特表 2024-501127 腫瘍浸潤リンパ球培地及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-11

(54)【発明の名称】腫瘍浸潤リンパ球培地及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/00 20060101AFI20231228BHJP

   C12N 5/078 20100101ALI20231228BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231228BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20231228BHJP

【ＦＩ】

C12N1/00 G

C12N5/078

A61P35/00

A61K35/17

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023531655

(86)(22)【出願日】2021-11-25

(85)【翻訳文提出日】2023-07-20

(86)【国際出願番号】 CN2021133059

(87)【国際公開番号】W WO2022111571

(87)【国際公開日】2022-06-02

(31)【優先権主張番号】202011339183.1

(32)【優先日】2020-11-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523136226

【氏名又は名称】上海君賽生物科技有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＪＵＮＣＥＬＬ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】金 華 君

(72)【発明者】

【氏名】何 周

(72)【発明者】

【氏名】李 甜 甜

(72)【発明者】

【氏名】沈 永 超

(72)【発明者】

【氏名】陳 海 斌

(72)【発明者】

【氏名】許 馥 慧

(72)【発明者】

【氏名】黄 晨

【テーマコード（参考）】

4B065

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AC20

4B065BA30

4B065BB19

4B065CA44

4B065CA46

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087BB64

4C087CA04

4C087NA14

4C087ZB26

(57)【要約】

本発明は、ＴＩＬ細胞を増幅するための培養組成物であって、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５及び免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片を含み、前記免疫チェックポイント抗体がＰＤ－１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＬＡＧ－３抗体、ＴＩＭ－３抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＢＴＬＡ抗体から選ばれる何れか１種又は複数種を含む培養組成物に関し、さらに、ＴＩＬ細胞増幅培地、ＴＩＬ細胞群体の製造方法、及び医薬組成物に関する。前記培養組成物は、ＩＬ－２の用量を大量に低減すると共に、細胞増殖と活性を保証し、患者に注入した後にＩＬ－２治療を無くして副作用を減少するほか、増幅過程においてフィーダー細胞を使用しないため、外来汚染を減少し、製造プロセスを簡略化して、製造コストを削減し、製造時間を短縮する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＴＩＬ細胞を増幅するための培養組成物であって、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５及び免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片を含み、好ましくは、前記免疫チェックポイント抗体がＰＤ－１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＬＡＧ－３抗体、ＴＩＭ－３抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＢＴＬＡ抗体から選ばれる何れか１種又は複数種を含み、
好ましくは、前記培養組成物がＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、及びメモリーＴ細胞の比率を向上させる小分子の何れか１種、２種、３種又は４種をさらに含み、
好ましくは、前記培養組成物がＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＯＸ４０抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＩＣＯＳ抗体、ＣＤ２０６抗体、ＣＤ４０抗体から選ばれる何れか１種又は複数種をさらに含み、
好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＯＸ４０抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＩＣＯＳ抗体、ＣＤ２０６抗体、ＣＤ４０抗体が活性化型抗体であり、
好ましくは、前記培養組成物が自家血小板又は他家血小板をさらに含むことを特徴とする、培養組成物。

【請求項2】

請求項１に記載の培養組成物であって、
前記１種又は複数種の抗体がマトリックスにカップリングし、及び／又は
前記マトリックスが固体マトリックスであり、前記固体マトリックスが微小球、ウェルプレート、ディッシュ、細胞培養フラスコ、及び細胞培養バッグから選ばれる何れか１種又は複数種を含み、及び／又は
前記メモリーＴ細胞の比率を向上させる小分子がＴＷＳ１１９であり、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＧＭ－ＣＳＦを含み、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体を含み、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体を含み、好ましくは、前記ＣＤ３抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングし、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＧＭ－ＣＳＦを含み、好ましくは、前記ＣＤ３抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングし、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体を含み、好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングし、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＴＷＳ１１９、ＣＤ１３７抗体を含み、好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングし、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＭ－ＣＳＦを含み、好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングし、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＬＡＧ３抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体を含み、好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングし、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ４０抗体、ＯＸ－４０抗体、自家血小板を含み、好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングし、及び／又は
前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＷＳ１１９、他家血小板を含み、好ましくは、前記ＣＤ３抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングすることを特徴とする、培養組成物。

【請求項3】

請求項１に記載の培養組成物であって、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又は前記成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又は前記成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、１～５００μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、１～５００μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体、１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの自家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含み、又は
前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの他家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含むことを特徴とする、培養組成物。

【請求項4】

血清及び／又は血小板、基礎培地、並びに請求項１～３の何れか１項に記載のＴＩＬ細胞を増幅するための培養組成物を含み、
好ましくは、前記培養組成物が、下記特徴、即ち、
前記基礎培地が、ＡＩＭ－Ｖ、Ｘ－ＶＩＶＯ、ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ１６４０、ＯｐＴｍｉｚｅｒ^ＴＭ、ＦＵＪＩＦＩＬＭ Ｉｒｖｉｎ ＭＨＭ－Ｃから選ばれること、
前記血清が、ヒトＡＢ血清、対象自己血清又は動物由来血清から選ばれること、
血清の濃度が１～１０％であること、
前記血小板が他家血小板又は対象自家血小板であること、
前記血小板の密度が０．５×１０^８～１．０×１０^９／ｍＬであること、
ＩＬ－２の濃度が２００～６０００ＩＵ／ｍＬであること、
ＩＬ－７の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであること、
ＩＬ－１５の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであること、
ＰＤ－１抗体の濃度が１～１００μｇ／ｍＬであること、
ＩＬ－２１の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであること、
ＩＬ－１２の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであること、
ＣＤ３抗体の濃度が０．５～１０μｇ／ｍＬであること、
ＣＤ２８抗体の濃度が０．５～１０μｇ／ｍＬであること、
ＣＤ１３７抗体の濃度が１～１００μｇ／ｍＬであること、
ＧＩＴＲ抗体の濃度が１～１００μｇ／ｍＬであること、
ＧＭ－ＣＳＦの濃度が２００～５０００Ｕ／ｍＬであること、
ＴＷＳ１１９の濃度が１～５００μＭであること、から選ばれる１つ又は複数を有することを特徴とする、ＴＩＬ細胞増幅培地。

【請求項5】

請求項１～３の何れか１項に記載の培養組成物又は請求項４に記載の培地の、ＴＩＬ細胞を含む薬物の製造における使用であって、
好ましくは、前記薬物ががんを治療するために利用され、
より好ましくは、前記がんが、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫から選ばれる１種又は複数種である、使用。

【請求項6】

ＴＩＬ細胞群体の増幅方法であって、
請求項４に記載の培地でＴＩＬ細胞群体をインキュベートするステップを含み、
好ましくは、前記インキュベートが少なくとも５日間継続し、及び／又は、前記インキュベートが多くとも２０日間継続することを特徴とする、方法。

【請求項7】

ＴＩＬ細胞群体の製造方法であって、
ＴＩＬ種細胞培地で腫瘍細胞を含む組織をインキュベートして、第１のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（１）と、
請求項４に記載の培地で第１のＴＩＬ細胞群体をインキュベートして、第２のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（２）と、を含み、
好ましくは、下記特徴、即ち、
ａ）前記腫瘍組織に対して前処理を行い、好ましくは、前記前処理が腫瘍組織を破砕及び／又は解離することを含むこと、
ｂ）前記腫瘍細胞を含む組織ががん患者の腫瘍組織又は体液であること、
ｃ）ステップ（１）に係るＴＩＬ種細胞培地が、１）ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、２）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、３）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＰＤ－１抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、４）ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、５）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、６）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、７）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＣＤ２８抗体、ＯＸ－４０抗体、ＰＤ－１抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、８）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ４０抗体、ＯＸ－４０抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、９）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１０）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体、ＣＤ４０抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１１）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＰＤ－１抗体、ＲＲｘ－００１、ＣＡＬ－１０１、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１２）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＰＤ－１抗体、ＣＮＩ－１４９３、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１３）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ダサチニブ、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１４）ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＣＴＬＡ－４抗体、ＰＤ－１抗体、ダサチニブ、ＬＹＣ－５５７１６、ＧＥＮＥ－１８５８、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１５）ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＬＡＧ３抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＮＩ－１４９３、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１６）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体、ＣＤ４０抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＣＮＩ－１４９３、ダサチニブ、ＧＮＥ－１８５８、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、の成分の組み合わせの何れか１種を含むこと、
ｄ）ステップ（１）のインキュベートが少なくとも５日間継続すること、
ｅ）ステップ（１）のインキュベートが多くとも２０日間継続すること、
ｆ）ステップ（１）のインキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃であること、
ｇ）ステップ（１）のインキュベートのＣＯ_２濃度が５％であること、
ｈ）ステップ（２）のインキュベートが少なくとも５日間継続すること、
ｉ）ステップ（２）のインキュベートが多くとも２０日間継続すること、
ｊ）ステップ（２）のインキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃であること、
ｋ）ステップ（２）のインキュベートのＣＯ_２濃度が５％であること、
ｌ）前記腫瘍細胞を含む組織が、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫などのがんを罹患している対象の腫瘍組織又は体液であること、から選ばれる１つ又は複数を有することを特徴とする、方法。

【請求項8】

ＴＩＬ細胞群体の製造方法であって、
ＴＩＬ種細胞培地で腫瘍細胞を含む組織をインキュベートして、第１のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（１）と、
（１）に係る第１のＴＩＬ細胞群体を、請求項１～３の何れか１項に記載の培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体の何れか１種又は複数種に接触させて、第２のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（２）と、
（２）に係る第２のＴＩＬ細胞群体を、請求項１～３の何れか１項に記載の培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体を除く成分の何れか１種又は複数種を含む培地に移し、培養して、第３のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（３）と、を含み、
好ましくは、下記特徴、即ち、
ａ）前記腫瘍組織に対して前処理を行い、好ましくは、前記前処理が腫瘍組織を破砕及び／又は解離することを含むこと、
ｂ）前記腫瘍細胞を含む組織ががん患者の腫瘍組織又は体液であること、
ｃ）ステップ（１）に係るＴＩＬ種細胞培地が、１）ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、２）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、３）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＰＤ－１抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、４）ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、５）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、６）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、７）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＣＤ２８抗体、ＯＸ－４０抗体、ＰＤ－１抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、８）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ４０抗体、ＯＸ－４０抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、９）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１０）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体、ＣＤ４０抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１１）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＰＤ－１抗体、ＲＲｘ－００１、ＣＡＬ－１０１、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１２）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＰＤ－１抗体、ＣＮＩ－１４９３、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１３）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ダサチニブ、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１４）ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＣＴＬＡ－４抗体、ＰＤ－１抗体、ダサチニブ、ＬＹＣ－５５７１６、ＧＥＮＥ－１８５８、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１５）ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＬＡＧ３抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＮＩ－１４９３、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１６）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体、ＣＤ４０抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＣＮＩ－１４９３、ダサチニブ、ＧＮＥ－１８５８、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、の成分の組み合わせの何れか１種を含むこと、
ｄ）ステップ（１）のインキュベートが少なくとも５日間継続すること、
ｅ）ステップ（１）のインキュベートが多くとも２０日間継続すること、
ｆ）ステップ（１）のインキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃であること、
ｇ）ステップ（１）のインキュベートのＣＯ_２濃度が５％であること、
ｈ）ステップ（２）に係るマトリックスがマルチウェルプレート、細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグであること、
ｉ）ステップ（２）に係るカップリングが共有結合又は非共有結合によるカップリングであること、
ｊ）ステップ（２）に係るマトリックスにカップリングする抗体がＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体の何れか１種又は複数種を含み、好ましくは、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体を含み、より好ましくは、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体を含むこと、
ｋ）ステップ（２）に係る接触が、ステップ（１）に係る第１のＴＩＬ細胞群体をマトリックスにカップリングする抗体と共にインキュベートすることであり、好ましくは、前記インキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃であり、好ましくは、前記インキュベートのＣＯ_２濃度が５％であること、
ｌ）ステップ（２）において、前記インキュベートが、前述した培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体を除く成分の何れか１種又は複数種を含む培地で行われること、
ｍ）ステップ（２）に係る第１のＴＩＬ細胞群体の密度が１．０×１０^５／ｍＬ～１．０×１０^６／ｍＬであり、好ましくは、２．０×１０^５／ｍＬ～１．０×１０^６／ｍＬであり、より好ましくは、２．５×１０^５／ｍＬ～３．５×１０^６／ｍＬであること、
ｎ）ステップ（２）に係る接触が１～３日間継続し、好ましくは、２～３日間継続すること、
ｏ）ステップ（３）におけるインキュベートが少なくとも５日間継続すること、
ｐ）ステップ（３）におけるインキュベートが多くとも２０日間継続すること、
ｑ）ステップ（３）のインキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃であること、
ｒ）ステップ（３）のインキュベートのＣＯ_２濃度が５％であること、
ｓ）前記腫瘍細胞を含む組織が、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫などのがんを罹患している対象の腫瘍組織又は体液であること、から選ばれる１つ又は複数を有することを特徴とする、方法。

【請求項9】

請求項６～８の何れか１項に記載の方法で取得する、ＴＩＬ細胞群体。

【請求項10】

請求項９に記載のＴＩＬ細胞群体の、がんを治療するための薬物の製造における用途であって、
好ましくは、前記がんが、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫から選ばれる１種又は複数種である、用途。

【請求項11】

請求項９に記載のＴＩＬ細胞群体と、薬学的に許容される添加物と、を含む、医薬組成物。

【請求項12】

請求項９に記載のＴＩＬ細胞群体と、凍結保存液と、を含み、
好ましくは、前記凍結保存液が細胞凍結保存液又は組織凍結保存液であり、
好ましくは、前記凍結保存液が無血清凍結保存液である、細胞凍結保存製剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、バイオテクノロジーの分野に関し、具体的には、腫瘍浸潤リンパ球培地及びその使用に関する。

【背景技術】

【0002】

腫瘍免疫治療分野の進展により、このような治療が現代がん治療の主流となっている。近年、抗腫瘍免疫を活性化して向上する様々な方策は開発され、さまざまな臨床研究において評価された。悪性腫瘍に対する免疫治療は、主に、免疫チェックポイント（例えば、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１／ＰＤＬ１）モノクローナル抗体治療、キメラ抗原受容体Ｔ（ＣＡＲ－Ｔ）細胞治療、ＴＣＲ－Ｔ治療などを含み、近年、その臨床効果が注目を集めている。そのうち、ＣＡＲ－Ｔ細胞治療は血液腫瘍免疫においてその効果が非常に顕著であるが、ＣＡＲ－Ｔ、ＴＣＲ－Ｔ及び／又は免疫チェックポイント阻害剤療法は、固形腫瘍免疫治療において、程度が異なるが、ボトルネックに直面している。

【0003】

１９９８年に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の患者治療における使用ケースは初めて米国国立がん研究所（ＮＣＩ）外科支部（Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｂｒａｎｃｈ）により報道されている。ＴＩＬを幅広く研究した結果、黒色腫患者の腫瘍組織から抗腫瘍活性を有する細胞を分離できることがわかる。近年、養子免疫細胞療法（ＡＣＴ）にとって、体積が大きい難治性腫瘍、特に固形腫瘍に対して、ＴＩＬが非常に顕著的な効果を有することは発見された。現在、アメリカＩｏｖａｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社が所有する複数種のＴＩＬ細胞薬物は、臨床第ＩＩ相又は中枢的（ｐｉｖｏｔａｌ）な第ＩＩＩ相に進んでおり、その適応症が黒色腫、子宮頸がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、結腸がん、膵臓がん、肉腫を含む。そのうち、ＬＮ１４５は２０１９年にＦＤＡから子宮頸がんを適応症とするファストトラック指定（ｆａｓｔ ｔｒａｃｋ ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ）を受けるようになると共に、化学療法期間における子宮頸がん又はその後に進行する末期子宮頸がんを治療するためのＢｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈ Ｔｈｅｒａｐｙと認定されている。

【0004】

ＴＩＬを腫瘍免疫治療に利用するには大量な細胞が必要であるが、これはＴＩＬ細胞増幅にとって技術及びプロセス制御に関する課題となっている。従来の一般的な方法として、ＩＬ－２に基づく前増幅（ｐｒｅ－Ｒａｐｉｄ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ、ｐｒｅ－ＲＥＰ）を行ってから、「急速増幅過程」（ＲＥＰ）を行う。ＲＥＰは１４日間でＴＩＬ細胞をさらに１０００倍増幅することができ、該過程では、フィーダー細胞（ｆｅｅｄｅｒ ｃｅｌｌ）として大量又は過量の被曝された複数の供与体由来の同種異系ＰＢＭＣ（単核細胞、ＭＮＣとも呼ばれる）、及び抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）と高用量ＩＬ－２が必要とされる。ＲＥＰ過程を受けたＴＩＬは、免疫抑制治療を受けた黒色腫患者に、養子免疫細胞療法（ＡＣＴ）を施すことができる。ＷＯ２０１８１８２８１７Ａ１及びＷＯ２０１９１９０５７９Ａ１では、ＴＩＬの製造方法であって、前述したＴＩＬ増幅培養方法を基に、医薬品法に適合する、産業化、量産化向けの改良ＴＩＬ培養方法を提供し、１０^１１桁のＴＩＬを製造できると共に、培養時間を短縮した、ＴＩＬの製造方法が開示された。しかしながら、該培養方法は、相変わらず、フィーダー細胞として、被曝された複数の供与体由来の同種異系ＰＢＭＣ細胞が必要とされる。フィーダー細胞の使用によって潜在的な汚染リスクが依然として存在すると共に、製造用フィーダー細胞の製造によって全ＴＩＬ製造過程の複雑性も向上した。さらに、該方法は高濃度のＩＬ－２（６０００ＩＵ／ｍＬ、３０００ＩＵ／ｍＬ）を使用したため、その後の注入において細胞疲弊のリスクがある。

【0005】

そのため、本分野は、より安全で効率的なＴＩＬ細胞のインビトロ増幅システムが必要とされている。

【発明の概要】

【0006】

本発明は、従来技術の現状に対して、培地の成分を最適化することで、より安全で効率的なＴＩＬ細胞インビトロ増幅システムを開発し、臨床的な使用範囲を拡大した。

【0007】

本発明の一態様は、ＴＩＬ細胞を増幅するための培養組成物であって、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５及び免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片を含み、好ましくは、前記免疫チェックポイント抗体がＰＤ－１抗体を含む、培養組成物を提供する。

【0008】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、及びメモリーＴ細胞の比率を向上させる小分子の何れか１種、２種、３種又は４種をさらに含む。好ましくは、前記培養組成物がＩＬ－２１及びＩＬ－１２、又はＩＬ－２１、ＩＬ－１２及びＧＭ－ＣＳＦ、又はＧＭ－ＣＳＦ及びメモリーＴ細胞の比率を向上させる小分子をさらに含む。好ましくは、前記メモリーＴ細胞の比率を向上させる小分子がＴＷＳ１１９である。

【0009】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体がＰＤ－１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＬＡＧ３抗体、ＴＩＭ３抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＢＴＬＡ抗体から選ばれる何れか１種又は複数種を含む。

【0010】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＯＸ４０抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＩＣＯＳ抗体、ＣＤ２０６抗体、ＣＤ４０抗体から選ばれる何れか１種又は複数種をさらに含む。好ましくは、前記培養組成物がＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体から選ばれる何れか１種、２種、３種又は４種をさらに含む。例えば、前記培養組成物が（１）ＣＤ３抗体及びＣＤ２８抗体、又は（２）ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体及びＧＩＴＲ抗体をさらに含む。

【0011】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＯＸ４０抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＩＣＯＳ抗体、ＣＤ２０６抗体、ＣＤ４０抗体が活性化型抗体である。

【0012】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が自家血小板又は他家血小板をさらに含む。

【0013】

１つ又は複数の実施形態において、前記各抗体がモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。

【0014】

１つ又は複数の実施形態において、前記１種又は複数種の抗体がマトリックスにカップリングする。１つ又は複数の実施形態において、前記マトリックスが固体マトリックスであり、例えば、微小球、ウェルプレート、ディッシュ、細胞培養フラスコ又は細胞培養バッグである。好ましくは、前記微小球が磁気ビーズである。好ましくは、前記カップリングは共有結合又は非共有結合によるカップリングである。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＧＭ－ＣＳＦを含む。

【0015】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体を含む。

【0016】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体を含む。好ましくは、前記ＣＤ３抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングする。

【0017】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＧＭ－ＣＳＦを含む。好ましくは、前記ＣＤ３抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングする。

【0018】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体を含む。好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングする。

【0019】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＴＷＳ１１９、ＣＤ１３７抗体を含む。好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングする。

【0020】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＭ－ＣＳＦを含む。好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングする。

【0021】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＬＡＧ３抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体を含む。好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングする。

【0022】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ４０抗体、ＯＸ－４０抗体、自家血小板を含む。好ましくは、前記ＣＤ３抗体、ＣＤ１３７抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングする。

【0023】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＷＳ１１９、他家血小板を含む。好ましくは、前記ＣＤ３抗体及びＣＤ２８抗体がマトリックスにカップリングする。

【0024】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＩＬ－２の濃度が２００～６０００ＩＵ／ｍＬであり、例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００ＩＵ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＩＬ－２の濃度が２００～９５０、２００～８５０、２００～７５０、２００～６５０、２００～５５０、２００～５００ＩＵ／ｍＬである。

【0025】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＩＬ－７の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであり、例えば、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｎｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＩＬ－７の濃度が５～６５、５～５５、５～４５、５～３５、５～２５、５～１５ｎｇ／ｍＬである。

【0026】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＩＬ－１５の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであり、例えば、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｎｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＩＬ－１５の濃度が５～６５、５～５５、５～４５、５～３５、５～２５、５～１５、１０～５０ｎｇ／ｍＬである。

【0027】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＰＤ－１抗体の濃度が１～１００μｇ／ｍＬであり、例えば、１、２、３、５、７、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＰＤ－１抗体の濃度が１～６５、１～５５、１～４５、１～３５、１～２５、１～１５、１～８、１～６、１～４、１～３μｇ／ｍＬである。

【0028】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＩＬ－２１の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであり、例えば、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｎｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＩＬ－２１の濃度が５～６５、５～５５、５～４５、５～３５、５～２５、５～１５ｎｇ／ｍＬである。

【0029】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＩＬ－１２の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであり、例えば、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｎｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＩＬ－１２の濃度が５～６５、１０～５５、１０～４５、１０～３５、１０～２５、１５～２５、１０～１５ｎｇ／ｍＬである。

【0030】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＣＤ３抗体の濃度が０．５～１０μｇ／ｍＬであり、例えば、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＣＤ３抗体の濃度が０．５～９．５、０．５～８．５、０．５～７．５、０．５～６．５、０．５～５．５、０．５～３、１．５～４．５、２．５～３．５μｇ／ｍＬである。

【0031】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＣＤ２８抗体の濃度が０．５～１０μｇ／ｍＬであり、例えば、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＣＤ２８抗体の濃度が０．５～９．５、０．５～８．５、０．５～７．５、０．５～６．５、０．５～５．５、０．５～１、１．５～４．５、２．５～３．５μｇ／ｍＬである。

【0032】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＣＤ１３７抗体の濃度が１～１００μｇ／ｍＬであり、例えば、１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＣＤ１３７抗体の濃度が１～９５、１～８５、１～７５、１～６５、１～５５、１～４５、１～３５、１～２５、１～１５、１～９、１．５～８、２～７、２．５～６、２．５～５、３～５μｇ／ｍＬである。

【0033】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＧＩＴＲ抗体の濃度が１～１００μｇ／ｍＬであり、例えば、１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＧＩＴＲ抗体の濃度が１～９５、１～８５、１～７５、１～６５、１～５５、１～４５、１～３５、１～２５、１～１５、１～９、１．５～８、２～７、２．５～６、３～５、２～３μｇ／ｍＬである。

【0034】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＧＭ－ＣＳＦの濃度が２００～５０００Ｕ／ｍＬであり、例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００Ｕ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＧＭ－ＣＳＦの濃度が２００～１５００、２００～１２００、２００～９５０、２００～８５０、２００～７５０、２００～６５０、２００～５５０、２００～５００Ｕ／ｍＬである。

【0035】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物におけるＴＷＳ１１９の濃度が１～５００μＭであり、例えば、１、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００μＭ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物におけるＴＷＳ１１９の濃度が１～２５０、２～１５０、３～９５、４～８５、５～７５、６～６５、７～５５、８～４５、９～３５、１０～２５、１０～１５μＭである。

