特表 2024-501434 遮断剤としてのヘパリンリチウム

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-12

(54)【発明の名称】遮断剤としてのヘパリンリチウム

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/531 20060101AFI20240104BHJP

   G01N 33/569 20060101ALI20240104BHJP

【ＦＩ】

G01N33/531 B

G01N33/569 L

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023533953

(86)(22)【出願日】2021-12-01

(85)【翻訳文提出日】2023-07-14

(86)【国際出願番号】 US2021061431

(87)【国際公開番号】W WO2022119937

(87)【国際公開日】2022-06-09

(31)【優先権主張番号】63/121,161

(32)【優先日】2020-12-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518267573

【氏名又は名称】オルト－クリニカル ダイアグノスティックス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100095407

【弁理士】

【氏名又は名称】木村 満

(74)【代理人】

【識別番号】100132883

【弁理士】

【氏名又は名称】森川 泰司

(74)【代理人】

【識別番号】100148633

【弁理士】

【氏名又は名称】桜田 圭

(74)【代理人】

【識別番号】100147924

【弁理士】

【氏名又は名称】美恵 英樹

(72)【発明者】

【氏名】ヒルシュ、ブレット

(72)【発明者】

【氏名】コンテスタブル、ポール

(57)【要約】

偽陽性結果を防止するために診断アッセイに使用できる遮断剤が、本明細書において記載される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

希釈剤中に１つ以上の結合剤、およびアッセイ中の非特異的結合を減少させるのに十分な量のヘパリンリチウム、を含むイムノアッセイ試薬。

【請求項2】

前記ヘパリンリチウムは、約１ｍｇ／ｍＬの量で存在する、請求項１に記載のイムノアッセイ試薬。

【請求項3】

前記１つ以上の結合剤は、抗原である、請求項１に記載のイムノアッセイ試薬。

【請求項4】

前記抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス組み換え抗原である、請求項３に記載のイムノアッセイ試薬。

【請求項5】

前記Ｃ型肝炎ウイルス組み換え抗原は、ＮＳ５、ｃ２２－３、ｃ２００、またはそれらの組み合わせである、請求項４に記載のイムノアッセイ試薬。

【請求項6】

コンジュゲート試薬をさらに含む、請求項１に記載のイムノアッセイ試薬。

【請求項7】

前記コンジュゲート試薬は、ＨＲＰである、請求項６に記載のイムノアッセイ試薬。

【請求項8】

抗微生物剤をさらに含む、請求項１に記載のイムノアッセイ試薬。

【請求項9】

前記抗微生物剤は、プロクリン３００である、請求項８に記載のイムノアッセイ試薬。

【請求項10】

Ｃ型肝炎ウイルスの存在について分析されるサンプル、および請求項１に記載のイムノアッセイ試薬、を含むサンプル組成物。

【請求項11】

前記サンプルは、血清サンプルである、請求項１０に記載のサンプル組成物。

【請求項12】

前記サンプルは、エチレンジアミン四酢酸を含む血漿サンプルである、請求項１０に記載のサンプル組成物。

【請求項13】

前記結合剤は、抗原である、請求項１０に記載のサンプル組成物。

【請求項14】

サンプル中のＣ型肝炎ウイルスを検出する方法であって、
当該方法は、
Ｃ型肝炎ウイルスの存在について分析されるサンプルを、請求項１に記載のイムノアッセイ試薬と、前記サンプル中に存在する任意のＣ型肝炎ウイルスおよび前記１つ以上の結合剤の複合体を形成するために、組み合わせることを含み、前記ヘパリンリチウムは、当該方法において非特異的結合を減少させ、
当該方法は、
Ｃ型肝炎ウイルスを検出するために、得られた複合体を検出すること、
を含む方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１２月３日に出願された米国仮特許出願第６３／１２１，１６１号の利益を主張し、それぞれの開示全体は参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

技術分野
免疫診断アッセイに使用される遮断剤、関連する装置およびシステム、ならびにそれらを使用する方法が、本明細書で説明される。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0003】

