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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-09
(54)【発明の名称】併用療法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/4985 20060101AFI20231226BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231226BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231226BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20231226BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20231226BHJP
【ＦＩ】
A61K31/4985
A61P43/00 121
A61K39/395 N
A61P31/18
C12N15/13 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023534373
(86)(22)【出願日】2021-12-03
(85)【翻訳文提出日】2023-08-07
(86)【国際出願番号】 US2021061697
(87)【国際公開番号】W WO2022125378
(87)【国際公開日】2022-06-16
(31)【優先権主張番号】63/122,031
(32)【優先日】2020-12-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521396042
【氏名又は名称】ヴィーブ、ヘルスケア、カンパニー
【氏名又は名称原語表記】ＶＩＩＶ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ ＣＯＭＰＡＮＹ
(74)【代理人】
【識別番号】100120031
【弁理士】
【氏名又は名称】宮嶋 学
(74)【代理人】
【識別番号】100120617
【弁理士】
【氏名又は名称】浅野 真理
(74)【代理人】
【識別番号】100172557
【弁理士】
【氏名又は名称】鈴木 啓靖
(72)【発明者】
【氏名】ジー、ホン
(72)【発明者】
【氏名】ジェリー、リー、ジェフリー
(72)【発明者】
【氏名】ブライアン、アルビン、ジョーンズ
(72)【発明者】
【氏名】アンドリュー、スパルテンステイン
(72)【発明者】
【氏名】エミール、ジョハン、ベルジュイセン
【テーマコード（参考）】
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C085AA14
4C085BB31
4C085BB41
4C085BB43
4C085BB44
4C085CC23
4C085EE03
4C085GG01
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB22
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA55
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB33
4C086ZC55
(57)【要約】
本発明は、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質の組合せに関する。本発明はまた、治療上有効な量のカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩および治療上有効な量のｇｐ１２０結合タンパク質の併用投与を用いるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を治療する方法を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質を含んでなる組合せであって、前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、ＨＩＶ－１を中和する、前記組合せ。
【請求項2】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、モノクローナル抗体またはそのフラグメントを含んでなる、請求項１に記載の組合せ。
【請求項3】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、前記重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、
前記軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ１アミノ酸、配列番号１９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号２０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有する、請求項１または２に記載の組合せ。
【請求項4】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなるＶＨおよび軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなるＶＬを含んでなり、前記重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、
前記軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１９で示されるＣＤＲＨＬアミノ酸配列および配列番号２０で示されるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有する、請求項１または２に記載の組合せ。
【請求項5】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～４のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項6】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号１で示される可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～４のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項7】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～６のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項8】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号２で示される可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～６のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項9】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が抗原結合フラグメントを含んでなる、請求項１～８のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項10】
前記抗原結合フラグメントがＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦＶまたはｓｃＦＶ２フラグメントを含んでなる、請求項９に記載の組合せ。
【請求項11】
前記モノクローナル抗体が、非修飾定常ドメインに比べて、胎児性Ｆｃ受容体への結合を増強する修飾を含んでなる組換え定常ドメインを含んでなり、前記組換え定常ドメインが、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含んでなるＩｇＧ１定常ドメインである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項12】
前記組合せが、ヒトに１か月毎に１回、２か月毎に１回または３か月毎に１回投与される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項13】
それを必要とするヒトにおいてＨＩＶを治療する方法であって、前記方法が、ヒトに治療上有効な量のカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩および治療上有効な量のｇｐ１２０結合タンパク質を併用投与する工程を含んでなり、前記ｇｐ１２０結合タンパク質がＨＩＶ－１を中和する、前記方法。
【請求項14】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質がモノクローナル抗体またはそのフラグメントを含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、前記重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、
前記軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ１アミノ酸、配列番号１９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号２０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有する、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項16】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなるＶＨおよび軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなるＶＬを含んでなり、前記重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、
前記軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１９で示されるＣＤＲＨＬアミノ酸配列および配列番号２０で示されるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有する、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項17】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項１３～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号１で示される可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項１３～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項１３～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号２で示される可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項１３～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が抗原結合フラグメントを含んでなる、請求項１３～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記抗原結合フラグメントがＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦＶまたはｓｃＦＶ２フラグメントである、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
前記モノクローナル抗体が、非修飾定常ドメインに比べて、胎児性Ｆｃ受容体への結合を増強する修飾を含んでなる組換え定常ドメインを含んでなり、前記組換え定常ドメインが、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含んでなるＩｇＧ１定常ドメインである、請求項１３～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
カボテグラビルおよびｇｐ１２０結合タンパク質の併用投与が逐次投与である、請求項１３～２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
カボテグラビルおよびｇｐ１２０結合タンパク質の併用投与が同時投与である、請求項１３～２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記方法が、カボテグラビルおよびｇｐ１２０結合タンパク質を非経口投与することを含んでなる、請求項１３～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
前記方法が、カボテグラビルおよびｇｐ１２０結合タンパク質をヒトに１か月毎に１回、２か月毎に１回、３か月毎に１回または６か月毎に１回投与することを含んでなる、請求項１３～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
ＨＩＶの治療における使用のための、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質を含んでなる組合せであって、前記ｇｐ１２０結合タンパク質がＨＩＶ－１を中和する、前記組合せ。
【請求項29】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質がモノクローナル抗体またはそのフラグメントを含んでなる、請求項２８に記載の使用のための組合せ。
