特表 2024-500628 腫瘍治療のための４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－Ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドの使用法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-10

(54)【発明の名称】腫瘍治療のための４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－Ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドの使用法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/5377 20060101AFI20231227BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20231227BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20231227BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20231227BHJP

   A61K 47/38 20060101ALI20231227BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20231227BHJP

   A61K 47/32 20060101ALI20231227BHJP

   A61K 47/20 20060101ALI20231227BHJP

   A61K 47/14 20170101ALI20231227BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20231227BHJP

   C12N 15/54 20060101ALN20231227BHJP

【ＦＩ】

A61K31/5377 ZNA

A61P35/00

A61P11/00

A61P35/04

A61K9/20

A61K47/12

A61K47/38

A61K47/26

A61K47/32

A61K47/20

A61K47/14

A61P1/00

A61P5/14

A61P15/00

A61P1/18

A61P17/00

A61P25/00

C12N15/54

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023530726

(86)(22)【出願日】2021-11-18

(85)【翻訳文提出日】2023-07-19

(86)【国際出願番号】 EP2021082120

(87)【国際公開番号】W WO2022106529

(87)【国際公開日】2022-05-27

(31)【優先権主張番号】63/116,282

(32)【優先日】2020-11-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/229,626

(32)【優先日】2021-08-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】505180070

【氏名又は名称】ヘルシン ヘルスケア ソシエテ アノニム

(71)【出願人】

【識別番号】000207827

【氏名又は名称】大鵬薬品工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ロヴァティ エマヌエラ

(72)【発明者】

【氏名】ジョルジーノ ルーベン

(72)【発明者】

【氏名】ドリア シモナ

(72)【発明者】

【氏名】ジュリアーノ クラウディオ

(72)【発明者】

【氏名】ボニファシオ アンナリーザ

(72)【発明者】

【氏名】五十嵐 美晴

(72)【発明者】

【氏名】宮崎 功

(72)【発明者】

【氏名】加藤 正徳

(72)【発明者】

【氏名】ベルナレッジ アルバート

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA36

4C076BB01

4C076CC01

4C076CC15

4C076CC16

4C076CC17

4C076CC18

4C076CC27

4C076CC30

4C076CC44

4C076DD43

4C076DD46

4C076DD57

4C076DD67

4C076EE16

4C076EE31

4C076FF70

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA10

4C086CB05

4C086GA07

4C086GA12

4C086GA13

4C086MA01

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA05

4C086MA35

4C086MA52

4C086ZA02

4C086ZA59

4C086ZA66

4C086ZA81

4C086ZA89

4C086ZB26

4C086ZC06

(57)【要約】

本発明は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を投与することを含む、ＲＥＴ遺伝子異常を有する癌の患者、例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）であり脳及び／又は軟髄膜転移もある可能性がある患者、又は別の固形腫瘍の患者を治療する組成物及び方法に関し、患者は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を有効量で投与され、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、組成物に配合することができ、単回用量又は複数回用量で経口投与することができ、並びに患者は、以前に別のＲＥＴ選択的若しくはマルチキナーゼ阻害剤を投与されたことがある、及び／又は別のＲＥＴ選択的若しくはマルチキナーゼ阻害剤に対して耐性を発生させてしまっている場合がある。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＲＥＴ遺伝子異常を有する非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）のヒト患者を治療する方法であって、前記ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、前記ヒト患者は、１日あたり約４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、方法。

【請求項2】

ＲＥＴ遺伝子異常を有する局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）のヒト患者を治療する方法であって、前記ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、前記ヒト患者は、１日あたり約４０ｍｇ～約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、方法。

【請求項3】

脳及び／又は軟髄膜転移のあるＲＥＴ遺伝子異常を有する転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）のヒト患者を治療する方法であって、前記ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、前記ヒト患者は、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを有効量で投与される、方法。

【請求項4】

前記有効量は、１日あたり約４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量である、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記脳及び／又は軟髄膜転移は、無症候性である、請求項３又は４に記載の方法。

【請求項6】

ＲＥＴ遺伝子異常を有する固形腫瘍のヒト患者を治療する方法であって、前記ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、前記ヒト患者は、１日あたり約４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、方法。

【請求項7】

ＲＥＴ遺伝子異常を有する固形腫瘍のヒト患者を治療する方法であって、前記ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、前記ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のソルベントフロント変異を含む、方法。

【請求項8】

脳及び／又は軟髄膜転移のあるＲＥＴ遺伝子異常を有する固形腫瘍のヒト患者を治療する方法であって、前記ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、前記ヒト患者は、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを有効量で投与される、方法。

【請求項9】

前記有効量は、１日あたり約４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量である、請求項７又は８に記載の方法。

【請求項10】

前記脳及び／又は軟髄膜転移は、無症候性である、請求項８又は９に記載の方法。

【請求項11】

前記ヒト患者は、１日あたり約１５０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記ヒト患者は、１日あたり約１６０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記ヒト患者は、１日あたり約３２０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

前記ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約２０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６及び１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約１２８０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び１６～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

前記ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び１６～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約２０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６、１７及び２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６～１８及び２０～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約１２８０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６～１８及び２１～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

前記ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記ヒト患者は、１日あたり３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６及び２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記ヒト患者は、１日あたり２０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６、１７、２１及び２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記ヒト患者は、１日あたり１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６～１８、及び２１～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記ヒト患者は、１日あたり１２８０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６～１９及び２１～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記ヒト患者は、１日あたり１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び１６～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

前記ヒト患者は、１日あたり約１５０ｍｇ～約５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

前記ヒト患者は、１日あたり約１６０ｍｇ～約５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１２及び３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

前記ヒト患者は、１日あたり約１５０ｍｇ又は約１６０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１１及び３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

前記組成物は、経口投与される、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記組成物は、単一錠剤として又は複数の錠剤として、経口投与される、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

各錠剤は、約１０ｍｇ又は約５０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等しい用量を含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記組成物は、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドの二塩酸塩を含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記組成物は、更に、クエン酸、結晶セルロース、ラクトース、ポリビニルＮ－ピロリドン、ラウリル硫酸ナトリウム、及び／又はベヘン酸グリセリルを含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

前記組成物は、１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ）投与される、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

前記組成物は、１日２回（ＢＩＤ）投与される、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び３４～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び３４～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約７５０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び３４～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び３４～４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０及び３４～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約３２０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１３及び３４～４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約３２０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～２５及び３４～４６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６～２５、３０及び３４～４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６～１９、２１～２４及び３４～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約７５０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６～１８、２１～２３、２８及び３４～４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６、１７、２１、２２、２７及び３４～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、請求項１～１０、１６、２１、２６及び３４～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記投薬量は、体重５０ｋｇ超の患者及び体重５０ｋｇ未満の患者で同じである、請求項１～５２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

前記組成物は、少なくとも１回の２１日治療サイクルで投与される、請求項１～５３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項55】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴ遺伝子融合、点変異、欠損変異、ＲＥＴ遺伝子のコピー数増加、それらのうちの任意の１種以上の過剰発現、及びＲＥＴ遺伝子の過剰発現のうち少なくとも１つを含む、請求項１～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴ遺伝子融合を含む、請求項１～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、ＣＣＤＣ６、ＫＩＦ５Ｂ、又はＴＲＩＭ３３をコードする遺伝子とのＲＥＴ遺伝子融合を含む、請求項１～５６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項58】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質の耐性変異を含む、請求項１～５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のソルベントフロント変異及び／又はＲＥＴタンパク質のヒンジ領域における変異を含む、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、アミノ酸残基７３０番、７３６番、７６０番、７７２番、８０４番、８０６番、８０７番、８０８番、８０９番、８１０番、及び／又は８８３番でのＲＥＴタンパク質の変異を含む、請求項１～５９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項61】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、アミノ酸残基８０４番、８０６番、８０７番、８０８番、８０９番、及び／又は８１０番でのＲＥＴタンパク質の変異を含む、請求項１～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、アミノ酸残基８１０番でのＲＥＴタンパク質の変異を含む、請求項１～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、以下：
ａ）Ｖ８０４Ｘ変異（Ｘは、バリン又はグルタミン酸以外の任意アミノ酸である）、
ｂ）Ｙ８０６Ｘ変異（Ｘは、チロシン以外の任意アミノ酸である）、
ｃ）Ａ８０７Ｘ変異（Ｘは、アラニン以外の任意アミノ酸である）、
ｄ）Ｋ８０８Ｘ変異（Ｘは、リシン以外の任意アミノ酸である）、
ｅ）Ｙ８０９Ｘ変異（Ｘは、チロシン以外の任意アミノ酸である）、及び／又は、
ｆ）Ｇ８１０Ｘ変異（Ｘは、グリシン以外の任意アミノ酸である）、
を含むＲＥＴタンパク質の変異を含む、請求項１～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、以下：
ａ）Ｌ７３０Ｑ若しくはＬ７３０Ｒ変異、
ｂ）Ｇ７３６Ａ変異、
ｃ）Ｌ７６０Ｑ変異、
ｄ）Ｌ７７２Ｍ変異、
ｅ）Ｖ８０４Ｌ若しくはＶ８０４Ｍ変異、
ｆ）Ｙ８０６Ｃ、Ｙ８０６Ｓ、Ｙ８０６Ｈ、若しくはＹ８０６Ｎ変異、
ｇ）Ｇ８１０Ｒ、Ｇ８１０Ｓ、Ｇ８１０Ｃ、Ｇ８１０Ｖ、Ｇ８１０Ｄ、若しくはＧ８１０Ａ変異、及び／又は、
ｈ）Ａ８８３Ｖ変異、
を含むＲＥＴタンパク質の変異を含む、請求項１～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、以下：
ａ）Ｖ８０４Ｌ若しくはＶ８０４Ｍ変異、
ｂ）Ｙ８０６Ｃ、Ｙ８０６Ｓ、Ｙ８０６Ｈ、若しくはＹ８０６Ｎ変異、及び／又は、
ｃ）Ｇ８１０Ｒ、Ｇ８１０Ｓ、Ｇ８１０Ｃ、Ｇ８１０Ｖ、Ｇ８１０Ｄ、若しくはＧ８１０Ａ変異、
を含むＲＥＴタンパク質の変異を含む、請求項１～６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＧ８１０Ｒ、Ｇ８１０Ｓ、Ｇ８１０Ｃ、Ｇ８１０Ｖ、Ｇ８１０Ｄ、又はＧ８１０Ａ変異を含む、請求項１～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＧ８１０Ｒ変異を含む、請求項１～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

前記癌又は前記腫瘍は、少なくとも１種のマルチキナーゼ阻害剤に対して耐性である、請求項１～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記癌又は前記腫瘍は、少なくとも１種のＲＥＴ選択的阻害剤に対して耐性である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項70】

前記癌又は前記腫瘍は、セルペルカチニブ及び／又はプラルセチニブに対して耐性である、請求項１～６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項71】

前記癌又は前記腫瘍は、セルペルカチニブ及び／又はプラルセチニブに対して耐性である細胞を含む、請求項１～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項72】

前記癌又は前記腫瘍は、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドに対して耐性ではなく、少なくとも１種の他のＲＥＴ選択的阻害剤に対して耐性である、請求項１～７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記ヒト患者は、前記癌又は前記腫瘍について前治療を以前に受けている、請求項１～７２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

治療される前記癌又は腫瘍は、前記癌又は腫瘍についての前治療の後に進行した、請求項１～７３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項75】

前記ヒト患者は、前記癌又は腫瘍についての前治療に対する不耐性を発生させた、請求項１～７４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項76】

前記ヒト患者は、以前にマルチキナーゼ阻害剤を投与された、請求項１～７５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項77】

前記ヒト患者は、以前にカボザンチニブ、バンデタニブ、レンバチニブ、及び／又はＲＸＤＸ－１０５を投与された、請求項１～７６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項78】

前記ヒト患者は、以前にＲＥＴ選択的阻害剤を投与された、請求項１～７７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項79】

前記ヒト患者は、以前にセルペルカチニブ及び／又はプラルセチニブを投与された、請求項１～７８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項80】

前記ヒト患者は、以前にＲＥＴ選択的阻害剤を投与されたことがない、請求項１～７７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項81】

前記ヒト患者は、唾液腺癌、肺癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、乳癌、膵癌、卵巣癌、皮膚癌、及び脳癌のうち少なくとも１つを有する、請求項１～８０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項82】

前記ヒト患者は、甲状腺髄様癌又は甲状腺未分化癌、転移性乳癌、及び転移性膵臓腺癌のうち少なくとも１つを有する、請求項１～８１のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願の相互参照］
本願は、２０２０年１１月２０日付で出願された米国仮出願第６３／１１６，２８２号及び２０２１年８月５日付で出願された米国仮出願第６３／２２９，６２６号の優先権の利益を主張し、それぞれの全体があらゆる目的で引用することにより本明細書の一部をなす。

【0002】

本出願は、ＨＭ０６の投与を含む、ＲＥＴ遺伝子異常を有する癌の患者を治療する組成物及び方法に関する。

【背景技術】

【0003】

受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、増殖、運動、分化、及び代謝をはじめとする様々な細胞プロセスにおいて、重要な役割を担っている。そのため、ＲＴＫシグナル伝達の調節不全は、或る種のヒト疾患、例えば癌を招く。ＲＴＫをコードする遺伝子、例えば、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２、ＭＥＴ、及びＲＥＴ（トランスフェクション中の再構成；REarranged during Transfection）の変異には様々なものが存在する。ＲＥＴは、複数の組織及び細胞型の正常な発達、成熟、及び維持に必要とされる１回膜貫通受容体チロシンキナーゼである（非特許文献１；非特許文献２）。ＲＥＴの活性化は、家族性癌及び散発性癌、例えば、甲状腺癌（乳頭／甲状腺髄様癌）及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）等の肺癌における、発癌性変異を介して起こる。ＲＥＴは、近年、とりわけ乳腺腫瘍及び膵腫瘍の進行にも関連するとされてきている（非特許文献３）。ＲＥＴ遺伝子異常は、脳転移及び／又は軟髄膜転移でも生じてきた。ＲＥＴ再構成進行性ＮＳＣＬＣ患者は、中枢神経系（ＣＮＳ）転移を有する可能性がある。

【0004】

ＲＥＴ遺伝子は、遺伝子異常、例えば、染色体再構成（ＲＥＴ遺伝子融合）、点変異、コピー数増加、過剰発現、又はリガンド誘導型活性化等により活性化された場合の発癌性ドライバーであることが発見されている。細胞増殖、遊走、及び分化につながる活性化下流経路として、ＲＡＳ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路、Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ経路、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路、ｐ３８経路、ＭＡＰＫ経路、及びタンパク質キナーゼＣ経路が挙げられる。ＲＥＴキナーゼドメイン部分は、融合において保存され、下流の細胞内キナーゼ活性を無傷で残す。ＲＥＴ遺伝子融合は、ＮＳＣＬＣ（発生率１％～２％）、甲状腺乳頭癌（ＰＴＣ）、結腸直腸癌（例えば、ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ融合）、及び乳癌（例えば、ＥＲＣ１－ＲＥＴ融合）で生じる可能性がある。ＲＥＴ遺伝子点変異は、多発性内分泌腺腫症２Ａ（ＭＥＮ２Ａ）、家族性甲状腺髄様癌（ＦＭＴＣ）、及びＭＥＮ２Ｂをはじめとする多くの遺伝性形態の甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）で生じる。散発性ＭＴＣでは、ＲＥＴ変異は、患者の最大５０％で同定される。ＲＥＴ遺伝子コピー数増加は、ＮＳＣＬＣ、乳癌、膵癌、及び神経膠芽細胞腫で起こる（非特許文献４；非特許文献３；非特許文献５）。

【0005】

ＲＥＴ遺伝子融合は、ＮＳＣＬＣの新規発癌性ドライバーである。ＮＳＣＬＣのＲＥＴ融合は、多数の症例に存在し、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ＡＬＫ、ＨＥＲ２、及びＢＲＡＦの変異とは相互排他的である。このことは、ＲＥＴ融合が、ＮＳＣＬＣにおいて独立した発癌性ドライバーであることを示唆する。これらの反復遺伝子融合は、２０１１年後半に初めて発見され、それ以降、複数の独立した研究者により確認されている（非特許文献６；非特許文献７）。融合は、例えば、Ｂａ／Ｆ３細胞及びＮＩＨ－３Ｔ３細胞で発現した場合、発癌性であり、これらの細胞は、ソラフェニブ、スニチニブ、及びバンデタニブをはじめとする様々なＲＥＴ阻害剤に対する感受性を獲得する可能性がある（非特許文献８；非特許文献９）。

【0006】

ＲＥＴ受容体チロシンキナーゼに対する活性を持つマルチキナーゼ阻害剤（ＭＫＩ）、例えば、カボザンチニブ、バンデタニブ、及びレンバチニブは、甲状腺髄様癌の患者及びＲＥＴ融合ＮＳＣＬＣの患者の少数において、限られた有効性を実証してきた（非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２）。これらＭＫＩで達成された総合臨床有用性の度合いは、異なる分子サブタイプのＮＳＣＬＣの患者における標的療法の成績に比べて低い場合がある。そのうえ、リスク／ベネフィットプロファイルは、ＶＥＧＦＲ２等の非ＲＥＴキナーゼのより強力な阻害から生じる重篤な毒性の観察により、妨害される場合がある（非特許文献４）。

【0007】

２種の選択的ＲＥＴ阻害剤、セルペルカチニブ（ＬＯＸＯ－２９２）（ＮＣＴ０３１５７１２８）及びプラルセチニブ（ＢＬＵ－６６７）（ＮＣＴ０３０３７３８５）は、２０２０年に米国ＦＤＡにより、転移性ＲＥＴ融合陽性非小細胞肺癌の成人患者の治療用として承認された（非特許文献１３；非特許文献１４）。２０１８年１２月及び２０１９年１１月、選択的ＲＥＴ阻害剤ＢＯＳ－１７２７３８及びＴＰＸ－００４６が、臨床試験に入った（それぞれ、ＮＣＴ０３７８０５１７及びＮＣＴ０４１６１３９１）。これらのＲＥＴ特異的薬物は、試料で、又はマルチキナーゼ阻害剤、例えば、カボザンチニブ、バンデタニブ、及びＲＸＤＸ－１０５に対して耐性である動物モデルで大々的に試験されたことがなかった。

【0008】

これらのＲＥＴ特異的阻害剤が、脳に転移した肺癌に対してどのくらい有効であるかについても、不明のままである。ＣＮＳ応答の期間及び脳転移出現を遅らせる効果は、依然として不明である。一般に、脳を含むＣＮＳは、ＣＮＳを取り囲む保護内皮組織である血液脳関門（ＢＢＢ）により保護されており、ＢＢＢは、高分子量の治療薬及び診断薬をＣＮＳに全身性送達する際の大きな障害である。神経障害の治療用薬物、例えば、巨大バイオ治療薬又は低分子量薬物であっても脳浸透性が低いもの等の脳浸透性は、一部には、大規模及び不透過性ＢＢＢのため、制限される。

【0009】

ＲＥＴ異常を持つ患者は、アンメットメディカルニーズの高い希少疾患を有する。新規標的療法の導入に伴う臨床的改善にも関わらず、多くの患者で最終的に再発する。進行中の患者には、限られた治療選択肢しかない。したがって、再発した患者を治療する新規作用剤が依然として必要とされている。そのうえ、進行ＮＳＣＬＣ患者におけるＲＥＴ再構成ＣＮＳ転移の頻度、応答性、及び全治療成績について得られる情報は限られている。こうした患者におけるＣＮＳ関与の頻度は、診断時で２５％であるが、生涯有病率は、ほぼ半数に達し得る。頭蓋内応答の低さが、様々なマルチキナーゼ阻害剤で治療された患者で報告されている（非特許文献１５；非特許文献１６）。

【0010】

したがって、ＣＮＳ再発を克服することができ望ましい忍容性プロファイルを持つ新規ＲＥＴ阻害剤を利用できることが求められている。強力で選択的なＲＥＴ阻害剤を利用できることは、耐性変異を持つ患者だけでなく、ＲＥＴ標的作用剤に対してナイーブな患者にとっても臨床的利益をもたらす可能性がある。高いＣＮＳ浸透性は、脳転移又は軟髄膜疾患のＮＳＣＬＣ患者において実質的な臨床的改善となる可能性もある。

【0011】

本明細書中、「ＨＭ０６」又は「ＴＡＳ０９５３／ＨＭ０６」又は「ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３」と称するＲＥＴ特異的阻害剤は、臨床開発中である。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＥＴリン酸化の強力かつ高選択的阻害剤である。前臨床モデルにおけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の抗腫瘍有効性は、この選択的ＲＥＴ阻害剤に臨床用途として治療的関心を持つことを支持する。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＥＴ阻害剤で治療されたことのない患者試料に由来する、ＲＥＴ再構成陽性肺癌細胞株の増殖を阻害した。これらの結果は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、ＲＥＴ融合を持つ細胞株の増殖の阻害について、ＲＥＴマルチキナーゼ阻害剤よりも有効であったことを示す。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を、異なるＲＥＴマルチキナーゼ化合物に対して耐性である患者試料由来の細胞株に対しても試験した。これらの結果は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、異なるＲＥＴマルチキナーゼ阻害剤に対して耐性であり、カボザンチニブ、ＲＸＤＸ－１０５、及びバンデタニブの阻害作用に対して抵抗性である細胞株に対しても、有効であることを示唆する。

【0012】

本明細書中提示される追加の前臨床データは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、肺癌の脳転移の同所性異種移植片モデルを含む固形腫瘍異種移植片に対して、阻害活性を示すことを示す。これらのデータは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が脳に入ること、及び脳においてＲＥＴ遺伝子異常を有する腫瘍に対して有効であることを示す。

