特表 2023-553520 コロナウイルス抗ウイルス剤としてのテラメプロコールおよびノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-12-21

(54)【発明の名称】コロナウイルス抗ウイルス剤としてのテラメプロコールおよびノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）誘導体

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20231214BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 31/05 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 31/09 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 31/085 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 9/52 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 47/40 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 47/14 20170101ALI20231214BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20231214BHJP

   A61K 47/20 20060101ALI20231214BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20231214BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P31/14

A61K31/05

A61K31/09

A61K31/085

A61K9/14

A61K9/48

A61K9/52

A61K9/10

A61K9/08

A61K47/40

A61K47/36

A61K47/14

A61K47/18

A61K47/20

A61K47/10

【審査請求】有

【予備審査請求】有

(21)【出願番号】P 2023543286

(86)(22)【出願日】2022-01-13

(85)【翻訳文提出日】2023-09-14

(86)【国際出願番号】 US2022012297

(87)【国際公開番号】W WO2022159326

(87)【国際公開日】2022-07-28

(31)【優先権主張番号】63/139,296

(32)【優先日】2021-01-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523271402

【氏名又は名称】エリモス・ファーマシューティカルズ・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー

【氏名又は名称原語表記】Ｅｒｉｍｏｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， ＬＬＣ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100150500

【弁理士】

【氏名又は名称】森本 靖

(74)【代理人】

【識別番号】100176474

【弁理士】

【氏名又は名称】秋山 信彦

(72)【発明者】

【氏名】クー，ジェフリー

(72)【発明者】

【氏名】グレン，ステファン ディ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076AA22

4C076AA29

4C076AA53

4C076AA56

4C076AA67

4C076BB01

4C076BB13

4C076CC35

4C076DD46

4C076DD52

4C076DD57

4C076DD69

4C076EE23

4C076EE39

4C076EE42

4C076FF15

4C076FF31

4C084AA17

4C084MA17

4C084MA23

4C084MA37

4C084MA41

4C084MA52

4C084MA66

4C084NA02

4C084NA12

4C084ZB331

4C084ZB332

4C206AA01

4C206AA02

4C206CA13

4C206CA27

4C206CA34

4C206KA01

4C206KA17

4C206MA01

4C206MA04

4C206MA37

4C206MA43

4C206MA57

4C206MA61

4C206MA72

4C206MA86

4C206NA02

4C206NA12

4C206ZB33

(57)【要約】

ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）誘導体（テラメプロコール（ＴＭＰ）を含む）は、コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む）に感染しているか、または感染の危険性のある患者において抗ウイルス剤として使用するのに有用性がある。０.２μＭ～２０μＭのＴＭＰで処理したコロナウイルス感染の細胞を用いるインビトロでの研究では、インビトロにてウイルスＲＮＡ活性の減少が示される。処理関連の細胞毒性は０.２μＭのＴＭＰでは示されず、５μＭのＴＭＰで低割合にて示された。適用する場合、ＮＤＧＡ誘導体は０.１～５０μＭのモル濃度で静脈内に、あるいは０.１～１００μＭのモル濃度で経口にて患者に投与され得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）誘導体をコロナウイルスに感染しているか、またはその感染の危険性のある患者に投与することを含む、方法。

【請求項2】

ＮＤＧＡ誘導体が、テラメプロコール、３’－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ、テトラアセチル ＮＤＧＡ、マルトース－トリ－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ、テトラ－Ｏ－グリシル ＮＤＧＡ、ビス－環状サルフェート ＮＤＧＡ；ビス－環状カーボネート ＮＤＧＡ；メチレンジオキシフェニル ＮＤＧＡ；テトラアセテート ＮＤＧＡからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ＮＤＧＡ誘導体が、式（１）：

【化1】

で示されるＮＤＧＡ構造の１または複数の２、３、４、５、６、２’、３’、４’、５’、および６’位に、構成基（Ｚ）を付加することによって製造され、
ここで、Ｚが、
独立して、メチル、エチル、アセチル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ヘキサノイル、プロピオニル、ピペリジン－１－イル、アセトニド、フルオロ、モルホリノ、ヒドロキシル、メトキシル、ヒドロキシ－メトキシル、ジメチル、ジヒドロキシル、ジメトキシル、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、トリメトキシル基、塩素、臭素、ニトライト、アミノ、およびアセトアミドからなる群より独立して選択されるか；
（ＣＨ_２）_ｘＨａｌ（ここで、ｘは１～１０の整数であり、Ｈａｌはハロゲン原子である）；
（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ（ここで、ｙは１～１０の整数である）；あるいは
カルバメート基である、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

コロナウイルスが、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、中東呼吸器症候群関連のコロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）、および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

ＮＤＧＡ誘導体を投与することでウイルスＲＮＡ複製が阻害される、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

ＮＤＧＡ誘導体が、大きさが１～１００ナノメートルの範囲にある、固形コロイドナノ粒子で形成される、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

ＮＤＧＡ誘導体を、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリン、中鎖トリグリセリド、モノオレイン酸グリセリル、コハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリソルベート２０、ナリンジン、マクロゴール－１５－ヒドロキシステアレート、およびその組み合わせからなる群より選択される化合物を含む、溶液または懸濁液に可溶化させる、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

ＮＤＧＡ誘導体が静脈内または経口投与用に製剤化される、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

静脈内投与用の製剤が０.１～５０μＭのＮＤＧＡ誘導体を含む、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

経口投与用の製剤が０.１～１００μＭのＮＤＧＡ誘導体を含む、請求項８に記載の方法。

【請求項11】

テラメプロコール（ＴＭＰ）をコロナウイルスに感染しているか、またはその感染の危険性のある患者に投与することを含む、方法。

【請求項12】

コロナウイルスが、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、中東呼吸器症候群関連のコロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）、および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）からなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

ＴＭＰを投与することでウイルスＲＮＡ複製が阻害される、請求項１１に記載の方法。

【請求項14】

ＴＭＰが、大きさが１～１００ナノメートルの範囲にある、固形コロイドナノ粒子で形成される、請求項１１に記載の方法。

【請求項15】

ＴＭＰを、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリン、中鎖トリグリセリド、モノオレイン酸グリセリル、コハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリソルベート２０、ナリンジン、マクロゴール－１５－ヒドロキシステアレート、およびその組み合わせからなる群より選択される化合物を含む、溶液または懸濁液に可溶化させる、請求項１１に記載の方法。

【請求項16】

ＴＭＰが静脈内投与用の溶液として製剤化される、請求項１１に記載の方法。

【請求項17】

静脈内投与用の溶液が０.１～５０μＭのＴＭＰを含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

ＴＭＰが、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリンを含む水溶液中にて可溶化される、請求項１６に記載の方法。

【請求項19】

１～１０ｍｇ／ｍＬのＴＭＰが、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリンを２０～５０％で含む水溶液中にて可溶化される、請求項１６に記載の方法。

【請求項20】

６ｍｇ／ｍＬのＴＭＰが、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリンを３０％で含む水溶液中にて可溶化される、請求項１６に記載の方法。

