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▶ クレージュ メディカル カンパニー，リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-09
(54)【発明の名称】移植拒絶反応に抵抗する細胞及び方法
(51)【国際特許分類】
C12N 5/10 20060101AFI20231226BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20231226BHJP
C12N 5/078 20100101ALI20231226BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20231226BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20231226BHJP
A61K 35/15 20150101ALI20231226BHJP
A61K 35/545 20150101ALI20231226BHJP
C07K 19/00 20060101ALN20231226BHJP
C07K 14/705 20060101ALN20231226BHJP
C07K 16/18 20060101ALN20231226BHJP
C07K 14/725 20060101ALN20231226BHJP
【ＦＩ】
C12N5/10 ZNA
C12N5/0783
C12N5/078
A61K35/12
A61K35/17 Z
A61K35/15 Z
A61K35/545
C07K19/00
C07K14/705
C07K16/18
C07K14/725
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021577705
(86)(22)【出願日】2020-06-29
(85)【翻訳文提出日】2022-02-25
(86)【国際出願番号】 CN2020098930
(87)【国際公開番号】W WO2020259707
(87)【国際公開日】2020-12-30
(31)【優先権主張番号】201910809425.X
(32)【優先日】2019-08-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522072507
【氏名又は名称】クレージュ メディカル カンパニー，リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＣＲＡＧＥ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯ．，ＬＩＭＩＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】Ｆｌａｔ／ＲＭ Ａ １２／Ｆ，ＺＪ ３００，３００ Ｌｏｃｋ ｈａｒｔ Ｒｏａｄ，Ｗａｎ Ｃｈａｉ，Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】李 宗海
(72)【発明者】
【氏名】廖 朝暉
【テーマコード（参考）】
4B065
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA94X
4B065AA94Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA25
4C087AA01
4C087BB37
4C087BB64
4C087BB65
4C087CA04
4C087CA12
4C087NA14
4C087ZB07
4H045BA10
4H045BA41
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
移植免疫拒絶に抵抗する細胞に関する。前記細胞は、宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができる第１のタンパク質を発現する。好ましくは、前記細胞は、宿主の免疫エフェクター細胞に対して阻害または殺傷機能を有する。また、移植免疫拒絶を予防または調節するための方法、および外因性細胞に対するＮＫ細胞の攻撃を予防または調節するための方法に関する。
【選択図】 なし
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができる第１のタンパク質を発現し、好ましくは、宿主の免疫エフェクター細胞に対して阻害または殺傷機能を有することを特徴とする、移植免疫拒絶に抵抗する細胞。
【請求項2】
前記細胞が免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞の機能を有する人工的に改変された細胞であることを特徴とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項3】
前記細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、ＣＩＫ細胞、および幹細胞に由来する免疫エフェクター細胞から選択され、好ましくは、前記細胞はＴ細胞であり、
より好ましくは、前記第１のタンパク質はキメラ受容体であることを特徴とする、請求項１または２に記載の細胞。
【請求項4】
前記細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体またはＴ細胞受容体であることを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項5】
前記細胞がＭＨＣを発現しないか、または前記細胞によって内因的に発現されるＭＨＣ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＭＨＣ遺伝子が、ＭＨＣクラスＩ分子の遺伝子であることを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項6】
前記細胞がＨＬＡを発現しないか、または前記細胞よって内因的に発現されるＨＬＡ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子であることを特徴とする、請求項５に記載の細胞。
【請求項7】
前記移植免疫拒絶に抵抗することは、宿主のＮＫ細胞からの攻撃に抵抗することか、または前記第１のタンパク質が宿主のＮＫ細胞を認識できることであり、好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上を特異的に認識でき、
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できることを特徴とする、請求項１～６のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項8】
前記第１のタンパク質は、宿主のＮＫ細胞を認識できる抗体を含み、好ましくは、前記抗体はＮＫＧ２Ａを認識でき、
さらに好ましくは、前記抗体は、配列番号１０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１２に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１３に示されるＬＣＤＲ１、配列番号１４に示されるＬＣＤＲ２、配列番号１５に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、前記抗体は、配列番号１に記載されている重鎖可変領域または配列番号２に記載されている軽鎖可変領域を含むことを特徴とする、請求項７に記載の細胞。
【請求項9】
前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、Ｂ２Ｍのうちの１つ以上から選択されるものであり、好ましくは、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子はＢ２Ｍであることを特徴とする、請求項８に記載の細胞。
【請求項10】
前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択されることを特徴とする、請求項３または４に記載の細胞。
【請求項11】
前記第１のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、宿主の免疫エフェクター細胞に対する阻害または殺傷を媒介することを特徴とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項12】
前記第２のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、腫瘍または病原体に対する阻害または殺傷を媒介することを特徴とする、請求項４に記載の細胞。
【請求項13】
前記細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子と内因性ＴＣＲ遺伝子によってサイレンシングされたＴ細胞であり、好ましくは、前記細胞は、Ｂ２ＭとＴＣＲ遺伝子によってサイレンシングされたＴ細胞であることを特徴とする、請求項６に記載の細胞。
【請求項14】
前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡまたはＣＤ１９を特異的に認識でき、好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含むことを特徴とする、請求項４に記載の細胞。
【請求項15】
遺伝子が遺伝子編集技術によりサイレンシングされたことを特徴とする、請求項５、６または１３に記載の細胞。
【請求項16】
前記第１のタンパク質は、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する抗体、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、好ましくは宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体とは、連結ペプチドによって連結され、
さらに好ましくは、前記第１のタンパク質は、配列番号９に示される配列を有することを特徴とする、請求項１０に記載の細胞。
【請求項17】
移植免疫拒絶に抵抗する細胞であって、前記細胞が、宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができるＴ細胞受容体を有するＴ細胞であり、好ましくは、前記細胞が宿主の免疫エフェクター細胞に対して阻害または殺傷機能を有することを特徴とする、細胞。
【請求項18】
前記細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体であることを特徴とする、請求項１７に記載の細胞。
【請求項19】
前記細胞がＭＨＣを発現しないか、または前記細胞によって内因的に発現されるＭＨＣ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＭＨＣ遺伝子が、ＭＨＣクラスＩ分子の遺伝子であることを特徴とする、請求項１７または１８項に記載の細胞。
【請求項20】
前記細胞がＨＬＡを発現しないか、または前記細胞よって内因的に発現されるＨＬＡ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子であることを特徴とする、請求項１９に記載の細胞。
【請求項21】
前記Ｔ細胞受容体は、宿主のＮＫ細胞を認識することができ、好ましくは、前記Ｔ細胞受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上を特異的に認識でき、
より好ましくは、前記Ｔ細胞受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６であるＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できることを特徴とする、請求項１７～２０のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項22】
前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、Ｂ２Ｍのうちの１つ以上から選択されるものであり、好ましくは、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子はＢ２Ｍであることを特徴とする、請求項２０に記載の細胞。
【請求項23】
前記第２のタンパク質はキメラ受容体であり、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択され、第２のタンパク質を含むキメラ受容体は、第２のタンパク質、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡまたはＣＤ１９を特異的に認識でき、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含むことを特徴とする、請求項１８に記載の細胞。
【請求項24】
請求項１～２３のいずれか１項に記載の細胞を投与することを特徴とする、移植免疫拒絶を予防または調節する方法。
【請求項25】
外因性細胞に対するＮＫ細胞の攻撃を予防または調節する方法であって、ＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現する免疫エフェクター細胞を投与し、任意選択で、前記外因性細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞、または操作されたＴ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞であることを特徴とする、前記方法。
【請求項26】
前記外因性細胞は免疫エフェクター細胞であり、好ましくは、前記外因性細胞は第２の受容体を発現することを特徴とする、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記第２の受容体は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体であり、好ましくは、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択されることを特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質が認識する抗原は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上であり、より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６であるＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できることを特徴とする、請求項２５に記載の方法。
【請求項29】
前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、ＣＩＫ細胞、および幹細胞に由来する免疫エフェクター細胞を含むことを特徴とする、請求項２５に記載の方法。
【請求項30】
外因性免疫エフェクター細胞に対するＮＫ細胞の攻撃を予防または調節する方法であって、前記外因性免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現し、好ましくは、前記外因性免疫エフェクター細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子を含まない細胞、または内因性のＨＬＡ－Ｉ遺伝子がサイレンシングされた細胞であり、
より好ましくは、前記外因性免疫エフェクター細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子を含まない細胞、またはＢ２Ｍ遺伝子がサイレンシングされた細胞であることを特徴とする、前記方法。
【請求項31】
前記外因性免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞であり、好ましくは、ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体であることを特徴とする、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質が認識する抗原は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上であり、より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６であるＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できることを特徴とする、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択されることを特徴とする、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記外因性免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体であり、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択されることを特徴とする、請求項３０～３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項35】
前記第１のタンパク質は、ＮＫ細胞を認識する抗体および腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体を含むキメラ抗原受容体、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）であることを特徴とする、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
前記第１のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、宿主の免疫エフェクター細胞に対する阻害または殺傷を媒介することを特徴とする、請求項３０に記載の細胞。
【請求項37】
前記第２のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、腫瘍または病原体に対する阻害または殺傷を媒介することを特徴とする、請求項３４に記載の細胞。
【請求項38】
前記第１のタンパク質は、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する抗体、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、好ましくは宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体とは、連結ペプチドによって連結され、
さらに好ましくは、前記第１のタンパク質は、配列番号９に示される配列を有することを特徴とする、請求項３０に記載の細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、移植免疫拒絶に抵抗する機能を有する細胞に関する。また、移植免疫拒絶に抵抗する方法、特にＮＫ細胞の免疫拒絶に抵抗する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ドナーとレシピエントとの間の免疫遺伝学的差異により、外来源ドナーが移植されると、外来源移植片として、ドナーはレシピエントの体内の免疫細胞によって認識および攻撃され、それによって外来源移植片を阻害または排除し、宿主対移植片反応（ＨＶＧＲ）が起こる可能性がある。移植細胞内のＭＨＣ分子をノックアウトすることにより、移植片に対する宿主Ｔ細胞の拒絶反応に効果的に抵抗することができるが、宿主内の他の免疫細胞の拒絶反応を引き起こす可能性がある。たとえば、同種異系細胞移植では、同種異系細胞のＭＨＣ－Ｉ分子が欠落していると、宿主内のＮＫ細胞の拒絶反応を引き起こし、同種異系細胞の排除が促進される（Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１７；３５（８）：７６５－７７２．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．３８６０）。したがって、宿主ＮＫ細胞の免疫拒絶反応を効果的に防ぐ方法は、同種異系細胞移植療法の開発にとって非常に重要である。
【発明の開示】
【0003】
本発明の目的は、移植免疫拒絶に抵抗する細胞、および阻害・拒絶に抵抗する方法を提供することにある。
【0004】
本発明によって提供される技術案には、以下が含まれる。
【0005】
本発明の第１の態様では、宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができる第１のタンパク質を発現し、好ましくは、宿主の免疫エフェクター細胞に対して阻害または殺傷機能を有する、細胞が提供される。
【0006】
好ましい一実施形態では、前記細胞は、免疫エフェクター細胞、または免疫エフェクター細胞の機能を有する人工的に改変された細胞である。
【0007】
好ましい一実施形態では、前記細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、ＣＩＫ細胞、および幹細胞に由来する免疫エフェクター細胞から選択され、
好ましくは、前記細胞はＴ細胞であり、
より好ましくは、前記第１のタンパク質はキメラ受容体である。
好ましくは、前記細胞はＴ細胞であり、
より好ましくは、前記第１のタンパク質はキメラ受容体である。
【0008】
好ましい一実施形態では、前記細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体またはＴ細胞受容体である。
【0009】
好ましい一実施形態では、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記タンパク質の活性化は、前記の第２の受容体によって調節される。
【0010】
好ましい一実施形態では、前記第２の受容体の活性化は、宿主の免疫エフェクター細胞を認識するタンパク質によって調節される。
【0011】
好ましい一実施形態では、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記タンパク質と第２の受容体の活性化は、互いに影響しない。
