-06-09

(31)【優先権主張番号】202011417088.9

(32)【優先日】2020-12-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523210434

【氏名又は名称】康威（▲広▼州）生物科技有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部達彦

(72)【発明者】

【氏名】余 ▲寧▼▲輝▼

(72)【発明者】

【氏名】江旭▲亮▼

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA05

4B064DA14

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA10

4C084BA14

4C084BA23

4C084MA02

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4H045AA11

4H045BA10

4H045BA72

4H045DA83

4H045EA28

4H045EA51

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

抗ＦＳＨＲ抗体及びその抗体－薬物複合体の製造並びに使用を提供する。具体的には、本発明は抗体又はその抗原結合断片を提供し、前記抗体又はその抗原結合断片は、可変領域を含み、ヒト卵胞刺激ホルモン受容体ＦＳＨＲに特異的に結合し、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、７、５、１０、１１及び１２に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲから選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つを含む。提供される抗ＦＳＨＲ抗体及びその抗体－薬物複合体は、癌の検出、スクリーニング、予防及び治療において広い範囲の使用の可能性を有している。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

可変領域を含み、ヒト卵胞刺激ホルモン受容体ＦＳＨＲに特異的に結合し、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、７、８、１０、１１及び１２に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲから選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つを含む、抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変領域を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、７及び８に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲから選択される１つ、２つ又は３つを含み、及び／又は、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、１１及び１２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲから選択される１つ、２つ又は３つを含む、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

ＳＥＱＩＤＮＯ：６、７及び８に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲと、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、１１及び１２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと、を含むことを特徴とする請求項１又は２に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項4】

軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示されるアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：５に示されるアミノ酸配列と比較して１つ以上の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は、
前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるアミノ酸配列と比較して１つ以上の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項5】

軽鎖及び重鎖を含み、
前記軽鎖は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３に示されるアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：３に示されるアミノ酸配列と比較して１つ以上の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は、
前記重鎖は、ＳＥＱＩＤＮＯ：４に示されるアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：４に示されるアミノ酸配列と比較して１つ以上の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗体結合断片。

【請求項6】

１０個以下のアミノ酸置換、欠失及び／又は付加を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片の変異体。

【請求項7】

下記Ｂ１）又はＢ２）である、請求項１－５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項６に記載の変異体に関連する生体材料：
Ｂ１）：請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項６に記載の変異体をコードする核酸分子；
Ｂ２）：Ｂ１）に記載の核酸分子を含有する発現カセット、組換えベクター、組換え細胞又は組換え微生物。

【請求項8】

請求項７に記載の生体材料であって、前記Ｂ１）の核酸分子は下記１）又は２）又は３）に示す核酸断片を含む、ことを特徴とする生体材料：
１）：以下のＤＮＡ分子：
ＳＥＱＩＤＮＯ：１における第１３０位～第１６８位の核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１における第２１４位～第２３４位の核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１における第３３１位～第３５７位の核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：２における第１５４位～第１６８位の核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：２における第２１１位～第２６１位の核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：２における第３５８位～第３７８位の核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１における第６４位～第４０５位に示される核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：２における第６４位～第４４１位の核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す核酸断片、又は
ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す核酸断片；
２）：１）において限定された核酸断片とハイブリダイズし、かつ請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項６に記載の変異体をコードする核酸断片；
３）：１）又は２）において限定されたＤＮＡ分子と９０％以上の同一性を有し、かつ請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項６に記載の変異体をコードする核酸断片。

【請求項9】

請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項６に記載の変異体を製造する方法であって、
請求項７における前記Ｂ１）の核酸分子を発現させることができる条件下で、培地中で前記核酸分子を含有する組換え細胞を培養することにより、前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体を製造することを含む、方法。

【請求項10】

請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項６に記載の変異体がリンカーを介して細胞毒性薬物と結合することにより得られる抗体－薬物複合体。

【請求項11】

前記細胞毒性薬物は化学療法剤又は毒素であり、前記毒素は好ましくはアウリスタチンであり、より好ましくはモノメチルアウリスタチンＦである、ことを特徴とする請求項１０に記載の抗体－薬物複合体。

【請求項12】

前記リンカーは、マレイミドアセチル又はその類似体から選択されることを特徴とする請求項１０に記載の抗体－薬物複合体。

【請求項13】

１～３０の範囲内にある平均薬物抗体比ＤＡＲを有する、ことを特徴とする請求項１０～１２のいずれか一項に記載の抗体－薬物複合体。

【請求項14】

前記リンカーを前記薬物に連結することにより、前記リンカー－薬物部分を前記抗体に結合させ、前記抗体－薬物複合体を精製することを含む、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の抗体－薬物複合体を製造する方法。

【請求項15】

請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項６に記載の変異体又は請求項１０～１３のいずれか一項に記載の抗体－薬物複合体と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物。

【請求項16】

請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項６に記載の変異体又は請求項１０～１３のいずれか一項に記載の抗体－薬物複合体の、以下（１）と（２）のいずれかの製品の製造における使用：
（１）ヒト卵胞刺激ホルモン受容体の発現を検出する製品；
（２）癌を検出、スクリーニング、予防及び／又は治療する製品。

【請求項17】

前記癌は、前立腺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、精巣癌及び卵巣癌である、ことを特徴とする請求項１６に記載の使用。

【請求項18】

癌細胞の増殖を抑制する方法であって、前記細胞を請求項１０～１３のいずれか一項に記載の抗体－薬物複合体と接触させることを含む、方法。

【請求項19】

前記癌細胞は、前立腺癌細胞、乳癌細胞、結腸癌細胞、膵臓癌細胞、膀胱癌細胞、腎臓癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、胃癌細胞、精巣癌細胞及び卵巣癌細胞である、ことを特徴とする請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

癌患者を治療する方法であって、前記患者に治療有効量の請求項１０～１３のいずれか一項に記載の抗体－薬物複合体を投与することを含む、方法。

【請求項21】

さらに前記患者に他の治療剤を投与することを含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記治療剤は細胞毒性剤である、ことを特徴とする請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

癌を有すると疑いがある対象を診断する方法であって、検出可能な標識が結合した請求項１－５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は請求項６に記載の変異体を前記対象に投与し、標識された抗体又はその抗原結合断片又は変異体の前記対象における分布を検出することを含む方法。

【請求項24】

前記癌は前立腺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、精巣癌及び卵巣癌である、請求項２０～２３のいずれかの一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、バイオテクノロジー分野に属し、抗ＦＳＨＲ抗体及びその抗体－薬物複合体の製造並びに使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ヒト卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）は８０ｋＤのＧタンパク質が結合する膜受容体である。ＦＳＨＲ細胞外ドメインは、１つの９－ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ドメイン、１つの細胞外ヒンジ、１つの７－へリックス膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを含む。ＬＲＲドメインはＦＳＨの高親和性結合に機能し、ヒンジは受容体活性化を機能し、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインは受容体信号伝導を機能する（非特許文献１～４）。

【0003】

ヒトＦＳＨＲは主に卵巣顆粒細胞及び精巣支持細胞において発現する（非特許文献５）。ＦＳＨＲの天然タンパク質リガンド組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）は臨床において男性及び女性の不妊症を治療するために用いられている。ＦＳＨＲ小分子アロステリックモジュレーターもいくつか発見された（非特許文献６～９）。

【0004】

最近では、生殖腺外の一部の正常組織や腫瘍組織におけるＦＳＨＲ発現が検出されている。ＦＳＨＲは、人間の女性の生殖管、胎盤（非特許文献１０）、破骨細胞（非特許文献１１）、脂肪細胞（非特許文献１２）、軟骨細胞（非特許文献１３）、良性前立腺肥大、前立腺癌（非特許文献１３）及び卵巣癌（非特許文献１４）において転写される。ＦＳＨ受容体は、内皮細胞により前立腺、乳腺、結腸、膵臓、膀胱、腎臓、肺臓、肝臓、胃、精巣及び卵巣に位置する様々な腫瘍を患う患者の組織サンプルにおいても発現する（非特許文献１５）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Ｊｉａｎｇ，Ｘ．ｅｔａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｌｉｇａｎｄ－ｂｉｎｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎｏｆｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓａｎｄｔｈｅｎａｔｕｒｅｏｆｈｏｒｍｏｎｅ－ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ３，１３４１－１３５３（１９９５）．

【非特許文献2】Ｊｉａｎｇ，Ｘ．ｅｔａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｆｏｌｌｉｃｌｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｉｎｃｏｍｐｌｅｘｗｉｔｈｔｈｅｅｎｔｉｒｅｅｃｔｏｄｏｍａｉｎｏｆｉｔｓｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０９，１２４９１－１２４９６（２０１２）．

【非特許文献3】Ｊｉａｎｇ，Ｘ．，Ｄｉａｓ，Ｊ．Ａ．＆Ｈｅ，Ｘ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｂｉｏｌｏｇｙｏｆｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｈｏｒｍｏｎｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｉｎｓｉｇｈｔｓｔｏｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．３８２，４２４－４５１（２０１４）．

【非特許文献4】Ｊｉａｎｇ，Ｘ．ｅｔａｌ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｆｏｌｌｉｃｌｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒａｓａｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｔｒｉｍｅｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８９，１４２７３－１４２８２（２０１４）．

