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▶ リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-09
(54)【発明の名称】ヒト化Ｆｃアルファ受容体を発現するマウス
(51)【国際特許分類】
C12N 15/09 20060101AFI20231226BHJP
A01K 67/027 20240101ALI20231226BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20231226BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20231226BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20231226BHJP
C12N 5/0735 20100101ALN20231226BHJP
【ＦＩ】
C12N15/09 100
A01K67/027 ZNA
C12N5/10
G01N33/53 N
C12N15/12
C12N5/0735
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023536551
(86)(22)【出願日】2021-12-15
(85)【翻訳文提出日】2023-07-26
(86)【国際出願番号】 US2021063574
(87)【国際公開番号】W WO2022132943
(87)【国際公開日】2022-06-23
(31)【優先権主張番号】63/126,326
(32)【優先日】2020-12-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
２．プルロニック
３．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】597160510
【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100105957
【弁理士】
【氏名又は名称】恩田 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100068755
【弁理士】
【氏名又は名称】恩田 博宣
(74)【代理人】
【識別番号】100142907
【弁理士】
【氏名又は名称】本田 淳
(74)【代理人】
【識別番号】100152489
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 美樹
(72)【発明者】
【氏名】マックフィルター、ジョン
(72)【発明者】
【氏名】トゥ、ナシン
(72)【発明者】
【氏名】マーフィー、アンドリュー ジェイ．
(72)【発明者】
【氏名】マクドナルド、リン
【テーマコード（参考）】
4B065
【Ｆターム（参考）】
4B065AA91X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065BA03
(57)【要約】
本明細書では、マウス白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置するＦｃａＲ遺伝子座からヒトまたはヒト化Ｆｏｏｔ受容体（ＦｃａＲ）を発現するマウスに関連する方法及び組成物が提供される。特定の実施形態において、このようなマウスは、ヒトＩｇＡ Ｆｃを含む治療薬のｉｎ ｖｉｖｏ試験（例えば、そのような治療薬の薬物動態学的及び／または薬力学的特性の試験、ならびに投与計画）に有用である。また、本明細書では、そのようなマウスを使用する方法、そのようなマウスから得られる細胞、そのようなマウスを作製する方法、及びそのようなマウスと同様の遺伝子改変を含むＥＳ細胞も提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ゲノム中に、マウス白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置するＦｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウスであって、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、前記マウス。
【請求項2】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、請求項１に記載のマウス。
【請求項3】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｌｉｌｒａ５タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、請求項１または２に記載のマウス。
【請求項4】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質及びＮｃｒ１タンパク質をコードする核酸配列の間など、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、請求項１～３のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項5】
前記遺伝子間領域は、前記Ｐｉｒａ６遺伝子座と前記Ｎｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である、請求項４に記載のマウス。
【請求項6】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体上の座標４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間に位置する、請求項１～５のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項7】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項8】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、前記ヒトＦｃアルファ受容体遺伝子のヒトエクソン１～５を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項9】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、非マウスげっ歯類ＦｃαＲエクソン１の非コード部分、ヒトＦｃαＲエクソン１及び２、ヒトＦｃαＲエクソン３及び４、ならびに非マウスげっ歯類ＦｃαＲエクソン５のコード部分を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項10】
前記ヒトまたはヒト化ＦｃαＲ受容体遺伝子座は、ヒト１９番染色体上の座標５４，８６２，２９７～５４，９０６，１８５の間で見出されるゲノム配列（＋鎖、ＧＲＣｈ３８アセンブリ）を含む、請求項７または８に記載のマウス。
【請求項11】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子に存在する核酸配列、及び／または前記ヒトＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲに存在する核酸配列をさらに含む、請求項７または８に記載のマウス。
【請求項12】
前記マウスは、マウス好中球、単球、マクロファージ、好酸球、及び樹状細胞（例えば、形質細胞様樹状細胞）上で前記ＦｃαＲポリペプチドを発現する、請求項１～１１のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項13】
前記マウスは、前記ＦｃαＲ遺伝子座についてヘテロ接合性またはホモ接合性を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項14】
ゲノム中に、ヒトまたはヒト化Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座をさらに含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項15】
ゲノム中に、マウスゲノムの白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置するＦｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウス胚性幹細胞（ＥＳ細胞）であって、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、前記マウス胚性幹細胞。
【請求項16】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、請求項１５に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項17】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｌｉｌｒａ５タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、請求項１５または１６に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項18】
前記Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質及びＮｃｒ１タンパク質をコードする核酸配列の間など、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、請求項１５～１７のいずれか一項に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項19】
前記遺伝子間領域は、前記Ｐｉｒａ６遺伝子座と前記Ｎｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である、請求項１８に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項20】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体上の座標４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間に位置する、請求項１５～１９のいずれか一項に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項21】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項１５～２０のいずれか一項に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項22】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、前記ヒトＦｃアルファ受容体遺伝子のヒトエクソン１～５を含む、請求項１５～２１のいずれか一項に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項23】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、非マウスげっ歯類ＦｃαＲエクソン１の非コード部分、ヒトＦｃαＲエクソン１及び２、ヒトＦｃαＲエクソン３及び４、ならびに非マウスげっ歯類ＦｃαＲエクソン５のコード部分を含む、請求項１５～２０のいずれか一項に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項24】
前記ヒトまたはヒト化ＦｃαＲ受容体遺伝子座は、ヒト１９番染色体上の座標５４，８６２，２９７～５４，９０６，１８５の間で見出されるゲノム配列（＋鎖、ＧＲＣｈ３８アセンブリ）を含む、請求項２１または２２に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項25】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子に存在する核酸配列、及び／または前記ヒトＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲに存在する核酸配列をさらに含む、請求項２１または２２に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項26】
前記ＥＳ細胞は、前記ＦｃαＲ遺伝子座についてヘテロ接合性またはホモ接合性を有する、請求項１５～２５のいずれか一項に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項27】
ゲノム中に、ヒトまたはヒト化Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座をさらに含む、請求項１５～２６のいずれか一項に記載のマウスＥＳ細胞。
【請求項28】
ヒトＩｇＡ抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを試験する方法であって、前記ＩｇＡ抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを請求項１～１４のいずれか一項に記載のマウスに投与することを含む、前記方法。
【請求項29】
前記投与されたヒトＩｇＡ抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特性を測定することをさらに含み、任意選択で、前記１つ以上の薬物動態学的特性は、血漿中濃度対時間下面積（ＡＵＣ）、生体内回収率（ＩＶＲ）、クリアランス率（ＣＬ）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、薬剤半減期（ｔ１／２）、及び／または定常状態分布容積（Ｖｓｓ）の１つ以上から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
前記投与されたヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの治療的有効性を測定することをさらに含む、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項31】
複数の用量の前記ヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを投与することと、各用量の前記ヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの治療的有効性、安全性、及び／または耐容性を決定することとをさらに含む、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記マウスにおける１つ以上のＦｃ受容体媒介反応を測定することをさらに含み、任意選択で、前記１つ以上のＦｃ受容体媒介反応が抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）反応である、請求項２８～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記ヒト抗体は、前記マウスの標的細胞に結合し、前記方法は、前記標的細胞に対するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定することと、ＡＤＣＣの量を対照と比較することとをさらに含み、標的細胞死滅の増加は、薬剤がＡＤＣＣを媒介する能力が増加していることを示す、請求項２８～３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
前記ヒト抗体に対して前記マウスが生成する前記免疫反応を測定することをさらに含む、請求項２８～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
マウスゲノムを改変する方法であって、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座をマウスゲノムの白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に挿入して、前記マウスゲノムを改変することを含み、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、前記方法。
【請求項36】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項38】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｌｉｌｒａ５タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、請求項３５～３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質及びＮｃｒ１タンパク質をコードする核酸配列の間など、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、請求項３５～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
前記遺伝子間領域は、前記Ｐｉｒａ６遺伝子座と前記Ｎｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
前記ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体上の座標４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間である、請求項３５～４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項42】
Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウスを作製する方法であって、請求項１５～２７のいずれか一項に記載のマウスＥＳ細胞を作製することと、
前記ＥＳ細胞からマウスを作製することと
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本出願は、２０２０年１２月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／１２６，３２６号に対する優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年１２月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／１２６，３２６号に対する優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
マウスは、サイズが小さく、生理学がよく特徴付けられており、大型の哺乳類モデル（霊長類など）に比べて維持費が比較的安価であるため、治療薬の前臨床試験に必須的なｉｎ ｖｉｖｏモデルである。マウスモデルは、ヒトの臨床研究に進む前に、治療薬の毒性や薬物動態を評価するためによく使用される。このような利点にもかかわらず、抗体及びＦｃ融合タンパク質のｉｎ ｖｉｖｏ試験では、これらの治療薬はマウスではヒトとは異なる振る舞いを示す可能性があることから、重大な欠点がある。これは、マウスがＩｇＡ抗体に結合するＦｃ受容体を発現しないため、特にＩｇＡベースの治療薬をマウスで試験する場合に当てはまる。従って、マウスモデルは、ＩｇＡベースの治療薬の安全性、有効性、及び最適な投与量を予測するために、広範に特性化されておらず、使用されてもいない。ヒト患者におけるこのようなＩｇＡベースの治療薬の特性を予測する、ＩｇＡベースの治療薬の前臨床試験を正確に行えるようにする新しいマウスモデル及び方法が必要とされている。
【発明の概要】
【0003】
本明細書では、ヒトまたはヒト化Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）を発現するマウスに関連する方法及び組成物、ならびにそのようなマウスにおけるヒトＩｇＡ Ｆｃを含む治療薬のｉｎ ｖｉｖｏ試験（例えば、薬物動態学的及び／または薬力学的特性の試験、ならびにそのような治療薬の投与計画）に関連する方法及び組成物が提供される。本明細書に記載されるように、マウスは、サイズが小さく、生理学がよく特徴付けられており、遺伝子改変に対する適応性のため、治療用抗体及びＦｃ融合タンパク質を試験するのに便利な動物モデルである。残念ながら、ヒトＩｇＡ Ｆｃ領域を含む薬剤（例えば、ＩｇＡ抗体及びＦｃα融合タンパク質）は、野生型マウスに投与したとき、ヒトに投与した場合と比較して非常に異なる薬物動態学的特性及び薬力学的特性を示すことが多いが、これは、そのようなマウスにはＦｃαＲが欠如しているためである。従って、本明細書で提供されるマウスは、治療用途のヒトＩｇＡ抗体及びＦｃα融合タンパク質の開発、スクリーニング、及び試験のためのｉｎ ｖｉｖｏシステムとして機能することができる。
【0004】
特定の態様において、本明細書は、ゲノム中に、マウス白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置するＦｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウスであって、当該ＦｃαＲ遺伝子座（ヒトまたはヒト化ＦｃαＲ遺伝子座など）には、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列が含まれる、当該マウスを提供する。いくつかの実施形態において、マウスは、マウス好中球、単球、マクロファージ、好酸球、及び樹状細胞（例えば、形質細胞様樹状細胞）上でＦｃαＲポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態において、好中球、単球、マクロファージ、好酸球、及び／または樹状細胞（例えば、形質細胞様樹状細胞）は、マウスの血液から得られる。いくつかの実施形態において、好中球、単球、マクロファージ、好酸球、及び樹状細胞（例えば、形質細胞様樹状細胞）は、マウスの脾臓から得られる。
【0005】
いくつかの態様において、本明細書は、ゲノム中に、マウスゲノムの白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置するＦｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウス胚性幹細胞（ＥＳ細胞）であって、当該ＦｃαＲ遺伝子座には、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列が含まれる、当該マウス胚性幹細胞を提供する。
【0006】
いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｌｉｌｒａ５タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質及びＮｃｒ１タンパク質をコードする核酸配列の間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体上の座標４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間に位置する。
【0007】
いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＦｃアルファ受容体遺伝子のヒトエクソン１～５を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、げっ歯類（非マウス）ＦｃαＲエクソン１の非コード部分、ヒトＦｃαＲエクソン１及び２、ヒトＦｃαＲエクソン３及び４、ならびにげっ歯類（非マウス）ＦｃαＲエクソン５のコード部分を含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲ受容体遺伝子座は、ヒト１９番染色体上の座標５４，８６２，２９７～５４，９０６，１８５の間で見出されるゲノム配列（＋鎖、ＧＲＣｈ３８アセンブリ）を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子に存在する核酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態において、遺伝子座は、ヒトＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲに存在する核酸配列をさらに含む。
【0008】
いくつかの実施形態において、マウスまたはマウスＥＳ細胞は、ＦｃαＲ遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。いくつかの実施形態において、マウスまたはマウスＥＳ細胞は、ＦｃαＲ遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0009】
いくつかの実施形態において、上記の態様または実施形態のいずれかのマウスまたはマウスＥＳ細胞は、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座をさらに含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはマウスＥＳ細胞は、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。いくつかの実施形態において、マウスまたはマウスＥＳ細胞は、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0010】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の様々な実施形態のＦｃαＲ遺伝子座を含むマウスまたはマウスＥＳ細胞は、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲをコードする核酸配列を含むヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、Ｆｃガンマ受容体２ａ（ＦｃγＲ２ａ）、Ｆｃガンマ受容体２ｂ（ＦｃγＲ２ｂ）、Ｆｃガンマ受容体３ａ（ＦｃγＲ３ａ）、Ｆｃガンマ受容体３ｂ（ＦｃγＲ３ｂ）、及び／またはＦｃガンマ受容体２ｃ（ＦｃγＲ２ｃ）から選択される１つ以上の低親和性ＦｃγＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、ヒトまたはヒト化Ｆｃガンマ受容体１アルファ（ＦｃγＲ１ａ）、Ｆｃガンマ受容体２ａ（ＦｃγＲ２ａ）、Ｆｃガンマ受容体２ｂ（ＦｃγＲ２ｂ）、Ｆｃガンマ受容体３ａ（ＦｃγＲ３ａ）、Ｆｃガンマ受容体３ｂ（ＦｃγＲ３ｂ）、及び／またはＦｃガンマ受容体２ｃ（ＦｃγＲ２ｃ）から選択される１つ以上のＦｃγＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲはヒト細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲはマウス膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲはヒト膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲはマウス細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲはヒト細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、内因性マウスＦｃγＲ遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲをコードする核酸配列は、内因性マウスＦｃγＲ遺伝子の全部または一部を置き換える。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲをコードする核酸配列は、マウスＦｃγＲ細胞外ドメインをコードする内因性核酸配列を置き換える、ヒトＦｃγＲ細胞外ドメインをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、上記の実施形態のいずれかのマウスは、マウスＦｃγＲを発現しない。
【0011】
特定の態様において、本明細書は、ヒトＩｇＡ抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを試験する方法であって、当該ＩｇＡ抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを上記の実施形態のいずれかのマウスに投与することを含む当該方法を提供する。
【0012】
いくつかの実施形態において、当該方法は、投与されたヒトＩｇＡ抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特性を測定することをさらに含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の薬物動態学的特性は、血漿中濃度対時間下面積（ＡＵＣ）、生体内回収率（ＩＶＲ）、クリアランス率（ＣＬ）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、薬剤半減期（ｔ１／２）、及び／または定常状態分布容積（Ｖｓｓ）の１つ以上から選択される。いくつかの実施形態において、当該方法は、投与されたヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの治療的有効性を測定することをさらに含む。いくつかの実施形態において、当該方法は、複数の用量のヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを投与することと、各用量のヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの治療的有効性を決定することとをさらに含む。いくつかの実施形態において、当該方法は、複数の用量のヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを投与することと、各用量のヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの安全性を決定することとをさらに含む。いくつかの実施形態において、当該方法は、複数の用量のヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを投与することと、各用量のヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの耐容性を決定することとをさらに含む。いくつかの実施形態において、当該方法は、マウスにおける１つ以上のＦｃ受容体媒介反応を測定することをさらに含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のＦｃ受容体媒介反応は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）反応である。いくつかの実施形態において、ヒト抗体はマウス中の標的細胞に結合し、当該方法は、標的細胞に対するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定することと、ＡＤＣＣの量を対照と比較することとをさらに含み、標的細胞死滅の増加は、薬剤がＡＤＣＣを媒介する能力が増加していることを示す。いくつかの実施形態において、当該方法は、ヒト抗体に対してマウスが生成する免疫反応を測定することをさらに含む。
【0013】
特定の態様において、本明細書は、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウスを作製する方法であって、ゲノム中に、本明細書で提供されるマウスゲノムの白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置するＦｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含む、マウスＥＳ細胞を作製することと、当該ＥＳ細胞からマウスを作製することとを含む、当該方法を提供する。
【0014】
特定の態様において、本明細書は、マウスゲノムを改変する方法であって、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座をマウスゲノムの白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に挿入して、マウスゲノムを改変することを含み、ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、当該方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む。特定の実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｌｉｌｒａ５タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である。特定の実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体上の座標４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間にある。
【0015】
特に示さない限り、図では、ヒト遺伝子配列には白のボックス、マウス遺伝子配列には黒のボックス、マウス遺伝子間配列には単線、ヒト遺伝子間配列には二重線、選択カセットにはテキストが入った白のボックス（例えば、Ｌｏｘ、ＣＭ）を使用する。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1A】ホモ接合性を有するように育種することができるヘテロ接合性のマウスを生成するためのＭＡＩＤ２０２７７カセットを、マウスゲノムに挿入することを示す（縮尺通りではない）。「ＬＲＣ」は、白血球受容体複合体を示し、「ＥＰ」はエレクトロポレーションを示す。対立遺伝子の改変（ＭＯＡ）アッセイ（実施例に記載）で使用されるプライマー及びプローブの名前と位置は、図の上の短い線として示す。
【図1B】マウスゲノム中のＭＡＩＤ２０２７７カセットの挿入のための、選択マーカーの欠失を引き起こすＣＲＥリコンビナーゼによるヘテロ接合性ＥＳ細胞の処理と、それによって、ＭＡＩＤ２０２７８カセットに対してヘテロ接合性を有するＥＳ細胞を産生することを示す（縮尺通りではない）。対立遺伝子の改変（ＭＯＡ）アッセイ（実施例に記載）で使用されるプライマー及びプローブの名前と位置は、図の上の短い線として示す。
【図2】マウスゲノムに相同な配列（「５’マウス相同性アーム」）、Ｉ－ＣｅｕＩ部位、ＦＣＡＲ遺伝子を含む４４，８８７ｂｐのヒトゲノムインサート、ｌｏｘ２３７２－Ｕｂ－Ｎｅｏ－ｌｏｘ２３７２カセット、ＰＩ－ＳｃｅＩ部位、マウスゲノムに相同な２番目の配列、及びクロラムフェニコール（「ＣＭ」と表示）耐性カセットを含む標的化ベクターを示す（縮尺通りではない）。
【図3】マウス１番染色体上のヒトＦｃγＲ２Ｂ、ＦｃγＲ３Ｂ、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、及びＦｃγＲ２Ａ遺伝子を含むヒト化低親和性ＦｃγＲ遺伝子座を示す（縮尺通りではない）。この遺伝子座のヒト化のステップは、米国特許第８，６５８，１５４号に記載されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【図4A】ＭＡＩＤ２０２７８カセットを用いて遺伝子操作されたマウスから得られた血液サンプル中の細胞におけるＦｃαＲの発現を検出するフローサイトメトリープロットを示す。
【図4B】ＭＡＩＤ２０２７８カセットを用いて遺伝子操作されたマウスから得られた脾臓細胞におけるＦｃαＲの発現を検出するフローサイトメトリープロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【0017】
概要
本明細書では、ヒト、ヒト化、または部分的ヒト化Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）を発現するマウスに関連する方法及び組成物、ならびにそのようなマウスにおけるヒトＩｇＡ Ｆｃを含む治療薬のｉｎ ｖｉｖｏ試験（例えば、そのような治療薬の薬物動態学的及び／または薬力学的特性の試験、ならびに投与計画）に関連する方法及び組成物が提供される。具体的には、本明細書に記載される様々な実施形態は、完全なヒトまたは部分的ヒトＦｃαＲ１／ＣＤ８９遺伝子／受容体（本明細書では「ＦｃαＲ」と呼ぶ）をコード及び／または発現する遺伝子を含む、マウス、ＥＳ細胞、及び方法に関する。遺伝子改変マウスは、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウス７番染色体上の白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲをコードする核酸配列は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間、Ｌｉｌｒａ５ポリペプチドの遺伝子座とＧｐ６ポリペプチドの遺伝子座との間、及び／またはＰｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間（例えば、Ｐｉｒａ６タンパク質のコード核酸配列とＮｃｒ１タンパク質のコード核酸配列との間）の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、マウスゲノム（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０の間に位置する遺伝子座でヒトＦｃαＲを発現する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲはヒト細胞外ドメインを含む。このような受容体の膜貫通ドメイン及び／または細胞質ドメインは、ヒトのものでも、または非ヒト（例えば、ラット）のものでもあり得る。
本明細書では、ヒト、ヒト化、または部分的ヒト化Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）を発現するマウスに関連する方法及び組成物、ならびにそのようなマウスにおけるヒトＩｇＡ Ｆｃを含む治療薬のｉｎ ｖｉｖｏ試験（例えば、そのような治療薬の薬物動態学的及び／または薬力学的特性の試験、ならびに投与計画）に関連する方法及び組成物が提供される。具体的には、本明細書に記載される様々な実施形態は、完全なヒトまたは部分的ヒトＦｃαＲ１／ＣＤ８９遺伝子／受容体（本明細書では「ＦｃαＲ」と呼ぶ）をコード及び／または発現する遺伝子を含む、マウス、ＥＳ細胞、及び方法に関する。遺伝子改変マウスは、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウス７番染色体上の白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲをコードする核酸配列は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間、Ｌｉｌｒａ５ポリペプチドの遺伝子座とＧｐ６ポリペプチドの遺伝子座との間、及び／またはＰｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間（例えば、Ｐｉｒａ６タンパク質のコード核酸配列とＮｃｒ１タンパク質のコード核酸配列との間）の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、マウスゲノム（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０の間に位置する遺伝子座でヒトＦｃαＲを発現する。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲはヒト細胞外ドメインを含む。このような受容体の膜貫通ドメイン及び／または細胞質ドメインは、ヒトのものでも、または非ヒト（例えば、ラット）のものでもあり得る。