【0036】

１つ又は複数の上記実施形態において、培養組成物における自家血小板又は他家血小板の濃度が０．５×１０^８／ｍＬ～１．０×１０^９／ｍＬであり、例えば、０．５×１０^８、１．０×１０^８、１．５×１０^８、２．０×１０^８、２．５×１０^８、３．０×１０^８、３．５×１０^８、４．０×１０^８、４．５×１０^８、５．０×１０^８、５．５×１０^８、６．０×１０^８、６．５×１０^８、７．０×１０^８、７．５×１０^８、８．０×１０^８、８．５×１０^８、９．０×１０^８、９．５×１０^８、１．０×１０^９／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、培養組成物における自家血小板又は他家血小板の濃度が０．５×１０^８～９．５×１０^８、０．５×１０^８～７．５×１０^８、０．５×１０^８～５．５×１０^８、１．０×１０^８～５．５×１０^８、１．０×１０^８～５．０×１０^８、１．０×１０^８～４．５×１０^８、１．０×１０^８～４．０×１０^８、１．０×１０^８～３．５×１０^８、１．５×１０^８～３．０×１０^８、１．５×１０^８～２．５×１０^８／ｍＬである。

【0037】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0038】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0039】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0040】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0041】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0042】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0043】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又は前記成分の同率濃縮物を含む。

【0044】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0045】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0046】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又は前記成分の同率濃縮物を含む。

【0047】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0048】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0049】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0050】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0051】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：３μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0052】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0053】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0054】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２．５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、２．５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0055】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１～５００μＭのＴＷＳ１１９を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１～５００μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0056】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１～１００μＭのＴＷＳ１１９を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１～１００μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0057】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：３μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１０μＭのＴＷＳ１１９を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１０μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0058】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：４０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：４０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：２μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１０μＭのＴＷＳ１１９を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、４０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、４０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、２μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１０μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0059】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0060】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、及び２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0061】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ３抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ２８抗体：５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0062】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0063】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、及び２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0064】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0065】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、及びマトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0066】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、及びマトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0067】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ３抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ２８抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ１３７抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ３抗体、細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ２８抗体、及び細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ１３７抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0068】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：１～５００μＭのＴＷＳ１１９を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、及び１～５００μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0069】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：１～１００μＭのＴＷＳ１１９を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、及び１～１００μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0070】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：２μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：１０μＭのＴＷＳ１１９を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、２μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、及び１０μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0071】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、及び２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0072】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、及び２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0073】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：７ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：２μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、７ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、２μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、及び５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0074】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0075】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0076】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２．５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、２．５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0077】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体：１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの自家血小板を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体、及び１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの自家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0078】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体：１×１０^８～３×１０^８／ｍＬの自家血小板を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体、及び１×１０^８～３×１０^８／ｍＬの自家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0079】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ３抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ２８抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ１３７抗体：２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：２μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体：３μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体：３×１０^８／ｍＬの自家血小板を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、２μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体、３μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体、及び３×１０^８／ｍＬの自家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0080】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの他家血小板を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの他家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0081】

好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１×１０^８～３×１０^８／ｍＬの他家血小板を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１×１０^８～３×１０^８／ｍＬの他家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0082】

より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：２μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：２μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１×１０^８／ｍＬの他家血小板を含む。１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、成分として、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、２μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、２μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１×１０^８／ｍＬの他家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0083】

本発明は、本明細書に係るＴＩＬ細胞を増幅するための培養組成物、血清及び／又は血小板、並びに基礎培地を含む、ＴＩＬ細胞増幅培地をさらに提供する。

【0084】

１つ又は複数の実施形態において、基礎培地が、ＡＩＭ－Ｖ、Ｘ－ＶＩＶＯ、ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ１６４０、ＯｐＴｍｉｚｅｒ^ＴＭ、ＦＵＪＩＦＩＬＭ Ｉｒｖｉｎ ＭＨＭ－Ｃから選ばれる。

【0085】

１つ又は複数の実施形態において、血清が、ヒトＡＢ血清、対象自己血清又は動物由来血清から選ばれる。

【0086】

１つ又は複数の実施形態において、血清の濃度が１～１０％であり、例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。好ましくは、血清の濃度が１．５～９．５％、２．５～８．５％、３．５～７．５％、４．５～６．５％である。

【0087】

１つ又は複数の実施形態において、前記血小板の密度が０．５×１０^８／ｍＬ～３×１０^８／ｍＬであり、例えば、０．５×１０^８／ｍＬ、１×１０^８／ｍＬ、１．５×１０^８／ｍＬ、２×１０^８／ｍＬ、２．５×１０^８／ｍＬ、３×１０^８／ｍＬである。

【0088】

１つ又は複数の実施形態において、血小板が対象自己血由来の血小板又は同種血由来の血小板である。

【0089】

１つ又は複数の実施形態において、前記培地が抗生物質をさらに含む。好ましくは、前記抗生物質がペニシリン、ストレプトマイシンから選ばれる１種又は複数種である。

【0090】

１つ又は複数の実施形態において、培地におけるペニシリンの濃度が１０～１０００ＩＵ／ｍＬ、２０～８００ＩＵ／ｍＬ、５０～１００ＩＵ／ｍＬである。

【0091】

１つ又は複数の実施形態において、培地におけるペニシリンの濃度が１０～１０００ＩＵ／ｍＬ、２０～８００ＩＵ／ｍＬ、５０～１００ＩＵ／ｍＬである。

【0092】

本発明は、細胞培養成分、サイトカイン、免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片を含み、前記サイトカインがＩＬ－２を含み、前記免疫チェックポイントがＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ及び／又はＣＴＬＡ－４を含み、前記細胞培養成分が血清培地又は無血清培地である、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の種細胞培地をさらに提供する。

【0093】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－２の濃度が約３０００ＩＵ／ｍＬ以下である。

【0094】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－２の濃度が約２０００ＩＵ／ｍＬ～約３０００ＩＵ／ｍＬである。

【0095】

１つ又は複数の実施形態において、前記サイトカインがＩＬ－７を含む。

【0096】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－７の濃度が約２００～約１０００Ｕ／ｍＬである。

【0097】

１つ又は複数の実施形態において、前記サイトカインがＩＬ－１５を含む。

【0098】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－１５の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0099】

１つ又は複数の実施形態において、前記サイトカインが腫瘍壊死因子ＴＮＦを含む。

【0100】

１つ又は複数の実施形態において、前記サイトカインがＴＮＦαを含む。

【0101】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＴＮＦαの濃度が約１０～約１００ｐｇ／ｍＬである。

【0102】

１つ又は複数の実施形態において、前記サイトカインがコロニー刺激因子を含む。

【0103】

１つ又は複数の実施形態において、前記サイトカインがＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ及び／又はＭ－ＣＳＦを含む。

【0104】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＧＭ－ＣＳＦの濃度が約２００～約５０００Ｕ／ｍＬである。

【0105】

１つ又は複数の実施形態において、前記Ｇ－ＣＳＦの濃度が約３００Ｕ／ｍＬ～約１０００Ｕ／ｍＬである。

【0106】

１つ又は複数の実施形態において、前記Ｍ－ＣＳＦの濃度が約３００Ｕ／ｍＬ～約８００Ｕ／ｍＬである。

【0107】

１つ又は複数の実施形態において、前記サイトカインがインターフェロンを含む。

【0108】

１つ又は複数の実施形態において、前記サイトカインがＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α及び／又はＩＦＮ－βを含む。

【0109】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＦＮ－γの濃度が約１０～約１０００ｎｇ／ｍＬである。

【0110】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＦＮ－γの濃度が約３００～約１０００Ｕ／ｍＬである。

【0111】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＦＮ－αの濃度が約５００Ｕ／ｍＬ～約１０００Ｕ／ｍＬである。

【0112】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＦＮ－βの濃度が約２００Ｕ／ｍＬ～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0113】

１つ又は複数の実施形態において、前記サイトカインがＩＬ－４、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１８、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１及び／又はＩＬ－１０をさらに含む。

【0114】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－４の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0115】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－１αの濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0116】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－１βの濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0117】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－６の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0118】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－９の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0119】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－１８の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0120】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－１２の濃度が約２００～約１０００Ｕ／ｍＬである。

【0121】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－２１の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0122】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＩＬ－１０の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬである。

【0123】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がヒトＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片である。

【0124】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片が前記ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片であり、前記ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約１００μｇ／ｍＬである。

【0125】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がヒトＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片である。

【0126】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片であり、前記ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片の濃度が約３～約１０μｇ／ｍＬである。

【0127】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片がヒトＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。

【0128】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であり、前記ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約２５μｇ／ｍＬである。

【0129】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がヒトＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片である。

【0130】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片であり、前記ＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約１００μｇ／ｍＬである。

【0131】

１つ又は複数の実施形態において、前記種細胞培地が共刺激受容体抗体又はその抗原結合断片をさらに含み、前記共刺激受容体又はその抗原結合断片がＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片及び／又はＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片を含む。

【0132】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片を含む。

【0133】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片がヒトＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片である。

【0134】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約１００μｇ／ｍＬである。

【0135】

１つ又は複数の実施形態において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片を含む。

【0136】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片がヒトＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片である。

【0137】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約１０μｇ／ｍＬである。

【0138】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片がヒトＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片である。

【0139】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片の濃度が約５～約１０μｇ／ｍＬである。

【0140】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片がヒトＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片である。

【0141】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片の濃度が約３～約１０μｇ／ｍＬである。

【0142】

１つ又は複数の実施形態において、前記血清培地が血清を含む。

【0143】

１つ又は複数の実施形態において、前記血清がヒトＡＢ血清を含む。

【0144】

１つ又は複数の実施形態において、前記血清の濃度が約１～約１０％（ｖ／ｖ）である。

【0145】

１つ又は複数の実施形態において、前記血清培地がＡＩＭ－Ｖ培地を含む。

【0146】

１つ又は複数の実施形態において、前記無血清培地がＸ－ＶＩＶＯ培地を含む。

【0147】

１つ又は複数の実施形態において、前記細胞培養成分が抗生物質を含む。

【0148】

１つ又は複数の実施形態において、前記細胞培養成分がペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳを含む。

【0149】

１つ又は複数の実施形態において、前記ペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳの濃度が約１～約２００Ｕ／ｍＬである。

【0150】

１つ又は複数の実施形態において、前記種細胞培地がＭ２型マクロファージ阻害剤をさらに含み、前記Ｍ２型マクロファージ阻害剤がＲＲｘ００１及び／又はＣＮＩ－１４９３を含む。

【0151】

１つ又は複数の実施形態において、前記Ｍ２型マクロファージ阻害剤の濃度が約０．１～約１００μＭである。

【0152】

１つ又は複数の実施形態において、前記種細胞培地が制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）阻害剤をさらに含み、前記制御性Ｔ細胞阻害剤がＣＡＬ－１０１、ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）及び／又はパノビノスタット（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ）を含む。

【0153】

１つ又は複数の実施形態において、前記制御性Ｔ細胞阻害剤の濃度が約０．１～約１００μＭである。

【0154】

１つ又は複数の実施形態において、前記種細胞培地が骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）阻害剤をさらに含み、前記骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤がＡＧ４９０、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、スニチニブ及び／又はＢＢＩ６０８を含む。

【0155】

１つ又は複数の実施形態において、前記骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤の濃度が約０．１～約１００μｇ／ｍＬである。

【0156】

１つ又は複数の実施形態において、前記種細胞培地がＴ細胞活性化剤をさらに含み、前記Ｔ細胞活性化剤がＬＹＣ－５５７１６、ＧＮＥ－１８５８及び／又はメチレンブルーを含む。

【0157】

１つ又は複数の実施形態において、前記Ｔ細胞活性化剤の濃度が約１～約１０μＭである。

【0158】

１つ又は複数の実施形態において、前記種細胞培地がＴ細胞分化阻害剤をさらに含み、前記Ｔ細胞分化阻害剤がＴＷＳ１１９を含む。

【0159】

１つ又は複数の実施形態において、前記Ｔ細胞分化阻害剤の濃度が約１～約１０μＭである。

【0160】

別の様態において、本願は、本願に係る種細胞培地により培養された腫瘍浸潤リンパ球の種細胞又はその細胞群体を提供する。

【0161】

別の様態において、本願は、本願に係る腫瘍浸潤リンパ球の種細胞又はその細胞群体、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。

【0162】

別の様態において、本願は、前記腫瘍浸潤リンパ球の種細胞又はその細胞群体、及び本願に係る医薬組成物の、がんを治療するための薬物の製造における使用を提供する。

【0163】

１つ又は複数の実施形態において、前記がんが、黒色腫、神経膠腫、胃がん、肺がん、消化管間質腫瘍、腸がん、肝がん、子宮頸がん、卵巣がん、乳がん、子宮内膜間質肉腫、骨盤低分化型腺がん、胆管がんから選ばれる。

【0164】

別の様態において、本願は、前記種細胞培地の、腫瘍浸潤リンパ球の増幅における使用を提供する。

【0165】

別の様態において、本願は、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞の培養方法であって、本願に係る種細胞培地で単離された腫瘍浸潤リンパ球を培養するステップを含む方法を提供する。

【0166】

別の様態において、本願は、腫瘍浸潤リンパ球の増幅方法であって、本願に係る種細胞培地で単離された腫瘍浸潤リンパ球を培養して、前記腫瘍浸潤リンパ球の種細胞を取得するステップを含む方法を提供する。

【0167】

１つ又は複数の実施形態において、前記単離された腫瘍浸潤リンパ球が、必要とする被験者の腹水、手術で切除した原発巣サンプル、手術で切除した同時性及び異時性転移巣サンプル、穿刺サンプル、体液から選ばれるサンプルに由来する。

【0168】

１つ又は複数の実施形態において、前記体液が血液、組織液、リンパ液及び／又は体腔貯留液を含む。

【0169】

１つ又は複数の実施形態において、前記単離された腫瘍浸潤リンパ球が、黒色腫、神経膠腫、胃がん、肺がん、消化管間質腫瘍、腸がん、肝がん、子宮頸がん、卵巣がん、乳がん、子宮内膜間質肉腫、骨盤低分化型腺がん、胆管がんから選ばれる腫瘍に由来する。

【0170】

１つ又は複数の実施形態において、前記単離された腫瘍浸潤リンパ球が切除された腫瘍組織に由来し、前記切除された腫瘍組織の直径が約１ｍｍ～約１０ｍｍである。

【0171】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養の時間が約３～２０日間である。

【0172】

１つ又は複数の実施形態において、前記培養の温度が約３０～４２℃である。

【0173】

本発明は、本明細書に係るＴＩＬ細胞を増幅するための培養組成物の、ＴＩＬ細胞を増幅するための培地又はＴＩＬ細胞を含む薬物の製造における使用をさらに提供する。１つ又は複数の実施形態において、前記薬物ががんを治療するために利用される。

【0174】

１つ又は複数の実施形態において、前記がんが、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫から選ばれる。

【0175】

本発明は、本明細書に係るＴＩＬ細胞を増幅するための培地の、ＴＩＬ細胞を含む薬物の製造における使用をさらに提供する。１つ又は複数の実施形態において、前記薬物ががんを治療するために利用される。

【0176】

１つ又は複数の実施形態において、前記がんが、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫から選ばれる。

【0177】

本発明は、ＴＩＬ細胞群体の増幅方法であって、本明細書に係る培地でＴＩＬ細胞群体をインキュベートするステップを含む方法をさらに提供する。

【0178】

１つ又は複数の実施形態において、前記インキュベートが少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間継続する。

【0179】

１つ又は複数の実施形態において、前記インキュベートが多くとも２０日間、多くとも１５日間、多くとも１４日間、多くとも１３日間、多くとも１２日間、多くとも１１日間、多くとも１０日間、多くとも９日間、多くとも８日間、多くとも７日間、多くとも６日間、多くとも５日間継続する。

【0180】

本発明は、ＴＩＬ細胞群体の製造方法であって、
ＴＩＬ種細胞培地で腫瘍細胞を含む組織をインキュベートして、第１のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（１）と、
（２）本明細書に係る培地で第１のＴＩＬ細胞群体をインキュベートして、第２のＴＩＬ細胞群体を取得するステップと、を含む方法をさらに提供する。

【0181】

１つ又は複数の実施形態において、前記腫瘍組織ががん患者から取得される。

【0182】

１つ又は複数の実施形態において、前記腫瘍組織に対して前処理を行う。１つ又は複数の実施形態において、前記前処理が腫瘍組織を破砕及び／又は解離することを含む。

【0183】

１つ又は複数の実施形態において、前記腫瘍組織に対して機械切断の方式により破砕した組織ブロックを形成する。

【0184】

１つ又は複数の実施形態において、前記破砕した組織ブロックのサイズが２×２×２ｍｍ^３、３×３×３ｍｍ^３、４×４×４ｍｍ^３、５×５×５ｍｍ^３、又は６×６×６ｍｍ^３である。

【0185】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）のインキュベートが少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間継続する。

【0186】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）のインキュベートが多くとも２０日間、多くとも１５日間、多くとも１４日間、多くとも１３日間、多くとも１２日間、多くとも１１日間、多くとも１０日間、多くとも９日間、多くとも８日間、多くとも７日間、多くとも６日間、多くとも５日間継続する。

【0187】

２つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）のインキュベートが少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間継続する。

【0188】

２つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）のインキュベートが多くとも２０日間、多くとも１５日間、多くとも１４日間、多くとも１３日間、多くとも１２日間、多くとも１１日間、多くとも１０日間、多くとも９日間、多くとも８日間、多くとも７日間、多くとも６日間、多くとも５日間継続する。

【0189】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係る第１のＴＩＬ細胞群体から開始した接種密度が２．０×１０^５／ｃｍ^２～５．０×１０^５／ｃｍ^２であり、好ましくは、２．５×１０^５／ｃｍ^２～４．５×１０^５／ｃｍ^２であり、より好ましくは、２．５×１０^５／ｃｍ^２～３．０×１０^５／ｃｍ^２である。

【0190】

１つ又は複数の実施形態において、腫瘍細胞を含む組織が、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫などのがんを罹患している対象の腫瘍組織又は体液である。

【0191】

１つ又は複数の実施形態において、前記体液が血液、胸水、組織液、リンパ液及び／又は腹水を含む。

【0192】

１つ又は複数の実施形態において、前記ＴＩＬ種細胞培地が前述した通りであり、引用によりその全文が本願に組み込まれているＰＣＴ／ＣＮ２０２１／０９６５８５に記載される内容を参照する。

【0193】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）に係るインキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃である。

【0194】

２つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）に係るインキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃である。

【0195】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）及びステップ（２）に係るインキュベートのＣＯ_２濃度が５％である。

【0196】

本発明は、ＴＩＬ細胞群体の製造方法であって、
ＴＩＬ種細胞培地で腫瘍細胞を含む組織をインキュベートして、第１のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（１）と、
（１）に係る第１のＴＩＬ細胞群体を、前述した培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体の何れか１種又は複数種に接触させて、第２のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（２）と、
（２）に係る第２のＴＩＬ細胞群体を、前述した培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体を除く成分の何れか１種又は複数種を含む培地に移し、培養して、第３のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（３）と、を含む方法をさらに提供する。

【0197】

１つ又は複数の実施形態において、前記腫瘍組織ががん患者から取得される。

【0198】

１つ又は複数の実施形態において、前記腫瘍組織が手術又は生検により取得した腫瘍組織である。

【0199】

１つ又は複数の実施形態において、前記腫瘍組織に対して前処理を行う。１つ又は複数の実施形態において、前記前処理が腫瘍組織を破砕及び／又は解離することを含む。

【0200】

１つ又は複数の実施形態において、前記腫瘍組織に対して機械切断の方式により破砕した組織ブロックを形成する。

【0201】

１つ又は複数の実施形態において、前記破砕した組織ブロックのサイズが２×２×２ｍｍ^３、３×３×３ｍｍ^３、４×４×４ｍｍ^３、５×５×５ｍｍ^３、又は６×６×６ｍｍ^３である。

【0202】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）のＴＩＬ種細胞培地が前述したＴＩＬ種細胞培地である。

【0203】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）に係るインキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃である。

【0204】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）に係るインキュベートのＣＯ_２濃度が５％である。

【0205】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）のインキュベートが少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間継続する。

【0206】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（１）のインキュベートが多くとも２０日間、多くとも１５日間、多くとも１４日間、多くとも１３日間、多くとも１２日間、多くとも１１日間、多くとも１０日間、多くとも９日間、多くとも８日間、多くとも７日間、多くとも６日間、多くとも５日間継続する。

【0207】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係るマトリックスにカップリングする抗体がＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体の何れか１種又は複数種を含み、好ましくは、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体を含み、より好ましくは、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体を含む。

【0208】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係るマトリックスがマルチウェルプレート、細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグである。

【0209】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係るカップリングが共有結合又は非共有結合によるカップリングによるカップリングである。

【0210】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係る接触が、ステップ（１）に係る第１のＴＩＬ細胞群体をマトリックスにカップリングする抗体と共にインキュベートすることであり、好ましくは、前記インキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃である。好ましくは、前記インキュベートのＣＯ_２濃度が５％である。

【0211】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）において、前記インキュベートが、前述した培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体を除く成分の何れか１種又は複数種を含む培地で行われる。

【0212】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係る接触が１～３日間継続する。好ましくは、２～３日間継続する。

【0213】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係る第１のＴＩＬ細胞群体の密度が１．０×１０^５／ｍＬ～１．０×１０^６／ｍＬであり、好ましくは、２．０×１０^５／ｍＬ～１．０×１０^６／ｍＬであり、より好ましくは、２．５×１０^５／ｍＬ～３．５×１０^６／ｍＬである。

【0214】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）の培養が少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間継続する。

【0215】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）の培養が多くとも２０日間、多くとも１５日間、多くとも１４日間、多くとも１３日間、多くとも１２日間、多くとも１１日間、多くとも１０日間、多くとも９日間、多くとも８日間、多くとも７日間、多くとも６日間、多くとも５日間継続する。

【0216】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）に係る培養の温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃である。

【0217】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）に係る培養のＣＯ_２濃度が５％である。

【0218】

本発明は、本明細書の何れか１つの実施形態に係る方法で取得するＴＩＬ細胞群体をさらに提供する。

【0219】

本発明は、本明細書の何れか１つの実施形態に係る方法で取得するＴＩＬ細胞群体の、がんを治療するための薬物の製造における用途をさらに提供する。

【0220】

１つ又は複数の実施形態において、前記がんが、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫から選ばれる。

【0221】

本発明は、前述した本明細書の何れか１つの実施形態に係る方法で取得するＴＩＬ細胞群体と、薬学的に許容される添加物とを含む、医薬組成物をさらに提供する。

【0222】

１つ又は複数の実施形態において、前記医薬組成物が、本明細書の何れか１つの実施形態に係る方法で取得するＴＩＬ細胞群体とヒドロキシクロロキンとを含む。好ましくは、前記医薬組成物が化学療法薬をさらに含む。より好ましくは、前記化学療法薬がシクロホスファミドである。

【0223】

本発明は、前述した本明細書の何れか１つの実施形態に係る方法で取得するＴＩＬ細胞群体と凍結保存液とを含む、細胞凍結保存製剤をさらに提供する。

【0224】

１つ又は複数の実施形態において、前記凍結保存液が細胞凍結保存液又は組織凍結保存液である。

【0225】

１つ又は複数の実施形態において、前記凍結保存液が無血清凍結保存液であり、例えば、ＢｉｏＬｉｆｅ ＳｏｌｕｔｉｏｎｓのＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０凍結保存液である。

【0226】

本発明は、
固形腫瘍患者の腫瘍組織を取得して、前述したＴＩＬ細胞群体の製造方法でＴＩＬ細胞を製造するステップ（１）と、
固形腫瘍患者に対して前処理を行うステップ（２）と、
前処理が行われた固形腫瘍患者に（１）におけるＴＩＬ細胞を注入するステップ（３）と、を含む固形腫瘍の治療方法をさらに提供する。

【0227】

１つ又は複数の実施形態において、前記固形腫瘍の治療方法が、
治療効果について評価するステップ（４）をさらに含んでもよい。

【0228】

１つ又は複数の実施形態において、前記固形腫瘍が、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫を含む。

【0229】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係る前処理が、前記固形腫瘍患者に対して化学療法薬とヒドロキシクロロキンを投与することを含む。１つ又は複数の実施形態において、前記化学療法薬がシクロホスファミドである。