【請求項21】

ＴＭＰが経口投与用に製剤化される、請求項１１に記載の方法。

【請求項22】

経口投与用の製剤が０.１～１００μＭのＴＭＰを含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

ＴＭＰが、中鎖トリグリセリドと、コハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールとを含む懸濁液中にて可溶化される、請求項２１に記載の方法。

【請求項24】

１００～５００ｍｇ／ｍＬのＴＭＰが、中鎖トリグリセリドと、５０～１００ｍｇ／ｍＬのコハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールとを含む懸濁液中にて可溶化される、請求項２１に記載の方法。

【請求項25】

３００ｍｇ／ｍＬのＴＭＰが、中鎖トリグリセリドと、８５～９０ｍｇ／ｍＬのコハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールとを含む懸濁液中にて可溶化される、請求項２１に記載の方法。

【請求項26】

経口用製剤が遅延放出型ソフトゼラチンカプセルである、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

経口用製剤が持続放出型ソフトゼラチンカプセルである、請求項２５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願との相互参照
本願は、２０２１年１月１９日付け出願の米国仮特許出願番号６３／１３９,２９６の優先権およびその利益を主張するものであり、その全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

発明の分野
本発明は、一般に、コロナウイルス抗ウイルス剤に、より具体的には、テラメプロコール（ＴＭＰ）などのノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）誘導体のコロナウイルスＲＮＡのインビトロでの複製阻害能に関する。

【背景技術】

【0003】

コロナウイルス病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）での感染によって引き起こされる、伝染性疾患である。ＣＯＶＩＤ－１９は、呼吸器経路を介してヒトからヒトへと広がり、上気道（副鼻腔、鼻、喉）および下気道（気管および肺）の両方に影響を及ぼす。最初は、肺がＣＯＶＩＤ－１９により最も影響を受ける器官である。というのも、該ウイルスはアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）という酵素を介して宿主細胞にアクセスし、それは肺のＩＩ型肺胞細胞に最も多量に存在するからである。ある患者では、ウイルス感染が他の器官および組織に広がる。ウイルスは、「スパイク」（ペプロマー）と称される特定の表面糖タンパク質を用いてＡＣＥ２と結合し、宿主細胞に侵入する。各組織におけるＡＣＥ２の密度は、その組織での疾患の重篤度と相関している。肺胞疾患が進行するにつれて、呼吸不全を発症するかもしれず、死に至る可能性がある。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は気道のＡＣＥ２発現性上皮細胞に対して指向性を有するが、重度のＣＯＶＩＤ－１９の患者は全身性炎症亢進の徴候がある。高濃度のＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－６、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターフェロン－γ誘導性タンパク質１０（ＩＰ－１０）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ－１）、マクロファージ炎症性タンパク質１－α（ＭＩＰ－１α）、および腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）の臨床検査室での知見は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）であることを示し、根本的に免疫病理であることを示唆する。ＨＣｏＶ－ＮＬ６３（ＮＬ６３）は、２００４年に細気管支炎の7カ月齢の子供で発見されたコロナウイルスのもう一つ別の種である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と同様に、ＮＬ６３は、ＡＣＥ２と結合することでその宿主細胞に侵入する、エンベロープ型のプラス鎖、一本鎖ＲＮＡウイルスである。

【0004】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫性を付与するのに数種のワクチンが製造されたが、これらのワクチンの保護期間は不明であり、おそらくは一般的な集団の中で変化し；かくして、ＣＯＶＩＤ－１９に罹患している患者は治療を必要するであろう。現在、レムデシビル（商品名：ベクラリー（VEKLURY）（登録商標）、Gilead Sciences社、County Cork、Ireland）が、ＣＯＶＩＤ－１９を治療するのに米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認されている、唯一の薬物である。レムデシビルは２０２０年１０月に米国にて医薬用に承認された。２０２０年１１月に、ＦＤＡは、ＣＯＶＩＤ－１９が疑われるか、確認された、特定の入院患者に投与され得る薬物（商品名：バリシチニブ（BARICITINIB）（登録商標）、Eli Lily and Company、Indianapolis, IN, USA）に緊急使用の許可を付与したが、それはレムデシビルと併用する場合だけであった。ＣＯＶＩＤ－１９、およびＮＬ－６３および他のコロナウイルスによって引き起こされる病気を治療するのに使用され得る、他の薬物に対する要求が今なお残っている。

【発明の概要】

【0005】

１の態様において、本発明は、コロナウイルスに感染した患者に、またはコロナウイルス感染の危険性のある患者に、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）誘導体を投与することを含む、方法を提供することで、当該分野における要求を克服する。

【0006】

もう一つ別の態様において、本発明は、コロナウイルスに感染した患者に、またはコロナウイルス感染の危険性のある患者に、テラメプロコール（ＴＭＰ）を投与することを含む、方法を提供することで、当該分野における要求を克服する。

【0007】

さらなる態様において、ＮＤＧＡ誘導体の投与はウイルスＲＮＡ複製を阻害する。

【0008】

もう一つ別の態様において、ＴＭＰの投与はウイルスＲＮＡ複製を阻害する。

【0009】

１の実施態様において、コロナウイルスは、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、中東呼吸器症候群関連のコロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）、および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）からなる群より選択される。

【0010】

もう一つ別の実施態様において、ＮＤＧＡ誘導体は、テラメプロコール、３’－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ、テトラアセチル ＮＤＧＡ、マルトース－トリ－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ、テトラ－Ｏ－グリシル ＮＤＧＡ、ビス－環状サルフェート ＮＤＧＡ；ビス－環状カーボネート ＮＤＧＡ；メチレンジオキシフェニル ＮＤＧＡ；テトラアセテート ＮＤＧＡからなる群より選択される。

【0011】

さらなる実施態様において、ＮＤＧＡ誘導体は、式（１）：

【化1】

で示されるＮＤＧＡ構造の１または複数の２、３、４、５、６、２’、３’、４’、５’、および６’位に、構成基（Ｚ）を付加することによって製造され、
ここで、Ｚは、独立して、メチル、エチル、アセチル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ヘキサノイル、プロピオニル、ピペリジン－１－イル、アセトニド、フルオロ、モルホリノ、ヒドロキシル、メトキシル、ヒドロキシ－メトキシル、ジメチル、ジヒドロキシル、ジメトキシル、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、トリメトキシル基、塩素、臭素、ニトライト、アミノ、およびアセトアミドからなる群より独立して選択されるか；（ＣＨ_２）_ｘＨ（ここで、ｘは１～１０の整数であり、Ｈはハロゲン原子である）；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ（ここで、ｙは１～１０の整数であり、Ｈはハロゲン原子である）；あるいはカルバメート基である。

【0012】

もう一つ別の実施態様において、ＮＤＧＡ誘導体は、大きさが１～１００ナノメートルの範囲にある、固形コロイドナノ粒子で形成される。

【0013】

さらなる態様において、ＴＭＰは、大きさが１～１００ナノメートルの範囲にある、固形コロイドナノ粒子で形成される。

【0014】

もう一つ別の実施態様において、ＮＤＧＡ誘導体を、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリン、中鎖トリグリセリド、モノオレイン酸グリセリル、コハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリソルベート２０、ナリンジン、マクロゴール－１５－ヒドロキシステアレート、およびその組み合わせからなる群より選択される化合物を含む、溶液または懸濁液に可溶化させる。