【0018】
治療用ヒト抗体及びヒトＦｃα融合タンパク質などのヒトＩｇＡ Ｆｃを含む治療薬は、典型的には、ヒトに投与する前に、非ヒト種に試験を行う。このような薬剤はヒト以外の霊長類やその他の比較的大型の哺乳類で試験されることが多いが、そのような試験には費用がかかり、医薬品開発者には多大な経済的負担になる。さらに、ヒト以外の霊長類やその他の比較的大型の哺乳類は、遺伝子改変に適していない場合が多く、そのような生物で利用可能な疾患モデルが制限されている。
【0019】
一方、マウスは、サイズが小さく、生理学がよく特徴付けられており、遺伝子改変に対する適応性のため、治療用抗体及びＦｃ融合タンパク質を試験するのに便利な動物モデルである。残念ながら、ヒトＩｇＡ Ｆｃ領域を含む薬剤は、従来のマウスに投与したとき、ヒトに投与した場合と比較して非常に異なる薬物動態学的特性及び薬力学的特性を示すことが多いが、これは、野生型マウスにはＦｃαＲが欠如されているためである。従って、本明細書で提供されるマウスは、治療用途のヒトＩｇＡ抗体及びＦｃα融合タンパク質の開発、スクリーニング、及び試験のためのｉｎ ｖｉｖｏシステムとして機能することができる。
【0020】
マウスのゲノム内の導入遺伝子の位置は、その発現に重大な影響を与える可能性がある。例えば、ヒトＦｃαＲ導入遺伝子を含むマウスは、好中球上でＦｃαＲを発現するが、単球では亜集団上でのみ発現することが報告されている。例えば、そのようなマウスでは、腹腔から単離されたマクロファージや、リンパ球、内皮細胞、肝細胞などの非骨髄細胞はＦｃαＲ発現を示さなかった。ｖａｎ Ｅｇｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ９３（１２）：４３８７－４３９４（１９９９）。対照的に、ヒトでは、通常、好中球、単球、マクロファージ（例えば、クッパー細胞）、好酸球、及び樹状細胞上でＦｃαＲが発現される。従って、特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置に対応するマウスゲノム中の位置、またはヒトゲノム中のヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置の近くに位置する遺伝子座に対応するそれらのゲノム中の位置で、ヒトＦｃαＲを発現する。具体的には、特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウス７番染色体上の白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間、Ｌｉｌｒａ５ポリペプチドの遺伝子座とＧｐ６ポリペプチドの遺伝子座との間、及び／またはＰｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間（例えば、Ｐｉｒａ６タンパク質のコード核酸配列とＮｃｒ１タンパク質のコード核酸配列との間）の遺伝子間領域に位置する遺伝子座でヒトＦｃαＲを発現する。いくつかの実施形態において、遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、マウスゲノム（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０の間に位置する遺伝子座でヒトＦｃαＲを発現する。本明細書で提供されるいくつかの実施形態において、本明細書に記載のマウスは、好中球、単球／マクロファージ（例えば、血液単球／マクロファージ）、好酸球、及び樹状細胞（例えば、形質細胞様樹状細胞）の細胞表面上にＦｃαＲを発現する。
【0021】
本明細書で提供されるマウス、ＥＳ細胞、及び方法の様々な実施形態では、野生型マウスＦｃＲγ鎖と会合する本明細書に記載のヒトまたはヒト化ＦｃαＲを、ゲノムが含み、及び／またはマウスが発現する。従って、いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲは、内因性マウスＦｃＲγ鎖と会合してマウス細胞の表面上に発現される。
【0022】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒトＦｃαを含む治療薬の投与後のマウス抗ヒト免疫反応の低下をさらに含む。これは、投与された抗体またはＦｃ融合タンパク質に存在するＦｃと一致するヒトＦｃを発現するように遺伝子を改変したマウスを使用することによって達成し得る。このようなマウスは、例えば、内因性非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子セグメントに対応する部分をコードする配列の代わりに、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域をコードする核酸配列の全部または一部を挿入することによって作製し得る。このような動物は、ヒトＦｃを「自己」タンパク質として認識するため、投与されたヒトＦｃ含有治療薬に対して免疫反応を発現する可能性が低い。
【0023】
さらに、いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒト患者で発現されるＦｃαＲと同様の、ヒトＦｃαと相互作用可能なＦｃα受容体（ＦｃαＲ）を発現する。例えば、特定の実施形態において、本明細書で提供される遺伝子改変マウスは、少なくともヒト細胞外ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインはヒトまたはラットのいずれのものでもよい）を有するＦｃαＲを発現する。特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒトまたは部分的ヒトＦｃαＲを発現することに加え、ヒトまたは部分的ヒトβ２Ｍ、ヒトまたは部分的ヒトＦｃεＲ１α、ヒトまたは部分的ヒトＦｃγＲ１ａ、ヒトまたは部分的ヒトＦｃγＲ２ａ、ヒトまたは部分的ヒトＦｃγＲ２ｂ、ヒトまたは部分的ヒトＦｃγＲ３ａ、ヒトまたは部分的ヒトＦｃγＲ３ｂ、及び／またはヒトまたは部分的ヒトＦｃγＲ２ｃを発現する。従って、そのようなマウスは、完全に非ヒトＦｃ受容体を有するマウスと比較して、ヒト患者のヒトＦｃ反応をより正確に模倣することが可能である。
【0024】
従って、特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、単に抗原に対する特異性及び／または親和性に基づくだけでなく、免疫系のエフェクター機能の評価を通じて、選択された抗体に関連する生物学的機能全体に基づき、治療用ヒトＩｇＡ抗体及びＦｃ融合タンパク質を開発、選択、及び試験するための新規なｉｎ ｖｉｖｏシステムである。このようにして、別々に評価された個々の成分のみに基づく予測ではなく、関連する生物学的反応（例えば、細胞反応）を伴う分子全体レベルで評価された治療可能性に基づいて、ヒト治療用候補を開発及び選択することができる。従って、本明細書に開示されるマウスは、特に、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト治療用抗体機能を予測及び特性評価するための適切なシステムを提供する。
【0025】
本明細書に開示されるヒトＦｃαＲを発現するトランスジェニックマウスは、より大型の動物モデルまたはヒトに比べ、免疫反応において受容体が有する機能的役割を低コストで研究するのに使用され得る。さらに、マウスは、基本的な生物学的機能を確認し、その後、それを大型の動物やヒトで確認するのにより好適なモデルである。例えば、ヒトＦｃαＲを発現するマウスは、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＴ）における受容体の役割を研究し、ＦｃαＲ媒介反応に必要な他の成分を同定するために以前から使用されていた。ｖａｎ Ｅｇｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｌｏｏｄ，９３（１２）：４３８７－９４を参照されたい。
【0026】
ＩｇＡ抗体は、特定の疾患の発症及び進行において重要な役割を果たす。Ｂｒｅｅｄｖｅｌｄ及びｖａｎ Ｅｇｍｏｎｄは、ＩｇＡ抗体が役割を果たすいくつかの疾患及び状態について議論している（（２０１９）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０：５５３）。例えば、いくつかの自己免疫疾患は、ＩｇＡ抗体の量が増加することを特徴としている（例えば、関節リウマチ及びＩｇＡ腎症）。炎症性腸疾患では、ＩｇＡでオプソニン化された細菌がＦｃαＲの架橋と好中球の活性化を引き起こし、組織損傷をもたらす可能性がある。ＩｇＡレベルが低いことは、特定の疾患にも関連している。低いＩｇＡレベルとアレルギー性喘息の重症度との間に潜在的な関連性が見出されているが、同時にアレルギー性鼻炎の対象では高いレベルも見出される。本明細書に記載のマウスを使用し、疾患の重症度に対するＦｃαＲの役割、またはＦｃαＲ阻害剤が症状の弱化に及ぼす影響を特定することができる。
【0027】
ＩｇＡが不足すると、感染症、特に粘膜感染症に対する感受性が高まる可能性がある。過剰な量のＩｇＡを投与すると、ＦｃαＲの活性化が亢進し、意図しない合併症を引き起こす可能性がある。従って、本明細書に記載のマウスを用い、副作用を引き起こすことなく、ＩｇＡ欠損症を好適に克服する適切な投与計画を確認することができる。本明細書に記載のマウスは、ＩｇＡが媒介し得る炎症の治療に対するＦｃαＲ阻害剤の有効性を評価するためにも使用することが可能である。
【0028】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるマウスは、抗腫瘍（または病原体）候補ＩｇＡ治療薬もしくはＩｇＡ Ｆｃ融合タンパク質、またはＦｃαＲ及び腫瘍抗原に対する二重特異性抗体で治療され得る。言い換えれば、本明細書に記載のマウスは、ＩｇＡ及び／またはＦｃαＲが関与する治療薬の前臨床評価に使用され得る。
【0029】
定義
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書では、冠詞の文法上の目的語の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指すように使用される。例として、「（ａｎ）要素」は、１つの要素または１つを超える要素を意味する。
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書では、冠詞の文法上の目的語の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指すように使用される。例として、「（ａｎ）要素」は、１つの要素または１つを超える要素を意味する。
【0030】
「アミノ酸」という用語は、天然であろうと合成であろうと、アミノ官能基及び酸官能基の両方を含み、天然に生じるアミノ酸のポリマーに含まれ得る全ての分子を網羅することを意図している。例示的なアミノ酸には、天然に生じるアミノ酸、その類似体、誘導体及び同族体、変異体側鎖を有するアミノ酸類似体、及び前述のいずれかの全ての立体異性体が含まれる。
【0031】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、インタクト抗体及びその抗原結合断片の両方を指し得る。インタクト抗体は、ジスルフィド結合によって相互結合された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖には、重鎖可変ドメイン及び重鎖定常ドメインが含まれる。各軽鎖には、軽鎖可変ドメイン及び軽鎖定常ドメインが含まれる。重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性のドメインにさらに細分することができる。重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、それぞれ３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へ、次の順序で配列される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変ドメインには、抗原と相互作用する結合ドメインが含まれる。
【0032】
本明細書で使用される、抗体の「抗原結合断片」及び「抗体結合部分」という用語は、抗原に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の「抗原結合断片」という用語に含まれる結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖抗体、単離されたＣＤＲＨ３、及びインタクト抗体の可変ドメインの少なくとも一部を保持する他の抗体断片が挙げられる。これらの抗体断片は、従来の組換え技術及び／または酵素技術を使用して得られ、インタクト抗体と同様の方法で抗原結合についてスクリーニングし得る。
【0033】
本明細書で使用される場合、「血漿中濃度対時間曲線下面積」または「ＡＵＣ」という用語は、投与後の治療薬の除去の速度及び程度を指す。いくつかの実施形態において、ＡＵＣは、１２、１８、２４、３６、４８、もしくは７２時間などの特定の期間にわたって、または曲線の傾きに基づき、外挿を用いて無限にわたって決定される。本明細書で特に指定しない限り、ＡＵＣは無限大（ＡＵＣＩＮＦ）で決定される。ＡＵＣは、用量ごとに計算してもよい。他のＰＫパラメータの多くと同様に、ＡＵＣの決定は、単一の動物で行ってもよく、平均が計算される動物集団で行ってもよい。
【0034】
本明細書で使用する「クリアランス率」または「ＣＬ」という用語は、薬物を除去する身体能力の尺度を指し、時間の経過とともに薬物が除去された血漿の量として表される。
「に由来する」という語句は、再構成されていない可変領域及び／または再構成されていない可変領域遺伝子セグメント「に由来する」再構成された可変領域遺伝子に関して使用される場合、再構成された可変領域遺伝子の配列を、可変ドメインを発現する遺伝子を形成するように再構成された、一連の再構成されていない可変領域遺伝子セグメントまで遡ることができることを指す（該当する場合、スプライスの相違点及び体細胞変異を説明する）。例えば、体細胞変異した、再構成された可変領域遺伝子は、それでもなお、再構成されていない可変領域遺伝子セグメントに由来する。いくつかの実施形態において、内因性遺伝子座がユニバーサル軽鎖または重鎖遺伝子座で置換される場合、「に由来する」という用語は、配列が体細胞変異したことがあっても配列の起源を上記の再構成された遺伝子座まで遡ることができることを示す。
「に由来する」という語句は、再構成されていない可変領域及び／または再構成されていない可変領域遺伝子セグメント「に由来する」再構成された可変領域遺伝子に関して使用される場合、再構成された可変領域遺伝子の配列を、可変ドメインを発現する遺伝子を形成するように再構成された、一連の再構成されていない可変領域遺伝子セグメントまで遡ることができることを指す（該当する場合、スプライスの相違点及び体細胞変異を説明する）。例えば、体細胞変異した、再構成された可変領域遺伝子は、それでもなお、再構成されていない可変領域遺伝子セグメントに由来する。いくつかの実施形態において、内因性遺伝子座がユニバーサル軽鎖または重鎖遺伝子座で置換される場合、「に由来する」という用語は、配列が体細胞変異したことがあっても配列の起源を上記の再構成された遺伝子座まで遡ることができることを示す。
【0035】
本明細書で使用される場合、「内因性遺伝子」または「内因性遺伝子セグメント」という語句は、本明細書に記載の破壊、欠失、置換、変更、または改変を導入する前の親または参照生物で見られる遺伝子または遺伝子セグメントを指す。いくつかの実施形態において、参照生物は野生型生物である。いくつかの実施形態において、参照生物は遺伝子操作された生物である。いくつかの実施形態において、参照生物は、実験室で飼育された生物（野生型生物であるか、または遺伝子操作された生物）である。
【0036】
「生体内回収率」または「ＩＶＲ」という用語は、観察されたピーク活性から投与前レベルを差し引き、次いで、投与量で除算した、増分回収率（Ｋ値）を指す。ＩＶＲは、パーセンテージに基づいて計算してもよい。平均ＩＶＲは、動物集団で決定することができ、または個別のＩＶＲを個別の動物で決定することができる。
【0037】
本明細書で使用される場合、「遺伝子座」という用語は、染色体上の位置を指す。いくつかの実施形態において、遺伝子座は、一連の関連する遺伝子エレメント（例えば、遺伝子、遺伝子セグメント、調節エレメント）を含有する。例えば、ヒト白血球受容体複合体（ＬＲＣ）遺伝子座は、１９番染色体上に位置し、とりわけＫＩＲ、ＦｃαＲ、ＮＣＲＩ、ＮＬＲＰ、ＧＰ６、及びＲｄｈ１３を含む遺伝子を含む。ヒトＬＲＣ遺伝子座と相同なマウス遺伝子座は、マウス７番染色体上にあり、ヒトＬＲＣの遺伝子と相同ないくつかの遺伝子（例えば、Ｎｃｒ１、Ｇｐ６、及びＲｄｈ１３遺伝子）を含む。遺伝子座は内因性または非内因性の場合がある。「内因性遺伝子座」という用語は、ある特定の遺伝子エレメントが天然に見出される染色体上の位置を指す。いくつかの実施形態において、内因性遺伝子座は、自然界に見出される配列を有する。いくつかの実施形態において、内因性遺伝子座は、野生型遺伝子座である。いくつかの実施形態において、内因性遺伝子座は、操作された遺伝子座である。
【0038】
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、互換的に使用される。当該用語は、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドまたはそれらの類似体のいずれかの、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有し、任意の機能を発揮し得る。ポリヌクレオチドの非限定的な例は、次のとおりである：遺伝子または遺伝子断片のコード領域または非コード領域、連鎖解析から定義された遺伝子座（複数の遺伝子座）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組み換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、及びプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体などの修飾ヌクレオチドを含んでもよい。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマーの組立て前または後に付与され得る。ポリヌクレオチドは、例えば標識成分の結合によりさらに修飾され得る。本明細書で提供される全ての核酸配列において、Ｕヌクレオチドは、Ｔヌクレオチドと置き換え可能である。
【0039】
本明細書で使用される場合、「定常状態における分布容積」または「Ｖｓｓ」という用語は、薬物が分布する見かけの空間（容積）を指す。より具体的には、Ｖｓｓは、定常状態における血漿中濃度で除算した動物体内の薬物量を表す。
【0040】
本明細書で使用される場合、「ＣＨ遺伝子セグメント」（例えば、Ｃγ１遺伝子セグメント、Ｃγ２ａ遺伝子セグメント、Ｃγ２ｃ遺伝子セグメント、Ｃμ遺伝子セグメント、Ｃγ２ｂ遺伝子セグメント、Ｃγ３遺伝子セグメント、Ｃδ遺伝子セグメント、Ｃε遺伝子セグメント、Ｃα遺伝子セグメントなど）という用語は、免疫グロブリン重鎖定常領域をコードするＤＮＡ配列のセグメントを指し、ＣＨ遺伝子（例えば、Ｃγ遺伝子、Ｃγ２ａ遺伝子、Ｃγ２ｃ遺伝子、Ｃγ３遺伝子、Ｃγ２ｂ遺伝子、Ｃμ遺伝子、Ｃδ遺伝子、Ｃε遺伝子、Ｃα遺伝子など）と互換的に使用され得る。例えば、Ｃγ１遺伝子セグメントまたはＣγ１遺伝子は、ＩｇＧ１定常領域をコードするＤＮＡ配列のセグメントを指す。「ＣＨ遺伝子セグメント遺伝子座」という用語は、ＣＨ遺伝子セグメントまたはＣＨ遺伝子が天然に見出される染色体上の位置を指す。
【0041】
遺伝子改変された遺伝子座
いくつかの態様において、本明細書に記載される、治療薬のｉｎ ｖｉｖｏ試験（例えば、そのような治療薬の薬物動態学的特性及び／または薬力学的特性の試験）に有用な遺伝子改変マウス及び細胞（例えば、ＥＳ細胞）は、ヒトＩｇＡ抗体またはＦｃα融合タンパク質を含む。本明細書に開示される遺伝子改変マウスは、当該マウスのゲノム中に、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲをコードする核酸配列を含み、ヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置、またはヒトゲノム中のヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置の近くに位置する遺伝子座に対応するマウスゲノム中の位置に対応する、少なくとも１つの遺伝子座を含む。例えば、特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウス７番染色体上の白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間、Ｌｉｌｒａ５ポリペプチドの遺伝子座とＧｐ６ポリペプチドの遺伝子座との間、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間、及び／またはＰｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウスゲノム（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０の間に位置する。いくつかの実施形態において、遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲをコードする核酸配列は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子の全部または一部をコードする核酸配列をさらに含み、及び／またはヒトＮＣＲ１遺伝子の全部または一部の核酸配列、例えば、ヒトＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲに存在する核酸配列をさらに含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載される、治療薬のｉｎ ｖｉｖｏ試験（例えば、そのような治療薬の薬物動態学的特性及び／または薬力学的特性の試験）に有用な遺伝子改変マウス及び細胞（例えば、ＥＳ細胞）は、ヒトＩｇＡ抗体またはＦｃα融合タンパク質を含む。本明細書に開示される遺伝子改変マウスは、当該マウスのゲノム中に、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲをコードする核酸配列を含み、ヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置、またはヒトゲノム中のヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置の近くに位置する遺伝子座に対応するマウスゲノム中の位置に対応する、少なくとも１つの遺伝子座を含む。例えば、特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウス７番染色体上の白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間、Ｌｉｌｒａ５ポリペプチドの遺伝子座とＧｐ６ポリペプチドの遺伝子座との間、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間、及び／またはＰｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウスゲノム（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０の間に位置する。いくつかの実施形態において、遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲをコードする核酸配列は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子の全部または一部をコードする核酸配列をさらに含み、及び／またはヒトＮＣＲ１遺伝子の全部または一部の核酸配列、例えば、ヒトＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲに存在する核酸配列をさらに含む。
【0042】
いくつかの実施形態において、遺伝子改変マウスは、ヒトＦｃ（例えば、ヒトＩｇＡ１Ｆｃ、ヒトＩｇＡ２Ｆｃ）を含む抗体重鎖をコードする遺伝子改変遺伝子座を含む。このような遺伝子座は、ＷＯ２０１９／１９０９９０に開示されており、当該文献は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、マウス及び／またはＥＳ細胞は、完全または部分的なヒト軽鎖をコードする（例えば、λ軽鎖またはκ軽鎖をコードする）遺伝子改変された遺伝子座を含む。このような遺伝子座は、ＷＯ２０１９／１９０９９０及び米国特許第１０，８２０，５８２号に開示されており、当該文献は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞は、ヒト細胞外ドメイン（例えば、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）α鎖、β－２－ミクログロブリンポリペプチド（β２Ｍ）、Ｆｃε受容体１α（ＦｃεＲ１α）α鎖、Ｆｃγ受容体１アルファ（ＦｃγＲ１ａ）α鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ（ＦｃγＲ２ａ）α鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ（ＦｃγＲ２ｂ）α鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ（ＦｃγＲ３ａ）α鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ（ＦｃγＲ３ｂ）α鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｃ（ＦｃγＲ２ｃ）α鎖）を有するＦｃ受容体をコードする１つ以上の遺伝子座をさらに含む。いくつかの実施形態において、そのような遺伝子座によってコードされる膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインは、ヒトまたは非ヒト（例えば、マウスなどのげっ歯類）であり得る。このような遺伝子座は、ＷＯ２０１９／１９０９９０及び米国特許第９，４７４，２５５号及び同第８，６５８，１５４号に開示されており、当該文献のそれぞれは、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0043】
ヒト化Ｆｃアルファ受容体
本明細書で提供されるマウスまたは胚性幹（ＥＳ）細胞は、ヒト化またはヒトＦｃアルファ受容体１（ＦｃαＲ１）を発現する及び／またはそのゲノム中に含む。マウスはＦｃαＲホモログを有さない。従って、いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲをコードする核酸配列を含み、ヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置、またはヒトゲノム中のヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置の近くに位置する遺伝子座に対応するマウスゲノム中の位置に対応する、少なくとも１つの遺伝子座を含む。例えば、特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウス７番染色体上の白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間、Ｌｉｌｒａ５ポリペプチドの遺伝子座とＧｐ６ポリペプチドの遺伝子座との間、及び／またはＰｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウスゲノム（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０の間に位置する。いくつかの実施形態において、遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲをコードする核酸配列は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子の全部または一部をコードする核酸配列をさらに含み、及び／またはヒトＮＣＲ１遺伝子の全部または一部の核酸配列、例えば、ヒトＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲに存在する核酸配列をさらに含む。特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞上にＦｃαＲを発現する。いくつかの実施形態において、好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞は、血液の好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞である。いくつかの実施形態において、好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞は、脾臓の好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞である。
本明細書で提供されるマウスまたは胚性幹（ＥＳ）細胞は、ヒト化またはヒトＦｃアルファ受容体１（ＦｃαＲ１）を発現する及び／またはそのゲノム中に含む。マウスはＦｃαＲホモログを有さない。従って、いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲをコードする核酸配列を含み、ヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置、またはヒトゲノム中のヒト内因性ＦｃαＲ遺伝子座の位置の近くに位置する遺伝子座に対応するマウスゲノム中の位置に対応する、少なくとも１つの遺伝子座を含む。例えば、特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウス７番染色体上の白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間、Ｌｉｌｒａ５ポリペプチドの遺伝子座とＧｐ６ポリペプチドの遺伝子座との間、及び／またはＰｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）タンパク質をコードする配列は、マウスゲノム（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０の間に位置する。いくつかの実施形態において、遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲをコードする核酸配列は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子の全部または一部をコードする核酸配列をさらに含み、及び／またはヒトＮＣＲ１遺伝子の全部または一部の核酸配列、例えば、ヒトＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲに存在する核酸配列をさらに含む。特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞上にＦｃαＲを発現する。いくつかの実施形態において、好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞は、血液の好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞である。いくつかの実施形態において、好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞は、脾臓の好中球、単球、マクロファージ（例えば、誘導マクロファージ）、好酸球、及び／または樹状細胞である。
【0044】
ＦｃαＲは、ヒトＦｃＲγ鎖と複合体を形成する活性化受容体であり、ヒトＩｇＡ１、ＩｇＡ２、分泌型ＩｇＡに対して中程度の親和性（Ｋａ約５ｘ１０６Ｍ－１）と、複合体ＩｇＡに対して高い結合活性（Ｋａ約５ｘ１０６Ｍ－１）を有する。ＩｇＡでコーティングされた粒子へのＦｃαＲの結合は、炎症性メディエーターの放出、食作用、及び抗体依存性細胞媒介細胞傷害を引き起こす原因になる。ＩｇＡ抗腫瘍療法を使用し、好中球を腫瘍細胞に誘導することで、腫瘍細胞を効果的に溶解することができる。全長の受容体に加え、好中球と好酸球は、分泌型ＩｇＡに結合可能な選択的にスプライシングされた受容体の形態で発現される。Ｉｎ ｖｉｖｏでは、２つのＦｃαＲ分子が二量体化し、ＩｇＡ単量体と相互作用する。
【0045】
いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、げっ歯類（非マウス、例えばラット）膜貫通ドメイン、及びげっ歯類（非マウス、例えばラット）細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、ヒト膜貫通ドメイン、及びげっ歯類（非マウス、例えばラット）細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、ヒト膜貫通ドメイン、及びヒト細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【0046】
いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。別の実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒト調節エレメント（例えば、ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。
【0047】
当該技術分野で記載されているように（例えば、Ｍｏｎｔｅｉｒｏ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１７７－２０４を参照）、ヒトＦｃαＲ遺伝子は、次の５つのエクソンからなる：５’ＵＴＲ、ＡＴＧ翻訳開始コドン、及びリーダーペプチドをコードする配列を含むエクソン１；リーダーペプチドの残りの部分をコードするエクソン２；ＦｃαＲの２つの細胞外ドメインであるＥＣ１及びＥＣ２をコードするエクソン３及び４（ＥＣ１はＩｇＡ Ｆｃに結合するドメインである）；タンパク質の細胞質ドメイン及び膜貫通ドメインをコードするエクソン５。
【0048】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるヒトまたはヒト化ＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸は、完全ヒトＦｃαＲポリペプチドをコードする。特定の実施形態において、そのような核酸は、ヒト化エクソン１（例えば、げっ歯類（非マウス、例えばラット）５’ＵＴＲ及びヒトコード配列を含む）、終止コドンまでのヒトコードエクソン２～５、及びヒトまたはげっ歯類（非マウス、例えばラット）の３’ＵＴＲとポリＡを含む。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸は、ヒトＦｃαＲ遺伝子のエクソン１～５を含む。
【0049】
いくつかの実施形態において、核酸は、マウスＥＳ細胞ゲノムに挿入するための標的化ベクターを生成するために使用される。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸は、ＦＣＡＲ遺伝子を含む約４４ｋｂのヒトゲノム配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトゲノム配列は、ヒト１９番染色体上に位置し、座標ｃｈｒ１９：５４，８６２，２９７～５４，９０６，１８５（＋鎖、ＧＲＣｈ３８アセンブリ）を有するゲノム配列であり、ＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子の３’末端及びヒトＦＣＡＲ遺伝子全体を含む。
【0050】
いくつかの実施形態において、ＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸は、げっ歯類（非マウス、例えばラット）／ヒトキメラ配列である。いくつかの実施形態において、げっ歯類（非マウス、例えばラット）／ヒトキメラ配列は、ヒト、ラット、またはラット／ヒトキメラのエクソン１（リーダー配列をコードする核酸配列はヒトまたはラットのいずれかである）；ヒトまたはラットのエクソン２、ヒトエクソン３～４；及びラットのエクソン５を含む。これらの実施形態において、核酸は、ヒトＦｃαＲ細胞外ドメイン及びラットの膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、調節領域（例えば、プロモーター及びＵＴＲ）は、げっ歯類（例えば、ラット）調節領域である。
【0051】
ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＷ＿０１６１０７３０４．１は、ヒトＦｃαＲ遺伝子の代表的な供給源配列である。ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＭ＿００２０００．４及びＮＰ＿００１９９１．１、ＮＭ＿１３３２６９．４及びＮＰ＿５７９８０３．１、ＮＭ＿１３３２７１．４及びＮＰ＿５７９８０５．１、ＮＭ＿１３３２７２．４及びＮＰ＿５７９８０６．１、ＮＭ＿１３３２７３．４及びＮＰ＿５７９８０７．１、ＮＭ＿１３３２７４．４及びＮＰ＿５７９８０８．１、ＮＭ＿１３３２７７．４及びＮＰ＿５７９８１１．１、ＮＭ＿１３３２７８．４及びＮＰ＿５７９８１２．１、ＸＭ＿０１１５２６６２５．３及びＸＰ＿０１１５２４９２７．１、ＸＭ＿０１７０２６４７３．１及びＸＰ＿０１６８８１９６２．１、ＸＭ＿０１７０２６４７４．２及びＸＰ＿０１６８８１９６３．１は、ヒトＦｃαＲ ｃＤＮＡの代表的な供給源配列及び所望のヒト部分が得られるポリペプチドを提供する。
【0052】
ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＣ＿００５１００．４は、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓのＦｃαＲ遺伝子の代表的な供給源配列を提供し、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＭ＿２０１９９２．１→ＮＰ＿９７３７２１．１は、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓのＦｃαＲ ｃＤＮＡ及び所望のＲａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ部分が得られるポリペプチド及び／または標的化ベクター相同性アームの設計に使用可能なポリペプチドの代表的な供給源配列を提供する。
