特表 2024-501148 Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を促進することにおいて使用するための２’－フコシルラクトース

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-11

(54)【発明の名称】Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を促進することにおいて使用するための２’－フコシルラクトース

(51)【国際特許分類】

   A23L 33/125 20160101AFI20231228BHJP

   A61K 31/7016 20060101ALI20231228BHJP

   A61K 31/702 20060101ALI20231228BHJP

   A61K 31/718 20060101ALI20231228BHJP

   A61P 25/20 20060101ALI20231228BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20231228BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20231228BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20231228BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20231228BHJP

   A61P 25/22 20060101ALI20231228BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20231228BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20231228BHJP

   A23L 33/21 20160101ALI20231228BHJP

【ＦＩ】

A23L33/125

A61K31/7016

A61K31/702

A61K31/718

A61P25/20

A61P31/14

A61P29/00

A61P1/04

A61P3/10

A61P25/22

A61P17/00

A61P37/08

A23L33/21

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023533292

(86)(22)【出願日】2021-11-30

(85)【翻訳文提出日】2023-05-31

(86)【国際出願番号】 EP2021083489

(87)【国際公開番号】W WO2022117538

(87)【国際公開日】2022-06-09

(31)【優先権主張番号】20211089.6

(32)【優先日】2020-12-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】21161030.8

(32)【優先日】2021-03-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】21171500.8

(32)【優先日】2021-04-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】505310426

【氏名又は名称】フリースランドカンピーナ ネーデルランド ベスローテン フェンノートシャップ

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ナウタ、アリエン

【テーマコード（参考）】

4B018

4C086

【Ｆターム（参考）】

4B018LB08

4B018LB10

4B018LE01

4B018LE02

4B018LE03

4B018MD03

4B018MD05

4B018MD20

4B018MD23

4B018MD29

4B018MD31

4B018MD47

4B018ME09

4B018ME11

4B018ME14

4B018MF02

4C086AA10

4C086EA01

4C086EA20

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA05

4C086ZA12

4C086ZA68

4C086ZA89

4C086ZB11

4C086ZB13

4C086ZB33

4C086ZC35

(57)【要約】

ヒト対象の胃腸管におけるフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させるための食物繊維の調製物であって、前記調製物中の食物繊維は、２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）と、任意選択的に、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、難消化性デンプン、ポリデキストロース及び２’－フコシルラクトース以外のヒトミルクオリゴ糖からなる群から選択される１種以上のさらなるオリゴ糖とから実質的になる、調製物。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト対象の胃腸管におけるフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させるための食物繊維の調製物の非治療的使用であって、前記調製物中の前記食物繊維は、２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）と、任意選択的に、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、難消化性デンプン、ポリデキストロース及び２’－フコシルラクトース以外のヒトミルクオリゴ糖からなる群から選択される１種以上のさらなるオリゴ糖とから実質的になる、非治療的使用。

【請求項2】

前記ヒト対象は、１歳超の年齢、好ましくは３歳超、より好ましくは１８歳超、特に好ましくは４０歳超、さらにより好ましくは５０歳超、特により好ましくは６０歳超及び最も好ましくは６５歳超の年齢である、請求項１に記載の非治療的使用。

【請求項3】

前記ヒト対象は、前記胃腸管におけるフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の平均未満の存在量を有する、請求項１又は２に記載の非治療的使用。

【請求項4】

睡眠の質及び／又は睡眠の持続性を改善するための、請求項１～３のいずれか一項に記載の非治療的使用。

【請求項5】

睡眠の質及び／又は睡眠の持続性に対する食物繊維、好ましくはオリゴ糖、より好ましくはガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）の効果を高めるための、請求項１～３のいずれか一項に記載の非治療的使用。

【請求項6】

前記調製物は、少なくとも０．０１グラム、より好ましくは少なくとも０．０２グラム、さらにより好ましくは少なくとも０．０４グラム、より好ましくは少なくとも０．０６グラム、より好ましくは少なくとも０．０８グラム及び最も好ましくは少なくとも０．１０グラムの１日２’－ＦＬ投与量で前記ヒト対象に投与される、請求項１～５のいずれか一項に記載の非治療的使用。

【請求項7】

前記調製物は、２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）及びガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）を０．０５：１～２：１、より好ましくは０．１０：１～１：１、好ましくは０．２０：１～０．５：１及び最も好ましくは０．２５：１～０．５：１の２’－ＦＬ：ＧＯＳ重量比で含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の非治療的使用。

【請求項8】

前記調製物は、脂質、可消化炭水化物、タンパク質及び／又はビタミンから選択されるさらなる成分を追加的に含む栄養組成物の一部である、請求項１～７のいずれか一項に記載の非治療的使用。

【請求項9】

ＣＯＶＩＤ－１９若しくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎若しくはクローン病などの炎症性腸症状、糖尿病、不安及び／又はアトピー性皮膚炎などのアレルギーを患っているか又はそれを発症するリスクがあるヒト対象の胃腸管におけるフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させることにおいて使用するための食物繊維の調製物であって、前記調製物中の前記食物繊維は、２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）と、任意選択的に、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、難消化性デンプン及び２’－フコシルラクトース以外のヒトミルクオリゴ糖からなる群から選択される１種以上のさらなるオリゴ糖とから実質的になる、調製物。

【請求項10】

２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）及びガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）を０．０５：１～２：１、より好ましくは０．１０：１～１：１、好ましくは０．２０：１～０．５：１及び最も好ましくは０．２５：１～０．５：１の２’－ＦＬ：ＧＯＳ重量比で含む、請求項９に記載の使用のための調製物。

【請求項11】

少なくとも０．０１グラム、より好ましくは少なくとも０．０２グラム、さらにより好ましくは少なくとも０．０４グラム、より好ましくは少なくとも０．０６グラム、より好ましくは少なくとも０．０８グラム、さらにより好ましくは少なくとも０．１０グラム、より好ましくは少なくとも０．５グラム、さらにより好ましくは少なくとも１．０グラム及び最も好ましくは少なくとも２．０グラムの１日２’－ＦＬ投与量で前記ヒト対象に投与される、請求項９又は１０に記載の使用のための調製物。

【請求項12】

最大で４０グラム、より好ましくは最大で３０グラム、さらにより好ましくは最大で２０グラム及び最も好ましくは最大で１０グラムの１日２’－ＦＬ投与量で前記ヒト対象に投与される、請求項９～１１のいずれか一項に記載の使用のための調製物。

