特表 2024-501565 抗ＦＧＦＲ２抗体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-12

(54)【発明の名称】抗ＦＧＦＲ２抗体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240104BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240104BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240104BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240104BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240104BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240104BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240104BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240104BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240104BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240104BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240104BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20240104BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240104BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240104BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N5/10

C12N1/19

C07K16/28

C07K16/46

C12N15/62 Z

A61K39/395 T

A61K31/7088

A61K48/00

A61K35/12

A61P35/00

A61K45/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023540213

(86)(22)【出願日】2021-12-29

(85)【翻訳文提出日】2023-08-29

(86)【国際出願番号】 CN2021142321

(87)【国際公開番号】W WO2022143728

(87)【国際公開日】2022-07-07

(31)【優先権主張番号】202011600351.8

(32)【優先日】2020-12-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521440736

【氏名又は名称】深▲せん▼福沃薬業有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】110002860

【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チュ，チョンガン

(72)【発明者】

【氏名】シュ，リャンリャン

(72)【発明者】

【氏名】ドン，ジエシェン

(72)【発明者】

【氏名】チャン，チャオチュン

(72)【発明者】

【氏名】ヤン，シュエン

(72)【発明者】

【氏名】ペン，ファンリ

(72)【発明者】

【氏名】リ，イエチン

(72)【発明者】

【氏名】チェン，チャオラ

(72)【発明者】

【氏名】バオ，リミン

(72)【発明者】

【氏名】ミン，シャンヤン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA13

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB26

4C085AA16

4C085BB01

4C085BB33

4C085BB34

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB43

4C085EE03

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB26

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZB26

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045BA72

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

抗ＦＧＦＲ２抗体、当該抗体をコードする核酸、当該抗体の発現および産生のためのベクターおよび宿主細胞、抗体－薬物複合体、ならびに当該抗体を含む医薬組成物を提供する。本発明はさらに、当該抗体分子のＦＧＦＲ２経路関連異常によって引き起こされる癌を診断するための薬剤の製造における使用、および当該抗体または抗体－薬物複合体のＦＧＦＲ２経路関連異常によって引き起こされる癌、特に胃癌を治療するための医薬の製造のための使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３がそれぞれ、ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％の同一性を有する、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域が、ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域配列と少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは９５％、最も好ましくは９８％の同一性を有する、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域配列を含む、請求項３に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

重鎖と軽鎖を含み、前記重鎖と軽鎖がそれぞれ、ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖配列および軽鎖配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは９０％、最も好ましくは少なくとも９５％、９８％、９９％の同一性を有する、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０
、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖および軽鎖配列を含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項8】

ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＤである、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項9】

Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一本鎖抗体（ｓｃＦＶ）、およびダイアボディから選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗原結合断片。

【請求項10】

請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離された核酸。

【請求項11】

請求項１０に記載の単離された核酸を含む、発現ベクター。

【請求項12】

請求項１０に記載の単離された核酸または請求項１１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞、好ましくは真核生物宿主細胞、より好ましくは哺乳動物宿主細胞。

【請求項13】

ＦＧＦＲ２関連疾患または障害を治療するための医薬組成物であって、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、請求項１０に記載の単離された核酸、請求項１１に記載の発現ベクター、または請求項１２に記載の宿主細胞を含み、さらに医薬用担体を含む、医薬組成物。

【請求項14】

第１の核酸および第２の核酸を含む組成物であって、前記第１の核酸が請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体の重鎖をコードし、前記第２の核酸が請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体の軽鎖をコードする、組成物。

【請求項15】

請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、および薬物を含む、抗体－薬物複合体。

【請求項16】

ＦＧＦＲ２経路関連異常によって引き起こされる癌、好ましくは胃癌、最も好ましくはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子の増幅がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現をもたらす胃癌を治療するための医薬の製造のための、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項１５に記載の抗体－薬物複合体の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗体分子、具体的にヒト抗ＦＧＦＲ２抗体分子，特に抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体分子に関する。