【0015】

さらなる実施態様において、ＴＭＰを、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリン、中鎖トリグリセリド、モノオレイン酸グリセリル、コハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリソルベート２０、ナリンジン、マクロゴール－１５－ヒドロキシステアレート、およびその組み合わせからなる群より選択される化合物を含む、溶液または懸濁液に可溶化させる。

【0016】

もう一つ別の実施態様において、ＮＤＧＡ誘導体は静脈内または経口投与用に製剤化される。

【0017】

さらなる実施態様において、静脈内投与用の製剤は０.１～５０μＭのＮＤＧＡ誘導体を含む。

【0018】

もう一つ別の実施態様において、経口投与用の製剤は０.１～１００μＭのＮＤＧＡ誘導体を含む。

【0019】

さらなる実施態様において、ＴＭＰは静脈内投与用の溶液として製剤化される。

【0020】

もう一つ別の実施態様において、静脈内投与用の溶液は０.１～５０μＭのＴＭＰを含む。

【0021】

さらなる実施態様において、静脈内投与用の溶液は（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリンを含む水溶液に可溶化させたＴＭＰを含む。

【0022】

もう一つ別の実施態様において、静脈内投与用の溶液は、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリンを２０～５０％で含む水溶液に１～１０ｍｇ／ｍＬのＴＭＰを可溶化させる。

【0023】

さらなる実施態様において、静脈内投与用の溶液は、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリンを３０％で含む水溶液に６ｍｇ／ｍＬのＴＭＰを可溶化させる。

【0024】

もう一つ別の実施態様において、ＴＭＰを経口投与用に製剤化させる。

【0025】

さらなる実施態様において、経口投与用の製剤は０.１～１００μＭのＴＭＰを含む。

【0026】

もう一つ別の実施態様において、経口投与用の溶液は、中鎖トリグリセリドおよびコハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールを含む懸濁液に、ＴＭＰを可溶化させて含む。

【0027】

さらなる実施態様において、経口投与用の溶液は、中鎖トリグリセリドおよび５０～１００ｍｇ／ｍＬのコハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールを含む懸濁液に、１００～５００ｍｇ／ｍＬのＴＭＰを可溶化させて含む。

【0028】

もう一つ別の実施態様において、経口投与用の溶液は、中鎖トリグリセリドおよび８５～９０ｍｇ／ｍＬのコハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールを含む懸濁液に、３００ｍｇ／ｍＬのＴＭＰを可溶化させて含む。

【0029】

さらなる実施態様において、経口製剤は、遅延放出型ソフトゼラチンカプセルである。

【0030】

もう一つ別の実施態様において、経口製剤は、徐放型ソフトゼラチンカプセルである。

【0031】

本発明のさらなる態様および／または実施態様が、以下に記載する発明の詳細な説明において、限定することなく、提供されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0032】

【図1】抗ウイルス処理なし（陰性対照）で、０.２μＭ、１μＭ、および５μＭのテラメプロコール（ＴＭＰ）で処理（抗ウイルス実験）して、およびメシル酸カモスタット（ＣＭ）で処理（陽性対照）した、培養したアカゲザルの腎臓上皮（ＬＬＣ－ＭＫ２）細胞を、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３感染に付し、その４８時間後に測定したＨＣｏＶ－ＮＬ６３ ＲＮＡのコピー数を示す棒グラフである。

【0033】

【図2】抗ウイルス処理なし（陰性対照）で、５μＭ、２０μＭ、および８０μＭのＴＭＰで処理（抗ウイルス実験）して、およびＣＭで処理（陽性対照）した、培養したＬＬＣ－ＭＫ２細胞を、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３感染に付し、その５日後に行われた細胞毒性アッセイの結果を示す棒グラフである。感染および／または処理に応答する細胞の細胞毒性は、細胞上清中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出を介して測定された。

【0034】

【図3】抗ウイルス処理なし（陰性対照）で、０.２μＭ、１μＭ、および５μＭのＴＭＰで処理（抗ウイルス実験）して、およびＣＭで処理（陽性対照）した、培養したＬＬＣ－ＭＫ２細胞を、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３感染に付し、その５日後に行われた細胞毒性アッセイの結果を示す棒グラフである。感染および／または処理に応答する細胞の細胞毒性は、細胞上清中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出を介して測定された。

【0035】

【図4A-4C】抗ウイルス処理なし（陰性対照）で、１μＭ、５μＭ、および２０μＭのＴＭＰで処理（抗ウイルス実験）して、およびＣＭで処理（陽性対照）した、培養したアフリカミドリザルの腎臓上皮（Ｖｅｒｏ Ｅ６）細胞を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に付し、その４８時間後に測定されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルス ＲＮＡのコピー数を示す３種の別々の実験に関する棒グラフである。

【0036】

【図5】処理なし（陰性対照）で、０.２μＭ、１.０μＭ、５μＭ、２０μＭ、および８０μＭのＴＭＰで処理して、およびＣＭで処理（陽性対照）した、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させた細胞を細胞溶解に付すことで測定される、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞の最大毒性パーセントを示す棒グラフである。

【0037】

【図6】抗ウイルス処理なし（陰性対照）で、５μＭ、２０μＭ、および４０μＭのＴＭＰで処理（抗ウイルス実験）して、およびＣＭで処理（陽性対照）した、培養したヒト非小細胞肺がん（Ｃａｌｕ－３）細胞をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に付し、その４８時間後に測定されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルス ＲＮＡのコピー数および関連する細胞の細胞毒性を示す棒グラフである。

【発明を実施するための形態】

【0038】

下記にて、今のところ、特許請求の範囲に記載の発明の好ましい態様および／または実施態様であると考えられる発明について説明する。機能、目的または構造でのいかなる改変または修飾も添付した特許請求の範囲によってカバーされるものとする。本明細書および添付した特許請求の範囲にて使用されるように、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈にて明らかにそうでない場合を除き、複数の対象を含む。本明細書および添付した特許請求の範囲にて使用される「含む」、「含んだ」、および／または「含んでいる」なる語は、明示的に記載される構成要素、要素、特徴および／または工程の存在を特定して記載するが、１または複数の他の構成要素、要素、特徴および／または工程の存在または追加を排除するものではない。

【0039】

本明細書にて使用される場合、「患者」なる語は、コロナウイルスに感染しているか、または感染の危険性のある、いずれの生物もいうものとする。かかる患者はヒト患者および／または動物患者を含み得る。

【0040】

ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）は、米国ではチャパラル（chaparral）またはグリースウッド（greasewood）として、メキシコではゴベルナドラ（gobernadora）またはヘジオンジラ（hediondilla）として知られる、クレオソートブッシュ（creosote bush）、ラレア・トリデンタタ（Larrea tridentata）の主たる代謝産物である。ＮＤＧＡは、分子量が３０２.３７で、式（１）：