【請求項13】

請求項９～１２のいずれか一項に記載の使用のための調製物と、脂質、可消化炭水化物、タンパク質、プロバイオティクス及び／又はビタミンから選択されるさらなる成分とを含む栄養組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ヒト対象の胃腸管におけるフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を促進することにおいて使用するための、少なくとも２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）を含む食物繊維の調製物に関する。

【背景技術】

【0002】

腸内微生物叢における細菌種の性質は、摂取される食品によって大きく左右されることになる。種々の有益な腸内細菌は、オリゴ糖及び多糖類などの食物繊維を摂取する。

【0003】

ヒトの母乳は、例えば、特に腸内における細菌のコロニー形成及び病原体からの保護など、乳児の健康に有益な影響を有することが示されている種々のオリゴ糖（ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）と分類される）を含有する。例えば、地理的起源及び遺伝的背景に応じて、ヒトの母乳中のＨＭＯの量及び多様性は、女性によって様々であるが、ヒトの母乳は、主に、フコシル化ＨＭＯ（３５～５０％）、シアル酸付加ＨＭＯ（１２～１４％）及び非フコシル化天然ＨＭＯ（４２～５５％）の３つのＨＭＯタイプを含有すると言うことができる。フコシル化ＨＭＯは、ヒトの母乳中に最も多く含まれるＨＭＯである２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）を含む。

【0004】

健康上の有益性に関連する腸内微生物叢種の１種は、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）である。Ｍ．Ｌｅｂａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ２０２０，８，１５２８に開示されているとおり、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）は、健常な対象で優勢であると共に、多く存在するグラム陰性バクテリアである。これは、クローン病及び潰瘍性大腸炎などの炎症性腸症状に対して有効であることが種々の研究で示されている。

【0005】

Ｋ．Ｇａｎｅｓａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．，２０１８，１９，３７２０は、糖尿病に対するＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の効果をレビューしている。

【0006】

Ｔ．Ｔｏｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｆｏｏｄｓ ２０１８，７，１４０は、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を、アトピー性皮膚炎などのアレルギーに関連する症状の改善と関連付けている。

【0007】

うつ状態及び不安に対するＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の効果は、Ｚ．Ｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２０１９；１０４，１３２－１４２で研究及び報告されている。

【0008】

さらに、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）は、種々の腸の状態に対する好適なバイオマーカーであるようである。Ｍ．Ｌｏｐｅｚ－Ｓｉｌａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ＩＳＭＥ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１７，１１，８４１－８５２を参照されたい。

【0009】

Ｎ．Ｓａｌａｚａｒ，Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ，２０１９，１１，１７６５に示されているとおり、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量は、年齢と共に低減し、特に６５歳を超えると顕著である。

【0010】

コロナウイルスパンデミックとしても知られるＣＯＶＩＤ－１９パンデミックは、重篤性急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）により引き起こされるコロナウイルス疾病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の継続中のパンデミックである。ＣＯＶＩＤ－１９パンデミックは、２０１９年１２月に中国の武漢で初めて確認された。世界保健機関は、２０２０年１月に国際的に懸念される公衆衛生上の緊急事態の発生及び２０２０年３月にパンデミックの発生を宣言した。２０２１年３月４日現在、１億１５００万人を超える事例が確認されており、ＣＯＶＩＤ－１９に起因する死亡者は、２５５万人を超え、史上最も犠牲者を伴うパンデミックの１つとなっている。

【0011】

Ｙｅｏｈ ＹＫ，ｅｔ ａｌ．（Ｇｕｔ ２０２１；０：１－９．ｄｏｉ：１０．１１３６／ｇｕｔｊｎｌ－２０２０－３２３０２０）は、患者が投薬を受けたか否かに関わらず、腸内ミクロビオーム組成が非ＣＯＶＩＤ－１９個体と比べてＣＯＶＩＤ－１９患者で顕著に変化していたことを示した（ｐ＜０．０１）。フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）など、既知の免疫調節能を有するいくつかの種の腸内細菌は、患者に少数のみ存在し、疾病の治癒後３０日間以内に回収したサンプルでも少数のままであった。さらに、この乱れた組成は、Ｃ反応性タンパク、乳酸脱水素酵素、アスパラギン酸アミノ基転移酵素及びγ－グルタミルトランスフェラーゼなどの炎症性サイトカイン及び血液マーカーの濃度の上昇と一致する疾病の重症度の層別化を示した。腸内微生物叢の組成と、ＣＯＶＩＤ－１９の患者におけるサイトカイン及び炎症性マーカーのレベルとの関連性は、場合により宿主免疫応答の調節を介して、ＣＯＶＩＤ－１９重症度の程度に腸内ミクロビオームが関与していることを示唆している。さらに、疾病の治癒後の腸内微生物叢腸内毒素症は、症状の持続に関与している可能性がある。

【0012】

従って、ヒト対象の胃腸管におけるＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させることができる処置は、ＣＯＶＩＤ－１９又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症に係る症状を予防、治療又は緩和する効果を有することが期待される。

【0013】

「処置」という用語は、所与の疾病又は病気に関連して、特に限定されないが、疾病若しくは病気の阻害（例えば、疾病若しくは病気の発症の抑止）、疾病若しくは病気の緩和（例えば、疾病若しくは病気の退行をもたらす）；及び／又は疾病若しくは病気に起因するか若しくはその結果として生じる病状の緩和（例えば、疾病若しくは病気の症状の緩和、予防若しくは治療）を含む。

【0014】

「予防」という用語は、所与の疾病又は病気に関連して、依然として何も生じていない場合における疾病の発症の開始の予防、病気若しくは疾病の素因があり得るが、病気若しくは疾病を有すると依然として診断されていない対象における疾病若しくは病気の予防及び／又は既に存在する場合にはさらなる疾病／病気の発症の予防を意味する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0015】

従って、本発明の目的は、好ましくは、非乳児、より好ましくは６５歳を超える高齢者などの成人などのヒト対象の胃腸管におけるＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させることができる調製物及び栄養組成物を提供することである。

【0016】

本明細書における非乳児ヒト対象は、少なくとも３歳の年齢のヒト対象と定義される。

【0017】

本発明のさらなる目的は、ＣＯＶＩＤ－１９／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、炎症性腸症状、糖尿病、不安及び／又はアトピー性皮膚炎などのアレルギーを患っているか又はそのリスクが高い、好ましくは非乳児、より好ましくは成人、さらにより好ましくは６５歳を超える高齢者などのヒト対象の胃腸管におけるＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させることにおいて使用するための調製物及び栄養組成物を提供することである。

