特表 2024-501643 化学的に定義された血清アルブミン代替物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-15

(54)【発明の名称】化学的に定義された血清アルブミン代替物

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/00 20060101AFI20240105BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20240105BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20240105BHJP

   A61K 35/30 20150101ALI20240105BHJP

   A61K 35/34 20150101ALI20240105BHJP

   A61K 35/39 20150101ALI20240105BHJP

   C07K 5/113 20060101ALI20240105BHJP

   C12N 9/00 20060101ALN20240105BHJP

【ＦＩ】

C12N5/00

A61K35/12

A61K35/28

A61K35/30

A61K35/34

A61K35/39

C07K5/113

C12N9/00 ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023536509

(86)(22)【出願日】2021-12-15

(85)【翻訳文提出日】2023-08-10

(86)【国際出願番号】 US2021063618

(87)【国際公開番号】W WO2022132974

(87)【国際公開日】2022-06-23

(31)【優先権主張番号】63/125,619

(32)【優先日】2020-12-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】502221282

【氏名又は名称】ライフ テクノロジーズ コーポレーション

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100123766

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 七重

(74)【代理人】

【識別番号】100136249

【弁理士】

【氏名又は名称】星野 貴光

(72)【発明者】

【氏名】ジェシー ジョエル

(72)【発明者】

【氏名】クニンガー デヴィッド

(72)【発明者】

【氏名】シン スジュン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA93X

4B065BB16

4B065BB19

4B065BB20

4B065BB21

4B065BB22

4B065BB31

4B065BB32

4B065BC50

4C087AA01

4C087BB44

4C087BB45

4C087BB47

4C087BB51

4C087BB56

4C087BB64

4C087NA03

4C087NA20

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA13

4H045BA14

4H045BA16

4H045BA17

4H045DA70

4H045DA89

4H045EA60

4H045FA30

4H045FA33

4H045GA21

(57)【要約】

本明細書では、とりわけ、細胞培養培地中のアルブミンを置換又は部分的に置換する化学的に定義された成分及び組成物が提供される。成分及び組成物は、細胞培養を支持するか、細胞を保護するか、又は培養細胞の生存率を増強し得る。アルブミンを含有する細胞培養培地中で使用するための化学的に定義された培養培地サプリメントが更に提供される。化学的に定義された培養培地サプリメントは、アルブミン誘導性毒性から細胞を救済し得る。
【選択図】図１１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチドを含む、細胞培養培地。

【請求項2】

前記ペプチドが合成的に作製される、請求項１に記載の細胞培養培地。

【請求項3】

前記ペプチドが少なくとも４個のアミノ酸残基を含む、請求項１又は２に記載の細胞培養培地。

【請求項4】

前記ペプチドが、少なくとも１個の負に荷電した残基を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項5】

前記ペプチドが、少なくとも１個の正に荷電した残基を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項6】

前記ペプチドが、ＤＡＨＫ（配列番号１）、ＤＴＨＫ（配列番号２）、及びＥＡＨＫ（配列番号７）からなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項7】

前記ペプチドが、約５０μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１～６のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項8】

前記培地が、血清及びアルブミンを含まない、請求項１～７のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項9】

スーパーオキシドスカベンジャーを更に含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項10】

前記スーパーオキシドスカベンジャーが、（２，２，６，６－テトラメチル－１－イル）オキシル若しくはその変異体を含有する化合物、又はフラボノイドを含む、請求項９に記載の細胞培養培地。

【請求項11】

前記スーパーオキシドスカベンジャーが、ＴＥＭＰＯ、ＴＥＭＰＯＬ、又はそれらの変異体を含む、請求項１０に記載の細胞培養培地。

【請求項12】

前記スーパーオキシドスカベンジャーが、細胞にとってネイティブではない化合物を含む、請求項９に記載の細胞培養培地。

【請求項13】

前記スーパーオキシドスカベンジャーが、Ｍｉｔｏ－ＴＥＭＰＯを含む、請求項９又は１０に記載の細胞培養培地。

【請求項14】

ビタミンＥ又はその類似体を更に含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項15】

前記ビタミンＥ類似体が、６－クロマノール基部分を含む、請求項１４に記載の細胞培養培地。

【請求項16】

前記ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体が、α－トコフェロール、β－トコフェロール、γ－トコフェロール、δ－トコフェロール、α－トコトリエノール、β－トコトリエノール、δ－トコトリエノール、γ－トコトリエノール、コハク酸α－トコペロール、α－トコフェロールモノグルコシド、γ－トコフェロールＮ，Ｎ－ジメチルグリシンエステル、又はそれらの置換体、純粋なアイソフォーム、ラセミ混合物、及び／若しくは混合物を含む、請求項１４に記載の細胞培養培地。

【請求項17】

前記ビタミンＥ類似体が、水溶性である、請求項１４に記載の細胞培養培地。

【請求項18】

前記ビタミンＥ類似体が、６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸を含む、請求項１５に記載の細胞培養培地。

【請求項19】

過酸化水素還元試薬を更に含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項20】

前記過酸化水素還元剤が、グルタチオン、Ｎ－アセチルシステイン、システイン、亜セレン酸ナトリウム、マンニトール、フラボノイド、リポ酸、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１９に記載の細胞培養培地。

【請求項21】

安定化剤分子を更に含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項22】

前記安定化剤分子が、トレハロース又はマンニトールである、請求項２１に記載の細胞培養培地。

【請求項23】

前記細胞培養培地が、平衡塩類溶液、基礎培地、及び／又は複合培地のうちの少なくとも１つを含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項24】

前記細胞培養培地が、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ハンクス平衡塩類溶液、アール平衡塩類溶液、ＭＥＭ、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ、ＤＭＥＭ、ＣＴＳ ＫｎｏｃｋＯｕｔ ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ－１６４０、ＩＭＤＭ、ハムＦ１２、Ｆ－１２ Ｋ、Ｆ－１０、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ、マッコイ５Ａ培地、ライボビッツＬ－１５、Ｍｅｄｉｕｍ １９９、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａ、Ｂｒａｉｎｐｈｙｓ、ＧＭＥＭ、及び／又はウィリアムＥ培地のうちの少なくとも１つを含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の細胞培養培地。

【請求項25】

スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチドを含む、細胞培養サプリメント。

【請求項26】

前記ペプチドが合成的に作製される、請求項２５に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項27】

前記ペプチドが少なくとも４個のアミノ酸残基を含む、請求項２５又は２６に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項28】

前記ペプチドが、少なくとも１個の負に荷電した残基を含む、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項29】

前記ペプチドが、少なくとも１個の正に荷電した残基を含む、請求項２１～２８のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項30】

前記ペプチドが、ＤＡＨＫ（配列番号１）及びＤＴＨＫ（配列番号２）からなる群から選択される、請求項２５～２９のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項31】

スーパーオキシドスカベンジャーを更に含む、請求項２５～３０のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項32】

前記スーパーオキシドスカベンジャーが、（２，２，６，６－テトラメチル－１－イル）オキシル若しくはその変異体を含有する化合物、又はフラボノイドを含む、請求項３１に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項33】

前記スーパーオキシドスカベンジャーが、ＴＥＭＰＯ、ＴＥＭＰＯＬ、又はそれらの変異体を含む、請求項３２に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項34】

前記スーパーオキシドスカベンジャーが、細胞にとってネイティブではない化合物を含む、請求項３１に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項35】

前記スーパーオキシドスカベンジャーが、Ｍｉｔｏ－ＴＥＭＰＯを含む、請求項３１又は３２に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項36】

ビタミンＥ又はその類似体を更に含む、請求項２５～３５のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項37】

前記ビタミンＥ類似体が、６－クロマノール基部分を含む、請求項３６に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項38】

