特表 2024-500153 ヒト化ＴＳＬＰ遺伝子、ヒト化ＴＳＬＰ受容体遺伝子、及び／又はヒト化ＩＬ７ＲＡ遺伝子を有する非ヒト動物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-04

(54)【発明の名称】ヒト化ＴＳＬＰ遺伝子、ヒト化ＴＳＬＰ受容体遺伝子、及び／又はヒト化ＩＬ７ＲＡ遺伝子を有する非ヒト動物

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/09 20060101AFI20231222BHJP

   A01K 67/027 20240101ALI20231222BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20231222BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20231222BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20231222BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20231222BHJP

   C12N 5/0789 20100101ALI20231222BHJP

   C12Q 1/04 20060101ALI20231222BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20231222BHJP

   G01N 33/15 20060101ALI20231222BHJP

【ＦＩ】

C12N15/09 100

A01K67/027 ZNA

C12N5/10

C12N15/113 Z

C12N15/12

C12N15/11 Z

C12N5/0789

C12Q1/04

G01N33/50 Z

G01N33/15 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023537555

(86)(22)【出願日】2021-12-20

(85)【翻訳文提出日】2023-07-20

(86)【国際出願番号】 US2021064270

(87)【国際公開番号】W WO2022140221

(87)【国際公開日】2022-06-30

(31)【優先権主張番号】63/128,258

(32)【優先日】2020-12-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】597160510

【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】タン， ヤジュン

(72)【発明者】

【氏名】ブリッジズ， スザンナ

(72)【発明者】

【氏名】スリバットサン， スバシニ

(72)【発明者】

【氏名】フリータ， ダボル

(72)【発明者】

【氏名】ギュラー， ケーガン

(72)【発明者】

【氏名】マーフィー， アンドリュー ジェイ．

【テーマコード（参考）】

2G045

4B063

4B065

【Ｆターム（参考）】

2G045AA40

4B063QA20

4B063QQ20

4B063QR80

4B065AA91X

4B065AA93Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA01

4B065CA44

(57)【要約】

本明細書において、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを含むように遺伝子改変された齧歯類（マウス及びラットなどであるが、これらに限定されない）が開示される。このような遺伝子改変齧歯類を作製するための組成物及び方法、並びにアレルギー性疾患及びがんなどの疾患のための動物モデルとしてそのような遺伝子改変齧歯類を使用する方法が提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

遺伝子改変齧歯類動物であって、そのゲノム中に、
齧歯類Ｔｓｌｐ核酸配列と、
ヒトＴＳＬＰ核酸配列と、を含む、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含み、
前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一の成熟タンパク質配列を含むヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドをコードする、遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項2】

前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子ポリペプチドが、前記ヒトＴＳＬＰタンパク質の前記成熟タンパク質配列と少なくとも９５％の同一性を有する成熟タンパク質配列を含む、請求項１に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項3】

前記ヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドが、前記ヒトＴＳＬＰタンパク質の前記成熟タンパク質配列と同一の成熟タンパク質配列を含む、請求項１に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項4】

前記ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質が、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項5】

前記ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質が、前記齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと少なくとも９５％の同一性を有するシグナルペプチドを含む、請求項４に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項6】

前記ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質が、内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと同一のシグナルペプチドを含む、請求項４に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項7】

前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列が、前記ヒトＴＳＬＰタンパク質の前記成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードする、先行請求項のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項8】

前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列が、前記ヒトＴＳＬＰタンパク質の前記成熟タンパク質配列をコードする、請求項７に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項9】

前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列が、ヒトＴＳＬＰ遺伝子の前記成熟タンパク質配列の第１のアミノ酸のコドンから、エクソン４における終止コドンまでエクソン１を含む、請求項８に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項10】

前記齧歯類Ｔｓｌｐ核酸配列が、前記齧歯類Ｔｓｌｐシグナルペプチドをコードする齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子のエクソン配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項11】

前記齧歯類動物が、マウスであり、前記齧歯類核酸配列が、マウスＴｓｌｐ遺伝子のシグナルペプチドアミノ酸をコードするエクソン１と、エクソン２の５’部分と、を含む、請求項１０に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項12】

前記齧歯類Ｔｓｌｐ核酸配列が、前記齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子の３’ＵＴＲを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項13】

前記齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子が、内因性Ｔｓｌｐ遺伝子である、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項14】

前記齧歯類動物が、マウスであり、前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、（ｉ）マウスＴｓｌｐ遺伝子のシグナルペプチドアミノ酸をコードするエクソン１、及びエクソン２の５’部分、並びに（ｉｉ）ヒトＴＳＬＰ遺伝子の前記成熟タンパク質配列の第１のアミノ酸のコドンから、エクソン４における終止コドンまでエクソン１を含む、請求項１に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項15】

前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、前記マウスＴｓｌｐ遺伝子の３’ＵＴＲを更に含む、請求項１４に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項16】

前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、齧歯類Ｔｓｌｐプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１～１５のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項17】

前記齧歯類Ｔｓｌｐプロモーターが、内因性齧歯類Ｔｓｌｐプロモーターである、請求項１６に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項18】

前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位に位置する、請求項１～１７のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項19】

前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位での齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡの、前記ヒトＴＳＬＰ核酸による置換の結果として形成される、請求項１８に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項20】

前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、前記内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質の前記成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードするエクソン配列を含む齧歯類ゲノムＤＮＡの、前記ヒトＴＳＬＰタンパク質の前記成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードする前記ヒトＴＳＬＰ核酸による置換の結果として形成される、請求項１９に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項21】

前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、前記内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質の前記成熟タンパク質配列をコードするエクソン配列を含む齧歯類ゲノムＤＮＡの、前記ヒトＴＳＬＰタンパク質の前記成熟タンパク質配列をコードする前記ヒトＴＳＬＰ核酸による置換の結果として形成される、請求項２０に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項22】

前記齧歯類動物がマウスであり、置換される前記マウスゲノムＤＮＡが、前記内因性マウスＴｓｌｐ遺伝子の前記成熟マウスＴｓｌｐタンパク質の第１のアミノ酸のコドンからエクソン５における終止コドンまでエクソン２を含み、前記ヒトゲノムＤＮＡが、ヒトＴＳＬＰ遺伝子の前記成熟ヒトＴＳＬＰタンパク質の第１のアミノ酸からエクソン４における終止コドンまでエクソン１を含む、請求項２１に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項23】

前記齧歯類が、前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子に対してホモ接合性である、請求項１～２２のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項24】

前記齧歯類が、前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子に対してヘテロ接合性である、請求項１～２２のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項25】

前記齧歯類が、前記齧歯類動物が、前記ヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドを発現する、先行請求項のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項26】

そのゲノムが、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位にヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位にヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを更に含む、先行請求項のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項27】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、先行請求項のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項28】

単離齧歯類組織又は細胞であって、そのゲノムが、齧歯類Ｔｓｌｐ 核酸配列及びヒトＴＳＬＰ核酸配列を含むヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含み、前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一の成熟タンパク質配列を含むヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドをコードする、単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項29】

前記ヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドが、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と少なくとも９５％の同一性を有する成熟タンパク質配列を含む、請求項２８に記載の単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項30】

前記齧歯類細胞が、齧歯類胚性幹細胞である、請求項２８又は２９に記載の単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項31】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の単離された齧歯類組織又は細胞。

【請求項32】

請求項３０に記載の齧歯類胚性幹細胞を含む、齧歯類胚。

【請求項33】

遺伝子改変齧歯類を作製する方法であって、
ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含むように齧歯類ゲノムを改変することであって、前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、齧歯類Ｔｓｌｐ 核酸配列及びヒトＴＳＬＰ核酸配列を含み、かつヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一の成熟タンパク質配列を含むヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドをコードする、改変することと、
前記改変された齧歯類ゲノムを含む齧歯類を作製することと、を含む、方法。

【請求項34】

前記ヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドが、前記ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と少なくとも９５％の同一性を有する成熟タンパク質配列を含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記改変することが、
前記ヒト核酸配列を含む核酸分子を、齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞のゲノム内に導入することと、
前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列が、齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡを置換するために内因性Ｔｓｌｐ座位内に組み込まれており、それによって前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を形成する、齧歯類ＥＳ細胞を取得することと、
前記取得された齧歯類ＥＳ細胞から齧歯類動物を生成することと、を含む、請求項３３又は３４に記載の方法。

【請求項36】

前記核酸分子が、前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列に隣接する５’相同アーム及び３’相同アームを更に含み、前記５’相同アーム及び３’相同アームが、置換される前記齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡに隣接する前記内因性齧歯類座位における核酸配列と相同である、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、前記内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位において前記内因性齧歯類Ｔｓｌｐプロモーターに作動可能に連結されている、請求項３５又は３６に記載の方法。

【請求項38】

前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列が、前記ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードする、請求項３３～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

標的化核酸構築物であって、
齧歯類Ｔｓｌｐ座位においてヌクレオチド配列に相同である５’ヌクレオチド配列及び３’ヌクレオチド配列が隣接する、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位で齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子内に組み込まれるべきヒトＴＳＬＰ核酸を含み、
前記齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子内への前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列の組み込みが、齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡの前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列による置換をもたらし、それによってヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を形成し、
前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列が、ヒトＴＳＬＰタンパク質の前記成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードする、標的化核酸構築物。

【請求項41】

前記齧歯類がマウス又はラットである、請求項４０に記載の標的核酸。

【請求項42】

遺伝子改変齧歯類動物であって、そのゲノム中に、
齧歯類Ｔｓｌｐｒ核酸配列と、
ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列と、を含む、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含み、
前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一の細胞外ドメインを含むヒト化Ｔｓｌｐｒポリペプチドをコードする、遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項43】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質が、前記ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと少なくとも９５％の同一性を有する細胞外ドメインを含む、請求項４２に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項44】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質が、前記ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと同一の細胞外ドメインを含む、請求項４２に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項45】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質が、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一の膜貫通型細胞質配列を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類。

【請求項46】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質が、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の前記膜貫通型細胞質配列と少なくとも９５％の同一性を有する膜貫通型細胞質配列を含む、請求項４５に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項47】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質が、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の前記膜貫通型細胞質配列を含む、請求項４６に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項48】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質が、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一なシグナルペプチドを含む、請求項４２～４７のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項49】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質が、前記齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと少なくとも９５％の同一性を有するシグナルペプチドを含む、請求項４８に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項50】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質が、前記齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドを含む、請求項４９に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項51】

前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列が、前記ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする、請求項４０～５０のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項52】

前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列が、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のエクソン２からエクソン６における最後の細胞外ドメインアミノ酸のコドンまでを含む、請求項５１に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項53】

前記齧歯類Ｔｓｌｐｒ核酸配列が、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通細胞質配列の少なくとも実質的な部分をコードする齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のエクソン配列を含む、請求項４０～５２のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項54】

前記齧歯類動物がマウスであり、前記齧歯類Ｔｓｌｐｒ核酸配列が、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子の前記膜貫通ドメインの第１のアミノ酸のコドンからエクソン８までエクソン６を含む、請求項５３に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項55】

前記齧歯類Ｔｓｌｐｒ核酸配列が、前記齧歯類Ｔｓｌｐｒシグナルペプチドをコードする齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のエクソン配列を含む、請求項４０～５４のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項56】

前記齧歯類動物がマウスであり、前記齧歯類核酸配列が、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子のエクソン１を含む、請求項５５に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項57】

前記齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、内因性Ｔｓｌｐｒ遺伝子である、請求項５３～５６のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項58】

前記齧歯類動物がマウスであり、前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、（ｉ）マウスＴｓｌｐｒ遺伝子のエクソン１、（ｉｉ）ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のエクソン６における細胞外ドメインの最後のアミノ酸のコドンまでエクソン２、及び（ｉｉｉ）マウスＴｓｌｐｒの遺伝子の膜貫通ドメインの第１のアミノ酸のコドンからエクソン８までエクソン６を含む、請求項４０に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項59】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、齧歯類Ｔｓｌｐｒプロモーターに作動可能に連結されている、請求項４０～５８のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項60】

前記齧歯類Ｔｓｌｐｒプロモーターが、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒプロモーターである、請求項５９に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項61】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位に位置する、請求項４０～６０のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項62】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位での齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡの、前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸による置換の結果として形成される、請求項６１に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項63】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、前記内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の前記細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするエクソン配列を含む齧歯類ゲノムＤＮＡの、前記ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸による置換の結果として形成される、請求項６２に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項64】

前記齧歯類動物がマウスであり、置換される前記マウスゲノムＤＮＡが、前記内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子のエクソン６における細胞外ドメインの最後のアミノ酸のコドンまでエクソン２を含み、前記ヒトゲノムＤＮＡが、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のエクソン６における前記細胞外ドメインの最後のアミノ酸のコドンまでエクソン２を含む、請求項６３に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項65】

前記齧歯類が、前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子に対してホモ接合性である、請求項４０～６４のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項66】

前記齧歯類が、前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子に対してヘテロ接合性である、請求項４０～６２のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項67】

前記齧歯類が、前記ヒト化Ｔｓｌｐｒポリペプチドを発現する、請求項４０～６６のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項68】

そのゲノムが、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位にヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位にヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を、又はそれらの組み合わせを、更に含む、請求項４０～６７のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項69】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、請求項４０～６８のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項70】

単離された齧歯類組織又は細胞であって、そのゲノムが、齧歯類Ｔｓｌｐｒ核酸配列及びヒトＴＳＬＰＲ核酸配列を含むヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含み、前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一である細胞外ドメインを含むヒト化Ｔｓｌｐｒポリペプチドをコードする、単離された齧歯類組織又は細胞。

【請求項71】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒポリペプチドが、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の前記細胞外ドメインと少なくとも９５％の同一性を有する細胞外ドメインを含む、請求項７０に記載の単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項72】

前記齧歯類細胞が、齧歯類胚性幹細胞である、請求項７０又は７１に記載の単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項73】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、請求項７０～７２のいずれか一項に記載の単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項74】

請求項７２に記載の齧歯類胚性幹細胞を含む、齧歯類胚。

【請求項75】

遺伝子改変齧歯類を作製する方法であって、
ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含むように齧歯類ゲノムを改変することであって、前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、齧歯類Ｔｓｌｐｒ 核酸配列と、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列とを含み、ヒトＴＳＬＰタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一である細胞外ドメインを含むヒト化Ｔｓｌｐｒポリペプチドをコードする、改変することと、
前記改変された齧歯類ゲノムを含む齧歯類を作製することと、を含む、方法。

【請求項76】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒポリペプチドが、ヒトＴＳＬＰタンパク質の前記細胞外ドメインと少なくとも９５％の同一性を有する細胞外ドメインを含む、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記改変することが、
前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列を含む核酸分子を、齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞のゲノム内に導入することと、
前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列が、齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡを置換するために内因性Ｔｓｌｐｒ座位内に組み込まれており、それによって前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を形成する、齧歯類ＥＳ細胞を取得することと、
前記取得された齧歯類ＥＳ細胞から齧歯類動物を生成することと、を含む、請求項７５又は７６に記載の方法。

【請求項78】

前記核酸分子が、前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列に隣接する５’相同アーム及び３’相同アームを更に含み、前記５’相同アーム及び３’相同アームが、置換される前記齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡに隣接する前記内因性齧歯類座位における核酸配列と相同である、請求項７５に記載の方法。

【請求項79】

前記ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、前記内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位において前記内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒプロモーターに作動可能に連結されている、請求項７７又は７８に記載の方法。

【請求項80】

前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列が、前記ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする、請求項７５～７９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項81】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、請求項７５～８０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

標的化核酸構築物であって、
齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位でヌクレオチド配列に相同である５’ヌクレオチド配列及び３’ヌクレオチド配列が隣接する、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位で齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子内に組み込まれるべきヒトＴＳＬＰＲ核酸を含み、
前記齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子内への前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列の組み込みが、齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡの前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列による置換をもたらし、それによってヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を形成し、
前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列が、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする、標的化核酸構築物。

【請求項83】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、請求項８２に記載の標的核酸。

【請求項84】

遺伝子修飾齧歯類動物であって、そのゲノム中に、
齧歯類Ｉｌ７ｒａ核酸配列と、
ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列と、を含む、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含み、
前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一の細胞外ドメインを含むヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドをコードする、遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項85】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドが、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の前記細胞外ドメインと少なくとも９５％の同一性を有する細胞外ドメインを含む、請求項８４に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項86】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドが、前記ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと同一の細胞外ドメインを含む、請求項８４に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項87】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質が、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一の膜貫通型細胞質配列を含む、請求項８４～８６のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項88】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質が、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の前記膜貫通型細胞質配列と少なくとも９５％の同一性を有する膜貫通型細胞質配列を含む、請求項８７に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項89】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質が、前記内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列を含む、請求項８７に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項90】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質が、前記齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含む、請求項８４～８９のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項91】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質が、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の前記シグナルペプチドと少なくとも９５％の同一性を有するシグナルペプチドを含む、請求項９０に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項92】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質が、前記内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質のシグナルペプチドを含む、請求項９０に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項93】

前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列が、前記ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする、請求項８４～９２のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項94】

前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列が、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子の成熟ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の第１のアミノ酸をコードするエクソン２におけるコドンからエクソン５までを含む、請求項９３に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項95】

前記齧歯類Ｉｌ７ｒａ核酸配列が、前記齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列の少なくとも実質的な部分をコードする齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のエクソン配列を含む、請求項８４～９４のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項96】

前記齧歯類動物がマウスであり、前記齧歯類Ｉｌ７ｒａ核酸配列が、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子のエクソン６からエクソン８までを含む、請求項９５に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項97】

前記齧歯類Ｉｌ７ｒａ核酸配列が、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質のシグナルペプチドをコードする齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のエクソン１の一部を含む、請求項８４～９６のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項98】

前記齧歯類Ｉｌ７ｒａ核酸配列が、前記齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のエクソン１の５’ＵＴＲ部分を含む、請求項９７に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項99】

前記齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、内因性Ｉｌ７ｒａ遺伝子である、請求項９５～９８のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項100】

前記齧歯類動物がマウスであり、前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、（ｉ）５’ＵＴＲ及びマウスＩｌ７ｒａのシグナルペプチドをコードする配列を含むマウスＩｌ７ｒａ遺伝子のエクソン１の一部、（ｉｉ）成熟ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の第１のアミノ酸をコードするヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のエクソン１のコドンからヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のエクソン５まで、及び（ｉｉｉ） マウスＩｌ７ｒａ遺伝子のエクソン６からエクソン８までを含む、請求項８４に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項101】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、齧歯類Ｉｌ７ｒａプロモーターに作動可能に連結される、請求項８４～１００のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項101】

前記齧歯類Ｉｌ７ｒａプロモーターが、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａプロモーターである、請求項１０１に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項102】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位に位置する、請求項８４～１０１のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項103】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位での齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡの、前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸による置換の結果として形成される、請求項１０２に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項104】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、前記内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の前記細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするエクソン配列を含む齧歯類ゲノムＤＮＡの、前記ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸による置換の結果として形成される、請求項１０３に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項105】

前記齧歯類動物がマウスであり、置換される前記マウスゲノムＤＮＡが、前記内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子の、前記成熟マウスＩｌ７ｒａタンパク質の第１のアミノ酸をコードするエクソン１におけるコドンからエクソン５までを含み、前記ヒトゲノムＤＮＡが、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子の、前記成熟ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の第１のアミノ酸をコードするエクソン１におけるコドンからエクソン５までを含む、請求項１０５に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項106】

前記齧歯類が、前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子に対してホモ接合性である、請求項８４～１０５のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項107】

前記齧歯類が、前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子に対してヘテロ接合性である、請求項８４～１０５のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項108】

前記齧歯類が、前記ヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドを発現する、請求項８４～１０７のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項109】

そのゲノムが、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位にヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位にヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を、又はそれらの組み合わせを、更に含む、請求項８４～１０８のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項110】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、請求項８４～１０９のいずれかに記載の遺伝子改変齧歯類動物。

【請求項111】

単離齧歯類組織又は細胞であって、そのゲノムが、齧歯類Ｉｌ７ｒａ 核酸配列及びヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含むヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含み、前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一である細胞外ドメインを含むヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドをコードする、単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項112】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドが、前記ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと少なくとも９５％の同一性を有する細胞外ドメインを含む、請求項１１１に記載の単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項113】

前記齧歯類細胞が、齧歯類胚性幹細胞である、請求項１１１又は１１２に記載の単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項114】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、請求項１１１～１１３のいずれか一項に記載の単離齧歯類組織又は細胞。

【請求項115】

請求項１１３に記載の齧歯類胚性幹細胞を含む、齧歯類胚。

【請求項116】

遺伝子改変齧歯類を作製する方法であって、
ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含むように齧歯類ゲノムを改変することであって、前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、齧歯類Ｉｌ７ｒａ 核酸配列及びヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含み、かつヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一の細胞外ドメインを含むヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドをコードする、改変することと、
前記改変された齧歯類ゲノムを含む齧歯類を作製することと、を含む、方法。

【請求項117】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドが、前記ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと少なくとも９５％の同一性を有する細胞外ドメインを含む、請求項１１６に記載の方法。

【請求項118】

前記改変することが、
前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含む核酸分子を、齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞のゲノム内に導入することと、
前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列が、齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡを置換するために内因性Ｉｌ７ｒａ座位内に組み込まれており、それによって前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を形成する、齧歯類ＥＳ細胞を取得することと、
前記取得された齧歯類ＥＳ細胞から齧歯類動物を生成することと、を含む、請求項１１６又は１１７に記載の方法。

【請求項119】

前記核酸分子が、前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列に隣接する５’相同アーム及び３’相同アームを更に含み、前記５’相同アーム及び３’相同アームが、置換される前記齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡに隣接する前記内因性齧歯類座位における核酸配列と相同である、請求項１１８に記載の方法。

【請求項120】

前記ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、前記内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位で前記内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１１８又は１１９に記載の方法。

【請求項121】

前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列が、前記ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の前記細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする、請求項１１６～１２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項122】

前記齧歯類が、マウス又はラットである、請求項１１６～１２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項123】

標的化核酸構築物であって、
齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位でヌクレオチド配列に相同である５’ヌクレオチド配列及び３’ヌクレオチド配列が隣接する、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位で齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子内に組み込まれるべきヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含み、
前記齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子内への前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列の組み込みが、齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡの前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列との置換をもたらし、それによってヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を形成し、
前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列が、前記ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする、標的化核酸構築物。

