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特表2024-500391２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンのプロドラッグ
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-09
(54)【発明の名称】２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンのプロドラッグ
(51)【国際特許分類】
C07D 401/06 20060101AFI20231226BHJP
A61K 31/4725 20060101ALI20231226BHJP
A61K 31/661 20060101ALI20231226BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231226BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20231226BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20231226BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20231226BHJP
A61P 25/30 20060101ALI20231226BHJP
A61P 25/14 20060101ALI20231226BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20231226BHJP
A61P 25/20 20060101ALI20231226BHJP
C07F 9/6558 20060101ALI20231226BHJP
【ＦＩ】
C07D401/06 CSP
A61K31/4725
A61K31/661
A61P43/00 123
A61P25/18
A61P25/28
A61P25/16
A61P25/30
A61P25/14
A61P25/04
A61P25/20
C07F9/6558
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023536109
(86)(22)【出願日】2021-12-16
(85)【翻訳文提出日】2023-08-08
(86)【国際出願番号】 EP2021086238
(87)【国際公開番号】W WO2022129356
(87)【国際公開日】2022-06-23
(31)【優先権主張番号】20215254.2
(32)【優先日】2020-12-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＷＩＮＤＯＷＳ
(71)【出願人】
【識別番号】514232085
【氏名又は名称】ユーシービー バイオファルマ エスアールエル
(74)【代理人】
【識別番号】110000855
【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】アテス、アリ
(72)【発明者】
【氏名】アテス、セラル
(72)【発明者】
【氏名】プロヴァン、ローラン
【テーマコード（参考）】
4C063
4C086
4H050
【Ｆターム（参考）】
4C063AA01
4C063BB04
4C063CC22
4C063DD15
4C063EE01
4C086AA01
4C086AA03
4C086AA10
4C086BC37
4C086GA07
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA02
4C086NA15
4C086ZA02
4C086ZA05
4C086ZA08
4C086ZA16
4H050AA01
4H050AB21
(57)【要約】
本発明は、２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンのプロドラッグであって、式（ＩＩ）で表されるプロドラッグに関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンのプロドラッグであって、式（ＩＩ）：【化1】
（式中、
Ｒ１は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＭ１）２、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ－）２Ｍ２、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｒａを表し；
Ｒａは、アミノで置換されたＣ１－６アルキルを表し；
Ｍ１は１価のカチオンを表し；
Ｍ２は２価のカチオンを表す。）
で表されるプロドラッグ。
【請求項2】
Ｒ１が－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２を表す、請求項１に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグ。
【請求項3】
Ｒａがアミノで置換されたＣ１－６アルキルを表す、請求項１に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグ。
【請求項4】
Ｒａが（アミノ）ブチルを表す、請求項３に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグ。
【請求項5】
Ｒａが（アミノ）ペンチルを表す、請求項３に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグ。
【請求項6】
式（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）および（ＩＩ－Ｃ）で表される化合物から選択される、請求項１に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグ。【化2】
【請求項7】
式（ＩＩ－Ａ）の化合物である、請求項６に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグ。
【請求項8】
式（ＩＩ－Ｂ）の化合物である、請求項６に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグ。
【請求項9】
式（ＩＩ－Ｃ）の化合物である、請求項６に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグ。
【請求項10】
請求項１に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグであって、式中、
Ｒ１は、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＭ１）２または－Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ－）２Ｍ２を表し、
Ｍ１は、Ｎａ＋を表し、
Ｍ２は、Ｃａ２＋を表す、プロドラッグ。
【請求項11】
請求項１に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグを、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む医薬組成物。
【請求項12】
統合失調症における認知症状および陰性症状、神経弛緩薬療法に関連する認知障害、軽度認知障害（ＭＣＩ）、衝動性、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病およびその他の運動障害、ジストニア、パーキンソン病認知症、ハンチントン病、レビー小体型認知症、アルツハイマー病、薬物中毒、睡眠障害、無関心、外傷性脊髄損傷、または神経因性疼痛の治療および／または予防に使用するための、請求項１～１０のいずれか１項に記載の式（ＩＩ）で表されるプロドラッグ、または請求項１１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンのプロドラッグに関する。
【0002】
本発明はまた、これらのプロドラッグの調製方法、およびそのようなプロドラッグを含む医薬組成物にも関する。
【背景技術】
【0003】
ＷＯ２０２１／００１２８８として公開された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０６８１８３は、式（Ｉ）の２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンを開示している。
この化合物は、Ｄ１ポジティブアロステリックモジュレーター（D1 Positive Allosteric Modulator）として作用し、そのため、Ｄ１受容体が役割を果たす疾患の治療用薬剤として有益である。
【化1】
この化合物は、Ｄ１ポジティブアロステリックモジュレーター（D1 Positive Allosteric Modulator）として作用し、そのため、Ｄ１受容体が役割を果たす疾患の治療用薬剤として有益である。
【0004】
ＷＯ２０２１／００１２８８として公開された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０６８１８３は、式（Ｉ）の化合物が、統合失調症における認知症状および陰性症状、神経弛緩薬療法に関連する認知障害、軽度認知障害（ＭＣＩ）、衝動性、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病およびその他の運動障害、ジストニア、パーキンソン病認知症、ハンチントン病、レビー小体型認知症、アルツハイマー病、薬物中毒、睡眠障害、無関心、外傷性脊髄損傷または神経因性疼痛の治療および／または予防に有用である可能性があることをさらに開示している。
【0005】
したがって、上記疾患のいずれか１つに罹患している患者への投与に適した式（Ｉ）の化合物の製剤を開発することが望まれている。
【0006】
特に、ＷＯ２０２１／００１２８８として公開された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０６８１８３の例２．８は、とりわけ、２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンの一水和結晶形を開示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
この一水和結晶形である２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンは、限られた溶解性を有し、それによって、経口投与が望ましい場合には、製剤化の困難性および／または低いバイオアベイラビリティー（生物学的利用能）を生じうる。
【0008】
したがって、２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンの一水和結晶形を、特に経口投与用の医薬組成物に組み込むことができるように、その溶解性を向上させる必要がある。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明は、２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノンのプロドラッグであって、式（ＩＩ）：
（式中、
Ｒ１は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＭ１）２、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ－）２Ｍ２、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｒａを表し；
Ｒａは、アミノで置換されたＣ１－６アルキルを表し；
Ｍ１は１価のカチオンを表し；
Ｍ２は２価のカチオンを表す。）