【非特許文献5】Ｓｐｒｅｎｇｅｌ，Ｒ．，Ｂｒａｕｎ，Ｔ．，Ｎｉｋｏｌｉｃｓ，Ｋ．，Ｓｅｇａｌｏｆｆ，Ｄ．Ｌ．＆Ｓｅｅｂｕｒｇ，Ｐ．Ｈ．ＴｈｅＴｅｓｔｉｃｕｌａｒＲｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒＦｏｌｌｉｃｌｅＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＨｏｒｍｏｎｅ：ＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｌｏｎｅｄｃＤＮＡ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４，５２５－５３０（１９９０）．

【非特許文献6】Ｈｅｎｒｙ，Ｎ．Ｙ．ｅｔａｌ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄｂｅｎｚａｍｉｄｅｓａｓｆｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒａｌｌｏｓｔｅｒｉｃｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２４，２１６８－２１７２（２０１４）．

【非特許文献7】Ｓｒｉｒａｍａｎ，Ｖ．ｅｔａｌ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆａｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅａｓａｎａｌｌｏｓｔｅｒｉｃｍｏｄｕｌａｔｏｒｏｆｆｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｉｔｓａｂｉｌｉｔｙｔｏｓｕｐｐｏｒｔｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｏｖｕｌａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８９，２６６－２７５（２０１４）．

【非特許文献8】Ｎａｔａｒａｊａ，Ｓ．Ｇ．，Ｙｕ，Ｈ．Ｎ．＆Ｐａｌｍｅｒ，Ｓ．Ｓ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅａｌｌｏｓｔｅｒｉｃｍｏｄｕｌａｔｏｒｓｏｆｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｆｒｏｎｔ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．（Ｌａｕｓａｎｎｅ）．６，１４２（２０１５）．

【非特許文献9】Ｖａｎｎｉｅｒ，Ｂ．，Ｌｏｏｓｆｅｌｔ，Ｈ．，Ｍｅｄｕｒｉ，Ｇ．，Ｐｉｃｈｏｎ，Ｃ．＆Ｍｉｌｇｒｏｍ，Ｅ．Ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎＦＳＨｒｅｃｅｐｔｏｒｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３５，１３５８－１３６６（１９９６）．

【非特許文献10】Ｓｔｉｌｌｅｙ，Ｊ．Ａ．Ｗ．ｅｔａｌ．ＦＳＨｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＦＳＨＲ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｅｘｔｒａｇｏｎａｄａｌｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａ，ａｎｄｔｈｅｉｍｐａｃｔｏｆｉｔｓｄｅｌｅｔｉｏｎｏｎｐｒｅｇｎａｎｃｙｉｎｍｉｃｅ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．９１，７１－７４（２０１４）．

【非特許文献11】Ｓｕｎ，Ｌ．ｅｔａｌ．ＦＳＨＤｉｒｅｃｔｌｙＲｅｇｕｌａｔｅｓＢｏｎｅＭａｓｓ．Ｃｅｌｌ１２５，２４７－２６０（２００６）．

【非特許文献12】Ｌｉｕ，Ｐ．ｅｔａｌ．ＢｌｏｃｋｉｎｇＦＳＨｉｎｄｕｃｅｓｔｈｅｒｍｏｇｅｎｉｃａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅａｎｄｒｅｄｕｃｅｓｂｏｄｙｆａｔ．Ｎａｔｕｒｅ５４６，１０７（２０１７）．

【非特許文献13】Ｋｏｎｇ，Ｄ．ｅｔａｌ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦＳＨＲｉｎｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＦＳＨｏｎｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．４９５，５８７－５９３（２０１８）．

【非特許文献14】Ｐｅｒａｌｅｓ－Ｐｕｃｈａｌｔ，Ａ．ｅｔａｌ．Ｆｏｌｌｉｃｌｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｉｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｂｙｍｏｓｔｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒｓｕｂｔｙｐｅｓａｎｄｉｓａｓａｆｅａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔ．Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２３，４４１－４５３（２０１７）．

【非特許文献15】Ｒａｄｕ，Ａ．ｅｔａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｆｏｌｌｉｃｌｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｕｍｏｒｂｌｏｏｄｖｅｓｓｅｌｓ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６３，１６２１－１６３０（２０１０）．

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

腫瘍周囲の血管、前立腺癌及び卵巣癌に共通するＦＳＨＲ標識のため、抗ＦＳＨＲヒト化抗体は原則として様々な腫瘍タイプに好適なものであるべきである。現在、市場では承認されているＦＳＨＲを対象とする癌治療用の抗体薬物が存在しない。明らかに、様々な癌を効果的に治療できる新規な抗ＦＳＨＲ抗体を発明する必要がある。したがって、癌の検出、スクリーニング及び治療に用いられ、より低い毒性や副作用、より優れた臨床薬効を有する新規な抗ＦＳＨＲモノクローナル抗体及びその抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）の開発が急務となっている。それにより、患者にはより多くの薬物の選択が提供される。

【課題を解決するための手段】

【0007】

一態様では、本発明は抗体又はその抗原結合断片を提供し、前記抗体又はその抗原結合断片は、可変領域を含み、ヒト卵胞刺激ホルモン受容体ＦＳＨＲに特異的に結合し、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、７、８、１０、１１及び１２に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲから選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つを含む。

【0008】

いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変領域を含み、前記抗体又はその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、７及び８に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲから選択される１つ、２つ又は３つを含み、及び／又は、
前記抗体又はその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、１１及び１２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲから選択される１つ、２つ又は３つを含む。

【0009】

いくつかの実施形態では、上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片おいて、前記抗体又はその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、７及び８に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲと、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、１１及び１２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと、を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合断片は単離された抗体又はその抗原結合断片である。

【0011】

いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合断片はマウス抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体又はその抗原結合断片である。

【0012】

いくつかの実施形態では、上記いずれか一形態の抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示されるアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：５に示されるアミノ酸配列と比較して１つ以上の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は、
前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるアミノ酸配列と比較して１つ以上の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。

【0013】

いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１サブクラス、ＩｇＧ２Ａサブクラス、ＩｇＧ２Ｂサブクラス、ＩｇＧ２Ｃサブクラス又はＩｇＧ３サブクラスから選択されるマウスＩｇＧアイソタイプであり、従来の方法でヒト化を行うことができる。

【0014】

いくつかの実施形態では、前記抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖と重鎖を含み、
前記軽鎖は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３に示されるアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：３に示されるアミノ酸配列と比較して１つ以上の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は、
前記重鎖は、ＳＥＱＩＤＮＯ：４に示されるアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又はＳＥＱＩＤＮＯ：４に示されるアミノ酸配列と比較して１つ以上の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。

【0015】

別の態様では、本発明は、上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片の変異体であって、１０個以下のアミノ酸置換、欠失及び／又は付加を含み、例えば１つ、２つ又は３つの保存的アミノ酸置換、欠失及び／又は付加を含み、例えばＦＲ領域でのアミノ酸置換、欠失及び／又は付加を含み、又は少なくとも１つの置換、欠失及び／又は付加がＣＤＲ領域にある、抗体又はその抗原結合断片の変異体をさらに提供する。

【0016】

いくつかの実施形態では、前記アミノ酸の置換、欠失及び／又は付加は、オリゴヌクレオチド誘発部位特異的突然変異、カセット突然変異、縮重オリゴヌクレオチドプライマーＰＣＲ、エラープローンＰＣＲ、ＤＮＡシャッフリング及び細菌ミューテーター株から選択される方法で行われるオリゴヌクレオチド突然変異により実現される。

【0017】

別の態様では、本発明は、下記Ｂ１）又はＢ２）である、上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体に関連する生体材料、をさらに提供する。
Ｂ１）：上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体をコードする核酸分子
Ｂ２）：Ｂ１）に記載の核酸分子を含有する発現カセット、組換えベクター、組換え細胞又は組換え微生物
いくつかの実施形態では、上記生体材料において、Ｂ１）に記載の核酸分子は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又は組換えＤＮＡなどのＤＮＡであってもよい。前記核酸分子は、ｍＲＮＡ又はｈｎＲＮＡなどのＲＮＡであってもよい。

【0018】

当業者は、既知の方法、例えば定向進化及び点突然変異の方法で、容易に本発明のヌクレオチド配列を突然変異させることができる。人工的に修飾された、本発明のヌクレオチド配列とある程度の同一性を有するヌクレオチドは、前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体をコードし、かつ前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体の機能を有するものであれば、いずれも本発明のヌクレオチド配列から誘導され、本発明の配列と同等である。

【0019】

本明細書において使用される「同一性」という用語は、核酸配列との配列類似性を意味する。「同一性」は、肉眼又はコンピュータソフトウェアで評価することができる。コンピュータソフトウェアを使用して、二つ又は複数の配列の間の同一性を百分率（％）で表すことができ、それは関連配列間の同一性を評価するために用いることができる。