【請求項124】

前記齧歯類がマウス又はラットである、請求項１２３に記載の標的化核酸。

【請求項125】

ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子を更に含み、前記齧歯類が、ＲＡＧ２－／－及びＩＬ２ＲＧ－／－に対してホモ接合性である、請求項１～２７、４２～６９、又は８４～１１０のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類。

【請求項126】

前記齧歯類が、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子、及び／又はヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位を更に含む、請求項１２５に記載の遺伝子改変齧歯類。

【請求項127】

アレルギー性疾患（例えば、喘息又は皮膚炎症）又はがんの齧歯類動物モデルの調製における、請求項１～２７、４２～６９、８４～１１０、又は１２５～１２６のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類動物の使用。

【請求項128】

アレルギー状態を治療するための候補薬剤を試験する方法であって、
請求項１～２７、４２～６９、８４～１１０、又は１２５～１２６のいずれかによって定義される遺伝子改変齧歯類動物においてアレルギー状態を誘導することと、
前記遺伝子改変齧歯類動物に候補薬剤を投与することと、
前記候補薬剤が前記遺伝子改変齧歯類動物において前記アレルギー状態を阻害するかどうかを決定することと、を含む、方法。

【請求項129】

がんを治療するための候補薬剤を試験する方法であって、
請求項１～２７、４２～６９、８４～１１０、又は１２５～１２６のいずれかよって定義される遺伝子改変齧歯類動物にヒトがん細胞を移植することと、
前記遺伝子改変齧歯類動物に候補薬剤を投与することと、
前記候補薬剤が、前記遺伝子改変齧歯類動物における前記がん細胞の増殖を阻害するかどうかを決定することと、を含む、方法。

【請求項130】

前記候補薬剤が、小分子化合物、核酸、又は抗体である、請求項１２８又は１２９に記載の方法。

【請求項131】

遺伝子改変齧歯類細胞を生成するためのインビトロ方法であって、
請求項４０又は４１に記載の標的化核酸構築物を齧歯類細胞に導入することを含み、これにより、ヒトＴＳＬＰ核酸配列が内因性齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子内に組み込まれ、その結果、齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡが前記ヒトＴＳＬＰ核酸配列で置換されてヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が形成され、それによって前記遺伝子改変齧歯類細胞を生成する、方法。

【請求項132】

前記齧歯類細胞が、齧歯類ＥＳ細胞である、請求項１３１に記載の方法。

【請求項133】

遺伝子改変齧歯類細胞を生成するためのインビトロ方法であって、
請求項８２又は８３に記載の標的化核酸構築物を齧歯類細胞に導入することを含み、これにより、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列が内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子内に組み込まれ、その結果、齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡが前記ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列で置換されてヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が形成され、それによって前記遺伝子改変齧歯類細胞を生成する、方法。

【請求項134】

前記齧歯類細胞が、齧歯類ＥＳ細胞である、請求項１３３に記載の方法。

【請求項135】

遺伝子改変齧歯類細胞を生成するためのインビトロ方法であって、
請求項１２３又は１２４に記載の標的化核酸構築物を齧歯類細胞に導入することを含み、これにより、ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列が内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子内に組み込まれ、その結果、齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡが前記ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列で置換されてヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が形成され、それによって前記遺伝子改変齧歯類細胞を生成する、方法。

【請求項136】

前記齧歯類細胞が、齧歯類ＥＳ細胞である、請求項１３５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１２月２１日出願の米国仮特許出願第６３／１２８，２５８号の優先権の利益を主張するものであり、当該仮特許出願の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表の参照による組み込み
２０２１年１２月２日に作製され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して米国特許商標庁に提出された３７３０１＿１０５８９ＷＯ０１＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇという名称の１９２ＫＢのＡＳＣＩＩテキストファイルの形態をとる配列表が、参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

胸腺間質リンパポエチン（ＴＳＬＰ）は、ＴＳＬＰに特異的な鎖（ＴＳＬＰＲ又はＴｓｌｐｒと称される）及びＩＬ７受容体α鎖から構成されるヘテロ二量体受容体を介して作用し、アレルギー性疾患及び特定のがんに関係している。効果的なインビボシステムは、アレルギー性疾患及びがんの病因のより良い理解を得るために、及び治療法の開発のために望まれる。

【発明の概要】

【0004】

一部の実施形態では、本明細書に開示されるのは、そのゲノム中にヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含む遺伝子改変齧歯類動物であって、このヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、齧歯類Ｔｓｌｐ核酸配列とヒトＴＳＬＰ核酸配列を含み、かつこのヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一の成熟タンパク質配列を含むヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドをコードする、遺伝子改変齧歯類動物である。

【0005】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドは、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と同一の成熟タンパク質配列を含む。

【0006】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質、例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと同一のシグナルペプチドを含む。

【0007】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰ核酸配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰ核酸配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列、例えば、ヒトＴＳＬＰタンパク質（例えば、配列番号３に記載されるヒトＴＳＬＰタンパク質）のアミノ酸２９～１５９をコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰ核酸配列は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子の成熟タンパク質配列の第１のアミノ酸をコードするコドンからのエクソン１を、エクソン４における終止コドンまで含む。

【0008】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中の齧歯類Ｔｓｌｐ核酸配列は、齧歯類Ｔｓｌｐシグナルペプチドをコードする齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子）のエクソン配列を含む。一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中の齧歯類核酸配列は、マウスＴｓｌｐ遺伝子のシグナルペプチドアミノ酸をコードするエクソン１、及びエクソン２の５’部分を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中の齧歯類Ｔｓｌｐ核酸配列は、齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子）の３’ＵＴＲも含む。

【0009】

一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、（ｉ）マウスＴｓｌｐ遺伝子のシグナルペプチドアミノ酸をコードするエクソン１、及びエクソン２の５’部分、並びに（ｉｉ）ヒトＴＳＬＰ遺伝子の成熟タンパク質配列の第１のアミノ酸をコードするコドンからのエクソン１を、エクソン４における終止コドンまで含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、マウスＴｓｌｐ遺伝子の３’ＵＴＲを更に含む。様々な実施形態では、マウスＴｓｌｐ遺伝子は、内因性マウスＴｓｌｐ遺伝子である。

【0010】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐプロモーターなどの齧歯類Ｔｓｌｐプロモーターに作動可能に連結されている。

【0011】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位以外の座位に位置する。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位に位置する。

【0012】

ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位に位置する一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位における齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡのヒトＴＳＬＰ核酸による置換の結果として形成される。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードするエクソン配列を含む齧歯類ゲノムＤＮＡの、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードするヒトＴＳＬＰ核酸による置換の結果として形成される。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質の成熟タンパク質配列をコードするエクソン配列を含む齧歯類ゲノムＤＮＡの、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列をコードするヒトＴＳＬＰ核酸による置換の結果として形成される。一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、置換されるマウスゲノムＤＮＡは、内因性マウスＴｓｌｐ遺伝子の成熟マウスＴｓｌｐタンパク質の第１のアミノ酸をコードするコドンからのエクソン２を、エクソン５における終止コドンまで含み、ヒトゲノムＤＮＡは、ヒトＴＳＬＰ遺伝子の成熟ヒトＴＳＬＰタンパク質の第１のアミノ酸をコードするコドンからのエクソン１を、エクソン４における終止コドンまで含む。

【0013】

一部の実施形態では、齧歯類動物は、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子に対してホモ接合性である。一部の実施形態では、齧歯類動物は、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子に対してヘテロ接合性である。

【0014】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドは、齧歯類動物においてヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子から発現される。

【0015】

一部の実施形態では、齧歯類動物は、そのゲノム中にヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを更に含む。

【0016】

一部の実施形態では、齧歯類は、マウス又はラットである。

【0017】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子をゲノムに含む、単離齧歯類細胞又は組織が、本明細書に開示される。一部の実施形態において、齧歯類細胞は、齧歯類胚性幹細胞である。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、卵子又は精子である。一部の実施形態では、単離齧歯類組織又は細胞は、マウス組織若しくは細胞、又はラット組織若しくは細胞である。

【0018】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含む齧歯類胚性幹細胞を含む齧歯類胚が、本明細書に開示される。

【0019】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類を作製する方法が本明細書に開示される。一部の実施形態では、方法は、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含むように齧歯類ゲノムを改変することであって、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、齧歯類Ｔｓｌｐ 核酸配列及びヒトＴＳＬＰ核酸配列を含み、かつヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一の成熟タンパク質配列を含むヒト化Ｔｓｌｐポリペプチドをコードする、改変することと、この改変齧歯類ゲノムを含む齧歯類を作製することと、を含む。

【0020】

一部の実施形態では、齧歯類ゲノムを改変することが、ヒトＴＳＬＰ核酸配列を含む核酸分子を齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞のゲノム内に導入するステップと、ヒトＴＳＬＰ核酸配列が内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位に組み込まれて、齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡを置換し、それによってヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が形成される、齧歯類ＥＳ細胞を取得するステップと、得られた齧歯類ＥＳ細胞から齧歯類動物を生成するステップとを、を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰ核酸配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードする。一部の実施形態では、ＥＳ細胞に導入される核酸分子は、ヒトＴＳＬＰ核酸配列に隣接する５’相同アーム及び３’相同アームを更に含み、５’及び３’相同アームは、置換される齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡに隣接する内因性齧歯類座位で核酸配列と相同である。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、齧歯類Ｔｓｌｐプロモーター、例えば内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位での内因性齧歯類Ｔｓｌｐプロモーターに作動可能に連結されている。

【0021】

一部の方法の実施形態では、齧歯類は、マウス又はラットである。

【0022】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位で齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子に組み込まれる、その齧歯類Ｔｓｌｐ座位でヌクレオチド配列と相同である５’ヌクレオチド配列及び３’ヌクレオチド配列が隣接する、ヒトＴＳＬＰ核酸配列を含む、標的化核酸構築物が本明細書に開示され、この齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子へのヒトＴＳＬＰ核酸配列の組み込みの結果、齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡの、ヒトＴＳＬＰ核酸配列による置換が生じ、それによってヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を形成し、このヒトＴＳＬＰ核酸配列が、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードする。一部の標的化核酸の実施形態では、齧歯類は、ラット又はマウスである。

【0023】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類細胞を生成するためのインビトロ方法が、本明細書に開示され、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列の内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位への組み込みを媒介する齧歯類相同アームが隣接する、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードするヒトＴＳＬＰ核酸配列を含む標的化ベクターを、齧歯類細胞に導入することを含み、その結果、齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡの、ヒトＴＳＬＰ核酸配列による置換が生じ、本明細書に記載されるヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が形成され、それによって遺伝子改変齧歯類細胞を生成する。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、マウス細胞又はラット細胞である。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、齧歯類ＥＳ細胞であり、本方法は、遺伝子改変齧歯類ＥＳ細胞を生成する。

【0024】

一部の実施形態では、本明細書に開示されるのは、そのゲノム中にヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含む遺伝子改変齧歯類動物であって、このヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、齧歯類Ｔｓｌｐｒ核酸配列とヒトＴＳＬＰＲ核酸配列を含み、かつこのヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一の細胞外ドメインを含むヒト化Ｔｓｌｐｒポリペプチドをコードする、遺伝子改変齧歯類動物である。

【0025】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば、内在性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質）の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一の膜貫通型細胞質配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば、内在性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質）の膜貫通型細胞質配列と同一の膜貫通型細胞質配列を含む。

【0026】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質）のシグナルペプチドと同一のシグナルペプチドを含む。

【0027】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子中のヒトＴＳＬＰＲ核酸配列は、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子中のヒトＴＳＬＰＲ核酸配列は、ヒトＴＳＬＰＲ（例えば、配列番号２３に記載されるヒトＴＳＬＰＲタンパク質）のアミノ酸２９～２３１をコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列は、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のエクソン２を、エクソン６における最後の細胞外ドメインアミノ酸をコードするコドンまで含む。

【0028】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子中の齧歯類Ｔｓｌｐｒ核酸配列は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質）の膜貫通型細胞質配列の少なくとも実質的な部分をコードする齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のエクソン配列を含む。一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、齧歯類Ｔｓｌｐｒ核酸配列は、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子（例えば、内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子）の膜貫通ドメインの第１のアミノ酸をコードするコドンからのエクソン６をエクソン８まで含む。

【0029】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子中の齧歯類Ｔｓｌｐｒ核酸配列は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質）のシグナルペプチドをコードする齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のエクソン配列を含む。一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、齧歯類核酸配列は、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子（例えば、内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子）のエクソン１を含む。

【0030】

一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、（ｉ）マウスＴｓｌｐｒ遺伝子（例えば、内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子）のエクソン１、（ｉｉ）ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のエクソン２を、エクソン６における細胞外ドメインの最後のアミノ酸をコードするコドンまで、及び（ｉｉｉ）マウスＴｓｌｐｒ遺伝子の膜貫通ドメインの第１のアミノ酸をコードするコドンからのエクソン６をエクソン８まで含む。

【0031】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒプロモーターなどの齧歯類Ｔｓｌｐｒプロモーターに作動可能に連結されている。

【0032】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位以外の座位に位置する。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位に位置する。

【0033】

ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位に位置する一部の実施形態では、このヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位で齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡのヒトＴＳＬＰＲ核酸による置換の結果として形成される。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするエクソン配列を含む齧歯類ゲノムＤＮＡの、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするヒトＴＳＬＰＲ核酸による置換の結果として形成される。一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、置換されるマウスゲノムＤＮＡは、内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子のエクソン２を、エクソン６における細胞外ドメインの最後のアミノ酸をコードするコドンまで含み、ヒトゲノムＤＮＡは、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のエクソン２を、エクソン６における細胞外ドメインの最後のアミノ酸をコードするコドンまで含む。

【0034】

一部の実施形態では、齧歯類動物は、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子に対してヘテロ接合性である。一部の実施形態では、齧歯類動物は、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子に対してヘテロ接合性である。

【0035】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒポリペプチドは、齧歯類動物においてヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子から発現される。

【0036】

一部の実施形態では、齧歯類動物は、そのゲノム中にヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを更に含む。

【0037】

一部の実施形態では、齧歯類は、マウス又はラットである。

【0038】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子をゲノムに含む、単離齧歯類細胞又は組織が、本明細書に開示される。一部の実施形態において、齧歯類細胞は、齧歯類胚性幹細胞である。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、卵子又は精子である。一部の実施形態では、単離齧歯類組織又は細胞は、マウス組織若しくは細胞、又はラット組織若しくは細胞である。

【0039】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含む齧歯類胚性幹細胞を含む齧歯類胚が、本明細書に開示される。

【0040】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類を作製する方法が本明細書に開示される。一部の実施形態では、方法は、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含むように齧歯類ゲノムを改変することであって、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、齧歯類Ｔｓｌｐｒ 核酸配列及びヒトＴＳＬＰＲ核酸配列を含み、かつヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一の細胞外ドメインを含むヒト化Ｔｓｌｐｒポリペプチドをコードする、改変することと、この改変齧歯類ゲノムを含む齧歯類を作製することと、を含む。

【0041】

一部の実施形態では、齧歯類ゲノムを改変することが、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列を含む核酸分子を齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞のゲノム内に導入するステップと、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列が内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位に組み込まれて、齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡを置換し、それによってヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が形成される、齧歯類ＥＳ細胞を取得するステップと、得られた齧歯類ＥＳ細胞から齧歯類動物を生成するステップとを、を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列は、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。一部の実施形態では、ＥＳ細胞に導入される核酸分子は、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列に隣接する５’相同アームと３’相同アームを更に含み、５’相同アームと３’相同アームは、置換される齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡに隣接する内因性齧歯類座位の核酸配列と相同である。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、齧歯類Ｔｓｌｐｒプロモーター、例えば内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位での内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒプロモーターに作動可能に連結されている。

【0042】

一部の方法の実施形態では、齧歯類は、マウス又はラットである。

【0043】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位で齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子に組み込まれる、その齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位でヌクレオチド配列と相同である５’ヌクレオチド配列及び３’ヌクレオチド配列が隣接する、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列を含む、標的化核酸構築物が本明細書に開示され、この齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子へのヒトＴＳＬＰＲ核酸配列の組み込みの結果、齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡの、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列による置換が生じ、それによってヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を形成し、このヒトＴＳＬＰＲ核酸配列が、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。一部の標的化核酸の実施形態では、齧歯類は、ラット又はマウスである。

【0044】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類細胞を生成するためのインビトロ方法が、本明細書に開示され、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列の内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位への組み込みを媒介する齧歯類相同アームが隣接する、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするヒトＴＳＬＰＲ核酸配列を含む標的化ベクターを、齧歯類細胞に導入することを含み、その結果、齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡの、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列による置換が生じ、本明細書に記載されるヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が形成され、それによって遺伝子改変齧歯類細胞を生成する。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、マウス細胞又はラット細胞である。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、齧歯類ＥＳ細胞であり、本方法は、遺伝子改変齧歯類ＥＳ細胞を生成する。

【0045】

一部の実施形態では、そのゲノム中にヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含む遺伝子改変齧歯類動物が本明細書に開示され、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、齧歯類Ｉｌ７ｒａ核酸配列及びヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含み、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一の細胞外ドメインを含むヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドをコードする。

【0046】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内在性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質）の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一の膜貫通型細胞質配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内在性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質）の膜貫通型細胞質配列と同一の膜貫通型細胞質配列を含む。

【0047】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質）のシグナルペプチドと同一のシグナルペプチドを含む。

【0048】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子中のヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子中のヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質のアミノ酸２１～２３６をコードする（例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列は、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子の成熟タンパク質の第１のアミノ酸をコードするエクソン１におけるコドンからエクソン５まで含む。

【0049】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子中の齧歯類Ｉｌ７ｒａ核酸配列は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質）の膜貫通型細胞質配列の少なくとも実質的な部分をコードする、齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子の配列を含む。一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、齧歯類Ｉｌ７ｒａ核酸配列は、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子）のエクソン６をエクソン８まで含む。

【0050】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子中の齧歯類Ｉｌ７ｒａ核酸配列は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質）のシグナルペプチドをコードする齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のエクソン１の一部を含む。一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、齧歯類核酸配列は、５’ＵＴＲの両方を含み、マウスＩｌ７ｒａのシグナルペプチドをコードするマウスＩｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子）のエクソン１の一部を含む。

【0051】

一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、（ｉ）マウスＩｌ７ｒａタンパク質のシグナルペプチドをコードする、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子）のエクソン１の一部、（ｉｉ）ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子の成熟タンパク質の第１のアミノ酸をコードするコドンからエクソン５までエクソン１を、及び（ｉｉｉ）マウスＩｌ７ｒａ遺伝子のエクソン６をエクソン８まで含む。

【0052】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａプロモーターなどの齧歯類Ｉｌ７ｒａプロモーターに作動可能に連結されている。

【0053】

一部の実施形態では、ヒト化ｌ７ｒａ遺伝子は、内因性齧歯類ｌ７ｒａ座位以外の座位に位置する。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位に位置する。

【0054】

ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位に位置する一部の実施形態では、このヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位で齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡのヒトＩＬ７ＲＡ核酸による置換の結果として形成される。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするエクソン配列を含む齧歯類ゲノムＤＮＡの、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするヒトＩＬ７ＲＡ核酸による置換の結果として形成される。一部の実施形態では、齧歯類動物はマウスであり、置換されるマウスゲノムＤＮＡは、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子の成熟タンパク質配列の第１のアミノ酸をコードするエクソン１におけるコドンから、エクソン５まで含み、ヒトゲノムＤＮＡは、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子の成熟タンパク質配列の第１のアミノ酸をコードするエクソン１におけるコドンから、エクソン５までを含む。

【0055】

一部の実施形態では、齧歯類動物は、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子に対してヘテロ接合性である。一部の実施形態では、齧歯類動物は、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子に対してホモ接合性である。

【0056】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドは、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子由来の齧歯類動物で発現される。

【0057】

一部の実施形態では、齧歯類動物は、そのゲノム中にヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、又はそれらの組み合わせを更に含む。

【0058】

一部の実施形態では、齧歯類は、マウス又はラットである。

【0059】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子をそのゲノムに含む、単離齧歯類細胞又は組織が、本明細書に開示される。一部の実施形態において、当該齧歯類細胞は、齧歯類胚性幹細胞である。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、卵子又は精子である。一部の実施形態では、単離齧歯類組織又は細胞は、マウス組織若しくは細胞、又はラット組織若しくは細胞である。

【0060】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含む齧歯類胚性幹細胞を含む齧歯類胚が、本明細書に開示される。

【0061】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類を作製する方法が本明細書に開示される。一部の実施形態では、方法は、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含むように齧歯類ゲノムを改変することであって、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、齧歯類Ｉｌ７ｒａ 核酸配列及びヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含み、かつヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一の細胞外ドメインを含むヒト化Ｉｌ７ｒａポリペプチドをコードする、改変することと、この改変齧歯類ゲノムを含む齧歯類を作製することと、を含む。

【0062】

一部の実施形態では、齧歯類ゲノムを改変することが、ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含む核酸分子を齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞のゲノム内に導入するステップと、ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列が内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位に組み込まれて、齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡを置換し、それによってヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を形成している齧歯類ＥＳ細胞を取得するステップと、得られた齧歯類ＥＳ細胞を使用して齧歯類動物を生成するステップと、を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。一部の実施形態では、ＥＳ細胞に導入される核酸分子は、ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列に隣接する５’相同アーム及び３’相同アームを更に含み、５’及び３’相同アームは、置換される齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡに隣接する内因性齧歯類座位で核酸配列と相同である。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、齧歯類Ｉｌ７ｒａプロモーター、例えば内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位での内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａプロモーターに作動可能に連結されている。

【0063】

一部の方法の実施形態では、齧歯類は、マウス又はラットである。

【0064】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位で齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子に組み込まれ、その齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位でヌクレオチド配列と相同である５’ヌクレオチド配列及び３’ヌクレオチド配列が隣接するヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含む、標的化核酸構築物が、本明細書に開示され、この齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子へのヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列の組み込みが齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡの、ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列による置換をもたらし、それによってヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を形成し、このヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列が、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。一部の標的化核酸の実施形態では、齧歯類は、ラット又はマウスである。