で表されるプロドラッグ類、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【化2】
（式中、
Ｒ１は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＭ１）２、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ－）２Ｍ２、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｒａを表し；
Ｒａは、アミノで置換されたＣ１－６アルキルを表し；
Ｍ１は１価のカチオンを表し；
Ｍ２は２価のカチオンを表す。）
で表されるプロドラッグ類、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0010】
したがって、更なる態様において、本発明は、式（ＩＩ）のプロドラッグおよび薬学的に許容される担体（キャリア）を含む医薬組成物を提供する。
【0011】
ＷＯ２０２１／００１２８８として公開された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０６８１８３は、式（Ｉ）の化合物がＤ１ポジティブアロステリックモジュレーター（D1 Positive Allosteric Modulator）として作用し、それによりＤ１受容体が関与する疾患の治療用薬剤として有益であることを開示している。
【0012】
ＷＯ２０２１／００１２８８として公開された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０６８１８３は、式（Ｉ）の化合物が、統合失調症における認知症状および陰性症状、神経弛緩薬療法に関連する認知障害、軽度認知障害（ＭＣＩ）、衝動性、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病およびその他の運動障害、ジストニア、パーキンソン病認知症、ハンチントン病、レビー小体型認知症、アルツハイマー病、薬物中毒、睡眠障害、無関心、外傷性脊髄損傷または神経因性疼痛の治療および／または予防に有用である可能性があることをさらに開示している。
【0013】
したがって、さらなる態様では、本発明は、統合失調症における認知症状および陰性症状、神経弛緩薬療法に関連する認知障害、軽度認知障害（ＭＣＩ）、衝動性、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病およびその他の運動障害、ジストニア、パーキンソン病認知症、ハンチントン病、レビー小体型認知症、アルツハイマー病、薬物中毒、睡眠障害、無関心、外傷性脊髄損傷または神経因性疼痛の治療および／または予防に使用するための式（ＩＩ）のプロドラッグ、またはその医薬組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1】図１は、本明細書にさらに記載される例７に従って調製されたプロドラッグ（ＩＩ－Ａ）の懸濁液を投与した後の、時間の関数としてプロットされた３匹の異なる動物の血漿中の化合物（Ｉ）の濃度のグラフを表す。
【発明を実施するための形態】
【0015】
発明の詳細な説明
本明細書で使用される「プロドラッグ」という用語は、式（Ｉ）の化合物のプロドラッグを指す場合、インビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）で式（Ｉ）の必要な化合物に容易に変換できる式（Ｉ）の化合物の機能的誘導体を意味する。本発明による式（Ｉ）の化合物のプロドラッグは、上で一般的に定義され、本明細書でさらに説明される式（ＩＩ）の化合物によって表される。
本明細書で使用される「プロドラッグ」という用語は、式（Ｉ）の化合物のプロドラッグを指す場合、インビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）で式（Ｉ）の必要な化合物に容易に変換できる式（Ｉ）の化合物の機能的誘導体を意味する。本発明による式（Ｉ）の化合物のプロドラッグは、上で一般的に定義され、本明細書でさらに説明される式（ＩＩ）の化合物によって表される。
【0016】
本明細書で使用される「Ｃ１－６アルキル」という用語は、直鎖または分枝鎖であってもよく、鎖中に１～６個の炭素原子を含み得る脂肪族炭化水素基を指す。本発明で使用する化合物上に存在し得る適切なアルキル基には、直鎖および分枝鎖のＣ１－４アルキル基が含まれる。例示的なＣ１－６アルキル基には、メチル、エチル、プロピルおよびブチルが含まれる。
【0017】
本発明の第１の実施形態では、Ｒ１は－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２を表す。本発明の第２の実施形態では、Ｒ１は－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＭ１）２を表す。本発明の第３の実施形態では、Ｒ１は－Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ－）２Ｍ２を表す。本発明の第４の実施形態では、Ｒ１はＣ（＝Ｏ）Ｒａを表す。
【0018】
一般に、Ｍ１はアルカリ金属カチオンを表す。アルカリ金属カチオンの適切な例は、Ｎａ＋およびＫ＋である。
【0019】
一般に、Ｍ２はアルカリ土類金属カチオンを表す。アルカリ土類金属カチオンの適切な例は、Ｃａ２＋である。
【0020】
一般に、Ｒａは、アミノによって置換されたＣ１－６アルキルを表す。第１の実施形態では、Ｒａは（アミノ）ブチルを表す。第２の実施形態では、Ｒａは（アミノ）ペンチルを表す。
【0021】
本発明による式（ＩＩ）の化合物の具体例は、式（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）および（ＩＩ－Ｃ）の化合物によって表される。
【化3】
【0022】
第一の実施形態において、本発明は式（ＩＩ－Ａ）のプロドラッグに関する。
【0023】
第２の実施形態において、本発明は式（ＩＩ－Ｂ）のプロドラッグに関する。
【0024】
第３の実施形態において、本発明は式（ＩＩ－Ｃ）のプロドラッグに関する。
【0025】
第４の実施形態において、本発明は、式（ＩＩ－Ａ）の化合物の塩に関する。この実施形態の一態様では、本発明は、Ｒ１が－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＭ１）２を表し、Ｍ１がＮａ＋を表す式（ＩＩ）の化合物に相当する式（ＩＩ－Ａ）の化合物の二ナトリウム塩に関する。
【0026】
この実施形態の別の態様では、本発明は、Ｒ１がＰ（＝Ｏ）（Ｏ－）２Ｍ２を表し、Ｍ２がＣａ２＋を表す式（ＩＩ）の化合物に相当する式（ＩＩ－Ａ）の化合物のカルシウム塩に関する。
【0027】
本発明による式（ＩＩ）で表されるプロドラッグは、一般に、式（Ｉ）の化合物の一水和物（本明細書では式（Ｉａ）の化合物と呼ぶ）の結晶形よりも溶解性が高い。このような改善された溶解度は、より高いバイオアベイラビリティーが達成され得るため、特に経口投与のために医薬組成物を調製する必要がある場合に格別に有利である。これにより、用量を減らすこともでき、したがって固体製剤が所望される場合に使用されるべき錠剤サイズを小さくすることもできる。
【0028】
実施例の表１は、本実施例に従って得られた式（ＩＩ）の化合物と式（Ｉａ）の化合物との間の溶解度の比較データを提示しており、使用された媒体に関係なく最小２０倍の増加を示す。
【0029】
本発明によるプロドラッグは、さらに、希釈剤、結合剤（バインダー）、崩壊剤、滑沢剤、流動化剤または担体（キャリア）などの薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて、適切な医薬組成物を形成することができる。
【0030】
このような医薬組成物を調製するために、本発明によるプロドラッグは、当業者に公知の従来の医薬配合技術に従って医薬希釈剤または担体と緊密に混合される。
【0031】
適切な希釈剤および担体は、所望の投与経路、例えば、経口、直腸、非経口または鼻内の経路に応じて、多種多様な形態を採ることができる。
【0032】
経口投与に適した医薬組成物は、固体または液体であり得、例えば、錠剤、丸薬、糖衣錠、ゼラチンカプセル、溶液、シロップ、チューインガムなどの形態であり得る。
【0033】
この目的のために、活性成分は、不活性希釈剤、またはデンプンもしくはラクトースなどの非毒性の薬学的に許容される担体と混合され得る。任意選択で、これらの医薬組成物はまた、微結晶セルロース、トラガカントゴムもしくはゼラチンなどの結合剤、クロスカルメロースナトリウムもしくはクロスポビドンアルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、コロイド状二酸化ケイ素などの流動化剤、スクロースもしくはサッカリンなどの甘味料、着色剤、または、ペパーミントもしくはサリチル酸メチルなどの芳香剤、およびＯｐａｄｒｙ（登録商標）（Ｉ、ＩＩ、ＡＭＢ ＩＩ、ＱＸもしくはＥＺ）などのコーティング剤を含有することができる。
【0034】
本発明はまた、制御された方法で活性物質を放出できる組成物を企図する。非経口投与に使用され得る医薬組成物は、一般にアンプル、使い捨て注射器、ガラスもしくはプラスチックのバイアル、または注入容器に含まれる水性または油性の溶液または懸濁液などの従来の形態である。
【0035】
プロドラッグに加えて、これらの溶液または懸濁液は、任意選択で、注射用水、生理食塩水、油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの滅菌希釈剤、ベンジルアルコールなどの抗菌剤、アスコルビン酸や亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩などの緩衝剤、塩化ナトリウムやデキストロースなどの浸透圧調整剤、および、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ－ＳＳＬ）、ヒプロメロース（ＨＰＭＣ）などの増粘剤、そして最後にＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、ＰＶＰＶＡ、ＰＶＰ、ＰＶＡなどの安定化剤を含有していてよい。
【0036】
これらの医薬形態は、薬剤師によって日常的に使用される方法で調製される。
【0037】
医薬組成物中の本発明による式（ＩＩ）のプロドラッグの量は、広い範囲の濃度であってよく、患者の性別、年齢、体重および病状などの様々な要因、ならびに投与方法に依存する。したがって、経口投与のためのプロドラッグの量は、一般に、組成物の全重量に対して約０．５重量％から約８０重量％の間、適切には、組成物の全重量に対して約２０重量％から約６０重量％の間に含まれる。
【0038】
ＷＯ２０２１／００１２８８として公開された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０６８１８３には、式（Ｉ）の化合物が、Ｄ１受容体が役割を果たす疾患および／または障害、特に、統合失調症における認知症状および陰性症状、神経弛緩薬療法に関連する認知障害、軽度認知障害（ＭＣＩ）、衝動性、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病およびその他の運動障害、ジストニア、パーキンソン病認知症、ハンチントン病、レビー小体型認知症、アルツハイマー病、薬物中毒、睡眠障害、無関心、外傷性脊髄損傷または神経因性疼痛の治療に有用である可能性があることが記載されている。
【0039】
したがって、更なる態様において、本発明は、統合失調症における認知症状および陰性症状、神経弛緩薬療法に関連する認知障害、軽度認知障害（ＭＣＩ）、衝動性、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病およびその他の運動障害、ジストニア、パーキンソン病認知症、ハンチントン病、レビー小体型認知症、アルツハイマー病、薬物中毒、睡眠障害、無関心、外傷性脊髄損傷または神経因性疼痛の治療および／または予防に使用するための、本明細書に記載の式（ＩＩ）のプロドラッグ、またはその医薬組成物を提供する。