【請求項30】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、前記重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、
前記軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ１アミノ酸、配列番号１９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号２０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有する、請求項２８または２９に記載の使用のための組合せ。
【請求項31】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなるＶＨおよび軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなるＶＬを含んでなり、前記重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、
前記軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１９で示されるＣＤＲＨＬアミノ酸配列および配列番号２０で示されるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有する、請求項２８または２９に記載の使用のための組合せ。
【請求項32】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項２８～３１のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項33】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号１で示される可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項２８～３１のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項34】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項２８～３３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項35】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が、配列番号２で示される可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなる、請求項２８～３３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項36】
前記ｇｐ１２０結合タンパク質が抗原結合フラグメントを含んでなる、請求項２８～３５のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項37】
前記抗原結合フラグメントがＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦＶまたはｓｃＦＶ２フラグメントである、請求項３６に記載の使用のための組合せ。
【請求項38】
前記モノクローナル抗体が、非修飾定常ドメインに比べて、胎児性Ｆｃ受容体への結合を増強する修飾を含んでなる組換え定常ドメインを含んでなり、前記組換え定常ドメインが、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含んでなるＩｇＧ１定常ドメインである、請求項２８～３６のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項39】
前記組合せが、逐次に併用投与される、請求項２８～３８のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項40】
前記組合せが、同時に併用投与される、請求項２８～３８のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項41】
前記組合せが、非経口的に併用投与される、請求項２８～３８のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項42】
前記ヒトに１か月毎に１回、２か月毎に１回、３か月毎に１回または６か月毎に１回併用投与される、請求項２８～４１のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項43】
ＨＩＶの治療における使用のための医薬の製造における、請求項１～１３のいずれか一項に記載のカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質の使用。
【請求項44】
インテグラーゼ鎖転移阻害剤カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびＨＩＶ－１を中和するｇｐ１２０結合タンパク質を含んでなるキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本願は、２０２０年１２月７日出願の米国仮特許出願第６３／１２２，０３１号の優先件を主張するものである。本願の内容は、参照により全体が本明細書の一部とされる。
本願は、２０２０年１２月７日出願の米国仮特許出願第６３／１２２，０３１号の優先件を主張するものである。本願の内容は、参照により全体が本明細書の一部とされる。
【0002】
発明の分野
本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の治療方法に関する。特に、本発明は、ＨＩＶ感染の治療のための注射可能な組合せに関する。
本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の治療方法に関する。特に、本発明は、ＨＩＶ感染の治療のための注射可能な組合せに関する。
【背景技術】
【0003】
１型ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ－１）感染、およびその結果としての後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、抗ＨＩＶ－１治療薬を開発するための広範な努力にもかかわらず、世界的な公衆衛生の脅威となり続けている。ＨＩＶ－１は変異率が高く、組み換え頻度も高いため、ウイルスの複製が十分に阻害されないと、薬剤耐性バリアントが急速に出現する可能性がある。Iyidogan, P., & Anderson, K. S. (2014). Current perspectives on HIV-1 antiretroviral drug resistance. Viruses, 6(10), 4095-4139。投与レジメンへのコンプライアンスの問題、忍容性の低さおよび抗レトロウイルス療法への過去の曝露も、患者をＨＩＶ－１薬剤耐性株発症の危険にさらす。Obasa AE, Mikasi SG, Brado D, et al. Front Microbiol. 2020;11:438; Rossouw TM, Feucht UD, Melikian G, et al. PLoS One. 2015;10(7)。
【0004】
高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）は、複数のメカニズム、特にＨＩＶ複製酵素であるプロテアーゼ、インテグラーゼおよびトランスアミナーゼによってウイルス複製を阻害する異なる薬剤の併用投与に焦点を当てている。１つの薬剤に耐性のあるウイルスの増殖は、他の２つの薬剤の作用によって阻害されるようになるため、複数のメカニズムの阻害が必要である。Shafer RW, Vuitton DA. Biomed Pharmacother. 1999 Mar;53(2):73-86。残念なことに、ＨＩＶ薬剤耐性は複数のメカニズムの阻害の有効性を低下または消失させる。
【0005】
ＨＩＶ－１薬剤耐性との絶え間ない戦いにおける新たな戦略としては、投与回数を減らすために長時間作用型製剤に焦点を当てた抗レトロウイルス療法がある。薬剤耐性を回避するためのもう１つの治療戦略には、広域中和抗体（ｂＮＡｂ）によるＨＩＶ－１の中和がある。中和とは、抗体分子が宿主細胞の外にあるウイルスの完全な感染形態であるビリオンと結合した際に起こる感染性の喪失と定義される。特異的ｂＮＡｂは、ウイルス膜糖タンパク質ｇｐ１２０のＨＩＶ－１エンベロープＣＤ４結合部位に結合し、ビリオンがＴ細胞に付着してそのＲＮＡを伝達する能力を中和する。様々な認識と糖タンパク質アミノ酸配列が保存されている十分な領域を有するＨＩＶ－１を同定する中和抗体が開発されている。Burton, D., Mascola, J. Nat Immunol 16, 571-576 (2015)。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
現在、当技術分野では、より少ない投与量で投与コンプライアンスを向上させることで
感染を治療するＨＩＶ－１治療レジメンを開発する必要性が残っている。
感染を治療するＨＩＶ－１治療レジメンを開発する必要性が残っている。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明の第１の態様によれば、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩と、ｇｐ１２０結合タンパク質とを含んでなる組合せであって、ｇｐ１２０結合タンパク質がＨＩＶ－１を中和する、組合せが提供される。
【0008】
本発明の第２の態様によれば、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶを治療する方法であって、ヒトに治療上有効な量のカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩と、治療上有効な量のｇｐ１２０結合タンパク質とを併用投与する工程を含んでなり、ｇｐ１２０結合タンパク質はＨＩＶ－１を中和する、方法が提供される。
【0009】
本発明の第３の態様によれば、ＨＩＶの治療における使用のための、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩とｇｐ１２０結合タンパク質とを含んでなる組合せであって、ｇｐ１２０結合タンパク質がＨＩＶ－１を中和する、組合せが提供される。
【0010】
本発明のさらなる態様によれば、ＨＩＶの治療における使用のための医薬の製造における、請求項１～１３に記載のカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質の使用が提供される。
【0011】
本発明の最後の態様によれば、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩と、ＨＩＶ－１を中和するｇｐ１２０結合タンパク質とを含んでなるキットが提供される。
【0012】
本発明は多くの点で有利である。具体的には、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩と、ｇｐ１２０結合タンパク質との併用投与の方法は、安全で、長期間安定で、ＨＩＶ治療に有効であり得る。カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩と、ｇｐ１２０結合タンパク質とを含んでなる本発明による組合せは、ＨＩＶ感染からの保護およびＨＩＶ中和を提供し得る。
【発明を実施するための形態】
【0013】
定義
本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物」は、薬学的使用に適切な組成物を意味する。
本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物」は、薬学的使用に適切な組成物を意味する。
【0014】
本明細書で使用する場合、用語「組合せ」は、併用投与する少なくとも２つの治療薬を指す。本明細書で使用する場合、用語「治療薬」は、組織、系、動物、哺乳動物、ヒトまたはその他の対象に所望の効果をもたらす物質を意味すると理解される。例えば、非固定用量の組合せが企図される。
【0015】
本明細書で使用する場合、用語「併用投与」は、治療上有効な量の化合物がともに患者の体内に存在するような同時投与または逐次投与を指す。用語「併用投与」はまた、非固定用量の一部として、任意に２つ以上の製剤で同時に投与することを指す。用語「併用投与」はまた、異なるスケジュールでの投与も指すが、所定の治療サイクル内で投与され得る。併用投与には、インテグラーゼ鎖転移阻害剤およびｇｐ１２０結合タンパク質の医薬組成物の投与、例えば、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質の互いの投与から数秒、数分、数時間、数日または数週間以内の投与が含まれる。例えば、いくつかの実施形態では、インテグラーゼ鎖転移阻害剤またはｇｐ１２０結合タンパク質の一方の単位用量が最初に投与され、次いで数秒または数分以内に他方が同じ経路または異なる経路のいずれかで投与される。
【0016】
本明細書で使用する場合、用語「薬学上許容可能な塩」は、対象化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒物学的影響が最小である塩を指す。これらの薬学上許容可能な塩は、化合物の最終的な単離および精製中にその場で調製することもできるし、遊離酸または遊離塩基の形態で精製した化合物を、それぞれ適切な塩基または酸と別々に反応させることによって調製することもできる。
【0017】