【0013】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、非ＲＥＴキナーゼの阻害から生じる有害反応を潜在的に持たずに臨床有用性を提供する可能性がある。例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、脳転移及び／又は軟髄膜疾患のＮＳＣＬＣ患者に改善された治療及び疾患管理の選択肢を提供することができる。さらに、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、他のＲＥＴキナーゼ又はマルチキナーゼ阻害剤に対して耐性である患者（例えば、患者は、その他の医薬に対して不耐性を進行させている又は発生させている）にとって有益である可能性がある。ＲＥＴ遺伝子異常を有する腫瘍患者の数が限られていること及びアンメットメディカルニーズの高い疾患の希少性を鑑みると、患者は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を用いた治療の恩恵を受ける可能性がある。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0014】

【非特許文献1】Airaksinen MS et al., Nat Rev Neurosci. 2002, 3(5):383-394

【非特許文献2】Alberti L et al., J Cell Physiol. 2003, 195(2):168-186

【非特許文献3】Mulligan LM, Nat Rev Cancer. 2014, 14(3):173-86

【非特許文献4】Ferrara R et al., J Thorac Oncol. 2017, 13(1):27-45

【非特許文献5】Mulligan LM, Front Physiol. 2019, 9:1873

【非特許文献6】Ju YS et al., Genome Res. 2012, 22(3):436-45

【非特許文献7】Suehara Y et al., Clin Cancer Res. 2012, 18(24):6599-608

【非特許文献8】Lipson D et al., Nat Med. 2012, 18(3):382-4

【非特許文献9】Takeuchi K et al., Nat Med. 2012, 18(3):378-81

【非特許文献10】Drilon A et al., Cancer Discov. 2013, 3(6):630-5

【非特許文献11】Drilon A et al., Lancet Oncol. 2016, 17(12):1653-60

【非特許文献12】Drilon A et al., Cancer Discov. 2019, 9(3):384-95

【非特許文献13】Wirth L et al., Ann Oncol. 2019, 30(Suppl 5):v933

【非特許文献14】Drilon A et al., J Thorac Oncol. 2019, 14(10): S6-S7

【非特許文献15】Drilon AE et al., J Clin Oncol. 2017, 35(15_Suppl):9069

【非特許文献16】Gautschi O et al., J Clin Oncol. 2017, 35(13):1403-10

【発明の概要】

【0015】

本発明によれば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投与を含む、ＲＥＴ遺伝子異常を有する癌の患者を治療する組成物及び方法が提供される。

【0016】

本開示は、ＲＥＴ遺伝子異常を有する非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）のヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、ヒト患者は、１日あたり約４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、方法を提供する。

【0017】

本開示はまた、ＲＥＴ遺伝子異常を有する局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）のヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、ヒト患者は、１日あたり約４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、方法を提供する。

【0018】

本開示は更にまた、脳及び／又は軟髄膜転移のあるＲＥＴ遺伝子異常を有する転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）のヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、ヒト患者は、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを有効量で投与される、方法を提供する。

【0019】

本開示は、ＲＥＴ遺伝子異常を有する固形腫瘍のヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、ヒト患者は、１日あたり約４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される、方法を提供する。

【0020】

本開示はまた、ＲＥＴ遺伝子異常を有する固形腫瘍のヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のソルベントフロント変異を含む、方法を提供する。

【0021】

本開示はまた、脳及び／又は軟髄膜転移のあるＲＥＴ遺伝子異常を有する固形腫瘍のヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを含む組成物を投与することを含み、ヒト患者は、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドを有効量で投与される、方法を提供する。

【0022】

幾つかの実施の形態において、有効量は、１日あたり約４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量である。

【0023】

幾つかの実施の形態において、脳及び／又は軟髄膜転移は、無症候性である。

【0024】

幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約１５０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約１６０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約３２０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。

【0025】

幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約２０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約１２８０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約４８０ｍｇ～約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約２０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約１２８０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約６４０ｍｇ～約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約３０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約２０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約１２８０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。

【0026】

幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約１５０ｍｇ～約５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約１６０ｍｇ～約５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日あたり約１５０ｍｇ又は約１６０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。

【0027】

幾つかの実施の形態において、組成物は、経口投与される。幾つかの実施の形態において、組成物は、単一錠剤として又は複数の錠剤として、経口投与される。幾つかの実施の形態において、各錠剤は、約１０ｍｇ又は約５０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等しい用量を含む。

【0028】

幾つかの実施の形態において、組成物は、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドの二塩酸塩を含む。

【0029】

幾つかの実施の形態において、組成物は、更に、クエン酸、結晶セルロース、ラクトース、ポリビニルＮ－ピロリドン、ラウリル硫酸ナトリウム、及び／又はベヘン酸グリセリルを含む。

【0030】

幾つかの実施の形態において、組成物は、１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ）投与される。幾つかの実施の形態において、組成物は、１日２回（ＢＩＤ）投与される。

【0031】

幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約７５０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１６０ｍｇ～約３２０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。

【0032】

幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約３２０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約６４０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約７５０ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１０００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、１日２回（ＢＩＤ）、約１５００ｍｇの４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド遊離塩基に等価な投薬量を投与される。

【0033】

幾つかの実施の形態において、投薬量は、体重５０ｋｇ超の患者及び体重５０ｋｇ未満の患者で同じである。

【0034】

幾つかの実施の形態において、組成物は、少なくとも１回の２１日治療サイクルで投与される。

【0035】

幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴ遺伝子融合、点変異、欠損変異、ＲＥＴ遺伝子のコピー数増加、それらのうちの任意の１種以上の過剰発現、及びＲＥＴ遺伝子の過剰発現のうち少なくとも１つを含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴ遺伝子融合を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＣＣＤＣ６、ＫＩＦ５Ｂ、又はＴＲＩＭ３３とのＲＥＴ遺伝子融合を含む。

【0036】

幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質の耐性変異を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のソルベントフロント変異及び／又はＲＥＴタンパク質のヒンジ領域における変異を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、アミノ酸残基７３０番、７３６番、７６０番、７７２番、８０４番、８０６番、８０７番、８０８番、８０９番、８１０番、及び／又は８８３番でのＲＥＴタンパク質の変異を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、アミノ酸残基８０４番、８０６番、８０７番、８０８番、８０９番、及び／又は８１０番でのＲＥＴタンパク質の変異を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、アミノ酸残基８１０番でのＲＥＴタンパク質の変異を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、以下：ａ）Ｖ８０４Ｘ変異（Ｘは、バリン又はグルタミン酸以外の任意アミノ酸である）、ｂ）Ｙ８０６Ｘ変異（Ｘは、チロシン以外の任意アミノ酸である）、ｃ）Ａ８０７Ｘ変異（Ｘは、アラニン以外の任意アミノ酸である）、ｄ）Ｋ８０８Ｘ変異（Ｘは、アラニン以外の任意アミノ酸である）、ｅ）Ｙ８０９Ｘ変異（Ｘは、チロシン以外の任意アミノ酸である）、及び／又はｆ）Ｇ８１０Ｘ変異（Ｘは、グリシン以外の任意アミノ酸である）を含むＲＥＴタンパク質の変異を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、以下：ａ）Ｌ７３０Ｑ若しくはＬ７３０Ｒ変異、ｂ）Ｇ７３６Ａ変異、ｃ）Ｌ７６０Ｑ変異、ｄ）Ｌ７７２Ｍ変異、ｅ）Ｖ８０４Ｌ若しくはＶ８０４Ｍ変異、ｆ）Ｙ８０６Ｃ、Ｙ８０６Ｓ、Ｙ８０６Ｈ、若しくはＹ８０６Ｎ変異、ｇ）Ｇ８１０Ｒ、Ｇ８１０Ｓ、Ｇ８１０Ｃ、Ｇ８１０Ｖ、Ｇ８１０Ｄ、若しくはＧ８１０Ａ、及び／又はＡ８８３Ｖ変異を含むＲＥＴタンパク質の変異を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、以下：ａ）Ｖ８０４Ｌ若しくはＶ８０４Ｍ変異、ｂ）Ｙ８０６Ｃ、Ｙ８０６Ｓ、Ｙ８０６Ｈ、若しくはＹ８０６Ｎ変異、及び／又はｃ）Ｇ８１０Ｒ、Ｇ８１０Ｓ、Ｇ８１０Ｃ、Ｇ８１０Ｖ、Ｇ８１０Ｄ、若しくはＧ８１０Ａ変異を含むＲＥＴタンパク質の変異を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＧ８１０Ｒ、Ｇ８１０Ｓ、Ｇ８１０Ｃ、Ｇ８１０Ｖ、Ｇ８１０Ｄ、又はＧ８１０Ａ変異を含む。幾つかの実施の形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＧ８１０Ｒ変異を含む。

【0037】

幾つかの実施の形態において、癌又は腫瘍は、少なくとも１種のマルチキナーゼ阻害剤に対して耐性である。幾つかの実施の形態において、癌又は腫瘍は、少なくとも１種のＲＥＴ選択的阻害剤に対して耐性である。幾つかの実施の形態において、癌又は腫瘍は、４－アミノ－Ｎ－［４－（メトキシメチル）フェニル］－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドに対して耐性ではなく、少なくとも１種の他のＲＥＴ選択的阻害剤に対して耐性である。幾つかの実施の形態において、癌又は腫瘍は、セルペルカチニブ及び／又はプラルセチニブに対して耐性である。幾つかの実施の形態において、癌又は腫瘍は、セルペルカチニブ及び／又はプラルセチニブに対して耐性である細胞を含む。

【0038】

幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、癌又は腫瘍について前治療を以前に受けている。幾つかの実施の形態において、治療される癌又は腫瘍は、癌又は腫瘍についての前治療の後に進行した。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、癌又は腫瘍についての前治療に対する不耐性を発生させた。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、以前にマルチキナーゼ阻害剤を投与された。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、以前にカボザンチニブ、バンデタニブ、レンバチニブ、及び／又はＲＸＤＸ－１０５を投与された。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、以前にＲＥＴ選択的阻害剤を投与された。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、以前にセルペルカチニブ及び／又はプラルセチニブを投与された。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、以前にＲＥＴ選択的阻害剤を投与されたことがない。

【0039】

幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、唾液腺癌、肺癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、乳癌、膵癌、卵巣癌、皮膚癌、及び脳腫瘍のうち少なくとも１つを有する。幾つかの実施の形態において、ヒト患者は、甲状腺髄様癌又は甲状腺未分化癌、転移性乳癌、及び転移性膵臓腺癌のうち少なくとも１つを有する。

【0040】

更なる目的及び利点は、一部は、以下に続く説明において記載されることになり、一部は、説明から理解されることになる、すなわち実践により学ぶことができる。目的及び利点は、添付の特許請求の範囲において特に指摘される要素及び組合せにより、理解され及び成し遂げられることになる。

【0041】

当然のことながら、上記の一般的な説明及び以下の詳細な説明は、例示及び説明にすぎず、特許請求の範囲を制限しない。

【0042】

添付の図面は、この明細書に組み込まれてこの明細書の一部を構成するものであり、１つ（複数）の実施形態を解説し、及び説明と一緒になって、本明細書中記載される原則を説明する働きをする。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1A】ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ Ｌｕｃ融合陽性脳転移モデルにおけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を示す図である。図１Ａは、５０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで投与したＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の抗腫瘍有効性を、ビークル対照と比較して示す。

【図1B】図１Ｂは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３で処置したＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ Ｌｕｃ融合脳転移マウスの体重変化パーセントを、ビークル対照マウスと比較して示す。

【図1C】図１Ｃは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３群の生存率がビークル対照群より高いことを示す。

【図1D】図１Ｄは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３処置したマウス脳のＩＶＩＳ画像及び病態を、対照と比較して示す。

【図2】バンデタニブ治療抵抗性マウスモデルのＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ融合腫瘍体積に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の効果を、連続バンデタニブ治療と比較して示す図である。

【図3A】ＲＥＴ融合陽性細胞株の増殖阻害について、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を、３種のＲＥＴマルチキナーゼ阻害剤、カボザンチニブ、ＲＸＤＸ－１０５、及びバンデタニブと比較して示す図である。図３Ａは、抗癌療法で治療されたことのない患者から得られた試料に由来する治療ナイーブ細胞株（ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ）での処置を示す。

【図3B】図３Ｂは、ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ融合細胞株での処置を示す。

【図3C】図３Ｃは、空対照プラスミドを発現する同じ細胞株の同質遺伝子カウンターパートに対する効果を示す。

【図3D】図３Ｄは、ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合細胞株での処置を示す。

【図3E】図３Ｅは、カボザンチニブ耐性であった患者から得られた試料に由来する細胞株（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）での処置を示す。

【図3F】図３Ｆは、ＲＸＤＸ－１０５耐性の患者から得られた細胞株での処置を示す。

【図4A】３Ｔ３－ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ異種移植片腫瘍の増殖に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を示す図である。図４Ａは、処置の開始から終了までの個別腫瘍それぞれの体積変化を示す。結果は、各時点での個別腫瘍５つの平均±ＳＥである。

【図4B】図４Ｂは、腫瘍それぞれの体積変化を示す。^＊ｐ＜０．０５、ビークル処置群との比較による。

【図4C】図４Ｃは、時間の関数としての動物体重である。結果は、１群あたり動物５匹の平均±ＳＥである。

【図5A】異種移植片腫瘍（ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合）の増殖に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を示す図である。図５Ａは、時間の関数としての腫瘍体積を示す。結果は、各時点での個別腫瘍５つの平均±ＳＥである。

【図5B】図５Ｂは、処置の開始から終了までの個別腫瘍それぞれの体積変化を示す。全ての群で、ビークル処置群に比べて有意な平均腫瘍体積の減少があった（ｐ＜０．０５）。

【図5C】図５Ｃは、時間の関数としての動物体重を示す。結果は、１群あたり動物５匹の平均±ＳＥである。処置開始後全ての時点で、バンデタニブ処置群の動物体重に有意な減少があった（ｐ＜０．０５）。

【図6A】もはやカボザンチニブに反応しなくなった患者から得られた腫瘍試料に由来するＰＤＸ腫瘍（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）の増殖に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を示す図である。図６Ａは、時間の関数としての腫瘍体積を示す。結果は、各時点での個別腫瘍５つの平均±ＳＥである。

【図6B】図６Ｂは、処置の開始から終了までの個別腫瘍それぞれの体積変化を示す。全ての群で、ビークル処置群に比べて有意な腫瘍体積の減少があった（ｐ＜０．０５）。

【図6C】図６Ｃは、時間の関数としての動物体重を示す。結果は、１群あたり動物８匹の平均±ＳＥである。

【図7A】ＲＸＤＸ－１０５治療に耐性であった患者に由来するＰＤＸ腫瘍（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）の増殖に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を示す図である。図７Ａは、時間の関数としての腫瘍体積を示す。結果は、各時点での個別腫瘍５つの平均±ＳＥである。

【図7B】図７Ｂは、処置の開始から終了までの個別腫瘍それぞれの体積変化を示す。全ての群で、ビークル処置群に比べて有意な腫瘍体積の減少があった（ｐ＜０．０５）。

【図7C】図７Ｃは、時間の関数としての動物体重を示す。結果は、１群あたり動物５匹の平均±ＳＥである。

【図8A】ＲＸＤＸ－１０５に対する反応性が乏しかった患者に由来するＰＤＸ腫瘍（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）の増殖に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を示す図である。図８Ａは、時間の関数としての腫瘍体積を示す。結果は、各時点での個別腫瘍５つの平均±ＳＥである。全ての群で、ビークル処置群に比べて有意な腫瘍体積の減少があった（ｐ＜０．０５）。

【図8B】図８Ｂは、処置の開始から終了までの個別腫瘍それぞれの体積変化を示す。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を１００ｍｇ／ｋｇでＱＤ群の１つの腫瘍が、２０．７％だけ増加した。

【図8C】図８Ｃは、時間の関数としての動物体重を示す。結果は、１群あたり動物５匹の平均±ＳＥである。

【図9A】マウスの脳に移植した腫瘍（ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合）の増殖に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を示す図である。図９Ａは、処置の開始から終了までの生物発光シグナルの画像を示す。

【図9B】図９Ｂは、発光の定量（左側）及び動物体重測定（右側）を示す。ビークル処置群に比べて有意な腫瘍体積の減少があった（ｐ＜０．０５）。結果は、動物５匹（ビークル）又は４匹（ＨＭ０６）の平均±ＳＥを表す。

【図9C】図９Ｃは、試験全体を通じた担癌マウスの生存率を示すカプランマイヤープロットを示す。

【図10A】マウスの脳に移植した腫瘍（ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合）の増殖に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、バンデタニブ、及びＬＯＸＯ－２９２の有効性を示す図である。図１０Ａは、細胞移植から３３日後及び９３日後の生物発光の代表的な画像を示す。

【図10B】図１０Ｂは、発光シグナルの定量を示す。結果は、１群あたり動物６匹の平均±ＳＥである。

【図10C】図１０Ｃは、試験全体を通じた担癌マウスの生存率を示すカプランマイヤープロットを示す。ＨＭ０６処置群とＬＯＸＯ－２９２処置群を比較するため調整したｐ値を、グラフの下に示す。

【図10D】図１０Ｄは、処置時間にわたる動物体重を示す。

【図11A】ラットにおけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の薬物動態プロファイルを示す図である。図１１Ａは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、及び５０ｍｇ／ｋｇで単回経口投与した後の経時的血漿中濃度を示す。

【図11B】図１１Ｂは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を３ｍｇ／ｋｇのＩＶで単回投与した後の経時的血漿中濃度を示す。

【図11C】図１１Ｃは、自由行動する成人オスＨａｎ（商標）Ｗｉｓｔａｒラットに１０ｍｇ／ｋｇで経口投与した後の、ＰＦＣ、ＣＳＦ、及び血漿（合計及び遊離画分）中のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の薬物動態プロファイルを示す。遊離血漿濃度対遊離脳濃度比が１：１であることは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が血液脳関門を自由に横断することを示す。

【図12A】野生型ＲＥＴと、ＴＡＳ化合物１、ＢＬＵ－６６７、及びＬＯＸＯ－２９２との複合体の、ＲＥＴアミノ酸残基８０６番～８１０番領域のＸ線結晶構造を示す図である。図１２Ａは、共結晶構造データに基づき、ＢＬＵ－６６７及びＬＯＸＯ－２９２がＲＥＴの同じポケット（ポケットＢ）に結合するのに対し、ＴＡＳ化合物１は、ＲＥＴの異なるポケット（ポケットＡ）に異なる結合様式で結合することを示す。

【図12B】図１２Ｂは、ＲＥＴと、ＴＡＳ化合物１、ＢＬＵ－６６７、及びＬＯＸＯ－２９２との共結晶複合体を示す。

【図12C】図１２Ｃは、ＲＥＴとＴＡＳ化合物１との共結晶複合体を示す。

【図13A】Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}細胞担持ヌードマウスモデルにおけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＬＯＸＯ－２９２、及びＢＬＵ－６６７の効果を示す図である。図１３Ａは、腫瘍体積に対する効果を示し、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＬＯＸＯ－２９２、及びＢＬＵ－６６７はそれぞれ、１日２回、用量１０ｍｇ／ｋｇで投与される。

【図13B】図１３Ｂは、１日２回、用量３０ｍｇ／ｋｇでの効果を示す。

【図13C】図１３Ｃは、Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}細胞担持ヌードマウスにおける処置期間中の体重変化を示す。

【図14A】Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}細胞担持ヌードマウスモデルにおけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＬＯＸＯ－２９２、及びＢＬＵ－６６７の効果を示す図である。図１４Ａは、腫瘍体積に対する効果を示し、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、１日２回、用量５０ｍｇ／ｋｇで投与され、ＬＯＸＯ－２９２及びＢＬＵ－６６７はそれぞれ、１日２回、用量３０ｍｇ／ｋｇで投与される。

【図14B】図１４Ｂは、Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}細胞担持ヌードマウスにおける処置期間中の体重変化を示す。

【図15A】ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＢＬＵ－６６７、及びＬＯＸＯ－２９２の投与から１時間後のＢａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}腫瘍におけるＲＥＴのリン酸化を示す図である。Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}担持マウスに、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、若しくは５０ｍｇ／ｋｇで、又はＬＯＸＯ２９２及びＢＬＵ６６７を１０ｍｇ／ｋｇ若しくは３０ｍｇ／ｋｇで、それぞれ１回経口投与した。投薬１時間後、腫瘍を収集し、溶解させた。細胞溶解液を免疫ブロットして、表示されるタンパク質を検出した。

【図15B】ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＢＬＵ－６６７、及びＬＯＸＯ－２９２の投与から１時間後のＢａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}腫瘍におけるＲＥＴのリン酸化を示す図である。Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}担持マウスに、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、若しくは５０ｍｇ／ｋｇで、又はＬＯＸＯ２９２及びＢＬＵ６６７を１０ｍｇ／ｋｇ若しくは３０ｍｇ／ｋｇで、それぞれ１回経口投与した。投薬１時間後、腫瘍を収集し、溶解させた。細胞溶解液を免疫ブロットして、表示されるタンパク質を検出した。