【0018】

本発明の別の目的は、ヒト対象、好ましくは非乳児、より好ましくは成人、最も好ましくは６５歳を超える高齢者におけるＣｏｖｉｄ－１９又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２感染症の重症度を低減させることにおいて使用するための調製物及び栄養組成物を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0019】

この目的は、これらの対象に食物繊維の調製物を投与することによって満たされ得ることがここで見出され、前記調製物中の食物繊維は、食物繊維として、２’－ＦＬと、任意選択的に、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ポリデキストロース、難消化性デンプン及び２’－フコシルラクトース以外のヒトミルクオリゴ糖からなる群から選択される１種以上のさらなるオリゴ糖とから実質的になる。

【発明を実施するための形態】

【0020】

「前記調製物中の食物繊維は、２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）と、任意選択的に、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、難消化性デンプン、ポリデキストロース及び２’－フコシルラクトース以外のヒトミルクオリゴ糖からなる群から選択される１種以上のさらなるオリゴ糖とから実質的になる」に用いられる「～から実質的になる」という用語は、この調製物が、列挙されているもの以外の食物繊維をいかなる材料量でも含有しないことを意味する。

【0021】

「材料量」は、腸内における細菌のコロニー形成に影響を与えない量として定義され、実際には、食物繊維の乾燥重量に基づいて＜５重量％、より好ましくは＜１重量％となる。調製物は、従って、イソマルトオリゴ糖；α－Ｄ－（１，６）結合を有する難消化性グルコースオリゴマーをいかなる量（材料量）でも含有しない。

【0022】

好ましい実施形態では、調製物は、唯一の食物繊維として、２’－ＦＬと、任意選択的なさらなるオリゴ糖とからなる。

【0023】

調製物は、水、単糖類（例えば、フルクトース、グルコース、ガラクトース）、スクロース及び／又はラクトースなどの食物繊維と分類できない化合物を含有し得る。

【0024】

ここで、成人及び高齢対象の糞便物質のインビトロ試験において、２’－ＦＬは、このようなヒト対象におけるＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させることが可能であることが示されている。

【0025】

これは、Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０２０，Ｖｏｌｕｍｅ １１，ａｒｔｉｃｌｅ ５６９７００）により行われたインビトロ試験において、２’－ＦＬが単独培養におけるＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量に影響を与えないと結論付けられていることを考慮すると特に意外である。ビフィドバクテリウム・ロンガム亜種インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐ．ｉｎｆａｎｔｉｓ）との共培養でも、２’－ＦＬは、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させることができなかった。明らかに且つ意外にも、本インビトロ試験に従うと、腸内ミクロビオームを表す共培養において、２’－ＦＬは、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させることが可能である。

【0026】

さらに、ラットにおける試験では、２’－ＦＬの投与の結果、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量の低減が示された（Ｆ．Ｃｈｅｉｌａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ ２０２０，１２，１５３２）。

【0027】

また、米国特許出願公開第２０１８／００１５０３２号明細書は、２’－ＦＬ及びイソマルトオリゴ糖（ＩＭＯ）の２：５重量比混合物を含む栄養組成物で処置した成人のヒトでのＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）レベルの上昇を報告しているが、この増加が２’－ＦＬ、ＩＭＯ又はこの組み合わせの投与に起因していたかは、明らかにされないままであった。

【0028】

本発明は、従って、ヒト対象の胃腸管におけるフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させるための食物繊維の調製物の使用に関し、前記調製物中の食物繊維は、２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）と、任意選択的に、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ポリデキストロース、難消化性デンプン及び２’－フコシルラクトース以外のヒトミルクオリゴ糖からなる群から選択される１種以上のさらなるオリゴ糖とからなる。この使用は、治療的又は非治療的であり得る。

【0029】

ヒト対象は、２歳超、好ましくは３歳超、より好ましくは１８歳超、特に好ましくは４０歳超、さらにより好ましくは５０歳超、特により好ましくは６０歳超及び最も好ましくは６５歳超の年齢など、１歳を超えた年齢である。

【0030】

好ましくは、ヒト対象は、胃腸管におけるフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の平均未満の存在量を有する。

【0031】

ヒト対象は、健常なヒト対象であり得るが、炎症性腸症状（炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎若しくはクローン病など）、Ｃｏｖｉｄ－１９若しくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、糖尿病、アレルギー（アトピー性皮膚炎など）、不安、睡眠病気、睡眠不足、断眠及び／又は睡眠欲求の増加を患っているか又はそれを発症するリスクがあるヒト対象でもあり得る。

【0032】

本明細書で用いられる場合、胃腸管中のＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の平均存在量よりも低いとは、対象の胃腸管におけるＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の数が、同じ年齢群に属する１０人の健常な対象群の腸管におけるＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の数の平均と比べて低いことを指す。健常な対象は、疾病と診断されておらず、腸管に関する何らかの問題を患っていない対象である。年齢群は、０～最大で１歳、１～最大で３歳、３～最大で１０歳、１０～最大で１８歳、１８～最大で２０歳、２０～最大で３０歳、３０～最大で４０歳、４０～最大で５０歳、５０～最大で６０歳、６０～最大で７０歳、７０～最大で８０歳、８０～最大で９０歳及び９０～最大で９０歳と定義される。

【0033】

本明細書で用いられる場合、対象の胃腸管におけるＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量の増加は、２’－ＦＬを介入させた後（１～５ｍｇ／日、少なくとも２週間）における、介入前と比べた対象の胃腸管中のＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の数の増加を指す。増加は、好ましくは、少なくとも３％、より好ましくは少なくとも８％、少なくとも１０％など、さらにより好ましくは少なくとも１５％である。増加の程度は、２’－ＦＬの１日投与量に応じ得る。Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量は、実施例で以下に記載のとおりに決定され得る。

【0034】

本発明は、ＣＯＶＩＤ－１９若しくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎若しくはクローン病などの炎症性腸症状、糖尿病、不安及び／又はアトピー性皮膚炎などのアレルギーを患っているか又はそのいずれかの発症リスクが高いヒト対象の胃腸管におけるフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量を増加させることにおいて使用するための、２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）と、任意選択的に、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ポリデキストロース、難消化性デンプン及び２’－フコシルラクトース以外のヒトミルクオリゴ糖からなる群から選択される１種以上のさらなるオリゴ糖とからなる食物繊維の調製物にさらに関する。

【0035】

調製物は、好ましくは、少なくとも０．０１グラム、より好ましくは少なくとも０．０２グラム、さらにより好ましくは少なくとも０．０４グラム、より好ましくは少なくとも０．０６グラム、より好ましくは少なくとも０．０８グラム、さらにより好ましくは少なくとも０．１０グラム、より好ましくは少なくとも０．５グラム、さらにより好ましくは少なくとも１．０グラム及び最も好ましくは少なくとも２．０グラムの１日２’－ＦＬ投与量でヒト対象に投与される。