【0053】
いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたＦｃαＲ遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたＦｃαＲ遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0054】
様々な実施形態において、本明細書に記載のヒトまたはヒト化ＦｃαＲポリペプチドは、野生型マウスＦｃＲγ鎖と会合して細胞表面上に発現される。様々な実施形態において、本明細書に記載のヒトまたはヒト化ＦｃαＲポリペプチドは、内因性マウスＦｃＲγ鎖と会合して細胞表面上に発現される。
【0055】
ヒト化低親和性Ｆｃガンマ受容体
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト低親和性Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）ポリペプチドをコードする遺伝子座（例えば、ヒトＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩＩｂポリペプチド；例えば、米国特許第８，６５８，１５４号を参照、当該文献は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト低親和性Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）ポリペプチドをコードする遺伝子座（例えば、ヒトＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩＩｂポリペプチド；例えば、米国特許第８，６５８，１５４号を参照、当該文献は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）をさらに含む。
【0056】
いくつかの実施形態において、低親和性ＦｃγＲ遺伝子座は、ヒトＦｃγＲＩＩａポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＦｃγＲＩＩａポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩａポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座の全部または一部を置き換える。いくつかの実施形態において、ヒトＦｃγＲＩＩａ遺伝子は多型を含み、この多型は、１３１Ｈｉｓ低反応性多型及び１３１Ａｒｇ高反応性多型から選択される。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩａ多型は、１３１Ｈｉｓ低反応性多型である。いくつかの実施形態において、マウスはマウス低親和性ＦｃγＲポリペプチドを発現しない（例えば、マウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩポリペプチドを発現しないか、または機能的なマウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩポリペプチドを発現しない）。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩａ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0057】
いくつかの実施形態において、低親和性ＦｃγＲ遺伝子座は、ヒトＦｃγＲＩＩｂポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＦｃγＲＩＩｂポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩｂポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座の全部または一部を置き換える。いくつかの実施形態において、ヒトＦｃγＲＩＩｂ遺伝子は、アミノ酸置換を含み、この置換は１８７Ｉｌｅまたは１８７Ｔｈｒ置換から選択される。いくつかの実施形態において、マウスはマウス低親和性ＦｃγＲポリペプチドを発現しない（例えば、マウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩポリペプチドを発現しないか、または機能的なマウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩポリペプチドを発現しない）。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩｂ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0058】
いくつかの実施形態において、低親和性ＦｃγＲ遺伝子座は、ヒトＦｃγＲＩＩｃポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＦｃγＲＩＩｃポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩｃポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座の全部または一部を置き換える。一実施形態において、ＦｃγＲＩＩｃ遺伝子は、特定の対立遺伝子変異体であり、この対立遺伝子変異体は、５７Ｓｔｏｐ変異体及び５７Ｑ変異体から選択される。いくつかの実施形態において、マウスは、マウス低親和性ＦｃγＲポリペプチドを発現しない（例えば、マウスＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＶ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩポリペプチドを発現しない）。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩｃ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0059】
いくつかの実施形態において、低親和性ＦｃγＲ遺伝子座は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＦｃγＲＩＩＩａポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩａポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座の全部または一部を置き換える。いくつかの実施形態において、マウスはマウス低親和性ＦｃγＲポリペプチドを発現しない（例えば、マウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩポリペプチドを発現しないか、または機能的なマウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩポリペプチドを発現しない）。一実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子は、特定の対立遺伝子変異体であり、この対立遺伝子変異体は、１７６Ｖａｌ変異体及び１７６Ｐｈｅ変異体から選択される。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩａ対立遺伝子変異体は１７６Ｖａｌ変異体である。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0060】
いくつかの実施形態において、低親和性ＦｃγＲ遺伝子座は、ヒトＦｃγＲＩＩＩｂポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＦｃγＲＩＩＩｂポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩｂポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウス低親和性ＦｃγＲ遺伝子座の全部または一部を置き換える。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩｂ遺伝子は、特定の対立遺伝子変異体であり、この対立遺伝子変異体は、ＮＡ１変異体及びＮＡ２変異体から選択される。別の特定の実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩｂ対立遺伝子変異体はＮＡ２変異体である。いくつかの実施形態において、マウスはマウス低親和性ＦｃγＲポリペプチドを発現しない（例えば、マウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩポリペプチドを発現しないか、または機能的なマウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩポリペプチドを発現しない）。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩｂ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、マウス調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0061】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、米国特許第９，２２１，８９４号、同第９，０５６，１３０号、同第９，０８９，５９９号、同第８，６５８，１５４号、同第８，８８３，４９６号、または同第８，６５８，８５３号に記載される１つ以上のヒト低親和性ＦｃγＲ遺伝子を含む（当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、少なくとも２つの低親和性ヒトＦｃγＲ遺伝子及び内因性マウスＦｃγ鎖遺伝子を含み、低親和性ヒトＦｃγＲ遺伝子は、ヒトＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂからなる群から選択される。いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒトＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ、ならびに内因性マウスＦｃγ鎖遺伝子を含む。いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、及びＦｃγＲＩＩＩｄ遺伝子、ならびに内因性マウスＦｃγ鎖遺伝子を含む。様々な実施形態において、１つ以上のヒトＦｃγＲを含むマウスは、内因性マウスＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＶ、及びＦｃγＲＩＩＩ遺伝子（すなわち、内因性マウスＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶ、及びＦｃγＲＩＩＩα鎖コード配列）におけるホモ接合性破壊をさらに含む。様々な実施形態において、本明細書に記載の１つ以上のヒト低親和性ＦｃγＲを含むマウスは、内因性マウス低親和性ＦｃγＲポリペプチド（例えば、内因性低親和性ＦｃγＲ α鎖ポリペプチド）を、検出できるほど発現しない。
【0062】
いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変された低親和性ＦｃγＲ遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変された低親和性ＦｃγＲ遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0063】
ヒト化新生児Ｆｃ受容体遺伝子座
いくつかの実施形態において、ゲノム中に、ヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座、及びいくつかの実施形態においてはヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座（上記のように）を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト化またはヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）遺伝子座をさらに含む。ブランベル受容体としても知られているＦｃＲｎは、内皮細胞によって発現され、ベータ２ミクログロブリン（β２Ｍ）と会合し、ＩｇＧ抗体のＦｃドメインと血清アルブミンの両方に結合するタンパク質である。ＦｃＲｎは、ＩｇＧと血清アルブミンの半減期を延長する。具体的には、ＦｃＲｎは、ｐＨ依存的にＩｇＧと血清アルブミンに結合することにより、これらの血清タンパク質を内皮細胞によるリソソーム分解から救い出すことができ、それによってそのようなタンパク質の血清半減期を延長することができる。
いくつかの実施形態において、ゲノム中に、ヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座、及びいくつかの実施形態においてはヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座（上記のように）を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト化またはヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）遺伝子座をさらに含む。ブランベル受容体としても知られているＦｃＲｎは、内皮細胞によって発現され、ベータ２ミクログロブリン（β２Ｍ）と会合し、ＩｇＧ抗体のＦｃドメインと血清アルブミンの両方に結合するタンパク質である。ＦｃＲｎは、ＩｇＧと血清アルブミンの半減期を延長する。具体的には、ＦｃＲｎは、ｐＨ依存的にＩｇＧと血清アルブミンに結合することにより、これらの血清タンパク質を内皮細胞によるリソソーム分解から救い出すことができ、それによってそのようなタンパク質の血清半減期を延長することができる。
【0064】
いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、げっ歯類（例えば、マウスまたはラット）膜貫通ドメイン、及びげっ歯類（例えば、マウスまたはラット）細胞質ドメインを含むＦｃＲｎポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、ヒト（例えば、マウスまたはラット）膜貫通ドメイン、及びげっ歯類（例えば、マウスまたはラット）細胞質ドメインを含むＦｃＲｎポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、ヒト（例えば、マウスまたはラット）膜貫通ドメイン、及びヒト（例えば、マウスまたはラット）細胞質ドメインを含むＦｃＲｎポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【0065】
いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスＦｃＲｎ遺伝子座に位置する。特定の実施形態において、ＦｃＲｎポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスＦｃＲｎ遺伝子の全部または一部を置き換える。例えば、いくつかの実施形態において、内因性ＦｃＲｎ遺伝子座における内因性ＦｃＲｎの細胞外ドメインをコードする核酸配列は、そのような遺伝子座を含むマウスがヒト細胞外ドメイン及びげっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）の膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを有するＦｃＲｎを発現するように、ヒトＦｃＲｎの細胞外ドメインをコードする核酸配列で置き換えられる。いくつかの実施形態において、マウスは、マウスＦｃＲｎを発現しないか、または機能的なマウスＦｃＲｎを発現しない。いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0066】
特定の実施形態において、マウスＦｃＲｎ遺伝子のアルファ１、アルファ２、及びアルファ３ドメインをコードするマウスエクソン（最初の３つのコードエクソンであるエクソン３、４、及び５）は、ヒトＦｃＲｎ遺伝子のアルファ１、アルファ２、及びアルファ３ドメインをコードするヒトエクソン（エクソン３、４、及び５）で置き換えられる。いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ遺伝子は、マウスエクソン１（非コードエクソン）、マウスエクソン２（シグナルペプチドをコードする核酸配列を含む）、ならびにヒトエクソン３～６、マウスエクソン６及び７（膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインをコードする）を含む。例示的なヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座は、ＷＯ２０１９／１９０９９０（例えば、図４）に記載されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0067】
ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００００１９．１０（４９５１２２７９～４９５２６４２８）、ＮＭ＿００１１３６０１９．１、及びＮＰ＿００１１２９４９１．１は、所望のヒト部分が得られるヒトＦｃＲｎ遺伝子、ｃＤＮＡ、及びポリペプチドの代表的な供給源配列を提供する。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００００７３．６（４５０９２９９２～４５１０３８４６）、ＮＭ＿０１０１８９．１、及びＮＰ＿０３４３１９．１は、マウスＦｃＲｎ遺伝子、ｃＤＮＡ、及びポリペプチドの代表的な供給源配列を提供し、これらの配列から、所望のマウス部分が得られる、及び／または標的化ベクター相同性アームの設計に使用され得る。
【0068】
いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたＦｃＲｎ遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたＦｃＲｎ遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0069】
ヒト化Ｆｃイプシロン受容体１アルファ
いくつかの実施形態において、ゲノム中に、ヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座、及びいくつかの実施形態においてはヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座（上記のように）を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト化またはヒトＦｃイプシロン受容体１アルファ（ＦｃεＲ１α）遺伝子座をさらに含む。ＦｃεＲ１αは、ＦｃεＲ１β及びＦｃεＲ１γと会合して、表皮ランゲルハンス細胞、好酸球、マスト細胞、及び好塩基球上に発現されるＩｇＥに対する高親和性受容体であるＦｃεＲ１を形成する。ＦｃεＲ１のＩｇＥ結合部位はＦｃεＲ１αサブユニットにおいて見出される。
いくつかの実施形態において、ゲノム中に、ヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座、及びいくつかの実施形態においてはヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座（上記のように）を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト化またはヒトＦｃイプシロン受容体１アルファ（ＦｃεＲ１α）遺伝子座をさらに含む。ＦｃεＲ１αは、ＦｃεＲ１β及びＦｃεＲ１γと会合して、表皮ランゲルハンス細胞、好酸球、マスト細胞、及び好塩基球上に発現されるＩｇＥに対する高親和性受容体であるＦｃεＲ１を形成する。ＦｃεＲ１のＩｇＥ結合部位はＦｃεＲ１αサブユニットにおいて見出される。
【0070】
いくつかの実施形態において、ＦｃεＲ１α遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、げっ歯類（例えば、マウスまたはラット）膜貫通ドメイン、及びげっ歯類（例えば、マウスまたはラット）細胞質ドメインを含むＦｃεＲ１αポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃεＲ１α遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、ヒト膜貫通ドメイン、及びげっ歯類（例えば、マウスまたはラット）細胞質ドメインを含むＦｃεＲ１αポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃεＲ１α遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、ヒト膜貫通ドメイン、及びヒト細胞質ドメインを含むＦｃεＲ１αポリペプチドをコードする核酸配列を含む。操作されたＦｃεＲ１α遺伝子座の例示的な実施形態は、ＷＯ２０１９／１９０９９０に記載されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0071】
いくつかの実施形態において、ＦｃεＲ１αポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスＦｃεＲ１α遺伝子座に位置する。特定の実施形態において、ＦｃεＲ１αポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスＦｃεＲ１α遺伝子の全部または一部を置き換える。例えば、いくつかの実施形態において、内因性ＦｃεＲ１α遺伝子座における内因性ＦｃεＲ１αの細胞外ドメインをコードする核酸配列は、そのような遺伝子座を含むマウスがヒト細胞外ドメイン及びげっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）の膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを有するＦｃεＲ１αを発現するように、ヒトＦｃεＲ１αの細胞外ドメインをコードする核酸配列で置き換えられる。いくつかの実施形態において、ヒト細胞外ドメイン、ヒト膜貫通ドメイン、及びヒト細胞質ドメインを含むＦｃεＲ１αポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスＦｃεＲ１α遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ヒト細胞外ドメイン、ヒト膜貫通ドメイン、及びヒト細胞質ドメインを含むＦｃεＲ１αポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスＦｃεＲ１α遺伝子の全部または一部を置き換える。いくつかの実施形態において、マウスは、マウスＦｃεＲ１αを発現しないか、または機能的なマウスＦｃεＲ１αを発現しない。いくつかの実施形態において、ＦｃεＲ１α遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0072】
特定の実施形態において、マウスＦｃεＲＩαのマウスコーディングエクソン１、コーディングエクソン２、コーディングエクソン３、コーディングエクソン４、及びコーディングエクソン５の一部が、ヒトＦｃεＲＩα遺伝子のヒトコーディングエクソン１、コーディングエクソン２、コーディングエクソン３、コーディングエクソン４、及びコーディングエクソン５の一部によって置き換えられる。いくつかの実施形態において、ＦｃεＲＩα遺伝子は、マウス／ヒトキメラエクソン１（マウスプロモーター及び５’ＵＴＲを含む）、ヒトコーディングエクソン２～５から終止コドン、ヒト３’ＵＴＲ及びポリＡ、続いてマウス３’ＵＴＲ及びポリＡを含む。いくつかの実施形態において、キメラ遺伝子エクソン１（部分）及び２はシグナルペプチドをコードし、エクソン３及び４はＩｇＥと相互作用すると考えられるＦｃεＲＩαの２つのＩｇ様ドメインをコードし、エクソン５はタンパク質の細胞質ドメイン及び膜貫通ドメインをコードする（ＷＯ２０１９／１９０９９０の図９を参照）。
【0073】
ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿０００００１．１１（１５９２８３８８８～１５９３０８２２４）、ＮＭ＿００２００１．３、及びＮＰ＿００１９９２．１は、所望のヒト部分が得られるヒトＦｃεＲ１α遺伝子、ｃＤＮＡ、及びポリペプチドの代表的な供給源配列を提供する。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００００６７．６（１７３２２１２６９～１７３２２７２３２）、ＮＭ＿０１０１８４．１、及びＮＰ＿０３４３１４．１は、マウスＦｃεＲ１α遺伝子、ｃＤＮＡ、及びポリペプチドの代表的な供給源配列を提供し、これらの配列から、所望のマウス部分が得られる、及び／または標的化ベクター相同性アームの設計に使用され得る。
【0074】
いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたＦｃεＲ１α遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたＦｃεＲ１α遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0075】
ヒト化Ｆｃガンマ受容体１ａ
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト化またはヒトＦｃガンマ受容体１ａ（ＦｃγＲ１ａ）遺伝子座をさらに含む。ＦｃγＲ１ａは、単球上に発現される高親和性ＦｃγＲタンパク質であり、ＩｇＧのＦｃ部分に結合し、宿主細胞の活性化を引き起こすものである。
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト化またはヒトＦｃガンマ受容体１ａ（ＦｃγＲ１ａ）遺伝子座をさらに含む。ＦｃγＲ１ａは、単球上に発現される高親和性ＦｃγＲタンパク質であり、ＩｇＧのＦｃ部分に結合し、宿主細胞の活性化を引き起こすものである。
【0076】
いくつかの実施形態において、ＦｃγＲ１ａ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、げっ歯類（例えば、マウスまたはラット）膜貫通ドメイン、及びげっ歯類（例えば、マウスまたはラット）細胞質ドメインを含むＦｃγＲ１ａポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲ１ａ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、ヒト（例えば、マウスまたはラット）膜貫通ドメイン、及びげっ歯類（例えば、マウスまたはラット）細胞質ドメインを含むＦｃγＲ１ａポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲ１ａ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン、ヒト（例えば、マウスまたはラット）膜貫通ドメイン、及びヒト（例えば、マウスまたはラット）細胞質ドメインを含むＦｃγＲ１ａポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【0077】
いくつかの実施形態において、ＦｃγＲ１αポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスＦｃγＲ１ａ遺伝子座に位置する。特定の実施形態において、ＦｃγＲ１ａポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスＦｃγＲ１ａ遺伝子の全部または一部を置き換える。例えば、いくつかの実施形態において、内因性ＦｃγＲ１ａ遺伝子座における内因性ＦｃγＲ１ａの細胞外ドメインをコードする核酸配列は、そのような遺伝子座を含むマウスがヒト細胞外ドメイン及びげっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）の膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを有するＦｃγＲ１ａを発現するように、ヒトＦｃγＲ１αの細胞外ドメインをコードする核酸配列で置き換えられる。いくつかの実施形態において、マウスは、マウスＦｃγＲ１ａを発現しないか、または機能的なマウスＦｃγＲ１ａを発現しない。いくつかの実施形態において、ＦｃγＲ１ａ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0078】
ヒト化ＦｃγＲ１ａポリペプチド、ヒト化ＦｃγＲ１ａポリペプチドをコードする遺伝子座、及びヒト化ＦｃγＲ１ａポリペプチドを発現するマウスについては、米国特許第９，４７４，２５５号及び米国特許公開第２０１７／００８６４３２号に記載されており、当該文献のそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる。
【0079】
いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたＦｃγＲ１ａ遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたＦｃγＲ１ａ遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0080】
ヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座
本明細書において上記で論じたように、特定の実施形態では、ヒトＦｃαＲを発現する本明細書で提供されるマウスは、ヒトＦｃを含む薬剤（例えば、治療用ヒトＩｇＡ抗体及びヒトＦｃα融合タンパク質などのヒトＦｃαを含む薬剤）を試験するために使用される。しかしながら、ヒトＦｃ領域を有する治療薬が野生型マウスに投与される場合、Ｆｃ領域内のヒト配列はマウス免疫系によって異物として識別されることが多い。その結果、マウスは投与された治療薬に対する免疫反応（マウス抗ヒト反応またはＭＡＨＡとして知られている）を開始する可能性があり、これは投与された薬剤の薬物動態学的特性及び薬力学的特性に影響を与える。ＷＯ２０１９／１９０９９０（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているように、ヒト免疫グロブリン遺伝子座領域を有するマウスにおいてヒトＦｃを含む治療薬を試験すると、ヒトＦｃがそのようなマウスにおいて異物として識別される可能性が低いため、ＭＡＨＡ反応を低減または排除することができる。
本明細書において上記で論じたように、特定の実施形態では、ヒトＦｃαＲを発現する本明細書で提供されるマウスは、ヒトＦｃを含む薬剤（例えば、治療用ヒトＩｇＡ抗体及びヒトＦｃα融合タンパク質などのヒトＦｃαを含む薬剤）を試験するために使用される。しかしながら、ヒトＦｃ領域を有する治療薬が野生型マウスに投与される場合、Ｆｃ領域内のヒト配列はマウス免疫系によって異物として識別されることが多い。その結果、マウスは投与された治療薬に対する免疫反応（マウス抗ヒト反応またはＭＡＨＡとして知られている）を開始する可能性があり、これは投与された薬剤の薬物動態学的特性及び薬力学的特性に影響を与える。ＷＯ２０１９／１９０９９０（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているように、ヒト免疫グロブリン遺伝子座領域を有するマウスにおいてヒトＦｃを含む治療薬を試験すると、ヒトＦｃがそのようなマウスにおいて異物として識別される可能性が低いため、ＭＡＨＡ反応を低減または排除することができる。
【0081】
いくつかの実施形態において、ゲノム中に、ヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座、ならびに任意に、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、遺伝子改変された免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖遺伝子座をさらに含む。このような遺伝子座は、一般に、可変領域及び定常領域を含む。可変領域には、Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子セグメント（例えば、少なくともＶＨ遺伝子セグメント、ＤＨ遺伝子セグメント、及びＪＨ遺伝子セグメント）が含まれる。定常領域遺伝子座には、１つ以上のＩｇ重鎖定常領域遺伝子セグメント（ＣＨ）が含まれる。特定の実施形態において、免疫グロブリン重鎖可変領域は、マウスが、ＶＨ遺伝子セグメント、ＤＨ遺伝子セグメント、及びＪＨ遺伝子セグメントに由来する可変ドメイン及びＣＨ遺伝子セグメントに由来する重鎖定常ドメインを含む抗体を産生するように、免疫グロブリン重鎖定常領域に機能的に連結される。
【0082】
抗体を生成する能力は、ヒト標的に対する治療用抗体を生成するために遺伝子改変動物で利用されてきた。治療用抗体を生成するための、ヒトＶ（Ｄ）Ｊ遺伝子セグメントを含む遺伝子改変マウスの例としては、米国特許第５，６３３，４２５号、同第５，７７０，４２９号、同第５，８１４，３１８号、同第６，０７５，１８１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１５０，５８４号、同第６，９９８，５１４号、同第７，７９５，４９４号、同第７，９１０，７９８号、同第８，２３２，４４９号、同第８，７０３，４８５号、同第８，９０７，１５７号、及び同第９，１４５，５８８号に記載されたものがあり、当該文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、それに加え、米国特許公開第２００８／００９８４９０号、同第２０１０／０１４６６４７号、同第２０１３／０１４５４８４号、同第２０１２／０１６７２３７号、同第２０１３／０１６７２５６号、同第２０１３／０２１９５３５号、同第２０１２／０２０７２７８号、及び同第２０１５／０１１３６６８号に記載されたものがあり、当該文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、さらに、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７１１７４１０号、同第ＷＯ２００８１５１０８１号、同第ＷＯ２００９１５７７７１号、同第ＷＯ２０１００３９９００号、同第ＷＯ２０１１００４１９２号、同第ＷＯ２０１１１２３７０８号、同第ＷＯ２０１４０９３９０８号、同第ＷＯ２０１４０９３９０８号、同第ＷＯ２００６００８５４８号、同第ＷＯ２０１０１０９１６５号、同第ＷＯ２０１６０６２９９０号、同第ＷＯ２０１８０３９１８０号、同第ＷＯ２０１１１５８００９号、同第ＷＯ２０１３０４１８４４号、同第ＷＯ２０１３０４１８４６号、同第ＷＯ２０１３０７９９５３号、同第ＷＯ２０１３０６１０９８号、同第ＷＯ２０１３１４４５６７号、同第ＷＯ２０１３１４４５６６号、同第ＷＯ２０１３１７１５０５号、及び同第ＷＯ２０１９００８１２３号に記載されたものがあり、当該文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。治療用抗体を生成するための、ヒトＶ（Ｄ）Ｊ遺伝子セグメントを含む遺伝子改変マウスの他の例としては、米国特許第６，５９６，５４１号、同第６，５８６，２５１号、同第８，６４２，８３５号、同第９，７０６，７５９号、同第１０，２３８，０９３号、同第８，７５４，２８７号、同第１０，１４３，１８６号、同第９，７９６，７８８号、同第１０，１３０，０８１号、同第９，２２６，４８４号、同第９，０１２，７１７号、同第１０，２４６，５０９号、同第９，２０４，６２４号、及び同第９，６８６，９７０号に記載されたものがあり、当該文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、それに加え、米国特許公開第２０１３／０２１２７１９号、同第２０１５／０２８９４８９号、同第２０１７／０３４７６３３号、同第２０１９／０２２３４１８号、同第２０１８／０１２５０４３号、同第２０１９／０２６１６１２号、及び同第２０１９／０３８０３１６号に記載されたものがあり、当該文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、さらに、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３１３８６８０号、同第ＷＯ２０１３１３８７１２号、同第ＷＯ２０１３１３８６８１号、同第ＷＯ２０１５０４２２５０号、同第ＷＯ２０１２１４８８７３号、同第ＷＯ２０１３１３４２６３号、同第ＷＯ２０１３１８４７６１号、同第ＷＯ２０１４１６０１７９号、同第ＷＯ２０１７２１４０８９号、同第ＷＯ２０１６１４９６７８号、及び同第ＷＯ２０１７１２３８０８号、ならびにＭｕｒｐｈｙ，Ａ．，「ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ：Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｍｏｕｓｅ」，ｉｎ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１０１－１０７（２００９）に記載されたものがあり、これらのそれぞれは、当該文献の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0083】