【発明を実施するための形態】

【0044】

特定配列の記載
表１に、本明細書中参照される特定配列の一覧を提示する。

【0045】

【表1】

【0046】

特定実施形態の記載
本明細書中使用される場合、「ＴＡＳ０９５３／ＨＭ０６」、又は「ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３」、又は「ＨＭ０６」は、同義で、特に記載がない限り、遊離塩基形の４－アミノ－Ｎ－（４－（メトキシメチル）フェニル）－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミド、並びにその任意の塩形を指し、塩形には、二塩酸塩が含まれる。４－アミノ－Ｎ－（４－（メトキシメチル）フェニル）－７－（１－メチルシクロプロピル）－６－（３－モルホリノプロパ－１－イン－１－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボキサミドの二塩酸塩は、同義で、「ＴＡＳ０９５３－０１／ＨＭ０６－０１」又は「ＨＭ０６－０１」又は「ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１」とも称する。遊離塩基形のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の分子式は、Ｃ２６Ｈ３０Ｎ６Ｏ３であり、分子量は４７４．５７である。遊離塩基の構造式は、以下である：

【化1】

【0047】

ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１の分子式は、Ｃ２６Ｈ３２Ｏ３Ｎ６Ｃｌ２であり、分子量は５４７．５４である。二塩酸塩の化学構造は、以下である：

【化2】

【0048】

幾つかの実施形態において、遊離塩基形が、医薬品有効成分（ＡＰＩ）である。幾つかの実施形態において、二塩酸塩が、医薬品有効成分（ＡＰＩ）である。幾つかの実施形態において、ＡＰＩは、白色～オフホワイト色固体である。幾つかの実施形態において、ＡＰＩは、水に自由に溶解する。

【0049】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を含む組成物の剤形は、経口形でも非経口形でも任意のものが可能である。そのような製剤の形としては特に限定されず、それらの例として、錠剤、コーティング錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、及び乳剤等の経口組成物、注射剤、坐剤、及び吸入剤等の非経口組成物が挙げられる。注射剤は、単独で又は一般的なアジュバント、例えばグルコース又はアミノ酸との混合物として静脈内投与することができ、又は必要に応じて、単独で、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、若しくは腹腔内投与することができる。坐剤は、直腸内投与される。

【0050】

幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、二塩酸塩（ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１）として調製され、錠剤に製剤化される。幾つかの実施形態において、錠剤は、経口投与用である。幾つかの実施形態において、錠剤は、約１０ｍｇ／単位若しくは約５０ｍｇ／単位（遊離塩基として表す）の用量で、又は明細書中記載される別の投薬量で製剤化される。幾つかの実施形態において、錠剤は、単一錠剤として又は複数の錠剤として経口投与される。

【0051】

幾つかの実施形態において、組成物は、公定の広く使用される賦形剤を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、少なくとも１種の賦形剤を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、少なくとも１種の抗酸化剤、少なくとも１種の充填剤、少なくとも１種の崩壊剤、少なくとも１種の界面活性剤、及び／又は少なくとも１種の滑沢剤を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、クエン酸、結晶セルロース（例えば、Ａｖｉｃｅｌ ＰＨ２００ ＬＭ）、ラクトース（例えば、ラクトース３１６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏ）、ポリビニルＮ－ピロリドン（例えば、クロスポビドン）、ラウリル硫酸ナトリウム、及び／又はベヘン酸グリセリル（例えば、Ｃｏｍｐｒｉｔｏｌ ＡＴＯ ８８８）を含む。

【0052】

一般に、ヒト患者には、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を有効薬量で含む組成物が投与される。幾つかの実施形態において、ヒト患者には、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約４０ｍｇ～約３０００ｍｇの範囲に等価なＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量でＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を含む組成物が投与される。幾つかの実施形態において、ヒト患者には、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約４０ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲に等価なＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量でＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を含む組成物が投与される。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日１回（ＱＤ）又は１日複数回（例えば、ＢＩＤ又はＴＩＤ）投与される。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約２０ｍｇ～約１５００ｍｇの範囲で１日２回（ＢＩＤ）に等価である。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約２０ｍｇ～約５００ｍｇの範囲で１日２回（ＢＩＤ））に等価である。

【0053】

幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約１５０ｍｇ～約６４０ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約７５ｍｇ～約３２０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約１６０ｍｇ～約６４０ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約８０ｍｇ～約３２０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約１５０ｍｇ～約５００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約７５ｍｇ～約２５０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約１６０ｍｇ～約５００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約８０ｍｇ～約２５０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約３２０ｍｇ～約６４０ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約１６０ｍｇ～約３２０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約４８０ｍｇ～約６４０ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約２４０ｍｇ～約３２０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約４８０ｍｇ～約３０００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約２４０ｍｇ～約１５００ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約４８０ｍｇ～約２０００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約２４０ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約４８０ｍｇ～約１５００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約２４０ｍｇ～約７５０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約４８０ｍｇ～約１２８０ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約２４０ｍｇ～約６４０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約４８０ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約２４０ｍｇ～約５００ｍｇの範囲で１日２回）。

【0054】

幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約６４０ｍｇ～約３０００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約３２０ｍｇ～約１５００ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約６４０ｍｇ～約２０００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約３２０ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約６４０ｍｇ～約１５００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約３２０ｍｇ～約７５０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約６４０ｍｇ～約１２８０ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約３２０ｍｇ～約６４０ｍｇの範囲で１日２回）。幾つかの実施形態において、投与されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたりＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基約６４０ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲に等価である（例えば、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離塩基を約３２０ｍｇ～約５００ｍｇの範囲で１日２回）。

【0055】

幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約４０ｍｇ（例えば、約２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約６０ｍｇ（例えば、約３０ｍｇを１日２回）、１日あたり約８０ｍｇ（例えば、約４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１００ｍｇ（例えば、約５０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１２０ｍｇ（例えば、約６０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１４０ｍｇ（例えば、約７０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１６０ｍｇ（例えば、約８０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１８０ｍｇ（例えば、約９０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２００ｍｇ（例えば、約１００ｍｇを１日２回）、１日あたり約２２０ｍｇ（例えば、約１１０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２４０ｍｇ（例えば、約１２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２６０ｍｇ（例えば、約１３０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２８０ｍｇ（例えば、約１４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３００ｍｇ（例えば、約１５０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３２０ｍｇ（例えば、約１６０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３４０ｍｇ（例えば、約１７０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３６０ｍｇ（例えば、約１８０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３８０ｍｇ（例えば、約１９０ｍｇを１日２回）、１日あたり約４００ｍｇ（例えば、約２００ｍｇを１日２回）、１日あたり約４２０ｍｇ（例えば、約２１０ｍｇを１日２回）、１日あたり約４４０ｍｇ（例えば、約２２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約４６０ｍｇ（例えば、約２３０ｍｇを１日２回）、１日あたり約４８０ｍｇ（例えば、約２４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約５００ｍｇ（例えば、約２５０ｍｇを１日２回）、１日あたり約７５０ｍｇ（例えば、約３７５ｍｇを１日２回）、１日あたり約１０００ｍｇ（例えば、約５００ｍｇを１日２回）、１日あたり約１２８０ｍｇ（例えば、約６４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１５００ｍｇ（例えば、約７５０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２０００ｍｇ（例えば、約１０００ｍｇを１日２回）、又は１日あたり約３０００ｍｇ（例えば、約１５００ｍｇを１日２回）を含む。

【0056】

幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約４０ｍｇ以上（例えば、約２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約６０ｍｇ以上（例えば、約３０ｍｇを１日２回）、１日あたり約８０ｍｇ以上（例えば、約４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１００ｍｇ以上（例えば、約５０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１２０ｍｇ以上（例えば、約６０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１４０ｍｇ以上（例えば、約７０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１６０ｍｇ以上（例えば、約８０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１８０ｍｇ以上（例えば、約９０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２００ｍｇ以上（例えば、約１００ｍｇを１日２回）、１日あたり約２２０ｍｇ以上（例えば、約１１０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２４０ｍｇ以上（例えば、約１２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２６０ｍｇ以上（例えば、約１３０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２８０ｍｇ以上（例えば、約１４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３００ｍｇ以上（例えば、約１５０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３２０ｍｇ以上（例えば、約１６０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３４０ｍｇ以上（例えば、約１７０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３６０ｍｇ以上（例えば、約１８０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３８０ｍｇ以上（例えば、約１９０ｍｇを１日２回）、１日あたり約４００ｍｇ以上（例えば、約２００ｍｇを１日２回）、１日あたり約４２０ｍｇ以上（例えば、約２１０ｍｇを１日２回）、１日あたり約４４０ｍｇ以上（例えば、約２２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約４６０ｍｇ以上（例えば、約２３０ｍｇを１日２回）、１日あたり約４８０ｍｇ以上（例えば、約２４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約５００ｍｇ以上（例えば、約２５０ｍｇを１日２回）、１日あたり約６４０ｍｇ以上（例えば、約３２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約７５０ｍｇ以上（例えば、約３７５ｍｇを１日２回）、１日あたり約１０００ｍｇ以上（例えば、約５００ｍｇを１日２回）、１日あたり約１２８０ｍｇ以上（例えば、約６４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１５００ｍｇ以上（例えば、約７５０ｍｇを１日２回）、１日あたり２０００ｍｇ以上（例えば、約２０００ｍｇを１日２回）、又は１日あたり約３０００ｍｇ以上（例えば、約１５００ｍｇを１日２回）である。

【0057】

幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約６４０ｍｇ以上（例えば、約３２０ｍｇを１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約１０００ｍｇ以上（例えば、約５００ｍｇを１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約１２８０ｍｇ以上（例えば、約６４０ｍｇを１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約１５００ｍｇ以上（例えば、約７５０ｍｇを１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約２０００ｍｇ以上（例えば、約１０００ｍｇを１日２回）である。

【0058】

幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約３０００ｍｇ以下（例えば、約１５００ｍｇ以下を１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約２０００ｍｇ以下（例えば、約１０００ｍｇ以下を１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約１５００ｍｇ以下（例えば、約７５０ｍｇ以下を１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約１２８０ｍｇ以下（例えば、約６４０ｍｇ以下を１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約１０００ｍｇ以下（例えば、約５００ｍｇ以下を１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約６４０ｍｇ以下（例えば、約３２０ｍｇ以下を１日２回）である。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約４００ｍｇ以下（例えば、約２００ｍｇ以下を１日２回）である。

【0059】

幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量（遊離塩基に換算して表す）は、１日あたり約１５０ｍｇである（例えば、約７５ｍｇを１日２回）。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約１６０ｍｇである（例えば、約８０ｍｇを１日２回）。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約３２０ｍｇである（例えば、約１６０ｍｇを１日２回）。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約６４０ｍｇである（例えば、約３２０ｍｇを１日２回）。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約１０００ｍｇである（例えば、約５００ｍｇを１日２回）。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約１２８０ｍｇである（例えば、約６４０ｍｇを１日２回）。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約１５００ｍｇである（例えば、約７５０ｍｇを１日２回）。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約２０００ｍｇである（例えば、約１０００ｍｇを１日２回）。幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約３０００ｍｇである（例えば、約１５００ｍｇを１日２回）。幾つかの実施形態において、用量変更が治療中に発生する場合がある。

【0060】

幾つかの実施形態において、ヒト患者は、年齢１２歳以上である。幾つかの実施形態において、年齢１２歳以上のヒト患者は、体重が５０ｋｇ未満である。幾つかの実施形態において、投与される投薬量は、体重５０ｋｇ超の患者についても体重５０ｋｇ未満の患者についても同じである。

【0061】

幾つかの実施形態において、体重５０ｋｇ未満の患者について、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約３０００ｍｇ以下（例えば、１５００ｍｇを１日２回）、１日あたり約２０００ｍｇ以下（例えば、１０００ｍｇを１日２回）、１日あたり約１５００ｍｇ以下（例えば、７５０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１２８０ｍｇ以下（例えば、６４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１０００ｍｇ以下（例えば、５００ｍｇを１日２回）、１日あたり約６４０ｍｇ以下（例えば、３２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３２０ｍｇ以下（例えば、１６０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１６０ｍｇ以下（例えば、８０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１２０ｍｇ以下（例えば、６０ｍｇを１日２回）、１日あたり約８０ｍｇ以下（例えば、４０ｍｇを１日２回）、又は約４０ｍｇ以下を１日１回が可能である。体重５０ｋｇ超の患者について、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の投薬量は、１日あたり約３０００ｍｇ以下（例えば、１５００ｍｇを１日２回）、１日あたり約２０００ｍｇ以下（例えば、１０００ｍｇを１日２回）、１日あたり約１５００ｍｇ以下（例えば、７５０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１２８０ｍｇ以下（例えば、６４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１０００ｍｇ以下（例えば、５００ｍｇを１日２回）、約６４０ｍｇ以下を１日１回（例えば、３２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約４８０ｍｇ以下（例えば、２４０ｍｇを１日２回）、１日あたり約３２０ｍｇ以下（例えば、１６０ｍｇを１日２回）、１日あたり約２４０ｍｇ以下（例えば、１２０ｍｇを１日２回）、１日あたり約１６０ｍｇ以下（例えば、８０ｍｇを１日２回）、又は１日あたり約８０ｍｇ以下（例えば、４０ｍｇを１日２回）が可能である。幾つかの実施形態において、用量変更が治療中に発生する場合がある。

【0062】

幾つかの実施形態において、ヒト患者は、唾液腺癌、肺癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、乳癌、膵癌、卵巣癌、甲状腺癌、皮膚癌、脳癌を有する、又はそれらの癌であると診断されている。実施形態において、ヒト患者は、甲状腺髄様癌若しくは甲状腺未分化癌、転移性乳癌、又は転移性膵臓腺癌を有する、又はそれらの癌であると診断されている。幾つかの実施形態において、ヒト患者は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する、又はその癌であると診断されている。ＮＳＣＬＣの例として、腺癌及び大細胞癌（非扁平上皮癌）、並びに扁平上皮癌が挙げられる。幾つかの実施形態において、ヒト患者は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣを有する、又はそれらの癌であると診断されている。

【0063】

幾つかの実施形態において、ヒト患者の原発腫瘍（複数の場合もある）は、中枢神経系（ＣＮＳ）に転移してしまうことが可能である。例えば、ヒト患者は、原発腫瘍及びＣＮＳ転移を有する、又はそれらであると診断されている可能性がある。幾つかの実施形態において、ヒトは、脳及び／又は軟髄膜転移を伴う転移性ＮＳＣＬＣを有する、又はそのような転移性ＮＳＣＬＣであると診断されている可能性がある。

【0064】

本明細書中使用される場合、「脳及び／又は軟髄膜転移」は、脳転移又は軟髄膜疾患とも称し、無症候性疾患及び症候性疾患を含み、測定可能であることも測定不可であることもあり得る。

【0065】

本明細書中使用される場合、特に記載がない限り、「ＲＥＴ」は、ＲＥＴタンパク質をコードする遺伝子及び／又はＲＥＴタンパク質、又はＲＥＴ遺伝子若しくはタンパク質の変異、多形、若しくは一部分を指す。

【0066】

本明細書中使用される場合、「ＲＥＴタンパク質」又は「ＲＥＴポリペプチド」は、ＲＥＴ遺伝子（ＲＥＴ癌原遺伝子とも称する）のコードするチロシンキナーゼ受容体を指し、ＲＥＴタンパク質全体又は一部分を含むことができる。

【0067】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列又はその一部分を含む。

【0068】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴタンパク質は、変異型ＲＥＴタンパク質である。幾つかの実施形態において、ＲＥＴタンパク質は、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、若しくは配列番号８のアミノ酸配列、又はその一部分を含む。

【0069】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴタンパク質は、ＲＥＴ遺伝子異常を含むＲＥＴ遺伝子によりコードされる。

【0070】

本明細書中使用される場合、「ＲＥＴ遺伝子異常」は、野生型ＲＥＴ遺伝子配列と比較しての変異型ＲＥＴ遺伝子配列の差異を指す。例えば、ＲＥＴ遺伝子異常は、染色体再構成、点変異、コピー数増加、過剰発現、及び／又はリガンド誘導型活性化であることが可能である。

【0071】

ＲＥＴ遺伝子異常の有無は、当該分野で理解される多数の方法の任意の１つにより特定することができ、そのような方法として、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ配列決定法又はＦＩＳＨ解析法が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Subbiah, V et al., Ann Oncol. 2021, 32(2):261-268；Lin JJ et al., Ann Oncol. 2020, 31(12):1725-1733；Solomon BJ et al., J Thorac Oncol. 2020, 15(4):541-549を参照）。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、循環腫瘍ＤＮＡの配列決定により検出される。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、標的単一アンプリコン配列決定（targeted single amplicon sequencing）により検出される。

【0072】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常を含むＲＥＴ遺伝子は、変異型ＲＥＴタンパク質、例えば、ＲＥＴタンパク質融合及び／又はソルベントフロント変異（solvent front mutation）を含むＲＥＴタンパク質をコードする。

【0073】

幾つかの実施形態において、癌又は腫瘍は、ＲＥＴ遺伝子異常を含む。幾つかの実施形態において、患者は、染色体再構成（ＲＥＴ遺伝子融合）、点変異、コピー数増加、過剰発現、及びリガンド誘導型活性化から選択されるＲＥＴ遺伝子異常を有する。過剰発現は、コピー数増加又は転写上方制御から生じる可能性があり、これが、受容体の局所濃度上昇及び異常活性化を招く可能性がある。コピー数増加又は過剰発現は、野生型ＲＥＴを指すことも変異型ＲＥＴを指すこともできる。例えば、変異型ＲＥＴの過剰発現は、ＭＥＮ２関連腫瘍で見つかっている。変異型Ｍ９１８Ｔ及び野生型ＲＥＴ両方の安定過剰発現が、２種のＳＣＬＣ細胞株で見つかっている。ＲＥＴのリガンド誘導型活性化は、ＭＡＰキナーゼ／Ｅｒｋ経路及びＰＩ３キナーゼ／Ａｋｔ経路をはじめとする複数のシグナル伝達経路の刺激をもたらす可能性がある。この活性化は、野生型ＲＥＴ及び変異型ＲＥＴで起こる可能性がある。

【0074】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子融合は、ＮＳＣＬＣ、甲状腺乳頭癌（ＰＴＣ）、結腸直腸癌（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ融合）、又は乳癌（ＥＲＣ１－ＲＥＴ融合）で起こる。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子点変異は、甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）で起こり、これには、多発性内分泌腺腫症２Ａ（ＭＥＮ２Ａ）、ＭＥＮ２Ｂ、又は家族性甲状腺髄様癌（ＦＭＴＣ）が含まれる。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子コピー数増加が、ＮＳＣＬＣ、乳癌、膵癌、又は神経膠芽細胞腫で起こる。

【0075】

幾つかの実施形態において、癌又は腫瘍は、ＲＥＴのＣ末端キナーゼドメインと、キネシンファミリーメンバー５ＢのＮ末端配列との融合（ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ）、ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ（ＲＥＴ－ＰＴＣ１）、ＮＣＯＡ４－ＲＥＴ（ＲＥＴ－ＰＴＣ３）、又はＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ（ＲＥＴ－ＰＴＣ７）を含む。ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ遺伝子融合は、ＲＥＴ転写の２倍～３０倍の増加をもたらす可能性があり、このことは、これらの場合においてＲＥＴキナーゼ活性が腫瘍形成を駆動することを示唆する。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ融合は、ＲＥＴと、ＰＲＫＡＲ１Ａ、ＴＲＩＭ２４、ＧＯＬＧＡ５、ＫＴＮ１、ＭＢＤ１、又はＴＲＩＭ２７との融合を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ融合は、ＲＥＴと、ＴＲＩＭ３３、ＫＩＦ５Ｂ、ＣＣＤＣ６、又はＫＩＦ５Ｂとの融合を含む。

【0076】

幾つかの実施形態において、ヒト患者は、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ＡＬＫ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＢＲＡＦ、及び／又はＭＥＴｅｘ１４活性化変異を有しない。ＮＳＣＬＣのＲＥＴ融合は、症例の大半に存在し、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ＡＬＫ、ＨＥＲ２、及びＢＲＡＦの変異とは相互排他的である。

【0077】

ＲＥＴ受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に対する活性を持つマルチキナーゼ阻害剤（ＭＫＩ）として、カボザンチニブ、バンデタニブ、アレクチニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、ポナチニブ、レゴラフェニブ、アパチニブ、シトラバチニブ、ＲＸＤＸ－１０５、及びレンバチニブが挙げられる。幾つかの実施形態において、ヒト患者は、以前に、カボザンチニブ、バンデタニブ、レンバチニブ、ＲＸＤＸ－１０５、又は別のマルチキナーゼ阻害剤で治療されたことがある。幾つかの実施形態において、ヒト患者は、前治療後に病勢進行した。幾つかの実施形態において、ヒト患者は、前治療に対する不耐性を発生させた。幾つかの実施形態において、ヒト患者は、以前に、マルチキナーゼ阻害剤で治療されたことがない。

【0078】

幾つかの実施形態において、ヒト患者は、以前にセルペルカチニブ（ＬＯＸＯ－２９２）、プラルセチニブ（ＢＬＵ－６６７）、ＢＯＳ－１７２７３８、又は別のＲＥＴ選択的阻害剤で治療されたことがある。幾つかの実施形態において、ヒト患者は、前治療後に病勢進行した。幾つかの実施形態において、ヒト患者は、前治療に対する不耐性を発生させた。幾つかの実施形態において、ヒト患者は、以前に、ＲＥＴ選択的阻害剤で治療されたことがない。