【0020】

いくつかの実施形態では、上記生体材料において、Ｂ２）に記載の、Ｂ１）に記載の核酸分子を含有する発現カセットは、宿主細胞において前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体を発現することができるＤＮＡを指し、該ＤＮＡが前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体をコードする遺伝子転写を開始するプロモーターを含むこともできるだけでなく、前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体をコードする遺伝子転写を停止するターミネーターを含むこともできる。さらに、前記発現カセットはエンハンサー配列を含んでもよく、
従来の発現ベクターを用いて、前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体をコードする核酸分子を含有する組換えベクターを構築することができ、従来の発現ベクターは、例えばｐｃＤＮＡ３．１ベクターがあり、軽鎖発現ベクターはｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣであってもよく、重鎖発現ベクターはｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＨＣであってもよく、
前記ベクターは、プラスミド、コスミド、ファージ又はウイルスベクターであってもよい。

【0021】

前記組換え微生物は、具体的には細菌、藻類及び真菌であってもよく、細菌は大腸菌であってもよく、
前記組換え細胞は非繁殖材料である。

【0022】

いくつかの実施形態では、上記生体材料において、前記核酸分子は下記１）又は２）又は３）に示す核酸断片を含む。

【0023】

１）：以下のＤＮＡ分子：
ＳＥＱＩＤＮＯ：１の第１３０位～第１６８位に示す核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１の第２１４位～第２３４位に示す核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１の第３３１位～第３５７位に示す核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：２の第１５４位～第１６８位に示す核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：２の第２１１位～第２６１位に示す核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：２の第３５８位～第３７８位に示す核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１の第６４位～第４０５位に示す核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：２の第６４位～第４４１位に示す核酸断片、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示す核酸断片、又は
ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示す核酸断片
２）：１）において限定された核酸断片とハイブリダイズし、かつ上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体をコードする核酸断片
３）：１）又は２）において限定されたＤＮＡ分子と９０％以上の同一性を有し、かつ上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体をコードする核酸断片
別の態様において、本発明は上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体を製造する方法を提供する。前記方法は、
上記Ｂ１）に記載の核酸分子を発現させることができる条件下で、培地中で前記核酸分子を含有する組換え細胞を培養することにより、前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体を製造することを含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、軽鎖発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣと重鎖発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１を共にＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクトし、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を培養し、上清を収集して、前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体を得る。好ましくは、ＣＡＮ００１重鎖及び軽鎖をコードするベクターｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＨＣ及びｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣ（質量比１：２）と、２５ｋＤ線状ＰＥＩポリマー（ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅ）とを用いて、ベクターのポリマー対する質量比が１：３という比率で、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をコトランスフェクトする。

【0025】

いくつかの実施形態では、上清を収集した後にさらに精製して前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体を得ることができ、精製はｐｒｏｔｅｉｎ－Ａアフィニティークロマトグラフィー（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を採用することができる。

【0026】

別の態様では、本発明は、上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体がリンカーを介して細胞毒性薬物と結合することにより得られる抗体－薬物複合体をさらに提供する。前記抗体－薬物複合体により、前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体が、標的細胞の表面のヒト卵胞刺激ホルモン受容体ＦＳＨＲに標的に結合し、前記抗体又はその抗原結合断片又は変異体が薬物と共に標的細胞の内部に取り込まれる。

【0027】

本明細書において使用される「薬物」又は「Ｄ」という用語は、細胞毒性薬物を指し、実例は化学療法剤及び毒素を含む。特に、「薬物」は以下（ａ）～（ｏ）から独立して選択することができる。（ａ）カンプトテシン誘導体及び代謝産物（例えば、ＳＮ－３８）。他には、ジフテリア毒素、ボツリヌストキシン、テタヌストキシン、赤痢毒素、コレラ毒素、アマニチン、Ｏ－アマニチン、アマニチン誘導体、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン誘導体、テトロドトキシン、ブレベトキシン、シガトキシン、リシン、ＡＭ毒素、ツブリシン、ゲルダナマイシン、メイタンシノール、カリケアマイシン、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、ビンデシン、ＳＧ２２８５、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン類（例えばモノメチルアウリスタチンＥ及びモノメチルアウリスタチンＦ）、クリプトフィシン、カンプトテシン、リゾキシン、リゾキシン誘導体、ＣＣ－１０６５、ＣＣ－１０６５類似体又は誘導体、デュオカルマイシン、エンジイン抗生物質、ラマイシン、エポチロン、アゾナフィド（ａｚｏｎａｆｉｄｅ）、アプリジン（ａｐｌｉｄｉｎｅ）、類毒素、又は上記のいずれかの組合せを含む；（ｂ）エルロチニブ、ボルテゾミブ、フルベストラント、スーテント、レトロゾール、メシル酸イマチニブ、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、オキサリプラチン、５－フルオロウラシル、フォリン酸、ラパマイシン、ラパチニブ、ロナファルニブ（ｌｏｎａｆａｒｎｉｂ）、ソラフェニブ、ゲフィチニブ、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１、チオテパ、シクロホスファミド、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボクオン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、ウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）、エチレンイミン、アルトレタミン、トレタミン、トリエチレンホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、ｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ、トリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）、ブラタシン、ブラタシノン、ａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ、トポテカン、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）、ＣＣ－１０６５、アドゼレシン、カルゼレシン、ビゼレシン、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８、ドラスタチン、デュオカルマイシン、ＫＷ－２１８９、ＣＢ１－ＴＭ１、エリュテロビン、パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）、サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）、スポンジスタチン、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、カリケアマイシン、カリケアマイシンγ１、カリケアマイシン ω１、ダイネミシン、ダイネミシンＡ、クロドロネート、ラマイシン、ネオカルジノスタチンクロモフォア、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、アンチマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、アクチノマイシンＣ、カラビシン、カルニノマイシン（ｃａｒｎｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン、デトルブシン（ｄｅｔｏｒｕｂｕｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、デオキシドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾトシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、５－フルオロウラシル、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フォリン酸、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）、ビサントレン、エダトレキサート、デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）、デメコルシン、ジアジクオン、エルフォルニチン、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）、メイタンシン、アンサマイトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）、ニトラエリン、ペントスタチン、フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）、ピラルビシン、ロソキサントロン、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ポリサッカライドＫ、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃａｃｉｄ）、トリアジコン、２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン、Ｔ－２トキシン、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ、アングイジン、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ジブロモズルシトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド、シクロホスファミド、チオテパ、パクリタキセル、パクリタキセルのアルブミン改変ナノ粒子製剤、ドセタキセル、クロラムブシル、ゲムシタビン、６－チオグアニン、メルカプトプリン、シスプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン、白金、エトポシド、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ミトキサントロン、テニポシド、エダトレキサート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、ＣＰＴ－１１、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ジフルオロメチルオルニチン、レチノイン酸、カペシタビン、又は上記の何れかの薬学的に許容される塩類、溶媒和物若しくは酸類；（ｃ）親和性リガンドであって、基質、阻害剤、刺激剤、神経伝達物質、放射性同位体又は上記のいずれかの組合せであるもの；（ｄ）放射性標識「Ｐ」、「Ｓ」、蛍光色素、電子密度試薬、酵素、ビオチン、ストレプトアビジン、ジゴキシン、ハプテン、免疫原性タンパク質、標的に相補的な配列を有する核酸分子、又は上記のいずれかの組合せ；（ｅ）免疫調節化合物、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗細菌剤、抗真菌剤及び抗寄生虫剤又は上記のいずれかの組合せ；（ｆ）タモキシフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、又はトレミフェン；（ｇ）４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲステロール、エキセメスタン、レトロゾール又はアナストロゾール（ａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；（ｈ）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、ゴセレリン又はトロキサシタビン（ｉ）アロマターゼ阻害剤（ｊ）プロテインキナーゼ阻害剤（ｋ）脂質キナーゼ阻害剤（ｌ）アンチセンスオリゴヌクレオチド（ｍ）リボザイム（ｎ）ワクチン（ｏ）血管新生阻害剤いくつかの実施形態では、前記毒素は好ましくはアウリスタチンであり、より好ましくはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）である。

【0028】

いくつかの実施形態では、上記いずれか一項に記載の抗体－薬物複合体において、前記リンカーはマレイミドアセチル（ｍｃ）又はその類似体から選択される。

【0029】

いくつかの実施形態では、上記いずれか一項に記載の抗体－薬物複合体において、前記抗体－薬物複合体は、１～３０の範囲内にある平均薬物抗体比ＤＡＲを有し、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０及び任意の２つの上記数値の間にある平均薬物抗体比ＤＡＲ、例えば５～６の平均薬物抗体比ＤＡＲを有する。

【0030】

別の態様では、本発明は、さらに上記いずれか一項に記載の抗体－薬物複合体を製造する方法をさらに提供する。前記方法は、前記リンカーを前記薬物に連結することにより、前記リンカー－薬物部分を前記抗体に結合させ、前記抗体－薬物複合体を精製することを含む。

【0031】

抗体－薬物複合体を製造するための他の方法は、様々な出版物において記載されている。例えば、コンジュゲーション反応を発生させるために、鎖間のジスルフィド結合を還元することによって活性化されたシステインスルフヒドリル基を通じて化学修飾を行うことができる。

