▶ アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-11
(54)【発明の名称】Ｓ１Ｐモジュレーターとしてのスピロ環状アミン誘導体
(51)【国際特許分類】
C07D 265/34 20060101AFI20231228BHJP
A61K 31/5386 20060101ALI20231228BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20231228BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20231228BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231228BHJP
【ＦＩ】
C07D265/34 CSP
A61K31/5386
A61P25/00
A61P25/28
A61P43/00 111
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023533304
(86)(22)【出願日】2021-11-30
(85)【翻訳文提出日】2023-07-18
(86)【国際出願番号】 EP2021083544
(87)【国際公開番号】W WO2022117553
(87)【国際公開日】2022-06-09
(31)【優先権主張番号】63/119,690
(32)【優先日】2020-12-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】513144626
【氏名又は名称】アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー
(74)【代理人】
【識別番号】110001173
【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】アンベルク，ビリー
(72)【発明者】
【氏名】バックフィッシュ，ギーゼラ
(72)【発明者】
【氏名】ボディエ，カレン
(72)【発明者】
【氏名】ヘンペル，カチヤ
(72)【発明者】
【氏名】ラプランシュ，ロイク
(72)【発明者】
【氏名】メッツラー，マリオ
(72)【発明者】
【氏名】オクセ，ミヒャエル
(72)【発明者】
【氏名】ターナー，ショーン
(72)【発明者】
【氏名】ファン・ベルゲアイク，イェルン
(72)【発明者】
【氏名】ファン・デル・カム，エリザベス
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086BC74
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA02
4C086ZA15
4C086ZA16
4C086ZC41
(57)【要約】
本発明は、Ｓ１Ｐ受容体のモジュレーターであって、ＣＮＳ障害の治療に有用である、スピロ環状アミン誘導体に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の構造を有する化合物１である化合物、【化1】
【請求項2】
以下の構造を有する化合物１ａである請求項１に記載の化合物、【化2】
【請求項3】
以下の構造を有する化合物１ｂである請求項１に記載の化合物、【化3】
【請求項4】
塩酸塩である、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項5】
請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項6】
Ｓ１Ｐ受容体活性を調節する方法であって、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩をＳ１Ｐ受容体と接触させるステップを含む、方法。
【請求項7】
Ｓ１ＰがＳ１Ｐ５である、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
接触させるステップが、化合物を患者に投与するステップを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項9】
Ｓ１Ｐ５に関連する疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、治療を必要とする患者に投与するステップを含む、方法。
【請求項10】
ＣＮＳ障害の治療を必要とする患者におけるＣＮＳ障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を患者に投与するステップを含む、方法。
【請求項11】
ＣＮＳ障害が、アルツハイマー病又は血管性認知症である、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
ＣＮＳ障害が、ニーマン・ピック病である、請求項１０に記載の方法。
【請求項13】
ＣＮＳ障害が、ニーマン・ピック病Ｃ型である、請求項１０に記載の方法。
【請求項14】
ＣＮＳ障害が、統合失調症における認知機能障害、強迫性行動、大うつ病、自閉症、多発性硬化症、又は疼痛である、請求項１０に記載の方法。
【請求項15】
ＣＮＳ障害が、認知障害である、請求項１０に記載の方法。
【請求項16】
認知障害が、加齢関連認知低下である、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
以下の構造を有する化合物１、【化4】
（ａ）化合物Ｇ又はその塩を、
【化5】
【化6】
【化7】
（ｂ）化合物Ｈ又はその塩を水酸化物と反応させ、続いて酸で処理して、化合物１を形成するステップを含む、方法。
【請求項18】
化合物Ｇ又はその塩が、化合物Ｄ又はその塩を、【化8】
【請求項19】
化合物Ｄが、化合物Ｃ又はその塩を、【化9】
【請求項20】
化合物Ｃ又はその塩が、化合物Ｂを、【化10】
【請求項21】
化合物Ｂが、化合物Ａを、【化11】
【請求項22】
請求項１７～２１のいずれか一項に記載の方法によって調製される化合物１である、化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、Ｓ１Ｐ受容体に対して親和性を有するスピロ環状アミン誘導体、この化合物を含有する医薬組成物、並びに任意のＳ１Ｐ受容体が関与する、又は任意のＳ１Ｐ受容体を介する内因性Ｓ１Ｐシグナル伝達系の調節が関与する、疾患及び状態を治療、緩和又は予防するための医薬を調製するための、この化合物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
スフィンゴシン－１－リン酸（Ｓ１Ｐ）は、生物活性スフィンゴ脂質であり、これは、増殖、細胞骨格組織化及び遊走、接着及び密着結合アセンブリ、並びに形態形成などの多種多様な細胞応答を媒介する。Ｓ１Ｐは、原形質膜局在化Ｇタンパク質共役型受容体の内皮細胞分化遺伝子ファミリー（ＥＤＧ受容体）のメンバーと結合できる。現在までに、このファミリーの５つのメンバー、Ｓ１Ｐ１（ＥＤＧ－１）、Ｓ１Ｐ２（ＥＤＧ－５）、Ｓ１Ｐ３（ＥＤＧ－３）、Ｓ１Ｐ４（ＥＤＧ－６）及びＳ１Ｐ５（ＥＤＧ－８）が、異なる細胞型におけるＳ１Ｐ受容体として同定されている。Ｓ１Ｐは、多くの細胞型において細胞骨格再配置を生じることができ、中枢神経系（ＣＮＳ）及び末梢器官系における免疫細胞輸送、血管恒常性及び細胞通信を調節する。
【0003】
Ｓ１Ｐは血管内皮によって分泌され、２００～９００ナノモルの濃度で血液中に存在し、アルブミン及び他の血漿タンパク質によって結合されることが知られている。これは、細胞外液中の安定な貯蔵所、及び高親和性細胞表面受容体への効率的な送達の両方を提供する。Ｓ１Ｐは、５つの受容体Ｓ１Ｐ１～５に低ナノモルの親和性で結合する。加えて、血小板もまたＳ１Ｐを含有し、局所的に放出されて、例えば血管収縮を引き起こし得る。受容体サブタイプＳ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２及びＳ１Ｐ３は、広く発現され、心血管系において顕性受容体を表す。更に、Ｓ１Ｐ１はリンパ球上の受容体でもある。Ｓ１Ｐ４受容体は、ほぼ排他的に造血系及びリンパ系に存在する。Ｓ１Ｐ５は、主に（排他的ではないが）中枢神経系において発現される。Ｓ１Ｐ５の発現は、マウスの希突起膠細胞、脳のミエリン形成細胞に限定されるようであるが、ラット及びヒトにおいては、星状細胞及び内皮細胞のレベルでの発現が見出されたが、希突起膠細胞では見出されなかった。
【0004】
Ｓ１Ｐ受容体モジュレーターは、１種以上のＳ１Ｐ受容体においてアンタゴニスト又はアゴニストとしてシグナル伝達する化合物である。本発明は、Ｓ１Ｐ５受容体のモジュレーター、特にアゴニストに関し、望ましくない心血管及び／又は免疫調節効果を考慮して、好ましくは、Ｓ１Ｐ１及び／又はＳ１Ｐ３受容体に対する選択性を有するアゴニストに関する。現在、Ｓ１Ｐ５アゴニストが、認知障害、特に加齢関連認知低下の治療において使用され得ることが見出されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
