特表 2024-501023 活性化抗原担体を用いるがんを処置するための方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-10

(54)【発明の名称】活性化抗原担体を用いるがんを処置するための方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/12 20060101AFI20231227BHJP

   A61K 35/18 20150101ALI20231227BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20231227BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231227BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20231227BHJP

   C07K 14/025 20060101ALN20231227BHJP

   C12N 5/078 20100101ALN20231227BHJP

   C12N 15/117 20100101ALN20231227BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20231227BHJP

【ＦＩ】

A61K39/12

A61K35/18

A61K39/395 T

A61P31/20

A61P35/00

A61P37/04

A61P43/00 121

C07K16/28 ZNA

C07K14/025

C12N5/078

C12N15/117 Z

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023539282

(86)(22)【出願日】2021-12-28

(85)【翻訳文提出日】2023-08-25

(86)【国際出願番号】 US2021073143

(87)【国際公開番号】W WO2022147443

(87)【国際公開日】2022-07-07

(31)【優先権主張番号】63/131,506

(32)【優先日】2020-12-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518071763

【氏名又は名称】スクイーズ バイオテクノロジーズ カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ローゼン， オリバー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA91X

4B065AA93X

4B065BA21

4B065BD09

4B065BD12

4B065BD35

4B065BD39

4B065CA44

4C085AA03

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA38

4C085BA76

4C085BB01

4C085BB11

4C085CC08

4C085CC12

4C085DD62

4C085DD84

4C085DD86

4C085EE01

4C085EE06

4C085FF14

4C085GG02

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB36

4C087CA04

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZB09

4C087ZB26

4C087ZB33

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA76

4H045DA86

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本出願は、ＨＰＶ関連がんを処置するための活性化抗原担体（ＡＡＣ）を提供する。ＡＡＣは、少なくとも１つの抗原およびアジュバントが細胞内に送達された無核細胞に由来する。一部の実施形態では、ＡＡＣは、ＣＴＬＡ４アンタゴニストおよび／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アゴニストなどのチェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを処置するための方法であって、有効量の活性化抗原担体（ＡＡＣ）を含む組成物を個体に投与するステップであって、有効量は、約０．１×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇであり、ＡＡＣは、細胞内に送達される少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップを含む、方法を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを処置するための方法であって、有効量の活性化抗原担体（ＡＡＣ）を含む組成物を前記個体に投与するステップであって、前記有効量は、約０．１×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇであり、前記ＡＡＣは、細胞内に送達される少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップを含む、方法。

【請求項2】

個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを処置するための方法であって、
有効量の活性化抗原担体（ＡＡＣ）を含む組成物を前記個体に投与するステップであって、前記ＡＡＣは、細胞内に送達される少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップ、ならびに
有効量のＣＴＬＡ－４のアンタゴニストおよび／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【請求項3】

前記ＣＴＬＡ４のアンタゴニストが、ＣＴＬＡ４に結合する抗体である、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストが、ＰＤ－１に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である、請求項２または３に記載の方法。

【請求項5】

ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体が、前記個体に投与される、請求項３または４に記載の方法。

【請求項6】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブである、請求項３～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブである、請求項４～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ペムブロリズマブである、請求項４～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、前記個体に投与され、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、前記個体に投与される、請求項４～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブである、請求項４および９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ－１６抗原またはＨＰＶ－１８抗原である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドが、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記ＡＡＣが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原および配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記個体が、ヒトである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記個体が、ＨＬＡ－Ａ^＊０２について陽性である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記ＡＡＣが、前記個体に対して自家または同種異系である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ＨＰＶ関連がんが、現在局所進行性または転移性がんである、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記ＨＰＶ関連がんが、頭頸部がん、子宮頸がん、肛門がんまたは食道がんである、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

ＡＡＣを含む前記組成物が、静脈内に投与される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記ＣＴＬＡ－４のアンタゴニストおよび／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストが、静脈内、経口、または皮下に投与される、請求項２～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体および／または前記ＰＤ－１に結合する抗体および／または前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、静脈内に投与される、請求項３～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントを含むＡＡＣの前記有効量が、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇである、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントを含むＡＡＣの前記有効量が、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約７．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇである、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントを含むＡＡＣの前記有効量が、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、または約７．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇである、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

イピリムマブの前記有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇである、請求項６～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

ニボルマブの前記有効量が、約３６０ｍｇである、請求項７および１１～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

アテゾリズマブの前記有効量が、約１２００ｍｇである、請求項１０～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記ＡＡＣを含む前記組成物が、３週間サイクルの１日目に送達される、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記ＡＡＣを含む前記組成物が、最初の３週間サイクルの２日目にさらに投与される、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ～約１×１０^９個細胞／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される、請求項３３または３４に記載の方法。

【請求項36】

約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約２．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約５．０×１０^８個細胞／ｋｇ、または約７．５×１０^８個細胞／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ～約１×１０^９個細胞／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの２日目に投与される、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約２．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約５．０×１０^８個細胞／ｋｇ、または約７．５×１０^８個細胞／ｋｇが、最初の３週間サイクルの２日目に投与される、請求項３３～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

ＣＴＬＡ－４に結合する抗体および／またはＰＤ－１に結合する抗体および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、３週間サイクルあたり１回に投与される、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、２回の３週間サイクルあたり１回投与される、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、それぞれの３週間サイクルの１日目または２回の３週間サイクルの１日目に投与される、請求項３３～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブであり、前記イピリムマブが、約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項３９～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

ＰＤ－１に結合する抗体が、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される、請求項３３～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブであり、前記ニボルマブが、約３６０ｍｇの用量で投与される、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブであり、前記イピリムマブが、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、２回の３週間サイクルの最初の３週間サイクルの１日目に投与され、前記ＰＤ－１に結合する抗体が、約３６０ｍｇの用量で、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される、請求項３９～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される、請求項３３～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブであり、前記アテゾリズマブが、約１２００ｍｇの用量で投与される、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

ＰＢＭＣを含む前記組成物が、少なくとも約３か月間、６か月間、９か月間または１年間、前記個体に投与される、請求項１～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

ＡＡＣを含む前記組成物が、凍結保存媒体中に約１×１０^９ＡＡＣ～約１×１０^１０ＡＡＣを含む、請求項１～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

ＡＡＣを含む前記組成物が、約１０ｍＬの凍結保存媒体中に約７×１０^９ＰＢＭＣを含む、請求項１～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記凍結保存媒体が、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２である、請求項４９または５０に記載の方法。

【請求項52】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む前記ＡＡＣが、
ａ）インプット無核物の集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記抗原が前記摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞の前記集団を前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントを含む前記ＡＡＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記狭窄の直径が、約１．６μｍ～約２．４μｍまたは約１．８μｍ～約２．２μｍである、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記インプット無核細胞が、赤血球細胞である、請求項５２または５３に記載の方法。

【請求項55】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドおよびＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む、請求項５２～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項５２～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項５２～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記ＡＡＣが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原および配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む、請求項５２～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項59】

前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、請求項５２～５８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項60】

前記アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、請求項５９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１２月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／１３１，５０６号の利益を主張し、この全内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける配列表の提出

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける以下の提出の内容は、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる：コンピューター可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５０３２２００３５４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年１２月２３日、サイズ：１３，０３３バイト）。

【0003】

発明の分野
本開示は、一般に、ＨＰＶ関連がんを有する個体を処置するための、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む活性化抗原担体（ＡＡＣ）を使用する方法、その用量およびレジメンに関する。少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むそのようなＡＡＣを製造する方法、ならびにその組成物も開示する。

【背景技術】

【0004】

発明の背景
パピローマウイルスは、直径が約５５ｎｍのビリオンサイズを有する小さな非エンベロープＤＮＡウイルスである。１００を超えるＨＰＶ遺伝子型が完全に特徴付けられ、より多くの数が存在すると推定される。ＨＰＶは、子宮頸がん、ならびに一部の外陰、膣、陰茎、中咽頭、肛門および直腸がんの公知の原因である。ほとんどのＨＰＶ感染症は、無症状で自然に消失するが、腫瘍形成性のＨＰＶ型の１つによる持続感染は、前がん状態またはがんに進行し得る。他のＨＰＶ関連疾患としては、尋常性疣贅、足底疣贅、扁平疣贅、肛門性器疣贅、肛門病変、表皮異形成、局所性上皮肥厚、口腔乳頭腫、疣贅嚢胞（ｖｅｒｒｕｃｏｕｓ ｃｙｓｔ）、喉頭乳頭腫症、扁平上皮内病変（ＳＩＬ）、子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰部上皮内腫瘍（ＶＩＮ）および膣上皮内腫瘍（ＶＡＩＮ）を挙げることができる。

【0005】

公知のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）型の多くは、腫瘍形成性であるサブセットによる良性病変を引き起こす。疫学的および系統発生学的な関係に基づいて、ＨＰＶ型は、１５種の「高リスク型」（ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２）および３種の「おそらく高リスク型」（ＨＰＶ２６、５３、および６６）に分類され、これらは、一緒に、低および高悪性度の子宮頸部の変化およびがん、ならびに外陰、膣、陰茎、肛門がんおよび肛門周囲がんなどの他の肛門性器がん、ならびに頭頸部がんとして現れることが公知である。最近、高リスク型のＨＰＶ１６および１８と乳がんとの関連も記載されている。「低リスク型」として分類される１１種のＨＰＶ型（ＨＰＶ６、１１、４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２および８１）は、良性の低悪性度の子宮頸部の変化、性器疣贅および再発性呼吸器乳頭腫症として現れることが公知である。皮膚のＨＰＶ型５、８および９２は、皮膚がんと関連する。一部のＨＰＶ関連がんでは、免疫系は抑制され、それに応じて、抗腫瘍応答は有意に損なわれる。Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７ （２０１７）を参照されたい。

【0006】

免疫療法は、概ね、受動的または能動的のいずれかの、２つの主な種類の介入に分けることができる。受動的プロトコールは、事前に活性化されたおよび／もしくは操作された細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）、疾患特異的治療用抗体、ならびに／またはサイトカインの投与を含む。能動免疫療法の戦略は、ｉｎ ｖｉｖｏで免疫系エフェクター機能を刺激することを対象とする。いくつかの現在の能動的プロトコールは、疾患関連ペプチド、溶解物、または同種異系細胞全体によるワクチン接種戦略、腫瘍抗原送達のためのビヒクルとしての自家樹状細胞（ＤＣ）の注入、および免疫チェックポイントモジュレーターの注入を含む。Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ， Ｎｉｋｏｓ Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４ （２０１６）を参照されたい。養子免疫療法は、免疫応答をモジュレートするため、抗腫瘍活性を増強するため、およびＨＰＶ関連がんを処置または予防する目標を達成するために用いられ得る。
疾患関連抗原によって刺激されたＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）およびＣＤ４^＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞は、罹患細胞を標的にし、破壊する潜在力を有するが、内因性Ｔ細胞応答を誘導するための現在の方法は、課題に直面している。本明細書に記載の方法を使用して、ハイスループット方法におけるＨＰＶ抗原および／もしくはアジュバントを含む無核細胞または無核細胞由来実体であり得、ＨＰＶ抗原に対するロバストなＴ細胞応答を誘導するのに利用され得る、ＡＡＣが効率的に作出される。本明細書に記載の方法は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを使用するＨＰＶ関連がんを有する個体を処置するための、方法、処置、用量ならびにレジメンも記載する。
特許出願および刊行物を含む、本明細書において引用されるすべての参照文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。特許公開ＷＯ２０１３／０５９３４３、ＷＯ２０１５／０２３９８２、ＷＯ２０１６／０７０１３６、ＷＯ２０１７０４１０５０、ＷＯ２０１７００８０６３、ＷＯ２０１７／１９２７８５、ＷＯ２０１７／１９２７８６、ＷＯ２０１９／１７８００５、ＷＯ２０１９／１７８００６、ＷＯ２０２０／０７２８３３、ＷＯ２０２０／１５４６９６、およびＷＯ２０２０／１７６７８９、ＵＳ２０１８０１４２１９８、およびＵＳ２０１８０２０１８８９は、それらの全体が参照により明示的に本明細書に組み込まれる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】国際公開第２０１３／０５９３４３号

【特許文献2】国際公開第２０１５／０２３９８２号

【特許文献3】国際公開第２０１６／０７０１３６号

【特許文献4】国際公開第２０１７／０４１０５０号

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７ （２０１７）を参照されたい。

【非特許文献2】Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ， Ｎｉｋｏｓ Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４ （２０１６）

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0009】

発明の簡単な概要
一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを処置するための方法であって、有効量の活性化抗原担体（ＡＡＣ）を含む組成物を個体に投与するステップであって、有効量は、約０．１×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇであり、ＡＡＣは、細胞内に送達される少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップを含む、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを処置するための方法であって、有効量の活性化抗原担体（ＡＡＣ）を含む組成物を個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、細胞内に送達される少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップ、ならびに有効量のＣＴＬＡ－４のアンタゴニストおよび／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストを個体に投与するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ４のアンタゴニストが、ＣＴＬＡ４に結合する抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストが、ＰＤ－１に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体が、個体に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体が、ペムブロリズマブである。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、個体に投与され、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、個体に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブである。

【0010】

本発明の一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ－１６抗原またはＨＰＶ－１８抗原である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドが、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＡＣが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原および配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む。

【0011】

一部の実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。

【0012】

一部の実施形態では、個体が、ヒトである。一部の実施形態では、個体が、ＨＬＡ－Ａ^＊０２について陽性である。一部の実施形態では、ＡＡＣが、個体に対して自家または同種異系である。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんが、現在局所進行性または転移性がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんが、頭頸部がん、子宮頸がん、肛門がんまたは食道がんである。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物が、静脈内に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４のアンタゴニストおよび／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストが、静脈内、経口、または皮下に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体および／またはＰＤ－１に結合する抗体および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、静脈内に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの有効量が、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの有効量が、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの有効量が、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、または約７．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇである。

【0013】

一部の実施形態では、イピリムマブの有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、ニボルマブの有効量が、約３６０ｍｇである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量が、約１２００ｍｇである。

【0014】

一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物が、３週間サイクルの１日目に送達される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物が、最初の３週間サイクルの２日目にさらに投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ～約１×１０^９個細胞／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約２．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約５．０×１０^８個細胞／ｋｇ、または約７．５×１０^８個細胞／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ～約１×１０^９個細胞／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約２．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約５．０×１０^８個細胞／ｋｇ、または約７．５×１０^８個細胞／ｋｇが、最初の３週間サイクルの２日目に投与される。

【0015】

一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体および／またはＰＤ－１に結合する抗体および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、３週間サイクルあたり１回に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、２回の３週間サイクルあたり１回投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブであり、イピリムマブが、約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体が、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブであり、ニボルマブが、約３６０ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブであり、イピリムマブが、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、２回の３週間サイクルの最初の３週間サイクルの１日目に投与され、ＰＤ－１に結合する抗体が、約３６０ｍｇの用量で、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、約１２００ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物が、少なくとも約３か月間、６か月間、９か月間または１年間、個体に投与される。

【0016】

一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物が、凍結保存媒体中に約１×１０^９ＡＡＣ～約１×１０^１０ＡＡＣを含む。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物が、約１０ｍＬの凍結保存媒体中に約７×１０^９ＰＢＭＣを含む。一部の実施形態では、凍結保存媒体が、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣが、ａ）インプット無核物の集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ならびにｂ）抗原が摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞の集団を少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、狭窄の直径が、約１．６μｍ～約２．４μｍまたは約１．８μｍ～約２．２μｍである。一部の実施形態では、インプット無核細胞が、赤血球細胞である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドおよびＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】図１は、コホート１のための処置レジメンを示す。

【0018】

【図2】図２は、コホート２ａのための処置レジメンを示す。

【0019】

【図3】図３は、コホート２ｂのための処置レジメンを示す。

【0020】

【図4】図４は、コホート２ｃのための処置レジメンを示す。

【0021】

【図5】図５Ａおよび５Ｂは、ＦＡＣＳを使用するアネキシンＶ＋事象の数によって測定される、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣ対処理されていない赤血球細胞の表面ホスファチジルセリンレベルを示す。細胞を、ＰＢＳ（図５Ａ）またはＲＰＭＩ（図５Ｂ）中で処理した。

【0022】

【図6】図６は、ＦＡＭ＋事象のパーセンテージを示す（シングレットに対してゲート）。ＡＡＣ－ＨＰＶおよび処理されていないＲＢＣを、陰性対照として使用する。群ごとに示されるそれぞれの点は、丸によって表される別々の実験において分析された個々のドナーについてのデータに由来する。第３の実験について示される値（それぞれの条件について右の丸）は、反復試料からのデータの平均である。

【0023】

【図7】図７は、アネキシンＶ＋事象のパーセンテージを示す（シングレットに対してゲート）。処理されていないＲＢＣを、陰性対照として使用する。群ごとに示されるそれぞれの点は、丸によって表される別々の実験において分析された個々のドナーについてのデータに由来する。第３の実験について示される値（それぞれの条件について右の丸）は、反復試料からのデータの平均である。

【0024】

【図8】図８は、示される３人の別々のドナー由来のＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）の代表画像を示す（ＦＡＭは緑色で示され、ＰＢは青色で示される）。ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）の長さにわたって描かれた線と一緒に（最小および最大シグナルに対して）正規化されたＦＡＭ（緑色）およびＰＢ（青色）蛍光強度を表すグラフは、それぞれの画像の下に示す。

【0025】

【図9】図９は、示される３人の別々のドナー由来のＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）の代表画像を示す（ＦＡＭは緑色で示され、ＰＢは青色で示される）。ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）の長さにわたって描かれた線と一緒に（最小および最大シグナルに対して）正規化されたＦＡＭ（緑色）およびＰＢ（青色）蛍光強度を表すグラフは、それぞれの画像の下に示す。

【0026】

【図10】図１０は、示される３人の別々のＲＢＣドナー由来の、ＦＡＭ蛍光についての陰性対照として使用されるＡＡＣ－ＨＰＶの代表画像を示す（ＦＡＭは緑色で示され、ＰＢは青色で示される）。ＡＡＣ－ＨＰＶの長さにわたって描かれた線と一緒に正規化されたＦＡＭ（緑色）およびＰＢ（青色）蛍光強度を表すグラフは、それぞれの画像の下に示す。Ａにおける表示セッティングは、図８におけるＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）のために使用された表示セッティングに対応する。Ｂにおける表示セッティングは、図９におけるＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）のために使用された表示セッティングに対応する。

【0027】

【図11】図１１は、３７℃（赤色）および４℃（青色）でインキュベートされたＣＤ１１ｃ＋ＭＯＤＣ／ＰＫＨ２６標識ＡＡＣ－ＨＰＶ共培養物ならびに３７℃（緑色）でインキュベートされたＭＯＤＣ／ＡＡＣ－ＨＰＶ共培養物において測定された、ＰＫＨ２６蛍光（生物学的反復の平均±平均の標準偏差）を示す。表示目的のために、（ＰＫＨ２６標識）ＡＡＣ－ＨＰＶなしの条件を、ｘ軸に０．２でプロットした。それぞれのグラフは、独立した実験を表す。それぞれの実験は、別個のヒト血液およびＭＯＤＣドナーを用いて行った。

【0028】

【図12】図１２は、対照媒体のみとの比較において、Ｃ媒体またはＡＡＣ－ＨＰＶとの３７℃での共培養の４６時間後のＭＯＤＣにおけるＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、およびＭＨＣ－ＩＩの表面レベルの幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）の倍数変化を示す要約データを提示する。個々のＭＯＤＣドナーからのデータを、異なる丸として示す。^＊＝Ｐ＜０．０５；^＊＊＝Ｐ＜０．０１。

【0029】

【図13】図１３は、ＭＯＤＣおよび媒体対照、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ、またはＥ７ ＳＬＰなしとの共培養の約２４時間後のＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞から分泌されたＩＦＮγ値を表すグラフを示す。それぞれのグラフは、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの別個のバッチとの共培養に対応する。ＭＯＤＣおよびＣＤ８＋ Ｔ細胞共培養物を、媒体対照、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ、またはＥ７ペプチドなしとともにインキュベートした。それぞれの個々のデータポイント（完全な丸）は、共培養試料の個々のウェルに対応する。ＦＰ数は、バッチ数を表す。

【0030】

【図14】図１４は、２つの独立した実験からの、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶまたはＭ－Ｃ媒体の投与の１４～１６時間後のＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ８^＋細胞（ＣＤ８^＋ ＤＣ）、ＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ１１ｂ^＋細胞（ＣＤ１１ｂ^＋ ＤＣ）およびＦ４／８０^＋ＣＤ１１ｂ^ｌｏ／－細胞（ＲＰＭ）のＣＤ８６幾何ＭＦＩの要約データを示す。それぞれのグラフは、別々の実験を表す。Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスは、Ｍ－Ｃ媒体を受けたマウスとの比較において、より高いＣＤ８６幾何ＭＦＩを有していた。^＊＝Ｐ＜０．０５。

【0031】

【図15】図１５は、２つの独立した実験からの、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶまたはＭ－Ｃ媒体の投与の１４～１６時間後のＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ８^＋細胞（ＣＤ８^＋ ＤＣ）、ＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ１１ｂ^＋細胞（ＣＤ１１ｂ^＋ ＤＣ）およびＦ４／８０^＋ＣＤ１１ｂ^ｌｏ／－（ＲＰＭ）のＣＤ８３幾何ＭＦＩの要約データを示す。ＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ８^＋細胞（ＣＤ８^＋ ＤＣ）およびＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ１１ｂ^＋細胞（ＣＤ１１ｂ^＋ ＤＣ）は、Ｍ－Ｃ媒体を受けたマウスと比較して、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスにおいてより高いＣＤ８３幾何ＭＦＩを有していた。留意すべきことには、１実験におけるＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ１１ｂ^＋細胞（ＣＤ１１ｂ^＋ ＤＣ）のＣＤ８３幾何ＭＦＩは、負のデータ値を有し、したがって、グラフに表していない。Ｂａｇｗｅｌｌ ＢＳ ａｎｄ Ｐａｒｋ ＤＲ， ｅｔ ａｌによって述べられたように、多重パラメーターフローサイトメトリーデータを適切に解釈するために必要なスペクトルのクロスオーバー比較は、減算プロセスである。結果として、蛍光補償後の、本質的に染色されないか、または特定の色素に対して陰性である細胞集団についてのデータ値は、程度の差はあるが、通常は低い値の周囲に分布するはずである。したがって、一般に（および適切に）コンピューター補償から得られるデータセットは、分布がゼロを下回って広がる集団を含む。^＊＝Ｐ＜０．０５。

【0032】

【図16】図１６は、２つの独立した実験からの、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶまたはＭ－Ｃ媒体の投与の１４～１６時間後のＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ８^＋細胞（ＣＤ８^＋ ＤＣ）、ＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ１１ｂ^＋細胞（ＣＤ１１ｂ^＋ ＤＣ）およびＦ４／８０^＋ＣＤ１１ｂ^ｌｏ／－細胞（ＲＰＭ）のＣＤ４０幾何ＭＦＩの要約データを示す。それぞれのグラフは、別々の実験を表す。ＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ８^＋細胞（ＣＤ８^＋ ＤＣ）およびＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ１１ｂ^＋細胞（ＣＤ１１ｂ^＋ ＤＣ）は、Ｍ－Ｃ媒体を受けたマウスと比較して、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスにおいてより高いＣＤ４０幾何ＭＦＩを有していた。^＊＝Ｐ＜０．０５。

【0033】

【図17】図１７は、２つの独立した実験からの、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶまたはＭ－Ｃ媒体の投与の１４～１６時間後のＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ８^＋細胞（ＣＤ８^＋ ＤＣ）、ＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ１１ｂ^＋細胞（ＣＤ１１ｂ^＋ ＤＣ）およびＦ４／８０^＋ＣＤ１１ｂ^ｌｏ／－細胞（ＲＰＭ）のＣＤ８０幾何ＭＦＩの要約データを示す。それぞれのグラフは、別々の実験を表す。ＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ８^＋細胞（ＣＤ８^＋ ＤＣ）およびＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ１１ｂ^＋細胞（ＣＤ１１ｂ^＋ ＤＣ）は、Ｍ－Ｃ媒体を受けたマウスと比較して、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスにおいてより高いＣＤ８０幾何ＭＦＩを有していた。^＊＝Ｐ＜０．０５。

【0034】

【図18】図１８は、２つの独立した実験からの、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶまたはＭ－Ｃ媒体の投与の１４～１６時間後のＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ８^＋細胞（ＣＤ８^＋ ＤＣ）、ＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ１１ｂ^＋細胞（ＣＤ１１ｂ^＋ ＤＣ）およびＦ４／８０^＋ＣＤ１１ｂ^ｌｏ／－細胞（ＲＰＭ）のＭＨＣ－ＩＩ幾何ＭＦＩの要約データを示す。それぞれのグラフは、別々の実験を表す。ＣＤ１１ｃ^ｈｉＭＨＣ－ＩＩ^ｈｉＣＤ８^＋細胞（ＣＤ８^＋ ＤＣ）およびＦ４／８０^＋ＣＤ１１ｂ^ｌｏ／－細胞（ＲＰＭ）は、Ｍ－Ｃ媒体を受けたマウスと比較して、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスにおいてより高いＭＨＣ－ＩＩ幾何ＭＦＩを有していた。ＮＡは「該当なし」を表す。^＊＝Ｐ＜０．０５。

【0035】

【図19】図１９は、Ｅ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞応答のプライミングにおける抗原（Ｅ７ ＳＬＰ）およびアジュバント（ポリＩ：Ｃ）についての要件を示す。ＩＦＮγ^＋ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞のパーセンテージを示す。^＊＊＊＊＝Ｐ＜０．０００１。

【0036】

【図20】図２０は、Ｅ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞応答の大きさに対するｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ用量の効果を示す。ＩＦＮγ^＋ ＣＤ４４^＋ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞のパーセントを示す。Ｂ＝１０^９；Ｍ＝１０^６。ｎ．ｓ．＝統計学的に有意ではない（Ｐ≧０．０５）；^＊＝Ｐ＜０．０５；^＊＊＊＝Ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊＝Ｐ＜０．０００１。

【0037】

【図21】図２１は、それぞれの群について全血において測定されたＥ７－四量体^＋活性化（ＣＤ４４^ｈｉ）ＣＤ８^＋ Ｔ細胞のパーセンテージを示す。データは以下について表す：ＰＢＳ（０日目）～最終用量の８日後（研究８日目）；プライム単独（０日目）～最終用量の８日後（研究８日目）、ブースト（２日目）～最終用量の８日後（研究１０日目）；ブースト（６日目）～最終用量の７日後（研究１３日目）。^＊＊＝Ｐ＜０．０１；^＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。

【0038】

【図22】図２２は、それぞれの群について全血において測定されたＥ７－四量体^＋活性化（ＣＤ４４^ｈｉ）ＣＤ８^＋ Ｔ細胞のパーセンテージを示す。データは以下について表す：ＰＢＳ（０日目）～最終用量の１３日後（研究１３日目）；プライム単独（０日目）～最終用量の１３日後（研究１３日目）、ブースト（２日目）～最終用量の１３日後（研究１５日目）；ブースト（６日目）～最終用量の１４日後（研究２１日目）。^＊＊＝Ｐ＜０．０１；^＊＊＊＊＝Ｐ＜０．０００１。

【0039】

【図23】図２３は、それぞれの群について全血において測定されたＥ７－四量体^＋活性化（ＣＤ４４^ｈｉ）ＣＤ８^＋ Ｔ細胞のパーセンテージを示す。データは以下について表す：ＰＢＳ（０日目）～最終用量の２１日後（研究２１日目）；プライム単独（０日目）～最終用量の２１日後（研究２１日目）、ブースト（２日目）～最終用量の２１日後（研究２３日目）；。^＊＊＝Ｐ＜０．０１。

【0040】

【図24】図２４Ａおよび２４Ｂは、２つの実験における経時的なそれぞれの実験群について示される腫瘍体積（平均±平均の標準誤差）の要約データを示す。線は、その群について生存期間中央値が到達した時に終了する。「Ｍ」は１００万を表し；「Ｂ」は１０億を表す。

【0041】

【図25】図２５は、２つの異なる実験群についての生存データを示す。括弧内の数字は、生存期間中央値（日）を示す。

【0042】

【図26】図２６は、経時的なそれぞれの実験群についての腫瘍体積（平均±平均の標準誤差）の要約データを示す。線は、その群について生存期間中央値に到達した時に終了する。「Ｂ」は１０億を表し、「Ｍ」は１００万を表す。ｎ＝１０マウス／群。

【0043】

【図27】図２７は、実験群についての生存データを示す。括弧内の数字は、生存期間中央値を示す。

【0044】

【図28】図２８は、（Ａ～Ｂ）実験１および（Ｃ～Ｄ）実験２における経時的なそれぞれの実験群についての腫瘍体積（平均±平均の標準誤差）の要約データを示す。線は、その群について生存期間中央値に到達した時に終了する。「Ｍ」は１００万を表す。ｎ＝１０マウス／群。

【0045】

【図29】図２９は、２つの実験群についての生存データを示す。括弧内の数字は、生存期間中央値（日）を示す。「Ｍ」は１００万を表す。ｎ＝１０マウス／群。

【0046】

【図30】図３０Ａ～３０Ｆは、生細胞集団のパーセンテージとして示されるＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを示す。（図３０Ｂ、図３０Ｅ）。Ｅ７特異的（四量体^＋）細胞のパーセンテージを、生細胞集団のパーセンテージとして、および（図３０Ｃ、図３０Ｆ）ＣＤ８＋ Ｔ細胞集団のパーセンテージとして示す。（図３０Ａ～３０Ｃ）実験１および（図３０Ｄ～３０Ｆ）実験２からのデータを示す。ＰＢＳ処置群と比較したＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶ処置群の統計学的有意性を示す（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【0047】

【図31】図３１Ａ～３１Ｄは、１００ｍｇの腫瘍に対して正規化された、それぞれ、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞およびＥ７特異的（四量体^＋）ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の数を表すグラフを示す。ＰＢＳ処置群と比較したＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶ処置群の統計学的有意性を示す（^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１）。

【0048】

【図32】図３２は、経時的なそれぞれの実験群に含まれるマウスについての平均腫瘍体積の要約データを示す。Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる免疫を、１４日目（実験１）または１３日目（実験２）において行い、点線として示した。データ（平均±平均の標準誤差）を、腫瘍が収集された時（実験２について２６日目、実験２について２５日目）まで示す。免疫後１２日目の時点（腫瘍移植の２５日または２６日後）が、十分な腫瘍材料を確実にするために選択され、処置群における処理および分析に利用可能であることに留意すべきである。

【0049】

【図33】図３３は、ルミネックス分析によって測定されるｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの反復静脈内投与後のマウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏ血清サイトカイン／ケモカイン分析についての研究設計を示す。

【0050】

【図34】図３４は、全血におけるＰＫＨ２６標識細胞のパーセントを示す。^＊＝Ｐ＜０．０５（Ｐ値を、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶにおける示された時点でのＰＫＨ２６標識細胞のパーセンテージをＰＢＳ対照における対応する時点と比較することによって算出した）。

【発明を実施するための形態】

【0051】

発明の詳細な説明
一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを処置するための方法であって、有効量の活性化抗原担体（ＡＡＣ）を含む組成物を個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップを含む、方法を提供する。

【0052】

一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連がんを処置するための方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物を個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップ、ならびに有効量の１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４のアンタゴニスト（限定されるものではないが、イピリムマブなど）、ＰＤ－１のアンタゴニスト（限定されるものではないが、ニボルマブなど）、および／または、ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニスト（限定されるものではないが、アテゾリズマブなど）を含む。

【0053】

一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連がんを処置するための方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物を個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップ、ならびに有効量のイピリムマブ、ニボルマブ、またはアテゾリズマブのうちの１つまたは複数を投与するステップであって、ＡＡＣは、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むステップを含み、ならびに／あるいは１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤は、３週間サイクルで投与され、ＡＡＣの有効量は、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇであり、イピリムマブの有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇであり、ニボルマブの有効量は、約３６０ｍｇ／ｋｇであり、アテゾリズマブの有効量は、約１２００ｍｇである、方法を提供する。