【背景技術】

【0002】

線維芽細胞増殖因子受容体２（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２、ＦＧＦＲ２）はチロシンキナーゼ受容体の一つであり、２つの免疫グロブリン様ドメイン（β－異性体）（それぞれＤ２およびＤ３ドメイン）または３つの免疫グロブリン様ドメイン（α－異性体）（それぞれＤ１、Ｄ２およびＤ３ドメイン）を有する細胞外領域を有し、細胞外領域は膜貫通領域および細胞内のジチロシンキナーゼサブドメインに連結している。ＦＧＦＲ２はエクソンの由来によって、主にＤ３ドメインで異なるＩＩＩｂとＩＩＩｃのサブタイプに分けられる。ＩＩＩｂサブタイプは、細胞外領域の免疫グロブリン様構造の数により、ＦＧＦＲ２αＩＩＩｂ（３つの免疫グロブリン様ドメインＤ１、Ｄ２、Ｄ３を有する）とＦＧＦＲ２βＩＩＩｂ（２つの免疫グロブリン様ドメインＤ２、Ｄ３を有する）に分けられる。また、ＩＩＩｂサブタイプは主に上皮組織に、ＩＩＩｃサブタイプは主に間葉系組織に発現し、これら２つの受容体の一部のＦＧＦリガンドは、逆の発現パターンを有する。例えば、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合するＦＧＦ７、ＦＧＦ１０およびＦＧＦ２２は間葉系組織で発現し、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合するＦＧＦ４、ＦＧＦ５およびＦＧＦ６は上皮系細胞で発現する。したがって、ＦＧＦＲ２は上皮－間葉系移行において重要な役割を果たしていると考えられる。

【0003】

配列の相同性によると、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４もＦＧＦＲ２と同じファミリーに属する。このファミリーのシグナル伝達経路の活性化には、リガンドとして線維芽細胞増殖因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ、ＦＧＦ）が必要であり、ＦＧＦは主に受容体のＤ２およびＤ３ドメインを介して受容体ＦＧＦＲ２に結合する一方、ヘパラン硫酸プロテオグリカンにも結合し、ＦＧＦＲの二量体化を引き起こし、さらに自己リン酸化し、ＦＧＦＲ基質２（ＦＧＦＲ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ２、ＦＲＳ２）およびカルモジュリンシグナル伝達経路ＰＬＣＡを介したＲＡＳ－ＥＲＫおよびＰＩ３Ｋ－ＡＫＴシグナル伝達カスケード、ならびにＤＡＧ－ＰＫＣおよびＩＰ３シグナル伝達カスケードにも関与する。ＦＧＦＲシグナルの異常な活性化は様々な悪性腫瘍に関与している。

【0004】

正常細胞では、ＦＧＦＲ２は染色体１０ｑ２６に位置し、主に組織の修復と発生における細胞の分化、増殖、アポトーシスに関与する。マウスでＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子をノックアウトすると胚致死が起こることが研究で示されている。さらに、ＦＧＦＲ２またはＦＧＦの過剰発現と、遺伝子増幅、遺伝子融合および再配列、遺伝子の点突然変異および染色体転座などの遺伝子の変化が、ＦＧＦＲ２シグナル伝達経路の調節異常につながり、調節異常したＦＧＦＲ／ＦＧＦシグナル伝達経路が細胞のがん化に密接に関与していることが、多くの証拠により示されている。子宮内膜癌、卵巣癌、乳癌、肺癌、胃癌、食道癌、膀胱癌、胆管癌など様々な癌種において、既にＦＧＦＲ２の過剰発現、ミスセンス変異の活性化、異常なタンパク質融合が報告されている。例えば、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂは４０％の胃癌組織サンプルで高発現しており、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子の増幅は胃癌患者集団で最大で１５％の変異頻度を有している。ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子増幅のない患者と比較して、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子増幅によりＦＧＦＲ２ＩＩＩｂが過剰発現している胃癌患者は著しリンパ節転移に伴い、これは低分化胃腺癌と有意に関連しており、生存率が低いことから、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子増幅は胃癌患者の非常に悪い予後の指標である。ＦＧＦＲ２遺伝子の融合と再配列は、胆管癌患者の約９％～１４％に認められる。

【0005】

以上のことから、ＦＧＦＲ２は腫瘍治療の可能な標的となり得、治療中で抗体などの遮断剤を用いてＦＧＦとＦＧＦＲ２の結合を遮断することによって、ＦＧＦＲ／ＦＧＦシグナル伝達経路の機能を阻害する治療法は、他のチロシンキナーゼ（ＨＥＲ２やＥＧＦＲなど）陽性腫瘍においても有効であることが既に証明されている。