前記ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体が、α－トコフェロール、β－トコフェロール、γ－トコフェロール、δ－トコフェロール、α－トコトリエノール、β－トコトリエノール、δ－トコトリエノール、γ－トコトリエノール、コハク酸α－トコペロール、α－トコフェロールモノグルコシド、γ－トコフェロールＮ，Ｎ－ジメチルグリシンエステル、又はそれらの置換体、純粋なアイソフォーム、ラセミ混合物、及び／若しくは混合物を含む、請求項３６に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項39】

前記ビタミンＥ類似体が、水溶性である、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項40】

前記ビタミンＥ類似体が、６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸を含む、請求項３７に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項41】

過酸化水素還元試薬を更に含む、請求項２５～４０のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項42】

前記過酸化水素還元剤が、グルタチオン、Ｎ－アセチルシステイン、システイン、亜セレン酸ナトリウム、マンニトール、フラボノイド、リポ酸、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４１に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項43】

安定化剤分子を更に含む、請求項２５～４２のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項44】

前記安定化剤分子が、トレハロース又はマンニトールである、請求項４３に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項45】

前記細胞培養サプリメントが、血清を含まない、請求項２５～４４のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項46】

前記細胞培養サプリメントが、アルブミンを含まない、請求項２５～４５のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項47】

前記サプリメントが、血清を含まない細胞培養培地に添加される、請求項２５～４６のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメント。

【請求項48】

（ｉ）スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチド、
（ｉｉ）ビタミンＥ又はその類似体、並びに
（ｉｉｉ）スーパーオキシドスカベンジャー、を含む、細胞培養サプリメント。

【請求項49】

培養中の細胞を成長させるための方法であって、請求項１～２４のいずれか一項に記載の細胞培養培地中で前記細胞を成長させることを含む、方法。

【請求項50】

培養中の細胞を成長させる方法であって、請求項２５～４８のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメントが補充された細胞培養培地中で前記細胞を成長させることを含む、方法。

【請求項51】

アルブミン誘導性毒性から細胞を救済する方法であって、アルブミン誘導性毒性を示す細胞を、請求項２５～４８のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメントと接触させることを含む、方法。

【請求項52】

培養中の細胞を拡張するための方法であって、請求項１～２４のいずれか一項に記載の細胞培養培地中で、前記細胞を、血清を含まず、アルブミンを含まない細胞培養培地と接触させることを含む、方法。

【請求項53】

細胞を酸化ストレスから回復させるための方法であって、前記細胞を、請求項２５～４８のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメントと接触させること、又は前記細胞を、請求項１～２４のいずれか一項に記載の細胞培養培地中で成長させることを含む、方法。

【請求項54】

前記酸化ストレスが、前記細胞の凍結によるものである、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記酸化ストレスが、脂質が豊富な条件への曝露であった、請求項５３に記載の方法。

【請求項56】

前記細胞が、治療用細胞である、請求項４９～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記細胞が、間葉系幹細胞、神経前駆細胞、網膜色素上皮、膵臓ベータ細胞、心筋細胞、ＨＥＫ－２９３細胞、及びＣＨＯ細胞からなる群から選択される、請求項４９～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

血清を含まない細胞培養培地及び請求項２５～４６のいずれか一項に記載の細胞培養サプリメントを含む、細胞培養キット。

【請求項59】

前記細胞培養サプリメントが、
（ｉ）スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチド、
（ｉｉ）ビタミンＥ又はその類似体、並びに
（ｉｉｉ）スーパーオキシドスカベンジャー、を含み、
（ｉ）～（ｉｉｉ）が、別々の容器で提供される、請求項５８に記載の細胞培養キット。

【請求項60】

前記細胞培養サプリメントが、
（ｉ）スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチド、
（ｉｉ）ビタミンＥ又はその類似体、並びに
（ｉｉｉ）スーパーオキシドスカベンジャー、を含み、
（ｉ）～（ｉｉｉ）が、単一の容器で提供される、請求項５８に記載のキット。

【請求項61】

過酸化水素還元試薬を更に含む、請求項５９又は６０に記載のキット。

【請求項62】

前記過酸化水素還元試薬が、グルタチオン及び／若しくはリポ酸、又はその変異体を含む、請求項６１に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願）
本出願は、２０２０年１２月１５日に出願された米国仮特許出願第６３／１２５，６１９号（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）に対する優先権の利益を主張する。

【0002】

（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２１年１２月９日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、ＬＴ０１５２６ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは９，７８８バイトである。

【背景技術】

【0003】

約６６キロダルトンの分子量を有する単一ポリペプチドであるアルブミンは、脊椎動物の血清中で最も豊富なタンパク質である。アルブミンは、細胞培養の重要な成分として機能し、拡張する細胞に有益な特性を付与する。しかしながら、アルブミンはまた、細胞培養性能における変動性の主要な源として寄与する。例えば、アルブミンの化学組成は、単一のメーカーであっても、ロット間で異なる。アルブミンは、ホルモン、ビタミン、及び酵素を含む血液からの多くの物質を運び、細胞に対して毒性である成分（例えば、遷移金属）、又は細胞生存率を改善する成分で汚染され得る。これらの汚染物質は全て、細胞培養の生存率に影響を及ぼし、生物学的研究において矛盾を引き起こす可能性がある。更に、培地成分とアルブミンとの間の相互作用を制御することは困難であり、アルブミンによって培地成分が隔離され、培養細胞へのそれらの接近性を制限する可能性がある。

【0004】

上記を考慮すると、細胞培養培地中で使用するための化学的に定義されたアルブミン代替物は、例えば、アルブミン誘導性毒性を救済するために、アルブミンを含有する細胞培養培地中で使用するための化学的に定義された培養培地サプリメントと同様に、非常に望ましい。本明細書では、当技術分野におけるこれらの問題及び他の問題に対する解決策が提供される。

【発明の概要】

【0005】

本明細書に開示される実施形態は、一般に、アルブミンについての化学的に定義された代替物又は部分的な代替物を含む組成物、及びその使用方法に関する。組成物は、細胞培養、例えば、ストレスに対して脆弱な細胞の細胞培養を支持するための培養培地又はサプリメントであり得る。組成物は、細胞、例えば、幹細胞、神経細胞及び乏突起膠細胞を、凍結／解凍サイクル、輸送、及びトランスフェクションを含む実験手順を含むプロセスによって引き起こされる損傷から保護することができる。本明細書で提供される培地又はサプリメントは、例えば、アルブミン誘導性毒性から細胞を救済するために、アルブミンを含む細胞培養培地中で使用され得る。本明細書で提供される培地又はサプリメントは、培養細胞の生存率を更に増強し得る。

【0006】

一態様では、スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチドを含む細胞培養培地が提供される。実施形態では、細胞培養培地は、ビタミンＥ類似体、過酸化水素還元試薬、及びスーパーオキシドスカベンジャーのうちの１つ以上を更に含む。

【0007】

一態様では、スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチドを含む細胞培養サプリメントが提供される。実施形態では、細胞培養サプリメントは、ビタミンＥ類似体、過酸化水素還元試薬、及びスーパーオキシドスカベンジャーのうちの１つ以上を更に含む。

【0008】

一態様では、培養中の細胞を成長させるための方法が提供され、方法は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養培地中で細胞を成長させることを含む。

【0009】

一態様では、培養中の細胞を成長させる方法が提供され、方法は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントが補充された細胞培養培地中で細胞を成長させることを含む。

【0010】

一態様では、アルブミン誘導性毒性を示す細胞を、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントと接触させることを含む、アルブミン誘導性毒性から細胞を救済する方法が提供される。

【0011】

一態様では、培養中の細胞を拡張するための方法が提供され、方法は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養培地中で、細胞を血清を含まず、アルブミンを含まない細胞培養培地と接触させることを含む。

【0012】

一態様では、酸化ストレスから細胞を回復させるための方法が提供され、方法は、細胞を、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントと接触させること、又はその実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養培地中で細胞を成長させることを含む。

