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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-11
(54)【発明の名称】治療用ペプチド製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 38/26 20060101AFI20231228BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20231228BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20231228BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20231228BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20231228BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20231228BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20231228BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20231228BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20231228BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20231228BHJP
A61K 47/59 20170101ALI20231228BHJP
C07K 14/00 20060101ALI20231228BHJP
C12N 15/11 20060101ALI20231228BHJP
【ＦＩ】
A61K38/26
A61K9/08
A61K38/16
A61K47/02
A61K47/18
A61K47/26
A61K47/12
A61P3/10
A61P3/04
A61P1/16
A61K47/59
C07K14/00 ZNA
C12N15/11 Z
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023538073
(86)(22)【出願日】2021-12-21
(85)【翻訳文提出日】2023-07-18
(86)【国際出願番号】 US2021064592
(87)【国際公開番号】W WO2022140373
(87)【国際公開日】2022-06-30
(31)【優先権主張番号】63/129,157
(32)【優先日】2020-12-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(72)【発明者】
【氏名】アレン，デイビッド ポール
(72)【発明者】
【氏名】デサイ，ダーラ パンカジ
(72)【発明者】
【氏名】チャン，カン カンイー
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076CC16
4C076CC21
4C076CC41
4C076DD26Z
4C076DD38D
4C076DD43S
4C076DD49S
4C076DD50Z
4C076EE59
4C076FF14
4C076FF15
4C076FF51
4C076FF61
4C084AA01
4C084AA02
4C084BA01
4C084BA19
4C084BA23
4C084BA42
4C084CA59
4C084DB35
4C084MA05
4C084MA17
4C084NA02
4C084NA03
4C084ZA701
4C084ZA702
4C084ZA751
4C084ZA752
4C084ZC351
4C084ZC352
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA18
4H045BA50
4H045EA27
4H045FA33
4H045GA15
4H045GA25
(57)【要約】
本発明は、治療用デュアルＧＬＰ－１受容体／グルカゴン受容体アゴニストの安定した医薬製剤及びかかる安定した医薬製剤を使用する方法を関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）以下の式：Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、Ｇｌｕ又はＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、前記２０位のＬｙｓとＣ１４－Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介したＬｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と前記Ｃ１４－Ｃ２４脂肪酸とのコンジュゲーションによって化学修飾されており、前記リンカーは、（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）ｔであって、式中、ｔは、１又は２であり、
Ｃ末端アミノ酸は、適宜アミド化されていてもよい］（配列番号５）
で示される化合物と、
（ｉｉ）緩衝液と、
（ｉｉｉ）等張化剤と、
（ｉｉｉ）抗酸化剤と
を含む医薬製剤であって、前記製剤のｐＨが、７．８～９．０である、医薬製剤。
【請求項2】
前記化合物が、（ａ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される化合物、
（ｂ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号２）
で示される化合物、
（ｃ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号３）
で示される化合物、及び
（ｄ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号４）
で示される化合物
からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項3】
前記化合物が、以下の式：Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される、請求項１又は２に記載の医薬製剤。
【請求項4】
前記製剤が、１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの前記化合物を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項5】
前記緩衝液が、リン酸緩衝液及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（又は２－アミノ－２－ヒドロキシメチル－プロパン－１，３－ジオール［（ＨＯＣＨ２）３ＣＮＨ２］）緩衝液からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項6】
前記製剤が、１ｍＭ～２０ｍＭの緩衝液を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項7】
前記緩衝液が、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）緩衝液である、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項8】
前記製剤が、１０ｍＭのトリス緩衝液を含む、請求項７に記載の医薬製剤。
【請求項9】
前記等張化剤が、マンニトール、スクロース、トレハロース、プロピレングリコール、グリセリン、塩化ナトリウム、及び塩酸アルギニンからなる群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項10】
前記製剤が、５ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬの前記等張化剤を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項11】
前記等張化剤が、マンニトールである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項12】
前記製剤が、４５～５５ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含む、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項13】
前記抗酸化剤が、ラジカルスカベンジャー、キレート剤、又は連鎖停止剤からなる群から選択される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項14】
前記製剤が、０．０５～１０．０ｍｇ／ｍＬの前記抗酸化剤を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項15】
前記抗酸化剤が、ＥＤＴＡ、クエン酸、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、亜硫酸ナトリウム、ｐ－アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、ヒスチジン、システイン、メチオニン、エタノール、及びＮ－アセチルシステインからなる群から選択される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項16】
前記抗酸化剤が、ＥＤＴＡである、請求項１５に記載の医薬製剤。
【請求項17】
前記製剤が、０．２～１．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含む、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項18】
前記製剤が、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含む、請求項１６又は１７に記載の医薬製剤。
【請求項19】
前記抗酸化剤が、クエン酸である、請求項１５に記載の医薬製剤。
【請求項20】
前記製剤が、５ｍＭ～１５ｍＭのクエン酸を含む、請求項１９に記載の医薬製剤。
【請求項21】
前記製剤が、８ｍＭ～１２ｍＭのクエン酸を含む、請求項１８又は１９に記載の医薬製剤。
【請求項22】
前記製剤が、１０ｍＭのクエン酸を含む、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項23】
前記製剤のｐＨが、８．０～８．６である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項24】
前記製剤のｐＨが、８．０～８．３である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項25】
（ｉ）１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの以下の式：Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される化合物、
（ｉｉ）１０ｍＭのトリス緩衝液、
（ｉｉｉ）４６ｍｇ／ｍＬのマンニトール、及び
（ｉｖ）０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ
を含む医薬製剤であって、前記製剤のｐＨが、８．０～８．３である、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項26】
２型糖尿病を治療し、及び／又は予防する方法であって、患者に、治療有効量の請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む、方法。
【請求項27】
肥満を治療し、及び／又は予防する方法であって、患者に、治療有効量の請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む、方法。
【請求項28】
非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療し、及び／又は予防する方法であって、患者に、治療有効量の請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む、方法。
【請求項29】
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療し、及び／又は予防する方法であって、患者に、治療有効量の請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む、方法。
【請求項30】
２型糖尿病の治療及び／又は予防に使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項31】
肥満の治療及び／又は予防に使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項32】
ＮＡＦＬＤの治療及び／又は予防に使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項33】
ＮＡＳＨの治療及び／又は予防に使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項34】
２型糖尿病の治療に使用するための薬剤の製造における、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤の使用。
【請求項35】
肥満の治療に使用するための薬剤の製造における、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤の使用。
【請求項36】
ＮＡＦＬＤの治療に使用するための薬剤の製造における、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤の使用。
【請求項37】
ＮＡＳＨの治療に使用するための薬剤の製造における、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医療の分野に属する。より具体的には、本発明は、皮下（「ＳＱ」）、筋肉内（「ＩＭ」）、及び／又は腹腔内（「ＩＰ」）投与に好適な治療用ペプチドを含む医薬製剤に関する。更により具体的には、本発明は、デュアルグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ－１）受容体及びグルカゴン（Ｇｃｇ）受容体アゴニストペプチドの医薬製剤に関する。デュアルＧＬＰ－１受容体／Ｇｃｇ受容体アゴニストを含むこれらの医薬製剤は、少なくとも２型糖尿病、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び／又は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療に有用であることが期待される。
【背景技術】
【0002】
デュアルＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニストの医薬製剤は、少なくとも２型糖尿病患者、肥満患者、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）患者、及び／又は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）患者の治療に必要とされている。ＳＱ、ＩＰ、及び／又はＩＭ投与によるかかる治療用ペプチドの投与は、一般的かつ有利である。かかる投与経路により、治療用ペプチドが短期間で送達されることが可能になり、患者が医師を訪問することなく治療用ペプチドを自己投与することが可能になる。ペプチドを患者にＳＣ、ＩＰ、及び／又はＩＭ送達することができるように、ある特定の濃度のデュアルＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドが医薬製剤に必要である。ある特定の濃度のデュアルＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドを含むこれらの医薬製剤は、このペプチドの物理的かつ化学的安定性を維持しなければならない。しかしながら、治療用ペプチドをＳＱ、ＩＭ、及び／又はＩＰ投与に好適な液体医薬製剤に製剤化することは、困難であり、予測不可能である。
【0003】
ＳＱ、ＩＭ、及び／又はＩＰ投与に好適な液体医薬製剤への治療用ペプチドの製剤化に伴う困難及び予測不可能性は、部分的に、医薬製剤が治療上実行可能であるために有さなければならない多数の特性に起因する。医薬製剤は、溶液中の治療用ペプチドに安定性を与えると同時に、治療効果に不可欠な治療用ペプチドの機能的特性を維持しなければならない。加えて、液体医薬製剤は、患者への投与に安全であり、患者がそれに対して良好な耐容性を示し、製造及び保管にも好適でなければならない。