【0054】

少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物および少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを調製する方法も提供される。一部の実施形態では、ＡＡＣは、ａ）インプット無核物の集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ならびにｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞の集団を少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。ＨＰＶ抗原に対する免疫応答の誘導における使用のための、またはＨＰＶ関連がんを処置するための、組成物も提供される。ＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激するためのまたはＨＰＶ関連がんを処置するための医薬の製造における、有効量のＡＡＣを含む組成物の使用も提供される。

【0055】

一般技法
本明細書に記載または参照される技法および手順は、一般に、十分に理解されており、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， ４^ｔｈ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．， ２０１２）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ．， ２００３）；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．）；ＰＣＲ ２： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｍ．Ｊ． ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ， Ｂ．Ｄ． Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ． Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．， １９９５）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， ｅｄｓ．， １９８８）；Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ： Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ （Ｒ．Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， ６^ｔｈ ｅｄ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， ２０１０）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ （Ｍ．Ｊ． Ｇａｉｔ， ｅｄ．， １９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ； Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ （Ｊ．Ｅ． Ｃｅｌｌｉｓ， ｅｄ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， １９９８）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ （Ｊ．Ｐ． Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ． Ｒｏｂｅｒｔｓ， Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， １９９８）；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ： Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ （Ａ． Ｄｏｙｌｅ， Ｊ．Ｂ． Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ， ａｎｄ Ｄ．Ｇ． Ｎｅｗｅｌｌ， ｅｄｓ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， １９９３－８）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｄ．Ｍ． Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ． Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ， ｅｄｓ．， １９９６）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ （Ｊ．Ｍ． Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ． Ｃａｌｏｓ， ｅｄｓ．， １９８７）；ＰＣＲ： Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ， （Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， １９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｊ．Ｅ． Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， １９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， ２００２）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ （Ｃ．Ａ． Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．， ２００４）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ （Ｐ． Ｆｉｎｃｈ， １９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｄ． Ｃａｔｔｙ．， ｅｄ．， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， １９８８－１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｐ． Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ． Ｄｅａｎ， ｅｄｓ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ２０００）；Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｅ． Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ． Ｌａｎｅ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ （Ｍ． Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ． Ｄ． Ｃａｐｒａ， ｅｄｓ．， Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， １９９５）；およびＣａｎｃｅｒ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ （Ｖ．Ｔ． ＤｅＶｉｔａ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｊ．Ｂ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ， ２０１１）に記載されている広く利用されている方法論などの、従来の方法論を使用して、当業者によって一般的に用いられている。

【0056】

定義
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、適切である場合は常に、単数で使用されている用語は、複数も含み、逆もまた同様である。下記に説明する任意の定義が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合、説明する定義が優先されるものとする。

【0057】

本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、他に指示されない限り、複数の参照を含む。

【0058】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語と他の類似の形態、ならびにそれらの文法的等価物は、本明細書で使用される場合、意味が等価であることが意図され、これらの語のいずれか１つに続く１つまたは複数の項目が、そのような１つまたは複数の項目の包括的なリストであることを意味しないか、あるいはリストされた１つまたは複数の項目のみに限定されないことを意味するという点で、オープンエンドであることが意図される。例えば、構成要素Ａ、Ｂ、およびＣを「含む」物品は、構成要素Ａ、Ｂ、およびＣからなってもよいし（すなわち、それらのみを含有してもよい）、構成要素Ａ、Ｂ、およびＣだけでなく、１つまたは複数の他の構成要素を含有してもよい。そのため、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」およびその類似の形態、ならびにその文法的等価物は、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」の実施形態の開示を含むことが意図され、理解される。

【0059】

値の範囲が提供される場合、文脈が他を明確に示さない限り、その範囲の上限と下限の間の、下限の単位の１０分の１までの各介在する値、およびその述べられた範囲における任意の他の述べられたまたは介在する値が、本開示内に包含され、述べられた範囲において任意の具体的に除外される限界が課せられることが理解される。述べられた範囲が一方または両方の限界を含む場合、これらの含まれる限界のいずれかまたは両方を排除する範囲がまた本開示に含まれる。

【0060】

本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野における当業者に容易に公知である、それぞれの値についての通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」の値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーターそれ自体を対象にする実施形態を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」を指す記載は、「Ｘ」の記載を含む。

【0061】

本明細書で使用される場合、「無核細胞」は、核を欠いている細胞を指す。そのような細胞としては、限定されるものではないが、血小板、赤血球細胞（ＲＢＣ）、例えば、赤血球および網状赤血球が挙げられる。網状赤血球は、典型的には人体の赤血球細胞の約１％を構成する、未成熟（例えば、未だ両凹でない）赤血球細胞である。網状赤血球も、無核である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のシステムおよび方法は、濃縮された（例えば、天然に見出されるものよりも高い総細胞集団のパーセンテージを構成する）、無核細胞（例えば、ＲＢＣ、網状赤血球、および／または血小板）の精製または単離された（例えば、それらの天然の環境から、実質的に純粋なまたは均一な形態）集団の処置および／または処理に使用される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のシステムおよび方法は、ＲＢＣ（例えば、赤血球または網状赤血球）、血小板および他の血液細胞を含有する全血の処置および／または処理のために使用される。これらの細胞型の精製または濃縮は、密度勾配システム（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ）、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）、磁気細胞選別、または赤芽球および赤血球前駆細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化などの公知方法を使用して達成される。

【0062】

「ベシクル」という用語は、本明細書で使用される場合、脂質二重層によって封入された液体を含む構造を指す。一部の例では、脂質二重層は、天然に存在する脂質組成物から供給される。一部の例では、脂質二重層は、細胞膜から供給され得る。一部の例では、ベシクルは、細胞などのさまざまな種類の実体に由来し得る。そのような例では、ベシクルは、起源である実体由来の分子（細胞内タンパク質または膜構成要素など）を保持することができる。例えば、赤血球細胞に由来するベシクルは、赤血球細胞および／または赤血球細胞の膜構成要素中に存在した任意の数の細胞内タンパク質を含有していてもよい。一部の例では、ベシクルは、所望のペイロードに加えて、細胞内に任意の数の分子を含有することができる。

【0063】

本明細書で使用される場合、「ペイロード」は、ＡＡＣ（例えば、ＡＡＣ）にロードされているなどの送達される材料を指す。「ペイロード」、「カーゴ」、「送達材料」、および「化合物」は、本明細書で互換的に使用される。一部の実施形態では、ペイロードは、タンパク質、小分子、核酸（例えば、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡ）、脂質、炭水化物、巨大分子、ビタミン、ポリマー、蛍光色素およびフルオロフォア、カーボンナノチューブ、量子ドット、ナノ粒子、ならびにステロイドを指し得る。一部の実施形態では、ペイロードは、タンパク質または小分子薬物を指し得る。一部の実施形態では、ペイロードは、１つまたは複数の化合物を含み得る。

【0064】

コード配列および制御配列などの核酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常、互いに接合されない、および／または通常、特定の細胞と関連しない配列を表す。そのため、核酸構築物またはベクターの「異種」領域は、本来は、他の分子との関連で見出されない別の核酸分子内の、またはそれらに結合した核酸のセグメントである。例えば、核酸構築物の異種領域は、本来は、コード配列との関連で見出されない配列に隣接するコード配列を含み得る。異種コード配列の別の例は、コード配列それ自体が、本来は見出されない構築物（例えば、生来の遺伝子（ｎａｔｉｖｅ ｇｅｎｅ）と異なるコドンを有する合成配列）である。同様に、細胞に通常存在しない構築物で形質転換された細胞は、本発明の目的のために、異種とみなされるはずである。対立遺伝子変形形態または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ＤＮＡを生じさせない。

【0065】

ペプチド配列およびポリペプチド配列などのアミノ酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常、互いに接合されない、および／または通常、特定の細胞と関連しない配列を表す。そのため、ペプチド配列の「異種」領域は、本来は、他の分子との関連で見出されない別のアミノ酸分子内の、またはそれらに結合したアミノ酸のセグメントである。例えば、ペプチド構築物の異種領域は、本来は、ペプチドのアミノ酸配列との関連で見出されない配列に隣接するペプチドのアミノ酸配列を含み得る。異種ペプチド配列の別の例は、ペプチド配列それ自体が、本来は見出されない構築物（例えば、生来の遺伝子からコードされる異なるアミノ酸を有する合成配列）である。同様に、細胞に通常存在しないアミノ酸構築物を発現するベクターで形質転換された細胞は、本発明の目的のために、異種とみなされるはずである。対立遺伝子変形形態または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ペプチドを生じさせない。

【0066】

「外因性」という用語は、細胞または細胞由来ベシクルに関して、抗原またはアジュバントなどの作用物質への言及において使用される場合、細胞の外側の作用物質、または細胞の外側から細胞に送達される作用物質を指す。細胞は、すでに存在するその作用物質を有してもよいし、有さなくてもよく、外因性作用物質が送達された後にその作用物質を産生してもよいし、産生しなくてもよい。

【0067】

本明細書で使用される「同種」という用語は、同じ生物体に由来する分子を指す。一部の例では、用語は、所与の生物体内で通常見出されるか、または発現する、核酸またはタンパク質を指す。

【0068】

本明細書で使用される場合、「処置」または「処置する」は、臨床結果を含む有益な結果または所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益な臨床結果または所望の臨床結果としては、限定されるものではないが、以下の１つまたは複数が挙げられる：疾患から生じる１つまたは複数の症状を軽減すること、疾患の程度を減退させること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を予防することまたは遅延させること）、疾患の伝播（例えば、転移）を予防することもしくは遅延させること、疾患の再発を予防することもしくは遅延させること、疾患の進行の遅延させることもしくは遅らせること、病状を回復させること、疾患の寛解（部分的または全部）を提供すること、疾患を処置するのに必要な１つもしくは複数の他の薬の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、クオリティオブライフを増加させることもしくは改善すること、体重増加を増加させること、および／または生存を延長すること。「処置」には、がんの病理学的帰結（例えば、腫瘍体積など）の低減も包含される。本発明の方法は、処置のこれらの態様のいずれか１つまたは複数を企図する。

【0069】

本明細書で使用される場合、「予防的処置」という用語は、個体が、障害を有することが知られているか、または障害を有すると疑われるか、または障害を有するリスクがあるが、障害の症状を示していないか、または障害の最低限の症状を示している、処置を指す。予防的処置を受けている個体は、症状の開始前に処置され得る。一部の実施形態では、個体が、前がん病変、特に、ＨＰＶ感染に関連する前がん病変を有する場合に、個体は、処置され得る。

【0070】

本明細書で使用される場合、「併用療法」とは、第１の作用物質が別の作用物質と併せて投与されることを意味する。「と併せて」は、別の処置モダリティに加えた１つの処置モダリティの投与、例えば、同じ個体への本明細書に記載のイムノコンジュゲートの投与に加えた本明細書に記載の有核細胞の組成物の投与を指す。そのため、「と併せて」は、個体への他の処置モダリティの送達の前、その間、またはその後の１つの処置モダリティの投与を指す。

【0071】

「同時投与」という用語は、本明細書で使用される場合、併用療法における第１の療法および第２の療法が、約１５分以下、例えば、約１０、５、または１分以下のいずれかの時間の隔たりで投与されることを意味する。第１および第２の療法が同時に投与される場合、第１および第２の療法は、同じ組成物（例えば、第１および第２の療法の両方を含む組成物）、または別々の組成物（例えば、第１の療法が１つの組成物に、および第２の療法が別の組成物に含有される）に含有されていてもよい。

【0072】

本明細書で使用される場合、「逐次投与」という用語は、併用療法における第１の療法および第２の療法が、約１５分超、例えば、約２０、３０、４０、５０、６０分超のいずれか、またはそれよりも長い時間の隔たりで投与されることを意味する。第１の療法または第２の療法のいずれが最初に投与されてもよい。第１および第２の療法は、別々の組成物に含有され、これは、同じまたは異なる包装またはキットに含有されていてもよい。

【0073】

本明細書で使用される場合、「並行投与」という用語は、併用療法における第１の療法の投与および第２の療法の投与が互いと重複することを意味する。

【0074】

がんの文脈では、「処置する」という用語は、がん細胞を死滅させること、がん細胞の成長を阻害すること、がん細胞の複製を阻害すること、全腫瘍量を低下させること、および疾患に関連する１つまたは複数の症状を回復させることのいずれかまたはすべてを含む。

【0075】

本明細書で使用される場合、「モジュレートする」という用語は、特定の標的の存在または活性を、変化させる、変える、変動させる、または他の方法で改変する作用を指し得る。例えば、免疫応答をモジュレートするとは、免疫応答を変化させること、変えること、変動させること、または他の方法で改変することをもたらす任意の作用を指し得る。一部の例では、「モジュレートする」は、特定の標的の存在または活性を増強することを指す。一部の例では、「モジュレートする」は、特定の標的の存在または活性を抑制することを指す。他の例では、核酸の発現をモジュレートすることとしては、限定されるものではないが、核酸の転写における変化、ｍＲＮＡの存在量における変化（例えば、ｍＲＮＡ転写を増加させる）、ｍＲＮＡの分解における対応する変化、ｍＲＮＡの翻訳における変化などが挙げられ得る。

【0076】

本明細書で使用される場合、「阻害する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、遮断する、低下させる、除去する、または他の方法で拮抗させる作用を指し得る。阻害は、部分的な阻害または完全な阻害を指し得る。例えば、免疫応答を阻害するとは、免疫応答の遮断、低下、除去、または任意の他の拮抗をもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の阻害としては、限定されるものではないが、核酸の転写の低下、ｍＲＮＡの存在量の低下（例えば、ｍＲＮＡ転写をサイレンシングする）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡの翻訳の阻害、遺伝子編集などが挙げられ得る。他の例では、タンパク質の発現の阻害としては、限定されるものではないが、タンパク質をコードする核酸の転写の低下、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の低下、タンパク質の翻訳の阻害、タンパク質の安定性の低下などが挙げられ得る。別の例では、阻害するとは、成長を遅らせるまたは停止する、例えば、腫瘍細胞の成長を妨害するまたは防止する作用を指し得る。

【0077】

本明細書で使用される場合、「抑制する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、減少させる、低下させる、妨げる、制限する、軽減する、または他の方法で減退させる作用を指し得る。抑制は、部分的な抑制または完全な抑制を指し得る。例えば、免疫応答を抑制するとは、免疫応答を減少させること、低下させること、妨げること、制限すること、軽減すること、または他の方法で減退させることをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の抑制としては、限定されるものではないが、核酸の転写の低下、ｍＲＮＡの存在量の低下（例えば、ｍＲＮＡ転写をサイレンシングする）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡの翻訳の阻害などが挙げられ得る。他の例では、タンパク質の発現の抑制としては、限定されるものではないが、タンパク質をコードする核酸の転写の低下、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の低下、タンパク質の翻訳の阻害、タンパク質の安定性の低下などが挙げられ得る。

【0078】

本明細書で使用される場合、「増強する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、改善する、ブーストする、高める、または他の方法で増加させる作用を指し得る。例えば、免疫応答を増強するとは、免疫応答を改善すること、ブーストすること、高めること、または他の方法で増加させることをもたらす任意の作用を指し得る。例示的な一例では、免疫応答を増強するとは、免疫応答を改善する、ブーストする、高める、もしくは他の方法で増加させるために、抗原および／またはアジュバントを用いることを指し得る。他の例では、核酸の発現を増強することとしては、限定されるものではないが、核酸の転写の増加、ｍＲＮＡの存在量の増加（例えば、ｍＲＮＡ転写を増加させる）、ｍＲＮＡの分解の減少、ｍＲＮＡの翻訳の増加などが挙げられ得る。他の例では、タンパク質の発現を増強することとしては、限定されるものではないが、タンパク質をコードする核酸の転写の増加、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の増加、タンパク質の翻訳の増加、タンパク質の安定性の増加などが挙げられ得る。

【0079】

本明細書で使用される場合、「誘導する」という用語は、開始する、促す、刺激する、確立する、または他の方法で結果を生成する作用を指し得る。例えば、免疫応答を誘導するとは、所望の免疫応答を開始すること、促すこと、刺激すること、確立すること、または他の方法で生成することをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現を誘導することとしては、限定されるものではないが、核酸の転写の開始、ｍＲＮＡの翻訳の開始などが挙げられ得る。他の例では、タンパク質の発現を誘導することとしては、限定されるものではないが、タンパク質をコードする核酸の転写の増加、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の増加、タンパク質の翻訳の増加、タンパク質の安定性の増加などが挙げられ得る。

【0080】

本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドを含む、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指す。そのため、この用語は、限定されるものではないが、一本鎖、二本鎖または多重鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、あるいはプリンおよびピリミジン塩基、または他の天然の、化学的もしくは生化学的に修飾された、非天然もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーを含む。ポリヌクレオチドの主鎖は、糖およびリン酸基（ＲＮＡまたはＤＮＡにおいて典型的に見出され得る通り）、または修飾もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含むことができる。ポリヌクレオチドの主鎖は、ペプチド結合によって連結された、Ｎ－（２－アミノエチル）－グリシンなどの繰り返し単位を含むことができる（すなわち、ペプチド核酸）。あるいは、ポリヌクレオチドの主鎖は、ホスホルアミデートおよびホスホロチオエートなどの合成サブユニットのポリマーを含むことができ、そのため、オリゴデオキシヌクレオシドホスホルアミデート（Ｐ－ＮＨ２）、または混合ホスホロチオエート－ホスホジエステルオリゴマーまたは混合ホスホルアミデート－ホスホジエステルオリゴマーであり得る。加えて、二本鎖ポリヌクレオチドは、相補鎖を合成すること、および適切な条件下で鎖をアニーリングすることによる、またはＤＮＡポリメラーゼを適切なプライマーと共に使用して相補鎖をｄｅ ｎｏｖｏで合成することによるいずれかで、化学合成の一本鎖ポリヌクレオチド生成物から得ることができる。

【0081】

「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換可能に使用され、最小の長さに限定されない。アミノ酸残基のそのようなポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含有し得、限定されるものではないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体および多量体が挙げられる。全長タンパク質およびその断片は両方とも定義により包含される。用語は、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらにまた、本発明の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加および置換（一般に、本来は、保存的）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異誘発によるような計画的なものであってもよく、またはタンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅に起因するエラーによるなど偶発的なものであってもよい。

【0082】

本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答をモジュレートおよび／または発生させる物質を指す。一般に、アジュバントは、抗原と併せて投与されて、抗原単独と比較して抗原に対する免疫応答の増強をもたらす。さまざまなアジュバントが本明細書に記載される。

【0083】

「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」および「ＣｐＧ ＯＤＮ」という用語は、本明細書において、ホスフェートによって分離されるシトシンおよびグアニンのジヌクレオチド（本明細書において「ＣｐＧ」ジヌクレオチドまたは「ＣｐＧ」とも称する）を含有する、１０～３０ヌクレオチド長のＤＮＡ分子を指す。本開示のＣｐＧ ＯＤＮは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する。すなわち、ＣｐＧジヌクレオチド中のシトシンは、メチル化されない（すなわち、５－メチルシトシンではない）。ＣｐＧ ＯＤＮは、部分的または完全なホスホロチオエート（ＰＳ）主鎖を有していてもよい。

【0084】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」または「薬学的に適合する」は、生物学的、または別段望ましくないものではない材料を意味し、例えば、材料は、任意の有意な望ましくない生物学的効果を引き起こすまたはそれが含有される組成物の他の構成要素のいずれかと有害な形式で相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に組み込まれ得る。薬学的に許容される担体または賦形剤は、好ましくは、毒性学的および製造試験の必要な基準を満たしており、ならびに／または米国食品医薬品局によって作られた不活性成分ガイド（Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ）に含まれる。

【0085】

本明細書に記載の任意の構造的および機能的特徴について、これらの特徴を決定する方法は、当技術分野において公知である。

【0086】

本明細書で使用される場合、「マイクロ流体システム」は、低体積（例えば、ｍＬ、ｎＬ、ｐＬ、ｆＬ）の流体が処理されて、少体積の流体の別個の処置を達成するシステムを指す。本明細書に記載のある特定のインプリメンテーションは、マルチプレックス化、自動化およびハイスループットスクリーニングを含む。流体（例えば、緩衝液、溶液、ペイロード含有溶液、または細胞懸濁液）は、移動、混合、分離、または他の方法で処理することができる。本明細書に記載のある特定の実施形態では、マイクロ流体システムは、機械的狭窄を、緩衝液に懸濁された細胞に適用し、ペイロードまたは化合物が細胞のサイトゾルに入るのを可能にする、細胞における撹乱（例えば、孔）を誘導するために使用される。

【0087】

本明細書で使用される場合、「狭窄」は、入口部分、中心点、および出口部分によって定義されるマイクロ流体チャネルの部分を指し得、ここで、中心点は、幅、長さ、および深さによって定義される。他の例では、狭窄は、ポアを指し得るか、またはポアの部分であり得る。ポアは、表面（例えば、フィルターおよび／または膜）に含有されていてもよい。

【0088】

本明細書に記載の任意の構造的および機能的特徴について、これらの特徴を決定する方法は、当技術分野において公知である。
処置の方法

【0089】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置する方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物を個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップを含む、方法が提供される。

【0090】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置する方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物を個体に投与するステップであって、有効量は、約０．５×１０^７ＡＡＣ／ｋｇ～約５×１０^１０ＡＡＣ／ｋｇであり、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップを含む、方法が提供される。

【0091】

一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患は、ＨＰＶ関連がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんは、子宮頸がん、肛門周囲がん、肛門生殖器がん、口腔がん、唾液腺がん、中咽頭がん、膣がん、外陰がん、陰茎がん、皮膚がんまたは頭頸部がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患は、ＨＰＶ関連感染性疾患である。

【0092】

一部の実施形態では、ＡＡＣの有効量は、約０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、１．０×１０^９、０．５×１０^１０、１．０×１０^１０、０．５×１０^１１、および１．０×１０^１１ＡＡＣ／ｋｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、有効量は、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８ＡＡＣ、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９ＡＡＣ、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、約１．０×１０^９～約０．５×１０^１０ＡＡＣ、約０．５×１０^１０～約１．０×１０^１０、約１．０×１０^１０～約０．５×１０^１１、または約０．５×１０^１１～約１．０×１０^１１ＡＡＣ／ｋｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連がんを処置する方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物を個体に投与するステップであって、有効量は、約０．５×１０^８～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇであり、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップを含む、方法が提供される。

【0093】

一部の実施形態では、方法は、有効量の１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップをさらに含む。例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、限定なく、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのアンタゴニストである。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数のアンタゴニストである。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体、ＰＤ－Ｌ１を結合する抗体、ＣＴＬＡ－４を結合する抗体、ＬＡＧ３を結合する抗体、またはＴＩＭ－３を結合する抗体、、ＴＩＧＩＴに結合する抗体、ＶＩＳＴＡを結合する抗体、ＴＩＭ－１を結合する抗体、Ｂ７－Ｈ４を結合する抗体、またはＢＴＬＡを結合する抗体のうちの１つまたは複数である。のうちの１つまたは複数である。さらなる実施形態では、抗体は、全長抗体または任意のバリアント、例えば、限定されるものではないが、抗体断片、一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、または抗原結合断片（Ｆａｂ）であり得る。さらなる実施形態では、抗体は、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数の化学化合物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数のペプチドである。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ－４を標的にする。

【0094】

一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連がんを処置する方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物を個体に投与するステップであって、有効量は、約０．５×１０^８～約１×１０^９ＡＡＣであり、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップ、ならびに有効量の１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４のアンタゴニストである。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１のアンタゴニストである。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストである。一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４のアンタゴニスト、ＰＤ－１のアンタゴニスト、および／またはＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストを含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である。一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、ＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体を含む。

【0095】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置する方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物を個体に投与するステップであって、有効量は、約０．５×１０^８～約１×１０^９ＡＡＣであり、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップ、ならびに有効量のＣＴＬＡ－４のアンタゴニスト、ＰＤ－１のアンタゴニスト、および／またはＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストを投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置する方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物を個体に投与するステップであって、有効量は、約０．５×１０^８～約１×１０^９ＡＡＣであり、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップ、ならびに有効量のＣＴＬＡ－４に結合する抗体、ＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ペムブロリズマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、アテゾリズマブである。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブである。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、個体に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、個体に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、個体に投与される。

【0096】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激するための方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物（例えば、ＲＢＣ由来ベシクル）を個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、ＨＰＶ抗原を含む、ステップを含み、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＡＡＣに細胞内送達される、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＡＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。一部の実施形態では、個体はがんを有する。

【0097】

一部の態様では、個体における腫瘍成長を低下させるための方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物（例えば、ＲＢＣ由来ベシクル）を個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、ＨＰＶ抗原を含む、ステップを含み、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＡＡＣに細胞内送達される、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＡＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。一部の実施形態では、個体はがんを有する。

【0098】

一部の態様では、それを必要とする個体にワクチン接種するための方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物（例えば、ＲＢＣ由来ベシクル）を個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、ＨＰＶ抗原を含む、ステップを含み、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＡＡＣに細胞内送達される、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＡＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。一部の実施形態では、個体はがんを有する。

【0099】

一部の態様では、個体におけるがんを処置するための方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物（例えば、ＲＢＣ由来ベシクル）を個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、ＨＰＶ抗原を含む、ステップを含み、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＡＡＣに細胞内送達される、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＡＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。

【0100】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激するための方法であって、ａ）インプット無核細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ｂ）少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞を少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップ；ならびにｃ）有効量の少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを個体に投与するステップを含む、方法が提供される。

【0101】

一部の態様では、個体における腫瘍成長を低減するするための方法であって、ａ）インプット無核細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ｂ）少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞を少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップ；ならびにｃ）有効量の少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを個体に投与するステップを含む、方法が提供される。

【0102】

一部の態様では、それを必要とする個体にワクチン接種するための方法であって、ａ）インプット無核細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原または少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞を少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップ；ならびにｃ）有効量の少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを個体に投与するステップを含む、方法が提供される。

【0103】

一部の態様では、個体におけるがんを処置するための方法であって、ａ）インプット無核細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ｂ）少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞を少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップ；ならびにｃ）有効量の少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを個体に投与するステップを含む、方法が提供される。

【0104】

本明細書に記載される方法、使用または組成物のいずれかに従う一部の実施形態では、方法は、ａ）インプット無核細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ｂ）少なくとも１つのＨＰＶ抗原が摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞を少なくとも１つのＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを作出するステップ；ならびにｃ）有効量の少なくとも１つのＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを個体に投与するステップを含む。

【0105】

一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶタンパク質に対する免疫応答を刺激するための組成物であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、組成物が提供される。一部の実施形態では、腫瘍成長を低下させるための組成物であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、組成物が提供される。一部の実施形態では、個体はがんを有する。一部の実施形態では、個体におけるがんを処置するための組成物であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、組成物が提供される。一部の実施形態では、がんは、子宮頸がん、肛門周囲がん、肛門生殖器がん、口腔がん、唾液腺がん、中咽頭がん、膣がん、外陰がん、陰茎がん、皮膚がんまたは頭頸部がんである。

【0106】

一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶタンパク質に対する免疫応答を刺激するための組成物であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、組成物が提供される。一部の実施形態では、腫瘍成長を低下させるための組成物であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、組成物が提供される。一部の実施形態では、個体はがんを有する。一部の実施形態では、個体におけるがんを処置するための組成物であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、組成物が提供される。

【0107】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激するための医薬の製造における、有効量のＡＡＣを含む組成物の使用であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原を含むＡＡＣの組成物のいずれか１つを含む、使用が提供される。一部の実施形態では、個体における腫瘍成長を低下させるための医薬の製造における、有効量のＡＡＣを含む組成物の使用であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、使用が提供される。一部の実施形態では、個体はがんを有する。一部の実施形態では、個体におけるがんを処置するための医薬の製造における、有効量のＡＡＣを含む組成物の使用であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、使用が提供される。

【0108】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原タンパク質に対する免疫応答を刺激するための医薬の製造における、有効量のＡＡＣを含む組成物の使用であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの組成物のいずれか１つを含む、使用が提供される。一部の実施形態では、個体における腫瘍成長を低下させるための医薬の製造における、有効量のＡＡＣを含む組成物の使用であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、使用が提供される。一部の実施形態では、個体はがんを有する。一部の実施形態では、個体におけるがんを処置するための医薬の製造における、有効量のＡＡＣを含む組成物の使用であって、組成物は、有効量の本明細書に記載のＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物のいずれか１つを含む、使用が提供される。

【0109】

本明細書に記載の方法、使用または組成物による一部の実施形態では、個体はがんを有する。一部の実施形態では、がんは、子宮頸がん、肛門周囲がん、肛門生殖器がん、口腔がん、唾液腺がん、中咽頭がん、膣がん、外陰がん、陰茎がん、皮膚がんまたは頭頸部がんである。一部の実施形態では、がんはＨＰＶに関連するがんである。一部の実施形態では、がんは限局性がんである。一部の実施形態では、がんは限局性がんである。一部の実施形態では、がんは局所進行性がんである。一部の実施形態では、がんは転移性がんである。一部の実施形態では、がんは固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんは液性腫瘍である。

【0110】

一部の実施形態では、狭窄の幅は、インプット無核細胞の平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の幅は、インプット無核細胞の平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．２５μｍ～約４μｍ、約１μｍ～約４μｍ、約１．２μｍ～約３μｍ、約１．４μｍ～約２．６μｍ、約１．６μｍ～約２．４μｍ、または約１．８μｍ～約２．２μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２．０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約３．０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．２５μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、２．０μｍ、２．２μｍ、２．４μｍ、２．６μｍ、２．８μｍ、３．０μｍ、３．２μｍ、３．４μｍ、３．６μｍ、３．８μｍ、４．０μｍ、４．２μｍ、４．４μｍ、４．６μｍ、４．８μｍ、５．０μｍ、５．２μｍ、５．４μｍ、５．６μｍ、５．８μｍ、６．０μｍのうちのいずれか１つ、または０．２５μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、２．０μｍ、２．２μｍ、２．４μｍ、２．６μｍ、２．８μｍ、３．０μｍ、３．２μｍ、３．４μｍ、３．６μｍ、３．８μｍ、４．０μｍ、４．２μｍ、４．４μｍ、４．６μｍ、４．８μｍ、５．０μｍ、５．２μｍ、５．４μｍ、５．６μｍ、５．８μｍ、６．０μｍ未満のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、インプット無核細胞を含む細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、ここで、複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている。

【0111】

一部の実施形態では、無核細胞は、ＲＢＣまたは血小板である。一部の実施形態では、無核細胞は、赤血球または網状赤血球である。一部の実施形態では、ＡＡＣは、無核細胞由来ベシクルである。一部の実施形態では、ＡＡＣは、ＲＢＣ由来ベシクルまたは血小板由来ベシクルである。一部の実施形態では、ＡＡＣは、赤血球由来ベシクルまたは網状赤血球板由来ベシクルである。

【0112】

一部の実施形態では、インプット無核細胞は、組成物を受ける個体に対して自家である。一部の実施形態では、インプット無核細胞は、組成物を受ける個体に対して同種異系である。一部の実施形態では、ＡＡＣは、組成物を受ける個体に対して自家である。一部の実施形態では、インプットＡＡＣは、組成物を受ける個体に対して同種異系である。

【0113】

一部の実施形態では、ＡＡＣがアジュバントを含む場合、調整のために使用されるアジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントは、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）である。

【0114】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する複数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。

【0115】

一部の実施形態では、方法は、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの複数回投与を含む。一部の実施形態では、方法は、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの約３～約９回の投与を含む。一部の実施形態では、方法は、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５回の投与のうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、方法は、必要により、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの連続投与を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの２回の連続投与の間の時間間隔は約１日～約３０日である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの２回の連続投与の間の時間間隔は約２１日である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの２回の連続投与の間の時間間隔は、約１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、１４、１６、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１５０日のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの最初の２回の連続する投与間の時間間隔は、１日または２日である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの最初の２回の連続する投与間の時間間隔は、１日または２日であり、方法は、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの２回より多くの投与を含む（限定されるものではないが、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５回、またはそれよりも多くの投与など）。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣは、静脈内、腫瘍内、経口、および／または皮下に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原を含むＡＡＣは、静脈内に投与される。