加齢関連認知低下及び認知症を治療するために使用できる治療薬を開発するための研究が進行中であるが、これは、多くの成功した候補をまだもたらしていない。したがって、所望の特性を有する新しい治療薬が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0006】
（発明の要旨）
本発明は、以下の構造を有する化合物１、
本発明は、以下の構造を有する化合物１、
【0007】
【化1】
【0008】
本発明は、化合物１又はその薬学的に許容される塩及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を更に提供する。
【0009】
本発明は、Ｓ１Ｐ受容体（例えば、Ｓ１Ｐ５）活性の調節方法を更に提供し、この方法は、化合物１又はその薬学的に許容される塩をＳ１Ｐ受容体と接触させるステップを含む。
【0010】
本発明は、Ｓ１Ｐ５の活性に関連する疾患又は障害を治療する方法を更に提供し、この方法は、治療有効量の化合物１又はその薬学的に許容される塩を必要とする患者に投与するステップを含む。
【0011】
本発明は、患者におけるＣＮＳ障害を治療するための方法を更に提供し、この方法は、治療有効量の化合物１又はその薬学的に許容される塩を患者に投与するステップを含む。
【0012】
本発明は、治療における、化合物１又はその薬学的に許容される塩の使用を更に提供する。
【0013】
本発明は、治療で使用するための医薬の調製において使用するための、化合物１又はその薬学的に許容される塩を更に提供する。
【0014】
本発明は、化合物１又はその薬学的に許容される塩を調製するための方法を更に提供する。
【発明を実施するための形態】
【0015】
化合物
以下の構造を有する化合物１である化合物、
以下の構造を有する化合物１である化合物、
【0016】
【化2】
【0017】
いくつかの実施形態において、化合物は、以下の構造を有する化合物１ａ、
【0018】
【化3】
【0019】
いくつかの実施形態において、化合物は、以下の構造を有する化合物１ｂ、
【0020】
【化4】
【0021】
いくつかの実施形態において、化合物は、３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパン酸である。
【0022】
いくつかの実施形態において、化合物は、（Ｓ）－３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパン酸である。
【0023】
いくつかの実施形態において、化合物は、（Ｒ）－３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパン酸である。
【0024】
いくつかの実施形態において、化合物は、前述の化合物のいずれかの塩酸塩である。
【0025】
本発明の特定の特徴は、明確にするために、別個の実施形態の文脈で記載され、単一の実施形態において組み合わせて提供することもできることが更に理解される（一方、実施形態は、複数の従属形式で書かれているかのように組み合わされることを意図している。）。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で記載されている本発明の様々な特徴は、別々に又は任意の適切なサブコンビネーションで提供することもできる。
【0026】
本明細書に記載される化合物は、非対称であり得る（例えば、１個以上の立体中心を有する。）。全ての立体異性体、例えば、エナンチオマー及びジアステレオマーを、他に示されない限り、意図する。非対称的に置換された炭素原子を含有する本発明の化合物は、光学活性体又はラセミ体で単離できる。光学的に不活性な出発物質から光学的に活性な形態を調製する方法は、当該分野で公知であり、例えば、ラセミ混合物の分割、又は立体選択的合成による。
【0027】
化合物のラセミ混合物の分割は、当技術分野で公知の多数の方法のいずれかによって行うことができる。１つの方法は、光学的に活性な塩形成有機酸であるキラル分割酸を使用する、分別再結晶を含む。分別再結晶法に適した分割剤は、例えば、光学活性酸、例えば、Ｄ型及びＬ型の酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、又は種々の光学活性カンファースルホン酸、例えば、β－カンファースルホン酸である。分別結晶法に適した他の分割剤としては、α－メチルベンジルアミンの立体異性的に純粋な形態（例えば、Ｓ及びＲ形態、又はジアステレオマー的に純粋な形態）、２－フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ－メチルエフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、１，２－ジアミノシクロヘキサンなどが挙げられる。
【0028】
ラセミ混合物の分割は、適切な溶出溶媒組成物を使用して、光学活性分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）を充填したカラム上での溶出によっても行うことができる。
【0029】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、（Ｒ）配置を有する。他の実施形態において、化合物は（Ｓ）配置を有する。
【0030】
本発明の化合物は、中間体又は最終化合物中に存在する原子の全ての同位体を含むこともできる。同位体は、同じ原子番号を有するが異なる質量数を有する原子を含む。例えば、水素の同位体にはトリチウム及び重水素が含まれる。本発明の化合物の１個以上の構成原子は、天然又は非天然存在度の原子の同位体で置き換える又は置換できる。いくつかの実施形態において、化合物は、少なくとも１個の重水素原子を含む。例えば、本開示の化合物中の１個以上の水素原子は、重水素によって置き換えられ得る、又は置換され得る。いくつかの実施形態において、化合物は、２個以上の重水素原子を含む。いくつかの実施形態において、化合物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２個の重水素原子を含む。有機化合物に同位体を含めるための合成方法は、当技術分野で公知である（Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｂｙ Ａｌａｎ Ｆ．Ｔｈｏｍａｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、Ａｐｐｌｅｔｏｎ－Ｃｅｎｔｕｒｙ－Ｃｒｏｆｔｓ、１９７１、Ｔｈｅ Ｒｅｎａｉｓｓａｎｃｅ ｏｆ Ｈ／Ｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｙ Ｊｅｎｓ Ａｔｚｒｏｄｔ、Ｖｏｌｋｅｒ Ｄｅｒｄａｕ、Ｔｈｏｒｓｔｅｎ Ｆｅｙ ａｎｄ Ｊｏｃｈｅｎ Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７、７７４４－７７６５、Ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｂｙ Ｊａｍｅｓ Ｒ．Ｈａｎｓｏｎ、Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１１）。同位体標識された化合物は、ＮＭＲ分光法、代謝実験及び／又はアッセイなどの様々な研究において使用できる。
【0031】
本明細書で使用される用語「化合物」は、示された構造の全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体及び同位体を含むことを意味する。この用語は、それらがどのように調製されるのか、例えば、合成的、生物学的方法（例えば、代謝又は酵素変換）を通して、又はそれらの組合せ、に関わらず、本発明の化合物を指すことも意味する。
【0032】
全ての化合物及びその薬学的に許容される塩は、水及び溶媒（例えば、水和物及び溶媒和物）などの他の物質と一緒に見出され得る、又は単離され得る。固体状態である場合、本明細書に記載の化合物及びその塩は、様々な形態で存在してもよく、例えば、水和物を含む溶媒和物の形態をとってもよい。化合物は、多形又は溶媒和物などの任意の固体形態であり得、特に明記されていない限り、本明細書における化合物及びその塩への言及は、化合物の任意の固体形態を包含するものとして理解されるべきである。