【化2】

で示される化学構造を有する、４個のフェノール性ヒドロキシル基の天然ポリフェノールを担持するＯ－ジヒドロキシ（カテコール）である。ラリア・トリデンタタ（L. tridentata）にはまた、（ＮＤＧＡに見られる４個のヒドロキシル基ではなく）１個のメトキシ側鎖と、３個のヒドロキシル側鎖とを有する天然のＮＤＧＡ誘導体である、３’－Ｏ－メチル ＮＤＧＡも含まれる。テラメプロコール（ＴＭＰ）としても知られる、テトラ－Ｏ－メチル ＮＤＧＡは、合成テトラメチル化誘導体のＮＤＧＡであって、分子量が４７０.５１で、式（２）：

【化3】

で示される化学構造を有する、転写阻害剤である。ＴＭＰは、ＤＮＡ合成の間に、遺伝子プロモータ領域内にある特定のＳｐ１ ＤＮＡ結合ドメインについて転写因子Ｓｐ１と競合する。理論に拘束されるつもりはないが、ウイルスに感染した細胞において、ＴＭＰはＳｐ１結合部位を遮断し、Ｓｐ１が制御するウイルスプロモータ活性および遺伝子発現を抑制し、それがウイルス転写およびウイルスに感染した細胞の複製を阻害すると考えられる。

【0041】

他の合成および半合成ＮＤＧＡ誘導体には、３、４、３’および４’位に４個のアセチル基（ＣＯＣＨ_３）を有する、テトラアセチル ＮＤＧＡ；ＮＤＧＡの水溶性誘導体である、マルトース－トリ－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ；ＮＤＧＡのもう一つ別の水溶性誘導体である、テトラ－Ｏ－グリシル ＮＤＧＡ；ビス－環状サルフェート ＮＤＧＡ；ビス－環状カーボネート ＮＤＧＡ；メチレンジオキシフェニル ＮＤＧＡ；およびテトラアセテート ＮＤＧＡが含まれる。さらなるＮＤＧＡ誘導体は、式（１）のＮＤＧＡ構造での１または複数の２、３、４、５、６、２’、３’、４’、５’および６’位にＲ基を付加することによって製造されてもよい。式（１）の１または複数の位置に付加してＮＤＧＡ誘導体を形成し得るＲ基の例には、限定されないが、メチル、エチル、アセチル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ヘキサノイル、プロピオニル、ピペリジン－１－イル、アセトニド、フルオロ、モルホリノ、ヒドロキシル、メトキシ、ヒドロキシ－メトキシル、ジメチル、ジヒドロキシル、ジメトキシル、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、トリメトキシル基、塩素、臭素、ニトライト、アミノ、およびアセトアミドが含まれる。さらなるＮＤＧＡ誘導体は、１または複数の次の：（ＣＨ_２）_ｘＨ（ここで、ｘは１～１０の整数であり、Ｈはハロゲン原子（例えば、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ）である）；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ（ここで、ｙは１～１０の整数であり、Ｈはハロゲン原子である）；およびカルバメート基で示されるＲ基を有してもよい。異なるＲ基を式（１）のＮＤＧＡに付加することによって、他のＮＤＧＡ誘導体が製造され得ることを理解すべきである。かかる誘導体を生成する技術は当業者に公知であろう。

【0042】

本発明は、コロナウイルスのインビトロ複製を阻害する、ＮＤＧＡ誘導体と関連付けられる。ＮＤＧＡ誘導体での処理の対象となり得るコロナウイルスの例には、限定されないが、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、中東呼吸器症候群関連のコロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）、および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）が含まれ、その中で後者がコロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を引き起こす。以下の討論では、ＮＤＧＡ誘導体の例示として、ＴＭＰに言及するが、ＴＭＰの効果は、３’－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ、テトラ－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ、およびＤＮＡ合成の間に、遺伝子プロモータ領域にあるＳｐ１ ＤＮＡ結合ドメインについて転写因子Ｓｐ１と競合する任意の他のＮＤＧＡ誘導体などの他の天然または合成ＮＤＧＡ誘導体でも得られ得ることを理解すべきである。

【0043】

図１（実施例１）を参照して、ＬＬＣ－ＭＫ２細胞（アカゲザル腎臓上皮細胞）をＮＬ６３に感染させ、０.２μＭ、１μＭ、および５μＭのＴＭＰで処理し、４８時間後にＮＬ６３ウイルスＲＮＡの存在について試験した。処理していないＮＬ６３感染のＬＬＣ－ＭＫ２細胞を陰性対照として用い、メシル酸カモスタット（ＣＭ）で処理したＮＬ６３感染のＬＬＣ－ＭＫ２細胞を陽性対照として用いた。当業者によって知られているように、ＣＭは細胞内にてウイルス受容体に干渉することによって感染を防止する抗ウイルス剤である。本発明の文脈の中で、ＴＭＰの抗ウイルス活性は、ＴＭＰが細胞内にてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製に干渉する点でＣＭのそれとは異なる。かくして、ＴＭＰは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した患者の治療にＣＭとは異なる作用機序を提供する薬剤である。図１に示されるように、ＮＬ６３感染したＬＬＣ－ＭＫ２細胞をＴＭＰで処理すると、１μＭ ＴＭＰで頭打ちとなる線形応答を示した。感染した細胞を０.２μＭのＴＭＰで処理すると、４８時間後にウイルス活性の部分的な減少がもたらされ、その一方で１μＭおよび５μＭの両方のＴＭＰでの処理によって４８時間後にはウイルス活性がほとんどなくなり、ＴＭＰでの処理に起因する細胞毒性は識別できなかった。図１に示されるように、ＮＬ６３感染の陰性対照細胞（非処理）は、２,９３１,９４６＋３９０,８５１個（平均＋標準偏差）のコピー数のウイルスＲＮＡを含有し、一方でＮＬ６３感染の細胞を０.２μＭ ＴＭＰで処理すると、ウイルスＲＮＡコピー数は５０,８８２＋２,２９６個（平均＋標準偏差；Ｐ＝０.００４ ｖｓ 陰性対照（Ｔ検定））に減少した。

【0044】

図２（実施例２）を参照して、ＮＬ６３感染のＬＬＣ－ＭＫ２細胞に対するＴＭＰの曝露時間を測定し、ＴＭＰへの長期曝露が細胞の細胞毒性をもたらし得るかどうかを決定した。宿主細胞に対する細胞毒性は、細胞溶解を引き起こす、ウイルス感染によって、または試験化合物の宿主細胞に対する毒性によって引き起こされ得る。細胞毒性は、細胞ハウスキーピング酵素である乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出、および最終反応における着色した基質のその変更によって測定される。死滅または溶解の細胞はＬＤＨを細胞外環境に放出し；かくして、細胞の死滅によって放出されるＬＤＨが多いほど、ＬＤＨの読取り値は高くなる。図２に示されるように、ＬＬＣ－ＭＫ２細胞を処理なし（陰性対照）でＮＬ６３に曝露すると、５日後にサンプル中の細胞の８０％近くが溶解し、その一方でＣＭで処理したＮＬ６３に感染のＬＬＣ－ＭＫ２細胞（陽性対照）は５日後に細胞毒性を示さなかった。ＮＬ６３に感染したＬＬＣ－ＭＫ２細胞を５μＭ ＴＭＰで処理した場合、細胞サンプルは５日後には１０％の細胞溶解を示したに過ぎなかった。より多用量の２０μＭ ＴＭＰで処理すると、５日後に２０～３０％の細胞溶解をもたらした。処理量を８０μＭ ＴＭＰまで増やすと、細胞がプレートから分離し、結果として細胞がプレート上に残っていた場合よりも低いＬＤＨ値をもたらした。