【0116】

一部の実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントはポリＩ：Ｃである。

【0117】

一部の実施形態では、個体は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０３、ＨＬＡ－Ａ^＊２４、ＨＬＡ－Ａ^＊１１、ＨＬＡ－Ａ^＊２６、ＨＬＡ－Ａ^＊３２、ＨＬＡ－Ａ^＊３１、ＨＬＡ－Ａ^＊６８、ＨＬＡ－Ａ^＊２９、ＨＬＡ－Ａ^＊２３、ＨＬＡ－Ｂ^＊０７、ＨＬＡ－Ｂ^＊４４、ＨＬＡ－Ｂ^＊０８、ＨＬＡ－Ｂ^＊３５、ＨＬＡ－Ｂ^＊１５、ＨＬＡ－Ｂ^＊４０、ＨＬＡ－Ｂ^＊２７、ＨＬＡ－Ｂ^＊１８、ＨＬＡ－Ｂ^＊５１、ＨＬＡ－Ｂ^＊１４、ＨＬＡ－Ｂ^＊１３、ＨＬＡ－Ｂ^＊５７、ＨＬＡ－Ｂ^＊３８、ＨＬＡ－Ｃ^＊０７、ＨＬＡ－Ｃ^＊０４、ＨＬＡ－Ｃ^＊０３、ＨＬＡ－Ｃ^＊０６、ＨＬＡ－Ｃ^＊０５、ＨＬＡ－Ｃ^＊１２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０１、ＨＬＡ－Ｃ^＊０８、またはＨＬＡ－Ｃ^＊１６の発現に対して陽性である。

【0118】

免疫チェックポイントは、免疫系の制御因子であり、チェック中に免疫応答を保つ。免疫チェックポイント阻害剤は、免疫応答の増強を促進するために用いることができる。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は同時に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は逐次的に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤および／または少なくとも１つのＨＰＶ抗原を含むＡＡＣは、静脈内、腫瘍内、経口、および／または皮下に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原を含むＡＡＣは、静脈内に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、静脈内、腫瘍内、経口、および／または皮下に投与される。

【0119】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。例えば、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間から約１週間前に投与される。例えば、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間～約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日前に投与される。

【0120】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約７日、約１０日、約１４日、約１８日、約２１日、約２４日、約２８日、約３０日、約３５日、約４０日、約４５日、または約５０日前に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約７日～約１０日、約１０日～約１４日、約１４日～約１８日、約１８日～約２１日、約２１日～約２４日、約２４日～約２８日、約２８日～約３０日、約３０日～約３５日、約３５日～約４０日、約４０日～約４５日、または約４５日～約５０日前に投与される。

【0121】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。例えば、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間～約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日後に投与される。

【0122】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約７日、約１０日、約１４日、約１８日、約２１日、約２４日、約２８日、約３０日、約３５日、約４０日、約４５日、または約５０日後に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約７日～約１０日、約１０日～約１４日、約１４日～約１８日、約１８日～約２１日、約２１日～約２４日、約２４日～約２８日、約２８日～約３０日、約３０日～約３５日、約３５日～約４０日、約４０日～約４５日、または約４５日～約５０日後に投与される。

【0123】

一部の実施形態では、方法は、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物の複数回投与、および／またはチェックポイント阻害剤の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物および／またはチェックポイント阻害剤の２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与、１０回投与、１１回投与、１２回投与、１３回投与、１４回投与、または１５回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物および／またはチェックポイント阻害剤の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。

【0124】

例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、限定なく、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡを標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体、ＰＤ－Ｌ１を結合する抗体、ＣＴＬＡ－４を結合する抗体、ＬＡＧ３を結合する抗体、またはＴＩＭ－３を結合する抗体、、ＴＩＧＩＴに結合する抗体、ＶＩＳＴＡを結合する抗体、ＴＩＭ－１を結合する抗体、Ｂ７－Ｈ４を結合する抗体、またはＢＴＬＡを結合する抗体のうちの１つまたは複数である。のうちの１つまたは複数である。さらなる実施形態では、抗体は、全長抗体または任意のバリアント、例えば、限定されるものではないが、抗体断片、一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、または抗原結合断片（Ｆａｂ）であり得る。さらなる実施形態では、抗体は、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数の化学化合物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数のペプチドである。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１を標的にする。

【0125】

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれか１つによる個体における免疫応答を刺激する方法における使用のためのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む複数のＡＡＣ（例えば、ＲＢＣ由来ベシクル）が提供される。
ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣの組成物

【0126】

一部の実施形態では、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット無核細胞に由来する。一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット赤血球細胞（ＲＢＣ）に由来する。一部の実施形態では、ＡＡＣは、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣである。一部の実施形態では、ＡＡＣは、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＲＢＣ由来ベシクルである。

【0127】

一部の実施形態では、方法は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む有効量のＡＡＣを投与するステップを含み、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣは、ａ）インプット無核細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ならびにｂ）少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞を少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップによって調製される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0128】

一部の態様では、ＨＰＶ抗原、またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの組成物が提供され、少なくとも１つのＨＰＶ抗原、または少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣは、ａ）インプット無核細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ならびにｂ）少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞を少なくとも１つのＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップによって調製される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0129】

一部の実施形態では、無核細胞は、ＲＢＣまたは血小板である。一部の実施形態では、無核細胞は、赤血球または網状赤血球である。一部の実施形態では、ＡＡＣは、無核細胞由来ベシクルである。一部の実施形態では、ＡＡＣは、ＲＢＣ由来ベシクルまたは血小板由来ベシクルである。一部の実施形態では、ＡＡＣは、赤血球由来ベシクルまたは網状赤血球板由来ベシクルである。

【0130】

一部の実施形態では、狭窄の幅は、インプット無核細胞の平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の幅は、インプット無核細胞の平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．２５μｍ～約４μｍ、約１μｍ～約４μｍ、約１．２μｍ～約３μｍ、約１．４μｍ～約２．６μｍ、約１．６μｍ～約２．４μｍ、または約１．８μｍ～約２．２μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２．０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約３．０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．２５μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、２．０μｍ、２．２μｍ、２．４μｍ、２．６μｍ、２．８μｍ、３．０μｍ、３．２μｍ、３．４μｍ、３．６μｍ、３．８μｍ、４．０μｍ、４．２μｍ、４．４μｍ、４．６μｍ、４．８μｍ、５．０μｍ、５．２μｍ、５．４μｍ、５．６μｍ、５．８μｍ、６．０μｍのうちのいずれか１つ、または０．２５μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、２．０μｍ、２．２μｍ、２．４μｍ、２．６μｍ、２．８μｍ、３．０μｍ、３．２μｍ、３．４μｍ、３．６μｍ、３．８μｍ、４．０μｍ、４．２μｍ、４．４μｍ、４．６μｍ、４．８μｍ、５．０μｍ、５．２μｍ、５．４μｍ、５．６μｍ、５．８μｍ、６．０μｍ未満のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、インプット無核細胞を含む細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、ここで、複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている。

【0131】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する複数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。

【0132】

一部の実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントは、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）である。
用量およびレジメン

【0133】

一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置する方法であって、有効量のＡＡＣを含む組成物を個体に投与するステップであって、有効量は、約０．５×１０^８～約１×１０^９ＡＡＣであり、ＡＡＣは、細胞内に送達されたＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有効量の１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップをさらに含む。

【0134】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの有効量は、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１．０×１０^９ＡＡＣ／ｋｇである。一部の実施形態では、ＡＡＣの有効量は、約０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．２５×１０^９、０．５×１０^９、０．７５×１０^９、１．０×１０^９、０．５×１０^１０、１．０×１０^１０、０．５×１０^１１、および１．０×１０^１１ＡＡＣ／ｋｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣの有効量は、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、または約７．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇである。一部の実施形態では、ＡＡＣの有効量は、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８ＡＡＣ、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９ＡＡＣ、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、約１．０×１０^９～約０．５×１０^１０ＡＡＣ、約０．５×１０^１０～約１．０×１０^１０、約１．０×１０^１０～約０．５×１０^１０ＡＡＣ／ｋｇのうちのいずれか１つである。

【0135】

一部の実施形態では、方法が、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップをさらに含む場合、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はイピリムマブである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約０．１、０．２、０．５、１．０、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約０．１～０．２、０．２～０．５、０．５～１．０、１．０～１．２、１．２～１．４、１．４～１．６、１．６～１．８、１．８～２．０、２．０～２．２、２．２～２．４、２．４～２．６、２．６～２．８、２．８～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１２、１２～１４、１４～１６、１６～１８、１８～２０、２０～２５、または２５～３０ｍｇ／ｋｇのうちのいずれか１つである。

【0136】

一部の実施形態では、方法が、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップをさらに含む場合、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はニボルマブである。一部の実施形態では、ニボルマブの有効量は、約３０ｍｇ～約１０００ｍｇである。一部の実施形態では、ニボルマブの有効量は、約３００ｍｇ～約４００ｍｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約３６０ｍｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約３０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０、４００、４５０、５００、５５０、６００、７００、８００、９００、または１０００ｍｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約３０～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、２００～２５０、２５０～３００、３００～３２０、３２０～３４０、３４０～３６０、３６０～３８０、３８０～４００、４００～４５０、５００～５５０、５５０～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、９００～１０００ｍｇのうちのいずれか１つである。

【0137】

一部の実施形態では、方法が、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップをさらに含む場合、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はアテゾリズマブである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約１００ｍｇ～約２５００ｍｇである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約９００ｍｇ～約１５００ｍｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約１２００ｍｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１４００、１５００、１６００、１８００、２０００、２２００、または２５００ｍｇのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、９００～１０００、１０００～１１００、１１００～１２００、１２００～１３００、１３００～１４００、１４００～１５００、１５００～１６００、１６００～１８００、１８００～２０００、２０００～２２００、２２００～２５００ｍｇのうちのいずれか１つである。

【0138】

一部の実施形態では、処置の方法は、本明細書に記載のＡＡＣのいずれか１つを個体に投与する複数（２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれよりも多くのうちのいずれかなど）のサイクルを含む。例えば、一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントがＡＡＣに入るように、インプット無核細胞を、狭窄を通過させて、ＡＡＣを形成することによって作出された抗原および／またはアジュバントを含むＡＡＣを、個体に、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回、またはそれよりも多く投与するステップによる、抗原に対して個体をワクチン接種する方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＡＣの任意の２回の連続した投与の間の期間は、少なくとも約１日（少なくとも約２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、またはそれよりも長いのうちのいずれかなど、これらの値の間の任意の範囲を含む）である。

【0139】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０週間サイクルのうちのいずれか１つで投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、３週間サイクルで投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、６週間サイクルで投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、処置サイクルの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日目のうちの１つまたは複数に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、処置サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、処置サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、処置サイクルの１日目および２日目に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、処置サイクルの１日目および３日目に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、処置サイクルの８日目に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、３週間サイクルの２日目にさらに投与される。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、ＡＡＣ組成物供給が枯渇するまで、または１年間、３週間サイクルで投与される。

【0140】

一部の実施形態では、約０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．２５×１０^９、０．５×１０^９、０．７５×１０^９、１．０×１０^９、０．５×１０^１０、１．０×１０^１０、０．５×１０^１１、および１．０×１０^１１ＡＡＣ／ｋｇのうちのいずれか１つが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約５．０×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、または約７．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．２５×１０^９、０．５×１０^９、０．７５×１０^９、１．０×１０^９、０．５×１０^１０、１．０×１０^１０、０．５×１０^１１、および１．０×１０^１１ＡＡＣ／ｋｇのうちのいずれか１つが、それぞれの３週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約５．０×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、または約７．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与され、０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与され、０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの３日目に投与される。一部の実施形態では、２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与され、２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与され、２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの３日目に投与される。一部の実施形態では、２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与され、５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与され、５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの３日目に投与される。

【0141】

一部の実施形態では、方法が、有効量の１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップをさらに含む場合、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、および／またはＰＤ－Ｌ１を標的にする。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、および／またはＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、サイクルに１、２、３、４、５、６回、またはそれよりも多く投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、および／またはＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、３週間サイクルに１回投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、３週間サイクルに１回投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、３週間サイクルに１回投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、３週間サイクルに１回投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、および／またはＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、２回の３週間サイクルに１回投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、２回の３週間サイクルに１回投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、２回の３週間サイクルに１回投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、２回の３週間サイクルに１回投与される。

【0142】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、処置サイクルの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日目に、１回または複数回に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ－４結合性抗体であり、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、４用量のうちの最大で投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体の有効量は、約３ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブである。一部の実施形態では、イピリムマブは、約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブであり、イピリムマブは、約３ｍｇ／ｋｇの用量で、すべての３週間サイクルの１日目に投与される。

【0143】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１結合性抗体であり、ＰＤ－１に結合する抗体は、最初の３週間サイクルの８日目、およびそれぞれのその後の３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブである。一部の実施形態では、ニボルマブは、約３６０ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブであり、ニボルマブは、約３６０ｍｇの用量で、最初の３週間サイクルの８日目、およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される。

【0144】

一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４結合性抗体およびＰＤ－１結合性抗体を含み、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、すべての代替の３週間サイクルの１日目（すなわち、すべての６週間サイクルの１日目）に投与され、ＰＤ－１に結合する抗体は、最初の３週間サイクルの８日目、およびそれぞれのその後の３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体はイピリムマブであり、ＰＤ－１に結合する抗体はニボルマブである。一部の実施形態では、イピリムマブは、約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ニボルマブは、約３６０ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブであり、イピリムマブは、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、すべての代替の３週間サイクルの１日目に投与され、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブであり、ニボルマブは、約３６０ｍｇの用量で、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される。

【0145】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１結合性抗体であり、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、最初の３週間サイクルの８日目、およびそれぞれのその後の３週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、アテゾリズマブである。一部の実施形態では、アテゾリズマブは、約１２００ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、アテゾリズマブであり、アテゾリズマブは、約３６０ｍｇの用量で、最初の３週間サイクルの８日目、およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される。
ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣの組成物を作出する方法

【0146】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣを含む組成物を作出するための方法であって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＡＡＣに細胞内送達される、方法が提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを含む組成物を作出するための方法であって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントは、ＡＡＣに細胞内送達される、方法が提供される。

【0147】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣは、ａ）無核のインプットの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ならびにｂ）抗原が摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞の集団を少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。

【0148】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドを含む。

【0149】

一部の実施形態では、インプット無核細胞は、赤血球細胞（ＲＢＣ）または血小板である。一部の実施形態では、インプット無核細胞は、赤血球または網状赤血球である。一部の実施形態では、ＡＡＣは、無核細胞由来ベシクルである。一部の実施形態では、ＡＡＣは、ＲＢＣ由来ベシクルまたは血小板由来ベシクルである。一部の実施形態では、ＡＡＣは、赤血球由来ベシクルまたは網状赤血球板由来ベシクルである。

【0150】

一部の実施形態では、狭窄の幅は、インプット無核細胞の平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の幅は、インプット無核細胞の平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．２５μｍ～約４μｍ、約１μｍ～約４μｍ、約１．２μｍ～約３μｍ、約１．４μｍ～約２．６μｍ、約１．６μｍ～約２．４μｍ、または約１．８μｍ～約２．２μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２．０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約３．０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．２５μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、２．０μｍ、２．２μｍ、２．４μｍ、２．６μｍ、２．８μｍ、３．０μｍ、３．２μｍ、３．４μｍ、３．６μｍ、３．８μｍ、４．０μｍ、４．２μｍ、４．４μｍ、４．６μｍ、４．８μｍ、５．０μｍ、５．２μｍ、５．４μｍ、５．６μｍ、５．８μｍ、６．０μｍのうちのいずれか１つ、または０．２５μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、２．０μｍ、２．２μｍ、２．４μｍ、２．６μｍ、２．８μｍ、３．０μｍ、３．２μｍ、３．４μｍ、３．６μｍ、３．８μｍ、４．０μｍ、４．２μｍ、４．４μｍ、４．６μｍ、４．８μｍ、５．０μｍ、５．２μｍ、５．４μｍ、５．６μｍ、５．８μｍ、６．０μｍ未満のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、インプット無核細胞を含む細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、ここで、複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている。

【0151】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する複数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、他の抗原とともに、またはアジュバントとともに送達される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶは、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６抗原またはＨＰＶ Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。

【0152】

一部の実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントは、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）である。
ＨＰＶ抗原

【0153】

本明細書に記載の方法による一部の実施形態では、外因性抗原はヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である。パピローマウイルスは、直径が約５５ｎｍのビリオンサイズを有する小さな非エンベロープＤＮＡウイルスである。１００を超えるＨＰＶ遺伝子型が完全に特徴付けられ、より多くの数が存在すると推定される。ＨＰＶは、子宮頸がん、ならびに一部の外陰、膣、陰茎、中咽頭、肛門および直腸がんの公知の原因である。ほとんどのＨＰＶ感染症は、無症状で自然に消失するが、腫瘍形成性のＨＰＶ型の１つによる持続感染は、前がん状態またはがんに進行し得る。他のＨＰＶ関連疾患としては、尋常性疣贅、足底疣贅、扁平疣贅、肛門性器疣贅、肛門病変、表皮異形成、局所性上皮肥厚、口腔乳頭腫、疣贅嚢胞（ｖｅｒｒｕｃｏｕｓ ｃｙｓｔ）、喉頭乳頭腫症、扁平上皮内病変（ＳＩＬ）、子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰部上皮内腫瘍（ＶＩＮ）および膣上皮内腫瘍（ＶＡＩＮ）を挙げることができる。公知のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）型の多くは、腫瘍形成性であるサブセットによる良性病変を引き起こす。疫学的および系統発生学的な関係に基づいて、ＨＰＶ型は、１５種の「高リスク型」（ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２）および３種の「おそらく高リスク型」（ＨＰＶ２６、５３、および６６）に分類され、これらは、一緒に、低および高悪性度の子宮頸部の変化およびがん、ならびに外陰、膣、陰茎、肛門および肛門周囲がんなどの他の肛門性器がん、ならびに頭頸部がんとして現れることが公知である。最近、高リスク型のＨＰＶ１６および１８と乳がんとの関連も記載された。「低リスク型」として分類される１１種のＨＰＶ型（ＨＰＶ６、１１、４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２および８１）は、良性の低悪性度の子宮頸部の変化、性器疣贅および再発性呼吸器乳頭腫症として現れることが公知である。皮膚のＨＰＶ型５、８および９２は、皮膚がんと関連する。一部のＨＰＶ関連がんでは、免疫系は抑制され、それに応じて、抗腫瘍応答は有意に損なわれる。Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ， Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７ （２０１７）を参照されたい。一部の実施形態では、外因性抗原は、同じおよび／または異なる抗原に対する応答を誘発する複数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、複数の抗原のプール中の抗原は、複数の抗原のプール中の他の抗原に向けられた免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶは、ＨＰＶ－１６抗原またはＨＰＶ－１８抗原である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６抗原またはＨＰＶ Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含み、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号１８と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号１９と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号２１のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号２３のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号２４のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号２５のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列の少なくとも１つを含む複数の抗原である。一部の実施形態では、外因性抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列の２、３、４、５、６、７、または８つを含む複数の抗原である。一部の実施形態では、外因性抗原は、配列番号１９と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列、および配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む複数の抗原である。一部の実施形態では、外因性抗原は、配列番号１９のアミノ酸配列、および配列番号２３のアミノ酸配列を含む複数の抗原である。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合的に連結されたペプチドのプール内に含有される。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合的に連結されたペプチドのプール内に含有され、それぞれのペプチドは、１つ以下の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合的に連結されたペプチドのプール内に含有され、配列番号１９のアミノ酸配列および配列番号２５のアミノ酸配列は、別々のペプチド内に含有される。

【0154】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する複数のポリペプチドのプール内にある。一部の実施形態では、複数の抗原のプール中の抗原は、複数の抗原のプール中の他の抗原に向けられた免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶ抗原および１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ１１特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ｂ７特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ｃ８特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、全長ＨＰＶタンパク質のＮ末端ドメインの一部または全部を含む。

【0155】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、ＡＡＣ（例えば、ＲＢＣ由来ベシクル）は、複数の免疫原性エピトープを含む複数のＨＰＶ抗原を含む。さらなる実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含むＡＡＣの個体への投与後、複数の免疫原性エピトープは、他の免疫原性エピトープのいずれかに対する個体における免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合されている。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、免疫原性ペプチドエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、隣接異種ペプチド配列は、疾患関連免疫原性ペプチド由来する。一部の実施形態では、隣接異種ペプチド配列は天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、隣接異種ペプチド配列は免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。
アジュバント

【0156】

本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答を、直接的または間接的のいずれかで、モジュレートおよび／または発生させる物質を指し得る。本発明の一部の実施形態では、アジュバントは、無核細胞またはＡＡＣの集団、例えば、ＲＢＣまたはＲＢＣ由来ベシクルの集団に、細胞内送達されて（すなわち、個体への投与の前であるが、狭窄処理の前、その間、および／またはその後の細胞またはベシクルのアジュバントとのインキュベーション）、アジュバントを含むＡＡＣを形成する。一部の例では、アジュバントは、ＨＰＶ抗原と併せて投与されて、ＨＰＶ抗原単独と比較して少なくとも１つのＨＰＶ抗原に対する免疫応答の増強をもたらす。したがって、アジュバントは、ＨＰＶ抗原に対する免疫細胞応答（例えば、Ｔ細胞応答）の誘発をブーストするために使用することができる。例示的なアジュバントとしては、限定なく、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、およびレチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ－Ｉ）アゴニスト、ならびにＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９のためのアゴニストが挙げられる。例示的なアジュバントとしては、限定なく、ＣｐＧ ＯＤＮ、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、イミキモド（Ｒ８３７）、レシキモド（Ｒ８４８）、またはリポ多糖（ＬＰＳ）が挙げられる。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、α－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン：ポリシチジン酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。特定の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ ＯＤＮ１５８５、ＣｐＧ ＯＤＮ２２１６、ＣｐＧ ＯＤＮ２３３６、ＣｐＧ ＯＤＮ１６６８、ＣｐＧ ＯＤＮ１８２６、ＣＰＧ ＯＤＮ２００６、ＣｐＧ ＯＤＮ２００７、ＣｐＧ ＯＤＮ ＢＷ００６、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｄ－ＳＬ０１、ＣｐＧ ＯＤＮ２３９５、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｍ３６２、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｄ－ＳＬ０３の群から選択されたものを含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ１８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ；配列番号３０）またはＣｐＧ ＯＤＮ２００６（ＣｐＧ７９０９としても公知）（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ；配列番号３１）オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ７９０９である。一部の実施形態では、ＲＩＧ－Ｉアゴニストは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）を含む。複数のアジュバントを、免疫応答の誘発を増強するためのＨＰＶ抗原と併せて使用することもできる。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原を含むＡＡＣは１つよりも多いアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原を含むＡＡＣは、アジュバントのＣｐＧ ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストの任意の組合せをさらに含む。
ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣのさらなる改変

【0157】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、ＡＡＣの組成物は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応するＡＡＣの組成物と比較してＡＡＣの機能を増強する。一部の実施形態では、ＡＡＣの組成物は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応するＡＡＣの組成物と比較して凍結－解凍サイクルの際のＡＡＣの機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、凍結保存剤および／または低温保存剤である。一部の実施形態では、凍結保存剤も低温保存剤も、任意の凍結－解凍サイクルの前の作用物質を含まない対応するＡＡＣの組成物と比較して作用物質を含むＡＡＣの組成物において１０％または２０％を超える細胞死を予防する。一部の実施形態では、凍結保存剤および／または低温保存剤を含む無核細胞由来ベシクル組成物の凍結－解凍サイクルは、凍結－解凍サイクル前の無核由来ベシクルの対応する組成物と比較した場合に、１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％以下の機能の喪失を引き起こす。一部の実施形態では、凍結保存剤および／または低温保存剤を含む無核細胞由来ベシクル組成物の凍結－解凍サイクルは、凍結保存剤および／または低温保存剤なしの無核由来ベシクルの対応する組成物の凍結－解凍サイクルと比較した場合に、１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％より少ない機能の喪失を引き起こす。一部の実施形態では、無核細胞由来ベシクル組成物の機能または機能性は、アネキシンＶ染色に対して陽性である無核細胞由来ベシクルのパーセンテージによって測定される。一部の実施形態では、無核細胞由来ベシクル組成物の機能または機能性は、ＣＤ２３５ａ染色に対して陽性である無核細胞由来ベシクルのパーセンテージによって測定される。一部の実施形態では、無核細胞由来ベシクル組成物の機能または機能性はＣＤ２３５ａおよびアネキシンＶ染色に陽性である無核細胞由来ベシクルのパーセンテージによって測定される。一部の実施形態では、ＡＡＣの少なくとも約７０％、約８０％、または約９０％は、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルの後、機能性である。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質はヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ－スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、またはＥＤＴＡのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、二価金属カチオンは、Ｍｇ^２＋、Ｚｎ^２＋またはＣａ^２＋のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＤＭＳＯ、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、イノシン、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、ナトリウム金属イオン、カリウム金属イオン、マグネシウム金属イオン、塩化物、アセテート、グルコネート、スクロース、水酸化カリウム、または水酸化ナトリウムのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）のうちの１つまたは複数である。

【0158】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、プロセスは、ＡＡＣの組成物を、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応するＡＡＣと比較してＡＡＣの機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む。

【0159】

一部の実施形態では、製剤は凍結保存媒体を含む。一部の実施形態では、製剤は、約９ｍＬ～約１０ｍＬの凍結保存媒体中に約１×１０^９～約１×１０^１１ＡＡＣを含む。一部の実施形態では、製剤は、約９ｍＬ～約１０ｍＬの凍結保存媒体中に約０．５×１０^７、０．７×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、０．７×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、０．７×１０^９、１．０×１０^９、０．５×１０^１０、０．７×１０^１０、１．０×１０^１０、０．５×１０^１１、０．７×１０^１１、１．０×１０^１１、０．５×１０^１２、０．７×１０^１２、および１．０×１０^１２ＡＡＣのうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、製剤は、約９ｍＬ～約１０ｍＬの凍結保存媒体中に約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８ＡＡＣ、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９ＡＡＣ、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、約１．０×１０^９～約０．５×１０^１０、約０．５×１０^１０～約１．０×１０^１０、約１．０×１０^１０～約０．５×１０^１１、約０．５×１０^１１～約１．０×１０^１１ＡＡＣ、約１．０×１０^１１～約０．５×１０^１２ＡＡＣのうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、製剤は、約９ｍＬ～約１０ｍＬの凍結保存媒体中に約１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、および１×１０^１０ＡＡＣのうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、製剤は、約９．５ｍＬの凍結保存媒体中に約１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、および１×１０^１０ＡＡＣのうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、製剤は、約９ｍＬ～約１０ｍＬの凍結保存媒体中に約７×１０^９ＡＡＣを含む。一部の実施形態では、製剤は、約９．５ｍＬの凍結保存媒体中に約７×１０^９ＡＡＣを含む。一部の実施形態では、製剤は、約９．５ｍＬの凍結保存媒体中に約６．６５×１０^９ＡＡＣを含む。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む製剤は、凍結保存媒体中に約０．５×１０^７、０．７×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、０．７×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、０．７×１０^９、１．０×１０^９、０．５×１０^１０、０．７×１０^１０、１．０×１０^１０、０．５×１０^１１、０．７×１０^１１、１．０×１０^１１、０．５×１０^１２、０．７×１０^１２、および１．０×１０^１２ＡＡＣのうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、製剤は、凍結保存媒体中に約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８ＡＡＣ、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９ＡＡＣ、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、約１．０×１０^９～約０．５×１０^１０、約０．５×１０^１０～約１．０×１０^１０、約１．０×１０^１０～約０．５×１０^１１、約０．５×１０^１１～約１．０×１０^１１ＡＡＣ、約１．０×１０^１１～約０．５×１０^１２ＡＡＣのうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、製剤は、凍結保存媒体中に約１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、および１×１０^１０ＡＡＣのうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、製剤は、凍結保存媒体中に約７×１０^９ＡＡＣを含む。一部の実施形態では、製剤は、凍結保存媒体中に約６．６５×１０^９ＡＡＣを含む。一部の実施形態では、製剤は、解凍後の凍結保存媒体中に約０．７×１０^９ＡＡＣ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、製剤は、コールターカウンターによって測定された場合に、解凍後の凍結保存媒体中に約０．７×１０^９ＡＡＣ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、凍結保存媒体はＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２を含む。一部の実施形態では、凍結保存媒体はＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２である。

【0160】

一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、約９ｍＬ～約１０ｍＬのＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２中に約７×１０^９ＡＡＣを含む。一部の実施形態では、ＡＡＣを含む組成物は、約９．５ｍＬのＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２中に約７×１０^９ＡＡＣを含む。一部の実施形態では、製剤は、約９．５ｍＬのＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２中に約６．６５×１０^９ＡＡＣを含む。

【0161】

一部の実施形態では、製剤中のＡＡＣは、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルまで、約５０％に等しいまたはそれよりも高い機能性を維持している。一部の実施形態では、製剤は、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルまで、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％に等しいまたはそれよりも高い機能性を維持している。一部の実施形態では、製剤中のＡＡＣは、－１４０℃またはそれより下の温度で少なくとも１２か月間の保管後に約７０％に等しいまたはそれよりも高い機能性を維持している。一部の実施形態では、製剤は、－１４０℃またはそれより下の温度で少なくとも１２か月間の保管後に約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％に等しいまたはそれよりも高い機能性を維持している。一部の実施形態では、製剤は、－１４０℃またはそれより下の温度で少なくとも６、９、１２、１５、１８、２４、３０、または３６か月間の保管後に約７０％に等しいまたはそれよりも高い機能性を維持している。一部の実施形態では、製剤は、－１００℃、－１１０℃、－１２０℃、－１３０℃、－１４０℃、－１５０℃、－１６０℃、－１７０℃、－１８０℃、－１９０℃、もしくは－２００℃またはそれより下の温度で少なくとも１２か月間の保管後に約７０％に等しいまたはそれよりも高い機能性を維持している。

【0162】

一部の実施形態では、製剤中のＡＡＣは、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルまで、約５０％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤は、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルまで、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤中のＡＡＣは、－１４０℃またはそれより下の温度で少なくとも１２か月間の保管後に約７０％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤は、－１４０℃またはそれより下の温度で少なくとも１２か月間の保管後に約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤は、－１４０℃またはそれより下の温度で少なくとも６、９、１２、１５、１８、２４、３０、または３６か月間の保管後に約７０％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤は、－１００℃、－１１０℃、－１２０℃、－１３０℃、－１４０℃、－１５０℃、－１６０℃、－１７０℃、－１８０℃、－１９０℃、もしくは－２００℃またはそれより下の温度で少なくとも１２か月間の保管後に約７０％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。

【0163】

一部の実施形態では、製剤中のＡＡＣは、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルまで、約５０％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤は、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルまで、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤中のＡＡＣは、－１４０℃またはそれより下の温度で少なくとも１２か月間の保管後に約７０％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤は、－１４０℃またはそれより下の温度で少なくとも１２か月間の保管後に約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤は、－１４０℃またはそれより下の温度で少なくとも６、９、１２、１５、１８、２４、３０、または３６か月間の保管後に約７０％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。一部の実施形態では、製剤は、－１００℃、－１１０℃、－１２０℃、－１３０℃、－１４０℃、－１５０℃、－１６０℃、－１７０℃、－１８０℃、－１９０℃、もしくは－２００℃またはそれより下の温度で少なくとも１２か月間の保管後に約７０％に等しいまたはそれよりも高いアネキシンＶおよび／またはＣＤ２３５ａに対する陽性染色を維持している。
ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣの組成物の作出において使用される狭窄

【0164】

一部の実施形態では、本発明は、免疫応答を刺激するための、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣの組成物を提供する。一部の実施形態では、無核細胞は、ＲＢＣまたは血小板である。一部の実施形態では、無核細胞は、赤血球または網状赤血球である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、無核細胞に細胞内送達される。ペイロードを無核細胞に導入する方法は、当技術分野において公知である。