【0065】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類細胞を生成するためのインビトロでの方法が、本明細書に開示され、ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列の内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位への組み込みを媒介する齧歯類相同アームが隣接する、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含む標的化ベクターを、齧歯類細胞に導入することを含み、その結果、齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡの、ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列による置換が生じ、本明細書に記載されるヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が形成され、それによって遺伝子改変齧歯類細胞を生成する。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、マウス細胞又はラット細胞である。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、齧歯類ＥＳ細胞であり、本方法は、遺伝子改変齧歯類ＥＳ細胞を生成する。

【0066】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子、内因性ＲＡＧ２遺伝子の破壊、内因性ＩＬ－２ＲＧ遺伝子の破壊、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子、及びヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位などのゲノム内に１つ以上の追加の遺伝子改変を含む。齧歯類は、そのような追加の遺伝子改変のいずれかについてヘテロ接合性又はホモ接合性であり得る。

【0067】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子及びヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子を含み、ＲＡＧ２遺伝子とＩＬ－２ＲＧ遺伝子の両方に対してホモ接合ヌルである。一部のこうした実施形態では、齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子及び／又はヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位を更に含む。齧歯類は、ヒト化遺伝子に対してヘテロ接合性又はホモ接合性であり得る。

【0068】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、及びヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子を含み、ＲＡＧ２遺伝子とＩＬ－２ＲＧ遺伝子の両方に対してホモ接合ヌルである。一部のこうした実施形態では、齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子及び／又はヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位を更に含む。齧歯類は、ヒト化遺伝子に対してホモ接合性又はヘテロ接合性であり得る。

【0069】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、及びヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子を含み、ＲＡＧ２遺伝子とＩＬ－２ＲＧ遺伝子の両方に対してホモ接合ヌルである。一部のこうした実施形態では、齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子及び／又はヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位を更に含む。齧歯類は、ヒト化遺伝子に対してホモ接合性又はヘテロ接合性であり得る。

【0070】

一部の実施形態では、本明細書に開示される、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを含み、任意選択的に１つ以上の追加の遺伝子改変を有する、遺伝子改変齧歯類動物は、アレルギー性疾患（例えば、気道又は皮膚炎症）又はがんの齧歯類動物モデルの調製に使用される。

【0071】

一部の実施形態では、アレルギー状態を治療するための候補薬剤を試験する方法が本明細書に開示され、本方法は、本明細書に開示される遺伝子改変齧歯類動物においてアレルギー状態を誘導することと、齧歯類動物に候補薬剤を投与することと、候補薬剤が齧歯類動物におけるアレルギー状態を阻害するかどうかを決定することと、を含む。

【0072】

一部の実施形態では、がんを治療するための候補薬剤を試験する方法が本明細書に開示され、本方法は、本明細書に開示される遺伝子改変齧歯類動物にヒトがん細胞を移植することと、齧歯類動物に候補薬剤を投与することと、候補薬剤が齧歯類動物におけるがん細胞の増殖を阻害するかどうかを決定することと、を含む。一部の実施形態では、がんは、例えば、乳がん、肺がん、及び膵がんを含む、Ｔｈ２駆動性がん（Ｔｈ２ ｄｒｉｖｅｎ ｃａｎｃｅｒ）である。
（図面の簡単な説明）

【0073】

本特許又は本出願のファイルには、カラーで制作された図面が少なくとも一点含まれている。カラー図面を含む本特許のコピーは、請求及び必要料金の支払いに応じて特許商標庁から提供される。

【0074】

本明細書において援用され、かつ本明細書の一部を成す添付の図面は、いくつかの実施形態を例証し、説明とともに、本開示の組成物及び方法を例証する。

【図面の簡単な説明】

【0075】

【図1-1】マウスＴｓｌｐ座位のヒト化のための戦略の例示的実施形態を図示する。マウスＴｓｌｐ遺伝子及びヒトＴＳＬＰ遺伝子は、水平線で表され、そのエクソンは、線の上方に配置されたボックスで表される。内因性マウスＴｓｌｐ座位におけるアミノ酸２０をコードするエクソン２におけるコドンから始まり、エクソン５における終止コドンまでの３４８６ｂｐの連続するマウスＴｓｌｐゲノム断片は、ヒトＴＳＬＰエクソン１におけるアミノ酸２９をコードするコドンから始まり、エクソン４における終止コドンまでの４１００ｂｐのヒトＴＳＬＰゲノム断片によって置換されている。置換の結果、マウスＴｓｌｐシグナルペプチド及びヒト成熟ＴＳＬＰポリペプチドを含むマウス－ヒトハイブリッド（「ヒト化」）Ｔｓｌｐタンパク質が得られる。図１Ｄ及び１Ｆも参照されたい。

【図1-2】マウスＴＳＬＰ座位のヒト化のための戦略である、マウスＴｓｌｐ座位を含む核酸並びにヒト化マウスＴｓｌｐ座位を含む標的化核酸構築物の例示的実施形態を図示し（正確な縮尺ではない）、そこではマウスＴｓｌｐ座位での３．４９ｋＢのマウスゲノム断片が、１．９ ｋｂのヒトゲノム断片１（ヒトＴＬＳＰの、アミノ酸２９をコードするエクソン１におけるコドンからエクソン３の３’末端の後の２５７ｂｐまで）、４．４ｋｂのＦｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｐｕｒｏカセット（ヒトＴＬＳＰイントロン３に挿入される）、及び２．２ｋｂのヒトゲノム断片２（ヒトＴＬＳＰの、エクソン３の末端後２５８ｂｐからエクソン４における終止コドンまで）を含むヒト化断片によって置換されている。標的化構築物中のヒト化断片は、１１４．３ｋｂのマウス５’相同アーム及び６５．３ｋｂのマウス３’相同アームに隣接している。ヒト化マウスＴｓｌｐ座位を含む標的化核酸構築物は、マウスゲノム内のマウスＴｓｌｐ遺伝子への標的化挿入のためにマウス胚性幹細胞に導入することができる。正しい標的化を確認するために、ヒト対立遺伝子の獲得アッセイ及びマウス対立遺伝子喪失アッセイで使用されるプライマー及びプローブの位置も示されている。プライマー及びプローブの配列を表６に記載する。

【図1-3】マウスＴＳＬＰ対立遺伝子のヒト化のための戦略の例示的実施形態である、図１Ｂで上述したマウスＴｓｌｐゲノム断片の、ヒト断片１、Ｆｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｐｕｒｏカセット、及びヒトゲノム断片２を含むヒト化断片による置換の結果として生じる、ＭＡＩＤ＃７４６６として指定されるヒト化Ｔｓｌｐ対立遺伝子を図示する（正確な縮尺ではない）。Ｆｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｐｕｒｏカセットが除去された後、ヒト化Ｔｓｌｐ対立遺伝子はＭＡＩＤ＃７４６７として指定される。

【図1-4】マウスＴｓｌｐ（配列番号１）、ヒトＴＳＬＰアイソフォーム１（配列番号３）（太字斜体）、及びヒト化（ハイブリッド）Ｔｓｌｐ（配列番号５）（ヒト部分を太字斜体で表記）のタンパク質配列の例示的実施形態を示す。各タンパク質配列ではシグナルペプチドに下線を付している。

【図1-5】マウスＴｓｌｐ（配列番号２）、ヒトＴＳＬＰアイソフォーム１（配列番号４）（太字斜体）、及びヒト化（ハイブリッド）Ｔｓｌｐ（配列番号６）（ヒト部分を太字斜体で表記）のｍＲＮＡ配列の例示的実施形態を示す。各ｍＲＮＡにでは、シグナルペプチドをコードする部分に下線を付している。

【図1-6】マウスＴｓｌｐ（「ｍＴｓｌｐ」、配列番号１）、ヒトＴＳＬＰアイソフォーム１（「ｈＴＳＬＰ」、配列番号３）、及びヒト化（ハイブリッド）Ｔｓｌｐ（配列番号５）タンパク質配列の例示的実施形態のアラインメントを示す。タンパク質のシグナルペプチドは枠で囲まれている。ヒト化（ハイブリッド）Ｔｓｌｐタンパク質の形成におけるマウス配列とヒト配列との間の接合部は、分子の５’（Ｎ末端）及び３’（Ｃ末端）の矢印によって示される。三角形は、Ｆｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｐｕｒｏカセットが挿入されるヒトイントロン３（２４２９ｂｐ）の位置を表す。

【図1-7】例示的実施形態において、ｎ実施例１に記載されるＴｓｌｐヒト化に対してヘテロ接合性のマウスが、マウス血清中で成熟ヒトＴＳＬＰタンパク質を発現したこと（中央）を、陰性対照としてＴｓｌｐヒト化を行わないマウス（左）及び陽性対照として正常なヒト血清（右）とともに示す。各点は、１匹のマウスを表す。

【図2-1】マウスＴｓｌｐｒ座位のヒト化のための戦略の例示的実施形態を図示する。マウスＴｓｌｐｒ遺伝子及びヒトＴＳＬＰＲ遺伝子は、水平線で表され、それらのエクソンは、線の上方に配置されたボックスで表される。エクソン２の前の３２８ｂｐでイントロン１から始まり、エクソン６の４７番目のｂｐで終わる内因性マウスＴｓｌｐｒ座位における２３６２ｂｐの連続マウスＴｓｌｐｒゲノム断片は、エクソン２の前の９０９ｂｐでイントロン１から始まり、エクソン６の４７番目のｂｐで終わる１３７４３ｂｐのヒトＴＳＬＰＲゲノム断片によって置換されている。この置換の結果、マウスＴｓｌｐｒのアミノ酸２７～２４３の欠失が生じるが、マウスＴｓｌｐｒシグナルペプチド（アミノ酸１～１９）、マウスＴｓｌｐｒ成熟タンパク質の最初の７個のアミノ酸、及びマウスＴｓｌｐｒ膜貫通ドメイン（アミノ酸２４４～２６４）及び細胞内ドメインは保存され、ヒトＴＳＬＰＲ細胞外ドメインの実質的な部分を挿入する（アミノ酸２７から始まり、 アミノ酸２３２～２５２のヒト膜貫通ドメインの直前の、アミノ酸２３１で終わる）。図２Ｄも参照されたい。

【図2-2】マウスＴｓｌｐｒ座位のヒト化のための戦略である、マウスＴｓｌｐｒ座位を含む核酸並びにヒト化マウスＴｓｌｐｒ座位を含む標的化核酸構築物の例示的実施形態を図示し（正確な縮尺ではない）、そこではマウスＴｓｌｐｒ座位での２．３６ｋＢのマウスゲノム断片が、４．８ｋｂのＦｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｎｅｏカセット（ヒトＴＬＳＰイントロン３に挿入される）、及び１３．７ｋｂのヒトゲノム断片（ヒトＴＬＳＰＲの、イントロン１の３’部分、エクソン２からエクソン６の４７番目のｂｐまで）を含むヒト化断片によって置換されている。標的化構築物中のヒト化断片は、２９．１ｋｂのマウス５’相同アーム（マウスＴｓｌｐｒのエクソン２の前最大３２８ｂｐ）及び１３３．２ｋｂのマウス３’相同アーム（マウスＴｓｌｐｒのエクソン６における４８番目のｂｐからエクソン８まで、続いてマウス３’ゲノム配列）に隣接している。ヒト化マウスＴｓｌｐｒ座位を含む標的化核酸構築物は、マウスゲノム内への標的化挿入のためにマウス胚性幹細胞に導入することができる。正しい標的化を確認するために、ヒト対立遺伝子の獲得アッセイ及びマウス対立遺伝子喪失アッセイで使用されるプライマー及びプローブの位置も示されている。プライマー及びプローブの配列を表９に記載する。

【図2-3】マウスＴＳＬＰ対立遺伝子のヒト化のための戦略の例示的実施形態である、図２Ｂで上述したマウスＴｓｌｐｒゲノム断片の、４．８ｋｂのＦｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｎｅｏカセット及び１３７４３ｂｐのヒトＴＳＬＰＲゲノム断片を含むヒト化断片による置換の結果として生じる、ＭＡＩＤ＃７５５８として指定されるヒト化Ｔｓｌｐｒ対立遺伝子を図示する（正確な縮尺ではない）。Ｆｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｎｅｏカセットが除去された後、ヒト化Ｔｓｌｐｒ対立遺伝子はＭＡＩＤ＃７５５９として指定される。

【図2-4】マウスＴｓｌｐｒ（配列番号２１）、ヒトＴＳＬＰＲ（配列番号２３）（太字斜体）、及びヒト化（ハイブリッド）Ｔｓｌｐｒ（配列番号２５）（ヒト部分を太字斜体で表記）のタンパク質配列の例示的実施形態を示す。各タンパク質配列では、シグナルペプチド（「ＳＰ」）及び膜貫通セグメント（「ＴＭ」）に下線を付している。

【図2-5】マウスＴｓｌｐｒ（配列番号２２）、ヒトＴＳＬＰＲ（配列番号２４）（太字斜体）、及びヒト化（ハイブリッド）Ｔｓｌｐｒ（配列番号２６）（ヒト部分を太字斜体で表記）のｍＲＮＡ配列の例示的実施形態を示す。各ｍＲＮＡにおいて、シグナルペプチド及び膜貫通セグメントをコードする部分にそれぞれ下線を付している。

【図2-6】同上。

【図2-7】マウスＴｓｌｐｒ（「ｍＴｓｌｐｒ」、配列番号２１）、ヒトＴＳＬＰＲ（「ｈＴＳＬＰＲ」、配列番号２３）、及びヒト化（ハイブリッド）Ｔｓｌｐｒ（配列番号２５）タンパク質配列の例示的実施形態のアラインメントを示す。タンパク質のシグナルペプチドは破線で囲まれている。膜貫通ドメインは、実線で囲まれている。ヒト化（ハイブリッド）Ｔｓｌｐｒの形成におけるマウス配列とヒト配列との間の接合部は、分子の５’（イントロン１内）及び３’（エクソン６内）で三角形によって示される。

【図3-1】マウスＩｌ７ｒａ座位のヒト化のための戦略の例示的実施形態を図示する。マウスＩｌ７ｒａ遺伝子及びヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子は、水平線で表され、それらのエクソンは、線の上方に配置されたボックスで表される。内因性マウスＩｌ７ｒａ座位における、エクソン１のコード配列における６９番目のｂｐから始まりイントロン５の５’部分までの、１９２３５ｂｐの連続マウスＩｌ７ｒａゲノム断片は、エクソン１のコード配列における６９番目のｂｐからイントロン５の５’部分までを含む１７２３２ｂｐのヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片によって置換される。置換により、マウスＩＬ７ｒａシグナルペプチド、実質的にヒトの細胞外ドメイン（最後の２つのアミノ酸、Ｇｌｙ－Ｔｒｐを除く）、及びマウスＩｌ７ｒａの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含むマウス－ヒトハイブリッド（「ヒト化」）Ｔｓｌｐタンパク質が生成される。図３Ｄも参照されたい。

【図3-2】は、マウスＩＬ７ｒａ座位のヒト化のための戦略である、マウスＩＬ７ｒａ座位を含む核酸並びにヒト化マウスＩＬ７ｒａ座位を含む標的化核酸構築物の例示的実施形態を図示し（正確な縮尺ではない）、そこではマウスＩＬ７ｒａ座位での１９．２ｋＢのマウスゲノム断片が、１２６ｂｐのヒトゲノム断片１（ヒトＩＬ７ＲＡの、エクソン１の最後の１４ｂｐ及びイントロン１の最初の１１２ｂｐを含む）、５．２ｋｂのＦｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｈｙｇカセット（ヒトＩＬ７ＲＡイントロン１に挿入される）、及び１７１０６ｂｐのヒトゲノム断片２（ヒトＩＬ７ＲＡの、イントロン１の３’部分、エクソン２からエクソン５、及びイントロン５の５’部分を含む）を含むヒト化断片によって置換されている。標的化構築物中のヒト化断片は、４８．８ｋｂのマウス５’相同アーム及び１２４．３ｋｂのマウス３’相同アームに隣接している。ヒト化マウスＩｌ７ｒａ座位を含む標的化核酸構築物は、マウスゲノム内への標的化挿入のためにマウス胚性幹細胞に導入することができる。正しい標的化を確認するために、ヒト対立遺伝子の獲得アッセイ及びマウス対立遺伝子喪失アッセイで使用されるプライマー及びプローブの位置も示されている。プライマー及びプローブの配列を表１２に記載する。

【図3-3】マウスＩＬ７ｒａ対立遺伝子のヒト化のための戦略の例示的実施形態である、図３Ｂで上述したマウスＩｌ７ｒａゲノム断片の、ヒトゲノム断片１（１２６ｂｐ）、Ｆｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｈｙｇカセット、及びヒトゲノム断片２（１７１０６ｂｐ）を含むヒト化断片による置換の結果として生じる、ＭＡＩＤ＃７２６６として指定されるヒト化Ｉｌ７ｒａ対立遺伝子を図示する（正確な縮尺ではない）。Ｆｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－ｈｙｇカセットが除去された後、ヒト化Ｉｌ７ｒａ対立遺伝子はＭＡＩＤ＃７２６７として指定される。

【図3-4】マウスＩｌ７ｒａ（配列番号４１）、ヒトＩＬ７ＲＡ（配列番号４３）（太字斜体）、及びヒト化（ハイブリッド）Ｉｌ７ｒａ（配列番号４５）（ヒト部分は太字斜体で表記）のタンパク質配列を示す。各タンパク質配列では、シグナルペプチド及び膜貫通ドメインに下線を付している。

【図3-5】マウスＩｌ７ｒａ（配列番号４２）、ヒトＩＬ７ＲＡ（配列番号４４）（太字斜体）、及びヒト化（ハイブリッド）Ｉｌ７ｒａ（配列番号４６）（ヒト部分は太字斜体で表記）のコード配列（ＣＤＳ）の例示的実施形態を示す。ヒト化に使用されるヒトＩＬ７ＲＡ配列の部分に下線を付している。ヒト起源を有するハイブリッドＩｌ７ｒａ配列の部分にも下線を付している。

【図3-6】同上。

【図3-7】は、マウスＩｌ７ｒａ（配列番号４１、上）及びヒトＩＬ７ＲＡ（配列番号４３、下）タンパク質配列の例示的実施形態のアラインメントを示す。タンパク質のシグナルペプチド及び膜貫通セグメント（枠内）が示されている。図３Ａ～３Ｅに記載されるヒト化（ハイブリッド）Ｉｌ７ｒａを形成する際のマウス配列とヒト配列との間の接合部は、Ｎ末端の垂直線（「５’接合部」）及び細胞外ドメインのＣ末端付近の線（「３’接合部」）によって示される。ヒト化に関与する細胞外ドメインのアミノ酸が強調表示される（５’接合部の直後のアミノ酸から始まり、３’接合部で終わる）。三角形は、コード配列内のエクソンの接合部を表す。

【図4-1】０日目及び１４日目に、生理食塩水及びミョウバン（ミョウバンのみ）又はオボアルブミン及びミョウバン（Ｏｖａ－ミョウバン）のいずれかでマウスを腹腔内で感作させ、続いて２１日目～２４日目にＯｖａで４回の連続的な鼻腔内チャレンジを行った。２５日目に、更なる分析のために肺組織及び血清を収集した。４Ａ．フローサイトメトリーによる肺細胞浸潤の評価。肺組織好酸球の細胞頻度を、全生細胞の頻度としてプロットする。４Ｂ．リアルタイムｑＰＣＲにより測定され、β２ｍ（β２－ミクログロブリン）対照ｍＲＮＡ発現と比較して発現されたＭｕｃ５ａｃｍＲＮＡ発現レベルの評価。血清Ｏｖａ特異的ＩｇＥ（４Ｃ）及びＯｖａ特異的ＩｇＧ１（４Ｄ）のＥＬＩＳＡ分析。各点は、１匹のマウスを表す。記号は、生理食塩水対照と比較して統計的有意性を表す（＊）。４Ｅは、実験スキームを図示する：０日目及び１４日目に、生理食塩水及びミョウバン（ミョウバンのみ）又はオボアルブミン及びミョウバン（Ｏｖａ－ミョウバン）のいずれかでマウスを腹腔内で感作させ、続いて２１日目～２４日目にＯｖａで４回の連続的な鼻腔内チャレンジを行った。２５日目に、４Ａ～４Ｄに示されるパラメータの更なる分析のために肺組織及び血清を収集した。

【図4-2】同上。

【図4-3】同上。

【図4-4】同上。

【図4-5】同上。

【発明を実施するための形態】

【0076】

本明細書において、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを含むように遺伝子改変された齧歯類（マウス及びラットなどであるが、これらに限定されない）が開示される。本明細書に開示される齧歯類は、例えば、限定されないが、Ｔｈ２駆動性（Ｔｈ２－ｄｒｉｖｅｎ）アレルギー性疾患のモデルとして、又は炎症性Ｔｈ２駆動性がんのモデルとして使用することができる。このような遺伝子改変齧歯類を作製するための組成物及び方法、並びにアレルギー又はがんの治療のための候補治療薬剤を試験するためにそのような遺伝子改変齧歯類を使用する方法が提供され、更に以下に記載される。

【0077】

Ｔｓｌｐヒト化齧歯類
胸腺間質リンパ球新生（ＴＳＬＰ）は、４ヘリックス束サイトカインファミリーのメンバーであり、インターロイキン－７（ＩＬ－７）の遠位パラログである。ＴＳＬＰは、マウス胸腺間質細胞株の培養上清において最初に発見され、Ｔ細胞及びＢ細胞の増殖因子として作用することが実証されている。例えば、Ｔｓｉｌｉｎｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ＆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２０１７；３：１７４－１８２を参照、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＴＳＬＰ発現細胞には、上皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、間質細胞、樹状細胞、マスト細胞、及び好塩基球が含まれる。上記、Ｔｓｉｌｉｎｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１７）を参照されたい。ヒトには２つのＴＳＬＰアイソフォームが存在する：定常状態で低い／検出不能レベルで発現され、複数の組織において炎症中に上方制御され、複数のＴｈ２関連疾患（例えば、限定されるものではないが、アトピー性皮膚炎、喘息、アレルギー反応、及び特定の種類のがん）におけるＴｈ２応答の悪化を特徴とする長いＴＳＬＰアイソフォーム（アイソフォーム１）及び、別個のプロモーターから構成的に発現され、腸及び胸腺において特定の免疫恒常性機能を媒介する、短いＴＳＬＰアイソフォーム（アイソフォーム２）。上記、Ｔｓｉｌｉｎｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１７）を参照されたい。特に示されない限り、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のエクソン番号付けは、長いアイソフォーム（ヒトＴＳＬＰタンパク質アイソフォーム１）をコードするエクソンに基づく。