【0012】
好ましい一実施形態では、前記細胞がＭＨＣを発現しないか、または前記細胞によって内因的に発現されるＭＨＣ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＭＨＣ遺伝子が、ＭＨＣクラスＩ分子の遺伝子である。
【0013】
好ましい一実施形態では、前記細胞がＨＬＡを発現しないか、または前記細胞よって内因的に発現されるＨＬＡ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子である。
【0014】
好ましい一実施形態では、前記抗移植免疫拒絶は、宿主のＮＫ細胞からの攻撃に抵抗することか、または前記第１のタンパク質が宿主のＮＫ細胞を認識できることであり、
好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上を特異的に認識でき、
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上を特異的に認識でき、
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
【0015】
好ましい一実施形態では、前記第１のタンパク質は、宿主のＮＫ細胞を認識できる抗体を含み、
好ましくは、前記抗体はＮＫＧ２Ａを認識でき、
さらに好ましくは、前記抗体は、配列番号１０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１２に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１３に示されるＬＣＤＲ１、配列番号１４に示されるＬＣＤＲ２、配列番号１５に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、前記抗体は、配列番号１に記載されている重鎖可変領域または配列番号２に記載されている軽鎖可変領域を含む。
好ましくは、前記抗体はＮＫＧ２Ａを認識でき、
さらに好ましくは、前記抗体は、配列番号１０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１２に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１３に示されるＬＣＤＲ１、配列番号１４に示されるＬＣＤＲ２、配列番号１５に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、前記抗体は、配列番号１に記載されている重鎖可変領域または配列番号２に記載されている軽鎖可変領域を含む。
【0016】
好ましい一実施形態では、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、Ｂ２Ｍのうちの１つ以上から選択されるものであり、好ましくは、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子はＢ２Ｍである。
【0017】
好ましい一実施形態では、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択される。
【0018】
好ましい一実施形態では、前記第１のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、
好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、宿主の免疫エフェクター細胞に対する阻害または殺傷を媒介する。
好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、宿主の免疫エフェクター細胞に対する阻害または殺傷を媒介する。
【0019】
好ましい一実施形態では、前記第２のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、
好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、腫瘍または病原体に対する阻害または殺傷を媒介する。
好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、腫瘍または病原体に対する阻害または殺傷を媒介する。
【0020】
好ましい一実施形態では、前記細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子と内因性ＴＣＲ遺伝子がサイレンシングされたＴ細胞であり、
好ましくは、前記細胞は、Ｂ２ＭとＴＣＲ遺伝子がサイレンシングされたＴ細胞である。
好ましくは、前記細胞は、Ｂ２ＭとＴＣＲ遺伝子がサイレンシングされたＴ細胞である。
【0021】
好ましい一実施形態では、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡまたはＣＤ１９を特異的に認識でき、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含む。
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含む。
【0022】
好ましい一実施形態では、遺伝子編集技術を使用して遺伝子をサイレンシングする。
【0023】
好ましくは、前記遺伝子編集技術は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術、人工ジンクフィンガーヌクレアーゼ（Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ，ＺＦＮ）技術、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ－ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ，ＴＡＬＥ）技術、またはＴＡＬＥ－ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術から選択され、
より好ましくは、前記遺伝子編集技術はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術である。
より好ましくは、前記遺伝子編集技術はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術である。
【0024】
好ましい一実施形態では、前記第１のタンパク質は、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する抗体、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、
好ましくは宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体とは、連結ペプチドによって連結され、
さらに好ましくは、前記第１のタンパク質は、配列番号９に示される配列を有する。
好ましくは宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体とは、連結ペプチドによって連結され、
さらに好ましくは、前記第１のタンパク質は、配列番号９に示される配列を有する。
【0025】
好ましい一実施形態では、第１のタンパク質と第２のタンパク質は、１つのキメラ受容体にあり得る。すなわち、好ましくは、前記キメラ受容体は、順に連結された、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する抗体（第１のタンパク質）、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体（第２のタンパク質）、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、または、
前記キメラ受容体は、順に連結された、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体（第２のタンパク質）、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する抗体（第１のタンパク質）、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、
好ましくは、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体（第１のタンパク質）と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体（第２のタンパク質）とは、連結ペプチドによって連結される。
前記キメラ受容体は、順に連結された、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体（第２のタンパク質）、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する抗体（第１のタンパク質）、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、
好ましくは、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体（第１のタンパク質）と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体（第２のタンパク質）とは、連結ペプチドによって連結される。
【0026】
本発明の第２の態様では、移植免疫拒絶に抵抗する細胞であって、前記細胞が、宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができるＴ細胞受容体を有するＴ細胞であり、好ましくは、前記細胞が宿主の免疫エフェクター細胞に対して阻害または殺傷機能を有する、細胞が提供される。
【0027】
好ましい一実施形態では、前記細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体である。
【0028】
好ましい一実施形態では、前記細胞がＭＨＣを発現しないか、または前記細胞によって内因的に発現されるＭＨＣ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＭＨＣ遺伝子が、ＭＨＣクラスＩ分子の遺伝子である。
【0029】
好ましい一実施形態では、前記細胞がＨＬＡを発現しないか、または前記細胞よって内因的に発現されるＨＬＡ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子である。
【0030】
好ましい一実施形態では、前記Ｔ細胞受容体は、宿主のＮＫ細胞を認識することができ、
好ましくは、前記Ｔ細胞受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上を特異的に認識でき、
より好ましくは、前記Ｔ細胞受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
好ましくは、前記Ｔ細胞受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上を特異的に認識でき、
より好ましくは、前記Ｔ細胞受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
【0031】
好ましい一実施形態では、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、Ｂ２Ｍのうちの１つ以上から選択されるものであり、好ましくは、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子はＢ２Ｍである。
【0032】
好ましい一実施形態では、前記第２のタンパク質はキメラ受容体であり、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択され、第２のタンパク質を含むキメラ受容体は、第２のタンパク質、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡまたはＣＤ１９を特異的に認識でき、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含む。
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡまたはＣＤ１９を特異的に認識でき、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含む。
【0033】
好ましい一実施形態では、遺伝子編集技術を使用して遺伝子をサイレンシングする。
【0034】
好ましくは、前記遺伝子編集技術は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術、人工ジンクフィンガーヌクレアーゼ（Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ，ＺＦＮ）技術、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ－ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ，ＴＡＬＥ）技術、またはＴＡＬＥ－ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術から選択され、
より好ましくは、前記遺伝子編集技術はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術である。
より好ましくは、前記遺伝子編集技術はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術である。
【0035】
本発明の第３の態様では、本発明の第１の態様または第２の態様のいずれかに記載の細胞を投与することを含む、移植免疫拒絶を予防または調節する方法が提供される。
【0036】
本発明の第４の態様では、外因性細胞に対するＮＫ細胞の攻撃を予防または調節する方法であって、ＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現している免疫エフェクター細胞を投与する方法が提供され、
任意選択で、前記外因性細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞、または操作されたＴ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞であり、
任意選択で、前記外因性細胞を投与する前、投与した後、または前記外因性細胞の投与と同時に前記免疫エフェクター細胞を投与する。
任意選択で、前記外因性細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞、または操作されたＴ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞であり、
任意選択で、前記外因性細胞を投与する前、投与した後、または前記外因性細胞の投与と同時に前記免疫エフェクター細胞を投与する。
【0037】
好ましい一実施形態では、前記外因性細胞は免疫エフェクター細胞であり、好ましくは、前記外因性細胞は第２の受容体を発現している。
【0038】
好ましい一実施形態では、前記第２の受容体は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体であり、
好ましくは、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択される。
好ましくは、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択される。
【0039】
好ましい一実施形態では、ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質が認識する抗原は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上であり、
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
【0040】
好ましい一実施形態では、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、Ｂ２Ｍのうちの１つ以上から選択されるものであり、好ましくは、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子はＢ２Ｍである。
【0041】
好ましい一実施形態では、前記第２のタンパク質は、キメラ受容体であり、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択され、第２のタンパク質を含むキメラ受容体は、第２のタンパク質、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡまたはＣＤ１９を特異的に認識でき、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含む。
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡまたはＣＤ１９を特異的に認識でき、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含む。
【0042】
好ましい一実施形態では、本発明の第１の態様または第２の態様のいずれかに記載の細胞を投与する。
【0043】
本発明の第５の態様では、ＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現している免疫エフェクター細胞を投与する、外因性細胞に対するＮＫ細胞の攻撃を予防または調節する方法であって、
任意選択で、前記外因性細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞、または操作されたＴ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞である、前記方法が提供される。
任意選択で、前記外因性細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞、または操作されたＴ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞である、前記方法が提供される。
【0044】
好ましい一実施形態では、前記外因性細胞は免疫エフェクター細胞であり、好ましくは、前記外因性細胞は第２の受容体を発現している。
【0045】
好ましい一実施形態では、前記第２の受容体は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体であり、
好ましくは、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択される。
好ましくは、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択される。
【0046】
好ましい一実施形態では、ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質が認識する抗原は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上であり、
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
【0047】
好ましい一実施形態では、前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、ＣＩＫ細胞、および幹細胞に由来する免疫エフェクター細胞を含む。
【0048】
本発明の第６の態様では、ＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現する外因性免疫エフェクター細胞に対するＮＫ細胞の攻撃を予防または調節する方法であって、
好ましくは、前記外因性免疫エフェクター細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子を含まない細胞、または内因性のＨＬＡ－Ｉ遺伝子がサイレンシングされた細胞であり、
より好ましくは、前記外因性免疫エフェクター細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子を含まない細胞、またはＢ２Ｍ遺伝子がサイレンシングされた細胞である、前記方法が提供される。
好ましくは、前記外因性免疫エフェクター細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子を含まない細胞、または内因性のＨＬＡ－Ｉ遺伝子がサイレンシングされた細胞であり、
より好ましくは、前記外因性免疫エフェクター細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子を含まない細胞、またはＢ２Ｍ遺伝子がサイレンシングされた細胞である、前記方法が提供される。
【0049】
好ましい一実施形態では、前記外因性免疫エフェクター細胞はＴ細胞であり、
好ましくは、ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体である。
好ましくは、ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体である。
【0050】
好ましい一実施形態では、ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質が認識する抗原は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上であり、
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できる。
【0051】
好ましい一実施形態では、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択される。
【0052】
好ましい一実施形態では、前記外因性免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、