【0036】

１日２’－ＦＬ投与量は、好ましくは、最大で４０グラム、より好ましくは最大で３０グラム、さらにより好ましくは最大で２０グラム及び最も好ましくは最大で１０グラムである。

【0037】

調製物は、食物繊維として２’－ＦＬのみを含有するか、又は食物繊維として、２’－ＦＬ以外に、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、難消化性デンプン（ＲＳ）、ポリデキストロース（ＰＤＸ）及び２’－フコシルラクトース以外のヒトミルクオリゴ糖からなる群から選択される１種以上のオリゴ糖を含有する。

【0038】

調製物中に存在する好ましいオリゴ糖は、ＧＯＳ及び／又はＦＯＳである。最も好ましいオリゴ糖は、ＧＯＳである。

【0039】

ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）の基本構造は、約７ガラクトース残基以下（重合度８；ＤＰ８）まで延在する還元末端におけるラクトース核を含む。

【0040】

市販のＧＯＳ調製物は、一般に、およそ１００種の異なる種類の構造並びに様々なＤＰ及び結合を有するオリゴマーの混合物がもたらされる、β－ガラクトシダーゼ酵素（ＥＣ．３．２．１．２３）によるラクトースの酵素処理によるトランスガラクトシル化反応を介して生成される。β－ガラクトシダーゼは、バチルス・シルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、クルイベロマイセス・マルシアナス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ）、クルイベロマイセス・フラジリス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、スポロボロマイセス・シングラリス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ ｓｉｎｇｕｌａｒｉｓ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）及びパピリオトレマ・テレストリス（Ｐａｐｉｌｉｏｔｒｅｍａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）（クリプトコッカス・パピリオトレマ・テレストリス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｐａｐｉｌｉｏｔｒｅｍａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ））などの多くの微生物で産生される。β－ガラクトシダーゼは、その三次元構造において異なり、その結果としてグリコシド結合のステレオ選択的形成及びレジオ選択的形成がもたらされる。酵素反応後、ＧＯＳは、ナノろ過及び／又は擬似移動床クロマトグラフィ（ＳＭＢ）などの従来の方法を用いて単離及び精製される。得られる生成物は、必要に応じて乾燥（例えば、噴霧乾燥、凍結乾燥又は噴霧冷却により）されて粉末を形成し得るＧＯＳ含有シロップである。

【0041】

特に好ましいタイプのＧＯＳは、バチルス・シルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）由来のβ－ガラクトシダーゼ酵素により調製された、Ｂｉｏｔｉｓ（商標）ＧＯＳなどのＧＯＳである。Ｂ．シルクランス（Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）由来のβ－ガラクトシダーゼは、特に強いトランスガラクトシル化活性を有すると共に、世界的に商品化されている。

【0042】

フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）は、イヌリン分解又はトランスフルクトシル化プロセスのいずれかによって商業的に生成されている。イヌリンは、多くの種類の植物によって生成される天然の多糖であり、工業的にはチコリーから最も多く抽出されている。イヌリンは、ポリフルクトース：末端α（１→２）結合Ｄ－グルコースとの、β（２→１）結合により結合したＤ－フルクトース残基のポリマーである。イヌリンの重合度は、約１０～約６０の範囲である。イヌリンは、酵素的又は化学的に、一般構造Ｇｌｕ－Ｆｒｕ_ｎ（ＧＦｎ）及びＦｒｕ_ｍ（Ｆｍ）（ここで、ｎ及びｍは、１～約７の範囲である）を有するオリゴ糖の混合物に分解され得る。このプロセスは、自然界でもある程度生じるものであり、これらのオリゴ糖は、特にキクイモ（Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ ａｒｔｉｃｈｏｋｅ）、チコリー及びブルーアガベ植物などの多数の植物に見出すことができる。市販のＦＯＳの主成分は、ケストース（ＧＦ２）、ニストース（ＧＦ３）、フルクトシルニストース（ＧＦ４）、ビフルコース（ＧＦ３）、イヌロビオース（Ｆ２）、イヌロトリオース（Ｆ３）及びイヌロテトラオース（Ｆ４）である。

【0043】

ＦＯＳの第２の分類は、スクロースに対するβ－フルクトシダーゼ（例えば、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）又はアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）由来）のトランスフルクトシル化作用によって調製される。得られる混合物は、ＧＦ_ｎ（ｎは１～５の範囲）の一般式を有する。

【0044】

難消化性デンプン（ＲＳ）は、小腸で消化されない食物デンプンの一部である。

【0045】

ポリデキストロース（ＰＤＸ）は、合成的に生成されるグルコース単位の分岐ポリマーである。ポリデキストロースは、可溶性繊維の形態であり、健康上の有益性を示す。

【0046】

２’－ＦＬ以外のＨＭＯの例としては、３’－フコシルラクトース（３’－ＦＬ）などのフコシル化ラクトース、３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ）及び６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ）などのシアル酸付加ラクトース並びにラクト－Ｎ－テトラオース（ＬＮＴ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）などの四糖が挙げられる。

【0047】

食物繊維の調製物が２’－ＦＬに追加して１種以上のオリゴ糖を含有する場合、それは、好ましくは、２’－ＦＬ及びさらなるオリゴ糖を０．０５：１～２：１、より好ましくは０．０８：１～２：１、さらにより好ましくは０．１０：１～１：１、さらにより好ましくは０．２０：１～０．５０：１及び最も好ましくは０．２５：１～０．５：１の２’－ＦＬ：さらなるオリゴ糖重量比で含む。

【0048】

より好ましくは、このさらなるオリゴ糖は、ＦＯＳ及び／又はＧＯＳであり、これは、２’－ＦＬ：（ＦＯＳ＋ＧＯＳ）重量比が好ましくは０．０５：１～２：１、より好ましくは０．０８：１～２：１、さらにより好ましくは０．１０：１～１：１、さらにより好ましくは０．２０：１～０．５０：１及び最も好ましくは０．２５：１～０．５０：１であることを意味する。

【0049】

最も好ましくは、このさらなるオリゴ糖は、ＧＯＳであり、２’－ＦＬ：ＧＯＳ重量比は、好ましくは、０．０５：１～２：１、より好ましくは０．０８：１～２：１、より好ましくは０．１０：１～１：１、さらに好ましくは０．２０：１～０．５０：１及び最も好ましくは０．２５：１～０．５０：１である。