【0013】

一態様では、細胞培養サプリメントであって、（ｉ）スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチド、（ｉｉ）ビタミンＥ又はその類似体、並びに（ｉｉｉ）スーパーオキシドスカベンジャー、を含む、細胞培養サプリメントが提供される。

【0014】

一態様では、細胞培養キットが提供され、細胞培養キットは、血清を含まない細胞培養培地、及びその実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントを含む。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1A】Ｂ２７培地中で成長させた様々な細胞培養物中に存在する場合、市販のアルブミン間に性能差が存在することを示す。

【図1B】異なるＢ２７培養成分とＢＳＡとの間の相互作用、及びニューロン細胞生存率に対する相互作用の効果を示す主な効果プロットを示す。

【図1C】異なるＢ２７培養成分とＢＳＡとの間の相互作用、及びニューロン細胞生存率に対する相互作用の効果を示す主な効果プロットを示す。

【図1D】異なるＢ２７培養成分と組換えヒト血清アルブミン（recombinant human serum albumin、ｒＨＳＡ）との間の相互作用、及びニューロン細胞生存率に対する相互作用の効果を示す主な効果プロットを示す。

【図1E】異なるＢ２７培養成分と組換えヒト血清アルブミン（recombinant human serum albumin、ｒＨＳＡ）との間の相互作用、及びニューロン細胞生存率に対する相互作用の効果を示す主な効果プロットを示す。

【図1F】広範な濃度のｒＨＳＡでの異なるＢ２７培養成分間の相互作用、及びニューロン細胞生存率に対する相互作用の効果を示す主な効果プロットを示す。

【図1G】広範な濃度のｒＨＳＡでの異なるＢ２７培養成分間の相互作用、及びニューロン細胞生存率に対する相互作用の効果を示す主な効果プロットを示す。

【図1H】広範な濃度のｒＨＳＡでの異なるＢ２７培養成分間の相互作用、及びニューロン細胞生存率に対する相互作用の効果を示す主な効果プロットを示す。

【図1I】広範な濃度のｒＨＳＡでの異なるＢ２７培養成分間の相互作用、及びニューロン細胞生存率に対する相互作用の効果を示す主な効果プロットを示す。

【図1J】広範な濃度のｒＨＳＡでの異なるＢ２７培養成分間の相互作用、及びニューロン細胞生存率に対する相互作用の効果を示す主な効果プロットを示す。

【図2A】ＢＳＡの異なるロットと供給源との間で観察された成分変動を示す。

【図2B】ＢＳＡ１及びＢＳＡ２の存在下でのラットニューロン生存（上パネル）、並びにラットニューロン生存に対する添加鉄の効果（下パネル）を比較する棒グラフである。

【図2C】培養中の抗酸化剤の添加が鉄誘導性毒性を防止及び／又は逆転させることを示す棒グラフである。

【図2D】幹細胞増殖に対する異なるアルブミン供給源の効果を示す棒グラフである。マウス胚性幹細胞（mouse embryonic stem cells、ｍＥＳＣ）の結果を図２Ｄに示し、ヒト神経幹細胞（human neural stem cells、ｈＮＳＣ）の結果を図２Ｅに示す。

【図2E】幹細胞増殖に対する異なるアルブミン供給源の効果を示す棒グラフである。マウス胚性幹細胞（mouse embryonic stem cells、ｍＥＳＣ）の結果を図２Ｄに示し、ヒト神経幹細胞（human neural stem cells、ｈＮＳＣ）の結果を図２Ｅに示す。

【図2F】Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ６培地中で成長させたヒト多能性幹細胞におけるフォークヘッドボックスタンパク質Ｇ１（forkhead box protein G1、ＦＯＸＧ１）及びペアードボックスタンパク質（Paired box protein、ＰＡＸ－６）の発現に対する異なる供給源由来のアルブミンの効果を示す。

【図3】異なる供給源由来のアルブミン相同体の総還元活性の変動を示す棒グラフである。

【図4A】異なる供給源由来のアルブミン相同体における種々のスーパーオキシドジスムターゼ（superoxide dismutase、ＳＯＤ）活性を示す棒グラフである。

【図4B】Ｍｉｔｏ－Ｔｅｍｐｏがある範囲の濃度でＳＯＤ活性を有することを示す棒グラフである。

【図5】Ｍｉｔｏ－Ｔｅｍｐｏが活性酸素種（reactive oxygen species、ＲＯＳ）によって誘導される細胞ストレスを減少させることができることを示す棒グラフである。

【図6】アルブミン相同体がカタラーゼ活性を有することを示す棒グラフである。

【図7】様々なアルブミン相同体がチオールベースの抗酸化活性を有することを示す棒グラフである。

【図8】グルタチオン及びリポ酸を含む化学的に定義された成分が、Ｈ₂Ｏ₂を除去して、培養中のラットニューロン生存率を改善することができることを示す。

【図9】ラットニューロンの培養培地への銅の添加がニューロン細胞死をもたらすことを示す棒グラフである。

【図10】ある濃度のペプチドＣはＨＳＡの金属結合特性を保持するが、ペプチドＡ及びペプチドＢは試験した濃度で金属をキレートしないことを示す棒グラフである。

【図11】テトラペプチドＤＡＨＫ（配列番号１）（第１のロット、第２のロット、ＢＳＡペプチド）がＨＳＡと同様の金属結合活性を有するが、スクランブル配列（スクランブル）は有さないことを示す棒グラフである。

【図12】ペプチドＣが、培養ラットニューロン細胞における銅誘導性毒性を救済及び／又は防止することを示す棒グラフである。

【図13】ペプチドＣ（ＤＡＨＫ（配列番号１））が、マウス胚性幹細胞を銅誘導性ストレスから濃度依存的に救済することを示す棒グラフである。図は配列番号１を開示する。

【図14】銅の存在が培養中のＨＥＫ－２９３細胞の細胞生存率を低下させ、ペプチドＣが銅誘導性ストレスから細胞を救済することを示す棒グラフである。図は配列番号１を開示する。

【図15】ＢＳＡ及びＨＳＡの様々なロット及び供給源が、第二鉄還元抗酸化力（Ferric reducing antioxidant power、ＦＲＡＰ）アッセイによって測定されるように、様々な抗酸化レベル及び活性を有することを示す棒グラフである。

【図16A】様々な供給源からのアルブミンが異なるレベルの抗酸化剤ビタミンＥを含むことを示す棒グラフである。

【図16B】ラット皮質ニューロン（Rat cortical neuron、ＲＣＮ）細胞生存に対するビタミンＥ（図１６Ｂ）及びトロロックス（図１６Ｃ）の効果を示す棒グラフである。

【図16C】ラット皮質ニューロン（Rat cortical neuron、ＲＣＮ）細胞生存に対するビタミンＥ（図１６Ｂ）及びトロロックス（図１６Ｃ）の効果を示す棒グラフである。

【図17A】ＩＣＣ（図１７Ａ）及びｑＰＣＲ（図１７Ｂ）によって測定した、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ６培養培地中で成長させたヒト多能性幹細胞におけるＦｏｘＧ１発現に対するペプチドＣの効果を示す棒グラフである。

【図17B】ＩＣＣ（図１７Ａ）及びｑＰＣＲ（図１７Ｂ）によって測定した、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ６培養培地中で成長させたヒト多能性幹細胞におけるＦｏｘＧ１発現に対するペプチドＣの効果を示す棒グラフである。

【図18A】ｒＨＳＡがＨＥＫ－２９３細胞（図１８Ａ）及びＨｅＬａ細胞（図１８Ｂ）に対して毒性であること、並びに本明細書に開示される化学的に定義されたサプリメントがｒＨＳＡ誘導性毒性からＨＥＫ－２９３及びＨｅＬａ細胞を救済することを示す棒グラフである。