【0040】
特定の態様では、本発明は、パーキンソン病および他の運動障害、アルツハイマー病、または統合失調症における認知症状および陰性症状の治療に使用するための、本発明による式（ＩＩ）のプロドラッグまたはその医薬組成物を提供する。
【0041】
式（Ｉ）の化合物は、式（Ａ）の中間体を式（Ｂ）の中間体と反応させることを包含するプロセスによって調製され得る。
【化4】
【0042】
中間体（Ｂ）は、（２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）または当業者に公知の別のカップリング剤の存在下で、適切な溶媒、例えばジメチルホルムアミド中、過剰量の塩基、例えばＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを用いて、式（Ａ）の中間体と首尾良く反応させることができる。
【0043】
式（Ｂ）の中間体は、式（ＩＶ）の中間体の反応を伴うプロセスによって調製することができる。
（式中、Ｚは、ハロゲンまたは１－ヒドロキシ－１－メチルエチルを表し；
Ｒａは、ｔ－ブチルジメチルシリルを表し；
Ｒｃは、水素またはｔ－ブトキシカルボニルを表す。）
【化5】
（式中、Ｚは、ハロゲンまたは１－ヒドロキシ－１－メチルエチルを表し；
Ｒａは、ｔ－ブチルジメチルシリルを表し；
Ｒｃは、水素またはｔ－ブトキシカルボニルを表す。）
【0044】
第１のステップでは、式（ＩＶ）（式中、Ｚはブロモを表し、Ｒｃは水素を表す。）の中間体（以下、中間体（ＩＶａ）と称する。）は、当業者に公知の方法に従って、適切な保護基で保護され、式（ＩＶ）（式中、Ｚはブロモを表し、Ｒｃはｔ－ブトキシカルボニルを表す。）の化合物（以下、中間体（ＩＶｂ）と称する。）を与えることができる。
【0045】
第２のステップでは、例えば、ｎ－ＢｕＬｉの存在下、適切な溶媒中、例えばテトラヒドロフラン中で、低温にて、乾燥アセトンの存在下、連続流下で、後続の実施例に記載された方法に従って、金属ハロゲン交換反応を行い、上記の対応する中間体（ＩＶ）（式中、Ｚは１－ヒドロキシ－１－メチルエチルを表す：以下、中間体（ＩＶｃ）と称する。）を与えることができる。
【0046】
次いで、当業者に知られている方法に従って、または添付の実施例にさらに記載されている方法に従って、ｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基（Ｒｃ）を最初に脱保護し、続いて、Ｂｏｃ基の脱保護中に形成されたトリメチルシリル基およびｔ－ブチルジメチルシリル基（Ｒａ）を脱保護して中間体（Ｂ）を得ることができる。
【0047】
式（ＩＶａ）の中間体は、式（Ｖ）の中間体の反応を含むプロセスによって製造することができ、式中、Ｙはハロゲン、例えばブロモであり、およびＲａは式（ＩＶ）の中間体について上で定義したものである。
【化6】
【0048】
この反応は、塩化メチルマグネシウムの存在下、適切な溶媒中、例えばテトラヒドロフラン中で、低い温度にて首尾良く行われる。
【0049】
中間体（Ｖ）は、式（ＶＩ）の中間体の反応を含む２段階プロセスによって調製され得る。
（式中、Ｙは式（Ｖ）の中間体について上で定義したとおりであり、Ｒａは水素またはｔ－ブチル－ジメチルシリルを表す。）
【化7】
（式中、Ｙは式（Ｖ）の中間体について上で定義したとおりであり、Ｒａは水素またはｔ－ブチル－ジメチルシリルを表す。）
【0050】
第１ステップでは、中間体（ＶＩ）（式中、Ｒａは水素を表す。）を、適切な塩基、例えば４－ジメチルアミノ－ピリジンの存在下、室温でｔ－ブチルジメチルシリルクロリドと反応させ、中間体（ＶＩ）（式中、Ｒａはｔ－ブチル－ジメチルシリルを表す。）を得る。
【0051】
第２ステップでは、中間体（ＶＩ）（式中Ｒａはｔ－ブチル－ジメチルシリルを表す。）を、適切な溶媒中、例えばＴＨＦ中で、Ｎ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）と反応させ中間体（Ｖ）を得る。
【0052】
中間体（ＶＩ）（式中、Ｒａは水素を表す。）は、式（ＶＩＩ）（式中、Ｙは中間体（Ｖ）について上で定義したとおりである。）の中間体を含むプロセスによって調製することができる。
【化8】
【0053】
この反応は、強塩基、例えば水酸化ナトリウムの存在下、適切な溶媒中、例えばエタノールと水の混合物中で、高い温度にて首尾良く行われる。
【0054】
式（ＶＩＩ）の中間体は、中間体（ＶＩＩＩ）の反応を含むプロセスによって調製することができる。
（式中、Ｙは式（Ｖ）の中間体について上で定義したとおりである。）
【化9】
（式中、Ｙは式（Ｖ）の中間体について上で定義したとおりである。）
【0055】
この反応は、トリメチルシリルトリフラートおよびパラホルムアルデヒドの存在下、適切な溶媒中、例えばジクロロメタン中で首尾良く行われる。
【0056】
中間体（ＶＩＩＩ）は、市販の中間体（ＩＸ）を含む２段階プロセスによって調製することができる。
（式中、Ｙは式（Ｖ）の中間体について上で定義したとおりである。）
【化10】
（式中、Ｙは式（Ｖ）の中間体について上で定義したとおりである。）
【0057】
この反応は、添付の実施例に記載の方法に従って、または当業者に知られている方法に従って首尾良く行われる。
【0058】
式（Ａ）の中間体は、式（Ｘ）の中間体の反応を含む多段階プロセスによって調製することができる。
（式中、
Ｒ１は、クロロ、アミノまたはニトロを表し；
Ｒｂは、水素またはｔ－ブチルを表す。）
【化11】
（式中、
Ｒ１は、クロロ、アミノまたはニトロを表し；
Ｒｂは、水素またはｔ－ブチルを表す。）
【0059】
第１のステップでは、式（Ｘ）（式中Ｒ１はニトロを表し、Ｒｂはｔ－ブチルを表す。）の中間体（以下、中間体（Ｘａ）と称する。）を、対応する中間体（Ｘ）（Ｒ１はアミノを表し、Ｒｂはｔ－ブチルを表す：以下、中間体（Ｘｂ）と称する。）に還元する。この反応は、適切な溶媒中、例えばメタノール中で、高圧下でのＰｄ／Ｃ触媒による水素化によって首尾良く行われる。
【0060】
中間体（Ｘｂ）は、濃塩酸および亜硝酸ナトリウムを添加し、続いて塩酸および塩化銅（ＩＩ）をさらに添加することによって、対応する中間体（Ｘ）（式中、Ｒ１はクロロを表し、Ｒｂは水素を表す：以下、中間体（Ｘｃ）と称する。）に変換される。この反応は、低い温度で首尾良く行われる。
【0061】
次いで、中間体（Ａ）は、添付の実施例に記載の方法または当業者に知られている方法に従って、Ｎ－クロロスクシンイミドと反応させることによって中間体（Ｘｃ）から直接得ることができる。
【0062】
式（Ｘａ）の中間体は、式（ＸＩ）の中間体を含むプロセスによって調製され得る。
（式中、Ｒ２は、水素またはメチルを表す。）
【化12】
（式中、Ｒ２は、水素またはメチルを表す。）
【0063】
第１のステップでは、式（ＸＩ）（式中、Ｒ２が水素を表す。）の市販の中間体（以下、中間体（ＸＩａ）と称する。）を、強塩基、例えば塩化カリウムの存在下で、適切な溶媒中、例えば、ジメチルホルムアミド中でヨウ化メチルと反応させる。次いで、得られた中間体（ＸＩ）（Ｒ２はメチルを表す：以下、中間体（ＸＩｂ）と称する。）を、適切な溶媒中、例えばテトラヒドロフラン中で、カリウムｔ－ブトキシドの存在下、低温で２－クロロ酢酸ｔ－ブチルと反応させて中間体（Ｘａ）を得る。
【0064】
式（ＩＩ）のプロドラッグは、式（Ｉ）の化合物の官能基変換によって得ることができる。
【0065】
式（ＩＩ）（Ｒ１は、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２を表す。）の化合物は、実施例３にさらに記載される手順に従って、または当業者に公知のいずれかの他の方法に従って調製される。
【0066】
式（ＩＩ）（Ｒ１は－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＭ１）２または－Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ－）２Ｍ２を表す。）の化合物は、式（ＩＩ）（Ｒ１は－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２を表す。）の化合物から、当業者にとって慣習的な方法に従って、塩基との反応により得ることができる。
【0067】
式（ＩＩ）（Ｒ１はＣ（＝Ｏ）Ｒａを表し、Ｒａはアミノで置換されたＣ１－６アルキルを表す。）の化合物は、典型的には式（Ｉ）の化合物から２段階の手順で調製される。
（ｉ）式（Ｉ）の化合物を、アミノ基が適切な保護基で保護されている、アミノで置換されたＣ１－６アルキルの対応するカルボン酸と反応させる。このようなカルボン酸は、一般に市販されている。
この反応は、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中、室温で首尾良く行われる。
（ｉｉ）工程（ｉ）の結果として得られる化合物のアミノ基の保護基は、当業者に公知の従来の方法、例えば酸との反応により除去される。
（ｉ）式（Ｉ）の化合物を、アミノ基が適切な保護基で保護されている、アミノで置換されたＣ１－６アルキルの対応するカルボン酸と反応させる。このようなカルボン酸は、一般に市販されている。
この反応は、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中、室温で首尾良く行われる。
（ｉｉ）工程（ｉ）の結果として得られる化合物のアミノ基の保護基は、当業者に公知の従来の方法、例えば酸との反応により除去される。
【0068】
本発明による化合物を調製するための上記のプロセスのいずれかから生成物の混合物が得られる場合、所望の生成物は、分取ＨＰＬＣなどの従来の方法によって；あるいは、例えばシリカおよび／またはアルミナを適切な溶媒系と組み合わせて利用するカラムクロマトグラフィーによって、適切な段階でそこから分離することができる。
【0069】
本発明による化合物を調製するための上記方法により立体異性体（ｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ）の混合物が生じる場合、これらの異性体は従来の技法によって分離され得る。特に、式（Ｉ）の化合物の特定のエナンチオマーを得ることを所望する場合、エナンチオマーを分割するためのいずれかの適切な従来の手順を用いて、対応するエナンチオマー混合物からこれを製造することができる。したがって、例えば、ジアステレオマー誘導体（塩など）は、式（Ｉ）のエナンチオマーの混合物（例えば、ラセミ体）および適当なキラル化合物（例えば、キラル塩基）の反応によって生成され得る。次いで、いずれかの好都合な手段、例えば結晶化によってジアステレオマーを分離することができ、例えば、ジアステレオマーが塩の場合には酸での処理によって所望のエナンチオマーを回収することができる。別の分割プロセスでは、キラルＨＰＬＣを使用して式（Ｉ）のラセミ体を分離することができる。さらに、所望される場合には、上記のプロセスの１つで適切なキラル中間体を使用することにより、特定のエナンチオマーを得ることができる。代替的に、特定のエナンチオマーは、エナンチオマーに特異的な酵素による生体内変換を行うことによって得ることもできる。この生体内変換の例としては、エステラーゼを使用してエステルを加水分解し、次いで未反応のエステル対掌体から純粋なエナンチオマーである加水分解された酸のみを精製することが挙げられる。本発明の特定の幾何異性体を得ることが望まれる場合、クロマトグラフィー、再結晶および他の従来の分離手順を、中間体または最終生成物に対して使用することもできる。代替的に、当業者に公知の方法、または添付の実施例に記載の方法に従って、酸または塩基の存在下で、所望されない鏡像異性体を所望の鏡像異性体にラセミ化してもよい。
【0070】