【0165】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原は、一時的なポアが細胞の膜に導入され、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原が細胞に入るのを可能にするように、細胞を、狭窄を通過させることによって、無核細胞に導入される。化合物の細胞への狭窄に基づく送達の例は、ＷＯ２０１３／０５９３４３、ＷＯ２０１５／０２３９８２、ＷＯ２０１６／０７０１３６、ＷＯ２０１７０４１０５０、ＷＯ２０１７００８０６３、ＷＯ２０１７／１９２７８５、ＷＯ２０１７／１９２７８６、ＷＯ２０１９／１７８００５、ＷＯ２０１９／１７８００６、ＷＯ２０２０／０７２８３３、ＷＯ２０２０／１５４６９６、およびＷＯ２０２０／１７６７８９、ＵＳ２０１８０１４２１９８、およびＵＳ２０１８０２０１８８９によって提供されている。

【0166】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントは、無核細胞（例えば、ＲＢＣ）を含む細胞懸濁液を、狭窄を通過させることにより、無核細胞に送達されて、本発明のＡＡＣを生じ、ここで、狭窄は、細胞を変形させ、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが細胞に入るように、細胞の摂動を引き起こす。一部の実施形態では、狭窄は、マイクロ流体チャネル内に含有される。一部の実施形態では、複数の狭窄は、マイクロ流体チャネル内に、並列および／または直列で配置することができる。

【0167】

一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄は、入口部分、中心点および出口部分を含む。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の長さ、深さおよび幅は、変動させることができる。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の幅は、無核細胞の直径の関数である。無核細胞の直径を決定するための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、高含有量イメージング、細胞計数器またはフローサイトメトリーである。

【0168】

ＨＰＶ抗原のＡＡＣへの狭窄に基づく送達の一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．５μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約１μｍ～約４μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約１μｍ～約３μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約１．５μｍ～約２．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約１．２μｍ～約２．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．５μｍ～約５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２μｍ～約２．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約１．５μｍ～約２μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．５μｍ～約３．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約３．２μｍ～約３．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約３．８μｍ～約４．３μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約０．２５μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、２．０μｍ、２．２μｍ、２．４μｍ、２．６μｍ、２．８μｍ、３．０μｍ、３．２μｍ、３．４μｍ、３．６μｍ、３．８μｍ、４．０μｍ、４．２μｍ、４．４μｍ、４．６μｍ、４．８μｍ、５．０μｍ、５．２μｍ、５．４μｍ、５．６μｍ、５．８μｍ、６．０μｍのうちのいずれか１つ、または０．２５μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、２．０μｍ、２．２μｍ、２．４μｍ、２．６μｍ、２．８μｍ、３．０μｍ、３．２μｍ、３．４μｍ、３．６μｍ、３．８μｍ、４．０μｍ、４．２μｍ、４．４μｍ、４．６μｍ、４．８μｍ、５．０μｍ、５．２μｍ、５．４μｍ、５．６μｍ、５．８μｍ、６．０μｍ未満のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２．２μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約２．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の幅は、約３μｍである。

【0169】

ＡＡＣへの化合物の送達に影響を与え得るパラメーターの例としては、限定されるものではないが、狭窄の寸法、狭窄の入口の角度、狭窄の表面の性質（例えば、粗さ、化学修飾、親水性、疎水性など）、運転流束（例えば、狭窄を通る細胞通過時間）、細胞の濃度、細胞懸濁液中の化合物の濃度、細胞懸濁液中の緩衝剤および狭窄を通過した後にＡＡＣを回復させるまたはインキュベートする時間の量が挙げられ、ＡＡＣに送達される化合物の通過に影響を及ぼし得る。ＡＡＣへの化合物の送達に影響を与える追加のパラメーターとしては、狭窄におけるインプット無核細胞の速度、狭窄におけるせん断速度、細胞懸濁液の粘度、流速に垂直な速度成分、および狭窄における時間を挙げることができる。加えて、チャネルを直列および／または並列で含む複数のチップは、ＡＡＣへの送達に影響を与え得る。並列の複数のチップは、スループットを増強するのに有用であり得る。そのようなパラメーターは、化合物の送達を制御するために設計することができる。一部の実施形態では、細胞の濃度は、約１０～少なくとも約１０^１２個細胞／ｍＬ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及ぶ。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１ｇ／ｍＬ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及び得る。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１ｐＭ～少なくとも約２Ｍ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及び得る。

【0170】

一部の実施形態では、無核細胞または無核細胞由来ベシクルとともにインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、無核細胞またはＡＡＣとともにインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、無核細胞またはＡＡＣとともにインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、無核細胞またはＡＡＣとともにインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、無核細胞またはＡＡＣとともにインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、無核細胞またはＡＡＣとともにインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、無核細胞またはＡＡＣとともにインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、１μＭである。

【0171】

一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原の濃度は、１μＭである。

【0172】

一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１～約１：１００００のうちのいずれかである。例えば、一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１～約１０００：１、約１０００：１～約１００：１、約１００：１～約１０：１、約１０：１～約１：１、約１：１～約１：１０、約１：１０～約１：１００、約１：１００～約１：１０００、約１：１０００～約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約２００：１である。一部の実施形態では、摂動インプット無核細胞とともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約２０：１である。

【0173】

一部の実施形態では、ＡＡＣは、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。例えば、一部の実施形態では、ＡＡＣは、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、約０．１μＭ～約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、約１μＭの濃度でアジュバントを含む。

【0174】

一部の実施形態では、ＡＡＣは、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度で抗原を含む。例えば、一部の実施形態では、ＡＡＣは、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、約０．１μＭ～約１ｍＭの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、約１μＭの濃度で抗原を含む。

【0175】

一部の実施形態では、ＡＡＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１～約１：１００００のうちのいずれかである。例えば、一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、ＡＡＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１～約１０００：１、約１０００：１～約１００：１、約１００：１～約１０：１、約１０：１～約１：１、約１：１～約１：１０、約１：１０～約１：１００、約１：１００～約１：１０００、約１：１０００～約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、ＡＡＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約２００：１である。一部の実施形態では、ＡＡＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約２０：１である。
ＡＡＣの特徴および抗原提示細胞による内部移行

【0176】

本明細書に記載の方法、使用、または組成物のいずれか１つによる実施形態では、方法は、ａ）インプット無核細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ｂ）少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞を少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを作出するステップを含む。一部の実施形態では、ペイロード（ＨＰＶ抗原およびアジュバントなど）を含むＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して、異なる特徴を示す。一部の実施形態では、ペイロード（ＨＰＶ抗原およびアジュバントなど）を含むＡＡＣは、他の送達方法（溶血ローディングまたは電気穿孔など）によって導入されたペイロードを含む無核細胞と比較して、異なる特徴を示す。

【0177】

一部の実施形態では、哺乳動物への投与後のＡＡＣの半減期は、哺乳動物への投与後のインプット無核細胞の半減期と比較して減少する。一部の実施形態では、ＡＡＣのヘモグロビン含有量は、インプット無核細胞のヘモグロビン含有量と比較して減少する。一部の実施形態では、ＡＡＣのＡＴＰ産生は、インプット無核細胞のＡＴＰ産生と比較して減少する。一部の実施形態では、ＡＡＣは球状形態を示す。一部の実施形態では、ＡＡＣは赤血球であり、ＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して、低下した両凹形状を有する。一部の実施形態では、ＡＡＣは赤血球細胞ゴーストである。一部の実施形態では、本プロセスによって調製されたＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して、その表面上に約１．５倍よりも多くのホスファチジルセリンを有する。一部の実施形態では、本プロセスによって調製されたＡＡＣの集団プロファイルは、インプット無核細胞と比較して、表面上でより高い平均ホスファチジルセリンレベルを示す。一部の実施形態では、本プロセスによって調製されたＡＡＣの集団プロファイルの少なくとも５０％は、インプット無核細胞と比較して、表面上でより高いホスファチジルセリンレベルを示す。一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して、組織または細胞における優先的な取り込みを示す。一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して、食細胞および／または抗原提示細胞における優先的な取り込みを示す。一部の実施形態では、ＡＡＣは改変されて、インプット無核細胞と比較して、組織または細胞における取り込みが増強される。一部の実施形態では、ＡＡＣは改変されて、未改変ＡＡＣと比較して、食細胞および／または抗原提示細胞における取り込みが増強される。一部の実施形態では、食細胞および／または抗原提示細胞は、樹状細胞またはマクロファージのうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、組織または細胞は、肝臓または脾臓のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、ＡＡＣは、その表面にＣＤ４７を含む。

【0178】

ＡＡＣを作出するための上記の方法の一部の実施形態では、狭窄は、マイクロ流体チャネル内に含有される。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネルは、複数の狭窄を含む。一部の実施形態では、複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている。一部の実施形態では、狭窄は、複数のマイクロピラー間、アレイに構成された複数のマイクロピラー間、または１つもしくは複数の可動プレート間にある。一部の実施形態では、狭窄は、ポアであるか、またはポア内に含有される。一部の実施形態では、ポアは、表面に含有される。一部の実施形態では、表面はフィルターである。一部の実施形態では、表面は膜である。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の関数である。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、懸濁液中のインプット無核細胞の直径の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、または約７０％である。一部の実施形態では、狭窄は、約０．２５μｍ～約４μｍの幅を有する。一部の実施形態では、狭窄は、約４μｍ、３．５μｍ、約３μｍ、約２．５μｍ、約２μｍ、約１．５μｍ、約１μｍ、約０．５μｍ、または約０．２５μｍの幅を有する。一部の実施形態では、狭窄は、約２．２μｍの幅を有する。一部の実施形態では、インプット無核細胞を、約１０ｐｓｉ～約９０ｐｓｉの範囲の圧力下で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、前記細胞懸濁液は、狭窄を通過する前、それと並行して、またはその後に、抗原と接触する。

【0179】

一部の実施形態では、ペイロード（例えば、ＨＰＶ抗原、ＨＰＶ抗原およびアジュバント）を含むＡＡＣは、インプット無核細胞から調製される場合、ＡＡＣは、以下の性質のうちの１つまたは複数を有する：（ａ）哺乳動物における循環半減期が、インプット無核細胞と比較して減少する、（ｂ）インプット無核細胞と比較して減少したヘモグロビンレベル、（ｃ）球状形態、（ｄ）インプット無核細胞と比較して増加した表面ホスファチジルセリンレベル、または（ｅ）インプット無核細胞と比較して低下したＡＴＰ産生。

【0180】

一部の実施形態では、インプット無核細胞は哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、インプット無核細胞はヒト細胞である。一部の実施形態では、インプット無核細胞は、赤血球細胞または血小板である。一部の実施形態では、赤血球細胞は、赤血球または網状赤血球である。

【0181】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるＡＡＣの循環半減期は、インプット無核細胞と比較して減少する。一部の実施形態では、哺乳動物における循環半減期は、インプット無核細胞と比較して、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％よりも大きく減少する。

【0182】

一部の実施形態では、インプット無核細胞はヒト細胞であり、ＡＡＣの循環半減期は、約１分、約２分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約１時間、約６時間、約１２時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約１０日、約２５日、約５０日、約７５日、約１００日、約１２０日未満である。

【0183】

一部の実施形態では、インプット無核細胞は赤血球細胞であり、ＡＡＣにおけるヘモグロビンレベルは、インプット無核細胞と比較して減少する。一部の実施形態では、ＡＡＣにおけるヘモグロビンレベルは、インプット無核細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９９％、または約１００％減少する。一部の実施形態では、ＡＡＣにおけるヘモグロビンレベルは、インプット無核細胞におけるヘモグロビンのレベルの約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、または約５０％である。

【0184】

一部の実施形態では、インプット無核細胞は赤血球であり、ＡＡＣは球状の形態である。一部の実施形態では、インプット無核細胞は赤血球であり、ＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して低下した両凹形状を有する。

【0185】

一部の実施形態では、インプット無核細胞は赤血球細胞または赤血球であり、ＡＡＣは赤血球細胞ゴースト（ＲＢＣゴースト）である。

【0186】

一部の実施形態では、ＡＡＣは、その表面にＣＤ４７を含む。

【0187】

一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して増加した表面ホスファチジルセリンレベルを有する。一部の実施形態では、本プロセスによって調製されたＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して、その表面上に約１．５倍よりも多くのホスファチジルセリンを有する。一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して、その表面上に約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９９％、約１００％、または約１００％よりも多くのホスファチジルセリンを有する。一部の実施形態では、ＡＡＣの表面上のホスファチジルセリンのレベルは、ＡＡＣの表面上のアネキシン染色（例えば、アネキシンＶ染色）のレベルを測定することによって決定される。

【0188】

一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して低下したＡＴＰ産生を有する。一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット無核細胞によって産生されるＡＴＰのレベルの約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、または約５０％未満でＡＴＰを産生する。一部の実施形態では、ＡＡＣはＡＴＰを産生しない。

【0189】

一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット無核細胞と比較して、組織または細胞における増強された取り込みを示す。一部の実施形態では、ＡＡＣは、インプット無核細胞の取り込みと比較して、肝臓もしくは脾臓における、または食細胞もしくは抗原提示細胞による、優先的な取り込みを示す。

【0190】

一部の実施形態では、ＡＡＣはさらに改変されて、インプット無核細胞と比較して、組織または細胞における取り込みが増強される。一部の実施形態では、ＡＡＣはさらに改変されて、インプット無核細胞の取り込みと比較して、肝臓もしくは脾臓における、または食細胞もしくは抗原提示細胞による、取り込みが増強される。

【0191】

一部の実施形態では、ＡＡＣが、肝臓もしくは脾臓における、または食細胞および／もしくは抗原提示細胞による、増強された取り込みを示す場合、ＡＡＣの内部移行は、食細胞または抗原提示細胞の成熟マーカーの増加した発現をもたらす。一部の実施形態では、食細胞および／または抗原提示細胞は単球由来樹状細胞（ＭＯＤＣ）である。一部の実施形態では、成熟マーカーは、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、およびＭＨＣ－ＩＩのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、およびＭＨＣ－ＩＩのうちの１つまたは複数の発現は、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣと接触した食細胞および／または抗原提示細胞において、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣと接触していない食細胞および／または抗原提示細胞と比較して、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍またはそれよりも高いのうちのいずれか１つまで増加する。一部の実施形態では、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、およびＭＨＣ－ＩＩのうちの１つまたは複数の発現は、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣと接触した食細胞および／または抗原提示細胞において、インプット無核細胞と接触した食細胞および／または抗原提示細胞と比較して、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍またはそれよりも高いのうちのいずれか１つまで増加する。

【0192】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原、またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣが、肝臓もしくは脾臓における、または食細胞および／もしくは抗原提示細胞による、増強された取り込みを示す場合、ＡＡＣの内部移行は、ＡＡＣ内に含まれる少なくとも１つのＨＰＶ抗原の増加された提示をもたらす。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原の提示は、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣと接触した食細胞および／または抗原提示細胞において、他の送達方法（限定されるものではないが溶血ローディングなど）によって導入された同じＨＰＶ抗原を含む対応する無核細胞と接触した食細胞および／または抗原提示細胞と比較して、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍またはそれよりも高いのうちのいずれか１つまで増加する。

【0193】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原、またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣが、肝臓もしくは脾臓における、または食細胞および／もしくは抗原提示細胞による、増強された取り込みを示す場合、ＡＡＣの内部移行は、抗原特異的免疫応答を誘導する食細胞および／または抗原提示細胞の増加した能力をもたらす。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣと接触した食細胞および／または抗原提示細胞によって媒介される抗原特異的免疫応答は、インプット無核細胞と接触した食細胞および／または抗原提示細胞と比較して、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍またはそれよりも高いのうちのいずれか１つまで増加する。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣと接触した食細胞および／または抗原提示細胞によって媒介される抗原特異的免疫応答は、他の送達方法（限定されるものではないが溶血ローディングなど）によって導入された同じＨＰＶ抗原を含む無核細胞と接触した食細胞および／または抗原提示細胞と比較して、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍またはそれよりも高いのうちのいずれか１つまで増加する。一部の実施形態では、抗原特異的免疫応答は、抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答である。一部の実施形態では、抗原特異的免疫応答は、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答である。

【0194】

一部の実施形態では、個体は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０３、ＨＬＡ－Ａ^＊２４、ＨＬＡ－Ａ^＊１１、ＨＬＡ－Ａ^＊２６、ＨＬＡ－Ａ^＊３２、ＨＬＡ－Ａ^＊３１、ＨＬＡ－Ａ^＊６８、ＨＬＡ－Ａ^＊２９、ＨＬＡ－Ａ^＊２３、ＨＬＡ－Ｂ^＊０７、ＨＬＡ－Ｂ^＊４４、ＨＬＡ－Ｂ^＊０８、ＨＬＡ－Ｂ^＊３５、ＨＬＡ－Ｂ^＊１５、ＨＬＡ－Ｂ^＊４０、ＨＬＡ－Ｂ^＊２７、ＨＬＡ－Ｂ^＊１８、ＨＬＡ－Ｂ^＊５１、ＨＬＡ－Ｂ^＊１４、ＨＬＡ－Ｂ^＊１３、ＨＬＡ－Ｂ^＊５７、ＨＬＡ－Ｂ^＊３８、ＨＬＡ－Ｃ^＊０７、ＨＬＡ－Ｃ^＊０４、ＨＬＡ－Ｃ^＊０３、ＨＬＡ－Ｃ^＊０６、ＨＬＡ－Ｃ^＊０５、ＨＬＡ－Ｃ^＊１２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０１、ＨＬＡ－Ｃ^＊０８、および／またはＨＬＡ－Ｃ^＊１６に対して陽性である。

【0195】

本明細書に記載の方法、組成物、または使用のいずれか１つによる一部の実施形態では、食細胞は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０３、ＨＬＡ－Ａ^＊２４、ＨＬＡ－Ａ^＊１１、ＨＬＡ－Ａ^＊２６、ＨＬＡ－Ａ^＊３２、ＨＬＡ－Ａ^＊３１、ＨＬＡ－Ａ^＊６８、ＨＬＡ－Ａ^＊２９、ＨＬＡ－Ａ^＊２３、ＨＬＡ－Ｂ^＊０７、ＨＬＡ－Ｂ^＊４４、ＨＬＡ－Ｂ^＊０８、ＨＬＡ－Ｂ^＊３５、ＨＬＡ－Ｂ^＊１５、ＨＬＡ－Ｂ^＊４０、ＨＬＡ－Ｂ^＊２７、ＨＬＡ－Ｂ^＊１８、ＨＬＡ－Ｂ^＊５１、ＨＬＡ－Ｂ^＊１４、ＨＬＡ－Ｂ^＊１３、ＨＬＡ－Ｂ^＊５７、ＨＬＡ－Ｂ^＊３８、ＨＬＡ－Ｃ^＊０７、ＨＬＡ－Ｃ^＊０４、ＨＬＡ－Ｃ^＊０３、ＨＬＡ－Ｃ^＊０６、ＨＬＡ－Ｃ^＊０５、ＨＬＡ－Ｃ^＊１２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０１、ＨＬＡ－Ｃ^＊０８、および／またはＨＬＡ－Ｃ^＊１６のハプロタイプを有するヒト細胞である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２、ＨＬＡ－Ａ^＊１１、ＨＬＡ－Ｂ^＊０７、またはＨＬＡ－Ｃ^＊０８のハプロタイプを有するヒト細胞である。一部の実施形態では、本明細書に記載の食細胞および／または抗原提示細胞に提示されるＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、本明細書に記載の食細胞および／または抗原提示細胞に提示されるＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ１１特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、本明細書に記載の食細胞および／または抗原提示細胞に提示されるＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ｂ７特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、本明細書に記載の食細胞および／または抗原提示細胞に提示されるＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ｃ８特異的エピトープで構成される。

【0196】

一部の実施形態では、本方法は、少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＡＡＣを個体に投与するステップであって、ＡＡＣは、食細胞および／または抗原提示細胞によって内部移行される、ステップを含む。一部の実施形態では、ＡＡＣが食細胞および／または抗原提示細胞によって内部移行される場合、ＡＡＣの内部移行は、食細胞または抗原提示細胞の成熟マーカーの増加した発現をもたらす。一部の実施形態では、食細胞および／または抗原提示細胞は単球由来樹状細胞（ＭＯＤＣ）である。一部の実施形態では、成熟マーカーは、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、およびＭＨＣ－ＩＩのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、およびＭＨＣ－ＩＩのうちの１つまたは複数の発現は、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣと接触した食細胞および／または抗原提示細胞において、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣと接触していない食細胞および／または抗原提示細胞と比較して、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍またはそれよりも高いのうちのいずれか１つまで増加する。一部の実施形態では、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、およびＭＨＣ－ＩＩのうちの１つまたは複数の発現は、ＨＰＶ抗原を含むＡＡＣと接触した食細胞および／または抗原提示細胞において、インプット無核細胞と接触した食細胞および／または抗原提示細胞と比較して、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍またはそれよりも高いのうちのいずれか１つまで増加する。

【0197】

一部の実施形態では、インプット無核細胞は、ＡＡＣの調製の間に、（ａ）熱処理されておらず、（ｂ）化学的処理されておらず、および／または（ｃ）低張または高張条件に供されていない。一部の実施形態では、容量オスモル濃度は、インプット無核細胞からのＡＡＣの調製の間、維持された。一部の実施形態では、容量オスモル濃度は、約２００ｍＯｓｍ～約６００ｍＯｓｍで維持された。一部の実施形態では、容量オスモル濃度は、約２００ｍＯｓｍ～約４００ｍＯｓｍで維持された。
システムおよびキット

【0198】

一部の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法における使用のための、狭窄、無核細胞懸濁液、ＨＰＶ抗原またはアジュバントの１つまたは複数を含むシステムを提供する。システムは、マイクロ流体チャネルもしくはポアを有する表面を含み、細胞変形狭窄、細胞懸濁液、細胞摂動、送達パラメーター、化合物、および／または適用などを提供する、上記に開示された方法について記載された任意の実施形態を含むことができる。システムは、「マイクロ流体システムおよびその構成要素」という名称の上記の項に開示のものを含む、本明細書に開示の主題の組成物および方法について記載の任意の実施形態を含むことができる。一部の実施形態では、細胞変形狭窄は、無核細胞への送達のための大きさである。一部の実施形態では、送達パラメーター、例えば、運転流束、細胞および化合物の濃度、狭窄における細胞の速度、ならびに細胞懸濁液の組成（例えば、容量オスモル濃度、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）は、免疫応答を抑制するまたは寛容を誘導するために、化合物の最大の応答について最適化される。

【0199】

ＨＰＶに関連するがんを有する個体の処置における使用のためのキットまたは製造品も提供される。一部の実施形態では、キットは、細胞内に成熟した抗原、および細胞内にアジュバントを含むＡＡＣを含む。一部の実施形態では、キットは、狭窄、無核細胞懸濁液、がんなどのＨＰＶに関連する疾患を有する個体の処置における使用のためのＡＡＣの作出における使用のためのＨＰＶ抗原またはアジュバントのうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、キットは、好適なパッケージ内に、本明細書に記載の組成物（例えば、ポアを含有するマイクロ流体チャネルもしくは表面、細胞懸濁液および／または化合物）を含む。好適なパッケージ材料は、当技術分野において公知であり、例えば、バイアル（密封バイアルなど）、容器、アンプル、瓶、広口瓶、フレキシブル包装材料（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）などが挙げられる。これらの製品は、さらに滅菌され得かつ／または密封され得る。

【0200】

本発明は、本明細書に記載の方法の構成要素を含むキットも提供し、ＨＰＶに関連するがんを有する個体を処置する方法を行うための指示、ならびに／またはＨＰＶ抗原および／またはアジュバントを無核細胞に導入するための指示をさらに含んでいてもよい。本明細書に記載のキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、ならびに本明細書に記載の方法のいずれかを行うための指示を伴う添付文書；例えば、ＨＰＶに関連するがんを有する個体を処置するための指示、または細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含有するＡＡＣを作出するための指示を含む、他の材料をさらに含み得る。
例示的な実施形態

【0201】

実施形態１． 個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを処置するための方法であって、有効量の活性化抗原担体（ＡＡＣ）を含む組成物を前記個体に投与するステップであって、前記有効量は、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇであり、前記ＡＡＣは、細胞内に送達される少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップを含む、方法。

【0202】

実施形態２． 個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを処置するための方法であって、
有効量の活性化抗原担体（ＡＡＣ）を含む組成物を前記個体に投与するステップであって、前記ＡＡＣは、細胞内に送達される少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む、ステップ、ならびに
有効量のＣＴＬＡ－４のアンタゴニストおよび／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0203】

実施形態３． 前記ＣＴＬＡ４のアンタゴニストが、ＣＴＬＡ４に結合する抗体である、実施形態２に記載の方法。

【0204】

実施形態４． 前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストが、ＰＤ－１に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である、実施形態２または３に記載の方法。

【0205】

実施形態５． ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体が、前記個体に投与される、実施形態３または４に記載の方法。

【0206】

実施形態６． 前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブである、実施形態３～５のいずれか一項に記載の方法。

【0207】

実施形態７． 前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブである、実施形態４～６のいずれか一項に記載の方法。

【0208】

実施形態８． 前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ペムブロリズマブである、実施形態４～６のいずれか一項に記載の方法。

【0209】

実施形態９． ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、前記個体に投与され、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、前記個体に投与される、実施形態４～６のいずれか一項に記載の方法。

【0210】

実施形態１０． 前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブである、実施形態４および９のいずれか一項に記載の方法。

【0211】

実施形態１１． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ－１６抗原またはＨＰＶ－１８抗原である、実施形態１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【0212】

実施形態１２． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む、実施形態１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【0213】

実施形態１３． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む、実施形態１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【0214】

実施形態１４． 前記ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドが、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１３に記載の方法。

【0215】

実施形態１５． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【0216】

実施形態１６． 前記ＡＡＣが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原および配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む、実施形態１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【0217】

実施形態１７． 前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、実施形態１～１６のいずれか一項に記載の方法。

【0218】

実施形態１８． 前記アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、実施形態１７に記載の方法。

【0219】

実施形態１９． 前記個体が、ヒトである、実施形態１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【0220】

実施形態２０． 前記個体が、ＨＬＡ－Ａ^＊０２について陽性である、実施形態１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【0221】

実施形態２１． 前記ＡＡＣが、前記個体に対して自家または同種異系である、実施形態１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【0222】

実施形態２２． 前記ＨＰＶ関連がんが、現在局所進行性または転移性がんである、実施形態１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【0223】

実施形態２３． 前記ＨＰＶ関連がんが、頭頸部がん、子宮頸がん、肛門がんまたは食道がんである、実施形態１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【0224】

実施形態２４． ＡＡＣを含む前記組成物が、静脈内に投与される、実施形態１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【0225】

実施形態２５． 前記ＣＴＬＡ－４のアンタゴニストおよび／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストが、静脈内、経口、または皮下に投与される、実施形態２～２４のいずれか一項に記載の方法。

【0226】

実施形態２６． 前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体および／または前記ＰＤ－１に結合する抗体および／または前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、静脈内に投与される、実施形態３～２５のいずれか一項に記載の方法。

【0227】

実施形態２７． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントを含むＡＡＣの前記有効量が、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約７．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇである、実施形態１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【0228】

実施形態２８． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントを含むＡＡＣの前記有効量が、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ～約１×１０^９ＡＡＣ／ｋｇである、実施形態１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【0229】

実施形態２９． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントを含むＡＡＣの前記有効量が、約０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、約５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇ、または約７．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇである、実施形態１～２８のいずれか一項に記載の方法。

【0230】

実施形態３０． イピリムマブの前記有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇである、実施形態６～２９のいずれか一項に記載の方法。

【0231】

実施形態３１． ニボルマブの前記有効量が、約３６０ｍｇである、実施形態７および１１～３０のいずれか一項に記載の方法。

【0232】

実施形態３２． アテゾリズマブの前記有効量が、約１２００ｍｇである、実施形態１０～３０のいずれか一項に記載の方法。

【0233】

実施形態３３． 前記ＡＡＣを含む前記組成物が、３週間サイクルの１日目に送達される、実施形態１～３２のいずれか一項に記載の方法。

【0234】

実施形態３４． 前記ＡＡＣを含む前記組成物が、最初の３週間サイクルの２日目にさらに投与される、実施形態１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【0235】

実施形態３５． 約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ～約１×１０^９個細胞／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される、実施形態３３または３４に記載の方法。

【0236】

実施形態３６． 約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約２．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約５．０×１０^８個細胞／ｋｇ、または約７．５×１０^８個細胞／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される、実施形態３３～３５のいずれか一項に記載の方法。

【0237】

実施形態３７． 約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ～約１×１０^９個細胞／ｋｇが、それぞれの３週間サイクルの２日目に投与される、実施形態３３～３６のいずれか一項に記載の方法。

【0238】

実施形態３８． 約０．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約２．５×１０^８個細胞／ｋｇ、約５．０×１０^８個細胞／ｋｇ、または約７．５×１０^８個細胞／ｋｇが、最初の３週間サイクルの２日目に投与される、実施形態３３～３７のいずれか一項に記載の方法。

【0239】

実施形態３９． ＣＴＬＡ－４に結合する抗体および／またはＰＤ－１に結合する抗体および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、３週間サイクルあたり１回に投与される、実施形態３３～３８のいずれか一項に記載の方法。

【0240】

実施形態４０． ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、２回の３週間サイクルあたり１回投与される、実施形態３３～３９のいずれか一項に記載の方法。

【0241】

実施形態４１． ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、それぞれの３週間サイクルの１日目に投与される、実施形態３３～４０のいずれか一項に記載の方法。

【0242】

実施形態４２． 前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブであり、前記イピリムマブが、約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態３９～４１のいずれか一項に記載の方法。

【0243】

実施形態４３． ＰＤ－１に結合する抗体が、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される、実施形態３９～４２のいずれか一項に記載の方法。

【0244】

実施形態４４． 前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブであり、前記ニボルマブが、約３６０ｍｇの用量で投与される、実施形態４３に記載の方法。

【0245】

実施形態４５． 前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブであり、前記イピリムマブが、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、２回の３週間サイクルの最初の３週間サイクルの１日目に投与され、前記ＰＤ－１に結合する抗体が、約３６０ｍｇの用量で、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される、実施形態３９～４４のいずれか一項に記載の方法。

【0246】

実施形態４６． ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、最初の３週間サイクルの８日目およびそれぞれのその後のサイクルの１日目に投与される、実施形態３３～３９のいずれか一項に記載の方法。

【0247】

実施形態４７． 前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブであり、前記アテゾリズマブが、約１２００ｍｇの用量で投与される、実施形態４６に記載の方法。

【0248】

実施形態４８． ＰＢＭＣを含む前記組成物が、少なくとも約３か月間、６か月間、９か月間または１年間、前記個体に投与される、実施形態１～４７のいずれか一項に記載の方法。

【0249】

実施形態４９． ＡＡＣを含む前記組成物が、凍結保存媒体中に約１×１０^９ＡＡＣ～約１×１０^１０ＡＡＣを含む、実施形態１～４８のいずれか一項に記載の方法。

【0250】

実施形態５０． ＡＡＣを含む前記組成物が、約１０ｍＬの凍結保存媒体中に約７×１０^９ＰＢＭＣを含む、実施形態１～４９のいずれか一項に記載の方法。

【0251】

実施形態５１． 前記凍結保存媒体が、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２である、実施形態４９または５０に記載の方法。

【0252】

実施形態５２． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む前記ＡＡＣが、
ａ）インプット無核物の集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット無核細胞の直径の関数であり、それによって、前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット無核細胞の摂動を引き起こして摂動インプット無核細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記抗原が前記摂動インプット無核細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット無核細胞の前記集団を前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原および前記アジュバントを含む前記ＡＡＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、実施形態１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【0253】