【0045】

図３（実施例２）を参照して、ＮＬ６３に感染したＬＬＣ－ＭＫ２細胞におけるＴＭＰ濃度を０.２μＭ ＴＭＰに下げると、サンプル中の細胞の１～２％が溶解するに過ぎず、これは陽性ＣＭ対照の結果に匹敵するものであった。ＴＭＰの濃度を上げると、サンプルの細胞毒性も約８％の細胞溶解まで上昇した。５μＭのＴＭＰで処理すると、２０％近くの細胞溶解の細胞毒性結果をもたらし、それは図２の５μＭ ＴＭＰ処理で示された結果よりも２倍高かった。図２および３の結果は、治療関連の細胞毒性を回避するために、インビトロでのＴＭＰの用量が注意して調整されなければならないことを示す。

【0046】

図４Ａ（実施例３）を参照して、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞（アフリカミドリザル腎臓上皮細胞）をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させ、０.２μＭ、１μＭ、および５μＭのＴＭＰで処理し、４８時間後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＮＡの存在について試験した。感染しておらず、未処理のＶｅｒｏ Ｅ６細胞を陰性対照として用い、ＣＭ処理の感染細胞を陽性対照として用いた。ここで、ＴＭＰ処理は線形用量応答を示し、ＴＭＰ処理の増加はウイルス複製の減少をもたらした。特に、２０μＭ ＴＭＰ処理は、４８時間後にはウイルス複製がほとんどゼロを示し、それはＣＭ陽性対照で測定されたウイルス複製に匹敵するものであった。図４Ｂおよび４Ｃは、図４Ａに示されるのと同じＴＭＰ処理レジメンの２つの補足的な試験を示すが、線形応答の代わりに、図４Ｂおよび４Ｃでは非線形応答を示し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染したＶｅｒｏ ６細胞を１μＭ ＴＭＰを用いて処理すると、ウイルス活性の増加を示し、その一方で５μＭのＴＭＰで処理すると、ウイルス複製はゼロであった。２０μＭ ＴＭＰを用いて処理すると、ＣＭ処理の陽性対照に匹敵し得るウイルス複製の減少を示し、そのＴＭＰ処理よりもたらされる識別可能な細胞毒性はなかった。図４Ａ～４Ｃは、ＴＭＰ処理したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の細胞に関してバラツキを示すが、結果はインビトロでのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のＶｅｒｏ Ｅ６に対する最適なＴＭＰ処理範囲として５μＭを示す。

【0047】

図５（実施例３）を参照して、Ｖｅｒｏ Ｅ６をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスで感染させ、０.２μＭ、１.０μＭ、５.０μＭ、２０μＭ、および８０μＭのＴＭＰで処理し、４８時間後にモノクローナル抗体を用いて細胞の細胞毒性について試験した。処理することなく、感染させたＶｅｒｏ Ｅ６細胞を陰性対照として用い、ＣＭで処理し、感染させたＶｅｒｏ Ｅ６細胞を陽性対照として用いた。ここで、モノクローナル抗体で同定したプラークの形成を介して細胞を細胞毒性について試験した。予想されるように、陰性対照は最も高い数のプラーク（８９％）を生成し、８０μＭ ＴＭＰ処理もまた、高い割合の細胞溶解を示した。２０μＭ ＴＭＰでの細胞の細胞毒性は、８０μＭ処理と比べて減少し、その一方で０.２μＭ、１.０μＭ、および５μＭのＴＭＰ処理は陽性対照に匹敵するもので、細胞毒性作用をほとんど示さなかった。

【0048】

図６（実施例４）を参照して、Ｖｅｒｏ－Ｅ６細胞についてのＴＭＰ処理プロトコルを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２で感染させたＣａｌｕ－３細胞（ヒト非小細胞肺がん細胞）で繰り返した。処理することなく、感染させたＣａｌｕ－３細胞を陰性対照として用い、ＣＭで処理し、感染させたＣａｌｕ－３細胞を陽性対照として用いた。モノクローナル抗体を用いて細胞の細胞毒性を同定した。この細胞株では、５μＭのＴＭＰは、陰性対照と比べた場合に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のコピー数の平均にて２５％の減少を示したのに対して、２０μＭおよび４０μＭ ＴＭＰ処理、ならびにＣＭ陽性対照は、ほとんどゼロのウイルス複製を示す。細胞の細胞毒性に関しては、感染したＣａｌｕ－３細胞を５μＭおよび２０μＭ ＴＭＰで処理しても、細胞毒性は結果として検出できず、４０μＭ ＴＭＰで細胞毒性がわずかに増加しただけであった。

【0049】

図１－６の結果は、異なるコロナウイルスに感染した細胞株はすべて、ＴＭＰ処理に対して積極的に応答するが、異なる細胞株は、処理による細胞毒性を回避しながら、最も積極的な抗ウイルス効果を示すのに、異なるＴＭＰ用量を必要とする可能性のあることを示す。ＴＭＰは核のＳＰ１部位に結合すると考えられているため、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＮＡのＴＭＰ阻害は、可能性として、ＴＭＰがＳＰ１制御遺伝子に結合した結果である。

【0050】

ＮＤＧＡ誘導体は親水性または疎水性であってもよい。疎水性ＮＤＧＡ誘導体の溶解度は、ＮＤＧＡ誘導体の粒径を、結晶性微粒子から１～１００ナノメートルの範囲にある大きさの固形コロイド状ナノ粒子に減少させることによっても増加させることができる。より大きな結晶性粒子からナノ粒子を形成するのは、粉砕を介するそのより大きな粒子のトップ－ダウン機構のブレイクダウンによるか、または化学蒸着を介する小さなナノ粒子のボトム－アップ組み立てによって達成され得る。ナノ粒子に縮小されたＮＤＧＡ誘導体は、生物学的利用能および生体内分布制御が改善され、吸収および効能を向上させ、薬物毒性を減少させた。親水性ＮＤＧＡ誘導体もまた、ナノ粒子のコロイド状分散に固有の生物学的利用能の改善より利益を受け得る。

【0051】

ＩＶまたは経口用医薬を形成するために、ＮＤＧＡ誘導体は、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）、モノオレイン酸グリセリル、コハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール（ＴＰＧＳ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリエチレングリコール４００（平均分子量が４００のＰＥＧ）、ポリソルベート２０（ツィーン（TWEEN）（登録商標）２０で市販されている、Croda Americas LLC, Wilmington, DE, USA）、ナリンギン（フラバノン－７－Ｏ－グリコシド）、マクロゴール－１５－ヒドロキシステアレート（コリホール（KOLLIPHOR）（登録商標）ＨＳ１５［以前はソルトール（Solutol）ＨＳ１５］として市販されている、BASF SE, Ludwingshafen am Rhein, Germany）、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される化合物で可溶化されてもよい。ＭＣＴは、炭素数が６～１２の中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）の脂肪族テールを有する、２または３の脂肪酸とのトリグリセリドである。ＭＣＦＡの例には、カプロン酸（Ｃ６）、カプリル酸（Ｃ８）、カプリン酸（Ｃ１０）およびラウリン酸（Ｃ１２）が含まれる。１の市販のＭＣＴがミグリオール（MIGLYOL）（登録商標）８１２Ｎ（Cremer Oleo GmbH, Hamburg, Germany）である。溶解度を最大とし、希釈の際のＮＤＧＡ誘導体の沈殿を防止するために、アルコール、界面活性剤およびｐＨ調整剤をその可溶化したＮＤＧＡ誘導体に添加してもよい。