【0032】

いくつかの実施形態では、上記抗体－薬物複合体において、前記細胞毒性薬物はＭＣ－ＭＭＡＦ（ＭａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌａｕｒｉｓｔａｔｉｎＦ，マレイミドカプロイル－モノメチルアウリスタチンＦ）であり、それが上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体のシステインのＳ原子に連結することで、抗体－薬物複合体が得られる。好ましくは、上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体を、ＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）の作用で還元させ、システインのＳ原子を露出させ、さらに薬物リンカーＭＣ－ＭＭＡＦを該硫黄原子に連結することにより、結合を実現し、サンプルを、ｉｌｌｕｓｔｒａＮＡＰ－１０カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ社から購入）により精製する。

【0033】

別の態様では、本発明は、上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体又は上記いずれか一項に記載の抗体－薬物複合体と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物をさらに提供する。

【0034】

別の態様において、本発明はさらに、上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は上記変異体又は上記いずれか一形態に記載の抗体－薬物複合体の、以下（１）と（２）のいずれかの製品の製造における使用を提供する。

【0035】

（１）ヒト卵胞刺激ホルモン受容体の発現を検出する製品
（２）癌を検出、スクリーニング、予防及び／又は治療する製品
いくつかの実施形態では、上記使用において、前記癌は前立腺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、精巣癌及び卵巣癌である。

【0036】

別の態様では、本発明は、上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は変異体又は上記いずれか一項に記載の抗体－薬物複合体を含むキットをさらに提供する。

【0037】

別の態様において、本発明は、癌細胞の増殖を抑制する方法であって、前記細胞を上記いずれか一項に記載の抗体－薬物複合体と接触させることを含む方法、をさらに提供する。

【0038】

いくつかの実施形態では、前記癌細胞は、前立腺癌細胞、乳癌細胞、結腸癌細胞、膵臓癌細胞、膀胱癌細胞、腎臓癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、胃癌細胞、精巣癌細胞及び卵巣癌細胞である。

【0039】

別の態様では、本発明は、癌患者を治療する方法であって、前記患者に治療有効量の上記いずれか一項に記載の抗体－薬物複合体を投与することを含む方法、をさらに提供する。

【0040】

いくつかの実施形態では、上記方法において、前記癌は、前立腺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、精巣癌及び卵巣癌である。

【0041】

いくつかの実施形態では、上記いずれか一項に記載の方法はさらに前記患者に他の治療剤を投与することを含む。好適な治療剤は従来の特定の使用（例えば癌）のための薬物及び／又は手術療法を含む。例えば、前記抗体－薬物複合体を一種又は複数の他の化学療法又は抗腫瘍剤と併用する。又は、他の治療剤は放射線療法である。

【0042】

いくつかの実施形態では、前記治療剤は細胞毒性剤である。

【0043】

他の態様では、本発明は、癌を有すると疑いがある対象を診断する方法を提供し、前記方法は、検出可能な標識が結合した上記いずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片又は変異体を前記対象に投与し、標識された抗体又はその抗原結合断片又は変異体の前記対象における分布を検出することを含む。

【0044】

当業者であれば、本発明の抗体又はその抗原結合断片又は変異体又は抗体－薬物複合体が様々な用途を有し、例えば、本発明の抗体－薬物複合体が治療剤として用いられ、本発明の抗体又はその抗原結合断片又は変異体が診断キットにおける試薬又は診断ツールとして用いられることを理解すべきであろう。

【0045】

本発明に係る抗ＦＳＨＲ抗体ＣＡＮ００１はＦＳＨＲと特異的に結合することができ、それに基いて得られたＣＡＮ００１抗体－薬物複合体ＣＡＮ００１－ＭＣ－ＭＭＡＦは、癌細胞に対して顕著な殺傷効果を有する。本発明に係る抗ＦＳＨＲ抗体及びその抗体－薬物複合体は、癌の検出、スクリーニング及び治療において広い範囲の使用の可能性を有している。

【図面の簡単な説明】

【0046】

【図1】ｐＭＳＧβ３＿ＦＳＨＲプラスミドプロファイルである。

【図2】ＣＡＮ００１抗体を含有する上清がＦＳＨＲ発現細胞を特異的に染色するが、ＧＦＰ発現細胞を染色しないことを示す。

【図3】最適なＣＡＮ００１上清のスクリーニング。

【図4】ＣＡＮ００１による人胎盤に対するＩＨＣ染色。

【図5】ＣＡＮ００１による卵巣癌組織及び隣接組織に対するＩＨＣ染色。

【図6】ＣＡＮ００１－ＭＣ－ＭＭＡＦの疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）である。

【図7】ＣＡＮ００１－ＭＣ－ＭＭＡＦのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）である。

【発明を実施するための形態】

【0047】

以下、特定の具体的な実施形態により本発明を説明するが、当業者は本明細書に開示された内容から本発明の利点及び効果を容易に理解することができる。本発明は、さらに他の異なる具体的な実施形態で実施又は使用してもよく、本明細書における各詳細も、異なる観点及び使用に基づいて、本発明の主旨から逸脱することなく様々な修飾又は変更を行うことができる。本発明の保護範囲は下記特定の具体的な実施形態に限定されないことは、理解されるであろう。また、本発明の実施例において使用される用語は特定の具体的な実施形態を説明するためのものであり、本発明の保護範囲を限定するためのものではないことも、理解されるであろう。

【0048】

実施例において数値範囲を示した場合、理解すべきことは、本発明が他の説明をしない限り、各数値範囲の両端及び両端間の任意の数値が選択可能である。特に定義しない限り、本発明に使用されるすべての技術及び科学用語は当業者が一般的に理解する意味と同じである。実施例で使用された具体的な方法、装置、材料以外に、当業者の従来技術に対する把握及び本発明の記載に基づき、本発明の実施例に記載の方法、装置、材料と類似又は同等の、従来技術による任意の方法、装置及び材料を使用して本発明を実現することもできる。

【0049】

特に断らない限り、本発明において開示された実験方法、検出方法、製造方法は、いずれも本技術分野の一般的な分子生物学、生物化学、染色質構造及び分析、分析化学、細胞培養、組換えＤＮＡ技術及び関連分野の通常の技術を採用する。これらの技術は従来の文献において完備して説明され、具体的には、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ，第二版，冷泉港実験室出版社，１９８９及び第三版，２００１、Ａｕｓｕｂｅｌら，ＣＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ニューヨーク，１９８７及びｐｅｒｉｏｄｉｃｕｐｄａｔｅｓ：ｔｈｅｓｅｒｉｅｓＭＥＴＨＯＤＳＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ，学術出版社，サンティアゴ、Ｗｏｌｆｆｅ，ＣＨＲＯＭＡＴＩＮＳＴＲＵＣＴＵＲＥＡＮＤＦＵＮＣＴＩＯＮ，第三版，学術出版社，サンティアゴ，１９９８、ＭＥＴＨＯＤＳＩＮＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ，第３０４巻，Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ（Ｐ．Ｍ．Ｗａｓｓａｒｍａｎ及びＡ．Ｐ．Ｗｏｌｆｆｅ、ｅｄｓ．），学術出版社，サンティアゴ，１９９９、及びＭＥＴＨＤＳＩＮＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹ，第１１９巻，ＣｈｒｏｍａｔｉｎＰｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｐ．Ｂ．Ｂｅｃｋｅｒ、ｅｄ．），ヒューマナ出版，トトワ，１９９９、等、を参照することができる。

【0050】

本明細書において使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子と、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち抗原に特異的に結合する（それと免疫反応する）抗原結合部位を含む分子、を意味する。「特異的に結合」又は「免疫反応が発生」又は「対象とする」とは、抗体が標的抗原の１つ又は複数の抗原決定クラスターとは反応するが、他のポリペプチドとは反応しないか又は非常に低い親和性（Ｋｄ＞１０－６ｇ／ｍｌ）で他のポリペプチドと結合することを意味する。抗体はモノクローナル抗体、キメラ抗体、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ及びＦａｂ発現ライブラリーを含むがこれらに限定されない。

【0051】

基本的な抗体構造単位は四量体を含むことが知られている。各四量体（又は「全抗体」と呼ばれる）は二対の同じポリペプチド鎖で構成され、各対は一本の「軽」鎖及び一本の「重」鎖を有する。各鎖のアミノ末端部分は約１００～１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含み、主に抗原認識を担う。各鎖のカルボキシル末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を規定する。一般的に、ヒトから取得された抗体分子はＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤのうちの何れかクラスに関し、これらは分子中に存在する重鎖の性質により互いに異なる。特定のクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及び他のサブクラスのようなサブクラスを更に有する。また、ヒトでは、軽鎖はκ鎖又はλ鎖でありうる。

【0052】

本明細書において使用される「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、特別な軽鎖遺伝子産物と特別な重鎖遺伝子産物とから構成された抗体分子の１つの分子種のみを含有する抗体分子の集団のことを意味する。具体的には、モノクローナル抗体の相補決定領域（ＣＤＲ）は集団の分子のすべてで同じである。ｍＡｂは、抗原の特定のエピトープと免疫反応することが可能な抗原結合部位を含有する。

【0053】

本明細書において使用される「特異的に結合」という用語は、免疫グロブリン分子と、その免疫グロブリンが特異的である抗原との間に起こるタイプの非共有相互作用を言及する。免疫学的結合相互作用の強度又は親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）で表すことができ、Ｋｄが小さいほど大きい親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該技術分野では周知の方法を用いて定量化することができる。

