特表 2023-554640 慢性炎症状態において終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）を標的とするための組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-12-28

(54)【発明の名称】慢性炎症状態において終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）を標的とするための組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/12 20060101AFI20231221BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20231221BHJP

   A61K 31/21 20060101ALI20231221BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231221BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20231221BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20231221BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20231221BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231221BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20231221BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20231221BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20231221BHJP

   A23G 3/42 20060101ALN20231221BHJP

【ＦＩ】

A61K31/12

A61P29/00

A61K31/21

A61P43/00 121

A61P3/10

A61P9/00

A61P25/28

A61P35/00

A61P25/02

A61P27/02

A23L33/10

A23G3/42

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023537120

(86)(22)【出願日】2021-12-16

(85)【翻訳文提出日】2023-08-07

(86)【国際出願番号】 US2021063676

(87)【国際公開番号】W WO2022133011

(87)【国際公開日】2022-06-23

(31)【優先権主張番号】63/126,920

(32)【優先日】2020-12-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】501394435

【氏名又は名称】サミ－サビンサ グループ リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100123766

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 七重

(74)【代理人】

【識別番号】100212509

【弁理士】

【氏名又は名称】太田 知子

(72)【発明者】

【氏名】マジード ムハンメド

(72)【発明者】

【氏名】ナガブシャナム カリアナム

(72)【発明者】

【氏名】ムンドクール ラクシュミ

【テーマコード（参考）】

4B014

4B018

4C206

【Ｆターム（参考）】

4B014GB06

4B014GB07

4B014GK12

4B014GL03

4B018LB01

4B018LB10

4B018LE01

4B018LE02

4B018LE03

4B018MD08

4B018ME03

4B018ME06

4B018ME10

4B018ME14

4C206AA01

4C206AA02

4C206CB14

4C206DB06

4C206DB56

4C206KA01

4C206KA04

4C206MA01

4C206MA02

4C206MA04

4C206MA72

4C206NA05

4C206NA14

4C206ZA16

4C206ZA20

4C206ZA21

4C206ZA33

4C206ZA36

4C206ZB11

4C206ZB26

4C206ZC35

4C206ZC42

4C206ZC75

(57)【要約】

本発明は、慢性炎症状態の対象において終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）発現の阻害に使用するための、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物及び方法を開示する。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。本発明は、対象における慢性炎症状態の管理における上記組成物の使用の開示も含む。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

慢性炎症状態の対象において終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）発現の阻害に使用するための組成物であって、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む、組成物。

【請求項2】

前記組成物が、２０～５０質量％ＢＤＭＣ、１０～２５質量％デメトキシクルクミン（ＤＭＣ）及び３０～５０質量％クルクミンを含み、組成物中の合計クルクミノイドが、２０～９５質量％の範囲である、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項3】

前記組成物が、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項4】

ＲＡＧＥ発現の阻害が、炎症マーカーの発現の低下、酸化的ストレスの低下、及び糖化レベルの緩和をもたらす、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項5】

ＲＡＧＥ発現の前記阻害が、１～１０μｇ／ｍＬの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又はその併用によって得られる、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項6】

ＲＡＧＥ発現の阻害が、ＲＡＧＥ発現レベルの低下をもたらす５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又はその併用による処置によって得られる、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項7】

前記炎症マーカーが、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択され、前記炎症マーカー発現の低下が、５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又は併用による処置によって得られる、請求項４に記載の使用のための組成物。

【請求項8】

前記酸化的ストレスが、５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又は併用による処置によって対象において低下する、請求項４に記載の使用のための組成物。

【請求項9】

グリカンレベルの軽減が、５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又は併用による処置によって得られる、請求項４に記載の使用のための組成物。

【請求項10】

慢性炎症状態が、ＩＩ型真性糖尿病、心臓血管疾患、アルツハイマー病、がん、末梢神経障害、感覚消失及び失明からなる群から選択される、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項11】

前記対象が哺乳動物である、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項12】

前記組成物が、安定化剤、生体利用性エンハンサー並びに酸化防止剤、薬学的又は栄養補助的又は薬用化粧品的に許容される賦形剤及びエンハンサーを更に含み、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディ剤又は食用品の形態で経口投与される、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項13】

対象において慢性炎症状態の治療的管理に使用するための組成物であって、前記組成物が、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む、組成物。

【請求項14】

前記組成物が、２０～５０質量％ＢＤＭＣ、１０～２５質量％デメトキシクルクミン（ＤＭＣ）及び３０～５０質量％クルクミンを含み、組成物中の合計クルクミノイドは、２０～９５質量％の範囲である、請求項１３に記載の使用のための組成物。

【請求項15】

前記組成物が、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む、請求項１３に記載の使用のための組成物。

【請求項16】

慢性炎症状態の前記治療的管理が、ＲＡＧＥを阻害する、ＲＡＧＥ発現を緩和する、炎症マーカーの発現を低下させる、酸化的ストレスを低下させる、及び糖化レベルを緩和することによって得られる、請求項１３に記載の使用のための組成物。

【請求項17】

ＲＡＧＥの前記阻害が、１～１０μｇ／ｍＬの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又はその併用によって得られる、請求項１６に記載の使用のための組成物。

【請求項18】

ＲＡＧＥ発現の軽減が、ＲＡＧＥ発現レベルの低下をもたらす５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又はその併用による処置によって得られる、請求項１６に記載の使用のための組成物。