特定の実施形態において、Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子座は、再構成されていないヒトＩｇ重鎖可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、再構成されていないヒトＩｇ可変領域遺伝子セグメントは、１つ以上のヒトＶＨセグメント、１つ以上のヒトＤＨセグメント、及び１つ以上のヒトＪＨセグメントを含む。いくつかの実施形態において、再構成されていないヒトＩｇ可変領域遺伝子セグメントは、少なくとも３個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１８個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも２０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも３０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも４０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも５０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも６０個のＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも７０個のＶＨ遺伝子セグメント、または少なくとも８０個のＶＨ遺伝子セグメントを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇＨ遺伝子座（または対立遺伝子）は、天然に現れるヒトＩｇＨ遺伝子座のヒトＶＨ３－７４遺伝子セグメントとヒトＶＨ６－１遺伝子セグメントとの間（両端を含む）に見出される機能的ヒトＶＨ遺伝子セグメントの全てまたは実質的に全てを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇＨ遺伝子座（または対立遺伝子）は、少なくとも、ヒトＶＨ遺伝子セグメントＶＨ３－７４、ＶＨ３－７３、ＶＨ３－７２、ＶＨ２－７０、ＶＨ１－６９、ＶＨ３－６６、ＶＨ３－６４、ＶＨ４－６１、ＶＨ４－５９、ＶＨ１－５８、ＶＨ３－５３、ＶＨ５－５１、ＶＨ３－４９、ＶＨ３－４８、ＶＨ１－４６、ＶＨ１－４５、ＶＨ３－４３、ＶＨ４－３９、ＶＨ４－３４、ＶＨ３－３３、ＶＨ４－３１、ＶＨ３－３０、ＶＨ４－２８、ＶＨ２－２６、ＶＨ１－２４、ＶＨ３－２３、ＶＨ３－２１、ＶＨ３－２０、ＶＨ１－１８、ＶＨ３－１５、ＶＨ３－１３、ＶＨ３－１１、ＶＨ３－９、ＶＨ１－８、ＶＨ３－７、ＶＨ２－５、ＶＨ７－４－１、ＶＨ４－４、ＶＨ１－３、ＶＨ１－２、及びＶＨ６－１を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、単一の多型ヒトＶＨ遺伝子セグメント、複数のＤＨ遺伝子セグメント、及び複数のＪＨ遺伝子セグメントによって特徴付けられる、制限された免疫グロブリン重鎖遺伝子座を有する（例えば、米国特許公開第２０１３／００９６２８７号に記載されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態において、ＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ１－２またはＶＨ１－６９である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、再構成された重鎖可変領域（例えば、米国特許公開第２０１４０２４５４６８号、ならびに米国特許第９，２０４，６２４号及び同第９，９３０，８７１号に記載されているユニバーサル重鎖可変領域または共通重鎖コード配列であり、当該文献の全体は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、免疫グロブリン重鎖遺伝子座で重鎖定常領域遺伝子に機能的に連結された、再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖、例えばκ、遺伝子セグメントを含む（例えば、米国特許第９，５１６，８６８号、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【0084】
さらに他の実施形態において、マウスは、その生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、そのようなマウスで生成された抗体にｐＨ依存性の結合特性を導入するように設計されたヒスチジンコドンの挿入及び／または置換を含む重鎖免疫グロブリン遺伝子座を含み得る。このような実施形態のいくつかにおいて、ヒスチジンコドンは、ＣＤＲ３をコードする核酸配列において挿入及び／または置換される。様々なそのような重鎖免疫グロブリン遺伝子座は、米国特許第９，３０１，５１０号、同第９，３３４，３３４号、米国特許出願公開第２０１３／０２４７２３６号、同第２０１４００１３４５６号に提供されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0085】
いくつかの実施形態において、操作されたＩｇＨ遺伝子座（または対立遺伝子）は、５、１０、１５、２０、２５、またはそれ以上（例えば、２６、２７など）のヒトＤＨ遺伝子セグメントを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇＨ遺伝子座（または対立遺伝子）は、天然に現れるヒトＩｇＨ遺伝子座のヒトＤＨ１－１遺伝子セグメントとヒトＤＨ７－２７遺伝子セグメントとの間（両端を含む）に見出される機能的ヒトＤＨ遺伝子セグメントの全てまたは実質的に全てを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇＨ遺伝子座（または対立遺伝子）は、少なくとも、ヒトＤＨ遺伝子セグメントＤＨ１－１、ＤＨ２－２、ＤＨ３－３、ＤＨ４－４、ＤＨ５－５、ＤＨ６－６、ＤＨ１－７、ＤＨ２－８、ＤＨ３－９、ＤＨ３－１０、ＤＨ５－１２、ＤＨ６－１３、ＤＨ２－１５、ＤＨ３－１６、ＤＨ４－１７、ＤＨ６－１９、ＤＨ１－２０、ＤＨ２－２１、ＤＨ３－２２、ＤＨ６－２５、ＤＨ１－２６、及びＤＨ７－２７を含む。いくつかの実施形態において、再構成されていないヒトＩｇ遺伝子セグメントは、ヒトＤＨ遺伝子セグメントの全てを含む。
【0086】
いくつかの実施形態において、操作されたＩｇＨ遺伝子座（または対立遺伝子）は、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の機能的ヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇＨ遺伝子座（または対立遺伝子）は、天然に現れるヒトＩｇＨ遺伝子座のヒトＪＨ１遺伝子セグメントとヒトＪＨ６遺伝子セグメントとの間（両端を含む）に見出される機能的ヒトＪＨ遺伝子セグメントの全てまたは実質的に全てを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇＨ遺伝子座（または対立遺伝子）は、少なくとも、ヒトＪＨ遺伝子セグメントＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、及びＪＨ６を含む。いくつかの実施形態において、再構成されていないヒトＩｇ遺伝子セグメントは、ヒトＪＨ遺伝子セグメントの全てを含む。
【0087】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の操作されたＩｇＨ遺伝子座は、内因性Ａｄａｍ６遺伝子を含まない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の操作されたＩｇＨ遺伝子座は、同種の野生型非ヒト動物の生殖細胞系列ゲノムに見出されるものと同様の生殖細胞系列ゲノム位置に、内因性Ａｄａｍ６遺伝子（またはＡｄａｍ６コード配列）を含まない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の操作されたＩｇＨ遺伝子座は、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子を含まない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の操作されたＩｇＨ遺伝子座は、１つ以上の非ヒト（例えば、マウス）Ａｄａｍ６ポリペプチドをコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列の挿入を含む。当該挿入は、本明細書に記載の操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座の外側（例えば、最も５’側のＶＨ遺伝子セグメントの上流）、操作されたＩｇＨ遺伝子座内、または非ヒト動物の生殖細胞系列ゲノム（例えば、無作為に導入された非ヒトＡｄａｍ６コード配列）、細胞もしくは組織のその他の場所であり得る。
【0088】
いくつかの実施形態において、操作された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、機能性内因性マウスＡｄａｍ６遺伝子を欠いている。いくつかの実施形態において、操作された重鎖遺伝子座を含むマウス生殖細胞系列ゲノムは、１つ以上のマウスＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のマウスＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片が（例えば、雄生殖系の細胞内、例えば、精巣細胞内で）発現される。
【0089】
いくつかの実施形態において、１つ以上のマウスＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列は、操作された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる。いくつかの実施形態において、１つ以上のマウスＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列は、操作された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる。いくつかの実施形態において、１つ以上のマウスＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列は、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間にある。いくつかの実施形態において、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントはＶＨ１－２であり、第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントはＶＨ６－１である。いくつかの実施形態において、１つ以上のマウスＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列は、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりである。いくつかの実施形態において、１つ以上のマウスＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列は、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子を置き換える。いくつかの実施形態において、１つ以上のマウスＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列は、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間にある。
【0090】
Ｉｇ重鎖遺伝子セグメントを含む例示的なＩｇ可変領域は、例えば、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１１：５１４７－５２及び補足情報に提供されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。このようなマウスは、例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号に記載されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0091】
いくつかの実施形態において、再構成されていないヒトＩｇ重鎖可変領域遺伝子セグメントを含むＩｇ重鎖可変遺伝子座には、ヒトＩｇ重鎖可変領域遺伝子間配列も含まれる。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖可変遺伝子座は、非ヒト（例えば、げっ歯類、ラット、マウス）Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子間配列を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＨ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。いくつかの実施形態において、ＩｇＨ遺伝子座はＩｇＭエンハンサー（Ｅμ）を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＭエンハンサーは非ヒトＥμ（例えば、マウスまたはラットＥμなどのげっ歯類Ｅμ）である。
【0092】
いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖可変領域は、Ｉｇ重鎖可変領域遺伝子（ユニバーサル重鎖可変領域）を含む再構成された可変領域である。いくつかの実施形態において、再構成されたＩｇ重鎖可変領域遺伝子は、再構成されたヒトＩｇ重鎖可変領域遺伝子である。再構成されたＩｇ重鎖可変領域の例としては、米国特許公開第２０１４／０２４５４６８号に提供されたものがあり、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0093】
特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒトＦｃ（例えば、ヒトＦｃα）を含む抗体を発現するように、ヒト免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒトＣα定常領域）を含む。ヒト免疫グロブリン定常領域を含むマウスは、例えば、ＷＯ２０１９／１９０９９０に開示されており、当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0094】
特定の実施形態において、免疫グロブリン定常領域は、ヒトＣＨ１ドメイン、ヒトヒンジ領域、ヒトＣＨ２ドメイン、ヒトＣＨ３ドメイン、ＩｇＧ膜貫通ドメイン、及びＩｇＧ細胞質ドメインを含むＩｇＧ定常ドメインをコードするＣＨ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ膜貫通ドメインは、げっ歯類ＩｇＧ膜貫通ドメイン（例えば、マウスまたはラット膜貫通ドメイン）である。特定の実施形態において、膜貫通ドメインはヒトＩｇＧ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ細胞質ドメインは、げっ歯類ＩｇＧ細胞質ドメイン（例えば、マウスまたはラット細胞質ドメイン）である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ細胞質ドメインは、ヒトＩｇＧ細胞質ドメインである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ接続領域は、げっ歯類ＩｇＧ接続領域（例えば、マウスまたはラット接続ドメイン）である。特定の実施形態において、ＩｇＧ接続領域はヒトＩｇＧ接続領域である。
【0095】
特定の実施形態において、ヒトＣＨ１ドメイン、ヒトヒンジ領域、ヒトＣＨ２ドメイン、及びヒトＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ１ドメインである。いくつかの実施形態において、このようなＩｇＧ１ドメインは、ＩＧＨＧ１＊０１、ＩＧＨＧ１＊０２、ＩＧＨＧ１＊０３、ＩＧＨＧ１＊０４、及びＩＧＨＧ１＊０５から選択される対立遺伝子によってコードされる。
【0096】
特定の実施形態において、ヒトＣＨ１ドメイン、ヒトヒンジ領域、ヒトＣＨ２ドメイン、及びヒトＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ２ドメインである。いくつかの実施形態において、このようなＩｇＧ２ドメインは、ＩＧＨＧ２＊０１、ＩＧＨＧ２＊０２、ＩＧＨＧ２＊０３、ＩＧＨＧ２＊０４、ＩＧＨＧ２＊０５、及びＩＧＨＧ２＊０６から選択される対立遺伝子によってコードされる。
【0097】
特定の実施形態において、ヒトＣＨ１ドメイン、ヒトヒンジ領域、ヒトＣＨ２ドメイン、及びヒトＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ３ドメインである。いくつかの実施形態において、このようなＩｇＧ３ドメインは、ＩＧＨＧ３＊０１、ＩＧＨＧ３＊０２、ＩＧＨＧ３＊０３、ＩＧＨＧ３＊０４、ＩＧＨＧ３＊０５、ＩＧＨＧ３＊０６、ＩＧＨＧ３＊０７、ＩＧＨＧ３＊０８、ＩＧＨＧ３＊０９、ＩＧＨＧ３＊１０、ＩＧＨＧ３＊１１、ＩＧＨＧ３＊１２、ＩＧＨＧ３＊１３、ＩＧＨＧ３＊１４、ＩＧＨＧ３＊１５、ＩＧＨＧ３＊１６、ＩＧＨＧ３＊１７、ＩＧＨＧ３＊１８、及びＩＧＨＧ３＊１９から選択される対立遺伝子によってコードされる。
【0098】
特定の実施形態において、ヒトＣＨ１ドメイン、ヒトヒンジ領域、ヒトＣＨ２ドメイン、及びヒトＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ４ドメインである。いくつかの実施形態において、このようなＩｇＧ４ドメインは、ＩＧＨＧ４＊０１、ＩＧＨＧ４＊０２、ＩＧＨＧ４＊０３、及びＩＧＨＧ４＊０４から選択される対立遺伝子によってコードされる。
【0099】
いくつかの実施形態において、ＣＨ遺伝子セグメントは、エフェクター機能及び／またはＦｃＲに対する親和性が、参照ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域と比較して増大または減少することを特徴とする、変異型ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列（すなわち、適切な参照ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列に対して１つ以上の付加、欠失、及び／または置換を含むヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列）をコードする。
【0100】
いくつかの実施形態において、ＣＨ遺伝子セグメントは、活性化及び／または抑制性受容体に対する親和性の変化を特徴とするヒト免疫グロブリン重鎖定常領域をコードする。いくつかの実施形態において、ＣＨ遺伝子セグメントは、ＦｃＲｎ受容体への結合が、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで、増大または減少することを特徴とするヒト免疫グロブリン重鎖定常領域をコードする。いくつかの実施形態において、ＣＨ遺伝子セグメントは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域を全体的または部分的にコードし、１つ以上のアミノ酸改変を有するヒト免疫グロブリン重鎖定常領域をコードする。アミノ酸改変の例としては、位置２９７（例えば、Ｎ２９７Ａ）、位置２５０（例えば、２５０Ｅまたは２５０Ｑ）、位置２５２（例えば、２５２Ｌ、２５２Ｙ、２５２Ｆ、２５２Ｗ、または２５２Ｔ）、位置２５４（例えば、２５４Ｓまたは２５４Ｔ）、位置２５６（例えば、２５６Ｓ、２５６Ｒ、２５６Ｑ、２５６Ｅ、２５６Ｄ、または２５６Ｔ）、位置３０７（例えば、３０７Ｐまたは３０７Ａ）、位置３０８（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｖ）、位置４２８（例えば、４２８Ｌまたは４２８Ｆ）、位置４３３（例えば、４３３Ｈ、４３３Ｌｍ、４３３Ｒ、４３３Ｓ、４３３Ｐ、４３３Ｑ、または４３３Ｋ）、位置４３４（例えば、４３４Ａ、４３４Ｗ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、または４３４Ｙ）、及びこれらの組み合わせでの置換が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＣＨ遺伝子セグメントは、２５０Ｑ及び２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０Ｑ及びＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔ、及び２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌ及び４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉ及び３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７Ｉ及びＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉ及び４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７Ｉ及びＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖ及び４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６Ｖ及びＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａ、及び４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、及びＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋ及び４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３Ｋ及びＮ４３４Ｆ）からなる群から選択されるアミノ酸改変の１つ以上対またはグループを有するヒト免疫グロブリン重鎖定常領域をコードする。
【0101】
いくつかの実施形態において、ＣＨ遺伝子セグメントは、２つ以上のヒト免疫グロブリンアイソタイプに由来する（または現れる）セグメントまたは部分を含むキメラ免疫グロブリン重鎖定常ドメインをコードする。例えば、そのようなキメラＣＨ領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ２ドメインを、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ３ドメインと組み合わせて含み得る。いくつかの特定の実施形態において、キメラＣＨ領域は、キメラヒンジ領域をさらに含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵ番号付けに従って２１６から２２７までの位置のアミノ酸残基）を、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列（ＥＵ番号付けに従って２２８から２３６までの位置のアミノ酸残基）と組み合わせて含み得る。いくつかの特定の実施形態において、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４上部ヒンジに由来するアミノ酸残基、及びヒトＩｇＧ２下部ヒンジに由来するアミノ酸残基を含む。
【0102】
特定の実施形態において、改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、内因性ＣＨ遺伝子セグメント遺伝子座に位置する。特定の実施形態において、改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、内因性Ｃγ１遺伝子セグメント遺伝子座、内因性Ｃγ２ａ遺伝子セグメント遺伝子座、内因性Ｃγ２ｂ遺伝子セグメント遺伝子座、内因性Ｃγ２ｃ遺伝子セグメント遺伝子座、または内因性Ｃγ３遺伝子セグメント遺伝子座に位置する。
【0103】
いくつかの実施形態において、改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、ヒトＣγ１遺伝子セグメント（または少なくともヒトＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分）であり、内因性Ｃγ２ａ遺伝子セグメント遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分は、内因性マウスＣγ２ａ遺伝子セグメントの、ＩｇＧ２ａ膜貫通ドメイン及び／または細胞質ドメインをコードする部分に機能的に連結される。
【0104】
いくつかの実施形態において、改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、ヒトＣγ１遺伝子セグメント（または少なくともヒトＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分）であり、内因性Ｃγ２ｃ遺伝子セグメント遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分は、内因性マウスＣγ２ｃ遺伝子セグメントの、ＩｇＧ２ｃ膜貫通ドメイン及び／または細胞質ドメインをコードする部分に機能的に連結される。
【0105】
いくつかの実施形態において、改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、ヒトＣγ４遺伝子セグメント（または少なくともヒトＣγ４遺伝子セグメントの、ＩｇＧ４定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分）であり、内因性Ｃγ１遺伝子セグメント遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、ヒトＣγ４遺伝子セグメントの、ＩｇＧ４定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分は、内因性マウスＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１膜貫通ドメイン及び／または細胞質ドメインをコードする部分に機能的に連結される。
【0106】
特定の実施形態において、改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、内因性ＣＨ遺伝子セグメントの全部または一部を置き換える。特定の実施形態において、改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、内因性Ｃγ１遺伝子セグメント、内因性Ｃγ２ａ遺伝子セグメント、内因性Ｃγ２ｂ遺伝子セグメント、内因性Ｃγ２ｃ遺伝子セグメント、または内因性Ｃγ３遺伝子セグメントの全部または一部を置き換える。
【0107】
いくつかの実施形態において、改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、ヒトＣγ１遺伝子セグメント（または少なくともヒトＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分）であり、内因性Ｃγ２ａ遺伝子セグメント遺伝子座の全部または一部を置き換える。いくつかの実施形態において、ヒトＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分は、内因性マウスＣγ２ａ遺伝子セグメントの、ＩｇＧ２ａ定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分を置き換え、ヒトＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分が、内因性マウスＣγ２ａ遺伝子セグメントの、ＩｇＧ２ａ膜貫通ドメイン及び／または細胞質ドメインをコードする部分に機能的に連結されるようにする。
【0108】
いくつかの実施形態において、改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、ヒトＣγ４遺伝子セグメント（または少なくともヒトＣγ４遺伝子セグメントの、ＩｇＧ４定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分）であり、内因性Ｃγ１遺伝子セグメント遺伝子座の全部または一部を置き換える。いくつかの実施形態において、ヒトＣγ４遺伝子セグメントの、ＩｇＧ４定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分は、内因性マウスＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分を置き換え、ヒトＣγ４遺伝子セグメントの、ＩｇＧ４定常ドメインのＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインをコードする部分が、内因性マウスＣγ１遺伝子セグメントの、ＩｇＧ１膜貫通ドメイン及び／または細胞質ドメインをコードする部分に機能的に連結されるようにする。
【0109】
特定の実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）の１つ以上のＣＨ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ定常領域は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）のＣμ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ定常領域は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）のＣδ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ定常領域は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）のＣγ１遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ定常領域は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）のＣγ２ａ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ定常領域は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）のＣγ２ｂ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ定常領域は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）のＣγ２ｃ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ定常領域は、げっ歯類（例えば、マウス）のＣγ３遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ定常領域は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）のＣε遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ定常領域は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）のＣε遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のげっ歯類定常領域遺伝子セグメントは、内因性定常領域遺伝子セグメントである。いくつかの実施形態において、上記の改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、Ｉｇ重鎖定常領域中の唯一の改変されたＣＨ遺伝子セグメントである。いくつかの実施形態において、上記の改変されたＣＨ遺伝子セグメントは、Ｉｇ重鎖定常領域中の複数の改変されたＣＨ遺伝子セグメントのうちの１つ（例えば、Ｉｇ重鎖定常領域中の部分的または完全にヒト化された２、３、４、５、６、７、または８つの改変された遺伝子セグメントのうちの１つ）である。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトまたは部分的ヒトＣμ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトまたは部分的ヒトＣδ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトまたは部分的ヒトＣγ１遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトまたは部分的ヒトＣγ２遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトまたは部分的ヒトＣγ３遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトまたは部分的ヒトＣγ４遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトまたは部分的ヒトＣε遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトまたは部分的ヒトＣα遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトＣμ遺伝子セグメント、ヒトＣδ遺伝子セグメント、ヒトＣγ１遺伝子セグメント、及びヒトＣγ３遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトＣγ２遺伝子セグメント及びヒトＣγ４遺伝子セグメントをさらに含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトＣα遺伝子セグメントをさらに含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇ重鎖定常領域は、ヒトＣε遺伝子セグメントをさらに含む。
【0110】
いくつかの実施形態において、ＩｇＨ遺伝子座は、ヒトまたはげっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）の調節エレメントを含む。いくつかの実施形態において、調節エレメントは内因性調節エレメントである。特定の実施形態において、ＩｇＨ遺伝子座は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）またはヒトのイントロンエンハンサー（Ｅｉ）を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＨ遺伝子座は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）またはヒトの３’調節領域（３’ＲＲ）を含む。
【0111】
いくつかの実施形態において、改変された免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に配置される。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座の全部または一部を置き換える。特定の実施形態において、改変されたＩｇＨ遺伝子座は、内因性遺伝子座の外側に配置される導入遺伝子上に位置する。いくつかの実施形態において、内因性ＩｇＨ遺伝子座は、不活性化される（例えば、内因性Ｉｇ重鎖遺伝子座の全部または一部の欠失、転位、及び／または逆位により）。
【0112】
したがって、いくつかの実施形態において、免疫グロブリン重鎖遺伝子座の１つ以上の免疫グロブリン重鎖定常領域（または一部）は、欠失されていない（すなわち、インタクト）。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン重鎖遺伝子座の１つ以上のＣＨ遺伝子セグメントは、とりわけ、非ヒト免疫グロブリン重鎖ＩｇＧ定常領域遺伝子の膜貫通及び細胞質コード配列（複数可）（例えば、Ｍ１及び／またはＭ２コード配列）に機能的に連結された本明細書に記載の免疫グロブリン重鎖定常領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドをコードする配列）、また、いくつかの実施形態においては、ＩｇＥ定常領域遺伝子の膜貫通及び細胞質コード配列（複数可）に機能的に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域配列（例えば、ヒトＩｇＥ ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４ポリペプチドをコードする配列）で変更、破壊、欠失、または置換される。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン重鎖定常領域の全てまたは実質的に全てが、異種免疫グロブリン重鎖定常領域で置き換えられる。いくつかの実施形態において、異種免疫グロブリン重鎖定常領域配列は、１つ以上のＩｇＧ定常領域遺伝子の膜貫通及び細胞質コード配列（例えば、Ｍ１及びＭ２エクソン）に機能的に連結される。いくつかの実施形態において、異種免疫グロブリン重鎖定常領域配列は、ＩｇＥ定常領域遺伝子の膜貫通及び細胞質コード配列（例えば、Ｍ１及びＭ２エクソン）に機能的に連結される。いくつかの実施形態において、異種免疫グロブリン重鎖定常領域配列は、ＩｇＡ定常領域遺伝子の膜貫通及び細胞質コード配列（例えば、Ｍエクソン（複数可））に機能的に連結される。いくつかの特定の実施形態において、１つ以上のＣＨ遺伝子セグメント（例えば、Ｃμ、Ｃδなど）は、本明細書に記載される１つ以上の定常領域遺伝子の膜貫通及び細胞質コード配列に機能的に連結された異種免疫グロブリン重鎖定常領域配列を含む免疫グロブリン重鎖定常領域において、欠失または置換されない。いくつかの実施形態において、異種免疫グロブリン重鎖定常領域配列は、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列である。いくつかの実施形態において、１つ以上の異種免疫グロブリン重鎖定常領域配列で変更、破壊、欠失、置換、または操作される免疫グロブリン重鎖定常領域は、マウス免疫グロブリン重鎖定常領域である。いくつかの実施形態において、異種免疫グロブリン重鎖定常領域配列は、免疫グロブリン重鎖定常領域のＩｇＧ定常領域遺伝子（例えば、Ｃγ１、Ｃγ２ａ、Ｃγ２ｂ、Ｃγ２ｃ、またはＣγ３）の２コピーのうちの当該ＩｇＧ定常領域遺伝子の１コピー（すなわち、対立遺伝子）に挿入され、これにより、異種免疫グロブリン重鎖定常領域配列に関してヘテロ接合性を有するマウスが生じる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される異種免疫グロブリン重鎖定常領域配列を含む、免疫グロブリン重鎖定常領域に関してホモ接合性を有するマウスが提供される。
【0113】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、同一または異なるＩｇＧサブクラスの非ヒト膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインコード配列（例えば、非ヒトＩｇＧ Ｍ１－Ｍ２）に機能的に連結されたヒト細胞外ドメインコード配列（例えば、ヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３）をそれぞれ含む１つ以上のＩｇＧコードＣＨ遺伝子セグメントを含む。
【0114】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、本明細書に記載される１つ以上の操作されたＩｇＧコードＣＨ遺伝子セグメントを含み、野生型（例えば、改変されていない、ラットまたはマウスなどの非ヒト）Ｃμ定常領域遺伝子を更に含む。
【0115】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、本明細書に記載される１つ以上の操作されたＩｇＧコードＣＨ遺伝子セグメントを含み、野生型（例えば、改変されていない、ラットまたはマウスなどの非ヒト）Ｃμ及びＣδ定常領域遺伝子を更に含む。