【0230】

１つ又は複数の実施形態において、前記シクロホスファミドの用量が５～５０ｍｇ／ｋｇ／日である。好ましくは、２０～５０ｍｇ／ｋｇ／日である。より好ましくは、２０～２５ｍｇ／ｋｇ／日である。

【0231】

１つ又は複数の実施形態において、前記ヒドロキシクロロキンの用量が４００ｍｇ／日～８００ｍｇ／日である。好ましくは、５００ｍｇ／日～８００ｍｇ／日である。より好ましくは、６００ｍｇ／日～８００ｍｇ／日である。

【0232】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係る前処理が、ＴＩＬ細胞注入前の６日目－注入前の３日目の任意の１日間、２日間又は３日間で行われる。好ましくは、前記前処理が、ＴＩＬ細胞注入前の５日目、４日目及び３日目で行われる。

【0233】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（２）に係る前処理が、ＴＩＬ細胞注入前の５日目で前記固形腫瘍患者に経口により４００～８００ｍｇのヒドロキシクロロキンを、静脈注射により５～５０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドを投与し、注入前の４日目と３日目で前記固形腫瘍患者に静脈注射により５～５０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドをそれぞれ投与することを含む。

【0234】

１つ又は複数の実施形態において、前記シクロホスファミドが静脈注射又は経口により投与される。

【0235】

１つ又は複数の実施形態において、前記ヒドロキシクロロキンが静脈注射又は経口により投与される。

【0236】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）に係る（１）におけるＴＩＬ細胞が本明細書に係る細胞凍結保存製剤に存在する。

【0237】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）に係る自己注入するＴＩＬ細胞の数が１．０×１０^１０～１．２×１０^１１個のＴＩＬ細胞である。好ましくは、２．０×１０^１０～８．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞である。より好ましくは、２．０×１０^１０～５．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞である。さらに好ましくは、２．０×１０^１０～４．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞である。

【0238】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）に係る自己注入するＴＩＬ細胞の数が、１．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞、１．５×１０^１０個のＴＩＬ細胞、２．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞、２．５×１０^１０個のＴＩＬ細胞、３．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞、３．５×１０^１０個のＴＩＬ細胞、４．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞、４．５×１０^１０個のＴＩＬ細胞、５．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞、５．５×１０^１０個のＴＩＬ細胞、６．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞、６．５×１０^１０個のＴＩＬ細胞、７．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞、７．５×１０^１０個のＴＩＬ細胞、８．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞、８．５×１０^１０個のＴＩＬ細胞、９．０×１０^１０個のＴＩＬ細胞、９．５×１０^１０個のＴＩＬ細胞、１．０×１０^１１個のＴＩＬ細胞、１．２×１０^１０個のＴＩＬ細胞である。

【0239】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）に係る注入するＴＩＬ細胞の細胞製剤の細胞密度が１．０×１０^８／ｍＬ～２．０×１０^８／ｍＬである。

【0240】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）に係る注入するＴＩＬ細胞の細胞製剤の体積が２００ｍＬ～６００ｍＬである。

【0241】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（３）に係る自己注入が静脈注射により行われる。

【0242】

１つ又は複数の実施形態において、ステップ（４）に係る治療効果評価が腫瘍イメージング評価と腫瘍マーカー発現レベル評価を含む。

【0243】

１つ又は複数の実施形態において、前記腫瘍イメージング評価がＣＴ及び／又はＭＲＩにより行われる。好ましくは、前記腫瘍イメージング評価の基準がＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１である。

【0244】

１つ又は複数の実施形態において、前記腫瘍マーカー発現レベルが免疫組織化学、血液指標検出及び／又はハイスループットシークエンシング検出により行う。

【0245】

発明の優位性：
１）本発明は、ＩＬ－２を除くサイトカインと活性化型抗体を導入するなど、成分が最適化された増幅培地を使用することで、インビトロ培養過程において腫瘍微小環境で抑制されるＴＩＬ細胞を再度効果的に活性化させることができる。
２）ＩＬ－２の用量を大量に低減すると共に、細胞増殖と活性を保証し、潜在的な細胞疲弊リスクを低減するほか、最適化されたインビトロ培養プロセスで培養するＴＩＬ細胞のＩＬ－２に対する依存度を大幅に低減する。
３）本発明に係るＴＩＬ細胞培地及びＴＩＬ細胞培養方法で培養するＴＩＬは、ＩＬ－２に対する依存度が大幅に低減したため、臨床患者に注入する前の前処理において通常の治療案では必要とされる化学療法薬のフルダラビンを無くすことができ、使用される化学療法薬のシクロホスファミドの用量が現在の通常用量より大幅に低減したほか、通常のＴＩＬ注入後にＩＬ－２を大用量で注射することに対して、注入後にＩＬ－２を注射しなくても、生体内において効率的且つ安定的に増殖することができ、且つ高グレードの有害事象がないことから、顕著でプラスの治療効果が示されると共に、臨床の副作用が大幅に低減された。また、一部の身体症状が悪化し、高用量のＩＬ－２治療に耐えられない末期固形腫瘍患者に対しても、本発明に係る培養法で製造するＴＩＬ細胞を利用して自己注入治療を施すことができ、即ち、本発明に係るＴＩＬ細胞培地及びＴＩＬ細胞培養方法で製造するＴＩＬ細胞はより多くの潜在的な固形腫瘍患者に対応できる。
４）本発明に係るＴＩＬ細胞は、増幅過程においてフィーダー細胞（例えば、外来同種異系ＰＢＭＣ又はその他の細胞）を使用しないため、外来汚染を減少すると共に、製造プロセスを大幅に簡略化し、製造コストを削減し、製造時間を短縮した。本発明に係る培地でＴＩＬ細胞を製造することで、フィーダー細胞を使用せずに１０^１０～１０^１１細胞を素早く取得することができる。

【図面の簡単な説明】

【0246】

【図1】組織サンプルＴ００１に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図2】組織サンプルＴ００２に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図3】組織サンプルＴ００３に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図4】組織サンプルＴ００４に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図5】組織サンプルＴ００５に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図6】組織サンプルＴ００６に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図7】組織サンプルＴ００７に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図8】組織サンプルＴ００８に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図9】組織サンプルＴ００９に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図10】組織サンプルＴ０１０に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図11】組織サンプルＴ０１１に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図12】組織サンプルＴ０１２に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図13】組織サンプルＴ０１３に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図14】組織サンプルＴ０１４に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図15】組織サンプルＴ０１５に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図16】組織サンプルＴ０１６に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図17】組織サンプルＴ０１７に由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果図である。

【図18】Ｔ００１に由来するＴＩＬの標的細胞ＨＧＣ２７に対するＲＴＣＡ殺傷効果図である。

【図19】Ｔ００２に由来するＴＩＬの標的細胞Ａ３７５に対するＲＴＣＡ殺傷効果図である。

【図20】Ｔ００３に由来するＴＩＬの標的細胞ＨｅＬａに対するＲＴＣＡ殺傷効果図である。

【図21】Ｔ００５に由来するＴＩＬの標的細胞ＨＧＣ２７に対するＲＴＣＡ殺傷効果図である。

【図22】Ｔ００４に由来するＴＩＬの標的細胞ＨＧＣ２７に対するＲＴＣＡ殺傷効果図である。

【図23】Ｔ００６に由来するＴＩＬの同種腫瘍オルガノイドに対する殺傷効果図である。

【図24】Ｔ００１に由来するＴＩＬの、ＨＧＣ２７により誘導されるＣＤＸ腫瘍組織マウスモデルに対する殺傷効果である。

【図25】Ｔ００２に由来するＴＩＬの、Ａ３７５により誘導される腫瘍組織ＣＤＸマウスモデルに対する殺傷効果である。

【図26】Ｔ００８に由来するＴＩＬの相同的対合のＰＤＸ腫瘍組織マウスモデルに対する殺傷効果図である。

【図27】Ｔ００７に由来するＴＩＬの相同的対合のＰＤＸ腫瘍組織マウスモデルに対する生体内腫瘍トロピズム効果図である。

【図28】ＴＩＬ細胞注入治療を受けたＴ００９患者の各時点のイメージング評価結果である。

【図29】Ｔ００９患者の注入前から注入約１２０日後の期間内の、末梢血における白血球、好中球及びリンパ球の数の変化傾向曲線図である。

【図30】Ｔ００９患者の注入前から注入２０日後の期間内の、末梢血における白血球、好中球及びリンパ球の数の変化傾向曲線図である。

【図31】Ｔ００９患者の末梢血に注入するＴＩＬ細胞のＴＣＲクローン型の頻度及びリンパ球の総数の経時変化の重ね合せ傾向である。

【発明を実施するための形態】

【0247】

ＴＩＬ細胞培養の外来汚染を減少すると共に、製造プロセスを簡略化し、製造コストを削減し、製造時間を短縮するために、本発明者らは、腫瘍組織でＴＩＬ細胞を製造するための増幅（ＲＥＰ）培地、及びＴＩＬ細胞を製造又は増幅するための方法を開発した。これらの培地でＴＩＬ細胞を処理することで、フィーダー細胞を使用しなくても、１０^１０～１０^１１以上の細胞を素早く増幅することができる。

【0248】

用語の定義
本願において、通常、用語「インターフェロン」はウイルス複製と細胞増殖を抑制すると共に、免疫応答を調節し、高度な種特異性を有するタンパク質ファミリーである。代表的且つ適切なインターフェロンとして、組換えインターフェロンα－２ｂ、組換えインターフェロンα－２ａ、組換えインターフェロンα－２Ｃ、インターフェロンα－ｎ１、コンセンサスαインターフェロン、又はインターフェロンα－ｎ３を含むが、これらに限定されない。

【0249】

本願において、通常、用語「コロニー刺激因子」は分泌型グリコプロテインであり、造血幹細胞の表面における受容体タンパク質に結合することで、細胞内のシグナル伝達経路を活性化させて、細胞が増殖して、特定種類の血細胞（通常、白血球であり、赤血球の形成について、エリスロポエチンを参照）に分化することに繋がる。これらは人工的に合成してもよく、外部から投与してもよい。

【0250】

本願において、通常、用語「抗原結合断片」は抗体分子の一部であり、抗体と抗原との特異的結合を担当するアミノ酸を含む。抗原における、抗体によって特異的に認識及び結合する部分は、上記に示される「エピトープ」と呼ばれる。上記に示されるように、抗原結合ドメインは抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を代表的に含んでもよいが、必ずしも両者共に含むとも限らない。Ｆｄ断片は、例えば、通常、２つのＶＨ領域を有すると共に、完全抗原結合ドメインの幾つかの抗原結合機能を保持する。抗体の抗原結合断片の例は、（１）ＶＬ、ＶＨ、定常軽鎖（ＣＬ）、ＣＨ１ドメインを有する、一価断片であるＦａｂ断片、（２）ヒンジ領域のジスルフィド架橋により連結される２つのＦａｂ断片を有する、二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（３）２つのＶＨとＣＨ１ドメインを有するＦｄ断片、（４）抗体シングルアームのＶＬとＶＨドメインを有するＦｖ断片、（５）ＶＨドメインを有するｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、“Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ａ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｏｆ Ｓｉｎｇｌｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｆｒｏｍ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，”Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６（１９８９）、その全文が引用の形で本明細書に組み込まれる）、（６）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び（７）例えば、ｓｃＦＶ－ライブラリーに由来する一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは、独立した遺伝子によりコードされるが、組換え法を利用して合成コネクソンにより連結してもよい。Ｆｖ断片は、合成コネクソンによりそのＶＬ及びＶＨ領域がペアリングするように製造されて、一価分子である単一のタンパク質鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）とも呼ばれる）が形成される（例えば、Hustonら,“Protein Engineering of Antibody Binding Sites: Recovery of Specific Activity in an Anti-Digoxin Single-Chain Fv Analogue Produced in Escherichia coli,”Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883(1988)を参照）。これらの抗体断片が当業者に知られている通常の技術により取得され、且つ前記断片の機能が完全抗体と同様に評価される。本願において、用語「抗原結合断片」は、抗原、特に細胞表面受容体分子抗原に特異的に結合するリガンドをさらに含む。通常、リガンドは、機能的反応を引き起こすように、高親和力及び特異的な方式で受容体タンパク質（例えば、前記抗原）に結合できるポリペプチド又は化合物である。例えば、前記リガンドが、ＣＤ４０のリガンドＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１３７のリガンドＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２８のリガンドＣＤ８０及び／又はＯＸ－４０のリガンドＯＸ－４０Ｌを含んでもよい。

【0251】

本願において、通常、用語「免疫チェックポイント」はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞表面における１組の分子である。これらの分子は、抗腫瘍免疫応答をダウンレギュレーション又は抑制する「ブレーキ」として効果的に機能できる。ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質のレベルを抑制することで、これらの抑制分子を抑制してもよい。

【0252】

本願において、通常、用語「活性化型抗体」は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞のＴ細胞表面受容体に対応する抗体であり、前記Ｔ細胞表面受容体が例えば、ＴＣＲ及び／又は共刺激受容体である。これらの抗体は、ＴＣＲ及び／又は共刺激受容体に結合することで、これらの受容体の下流にある活性化シグナル経路を活性化させ、前記免疫細胞の活性化と増殖のレベルを顕著に向上させることができる。

【0253】

本願において、通常、用語「共刺激受容体」は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の表面に発現する、活性化免疫応答反応が依存する受容体である。共刺激受容体は、抗原提示細胞が存在し、且つ第１のシグナルが提供された前提で、その対応する活性化型抗体、リガンド又は抗原結合断片に結合することで、共刺激シグナルをオンにして、免疫エフェクター細胞を完全に活性化させる。通常、共刺激受容体に仲介されるシグナル経路の活性化は、免疫応答の効果的な発生にとって、重要な役割を果たしている。よく使われる共刺激受容体がＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１３７、及びＯＸ－４０を含むが、これらに限定されない。

【0254】

本願において、通常、用語「腫瘍壊死因子ＴＮＦ」はＴＮＦタンパク質であり、ＴＮＦリガンドのスーパーファミリーではない。ヒトＴＮＦαのＧｅｎｂａｎｋ登録番号はＮＰ＿０００５８５．２である。用語「ＴＮＦα」は、ＴＮＦαの前駆体形態、前ＴＮＦα（ｐｒｏ－ＴＮＦα）、完全長ＴＮＦα、及び細胞内のプロセスで発生される任意の形態のＴＮＦαを含む。該用語は、例えば、スプライスバリアント、アレルバリアント、及びアイソタイプなど、ＴＮＦαの天然存在及び非天然存在バリアントをさらに含む。ＴＮＦαがＴＮＦＲ１（１型ＴＮＦ受容体、ＣＤ１２０ａ、ｐ５５／６０）及びＴＮＦＲ２（２型ＴＮＦ受容体、ＣＤ１２０ｂ、ｐ７５／８０）の２つの受容体に結合できる。ＴＮＦαは炎症性サイトカインの働きを果たし、例えば、神経炎において機能する。

【0255】

本願において、通常、用語「腫瘍浸潤リンパ球」は腫瘍組織から単離された浸潤リンパ球である。免疫組織化学染色によれば、腫瘍浸潤リンパ球がＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ２０＋、ＣＤ７９α＋Ｂ細胞、形質細胞、及びＣＤ５６＋ＮＫ細胞を含んでもよく、Ｔ細胞、少量のＢ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、及び樹状細胞をさらに含んでもよい。前記腫瘍浸潤リンパ球は、そのまま細胞傷害性Ｔリンパ球或いは分泌サイトカインを介して効率的且つ高特異的な抗腫瘍細胞傷害効果を果たす。本願において、前記腫瘍浸潤リンパ球が単球白血球を含んでもよく、前記単球白血球が血液から離れて腫瘍に遷移する。前記腫瘍浸潤リンパ球が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞からなる群より選ばれてもよい。

【0256】

本願において、通常、用語「種細胞」は、本願に係る培地を含む任意の適切な培地で腫瘍組織から培養した腫瘍浸潤リンパ球である。これらの細胞は、その後培養をさらに拡大する開始細胞群体としてもよく、例えば、被験者個体に注入治療を施すための細胞群体など、最終用途の細胞群体としてもよい。前記種細胞は任意の異なる培養時間で腫瘍組織から取得してもよい。前記種細胞の培養時間が特定の培養時間に限定されず、前記種細胞のその後の用途によって決定してもよい。

【0257】

本願において、通常、用語「ＩＬ－１５」はＴ細胞（特に、腸管上皮細胞間リンパ球（ＩＥＬ））及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の有効成長因子、生存因子、活性化因子に当たる炎症性サイトカインであり、「ＩＬ－１５抗原」及び「インターロイキン１５」とも呼ばれてもよい。ＣＤ、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬を含む複数種の炎症性疾患において、ＩＬ－１５の発現増加が証明された（Ｍａｌａｍｕｔら、２０１０）。ＩＬ－１５はＣＤ免疫病理の中心調節因子及びＲＣＤにおいてリンパ腫を形成する非冗長駆動因子と考えられる。

【0258】

本願において、通常、用語「ＩＬ－２」は、リンホカインにより誘導されて、正常な末梢血リンパ球から発生すると共に低濃度で生体内に存在するタンパク質である。ＩＬ－２は最初にＭｏｒｇａｎら（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ１９３：１００７－１００８に記述されており、Ｔリンパ球の増殖を誘導・刺激することができるため、当初Ｔ細胞成長因子と呼ばれる。該用語は、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、ＩＬ－２の発現後修飾のタンパク質も含む。

【0259】

本願において、通常、用語「ＩＬ－７」はＩＬ－７遺伝子によりコードされるタンパク質である。ＩＬ－７は骨髄及び胸腺における間質細胞が分泌する造血成長因子であり、角化細胞、樹状細胞、肝細胞、神経細胞や上皮細胞から発生できる。ＩＬ－７はＴ細胞及びＢ細胞に対する作用に関する。

【0260】

本願において、通常、用語「ＰＤ－１」はＣＤ２８ファミリーに属する免疫抑制性受容体である。ＰＤ－１は主にその前に活性化したＴ細胞にインビボで発現すると共に、ＰＤ－１とＰＤ－２の２種のリガンドに結合する。完全なｈＰＤ－１配列はＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ６４８６３を参照する。

【0261】

本願において、通常、用語「ＬＹＣ－５５７１６」はＲＯＲγ活性化剤であり、そのＣＡＳ番号が２０５５５３６－６４－４である。

【0262】

本願において、通常、用語「ＧＮＥ－１８５８」はＨＰＫ１阻害剤であり、そのＣＡＳ番号がＴ１１４３８である。

【0263】

本願において、通常、用語「ＴＷＳ１１９」はＧＳＫ－３阻害剤であり、そのＣＡＳ番号が６０１５１４－１９－６である。

【0264】

本願において、通常、用語「ＲＲＸ－００１」は放射線増感活性を有するエピジェネティクス調整剤である。前記ＲＲＸ－００１は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα軸をダウンレギュレーションすることができると共に、腫瘍微小環境におけるＴＡＭ及びその他の免疫サプレッサー細胞を免疫刺激表現型に改めて極性化する。そのＣＡＳ番号が９２５２０６－６５－１である。

【0265】

本願において、通常、用語「ＣＮＩ－１４９３」は炎症性サイトカイン（ＴＮＦを含む）の産生を阻害できる化合物であり、そのＣＡＳ番号が１６４３０１－５１－３である。

【0266】

本明細書において、用語「ＴＩＬ誘導」は動物の腫瘍からＴＩＬ細胞を単離する過程である。ＴＩＬ細胞をインビトロで所定数に増幅した後、動物の生体内に注入することで、腫瘍の成長や転移を抑制する効果が得られる。

【0267】

本発明は、開放術又は最小侵襲手術で取得する腫瘍組織を含む任意の腫瘍組織からＴＩＬを単離することに適する。例示的な腫瘍組織は、例えば、胃がん、甲状腺腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、肺がん、黒色腫、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肝がん、結腸直腸がん、神経膠腫、膵臓がん、膀胱がん、前立腺がん、腎がん、骨肉腫などのがんの腫瘍組織である。

【発明の詳細な説明】

【0268】

本発明は、ＴＩＬ細胞を増幅するための培養組成物及び培地を提供する。前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５及び免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片を含む。幾つかの形態において、前記培養組成物がＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、及びメモリーＴ細胞の比率を向上させる小分子の何れか１種、２種、３種又は４種をさらに含む。前記メモリーＴ細胞の比率を向上させる小分子がＴＷＳ１１９を含むが、これに限定されない。

【0269】

前記免疫チェックポイント抗体がＰＤ－１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＬＡＧ３抗体、ＴＩＭ３抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＢＴＬＡ抗体から選ばれる何れか１種又は複数種である。

【0270】

前記培養組成物がＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＯＸ４０抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＩＣＯＳ、ＣＤ２０６抗体、ＣＤ４０抗体の何れか１種又は複数種をさらに含んでもよい。好ましくは、前記培養組成物がＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体の何れか１種、２種、３種又は４種をさらに含む。本明細書に係る培養組成物又は培地における抗体が分散又は固定の形態で存在してもよい。例えば、上記１種又は複数種の抗体がマトリックス（例えば、固体マトリックス）に結合されてもよい。特定の例示的な一実施形態において、前記固体マトリックスが微小球、例えば、磁気ビーズである。特定の例示的な一実施形態において、前記固体マトリックスが細胞培養用プレートであり、例えば、ウェルプレート、ディッシュ、細胞培養フラスコ又は細胞培養バッグである。

【0271】

本明細書において、免疫チェックポイント抗体が免疫細胞における自己免疫機能を調節するタンパク質分子に対する抗体である。

【0272】

本明細書において、本分野に知られている通り、天然の完全抗体は四量体であり、２本の同じ重鎖ポリペプチドと２本の同じ軽鎖ポリペプチドを含む。各重鎖が、少なくとも４つのドメイン、即ち、アミノ末端の可変ドメインＶＨ、定常ドメインＣＨ１、定常ドメインＣＨ２、カルボキシ末端の定常ドメインＣＨ３を含む。各軽鎖が、２つのドメイン、即ち、アミノ末端の可変ドメインＶＬ、カルボキシ末端の定常ドメインＣＬを含む。各可変領域が、３つの「相補性決定領域」、即ち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及び４つの「フレームワーク」領域、即ち、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４を含む。「抗原結合断片」は、抗体における標的抗原に特異的に結合できる断片を示す。抗体又はその抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合により結合されたＦｖ断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単離されたＣＤＲ又はＣＤＲグループ、ポリペプチド－Ｆｃ融合体、単一ドメイン抗体、ラクダ科抗体、マスキング抗体、小型モジュール免疫薬、二機能抗体、ナノボディ抗体、Ｈｕｍａｂｏｄｙ抗体を含む。

【0273】

具体的な実施形態において、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＧＭ－ＣＳＦを含む。或いは、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体を含む。或いは、前記培養組成物がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＷＳ１１９を含む。

【0274】

本発明に係るＴＩＬ細胞増幅培地が、本明細書に係るＴＩＬ細胞を増幅するための培養組成物、血清及び／又は血小板、並びに基礎培地を含む。本明細書に係る培養組成物又は培地が抗生物質をさらに含んでもよい。好ましくは、前記抗生物質がペニシリン、ストレプトマイシンから選ばれる１種又は複数種である。

【0275】

本明細書に係る培養組成物又は培地において、ＩＬ－２の濃度が２００～６０００ＩＵ／ｍＬであり、例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００ＩＵ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、ＩＬ－７の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであり、例えば、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｎｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、ＩＬ－１５の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであり、例えば、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｎｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、ＰＤ－１抗体の濃度が１～１００μｇ／ｍＬであり、例えば、１、２、３、５、７、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、ＩＬ－２１の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであり、例えば、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｎｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、ＩＬ－１２の濃度が５～１００ｎｇ／ｍＬであり、例えば、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｎｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、ＣＤ３抗体の濃度が０．５～１０μｇ／ｍＬであり、例えば、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、ＣＤ２８抗体の濃度が０．５～１０μｇ／ｍＬであり、例えば、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、ＣＤ１３７抗体の濃度が１～１００μｇ／ｍＬであり、例えば、１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、培養組成物におけるＧＩＴＲ抗体の濃度が１～１００μｇ／ｍＬであり、例えば、１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μｇ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、培養組成物におけるＧＭ－ＣＳＦの濃度が２００～５０００Ｕ／ｍＬであり、例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００Ｕ／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲であり、ＴＷＳ１１９の濃度が１～５００μＭであり、例えば、１、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００μＭ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。

【0276】

具体的な実施形態において、本明細書に係る培養組成物又は培地が、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。好ましくは、前記培養組成物又は培地が、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。より好ましくは、前記培養組成物又は培地が、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。前記培地が、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、ＯｐＴｍｉｚｅｒ^ＴＭをさらに含む。