【請求項19】

前記炎症マーカーが、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択され、前記炎症マーカー発現の低下が、５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又は併用による処置によって得られる、請求項１６に記載の使用のための組成物。

【請求項20】

前記酸化的ストレスが、５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又は併用による処置によって対象において低下する、請求項１６に記載の使用のための組成物。

【請求項21】

グリカンレベルの軽減が、５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又は併用による処置によって得られる、請求項１６に記載の使用のための組成物。

【請求項22】

慢性炎症状態が、ＩＩ型真性糖尿病、心臓血管疾患、アルツハイマー病、がん、末梢神経障害、感覚消失及び失明からなる群から選択される、請求項１６に記載の使用のための組成物。

【請求項23】

前記組成物が、安定化剤、生体利用性エンハンサー並びに酸化防止剤、薬学的又は栄養補助的又は薬用化粧品的に許容される賦形剤及びエンハンサーを更に含み、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディ剤又は食用品の形態で経口投与される、請求項１３に記載の使用のための組成物。

【請求項24】

前記対象が哺乳動物である、請求項１３に記載の使用のための組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願に対する相互参照
本出願は、２０２０年１２月１７日に出願の米国特許仮出願第６３１２６９２０号の優先権を主張するＰＣＴ出願であり、当該仮出願の内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を使用して慢性炎症状態の対象において終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）発現を阻害するのに使用するための組成物及び方法に一般に関する。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。本発明は、上の組成物を使用して対象において慢性炎症状態を治療的に管理するステップも含む。