【0116】
様々な実施形態において、本明細書に記載されるヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列を含む操作されたＩｇＧコードＣＨ遺伝子セグメントは、Ｃγ１、Ｃγ２ａ、Ｃγ２ｂ、Ｃγ２ｃ、またはＣγ３から選択されるＩｇＧサブクラスの操作されたＩｇＧコードＣＨ遺伝子セグメントである。
【0117】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ２ａ遺伝子セグメントのＭ１及びＭ２エクソンに機能的に連結された、操作されたＣγ２ａ遺伝子セグメントを含む。
【0118】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ２ａ遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結された、操作されたＣγ２ａ遺伝子セグメントを含む。
【0119】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントのＭ１及びＭ２エクソンに機能的に連結された、操作されたＣγ２ｃ遺伝子セグメントを含む。
【0120】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結された、操作されたＣγ２ｃ遺伝子セグメントを含む。
【0121】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ１遺伝子セグメントのＭ１及びＭ２エクソンに機能的に連結された、操作されたＣγ１遺伝子セグメントを含む。
【0122】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ１遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結された、操作されたＣγ１遺伝子セグメントを含む。
【0123】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ２ａ遺伝子セグメントのＭ１及びＭ２エクソンに機能的に連結された、操作されたＣγ２ａ遺伝子セグメントと、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ１遺伝子セグメントのＭ１及びＭ２エクソンに機能的に連結された、操作されたＣγ１遺伝子セグメントと、を含む。
【0124】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ２ａ遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結された、操作されたＣγ２ａ遺伝子セグメントと、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ１遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結された、操作されたＣγ１遺伝子セグメントと、を含む。
【0125】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントのＭ１及びＭ２エクソンに機能的に連結された、操作されたＣγ２ｃ遺伝子セグメントと、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ１遺伝子セグメントのＭ１及びＭ２エクソンに機能的に連結された、操作されたＣγ１遺伝子セグメントと、を含む。
【0126】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結された、操作されたＣγ２ｃ遺伝子セグメントと、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、非ヒト（例えば、ラットまたはマウス）Ｃγ１遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結された、操作されたＣγ１遺伝子セグメントと、を含む。
【0127】
様々な実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３またはヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２（例えば、ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２ａ）をコードする配列を含む１つ以上のＩｇＧ定常領域以外の定常領域遺伝子（すなわち、アイソタイプ）を、例えば、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＧ（それ自体が本明細書に記載されるヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３またはヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含有しないＩｇＧ）（例えば、ＩｇＧ２ｂ及び／またはＩｇＧ３）をコードする１つ以上の免疫グロブリン定常領域遺伝子の全体的または部分的な欠失、全体的または部分的な変更、全体的または部分的な破壊、全体的または部分的な置換を介して、機能させないようにすることを含む、１つ以上の更なる改変を含む。そのようなマウス、胚、及び細胞を作製するための操作された非ヒト胚、細胞、及び標的化ベクターもまた提供される。
【0128】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、野生型（例えば、改変されていない非ヒト（ラットまたはマウスなど））Ｃμ遺伝子セグメントと、Ｃγ１遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃγ１遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣγ１遺伝子セグメントと、Ｃδ、Ｃγ２ａ、Ｃγ２ｃ、Ｃγ２ｂ、Ｃγ３、Ｃε及びＣα遺伝子セグメントの欠失と、を含む。
【0129】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、野生型（例えば、改変されていない非ヒト（ラットまたはマウスなど））Ｃμ遺伝子セグメントと、Ｃγ１遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、当該Ｃγ１遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結されたＣγ１遺伝子セグメントと、Ｃδ、Ｃγ２ａ、Ｃγ２ｃ、Ｃγ２ｂ、Ｃγ３、Ｃε及びＣα遺伝子セグメントの欠失と、を含む。
【0130】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、野生型（例えば、改変されていない非ヒト（ラットまたはマウスなど））Ｃμ遺伝子セグメントと、Ｃγ２ａ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ａ遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣγ２ａ遺伝子セグメントと、Ｃδ、Ｃγ１、Ｃγ２ｂ、Ｃγ２ｃ、Ｃγ３、Ｃε及びＣα遺伝子セグメントの欠失と、を含む。
【0131】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、野生型（例えば、改変されていない非ヒト（ラットまたはマウスなど））Ｃμ遺伝子セグメントと、Ｃγ２ａ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ａ遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結されたＣγ２ａ遺伝子セグメントと、Ｃδ、Ｃγ１、Ｃγ２ｂ、Ｃγ２ｃ、Ｃγ３、Ｃε及びＣα遺伝子セグメントの欠失と、を含む。
【0132】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、野生型（例えば、改変されていない非ヒト（ラットまたはマウスなど））Ｃμ遺伝子セグメントと、Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣγ２ｃ遺伝子セグメントと、Ｃδ、Ｃγ１、Ｃγ２ａ、Ｃγ２ｂ、Ｃγ３、Ｃε及びＣα遺伝子セグメントの欠失と、を含む。
【0133】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、野生型（例えば、改変されていない非ヒト（ラットまたはマウスなど））Ｃμ遺伝子セグメントと、Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結されたＣγ２ｃ遺伝子セグメントと、Ｃδ、Ｃγ１、Ｃγ２ａ、Ｃγ２ｂ、Ｃγ３、Ｃε及びＣα遺伝子セグメントの欠失と、を含む。
【0134】
様々な実施形態において、本明細書に記載される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３またはヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２（例えば、ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２ａ）をコードする配列を含む１つ以上のＩｇＧ定常領域以外の定常領域遺伝子（すなわち、アイソタイプ）を、本明細書に記載されるヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列の、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＧ（それ自体が本明細書に記載されるヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３またはヒトＩｇＧ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含有しないＩｇＧ）（例えば、ＩｇＧ２ｂ及び／またはＩｇＧ３）の１つ以上の免疫グロブリン定常領域遺伝子への挿入を介して、変更、改変、置換、操作などがなされるように操作することを含む、１つ以上の更なる改変を含む。
【0135】
本明細書に記載される操作された定常領域を有する免疫グロブリン遺伝子座を含むマウス、胚、及び細胞を作製するための操作されたマウス胚、細胞、及び標的化ベクターもまた提供される。
【0136】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、野生型Ｃμ遺伝子セグメントと、野生型Ｃδ遺伝子セグメントと、Ｃγ３遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ３ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃγ３遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣγ３遺伝子セグメントと、Ｃγ１遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりにヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃγ１遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣγ１遺伝子セグメントと、Ｃγ２ｂ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ２ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ｂ遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣγ２ｂ遺伝子セグメントと、Ｃγ２ａ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ａ遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣγ２ａ遺伝子セグメント（及び／またはＣγ２ｃ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣγ２ｃ遺伝子セグメント）と、Ｃε遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４エクソンの代わりに、ヒトＩｇＥ ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４をコードする配列を含み、当該Ｃε遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣε遺伝子セグメントと、Ｃα遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＡ１またはＩｇＡ２ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃα遺伝子セグメントのＭエクソン（複数可）に機能的に連結されたＣα遺伝子セグメントと、を含む。
【0137】
いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供される操作された免疫グロブリン重鎖定常領域は、野生型Ｃμ遺伝子セグメントと、野生型Ｃδ遺伝子セグメントと、Ｃγ３遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ３ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、当該Ｃγ３遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結されたＣγ３遺伝子セグメントと、Ｃγ１遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりにヒトＩｇＧ４ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、当該Ｃγ１遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結されたＣγ１遺伝子セグメントと、Ｃγ２ｂ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ２ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ｂ遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結されたＣγ２ｂ遺伝子セグメントと、Ｃγ２ａ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ａ遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結されたＣγ２ａ遺伝子セグメント（及び／またはＣγ２ｃ遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２エクソンの代わりに、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｍ１－Ｍ２をコードする配列を含み、当該Ｃγ２ｃ遺伝子セグメントのスイッチ領域に機能的に連結されたＣγ２ｃ遺伝子セグメント）と、Ｃε遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４エクソンの代わりに、ヒトＩｇＥ ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４をコードする配列を含み、当該Ｃε遺伝子セグメントのＭ１－Ｍ２エクソンに機能的に連結されたＣε遺伝子セグメントと、Ｃα遺伝子セグメントであって、ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３エクソンの代わりに、ヒトＩｇＡ１またはＩｇＡ２ ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３をコードする配列を含み、当該Ｃα遺伝子セグメントのＭエクソン（複数可）に機能的に連結されたＣα遺伝子セグメントと、を含む。
【0138】
いくつかの実施形態において、マウスは、本明細書に記載される改変された免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。特定の実施形態において、マウスは、本明細書に記載される改変された免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0139】
ヒトＦｃを含む治療薬（例えば、治療用ヒトＩｇＡ抗体などのヒトＦｃαを含む治療薬）は、典型的には、ヒトに投与する前に非ヒト種（例えば、マウス）で試験される。残念ながら、ヒトＦｃ領域を含む薬剤は、従来のマウスに投与したとき、ヒトに投与した場合と比較して非常に異なる薬物動態学的特性及び薬力学的特性を示すことが多い。例えば、ヒトＦｃ領域を有する治療薬が従来のマウスに投与される場合、Ｆｃ領域内のヒト配列はマウス免疫系によって異物として識別されることが多い。その結果、マウスは投与された治療薬に対する免疫反応（マウス抗ヒト反応またはＭＡＨＡとして知られている）を開始する可能性があり、これは投与された薬剤の薬物動態学的特性及び薬力学的特性に影響を与える。従って、従来のマウスモデルは、ヒトＦｃを含む治療薬に対するヒトの治療応答の予測因子として不十分であることが多い。特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒトＦｃを含む治療薬の投与後のＭＡＨＡ反応が低下する。従って、ヒト免疫グロブリン遺伝子座領域を有する本明細書に開示されるマウスは、ＭＡＨＡ反応を低減または排除するのに役立つ。
【0140】
従って、例えば、ＷＯ２０１９／１９０９９０（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されたように、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲを発現し、ヒト定常領域（例えば、ヒトＣα定常領域）を含む本明細書で提供される様々なマウスを用いてヒトＦｃを含む薬剤（例えば、治療用ヒトＩｇＡ抗体などのヒトＦｃαを含む薬剤）の投与に対するＭＡＨＡ反応を試験することができる。
【0141】
ヒト化免疫グロブリンカッパ遺伝子座
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒト化Ｉｇκ鎖遺伝子座をさらに含む。ＷＯ２０１９／１９０９９０（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているように、ヒト化Ｉｇκ鎖遺伝子座を有するマウスにおいてヒトκ鎖を含む治療薬を試験すると、ヒトκ鎖がそのようなマウスにおいて異物として識別される可能性が低いため、ＭＡＨＡ反応を低減または排除することができる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒト化Ｉｇκ鎖遺伝子座をさらに含む。ＷＯ２０１９／１９０９９０（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているように、ヒト化Ｉｇκ鎖遺伝子座を有するマウスにおいてヒトκ鎖を含む治療薬を試験すると、ヒトκ鎖がそのようなマウスにおいて異物として識別される可能性が低いため、ＭＡＨＡ反応を低減または排除することができる。
【0142】
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、遺伝子改変されたＩｇκ鎖遺伝子座をさらに含む。このような遺伝子座は、κ可変領域及びκ定常領域を含む。κ可変領域には、Ｉｇκ鎖可変領域遺伝子セグメント（すなわち、少なくともＶκ遺伝子セグメント及びＪκ遺伝子セグメント）が含まれる。定常領域には、Ｉｇκ鎖定常領域（Ｃκ）遺伝子セグメントが含まれる。特定の実施形態において、ヒトＩｇκ可変領域などの免疫グロブリンκ鎖可変領域は、マウスがヒトＶκ遺伝子セグメント及びヒトＪκ遺伝子セグメントに由来する軽鎖可変ドメインと、Ｃκ遺伝子セグメントに由来する軽鎖定常ドメインとを含む抗体を生成するように、免疫グロブリンκ鎖定常領域に機能的に連結する。いくつかの実施形態において、Ｉｇκ可変領域は、再構成されていないＩｇκ可変領域であり、従って、再構成されていないＩｇκ可変領域遺伝子セグメントを含むことになる。いくつかの実施形態において、Ｉｇκ可変領域は、再構成されたＩｇκ可変領域であり、従って、再構成されたＩｇκ可変領域遺伝子を含むことになる。特定の実施形態において、Ｉｇκ可変領域遺伝子セグメントは、ヒトＩｇκ可変領域遺伝子セグメントである。特定の実施形態において、Ｉｇκ可変領域遺伝子セグメントは、げっ歯類Ｉｇκ可変領域遺伝子セグメント（例えば、ラットまたはマウス可変領域遺伝子セグメント）である。いくつかの実施形態において、Ｉｇκ定常領域遺伝子座は、部分的または完全にヒトのＩｇκ定常領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＩｇκ鎖遺伝子座は、内因性Ｉｇκ鎖遺伝子座に位置する。
【0143】
特定の実施形態において、Ｉｇκ可変領域は、再構成されていないヒトＩｇκ可変領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、天然に現れるヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座の遠位可変クラスター（または遠位アームもしくは遠位重複）に現れる少なくともヒトＶκ遺伝子セグメントを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、天然に現れるヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座の近位可変クラスター（または近位アームもしくは近位重複）に現れる少なくともヒトＶκ遺伝子セグメントを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、天然に現れるヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座の遠位及び近位可変クラスターに現れるヒトＶκ遺伝子セグメントを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、天然に現れるヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座のヒトＶκ２－４０（またはＶκ３Ｄ－７）遺伝子セグメントとヒトＶκ４－１遺伝子セグメントとの間（両端を含む）に見出される機能的ヒトＶκ遺伝子セグメントの全てまたは実質的に全てを含む。
【0144】
いくつかの実施形態において、再構成されていないヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、複数のヒトＶκセグメント及び１つ以上のヒトＪκセグメントを含む。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、４個の機能的Ｖκセグメント及び全てのヒトＪκセグメントを含む。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、１６個の機能的Ｖκセグメント及び全てのヒトＪκセグメントを含む。いくつかの実施形態において、再構成されていないヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、全てのヒトＶκセグメント及び全てのヒトＪκセグメントを含む。
【0145】
いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、またはそれ以上（例えば、３６、３７、３８、３９、４０など）のヒトＶκ遺伝子セグメントを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、ヒトＶκ遺伝子セグメントＶκ３Ｄ－７、Ｖκ１Ｄ－８、Ｖκ１Ｄ－４３、Ｖκ３Ｄ－１１、Ｖκ１Ｄ－１２、Ｖκ１Ｄ－１３、Ｖκ３Ｄ－１５、Ｖκ１Ｄ－１６、Ｖκ１Ｄ－１７、Ｖκ３Ｄ－２０、Ｖκ６Ｄ－２１、Ｖκ２Ｄ－２６、Ｖκ２Ｄ－２８、Ｖκ２Ｄ－２９、Ｖκ２Ｄ－３０、Ｖκ１Ｄ－３３、Ｖκ１Ｄ－３９、Ｖκ２Ｄ－４０、Ｖκ２－４０、Ｖκ１－３９、Ｖκ１－３３、Ｖκ２－３０、Ｖκ２－２８、Ｖκ１－２７、Ｖκ２－２４、Ｖκ６－２１、Ｖκ３－２０、Ｖκ１－１７、Ｖκ１－１６、Ｖκ３－１５、Ｖκ１－１２、Ｖκ３－１１、Ｖκ１－９、Ｖκ１－８、Ｖκ１－６、Ｖκ１－５、Ｖκ５－２、及びＶκ４－１を含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、少なくともヒトＶκ遺伝子セグメントＶκ３Ｄ－７、Ｖκ１Ｄ－８、Ｖκ１Ｄ－４３、Ｖκ３Ｄ－１１、Ｖκ１Ｄ－１２、Ｖκ１Ｄ－１３、Ｖκ３Ｄ－１５、Ｖκ１Ｄ－１６、Ｖκ１Ｄ－１７、Ｖκ３Ｄ－２０、Ｖκ６Ｄ－２１、Ｖκ２Ｄ－２６、Ｖκ２Ｄ－２８、Ｖκ２Ｄ－２９、Ｖκ２Ｄ－３０、Ｖκ１Ｄ－３３、Ｖκ１Ｄ－３９、及びＶκ２Ｄ－４０を含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、少なくともヒトＶκ遺伝子セグメントＶκ２－４０、Ｖκ１－３９、Ｖκ１－３３、Ｖκ２－３０、Ｖκ２－２８、Ｖκ１－２７、Ｖκ２－２４、Ｖκ６－２１、Ｖκ３－２０、Ｖκ１－１７、Ｖκ１－１６、Ｖκ３－１５、Ｖκ１－１２、Ｖκ３－１１、Ｖκ１－９、Ｖκ１－８、Ｖκ１－６、Ｖκ１－５、Ｖκ５－２、及びＶκ４－１を含む。
【0146】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、２つ以下のヒトＶＬ遺伝子セグメント及び複数のＪＬ遺伝子セグメント（例えば、米国特許公開第２０１３／０１９８８８０（当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載の二重軽鎖マウスまたはＤＬＣ）を特徴とする制限された免疫グロブリン軽鎖遺伝子座を有する。いくつかの実施形態において、ＶＬ遺伝子セグメントはＶκ遺伝子セグメントである。いくつかの実施形態において、ＶＬ遺伝子セグメントはＶλ遺伝子セグメントである。いくつかの実施形態において、Ｖκ遺伝子セグメントはＶκ３－２０及びＶκ１－３９である。
【0147】
いくつかの実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、１、２、３、４、５、またはそれ以上の機能的ヒトＪκ遺伝子セグメントを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、天然に現れるヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座のヒトＪκ１遺伝子セグメントとヒトＪκ５遺伝子セグメントとの間（両端を含む）に見出される機能的ヒトＪκ遺伝子セグメントの全てまたは実質的に全てを含む。いくつかの特定の実施形態において、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（または対立遺伝子）は、少なくともヒトＪκ遺伝子セグメントＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、及びＪκ５を含む。
【0148】
さらに他の実施形態において、非ヒト生物は、その生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、そのような非ヒト生物で生成された抗体にｐＨ依存性の結合特性を導入するように設計されたヒスチジンコドンの挿入及び／または置換を含む軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を含み得る。このような実施形態のいくつかにおいて、ヒスチジンコドンは、ＣＤＲ３をコードする核酸配列において挿入及び／または置換される。様々なそのような軽鎖免疫グロブリン遺伝子座は、米国特許第９，３０１，５１０号、同第９，３３４，３３４号、米国特許出願公開第２０１３／０２４７２３６号、同第２０１４／００１３４５６号に提供されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0149】
Ｉｇκ遺伝子セグメントを含む例示的な可変領域は、例えば、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１１：５１４７－５２及び補足情報に提供されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、再構成されていないヒト免疫グロブリン可変領域遺伝子セグメントは、全てのヒトＪκセグメントを含む。
【0150】
いくつかの実施形態において、再構成されていないヒトＩｇκ可変領域遺伝子セグメントを含むＩｇκ可変遺伝子座には、ヒトＩｇκ可変領域遺伝子間配列も含まれる。いくつかの実施形態において、Ｉｇκ可変遺伝子座は、非ヒト（例えば、げっ歯類、ラット、マウス）Ｉｇκ可変領域遺伝子間配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇκ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0151】
いくつかの実施形態において、Ｉｇκ可変領域遺伝子座は、Ｉｇκ可変領域遺伝子（ユニバーサル軽鎖可変領域）を含む再構成された可変領域遺伝子座である。いくつかの実施形態において、再構成されたＩｇκ可変領域遺伝子は、再構成されたヒトＩｇκ可変領域遺伝子（例えば、ヒトＶκ１－３９Ｊκ５またはヒトＶκ３－２０Ｊκ１配列などの、ヒトＶκ１－３９ＪκまたはヒトＶκ３－２０Ｊκ配列を含む再構成されたヒトＩｇκ可変領域）である。ユニバーサル軽鎖可変領域を使用すると、二重特異性抗体の生成が容易になる。再構成されたＩｇ軽鎖可変領域の例としては、米国特許公開第２０１３／０１８５８２１号に提供されたものがあり、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0152】
いくつかの実施形態において、Ｉｇκ鎖遺伝子座は、ヒトまたはげっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）の調節エレメントを含む。いくつかの実施形態において、調節エレメントは内因性調節エレメントである。特定の実施形態において、Ｉｇκ鎖遺伝子座は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）またはヒトのイントロンκエンハンサー（Ｅκｉ）を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＨ遺伝子座は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）またはヒトの３’κエンハンサー（Ｅκ３’）を含む。
【0153】
いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたげっ歯類における改変された免疫グロブリンκ鎖遺伝子座は、Ｃλ遺伝子の上流に（例えば、機能的に連結された）、１つ以上の再構成されていないヒトＶλ遺伝子セグメント及び１つ以上の再構成されていないヒトＪλ遺伝子セグメントを含む。このような遺伝子改変された免疫グロブリンκ鎖遺伝子座を含むげっ歯類の例としては、米国特許第１１，０５１，４９８号（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されたものが挙げられる。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたげっ歯類における改変された免疫グロブリンκ鎖遺伝子座は、限定されたヒトλ軽鎖可変領域レパートリーを含み、限定されたヒトλ軽鎖可変領域レパートリーは、単一の再構成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域（Ｖλ／Ｊλ）を含む。単一の再構成されたヒトλ軽鎖可変領域は、ヒトＪλ遺伝子セグメントに連結され、ＣκまたはＣλ遺伝子セグメント（例えば、げっ歯類ＣκまたはＣλ遺伝子セグメント（例えば、マウスＣλ１遺伝子セグメント）に機能的に連結されたヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。このような遺伝子改変された免疫グロブリンκ鎖遺伝子座を含むげっ歯類の例としては、ＷＯ２０２０／２４７６２３（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されたものが挙げられる。
【0154】
いくつかの実施形態において、改変された免疫グロブリンκ鎖遺伝子座は、内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座に配置される。いくつかの実施形態において、免疫グロブリンκ鎖遺伝子座は、内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座の全部または一部を置き換える。特定の実施形態において、改変されたＩｇκ鎖遺伝子座は、内因性遺伝子座の外側に配置される導入遺伝子上に位置する。いくつかの実施形態において、内因性Ｉｇκ鎖遺伝子座は、不活性化される（例えば、内因性Ｉｇκ鎖遺伝子座の全部または一部の欠失、転位、及び／または逆位により）。
【0155】
いくつかの実施形態において、マウスは、本明細書に記載される改変された免疫グロブリンκ鎖遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。特定の実施形態において、マウスは、本明細書に記載される改変された免疫グロブリンκ鎖遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0156】
従って、例えば、ＷＯ２０１９／１９０９９０（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されたように、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲを発現し、ヒト軽鎖定常領域（及び、いくつかの実施形態においては、また、ヒトＣα定常領域）を含む本明細書で提供される様々なマウスを用いて、ヒトＦｃを含む薬剤（例えば、治療用ヒトＩｇＡ抗体などのヒトＦｃαを含む薬剤）の投与に対するＭＡＨＡ反応を試験することができる。
【0157】
ヒト化免疫グロブリンラムダ遺伝子座
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒト化Ｉｇλ鎖遺伝子座をさらに含む。ＷＯ２０１９／１９０９９０（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているように、ヒト化Ｉｇλ鎖遺伝子座を有するマウスにおいてヒトλ鎖を含む治療薬を試験すると、ヒトκ鎖がそのようなマウスにおいて異物として識別される可能性が低いため、ＭＡＨＡ反応を低減または排除することができる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、ヒト化Ｉｇλ鎖遺伝子座をさらに含む。ＷＯ２０１９／１９０９９０（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているように、ヒト化Ｉｇλ鎖遺伝子座を有するマウスにおいてヒトλ鎖を含む治療薬を試験すると、ヒトκ鎖がそのようなマウスにおいて異物として識別される可能性が低いため、ＭＡＨＡ反応を低減または排除することができる。
【0158】
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、遺伝子改変されたＩｇλ鎖遺伝子座をさらに含む。そのような遺伝子座には、Ｉｇλ鎖可変領域遺伝子セグメント（すなわち、少なくともＶλ遺伝子セグメント及びＪλ遺伝子セグメント）が含まれる。改変されたλ遺伝子座は、少なくとも１つのＩｇλ鎖定常領域（Ｃλ）遺伝子セグメントをさらに含む。特定の実施形態において、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントなどのＶλ遺伝子セグメント及びＪλ遺伝子セグメントは、マウスがヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントに由来する軽鎖可変ドメインと、Ｃλ遺伝子セグメントに由来する軽鎖定常ドメインとを含む抗体を生成するように、Ｃλに機能的に連結される。いくつかの実施形態において、Ｖλ遺伝子セグメント及びＪλ遺伝子セグメントは、再構成されていないＶλ及びＪλ遺伝子セグメントであり得る。いくつかの実施形態において、Ｖλ遺伝子セグメント及びＪλ遺伝子セグメントは、再構成されたＶλ及びＪλ遺伝子セグメントであり得、従って、再構成された可変領域遺伝子の形態であり得る。特定の実施形態において、Ｉｇλ可変領域遺伝子セグメントは、ヒト可変領域遺伝子セグメントである。特定の実施形態において、Ｉｇλ可変領域遺伝子セグメントは、げっ歯類可変領域遺伝子セグメント（例えば、ラットまたはマウス可変領域遺伝子セグメント）である。いくつかの実施形態において、Ｉｇλ定常領域遺伝子座は、部分的または完全にヒトのλ定常領域遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＩｇλ鎖遺伝子座は、内因性Ｉｇλ鎖遺伝子座に位置する。Ｉｇλ遺伝子セグメントを含む可変領域の例としては、例えば、米国特許公開第２０１２／００７３００４号及び同第２００２／００８８０１６号、ならびに米国特許出願第１５／８０３，５１３号（２０１７年１１月３日出願、ＵＳ２０１８／０１２５０４３として公開）に提供されたものが挙げられ、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0159】
いくつかの実施形態において、再構成されていないヒトＩｇλ可変領域遺伝子セグメントを含むＩｇλ可変遺伝子座には、ヒトＩｇλ可変領域遺伝子間配列も含まれる。いくつかの実施形態において、Ｉｇλ可変遺伝子座は、非ヒト（例えば、げっ歯類、ラット、マウス）Ｉｇλ可変領域遺伝子間配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇλ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0160】