診断アッセイに使用できる遮断剤が、本明細書で説明される。いくつかの実施形態では、診断アッセイはイムノアッセイであり得る。

【0004】

記載された遮断剤は、患者集団において検出される偽陽性結果の割合を低減することができる。

【0005】

遮断剤は、試薬混合物に添加され、またはアッセイ中に試薬として添加され得る。

【0006】

一実施形態では、遮断剤にはヘパリンを含み得る。他の実施形態では、遮断剤はリチウムを含み得る。いくつかの実施形態では、遮断剤はヘパリンリチウムである。

【0007】

いくつかの実施形態では、希釈剤中に、１つ以上の検体結合剤と、検体のサンプルのアッセイ中に、非特異的結合を減少させるのに十分な量の遮断剤とを含むイムノアッセイ試薬が提供される。

【0008】

さらに、検体の存在について分析されるサンプル、検体結合剤、および検体に対するサンプルのアッセイにおいて非特異的結合を減少させるのに十分な量の遮断剤を含むサンプル組成物が提供される。

【0009】

また、サンプル中の検体を、非特異的結合を低減するために遮断剤を用いて、検出する方法が提供される。当該方法は、検体の存在について分析されるサンプルを、遮断剤および１つ以上の検体結合剤と、前記サンプル中に存在する任意の検体と前記検体結合剤との複合体を形成するために組み合わせることを含み、前記遮断剤は非特異的結合を低減させ、当該方法は、検体を検出するために、得られた複合体を検出することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】本明細書に記載のアッセイの一般的なフローチャート。

【図2】ヘパリンリチウムを使用した場合と使用しない場合のアッセイを示すグラフ。

【図3】ヘパリンリチウムを含むサンプルの分類の保持を示すグラフ。

【発明を実施するための形態】

【0011】

本明細書では、偽陽性結果を防止するために診断アッセイにおいて使用できる遮断剤について説明する。いくつかの実施形態では、診断アッセイはイムノアッセイであり得る。いくつかの実施形態では、希釈剤中に１つ以上の検体結合剤を含むイムノアッセイ試薬と、検体のためのサンプルのアッセイ中に非特異的結合を減少させるのに十分な量の遮断剤とを含む、組成物およびシステムが提供される。

【0012】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の、診断アッセイおよび／またはイムノアッセイは、結果を達成する任意の方法で実施することができる。いくつかの実施形態では、診断アッセイおよび／またはイムノアッセイは、作業台上アッセイ（ｂｅｎｃｈｔｏｐ ａｓｓａｙ）として実施することができる。他の実施形態では、診断アッセイおよび／またはイムノアッセイは、自動または半自動システムで実施することができる。一実施形態では、診断アッセイおよび／またはイムノアッセイは、メインフレーム分析装置上で実行することができる。いくつかの実施形態では、診断アッセイおよび／またはイムノアッセイは、インビトロ試験であり得る。

【0013】

多くの場合、生物標本またはサンプル中の検体の存在および濃度を測定することが望ましい。検体は、分析手順（イムノアッセイなど）で測定される物質または化学成分である。イムノアッセイは、結合パートナーの概念に基づいている。対象の検体は検体結合剤（例えば、検体に対する抗体、または検体に対する受容体など）に結合し、検体および検体結合剤は「結合パートナー」として言及される。

【0014】

検体の存在について分析されるサンプルは、任意の適切なサンプルであり得、好ましくは、血清サンプルまたは血漿サンプルなどの血液サンプルであり得る。血漿は、血液細胞が懸濁された血液の液体成分である。血液サンプル中の血液細胞から血漿を分離する簡単な方法は、遠心分離によるものである。血清とは、液体成分を単離する前に血液を凝固させることによって凝固因子が自然に除去された血漿を指す。血漿サンプルは、ヘパリンナトリウム、クエン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、シュウ酸カリウムまたはＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）カリウムなどの抗凝固剤を含む血管から得られ得る。血漿サンプルの場合、血漿は、抗凝固剤を使用して得られ得る。