【0079】

標的指向型作用剤を用いることで臨床的改善が見られるにも関わらず、ＲＥＴ異常を持つ患者では、再発が頻発する。幾つかの実施形態において、癌又は腫瘍は、耐性変異を有する、又はそのような耐性変異を発生させてしまっている。幾つかの実施形態において、癌又は腫瘍は、１種以上のマルチキナーゼ阻害剤に対して耐性である。幾つかの実施形態において、癌又は腫瘍は、１種以上のＲＥＴ選択的阻害剤に対して耐性である。幾つかの実施形態において、癌又は腫瘍は、セルペルカチニブ及び／又はプラルセチニブに対して耐性である。幾つかの実施形態において、癌又は腫瘍は、セルペルカチニブ及び／又はプラルセチニブ耐性である細胞を含む。

【0080】

幾つかの実施形態において、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＥＴタンパク質の耐性変異を有する又はそのような耐性変異を発生させてしまった癌又は腫瘍の治療に有効である。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のソルベントフロント変異及び／又はＲＥＴタンパク質のヒンジ領域の変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のソルベントフロント変異を含む。

【0081】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、アミノ酸残基７３０番、７３６番、７６０番、７７２番、８０４番、８０６番、８０７番、８０８番、８０９番、８１０番、及び／又は８８３番でのＲＥＴタンパク質の変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、アミノ酸残基８０４番、８０６番、８０７番、８０８番、８０９番、及び／又は８１０番でのＲＥＴタンパク質の変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、アミノ酸残基８１０番でのＲＥＴタンパク質の変異を含む。

【0082】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、以下の変異を含むＲＥＴタンパク質変異を含む：Ｖ８０４Ｘ変異（Ｘはバリン又はグルタミン酸以外の任意アミノ酸である）；ｂ）Ｙ８０６Ｘ変異（Ｘはチロシン以外の任意アミノ酸である）；ｃ）Ａ８０７Ｘ変異（Ｘはアラニン以外の任意アミノ酸である）；ｄ）Ｋ８０８Ｘ変異（Ｘはアラニン以外の任意アミノ酸である）；ｅ）Ｙ８０９Ｘ変異（Ｘはチロシン以外の任意アミノ酸である）；及び／又はｆ）Ｇ８１０Ｘ変異（Ｘはグリシン以外の任意アミノ酸である）。

【0083】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、Ｖ８０４Ｘ変異を含むＲＥＴタンパク質変異を含み、Ｘは、バリン又はグルタミン酸以外の任意アミノ酸である。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、Ｙ８０６Ｘ変異を含むＲＥＴタンパク質変異を含み、Ｘは、チロシン以外の任意アミノ酸である。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、Ａ８０７Ｘ変異を含むＲＥＴタンパク質変異を含み、Ｘは、アラニン以外の任意アミノ酸である。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、Ｋ８０８Ｘ変異を含むＲＥＴタンパク質変異を含み、Ｘは、アラニン以外の任意アミノ酸である。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、Ｙ８０９Ｘ変異を含むＲＥＴタンパク質変異を含み、Ｘは、チロシン以外の任意アミノ酸である。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、Ｇ８１０Ｘ変異を含むＲＥＴタンパク質変異を含み、Ｘは、グリシン以外の任意アミノ酸である。

【0084】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、以下の変異を含むＲＥＴタンパク質変異を含む：ａ）Ｖ８０４Ｌ若しくはＶ８０４Ｍ変異；ｂ）Ｙ８０６Ｃ、Ｙ８０６Ｓ、Ｙ８０６Ｈ、若しくはＹ８０６Ｎ変異；及び／又はｃ）Ｇ８１０Ｒ、Ｇ８１０Ｓ、Ｇ８１０Ｃ、Ｇ８１０Ｖ、Ｇ８１０Ｄ、若しくはＧ８１０Ａ変異。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＶ８０４Ｌ又はＶ８０４Ｍ変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＹ８０６Ｃ、Ｙ８０６Ｓ、Ｙ８０６Ｈ、又はＹ８０６Ｎ変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＧ８１０Ｒ、Ｇ８１０Ｓ、Ｇ８１０Ｃ、Ｇ８１０Ｖ、Ｇ８１０Ｄ、又はＧ８１０Ａ変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＧ８１０Ｒ変異を含む。

【0085】

幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、以下を含むＲＥＴタンパク質変異を含む：ａ）Ｌ７３０Ｑ若しくはＬ７３０Ｒ変異；ｂ）Ｇ７３６Ａ変異；ｃ）Ｌ７６０Ｑ変異；ｄ）Ｌ７７２Ｍ変異；及び／又はｅ）Ａ８８３Ｖ変異。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＬ７３０Ｗ又はＬ７３０Ｒ変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＧ７３６Ａ変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＬ７６０Ｑ変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＬ７７２Ｍ変異を含む。幾つかの実施形態において、ＲＥＴ遺伝子異常は、ＲＥＴタンパク質のＡ８８３Ｖ変異を含む。

【実施例】

【0086】

実施例１．ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の脳移行特性
初期研究では、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が血液脳関門を横断して移行する能力を評価した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を０．５％ＨＰＭＣ、０．１Ｎ塩酸に溶解させ、単回用量で、ＢＡＬＢ／ｃＡＪｃｌ－ｎｕ／ｎｕマウス（日本クレア株式会社）に経口投与した。マウスには、ＢａＦ３／ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ＿ＲＦＰ細胞株（すなわち、ＫＩＦ５Ｂ ＲＥＴ融合陽性細胞株）を皮下移植しておいた。投与の１時間後、イソフルラン麻酔下で、下大静脈から血液を採取し、次いで、全脳を取り出した。血液試料を遠心して、血漿試料を得た。超音波ホモジナイザーを用いて、脳を３倍量の水とともにホモジナイズし、脳ホモジネートを得た。

【0087】

血漿中及び脳ホモジネート中のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の化合物濃度を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより測定し、脳ホモジネート中の化合物濃度に係数４を乗じて、脳中の化合物濃度を計算した。以下の表２を参照。脳／血漿中の化合物濃度比から、Ｋｐ値（＝脳ホモジネート中の化合物濃度／血漿中の化合物濃度）を計算した。血漿中及び脳中の非結合化合物濃度を、血漿タンパク質非結合比及び脳タンパク質非結合比から計算し、脳／血漿中の非結合化合物濃度比からＫｐ，ｕｕ値を計算した。計算したＫｐ値及びＫｐ，ｕｕ値に基づいて脳移行特性を評価した。Ｋｐ値０．１以上を示す化合物を、脳移行特性を有すると見なし、Ｋｐ，ｕｕ値０．３以上を示す化合物を、優れた脳移行特性を有すると見なした（Varadharajan S, et al. J Pharm Sci. 2015, 104:1197-1206）。

【0088】

【表2】

【0089】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、高いＫｐ値及び高いＫｐ，ｕｕ値を呈し、優れた脳移行特性を示す。このデータは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、脳転移性病変又は他のＣＮＳ疾患の治療に有効である可能性を示唆する。

【0090】

実施例２．ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、脳転移モデルにおいて強力な有効性を有する
ＲＥＴ異常陽性腫瘍の治療におけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を、ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ融合陽性脳転移モデルで試験した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、強力かつ安定した効果を示した。

【0091】

このモデルでは、ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ Ｌｕｃ融合陽性ＮＩＨ３Ｔ３細胞（２．５×１０^５細胞／マウス）を、無胸腺ヌードマウス（日本チャールス・リバー株式会社）の脳に、ラムダ縫合の３ｍｍ前方及び２ｍｍ右外側の位置に深さ３ｍｍで移植した。移植から６日後、マウスにルシフェリン（富士フイルム和光純薬株式会社）を静脈内注射し、マウスの発光をｉｎ ｖｉｖｏ撮影システム（Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ、PerkinElmer）で測定した。マウスの背面及び側面の関心対象の領域の合計フラックス（ｐ／ｓ）を、それぞれ、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウェア（PerkinElmer）を用いて定量し、両方の合計フラックス値を加算して得られた合計フォトンを、発光シグナルとして利用した。マウスを、各群の平均合計フォトンが等しくなるように、１群につき１０匹で無作為に３つの群に割り当て、次いで、ビークル（０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸含有０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース）又はＴＡＳ０９５３（１２．５ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇ）を、７日目から１日２回（ｂ．ｉ．ｄ）経口投与した。マウスの発光シグナルを、試験終了まで、週に１回測定した。

【0092】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、強力かつ安定した効果を示した。図１Ａは、５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤで投与した場合のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の抗腫瘍有効性を、ビークル対照と比較して示す。図１Ｂは、体重変化パーセントを示すとともに、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３で処置されたマウスが、試験した用量で化合物に対して十分に忍容性であった一方で、ビークル対照群では、腫瘍負荷による動物死亡及び体重増加抑制が観察されたことを示す。図１Ｃは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３群での生存率がビークル対照群よりも高いことを示す。図１Ｄは、処置したマウスのｉｎ ｖｉｖｏ撮影システム（ＩＶＩＳ）画像及び脳の病態を、ビークル対照と比較して示す。

【0093】

これらのデータは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、ＲＥＴ変異陽性患者において、脳転移に強力な抗腫瘍効果を有する可能性があることを確立し、長期生存期間を示す。これらのデータは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、マウスにおいて良好な脳浸透度を有することも示す。

【0094】

実施例３．ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、バンデタニブ治療抵抗性腫瘍モデルにおいて有効性を有する
ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３への切り替えが腫瘍寸法に対して有意な効果を有するかどうかを評価するため、バンデタニブ治療後のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を、バンデタニブ治療継続と比較して評価した。結果は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が治療抵抗性腫瘍に対して有効である可能性を示唆する。

【0095】

融合キナーゼＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ（ＮＩＨ３Ｔ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ）で遺伝子導入したマウス線維芽細胞株を、６週齢のオスＢＡＬＢ／ｃＡ Ｊｃｌ－ｎｕマウスの右胸部に５×１０^６細胞／マウスで移植した。腫瘍移植後、腫瘍の長軸（ｍｍ）及び短軸（ｍｍ）を、ノギスを用いて測定し、以下の式（Ａ）に従って腫瘍体積（ＴＶ）を計算した。次いで、マウスを、各種群の平均ＴＶが均一になるように、各種群に割り当てた。このグループ分け（ｎ＝５又は６／群）を行った日を、１日目と指定した。

【0096】

バンデタニブ処置したマウスの平均腫瘍体積が１日目の平均腫瘍体積の３倍の大きさを超える時点まで、バンデタニブを毎日１００ｍｇ／ｋｇ／日で経口投与した。１６日目、バンデタニブ処置群を、２つの群に分けた：群１：バンデタニブ処置継続群；群２：ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３処置群。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３処置群では、バンデタニブからＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３に切り替えた後、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を毎日１００ｍｇ／ｋｇ／日（５０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＤ）で経口投与した

【0097】

抗腫瘍効果の指標として、３１日目のＴＶを、各群について測定し、１日目に対する相対腫瘍体積（ＲＴＶ）を、以下の式（Ｂ）により計算して、抗腫瘍効果を評価した。

【0098】

結果を図２に示す。図中、記号^＊は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３処置群と連続バンデタニブ処置群の比較の間の有意差を示す。
（Ａ）：ＴＶ（ｍｍ^３）＝（長軸×短軸^２）／２
（Ｂ）：ＲＴＶ＝（ｎ日目のＴＶ）／（１日目のＴＶ）
ｎ：表示された測定日

【0099】

統計上、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３処置群の平均ＲＴＶ値は、バンデタニブ処置継続群のものより有意に小さかった（ステューデントのｔ検定、ｐ＜０．０５）。これらのデータは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、バンデタニブ治療抵抗性腫瘍に対して有効であったことを示す。

【0100】

実施例４．ＲＥＴ再構成により駆動される肺癌細胞株におけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の前臨床評価
次いで、ＲＥＴ融合陽性細胞株の増殖阻害におけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を、３種のＲＥＴマルチキナーゼ阻害剤（カボザンチニブ、ＲＸＤＸ－１０５、及びバンデタニブ）との比較で検査した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を、治療ナイーブ試料に由来する２種の細胞株で検査した。細胞株の１種は、どのような抗癌療法による治療も受けたことのなかった患者から得られた試料に由来するものであり、この試料は、ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ融合陽性である。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を用いた処置は、ＩＣ５０＝０．０３μＭで細胞の増殖を阻害した（図３Ａ）。これは、マルチキナーゼ阻害剤、カボザンチニブ、ＲＸＤＸ－１０５、及びバンデタニブより７倍～２４倍強力であった。

【0101】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を、ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ融合駆動型細胞株に対する有効性及び非腫瘍形成性対照細胞株における非特異的効果を検討するために、同質遺伝子対の細胞株において検査した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＩＣ５０＝０．１μＭでＣＣＤＣ６－ＲＥＴ融合細胞株の増殖を阻害した（図３Ｂ）。この細胞株の空対照プラスミドを発現する同質遺伝子カウンターパートは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３に対する感度がずっと低かった（１７倍低い）（図３Ｃ）。ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ融合細胞株は、カボザンチニブ、ＲＸＤＸ－１０５、及びバンデタニブに対して等しい感受性であった。

【0102】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を、ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合陽性細胞株で試験した。細胞の増殖は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３によりＩＣ５０＝０．００６μＭで阻害され、これは、３種のマルチキナーゼＲＥＴ阻害剤による増殖阻害のＩＣ５０より８倍～２０倍低かった（図３Ｄ）。

【0103】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の阻害効果を、ＲＥＴマルチキナーゼ阻害剤に対して耐性であるＲＥＴ融合陽性細胞株で検査した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、カボザンチニブ耐性であった患者の試料に由来する細胞株（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ融合）の増殖をＩＣ５０＝０．０６μＭで阻害した。これは、カボザンチニブによるこれら細胞の増殖阻害のＩＣ５０より１１．５倍低かった。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、カボザンチニブ耐性細胞の増殖阻害について、ＲＸＤＸ－１０５及びバンデタニブと比べても、より強力であった（図３Ｅ）。

【0104】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＸＤＸ－１０５耐性を獲得した患者から得られた試料に由来する細胞株（ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ融合）の増殖をＩＣ５０＝０．０７μＭで阻害した（図３Ｆ）。これは、カボザンチニブ（０．３４μＭ、９５％ＣＩ：０．２１～０．５４）、ＲＸＤＸ－１０５（０．４９μＭ、９５％ＣＩ：０．３１～０．７６）、又はバンデタニブ（０．３８μＭ、９５％ＣＩ：０．２９～０．４９）による増殖阻害のＩＣ５０より有意に低かった。

【0105】

これらの結果は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、ＲＥＴ融合を持つ細胞株の増殖阻害について、他のＲＥＴマルチキナーゼ阻害剤よりも有効であることを示唆する。これらの結果は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、ＲＥＴマルチキナーゼ阻害剤の阻害活性に対して治療抵抗性である細胞株に対して有効であることを示唆する。また、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、３種の異なるＮ末端融合パートナー（ＣＣＤＣ６、ＫＩＦ５Ｂ、及びＴＲＩＭ３３）からなるＲＥＴ融合を持つ細胞株に対して有効であった。

【0106】

実施例５．ＲＥＴ再構成により駆動される肺癌の前臨床動物モデルにおけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３有効性の評価
異種移植片腫瘍の増殖を低減するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を確認し、抗ＲＥＴ活性を持つ既知のマルチキナーゼ阻害剤であるバンデタニブと比較した有効性を、更に検査した。ＲＥＴ融合陽性癌の前臨床動物モデルにおいて有効性を観察した。この前臨床動物モデルは、同質遺伝子細胞（ＮＩＨ－３Ｔ３－ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）又は患者由来細胞（ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合）いずれかを免疫不全マウスに移植して異種移植片腫瘍を発生させることによりＲＥＴ阻害剤に対して感受性である（実施例５Ａ及び実施例５Ｂ）。また、ＲＸＤＸ－１０５又はカボザンチニブいずれかに対する耐性を発生させてしまった患者の試料から発生させた複数の患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおいて、有効性を観察した（実施例５Ｃ）。以下で詳細に記載するとおり、全てのモデルにおいて、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、腫瘍増殖の阻害について、場合によっては、腫瘍退縮も含めて、バンデタニブより優れているか、又はバンデタニブと同じぐらい有効であった。ＲＥＴ依存性異種移植片腫瘍を担持するマウスをＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３で処置すると、わずか１２．５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤという用量の少なさで、腫瘍増殖の有意な低減が得られた。５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ又は１００ｍｇ／ｋｇをＱＤの用量では、腫瘍増殖の有意な低減が存在し、その中には、ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合異種移植片腫瘍の約１００％退縮が含まれていた。同様に、５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ又は１００ｍｇ／ｋｇをＱＤのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を用いた処置は、カボザンチニブ耐性ＰＤＸ腫瘍の増殖を有意に低減し、約５０％腫瘍退縮をもたらした。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３処置は、ＲＸＤＸ－１０５耐性腫瘍に由来する２つのＰＤＸモデルの増殖においても有意な低減を引き起こした。バンデタニブで処置したマウスは、体重を相当量減少させたが、一方でＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３で処置したマウスは、この試験で試験した全ての用量で、化合物に対して十分に忍容性であった。

【0107】

異種移植片腫瘍の増殖に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の効果を、更に、前臨床脳同所性モデル（ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合）において観察した（実施例５Ｄ）。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を５０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで用いた処置は、脳における腫瘍増殖を完全に遮断し、担癌マウスの生存率の有意な上昇をもたらした。これらの結果は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、マウスの皮下側腹部に移植された又は脳中に移植されたＲＥＴ融合陽性異種移植片腫瘍の増殖を遮断することができる有効な抗ＲＥＴ阻害剤であることを示唆する。

【0108】

方法：ＰＤＸモデルの生成及び全ての有効性試験に、６週齢のメスＮＳＧ（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ ｇａｍｍａ）マウス（Envigo, Madison, WI）を使用したが、例外として、ＮＩＨ－３Ｔ３異種移植片試験には、無胸腺ヌードマウス（Envigo, Madison, WI）を使用した。細胞の移植から２２日後、確固たるシグナルが検出され、ビークル又は５０ｍｇ／ｋｇのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３をＢＩＤで用いた処置を開始した後、マウスを、１群につき５匹で無作為に群に割り当てた。ルシフェラーゼシグナルを毎週記録し、動物の体重を週に２回測定した。病的状態の兆候、例えば、協調運動障害又は過剰な体重減少及び疲労が検出されたところでマウスを屠殺した。処置群では、１匹の動物が試験の初期に死亡したことがわかり、したがって、処置群は、４匹の動物のみに縮小した。

【0109】

ビークル及び化合物：カボザンチニブを、３０％プロピレングリコール、５％Ｔｗｅｅｎ８０、６５％Ｄ５Ｗ（ブドウ糖５％含有水）に混合して、懸濁液を生成させた。バンデタニブを、１％ナトリウムカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ－Ｎａ）に混合して、懸濁液を生成させた。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を、０．１ＮのＨＣｌ及び０．５％ヒプロメロース（ＨＰＭＣ）に混合して、懸濁液を生成させた。ＲＸＤＸ－１０５を、１５％カプチゾールに混合して、懸濁液を生成させた。ＮＩＨ－３Ｔ３モデル、ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合モデル、ＲＸＤＸ－１０５耐性になった後に得られた患者試料から得られたＰＤＸモデル（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）、及びカボザンチニブ耐性であった患者から得られたモデル（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）を、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３遊離塩基で処置した。他のモデルは全て、ＨＭ０６二塩酸塩形で処置した。

【0110】

統計分析：データセットは、二元配置分散分析により比較し、テューキー又はシダックス多重比較検定を用いて、有意性を特定した。ｐ＜０．０５を、２つの値又はデータセット間の差が統計上有意であると見なした。生存曲線は、ログランク（マンテルコックス）検定を用いて比較した。９５％信頼区間及び全ての統計分析は、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ７ソフトウェアを用いて行った。

【0111】

実施例５Ａ：ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＥＴ阻害剤感受性異種移植片腫瘍の増殖阻害について有効である。
ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、ＲＥＴ阻害剤で処置されたことのない細胞に由来する異種移植片腫瘍の増殖を阻害する能力を、検査した。ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ融合タンパク質を安定発現するＮＩＨ－３Ｔ３細胞を、無胸腺ヌードマウスの皮下側腹部に移植した。腫瘍が約１００ｍｍ^３に到達したところで、マウスを、１群につき５匹で無作為に群に割り当て、処置を開始した（６日目）。ＮＩＨ－３Ｔ３－ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ細胞株は、ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ融合ｃＤＮＡの安定発現により生成させた。ＮＩＨ－３Ｔ３－ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ異種移植片腫瘍を担持する無胸腺免疫不全ヌードマウスを、１２．５ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３で１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ）のいずれかで処置した。バンデタニブ（１００ｍｇ／ｋｇをＱＤ）を、比較に用いた。

【0112】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を用いた処置は、試験した全ての用量で、腫瘍増殖の有意な低減をもたらした（図４Ａ及び図４Ｂ）。バンデタニブ処置も、ビークル処置群に比べて、腫瘍体積の有意な減少をもたらした。しかしながら、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ又は１００ｍｇ／ｋｇをＱＤで投与した場合、バンデタニブよりも有効であった。これらの実験において、ＲＥＴ融合依存性腫瘍増殖を阻害することが示されているもの（５０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ）よりもはるかに高用量のバンデタニブ（１００ｍｇ／ｋｇ）が使用された（Suzuki M et al., Cancer Sci .2013, 104(7):896-903 doi 10.1111/cas.12175）。これらの結果は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、ＲＥＴ融合駆動型腫瘍の増殖の低減について、バンデタニブよりも有効であることを示唆する。使用したＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の用量のいずれにおいても、動物の有意な体重減少はなかった（図４Ｃ）。