【0277】

別の具体的な実施形態において、本明細書に係る培養組成物又は培地が、２００～６０００ＩＵのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。好ましくは、前記培養組成物又は培地が、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。より好ましくは、前記培養組成物又は培地が、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を含む。前記培地が、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、ＯｐＴｍｉｚｅｒ^ＴＭをさらに含む。

【0278】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物又は培地が、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。好ましくは、前記培養組成物又は培地が、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。より好ましくは、前記培養組成物又は培地が、２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。前記培地が、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、ＡＩＭ－Ｖをさらに含む。

【0279】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物又は培地が、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。好ましくは、前記培養組成物又は培地が、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。より好ましくは、前記培養組成物又は培地が、２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。前記培地が、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、ＡＩＭ－Ｖをさらに含む。

【0280】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物又は培地が、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。好ましくは、前記培養組成物又は培地が、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。より好ましくは、前記培養組成物又は培地が、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。前記培地が、自家血小板、ＰＳ二重特異性抗体、Ｘ－ＶＩＶＯをさらに含む。

【0281】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物又は培地が、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。好ましくは、前記培養組成物又は培地が、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。より好ましくは、前記培養組成物又は培地が、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２．５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。前記培地が、自家血小板、ＰＳ二重特異性抗体、Ｘ－ＶＩＶＯをさらに含む。

【0282】

その他の具体的な実施形態において、前記培養組成物又は培地が、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１～５００μＭのＴＷＳ１１９を含む。好ましくは、前記培養組成物又は培地が、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１～１００μＭのＴＷＳ１１９を含む。より好ましくは、前記培養組成物又は培地が、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１０μＭのＴＷＳ１１９を含む。或いは、より好ましくは、前記培養組成物又は培地が、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：４０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：４０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：２μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１０μＭのＴＷＳ１１９を含む。前記培地が、他家血小板、ＰＳ二重特異性抗体、ＭＨＭ－Ｃをさらに含む。

【0283】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ３抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ２８抗体：５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。

【0284】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。好ましくは、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、及び２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0285】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。

【0286】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。好ましくは、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、及び２００～１０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、３μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、及び５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0287】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体を含む。好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ３抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ２８抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ１３７抗体を含む。

【0288】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、及びマトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。好ましくは、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、及びマトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ３抗体、細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ２８抗体、及び細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ１３７抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0289】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：１～５００μＭのＴＷＳ１１９を含む。好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：１～１００μＭのＴＷＳ１１９を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：２μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：１０μＭのＴＷＳ１１９を含む。

【0290】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、及び１～５００μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。好ましくは、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、及び１～１００μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、成分として、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、２μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、及び１０μＭのＴＷＳ１１９、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0291】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：７ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：２μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦを含む。

【0292】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、及び２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。好ましくは、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、及び２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、７ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、２μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、及び５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0293】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１：１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２：０．５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体：１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体：２．５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体を含む。

【0294】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５～１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。好ましくは、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、０．５～５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、１～５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び１～５μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、成分として、４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１２、０．５μｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、２．５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、及び３μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0295】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体：１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの自家血小板を含む。好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体：１×１０^８～３×１０^８／ｍＬの自家血小板を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ３抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ２８抗体：細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグにカップリングするＣＤ１３７抗体：２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体：２μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体：３μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体：３×１０^８／ｍＬの自家血小板を含む。

【0296】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体、及び１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの自家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。好ましくは、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体、及び１×１０^８～３×１０^８／ｍＬの自家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、成分として、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ１３７抗体、２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体、２μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体、３μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体、及び３×１０^８／ｍＬの自家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0297】

別の１つ又は複数の実施形態において、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの他家血小板を含む。好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：１～５０μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１×１０^８～３×１０^８／ｍＬの他家血小板を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、下記比率の各成分、即ち、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２：１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７：３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５：１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体：２μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体：マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体：５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体：２μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体：２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ：１×１０^８／ｍＬの他家血小板を含む。

【0298】

別の具体的な実施形態において、前記培養組成物が、成分として、２００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～１００μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５０００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１×１０^８～５×１０^８／ｍＬの他家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。好ましくは、前記培養組成物が、成分として、２００～５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、５～５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１～５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、１～５０μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００～５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１×１０^８～３×１０^８／ｍＬの他家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。より好ましくは、前記培養組成物が、成分として、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体、２μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ３抗体、マトリックスにカップリングするＣＤ２８抗体、５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体、２μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗体、２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、及び１×１０^８／ｍＬの他家血小板、又はこれらの成分の同率濃縮物を含む。

【0299】

本明細書に係る抗体が任意の種に由来する抗体又は組換え抗体であってもよく、好ましくは、モノクローナル抗体である。これらの抗体が本分野において周知されており、例えば、ＰＤ－１抗体Ｔｉｓｌｅｌｉｚｕｍａｂ、ＰＤ－１抗体Ｓｉｎｔｉｌｉｍａｂ、ＰＤ－１抗体Ｔｏｒｉｐａｌｉｍａｂ、ＰＤ－１抗体Ｃａｍｒｅｌｉｚｕｍａｂ、ＣＤ３抗体ａｂ８６８８３、ＣＤ２８抗体ＭＡＢ３４２、ＣＮ１０３９５１７５３ＢにおけるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５に示されるＧＩＴＲ抗体、ＣＮ１１１１８２９１９ＡにおけるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示されるＣＤ１３７抗体である。これらの特許文献又は開示は引用により全文が本願に組み込まれている。

【0300】

上記誘導組成物又は培地において、ＣＤ３抗体とＣＤ２８抗体の濃度比が３：１～１：６、２：１～１：５、１：１～１：４である。上記増幅組成物又は培地において、ＣＤ３抗体とＣＤ２８抗体の濃度比が３：１～１：６、２：１～１：５、１：１～１：４であり、ＣＤ３抗体とＣＤ１３７抗体の濃度比が３：１～１：６、２：１～１：５、１：１～１：４である。

【0301】

本明細書に係る血清が本分野における既知の動物細胞（例えば、ＴＩＬ細胞）の培養に利用できる任意の血清であってもよく、例えば、ヒトＡＢ血清、対象自己血清又は動物由来血清である。血清の濃度が１～１０％であり、例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。

【0302】

本明細書に係る血小板が対象血液由来の血小板又は同種血由来の血小板であってもよい。血小板の密度が０．５×１０^８／ｍＬ～３×１０^８／ｍＬであり、例えば、０．５×１０^８／ｍＬ、１×１０^８／ｍＬ、１．５×１０^８／ｍＬ、２×１０^８／ｍＬ、２．５×１０^８／ｍＬ、３×１０^８／ｍＬ、又は上記数値の何れか２つの間の範囲である。

【0303】

本明細書に係る「基礎培地」が本分野における既知のＴＩＬ細胞の培養に利用できる任意の培地であり、ＡＩＭ－Ｖ、Ｘ－ＶＩＶＯ、ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ１６４０、ＯｐＴｍｉｚｅｒ、ＭＨＭ－Ｃを含むが、これらに限定されない。これらの培地は成分及び含有量が本分野において周知されており、その由来が実施例に記載されている。

【0304】

本明細書に係る方法で使用されるＴＩＬ種細胞培地が本分野における既知の腫瘍組織からＴＩＬ細胞の増殖を誘導できる任意の培地であってもよい。例示的なＴＩＬ種細胞培地はＰＣＴ／ＣＮ２０２１／０９６５８５に記載される通りであり、引用によりその全文が本明細書に組み込まれている。

【0305】

例えば、本明細書に係るＴＩＬ種細胞培地は、細胞培養成分、サイトカイン、免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片を含み、前記サイトカインがＩＬ－２を含み、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片を含み、前記細胞培養成分が血清培地又は無血清培地である。前記ＩＬ－２の濃度が約３０００ＩＵ／ｍＬ以下又は約２００ＩＵ／ｍＬ以下である。一態様において、本願は、細胞培養成分、サイトカイン、免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片を含み、前記サイトカインがＩＬ－２を含み、前記免疫チェックポイントがＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ及び／又はＣＴＬＡ－４を含み、前記細胞培養成分が血清培地又は無血清培地である、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞培地を提供する。

【0306】

本願において、前記サイトカインがヒト化サイトカインであってもよい。

【0307】

本願において、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がヒト化及び／又は完全ヒト化抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0308】

例えば、前記ＩＬ－２の濃度が約３０００ＩＵ／ｍＬ以下であってもよい（例えば、約２９００ＩＵ／ｍＬ以下、約２８００ＩＵ／ｍＬ以下、約２７００ＩＵ／ｍＬ以下、約２６００ＩＵ／ｍＬ以下、約２５００ＩＵ／ｍＬ以下、約２４００ＩＵ／ｍＬ以下、約２３００ＩＵ／ｍＬ以下、約２２００ＩＵ／ｍＬ以下、約２１００ＩＵ／ｍＬ以下、約２０００ＩＵ／ｍＬ以下、約１９００ＩＵ／ｍＬ以下、約１８００ＩＵ／ｍＬ以下、約１７００ＩＵ／ｍＬ以下、約１６００ＩＵ／ｍＬ以下、約１５００ＩＵ／ｍＬ以下、約１４００ＩＵ／ｍＬ以下、約１３００ＩＵ／ｍＬ以下、約１１００ＩＵ／ｍＬ以下、約１０００ＩＵ／ｍＬ以下、約９００ＩＵ／ｍＬ以下、約８００ＩＵ／ｍＬ以下、約７００ＩＵ／ｍＬ以下、約６００ＩＵ／ｍＬ以下、約５００ＩＵ／ｍＬ以下、約４００ＩＵ／ｍＬ以下、約３００ＩＵ／ｍＬ以下又はさらに低くてもよい）。例えば、前記ＩＬ－２の濃度が約２０００ＩＵ／ｍＬ以下、約２５００ＩＵ／ｍＬ以下、又は約３０００ＩＵ／ｍＬ以下であってもよい。

【0309】

例えば、前記サイトカインがＩＬ－７を含んでもよい。

【0310】

例えば、前記ＩＬ－７の濃度が約５～約１００ｎｇ／ｍＬであってもよい（例えば、約５～約９５ｎｇ／ｍＬ、約５～約９０ｎｇ／ｍＬ、約５～約８５ｎｇ／ｍＬ、約５～約８０ｎｇ／ｍＬ、約５～約７５ｎｇ／ｍＬ、約５～約７０ｎｇ／ｍＬ、約５～約６５ｎｇ／ｍＬ、約５～約６０ｎｇ／ｍＬ、約５～約５５ｎｇ／ｍＬ、約５～約５０ｎｇ／ｍＬ、約５～約４５ｎｇ／ｍＬ、約５～約４０ｎｇ／ｍＬ、約５～約３５ｎｇ／ｍＬ、約５～約３０ｎｇ／ｍＬ、約５～約２５ｎｇ／ｍＬ、約５～約２０ｎｇ／ｍＬ又は約５～約１０ｎｇ／ｍＬであってもよい）。例えば、前記ＩＬ－７の濃度が約２００～約１０００Ｕ／ｍＬであってもよい（例えば、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬ、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬ、又は少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬであってもよい）。本願において、前記ＩＬ－７の濃度が約２００～１０００ＩＵ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約１０００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0311】

例えば、前記サイトカインがＩＬ－１５を含んでもよい。

【0312】

例えば、前記ＩＬ－１５の濃度が約５～約１００ｎｇ／ｍＬであってもよい（例えば、約５～約９５ｎｇ／ｍＬ、約５～約９０ｎｇ／ｍＬ、約５～約８５ｎｇ／ｍＬ、約５～約８０ｎｇ／ｍＬ、約５～約７５ｎｇ／ｍＬ、約５～約７０ｎｇ／ｍＬ、約５～約６５ｎｇ／ｍＬ、約５～約６０ｎｇ／ｍＬ、約５～約５５ｎｇ／ｍＬ、約５～約５０ｎｇ／ｍＬ、約５～約４５ｎｇ／ｍＬ、約５～約４０ｎｇ／ｍＬ、約５～約３５ｎｇ／ｍＬ、約５～約３０ｎｇ／ｍＬ、約５～約２５ｎｇ／ｍＬ、約５～約２０ｎｇ／ｍＬ又は約５～約１０ｎｇ／ｍＬであってもよい）。例えば、前記ＩＬ－１５の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい（例えば、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬ、少なくとも約２５０Ｕ／ｍＬ、少なくとも約３００Ｕ／ｍＬ、又は少なくとも約５００Ｕ／ｍＬであってもよい）。本願において、前記ＩＬ－１５の濃度が２００～５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２５０ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３００ＩＵ／ｍＬ又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0313】

例えば、前記サイトカインが腫瘍壊死因子ＴＮＦを含んでもよい。

【0314】

例えば、前記サイトカインがＴＮＦαを含んでもよい。

【0315】

例えば、前記ＴＮＦαの濃度が約１０～約１００ｐｇ／ｍＬであってもよい（例えば、約１０～約９５ｐｇ／ｍＬ、約１０～約９０ｐｇ／ｍＬ、約１０～約８０ｐｇ／ｍＬ、約１０～約７０ｐｇ／ｍＬ、約１０～約６０ｐｇ／ｍＬ、約１０～約５０ｐｇ／ｍＬ、約１０～約４０ｐｇ／ｍＬ、約１５～約４０ｐｇ／ｍＬ、約１０～約２５ｐｇ／ｍＬ、約１５～約２５ｐｇ／ｍＬ、約１０～約３０ｐｇ／ｍＬ、約１０～約２０ｐｇ／ｍＬ、又は約１０～約１５ｐｇ／ｍＬであってもよい）。本願において、前記ＴＮＦ－αの濃度が約１０～１００ｐｇ／ｍＬであってもよい。例えば、約１０～１００ｐｇ／ｍＬ、約１５～１００ｐｇ／ｍＬ、約２０～１００ｐｇ／ｍＬ、又は約２５～１００ｐｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約１０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬであってもよい。

【0316】

例えば、前記サイトカインがコロニー刺激因子を含んでもよい。

【0317】

例えば、前記サイトカインがＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ及び／又はＭ－ＣＳＦを含んでもよい。

【0318】

例えば、前記ＧＭ－ＣＳＦの濃度が約２００～約５０００Ｕ／ｍＬであってもよい（例えば、約２００～約８００Ｕ／ｍＬ、約２００～約５００Ｕ／ｍＬ、約３００～約５０００Ｕ／ｍＬ、約５００～約５０００Ｕ／ｍＬ、約１０００～約５０００Ｕ／ｍＬ、約１５００～約５０００Ｕ／ｍＬ、約２０００～約５０００Ｕ／ｍＬ、約２５００～約５０００Ｕ／ｍＬ、約３０００～約５０００Ｕ／ｍＬ、約３５００～約５０００Ｕ／ｍＬ、約４０００～約５０００Ｕ／ｍＬ、又は約４５０００～約５０００Ｕ／ｍＬであってもよい）。例えば、約２００～約１０００Ｕ／ｍＬ、約２００～約８００Ｕ／ｍＬ、約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬ、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬ、又は少なくとも約８００Ｕ／ｍＬであってもよい。

【0319】

例えば、前記Ｇ－ＣＳＦの濃度が約３００Ｕ／ｍＬ～約１０００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、前記Ｇ－ＣＳＦの濃度が約５００～１０００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬ、又は少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬであってもよい。

【0320】

例えば、前記Ｍ－ＣＳＦの濃度が約３００Ｕ／ｍＬ～約８００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、前記Ｍ－ＣＳＦの濃度が約３００Ｕ／ｍＬ～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約３００Ｕ／ｍＬ、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬ、又は少なくとも約８００Ｕ／ｍＬであってもよい。

【0321】

例えば、前記サイトカインがインターフェロンを含んでもよい。

【0322】

例えば、前記サイトカインがＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α及び／又はＩＦＮ－βを含んでもよい。

【0323】

例えば、前記ＩＦＮ－γの濃度が約１０～約１０００ｎｇ／ｍＬであってもよい（例えば、約１５～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約２０～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約３０～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約４０～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約５０～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約６０～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約７０～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約８０～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約９０～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約１００～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約２００～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約３００～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約４００～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約５００～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約６００～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約７００～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約８００～約１０００ｎｇ／ｍＬ、又は約９００～約１０００ｎｇ／ｍＬであってもよい）。例えば、前記ＩＦＮ－γの濃度が約１０～約１０００ｎｇ／ｍＬであってもよい。例えば、前記ＩＦＮ－γの濃度が約３００～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約３００～約８００ｎｇ／ｍＬ、又は約３００～約５００ｎｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約３００ ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ ｎｇ／ｍＬ、又は少なくとも約１０００ ｎｇ／ｍＬであってもよい。

【0324】

例えば、前記ＩＦＮ－αの濃度が約５００Ｕ／ｍＬ～約１０００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬであってもよい。

【0325】

例えば、前記ＩＦＮ－βの濃度が約２００Ｕ／ｍＬ～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、前記ＩＦＮ－βの濃度が約２５０～約５００ｎｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｎｇ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬであってもよい。

【0326】

例えば、前記サイトカインがＩＬ－４、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１８、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１及び／又はＩＬ－１０をさらに含んでもよい。

【0327】

例えば、前記ＩＬ－４の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0328】

例えば、前記ＩＬ－１αの濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0329】

例えば、前記ＩＬ－１βの濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0330】

例えば、前記ＩＬ－６の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0331】

例えば、前記ＩＬ－９の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0332】

例えば、前記ＩＬ－１８の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0333】

例えば、前記ＩＬ－１２の濃度が約２００～約１０００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、前記ＩＬ－１２の濃度が約２００～約１０００Ｕ／ｍＬ、約２００～約５００Ｕ／ｍＬ、又は約３００～約１０００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２５０ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３００ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0334】

例えば、前記ＩＬ－２１の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、前記ＩＬ－２１の濃度が約２５０～約１０００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２５０ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0335】

例えば、前記ＩＬ－１０の濃度が約２００～約５００Ｕ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２５０ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３００ＩＵ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ＩＵ／ｍＬであってもよい。

【0336】

例えば、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0337】

例えば、前記ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片がヒトＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0338】

例えば、前記ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約１００μｇ／ｍＬであってもよい（例えば、約３～約１００μｇ／ｍＬ、約５～約１００μｇ／ｍＬ、約１０～約１００μｇ／ｍＬ、約１５～約１００μｇ／ｍＬ、約１６～約１００μｇ／ｍＬ、約１７～約１００μｇ／ｍＬ、約１８～約１００μｇ／ｍＬ、約１９～約１００μｇ／ｍＬ、約２０～約１００μｇ／ｍＬ、約２５～約１００μｇ／ｍＬ、約３０～約１００μｇ／ｍＬ、約３６～約１００μｇ／ｍＬ、約４０～約１００μｇ／ｍＬ、約４５～約１００μｇ／ｍＬ、約５０～約１００μｇ／ｍＬ、約５５～約１００μｇ／ｍＬ、約６０～約１００μｇ／ｍＬ、約６５～約１００μｇ／ｍＬ、約７０～約１００μｇ／ｍＬ、約８０～約１００μｇ／ｍＬ、又は約９０～約１００μｇ／ｍＬであってもよい）。本願において、前記ＰＤ－１ ｍＡｂの濃度が約３～１００μｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約３μｇ／ｍＬ、少なくとも約５μｇ／ｍＬ、少なくとも約１０μｇ／ｍＬ、少なくとも約１５μｇ／ｍＬ、少なくとも約２０μｇ／ｍＬ、少なくとも約２５μｇ／ｍＬ、少なくとも約３６μｇ／ｍＬ、少なくとも約５０μｇ／ｍＬ、又は少なくとも約１００μｇ／ｍＬであってもよい。

【0339】

例えば、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がヒトＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0340】

例えば、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片であってもよく、前記ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片の濃度が約３～約１０μｇ／ｍＬである。例えば、約５～約１０μｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約３μｇ／ｍＬ、少なくとも約５μｇ／ｍＬ、又は少なくとも約１０μｇ／ｍＬであってもよい。

【0341】

例えば、前記ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片がヒトＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0342】

例えば、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片であってもよく、前記ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約２５μｇ／ｍＬである。本願において、前記ＴＩＧＩＴ ｍＡｂの濃度が約２．５～２０μｇ／ｍＬであってもよい。例えば、約５～２０μｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約２．５μｇ／ｍＬ、少なくとも約５μｇ／ｍＬ、又は少なくとも約２０μｇ／ｍＬであってもよい。

【0343】

例えば、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がヒトＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0344】

例えば、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片であってもよく、前記ＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約１００μｇ／ｍＬである。本願において、前記ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂの濃度が約３～５０μｇ／ｍＬ、約５～５０μｇ／ｍＬ、又は約１０～５０μｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約３μｇ／ｍＬ、少なくとも約５μｇ／ｍＬ、少なくとも約１０μｇ／ｍＬ、又は少なくとも約５０μｇ／ｍＬであってもよい。

【0345】

本願において、前記種細胞培地が共刺激受容体抗体又はその抗原結合断片をさらに含んでもよく、前記共刺激受容体免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、及び／又はＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片を含んでもよい。

【0346】

例えば、前記共刺激抗体又はその抗原結合断片がＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片を含んでもよい。

【0347】

例えば、前記ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片がヒトＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0348】

例えば、前記ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約１００μｇ／ｍＬであってもよい（例えば、約２～約１００μｇ／ｍＬ、約３～約１００μｇ／ｍＬ、約３～約２０μｇ／ｍＬ、約４～約１００μｇ／ｍＬ、約５～約１００μｇ／ｍＬ、約６～約１００μｇ／ｍＬ、約７～約１００μｇ／ｍＬ、約８～約１００μｇ／ｍＬ、約９～約１００μｇ／ｍＬ、約１０～約１００μｇ／ｍＬ、約１２～約１００μｇ／ｍＬ、約２０～約１００μｇ／ｍＬ、約１０～約９０μｇ／ｍＬ、約１０～約８０μｇ／ｍＬ、約１０～約７０μｇ／ｍＬ、約１０～約５０μｇ／ｍＬ、約１０～約２０μｇ／ｍＬ、又は約３～約１２μｇ／ｍＬであってもよい）。本願において、前記ＣＤ１３７ ｍＡｂの濃度が約３～２０μｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約３μｇ／ｍＬ、少なくとも約５μｇ／ｍＬ、少なくとも約１０μｇ／ｍＬ、少なくとも約１２μｇ／ｍＬ、又は少なくとも約２０μｇ／ｍＬであってもよい。

【0349】

例えば、前記共刺激抗体又はその抗原結合断片がＯＸ４０抗体又はその抗原結合断片を含んでもよい。

【0350】

例えば、前記ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片がヒトＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0351】

例えば、前記ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片の濃度が約３～約１０μｇ／ｍＬであってもよい。本願において、前記ＯＸ－４０ ｍＡｂの濃度が約５～１０μｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約３μｇ／ｍＬ、少なくとも約５μｇ／ｍＬ、又は少なくとも約１０μｇ／ｍＬであってもよい。
例えば、前記共刺激抗体又はその抗原結合断片がＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片を含んでもよい。
例えば、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片を含んでもよい。

【0352】

例えば、前記ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片がヒトＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0353】

例えば、前記ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１～約１０μｇ／ｍＬであってもよい（例えば、約２～約１０μｇ／ｍＬ、約３～約１０μｇ／ｍＬ、約３～約５μｇ／ｍＬ、約４～約１０μｇ／ｍＬ、約５～約１０μｇ／ｍＬ、約６～約１０μｇ／ｍＬ、約７～約１０μｇ／ｍＬ、又は約８～約１０μｇ／ｍＬであってもよい）。本願において、前記ＣＤ２８ ｍＡｂの濃度が約３～１０μｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約３μｇ／ｍＬ、少なくとも約５μｇ／ｍＬ、又は少なくとも約１０μｇ／ｍＬであってもよい。

【0354】

例えば、前記共刺激抗体又はその抗原結合断片がＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片を含んでもよい。

【0355】

例えば、前記ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片がヒトＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片であってもよい。

【0356】

例えば、前記ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片の濃度が約５～約１０μｇ／ｍＬであってもよい。本願において、前記ＣＤ４０ ｍＡｂの濃度が約６～１０μｇ／ｍＬ、又は約５～８μｇ／ｍＬであってもよい。例えば、少なくとも約５μｇ／ｍＬであってもよい。

【0357】

例えば、前記血清培地が血清を含んでもよい。

【0358】

例えば、前記血清がヒトＡＢ血清を含んでもよい。

【0359】

例えば、前記血清の濃度が約１～約１０％（ｖ／ｖ）であってもよい（例えば、約１．５～約１０％、約２～約１０％、約３～約１０％、約４～約１０％、約５～約１０％、約１～約９％、約１～約８％、約１～約７％、又は約１～約６％であってもよい）。