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座は、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座に由来する遺伝物質を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座は、少なくとも１つのヒトＶλ遺伝子セグメント、少なくとも１つのヒトＪλ遺伝子セグメント、少なくとも１つのヒトＣλ遺伝子セグメント、及び、当該少なくとも１つのヒトＶλ遺伝子セグメントと当該少なくとも１つのヒトＪλ遺伝子セグメントとの再構成を促進し、ヒトＶλドメインをコードする機能的な再構成されたヒトＶλ－Ｊλ配列を形成するのに必要な１つ以上の配列（例えば、組換えシグナル配列［複数可］）を含む。多くの実施形態において、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び当該ヒトＶλ遺伝子セグメントと少なくとも１つのヒトＪλ遺伝子セグメントとの再構成を促進するのに必要な１つ以上の配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のヒトＩｇλ軽鎖配列は、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座のゲノム配列であり（例えば、細菌人工染色体から単離及び／またはクローン化されたもの）、生殖細胞系列の構成に複数のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、生殖細胞系列の構成にヒトＶλ、Ｊλ、及びＣλ配列を含む（すなわち、当該ヒトＶλ、Ｊλ、及びＣλ配列がヒト細胞内のＩｇλ軽鎖遺伝子座に現れるため、言い換えれば、Ｊλ及びＣλ配列はＪλＣλクラスターとして現れる）。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、全体または部分的にＩｇλ軽鎖ポリペプチドをコードし、そのＩｇλ軽鎖ポリペプチドは、免疫グロブリン、特にヒトＢ細胞によって発現される免疫グロブリンに現れる。対応する非ヒトＩｇλ軽鎖配列（例えば、内因性マウスＩｇλ軽鎖遺伝子座）の代わりに当該ヒトＩｇλ軽鎖配列を含むマウス、非ヒト胚、及び細胞を作製するためのマウス、胚、細胞、及びターゲティング構築物も提供される。
【0161】
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、非ヒト動物の生殖細胞系列ゲノム内の対応する非ヒトＩｇλ軽鎖配列の代わりに挿入される。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、非ヒトＩｇλ軽鎖配列（例えば、非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域配列）の上流に挿入される。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、当該ヒトＩｇλ軽鎖配列が非ヒトＩｇλ軽鎖配列と並置されるように、１つ以上の非ヒトＩｇλ軽鎖配列の中央に挿入される。
【0162】
特定の実施形態において、Ｉｇλ鎖遺伝子座は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、１０、２０、３０、または４０個の機能的Ｖλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態において、遺伝子座は、ヒトＶλ遺伝子セグメントＶλ３－１０、Ｖλ３－９、Ｖλ２－８、Ｖλ４－３、及びＶλ３－１を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子座は、Ｖλ２－１１、Ｖλ３－１２、Ｖλ２－１４、Ｖλ３－１６、Ｖλ３－１９、Ｖλ３－２１、Ｖλ３－２２、λ２－２３、Ｖλ３－２５、及びＶλ３－２７を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子座は、Ｖλ３－２７、Ｖλ１－３６、Ｖλ５－３７、Ｖλ５－３９、Ｖλ１－４０、Ｖλ７－４３、Ｖλ１－４４、Ｖλ５－４５、Ｖλ７－４６、Ｖλ１－４７、Ｖλ９－４９、Ｖλ１－５１、及びＶλ５－５２を含む。特定の実施形態において、遺伝子座は、Ｖλ１０－５４、Ｖλ６－５７、Ｖλ４－６０、Ｖλ８－６１、及びＶλ４－６９を含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇλ鎖遺伝子座は、１つ以上のヒトＪλ－Ｃλ対を含む。例えば、特定の実施形態において、Ｉｇλ鎖遺伝子座は、ヒトＶλ遺伝子セグメントの下流に、ヒトＪλ１－Ｃλ１、Ｊλ２－Ｃλ２、Ｊλ３－Ｃλ３、Ｊλ６－Ｃλ６、及び／またはＪλ７－Ｃλ７を含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇλ鎖遺伝子座は、ヒトＶλ遺伝子セグメントの下流に、ヒトＪλ１－Ｃλ１、Ｊλ２－Ｃλ２、Ｊλ３－Ｃλ３、Ｊλ６－Ｃλ６、ヒトＪλ７、及びマウスＣλ１を含む。
【0163】
いくつかの実施形態において、Ｉｇλ遺伝子座は、Ｉｇλ可変領域遺伝子（ユニバーサル軽鎖可変領域）を含む再構成された遺伝子座である。いくつかの実施形態において、再構成されたＩｇλ可変領域遺伝子は、再構成されたヒトＩｇλ可変領域遺伝子である。ユニバーサル軽鎖可変領域を使用すると、少なくとも１つの抗原結合ドメインが結合する二重特異性抗体の生成が容易になる。再構成されたＩｇ軽鎖可変領域の例としては、米国特許公開第２０１３／０１８５８２１号に提供されたものがあり、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0164】
いくつかの実施形態において、Ｉｇλ鎖遺伝子座は、ヒトまたはげっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）の調節エレメントを含む。いくつかの実施形態において、調節エレメントは内因性調節エレメントである。特定の実施形態において、Ｉｇλ鎖遺伝子座は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）λエンハンサー２．４を含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇλ鎖遺伝子座は、ヒトまたはげっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）の３’λエンハンサーを含む。いくつかの実施形態において、Ｉｇλ鎖遺伝子座は、げっ歯類（例えば、ラットまたはマウス）λエンハンサー３．１を含む。
【0165】
いくつかの実施形態において、改変された免疫グロブリンλ鎖遺伝子座は、内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座に配置される。いくつかの実施形態において、免疫グロブリンλ鎖遺伝子座は、内因性免疫グロブリンλ鎖遺伝子座の全部または一部を置き換える。特定の実施形態において、改変されたＩｇλ鎖遺伝子座は、内因性遺伝子座の外側に配置される導入遺伝子上に位置する。特定の実施形態において、改変されたＩｇλ鎖遺伝子座は、内因性免疫グロブリンκ鎖遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態において、内因性Ｉｇλ鎖遺伝子座は、不活性化される（例えば、内因性Ｉｇλ鎖遺伝子座の全部または一部の欠失、転位、及び／または逆位により）。
【0166】
いくつかの実施形態において、マウスは、改変された免疫グロブリンλ鎖遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。特定の実施形態において、マウスは、改変された免疫グロブリンλ鎖遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0167】
いくつかの実施形態において、マウスは、その生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、軽鎖可変遺伝子セグメントの限られたレパートリー（例えば、２つの軽鎖可変遺伝子セグメントを含む二重軽鎖可変領域）を含む軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖遺伝子セグメントの限られたレパートリーにおける軽鎖可変遺伝子セグメントは、ヒト軽鎖遺伝子セグメントである。二重軽鎖可変領域の例としては、米国特許公開第２０１３／０１９８８８０号に提供されたものがあり、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、二重軽鎖可変領域を含むマウスは、二重特異性抗体を生成するために使用される。
【0168】
従って、例えば、ＷＯ２０１９／１９０９９０（当該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されたように、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲを発現し、ヒト軽鎖定常領域（及び、いくつかの実施形態においては、また、ヒトＣα定常領域）を含む本明細書で提供される様々なマウスを用いて、ヒトＦｃを含む薬剤（例えば、治療用ヒトＩｇＡ抗体などのヒトＦｃαを含む薬剤）の投与に対するＭＡＨＡ反応を試験することができる。
【0169】
ヒト化ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂ遺伝子座
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒトまたはヒト化Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質アルファ鎖（ＣＤ７９ａまたはＩｇα）及び／またはＢ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質ベータ鎖（ＣＤ７９ｂまたはＩｇβ）遺伝子座をさらに含む。ヒトまたはヒト化ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂ遺伝子を含むマウスは、ヒトまたはヒト化ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂポリペプチドをヘテロ二量体としてＢ細胞の表面に発現し、これが膜発現免疫グロブリンと非共有結合で会合してＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を形成する。ＢＣＲは抗原と会合し、抗原との結合後のシグナル伝達及び内部移行において機能する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のマウスは、ヒトまたはヒト化ＣＤ７９ａ遺伝子及びＣＤ７９ｂ遺伝子を含む。いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載のマウスは、げっ歯類ＣＤ７９ａ部分及びヒトＣＤ７９ａ部分を含むＣＤ７９ａ遺伝子、ならびにげっ歯類ＣＤ７９ｂ部分及びヒトＣＤ７９ｂ部分を含むＣＤ７９ｂ遺伝子をさらに含み、ヒトＣＤ７９ａ部分は、実質的に全てのヒトＣＤ７９ａポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、ヒトＣＤ７９ａポリペプチドの残基３３～１４３に対応するアミノ酸）をコードし、ヒトＣＤ７９ｂ部分は、実質的に全てのヒトＣＤ７９ｂポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、ヒトＣＤ７９ｂポリペプチドの残基２９～１５９に対応するアミノ酸）をコードする。いくつかの実施形態において、げっ歯類ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂ部分の各々は、内因性ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂポリペプチドの少なくとも細胞内ドメインをそれぞれコードし、いくつかの特定の実施形態においては、内因性ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂポリペプチドの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをそれぞれコードする。いくつかの実施形態において、ヒト部分及び内因性部分は、それぞれ内因性ＣＤ７９ａプロモーターまたはＣＤ７９ｂプロモーターに機能的に連結する。
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒトまたはヒト化Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質アルファ鎖（ＣＤ７９ａまたはＩｇα）及び／またはＢ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質ベータ鎖（ＣＤ７９ｂまたはＩｇβ）遺伝子座をさらに含む。ヒトまたはヒト化ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂ遺伝子を含むマウスは、ヒトまたはヒト化ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂポリペプチドをヘテロ二量体としてＢ細胞の表面に発現し、これが膜発現免疫グロブリンと非共有結合で会合してＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を形成する。ＢＣＲは抗原と会合し、抗原との結合後のシグナル伝達及び内部移行において機能する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のマウスは、ヒトまたはヒト化ＣＤ７９ａ遺伝子及びＣＤ７９ｂ遺伝子を含む。いくつかの特定の実施形態において、本明細書に記載のマウスは、げっ歯類ＣＤ７９ａ部分及びヒトＣＤ７９ａ部分を含むＣＤ７９ａ遺伝子、ならびにげっ歯類ＣＤ７９ｂ部分及びヒトＣＤ７９ｂ部分を含むＣＤ７９ｂ遺伝子をさらに含み、ヒトＣＤ７９ａ部分は、実質的に全てのヒトＣＤ７９ａポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、ヒトＣＤ７９ａポリペプチドの残基３３～１４３に対応するアミノ酸）をコードし、ヒトＣＤ７９ｂ部分は、実質的に全てのヒトＣＤ７９ｂポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、ヒトＣＤ７９ｂポリペプチドの残基２９～１５９に対応するアミノ酸）をコードする。いくつかの実施形態において、げっ歯類ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂ部分の各々は、内因性ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂポリペプチドの少なくとも細胞内ドメインをそれぞれコードし、いくつかの特定の実施形態においては、内因性ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂポリペプチドの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをそれぞれコードする。いくつかの実施形態において、ヒト部分及び内因性部分は、それぞれ内因性ＣＤ７９ａプロモーターまたはＣＤ７９ｂプロモーターに機能的に連結する。
【0170】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のマウスは、げっ歯類ＣＤ７９ａ部分及びヒトＣＤ７９ａ部分を含むキメラＣＤ７９ａ遺伝子をさらに含み、ヒトＣＤ７９ａ部分は、ヒトＣＤ７９ａポリペプチドの残基３３～１１６に対応するアミノ酸を含む配列をコードし、一実施形態においては、ヒトＣＤ７９ａポリペプチドのアミノ酸３３～１１９を含む配列をコードし、一実施形態においては、ヒトＣＤ７９ａポリペプチドのアミノ酸３３～１４３を含む配列をコードし、一実施形態においては、ヒトＣＤ７９ａポリペプチドのアミノ酸３３～１６５を含む配列をコードする。いくつかの実施形態において、キメラＣＤ７９ａポリペプチドは、ヒトＩｇ Ｃ２様ドメインを含み、いくつかの実施形態においては、キメラＣＤ７９ａポリペプチドは、ヒトストーク領域も含み、いくつかの実施形態においては、キメラＣＤ７９ａポリペプチドは、ヒト膜貫通ドメインも含み、またいくつかの実施形態においては、キメラＣＤ７９ａポリペプチドは、げっ歯類（例えば、マウス）細胞質ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、マウスは、本明細書に記載のヒト領域部分と、ヒトまたはげっ歯類（例えば、マウス）ＣＤ７９ａシグナルペプチドをコードする配列とを含むキメラＣＤ７９ａ遺伝子を含み、一実施形態においては、シグナルペプチドをコードする配列は、マウスＣＤ７９ａのアミノ酸１～２８をコードするマウスＣＤ７９ａ配列である。
【0171】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のマウスは、げっ歯類ＣＤ７９ｂ部分及びヒトＣＤ７９ｂ部分を含むキメラＣＤ７９ｂ遺伝子をさらに含み、ヒトＣＤ７９ｂ部分は、ヒトＣＤ７９ｂポリペプチドの残基２９～１３５に対応するアミノ酸を含む配列をコードし、一実施形態においては、ヒトＣＤ７９ｂポリペプチドのアミノ酸２９～１５９を含む配列をコードし、一実施形態においては、ヒトＣＤ７９ｂポリペプチドのアミノ酸２９～１８４を含む配列をコードする。いくつかの実施形態において、キメラＣＤ７９ｂポリペプチドは、ヒトＩｇＶ様ドメインを含み、いくつかの実施形態においては、キメラＣＤ７９ｂポリペプチドは、ヒトストーク領域も含み、いくつかの実施形態においては、キメラＣＤ７９ｂポリペプチドは、ヒト膜貫通ドメインも含み、またいくつかの実施形態においては、キメラＣＤ７９ｂポリペプチドは、げっ歯類（例えば、マウス）細胞質ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、マウスは、本明細書に記載のヒト領域部分と、ヒトまたはげっ歯類（例えば、マウス）ＣＤ７９ｂシグナルペプチドをコードする配列とを含むキメラＣＤ７９ｂ遺伝子を含み、一実施形態においては、シグナルペプチドをコードする配列は、マウスＣＤ７９ｂのアミノ酸１～２５をコードするマウスＣＤ７９ｂ配列である。
【0172】
ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７７４．１、ＮＭ＿００１７８３．３、ＮＰ＿０６７６１２．１、及びＮＭ＿０２１６０１．３、ならびにＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１１９１２は、所望のヒト部分が得られるヒトＣＤ７９Ａ遺伝子及びヒトＣＤ７９Ａポリペプチドの代表的な供給源配列を提供する。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００６１７．１、ＮＭ＿０００６２６．２、ＮＰ＿００１０３５０２２．１、ＮＭ＿００１０３９９３３．１、ＮＰ＿０６７６１３．１、及びＮＭ＿０２１６０２．２、ならびにＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ４０２５９は、所望のヒト部分が得られるヒトＣＤ７９Ｂ遺伝子及びヒトＣＤ７９Ｂポリペプチドの代表的な供給源配列を提供する。
【0173】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、米国特許願公開第２０１１－００９３９６３Ａ１号及び同第２００９－００５３２１０Ａ１号、国際特許出願公開第ＷＯ２００８／０２７９８６号、及び欧州特許第２ ０６４ ３２５ Ｂ１号（当該文献のそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる）に記載された１つ以上のヒトＣＤ７９Ａ及びＣＤ７９Ｂ遺伝子をさらに含む。いくつかの特定の実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、内因性ＣＤ７９ａ部分及びヒトＣＤ７９ａ部分を含むヒト化ＣＤ７９ａ遺伝子、ならびに内因性ＣＤ７９ｂ部分及びヒトＣＤ７９ｂ部分を含むヒト化ＣＤ７９ｂ遺伝子を含み、ヒトＣＤ７９ａ部分は、実質的に全てのヒトＣＤ７９ａポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、ヒトＣＤ７９ａポリペプチドの残基３３～１４３に対応するアミノ酸）をコードし、ヒトＣＤ７９ｂ部分は、実質的に全てのヒトＣＤ７９ｂポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、ヒトＣＤ７９ｂポリペプチドの残基２９～１５９に対応するアミノ酸）をコードする。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、内因性ＣＤ７９ａ部分及びヒトＣＤ７９ａ部分を含むヒト化ＣＤ７９ａ遺伝子、ならびに内因性ＣＤ７９ｂ部分及びヒトＣＤ７９ｂ部分を含むヒト化ＣＤ７９ｂ遺伝子を含み、ヒトＣＤ７９ａ部分は、アミノ酸３３～１１６を含む配列（例えば、ヒトＣＤ７９ａポリペプチドのアミノ酸３３～１１９を含む配列、アミノ酸３３～１４３を含む配列、またはアミノ酸３３～１６５を含む配列）をコードし、ヒトＣＤ７９ｂ部分は、アミノ酸２９～１３５を含む配列（例えば、ヒトＣＤ７９ａポリペプチドのアミノ酸２９～１５９を含む配列、またはアミノ酸２９～１８４を含む配列）をコードする。いくつかの実施形態において、内因性ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂ部分の各々は、少なくとも内因性ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂポリペプチドの細胞内ドメインをそれぞれコードし、いくつかの特定の実施形態においては、内因性ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂポリペプチドの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをそれぞれコードする。
【0174】
ヒト化β－２－ミクログロブリン
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト化β－２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドをコードする遺伝子座をさらに含む。β２Ｍは、膜貫通領域を欠いており、かつＦｃＲｎ及びＭＨＣクラスＩ分子と結合するポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、ゲノム中にヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含むように遺伝子改変されたマウス及びＥＳ細胞は、ヒト化β－２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドをコードする遺伝子座をさらに含む。β２Ｍは、膜貫通領域を欠いており、かつＦｃＲｎ及びＭＨＣクラスＩ分子と結合するポリペプチドである。
【0175】
いくつかの実施形態において、β２Ｍ遺伝子座は、ヒトβ２Ｍポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトβ２Ｍポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスβ２Ｍ遺伝子座に位置する。特定の実施形態において、β２Ｍポリペプチドをコードする核酸配列は、内因性マウスβ２Ｍ遺伝子の全部または一部を置き換える。いくつかの実施形態において、マウスは、マウスβ２Ｍを発現しないか、または機能的なマウスβ２Ｍポリペプチドを発現しない。いくつかの実施形態において、β２Ｍ遺伝子座は、非ヒト調節エレメント（例えば、非ヒトプロモーター及び／またはエンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、非ヒト調節エレメントは、げっ歯類調節エレメント（例えば、ラットまたはマウスのプロモーターまたはエンハンサー）である。
【0176】
ヒト化β２Ｍポリペプチド、ヒト化β２Ｍポリペプチドをコードする遺伝子座、及びヒト化β２Ｍポリペプチドを発現するマウスについては、米国特許公開第２０１３／０１１１６１７号及び同第２０１３／０１８５８１９号に記載されており、当該文献のそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる。従って、米国特許公開第２０１３／０１１１６１７号及び同第２０１３／０１８５８１９号に記載されているように、いくつかの実施形態において、マウスは、ヒト化β２Ｍ遺伝子を含み、当該遺伝子は、ヒトβ２Ｍ遺伝子のエクソン２、３、及び４を含み、いくつかの実施形態において、ヒト化β２Ｍ遺伝子は、非ヒト（例えば、マウス）β２Ｍ遺伝子のエクソン１を含む。いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたβ２Ｍ遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。いくつかの実施形態において、マウスは、遺伝子改変されたβ２Ｍ遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0177】
遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞
特定の態様において、本明細書では、本明細書に開示されるヒト化遺伝子座の１つ以上を含む遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞、ならびにそのようなマウスの作製に有用な遺伝子改変マウスＥＳ細胞が提供される。
特定の態様において、本明細書では、本明細書に開示されるヒト化遺伝子座の１つ以上を含む遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞、ならびにそのようなマウスの作製に有用な遺伝子改変マウスＥＳ細胞が提供される。
【0178】
特定の態様において、本明細書では、生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、ヒト化またはヒトＦｃαＲ１遺伝子座を含む遺伝子改変マウス及びマウスＥＳ細胞が提供される。例えば、いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、その生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＦｃαＲ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、本明細書で提供されるＩｇＨ遺伝子座をさらに含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、本明細書で提供されるＩｇκ及び／またはＩｇλ遺伝子座をさらに含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＣＤ７９ａ及び／またはＣＤ７９ｂ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＦｃＲｎ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるβ２Ｍ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＦｃεＲ１α遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＦｃγＲ１ａ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＦｃγＲ２ａ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＦｃγＲ２ｂ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＦｃγＲ３ａ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＦｃγＲ３ｂ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、それらの生殖細胞系列及び／またはゲノム中に、本明細書で提供されるＦｃγＲ２ｃ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、本明細書で提供される１つ以上の遺伝子座、例えば、遺伝子操作された遺伝子座についてヘテロ接合性を有する。いくつかの実施形態において、マウスまたはＥＳ細胞は、本明細書で提供される１つ以上の遺伝子座、例えば、遺伝子操作された遺伝子座についてホモ接合性を有する。
【0179】
いくつかの実施形態において、マウスはＣ５７ＢＬ系統のマウスである。いくつかの実施形態において、Ｃ５７ＢＬ系統は、Ｃ５７ＢＬ／Ａ、Ｃ５７ＢＬ／Ａｎ、Ｃ５７ＢＬ／ＧｒＦａ、Ｃ５７ＢＬ／ＫａＬｗＮ、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｃ５７ＢＬ／６ＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＪ、Ｃ５７ＢＬ／１０、Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｃｒ、及びＣ５７ＢＬ／Ｏｌａから選択される。いくつかの実施形態において、マウスは１２９系統のマウスである。いくつかの実施形態において、１２９系統は、１２９Ｐ１、１２９Ｐ２、１２９Ｐ３、１２９Ｘ１、１２９Ｓ１（例えば、１２９Ｓ１／ＳＶ、１２９Ｓ１／ＳｖＩｍ）、１２９Ｓ２、１２９Ｓ４、１２９Ｓ５、１２９Ｓ９／ＳｖＥｖＨ、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）、１２９Ｓ７、１２９Ｓ８、１２９Ｔ１、１２９Ｔ２系統からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、遺伝子改変マウスは、１２９系統とＣ５７ＢＬ系統との混合である。いくつかの実施形態において、マウスは、１２９系統の混合及び／またはＣ５７ＢＬ／６系統の混合である。いくつかの実施形態において、混合１２９系統は、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）系統である。いくつかの実施形態において、マウスはＢＡＬＢ系統（例えば、ＢＡＬＢ／ｃ）である。いくつかの実施形態において、マウスは、ＢＡＬＢ系統と別の系統（例えば、Ｃ５７ＢＬ系統及び／または１２９系統）との混合である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるマウスは、前述の系統の任意の組み合わせに由来するマウスであり得る。
【0180】
遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞は、当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して産生することができる。例えば、そのような遺伝子改変マウスＥＳ細胞は、米国特許第６，５８６，２５１号、同第６，５９６，５４１号、同第７，１０５，３４８号、及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．（２００３）「Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｇｅｎｏｍｅ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ－ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ」Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２－６５９に記載されているＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術を用いて産生することができ、当該文献のそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。改変は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、またはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系などのゲノム標的ヌクレアーゼ系を使用して行うこともできる。いくつかの実施形態において、改変は、例えば米国特許出願第１４／３１４，８６６号、同第１４／５１５，５０３号、同第１４／７４７，４６１号、及び同第１４／７３１，９１４号に記載されているＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して行われ、当該文献のそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。このような遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞を作製する例示的な方法も、本明細書の実施例１に提供される。
【0181】
次いで、本明細書に記載のＥＳ細胞は、当技術分野で知られている方法を使用してマウスを作製する場合に使用可能である。例えば、本明細書に記載のマウスＥＳ細胞を使用して、米国特許第７，２９４，７５４号及びＰｏｕｅｙｍｉｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２５：９１－９９（２００７）に記載されているように、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法を用いて遺伝子改変マウスを作製することができ、当該文献のそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。得られたマウスはホモ接合性を有し得る。
【0182】
ヒトＦｃα含有治療薬の試験方法
特定の態様において、本明細書では、本明細書で提供されるマウスに治療用タンパク質を投与することを含む、ヒトＦｃαドメインを含む治療用タンパク質（例えば、ヒト抗体またはＦｃα融合タンパク質）を試験する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書では、そのような方法を実施するための動物モデルが提供される。
特定の態様において、本明細書では、本明細書で提供されるマウスに治療用タンパク質を投与することを含む、ヒトＦｃαドメインを含む治療用タンパク質（例えば、ヒト抗体またはＦｃα融合タンパク質）を試験する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書では、そのような方法を実施するための動物モデルが提供される。
【0183】
いくつかの実施形態において、投与されるヒト抗体またはＦｃ融合タンパク質は、本明細書で提供されるマウスの遺伝子改変されたＩｇＨ遺伝子座におけるヒトＣＨによってコードされるＦｃドメインのアイソタイプ及び／またはアロタイプと一致するアイソタイプ及び／またはアロタイプを有する。例えば、いくつかの実施形態において、薬剤はヒトＩｇＡ１抗体であり、マウスは、ヒトＩｇＡ１ ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインをコードするＣＨ遺伝子セグメントを含む遺伝子改変されたＩｇＨ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、薬剤はヒトＩｇＡ２抗体であり、マウスは、ヒトＩｇＡ２ ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインをコードするＣＨ遺伝子セグメントを含む遺伝子改変されたＩｇＨ遺伝子座を含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、ヒト重鎖可変ドメインを含む抗体（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２抗体）である。
【0184】
いくつかの実施形態において、当該方法は、投与された治療用タンパク質の１つ以上の薬物動態学的特性を測定することを含む。いくつかの実施形態において、投与されたヒト抗体または融合タンパク質の薬物動態学的特性を決定するために使用される動物モデルは、ヒトＦｃαＲ遺伝子座を含む、本明細書で提供される遺伝子改変マウスである。
【0185】
いくつかの実施形態において、１つ以上の薬物動態学的パラメータは、血漿中濃度対時間下面積（ＡＵＣ）、生体内回収率（ＩＶＲ）、クリアランス率（ＣＬ）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、薬剤半減期（ｔ１／２）、及び定常状態分布容積（Ｖｓｓ）を含むが、これらに限定されない。一般に、投与される治療薬の薬物動態学的特性は、選択された用量の治療薬（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｍｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇ以上）を投与し、その後、治療薬の血漿濃度が経時的に（例えば、０時間、６時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、もしくは最大３０日、またはそれ以上）どのように変化するかを決定することで判定される。
【0186】
いくつかの実施形態において、当該方法は、投与された治療用タンパク質の治療的有効性（例えば、ある投与量の治療用タンパク質が、動物モデルにおいて、１つ以上の疾患症状を軽減または排除する能力）を測定することを更に含む。いくつかの実施形態において、動物モデルは、がんモデルであり、疾患症状には、例えば、腫瘍サイズ、腫瘍転移、及び／または動物の生存が含まれ得る。いくつかの実施形態において、動物モデルは、自己免疫または炎症モデルであり、疾患症状には、例えば、サイトカインの発現レベル、免疫細胞の増殖、組織損傷、及び／または動物の生存が含まれ得る。いくつかの実施形態において、動物モデルは、感染症モデルであり、疾患症状には、例えば、感染性因子レベル、組織損傷、及び／または動物の生存が含まれ得る。
【0187】
いくつかの実施形態において、当該方法は、投与された治療用タンパク質の安全性及び投与量（例えば、ある投与量の治療用タンパク質が、動物モデルにおいて、１つ以上の有害作用をもたらす程度）を測定することを更に含む。有害作用には、アレルギー反応、脱毛症、アナフィラキシー、貧血、食欲不振、平衡感覚障害、出血、血栓、呼吸困難、気管支炎、打撲、白血球数の減少、赤血球数の減少、血小板数の減少、心毒性、結膜炎、便秘、咳、脱水、下痢、電解質平衡障害、不妊、発熱、脱毛、心不全、感染症、注射部位反応、鉄欠乏症、腎不全、白血球減少症、肝機能障害、肺炎、急速な心拍動、直腸出血、痙攣、体重減少、及び体重増加が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるのは、治療薬によって誘発されたアレルギー反応を、受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）及び／または受動全身性アナフィラキシー（ＰＳＡ）モデルを使用して測定する方法である。
【0188】
いくつかの実施形態において、当該方法は、治療用タンパク質が、マウスにおいて、１つ以上のＦｃαＲ媒介反応を誘導する程度（例えば、治療用タンパク質が抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する程度）を測定することを更に含む。例えば、特定の実施形態において、本明細書で提供されるのは、ヒト抗体のヒトＦｃα領域を含む治療薬をスクリーニングする方法であり、（ａ）ヒト抗体のＦｃα領域を含む薬剤を本明細書で提供されるマウスに投与することであって、薬剤は、マウスの標的細胞に結合する、当該投与することと、（ｂ）標的細胞に対するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定することと、（ｃ）ステップ（ｂ）におけるＡＤＣＣの量を対照と比較することであって、標的細胞の殺傷増加は、薬剤がＡＤＣＣを媒介する能力を増加させることを示す、当該比較することと、を含む。