実施形態５３． 前記狭窄の直径が、約１．６μｍ～約２．４μｍまたは約１．８μｍ～約２．２μｍである、実施形態５２に記載の方法。

【0254】

実施形態５４． 前記インプット無核細胞が、赤血球細胞である、実施形態５２または５３に記載の方法。

【0255】

実施形態５５． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドおよびＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む、実施形態５２～５４のいずれか一項に記載の方法。

【0256】

実施形態５６． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態５２～５５のいずれか一項に記載の方法。

【0257】

実施形態５７． 前記少なくとも１つのＨＰＶ抗原が、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態５２～５５のいずれか一項に記載の方法。

【0258】

実施形態５８． 前記ＡＡＣが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原および配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む、実施形態５２～５５のいずれか一項に記載の方法。

【0259】

実施形態５９． 前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、実施形態５２～５８のいずれか一項に記載の方法。

【0260】

実施形態６０． 前記アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、実施形態５９に記載の方法。

【実施例】

【0261】

当業者は、いくつかの実施形態が本発明の範囲および精神内で可能であることを認識する。本発明は、ここに、以下の非限定的な実施例を参照することによって、より詳細に記載する。以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、当然ながら、その範囲を決して限定するものとして解釈されるべきではない。
（実施例１）
ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの安全性および耐容性のフェーズＩ研究

【0262】

再発性、局所進行性または転移性ＨＰＶ１６＋固形腫瘍を有するＨＬＡ Ａ^＊０２＋患者における、単剤療法としての、および（１）イピリムマブ、（２）ニボルマブ、および（３）ニボルマブとイピリムマブと組み合わせた、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの安全性および耐容性、抗腫瘍活性、ならびに免疫原性効果および薬力学的効果のフェーズ１の非盲検、多施設研究を実施する。

【0263】

ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶは、ＨＬＡ－Ａ血清型群陽性（ＨＬＡ－Ａ^＊０２＋）患者内のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）血清型におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）株１６陽性（ＨＰＶ１６＋）がんのための処置として使用される活性化抗原担体（ＡＡＣ）の赤血球細胞（ＲＢＣ）由来製品である。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶは、ＨＰＶ１６のＨＬＡ－Ａ^＊０２拘束性Ｅ６およびＥ７エピトープならびにアジュバントのポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）を用いて処理された自家ＲＢＣからなり、これは、製造の間にサイトゾルに送達される。
Ｅ６ ＳＬＰ：ＱＬＣＴＥＬＱＴＴＩＨＤＩＩＬＥＣＶＹＣＫＱＱＬＬ（配列番号１９）
Ｅ７ ＳＬＰ：ＱＬＣＴＥＬＱＴＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴＹＣＫＱＱＬＬ（配列番号２３）

【0264】

プロセスは、全血が採取される臨床現場で特定の患者を用いて開始し、次いで、製造場所に輸送される。製造場所では、血小板および白血球細胞が除去され、ポリＩ：Ｃアジュバントと一緒にＥ６およびＥ７エピトープが、Ｃｅｌｌ Ｓｑｕｅｅｚｅ技術を使用して、細胞に送達される。Ｃｅｌｌ Ｓｑｕｅｅｚｅ技術の結果として、開始ＲＢＣと比べて、ＡＡＣの表面上のホスファチジルセリンが増加する。得られる細胞は、ＡＡＣ－ＨＰＶ原体である。ＡＡＣ－ＨＰＶ原体は、凍結保存媒体で洗浄され、その後、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ自家製剤に製剤化され、凍結保存される。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原体は、製造プロセスの間にサイトゾルに送達されたＨＰＶ１６のＨＬＡ－Ａ^＊０２拘束性Ｅ６およびＥ７エピトープを含有する合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）を有する自家ＰＢＭＣからなる。
概要

【0265】

研究集団は、進行期のＨＰＶ１６＋固形腫瘍（頭頸部がん、子宮頸がん、および他の腫瘍型）を有するＨＬＡ－Ａ^＊０２＋である患者からなる。ＨＬＡ Ａ^＊０２＋状態およびＨＰＶ１６＋腫瘍状態は、臨床検査報告によって確認され、自家血液製品の製造のための患者の採血の前に、すべての適格性の基準を満たしていなければならない。局所的に確認されたＨＰＶ１６＋状態を有する患者は、臨床検査評価の文書化が不十分であるとスポンサーによって判断されると、スクリーニング時に採取された新鮮な腫瘍生検から中央確認が行われ得る。

【0266】

適格な患者は、自家製剤の製造のための研究場所で単回の採血を受ける。少なくとも２００ｍＬの全血が、この目的のために取られる。この採血は、それぞれの患者の個別化自家細胞療法の製造のために委託製造業者に送られる。次いで、ＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶの凍結バイアルは、投与のために研究場所に送られる。

【0267】

この研究は２つのパートで実施され、パート１は、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ単剤療法の安全性プロファイル、予備的有効性、およびＲＰ２Ｄを決定するための用量漸増からなる。研究のパート２は、併用安全性フェーズで免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた場合のＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの安全性および予備的有効性を評価する。

【0268】

すべてのコホートで、ＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶは、最大で１年間、またはＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ供給が枯渇する、もしくは処置の中断基準を満たすのいずれか早い方まで、３週間間隔で投与される。

【0269】

パート１およびパート２のすべての患者は、ＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶのそれぞれの投与後少なくとも４時間、観察される。加えて、それぞれのコホートの最初の２人の患者は、ＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶの初回投与後に最低で２３時間の観察を受ける。

【0270】

腫瘍の評価は、疾患進行、容認できない毒性、同意の撤回、死亡、またはＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶの初回投与の日から２年間のいずれかが最初に起こるまで、ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴによって、研究全体を通して行われる。ＲＥＣＩＳＴ １．１による疾患進行を経験する患者は、疾患進行：すなわちｉＲＥＣＩＳＴによるｉＣＰＤ（Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ， ２０１７）の確認を可能にするために処置している治験責任医師によるそれらの最良の関心で考慮される場合、投薬が継続されてもよい。

【0271】

治験製品の最終用量の後、安全性および耐容性をモニターするため、ならびに全生存期間を評価するための追跡調査来院がある。
パート１：漸増フェーズ（ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ単剤療法）

【0272】

漸増フェーズのための計画された用量コホートを表１に示す。従来の３＋３設計は、安全性および耐容性を評価するために意図されるが、安全性および耐容性、免疫原性効果、ならびに抗腫瘍活性をさらに調べるために、コホートにおいて最大で合計１２人の追加患者を処置することが賢明であり得る。この改変３＋３設計において、コホートあたり最大で１２人の患者が存在する。

【表1】

ａ．ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる投薬は、処置の中断基準を満たす、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ供給が枯渇する、または最大で１年間のいずれか早い方まで、３週間ごとに継続する。
ｂ．サイクル１では、患者は１日目および２日目にＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受ける。
ｃ．安全性のシグナルが観察されない場合、高用量レベルは、５×１０^８ ＡＡＣ／ｋｇである。非ＰＤ関連毒性に関する≧グレード２が、ＤＬＴ期間の間に、３人の患者のうちの１人または６人の患者のうちの２人で観察される場合、高用量レベルは、２．５×１０^８ ＡＡＣ／ｋｇである。
ｄ．２．５×１０^８ ＡＡＣ／ｋｇの高用量が選択される場合、２．５×１０^８ ＡＡＣ／ｋｇのＤＬＴ評価が終了したら、５×１０^８ ＡＡＣ／ｋｇによる第３のコホートが解放され得る。

【0273】

少なくとも２つの単剤療法の用量レベルが試験される。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの低用量は、０．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇである。可能な限り最も多くの免疫原性細胞用量に曝露されるコホート２における患者を確保するために、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの高用量レベルは、コホート１における安全性の所見に基づく。安全性のシグナルが観察されない場合（すなわち、≧グレード２の処置関連毒性なし）、高用量レベルは５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇである。非ＰＤ関連毒性（またはＤＬＴ）に関する≧グレード２が、ＤＬＴ期間の間に、３人の患者のうちの１人または６人の患者のうちの２人で観察される場合、高用量レベルは、２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇである。２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇの高用量が選択される場合、２．５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇのＤＬＴ評価が終了したら、５×１０^８ＡＡＣ／ｋｇによる第３のコホートが解放され得る。所与のコホートにおける患者からの利用可能な安全性、有効性、および薬力学データのレビュー後、ＳＳＣは、追加のより高いまたはより低い単一または二重の抗原ローディング用量レベルの調査が是認されるかどうかを決定する。この場合において、用量漸増または漸減の大きさは、観察されたＴＥＡＥの種類および重症度に基づいて、ＳＳＣによって決定される。

【0274】

患者は、サイクル１の１日目および２日目、ならびにそれぞれのその後の２１日サイクルの１日目にＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受ける。パート１では、ＤＬＴ観察期間は２８日である（図１）。

【0275】

患者は、コホートにおける１人以下の患者が、１週間以内にＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶの初回投与を受けることを意味する、調査場所にわたって調整した方法で登録される。その後のコホートにおけるＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶの投与は、ＳＳＣが利用可能な安全性データをレビューし、用量漸増が是認されることを決定するまで、開始されない。
用量漸増およびＲＰ２Ｄ決定

【0276】

従来の３＋３設計は、安全性および耐容性を評価するために意図されるが、安全性および耐容性、免疫原性効果、ならびに抗腫瘍活性をさらに調べるために、コホートにおいて最大で６人の追加患者を処置することが賢明であり得る。この改変３＋３設計において、コホートあたり最大で１２人の患者が存在する。

【0277】

用量漸増、または６人から１２人の患者へのコホートサイズの増加は、所与の用量レベルでの最初の３人の患者が、ＤＬＴ観察期間を終了し、ＳＳＣによって実施される安全性データのレビューの際に安全性について評価可能であることが見出された後に考慮される。ＤＬＴ観察期間は、パート１について２８日と定義される。

【0278】

ＤＬＴ観察期間にわたる所与の用量レベルでの最初の３人の登録患者のいずれかにおいてＤＬＴが観察されない場合、次に、より高い用量レベルのコホートが、登録のために開放され得る。最初の３人の患者のうちの１人がＤＬＴを経験する場合、３人の追加患者が登録される（同じ用量レベルで合計６人の評価可能な患者）。最初の３人の患者のうちの≧１人または６人の患者のうちの≧２人がＤＬＴを経験する場合、さらなる用量漸増は考慮せず、これが最大投与用量（ＭＡＤ）になる。ＲＰ２Ｄは、以前に評価されたより低い用量レベルであってもよく、または代替の中間用量レベルが、さらなる評価のために選択されてもよい。ＲＰ２Ｄ決定は、少なくとも６人の患者からの安全性データに基づいて、ＳＳＣによって行われる。ＲＰ２Ｄは、研究のパート２（併用安全性フェーズ）においてさらに評価される。あるいは、ＲＰ２Ｄは、最大の生物学的効果が達成されていること、および患者がさらなる用量漸増から利益が得られないことが決定される薬力学的評価に基づいて申告されてもよい。

【0279】

患者は、安全性以外の任意の理由で患者がＤＬＴ観察期間を終了することができない場合、または薬力学的評価が研究処置の生物学的効果を定義するのに不十分である場合、評価不能と見なされる。評価不能と見なされたパート１の患者は、治験責任医師とスポンサーとの間の協議後に交代され得る。

【0280】

任意の投与された用量後に発生する有害事象は、その後の投与の時に≦グレード２に解消される。同様に、任意の投与された用量後に発生する特に注目すべき有害事象（ＡＥＳＩ）は、その後の投与の時に＜グレード２に解消される。サイクル１の初回投与後、これらの再処置基準を満たす場合、２回目のＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶ投与は、≧２３時間の観察期間（すなわち、初回用量の１６～２４時間）の間に与えられる。患者は、２回目の抗原ロードの投与後に最小で４時間観察される。２回の投与間の最小間隔は、１６時間である。

【0281】

患者は、単剤療法コホートにおけるＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶの初回用量後２８日間、ＤＬＴの出現についてモニターされる。改変３＋３ルールに従って、ＤＬＴに関して安全とコホートを確認するために必要な患者の最小数は、３人の患者において０ＤＬＴ、６人の患者において≦１ＤＬＴ、９人の患者において≦２ＤＬＴ、または１２人の患者において≦３ＤＬＴである。

【0282】

単剤療法ＲＰ２Ｄレジメンの決定のために、すべてのコホートにおけるＤＬＴ評価を終了しなければならない。ＲＰ２Ｄレジメンは、すべての利用可能な安全性、耐容性、免疫原性、ならびに他の薬力学および抗腫瘍データのレビューに基づいて選択される。ＳＳＣは、データをレビューし、ＲＰ２Ｄ承認の責任を負うＤＳＭＢに推薦を行う。

【0283】

ＲＰ２Ｄレジメンが定義されると、パート２（併用安全性フェーズ）が開始され得る。
パート２：併用安全性フェーズ（ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ＋チェックポイント阻害剤）

【0284】

併用安全性調査の間に評価されるＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ用量は、すべての利用可能な安全性、耐容性、免疫原性、ならびに他の薬力学および抗腫瘍データのレビューに基づいて選択される。ＤＳＭＢは、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ単剤療法ＲＰ２Ｄを併用安全性フェーズのために選択するかどうか、またはより低い用量で開始するかどうかを決定する。

【0285】

コホートは、ＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶ ＲＰ２Ｄおよび併用パートナーによって定義される。ＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶは、コホート２ａ、２ｂ、および２ｃにおいてＲＰ２Ｄで投与される。
コホート２ａ：ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ（ＲＰ２Ｄ）とイピリムマブ（耐容性が許容される場合、最大４用量について、３週間ごとに３ｍｇ／ｋｇ）
コホート２ｂ：ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ（ＲＰ２Ｄ）とニボルマブ（３週間ごとに３６０ｍｇ）
コホート２ｃ（コホート２ａおよび２ｂにおいてそれぞれ処置された６人の患者の安全性評価次第）：ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ（ＲＰ２Ｄ）とニボルマブ（３週間ごとに３６０ｍｇ）およびイピリムマブ（６週間ごとに１ｍｇ／ｋｇ）

【0286】

パート２における登録は、コホート２ａおよび２ｂで開始する。コホート２ａおよび２ｂにおいてそれぞれ６人の患者が登録され、４２日のＤＬＴ評価期間が成功裏に終了する；すなわち、患者の＜３３％がＤＬＴを経験すると、コホート２ｃが、登録のために開放される。両方のコホートからの利用可能な安全性データに基づいて、ＳＳＣは、コホート２ａおよび２ｂについて選択されたＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ用量レジメンを、コホート２ｃのために選択するかどうか、またはより低い用量レジメンで開始するかどうかを決定する。ＳＳＣが、より低い用量のＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶでコホート２ｃを開始することを推奨する場合、６人の患者が最初に登録され、少なくとも４人の患者が４２日間観察される。ＳＳＣが、患者の＜３３％がＤＬＴを経験することにより併用を安全と見なす場合、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの用量は、完全単剤療法ＲＰ２Ｄまで上昇させてもよく、登録は、是認される場合、最大で１２人の患者が登録されるまで継続され得る。

【0287】

パート２の併用安全性コホートにおける患者は、サイクル１の１日目および２日目、ならびにそれぞれのその後の２１日サイクルの１日目にＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受ける。それぞれのコホートにおいて、最初の２人の患者がサイクル１の８日目を終了した後、コホートにおける追加患者を、そのコホートにおいて処置することができる。

【0288】

すべての患者は、安全性および耐容性、ならびに抗腫瘍応答の予備的証拠について評価される。

【0289】

コホート２ａ － ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶとイピリムマブ

【0290】

サイクル１において、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶは、パート１で決定されたＲＰ２Ｄに従って、すなわち、１日目および２日目に二重抗原ロード用量として、または１日目に単一抗原ロード用量としてのいずれかで、ＩＶ投与される。イピリムマブ３ｍｇ／ｋｇは、１日目のＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶの前に、９０分にわたってＩＶ投与される。サイクル２、３、および４において、イピリムマブは、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの投与後、１日目に与えられる。イピリムマブは、最大で４サイクルの間、投与される。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶは、中断基準を満たす、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ供給が枯渇した、または最大で１年間のいずれか早い方まで、３週間サイクルで与えられる（図２）。

【0291】

コホート２ｂ － ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶとニボルマブ

【0292】

サイクル１において、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶは、パート１で決定されたＲＰ２Ｄに従って、すなわち、１日目および２日目に二重抗原ロード用量として、または１日目に単一抗原ロード用量としてのいずれかで、ＩＶ投与される。サイクル１の８日目に、ニボルマブは、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ注入の終了直後に、３０分にわたって、３６０ｍｇの用量でＩＶ投与される。その後のサイクルにおいて、ＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶと、それに続くニボルマブは、３週間ごとに、１日目に投与される。ニボルマブは、最大で２年間、または中断基準を満たすまで、３週間ごとに与えられ得る。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶは、中断基準を満たす、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ供給が枯渇した、または最大で１年間のいずれか早い方まで、３週間サイクルで投与される（図３）。

【0293】

コホート２ｃ － ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶとニボルマブとイピリムマブ

【0294】

サイクル１において、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶは、コホート２ａおよび２ｂにおける所見に基づくＲＰ２Ｄに従って、ＩＶ投与される。留意すべきことには、ＳＳＣは、コホート２ａおよび２ｂのために選択された用量を下回る用量、または改変用量レジメン（例えば、１日目のみに単回抗原ロード用量として）での手順が助言されることを決定してもよい。イピリムマブは、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの前に、１日目に、３０分にわたって１ｍｇ／ｋｇの用量でＩＶ投与される。サイクル１の８日目に、ニボルマブ３６０ｍｇ ＩＶが、３０分にわたって投与される。ニボルマブは、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの投与後、その後の３週間サイクルにおける１日目に与えられる。イピリムマブは、その後のサイクルにおけるＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶおよびニボルマブの投与後、６週間ごとに投与される（図４）。ニボルマブおよびイピリムマブは、処置の中断についての基準の１つを満たすまで、サイクル１の１日目から２年間与えられ得る。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶは、中断基準を満たす、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ供給が枯渇した、または最大で１年間のいずれか早い方まで、３週間サイクルで投与される。

【0295】

免疫媒介ＡＥに起因して、患者がチェックポイント阻害剤の中断についての基準を満たし（添付物Ｅによる）、治験責任医師は、事象がニボルマブまたはイピリムマブに関連するかどうかを決定することができない場合、患者は、両方の薬物を中断し、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶを継続し得る。

【0296】

パート２のすべてのコホートについて、サイクル１の２日目における２回目のＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ投与は、≧２３時間の観察の間に与えられる。任意の投与された用量後に発生する有害事象は、その後の投与の時に≦グレード２に解消される。同様に、任意の投与された用量後に発生するＡＥＳＩは、その後の投与の時に＜グレード２に解消される。これらの再処置基準を満たす場合、２回目のＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶ投与は、≧２３時間の観察期間（すなわち、初回用量の１６～２４時間）の間に与えられる。患者は、２回目の抗原ロードの投与後に最小で４時間観察される。２回の投与間の最小間隔は、１６時間である。それぞれのコホートにおいて、最初の２人の患者がサイクル１の１４日目を終了した後、コホートにおける追加患者は処置される。

【0297】

患者は、併用療法コホートにおけるＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶの初回用量後４２日間、ＤＬＴの出現についてモニターされる。

【0298】

個々の患者におけるＤＬＴまたは他の著しい毒性の場合に、より低いＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶ用量への漸減が行われる。個々の併用安全性コホートにおける患者からの利用可能な安全性、有効性、および薬力学データのレビュー後、ＳＳＣは、二重抗原ロードが、１回または複数回の用量の組合せが賢明ではないことを決定し得る。この場合において、ＳＳＣは、２回目（サイクル１の２日目）のＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ用量を下げることを推奨してもよい。あるいは、ＳＳＣは、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶについてのより低い用量レベルが調査されてもよい（用量漸減）ことを決定してもよい。例えば、ＤＬＴが個々の併用安全性コホートにおける患者の≧３３％において観察される場合、より低いＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶレベルを評価するコホートが解放され、調査される。より高い用量コホートは、２ｃ、２ｄなどと表し、より低い用量コホートは、２ａ－１、２ｂ－１などと表す。
投薬スケジュールおよび研究期間

【0299】

すべての患者は、処置の開始前に自家血液製品の製造のために使用される単回採血を受ける。患者は、研究場所でこの採血を受け、これは、典型的には、ＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶの（サイクル１の１日目）初回投与のおよそ１～２週間前に行われる。ＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶの初回投与のスケジュールは、場所の位置および輸送ロジスティクスを考慮する。

【0300】

サイクルは、２１日の処置期間として定義される。

【0301】

患者は、最大で１年間、治験製品が枯渇するまで、または処置中断基準を満たすまでのいずれか早い方まで、３週間間隔でＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶを受ける。

【0302】

臨床証拠の蓄積は、免疫系刺激剤で処置された一部の対象が、臨床の客観的応答および／または安定疾患を実証する前に、疾患の進行の徴候を明らかにし得る（従来の応答基準による）ことを示す。２つの仮説が、この現象を説明するために出されている。第１は、腫瘍内の増強された炎症が、腫瘍サイズの増加をもたらし、これが、拡大した指標病変として、および新たな目に見える小さな非指標病変として現れる。経時的に、塊の有害なおよび炎症の性質は両方とも、次いで減少し、臨床改善の公然の徴候をもたらす（Ｗｏｌｃｈｏｋ ｅｔ ａｌ， ２００９）。あるいは、一部の個体では、腫瘍成長の動態は、最初に、抗腫瘍免疫活性に勝ることがある。十分な時間により、抗腫瘍活性は、支配し、臨床的に明らかになる。そのため、それぞれの時点で並行してＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴを評価することが重要である。

【0303】

患者は、初期のＲＥＣＩＳＴ １．１が定義する進行後に研究の療法を継続してもよく、したがって、以下の基準を満たす場合、ｉＲＥＣＩＳＴ（Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ， ２０１７）に従って疾患進行の確認を可能にし得る
１．治験責任医師が評価した臨床的利益、および迅速な疾患進行の欠如
２．治験責任医師によって定義される治験薬の耐容性
３．安定な一般状態
４．進行を超える処置が、迅速に進行する疾患から重篤な帰結を防止するための切迫した介入を遅延させない
５．疾患進行の合併症（例えば、ＣＮＳ転移）の欠如

【0304】

臨床的利益の評価は、患者が臨床的に悪化しており、継続した処置から更なる利益を受ける可能性が低いかどうかを考慮する。
用量制限毒性

【0305】

患者は、以下の場合に、ＤＬＴ評価について評価可能であると見なされる：１）受けた細胞用量にかかわらず、ＤＬＴ評価期間の間にＤＬＴを経験する；または２）ＤＬＴ評価期間の間にＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの意図される用量の少なくとも７０％を受けた後、ＤＬＴ評価期間の間にＤＬＴを経験しない。ＤＬＴ評価期間の間に、ＤＬＴを経験せず、意図されるＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ用量の７０％未満をまだ受けていない患者は、ＤＬＴについて評価可能と見なされず、交代される。

【0306】

ＩＲＲではないＤＬＴを経験している患者は、研究が中断される。治験責任医師およびスポンサーの見解において、治験製品における処置を継続することが患者の最良の関心である場合、その後の処置は、スポンサーとの協議において治験責任医師によって決定される。ＩＲＲのために、前投与または投与速度は、患者が研究に留まることが可能になるように調整され得る。

【0307】

ＤＬＴは、主任治験責任医師によって評価されたＡＥまたは臨床的に重要な異常な臨床検査値として定義され、単剤療法による処置の最初の２８日以内、または併用療法による処置の最初の４２日以内のいずれかに起こる、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ（単独または組合せのいずれか）に関連するが、疾患、疾患進行、併発疾病、併用薬／手順、または環境因子に無関係として、ＳＳＣによって確認され、これは、国立がん研究所（ＮＣＩ）の有害事象共通用語基準（ＣＴＣＡＥ）バージョン５．０を使用して、以下にリストされる事前に定義された基準のいずれかを満たす。ＣＲＳおよび神経毒性の等級付けは、米国移植細胞治療学会（ＡＳＴＣＴ）コンセンサス等級付けを、それぞれ、セクション６．１．４およびセクション６．１．５を参照して、使用する。
非血液学的毒性
グレード４またはグレード５。
２４時間以内に≦グレード２に解消しないグレード３のＣＲＳまたは神経毒性を除いて、最適な支持療法にもかかわらず、７日以内に≦グレード１またはベースラインに解消しない、グレード３の毒性。
＞７日持続し、医学的介入を必要とするグレード３の臨床検査値。
以下を除く、＞４８時間持続する＞グレード３の肝臓毒性：ベースライン時にグレード２のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、および／またはアルカリホスファターゼの異常を有する患者について、＞８×正常上限（ＵＬＮ）への増加が＞４８時間持続する場合のみ、ＤＬＴと見なされる。
Ｈｙ’ｓ ｌａｗ基準を満たす肝臓検査の異常。
血液学的毒性
任意のグレード５の毒性。
任意のグレード４の貧血。
任意の≧グレード３の発熱性好中球減少症。
＞７日持続する≧グレード４の好中球減少症（好中球絶対数＜５００／μＬ）。
≧グレード４の血小板減少症（＜２５，０００／μＬ）。
臨床的に重要な出血に関連する＞７日持続する≧グレード３の血小板減少症（＜５０，０００／μＬ）。
サイクル２の１日目の予定されたＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶ投与の恒久的中断または＞１４日の遅延をもたらす、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ（単独または組合せのいずれか）に少なくとも関連する可能性があるＴＥＡＥ。
治験責任医師およびスポンサーの判断で、ＤＬＴであると見なされる任意の他の事象。

【0308】

以下の事象は、ＤＬＴと見なされない：
膵炎の≧グレード３のアミラーゼ値または臨床症状またはＸ線検査による証拠に付随しない、分離したグレード３のリパーゼ値。
対症療法ありまたはなしで、２４時間以内に≦グレード２に改善するグレード３のＣＲＳ。
適切な支持療法ありまたはなしで、７日以内に≦グレード２に解消するグレード３の皮膚発疹。
２４時間で≦グレード２に戻る、細胞製品投与の２時間以内に起こる即時型アレルギー反応。
臨床的続発症がない、７２時間以内に是正されるグレード１またはグレード２の電解質異常。
脱毛症。

【0309】

これらの変化が、ＳＳＣの推奨に基づいて研究に登録されたすべてのその後の患者に適用可能であると見なされない限り、前投薬の追加または投与速度の改変により適切に管理することができるグレード３のＩＲＲは、ＤＬＴと見なされない。改変が、すべてのその後の患者に適用される場合、コホートは、ＤＬＴ評価について再開する。グレード３の注入反応を経験した患者は、それらの前処置または注入速度に対する改変を伴って、研究を続け得る。

【0310】

任意のコホートにおいて最大耐用量（ＭＴＤ）に到達しない場合、追加の細胞用量レベルまたはレジメンが試験され得る。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶに関連しないが、ＤＬＴの定義に包含されるＡＥの事象において、その所見は、ＳＳＣによって議論される。
コホートの停止基準、およびコホートへの用量漸増または進行の停止、および研究の終了

【0311】

改変３＋３ルールは、コホートを安全と宣言するための最終決定を定義する。コホートを安全と確認するために必要な患者の最小数は、０ＤＬＴで３人の患者であり、これは、コホートを安全と確認するために最大で１２人の患者まで増加し得る（すなわち、ＤＬＴを有する患者の＜３３％；例えば、＜２のＤＬＴを有する６人の患者、＜３のＤＬＴを有する９人の患者、または＜４のＤＬＴを有する１２人の患者の、コホートの安全性を確認するいずれか）。コホートがＭＴＤに達したことを示さなかった場合、追加の細胞用量レベルまたはレジメンが試験され得る。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶに関連しないが、ＤＬＴの定義に包含されるＡＥの事象において、その所見は、ＳＳＣによって議論される。

【0312】

ＤＬＴの定義を満たし、ＤＬＴウィンドウ外で起こるＡＥは、ＤＬＴとカウントされないが、代わりに、所与のコホートの全体的な安全性評価およびＲＰ２Ｄレジメンの選択において考慮される。

【0313】

コホートの停止ルールは、同じ用量コホート内で治験製品を受けている最大で１２人の患者における≧３のＤＬＴ（≧３３％）の出現である。停止ルールが引き起こされると、ＳＳＣは、以下の推奨のうちの１つを行い得る：
前の耐性用量レベルをＭＴＤと宣言する。
ＤＬＴの観察なしの最大投与用量（ＭＡＤ）レベルを用量レベルと宣言する。そのため、ＲＰ２ＤはＭＴＤではない。
中間用量レベルの試験を推奨する。
患者の安全性を増加するためのプロトコールの修正を推奨する。
登録および／研究を中断する。

【0314】

ＳＳＣによるレビューの後、患者の投薬は、これらの一般的な安全性基準に基づいて、患者の安全性の利益のために停止され得る：
治験製品に関連するとして、生命を脅かす可能性があると見なされ、医療モニターによって評価される、任意の重篤有害事象（ＳＡＥ）。
治験責任医師またはスポンサーに主な耐容性の懸念を示す、任意の他の臨床的に重要な変化。
研究集団

【0315】

研究集団は、進行期のＨＰＶ１６＋固形腫瘍（頭頸部がん、子宮頸がん、および他の腫瘍型）を有するＨＬＡ－Ａ^＊０２＋である患者を含む。

【0316】

患者は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４阻害剤、または他の免疫チェックポイント阻害剤による療法を前に受けていてもよい。