【0050】

上記の重量比は、オリゴ糖（ＤＰ≧２）の乾燥重量に基づいており、従って単糖含有量が除かれる。

【0051】

理論的には、ＧＯＳ及び２’－ＦＬを含む食物繊維の混合物をヒト対象に投与すると、ビフィズス菌、特にＢ．アドルセンシス（Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｓｉｓ）及びＢ．ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）と、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）との間である種の栄養共生が生じるとされている。

【0052】

さらに、ヒト対象の加齢に際して、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量が減少するのみならず、近位結腸におけるビフィズス菌の存在量も減少する。２’－ＦＬ及びＧＯＳの併用は、従って、微生物叢組成及びヒト対象の活性をさらに改善するであろう。

【0053】

加えて、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量は、一定の睡眠治療に対する効果に影響を有し得ることが強く示唆されている。オリゴ糖、特にガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）などの食物繊維は、睡眠の質及び／又は睡眠の持続性に効果を有することが知られている。このような治療に対して反応がある対象中の腸内微生物叢は、このような治療に対して反応がない対象のものに対して大きく異なることがここで見出された。反応群及び非反応群の両方は、脳に影響を与え得る代謝産物を産生することが知られているビフィズス菌（より具体的にはＢ．アドルセンシス（Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｓｉｓ）及びＢ．ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ））の存在量の増加を示したが、（反応群における治療中に変化しなかった）Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の相対的存在量は、非反応群よりも約３倍高かった。前記睡眠治療に対する反応群の糞便サンプルは、フィーカリバクテリウム属（Ｆｅａｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）関連遺伝経路の存在量が非反応群のものよりも高いことも示した。従って、食物繊維による治療に対する反応は、一定のレベルを上回るＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）のベースライン存在量により強化されることが予期される。

【0054】

従って、２’－ＦＬ調製物の投与によるＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量の増加は、睡眠の質及び／又は睡眠の持続性に対するオリゴ糖、特にガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）などの食物繊維の好ましい効果に対するヒト対象の反応性を高める（すなわち反応群の数を増加させる）ことが予期される。

【0055】

この効果を達成するために、２’－ＦＬは、同じ治療期間中に投与される併用調製物若しくは栄養組成物中又は個別の調製物若しくは栄養組成物中において、前記食物繊維と一緒に投与され得る。代わりに、Ｆ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）のベースラインレベルを高め、これにより睡眠の質及び／又は持続性に対する食物繊維の効果に対する反応性を高めるために、前記食物繊維を投与する数日又は数週間前に２’－ＦＬの投与を開始し得る。

【0056】

「睡眠の質及び／又は睡眠の持続性の改善」とは、入眠の促進；成熟した睡眠パターンの誘導若しくは支援；睡眠障害の低減若しくは予防／ベッドに入っている間の睡眠時間の延長；深い睡眠感の増加；起床時のより爽快な感覚；並びに／又はより活力に満ちた感覚及び／若しくは日中より良好な気分を得るなどの態様の１つ以上、好ましくは２つ以上を含む。

【0057】

本発明は、従って、睡眠の質及び／又は睡眠の持続性を向上させるための２’－ＦＬ含有調製物の（非）治療的使用にも関する。本発明は、睡眠の質及び／又は睡眠の持続性に対する食物繊維、好ましくはオリゴ糖、より好ましくはガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）の効果を高めるための２’－ＦＬ含有調製物の（非）治療的使用にも関する。

【0058】

食物繊維の調製物は、そのまま投与され得るが、栄養組成物の一部として投与されることが好ましい。このような栄養組成物において、食物繊維は、栄養組成物の総重量に対して且つ乾燥重量に基づいて少なくとも１０重量％、例えば少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％又は少なくとも９０重量％、例えば９１重量％以下、９２重量％、９３重量％又は９４重量％の量で存在することが好ましい。より好ましくは、２’－ＦＬは、栄養組成物の総重量に対して且つ乾燥重量に基づいて少なくとも１０重量％、例えば少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％又は少なくとも９０重量％、例えば９１重量％以下、９２重量％、９３重量％又は９４重量％の量で栄養組成物中に存在することが好ましい。

【0059】

栄養組成物は、食品製品、飲料又は栄養補助食品の形態を有し得る。

【0060】

栄養組成物は、食物繊維の調製物以外に、脂質、可消化炭水化物、プロバイオティクス、タンパク質並びに／又はビタミン、ミネラル及び／若しくは生物活性ペプチドなどの追加の栄養剤から選択される少なくとも１種のさらなる成分を含む。

【0061】

食物繊維の調製物の他に、栄養組成物は、追加の食物繊維をいずれの材料量でも含有しない。すなわち、栄養組成物中の食物繊維の総量の５重量％以下、より好ましくは１重量％以下は、食物繊維の調製物以外の供給源に由来し得る。

【0062】

脂質の例は、動物性脂質（乳脂肪、魚油）及び／又は植物性脂質（例えば、藻類性油、真菌性油及び細菌性油）であり、好ましくは長鎖ポリ不飽和脂肪酸（ＬＣ－ＰＵＦＡ；２０～２４個の炭素原子、好ましくは２つ以上の不飽和結合を含む２０個又は２２個の炭素原子の長さを有する脂肪酸又は脂肪アシル鎖）を含む。

【0063】

タンパク質の例は、乳タンパク質（例えば、カゼイン及び／又は乳漿タンパク質）、植物性タンパク質（例えば、ダイズタンパク質及び／又はイネタンパク質）、約２０アミノ酸以下の長さのポリペプチド（カゼイントリプシン加水分解物など）などのこれらの加水分解物、これらの発酵生成物（発酵乳漿タンパク質濃縮物又は発酵乳漿タンパク質単離物など）、トリプトファン及びシステインなどの遊離アミノ酸並びにその混合物である。

【0064】

可消化炭水化物の例は、スクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、コーンシロップ剤固形分、デンプン及びマルトデキストリンである。

【0065】

ビタミン及びミネラルの例は、マグネシウム、亜鉛、ビタミンＢ３及びビタミンＢ６であり、且つＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の酸素感応性の観点から、ビタミンＣ、ビタミンＥ及び／又はβカロチンなどの抗酸化効果をもたらすビタミンである。