【0015】

多くのイムノアッセイでは、検体結合剤は抗体である。このような抗体は、しばしば緩衝液などの希釈剤中で提供される。抗体は、例えばＩｇＧまたはＩｇＭを含む任意の免疫グロブリンクラスのものでよい。抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体でよい。サンプル中に存在する対象の検体は、固定化された捕捉抗体に結合することができ、次いで標識された抗体が、または複数の抗体が次々に、捕捉された検体に結合する。標識は当技術分野で公知の任意のものであってよく、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼを含む。検出された信号は、サンプル中に存在する検体の量を示す。検出方法は、選択された標識の種類に依存し、熱量測定法、蛍光測定法、または化学発光法を含むことができる。

【0016】

また、イムノアッセイの偽陽性率を低減する方法、または特異度を改善する方法が記載される。一実施形態では、低減は、Ｃ型肝炎抗体の検出のためのものであり得る。アッセイ試薬へのヘパリン（例えば、ヘパリンリチウム）の添加は、これを達成し得る。偽陽性結果の防止は、非特異的結合相互作用を防止することの結果であり得る。

【0017】

いくつかの実施形態では、方法、組成物、およびシステムは、ヒト血清および／または血漿中のＣ型肝炎ウイルスに対する免疫グロブリンＧ抗体（抗ＨＣＶ）のインビトロ定性的検出に使用し得る。いくつかの実施形態では、検出は、ビトロス（ＶＩＴＲＯＳ）ＥＣｉ／ＥＣｉＱ／３６００免疫診断システムまたはビトロス５６００／ＸＴ７６００統合システムを使用する。

【0018】

いくつかの実施形態では、方法、組成物およびシステムは、スライドまたは乾燥スライド上などでの側方流動アッセイで使用され得る。このような実施形態では、遮断剤は、分析前または分析中に、スライド上に添加され得る。いくつかの実施形態では、遮断剤は、スライド内またはスライド上の、流路またはウェルにコーティングとして添加され得る。

【0019】

いくつかの実施形態では、方法、組成物、およびシステムは、ヒト血清および／または血漿の分析が望まれる、診療現場のシステム（ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｃａｒｅ ｓｙｓｔｅｍｓ）において使用され得る。

【0020】

いくつかの実施形態では、方法、組成物、およびシステムは、自動分析装置で使用され得る。

【0021】

いくつかの実施形態では、遮断剤は、サンプルをテストするために、必要に応じて側方流動アッセイスライドまたはチップに添加され得る。

【0022】

アッセイ結果は、他の実験結果および臨床情報と併せて、肝炎の徴候または症状を有する人およびＣ型肝炎感染の危険性のある人におけるＣ型肝炎ウイルス感染の証拠を提供するために使用され得る。さらに、本明細書に記載のアッセイは、妊婦におけるＣ型肝炎感染をスクリーニングして、出生前期間中にＨＣＶに感染する危険性が高い新生児を同定することに使用され得る。

【0023】

Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、現在、血液由来の非Ａ、非Ｂ肝炎（ＮＡＮＢＨ）の、全部ではないが、大分部の原因となる病原体であることが知られている。研究は、ＨＣＶが、汚染された血液および血液製剤を介して、輸血を介して、またはその他の密接な個人的接触を介して、伝染することを示す。抗ＨＣＶの存在は、ある個体が、ＨＣＶに感染した可能性があり、ＨＣＶ感染を伝播する能力がある可能性があることを示す。３つの組み換えＣ型肝炎ウイルスにコードされた抗原（ｃ２２－３、ｃ２００およびＮＳ５）を使用して、ＨＣＶを検出することができる。組み換えタンパク質ｃ２２－３は、ＨＣＶゲノムの推定上のコア領域にコードされる。ＨＣＶ組み換えタンパク質ｃ２００は、ＨＣＶゲノムの推定上のＮＳ３領域およびＮＳ４領域にコードされる。ｃ２００タンパク質は、ｃ１００－３タンパク質配列に遺伝子学的に連結されたｃ３３ｃタンパク質配列を含む。研究は、ＨＣＶ感染後に発現する抗体が、しばしばｃ２２－３および／またはｃ３３ｃと反応性であることを示している。ＨＣＶ組み換えタンパク質ＮＳ５は、ＨＣＶゲノムの推定上のＮＳ５領域にコードされる。ＨＣＶに感染したかなりの割合の人は、ＮＳ５に対する抗体を発現する。３つのＨＣＶ組み換え抗原すべてに対する宿主生物は、Ｓ．セレビシエ（酵母）である。