好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体であり、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択される。
好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体であり、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択される。
【0053】
好ましい一実施形態では、前記第１のタンパク質は、ＮＫ細胞を認識する抗体および腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体を含むキメラ抗原受容体、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）である。
【0054】
好ましい一実施形態では、前記第１のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、
好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、宿主の免疫エフェクター細胞に対する阻害または殺傷を媒介する。
好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、宿主の免疫エフェクター細胞に対する阻害または殺傷を媒介する。
【0055】
好ましい一実施形態では、前記第２のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、
好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、腫瘍または病原体に対する阻害または殺傷を媒介する。
好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、腫瘍または病原体に対する阻害または殺傷を媒介する。
【0056】
好ましい一実施形態では、前記第１のタンパク質は、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する抗体、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、
好ましくは宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体とは、連結ペプチドによって連結され、
さらに好ましくは、前記第１のタンパク質は、配列番号９に示される配列を有する。
好ましくは宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体とは、連結ペプチドによって連結され、
さらに好ましくは、前記第１のタンパク質は、配列番号９に示される配列を有する。
【図面の簡単な説明】
【0057】
【発明の概要】
【0058】
特に定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、遺伝子治療、生化学、遺伝学、および分子生物学の分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等のすべての方法および材料を、本発明の実施または試験に使用することができ、その中で適切な方法および材料が本明細書に記載されている。本明細書で言及されているすべての刊行物、特許出願、特許、およびその他の参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾する場合は、定義を含む本明細書に準ずる。また、特に明記しない限り、材料、方法、および実施例は例示にすぎず、限定することを意図するものではない。
【0059】
特に明記しない限り、本発明の実施は、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の従来の技術を採用し、これらはすべて本分野の技術的範囲に属する。これらの技術は文献で十分に説明されている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｍ. ＡＵＳＵＢＥＬ，２０００，Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ ｓｏｎ Ｉｎｃ，Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ，ＵＳＡ）；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ，２００１，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ： Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ （Ｍ.Ｊ.Ｇａｉｔｅｄ. ， １９８４）；Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ. Ｕ.Ｓ. Ｐａｔ. Ｎｏ. ４，６８３，１９５；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ （Ｂ. Ｄ. Ｈａｒｒｉｅｓ ＆ Ｓ. Ｊ. Ｈｉｇｇｉｎｓｅｄｓ. １９８４）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ （Ｂ. Ｄ. Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ. Ｊ. Ｈｉｇｇｉｎｓｅｄｓ. １９８４）；Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ （Ｒ. Ｉ. Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ａｌａｎ Ｒ. Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ.，１９８７）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ （ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｂ. Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ （１９８４）；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ （Ｊ. Ａｂｅｌｓｏｎ ａｎｄ Ｍ. Ｓｉｍｏｎ，ｅｄｓ.－ｉｎ－ｃｈｉｅｆ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ.，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、特にＶｏｌｓ.１５４と１５５ （Ｗｕｅｔａｌ. ｅｄｓ.）およびＶｏｌ.１８５，“Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ” （Ｄ. Ｇｏｅｄｄｅｌ，ｅｄ.）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ （Ｊ. Ｈ. Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ. Ｐ. Ｃａｌｏｓｅｄｓ.，１９８７，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ.， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）；Ｈａｎｄ ｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ－ＩＶ （Ｄ. Ｍ. Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ. Ｃ. Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ.，１９８６）；およびＭａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ.Ｙ.，１９８６）を参照できる。
【0060】
本開示では、保護を求める主題の各方面はいずれも範囲の形で表される。範囲の形での説明は、単に便宜上および簡潔にするためのものであり、保護を求める主題の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。よって、範囲の説明は、あらゆる可能なサブ範囲および当該範囲内の個々の値を具体的に開示していると見なすべきである。例えば、値の範囲が提供されている場合、当該範囲の上限と下限の間の全ての中間値、および当該範囲内の任意の他の、または中間値は、いずれも保護を求める主題の範囲に含まれ、その範囲の上下限も保護を求める主題の範囲に含まれる。それらのより小さい範囲の上下限は、そのより小さい範囲に独立して含まれてもよく、範囲の上下限が明確に除外されない限り、それらはまた、保護を求める主題の範囲に属す。設定範囲に１つまたは２つの制限値が含まれる場合、保護を求める主題も、制限値の１つまたは２つが除外された範囲を含む。これは、範囲の広さに関係なく適用される。
【0061】
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者に容易に知られている各値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」で修飾されている値またはパラメータは、当該値またはパラメータ自体を指す実施形態を含む（しかも説明する）。例えば、「約Ｘ」という記載は、「Ｘ」に関する説明を含む。例えば、「約」または「含む」は、当該分野での実際の標準偏差に従って、１以内または１を超えることを意味することができる。あるいは、「約」または「含む」は、最大１０％（すなわち、±１０％）の範囲を意味することができる。例えば、約５μＭは、４．５μＭから５．５μＭまでの任意の数を含むことができる。特定の値または組成が出願および特許出願の範囲で提供される場合、特に明記しない限り、「約」または「含む」は、当該特定の値または組成の許容誤差範囲内にあるべきである。
【0062】
本明細書に記載の任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲または整数範囲は、特に明記しない限り、当該範囲内の任意の整数、および適切な場合、その分数（例えば、整数の１０分の１および１００分の１）の数値を含むと理解されるべきである。
【0063】
本発明をよりよく理解するために、関連する用語について以下のように定義する。
【0064】
「移植免疫拒絶」という用語は、宿主が同種異系の組織、臓器、または細胞などの移植片を移植した後、外来源移植片を宿主の免疫系によって「外来成分」として認識し、移植片に対して攻撃、破壊、および除去などの免疫学的応答を開始することを意味する。
【0065】
「移植片」という用語は、宿主以外の個体に由来し、宿主に移植するために使用される生物学的材料または調製物を指す。移植片は、哺乳動物源など、任意の動物源から、好ましくはヒトからのものであり得る。いくつかの実施形態において、前記の移植片は、宿主に由来し得、例えば、宿主からの細胞は、インビトロで培養されるか、または改変されて宿主に再び移植される。いくつかの実施形態において、前記の移植片は、同種異系の他の個体に由来し得、例えば、他のヒトからの細胞は、インビトロで培養されるか、または改変されて宿主に移植される。いくつかの実施形態において、前記の移植片は、他の種（マウス、ブタ、およびサルなど）からの臓器をヒトに移植するなど、異種の個体に由来し得る。
【0066】
「細胞」という用語および他の文法的形態は、ヒトまたは非ヒト動物由来の細胞を指すことができる。
【0067】
「宿主」という用語は、移植片移植を受けるレシピエントを指し、いくつかの実施形態において、それは、外来細胞移植を受けるヒトなどの個体であり得る。
【0068】
「免疫エフェクター細胞」という用語は、免疫応答に関与し、免疫効果を生み出す細胞であり、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞、ＣＩＫ細胞、マクロファージ、マスト細胞などが挙げられる。いくつかの実施形態において、前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞である。いくつかの実施形態において、前記Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞、異種Ｔ細胞、または同種異系Ｔ細胞であり得る。いくつかの実施形態において、前記ＮＫ細胞は、同種異系ＮＫ細胞であり得る。
【0069】
「免疫エフェクター細胞機能を有する人工的に改変された細胞」という用語は、人工的に改変された後または刺激物によって刺激された後、免疫効果を有さない細胞または細胞株が免疫エフェクター細胞機能を獲得した細胞をいう。たとえば、２９３Ｔ細胞は、免疫エフェクター細胞の機能を持たせるように人工的に改変される。たとえば、幹細胞は、免疫エフェクター細胞に分化させるようにインビトロで誘導される。
【0070】
場合によっては、「Ｔ細胞」は骨髄由来の多能性幹細胞であり、胸腺で免疫学的活性を持つ成熟Ｔ細胞に分化して成熟し得る。場合によっては、「Ｔ細胞」は特定の表現型の特徴を有する細胞集団、または異なる表現型の特徴を有する混合細胞集団であり得、例えば、「Ｔ細胞」は、記憶幹細胞様メモリーＴ細胞（ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ－ｌｉｋｅ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ，Ｔｓｃｍ細胞）、中央メモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆ、Ｔｅｆｆ）、制御性Ｔ細胞（ｔｒｅｇｓ）および／またはエフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ）からの少なくとも１つのＴ細胞亜集団を含む細胞であり得る。場合によっては、「Ｔ細胞」は、γδＴ細胞などの特定のサブタイプのＴ細胞であり得る。
【0071】
Ｔ細胞は、ＰＢＭＣ、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍組織を含む複数のソースから獲得できる。場合によっては、ＦｉｃｏｌｌＴＭ単離などの当業者に知られている任意の数の技術を使用して、個体から収集された血液からＴ細胞を取得することができる。一実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシス（成分採血）によって得られる。アフェレーシス製品には通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、その他の有核白血球、赤血球、血小板などのリンパ球が含まれている。一実施形態では、アフェレーシス収集によって収集された細胞を洗浄して血漿分子を除去し、その後の処理ステップのために適切な緩衝液または培地に入れることができる。あるいは、細胞は、健康なドナー、がんと診断された患者に由来することができる。
【0072】
「ＭＨＣ」という用語は、生体適合性複合体の抗原をコードするすべての遺伝子グループの総称である組織適合性複合体である。ＭＨＣ抗原は、すべての高等脊椎動物の組織で発現され、ヒト細胞ではＨＬＡ抗原と呼ばれ、移植反応において重要な役割を果たし、拒絶反応は、移植された組織の表面にある組織適合性抗原に応答するＴ細胞によって媒介される。ＭＨＣタンパク質はＴ細胞刺激において重要な役割を果たし、抗原提示細胞（通常は樹状細胞）は、ＭＨＣの細胞表面に外来タンパク質の分解産物に属するペプチドを表示し、共刺激シグナルの存在下で、Ｔ細胞が活性化され、同じペプチド／ＭＨＣ複合体を表示する標的細胞に作用する。たとえば、刺激されたＴヘルパー細胞は、ＭＨＣに結合した抗原を表示するマクロファージを標的にするか、または、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）は、外来ウイルスペプチドを表示するウイルス感染細胞に作用する。ＭＨＣ抗原は、ＮＨＣクラスＩ抗原とＭＨＣクラスＩＩ抗原に分けられる。
【0073】
「ヒト白血球抗原」（Ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ，ＨＬＡ）という用語は、染色体６（６ｐ２１．３１）に位置する、ヒト主要組織適合遺伝子複合体のコード遺伝子であり、ヒト免疫系の機能に密接に関連している。ＨＬＡには、クラスＩ、クラスＩＩ、およびクラスＩＩＩの遺伝子部分が含まれる。ＨＬＡのクラスＩおよびクラスＩＩ遺伝子によって発現される抗原は細胞膜上にあり、ＭＨＣ－Ｉ（ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ部位によるコーディング）およびＭＨＣ－ＩＩ（ＨＬＡ－Ｄ領域によるコーディング）である。ＨＬＡクラスＩは、体のほぼすべての細胞の表面に分布し、重鎖（α鎖）とβ２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）からなるヘテロダイマーであり、クラスＩＩは、主にマクロファージとＢリンパ球の表面にある糖タンパク質である。
【0074】
「Ｂ２Ｍ」という用語は、ＭＨＣクラスＩ分子の軽鎖である、Ｂ２Ｍとも呼ばれるβ－２ミクログロブリンを指す。ヒトでは、Ｂ２Ｍは染色体１５にあるｂ２ｍ遺伝子によってコードされ、染色体６に遺伝子クラスターとして位置付ける他のＭＨＣ遺伝子と相対する。Ｂ２Ｍ遺伝子の変異により、正常な細胞表面のＭＨＣ Ｉ発現を欠くマウスからの造血移植片は、正常なマウスのＮＫ細胞によって拒絶され、これは、ＭＨＣ Ｉ分子の発現不良により、細胞が宿主の免疫系によって拒絶されやすくなることを示している（Ｂｉｘ ｅｔ ａｌ.１９９１）。
【0075】
「キメラ受容体」という用語は、すなわち、異なる供給源からのＤＮＡ断片またはタンパク質対応ｃＤＮＡを遺伝子組換え技術によって連結して形成される融合分子であり、細胞外領域、膜貫通領域、および細胞内領域を含む。キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）を含むが、これらに限定されない。
【0076】
「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）という用語は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、刺激分子及び／または共刺激分子の機能的シグナル伝達ドメインを含む。一態様では、刺激分子はＴ細胞受容体複合体と結合したζ鎖である。一態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、および／またはＣＤ２８などの１つ以上の共刺激分子の機能的シグナル伝達ドメインをさらに含む。
【0077】
「Ｔ細胞受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＴＣＲ）」という用語は、クラシックなＴＣＲ受容体と最適化されたＴＣＲ受容体を含み、Ｔ細胞による特異的主要な組織適合性複合体（ＭＨＣ）制限ペプチド抗原の認識を仲介する。クラシックなＴＣＲ受容体は、αとβの２つのペプチド鎖からなり、各ペプチド鎖はさらに、可変領域（Ｖ領域）、定常領域（Ｃ領域）、膜貫通領域、及び細胞質領域などに分けられる。その抗原特異性はＶ領域に存在する。Ｖ領域（Ｖα、Ｖβ）にはそれぞれ３つの超可変領域、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３がある。一態様では、クラシックなＴＣＲを発現するＴ細胞は、Ｔ細胞に対する抗原刺激などの方法を使用することにより、標的抗原に対するＴ細胞のＴＣＲの特異性を誘導することができる。
【0078】
「キメラＴ細胞受容体」という用語は、ＴＣＲを構成する様々なポリペプチドに由来する組換えポリペプチドを含み、これは、標的細胞の表面抗原に結合し、通常はＴ細胞表面に共局在する完全なＴＣＲ複合体の他のポリペプチドと相互作用することができる。キメラＴ細胞受容体は、ＴＣＲサブユニットと、ヒトまたはヒト化抗体ドメインで構成される抗原結合ドメインとからなる。ＴＣＲサブユニットには、少なくとも一部のＴＣＲ細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴＣＲ細胞内ドメインの細胞内シグナルドメインの刺激ドメインが含まれる。当該ＴＣＲサブユニットと当該抗体ドメインは効果的に連結されており、ＴＣＲサブユニットの細胞外、膜貫通、および細胞内シグナルドメインはＣＤ３εまたはＣＤ３γに由来し、当該キメラＴ細胞受容体は、Ｔ細胞に発現するＴＣＲに組み込まれる。
【0079】
「Ｔ細胞抗原カプラー（Ｔ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｕｐｌｅｒ、ＴＡＣ）」という用語には、１、一本鎖抗体、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｎｋｙｒｉｎ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＤＡＲＰｉｎ）またはその他のターゲティング基を含む抗原結合ドメイン；２、ＣＤ３に結合する一本鎖抗体により、ＴＡＣ受容体がＴＣＲ受容体に近くなる、細胞外領域ドメイン；３、膜貫通領域とＣＤ４共受容体の細胞内領域の、３つの機能ドメインが含まれる。ここで、細胞内領域は、プロテインキナーゼＬＣＫに連結されており、Ｔ細胞活性化の最初ステップとしてＴＣＲ複合体の免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭｓ）のリン酸化を触媒する。
【0080】
「シグナル伝達ドメイン」という用語は、細胞内で情報を伝達することによって機能するタンパク質の機能部分を指し、セカンドメッセンジャーを生成するか、そのようなメッセンジャーに応答してエフェクターとして作用することにより、確定されたシグナル伝達経路を介して細胞の活性を調節するためである。細胞内シグナル伝達ドメインは、分子のすべての細胞内部分、またはすべての天然の細胞内シグナル伝達ドメイン、またはそれらの機能的断片もしくは誘導体を含み得る。
【0081】
「共刺激分子」という用語は、ＴＣＲ／ＣＤ３などの細胞刺激シグナル分子に結合し、その組み合わせにより、Ｔ細胞の増殖および／または重要な分子のアップレギュレーションまたはダウンレギュレーションをもたらすシグナルを指す。
【0082】