【0360】

例えば、前記血清培地がＡＩＭ－Ｖ培地を含んでもよい。

【0361】

例えば、前記無血清培地がＸ－ＶＩＶＯ培地、又はＣＴＳ^ＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒ^ＴＭ培地を含んでもよい。

【0362】

例えば、前記細胞培養成分が抗生物質を含んでもよい。

【0363】

例えば、前記細胞培養成分がペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳを含んでもよい。

【0364】

例えば、前記ペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳの濃度が約１～約２００Ｕ／ｍＬであってもよい（例えば、約１～約５Ｕ／ｍＬ、約１～約１０Ｕ／ｍＬ、約１～約２０Ｕ／ｍＬ、約１～約３０Ｕ／ｍＬ、約１～約４０Ｕ／ｍＬ、約１～約５０Ｕ／ｍＬ、約１～約６０Ｕ／ｍＬ、約１～約７０Ｕ／ｍＬ、約１～約８０Ｕ／ｍＬ、約１～約９０Ｕ／ｍＬ、約１～約１００Ｕ／ｍＬ、約１～約１２０Ｕ／ｍＬ、約１～約１４０Ｕ／ｍＬ、約１～約１６０Ｕ／ｍＬ、約１～約１８０Ｕ／ｍＬ、又は約１～約２００Ｕ／ｍＬであってもよい）。例えば、前記ペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳの濃度が約１００Ｕ／ｍＬであってもよい。

【0365】

例えば、前記種細胞培地がＭ２型マクロファージ阻害剤をさらに含んでもよく、前記Ｍ２型マクロファージ阻害剤がＲＲｘ００１及び／又はＣＮＩ－１４９３を含んでもよい。

【0366】

例えば、前記Ｍ２型マクロファージ阻害剤の濃度が約０．１～約１００μＭであってもよい（例えば、約０．５～約１００μＭ、約１～約１００μＭ、約２～約１００μＭ、約２．５～約１００μＭ、約３～約１００μＭ、約２～約３μＭ、約５～約１００μＭ、約１０～約１００μＭ、約２０～約１００μＭ、約０．１～約９０μＭ、約０．５～約９０μＭ、約１～約９０μＭ、約５～約９０μＭ、約０．１～約８０μＭであってもよい）。

【0367】

例えば、前記種細胞培地が制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）阻害剤をさらに含んでもよく、前記制御性Ｔ細胞阻害剤がＣＡＬ－１０１、ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）及び／又はパノビノスタット（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ）を含んでもよい。

【0368】

例えば、前記制御性Ｔ細胞阻害剤の濃度が約０．１～約１００μＭであってもよい（例えば、約０．５～約１００μＭ、約１～約１００μＭ、約５～約１００μＭ、約１０～約１００μＭ、約２０～約１００μＭ、約０．１～約９０μＭ、約０．５～約９０μＭ、約１～約９０μＭ、約５～約９０μＭ、約０．１～約８０μＭであってもよい）。例えば、前記制御性Ｔ細胞阻害剤の濃度が約１～約５μＭ、約１～約３μＭ、約１．５～約５μＭ、約２～約５μＭ、約２．５～約５μＭ、又は約３～約５μＭであってもよい。

【0369】

例えば、前記種細胞培地が骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤をさらに含んでもよく、前記骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤がＡＧ４９０、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、スニチニブ及び／又はＢＢＩ６０８を含んでもよい。

【0370】

例えば、前記骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤の濃度が約０．１～約１００μｇ／ｍＬであってもよい（例えば、約０．５～約１００μｇ／ｍＬ、約１～約１００μｇ／ｍＬ、約２～約１００μｇ／ｍＬ、約５～約１００μｇ／ｍＬ、約６～約１００μｇ／ｍＬ、約７～約１００μｇ／ｍＬ、約８～約１００μｇ／ｍＬ、約９～約１００μｇ／ｍＬ、約１０～約１００μｇ／ｍＬ、約２０～約１００μｇ／ｍＬ、約１０～約９０μｇ／ｍＬ、約１０～約８０μｇ／ｍＬ、約１０～約７０μｇ／ｍＬ、又は約１０～約５０μｇ／ｍＬであってもよい）。例えば、前記骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤の濃度が約１～約３μｇ／ｍＬ、又は約１．５～約３μｇ／ｍＬであってもよい。

【0371】

本願において、前記種細胞培地が前記制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）阻害剤、前記骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤、及び前記Ｍ２型マクロファージ阻害剤の少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種を含んでもよい。

【0372】

本願において、前記種細胞培地がＴ細胞活性化剤をさらに含んでもよく、前記Ｔ細胞活性化剤がＬＹＣ－５５７１６、ＧＮＥ－１８５８及び／又はメチレンブルーを含んでもよい。

【0373】

例えば、前記Ｔ細胞活性化剤の濃度が約１～約１０μＭであってもよい。例えば、約１～約９μＭ、約１～約８μＭ、約１～約７μＭ、約１～約６μＭ、約２～約１０μＭ、約３～約１０μＭ、約４～約１０μＭ、又は約５～約１０μＭであってもよい。

【0374】

本願において、前記種細胞培地がＴ細胞分化阻害剤をさらに含んでもよく、前記Ｔ細胞分化阻害剤がＴＷＳ１１９を含んでもよい。

【0375】

例えば、前記Ｔ細胞分化阻害剤の濃度が約１～約１０μＭであってもよい。例えば、約１～約９μＭ、約１～約８μＭ、約１～約７μＭ、約１～約６μＭ、約２～約１０μＭ、約３～約１０μＭ、約４～約１０μＭ、又は約５～約１０μＭであってもよい。

【0376】

本願において、前記ＲＲＸ－００１の濃度が約０．１～約１００μＭであってもよい。例えば、少なくとも約３μＭであってもよい。

【0377】

本願において、前記Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂの濃度が約１．５～約３μＭであってもよい。例えば、少なくとも約１．５μＭ又は少なくとも約３μＭであってもよい。

【0378】

本願において、前記ＣＮＩ－１４９３の濃度が約２～約３μＭであってもよい。例えば、少なくとも約２μＭ、少なくとも約２．５μＭ、又は少なくとも約３μＭであってもよい。

【0379】

本願において、前記Ｉｍａｔｉｎｉｂの濃度が約２～約５μＭであってもよい。例えば、少なくとも約２μＭ又は少なくとも約５μＭであってもよい。

【0380】

本願において、前記ＣＡＬ－１０１の濃度が約１．５～約５μＭであってもよい。例えば、少なくとも約１．５μＭ又は少なくとも約５μＭであってもよい。

【0381】

本願において、前記Ｄａｓａｔｉｎｉｂの濃度が約２～約３μＭであってもよい。例えば、少なくとも約２μＭ、少なくとも約２．５μＭ、又は少なくとも約３μＭであってもよい。

【0382】

本願において、前記ＬＹＣ－５５７１６の濃度が約１～約１０μＭであってもよい。例えば、少なくとも約１μＭ又は少なくとも約１０μＭであってもよい。

【0383】

本願において、前記ＧＮＥ－１８５８の濃度が約４～約５ｎＭであってもよい。例えば、少なくとも約４ｎＭ、少なくとも約４．５ｎＭ、又は少なくとも約５ｎＭであってもよい。

【0384】

本願において、前記メチレンブルーの濃度が約１～約２μＭであってもよい。例えば、少なくとも約１μＭ、少なくとも約１．５μＭ、又は少なくとも約２μＭであってもよい。

【0385】

本願において、前記ＴＷＳ１１９の濃度が約１～約１０μＭであってもよい。例えば、少なくとも約１μＭ、少なくとも約５μＭ、又は少なくとも約１０μＭであってもよい。

【0386】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0387】

例えば、前記種細胞培地が、少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約１００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0388】

本願において、前記種細胞培地が、ＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0389】

例えば、前記種細胞培地が、少なくとも約２０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－９、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１５、少なくとも約５０μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３％のヒト血清、無血清培地ＡＩＭ－Ｖ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0390】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0391】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約２０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬのＧ－ＣＳＦ、少なくとも約３６μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約３％のヒト血清、無血清培地ＡＩＭ－Ｖ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0392】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＬＡＧ３抗体又はその抗原結合断片、ＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0393】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２１、少なくとも約８００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地ＣＴＳＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒＴＭ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0394】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0395】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１β、少なくとも約２５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－６、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２１、少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ、少なくとも約２０μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0396】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１８、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0397】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１α、少なくとも約２０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－９、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１８、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－α、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－β、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２５μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0398】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0399】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－４、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１０、少なくとも約２５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２１、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0400】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0401】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－６、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２１、少なくとも約２０μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約３％のヒト血清、無血清培地ＣＴＳＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒＴＭ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0402】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0403】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１β、少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２１、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＧ－ＣＳＦ、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１５ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地ＣＴＳＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒＴＭ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0404】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、ＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0405】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約２５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－４、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、少なくとも約３００Ｕ／ｍＬのＭ－ＣＳＦ、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－β、少なくとも約８００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0406】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦαヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0407】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１５、少なくとも約８００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0408】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0409】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約２５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－４、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１０、少なくとも約２５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－１０、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＧ－ＣＳＦ、少なくとも約３００Ｕ／ｍＬのＭ－ＣＳＦ、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地ＡＩＭ－Ｖ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0410】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、ＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0411】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２１、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－α、少なくとも約８００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0412】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0413】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１５、少なくとも約２５０Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－β、少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１５μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0414】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地ＣＴＳＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒＴＭ、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0415】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１５、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地ＣＴＳＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒＴＭ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0416】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0417】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約３００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１２、少なくとも約３００Ｕ／ｍＬのＧ－ＣＳＦ、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－α、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１０ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0418】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＲＲｘ－００１、ＣＡＬ－１０１、ヒト血清、無血清培地ＣＴＳＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒＴＭ、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0419】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約５０μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μＭのＲＲｘ－００１、少なくとも約１．５μＭのＣＡＬ－１０１、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地ＣＴＳＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒＴＭ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0420】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１８、ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ、Ｉｍａｔｉｎｉｂ、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0421】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約２５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１０、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１８、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μＭのＳｕｎｉｔｉｎｉｂ、少なくとも約５μＭのＩｍａｔｉｎｉｂ、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0422】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＣＮＩ－１４９３、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0423】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１β、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－６、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＭ－ＣＳＦ、少なくとも約５μＭのＣＮＩ－１４９３、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0424】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－２１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＯＸ４０抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0425】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約２０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－９、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１０、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２１、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＯＸ４０抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３６μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１．５μＭのＳｕｎｉｔｉｎｉｂ、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0426】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、ＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、ＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、ＴＮＦα、Ｉｍａｔｉｎｉｂ、ヒト血清、無血清培地ＣＴＳＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒＴＭ、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0427】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約２５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－６、少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１２、少なくとも約１０μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＯＸ－４０抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約１５ｐｇ／ｍＬのＴＮＦα、少なくとも約５μＭのＩｍａｔｉｎｉｂ、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地ＣＴＳＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒＴＭ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0428】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0429】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－７、少なくとも約３００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１５、少なくとも約１２μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μＭのＤａｓａｔｉｎｉｂ、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0430】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、ＬＹＣ－５５７１６、ＧＮＥ－１８５８、ヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0431】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－６、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１２、少なくとも約１０００Ｕ／ｍＬのＧ－ＣＳＦ、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＭ－ＣＳＦ、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－β、少なくとも約８００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２．５μＭのＤａｓａｔｉｎｉｂ、少なくとも約１０μＭのＬＹＣ－５５７１６、少なくとも約４．５ｎＭのＧＮＥ－１８５８、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地Ｘ－ＶＩＶＯ １５、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0432】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－１α、ＩＬ－９、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、ＣＮＩ－１４９３、メチレンブルー、ＴＷＳ１１９、ヒト血清、無血清培地ＡＩＭ－Ｖ、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0433】

例えば、前記種細胞培地が少なくとも約２５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１α、少なくとも約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－９、少なくとも約８００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約５μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２．５μｇ／ｍＬのＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片、少なくとも約２．５μＭのＣＮＩ－１４９３、少なくとも約１μＭのメチレンブルー、少なくとも約５μＭのＴＷＳ１１９、少なくとも約５％のヒト血清、無血清培地ＡＩＭ－Ｖ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0434】

本願において、前記種細胞培地がＩＬ－２、ＩＬ－１α、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、ＣＮＩ－１４９３、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、ＧＮＥ－１８５８、メチレンブルー、ヒト血清、無血清培地ＡＩＭ－Ｖ、及びペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0435】

例えば、前記種細胞培地が約３０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、約２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１α、約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－１２、約５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２１、約３００Ｕ／ｍＬのＧ－ＣＳＦ、約８００Ｕ／ｍＬのＭ－ＣＳＦ、約５００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－α、約３００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－β、約３００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ、約３μｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、約５μｇ／ｍＬのＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、約５μｇ／ｍＬのＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片、約３μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片、約３μＭのＣＮＩ－１４９３、約２μＭのＤａｓａｔｉｎｉｂ、約５ｎＭのＧＮＥ－１８５８、約１．５μＭのメチレンブルー、約５％のヒト血清、無血清培地ＡＩＭ－Ｖ、及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン混合液ＰＳ二重特異性抗体を含んでもよい。

【0436】

別の様態において、本願は、本願に係る種細胞培地により培養された腫瘍浸潤リンパ球の種細胞又はその細胞群体を提供する。

【0437】

別の様態において、本願は、本願に係る腫瘍浸潤リンパ球の種細胞又はその細胞群体、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。

【0438】

別の様態において、本願は、前記腫瘍浸潤リンパ球の種細胞又はその細胞群体、及び本願に係る医薬組成物の、がんを治療するための薬物の製造における使用を提供する。

【0439】

本願に係る種細胞培地が、さまざまながんに由来する腫瘍浸潤リンパ球の増幅に使用できる。本願に係る種細胞培地が、がんの種類に対して広範なスペクトルと普遍的な適用性を有する。いくつかの場合において、前記種細胞培地が、さまざまながんに由来する腫瘍浸潤リンパ球の培養に使用でき、さまざまながんに由来する腫瘍浸潤リンパ球の種細胞又はその細胞群体の取得に使用できる。いくつかの場合において、本願に係る種細胞培地及び／又は本願に係る医薬組成物ががんを治療するための薬物の製造に使用できる。本願において、前記がんが、子宮頸がん（例えば、再発した子宮頸がんを含んでもよい）、卵巣がん、骨盤低分化型腺がん、腸がん（例えば、肝臓に転移した腸がんなどの転移したものを含んでもよい）、胃がん、黒色腫、乳がん及び／又は子宮内膜間質肉腫を含んでもよい。例えば、前記がんが、黒色腫、神経膠腫、胃がん、肺がん、消化管間質腫瘍、腸がん、肝がん、子宮頸がん、卵巣がん、乳がん、子宮内膜間質肉腫、骨盤低分化腺、胆管がんから選ばれてもよい。

【0440】

別の様態において、本願は、前記種細胞培地の、腫瘍浸潤リンパ球の増幅における使用を提供する。

【0441】

別の様態において、本願は、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞の培養方法であって、本願に係る種細胞培地で単離された腫瘍浸潤リンパ球を培養するステップを含む方法を提供する。

【0442】

別の様態において、本願は、腫瘍浸潤リンパ球の増幅方法であって、本願に係る種細胞培地で単離された腫瘍浸潤リンパ球を培養して、前記腫瘍浸潤リンパ球の種細胞を取得するステップを含む方法を提供する。

【0443】

例えば、前記単離された腫瘍浸潤リンパ球が、必要とする被験者の腹水、手術で切除した原発巣サンプル、手術で切除した同時性及び異時性転移巣サンプル、穿刺サンプル、体液から選ばれるサンプルに由来してもよい。

【0444】

例えば、前記体液が血液、組織液、リンパ液及び／又は体腔貯留液を含んでもよい。例えば、前記体液が腹水（例えば、胃がん患者の腹水又は乳がん患者の腹水であってもよい）及び／又は胸水（例えば、子宮内膜間質肉腫患者の胸水であってもよい）を含んでもよい。

【0445】

例えば、前記単離された腫瘍浸潤リンパ球が、黒色腫、神経膠腫、胃がん、肺がん、消化管間質腫瘍、腸がん、肝がん、子宮頸がん、卵巣がん、乳がん、子宮内膜間質肉腫、骨盤低分化型腺がん、胆管がんから選ばれる腫瘍に由来してもよい。例えば、前記単離された腫瘍浸潤リンパ球が、子宮頸がん（例えば、再発した子宮頸がんを含んでもよい）、卵巣がん、骨盤低分化型腺がん、腸がん（例えば、肝臓に転移した腸がんなどの転移したものを含んでもよい）、胃がん、黒色腫、乳がん及び／又は子宮内膜間質肉腫から選ばれるがんの腫瘍組織に由来してもよい。

【0446】

例えば、前記単離された腫瘍浸潤リンパ球が腫瘍組織を切除した組織ブロックに由来してもよく、前記腫瘍組織を切除した組織ブロックの直径が約１ｍｍ～約１０ｍｍであり、例えば、約２ｍｍ～約１０ｍｍ、約３ｍｍ～約１０ｍｍ、約４ｍｍ～約１０ｍｍ、約５ｍｍ～約１０ｍｍ、約６ｍｍ～約１０ｍｍ、約７ｍｍ～約１０ｍｍ、又は約８ｍｍ～約１０ｍｍであってもよい。

【0447】

例えば、前記培養の時間が約３～２０日間であってもよい。例えば、前記培養の時間が約３～１５日間であってもよく、例えば、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、又は約２０日間であってもよい。

【0448】

例えば、前記培養の温度が約３０～４２℃であってもよい。例えば、少なくとも約３０℃、少なくとも約３１℃、少なくとも約３２℃、少なくとも約３３℃、少なくとも約３４℃、少なくとも約３５℃、少なくとも約３６℃、少なくとも約３７℃、少なくとも約３８℃、少なくとも約３９℃、少なくとも約４０℃、少なくとも約４１℃、又は少なくとも約４２℃であってもよい。

【0449】

例えば、前記培養のＣＯ２濃度が約１％～１０％であり、例えば、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、又は少なくとも約１０％であってもよい。

【0450】

本願において、本願に係る種細胞培地を使用することで、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞の細胞活性を顕著に向上することができる（例えば、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞の細胞総数を顕著に向上することができ、例えば、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞の数が少なくとも約１０^８桁に達するようにできる。例えば、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞の細胞生存率を顕著に向上することができ、例えば、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞の細胞生存率が少なくとも約８５％に達するようにできる。例えば、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞から分泌されるサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ）の数を顕著に向上することができる）。本願において、本願に係る種細胞培地を使用することで、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞におけるＣＤ３＋細胞の比率を顕著に向上することができる。

【0451】

本願において、本願に係る種細胞培地を使用することで、腫瘍浸潤リンパ球の種細胞を供与体である被験者（例えば、腫瘍患者）に注入した後、一部の注入製品ＴＩＬのＴＣＲクローンの頻度が供与体である被験者の末梢血において顕著に大幅に向上すると共に、供与体である被験者の末梢血のＴＣＲライブラリーとＴＩＬ注入製品のＴＣＲライブラリーとの類似度も顕著に向上し、長時間にわたって維持することができる。また、本願に係る種細胞培地で培養したＴＩＬ細胞を供与体である被験者に自己注入した後、供与体である被験者の体内のリンパ球が比較的に活発に増殖できる。

【0452】

前記ＴＩＬ種細胞培地のサイトカインは、下記特徴、即ち、前記サイトカインがＩＬ－７を含み、前記ＩＬ－７の濃度が、例えば、約５～約１００ｎｇ／ｍＬであること、前記サイトカインがＩＬ－１５を含み、前記ＩＬ－１５の濃度が、例えば、約５～約１００ｎｇ／ｍＬであること、前記サイトカインが腫瘍壊死因子ＴＮＦ、例えば、ＴＮＦαを含み、前記ＴＮＦαの濃度が、例えば、約１０～約１００ｐｇ／ｍＬであること、前記サイトカインがコロニー刺激因子、例えば、ＧＭ－ＣＳＦを含み、前記ＧＭ－ＣＳＦの濃度が、例えば、約２００～約５０００Ｕ／ｍＬであること、前記サイトカインがインターフェロン、例えば、ＩＦＮ－γを含み、前記ＩＦＮ－γの濃度が、例えば、約１０～約１０００ｎｇ／ｍＬであること、前記サイトカインがＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＩＬ－１０から選ばれるインターロイキンをさらに含むこと、をさらに有してもよい。

【0453】

前記ＴＩＬ種細胞培地の免疫チェックポイント抗体は、下記特徴、即ち、前記ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片がヒトＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片であり、前記ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片の濃度が、例えば、約１０～約１００μｇ／ｍＬであること、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片、例えば、ヒトＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片を含み、前記ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合断片の濃度が、例えば、約１～約１００μｇ／ｍＬであること、前記免疫チェックポイント抗体又はその抗原結合断片がＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片、例えば、ヒトＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片を含み、前記ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片の濃度が、例えば、約１～約１０μｇ／ｍＬであること、をさらに有してもよい。

【0454】

前記ＴＩＬ種細胞培地の細胞培養成分は、下記特徴、即ち、血清培地が血清、例えば、ヒトＡＢ血清を含み、前記血清の濃度が、例えば、約１～約１０％（ｖ／ｖ）であること、前記血清培地がＡＩＭ－Ｖ培地を含むこと、前記無血清培地がＸ－ＶＩＶＯ培地、ＭＨＭ－Ｃ培地を含むこと、をさらに有してもよい。

【0455】

前記ＴＩＬ種細胞培地の細胞培養成分は、下記特徴、即ち、無血清培地が血小板、例えば、対象自己血由来の血小板又は同種血由来の血小板を含み、前記血小板の密度が、例えば、約０．５×１０^８／ｍＬ～約３×１０^８／ｍＬであること、前記無血清培地がＸ－ＶＩＶＯ培地、ＭＨＭ－Ｃ培地を含むこと、をさらに有してもよい。

【0456】

前記ＴＩＬ種細胞培地がＭ２型マクロファージ阻害剤をさらに含んでもよく、前記Ｍ２型マクロファージ阻害剤がＲＲｘ００１及び／又はＣＮＩ－１４９３を含んでもよい。前記Ｍ２型マクロファージ阻害剤の濃度が約０．１～約１００μＭである。前記ＴＩＬ種細胞培地が制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）阻害剤をさらに含んでもよく、前記制御性Ｔ細胞阻害剤がＣＡＬ－１０１、ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）及び／又はパノビノスタット（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ）を含む。前記制御性Ｔ細胞阻害剤の濃度が約０．１～約１００μＭである。前記ＴＩＬ種細胞培地が骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤をさらに含んでもよく、前記骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤がＡＧ４９０、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、スニチニブ及び／又はＢＢＩ６０８を含む。前記骨髄由来サプレッサー細胞阻害剤の濃度が約０．１～約１００μｇ／ｍＬである。

【0457】

本発明は、本明細書に係るＴＩＬ細胞を増幅するための培養組成物の、ＴＩＬ細胞を増幅するための培地又はＴＩＬ細胞を含む薬物の製造における使用をさらに提供する。本発明は、本明細書に係るＴＩＬ細胞を増幅するための培地の、ＴＩＬ細胞を含む薬物の製造における使用をさらに提供する。これらの薬物がＴＩＬ細胞を取得する由来となる腫瘍組織に関するがんを治療するために利用される。

【0458】

本発明は、ＴＩＬ細胞群体の増幅方法であって、本明細書に係るＴＩＬ細胞培養組成物を含む培地でＴＩＬ細胞群体をインキュベートすることを含む方法をさらに提供する。前記インキュベートが少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間継続し、及び／又は前記インキュベートが多くとも２０日間、多くとも１５日間、多くとも１４日間、多くとも１３日間、多くとも１２日間、多くとも１１日間、多くとも１０日間、多くとも９日間、多くとも８日間、多くとも７日間、多くとも６日間、多くとも５日間継続する。前記インキュベートの条件が本分野において周知されており、例えば、約３０～４２℃、約１％～１０％のＣＯ_２である。

【0459】

本発明は、ＴＩＬ細胞群体の製造方法１であって、
ＴＩＬ種細胞培地で腫瘍組織をインキュベートして、第１のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（１）と、
本明細書に係る培地で第１のＴＩＬ細胞群体をインキュベートして、第２のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（２）と、を含む方法をさらに提供する。