【0024】

いくつかの実施形態では、検出に使用される組成物は、３つの組み換えＣ型肝炎ウイルスにコードされた抗原を含み得る。他の実施形態では、１つまたは２つを使用することができる。いくつかの実施形態では、ｃ２２－３、ｃ２００およびＮＳ５が使用される。他の実施形態では、ｃ２２－３およびｃ２００、またはｃ２２－３およびＮＳ５、またはｃ２００およびＮＳ５が使用される。さらに他の実施形態では、ｃ２２－３、ｃ２００またはＮＳ５が使用される。

【0025】

Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）は、しばしば肝臓に影響を及ぼし、患者のケアと世界の血液供給の両方にとって大きな懸念事項である。この感染は、患者の血液中にＨＣＶ抗体を生成し、これは診断用イムノアッセイによって捕捉および検出され得る。これらのイムノアッセイは、感染患者および血液サンプルを特定する上で重要な役割を果たす。これらのアッセイは、非常に感度が高く特異的であるように設計されているが、偽陽性の結果が現実にある。偽陽性結果は、試験サンプル中に実際にはＨＣＶ抗体が存在しない場合で、イムノアッセイなどの診断ツールが陽性結果を与えるときに、生じる。これらの偽陽性結果は、非特異的結合を含むがこれに限定されない様々な理由で発生する可能性がある。

【0026】

非特異的結合は、サンプル中の化合物がアッセイによって、捕捉され、検出される場合に、その化合物が標的検体ではない（すなわち、ＨＣＶ抗体ではない）ときに生じる。本明細書に記載の遮断剤は、これらの偽陽性を最小限にするためにアッセイ試薬製剤に含まれ得る。

【0027】

記載された遮断剤は、サンプル中および／または患者集団全体にわたって検出される偽陽性結果の比率を低減し得る。

【0028】

遮断剤は、試薬混合物に添加され得、またはアッセイ中に試薬として添加され得る。

【0029】

一実施形態では、遮断剤は、これらに限定されないが、ヘパリン、コンドロイチン、デルマタン、ケラチン、およびヒアルロン酸などのグリコサミノグリカンを含み得る。一実施形態では、グリコサミノグリカンは、ヘパリンである。そのヘパリンは、金属イオンなどの金属と配位結合され得る。金属は、Ｉ族元素などのアルカリ金属であり得る。金属は、リチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム、フランシウム、またはセシウムを含み得る。

【0030】

いくつかの実施形態では、遮断剤は、リチウムを含み得る。いくつかの実施形態では、遮断剤は、ヘパリンリチウムである。

【0031】

ヘパリンリチウムは、グリコソアミノグリカンとして分類される負に帯電した多糖ポリマーであり、哺乳類の組織内で生成され、貯蔵される。

【化1】

【0032】

本明細書に記載のヘパリンは、偽陽性の減少をもたらす鎖長を有し得る。いくつかの実施形態では、ｎは１－１００、１－１，０００、または１－１０，０００であり得る。

【0033】

ヘパリンは、ヒトの凝固過程においていくつかの補因子と相互作用するため、抗凝固剤として医学で利用されている。ヘパリンリチウムは、ヘパリンのリチウム塩である。

【0034】

遮断剤は、検体に対するサンプルのアッセイにおいて非特異的結合を減少させるのに十分な量で提供される。遮断剤がヘパリンリチウムである場合、その量は、好ましくは約０．２５ｍｇ／ｍＬから約４ｍｇ／ｍＬ（約０．０２５％から約０．４％に相当）である。

【0035】

いくつかの実施形態では、免疫測定技術が使用される。このような技術には２段階の反応が含まれる。第１段階では、サンプル中に存在するＨＣＶ抗体が、ウェル上にコーティングされたＨＣＶ組み換え抗原と結合する。未結合のサンプルは洗浄により除去される。第２段階では、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識された抗体コンジュゲート（マウスモノクローナル抗ヒトＩｇＧ）が、第１段階でウェル上に捕捉されたヒトＩｇＧに結合する。未結合のコンジュゲートは洗浄により除去される。