【0033】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物又はその塩は、実質的に単離されている。「実質的に単離された」とは、化合物が、それが形成又は検出された環境から少なくとも部分的に又は実質的に分離されていることを意味する。部分的な分離は、例えば、本発明の化合物が濃縮された組成物を含むことができる。実質的な分離は、本発明の化合物又はその塩の少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、又は少なくとも約９９重量％を含有する組成物を含むことができる。
【0034】
語句「薬学的に許容される」は、本明細書において、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題若しくは合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに適しており、妥当な利益／リスク比に見合う、化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指すために使用される。
【0035】
表現「周囲温度」及び「室温」は、本明細書で使用される場合、当技術分野において理解されており、一般に、例えば反応温度、反応が行われる部屋のおおよその温度、例えば約２０℃～約３０℃の温度を指す。
【0036】
本発明は、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容される塩も含む。用語「薬学的に許容される塩」は、開示された化合物の誘導体を指し、この親化合物は、存在する酸又は塩基部分を塩形態に変換することによって、修飾される。薬学的に許容される塩の例としては、塩基性残基、例えば、アミンの無機塩又は有機酸塩、酸性残基、例えば、カルボン酸のアルカリ塩又は有機塩などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学的に許容される塩は、塩基性部分又は酸性部分を含む親化合物から、従来の化学的方法によって合成され得る。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸形態又は遊離塩基形態を、化学量論量の適切な塩基又は酸と、水中若しくは有機溶媒中、又はこれら２つの混合物中で反応させることによって調製でき、一般に、エーテル、酢酸エチル、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール若しくはブタノール）又はアセトニトリル（ＭｅＣＮ）のような非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１７ｔｈＥｄ．、（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、１９８５）、ｐ．１４１８、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．、Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．、１９７７、６６（１）、１－１９及びＳｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｕｓｅ，（Ｗｉｌｅｙ、２００２）に見出せる。
【0037】
合成
本発明の化合物（その塩を含む）は、公知の有機合成技術を使用して調製でき、例えば、以下のスキームなど、多数の可能な合成経路のいずれかに従って合成できる。
本発明の化合物（その塩を含む）は、公知の有機合成技術を使用して調製でき、例えば、以下のスキームなど、多数の可能な合成経路のいずれかに従って合成できる。
【0038】
本発明の化合物を調製するための反応は、適切な溶媒中で行われ得、適切な溶媒は、有機合成の当業者によって容易に選択され得る。反応が行われる温度で、例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸点までの範囲であり得る温度で、適切な溶媒は、出発物質（反応物）、中間体又は生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１種の溶媒又は２種以上の溶媒の混合物中で行い得る。特定の反応ステップに依存して、特定の反応ステップのための適切な溶媒は、当業者によって選択され得る。
【0039】
本発明の化合物の調製は、種々の化学基の保護及び脱保護を含み得る。保護及び脱保護の必要性、並びに適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。保護基の化学は、例えば、Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ、（Ｔｈｉｅｍｅ、２００７）、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ， ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、６ｔｈ Ｅｄ．（Ｗｉｌｅｙ、２００７）、Ｐｅｔｕｒｓｓｉｏｎ ｅｔ ａｌ、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”、Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｅｄｕｃ．、１９９７、７４（１１）、１２９７及びＷｕｔｓ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、４ｔｈ Ｅｄ．，（Ｗｉｌｅｙ、２００６）に記載されている。
【0040】
反応は、当技術分野で公知の任意の適切な方法によって監視できる。例えば、生成物形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈ又は１３Ｃ）、赤外分光法、分光光度法（例えば、紫外－可視）、質量分析などの分光手段によって、又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）などのクロマトグラフィー法によって、監視できる。
【0041】
以下のスキームは、本発明の化合物の調製に関連する一般的な指針を提供する。当業者は、本発明の様々な化合物を調製するために、有機化学の一般的知識を使用して、スキームに示される調製を改変又は最適化できることを理解されよう。
【0042】
化合物１、１ａ、及び１ｂは、例えば、以下のスキームに示される方法を使用して、調製できる。
【0043】
スキーム１に示される方法を使用して、化合物Ｄ、Ｅ及びＦは調製され得る。スキーム１に示される方法において、ケトンＡは、塩基（例えば、ＫＯＨ）の存在下で、スルホニウム塩で処理されて、エポキシドＢを生成する。エポキシドＢは、塩基（例えば、トリエチルアミン）の存在下で、１，２－エタノールアミンで処理されて、ジオールＣを生成する。ジオールＣは、酸（例えば、酢酸中のＨＢｒ）の存在下で、環化されて、モルホリンＤを生成する。モルホリンＤは、キラル分割（例えば、超臨界流体クロマトグラフィー）によって、エナンチオマーＥ及びＦに分割され得る。
【0044】
【化5】
【0045】
化合物１は、スキーム２に示される方法を使用して、調製され得る。化合物Ｄは、塩基（例えば、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）の存在下で、エチルアクリレートで、処理でされて、化合物Ｇを生成する。化合物Ｇは、適切な遷移金属カップリング条件（例えば、Ｐｄ触媒カップリング反応）下で、（２－クロロ－６－エチルフェニル）メタノールとカップリングさせて、化合物Ｈを生成し得る。例えば、カップリングは塩基（例えば、炭酸セシウム）の存在下で、Ｐｄ２ｄｂａ３を用いて成し遂げることができる。化合物Ｈを鹸化し（例えば、ＬｉＯＨで）、酸（例えば、ＨＣｌ）で処理して、化合物１を得ることができる。
【0046】
【化6】
【0047】
化合物１ａ及び１ｂは、上記スキーム２に従って化合物１と同様の様式で調製され得、化合物Ｄの代わりに化合物Ｅ又は化合物Ｆのいずれかから開始して、それぞれ化合物１ａ又は化合物１ｂを生成し得る。
【0048】
いくつかの実施形態において、本発明は、以下の構造を有する化合物１、
【0049】
【化7】
【0050】
【化8】
【0051】
【化9】
【0052】
【化10】
（ｂ）化合物Ｈ又はその塩を水酸化物と反応させ、続いて酸で処理して、化合物１を形成するステップ、を含む。
【0053】
いくつかの実施形態において、化合物Ｇ又はその塩は、化合物Ｄ又はその塩を、
【0054】
【化11】
【0055】
いくつかの実施形態において、化合物Ｄは、化合物Ｃ又はその塩を、
【0056】
【化12】
【0057】
いくつかの実施形態において、化合物Ｃ又はその塩は、化合物Ｂを、
【0058】
【化13】
【0059】
いくつかの実施形態において、化合物Ｂは、化合物Ａを、