【0189】
いくつかの実施形態において、当該方法は、治療用タンパク質の投与が、マウスにおいて、抗ヒトＦｃα免疫反応を誘導する程度を測定することを更に含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法で試験される抗体は、ヒト軽鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは、λ軽鎖可変ドメインである。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは、κ軽鎖可変ドメインである。いくつかの実施形態において、抗体はヒト軽鎖定常ドメインを有する。いくつかの実施形態において、軽鎖定常ドメインは、λ軽鎖定常ドメインである。いくつかの実施形態において、軽鎖定常ドメインは、κ軽鎖定常ドメインである。ヒト軽鎖定常ドメインの配列は、当該技術分野において知られている（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２及びＩＭＧＴデータベース（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで入手可能）を参照）。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法で試験される抗体は、ヒト軽鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは、λ軽鎖可変ドメインである。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは、κ軽鎖可変ドメインである。いくつかの実施形態において、抗体はヒト軽鎖定常ドメインを有する。いくつかの実施形態において、軽鎖定常ドメインは、λ軽鎖定常ドメインである。いくつかの実施形態において、軽鎖定常ドメインは、κ軽鎖定常ドメインである。ヒト軽鎖定常ドメインの配列は、当該技術分野において知られている（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２及びＩＭＧＴデータベース（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで入手可能）を参照）。
【0190】
いくつかの実施形態において、治療薬は、医薬組成物、例えば、薬学的に許容される担体と一緒に製剤化されたヒトＩｇＡ抗体またはＦｃ融合タンパク質を含有する医薬組成物の一部として、本明細書で提供されるマウスに投与される。
【0191】
本明細書で提供される医薬組成物は、固体または液体の形態での投与用に特別に製剤化され得、（１）経口投与、例えば、ドレンチ（水性もしくは非水性の溶液または懸濁液）、錠剤、例えば、口腔粘膜、舌下、及び全身吸収を目的にしたもの、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌への塗布のためのペースト剤、または（２）非経口投与、例えば、皮下、筋肉内、静脈内もしくは硬膜外注射による、例えば、無菌の溶液もしくは懸濁液、または徐放性製剤に適応されたものを含む。
【0192】
非経口投与に好適な医薬組成物は、ヒトＩｇＡ抗体またはＦｃ融合タンパク質を、１つ以上の薬学的に許容される無菌の等張性の水性もしくは非水性の溶液、分散液、懸濁液もしくは乳濁液、または使用直前に無菌の注射用溶液もしくは分散液中に再構成することができる無菌粉末との組み合わせで含み、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、目的のレシピエントの血液と製剤とを等張にする溶質、または懸濁化剤もしくは粘稠化剤を含有し得る。
【0193】
本明細書で提供される医薬組成物に採用され得る好適な水性及び非水性の担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、及びこれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材の使用によって、分散剤の場合には必要な粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。
【0194】
いくつかの実施形態において、組成物は、ヒト抗体またはＦｃ融合タンパク質を、所望の投与量に適したｗ／ｖをもたらす濃度で含む。抗体は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも３５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも４５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも６５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１３５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも３００ｍｇ／ｍＬの濃度で組成物中に存在し得る。
【0195】
いくつかの実施形態において、組成物は、ヒトＩｇＡ抗体またはＦｃ融合タンパク質を、任意選択の生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤、例えば、限定するものではないが、緩衝剤、糖類、塩、界面活性剤、可溶化剤、ポリオール、希釈剤、結合剤、安定剤、塩、親油性溶媒、アミノ酸、キレート剤、保存剤などと混合することによって（Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１２ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌ．Ｂｒｕｎｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９９９））、所望の最終濃度の凍結乾燥された組成物または水溶液の形態に調製される。許容可能な担体、賦形剤、または安定化剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、これには緩衝液、例えば、ヒスチジン、リン酸塩、クエン酸塩、グリシン、酢酸塩、及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；トレハロース、グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ、ポリソルベート８０、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。
【0196】
いくつかの実施形態において、緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、または酢酸塩である。糖賦形剤は、トレハロース、スクロース、マンニトール、マルトース、またはラフィノースであり得る。界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート８０、またはプルロニックＦ６８であり得る。塩は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２、またはＣａＣｌ２であり得る。
【0197】
いくつかの実施形態において、組成物は、改善されたｐＨ制御をもたらすために、緩衝剤またはｐＨ調整剤を含む。このような組成物は、約３．０～約９．０の間、約４．０～約８．０の間、約５．０～約８．０の間、約５．０～約７．０の間、約５．０～約６．５の間、約５．５～約８．０の間、約５．５～約７．０の間、または約５．５～約６．５の間のｐＨを有し得る。更なる実施形態において、そのような組成物は、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、または約９．０のｐＨを有する。いくつかの実施形態において、組成物のｐＨは約６．０である。当業者は、組成物のｐＨが、一般に、組成物中に使用されるヒト抗体またはＦｃ融合タンパク質の等電点と同じであってはならないことを理解している。典型的に、緩衝剤は、有機もしくは無機の酸または塩基から調製される塩である。代表的な緩衝剤には、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、またはフタル酸の塩などの有機酸塩；トリス緩衝液、トロメタミン塩酸塩緩衝液、またはリン酸緩衝液が含まれるが、これらに限定されない。加えて、アミノ酸成分は、緩衝能としても機能し得る。緩衝剤として組成物に利用され得る代表的なアミノ酸成分には、グリシン及びヒスチジンが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、及び酢酸塩から選択される。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、ヒスチジンである。別の具体的な実施形態において、緩衝剤は、クエン酸塩である。さらに別の実施形態において、緩衝剤はグリシンである。緩衝剤の純度は、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％でなければならない。本明細書で使用される場合、ヒスチジン及びグリシンの文脈における「純度」という用語は、当該技術分野において理解される、例えば、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，１３ｔｈ ｅｄ．，Ｏ’Ｎｅｉｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄ．（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，２００１）に記載されるヒスチジンまたはグリシンの化学純度を指す。
【0198】
いくつかの実施形態において、組成物は、緩衝剤としてヒスチジンを含む。いくつかの実施形態において、ヒスチジンは、少なくとも約１ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１５０ｍＭ、または少なくとも約２００ｍＭのヒスチジンの濃度で組成物中に存在する。別の実施形態において、組成物は、約１ｍＭ～約２００ｍＭ、約１ｍＭ～約１５０ｍＭ、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、約１ｍＭ～約７５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約７５ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０ｍＭ、約１０ｍＭ～約３０ｍＭ、約２０ｍＭ～約７５ｍＭ、約２０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約４０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約３０ｍＭのヒスチジンを含む。更なる実施形態において、組成物は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、または約２００ｍＭのヒスチジンを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、約１０ｍＭ、約２５ｍＭのヒスチジンを含むか、またはヒスチジンを含まなくてもよい。
【0199】
いくつかの実施形態において、組成物は、炭水化物賦形剤を含む。炭水化物賦形剤は、例えば、増粘剤、安定剤、増量剤、可溶化剤、及び／または同様のものとして作用し得る。炭水化物賦形剤は、一般に、約１％～約９９％の重量％または体積％、例えば、約０．１％～約２０％、約０．１％～約１５％、約０．１％～約５％、約１％～約２０％、約５％～約１５％、約８％～約１０％、約１０％及び約１５％、約１５％及び約２０％、０．１％～２０％、５％～１５％、８％～１０％、１０％～１５％、１５％～２０％、約０．１％～約５％、約５％～約１０％、または約１５％～約２０％で存在する。更に別の具体的な実施形態において、炭水化物賦形剤は、１％、または１．５％、または２％、または２．５％、または３％、または４％、または５％、または１０％、または１５％、または２０％で存在する。
【0200】
いくつかの実施形態において、組成物は、炭水化物賦形剤を含む。組成物での使用に好適な炭水化物賦形剤には、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ－マンノース、ソルボースなどの単糖；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどの二糖；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどの多糖；及びマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）などのアルジトールが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される組成物に使用される炭水化物賦形剤は、スクロース、トレハロース、ラクトース、マンニトール、及びラフィノースから選択される。いくつかの実施形態において、炭水化物賦形剤は、トレハロースである。別の具体的な実施形態において、炭水化物賦形剤は、マンニトールである。さらに別の具体的な実施形態において、炭水化物賦形剤はスクロースである。さらに別の具体的な実施形態において、炭水化物賦形剤は、ラフィノースである。炭水化物賦形剤の純度は、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％でなければならない。
【0201】
いくつかの実施形態において、組成物は、トレハロースを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約４％、少なくとも約８％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％のトレハロースを含む。別の実施形態において、組成物は、約１％～約４０％、約１％～約３０％、約１％～約２０％、約２％～約４０％、約２％～約３０％、約２％～約２０％、約４％～約４０％、約４％～約３０％、または約４％～約２０％のトレハロースを含む。さらなる実施形態において、組成物は、約１％、約２％、約４％、約６％、約８％、約１５％、約２０％、約３０％、または約４０％のトレハロースを含む。いくつかの実施形態において、組成物は約４％、約６％、または約１５％のトレハロースを含む。
【0202】
いくつかの実施形態において、組成物は、賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、糖、塩、界面活性剤、アミノ酸、ポリオール、キレート剤、乳化剤、及び保存剤から選択される、少なくとも１つの賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、例えばＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２、及びＭｇＣｌ２から選択される塩などの、塩を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ＮａＣｌを含む。
【0203】
いくつかの実施形態において、組成物は、アミノ酸、例えば、リジン、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、またはアミノ酸塩を含む。組成物は、少なくとも約１ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１５０ｍＭ、少なくとも約２００ｍＭ、少なくとも約２５０ｍＭ、少なくとも約３００ｍＭ、少なくとも約３５０ｍＭ、または少なくとも約４００ｍＭのアミノ酸を含み得る。別の実施形態において、組成物は、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約２５ｍＭ～約２５０ｍＭ、約２５ｍＭ～約３００ｍＭ、約２５ｍＭ～約３５０ｍＭ、約２５ｍＭ～約４００ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約５０ｍＭ～約３５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約４００ｍＭ、約１００ｍＭ～約２５０ｍＭ、約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１００ｍＭ～約４００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約１５０ｍＭ～約３００ｍＭ、または約１５０ｍＭ～約４００ｍＭのアミノ酸を含み得る。さらなる実施形態において、組成物は、約１ｍＭ、１．６ｍＭ、２５ｍＭ、約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、または約４００ｍＭのアミノ酸を含む。
【0204】
いくつかの実施形態において、組成物は、界面活性剤を含む。本明細書で使用される「界面活性剤」という用語は、両親媒性構造を有する有機物質を指し、すなわち、反対の溶解傾向を有する基、典型的には、油溶性炭化水素鎖及び水溶性イオン基からなる。界面活性剤は、界面活性部分の電荷に応じて、アニオン性、カチオン性、及び非イオン性界面活性剤に分類することができる。界面活性剤は、生物学的材料の様々な医薬組成物及び調製物に、湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、及び分散剤として使用されることが多い。ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；Ｔｒｉｔｏｎ；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－、またはステアリル－スルホベタイン；ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－またはステアリル－サルコシン；リノレイル－、ミリスチル－、またはセチル－ベタイン；ラウロアミドプロピル－、コカミドプロピル－、リノールアミドプロピル－、ミリスタミドプロピル－、パイミドプロピル（ｐａＩｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）－、またはイソステアラミドプロピル－ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピル－、パイミドプロピル（ｐａＩｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）－、またはイソステアラミドプロピル－ジメチルアミン；ココイルメチルタウリン酸ナトリウム、またはオレイルメチルタウリン酸二ナトリウム；ならびにＭＯＮＡＱＵＡ（登録商標）シリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、及びエチレンとプロピレングリコールのコポリマー（例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）ＰＦ６８など）のような薬学的に許容される界面活性剤を、凝集を低減するために、任意に組成物に加えることができる。いくつかの実施形態において、組成物は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、またはポリソルベート８０を含む。界面活性剤は、組成物の投与にポンプまたはプラスチック容器が使用される場合、特に有用である。薬学的に許容される界面活性剤の存在は、タンパク質の凝集する性質を緩和する。組成物は、約０．００１％～約１％、または約０．００１％～約０．１％、または約０．０１％～約０．１％の範囲の濃度であるポリソルベートを含み得る。他の具体的な実施形態において、組成物は、０．００１％、または０．００２％、または０．００３％、または０．００４％、または０．００５％、または０．００６％、または０．００７％、または０．００８％、または０．００９％、または０．０１％、または０．０１５％、または０．０２％の濃度であるポリソルベートを含む。
【0205】
いくつかの実施形態において、組成物は、限定するものではないが、希釈剤、結合剤、安定剤、親油性溶媒、保存剤、アジュバントなどを含む、他の賦形剤及び／または添加剤を含む。薬学的に許容される賦形剤及び／または添加剤は、本明細書で提供される組成物に使用され得る。薬学的に許容されるキレート剤（例えば、限定するものではないが、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、またはＥＧＴＡ）などの一般に使用される賦形剤／添加剤は、凝集を低減するために、任意に組成物に加えることができる。これらの添加剤は、組成物の投与にポンプまたはプラスチック容器が使用される場合、特に有用である。
【0206】
いくつかの実施形態において、組成物は、保存剤を含む。フェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、ｏ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、限定されるものではないが、六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、及びチメロサール、またはこれらの混合物などの保存剤は、約０．００１％～約５％、または当該範囲内の任意の範囲もしくは値などの任意の好適な濃度で、任意に組成物に加えることができる。組成物に使用される保存剤の濃度は、微生物作用をもたらすのに十分な濃度である。そのような濃度は、選択された保存剤に依存し、当業者によって容易に決定される。
【0207】
いくつかの実施形態において、組成物は、ヒトの血液と等張であり、当該組成物は、ヒトの血液と本質的に同じ浸透圧を有する。そのような等張性組成物は、一般に、約２５０ｍＯＳｍ～約３５０ｍＯＳｍの浸透圧を有する。等張性は、例えば、蒸気圧または凍結点型浸透圧計を使用することによって、測定することができる。組成物の張度は、張度調整剤を使用して調節される。「張度調整剤」は、組成物の等張性をもたらすために組成物に加えることができる、薬学的に許容される不活性物質である。本明細書で提供される組成物のための好適な張度調整剤には、糖、塩、及びアミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。
【0208】
いくつかの実施形態において、組成物は、エンドトキシン及び／または関連する発熱物質を実質的に含まない、パイロジェンフリー組成物である。エンドトキシンには、微生物の内部に閉じ込められた毒素であって、その微生物が分解または死滅したときにのみ放出される毒素が含まれる。発熱物質にはまた、細菌及び他の微生物の外膜からの発熱性の熱安定性物質が含まれる。これらの物質はいずれも、ヒトに投与されると、発熱、低血圧、及びショックを引き起こす場合がある。潜在的な有害作用があることから、エンドトキシンは、たとえ少量であっても、静脈内投与される医薬品溶液から除去しなければならない。米国食品医薬品局（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬物投与の場合、１時間当たり、５エンドトキシン単位（ＥＵ）／用量／キログラム体重の上限を設定している（Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｆｏｒｕｍ ２６（１）：２２３（２０００））。治療用タンパク質が、目的のタンパク質（例えば、抗体）のように、体重１キログラム当たり数百または数千ミリグラムの量で投与される場合、有害かつ危険なエンドトキシンは、微量であっても、除去しなければならない。いくつかの実施形態において、組成物中のエンドトキシン及び発熱物質のレベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、または５ＥＵ／ｍｇ未満、または１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。
【0209】
ｉｎ ｖｉｖｏ投与で使用される場合、本明細書に記載される組成物は、無菌でなければならない。組成物は、滅菌濾過、放射線などを含む様々な滅菌方法によって滅菌され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、滅菌済みの０．２２ミクロンフィルターで滅菌濾過される。注射用無菌組成物は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，（２００５）に記載されているような従来の薬学的実務に従って、製剤化することができる。本明細書で開示されるものなどの目的のタンパク質（例えば、抗体）を含む組成物は、通常、凍結乾燥形態または溶液中で保存される。目的のタンパク質（例えば、抗体）を含む無菌組成物は、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針で貫通可能な栓などの、組成物を取り出すことが可能なアダプターを有する静脈内注射用溶液バッグまたはバイアル中に入れられることが企図される。いくつかの実施形態において、組成物は、プレフィルドシリンジとして提供される。
【0210】
いくつかの実施形態において、組成物は、凍結乾燥製剤である。「凍結乾燥」または「フリーズドライ」という用語は、凍結乾燥などの乾燥手順に供された物質の状態を含み、少なくとも５０％の水分が除去されている。
【0211】
選択された投与経路にかかわらず、好適な水和形態で使用され得る本明細書で提供される薬剤、及び／または本明細書で提供される医薬組成物は、当業者に知られている従来の方法によって、薬学的に許容される剤形に製剤化される。
【0212】
本明細書で提供される方法において、ヒト抗体、Ｆｃ融合タンパク質、及び／または医薬組成物は、任意の好適な投与経路によって送達され得、例えば、経口、経鼻、例えば、スプレーによるもの、経直腸、膣内、非経口、大槽内及び局所的、散剤、軟膏剤または滴剤によるもの、口腔粘膜及び舌下投与を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、全身投与される（例えば、経口または非経口投与を介して）。
【0213】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物中の有効成分の実際の投与量は、動物モデルにおいて毒性なく、その動物モデル、組成物、及び投与方法で所望の治療応答を達成するのに有効である有効成分の量を決定するために変化させてもよい。
【0214】
例えば、特定の実施形態において、本明細書に記載されるマウスは、１つ以上のヒト抗体候補の薬物動態プロファイルを決定するために使用される。様々な実施形態において、１つ以上の本明細書に記載のマウス及び１つ以上の対照または参照のマウスは、１つ以上のヒト抗体候補に、様々な投与量（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｍｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇ以上）でそれぞれ曝露される。候補の治療用抗体は、非経口及び非経口以外の投与経路を含む、任意の所望の投与経路を介して投与され得る。非経口経路には、例えば、静脈内、動脈内、門脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、髄腔内、鞘内、側脳室内、頭蓋内、胸腔内または他の注射経路が含まれる。非経口でない経路は、例えば、経口、経鼻、経皮、肺、直腸、頬、膣、眼を含む。投与は、連続注入、局所投与、インプラント（ゲル、膜など）からの持続放出、及び／または静脈内注射によるものであってもよい。様々な時点（例えば、０時間、６時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、もしくは最大３０日、またはそれ以上）で、マウス（ヒト化及び対照）から血液を単離する。投与された候補の治療用抗体またはＦｃ融合ポリペプチドの薬物動態プロファイルを決定するために、本明細書に記載されるマウスから得られた試料を使用し、限定するものではないが、総ＩｇＡ、抗治療用抗体反応、凝集などを含む、様々なアッセイを実施し得る。
【0215】
様々な実施形態において、本明細書に記載のマウスは、目的のポリペプチドの活性を遮断もしくは調節する治療効果、及び細胞変化の結果としての遺伝子発現に対する効果、または受容体ポリペプチドとの関係では、マウスの細胞表面上の受容体ポリペプチドの密度に対する効果を測定するために使用される。様々な実施形態において、本明細書に記載されるマウスまたは当該マウスから単離された細胞は、目的のポリペプチドに結合する候補治療薬に曝露され、一定期間後、当該目的のポリペプチドに関連する特定の細胞プロセス、例えば、リガンド受容体相互作用またはシグナル伝達に対する効果について分析される。
【0216】
本明細書に記載のマウスは、腫瘍学及び／または感染症において使用するヒトＩｇＡ抗体またはＦｃ融合ポリペプチドの開発及び選択のための改善されたｉｎ ｖｉｖｏシステムを提供する。様々な実施形態において、本明細書に記載されるマウス及び対照マウス（例えば、本明細書に記載されるものとは異なる遺伝子改変を有するマウス、または遺伝子改変のない、すなわち、野生型マウス）は、腫瘍（または腫瘍細胞）が移植され得、またはウイルス（例えば、インフルエンザ、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶなど）に感染させられ得る。移植または感染させた後、マウスに、候補治療薬が投与され得る。腫瘍またはウイルスは、候補治療薬の投与前に、マウス内の１つ以上の場所に定着するのに十分な時間を与えてもよい。代替的及び／または付加的に、治療薬として開発され得る潜在的ヒト抗体の特性評価及び選択のために、そのようなマウスにおける免疫反応がモニタリングされ得る。
【0217】
遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞の作製方法
特定の態様において、本明細書で提供される方法は、本明細書で提供される遺伝子改変された遺伝子座の１つ以上を含むマウス及びＥＳ細胞を作製することである。本明細書で提供される遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞を作製する例示的な方法は、本明細書の説明、実施例、及び／または図に記載されている。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法は、本明細書で提供されるＦｃαＲ遺伝子座を含むマウス及びＥＳ細胞を作製することである。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体の、Ｐｉｒａ６遺伝子とＮｃｒ１遺伝子との間に挿入される。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体の、ヌクレオチド残基４，３０３，９０５～４，３１２，２８０の間に挿入される（ＧＲＣｍ３８アセンブリ）。
特定の態様において、本明細書で提供される方法は、本明細書で提供される遺伝子改変された遺伝子座の１つ以上を含むマウス及びＥＳ細胞を作製することである。本明細書で提供される遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞を作製する例示的な方法は、本明細書の説明、実施例、及び／または図に記載されている。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法は、本明細書で提供されるＦｃαＲ遺伝子座を含むマウス及びＥＳ細胞を作製することである。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体の、Ｐｉｒａ６遺伝子とＮｃｒ１遺伝子との間に挿入される。いくつかの実施形態において、ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体の、ヌクレオチド残基４，３０３，９０５～４，３１２，２８０の間に挿入される（ＧＲＣｍ３８アセンブリ）。
【0218】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供されるヒト化ＣＤ７９ａ遺伝子座及び／または本明細書で提供されるヒト化ＣＤ７９ｂ遺伝子座をさらに含むマウス及びＥＳ細胞を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供されるヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座及び／または本明細書で提供されるヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座をさらに含むマウス及びＥＳ細胞を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供されるヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座をさらに含むマウス及びＥＳ細胞を作製する方法が提供される。特定の実施形態において、本明細書では、本明細書で提供されるヒトまたはヒト化ＦｃγＲ１ａ遺伝子座をさらに含むマウス及びＥＳ細胞を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供されるヒトまたはヒト化ＦｃγＲ２ａ遺伝子座、本明細書で提供されるヒトまたはヒト化ＦｃγＲ２ｂ遺伝子座、本明細書で提供されるヒトまたはヒト化ＦｃγＲ２ｃ遺伝子座、本明細書で提供されるヒトまたはヒト化ＦｃγＲ３ａ遺伝子座、及び／または本明細書で提供されるヒトまたはヒト化ＦｃγＲ３ｂ遺伝子座をさらに含むマウス及びＥＳ細胞を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供されるヒトまたはヒト化重鎖及び／または軽鎖遺伝子座をさらに含むマウス及びＥＳ細胞を作製する方法が提供される。本明細書で提供される遺伝子改変マウス及びＥＳ細胞を作製する例示的な方法は、本明細書の説明、実施例、及び／または図に記載されている。
【0219】
キット
本明細書では、本明細書中の説明、実施例、及び／または図に記載される少なくとも１つのマウス、マウス細胞、ＤＮＡ断片、及び／または標的化ベクターを充填した１つ以上の容器を含む、パックまたはキットが提供される。キットは、任意の適用可能な方法（例えば、研究方法）に使用され得る。そのような容器（複数可）には、医薬品または生物製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形式の文書を任意選択で添付してもよく、文書は、（ａ）ヒト投与のための製造、使用または販売に関する当局による承認、（ｂ）使用法、（ｃ）材料及び／または生物製品（例えば、本明細書に記載されるマウスまたはマウス細胞）を２つ以上の主体及びこれらの組み合わせの間で移転することを管理する契約を示すものである。
本明細書では、本明細書中の説明、実施例、及び／または図に記載される少なくとも１つのマウス、マウス細胞、ＤＮＡ断片、及び／または標的化ベクターを充填した１つ以上の容器を含む、パックまたはキットが提供される。キットは、任意の適用可能な方法（例えば、研究方法）に使用され得る。そのような容器（複数可）には、医薬品または生物製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形式の文書を任意選択で添付してもよく、文書は、（ａ）ヒト投与のための製造、使用または販売に関する当局による承認、（ｂ）使用法、（ｃ）材料及び／または生物製品（例えば、本明細書に記載されるマウスまたはマウス細胞）を２つ以上の主体及びこれらの組み合わせの間で移転することを管理する契約を示すものである。
【0220】
例示的な実施形態
例示的な実施形態１によると、本明細書では、ゲノム中に、マウス白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置するＦｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウスであって、前記ＦｃαＲ遺伝子座には、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列が含まれる、前記マウスを提供する。
例示的な実施形態１によると、本明細書では、ゲノム中に、マウス白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置するＦｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウスであって、前記ＦｃαＲ遺伝子座には、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列が含まれる、前記マウスを提供する。
【0221】
例示的な実施形態２によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、実施形態１のマウスが提供される。
【0222】
例示的な実施形態３によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｌｉｌｒａ５タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、実施形態１または２のマウスが提供される。
【0223】
例示的な実施形態４によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質及びＮｃｒ１タンパク質をコードする核酸配列の間など、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、実施形態１～３のいずれか１つのマウスが提供される。
【0224】
例示的な実施形態５によると、本明細書では、前記遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である、実施形態４のマウスが提供される。
【0225】
例示的な実施形態６によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体上の座標４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間に位置する、実施形態１～５のいずれか１つのマウスが提供される。
【0226】
例示的な実施形態７によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、実施形態１～６のいずれか１つのマウスが提供される。
【0227】
例示的な実施形態８によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＦｃアルファ受容体遺伝子のヒトエクソン１～５を含む、実施形態１～７のいずれか１つのマウスが提供される。
【0228】
例示的な実施形態９によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、非マウスげっ歯類ＦｃαＲエクソン１の非コード部分、ヒトＦｃαＲエクソン１及び２、ヒトＦｃαＲエクソン３及び４、ならびに非マウスげっ歯類ＦｃαＲエクソン５のコード部分を含む、実施形態１～６のいずれか１つのマウスが提供される。