【発明の概要】

【0006】

本発明は、一連のＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する新規抗体を提供する。本発明はまた、本発明の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む医薬組成物、および本発明の抗体の胃癌、特にＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子の増幅がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現をもたらす胃癌を診断または治療するための医薬の製造のための使用を提供する。

【0007】

具体的には、本発明は抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を提供する。本発明の好ましい実施形態は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列とそれぞれ少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の同一性を有する、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片。より好ましくは、本発明は、ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に関する。

【0008】

本発明のより好ましい実施形態は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域が、ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域配列と少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは９５％、最も好ましくは９８％の同一性を有する、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片。さらに好ましくは、本発明は、ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２３、ＦＷＢ１９２４およびＦＷＢ１９２５からなる群から選択される抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域配列を含む、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に関する。

【0009】

本発明の特に好ましい実施形態は、本明細書でＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、およ
びＦＷＢ１９２５と称される抗体分子の３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体である。

【0010】

本発明はまた、本発明の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離された核酸を提供する。

【0011】

本発明はまた、本発明の単離された核酸を含む発現ベクターを提供する。本発明はまた、本発明の核酸または発現ベクターを含む宿主細胞を提供し、ここで宿主細胞は好ましくは真核生物宿主細胞であり、より好ましくは哺乳動物宿主細胞である。

【0012】

本発明はまた、第１の核酸および第２の核酸を含む組成物であって、前記第１の核酸が本発明に記載の抗体の重鎖をコードし、前記第２の核酸が本発明に記載の抗体の軽鎖をコードする、組成物を提供する。

【0013】

本発明は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ関連疾患または障害を治療するための医薬組成物であって、本発明の抗体またはその抗原結合断片、単離された核酸、発現ベクター、または宿主細胞を含み、さらに医薬用担体を含む、医薬組成物を提供する。好ましくは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ関連疾患または障害は、胃癌、特に、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子の増幅がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現をもたらす胃癌である。

【0014】

本発明はまた、抗体－薬物複合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）に関する。本発明はまた、抗体－薬物複合体および医薬担体を含む医薬組成物に関する。前記抗体－薬物複合体は、本発明の抗体またはその抗原結合断片と薬物とを含む。

【0015】

本発明はまた、ＦＧＦＲ２経路関連異常によって引き起こされる癌、好ましくは胃癌、最も好ましくはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子の増幅がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現をもたらす胃癌を治療するための医薬の製造のための、本発明に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または抗体－薬物結合体の使用に関する。

【発明を実施するための形態】

【0016】

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別途内容が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子」への言及は、２つ以上のかかる分子の組み合わせなどを任意に含む。

【0017】

本明細書で使用される「約」という用語は、当業者に容易に知られているそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。

【0018】

本明細書で使用される用語は、特に断らない限り、当該技術分野において一般的に知られている意味を有する。

【0019】

特に断らない限り、本明細書で言及されるＦＧＦＲ２ＩＩＩｂは、通常、ヒトＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを指し、本明細書のいくつかの部分では、「抗原」とも呼ばれる。本発明は、ヒトＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する抗体を提供する。抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ、特に哺乳動物（例えば、ヒト）のＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体であり得る。抗体分子は、単離された抗体分子であり得る。

【0020】

本出願に記載されるいずれの実施形態ではも、抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合し、
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合しなくてもよい。

【0021】

一実施形態では、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体分子は重鎖と軽鎖を含む。抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の抗原結合断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一本鎖抗体（ｓｃＦＶ）、およびダイアボディである。

【0022】

本発明の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体分子は、ヒトに有効な抗体分子、ヒト抗体分子、ヒト化抗体分子、ＣＤＲグラフト抗体分子、キメラ抗体分子、変異抗体分子、アフィニティー成熟抗体分子、脱免疫抗体分子、合成された抗体分子、またはインビトロで産生された抗体分子であり得る。一実施形態では、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体はヒト化抗体である。別の実施形態では、抗体分子は、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥの重鎖定常領域、特にＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の重鎖定常領域、より特にＩｇＧ１（例えば、ヒトＩｇＧ１）の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域を有する。重鎖定常領域は、一般にヒト定常領域またはヒト定常領域の改変型である。別の実施形態では、抗体分子は、ＬａｍｂｄａまたはＫａｐｐａ（好ましくは、ヒトＬａｍｂｄａなどのＬａｍｂｄａ）軽鎖定常領域などから選択される軽鎖定常領域を有する。一実施形態では、抗体分子の特性を改変するために、定常領域を改変（例えば変異）させることができる（例えば、以下の１つ以上を増加または減少させる： Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能）。