【0060】
【化14】
【0061】
本発明は更に、化合物１を塩酸で処理するステップを含む、化合物１の塩酸塩を調製する方法に関する。
【0062】
本発明は更に、化合物１ａを塩酸で処理するステップを含む、化合物１ａの塩酸塩を調製する方法に関する。
【0063】
本発明は更に、化合物１ｂを塩酸で処理するステップを含む、化合物１ｂの塩酸塩を調製する方法に関する。
【0064】
治療方法
化合物１、１ａ、又は１ｂは、Ｓ１Ｐ受容体、特にＳ１Ｐ５受容体を調節する。より具体的には、化合物１、１ａ、又は１ｂは、Ｓ１Ｐ５受容体アゴニストである。化合物１、１ａ、又は１ｂは、Ｓ１Ｐ５受容体の選択的アゴニストであり得、選択性は、Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、及びＳ１Ｐ４のうちの１種以上などの他のＳ１Ｐ受容体に関するものである。したがって、本発明は、化合物１、１ａ、又は１ｂをＳ１Ｐ５受容体と接触させることによって、Ｓ１Ｐ５受容体を調節する方法を対象とする。接触は、インビトロ又はインビボで行うことができる。
化合物１、１ａ、又は１ｂは、Ｓ１Ｐ受容体、特にＳ１Ｐ５受容体を調節する。より具体的には、化合物１、１ａ、又は１ｂは、Ｓ１Ｐ５受容体アゴニストである。化合物１、１ａ、又は１ｂは、Ｓ１Ｐ５受容体の選択的アゴニストであり得、選択性は、Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、及びＳ１Ｐ４のうちの１種以上などの他のＳ１Ｐ受容体に関するものである。したがって、本発明は、化合物１、１ａ、又は１ｂをＳ１Ｐ５受容体と接触させることによって、Ｓ１Ｐ５受容体を調節する方法を対象とする。接触は、インビトロ又はインビボで行うことができる。
【0065】
化合物１、１ａ、又は１ｂ（その塩を含む）は、Ｓ１Ｐ受容体（例えば、Ｓ１Ｐ５）に関連する疾患、又は任意のＳ１Ｐ受容体を介した内因性Ｓ１Ｐシグナル伝達系の調節が関与する疾患を治療及び予防するのに有用である。特に、化合物１、１ａ、又は１ｂは、ＣＮＳ（中枢神経系）障害、例えば、神経変性障害、特に、限定されないが、認知障害（特に、加齢関連認知低下）及び関連状態、例えば、アルツハイマー病、（血管性）認知症、ニーマン・ピック病、及び統合失調症における認知機能障害、強迫性行動、大うつ病、自閉症、多発性硬化症及び疼痛を治療又は予防するために使用され得る。好ましくは、本発明の化合物は、認知障害（特に、加齢関連性認知低下）及び関連状態を治療又は予防するために使用され得る。いくつかの実施形態において、疾患は、ニーマン・ピック病、例えば、ニーマン・ピック病Ｃ型である。
【0066】
本明細書で使用される場合、用語「接触させる」は、インビトロ系又はインビボ系において、示された部分が集結して、それらが相互作用するよう十分に物理的に近接することを指す。
【0067】
互換的に使用される用語「個体」又は「患者」は、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、又は霊長類、最も好ましくはヒトを含む任意の動物を指す。
【0068】
語句「治療有効量」は、研究者、獣医、医師又は他の臨床医によって求められている組織、系統、動物、個体又はヒトにおいて生物学的又は医学的応答を誘発する、活性化合物又は医薬品の量を指す。
【0069】
本明細書中で使用される場合、用語「治療すること」又は「治療」は、（１）疾患を阻害すること、例えば、疾患、状態又は障害の病理又は症候を経験又は示している個体における疾患、状態又は障害を阻害すること（すなわち、病理及び／又は症候の更なる進行を阻止すること）、及び（２）疾患を改善すること、例えば、疾患、状態又は障害の病理又は症候を経験又は示している個体における疾患、状態又は障害を改善すること（すなわち、病理及び／又は症候を逆転させること）、例えば、疾患の重症度を減少させることなど、のうちの１種以上を指す。
【0070】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、本明細書で言及される疾患のいずれかを発症するリスクを予防又は低減するのに有用であり、例えば、疾患、状態又は障害に罹りやすい可能性があるが、疾患の病理又は症候をまだ経験又は示していない個体において、疾患、状態又は障害を発症するリスクを予防又は低減する。
【0071】
併用療法
本明細書に記載されるＳ１Ｐ受容体関連疾患、障害、又は状態の治療のために、１種以上の追加の医薬品を化合物１、１ａ、又は１ｂと組み合わせて使用できる。薬剤は、単一剤形で本発明の化合物と組み合わせることができ、又は薬剤は、別々の剤形として同時に又は逐次的に投与できる。いくつかの実施形態において、追加の医薬品は、抗アルツハイマー薬である。いくつかの実施形態において、追加の医薬品は、抗血管性認知症薬である。いくつかの実施形態において、追加の医薬品は、コリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ドネペジル、ガランタミン、及びリバスティグミン）、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸受容体アンタゴニスト、メマンチン、ニモジピン、ヒデルギン、ニセルゴリン、ＣＤＰ－コリン、又は葉酸である。
本明細書に記載されるＳ１Ｐ受容体関連疾患、障害、又は状態の治療のために、１種以上の追加の医薬品を化合物１、１ａ、又は１ｂと組み合わせて使用できる。薬剤は、単一剤形で本発明の化合物と組み合わせることができ、又は薬剤は、別々の剤形として同時に又は逐次的に投与できる。いくつかの実施形態において、追加の医薬品は、抗アルツハイマー薬である。いくつかの実施形態において、追加の医薬品は、抗血管性認知症薬である。いくつかの実施形態において、追加の医薬品は、コリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ドネペジル、ガランタミン、及びリバスティグミン）、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸受容体アンタゴニスト、メマンチン、ニモジピン、ヒデルギン、ニセルゴリン、ＣＤＰ－コリン、又は葉酸である。
【0072】
いくつかの実施形態において、追加の医薬品は抗精神病薬である。いくつかの実施形態において、追加の医薬品は、クロルプロマジン、フルフェナジン、ハロペリドール、ペルフェナジン、アリピプラゾール、アセナピン、ブレクスピプラゾール、カリプラジン、クロザピン、イロペリドン、ルラシドン、オランザピン、パリペリドン、クエチアピン、リスペリドン、又はジプラシドンである。
【0073】
製剤、剤形、及び投与
医薬として使用される場合、本開示の化合物は、医薬組成物の形態で投与できる。したがって、本開示は、本明細書に記載の化合物、請求項のいずれかに列挙され、本明細書に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩、又はその実施形態のいずれか及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組成物を提供する。これらの組成物は、薬学分野において周知の様式で調製され得、そして局所的治療又は全身的治療が示されるか否か、及び治療されるべき領域に依存して、種々の経路によって投与され得る。投与は、局所（経皮、表皮、眼、並びに鼻腔内、膣及び直腸送達を含む粘膜を含む）、肺（例えば、粉末又はエアロゾルの吸入又はガス注入による、ネブライザーによるものを含む、気管内又は鼻腔内）、経口又は非経口であり得る。非経口投与としては、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉内又は注射若しくは点滴、又は頭蓋内、例えば、髄腔内若しくは脳室内投与が挙げられる。非経口投与は、単回ボーラス用量の形態であり得る、又は例えば、連続灌流ポンプによるものであり得る。局所投与のための医薬組成物及び製剤は、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液体及び粉末を含み得る。従来の医薬担体、水性、粉末又は油性基剤、増粘剤などが必要であり得又は望ましい場合が得る。