薬学上許容可能な塩としては、とりわけ、Berge, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19に記載されているもの、またはP H Stahl and C G Wermuth, editors, Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use, Second Edition Stahl/Wermuth: Wiley- VCH/VHCA, 2011 (http://www.wiley.com/WileyCDA/WileyTitle/productCd-3906390519.html参照)に挙げられているものが含まれる。
【0018】
適切な薬学上許容可能な塩としては、酸または塩基付加塩を含み得る。本発明の適切な薬学上許容可能な塩には、塩基付加塩が含まれる。
【0019】
代表的な薬学上許容可能な塩基付加塩としては、限定されるものではないが、アルミニウム、２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－１，３－プロパンジオール（ＴＲＩＳ、トロメタミン）、アルギニン、ベネタミン（Ｎ－ベンジルフェネチルアミン）、ベンザチン （Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン）、ビス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、ビスマス、カルシウム、クロロプロカイン、コリン、クレミゾール（１－ｐクロロベンジル－２－ピロリルジン－１’－イルメチルベンズイミダゾール）、シクロヘキシルアミン、ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、ジエチルトリアミン、ジメチルアミン、ジメチルエタノールアミン、ドーパミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｌ－ヒスチジン、鉄、イソキノリン、レピジン、リチウム、リシン、マグネシウム、メグルミン（Ｎ－メチルグルカミン）、ピペラジン、ピペリジン、カリウム、プロカイン、キニーネ、キノリン、ナトリウム、ストロンチウム、ｔ－ブチルアミンおよび亜鉛が挙げられる。
【0020】
「治療上有効な量」または「有効量」とは、病態を予防するか、または治療される障害の１または２以上の症状をある程度緩和する、投与される化合物の量を指す。本明細書での使用に適切な医薬組成物には、有効成分が、意図された目的を達成するのに十分な量で含有される組成物が含まれる。治療上有効な量の決定は、特に本明細書に提供される詳細な開示に照らせば、当業者の能力の範囲内である。
【0021】
本明細書で使用する場合、治療方法に関して用語「治療」または「治療する」は、特定の状態を緩和すること、病態の症状を除去または軽減すること、病態の進行、浸潤または拡散を緩徐化または排除すること、および過去に罹患した対象における病態の再発を軽減または遅延させることを指す。本発明はさらに、それを必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）におけるいくつかの状態の治療のための医薬の調製のための、本発明の化合物または組成物の使用を提供する。
【0022】
本明細書で使用する場合、治療方法に関して用語「非経口」または「非経口的に」は、経口投与以外の医薬化合物または組成物の投与経路を指す。本明細書での使用に適切な、非経口投与経路としては、注射、注入、移植または消化管以外の他のいくつかの経路が挙げられる。非経口注射投与経路としては、静脈内、筋肉内および皮下が挙げられる。
【0023】
本明細書で使用する場合、用語「ｇｐ１２０結合タンパク質」は、エンベロープ糖タンパク質ＧＰ１２０に結合し得る抗体およびその他のタンパク質構築物、例えばドメインを指す。用語「ｇｐ１２０結合タンパク質」および「抗原結合タンパク質」は、本明細書で互換的に使用される。これには天然の同族リガンドまたは受容体は含まれない。ｇｐ１２０結合タンパク質の例として、相補性決定領域（ＣＤＲ）配列番号１、２、１５、１６、１７、１８、１９または２０を有する米国特許第１０，５６２，９６０号に開示されている抗体Ｎ６が挙げられる。Ｎ６ＬＳは、相補性決定領域（ＣＤＲ）配列番号１、２、１５、１６、１７、１８、１９または２０を有し、かつ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含んでなるＩｇＧ１定常ドメインを有するｇｐ１２０結合タンパク質９６０である。
【0024】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、本明細書では最も広義で、免疫グロブリン様ドメインを有する分子（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）を指して使用され、モノクローナル抗体またはそのフラグメント、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、広域中和抗体、二重特異性抗体を含む多重特異性抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体；単一可変ドメイン（例えば、ドメイン抗体（ＤＡＢ））、抗原結合抗体フラグメント、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ（disulphide linked Fv）、単鎖Ｆｖ、ジスルフィド結合ｓｃＦｖ（disulphide-linked scFv）、ダイアボディ、ＴＡＮＤＡＢなど、ならびに上記のいずれかの修飾形態を指す（別の「抗体」形式の概要は、Holliger and Hudson, Nature Biotechnology, 2005, Vol 23, No. 9, 1126-1136参照）。
【0025】
本明細書で互換的に使用される完全抗体、全抗体またはインタクトな抗体という用語は、分子量約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質を指す。インタクトな抗体は、共有結合性ジスルフィド結合で連結された２本の同一の重鎖（ＨＣ）と２本の同一の軽鎖（ＬＣ）から構成される。このＨ２Ｌ２構造は、折り畳まれて、「Ｆａｂ」フラグメントとして知られる２つの抗原結合フラグメントと「Ｆｃ」結晶化可能フラグメントを含んでなる３つの機能的ドメインを形成する。Ｆａｂフラグメントは、アミノ末端の可変ドメインとしての可変重鎖（ＶＨ）または可変軽鎖（ＶＬ）、およびカルボキシル末端の定常ドメインとしてのＣＨ１（重鎖）およびＣＬ（軽鎖）から構成される。Ｆｃフラグメントは、対をなすＣＨ２領域とＣＨ３領域の二量体化によって形成される２つのドメインから構成される。Ｆｃは免疫細胞上の受容体に結合するか、古典的補体経路の第一成分であるＣ１ｑに結合することにより、エフェクター機能を発揮し得る。抗体の５つのクラスＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥおよびＩｇＤは、それぞれμ、α、γ、εおよびδと呼ばれる異なる重鎖アミノ酸配列によって定義され、各重鎖はκ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかと対になることができる。血清中の抗体の大部分はＩｇＧクラスに属し、ヒトＩｇＧには４つのアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）があり、その配列は主にヒンジ領域で異なっている。
【0026】
完全ヒト抗体は、酵母ベースのライブラリーまたはヒト抗体のレパートリーを産生できるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を用いるなど、様々な方法を用いて得ることができる。対象とする抗原に結合するヒト抗体を表面に提示する酵母は、ＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞選別）ベースの方法または標識抗原を用いたビーズ上への捕捉を用いて選択することができる。ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するように改変したトランスジェニック動物を対象とする抗原で免疫し、Ｂ細胞選別技術を用いて抗原特異的ヒト抗体を単離することができる。次に、これらの技術を用いて産生されたヒト抗体は、親和性、開発可能性および選択性などの所望の特性について特性評価を行うことができる。
【0027】
代替の抗体形式としては、抗原結合タンパク質の１または２以上のＣＤＲをアフィボディ、ＳｐＡスキャフォールド、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマー（例えば、米国特許出願公開第２００５／００５３９７３号、第２００５／００８９９３２号、第２００５／０１６４３０１号参照）またはＥＧＦドメインなどの適切な非免疫グロブリンタンパク質スキャフォールドまたは骨格上に配置することができる代替スキャフォールドが挙げられる。
【0028】
本明細書で使用する場合、用語「抗原結合部位」は、抗原に特異的に結合し得る、抗原結合タンパク質の部位を指す。抗原結合部位は単一可変ドメインであってもよいし、または標準的な抗体に見出せるようなＶＨ／ＶＬドメイン対であってもよい。単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）ドメインもまた抗原結合部位を提供し得る。
【0029】
本明細書で使用する場合、用語「多重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なる抗原結合部位を含んでなる抗体を指す。これらの抗原結合部位のそれぞれは異なるエピトープに結合することができ、これらは同じ抗原にあっても異なる抗原にあってもよい。多重特異性抗原結合タンパク質は、２つ以上の抗原、例えば、２つの抗原または３つの抗原または４つの抗原に特異性を有し得る。
【0030】
二重特異性抗体の分類および形式は、Labrijn et al 2019およびBrinkmann and Kontermann 2017に総説として包括的に記載されている。二重特異性は、一般に対称型または非対称型に分類することができる。二重特異性はＦｃを有してもよいし、またはフラグメントベース（Ｆｃを欠く）であってもよい。フラグメントベースの二重特異性は、Ｆｃ領域を有しない１分子に複数の抗原結合抗体フラグメントを組み合わせ、例えば、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ２、直交性Ｆａｂ－Ｆａｂ（orthogonal Fab-Fab）、Ｆａｂ－Ｆｖ、タンデムｓｃＦｃ（例えば、ＢｉＴＥおよびＢｉＫＥ分子）、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、タンデムｄＡｂなどがある。
【0031】
対称形式は、Ｆｃ融合タンパク質であるフラグメントベース形式および抗体フラグメントが通常の抗体分子に融合された形式を含む、単一のポリペプチド鎖または単一のＨＬ対に複数の結合特異性が組み合わされている。対称形式の例としては、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＴＶＤ－Ｉｇ、ＣＯＤＶ－Ｉｇ、（ｓｃＦｖ）４－Ｆｃ、ＩｇＧ－（ｓｃＦｖ）２、四価ＤＡＲＴ－Ｆｃ、Ｆ（ａｂ）４ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＩｇＧ－ＨＣ－ｓｃＦｖ、ＩｇＧ－ＬＣ－ｓｃＦｖ、ｍＡｂ－ｄＡｂなどが挙げられる。
【0032】
非対称形式は、３本（共通重鎖または軽鎖を使用する場合）または４本のポリペプチド鎖の共発現の際に、適正なＨＬ鎖の対形成を強制すること、および／またはＨ鎖のヘテロ二量化を促進することで、天然抗体の本来の構造を可能な限り保持し、例えば、Ｔｒｉｏｍａｂ、ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｒｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ＡＲＴ－Ｉｇ）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ共通軽鎖、ＺＷ１共通軽鎖、ＤｕｏＢｏｄｙおよびノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）、ＤｕｅｔＭａｂ、κλボディ、Ｘｍａｂ、ＹＢＯＤＹ、ＨＥＴ－ｍＡｂ、ＨＥＴ－Ｆａｂ、ＤＡＲＴ－Ｆｃ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、マウス／ラットキメラＩｇＧが挙げられる。
【0033】
二重特異性形式にはまた、Ａｆｆｉｍａｂ、Ｆｙｎｏｍａｂ、Ｚｙｂｏｄｙおよびアンチカリン－ＩｇＧ融合体、ＩｍｍＴＡＣなどの非Ｉｇスキャフォールドに融合された抗体も含む。
【0034】
本明細書で使用する場合、用語「キメラ抗原受容体」（「ＣＡＲ」）は、細胞外抗原結合ドメイン（通常、モノクローナル抗体またはそのフラグメント、例えば、ｓｃＦｖ形態のＶＨドメインおよびＶＬドメインに由来する）、場合により、スペーサー領域、膜貫通領域および１または２以上の細胞内エフェクタードメインからなる遺伝子工学操作された受容体を指す。ＣＡＲは、キメラＴ細胞受容体またはキメラ免疫受容体（ＣＩＲ）とも呼ばれてきた。ＣＡＲは、一般に、Ｔ細胞の特異性を所望の細胞表面抗原に向け直すためにＴ細胞などの造血細胞に導入してＣＡＲ－Ｔ治療薬とする。
【0035】
用語「スペーサー領域」は、本明細書で使用する場合、標的結合ドメインに膜貫通ドメインを連結する働きをするオリゴペプチドまたはポリペプチドを指す。この領域は、「ヒンジ領域」または「スターク領域（stalk region）」と呼ばれることもある。スペーサーのサイズは、ＣＡＲ：標的結合時に設定距離（例えば、１４ｎＭ）を維持するために、標的エピトープの位置によって可変である。
【0036】
用語「膜貫通ドメイン」は、本明細書で使用する場合、細胞膜を横切るＣＡＲ分子の部分を指す。