上記の合成手順のいずれかの間に、関係するいずれかの分子上の感受性または反応性の基を保護することが必要および／または望ましい場合がある。これは、Protective Groups in Organic Chemistry「有機化学における保護基」、J.F.W. McOmie、Plenum Press編、１９７３年；ならびに、T.W. Greene及びP.G.M. Wuts、Protective Groups in Organic Synthesis「有機合成における保護基」、John Wiley & Sons、第３版、１９９９年に記載されたものなどの従来の保護基の手段によってなし得る。保護基は、当該技術分野で知られている方法を利用して、後続の好都合ないずれかの段階で除去することができる。
【実施例】
【0071】
略語／頻出する試薬
Ａｃ：アセチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
ブライン（ｂｒｉｎｅ）：飽和塩化ナトリウム水溶液
ｎＢｕ：ｎ－ブチル
ｔＢｕ：ｔ－ブチル（ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ）
ＣＶ：カラム容量
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＳ＋：エレクトロスプレー正イオン化
Ｅｔ：エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ｈ：時間（Ｈｏｕｒ）
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＩＰＡＣ：酢酸イソプロピル
ＬＣ：液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析法
Ｍｅ：メチル
ＭｅＯＨ：メタノール
ｍｉｎ：分
ＮＣＳ：Ｎ－クロロスクシンイミド
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ｉＰｒ：イソプロピル
ｉＰｒＯＨ：イソプロパノール
ｐ－ＴＳＡ：ｐ－トルエンスルホン酸
ｒｔ：室温
ＲＴ：保持時間
ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー
ＳＰＥ：固相抽出
ｔ－ＢｕＯＫ：カリウムｔ－ブトキシド
ＴＢＳ：ｔ－ブチルジメチルシリル
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳ：トリメチルシリル
ＵＰＬＣ：超高速液体クロマトグラフィー
ＩＵＰＡＣ名は、Ｂｉｏｖｉａ Ｄｒａｗ バージョン１９．１（２０１９）および２０．１（２０２０）を使用して作られた。
Ａｃ：アセチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
ブライン（ｂｒｉｎｅ）：飽和塩化ナトリウム水溶液
ｎＢｕ：ｎ－ブチル
ｔＢｕ：ｔ－ブチル（ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ）
ＣＶ：カラム容量
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＳ＋：エレクトロスプレー正イオン化
Ｅｔ：エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ｈ：時間（Ｈｏｕｒ）
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＩＰＡＣ：酢酸イソプロピル
ＬＣ：液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析法
Ｍｅ：メチル
ＭｅＯＨ：メタノール
ｍｉｎ：分
ＮＣＳ：Ｎ－クロロスクシンイミド
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ｉＰｒ：イソプロピル
ｉＰｒＯＨ：イソプロパノール
ｐ－ＴＳＡ：ｐ－トルエンスルホン酸
ｒｔ：室温
ＲＴ：保持時間
ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー
ＳＰＥ：固相抽出
ｔ－ＢｕＯＫ：カリウムｔ－ブトキシド
ＴＢＳ：ｔ－ブチルジメチルシリル
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳ：トリメチルシリル
ＵＰＬＣ：超高速液体クロマトグラフィー
ＩＵＰＡＣ名は、Ｂｉｏｖｉａ Ｄｒａｗ バージョン１９．１（２０１９）および２０．１（２０２０）を使用して作られた。
【0072】
１．分析方法
空気または湿気に敏感な試薬を含むすべての反応は、乾燥した溶媒およびガラス器具を使用して窒素またはアルゴン雰囲気下で実行された。マイクロ波照射を必要とする実験は、オペレーティングソフトウェアのバージョン２．０でアップグレードされたＢｉｏｔａｇｅ Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ Ｓｉｘｔｙ電子レンジで行われる。実験は、必要な温度にできるだけ早く到達するように行われる（最大照射出力：４００Ｗ、外部冷却なし）。市販の溶媒および試薬は、通常さらに精製することなく使用され、必要に応じて無水溶媒が用いられた（一般的に、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから入手されるＳｕｒｅ－Ｓｅａｌ（商標）製品またはＡＣＲＯＳ Ｏｒｇａｎｉｃｓから入手されるＡｃｒｏＳｅａｌ（商標））。一般に、反応は薄層クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、または質量分析によって追跡された。
空気または湿気に敏感な試薬を含むすべての反応は、乾燥した溶媒およびガラス器具を使用して窒素またはアルゴン雰囲気下で実行された。マイクロ波照射を必要とする実験は、オペレーティングソフトウェアのバージョン２．０でアップグレードされたＢｉｏｔａｇｅ Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ Ｓｉｘｔｙ電子レンジで行われる。実験は、必要な温度にできるだけ早く到達するように行われる（最大照射出力：４００Ｗ、外部冷却なし）。市販の溶媒および試薬は、通常さらに精製することなく使用され、必要に応じて無水溶媒が用いられた（一般的に、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから入手されるＳｕｒｅ－Ｓｅａｌ（商標）製品またはＡＣＲＯＳ Ｏｒｇａｎｉｃｓから入手されるＡｃｒｏＳｅａｌ（商標））。一般に、反応は薄層クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、または質量分析によって追跡された。
【0073】
ＬＣＭＳモードでの質量分析測定は、次のようなさまざまな方法および機器を使用して実行された。
－ 塩基性ＬＣＭＳ方法１：
ＱＤＡ Ｗａｔｅｒｓの簡易四重極質量分析計がＬＣＭＳ分析に使用される。この分光計には、ＥＳＩ源と、ダイオードアレイ検出器（２１０～４００ｎｍ）を備えたＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃｌａｓｓｉｃとが装備されている。データは、塩基性溶出（ｂａｓｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ）によるポジティブ／ネガティブモードでｍ／ｚ７０～８００のフルＭＳスキャンで取得される。逆相分離は、塩基性溶出用のＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ（２．１×５０ｍｍ）カラム上で４５℃にて実行される。勾配溶出は、Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）＋１００μＬ／Ｌ ＮＨ４ＯＨ（溶媒Ａ）およびＡＣＮ／Ｈ２Ｏ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）＋１００μＬ／Ｌ ＮＨ４ＯＨ（溶媒Ｂ）を用いて行われる。注入容積：１μＬ。ＭＳにおけるフル流量。
－ 塩基性ＬＣＭＳ方法１：
ＱＤＡ Ｗａｔｅｒｓの簡易四重極質量分析計がＬＣＭＳ分析に使用される。この分光計には、ＥＳＩ源と、ダイオードアレイ検出器（２１０～４００ｎｍ）を備えたＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃｌａｓｓｉｃとが装備されている。データは、塩基性溶出（ｂａｓｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ）によるポジティブ／ネガティブモードでｍ／ｚ７０～８００のフルＭＳスキャンで取得される。逆相分離は、塩基性溶出用のＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ（２．１×５０ｍｍ）カラム上で４５℃にて実行される。勾配溶出は、Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）＋１００μＬ／Ｌ ＮＨ４ＯＨ（溶媒Ａ）およびＡＣＮ／Ｈ２Ｏ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）＋１００μＬ／Ｌ ＮＨ４ＯＨ（溶媒Ｂ）を用いて行われる。注入容積：１μＬ。ＭＳにおけるフル流量。
【表1】
【0074】
一部の反応混合物は、Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）セパレーターフェーズカートリッジ（Ｂｉｏｔａｇｅから入手）、酸性カラム、またはキャッチアンドリリースＳＰＥ（固相抽出）カートリッジを使用して処理することができた。粗物質は、順相クロマトグラフィー、分取ＴＬＣ、（酸性または塩基性）逆相クロマトグラフィー、キラル分離研和（ｔｒｉｔｕｒａｔｉｏｎ）または再結晶によって精製することができた。
【0075】
順相クロマトグラフィーは、シリカゲルカラム（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）のＩｓｏｌｅｒａ（商標）ＦｏｕｒもしくはＴｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＮｏｒｍａｌ ｐｈａｓｅ ｃｏｌｕｍｎ（登録商標）などの順相カラムクロマトグラフィーシステム用のカートリッジ、または１００：２００メッシュのシリカゲル）を使用して実行された。
製品は、通常、最終分析および生物学的試験に提供する前に真空下で乾燥された。
製品は、通常、最終分析および生物学的試験に提供する前に真空下で乾燥された。
【0076】
ＮＭＲペクトルは、Ｔｏｐｓｐｉｎ ３．２ソフトウェアを実行するＷｉｎｄｏｗｓ ７ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌワークステーションと、５ｍｍのＤｏｕｂｌｅ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｂｒｏａｄｂａｎｄ Ｐｒｏｂｅ（ＰＡＢＢＩ１Ｈ／１９Ｆ－ＢＢ Ｚ－ＧＲＤ Ｚ８２０２１／００７５）または１ｍｍのＴｒｉｐｌｅ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｐｒｏｂｅ（ＰＡＴＸＩ １Ｈ／Ｄ－１３Ｃ／１５Ｎ Ｚ－ＧＲＤ Ｚ８６８３０１／００４）とを搭載したＢＲＵＫＥＲ ＡＶＡＮＣＥＩＩＩ ４００ＭＨｚ－Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ ＮＭＲ分光計で記録した。
【0077】
化学シフトは、重水素化溶媒（ＤＭＳＯ－ｄ６、ＭｅＯＨ－ｄ４またはＣＤＣｌ３）の残留プロトンに由来するシグナルを参照する。化学シフトは百万分率（ｐｐｍ）で表され、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で表される。スピン多重度は、ブロード（ｂｒ）、一重項（ｓ）、二重項（ｄ）、三重項（ｔ）、四重項（ｑ）、および多重項（ｍ）として与えられる。
【0078】