医薬として使用される場合、本開示の化合物は、医薬組成物の形態で投与できる。したがって、本開示は、本明細書に記載の化合物、請求項のいずれかに列挙され、本明細書に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩、又はその実施形態のいずれか及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組成物を提供する。これらの組成物は、薬学分野において周知の様式で調製され得、そして局所的治療又は全身的治療が示されるか否か、及び治療されるべき領域に依存して、種々の経路によって投与され得る。投与は、局所（経皮、表皮、眼、並びに鼻腔内、膣及び直腸送達を含む粘膜を含む）、肺（例えば、粉末又はエアロゾルの吸入又はガス注入による、ネブライザーによるものを含む、気管内又は鼻腔内）、経口又は非経口であり得る。非経口投与としては、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉内又は注射若しくは点滴、又は頭蓋内、例えば、髄腔内若しくは脳室内投与が挙げられる。非経口投与は、単回ボーラス用量の形態であり得る、又は例えば、連続灌流ポンプによるものであり得る。局所投与のための医薬組成物及び製剤は、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液体及び粉末を含み得る。従来の医薬担体、水性、粉末又は油性基剤、増粘剤などが必要であり得又は望ましい場合が得る。
【0074】
本発明はまた、有効成分として、本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩を、１種以上の薬学的に許容される担体と組み合わせて含有する医薬組成物を含む。いくつかの実施形態において、組成物は局所投与に適している。本発明の組成物を作る際に、有効成分は、通常、賦形剤と混合される、賦形剤によって希釈される、又は例えば、カプセル、小袋、紙、若しくは他の容器の形態でそのような担体内に封入される。賦形剤が希釈剤として働く場合、それは固体、半固体又は液体物質であり得、これは有効成分のためのビヒクル、担体又は媒体として働く。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、散剤、トローチ剤、小袋入り、カシュ―、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアロゾル剤（固体として、又は液体媒体中）、例えば、１０重量％までの活性化合物を含有する軟膏剤、軟ゼラチンカプセル剤及び硬ゼラチンカプセル剤、坐剤、滅菌注射用液剤及び滅菌包装散剤の形態であり得る。
【0075】
いくつかの実施形態において、組成物は、徐放性組成物であり、徐放性組成物は、本明細書に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の少なくとも１種及び薬学的に許容される担体又は賦形剤の少なくとも１種を含む。
【0076】
組成物は、単位剤形で製剤化でき、各剤は約５～約１，０００ｍｇ（１ｇ）を含有する。用語「単位剤形」は、ヒト対象及び他の哺乳動物のための単一投与量として適切な物理的に別個の単位を指し、各単位は、適切な薬学的賦形剤と関連して、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性物質を含む。
【0077】
活性化合物は、広い用量範囲にわたって有効であり得、一般に治療有効量で投与される。しかし、実際に投与される化合物の量は、通常、治療される状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重及び応答、患者の症状の重篤度などを含む、関連する状況に従って、医師によって決定されることが理解される。
【0078】
本発明の化合物の治療用量は、例えば、治療が行われる特定の使用、化合物の投与様式、患者の健康及び状態、並びに処方する医師の判断に従って変動し得る。医薬組成物中の本発明の化合物の割合又は濃度は、投与量、化学的特性（例えば、疎水性）、及び投与経路を含むいくつかの要因に応じて、変化し得る。投薬量は、疾患又は障害の進行のタイプ及び程度、特定の患者の全体的な健康状態、選択された化合物の相対的な生物学的有効性、賦形剤の処方、並びにその投与経路などの変数に依存する可能性が高い。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系に由来する用量反応曲線から、推定できる。
【0079】
本発明の化合物及び組成物が経口又は注射による投与のために組み込まれ得る液体形態としては、水溶液、適切に風味付けされたシロップ、水性又は油性懸濁液、例えば、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、又はピーナッツ油などの食用油を含む風味付けされたエマルジョン、エリキシル及び類似の薬学的ビヒクルが挙げられる。
【0080】
吸入又はガス注入のための組成物としては、薬学的に許容される、水性溶媒若しくは有機溶媒、又はそれらの混合物の溶液及び懸濁液、並びに粉末が挙げられる。液体又は固体組成物は、上記のような適切な薬学的に許容される賦形剤を含有し得る。いくつかの実施形態において、組成物は、局所的又は全身的効果のために、経口又は経鼻呼吸経路によって投与される。組成物は、不活性ガスの使用によって、噴霧できる。噴霧された溶液は、噴霧デバイスから直接吸い込まれ得る、又は噴霧デバイスは、フェースマスク、テント、若しくは間欠的加圧呼吸装置に取り付けられ得る。溶液、懸濁液、又は粉末組成物は、適切な様式で製剤を送達するデバイスから、経口又は経鼻投与できる。
【0081】
局所製剤は、１種以上の従来の担体を含有できる。いくつかの態様において、軟膏は、水及び１種以上の疎水性担体を含有できる。
【実施例】
【0082】
本発明の化合物のための実験手順を以下に提供する。出発物質の調製が記載されていない場合、これらは、市販されている、文献において公知である、又は標準的な手順を使用して当業者によって容易に入手可能である。使用した全ての溶媒は市販されており、更に精製することなく使用した。反応は、通常、窒素の不活性雰囲気下で無水溶媒を使用して、行った。
【0083】
［実施例１］ （Ｓ）－３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパン酸（化合物１ａ）の合成
【0084】
ステップ１．５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－オキシラン］
【0085】
【化15】
【0086】
アセトニトリル（４．７Ｌ）及びＨ２Ｏ（３４５ｍＬ）中のトリメチルスルホニウムブロミド（７２６ｇ、４．６２ｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨ（１．０４ｋｇ、１８．５ｍｏｌ）を５５℃で１０分間加えた。５－ブロモ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オン（６５０ｇ、３．０８ｍｏｌ）を反応混合物に加え、５５℃で２０分間撹拌した。この反応を並行して三連で行った。粗反応混合物を１５℃に冷却し、石油エーテル：ＴＢＭＥ（４：１、１０６Ｌ×４）と合わせて、抽出した。粗生成物の少量の試料を真空中で濃縮して、１Ｈ ＮＭＲによって分析し、目的生成物である、５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－オキシラン］の同一性を確認した。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．４７ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１８－３．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９３－３．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３７－２．３８ （ｍ， １Ｈ）， ２．０１－２．１２ （ｍ， １Ｈ）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．４７ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１８－３．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９３－３．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３７－２．３８ （ｍ， １Ｈ）， ２．０１－２．１２ （ｍ， １Ｈ）．
【0087】
ステップ２．５－ブロモ－１－（（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オール
【0088】
【化16】
【0089】