【0037】
用語「細胞内エフェクタードメイン」（「シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）は、本明細書で使用する場合、抗原結合ドメインが標的に結合した後に細胞内シグナル伝達を担うＣＡＲ内のドメインを指す。細胞内エフェクタードメインは、ＣＡＲが発現される免疫細胞の通常のエフェクター機能の少なくとも１つの活性化を担う。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性、またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。
【0038】
本明細書で開示されるＶＨおよび／またはＶＬドメインは、例えばｓｃＦｖの形態でＣＡＲ－Ｔ治療薬に導入され得るということが当業者に認識されるであろう。
【0039】
本明細書で使用する場合、本明細書を通じて使用される用語「中和する」は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、本明細書に記載される抗原結合タンパク質の存在下で、抗原結合タンパク質の不在下でのｇｐ１２０の活性に比べて、ｇｐ１２０の生物活性が低下することを意味する。中和は、ｇｐ１２０がその受容体に結合するのを遮断すること、ｇｐ１２０がその受容体を活性化するのを妨げること、ｇｐ１２０またはその受容体を下方調節すること、またはエフェクター機能に影響を及ぼすことの１または２以上によるものであり得る。
【0040】
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤＲ」は、抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列として定義される。これらは、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変領域には、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。よって、「ＣＤＲ」は、本明細書で使用する場合、３つ総ての重鎖ＣＤＲ、３つ総ての軽鎖ＣＤＲ、総ての重鎖および軽鎖ＣＤＲ、または少なくとも２つのＣＤＲを指す。
【0041】
本明細書を通して、可変ドメイン配列中のアミノ酸残基および完全長の抗原結合配列内の可変ドメイン領域中のアミノ酸残基、例えば、抗体重鎖配列又は抗体軽鎖配列内のアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従って符番される。同様に、実施例で使用される用語「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従う。さらに詳しくは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)を参照のこと。
【0042】
可変ドメイン配列および完全長の抗体配列中のアミノ酸残基についての別のナンバリング規則が存在することは、当業者には自明である。ＣＤＲ配列についての別のナンバリング規則も存在し、例えば、Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883に提示されているナンバリング規則である。抗原結合タンパク質の構造及びタンパク質フォールディングは、他の残基がＣＤＲ配列の一部とみなされることを意味し、当業者にはそのように理解される。
【0043】
当業者に利用可能なＣＤＲ配列の他のナンバリング規則として、「ＡｂＭ」（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ）および「ｃｏｎｔａｃｔ」（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ）法がある。
【0044】
以下の表１に、各ＣＤＲまたは結合単位に関して各ナンバリング規則を用いた１つの定義を示す。表１では、可変ドメインアミノ酸配列の符番にＫａｂａｔナンバリング法を用いている。ＣＤＲ定義の一部は使用した個々の刊行物によって異なる場合があることに留意されたい。
【0045】
【表1】
【0046】
よって、以下のＣＤＲアミノ酸配列のいずれか１つまたは組合せを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。
配列番号１５のＣＤＲＨ１：ＡＨＩＬＦ
配列番号１６のＣＤＲＨ２：ＷＩＫＰＱＹＧＡＶＮＦＧＧＧＦＲＤ
配列番号１７のＣＤＲＨ３：ＤＲＳＹＧＤＳＳＷＡＬＤＡ
配列番号１８のＣＤＲＬ１：ＱＴＳＱＧＶＧＳＤＬＨ
配列番号１９のＣＤＲＬ２：ＨＴＳＳＶＥＤ
配列番号２０のＣＤＲＬ３：ＱＶＬＱＦ
配列番号１５のＣＤＲＨ１：ＡＨＩＬＦ
配列番号１６のＣＤＲＨ２：ＷＩＫＰＱＹＧＡＶＮＦＧＧＧＦＲＤ
配列番号１７のＣＤＲＨ３：ＤＲＳＹＧＤＳＳＷＡＬＤＡ
配列番号１８のＣＤＲＬ１：ＱＴＳＱＧＶＧＳＤＬＨ
配列番号１９のＣＤＲＬ２：ＨＴＳＳＶＥＤ
配列番号２０のＣＤＲＬ３：ＱＶＬＱＦ
【0047】
本発明のある実施形態では、ＣＤＲは、少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失または付加によって改変されていてもよく、このバリアント抗原結合タンパク質は実質的に、Ｎ６またはＮ６ＬＳなどの非改変タンパク質の生物学的特徴を保持する。
【0048】
ＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３のそれぞれは、単独でまたはいずれかの他のＣＤＲと組み合わせて、任意の順列もしくは組合せで改変されてもよいことが認識されるであろう。１つの実施形態では、ＣＤＲは、３個までのアミノ酸、例えば、１または２個のアミノ酸、例えば、１個のアミノ酸の置換、欠失または付加により改変される。一般に、改変は、置換、特に、例えば以下の表２に示されるような保存的置換である。
【0049】
【表2】
【0050】
例えば、バリアントＣＤＲにおいて、別の定義、例えば、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａの一部としてＣＤＲを含んでなる隣接残基は、保存的アミノ酸残基で置換してもよい。
【0051】
上記のようなバリアントＣＤＲを含んでなるこのような抗原結合タンパク質は、本明細書では「機能的ＣＤＲバリアント」と呼ぶ場合がある。
【0052】
本明細書で使用する場合、用語「エピトープ」は、抗原結合タンパク質の特定の結合ドメインと接触する抗原の部分を指し、パラトープとも呼ばれる。エピトープは、直鎖状であっても、立体配座型／不連続であってもよい。立体配座型または不連続エピトープは、他の配列によって分離されているアミノ酸残基、すなわち、ポリペプチド鎖の三次元折り畳みによって組み立てられた抗原の一次配列において連続した配列にないアミノ酸残基を含んでなる。残基はポリペプチド鎖の異なる領域からのものであってもよいが、抗原の三次元構造では近接している。多量体抗原の場合、立体配座型または不連続エピトープは、異なるペプチド鎖の残基を含み得る。エピトープに含まれる特定の残基は、コンピュータモデリングプログラム、またはＸ線結晶学などの当技術分野で公知の方法によって得られる三次元構造によって決定することができる。エピトープマッピングは、Methods in Molecular Biology ‘Epitope Mapping Protocols’, Mike Schutkowski and Ulrich Reineke (volume 524, 2009) and Johan Rockberg and Johan Nilvebrant (volume 1785, 2018)などの刊行物に記載されているような当業者に公知の様々な技術を用いて実施することができる。例示的な方法としては、ｐｅｐｓｃａｎなどのペプチドに基づくアプローチが挙げられ、この方法では、ＥＬＩＳＡなどの技術を使用して、あるいは、例えばファージによる、ペプチドまたはタンパク質変異体の大規模なライブラリーのｉｎ ｖｉｔｒｏディスプレイを用いて一連の重複するペプチドが結合についてスクリーニングされる。エピトープの詳細な情報は、Ｘ線結晶構造解析、溶液核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法および低温電子顕微鏡（ｃｒｙｏ－ＥＭ）を含む構造的技術によって決定することができる。アラニンスキャニングなどの変異誘発は、エピトープマッピングのために結合喪失の分析を使用する効果的なアプローチである。別法として、水素／重水素交換（ＨＤＸ）とタンパク質分解および液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）との組合せによる、不連続または立体配座エピトープの特性決定を行う方法もある。
【0053】
本発明のｇｐ１２０結合タンパク質と参照ｇｐ１２０結合タンパク質、例えば、参照抗体との間の競合は、ＥＬＩＳＡ、ＦＭＡＴ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）またはＦＯＲＴＥＢＩＯ ＯＣＴＥＴバイオレイヤー干渉（ＢＬＩ）などの当業者に公知の１または２以上の技術によって決定することができる。このような技術はエピトープビニングとも呼ばれる。この競合には可能性のあるいくつかの理由が存在し、２つのタンパク質が同じもしくは重複するエピトープに結合するか、結合の立体的阻害が存在するか、または第１のタンパク質の結合が抗原の立体配座変化を引き起こし、第２のタンパク質の結合を妨げるもしくは低下させるなどであり得る。
【0054】
生物活性の低下または阻害は、部分的であっても全面的であってもよい。本発明のある実施形態では、ｇｐｌ２０に結合する治療上有効な量の開示抗体または抗原結合フラグメントの投与は、ＨＩＶ－１感染（例えば、細胞の感染により、またはＨＩＶ－１に感染した対象の数もしくはパーセンテージにより、または感染対象の生存期間の延長により測定される）を、所望の量、例えば、適切な対照に比べて少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％またはさらには少なくとも１００％低減または阻害することができる（検出可能なＨＩＶ－１感染の排除または抑制）。中和は、当業者に公知のまたは本明細書に記載の１または２以上のアッセイを用いて決定または測定することができる。
【0055】
クエリー核酸配列と対象核酸配列の間の「同一性パーセント」は、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＣｌｕｓｔａｌＷ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴ、ＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅ、Ｔ－ＣｏｆｆｅｅおよびＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅなどの好適なアルゴリズムまたはソフトウエアを用いてペアワイズグローバル配列アラインメントを行った後に、クエリー配列の全長にわたってＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ、ＧｅｎｅＤｏｃ、Ｂｉｏｅｄｉｔ、ＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｌｅまたはＥＭＢＯＳＳ ｉｎｆｏａｌｉｇｎなどの好適なアルゴリズムまたはソフトウエアを用いて計算される、パーセンテージで表される「同一性」の値である。重要なこととして、クエリー核酸配列は、本明細書の１または２以上の請求項で特定される核酸配列により記載され得る。
【0056】
クエリーアミノ酸配列と対象アミノ酸配列の間の「同一性パーセント」は、ＢＬＡＳＴＰ、ＦＡＳＴＡ、ＣｌｕｓｔａｌＷ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴ、ＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅ、Ｔ－ＣｏｆｆｅｅおよびＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅなどの好適なアルゴリズムまたはソフトウエアを用いてペアワイズグローバル配列アラインメントを行った後に、クエリー配列の全長にわたってＢＬＡＳＴＰ、ＦＡＳＴＡ、ＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ、ＧｅｎｅＤｏｃ、Ｂｉｏｅｄｉｔ、ＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｌｅまたはＥＭＢＯＳＳ ｉｎｆｏａｌｉｇｎなどの好適なアルゴリズムまたはソフトウエアを用いて計算される、パーセンテージで表される「同一性」値または「同一である」値である。重要なこととして、クエリー核酸配列は、本明細書の１または２以上の請求項で特定されるアミノ酸配列により記載され得る。
【0057】
クエリー配列は対象配列と１００％同一であり得るか、または同一性％が１００％未満であるように、対象配列と比較して特定の整数個までのアミノ酸またはヌクレオチドの変化を含み得る。例えば、クエリー配列は、対象配列と少なくとも５０、６０、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％同一である。このような変化は、少なくとも１つのアミノ酸欠失、置換（保存的置換および非保存的置換を含む）または挿入を含み、変化は、クエリー配列のアミノ末端位置またはカルボキシ末端位置で起こり得、あるいは、それらの末端位置の間の、クエリー配列内のアミノ酸もしくはヌクレオチド間に個別に散在する任意の場所、またはクエリ配列内の１もしくは２以上の連続した群に散在する任意の場所で起こり得る。
【0058】
同一性％は、ＣＤＲを含むクエリー配列の全長にわたって決定されてもよい。あるいは、同一性％は、ＣＤＲの１または２以上または総てを除外してもよく、例えば、ＣＤＲは総て、対象配列と１００％同一であり、同一性％の変動はクエリー配列の残りの部分、例えば、フレームワーク配列に存在し、従って、ＣＤＲ配列は固定され、インタクトである。