【0036】

結合したＨＲＰコンジュゲートは、発光反応によって測定される。発光基質（ルミノール誘導体および過酸塩）および電子伝達剤を含む試薬がウェルに添加される。結合したコンジュゲート中のＨＲＰは、ルミノール誘導体の酸化を触媒し、光を生成する。電子移動剤（置換アセトアニリド）は、生成される光のレベルを増加させ、その発光を延長する。光信号はシステムによって読み取られる。結合したＨＲＰコンジュゲートの量は、サンプル中に存在する抗ＨＣＶのレベルを示す。

【0037】

試薬組成物は、緩衝液中の診断試薬と組み合わせて、本明細書に記載の遮断剤を含み得る。いくつかの実施形態では、それらの診断試薬は免疫診断試薬である。

【0038】

他の実施形態では、試薬組成物は、本明細書に記載の遮断剤、標識されたタンパク質、および緩衝液中の抗原を含み得る。

【0039】

他の実施形態では、試薬組成物は、本明細書に記載の遮断剤、ＨＲＰで標識されたタンパク質、および緩衝液中の抗原を含み得る。

【0040】

他の実施形態では、試薬組成物は、本明細書に記載の遮断剤、ＨＲＰで標識されたタンパク質、抗微生物剤、および緩衝液中の抗原を含み得る。

【0041】

他の実施形態では、試薬組成物は、本明細書に記載の遮断剤、ＨＲＰで標識されたタンパク質、および緩衝液中のＨＣＶにコードされた抗原を含み得る。

【0042】

他の実施形態では、試薬組成物は、本明細書に記載の遮断剤、ＨＲＰで標識されたタンパク質、抗微生物剤、および緩衝液中のＨＣＶにコードされた抗原を含み得る。

【0043】

他の実施形態では、試薬組成物は、本明細書に記載の遮断剤、ＨＲＰで標識されたＩｇＧ、および緩衝液中のＨＣＶにコードされた抗原を含み得る。

【0044】

他の実施形態では、試薬組成物は、本明細書に記載の遮断剤、ＨＲＰで標識されたＩｇＧ、抗微生物剤、および緩衝液中のＨＣＶにコードされた抗原を含み得る。

【0045】

他の実施形態では、試薬組成物は、ヘパリンリチウム、標識されたタンパク質、および緩衝液中の抗原を含み得る。

【0046】

他の実施形態では、試薬組成物は、ヘパリンリチウム、ＨＲＰで標識されたタンパク質、および緩衝液中の抗原を含み得る。

【0047】

他の実施形態では、試薬組成物は、ヘパリンリチウム、ＨＲＰで標識されたタンパク質、抗微生物剤、および緩衝液中の抗原を含み得る。

【0048】

他の実施形態では、試薬組成物は、ヘパリンリチウム、ＨＲＰで標識されたタンパク質、および緩衝液中のＨＣＶにコードされた抗原を含み得る。

【0049】

他の実施形態では、試薬組成物は、ヘパリンリチウム、ＨＲＰで標識されたタンパク質、抗微生物剤、および緩衝液中のＨＣＶにコードされた抗原を含み得る。

【0050】

他の実施形態では、試薬組成物は、ヘパリンリチウム、ＨＲＰで標識されたＩｇＧ、および緩衝液中のＨＣＶにコードされた抗原を含み得る。

【0051】

他の実施形態では、試薬組成物は、ヘパリンリチウム、ＨＲＰで標識されたＩｇＧ、抗微生物剤、および緩衝液中のＨＣＶにコードされた抗原を含み得る。

【0052】

記載したように、３つの組み換えＣ型肝炎ウイルスにコードされた抗原（ｃ２２－３、ｃ２００およびＮＳ５）は、ＨＣＶを検出するために使用できる。使用される場合、図１と同様の反応スキームが使用され、３つの抗原のそれぞれが、ＨＲＰで標識された抗ヒトＩｇＧを使用して測定される。