この反応ステップのために、有機層を４等分した。イソプロピルアルコール（２．０Ｌ）中の１，２－エタノールアミン（７０６ｇ、１１．６ｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．１７ｋｇ、１１．６ｍｏｌ）の溶液に、ステップ１からの粗５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－オキシラン］（２．３１ｍｏｌ）の溶液を一部加え、混合物を５０℃で５時間撹拌した。４つの反応混合物を合わせ、次いで、真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル（８Ｌ）に溶解し、Ｎａ２ＣＯ３の飽和溶液（４Ｌ）、水（４Ｌ）及びブライン（２Ｌ）で連続的に洗浄した。有機層を分離して、真空中で濃縮し、５－ブロモ－１－（（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オール（２．００ｋｇ）を褐色油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．２９－７．３６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．３７－３．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６３－２．７２ （ｍ， １Ｈ）， ２．５７－２．６０ （ｍ， ３Ｈ）， ２．５２－２．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２３－２．３１ （ｍ， １Ｈ）， １．８５－１．８８ （ｍ， １Ｈ）．
【0090】
ステップ３．５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］
【0091】
【化17】
【0092】
酢酸（７３５ｇ、４０％）及び水（４．５０Ｌ）中の臭化水素の溶液に、ステップ２からの粗５－ブロモ－１－（（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オール（６５０ｇ、２．２７ｍｏｌ）を加え、混合物を８０℃で１２時間撹拌した。１５℃に冷却した後、３つの反応混合物を合わせ、濾過した。濾過ケーキを８０℃でエチルアルコール：Ｈ２Ｏ（１０Ｌ、４：１）に溶解した。混合物を室温に冷却した。３日後、結晶化した生成物を濾過した。濾過ケーキを水（３Ｌ）に溶解して、炭酸ナトリウムを加えて、混合物のｐＨを８に調整した。混合物を酢酸エチルで抽出した（２×２Ｌ）。活性炭（２００ｇ）を有機層に加え、混合物を２時間撹拌した。得られた溶液を濾過し、濾液を濃縮して、５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］（７７０ｇ）をオフホワイトの固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３４－７．４１ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７６－３．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９９－３．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９４－２．９８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７７－２．８３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５１－２．５２ （ｍ， １Ｈ）， ２．１７－２．２０ （ｍ， １Ｈ）， １．６９ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３４－７．４１ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７６－３．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９９－３．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９４－２．９８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７７－２．８３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５１－２．５２ （ｍ， １Ｈ）， ２．１７－２．２０ （ｍ， １Ｈ）， １．６９ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）
【0093】
ステップ４．（Ｓ）－５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］
【0094】
【化18】
【0095】
５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］のエナンチオマーを、以下の条件下で、キラル超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）によって分離した。
【0096】
カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＹ、１５０×４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．，３μｍ
移動相：ＡはＣＯ２、Ｂはイソプロパノール（０．０５％ジエチルアミンを含む）
勾配：Ｂ５～４０％、流速：２．４ｍＬ／分
背圧：１００バール
カラム温度：３５℃
ＵＶ検出器：２２０ｎｍ
移動相：ＡはＣＯ２、Ｂはイソプロパノール（０．０５％ジエチルアミンを含む）
勾配：Ｂ５～４０％、流速：２．４ｍＬ／分
背圧：１００バール
カラム温度：３５℃
ＵＶ検出器：２２０ｎｍ
【0097】
【化19】
【0098】
第１（速く溶出する）及び第２（遅く溶出するエナンチオマー）のエナンチオマーを、それぞれ９７．６％ｅｅ及び９８．６％ｅｅで純粋に得た。第１の（速く溶出する）エナンチオマーは、単結晶Ｘ線回折によって決定されるように、（Ｓ）－５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］に対応すると考えられる。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ２．１５ － ２．２２ （ｍ， １ Ｈ） ２．５２ （ｄｄｄ， Ｊ＝１２．８４， ８．４３， ４．０８ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．７７ － ２．７７ （ｍ， １ Ｈ） ２．７７ － ２．８８ （ｍ， ２ Ｈ） ２．８９ － ３．０５ （ｍ， ４ Ｈ） ３．７８ （ｄｄ， Ｊ ＝６．７３， ２．９８ Ｈｚ， ２ Ｈ） ７．３６ － ７．４２ （ｍ， ３ Ｈ）．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ２．１５ － ２．２２ （ｍ， １ Ｈ） ２．５２ （ｄｄｄ， Ｊ＝１２．８４， ８．４３， ４．０８ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．７７ － ２．７７ （ｍ， １ Ｈ） ２．７７ － ２．８８ （ｍ， ２ Ｈ） ２．８９ － ３．０５ （ｍ， ４ Ｈ） ３．７８ （ｄｄ， Ｊ ＝６．７３， ２．９８ Ｈｚ， ２ Ｈ） ７．３６ － ７．４２ （ｍ， ３ Ｈ）．
【0099】
ステップ５．（Ｓ）－エチル３－（５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパノエート（化合物１ａ）
【0100】
【化20】
【0101】
エタノール（４００ｍｌ）中の（Ｓ）－５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］（４０ｇ、１４９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（８ｍｌ、４４８ｍｍｏｌ）及びアクリル酸エチル（４４．８ｇ、４４８ｍｍｏｌ）を加え、次いで混合物を８０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１０：１）により精製し、（Ｓ）－エチル３－（５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパノエート（５１ｇ、１３８ｍｍｏｌ、収率９３％）を褐色油状物として得た。生成物を以下のように分析した。
【0102】
ＬＣ／ＭＳ法
カラム：２．０×５０ｍｍ ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ－Ｃ１８カラム、５μｍ
移動相：Ａは水中の０．０３７５％ＣＦ３ＣＯ２Ｈ、ＢはＣＨ３ＣＮ中の０．０１８％ＣＦ３ＣＯ２Ｈ
勾配：１０～１００％Ｂで３．４分間、１００％Ｂで０．４５分間保持、１００～１０％Ｂで０．０１分間、次いで１０％Ｂで０．６５分間保持（流速０．８ｍＬ／分）。