【0066】

栄養組成物は、香味剤、防腐剤及び／又は着色剤をさらに含有し得る。

【0067】

好適なプロバイオティクスの例は、ビフィズス菌及び／又は乳酸杆菌などの（シンバイオティクス）細菌である。

【0068】

栄養組成物は、液体、半液体又は固体の構成成分を有し得る。

【0069】

栄養組成物は、ヒト、ヤギ、ヒツジ、雌ウシ、ラクダ又は反芻動物由来の乳などの哺乳動物の乳ではない。栄養組成物は、合成組成物である。「合成組成物」という用語は、人工的に調製された組成物を指し、好ましくは生体外で化学的及び／又は生物学的に、例えば化学反応、酵素反応又は組換えにより生成される少なくとも１種の化合物を含有する組成物を意味する。

【0070】

好適な食品製品及び飲料の例は、乳、ミルクセーキ、チョコレートミルク、ヨーグルト、クリーム、チーズ、プリン及びアイスクリームなどの乳製品；栄養バー、エネルギーバー、スナックバー、シリアルバー及び糖尿病患者のためのバーなどのバー；栄養ドリンク、ダイエットドリンク、液体完全食、スポーツドリンク及び他の栄養飲料などの液体製品；チップス、トルティーヤ、パフ入りスナック、クラッカー、プレッツェル及びセイボリービスケットなどのセイボリースナック；マフィン、ケーキ及びビスケットなどのベーカリー製品；グミなどの菓子；並びにスパゲッティなどのパスタである。

【0071】

食品サプリメントは、丸剤、カプセル又は乾燥粉末の形態を有し得る。食品サプリメントは、直ちに消費可能なもの又は水のような液体中に溶解する必要があるものであり得る。乾燥粉末形態の製品には、所望の粉末量（例えば、日又は単位投与量）を計測するためのスプーンなどのデバイスが付属し得る。

【0072】

栄養組成物は、ジャー、ボトル、サッシェ、カートン、ラッピング等で提供され得る。

【0073】

好ましい実施形態では、食物繊維の調製物又は前記調製物を含む栄養組成物は、単一回分の形態で提供される。単一回分の各々は、任意選択的に、個別に包装され得る。

【0074】

一実施形態では、単一回分は、１．０～４０グラム、好ましくは１．０～３０グラム、好ましくは１．５～２５グラム、より好ましくは２．０～２０グラム、より好ましくは２．５～１５グラム、さらにより好ましくは３．０～１０グラム、より好ましくは３．５～８グラム及び最も好ましくは４．０～５．０グラムの２’－ＦＬを含むことが好ましい。

【0075】

他の実施形態では、単一回分は、少なくとも０．０１グラム、より好ましくは少なくとも０．０２グラム、さらにより好ましくは少なくとも０．０４グラム、より好ましくは少なくとも０．０６グラム、より好ましくは少なくとも０．０８グラム、さらにより好ましくは少なくとも０．１０グラム、より好ましくは少なくとも０．５グラム、さらにより好ましくは少なくとも１．０グラム及び最も好ましくは少なくとも２．０グラムの２’－ＦＬを含むことが好ましい。本実施形態に係る単一回分は、最大で４０グラム、より好ましくは最大で３０グラム、さらにより好ましくは最大で２０グラム及び最も好ましくは最大で１０グラムの２’－ＦＬを含むことが好ましい。

【0076】

調製物又は栄養組成物の単位投与量は、少なくとも週に１回、好ましくは少なくとも３日に１回、より好ましくは少なくとも２日に１回、最も好ましくは少なくとも１日に１回投与することが好ましい。

【0077】

一実施形態では、２’－ＦＬの１日投与量は、０．５～４０グラム、好ましくは０．５～３０グラム、より好ましくは０．５～２０グラム、より好ましくは０．５～１０グラム、さらにより好ましくは１．０～１０グラム、より好ましくは１．０～５．０グラム及び最も好ましくは４．０～５．０グラムの２’－ＦＬの範囲であることが好ましい。

【0078】

他の実施形態では、２’－ＦＬの１日投与量は、少なくとも０．０１グラム、より好ましくは少なくとも０．０２グラム、さらにより好ましくは少なくとも０．０４グラム、より好ましくは少なくとも０．０６グラム、より好ましくは少なくとも０．０８グラム及び最も好ましくは少なくとも０．１０グラムの２’－ＦＬであることが好ましい。本実施形態に係る１日投与量は、最大で１０グラム、より好ましくは最大で８．０グラム、さらにより好ましくは最大で６．０グラム、より好ましくは最大で５．０グラム、より好ましくは最大で４．０グラム、より好ましくは最大で２．０グラム及び最も好ましくは最大で１．０グラムの２’－ＦＬであることが好ましい。

【0079】

調製物又は栄養組成物の使用は、少なくとも２週間、例えば少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月又はさらに少なくとも６ヶ月の期間継続することが好ましい。調製物又は栄養組成物の投与によりもたらされる健康上の有益性を維持するために、調製物又は栄養組成物は、少なくとも１日１回投与することが好ましい。調製物又は栄養組成物は、朝食中又は１日の終わり、例えば就寝の０～１２０分、より好ましくは０～６０分及び最も好ましくは０～３０分前に食事と共に摂取され得る。代わりに、調製物又は栄養組成物は、例えば、朝食及び夕食中又は朝食中及び就寝前、好ましくは朝及び夕方の１日２回投与され得る。食事と一緒の投与は、簡便であると共に、摂取者が調製物又は栄養組成物の摂取を忘れる恐れが低減する。

【実施例】

【0080】

実施例１
１２人の不作為に連絡した成人グループ（２５～５０歳の年齢の３人の男性及び３人の女性並びに７０～７９歳の年齢の３人の男性及び３人の女性）により、自身の糞便物質がインビトロ試験のために提供された。無酸素凍結保存した糞便種菌を解凍し、９６％Ｎ_２及び４％Ｈ_２を充填した嫌気性チャンバに移した。標準的な回腸流出物培地を用いて、２’－ＦＬ（１０ｍｇ／ｍｌ）のインキュベーションを１０％（ｖ／ｖ）糞便種菌と共にデュプリケートで行う一方、対照として、糞便種菌を伴わないインキュベーション及び炭水化物を伴わないインキュベーションを行った。播種から０時間、４時間、１０時間及び２４時間後にサンプルを回収した。

【0081】

次いで、各培養ボトルからの３つの１ｍｌアリコートを１．５ｍｌ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに分配した。これらのアリコートの１つを１００℃で５分間加熱して、上澄み中の炭水化物を判定した。その後、すべてのサンプルを４℃、１８６００相対遠心力（ｒｃｆ）で１０分間遠心分離した。他の２つのチューブからの上澄みを貯蔵し、代謝産物測定のために－２０℃で保管した一方、残りのペレットを微生物叢組成分析のために－８０℃で保管した。