「活性化する」および「活性化させる」という用語は、細胞が休止状態から活性状態に変化するプロセスを指すことができる。このプロセスは、抗原、遷移、および/または機能的活動状態の表現型または遺伝的変化への応答を含むことができる。例えば、「活性化」という用語は、Ｔ細胞の段階的な活性化のプロセスを指すことができる。たとえば、Ｔ細胞は完全に活性化するために少なくとも１つのシグナルを必要とする場合がある。
【0083】
「遺伝子編集」という用語は、特定のＤＮＡフラグメントのノックアウトや追加などを実現するために、ヒトが標的遺伝子を「編集」できることを指す。
【0084】
「遺伝子サイレンシング」という用語は、さまざまな理由で遺伝子を発現しないまたは過少発現する現象を指す。遺伝子サイレンシングは、ＤＮＡメチル化、ヘテロクロマチン化、および位置効果などによって引き起こされる転写レベルでの遺伝子サイレンシングであってもよく、転写後の遺伝子サイレンシング、つまり遺伝子転写のレベルで、アンチセンスＲＮＡ、共阻害、遺伝子阻害、ＲＮＡ干渉、ｍｉｃｒｏＲＮＡを介した翻訳阻害などの標的ＲＮＡの特異的阻害によって遺伝子を不活化することであってもよい。
【0085】
「ＴＣＲサイレンシング」は、内因性ＴＣＲを発現しないまたは過少発現することを指す。
【0086】
「ＭＨＣサイレンシング」は、内因性ＭＨＣを発現しないまたは過少発現することを指す。
【0087】
「ＣＲＩＳＰＲ（Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃｒｅｐｅａｔｓ）」という用語は、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピートを指す。
【0088】
「Ｃａｓ９（ＣＲＩＳＰＲ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｎｕｃｌｅａｓｅ）」という用語は、ＣＲＩＳＰＲ関連ヌクレアーゼであり、Ｃａｓ９ヌクレアーゼを使用して標的遺伝子を編集する、ＲＮＡによってガイドされる技術である。
【0089】
「ＣＲＩＳＰＥＲ／Ｃａｓ９システム」は、転写物、およびＣａｓ９酵素遺伝子の発現に関与する、またはその活性を指導する他の要素と総称され、これには、Ｃａｓ９遺伝子をコードする配列、ｔｒａｃｒ（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ＣＲＩＳＰＲ）配列（ｔｒａｃｒＲＮＡまたは活性部分ｔｒａｃｒＲＮＡなど）、ｔｒａｃｒペアリング配列（「ダイレクトリピート」、及び内因性ＣＲＩＳＰＲシステムのコンテキストでのｔｒａｃｒＲＮＡ処理の部分的なダイレクトリピートを含む）、ガイド配列（内因性ＣＲＩＳＰＲシステムのコンテキストで「スペーサー（ｓｐａｃｅｒ）」とも呼ばれ、すなわちｇＲＮＡ）、またはＣＲＩＳＰＲ遺伝子座からの他の配列と転写物が含まれる。
【0090】
「標的配列」という用語は、ガイド配列と相補性を有する配列を指し、標的配列とガイド配列との間の相補的対形成は、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進する。標的配列は、ＤＮＡまたはＲＮＡポリヌクレオチドなどの任意のポリヌクレオチドを含むことができる。一部の実施形態において、標的配列は、細胞の核または細胞質に位置する。
【0091】
一般的に言えば、ガイド配列（ｇＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズしてＣＲＩＳＰＲ複合体と標的配列との配列特異的結合をガイドするように当該標的ポリヌクレオチド配列と十分な相補性を有する任意のポリヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、適切なアラインメントアルゴリズムを使用して最適なアラインメントを行う場合、ガイド配列およびそれに対応する標的配列間の相補程度は約５０％以上、６０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７．５％以上、９９％以上またはそれ以上である。最適なアラインメントは、配列をアラインするための任意の適切なアルゴリズムを使用して決定でき、その非限定的な例として、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｉｍｓｃｈアルゴリズム、Ｂｕｒｒｏｗｓ－Ｗｈｅｅｌｅｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍに基づいたアルゴリズム（例えば、Ｂｕｒｒｏｗｓ Ｗｈｅｅｌｅｒ Ａｌｉｇｎｅｒ）、ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｉ Ｘ、ＢＬＡＴ、Ｎｏｖｏａｌｉｇｎ（Ｎｏｖｏｃｒａｆｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＥＬＡＮＤ（（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＳＯＡＰ（ｓｏａｐ．ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｏｒｇ．ｃｎで入手可能）およびＭａｑ（ｍａｑ．ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅｔ．ｎｅｔで入手可能）が含まれる。
【0092】
一部の実施形態では、当該ＣＲＩＳＰＲ酵素は、１つまたは複数の異種タンパク質ドメイン（例えば、当該ＣＲＩＳＰＲ酵素以外の約１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上のドメイン）を含む融合タンパク質の一部である。ＣＲＩＳＰＲ酵素融合タンパク質は、任意の追加のタンパク質配列、および選択されてもよい、任意の２つのドメイン間のリンカー配列を含むことができる。ＣＲＩＳＰＲ酵素と融合できるタンパク質ドメインの例には、エピトープタグ、レポーター遺伝子配列、および、メチラーゼ活性、デメチラーゼ活性、転写活性化活性、転写阻害活性、転写放出因子活性、ヒストン修飾活性、ＲＮＡ切断活性、および核酸結合活性からなる群より選ばれる１つまたは複数の活性を有するタンパク質ドメインが含まれるが、これらに限定されない。エピトープタグの非限定的な例には、ヒスチジン（Ｈｉｓ）タグ、Ｖ５タグ、ＦＬＡＧタグ、インフルエンザウイルス血球凝集素（ＨＡ）タグ、Ｍｙｃタグ、ＶＳＶ－Ｇタグ、及びチオレドキシン（Ｔｒｘ）タグが含まれる。
【0093】
「Ｃａｓ９酵素」という用語は、野生型Ｃａｓ９または人工的に改変されたＣａｓ９であってもよい。
【0094】
「ｓｇＲＮＡ」という用語は短いｇＲＮＡを指す。
【0095】
遺伝子編集を行う場合、特定のｇＲＮＡ、ｔｒａｃｒペアリング配列、およびｔｒａｃｒ配列を個別に与えることもできるし、完全なＲＮＡ配列を与えることもできる。
【0096】
Ｃａｓ９タンパク質のｇＲＮＡへの結合により、特定の部位でＤＮＡを切断することができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓに由来するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム認識配列は２３ｂｐであり、２０ｂｐを標的とすることができ、認識部位の最後の３つのＮＧＧ配列は、ＰＡＭ（ｐｒｏｔｏｓｐａｃｅｒ ａｄｊａｃｅｎｔ ｍｏｔｉｆ）配列と呼ばれる。
【0097】
Ｃａｓ導入遺伝子は、ベクター（例えば、ＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス）、および／または粒子および／またはナノ粒子、および／またはエレクトロポレーションによって送達することができる。
【0098】
一実施形態では、ＴＣＲのα鎖およびβ鎖の一方または両方の定常領域における対応するコーディング遺伝子のエキソンは、内因性ＴＣＲを不活性にするために、ＣＲＩＳＰＥＲ／Ｃａｓ技術を使用してノックアウトされる。好ましくは、内因性ＴＣＲα鎖の定常領域の第１のエキソンを標的してノックアウトする。
【0099】
Ｂ２ＭまたはＴＣＲの発現を「阻害する」または「抑制する」とは、細胞におけるＢ２ＭまたはＴＣＲの発現が、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％減少することを意味する。より具体的には、Ｂ２Ｍの発現を「阻害する」または「抑制する」とは、細胞中のＢ２Ｍの含有量が少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％。、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％減少することを意味する。細胞内のタンパク質の発現または含有量は、Ｂ２ＭまたはＴＣＲの特異的抗体を使用して、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、ウエスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）またはフローサイトメトリーなどの本分野で知られている任意の適切な方法によって測定することができる。
【0100】
本発明で使用される「修飾」という用語は、本発明のタンパク質またはポリペプチドの状態または構造の変化を指す。修飾方法は、化学的、構造的、および機能的であり得る。
【0101】
「トランスフェクション」という用語は、真核細胞への外因性核酸の導入を指す。トランスフェクションは、リン酸カルシウム－ＤＮＡ共沈、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、ポリブレン媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポソーム融合、リポフェクション、プロトプラスト融合、レトロウイルス感染および微粒子銃（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃｓ）を含む、当技術分野で知られている様々な手段によって達成することができる。
【0102】
「核酸分子コーディング」、「ＤＮＡ配列をコードする」および「ＤＮＡをコードする」という用語は、デオキシリボ核酸鎖に沿ったデオキシリボヌクレオチドの順序または順番を指す。これらのデオキシリボヌクレオチドの順序は、ポリペプチド（タンパク質）鎖に沿ったアミノ酸の順序を決定する。したがって、核酸配列はアミノ酸配列をコードする。
【0103】
「個体」という用語は、哺乳類または有袋類などの任意の動物を指す。本発明の個体には、ヒト、ヒト以外の霊長類（アカゲザルまたは他の種類のマカクなど）、マウス、ブタ、ウマ、ロバ、ウシ、ヒツジ、ラット、および任意の種類の家禽が含まれるが、これらに限定されない。
【0104】
「末梢血単核球」（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ、ＰＢＭＣ）という用語は、リンパ球、単球などを含む、末梢血中に単核を有する細胞を指す。
【0105】
「Ｔ細胞が活性化する」または「Ｔ細胞が活性化させる」という用語および文法上の他の形は、検出可能な細胞増殖、サイトカイン産生、および／または検出可能なエフェクター機能を誘導するのに十分に刺激されるＴ細胞の状態を指すことができる。
【0106】
ヌクレオチド配列を指すために使用される場合、本明細書に使用される「配列」という用語および文法上の他の形態は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含み得、一本鎖または二本鎖であってもよい。
【0107】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、治療的または予防的利益を提供する量を指す。
【0108】
本明細書で使用される「発現ベクター」という用語は、発現されるヌクレオチド配列に有効的に連結された発現制御配列を含む、組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のための十分なシスエレメント（ｃｉｓ－ａｃｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔｓ）を含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞またはインビトロ発現システムによって提供されることができる。発現ベクターには、プラスミド、およびウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルス）などの当技術分野で知られているすべてのものが含まれる。
【0109】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、単離された核酸を含み、単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用することができる組成物である。線状ポリヌクレオチド、イオンまたは両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド、およびウイルスを含むがこれらに限定されない多くのベクターが当技術分野で知られている。したがって、「ベクター」という用語は、プラスミドまたはウイルスを自発的に複製することを含む。この用語はまた、ポリリジン化合物、リポソームなどの、細胞への核酸の移動を促進する非プラスミドおよび非ウイルス化合物を含むことができる。
【0110】
本明細書で使用される配列「同一性」という用語は、比較ウィンドウ（例えば、少なくとも２０位置）で２つの最適にマッチングした配列を比較することによって同一性パーセンテージを決定し、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の一部は、追加または欠失（すなわちインデル）を含んでもよく、例えば、最適にマッチングした２つの配列にとって参照配列（追加または欠失を含まない）と比較して２０％以下のインデル（たとえば、５～１５％、または１０～１２％）を含んでもよい。通常、２つの配列で同じ核酸塩基またはアミノ酸残基が発生する位置の数を確定してパーセンテージを計算し、これによって正しいマッチング位置の数を生成し、正しいマッチング位置の数を参照配列内の位置の総数（つまり、ウィンドウサイズ）で割り、その結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージを生成する。
【0111】
本明細書で使用される「外因性」という用語は、核酸分子またはポリペプチド、細胞、組織などが、生体内で内因性発現を有さないか、または過剰発現されたときの機能を達成するには発現レベルが不十分であることを指す。
【0112】
「内因性」という用語は、核酸分子またはポリペプチドなどが生体自身に由来することを指す。
【0113】
一部の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、キメラ抗原受容体である。
【0114】
キメラ抗原受容体は通常、細胞外抗原結合領域を含む。一部の実施形態において、細胞外抗原結合領域は、完全にヒトであってもよく、またヒト化、マウスに由来するか、または前記細胞外抗原結合領域のキメラは、少なくとも２つの異なる動物からのアミノ酸配列からなる。
【0115】
細胞外抗原結合領域の例としては、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメインフラグメント、またはそれらの同族受容体に接合する天然リガンド、およびそれらの任意の誘導体であってもよい。
【0116】
一部の態様では、細胞外抗原結合領域（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗原に特異的な軽鎖ＣＤＲを含むことができる。場合によっては、軽鎖ＣＤＲは、軽鎖ＣＤＲ－１、ＣＤＲ－２などと呼ばれることができる２つ以上の軽鎖ＣＤＲを含んでもよい。場合によっては、軽鎖ＣＤＲは３つの軽鎖ＣＤＲを含んでもよく、それぞれ軽鎖ＣＤＲ－１、軽鎖ＣＤＲ－２、および軽鎖ＣＤＲ－３と呼ばれることができる。一実施形態では、一般的な軽鎖上に存在する一組のＣＤＲは、まとめて軽鎖ＣＤＲと呼ばれることができる。
【0117】
一部の態様では、細胞外抗原結合領域（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗原に特異的な重鎖ＣＤＲを含んでもよい。重鎖ＣＤＲは、ｓｃＦｖなどの抗原結合ユニットの重鎖相補性決定領域であってもよい。場合によっては、重鎖ＣＤＲは、重鎖ＣＤＲ－１、ＣＤＲ－２などと呼ばれることができる２つ以上の重鎖ＣＤＲを含んでもよい。場合によっては、重鎖ＣＤＲは、３つの重鎖ＣＤＲを含んでもよく、それぞれ、重鎖ＣＤＲ－１、重鎖ＣＤＲ－２、および重鎖ＣＤＲ－３と呼ばれることができる。一実施形態では、共通の重鎖に存在する一組のＣＤＲをまとめて重鎖ＣＤＲと呼ぶことができる。
【0118】
遺伝子工学を使用することにより、細胞外抗原結合領域をさまざまな方法で修飾することができる。場合によっては、細胞外抗原結合領域を変異させて、細胞外抗原結合領域をその標的に対してより高い親和性を有するように選択することができる。場合によっては、細胞外抗原結合領域の標的に対する親和性を、正常組織において低レベルで発現できる標的に最適化することができる。潜在的な毒性をなるべく抑えるためにこの最適化を行うことができる。他の場合には、標的の膜結合型に対してより高い親和性を有する細胞外抗原結合領域のクローンは、それらの可溶性形態の対応物よりも優れている可能性がある。可溶性形態の異なるレベルの標的も検出することができ、それらの標的が望ましくない毒性を引き起こす可能性があるため、この修飾を行うことができる。
【0119】
場合によっては、細胞外抗原結合領域はヒンジまたはスペーサーを含む。ヒンジとスペーサーという用語は置き換えて使用することができる。ヒンジは、細胞外抗原結合領域に柔軟性を提供するために使用されるＣＡＲの一部と見なすことができる。例えば、ヒンジは、ＣＤ８α分子の天然のヒンジ領域であり得る。
【0120】
「膜貫通ドメイン」という用語は、キメラタンパク質を細胞の原形質膜に固定することができる。たとえば、ＣＤ２８およびＣＤ８αの膜貫通ドメインを使用できる。
【0121】
「調節」という用語は、正または負の変更を指す。調節の例には、１％、２％、１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％の変更が含まれる。具体的な一実施形態では、負の変更を指す。
【0122】
「治療」という用語は、疾患を変えようとする過程における干渉措置を指し、予防もできると共に、臨床病理学的過程において介入することもできる。治療効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の軽減、疾患の直接的または間接的な病理学的結果の低減、転移の予防、疾患の進行の遅延、状態の改善または緩和、予後の緩和または改善などが含まれるが、これらに限定されない。
【0123】
「予防」という用語は、疾患（細胞移植によって引き起こされる拒絶反応など）が発生する前に行われる干渉措置を指す。
【0124】
本発明の第１のタンパク質は、宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができる上記のタンパク質を指す。
【0125】
本発明の第２のタンパク質は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する上記のタンパク質を指す。
【0126】
本発明に記載の「第２の受容体」および「宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができるタンパク質」は、並行して発現（タンデム発現）させることも、別々に発現させることもできる。
【0127】
本発明に記載の「第２受容体」と「宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができるタンパク質」を別々に発現させる場合、それぞれ独立した膜貫通ドメインと細胞内ドメインを持つ。その発現方法については、ＰＣＴ／ＣＮ２０１５／０９５９３８、Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ， Ｄｕｏｎｇ ＣＰ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ３（１）：３３－４８などを参照されたい。
【0128】
本発明の「第２の受容体」が「宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識できるタンパク質」と並行して発現（タンデム発現）される場合、宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識するタンパク質は、「第２の受容体」が認識する腫瘍抗原などの抗原を認識することもできる。
【0129】
「腫瘍抗原」とは、過剰増殖性疾患の発生および進展中に新たに出現または過剰発現される抗原を指す。特定の態様において、本発明の過剰増殖性障害は、がんを指す。
【0130】
本発明に記載の腫瘍抗原は、固形腫瘍抗原または血腫抗原であり得る。
【0131】