検出方法：ダイオードアレイ、蒸発光散乱（ＥＬＳＤ）、及びポジティブエレクトロスプレーイオン化。
カラム：２．０×５０ｍｍ ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ－Ｃ１８カラム、５μｍ
移動相：Ａは水中の０．０３７５％ＣＦ３ＣＯ２Ｈ、ＢはＣＨ３ＣＮ中の０．０１８％ＣＦ３ＣＯ２Ｈ
勾配：１０～１００％Ｂで３．４分間、１００％Ｂで０．４５分間保持、１００～１０％Ｂで０．０１分間、次いで１０％Ｂで０．６５分間保持（流速０．８ｍＬ／分）。
検出方法：ダイオードアレイ、蒸発光散乱（ＥＬＳＤ）、及びポジティブエレクトロスプレーイオン化。
【0103】
ＨＰＬＣ法
カラム：２．０×５０ｍｍ ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ－Ｃ１８カラム（５μｍ粒子）
移動相：Ａは水中の０．０３７５％ＴＦＡ、ＢはＭｅＣＮ中の０．０１８％ＴＦＡ
勾配：１０～８０％Ｂで４分間、８０％Ｂで０．９分間保持、８０～１０％Ｂで０．０１分間、次いで１０％Ｂで１分間保持（流速０．８ｍＬ／分）
検出方法：ダイオードアレイ
ＱＣ：ｍ／ｚ＝３６８．１及び３７０．１
ＨＰＬＣ：生成物の保持時間：２．１３分
カラム：２．０×５０ｍｍ ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ－Ｃ１８カラム（５μｍ粒子）
移動相：Ａは水中の０．０３７５％ＴＦＡ、ＢはＭｅＣＮ中の０．０１８％ＴＦＡ
勾配：１０～８０％Ｂで４分間、８０％Ｂで０．９分間保持、８０～１０％Ｂで０．０１分間、次いで１０％Ｂで１分間保持（流速０．８ｍＬ／分）
検出方法：ダイオードアレイ
ＱＣ：ｍ／ｚ＝３６８．１及び３７０．１
ＨＰＬＣ：生成物の保持時間：２．１３分
【0104】
１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ １．２７ （ｔ， Ｊ＝７．１７ Ｈｚ， ３ Ｈ） ２．１０ （ｄｄｄ， Ｊ＝１３．２９， ７．６６， ６．１７ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．３３－２．６１ （ｍ， ７ Ｈ） ２．６１－２．８５ （ｍ，３ Ｈ） ２．９８－３．０８ （ｍ， １ Ｈ） ３．６８－３．８０ （ｍ， ２ Ｈ） ４．１６ （ｑ， Ｊ＝７．０６ Ｈｚ， ２ Ｈ） ７．３１ （ｄ， Ｊ＝７．９４ Ｈｚ， １ Ｈ） ７．３７ （ｓ， １ Ｈ） ７．４９ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝７．９４ Ｈｚ， １ Ｈ）．
【0105】
ステップ６．（Ｓ）－エチル３－（５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパノエート
【0106】
【化21】
【0107】
三つ口フラスコに、ガラスビーズ（４ｍｍ、１６５ｇ）、Ｐｄ２ｄｂａ３（１１．４４ｇ、１２．４９ｍｍｏｌ）、２－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）－２’，４’，６’－トリイソプロピル－３，６－ジメトキシ－１，１’－ビフェニル（１２．４１ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）、及び炭酸セシウム（３０５ｇ、９３７ｍｍｏｌ）を入れた。フラスコにオーバーヘッド撹拌機、還流冷却器、並びにアルゴン注入口及び温度プローブを備えたクライゼンアダプターを取り付けた。フラスコをアルゴンで９０分間パージして、全ての酸素を除去した。
【0108】
別のフラスコ中で、（Ｓ）－エチル３－（５－ブロモ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパノエート（２３０ｇ、６２５ｍｍｏｌ）、（２－クロロ－６－エチルフェニル）メタノール（ＣＡＳ登録＃１２６８８６２－１８－５、１２８ｇ、７４９ｍｍｏｌ）をトルエン（１８４０ｍｌ）中で均一な溶液が得られるまで混合した。混合物をアルゴンで１時間パージした。アルゴン圧を使用して、溶液をカニューレによって反応フラスコに移した。反応混合物を７０℃に温め、１４時間撹拌した。水浴を使用して、反応混合物を室温に冷却し、無機材料及びガラスビーズを濾別した。反応フラスコを酢酸エチル（１Ｌ）で洗浄し、全ての残留固体を濾別した。濾過ケーキを酢酸エチル（１．３Ｌ）で洗浄した。水（３４８０ｇ）中の５％Ｌ－システイン（２００ｇ）及び８％ＮａＨＣＯ３（３２０ｇ）の新たに調製した溶液で、暗褐色溶液を洗浄した（２×２０００ｇ）。洗浄の間に溶液を２５分間沈降させた。有機層を分離し、濾過して全ての残留微粒子を除去した。
【0109】
少量の試料を真空中で濃縮して、１Ｈ ＮＭＲによって分析して、所望の生成物、（Ｓ）－エチル－３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパノエートの同一性を確認した。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．４８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝８．１９ Ｈｚ， １ Ｈ） ７．１２ － ７．２３ （ｍ， ２ Ｈ） ７．０８ （ｍ， １ Ｈ） ６．８３ （ｓ， １ Ｈ） ６．７８ （ｄｄ， Ｊ＝８．３８， ２．０２ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．０９ （ｓ， ２ Ｈ） ４．０９ （ｑ， Ｊ＝７．１３ Ｈｚ， ２ Ｈ） ３．６８ （ｍ， ２ Ｈ） ２．９７ （ｍ， １ Ｈ） ２．５８ － ２．７７ （ｍ， ５ Ｈ） ２．３８ － ２．５１ （ｍ， ６ Ｈ） ２．２８ （ｍ， １ Ｈ） ２．０７ （ｄｄｄ， Ｊ＝１３．２４， ８．１６， ５．３８ Ｈｚ， １ Ｈ） １．１８ （ｍ， ３ Ｈ） １．１３ － １．１６ （ｍ， ３ Ｈ）．
【0110】
ステップ７．（Ｓ）－３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパン酸
【0111】
【化22】
【0112】
ステップ６からの粗（Ｓ）－エチル３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパノエート（４．３１ｇ、９．４１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．６Ｌ）溶液に溶解し、撹拌した。水酸化リチウム（７０．６ｇ、２９４８ｍｍｏｌ）及び６００ｍＬの水を加えた。２０時間後、有機層と水層を分離した。水層を１Ｍ ＨＣｌを使用して、ｐＨ ７に滴定した。次に、水層を酢酸エチル（３×３５０ｍＬ）、次に１：１（ｖ／ｖ）のＣＨＣｌ３／イソプロピルアルコールで抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で３０分間撹拌することにより乾燥させた。濾過及び溶媒の除去後、粗残留物を最小量のＴＨＦに溶解した。ヘプタンによる沈殿によって、（Ｓ）－３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパン酸を得た。この生成物を更に精製することなくステップ８で使用した。
【0113】
ステップ８：（Ｓ）－３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパン酸塩酸塩
【0114】
【化23】
【0115】
ステップ７からの生成物のいくつかのバッチを合わせ、以下のようにＨＣｌ塩として再結晶させた。（Ｓ）－３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパン酸（２７９ｇ、６４９ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２．８Ｌ）に溶解して、０．４５ミクロンフィルターに通し、全ての微粒子を除去した。溶液を１０℃に冷却し、ジオキサン（１７８ｍＬ）中の１．１当量の４Ｍ ＨＣｌを滴下して加えた。追加の酢酸エチルを濃厚溶液に加えて、撹拌を可能にした。固体を室温で濾過し、酢酸エチルで洗浄し、真空オーブン中４５℃で一晩乾燥させて、所望の（Ｓ）－３－（５－（（２－クロロ－６－エチルベンジル）オキシ）－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，２’－モルホリン］－４’－イル）プロパン酸塩酸塩（２８０ｇ）を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ７．１９ － ７．４４ （ｍ， ４ Ｈ） ７．００ （ｓ， １ Ｈ） ６．９３ （ｄ， Ｊ＝８．１６ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．１４ （ｓ， ２ Ｈ） ３．９４ （ｄ， Ｊ＝５．０７ Ｈｚ， ２ Ｈ） ３．１７ － ３．３３ （ｍ， ４ Ｈ） ３．０２ － ３．１６ （ｍ， ２ Ｈ） ２．８２ － ２．９９ （ｍ， ５ Ｈ） ２．７１ （ｑ， Ｊ＝７．２８ Ｈｚ， ２ Ｈ） ２．１２ （ｍ， １ Ｈ） １．１６ （ｔ， Ｊ＝７．５０ Ｈｚ， ３ Ｈ）．