【図18B】ｒＨＳＡがＨＥＫ－２９３細胞（図１８Ａ）及びＨｅＬａ細胞（図１８Ｂ）に対して毒性であること、並びに本明細書に開示される化学的に定義されたサプリメントがｒＨＳＡ誘導性毒性からＨＥＫ－２９３及びＨｅＬａ細胞を救済することを示す棒グラフである。

【図19A】一次ニューロンのニューロン生存率（図１９Ａ）及び神経突起長さ（図１９Ｂ）が、本明細書に開示される化学的に定義されたサプリメントの存在下で増強されることを示す棒グラフである。

【図19B】一次ニューロンのニューロン生存率（図１９Ａ）及び神経突起長さ（図１９Ｂ）が、本明細書に開示される化学的に定義されたサプリメントの存在下で増強されることを示す棒グラフである。

【図20】ラットニューロン細胞成長に対する組換えＨＳＡ及び種々の長さの種々のペプチドＣ由来ペプチドの効果を比較するグラフである。図は、出現順に、それぞれ、配列番号１、１０、１１、１４、１２、１３、及び１５～１７を開示する。

【図21】ラットニューロン細胞成長に対する組換えＨＳＡ及び種々のペプチドＣ由来ペプチドの効果を比較するグラフである。ペプチドＣ由来ペプチドは、ペプチドＣの電荷特性を保持する。図は、出現順に、それぞれ、配列番号１、７、８、１９及び９を開示する。

【発明を実施するための形態】

【0016】

この説明を読んだ後、様々な代替の実施形態及び代替の用途で本開示をどのように実施するかが当業者に明らかになるであろう。しかしながら、本発明の全ての様々な実施形態は、本明細書では説明されない。ここに提示された実施形態は、限定ではなく、一例としてのみ提示されていることが理解されよう。したがって、様々な代替の実施形態のこの詳細な説明は、本明細書で記載されるように、本開示の範囲又は広さを限定するように解釈されるべきではない。

【0017】

本技術が開示及び説明される前に、以下に説明される態様は、特定の組成物に限定されず、そのような組成物を調製する方法、又はそのようなものとしての使用は、もちろん変化し得ることを理解されたい。本明細書で使用される専門用語は、特定の態様のみを説明するためのものであり、限定するようには意図されていないことが理解される。

【0018】

詳細な説明は、読者の便宜のためにのみ様々なセクションに分割されており、任意のセクションに見られる開示は、別のセクションの開示と組み合わせることができる。タイトル又はサブタイトルは、読者の便宜のために本明細書で使用することができ、本開示の範囲に影響を与えることを意図していない。

【0019】

定義
別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書及び以下の特許請求の範囲では、本明細書で定義される多数の用語を参照する。

【0020】

本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図するものではない。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを示さない限り、複数形も含むことを意図している。

【0021】

「任意の」又は「任意に」とは、後に記載される事象又は状況が発生する可能性がある、又は発生しない可能性があることを意味し、その記載には、その事象又は状況が発生する実例及び発生しない実例が含まれる。

【0022】

「約」という用語は、数値表記、例えば、温度、時間、量、濃度、及び範囲を含むそのような他のものの前に使用される場合、（＋）又は（－）１０％、５％、１％、又はその間の任意の部分範囲又は部分値によって変動し得る近似を示している。好ましくは、「約」という用語は、量に関して使用される場合、量が＋／－１０％変動し得ることを意味する。

【0023】

「含むこと（comprising）」又は「含む（comprises）」は、組成物及び方法が記載された要素を含むが、他のものを除外しないことを意味することを意図している。組成物及び方法を定義するために使用される場合、「本質的にからなる（consisting essentially）」とは、述べられた目的のために、組み合わせにとって本質的に重要な他の要素を除外することを意味するものとする。したがって、本明細書で定義される要素から本質的になる組成物は、特許請求される発明の基本的及び新規の特性に実質的に影響を及ぼさない他の材料又はステップを除外しないであろう。「からなる（consisting of）」とは、他の成分の微量要素及び実質的な方法ステップを超えて除外することを意味するものとする。これらの移行用語のそれぞれによって定義される実施形態は、本開示の範囲内である。

【0024】

「アミノ酸」という用語は、天然に存在する及び合成のアミノ酸、並びに天然に存在するアミノ酸に類似の様式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによってコードされたもの、並びに後から修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート、及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合したα炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニン、メチルスルホニウムを指す。このような類似体は、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）又は修飾ペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を保持している。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と類似の様式で機能する化合物を指す。

【0025】

アミノ酸は、本明細書では、一般に知られている３文字記号又はＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎが推奨する１文字記号のいずれかで言及され得る。同様に、ヌクレオチドは、一般に受け入れられている１文字コードで言及され得る。

【0026】

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書では互換的に使用され、ここで、ポリマーはアミノ酸から構成されない部分に任意選択的にコンジュゲートされてもよい。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、並びに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーに該当する。

【0027】

「組換えタンパク質」とは、宿主細胞に導入された核酸によってコードされるタンパク質を指す。宿主細胞は、核酸を発現する。「核酸を発現する」という用語は、「核酸によりコードされるＲＮＡからタンパク質を発現すること」と同義である。本明細書に使用される「タンパク質」とは、重合されたアミノ酸、例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質などを広く指す。

【0028】

「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸配列と核酸配列との両方に該当する。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体は、同一若しくは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸、又は核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列を指す。アミノ酸配列については、コードされた配列における単一のアミノ酸又はごく一部のアミノ酸を改変する、付加する、又は欠失させる、核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質配列への個々の置換、欠失、又は付加は、アミノ酸が化学的に類似したアミノ酸に置換される「保存的に修飾された変異体」であることを、当業者であれば認識するであろう。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該技術分野で周知である。そのような保存的に修飾された変異体は、本発明の多型変異体、種間相同体、及び対立遺伝子に加えてのものであり、これらを除外しない。

【0029】

以下の８つの群はそれぞれ、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する：（１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、（２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、（３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、（４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、（５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、（６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、（７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及び（８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照されたい）。

【0030】

「配列同一性の割合」は、比較ウィンドウで最適に整列された２つの配列を比較することで決定され、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチド又はポリペプチド配列の一部は、２つの配列の最適な整列について、参照配列（付加又は欠失を含まない）と比較して、付加又は欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。割合は、一致する位置の数を得るために両方の配列で同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が生じる位置の数を決定し、一致する位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で割り、その結果に１００を掛けて、配列同一性の割合を求めることにより計算される。

【0031】

２つ以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈における「同一」又は「同一性」パーセントという用語は、配列比較アルゴリズムを使用するか、又は手動整列及び目視検査によって測定した場合、比較ウィンドウにわたって、又は指定された領域にわたって最大の対応が得られるように比較及び整列されたときに、同一であるか、又は同じ特定の割合のアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを有する（すなわち、本発明の全ポリペプチド配列又は本発明のポリペプチドの個々のドメインの指定された領域にわたって、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性）２つ以上の配列又は部分配列を指す。少なくとも約８０％同一であるそのような配列は、「実質的に同一」であると言われる。いくつかの実施形態では、２つの配列は１００％同一である。特定の実施形態では、２つの配列は、配列のうちの１つの全長にわたって１００％同一である（例えば、配列が異なる長さを有する場合、２つの配列のうちの短い方）。種々の実施形態では、同一性は、試験配列の相補体を指し得る。いくつかの実施形態では、同一性は、少なくとも約１０～約１００、約２０～約７５、約３０～約５０アミノ酸又はヌクレオチド長である領域にわたって存在する。特定の実施形態では、同一性は、少なくとも約５０アミノ酸長である領域にわたって、又はより好ましくは、１００～５００、１００～２００、１５０～２００、１７５～２００、１７５～２２５、１７５～２５０、２００～２２５、２００～２５０以上のアミノ酸長である領域にわたって存在する。