すべての最終生成物は、次のように塩基性モードと酸性モードの両方でＬＣＭＳによって分析された。
－ 塩基性ＬＣＭＳ方法２：
ＱＤＡ Ｗａｔｅｒｓの簡易四重極質量分析計がＬＣＭＳ分析に使用される。この分光計には、ＥＳＩ源と、ダイオードアレイ検出器（２１０～４００ｎｍ）を備えたＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃｌａｓｓｉｃとが装備されている。データは、塩基性溶出（ｂａｓｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ）によるポジティブ／ネガティブモードでｍ／ｚ７０～８００のフルＭＳスキャンで取得される。逆相分離は、塩基性溶出用のＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ（２．１×１００ｍｍ）カラム上で４５℃にて実行される。勾配溶出は、Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）＋１００μＬ／Ｌ ＮＨ４ＯＨ（溶媒Ａ）、およびＡＣＮ／Ｈ２Ｏ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）＋１００μＬ／Ｌ ＮＨ４ＯＨ（溶媒Ｂ）を用いて行われる。注入容積：１μＬ。ＭＳにおけるフル流量。
－ 塩基性ＬＣＭＳ方法２：
ＱＤＡ Ｗａｔｅｒｓの簡易四重極質量分析計がＬＣＭＳ分析に使用される。この分光計には、ＥＳＩ源と、ダイオードアレイ検出器（２１０～４００ｎｍ）を備えたＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃｌａｓｓｉｃとが装備されている。データは、塩基性溶出（ｂａｓｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ）によるポジティブ／ネガティブモードでｍ／ｚ７０～８００のフルＭＳスキャンで取得される。逆相分離は、塩基性溶出用のＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ（２．１×１００ｍｍ）カラム上で４５℃にて実行される。勾配溶出は、Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）＋１００μＬ／Ｌ ＮＨ４ＯＨ（溶媒Ａ）、およびＡＣＮ／Ｈ２Ｏ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）＋１００μＬ／Ｌ ＮＨ４ＯＨ（溶媒Ｂ）を用いて行われる。注入容積：１μＬ。ＭＳにおけるフル流量。
【表2】
【0079】
－ 酸性ＬＣＭＳ法：
ＱＤＡ Ｗａｔｅｒｓの簡易四重極質量分析計がＬＣＭＳ分析に使用される。この分光計には、ＥＳＩ源と、ダイオードアレイ検出器（２１０～４００ｎｍ）を備えたＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈｃｌａｓｓとが装備されている。データは、酸性溶出（ａｃｉｄｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ）によるポジティブ／ネガティブモードでｍ／ｚ７０～８００のフルＭＳスキャンで取得される。逆相分離は、酸性溶出用のＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μｍ（２．１×１００ｍｍ）カラム上で４５℃にて実行される。勾配溶出は、Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ／ＴＦＡ（９５／５／０．０５％）（溶媒Ａ）およびＡＣＮ（溶媒Ｂ）を用いて行われる。
ＱＤＡ Ｗａｔｅｒｓの簡易四重極質量分析計がＬＣＭＳ分析に使用される。この分光計には、ＥＳＩ源と、ダイオードアレイ検出器（２１０～４００ｎｍ）を備えたＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈｃｌａｓｓとが装備されている。データは、酸性溶出（ａｃｉｄｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ）によるポジティブ／ネガティブモードでｍ／ｚ７０～８００のフルＭＳスキャンで取得される。逆相分離は、酸性溶出用のＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μｍ（２．１×１００ｍｍ）カラム上で４５℃にて実行される。勾配溶出は、Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ／ＴＦＡ（９５／５／０．０５％）（溶媒Ａ）およびＡＣＮ（溶媒Ｂ）を用いて行われる。
【表3】
【0080】
２． ２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）－１－［（１Ｓ，３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル］エタノン（１ａ）の一水和結晶形の調製
式（Ｉａ）の化合物を、参照により本明細書に組み込まれる同時係属中の国際特許出願ＷＯ２０２１／００１２８８の実施例２に記載されているのと同じ合成方法を適用することによって調製した。
式（Ｉａ）の化合物を、参照により本明細書に組み込まれる同時係属中の国際特許出願ＷＯ２０２１／００１２８８の実施例２に記載されているのと同じ合成方法を適用することによって調製した。
【0081】
次の再結晶化プロトコルも、セクション２．８で開示された再結晶化プロトコルの代替として適用された：
２４０ｍｌのジメチルスルホキシドに可溶化されている５．００ｇの粗物質に対して再結晶化を実施する。この溶液を４０℃に加熱し、次いでＰ３焼結ガラス上で濾過する。反応器およびフィルターを３５ｍｌのジメチルスルホキシドですすぐ。濾液を清浄な反応器に移し、８５℃に加熱する。１１０ｍｌの水を、３０分かけてゆっくりと投与する。次いで、２５０ｍｇの化合物（Ｉａ）（０．５％ｗ／ｗ、一水和物形態）を反応混合物に添加する。混合物を８５℃で２時間３０分撹拌し、そして、１２時間かけて２０℃に達するようにゆっくりと冷却し、その間に結晶性物質が溶液から出て来る。懸濁液を濾過し、濾過ケーキを水で数回、次いで酢酸エチル１５０ｍｌで連続的に洗浄する。フィルターケーキを真空下、５０～６０℃で乾燥させる。化合物（Ｉａ）をオフホワイトの粉末４６．９ｇとして得る。収率＝９４％
２４０ｍｌのジメチルスルホキシドに可溶化されている５．００ｇの粗物質に対して再結晶化を実施する。この溶液を４０℃に加熱し、次いでＰ３焼結ガラス上で濾過する。反応器およびフィルターを３５ｍｌのジメチルスルホキシドですすぐ。濾液を清浄な反応器に移し、８５℃に加熱する。１１０ｍｌの水を、３０分かけてゆっくりと投与する。次いで、２５０ｍｇの化合物（Ｉａ）（０．５％ｗ／ｗ、一水和物形態）を反応混合物に添加する。混合物を８５℃で２時間３０分撹拌し、そして、１２時間かけて２０℃に達するようにゆっくりと冷却し、その間に結晶性物質が溶液から出て来る。懸濁液を濾過し、濾過ケーキを水で数回、次いで酢酸エチル１５０ｍｌで連続的に洗浄する。フィルターケーキを真空下、５０～６０℃で乾燥させる。化合物（Ｉａ）をオフホワイトの粉末４６．９ｇとして得る。収率＝９４％
【0082】
【数1】
【0083】
３． 式（ＩＩ－Ａ）の化合物の調製 － ［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル二水素ホスファート、ならびにその二ナトリウム塩（ＩＩ－Ａ－Ｎａ）およびカルシウム塩（ＩＩ－Ａ－Ｃａ）の調製
【化13】
【0084】
３．１．中間体（ａ１）の合成 － ジベンジル［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファートの合成
ＤＣＭ（２１０ｍＬ）中の式（Ｉａ）の化合物（１０．０ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、室温で、ジベンジルｎ，ｎ－ジイソプロピルホスホルアミダイト（１０．８ｍＬ、３１．５ｍｍｏｌ）、イミダゾール（１．４３ｇ、２１．０ｍｍｏｌ）およびイミダゾール塩酸塩（３．２９ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）を連続的に加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、過酸化水素（水中３５％ｗ／ｗ、１０．４ｍＬ、１２８ｍｍｏｌ）を４５分かけて２回に分けて加え、反応混合物を室温で１時間３０分撹拌した。次いで、反応混合物を飽和亜硫酸水素ナトリウム溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、水相をＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、さらに乾燥するまで真空中で濃縮して、淡黄色油を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒ（１５ＣＶ（カラムボリューム）でヘプタン：ＥｔＯＡｃ７０：３０～２０：８０の勾配における１００ｇ ＳＦＡＲシリカゲルカラム）により精製した。最も純粋な画分を収集し、乾燥するまで溶媒を蒸発させ（３０℃）、ジベンジル［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファート（ａ１）を白色固体として得た（１１．９ｇ、１６．２ｍｍｏｌ、収率８１％）。
ＤＣＭ（２１０ｍＬ）中の式（Ｉａ）の化合物（１０．０ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、室温で、ジベンジルｎ，ｎ－ジイソプロピルホスホルアミダイト（１０．８ｍＬ、３１．５ｍｍｏｌ）、イミダゾール（１．４３ｇ、２１．０ｍｍｏｌ）およびイミダゾール塩酸塩（３．２９ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）を連続的に加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、過酸化水素（水中３５％ｗ／ｗ、１０．４ｍＬ、１２８ｍｍｏｌ）を４５分かけて２回に分けて加え、反応混合物を室温で１時間３０分撹拌した。次いで、反応混合物を飽和亜硫酸水素ナトリウム溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、水相をＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、さらに乾燥するまで真空中で濃縮して、淡黄色油を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒ（１５ＣＶ（カラムボリューム）でヘプタン：ＥｔＯＡｃ７０：３０～２０：８０の勾配における１００ｇ ＳＦＡＲシリカゲルカラム）により精製した。最も純粋な画分を収集し、乾燥するまで溶媒を蒸発させ（３０℃）、ジベンジル［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファート（ａ１）を白色固体として得た（１１．９ｇ、１６．２ｍｍｏｌ、収率８１％）。
【0085】
塩基性ＬＣＭＳ方法１： １．７１分（ＥＳ＋）にて１ピーク：７５８／７６０［Ｍ＋Ｎａ］＋、４５８／４６０［Ｍ－（ＢｎＯ）２Ｐ（Ｏ）ＯＨ＋Ｈ］＋、純度８７％。
【数2】
【0086】
３．２． 化合物（ＩＩ－Ａ）の合成 － ［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル二水素ホスファートの合成