【0004】
米国特許第９，９３８，３３５号は、概して、非経口経路により投与されるデュアルＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドについて記載している。米国特許第９，９３８，３３５号の実施例２に記載されている化合物は、配列番号１に示される配列を有する（以下、化合物１と称される）。化合物１は、現在、２型糖尿病患者の治療について評価されている。化合物１は、３４個のアミノ酸残基、１個の非コードアミノ酸（アミノイソ酪酸（Ａｉｂ））、Ｃ末端アミド、及び配列内の２０位のリジンに共有結合したＣ２０脂肪二酸部分からなる合成ペプチドである。共有結合リンカーは、ガンマ－グルタミン酸及び２つのＰＥＧ単位を含む。治療的には、このペプチドは、ヒトグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ－１）及びグルカゴン（Ｇｃｇ）のデュアルアゴニスト活性を有するオキシントモジュリン様アシル化ペプチドである。これは独立して、感受性細胞の表面にあるグルカゴン様ペプチド受容体（ＧＬＰ－１Ｒ）及びグルカゴン受容体（ＧｃｇＲ）の両方に結合し、それらを活性化する。
【0005】
驚くべきことに、米国特許第９，９３８，３３５号に記載の化合物、具体的には化合物１が、より低いｐＨ値（例えば、ｐＨ５．０～６．５）で最適以下の溶解度を有することが見出された。米国特許第９，９３８，３３５号に記載の化合物、具体的には化合物１が、ｐＨ値７．０～８．５を有するある特定の製剤中で最適以下の安定性を有することも見出された。これらの観察された問題を回避する、配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を有するデュアルＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニストペプチド化合物を含む医薬製剤が必要とされている。
【発明の概要】
【0006】
本明細書に提供される医薬製剤は、前述の必要性を満たす。より具体的には、本明細書に提供される医薬製剤は、治療効果に不可欠なペプチドの機能的特性を維持すると同時に、デュアルＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのＳＱ、ＩＭ、及び／又はＩＰ投与に好適である。
【0007】
したがって、
（ｉ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、Ｇｌｕ又はＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、２０位のＬｙｓとＣ１４－Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介したＬｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基とＣ１４－Ｃ２４脂肪酸とのコンジュゲーションによって化学修飾されており、リンカーは、（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）ｔであって、式中、ｔは、１又は２であり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意選択的にアミド化されている］（配列番号５）
で示される化合物又はその薬学的に許容される塩と、
（ｉｉ）緩衝液と、
（ｉｉｉ）等張化剤と、
（ｉｉｉ）抗酸化剤と
を含むものであって、製剤のｐＨが７．８～９．０である、医薬製剤が提供される。
（ｉ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、Ｇｌｕ又はＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、２０位のＬｙｓとＣ１４－Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介したＬｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基とＣ１４－Ｃ２４脂肪酸とのコンジュゲーションによって化学修飾されており、リンカーは、（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）ｔであって、式中、ｔは、１又は２であり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意選択的にアミド化されている］（配列番号５）
で示される化合物又はその薬学的に許容される塩と、
（ｉｉ）緩衝液と、
（ｉｉｉ）等張化剤と、
（ｉｉｉ）抗酸化剤と
を含むものであって、製剤のｐＨが７．８～９．０である、医薬製剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【図1】ｐＨがおよそ５．０からおよそ７．０に変化したときの溶液中の化合物１の濃度を説明する。
【図2a】サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定した、等張化剤としてＮａＣｌ又はグリセリンのいずれかを含む１０ｍＭのリン酸緩衝液を含む製剤マトリックス中の化合物１溶液製剤の総凝集体を説明する。
【図2b】ＳＥＣによって測定した、等張化剤としてＮａＣｌ又はグリセリンのいずれかを含む１０ｍＭのトリス緩衝液を含む製剤マトリックス中の化合物１溶液製剤の総凝集体を説明する。
【図3a】２ｍｇ／ｍＬの化合物１を様々なｐＨ条件で製剤化し、かつフィブリルを添加した場合のｐＨの関数としての化合物１のフィブリル化のリスクを説明する。
【図3b】１２ｍｇ／ｍＬの化合物１を様々なｐＨ条件で製剤化し、かつフィブリルを添加した場合のｐＨの関数としての化合物１のフィブリル化のリスクを説明する。
【図4】２ｍｇ／ｍＬの化合物１溶液製剤を４０℃で最長４週間保管した場合の熱応力の影響を示すＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図5a】遷移金属及びＨ２Ｏ２の影響を示す、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡで製剤化した２ｍｇ／ｍＬの化合物１医薬品のＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図5b】遷移金属及びＨ２Ｏ２の影響を示す、ＥＤＴＡなしで製剤化した２ｍｇ／ｍＬの化合物１医薬品のＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図6a】０ヶ月、１ヶ月、及び３ヶ月時点のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で測定した、５℃で保管した化合物１製剤中の総凝集体を説明する。
【図6b】０ヶ月、１ヶ月、及び３ヶ月時点のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で測定した、２５℃で保管した化合物１製剤中の総凝集体を説明する。
【図6c】０ヶ月、１ヶ月、及び３ヶ月時点のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で測定した、３０℃で保管した化合物１製剤中の総凝集体を説明する。
【発明を実施するための形態】
【0009】
予備的製剤研究において、本明細書に記載の化合物がｐＨ５．０～６．０で最適以下の溶解度を有することが見出された。これらの研究により、ＳＣ、ＩＭ、及び／又はＩＰ投与に好適な溶解度を得るために、本化合物をおよそ７．０以上のｐＨで製剤化しなければならないことが明らかになった。しかしながら、更なる製剤研究により、驚くべきことに、本明細書に記載の化合物が７．０～８．５の範囲のｐＨ値で有意な安定性問題を呈することが明らかになった。安定性問題を理解するために更なる研究が行われた。驚くべきことに、安定性問題を引き起こす可能性のある少なくとも２つのメカニズムが存在することが見出された。第一に、天然ヒトグルカゴンとの配列類似性のため、これらの化合物がフィブリル化を受けやすい可能性があると考えられた。本明細書に記載の研究は、本化合物がｐＨ７．８未満で有意なフィブリル化を受けることを実証している。第二に、本化合物がある特定のアミノ酸残基、特に１位のヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）及び２５位のトリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）で酸化を受けやすい可能性があると考えられた。本明細書に記載の研究は、本化合物が酸化を受けやすいことを実証している。これらの化合物を上記のように製剤化して、安定性問題のこれらの検証された原因に対処する。本化合物をｐＨ７．８～９．０の範囲で製剤化することにより、フィブリル化が回避される。酸化防止剤を含めることにより、本化合物の酸化に起因する凝集体が有意に減少又は除去される。
【0010】
本発明の更なる実施形態では、Ｃ１４－Ｃ２４脂肪酸は、ミリスチン酸（テトラデカン酸）（Ｃ１４一塩基酸）、テトラデカン二酸（Ｃ１４二塩基酸）、パルミチン酸（ヘキサデカン酸）（Ｃ１６一塩基酸）、ヘキサデカン二酸（Ｃ１６二塩基酸）、マルガリン酸（ヘプタデカン酸）（Ｃ１７一塩基酸）、ヘプタデカン二酸（Ｃ１７二塩基酸）、ステアリン酸（オクタデカン酸）（Ｃ１８一塩基酸）、オクタデカン二酸（Ｃ１８二塩基酸）、ノナデシル酸（ノナデカン酸）（Ｃ１９一塩基酸）、ノナデカン二酸（Ｃ１９二塩基酸）、アラカジン酸（ａｒａｃｈａｄｉｃ ａｃｉｄ）（エイコサン酸）（Ｃ２０一塩基酸）、エイコサン二酸（Ｃ２０二塩基酸）、ヘンイコシル酸（ヘンエイコサン酸）（Ｃ２１一塩基酸）、ヘンエイコサン酸（Ｃ２１二塩基酸）、ベヘン酸（ドコサン酸）（Ｃ２２）、ドコサン二酸（Ｃ２２二塩基酸）、リグノセリン酸（テトラコサン酸）（Ｃ２４一塩基酸）、及びテトラコサン二酸（Ｃ２４二塩基酸）からなる群から選択される飽和一塩基酸又は飽和二塩基酸である。
【0011】
好ましくは、Ｃ１４－Ｃ２４脂肪酸は、オクタデカン二酸である。
【0012】
代替として好ましくは、Ｃ１４－Ｃ２４脂肪酸は、エイコサン二酸である。
【0013】
本発明の好ましい実施形態では、Ｃ末端アミノ酸はアミド化されている。
【0014】
本発明の更なる実施形態では、本化合物は、
（ａ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される化合物（化合物１）、又はその薬学的に許容される塩、
（ｂ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号２）
で示される化合物（以下、化合物２と称される）、又はその薬学的に許容される塩、
（ｃ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号３）
で示される化合物（以下、化合物３と称される）、又はその薬学的に許容される塩、及び
（ｄ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号４）
で示される化合物（以下、化合物４と称される）、又はその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される。
（ａ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される化合物（化合物１）、又はその薬学的に許容される塩、
（ｂ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号２）
で示される化合物（以下、化合物２と称される）、又はその薬学的に許容される塩、
（ｃ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号３）
で示される化合物（以下、化合物３と称される）、又はその薬学的に許容される塩、及び
（ｄ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号４）
で示される化合物（以下、化合物４と称される）、又はその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される。
【0015】
本発明の好ましい実施形態では、本化合物は、以下の式を有し、
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
式中、Ｘａａ２が、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓが、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸がアミド化されている（配列番号１）、化合物（化合物１）、
又はその薬学的に許容される塩である。
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
式中、Ｘａａ２が、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓが、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸がアミド化されている（配列番号１）、化合物（化合物１）、
又はその薬学的に許容される塩である。
【0016】
本発明の更なる実施形態では、本製剤は、１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0017】
好ましくは、本製剤は、５ｍｇ／ｍＬ～９０ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0018】
更に好ましくは、本製剤は、１０ｍｇ／ｍＬ～８０ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0019】
なお更に好ましくは、本製剤は、２０ｍｇ／ｍＬ～７０ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0020】
なお更に好ましくは、本製剤は、３０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0021】
なお更に好ましくは、本製剤は、４０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0022】
代替として、本製剤は、１ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0023】
更に代替として、本製剤は、２ｍｇ／ｍＬ～４５ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0024】
なお更に代替として、本製剤は、３ｍｇ／ｍＬ～４０ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0025】
なお更に代替として、本製剤は、４ｍｇ／ｍＬ～３５ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0026】
なお更に代替として、本製剤は、５ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0027】
なお更に代替として、本製剤は、６ｍｇ／ｍＬ～２５ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0028】
なお更に代替として、本製剤は、７ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0029】
なお更に代替として、本製剤は、８ｍｇ／ｍＬ～１５ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0030】
代替として好ましくは、本製剤は、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ １５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、２６ｍｇ／ｍＬ、２７ｍｇ／ｍＬ、２８ｍｇ／ｍＬ、２９ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３１ｍｇ／ｍＬ、３２ｍｇ／ｍＬ、３３ｍｇ／ｍＬ、３４ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、３６ｍｇ／ｍＬ、３７ｍｇ／ｍＬ、３８ｍｇ／ｍＬ、３９ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４１ｍｇ／ｍＬ、４２ｍｇ／ｍＬ、４３ｍｇ／ｍＬ、４４ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、４６ｍｇ／ｍＬ、４７ｍｇ／ｍＬ、４８ｍｇ／ｍＬ、４９ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、９５ｍｇ／ｍＬ、又は１００ｍｇ／ｍＬの本化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0031】