【0052】

１の実施態様において、ＩＶ用製剤は、本明細書に記載されるように、無傷の化合物として、または固形ナノ粒子コロイドとして可溶化されたＮＤＧＡ誘導体を含む。患者に静脈内投与されるであろうＮＤＧＡ誘導体の量は０.１～５０μＭの範囲であろう。ＮＤＧＡ誘導体がＴＭＰである場合、そのＩＶ用製剤は、２０～５０％（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）を含む水溶液中にＴＭＰを１～１０ｍｇ／ｍＬで有してもよい。限定されないが、一例として、ＩＶ製剤は、３０％ＨＰＢＣＤを含む水溶液中にＴＭＰを６ｍｇ／ｍＬで有してもよい。

【0053】

もう一つ別の実施態様において、経口用製剤は、本明細書に記載されるように、無傷の化合物として、または固形ナノ粒子コロイドとしてＮＤＧＡ誘導体を含む。患者に経口投与されるであろうＮＤＧＡ誘導体の量は０.１～１００μＭの範囲であろう。ＮＤＧＡ誘導体がＴＭＰである場合には、その経口用製剤は、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）とコハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール（ＴＰＧＳ）とを含む懸濁液中に１００～５００ｍｇ／ｍＬのＴＭＰを有するであろう。ＴＰＧＳの懸濁液中の量は５０～１００ｍｇ／ｍＬの範囲であってもよい。限定されないが、一例として、経口用製剤は、ＭＣＴおよび８５～９０ｍｇ／ｍＬのＴＰＧＳを含む懸濁液中に３００ｍｇ／ｍＬのＴＭＰをを有してもよい。

【0054】

本明細書に記載のＮＤＧＡ誘導体の経口用剤形は、即時放出（投与後に薬物が即時に放出される）または修飾放出（薬物の放出が投与後の一定期間、または長期間にわたる放出、あるいは体内の特定の標的に対する放出）のために、錠剤、カプセル、またはソフトゲルカプセル（ソフトゲル）として製剤化され得る。修飾放出の例として、限定されないが、遅延放出（薬物が最初の投与後のある時点でのみ放出される）および持続放出（薬物の放出を長期化させて投与の頻度を減らす）が挙げられる。持続性剤形には、徐放性剤形（薬物が特定の期間にわたって特定の濃度で送達される）および放出制御剤形（薬物の放出が、放出のタイミングではなく、薬物の血漿中の一定濃度に基づく）が含まれる。剤形が放出制御カプセルである場合、その剤形の放出制御特性を生成するのに使用されるポリマーは、カプセル殻内に入れられる顆粒中に組み込まれ、その中の後者は、典型的には、ゼラチンまたはヒドロキシメチルセルロース（ＨＰＭＣ）より製造される。修飾放出剤形の放出特性は、適切なポリマーが錠剤、ソフトゲル、またはカプセルの顆粒をコーティングするのに使用される、リザバーシステムを介して、あるいは薬物をポリマーに溶解または分散させるマトリックスシステムを介して達成されてもよい。遅延放出剤形の場合、経口用製剤は、一般に、薬物が胃の低ｐＨ環境よりもむしろ、小腸の高ｐＨ環境下で放出されるように、ｐＨ感受性ポリマーで腸溶コーティングされる。持続放出型剤形の場合、経口用製剤は活性剤を適切なポリマーを含むマトリックス中に組み込むことによって製造されてもよい。持続放出型剤形に使用されるポリマーの例には、限定されないが、エチルセルロース、酢酸セルロース、酢酸プロピオン酸セルロース、ポリメタクリレート、酢酸コハク酸ヒプロメロース、およびその組み合わせが含まれる。

【0055】

１の実施態様において、ＮＤＧＡ誘導体は経口用製剤をｐＨ感受性ポリマーで腸溶コーティングに付すことで遅延放出型経口用製剤に処方される。もう一つ別の実施態様において、ＮＤＧＡ誘導体はエチルセルロース、または他の適切なポリマーを経口用製剤に組み込むことによって持続放出型製剤に処方される。限定されないが、例示としての実施態様において、ＮＤＧＡ誘導体は遅延放出または持続放出型ソフトゲルに処方されるＴＭＰである。

【0056】

本発明の様々な態様および／または実施態様の記載は、説明を目的として提示されるが、網羅的であること、または開示される実施態様に限定されることを意図するものではない。記載される実施態様の範囲および精神から逸脱することなく、多くの修飾および変形をすることは当業者に明らかであろう。本明細書にて使用される専門用語は、態様および／または実施態様の原理、市場で見いだされる技術を越える実用的応用または技術的改善を最もうまく説明するのに、あるいは当業者が本明細書にて開示される態様および／または実施態様を理解できるように選択された。

【0057】

実験
以下の実施例は、本明細書に記載の本発明の態様および実施態様の製造および使用の仕方を完全に開示して当業者に提供するのに記載される。量、温度等などの変数に関して正確性を確保するための努力がなされているが、実験誤差および偏差は考慮されるべきである。特記されない限り、部は重量部であり、温度は摂氏度、圧力は大気圧または大気圧付近である。特記されない限り、構成成分はすべて市場より購入した。

【0058】

以下の実施例において、ＯＲＩＧ３Ｎ（登録商標）２０１９年新型コロナウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）試験（以下、「Ｏｒｉｇ３ｎ試験」という）（Orig3n,Inc.,Boston,MA,USA）を用いてウイルスＲＮＡを測定した。試験に使用されるプライマーおよびプローブを含む、Ｏｒｉｇ３ｎ ＲＴ－ＰＣＲ試験に関する指示は、https://www.fda.gov/media/
136873/downloadにて利用され得る。その中で開示されるように、Ｏｒｉｇ３ｎ試験は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（Ｎ）遺伝子にある２個の領域を検出するための２個のプライマーとプローブのセット（Ｎ１およびＮ２）、ＳＡＲＳ様コロナウイルスを普遍的に検出するための１個のプライマーとプローブのセット（Ｎ３）、および臨床サンプルにあるヒトＲＮａｓｅＰを検出するための１個のプライマーとプローブのセットを使用する、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）試験である。