【0032】

アミノ酸又はヌクレオチド塩基の「位置」は、Ｎ末端（又は５’末端）に対する位置に基づいて、参照配列内の各アミノ酸（又はヌクレオチド塩基）を順番に識別する番号により示される。最適な整列を決定する際に考慮しなければならない欠失、挿入、短縮、融合などに起因して、一般に、Ｎ末端から単純に数えることによって決定される試験配列のアミノ酸残基番号は、必ずしも参照配列内のその対応する位置の番号と同じである必要はない。例えば、変異体が整列した参照配列に対して欠失を有する場合、欠失部位の参照配列の位置に対応する変異体にはアミノ酸が存在しないことになる。整列した参照配列に挿入がある場合、その挿入は参照配列の番号付きアミノ酸位置に対応しないことになる。短縮又は融合の場合、参照配列又は整列配列のいずれかに、対応する配列のアミノ酸に対応しないアミノ酸の伸長が存在し得る。

【0033】

所与のアミノ酸又はポリヌクレオチド配列の番号付けの文脈で使用する場合、「に関連して番号付け」又は「に対応する」という用語は、所与のアミノ酸又はポリヌクレオチド配列が参照配列と比較されるときの指定された参照配列の残基の番号付けを指す。タンパク質中のアミノ酸残基は、所与の残基と同じタンパク質内の必須構造位置を占有する場合、所与の残基に「対応する」。

【0034】

本明細書に記載の特定のタンパク質（例えば、ＨＳＡ）の場合、指名されたタンパク質には、タンパク質活性を（例えば、天然タンパク質と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の活性内に）維持する、タンパク質の天然に存在する形態、又は変異体若しくは相同体のうちのいずれかが含まれる。態様では、変異体又は相同体は、天然に存在する形態と比較して、配列全体にわたって、又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０、又は２００個の連続アミノ酸部分）で、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。態様では、タンパク質は、そのＮＣＢＩ配列参照により識別されるタンパク質である。態様では、タンパク質は、そのＮＣＢＩ配列参照又はその機能的フラグメント若しくは相同体により識別されるタンパク質である。

【0035】

配列比較では、典型的には、１つの配列が参照配列として機能し、これに対して試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列をコンピュータに入力し、必要に応じて部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。好ましくは、初期設定のプログラムパラメータを使用してもよく、あるいは代替のパラメータを指定してもよい。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。

【0036】

「比較ウィンドウ」は、２つの配列が最適に整列された後に、同じ数の連続する位置の参照配列と比較され得る、いくつかの数の連続する位置のうちのいずれか１つのセグメント（例えば、少なくとも約１０～約１００、約２０～約７５、約３０～約５０、１００～５００、１００～２００、１５０～２００、１７５～２００、１７５～２２５、１７５～２５０、２００～２２５、２００～２５０）を指す。種々の実施形態では、比較ウィンドウは、２つの整列された配列の一方又は両方の全長である。いくつかの実施形態では、比較される２つの配列は、異なる長さを含み、比較ウィンドウは、２つの配列の長い方又は短い方の全長である。異なる長さの２つの配列に関する特定の実施形態では、比較ウィンドウは、２つの配列のうちの短い方の全長を含む。異なる長さの２つの配列に関するいくつかの実施形態では、比較ウィンドウは、２つの配列の長い方の全長を含む。

【0037】

比較のための配列の整列方法は、当該技術分野で周知である。比較のための配列の最適な整列は、例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性整列アルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の同様の方法についての探求により、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）により、又は手動整列及び目視検査（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５補遺））により、実行することができる。

【0038】

配列同一性及び配列類似性パーセントの決定に好適なアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２、及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２１５：４０３－４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、ＮＣＢＩ）から公開されており、当技術分野では周知である。例示的なＢＬＡＳＴアルゴリズムには、クエリ配列内の長さＷの短いワードを識別することによって、最初に高スコア配列対（high scoring sequence pairs、ＨＳＰ）を識別し、これは、データベース配列内の同じ長さのワードと整列したときに、ある正の値の閾値スコアＴに一致するか、又はそれを満たすものである。Ｔは、近隣ワードスコア閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、前掲）。これらの最初の近隣ワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰを見つけるための検索を開始するためのシードとして機能する。ワードのヒットは、累積整列スコアが増加できる限り、各配列に沿って両方向に伸びる。累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（一致する残基の対についての報酬スコア、常に＞０）及びＮ（不一致残基についてのペナルティスコア、常に＜０）を使用して算出される。アミノ酸配列の場合、累計スコアは、スコアリングマトリックスを使用して計算される。各方向におけるワードヒットの拡張は、累積整列スコアがその最大達成値から量Ｘだけ低下するか、累積スコアが、１つ以上の負のスコアの残基整列の累積に起因して、０以下になるか、又はいずれかの配列の末端に到達するときに、停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータであるＷ、Ｔ、及びＸは、整列の感度及び速度を決定する。特定の実施形態では、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴＮ又はＢＬＡＳＴＰプログラムを使用して配列を整列させる。特定の実施形態では、ＢＬＡＳＴＮ又はＢＬＡＳＴＰプログラムは、ＮＣＢＩによって使用される初期設定を使用する。特定の実施形態では、ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、初期設定として、２８のワードサイズ（Ｗ）、期待閾値（Ｅ）又は１０、０に設定されたクエリ範囲内の最大一致、１、－２の一致／不一致スコア、線形ギャップコスト、使用される低い複雑度領域のためのフィルタ、及び使用されるルックアップテーブルのみのためのマスク、を使用する。特定の実施形態では、ＢＬＡＳＴＰプログラム（アミノ酸配列用）は、初期設定として、３のワードサイズ（Ｗ）、１０の期待閾値（Ｅ）、０に設定されたクエリ範囲内の最大一致、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ １９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５を参照されたい）、存在のギャップコスト：１１及び拡張：１、並びに条件付き構成スコア行列調整、を使用する。

【0039】

ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計分析も実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然に発生する確率を示す。例えば、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が約０．２未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合、核酸は参照配列に類似しているとみなされる。

【0040】

「単離された」という用語は、核酸又はタンパク質に適用される場合、核酸又はタンパク質が自然状態で関連する他の細胞成分を本質的に含まないことを示す。これは、例えば、均質な状態であり得、乾燥又は水溶液中のいずれであってもよい。純度及び均質性は、典型的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィなどの分析化学技法を使用して決定される。調製物中に存在する主要な種であるタンパク質は、実質的に精製される。

【0041】

本明細書で使用される「脂質」という用語は、脂肪、ワックス、ステロール、脂溶性ビタミン（ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、及びＫなど）、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、リン脂質などを含む天然に存在する分子の群を指す。脂質は、疎水性又は両親媒性の小分子として広く定義され得る。いくつかの脂質の両親媒性の性質は、それらが水性環境において小胞、多重膜／単層リポソーム、又は膜などの構造を形成することを可能にする。生物学的脂質は、２つの異なるタイプの生化学的サブユニットイソプレン及びケトアシル基に由来する。脂質は、以下のカテゴリーに分類され得る：脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、サッカロ脂質、及びポリケチド（ケトアシルサブユニットの縮合から誘導される）；並びにステロール脂質及びプレノール脂質（イソプレンサブユニットの縮合から誘導される）。脂肪は、トリグリセリドと呼ばれる脂質のサブグループである。脂質はまた、脂肪酸及びそれらの誘導体（トリ－、ジ－、モノグリセリド、及びリン脂質を含む）などの分子、並びにコレステロールなどの他のステロール含有代謝産物を包含する。

【0042】

本明細書で使用される「細胞」は、そのゲノムＤＮＡを保存又は複製するのに十分な代謝又は他の機能を実行する細胞を指す。細胞は、例えば、無傷の膜の存在、特定の色素による染色、子孫を産生する能力、又は配偶子の場合には第２の配偶子と組み合わさって子孫を産生する能力を含む、当該技術分野で周知の方法によって特定することができる。細胞には、原核細胞及び真核細胞が含まれ得る。原核細胞には細菌が含まれるが、これに限定されない。真核細胞としては、酵母細胞、並びに植物及び動物に由来する細胞、例えば、哺乳動物、昆虫（例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）、及びヒト細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0043】