本発明のなお更なる実施形態では、緩衝液は、リン酸緩衝液及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（又は２－アミノ－２－ヒドロキシメチル－プロパン－１，３－ジオール［（ＨＯＣＨ２）３ＣＮＨ２］）緩衝液からなる群から選択される。
【0032】
本発明のなお更なる実施形態では、本製剤は、１ｍＭ～２０ｍＭの緩衝液を含む。
【0033】
好ましくは、本製剤は、３ｍＭ～１８ｍＭの緩衝液を含む。
【0034】
更に好ましくは、本製剤は、５ｍＭ～１５ｍＭの緩衝液を含む。
【0035】
なお更に好ましくは、本製剤は、８ｍＭ～１２ｍＭの緩衝液を含む。
【0036】
なお更に好ましくは、本製剤は、９ｍＭ～１１ｍＭの緩衝液を含む。
【0037】
本発明のなお更なる実施形態では、本製剤は、１ｍＭの緩衝液、２ｍＭの緩衝液、３ｍＭの緩衝液、４ｍＭの緩衝液、５ｍＭの緩衝液、６ｍＭの緩衝液、７ｍＭの緩衝液、８ｍＭの緩衝液、９ｍＭの緩衝液、１０ｍＭの緩衝液、１１ｍＭの緩衝液、１２ｍＭの緩衝液、１３ｍＭの緩衝液、１４ｍＭの緩衝液、１５ｍＭの緩衝液、１６ｍＭの緩衝液、１７ｍＭの緩衝液、１８ｍＭの緩衝液、１９ｍＭの緩衝液、又は２０ｍＭの緩衝液を含む。
【0038】
本発明の好ましい実施形態では、緩衝液は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス（Ｔｒｉｓ））緩衝液である。
【0039】
更に好ましくは、本製剤は、１ｍＭのトリス緩衝液、２ｍＭのトリス緩衝液、３ｍＭのトリス緩衝液、４ｍＭのトリス緩衝液、５ｍＭのトリス緩衝液、６ｍＭのトリス緩衝液、７ｍＭのトリス緩衝液、８ｍＭのトリス緩衝液、９ｍＭのトリス緩衝液、１０ｍＭのトリス緩衝液、１１ｍＭのトリス緩衝液、１２ｍＭのトリス緩衝液、１３ｍＭのトリス緩衝液、１４ｍＭのトリス緩衝液、１５ｍＭのトリス緩衝液、１６ｍＭのトリス緩衝液、１７ｍＭのトリス緩衝液、１８ｍＭのトリス緩衝液、１９ｍＭのトリス緩衝液、又は２０ｍＭのトリス緩衝液を含む。
【0040】
より好ましくは、本製剤は、１０ｍＭのトリス緩衝液を含む。
【0041】
本発明のなお更なる実施形態では、等張化剤は、マンニトール、スクロース、トレハロース、グリセリン、プロピレングリコール、塩化ナトリウム、及び塩酸アルギニンからなる群から選択される。
【0042】
等張化剤は、製剤の張度を調節するために選択される賦形剤である。張度は、一般に、通常はヒト血清の浸透圧に対する溶液の浸透圧に関連する。本製剤は、低張性、等張性、又は高張性とすることができる。等張化剤の濃度は、所望の張度及び選択された特定の薬剤の分子量に依存する。例えば、２５ｍｇ／ｍＬのグリセリンは、９５ｍｇ／ｍＬのスクロースと同様の影響を水溶液の張度に及ぼす。他の賦形剤が製剤の張度に影響を及ぼす可能性があり、等張化剤の濃度は、所望の結果及び使用される薬剤の分子量に応じて変更される。
【0043】
本発明のなお更なる実施形態では、本製剤は、５ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬの等張化剤を含む。
【0044】
好ましくは、本製剤は、１０ｍｇ／ｍＬ～１２０ｍｇ／ｍＬの等張化剤を含む。
【0045】
更に好ましくは、本製剤は、２０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの等張化剤を含む。
【0046】
なお更に好ましくは、本製剤は、３０ｍｇ／ｍＬ～８０ｍｇ／ｍＬの等張化剤を含む。
【0047】
なお更に好ましくは、本製剤は、４０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬの等張化剤を含む。
【0048】
なお更に好ましくは、本製剤は、４５ｍｇ／ｍＬ～５５ｍｇ／ｍＬの等張化剤を含む。
【0049】
本発明の好ましい実施形態では、等張化剤は、マンニトールである。
【0050】
なお更に好ましくは、本製剤は、１０ｍｇ／ｍＬ～９０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含む。
【0051】
なお更に好ましくは、本製剤は、２０ｍｇ／ｍＬ～８０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含む。
【0052】
なお更に好ましくは、本製剤は、３０ｍｇ／ｍＬ～７０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含む。
【0053】
なお更に好ましくは、本製剤は、４０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含む。
【0054】
なお更に好ましくは、本製剤は、４５ｍｇ／ｍＬ～５５ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含む。
【0055】
より好ましくは、本製剤は、５０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含む。
【0056】
本発明のなお更なる実施形態では、抗酸化剤は、ラジカルスカベンジャー、キレート剤、又は連鎖停止剤からなる群から選択される。
【0057】
本発明のなお更なる実施形態では、本製剤は、０．０５～１０．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤を含む。
【0058】
好ましくは、本製剤は、０．１～５．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤を含む。
【0059】
更に好ましくは、本製剤は、０．２～１．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤を含む。
【0060】
代替として好ましくは、本製剤は、０．０５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．０７５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．１ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．２ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．３ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．４ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．６ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．７ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．８ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、０．９ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．１ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．２ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．３ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．４ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．６ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．７ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．８ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、１．９ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、２．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、２．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、３．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、３．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、４．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、４．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、５．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、５．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、６．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、６．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、７．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、７．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、８．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、８．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、９．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、９．５ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤、又は１０．０ｍｇ／ｍＬの抗酸化剤を含む。
【0061】
本発明の好ましい実施形態では、本製剤は、ラジカルスカベンジャーである。
【0062】
更に好ましくは、抗酸化剤は、ＥＤＴＡ、クエン酸、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、亜硫酸ナトリウム、ｐ－アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、システイン、ヒスチジン、メチオニン、エタノール、及びＮ－アセチルシステインからなる群から選択される。
【0063】
なお更に好ましくは、抗酸化剤は、ＥＤＴＡである。
【0064】
なお更に好ましくは、本製剤は、０．０５～１０．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含む。
【0065】
なお更に好ましくは、本製剤は、０．１～５．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含む。
【0066】
なお更に好ましくは、本製剤は、０．２～１．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含む。
【0067】
代替として好ましくは、本製剤は、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．０７５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．１ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．２ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．３ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．４ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．６ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．７ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．８ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．９ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．１ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．２ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．３ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．４ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．６ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．７ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．８ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、１．９ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、２．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、２．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、３．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、３．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、４．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、４．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ，５．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、５．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、６．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、６．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、７．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、７．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、８．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、８．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、９．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、９．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、又は１０．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含む。
【0068】
より好ましくは、本製剤は、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含む。
【0069】
代替として好ましくは、抗酸化剤は、クエン酸である。
【0070】
なお更に好ましくは、本製剤は、１～２０ｍＭのクエン酸を含む。
【0071】
なお更に好ましくは、本製剤は、５～１５ｍＭのクエン酸を含む。
【0072】
なお更に好ましくは、本製剤は、８～１２ｍＭのクエン酸を含む。
【0073】