【背景技術】

【0003】

タンパク質の非酵素的酸化及び糖化反応は、終末糖化産物（ＡＧＥ）の形成をもたらす。進行性腎不全、アテローム性動脈硬化症、糖尿病及び加齢は、ＡＧＥが形成される状態のいくつかである。ＡＧＥは、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性骨関節炎及び透析関連合併症などの炎症状態において増大し、慢性炎症性疾患との固有の関連が示唆されている。これら慢性炎症状態は、アテローム性動脈硬化症の加速及びその合併症のリスクを増大させうる。逆に、低酸素及び虚血性再灌流傷害は、ＡＧＥを急速に発生させ、炎症性疾患の合併症を更に増大させうる。高血糖又は糖尿病は、血流中の血中グルコースレベルの上昇をもたらし、終末糖化産物（ＡＧＥ）の形成を促進する状態である。細胞は、グルコースに過度に曝露されるとグルコース誘導性炎症及び他の関連する病理学的障害を生じるが、その機序はまだ確立されていない。また、既存の仮説は、組織におけるＡＧＥの沈着が臓器不全に至ることを示唆している（Lin et al. Curcumin inhibits gene expression of receptor for advanced glycation end-products (RAGE) in hepatic stellate cells in vitro by elevating PPARγ activity and attenuating oxidative stress, British Journal of Pharmacology 2212-2227 (2012)）。ＡＧＥは多様な巨大分子であり、中でもカルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）、カルボキシエチルリジン（ＣＥＬ）、ペントシジン、グルコスパン、グリオキサールリジン二量体及びグリコール酸リジンアミドであり、タンパク質及び脂質の非酵素的糖化プロセスによって形成される。ＡＧＥは、受容体と相互作用することによって細胞性効果を誘導する。終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）は、様々な内因性リガンドに結合する遍在性の膜貫通型受容体である。ＡＧＥとＲＡＧＥとの相互作用は、複雑な細胞内シグナル伝達カスケードを開始し、ＲＡＧＥ自体の上方調節と伴に活性酸素種（ＲＯＳ）の産生、免疫炎症効果、細胞増殖又はアポトーシスをもたらす。いくつかの研究は、ＲＡＧＥ活性とがん、糖尿病、心臓血管疾患及び神経変性などの病的状態との相関を発見した。ＡＧＥは、良性で無反応性でもありうるが、いくつかの研究は、ＲＡＧＥ活性とがん、糖尿病、心臓血管疾患及び神経変性などの病的状態との相関を発見し、ＡＧＥは、ＩＩ型真性糖尿病、心臓血管疾患、アルツハイマー病、がん、末梢神経障害、感覚消失及び失明などの慢性疾患における合併症の原因となる場合がある（Rehman et al. Effect of non-enzymatic glycosylation in the epigenetics of cancer, Semin Cancer Biol. Dec 2:S1044-579X(20) 30257 (2020)；（Laura et al. The AGE-RAGE Axis: Implications for Age-Associated Arterial Diseases, Frontiers in Genetics, 8 , 1-10 (2017)）。ＡＧＥ－ＲＡＧＥ結合に起因する作用機序は、ＮＡＤＰＨオキシダーゼの刺激を導き、活性酸素種（ＲＯＳ）の産生を増大させ、それにより腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）、転写因子核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）の発現、サイトカインの放出、炎症性発現、及び細胞性シグナル伝達の活性化を調節する。ＲＡＧＥ活性化の間に生成されるＲＯＳは、タンパク質酸化の供給源であり、タンパク質カルボニル種を形成する。「一次タンパク質カルボニル化」反応において、他のアミノ酸の中でも、リジン、アルギニン、プロリン及びトレオニン残基の側鎖の直接酸化は、反応性カルボニル種（ＲＣＳ）と呼ばれる、ＤＮＰＨで検出可能なタンパク質産物を産生する（Suzuki et al. Protein carbonylation. Antioxid Redox Signal. 2010;12(3):323-325）。これに反して、糖の反応性カルボニルは、タンパク質、脂質又は核酸のアミノ基と結合してシッフ塩基を生成し、そのシッフ塩基は、アマドリ産物を再編成する。一連のゆっくりした反応において、アマドリ反応、シッフ塩基及びマイヤール反応は、ＡＧＥを最終的に形成する。アマドリ化合物は、スーパーオキサイドアニオン及び過酸化水素などのＲＯＳを放出しながら、反応性α－ジカルボニルを含む異なる終末糖化産物に更に分解しうる。シッフ塩基及びアマドリ付加物の酸化的分解によって並びにグルコース自己酸化の間に形成されるα－ジカルボニルは、ストレッカー型反応によってＬｙｓの酸化的脱アミノを生じ、３－デオキシグルコソン（３ｄｇ）及びメチルグリオキサル（Ｍｇ）の形成を導きうる（Ros et al. Protein Carbonylation (Principles, Analysis, and Biological Implications) Diversity of Protein Carbonylation Pathways., 48-8 (2017)）。α－ジカルボニル化合物は、脂質過酸化、グルコースの自己酸化又はグルコース代謝の間にｉｎ ｖｉｖｏでも生成される。グリオキサール（ＧＯ）及びメチルグリオキサル（ＭＧＯ）とタンパク質中のリジン及びアルギニン残基との反応は、カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）、カルボキシエチルリジン（ＣＥＬ）及びアルグピリミジン（ＡｒｇＰ）などのＡＧＥの形成を引き起こす。したがって、ＡＧＥ、タンパク質カルボニルの形成、及びＲＡＧＥとそれらとの相互作用並びに下流の酸化的ストレス及び炎症は、密接に連関している。ＲＣＳ及びＡＧＥの定常状態レベルの増大は、カルボニルストレスを生じ、正常な代謝を妨げる。ＲＣＳは、特に活性酸素種（ＲＯＳ）と比較すると、半減時間及び安定性が比較的高い遍在性の化合物である。ＲＣＳは、低い分子的嵩、非荷電構造及び比較的高い安定性のため、生体膜を横断し、末梢循環を通って拡散し、血液脳関門を横断することも可能である。メチルグリオキサル、グリオキサール、３－デオキシフルクトース、グルコソン及び３－デオキシグルコソンのような糖化誘導体ＲＣＳは、還元炭水化物より約２００００倍反応性である。アルツハイマー病（ＡＤ）、関節リウマチ、糖尿病、敗血症、慢性腎不全及び呼吸窮迫症候群は、タンパク質カルボニル化が増大する状態のいくつかである（Isabella et al. Protein carbonyl groups as biomarkers of oxidative stress, 329(1), 23-38 (2003)）。ＡＧＥの形成は、高血糖、酸化的ストレス、加齢及び炎症下で加速される（Laura et al. The AGE-RAGE Axis: Implications for Age-Associated Arterial Diseases, Frontiers in Genetics, 8 , 1-10 (2017)）。ＡＧＥは、良性で無反応性でもありうるが、ＡＧＥは、ＩＩ型真性糖尿病、心臓血管疾患、アルツハイマー病、がん、末梢神経障害、感覚消失及び失明などの慢性疾患における合併症の原因となる場合がある（Rehman et al. Effect of non-enzymatic glycosylation in the epigenetics of cancer, Semin Cancer Biol. Dec 2:S1044-579X(20) 30257 (2020)）。糖化、ＲＡＧＥ発現及びタンパク質カルボニル化の減少は、酸化的及びカルボニルストレスを最終的に減少させることができ、慢性炎症状態に有益でありうる。ＲＡＧＥは、いくつかの疾患に対する潜在的バイオマーカーとして、これら状態を管理するための阻害剤の開発にとって魅力的な標的である。ＲＡＧＥの循環レベルの変化が、糖尿病合併症、心臓血管疾患及びアルツハイマー病の患者において同定されてきた。ＲＡＧＥは、がん、心臓血管疾患及び神経変性の療法に対する潜在的標的として調査されてきた（Salvatore et al. Targeting the Receptor for Advanced Glycation End products (RAGE): A Medicinal Chemistry Perspective, 60(17), 7213-7232 (2017)）。

【0004】

ＲＡＧＥの役割をアテローム性動脈硬化症病変形成に関連付け、炎症誘発性経路を促進することにより、糖尿病媒介性アテローム性動脈硬化症を示唆する研究が多数存在する。研究では、糖尿病性ＲＡＧＥ^-/-／ａｐｏＥ^-/-マウスにおいて糖尿病とリンクするＡＧＥの増大は、マクロファージ蓄積、サイトカイン及びケモカイン発現が減少した炎症応答とならんで有意に減少した（Paavonen et al. Receptor for Advanced Glycation End Products (RAGE) Deficiency Attenuates the Development of Atherosclerosis in Diabetes, Diabetes, 57, 2461-2469 (2008)）。これは、中和抗体又は可溶性ＲＡＧＥを使用したＲＡＧＥ活性化の阻害を示す多数の研究によっても支持された（Park et al. Suppression of accelerated diabetic atherosclerosis by the soluble receptor for advanced glycation end products. Nat Med 4, 1025-1031 (1998)；Bucciarelli et al. RAGE blockade stabilizes established atherosclerosis in diabetic apolipoprotein E-null mice. Circulation 106, 2827-2835 (2002)；Sakaguchi et al. Central role of RAGE-dependent neointimal expansion in arterial restenosis. J Clin Invest 111, 959 -972 (2003)）。