本明細書で使用される「治療用細胞」という用語は、薬効を達成するために、それを必要とする患者又は対象に投与することができる細胞を指す。投与は、前述の患者又は対象への注射、移植又は埋め込みを含んでもよい。例えば、Ｔ細胞は、がんを処置するための免疫応答を調節するために患者に移植され得る。

【0044】

本明細書で使用される場合、「分化」という用語は、細胞の生活環の発達における段階を指す。

【0045】

「細胞培養培地」、「組織培養培地」、「培養培地」（各々の場合において、複数「培地（media）」）、及び「培地製剤」という句は、細胞又は組織を増殖するための栄養素液を指す。これらの句は、互換可能に使用され得る。

【0046】

「細胞培養」又は「培養」とは、人工的なインビトロ環境における細胞の維持又は拡張を意味する。

【0047】

「細胞培養サプリメント」、「培養サプリメント」又は「培地サプリメント」という用語は、細胞拡張を増強するために細胞培養培地に添加される成分を指す。これらの句は、互換可能に使用され得る。細胞培養サプリメントは、アミノ酸、塩、ペプチド、糖、脂質、ビタミン、ミネラル、金属などのうちの１つ以上を含み得る。実施形態では、細胞培養サプリメントは、化学的に定義された成分を含む。

【0048】

本明細書で使用される場合、「化学的に定義された」という用語は、既知の分子構造及び濃度の成分を指す。

【0049】

本明細書で使用される「化学的に定義された培地」という用語は、細胞、特に真核細胞のインビトロ培養に好適な培地を指し、ここで、全ての化学成分及びそれらの濃度が知られている。

【0050】

本明細書で使用される「血清を含まない」という用語は、血清を含まないか、又は実質的に血清を含まない培地を指す。本明細書で使用される「実質的に血清を含まない」とは、約１重量％未満の血清を含有する、微量の血清のみを含有する、又は検出できない量の血清を含有する培地を指す。実施形態では、血清を実質的に含まないとは、１重量％未満の血清、０．９５重量％未満の血清、０．９重量％未満の血清、０．８５重量％未満の血清、０．８重量％未満の血清、０．７５重量％未満の血清、０．７重量％未満の血清、０．６５重量％未満の血清、０．６重量％未満の血清、０．５５重量％未満の血清、０．５重量％未満の血清、０．４５重量％未満の血清、０．４重量％未満の血清、０．３５重量％未満の血清、０．３重量％未満の血清、０．２５重量％未満の血清、０．２重量％未満の血清、０．１５重量％未満の血清、０．１重量％未満の血清、０．０９重量％未満の血清、０．０８重量％未満の血清、０．０７重量％未満の血清、０．０６重量％未満の血清、０．０５重量％未満の血清、０．０４重量％未満の血清、０．０３重量％未満の血清、０．０２重量％未満の血清、又は０．０１重量％未満の血清を含有する培地を指す。

【0051】

「アルブミンを含まない」培養培地という句は、アルブミンを含有しないか、又はアルブミンを実質的に含まない培養培地を指す。したがって、アルブミンを実質的に含まないとは、アルブミンが培養培地中に約１％（ｗ／ｖ）未満、より好ましくは、約０．１％（ｗ／ｖ）未満、更により好ましくは、約０．０１％（ｗ／ｖ）未満の濃度で存在することを意味する。したがって、実施形態では、アルブミンを含まない培養培地は、１％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．９５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．９％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．８５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．８％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．７５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．７％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．６５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．６％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．５５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．４５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．４％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．３５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．３％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．２５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．２％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．１５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．１％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．０９％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．０８％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．０７％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．０６％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．０５％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．０４％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．０３％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、０．０２％（ｗ／ｖ）未満のアルブミン、又は０．０１％（ｗ／ｖ）未満のアルブミンを含有する培地を指す。

【0052】

本明細書で使用される「合成的に作製された」又は「合成された」という句は、インビトロでの化学（例えば、タンパク質）合成によって作製された分子を指す。ペプチドの合成は当技術分野で周知である。例えば、限定するものではないが、ペプチドは、液相ペプチド合成又は固相ペプチド合成を使用して合成することができる。一般に、合成的に作製された分子は、例えば、混入物及び不適切に形成された分子（例えば、不完全又は不正確なペプチド配列）を除去するために精製される。タンパク質を精製する方法は、当技術分野において周知であり、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ（ion exchange chromatography、ＩＥＣ）、分配クロマトグラフィ、高速液体クロマトグラフィ（high-performance liquid chromatography、ＨＰＬＣ）、及び逆相クロマトグラフィ（reverse-phase chromatography、ＲＰＣ）を含むが、これらに限定されない。実施形態では、合成的に作製されたペプチドは、少なくとも７０％純粋である（少なくとも７０％の所望のペプチドを含有する）。実施形態では、合成的に作製されたペプチドは、少なくとも８０％純粋である。実施形態では、合成的に作製されたペプチドは、少なくとも９０％純粋である。実施形態では、合成的に作製されたペプチドは、少なくとも９５％純粋である。実施形態では、合成的に作製されたペプチドは、少なくとも９６％純粋である。実施形態では、合成的に作製されたペプチドは、少なくとも９７％純粋である。実施形態では、合成的に作製されたペプチドは、少なくとも９８％純粋である。実施形態では、合成的に作製されたペプチドは、少なくとも９９％純粋である。割合は、重量（ｗ／ｗ）又は体積（ｗ／ｖ）に基づくことができる。

【0053】

「接触する」は、その単純な通常の意味に従って使用され、少なくとも２つの異なる種（例えば、生体分子又は細胞を含む化学化合物）が、反応、相互作用、又は物理的に触れるのに十分に近くなることを可能にするプロセスを指す。しかしながら、得られる反応産物は、添加試薬間の反応から直接、又は反応混合物中で産生され得る、添加試薬のうちの１つ以上に由来する中間体から産生され得ることを認識されたい。

【0054】

「接触する」という用語は、２つの種が反応、相互作用、又は物理的に触れるのを可能にすることを含み得、ここで、２つの種は、本明細書に記載される化合物及びタンパク質又は酵素であり得る。いくつかの実施形態では、接触することは、本明細書に記載される化合物が、シグナル伝達経路に関与するタンパク質又は酵素と相互作用するのを可能にすることを含む。

【0055】

「対照」試料又は値は、試験試料と比較するための参照、通常は既知の参照として機能する試料を指す。例えば、試験試料は、例えば試験化合物の存在下で試験条件から採取され、例えば、試験化合物の不在下（陰性対照）、又は既知の化合物の存在下（陽性対照）で、既知の条件からの試料と比較され得る。対照はまた、ある数の試験又は結果から収集された平均値を表し得る。当業者であれば、対照は、あらゆる数のパラメータを評定するために設計できることを認識するであろう。例えば、薬理学的データ（例えば、半減期）又は治療的尺度（例えば、副作用の比較）に基づいて治療的利益を比較するために対照を考案することができる。当業者は、所定の状況においてどの対照が価値があるかを理解し、対照値との比較に基づいてデータを分析することができるであろう。対照は、データの有意性を判断するのにも役立つ。例えば、所与のパラメータの値が対照において大きく異なる場合、試験試料における変動は有意であるとはみなされない。
組成物

【0056】

一態様では、スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を有するペプチドを含む細胞培養培地が提供される。

【0057】

実施形態では、ペプチドは、約２５～約１５０μｇ／ｍｌの濃度を有する（最終濃度で存在する）。実施形態では、ペプチドは、約２５μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬの濃度を有する。実施形態では、ペプチドは、約５０μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬの濃度を有する。実施形態では、ペプチドは、約７５μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬの濃度を有する。実施形態では、ペプチドは、約１００μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬの濃度を有する。実施形態では、ペプチドは、約１２５μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬの濃度を有する。