３００ｍＬのガラス製パール反応器に、ジベンジル［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファート（ａ１）（１１．５ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１４１ｍＬ）、およびパラジウム（カーボン上に担持５％、Ｐａｓｔｅ ＪＭ タイプ８７Ｌ、７６４ｍｇ、０．３５９ｍｍｏｌ）を導入し、この反応混合物を４バールのＨ２下で３時間撹拌した。次いで、反応混合物をセライトのパッド上で濾過し、濾過ケーキをＴＨＦ（２００ｍＬ）で溶出した。濾液を乾燥するまで真空中で濃縮して、白色固体を得た。この粗混合物を逆相分取ＨＰＬＣ ＧＩＬＳＯＮ塩基性モード（ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ－５００ｇ－１０μｍ－７６．５×２００ｍｍ、Ｇｒａｄｉｅｎｔ（勾配）溶出ＡＣＮ（１０００ｍＬ水中ＮＨ４ＯＨ５ｍＬ）２０／８０～５０／５０）により精製した。最も純粋な画分を収集し、直接凍結乾燥して白色固体を得た。この白色固体を、酸性条件下で（１．０ｇずつ、Ｃ１８ ＳＮＡＰ ６０ｇゲルカラム、１２ＣＶで、水／ギ酸（ｐＨ約５）中２０％から５０％のＡＣＮの勾配の条件により）、逆相フラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒにより２度目の精製を行った。最も純粋な画分を収集し、直接凍結乾燥して、［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル二水素ホスファート（ＩＩ－Ａ）（６．０７ｇ、１０．９ｍｍｏｌ、収率７０％）を白色固体として得た。
３００ｍＬのガラス製パール反応器に、ジベンジル［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファート（ａ１）（１１．５ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１４１ｍＬ）、およびパラジウム（カーボン上に担持５％、Ｐａｓｔｅ ＪＭ タイプ８７Ｌ、７６４ｍｇ、０．３５９ｍｍｏｌ）を導入し、この反応混合物を４バールのＨ２下で３時間撹拌した。次いで、反応混合物をセライトのパッド上で濾過し、濾過ケーキをＴＨＦ（２００ｍＬ）で溶出した。濾液を乾燥するまで真空中で濃縮して、白色固体を得た。この粗混合物を逆相分取ＨＰＬＣ ＧＩＬＳＯＮ塩基性モード（ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ－５００ｇ－１０μｍ－７６．５×２００ｍｍ、Ｇｒａｄｉｅｎｔ（勾配）溶出ＡＣＮ（１０００ｍＬ水中ＮＨ４ＯＨ５ｍＬ）２０／８０～５０／５０）により精製した。最も純粋な画分を収集し、直接凍結乾燥して白色固体を得た。この白色固体を、酸性条件下で（１．０ｇずつ、Ｃ１８ ＳＮＡＰ ６０ｇゲルカラム、１２ＣＶで、水／ギ酸（ｐＨ約５）中２０％から５０％のＡＣＮの勾配の条件により）、逆相フラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒにより２度目の精製を行った。最も純粋な画分を収集し、直接凍結乾燥して、［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル二水素ホスファート（ＩＩ－Ａ）（６．０７ｇ、１０．９ｍｍｏｌ、収率７０％）を白色固体として得た。
【0087】
塩基性ＬＣＭＳ方法２： ４．００分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５５４／５５６［Ｍ－Ｈ］－、純度９７％。
酸性ＬＣＭＳ方法１： ２．３０分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５５４／５５６［Ｍ－Ｈ］－、純度９７％。
酸性ＬＣＭＳ方法１： ２．３０分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５５４／５５６［Ｍ－Ｈ］－、純度９７％。
【数3】
【0088】
式（ＩＩ－Ａ）の化合物の結晶化は、１０ｍＬのエタノール／ペンタン（１０／１）溶液中の１００ｍｇの化合物を使用して最適化された。３週間後、白色の結晶が得られた（２０ｍｇ、収率２０％）。結晶化のスケールアップは、１０ｍＬエタノール／ペンタン（１０／１）を使用して、７００ｍｇを１４０ｍｇの５つのバッチに分割して実行した。３週間後、［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル二水素ホスファート（ＩＩ－Ａｘ）の白色結晶が得られた（２０３ｍｇ、収率２９％、５つの実験の組み合わせ）。
【0089】
３．３． 化合物（ＩＩ－Ａ－Ｎａ）の合成 － 二ナトリウム［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファートの合成
［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル二水素ホスファート（ＩＩ－Ａ）（１．０当量、２７５ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）の水溶液（０．１Ｍ、５ｍＬ）に、０℃にて水酸化ナトリウム溶液（２．０当量、１ｍＬ、１ｍｍｏｌ、１Ｍ溶液）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を一晩凍結乾燥して、二ナトリウム［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファート（ＩＩ－Ａ－Ｎａ）（２５０ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ、収率８２％）を淡黄色固体として得た。
［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル二水素ホスファート（ＩＩ－Ａ）（１．０当量、２７５ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）の水溶液（０．１Ｍ、５ｍＬ）に、０℃にて水酸化ナトリウム溶液（２．０当量、１ｍＬ、１ｍｍｏｌ、１Ｍ溶液）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を一晩凍結乾燥して、二ナトリウム［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファート（ＩＩ－Ａ－Ｎａ）（２５０ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ、収率８２％）を淡黄色固体として得た。
【0090】
【数4】
【0091】
３．４． 化合物（ＩＩ－Ａ－Ｃａ）の合成 － カルシウム［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファートの合成
［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル二水素ホスファート（ＩＩ－Ａ）（１．０当量、１００ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）の水溶液（０．１Ｍ、２ｍＬ）に、０℃にて水酸化カルシウム溶液（１．０当量、１４ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を一晩凍結乾燥して、カルシウム［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファート（ＩＩ－Ａ－Ｃａ）（１１０ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ、収率１００％）を白色固体として得た。
［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル二水素ホスファート（ＩＩ－Ａ）（１．０当量、１００ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）の水溶液（０．１Ｍ、２ｍＬ）に、０℃にて水酸化カルシウム溶液（１．０当量、１４ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を一晩凍結乾燥して、カルシウム［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチルホスファート（ＩＩ－Ａ－Ｃａ）（１１０ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ、収率１００％）を白色固体として得た。
【0092】
【数5】
【0093】
４． 化合物（ＩＩ－Ｂ）の調製 － ［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノアートの調製
【化14】
【0094】
４．１． 中間体（ａ２）の合成 － ［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノアートの合成
式（Ｉａ）の化合物（８．００ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１７０ｍＬ）溶液に、室温で、（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタン酸（Ｂｏｃ－Ｌ－Ｖａｌｉｎｅ、７．３０ｇ、３３．２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．００ｇ、８．４０ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（６．９３ｇ、３３．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。次いで、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液を加え、水層をＤＣＭで抽出した（３回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させて、白色固体を得た。この粗混合物を逆相分取ＨＰＬＣ ＧＩＬＳＯＮ塩基性モード（ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ－５００ｇ－１０μｍ－７６．５×２００ｍｍ、Ｇｒａｄｉｅｎｔ（勾配）溶出ＡＣＮ（１０００ｍＬ水中ＮＨ４ＯＨ５ｍＬ）６０／４０～９０／１０）により精製した。最も純粋な画分を収集し、濃縮乾固して、［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノアート（ａ２）（１０．０ｇ、１４．８ｍｍｏｌ、収率９１％）を白色固体として得た。
式（Ｉａ）の化合物（８．００ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１７０ｍＬ）溶液に、室温で、（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタン酸（Ｂｏｃ－Ｌ－Ｖａｌｉｎｅ、７．３０ｇ、３３．２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．００ｇ、８．４０ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（６．９３ｇ、３３．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。次いで、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液を加え、水層をＤＣＭで抽出した（３回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させて、白色固体を得た。この粗混合物を逆相分取ＨＰＬＣ ＧＩＬＳＯＮ塩基性モード（ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ－５００ｇ－１０μｍ－７６．５×２００ｍｍ、Ｇｒａｄｉｅｎｔ（勾配）溶出ＡＣＮ（１０００ｍＬ水中ＮＨ４ＯＨ５ｍＬ）６０／４０～９０／１０）により精製した。最も純粋な画分を収集し、濃縮乾固して、［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノアート（ａ２）（１０．０ｇ、１４．８ｍｍｏｌ、収率９１％）を白色固体として得た。