【0113】

実施例５Ｂ：ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＥＴ融合により駆動される患者由来細胞株異種移植片の増殖阻害に有効である。
有効性試験を、患者由来細胞株異種移植片モデルに拡大した。ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合陽性異種移植片腫瘍を、ＮＳＧマウスの皮下側腹部に移植した。腫瘍が約１００ｍｍ^３に到達したところで、マウスを、１群につき５匹で無作為に群に割り当て、処置を開始した（２２日目）（Somwar R et al., J Clin Oncol. 2016, 34(15_suppl):9068）。

【0114】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を用いた処置は、試験した３種の異なる用量で、腫瘍増殖の有意な低減を引き起こした（図５Ａ）。全ての群において、各異種移植片腫瘍は退縮した。腫瘍は、５０ｍｇ／ｋｇのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３で１日１回処置した場合、６０．７±５％縮小した（図５Ｂ）。５０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで処置したマウスに触知可能な腫瘍は残存せず、動物を１００ｍｇ／ｋｇのＱＤのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３で処置した場合、腫瘍増殖が９０±４％低減した（図５Ｂ）。ＨＭ０６処置群のいずれにおいても、開始と終了時で動物体重を比較した場合、動物体重の有意な変化は存在しなかった。バンデタニブでの処置は、完全腫瘍退縮をもたらしたものの、動物は、相当量の体重を減少させ、４７日目には、この群の全ての動物を屠殺しなければならなかった（図５Ｃ）。バンデタニブ処置群の各動物は、処置開始の３日目に体重を減少させ始めた。

【0115】

実施例５Ｃ：ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＥＴマルチキナーゼ阻害剤に対して治療抵抗性であるＰＤＸ腫瘍の増殖阻害について有効である
腫瘍増殖を阻害するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を更に探求するため、３種のＰＤＸモデルにおける腫瘍増殖に対する阻害剤の有効性を検査した。これらのモデルは、ＲＸＤＸ－１０５耐性であり、１種は、カボザンチニブ耐性であった。

【0116】

もはやカボザンチニブに反応しなくなった患者から得られた腫瘍試料に由来するＰＤＸ腫瘍（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）を、ミンチし、マトリゲルと混合し、次いで、ＮＳＧマウスの皮下側腹部に移植した。腫瘍が約１００ｍｍ^３に到達したところで、マウスを、１群につき８匹で無作為に群に割り当て、処置を開始した（１２日目）。バンデタニブを用いた担癌マウスの処置は、腫瘍増殖の有意な低減を引き起こし（図６Ａ）、試験の終了時に触知可能な腫瘍は残存しなかった（図６Ｂ）。この群の腫瘍は全て、１００％縮小した。しかしながら、動物は、相当量の体重を減少させた（図６Ｃ）。カボザンチニブ（３０ｍｇ／ｋｇをＱＤ）処置は、ビークル処置群と比べた場合に腫瘍増殖を有意に低減したものの（ｐ＜０．０５）、腫瘍の縮小は存在せず、この群の全ての腫瘍が或る程度の増殖を示した（図６Ｂ）。５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ又は１００ｍｇ／ｋｇをＱＤでＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を用いた処置は、腫瘍増殖の有意な低減を引き起こし（図６Ａ）、腫瘍はそれぞれ４３．７±３．８％及び４７．７±０．９％縮小した。ＨＭ０６－５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ群で、２５日目に動物が１匹死亡しているのが見つかり、そのため、実験の終了時、この群には動物が７匹しかいなかった。動物の死因は不明であった。

【0117】

腫瘍試料収集時点でＲＸＤＸ－１０５治療に耐性であった患者由来のＰＤＸ腫瘍（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）を、ミンチし、マトリゲルと混合し、次いで、ＮＳＧマウスの皮下側腹部に移植した。腫瘍が約１００ｍｍ^３に到達したところで、マウスを、１群につき５匹で無作為に群に割り当て、処置を開始した（１４日目）。ＲＸＤＸ－１０５（３０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ）を用いた処置は、ビークル処置群に比べて、腫瘍体積の有意な変化を引き起こさず（ｐ＞０．０５）、このモデルがＲＸＤＸ－１０５耐性であることを実証した（図７Ａ）。バンデタニブ（５０ｍｇ／ｋｇをＱＤ）を用いた処置は、腫瘍体積の有意な減少を引き起こし、腫瘍は２７．２±５．２％縮小した（ｐ＜０．０５）（図７Ａ及び図７Ｂ）。図５Ｃで相当な体重減少が観察されたことを理由に、この試験及びその後の全ての試験について、５０ｍｇ／ｋｇのＱＤのバンデタニブを使用した。同様に、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３（５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ又は１００ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ）を用いた処置は、ビークル処置群に比べて、腫瘍体積の有意な減少を引き起こし、腫瘍はそれぞれ、８．６±１１．８％及び３０±７．７％縮小した（図７Ａ及び図７Ｂ）。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３をいずれかの用量で用いた処置は、これらの群において動物体重に有意な影響を及ぼさなかった（ｐ＞０．０５）（図７Ｃ）。

【0118】

ＲＸＤＸ－１０５に対する反応性が不良であった患者に由来するＰＤＸ腫瘍（ＣＣＤＣ６－ＲＥＴ）を、ミンチし、マトリゲルと混合し、次いで、ＮＳＧマウスの皮下側腹部に移植した。腫瘍が約１００ｍｍ^３に到達したところで、マウスを、１群につき８匹で無作為に群に割り当て、処置を開始した（１２日目）。５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ及び１００ｍｇ／ｋｇをＱＤのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を、このモデルで試験した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を５０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤの用量で用いた処置は、ビークル処置群に比べて、腫瘍体積の小さいけれど有意な減少を引き起こした（図８Ａ）。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を１００ｍｇ／ｋｇのＱＤの用量で用いた処置は、腫瘍増殖の減速についてより有効であった。図８Ａに示すとおり、腫瘍の縮小はなかった（図８Ｂ）。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、いずれの群においても動物の体重にどのような有意な変化も引き起こさなかった（図８Ｃ）。

【0119】

これらの結果は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、カボザンチニブ及びＲＸＤＸ－１０５に対して治療抵抗性であったＰＤＸ腫瘍の増殖の低減に有効であることを示唆する。

【0120】

実施例５Ｄ：ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＥＴ融合を持つ脳同所性異種移植片腫瘍モデルの増殖阻害について有効である。
脳に存在するＲＥＴ融合陽性腫瘍に対するＨＭ０６の効果を評価するため、ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合陽性異種移植片腫瘍を、ＮＳＧマウスの脳に移植した。これらの細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏでの生物発光撮影をしやすくする目的で、ホタルルシフェラーゼを発現するように改変された。異種移植片腫瘍を消化し、次いで、単一細胞をＮＳＧマウスの脳に移植した。生物発光撮影を毎週行い、確固たるシグナルが検出された時点で、腫瘍細胞の移植から２２日後に処置を開始した（パネルＡ及びパネルＢの０日目）。マウスを毎週撮影し、確固たるシグナルが検出された後、５０ｍｇ／ｋｇのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３をＢＩＤで又はビークルを用いて処置を開始した（移植から２２日後）。生物発光シグナルを、材料及び方法のセクションで記載したとおりに定量した。ビークル処置したマウスは、平均開始シグナルを超える（ｐ＜０．０５）強力な生物発光シグナルによりわかるとおり（図９Ａ及び図９Ｂ）、腫瘍を急速に発達させた。しかしながら、２２日目、ビークル処置群とＨＭ０６処置群の間には有意差が存在した（ｐ＜０．０５）。ＨＭ０６処置したマウスは、ビークル処置したマウスよりも有意に長く生存し（ｐ＜０．０５）、腫瘍負荷を理由にビークル処置群の最後の動物を屠殺しなければならなくなってから２８日後、実験の終了時に依然として３匹のマウスが生存していた（図９Ｃ）。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３処置は、実験動物の体重に対してどのような有害作用も持たなかった（図９Ｂ、右側パネル）。これらの結果から、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、横断して脳に入り、そこに存在するＲＥＴ再構成腫瘍に対して有効であることが確認される。

【0121】

ＲＥＴ特異的キナーゼ阻害剤ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＥＴ阻害剤で処置されたことのないＲＥＴ再構成腫瘍並びにマルチキナーゼＲＥＴ阻害剤カボザンチニブ及びＲＸＤＸ－１０５に対して耐性である腫瘍の前臨床モデルの増殖を遮断することが観察された。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性は、バンデタニブの有効性に匹敵するものであった。しかしながら、バンデタニブを用いた処置は、動物の有意な体重減少をもたらした。これはＨＭ０６では見られなかった知見である。重要なことは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、脳においてＲＥＴ融合陽性肺癌の前臨床モデルの増殖を抑制し、全生存期間を延長したことである。

【0122】

実施例６．脳内におけるＲＥＴ再構成により駆動される肺癌の同所性異種移植片モデルに対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３有効性の評価
ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合陽性肺癌の脳同所性モデルにおけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有効性を、ＬＯＸＯ－２９２及びバンデタニブと比較した。脳に腫瘍を有するマウスをＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３（５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ）で処置すると、ＬＯＸＯ－２９２（１０ｍｇ／ｋｇ及び２５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤの投薬量）よりも有効に腫瘍増殖を遮断した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＬＯＸＯ－２９２の両用量に比べて、担癌マウスの生存期間の有意な増加を引き起こした。バンデタニブ（５０ｍｇ／ｋｇをＱＤ）は、担癌動物の腫瘍増殖も生存率も減少させなかった。今回提示する結果は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、脳における腫瘍増殖の低減において、ＬＯＸＯ－２９２よりも有効であることを示唆する。

【0123】

動物の脳への注射用細胞の調製及び生物発光画像の定量：ＴＲＩＭ３３－ＲＥＴ融合細胞に、ＧＦＰルシフェラーゼ構築物を内包するレトロウイルスで形質導入し、次いで、ＧＦＰ陽性細胞をＦＡＣＳにより単離した。これらの細胞を、ＮＳＧマウスの皮下側腹部に注射し、異種移植片腫瘍を生成させた。腫瘍を収集し、ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ組織プロセッサ（Miltenyi Biotech）中で６０分間、腫瘍分離酵素セット（Miltenyi Biotech）を用いて消化し、次いで、１０％ＦＢＳ含有増殖培地を加えることで消化酵素を中和し、次いで、遠心によりペレット化した。次いで、細胞を新鮮な増殖培地に再懸濁させ、７５μｍフィルターを通過させ、計数し、ＰＢＳで１回洗い、密度１０００００細胞／μＬでＰＢＳに再懸濁させた。分離した腫瘍細胞を、Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジに２６Ｇ針（１μＬ）を用いて、以下の座標で、麻酔したマウスの脳に注射した：前方（Ｘ）：０．５、後方（Ｙ）：１．５、背側（Ｚ）：２．５。創傷を封鎖し、マウスを回復させた。生物発光撮影を毎週行って腫瘍増殖をモニタリングし、画像をＩｍａｇｅＪソフトウェアで分析した。個別のマウスの全発光領域を包含する対象領域（ＲＯＩ）におけるピクセルを、閾値関数を用いて同定し、それらの面積（Ａ）及び平均強度（Ｉ）を測定した。平均バックグラウンドピクセル強度（Ｂ）は、無発光面積から測定した。個別のマウスの合計発光（Ｌ）は、以下の式を用いて定量した：Ｌ＝（Ｉ－Ｂ）×Ａ。これは、バックグラウンド強度に関して調整する。

【0124】

確固たるシグナルが検出された後、マウスを１群あたり６匹からなる群に無作為に割り当てた。細胞移植から１０日後、ビークル、５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのＨＭ０６、１００ｍｇ／ｋｇをＱＤのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、及び１０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのＬＯＸＯ－２９２を用いて処置を開始した。バンデタニブ（５０ｍｇ／ｋｇをＱＤ）及び２５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのＬＯＸＯ－２９２を用いるマウスの処置は、これらのマウスから確固たる生物発光シグナルを得るのに長めの時間を要したため、移植から２８日後に開始した。生物発光を毎週記録し、動物の体重を週に２回測定した。病的状態の兆候、例えば、協調運動障害又は過剰な体重減少及び疲労が検出されたところでマウスを屠殺した。

【0125】

ビークル及び化合物：バンデタニブを、１％カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ－Ｎａ）と混合して、懸濁液を生成させた。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を、０．１ＮのＨＣｌ及び０．５％ヒプロメロース（ＨＰＭＣ）と混合して、懸濁液を生成させた。

【0126】

統計分析：データセットは、二元配置分散分析により比較し、テューキー又はシダックス多重比較検定を用いて、有意性を特定した。ｐ＜０．０５を、２つの値又はデータセット間の差が統計上有意であると見なした。生存曲線は、ログランク（マンテルコックス）検定を用いて比較した。全てのグラフ及び統計分析は、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８ソフトウェアを用いて行った。

【0127】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＲＥＴ融合を持つ脳同所性異種移植片腫瘍モデルの増殖阻害について、ＬＯＸＯ－２９２よりも有効である：ビークル処置したマウスは、平均開始シグナルを超える強力な生物発光シグナルによりわかるとおり（図１０Ａ及び図１０Ｂ）、腫瘍を急速に発達させた。処置の３３日目には、ビークル群の担癌マウスは病気になり、屠殺しなければならなくなった。対照的に、処置開始から５日後、５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ（ｐ＝０．００１２）又は１００ｍｇ／ｋｇをＱＤのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３（ｐ＝０．０００８）で処置したマウスから得られるルシフェラーゼシグナルに有意な減少が存在した。５０ｍｇ／ｋｇのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３をＢＩＤで投与すると、試験の全期間（１３１日間の処置）の間、腫瘍増殖が遮断された。ＬＯＸＯ－２９２を１０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで用いる処置は、生物発光シグナルのどのような減少も引き起こさず、マウスをＬＯＸＯ－２９２で処置する間、腫瘍は増殖し続けた（図１０Ｂ）。高用量のＬＯＸＯ－２９２（２５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ）は、処置の最初の３週間は腫瘍増殖を低減させたが、その後、腫瘍は、処置開始から６４日後に拡大を開始し、高腫瘍負荷を理由にマウスを屠殺しなければならなくなるまで拡大を続けた（図１０Ｂ）。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を用いた処置は、１０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのＬＯＸＯ－２９２（ｐ＝０．００１２）及び２５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのＬＯＸＯ－２９２（ｐ＝０．００１）に比べて担癌マウスの生存期間の有意な増加を引き起こした。試験終了時、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を５０ｍｇ／ｋｇでＢＩＤ群の６匹のマウスには、低／検出不能なルシフェラーゼシグナルが存在し、全てのマウスが試験終了時に依然として生存していた。２つのＬＯＸＯ－２９２群間で生存率に差はなかった。実験動物の体重に何らかの有害作用を有する処置はなかった（図１０Ｄ）。これらの結果から、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、横断して脳に移行し、そこに存在するＲＥＴ再構成腫瘍に対して有効であることが確認される。

【0128】

ＲＥＴ特異的キナーゼ阻害剤ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、マウスの脳に移植されたＲＥＴ融合を持つ肺癌細胞の増殖を遮断し、担癌動物の生存期間の増加をもたらした。ＬＯＸＯ－２９２は１０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤの投薬量で、マウスの皮下側腹部に移植されたＲＥＴ融合陽性腫瘍の退縮を引き起こすのに十分であることを考慮すると、これらのデータは、ＬＯＸＯ－２９２の脳中の腫瘍部位への送達が、たとえ２５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤの高用量であったとしても、不良であることを示す。

【0129】

実施例７．安全性薬理試験
心血管系、呼吸器系、及び中枢神経系に関する安全性薬理試験を行った。ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１は、痙攣促進活性及び呼吸器系において生物学的に関連する変化をなにももたらさなかった。

【0130】

中枢神経系
ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１は容易に血液脳関門を横断するため、ＣＮＳに対する効果を、複数の非ＧＬＰ及びＧＬＰ安全性薬理試験で評価した。

【0131】

ラットにおける２週間毒物学ＧＬＰ試験では、ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１を２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、及び１２５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤでの毎日投与において、１日目の２回目の投与から１．５時間後に、Ｉｒｗｉｎ試験を行った。各群は、オスラット１０匹及びメスラット１０匹で構成された。５０ｍｇ／ｋｇ及び１２５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤで投薬された動物は、探索行動及び覚醒の低下を示した。また、１２５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤで処置されたメスは、尿プールの平均数が高く（対照の０．０に対して０．８）、直腸温度が低かった（対照の３７．７℃に対して３７．１℃）。しかしながら、他のＩｒｗｉｎ試験パラメーターは正常であり、動物の健康状態は、肉眼的には変化していなかったため、これらの変化は、有害ではないと判断された。

【0132】

潜在的な痙攣促進効果及び抗痙攣効果を評価するため、ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１を、０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、及び２００ｍｇ／ｋｇのＳＩＤの用量レベルで、強制経口投与を介してラットに投与した。各群は、オスラット１０匹で構成された。潜在的な痙攣促進活性を評価するため、これら経口用量レベルのＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１又は３５ｍｇ／ｋｇのｄ－アンフェタミンを投与してから１時間後に、閾値以下用量の２５ｍｇ／ｋｇのＰＴＺを投与して、痙攣促進効果を評価した。ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１は、どのような痙攣促進効果も示さなかった。対照群又はＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１処置群のラットで、ステージ５、強直性／間代性痙攣を示したラットはいなかった。一方で、ラットをｄ－アンフェタミンで前処置した陽性対照群は、ラットのドーパミンアゴニスト処置に典型的な反復挙動を示し、ラット１０匹中３匹に、完全強直性（full tonic）／間代性痙攣を誘導した。相対抗痙攣効果を評価するため、ＷｉｓｔａｒラットにＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１又はジアゼパムを経口投与した。ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１は、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇの用量で、ペンチレンテトラゾールの予荷重試験により誘導された痙攣の合計数の減少をもたらした。これらのデータは、ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１が、ラットにおいて、痙攣促進活性を有さず、特筆すべきは、抗痙攣特性を有する可能性があることを示唆する。

【0133】

イヌにおける２週間毒性試験及び４週間毒性試験（実施例８で更に記載する）では、定期臨床観察中、１５ｍｇ／ｋｇ以上のＢＩＤの一日量で初回後に、及びＰＫ試験において５ｍｇ／ｋｇ以上のＢＩＤの用量で初回投与後に、イヌにＣＮＳ症候が見られた。ＨＭ０６－０１の潜在的神経毒性効果を評価する目的で、対照イヌ及び４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１で処置したイヌの異なる脳領域９箇所（すなわち、前頭極、視交叉、漏斗、乳頭体、第三脳神経底（base）、脳橋の前方部及び後頭極部、小脳、並びに延髄）でＦｌｕｏｒｏ－Ｊａｄｅ Ｃ染色を行った（試料は、イヌにおける２週間毒性試験から採取した）。また、代替法を用いて検証する目的で、対照１匹及び４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤで処置した高用量イヌ１匹でのみＡＴＦ３免疫染色を行ったところ、ニューロン変性又は苦痛のどのような兆候も存在しなかった。対照イヌの脳とＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１処置したイヌの脳の間に差は観察されなかった。このことは、試験したイヌ脳範囲のどこにおいても、どのようなニューロン変性及び／又はストレスを受けた／損傷したニューロンの証拠も存在しないことを意味する。

【0134】

心臓血管系
上記に記載するとおりのイヌにおける２週間毒性ＧＬＰ試験で、１２日目に、ＥＣＧに対するＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１の効果を調べた。ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１を用量レベル１５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、及び４５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで反復投与した後、ＱＴ延長のエビデンスは見られなかった。心拍数及びＥＣＧもまた、試験した全ての用量レベルで影響を受けなかった。対照的に、高用量で処置されたメスは、一日量の投与の初回から５時間後及び一日量の２回目から１時間後に、動脈血圧の低下を示した。平均動脈血圧の平均値は、ビークル群の１２７ｍｍＨｇ及び１１５ｍｍＨｇに対して、及びベースラインの１１９ｍｍＨｇに対して、それぞれ、９１ｍｍＨｇ及び９３ｍｍＨｇであった。８時間後、動脈血圧は、対照／ベースラインレベルに戻っていた。この低下は、対照に対して有意差ではなかったものの、一貫したものであり、試験品に関連すると見なすのに十分なほど目立っていた。そうはいっても、変化の程度が限定的で高用量のメスにのみ存在したこと、及びこの血圧低下が動物の健康に負の影響を有していなかったことから、これは有害ではないと見なした。

【0135】

ＥＣＧに対するＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１の効果を、上記に記載（及び実施例８で更に記載）するとおりのイヌにおける４週間毒性ＧＬＰ試験の１週目（２日目）、４週目（２３日目）、及び２週間回復期間の終了時でも調べた。２日目、一日量の２回目から２時間後、ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１の効果は、１５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、及び４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤの用量レベルでは認められなかった。一方、２３日目、オスの１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで、心電図パラメーターに、試験品関連効果は認められなかった。反対に、オスの用量レベル４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤでは、有害ではない潜在的に試験品関連のわずかな心拍数増加が認められ、並びにメスの用量レベル１５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、及び４５ｍｇ／ｋｇで、試験品及び用量関連のわずかな（対照に比べて最大８％）Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａ及びＶａｎ ｄｅｒ Ｗａｔｅｒ補正ＱＴｃ間隔の延長が認められた。これらの心電図効果は、２週間の回復期間終了時には、もはや観察されなかった。また、２日目及び２３日目、並びに回復期間の終了時、心電図調律及び波形に異常はなかった。