【0054】

本明細書において使用される「相補決定領域」及び「ＣＤＲ」という用語は、抗体のＨＣ及びＬＣペプチドの可変領域内において見出される非隣接的な抗原結合部位を意味することを意図する。これらの特定の領域について、Ｋａｂａｔら，Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２－９３（１９７１）、Ｋａｂａｔら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔら，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１－３２４２（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２－７４５（１９９６）、及びＮｏｒｔｈら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４０６、２２８－２５６（２０１１）を含む他者によって記載されており、ここで、定義は、互いに比較した場合のアミノ酸残基の重複又はサブセットを含む。

【0055】

ＣＤＲは、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と呼ばれる、より保存される領域に散在している。各ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成され、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４という順にアミノ末端からカルボキシル末端まで配列される。軽鎖の３つのＣＤＲは「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３」と称され、重鎖の３つのＣＤＲは「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原と特異的な相互作用が発生する大多数の残基を含む。本発明におけるＬＣＶＲ及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の番号及び位置はＫａｂａｔの定義に従う。

【0056】

「単離された」抗体は、その天然の環境の成分から単離及び／又は回収された抗体である。その天然の環境の夾雑成分は、診断又は治療における抗体の使用を阻害する物質であり、かつ酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性若しくは非タンパク質性溶質を含むことができる。いくつかの実施形態では、（１）前記抗体の重量百分率が９５％超、例えばＬｏｗｒｙ法により９９％超と測定されるまで、（２）スピニングカップシーケネーターを使用してＮ末端アミノ酸配列若しくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに充分な程度まで、又は（３）クマシーブルー若しくは銀染色を用いた還元又は非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均一性が測定されるまで、前記抗体を精製する。単離された抗体は、組換え細胞内のインサイチュ抗体を含む。一般的に、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程により調製される。いくつかの実施形態では、単離された抗体の純度は少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、又はこれらの数値のうちの任意の２つの値の間の範囲（終点を含む）又はそのうちの任意の値である。

【0057】

「配列同一性」という用語は、２個のポリヌクレオチド又はアミノ酸配列同士が比較ウインドウにわたって同一である（すなわちヌクレオチド対ヌクレオチド又は残基対残基で同一である）ことを意味する。「配列同一性百分率」という用語は、２個の最適に整列された配列同士を比較ウインドウにわたって比較し、同じ核酸塩基（例えばＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、又はＵ）又はアミノ酸残基が両方の配列に生じる位置の数を求めることにより、一致した位置の数を得て、一致した位置の数を比較ウインドウ内の位置の総数（すなわちウインドウサイズ）で割り、その結果に１００を掛けて配列同一性百分率を得ることによって計算される。

【0058】

抗体又は免疫グロブリン分子のアミノ酸配列のわずかな変異は、アミノ酸配列の変異が少なくとも７５％、例えば少なくとも８０％、９０％、９５％、又は９９％の同一性を維持しているという条件で、本開示に包含されるものとみなされる。いくつかの実施形態では、変化は保存的アミノ酸置換である。保存的アミノ酸置換は、その側鎖において関連するアミノ酸ファミリー内で起こる置換である。遺伝子にコードされるアミノ酸は、大きく以下の種類に分けられる。（１）酸性アミノ酸は、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩であり、（２）塩基性アミノ酸は、リジン、アルギニン、ヒスチジンであり、（３）非極性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンであり、及び（４）極性無電荷アミノ酸は、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンである。アミノ酸の他のファミリーについて、（ｉ）脂肪族－ヒドロキシファミリーであるセリン及びトレオニン、（ｉｉ）アミド含有ファミリーであるアスパラギン及びグルタミン、（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーのアラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン、並びに（ｉｖ）芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシン、が挙げられる。いくつかの実施形態では、保存的アミノ酸置換群は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、及びアスパラギン－グルタミンである。例えば、イソロイシン若しくはバリンによるロイシンの単独の置換、グルタミン酸塩によるアスパラギン酸塩の置換、セリンによるトレオニンの置換、又は構造的に関連したアミノ酸によるあるアミノ酸の同様の置換が、特にこうした置換には結合部位内のアミノ酸が参加しない場合、得られる分子の結合又は性質に大きな影響を及ぼさないであろうと予想することは合理的である。アミノ酸の改変が機能性ペプチドを産生するか否かは、ポリペプチド誘導体の比活性を測定することにより容易に判定することができる。前記測定は本明細書において詳細に述べている。抗体又は免疫グロブリン分子の断片若しくは類似体は、当業者によって容易に調製することができる。

【0059】

「薬学的に許容される」という用語は、ヒト及び／又は動物の使用に適して、かつ、合理的な利益／リスク比に相当する過剰な副作用（例えば毒性、刺激及びアレルギー反応）がない成分を意味する。

【0060】

「担体」という用語は、活性成分と共に使用される治療用の希釈剤、アジュバント、賦形剤又は担体を意味する。このような薬物担体は、例えば石油、動植物又は合成に由来するものを含む油、水などの無菌液体であってもよく、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などであってもよい。いくつかの実施形態では、医薬組成物を静脈内に投与する場合、担体は水であってもよい。塩水溶液及びグルコース水溶液とグリセリン溶液を、液体担体として、特に注射液に利用できる。好適な薬物担体の実例は、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎのＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓに記載され、ここで引用により本発明に組み込まれる。このような組成物は、患者に適切な投与形態を提供するように、好適な担体と共に、臨床的有効量の抗体又は抗体断片を含有する。該製剤は投与モードに好適なものであるべきである。製剤は、アンプル、使い捨て注射器又はガラス若しくはプラスチックで製の多回投与バイアルの中に封入され得る。

【0061】

「遺伝子」という用語は、機能性タンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードするユニットを指すために使用される。当業者に理解されるように、該機能性用語は、ゲノム配列、ｃＤＮＡ配列又はその断片又は組み合わせ、及び遺伝子産物を含み、人間の手によって変化され得た遺伝子産物を含む。精製された遺伝子、核酸、タンパク質及び類似体は、一般的に関連している少なくとも１つの汚染核酸又はタンパク質から同定及び単離された場合に、これらの実体を指すために使用される。

【0062】

本明細書において使用される「ベクター」という用語は、ヌクレオチド又はアミノ酸を指し、天然のものであっても加工したものであってもよく、例えば修飾された核酸又はアミノ酸である。

【0063】

いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、（１）加水分解作用に対するタンパク質の感受性を低下させ、（２）酸化作用に対する感受性を低下させ、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変更させ、（４）結合親和性を変更させ、及び（５）このような類似体の他の物理化学又は機能特性を付与又は改善する、という効果を有する。類似体は、配列が天然に存在するペプチド配列とは異なる様々な変異タンパク質を含むことができる。例えば、天然に存在する配列（好ましくは分子間接触を形成するドメイン以外のポリペプチド部分）において単一又は複数のアミノ酸置換（好ましくは保存的アミノ酸置換）を行うことができる。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特性を大きく変えるものであってはならない（例えば、置換アミノ酸は親配列中に存在する螺旋構造を破壊したり、親配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊する傾向を有してはならない）。人工的に認識されたポリペプチドの二次構造及び三次構造の例については、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編集，Ｗ．Ｈ．ＦｒｅｅｍａｎａｎｄＣｏｍｐａｎｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９８４））；ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｏＰｒｏｔｅｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ及びＪ．Ｔｏｏｚｅ編集，ＧａｒｌａｎｄＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；及びＴｈｏｒｎｔｏｎらＮａｔｕｒｅ３５４：１０５（１９９１）に述べられている。

【0064】

抗体は、例えばタンパク質Ａ又はタンパク質Ｇを使用したアフィニティークロマトグラフィーなどの周知の方法によって精製され、主に免疫血清のＩｇＧ画分が与えられる。また、免疫グロブリンの標的である特異的抗原、又はそのエピトープをカラム上に固定することにより、免疫アフィニティークロマトグラフィーにより免疫特異的抗体を精製することができる。免疫グロブリンの精製については、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎの文章（ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ、ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ、Ｉｎｃ．、ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａＰａ．出版，第１４巻，第８期（２０００年４月１７日），第２５～２８ページ）を参照することができる。

【0065】

本明細書において使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、薬物投与に適合する任意及びすべての溶媒、安定剤、緩衝剤、分散媒、コーティング、静菌剤、等張化剤及び吸収遅延剤等を含むことを意図する。適切なベクターは最新版のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓにおいて述べされている。このような担体又は希釈剤として、水、塩水、リンゲル液、グルコース溶液及び５％のヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0066】

「投与」及び「治療」は、動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、器官又は生物学的液体を言及する場合は、外因性薬物、治療剤、診断剤又は組成物を、動物、ヒト、治療対象、細胞、組織、器官又は生物学的液体に接触させることを意味する。「投与」及び「治療」とは、例えば、治療方法、薬物動態学的方法、診断方法、研究方法及び実験方法を意味し得る。細胞を治療することは、試薬を細胞と接触させること及び試薬を流液と接触させることを含み、ここで前記流液は細胞と接触する。「投与」及び「治療」とは、例えば、試薬、診断剤、結合組成物、又はその他の細胞による、細胞に対するインビトロ治療及びエクスビボ治療を意味する。