【0229】
例示的な実施形態１０によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃαＲ受容体遺伝子座は、ヒト１９番染色体上の座標５４，８６２，２９７～５４，９０６，１８５の間で見出されるゲノム配列（＋鎖、ＧＲＣｈ３８アセンブリ）を含む、実施形態７または８のマウスが提供される。
【0230】
例示的な実施形態１１ａによると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子に存在する核酸配列をさらに含む、実施形態７または８のマウスが提供される。例示的な実施形態１１ｂによると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲに存在する核酸配列をさらに含む、実施形態７、８、または１１ａのマウスが提供される。
【0231】
例示的な実施形態１２によると、本明細書では、前記マウスは、マウス好中球、単球、マクロファージ、好酸球、及び形質細胞様樹状細胞上で前記ＦｃαＲポリペプチドを発現する、実施形態１～１１のいずれか１つのマウスが提供される。
【0232】
例示的な実施形態１３によると、本明細書では、前記マウスは、前記ＦｃαＲ遺伝子座についてヘテロ接合性を有する、実施形態１～１２のいずれか１つのマウスが提供される。
【0233】
例示的な実施形態１４によると、本明細書では、前記マウスは、前記ＦｃαＲ遺伝子座についてホモ接合性を有する、実施形態１～１２のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態１５によると、本明細書では、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座をさらに含む、実施形態１～１４のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態１５によると、本明細書では、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座をさらに含む、実施形態１～１４のいずれか１つのマウスが提供される。
【0234】
例示的な実施形態１６によると、本明細書では、前記マウスは、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲをコードする核酸配列を含むヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座を含む、実施形態１５のマウスが提供される。
【0235】
例示的な実施形態１７によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、Ｆｃガンマ受容体２ａ（ＦｃγＲ２ａ）、Ｆｃガンマ受容体２ｂ（ＦｃγＲ２ｂ）、Ｆｃガンマ受容体３ａ（ＦｃγＲ３ａ）、Ｆｃガンマ受容体３ｂ（ＦｃγＲ３ｂ）、及び／またはＦｃガンマ受容体２ｃ（ＦｃγＲ２ｃ）から選択される１つ以上の低親和性ＦｃγＲをコードする核酸配列を含む、実施形態１６のマウスが提供される。
【0236】
例示的な実施形態１８によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、ヒトまたはヒト化Ｆｃガンマ受容体１アルファ（ＦｃγＲ１ａ）、Ｆｃガンマ受容体２ａ（ＦｃγＲ２ａ）、Ｆｃガンマ受容体２ｂ（ＦｃγＲ２ｂ）、Ｆｃガンマ受容体３ａ（ＦｃγＲ３ａ）、Ｆｃガンマ受容体３ｂ（ＦｃγＲ３ｂ）、及び／またはＦｃガンマ受容体２ｃ（ＦｃγＲ２ｃ）から選択される１つ以上のＦｃγＲをコードする核酸配列を含む、実施形態１６のマウスが提供される。
【0237】
例示的な実施形態１９によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、ヒト細胞外ドメインを含む、実施形態１６～１８のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態２０によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、マウス膜貫通ドメインを含む、実施形態１６～１９のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態２０によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、マウス膜貫通ドメインを含む、実施形態１６～１９のいずれか１つのマウスが提供される。
【0238】
例示的な実施形態２１によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、ヒト膜貫通ドメインを含む、実施形態１６～１９のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態２２によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、マウス細胞質ドメインを含む、実施形態１６～２１のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態２２によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、マウス細胞質ドメインを含む、実施形態１６～２１のいずれか１つのマウスが提供される。
【0239】
例示的な実施形態２３によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、ヒト細胞質ドメインを含む、実施形態１６～２１のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態２４によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、内因性マウスＦｃγＲ遺伝子座に位置する、実施形態１６～２３のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態２４によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、内因性マウスＦｃγＲ遺伝子座に位置する、実施形態１６～２３のいずれか１つのマウスが提供される。
【0240】
例示的な実施形態２５によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲをコードする前記核酸配列は、内因性マウスＦｃγＲ遺伝子の全部または一部を置き換える、実施形態２４のマウスが提供される。
【0241】
例示的な実施形態２６によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲをコードする前記核酸配列は、マウスＦｃγＲ細胞外ドメインをコードする内因性核酸配列を置換するヒトＦｃγＲ細胞外ドメインをコードする核酸配列を含む、実施形態２５のマウスが提供される。
【0242】
例示的な実施形態２７によると、本明細書では、前記マウスは、マウスＦｃγＲを発現しない、実施形態１５～２６のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態２８によると、本明細書では、前記マウスは、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座についてヘテロ接合性を有する、実施形態１５～２７のいずれか１つのマウスが提供される。
例示的な実施形態２８によると、本明細書では、前記マウスは、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座についてヘテロ接合性を有する、実施形態１５～２７のいずれか１つのマウスが提供される。
【0243】
例示的な実施形態２９によると、本明細書では、前記マウスは、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座についてホモ接合性を有する、実施形態１５～２７のいずれか１つのマウスが提供される。
【0244】
例示的な実施形態３０によると、本明細書では、ゲノム中に、マウスゲノムの白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に位置するＦｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウス胚性幹細胞（ＥＳ細胞）であって、前記ＦｃαＲ遺伝子座には、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列が含まれる、前記マウスＥＳ細胞が提供される。
【0245】
例示的な実施形態３１によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、実施形態３０のマウスＥＳ細胞が提供される。
【0246】
例示的な実施形態３２によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｌｉｌｒａ５タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、実施形態３１または３２のマウスＥＳ細胞が提供される。
【0247】
例示的な実施形態３３によると、本明細書では、前記Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質及びＮｃｒ１タンパク質をコードする核酸配列の間など、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、実施形態３０～３２のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0248】
例示的な実施形態３４によると、本明細書では、前記遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である、実施形態３３のマウスＥＳ細胞が提供される。
【0249】
例示的な実施形態３５によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体上の座標４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間に位置する、実施形態３０～３４のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0250】
例示的な実施形態３６によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、実施形態３０～３５のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0251】
例示的な実施形態３７によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＦｃアルファ受容体遺伝子のヒトエクソン１～５を含む、実施形態３０～３６のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0252】
例示的な実施形態３８によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、非マウスげっ歯類ＦｃαＲエクソン１の非コード部分、ヒトＦｃαＲエクソン１及び２、ヒトＦｃαＲエクソン３及び４、ならびに非マウスげっ歯類ＦｃαＲエクソン５のコード部分を含む、実施形態３０～３５のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0253】
例示的な実施形態３９によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃαＲ受容体遺伝子座は、ヒトの１９番染色体上の座標５４，８６２，２９７～５４，９０６，１８５の間で見出されるゲノム配列（＋鎖、ＧＲＣｈ３８アセンブリ）を含む、実施形態３６または３７のマウスＥＳ細胞が提供される。
【0254】
例示的な実施形態４０ａによると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子に存在する核酸配列をさらに含む、実施形態３６または３７のマウスＥＳ細胞が提供される。例示的な実施形態４０ｂによると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲに存在する核酸配列をさらに含む、実施形態３６、３７、または４０ａのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0255】
例示的な実施形態４１によると、本明細書では、前記ＥＳ細胞は、前記ＦｃαＲ遺伝子座についてヘテロ接合性を有する、実施形態３０～４０のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0256】
例示的な実施形態４２によると、本明細書では、前記ＥＳ細胞は、前記ＦｃαＲ遺伝子座についてホモ接合性を有する、実施形態３０～４０のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0257】
例示的な実施形態４３によると、本明細書では、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座をさらに含む、実施形態３０～４２のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0258】
例示的な実施形態４４によると、本明細書では、前記マウスＥＳ細胞は、ゲノム中に、ヒトまたはヒト化ＦｃγＲをコードする核酸配列を含むヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座を含む、実施形態４３のマウスＥＳ細胞が提供される。
【0259】
例示的な実施形態４５によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、Ｆｃガンマ受容体２ａ（ＦｃγＲ２ａ）、Ｆｃガンマ受容体２ｂ（ＦｃγＲ２ｂ）、Ｆｃガンマ受容体３ａ（ＦｃγＲ３ａ）、Ｆｃガンマ受容体３ｂ（ＦｃγＲ３ｂ）、及び／またはＦｃガンマ受容体２ｃ（ＦｃγＲ２ｃ）から選択される１つ以上の低親和性ＦｃγＲをコードする核酸配列を含む、実施形態４４のマウスＥＳ細胞が提供される。
【0260】
例示的な実施形態４６によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、ヒトまたはヒト化Ｆｃガンマ受容体１アルファ（ＦｃγＲ１ａ）、Ｆｃガンマ受容体２ａ（ＦｃγＲ２ａ）、Ｆｃガンマ受容体２ｂ（ＦｃγＲ２ｂ）、Ｆｃガンマ受容体３ａ（ＦｃγＲ３ａ）、Ｆｃガンマ受容体３ｂ（ＦｃγＲ３ｂ）、及び／またはＦｃガンマ受容体２ｃ（ＦｃγＲ２ｃ）から選択される１つ以上のＦｃγＲをコードする核酸配列を含む、実施形態４４のマウスＥＳ細胞が提供される。
【0261】
例示的な実施形態４７によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、ヒト細胞外ドメインを含む、実施形態４４～４６のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0262】
例示的な実施形態４８によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、マウス膜貫通ドメインを含む、実施形態４４～４７のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0263】
例示的な実施形態４９によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、ヒト膜貫通ドメインを含む、実施形態４４～４７のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0264】
例示的な実施形態５０によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、マウス細胞質ドメインを含む、実施形態４４～４９のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0265】
例示的な実施形態５１によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲは、ヒト細胞質ドメインを含む、実施形態４４～４９のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0266】
例示的な実施形態５２によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座は、内因性マウスＦｃγＲ遺伝子座に位置する、実施形態４４～５１のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0267】
例示的な実施形態５３によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲをコードする前記核酸配列は、内因性マウスＦｃγＲ遺伝子の全部または一部を置き換える、実施形態５２のマウスＥＳ細胞が提供される。
【0268】
例示的な実施形態５４によると、本明細書では、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲをコードする前記核酸配列は、マウスＦｃγＲ細胞外ドメインをコードする内因性核酸配列を置換するヒトＦｃγＲ細胞外ドメインをコードする核酸配列を含む、実施形態５３のマウスＥＳ細胞が提供される。
【0269】
例示的な実施形態５５によると、本明細書では、前記マウスは、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座についてヘテロ接合性を有する、実施形態４３～５４のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0270】
例示的な実施形態５６によると、本明細書では、前記マウスは、前記ヒトまたはヒト化ＦｃγＲ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＩｇＨ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇκ遺伝子座、ヒトまたはヒト化Ｉｇλ遺伝子座、ヒトまたはヒト化ＦｃＲｎ遺伝子座、ヒトまたはヒト化β２Ｍ遺伝子座、及び／またはヒトまたはヒト化ＦｃεＲ１α遺伝子座についてホモ接合性を有する、実施形態４３～５４のいずれか１つのマウスＥＳ細胞が提供される。
【0271】
例示的な実施形態５７によると、本明細書では、ヒトＩｇＡ抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを試験する方法であって、前記ＩｇＡ抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを実施形態１～２９のいずれか１つのマウスに投与することを含む、前記方法が提供される。
【0272】
例示的な実施形態５８によると、本明細書では、前記投与されたヒトＩｇＡ抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特性を測定することをさらに含む、実施形態５７の方法が提供される。
【0273】
例示的な実施形態５９によると、本明細書では、前記１つ以上の薬物動態学的特性は、血漿中濃度対時間下面積（ＡＵＣ）、生体内回収率（ＩＶＲ）、クリアランス率（ＣＬ）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、薬剤半減期（ｔ１／２）、及び／または定常状態分布容積（Ｖｓｓ）の１つ以上から選択される、実施形態５８の方法が提供される。
【0274】
例示的な実施形態６０によると、本明細書では、前記投与されたヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの治療的有効性を測定することをさらに含む、実施形態５７～５９のいずれか１つの方法が提供される。
【0275】
例示的な実施形態６１によると、本明細書では、複数の用量の前記ヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを投与することと、各用量の前記ヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの治療的有効性を決定することとをさらに含む、実施形態５７～６０のいずれか１つの方法が提供される。
【0276】
例示的な実施形態６２によると、本明細書では、複数の用量の前記ヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを投与することと、各用量の前記ヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの安全性を決定することとをさらに含む、実施形態５７～６１のいずれか１つの方法が提供される。
【0277】
例示的な実施形態６３によると、本明細書では、複数の用量の前記ヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドを投与することと、各用量の前記ヒト抗体またはＦｃα融合ポリペプチドの耐容性を決定することとをさらに含む、実施形態５７～６２のいずれか１つの方法が提供される。
【0278】
例示的な実施形態６４によると、本明細書では、前記マウスにおける１つ以上のＦｃ受容体媒介反応を測定することをさらに含む、実施形態５７～６３のいずれか１つの方法が提供される。
【0279】
例示的な実施形態６５によると、本明細書では、前記１つ以上のＦｃ受容体媒介反応が抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）反応である、実施形態６４の方法が提供される。
【0280】
例示的な実施形態６６によると、本明細書では、前記ヒト抗体は、前記マウスの標的細胞に結合し、前記方法は、前記標的細胞に対するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定することと、ＡＤＣＣの量を対照と比較することとをさらに含み、標的細胞死滅の増加は、薬剤がＡＤＣＣを媒介する能力が増加していることを示す、実施形態５７～６５のいずれか１つの方法が提供される。
【0281】
例示的な実施形態６７によると、本明細書では、前記ヒト抗体に対して前記マウスが生成する前記免疫反応を測定することをさらに含む、実施形態５７～６６のいずれか１つの方法が提供される。
【0282】
例示的な実施形態６８によると、本明細書では、マウスゲノムを改変する方法であって、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座をマウスゲノムの白血球受容体複合体（ＬＲＣ）に挿入して、前記マウスゲノムを改変することを含み、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒト細胞外ドメイン及びヒトまたはげっ歯類の細胞質ドメインを含むＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、前記方法が提供される。
【0283】
例示的な実施形態６９によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、ヒトまたはヒト化ＦｃαＲポリペプチドをコードする核酸配列を含む、実施形態６８の方法が提供される。
【0284】
例示的な実施形態７０によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｔｔｈｙ１タンパク質の遺伝子座とＲｄｈ１３タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、実施形態６８または６９の方法が提供される。
【0285】
例示的な実施形態７１によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｌｉｌｒａ５タンパク質の遺伝子座とＧｐ６タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、実施形態６８～７０のいずれか１つの方法が提供される。
【0286】
例示的な実施形態７２によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、Ｐｉｒａ６タンパク質及びＮｃｒ１タンパク質をコードする核酸配列の間など、Ｐｉｒａ６タンパク質の遺伝子座とＮｃｒ１タンパク質の遺伝子座との間の遺伝子間領域に位置する、実施形態６８～７１のいずれか１つの方法が提供される。
【0287】
例示的な実施形態７３によると、本明細書では、前記遺伝子間領域は、Ｐｉｒａ６遺伝子座とＮｃｒ１遺伝子座との間の５４ｋｂの領域である、実施形態７２の方法が提供される。
【0288】
例示的な実施形態７４によると、本明細書では、前記ＦｃαＲ遺伝子座は、マウス７番染色体上の座標４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間である、実施形態６８～７３のいずれか１つの方法が提供される。
【0289】
例示的な実施形態７５によると、本明細書では、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）遺伝子座を含むマウスを作製する方法であって、実施形態３０～５６のいずれか１つのマウスＥＳ細胞を作製することと、前記ＥＳ細胞からマウスを作製することとを含む、前記方法が提供される。
【実施例】
【0290】
実施例１．１：ヒトまたはヒト化ＦｃαＲを含むマウスの遺伝子操作
ヒトＦｃαＲ（ＭＡＩＤ２０２７７及びＭＡＩＤ２０２７８）カセットをコードする核酸配列を含む標的化ベクターを生成した。ＭＡＩＤ２０２７７及びＭＡＩＤ２０２７８は、ＭＡＩＤ２０２７７が選択マーカー（すなわち、ネオマイシン耐性）を保持していることを除いて同一であった。簡単に言うと、ヒトＦＣＡＲ遺伝子は、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術（例えば、米国特許第６，５８６，２５１号及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２－６５９を参照、両文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を使用してマウスゲノムに導入された。プロモーターを含むヒトＦＣＡＲの４４ｋｂのゲノム配列を、マウス７番染色体上のマウスＰｉｒａ６遺伝子とＮｃｒ１遺伝子との間、座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間に位置するマウスＬＲＣ遺伝子座に挿入した（図１Ａ及び１Ｂ）。
ヒトＦｃαＲ（ＭＡＩＤ２０２７７及びＭＡＩＤ２０２７８）カセットをコードする核酸配列を含む標的化ベクターを生成した。ＭＡＩＤ２０２７７及びＭＡＩＤ２０２７８は、ＭＡＩＤ２０２７７が選択マーカー（すなわち、ネオマイシン耐性）を保持していることを除いて同一であった。簡単に言うと、ヒトＦＣＡＲ遺伝子は、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術（例えば、米国特許第６，５８６，２５１号及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２－６５９を参照、両文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を使用してマウスゲノムに導入された。プロモーターを含むヒトＦＣＡＲの４４ｋｂのゲノム配列を、マウス７番染色体上のマウスＰｉｒａ６遺伝子とＮｃｒ１遺伝子との間、座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０（＋鎖、ＧＲＣｍ３８アセンブリ）の間に位置するマウスＬＲＣ遺伝子座に挿入した（図１Ａ及び１Ｂ）。
【0291】
より具体的には、マウス相同性アームは、ＢＡＣクローンＲＰ２３－４５８ｉ１６を鋳型として使用するＰＣＲ増幅によって作製され、それを表１に示す。
【0292】
【表1】
【0293】
マウスの相同性アームは、５’から３’に、５’アーム、Ｉ－ＣｅｕＩ及びＰＩ－ＳｃｅＩホーミングエンドヌクレアーゼ部位が隣接するスペクチノマイシン耐性カセット、３’アーム、及びクロラムフェニコール耐性カセットを含む構築物に組み立てられた（構築物Ａ）。遺伝子操作の後工程で、構築物Ａのスペクチノマイシン耐性カセットがヒトＦＣＡＲを含むインサートによって置き換えられた。
【0294】
ＦＣＡＲ遺伝子全体と隣接配列を含むヒトインサートは、ＢＡＣクローンＣＴＤ－３１６１ｐ２２の２回の連続した細菌相同組換え（ＢＨＲ）改変によって作成された。最初のＢＨＲステップでは、スペクチノマイシン耐性カセットとＩ－ＣｅｕＩ部位が、ヒトＢＡＣの５’末端に挿入された。２番目のＢＨＲステップでは、ＮＣＲ１遺伝子を含む約４４ｋｂの配列が、ヒトＢＡＣの３’末端から欠失され、変異型ｌｏｘ部位が隣接するネオマイシン耐性カセット（ｌｏｘ２３７２－Ｕｂ－ｎｅｏ－ｌｏｘ２３７２）及び３’ＰＩ－ＳｃｅＩ部位に置き換えられた。この構築物（構築物Ｂ）には、この時点で、５’から３’に、スペクチノマイシン耐性カセット、Ｉ－ＣｅｕＩ部位、４４，８８７ｂｐのヒトゲノム配列（ＧＲＣｈ３８座標ｃｈｒ１９：５４，８６２，２９７～５４，９０６，１８５）、ｌｏｘ２３７２－Ｕｂ－ｎｅｏ－ｌｏｘ２３７２カセット、及びＰＩ－ＳｃｅＩ部位が含まれていた。ヒト配列には、ＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子の最後の約５ｋｂ（イントロン６から始まる）、ＦＣＡＲ遺伝子全体（約１７ｋｂ）、及びＮＣＲ１遺伝子の５’ＵＴＲが含まれていた。
【0295】
最終的な標的化ベクター（ＭＡＩＤ２０２７７と指定）を作製するために、構築物Ａ及びＢを両方ともＩ－ＣｅｕＩ及びＰＩ－ＳｃｅＩ制限酵素で消化し、一緒にライゲーションした。最終的な標的化ベクターには、５’から３’に、５’マウス相同性アーム、Ｉ－ＣｅｕＩ部位、ＦＣＡＲ遺伝子を含む４４，８８７ｂｐのヒトゲノムインサート、ｌｏｘ２３７２－Ｕｂ－Ｎｅｏ－ｌｏｘ２３７２カセット、ＰＩ－ＳｃｅＩ部位、３’マウス相同性アーム、及びクロラムフェニコール耐性カセットが含まれており、最終クローンは、ＣＭ／カナマイシン耐性に基づいて選択された（図２）。最終クローンのさまざまな接合部を表２に示す。
【0296】
【表2】
【0297】
ＭＡＩＤ２０２７７標的化ベクターを、ヒト低親和性Ｆｃγ受容体を含むマウス胚性幹（ＥＳ）細胞にエレクトロポレーションした。低親和性Ｆｃγ受容体遺伝子座の遺伝子改変は、米国特許第８，６５８，１５４号に記載されており、図３に概略的に示されている。標的相同組換えにより、約８．４ｋｂのマウス配列（ＧＲＣｍ３８の座標ｃｈｒ７：４，３０３，９０５～４，３１２，２８０）が欠失し、ＦＣＡＲ遺伝子を含む約４４ｋｂのヒト配列が挿入された。組み込みの成功は、例えば、上記のＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌに記載されているように、対立遺伝子の改変（ＭＯＡ）アッセイによって確認された。ヒトＦＣＡＲ配列の存在及びマウスＬＲＣ配列の喪失を検出するためのＭＯＡアッセイに使用されたプライマー（フォワード（Ｆ）プライマー及びリバース（Ｒ）プライマー）及びプローブを以下の表３に示し、それらの位置を図１Ａに示す。続いて、抗体耐性カセットは、ＥＳ細胞クローンにおけるＣＲＥリコンビナーゼの一過性発現によって除去された（図１Ｂ）。
【0298】
【表3】
【0299】
ポジティブに標的化されたＥＳ細胞（上記のヒト低親和性Ｆｃγ受容体をコードする遺伝子も含む）をドナーＥＳ細胞として使用し、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法により前桑実胚（８細胞）期のマウス胚に微量注入した（例えば、ＵＳ７，５７６，２５９、ＵＳ７，６５９，４４２、ＵＳ７，２９４，７５４、及びＵＳ２００８－００７８０００Ａ１を参照、それぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ドナーＥＳ細胞を含むマウス胚をｉｎ ｖｉｔｒｏでインキュベートし、代理母に移植して完全にドナーＥＳ細胞に由来するＦ０マウスを作製した。ヒトＦＣＡＲ遺伝子（及びヒト低親和性Ｆｃγ受容体をコードする遺伝子）を有するマウスは、上記のＭＯＡアッセイを使用した遺伝子型決定によって同定された。ヒトＦＣＡＲ遺伝子に関してヘテロ接合であるマウスをホモ接合になるまで育種した。
【0300】
上記の戦略の代わりに、標的化ベクターを野生型ＥＳ細胞（内因性の低親和性Ｆｃγ受容体を含む）にエレクトロポレーションし、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法を使用してマウスを作製する。ヒトＦｃαＲを含むマウスを、ヒト低親和性ＦｃγＲを含むマウス（図３に記載の遺伝子座を有する）になるまで育種する。ヒトＦｃαＲ（及び任意に、ヒト低親和性ＦｃγＲ）を含むマウスは、当技術分野で周知の技術を使用して、ヒトまたはヒト化高親和性ＦｃγＲ、ＦｃεＲ、ＦｃＲｎ、β２Ｍを含むマウス、及びヒト化Ｉｇ重鎖及び／または軽鎖遺伝子座を含むマウスになるまで育種することも可能である。
【0301】
実施例１．２：ヒトまたはヒト化ＦｃαＲを含むマウスの遺伝子操作の表現型分析
ヒトＦＣＡＲ遺伝子及び低親和性ＦＣＧＲ遺伝子を含む上記の実施例１．１に記載のマウスをＦｃαＲ発現に関して分析した。全てのマウスは、特定の病原体のない条件で飼育及び繁殖された。マウスを屠殺し、脾臓と血液を採取した。血液は、ＥＤＴＡ（カタログ番号３６５９７３）を含むＢＤマイクロテナーチューブに収集された。脾臓からの赤血球及び血液調製物をＡＣＫ溶解緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１０４９２０１）で溶解し、続いて完全ＲＰＭＩ培地で洗浄した。
ヒトＦＣＡＲ遺伝子及び低親和性ＦＣＧＲ遺伝子を含む上記の実施例１．１に記載のマウスをＦｃαＲ発現に関して分析した。全てのマウスは、特定の病原体のない条件で飼育及び繁殖された。マウスを屠殺し、脾臓と血液を採取した。血液は、ＥＤＴＡ（カタログ番号３６５９７３）を含むＢＤマイクロテナーチューブに収集された。脾臓からの赤血球及び血液調製物をＡＣＫ溶解緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１０４９２０１）で溶解し、続いて完全ＲＰＭＩ培地で洗浄した。
【0302】
脾臓細胞と血液細胞の両方を、生存不能な細胞を排除するためにＬｉｖｅ Ｄｅａｄ Ａｑｕａ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）でインキュベートした。染色の前に、細胞を抗マウスＣＤ１６／３２（２．４Ｇ２、ＢＤ）とともに氷上で１０分間インキュベートした。次に、細胞を蛍光色素結合抗ヒトＣＤ８９（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン番号Ａ５９）及び次の抗マウス抗体；ＣＤ４５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン番号３０－Ｆ１１）、Ｂ２２０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン番号ＲＡ３－６Ｂ２）、ＣＤ１１ｃ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン番号Ｎ４１８）、Ｌｙ６Ｇ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン番号１Ａ８）、Ｌｙ６Ｃ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン番号ＨＫ１．４）、ＳｉｇｌｅｃＦ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓクローン番号Ｅ５０－２４４０）、ＮＫｐ４６（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン番号２９Ａ１．４）、ＣＤ１１ｂ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン番号Ｍ１／７０）、Ｆ４／８０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓクローン番号Ｔ４５－２３４２）、及びＮＫ１．１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン番号ＰＫ１３６）で、氷上で３０分間染色した。
【0303】
リンパ球及び骨髄細胞集団は、ＢＤ Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ａ３機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのフローサイトメトリーによって同定された。まず、生存可能な単一細胞をＣＤ４５＋でゲーティングした。次に、以下のサブセットが同定された：Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、ｃＤＣ（ＣＤ１１ｃ＋＋）、ｐＤＣ（ＣＤ１１ｃｉｎｔ、Ｌｙ６Ｃ＋ Ｂ２２０＋）、ＰＭＮ Ｌｙ６Ｇ＋ Ｌｙ６Ｃ＋）、好酸球（Ｌｙ６Ｇ－、ＳｉｇｌｅｃＦ＋ＣＤ１１ｂ＋）、マクロファージ／単球（Ｌｙ６Ｇ－、ＳｉｇｌｅｃＦ－、Ｆ４／８０＋ ＣＤ１１ｂ＋）、及びＮＫ細胞（Ｌｙ６Ｇ－、ＳｉｇｌｅｃＦ－、Ｆ４／８０－ＣＤ１１ｂ－、ＮＫ１．１＋）。ＣＤ８９（ＦｃαＲ）の発現を各細胞タイプで測定した。
【0304】
ＭＡＩＤ２０２７８カセットで遺伝子操作されたマウスは、脾臓及び血液の好中球、好酸球、一部の血液の単球／マクロファージ、及び脾臓の形質細胞様樹状細胞でｈＦｃαＲの増加を示した。脾臓の単球またはマクロファージではｈＦｃαＲ発現は観察されなかった（図４Ａ～４Ｂ）。
【0305】
参照による組み込み
本明細書で述べられるすべての刊行物、特許、及び特許出願は、各々の個々の刊行物、特許、または特許出願が参照によって組み込まれることが具体的かつ個別に示されるかのように、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる。矛盾する場合には、本出願が、本明細書におけるあらゆる定義を含めて優先する。
本明細書で述べられるすべての刊行物、特許、及び特許出願は、各々の個々の刊行物、特許、または特許出願が参照によって組み込まれることが具体的かつ個別に示されるかのように、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる。矛盾する場合には、本出願が、本明細書におけるあらゆる定義を含めて優先する。
【0306】
均等物
当業者らは、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または単なる通常の実験のみを使用して確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
当業者らは、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または単なる通常の実験のみを使用して確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【国際調査報告】