【0023】

本発明は、本発明に記載の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の胃癌を治療するための医薬の製造のための使用を提供する。いくつかの実施形態では、胃癌は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅は、＞３のＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（１０番染色体のセントロメア）比を含む。いくつかの実施形態では、癌はＦＧＦＲ２を過剰発現する。いくつかの実施形態では、＞３のＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ：ＣＥＮ１０（１０番染色体のセントロメア）比を含むＦＧＦＲ２増幅を含む癌について、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現の程度は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃの過剰発現の程度よりも高い。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む癌について、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現の正規化レベルは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発現のそれを２、３、５または１０倍上回る。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＧＵＳＢに対して正規化される。いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの発現または過剰発現は、ＩＨＣによって決定される。いくつかの実施形態では、ＩＨＣによる腫瘍細胞の１＋、２＋または３＋染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつかの実施形態では、ＩＨＣによる腫瘍細胞の２＋または３＋染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現を示す。

【0024】

抗体薬物複合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）は、生物学的活性を有する低分子薬物を化学的結合によってモノクローナル抗体に連結されてなるものであり、モノクローナル抗体は、低分子薬物を標的細胞に標的化輸送するビヒクルとして機能する。本発明の抗体－薬物複合体は、本発明の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を薬物に化学的に連結することにより製造される。

【0025】

ＦＧＦ／ＦＧＦＲシグナル伝達経路は、細胞の増殖、分化、アポトーシス、遊走に関与し、腫瘍細胞におけるＦＧＦＲの活性化変異やリガンド／レセプターの過剰発現は、そのシグナル伝達経路の持続的な活性化をもたらし、様々な悪性腫瘍の発生、増殖、予後不良などに密接に関与しているだけでなく、腫瘍の血管新生、腫瘍の浸潤、転移などにおいても重要な役割を果たしている。本発明の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂとそのリガンドであるＦＧＦ（ＦＧＦ１、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、およびＦＧＦ３、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ２２などのＦＧＦ７サブファミリーの他のメンバーを含むリガンド）への
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの結合を阻害することにより、腫瘍細胞の増殖、腫瘍血管内皮細胞の新生、分化、遊走を阻害する。

【0026】

表１および表２に、本発明の抗体の６つのＣＤＲの配列を示す。

【0027】

【表1】

【0028】

【表2】

【0029】

【表3】

【0030】

【表4】

【0031】

【表5】

【0032】

【表6】

【0033】

【表7】

【0034】

【表8】

【0035】

【表9】

【0036】

【表10】

【0037】

【表11】

【0038】

【表12】

【0039】

【表13】

【実施例】

【0040】

実施例１：遺伝子工学的手法による抗体の作製
下記表５および表６に示す重鎖および軽鎖のアミノ酸配列に基づいてそれぞれの遺伝子配列を合成し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）にクローニングした。二プラスミドをエレクトロポレーションによりＨＥＫ２９３細胞に共導入し、形質転換ＨＥＫ２９３細胞が抗体を発現するようにした。３７℃で１週間振盪培養した後、抗体を精製するために上清を回収した。精製はプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーカラムを用いて行い、精製後の抗体の純度はそれぞれＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＳＥＣ－ＨＰＬＣ検出法を用いて検出した。すべての抗体の純度は９５％以上であった。ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂと高い結合活性を持つ候補抗体を得るために、２５の候補抗体をＥＬＩＳＡでスクリーニングした。