【0053】

いくつかの実施形態では、ＨＣＶを検出するために使用される試薬は、酵母（Ｓ．セレビシエ）由来のＣ型肝炎ウイルス組み換え抗原（ＮＳ５、ｃ２２－３、ｃ２００）、試薬（２－クロロアセトアミド抗微生物剤を含む緩衝液）、抗微生物剤（１％プロクリン３００ｗ／ｗ）を含む緩衝液中のコンジュゲート試薬（ＨＲＰマウスモノクローナル抗ヒトＩｇＧ、１．０４ｎｇ／ウェル）、およびヘパリンリチウムを含み得る。

【0054】

いくつかの実施形態では、ＨＣＶを検出するために使用される試薬は、酵母（Ｓ．セレビシエ）由来のＣ型肝炎ウイルス組み換え抗原（ＮＳ５、ｃ２２－３、ｃ２００）、１８．２ｍＬのアッセイ試薬（２－クロロアセトアミド抗微生物剤を含む緩衝液）、抗微生物剤（１％プロクリン３００ｗ／ｗ）を含む緩衝液中の２０．６ｍＬコンジュゲート試薬（ＨＲＰマウスモノクローナル抗ヒトＩｇＧ、１．０４ｎｇ／ウェル）、およびヘパリンリチウムを含み得る。

【0055】

いくつかの実施形態では、Ｃ型肝炎ウイルス組み換え抗原（ＮＳ５、ｃ２２－３、ｃ２００）は、１００ウェルプレート内のウェルなどのウェル上にコーティングされ得る。

【0056】

いくつかの実施形態では、遮断剤を含む試薬パックは、安定性を保つために冷蔵保存される。

【0057】

いくつかの実施形態では、ＨＣＶイムノアッセイ用のアッセイ試薬にヘパリンリチウムなどのヘパリンを含めることは、偽陽性の発生を著しく減少させ得る。ヘパリンは、血清または血漿サンプル内の化合物に結合する可能性があり、それは、結合しない場合は、偽陽性アッセイ結果につながる、非特異的結合事象の原因となり得る。ヘパリンリチウムを含むヘパリンの、免疫診断アッセイの試薬の製剤中への添加は、アッセイの全体的な特異度を高める、偽陽性の発生率を低下させ得る。

【0058】

いくつかの実施形態では、アッセイにヘパリンリチウムを含めることは、偽陽性率を、約７０％を超えて、約８０％を超えて、約８５％を超えて、約８６％を超えて、約９０％を超えて、または約９５％を超えて、減少させることができる。

【0059】

いくつかの実施形態では、ヘパリンリチウムは、アッセイの感度に影響を与えない。

【0060】

いくつかの実施形態では、ヘパリンリチウムは、真陽性サンプルを検出するアッセイの能力に作用しない。

【0061】

いくつかの実施形態では、ヘパリンリチウムは、アッセイの特異度を増加させ得る。いくつかの実施形態では、特異度は、約０．０５％を超えて、約０．１％を超えて、約０．２％を超えて、約０．３％を超えて、約０．４％を超えて、または約０．５％を超えて、増加し得る。

【0062】

また、サンプル中の検体を検出する方法であって、検体の存在について分析されるサンプルを、遮断剤および検体結合剤と、サンプル中に存在する任意の検体と検体結合剤との複合体を形成するために、組み合わせること含み、遮断剤は、当該方法において非特異的結合を減少させ、当該方法は、検体を検出するために、結果として生じる複合体を検出すること、を含む方法が提供される。一実施形態では、サンプルは遮断剤と混合され、次いで、得られたサンプルは検体結合剤と混合される。別の実施形態では、サンプルは検体結合剤と混合され、次いで、得られたサンプルは遮断剤と混合される。さらに別の実施形態では、検体結合剤は、希釈剤中の検体結合剤および遮断剤を含むイムノアッセイ試薬として提供され、イムノアッセイ試薬はサンプルと混合される。