【0078】

ヒトＴＳＬＰアイソフォーム１、マウスＴｓｌｐ、ラットＴｓｌｐ、及びヒト化Ｔｓｌｐの核酸配列及びタンパク質配列を含む例示的配列が、配列表に開示され、表１に要約されている。マウス及びラットＴｓｌｐ遺伝子は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のように４つのエクソンの代わりに、小さなコードエクソン１及び合計５つのエクソンを有する。ヒトＴＳＬＰアイソフォーム１、マウスＴｓｌｐ、及びヒト化（ハイブリッド）Ｔｓｌｐタンパク質配列のアラインメントを図１Ｆに提供する。

【表1】

【0079】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、生殖細胞系にヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含む。

【0080】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子のヌクレオチド配列及びヒトＴＳＬＰ 遺伝子のヌクレオチド配列をそのゲノム中に含むヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含む。本明細書において使用される場合、「遺伝子のヌクレオチド配列」は、遺伝子の全部又は一部のゲノム配列、ｍＲＮＡ配列又はｃＤＮＡ配列を含む。例えば、ヒトＴＳＬＰ 遺伝子のヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰ 遺伝子の全部又は一部のゲノム配列、ｍＲＮＡ配列、又はｃＤＮＡ配列であってもよく、齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子のヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子）の全部又は一部のゲノム配列、ｍＲＮＡ配列、又はｃＤＮＡ配列であってもよい。げっ歯類Ｔｓｌｐ 遺伝子のヌクレオチド配列とヒトＴＳＬＰ遺伝子のヌクレオチド配列は、げっ歯類ゲノム中のヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が、Ｔｓｌｐタンパク質の機能、例えば、Ｔｓｌｐ受容体（Ｔｓｌｐｒ）への結合を果たす、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質をコードするように、互いに作動可能に連結されている。

【0081】

本明細書において使用される場合、「ヒトＴＳＬＰ」遺伝子及びタンパク質は、ヒト起源のＴＳＬＰ遺伝子及びタンパク質を指す。

【0082】

一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰタンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰタンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰタンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰタンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0083】

本明細書で使用される場合、「齧歯類Ｔｓｌｐ」遺伝子及びタンパク質は、齧歯類（例えば、マウス又はラット）起源のＴｓｌｐ遺伝子及びタンパク質を指す。

【0084】

一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐタンパク質は、
配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐタンパク質は、
配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の
実施形態では、マウスＴｓｌｐタンパク質は、
配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐタンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0085】

一部の実施形態では、ラットＴｓｌｐタンパク質は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＴｓｌｐタンパク質は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＴｓｌｐタンパク質は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＴｓｌｐタンパク質は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0086】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類は、そのゲノム中にヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含み、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列（配列番号３に記載されるようなヒトＴＳＬＰタンパク質など）と実質的に同一である成熟タンパク質配列を含むヒト化Ｔｓｌｐタンパク質をコードする。

【0087】

「成熟タンパク質」は、Ｎ末端シグナルペプチドが切断された後のタンパク質の部分を指す。

【0088】

ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一である成熟タンパク質配列は、（ｉ）ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質と少なくとも９５％同一であるポリペプチド配列、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質と少なくとも９８％同一であるポリペプチド配列、又はヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質と少なくとも９９％同一であるポリペプチド配列であり得る。ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一である成熟タンパク質配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と同一のポリペプチド配列であってもよい。ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一である成熟タンパク質配列は、代替的に又は追加的に、（ｉｉ）ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列とは５アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド配列、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列とは４アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド配列、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列とは３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド配列、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列とは２アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド配列、又はヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列とは１アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド配列であり得る。ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一である成熟タンパク質配列は、代替的に又は追加的に、（ｉｉｉ）例えば、成熟タンパク質のＮ末端部分又はＣ末端部分にアミノ酸（５アミノ酸を超えない）の付加、欠失又は置換を有することによって、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列とは、ドメインのＮ末端部分又はＣ末端部分でのみ異なるポリペプチドであってもよく、「成熟タンパク質のＮ末端部分又はＣ末端部分」とは、成熟タンパク質のＮ末端又はＣ末端からの５～１０アミノ酸内を意味する。ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列と実質的に同一である成熟タンパク質配列は、代替的に又は追加的に、（ｉｖ）上記（ｉ）～（ｉｉｉ）に記載される特徴のうちの１つ以上を有するポリペプチドであり得、例えば、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質と少なくとも９５％同一でありかつヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列とは、ドメインのＮ末端部分又はＣ末端部分でのみ５アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、又はヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質と少なくとも９８％同一でありかつヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列とは、ドメインのＮ末端部分又はＣ末端部分でのみ３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であり得る。

【0089】

一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰタンパク質は、配列番号３に記載されるヒトＴＳＬＰタンパク質アイソフォーム１であり、アミノ酸２９～１５９は成熟タンパク質配列を構成する。したがって、一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類は、配列番号３のアミノ酸２９～１５９に記載されるアミノ酸配列と実質的に同一である成熟タンパク質配列を含むヒト化Ｔｓｌｐタンパク質をコードする、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子をそのゲノム中に含む。。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、配列番号３のアミノ酸２９～１５９を含む成熟タンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、配列番号３のアミノ酸３０～１５９を含む成熟タンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、配列番号３のアミノ酸３１～１５９を含む成熟タンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、配列番号３のアミノ酸３２～１５９を含む成熟タンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、配列番号３のアミノ酸２９～１５８を含む成熟タンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、配列番号３のアミノ酸２９～１５７を含む成熟タンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、配列番号３のアミノ酸２９～１５６を含む成熟タンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、配列番号３のアミノ酸２９～１５９に示される成熟タンパク質配列を含む。

【0090】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、ヒトＴＳＬＰタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドを含むヒト化Ｔｓｌｐタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドは、ヒトＴＳＬＰタンパク質のシグナルペプチドと配列において少なくとも９５％同一であるシグナルペプチドである。ヒトＴＳＬＰタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドは、ヒトＴＳＬＰタンパク質のシグナルペプチドと同一のシグナルペプチドであってもよい。追加的又は代替的に、ヒトＴＳＬＰタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドは、ヒトＴＳＬＰタンパク質のシグナルペプチドとは、３アミノ酸を超えずに異なる、２アミノ酸を超えずに異なる、又は１アミノ酸を超えずに異なる、シグナルペプチドであってもよい。特定の実施形態では、ヒトＴＳＬＰタンパク質のシグナルペプチドは、配列番号３のアミノ酸１～２８に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0091】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質などの、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドを含むヒト化Ｔｓｌｐタンパク質をコードする。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと配列において少なくとも９５％同一であるシグナルペプチドであり、一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと配列において同一であるシグナルペプチドである。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドとは３アミノ酸を超えずに異なるシグナルペプチドであり、一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドとは２アミノ酸を超えずに異なるシグナルペプチドであり、一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドとは１アミノ酸を超えずに異なるシグナルペプチドである。特定の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、マウスＴｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチド、例えば、配列番号１のアミノ酸１～１９に記載されるシグナルペプチドを含む。特定の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、ラットＴｓｌｐタンパク質、例えば、配列番号７に記載されるラットＴｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドを含む。

【0092】

上述のように、遺伝子改変齧歯類のゲノム中のヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のヌクレオチド配列（「ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列」）及び齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子のヌクレオチド配列（「内因性齧歯類Ｔｓｌｐヌクレオチド配列」内因性齧歯類Ｔｓｌｐヌクレオチド配列）を含む。

【0093】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質（例えば、ヒトＴＳＬＰタンパク質アイソフォーム１）の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードする。成熟Ｔｓｌｐタンパク質配列の「実質的な部分」は、成熟タンパク質配列のほぼ全長であるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、成熟タンパク質配列の実質的な部分は、全長成熟タンパク質配列の少なくとも９５％であるポリペプチドを指し、一部の実施形態では、成熟タンパク質配列の実質的な部分は、全長成熟タンパク質配列の少なくとも９８％であるポリペプチドを指し、一部の実施形態では、成熟タンパク質配列の実質的な部分は、全長成熟タンパク質配列の少なくとも９９％であるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、成熟タンパク質配列の実質的な部分は、成熟タンパク質配列のＮ末端又はＣ末端での５アミノ酸を超えない欠如によって成熟タンパク質配列とは異なるポリペプチドを指し、一部の実施形態では、成熟タンパク質配列の実質的な部分は、成熟タンパク質配列のＮ末端又はＣ末端での４アミノ酸を超えない欠如によって成熟タンパク質配列とは異なるポリペプチドを指し、一部の実施形態では、成熟タンパク質配列の実質的な部分は、成熟タンパク質配列のＮ末端又はＣ末端での３アミノ酸を超えない欠如によって成熟タンパク質配列とは異なるポリペプチドを指し、成熟タンパク質配列の実質的な部分は、成熟タンパク質配列のＮ末端又はＣ末端での２アミノ酸を超えない欠如によって成熟タンパク質配列とは異なるポリペプチドを指し、成熟タンパク質配列の実質的な部分とは、成熟タンパク質配列のＮ末端又はＣ末端での１アミノ酸を超えない欠如によって成熟タンパク質配列とは異なるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列（例えば、配列番号３に記載されるヒトＴＳＬＰタンパク質アイソフォーム１などのヒトＴＳＬＰタンパク質アイソフォーム１）をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰ核酸配列は、配列番号３のアミノ酸２９～１５９をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰ核酸配列は、配列番号３のアミノ酸３０～１５９をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰ核酸配列は、配列番号３のアミノ酸３１～１５９をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰ核酸配列は、配列番号３のアミノ酸３２～１５９をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰ核酸配列は、配列番号３のアミノ酸２９～１５８をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰ核酸配列は、配列番号３のアミノ酸２９～１５７をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰ核酸配列は、配列番号３のアミノ酸２９～１５６をコードする。

【0094】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中のヒトＴＳＬＰ核酸配列は、ｃＤＮＡ配列である。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードするエクソン配列を含むゲノム断片である。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質（例えば、配列番号３に記載されるヒトＴＳＬＰタンパク質アイソフォーム１などのヒトＴＳＬＰタンパク質アイソフォーム１）の成熟タンパク質配列をコードするエクソン配列を含むゲノム断片である。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のゲノム断片であり、その断片は、成熟タンパク質アミノ酸をコードしているエクソン１、エクソン２、エクソン３の部分、及びエクソン４のコード部分（すなわち、エクソン４における終止コドンまで）を含む。

【0095】

一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のゲノム断片であり、その断片は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子の３’ＵＴＲ（ヒトＴＳＬＰエクソン４の３’部分）も含む。

【0096】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子中の齧歯類Ｔｓｌｐヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質）のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと配列において少なくとも９５％同一であるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドとは３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一なポリペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドとは２アミノ酸を超えずに異なるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一なポリペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドとは１アミノ酸を超えずに異なるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子における齧歯類Ｔｓｌｐヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質、例えば、マウス又はラットＴｓｌｐタンパク質）のシグナルペプチドをコードする。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドをコードする齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子のエクソン配列を含む。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐヌクレオチド配列はマウスＴｓｌｐヌクレオチド配列であり、一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐヌクレオチド配列は、マウスＴｓｌｐ遺伝子（例えば、内因性マウスＴｓｌｐ遺伝子）のエクソン１と、エクソン２のシグナルペプチドアミノ酸コード部分とを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子における齧歯類Ｔｓｌｐヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子（例えば、マウス又はラットＴｓｌｐ遺伝子、例えば内因性マウス又はラットＴｓｌｐ遺伝子）の５’ＵＴＲを含む。

【0097】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、例えば、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子の発現が齧歯類Ｔｓｌｐ ５’制御配列の制御下におかれるように、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位での内因性齧歯類５’転写制御配列などの、齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子のプロモーター及び／又はエンハンサーのような５’転写制御配列など、齧歯類Ｔｓｌｐ制御配列に作動可能に連結されている。

【0098】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位にある。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、例えば、ランダムな組み込みの結果として、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位以外の座位にある。ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位以外の座位にある一部の実施形態では、齧歯類は、例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子の不活性化（例えば、全部又は一部の欠失）の結果として、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質を発現することができない。

【0099】

ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位にある一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位で内因性齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子がヒトＴＳＬＰ遺伝子のヌクレオチド配列により置換された結果、生じ得る。

【0100】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位で齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子のゲノム断片を置換するヒトＴＳＬＰ遺伝子のヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡ配列である。一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位で齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子のゲノム断片を置換するヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的部分をコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードする、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のエクソンの全部又は一部を含む、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、ヒトゲノム断片は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のエクソン１、エクソン２、エクソン３の成熟タンパク質アミノ酸のコード部分、及びエクソン４のコード部分を含む。一部の実施形態では、ヒトゲノム断片は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子のエクソン４の３’ＵＴＲ部分を更に含むことができる。

【0101】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位に組み込まれたヒトヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドをコードする齧歯類Ｔｓｌｐヌクレオチド配列に作動可能に連結される。一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位に組み込まれたヒトヌクレオチド配列は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドを実質的コードする内因性齧歯類Ｔｓｌｐゲノム配列に作動可能に連結される。一部の実施形態では、ヒトヌクレオチド配列は、内因性マウスＴｓｌｐ座位に組み込まれ、マウスＴｓｌｐタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドをコードするマウスＴｓｌｐヌクレオチド配列に作動可能に連結され、一部のそのような実施形態では、マウスＴｓｌｐヌクレオチド配列は、マウスＴｓｌｐ遺伝子（例えば、内因性マウスＴｓｌｐ遺伝子）のエクソン１と、エクソン２のシグナルペプチドアミノ酸コード部分とを含む。

【0102】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位での内因性齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質の成熟タンパク質配列をコードするエクソン配列を含むゲノム断片（例えば、成熟マウスＴｓｌｐタンパク質の第１のアミノ酸をコードするエクソン２におけるコドンから始まり、終止コドンまでのマウスゲノム断片）は、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列をコードするエクソン配列を含むヒトＴＳＬＰ遺伝子のヒトゲノム断片（例えば、成熟ヒトＴＳＬＰタンパク質の第１のアミノ酸をコードするエクソン１におけるコドンから始まり、エクソン４における終止コドンまでのゲノム断片）によって置換されている。結果として、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位で形成される。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、内因性マウスＴｓｌｐ座位で形成され、マウスＴｓｌｐエクソン１、マウスＴｓｌｐエクソン２のシグナルペプチドアミノ酸コード部分、成熟ヒトＴＳＬＰタンパク質の第１のアミノ酸をコードするヒトＴＳＬＰエクソン１のコドンからヒトＴＳＬＰエクソン４における終止コドンまで、及びマウスＴｓｌｐエクソン５のマウス３’ＵＴＲを含む。このようなヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、マウスＴｓｌｐシグナルペプチド及び成熟ヒトＴＳＬＰポリペプチドを含むヒト化Ｔｓｌｐタンパク質をコードする。

【0103】

一部の実施形態では、本明細書に提供される齧歯類は、そのゲノムにおいて、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子に対しヘテロ接合性である。一部の実施形態では、本明細書に提供される齧歯類は、そのゲノムにおいて、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子に対しホモ接合性である。

【0104】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子は、齧歯類において、例えば齧歯類の血清において、コードされたヒト化Ｔｓｌｐタンパク質の発現をもたらす。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐタンパク質は、対応する齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質が対照齧歯類（例えば、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を有しない齧歯類）で発現される細胞及び組織で、例えば、皮膚、腸、肺及び眼組織の上皮細胞及びケラチノサイト、並びに樹状細胞、マスト細胞及び好塩基球で、発現される。例えば、上記、Ｔｓｉｌｉｎｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１７）を参照されたい。

【0105】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ遺伝子の不活性化（例えば、全部又は一部の欠失）又は置換（全部又は一部）の結果として、齧歯類Ｔｓｌｐタンパク質を発現することができない。

【0106】

ＴＳＬＰＲヒト化
ＴＳＬＰは、ＴＳＬＰに特異的な鎖（“ＴＳＬＰＲ”又は“Ｔｓｌｐｒ”と称される）及びＩＬ７受容体α鎖から構成されるヘテロ二量体を介して作用する。ＴＳＬＰＲは、シグナルペプチド、細胞外ドメイン（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ）（「ＥＣＤ」又は「細胞外ドメイン（ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ）」）、膜貫通ドメイン、及び細胞内（細胞質）ドメインを含有する。

【0107】

ヒトＴＳＬＰＲアイソフォーム１、マウスＴｓｌｐｒアイソフォーム１、ラットＴｓｌｐｒアイソフォーム１、及びヒト化（マウス－ヒトハイブリッド）Ｔｓｌｐｒの核酸配列及びタンパク質配列を含む例示的な配列が、配列表に開示され、表２に要約されている。ヒトＴＳＬＰＲアイソフォーム１、マウスＴｓｌｐｒアイソフォーム１、及びヒト化（マウス－ヒトハイブリッド）Ｔｓｌｐｒタンパク質配列のアラインメントを図２Ｆに提供する。特に示されない限り、ヒト及びマウス遺伝子のエクソンの番号付けは、ヒト及びマウスのタンパク質アイソフォーム１をコードするエクソンに基づく。

【表2-1】

【表2-2】

【0108】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、生殖細胞系にヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含む。

【0109】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子）のヌクレオチド配列及びヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のヌクレオチド配列をそのゲノム中に含む、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含む。本明細書において使用される場合、「遺伝子のヌクレオチド配列」は、遺伝子の全部又は一部のゲノム配列、ｍＲＮＡ配列又はｃＤＮＡ配列を含む。非限定的な例として、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のヌクレオチド配列には、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子の全部又は一部のゲノム配列、ｍＲＮＡ配列又はｃＤＮＡ配列が含まれる。齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のヌクレオチド配列とヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のヌクレオチド配列は、齧歯類ゲノム中のヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が、Ｔｓｌｐｒタンパク質構造（細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインを含む）を有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードし、Ｔｓｌｐｒ機能（例えば、Ｔｓｌｐタンパク質を結合し、ＩＬ－７受容体とヘテロ二量体を形成する）を実行するように、互いに作動可能に連結されている。

【0110】

本明細書において使用される場合、「ヒトＴＳＬＰＲ」遺伝子及びタンパク質は、ヒト起源のＴＳＬＰＲ遺伝子及びタンパク質を指す。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0111】

本明細書で使用される場合、「齧歯類Ｔｓｌｐｒ」遺伝子及びタンパク質は、齧歯類（例えば、マウス又はラット）起源のＴｓｌｐｒ遺伝子及びタンパク質を指す。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒタンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒタンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒタンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒタンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＴｓｌｐｒタンパク質は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＴｓｌｐｒタンパク質は、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＴｓｌｐｒタンパク質は、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＴｓｌｐｒタンパク質は、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0112】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類は、そのゲノム中にヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含有し、このヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一の細胞外ドメインを含有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一である細胞外ドメインは、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと同じ機能性（例えば、リガンド結合特性）を呈示する。「ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、（ｉ）ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９５％同一であるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９８％同一であるポリペプチド、又はヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９９％同一であるポリペプチドであり得る。「ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと配列において１００％同一であるポリペプチドであり得る。代替的に又は追加的に、「ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、（ｉｉ）ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは１０アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは７アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは５アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは４アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは２を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは１アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であり得る。代替的に又は追加的に、「ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、（ｉｉｉ）例えば、細胞外ドメインのＮ末端及び／又はＣ末端部分（すなわち、細胞外ドメインのＮ又はＣ末端から５～１０アミノ酸以内）にアミノ酸の付加、欠失、及び／又は置換を有することによって、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは、細胞外ドメインのＮ末端又はＣ末端部分でのみ異なるポリペプチドであってもよい。代替的に又は追加的に、「ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、（ｉｖ）上記（ｉ）～（ｉｉｉ）に詳述される特徴のうちの１つ以上を有するポリペプチドであり得、例えば、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９５％同一でありかつヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは、細胞外ドメインのＮ末端部分又はＣ末端部分でのみ１０アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９５％同一でありかつヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは、細胞外ドメインのＮ末端部分又はＣ末端部分でのみ５アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、又はヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９８％同一でありかつヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは、細胞外ドメインのＮ末端部分又はＣ末端部分でのみ３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であり得る。特定の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質は、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含み、その細胞外ドメインは、配列番号２３のアミノ酸２３～２３１で構成されている。。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、その細胞外ドメインが配列番号２３に記載されるヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一である、すなわち、配列番号２３のアミノ酸２３～２３１と実質的に同一であるヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。例えば、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、配列番号２３のアミノ酸２３～２３１、２４～２３１、２５～２３１、２６～２３１、２７～２３１、２８～２３１、２３～２３０、２３～２２９、２３～２２８、２３～２２７、又は２３～２２６を含む細胞外ドメインを有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、配列番号２３のアミノ酸２３～２３１を含む細胞外ドメインを有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、配列番号２３のアミノ酸２５～２３１を含む細胞外ドメインを有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、配列番号２３のアミノ酸２７～２３１を含む細胞外ドメインを有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、配列番号２３のアミノ酸２３～２２８を含む細胞外ドメインを有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、配列番号２３のアミノ酸２３～２２６を含む細胞外ドメインを有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。