代替として好ましくは、本製剤は、１ｍＭのクエン酸、１．５ｍＭのクエン酸、２ｍＭのクエン酸、２．５ｍＭのクエン酸、３ｍＭのクエン酸、３．５ｍＭのクエン酸、４ｍＭのクエン酸、４．５ｍＭのクエン酸、５ｍＭのクエン酸、５．５ｍＭのクエン酸、６ｍＭのクエン酸、６．５ｍＭのクエン酸、７ｍＭのクエン酸、７．５ｍＭのクエン酸、８ｍＭのクエン酸、８．５ｍＭのクエン酸、９ｍＭのクエン酸、９．５ｍＭのクエン酸、１０ｍＭのクエン酸、１０．５ｍＭのクエン酸、１１ｍＭのクエン酸、１１．５ｍＭのクエン酸、１２ｍＭのクエン酸、１３ｍＭのクエン酸、１３．５ｍＭのクエン酸、１４ｍＭのクエン酸、１４．５ｍＭのクエン酸、１５ｍＭのクエン酸、１５．５ｍＭのクエン酸、１６ｍＭのクエン酸、１６．５ｍＭのクエン酸、１７ｍＭのクエン酸、１７．５ｍＭのクエン酸、１８ｍＭのクエン酸、１８．５ｍＭのクエン酸、１９ｍＭのクエン酸、１９．５ｍＭのクエン酸、又は２０ｍＭのクエン酸を含む。
【0074】
より好ましくは、本製剤は、１０ｍＭのクエン酸を含む。
【0075】
本発明の代替の実施形態では、抗酸化剤は、アスコルビン酸である。
【0076】
本発明の更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）である。
【0077】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）である。
【0078】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、亜硫酸ナトリウムである。
【0079】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、ｐ－アミノ安息香酸である。
【0080】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、グルタチオンである。
【0081】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、没食子酸プロピルである。
【0082】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、システインである。
【0083】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、ヒスチジンである。
【0084】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、メチオニンである。
【0085】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、エタノールである。
【0086】
本発明のなお更なる代替の実施形態では、抗酸化剤は、Ｎ－アセチルシステインである。
【0087】
本発明の好ましい実施形態では、本製剤のｐＨは、８．０～８．６である。
【0088】
更に好ましくは、本製剤のｐＨは、８．０～８．３である。
【0089】
本発明の好ましい実施形態では、本製剤は、
（ｉ）１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される化合物（化合物１）、又はその薬学的に許容される塩、
（ｉｉ）１０ｍＭのトリス緩衝液、
（ｉｉｉ）４６ｍｇ／ｍＬのマンニトール、
（ｉｖ）０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ
を含むものであって、本製剤のｐＨは、８．０～８．３である。
（ｉ）１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される化合物（化合物１）、又はその薬学的に許容される塩、
（ｉｉ）１０ｍＭのトリス緩衝液、
（ｉｉｉ）４６ｍｇ／ｍＬのマンニトール、
（ｉｖ）０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ
を含むものであって、本製剤のｐＨは、８．０～８．３である。
【0090】
本発明のなお更なる実施形態では、２型糖尿病、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び／又は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療及び／又は予防する方法であって、患者に、治療有効量の本明細書に記載の医薬製剤を投与することを含む、方法が提供される。
【0091】
本発明のなお更なる実施形態では、２型糖尿病、肥満、ＮＡＦＬＤ、及び／又はＮＡＳＨの治療及び／又は予防に使用するための、本明細書に記載の医薬製剤が提供される。
【0092】
本発明のなお更なる実施形態では、２型糖尿病、肥満、ＮＡＦＬＤ、及び／又はＮＡＳＨの治療に使用するための薬剤の製造における、本明細書に記載の医薬製剤の使用が提供される。
【0093】
本明細書で使用される場合、「医薬製剤」という表現は、ヒトに生物学的効果を発揮することができる少なくとも１つの医薬品有効成分（ＡＰＩ）と、ＡＰＩと組み合わせた場合にヒトへの治療的投与に好適な少なくとも１つの不活性成分（例えば、緩衝液、賦形剤、界面活性剤など）とを有する溶液を意味する。本開示の医薬製剤は、本製剤における治療化合物の分解、修飾、凝集、生物活性の喪失などの程度が許容範囲内で制御され、かつ経時的に許容範囲を超えて増加しない安定した製剤である。
【0094】
本発明との関連で、ＡＰＩは、化合物１若しくはその薬学的に許容される塩、化合物２若しくはその薬学的に許容される塩、化合物３若しくはその薬学的に許容される塩、又は化合物４若しくはその薬学的に許容される塩である。化合物１、化合物２、化合物３、及び化合物４、並びにそれらの薬学的に許容される塩、及びそれらを作製する方法は、米国特許第９，９３８，３３５号に記載されている。
【0095】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、医薬製品の製剤化に使用される緩衝剤、溶媒、等張化剤、安定剤、抗酸化剤、界面活性剤、又はポリマーなどの、治療活性を有さず、かつ許容される毒性を有するあらゆる成分を指す。これらは、一般に、米国食品医薬品局によって公表された基準を含む確立された政府の基準に従ってヒトへの投与に安全である。
【0096】
本明細書で使用される場合、本明細書で使用される「緩衝液」という用語は、ｐＨの変化に耐性を示す溶液を指す。緩衝液は、ｐＨの安定性を維持するのに役立つ弱酸及びその塩又は弱塩基及びその塩を含むことができる。医薬製剤に使用される緩衝液の例としては、重炭酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、酒石酸緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（又は２－アミノ－２－ヒドロキシメチル－プロパン－１，３－ジオール［（ＨＯＣＨ２）３ＣＮＨ２］）緩衝液、及びそれらの組み合わせが挙げられる。ある特定のこれらの緩衝液は、皮下投与される医薬製剤に好適である。緩衝液は、本製剤の所望のｐＨに従って医薬製剤で使用するために選択される。例えば、本発明の医薬製剤のｐＨは、７．８～９．０である。このｐＨを達成するのに好適な緩衝液には、重炭酸緩衝液、炭酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（又は２－アミノ－２－ヒドロキシメチル－プロパン－１，３－ジオール［（ＨＯＣＨ２）３ＣＮＨ２］）緩衝液、及び水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）緩衝液が含まれる。これらのうち、リン酸緩衝液及びトリス緩衝液が注射用製剤における使用に好ましい。本製剤のｐＨは、所望のｐＨを達成するために必要とされ得る生理学的に適切な酸及び塩基を使用して調整することができる（例えば、製剤中のＡＰＩの濃度が増加又は減少するにつれて、ｐＨの調整が必要になり得る）。
【0097】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液は、「トリス（ＴＲＩＳ）」、「トリス（Ｔｒｉｓ）」、「トリス塩基」、「トリス緩衝液」、「トリスアミン」、「ＴＨＡＭ」などと称することができる。加えて、多くの緩衝液及び／又は緩衝系にはトリスが含まれている。例えば、トリス緩衝生理食塩水（「ＴＢＳ」）、トリス塩酸緩衝液（「トリス－ＨＣｌ」）、トリス塩基（ｐＨ１０．６）、トリス／ホウ酸／エチレンジアミン四酢酸（「ＥＤＴＡ」）緩衝液（「ＴＢＥ」）、トリス／酢酸／ＥＤＴＡ緩衝液（「ＴＡＥ」）。トリス塩基は、多くの場合、所望のｐＨでトリス緩衝液を調製するためにトリス－ＨＣｌとともに使用される。
【0098】
本明細書で使用される「等張化剤」という用語は、製剤の張度を調節するために使用される薬学的に許容される賦形剤を指す。張度は、一般に、通常はヒト血清の浸透圧に対する溶液の浸透圧に関連する。本製剤は、低張性、等張性、又は高張性とすることができる。好適な等張化剤としては、塩、アミノ酸、及び糖が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の医薬製剤における使用に好ましい等張化剤としては、マンニトール、スクロース、トレハロース、プロピレングリコール、グリセリン、塩化ナトリウム、及び塩酸アルギニンが挙げられる。
【0099】
「抗酸化剤」という用語は、ＡＰＩの酸化を防止する薬学的に許容される賦形剤を指す。本発明の医薬製剤における使用に好適な抗酸化剤としては、キレート剤（ＥＤＴＡ、クエン酸）、活性酸素スカベンジャー（アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、亜硫酸ナトリウム、ｐ－アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル）、及び連鎖停止剤（ヒスチジン、システイン、メチオニン、エタノール、及びＮ－アセチルシステイン））が挙げられる。
【0100】
本発明の医薬製剤における使用に好適であり得る代替の緩衝液、等張化剤、及び抗酸化剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２３版（編集者：Ａｄｅｂｏｙｅ Ａｄｅｊａｒｅ）に記載されている。
【0101】
本明細書に記載の医薬製剤は、可溶化剤、乳化剤、界面活性剤、防腐剤、着色剤、粘度調整剤、及び安定剤などの他の好適な薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。
【0102】
本明細書で使用され得る場合、「約」又は「およそ」という用語は、具体的に列挙されている数値又は値の範囲に関して使用される場合、その値が列挙されている値とは１０％以下（例えば、±１０％）異なり得ることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、「約１００」という表現は、９０及び１１０、並びにそれらの間の全ての値（例えば、９１、９２、９３、９４など）を含む。
【0103】
本明細書で互換的に使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」及び／又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」及び／又は「治療する（ｔｒｅａｔ）」は、疾患及び／又は疾患症状の完全な消失、その減速又は遅延、（例えば、フレア又はエピソードの）重症度又は頻度の低下、その進行の中断又は停止が存在し得る全ての過程を指すよう意図されているが、全ての疾患症状の完全な消失を必要としない。治療は、（ａ）疾患の症状及び影響の更なる進行を抑制すること、すなわち、その発症を阻止すること、（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患、疾患症状、又はその合併症の消失又は退行を引き起こすこと、及び（ｃ）疾患エピソード若しくはフレアを予防する又はその頻度を減少させることを含む、上記の過程のうちの少なくとも１つから恩恵を受けるであろうヒトにおける疾患の治療のための本開示の医薬製剤の投与を含む。特定の実施形態によれば、本明細書に提供される医薬製剤は、２型糖尿病、肥満、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨのうちの少なくとも１つの治療に使用され得る。
【0104】
本明細書で互換的に使用される場合、「患者」、「対象」、及び「個体」という用語は、ヒトを指す。別途記載されない限り、対象は、本明細書に開示される医薬製剤の投与から恩恵を受けるであろう疾患の症状を有する、それを発症するリスクがある、又はそれを経験すると更に特徴付けられる。
【0105】
本明細書で互換的に使用される場合、本開示の医薬製剤の「有効量」又は「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するのに必要な量（投薬量、投与頻度、及び特定の投与手段に対する期間）を指す。本開示の医薬製剤の有効量は、対象の病状、年齢、性別、及び体重、並びに対象において所望の応答を誘発する本開示の医薬製剤の能力などの要因に応じて変動し得る。有効量は、治療上有益な効果が本開示の医薬製剤の毒作用又は有害作用を上回る量でもある。
【0106】
本発明の医薬製剤は、非経口投与により患者に投与され得る。非経口投与とは、医療分野で理解されているように、滅菌シリンジ又は自己注射器若しくは注入ポンプを含むいくつかの他の薬物送達システムによる体内へのある用量の注射を指す。本開示の医薬製剤とともに使用するための薬物送達システムの例は、以下の参考文献に記載されており、それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に明示的に組み込まれる：米国特許公開第２０１４／００５４８８３号（２０１３年３月７日に出願されたＬａｎｉｇａｎらの表題「Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｐｕｍｐ Ａｓｓｅｍｂｌｙ」）、米国特許第７，２９１，１３２号（２００６年２月３日に出願されたＤｅＲｕｎｔｚらの表題「Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ Ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ｗｉｔｈ Ｔｒｉｐｌｅ Ｓｃｒｅｗ Ｔｈｒｅａｄｓ ｆｏｒ Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ Ａｄｖａｎｔａｇｅ」）、米国特許第７，５１７，３３４号（２００６年９月１８日に出願されたＪａｃｏｂｓらの表題「Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ Ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ｗｉｔｈ Ｓｐｒｉｎｇ－Ｄｒｉｖｅｎ Ｌｏｃｋｉｎｇ Ｆｅａｔｕｒｅ Ｅｎａｂｌｅｄ ｂｙ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｉｎａｌ Ｄｏｓｅ」）、及び米国特許第８，７３４，３９４号（２０１２年８月２４日に出願されたＡｄａｍｓらの表題「Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ Ｄｅｖｉｃｅ ｗｉｔｈ Ｄｅｌａｙ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｄｕａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ Ｂｉａｓｉｎｇ Ｍｅｍｂｅｒ」）。非経口経路には、ＩＭ、ＳＱ、及びＩＰ投与経路が含まれる。
【0107】
図面の簡単な説明
図１は、ｐＨがおよそ５．０からおよそ７．０に変化したときの溶液中の化合物１の濃度を説明する。
図２ａは、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定した、等張化剤としてＮａＣｌ又はグリセリンのいずれかを含む１０ｍＭのリン酸緩衝液を含む製剤マトリックス中の化合物１溶液製剤の総凝集体を説明する。
図２ｂは、ＳＥＣによって測定した、等張化剤としてＮａＣｌ又はグリセリンのいずれかを含む１０ｍＭのトリス緩衝液を含む製剤マトリックス中の化合物１溶液製剤の総凝集体を説明する。
図３ａは、２ｍｇ／ｍＬの化合物１を様々なｐＨ条件で製剤化し、かつフィブリルを添加した場合のｐＨの関数としての化合物１のフィブリル化のリスクを説明する。
図３ｂは、１２ｍｇ／ｍＬの化合物１を様々なｐＨ条件で製剤化し、かつフィブリルを添加した場合のｐＨの関数としての化合物１のフィブリル化のリスクを説明する。
図４は、２ｍｇ／ｍＬの化合物１溶液製剤を４０℃で最長４週間保管した場合の熱応力の影響を示すＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。
図５ａは、遷移金属及びＨ２Ｏ２の影響を示す、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡで製剤化した２ｍｇ／ｍＬの化合物１医薬品のＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。