【0063】

実施例１
ヘパリンリチウムは、ビトロス免疫診断製品ＨＣＶアッセイのアッセイ試薬に０．０４から０．１０％ｗ／ｖの濃度で添加される。次に、そのアッセイを使用して、このアッセイを使用した場合に偽陽性結果を与えることが知られている一連の１１２個のサンプルを分析する。これらのサンプルは、以前にビトロスＨＣＶアッセイで陽性として検査されたが、免疫ブロット法および／または核酸検査（ＮＡＴ）によって陰性であることが証明された。ヘパリンリチウムをアッセイの試薬に添加すると、これらの１１２個のサンプルのうち１６個だけが偽陽性の結果を出し続ける。

【0064】

図１は、この研究の結果を示す。ｘ軸はサンプルＩＤ番号を表し、ｙ軸はシグナル対カットオフ値（Ｓ／Ｃ）を表す。結果＞１．０Ｓ／Ｃである任意のサンプルは、ビトロスＨＣＶアッセイである、このアッセイにおいて陽性であるとみなされる。対照データセットは未修正アッセイで得られた結果であり、一方、ヘパリンリチウムデータ点は、アッセイがアッセイ試薬中にヘパリンリチウム添加剤を含む場合の同じサンプルの結果である。これは、ヘパリンリチウムの添加が偽陽性率を減少させることを示唆している。

【0065】

実施例２
ヘパリンリチウムはアッセイの感度に大きな影響を与えない。換言すれば、それは真陽性サンプルを検出する、アッセイの能力には影響を及ぼさない。陽性結果の１．０Ｓ／Ｃカットオフに近い４人の抗体陽転パネルメンバー（初期免疫応答の発生中に最近感染したドナーから採取されたサンプル）を調査する。結果を図２に示す。

【0066】

左側の棒の結果は、市販のビトロスＨＣＶアッセイによって得られた結果であり、右側の棒の結果は、ヘパリンリチウム添加剤を用いたこのアッセイによるものである。ヘパリンの添加は、これら４つの陽性サンプルのいずれの区分も変化させなかった。

【0067】

実施例３
ヘパリンリチウムの添加は、アッセイの特異度を高めることができる。一千の推定陰性患者サンプルを市販のビトロスＨＣＶアッセイで分析し、次いでヘパリンリチウム添加剤を用いた同じアッセイで再び分析する。特異度は９９．８０％から９９．９０％に増加する。このアッセイおよび同様の診断製品は、毎年何百万もの患者と血液サンプルのスクリーニングに使用されている。この偽陽性の減少には、年間何万もの結果を訂正できる可能性がある。

【0068】

別段の指示がない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される、成分の量、分子量などの特性、反応条件などを表す全ての数字は、全ての場合において用語「約」によって修飾されるものとして理解されるべきである。したがって、特に断りのない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲中で示される数値パラメータは、本発明によって得ようとする所望の特性に応じて変化し得る近似値である。少なくとも、および均等論の適用を特許請求の範囲に限定するものではなく、各数値パラメータは、少なくとも報告された有効桁数を考慮し、および通常の丸め技術を適用することによって解釈されるべきである。本発明の広い範囲を示す数値範囲およびパラメータは、近似値であるにもかかわらず、特定の実施例中で示される数値は可能な限り正確に報告される。しかしながら、いかなる数値も、それぞれの試験測定で見出される標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を本質的に含む。

【0069】

本発明の説明の文脈（特に以下の特許請求の範囲の文脈）中で使用される用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および同様の指示対象は、本明細書に別段の指示がある場合、または文脈と明らかに矛盾する場合を除き、単数形および複数形の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書の値の範囲の記述は、その範囲内にあるそれぞれの個別の値を個別に参照する簡略的な方法としての機能を果すことを単に意図している。本明細書に別段の指示がない限り、個々の値は、あたかも本明細書に個別に記述されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書に別段の指示がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実行され得る。本明細書で提供されるありとあらゆる例、または例示的な言語（例えば、「など（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、単に本発明をより明らかにすることを目的としており、別途請求される本発明の範囲に制限を課すものではない。本明細書のいかなる言語も、特許請求されていない、本発明の実施に必須の要素を示すものとして解釈されるべきではない。