【0067】

本明細書において使用される「抑制」又は「治療」とは、疾患に関連する症状の進行の遅延、及び／又は前記疾患で発症する若しくは発症が予測される症状の重症度の低減を含む。前記用語は、さらに、既存の症状を緩和し、他の症状を防止し、かつこれらの症状の潜在的な原因を緩和又は防止することを含む。したがって、前記用語は、疾患に罹患している脊椎動物対象、例えばヒトに有益な結果を与えていることを意味する。

【0068】

本明細書において使用する「治療有効量」又は「有効量」という用語は、抗体－薬物複合体を単独で又は他の治療剤と組み合わせて、細胞、組織又は治療対象者に投与する場合、それが治療すべき疾患又は病症を効果的に防止又は軽減する量を指す。治療上有効な用量は、さらに、例えば関連する医学的状態の治療、治癒、予防若しくは緩和である症状緩和、又は、前記症状の治療率、治癒率、予防率若しくは緩和率の向上に十分な、前記抗体－薬物複合体の量を指す。具体的な治療対象についての有効量は、治療される疾患、患者の健康全般、投与の方法経路及び副作用の重症度などの要因に依存して変化できる。有効量は、顕著な副作用又は毒性作用を避ける最大用量又は投与計画であってもよい。個体に単独で投与される活性成分を投与する場合、治療有効量は該単独の成分を意味する。組み合わせて投与する場合、治療有効量は、それが組み合わせ投与、連続投与又は同時投与かにかかわらず、治療効果を生じる活性成分の組み合わされた量を意味する。治療有効量では一般的に、症状を少なくとも１０％軽減させ、一般的に、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％軽減させる。

【0069】

モノクローナル抗体
本分野の知識及び技能に基づいてＦＳＨＲを対象とするモノクローナル抗体を製造することができる。

【0070】

従来の方法でモノクローナル抗体のＤＮＡ（例えば軽鎖ＤＮＡ及び重鎖ＤＮＡ）を容易に合成することができる。前記ＤＮＡを発現ベクター（例えば構築して得られる軽鎖発現ベクター及び重鎖発現ベクター）に配置し、次にこれらのベクターを宿主細胞にトランスフェクトすることにより、組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を実現することができ、前記宿主細胞として、例えばＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、又は、免疫グロブリンを別途生成しない骨髄腫細胞が挙げられる。抗体の組換え産生は、より詳細に以下に記載される。

【0071】

抗体－薬物複合体
ＦＳＨＲのモノクローナル抗体は薬物リンカー（例えばＭＣ－ＭＭＡＦ）と結合することができ、一般的に抗体のシステインのＳ原子に接続する。

【0072】

本発明の抗体及びその抗体－薬物複合体の治療における使用
ＦＳＨＲと特異的に結合する本発明の抗体又は抗原結合断片又は抗体－薬物複合体は、ＦＳＨＲを発現する細胞、組織等を特異的に認識するために用いることができる。

【0073】

いくつかの実施形態では、本発明はさらに疾患を治療する方法を提供する。前記方法は、それを必要とする患者に本発明に係る前記治療有効量の抗体－薬物複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、前記疾患は癌である。

【0074】

癌
本発明の抗体－薬物複合体は、癌の治療（すなわち腫瘍細胞の増殖又は生存の抑制）に用いることができる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体－薬物複合体を使用して、その成長を抑制可能な癌は一般的に前立腺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、精巣癌及び卵巣癌を含む。

【0075】

本発明の抗体及びその抗体－薬物複合体の非治療性使用
本発明の抗体及びその抗体－薬物複合体は診断測定に用いることができ、例えばＦＳＨＲの特定の細胞、組織又は血清における発現を検出することに用いることができる。診断使用のために、一般的に検出可能な部分で（直接的又は間接的に）抗体を標識する。様々な標記物を使用することができ、一般的に、ビオチン、蛍光色素、放射性ヌクレオチド、酵素、ヨウ素および生合成マーカーに分けられる。

【0076】

本発明の抗体は、体内診断測定に用いることができる。一般的に放射性核種（例えば１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ、４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、３２Ｐ、３５Ｓ又は１８Ｆ）で抗体を標識することにより、イムノシンチグラフィー（ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｏｇｒａｐｈｙ）または陽電子イメージング法で抗原又は抗体を発現する細胞を位置決めすることができる。

【0077】

医薬組成物
本発明はさらに医薬組成物を提供する。このような組成物は、有効用量の抗体－薬物複合体及び薬学的に許容される担体を含有する。

【0078】

いくつかの実施形態では、「薬学的に許容される担体」という用語は、政府の規制機関によって承認されている又は他の一般的に認識されている薬局方に列挙された動物（特にヒト）に用いられる物質を意味する。また、「薬学的に許容される担体」とは、一般的に、任意の種類の非毒性固体、半固体、又は液体充填剤、希釈剤、封入材又は製剤助剤である。

【0079】

実施例１：マウス抗ヒトＦＳＨＲモノクローナル抗体ＣＡＮ００１
１、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔにより、抗ヒトＦＳＨＲモノクローナル抗体の軽鎖及び重鎖をコードするコドン最適化ＤＮＡ断片（それぞれＳＥＱＩＤＮＯ：１とＳＥＱＩＤＮＯ：２に示すとおりである）を合成し、合成されたＤＮＡ断片のヌクレオチド配列を配列決定した。

【0080】

ＳＥＱＩＤＮＯ：１：軽鎖ＤＮＡ配列
ＡＴＧＧＣＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＡＣＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＴＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＡＣＧＣＣＧＣＴＣＧＧＣＣＣＣＡＧＡＴＡＧＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＡＴＣＡＣＣＣＧＴＣＡＴＡＡＴＧＡＧＣＧＣＡＴＣＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＡＧＧＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＡＴＧＣＴＣＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＡＧＣＧＴＧＡＧＴＡＧＴＴＣＴＴＡＴＣＴＣＴＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＡＣＣＣＧＧＡＴＣＴＴＣＴＡＧＴＡＡＡＴＴＧＴＧＧＡＴＡＴＡＴＴＣＴＡＣＧＴＣＴＡＡＴＣＴＴＧＣＧＴＣＡＧＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＴＣＧＧＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＧＧＴＣＣＧＧＧＡＣＣＡＧＣＴＡＴＡＧＴＴＴＧＡＣＴＡＴＡＡＧＴＡＧＴＡＴＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＧＣＡＧＣＴＡＧＣＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＴＣＡＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＴＡＴＣＣＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＧＧＧＧＧＣＧＧＡＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＧＣＧＧＣＡＣＣＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＣＴＣＡＴＣＡＧＡＡＣＡＧＣＴＣＡＣＴＴＣＡＧＧＣＧＧＣＧＣＣＡＧＴＧＴＧＧＴＧＴＧＴＴＴＣＣＴＣＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＴＡＡＡＧＡＣＡＴＡＡＡＴＧＴＡＡＡＡＴＧＧＡＡＡＡＴＡＧＡＣＧＧＴＡＧＣＧＡＧＣＧＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＧＴＧＣＴＧＡＡＣＴＣＡＴＧＧＡＣＧＧＡＣＣＡＡＧＡＴＴＣＣＡＡＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＴＡＴＴＣＡＡＴＧＡＧＴＴＣＴＡＣＡＴＴＧＡＣＡＣＴＴＡＣＧＡＡＡＧＡＣＧＡＡＴＡＣＧＡＧＣＧＣＣＡＣＡＡＴＴＣＣＴＡＴＡＣＧＴＧＣＧＡＡＧＣＡＡＣＧＣＡＣＡＡＡＡＣＣＴＣＣＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＴＴＧＴＧＡＡＧＴＣＣＴＴＣＡＡＴＡＧＧＡＡＴＧＡＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡ
軽鎖可変領域のＤＮＡ配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の第６４位～第４０５位であり、軽鎖ＣＤＲ１のＤＮＡ配列は、第１３０位～第１６８位であり、軽鎖ＣＤＲ２のＤＮＡ配列は、第２１４位～第２３４位であり、軽鎖ＣＤＲ３のＤＮＡ配列は、第３３１位～第３５７位である。