【0059】
バリアント配列は、ｇｐ１２０などの非改変タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持する。
【0060】
配列のバリエーションについては、ＶＨもしくはＶＬ（またはＨＣもしくはＬＣ）配列は、最大１０個のアミノ酸の置換、付加または欠失を有するバリアント配列であり得る。例えば、バリアント配列は、最大９、８、７、６、５、４、３、２または１個のアミノ酸置換、付加または欠失を有し得る。
【0061】
ＨＣ配列は、最大２０％の配列のバリエーションを有するバリアント配列であり得る。
【0062】
ＬＣ配列は、最大２０％の配列のバリエーションを有するバリアント配列であり得る。
【0063】
配列のバリエーションは、１または２以上または総てのＣＤＲを除外してもよく、例えば、ＣＤＲはＶＨもしくはＶＬ（またはＨＣもしくはＬＣ）配列と同じであり、バリエーションはＶＨもしくはＶＬ（またはＨＣもしくはＬＣ）配列の残りの部分にあるため、ＣＤＲ配列は固定され、インタクトである。
【0064】
一般に、バリエーションは置換、特に、例えば表２に示されるような保存的置換である。
【0065】
バリアント配列は、ｇｐ１２０などの非改変タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持する。
【0066】
本明細書で使用する場合、「耐性に対する遺伝的障壁」という用語は、医薬組成物に耐性を付与するための必要な変異の数を指す。耐性に対する遺伝的障壁が低い医薬組成物は、ウイルスが変異した後、または変異の数が少なくても、効果が低下する。耐性に対する遺伝的障壁が高い医薬組成物は、数回の変異の後でもウイルスに対する生物学的活性を失わない。
【0067】
本明細書で使用する場合、用語「インテグラーゼ鎖転移阻害剤」は、宿主細胞のＤＮＡにウイルスゲノムを挿入するウイルス酵素であるインテグラーゼの作用を遮断するように設計されたある種の抗レトロウイルス薬を指す。特定の理論に縛られることを望むものではないが、ＨＩＶゲノム組込みの阻害は、レトロウイルスの複製を停止させてさらなるウイルスの拡散を止める。
【0068】
発明の記載
本発明、組合せおよび方法は、ＨＩＶを処置または中和するために使用することができ、ＨＩＶはさらに明示されない限り、ＨＩＶ－１を意味することを意図する。別の実施形態として、方法および組合せは、ＨＩＶ－２に対しても、またはＨＩＶ－１／ＨＩＶ－２の二重感染を有する患者に対しても有効であり得る。
本発明、組合せおよび方法は、ＨＩＶを処置または中和するために使用することができ、ＨＩＶはさらに明示されない限り、ＨＩＶ－１を意味することを意図する。別の実施形態として、方法および組合せは、ＨＩＶ－２に対しても、またはＨＩＶ－１／ＨＩＶ－２の二重感染を有する患者に対しても有効であり得る。
【0069】
第１の態様によれば、本発明は、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質を含んでなる組合せであって、ｇｐ１２０結合タンパク質がＨＩＶ－１を中和する組合せを提供する。
【0070】
カボテグラビル（Ｎ－（（２，４－ジフルオロフェニル）メチル）－６－ヒドロキシ－３－メチル－５，７－ジオキソ－２，３，５，７，１１，１１ａヘキサヒドロ（１，３）オキサゾロ（３，２－ａ）ピリド（１，２－ｄ）ピラジン－８－カルボキサミド）は、ＵＳ８，１２９，３８５の実施例Ｚ－１に記載されている。カボテグラビルの経口投与は、許容可能な安全性および忍容性プロファイルを示し、半減期は長く、薬物相互作用がほとんどないことが示されている。カボテグラビルは、経口および非経口の投与形態の両方においてＨＩＶの処置および予防に有効であることが証明されており、例えば、Margolis DA, Brinson CC, Eron JJ, et al. 744 and Rilpivirine as Two Drug Oral Maintenance Therapy: LAI116482 (LATTE) Week 48 Results. 21st Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections (CROI); March 3-6, 2014; Boston, MA, Margolis DA, Podzamczer D, Stellbrink H-J, et al. Cabotegravir + Rilpivirine as Long-Acting Maintenance Therapy: LATTE-2 Week 48 Results. 21st International AIDS Conference; July 18-22, 2016; Durban, South Africa, Abstract THAB0206LB. Levin: Conference reports for National AIDS Treatment Advocacy Project (NATAP); 2016, and Markowitz M, Frank I, Grant R, et al. ECLAIR: Phase 2A Safety and PK Study of Cabotegravir LA in HIV-Uninfected Men. Abstract presented at: 23rd Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections (CROI); February 22-25, 2016; Boston, MA.を参照のこと。ビクテグラビルもインテグラーゼ鎖転移阻害剤である。本明細書では、ビクテグラビルとｇｐ１２０結合分子の組合せが開示される。
【0071】
本発明のある実施形態では、カボテグラビルは遊離酸として存在する。本発明の別の実施形態では、カボテグラビルは、ナトリウム塩として存在する。
【0072】
本発明のある実施形態では、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩は、医薬組成物として提供される。本カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩は、経口的にまたは非経口的に投与され得る。経口投与の場合、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩は、従来の製剤として、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などの固体薬剤；水溶液薬剤；油性懸濁液；またはシロップおよびエリキシルなどの液体薬剤の任意の投与形として使用することもできる。
【0073】
非経口投与の場合、化合物は、水性もしくは油性懸濁注射剤、または点鼻剤として使用され得る。その調製の際には、従来の賦形剤、結合剤、滑沢剤、水性溶媒、油性溶媒、乳化剤、沈殿防止剤、保存剤、安定剤などが使用可能である。
【0074】
本発明のある実施形態では、医薬組成物は、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩および界面活性剤系を含んでなる。本発明のある実施形態では、界面活性剤系は、１～３か月の期間にわたってカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩の放出をもたらすポリマーの組合せさらに含んでなる。適切なポリマーの組合せは、例えば、ポリソルベート２０およびポリエチレングリコール３３５０である。本発明のある実施形態では、界面活性剤系はマンニトールを含んでなる。本発明のある実施形態では、カボテグラビルは、＜２００ｎｍにナノ粉砕される。
【0075】
本発明のある実施形態では、経口投与されるカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩の用量は、約１ｍｇ／日～約５０ｍｇ／日、好ましくは５ｍｇ／日～約３０ｍｇ／日、より好ましくは３０ｍｇ／日をもとに計算される。
【0076】
本発明の別の実施形態では、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩は、１週間、１か月、２か月、３か月または６か月当たり約１０ｍｇ～約１０００ｍｇの用量で非経口的に投与される。１つの実施形態によれば、化合物またはその塩は、４００ｍｇ、６００ｍｇまたは９００ｍｇのいずれかで投与される。
【0077】
本発明のある実施形態では、上記に定義されるような医薬組成物は、毎日、毎週、毎月、隔月（２か月毎に１回）または３か月おき（３か月毎に１回）投与され得る。
【0078】
本発明のある実施形態では、組合せは、ｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。ＧＰ１２０結合タンパク質は、ＨＩＶビリオン上に見られる露出したエンベロープ糖タンパク質１２０に結合し、ビリオンがＴ細胞の細胞表面に見られるＣＤ４受容体に付着するのを阻害する。ＣＤ４受容体への結合を遮断することにより、ビリオンは、Ｔ細胞の共受容体と結合して、ビリオンの膜をＴ細胞膜と融合させ、ビリオンの遺伝情報を細胞に送り込むことができなくなる。
【0079】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、モノクローナル抗体またはそのフラグメントを含んでなる。用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体集団から得られるような抗体の特徴を示し、いずれかの特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきではない。本発明のある実施形態では、モノクローナル抗体は、上記で定義されるＶＨおよびＶＬを有する。
【0080】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）は、配列番号１５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）は、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ１アミノ酸、配列番号１９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号２０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有する。
【0081】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなるＶＨおよび軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなるＶＬを含んでなり、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）は、配列番号１５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）は、配列番号１８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１９で示されるＣＤＲＨＬアミノ酸配列および配列番号２０で示されるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有する。
【0082】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１で示される可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる。
【0083】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなる。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号２で示される可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる。
【0084】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変重鎖領域アミノ酸配列および配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなる。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１で示される可変重鎖領域アミノ酸配列および配列番号２で示される可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなる。
【0085】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１および配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２を有し得る。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１および配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３を有し得る。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２および配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３を有し得る。
【0086】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１および配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２を有し得る。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１および配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３を有し得る。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２および配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３を有し得る。