【0095】
塩基性ＬＣＭＳ方法１： １．７８分（ＥＳ＋）にて１ピーク：６７５／６７７［Ｍ＋Ｈ］＋、５７５／５７７［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋、純度９８％。
【数6】
【0096】
４．２． 化合物（ＩＩ－Ｂ）の合成 － ［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノアートの合成
［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノアート（ａ２）（１０．０ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）の２－プロパノール（１００ｍＬ）溶液に、室温で塩酸（水中３７％、３６．２ｍＬ、４３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、得られた混合物にｐＨが７～８に達するまでＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３の飽和溶液を添加し、層を分離した。水層をＤＣＭで２回抽出した。次いで、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、白色固体を得た。この粗混合物を逆相分取ＨＰＬＣ ＧＩＬＳＯＮ塩基性モード（ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ－５００ｇ－１０μｍ－７６．５×２００ｍｍ、Ｇｒａｄｉｅｎｔ（勾配）溶出ＡＣＮ（１０００ｍＬ水中ＮＨ４ＯＨ５ｍＬ）５０／５０～１００／０）により精製した。最も純粋な画分を収集し、濃縮乾固して、表題生成物を白色固体として得た。この生成物をＥｔＯＡｃ／ペンタン５：２（３５ｍＬ／ｇ）の混合物中で再結晶し、［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノアート（ＩＩ－Ｂ）（３．３０ｇ、５．７５ｍｍｏｌ、収率３９％）を白色結晶として得た。
［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－ブタノアート（ａ２）（１０．０ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）の２－プロパノール（１００ｍＬ）溶液に、室温で塩酸（水中３７％、３６．２ｍＬ、４３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、得られた混合物にｐＨが７～８に達するまでＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３の飽和溶液を添加し、層を分離した。水層をＤＣＭで２回抽出した。次いで、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、白色固体を得た。この粗混合物を逆相分取ＨＰＬＣ ＧＩＬＳＯＮ塩基性モード（ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ－５００ｇ－１０μｍ－７６．５×２００ｍｍ、Ｇｒａｄｉｅｎｔ（勾配）溶出ＡＣＮ（１０００ｍＬ水中ＮＨ４ＯＨ５ｍＬ）５０／５０～１００／０）により精製した。最も純粋な画分を収集し、濃縮乾固して、表題生成物を白色固体として得た。この生成物をＥｔＯＡｃ／ペンタン５：２（３５ｍＬ／ｇ）の混合物中で再結晶し、［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタノアート（ＩＩ－Ｂ）（３．３０ｇ、５．７５ｍｍｏｌ、収率３９％）を白色結晶として得た。
【0097】
塩基性ＬＣＭＳ方法２： ４．５９分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５７５／５７７［Ｍ＋Ｈ］＋、純度９８％。
酸性ＬＣＭＳ方法１： ４．４５分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５７５／５７７［Ｍ＋Ｈ］＋、純度９９％。
酸性ＬＣＭＳ方法１： ４．４５分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５７５／５７７［Ｍ＋Ｈ］＋、純度９９％。
【数7】
【0098】
５． 化合物（ＩＩ－Ｃ）の合成 － ［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－アミノ－４－メチル－ペンタノアートの合成
【化15】
【0099】
５．１． 中間体（ａ３）の合成 － ［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－４－メチル－ペンタノアートの合成
（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－４－メチル－ペンタン酸（Ｂｏｃ－Ｌ－ロイシン（Ｌｅｕｃｉｎｅ）、９．５０ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）および式（Ｉａ）の化合物（１０．０ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍｌ）懸濁液に、室温でＤＭＡＰ（１．２４ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（８．３５ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応混合物を室温で１８時間撹拌した。ＬＣＭＳモニタリングにより不完全な転化が示された後、追加のＤＣＣ（２．０９ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）－２，４－ジメチルペンタン酸（２．３９ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、得られた反応混合物を室温で２０時間撹拌した。ＬＣＭＳモニタリングにより完全な転化が示された後、反応混合物を水およびＤＣＭで希釈し、層を分離した。有機層を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒ（セライト上に固体充填、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ１００／０から４０／６０の勾配中、２２０ｇのＳＦＡＲシリカゲル）により精製した。所望の化合物を含む画分を収集し、濃縮して残渣を得て、次いでフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒ（ＤＣＭ中の液体充填、ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ１００／０から８０／２０の勾配中、２２０ｇのＳＦＡＲシリカゲル）によって精製した。所望の生成物を含む画分を合わせ、ＤＣＭがすべて除去されるまで減圧下で部分的に蒸発させて懸濁液を得、これを濾過して溶液を得、濃縮して［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－４－メチル－ペンタノアート（ａ３）（１１．３ｇ、１６．４ｍｍｏｌ、収率８１％）を白色固体として得た。
（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－４－メチル－ペンタン酸（Ｂｏｃ－Ｌ－ロイシン（Ｌｅｕｃｉｎｅ）、９．５０ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）および式（Ｉａ）の化合物（１０．０ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍｌ）懸濁液に、室温でＤＭＡＰ（１．２４ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（８．３５ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応混合物を室温で１８時間撹拌した。ＬＣＭＳモニタリングにより不完全な転化が示された後、追加のＤＣＣ（２．０９ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）－２，４－ジメチルペンタン酸（２．３９ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、得られた反応混合物を室温で２０時間撹拌した。ＬＣＭＳモニタリングにより完全な転化が示された後、反応混合物を水およびＤＣＭで希釈し、層を分離した。有機層を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒ（セライト上に固体充填、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ１００／０から４０／６０の勾配中、２２０ｇのＳＦＡＲシリカゲル）により精製した。所望の化合物を含む画分を収集し、濃縮して残渣を得て、次いでフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒ（ＤＣＭ中の液体充填、ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ１００／０から８０／２０の勾配中、２２０ｇのＳＦＡＲシリカゲル）によって精製した。所望の生成物を含む画分を合わせ、ＤＣＭがすべて除去されるまで減圧下で部分的に蒸発させて懸濁液を得、これを濾過して溶液を得、濃縮して［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－４－メチル－ペンタノアート（ａ３）（１１．３ｇ、１６．４ｍｍｏｌ、収率８１％）を白色固体として得た。
【0100】
塩基性ＬＣＭＳ方法２： １．８２分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５８９［Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ］＋、純度９８％。
酸性ＬＣＭＳ方法１： １．８２分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５８９［Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ］＋、純度９８％。
酸性ＬＣＭＳ方法１： １．８２分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５８９［Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ］＋、純度９８％。
【数8】
【0101】
５．２． 化合物（ＩＩ－Ｃ）の合成 － ［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－アミノ－４－メチルペンタノアートの合成