【0317】

患者の数

【0318】

患者の数は、安全性および観察される免疫原性効果に依存する。単剤療法のパート１（漸増フェーズ）では、およそ９～３６のＤＬＴを評価可能な患者が登録され得ると予期される。計画されたコホートがＭＴＤに達したことを示さなかった場合、追加の細胞用量レベルまたはレジメンが試験され得る。最大で合計およそ３６人の評価可能な患者が、パート２に登録され得る（コホートあたりｎ＝１２）。コホート内で患者を交代する必要性に応じて、およそ７２人の評価可能な患者が研究において処置されると予期される。
組み入れ基準
１．血液からのジェノタイピングアッセイによって確認されたＨＬＡ－Ａ^＊０２＋である≧１８歳の男性または女性患者。
２．ＨＰＶ１６＋である、組織学的に確認された不治または転移性固形腫瘍（限定されるものではないが、子宮頸部および頭頸部腫瘍を含む）。
３．外科手術、放射線療法、および／または放射線化学療法による治癒的処置に適していない子宮頸がんについて、がんは、アジュバントまたは再発状況において白金系レジメンによる前の全身化学療法処置後に進行していなければならない。患者は、最近の前の処置を受けている間またはその終了後に、進行性疾患を有していなければならない。
再発性疾患のための白金系全身化学療法処置に耐えられないまたはそれを拒絶する患者について、理由は文書化されていなければならない。
４．外科手術、放射線療法、および／または放射線化学療法による治癒的処置に適していない再発性および転移性頭頸部がんについて、がんは、主にアジュバントまたは再発状況において少なくとも１回の前の白金系化学療法後に進行し、チェックポイント免疫療法を提示されていなければならない。白金含有根治的化学放射線療法後またはアジュバント化学放射線療法後に再発した患者は、再発の時に白金再チャレンジが有益と見られない場合に、適格である。
再発性疾患のための白金系全身化学療法処置に耐えられないまたはそれを拒絶する患者について、理由は文書化されていなければならない。
５．子宮頸がんまたは頭頸部がん以外の不治または転移性ＨＰＶ１６＋がんを有する患者は、不治の疾患のための少なくとも１回の利用可能な標準療法後に進行していなければならないか、あるいは患者は、標準療法に耐えられないもしくはそれを拒絶するか、または標準療法が存在しない腫瘍を有する。
漸増フェーズ（パート１）および併用安全性フェーズ（パート２）
６．米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）一般状態（ＰＳ）が０～１。
７．患者は、自家血液製品の製造のための採血のために静脈アクセスに同意しなければならず、静脈アクセスが問題である場合は、中心ラインの挿入に受け入れなければならない。
８．切除不可能なまたは転移性固形腫瘍を有する患者は、許容される臨床リスクで生検を行うことができる病変を有していなければならず、スクリーニングおよびサイクル２の８日目（±２日）で新たな生検に同意しなければならない。
ａ．以前に照射された領域の病変は、研究登録前に病変の進行の客観的証拠が存在する限り、生検を行うことができる。
９．ＲＥＣＩＳＴ １．１に従った少なくとも１つの測定可能な病変。
ａ．以前に照射された領域の病変は、研究登録前に病変の進行の客観的証拠が存在する場合、測定可能な疾患として見なされる資格がある。
１０．自家血液製品の製造のための採血の１４日前以内に行われた以下の臨床検査評価によって示される、適切な臓器の機能および骨髄予備能：
ａ．骨髄機能：好中球絶対数≧１０００／μＬ；ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ；血小板数≧７５，０００／μＬ。留意：＜９ｇ／ｄＬのヘモグロビン値を有する安定した患者において、輸血を利用して、組み入れ基準を満たしてもよい。
ｂ．肝臓機能：総血清ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ；血清ＡＳＴ／ＡＬＴ、≦２．５×ＵＬＮ（肝臓転移の存在下で≦５×ＵＬＮ）；以下を除いてアルカリホスファターゼ＜２．５×ＵＬＮ：肝臓および骨の関与を有する患者：アルカリホスファターゼ≦５×ＵＬＮ。
ｉ．ビリルビン代謝の遺伝性障害を有する患者は、スポンサーと議論しなければならない。
ｃ．腎臓機能：採尿またはコッククロフト－ゴールト推定のいずれかに基づいて、血清クレアチニン≦２．５×ＵＬＮまたはクレアチニンクリアランス≧３０ｍＬ／分。
ｄ．凝固プロファイル：プロトロンビン時間（ＰＴ）、国際標準化比（ＩＮＲ）／部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）≦１．５×ＵＬＮ。自家血液製品の製造のための採血の前に少なくとも３０日間の抗凝固剤療法の安定な維持レジメンにおける患者は、治験責任医師の意見で患者が研究に好適である場合、ＰＴ／ＩＮＲ測定値＞１．５×ＵＬＮを有していてもよい。適切な根拠が、登録の前にスポンサーに提供されなければならない。
１１．ホルモン補充療法を必要とする免疫チェックポイント阻害剤による処置後の免疫介在性内分泌異常を有する患者は、適格である。
ａ．ホルモン補充療法の一部としてプレドニゾンを必要とする患者は、１日用量が１０ｍｇを越えない場合、適格である。
１２．妊娠の可能性がある女性患者は、以下でなければならない：
ａ．スクリーニングで、陰性の血清ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）妊娠検査を有する；および
ｂ．インフォームドコンセントの時から免疫チェックポイント阻害剤またはＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの最終用量の少なくとも５か月後まで、非常に有効な避妊法を使用することに同意する（ＣＴＦＧ， ２０２０）。
非常に有効な避妊法の例としては、以下が挙げられる：
・排卵の阻害に関連する混合ホルモン避妊薬（エストロゲンおよびプロゲステロンの両方を含有する）；経口、膣内または経皮であり得る
・子宮内避妊具（ＩＵＤ）
・子宮内ホルモン放出システム（ＩＵＳ）
・両側卵管閉塞
・精管切除術を受けたパートナー
・禁欲
１３．精管切除術を受けていない男性患者は、インフォームドコンセントの時から免疫チェックポイント阻害剤またはＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの最終用量の少なくとも５か月後まで、コンドームの使用を受け入れなければならない。
１４．患者は、プロトコールを理解し、従うことができ、必要なインフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名した。適切なＩＣＦは、関連する研究手順が行われる前に署名されなければならない。該当する場合、男性患者の女性パートナーは、妊娠中のパートナーのＩＣＦを理解し、署名する。
除外基準
１．自家血液製品の製造のための採血前２週間以内に、調査的療法を含む抗がん療法による処置。３日よりも長い半減期を有する前の療法について、療法の中断のタイミングは、スポンサーと議論しなければならない。
２．自家血液製品の製造のための採血の少なくとも２週間前に解消されていない（すなわち、≦グレード１またはそれよりも上）抗がん療法または調査的療法による以前の処置に関連する、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０に従って＞グレード１の有害事象（ＡＥ）（グレード２の貧血を除く）を有する患者。
３．前の免疫療法から任意のグレード４のｉｒＡＥ（補充療法で管理された内分泌異常または血清アミラーゼもしくはリパーゼの無症候性の上昇を有する患者は適格である）、前の免疫療法の恒久的中断をもたらす任意のｉｒＡＥ、または自家血液製品の製造のための採血の≦６か月前に起こった任意のグレード３のｉｒＡＥの病歴。
４．最後の６か月以内に非コルチコステロイド系免疫抑制剤で処置された患者は、適格ではないことがあり、スポンサーと議論しなければならない。
５．活動性、公知、または疑わしい自己免疫疾患を有する患者は、適格ではないことがあり、スポンサーと議論しなければならない。
６．脾摘出術を受けた患者。
７．自家治験製品製造のための採血前４週間以内に、輸血を受けたか、または輸血が必要と予期される患者。
留意：患者は、臨床的に適応のある採血後に輸血を受けてもよい。
８．前の同種異系骨髄移植または固形臓器移植を有する患者は、適格ではないことがあり、スポンサーと議論しなければならない。
９．自家血液製品の製造のための採血前４週間以内の生ウイルスワクチン接種。
１０．自家血液製品の製造のための採血前１４日以内のコルチコステロイド（１日あたり＞１０ｍｇのプレドニゾンまたは等価物）または他の免疫抑制薬のいずれかによる全身処置。留意：吸入、鼻腔内、関節内および局所（眼を含む）ステロイドは許容される。副腎不全を有する患者のためのステロイド補充の使用は許容される。副腎不全を有する患者におけるミネラルコルチコイド補充のためのフルドロコルチゾンの使用は許容される。
１１．公知の活動性の中枢神経系転移および／またはがん性髄膜炎を有する。以前に処置された脳転移を有する患者は、患者が、安定である（治験製品の初回用量前の少なくとも４週間、イメージングによる進行の証拠がなく、任意の神経症状がベースラインに戻った）、新たなまたは増大している脳転移の証拠がない、および自家血液製品の製造のための採血前の少なくとも７日間ステロイドを使用していないという条件で参加してもよい。この例外は、臨床状態にかかわらず除外されるがん性髄膜炎を含まない。
１２．ステロイドを必要とする間質性肺疾患、特発性肺線維症、肺炎（薬物誘発性を含む）、または器質化肺炎（例えば、閉塞性細気管支炎、特発性器質化肺炎）の病歴。
ａ．肺炎のためのステロイド療法を必要していない無症候性肺炎を有する患者は、適格である。
１３．不安定狭心症、自家血液製品の製造のための採血前６か月以内の急性心筋梗塞、ニューヨーク心臓協会クラスＩＩＩまたはＩＶのうっ血性心不全、および療法を必要とする不整脈を含む、臨床的に重要な心臓疾患。
１４．自家血液製品の製造のための採血前１か月以内の脳血管発作（虚血性発作を含む）などの全身性の動脈の血栓または塞栓事象。
１５．自家血液製品の製造のための採血前１か月以内の全身性の静脈の血栓事象（例えば、深部静脈血栓）または肺動脈事象（例えば、肺塞栓）。
ａ．安定な抗凝固剤療法に対する自家血液製品の製造のための採血前の静脈血栓事象を有する患者は、適格である。
１６．治験責任医師の意見において、臨床的に意味のある心電図異常（ＥＣＧ）の病歴または存在。
１７．左心室駆出分画率（ＬＶＥＦ）＜５０％。
１８．自家血液製品の製造のための採血の２週間以内の大手術；自家血液製品の製造のための採血前＞２週間の大手術後、すべての手術創傷は、治癒し、感染または離開なしでなければならない。
１９．任意の他の臨床的に重要な併存疾患、例えば、活動性感染症、公知の精神障害もしくは神経障害、または治験責任医師の判断において、プロトコールへの遵守を損なうか、研究結果の解釈を妨げるか、または患者を安全上のリスクがあるようにする、任意の他の状態。
２０．公知の活動性Ｂ型肝炎もしくはＣ型肝炎、または活動性ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染。
２１．患者が、エントリーの１２か月以内にアルコールおよび／または違法薬物乱用の病歴を有する。
２２．スクリーニング来診時に、母乳育児しているか、または陽性の血清妊娠検査を有する女性患者。
２３．患者が、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの任意の構成要素に対するアレルギーまたは過敏性の病歴を有する。
２４．キメラ、ヒト、もしくはヒト化抗体、または注入タンパク質に対する重篤なアレルギーのアナフィラキシー反応の病歴（併用コホートのみ）。
２５．イピリムマブ、ニボルマブ、チャイニーズハムスター卵巣細胞製品、またはイピリムマブもしくはニボルマブ製剤の任意の構成要素に対する公知の過敏性（併用コホートのみ）。
２６．ＨＩＶ＋患者の登録は、スポンサーと議論しなければならない。
自家血液製品の製造のための採血

【0319】

自家製品製造のための採血の目標は、長期の処置期間をサポートするためにおよそ５００×１０^９個細胞のそれぞれの患者についてのＲＢＣの収量を提供することである。この目的のために、少なくとも２００ｍＬの全血（±１０％）が、少なくとも５００×１０^９ＲＢＣを採取するために取られる。ローカル手順に従って、ＲＢＣまたは全血球算定が、処理された血液の体積が増加し得るように、採血の間に行われる。ＲＢＣまたは全血球算定を採血の間に行うことができない事象では、試料は、可能なら、ＲＢＣ採取においてＲＢＣ数を決定するために、採血の最後に取られる。結果は、可能な限り早く処理され、スポンサーにリアルタイムで提供されなければならない。
腫瘍応答評価およびスケジュール

【0320】

腫瘍評価は、スクリーニング（ベースライン）で行われ、腫瘍応答は、ＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶの初回用量後１年間、９週間（±７日）ごとに、次いで、その後に、ＲＥＣＩＳＴおよびｉＲＥＣＩＳＴによって確認される疾患進行、許容されない毒性、同意の撤回、死亡、またはＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶの初回投与の日から２年のいずれかが最初に起こるまで１２週間（±７日）ごとに、治験責任医師によって評価される。

【0321】

部分奏功（ＰＲ）または完全奏功（ＣＲ）に達した患者について、腫瘍評価を、４週間後に繰り返して、応答を確認する。

【0322】

疾患は、ＣＴスキャンまたはＭＲＩのいずれかのＸ線イメージングを介して評価され、Ｘ線検査法は研究全体を通して一貫している。ＲＥＣＩＳＴ １．１による疾患進行を経験する患者は、疾患進行：すなわちｉＲＥＣＩＳＴによるｉＣＰＤ（Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ， ２０１７）の確認を可能にするために処置している治験責任医師によるそれらの最良の関心で考慮される場合、投薬が継続されてもよい。

【0323】

患者が進行以外の理由のために治験製品を中断する場合、その患者は、上記に概要を述べたスケジュールに従ってイメージングを継続する。患者が臨床的悪化に起因して処置を中断する場合、臨床進行に関連するＴＥＡＥが、ＡＥの頁に記録される。Ｘ線検査の評価を、得て、記録しなければならない。

【0324】

スクリーニングおよびすべてのその後の時点で、子宮頚癌、肛門／直腸癌、外陰／膣癌、および陰茎癌は、胴体（胸部、腹部および骨盤）および疾患のすべての公知の部位のコンピューター断層撮影（ＣＴ）を必要とし；中咽頭癌は、頭部、頸部、および胸部、ならびに公知の関与する他の領域のＣＴを必要とする。判断可能な理由のために、ＣＴスキャンを使用することができない、または適切な腫瘍評価が可能でない場合、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）が許可され、スポンサーに、スクリーニングの間に知らされる。スクリーニング時に疾患部位を評価するために使用された同じＸ線検査手順が、研究全体を通して使用される。すべての他の進行性固形腫瘍型について、治験責任医師は、治験責任医師がその腫瘍型に最良であると考えられるイメージングモダリティを使用して、疾患のすべての公知の部位をイメージングする。

【0325】

脳の磁気共鳴画像法は、脳転移の病歴を有するすべての患者において、スクリーニング時に必要とされ、脳転移の病歴を有する任意の患者、および／または脳転移を示唆する症状を発生した任意の患者において、その後の時点で繰り返され得る。患者が、ＭＲＩに耐えることができない、またはＭＲＩに禁忌を有する場合、ＣＴスキャンが使用される。

【0326】

可能なら、同じ評価者が評価を行って、来診にわたる内部的な一貫性を確実にする。治験責任医師の指示で、ＣＴスキャンは、進行性疾患（ＰＤ）が疑われる場合に、任意の時に繰り返される。部分奏功（ＰＲ）または完全奏功（ＣＲ）に達した患者について、腫瘍評価を、４週間後に繰り返して、応答を確認する。
免疫原性測定を含む薬力学的評価
試料採取スケジュール

【0327】

免疫原性測定を含む薬力学に対するＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの効果を評価するために、血液および腫瘍生検試料を採取する。
腫瘍生検

【0328】

自家血液製品の製造のための採血前に、患者は、活発な腫瘍成長を有する以前に照射された部位からであり得るスクリーニング腫瘍生検（原発腫瘍または転移）を受ける。すべての患者は、サイクル２の８日目（±２日）に、同じ原発腫瘍または転移の反復腫瘍生検を受ける必要がある。可能なら、追加の反復腫瘍生検を、サイクル５の１日目（＋２日）に得（投薬前）、この試料は、必要に応じてである。予備的データは、処置中の腫瘍生検時点の改変がより適切であることを示唆する場合、代替の処置中の腫瘍生検時点が考慮され得る。

【0329】

腫瘍組織は、合計のおよび生存する腫瘍内容物に基づいて、良好な品質でなければならない。新しい腫瘍生検は、原発腫瘍または転移部位からスクリーニング時に取られ、その後の生検は、スクリーニング時に生検が行われた同じ原発腫瘍または転移からである。解剖学的位置（臓器および臓器内の領域）は、ＣＲＦにおいて留意しなければならない。
薬力学的評価

【0330】

可能ならいつでも、ベースライン試料は、限定されるものではないが、四量体染色を含むフローサイトメトリーによる免疫表現型検査、ＨＰＶペプチドとの共培養後のＴ細胞のサイトカイン産生の評価（ＩＦＮγおよびグランザイムＢ酵素結合免疫スポット［ＥＬＩＳＰＯＴ］）、および循環無細胞ＨＰＶ１６ ＤＮＡ（ｃｆＨＰＶ ＤＮＡ）を含む、細胞相関性試験の長期的評価のために使用される。ベースラインの腫瘍生検および選択された血液試料は、処置後試料との比較のためにのみ使用される（表２）。

【表2】

略称： ＤＮＡ＝デオキシリボ核酸； ＨＰＶ１６＝ヒトパピローマウイルス株１６； ＩＦＮγ＝インターフェロンガンマ

【0331】

ＥＬＩＳＰＯＴ、Ｔ細胞受容体シークエンシング、およびエピトープスプレッディングを介した内因性免疫応答の発生についての評価が実施され得る。ＥＬＩＳＰＯＴを介して検出された内因性免疫応答についての情報は、腫瘍生検の免疫組織化学的分析に情報を提供する。
サイトカイン評価

【0332】

グレード２、３、または４のＣＲＳを有する患者は、グレード２、３、または４のＣＲＳ事象の間に行われた追加のサイトカイン血漿レベルを有する。採血は、サイクル１の１日目の投薬前、ならびにＣＲＳの診断の時、重症度の増加の時（例えば、グレード２のＣＲＳがグレード３のＣＲＳに進行した時）、神経学的症状の開始、および退院もしくは解消の時に得る。

【0333】

サイトカインパネルの評価は、限定されるものではないが、ＩＦＮガンマ（ＩＦＮγ）およびＩＬ６を含む。ＣＲＳは開始が遅延することがあるが、療法の開始後１４日を超えて存在することはめったにない。このウィンドウ外に存在するＣＲＳと一致する症状を示す患者は、他の原因について注意深く評価される。

【0334】

サイトカインはまた、薬力学的評価のためにモニターされる。ベースラインおよび処置後の血清試料を採取して、薬物の炎症応答についての情報を提供するサイトカインを測定することによって、抗腫瘍免疫応答を評価する。

【0335】

そのＩＶ投与後の血流からのＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ除去の動態を評価するために、血液試料を、サイクル１およびサイクル２において採取する。
安全性評価

【0336】

この研究についての適格性の基準は、参加している患者の安全性を確実にするために確立された。安全性は、この研究において、すべてのＳＡＥおよび重篤でないＡＥ、ならびに臨床検査の異常のモニタリングを通して評価され、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０に従って定義および等級付けされる。一般的安全性評価は、身体診察および特殊な臨床検査評価を含み、血液生化学検査、凝固、および分画を含む血球数を含む。ＳＡＥおよび≧グレード２のＡＥＳＩは、安全性データベースへのエントリーのために迅速処理様式で報告される。

【0337】

研究の実施の間、観察された安全性事象の全体性がレビューされ（グレード２に解消されたＣＲＳ事象を含む）、所与の事象がこの事象後の患者の調整された登録の開始を必要とするかが決定される。可能性のある追加の単剤療法コホート（パート１）または併用安全性コホート（パート２）における調整された登録は、１つまたは複数のコホートにおけるすべてのその後の新たに登録される患者を、１週間調整することを必要とする。患者の並行登録は、該当する場合、一部のコホートで継続されてもよい。グレード２、３、または４のＣＲＳを有する患者は、安全性検査およびサイトカインパネルの評価のために取られた追加の血液試料を有する。

【0338】

免疫チェックポイント阻害剤への曝露は、ｉｒＡＥ、特に、自己免疫状態のリスクを増加させ得る。そのため、ｉｒＡＥは、早期に認識され、可能性のある主要な合併症を回避するために、即座に処置される。

【0339】

すべての患者は、治験製品の最終用量後１５から４５日以内に、安全性追跡調査来院のために診療所に戻る。すべてのＡＥおよびＳＡＥは、治験製品の最終用量の６週間後（ＥＯＤ６Ｗ）、もしくはドロップアウトから最大で４５日まで、または別の抗がん療法の開始までのいずれかが最初に起こるまで、記録される。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ単剤療法または併用療法に、関連する可能性がある、ほぼ確実に関連する、または明白に関連すると治験責任医師によって決定された進行中のＳＡＥのみが追跡調査される。
身体診察、ならびに身長および体重

【0340】

身体診察は、示される通り、身長（スクリーニングのみ）、体重、および全身外観の評価、ならびに以下の系：皮膚、頭部、眼、耳、鼻、口／喉／頸部、甲状腺、リンパ節、呼吸器系、心臓血管系、胃腸系、四肢、筋骨格系、神経系、ならびに婦人科系および泌尿生殖器系の評価を含む。患者の投薬が体重によって決定されるので、自家血液製品の製造のための採血の２４時間以内の患者の身体診察の間に体重を捕えることは特に重要である。
一般状態

【0341】

米国東海岸がん臨床試験グループのスケールおよび基準を使用して、患者の一般状態を評価し、疾患が患者の日常生活能力にどのような影響を与えるかを評価し、適切な処置および予後を決定する。
１２誘導心電図

【0342】

１２誘導ＥＣＧは、心拍数、ＰＲ間隔、ＱＲＳ間隔、ＲＲ間隔、およびＱＴ間隔を決定するＥＣＧ機器を使用して、予定された時点で、資格のある現場の人員によって行われる。ＱＴｃＢ（Ｂａｚｅｔｔの式によって補正されたＱＴｃ）および／またはＱＴｃＦ（Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａの式によって補正されたＱＴｃ）を、ＱＴおよびＲＲ間隔に基づいて算出する。ＥＣＧの採取の間、患者は、ＥＣＧ採取の前に少なくとも１０分間、気を散らすものがない（例えば、テレビ、携帯電話がない）静かな環境で、静止した姿勢でなければならない。

【0343】

すべてのＥＣＧは、異常の存在について資格のある医師によって評価される。
心エコー図

【0344】

心エコー図またはマルチゲート収集（ＭＵＧＡ）スキャンを行って、スクリーニングおよび臨床的に示された時に、ＬＶＥＦを測定する。
臨床検査評価

【0345】

臨床検査評価のための試料を、時点で採取する。表３に概要を述べた臨床検査試験は、その場所で行われる。表３に概要を述べた臨床検査のための試料は、その場所の標準手順に従って、適切な管に採取され、取り扱われる。

【0346】

臨床検査の変数を表３にリストする。安全性モニタリングの目的のために、治験責任医師は、すべての範囲外の臨床検査結果をレビューし、署名し、日付を付けなければならない。臨床検査結果は文書化されなければならない。

【表3】

ａ． これらの臨床検査についての結果は、自家血液製品の製造のための採血の前に利用可能である結果を伴って、自家血液製品の製造のための採血の前またはその日に収集することが必要である。
ｂ． 凝固パラメーターの結果は、任意の腫瘍生検の日、またはその翌日に必要である。
略称： ＣＲＳ＝サイトカイン放出症候群； Ｔ３＝トリヨードチロニン； Ｔ４＝チロキシン； ＴＳＨ＝甲状腺刺激ホルモン
有害事象
有害事象

【0347】

ＡＥは、投与された治験製品との原因となる関係を必ずしも有さない、患者における任意の不都合な医療上の出来事である。したがって、ＡＥは、治験製品に関連するかどうかにかかわらず、治験製品の使用に時間的に関連する、任意の好ましくないまたは意図的でない徴候（異常な臨床検査所見を含む）、症状、または疾患であり得る。有害事象は、新たな事象であってもよく、または重症度もしくは頻度において深刻になったか、もしくは悪化した、既往症であってもよい。

【0348】

有害事象は、身体診察、臨床検査、または他の診断的調査におけるベースラインからの臨床的に重要な変化であり得る。

【0349】

この研究では、ＡＥは、開始時が、治験製品の投与後から研究処置（ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶまたは免疫チェックポイント阻害剤）の最終用量の６週間後までの場合の、処置中に発生したものである。
重篤有害事象

【0350】

ＳＡＥは、以下のうちのいずれかをもたらす任意のＡＥである。
死亡。
即座に生命を脅かす。
患者の入院または現行の入院の延長を必要とする。
持続性のもしくは重要な身体障害または無能をもたらす。
先天性異常または出生異常をもたらす。
患者を危険にさらし得るか、または上記にリストされた転帰のうちの１つを防止するために医学的介入を必要とし得る、重要な医療事象である。

【0351】

任意の患者がＩＣＦに署名した後、処置前、処置の間、または処置の休止後３０日以内に起こったすべてのＳＡＥは、それが研究に関連するかどうかにかかわらず、適切な臨床手順形式で報告されなければならない。
特に注目すべき有害事象

【0352】

ＡＥＳＩは、継続的なモニタリングおよび治験責任医師によるスポンサーへの即時通知が必要な、治験製品に特異的な科学的および医学的関心のあるＡＥ（重篤または重篤ではない）である。そのようなＡＥは、それらを特徴付け、理解するために、さらなる調査を必要とし得る。特に注目すべき有害事象は、プロトコールの修正によって研究の間に追加または除去されてもよい。

【0353】

以下のＡＥが、ＡＥＳＩと見なされる：
過敏性、サイトカイン放出、全身性炎症反応症候群、全身性炎症活性化を示唆する事象。
インフルエンザ様疾病。
注入反応症候群。
免疫療法に関連するｉｒＡＥ、例えば、心筋炎、神経学的ｉｒＡＥ、免疫関連病因の高トランスアミナーゼ血症、および腎炎。
グレード２またはそれよりも高いすべてのＡＥＳＩは、認識の２４時間以内にスポンサーに報告される。治験責任医師によって、ｉｒＡＥであると見なされるか、免疫関連であると疑われる事象は、即座にスポンサーと議論されなければならない。

【0354】

加えて、以下の事象がスポンサーに報告される：
疑わしいＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの過量投与。
Ｈｙ’ｓ ｌａｗ基準を満たす肝臓検査の異常、すなわち、特定のプロトコールまたは予定外の臨床検査によって決定される、ＡＳＴまたはＡＬＴ臨床検査値≧３×ＵＬＮ、および総ビリルビン臨床検査値≧２×ＵＬＮ、ならびに同時に、アルカリホスファターゼ臨床検査値＜２×ＵＬＮ。
全般

【0355】

ＳＡＥを含む有害事象は、最初にＩＣＦに署名された日からＥＯＤ６Ｗもしくはドロップアウトから最大で４５日まで、または別の抗がん療法の開始までのいずれかが最初に起こるまで、それぞれの患者について収集される。報告期間内に起こったすべてのＳＡＥおよび≧グレード２のＡＥＳＩは、因果関係にかかわらず、治験責任医師がＳＡＥもしくはＡＥＳＩに気付いた時から２４時間以内に、治験責任医師によってスポンサーまたは被指名人に報告されなければならない。ＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶ単剤または併用療法に、関連する可能性がある、ほぼ確実に関連する、または明白に関連すると治験責任医師によって決定された進行中のＳＡＥのみが追跡調査される。

【0356】

ＡＥの用語は、可能な場合に、標準的な医学用語で報告される。それぞれのＡＥについて、治験責任医師は、開始（日時）、解消（日時）、重症度、因果関係、取られたアクション、重篤かどうか、および患者が研究の中断を引き起こすかどうか、または治験製品投与の改変もしくは遅延をもたらすかどうかを評価および報告する。

【0357】

患者によって自発的に報告されるか、または研究の職員からの自由回答式質問に答えた、または観察によって明らかになった、すべてのＡＥ（予想通りおよび予想外の両方）は、研究場所で、研究の間に、適切な研究特異的臨床手順形式で文書化される。ＰＤに関連する臨床転帰または症状は、それらが、ＳＡＥおよび／または死亡基準を満たし、最終の治験製品投与の６週間以内に起こる場合、ＳＡＥおよび／または死亡として報告される。それらは、事象の診断または症状に従って報告され、「進行性疾患」という用語によって報告されない。

【0358】

正常範囲外の任意の臨床検査値は、その場所での治験責任医師または被指名人の注意について警告が与えられる。治験責任医師または被指名人は、臨床的な意義をレビューする。臨床的に重要な異常が、投薬後、研究の間、および／または治験製品の休止後６週間以内に取られた試料で見出される場合、ＡＥとして報告されなければならず、患者は、治験責任医師の裁量で、検査が正常化または安定化されるまで追跡されなければならない。ＳＡＥを構成するか、または治験製品の投与の中断をもたらす異常な臨床検査値は、症例報告書（ＣＲＦ）のＡＥの頁に報告および記録される。

【0359】

ＳＡＥおよびＡＥＳＩは、解決、状態が安定する、または治験責任医師およびスポンサーが追跡を必要としないことに同意するまで、追跡される。事象が、研究報告期間の最後に解消しなかった場合、これは、進行中であるとして文書化されなければならない。すべてのＳＡＥおよび重篤ではない≧グレード２のＡＥＳＩは、事象を知ってから２４時間以内に、グローバル医薬品安全性監視処理グループに報告される。
重症度の評価

【0360】

ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０を使用して、ＡＥについておよび臨床検査の異常についての重症度が評価および等級付けされる。ＡＳＴＣＴコンセンサス等級付けが、ＣＲＳおよびＩＣＡＮＳのために使用される。それぞれのＡＥの用語は、国際医薬用語集（ＭｅｄＤＲＡ）の用語およびコードの最新バージョンにマッピングされる。

【0361】

事象が、ＣＴＣＡＥバージョン５．０に包含されない場合、表４に示すガイドラインが、重症度を評価するためのものである。

【表4】

起源： （ＮＩＡＩＤ， ２００３）
略称： ＣＴＣＡＥ＝有害事象共通用語規準
因果関係の評価

【0362】

治験製品との関係は、治験責任医師によって評価される。したがって、ＡＥおよびＳＡＥ報告形式は、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ、イピリムマブ、ニボルマブ、または併用との因果関係に寄与する選択肢を含む。ＳＱＺ ＡＡＣ－ＨＰＶおよび免疫チェックポイント阻害剤による併用療法を受けている患者について、因果関係は、それぞれのプロトコールで特定された療法について個々に評価される。合理的に疑わしい因果関係は、事象が免疫チェックポイント阻害剤のラベルと一致する場合、免疫チェックポイント阻害剤だけに帰する。

【0363】

ＡＥと治験製品（すなわち、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ、イピリムマブ、ニボルマブ、または併用）の関係は、以下の通り文書化される。
明白：ＡＥは、治験製品と明確に関連する。
ほぼ確実：ＡＥは、治験製品と関連する可能性がある。
可能性がある：ＡＥは、治験製品と関連することがある。
可能性が低い：ＡＥは、治験製品と関連するか疑わしい。
無関係：ＡＥは、治験製品と明確に関連しない。

【0364】

薬の資格を持つ治験責任医師が、それぞれのＡＥについて治験製品との関係の決定を行う。治験責任医師は、その医学的判断において、事象が治験製品によって引き起こされ得る妥当な可能性があるかどうかを決定する。正当な理由が関係を示唆するために存在しない場合、ＡＥは、「無関係」に分類される。任意の正当な理由が存在する場合、不確定であっても、治験製品とＡＥの出現との間に因果関係の可能性が疑われることに対して、そのＡＥは、「関連する」と見なされる。

【0365】

ＡＥ／ＳＡＥと治験製品との間の関係が、「明白」、「ほぼ確実」または「可能性がある」と決定される場合、事象は、迅速な規制当局の報告の目的のために、治験製品に関連すると見なされる。
予測可能

【0366】

適用可能な製品情報（例えば、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶについてのＩＢ、またはイピリムマブもしくはニボルマブについての承認されたラベル）にリストされていない、またはそこからの特異度または重症度と矛盾するＡＥは、予想外と見なされる。
有効性分析
定義

【0367】

無進行生存期間（ＰＦＳ）は、サイクル１の１日目から、ＲＥＣＩＳＴ １．１に従う客観的な腫瘍試行（ＰＤ、放射線学的）の最初の文書化または任意の原因に起因する死亡のいずれか早い方まで期間として定義される。無進行生存期間データは、客観的な腫瘍進行を有しておらず、分析の時に依然として研究中であるか、治験製品以外の抗腫瘍処置が与えられるか、または客観的な腫瘍進行の文書化の前の処置の追跡から除去される、患者についてのＰＤの非存在を文書化する最後の腫瘍評価の日付で打ち切られる。死亡したことが知られていない登録後の腫瘍評価を有さない患者は、サイクル１の１日目に打ち切られたＰＦＳを有する。ＰＦＳは、ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴ基準の両方によって評価されて、参加している場所にわたる異なる実施に適応される。

【0368】

全生存期間（ＯＳ）は、サイクル１の１日目の日付から任意の原因に起因する死亡の日付までの期間として定義される。死亡の確認の非存在下では、生存期間は、患者が生きていることが知られている最後の日付で打ち切られる。サイクル１の１日目を超える日付を欠いている患者は、サイクル１の１日目に打ち切られたその生存期間を有する。

【0369】

客観的奏功率（ＯＲＲ）は、ＲＥＣＩＳＴ １．１によるＣＲまたはＰＲを有する患者の割合として定義される。客観的奏功率は、確認されていないおよび確認されたＯＲＲとして提供される。確認された応答は、応答の最初の文書化から少なくとも２８日後に、反復イメージング研究で持続しているものである。同様に、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＯＲＲも、要約および報告される。

【0370】

奏功期間（ＤｏＲ）は、ＰＲまたはＣＲの最初の文書化から客観的な腫瘍進行の最初の文書化または任意の原因に起因する死亡までの期間として定義される。奏功期間データは、１）腫瘍進行を有しておらず、分析の時に依然として研究中である；２）治験製品以外の抗腫瘍処置が与えられる；または３）客観的な腫瘍進行の文書化の前の研究の追跡から除去される、患者について、ＰＤの非存在を文書化する最後の腫瘍評価の日付で打ち切られる。同様に、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＤｏＲも、要約および報告される。