【0005】

実験的糖尿病性ラットにおいてＲＡＧＥシグナル伝達の効果の減弱、ＡＧＥ蓄積の阻害及びＲＡＧＥ発現、におけるクルクミンの役割が報告されている（Lin et al. Curcumin inhibits gene expression of receptor for advanced glycation end products (RAGE) in hepatic stellate cells in vitro by elevating PPARγ activity and attenuating oxidative stress, British Journal of Pharmacology 166, 2212-2227 (2012)；Yu et al. Curcumin Alleviates Diabetic Cardiomyopathy in Experimental Diabetic Rats, PLOS One 7(12) 1-11)）。しかし、市販のクルクミンは、３種のクルクミノイド、７２～７７％クルクミン、１４～１８％ジメトキシクルクミン及び３～５％ビスデメトキシクルクミンを含む。更に、クルクミンより大きい画分は、それを疎水性にし、そのため生体利用性及び吸収に影響を及ぼす（Pushpakumari et al. Enhancing the Absorption of Curcuminoids from Formulated Turmeric Extracts, 6(6) 2468-2476 (2015)）。クルクミン、ビスデメトキシクルクミン及びデメトキシクルクミンの生物学的特性は、異なる疾患状態で変動し、最近では、特定の疾患症状の管理においてビスデメトキシクルクミン及びデメトキシクルクミンは、クルクミンと類似及びより優れた有効性を持つため多くの注目を集めている（Majeed et al., Reductive Metabolites of Curcuminoids, Nutriscience Publishers LLC, 2019）。ＲＡＧＥを標的することに関連する薬理学的課題は、フィードフォワードループにおいて炎症性遺伝子の遺伝子発現を制御するだけでなく、ＲＡＧＥの発現を誘導するＮＦ－κＢ活性化を制御することにも関係する（Armando et al. Inhibition of RAGE Axis Signalling: A Pharmacological Challenge, Current Drug Targets, 20, 340-346, (2019)）。ＲＡＧＥに対して産生された遮断ペプチド及び抗体によって有望な結果が得られたが、治療用化合物としての制約のため、限定的な使用に直面した（Arumugam T et al. S100P-derived RAGE antagonistic peptide reduces tumor growth and metastasis. Clin Cancer Res. 18(16): 4356-64 (2012)；Kokkola et al. Successful treatment of collagen-induced arthritis in mice and rats by targeting extracellular high mobility group box chromosomal protein 1 activity. Arthritis Rheum 48(7): 2052-8 (2003)）。また、ＴＴＰ４８８、アゼリラゴン、ピオグリタゾン、ＰＰＡＲγアゴニストなど、いくつかの小分子もＲＡＧＥシグナル伝達を遮断する（Salvatore et al. Targeting the Receptor for Advanced Glycation End products (RAGE): A Medicinal Chemistry Perspective, 60(17), 7213-7232 (2017)；Burstein et al. Effect of TTP488 in patients with mild to moderate Alzheimer's disease. BMC Neurol.14, 12 (2014)；Burstein et al. Development of azeliragon, an oral small molecule antagonist of the receptor for advanced glycation end products, for the potential slowing of loss of cognition in mild Alzheimer's disease, J Prev Alzheimers Dis 5(2): 149-54 (2018)）。ＲＡＧＥを標的することに関連する複雑さ及び臨床試験において化合物リストが非常に限られることを考慮すると、ＲＡＧＥを標的する新規手段、特に安全で、毒性が少ない手段が必要である。

【0006】

発明の目的
２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を使用して、慢性炎症状態の対象においてＲＡＧＥ発現を阻害するのに使用するための組成物及び方法を開示することが、本発明の主要な目的である。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。
本発明のなお別の主要な目的において、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を用いて、慢性炎症状態の対象においてＲＡＧＥを治療的に管理するために使用する組成物及び方法を開示する。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を使用して慢性炎症状態の対象においてＲＡＧＥ発現を阻害するのに使用するための方法及び組成物を包含することによって、背景に記載した前述の問題を広く解決する。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。
本発明の第１の態様は、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を用いて慢性炎症状態の対象においてＲＡＧＥ発現を阻害するのに使用するための組成物に関する。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。
本発明の更に別の態様において、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を用いて対象において慢性炎症状態を治療的に管理するのに使用するための組成物を包含する。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。
本発明の別の態様において、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を用いて慢性炎症状態の対象においてＲＡＧＥ発現を阻害する方法を包含する。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。
本発明の別の態様は、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を対象に投与する、前記対象において慢性炎症状態を処置する方法を包含する。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。
本発明のより広い範囲の適用は、下記の詳細な説明から明らかになろう。しかしながら、以下の詳細な説明及び特定の例は、本発明の好ましい実施形態を示しているが、本発明に対する制約と解釈されるべきでないことは理解されるべきであり、使用する試料の濃度範囲の変更、クルクミノイド誘導体／類似体、ＢＡＰ、実験条件、哺乳動物の選択など、様々な変更及び修飾を行うことは当業技術者の範囲内であり、この詳細な説明から本発明の精神及び範囲の十分範囲内である。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】膵臓におけるＲＡＧＥ発現に対する、ＡＣ３、ＢＡＰ及びその併用の効果を示す図である。＊Ｐ＜０．０５。