【0113】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、齧歯類Ｔｓｌｐｒ（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ）の細胞外ドメインのＮ末端からのアミノ酸を含む細胞外ドメインと、それに続くヒトＴＳＬＰＲ又はその実質的な部分の細胞外ドメインとを有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。ヒトＴＳＬＰＲ（又は齧歯類Ｔｓｌｐｒ）タンパク質の「細胞外ドメインの実質的な部分」は、タンパク質のほぼ完全な細胞外ドメインであるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の全長細胞外ドメインの少なくとも９５％であるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の全長細胞外ドメインの少なくとも９８％であるポリペプチドを指す。配列一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、細胞外ドメインのＮ末端又はＣ末端での１０アミノ酸を超えない欠如によって、全長の細胞外ドメインとは異なるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、細胞外ドメインのＮ末端又はＣ末端での５アミノ酸を超えない欠如によって全長の細胞外ドメインとは異なるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、細胞外ドメインのＮ末端又はＣ末端での４アミノ酸を超えない欠如によって全長の細胞外ドメインとは異なるポリペプチドを指す。例えば、配列番号２３に記載されるヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインは、アミノ酸２３～２３１によって定義され、細胞外ドメインの実質的な部分の例には、配列番号２３のアミノ酸２５～２３１、２６～２３１、２７～２３１、２３～２２８、２３～２２７、又は２３～２２６が含まれ得る。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２５～２３１を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２７～２３１を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２３～２２８を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２３～２２６を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質の細胞外ドメインは、齧歯類Ｔｓｌｐｒ（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ）の細胞外ドメインのＮ末端からの６～８アミノ酸と、それに続くヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質の細胞外ドメインは、齧歯類Ｔｓｌｐｒ（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ）の細胞外ドメインのＮ末端からの７アミノ酸と、それに続く配列番号２３のアミノ酸２７～２３１を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、配列番号２５のアミノ酸２０～２３１に記載される細胞外ドメインを含有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードし、－この細胞外ドメインは、マウスＴｓｌｐｒ細胞外ドメインのＮ末端からの７アミノ酸とそれに続く配列番号２３のアミノ酸２７～２３１（ヒトＴｓｌｐｒ）を含み、細胞外ドメインのＮ末端における配列番号２３のヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは異なるが（配列番号２３のヒトＴＳＬＰＲにおける「ＱＧＧＡ」（配列番号６８）とは対照的に、配列番号２５のヒト化ＴＳＬＰＲにおける「ＡＡＡＶＴＳＲ」（配列番号６７））、残りのａｍｅ２０５アミノ酸はヒトＴＳＬＰ細胞外ドメインと同一である。

【0114】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質、例えば内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の、膜貫通型細胞質配列と実質的に同一である膜貫通型細胞質配列（すなわち、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインの両方を含む配列）を含有するヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一である膜貫通型細胞質配列は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質などの齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と同じ機能性（例えば、シグナル伝達及び／又は細胞内分子との相互作用）を呈示する。「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一である」膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、（ｉ）齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と配列において少なくとも９５％同一であるポリペプチド、又は齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と配列において少なくとも９８％同一であるポリペプチドであり得る。「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一である」膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と同一であるポリペプチドであり得る。代替的に又は追加的に、「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一」である膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、（ｉｉ）齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは５アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは４アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは２アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、又は齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは１アミノ酸を超えずに異なるポリペプチドであり得る。代替的に又は追加的に、「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一」である膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、（ｉｉｉ）一部の実施形態では、例えば、膜貫通型細胞質配列のＮ末端又はＣ末端部分にアミノ酸の付加、欠失又は置換を有することによって、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは、Ｎ末端又はＣ末端でのみ異なるポリペプチドであり得る。代替的に又は追加的に、「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一」である膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、（ｉｖ）上記（ｉ）～（ｉｉｉ）に詳述される特徴の１つ以上を有するポリペプチドであり得、例えば、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と配列において少なくとも９５％同一でありかつ齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは、Ｎ末端又はＣ末端でのみ５アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、又は齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と配列において少なくとも９５％同一でありかつ齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは、Ｎ末端又はＣ末端でのみ３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であり得る。「膜貫通型細胞質配列のＮ又はＣ末端部分」とは、膜貫通ドメインのＮ末端から５～１０アミノ酸内、又は細胞質ドメインのＣ末端から５～１０アミノ酸内を意味する。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質は、マウスＴｓｌｐｒタンパク質（内因性マウスＴｓｌｐｒタンパク質など）の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一である膜貫通型細胞質配列を含有する。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質は、ラットＴｓｌｐｒタンパク質（内因性ラットＴｓｌｐｒタンパク質など）の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一である膜貫通型細胞質配列を含有する。

【0115】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質）のシグナルペプチドと実質的に同一であるシグナルペプチドを含むヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質をコードする。「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一である」シグナルペプチドは、（ｉ）齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと配列において少なくとも９５％同一であるポリペプチド、又は齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと配列において同一であるポリペプチドであり得る。代替的に又は追加的に、「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一」であるシグナルペプチドは、（ｉｉ）内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドとは３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドとは２アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、又は内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドとは１アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であり得る。代替的に又は追加的に、「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一」であるシグナルペプチドは、例えば、シグナルペプチドのＮ末端又はＣ末端部分にアミノ酸の付加、欠失又は置換を有することによって、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドとは、Ｎ末端又はＣ末端でのみ異なるポリペプチドであってもよい。代替的に又は追加的に、「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一」であるシグナルペプチドは、（ｉｖ）上記（ｉ）～（ｉｉｉ）に詳述される特徴のうちの１つ以上を有するポリペプチドであり得、例えば、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと少なくとも９５％同一であり、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドとはＮ末端又はＣ末端で３アミノ酸を超えずに異なるのみのポリペプチドであり得る。「シグナルペプチドのＮ又はＣ末端部分」とは、シグナルペプチドのＮ又はＣ末端から５アミノ酸以内を意味する。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質は、マウスＴｓｌｐｒタンパク質（内因性マウスＴｓｌｐｒタンパク質など）のシグナルペプチドと実質的に同一なシグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質は、ラットＴｓｌｐｒタンパク質（内因性ラットＴｓｌｐｒタンパク質など）のシグナルペプチドと実質的に同一なシグナルペプチドを含む。

【0116】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類のゲノム中のヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子には、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のヌクレオチド配列（「ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列」）、及び齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のヌクレオチド配列（「齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列」、例えば内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列）を含み、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。上述のように、ヒトＴＳＬＰＲの細胞外ドメインの実質的な部分の例には、配列番号２３のアミノ酸２５～２３１、２６～２３１、２７～２３１、２３～２２８、２３～２２７、又は２３～２２６が含まれ得る。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２７～２３１を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２５～２３１を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２３～２２８を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２３～２２６を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡ配列である。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子中のヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質（例えば、配列番号２３に定義されるヒトＴＳＬＰＲタンパク質アイソフォーム１）の細胞外ドメインをコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、エクソン２からヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの最後のアミノ酸をコードするエクソン６のコドンまでを含むヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲゲノム断片は、ヒトＴＳＬＰＲアイソフォーム１の細胞外ドメインのＮ末端に４アミノ酸が存在しない、ヒトＴＳＬＰＲアイソフォーム１のアミノ酸２７～２３１をコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲゲノム断片は、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの最後のアミノ酸をコードするエクソン６のコドンを通して、エクソン２に作動可能に連結されたイントロン１の３’部分を更に含む。

【0117】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類のゲノム中のヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列及びヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列を含み、齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質）の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一のポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子中に存在する齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子中に存在する齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列は、マウスＴｓｌｐｒヌクレオチド配列であり、一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒヌクレオチド配列は、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子（例えば、内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子）の、エクソン６（マウスＴｓｌｐｒ膜貫通ドメインの第１のアミノ酸をコードするコドンから始まる）からのエクソン８までの一部を含む。

【0118】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類のゲノム中のヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列の上流（５’）に齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列を含み、齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質）のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一なポリペプチドをコードする齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列は、マウスＴｓｌｐｒヌクレオチド配列（例えば、内因性マウスＴｓｌｐｒヌクレオチド配列）、又はラットＴｓｌｐｒヌクレオチド配列（例えば、内因性ラットＴｓｌｐｒヌクレオチド配列）である。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の、シグナルペプチド配列、及び細胞外ドメインのＮ末端からのアミノ酸（例えば、６～８アミノ酸）を含むポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の、シグナルペプチド配列及び細胞外ドメインのＮ末端からの７アミノ酸を含むポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、齧歯類Ｔｓｌｐｒヌクレオチド配列は、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子（例えば、内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子）のエクソン１を含むマウスＴｓｌｐｒヌクレオチド配列であり、一部のこのような実施形態では、マウスＴｓｌｐｒヌクレオチド配列は、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子のイントロン１の５’部分を更に含む。

【0119】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子の発現が齧歯類Ｔｓｌｐｒ ５’制御配列の制御下におかれるように、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ制御配列などの齧歯類Ｔｓｌｐｒ ５’制御配列、例えばプロモーター及び／又はエンハンサーなどの５’転写制御配列に作動可能に連結されている。

【0120】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位にある。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、例えば、ランダムな組み込みの結果として、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位以外の座位にある。ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位以外の座位にある一部の実施形態では、齧歯類は、例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子の不活性化（例えば、全部又は一部の欠失）の結果として、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質を発現することができない。

【0121】

ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位にある一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位における内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のヌクレオチド配列の、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のヌクレオチド配列による置換の結果生じ得る。

【0122】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位での置換される内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分コードする内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、齧歯類はマウスであり、置換されるマウスＴｓｌｐｒゲノム断片は、内因性マウスＴｓｌｐｒタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。例えば、配列番号２１のマウスＴｓｌｐｒの細胞外ドメインは、アミノ酸２０～２４３によって定義され、細胞外ドメインの実質的な部分の例には、配列番号２１のアミノ酸２１～２４３、２２～２４３、２３～２４３、２４～２４３、２５～２４３、２６～２４３、２７～２４３、２０～２４１、２０～２４０、２０～２３９、及び２０～２３８が含まれ得る。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２１のアミノ酸２７～２４３を含む。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２１のアミノ酸２５～２４３を含む。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２１のアミノ酸２０～２４０を含む。一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２１のアミノ酸２０～２３８を含む。一部の実施形態では、置換されるマウスＴｓｌｐｒゲノム断片は、エクソン２から細胞外ドメインの最後のアミノ酸をコードするエクソン６のコドンまでを含む。

【0123】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位で齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のゲノム断片を置換するヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡ配列である。一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位で齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のゲノム断片を置換するヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位で齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のゲノム断片を置換するヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のゲノム断片は、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のエクソンの全部又は一部を含む。上述のように、ヒトＴＳＬＰＲの細胞外ドメインの実質的な部分の例には、配列番号２３のアミノ酸２３～２３１、２４～２３１、２５～２３１、２６～２３１、２７～２３１、２８～２３１、２３～２３０、２３～２２９、２３～２２８、２３～２２７、又は２３～２２６が含まれ得る。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲの細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２５～２３１を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲの細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２７～２３１を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲの細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２３～２２８を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲの細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号２３のアミノ酸２３～２２６を含む。一部の実施形態では、ヒトゲノム断片は、ヒトＴＳＬＰＲ細胞外ドメインのヒトＴＳＬＰＲエクソン２から最後のアミノ酸をコードするエクソン６のコドンを含む。

【0124】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位内に挿入されるヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば、内因性齧歯類、マウス又はラットＴｓｌｐｒタンパク質など）の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一のポリペプチドをコードする齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のゲノム配列に作動可能に連結されている。齧歯類がマウスである実施形態では、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子のゲノム配列は、一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子（例えば、内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子）の膜貫通ドメインの第１のアミノ酸をコードするコドンからエクソン８までエクソン６を含む。

【0125】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位内に挿入されるヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質（例えば、内因性齧歯類、マウス又はラットＴｓｌｐｒタンパク質など）のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドをコードする齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子のゲノム配列に作動可能に連結されている。齧歯類がマウスである実施形態では、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子のゲノム配列は、一部の実施形態では、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子（例えば、内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子）のエクソン１、及び任意選択的にイントロン１の、全部又は一部を含む。

【0126】

一部の実施形態では、齧歯類はマウスであり、内因性マウスＴｓｌｐｒ座位において、マウスＴｓｌｐｒ細胞外ドメインのエクソン２を、最後のアミノ酸をコードするエクソン６におけるコドンまで含む、内因性マウスＴｓｌｐｒ遺伝子のゲノム断片は、ヒトＴＳＬＰＲ細胞外ドメインのエクソン２を、最後のアミノ酸をコードするエクソン６におけるコドンまで含む、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のゲノム断片で置換されている。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位で形成され、マウスＴｓｌｐｒ遺伝子のエクソン１、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のエクソン２を最後のアミノ酸をコードするエクソン６のコドンまで、及びマウスＴｓｌｐｒ遺伝子の、マウスＴｓｌｐｒ膜貫通ドメインの第１のアミノ酸をコードするコドンから開始するエクソン６をエクソン８まで含む。

【0127】

一部の実施形態では、本明細書に提供される齧歯類は、そのゲノムにおいて、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子に対しヘテロ接合性である。一部の実施形態では、本明細書に提供される齧歯類は、そのゲノムにおいて、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子に対しホモ接合性である。

【0128】

一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子は、齧歯類において、コードされるヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質の発現を生じさせる。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｓｌｐｒタンパク質は、細胞及び組織で発現され、対照齧歯類（例えば、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を有しない齧歯類）における対応する齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質が、典型的には、例えば、樹状細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、及びグループ２の自然リンパ球系細胞、並びに上皮、内皮及び平滑筋細胞などの非免疫細胞型で発現される。

【0129】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ遺伝子の不活性化（例えば、全部又は一部の欠失）又は置換（全部又は一部）の結果として、齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質を発現することができない。

【0130】

ＩＬ７ＲＡヒト化
ＴＳＬＰは、ＴＳＬＰに特異的な鎖（「ＴＳＬＰＲ」又は「Ｔｓｌｐｒ」と称される）、及びＩＬ７受容体α鎖（ヒトについては「ＩＬ７ＲＡ」、非ヒト又はヒト化分子については「Ｉｌ７ｒａ」）から構成されるヘテロ二量体を介して作用する。ＩＬ７ＲＡは、シグナルペプチド、細胞外ドメイン（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ）（「ＥＣＤ」又は「細胞外ドメイン（ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ）」）、膜貫通ドメイン、及び細胞内（細胞質）ドメインを含有する。

【0131】

ヒトＩＬ７ＲＡ、マウスＩｌ７ｒａ、ラットＩｌ７ｒａ、及びヒト化（マウス－ヒトハイブリッド）Ｉｌ７ｒａの核酸配列及びタンパク質配列を含む例示的な配列が、配列表に開示され、表３に要約されている。ヒトＩＬ７ＲＡ及びマウスＩｌ７ｒａタンパク質配列のアラインメントを図３Ｆに提示する。

【表3-1】

【表3-2】

【0132】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、生殖細胞系にヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含む。

【0133】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子）のヌクレオチド配列及びヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列を含む、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子をそのゲノム中に含む。本明細書において使用される場合、「遺伝子のヌクレオチド配列」は、遺伝子の全部又は一部のゲノム配列、ｍＲＮＡ配列又はｃＤＮＡ配列を含む。非限定的な例として、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列には、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子の全部又は一部のゲノム配列、ｍＲＮＡ配列又はｃＤＮＡ配列が含まれる。齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のヌクレオチド配列とヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列は、齧歯類ゲノム中のヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が、Ｉｌ７ｒａタンパク質構造（細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインを含む）を有するヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質をコードし、Ｉｌ７ｒａ機能（例えば、Ｉｌ７タンパク質を結合し、Ｔｓｌｐを結合するＴｓｌｐｒとヘテロ二量体を形成する）を実行するように、互いに作動可能に連結されている。

【0134】

本明細書で使用される場合、「ヒトＩＬ７ＲＡ」遺伝子及びタンパク質は、ヒト起源のＩＬ７ＲＡ遺伝子及びタンパク質を指す。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質は、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質は、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質は、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0135】

本明細書において使用される場合、「齧歯類Ｉｌ７ｒａ」遺伝子及びタンパク質は、齧歯類（例えば、マウス又はラット）起源のＩｌ７ｒａｒ遺伝子及びタンパク質を指す。一部の実施形態では、マウスＩＬ７ｒａタンパク質は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスＩＬ７ｒａタンパク質は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスＩＬ７ｒａｒタンパク質は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウスＩＬ７ｒａｒタンパク質は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＩＬ７ｒａタンパク質は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＩＬ７ｒａタンパク質は、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＩＬ７ｒａタンパク質は、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ラットＩＬ７ｒａタンパク質は、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0136】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類は、そのゲノム中にヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含有し、このヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一の細胞外ドメインを含有するヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一である細胞外ドメインは、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと同じ機能性（例えば、リガンド結合特性）を呈示する。「ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９５％同一であるポリペプチド、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９８％同一であるポリペプチド、又はヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９９％同一であるポリペプチドであり得る。「ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと配列において１００％同一であるポリペプチドであり得る。代替的に又は追加的に、「ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、（ｉｉ）ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインとは１０アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインとは７アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインとは５アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインとは４アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは３アミノを超えずに異なるポリペプチド、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは２アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、又はヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインとは１アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であり得る。代替的に又は追加的に、「ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、（ｉｉｉ）例えば、細胞外ドメインのＮ末端及び／又はＣ末端部分（すなわち、細胞外ドメインのＮ又はＣ末端から５～１０アミノ酸以内）でアミノ酸の付加、欠失、及び／又は置換を有することによって、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインとは、細胞外ドメインのＮ末端又はＣ末端部分でのみ異なるポリペプチドであってもよい。代替的に又は追加的に、「ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一」である細胞外ドメイン又はポリペプチドは、上記（ｉ）～（ｉｉｉ）に詳述される特徴のうちの１つ以上を有するポリペプチドであり得、例えば、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９５％同一でありかつヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインとは、細胞外ドメインのＮ末端部分又はＣ末端部分でのみ５アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、又はヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと配列において少なくとも９８％同一でありかつヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインとは、細胞外ドメインのＮ末端部分又はＣ末端部分でのみ３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であり得る。特定の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質は、配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含み、その細胞外ドメインは、配列番号４３のアミノ酸２１～２３８により定義される。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ 遺伝子は、その細胞外ドメインが配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと実質的に同一である、すなわち、配列番号４３のアミノ酸２１～２３８と実質的に同一であるヒト化Ｉｌ７ｒａ タンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、配列番号４３のアミノ酸２１～２３８を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、配列番号４３のアミノ酸２１～２３７を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、配列番号４３のアミノ酸２１～２３６を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、配列番号４３のアミノ酸２２～２３８を含む細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、配列番号４３のアミノ酸２４～２３８を含む細胞外ドメインを含む。

【0137】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、ヒトＩＬ７ＲＡの細胞外ドメイン又はその実質的な部分と、それに続く齧歯類Ｉｌ７ｒａ（例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ）の細胞外ドメインのＣ末端由来のアミノ酸を含む細胞外ドメインを有するヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質をコードする。ヒトＩＬ７ＲＡ（又は齧歯類ＩＬ７ｒａ）タンパク質の「細胞外ドメインの実質的な部分」は、ヒトＩＬ７ＲＡ（又は齧歯類ＩＬ７ｒａ）タンパク質のほぼ完全な細胞外ドメインであるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な割合は、少なくとも９５％の全長細胞外ドメイン配列を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な割合は、少なくとも９８％の全長細胞外ドメイン配列を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な割合は、細胞外ドメインのＮ末端又はＣ末端での１０アミノ酸を超えない欠如によって細胞外ドメインとは異なる。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な割合は、細胞外ドメインのＮ末端又はＣ末端での７アミノ酸を超えない欠如によって細胞外ドメインとは異なる。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な割合は、細胞外ドメインのＮ末端又はＣ末端での５アミノ酸を超えない欠如によって細胞外ドメインとは異なる。一部の実施形態では、細胞外ドメインの実質的な割合は、細胞外ドメインのＮ末端又はＣ末端での３アミノ酸を超えない欠如によって細胞外ドメインとは異なる。例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインは、アミノ酸２１～２３８によって定義され、この細胞外ドメインの実質的な部分の例には、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質のアミノ酸２２～２３８、２３～２３８、２４～２３８、２１～２３７、２１～２３６、２１～２３５が 含まれ得る。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡの細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号４３のアミノ酸２１～２３６を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡの細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号４３のアミノ酸２１～２３７を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡの細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号４３のアミノ酸２２～２３８を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡの細胞外ドメインの実質的な部分は、配列番号４３のアミノ酸２３～２３８を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質の細胞外ドメインは、ヒトＩＬ７ＲＡの細胞外ドメインの実質的な部分と、それに続く齧歯類Ｉｌ７ｒａ（例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ）の細胞外ドメインのＣ末端由来の１～３アミノ酸を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質の細胞外ドメインは、配列番号４３のアミノ酸２１～２３６と、それに続く齧歯類Ｉｌ７ｒａの細胞外ドメインのＣ末端由来の２アミノ酸を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、配列番号４５のアミノ酸２１～２３８を含む細胞外ドメインを含有するヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質をコードする、－この細胞外ドメインは、配列番号４３のアミノ酸２１～２３６（ヒトＩＬ７ＲＡ）及びマウスＩｌ７ｒａの細胞外ドメインのＣ末端由来の最後の２アミノ酸（「ＧＷ」）を含み、配列番号４３のヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインとは、細胞外ドメインのＣ末端の２つのアミノ酸において異なり（配列番号４３のヒトＩＬ７ＲＡにおける「ＥＭ」とは対照的に、配列番号４５のヒト化Ｉｌ７ｒａにおける「ＧＷ」を伴う）、及びそれ以外はヒトＩＬ７ＲＡ細胞外ドメインと同一である。

【0138】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質、例えば内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の、膜貫通型細胞質配列と実質的に同一である膜貫通型細胞質配列（すなわち、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインの両方を含む配列）を含有するヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質をコードする。一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一である膜貫通型細胞質配列は、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質などの齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列と同じ機能性（例えば、シグナル伝達及び／又は細胞内分子との相互作用）を呈示する。「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一」である膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、一部の実施形態では、（ｉ）齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列と配列において少なくとも９５％同一であるポリペプチド、又は齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列と配列において少なくとも９８％同一であるポリペプチドであり得る。「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一」である膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列と配列において同一であるポリペプチドであり得る。代替的に又は追加的に、「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一」である膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、（ｉｉ）齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは５アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは４アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは２アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは１アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であり得る。代替的に又は追加的に、「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一」である膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、（ｉｉｉ）、例えば、膜貫通型細胞質配列のＮ末端又はＣ末端部分にアミノ酸の付加、欠失又は置換を有することによって、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは、Ｎ末端又はＣ末端でのみ異なるポリペプチドであってもよい。代替的に又は追加的に、「齧歯類Ｔｓｌｐｒタンパク質の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一」である膜貫通型細胞質配列又はポリペプチドは、（ｉｖ）上記（ｉ）～（ｉｉｉ）に詳述される特徴のうちの１つ以上を有するポリペプチドであり得、例えば、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列と配列において少なくとも９５％同一でありかつ齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列とは、Ｎ末端又はＣ末端でのみ３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であり得る。「膜貫通型細胞質配列のＮ又はＣ末端部分」とは、膜貫通ドメインのＮ末端から５～１０個のアミノ酸内、又は細胞質ドメインのＣ末端から５～１０個のアミノ酸内を意味する。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、マウスＩｌ７ｒａタンパク質（内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質など）の膜貫通型細胞質配列、又はラットＩｌ７ｒａタンパク質（内因性ラットＩｌ７ｒａタンパク質など）の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一の膜貫通型細胞質配列を含有する。