【0371】

最良総合効果（ＢＯＲ）は、サイクル１の１日目から疾患進行または死亡までのすべての腫瘍評価が記録されたら、決定される。一般に、これは、すべての評価にわたる最良の応答であるが、しかしながら、ＣＲ、ＰＲ、および安定疾患（ＳＤ）の確認が、ＢＯＲ決定において使用される。ＣＲまたはＰＲを確認するために、腫瘍測定値の変化が、理由についての基準を最初に満たした後４週間（２８日）以上でなければならない反復評価によって確認される。ＳＤを確認するために、これは、サイクル１の１日目から少なくとも１２週間で起こらなければならず、そうでなければ、ＢＯＲは、その後の評価に依存する。最良総合効果は、パーセンテージによって、および固定日付として登録を使用して、最良応答までの期間についての可変の事象までの期間として、要約される。同様に、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＢＯＲが、要約および報告される。

【0372】

疾患制御率（ＤＣＲ）は、ＢＯＲが、定義された時点で、ＲＥＣＩＳＴ １．１によってＣＲ、ＰＲ、またはＳＤとして決定される患者の割合である。ベースラインで測定可能な疾患を有し、腫瘍評価に適格な安全性解析集団におけるすべての患者は、３、６、および１２か月で、ＤＣＲの割合の分母として見なされる。同様に、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＤＣＲが、要約および報告される。
分析

【0373】

有効性分析は、安全性解析集団において行われる。抗腫瘍活性（ＯＲＲ、ＰＦＳ、ＯＳ）は、同様に、文書化されたＨＬＡクラスＩ発現を有する患者について記載される。プロトコールあたりの集団が、安全性解析集団とは異なる場合、有効性分析はまた、ＰＰ集団を使用して行われる。

【0374】

ＲＥＣＩＳＴ １．１またはｉＲＥＣＩＳＴによる応答評価を使用するすべての評価は、治験責任医師のレビュー評価を使用して分析される。

【0375】

カプラン－マイヤー法を使用して、中位ＰＦＳ、および両側９５％信頼区間を推定する。死亡した患者は、死亡の原因にかかわらず、その後の抗がん療法を死亡の前に受けた限り、事象を有していたと見なされる。その後の療法を受ける場合、患者は、その後の療法の前の最終の評価可能な腫瘍評価の日付で打ち切られる。研究についての同意を撤回した患者は、同意を撤回する前の最終の評価可能な腫瘍評価の時で打ち切られたと見なされる。臨床データのカットオフ日の時に依然として生きている患者は、最近の評価可能な腫瘍評価で打ち切られる。臨床データのカットオフ日の前の追跡がないすべての患者はまた、追跡がなくなる前の最終の評価可能な腫瘍評価の時に打ち切られたと見なされる。

【0376】

奏功期間、最良総合効果までの期間、および全生存期間は、ＰＦＳと同じ打ち切りアルゴリズムを使用する。加えて、ｉＲＥＣＩＳＴを使用するｉＰＦＳ、ｉＢＯＲ、ｉＤＣＲ、およびｉＢＯＲまでの期間は、類似の方法を使用して、分析および報告される。

【0377】

客観的奏功率（ＯＲＲ）およびＤＣＲは、正確な二項分布に基づいて、９５％の両側信頼区間を有する割合として表される。少なくとも１２週間持続するＳＤは、推定ポイントとして報告される。
安全性分析

【0378】

すべての安全性パラメーターは、安全性解析集団を使用して分析される。安全性パラメーターは、ＡＥ、臨床検査評価、バイタルサイン、ＥＣＯＧ、曝露、ＥＣＧ、ＥＣＨＯ／ＭＵＧＡ、および身体診察を含む。

【0379】

安全性についての主要エンドポイントは、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ投与に対する任意のＡＥおよび観察された毒性を有する患者の数であり、ここで、重症度は、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０を使用して評価される。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの初回投与後に開始するすべてのＡＥが、分析に含まれる。有害事象は、インフォームドコンセントの署名の時に最初に収集されるが、しかしながら、分析は、処置中に発生したＡＥに集中して行われる。

【0380】

ＡＥは、記述統計量を使用して分析される。所与のＡＥの複数の指標を有する患者について、最も高い重症度が使用される。
有害事象

【0381】

ＡＥは、ＭｅｄＤＲＡコード化辞書の最新バージョンを使用してコード化される。

【0382】

ＡＥは、その開始がサイクル１の１日目から治験製品の最終用量の６週間後までに起こる場合、処置中に発生している。部分的な開始時を有するＡＥについて、欠落していない日付部分は、ＡＥが処置中に発生したかを決定するために使用される。ＡＥが治験製品投与に関連していつ起こったかについて決定することができない場合、ＡＥは、処置中に発生したとして分類される。処置中に発生したＡＥは、治験製品の初回投与の前に存在し、投与後に毒性が悪化した任意のＡＥも含む。

【0383】

本セクションに記載の分析は、本セクションで簡潔にＡＥと簡素に称されるＴＥＡＥに基づく。

【0384】

治験製品に関連する可能性がある、高い確実性で関連する、または明確に関連すると治験責任医師によって見なされる有害事象は、要約目的で、関連するとして分類される。

【0385】

任意のＡＥ、任意の関連ＡＥ、任意のＳＡＥ、任意の関連ＳＡＥ、任意のグレード３またはそれよりも高いＡＥ、任意の関連グレード３またはそれよりも高いＡＥを有する患者の数およびパーセンテージ、ならびにそれぞれのカテゴリーについての事象の総数が要約される。ＡＥに起因する死亡、ＡＥに起因する入院、およびＡＥに起因する処置の中断、ならびにＤＬＴおよびＡＥＳＩの数が要約される。

【0386】

ＡＥを有する患者の数およびパーセンテージ、ならびにＡＥの総数が、器官別大分類および基本語によって要約される。この作表は、関連ＡＥ、ＡＥＳＩ、ＳＡＥ、関連ＳＡＥ、ならびに≧グレード３のＡＥおよび≧グレード３の関連ＡＥについて繰り返す。

【0387】

非ＴＥＡＥを含むすべてのＡＥは、患者のリストに提供される。治験製品の中断を引き起こすＡＥ、死亡に至るＡＥ、ＳＡＥ、関連ＡＥ、ＡＥＳＩ、ＤＬＴ、および≧グレード３のＡＥの患者のリストが作成される。
臨床検査評価

【0388】

ベースラインは、治験製品への最初の曝露前の最終の欠落していない値として定義される。これは、典型的には、サイクルの１日目の投薬前であるが、より早くてもよい。実際の値、およびベースラインの臨床検査からの変化は、研究来診によって要約される。

【0389】

臨床検査の結果は、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０、および治験責任医師によって決定される臨床的な意義に従って分類される。１超の臨床検査結果が、パラメーターごとに研究来診ごとに報告される場合、最も重篤な分類を与える結果が、分析のために選択される。シフト表が作出されて、等級付けされた臨床検査パラメーターについてのベースラインからの最大の変化を示す。

【0390】

すべての臨床検査評価は、リストに提供される。

【0391】

臨床的に意義がある異常な臨床検査結果を有する患者がリストされる。このリストは、異常であり、研究来診にわたって患者について臨床的に意義があると治験責任医師によって決定された臨床検査パラメーターのすべての結果を含む。
バイタルサイン

【0392】

ベースラインは、治験製品への最初の曝露前の最終の欠落していない値として定義される。実際の値、およびバイタルサインのベースラインからの変化は、研究来診および研究時点によって要約される。すべてのバイタルサインデータが、患者のリストに提示される。

【0393】

バイタルサイン値は、治験責任医師によって決定された臨床的意義に従って分類される。欠落していない結果を有する患者の数、臨床的に意義がない結果を有する患者の数およびパーセンテージ、ならびに臨床的に意義がある結果は、研究来診および研究時点によって要約される。１超のバイタルサイン結果が、パラメーターごとに研究来診および研究時点ごとに報告される場合、最も重篤な分類を与える結果が、分析のために選択される。

【0394】

臨床的に意義があるバイタルサイン値を有する患者がリストされる。このリストは、研究時点にわたって患者について臨床的に意義があると治験責任医師によって決定されたバイタルサインパラメーターのすべての結果を含む。
身体診察

【0395】

異常な身体診察所見がリストされる。
１２誘導ＥＣＧ

【0396】

ＥＣＧ結果は、シフト表（正常、臨床的に意義がない異常、異常、臨床的に意義がある）に提示されて、ベースラインからの最大の変化を示す。すべてのＥＣＧ結果が、患者のリストに提示される。
他の安全性変数

【0397】

すべての安全性データが、リストに提供される。

【0398】

ＥＣＯＧ ＰＳおよびＥＣＯＧ ＰＳのベースラインからの変化が、収集されたそれぞれの予定された来診で要約される。ＥＣＯＧ ＰＳのベースラインからの変化は、連続的変数としておよびカテゴリー変数として要約される。ベースラインからの≧１のポイントの減少は、ベースラインからの「改善」として分類される。ベースラインからの≧１のポイントの増加は、ベースラインからの「悪化」として分類される。ベースラインからの改善、悪化、および未変化のＥＣＯＧ ＰＳは、ＥＣＯＧ ＰＳが評価されるそれぞれの登録後の時点で、処置によるカテゴリー変数として要約される。
薬力学的分析

【0399】

バイオマーカーが、それぞれの時点について、ベースラインからの変化およびベースラインからの変化％について要約される。薬力学マーカーとＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶとの間の相関は、記述および図式方法で調査される。

【0400】

それぞれのマーカーについての記述統計量（平均、標準偏差、中位、最小、最大、および幾何平均）が報告される。用量群による経時的な個々の値のグラフが提示される。
用量製造の実現可能性

【0401】

用量製造の実現可能性は、個々の患者のバッチ収量、使用を差し止める製品の不良、および自家血液製品の製造のための採血から関連すると考えられるＳＱＺ ＡＡＣ ＨＰＶ製品の生産までの任意の追加情報に基づいて評価される。
（実施例２）
Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの生産およびフローサイトメトリーによって測定されるアネキシンＶ＋細胞に基づく表面ホスファチジルセリンの特徴付け

【0402】

これらの研究の目的は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶのアネキシンＶ染色およびフローサイトメトリー分析を介した表面ホスファチジルセリン（ＰＳ）レベルを特徴付けることであった。
Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを作出するために使用されたプロセスの記載

【0403】

Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを作出するために、マウスＲＢＣを、Ｅ７合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）およびアジュバントのポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）でＳＱＺ処理する。下記で太字および下線付きで示されるマウスＥ７ ＳＬＰは、Ｃ５７ＢＬ／６ＪクラスＩ ＭＨＣ Ｈ２－Ｋｂにおいて提示されるマウスＥ７抗原エピトープを含む。この配列は、ヒトＥ７ ＳＬＰが由来する同じＨＰＶ１６ Ｅ７タンパク質内に含有される。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスについて、Ｅ７が、免疫優性抗原であること、およびＥ６に対する免疫がＨＰＶ１６ ＴＣ－１腫瘍モデル（Ｏｏｓｔｅｒｈｕｉｓ ２０１１；Ｐｅｎｇ ２０１６、Ｌｉ ２０１０）においてわずかな治療利益を提供することに留意されたい。それ故に、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶは、マウスＥ７ ＳＬＰのみを含有する。下記は、マウスＥ７ ＳＬＰおよびヒトＥ７ ＳＬＰの構造の比較である。
マウスＥ７ ＳＬＰ：ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＳＳＫＳＤＳＴＬＲＬＳＶＱＳＴＨＶＤＩＲ（配列番号２５）
ヒトＥ７ ＳＬＰ：ＱＬＣＴＥＬＱＴＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴＹＣＫＱＱＬＬ（配列番号２３）

【0404】

Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの生産において使用されたアジュバントは、ヒト製剤のＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶにおいて使用されたものと同じアジュバントのポリＩ：Ｃである。

【0405】

Ｅ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの内部への送達を容易にすることに加えて、ＳＱＺプロセスは、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ膜上に露出したＰＳのレベルを増加させる。この表面ＰＳは、静脈内投与後にＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶを内在化する抗原提示細胞上の受容体によって認識されるリガンドとしての機能を果たすと仮定される。高親和性でＰＳに結合するリン脂質結合タンパク質であるアネキシンＶの蛍光誘導体（Ｋｏｏｐｍａｎ １９９４）を使用して、細胞表面ＰＳについて細胞を染色し、フローサイトメトリーを使用して検出する。

【0406】

全血をマウスから収集し、マウスＲＢＣを単離した。これらの研究をこのプロセスにおけるＰＢＳまたはＲＰＭＩの使用と比較するので、次いで、マウスＲＢＣを、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）またはＲＰＭＩ（Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（培養培地））のいずれか中に抗原（マウスＥ７ ＳＬＰ；１００Ｍ）およびアジュバント（ポリＩ：Ｃ；１ｍｇ／ｍＬ）を含有する溶液に、１×１０^９個細胞／ｍＬで懸濁させた。得られた細胞懸濁液を、小スケールＳＱＺ装置のシリンジに移し、次いで、ＳＱＺ処理に供した。ＳＱＺ処理後、得られるＡＡＣの懸濁液を、室温で２０～６０分間インキュベートした。次いで、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ懸濁液を、遠心分離を使用してＰＢＳで洗浄し、最終的にＰＢＳで２×１０^９個／ｍＬに再懸濁させた。
Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ上の表面ＰＳレベル

【0407】

表面ＰＳレベルを、アネキシンＶ染色およびフローサイトメトリーによって取得されたデータの分析を介して特徴付けた。アネキシンＶ＋であるＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶのパーセンテージを表示する要約データを図５Ａおよび図５Ｂに示す）。

【0408】

６つの独立して調製されたバッチ（ＰＢＳ中でＳＱＺ処理された３バッチ、およびＲＰＭＩ中でＳＱＺ処理された３バッチ）からのアネキシンＶ＋ Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの平均パーセンテージは、９４．８±５．３％（平均±標準偏差）であり、アネキシンＶ＋未処理ＲＢＣの平均パーセントは、２．０±１．３％であった。６つの独立して調製されたバッチからのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶ中のアネキシンＶ ＭＦＩ（幾何平均蛍光強度）の未処理ＲＢＣ中のものに対する平均比は、９９±５９（平均±標準偏差）であった。加えて、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶのアネキシンＶ ＭＦＩの未処理ＲＢＣ中のアネキシンＶ ＭＦＩに対する比は、細胞がＰＢＳまたはＲＰＭＩ中で処理された場合に、有意差がなかった。

【0409】

これらの研究は、ＰＳの表面レベルが、ＲＢＣのＳＱＺ処理のために使用された条件下で上昇することを実証する。Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶについてのアネキシンＶ＋ＡＡＣのパーセントは、ヒト製品のＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶのものと同等であり、これは、少なくとも９５．８％である。
（実施例３）
フローサイトメトリーによるＡＡＣ－ＨＰＶの細胞の特徴付け

【0410】

本研究の目的は、ＦＡＭ（５－カルボキシ－フルオレセイン）標識ＳＬＰ（合成長鎖ペプチド）、ＦＡＭ－Ｅ６およびＦＡＭ－Ｅ７ ＳＬＰのＡＡＣへの送達を定量化すること、ならびにＡＡＣ上の表面ホスファチジルセリン（ＰＳ）レベルを特徴付けることである。
ヒトＡＡＣを作出するために使用された小スケールプロセスの記載

【0411】

全血を研究の前の日に採取し、ＲＢＣを研究の日に単離した。次いで、ＲＢＣを、抗原（ＳＬＰ）およびアジュバント（ポリＩ：Ｃ）を含有する溶液に２×１０^９個細胞／ｍＬで懸濁させた。得られた細胞懸濁液を、氷上で１０分間インキュベートし、小スケールＳＱＺ装置のシリンジに移し、次いで、ＳＱＺ処理に供した。ＳＱＺ処理後、得られるＡＡＣの懸濁液を、２～８℃で２０分間、次いで３７℃で６０分間インキュベートした。次いで、ＡＡＣ懸濁液を、遠心分離を使用してＰＢＳで洗浄し、最終的にＰＢＳで２×１０^９個／ｍＬに再懸濁させた。
ＦＡＭ－Ｅ６ ＳＬＰおよびＦＡＭ－Ｅ７ ＳＬＰのＡＡＣへの送達

【0412】

３つの別々の実験において３人の健康なドナーから単離されたＲＢＣは、それぞれ：Ａ）対照としてそのまま（ＳＱＺ処理なし）使用された、Ｂ）未標識Ｅ６ ＳＬＰ、未標識Ｅ７ ＳＬＰ、およびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されて、ＡＡＣ－ＨＰＶを作出した、Ｃ）５－カルボキシ－フルオレセイン（ＦＡＭ）標識Ｅ６ ＳＬＰ、未標識Ｅ７ ＳＬＰ、およびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されて、ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）を作出した、またはＤ）ＦＡＭ標識Ｅ７ ＳＬＰ、未標識Ｅ６ ＳＬＰ、およびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されて、ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ７、Ｅ６）を作出した。表３は、これらの実験群を記載する。異なるドナーからのそれぞれのバッチのヒトＲＢＣの３つのバッチを、ＳＱＺ処理して、ＡＡＣ－ＨＰＶ、ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）およびＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）を作出した。ＳＱＺ処理された細胞を、ＡＦ６４７－アネキシンＶで染色し、フローサイトメトリーによって分析して、蛍光標識ＳＬＰの組込みを定量化し、表面ＰＳレベルを評価した（アネキシンＶに基づく；２．４．３に記載された結果）。処理されていないＲＢＣおよびＡＡＣ－ＨＰＶは、陰性対照としての役割を果たした（ＦＡＭ標識なし）。

【表5】

ＮＡは「該当なし」を表す。

【0413】

ＦＡＭ－Ｅ６ ＳＬＰ＋およびＦＡＭ－Ｅ７ ＳＬＰ＋試料のパーセンテージを表示する要約データを図６に示す。ＦＡＭ蛍光を、それぞれ、０．１％および０．０％のＡＡＣ－ＨＰＶおよび処理されていないＲＢＣにおいて検出した（陰性対照）。ＡＡＣの大部分は、ＦＡＭ－Ｅ６ ＳＬＰまたはＦＡＭ－Ｅ７ ＳＬＰに陽性であり；平均で９７．８％のＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）および９５．０％のＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）が、それぞれ、ＦＡＭ－Ｅ６ ＳＬＰおよびＦＡＭ－Ｅ７ ＳＬＰに陽性であった。

【0414】

処理されていないＲＢＣおよびＳＱＺ処理された細胞を、ＡＦ６４７－アネキシンＶで染色し、フローサイトメトリーによって分析して、表面ＰＳレベルを定量化した（アネキシンＶに基づく）。アネキシンＶ＋試料のパーセンテージを表示する要約データを図７に示す。アネキシンＶ＋であった処理されていないＲＢＣの平均パーセンテージは１．０％であったが、ＡＡＣ－ＨＰＶ、ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）またはＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）の少なくとも９５．８％は、アネキシンＶに陽性であり、ＳＱＺプロセスが細胞膜上のＰＳを増加させることを実証した。
（実施例４）
蛍光標識ＳＬＰでＳＱＺ処理されたヒトＲＢＣのイメージング

【0415】

この研究は、ＳＱＺ処理後の蛍光標識ＨＰＶ Ｅ６およびＥ７ ＳＬＰのＡＡＣへの細胞内送達を実証する。

【0416】

表６は、これらの研究において使用された実験群を記載する。３つの独立した実験のそれぞれにおいて、健康なドナーからのＲＢＣは、全血から単離され、Ａ）５－カルボキシ－フルオレセイン（ＦＡＭ）標識Ｅ６ ＳＬＰ、未標識Ｅ７ ＳＬＰ、およびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されて、ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）が作出され、Ｂ）ＦＡＭ標識Ｅ７ ＳＬＰ、未標識Ｅ６ ＳＬＰ、およびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されて、ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）が作出され、またはＣ）未標識Ｅ６ ＳＬＰ、未標識Ｅ７ ＳＬＰ、およびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されて、ＡＡＣ－ＨＰＶが作出された。ＳＱＺ処理された試料を、パシフィックブルー（ＰＢ）コンジュゲート抗ＣＤ２３５ａ抗体で染色し、ｅｐｉ蛍光顕微鏡でイメージングした。それぞれの試料についての画像を、ライン走査分析に供して、ＦＡＭ標識ＳＬＰの局在化が管腔（ＡＡＣの内側）であったかどうかを決定した。

【表6】

【0417】

３人の個々のドナーのＲＢＣ（実験あたり１人のドナー）のＳＱＺ処理によって作出されたＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）、ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）、およびＡＡＣ－ＨＰＶについての代表的なｅｐｉ蛍光画像およびそれらの対応するライン走査トレースを、それぞれ、図８、図９および図１０に示す。ＦＡＭ＋ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）、ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）、およびＡＡＣ－ＨＰＶのパーセンテージの平均および範囲を表７に示す。

【表7】

表の注記： Ｎ ＝ ３ドナー／群。

【0418】

ＳＱＺプロセスによる蛍光標識Ｅ６およびＥ７ ＳＬＰ（ＦＡＭ－Ｅ６およびＦＡＭ－Ｅ７）のヒトＡＡＣへの細胞内送達を、蛍光顕微鏡により可視化した。ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）、ＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）、およびＡＡＣ－ＨＰＶを、ＰＢコンジュゲート抗ＣＤ２３５ａ抗体で染色して、細胞膜を規定した。次いで、ＦＡＭ－Ｅ６またはＦＡＭ－Ｅ７ ＳＬＰの局在化を、蛍光顕微鏡によって可視化した。未標識ＳＬＰでＳＱＺ処理されたＡＡＣ－ＨＰＶは、陰性対照としての役割を果たした。

【0419】

蛍光画像において行われたライン走査は、ＳＱＺ処理後のＦＡＭ－Ｅ６およびＦＡＭ－Ｅ７のＡＡＣ内局在化を確認した。具体的には、ＡＡＣ内ＦＡＭは、分析されたＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）のすべて（１００％）、および分析されたＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）の大部分（平均で９５．０％）において観察された。

【0420】

このイメージング研究は、ＳＱＺ処理の結果として、それぞれ、蛍光標識Ｅ６またはＥ７ ＳＬＰのヒトＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｆ－Ｅ６、Ｅ７）およびＡＡＣ－ＨＰＶ（Ｅ６、Ｆ－Ｅ７）の大部分への送達を確認する。
（実施例５）
フローサイトメトリーによって測定されるヒト抗原提示細胞（ＡＰＣ）によるＡＡＣ－ＨＰＶのｉｎ ｖｉｔｒｏ取り込み

【0421】

研究の目的は、ヒト抗原提示細胞（ＡＰＣ）によるＡＡＣ－ＨＰＶのｉｎ ｖｉｔｒｏ取り込みを評価することであった。

【0422】

ＣＤ１４＋単球の５日のＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－４分化によってＨＬＡ－Ａ^＊０２＋ドナーから作出された単球由来樹状細胞（ＭＯＤＣ）を、ヒトＡＰＣのｉｎ ｖｉｔｒｏモデルとして使用した。

【0423】

３人の健康なヒトドナー由来の赤血球細胞（ＲＢＣ）を、脂溶性蛍光膜色素のＰＫＨ２６で標識した。未標識ＲＢＣおよびＰＫＨ２６標識ＲＢＣを、報告番号ＳＱＺ－ＡＡＣ－０１２４に記載のプロセスを使用して、Ｅ６ ＳＬＰ、Ｅ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理し、それぞれ、未標識ＡＡＣ－ＨＰＶおよびＰＫＨ２６標識ＡＡＣ－ＨＰＶを作出した。

【0424】

ＭＯＤＣによるＡＡＣ－ＨＰＶのｉｎ ｖｉｔｒｏ取り込みを、フローサイトメトリーによって測定される、３７℃でのＰＫＨ２６標識ＡＡＣ－ＨＰＶとの終夜の共培養後のＭＯＤＣ（ＣＤ１１ｃ＋細胞）ＰＫＨ２６蛍光の増加として特徴付けた。４℃でのＭＯＤＣのＰＫＨ２６標識ＡＡＣ－ＨＰＶとの共培養またはＭＯＤＣの未標識ＡＡＣ－ＨＰＶとの共培養を陰性対照として使用した。３つの独立した実験からの要約グラフを図１１に示す。４℃で共培養されたＭＯＤＣに対する３７℃で培養されたＭＯＤＣのＰＫＨ２６蛍光の倍数増加を示す要約データを表８に示す。

【表8】

Ｎ／Ａは該当せずを表す。ＥＬＮ１０８４において、ＰＫＨ２６標識ＡＡＣ－ＨＰＶまたはＡＡＣ－ＨＰＶの最高試験用量は、ウェルあたり２００×１０^６個細胞であった。

【0425】

３７℃でＰＫＨ２６標識ＡＡＣ－ＨＰＶとともに共培養されたＭＯＤＣのＰＫＨ２６ ＭＦＩは、取り込みが抑制される温度（Ａｌｂｅｒｔ １９９８）の４℃で共培養されたＭＯＤＣのＰＫＨ２６ ＭＦＩに対する増加（２．８～３１．２倍）を示した。これは、すべての研究（３つの研究のうちの３つ）で２～６００×１０^６の範囲のＡＡＣ－ＨＰＶ用量について観察された。蛍光は、未標識ＡＡＣ－ＨＰＶを含む共培養において観察されず、ＭＯＤＣのＰＫＨ２６ ＭＦＩの増加がＰＫＨ２６標識ＡＡＣ－ＨＰＶに依存することを実証した。そのため、ＣＤ１１ｃ＋ ＭＯＤＣは、用量および温度依存性の方法で、ＰＫＨ２６標識ＡＡＣ－ＨＰＶを内在化する。

【0426】

この研究は、ＭＯＤＣが、用量および温度依存性の方法でＰＫＨ２６標識ＡＡＣ－ＨＰＶを取り込むことを実証する。
（実施例６）
フローサイトメトリーによって測定されるＡＡＣ－ＨＰＶ取り込み後のＡＰＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ成熟

【0427】

この研究の目的は、ＡＡＣ－ＨＰＶとの共培養のおよそ２日後のヒトモデルＡＰＣのＭＯＤＣ（単球由来樹状細胞）における成熟マーカーのｉｎ ｖｉｔｒｏ上方制御を評価することであった。

【0428】

５人のＨＬＡ－Ａ^＊０２＋ドナーのそれぞれ由来の単球を、ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－４とともに４日間インキュベートして、５ロットのＭＯＤＣを作出した。ＭＯＤＣを、表現型決定し、凍結し、使用のために解凍されるまで≦１４０℃で保管した。

【0429】

ヒトＲＢＣを、報告番号ＳＱＺ－ＡＡＣ－０１２４に記載のプロセスを使用して、Ｅ６ ＳＬＰ、Ｅ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理し、ＡＡＣ－ＨＰＶを作出した。同様に、ヒトＲＢＣを、抗原（Ｅ６およびＥ７ ＳＬＰ）およびアジュバント（ポリＩ：Ｃ）の非存在下の媒体でＳＱＺ処理して、Ｃ媒体を作出した。

【0430】

５人の異なるドナー由来のＭＯＤＣを、ＡＡＣ－ＨＰＶとともにおよそ２日間共培養した。

【0431】

成熟マーカーの上方制御を、フローサイトメトリーによってＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＭＨＣ－ＩＩおよびＣＤ４０染色の幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定すること、およびそれを、Ｃ媒体または対象媒体のみとともに培養されたＭＯＤＣの成熟マーカーレベルと比較することによって決定した。

【0432】

ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ８３およびＭＨＣ－ＩＩについての要約グラフを図１２に示す。ＭＯＤＣとともに共培養されたＡＡＣ－ＨＰＶは、対象媒体との培養と比べて、ＭＯＤＣにおけるＣＤ４０発現の増加をもたらさなかった。したがって、ＣＤ４０は、グラフに表さない。

【0433】

ＭＯＤＣ表面上の成熟マーカーの上方制御の統計学的に有意な増加が、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＭＨＣ－ＩＩについて観察された。成熟マーカーＣＤ８３の上方制御の統計学的に有意な増加は観察されなかったが、５人のＭＯＤＣドナーのうちの３人が、Ｃ媒体と比較して、ＡＡＣ－ＨＰＶとの共培養後にＣＤ８３の上方制御を示した。加えて、対照媒体、Ｃ媒体およびＡＡＣ－ＨＰＶの生（正規化されていない）データに対して行われた統計分析は、対照媒体とＣ媒体との間の差を示さず、アジュバント（および抗原）なしでＳＱＺ処理されたＲＢＣが、ＭＯＤＣにおける成熟マーカーを上方制御しないことを確認した。

【0434】

この研究は、ＡＡＣ－ＨＰＶとともにｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養されたＭＯＤＣが、ＭＯＤＣの表面上のＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＭＨＣ－ＩＩを含む複数の成熟マーカーを有意に上方制御することを実証する。有意ではないが、ＣＤ８３の上方制御が、ＭＯＤＣ作出のために使用された５人のドナーのうちの３人で観察される。
（実施例７）
ＭＯＤＣとの共培養後のＥ７１１－２０反応性ＣＤ８＋ Ｔ細胞によるＩＦＮ分泌として測定されるＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性

【0435】

研究の目的は、ヒトモデルＡＰＣのＭＯＤＣ（単球由来樹状細胞）およびＥ７１１－２０特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞とともに共培養されたＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶに対する機能的応答を実証することであった。

【0436】

７つの異なるバッチのＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶを、Ｅ６およびＥ７ ＳＬＰ、ならびにポリＩ：Ｃで健康なドナーの新鮮な血液をＳＱＺ処理することによって作出し、製剤として製剤化した。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶを、ＣＤ１４＋単球のＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４による５日の刺激によって、ＨＬＡ－Ａ^＊０２＋ドナーに由来するＭＯＤＣとともに共培養した。得られる共培養物からの媒体を、Ｅ７１１－２０特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞からのＩＦＮ分泌についてＥＬＩＳＡによって分析した。

【0437】

ＥＬＩＳＡによって測定される、ＭＯＤＣとともに共培養されたＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞からのＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶが誘導した抗原特異的ＩＦＮ応答を示す７つの異なるロットからの要約データを図１３に示す。ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶ含有共培養物において測定されたＩＦＮと媒体対照共培養物において測定されたＩＦＮとの間の倍数増加として表されるＩＦＮ分泌の大きさを示す要約データを表９に示す。

【0438】

ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶの７つのバッチすべてとのＭＯＤＣおよびＣＤ８＋ Ｔ細胞の共培養は、媒体対照とのＭＯＤＣおよびＣＤ８＋ Ｔ細胞の共培養と比較して、分泌されたＩＦＮγの少なくとも６倍の増加をもたらした。

【0439】

この研究は、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２＋ ＭＯＤＣおよびＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞とのｉｎ ｖｉｔｒｏ共培養後にＥ７１１－２０最小エピトープを認識するＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞によるＩＦＮγの分泌を誘導することを実証する。

【表9】

^ａ倍数増加は、ＳＱＺ－ＡＡＣ－ＨＰＶおよび媒体対照条件について算出する。
（実施例８）
フローサイトメトリーによって測定されるＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの静脈内投与後のマウスにおける内因性ＡＰＣのｉｎ ｖｉｖｏ成熟

【0440】

研究ＳＱＺ－ＡＡＣ－０１２７の目的は、マウスプロトタイプのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶによるマウスの免疫後のさまざまな内因性脾臓ＡＰＣ（抗原提示細胞）における成熟マーカーのｉｎ ｖｉｖｏ上方制御を評価することであった。

【0441】

表１０は、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる脾臓ＡＰＣの活性化を評価するための研究の設計を示す。Ｍ－Ｃ媒体（媒体で（抗原またはアジュバントの非存在下で）ＳＱＺ処理されたマウスＲＢＣ）を対照として使用した。動物の犠牲の日は、免疫表現型検査が行われた日である。

【0442】

評価された脾臓ＡＰＣは、ＣＤ１１ｃｈｉＭＨＣ－ＩＩｈｉＣＤ８＋細胞（ＣＤ８＋樹状細胞またはＣＤ８＋ ＤＣ）、ＣＤ１１ｃｈｉＭＨＣ－ＩＩｈｉＣＤ１１ｂ＋細胞（ＣＤ１１ｂ＋樹状細胞またはＣＤ１１ｂ＋ ＤＣ）、およびＦ４／８０＋ＣＤ１１ｂｌｏ／－（ＲＰＭ；赤脾髄マクロファージ）であった。