【0082】

微生物叢組成を、Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｈｉｓｅｑ２５００（２×１５０ｂｐ）を用いたバーコード付きの１６Ｓリボソーム性ＲＮＡ（ｒＲＮＡ）遺伝子単位複製配列の配列決定により決定した。回収したペレットを３５０μｌのＳｔｏｏｌ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ａｎｄ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ（ＳＴＡＲ）緩衝剤（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、米国）と混合し、その後、０．１ｍｍジルコニアビーズ０．２５ｇ及びガラスビーズ（直径２．５ｍｍ）を３個含むスクリューキャップチューブに移した。

【0083】

次いで、ＦａｓｔＰｒｅｐ－２４（商標）５Ｇビーズ破砕グラインダ及び溶解システム（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、オランダ）を用いて、サンプルを反復的にビーズ破砕（３×５．５ｍｓ×６０ｓ）に供し、続いて４℃で１５分間遠心分離に供した。上澄みを回収し、ペレットを３００μｌのＳＴＡＲ緩衝剤によるさらなる単離サイクルに供した。２５０μｌの組み合わせた上澄みをＭａｘｗｅｌｌＲ １６Ｔｉｓｓｕｅ ＬＥＶ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（ＸＡＳ１２２０）に移し、ＭａｘｗｅｌｌＲ １６ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ライデン、オランダ）を用いて処理した。

【0084】

その後、ＤＮＡを３５μｌのヌクレアーゼフリー水中に溶出した。１６ＳｒＲＮＡ遺伝子のＶ４領域を、バーコード付５１５Ｆ－８０６Ｒプライマー及び鋳型として希釈ＤＮＡ（ヌクレアーゼフリー水中、２０ｎｇ／μｌ）を用いて、５０℃のアニーリング温度において３連で増幅した。ＰＣＲをＲ．Ａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ，１１（２０１９）２１９３に記載のとおり行った。精製ＰＣＲ産物の等モル混合物を配列決定に供した（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、コンスタンツ、ドイツ）。生の配列決定データをＮＧ－Ｔａｘ １．０を用いて加工した。分類は、ＳＩＬＶＡデータベースバージョン１２８に基づいて割り当てた。

【0085】

インキュベーション中、異なる炭水化物を有する微生物叢組成と無炭水化物対照との間における変化を比較対比するために、ｖｅｇａｎパッケージにおけるｐｒｃ機能を使用して、主要反応曲線（ＰＲＣ）分析を用いて最もフィット（重み＞０．０５）する属を同定して、無炭水化物及び炭水化物系インキュベーション間で観察された差異を説明した［Ｊ．Ｏｋｓａｎｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐａｃｋａｇｅ‘ｖｅｇａｎ’．Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｅｃｏｌｏｇｙ ｐａｃｋａｇｅ，ｖｅｒｓｉｏｎ，２０１３，２（９）］。

【0086】

その結果、２’－ＦＬの摂取により、２’－ＦＬを含まない対照培地における増殖と比べてＦ．プラウスニッツイ（Ｆ．ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量の増加がもたらされることが観察された。

【0087】

実施例２
この試験は、睡眠障害を有する（ピッツバーグ睡眠質問票（ＰＳＱＩ）≧９）７０人の一見健常なオランダ成人（年齢３０～５０歳、ＢＭＩ １９．５～２５ｋｇ／ｍ^２）でランダム化プラセボ対照二重盲検クロスオーバー試験として設計された。

【0088】

含まれる対象は、３週間の休薬期間で、それぞれ３週間、Ｂｉｏｔｉｓ（商標）Ｓｌｅｅｐｗｅｌｌ又は偽薬で開始するように（すべて同時に）無作為化した。

【0089】

Ｂｉｏｔｉｓ（商標）Ｓｌｅｅｐｗｅｌｌは、１９．３重量％のＢｉｏｔｉｓ（商標）ＧＯＳ、１０重量％のラクトース及び５２．５重量％の乳漿タンパク質を含む組成物である。

【0090】

偽薬は、脱脂粉乳であった。

【0091】

Ｂｉｏｔｉｓ（商標）Ｓｌｅｅｐｗｅｌｌ及び偽薬は、１６．３グラムの生成物を含有する同等の白いサッシェに梱包した。味の違いを隠すために、生成物をバニラで風味付けし、スクラロースで甘味を付けた。生成物は、１５０ｍｌのぬるい水に溶解する必要があり、１日１回、就寝の約１時間前に摂取させた。

【0092】

各介入期間中、就寝時間及び起床時間、生活習慣、睡眠特性（ＰＳＱＩアンケート）並びに起床時の健康状態及び気分に関するアンケートを毎日記入する必要があった。スリープトラッカー（ＳｍａｒｔＳｌｅｅｐ（商標）、Ｐｈｉｌｉｐｓ、オランダ）による測定を、製品を摂取する前、各介入期間中及び各期間の最後の５晩中、連続する５晩で行った。便サンプルを第１介入期間中にのみ０日目及び２１日目に回収した。

【0093】

介入試験に係る１３８の糞便サンプルから単離されたＤＮＡを完全（５Ｇｂ）ショットガンメタゲノムシーケンス（ＰＥ１５０リード、Ｎｏｖａｓｅｑ ６０００）に供した。生の配列決定データを、精度管理（ＱＣ）を含めてショットガンメタゲノムシーケンスデータのために加工した（ＨＵＭＡＮｎ２ ｗｏｒｋｆｌｏｗ－ｂａｓｅｄ）。生の配列決定データを、データ精度管理、マイニング及びデータの生物学的解釈を含むＶｉｓｕａｌ Ａｎａｌｙｔｉｃｓによるアウトプット表現を含む、ショットガンメタゲノムシーケンスのためのバイオインフォマティクスワークフローで分析した。

【0094】

ミクロビオーム組成を、多変量（ＰＣＡ／ＲＤＡ）及び二変量統計法を用いて分析した。介入生成物による介入の前後において、治療群間並びに比較的よく寝た対象及び比較的よく寝られなかった対象で比較を行った。サンプル中のミクロビオーム遺伝機能（汎用バイオインフォマティクスパイプライン及びバックグラウンドデータベースにより検出した）を同じ方法で予備的に比較した。

【0095】

文献において睡眠の質と関連付けられている、微生物機能に標的化した分析を専用のバイオインフォマティクスモジュールで行った。この目的のために、配列決定リードをコンティグにアセンブリした（サンプル毎に新たなアセンブリ）。以下のモジュールを用いた。
１）Ｍ．Ｖａｌｌｅｓ－Ｃｏｌｏｍｅｒ，ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４（２０１９）６２３－６３２により発表されている「Ｇｕｔ－Ｂｒａｉｎ」モジュールを用いて、このタイプの遺伝子を検索し、これらを定量化した（相対的存在量）。