【0058】

実施形態では、ペプチドは、約２５μｇ／ｍＬ～約１２５μｇ／ｍＬの濃度を有する。実施形態では、ペプチドは、約２５μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬの濃度を有する。実施形態では、ペプチドは、約２５μｇ／ｍＬ～約７５μｇ／ｍＬの濃度を有する。実施形態では、ペプチドは、約２５μｇ／ｍＬ～約５０μｇ／ｍＬの濃度を有する。実施形態では、ペプチドは、約２５μｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ、約７５μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ、約１２５μｇ／ｍＬ、又は約１５０μｇ／ｍＬの濃度を有する。

【0059】

実施形態では、ペプチドは、約３０μｇ／ｍｌ～約１２５μｇ／ｍｌの濃度を有する。実施形態では、ペプチドは、約５０μｇ／ｍｌ～約１００μｇ／ｍｌの濃度を有する。

【0060】

一態様では、スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を有するペプチドを含む細胞培養サプリメントが提供される。実施形態では、細胞培養サプリメントは、培養培地に添加された場合に、約２５～約１５０μｇ／ｍｌの最終ペプチド濃度を提供する５×溶液として提供される。実施形態では、細胞培養サプリメントは、培養培地に添加された場合に、約２５μｇ／ｍｌ～約１５０μｇ／ｍｌの最終ペプチド濃度を提供する１０×溶液として提供される。実施形態では、細胞培養サプリメントは、培養培地に添加された場合に、約２５μｇ／ｍｌ～約１５０μｇ／ｍｌの最終ペプチド濃度を提供する５０×溶液として提供される。実施形態では、細胞培養サプリメントは、培養培地に添加された場合に、約２５μｇ／ｍｌ～約１５０μｇ／ｍｌの最終ペプチド濃度を提供する１００×溶液として提供される。

【0061】

実施形態では、培養培地に添加される場合、細胞培養サプリメントは、約２５～約１５０μｇ／ｍｌの最終ペプチド濃度を提供する。実施形態では、培養培地に添加される場合、細胞培養サプリメントは、約３０μｇ／ｍｌ～１２５μｇ／ｍｌの最終ペプチド濃度を提供する。実施形態では、培養培地に添加された場合、細胞培養サプリメントは、約５０μｇ／ｍｌ～約１００μｇ／ｍｌの最終ペプチド濃度を提供する。

【0062】

実施形態では、ペプチドは合成的に作製される。実施形態では、合成ペプチドは、少なくとも４個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、８個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、１２個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、１６個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、２０個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、２４個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、２８個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、３２個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、３６個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４０個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４４個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４８個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、５２個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、５６個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、６０個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、６４個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、６８個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、７２個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、７６個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、８０個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、８４個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、８８個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、９２個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、９６個のアミノ酸残基～１００個のアミノ酸残基を含む。

【0063】

実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～９６個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～９２個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～８８個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～８４個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～８０個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～７６個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～７２個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～６８個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～６４個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～６０個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～５６個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～５２個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～４８個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～４４個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～４０個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～３６個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～３２個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～２８個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～２４個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～２０個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～１６個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～１２個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４個のアミノ酸残基～８個のアミノ酸残基を含む。実施形態では、合成ペプチドは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、６４、６８、７２、７６、８０、８４、８８、９２、９６又は１００個のアミノ酸残基を含む。合成ペプチド長は、端点を含む、記載された範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0064】

実施形態では、ペプチドは、少なくとも１個の負に荷電した残基を含む。実施形態では、ペプチドは、少なくとも１個の正に荷電した残基を含む。実施形態では、ペプチドは、１個の正に荷電した残基を含む。実施形態では、ペプチドは、２個の正に荷電した残基を含む。

【0065】

実施形態では、ペプチドは、ＤＡＨＫ（配列番号１）、ＤＴＨＫ（配列番号２）、又はＥＡＨＫ（配列番号７）から選択される。実施形態では、ペプチドは、ＤＡＨＫ（配列番号１）である。実施形態では、ペプチドは、ＤＴＨＫ（配列番号２）である。実施形態では、ペプチドは、ＥＡＨＫ（配列番号７）である。実施形態では、ペプチドは、アルブミン由来ペプチドである。実施形態では、ペプチドは、ＤＡＨＫ（配列番号１）、ＤＴＨＫ（配列番号２）、ＶＦＲＲＥＡＨＫＳＥＩＡＨＲ（配列番号６）、ＥＡＨＫ（配列番号７）、ＤＡＨＲ（配列番号８）、ＤＡＲＫ（配列番号９）、ＲＤＡＨＫ（配列番号１０）、ＲＤＡＨＫＳ（配列番号１１）、ＲＲＤＡＨＫ（配列番号１２）、ＲＲＤＡＨＫＳ（配列番号１３）、ＲＤＡＨＫＳＥ（配列番号１４）、ＲＲＤＡＨＫＳＥ（配列番号１５）、ＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶ（配列番号１６）、又はＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡ（配列番号１７）のうちの１つ以上である。実施形態では、列挙されたペプチドのいずれか１つ以上が除外され得る。

【0066】

実施形態では、ペプチドは、負に荷電した（－）アミノ酸、中性（Ｘ）アミノ酸、及び２個の正に荷電した（＋）アミノ酸を順に含む４アミノ酸残基配列を含む。負に荷電した（－）アミノ酸、中性（Ｘ）アミノ酸、及び２個の正に荷電した（＋）アミノ酸を含む４アミノ酸残基配列は、－Ｘ＋＋ペプチドと称され得る。実施形態では、ペプチドは、キレート標的への－Ｘ＋＋配列の曝露を妨害する、Ｃ末端側及び／又はＮ末端側に－Ｘ＋＋ペプチドに隣接する（例えば、ペプチドの１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０アミノ酸内に）追加のアミノ酸分岐を有さない。

【0067】

ペプチドは、細胞に対して毒性である化合物（例えば、遷移金属）をキレート化してもよい。実施形態では、－Ｘ＋＋配列を含むペプチドの部分は、化合物（例えば、遷移金属）をキレート化する。したがって、実施形態では、ペプチドは、機能的ペプチド配列の標的（例えば、遷移金属）への接触を中断させる追加のＣ末端又はＮ末端残基を含まない。実施形態では、機能的配列は、配列番号１のアミノ酸配列である。

【0068】

実施形態では、ペプチドは、長さが少なくとも約４アミノ酸（例えば、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０アミノ酸）である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約４アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約５アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約６アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約７アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約８アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約９アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１０アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１１アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１２アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１３アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１４アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１５アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１６アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１７アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１８アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約１９アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約２０アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、少なくとも約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０アミノ酸長である。

【0069】

実施形態では、ペプチドは、４アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、５アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、６アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、７アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、８アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、９アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１０アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１１アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１２アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１３アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１４アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１５アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１６アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１７アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１８アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、１９アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、２０アミノ酸長である。

【0070】

実施形態では、ペプチドは、約４～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約８～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約１２～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約１６～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約２０～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約２４～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約２８～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約３２～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約３６～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４０～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４４～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４８～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約５２～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約５６～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約６０～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約６４～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約６８～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約７２～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約７６～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約８０～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約８４～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約８８～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約９２～約１００アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約９６～約１００アミノ酸長である。