図５ｂは、遷移金属及びＨ２Ｏ２の影響を示す、ＥＤＴＡなしで製剤化した２ｍｇ／ｍＬの化合物１医薬品のＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。
図６ａは、０ヶ月、１ヶ月、及び３ヶ月時点のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で測定した、５℃で保管した化合物１製剤中の総凝集体を説明する。
図６ｂは、０ヶ月、１ヶ月、及び３ヶ月時点のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で測定した、２５℃で保管した化合物１製剤中の総凝集体を説明する。
図６ｃは、０ヶ月、１ヶ月、及び３ヶ月時点のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で測定した、３０℃で保管した化合物１製剤中の総凝集体を説明する。
図１は、ｐＨがおよそ５．０からおよそ７．０に変化したときの溶液中の化合物１の濃度を説明する。
図２ａは、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定した、等張化剤としてＮａＣｌ又はグリセリンのいずれかを含む１０ｍＭのリン酸緩衝液を含む製剤マトリックス中の化合物１溶液製剤の総凝集体を説明する。
図２ｂは、ＳＥＣによって測定した、等張化剤としてＮａＣｌ又はグリセリンのいずれかを含む１０ｍＭのトリス緩衝液を含む製剤マトリックス中の化合物１溶液製剤の総凝集体を説明する。
図３ａは、２ｍｇ／ｍＬの化合物１を様々なｐＨ条件で製剤化し、かつフィブリルを添加した場合のｐＨの関数としての化合物１のフィブリル化のリスクを説明する。
図３ｂは、１２ｍｇ／ｍＬの化合物１を様々なｐＨ条件で製剤化し、かつフィブリルを添加した場合のｐＨの関数としての化合物１のフィブリル化のリスクを説明する。
図４は、２ｍｇ／ｍＬの化合物１溶液製剤を４０℃で最長４週間保管した場合の熱応力の影響を示すＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。
図５ａは、遷移金属及びＨ２Ｏ２の影響を示す、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡで製剤化した２ｍｇ／ｍＬの化合物１医薬品のＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。
図５ｂは、遷移金属及びＨ２Ｏ２の影響を示す、ＥＤＴＡなしで製剤化した２ｍｇ／ｍＬの化合物１医薬品のＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。
図６ａは、０ヶ月、１ヶ月、及び３ヶ月時点のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で測定した、５℃で保管した化合物１製剤中の総凝集体を説明する。
図６ｂは、０ヶ月、１ヶ月、及び３ヶ月時点のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で測定した、２５℃で保管した化合物１製剤中の総凝集体を説明する。
図６ｃは、０ヶ月、１ヶ月、及び３ヶ月時点のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で測定した、３０℃で保管した化合物１製剤中の総凝集体を説明する。
【実施例】
【0108】
化合物１、化合物２、化合物３、及び化合物４の調製
化合物１
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）１－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている］（配列番号１）。
化合物１
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）１－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている］（配列番号１）。
【化1】
【0109】
上の図は、アミノ酸残基Ａｉｂ２及びＫ２０の構造が拡大されているこれらの残基を除いて、標準の１文字アミノ酸コードを使用して化合物１の構造を描写している。
【0110】
化合物１を、米国特許第９，９３８，３３５号の実施例２に記載されるように調製する。代替の合成方法は、米国仮特許出願第６３／０３８，３６３号に記載されている。
【0111】
化合物２
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている］（配列番号２）。
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている］（配列番号２）。
【化2】
【0112】
上の図は、アミノ酸残基Ａｉｂ２及びＫ２０の構造が拡大されているこれらの残基を除いて、標準の１文字アミノ酸コードを使用して化合物２の構造を描写している。
【0113】
化合物２を、米国特許第９，９３８，３３５号の実施例４に記載されるように調製する。
【0114】
化合物３
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）１－ＣＯ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている］（配列番号３）。
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）１－ＣＯ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている］（配列番号３）。
【化3】
【0115】
上の図は、アミノ酸残基Ａｉｂ２及びＫ２０の構造が拡大されているこれらの残基を除いて、標準の１文字アミノ酸コードを使用して化合物３の構造を描写している。
【0116】
化合物３を、米国特許第９，９３８，３３５号の実施例１に記載されるように調製する。
【0117】
化合物４
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている］（配列番号４）。
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている］（配列番号４）。
【化4】
【0118】
上の図は、アミノ酸残基Ａｉｂ２及びＫ２０の構造が拡大されているこれらの残基を除いて、標準の１文字アミノ酸コードを使用して化合物４の構造を描写している。
【0119】
化合物４を、米国特許第９，９３８，３３５号の実施例３に記載されるように調製する。
【0120】
化合物１の溶解度
化合物１を、ヒト患者における２型糖尿病の治療の臨床試験で評価している。本薬剤を非経口投与すべきであることが予測される。異なるｐＨ条件での化合物１の溶解度を評価した。
化合物１を、ヒト患者における２型糖尿病の治療の臨床試験で評価している。本薬剤を非経口投与すべきであることが予測される。異なるｐＨ条件での化合物１の溶解度を評価した。
【0121】
材料
本研究で使用した化合物１原薬及び賦形剤を表１に詳細に示す。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
本研究で使用した化合物１原薬及び賦形剤を表１に詳細に示す。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
【表1】
【0122】
方法
化合物１の溶解度を、２５℃で、ｐＨ５．０～ｐＨ７．０で評価した。溶液は全て、１０ｍＭのトリス（１．２１ｇ／Ｌ）及び０．０５％ＥＤＴＡ（０．５ｇ／Ｌ）を含んだ。溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸又は濃縮トリス塩基ストック溶液のいずれかを使用して滴定した。
化合物１の溶解度を、２５℃で、ｐＨ５．０～ｐＨ７．０で評価した。溶液は全て、１０ｍＭのトリス（１．２１ｇ／Ｌ）及び０．０５％ＥＤＴＡ（０．５ｇ／Ｌ）を含んだ。溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸又は濃縮トリス塩基ストック溶液のいずれかを使用して滴定した。
【0123】
化合物１の濃度を、ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計（ＳｏｌｏＶＰＥ）により２８０ｎｍで測定した。ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計は、溶液中のタンパク質又はペプチドの定量に一般的に使用されている。２８０ｎｍ付近の特徴的なＵＶ吸収スペクトルは、主にトリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）及びチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）などの芳香族アミノ酸に由来する。タンパク質又はペプチドのモル吸光係数が分かっている場合、分子には結合ヌクレオチド補因子、ヘム、又は鉄硫黄中心などのＵＶ吸収性の非タンパク質性成分が含まれていないと仮定して、ランベルト・ベールの法則を使用して、ＵＶ吸光度によりタンパク質又はペプチドの量を正確に定量する。化合物１は、１０位及び１３位にチロシンアミノ酸残基を有し、２５位にトリプトファンアミノ酸残基を有し、１．８６ｍＬ・ｍｇ－１・ｃｍ－１の吸光係数を有する（Ｐａｃｅ法により計算）。この方法による様々なｐＨ条件でのペプチド濃度の測定は、化合物１に適している。
【0124】
【0125】
化合物１の溶解度は、ｐＨが５．３から６．８に増加するにつれて有意に増加した。本実験を行った時点で化合物１の供給量が限られていたため、ｐＨ６．８以降は本研究を続行しなかった。データの外挿により、化合物１の溶解度がｐＨ値７．０以上で高くなることが示される。このデータは、医薬品製造プロセス中の及び／又は最終剤形での化合物１の適切な溶解性を確実にするために化合物１をｐＨ７．０以上で製剤化すべきであることを示している。
【0126】
溶液中での化合物１の製剤化の実現可能性研究
化合物１を溶液中で製剤化する実現可能性を評価するための研究を行った。化合物１の溶解度データは、化合物１をｐＨ７．０以上で製剤化すべきであることを示した。
化合物１を溶液中で製剤化する実現可能性を評価するための研究を行った。化合物１の溶解度データは、化合物１をｐＨ７．０以上で製剤化すべきであることを示した。
【0127】
材料
本研究で使用した化合物１ ＡＰＩ及び賦形剤を表３に詳細に示す。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
本研究で使用した化合物１ ＡＰＩ及び賦形剤を表３に詳細に示す。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
【表3】
【0128】
方法
化合物１の医薬品処方を表４に示す。
化合物１の医薬品処方を表４に示す。
【表4】
【0129】
溶液を０．２２ｍｍのＰＶＤＦフィルターに通して濾過した。層流フード内で、溶液をガラスバイアルに充填した。バイアルをキャップし、５℃、２５℃、及び３０℃で保管した。試料を取り出し、以下の試験：（ａ）初期試験、（ｂ）２週間、（ｃ）１ヶ月のために提出した。共有結合凝集体の形成をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定した。
【0130】
結果
２５℃での凝集体形成のデータを図２ａ及び図２ｂに説明する。全ての製剤で急速な凝集体の形成が観察された。ｐＨ、緩衝液、及び等張化剤に応じて、凝集速度に差異がある。１ヶ月後に２５℃で存在する凝集体の量により、いずれの製剤も注射用製品として実現可能ではない、すなわち、２４ヶ月の有効期限も所望の使用期間も有しないことが実証された。化合物１の分解メカニズムを理解するために更なる研究が必要である。
２５℃での凝集体形成のデータを図２ａ及び図２ｂに説明する。全ての製剤で急速な凝集体の形成が観察された。ｐＨ、緩衝液、及び等張化剤に応じて、凝集速度に差異がある。１ヶ月後に２５℃で存在する凝集体の量により、いずれの製剤も注射用製品として実現可能ではない、すなわち、２４ヶ月の有効期限も所望の使用期間も有しないことが実証された。化合物１の分解メカニズムを理解するために更なる研究が必要である。
【0131】
化合物１の溶液製剤のフィブリル化傾向及び適切なｐＨ条件
化合物１は天然グルカゴンと配列類似性を共有しており、この化合物がフィブリル化を受けやすい可能性があると考えられた。フィブリル化は、天然タンパク質機能の喪失を引き起こす可能性があり、免疫原性応答の誘発などの潜在的な毒性機能獲得を引き起こす可能性もある。フィブリルを形成する化合物１の傾向を評価して、それが化合物の分解に寄与する可能性があるかを決定した。溶液のｐＨの関数として化合物１のフィブリル化のリスクを評価した。
化合物１は天然グルカゴンと配列類似性を共有しており、この化合物がフィブリル化を受けやすい可能性があると考えられた。フィブリル化は、天然タンパク質機能の喪失を引き起こす可能性があり、免疫原性応答の誘発などの潜在的な毒性機能獲得を引き起こす可能性もある。フィブリルを形成する化合物１の傾向を評価して、それが化合物の分解に寄与する可能性があるかを決定した。溶液のｐＨの関数として化合物１のフィブリル化のリスクを評価した。
【0132】
材料
２ｍｇ／ｍＬ及び１２ｍｇ／ｍＬの化合物１の溶液製剤を調製し、溶液のｐＨを、それぞれ、７．５、７．８、８．０、８．３、及び８．５に調整した。製剤の組成を表５に提示する。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
２ｍｇ／ｍＬ及び１２ｍｇ／ｍＬの化合物１の溶液製剤を調製し、溶液のｐＨを、それぞれ、７．５、７．８、８．０、８．３、及び８．５に調整した。製剤の組成を表５に提示する。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
【表5】
【0133】
化合物１のフィブリルシードの調製
化合物１のフィブリルを、５００μＬの２ｍｇ／ｍＬ溶液及び１２ｍｇ／ｍＬ溶液（ｐＨ７．５）を３７℃のインキュベーター内で一定の前方回転で７２時間インキュベートすることによって生成した。７２時間後、溶液が濁った。その後、フィブリルシードを、溶液が透明になるまで２００μＬの濁った溶液を超音波浴内で様々な２分サイクルで超音波処理することによって生成した。２ｍｇ／ｍＬの試料を２分サイクルで２回超音波処理し、１２ｍｇ／ｍＬの試料を２分サイクルで６回超音波処理した。１０
化合物１のフィブリルを、５００μＬの２ｍｇ／ｍＬ溶液及び１２ｍｇ／ｍＬ溶液（ｐＨ７．５）を３７℃のインキュベーター内で一定の前方回転で７２時間インキュベートすることによって生成した。７２時間後、溶液が濁った。その後、フィブリルシードを、溶液が透明になるまで２００μＬの濁った溶液を超音波浴内で様々な２分サイクルで超音波処理することによって生成した。２ｍｇ／ｍＬの試料を２分サイクルで２回超音波処理し、１２ｍｇ／ｍＬの試料を２分サイクルで６回超音波処理した。１０
【0134】
チオフラビンＴ（ＴｈＴ）蛍光アッセイによる化合物１のフィブリル化の観察
フィブリルシードを含む又は含まない化合物１溶液製剤を調製した。シードを含む試料の場合、５μＬの２ｍｇ／ｍＬシード又は１２ｍｇ／ｍＬシードのいずれかを、１５０μＬの対応する医薬品に添加した。シードを含まない試料の場合、５μＬの水を１５０μＬの化合物１医薬品に添加した。シードを含む緩衝液の陰性対照も実行した。
フィブリルシードを含む又は含まない化合物１溶液製剤を調製した。シードを含む試料の場合、５μＬの２ｍｇ／ｍＬシード又は１２ｍｇ／ｍＬシードのいずれかを、１５０μＬの対応する医薬品に添加した。シードを含まない試料の場合、５μＬの水を１５０μＬの化合物１医薬品に添加した。シードを含む緩衝液の陰性対照も実行した。
【0135】
化合物１のフィブリル化を、チオフラビンＴ（ＴｈＴ）アッセイ（Ｓｃｈｌｅｉｎ，Ｍ，Ｔｈｅ ＡＡＰＳ Ｊｏｕｒｎａｌ ２０１７，１９，（２），３９７－４０８に記載されているように行った）を使用して観察した。簡潔には、２０μＬの試料を各々、黒色の底が透明な３８４ウェルプレートの３つのウェルの各々に添加した。ＴｈＴを各ウェルに添加し、最終ＴｈＴ濃度を１ウェル当たり４μＭとした。プレートを、光学接着フィルムを使用して密封し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３ｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）プレートリーダーにロードし、３７℃まで過インキュベート（ｐｅｒ－ｉｎｃｕｂａｔｅ）した。プレートを、励起波長４５０ｎｍ及び発光波長４８０ｎｍを使用して、読み取りの合間に３秒間振盪しながら、３６時間にわたって１５分毎に読み取った。
【0136】
結果：ＴｈＴ蛍光アッセイによる化合物１のフィブリル化