【0460】

本発明は、ＴＩＬ細胞群体の製造方法２であって、
ＴＩＬ種細胞培地で腫瘍細胞を含む組織をインキュベートして、第１のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（１）と、
（１）に係る第１のＴＩＬ細胞群体を、前述した培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体の何れか１種又は複数種に接触させて、第２のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（２）と、
（２）に係る第２のＴＩＬ細胞群体を、前述した培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体を除く成分の何れか１種又は複数種を含む培地に移し、培養して、第３のＴＩＬ細胞群体を取得するステップ（３）と、を含む方法をさらに提供する。

【0461】

前記方法１及び方法２の前記第２のＴＩＬ細胞群体が１０^１０～１０^１１以上のＴＩＬ細胞を有する。通常、前記腫瘍組織は、腫瘍組織を洗浄、破砕及び／又は解離することを含む前処理を必要とする。前記腫瘍組織を破砕及び／又は解離する方法は機械切断の方式又は酵素消化であってもよい。前記腫瘍組織を機械切断して形成された破砕した組織ブロックのサイズがその後の培養及び更なる処理を容易にする任意の通常のサイズであってもよく、任意に、２×２×２ｍｍ^３、３×３×３ｍｍ^３、４×４×４ｍｍ^３、５×５×５ｍｍ^３、又は６×６×６ｍｍ^３である。

【0462】

ＴＩＬ細胞を誘導するために、前記方法１及び方法２のステップ（１）のインキュベートが少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間継続し、及び／又は、ステップ（１）のインキュベートが多くとも２０日間、多くとも１５日間、多くとも１４日間、多くとも１３日間、多くとも１２日間、多くとも１１日間、多くとも１０日間、多くとも９日間、多くとも８日間、多くとも７日間、多くとも６日間、多くとも５日間継続する。十分な数のＴＩＬ細胞を増幅するために、前記方法１のステップ（２）のインキュベートが少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間継続し、及び／又は、前記方法１のステップ（２）のインキュベートが多くとも２０日間、多くとも１５日間、多くとも１４日間、多くとも１３日間、多くとも１２日間、多くとも１１日間、多くとも１０日間、多くとも９日間、多くとも８日間、多くとも７日間、多くとも６日間、多くとも５日間継続する。前記インキュベートの条件が本分野において周知されており、例えば、約３０～４２℃、約１％～１０％のＣＯ_２である。

【0463】

前記方法２のステップ（２）において、前記マトリックスにカップリングする抗体がＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ４０抗体、ＯＸ－４０抗体、ＧＩＴＲ抗体から選ばれる何れか１種又は複数種を含む。好ましくは、ＣＤ３抗体、ＣＤ２８抗体、ＣＤ１３７抗体から選ばれる何れか１種又は複数種を含む。前記マトリックスがマルチウェルプレート、細胞培養ディッシュ、細胞培養バッグ、磁気ビーズから選ばれる何れか１種又は複数種を含む。前記カップリングは共有結合又は非共有結合によるカップリングであり、上記抗体をマトリックスに固定させることができればよい。例えば、前記マトリックスが細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグであってもよく、前記カップリングは、上記抗体を含む母液を細胞培養ディッシュ又は細胞培養バッグの底部又は内壁にインキュベートすることでコーティングし、コーティング前処理により、培養ディッシュの底部に付着すると共にマトリックスに固定する抗体を形成してもよい。好ましくは、上記抗体が活性化型抗体である。

【0464】

前記方法２のステップ（２）において、好ましくは、前記接触が前記方法２のステップ（１）に係る第１のＴＩＬ細胞群体をマトリックスにカップリングする抗体と共にインキュベートすることであり、前記インキュベートの温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃である。好ましくは、前記インキュベートのＣＯ_２濃度が５％である。好ましくは、前記インキュベートが、前述した培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体を除く成分の何れか１種又は複数種を含む培地で行われる。任意に、前記前述した培養組成物におけるマトリックスにカップリングする抗体を除く成分の何れか１種又は複数種を含む培地が、１）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、２）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、及びＧＭ－ＣＳＦ、３）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＧＩＴＲ抗体、及びＴＷＳ１１９、４）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、及びＧＭ－ＣＳＦ、５）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＬＡＧ３抗体、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、及びＧＩＴＲ抗体、６）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＤ４０抗体、ＯＸ－４０抗体、及び自家血小板、７）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＤ－１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＣＤ１３７抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＷＳ１１９、及び他家血小板、の成分の組み合わせの何れか１種又は複数種を含む。前記接触が１～３日間継続し、例えば、１日間、２日間、３日間継続する。

【0465】

方法２のステップ（２）において、前記第１のＴＩＬ細胞群体の密度が１．０×１０^５／ｍＬ～１．０×１０^６／ｍＬであり、好ましくは、２．０×１０^５／ｍＬ～１．０×１０^６／ｍＬであり、より好ましくは、２．５×１０^５／ｍＬ～３．５×１０^６／ｍＬである。任意に、１．０×１０^５／ｍＬ、２．０×１０^５／ｍＬ、２．５×１０^５／ｍＬ、３．０×１０^５／ｍＬ、３．５×１０^５／ｍＬ、４．０×１０^５／ｍＬ、４．５×１０^５／ｍＬ、５．０×１０^５／ｍＬ、５．５×１０^５／ｍＬ、６．０×１０^５／ｍＬ、６．５×１０^５／ｍＬ、７．０×１０^５／ｍＬ、７．５×１０^５／ｍＬ、８．０×１０^５／ｍＬ、８．５×１０^５／ｍＬ、９．０×１０^５／ｍＬ、９．５×１０^５／ｍＬ又は１０×１０^６／ｍＬである。

【0466】

前記方法２のステップ（３）において、前記培養が少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間継続し、又は、多くとも２０日間、多くとも１５日間、多くとも１４日間、多くとも１３日間、多くとも１２日間、多くとも１１日間、多くとも１０日間、多くとも９日間、多くとも８日間、多くとも７日間、多くとも６日間、多くとも５日間継続する。前記培養の温度が３０～４２℃であり、好ましくは、３７℃である。前記培養のＣＯ_２濃度が５％である。

【0467】

前記方法１及び方法２のステップ（１）において、前記ＴＩＬ種細胞培地が前述したＴＩＬ種細胞培地の何れか１種であってもよい。任意に、前記ＴＩＬ種細胞培地が、１）ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、２）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、３）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＰＤ－１抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、４）ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、５）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、６）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、７）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＣＤ２８抗体、ＯＸ－４０抗体、ＰＤ－１抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、８）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ４０抗体、ＯＸ－４０抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、９）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１０）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体、ＣＤ４０抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１１）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＰＤ－１抗体、ＲＲｘ－００１、ＣＡＬ－１０１、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１２）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＰＤ－１抗体、ＣＮＩ－１４９３、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１３）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ダサチニブ、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１４）ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＣＴＬＡ－４抗体、ＰＤ－１抗体、ダサチニブ、ＬＹＣ－５５７１６、ＧＥＮＥ－１８５８、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１５）ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＬＡＧ３抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＮＩ－１４９３、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、１６）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体、ＣＤ４０抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＣＮＩ－１４９３、ダサチニブ、ＧＮＥ－１８５８、血清、二重特異性抗体、及び基礎培地、の何れか１種を含んでもよい。好ましくは、前記ＴＩＬ種細胞培地が、下記成分の組合せ、即ち、１）ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、２）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、３）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＰＤ－１抗体、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＣＴＳ^ＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒ^ＴＭ、４）ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＣＴＳ^ＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒ^ＴＭ、５）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、６）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、７）ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＣＤ２８抗体、ＯＸ－４０抗体、ＰＤ－１抗体、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＡＩＭ－Ｖ培地、８）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ４０抗体、ＯＸ－４０抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、９）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、１０）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体、ＣＤ４０抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＰＤ－１抗体、ＴＮＦ－α、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、１１）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＰＤ－１抗体、ＲＲｘ－００１、ＣＡＬ－１０１、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＣＴＳ^ＴＭＯｐＴｍｉｚｅｒ^ＴＭ、１２）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＰＤ－１抗体、ＣＮＩ－１４９３、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、１３）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ダサチニブ、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、１４）ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＣＴＬＡ－４抗体、ＰＤ－１抗体、ダサチニブ、ＬＹＣ－５５７１６、ＧＥＮＥ－１８５８、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、１５）ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１３７抗体、ＣＤ２８抗体、ＬＡＧ３抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＮＩ－１４９３、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＸ－ＶＩＶＯ １５培地、１６）ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＣＤ２８抗体、ＣＤ４０抗体、ＬＡＧ３抗体、ＰＤ－１抗体、ＣＮＩ－１４９３、ダサチニブ、ＧＮＥ－１８５８、ヒトＡＢ血清、ＰＳ二重特異性抗体、及びＡＩＭ－Ｖ培地、の成分の組み合わせの何れか１種を含んでもよい。

【0468】

本発明に係る方法で製造するＴＩＬ細胞群体ががんを治療するための薬物の製造に利用されてもよい。そのため、本発明は、本明細書の何れか１つの実施形態に係る方法で取得するＴＩＬ細胞群体と、薬学的に許容される添加物とを含む、医薬組成物をさらに含む。本明細書において、薬学的に許容される添加物は、薬理学的及び／又は生理学的に被験者や活性成分と相溶性がある担体、希釈剤及び／又は賦形剤であり、ｐＨ調整剤、界面活性剤、炭水化物、アジュバント、酸化防止剤、キレート剤、イオン強度増強剤、防腐剤を含むが、これらに限定されない。具体的には、薬学的に許容される適切な添加物が、本分野でＴＩＬ細胞の注入（例えば、静脈輸注）によく利用される添加物であってもよい。

【0469】

通常、医薬組成物にＴＩＬ細胞が治療有効量で含まれる。治療有効量とは、被験者における疾患又は病状の治療、予防、軽減及び／又は緩和が実現できる用量である。患者の年齢、性別、罹患病状及びその重症度、患者のその他の体調などの要素によって治療有効量が決定される。本明細書において、通常、被験者又は患者が哺乳動物であり、特に、ヒトである。

【0470】

本発明は、前述した本明細書の何れか１つの実施形態に係る方法で取得するＴＩＬ細胞群体と凍結保存液とを含む、細胞凍結保存製剤をさらに提供する。

【0471】

本明細書に係る凍結保存液は、組織凍結保存液又は細胞凍結保存液であってもよく、本発明に係るＴＩＬ細胞が低温条件で、例えば、ドライアイス凍結保存又は液体窒素凍結保存の条件で活性を保持することができるようにする。好ましくは、前記凍結保存液は、無血清凍結保存液であってもよく、前記細胞凍結保存製剤が低温から回復した後に、除去しないまま個体に直接的に注入するにも関わらず、個体に対しても顕著な毒性と副作用がない。

【0472】

本発明は、本明細書に係る方法でＴＩＬ細胞を製造すること、及び対象に前記ＴＩＬ細胞を投与することを含む、細胞療法をさらに含む。例えば、投与するＴＩＬ細胞は、受験者の腫瘍細胞を死滅させることができる。また、ＴＩＬ細胞により仲介される免疫応答が養子免疫療法のステップの一部であってもよい。

【0473】

以下は具体的な実施例により本発明を説明する。なお、これらの実施例は説明するためのものであり、意図的に本発明の範囲を限定するものではない。実施例に使用される方法及び材料は別途断りのない限り、本分野でよく知られている材料及び方法である。

【実施例】

【0474】

実施例１：培地の調製
下記成分でＴＩＬ種細胞培地を製造した。

【0475】

【表1】

【0476】

ＧＩＴＲ抗体はＧｅｎＳｃｒｉｐｔにより合成される（配列がＣＮ１０３９５１７５３ＢにおけるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５に由来）。

【0477】

表１～表３に従って異なるＴＩＬ細胞培地を調製した。基礎培地は血清と二重特異性抗体を所定の比率で入れられた後、４℃で１ヶ月以内保存できる。使用する際に、まず、培地を４℃で取り出して、３７℃の水浴で予熱し、次に、使用直前にその他の成分（様々なインターロイキン、コロニー刺激因子、インターフェロン、ＴＮＦ－α、様々な抗体及びその他の分子）を作業濃度となるまで入れて、ＴＩＬ細胞培養に利用した。表３で「コーティング」と記載される成分（ＣＤ３ ｍＡｂ、ＣＤ２８ ｍＡｂ及びＣＤ１３７ ｍＡｂ）は、溶液成分の形態で培地に存在するのではなく、細胞培養を開始する前に、これらの成分を含む母液を、例えば、マルチウェルプレート、ディッシュ又は細胞培養バッグなど、細胞培養ディッシュの底部又は内壁でインキュベートして、コーティング前処理により、培養ディッシュの底部に付着すると共にマトリックスに固定する成分を形成した。前記コーティング前処理の方式は、本分野における周知のタンパク質によるコーティングの通常操作であってもよい。例えば、具体的な処理方式として、コーティング対象成分であるＣＤ３ ｍＡｂ、ＣＤ２８ ｍＡｂ及び／又はＣＤ１３７ ｍＡｂをＰＢＳでコーティング母液に調製し（各成分の濃度が５μｇ／ｍＬ）、上記細胞培養ディッシュの底部又は内壁がコーティング母液に満遍なく覆われるように、コーティング母液を細胞培養ディッシュに入れ、４℃で一晩インキュベートした後、コーティング母液を捨て、ＰＢＳで５回洗浄してから、使用に備えた。表３における自家血小板は患者自己の血液に、他家血小板は健康成人の血液に由来する。血小板はＣＮ１０５１０７２３３Ｂに開示された方法で製造する。ここの全文が引用により本願に組み込まれている。下記培地に使用される一部のサイトカインは、質量－活性が下記のように換算する。即ち、ＩＬ－７：１ｍｇ＝１．２１×１０^７Ｕ、ＩＬ－１５：１ｍｇ＝１．１４×１０^７Ｕ、ＩＬ－１２：１ｍｇ＝１．０２×１０^７Ｕ、ＩＬ－２１：１ｍｇ＝１．０７×１０^７Ｕ。

【0478】

【表2】

【0479】

【表3】

【0480】

【表4】

【0481】

実施例２：患者固形腫瘍サンプルの処理及びＴＩＬ細胞培養
１）最終濃度１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含む生理食塩水を調製して、使用に備えた。

【0482】

２）クラスＩＩ生物学的安全キャビネットの無菌環境において、単離されて間もない腫瘍患者の腫瘍組織サンプルを、３０ｍＬのステップ１）で調製された生理食塩水が加えられた１０ｃｍ培養ディッシュに入れて洗浄し、その後３０ｍＬのステップ１）で調製された生理食塩水が加えられた別の１０ｃｍディッシュに移して洗浄し、計３回繰り返して洗浄した。

【0483】

３）無菌手術用ブレードで脂肪組織と壊死組織を取り除き、腫瘍組織を直径３×３×３ｍｍ^３の小さなブロックに切断し、２つのＧ－ＲＥＸ１００培養ポット（Ｗｉｌｓｏｎｗｏｌｆより購入）を取り、各Ｇ－ＲＥＸ１００培養ポットにランダムで選定された４２個の腫瘍組織ブロックを入れ、培養ポットに実施例１で製造されたＴＩＬ培地の何れか１種を入れて、種細胞培地とした。プログラムフリーザーを利用して、残りの腫瘍組織ブロックをＣｒｙｏＳｔｏｒ１０（ＢｉｏＬｉｆｅＳｏｌｕｔｉｏｎｓより購入）凍結保存液で液体窒素凍結保存した。

【0484】

４）３）の腫瘍組織ブロックを含むＧ－ＲＥＸ１００培養ポットに１Ｌの種細胞培地を入れて、腫瘍組織ブロックを３７℃、５％ＣＯ_２で培養した。４日間おきに古い種細胞培地を半分の体積で取り除き、新しい種細胞培地を半分の体積で補充し、１１～１５日目に遠心分離してＴＩＬ種細胞を取得し、細胞の総数と生存率を統計した。

【0485】

５）ａ：全成分が培地溶液成分である拡大培地（表２～表３の番号１８と２２の培地）の場合、Ｇ－ＲＥＸ５００Ｍ培養ポット（Ｗｉｌｓｏｎｗｏｌｆより購入）に５Ｌの予熱された拡大培地を入れ、ステップ４）で取得した種細胞を２．０×１０^５／ｃｍ^２～５．０×１０^５／ｃｍ^２の接種密度で接種し、３７℃、５％ＣＯ_２で培養した。４日間おきに細胞を計数して、古い拡大培地を半分の体積で取り除き、新しい拡大培地を半分の体積で補充し、各Ｇ－ＲＥＸ５００Ｍポットの細胞総数が１．０×１０^１０に達した後、１：２の比率でフラスコに分けた。各フラスコに新しい拡大培地を５Ｌまで補充した後、培養し続けた。拡大培地に計１２～１５日間培養した後、細胞を収穫して、ＴＩＬ製品細胞を取得した。

【0486】

ｂ：一部の成分が前述したように事前にコーティング処理を行われた拡大培地（表２～表３の番号１７、１９、２０、２１、２３、２４の培地）の場合、４）で収穫された種細胞を取り、コーティング成分を除く対応する溶液におけるその他の成分を含む拡大培地で１．０×１０^５／ｍＬ～１．０×１０^６／ｍＬとなるように再懸濁させ、コーティング成分でコーティング前処理が行われた細胞培養ディッシュに入れて、３７℃、５％ＣＯ_２で２～３日間活性化させた。その後、活性化された細胞を遠心分離して収集し、事前に予熱された拡大培地が加えられたＧ－ＲＥＸ５００Ｍ培養ポットに接種した。Ｇ－ＲＥＸ５００Ｍ培養ポットにおける拡大培地は同じくコーティング成分を除く対応する溶液におけるその他の成分を含む拡大培地である。各Ｇ－ＲＥＸ５００Ｍにおける拡大培地の体積が５Ｌである。活性化された種細胞を２．０×１０^５／ｃｍ^２～５．０×１０^５／ｃｍ^２の接種密度で接種し、３７℃、５％ＣＯ_２で培養した。４日間おきに細胞を計数して、古い拡大培地を半分の体積で取り除き、新しい拡大培地を半分の体積で補充し、各Ｇ－ＲＥＸ５００Ｍポットの細胞総数が１．０×１０^１０に達した後、１：２の比率でフラスコに分けた。各フラスコに新しい拡大培地を５Ｌまで補充した後、培養し続けた。Ｇ－ＲＥＸ５００Ｍ培養ポットの拡大培地に計１０～１２日間培養した後、細胞を収穫して、ＴＩＬ製品細胞を取得した。

【0487】

６）５）で収穫された製品細胞を取り、フローサイトメータにより収穫された製品細胞の表現型を検出すると共に、ＨＴＲＦ ＩＦＮ－γ検出試薬キット（Ｃｉｓｂｉｏ Ｈｕｍａｎ ＩＦＮ ｇａｍｍａ ｋｉｔ 品番：６２ＨＩＦＮＧＰＥＴ）により取扱説明書に記載される方法でＩＦＮ－γ分泌レベルを検出した。

【0488】

下記の表４は、腫瘍組織サンプル番号、がん種類、培養過程で使用される種細胞培地と拡大培地の表１～表３における対応する番号、各組織サンプルの種細胞培地と拡大培地のそれぞれの培養時間及びＧ－ＲＥＸ５００Ｍ細胞接種密度を示す。表５は、ステップ５）のｂにおける、対応する腫瘍組織サンプルのコーティング容器種類、コーティング活性化再懸濁細胞密度及びコーティング活性化時間を示す。

【0489】

【表5】

【0490】

【表6】

【0491】

２４５Ｍｍ細胞培養ディッシュはＣｏｒｎｉｎｇ（Ｃａｔ． ４３１１１１）より、細胞培養バッグはＴａｋａｒａ （ＣｕｌｔｉＬｉｆｅ^ＴＭ ２１５ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｂａｇ， Ｃａｔ． ＦＵ０００５）より購入される。上記ＴＩＬ製品細胞の製造全過程はＧＭＰグレード製造現場で関連法律に遵守した上で行われる。細胞を収穫して遠心分離し、Ｄ－ＰＢＳで洗浄し、生理食塩水に再懸濁させ、品質制御検出の結果、各指標（ＣＤ３＋比率、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋比率、ＩＦＮ－γ分泌レベル、無菌、内毒素、浸透圧など）が「中華人民共和国薬典」の規定又は国内外で上場した免疫細胞治療製品の対応する一般基準に適合したため、許可を受けた。

【0492】

結果は表６及び図１～図１７に示される。表６は、本発明に係る培地及び培養方法で表４の各組織サンプルから培養した腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の種細胞数、製品細胞数、製品細胞生存率、製品細胞表現型、及び製品細胞のＩＦＮ－γ分泌レベルを示す。図１～図１７は、番号Ｔ００１、Ｔ００２、Ｔ００３、Ｔ００４、Ｔ００５、Ｔ００６、Ｔ００７、Ｔ００８、Ｔ００９、Ｔ０１０、Ｔ０１１、Ｔ０１２、Ｔ０１３、Ｔ０１４、Ｔ０１５、Ｔ０１６、Ｔ０１７の組織サンプルに由来するＴＩＬ製品細胞のフローサイトメトリーによる表現型解析結果にそれぞれ対応する。

【0493】

【表7】

【0494】

表６の結果によれば、本願に係る各群の種細胞培地で培養した固形腫瘍組織は、１２日間の収穫時に少なくとも１０^８程度の細胞総数が得られ、例えば、Ｔ００２、Ｔ０１０及びＴ０１３の一部の腫瘍サンプルでは、総数が２×１０^８及び３×１０^８を超えるＴＩＬ種細胞が得られた。各群の種細胞は、本願に係る各群の異なる拡大培地で培養した後、最終的に２４日前後の収穫時に１０^１０～１０^１１桁のＴＩＬ製品細胞を取得でき、その大部分が１０^１１の量以上である。全ての群で収穫されたＴＩＬ製品細胞は、生存率が高く、個別を除く大部分のサンプルは９０％以上であり、例えば、Ｔ００５、Ｔ００８及びＴ０１３などはほぼ９９％である。また、検出した結果、各群のＴＩＬ製品細胞はＩＦＮ－γ分泌量も高レベルである。そのため、本願に係る培地及び培養方法で取得した全てのＴＩＬ製品細胞は高レベルの活性化状態を保持している。図１～図１７によれば、全ての群のＴＩＬ製品細胞は高純度のリンパ球であり、ＣＤ４５^＋細胞の比率が１００％又はほぼ１００％である。全てのＴＩＬ製品細胞は、ＣＤ３^＋細胞の比率が少なくともほぼ８０％（７９．２５％）であり、大部分の群のＴＩＬ製品細胞はＣＤ３^＋細胞の比率が９０％を超え、一部の群はほぼ１００％である（例えば、Ｔ００６、Ｔ０１３、Ｔ００２、Ｔ０１５）。全ての群のサンプルのＴＩＬ製品細胞において、大部分の群は、図３、４、５、６、８、１０、１３、１４、１５、１６、１７に示されるように、ＣＤ３^＋細胞群体におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率がほぼ５０％又は５０％を超え、ＣＤ４^＋Ｔ細胞に対して絶対的な優位性を示しており、一部の群は、図２、９に示されるように、ＣＤ８^＋Ｔ細胞とＣＤ４^＋Ｔ細胞の比率が約１：１である。上記の結果によれば、本願に係る各群の種細胞培地と拡大培地の組合せで異なる腫瘍組織サンプルから培養したＴＩＬ製品細胞は、優れた表現型を有する。

【0495】

実施例３：Ｔ００１に由来するＴＩＬの標的細胞に対する殺傷効果
胃がん細胞系ＨＧＣ２７（Ｍｅｒｃｋ Ｃａｔ． ９４０４２２５６より購入）を選定して標的細胞とし、ＡＣＥＡ社のリアルタイム非標識細胞機能アナライザー（ＲＴＣＡ）で実施例２により取得したＴ００１組織に由来するＴＩＬ製品細胞のインビトロ殺傷活性を検出した。具体的なステップは下記の通りである。

【0496】

（１）ゼロ設定：各ウェルに５０μＬのＤＭＥＭ又は１６４０培養液を入れ、装置に入れ、ｓｔｅｐ １を選択して、ゼロ設定した。

【0497】

（２）標的細胞プレーティング：ＨＧＣ２７細胞を、１ウェルあたり１０^４個細胞／５０μＬで検出電極を含むプレートにプレーティングし、細胞が安定的になるまで数分間静置してから、装置に入れ、ｓｔｅｐ ２を開始して、細胞を培養した。