本発明の腫瘍抗原は、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；ＣＤ１７１；ＣＳ－１；Ｃ型レクチン様分子－１；ガングリオシドＧＤ３；Ｔｎ抗原；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ７０；ＣＤ１２３；ＣＤ１３８；ＣＤ３３；ＣＤ４４；ＣＤ４４ｖ７／８；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７Ｈ６；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン１３受容体サブユニットα（ＩＬ－１３Ｒα）；インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒα）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；癌胚性抗原（ＣＥＡ）；ＮＹ－ＥＳＯ－１；ＨＩＶ－１ Ｇａｇ；ＭＡＲＴ－１；ｇｐ１００；チロシナーゼ；メソテリン；ＥｐＣＡＭ；プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）；段階特異的胚性抗原－４（ＳＳＥＡ－４）；細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ６；表皮成長因子受容体ファミリーとその変異体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；炭酸アンヒドラーゼＩＸ（ＣＡＩＸ）；ＬＭＰ２；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）;フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３；ＴＧＳ５；高分子量メラニン腫瘍関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；Ｏ－アセチルＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体；腫瘍血管内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍血管内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；Ｃｌａｕｄｉｎ６、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．１；ＡＳＧＰＲ１；ＣＤＨ１６；５Ｔ４；８Ｈ９；αｖβ６インテグリン；Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；ＣＡ９；κ軽鎖（カッパ軽鎖）；ＣＳＰＧ４；ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０；ＦＡＰ；ＦＡＲ； ＦＢＰ；胚性ＡｃｈＲ；ＨＬＡ－Ａ１、ＨＬＡ－ Ａ２；ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥ３；ＫＤＲ；ＭＣＳＰ；ＮＫＧ２Ｄリガンド；ＰＳＣ１；ＲＯＲ１；Ｓｐ１７；ＳＵＲＶＩＶＩＮ；ＴＡＧ７２；ＴＥＭ１；フィブロネクチン；テネイシン；腫瘍壊死ゾーンの癌胚性変異体；Ｇタンパク質結合受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドのヘキソース部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳房分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役型受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ交互リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＥＴＳトランスロケーションバリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；メラノーマ癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；メラノーマ癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；Ｐ５３変異体;ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫移行ブレークポイント;アポトーシスのメラノーマ阻害剤（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；Ｖ－ｍｙｃ鳥類骨髄症ウイルス腫瘍遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）； ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チトクロームＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）；Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュールを含むムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン－３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンλ様ペプチド１（ＩＧＬＬ１）を含むが、これらに限定されない。好ましくは、前記腫瘍抗原はＢＣＭＡまたはＣＤ１９である。
【0132】
病原体抗原は、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、または寄生虫の抗原から選ばれる。ウイルス抗原は、サイトメガロウイルス抗原、エプスタインバーウイルス抗原、ヒト免疫不全ウイルス抗原またはインフルエンザウイルス抗原から選ばれる。
【0133】
本発明は、具体的な実施例と併せて以下でさらに説明される。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。下記の実施例では、具体的な条件を示していない実験方法は、通常、Ｊ． Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．, ｅｄｓ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、科学出版社、２００２に記載されている条件などの従来の条件に従うか、製造元に勧められた条件に従う。
【実施例】
【0134】
ＮＫ細胞表面受容体の発現の検出
密度勾配遠心分離にＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（ＧＥ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、単球を末梢血から単離し、ＮＫ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから購入）を使用してネガティブスクリーニングを行い、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および単球などの細胞を除去した後、インビトロでの細胞表現型の同定と増殖を行った。フローサイトメトリーを使用して、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６のようなマーカーなど、単離されたＮＫ細胞の表面にある受容体を同定した。フローサイトメトリーの結果は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６がＮＫ細胞の約８０％で発現し、ＮＫＧ２ＤがＮＫ細胞の９０％以上で発現したことを示している（図１を参照）。
さらに、Ｔ細胞における上記の表面マーカーの発現も検出した。ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒから購入）によって活性化されたＴ細胞を収集し、８日目まで培養してフローサイトメトリーのために染色をした。実験結果は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６がＴ細胞でほとんど発現されていないことを示しており、上記のマーカーがＮＫ細胞の標的として使用できることを示している（図２を参照）。
密度勾配遠心分離にＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（ＧＥ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、単球を末梢血から単離し、ＮＫ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから購入）を使用してネガティブスクリーニングを行い、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および単球などの細胞を除去した後、インビトロでの細胞表現型の同定と増殖を行った。フローサイトメトリーを使用して、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６のようなマーカーなど、単離されたＮＫ細胞の表面にある受容体を同定した。フローサイトメトリーの結果は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６がＮＫ細胞の約８０％で発現し、ＮＫＧ２ＤがＮＫ細胞の９０％以上で発現したことを示している（図１を参照）。
さらに、Ｔ細胞における上記の表面マーカーの発現も検出した。ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒから購入）によって活性化されたＴ細胞を収集し、８日目まで培養してフローサイトメトリーのために染色をした。実験結果は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６がＴ細胞でほとんど発現されていないことを示しており、上記のマーカーがＮＫ細胞の標的として使用できることを示している（図２を参照）。
【実施例】
【0135】
ＣＡＲ－Ｔ細胞の調製と機能検証
１、ＮＫ細胞を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞を調製するための代表として、ＮＫＧ２Ａを標的として選択した。従来の操作を参照して、抗ＮＫＧ２Ａを含む一本鎖抗体（ＶＨのアミノ酸配列は配列番号１に示され、ＶＬのアミノ酸配列は配列番号２に示される）、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよび細胞内ドメイン（アミノ酸配列は配列番号３に示される）、Ｔ細胞活性化因子ＣＤ３ζ（アミノ酸配列は配列番号４に示される）のキメラ抗原受容体（アミノ酸配列は配列番号５に示される）のベクターを設計および構築し、プラスミドマップは図８に示されている。レンチウイルスはパッケージングされ、ＶＲＲＬ－ＮＫＧ２Ａ－２８Ｚ（ＴＭ）と名付けられた。
Ｔ細胞の活性化と増殖を４８時間行った後、細胞密度を２×１０６／ｍＬに調整し、ＶＲＲＬ－ＮＫＧ２Ａ－２８Ｚ（ＴＭ）レンチウイルスをＭＯＩ＝１０の比率で添加して、ＮＫＧ２Ａを標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞を取得した。
細胞増殖検出のために６日目にＣＡＲ－Ｔ細胞を採取し、開始細胞数を５×１０５に調整し、２４時間、４８時間、７２時間、および９６時間で細胞数を検出し、細胞直径を記録した。同時に、ＣＡＲベクターの発現を検出するために、抗Ｆ（ａｂ）’２抗体を用いてフローサイトメトリー染色を行った。実験結果によると、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ細胞とトランスフェクトされなかったＴ細胞（ＵＴＤ）は同様の増殖曲線を示し、細胞径に有意差はなく、ＣＡＲ－Ｔ細胞の約８０％がＮＫＧ２Ａを標的とするＣＡＲ分子を発現した。これは、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖特性が正常であることを示している（図３を参照）。
２、ＢＣＭＡを標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
１の操作を参照して、ＢＣＭＡのキメラ抗原受容体を標的とするプラスミド（アミノ酸配列は配列番号６に示される）を構築し、プラスミドマップは図９に示されている。レンチウイルスはパッケージングされ、Ｔ細胞をトランスフェクトして、ＢＣＭＡを標的とするＢＣＭＡ－ＣＡＲ Ｔ細胞を取得した。
３、インビトロ殺傷機能実験
標的細胞としてインビトロで初代ＮＫ細胞を増幅した。細胞密度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種し（３つの複製ウェルを並行して作製）、エフェクターＴ細胞：標的細胞の比率１：３、１：１、および３：１の３つの比率に従って、対応するＣＡＲ－Ｔ細胞を接種した。ＭＥＭ－α＋５％ＦＢＳを培地として使用し、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターでそれぞれ４時間と１８時間インキュベートした。サイトトックス－９６非放射性細胞毒性アッセイ（ｃｙｔｏｔｏｘ－９６ ｎｏｎ－ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ）キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒから購入）を使用して、５０μｌの上澄みを取り、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の含有量を測定し、ＵＴＤおよびＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔの２つの群における初代ＮＫ細胞の溶解効率を計算した。
検出結果は、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ群のＬＤＨ値がＵＴＤ群のそれよりも有意に高いことを示し、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔが初代ＮＫ細胞を効果的に殺傷することができることを示している（図４および図５を参照）。
１、ＮＫ細胞を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞を調製するための代表として、ＮＫＧ２Ａを標的として選択した。従来の操作を参照して、抗ＮＫＧ２Ａを含む一本鎖抗体（ＶＨのアミノ酸配列は配列番号１に示され、ＶＬのアミノ酸配列は配列番号２に示される）、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよび細胞内ドメイン（アミノ酸配列は配列番号３に示される）、Ｔ細胞活性化因子ＣＤ３ζ（アミノ酸配列は配列番号４に示される）のキメラ抗原受容体（アミノ酸配列は配列番号５に示される）のベクターを設計および構築し、プラスミドマップは図８に示されている。レンチウイルスはパッケージングされ、ＶＲＲＬ－ＮＫＧ２Ａ－２８Ｚ（ＴＭ）と名付けられた。
Ｔ細胞の活性化と増殖を４８時間行った後、細胞密度を２×１０６／ｍＬに調整し、ＶＲＲＬ－ＮＫＧ２Ａ－２８Ｚ（ＴＭ）レンチウイルスをＭＯＩ＝１０の比率で添加して、ＮＫＧ２Ａを標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞を取得した。
細胞増殖検出のために６日目にＣＡＲ－Ｔ細胞を採取し、開始細胞数を５×１０５に調整し、２４時間、４８時間、７２時間、および９６時間で細胞数を検出し、細胞直径を記録した。同時に、ＣＡＲベクターの発現を検出するために、抗Ｆ（ａｂ）’２抗体を用いてフローサイトメトリー染色を行った。実験結果によると、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ細胞とトランスフェクトされなかったＴ細胞（ＵＴＤ）は同様の増殖曲線を示し、細胞径に有意差はなく、ＣＡＲ－Ｔ細胞の約８０％がＮＫＧ２Ａを標的とするＣＡＲ分子を発現した。これは、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖特性が正常であることを示している（図３を参照）。
２、ＢＣＭＡを標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
１の操作を参照して、ＢＣＭＡのキメラ抗原受容体を標的とするプラスミド（アミノ酸配列は配列番号６に示される）を構築し、プラスミドマップは図９に示されている。レンチウイルスはパッケージングされ、Ｔ細胞をトランスフェクトして、ＢＣＭＡを標的とするＢＣＭＡ－ＣＡＲ Ｔ細胞を取得した。
３、インビトロ殺傷機能実験
標的細胞としてインビトロで初代ＮＫ細胞を増幅した。細胞密度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種し（３つの複製ウェルを並行して作製）、エフェクターＴ細胞：標的細胞の比率１：３、１：１、および３：１の３つの比率に従って、対応するＣＡＲ－Ｔ細胞を接種した。ＭＥＭ－α＋５％ＦＢＳを培地として使用し、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターでそれぞれ４時間と１８時間インキュベートした。サイトトックス－９６非放射性細胞毒性アッセイ（ｃｙｔｏｔｏｘ－９６ ｎｏｎ－ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ）キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒから購入）を使用して、５０μｌの上澄みを取り、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の含有量を測定し、ＵＴＤおよびＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔの２つの群における初代ＮＫ細胞の溶解効率を計算した。
検出結果は、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ群のＬＤＨ値がＵＴＤ群のそれよりも有意に高いことを示し、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔが初代ＮＫ細胞を効果的に殺傷することができることを示している（図４および図５を参照）。
【実施例】
【0136】
ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
１、ＴＣＲおよびＢ２Ｍ遺伝子のノックアウト
従来のＵＴＤ細胞、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ細胞、およびＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞（対照用）をインビトロで４８時間増殖させた後、細胞密度を２×１０７／ｍＬに調整した。Ｃａｓ９酵素（ＮＥＢから購入）とｓｇＲＮＡを１：４の比率で室温で１０分間インキュベートして、ＲＮＰ複合体溶液を取得した。ＴＲＡＣ－ｓｇＲＮＡの核酸配列は配列番号７に示され、Ｂ２Ｍ－ｓｇＲＮＡの核酸配列は配列番号８に示される。１×１０６細胞をＲＮＰ複合体溶液と混合し（Ｃａｓ９酵素の最終濃度は３ｕＭ）、ｍａｘｃｙｔｅエレクトロトランスミッターを使用してＲＮＰ複合体をＣＡＲ－Ｔ細胞に個別に導入した。エレクトロポレーション後７日目に、フローサイトメトリーを使用してＴＣＲおよびＢ２Ｍ遺伝子のノックアウトを検出した。実験結果は、ＴＲＡＣおよびＢ２Ｍのノックアウト効率が８５％以上であることを示している（図６を参照）。
２、ＴＣＲ／Ｂ２Ｍダブルネガティブ細胞スクリーニング
Ｂ２ＭおよびＴＣＲがノックアウトされたＣＡＲ－Ｔ細胞およびＵＴＤ細胞をインビトロで増殖させ、８日目に細胞密度を１×１０７／ｍＬに調整し、細胞を抗ＨＬＡ－ＡＢＣおよびＢ２Ｍ抗体で標識してから、カップリングフィコエリトリン（ＰＥ）の二次抗体で標識した。標識した細胞を抗ＰＥ磁気ビーズで選別カラムで選別した後、ＴＣＲおよびＢ２Ｍダブルネガティブ細胞を回収し（選別キットは、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから購入した）、ＴＣＲとＢ２Ｍを欠くＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞、およびＵ－ＵＴＤ細胞が得られた。
１、ＴＣＲおよびＢ２Ｍ遺伝子のノックアウト
従来のＵＴＤ細胞、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ細胞、およびＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞（対照用）をインビトロで４８時間増殖させた後、細胞密度を２×１０７／ｍＬに調整した。Ｃａｓ９酵素（ＮＥＢから購入）とｓｇＲＮＡを１：４の比率で室温で１０分間インキュベートして、ＲＮＰ複合体溶液を取得した。ＴＲＡＣ－ｓｇＲＮＡの核酸配列は配列番号７に示され、Ｂ２Ｍ－ｓｇＲＮＡの核酸配列は配列番号８に示される。１×１０６細胞をＲＮＰ複合体溶液と混合し（Ｃａｓ９酵素の最終濃度は３ｕＭ）、ｍａｘｃｙｔｅエレクトロトランスミッターを使用してＲＮＰ複合体をＣＡＲ－Ｔ細胞に個別に導入した。エレクトロポレーション後７日目に、フローサイトメトリーを使用してＴＣＲおよびＢ２Ｍ遺伝子のノックアウトを検出した。実験結果は、ＴＲＡＣおよびＢ２Ｍのノックアウト効率が８５％以上であることを示している（図６を参照）。
２、ＴＣＲ／Ｂ２Ｍダブルネガティブ細胞スクリーニング
Ｂ２ＭおよびＴＣＲがノックアウトされたＣＡＲ－Ｔ細胞およびＵＴＤ細胞をインビトロで増殖させ、８日目に細胞密度を１×１０７／ｍＬに調整し、細胞を抗ＨＬＡ－ＡＢＣおよびＢ２Ｍ抗体で標識してから、カップリングフィコエリトリン（ＰＥ）の二次抗体で標識した。標識した細胞を抗ＰＥ磁気ビーズで選別カラムで選別した後、ＴＣＲおよびＢ２Ｍダブルネガティブ細胞を回収し（選別キットは、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから購入した）、ＴＣＲとＢ２Ｍを欠くＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞、およびＵ－ＵＴＤ細胞が得られた。
【実施例】
【0137】
ＮＫ細胞に対するＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の抵抗機能の検証
１、ＬＤＨ実験によるＮＫ細胞に対するＵＣＡＲ－Ｔ細胞の拒絶効果の検出