【0136】

呼吸器系
呼吸器系に対するＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１の効果も、ラットにおける４週間ＧＬＰ試験で、ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１を２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、及び９０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで反復投与した後に調べた。このＧＬＰ試験は、実施例８で更に記載する。各群は、５匹の動物／群／性別で構成された。４週目において、呼吸器パラメーターに毒物学的関連効果は観察されず、投与期間の終了から２週間後の６週目において遅発型慢性効果も見られなかった。

【0137】

実施例８．ラット及びイヌにおける４週間反復投与毒性試験
ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の有害作用を、ラット及びイヌにおける４週間毒性ＧＬＰ試験で、上記のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３二塩酸塩（ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１）を用いて評価した。

【0138】

ラットにおける４週間毒性試験
ラットにおける４週間ＧＬＰ毒性試験では、動物は、強制経口投与により０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、及び９０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１を与えられた。高用量の９０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ群において、試験品関連の死亡が観察された：メス３匹について、１０日目～１４日目に、死亡が見つかった、又は倫理的理由により予定前に屠殺された（活動性の低下、異常な呼吸数、及び立毛のような重篤な臨床兆候）。死体解剖時、肺の変色が概して観察され、この変色は、肺の有害な中等度～顕著な炎症性変化（肺胞／血管周囲炎症、マクロファージ凝集、肺胞浮腫／出血）と組織学的に相関していた。更に１匹のメス（サテライト）が、７日目、投与前に死亡しているのが見つかった。しかしながら、死体解剖では臨床症候も異常性もなく、試験品投与との関連性は疑わしいと判断された。

【0139】

試験品関連の臨床兆候は、両方の性別で及び用量依存性を持って観察され、臨床兆候としては、例えば、異常呼吸数、呼吸中の異常音、活動性の低下／上昇、自発運動性常同症（locomotor stereotypy）、体幹屈曲姿勢、頭尾の低さ（low carriage）、歩行障害、ペダリング、目瞑り、咀嚼動作、瞳孔異常、及び手触りの冷たさ等である。これらの臨床観察は、一時的であり、投与３０分後の発生率が高かった。これらの兆候は全て、投与終了後の回復動物には存続しなかった。

【0140】

２５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ及び５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤでは、体重に対して何の効果もなかったが、一方で９０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤでは、両性別で、少ない体重増加及び食物消費量の減少と関連した体重の１０％減少が観察された。これらの効果は、回復期間の終了時に、元に戻るものであった。

【0141】

眼科的変化はなく、呼吸機能評価において毒物学的に関連する急性及び慢性の効果もなかった。凝血パラメーターに対する効果もなかった。

【0142】

血液学的には、両性別で、網状赤血球の用量依存的増加が見られた。また、オスでのみ好中球の増加が見られ、中用量及び高用量のオス並びに高用量のメスで血小板の増加が見られた。白血球数の有意な増加が、オスの高用量でのみ観察された。これらの効果は全て、回復期間の終了時に、元に戻るものであった。

【0143】

対照群と比べて、平均臨床化学パラメーターにおける以下の変化が、用量依存的に見られ、試験品関連であると判断された：
両性別でＡＳＴ及びＡＬＴにおける用量依存的増加が見られた。
全ての用量でオスのＡＰが上昇
中用量及び高用量のオスでコレステロールの上昇及びトリグリセリドの低下が観察された。
これらの効果は全て、回復期間の終了時に、元に戻るものであった。

【0144】

尿タンパク質濃度の用量依存的上昇が、両性別で認められ、高用量オスで発生率が高く（７／１０匹のオスが１ｇ／Ｌ）並びに中用量及び高用量のメスで発生率が高かった（それぞれ、４／１０匹のメス及び３／７匹のメスが１ｇ／Ｌ以上）。この効果は、回復期間の終了時に、元に戻るものであった。Ｔ_ｍａｘは、概して、１日目の１回目の一日量の７時間後（２回目の一日量の１時間後）及び２８日目の１回目の一日量の１時間後に観察され、用量レベルの上昇とともにＣ_ｍａｘが上昇した。２回目の一日量後に推定可能な場合にはＴ１／２を観察し、これは２．０３時間～３．６７時間の範囲であった。ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１への全身曝露は、およそ用量に比例した様式で、用量レベルの上昇とともに上昇し、性別間で同様であった。２８日目、全身貯留は認められなかった。

【0145】

投与期間の終了時、ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１関連炎症の顕微鏡による知見が、肺、膵臓（空胞形成／アポトーシス性腺房細胞）、大腿骨（骨端軟骨肥大）、精巣／精巣上体（セルトリ細胞の空胞形成、管変性、管内細胞デブリの増加、精子濃度の低下）に認められた。回復期間の終了時、終了時屠殺及び早期死亡で見られた試験品関連の知見は、膵臓について完全に元に戻るものであり、主に９０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで肺及び大腿骨における最小限の重篤度での孤発的発生を示した。このことは、回復の進行が進んでいることを示す。回復期間中に試験品関連の変化が精巣及び精巣上体に存在し、９０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤでは発生率及び重篤度が上昇することは、不完全な可逆性であることを示す。

【0146】

これらの結果に基づき、重篤な毒性用量１０（ＳＴＤ１０）を、５０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤに設定した。これは、平均ＡＵＣ_{（０－ｔ）}が１日目でオスにおいて５０３００ｎｇ・ｈ／ｍＬ及びメスにおいて３７２００ｎｇ・ｈ／ｍＬ、２８日目で、オスにおいて７３０００ｎｇ・ｈ／ｍＬ及びメスにおいて７４３００ｎｇ・ｈ／ｍＬであることに相当する。

【0147】

イヌにおける４週間毒性試験
イヌにおける４週間ＧＬＰ毒性試験では、動物は、強制経口投与により０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、及び４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１を４週連続で与えられ、続いて２週間の回復期間とした。高用量の４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ群において、試験品関連の死亡が観察された：オス２匹について、１７日目及び１８日目に、倫理的理由により予定前に屠殺された（顕著な体重減少と関連した重篤な臨床兆候）。主な死因は、肺胞又は気管支肺胞上皮流通を伴う軽度～中等度の多発性亜急性炎症であり、１匹のオスでは、肺胞異物肉芽腫を伴っていた。他方のオスでは、前立腺房アポトーシスを伴う最小の膵臓腺房空胞形成／アポトーシスが認められ、これについては、試験品との関連性を排除することができない。

【0148】

試験品関連臨床兆候は、用量依存的であり、１５ｍｇ／ｋｇ以上のＢＩＤの用量で１日目から始まることが認められた。これらの観察には、全ての用量での、活動性低下及び振戦、横臥位、毛皮／皮膚の汚れ、目瞑り、歩行異常、手触りの冷たさ；中用量及び高用量での、嘔吐及び唾液分泌、尿の変色／赤色糞便、抑止された／疲弊した及び見かけ上の筋肉萎縮（後肢）が含まれる。しかしながら、これらの臨床兆候は、一過性であり、投与から３０分後に発生率が高まった。

【0149】

低用量では、体重への効果がなかったが、一方でメスの３０ｍｇ／ｋｇ及び４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤで１日目と２９日目の間に、並びに４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤで予定前に屠殺されたオスで、体重減少が認められた（オス６４４番で－２５％及びオス６４２番で－１２％、それぞれ、１５日目及び１７日目）。回復期間の終了時、中用量及び高用量のメスは体重が増加していたが、これらの体重増加は、対照動物のものより少なかった。

【0150】

眼科、尿検査、凝血、及び臨床化学パラメーターに変化はなかった。

【0151】

血液学的には、両性別で単球数の増加により合計白血球数が増加（全ての用量で用量依存的に）、及び好中球数が増加（メスでは高用量のみ、オスでは中用量及び高用量で）；オスの高用量でのみ網状赤血球数が増加、両性別で高用量及び／又は中用量で血小板数が増加。好酸球数の減少は、メスにのみ関係したこと及び用量依存的ではなかったことを考慮して、疑わしいと判断された。これらの効果は全て、回復期間の終了時に、元に戻るものであったが、例外として、高用量のオスの単球及びメスの好酸球については違った。

【0152】

ｔ_ｍａｘは、１回目の一日量の１時間後と８時間後（１回目の一日量の１時間後と２回目の一日量の２時間後）の間で観察された。ＡＵＣ_{（０－ｔ）}に基づき、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３への全身曝露は、用量比例よりもわずかに多く増加していたが、例外として、２８日目のオス及びメスの３０ｍｇ／ｋｇと４５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤの間では、この増加は用量比例より少なかった。同様なＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３への曝露が、全ての投与された用量で１日目と２８日目にオスとメスの間で観察された。２８日目のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３への曝露は、１日目と比較した場合、３０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤでは同様であり、１５ｍｇ／ｋｇ及び４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤでは、個体の一部について、減少していた又は同様なままであった。

【0153】

投与期間の終了時、全てのメスで胸腺の平均重量の低下、並びに３０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのオス及び４５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤの生存しているオス限定の前立腺の平均重量の低下が観察された。組織病理学検査では、ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１は、顕微鏡的炎症性知見を、肺（肺胞又は気管支肺胞上皮流通を伴う亜急性炎症）、膵臓（腺房細胞空胞形成／アポトーシス）、及び胸腺（萎縮）に誘導した。回復期間の終了時、肺における試験品関連の知見は、回復の進行を進めていることを示した。回復期間の終了時に膵臓及び胸腺で観察された組織学的知見は、対照群及び処置群で同様な重篤度及び／又は孤発性の発生を示し、試験したビーグル犬で自然発生的に遭遇する毒性又は機能改変の兆候はなかった。

【0154】

これらの結果に基づき、重篤な毒性が発現しない最大用量（ＨＮＳＴＤ）は、この試験において３０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤであると確立された。この量は、平均ＡＵＣ（０－ｔ）が、１日目にオスにおいて２１４００ｎｇ・ｈ／ｍＬ及びメスにおいて２９２００ｎｇ・ｈ／ｍＬ、２８日目にオスにおいて２２３００ｎｇ・ｈ／ｍＬ及びメスにおいて２９１００ｎｇ・ｈ／ｍＬであることに相当する。

【0155】

実施例９．ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離血漿中濃度と脳及び脳脊髄液中の遊離濃度との相関
自由行動成体オスＨａｎ（商標）ＷｉｓｔａｒラットにＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３二塩酸塩を３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び５０ｍｇ／ｋｇの単回用量（用量は、投与された遊離塩基を示す）で経口投与した後の前頭前皮質、脳脊髄液（ＣＳＦ）、及び血漿中のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の薬物動態を、以下の表３に従って評価した。

【0156】

【表3】

【0157】

前頭前皮質（ＰＦＣ）、血漿、及び脳脊髄液（ＣＳＦ）におけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３曝露は、３ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇの使用した用量範囲にわたり広く用量比例の様式で用量の増加とともに上昇した。Ｔｍａｘが０．５時間～１時間であることは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が速く吸収され、短い半減期、良好なＦ％（４６％～５１％）、中等度の血漿クリアランス、巨大な分布容積、及び限界腎クリアランスを伴うことを示す。図１１Ａは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、及び５０ｍｇ／ｋｇで単回経口投与した後の経時的血漿中濃度を示す。図１１Ｂは、３ｍｇ／ｋｇのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を経口及び静脈内で単回投与した後の経時的血漿中濃度を示す。

【0158】

いったん区画間での平衡に到達すると、ＰＦＣ、ＣＳＦ、及び血漿遊離画分からのＭｅｔａＱｕａｎｔ微小透析液中で観察されるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３濃度の比は、１：１：１に近かった。この濃度比は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３投与後２時間から６．５時間まで（ＣＳＦは最長８時間）維持された。図１１Ｃは、投与後２時間から６．５時間までの血漿遊離画分、ＰＦＣ、及びＣＳＦにおける薬物動態プロファイルを重ね合わせたものを示す。

【0159】

遊離血漿中濃度対遊離脳濃度の濃度比が１：１であることは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が血液脳関門を容易に横断することを示した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の遊離血漿中濃度を用いて、脳及びＣＳＦ中の遊離濃度の良好な近似を推定することができる。高い脳浸透性は、ＣＮＳアウトカム（例えば、ＣＮＳ転移の制御、反応期間、及び／又はＣＮＳ転移からの保護）を改善する可能性がある。

【0160】

実施例１０．ＲＥＴに関するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の標的選択性の評価
ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３のＲＥＴ選択性を、ＬＯＸＯ－２９２及びＢＬＵ－６６７と比較した。表４に示すとおり、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＩＣ_５０値に基づき、ＬＯＸＯ－２９２及びＢＬＵ－６６７と比較した場合、ＲＥＴキナーゼ選択性をより高く有する。

【0161】

【表4】

【0162】

安全性の観点から、ＲＥＴに関するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の標的選択性が高いことは、潜在的なオフターゲットキナーゼ阻害を原因とする有害作用を最小限にする可能性があり、潜在的な臨床的利益がある。

【0163】

実施例１１．ヒト治験用の開始用量決定
ヒト治験用の開始用量計算は、４週間反復用量のＧＬＰに準拠した毒性試験のデータに基づいており、ＩＣＨ Ｓ９指針のとおり、処置したラットの１０％に重篤な毒性が発現する用量（ＳＴＤ１０）の１０分の１及びイヌの重篤な毒性が発現しない最大用量（ＨＮＳＴＤ）の６分の１に基づく。

【0164】

４週間ラット毒性試験におけるＳＴＤ１０は、５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤに設定された。５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤという用量（１００ｍｇ／ｋｇの一日量に等しい）は、８ｍｇ／ｋｇをＢＩＤのヒト等価用量（ＨＥＤ）に相当する。安全係数１０を適用すると、ヒト開始用量は、６０ｋｇ体重（ＢＷ）の患者について０．８ｍｇ／ｋｇすなわち４８ｍｇをＢＩＤもの高用量が可能である。追加の安全係数２．５を加えるが、その理由は、用量依存的肺胞炎症並びに精巣及び精巣上体における試験品関連変化がラットの２週間及び４週間毒性試験で観察され、２週間の回復期間の終了時にそれぞれ進行性の回復が進んでいたこと及び不完全な可逆性を伴っていたこと、並びに５０ｍｇ／ｋｇ以上をＳＩＤでの経口投与後にラットのＦＯＢにおいてＣＮＳ効果が観察されたことによる。これにより、２０ｍｇをＢＩＤというヒト開始用量案が導かれる。

【0165】

イヌの重篤な毒性が発現しない最大用量（ＨＮＳＴＤ）は、イヌにおける４週間毒性試験で試験した高用量（３０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ）である。用量３０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ（６０ｍｇ／ｋｇの一日量に等しい）は、６０ｋｇ ＢＷの患者について１６．２ｍｇ／ｋｇをＢＩＤすなわち９７２ｍｇをＢＩＤというヒト等価用量（ＨＥＤ）に相当する。ＩＣＨ Ｓ９指針において指定されるとおり安全係数６を適用すると、ヒト開始用量は、６０ｋｇの患者について２．７ｍｇ／ｋｇすなわち１６２ｍｇをＢＩＤもの高用量が可能である。ラット試験と一貫して、追加の安全係数２．５を適用するが、その理由は、イヌでも用量依存的肺胞炎症が観察され、２週間の回復期間の終了時に進行性の回復が進んでいたこと、ＱＴｃＦ延長がイヌの４週間試験において観察されたこと、及び総合毒性試験中、用量≧１５ ＢＩＤ ｍｇ／ｋｇ／日で最初の投与後、１日目からＣＮＳ関連臨床兆候が認められたことによる。これにより、６４．８ｍｇをＢＩＤというヒト開始用量案が導かれる。

【0166】

ヒト治験用の開始用量は、４週間反復用量のＧＬＰ準拠した毒性試験のデータに基づき、２０ｍｇをＢＩＤ（すなわち、患者１人あたり４０ｍｇ／日）に特定した。これは、処置したラットの１０％に重篤な毒性が発現する用量（ＳＴＤ１０）の１０分の１及びイヌの重篤な毒性が発現しない最大用量（ＨＮＳＴＤ）の６分の１に基づく。加速漸増デザイン（ＡＴＤ）により、許容可能な忍容性の範囲で治験薬用量を投与しながら、有効ではない可能性のある用量に多すぎる患者を晒すことにならないようにできる。

【0167】

実施例１２．ＲＥＴ遺伝子異常を持つ進行性固形腫瘍の患者における、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、及び抗腫瘍活性の評価。
ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、及び抗腫瘍活性を評価する目的で、第Ｉ／ＩＩ相非盲検、単群、ファーストインヒューマン試験を行う。この試験は、２つの部からなる：用量漸増及び用量拡大コホートを用いる第Ｉ相部、並びに３つのコホートを用いる第ＩＩ相部である。ＲＥＴ遺伝子異常陽性進行性固形腫瘍の患者が、治療を受けることになる。両方の部において、治療サイクルは、２１日間の連続投薬であり、サイクル間に治療中断を挟まない。投薬は、病勢進行、臨床的有益性の喪失、許容できない有害事象の発生、新規抗癌治療の開始、同意の撤回、医師の判断、死亡、又は追跡不能になるまで続けることになる。第Ｉ／ＩＩ相試験は、安全性評価も含むことになり、安全性評価には、ＴＥＡＥ及び重篤な有害事象（ＳＡＥ）の頻度、重篤度、及び関連性の評価、血液学的及び血液化学物質値の変化、身体検査の評価、バイタルサイン、並びに心電図（ＥＣＧ）を含む。

【0168】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３錠剤を、絶食状態（すなわち、薬物投与の２時間前と１時間後の間にどのような食物も消費されてはならない）において、ＢＩＤ（約１２時間ごと）で経口投与することになる。

【0169】

第Ｉ相試験は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の経口治療、１日２回の２０ｍｇ用量で開始、最大耐量（ＭＴＤ）に達するまで、連続した毎日の投薬、サイクルは２１日間継続を含むことになる。

【0170】

前臨床有効性データ（マウスモデルにおけるＥＤ_５０は経口３ｍｇ／ｋｇ／日）、安全性データ（４週間毒物学試験のラットにおける経口用量は２５ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤ）、組換えＣＹＰデータからウェル・スタード（well-stirred）モデルにより予測されるヒトクリアランス６．４ｍＬ／分／ｋｇに基づき、ヒトにおける経口生体利用度を５０％と仮定すると、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、約４０ｍｇをＢＩＤで開始して癌患者において抗腫瘍有効性の兆候を示し、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の１日の曝露量ＡＵＣ_{０－２４，ｓｓ}≧１６５０ｎｇ・ｈ／ｍＬとなることが予想される。最大投与量は、５００ｍｇをＢＩＤ～１５００ｍｇをＢＩＤの範囲が可能であり、１日の曝露量ＡＵＣ_{０－２４，ｓｓ}≧２２０００ｎｇ・ｈ／ｍＬ～≦６３０００ｎｇ・ｈ／ｍＬをもたらす可能性がある。これらの曝露量は、それぞれ、ラットにおけるＳＴＤ１０である５０ｍｇ／ｋｇをＢＩＤより低い２５ｍｇ／ｋｇをＢＩＤの安全用量、及びＳＴＤ１０で達成されるものに等しい（動物で測定されたＡＵＣ値を、動物対ヒトの非結合画分比で乗算することにより、ヒト用に調整してある）。上記の仮定に基づき、この治験で投与することになる最大用量は、５００ｍｇをＢＩＤ～１５００ｍｇをＢＩＤの範囲が可能である。

【0171】

第ＩＩ相試験は、経口治療で、推奨用量を１日２回、連続した毎日の投薬、サイクルは２１日間継続を含むことになる。

【0172】

第Ｉ相用量漸増
第Ｉ相用量漸増試験は、加速漸増デザイン（ＡＴＤ）に従うことになり、開始用量２０ｍｇをＢＩＤで開始して１００％刻みで用量を段階的に増加させる初期加速段階（１用量レベルあたり１人の患者）を伴う。８０ｍｇをＢＩＤのコホートの後、加速段階を３＋３デザインに変換する。加速段階中、治療の最初のサイクル（すなわち治療の最初の２１日間、サイクル１）において安全レビュー委員会（ＳＲＣ）により臨床上意味があると見なされるグレード２以上の薬物関連毒性又は用量制限毒性（ＤＬＴ）が観察されない場合、及び標準段階において患者の０／３又は２／６未満がＤＬＴを経験する場合、最大耐量（ＭＴＤ）に達するまで新たな患者で用量漸増を続けることになる。

【0173】

第一コホートは、１人の患者からなり、この患者は、２１日間サイクルで、２１日間連続してＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を投与されることになる。サイクル１の間にこの患者で関連性のある関連毒性が観察されない場合、次のコホートを開始することになる。治験計画に基づき、１から最大３つまでのコホートが、漸増段階に含まれることになり、一方、標準段階のコホートの数は、ＭＴＤに達するまで用量漸増を続けることになるため、予測不能である。

【0174】

ＭＴＤは、以下のとおり定義される：サイクル１でＤＬＴを経験する患者が３３％以下である、最高用量レベル。

【0175】

ＤＬＴは、以下のとおり定義される：試験プロトコルにおいて詳細に記載されるとおり、治療の最初のサイクルにおける治療中に発生した毒性（病勢進行又は併発する病気と明白に関連しており、治験薬と無関係であるとして、治験責任医師により判定された有害事象を除く）。

【0176】

第ＩＩ相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）は、以下のとおり定義される：用量の漸増及び拡張の用量レベルで治療された患者に由来する、総合的安全性、忍容性、ＰＫデータ、及び非臨床データから外挿される有効曝露量の推定に基づき第ＩＩ相で試験される用量。ＲＰ２Ｄは、ＭＴＤ以下である可能性があるが、ＭＴＤより高くはならない。ＭＴＤに到達しない場合、ＲＰ２Ｄが、試験した最高用量より高くなることはありえない。