【0116】
［実施例Ａ］ インビトロ活性
アゴニスト効能及び有効性を、細胞内Ｃａ２＋放出の測定によって評価した。１０％ＦＢＳ、１００ｐｇ／ｍＬゲンタマイシンを補充し、５％ＣＯ２で平衡化した栄養混合物Ｆ－１２ Ｈａｍ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する培地を使用して、ヒトＳ１ＰＲ５、Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ３又はＳ１ＰＲ４受容体、エクオリン、及びＧＴＰ結合タンパク質Ｇｑ／ｉ５を発現する組換えＣＨＯ－Ｋ１細胞（Ｅｕｒｏｓｃｒｅｅｎ、ブリュッセル、ベルギー）を培養した。２０ｐＬ培地中の１５，０００個の細胞を、Ｂｉｏｃｏａｔポリ－Ｄ－リジンコーティング３８４ウェルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＃３５－６６６３）に播種し、２４時間後に約９５％コンフルエントになるまで増殖させた。培養培地を、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋を含むＨＢＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１４０２５－０５０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｈｅｐｅｓ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ｈ－３３７５）、２．５ｍｍｏｌ／Ｌ プロベネシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ｐ－８７６１）、及び０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ａ－７０３０）ｐＨ ７．４からなるアッセイ緩衝液と交換した。Ｃａｌｃｉｕｍ ５ ｎｏ－ｗａｓｈ ＦＬＩＰＲアッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＃５０００６２５）を、キット説明書に記載されているように実施した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２、暗所で１時間、カルシウム５色素とともにインキュベートした。４５分後、細胞内Ｃａ２＋放出のアゴニスト刺激のＲＴ評価への適合を、連続希釈によって得られた様々な濃度の試験化合物を加えることによって、実施した。陽性対照及び参照アゴニスト（固有活性１００％）として、ホスホ－フィンゴリモドを使用した。ヒトＳ１Ｐｘ受容体における試験化合物の受容体活性化作用は、適合した参照アゴニスト（ホスホ－フィンゴリモド）の効果曲線の下側及び上側のプラトーに正規化した後の測定された蛍光データに適合する非線形４パラメトリックロジスティック曲線から推定されるＥＣ５０値（効能）によって、及び１００％のＥｍａｘとして定義される、参照アゴニストの有効性の％における達成可能な最大効果によって表されるそれらの効力（Ｅｍａｘ）値によって、特徴付けられた。
アゴニスト効能及び有効性を、細胞内Ｃａ２＋放出の測定によって評価した。１０％ＦＢＳ、１００ｐｇ／ｍＬゲンタマイシンを補充し、５％ＣＯ２で平衡化した栄養混合物Ｆ－１２ Ｈａｍ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する培地を使用して、ヒトＳ１ＰＲ５、Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ３又はＳ１ＰＲ４受容体、エクオリン、及びＧＴＰ結合タンパク質Ｇｑ／ｉ５を発現する組換えＣＨＯ－Ｋ１細胞（Ｅｕｒｏｓｃｒｅｅｎ、ブリュッセル、ベルギー）を培養した。２０ｐＬ培地中の１５，０００個の細胞を、Ｂｉｏｃｏａｔポリ－Ｄ－リジンコーティング３８４ウェルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＃３５－６６６３）に播種し、２４時間後に約９５％コンフルエントになるまで増殖させた。培養培地を、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋を含むＨＢＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１４０２５－０５０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｈｅｐｅｓ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ｈ－３３７５）、２．５ｍｍｏｌ／Ｌ プロベネシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ｐ－８７６１）、及び０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ａ－７０３０）ｐＨ ７．４からなるアッセイ緩衝液と交換した。Ｃａｌｃｉｕｍ ５ ｎｏ－ｗａｓｈ ＦＬＩＰＲアッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＃５０００６２５）を、キット説明書に記載されているように実施した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２、暗所で１時間、カルシウム５色素とともにインキュベートした。４５分後、細胞内Ｃａ２＋放出のアゴニスト刺激のＲＴ評価への適合を、連続希釈によって得られた様々な濃度の試験化合物を加えることによって、実施した。陽性対照及び参照アゴニスト（固有活性１００％）として、ホスホ－フィンゴリモドを使用した。ヒトＳ１Ｐｘ受容体における試験化合物の受容体活性化作用は、適合した参照アゴニスト（ホスホ－フィンゴリモド）の効果曲線の下側及び上側のプラトーに正規化した後の測定された蛍光データに適合する非線形４パラメトリックロジスティック曲線から推定されるＥＣ５０値（効能）によって、及び１００％のＥｍａｘとして定義される、参照アゴニストの有効性の％における達成可能な最大効果によって表されるそれらの効力（Ｅｍａｘ）値によって、特徴付けられた。
【0117】
ｈＳ１ＰＲ２についての有効性試験を、Ｅｕｒｏｓｃｒｅｅｎ社、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ社、フランスで行った。ミトコンドリアアポエクオリン、組換えヒトＧα１６及びＳ１Ｐ２受容体（ＦＡＳＴ－０１９８Ａ）を共発現し、抗生物質を含まない培養培地中で対数中期まで増殖させた細胞を、ＰＢＳ－ＥＤＴＡで分離して、遠心分離し、アッセイ緩衝液（ＨＥＰＥＳを含み、フェノールレッドを含まないＤＭＥＭ／ＨＡＭ’ｓ Ｆ１２＋０．１脂肪酸であって、ＢＳＡを含まない）中に１×１０６細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。セレンテラジンとともに、室温で少なくとも４時間、細胞をインキュベートした。参照アゴニストＳ１Ｐ及びＪＴＥ－０１３を試験して、試験の各日におけるアッセイの性能を評価し、ＥＣ５０を決定した。アゴニスト試験のために、細胞懸濁液を３８４ウェルプレート中で試験アゴニスト又は参照アゴニストと１：１で混合した。得られた発光を、Ｈａｍａｍａｔｓｕ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｄｒｕｇ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ ６０００（ＦＤＳＳ）ルミノメーターを使用して、記録した。実験の各日に、参照化合物をいくつかの濃度で試験して、用量反応曲線及び推定ＥＣ５０値を得た。試験のためにこのようにして得られた参照値を、同じ受容体から得られた過去の値と比較し、実験期間を検証するために使用した。
【0118】
受容体活性化作用データを以下の表に示す。
【0119】
【表1】
【0120】
本明細書に記載されるものに加えて、本発明の様々な改変は、前述の説明から当業者には明らかであろう。このような改変も、添付の特許請求の範囲内に入ることが意図される。本出願において引用された全ての特許、特許出願、及び刊行物を含む各参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【国際調査報告】