【図2】膵臓における抗糖化効果に対する、ＡＣ３、ＢＡＰ及びその併用の効果を示す図である。＊Ｐ＜０．０５。

【発明を実施するための形態】

【0009】

選択した定義
別途指定がない限り、本出願に使用される用語は全て、先行技術において公知である通常の意味を保有する。本発明で使用される他の特定の少数の定義が以下で説明され、本明細書全体に適用される。別途指定がない限り、請求項は、より広い定義を提供する。

【0010】

本出願において、試料へのどんな言及も、開示された治療的効果をもたらす以下の薬剤のうちの１種又は組み合わせのいずれかを指す。本薬剤は、少なくとも２０質量％のＢＤＭＣを含むクルクミノイド組成物のことを指す濃縮ＢＤＭＣ組成物を含む。より具体的には、ＡＣ３は、本発明に使用される好ましいクルクミノイドであり、クルクミノイドへのいずれの言及もＡＣ３であり、ＡＣ３は、２０～５０質量％ビスデメトキシクルクミン、１０～２５質量％デメトキシクルクミン及び３０～５０質量％クルクミンであり、ＢＡＰとは、β－アミリンパルミチン酸のことを指す。Ｃ３複合体へのいずれの言及も、７５～８１％クルクミン、１５～１９％デメトキシクルクミン、及び２．２～６．５％ビスデメトキシクルクミンである。また、クルクミノイドとは、開示される例によってＢＤＭＣ、ＤＭＣ又はＡＣ３のいずれかのことを指す。
治療的に管理する又は管理とは、本発明に開示される状態を効果的に改善する状態のことを指す。本明細書における対照に対するいずれの言及も、包含される実験及び例に対する糖尿病対照、無処置対照、メトホルミン対照のことを指す。

【0011】

本発明は、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を用いて、慢性炎症状態の対象においてＲＡＧＥ発現を阻害するのに使用するための方法及び組成物を一般に包含する。本発明は、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を用いて対象において慢性炎症状態を治療的に管理するのに使用するための組成物も包含する。更に、本発明は、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を対象に投与する、前記対象において慢性炎症状態を処置する方法であって、組成物が２０～５０質量％ ＢＤＭＣ、１０～２５質量％デメトキシクルクミン（ＤＭＣ）及び３０～５０質量％クルクミンを含み、組成物中の合計クルクミノイドが、２０～９５質量％の範囲である組成物を包含する。組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。関連する態様において、対象は哺乳動物である。

【0012】

最も好ましい実施形態において、本発明は、慢性炎症状態の対象においてＲＡＧＥ発現の阻害に使用するための組成物を開示し、組成物は、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む。本実施形態の別の態様において、組成物は、２０～５０質量％ ＢＤＭＣ、１０～２５質量％デメトキシクルクミン（ＤＭＣ）及び３０～５０質量％クルクミンを含み、組成物中の合計クルクミノイドは、２０～９５質量％の範囲である。本実施形態の関連する態様において、組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。関連する態様において、対象は哺乳動物である。

【0013】

本発明の別の最も好ましい実施形態において、本発明は、対象において慢性炎症状態を治療的に管理するのに使用するための組成物を開示し、組成物は、２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む。本実施形態の別の態様において、組成物は、２０～５０質量％ ＢＤＭＣ、１０～２５質量％デメトキシクルクミン（ＤＭＣ）及び３０～５０質量％クルクミンを含み、組成物中の合計クルクミノイドは、２０～９５質量％の範囲である。本実施形態の関連する態様において、組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。関連する態様において、対象は哺乳動物である。
本発明の最も好ましい別の実施形態において、本発明は、（ａ）慢性炎症状態の対象を同定するステップと；（ｂ）２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を前記対象に投与するステップとを含む、慢性炎症状態の対象においてＲＡＧＥ発現を阻害する方法を開示する。本実施形態の別の態様において、組成物は、２０～５０質量％ ＢＤＭＣ、１０～２５質量％デメトキシクルクミン（ＤＭＣ）及び３０～５０質量％クルクミンを含み、組成物中の合計クルクミノイドは、２０～９５質量％の範囲である。本実施形態の関連する態様において、組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。関連する態様において、対象は哺乳動物である。

【0014】

本発明の最も好ましいなお別の実施形態において、本発明は、（ａ）慢性炎症状態の対象を同定するステップと；（ｂ）２０質量％以上存在する濃縮ビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）を含む組成物を前記対象に投与するステップとを含む、対象において慢性炎症状態を処置する方法を開示する。本実施形態の別の態様において、組成物は、２０～５０質量％ ＢＤＭＣ、１０～２５質量％デメトキシクルクミン（ＤＭＣ）及び３０～５０質量％クルクミンを含み、組成物中の合計クルクミノイドは、２０～９５質量％の範囲である。本実施形態の関連する態様において、組成物は、β－アミリンパルミチン酸（ＢＡＰ）を更に含む。関連する態様において、対象は哺乳動物である。