【0139】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質）のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含有するヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質（例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含有するヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質をコードする。参照タンパク質（ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質又は齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質のいずれか）のシグナルペプチドと「実質的に同一」なシグナルペプチドは、（ｉ）参照タンパク質のシグナルペプチドと配列において少なくとも９５％同一であるポリペプチド、又は参照タンパク質のシグナルペプチドと配列において同一であるポリペプチドであってよい。代替的に又は追加的に、参照タンパク質のシグナルペプチドと「実質的に同一」であるシグナルペプチドは、（ｉｉ）参照タンパク質のシグナルペプチドとは３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、参照タンパク質のシグナルペプチドとは２アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、又は一部の実施形態では、参照タンパク質のシグナルペプチドとは１アミノ酸を超えずに異なるポリペプチドであり得る。代替的に又は追加的に、参照タンパク質のシグナルペプチドと「実質的に同一」であるシグナルペプチドは、（ｉｉｉ）例えば、シグナルペプチドのＮ末端若しくはＣ末端部分にアミノ酸の付加、欠失若しくは置換を有することによって、参照タンパク質のシグナルペプチドとは、Ｎ末端若しくはＣ末端でのみ異なるポリペプチドであってもよく、又は（ｉｖ）上記（ｉ）～（ｉｉｉ）に詳述される特徴のうちの１つ以上を有するポリペプチド、例えば、参照タンパク質のシグナルペプチドと少なくとも９５％同一でありかつ参照タンパク質のシグナルペプチドとは、Ｎ末端又はＣ末端でのみ３アミノ酸を超えずに異なるポリペプチド、であってもよい。「シグナルペプチドのＮ又はＣ末端部分」とは、シグナルペプチドのＮ又はＣ末端から５アミノ酸以内を意味する。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、マウスＩｌ７ｒａタンパク質（内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質など）のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、ラットＩｌ７ｒａタンパク質（内因性ラットＩｌ７ｒａタンパク質など）のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質（例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）のシグナルペプチドと実質的に同一のシグナルペプチドを含む。

【0140】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類のゲノム中のヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列（「ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列」）及び齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のヌクレオチド配列（「齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列」、例えば内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列）を含み、ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡ配列である。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子中のヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質（例えば、配列番号４３のヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）の細胞外ドメインをコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、成熟タンパク質配列中の第１のアミノ酸をコードするエクソン２のコドンから、エクソン５まで（すなわち、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の膜貫通セグメントの開始前の２アミノ酸であるアミノ酸残基をコードするコドンまでを含む、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質（例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）のアミノ酸２１～２３８をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質（例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）のアミノ酸２１～２３７をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質（例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）のアミノ酸２１～２３６をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質（例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）のアミノ酸２１～２３５をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質（例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）のアミノ酸２２～２３８をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質（例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡタンパク質）のアミノ酸２４～２３８をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、イントロン５の５’部分を更に含む。

【0141】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類のゲノム中のヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列及びヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列を含み、齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質）の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一のポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子中に存在する齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列は、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質配列をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子中に存在する齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列は、マウスＩｌ７ｒａヌクレオチド配列であり、一部のそのような実施形態では、マウスＩｌ７ｒａヌクレオチド配列は、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子）のイントロン５の３’部分及びエクソン６からエクソン８までを含む。

【0142】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類のゲノム中のヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列の上流（５’）に齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列を含み、齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質）のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドをコードする齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列は、マウスＩｌ７ｒａヌクレオチド配列（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａヌクレオチド配列）、又はラットＩｌ７ｒａヌクレオチド配列（例えば、内因性ラットＩｌ７ｒａヌクレオチド配列）である。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子中のマウスＩｌ７ｒａヌクレオチド配列は、マウスＩｌ７ｒａのシグナルペプチドをコードするマウスＩｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子）のエクソン１部分を含み、一部の実施形態では、マウスＩｌ７ｒａヌクレオチド配列は、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子のエクソン１の５’ＵＴＲも含む。

【0143】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子の発現が齧歯類Ｉｌ７ｒａ ５’制御配列の制御下におかれるように、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ制御配列などの齧歯類Ｉｌ７ｒａ ５’制御配列、例えばプロモーター及び／又はエンハンサーなどの５’転写制御配列に作動可能に連結されている。

【0144】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位にある。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、例えば、ランダムな組み込みの結果として、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位以外の座位にある。ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位以外の座位にある一部の実施形態では、齧歯類は、例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子の不活性化（例えば、全体又は部分的な欠失）の結果として、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質を発現することができない。

【0145】

ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位にある一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位で内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子がヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列により置換された結果、生じる。

【0146】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位での置換される内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のヌクレオチド配列は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、齧歯類はマウスであり、置換されるマウスＩｌ７ｒａゲノム断片は、内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする。内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質の細胞外ドメインの実質的な部分の例としては、内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質（例えば、配列番号４１）のアミノ酸２２～２３８、２３～２３８、２４～２３８、２１～２３７、２１～２３６、又は２１～２３５が挙げられる。一部の実施形態では、置換されるマウスＩｌ７ｒａゲノム断片は、内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質（例えば、配列番号４１）のアミノ酸２１～２３５をコードする。一部の実施形態では、置換されるマウスＩｌ７ｒａゲノム断片は、内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質（例えば、配列番号４１）のアミノ酸２１～２３６をコードする。一部の実施形態では、置換されるマウスＩｌ７ｒａゲノム断片は、内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質（例えば、配列番号４１）のアミノ酸２１～２３７をコードする。一部の実施形態では、置換されるマウスＩｌ７ｒａゲノム断片は、内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質（例えば、配列番号４１）のアミノ酸２１～２３８をコードする。一部の実施形態では、置換されるマウスＩｌ７ｒａゲノム断片は、内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質（例えば、配列番号４１）のアミノ酸２２～２３８をコードする（例えば、配列番号４１）。一部の実施形態では、置換されるマウスＩｌ７ｒａゲノム断片は、内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質（例えば、配列番号４１）のアミノ酸２３～２３８をコードする。一部の実施形態では、置換されるマウスＩｌ７ｒａゲノム断片は、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子の成熟Ｉｌ７ｒａタンパク質の第１のアミノ酸をコードするエクソン１におけるコドンからエクソン５まで、及び一部の実施形態では、イントロン５の５’部分までを含む。

【0147】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位で齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のゲノム断片を置換するヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡ配列である。一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位で齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のゲノム断片を置換するヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のゲノム断片である。一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位で齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のゲノム断片を置換するヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードする、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のエクソンの全部又は一部を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡ、例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡのアミノ酸２１～２３８をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡ、例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡのアミノ酸２１～２３７をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡ、例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡのアミノ酸２１～２３６をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡ、例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡのアミノ酸２１～２３５をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡ、例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡのアミノ酸２２～２３８をコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡ、例えば、配列番号４３に記載されるヒトＩＬ７ＲＡのアミノ酸２４～２３８をコードする。一部の実施形態では、ヒトゲノム断片は、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子の、成熟ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の第１のアミノ酸をコードするエクソン１におけるコドンからエクソン５まで、及び一部の実施形態では、イントロン５の５’部分をまでを含む。

【0148】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位内に挿入されるヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内因性齧歯類、マウス又はラットＩｌ７ｒａタンパク質など）の膜貫通型細胞質配列と実質的に同一のポリペプチドをコードする齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のゲノム配列に作動可能に連結されている。齧歯類がマウスである実施形態では、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子のゲノム配列は、一部の実施形態では、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子）のエクソン６からエクソン８を含み、一部の実施形態では、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子）のイントロン５の３’部分からエクソン８を含む。

【0149】

一部の実施形態では、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位内に挿入されるヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質（例えば、内因性齧歯類、マウス又はラットＩｌ７ｒａタンパク質など）のシグナルペプチドと実質的に同一のポリペプチドをコードする齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子のゲノム配列に作動可能に連結されている。齧歯類がマウスである実施形態では、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子のゲノム配列は、一部の実施形態では、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子のシグナルペプチドをコードするマウスＩｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子）のエクソン１の部分を含み、一部の実施形態では、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子（例えば、内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子）のエクソン１の５’ ＵＴＲ及びマウスＩｌ７ｒａのシグナルペプチドをコードするのエクソン１の部分を含む。

【0150】

一部の実施形態では、齧歯類がマウスであり、内因性マウスＩｌ７ｒａ座位で、第１の成熟Ｉｌ７ｒａアミノ酸をコードするエクソン１の第１のコドンからエクソン５まで（又は一部の実施形態では、イントロン５の５’部分まで）を含む内因性マウスＩｌ７ｒａ遺伝子のゲノム断片が、第１の成熟ＩＬ７ＲＡアミノ酸をコードするエクソン１の第１のコドンからエクソン５まで（又は一部の実施形態では、イントロン５の５’部分まで）を含むヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のゲノム断片により置換されている。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位で形成され、マウスＩｌ７ｒａ遺伝子のエクソン１の５’ＵＴＲ及びシグナルペプチドコード部分、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子のエクソン１からエクソン５までの成熟アミノ酸コード部分、及びマウスＩｌ７ｒａ遺伝子のエクソン６からエクソン８まで、一部のそのような実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子のイントロン５には、ヒトのイントロン５の５’部分及び内因性マウスイントロン５の３’部分が含まれている。

【0151】

一部の実施形態では、齧歯類は、内因性マウスＩｌ７ｒａ座位にヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含むマウスであり、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質のシグナルペプチドと少なくとも実質的に同一なシグナルペプチド、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインと少なくとも実質的に同一な細胞外ドメイン、及び内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質の膜貫通型細胞質ドメインを含む、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質はヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の全長細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質の細胞外ドメインは、（ｉ）ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインのＣ末端の２アミノ酸を除いて、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質のほぼ全長の細胞外ドメインと、（ｉｉ）内因性マウスＩｌ７ｒａタンパク質の細胞外ドメインのＣ末端の２アミノ酸とを含む。一部の実施形態では、齧歯類は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＣＮ１１１８０８８８２Ａに記載される内因性マウスＩｌ７ｒａ座位にヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含むマウスである。

【0152】

一部の実施形態では、本明細書に提供される齧歯類は、そのゲノムにおいて、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子に対しヘテロ接合性である。一部の実施形態では、本明細書に提供される齧歯類は、そのゲノムにおいて、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子に対しホモ接合性である。

【0153】

一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子は、齧歯類においてコードされたヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質の発現を生じさせる。一部の実施形態では、ヒト化Ｉｌ７ｒａタンパク質は、対照齧歯類（例えば、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を有しない齧歯類）における対応する齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質が通常、例えばＴリンパ球上で発現される、細胞及び組織において発現される。

【0154】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、例えば、内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ遺伝子の不活性化（例えば、全体又は部分的な欠失）又は置換（全体又は部分的な）の結果として、齧歯類Ｉｌ７ｒａタンパク質を発現することができない。

【0155】

更なる遺伝的特徴
一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、そのゲノム中にヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子を更に含む。齧歯類Ｓｉｒｐα遺伝子のヒト化は、例えば、ＷＯ２０１５／０４２５５７Ａ１（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）及びＵＳ２０１９／０３７３８６７Ａ１（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ）に記載されており、それらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0156】

一部の実施形態では、ヒト化Ｓｉｒｐａ遺伝子は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質の細胞外ドメインの全部又は一部を含むヒト化Ｓｉｒｐαタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｓｉｒｐａ遺伝子は、リガンド結合（すなわち、ＣＤ４７への結合）に関与するヒトＳＩＲＰαタンパク質の細胞外部分を含むヒト化Ｓｉｒｐαタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｓｉｒｐａ遺伝子は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１０３５１１１．１に記載されるヒトＳＩＲＰαタンパク質のアミノ酸残基２８～３６２を含むヒト化Ｓｉｒｐαタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｓｉｒｐａ遺伝子は、齧歯類Ｓｉｒｐαタンパク質（例えば、内因性齧歯類Ｓｉｒｐαタンパク質）の膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを含むヒト化Ｓｉｒｐαタンパク質をコードする。一部の実施形態では、ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子は、ヒトＳＩＲＰα遺伝子のエクソン２、３、及び４を含む。一部の実施形態では、ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子は、内因性齧歯類Ｓｉｒｐα座位に位置する。一部の実施形態では、ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子は、ヒトＳＩＲＰα遺伝子のエクソン２～４による内因性齧歯類Ｓｉｒｐα座位での内因性齧歯類Ｓｉｒｐα遺伝子のエクソン２～４の置換の結果として形成される。一部の実施形態では、ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子は、内因性齧歯類Ｓｉｒｐα座位に位置し、内因性齧歯類Ｓｉｒｐα遺伝子のエクソン１、ヒトＳＩＲＰα遺伝子のエクソン２～４、及び内因性齧歯類Ｓｉｒｐα遺伝子のエクソン５～８を含み、この場合においてヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子は、内因性齧歯類Ｓｉｒｐα座位で齧歯類Ｓｉｒｐαプロモーターに作動可能に連結される。一部の実施形態では、齧歯類は、ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子に対してヘテロ接合性である。一部の実施形態では、齧歯類は、ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子に対してホモ接合性である。一部の実施形態では、ヒト化 Ｓｉｒｐα遺伝子を含む齧歯類は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質の細胞外ドメインと齧歯類Ｓｉｒｐαタンパク質の膜貫通型細胞質ドメインとを含むタンパク質などのヒト化Ｓｉｒｐαタンパク質を発現する。一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、内因性齧歯類Ｓｉｒｐαタンパク質を発現することができない（例えば、内因性齧歯類Ｓｉｒｐα遺伝子の破壊又は置換の結果として）。

【0157】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、そのゲノム中にヒト化Ｔｐｏ（トロンボポエチン）遺伝子を更に含む。齧歯類Ｔｐｏ遺伝子のヒト化は、例えば、米国特許第８５４１６４６号（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、及びＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ＩＲＢ）、及びＲｏｎｇｖａｕｘ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１１；１０８（６）：２３７８－２３８３）に記載されており、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、ヒト化は、内因性齧歯類Ｔｐｏ遺伝子のヒトＴＰＯ遺伝子による置換を含む。一部の実施形態では、齧歯類は、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子からヒトＴＰＯタンパク質を発現する。一部の実施形態では、齧歯類は、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子に対してヘテロ接合性である。一部の実施形態では、齧歯類は、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子に対してホモ接合性である。一部の実施形態では、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子を含む齧歯類は、内因性齧歯類Ｔｐｏタンパク質を発現することができない（例えば、内因性齧歯類Ｔｐｏ遺伝子の破壊又は置換の結果として）。

【0158】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、そのゲノム中にヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位を更に含み、内因性齧歯類ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子がヒトＧＭ－ＣＳＦ遺伝子で置換され、内因性齧歯類ＩＬ－３遺伝子がヒトＩＬ－３遺伝子で置換されている。齧歯類ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位のヒト化は、例えば、米国特許第８５４１６４６号（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、及びＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ＩＲＢ）及びＷｉｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ，１０８（６）：２３９０－２３９５，２０１１）に記載されており、両者ともそれらの全体が本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、齧歯類は、ヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位に対してヘテロ接合性である。一部の実施形態では、齧歯類は、ヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位に対してホモ接合性である。一部の実施形態では、齧歯類は、ヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位からヒトＧＭ－ＣＳＦ及びヒトＩＬ－３を発現する。一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、内因性齧歯類ＧＭ－ＣＳＦタンパク質を発現することができず、内因性齧歯類ＩＬ－３タンパク質を発現することができず、（例えば、内因性齧歯類ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位の破壊又は置換の結果として）。

【0159】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、その内因性ＲＡＧ２遺伝子が破壊されており、一部の実施形態では、齧歯類は、破壊に対してホモ接合性であり（ＲＡＧ２－／－又はＲＡＧノックアウト）、内因性ＲＡＧ２タンパク質を発現することができない。一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、その内因性ＩＬ－２ＲＧ遺伝子が破壊され、一部の実施形態では、齧歯類は、破壊に対してホモ接合性であり（ＩＬ－２ＲＧ－／又はＩＬ－２ＲＧノックアウト）、内因性ＩＬ－２ＲＧタンパク質（「γｃ」としても知られる）を発現することができない。ＲＡＧ２及びＩＬ－２ＲＧダブルノックアウト（ＤＫＯ）齧歯類は、既知の免疫不全齧歯類であり（例えば、Ｔｒａｇｇｉａｉ Ｅ ｅｔ ａｌ．（２００４） Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ－ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｍｉｃｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０４：１０４－１０７を参照、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）かつ、市販により容易に入手可能である（例えば、Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋから）。

【0160】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子及びヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子を含み、ＲＡＧ２遺伝子とＩＬ－２ＲＧ遺伝子の両方に対してホモ接合ヌルである。一部のこのような実施形態では、齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子、及び／又はヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位を更に含む。齧歯類は、ヒト化遺伝子に対してヘテロ接合性又はホモ接合性であり得る。

【0161】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、及びヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子を含み、ＲＡＧ２遺伝子とＩＬ－２ＲＧ遺伝子の両方に対してホモ接合ヌルである。一部のこのような実施形態では、齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子及び／又はヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位を更に含む。齧歯類は、ヒト化遺伝子に対してホモ接合性又はヘテロ接合性であり得る。

【0162】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、及びヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子を含み、ＲＡＧ２遺伝子とＩＬ－２ＲＧ遺伝子の両方に対してホモ接合ヌルである。一部のこのような実施形態では、齧歯類は、そのゲノム中に、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子、及び／又はヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位を更に含む。齧歯類は、ヒト化遺伝子に対してホモ接合性又はヘテロ接合性であり得る。

【0163】

齧歯類種及び系統
一部の実施形態では、本開示の齧歯類は、非限定的な例として、マウス、ラット、及びハムスターを含む。一部の実施形態では、齧歯類はＭｕｒｏｉｄｅａ上科から選択される。一部の実施形態では、本開示の齧歯類は、ヨルマウス科（Ｃａｌｏｍｙｓｃｉｄａｅ）（例えば、カンガルーハムスター）、キヌゲネズミ科（Ｃｒｉｃｅｔｉｄａｅ）（例えば、ハムスター、新世界ラット及びマウス、ハタネズミ）、ネズミ科（Ｍｕｒｉｄａｅ）（純種のマウス及びラット、アレチネズミ、トゲマウス、タテガミネズミ）、アシナガマウス科（Ｎｅｓｏｍｙｉｄａｅ）（キノボリマウス（ｃｌｉｍｂｉｎｇ ｍｉｃｅ）、ロックマウス、オジロラット（ｗｉｔｈ－ｔａｉｌｅｄ ｒａｔ）、マダガスカルラット及びマウス）、トゲヤマネ科（Ｐｌａｔａｃａｎｔｈｏｍｙｉｄａｅ）（例えば、トゲヤマネ）、及びメクラネズミ科（Ｓｐａｌａｃｉｄａｅ）（例えば、メクラネズミ、タケネズミ、及び高原モグラネズミ（ｚｏｋｏｒ））から選択された科由来の動物である。一部の実施形態では、本開示の齧歯類は、純種のマウス又はラット（ネズミ科）、アレチネズミ、トゲマウス、及びタテガミネズミから選択される。一部の実施形態では、本開示のマウスは、ネズミ科のメンバー由来のものである。

【0164】

一部の実施形態では、齧歯類は、マウスである。一部の実施形態では、齧歯類は、Ｃ５７ＢＬ／Ａ、Ｃ５７ＢＬ／Ａｎ、Ｃ５７ＢＬ／ＧｒＦａ、Ｃ５７ＢＬ／ＫａＬｗＮ、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｃ５７ＢＬ／６ＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＪ、Ｃ５７ＢＬ／１０、Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｃｒ、及びＣ５７ＢＬ／Ｏｌａから選択されるＣ５７ＢＬ系統のマウスである。一部のある実施形態では、齧歯類は、１２９Ｐ１、１２９Ｐ２、１２９Ｐ３、１２９Ｘ１、１２９Ｓ１（例えば、１２９Ｓ１／ＳＶ、１２９Ｓ１／ＳｖＩｍ）、１２９Ｓ２、１２９Ｓ４、１２９Ｓ５、１２９Ｓ９／ＳｖＥｖＨ、１２９／ＳｖＪａｅ、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）、１２９Ｓ７、１２９Ｓ８、１２９Ｔ１、１２９Ｔ２である系統からなる群から選択される１２９系統のマウスである（例えば、Ｆｅｓｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｇｅｎｏｍｅ １０：８３６； Ａｕｅｒｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２９（５）：１０２４－１０２８，１０３０，１０３２を参照）。一部の実施形態では、齧歯類は、１２９系統及びＣ５７ＢＬ／６系統を混合したマウスである。一部の実施形態では、齧歯類は、前述の１２９系統の混合、又は前述のＢＬ／６系統の混合であるマウスである。一部の実施形態では、齧歯類は、ＢＡＬＢ系統、例えば、ＢＡＬＢ／ｃ系統のマウスである。一部の実施形態では、齧歯類は、ＢＡＬＢ系統及び別の前述の系統の混合であるマウスである。

【0165】

一部の実施形態では、齧歯類は、ラットである。一部の特定の実施形態では、ラットは、ウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）ラット、ＬＥＡ系統、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ系統、フィッシャー（Ｆｉｓｃｈｅｒ）系統、Ｆ３４４、Ｆ６、及びＤａｒｋ Ａｇｏｕｔｉから選択される。一部の実施形態では、本明細書に記載のラット系統は、ウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）、ＬＥＡ、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、フィッシャー（Ｆｉｓｃｈｅｒ）、Ｆ３４４、Ｆ６、及びＤａｒｋ Ａｇｏｕｔｉからなる群から選択される２つ以上の系統の混合である。