【0081】

ＳＥＱＩＤＮＯ：２：重鎖ＤＮＡ配列
ＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＣＡＧＴＴＧＧＧＴＣＴＴＴＣＴＣＧＴＧＧＣＡＣＴＧＴＴＴＣＧＣＧＧＧＧＴＡＣＡＧＴＧＣＧＣＴＡＧＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＧＣＧＧＡＧＣＴＣＧＴＴＡＡＡＣＣＧＧＧＧＧＣＧＡＧＣＧＴＣＡＡＣＣＴＴＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＣＴＣＣＧＧＴＴＡＴＡＣＣＴＴＴＡＣＡＡＧＴＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＣＧＡＣＣＡＧＧＧＣＡＡＧＧＡＣＧＣＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＧＧＡＡＡＴＡＡＡＴＣＣＡＡＧＧＡＡＣＧＧＣＡＧＡＡＣＧＡＡＴＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＡＴＣＣＡＡＧＧＣＧＡＣＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＴＴＣＡＡＣＴＧＣＴＴＡＴＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＴＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＡＧＧＡＴＡＧＴＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＧＴＴＧＣＧＣＣＡＧＧＴＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＧＴＴＣＧＣＣＴＡＣＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＡＣＧＣＴＣＧＴＴＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＣＧＧＣＣＡＡＧＡＣＧＡＣＴＧＣＧＣＣＴＴＣＡＧＴＡＴＡＴＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＴＧＣＧＧＡＧＡＴＡＣＧＡＣＡＧＧＴＡＧＴＴＣＴＧＴＡＡＣＴＴＴＧＧＧＡＴＧＣＣＴＣＧＴＴＡＡＧＧＧＴＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＧＣＣＧＧＴＣＡＣＣＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＡＴＣＡＣＴＣＴＣＣＴＣＡＧＧＧＧＴＡＣＡＴＡＣＡＴＴＴＣＣＡＧＣＧＧＴＴＴＴＧＣＡＧＡＧＣＧＡＣＣＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＣＡＧＴＡＧＣＡＧＴＧＴＡＡＣＣＧＴＴＡＣＣＴＣＡＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＣＴＡＧＣＣＡＧＡＧＴＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＴＧＴＴＧＣＡＣＡＣＣＣＧＧＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＡＡＡＡｃＴＣＧＡＧＣＣＴＡＧＡＧＧＡＣＣＧＡＣＧＡＴＡＡＡＧＣＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣＴＴＧＣＡＡＡＴＧＴＣＣＧＧＣＡＣＣＴＡＡＣＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＣＴＧＴＴＴＴＴＡＴＡＴＴＴＣＣＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＡＡＧＧＡＣＧＴＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＡＧＴＣＴＧＡＧＣＣＣＴＡＴＡＧＴＣＡＣＧＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＡＴＧＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＧＡＴＣＣＣＧＡＣＧＴＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＡＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＡＣＡＣＡＧＣＣＣＡＡＡＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＣＣＧＣＧＡＡＧＡＴＴＡＣＡＡＴＡＧＴＡＣＡＣＴＧＣＧＧＧＴＡＧＴＣＴＣＴＧＣＣＣＴＣＣＣＡＡＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＣＧＧＧＡＡＡＧＡＧＴＴＣＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＣＡＡＴＡＡＣＡＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＡＴＡＧＡＡＡＧＡＡＣＴＡＴＡＡＧＴＡＡＡＣＣＡＡＡＧＧＧＧＡＧＣＧＴＡＡＧＡＧＣＧＣＣＣＣＡＡＧＴＧＴＡＴＧＴＣＣＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＡＣＡＡＧＴＴＡＣＴＣＴＣＡＣＡＴＧＣＡＴＧＧＴＡＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＴＧＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＧＴＡＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＡＣＡＡＣＧＧＧＡＡＧＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＴＡＣＡＧＡＧＣＣＣＧＴＴＣＴＣＧＡＴＴＣＴＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＡＣＴＴＴＡＴＧＴＡＴＡＧＣＡＡＡＣＴＣＣＧＧＧＴＧＧＡＡＡＡＡＡＡＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＧＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＴＴＡＴＴＣＡＴＧＴＴＣＴＧＴＴＧＴＴＣＡＣＧＡＧＧＧＴＴＴＧＣＡＴＡＡＣＣＡＴＣＡＴＡＣＧＡＣＧＡＡＡＴＣＴＴＴＴＴＣＣＡＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＴＧＡ
重鎖可変領域のＤＮＡ配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２の第６４位～第４４１位であり、重鎖ＣＤＲ１のＤＮＡ配列は、第１５４位～第１６８位であり、重鎖ＣＤＲ２のＤＮＡ配列は、第２１１位～第２６１位であり、重鎖ＣＤＲ３のＤＮＡ配列は、第３５８位～第３７８位である。

【0082】

２、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎクローニング法により、軽鎖のＤＮＡ配列を、ｐｃＤＮＡ３．１（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒから購入）のＨｉｎｄＩＩＩ部位とＥｃｏＲＩ部位との間にクローニングして、軽鎖発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣを構築した。

【0083】

３、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎクローニング法により、重鎖のＤＮＡ配列を、ｐｃＤＮＡ３．１のＨｉｎｄＩＩＩ部位とＥｃｏＲＩ部位との間にクローニングして、重鎖発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＨＣを構築した。

【0084】

ＳＥＱＩＤＮＯ：３：軽鎖アミノ酸配列
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＩＶＬＴＱＳＰＶＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＬＴＣＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＳＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＳＹＦＣＨＱＷＳＳＹＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
Ｋａｂａｔナンバリングシステム従ったナンバリングによれば、軽鎖可変領域のアミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：３の第２２位～第１３５位（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）であり、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は第４４位～第５６位（ＣＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：６））であり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は第７２位～第７８位（ＳＴＳＮＬＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７））であり、軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は第１１１位～第１１９位（ＨＱＷＳＳＹＰＰＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８））である。

【0085】

ＳＥＱＩＤＮＯ：４：重鎖アミノ酸配列
ＭＥＦＧＬＳＷＶＦＬＶＡＬＦＲＧＶＱＣＡＳＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＮＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＲＥＷＩＧＥＩＮＰＲＮＧＲＴＮＹＮＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＣＣＡＲＬＳＶＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＬＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＡＡＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＧＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ
Ｋａｂａｔナンバリングシステム従ったナンバリングによれば、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：４の第２２位～第１４７位（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）であり、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は第５２位～第５６位（ＳＹＷＭＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０））であり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は第７１位～第８７位（ＥＩＮＰＲＮＧＲＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１））であり、重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は第１２０位～第１２６位（ＬＳＶＧＦＡＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２））である。

【0086】

実施例２：ヒトＦＳＨＲ遺伝子のクローニング及び発現ベクターの構築
ＯＶＣＡＲ３細胞株（ＡＴＣＣ社から購入、製品カタログ番号がｈｔｂ－１６１）のＲＮＡを抽出してｃＤＮＡに逆転写し、ｃＤＮＡをテンプレートとしてＦＳＨＲ－Ｆ及びＦＳＨＲ－ＲをプライマーとしてＰＣＲ増幅を行ってＦＳＨＲ遺伝子を含有する断片を得た。

【0087】

ＦＳＨＲ－Ｆ：５’－ｇｔｔｔＣＣＡＣＡＡＣＣａｔｇｇｃｃｃｔｇｃｔｃｃｔｇｇ－３’（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）；
ＦＳＨＲ－Ｒ：５’－ｇｇｔｔｇａｔｔａａｃｔｃｇａｇｔｔａｇｔｔｔｔｇｇｇｃｔａａａｔｇａｃｔｔａｇａｇｇｇａｃａａｇ－３’（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）。

【0088】

ＦＳＨＲ遺伝子を含有する断片をクローニングベクターｐＪＥＴ２．１（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒから購入、製品カタログ番号がＳＯ５０１）にクローニングし、ｐＪＥＴ２．１－ＦＳＨＲプラスミドを構築した。配列決定した後、挿入断片をｐＭＳＧβ３のＮｃｏＩとＸｈｏＩ部位の間にサブクローニングし、ｐＭＳＧβ３＿ＦＳＨＲプラスミドを構築した。ｐＭＳＧβ３＿ＦＳＨＲのプラスミドプロファイルは図１に示すとおりである。

【0089】

実施例３：ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に抗体ＣＡＮ００１を産生
ＣＡＮ００１抗体を作製するために、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を無血清培地で培養し、ＣＡＮ００１重鎖及び軽鎖をコードするベクターｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＨＣ及びｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣ（質量比１：２）と、２５ｋＤ線形ＰＥＩポリマー（ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅ）とを用いて、ベクターのポリマー対する質量比が１：３という比率で、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をコトランスフェクトした。トランスフェクトした後にＨＥＫ２９３Ｔ細胞を７２時間培養し、培養上清を収集し、すなわちＣＡＮ００１抗体を含有する上清である。

【0090】

実施例４：ＣＡＮ００１抗体のフローサイトメトリー分析
ｐＭＳＧβ３＿ＦＳＨＲプラスミドでＨＥＫ２９３Ｔ細胞をトランスフェクトし、ＦＳＨＲを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を得て、実験群とする。ｐｍａｘＧＦＰ（Ｌｏｎｚａ）でＨＥＫ２９３Ｔ細胞をトランスフェクトし、ＧＦＰタンパク質を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を得て、陰性対照群とする。実験群と陰性対照群の細胞をそれぞれ実施例３で得られたＣＡＮ００１抗体を含有する上清と共にインキュベートした後、ＣＡＮ００１抗体で被覆された細胞を洗浄し、かつＡＰＣ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ二次抗体とインキュベートする。ＢＤｃａｌｉｂｕｒを用いてフローサイトメトリーを行い、かつＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェアを用いて分析する。結果は、図２に示すように、ＣＡＮ００１抗体を含有する上清で、ＦＳＨＲを発現する細胞を特異的に染色し、ＧＦＰを発現する細胞を染色しないことを示す。