【0015】

本発明の関連する実施形態において、慢性炎症状態の対象におけるＲＡＧＥ発現の阻害は、炎症マーカーの発現を低下させ、酸化的ストレスを低下させ、糖化レベルを緩和することによって得られる。本実施形態の更なる態様において、ＲＡＧＥの阻害は、１～１０μｇ／ｍＬ、好ましくは２～８μｇ／ｍＬ、好ましくは４～６μｇ／ｍＬの範囲から選択されるクルクミノイド、ＢＡＰ又はその併用によって得られる（実施例１、表１～表３）。本実施形態の関連する別の態様において、ＲＡＧＥ発現の軽減は、ＲＡＧＥ発現の低下をもたらすクルクミノイド、ＢＡＰ又はその併用によって得られる。ＲＡＧＥ発現は、糖尿病ラットにおいて増大した。ＢＡＰは、膵臓ＲＡＧＥ発現に効果が無かったが、ＡＣ３は、発現を３０．３％減少させた。併用は、発現をそれぞれ４４．６％及び７６．７％減少させた。メトホルミンは、６．９％減少に有効であった（図１、実施例３）。本発明の本実施形態の関連する態様において、炎症マーカー（ＴＮＦ－α、ＩＬ６、ＩＬ－１β）の発現の低下は、クルクミノイド、ＢＡＰ又は併用による処置によって得られる。併用は、糖尿病対照と比較して１／２０～１／５０の低下を示し、その効果は、個々の処置と比較して、１００ｍｇ／ｋｇクルクミノイドと２００μｇ／ｋｇ ＢＡＰを使用した場合に一層顕著であった（表５、実施例３）。本発明の本実施形態の別の態様において、対象において酸化的ストレスが低下し、クルクミノイド、ＢＡＰ又はその併用によって得られた。ＢＡＰによる、糖尿病対照より１／２の低下と比較して、併用の効果は、１／３～１／４の低下とより優れていた（表６、実施例４）。本発明の本実施形態の別の態様において、グリカンレベルの軽減は、クルクミノイド、ＢＡＰ又は併用による処置によって得られる。タンパク質カルボニル化による効果は、クルクミノイド又はＢＡＰのいずれかが個々に使用された場合、高血糖対照より１／６～１／１０に阻害され、併用は、１／２０の変化をもたらした（図２、実施例５）。関連する態様において、対象は哺乳動物である。

【0016】

本発明の関連する実施形態において、対象における治療的効果は、５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲のクルクミノイド、ＢＡＰによる処置によって得られる。より好ましくは１～１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは５０～１００ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは１００ｍｇ／ｋｇクルクミノイドである。ＢＡＰは、５０～２００μｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは５０μｇ／ｋｇ、最も好ましくは５０μｇ／ｋｇ又は２００μｇ／ｋｇのいずれかから選択される。クルクミノイドとＢＡＰの併用は、５０μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは５０μｇ／ｋｇ又は２００μｇ／ｋｇのいずれかのＢＡＰと１００ｍｇ／ｋｇクルクミノイドから選択される。本発明の関連する実施形態において、慢性炎症状態は、ＩＩ型真性糖尿病、心臓血管疾患、アルツハイマー病、がん、末梢神経障害、感覚消失及び失明からなる群から選択される。関連する態様において、対象は哺乳動物である。

【0017】

本発明の関連する別の実施形態において、組成物は、安定化剤、生体利用性エンハンサー並びに酸化防止剤、薬学的又は栄養補助的又は薬用化粧品的に許容される賦形剤及びエンハンサーを更に含み、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディ剤又は食用品の形態で経口投与されるように適切に処方されている（実施例７）。投与に適した製剤を考え出すことは、当技術に熟達した者の十分範囲内である。
本発明の別の実施形態において、ＡＣ３、Ｃ３、又は個々のクルクミノイド組成物を使用するＤＰＰ４（ジペプチジルペプチダーゼ４）、α－グルコシダーゼ、及び抗糖化の阻害を開示する（表７～表１０）。
本発明の他の修正及び変更は、前述の開示及び教示から当業技術者にとって明らかであろう。このように、本発明の特定の実施形態しか、本明細書には特に記述されていないが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく、多数の修正が行われてもよいことは明らかであろう。

【実施例】

【0018】

（実施例１）
抗糖化－ｉｎ ｖｉｔｒｏで終末糖化産物を防止する方策
糖化とは、タンパク質、脂質又は核酸のアミノ基と糖のアルデヒド若しくはケト基とが関係する非酵素的グリコシル化反応であり、終末糖化産物（ＡＧＥ）の形成をもたらす（Yamagishi et al. Pathologic role of dietary advanced glycation end products in cardiometabolic disorders, and therapeutic intervention, Nutrition, 32(2), 157-65 (2016)）。糖の反応性カルボニルは、タンパク質、脂質又は核酸のアミノ基と結合してシッフ塩基を生成し、そのシッフ塩基は、アマドリ産物を再編成する。一連のゆっくりした反応において、アマドリ反応、シッフ塩基及びマイヤール反応は、ＡＧＥを最終的に形成する。ｉｎ ｖｉｖｏで糖化は緩慢であるが、糖化産物の効果は持続的である。ＡＧＥの形成を防止する試験物質の効果を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。