［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－４－メチル－ペンタノアート（ａ３）（１０．０ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）の２－プロパノール（１５０ｍＬ）溶液に、０℃で塩酸（水中３７％ｗ／ｗ、３６．２ｍＬ、４３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を４℃から室温にて８日間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（６００ｍＬ）で希釈した後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液をｐＨ＝８になるまでゆっくり加えた。層を分離し、水層をＤＣＭ（２×４００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を半飽和ＮａＣｌ水溶液（８００ｍＬ）、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒ（ＤＣＭ中の液体充填、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ５０／５０／０から０／１００／０、次いで０／１００／０から０／９０／１０への勾配中、２２０ｇのＳＦＡＲシリカゲル）によって２回精製し、白色固体を得た。固体をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、ペンタン（２５０ｍＬ）で希釈した。混合物全体を、透明な溶液が得られるまで３５℃で３０分間撹拌した。溶液を室温まで放冷し、室温にて１５０ｒｐｍで６日間撹拌して白色の懸濁液を得、これを濾過した。固体を高真空下、室温で２４時間乾燥させて、［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－アミノ－４－メチルペンタノアート（ＩＩ－Ｃ）（２．５６ｇ、４．３５ｍｍｏｌ、収率３０％）を白色結晶として得た。
［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－４－メチル－ペンタノアート（ａ３）（１０．０ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）の２－プロパノール（１５０ｍＬ）溶液に、０℃で塩酸（水中３７％ｗ／ｗ、３６．２ｍＬ、４３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を４℃から室温にて８日間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（６００ｍＬ）で希釈した後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液をｐＨ＝８になるまでゆっくり加えた。層を分離し、水層をＤＣＭ（２×４００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を半飽和ＮａＣｌ水溶液（８００ｍＬ）、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｆｏｕｒ（ＤＣＭ中の液体充填、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ５０／５０／０から０／１００／０、次いで０／１００／０から０／９０／１０への勾配中、２２０ｇのＳＦＡＲシリカゲル）によって２回精製し、白色固体を得た。固体をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、ペンタン（２５０ｍＬ）で希釈した。混合物全体を、透明な溶液が得られるまで３５℃で３０分間撹拌した。溶液を室温まで放冷し、室温にて１５０ｒｐｍで６日間撹拌して白色の懸濁液を得、これを濾過した。固体を高真空下、室温で２４時間乾燥させて、［（１Ｓ，３Ｒ）－２－［２－（３，５－ジクロロ－１－メチル－インダゾール－４－イル）アセチル］－５－（１－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－１－メチル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－３－イル］メチル（２Ｓ）－２－アミノ－４－メチルペンタノアート（ＩＩ－Ｃ）（２．５６ｇ、４．３５ｍｍｏｌ、収率３０％）を白色結晶として得た。
【0102】
塩基性ＬＣＭＳ方法２： ４．８０分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５８９［Ｍ＋Ｈ］＋、純度１００％。
酸性ＬＣＭＳ方法１： ３．９３分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５８９［Ｍ＋Ｈ］＋、純度１００％。
酸性ＬＣＭＳ方法１： ３．９３分（ＥＳ＋）にて１ピーク：５８９［Ｍ＋Ｈ］＋、純度１００％。
【数9】
【0103】
６． 式（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ａｘ）、（ＩＩ－Ｂ）および（Ｉ）の化合物の溶解度
例２．１２．に従って得られた式（Ｉａ）の化合物、ならびに例３．２．および４．２．に従ってそれぞれ得られた式（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ａｘ）および（ＩＩ－Ｂ）の化合物の溶解度を、振盪フラスコ法を使用して異なる媒体で測定した。５ｍｇ／ｍＬの式（Ｉ）の化合物の濃度に相当する（ＩＩ－Ａｘ）および（ＩＩ－Ｂ）について、および、１ｍｇ／ｍＬの式（Ｉ）の化合物の濃度に相当する（ＩＩ－Ａ）についての過剰の固体を、表１に具体的に記載されている５ｍＬの緩衝液／生体関連媒体に懸濁し、ロータリーミキサーを備えた気候室内で、室温または３７℃（以下に示す）にて、２４時間、密閉ガラスバイアル（１０ｍＬ）中でインキュベートした。２４時間の時点で溶解度に達したと仮定し、その時点で懸濁液を０．４５μｍのウルトラフリーフィルター（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を通して濾過し、薬物含有量をＨＰＬＣによって測定した。化合物（Ｉａ）、（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ａｘ）、および（ＩＩ－Ｂ）の溶解度を３回測定し（ｎ＝３）、平均値を計算した。
例２．１２．に従って得られた式（Ｉａ）の化合物、ならびに例３．２．および４．２．に従ってそれぞれ得られた式（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ａｘ）および（ＩＩ－Ｂ）の化合物の溶解度を、振盪フラスコ法を使用して異なる媒体で測定した。５ｍｇ／ｍＬの式（Ｉ）の化合物の濃度に相当する（ＩＩ－Ａｘ）および（ＩＩ－Ｂ）について、および、１ｍｇ／ｍＬの式（Ｉ）の化合物の濃度に相当する（ＩＩ－Ａ）についての過剰の固体を、表１に具体的に記載されている５ｍＬの緩衝液／生体関連媒体に懸濁し、ロータリーミキサーを備えた気候室内で、室温または３７℃（以下に示す）にて、２４時間、密閉ガラスバイアル（１０ｍＬ）中でインキュベートした。２４時間の時点で溶解度に達したと仮定し、その時点で懸濁液を０．４５μｍのウルトラフリーフィルター（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を通して濾過し、薬物含有量をＨＰＬＣによって測定した。化合物（Ｉａ）、（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ａｘ）、および（ＩＩ－Ｂ）の溶解度を３回測定し（ｎ＝３）、平均値を計算した。
【0104】
試験した媒体はそれぞれ、水、リン酸緩衝液、ＦａｓＳＧＦ、ＦＡＳＳＩＦ－Ｖ２、およびＦｅＳＳＩＦ－Ｖ２である。ＦａｓＳＧは空腹時の胃液である。ＦａｓＳＧＦは、ｐＨ１．６で調製され、０．０８ｍＭタウロコール酸塩、０．０２ｍＭリン脂質、３４ｍＭナトリウムおよび５９ｍＭ塩化物を含む。ＦａＳＳＩＦ－Ｖ２およびＦｅＳＳＩＦ－Ｖ２は、それぞれ絶食および摂食状態の生物関連媒体である。ＦａＳＳＩＦ－Ｖ２は、ｐＨ６．５で調製され、３ｍＭタウロコール酸塩、０．２ｍＭリン脂質、１０６ｍＭナトリウム、６９ｍＭ塩化物、および１９ｍＭマレイン酸を含む。ＦｅＳＳＩＦ－Ｖ２は、ｐＨ５．８で調製され、１０ｍＭタウロコール酸塩、２ｍＭリン脂質、０．８ｍＭオレイン酸塩、５ｍＭモノオレイン酸グリセロール、２１８ｍＭナトリウム、１２５ｍＭ塩化物、および５５ｍＭマレイン酸を含む。
【0105】
【表1】
【0106】
上で得られた結果は、使用された媒体に関わりなく、式（Ｉａ）の化合物と比較して、プロドラッグ（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ａｘ）および（ＩＩ－Ｂ）の溶解度の少なくとも２０倍の増加が得られることを示す。
【0107】
７． （ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）、および（ＩＩ－Ｃ）の懸濁液のインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）でのバイオアベイラビリティー
７．１． （ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）、および（ＩＩ－Ｃ）の懸濁液
以下の懸濁液で使用される製剤ビヒクルは、２５ｍＭホスファート緩衝液中の１％（ｗ／ｖ）メチルセルロース（４００ｃｐｓ）、０．１％（ｗ／ｖ）ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、０．１％（ｗ／ｖ）Ａｎｔｉｆｏａｍ １５１０ＵＳの混合物であり、水中でのｐＨは３．０である。
７．１． （ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）、および（ＩＩ－Ｃ）の懸濁液
以下の懸濁液で使用される製剤ビヒクルは、２５ｍＭホスファート緩衝液中の１％（ｗ／ｖ）メチルセルロース（４００ｃｐｓ）、０．１％（ｗ／ｖ）ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、０．１％（ｗ／ｖ）Ａｎｔｉｆｏａｍ １５１０ＵＳの混合物であり、水中でのｐＨは３．０である。
【0108】
式（ＩＩ）の化合物を超音波処理システム（Ｃｏｖａｒｉｓ Ｓ２２０Ｘ）の容器中で秤量し、上記の配合ビヒクルを添加して、式（ＩＩ）の化合物の濃度０．７２ｇ／ｍｌを得た。
１分間の超音波処理を３回繰り返してこの溶液を均質化する。
１分間の超音波処理を３回繰り返してこの溶液を均質化する。
【0109】
７．２． 投与およびバイオアベイラビリティの測定
３匹の雄のスプラーグドーリーラットに、上のパラグラフ７．１に記載された（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）および（ＩＩ－Ｃ）のそれぞれの懸濁液を、式（Ｉ）の化合物３ｍｇ／ｋｇに相当する単回経口用量で投与した。
３匹の雄のスプラーグドーリーラットに、上のパラグラフ７．１に記載された（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）および（ＩＩ－Ｃ）のそれぞれの懸濁液を、式（Ｉ）の化合物３ｍｇ／ｋｇに相当する単回経口用量で投与した。
【0110】
血漿サンプルを、投与後０．１２時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間および８時間後に採取した。
化合物（Ｉ）ならびにそれぞれの化合物（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）および（ＩＩ－Ｃ）の血漿濃度を、ＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）によって定量した。
化合物（Ｉ）ならびにそれぞれの化合物（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）および（ＩＩ－Ｃ）の血漿濃度を、ＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）によって定量した。
【0111】
図１および図３は、すべてのプロドラッグ（ＩＩ－Ａ）および（ＩＩ－Ｃ）が完全に切断されて式（Ｉ）の化合物となり、血流中を循環することを示している。
図２は、プロドラッグ（ＩＩ－Ｂ）が部分的に切断されて式（Ｉ）の化合物になることを示している。
図２は、プロドラッグ（ＩＩ－Ｂ）が部分的に切断されて式（Ｉ）の化合物になることを示している。
【図1】
【図2】
【図3】
【国際調査報告】