【0091】

さらに最適なＣＡＮ００１上清をスクリーニングするために、異なる比率によるプラスミドｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＨＣ及びｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣの混合物（図３において左から右へｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＨＣとｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣの質量比はそれぞれ１：２、１：１及び１：３である）と、２５ｋＤ線形ＰＥＩポリマーとを用いて、ベクターのポリマー対する質量比が１：３という比率で、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をコトランスフェクトした。トランスフェクトして７２時間後、上清を収集し、ＦＳＨＲを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を染色するために用いて、ＧＦＰタンパク質を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を陰性対照とした。ステップは上述したとおりである。フローサイトメトリー分析結果は図３に示され、結果によると、ｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＨＣとｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣの質量比が１：２である場合、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞の染色される陽性率が最も高く（３８．３％）、ｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＨＣとｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣの質量比が１：１、１：３である場合、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞の染色される陽性率がそれぞれ３０．０２％と３４．７５％である。ｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＨＣとｐｃＤＮＡ３．１＿ＣＡＮ００１ＬＣの質量比を１：２にして、ＣＡＮ００１抗体を含有する上清を調製する。

【0092】

実施例５：ＣＡＮ００１抗体でヒト胎盤及び腫瘍組織に対してＩＨＣ染色を行った。

【0093】

実験試薬：
ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ＝７．４）：１０００ｍｌの蒸留水、８．０ｇのＮａＣｌ、０．２ｇのＫＣｌ、１．１４９ｇのＮａ_２ＨＰＯ_４、０．２ｇのＮａＨ_２ＰＯ_４。

【0094】

０．０１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）：
Ａ液：２９．４１ｇのクエン酸三ナトリウム－２Ｈ_２Ｏ＋１０００ｍｌの蒸留水
Ｂ液：２１ｇのクエン酸＋１０００ｍｌの蒸留水
抗原賦活化液の調製：８２ｍｌのＡ液＋１８ｍｌのＢ液＋９００ｍｌの蒸留水
ヘマトキシリン発色液（光で酸化するため、暗所で保存する）：配合比率はヘマトキシリンキット（福州邁新バイオテクノロジー開発有限公司から購入、製品カタログ番号がＣＴＳ１０９７）の説明書を参照した。最適な染色を達成するために、予備実験で得られた試験結果に基づいて比率を調整してもよい。通常の配合比率：１ｍｌのヘマトキシリン原液＋４ｍｌの蒸留水
ＧＴＶｉｓｉｏｎIII抗マウス／ウサギ汎用型免疫組織化学検査キットは遺伝子科学技術（上海）股フン有限公司から購入され、製品カタログ番号がＧＫ５００７０５であり、Ａ液（二次抗体液）：ＨＲＰ標識ポリマー（抗マウス、ウサギ）、Ｂ液：ＤＡＢ緩衝希釈液Ｃ液：ＤＡＢ原液。ＤＡＢ発色液の調製：１ｍｌのＢ液＋２０μｌのＣ液。発色結果：褐色。該キットは、アビジン、ストレプトアビジンを含まず、内因性ビオチンに干渉されない。

【0095】

実験ステップ：
１）脱パラフィン及び水和
ヒト胎盤又は卵巣癌組織のパラフィン包埋切片して７０℃の恒温箱で約４０分間ベークする。次に切片をキシレンに入れて１５分間浸漬し、次に無水エタノール、９５％エタノール、７５％エタノールにそれぞれ５分間浸漬して勾配的に水和する。

【0096】

２）内因性ペルオキシダーゼの除去
切片を３％の過酸化水素に約１５分間浸漬し、組織内因性カタラーゼを除去し、次にＰＢＳ緩衝液で毎回５分間×３回洗浄する。

【0097】

３）抗原賦活化
沸騰水に抗原賦活化液（ｐＨ６．０）を加える。切片を賦活化溶液内に入れ、最高圧力で、約１０分間加熱した後に蓋を開け、室温まで自然冷却させる。

【0098】

４）ブロッキング、抗体インキュベート
スライドが室温まで冷却した後、ＰＢＳ緩衝液で毎回５分間×３回洗浄し、１０％のヤギ血清／ＰＢＳブロッキング液を標本に滴下し、ウェットボックス内において室温で１時間静置してブロッキングする。その後に、サンプルに標的タンパク質抗体ＣＡＮ００１（１：２００－８００）を、各標本に約５０μＬ滴下し、ウェットボックスに置いて４℃で一晩越した後にＰＢＳ緩衝液で毎回５分間×３回洗浄し、ヤギ抗マウス二次抗体５０μＬ（１：２００）を滴下し、ウェットボックスに置いて室温で１時間静置し、ＰＢＳ緩衝液で毎回５分間×３回洗浄する。

【0099】

５）ＤＡＢ発色
各切片組織に１、２滴のＤＡＢ発色液を滴下し、同時に顕微鏡で染色程度を観察し、程度が適切である場合にＰＢＳ緩衝液で反応を停止し、その後にヘマトキシリンで細胞核を３０秒間対比染色し、ＰＢＳ緩衝液で反応を停止する。

【0100】

６）封入
封入剤を組織の近傍に滴下し、方形カバーガラスをかける。気泡の発生を回避するために、まず片側を平らに下ろしてから、他側を平らに下ろし、最後にカバーガラスを数回軽く押さえ、封入後２４時間乾燥させる。

【0101】

ＣＡＮ００１抗体によるヒト胎盤に対するＩＨＣ染色は図４に示すとおりである。

【0102】

ＣＡＮ００１抗体による卵巣癌組織及び隣接組織に対するＩＨＣ染色は図５に示すとおりである。

【0103】

実施例６：ＣＡＮ００１抗体－薬物複合体の調製
ＰＢＳ緩衝液（６６０．０μＬ、ｐＨ＝７）で抗体溶液ＣＡＮ００１（１０３９．２μＬ、７．６６ｍｇ／ｍＬ）を希釈し、濃度が４．６８ｍｇ／ｍＬのＣＡＮ００１抗体溶液を１６９９．２μＬ得た。上記ＣＡＮ００１抗体溶液に、ＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）を含有するＰＢＳ溶液（１４．７μＬ、２．５ｍＭ、ｐＨ＝７）を添加し、得られた溶液を軽く均一にボルテックスミックスした後に３７℃で２時間インキュベートした。３．５ｍＭの薬物リンカーＭＣ－ＭＭＡＦ（ＭａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌａｕｒｉｓｔａｔｉｎＦ，マレイミドカプロイル－モノメチルアウリスタチンＦ）を含有するＤＭＳＯ溶液を１３６．５μＬ添加し、溶液を軽くボルテックスミックスし、２５℃で１時間保持し、反応から粗試料を得た。粗試料をｉｌｌｕｓｔｒａＮＡＰ－１０カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ社から購入）にかけて精製し、かつ０．２５μｍの精密フィルターで濾過して、最終的な抗体－薬物複合体ＣＡＮ００１－ＭＣ－ＭＭＡＦを、３．１ｍＬ、２．５６ｍｇ／ｍＬ、ＤＡＲ（薬物抗体比）＝５．９５、ＵｍＡｂ％（未結合抗体百分率）＝１．３％、Ａｇｇ％（重合抗体百分率）＝１．６％で得た。

【0104】

ＣＡＮ００１－ＭＣ－ＭＭＡＦの構造式は式１に示すとおりである。

【0105】

ＣＡＮ００１－ＭＣ－ＭＭＡＦの疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）は図６に示すとおりである。

【0106】

ＣＡＮ００１－ＭＣ－ＭＭＡＦのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は図７に示すとおりである。

【0107】

【化1】

実施例７：ＣＡＮ００１抗体－薬物複合体の細胞殺傷実験
本実施例は、９６ウェルプレートを用いてＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ細胞活力測定法により、ＣＡＮ００１抗体－薬物複合体の癌細胞株に対する作用を測定する。

【0108】

ヒト卵巣癌細胞株ＯＶＣＡＲ－３、Ａ２７８０、３ＡＯは、いずれもＡＴＣＣから購入された。

【0109】

細胞を、１０００細胞／ウェルで、９６ウェル細胞培養プレートに接種し、各ウェルの培地の総量を２００μＬに制御した。細胞が容器壁に付着した後、対応する薬物を投与して細胞を処理し、異なる時点（０ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ）で薬物を除去し、かつＭＴＳ測定溶液（ＭＴＳ試薬１０μＬ＋１９０μＬ完全培地）（ＭＴＳ細胞増殖アッセイキット（比色法）が艾美捷社の製品である）を添加し、その後に９６ウェルの細胞培養プレートをＣＯ_２細胞恒温インキュベータに置いて光を避けて約２時間インキュベートし、その後に細胞培養プレートを取り出し、マイクロプレートリーダーに配置し、各群の細胞の４９２ｎｍでの吸光度を測定する。

【0110】

各化合物の％抑制率及びＩＣ５０を、ＸＬＦｉｔカーブフィッティングソフトウェアにより計算した。結果を表１に示す。

【0111】

表１

【表1】

表１から分かるように、ＭＭＡＦに比べて、ＣＡＮ００１抗体－薬物複合体ＣＡＮ００１－ＭＣ－ＭＭＡＦは卵巣癌細胞に対して顕著に向上した殺傷効果を有する。