ＵＴＤ細胞、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞、およびＵ－ＵＴＤ細胞を標的細胞として使用し、細胞濃度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種し、増幅された初代ＮＫ細胞と標的細胞の比率１：１に従って、同じ量（体積）と数のＮＫ細胞を接種し、インキュベーター内でそれぞれ４時間と１８時間インキュベートした。上澄み５０μｌを取り、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の含有量を測定し、ＣＡＲ－ＴおよびＵＣＡＲ－Ｔ細胞の溶解効率を計算した。検出結果は、ＵＴＤとＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ群のＬＤＨ値が両方とも非常に低いことを示している。これは、通常のＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞の攻撃を引き起こさないことを示している。それに対して、Ｕ－ＵＴＤとＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ群は両方とも４時間および１８時間で徐々に増加するＬＤＨ値を示し、これは、ＮＫ細胞がＴＣＲおよびＢ２Ｍを欠くＴ細胞を殺傷することを示している。ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞はより低いレベルのＬＤＨを示し、これは、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞に対して抵抗効果があることを示している。
２、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞のＮＫ細胞に対する抵抗能力をさらに証明するために、対照としてＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を選択し、細胞濃度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種した。増殖された初代ＮＫ細胞と標的細胞の比率１：１で、同じ体積と数のＮＫ細胞を接種し、インキュベーター内でそれぞれ４時間、１８時間、２４時間、４２時間インキュベートした。フローサイトメトリーを使用してＨＬＡ－ＡＢＣ陽性ＮＫ細胞を標識し、さまざまな時点でインキュベートされたＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を検出した。実験結果は、図７Ａ～７Ｄに示されているように、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔは４時間で約２０％の低い割合であり、検出時間の延長に伴い割合が常に非常に低く、これは、ＮＫ細胞がＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖を有意に阻害したことを示している。ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞は４時間で約２０％の低い割合であるが、検出時間の延長に伴い、割合が徐々に増加し、４２時間で６０％近くに達した。これは、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖は最初からＮＫ細胞によって阻害されているが、時間の経過とともに徐々に増殖能力が回復することを示している。上記の結果は、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴがＮＫ細胞の殺傷能力に効果的に抵抗できることを示している。
３、初代ＮＫ細胞に対するＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の抵抗能力をさらに証明するために、ＧＦＰを発現するＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞とＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を構築した。ＢＣＭＡ－ＧＦＰのアミノ酸配列は配列番号２４に示され、ＮＫＧ２Ａ－ＧＦＰのアミノ酸配列は配列番号２５に示される。
実施例２の操作を参照して、ＧＦＰを発現するＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を発現するプラスミドＰＲＲＬ－ＢＣＭＡ－ＢＢＺ－Ｆ２Ａ－ＥＧＦＰを構築し、プラスミドマップを図１６に示す。ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を発現するプラスミドＰＲＲＬ－ＮＫＧ２Ａ－２８Ｚ－Ｆ２Ａ－ＥＧＦＰを構築し、プラスミドマップを図１７に示す。構築されたプラスミドについてレンチウイルスをパッケージングし、Ｔ細胞をトランスフェクトし、ＣＡＲ－Ｔ細胞に対して遺伝子ノックアウトおよび磁気ビーズ選別を実行して、ＧＦＰを発現するＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞とＧＦＰを発現するＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を取得した。
ＣＡＲ－Ｔ細胞の濃度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種し、増殖された初代ＮＫ細胞と標的細胞の比率１：１に従って、同じ体積と数のＮＫ細胞を接種し、インキュベーター内でそれぞれ０時間、４時間、１８時間、２４時間、４８時間培養した。フローサイトメトリーを使用して、さまざまな時点で共培養されたＧＦＰ細胞の割合を検出し、ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の生存を追跡するために使用した。
実験結果は、図１０に示されるように、ＧＦＰ陽性ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合は時間の延長とともに徐々に減少し、４８時間後にほとんどＮＫ細胞によって完全に殺傷されたが、ＧＦＰ陽性ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合は４時間にわずかに減少し、１８時間後に有意に増加し、４８時間後に約９０％を占め、これは、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞の殺傷に有意に抵抗できることを示している。
１、ＬＤＨ実験によるＮＫ細胞に対するＵＣＡＲ－Ｔ細胞の拒絶効果の検出
ＵＴＤ細胞、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞、およびＵ－ＵＴＤ細胞を標的細胞として使用し、細胞濃度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種し、増幅された初代ＮＫ細胞と標的細胞の比率１：１に従って、同じ量（体積）と数のＮＫ細胞を接種し、インキュベーター内でそれぞれ４時間と１８時間インキュベートした。上澄み５０μｌを取り、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の含有量を測定し、ＣＡＲ－ＴおよびＵＣＡＲ－Ｔ細胞の溶解効率を計算した。検出結果は、ＵＴＤとＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ群のＬＤＨ値が両方とも非常に低いことを示している。これは、通常のＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞の攻撃を引き起こさないことを示している。それに対して、Ｕ－ＵＴＤとＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ群は両方とも４時間および１８時間で徐々に増加するＬＤＨ値を示し、これは、ＮＫ細胞がＴＣＲおよびＢ２Ｍを欠くＴ細胞を殺傷することを示している。ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞はより低いレベルのＬＤＨを示し、これは、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞に対して抵抗効果があることを示している。
２、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞のＮＫ細胞に対する抵抗能力をさらに証明するために、対照としてＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を選択し、細胞濃度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種した。増殖された初代ＮＫ細胞と標的細胞の比率１：１で、同じ体積と数のＮＫ細胞を接種し、インキュベーター内でそれぞれ４時間、１８時間、２４時間、４２時間インキュベートした。フローサイトメトリーを使用してＨＬＡ－ＡＢＣ陽性ＮＫ細胞を標識し、さまざまな時点でインキュベートされたＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を検出した。実験結果は、図７Ａ～７Ｄに示されているように、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔは４時間で約２０％の低い割合であり、検出時間の延長に伴い割合が常に非常に低く、これは、ＮＫ細胞がＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖を有意に阻害したことを示している。ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞は４時間で約２０％の低い割合であるが、検出時間の延長に伴い、割合が徐々に増加し、４２時間で６０％近くに達した。これは、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖は最初からＮＫ細胞によって阻害されているが、時間の経過とともに徐々に増殖能力が回復することを示している。上記の結果は、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴがＮＫ細胞の殺傷能力に効果的に抵抗できることを示している。
３、初代ＮＫ細胞に対するＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の抵抗能力をさらに証明するために、ＧＦＰを発現するＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞とＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を構築した。ＢＣＭＡ－ＧＦＰのアミノ酸配列は配列番号２４に示され、ＮＫＧ２Ａ－ＧＦＰのアミノ酸配列は配列番号２５に示される。
実施例２の操作を参照して、ＧＦＰを発現するＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を発現するプラスミドＰＲＲＬ－ＢＣＭＡ－ＢＢＺ－Ｆ２Ａ－ＥＧＦＰを構築し、プラスミドマップを図１６に示す。ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を発現するプラスミドＰＲＲＬ－ＮＫＧ２Ａ－２８Ｚ－Ｆ２Ａ－ＥＧＦＰを構築し、プラスミドマップを図１７に示す。構築されたプラスミドについてレンチウイルスをパッケージングし、Ｔ細胞をトランスフェクトし、ＣＡＲ－Ｔ細胞に対して遺伝子ノックアウトおよび磁気ビーズ選別を実行して、ＧＦＰを発現するＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞とＧＦＰを発現するＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を取得した。
ＣＡＲ－Ｔ細胞の濃度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種し、増殖された初代ＮＫ細胞と標的細胞の比率１：１に従って、同じ体積と数のＮＫ細胞を接種し、インキュベーター内でそれぞれ０時間、４時間、１８時間、２４時間、４８時間培養した。フローサイトメトリーを使用して、さまざまな時点で共培養されたＧＦＰ細胞の割合を検出し、ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の生存を追跡するために使用した。
実験結果は、図１０に示されるように、ＧＦＰ陽性ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合は時間の延長とともに徐々に減少し、４８時間後にほとんどＮＫ細胞によって完全に殺傷されたが、ＧＦＰ陽性ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合は４時間にわずかに減少し、１８時間後に有意に増加し、４８時間後に約９０％を占め、これは、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞の殺傷に有意に抵抗できることを示している。
【実施例】
【0138】
ＮＫ細胞に対するインビボでのＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の抵抗
ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞をインビトロで培養し、ＣＡＲ陽性率を８０％に調整し、８×１０６細胞／匹の用量で尾静脈注射によりＮＰＧ免疫不全マウスに注入し、マウスを、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫ細胞を投与した群（ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫと表示）、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ群およびＮＫ細胞を投与した群（ＮＫＧ２Ａ－ＵＣＡＲＴ＋ＮＫと表示）の２群に分けた。
ＵＣＡＲ Ｔ細胞投与の４時間後に同量のＮＫ細胞を注射した。ＣＡＲ Ｔ細胞注射後の１日目、３日目、６日目、マウスの末梢血中のヒト由来ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の生存をフローアブソリュートテクノロジー（フローサイトメトリーによる絶対細胞計数）によって検出した。
実験結果は、図１１に示されているように、注射後１日目、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群およびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞（すなわち、ヒト由来ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞）の数は、有意に減少し、これは、ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞によって拒絶されることを示している。注射後３日目と６日目では、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞の数は常に非常に低いレベルであり、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞の数は３日目および６日目には有意な増加があった。上記の結果は、インビボモデルにおいて、ＮＫ細胞がＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の生存を有意に阻害するに対して、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞はＮＫ細胞の殺傷に効果的に抵抗し、増殖能力を回復できることを示している。
ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞をインビトロで培養し、ＣＡＲ陽性率を８０％に調整し、８×１０６細胞／匹の用量で尾静脈注射によりＮＰＧ免疫不全マウスに注入し、マウスを、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫ細胞を投与した群（ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫと表示）、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ群およびＮＫ細胞を投与した群（ＮＫＧ２Ａ－ＵＣＡＲＴ＋ＮＫと表示）の２群に分けた。
ＵＣＡＲ Ｔ細胞投与の４時間後に同量のＮＫ細胞を注射した。ＣＡＲ Ｔ細胞注射後の１日目、３日目、６日目、マウスの末梢血中のヒト由来ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の生存をフローアブソリュートテクノロジー（フローサイトメトリーによる絶対細胞計数）によって検出した。
実験結果は、図１１に示されているように、注射後１日目、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群およびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞（すなわち、ヒト由来ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞）の数は、有意に減少し、これは、ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞によって拒絶されることを示している。注射後３日目と６日目では、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞の数は常に非常に低いレベルであり、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞の数は３日目および６日目には有意な増加があった。上記の結果は、インビボモデルにおいて、ＮＫ細胞がＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の生存を有意に阻害するに対して、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞はＮＫ細胞の殺傷に効果的に抵抗し、増殖能力を回復できることを示している。
【実施例】
【0139】
ＢＣＭＡおよびＮＫＧ２Ａを標的とするＣＡＲ Ｔ細胞の構築
図１２に示すように、ＢＣＭＡを標的とするｓｃＦｖおよびＮＫＧ２Ａを標的とするｓｃＦｖがタンデムで連結したＵＣＡＲ－Ｔ細胞（すなわち、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ）を調製した。ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲのアミノ酸配列は、配列番号９に示されている。
ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴのプラスミドＰＲＲＬ－ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ－ＢＢＺを構築し、プラスミドマップを図１８に示す。実施例２および３の操作を参照して、ウイルストランスフェクションを実行してＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を取得し、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞に対してＴＲＡＣおよびＢ２Ｍ遺伝子ノックアウトを実行してから、磁気ビーズによる選別の方法で９９％以上のＴＣＲおよびＨＬＡ－ＡＢＣ陰性のＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を得た。
実施例２および３の操作を参照して、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞およびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞をそれぞれ調製した。
ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴとＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴのＣＡＲ発現をそれぞれ検出した。実験結果は、図１３に示されているように、陽性率は６０％以上に達し、これは、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の調製が成功したことを示している。
図１２に示すように、ＢＣＭＡを標的とするｓｃＦｖおよびＮＫＧ２Ａを標的とするｓｃＦｖがタンデムで連結したＵＣＡＲ－Ｔ細胞（すなわち、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ）を調製した。ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＣＡＲのアミノ酸配列は、配列番号９に示されている。
ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴのプラスミドＰＲＲＬ－ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ－ＢＢＺを構築し、プラスミドマップを図１８に示す。実施例２および３の操作を参照して、ウイルストランスフェクションを実行してＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を取得し、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞に対してＴＲＡＣおよびＢ２Ｍ遺伝子ノックアウトを実行してから、磁気ビーズによる選別の方法で９９％以上のＴＣＲおよびＨＬＡ－ＡＢＣ陰性のＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞を得た。
実施例２および３の操作を参照して、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞およびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞をそれぞれ調製した。
ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ、ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴとＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴのＣＡＲ発現をそれぞれ検出した。実験結果は、図１３に示されているように、陽性率は６０％以上に達し、これは、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の調製が成功したことを示している。