【0498】

（３）エフェクター細胞の添加：標的細胞を細胞指数（Ｃｅｌｌ Ｉｎｄｅｘ）が１．０に近づくまで１９ｈ培養した後、ｓｔｅｐ ２を一時的に停止し、エフェクター細胞を１ウェルあたり５０μＬで添加した。ＴＩＬ細胞生存率の比率に従って、それぞれ２：１、４：１、８：１のＥＴ比でエフェクター細胞数量を添加し、ｓｔｅｐ ３を開始し、５０ｈを超えて共培養し続けて、細胞の増殖曲線を観察した。

【0499】

その結果、図１８に示されるように、ＥＴ比が２：１である場合、腫瘍細胞対照群に比べて、Ｔ００１に由来するＴＩＬ細胞が腫瘍細胞ＨＧＣ２７に対する顕著な殺傷効果を示している。ＥＴ比が向上するに伴って、ＴＩＬ細胞のＨＧＣ２７に対する殺傷効果も顕著に向上する。

【0500】

実施例４：Ｔ００２に由来するＴＩＬの標的細胞に対する殺傷効果
黒色腫細胞系Ａ３７５（ＡＴＣＣより購入）を選定して標的細胞とし、ＡＣＥＡ社のリアルタイム非標識細胞機能アナライザー（ＲＴＣＡ）で実施例２により取得したＴ００２組織に由来するＴＩＬ製品細胞のインビトロ殺傷活性を検出した。具体的なステップは下記の通りである。

【0501】

（１）ゼロ設定：各ウェルに５０μＬのＤＭＥＭ又は１６４０培養液を入れ、装置に入れ、ｓｔｅｐ １を選択して、ゼロ設定した。

【0502】

（２）標的細胞プレーティング：標的細胞Ａ３７５を、１ウェルあたり１０^４個細胞／５０μＬで検出電極を含むプレートにプレーティングし、細胞が安定的になるまで数分間静置してから、装置に入れ、ｓｔｅｐ ２を開始して、細胞を培養した。

【0503】

（３）エフェクター細胞の添加：標的細胞を細胞指数（Ｃｅｌｌ Ｉｎｄｅｘ）が１．５になるまで２０ｈ培養した後、ｓｔｅｐ ２を一時的に停止し、エフェクター細胞を１ウェルあたり５０μＬで添加した。ＴＩＬ細胞生存率の比率に従って、それぞれ２：１、４：１、８：１のＥＴ比でエフェクター細胞数量を添加し、ｓｔｅｐ ３を開始し、５０ｈを超えて共培養し続けて、細胞の増殖曲線を観察した。

【0504】

その結果、図１９に示されるように、ＥＴ比が２：１である場合、腫瘍細胞対照群に比べて、Ｔ００２に由来するＴＩＬ細胞が顕著な腫瘍細胞Ａ３７５に対する殺傷効果を示している。ＥＴ比が向上するに伴って、ＴＩＬ細胞のＡ３７５に対する殺傷効果も顕著に向上する。

【0505】

実施例５：Ｔ００３に由来するＴＩＬの標的細胞に対する殺傷効果
子宮頸がん細胞系ＨｅＬａ（ＡＴＣＣより購入）を選定して標的細胞とし、ＡＣＥＡ社のリアルタイム非標識細胞機能アナライザー（ＲＴＣＡ）で実施例２により取得したＴ００３組織に由来するＴＩＬ製品細胞のインビトロ殺傷活性を検出した。具体的なステップは下記の通りである。

【0506】

（１）ゼロ設定：各ウェルに５０μＬのＤＭＥＭ又は１６４０培養液を入れ、装置に入れ、ｓｔｅｐ １を選択して、ゼロ設定した。

【0507】

（２）標的細胞プレーティング：標的細胞ＨｅＬａを、１ウェルあたり１０^４個細胞／５０μＬで検出電極を含むプレートにプレーティングし、細胞が安定的になるまで数分間静置してから、装置に入れ、ｓｔｅｐ ２を開始して、細胞を培養した。

【0508】

（３）エフェクター細胞の添加：標的細胞を細胞指数（Ｃｅｌｌ Ｉｎｄｅｘ）が１．０になるまで２０ｈ培養した後、ｓｔｅｐ ２を一時的に停止し、エフェクター細胞を１ウェルあたり５０μＬで添加した。ＴＩＬ細胞生存率の比率に従って、それぞれ２：１、４：１、８：１のＥＴ比でエフェクター細胞数量を添加し、ｓｔｅｐ ３を開始し、５０ｈを超えて共培養し続けて、細胞の増殖曲線を観察した。

【0509】

その結果、図２０に示されるように、ＥＴ比が２：１である場合、腫瘍細胞対照群に比べて、Ｔ００３に由来するＴＩＬ細胞が顕著な腫瘍細胞ＨｅＬａに対する殺傷効果を示している。ＥＴ比が向上するに伴って、ＴＩＬ細胞のＨｅＬａに対する殺傷効果も顕著に向上する。

【0510】

実施例６：Ｔ００５に由来するＴＩＬの標的細胞に対する殺傷効果
胃がん細胞系ＨＧＣ２７（Ｍｅｒｃｋ Ｃａｔ． ９４０４２２５６より購入）を選定して標的細胞とし、ＡＣＥＡ社のリアルタイム非標識細胞機能アナライザー（ＲＴＣＡ）で実施例２により取得したＴ００５組織に由来するＴＩＬ製品細胞のインビトロ殺傷活性を検出した。具体的なステップは下記の通りである。

【0511】

（１）ゼロ設定：各ウェルに５０μＬのＤＭＥＭ又は１６４０培養液を入れ、装置に入れ、ｓｔｅｐ １を選択して、ゼロ設定した。

【0512】

（２）標的細胞プレーティング：標的細胞ＨＧＣ２７を、１ウェルあたり１０^４個細胞／５０μＬで検出電極を含むプレートにプレーティングし、細胞が安定的になるまで数分間静置してから、装置に入れ、ｓｔｅｐ ２を開始して、細胞を培養した。

【0513】

（３）エフェクター細胞の添加：標的細胞を細胞指数（Ｃｅｌｌ Ｉｎｄｅｘ）が１．０程度になるまで２１ｈ培養した後、ｓｔｅｐ ２を一時的に停止し、エフェクター細胞を１ウェルあたり５０μＬで添加した。ＴＩＬ細胞生存率の比率に従って、それぞれ２：１、４：１、８：１のＥＴ比でエフェクター細胞数量を添加し、ｓｔｅｐ ３を開始し、５０ｈを超えて共培養し続けて、細胞の増殖曲線を観察した。

【0514】

その結果、図２１に示されるように、ＥＴ比が２：１である場合、腫瘍細胞対照群に比べて、Ｔ００５に由来するＴＩＬ細胞が強い腫瘍細胞ＨＧＣ２７に対する殺傷効果を示している。また、ＥＴ比が向上するに伴って、ＴＩＬ細胞ＨＧＣ２７に対する殺傷効果がさらに顕著に向上することはないため、低いＥＴ比でＴ００５に由来するＴＩＬ細胞の標的細胞ＨＧＣ２７に対する殺傷効果が上限まで達したことを示している。

【0515】

実施例７：Ｔ００４に由来するＴＩＬの標的細胞に対する殺傷効果
胃がん細胞系ＨＧＣ２７（Ｍｅｒｃｋ Ｃａｔ． ９４０４２２５６より購入）を選定して標的細胞とし、ＡＣＥＡ社のリアルタイム非標識細胞機能アナライザー（ＲＴＣＡ）で実施例２により取得したＴ００４組織に由来するＴＩＬ製品細胞のインビトロ殺傷活性を検出した。具体的なステップは下記の通りである。

【0516】

（１）ゼロ設定：各ウェルに５０μＬのＤＭＥＭ又は１６４０培養液を入れ、装置に入れ、ｓｔｅｐ １を選択して、ゼロ設定した。

【0517】

（２）標的細胞プレーティング：標的細胞ＨＧＣ２７を、１ウェルあたり１０^４個細胞／５０μＬで検出電極を含むプレートにプレーティングし、細胞が安定的になるまで数分間静置してから、装置に入れ、ｓｔｅｐ ２を開始して、細胞を培養した。

【0518】

（３）エフェクター細胞の添加：標的細胞を細胞指数（Ｃｅｌｌ Ｉｎｄｅｘ）が１．５程度になるまで２１ｈ培養した後、ｓｔｅｐ ２を一時的に停止し、エフェクター細胞を１ウェルあたり５０μＬで添加した。ＴＩＬ細胞生存率の比率に従って、それぞれ２：１、４：１、８：１のＥＴ比でエフェクター細胞数量を添加し、ｓｔｅｐ ３を開始し、８０ｈを超えて共培養し続けて、細胞の増殖曲線を観察した。

【0519】

その結果、図２２に示されるように、ＥＴ比が２：１である場合、腫瘍細胞対照群に比べて、Ｔ００４に由来するＴＩＬ細胞が腫瘍細胞ＨＧＣ２７に対してある程度の殺傷効果を示している。ＥＴ比が向上するに伴って、ＴＩＬ細胞のＨＧＣ２７に対する殺傷効果も顕著に徐々に向上する。

【0520】

実施例８：ＴＩＬ細胞の同種腫瘍オルガノイドに対する殺傷効果
実施例２における単離されて間もないＴ００６腫瘍組織を取り、開示文献（Chiara M Cattaneo , Krijn K Dijkstra , Lorenzo F Fanchi , Sander Kelderman, Sovann Kaing, Nienke van Rooij, Stieneke van den Brink, Ton N Schumacher, Emile E Voest. Tumor organoid-T-cell coculture systems Nat Protoc. 2020 Jan;15(1):15-39. ，該文献の全文が引用により本願に組み込まれる）の１０ページに記載される方法で腫瘍組織を処理した後、オルガノイド（Ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｏｒｇａｎｏｉｄ，ＰＤＯ）を培養した。培養に使用される試薬キットはすべて該開示文献の記載を参照して購入した。適切に培養して２～３代継代したＰＤＯを取り、下記フローで同種ＴＩＬ細胞（Ｔ００６ ＴＩＬ製品細胞）とＰＤＯの共培養及び殺傷実験を行った。

【0521】

１日目：
１． 培養されたＴ００６ ＰＤＯ系を取り、ＰＤＯ培地を捨て、予熱した適量のディスパーゼ（２ｍｇ／ｍＬ ＰＢＳに溶解）でＰＤＯを処理し、ピペットガンでＰＤＯを軽く吹いてから、ＰＤＯを３７℃で５～１５ｍｉｎ置いた。単細胞が現れないようにした。

【0522】

２． ＰＤＯを遠心分離チューブに移し、１ｍＬのディスパーゼに対して１００μＬのＥＤＴＡ （０．５Ｍ）を入れ、ＰＢＳを１０ｍＬとなるように補充して、遠心分離した。

【0523】

３． ２ｍＬのＰＤＯ培地でＰＤＯを１２ウェルプレートに移し、アノイキスが発生しないように１０μＭのＹ－２７６３２（ＭＣＥ Ｃａｔ． ＨＹ１００７１より購入）を入れて、３７℃、５％ ＣＯ_２で２４時間培養した。

【0524】

２日目：
１． 抗原提示を増強するように、ＰＤＯに２００ｎｇ／ｍＬのＩＦＮγを入れて、一晩処理した。

【0525】

２． ９６ウェルプレートに５μｇ／ｍＬのＣＤ２８ｍＡｂのＰＢＳ（１ウェルあたり５０μＬ）をコーティングして、４℃で２４時間インキュベートした。

【0526】

３． ２４ウェルＧ－ＲＥＸに１×１０^７個のＴＩＬ細胞をプレーティングし、１５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２と２０μｇ／ｍＬのＰＤ１ ｍＡｂを入れて、一晩処理した。

【0527】

３日目：
１． １２ウェルプレートからＰＤＯを収集した。オルガノイドと培地の懸濁液を１５ｍｌ試験管に移した。総体積を二等分した。総体積の１／１１は単細胞に分解して計数するために利用され、総体積の１０／１１は実験に利用される。

【0528】

２． １／１１を酵素性分解して単細胞に分解した。ＰＤＯを５００μＬのＴｒｙｐＬＥに再懸濁させて、３７℃で５～１５分間インキュベートした。数分間おきに器官が遊離するかについて検査した。単細胞に分解した場合、停止して計数した。

【0529】

３． ＰＢＳでＰＤＯの１０／１１を２回洗浄して、培養液に添加されたＩＦＮ－γを取り除いた。

【0530】

４． ＴＩＬ細胞培地（表１の８番培地）に１×１０^５個／ｍＬの単細胞でオルガノイドを再懸濁させた。ＰＤ－１ｍＡｂを濃度４０μｇ／ｍＬとなるように、Ｙ－２７６３２を濃度２０μＭとなるように入れた。

【0531】

５． ＴＩＬ細胞を収集し、８００ｇで３ｍｉｎ遠心分離して、表１の８番培地で再懸濁させた。密度が５×１０^５／ｍＬとなるように調整した。

【0532】

６． 細胞数量を２群に均等に分けて、９６ウェルプレートに入れた。
群１：１００μＬのＰＤＯ＋１００μＬの８番培地
群２：１００μＬのＰＤＯ＋１００μＬの５×１０^４ ＴＩＬ細胞を含む８番培地
群１と群２はそれぞれ３つの平行するサブウェルを作った。３７℃で４８時間培養した後、各サブウェルにおけるＴＩＬとＰＤＯの混合懸濁液を単細胞懸濁液に酵素消化し、腸がん細胞マーカーＥｐＣＡＭのフローサイトメトリー用抗体で腫瘍細胞を染色し、染料試薬キットＺｏｍｂｉｅ ＮＩＲ^ＴＭ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｋｉｔ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄより購入）による染色で死細胞と生細胞を区別して、染色後にフローサイトメータにより検出した。

【0533】

その結果、図２３に示されるように、＊＊：ｐ＜０．０１である。同種ＴＩＬ細胞と４８時間共培養した後、ＰＤＯ＋ＴＩＬ群のＥｐＣＡＭ^＋腫瘍細胞生存率はＰＤＯ＋ＴＩＬ培地群より顕著に減少した。Ｔ００６腫瘍組織により誘導・培養されたオルガノイドはその相同的対合のＴＩＬ細胞によって効果的に殺傷された。

【0534】

実施例９：Ｔ００１組織サンプルに由来するＴＩＬ製品細胞の、マウスの細胞株由来腫瘍移植物（Ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ，ＣＤＸ）の腫瘍組織に対する殺傷効果
実験動物
免疫不全Ｂ－ＮＤＧマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎより購入）を選定して、ＣＤＸモデル構築用実験動物とした。

【0535】

実験設計と群分け：下記表７に示される。

【0536】

【表8】

【0537】

ＴＩＬ細胞は実施例２により製造され、組織サンプルＴ００１に由来するＴＩＬ製品細胞である。尾静脈注射投与前に細胞を遠心分離してＰＢＳに再懸濁させ、細胞密度が２×１０^７／ｍＬであるＰＢＳ細胞懸濁液を調製した。

【0538】

動物飼養
必要な数のＢ－ＮＤＧマウスを購入した後、ＳＰＦ級実験動物飼育室に飼養した。適応期間を７～１０日とした。

【0539】

環境：マウスを動物飼育室の透明な樹脂製ケージに入れた。ケージの床材は高圧滅菌が行われた木屑やとうもろこしの芯であり、定期的に交換した。動物飼育室に高効率エアフィルターを配置して、温度を２０～２６℃（６８～７９°Ｆ）、相対湿度を４０～７０％に保持した。持続的に観測して、温度と湿度を記録した。照明条件は１日に１２時間蛍光灯照射と１２時間照明無しとした。

【0540】

餌と水：実験用マウスは専門のマウス餌（放射線により消毒済み、Ｓｈａｎｇｈａｉ ＳＬＡＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ、中国）を無限量で摂取し、任意の時間で滅菌に近い清潔水を支障なく飲用することができる。

【0541】

腫瘍細胞の接種
各マウスの右側皮下にＨＧＣ－２７腫瘍細胞（マウス１匹あたり２×１０^６細胞）を接種した。腫瘍の成長を促進するために、接種は０．１ｍＬの５０％マトリックスを含む培地で行う。

【0542】

動物の群分けと投与
腫瘍体積が～５０ｍｍ^３程度に達した場合、１２匹の動物を腫瘍体積によってランダムに群分けして（ｎ＝６）、全ての群がベースラインにおいて比較可能性を有するようにした。群分ける当日をＰ０とする。実験期間において動物体重と腫瘍体積を週３回測定し、毎日、動物の臨床症状を観察した。腫瘍体積は、ｍｍ^３で示し、計算式がＶ＝０．５×ａ×ｂ^２であり、但し、ａとｂはそれぞれ腫瘍の長径と短径である。

【0543】

結果
実験結果は図２４に示される。群間の腫瘍体積の差は、対応のない両側ｔ検定により統計的分析を行う。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１。図２４の結果によれば、投与後２３日目まで、ＰＢＳ対照群を注射した担癌マウスに比べて、ＴＩＬ細胞投与群のマウス腫瘍体積の増大が顕著に抑制され、Ｔ００１に由来するＴＩＬ製品細胞がインビボで胃がん腫瘍に対して非常に顕著な殺傷効果を有することを示している。

【0544】

実施例１０：Ｔ００２組織サンプルに由来するＴＩＬ製品細胞の、マウスＣＤＸ腫瘍組織に対する殺傷効果

【0545】

実験動物
免疫不全Ｂ－ＮＤＧマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎより購入）を選定して、ＣＤＸモデル構築用実験動物とした。

【0546】

実験設計と群分け：下記表８に示される。

【0547】

【表9】

【0548】

ＴＩＬ細胞は実施例２により製造され、組織サンプルＴ００２に由来するＴＩＬ製品細胞である。

【0549】

尾静脈注射投与前に細胞を遠心分離してＰＢＳに再懸濁させ、細胞密度が２×１０^７／ｍＬであるＰＢＳ細胞懸濁液を調製した。

【0550】

腫瘍細胞の接種
各マウスの右側皮下に黒色腫細胞Ａ３７５（マウス１匹あたり２×１０^６細胞）を接種した。腫瘍の成長を促進するために、接種は０．１ｍＬの５０％マトリックスを含む培地で行う。

【0551】

動物飼養、動物群分け及び投与は実施例９と同様である。

【0552】

結果
実験結果は図２５に示される。群間の腫瘍体積の差は、対応のない両側ｔ検定により統計的分析を行う。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１。図２５の結果によれば、投与後２２日目まで、ＰＢＳ対照群を注射した担癌マウスに比べて、ＴＩＬ細胞投与群のマウス腫瘍体積の増大が顕著に抑制され、Ｔ００２に由来するＴＩＬ製品細胞がインビボで黒色腫に対して非常に顕著な殺傷効果を有することを示している。

【0553】

実施例１１：Ｔ００８組織サンプルに由来するＴＩＬ製品細胞の、相同的対合の患者に由来する腫瘍移植物（Ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ，ＰＤＸ）の腫瘍組織に対する殺傷効果
実験動物
免疫不全Ｂ－ＮＤＧマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎより購入）を選定して、ＰＤＸモデル構築用実験動物とした。

【0554】

実験設計と群分け：下記表９に示される

【0555】

【表10】

【0556】

ＴＩＬ細胞は実施例２により製造され、組織サンプルＴ００８に由来するＴＩＬ製品細胞である。尾静脈注射投与前に細胞を遠心分離してＰＢＳに再懸濁させ、細胞密度が１×１０^８／ｍＬであるＰＢＳ細胞懸濁液を調製した。

【0557】

動物飼養
必要な数のＢ－ＮＤＧマウスを購入した後、ＳＰＦ級実験動物飼育室に飼養した。適応期間を７～１０日とした。

【0558】

環境：マウスを動物飼育室の透明な樹脂製ケージに入れる。ケージの床材は高圧滅菌が行われた木屑やとうもろこしの芯であり、定期的に交換した。動物飼育室に高効率エアフィルターを配置して、温度を２０～２６℃（６８～７９°Ｆ）、相対湿度を４０～７０％に保持した。持続的に観測して、温度と湿度を記録した。照明条件は１日で１２時間蛍光灯照射と１２時間照明無しとした。

【0559】

餌と水：実験用マウスは専門のマウス餌（放射線により消毒済み、Ｓｈａｎｇｈａｉ ＳＬＡＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ、中国）を無限量で摂取し、任意の時間で滅菌に近い清潔水を支障なく飲用した。

【0560】

ＰＤＸモデルの構築
１）患者腫瘍組織サンプルの処理：Ｔ００８腫瘍組織の一部を取り、無菌条件で壊死部分組織、脂肪組織、結締組織などを取り除き、綺麗に洗浄した後、メスで幾つかの５×５×５ｍｍ^３組織ブロックに切断し、腫瘍サンプル輸送保存液を含むＵＷに入れて、腫瘍ブロックをＢ－ＮＤＧマウスに接種した。

【0561】

２）腫瘍組織サンプルの接種：幾つかのＢ－ＮＤＧマウスを取り、マウス肩甲部の皮膚を処理し、マウス皮下腫瘍接種固定器でマウスを固定し、ヨードフォアで消毒し、リドカインで局所麻酔を施してから、ＰＤＸモデル腫瘍ブロック接種用トロカールで１）の腫瘍ブロックを右側鼠径部に接種した。接種当日をＰ０とした。腫瘍の大きさを週２回測定した。腫瘍体積の計算式はＶ＝０．５×ａ×ｂ^２であり、但し、ａとｂはそれぞれ腫瘍の長径と短径を示す。

【0562】

３）ＰＤＸ組織の継代：各接種マウスの腫瘍組織の成長状況を観察し、腫瘍組織の体積が３００ｍｍ^３以上に成長した場合、マウスに麻酔を施し、腫瘍ブロックを取り出して、無菌条件においてメスで５×５×５ｍｍ^３組織ブロックに切断した後、ステップ２）を繰り返し、別のマウス右側鼠径部に接種し、次代のＰＤＸ腫瘍の成長を待つ。

【0563】

４）ステップ３）を繰返し、２～３代継代した後、マウス体内のＰＤＸ組織の一部を取り、組織切片の病理分析を行った。ＰＤＸ組織が依然としてヒト組織である（マウス組織ではない）ことを確認したら、表９の実験計画に使用されるマウス数の１．５倍でＰＤＸ組織をマウスに接種し（即ち、ＰＤＸ組織ブロックをマウス２４匹に接種）、マウス腫瘍の成長状況を観察した。腫瘍の大きさを週２回測定し、腫瘍の成長を待つ。

【0564】

動物の群分けと投与
ＰＤＸ接種マウスの腫瘍体積が～５０ｍｍ^３程度に達した場合、２４匹の動物から適切な腫瘍体積の動物を１６匹選定し、腫瘍体積によってランダムに群分けして（ｎ＝８）、全ての群がベースラインにおいて比較可能性を有するようにした。群分ける当日をＤ０とした。表９の案で投与した。実験期間において動物体重と腫瘍体積を週３回測定し、毎日、動物の臨床症状を観察した。腫瘍体積はｍｍ^３で示し、腫瘍測定の計算式が上記と同様である。

【0565】

結果
実験結果は図２６に示される。群間の腫瘍体積の差は、対応のない両側ｔ検定により統計的分析を行った。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１。図２６の結果によれば、投与後４０日目まで、ＰＢＳ対照群を注射した担癌マウスに比べて、ＴＩＬ細胞投与群のマウス腫瘍体積の増大が顕著に抑制され、Ｔ００８に由来するＴＩＬ製品細胞がインビボで同じ患者由来の腫瘍ＰＤＸ組織に対して非常に顕著な殺傷効果を有することを示している。

【0566】

実施例１２：Ｔ００７組織サンプルに由来するＴＩＬ製品の、相同的対合のＰＤＸマウス生体内における腫瘍トロピズム検出
１．患者末梢血ＰＢＭＣからのＴ細胞の単離及び製造
Ｆｉｃｏｌｌ分離法によりＴ００７組織サンプルの対応する患者末梢血２０ｍＬから末梢血単核球（ＰＢＭＣｓ）を単離した。ＰＢＭＣを２～４ｈ接着培養した。そのうち、接着していない懸濁細胞がナイーブＴ細胞である。懸濁細胞を１５ｍｌ遠心分離チューブに収集して、１２００ｒｍｐで３ｍｉｎ遠心分離し、上澄みを捨て、生理食塩水を入れて、１２００ｒｍｐで３ｍｉｎ遠心分離し、生理食塩水を捨て、このステップを繰り返した。収穫されたＴ細胞を、２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２と５％のヒトＡＢ血清を含むＸ－ＶＩＶＯ１５で再懸濁させ、事前にＣＤ３ ｍＡｂとＣＤ２８ ｍＡｂをコーティングした細胞培養ディッシュに入れて、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベータで３日間活性化させた。細胞懸濁液を別の培養ディッシュに移して培養し、１～２日間おきに新しい培地を交換し、少なくとも１．０×１０^８Ｔ細胞を取得して、その後の実験に供した。