フィブリルは、ある特定の生物物理学的特徴を有するタンパク質又はペプチドの大きな高分子自己集合体である。最も注目すべきは、個々のペプチド骨格がβシートに富んだ立体構造に変換されることである。結果として、潜在的に望ましくない物理的、化学的、及び治療的リスクが生じる可能性がある。実験的に、フィブリルの形成は、濁度、沈殿、又はゲル化の増加として視覚的に観察され得る。
フィブリルは、ある特定の生物物理学的特徴を有するタンパク質又はペプチドの大きな高分子自己集合体である。最も注目すべきは、個々のペプチド骨格がβシートに富んだ立体構造に変換されることである。結果として、潜在的に望ましくない物理的、化学的、及び治療的リスクが生じる可能性がある。実験的に、フィブリルの形成は、濁度、沈殿、又はゲル化の増加として視覚的に観察され得る。
【0137】
本研究では、蛍光分光法を使用して、結合色素としてチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を用いて、溶液のｐＨの関数として化合物１のフィブリル化のリスクを評価した。ＴｈＴは、フィブリルの強力な蛍光マーカーである。フィブリル沈着物に選択的に結合すると、蛍光シグナルは蛍光輝度の劇的な増加を呈する。化合物１を様々なｐＨ条件（７．５、７．８、８．０、８．３、及び８．６）で製剤化し、事前に調製したフィブリルシードを添加して、フィブリル化速度を加速させた。図３ａ及び図３ｂは、ｐＨ８．０以下の製剤でＴｈＴ蛍光シグナルの増加が明らかに見られ得ることを説明する。化合物１のフィブリル化は、ｐＨに特に感受性があるようであった。７．８未満のｐＨでは、フィブリルの形成は両方の濃度（２ｍｇ／ｍＬ及び１２ｍｇ／ｍＬ）で急速であった。ｐＨが８．０を超えて上昇しても、蛍光シグナルは平坦なままであり、アミロイドフィブリルが存在しないことを示している。
【0138】
ＴｈＴ蛍光アッセイからの実験データは、ｐＨ８．０以下での化合物１のフィブリル化のリスクを説明する。ｐＨ８．０超では、フィブリルシードの添加があってもフィブリル化をうまく防ぐことができる。フィブリル化のリスクを軽減する観点から、化合物１溶液製剤の適切なｐＨ条件は７．８超であり、好ましくは８．０超である。更に、本研究は、製品有効期間中の厳格なｐＨ制御が重要であることも明らかにした。適切な緩衝強度を有するトリスなどの好適な緩衝液を利用してもよい。
【0139】
化合物１溶液製剤の分解研究
化合物１のアミノ酸配列には、ペプチドが潜在的に化学的及び／又は物理的分解を受けやすくする残基が含まれている。例えば、化合物１は、それぞれ、３位及び４位にグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）及びグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）を有し、脱アミド化を受けやすい可能性がある。脱アミド化は主に温度及びｐＨの影響を受ける。化合物１は、それぞれ、１位及び２５位にヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）及びトリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）も有し、潜在的な酸化ホットスポットである可能性がある。溶液中の化合物１の酸化のリスクを評価した。
化合物１のアミノ酸配列には、ペプチドが潜在的に化学的及び／又は物理的分解を受けやすくする残基が含まれている。例えば、化合物１は、それぞれ、３位及び４位にグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）及びグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）を有し、脱アミド化を受けやすい可能性がある。脱アミド化は主に温度及びｐＨの影響を受ける。化合物１は、それぞれ、１位及び２５位にヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）及びトリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）も有し、潜在的な酸化ホットスポットである可能性がある。溶液中の化合物１の酸化のリスクを評価した。
【0140】
材料
２ｍｇ／ｍＬ及びｐＨ８．０の化合物１溶液製剤を調製した。研究製剤の組成を表６に提示する。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
２ｍｇ／ｍＬ及びｐＨ８．０の化合物１溶液製剤を調製した。研究製剤の組成を表６に提示する。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
【表6】
【0141】
化合物１の分解応力
表７に要約したように、化合物１溶液製剤を様々な条件に供した。
表７に要約したように、化合物１溶液製剤を様々な条件に供した。
【表7】
【0142】
結果及び結論
（ａ）熱応力の影響
化合物１溶液製剤を調製し、４０℃で最長４週間保管した。ロット１及びロット３の組成は０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含むが（表６）、ロット２及びロット４の組成はＥＤＴＡを含まない。ＥＤＴＡは有効なラジカルスカベンジャーであることが知られている。Ｔｒｐの酸化がＲＯＳによって開始された場合、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡの存在が観察された化学分解を抑制する可能性があると仮定する。試料を適切な時点で取り出し、その後、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して分析した。
（ａ）熱応力の影響
化合物１溶液製剤を調製し、４０℃で最長４週間保管した。ロット１及びロット３の組成は０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含むが（表６）、ロット２及びロット４の組成はＥＤＴＡを含まない。ＥＤＴＡは有効なラジカルスカベンジャーであることが知られている。Ｔｒｐの酸化がＲＯＳによって開始された場合、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡの存在が観察された化学分解を抑制する可能性があると仮定する。試料を適切な時点で取り出し、その後、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して分析した。
【0143】
ＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムを図４に示す。ロット２及びロット４では、保持時間およそ４分時点で新たなピークが観察された。過去のデータに基づいて、この新たなピークは、Ｔｒｐの酸化によるものである。同様に、保持時間およそ７分時点で別の新たなピークが確認され、これは、Ｔｒｐの二重酸化に相当する。しかしながら、これらの新たなピークは、同じ保持時間でロット１及びロット３のクロマトグラムには存在しない。
【0144】
（ｂ）遷移金属及びＨ２Ｏ２の影響
化合物１製剤に２ｐｐｍのＦｅ３＋又は１ｐｐｍのＨ２Ｏ２を添加した場合、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡの存在がＴｒｐの酸化を抑制した、すなわち、ＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムには保持時間およそ４分時点及び７分時点で新たなピークが存在しない（図５ａ）。ＥＤＴＡなしで、２ｐｐｍのＦｅ３＋又は１ｐｐｍのＨ２Ｏ２を添加した試料はＴｒｐ酸化体を生成した（図５ｂ）。Ｃｕ２＋又はＮｉ２＋を添加した化合物１製剤は、同程度の分解を示さなかった。
化合物１製剤に２ｐｐｍのＦｅ３＋又は１ｐｐｍのＨ２Ｏ２を添加した場合、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡの存在がＴｒｐの酸化を抑制した、すなわち、ＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムには保持時間およそ４分時点及び７分時点で新たなピークが存在しない（図５ａ）。ＥＤＴＡなしで、２ｐｐｍのＦｅ３＋又は１ｐｐｍのＨ２Ｏ２を添加した試料はＴｒｐ酸化体を生成した（図５ｂ）。Ｃｕ２＋又はＮｉ２＋を添加した化合物１製剤は、同程度の分解を示さなかった。
【0145】
（ｃ）溶液中の潜在的な酸化を減少させるために提案された軽減策
溶液状態でのタンパク質の酸化は、酵素酸化を除いて、一般に、フリーラジカル、すなわち、活性酸素種（ＲＯＳ）によって開始される。ＲＯＳは、化学的滅菌プロセスの結果として、不純物により、又は光への曝露により生成される可能性がある。例えば、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を滅菌に使用した場合、残留レベルのＨ２Ｏ２が容器の壁に吸着されたままになる可能性があり、酸化反応を開始する場合がある。γ線を滅菌に使用した場合、ＲＯＳが放射線誘発化学プロセスにより生成される。鉄（Ｆｅ３＋）、銅（Ｃｕ２＋）、又はニッケル（Ｎｉ２＋）などの遷移金属イオンは、ＲＯＳの別の発生源となる可能性があり、ＡＰＩ／原薬又は賦形剤のいずれかで不純物として医薬品製剤中に見つかることが多い。それらがステンレス鋼容器などのタンパク質製品の保管及び加工に使用される機器から浸出する可能性もある。機器のエラストマーコンポーネントには、それらの硬化プロセスにより金属が含まれる可能性もある。タンパク質溶液が光に曝露されると、紫外線が芳香族アミノ酸に吸収され、ＲＯＳの生成につながり得る。
溶液状態でのタンパク質の酸化は、酵素酸化を除いて、一般に、フリーラジカル、すなわち、活性酸素種（ＲＯＳ）によって開始される。ＲＯＳは、化学的滅菌プロセスの結果として、不純物により、又は光への曝露により生成される可能性がある。例えば、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を滅菌に使用した場合、残留レベルのＨ２Ｏ２が容器の壁に吸着されたままになる可能性があり、酸化反応を開始する場合がある。γ線を滅菌に使用した場合、ＲＯＳが放射線誘発化学プロセスにより生成される。鉄（Ｆｅ３＋）、銅（Ｃｕ２＋）、又はニッケル（Ｎｉ２＋）などの遷移金属イオンは、ＲＯＳの別の発生源となる可能性があり、ＡＰＩ／原薬又は賦形剤のいずれかで不純物として医薬品製剤中に見つかることが多い。それらがステンレス鋼容器などのタンパク質製品の保管及び加工に使用される機器から浸出する可能性もある。機器のエラストマーコンポーネントには、それらの硬化プロセスにより金属が含まれる可能性もある。タンパク質溶液が光に曝露されると、紫外線が芳香族アミノ酸に吸収され、ＲＯＳの生成につながり得る。
【0146】
全てのアミノ酸側鎖は酸化を受けやすいが、ラジカルは数個のアミノ酸残基、とりわけ、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、又はトリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）を優先的に攻撃する傾向がある。化合物１のアミノ酸配列には、それぞれ、１位及び２５位にＨｉｓアミノ酸及びＴｒｐアミノ酸があり、ペプチドが潜在的に酸化を受けやすくする。
【0147】
分解研究により、化合物１は酸化を受けやすい可能性があることが示された。抗酸化剤、特にラジカルスカベンジャー（ＥＤＴＡなど）を含めることは、溶液状態での酸化を軽減するための有力な戦略である。
【0148】
化合物１溶液製剤の安定性研究
この研究では、プレフィルドシリンジ内の１２個の製剤中の溶液医薬品としての化合物１の安定性を、公称条件、加速条件、及び応力条件で評価した。製剤の頑健性を、賦形剤のタイプ、ｐＨ、及びフィブリル添加を変化させることによって評価した。化合物１の安定性を、ｐＨを変化させながら（８．０、８．３、及び８．６）、賦形剤としてマンニトール、スクロース、及びプロピルグリコールを用いて評価した。この研究で使用した全ての製剤を表８に列記する。試料を、５±３℃及び２５±２℃／６０±５％相対湿度（ＲＨ）で最長６ヶ月間保管し、３０±２℃／６５±５％ＲＨで最長２ヶ月間保管した。完了した分析スケジュールを表９に示す。各安定性時点で行った分析試験は、物理的外観による説明、ＲＰ－ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、及びＡＥＸである。試験方法を各安定性時点で実行した。
この研究では、プレフィルドシリンジ内の１２個の製剤中の溶液医薬品としての化合物１の安定性を、公称条件、加速条件、及び応力条件で評価した。製剤の頑健性を、賦形剤のタイプ、ｐＨ、及びフィブリル添加を変化させることによって評価した。化合物１の安定性を、ｐＨを変化させながら（８．０、８．３、及び８．６）、賦形剤としてマンニトール、スクロース、及びプロピルグリコールを用いて評価した。この研究で使用した全ての製剤を表８に列記する。試料を、５±３℃及び２５±２℃／６０±５％相対湿度（ＲＨ）で最長６ヶ月間保管し、３０±２℃／６５±５％ＲＨで最長２ヶ月間保管した。完了した分析スケジュールを表９に示す。各安定性時点で行った分析試験は、物理的外観による説明、ＲＰ－ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、及びＡＥＸである。試験方法を各安定性時点で実行した。
【表8】
【表9】
【0149】
材料
本研究に使用した材料は以下のとおりである。
ｉ）化合物１試験試料、ロットＮＢ７９５６ｐ７Ａ－Ｌ、濃度１２ｍｇ／ｍＬ
ｉｉ）化合物１企業参照標準、ロットＲＳ１２３７、濃度０．８９ｍｇ／ｍＬ
ｉｉｉ）化合物１フィブリルシード、ロットＣ２４１８３６－２０１８－０１７６－Ｂ１、濃度１２ｍｇ／ｍＬ
ｉｖ）ガラス製プレフィル可能シリンジプラットフォーム、ＢＤ Ｎｅｏｐａｋ、Ｃ／Ｎ ４７４３３０１０、ロット４３５７１０８
ｖ）シリンジプランジャー、Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａ、Ｃ／Ｎ １１４０２００７、ロットＤ００００７７８８５
ｖｉ）ＥＤＴＡ二ナトリウム塩二水和物、Ｓｉｇｍａ、Ｃ／Ｎ Ｅ１６４４、ロットＳＬＢＶ１７９８
ｖｉｉ）マンニトール、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｃ／Ｎ ２５５３－０１、ロット２１２５９５
ｖｉｉｉ）プロピレングリコール、Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｃ／Ｎ Ｐ３５５－１、ロット１８０２４８
ｉｘ）スクロース、Ｓｉｇｍａ、Ｃ／Ｎ Ｓ３９２９、ロットＳＬＢＶ６６５１
ｘ）トリス塩基、Ｓｉｇｍａ、Ｃ／Ｎ Ｔ６７９１、ロットＳＬＢＱ２３０６Ｖ
ｘｉ）Ａｅｒｉｓ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＸＢ－Ｃ１８、２．６μｍ、４．６×２５０ｍｍ、Ｃ／Ｎ ００Ｇ－４５０５－Ｅ０、ロットＨ１８－３０３２８６、Ｈ１９ ０５１４１０、Ｈ１９－０７９４７４、Ｈ１９－０８４５０９、Ｈ１９－１３１０６０、及びＨ１９－１３１０６１
ｘｉｉ）ＢｉｏＰｒｏ ＩＥＸ ＱＦ、５μｍ、４．６×１００ｍｍ、Ｃ／Ｎ ＱＦ００５０５－１０４６ＷＰ、ロット１４１５３
ＴＯＳＯＨ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ２０００ＳＷＸＬ、５μｍ、７．８×３００ｍｍ、Ｃ／Ｎ ０８５４０、ロット００８Ｃ－００７７６Ｄ及びＡ０２３５３－０５Ａ
本研究に使用した材料は以下のとおりである。
ｉ）化合物１試験試料、ロットＮＢ７９５６ｐ７Ａ－Ｌ、濃度１２ｍｇ／ｍＬ
ｉｉ）化合物１企業参照標準、ロットＲＳ１２３７、濃度０．８９ｍｇ／ｍＬ
ｉｉｉ）化合物１フィブリルシード、ロットＣ２４１８３６－２０１８－０１７６－Ｂ１、濃度１２ｍｇ／ｍＬ
ｉｖ）ガラス製プレフィル可能シリンジプラットフォーム、ＢＤ Ｎｅｏｐａｋ、Ｃ／Ｎ ４７４３３０１０、ロット４３５７１０８
ｖ）シリンジプランジャー、Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａ、Ｃ／Ｎ １１４０２００７、ロットＤ００００７７８８５
ｖｉ）ＥＤＴＡ二ナトリウム塩二水和物、Ｓｉｇｍａ、Ｃ／Ｎ Ｅ１６４４、ロットＳＬＢＶ１７９８
ｖｉｉ）マンニトール、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｃ／Ｎ ２５５３－０１、ロット２１２５９５
ｖｉｉｉ）プロピレングリコール、Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｃ／Ｎ Ｐ３５５－１、ロット１８０２４８
ｉｘ）スクロース、Ｓｉｇｍａ、Ｃ／Ｎ Ｓ３９２９、ロットＳＬＢＶ６６５１
ｘ）トリス塩基、Ｓｉｇｍａ、Ｃ／Ｎ Ｔ６７９１、ロットＳＬＢＱ２３０６Ｖ