【0443】

ＡＰＣ成熟マーカーの上方制御は、フローサイトメトリーによりＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ８３およびＭＨＣ－ＩＩ染色の幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することによって実証された。脾臓のフローサイトメトリー分析を、細胞表面上の成熟マーカーの蓄積を可能にするＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶまたはＭ－Ｃ媒体の投与１４～１６時間後に行った。

【表10】

Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ ＝ ＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（マウスＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されたマウスＲＢＣ）； Ｍ－Ｃ媒体＝媒体（抗原またはアジュバントの非存在下）でＳＱＺ処理されたマウスＲＢＣ； ＲＯ： 後眼窩（投与経路）

【0444】

脾臓ＡＰＣにおけるマーカーについての要約グラフを、ＣＤ８６幾何ＭＦＩについて図１４に、ＣＤ８３幾何ＭＦＩについて図１５に、ＣＤ４０幾何ＭＦＩについて図１６に、ＣＤ８０幾何ＭＦＩについて図１７に、ＭＨＣ－ＩＩ幾何ＭＦＩについて図１８に示す。

【0445】

２つの独立した実験からの結果は、Ｍ－Ｃ媒体を受けたマウスと比較して、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスにおいて３つの脾臓ＡＰＣ集団（ＣＤ８＋ ＤＣ、ＣＤ１１ｂ＋ ＤＣ、ＲＰＭ）すべてにおいてＣＤ８６幾何ＭＦＩの統計学的に有意な増加を実証した。２つの独立した実験からの結果は、Ｍ－Ｃ媒体を受けたマウスと比較して、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスにおいて脾臓樹状細胞、すなわち、ＣＤ８＋ ＤＣおよびＣＤ１１ｂ＋ ＤＣにおいて、選択的な、ＣＤ８３、ＣＤ４０およびＣＤ８０幾何ＭＦＩの統計学的に有意な増加を実証した。２つの独立した実験からの結果は、Ｍ－Ｃ媒体を受けたマウスと比較して、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスにおいて脾臓ＣＤ８＋ ＤＣおよびＲＰＭにおいて、選択的な、ＭＨＣ－ＩＩ幾何ＭＦＩの統計学的に有意な増加を実証した。

【0446】

この研究は、マウスプロトタイプＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶを有するマウスの免疫が、ｉｎ ｖｉｖｏで、ＣＤ８＋ ＤＣ、ＣＤ１１ｂ＋ ＤＣおよびＲＰＭを含む脾臓ＡＰＣを活性化することを実証した。成熟についてのマーカーである共刺激マーカー（ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ４０、ＣＤ８０、およびＭＨＣ－ＩＩ）の上方制御が、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの静脈内（ＩＶ）投与１４～１６時間後のさまざまなＡＰＣ集団において観察されたが、任意の抗原またはアジュバントなしでＳＱＺ処理されたマウスＲＢＣ（Ｍ－Ｃ媒体）を受けたマウスでは観察されなかった。
（実施例９）
フローサイトメトリーＩＣＳによって評価されるＣＤ８＋ Ｔ細胞内因性応答を測定するためのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶによるマウスのｉｎ ｖｉｖｏ免疫－抗原およびアジュバントの効果

【0447】

マウスにおけるＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答のプライミングにおける抗原およびアジュバントについての要件を、ＩＦＮγに対する細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を使用して調べた。

【0448】

マウス血液の収集およびＲＢＣの単離を、上記に記載されたようにして行った。ＲＢＣを、再懸濁させ、報告ＳＱＺ－ＡＡＣ－０１２６に記載されるＳＱＺ処理条件を用いて、Ｅ７ ＳＬＰ単独（Ｍ－ＡＣを作出するため）またはポリＩ：Ｃ単独（Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃを作出するため）またはＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：Ｃの両方を含有する溶液（Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを作出するため）のいずれかを含有するＰＢＳ溶液でＳＱＺ処理した。

【0449】

表１１は、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏでＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を誘発するＳＱＺ処理された赤血球細胞（ＲＢＣ）における抗原（Ｅ７ ＳＬＰ）およびアジュバント（ポリＩ：Ｃ）についての要件を評価するための研究の設計を示す。動物の犠牲の日は、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）が脾細胞に対して行われた日である。

【表11】

ＩＣＳ ＝細胞内サイトカイン染色； Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ ＝ ＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（マウスＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されたマウスＲＢＣ）； Ｍ－ＡＣ ＝抗原単独（抗原の非存在下）でＳＱＺ処理されたマウスＲＢＣ； Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃ ＝アジュバント単独（抗原の非存在下）でＳＱＺ処理されたマウスＲＢＣ； ＮＡ ＝該当なし； ＰＢＳ ＝リン酸緩衝食塩水； ＲＯ ＝ 後眼窩（ＩＶ投与の方法）

【0450】

ＩＣＳについて上記の表１１に示された日に、マウスを犠牲にし、脾臓を採取し、細胞を分析のために単離した。Ｅ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答は、Ｅ７最小エピトープペプチドで再刺激した場合にＩＦＮγを産生するＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを評価することによって測定される。

【0451】

Ｅ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の大きさを図１９に示す。ＩＦＮγ産生ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、免疫のために使用されたＳＱＺ処理された細胞がアジュバント（ポリＩ：Ｃ）および抗原（Ｅ７ ＳＬＰ）の両方を含有する場合に最も大きい。Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けた動物においてＥ７最小エピトープペプチドで再刺激した場合にＩＦＮγを産生するＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、アジュバント単独（Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃ）または抗原単独（Ｍ－ＡＣ）で調製されたＳＱＺ処理されたＲＢＣを受けた動物におけるよりも有意に大きかった（ｐ＜０．０００１）（Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃについての０．０２％およびＭ－ＡＣについての０．０３％と比較して、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶについて平均で０．６０％）。

【0452】

Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶで処置されたマウスは、有意なＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を誘発し、これは、抗原（Ｅ７）およびアジュバント（ポリＩ：Ｃ）の存在に依存する。
（実施例１０）
Ｍ ＡＡＣ－ＨＰＶ投与後のマウスにおけるＣＤ８＋ Ｔ細胞内因性応答の評価－用量応答

【0453】

この研究の目的は、ＩＦＮγに対する細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を使用するマウスにおけるＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答に対するＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの漸増用量（５×１０^７、１×１０^８、２．５×１０^８、５×１０^８、および１×１０^９Ｍ－ＡＡＣ ＨＰＶ／マウス）の効果を調べることであった。

【0454】

マウスＲＢＣを単離するための方法、ならびにＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ）を作出するためのＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣによるＲＢＣのＳＱＺ処理は、上記に記載されている。

【0455】

表１２は、ｉｎ ｖｉｖｏでＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの異なる用量を評価するための研究の設計を示す。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを研究のために使用した。動物の犠牲の日は、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）が脾細胞に対して行われた日である。

【表12】

Ｍは１００万を表す； Ｂは１０億を表す； ＮＡは「該当なし」を表す； ＲＯ： 後眼窩（ＩＶ投与の方法）； ＩＣＳ ＝細胞内サイトカイン染色

【0456】

ＩＣＳについて上記の表に示された日に、マウスを犠牲にし、脾臓を採取し、細胞を分析のために単離した。Ｅ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答は、Ｅ７最小エピトープペプチドで再刺激した場合にＩＦＮγを産生するＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを評価することによって測定される。図２０に示されるＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の大きさは、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの用量の範囲の効果を実証する。

【0457】

図２０に見られるように、Ｅ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞のＩＦＮ応答の大きさは、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの用量に依存する。Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの用量が増加するにつれて、応答は、従って、Ｅ７短ペプチドで再刺激した場合にＩＦＮγを産生するＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージとともに増加し、０．０２％のＰＢＳ対照についての平均値と比較して、５×１０^７Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ／マウスの用量での０．１０％の平均値から１×１０^９Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ／マウスの用量での０．６３％の平均値まで増加する。研究された用量範囲（５×１０^７Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ／マウス～１×１０^９Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ／マウス）にわたって、応答は、２．５×１０^８Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ／マウスでプラトーに見えた。

【0458】

Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶで処置されたマウスは、有意なＣＤ８＋ Ｔ細胞ＩＦＮγ応答を誘発し、その大きさは、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ用量に依存する。
（実施例１１）
四量体染色によって評価される血液中のＥ７特異的ＣＤ８＋細胞を測定するためのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶを用いるマウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏ免疫－ブースティングスケジュールの効果

【0459】

この目的は、四量体染色を使用して血液中で測定されるＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の内因性応答の大きさに対するＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶのマウスへのブースター投与の効果を決定することであった。

【0460】

表１３は、Ｅ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の大きさに対する雌Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスへのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの追加ブースター用量を投与する影響を評価するための研究の設計を示す。Ｅ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、マウスにおけるＥ７免疫優性エピトープ（Ｅ７４９－５７ － ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ）に特異的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に結合するＭＨＣクラスＩ四量体で全血中の細胞を染色すること、およびフローサイトメトリーにより全血中のＥ７四量体＋ ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを評価することによって測定した。

【表13】

ＮＡは「該当なし」を表す； ＲＯ： 後眼窩（ＩＶ投与の方法）

【0461】

最終免疫後のさまざまな時点でのＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の大きさを図２１、２２、および２３に示す。

【0462】

この研究では、経時的なＥ７に対するＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を、全血中のすべてのＣＤ８^＋ Ｔ細胞と比べて、活性化された（ＣＤ４４^ｈｉ）Ｅ７－四量体陽性ＣＤ８^＋ Ｔ細胞のパーセンテージを測定することによってモニターした。図２１～２３に見られるように、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの単回用量の投与は、ＰＢＳ対照（０．０２％～０．０７％の範囲、平均０．０３％）と比較して、プライムのみの群における全血中のＥ７四量体^＋ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞（０．２２％～０．４４％の範囲、平均０．２８％）の増加によって証明される通り、Ｅ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞応答をプライムしたが、この差は、統計学的有意性に達しなかった。さらにまた、Ｅ７四量体^＋ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、プライミング用量のみを受けた動物と比べて、プライムの２日後または６日後のいずれかに投与された追加免疫によって有意に増加した。

【0463】

すべての群についての最大Ｅ７四量体^＋ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞応答は、最終免疫のおよそ１週間後に観察された。Ｅ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、ＰＢＳ対照群について０．０２％～０．０７％（平均０．０３％）、プライム単独群における動物について０．２２％～０．４４％（平均０．２８％）、２日目にブーストされた動物について０．４７％～１．２７％（平均０．７９％）、および６日目にブーストされた動物について０．６８％～１．３０％の間（平均０．９８％）の範囲であった。最終免疫のおよそ２週間後まで、単回プライミング用量を受けた動物におけるＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答（０．０３％～０．１１％の範囲）は、ＰＢＳ対照（０．００％～０．０３％の範囲）から有意差はなかった。対照的に、２日目（範囲：０．２１％～０．６％）または６日目（０．７６％～１．０８％の範囲）のいずれかでブーストされた動物におけるＥ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞応答は、上昇したままであり、プライム単独の動物における応答よりも有意に大きかった。さらにまた、６日目にブーストされた動物は、２日目にブーストされた動物とさらに比較して、有意に多くのＥ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞を有していた。

【0464】

本明細書の研究は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる免疫が、血液中のｉｎ ｖｉｖｏのＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答をプライムすることを実証する。２５０×１０^６Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶのプライミング用量の２日後または６日後にマウスに静脈内に投与された２５０×１０^６Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶのブースター用量は、ＰＢＳ対照群およびプライムのみの群の両方と比べて、Ｅ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の有意で持続した増加をもたらした。
（実施例１２）
ＴＣ １腫瘍モデルにおける静脈内に投与されたＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる治療的免疫後のマウスにおける有効性のｉｎ ｖｉｖｏ決定－抗原についての要件

【0465】

この研究の目的は、同じ用量のＭ－Ｃ－ポリＩ：Ｃ（ポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されたマウスＲＢＣ（抗原なし））の単回静脈内投与、および静脈内ＰＢＳ投与と比較して、静脈内に投与されたマウスあたり２５０×１０^６Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶまたは１×１０^９Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの単回ワクチン接種後の治療的ＴＣ－１腫瘍モデルにおいて、腫瘍成長を阻害し、生存期間中央値を延長する抗原についての要件を評価することであった。

【0466】

マウスＲＢＣを単離するための方法、ならびにＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ）を作出するためのＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣによるＲＢＣのＳＱＺ処理は、報告番号ＳＱＺ－ＡＡＣ－０１２６に記載されている。Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃを、ポリＩ：ＣによるマウスＲＢＣのＳＱＺ処理を使用して、同等に作出した。

【0467】

以下の表は、腫瘍研究における抗原の効果を評価するための研究の設計を示す（表１４および表１５）。マウス（雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）に、０日目にＴＣ－１腫瘍細胞（５０，０００個細胞）を皮下（ＳＣ）注射した。マウスを、表１４および表１５に記載された日に、後眼窩投与によって試験物質で処置した。生存を毎日モニターし、腫瘍成長を１週間に２回測定した。

【表14】

ＮＡは「該当なし」を表す。「Ｍ」は１００万を表す。

【表15】

ＮＡは「該当なし」を表す。「Ｂ」は１０億を表す。

【0468】

２つの独立した実験（ＥＬＮ１０３２１２およびＥＬＮ１４１６）からの要約腫瘍成長データを図２３に示し、要約生存データを図２５および表１６に示す。

【表16】

【0469】

図２４Ａおよび２４Ｂに示されるように、２５０×１０^６または１×１０^９の静脈内に投与されたＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶ用量は、両方の研究において、腫瘍成長速度を有意に遅延させた。等用量の抗原なしのアジュバント担体Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃの投与は、ＰＢＳ対照と比べて、腫瘍成長を遅らせなかった。

【0470】

いずれかの用量のＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶで処置されたマウスは、図２５および表１６に見られるように、対照処置マウスと比較して、統計学的に有意に延長された生存を示した。生存は、２５０×１０^６Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶで処置されたマウスにおいて３８～５３日（研究ＥＬＮ１０３２１２）、および１×１０^９Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶで処置されたマウスにおいて３８～４８日（研究ＥＬＮ１４１６）の範囲であった。ＰＢＳおよび２５０×１０^６Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃで処置されたマウスにおいて、生存は、それぞれ、２６～４５日、および２６～３４日の範囲であった（ＥＬＮ１０３２１２）。第２の研究（ＥＬＮ１４１６）において、生存は、ＰＢＳおよび１×１０^９Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃ処置マウスについて、２７～３４日、および２７～４１日の範囲であった。

【0471】

２５０×１０^６または１×１０^９Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの静脈内に投与される用量によるマウスの処置は、対照処置マウスと比較して、有意に遅延した腫瘍成長をもたらした。加えて、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ処置マウスは、両方の用量で、統計学的に有意に延長された生存を示した。対照的に、Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃで処置されたマウスは、Ｍ－Ｃ－ポリＩ：Ｃ用量に関係なく、対照と比べて、腫瘍成長の遅延または生存の延長の改善を示さなかった。

【0472】

これらのデータは、治療的ＴＣ－１モデルにおける有効性に対する抗原の存在の必要性を裏付ける。
（実施例１３）
ＴＣ １腫瘍モデルにおける静脈内に投与されたＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる治療的免疫後のマウスにおける治療有効性のｉｎ ｖｉｖｏ決定－用量応答

【0473】

この研究の目的は、ＴＣ－１マウス腫瘍モデルにおける静脈内に投与されたＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの漸増用量（５０×１０^６、１００×１０^６、２５０×１０^６、および１×１０^９Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ／マウス）の抗腫瘍活性を評価することであった。

【0474】

マウスＲＢＣを単離するための方法、ならびにＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ）を作出するためのＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣによるＲＢＣのＳＱＺ処理は、上記に記載されている。

【0475】

以下の表は、腫瘍研究におけるＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの異なる用量を評価するための研究の設計を示す（表１７～表２０）。マウス（雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）に、０日目にＴＣ－１腫瘍細胞（５０，０００個細胞）を皮下（ＳＣ）注射した。研究の１０日目に、マウスを、後眼窩投与によって試験物質で処置した。生存を毎日モニターし、腫瘍成長を１週間に２回測定した。

【表17】

ＮＡは「該当なし」を表す

【表18】

ＮＡは「該当なし」を表す

【表19】

ＮＡは「該当なし」を表す

【表20】

ＮＡは「該当なし」を表す

【0476】

４つの独立した実験からの要約腫瘍成長データを図２６に示し、要約生存データを図２７および表２１に示す。

【表21-1】

ＮＡは「該当なし」を表す。群は研究に含まれなかった。
ＰＢＳ群と比較した所与の用量でのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶ群の統計学的有意性を示す。＊はｐ＜０．０５を表し、＊＊＊はｐ＜０．００１を表し、＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を表す。

【0477】

これらの研究は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶによるマウスの静脈内免疫が、ＨＰＶ－１６ Ｅ６およびＥ７発現ＴＣ－１マウス腫瘍モデルにおいて、治療的に、腫瘍成長を阻害し、生存を延長することを実証する。Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶのＴＣ－１腫瘍成長を阻害する能力および腫瘍保持マウスの生存を延長する能力は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの用量に依存する。具体的には、マウスあたり１×１０^９または２５０×１０^６の静脈内に投与されるＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶ用量で処置されたマウスは、ＴＣ－１モデルを使用するすべての研究（４つのうちの４つ）において、ＰＢＳを投与されたマウスと比較して、遅れた腫瘍成長を示した。１００×１０^６Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの用量を投与されたマウスは、大部分の研究（３つのうちの２つ）において、ＰＢＳを投与されたマウスとの比較において、遅れた腫瘍成長を示した。さらにまた、生存期間中央値の有意な増加が、１×１０^９用量による４つの研究のうちの４つ、２５０×１０^６用量による４つの研究のうちの３つ、および１００×１０^６用量による３つの研究のうちの１つで観察された。腫瘍成長の阻害も、生存期間中央値の延長も、５０×１０^６用量が投与されたマウスでは観察されなかった（２つの研究のうち０）。
（実施例１４）
ＴＣ－１腫瘍モデルにおける静脈内に投与されたＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる治療的免疫後のマウスにおける有効性のｉｎ ｖｉｖｏ決定－ブースティングレジメンの効果

【0478】

この研究の目的は、ＴＣ－１腫瘍モデルにおける同じ用量での単回投与（プライムのみ）と比較して、マウスあたり１００×１０^６または２５０×１０^６Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶで静脈内に投与されたＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの２回の投与（プライムおよびブースト）の抗腫瘍効果を評価することであった。

【0479】

マウスＲＢＣを単離するための方法、ならびにＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ）を作出するためのＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣによるＲＢＣのＳＱＺ処理は、上記に記載されている。

【0480】

以下の表は、腫瘍研究におけるＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの異なる用量を評価するための研究の設計を示す（表２２および表２３）。マウス（雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）に、０日目にＴＣ－１腫瘍細胞（５０，０００個細胞）を皮下（ＳＣ）注射した。表２２および表２３に記載されたスケジュールにより、マウスを、後眼窩投与によって試験物質で処置した。

【表21-2】

ＮＡは「該当なし」を表す

【表22】

ＮＡは「該当なし」を表す

【0481】

２つの独立した実験からの要約腫瘍成長データを図２８に示す。要約生存データを図２９および表２４に示す。

【表24-1】

【0482】

これらの研究は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの２回の静脈内投与（プライムとブースト）が、ＴＣ－１腫瘍モデルにおいて、プライム単独の投与と比べて、生存期間中央値に対する効果なしで、より遅い腫瘍成長をもたらすことができることを実証する。プライムと２日目のブーストで処置されたマウスは、１００×１０^６ＡＡＣ／マウスの用量のＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶのプライム単独と比較した場合、２つの研究のうちの１つで統計学的に有意に遅い腫瘍成長を示し、第２の研究においてより遅い成長への可能性がある傾向を示した。プライム単独と比較して、プライムとブーストについて２つの研究のうちの２つで観察された生存期間中央値において、この用量レベルでの統計学的な差はなかった。２５０×１０^６ＡＡＣ／マウスの用量でＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶのプライムと２日目のブーストで処置されたマウスは、２つの研究のうちの１つでプライム単独と比較した場合に、統計学的に有意に遅い腫瘍成長を示し、第２の研究においてより遅い成長への可能性がある傾向を示した。プライム単独と比較して、プライムとブーストについて２つの研究のうちの２つにおいて、この用量レベルでの生存期間中央値データに統計学的な差はなかった。最後に、マウスあたり１００×１０^６または２５０×１０^６Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶのプライムまたはプライムとブーストによるマウスの処置は、対照ＰＢＳ処置マウスと比較して、腫瘍成長を遅延させることができ、生存期間中央値を延長することができる。
（実施例１５）
Ｅ７特異的ＣＤ８＋ ＴＩＬの動員を測定するためのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶによるＴＣ－１腫瘍保持マウスのｉｎ ｖｉｖｏ免疫

【0483】

この研究の目的は、Ｍ ＡＡＣ－ＨＰＶによる静脈内免疫１２日後のＴＣ－１腫瘍の腫瘍微小環境中のＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞を定量化することであった。

【0484】

マウスＲＢＣを単離するための方法、ならびにＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ）を作出するためのＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣによるＲＢＣのＳＱＺ処理は、上記に記載されている。

【0485】

表２５は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ投与後のＴＣ－１腫瘍におけるＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞を定量化するために使用された研究の設計を示す。マウス（雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ；群あたり５頭）に、０日目にＴＣ－１腫瘍細胞（５０，０００個細胞）を皮下注射した。研究の１４日目（ＥＬＮ６８の研究）または１３日目（ＥＬＮ２２１の研究）に、マウスを、表２５に記載される試験物質で免疫した。腫瘍体積および生存を、犠牲の前の日（２４日目または２５日目）までモニターした。マウスを、試験物質投与の１２日後（ＥＬＮ６８において２６日目、およびＥＬＮ２２１において２５日目）に犠牲にし、腫瘍を、単一細胞懸濁液への酵素処理のために、取り出した。四量体染色を、細胞懸濁液において行って、フローサイトメトリーによってＥ７に特異的な浸潤ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを決定した。

【表24-2】

ＮＡは「該当なし」を表す

【0486】

図３０は、総生存細胞中のＣＤ８^＋ Ｔ細胞の腫瘍内パーセンテージ、総生存細胞中のＥ７四量体^＋細胞のパーセンテージ、およびＣＤ８^＋ Ｔ細胞集団のうちのＥ７四量体^＋細胞のパーセンテージを表す。腫瘍質量に対して正規化された総ＣＤ８^＋ Ｔ細胞およびＥ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞を図３１に示す。腫瘍採取のために犠牲にされたマウスについての腫瘍成長要約データを図３２に示す。

【0487】

図３０に見られるように、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶで免疫されたマウスは、それぞれ、ＥＬＮ６８およびＥＬＮ２２１において、免疫１２日後のＰＢＳ処置対照と比較して、腫瘍中のＣＤ８^＋ Ｔ細胞の平均パーセンテージの１２．８倍および２０．８倍の増加を有していた。Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ処置動物では、これらのＣＤ８＋ Ｔ細胞の大部分が、四量体染色によって決定されるように、Ｅ７抗原に対して特異的であった（ＣＤ８＋ Ｔ細胞集団のＥＬＮ６８において７６．６±１２．６％およびＥＬＮ２２１において８６．２±７．９％）。これらのデータは、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる免疫が、ＰＢＳ処置との比較において、免疫の１２日後の腫瘍微小環境中のＥ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の平均パーセンテージを有意に増加させたことを実証する（ＥＬＮ６８において２０９．３倍の増加およびＥＬＮ２２１において７１．２倍の増加）。図３１に示されるように、Ｅ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞のこの増加は、腫瘍質量に対して正規化された細胞数に変換された場合にも留意されたい。腫瘍体積の減少と連動したＥ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の増加は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶが、Ｅ７特異的エフェクターＣＤ８＋ Ｔ細胞を増やすことによって、腫瘍負荷を低下させることを示唆する。

【0488】

これらの研究は、ＴＣ－１マウス腫瘍モデルにおけるＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる静脈内免疫が、腫瘍に浸潤するＥ７特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の有意な増加をもたらしたことを実証した。この観察は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶについての提案される作用機構と協調する。
（実施例１６）
ルミネックス分析によって測定されるＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの反復静脈内投与後のマウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏ血清サイトカイン／ケモカイン分析

【0489】

この研究の目的は、対照ＰＢＳ注射マウスと比較して、１、２、３、４または５用量のＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる静脈内免疫後のさまざまな時点でマウスにおける血清サイトカイン／ケモカインを測定することであった。

【0490】

マウスＲＢＣを単離するための方法、ならびにＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ）を作出するためのＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣによるＲＢＣのＳＱＺ処理は、上記に記載されている。

【0491】

表２７は、最大で５用量のＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶで免疫されたＣ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスにおける血清サイトカイン／ケモカイン濃度を評価するための研究の設計を示す。Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘアッセイを使用するサイトカイン／ケモカイン濃度の分析を、図３２に示されるすべての時点で血清採取後に行った。

【表27-1】

Ｂはブーストを表す； すべての静脈内投与は後眼窩 （ＲＯ）経路によってであった。
^ａ血清は顎下静脈の穿刺を介して採取した。
^ｂ血清は末端心臓穿刺によって採取した。

【0492】

Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘアッセイに含まれる分析物は以下の通りである：Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＰ－１０、ＫＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＭＩＰ－２、ＲＡＮＴＥＳおよびＴＮＦ－α。表２８は、対応するＰＢＳの時点と比べて少なくとも１つの時点において統計学的な差を示した任意のサイトカイン／ケモカインについての重要な知見を記載する要約表である。

【0493】

４つのケモカイン、すなわち、ＩＰ－１０、ＭＩＰ－１β、ＭＣＰ－１およびＲＡＮＴＥＳは、すべての群において１つの例外で、最終免疫の１日後の血清濃度の一過性であるが有意な一貫性のある増加を実証した。群の１つ（Ｐ／Ｂ３）における免疫前の値に対するＭＩＰ－１βの倍数変化は、研究の過程全体にわたる任意の時点でＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶとＰＢＳ対照との間で有意に異ならなかった（ｐ＝０．４６）。ＩＰ－１０濃度は、免疫の４日後まで、すべての群において上昇したままであった。７日目まで、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ群におけるすべてのサイトカイン／ケモカインの倍数変化（免疫前の値に対する）は、ＩＬ－１２ｐ７０を除いて、ＰＢＳ対照において観察された変化と比較してもはや有意に上昇していなかった。ＩＬ－１２ｐ７０の倍数変化は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けた５つの群のうち１つの群（プライム単独群）において、７日目に対応するＰＢＳ群において観察されたよりも有意に高いままであった。しかしながら、プライム単独群におけるＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスのＩＬ－１２ｐ７０の免疫前の値に対する変化（０．４３～２．０５の範囲）は、研究全体にわたって対応するＰＢＳ群において観察された範囲内であった（０．４３～２．３７の範囲）。上昇した他のサイトカイン／ケモカインの濃度は、一貫して有意に上昇しなかったが、一部の他のサイトカイン／ケモカインについて、散発的な統計学的に有意な上昇が観察された。これらには、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１３、ＫＣおよびＭＩＰ－１αが含まれた。

【0494】

ポリＩ：Ｃなどのアジュバントは、各種の細胞型によるＩＰ－１０、ＭＩＰ－１β、ＭＣＰ－１およびＲＡＮＴＥＳを含むケモカインの分泌をもたらす自然免疫系の活性化因子であることが以前に示されている（Ｌｏｎｇｈｉ ２０１５；Ｄｅ Ｗａｅｌｅ ２０１８）。これらの特定のケモカインは、脾臓などの二次リンパ器官の抗原提示細胞（ＡＰＣ）リッチ領域へのＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞の遊走のために重要であることも示されている（Ｓｏｋｏｌ ２０１５において概説）。さらにまた、それらは、クラスタリングおよびＴ細胞とＡＰＣとの間の安定な接触の形成を促進し、それによって、生産的な活性化、およびナイーブＴ細胞のエフェクターＴ細胞への分化を促進することも示している。したがって、ＩＰ－１０、ＭＩＰ－１β、ＭＣＰ－１およびＲＡＮＴＥＳの血清レベルの早期の一過性の増加は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶによる自然免疫細胞の早期活性化をおそらく示す。

【0495】

Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＭＩＰ－２およびＴＮＦ－αを含むこの研究で測定された他の分析物は、すべての時点で、ＰＢＳ処置対象と比較して、すべてのＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶ群において有意な変化を示さなかった。

【0496】

この研究は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの静脈内投与が、一般に、最終免疫の１日後に開始する、個々のＰＢＳ対照と比較してＩＰ－１０、ＭＩＰ－１β、ＭＣＰ－１およびＲＡＮＴＥＳの血清濃度の一過性であるが有意な上昇をもたらしたことを実証する。免疫前の値に対するすべての分析物の濃度の変化は、最終ワクチン接種後７日目まで、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶを受けたマウスとＰＢＳを受けたマウスとの間で同等であった。

【表27-2】

【表27-3】

（実施例１７）
Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの反復ＩＶ投与後のマウスにおけるＲＢＣクリアランスのｉｎ ｖｉｖｏ決定

【0497】

この研究の目的は、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの５回の反復投与が、ＲＢＣの構成要素に対する免疫応答をもたらし、それによって、未処理ＲＢＣのその後の投与のクリアランスの加速をもたらすかを決定することであった。マウスにおける以前の研究が、静脈内血液投与の時に静脈内に投与されたポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）などのアジュバントが表面ＲＢＣ抗原に対する免疫応答を誘導または増強することができることを示した（Ｇｉｂｂ ２０１７）ので、この研究を実施した。そのような応答は、その後の静脈内投与におけるＲＢＣのクリアランスの加速をもたらすことが示されている（Ｓｔｏｗｅｌｌ ＳＲ ２０１４）。

【0498】

マウスＲＢＣを単離するための方法、ならびにＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ）を作出するためのＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣによるＲＢＣのＳＱＺ処理は、上記に記載されている。

【0499】

表２９は、５用量のＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶにより免疫された雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける静脈内に投与された処理されていない（ＳＱＺ処理されていない）同系ＲＢＣ（ＰＫＨ２６で標識）の循環動態を評価するための研究の設計を示す。循環ＲＢＣの分析は、ＰＫＨ２６標識ＲＢＣについてのフローサイトメトリーによって、表２９に示された時点での採血直後に行った。

【表29】

すべての静脈内投与は後眼窩（ＲＯ）経路によってであった。
Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶ ＝ ＡＡＣ－ＨＰＶのマウスプロトタイプ（マウスＥ７ ＳＬＰおよびポリＩ：ＣでＳＱＺ処理されたマウスＲＢＣ）； ＰＢＳ ＝リン酸緩衝食塩水

【0500】

静脈内投与後のさまざまな時点での全血中の標識ＲＢＣのパーセンテージを図３４に示す。

【0501】

この研究は、静脈内に投与された標識ＲＢＣのクリアランスを測定することによって、同系ＲＢＣに対する免疫応答の誘導に対するＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの反復投薬の影響を評価した。標識ＲＢＣを、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶの５回目および最終免疫の１週間後に投与して、免疫応答の発生に十分な時間を可能にした。静脈内投与後、標識ＲＢＣを、４８時間の期間モニターした。２時間の時点を除いて、すべての時点で２群間に統計的な差はなかった。２時間の時点で、Ｍ－ＡＡＣ－ＨＰＶについての全血中のＰＫＨ２６標識ＲＢＣのパーセンテージの値は、ＰＢＳについての６．４１％（範囲：５．８７～７．１１％）と比較して、６．０５％（範囲：５．８６～６．２１％）であり、その差は、予想される動物間の変動内であり、生理学的に有意ではない。

【0502】

この研究は、５用量のＭ－ＡＡＣ－ＨＰＶの静脈内投与が、５用量のＰＢＳ対照と比較した場合に、最大で投与後４８時間の静脈内に投与された同系の標識ＲＢＣの同等の循環によって証明されるように、同系ＲＢＣのクリアランスの加速を引き起こすことができる免疫応答をもたらさないことを実証する。

【表30-1】

【表30-2】

【表30-3】

【表30-4】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【配列表】

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【国際調査報告】