【0096】

２）「Ｇｕｔ－Ｂｒａｉｎ」モジュールを、睡眠の質に関連付けられている微生物遺伝子、より具体的にはＧＡＢＡ産生、カテコールアミンの脱共役化及びヒスチジン脱カルボキシル化に関与する遺伝子を特に探すために新たに構築したバイオインフォマティクスモジュールにより拡張した。遺伝子リストを、Ｈｉｄｄｅｎ Ｍａｒｋｏｖ Ｍｏｄｅｌｓ（ＨＭＭ）に基づく新規の機能的バイオインフォマティクスモジュールの生成に用いた。推定遺伝子を、予測されたタンパク質配列をＨＭＭでスキャンすることによりミクロビオームデータにおいて同定した。ダウンストリーム統計分析を組成分析に記載のものと同じ方法で行った。

【0097】

結果
試験群中において、真の反応群（すなわちＢｉｏｔｉｓ（商標）Ｓｌｅｅｐｗｅｌｌを摂取した後に睡眠の改善が観察されたが、偽薬の摂取では改善が観察されない対象）と、真の非反応群（すなわちＢｉｏｔｉｓ（商標）Ｓｌｅｅｐｗｅｌｌでも偽薬でも睡眠の改善が見られない対象）との存在が見られた。

【0098】

これら２つの群の微生物叢を比較したところ、顕著な分類学的な組成の差異が明らかになった。

【0099】

介入開始前（０日目）には、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の相対存在量の中央値は、真の非反応群（７．５％）と比べて真の反応群（２．５％）でおよそ３倍低く、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）の相対存在量の中央値は、真の非反応群（８．６％）と比べて真の反応群（１．２％）でおよそ７倍低い。

【0100】

Ｂｉｏｔｉｓ（商標）Ｓｌｅｅｐｗｅｌｌによる３週間の介入後、有益なビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）の顕著な増加が真の反応群及び真の非反応群の両方で検出された。これは、ビフィズス菌存在量に対するＢｉｏｔｉｓ（商標）Ｓｌｅｅｐｗｅｌｌ、特にＧＯＳの効果を証明するものである。

【0101】

しかしながら、真の反応群におけるビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）レベルの相対存在量の中央値は、真の非反応群（２５．８％）におけるものよりも顕著に低いままであった（１２．７％）。ビフィドバクテリウム科についても同じ傾向が見出された。換言すると、このようなビフィズス菌存在量は、睡眠と直接的に相関するものではない。

【0102】

０日目におけるフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の相対存在量の中央値は、真の非反応群（６．２％）と比べて真の反応群でおよそ３倍高い（１８．２％）ことも観察された。

【0103】

フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）に対するＢｉｏｔｉｓ（商標）Ｓｌｅｅｐｗｅｌｌの促進効果は、真の反応群及び真の非反応群の両方で試験終了時に検出されなかった。

【0104】

真の反応群及び真の非反応群の微生物経路（ＭｅｔａＣｙｃ）も比較した。０日目に、２６のＭｅｔａＣｙｃ経路が真の反応群及び真の非反応群間で異なり、これらの経路は、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）と強い相関を有した：キュレーションしたＧｕｔ－Ｂｒａｉｎモジュール（ＧＢＭ；Ｍ．Ｖａｌｌｅｓ－Ｃｏｌｏｍｅｒ，ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４（２０１９）６２３－６３２に記載）、「キノリン酸分解」（キノリン酸の増加は、うつ状態と関連付けられている；Ｏ．Ｖ．Ａｖｅｒｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．，２１（２０２０）９２３４）、「イノシトール合成」（前頭皮質イノシトールは、総睡眠時間と正の相関を示し、うつ状態の重症度と負の相関を示す；Ａ．Ｓ．Ｕｒｒｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｐｙｃｈｏｂｉｏｌｏｇｙ ７５（２０１７）２１－３１）及び「一酸化窒素合成ＩＩ－亜硝酸還元酵素」（一酸化窒素は、有益な神経伝達物質としてみなされている）は、真の反応群で顕著に低かった。

【0105】

上記は、（ｉ）ＧＯＳによる処置がビフィズス菌の存在量を増加させるが、（ｉｉ）これが、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）の存在量のベースラインが一定の最低レベルにある場合にのみ、向上した睡眠をもたらすことが強く示唆された。従って、このベースラインレベルを高めることで（２’－ＦＬによって達成され得る（実施例１を参照されたい））、ＧＯＳによる処置に対する真の反応群の数が増加することが予期される。

【0106】

このような組成の例を以下の表に表す。

【0107】

栄養分 含有量
タンパク質（ｇ） １０
乳漿タンパク質（ｇ） ９．５
Ｌａｃｔｉｕｍ（登録商標）（７３％タンパク質）（ｍｇ） ２００
ラクトース（ｇ） １．９
ＧＯＳ（ｇ） ５．２
２’ＦＬ（ｇ） ０．５
マグネシウム（ｍｇ） ２００
亜鉛（ｍｇ） ５
ビタミンＢ６（ｍｇ） １
ナイアシン（ｍｇ） １０
ビタミンＤ３（μｇ） １０

【0108】

栄養分 含有量
タンパク質（ｇ） １０
乳漿タンパク質（ｇ） ９．５
Ｌａｃｔｉｕｍ（登録商標）（７３％タンパク質）（ｍｇ） ２００
ラクトース（ｇ） １．９
ＧＯＳ（ｇ） ５．２
２’ＦＬ（ｇ） ０．２５
マグネシウム（ｍｇ） ２００
亜鉛（ｍｇ） ５
ビタミンＢ６（ｍｇ） １
ナイアシン（ｍｇ） １０
ビタミンＤ３（μｇ） １０

【0109】

栄養分 含有量
タンパク質（ｇ） １０
乳漿タンパク質（ｇ） ９．５
Ｌａｃｔｉｕｍ（登録商標）（７３％タンパク質）（ｍｇ） ２００
ラクトース（ｇ） １．９
ＧＯＳ（ｇ） ５．２
２’ＦＬ（ｇ） １．０
マグネシウム（ｍｇ） ２００
亜鉛（ｍｇ） ５
ビタミンＢ６（ｍｇ） １
ナイアシン（ｍｇ） １０
ビタミンＤ３（μｇ） １０

【国際調査報告】