【実施例】
【0140】
ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ機能の検証
ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ－８２２６およびＮＣＩ－Ｈ９２９を標的細胞としてインビトロで培養し、１×１０４の腫瘍細胞を９６ウェルプレートに接種し、Ｔ細胞と腫瘍細胞の比率３：１、１：１、および１：３に従って、対応する数のＵＣＡＲ－Ｔ細胞を接種し、１８時間インキュベートした後、ＬＤＨ含有量検出のために５０μｌの上澄みを吸引した。
実験結果は、図１４に示されているように、ＵＴＤおよびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ群では、ＲＰＭＩ－８２２６およびＮＣＩ－Ｈ９２９の細胞溶解率は非常に低く、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ群の腫瘍細胞の溶解率はＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ群の溶解率に近く、これは、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がインビトロでＢＣＭＡ陽性腫瘍細胞を効果的に殺傷することができることを示している。
ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ－８２２６およびＮＣＩ－Ｈ９２９を標的細胞としてインビトロで培養し、１×１０４の腫瘍細胞を９６ウェルプレートに接種し、Ｔ細胞と腫瘍細胞の比率３：１、１：１、および１：３に従って、対応する数のＵＣＡＲ－Ｔ細胞を接種し、１８時間インキュベートした後、ＬＤＨ含有量検出のために５０μｌの上澄みを吸引した。
実験結果は、図１４に示されているように、ＵＴＤおよびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ群では、ＲＰＭＩ－８２２６およびＮＣＩ－Ｈ９２９の細胞溶解率は非常に低く、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ群の腫瘍細胞の溶解率はＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ群の溶解率に近く、これは、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がインビトロでＢＣＭＡ陽性腫瘍細胞を効果的に殺傷することができることを示している。
【実施例】
【0141】
ＮＫ細胞に対するＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の抵抗機能の検証
陰性および陽性対照として、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞をそれぞれ選択し、細胞濃度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種し、ＮＫ細胞とＴ細胞の比率１：１に従って、同じ体積と数のＮＫ細胞を接種し、インキュベーター内でそれぞれ０時間、４時間、１８時間、２４時間、４８時間培養した。フローサイトメトリーを使用してＨＬＡ－ＡＢＣ陽性のＮＫ細胞を標記し、さまざまな時点で共培養されたＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を検出した。実験結果は、図１５に示されるように、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合はインキュベーション時間の延長とともに徐々に減少し、４８時間後にほとんどＮＫ細胞によって殺傷されたが、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞は同じ変化傾向を示し、４時間にわずかに減少し、その後徐々に増加し、４８時間後に約７０％以上に達し、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞が４８時間後に９０％に達し、これは、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞の殺傷に有意に抵抗できることを示している。
陰性および陽性対照として、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞をそれぞれ選択し、細胞濃度を５×１０５／ｍＬに調整し、１００μｌを９６ウェルプレートに接種し、ＮＫ細胞とＴ細胞の比率１：１に従って、同じ体積と数のＮＫ細胞を接種し、インキュベーター内でそれぞれ０時間、４時間、１８時間、２４時間、４８時間培養した。フローサイトメトリーを使用してＨＬＡ－ＡＢＣ陽性のＮＫ細胞を標記し、さまざまな時点で共培養されたＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を検出した。実験結果は、図１５に示されるように、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の割合はインキュベーション時間の延長とともに徐々に減少し、４８時間後にほとんどＮＫ細胞によって殺傷されたが、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞は同じ変化傾向を示し、４時間にわずかに減少し、その後徐々に増加し、４８時間後に約７０％以上に達し、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞が４８時間後に９０％に達し、これは、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞の殺傷に有意に抵抗できることを示している。
【実施例】
【0142】
ＮＫ細胞に対するインビボでのＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の抵抗
ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞をインビトロで培養し、ＣＡＲ陽性率を６０％に調整し、８×１０６細胞／匹の用量で尾静脈注射によりＮＰＧ免疫不全マウスに注入し、マウスを、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫ細胞を投与した群（ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫと表示）、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ群およびＮＫ細胞を投与した群（ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ－ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫと表示）の２群に分けた。ＵＣＡＲ－Ｔ細胞投与の４時間後に同量のＮＫ細胞を注射した。ＣＡＲ Ｔ細胞注射後の１日目、３日目、６日目、マウスの末梢血中のヒト由来ＣＤ４５陽性Ｔ細胞の生存をフローアブソリュートテクノロジーによって検出した。
実験結果は、図１９に示されているように、注射後１日目と比較して、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞の数は、３日目および６日目には有意な増加はなく、これは、ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞によって拒絶されていることを示している。ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞の数は、３日目と６日目では、いずれも有意に増加し、６日目に細胞数は、１日目の細胞数より３０倍以上増加した。上記の結果は、インビボモデルにおいて、ＮＫ細胞がＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の生存を有意に阻害するに対して、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞はＮＫ細胞の殺傷に効果的に抵抗し、増殖能力を回復できることを示している。
ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞をインビトロで培養し、ＣＡＲ陽性率を６０％に調整し、８×１０６細胞／匹の用量で尾静脈注射によりＮＰＧ免疫不全マウスに注入し、マウスを、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－ＴおよびＮＫ細胞を投与した群（ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫと表示）、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ群およびＮＫ細胞を投与した群（ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ－ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫと表示）の２群に分けた。ＵＣＡＲ－Ｔ細胞投与の４時間後に同量のＮＫ細胞を注射した。ＣＡＲ Ｔ細胞注射後の１日目、３日目、６日目、マウスの末梢血中のヒト由来ＣＤ４５陽性Ｔ細胞の生存をフローアブソリュートテクノロジーによって検出した。
実験結果は、図１９に示されているように、注射後１日目と比較して、ＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞の数は、３日目および６日目には有意な増加はなく、これは、ＵＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＫ細胞によって拒絶されていることを示している。ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ＋ＮＫ群のＵＣＡＲ－Ｔ細胞の数は、３日目と６日目では、いずれも有意に増加し、６日目に細胞数は、１日目の細胞数より３０倍以上増加した。上記の結果は、インビボモデルにおいて、ＮＫ細胞がＢＣＭＡ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞の生存を有意に阻害するに対して、ＢＣＭＡ－ＧＳ－ＮＫＧ２Ａ ＵＣＡＲ－Ｔ細胞はＮＫ細胞の殺傷に効果的に抵抗し、増殖能力を回復できることを示している。
【0143】
本願に係る配列は、次の表に示す。
【0144】
【表1-1】
【0145】
【表1-2】
【0146】
【表1-3】
【0147】
【表1-4】
【0148】
【表1-5】
【0149】
【表1-6】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-02-25
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができる第１のタンパク質を発現し、好ましくは、宿主の免疫エフェクター細胞に対して阻害または殺傷機能を有することを特徴とする、移植免疫拒絶に抵抗する細胞。
【請求項2】
前記細胞が免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞の機能を有する人工的に改変された細胞であることを特徴とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項3】
前記細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、ＣＩＫ細胞、および幹細胞に由来する免疫エフェクター細胞から選択され、好ましくは、前記細胞はＴ細胞であり、
より好ましくは、前記第１のタンパク質はキメラ受容体であることを特徴とする、請求項１または２に記載の細胞。
【請求項4】
前記細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体またはＴ細胞受容体であることを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項5】
前記細胞がＭＨＣを発現しないか、または前記細胞によって内因的に発現されるＭＨＣ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＭＨＣ遺伝子が、ＭＨＣクラスＩ分子の遺伝子であることを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項6】
前記細胞がＨＬＡを発現しないか、または前記細胞よって内因的に発現されるＨＬＡ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子であることを特徴とする、請求項５に記載の細胞。
【請求項7】
前記移植免疫拒絶に抵抗することは、宿主のＮＫ細胞からの攻撃に抵抗することか、または前記第１のタンパク質が宿主のＮＫ細胞を認識できることであり、好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上を特異的に認識でき、
より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６などのＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できることを特徴とする、請求項１～６のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項8】
前記第１のタンパク質は、宿主のＮＫ細胞を認識できる抗体を含み、好ましくは、前記抗体はＮＫＧ２Ａを認識でき、
さらに好ましくは、前記抗体は、配列番号１０に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１２に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１３に示されるＬＣＤＲ１、配列番号１４に示されるＬＣＤＲ２、配列番号１５に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、前記抗体は、配列番号１に記載されている重鎖可変領域または配列番号２に記載されている軽鎖可変領域を含むことを特徴とする、請求項７に記載の細胞。
【請求項9】
前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、Ｂ２Ｍのうちの１つ以上から選択されるものであり、好ましくは、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子はＢ２Ｍであることを特徴とする、請求項８に記載の細胞。
【請求項10】
前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択されることを特徴とする、請求項３または４に記載の細胞。
【請求項11】
前記第１のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、宿主の免疫エフェクター細胞に対する阻害または殺傷を媒介することを特徴とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項12】
前記第２のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、腫瘍または病原体に対する阻害または殺傷を媒介することを特徴とする、請求項４に記載の細胞。
【請求項13】
前記細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子と内因性ＴＣＲ遺伝子によってサイレンシングされたＴ細胞であり、好ましくは、前記細胞は、Ｂ２ＭとＴＣＲ遺伝子によってサイレンシングされたＴ細胞であることを特徴とする、請求項６に記載の細胞。
【請求項14】
前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡまたはＣＤ１９を特異的に認識でき、好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含むことを特徴とする、請求項４に記載の細胞。
【請求項15】
遺伝子が遺伝子編集技術によりサイレンシングされたことを特徴とする、請求項５、６または１３に記載の細胞。
【請求項16】
前記第１のタンパク質は、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する抗体、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、好ましくは宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体とは、連結ペプチドによって連結され、
さらに好ましくは、前記第１のタンパク質は、配列番号９に示される配列を有することを特徴とする、請求項１０に記載の細胞。
【請求項17】
移植免疫拒絶に抵抗する細胞であって、前記細胞が、宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識することができるＴ細胞受容体を有するＴ細胞であり、好ましくは、前記細胞が宿主の免疫エフェクター細胞に対して阻害または殺傷機能を有することを特徴とする、細胞。
【請求項18】
前記細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体であることを特徴とする、請求項１７に記載の細胞。
【請求項19】
前記細胞がＭＨＣを発現しないか、または前記細胞によって内因的に発現されるＭＨＣ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＭＨＣ遺伝子が、ＭＨＣクラスＩ分子の遺伝子であることを特徴とする、請求項１７または１８項に記載の細胞。
【請求項20】
前記細胞がＨＬＡを発現しないか、または前記細胞よって内因的に発現されるＨＬＡ遺伝子がサイレンシングされ、好ましくは、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子であり、好ましく、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、Ｂ２Ｍのうちの１つ以上から選択されるものであり、好ましくは、前記ＨＬＡ－Ｉ遺伝子はＢ２Ｍであることを特徴とする、請求項１９に記載の細胞。
【請求項21】
前記Ｔ細胞受容体は、宿主のＮＫ細胞を認識することができ、好ましくは、前記Ｔ細胞受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上を特異的に認識でき、
より好ましくは、前記Ｔ細胞受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６であるＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できることを特徴とする、請求項１７～２０のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項22】
前記第２のタンパク質はキメラ受容体であり、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択され、第２のタンパク質を含むキメラ受容体は、第２のタンパク質、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡまたはＣＤ１９を特異的に認識でき、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡを特異的に認識できる抗体を含み、
さらに好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１８に示されるＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ３を含み、
さらにより好ましくは、ＢＣＭＡを特異的に認識する前記抗体は、配列番号２２に示される重鎖可変領域および配列番号２３に示される軽鎖可変領域を含むことを特徴とする、請求項１８に記載の細胞。
【請求項23】
請求項１～２２のいずれか１項に記載の細胞を投与することを特徴とする、移植免疫拒絶を予防または調節する方法。
【請求項24】
外因性細胞に対するＮＫ細胞の攻撃を予防または調節する方法であって、ＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現する免疫エフェクター細胞を投与し、任意選択で、前記外因性細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞、または操作されたＴ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞であることを特徴とする、前記方法。
【請求項25】
前記外因性細胞は免疫エフェクター細胞であり、好ましくは、前記外因性細胞は第２の受容体を発現することを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記第２の受容体は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体であり、好ましくは、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択されることを特徴とする、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質が認識する抗原は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上であり、より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６であるＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できることを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
【請求項28】
前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、ＣＩＫ細胞、および幹細胞に由来する免疫エフェクター細胞を含むことを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