【0166】

遺伝子改変齧歯類の組織及び細胞
一部の実施形態では、そのゲノムがヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを含む単離齧歯類細胞又は組織が本明細書に開示される。一部の実施形態では、単離齧歯類の細胞又は組織は、上述の追加の遺伝子改変（例えば、ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子、ＲＡＧ２－／－及びＩＬ－２ＲＧ－／－、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子、又はヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位）のうちの１つ以上を更に含む。

【0167】

一部の実施形態では、組織は、脂肪、膀胱、脳、乳房、骨髄、目、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、筋肉、膵臓、血漿、血清、皮膚、脾臓、胃、胸腺、精巣、卵子、及びこれらの組み合わせから選択される。

【0168】

一部の実施形態では、細胞は、上皮細胞、ケロチノサイト、樹状細胞、リンパ球（例えば、Ｂ細胞又はＴ細胞）、マクロファージ、マスト細胞、及び好塩基球から選択される。一部の実施形態では、単離齧歯類細胞は、齧歯類胚性幹細胞である。一部の実施形態では、単離齧歯類細胞は、齧歯類卵子、又は齧歯類精子である。

【0169】

ヒト化齧歯類を作製するための組成物及び方法
本明細書に記載されるヒト化遺伝子を形成するために齧歯類座位に組み込まれることが望ましい、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列、又はヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列を含む標的化ベクター（又は核酸構築物）が本明細書に開示される。

【0170】

一部の実施形態では、標的化ベクターは、本明細書で上述したヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードするヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列は、配列番号３のアミノ酸２９～１５９を含むポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰ核酸配列は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子の、成熟タンパク質配列の第１のアミノ酸をコードするコドン開始するエクソン１から、エクソン４における終止コドンまでを含む。

【0171】

一部の実施形態では、標的化ベクターは、本明細書に記載されるヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、配列番号２３のアミノ酸２７～２３１を含むポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列は、ヒトＴＳＬＰＲ遺伝子のエクソン２から最後の細胞外ドメインアミノ酸をコードするエクソン６のコドンまでを含む。

【0172】

一部の実施形態では、標的化ベクターは、本明細書で上述したヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、配列番号４３のアミノ酸２１～２３６を含むポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列は、ヒトＩＬ７ＲＡ遺伝子の成熟ＩＬ７ＲＡタンパク質の第１のアミノ酸をコードするエクソン１におけるコドンから、エクソン５まで（及び一部の実施形態では、イントロン５の５’部分まで）を含む。

【0173】

標的化ベクターはまた、５’及び３’相同アームとしても知られる、組み込まれるヒトヌクレオチド配列に隣接する５’及び３’齧歯類配列を含み、これは、相同組換え及びヒトヌクレオチド配列の標的齧歯類座位（例えば、内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位、内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位、又は内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位）への組み込みを媒介して、本明細書で上述したヒト化遺伝子を形成する。典型的には、５’及び３’の隣接齧歯類配列は、ヒトヌクレオチド配列によって置換されるべき対応する齧歯類ヌクレオチド配列に標的齧歯類座位で隣接する、ヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、標的化ベクターは、本明細書で上述したヒト化遺伝子を含む。一部の実施形態では、標的化ベクターは、本明細書で上述したヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列及び齧歯類Ｔｓｌｐヌクレオチド配列を含むヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を含む。一部の実施形態では、標的化ベクターは、本明細書で上述したヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列及び齧歯類Ｔｓｌｐａヌクレオチド配列を含むヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を含む。一部の実施形態では、標的化ベクターは、本明細書で上述したヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列及び齧歯類Ｉｌ７ｒａヌクレオチド配列を含むヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含む。

【0174】

一部の実施形態では、標的化ベクターは選択マーカー遺伝子を含む。選択マーカー遺伝子は、組み込まれるヒトゲノム配列のイントロンに挿入され得る。一部の実施形態では、選択マーカー遺伝子は、ヒトヌクレオチド配列の組み込みに成功した後に欠失させられ得る自動欠失カセットとして提供される。

【0175】

例示的な実施形態では、標的化ベクターは、細菌相同組換え及びＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術を使用して齧歯類Ｔｓｌｐ、Ｔｓｌｐｒ、又はＩｌ７ｒａゲノムＤＮＡを保有する細菌人工染色体（ＢＡＣ）クローンから生成される（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｕ．Ｓ．６，５８６，２５１、及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．（２００３） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２－６５９を参照されたい）。細菌相同組換えの結果として、齧歯類ゲノム配列は、ＢＡＣクローンから欠失させられ、ヒトヌクレオチド配列が挿入され、その結果、５’及び３’齧歯類相同アームが隣接したヒトヌクレオチド配列を保持する改変ＢＡＣクローンが得られる。一部の実施形態では、ヒトヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡ配列又はヒトゲノムＤＮＡであり得る。改変ＢＡＣクローンは、直線化されると、齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞に導入することができる。

【0176】

一部の実施形態では、本発明は、改変齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞を作るための本明細書に記述された標的化ベクターの利用法を提供する。標的化ベクターは、例えばエレクトロポレーションによって齧歯類ＥＳ細胞に導入することができる。マウスＥＳ細胞とラットＥＳ細胞の両方が、共に当技術分野で説明されている。例えば、マウスＥＳ細胞、及び遺伝子改変マウスを作製するＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法について記述するＵＳ ７，５７６，２５９、ＵＳ ７，６５９，４４２、ＵＳ ７，２９４，７５４、及びＵＳ２００８－００７８０００ Ａ１（これらの全てはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）、ラットＥＳ細胞、及び遺伝子改変ラットを作製する方法について記述するＵＳ ２０１４／０２３５９３３ Ａ１（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＵＳ ２０１４／０３１０８２８ Ａ１（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、Ｔｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１０） Ｎａｔｕｒｅ ４６７：２１１－２１５、及びＴｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１１） Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ．６（６）：ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｐｒｏｔ．２０１１．３３８（これら全てはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい、これらを使用して改変齧歯類胚を作製することができ、次いでこれを使用して齧歯類動物を作製することができる。

【0177】

一部の実施形態では、ゲノムに組み込まれた所望のヒトヌクレオチド配列（例えば、ヒトＴＳＬＰ、ヒトＴＳＬＰＲ、又はヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列）を有するＥＳ細胞を選択することができる。一部の実施形態では、ＥＳ細胞は、齧歯類対立遺伝子の喪失及び／又はヒト対立遺伝子の獲得アッセイに基づいて選択される。一部の実施形態では、次いで選択されたＥＳ細胞を、ドナーＥＳ細胞として、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法（例えば、それら全てがその全体が参照により組み込まれる、ＵＳ ７，５７６，２５９、ＵＳ ７，６５９，４４２、ＵＳ ７，２９４，７５４、及びＵＳ２００８－００７８０００ Ａ１を参照）、又は、両方ともその全体が参照により組み込まれる、ＵＳ ２０１４／０２３５９３３ Ａ１及びＵＳ２０１４／０３１０８２８ Ａ１に記載の方法を使用することにより、前桑実胚期の胚（例えば、８細胞期胚）への注入に使用する。一部の実施形態では、ドナーＥＳ細胞を含む胚はインキュベートし、代理母に移植して、Ｆ０齧歯類を産生する。ヒトヌクレオチド配列を保有する齧歯類の仔は、齧歯類対立遺伝子の喪失及び／又はヒト対立遺伝子の獲得アッセイを使用した、尾部断片から単離されたＤＮＡの遺伝子型決定により特定することができる。

【0178】

一部の実施形態では、ヒト化遺伝子に対してヘテロ接合性の齧歯類を交雑させ、ホモ接合性齧歯類をする生成することができる。

【0179】

本明細書に記載されるヒト化齧歯類（すなわち、ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを含む齧歯類）は、別の齧歯類と交配又は交雑させることができる。したがって、交配の方法並びにかかる交配から得られた子孫もまた、本開示の実施形態である。

【0180】

一部の実施形態では、本明細書で上述した第１の齧歯類、例えば、そのゲノムがヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを含む齧歯類を、第２の齧歯類と交配させて、ゲノムがヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、及び／又はヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を含む子孫齧歯類を得ることを含む方法が提供される。子孫は、交配で使用される第２の齧歯類から受け継ぐ他の望ましい表現型又は遺伝子改変を有してもよい。一部の実施形態では、子孫齧歯類は、第１の齧歯類からのヒト化遺伝子（又は複数の遺伝子）に対してヘテロ接合性である。一部の実施形態では、子孫齧歯類は、第１の齧歯類からのヒト化遺伝子に対してホモ接合性である。一部の実施形態では、交配に使用される第２の齧歯類は、ヒト化Ｓｉｒｐα遺伝子、ＲＡＧ２－／－及びＩＬ－２ＲＧ－／－、ヒト化Ｔｐｏ遺伝子、又はヒト化ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３座位などの追加の遺伝子改変のうちの１つ以上を含む。

【0181】

一部の実施形態では、ゲノムがヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子、ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子、ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子、又はそれらの組み合わせを含む子孫齧歯類が提供され、この子孫齧歯類は、そのゲノムがヒト化遺伝子又は複数のヒト化遺伝子を含む第１の齧歯類を、第２の齧歯類と交配させることを含む方法によって産生される。一部の実施形態では、子孫齧歯類は、第１の齧歯類からのヒト化遺伝子（又は複数の遺伝子）に対してヘテロ接合性である。一部の実施形態では、子孫齧歯類は、第１の齧歯類からのヒト化遺伝子（又は複数の遺伝子）に対してホモ接合性である。

【0182】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類細胞を生成するためのインビトロでの方法が、本明細書に開示され、ヒトＴＳＬＰヌクレオチド配列の内因性齧歯類Ｔｓｌｐ座位への組み込みを媒介する齧歯類相同アームが隣接する、ヒトＴＳＬＰタンパク質の成熟タンパク質配列の少なくとも実質的な部分をコードするヒトＴＳＬＰ核酸配列を含む標的化ベクターを、齧歯類細胞に導入することを含み、その結果、齧歯類ＴｓｌｐゲノムＤＮＡの、ヒトＴＳＬＰ核酸配列による置換が生じ、本明細書に記載されるヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子が形成され、それによって遺伝子改変齧歯類細胞を生成する。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、マウス細胞又はラット細胞である。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、齧歯類ＥＳ細胞であり、本方法は、遺伝子改変齧歯類ＥＳ細胞を生成する。

【0183】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類細胞を生成するためのインビトロ方法が、本明細書に開示され、ヒトＴＳＬＰＲヌクレオチド配列の内因性齧歯類Ｔｓｌｐｒ座位への組み込みを媒介する齧歯類相同アームが隣接する、ヒトＴＳＬＰＲタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするヒトＴＳＬＰＲ核酸配列を含む標的化ベクターを、齧歯類細胞に導入することを含み、その結果、齧歯類ＴｓｌｐｒゲノムＤＮＡの、ヒトＴＳＬＰＲ核酸配列による置換が生じ、本明細書に記載されるヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子が形成され、それによって遺伝子改変齧歯類細胞を生成する。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、マウス細胞又はラット細胞である。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、齧歯類ＥＳ細胞であり、本方法は、遺伝子改変齧歯類ＥＳ細胞を生成する。

【0184】

一部の実施形態では、遺伝子改変齧歯類細胞を生成するためのインビトロ方法が、本明細書に開示され、ヒトＩＬ７ＲＡヌクレオチド配列の内因性齧歯類Ｉｌ７ｒａ座位への組み込みを媒介する齧歯類相同アームが隣接する、ヒトＩＬ７ＲＡタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも実質的な部分をコードするヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列を含む標的化ベクターを、齧歯類細胞に導入することを含み、その結果、齧歯類Ｉｌ７ｒａゲノムＤＮＡの、ヒトＩＬ７ＲＡ核酸配列による置換が生じ、本明細書に記載されるヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子が形成され、それによって遺伝子改変齧歯類細胞を生成する。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、マウス細胞又はラット細胞である。一部の実施形態では、齧歯類細胞は、齧歯類ＥＳ細胞であり、本方法は、遺伝子改変齧歯類ＥＳ細胞を生成する。

【0185】

ヒト化齧歯類を用いる方法
本明細書に開示される齧歯類は、特に、Ｔｈ２駆動性アレルギー性疾患、喘息、がんなどのＴＳＬＰシグナル伝達に関連する疾患を含む、ヒト疾患治療に対する可能性のある化合物を同定し及び試験するための有用なインビボシステム及び生体材料の供給源を提供する。

【0186】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類動物は、例えば、ヒトＴＳＬＰ、ヒトＴＳＬＰＲ、又はヒトＩＬ７ＲＡを標的とすることを介して、ＴＳＬＰシグナル伝達を標的とする薬剤を開発するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類は、ヒトＴＳＬＰ、ヒトＴＳＬＰＲ、又はヒトＩＬ７ＲＡに特異的に結合する候補薬剤（例えば、抗体）をスクリーニング及び開発するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類動物は、薬剤（例えば、抗体）の結合プロファイルを決定するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類動物は、ヒトＴＳＬＰ、ヒトＴＳＬＰＲ、又はヒトＩＬ７ＲＡ活性を遮断又は調節する効果を測定するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類動物は、ヒトＴＳＬＰに結合してこれを阻害する候補薬剤に曝露され、ヒトＴＳＬＰ依存性プロセスに対する効果について分析される。

【0187】

一部の実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変齧歯類は、アレルギー性疾患のモデルとして使用される。一部の実施形態では、アレルギー性疾患は気道炎症（例えば、喘息）が含まれる

【0188】

一部の実施形態では、肺炎症のｏｖａ－ミョウバンモデルが、Ｔｓｌｐシグナル伝達を評価するために使用される。肺炎症のｏｖａ－ミョウバンモデルは、当技術分野で十分に文書化されている（Ａｌ－Ｓｈａｍｉ ｅｔ ａｌ．，ＪＥＭ Ｖｏｌ．２０２，Ｎｏ．６，８２９－８３９，２００５、Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１３；１３１：１８７－２００、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態では、水酸化アルミニウム中に乳化させたＯＶＡ、又は水酸化アルミニウム単独（対照として）を、齧歯類動物（例えば、本明細書に開示されるＴｓｌｐ、Ｔｓｌｐｒ、及び／又はＩｌ７ｒａのうちの１つ以上に関してヒト化されたマウスなどのマウス、又はヒト化されていない野生型マウス）に腹腔内投与する。次いで、マウスを、ＯＶＡを用いて鼻腔内にチャレンジし、続いて、例えば、血清ｏｖａ特異的ＩｇＥ及びｏｖａ特異的－ＩｇＧ１、杯細胞化生、及び／又は肺組織好酸球増多を含む、肺炎症を示すパラメータについて分析する。一部の実施形態では、喘息肺の気道に過剰に発現される代表的ムチン遺伝子であるＭｕｃ５ａｃの肺発現は、チャレンジ後に分析され、杯細胞化生の代替エンドポイントとして供され得る。例示的なプロトコルでは、２ｍｇの水酸化アルミニウム中に乳化させた５０μｇのＯＶＡ、又は２ｍｇの水酸化アルミニウム単独を、齧歯類動物（例えば、１日目及び１４日目に、Ｔｓｌｐ及びＴｓｌｐｒについて二重にヒト化されたマウス、Ｔｓｌｐ、Ｔｓｌｐｒ、及びＩｌ７ｒａについて三重にヒト化されたマウス、又はヒト化されていない野生型マウスなどのマウス）に腹腔内投与する。麻酔をかけたマウスは、２１日目から開始して、４日間、ＰＢＳ中の１５０μｇのＯＶＡを用いて鼻腔内にチャレンジする。マウスを、最後のチャレンジから２４時間後に、血清Ｏｖａ特異的ＩｇＥ及びＯｖａ特異的－ＩｇＧ１、杯細胞化生、及び／又は肺組織好酸球増多ついて分析する。一部の実施形態では、喘息肺の気道に過剰に発現される代表的ムチン遺伝子であるＭｕｃ５ａｃの肺発現が、チャレンジ後に分析され、杯細胞化生の代替エンドポイントとして供され得る。

【0189】

一部の実施形態では、気道炎症は、アレルゲン（例えば、イエダニ抽出物又は“ＨＤＭ”モデル）の鼻腔内投与を１回以上の用量で一定期間行うことによって齧歯類に誘導させてもよく、気道炎症は、粘液蓄積、気管支肺胞洗浄液中の好酸球浸潤細胞、総循環ＩｇＥのレベル、及び／又はマイクロアレイ発現分析によって測定可能な発現プロファイルの変化に基づいて測定されてもよい。候補治療薬の効果は、ｏｖａ－ミョウバンモデル又はＨＤＭモデルのいずれかにおいて、薬剤の投与の結果として気道炎症の程度が軽減されるかどうかを測定することによって決定することができる。気道炎症を誘導するために使用されるアレルゲン及び試験される薬剤は、同時に又は異なる時期に投与できる。一部の実施形態では、アレルゲンは１回以上の投与で齧歯類に与えられ、試験される薬剤は、少なくとも１回のアレルゲン投与が齧歯類になされた後に齧歯類に投与される。

【0190】

一部の実施形態では、アレルギー性疾患は、皮膚炎症又はアトピー性皮膚炎が含まれる。皮膚に損傷を与え、損傷した皮膚をアレルゲン（例えば、細菌毒素又はイエダニ抽出物）に一定期間、１回以上の用量で曝露することによって齧歯類に皮膚炎症を誘導させることができる。薬剤の効果は、皮膚炎症（例えば、ＩｇＥレベル、そう痒症、表皮の肥厚、及びアトピー性皮膚炎の他の典型的な症状を評価することによって決定される）が、薬剤の投与の結果として軽減されるかどうかを測定することによって決定することができる。

【0191】

一部の実施形態では、本明細書に開示される齧歯類動物は、例えば、ヒトがん細胞を標的とする治療剤の有効性を評価するために、Ｔｈ２駆動性がんなどのがんの動物モデルとして使用される。様々な実施形態では、本明細書に開示される齧歯類動物は、ヒトがん細胞が移植され、このようなヒトがん細胞を標的とする薬剤候補が齧歯類動物に投与される。薬剤の治療有効性は次に、薬剤投与後の齧歯類動物中のヒトがん細胞をモニタリングすることによって、例えば、齧歯類動物中のヒトがん細胞の増殖又は転移が、薬剤の投与の結果として阻害されるかどうかを評価することによって、決定される。齧歯類動物への移植に適したヒトがん細胞としては、例えば、とりわけ、乳がん細胞、肺がん細胞、膵がん細胞、結腸がん細胞、黒色腫が挙げられる。非ヒト動物で試験できる薬剤には、小分子化合物、すなわち１５００ｋＤ、１２００ｋＤ、１０００ｋＤ、又は８００ダルトン未満の分子量の化合物、及び大分子化合物（タンパク質など、例えば抗体）の両方を含み、これらはヒト細胞を標的化する（例えば、結合する及び／又は作用する）ことによって、ヒトの疾患及び状態の治療に対する治療効果を意図するものである。

【0192】

本説明は、以下の実施例によって更に説明されるが、これらは決して限定するものとして解釈されるべきではない。全ての引用参考文献（本出願全体で引用される文献参照、発行特許、及び公開された特許出願を含む）の内容は、それらの全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【実施例】

【0193】

以下の実施例は、本明細書に請求される化合物、組成物、物品、デバイス、及び／又は方法がどのようになされて評価されるのかに関して、当業者に完全な開示及び説明を提供するように示されるものであり、単に例示的であることを意図しており、本開示を限定することを意図するものではない。

【0194】

実施例１ ヒト化Ｔｓｌｐマウスの生成
マウスＴｓｌｐ座位は、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術を使用してヒト化された（例えば、米国特許第６，５８６，２５１号及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．（２００３） Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｇｅｎｏｍｅ ｃｏｕｐｌｅ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ－ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２－６５９を参照されたい。両方とも参照により本明細書に組み込まれる）。得られたヒト化Ｔｓｌｐ座位には、マウスＴｓｌｐプロモーター、マウスＴｓｌｐエクソン１、マウスＴｓｌｐエクソン２の一部（エクソン２の５’末端からマウスＴｓｌｐシグナルペプチドの最後のアミノ酸をコードするコドンまで）、ヒトＴＳＬＰエクソン１の一部（成熟ヒトＴＳＬＰタンパク質の第１のアミノ酸をコードするコドンから、エクソン１の３’末端まで）、から、ヒトＴＳＬＰエクソン４における終止コドンまで、その後にマウスＴｓｌｐ ３’ ＵＴＲ及び下流のマウスゲノム配列が含まれていた。図１Ａ～図１Ｃを参照されたい。

【0195】

マウスＴｓｌｐ座位をヒト化するために、以下のマウス配列及びヒト配列に基づいて標的化核酸構築物を生成した：

【表4】

【表5-1】

【表5-2】

【0196】

標的化核酸構築物は５’から３’まで以下を含有した：
（ｉ）成熟マウスＴｓｌｐタンパク質の第１のアミノ酸をコードする、マウスＴｓｌｐエクソン２のコドンの１１４．３ｋｂ 上流の５’マウス相同アーム、図１Ｂ参照、
（ｉｉ）成熟ヒトＴＳＬＰタンパク質（アミノ酸２９）の第１のアミノ酸をコードするヒトＴＳＬＰエクソン１におけるコドンから始まり、ヒトＴＳＬＰエクソン３の終わり後２５７ｂｐで終わる、「ヒトゲノム断片１」として指定される、１．９ｋｂのヒトＴＳＬＰゲノム配列、図１Ｂ参照、
（ｉｉｉ）ヒトＴＳＬＰのイントロン３に挿入された、４．４ｋｂの「Ｆｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｐｕｒｏ」（ＬｏｘＰ部位に隣接する、ヒトユビキチンプロモーターに作動可能に連結されたピューロマイシン耐性遺伝子）として指定される選択カセット、図１Ｂ参照、
（ｉｖ）ヒトＴＳＬＰエクソン３の終わり後２５８ｂｐから始まり、ヒトＴＳＬＰエクソン４における終止コドンで終わる、「ヒトゲノム断片２」として指定される、２．２ｋｂのヒトＴＳＬＰゲノム配列、図１Ｂ参照、及び
（ｖ）マウスＴｓｌｐエクソン５の３’ＵＴＲ配列及び下流マウスゲノム配列を含む、約６５．３ｋｂの３’マウス相同アーム、図１Ｂ参照。