【0041】

【表14】

【0042】

【表15】

【0043】

全部の抗体の重鎖定常領域はいずれも：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0044】

【表16】

【0045】

【表17】

【0046】

全部の抗体の軽鎖定常領域はいずれも：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0047】

実施例２： ＥＬＩＳＡ法による抗ＦＧＦＲ２抗体の結合活性の測定
まず、９６穴ＥＬＩＳＡプレートに２μｇ／ｍＬのｒｈＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ－Ｆｃ（組換えヒトＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ－Ｆｃ）１００μＬを４℃で一晩コートし、ブロッキング溶液（ＰＢＳＴ中３％ＢＳＡ）２５０μＬとともに３７℃で２時間インキュベートした後、ＰＢＳＴで３回洗浄した。試験抗体の１０倍希釈系列を１０μｇ／ｍＬから調製し、合計で８濃度点（ブランクコントロールを含む）とし、系列で希釈した抗体を１ウェル当たり１００μＬずつＥＬＩＳＡウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした後、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した。二次抗体として抗Ｆａｂ ＨＲＰコンジュゲートを加え、３７℃で１時間インキュベートした。最後にプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、１００μＬのＴＭＢを加えて１５分間反応させた。発色反応を １Ｎ 塩酸（５０ μＬ）で停止させ、４５０ ｎｍ の吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｍ５）で検出し、各抗体のヒト ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ に対する結合活性（ＥＣ５０）を算出した。表 ７ に示したように、スクリーニングにより、最終的に以降の実験に使用するための、ヒトＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ、ヒトＦＧＦＲ２βＩＩＩｂおよびマウスＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに強い結合活性を有するが、ヒトＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ、ＦＧＦＲ３ＩＩＩｂ、ＦＧＦＲ３ＩＩＩｃ、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ１ＩＩＩｂおよびＦＧＦＲ１ＩＩＩｃには結合しない抗体：ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２、ＦＷＢ１９２５を選出した。

【0048】

【表18】

【0049】

実施例３：ＦＡＣＳによる抗ＦＧＦＲ２抗体の結合活性の測定
試験抗体は、ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９０６、ＦＷＢ１９０７、ＦＷＢ１９０８、ＦＷＢ１９１０、ＦＷＢ１９１１、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１３、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１８、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２０、ＦＷＢ１９２１、ＦＷＢ１９２２およびＦＷＢ１９２５とした。ウェルあたり２×１０５個の細胞（ＡＴＣＣから購入したＫＡＴＯ ＩＩＩとＳＮＵ１６、それらの細胞表面にＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ受容体が高発現している）をマイクロプレートに集め、遠心分離し、２％ＦＢＳを含むＰＢＳで再懸濁した。抗体は３０μｇ／ｍＬを初期濃度として５倍系列で希釈し、対応する濃度の抗体またはブランクコントロールを１００μＬずつ各ウェルの細胞に加え、４℃で１時間インキュベートした。細胞を２％ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、Ａｌｅｘａ ４８８ ヤギ抗ヒト ＩｇＧを添加し、４℃、暗所で１時間インキュベートした。細胞を２％ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、２％ＦＢＳ含有ＰＢＳ１００μＬで再懸濁し、最後にフローサイトメーターで細胞表面の蛍光シグナルを検出した。スクリーニングにより最終的に以降の実験に使用するための、ＫＡＴＯ ＩＩＩおよびＳＮＵ１６に対して強い結合活性を有するＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１９
、ＦＷＢ１９２１およびＦＷＢ１９２５を選出した。

【0050】

【表19】

【0051】

実施例４：ＦＡＣＳによる、細胞表面受容体ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂとそのリガンドＦＧＦ７との結合を阻害する抗体の活性の測定
試験抗体は、ＦＷＢ１９０４、ＦＷＢ１９０５、ＦＷＢ１９１２、ＦＷＢ１９１４、ＦＷＢ１９１５、ＦＷＢ１９１６、ＦＷＢ１９１９、ＦＷＢ１９２１およびＦＷＢ１９２５とした。ウェルあたり３×１０５個の細胞（ＫＡＴＯ ＩＩＩおよびＳＮＵ１６）をマイクロプレートに集め、遠心分離し、２％ＦＢＳを含むＰＢＳで再懸濁した。抗体を３０μｇ／ｍＬを初期濃度として５倍系列で希釈し、対応する濃度の抗体またはブランクコントロールを１００μＬずつ各ウェルの細胞に加え、４℃で０．５時間インキュベートした後、０．３２μｇ／ｍＬのビオチン標識ＦＧＦ７を１００μＬずつ加え、４℃で１時間インキュベートした。細胞を２％ＦＢＳを含むＰＢＳで２回洗浄した後、Ａｌｅｘａ ４８８ストレプトアビジンを添加し、４℃、暗所で０．５時間インキュベートした。細胞を２％
ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、２％ＦＢＳ含有ＰＢＳ １００μＬで再懸濁し、最後にフローサイトメーターで細胞表面の蛍光シグナルを検出した。

【0052】

【表20】

【国際調査報告】