【0087】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１および配列番号１９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２を有し得る。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１および配列番号２０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を有し得る。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２および配列番号２０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を有し得る。
【0088】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１および配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２を有し得る。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を有し得る。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を有し得る。
【0089】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、抗原結合フラグメントである。本発明のある実施形態では、抗原結合フラグメントは、上記に定義されるＶＨおよびＶＬを有する。本発明のある実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦＶまたはｓｃＦＶ２フラグメントを含んでなる。抗原結合フラグメントのさらなる例としては、限定されるものではないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖抗体、単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦＶ）および抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【0090】
本発明のある実施形態では、抗体の定常領域は、抗体のｉｎ ｖｉｖｏ半減期を最適化するために１または２以上のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ Ａｂの血清半減期は、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）により調節される。よって、いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲｎへの結合を増強するアミノ酸置換を含む。いくつかのこのような置換は、ＩｇＧ定常領域Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ（例えば、Hinton et al, J Immunol, 176:346-356, 2006参照）；Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（「ＬＳ」変異、例えば、Zalevsky, et al, Nature Biotechnology, 28:157-159, 2010参照）；Ｎ４３４Ａ（例えば、Petkova et al, Int. Immunol, 18:1759-1769, 2006参照）；Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａ（例えば、Petkova et al, Int. Immunol, 18:1759-1769, 2006参照）；ならびにＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ（例えば、Dall'Acqua et al, J. Biol. Chem., 281:23514-23524, 2006参照）における置換など、当業者に公知である。開示される抗体および抗原結合フラグメントは、上記に挙げた置換のいずれかを含むＦｃポリペプチドに連結することができ、例えば、Ｆｃポリペプチドは、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ置換を含み得る。よって、本発明のある実施形態では、モノクローナル抗体は、非改変定常ドメインに比べて胎児性Ｆｃ受容体への結合を増強する改変を含んでなる組換え定常ドメインを含んでなり、組換え定常ドメインは、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含んでなるＩｇＧ１ 定常ドメインである。
【0091】
本発明のある実施形態では、抗体の定常領域は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）を最適化するように１または２以上のアミノ酸置換を含む。ＡＤＣＣは主として、密接に関連する１組のＦｅｙ受容体により媒介される。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃｙＲＩＩＩａへの結合を増強する１または２以上のアミノ酸置換を含む。このようないくつかの置換は、ＩｇＧ定常領域Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ（例えば、Lazar et al, Proc. Natl, Acad. Sci. U.S.A., 103:4005-4010, 2006参照）；ならびにＳ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅ（例えば、Lazar et al, Proc. Natl, Acad. Sci. U.S.A., 103:4005-4010, 2006参照）における置換など、当業者に公知である。
【0092】
本発明のある実施形態では、上記置換の組合せはまた、ＦｃＲｎおよびＦｃｙＲＩＩＩａへの結合が増強されたＩｇＧ定常領域を作出するために含まれる。これらの組合せは、抗体の半減期を延長し、ＡＤＣＣを増強する。例えば、このような組合せには、Ｆｃ領域に以下のアミノ酸置換を有する抗体が含まれる：（１）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ；（２）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；（３）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＮ４３４Ａ；（４）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ；（５）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ；（６）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅおよび２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ；（７）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；（８）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＮ４３４Ａ；（９）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ；または（１０）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ。いくつかの例では、これらの抗体またはそれらの抗原結合フラグメントは、感染細胞に対して直接細胞傷害性を示すように改変され、あるいは、補体、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）またはマクロファージによる貪食作用などの自然防御を使用するように改変される。
【0093】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、ｇｐ１２０結合タンパク質組成物として提供される。ある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質組成物は、ｇｐ１２０特異的抗体、抗原結合フラグメント、コンジュゲート、ＣＡＲ、ＣＡＲ発現Ｔ細胞または本明細書に開示される分子をコードする核酸分子のうち１または２以上を担体中に含む。ｇｐ１２０結合タンパク質組成物は、例えば、ＨＩＶ－１感染の治療または検出に有用である。ｇｐ１２０結合タンパク質組成物は、対象への投与のために単位投与形態で調製することができる。投与の量および時機は、所望の目的を達成するために治療医の裁量にある。ｇｐ１２０特異的抗体、抗原結合フラグメント、コンジュゲート、ＣＡＲ、ＣＡＲ発現Ｔ細胞またはそのような分子をコードする核酸分子は全身投与または局所投与用に調合することができる。一例では、ｇｐ１２０特異的抗体、抗原結合フラグメント、コンジュゲート、ＣＡＲ、ＣＡＲ発現Ｔ細胞またはそのような分子をコードする核酸分子は、静脈内投与などの非経口投与用に調合される。
【0094】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質組成物は、抗体、抗原結合フラグメントまたはそのコンジュゲートを、少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％）の純度で含んでなる。特定の実施形態では、これらの組成物が含有する高分子夾雑物、例えば、他の哺乳動物（例えば、ヒト）タンパク質は、１０％未満（例えば、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、またはなお少ない）である。
【0095】
投与用のｇｐ１２０結合タンパク質組成物は、水性担体などの薬学上許容可能な担体に溶解させた、ｇｐｌ２０特異的抗体、抗原結合フラグメント、コンジュゲート、ＣＡＲ、ＣＡＲ発現Ｔ細胞またはそのような分子をコードする核酸分子の溶液を含み得る。例えば緩衝生理食塩水などの様々な水性担体が使用可能である。これらの溶液は無菌であり、一般に望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌することができる。これらの組成物は、生理学的条件に近づけるために必要であれば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどの薬学上許容可能な補助物質を含有し得る。これらの調合物中の抗体の濃度は広く変更可能であり、主として、選択される特定の投与様式および対象の必要に応じて液体容量、粘度、体重などに基づいて選択される。
【0096】
静脈内投与用の典型的なｇｐ１２０結合タンパク質組成物は、１日１対象当たり約０．０１～約３０ｍｇ／ｋｇの抗体もしくは抗原結合フラグメントまたはコンジュゲート（または相当する用量の抗体もしくは抗原結合フラグメントを含むコンジュゲート）を含み得る。投与可能な組成物を調製するための実施の方法は、当業者に公知であるか自明であり、Remington's Pharmaceutical Science, 第22版, Pharmaceutical Press, London, UK (2012)などの刊行物により詳しく記載されている。いくつかの実施形態では、これらの組成物は、１または２以上の抗体、抗原結合フラグメント（例えば、ｇｐｌ２０と特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメント）を約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、または約０．５ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、または約０．５ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲で含む液体製剤であり得る。
【0097】
抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはコンジュゲートまたはそのような分子をコードする核酸は、既知の濃度の無菌溶液でも提供されるが、凍結乾燥形態で提供し、使用前に無菌水で再水和することができる。その後、抗体溶液、もしくは抗原結合フラグメントまたはそのような抗体もしくは抗原結合フラグメントをコードする核酸を、０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰを含有する点滴バッグに添加し、一般には、０．５～１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与することができる。１９９７年にリツキサン（登録商標）が承認されて以来、米国で販売されている抗体薬剤の投与において、当技術分野では豊富な経験を利用できる。抗体、抗原結合フラグメント、コンジュゲートまたはそのような分子をコードする核酸は、静脈内注射やボーラス投与ではなく、緩徐点滴で投与することができる。一例では、高い負荷量を投与し、その後の維持量は低レベルで投与する。例えば、４ｍｇ／ｋｇの初回負荷量を約９０分かけて点滴し、その後、前回の用量が良好な忍容性を示した場合には、４～８週間にわたり毎週２ｍｇ／ｋｇの維持用量を３０分かけて点滴する。
【0098】