【0059】

ＲＮＡの４００μＬのサンプルからの抽出は、ＭＡＧ－ＢＩＮＤ（登録商標）ウイルスＤＮＡ／ＲＮＡ９６（Omega Bio-Tek, Inc., Norcross, GA, USA）を用いて行われた。ＲＮＡサンプルをＱＵＡＮＴＳＴＵＤＩＯ（登録商標）リアルタイムＰＣＲソフトウェアバージョン１.３を装着したＱＵＡＮＴＳＴＵＤＩＯ（登録商標）７Ｆｌｅｘ（ＱＳ７）（Life Technologies Corp., Carlsbad, CA, USA）装置を用いて増幅かつ伸長させた。増幅プロセスの間に、プローブは順プライマーと逆プライマーとの間に位置する特定の標的配列にアリールする。ＰＣＲサイクルの伸長期の間に、Ｔａｑポリメラーゼの５’－ヌクレアーゼ活性が結合したプローブを分解し、レポーター色素（ＦＡＭ）をクエンチャー色素（ＢＨＱ－１）から分離させ、蛍光シグナルを発生させる。各ＰＣＲサイクルで蛍光強度をモニター観察する。

【0060】

実施例１
ＴＭＰで処理したＮＬ６３に感染したＬＬＣ－ＭＫ２細胞のインビトロ分析
ＬＬＣ－ＭＫ２サル上皮細胞を、ＮＬ６３コロナウイルスの宿主細胞として、ＡＴＣＣの推奨培地条件を用いて９６ウェルの細胞培養プレートにおいて培養した。ＮＬ－６３ウイルスを増殖培地（培地１９９＋２.０％ウシ胎児血清）を用いて約５００プラーク形成単位／ｍＬにまで希釈した。細胞をウイルスに３７℃で１時間感染させ、平衡塩類溶液で１回洗浄し、１０％ＦＢＳを含有する新たな培地を添加した。該細胞を細胞障害効果（ＣＰＥ）とプラーク（細胞死によって引き起こされる細胞単層の透明な領域）の形成について５日間にわたって観察した。死細胞は廃棄し、生細胞をＴＭＰで試験するのに用いた。

【0061】

ＴＭＰのストック溶液は、ＴＭＰを１００％ＤＭＳＯに７０℃に加温しながら３時間にわたって５０ｍＭで溶解させることで製造された。ＴＭＰを以下の濃度：０.２μＭ、１μＭ、および５μＭにてＮＬ６３感染のＬＬＣ－ＭＫ２細胞に添加した。未処理の感染ＬＬＣ－ＭＫ２細胞およびメシル酸カモスタット（ＣＭ）で処理した感染したＬＬＣ－ＭＫ２細胞を、各々、陰性および陽性対照として用いた。ＴＭＰで処理した４８時間後に、４００μＬの上清を各プレートウェルから集め、ＯＲＩＧ３Ｎ ＲＴ ＰＣＲ試験によって抽出したＤＮＡからウイルスＲＮＡ（細胞ＲＮＡは集めなかった）およびウイルスコピー数を測定して決定した。図１は細胞上清から測定されたＮＬ６３コロナウイルス ＲＮＡのコピー数の平均±ＳＤ（標準偏差）を示す。

【0062】

実施例２
ＴＭＰ処理したＮＬ６３感染のＬＬＣ－ＭＫ２細胞での処理の細胞毒性分析
ＬＬＣ－ＭＫ２細胞に、実施例１にて提供されるようにＮＬ６３を接種した。細胞を細胞毒性について乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出を介して試験し、その中で後者をＬＤＨアッセイマルチプレートリーダーを用いて測定して定量した。細胞毒性アッセイは３回行い、図２および３にて示されるように、各処理群および対照での値をアッセイ全体を通して平均化した。

【0063】

実施例３
ＴＭＰ処理したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のＶＥＲＯ Ｅ６細胞のインビトロ分析
ＶｅｒｏＥ６アフリカミドリザルの腎臓上皮細胞を、９６ウェル細胞培養プレートにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルスの宿主細胞として培養した。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、Ｌ－グルタミンおよびＮａ－ピルビン酸リン酸緩衝セイラインを補足したイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）において５００～１５００単位のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを、Ogandoら、Journal of General Virology（2020）
（biorxiv.org/content/10.1101/2020.04.20.049924v1で利用可能）にて記載されるように、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞培養ウェルに導入した。細胞を、４８時間にわたって、細胞毒性作用とプラーク（すなわち、細胞死によって引き起こされる細胞単層での透明な領域）の形成について観察した。プラークは、マウスモノクローナル抗体Ｊ２でのプラークアッセイを用いて同定された（Ogandoら、上掲）。ウイルスＲＮＡもまた、培地の上清より単離され、処理後のウイルスのコピー数を推定するために、ＲＴ ＰＣＲによってウイルスのコピー数を測定した。

【0064】

ＴＭＰのストック溶液は、ＴＭＰを１００％ＤＭＳＯに７０℃に加温しながら３時間にわたって５０ｍＭで溶解させることで製造された。ＴＭＰを以下の濃度：０.２μＭ、１μＭ、５μＭ、２０μＭおよび８０μＭにてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のＶｅｒｏ Ｅ６細胞に添加した。未処理の感染Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞およびＣＭで処理した感染Ｖｅｒｏ Ｅ６を、各々、陰性および陽性対照として用いた。ＴＭＰで処理した４８時間後に、４００μＬの上清を各プレートウェルから集め、１μＭ、５μＭ、および２０μＭ ＴＭＰ処理したウェルについて、ならびに陰性および陽性対照についてＯＲＩＧ３Ｎ ＲＴ ＰＣＲ試験によって、抽出したＤＮＡからウイルスＲＮＡ（細胞ＲＮＡは集めなかった）およびウイルスコピー数を測定した。別個に、細胞溶解を５つのすべてのＴＭＰ処理したウェルに、ならびに陰性および陽性対照について測定した。アッセイをさらに２回繰り返した。図４Ａ－４Ｃは、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞の３回のアッセイについて細胞上清から測定したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＮＡのコピー数の平均±ＳＤを示す。図５にて細胞溶解を測定した結果を示す。

【0065】

実施例４
ＴＭＰ処理したＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のＣａｌｕ－３細胞のインビトロ分析
Ｃａｌｕ－３ヒト非小細胞肺がん細胞を、９６ウェル細胞培養プレートにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルスの宿主細胞として培養した。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、Ｌ－グルタミンおよびＮａ－ピルビン酸リン酸緩衝セイラインを補足したイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）において５００～１５００単位のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを、Ogandoら、上掲にて記載されるように、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞培養ウェルに導入した。細胞を、４８時間にわたって、細胞毒性作用とプラーク（すなわち、細胞死によって引き起こされる細胞単層での透明な領域）の形成について観察した。プラークは、マウスモノクローナル抗体Ｊ２でのプラークアッセイを用いて同定された（Ogandoら、上掲）。ウイルスＲＮＡもまた、培地の上清より単離され、処理後のウイルスのコピー数を推定するために、ＲＴ ＰＣＲによってウイルスのコピー数を測定した。