【0070】

本明細書に開示される本発明の代替要素または実施形態のグループ分けは、限定として解釈されるべきではない。各グループの構成要素は、個別に、またはグループの他の構成要素または本明細書に見られる他の要素と任意に組み合わせて参照および特許請求されてもよい。利便性および／または特許性の理由から、グループの１以上の構成要素がグループに含まれたり、グループから削除されたりする可能性があることが予想される。そのような包含または削除が起きた場合、明細書は、添付の特許請求の範囲で使用される全てのマーカッシュグループの書面による記載を満たすように変更されたグループを含むものとみなされる。

【0071】

本明細書において、発明者に知られている本発明を実施するための最良の態様を含む、本発明の特定の実施形態が記述される。当然、これらの記述された実施形態の変形は、前述の記述を読むことで当業者にとって明らかになるであろう。本発明者は、当業者がそのような変形を適宜採用することを期待しており、本明細書に具体的に記載されている以外の方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、適用される法律によって許可されるように、本明細書に添付の特許請求の範囲に記載された主題の全ての修正および均等物を含む。さらに、それらの全ての可能な変形における上述の要素の任意の組み合わせは、明細書に別段の指示がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明によって包含される。

【0072】

さらに、多数の参照が、本明細書全体を通じて、特許および印刷された出版物に対してなされた。上で引用した参照および印刷された出版物のそれぞれは、その全体が参照により個別に本明細書に組み込まれる。

【0073】

最後に、本明細書に開示される本発明の実施形態は、本発明の原理を明らかにするであることを理解されたい。採用されてもよい他の修正は、本発明の範囲内である。従って、限定ではなく例として、本発明の代替構成を本明細書の教示に従って利用してもよい。従って、本発明は、図示され説明されたものに厳密に限定されない。

【0074】

（付記）
（付記１）
希釈剤中に１つ以上の結合剤、およびアッセイ中の非特異的結合を減少させるのに十分な量のヘパリンリチウム、を含むイムノアッセイ試薬。

【0075】

（付記２）
前記ヘパリンリチウムは、約１ｍｇ／ｍＬの量で存在する、付記１に記載のイムノアッセイ試薬。

【0076】

（付記３）
前記１つ以上の結合剤は、抗原である、付記１に記載のイムノアッセイ試薬。

【0077】

（付記４）
前記抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス組み換え抗原である、付記３に記載のイムノアッセイ試薬。

【0078】

（付記５）
前記Ｃ型肝炎ウイルス組み換え抗原は、ＮＳ５、ｃ２２－３、ｃ２００、またはそれらの組み合わせである、付記４に記載のイムノアッセイ試薬。

【0079】

（付記６）
コンジュゲート試薬をさらに含む、付記１に記載のイムノアッセイ試薬。

【0080】

（付記７）
前記コンジュゲート試薬は、ＨＲＰである、付記６に記載のイムノアッセイ試薬。

【0081】

（付記８）
抗微生物剤をさらに含む、付記１に記載のイムノアッセイ試薬。

【0082】

（付記９）
前記抗微生物剤は、プロクリン３００である、付記８に記載のイムノアッセイ試薬。

【0083】

（付記１０）
Ｃ型肝炎ウイルスの存在について分析されるサンプル、および付記１に記載のイムノアッセイ試薬、を含むサンプル組成物。

【0084】

（付記１１）
前記サンプルは、血清サンプルである、付記１０に記載のサンプル組成物。

【0085】

（付記１２）
前記サンプルは、エチレンジアミン四酢酸を含む血漿サンプルである、付記１０に記載のサンプル組成物。

【0086】

（付記１３）
前記結合剤は、抗原である、付記１０に記載のサンプル組成物。

【0087】

（付記１４）
サンプル中のＣ型肝炎ウイルスを検出する方法であって、
当該方法は、
Ｃ型肝炎ウイルスの存在について分析されるサンプルを、付記１に記載のイムノアッセイ試薬と、前記サンプル中に存在する任意のＣ型肝炎ウイルスおよび前記１つ以上の結合剤の複合体を形成するために、組み合わせることを含み、前記ヘパリンリチウムは、当該方法において非特異的結合を減少させ、
当該方法は、
Ｃ型肝炎ウイルスを検出するために、得られた複合体を検出すること、
を含む方法。

【図1】

【図2】

【図3】

【国際調査報告】