本発明のある実施形態では、上記に定義されるようなｇｐ１２０結合タンパク質またはｇｐ１２０結合タンパク質組成物は、約１、１．２５、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量、または治療医によって適当と見なされる他の用量で投与される。本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質またはｇｐ１２０結合タンパク質組成物は、対象に約０．５～約４０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１～約３０、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、約１～約５、約１～約３、約０．５～約４０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．５～約３０、約０．５～約２０、約０．５～約１５、約０．５～約１０、約０．５～約５、約０．５～約３、約３～約７、約８～約１２、約１５～約２５、約１８～約２２、約２８～約３２、約１０～約２０、約５～約１５、または約２０～約４０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。本明細書に記載の用量は、限定するものではないが、毎日、毎週、２週間毎、毎月、隔月、３か月毎、４か月毎、５か月毎、６か月毎、９か月毎または１２か月毎を含む、本明細書に記載の投与頻度／投与の頻度に従って投与することができる。
【0099】
本発明のある実施形態では、この組合せは、任意の適切な手段によって投与される。１つの実施形態では、この組合せは、非経口的に投与される。この組合せは、注射剤の形態で投与してもよい。本発明のある実施形態では、この組合せは、筋肉内投与される。本発明のある実施形態では、この組合せは、皮下投与される。本発明のある実施形態では、この組合せは、静脈内投与される。
【0100】
本発明のある実施形態では、この組合せは、ヒトに１か月毎に１回、２か月毎に１回または３か月毎に１回投与される。本発明のある実施形態では、この組合せは、１か月毎に１回投与される。本発明のある実施形態では、この組合せは、２か月毎に１回投与される。本発明のある実施形態では、この組合せは、３か月毎に１回投与される。本発明のある実施形態では、この組合せは、６か月毎に１回投与される。
【0101】
本発明のある実施形態では、カボテグラビルおよびｇｐ１２０結合タンパク質は、ヒトによって自己投与される。用語「自己投与される（self-administered）」とは、本明細書で使用する場合、医療専門家以外の誰かによる投与を意味し、例えば、患者が医薬組成物を自分自身に投与してもよく、または医療専門家以外の他者が医薬組成物を患者に投与してもよい。別の実施形態では、カボテグラビルおよびｇｐ１２０結合タンパク質は、医療専門家によって投与される。
【0102】
本発明のある実施形態では、ｇｐ１２０結合タンパク質は、広域中和抗体（ｂＮＡｂ）である。ＨＩＶ－１に対する広域中和抗体は、循環中の高パーセンテージの多くのタイプのＨＩＶ－１を中和するという点でＨＩＶ－１に対する他の抗体とは異なる。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ－１に対する広域中和抗体は、循環中の高パーセンテージ（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）の多くのタイプのＨＩＶ－１を中和するという点でＨＩＶ－１に対する他の抗体とは異なる。
【0103】
本発明の第２の態様によれば、本発明は、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶを治療する方法であって、ヒトに治療上有効な量のカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩および治療上有効な量のＨＩＶ－１を中和するｇｐ１２０結合タンパク質を併用投与する工程を含んでなる方法を提供する。カボテグラビルは、第１の態様で上記された通りである。ｇｐ１２０結合タンパク質は、第１の態様で上記された通りである。
【0104】
本発明のある実施形態では、この方法は、モノクローナル抗体またはそのフラグメントを含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0105】
本発明のある実施形態では、この方法は、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ１アミノ酸、配列番号１９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号２０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有するｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0106】
本発明のある実施形態では、この方法は、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなるＶＨおよび軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなるＶＬを含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１９で示されるＣＤＲＨＬアミノ酸配列および配列番号２０で示されるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有するｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0107】
本発明のある実施形態では、この方法は、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。本発明のある実施形態では、この方法は、配列番号１で示される可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0108】
本発明のある実施形態では、この方法は、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。本発明のある実施形態では、この方法は、配列番号２で示される可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0109】
本発明のある実施形態では、この方法は、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列および配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0110】
本発明のある実施形態では、この方法は、配列番号１で示される可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質および配列番号２で示される可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0111】
本発明のある実施形態では、この方法は、抗原結合フラグメントを含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。本発明のある実施形態では、この方法は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦＶまたはｓｃＦＶ２フラグメントである抗原結合フラグメントを提供する。
【0112】
本発明のある実施形態では、この方法は、非改変定常ドメインに比べて、胎児性Ｆｃ受容体への結合を増強する改変を含んでなる組換え定常ドメインを含んでなるモノクローナル抗体を提供し、この組換え定常ドメインは、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含んでなるＩｇＧ１定常ドメインである。
【0113】
本発明のある実施形態では、この方法は、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質の併用投与を提供する。本発明のある実施形態では、この方法は、カボテグラビルとｇｐ１２０結合タンパク質の逐次併用投与を提供する。本発明のある実施形態では、この方法は、カボテグラビルとｇｐ１２０結合タンパク質の同時併用投与を提供する。本発明のある実施形態では、併用投与は同時ではない。これらの化合物は、異なるスケジュールで投与されてもよいが、所与の治療サイクルで投与することができる。本発明のある実施形態では、化合物の併用投与は、数秒、数分、数時間、数日、数週間または数か月以内に行う。ある実施形態では、併用投与は、任意の適切な手段によって行う。本発明のある実施形態では、この方法は、カボテグラビルおよびｇｐ１２０結合タンパク質を非経口的に投与することを含んでなる。カボテグラビルおよびｇｐ１２０結合タンパク質は、注射剤の形態で非経口的に投与され得る。本発明のある実施形態では、各注射剤は独立に、筋肉内投与され得る。本発明のある実施形態では、各注射剤は独立に、皮下投与され得る。本発明のある実施形態では、この方法は、カボテグラビルとｇｐ１２０結合タンパク質を併用投与することを含んでなり、各注射剤は独立に、静脈内投与され得る。
【0114】
本発明のある実施形態では、この方法は、カボテグラビルおよびｇｐ１２０結合タンパク質をヒトに１か月毎に１回、２か月毎に１回、３か月毎に１回または６か月毎に１回投与することを含んでなる。
【0115】
本発明の第３の態様によれば、ＨＩＶの治療における使用のための、上記のようなカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質を含んでなる組合せであって、ｇｐ１２０結合タンパク質がＨＩＶ－１を中和する、組合せが提供される。
【0116】
本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、モノクローナル抗体またはそのフラグメントを含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0117】
本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ１アミノ酸、配列番号１９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号２０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有するｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0118】
本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなるＶＨおよび軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなるＶＬを含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）が、配列番号１５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有し、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）が、配列番号１８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１９で示されるＣＤＲＨＬアミノ酸配列および配列番号２０で示されるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有するｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0119】
本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、配列番号１で示される可変重鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0120】
本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一の配列を含んでなる可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、配列番号２で示される可変軽鎖領域アミノ酸配列を含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。
【0121】
本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、抗原結合フラグメントを含んでなるｇｐ１２０結合タンパク質を提供する。本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦＶまたはｓｃＦＶ２フラグメントである抗原結合フラグメントを提供する。
【0122】
本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、非改変定常ドメインに比べて胎児性Ｆｃ受容体への結合を増強する改変を含んでなる組換え定常ドメインを含んでなるモノクローナル抗体を提供し、この組換え定常ドメインは、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含んでなるＩｇＧ１定常ドメインである。
【0123】
本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、逐次に併用投与される組合せを提供する。本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、同時に併用投与される組合せを提供する。本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、非経口的に併用投与される組合せを提供する。
【0124】
本発明のある実施形態では、使用のための組合せは、ヒトに１か月毎に１回、２か月毎に１回、３か月毎に１回または６か月毎に１回併用投与される組合せを提供する。