【0177】

第Ｉ相用量漸増試験の主要目的は、治療の最初の２１日間（サイクル１）内での最大耐量（ＭＴＤ）を決定すること、及び第ＩＩ相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）を同定することである。

【0178】

第Ｉ相用量漸増試験の主な副次目的は、以下を評価することである：単回投薬及び複数回投薬（高密度試料採取）後の血漿中のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３及びその代謝産物の個々のＰＫプロファイル；単回投薬後の尿中排泄；安全性及び忍容性；抗腫瘍活性；並びに治療中の液体生検により得られる循環遊離核酸中のＲＥＴ遺伝子状態の変化。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３及び代謝産物の薬物動態評価は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３及び主要代謝産物の血漿中濃度並びにＰＫパラメーターを測定することで評価することができ、そのようなＰＫパラメーターとして、０時点から２４時間までの曲線下面積（ＡＵＣ０－２４）、最大薬物濃度（Ｃｍａｘ）、最大血漿中濃度に到達する時間（Ｔｍａｘ）、及び蓄積度合いが挙げられるが、これらに限定されない。脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３濃度を特定することができる。血漿試料を同時に採取して、ＣＳＦ／血漿比を推定することができる。

【0179】

試験は、ＤＬＴ評価のために評価可能な患者を最高３６人含むことができる。患者の合計数は、用量漸増で必要かつ可能な患者の交代の数に依存することになる。標的試験集団は、ＲＥＴ遺伝子異常陽性進行性固形腫瘍患者を含むことができる。

【0180】

第Ｉ相用量拡大：
第Ｉ相用量拡大試験において、追加の患者の登録とともにＲＰ２Ｄ用量レベルが拡大される。患者のサブセットにおいて、無作為化クロスオーバーデザインに従って、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３生体利用度に対する食事の影響が評価されることになる。

【0181】

第Ｉ相用量拡大試験の主要目的は、３つの第ＩＩ相コホートで使用することになる、標的集団における第ＩＩ相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）を確認することである。用量漸増の時間枠は、約１０ヶ月（又は患者が試験を中止する場合はそれより早い）間の治療の最初の２１日間（サイクル１）及び各サイクル（２１日間）になる。

【0182】

第Ｉ相用量拡大試験の主な副次目的は、以下を評価することである：個別ＰＫ特性決定用に患者のサブセットから高密度試料採取することによる、及び集団ＰＫ分析用に他の全ての患者において疎に試料採取することによる、定常状態の血漿中のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３及びその代謝産物の個々のＰＫプロファイル；患者のサブセットにおけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３生体利用度に対する食事の影響；安全性及び忍容性；抗腫瘍活性；並びに治療中の液体生検により得られる循環遊離核酸中のＲＥＴ遺伝子状態の変化。

【0183】

この試験は、２０人～３０人の患者を含むことができ、その中には、ベースラインで測定可能な（ＲＡＮＯ作業部会の推奨に従って）ＣＮＳ転移を持つ患者が少なくとも１０人含まれる。用量拡大中のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３生体利用度に対する食事の影響の予備的評価は、ＰＫ評価に含まれる患者１０人で行うことができる。

【0184】

標的試験集団は、一次ＲＥＴ遺伝子融合（耐性変異の有無を問わない）を持ちＲＥＴ選択的阻害剤に以前に曝露した局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ患者を含む。患者は臨床的ベネフィットが実証されていると治験担当医師がみなした既存の治療を受けた後に疾患進行が記録された、又は、そのような治療を受けることができない患者である。

【0185】

第ＩＩ相：
第ＩＩ相試験では、患者は、３つのコホートにおいてＲＰ２Ｄレベルで治療されることになる：コホート１及びコホート２（ピボタル）、並びにコホート３（探索用）である。

【0186】

第ＩＩ相試験の主目的は、３つの異なる集団における選択したＲＰ２Ｄの抗腫瘍活性（総合的、及び適宜、頭蓋内において）を評価することである。奏効率は、最初の６ヶ月間は約６週間（±１週間）ごとに、その後は病勢進行しなかった患者において、病勢進行するまで又は試験完了まで９週間（±１週間）ごとに評価することとする。

【0187】

第ＩＩ相試験の主な副次目的は、以下を評価することである：３つのコホートにおける安全性及び忍容性；集団ＰＫ分析用に全ての患者において疎に試料採取することによる、定常状態の血漿中のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３及びその代謝産物の個々のＰＫプロファイル；並びに治療中の液体生検により得られる循環遊離核酸中のＲＥＴ遺伝子状態の変化。脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３濃度を特定することができる。血漿試料を同時に採取して、ＣＳＦ／血漿比を推定することができる。

【0188】

追加の副次アウトカム尺度は、治験責任医師によるＯＲＲ（客観的奏効率）；疾患制御率；腫瘍奏効までの期間；奏効期間；無増悪期間；無増悪生存期間；全生存期間；並びに中枢神経系に特に関する上記のもののいずれかを含むことができる。

【0189】

第ＩＩ相試験は、コホート１中、１段階デザインに５５人の患者を含むことができる。この試験は、コホート２中、Ｓｉｍｏｎ２段階デザインに従って最大６１人の患者（第一段階から継続する２４人の患者及び第二段階で３７人）を含むことができる。この試験は、コホート３中、各腫瘍型につき３人の患者を含むことができる。臨床的有益性が観察される場合は、より多くの患者を登録することができる。

【0190】

コホート１（ピボタル）の標的試験集団は、以下を含むことができる：一次ＲＥＴ遺伝子融合（耐性変異の有無を問わない）を持ちＲＥＴ選択的阻害剤に以前に曝露した局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ患者：臨床的ベネフィットが実証されていると治験担当医師がみなした既存の治療を受けた後に疾患進行が記録された、又は、そのような治療を受けることができない患者；測定可能な脳及び／又は軟髄膜転移の有無を問わない。

【0191】

コホート２（ピボタル）の標的試験集団は、以下を含むことができる：ＲＥＴ遺伝子融合を持ちＲＥＴ選択的阻害剤に対してナイーブである局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ患者：臨床的ベネフィットが実証されていると治験担当医師がみなした既存の治療を受けた後に疾患進行が記録された、又は、そのような治療を受けることができない患者；測定可能な脳及び／又は軟髄膜転移の有無を問わない。

【0192】

コホート３（探索用）の標的試験集団は、以下を含むことができる：ＲＥＴ遺伝子異常陽性進行性固形腫瘍の患者（一次ＲＥＴ遺伝子融合を持つＮＳＣＬＣ患者以外）であり、利用可能な治療選択肢すべてが無効となった、又は治験担当医師が他の治療に実質的なベネフィットがないと判断した、及び／又はそれを拒否した患者。

【0193】

第Ｉ／ＩＩ相試験の選択基準は、以下を含むことができる：
第Ｉ相－用量漸増／用量拡大の共通選択基準：
年齢１８歳以上の男性又は女性患者。
米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンススコアが０又は１。
ベースラインで組織生検又は液体生検により特定されるＲＥＴ遺伝子異常が得られる。
以下のとおり定義される適切な造血機能：
血小板数が１０００００／μＬ以上
好中球絶対数が１５００／μＬ以上
ヘモグロビンレベルが９．０ｇ／ｄＬ以上（赤血球輸血及びエリスロポエチンを９．０ｇ／ｄＬに到達させるために使用可能であるが、治験薬の初回投与の少なくとも２週間前に投与されていなければならない）。
以下のとおり定義される適切な肝機能：血清総ビリルビンレベルが基準値上限（ＵＬＮ）×１．５以下、血清アルブミンが２ｇ／ｄＬ以上、ＡＳＴレベル及びＡＬＴレベルが、肝転移が存在しない場合にＵＬＮ×２．５以下、肝転移が存在する場合にＵＬＮ×５以下。
以下のとおり定義される適切な腎機能：血清クレアチニンがＵＬＮ×２以下又は推定クレアチニンクリアランスが６０ｍＬ／分以上。
子供を持つ可能性がある及び妊娠にリスクがある男性患者及び女性患者は、説明同意書の書式に署名をした日付から、試験全体を通じて、高度に有効な避妊法を使用すること、及び割り当てられた治療の最終用量後、１８０日間継続することに同意しなければならない。患者が子を持つことが生物学的に可能であり、性的に活発であると治験担当医師が判断した場合を妊娠可能と定義する。
第Ｉ相用量漸増－特定選択基準：
ＲＥＴ遺伝子異常のエビデンスを持つ進行性固形腫瘍の患者。
ＲＥＣＩＳＴ１．１により決定されるとおりの測定可能な及び／又は測定不能な疾患
患者は、進行性固形腫瘍についての少なくとも１つの又は複数の以前の治療ライン後に疾患の進行が文言化されている、又はそのような治療を受けることができない患者。
患者が脳及び／又は軟髄膜転移を有する場合、その男性患者／女性患者は、無症候性でなければならない。ＲＡＮＯ作業部会（ＷＧ）推奨に従って測定可能な病変及び測定不能な病変の両方が許容される。
患者が以前にＲＥＴ選択的阻害剤ですでに治療されたことがある場合、以前のＲＥＴ選択的阻害剤治療からＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の最初の用量まで、半減期の少なくとも５倍分が経過していなければならない。
第Ｉ相用量拡大－特定選択基準：
一次ＲＥＴ遺伝子融合（耐性変異の有無を問わない）を持ちＲＥＴ選択的阻害剤に以前に曝露した局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ患者：
既存療法後に疾患が進行し、その療法は治験責任医師の判断によれば臨床的利益を実証した又はその療法を受けることができないとして、文言化されている；
ベースラインでの脳及び／又は軟髄膜転移の有無を問わない。
患者が脳及び／又は軟髄膜転移を有する場合、その男性患者／女性患者は、以下を有するのでなければならない：
少なくとも７日間ステロイド及び抗痙攣薬を使用していない無症候性の未処置脳／軟髄膜転移（これらは、寸法的に適格な場合、標的病変としてとらえる）
又は
局所療法（ＷＢＲＴ／ＳＲＴ／手術）ですでに治療されており、治験薬投与の前、少なくとも７日間、ステロイド及び抗痙攣薬使用により臨床上安定している、無症候性脳転移。
ＲＥＣＩＳＴ１．１により特定されるとおりの測定可能な疾患
以前のＲＥＴ選択的阻害剤治療からＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の初回投与まで、半減期の少なくとも５倍分が経過していなければならない。
特定の場所で管理されているＮＧＳ試験により優先的にＲＥＴ状態が文言化されている又は以前のＲＥＴ阻害剤治療から実質的かつ長期（６ヶ月超）の臨床的利益が実証されているのいずれかである。
第ＩＩ相－コホート１～３の共通選択基準：
年齢１８歳以上の男性又は女性患者。
米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンススコアが０～２。
ベースラインで組織生検又は液体生検により特定されるＲＥＴ遺伝子異常が得られる。
ＲＥＣＩＳＴ１．１により特定されるとおりの測定可能な疾患。
患者が脳及び／又は軟髄膜転移を有する場合、その男性患者／女性患者は、以下を有するのでなければならない：
少なくとも７日間ステロイド及び抗痙攣薬を使用していない無症候性の未処置脳／軟髄膜転移（これらは、寸法的に適格な場合、標的病変としてとらえる）
又は
局所療法（ＷＢＲＴ／ＳＲＴ／手術）ですでに治療されており、治験薬投与の前、少なくとも７日間、ステロイド及び抗痙攣薬使用により臨床上安定している、無症候性脳転移。
以下のとおり定義される適切な造血機能：
血小板数が１０００００／μＬ以上
好中球絶対数が１５００／μＬ以上
ヘモグロビンレベルが９．０ｇ／ｄＬ以上（赤血球輸血及びエリスロポエチンを９．０ｇ／ｄＬに到達させるために使用可能であるが、治験薬の初回投与の少なくとも２週間前に投与されていなければならない）。
以下のとおり定義される適切な肝機能：血清総ビリルビンレベルがＵＬＮ×１．５以下、血清アルブミンが２ｇ／ｄＬ以上、ＡＳＴレベル及びＡＬＴレベルが、肝転移が存在しない場合にＵＬＮ×２．５以下、肝転移が存在する場合にＵＬＮ×５以下。
以下のとおり定義される適切な腎機能：血清クレアチニンがＵＬＮ×２以下又は推定クレアチニンクリアランスが６０ｍＬ／分以上。
子供を持つ可能性がある及び妊娠にリスクがある男性患者及び女性患者は、スクリーニング時の最初の妊娠検査陰性の時点から、試験全体を通じて及び割り当てられた治療の最終用量後１８０日間、高度に有効な避妊法を使用することに同意しなければならない。患者が子を持つことが生物学的に可能であり、性的に活発であると治験担当医師が判断した場合を妊娠可能と定義する。
・第ＩＩ相コホート１－特定選択基準：
一次ＲＥＴ遺伝子融合（耐性変異の有無を問わない）を持ちＲＥＴ選択的阻害剤に以前に曝露した局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ患者。
臨床的ベネフィットが実証されていると治験担当医師がみなした既存の治療を受けた後に疾患進行が記録された、又は、そのような治療を受けることができない患者。
以前のＲＥＴ選択的阻害剤治療からＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の初回投与まで、半減期の少なくとも５倍分が経過していなければならない。
特定の場所で管理されているＮＧＳ試験により優先的にＲＥＴ状態が文言化されている又は以前のＲＥＴ阻害剤治療から実質的かつ長期（６ヶ月超）の臨床的利益が実証されているのいずれかである。
第ＩＩ相コホート２－特定選択基準：
ＲＥＴ遺伝子融合を持ちＲＥＴ選択的阻害剤に以前に曝露したことのない局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ患者。
臨床的ベネフィットが実証されていると治験担当医師がみなした既存の治療を受けた後に疾患進行が記録された、又は、そのような治療を受けることができない患者。
第ＩＩ相コホート３－特定選択基準：
ＲＥＴ遺伝子異常を担持する進行性固形腫瘍の患者（一次ＲＥＴ遺伝子融合を持つＮＳＣＬＣ患者以外）であり、利用可能な治療選択肢すべてが無効となった、又は治験担当医師が他の治療に実質的なベネフィットがないと判断した、及び／又は患者がそれを拒否した：これには、以下を含むことができる（がそれらに限定されない）：
選択的ＲＥＴ阻害剤に対する不耐性を進行させてしまった又は発生させてしまった、甲状腺髄様癌又は甲状腺未分化癌；
転移性乳癌；
転移性膵臓腺癌；
ＥＧＦＲ／ＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＢＲＡＦ標的療法に限定されないがこれら療法の後のＲＥＴ経路の出現を伴うＮＳＣＬＣ。
患者が以前にＲＥＴ選択的阻害剤ですでに治療されたことがある場合、以前のＲＥＴ選択的阻害剤治療からＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の最初の用量まで、半減期の少なくとも５倍分が経過していなければならない。

【0194】

第Ｉ／ＩＩ相試験の除外基準には、以下を含むことができる：
第Ｉ相－用量漸増／用量拡大の共通除外基準：
授乳中の女性。
治験薬の初回投与前、臨床試験中の作用剤又は抗癌療法を半減期の５倍分（又は、残留毒性がないという条件で、抗癌抗体及び他のバイオ薬物等長期作用薬の場合に半減期１倍分）以内で使用。
治験薬の初回投与前、４週間以内に大手術（血管アクセスの設置を除く）を受けている又は治験治療の過程中に大手術を受ける計画がある。
治験薬の初回投与前、１４日間以内にＷＢＲＴを受けている、又は７日間以内に他の緩和的放射線治療を受けている、或いはそのような治療の副作用から回復しておらず、治験責任医師の見解においてそのことに臨床上意味がある場合、の患者。
原発性ＣＮＳ腫瘍の患者。
治験責任医師の見解に従って、臨床上顕著な制御不能の循環器疾患、これには、サイクル１の１日目前３ヶ月以内の心筋梗塞、不安定狭心症、顕著な弁膜又は心膜疾患、心室頻脈歴、症候性うっ血性心不全（ＣＨＦ）のニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩ～ＩＶ、及び重篤な制御不能の動脈性高血圧が含まれる。
Fridericiaの式を用いて補正したオーバータイムＱＴ時間（ＱＴｃＦ）の持続が４７０ｍｓｅｃ超；ＱＴ延長症候群の個人歴若しくは家族歴又はトルサードドポアント（ＴｄＰ）歴。制御不能かつ持続性のＴｄＰリスク因子（例えば、心不全、低カリウム血症、最適治療にも関わらずＱＴ／ＱＴｃ間隔を延長させる併用医薬の使用）歴。
現在、ＨＩＶ、肝炎Ｂウイルス、又はＣ型肝炎ウイルスの活動性感染症がある。
文言化された間質性肺疾患歴、又は現在、ステロイド服薬を必要とする間質性肺疾患のエビデンスがある。
治験責任医師の見解に従って、薬物吸収に影響を及ぼすと思われる臨床上顕著な胃腸異常。
治験責任医師の見解に従って、治験薬療法に影響を及ぼすと思われる、消化機能に影響を及ぼす臨床上顕著な疾患（慢性下痢を含む）。
治験薬の初回投与前、１週間（７日間）以内の強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤を用いた治療。
治験薬の初回投与前、３週間（２１日間）以内の強力なＣＹＰ３Ａ４誘導剤を用いた反復治療。
ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３中の添加剤に対する既知の過敏症。
治験責任医師の見解に従って、試験結果に交絡する可能性のある又は患者に対し治験薬を投与することに望ましくないリスクを負わせる可能性のある、任意の病気又は医学的状態。
第Ｉ相用量漸増－特定除外基準：
ベースラインで症候性ＣＮＳ転移のある患者。
第Ｉ相用量拡大－特定除外基準：
ベースラインで症候性脳及び／又は軟髄膜転移があり、局所及び／又は全身療法による制御が不能な患者。
既知のＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ＡＬＫ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＢＲＡＦ、及びＭＥＴｅｘ１４活性化変異が存在する。
第ＩＩ相－コホート１～３の共通除外基準：
授乳中の女性。
治験薬の初回投与前、臨床試験中の作用剤又は抗癌療法を半減期の５倍分（又は、残留毒性がないという条件で、抗癌抗体及び他のバイオ薬物等長期作用薬の場合に半減期１倍分）以内で使用
治験薬の初回投与前、４週間以内に大手術（血管アクセスの設置を除く）を受けている又は治験治療の過程中に大手術を受ける計画がある。
治験薬の初回投与前、１４日間以内にＷＢＲＴを受けている、又は７日間以内に他の緩和的放射線治療を受けている、或いはそのような治療の副作用から回復しておらず、治験責任医師の見解においてそのことに臨床上意味がある場合の、患者。
原発性ＣＮＳ腫瘍の患者。
ベースラインで症候性脳及び／又は軟髄膜転移があり、局所及び／又は全身療法による制御が不能な患者。
治験責任医師の見解に従って、臨床上顕著な制御不能の循環器疾患、これには、サイクル１の１日目前３ヶ月以内の心筋梗塞、不安定狭心症、顕著な弁膜又は心膜疾患、心室頻脈歴、症候性うっ血性心不全（ＣＨＦ）のニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩ～ＩＶ、及び重篤な制御不能の動脈性高血圧が含まれる。
Fridericiaの式を用いて補正したオーバータイムＱＴ時間（ＱＴｃＦ）の持続が４７０ｍｓｅｃ超；ＱＴ延長症候群の個人歴若しくは家族歴又はトルサードドポアント（ＴｄＰ）歴。制御不能かつ持続性のＴｄＰリスク因子（例えば、心不全、低カリウム血症、最適治療にも関わらずＱＴ／ＱＴｃ間隔を延長させる併用医薬の使用）歴。
現在、ＨＩＶ、肝炎Ｂウイルス、又はＣ型肝炎ウイルスの活動性感染症がある。
文言化された間質性肺疾患歴、又は現在、ステロイド服薬を必要とする間質性肺疾患のエビデンスがある。
治験責任医師の見解に従って、薬物吸収に影響を及ぼすと思われる、臨床上顕著な胃腸異常。
治験責任医師の見解に従って、治験薬療法に影響を及ぼすと思われる、消化機能に影響を及ぼす臨床上顕著な疾患（慢性下痢を含む）。
治験薬の初回投与前、１週間（７日間）以内の強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤を用いた治療。
治験薬の初回投与前、３週間（２１日間）以内の強力なＣＹＰ３Ａ４誘導剤を用いた反復治療。
ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３中の添加剤に対する既知の過敏症。
治験責任医師の見解に従って、試験結果に交絡する可能性のある、又は患者に対し治験薬を投与することに望ましくないリスクを負わせる可能性のある、任意の病気又は医学的状態。
第ＩＩ相コホート１－特定除外基準：
既知のＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ＡＬＫ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＢＲＡＦ、及びＭＥＴｅｘ１４活性化変異が存在する。
第ＩＩ相コホート２－特定除外基準：
既知のＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ＡＬＫ、ＨＥＲ２、ＲＯＳ１、ＢＲＡＦ、及びＭＥＴｅｘ１４活性化変異が存在する。
第ＩＩ相コホート３－特定除外基準：
なし。

【0195】

薬物投与：
ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３を、臨床用途用に二塩酸塩（ＨＭ０６－０１／ＴＡＳ０９５３－０１）として調製する。生成物を、経口使用の錠剤として製剤化する。試験を、用量１０ｍｇ／単位及び５０ｍｇ／単位（遊離塩基として表す）の錠剤を用いて行う。意図される貯蔵条件は、冷蔵条件である（２℃～８℃（３６°Ｆ～４６°Ｆ）に制御された温度）。