ｘｉ）Ａｅｒｉｓ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＸＢ－Ｃ１８、２．６μｍ、４．６×２５０ｍｍ、Ｃ／Ｎ ００Ｇ－４５０５－Ｅ０、ロットＨ１８－３０３２８６、Ｈ１９ ０５１４１０、Ｈ１９－０７９４７４、Ｈ１９－０８４５０９、Ｈ１９－１３１０６０、及びＨ１９－１３１０６１
ｘｉｉ）ＢｉｏＰｒｏ ＩＥＸ ＱＦ、５μｍ、４．６×１００ｍｍ、Ｃ／Ｎ ＱＦ００５０５－１０４６ＷＰ、ロット１４１５３
ＴＯＳＯＨ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ２０００ＳＷＸＬ、５μｍ、７．８×３００ｍｍ、Ｃ／Ｎ ０８５４０、ロット００８Ｃ－００７７６Ｄ及びＡ０２３５３－０５Ａ
【0150】
機器
本研究で使用した機器は以下のとおりである。
ｉ）Ａｇｉｌｅｎｔ １１００／１２００ ＨＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ
ｉｉ）Ｅｉｓａｉ Ｍａｃｈｉｎｅｒｙ Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｌａｍｐ、モデルＭＩＨ－ＤＸ
ｉｉｉ）Ｆｉｓｈｅｒ Ｌｉｇｈｔ Ｍｅｔｅｒ、モデル０６－６６２－６３
ｉｖ）ＨＩＡＣ Ｌｉｇｈｔ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ、モデル９７０３
ｖ）Ｍｅｔｔｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＳｅｖｅｎＭｕｌｔｉ ｐＨ ｍｅｔｅｒ
ｖｉ） ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ Ｍｉｃｒｏ－Ｆｌｏｗ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、ＤＰＡ ５２００＋Ｂｏｔ １
本研究で使用した機器は以下のとおりである。
ｉ）Ａｇｉｌｅｎｔ １１００／１２００ ＨＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ
ｉｉ）Ｅｉｓａｉ Ｍａｃｈｉｎｅｒｙ Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｌａｍｐ、モデルＭＩＨ－ＤＸ
ｉｉｉ）Ｆｉｓｈｅｒ Ｌｉｇｈｔ Ｍｅｔｅｒ、モデル０６－６６２－６３
ｉｖ）ＨＩＡＣ Ｌｉｇｈｔ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ、モデル９７０３
ｖ）Ｍｅｔｔｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＳｅｖｅｎＭｕｌｔｉ ｐＨ ｍｅｔｅｒ
ｖｉ） ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ Ｍｉｃｒｏ－Ｆｌｏｗ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、ＤＰＡ ５２００＋Ｂｏｔ １
【0151】
方法
ａ）物理的外観による説明
全ての時点での物理的外観検査による説明を、表題「クライアント０５５バイオ製品原薬及び液体医薬品の物理的外観検査」のプロトコルを使用して行った。
ａ）物理的外観による説明
全ての時点での物理的外観検査による説明を、表題「クライアント０５５バイオ製品原薬及び液体医薬品の物理的外観検査」のプロトコルを使用して行った。
【0152】
ｂ）ＲＰ－ＨＰＬＣ
全ての時点にわたる試料の純度及びタンパク質含有量を、表題「ＲＰ－ＨＰＬＣによる化合物１の同一性及び純度決定」のプロトコルを使用して、ＲＰ－ＨＰＬＣによって決定した。
全ての時点にわたる試料の純度及びタンパク質含有量を、表題「ＲＰ－ＨＰＬＣによる化合物１の同一性及び純度決定」のプロトコルを使用して、ＲＰ－ＨＰＬＣによって決定した。
【0153】
ｃ）サイズ排除クロマトグラフィー
全ての時点にわたる試料の凝集体を、表題「サイズ排除クロマトグラフィーによる化合物１の純度の決定」のプロトコルを使用して、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定した。
全ての時点にわたる試料の凝集体を、表題「サイズ排除クロマトグラフィーによる化合物１の純度の決定」のプロトコルを使用して、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定した。
【0154】
ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー
全ての時点にわたる試料の電荷不均一性プロファイルを、表題「陰イオン交換クロマトグラフィーによる化合物１の電荷不均一性の測定」のプロトコルを使用して、陰イオン交換クロマトグラフィーによって測定した。
全ての時点にわたる試料の電荷不均一性プロファイルを、表題「陰イオン交換クロマトグラフィーによる化合物１の電荷不均一性の測定」のプロトコルを使用して、陰イオン交換クロマトグラフィーによって測定した。
【0155】
結果
ａ）物理的外観による説明
物理的外観結果を表１０に示す。全ての製剤化試料は、全ての時点及び条件で、わずかに乳白色でわずかに黄色の溶液であった。初期、半月時点、又は１ヶ月時点で、各々の製剤中に粒子は観察されなかった。２ヶ月時点で、２５±２℃／６０±５％ＲＨ条件下の製剤４、製剤５、及び製剤１２中に粒子はほとんど観察されず、３０±２℃／６５±５％ＲＨ条件下の製剤２、製剤５、及び製剤６中に粒子はほとんど観察されなかった。２ヶ月時点で、それぞれの安定性条件下の残りの製剤中に粒子は観察されなかった。３ヶ月時点及び６ヶ月時点で、両方の安定性条件下で全ての製剤中に粒子はほとんど観察されなかった。
ａ）物理的外観による説明
物理的外観結果を表１０に示す。全ての製剤化試料は、全ての時点及び条件で、わずかに乳白色でわずかに黄色の溶液であった。初期、半月時点、又は１ヶ月時点で、各々の製剤中に粒子は観察されなかった。２ヶ月時点で、２５±２℃／６０±５％ＲＨ条件下の製剤４、製剤５、及び製剤１２中に粒子はほとんど観察されず、３０±２℃／６５±５％ＲＨ条件下の製剤２、製剤５、及び製剤６中に粒子はほとんど観察されなかった。２ヶ月時点で、それぞれの安定性条件下の残りの製剤中に粒子は観察されなかった。３ヶ月時点及び６ヶ月時点で、両方の安定性条件下で全ての製剤中に粒子はほとんど観察されなかった。
【表10-1】
【表10-2】
【表10-3】
【表10-4】
【0156】
ｂ）逆相高速液体クロマトグラフィー
ＲＰ－ＨＰＬＣによる純度分析の結果を表１１に示す。一連の製剤にわたって、初期平均主ピーク純度パーセンテージは９７．３～９７．５％の範囲であり、平均総関連物質（ＴＲＳ）パーセンテージは２．５～２．７％の範囲であった。６ヶ月時点及び５±３℃条件での一連の製剤にわたって、平均主ピーク純度パーセンテージは９６．４～９７．２％の範囲であり、平均ＴＲＳパーセンテージは２．８～３．６％の範囲であった。６ヶ月時点及び２５±２℃／６０±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、平均主ピーク純度パーセンテージは８９．４～９３．１％の範囲であり、平均ＴＲＳパーセンテージは６．９～１０．６％の範囲であった。２ヶ月時点及び３０±２℃／６５±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、平均主ピーク純度パーセンテージは９２．０～９４．３％の範囲であり、平均ＴＲＳパーセンテージは５．７～８．０％の範囲であった。各製剤について、加速安定性条件にわたって、主ピークパーセンテージの減少及びＴＲＳパーセンテージの増加の同様のパターンが観察された。初期値と比較して、６ヶ月まで５±３℃条件で主ピーク純度のわずかな減少が観察された。主ピーク純度のパーセントの減少はｐＨ値に依存しており、ｐＨ値が高いほど大きな変化が見られた。
ＲＰ－ＨＰＬＣによる純度分析の結果を表１１に示す。一連の製剤にわたって、初期平均主ピーク純度パーセンテージは９７．３～９７．５％の範囲であり、平均総関連物質（ＴＲＳ）パーセンテージは２．５～２．７％の範囲であった。６ヶ月時点及び５±３℃条件での一連の製剤にわたって、平均主ピーク純度パーセンテージは９６．４～９７．２％の範囲であり、平均ＴＲＳパーセンテージは２．８～３．６％の範囲であった。６ヶ月時点及び２５±２℃／６０±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、平均主ピーク純度パーセンテージは８９．４～９３．１％の範囲であり、平均ＴＲＳパーセンテージは６．９～１０．６％の範囲であった。２ヶ月時点及び３０±２℃／６５±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、平均主ピーク純度パーセンテージは９２．０～９４．３％の範囲であり、平均ＴＲＳパーセンテージは５．７～８．０％の範囲であった。各製剤について、加速安定性条件にわたって、主ピークパーセンテージの減少及びＴＲＳパーセンテージの増加の同様のパターンが観察された。初期値と比較して、６ヶ月まで５±３℃条件で主ピーク純度のわずかな減少が観察された。主ピーク純度のパーセントの減少はｐＨ値に依存しており、ｐＨ値が高いほど大きな変化が見られた。
【0157】
タンパク質含有量の結果を、ＲＰ－ＨＰＬＣによって全ての時点及び条件で評価した（表１１）。１２個の特有の製剤を各々、約１２ｍｇ／ｍｌの単一濃度レベルで調製した。タンパク質含有量は本研究にわたって９．８～１３．７ｍｇ／ｍＬの範囲であった。その結果、本研究にわたってタンパク質濃度を初期段階時点と比較した場合、ラベルクレームパーセントは８４～１１１％の範囲であった。タンパク質濃度の減少は、６ヶ月時点加速条件で観察された。より具体的には、含有量の減少はｐＨ値に依存しており、ｐＨ値が高いほど大きな変化が見られた。
【表11-1】
【表11-2】
【表11-3】
【表11-4】
【表11-5】
【0158】
（ｃ）サイズ排除クロマトグラフィー
ＳＥＣによる純度分析の結果を表１２に示す。一連の製剤にわたって、初期モノマーパーセンテージは９８．８～９９．２％の範囲であり、全ての製剤の凝集体パーセンテージは０．３％であり、断片パーセンテージは０．５～０．９％の範囲であった。６ヶ月時点及び５±３℃条件での一連の製剤にわたって、モノマーパーセンテージは９８．７～９９．０％の範囲であり、凝集体パーセンテージは０．４～０．５％の範囲であり、断片パーセンテージは０．６～０．９％の範囲であった。６ヶ月時点及び２５±２℃／６０±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、モノマーパーセンテージは９８．２～９８．７％の範囲であり、凝集体パーセンテージは０．７～１．０％の範囲であり、断片パーセンテージは０．６～１．０％の範囲であった。２ヶ月時点及び３０±２℃／６５±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、モノマーパーセンテージは９８．４～９９．０％の範囲であり、凝集体パーセンテージは０．５～０．８％の範囲であり、断片パーセンテージは０．５～１．０％の範囲であった。各製剤について、関与する安定性条件にわたって、モノマーパーセンテージの減少並びに凝集体パーセンテージ及び断片パーセンテージの増加の同様のパターンが観察された。わずかな変化は方法のばらつきによるものであり得るが、スクロースベースの製剤で最も大きいモノマーパーセントの変化が見られ、マンニトールベースの製剤で最も小さいモノマーパーセントの変化が見られた。加えて、プロピレングリコールを除いて、ｐＨ値が高いほど、各賦形剤タイプで最も大きな変化が見られた。更に、フィブリルシードを含む製剤及び含まない製剤の同じ製剤成分を比較して、全体として、フィブリルシードを含む製剤は特に加速条件下でより高い純度を示した。
ＳＥＣによる純度分析の結果を表１２に示す。一連の製剤にわたって、初期モノマーパーセンテージは９８．８～９９．２％の範囲であり、全ての製剤の凝集体パーセンテージは０．３％であり、断片パーセンテージは０．５～０．９％の範囲であった。６ヶ月時点及び５±３℃条件での一連の製剤にわたって、モノマーパーセンテージは９８．７～９９．０％の範囲であり、凝集体パーセンテージは０．４～０．５％の範囲であり、断片パーセンテージは０．６～０．９％の範囲であった。６ヶ月時点及び２５±２℃／６０±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、モノマーパーセンテージは９８．２～９８．７％の範囲であり、凝集体パーセンテージは０．７～１．０％の範囲であり、断片パーセンテージは０．６～１．０％の範囲であった。２ヶ月時点及び３０±２℃／６５±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、モノマーパーセンテージは９８．４～９９．０％の範囲であり、凝集体パーセンテージは０．５～０．８％の範囲であり、断片パーセンテージは０．５～１．０％の範囲であった。各製剤について、関与する安定性条件にわたって、モノマーパーセンテージの減少並びに凝集体パーセンテージ及び断片パーセンテージの増加の同様のパターンが観察された。わずかな変化は方法のばらつきによるものであり得るが、スクロースベースの製剤で最も大きいモノマーパーセントの変化が見られ、マンニトールベースの製剤で最も小さいモノマーパーセントの変化が見られた。加えて、プロピレングリコールを除いて、ｐＨ値が高いほど、各賦形剤タイプで最も大きな変化が見られた。更に、フィブリルシードを含む製剤及び含まない製剤の同じ製剤成分を比較して、全体として、フィブリルシードを含む製剤は特に加速条件下でより高い純度を示した。
【0159】
全体として、このデータは、加速条件下で６ヶ月間保管した後の凝集体及び断片のわずかな変化を示している。
【表12-1】
【表12-2】
【表12-3】
【表12-4】
【表12-5】
【0160】
（ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー
ＡＥＸによる電荷不均一性の結果を表１３に示す。一連の製剤にわたって、初期主ピークパーセンテージは９８．１～９８．７％の範囲であり、塩基性変異体パーセンテージは０．６～１．１％の範囲であり、酸性変異体パーセンテージは０．６～０．８％の範囲であった。６ヶ月時点及び５±３℃条件での一連の製剤にわたって、主ピークパーセンテージは９３．３～９７．１％の範囲であり、塩基性変異体パーセンテージは０．５～０．９％の範囲であり、酸性変異体パーセンテージは２．３～６．０％の範囲であった。６ヶ月時点及び２５±２℃／６０±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、主ピークパーセンテージは８６．５～９１．６％の範囲であり、塩基性変異体パーセンテージは０．９～１．９％の範囲であり、酸性変異体パーセンテージは７．３～１１．８％の範囲であった。２ヶ月時点及び３０±２℃／６５±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、主ピークパーセンテージは９２．４～９３．３％の範囲であり、塩基性変異体パーセンテージは１．０～１．４％の範囲であり、酸性変異体パーセンテージは５．３～６．５％の範囲であった。各製剤について、関与する安定性条件全体にわたって、主ピークパーセンテージの減少並びに酸性変異体パーセンテージ及び塩基性変異体パーセンテージの増加の同様のパターンが観察された。
ＡＥＸによる電荷不均一性の結果を表１３に示す。一連の製剤にわたって、初期主ピークパーセンテージは９８．１～９８．７％の範囲であり、塩基性変異体パーセンテージは０．６～１．１％の範囲であり、酸性変異体パーセンテージは０．６～０．８％の範囲であった。６ヶ月時点及び５±３℃条件での一連の製剤にわたって、主ピークパーセンテージは９３．３～９７．１％の範囲であり、塩基性変異体パーセンテージは０．５～０．９％の範囲であり、酸性変異体パーセンテージは２．３～６．０％の範囲であった。６ヶ月時点及び２５±２℃／６０±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、主ピークパーセンテージは８６．５～９１．６％の範囲であり、塩基性変異体パーセンテージは０．９～１．９％の範囲であり、酸性変異体パーセンテージは７．３～１１．８％の範囲であった。２ヶ月時点及び３０±２℃／６５±５％ＲＨ条件での一連の製剤にわたって、主ピークパーセンテージは９２．４～９３．３％の範囲であり、塩基性変異体パーセンテージは１．０～１．４％の範囲であり、酸性変異体パーセンテージは５．３～６．５％の範囲であった。各製剤について、関与する安定性条件全体にわたって、主ピークパーセンテージの減少並びに酸性変異体パーセンテージ及び塩基性変異体パーセンテージの増加の同様のパターンが観察された。
【表13-1】
【表13-2】
【表13-3】
【表13-4】
【0161】