【0125】
本発明のさらなる態様によれば、本発明は、ＨＩＶの治療における使用のための医薬の製造における、本明細書で定義されるようなカボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質の使用を提供する。
【0126】
本発明のさらなる態様によれば、本発明は、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質を含んでなるキットを提供する。１つの実施形態では、キットは、本明細書に開示されるインテグラーゼ鎖転移阻害剤および本明細書に記載されるｇｐ１２０結合タンパク質を含んでなる。１つの実施形態では、キットは、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質を含んでなり、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなるＶＨと、配列番号１８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１９で示されるＣＤＲＨＬアミノ酸配列および配列番号２０で示されるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を含んでなる軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなるＶＬとを含んでなる。１つの実施形態では、キットは、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質を含んでなり、ｇｐ１２０結合タンパク質は、配列番号１５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含んでなるＶＨと、配列番号１８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１９で示されるＣＤＲＨＬアミノ酸配列および配列番号２０で示されるＣＤＲＨＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含んでなるＶＬと、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含んでなるＩｇＧ１定常ドメインとを含んでなる。１つの実施形態では、キットは、本発明の医薬組成物を含んでなるシリンジおよび使用説明書を含んでなるリーフレットを含んでなる。
【0127】
特定の理論に縛られることを望むものではないが、カボテグラビルまたはその薬学上許容可能な塩およびｇｐ１２０結合タンパク質の投与は、ＨＩＶ生活環の２つの異なる部分を標的として妨害すると考えられる。さらに、耐性に対する遺伝的障壁が高い化合物であるカボテグラビルと、耐性に対する遺伝的障壁が低い化合物であるｇｐ１２０結合分子を投与することで、ウイルスの遺伝コードの変異に起因する治療活性の喪失を低減できると考えられる。
【0128】
以下、限定されない実施例により本発明を説明する。
【実施例】
【0129】
実施例１：カボテグラビルの調製
【0130】
【表3】
【0131】
カボテグラビル、マンニトール、ポリソルベート２０、ＰＥＧ ３３５０および注射用水を配合し、湿式ビーズミルを用いて粉砕した。得られた懸濁液を３ｍＬのＵＳＰタイプＩガラスバイアルに充填量１．５ｍＬで充填し、バイアルに栓をして密封した。
【0132】
実施例２：２剤併用
２剤併用におけるＮ６ＬＳの抗ＨＩＶ評価
薬剤調製
以下に、カボテグラビルとの２剤併用試験におけるＮ６ＬＳの抗ＨＩＶ－１活性および細胞傷害性の評価を示す。Ｎ６ＬＳは、当技術分野で記載されている標準的な方法を用いて調製した。原液は表４に記載されているように調製し、アッセイセットアップの各日に室温で解凍し、その日のアッセイで使用する新鮮な検量線用薬剤希釈液を作製した。検量線用希釈液は、異なる日に実施されるその後の実験での再使用のためには保存しなかった。各併用アッセイで、Ｎ６ＬＳは２０ｎＭの高濃度試験薬と７回の連続半対数希釈を加えて評価した。Ｎ６ＬＳの各希釈液を、抗ＨＩＶ薬カボテグラビルの５つの希釈液と組み合わせて試験した。総ての場合で、最終的なＤＭＳＯ濃度は０．２５％未満であり、この濃度は記載のアッセイで影響を及ぼさないことが事前に示されていた。
２剤併用におけるＮ６ＬＳの抗ＨＩＶ評価
薬剤調製
以下に、カボテグラビルとの２剤併用試験におけるＮ６ＬＳの抗ＨＩＶ－１活性および細胞傷害性の評価を示す。Ｎ６ＬＳは、当技術分野で記載されている標準的な方法を用いて調製した。原液は表４に記載されているように調製し、アッセイセットアップの各日に室温で解凍し、その日のアッセイで使用する新鮮な検量線用薬剤希釈液を作製した。検量線用希釈液は、異なる日に実施されるその後の実験での再使用のためには保存しなかった。各併用アッセイで、Ｎ６ＬＳは２０ｎＭの高濃度試験薬と７回の連続半対数希釈を加えて評価した。Ｎ６ＬＳの各希釈液を、抗ＨＩＶ薬カボテグラビルの５つの希釈液と組み合わせて試験した。総ての場合で、最終的なＤＭＳＯ濃度は０．２５％未満であり、この濃度は記載のアッセイで影響を及ぼさないことが事前に示されていた。
【0133】
【表4】
【0134】
ＭＴ－４細胞における有効性評価
細胞調製では、ＭＴ－４細胞（ＮＩＨ ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍから入手）を、抗ウイルスアッセイに使用する前にＴ－７５フラスコで継代培養した。アッセイ前日に、感染時に細胞が指数関数的増殖期にあることを保証するために細胞を１：２に分割した。全細胞と生存率の定量は、血球計数装置とトリパンブルー排除を用いて行った。細胞をアッセイに利用するためには、細胞生存率が９５％を超える必要があった。細胞を組織培養培地に再懸濁させ、薬剤含有マイクロタイタープレートに１１０μＬの容量で、５．０×１０３細胞／ウェルの播種密度で添加した。
細胞調製では、ＭＴ－４細胞（ＮＩＨ ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍから入手）を、抗ウイルスアッセイに使用する前にＴ－７５フラスコで継代培養した。アッセイ前日に、感染時に細胞が指数関数的増殖期にあることを保証するために細胞を１：２に分割した。全細胞と生存率の定量は、血球計数装置とトリパンブルー排除を用いて行った。細胞をアッセイに利用するためには、細胞生存率が９５％を超える必要があった。細胞を組織培養培地に再懸濁させ、薬剤含有マイクロタイタープレートに１１０μＬの容量で、５．０×１０３細胞／ウェルの播種密度で添加した。
【0135】
ウイルスの調製には、ＣＸＣＲ４向性ウイルス株ＨＩＶ １ＮＬ４－３を用いた。このウイルスはＮＩＨ ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍから入手し、ストックウイルスプールの作製のためにＭＴ－４細胞で増殖させた。各アッセイでは、力価測定済みウイルスアリコートを冷凍庫（－８０℃）から取り出し、生物学的安全キャビネット内で室温までゆっくり解凍した。ウイルスを再懸濁させ、組織培養培地で希釈し、５０μＬの容量で各ウェルに添加したウイルス量は、感染後６日目に８５～９５％の細胞を障害すると決定された量であった。ＭＴ－４細胞での終点滴定によるＴＣＩＤ５０の計算では、これらのアッセイの感染多重度は約０．０１であることが示された。
【0136】
プレート形式については、チェッカーボードプレート形式を使用して、５つの濃度のカボテグラビルと８つの濃度のＮ６ＬＳを試験した。併用抗ウイルス効果は、細胞対照ウェル（細胞のみ）およびウイルス対照ウェル（細胞＋ウイルス）を含む３つの同一のアッセイプレート（すなわち、３反復測定）で評価した。併用細胞傷害性は、細胞対照ウェルを含む２つの同一のアッセイプレート（すなわち、２反復測定）で並行して評価した。抗ウイルス効果と細胞傷害性は、実験終点でＭＴＳ染色によりモニタリングした。
【0137】
細胞生存率のＭＴＳエンドポイントでは、アッセイ終了時に、可溶性テトラゾリウム系色素ＭＴＳ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ Ｒｅａｇｅｎｔ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加して細胞生存率を測定し、化合物の毒性を定量化した。ＭＴＳは代謝活性の高い細胞のミトコンドリア酵素によって代謝され、可溶性ホルマザン産物を生成するため、細胞生存率と化合物の細胞傷害性の迅速な定量分析を可能とする。この試薬は、使用前に調製する必要のない安定した単一溶液である。アッセイ終了時、ＨＩＶ細胞保護アッセイのために、１ウェルあたり２０μＬのＭＴＳ試薬を加え、次いでマイクロタイタープレートを３７℃、５％ＣＯ２で３～４時間インキュベートし、このインキュベーション間隔は、最適なＭＴＳ減少のために実験的に決定された時間に基づいて選択された。蓋の代わりに粘着性プレートシーラーを使用し、密封したプレートを数回反転させて可溶性ホルマザン産物を混合し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３プレートリーダーを用いて４９０／６５０ｎｍで分光光度的にプレートを読み取った。
【0138】
データ解析
上記のように、ＨＩＶ－１ＮＬ４－３を利用したＭＴ－４細胞を用いて併用抗ウイルスアッセイを実施した。各併用アッセイでは、５つの濃度のカボテグラビルと８つの濃度のＮ６ＬＳを試験した。３反復を用いて併用抗ウイルス効果を測定し、２反復を用いて未感染のＭＴ－４における併用細胞傷害を測定した。各併用アッセイは３回実施した。
上記のように、ＨＩＶ－１ＮＬ４－３を利用したＭＴ－４細胞を用いて併用抗ウイルスアッセイを実施した。各併用アッセイでは、５つの濃度のカボテグラビルと８つの濃度のＮ６ＬＳを試験した。３反復を用いて併用抗ウイルス効果を測定し、２反復を用いて未感染のＭＴ－４における併用細胞傷害を測定した。各併用アッセイは３回実施した。
【0139】
薬物併用アッセイデータは、データ解析と統計的評価のためにＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ ＩＩプログラムを用いて、Prichard and Shipman (Antiviral Research 14:181-206 [1990])の方法に従って分析した。簡単に述べれば、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ ＩＩプログラムは、薬物－薬物相互作用に対する期待される効果のＢｌｉｓｓ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ数学的定義に基づいて、薬物の理論的な相加的相互作用を計算する。Ｂｌｉｓｓ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅモデルは統計的確率に基づくもので、薬剤が独立にしてウイルス複製に影響を及ぼす働きをすると仮定し、この独立効果モデルはＤｕａｌ－Ｓｉｔｅ（ＤＳ）モデルとも呼ばれ、本明細書で報告される総ての併用解析に使用される。
【0140】
理論的相加的相互作用は、別個に使用された各薬剤の用量反応曲線から計算した。この計算された相加的な表面は、予測される相互作用または相加的な相互作用を表し、次に非相加的な活性の領域を明らかにするために、実験的に決定された用量反応表面から計算された相加的な表面を差し引いた。結果として得られた表面は、相互作用が単に相加的であった場合、計算された阻害率０％の水平面として現れる。この相加平面より上にピークがあれば、相乗作用を示す。同様に、相加平面より下に窪みがあれば拮抗作用を示す。実験的な用量反応表面の周りの９５％信頼区間を用いてデータを統計的に評価し、ピーク／窪みの体積を計算し、生じた相乗作用／拮抗作用の体積を定量化した。相乗作用のプロットで観察されたピークの体積（濃度×パーセントの単位；例えば、μＭ２％、ｎＭ２％、ｎＭμＭ％など）は、プログラムによって計算した。このピーク体積は、３次元用量反応曲面下の面積の３次元的な対応物であり、相乗作用または拮抗作用の定量的尺度である。これらの研究では、相乗作用は５０を超える相乗体積をもたらす薬剤の組合せとして定義される。やや相乗的な活性および高い相乗的な活性は、それぞれ５０～１００および１００を超える相乗体積をもたらすものとして実施上定義されている。相加的な薬物相互作用は－５０～５０の範囲の相乗体積を示し、－５０～－１００の間の相乗体積はやや拮抗的であり、－１００未満は高い拮抗作用があると考えられる。
【0141】
結果
表５は、ＭＴ－４におけるＨＩＶ－１ＮＬ４－３に対するＮ６ＬＳの抗ウイルス試験の結果をまとめたものである。表５にまとめられるように、本試験のＮ６ＬＳとカボテグラビルの併用は、主として相乗的または相加的な相互作用をもたらした。
表５は、ＭＴ－４におけるＨＩＶ－１ＮＬ４－３に対するＮ６ＬＳの抗ウイルス試験の結果をまとめたものである。表５にまとめられるように、本試験のＮ６ＬＳとカボテグラビルの併用は、主として相乗的または相加的な相互作用をもたらした。
【0142】
【表5】
【0143】
配列表
添付の配列表に記載されている核酸配列およびアミノ酸配列は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ． １．８２２に定義されているように、ヌクレオチド塩基については標準的な文字略号、アミノ酸については３文字のコードを用いて示される。各核酸配列の一方の鎖のみが示されているが、表示されているいずれの鎖にも相補鎖が含まれると理解される。
添付の配列表に記載されている核酸配列およびアミノ酸配列は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ． １．８２２に定義されているように、ヌクレオチド塩基については標準的な文字略号、アミノ酸については３文字のコードを用いて示される。各核酸配列の一方の鎖のみが示されているが、表示されているいずれの鎖にも相補鎖が含まれると理解される。
【0144】
【表6】
【配列表】
【国際調査報告】