【0066】

ＴＭＰのストック溶液は、ＴＭＰを１００％ＤＭＳＯに７０℃に加温しながら３時間にわたって５０ｍＭで溶解させることで製造された。ＴＭＰを以下の濃度：５μＭ、２０μＭ、および４０μＭにてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のＶｅｒｏ Ｅ６細胞に添加した。未処理の感染Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞およびＣＭで処理した感染Ｖｅｒｏ Ｅ６を、各々、陰性および陽性対照として用いた。ＴＭＰで処理した４８時間後に、４００μＬの上清を各プレートウェルから集め、ＯＲＩＧ３Ｎ ＲＴ ＰＣＲ試験によって、抽出したＤＮＡからウイルスＲＮＡ（細胞ＲＮＡは集めなかった）およびウイルスコピー数を測定した。アッセイをさらに２回繰り返した。図６は、Ｃａｌｕ－３細胞について細胞培養から測定したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＮＡのコピー数の平均±ＳＤ、ならびにプラーク数によって測定されるようなＴＭＰ処理についての細胞毒性の結果を示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【手続補正書】

【提出日】2023-11-06

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）誘導体および医薬的に許容し得る担体を含む、コロナウイルス感染症の治療又は予防のための医薬組成物であって、ＮＤＧＡ誘導体は、テラメプロコール、３’－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ、テトラアセチル ＮＤＧＡ、マルトース－トリ－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ、テトラ－Ｏ－グリシル ＮＤＧＡ、ビス－環状サルフェート ＮＤＧＡ；ビス－環状カーボネート ＮＤＧＡ；メチレンジオキシフェニル ＮＤＧＡ；テトラアセテート ＮＤＧＡからなる群より選択される、該医薬組成物。

【請求項2】

コロナウイルスが、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、中東呼吸器症候群関連のコロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）、および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）からなる群より選択される、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

ＮＤＧＡ誘導体がウイルスＲＮＡ複製を阻害する、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項4】

ＮＤＧＡ誘導体が、大きさが１～１００ナノメートルの範囲にある、固形コロイドナノ粒子に形成される、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項5】

ＮＤＧＡ誘導体を、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリン、中鎖トリグリセリド、モノオレイン酸グリセリル、コハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリソルベート２０、ナリンジン、マクロゴール－１５－ヒドロキシステアレート、およびその組み合わせからなる群より選択される化合物を含む、溶液または懸濁液に可溶化させる、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項6】

０．１～５０μＭのＮＤＧＡ誘導体が、静脈内投与用に製剤化される、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項7】

０．１～１００μＭのＮＤＧＡ誘導体が、経口投与用に製剤化される、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項8】

テラメプロコール（ＴＭＰ）および医薬的に許容し得る担体を含む、コロナウイルス感染症の治療又は予防のための医薬組成物。

【請求項9】

コロナウイルスが、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、中東呼吸器症候群関連のコロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）、および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）からなる群より選択される、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項10】

ＴＭＰがウイルスＲＮＡ複製を阻害する、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項11】

ＴＭＰが、大きさが１～１００ナノメートルの範囲にある、固形コロイドナノ粒子に形成される、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項12】

ＴＭＰを、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリン、中鎖トリグリセリド、モノオレイン酸グリセリル、コハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリソルベート２０、ナリンジン、マクロゴール－１５－ヒドロキシステアレート、およびその組み合わせからなる群より選択される化合物を含む、溶液または懸濁液に可溶化させる、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項13】

０．１～５０μＭのＴＭＰが、静脈内投与用に製剤化される、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項14】

ＴＭＰが、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリンを含む水溶液中にて可溶化される、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

１～１０ｍｇ／ｍＬのＴＭＰが、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリンを２０～５０％で含む水溶液中にて可溶化される、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項16】

６ｍｇ／ｍＬのＴＭＰが、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリンを３０％で含む水溶液中にて可溶化される、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項17】

０．１～１００μＭのＴＭＰが、経口投与用に製剤化される、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項18】

ＴＭＰが、中鎖トリグリセリドと、コハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールとを含む懸濁液中にて可溶化される、請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項19】

１００～５００ｍｇ／ｍＬのＴＭＰが、中鎖トリグリセリドと、５０～１００ｍｇ／ｍＬのコハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールとを含む懸濁液中にて可溶化される、請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項20】

３００ｍｇ／ｍＬのＴＭＰが、中鎖トリグリセリドと、８５～９０ｍｇ／ｍＬのコハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールとを含む懸濁液中にて可溶化される、請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項21】

経口用製剤が遅延放出型ソフトゼラチンカプセルである、請求項２０に記載の医薬組成物。

【請求項22】

経口用製剤が持続放出型ソフトゼラチンカプセルである、請求項２０に記載の医薬組成物。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0011】

さらなる実施態様において、ＮＤＧＡ誘導体は、式（１）：

【化1】

で示されるＮＤＧＡ構造の１または複数の２、３、４、５、６、２’、３’、４’、５’
、および６’位に、構成基（Ｚ）を付加することによって製造され、
ここで、Ｚは、独立して、メチル、エチル、アセチル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ヘキサノイル、プロピオニル、ピペリジン－１－イル、アセトニド、フルオロ、モルホリノ、ヒドロキシル、メトキシル、ヒドロキシ－メトキシル、ジメチル、ジヒドロキシル、ジメトキシル、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、トリメトキシル基、塩素、臭素、ニトライト、アミノ、およびアセトアミドからなる群より独立して選択されるか；（ＣＨ_２）_ｘＨａｌ（ここで、ｘは１～１０の整数であり、Ｈａｌはハロゲン原子である）；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ（ここで、ｙは１～１０の整数である）；あるいはカルバメート基である。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0041】

他の合成および半合成ＮＤＧＡ誘導体には、３、４、３’および４’位に４個のアセチル基（ＣＯＣＨ_３）を有する、テトラアセチル ＮＤＧＡ；ＮＤＧＡの水溶性誘導体である、マルトース－トリ－Ｏ－メチル ＮＤＧＡ；ＮＤＧＡのもう一つ別の水溶性誘導体である、テトラ－Ｏ－グリシル ＮＤＧＡ；ビス－環状サルフェート ＮＤＧＡ；ビス－環状カーボネート ＮＤＧＡ；メチレンジオキシフェニル ＮＤＧＡ；およびテトラアセテート ＮＤＧＡが含まれる。さらなるＮＤＧＡ誘導体は、式（１）のＮＤＧＡ構造での１または複数の２、３、４、５、６、２’、３’、４’、５’および６’位にＲ基を付加することによって製造されてもよい。式（１）の１または複数の位置に付加してＮＤＧＡ誘導体を形成し得るＲ基の例には、限定されないが、メチル、エチル、アセチル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ヘキサノイル、プロピオニル、ピペリジン－１－イル、アセトニド、フルオロ、モルホリノ、ヒドロキシル、メトキシ、ヒドロキシ－メトキシル、ジメチル、ジヒドロキシル、ジメトキシル、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、トリメトキシル基、塩素、臭素、ニトライト、アミノ、およびアセトアミドが含まれる。さらなるＮＤＧＡ誘導体は、１または複数の次の：（ＣＨ_２）_ｘＨａｌ（ここで、ｘは１～１０の整数であり、Ｈａｌはハロゲン原子（例えば、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ）である）；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ（ここで、ｙは１～１０の整数である）；およびカルバメート基で示されるＲ基を有してもよい。異なるＲ基を式（１）のＮＤＧＡに付加することによって、他のＮＤＧＡ誘導体が製造され得ることを理解すべきである。かかる誘導体を生成する技術は当業者に公知であろう。

【国際調査報告】