【0567】

２．ルシフェラーゼを組み込んで発現するＴ細胞及びＴＩＬ細胞の製造
Ｇｅｎｅｃｈｅｍよりルシフェラーゼ遺伝子を発現する品番ＬＶＣＯＮ１０１のレンチウイルス粒子を購入した。下記ステップによりルシフェラーゼを発現するレンチウイルスで、１により製造されたＴ００７患者の末梢血に由来するＴ細胞（使用細胞数量：１×１０^８）及び実施例２により製造されたＴ００７腫瘍組織サンプルに由来するＴＩＬ製品細胞（使用細胞数量：１×１０^８）を導入した。具体的なステップは下記の通りである。

【0568】

第１ステップ：感染前の準備。冷蔵庫からウイルスを取り出し、氷上で溶かし、ウイルスをＦＢＳ無しのＤＭＥＭで１０倍希釈した。

【0569】

第２ステップ：感染の操作。Ｔ細胞及びＴＩＬ細胞を８００ｇで３ｍｉｎ遠心分離し、細胞沈殿物を無血清Ｘ－ＶＩＶＯ １５基礎培地で再懸濁させた後、細胞ＭＯＩ及びウイルス力価に応じて、対応するウイルス量を入れた。計算式：ウイルス体積＝（ＭＯＩ×細胞数）／ウイルス力価。ＭＯＩ値＝５０で末梢血Ｔ細胞及びＴＩＬ細胞を感染し、８～１２ｈ感染後にヒトＡＢ血清を最終濃度が５％ ｖ／ｖとなるように、ＩＬ－２を最終濃度が２００ＩＵ／ｍＬとなるように補充して、２４～４８ｈ培養し続けた。

【0570】

第３ステップ：細胞培養及び継代。途中で細胞に液体を補充して、細胞活性を保持してもよい。

【0571】

第４ステップ：感染効果の確認。感染後７２ｈに、細胞を少量で取り、９６ウェルプレートの１つのウェルに入れると同時に、２０μＬのルシフェラーゼの基質フルオレセインを入れ、塩希釈液を入れて、小動物生体イメージャで蛍光状況を観測した。

【0572】

その結果、Ｔ細胞及びＴＩＬ細胞はいずれも、蛍光値を明らかに検出でき、ルシフェラーゼを発現するレンチウイルスがＴ００７のＴ細胞及びＴＩＬ細胞を適切に導入されたことを示している。それぞれ、Ｔ－Ｌｕｃ細胞及びＴＩＬ－Ｌｕｃ細胞とした。

【0573】

３．ＰＤＸモデルの構築
実施例１１における「ＰＤＸモデルの構築」に記載される方法を参照しながら、Ｔ００７腫瘍組織の一部を取り、免疫不全Ｂ－ＮＤＧマウスのＴ００７腫瘍組織に基づくＰＤＸモデルを構築した。２～３代安定的に継代し、病理検出により、マウスＰＤＸ組織ではなく、依然としてヒトＰＤＸ組織であることを確認できた場合、実験要求に応じてＢ－ＮＤＧマウスに腫瘍ブロックの移植接種を行った。腫瘍ブロックの接種部位はマウスの右側鼠径部である。

【0574】

４．ＴＩＬ細胞の生体内腫瘍トロピズム検出
実験設計及び群分けは下記の表１０に示される。

【0575】

【表11】

【0576】

２により製造されたＴ－Ｌｕｃ細胞及びＴＩＬ－Ｌｕｃ細胞を遠心分離し、細胞沈殿物をＰＢＳで再懸濁させ、密度が１×１０^８／ｍＬである細胞懸濁液を調製した。３群のＴ００７ ＰＤＸ担癌マウスに表１０の実験方案で投与した。投与後１日（Ｄ１）と１０日（Ｄ１０）に、それぞれ３群のマウスにルシフェラーゼの基質フルオレセインを注射することで反応させてから、小動物生体イメージング観測装置により生体蛍光イメージングを行い、Ｔ－Ｌｕｃ細胞及びＴＩＬ－Ｌｕｃ細胞の担癌マウス生体内における分布状況を観察した。

【0577】

結果は図２７に示される。図２７に示すように、尾静脈注入１日後、末梢血に由来するＴ細胞及びＴＩＬ細胞が血液の循環により肺に顕著に集積した。注入１０日後に、蛍光生体イメージングによれば、Ｔ細胞及びＴＩＬ細胞は、腫瘍生成の傾向があるが、末梢血に由来するＴ細胞に比べて、ＴＩＬ細胞の腫瘍生成の傾向がより顕著であった。

【0578】

実施例１３：ＴＩＬ臨床注入及び生体内ＴＩＬ細胞増殖
本願に係る培養方法で取得したＴＩＬの臨床における安全性と有効性を検証するために、固形腫瘍に対するＴＩＬ注入治療の臨床試験を行った。該臨床試験は上海市第十人民病院倫理委員会により承認された。詳細についてｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｈｉｃｔｒ．ｏｒｇ．ｃｎ／を参照し、登録番号はＣｈｉＣＴＲ２１０００４４７０５であり、或いはｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖを参照し、登録番号はＮＣＴ０４７６６３２０である。また、該試験は上海交通大学医学院付属同仁病院及び蘇州大学付属第２病院と共同で実施した。ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ登録番号はそれぞれＮＣＴ０４９６７８３３とＮＣＴ０４９４３９１３である。

【0579】

研究案
１．被験者受入・除外基準及び群分け方法
受入基準：
１）１８歳≦年齢≦７５歳
２）病理診断により悪性腫瘍原発／再発／転移と診断した患者
３）期待寿命＞３ヶ月
４）Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ≧６０％又はＥＣＯＧ点数０～２点
５）現在、被験者には標準治療法を施したが失敗に終わり、或いは標準治療案がないこと
６）被験者は穿刺又は生組織切除に適する腫瘍領域を有すること、或いは悪性水腫からＴＩＬｓが分離可能であること
７）少なくとも１つの評価可能な腫瘍病巣を有すること
８）白血球計数≧２．５×１０^９／Ｌ、好中球絶対計数≧１．５×１０^９／Ｌ、血小板計数≧１００×１０^９、血色素≧９０ｇ／Ｌ
９）血清クレアチニンのクリアランスが５０ｍＬ／ｍｉｎ以上であり、クレアチニン≦１．５×ＵＬＮ、ＡＬＴ（アラニンアミノトランスアミナーゼ）／ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）＜正常群の３倍、肝転移患者＜正常群の５倍、総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ
１０）活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）≦１．５×ＵＬＮ、国際標準化比（ＩＮＲ）≦１．５×ＵＬＮ
１１）十分な静脈通路があり、手術又は穿刺術の絶対禁忌或いは相対禁忌がないこと
１２）生育能力を有する被験者は、内容を理解した上で自分の意思で、許可された高効率的な避妊方法を実施すると共に、リンパ除去案が完了した後の１年間以内で実施し続けること
１３）放射線治療、化学治療及び生物製剤を含む悪性腫瘍に対する任意の治療方法は、ＴＩＬｓを取得する２８日間前に停止すること
１４）十分な理解能力があり、自分の意思でインフォームドコンセントにサインすること。
１５）優れたコンプライアンスを有し、研究訪問計画やその他の協議書の要求に従うこと。

【0580】

除外基準：
１）糖質コルチコイドで治療する必要があり、１日用量が１５ｍｇのプレドニゾン（又は相当量のホルモン）より大きいこと
２）自己免疫性疾患のため免疫抑制治療が必要とされること
３）血清クレアチニン＞１．５×ＵＬＮ、血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＳＧＯＴ）＞５倍正常値上限、総ビリルビン＞１．５×ＵＬＮ
４）１秒間努力呼気量（ＦＥＶ１）＜２Ｌ、一酸化炭素肺拡散能（ＤＬＣＯ）（校正）＜４０％
５）顕著な心血管異常の下記何れか１の定義：ニューヨーク心臓病協会（ＮＹＨＡ）によるＩＩＩ又はＩＶ度のうっ血性心不全、臨床的に顕著な低血圧、臨床的に制御できない高血圧、制御できない症状性虚血性心疾患、又は駆出率＜３５％；臨床的に関与する必要がある心室性不整脈、ＩＩ－ＩＩＩ度房室ブロックなどの、重篤な心調律又は伝導異常
６）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症に罹患し、又はＨＩＶ抗体が検出されたこと
検出の結果、アクティブｂ型肝炎又はｃ型肝炎ウイルス感染症（ＨＢｓＡｇ陽性及び／又は抗－ＨＣＶ陽性）、梅毒感染症又は梅毒トレポネーマ抗体陽性であること
７）重篤な身体又は精神疾患。
８）血培養による陽性又は感染のイメージング証拠
９）その他の薬物、又はその他の生物治療、化学治療又は放射治療を１ヶ月以内に受けた、或いは受けていること
１０）細胞治療に類似する化学又は生物成分の化合物に対するアレルギー反応があること
１１）以前免疫治療を受け、ｉｒＡＥグレード≧３であったこと
１２）既往の抗腫瘍治療の不良反応がＣＴＣＡＥ５．０バージョングレード評価≦１グレードに回復していない（脱毛など研究者判断では安全リスクのない毒性を除く）こと
１３）妊娠期又は哺乳期女性
１４）研究者は、その他の重篤な全身性疾患の病歴を有し、又はその他の理由で、被験者が該臨床研究に適しないと判断すること

【0581】

２．治療効果の評価基準
主要な治療効果指標：
１）全奏効率（ＯＲＲ）、
２）病勢コントロール率（ＤＣＲ）、
３）奏効持続期間（ＤＯＲ）、
４）無増悪生存期間（ＰＦＳ）、
５）全生存期間（ＯＳ）。

【0582】

副次の治療効果指標：
１）臨床効果評価：完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定（ＳＤ）、進行（ＰＤ）など
２）治療前後の生活品質変化
治療効果は研究者が観察できるＯＲＲと定義される。ＲＥＣＩＳＴ１．１基準に準拠する。

【0583】

３．有害事象の記録及び処理措置
３．１有害事象の定義
有害事象（ＡＥ）：被験者がインフォームドコンセントにサインして試験に選定された時点から、最後の医学的フォローアップまでの医学的有害事象であり、身体症状、疾患又はラボ検査異常と表れることがあるが、必ずしも治療又は試験薬物と因果関係があるとは限らない。

【0584】

新しい状況又は既存状況の悪化はＡＥと見なす。例えば、関節炎など、研究に選定される前に既存し、且つ研究期間において悪化していない安定的な慢性疾患はＡＥと見なさない。異常なラボ検査結果、臨床症状又は身体症状は、研究者判断で臨床的意義を有する場合、ＡＥと見なす。

【0585】

重篤な有害事象（ＳＡＥ）：試験過程において下記何れか１つ又は複数の状況に該当する有害事象である。（１）死亡、（２）命を脅かす、即ち、重篤な患者が即時に死亡するリスクであり、将来的に進展する場合に死亡する可能性ではない、（３）入院又は入院時間が延長する、（４）永久な又は顕著な機能喪失、（５）奇形、先天性欠損に致す、（６）その他の重要な医学的事象。

【0586】

３．２．有害事象重篤度の判定基準
研究過程において発生する全ての有害事象の重篤度はＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ ５．０バージョンに基づいて評価し、１～５級に分ける。
・１級：軽度；無症状又は症状微小；臨床又は診断所見に過ぎない；治療が不要。
・２級：中度；軽度、局部又は非侵襲治療が必要；年齢に見合う手段的日常生活動作が制限される。
・３級：重篤又は医学的重要な意味を有するが、即時に命に危険を及ぼすことはない；入院又は入院時間が延長；障害に致す；個人の日常生活動作が制限される。
・４級：命に危険を及ぼす；緊急治療が必要。
・５級：ＡＥに関わる死亡。

【0587】

４．注入前の前処理
ＴＩＬ細胞を注入する前に、患者がリンパ球の前処理案（ヒドロキシクロロキン６００～８００ｍｇ×１日、シクロホスファミド２０～２５ｍｇ／ｋｇ／ｄ×３日）を受ける。前処理案に使用される薬物、用量、日数（投与回数）は、研究者が患者の実際状況に応じて判断・調整する。

【0588】

注入当日を０日目と定義する。ＴＩＬ細胞を注入する前に、研究者が患者に対して下記の化学治療前処理を行う（前処理後に患者の白血球が減少するため、病室への不要な出入りを制限、患者がマスクをつけるなど、感染予防策を講じる）。

【0589】

－５日にシクロホスファミド（Ｃｙ）２０～２５ｍｇ／ｋｇを静脈注射し、ヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ） ６００～８００ｍｇを経口投与する。

【0590】

－４日にシクロホスファミド２０～２５ｍｇ／ｋｇを静脈注射する。

【0591】

－３日にシクロホスファミド２０～２５ｍｇ／ｋｇを静脈注射する。

【0592】

－２、－１日に患者が休憩する。

【0593】

０日にＴＩＬ細胞を注入する。

【0594】

５．ＴＩＬ細胞注入及び治療効果評価
前述した４回の注入前の前処理が完了した後の０日目に患者に注入する。各患者に１回注入し、１回の注入用量が２×１０^１０～５×１０^１０個のＴＩＬ細胞であり、注入する細胞製剤の細胞密度が１．０×１０^８／ｍＬ～２．０×１０^８／ｍＬであり、注入する細胞製剤の体積が２００ｍＬ～６００ｍＬである。０日目に患者にＴＩＬ細胞を注入し、注入後にサイトカインを投与しない。注入後に患者を５～８日入院させて、患者の注入後状況を観測しながら記録する。患者が内容を理解・了承した上で、異なる時点で患者の末梢血を採取して、ＰＢＭＣの成分と変化を検出し、注入後１～３ヶ月でイメージングによる効果評価を行う。

【0595】

６．ＴＩＬ臨床注入の結果
現在まで１６名の被験者を選定した。下記に示される表１１には、臨床効果評価を受けたそのうちの１１名の患者の基本状況が記載されている（評価時間が注入後１～３ヶ月以内である）。

【0596】

【表12】

【0597】

１６名の被験者のうち、有害事象はグレード１の寒気５名（３１．３％）、グレード１の発熱７名（４３．８％）、グレード２の発熱６名（３７．５％）を含み、全ての症状が時間経過に伴って消える。それ以外、その他の有害事象を観察していない。

【0598】

Ｔ０１７患者はイメージング評価により腫瘍が顕著に縮小することを示し、部分奏効（ＰＲ）と判定した。該患者に対して、ＴＩＬ細胞注入前後にそれぞれ末梢血を採取し、一部の腫瘍マーカーのレベルを検出した。比較結果が下記の表１２に示される。

【0599】

【表13】

【0600】

表１２の結果によれば、Ｔ０１７患者は、注入前に、上記の幾つかの腫瘍マーカーのうち、正常範囲にあるα－フェトプロテインとＣＡ１９９を除き、その他が正常範囲を大幅に上回る。ＴＩＬ注入後３０日に該患者の末梢血における上記腫瘍マーカーを再度検出した結果、正常範囲を上回った腫瘍マーカーのうち、正常範囲を僅か上回るヒト精巣上体タンパク４を除き、その他が正常範囲に回復又は維持する。

【0601】

図２８はＴ００９患者のＴＩＬ細胞注入後のイメージング評価結果を示す。核磁気共鳴イメージングの結果によれば、注入前の腫瘍病巣サイズが約３ｃｍである。注入前に比べて、該患者はＴＩＬ注入後６週間に腫瘍病巣が顕著に縮小した（当時、部分奏効ＰＲと判定）。注入１０週間後に、腫瘍はイメージングにより検出できなくなり、ＲＥＣＩＳＴ １．１指針基準に従って、完全奏効（ＣＲ）と判定した。

【0602】

患者は、注入前から注入後１２０日の期間内の、複数の異なる時点で採血及び血液検査を行った。Ｔ００９患者が内容を理解・了承した上で、該患者のＴＩＬ注入当日の注入前（Ｄ０）及び注入後２、７、１１、１３、１７、２４、２９、３１、４３、４９、５３、５９日目（Ｄ２、Ｄ７、Ｄ１１、Ｄ１３、Ｄ１７、Ｄ２４、Ｄ２９、Ｄ３１、Ｄ４３、Ｄ４９、Ｄ５３、Ｄ５９）に採取した末梢血から、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離法によりＰＢＭＣを単離した後に、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で細胞を分解し、細胞分解液からＲＮＡを抽出して、ＴＣＲ β鎖ＣＤＲ３領域のＲＮＡシークエンシング（ＴＣＲ－ｓｅｑ，Ｉｍｍｕｑｕａｄ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を行うと共に、患者に臨床注入するためのＴ００９ ＴＩＬ製品細胞に対してＴＣＲ β鎖ＣＤＲ３領域のＴＣＲ－ｓｅｑを行い、さまざまな時点における末梢血ＰＢＭＣ及び注入するＴＩＬ製品細胞のＴＣＲβ鎖ＣＤＲ３ライブラリーを取得した。ＴＣＲ－ｓｅｑにより取得したＤ０、Ｄ２、Ｄ７、Ｄ１１、Ｄ１３、Ｄ１７、Ｄ２４、Ｄ２９、Ｄ３１、Ｄ４３、Ｄ４９、Ｄ５３、Ｄ５９のＴＣＲβ鎖ＣＤＲ３ライブラリーのそれぞれをＴＩＬ製品細胞のＴＣＲβ鎖ＣＤＲ３ライブラリーに比べることで、重なり合うＴＣＲはＴＩＬ注入前後のさまざまな時点（Ｄ２、Ｄ７、Ｄ１１、Ｄ１３、Ｄ１７、Ｄ２４、Ｄ２９、Ｄ３１、Ｄ４３、Ｄ４９、Ｄ５３、Ｄ５９）における患者末梢血に注入するＴＩＬ細胞のクローン型に対応するＴＣＲである。

【0603】

図２９は患者の注入前から注入後約１２０日の期間内の、末梢血における白血球、好中球及びリンパ球の数の変化傾向曲線図である。図３０は図２９における注入前から注入後２０日までの部分拡大図である。図２９及び３０によれば、注入前の前処理から注入当日（Ｄ０）まで、上記の３種類の細胞の絶対計数が顕著に低下した。Ｄ０から、白血球、好中球の２種類の絶対計数は低下し続き、Ｄ１０前後まで白血球と好中球は共に最低レベルまで低下した。これは、文献に報道される内容と同様である（Ｍ Ｅ Ｇｅｒｓｈｗｉｎ， Ｅ Ｊ Ｇｏｅｔｚｌ， Ａ Ｄ Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ： ｕｓｅ ｉｎ ｐｒａｃｔｉｃｅ Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ． １９７４ Ａｐｒ；８０（４）：５３１－４０）。一方、リンパ球計数は、Ｄ０から顕著に上昇し、その上昇傾向がＤ０後の１週間で特に著しく、白血球、好中球の２種類の細胞の絶対計数の低下傾向とは顕著に対照的であるため、ＴＩＬ細胞注入後に、リンパ球がインビボで顕著に増殖したことを示している。

【0604】

図３１は、患者の末梢血に注入するＴＩＬ細胞のＴＣＲクローン型の頻度及びリンパ球の総数の経時変化の重ね合せ傾向である。図３１によれば、注入当日に、ＴＩＬを注入するＴＣＲクローン型の頻度が一瞬でピークに達し、その後低く低下してから、また上昇し続き、しかも注入後３０日までこの上昇傾向がリンパ球の総数の上昇傾向と高度的に重なり合うため、患者の末梢血におけるリンパ球の数の注入後の顕著な上昇がＴＩＬを注入するＴＣＲクローン型の増殖と高度的に関わることを示している。

【0605】

図２９、３０、及び３１の結果によれば、本発明に係るＴＩＬ製品細胞は、低用量のシクロホスファミド＋ヒドロキシクロロキンにより前処理を行われた患者に注入すると、生体内で積極的且つ有効的に増殖できる。

【0606】

比較例
中国特許出願ＣＮ１１０７８５４８６Ａの明細書の１４２ページの実施例１９に記載される方法の過程２Ａ（即ち、明細書に記載されるＧｅｎ２製造方法）を利用して、ＣＮ１１０７８５４８６Ａの明細書の１７７ページの実施例２７に開示されたｐｒｅ－ＲＥＰ培養段階（即ち、本願に係る種細胞培養段階に対応）でＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１を添加する技術案と組み合わせて、実施例２の表４におけるＴ００４、Ｔ００９、Ｔ０１３、Ｔ０１４組織サンプルからＴＩＬ製品細胞を製造した。採用される製造方法は、ＣＮ１１０７８５４８６Ａの明細書の実施例１９、２７及びその他の全ての関連実施例に記載される方法であり、方法参照先のＣＮ１１０７８５４８６Ａの全文が引用により本願に組み込まれている。参照するＴＩＬ製造方法の必要とされるフィーダー細胞が健康人のＰＢＭＣに由来する。

【0607】

ＣＮ１１０７８５４８６Ａに記載される製造方法（以下「比較方法」と呼ぶ）及び本発明に係る製造方法（以下「本方法」と呼ぶ）で製造された最終のＴＩＬ製品細胞についてそれぞれ下記の指標検出と比較を行った。

【0608】

１）細胞計数と生存率、
２）ＣＤ４５^＋細胞の全細胞に占める比率、
３）ＣＤ３^＋細胞のＣＤ４５^＋細胞に占める比率、
４）ＣＤ４^＋細胞及びＣＤ８^＋細胞のＣＤ３^＋細胞に占める比率、
５）メモリーＴ細胞のＣＤ３^＋細胞に占める比率、
６）ＩＦＮ－γ分泌レベル、
７）Ｔ細胞疲弊レベル、
８）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のＣＤ３^＋細胞に占める比率。
メモリーＴ細胞比率、疲弊Ｔ細胞、活性化Ｔ細胞はフローサイトメータにより検出する。具体的には、ＴｃｍはＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７^＋細胞を検出することで決定され、ＴｅｍはＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７^－細胞を検出することで決定され、疲弊Ｔ細胞はＬａｇ３^＋細胞を検出することで決定され、ＩＦＮ－γ分泌レベルの検出は本願に係る実施例２に記載される方法を採用し、ＴｒｅｇはＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^＋細胞を検出することで決定される。

【0609】

結果は表１３に示される。

【0610】

【表14】

【0611】

表１３の結果によれば、比較方法で培養されたＴＩＬ製品細胞は、細胞数、生存率、ＣＤ４５^＋細胞比率、ＣＤ３^＋／ＣＤ４５^＋比率の指標が、本方法で培養されたＴＩＬ製品細胞と大体同じである。２つの方法で培養されたＴＩＬ製品細胞におけるＣＤ８^＋細胞のＣＤ３^＋細胞に占める比率はほぼ同じであり、比較方法で培養されたＴＩＬ細胞におけるＣＤ４^＋細胞の比率は比較的に高く、本方法で培養されたＴＩＬ細胞における一部の細胞はＣＤ４^－ＣＤ８^－ＣＤ３^＋ Ｔ細胞であり、即ち、ダブルネガティブＴ細胞である。２つの方法で培養されたＴＩＬ細胞のメモリーＴ細胞表現型において、ＴｃｍのＴ細胞総数に占める比率は１０％程度で最高であり、２つのＴＩＬ細胞のＩＦＮ－γ分泌レベルも大体同じである。一方、比較方法で培養されたＴＩＬ細胞に比べて、本発明に係る方法では、４つの組織サンプルにおいて培養されたＴＩＬ製品細胞は、疲弊Ｔ細胞とＴｒｅｇ比率に関して顕著に低いため、本方法で培養されたＴＩＬ細胞がインビボ・インビトロにおいて活性化、増殖と殺傷性能に関してより大きな潜在的優位性を有する。

【0612】

以上、本願の実施形態について詳しく記述したが、本願は上記実施形態の詳細内容に限定されず、本願の技術範囲内で本願の技術案について様々な簡易な変形をしてもよく、これらの簡易な変形は本願の保護範囲である。なお、上記具体的な実施形態に記述された各具体的な技術特徴は、矛盾が生じない限り、任意の適切な方式で組み合わせられてもよく、必要でない繰返しがないように、本願は可能な各組合せ方式について別途で説明しない。さらに、本願の各種の実施形態も互いに任意に組み合わせられてもよく、本願の趣旨から逸脱しない限り、本願に開示された内容と見なされる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【国際調査報告】