【0019】

前に記述した通り、抗糖化活性を評価した（Sero et al. Tuning a 96-Well Microtiter Plate Fluorescence-Based Assay to Identify AGE Inhibitors in Crude Plant Extracts）。簡潔には、９６ウェル黒色マイクロプレートにおいて様々な試料濃度の１０μＬを、２５ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン４０μＬ及び１５０ｍｇ／ｍＬ Ｄ－リボース５０μＬに添加した。Ｄ－リボースと緩衝液を対照として用いた。混合物を含有するプレートを３７℃で２４時間インキュベートした。糖化産物を、ＢＭＧ ＦＬＵＯｓｔａｒ Ｏｐｔｉｍａマイクロプレートリーダーを使用して３９０／４６０ｎｍのＥｘ／Ｅｍで蛍光強度を測定することによって検出した。ＡＧＥの形成［タンパク質（ＢＳＡ）と糖（リボース）の間の非酵素反応］を、濃度依存的様式でＡＣ３によって阻害した（表１）。ＢＡＰは、ＡＧＥ形成の弱い阻害剤であった（表１）。ＡＣ３とＢＡＰの併用は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで糖化の阻害を相乗的に増大させる可能性がある（表２）。

【0020】

【表1】

【表2】

【0021】

（実施例２）
糖尿病の例を利用する生理的状態におけるＡＧＥ及びＲＡＧＥの阻害。
ＡＧＥとＲＡＧＥの相互作用効果及びその病理学的帰結を研究するために、食餌誘導性糖尿病をモデルとして使用した。
ウィスターラット（１５０ｇ）に高脂肪及びフルクトース食餌（ＨＦＦＤ）与えて２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）を誘導した。ＨＦＦＤは、空腹時高血糖、食事前後の高インスリン血症、インスリン抵抗性、耐糖能異常及び脂質異常症を含めた長期代謝障害に関連する糖尿病の発症を誘導する。ＨＦＦＤの動物は、線維症、炎症、高レプチン血症及び内皮細胞機能不全を伴う肝臓脂肪症など、Ｔ２Ｄに関連する合併症を示す。

【0022】

ラットに、ＨＦＦＤとともにＡＣ３（１００ｍｇ／ｋｇ）、ＢＡＰ（２００μｇ／ｋｇ）、ＢＡＰ＋ＡＣ３（２００μｇ＋１００ｍｇ／ｋｇ）、ＢＡＰ＋ＡＣ３（５０μｇ＋１００ｍｇ／ｋｇ）及び陽性対照として１００ｍｇ／ｋｇメトホルミンを９０日間同時投与した（表３）。器官を、実験の終わりに採取して、ＲＡＧＥ発現、酸化的ストレス及び炎症に対する補助剤の効果を評価した。

【表3】

【0023】

（実施例３）
膵臓におけるＲＡＧＥ発現
ＤＮＡを、ｔｒｉｚｏｌ法を使用して膵臓試料から抽出した。膵臓組織を液体窒素中でホモジナイズし、続いてｔｒｉｚｏｌ抽出及びＤＮＡｓｅ処理して、あらゆる微量のＤＮＡを除去した。第１鎖ｃＤＮＡを、オリゴｄＴプライマー及びＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ逆転写酵素［ｃＤＮＡ合成キット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標）］を使用してＲＮＡ試料から調製した。定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）を、製造業者の指示にしたがってライトサイクラー９６を使用して、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ蛍光色素を用いて実行した［Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ（登録商標）ＦａｓｔＳｔａｒｔ ＤＮＡ Ｍａｓｔｅｒ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ、Ｒｏｃｈｅ］。分析に使用したプライマーを、表４に提供する。ベータアクチン遺伝子を、ハウスキーピング遺伝子として使用した。各試験試料中の標的遺伝子の遺伝子発現を、比較Ｃｔ（ΔΔＣｔ）法を使用する相対定量によって決定した。

【0024】

ＲＡＧＥ発現は、糖尿病ラットにおいて増大した。ＢＡＰは、膵臓ＲＡＧＥ発現に効果が無かったが、ＡＣ３は、発現を３０．３％減少させた。併用は、発現をそれぞれ４４．６％及び７６．７％減少させた。メトホルミンは、６．９％減少に有効であった（図１）。

【0025】

【表4】

【表5】

【0026】

炎症性サイトカインの発現は、対照と比較して糖尿病性ラットにおいて増大を示した。２００ｕｇ／ｋｇのＢＡＰは、膵臓においてサイトカイン発現を減少させるのに有効でなかった、一方でＡＣ３は最小限の活性があった。それらの併用は、炎症性サイトカインの発現レベルを減少させるのに非常に有効であった（表５）（ｐ＜０．０５）。

【0027】

（実施例４）
酸化的ストレスの評価
組織中の酸化的ストレスのレベルを、ヒドロキシル、ペルオキシル及び他の活性酸素種（ＲＯＳ）活性を測定する２’，７’－ジクロロフルオレセインジアセテート（ＤＣＦＤＡ）発蛍光性色素を使用することによって推定した。簡潔には、組織ホモジェネートのアリコート（１０μＬ）を、終濃度１０ｍＭになるＤＣＦＤＡエタノール溶液１５０μＬと混合した。暗所において室温で３０分間インキュベーションした後、蛍光を４８８及び５２０ｎｍの励起及び発光波長で測定した。蛍光が高いほど、酸化的ストレスは高い。酸化的ストレスは対象において低下し、クルクミノイド、ＢＡＰ又はその併用によって得られる。ＢＡＰによる、糖尿病対照より１／２の低下と比較して、併用の効果は、１／３～１／４の低下とより優れていた（表６）。