化合物１の安定性に対する抗酸化剤の影響
序文
分解研究により、化合物１は酸化を受けやすい可能性があることが示された。一般に使用されている抗酸化剤であるＥＤＴＡを含めることは、溶液状態での酸化の軽減に有効である。他の賦形剤も酸化を抑制すると考えてもよい。本研究では、ＥＤＴＡ、クエン酸塩、及びメチオニンを化合物Ｉ溶液製剤の抗酸化剤として評価した。抗酸化剤を含まない試料を対照として含めた。
序文
分解研究により、化合物１は酸化を受けやすい可能性があることが示された。一般に使用されている抗酸化剤であるＥＤＴＡを含めることは、溶液状態での酸化の軽減に有効である。他の賦形剤も酸化を抑制すると考えてもよい。本研究では、ＥＤＴＡ、クエン酸塩、及びメチオニンを化合物Ｉ溶液製剤の抗酸化剤として評価した。抗酸化剤を含まない試料を対照として含めた。
【0162】
材料及び方法
本研究で使用した化合物１ ＡＰＩ及び賦形剤を表１４に詳細に示す。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
本研究で使用した化合物１ ＡＰＩ及び賦形剤を表１４に詳細に示す。全ての他の実験用試薬をそのまま使用した。
【表14】
【0163】
研究すべき化合物１を含む製剤を表１５に示す。
【表15】
【0164】
溶液を０．２２ｍｍのＰＶＤＦフィルターに通して濾過した。層流フード内で、溶液をガラスバイアルに充填した。バイアルをキャップし、５℃、２５℃、及び３０℃で保管した。化合物１を含む４つの製剤を調製して、抗酸化剤、すなわち、ＥＤＴＡ、クエン酸塩、及びメチオニンの安定化有効性を評価した。いずれの抗酸化剤も含まない対照試料も含めた（表１５、ロット番号２５－１、２５－２、２５－３、及び２５－４）。その後、より高濃度のメチオニン（１０ｍＭに対して１００ｍＭ）を含む第５の試料を調製して、メチオニン濃度の影響を評価した（表１５、ロット番号２６）。試料を調製し、５℃、２５℃、及び３０℃で最長３ヶ月間保管した。適切な時点で、安定性を示すアッセイを行い、物理的安定性及び化学的安定性を評価した。
【0165】
化合物Ｉ製剤の外観
目視検査による３ヶ月後の化合物１製剤の外観は、製剤間で明白な差異を示した（表１５）。５℃では、溶液は無色であった。しかしながら、２５℃及び３０℃では、対照及びメチオニン含有試料がわずかに黄色であった一方で、ＥＤＴＡ及びクエン酸塩含有試料は無色のままであった。色の変化は、多くの場合、化学分解の兆候である。５℃では、安定剤にかかわらず化学分解速度が十分に遅い可能性があり、それゆえに、全ての溶液が無色に見える。高温では、異なる分解速度が抗酸化剤の影響を反映する。
目視検査による３ヶ月後の化合物１製剤の外観は、製剤間で明白な差異を示した（表１５）。５℃では、溶液は無色であった。しかしながら、２５℃及び３０℃では、対照及びメチオニン含有試料がわずかに黄色であった一方で、ＥＤＴＡ及びクエン酸塩含有試料は無色のままであった。色の変化は、多くの場合、化学分解の兆候である。５℃では、安定剤にかかわらず化学分解速度が十分に遅い可能性があり、それゆえに、全ての溶液が無色に見える。高温では、異なる分解速度が抗酸化剤の影響を反映する。
【表16】
【0166】
ＲＰ－ＨＰＬＣによる化合物１の化学的安定性に対する抗酸化剤の影響
表１７のデータは、化合物１の化学分解が冷蔵条件では実質的ではなかったことを示している。２５℃及び３０℃ では、安定化有効性に有意差がある。いずれの抗酸化剤も含まない場合、対照試料は急速な化学分解を示した。モノクローナル抗体製剤に一般に使用されている抗酸化剤であるメチオニンは、ＥＤＴＡ及びクエン酸塩と比較して低い安定化有効性を示した（１０ｍＭ又は１００ｍＭのいずれか）。化学分解はＥＤＴＡ又はクエン酸塩のいずれかによって抑制され、ＥＤＴＡがクエン酸塩よりわずかに有効であった。
表１７のデータは、化合物１の化学分解が冷蔵条件では実質的ではなかったことを示している。２５℃及び３０℃ では、安定化有効性に有意差がある。いずれの抗酸化剤も含まない場合、対照試料は急速な化学分解を示した。モノクローナル抗体製剤に一般に使用されている抗酸化剤であるメチオニンは、ＥＤＴＡ及びクエン酸塩と比較して低い安定化有効性を示した（１０ｍＭ又は１００ｍＭのいずれか）。化学分解はＥＤＴＡ又はクエン酸塩のいずれかによって抑制され、ＥＤＴＡがクエン酸塩よりわずかに有効であった。
【表17】
【0167】
上記の実験からのデータは、Ｔｒｐの酸化が主要分解経路のうちの１つであることを示している。表１８のデータは、Ｔｒｐ酸化の可能性がＥＤＴＡ又はクエン酸塩によってほぼ完全に抑制され、メチオニンから得ることができる効果はより小さいことを示している。
【表18】
【0168】
化合物１の物理的安定性に対する抗酸化剤の影響
共有結合凝集体の形成をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって評価した。３ヶ月にわたってＳＥＣによって測定した総凝集体を、５℃で保管したバイアルについては図６ａに示し、２５℃で保管したバイアルについては図６ｂに示し、３０℃で保管したバイアルについては図６ｃに示す。全ての製剤は５℃で良好に挙動した。２５℃及び３０℃では、ＥＤＴＡ及びクエン酸塩が有意な安定化有効性を示した。
共有結合凝集体の形成をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって評価した。３ヶ月にわたってＳＥＣによって測定した総凝集体を、５℃で保管したバイアルについては図６ａに示し、２５℃で保管したバイアルについては図６ｂに示し、３０℃で保管したバイアルについては図６ｃに示す。全ての製剤は５℃で良好に挙動した。２５℃及び３０℃では、ＥＤＴＡ及びクエン酸塩が有意な安定化有効性を示した。
【0169】
ＳＥＣに加えて、光遮蔽（ＨＩＡＣ）法及びフローイメージング（ＭＦＩ）法を使用して、３ヶ月試料を肉眼では見ることができない粒子状物質について試験した。実験データを表１９に示す。明らかな傾向は観察されない。ＨＩＡＣによる粒子数は全て、１０μｍ以上の寸法及び２５μｍ以上の寸法の仕様範囲内である。
【表19】
【図1】
【図2a】
【図2b】
【図3a】
【図3b】
【図4】
【図5a】
【図5b】
【図6a】
【図6b】
【図6c】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-07-18
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）以下の式：Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、Ｇｌｕ又はＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、前記２０位のＬｙｓとＣ１４－Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介したＬｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と前記Ｃ１４－Ｃ２４脂肪酸とのコンジュゲーションによって化学修飾されており、前記リンカーは、（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）ｔであって、式中、ｔは、１又は２であり、
Ｃ末端アミノ酸は、適宜アミド化されていてもよい］（配列番号５）
で示される化合物と、
（ｉｉ）緩衝液と、
（ｉｉｉ）等張化剤と、
（ｉｉｉ）抗酸化剤と
を含む医薬製剤であって、前記製剤のｐＨが、７．８～９．０である、医薬製剤。
【請求項2】
前記化合物が、（ａ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される化合物、
（ｂ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号２）
で示される化合物、
（ｃ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号３）
で示される化合物、及び
（ｄ）以下の式：
Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号４）
で示される化合物
からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項3】
前記化合物が、以下の式：Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される、請求項１又は２に記載の医薬製剤。
【請求項4】
前記製剤が、１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの前記化合物を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項5】
前記緩衝液が、リン酸緩衝液及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（又は２－アミノ－２－ヒドロキシメチル－プロパン－１，３－ジオール［（ＨＯＣＨ２）３ＣＮＨ２］）緩衝液からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項6】
前記製剤が、１ｍＭ～２０ｍＭの緩衝液を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項7】
前記緩衝液が、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）緩衝液である、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項8】
前記製剤が、１０ｍＭのトリス緩衝液を含む、請求項７に記載の医薬製剤。
【請求項9】
前記等張化剤が、マンニトール、スクロース、トレハロース、プロピレングリコール、グリセリン、塩化ナトリウム、及び塩酸アルギニンからなる群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項10】
前記製剤が、５ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬの前記等張化剤を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項11】
前記等張化剤が、マンニトールである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項12】
前記製剤が、４５～５５ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含む、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項13】
前記抗酸化剤が、ラジカルスカベンジャー、キレート剤、又は連鎖停止剤からなる群から選択される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項14】
前記製剤が、０．０５～１０．０ｍｇ／ｍＬの前記抗酸化剤を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項15】
前記抗酸化剤が、ＥＤＴＡ、クエン酸、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、亜硫酸ナトリウム、ｐ－アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、ヒスチジン、システイン、メチオニン、エタノール、及びＮ－アセチルシステインからなる群から選択される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項16】
前記抗酸化剤が、ＥＤＴＡである、請求項１５に記載の医薬製剤。
【請求項17】
前記製剤が、０．２～１．０ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含む、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項18】
前記製剤が、０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡを含む、請求項１６又は１７に記載の医薬製剤。
【請求項19】
前記抗酸化剤が、クエン酸である、請求項１５に記載の医薬製剤。
【請求項20】
前記製剤が、５ｍＭ～１５ｍＭのクエン酸を含む、請求項１９に記載の医薬製剤。
【請求項21】
前記製剤が、８ｍＭ～１２ｍＭのクエン酸を含む、請求項１８又は１９に記載の医薬製剤。
【請求項22】
前記製剤が、１０ｍＭのクエン酸を含む、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項23】
前記製剤のｐＨが、８．０～８．６である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項24】
前記製剤のｐＨが、８．０～８．３である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項25】
（ｉ）１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの以下の式：Ｈｉｓ－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓ側鎖のイプシロン－アミノ基と（［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８ＣＯ２Ｈとのコンジュゲーションによって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている］（配列番号１）
で示される化合物、
（ｉｉ）１０ｍＭのトリス緩衝液、
（ｉｉｉ）４６ｍｇ／ｍＬのマンニトール、及び
（ｉｖ）０．５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ
を含む医薬製剤であって、前記製剤のｐＨが、８．０～８．３である、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項26】
２型糖尿病の治療及び／又は予防に使用するための請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤であって、前記医薬製剤を投与することに用いられることを特徴とする、医薬製剤。
【請求項27】
肥満の治療及び／又は予防に使用するための請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤であって、前記医薬製剤を投与することに用いられることを特徴とする、医薬製剤。
【請求項28】
非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療及び／又は予防に使用するための請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤であって、前記医薬製剤を投与することに用いられることを特徴とする、医薬製剤。
【請求項29】
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療及び／又は予防に使用するための請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤であって、前記医薬製剤を投与することに用いられることを特徴とする、医薬製剤。
【請求項30】
２型糖尿病の治療及び／又は予防に使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項31】
肥満の治療及び／又は予防に使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項32】
ＮＡＦＬＤの治療及び／又は予防に使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項33】
ＮＡＳＨの治療及び／又は予防に使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項34】
２型糖尿病の治療に使用するための薬剤の製造における、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤の使用。
【請求項35】
肥満の治療に使用するための薬剤の製造における、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤の使用。
【請求項36】
ＮＡＦＬＤの治療に使用するための薬剤の製造における、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤の使用。
【請求項37】
ＮＡＳＨの治療に使用するための薬剤の製造における、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤の使用。
【国際調査報告】