【請求項29】
外因性免疫エフェクター細胞に対するＮＫ細胞の攻撃を予防または調節する方法であって、前記外因性免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現し、好ましくは、前記外因性免疫エフェクター細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子を含まない細胞、または内因性のＨＬＡ－Ｉ遺伝子がサイレンシングされた細胞であり、
より好ましくは、前記外因性免疫エフェクター細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子を含まない細胞、またはＢ２Ｍ遺伝子がサイレンシングされた細胞であることを特徴とする、前記方法。
【請求項30】
前記外因性免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞であり、好ましくは、ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体であることを特徴とする、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
ＮＫ細胞を認識する前記第１のタンパク質が認識する抗原は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原のうちの１つ以上であり、より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、及びＮＫＰ４６であるＮＫ細胞表面抗原の１つ以上を特異的に認識できることを特徴とする、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択されることを特徴とする、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記外因性免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、好ましくは、前記第２のタンパク質はキメラ受容体であり、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択されることを特徴とする、請求項２９～３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項34】
前記第１のタンパク質は、ＮＫ細胞を認識する抗体および腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体を含むキメラ抗原受容体、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）であることを特徴とする、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
前記第１のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、宿主の免疫エフェクター細胞に対する阻害または殺傷を媒介することを特徴とする、請求項２９に記載の細胞。
【請求項36】
前記第２のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外シグナルドメインを含み、好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達し、腫瘍または病原体に対する阻害または殺傷を媒介することを特徴とする、請求項３３に記載の細胞。
【請求項37】
前記第１のタンパク質は、宿主の免疫エフェクター細胞を認識する抗体、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、好ましくは宿主の免疫エフェクター細胞を認識する前記抗体と、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する前記抗体とは、連結ペプチドによって連結され、
さらに好ましくは、前記第１のタンパク質は、配列番号９に示される配列を有することを特徴とする、請求項２９に記載の細胞。
【手続補正書】
【提出日】2023-09-14
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
宿主の１つ以上の免疫エフェクター細胞を認識する第１のタンパク質を発現し、好ましくは、宿主の免疫エフェクター細胞を阻害または殺傷する機能を有することを特徴とする、移植免疫拒絶に抵抗する細胞。
【請求項2】
第１のタンパク質を発現する前記細胞が免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞の機能を有する人工的に改変された細胞であり、
好ましくは、第１のタンパク質を発現する前記細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、ＣＩＫ細胞、および幹細胞に由来する免疫エフェクター細胞からなる群より選択される、
ことを特徴とする、
請求項１に記載の細胞。
【請求項3】
前記第１のタンパク質は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体であるか、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１または２に記載の細胞。
【請求項4】
第１のタンパク質を発現する前記細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、
好ましくは、第２のタンパク質は、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ３、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｂ７Ｈ３、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、ＦＡＰ、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、ＣＤ１９またはこれらの組合せを特異的に認識し;
好ましくは、第２のタンパク質は、配列番号１６、１７、１８、１９、２０および２１で表されるアミノ酸配列；または、配列番号２２および２３で表されるアミノ酸配列；または、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項5】
前記移植免疫拒絶への抵抗は、ＮＫ細胞の攻撃への抵抗である、または前記第１のタンパク質がＮＫ細胞を認識する
ことを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項6】
前記第１のタンパク質は、ＮＫ細胞を認識する抗体を含み、好ましくは、前記抗体はＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ９４を認識する；
より好ましくは、前記抗体は、配列番号１０で表されるＨＣＤＲ１、配列番号１１で表されるＨＣＤＲ２、配列番号１２で表されるＨＣＤＲ３、配列番号１３で表されるＬＣＤＲ１、配列番号１４で表されるＬＣＤＲ２、配列番号１５で表されるＬＣＤＲ３を含む；または、
前記抗体は、配列番号１に記載されている重鎖可変領域または配列番号２に記載されている軽鎖可変領域を含む；または、
前記第１のタンパク質は、配列番号５または９で表されるアミノ酸配列を含む
ことを特徴とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項7】
前記第１のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、好ましくは、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８およびＣＤ８αから選択される；および／または、細胞内シグナル伝達ドメインは、刺激分子および／または共刺激分子の機能的シグナル伝達ドメインを含む；
好ましくは、細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３ζまたはこれらの組合せから選択され、
好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達することにより、宿主の免疫エフェクター細胞の阻害または殺傷を媒介する、
ことを特徴とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項8】
前記第２のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞外シグナルドメインを含み、好ましくは、前記細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達することにより、腫瘍または病原体の阻害または殺傷を媒介する
ことを特徴とする、請求項４に記載の細胞。
【請求項9】
第１のタンパク質を発現する前記細胞は、内因性ＨＬＡ－Ｉ遺伝子と内因性ＴＣＲ遺伝子がサイレンシングされたまたはノックアウトされたＴ細胞である；または、
Ｂ２Ｍ遺伝子とＴＣＲ遺伝子がサイレンシングされたまたはノックアウトされたＴ細胞である
ことを特徴とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項10】
前記第１のタンパク質は、免疫エフェクター細胞を認識する抗体、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み、好ましくは、腫瘍抗原は、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ３、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｂ７Ｈ３、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、ＦＡＰ、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、ＣＤ１９またはこれらの組合せを含み；
さらに好ましくは、前記第１のタンパク質は、配列番号９で表される配列を有する
ことを特徴とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項11】
移植免疫拒絶を予防または調節するための方法における使用のための、宿主の１以上の免疫エフェクター細胞を認識する第１のタンパク質を発現する請求項１～１０のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項12】
外因性細胞に対するＮＫ細胞の攻撃を予防または調節するための方法における使用のための、ＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現する、別の免疫エフェクター細胞。
【請求項13】
前記外因性細胞は免疫エフェクター細胞であり、前記外因性細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または幹細胞、または操作されたＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または幹細胞から選択されてもよく；
および／または、前記外因性細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子を含まない、または、内因性ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、サイレンシングまたはノックアウトされてもよく；
および／または、前記外因性細胞は、宿主の自己細胞に由来するか、または、別の同種異系に由来する；
好ましくは、前記外因性細胞は第２の受容体を発現し、
好ましくは、第２の受容体は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体である、または、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）からなる群より選択される
ことを特徴とする、請求項１２に記載の使用のための免疫エフェクター細胞。
【請求項14】
ＮＫ細胞を認識する別の免疫エフェクター細胞の前記第１のタンパク質により認識される抗原は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原からなる群より選択される１つ以上であり、より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、およびＮＫＰ４６からなる群より選択される１つ以上のＮＫ細胞表面抗原を特異的に認識する
ことを特徴とする、請求項１２に記載の使用のための免疫エフェクター細胞。
【請求項15】
ＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現する前記別の免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、ＣＩＫ細胞、または幹細胞に由来する免疫エフェクター細胞を含む、および／または、
第１のタンパク質を発現する前記別の免疫エフェクター細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子を含まない、または、内因性ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、サイレンシングまたはノックアウトされている；および／または、
第１のタンパク質を発現する前記別の免疫エフェクター細胞は、宿主の自己細胞に由来するか、または、別の同種異系に由来する、
ことを特徴とする、請求項１２に記載の使用のための免疫エフェクター細胞。
【請求項16】
外因性免疫エフェクター細胞を投与する際のＮＫ細胞の攻撃を予防または調節するための方法における使用のためのＮＫ細胞を認識する第１のタンパク質を発現する外因性免疫エフェクター細胞。
【請求項17】
前記外因性免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞であるか、または幹細胞に由来する、および／または、
前記外因性免疫エフェクター細胞は、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子を含まない、または、内因性ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、サイレンシングまたはノックアウトされている；および／または、
前記外因性免疫エフェクター細胞は、宿主の自己細胞に由来するか、または、別の同種異系に由来する
ことを特徴とする、請求項１６に記載の使用のための外因性免疫エフェクター細胞。
【請求項18】
ＮＫ細胞を認識する外因性免疫エフェクター細胞の前記第１のタンパク質により認識される抗原は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原からなる群より選択される１つ以上の抗原であり、より好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、およびＮＫＰ４６からなる群より選択される、１つ以上のＮＫ細胞表面抗原を特異的に認識する
ことを特徴とする、請求項１７に記載の使用のための外因性免疫エフェクター細胞。
【請求項19】
前記外因性免疫エフェクター細胞は、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する第２のタンパク質をさらに発現し、好ましくは、前記第１のタンパク質および／または前記第２のタンパク質は、キメラ受容体またはＴ細胞受容体であるか、または、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴ細胞受容体、およびＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）からなる群より選択され、
好ましくは、前記第２のタンパク質は、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ３、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｂ７Ｈ３、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、ＦＡＰ、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、ＣＤ１９またはこれらの組合せを特異的に認識する
ことを特徴とする、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の使用のための外因性免疫エフェクター細胞。
【請求項20】
前記第１のタンパク質は、ＮＫ細胞を認識する抗体を認識する抗体を含むキメラ抗原受容体、キメラＴ細胞受容体、またはＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）であり、腫瘍抗原または病原体抗原を認識する抗体も含んでもよく；
好ましくは、腫瘍抗原は、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ３、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｂ７Ｈ３、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、ＦＡＰ、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、ＣＤ１９またはこれらの組合せを含む
ことを特徴とする、請求項１９に記載の使用のための外因性免疫エフェクター細胞。
【請求項21】
前記第１のタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナルドメインを含み、好ましくは、前記外因性免疫エフェクター細胞は、細胞内シグナルドメインを介してシグナルを伝達することにより、宿主の免疫エフェクター細胞の阻害または殺傷を媒介する
ことを特徴とする、請求項１６に記載の使用のための外因性免疫エフェクター細胞。
【請求項22】
第１のタンパク質は、抗原結合領域を有し、抗原結合領域は、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメインフラグメント、またはその同族受容体に接合する天然リガンド、およびそれらの任意の誘導体からなる群より選択される、
請求項１に記載の細胞。
【請求項23】
前記第１のタンパク質を発現する細胞は、前記宿主の自己細胞に由来するか、または、別の同種異系に由来する、請求項１に記載の細胞。
【請求項24】
前記第１のタンパク質は、
ｉ）抗原結合領域、ＴＣＲα鎖およびＴＣＲβ鎖、
ｉｉ）抗原結合領域、およびＴＣＲサブユニット；または、
ｉｉｉ）抗原結合領域、ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメイン、ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメイン、およびＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインの少なくとも一部を含み、
好ましくは、ＴＣＲサブユニットは、ＣＤ３εまたはＣＤ３γから選択される、
請求項３に記載の細胞。
【請求項25】
前記第１のタンパク質を発現する細胞は、ＭＨＣ遺伝子またはＨＬＡ遺伝子を含まないか、または、前記細胞において内因的に発現されるＭＨＣ遺伝子またはＨＬＡ遺伝子は、サイレンシングまたはノックアウトされており；
好ましくは、ＭＨＣ遺伝子は、ＭＨＣクラスＩ分子の遺伝子であり、ＨＬＡは、ＨＬＡ－Ｉの遺伝子であり；
好ましくは、ＨＬＡ－Ｉ遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－ＣまたはＢ２Ｍからなる群より選択される１以上である、
請求項１に記載の細胞。
【請求項26】
前記第１のタンパク質は、
ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２ＣなどのＮＫＧ２受容体ファミリー；ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２／Ｓ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１などの殺傷免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリー；ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、ＮＫＰ４６、ＮＫｐ８０などの天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）；およびＣＤ１５９ａ、ＣＤ１５９ｃ、ＣＤ９４、ＣＤ１５８、ＣＤ５６、ＬＩＲ／ＩＬＴ２、ＣＤ２４４、ＣＤ２２６、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１６１などのＮＫ細胞によって特異的に発現される他の抗原；
からなる群より選択される１以上の抗原を特異的に認識し、
好ましくは、前記第１のタンパク質は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ３０、ＮＫＰ４４、およびＮＫＰ４６からなる群より選択される、１以上のＮＫ細胞表面抗原を認識する、
請求項１に記載の細胞。
【請求項27】
前記別の免疫エフェクター細胞の第１のタンパク質は、抗原結合領域を有し、抗原結合領域は、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメインフラグメント、またはその同族受容体に接合する天然リガンド、およびそれらの任意の誘導体からなる群より選択される、
請求項１２に記載の別の免疫エフェクター細胞。
【請求項28】
前記第１のタンパク質は、抗原結合領域を有し、抗原結合領域は、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメインフラグメント、またはそれらの同族受容体に接合する天然リガンド、およびそれらの任意の誘導体であってもよい、
請求項１６に記載の使用のための外因性免疫エフェクター細胞。
【国際調査報告】