【0197】

標的化核酸構築物を、Ｆ１Ｈ４マウス胚性幹（ＥＳ）細胞にエレクトロポレーションした。組み込みの成功は、例えば、上記のＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．に記載される対立遺伝子改変（ＭＯＡ）アッセイによって確認された。ヒトＴＳＬＰ配列の存在を検出し、マウスＴｓｌｐ配列の喪失及び／又は保持を確認するためにＭＯＡアッセイに使用されるプライマー及びプローブを表６に示し、それらの位置を図１Ｂに示す。

【表6-1】

【表6-2】

【0198】

適正に標的化されたＥＳ細胞クローンを選択した後、ピューロマイシン選択カセットを切除した。ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子のコード配列及びコードされるアミノ酸配列を、それぞれ配列番号６及び配列番号５に記載する。マウスＴｓｌｐ（配列番号１）、ヒトＴＳＬＰ（配列番号３）、及びヒト化Ｔｓｌｐ（配列番号５）タンパク質配列のアラインメントを図１Ｆに提供する。

【0199】

ポジティブに標的化されたＥＳ細胞をドナーＥＳ細胞として使用し、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法により、前桑実胚（８細胞）期のマウス胚に顕微注入した（例えば、ＵＳ ７，５７６，２５９、ＵＳ ７，６５９，４４２、ＵＳ ７，２９４，７５４、及びＵＳ２００８－００７８０００ Ａ１を参照されたい、これらの全てが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ドナーＥＳ細胞を含むマウス胚をインビトロでインキュベートし、次に代理母に移植して、完全にドナーＥＳ細胞に由来するＦ０マウスを産生した。ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子を保有するマウスを、上述のＭＯＡアッセイを使用した遺伝子型決定により同定した。ヒト化Ｔｓｌｐ遺伝子に対してヘテロ接合性のマウスを、ホモ接合性になるまで交配させた。

【0200】

Ｔｓｌｐヒト化に対してホモ接合性のマウスがヒト化Ｔｓｌｐタンパク質を発現したかどうかを決定するために、マウスを安楽死させ、心臓穿刺を介して採血した。血液を血清分離管に収集し、血清を調製した。血清中のヒトＴＳＬＰレベルを、製造業者の指示に従って、Ｈｕｍａｎ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＴＳＬＰ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄシステム、カタログ番号ＤＴＳＬＰ０）を使用して決定した。ＥＬＩＳＡの種特異性を検証するために、１０００ｐｇ／ｍＬの組換えマウスＴｓｌｐ（Ｒ＆Ｄシステムカタログ番号５５５－ＴＳ－０１０）も、陰性対照として使用し（データは示さず）、正常なヒト血清（ＮＨＳ）を陽性対照として使用した。上記のＴｓｌｐヒト化に対してヘテロ接合性のマウスは、血清中で成熟ヒトＴＳＬＰを発現することが見出された（図１Ｇ）。

【0201】

実施例２．ヒト化Ｔｓｌｐｒマウスの生成
マウスＴｓｌｐｒ座位は、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術を使用してヒト化された（例えば、米国特許第６，５８６，２５１号及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．（２００３） Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｇｅｎｏｍｅ ｃｏｕｐｌｅ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ－ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２－６５９を参照されたい。両方とも参照により本明細書に組み込まれる）。得られたヒト化Ｔｓｌｐｒ座位には、マウスＴｓｌｐｒプロモーター、マウスＴｓｌｐｒエクソン１（５’ＵＴＲ、及びマウスＴｓｌｐｒシグナルペプチドをコードする配列及びマウスＴｓｌｐｒ成熟タンパク質の第１の７アミノ酸を含む）、マウスＴｓｌｐｒイントロン１の一部（エクソン２の前に最大３２８ｂｐ）、ヒトＴＳＬＰＲイントロン１の一部（エクソン２の前に９０９ｂｐから始まる）、ヒトＴＳＬＰＲエクソン２からエクソン６の最初の４７ｂｐ（実質的にヒトＴＳＬＰＲ細胞外ドメイン、すなわち、アミノ酸２７から膜貫通ドメインの直前までをコードする）、マウスＴｓｌｐｒエクソン６の４８番目のｂｐから始まりエクソン８まで（マウスＴｓｌｐｒ膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをコードし、マウスＴｓｌｐｒ ３’ＵＴＲを含む）、その後に下流のマウスゲノム配列が含まれていた。図２Ａ～図２Ｃを参照されたい。
［０２０７］ マウスＴｓｌｐｒ座位をヒト化するために、以下の配列情報に基づいて標的化核酸構築物を生成した：

【表7】

【表8】

【0202】

標的化核酸構築物は５’から３’まで以下を含有した：
（ｉ）マウスＴｓｌｐｒエクソン２の前の約２９．１ｋｂ～最大３２８ｂｐの５’マウス相同アーム、図２Ｂ参照、
（ｉｉ）ＬｏｘＰ部位に隣接する、ヒトユビキチンプロモーターに作動可能に連結されたネオマイシン耐性遺伝子を含有する自動欠失選択カセット（「Ｆｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｎｅｏ」）、図２Ｂ参照、
（ｉｉｉ）ヒトＴＳＬＰＲのエクソン２の前の９０９ ｂｐから始まり、エクソン６の最初の４７ ｂｐまでの、実質的にヒトＴＳＬＰＲ細胞外ドメイン、すなわちアミノ酸２７からアミノ酸２３１（ヒトＴＳＬＰＲにおいて：シグナルペプチドを構成するアミノ酸１～２２、及び膜貫通ドメインを構成するアミノ酸２３２～２５２）をコードする、１３７４３ｂｐのヒトＴＳＬＰＲ核酸配列、図２Ｂ参照、及び
（ｉｖ）エクソン６の４８番目のｂｐから始まり、エクソン８までの、マウスＴｓｌｐｒ膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをコードし、マウスＴｓｌｐｒ ３’ ＵＴＲとその後に下流マウスゲノム配列を含む、約１３３．２ｋｂの３’マウス相同アーム、図２Ｂ参照。

【0203】

標的化核酸構築物を、マウス胚性幹（ＥＳ）細胞にエレクトロポレーションした。組み込みの成功は、例えば、上記のＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．に記載される対立遺伝子改変（ＭＯＡ）アッセイによって確認された。ヒトＴＳＬＰＲ配列の存在を検出し、マウスＴｓｌｐｒ配列の喪失及び／又は保持を確認するためにＭＯＡアッセイに使用されるプライマー及びプローブを表９に示し、それらの位置を図２Ｂに示す。適正に標的化されたＥＳ細胞クローンを選択した後、ネオマイシン選択カセットを切除できる。カセットを有する、及び有さない標的（ヒト化）Ｔｓｌｐｒ対立遺伝子のゲノム配列を、配列番号６３及び６４にそれぞれ記載する。ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子のコード配列及びコードされるアミノ酸配列を、それぞれ配列番号２６及び配列番号２５に記載する。マウスＴｓｌｐｒ（配列番号２１）、ヒトＴＳＬＰＲ（配列番号２３）、及びヒト化Ｔｓｌｐｒ（配列番号２５）タンパク質配列のアラインメントを図２Ｆに提供する。

【表9-1】

【表9-2】

【0204】

ポジティブに標的化されたＥＳ細胞をドナーＥＳ細胞として使用し、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法により、前桑実胚（８細胞）期のマウス胚に顕微注入した（例えば、ＵＳ ７，５７６，２５９、ＵＳ ７，６５９，４４２、ＵＳ ７，２９４，７５４、及びＵＳ２００８－００７８０００ Ａ１を参照されたい、これらの全てが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ドナーＥＳ細胞を含むマウス胚をインビトロでインキュベートし、次に代理母に移植して、完全にドナーＥＳ細胞に由来するＦ０マウスを産生した。ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子を保有するマウスを、上述のＭＯＡアッセイを使用した遺伝子型決定により同定した。ヒト化Ｔｓｌｐｒ遺伝子に対してヘテロ接合性のマウスを、ホモ接合性になるまで交配させた。

【0205】

実施例３．ヒト化Ｉｌ７ｒａマウスの生成
マウスＩｌ７ｒａ座位は、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術を使用してヒト化された（例えば、米国特許第６，５８６，２５１号及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｇｅｎｏｍｅ ｃｏｕｐｌｅ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ－ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２－６５９を参照されたい。両者とも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。得られたヒト化Ｉｌ７ｒａ座位には、マウスＩｌ７ｒａプロモーター、マウスＩｌ７ｒａエクソン１の一部（５’ＵＴＲ及び開始コドンから始まる最初の６８ｂｐを含み、マウスＩｌ７ｒａシグナルペプチドとマウスＩｌ７ｒａ成熟タンパク質の最初の３アミノ酸とをコードする）、ヒトＩＬ７ＲＡエクソン１の一部（エクソン１の最後の１４ｂｐ）、ヒトＩＬ７ＲＡイントロン１、ヒトＩＬ７ＲＡエクソン２からエクソン５、ヒトＩＬ７ＲＡイントロン５の一部、マウスＩｌ７ｒａイントロン５の一部、マウスＩｌ７ｒａエクソン６からエクソン８まで（マウスＩｌ７ｒａ細胞外ドメインの最後の２つのアミノ酸、マウスＩｌ７ｒａの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをコードし、マウスＩｌ７ｒａ ３’ＵＴＲを含む）が含まれていた。図３Ａ～図３Ｆを参照されたい。

【0206】

マウスＩｌ７ｒａ座位をヒト化するために、以下の配列情報に基づいて標的化核酸構築物を生成した：

【表10】

【表11】

【0207】

標的化核酸構築物は５’から３’まで以下を含有した：
（ｉ）約４８．８ｋｂまでの５’マウス相同アーム（マウスＩｌ７ｒａ ５’配列からエクソン１の一部まで、すなわち、５’ＵＴＲ及び開始コドンから始まる最初の６８ｂｐ）、図３Ｂ及び図３Ｅ参照、
（ｉｉ）１２６ｂｐのヒトゲノム断片１（配列番号６９）（これにはヒトＩＬ７ＲＡのエクソン１の最後の１４ｂｐ及びイントロン１の最初の１１２ｂｐが含まれる）、図３Ｂ及び図３Ｅ参照、
（ｉｉｉ）ＬｏｘＰ部位に隣接する、ヒトユビキチンプロモーターに作動可能に連結されたハイグロマイシン耐性遺伝子を含有する約５．２ｋｂの自動欠失選択カセット（「Ｆｌｏｘｅｄ ＨＵｂ－Ｈｙｇ」）、図３Ｂ参照、
（ｉｖ）ヒトＩＬ７ＲＡのイントロン１の３’部分、エクソン２からエクソン５及びイントロン５の５’部分を含む、１７１０６ｂｐのヒトゲノム断片２、図３Ｂ参照、及び
（ｖ）マウスＩｌ７ｒａのイントロン５の３’部分、エクソン６からエクソン８まで（マウスＩｌ７ｒａ ３’ ＵＴＲを含む）、その後に下流マウスゲノム配列が含まれる、約１２４．３ｋｂの３’マウス相同、図３Ｂ及び３Ｆ参照。マウスＩｌ７ｒａのエクソン６からエクソン８は、マウスＩｌ７ｒａの細胞外ドメインの最後の２つのアミノ酸（Ｇｌｙ－Ｔｒｐ）、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをコードする。

【0208】

標的化核酸構築物を、Ｆ１Ｈ４マウス胚性幹（ＥＳ）細胞にエレクトロポレーションした。組み込みの成功は、例えば、上記のＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．に記載される対立遺伝子改変（ＭＯＡ）アッセイによって確認された。ヒトＩＬ７ＲＡ配列の存在を検出し、マウスＩｌ７ｒａ配列の喪失及び／又は保持を確認するためにＭＯＡアッセイに使用されるプライマー及びプローブを表１２に記載し、それらの位置を図３Ｂに示す。適正に標的化されたＥＳ細胞クローンを選択した後、ハイグロマイシン選択カセットを切除できる。カセットを有する、及び有さない標的（ヒト化）Ｉｌ７ｒａ対立遺伝子のゲノム配列を、配列番号６５及び６６にそれぞれ記載する。ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子のコード配列及びコードされたアミノ酸配列を、それぞれ配列番号４６及び配列番号４５に記載する。マウスＩｌ７ｒａ（配列番号４１）及びヒトＩＬ７ＲＡ（配列番号４３）タンパク質配列のアラインメントを図３Ｆに提供する。

【表12】

【0209】

ポジティブに標的化されたＥＳ細胞をドナーＥＳ細胞として使用し、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法により、前桑実胚（８細胞）期のマウス胚に顕微注入した（例えば、ＵＳ ７，５７６，２５９、ＵＳ ７，６５９，４４２、ＵＳ ７，２９４，７５４、及びＵＳ２００８－００７８０００ Ａ１を参照されたい、これらの全てが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ドナーＥＳ細胞を含むマウス胚をインビトロでインキュベートし、次に代理母に移植して、完全にドナーＥＳ細胞に由来するＦ０マウスを産生した。ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子を保有するマウスを、上述のＭＯＡアッセイを使用した遺伝子型決定により同定した。ヒト化Ｉｌ７ｒａ遺伝子に対してヘテロ接合性のマウスを、ホモ接合性まで交配させた。

【0210】

実施例４．野生型、二重ヒト化マウス（Ｔｓｌｐ ^{ｈｕ／ｈｕ}／Ｔｓｌｐｒ ^{ｈｕ／ｈｕ}） 及び三重ヒト化マウス（Ｔｓｌｐ ^{ｈｕ／ｈｕ}／Ｔｓｌｐｒ ^{ｈｕ／ｈｕ}／Ｉｌ７ｒａ^{ｈｕ／ｈｕ}）におけるＯｖａ－ミョウバン誘導性２型駆動性炎症（ｔｙｐｅ ２ ｄｒｉｖｅｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）
種々のヒト化マウス系統が、２型駆動性炎症のモデルにおいて同等の病理を有することを確認するために、ＴＳＬＰの役割が以前に報告されているオボアルブミン（ＯＶＡ）／ミョウバン（ａｌｕｍ）誘導性肺炎症モデルが採用された（Ｃｈｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１３；１３１：１８７－２００．ｅ１－８、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。従来の２型炎症のエンドポイント、例えば循環レベルの抗原特異的ＩｇＥ及びＩｇＧ１、肺組織好酸球浸潤及び喘息肺の気道に過剰発現される代表的なムチン遺伝子、Ｍｕｃ５ａｃの肺発現、並びに杯細胞化生（ＧＣＭ）の代替エンドポイント（Ｗｉｌｌｓ－Ｋａｒｐ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９８； ２８２：２２５８－６１、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる）を、マウスの３系統：野生型マウス（ＷＴ）、二重ヒト化マウス（Ｔｓｌｐ^{ｈｕ／ｈｕ}／Ｔｓｌｐｒ^{ｈｕ／ｈｕ}）、及び三重ヒト化マウス（Ｔｓｌｐ^{ｈｕ／ｈｕ}／Ｔｓｌｐｒ^{ｈｕ／ｈｕ}／ＩＬ７Ｒ^{ｈｕ／ｈｕ}）で評価した。Ｔｓｌｐ分子、Ｔｓｌｐｒ分子、及びＩＬ７Ｒ分子の各々に対するヒト化は、それぞれ実施例１、２及び３に記載される通りである。

【0211】

肺は高度に血管形成された器官であるため、好酸球をゲーティングする前に、肺を浸潤する細胞（肺組織）を、肺血管系を循環する細胞（肺循環）とＣＤ４５ベースの血管内標識技術（Ａｎｄｅｒｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ ２０１４；９：２０９－２２、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる）を使用して区別した。予想通り、ＴＳＬＰ／ＯＶＡ投与は、マウス系統全体にわたって同等のレベルで肺組織好酸球の増加を誘導した（図４Ａ）。更に、ＴＳＬＰ／ＯＶＡは、同等のレベルのＭｕｃ５ａｃの肺発現（図４Ｂ）並びに同等レベルのＯｖａ特異的ＩｇＥ（図 ４Ｃ）及びＯｖａ特異的ＩｇＧ１（図 ４Ｄ）の循環レベルを誘導した。

【0212】

方法
Ｏｖａ－ミョウバン誘導性肺炎症。２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）で乳化させた５０μｇのＯＶＡ（グレードＶ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）又は２ｍｇの水酸化アルミニウム単独を、１日目と１４日目にＷＴ Ｂａｌｂ／ｃマウスに腹腔内投与した。麻酔をかけたマウスは、２１日目から開始して、４日間、２０μＬのＰＢＳ中の１５０μｇのＯＶＡ（グレードＩＩＩ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて鼻腔内にチャレンジした。最後のチャレンジの２４時間後にマウスを分析した。

【0213】

研究の終わりに、マウスを屠殺し、肺組織中の好酸球浸潤、リアルタイムｑＰＣＲによる肺遺伝子発現、及び循環血清免疫グロブリンレベルの分析のために血液及び肺を収集した。

【0214】

フローサイトメトリー分析。肺の循環免疫細胞と組織浸潤免疫細胞のフローサイトメトリー分析を可能にするために、屠殺の５分前にマウスに抗ＣＤ４５ ＢＶ６５０抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を静脈内注射して、肺実質に浸潤した細胞を標識されないままにしつつ、血管系にまだある免疫細胞を選択的に標識した。マウス尾側肺葉を消化し、リベラーゼＴＨ（Ｒｏｃｈｅ）及びＤＮａｓｅ Ｉ（Ｒｏｃｈｅ）の溶液を使用して単細胞懸濁液を調製し、続いて機械的解離を行った。次いで、細胞をＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色し、死細胞を除去し、その後、以下に対する抗体で処理した：ＣＤ４５、ＣＤ２６、Ｓｉｇｌｅｃ－Ｆ、Ｌｙ６Ｇ、Ｌｙ６Ｃ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、ＳＩＲＰα、ＣＤ２３、ＣＤ１２７、Ｓｃａ－１、ＣＤ４４、ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲｂ、ＣＤ６９ ＣＤ６２Ｌ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；ＣＤ６４、ＸＣＲ１、Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ３０１ｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）；ＭｅｒＴＫ、ＳＴ２（（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。試料は、ＨＴＳアタッチメント（ＢＤ）を使用する、ＬＳＲ ＦｏｒｔｅｓｓａＸ－２０又は ＦＡＣＳｙｍｐｈｏｎｙ ｃｅｌｌアナライザーで取得した。ＦｌｏｗＪｏｖ１０ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢＤ）を使用してデータ分析を行った。

【0215】

血清ＩｇＥ及び抗原特異的ＩｇＥ又はＩｇＧ１の測定。全血をＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ ＳＳＴ血清チューブに収集し、４℃、１５，０００ｇで１０分間遠心分離することによってペレット化した。血清サンプルを使用して濃度を決定した：ＩｇＥサンドイッチＥＬＩＳＡ ＯｐｔＥＩＡキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）による総ＩｇＥ濃度、間接ＥＬＩＳＡ（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ社）による総抗Ｏｖａ ＩｇＥ及び抗Ｏｖａ ＩｇＧ１濃度、サンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ社）による総抗ＨＤＭ ＩｇＥ、及び社内サンドイッチＥＬＩＳＡによる総抗ＨＤＭ ＩｇＧ１力価。全てのＥＬＩＳＡキットについて、製造業者の指示に従った。

【0216】

Ｍｕｃ５ａｃの測定。肺Ｍｕｃ５ａｃ遺伝子発現は、リアルタイムｑＰＣＲによって採取された肺組織で検出され、ハウスキーピング遺伝子対して正規化された。簡潔に述べると、試験の最後に、マウスを放血させ、各マウスから右肺の副葉を取り出し、その後４００μＬのＲＮＡを含有するチューブに入れ、－２０℃で保存した。全ての試料をＴＲＩｚｏｌ中でホモジナイズし、相分離にクロロホルムを使用した。総ＲＮＡを含有する水相を、製造業者の仕様書に従って、Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによるＡｍｂｉｏｎ）用のＭａｇＭＡＸ（商標）－９６を使用して精製した。ゲノムＤＮＡを、ＲＮａｓｅ－Ｆｒｅｅ ＤＮａｓｅ Ｓｅｔ（Ｑｉａｇｅｎ社）を使用して除去した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＶＩＬＯ（商標）Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによるＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ）を使用して、ｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ｃＤＮＡを２ｎｇ／ｕＬに希釈し、１０ｎｇ ｃＤＮＡを、ＡＢＩ ７９００ＨＴ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してＳｅｎｓｉＦＡＳＴ Ｐｒｏｂｅ Ｈｉ－ＲＯＸ（Ｍｅｒｉｄｉａｎ）により増幅した。内部標準のハウスキーピング遺伝子を使用して、ｃＤＮＡインプットの差異を標準化した。対照マウスに対する肺組織ｍＲＮＡ発現レベルの倍率変化を測定し、ハウスキーピングｍＲＮＡ発現に対して表した。

【表13】

【0217】

結論
Ｏｖａ－ミョウバンモデルは、肺好酸球浸潤、肺遺伝子発現分析、及び循環抗体抗体レベルの分析に基づき、二重ヒト化マウス（Ｔｓｌｐ^{ｈｕ／ｈｕ}／Ｔｓｌｐｒ^{ｈｕ／ｈｕ}）及び三重ヒト化マウス（Ｔｓｌｐ^{ｈｕ／ｈｕ}／Ｔｓｌｐｒ^{ｈｕ／ｈｕ}／Ｉｌ７ｒａ^{ｈｕ／ｈｕ}）において、同程度のレベルの２型駆動性炎症を誘導した。

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図1-4】

【図1-5】

【図1-6】

【図1-7】

【図2-1】

【図2-2】

【図2-3】

【図2-4】

【図2-5】

【図2-6】

【図2-7】

【図3-1】

【図3-2】

【図3-3】

【図3-4】

【図3-5】

【図3-6】

【図3-7】

【図4-1】

【図4-2】

【図4-3】

【図4-4】

【図4-5】

【配列表】

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【国際調査報告】