【0028】

【表6】

【0029】

（実施例５）
膵臓におけるタンパク質カルボニル化及びＡＧＥ－タンパク質カルボニル化
タンパク質のカルボニル化は、酸化的ストレス関連反応による、タンパク質におけるアルデヒド、ケトン又はラクタムなどの反応性カルボニル部分の導入と定義される。したがって、用語「カルボニルストレス」は、反応性カルボニル種の産生又は細胞代謝の妨害によるそれの異常な蓄積について記述するものと示唆される。他の酸化的修飾と比較して、タンパク質カルボニルは固有の安定性を有し、より長期間血液中を循環することができ、広範な下流の機能的帰結を有する。糖尿病の様な慢性疾患、肺疾患、腎不全及びアルツハイマー病は、カルボニル化タンパク質の帰結の一部である。ＡＧＥは別として、高血糖はタンパク質カルボニル化を増大させうる。糖尿病において、高血糖を伴う活性酸素種（ＲＯＳ）レベルの増大は、グルコースの酸化から得られるグリオキサール及びメチルグリオキサル（ＭＧ）などの反応性カルボニル含有中間体の形成をもたらす。したがって、タンパク質カルボニル化合物を減らすことが、慢性疾患を管理する新規の機序として追求されている。

【0030】

タンパク質カルボニル（ＰＣ）の蛍光定量的ＮＢＤＨ（７－ヒドラジノ－４－ニトロベンゾ－２，１，３－オキサジアゾール）アッセイ
本アッセイは、ヒドラゾン形成を介するＮＢＤＨとカルボニルとの反応に基づき、高度に蛍光性の産物を形成する（Vidal et la., 2014）。すべてのタンパク質含有試料又は生体試料をＰＢＳ中に２倍希釈した。希釈したタンパク質試料１００μＬを、黒色９６ウェルマイクロプレートに入れた。そこへ、ＮＢＤＨ溶液［ＰＢＳ中に２００μＭ ＮＢＤＨ、１Ｍ ＨＣｌを用いて（ｐＨ７．４）にした］１００μＬを添加し、穏やかに振盪しながら３７℃で２０分間インキュベートした。蛍光を、４８０ｎｍで励起し、５６０ｎｍで測定した。タンパク質カルボニル化による効果は、クルクミノイド又はＢＡＰのいずれかが個々に使用された場合、高血糖対照より１／６～１／１０に阻害され、併用は、１／２０の変化をもたらした（図２）。ＡＣ３とＢＡＰの併用は、個々の処置より大きな効果を示した。

【0031】

（実施例６）
ＤＰＰ４、α－グルコシダーゼ及び糖化に対する活性
ビスデメトキシクルクミン（ＡＣ３）組成物は、ＤＰＰ４酵素（表７）、α－グルコシダーゼ酵素（表８）を阻害する効果により高血糖に対する管理を呈し、個々のクルクミノイド、Ｃ３複合体、ＡＣ３複合体は、用量依存的様式で抗糖化及び抗ＤＰＰ４の効果を呈する。ＡＣ３複合体は、抗糖化に対して個々のクルクミノイドより優れた阻害剤であり（表９）、クルクミンは、ＤＰＰ４に対してＡＣ３と同程度に有効であった（表１０）。

【0032】

【表7】

【表8】

【表9】

【表10】

【0033】

（実施例７）
ＡＣ３及びβ－アミリンパルミチン酸を含有する製剤
組成物は、薬学的／栄養補助的に許容可能な賦形剤、アジュバント、希釈剤、安定化剤、分散可能なゴム、生体利用性エンハンサー又は担体とともに処方され、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ剤、散剤、懸濁液、乳剤、チュアブル剤、キャンディ剤若しくは食用品の形態で経口投与される。

【0034】

関連する態様において、生体利用性エンハンサーは、ピペリン［ＢｉｏＰｅｒｉｎｅ（登録商標）］、ケルセチン、ニンニク抽出物、ショウガ抽出物及びナリンギンの群から選択される。関連する別の態様において、安定化剤は、ロスマリン酸、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、メタ重亜硫酸ナトリウム、没食子酸プロピル、システイン、アスコルビン酸及びトコフェロールからなる群から選択される。更に関連する別の態様において、分散可能なゴムは、寒天、アルギン酸塩、カラギーナン、アラビアゴム、グアーガム、ローカストビーンガム、こんにゃくゴム、キサンタンガム及びペクチンからなる群から選択される。

【0035】

表１１～表１５は、ビスデメトキシクルクミンを含有する機能性食品製剤の実例を提供する

【表11】

【表12】

【表13】

【表14】

【表15】

上の製剤は、単なる実例であり、前記目的を意図する上の活性成分を含有するあらゆる製剤が、同等と見なされることになる。

【0036】

本発明の他の修正及び変更は、前述の開示及び教示から当業技術者にとって明らかであろう。このように、本発明の特定の実施形態しか、本明細書には特に記述されていないが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく、多数の修正が行われてもよいことは明らかであり、添付の特許請求の範囲と組み合わせてのみ解釈されるべきである。

【図1】

【図2】

【配列表】

2023554640000001.app

【国際調査報告】