【0196】

ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３錠剤を、絶食状態（すなわち、薬物投与の２時間前と１時間後の間にどのような食物も消費されてはならない）において、２０ｍｇ（開始用量）ＢＩＤを用いて、ＢＩＤ（約１２時間ごと）で経口投与することになる。

【0197】

実施例１３．第Ｉ相試験の用量漸増部を、３２０ｍｇのＢＩＤ用量レベルまで進行させる
第Ｉ相試験の漸増部は、依然として進行中であるものの、１６０ｍｇをＢＩＤで投与された患者の最初の治療サイクルから得られる安全性情報から、３２０ｍｇをＢＩＤの用量レベルに用量漸増させることが可能となった。このプロセスは、上記の実施例１２で概要を記載した試験プロトコルに準拠している、すなわち、プロトコルのとおりに採用された患者の最初の治療サイクルから得られる安全性データが入手可能な場合、用量漸増のための安全審査委員会（ＳＲＣ）会議が行われる。上記の実施例１２で検討したとおり、この試験で投与されることになる最大用量は、５００ｍｇをＢＩＤ～１５００ｍｇをＢＩＤの範囲である可能性がある。

【0198】

実施例１４．ＲＥＴソルベントフロント変異に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の細胞性効力
選択的ＲＥＴ阻害剤であるＬＯＸＯ－２９２（セルペルカチニブ）及びＢＬＵ－６６７（プラルセチニブ）は非小細胞肺癌において臨床上の抗腫瘍活性を示すものの、ＲＥＴソルベントフロント変異（例えば、ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ／Ｓ／Ｃ}）により駆動される獲得耐性が出現してしまった（Subbiah, V et al., Ann Oncol. 2021, 32(2):261-268；Lin JJ et al., Ann Oncol. 2020, 31(12):1725-1733；Solomon BJ et al., J Thorac Oncol. 2020, 15(4):541-549；Fancelli S et al., Cancers (Basel). 2021, 13(5):1091. doi: 10.3390/cancers13051091を参照）。そのような場合、セルペルカチニブ又はプラルセチニブを用いて再発した後の患者に現在利用可能な他の治療選択肢は、存在しない。

【0199】

ゲートキーパー変異Ｖ８０４Ｌ／Ｍ及びセルペルカチニブ又はプラルセチニブ耐性変異Ｇ８１０Ｒ／Ｓを含む、ＲＥＴ野生型融合及びＲＥＴ変異に対する細胞性効力を、改変Ｂａ／Ｆ３細胞で調べた。９６ウェルプレート中１ウェルあたり約１０００の細胞を培養し、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、バンデタニブ、ＢＬＵ－６６７、又はＬＯＸＯ－２９２で７２時間（３７℃で３日間）、処理した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ２．０ Ａｓｓａｙ（Promega Corporation）を用いて、発光により細胞生存度を評価した。ＸＬｆｉｔソフトウェア（ID Business Solutions）でシグモイド用量応答モデルを用いて、ＧＩ５０値（化合物未処理対照のものと比較して５０％の増殖阻害をもたらす濃度）を計算した。データは、３回の独立実験から得られたデータの平均±ＳＤで表す。

【0200】

ＩＣ５０データを、表５に示す。Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ／Ｓ}細胞は、ＢＬＵ－６６７に対してだけでなく、ＬＯＸＯ－２９２に対しても耐性であることがわかった。しかしながら、Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ／Ｓ}細胞は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３に対して感受性であった。

【0201】

また、Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｖ８０４Ｌ／Ｍ}細胞は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＢＬＵ－６６７、及びＬＯＸＯ－２９２に対して感受性であったが、バンデタニブに対しては感受性でなかった。

【0202】

【表5】

【0203】

ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ／Ｓ}変異体がＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３に対して感受性であり続ける機構の解明を助けるため、ＴＡＳ化合物１（ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３と類似の構造を有する）、ＢＬＵ－６６７、及びＬＯＸＯ－２９２と複合体形成するＲＥＴキナーゼドメインの結晶構造を検査した。複合体のＸ線結晶構造から、ＴＡＳ化合物１は、ＢＬＵ－６６７及びＬＯＸＯ－２９２に比べて、ＲＥＴに対して独特の結合様式を有することが明らかとなった。共結晶構造データに基づき、図１２Ａに示すとおり、ＢＬＵ－６６７及びＬＯＸＯ－２９２は、ＲＥＴの同じポケット（ポケットＢ）に結合するが、一方でＴＡＳ化合物１は、異なる結合様式でＲＥＴの異なるポケット（ポケットＡ）に結合する。ＴＡＳ化合物１は、Ｇ８１０の側鎖方向で、空間を完全に埋めはせず、このことは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、ソルベントフロント置換による立体障害を有効に回避できることを示唆する。この特長が、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３がＧ８１０変異においてその生物学的効力を維持する能力に寄与している可能性が高い。

【0204】

ＴＡＳ化合物１の構造式は、以下のとおりである：

【化3】

【0205】

図１２Ｂ及び図１２Ｃは、ＲＥＴ共結晶複合体の構造解析を、ＲＥＴアミノ酸残基８０６番～８１０番の領域で拡大した図である。図１２Ｂは、ＲＥＴと、ＴＡＳ化合物１、ＢＬＵ－６６７、及びＬＯＸＯ－２９２との共結晶複合体を示し、図１２Ｃは、ＲＥＴとＴＡＳ化合物１の共結晶複合体を示す。グリシン８１０は、ＢＬＵ－６６７及びＬＯＸＯ－２９２のどちらにも接近しており、この位置での置換は、これらの阻害剤に対する立体障害に影響を及ぼす可能性がある。対照的に、ＴＡＳ化合物１は、アミノ酸残基８０６番～８１０番からなるポケットに挿入されていない。

【0206】

このデータは、ＲＥＴ変異（例えば、Ｇ８１０Ｒ／Ｓ）に対する阻害パターンが、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３とＢＬＵ－６６７／ＬＯＸＯ－２９２の間で異なるという生物学的データと一致する。

【0207】

実施例１５．ＲＥＴ変異体に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の薬理学的効果
ソルベントフロントＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ／Ａ／Ｃ／Ｄ／Ｓ}変異体を含む各種ＲＥＴ変異の、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＢＬＵ－６６７、及びＬＯＸＯ－２９２に対する感受性を、一過性遺伝子導入したＨＥＫ２９３細胞において、ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴリン酸化のＩｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（商標）（ＩＣＷ）分析により検査した。３回の独立実験に基づき、ＩＣ５０値を計算した。データを、以下の表６にまとめる。

【0208】

野生型ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴに対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の効力は、ＢＬＵ－６６７及びＬＯＸＯ－２９２のものと等価であった。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３により阻害されるＲＥＴ変異のパターンは、ＬＯＸＯ－２９２及びＢＬＵ－６６７により阻害されるものとは異なっていた。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、Ｇ８１０Ｘ変異を阻害し、ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｘ}のリン酸化を抑制するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３のＩＣ５０値は、３５．４ｎｍｏｌ／Ｌ～２８２ｎｍｏｌ／Ｌの範囲であった。Ｇ８１０Ｘ変異に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の効力は、ＢＬＵ－６６７及びＬＯＸＯ－２９２のものより高かった。また、Ｌ７３０Ｘ、Ｇ７３６Ａ、Ｌ７６０Ｑ、Ｌ７７２Ｍ、Ｙ８０６Ｃ、及びＡ８８３Ｖに対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の効力も、ＢＬＵ－６６７及びＬＯＸＯ－２９２のものより高かったが、一方でＩ７８８Ｎ及びＬ８６５Ｖに対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の効力は、ＢＬＵ－６６７及びＬＯＸＯ－２９２のものより低かった。これらのデータは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、他のＲＥＴ阻害剤、例えば、ＬＯＸＯ－２９２及び／又はＢＬＵ－６６７に対する耐性を示すＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴの点変異に対して有効である可能性を示唆する。

【0209】

発現ベクターの生成
Ｇａｔｅｗａｙ技術を用いて発現ベクターを生成させた。最初に、ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ ＰＣＲ産物、ｐＤＯＮＲ ２２１ベクター（Invitrogen Corporation）、及びＧａｔｅｗａｙ ＢＰ Ｃｌｏｎａｓｅ酵素ミックス（Invitrogen Corporation）を用いて、エントリーベクター（ｐＥＮＴＲ／ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ）を構築した。次いで、エントリーベクター、ｐＪＴＩ ＦＡＳＴ ＫＯ２－ＰｕｒｏＲ発現ベクター（これは大鵬薬品工業株式会社においてｐＪＴＩ－ＦＡＳＴ ＤＥＳＴ発現ベクター（Thermo Fisher Scientific）を用いて改変されている）、及びＧａｔｅｗａｙ ＬＲ Ｃｌｏｎａｓｅ酵素ミックス（Invitrogen Corporation）を用いて、ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ発現ベクターを構築した。

【0210】

Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ法
ＴｒａｎｓＩＴ－Ｘ２（Mirus Bio LLC.）を用いて、Ｊｕｍｐ－Ｉｎ ＧｒｉｐＴｉｔｅ ＨＥＫ２９３細胞に、ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ発現ベクターで一過性に遺伝子導入した。各試験化合物をさまざまな濃度で用いて１時間処理した後、細胞を、２０％ホルマリン中性緩衝液で固定した。次いで、マイクロプレートを、室温で１時間、Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ（商標）（ＰＢＳ）ブロック緩衝液（LI-COR Inc.）でブロックし、Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ（商標）（ＰＢＳ）ブロック緩衝液で希釈した一次抗体（抗リン酸化ＲＥＴ（Ｔｙｒ９０５）抗体（カタログ番号３２２１、Cell Signaling Technology, Inc.）及び抗ＲＥＴ抗体（カタログ番号ｓｃ－１０１４２２、Santa Cruz Biotechnology, Inc.））とともに、４℃で一晩インキュベートした。続いてマイクロプレートを洗い、二次抗体（ヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ及びヤギ抗マウスＩＲＤｙｅ ６８０ＲＤ）（LI-COR Inc.）とともにインキュベートした。

【0211】

マイクロプレートを洗った後、Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（LI-COR Inc.）を用いて、各ウェルの蛍光を定量した。Ｔ／Ｃ（％）は、以下のとおり特定した：
（試験化合物の平均シグナル）／（対照の平均シグナル）×１００
平均シグナル：（リン酸化ＲＥＴの蛍光－バックグラウンド）／（ＲＥＴの蛍光－バックグラウンド）

【0212】

ＸＬＦｉｔを用いて濃度対Ｔ／Ｃ（％）曲線から曲線当てはめによりＩＣ５０値を計算した。ＩＣ５０値は、３回の独立実験により特定した。

【0213】

【表6】

【0214】

実施例１６．Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}細胞を皮下移植したヌードマウスにおけるＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３の抗腫瘍効果の評価
ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}動物腫瘍モデルにおいて顕著な抗腫瘍効果及び際立った標的阻害を示した。このことは、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３が、Ｇ８１０Ｒ変異を持つＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ遺伝子陽性である腫瘍の治療において有効である可能性を示唆する。１０ｍｇ／ｋｇを１日２回というぐらい少ない用量で、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、腫瘍増殖及びリン酸化ＲＥＴを顕著に阻害した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、野生型ＲＥＴに対するその選択的で高い効力に加えて、Ｇ８１０Ｒソルベントフロント変異に対する顕著な効力も示す。Ｇ８１０Ｒソルベントフロント変異は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで、セルペルカチニブ及びプラルセチニブに対する耐性が高い。

【0215】

最初の試験では、Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}細胞（５×１０^６細胞／マウス）を、５０％マトリゲル（Corning Incorporated）／ＰＢＳに懸濁させ、オス無胸腺ヌードマウス（ＢＡＬＢ／ｃＡＪｃｌ－ｎｕ／ｎｕ、日本クレア株式会社）に皮下移植した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＬＯＸＯ－２９２、及びＢＬＵ－６６７を、０．１ｍｏｌ／ＬのＨＣｌを含有する０．５ｗ／ｖ％ＨＰＭＣ（信越化学工業株式会社）に配合した。移植から１週間後、マウスを、各群の平均腫瘍体積が等しくなるようにして無作為に異なる治療群に分け、ビークル（ｂｉｄ）、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３（１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）、ＬＯＸＯ－２９２（１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）、又はＢＬＵ－６６７（１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）を、１４日間経口投与した。ビークルとして０．１ｍｏｌ／ＬのＨＣｌを含有する０．５ｗ／ｖ％ＨＰＭＣを投与される群が、対照群であった。腫瘍の長さ及び幅を、デジタルノギス（株式会社ミツトヨ）を用いて測定し、腫瘍体積を以下のとおり計算した：［長さ×（幅）^２］／２。マウスの腫瘍体積及び体重を、試験終了まで、週に２回測定した。

【0216】

ダネットの検定を用いることにより統計上の有意性を特定し、処置群の腫瘍体積を対照群のものと比較した。統計分析は、ＥＸＳＵＳバージョン１０．０（株式会社ＣＡＣエクシケア）を介してＳＡＳバージョン９．４（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｊａｐａｎ株式会社）を使用して行った。０．０５未満のｐ値を、統計上の有意性を示すと見なした。

【0217】

図１３Ａ及び図１３Ｂは、腫瘍体積に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＬＯＸＯ－２９２、及びＢＬＵ－６６７の効果を示す。これらはそれぞれ、低用量１０ｍｇ／ｋｇ（図１３Ａ）及び高用量３０ｍｇ／ｋｇ（図１３Ｂ）で１日２回投与された。データは、平均±ＳＥで表した（各群、ｎ＝５）。図１３Ａに反映されるとおり、低用量処置群の中で、１０ｍｇ／ｋｇのＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３で処置した群だけが、試験終了時、対照群に比べて有意な腫瘍体積の減少を示した（^＊は、ｐ＜０．０５を反映する；ダネットの検定）。図１３Ｂに示すとおり、試験終了時、高用量処置群のそれぞれにおける腫瘍体積は、対照群に比べて減少していた（^＊は、ｐ＜０．０５を反映する；ダネットの検定）。そのうえ、図１３Ｂに示すとおり、試験終了時、３０ｍｇ／ｋｇで処置されたＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３群だけが、腫瘍の再増殖を示さず、一方でＬＯＸＯ－２９２群及びＢＬＵ－６６７群は、対照群と並行して腫瘍が再増殖する傾向を呈した。図１３Ｃは、治療期間中の体重に対する投薬量の効果を示す。群間で、体重変化に関して有意な変化はなかった。データは、平均±ＳＥで表した（各群、ｎ＝５）。ＢＬＵ－６６７の３０ｍｇ／ｋｇ群の１匹のマウスが、事故死した。

【0218】

第二の試験では、Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}細胞（５×１０^６細胞／マウス）を、５０％マトリゲル（Corning Incorporated）／ＰＢＳに懸濁させ、６週齢オス無胸腺ヌードマウス（ＢＡＬＢ／ｃＡＪｃｌ－ｎｕ／ｎｕ、日本クレア株式会社）に皮下移植した。ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＬＯＸＯ－２９２、及びＢＬＵ－６６７を、０．１ｍｏｌ／ＬのＨＣｌを含有する０．５ｗ／ｖ％ＨＰＭＣ（信越化学工業株式会社）に配合した。移植から５日後、マウスを、各群の平均腫瘍体積が等しくなるようにして無作為に異なる治療群に分け、ビークル（ｂｉｄ）、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３（５０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）、ＬＯＸＯ－２９２（３０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）、又はＢＬＵ－６６７（３０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ）を、１４日間経口投与した。ビークルとして０．１ｍｏｌ／ＬのＨＣｌを含有する０．５ｗ／ｖ％ＨＰＭＣを投与される群が、対照群であった。腫瘍の長さ及び幅を、デジタルノギス（株式会社ミツトヨ）を用いて測定し、腫瘍体積を以下のとおり計算した：［長さ×（幅）^２］／２。マウスの腫瘍体積及び体重を、試験終了まで、週に２回測定した。

【0219】

ダネットの検定を用いることにより統計上の有意性を特定し、処置群のＴＶを対照群のものと比較した。統計分析は、ＥＸＳＵＳバージョン１０．０（株式会社ＣＡＣエクシケア）を介してＳＡＳバージョン９．４（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｊａｐａｎ株式会社）を使用して行った。０．０５未満のｐ値を、統計上の有意性を示すと見なした。

【0220】

図１４Ａは、腫瘍体積に対する、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＬＯＸＯ－２９２、及びＢＬＵ－６６７の効果を示し、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、用量５０ｍｇ／ｋｇで１日２回投与され、ＬＯＸＯ－２９２及びＢＬＵ－６６７はそれぞれ、用量３０ｍｇ／ｋｇで１日２回投与される。データは、平均±ＳＥで表した（各群、ｎ＝５）。１５日目の平均腫瘍体積は、作用剤処置群において対照群よりも有意に小さかった（ｐ＜０．０５、ダネットの検定）。また、１５日目の平均腫瘍体積は、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３処置群においてＬＯＸＯ－２９２群及びＢＬＵ－６６７群よりも有意に小さかった（それぞれｐ＜０．０５、テューキーの検定）。ＬＯＸＯ－２９２及びＢＬＵ－６６７は、１５日目に腫瘍再増殖の傾向を示したものの、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３は、一貫した腫瘍退縮を呈した。図１４Ｂは、処置期間中の体重に対する投薬量の効果を示す。群間で、体重変化に関して有意な変化はなかった。データは、平均±ＳＥで表した（各群、ｎ＝５）。

【0221】

投与から１時間後の、Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}腫瘍におけるＲＥＴリン酸化に対するＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３、ＬＯＸＯ－２９２、及びＢＬＵ－６６７の阻害効果を、ウエスタンブロットにより評価した。Ｂａ／Ｆ３ ＫＩＦ５Ｂ－ＲＥＴ^{Ｇ８１０Ｒ}を担持するマウスに、ＨＭ０６を１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、若しくは５０ｍｇ／ｋｇで、又はＬＯＸＯ２９２及びＢＬＵ６６７を１０ｍｇ／ｋｇ若しくは３０ｍｇ／ｋｇで、それぞれ１回、経口投与した。投薬から１時間後、腫瘍を収集し、溶解させた。細胞溶解液を、免疫ブロットして、リン酸化ＲＥＴ（ｐＲＥＴ）、ＲＥＴ、及びＧＡＰＤＨ（対照）を検出した。図１５Ａ（最初の試験）及び図１５Ｂ（第二の試験）のウエスタンブロットに示されるとおり、対照群と比較して、ＨＭ０６／ＴＡＳ０９５３群においてＲＥＴリン酸化の際立った減少が観察され、一方でＬＯＸＯ－２９２群及びＢＬＵ－６６７群では、わずかな減少が観察された。

【0222】

上記の２つの試験それぞれにおいて、ウエスタンブロット法を行った。腫瘍を、投与の１時間後に収集した。Ｓａｍｐｌｅ Ｄｉｌｕｅｎｔ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ２（R&D Systems）に、ｃＯｍｐｌｅｔｅ（商標）、ｍｉｎｉ、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Roche Applied Science）及びＰｈｏｓＳＴＯＰ（商標）ホスファターゼ阻害剤カクテル（Roche Applied Science）を添加して用いて、腫瘍組織を溶解させた。溶解液を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥに供して、ＰＶＤＦ膜（Ｔｒａｎｓ－Ｂｌｏｔ ｔｕｒｂｏ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ；Bio-rad）に転写した。次いで、膜をＢｌｏｃｋｉｎｇ Ｏｎｅ－Ｐ（ナカライテスク株式会社.）でブロックし、一次抗体とともに４℃で一晩インキュベートした。リン酸化Ｒｅｔ（Ｔｙｒ９０５）抗体（＃３２２１、Cell Signaling Technology）、Ｒｅｔ（Ｃ３１Ｂ４）ウサギｍＡｂ（＃３２２３、Cell Signaling Technology）、及びＧＡＰＤＨ（Ｄ１６Ｈ１１）ＸＰ（商標）ウサギｍＡｂ（＃５１７４、Cell Signaling Technology）を、一次抗体として用いた。続いて、膜を洗い、二次抗体（＃７０７４、Cell Signaling Technology）とともに、室温で１時間インキュベートし、再度洗った。発光画像分析装置（Ａｍｅｒｓｈａｍ（商標） Ｉｍａｇｅｒ ６００ＱＣ、GEヘルスケア・ジャパン株式会社）により化学発光画像を得た。ＧＡＰＤＨは、内部対照として用いた。

【0223】

等価物
上記に記述された明細書は、当業者が実施形態を実施することを可能にするのに十分であると見なされる。上記の説明及び実施例は、或る特定の実施形態の詳細を説明するものであり、本発明者らが企図する最適様式を記載するものである。しかし、当然のことながら、上記のものが文章においてどれほど詳細に説明されているかに関わらず、実施形態は、多くのやり方で実施することができ、添付の特許請求の範囲及びそれらの任意の等価物に従って解釈されなければならない。

【0224】

本明細書中使用される場合、約という用語は、明示されているか否かに関わらず、数値を指し、数値には、例えば、整数、分数、及びパーセンテージが含まれる。約という用語は、一般に、記載される値と等価である（例えば、同じ機能又は結果を有する）と当業者が判断すると思われるある数値範囲を指す（例えば、記載される範囲の±５％～１０％）。少なくとも及び約等の用語が数値又は範囲の列挙に先行する場合、その用語は、その列挙に提示される数値又は範囲の全てを修飾する。一部の例において、約という用語は、最も近い有効数字に丸められた数値を含むことができる。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図14A】

【図14B】

【図15A】

【図15B】

【配列表】

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【国際調査報告】