【0071】

実施形態では、ペプチドは、約４～約９６アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約９２アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約８８アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約８４アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約８０アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約７６アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約７２アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約６８アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約６４アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約６０アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約５６アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約５２アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約４８アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約４４アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約４０アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約３６アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約３２アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約２８アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約２４アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約２０アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約１６アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約１２アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４～約８アミノ酸長である。実施形態では、ペプチドは、約４アミノ酸、約８アミノ酸、約１２アミノ酸、約１６アミノ酸、約２０アミノ酸、約２４アミノ酸、約２８アミノ酸、約３２アミノ酸、約３６アミノ酸、約４０アミノ酸、約４４アミノ酸、約４８アミノ酸、約５２アミノ酸、約５６アミノ酸、約６０アミノ酸、約６４アミノ酸、約６８アミノ酸、約７２アミノ酸、約７６アミノ酸、約８０アミノ酸、約８４アミノ酸、約８８アミノ酸、約９２アミノ酸、約９６アミノ酸、又は約１００アミノ酸長である。ペプチド長は、端点を含む、記載された範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0072】

実施形態では、ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号７のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号１３のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号１４のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号１６のアミノ酸配列である。実施形態では、ペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列である。実施形態では、列挙されたペプチドのうちの任意の１つ以上の配列は除外され得る。

【0073】

実施形態では、細胞培養培地は、血清を含まない。実施形態では、細胞培養培地は、アルブミンを含まない。実施形態では、細胞培養培地は、血清及びアルブミンを含まない。実施形態では、細胞培養培地は、実質的に血清を含まない。実施形態では、細胞培養培地は、実質的にアルブミンを含まない。実施形態では、細胞培養培地は、実質的に血清及び実質的にアルブミンを含まない。

【0074】

実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、１×～１００×濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、１×、２×、３×、５×、１０×、２０×、２５×、５０×、７５×、又は１００×の濃度で提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、１×濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、２×濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、３×濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、５×の濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、１０×濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、２０×濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、２５×の濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、５０×濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、７５×濃度として提供される。実施形態では、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、１００×の濃度として提供される。

【0075】

実施形態では、本明細書で提供される細胞培養培地又は細胞培養サプリメントは、スーパーオキシドスカベンジャーを更に含む。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、（２，２，６，６－テトラメチル－１－イル）オキシル若しくはその変異体、又はフラボノイドを含有する化合物を含む。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、（２，２，６，６－テトラメチル－１－イル）オキシルを含む。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、（２，２，６，６－テトラメチル－１－イル）オキシルの１つ以上の変異体を含む。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、フラボノイドを含む。実施形態では、列挙されたスーパーオキシドスカベンジャーのうちの１つ以上は、明示的に除外され得る。

【0076】

実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、細胞（例えば、培養されている細胞）に対してネイティブ（内因性）ではない化合物を含む。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－Ｎ－オキシル）、ヒドロキシ－ＴＥＭＰＯ（４－ヒドロキシ－２，２，６，６－テトラメチル－ピペリジン－Ｎ－オキシル）、ＴＥＭＰＯＬ（１－オキシル－２，２，６，６－テトラメチル－４－ヒドロキシピペリジン）、又はそれらの変異体を含み得る。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、ＴＥＭＰＯを含む。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、ＴＥＭＰＯの変異体を含む。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、ＴＥＭＰＯＬを含む。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、ＴＥＭＰＯＬの変異体を含む。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーは、Ｍｉｔｏ－ＴＥＭＰＯ（（２－（２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－オキシル－４－イルアミノ）－２－オキソエチル）トリフェニルホスホニウムクロリド）を含む。更なるスーパーオキシドスカベンジャーは、例えば、米国特許第６，７５９，４３０号に見出すことができ、これは、化合物、組成物、方法、分子、合成などを含む、開示されている全てについて参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、列挙されたスーパーオキシドスカベンジャーのうちの１つ以上は、明示的に除去され得る。

【0077】

スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養培地中のスーパーオキシドスカベンジャーの濃度を指し得る。スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、完全細胞培養培地（すなわち、本明細書で提供される細胞培養サプリメントが添加された基礎培地）中の最終濃度を指し得る。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約２μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約３μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約４μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約５μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約６μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約７μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約８μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約９μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１０μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１１μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１２μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１３μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１４μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１５μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１６μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１７μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１８μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１９μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約２０μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約２１μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約２２μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約２３μＭ～約２５μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約２４μＭ～約２５μＭである。濃度は、端点を含む、本明細書で列挙される任意の範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0078】

実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ～約２３μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ～約２２μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ～約２１μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ～約２０μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ～約１９μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ～約１８μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ～約１７μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１６μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１５μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１４μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１３μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１２μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１１μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１０μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約９μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約８μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約７μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約６μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約５μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約４μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約３μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約２μＭ～約２４μＭである。実施形態では、スーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、約１μＭ、約２μＭ、約３μＭ、約４μＭ、約５μＭ、約６μＭ、約７μＭ、約８μＭ、約９μＭ、約１０μＭ、約１１μＭ、約１２μＭ、約１３μＭ、約１４μＭ、約１５μＭ、約１６μＭ、約１７μＭ、約１８μＭ、約１９μＭ、約２０μＭ、約２１μＭ、約２２μＭ、約２３μＭ、約２４μＭ、又は約２５μＭである。実施形態を含む本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャーの濃度は、端点を含む、列挙された範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0079】

実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約２５μＭである。スーパーオキシドスカベンジャーの最終濃度は、完全細胞培養培地（すなわち、本明細書で提供される細胞培養サプリメントが添加された基礎培地）中のスーパーオキシドスカベンジャーの濃度を指し得る。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約６～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約７～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約８～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約９～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１０～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１１～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１２～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１３～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１４～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１５～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１６～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１７～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１８～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約１９～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約２０～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約２１～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約２２～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約２３～約２５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約２４～約２５μＭである。

【0080】

実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約２４μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約２３μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約２２μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約２１μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約２０μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１９μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１８μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１７μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１６μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１５μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１４μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１３μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１２μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１１μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約１０μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約９μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約８μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約７μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５～約６μＭである。実施形態では、本明細書で提供されるスーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５μＭである。スーパーオキシドスカベンジャー培地の最終濃度は、端点を含む、本明細書に列挙される任意の範囲内の任意の値又は部分範囲を包含する濃度で提供され得る。

【0081】

実施形態では、本明細書で提供される細胞培養培地又は細胞培養サプリメントは、ビタミンＥ又はその類似体を含む。実施形態では、ビタミンＥ類似体は、６－クロマノール基部分を含む。

【0082】

実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、α－トコフェロール、β－トコフェロール、γ－トコフェロール、δ－トコフェロール、α－トコトリエノール、β－トコトリエノール、δ－トコトリエノール、γ－トコトリエノール、コハク酸α－トコペロール、α－トコフェロールモノグルコシド、γ－トコフェロールＮ，Ｎ－ジメチルグリシンエステル、又はそれらの置換体、純粋なアイソフォーム、ラセミ混合物、及び／若しくは混合物を含む。

【0083】

実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、α－トコフェロールを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、β－トコフェロールを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、γ－トコフェロールを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、δ－トコフェロールを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、α－トコトリエノールを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、β－トコトリエノールを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、δ－トコトリエノールを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、γ－トコトリエノールを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、コハク酸α－トコペロールを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、α－トコフェロールモノグルコシドを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、γ－トコフェロールＮ，Ｎ－ジメチルグリシンエステルを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、ビタミンＥの内因性代謝産物を含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、アルファ－トコフェロールヒドロキノンを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、ビタミンＥの内因性代謝産物、アルファ－トコフェロールヒドロキノンなどを含む。

【0084】

実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、本明細書において提供されるビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体の純粋なアイソフォームを含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、本明細書で提供される置換ビタミンＥ又は類似体若しくは変異体を含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、本明細書において提供されるビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体のラセミ混合物を含む。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体若しくは変異体は、本明細書で提供される２つ以上のビタミンＥ化合物又は類似体若しくは変異体の混合物を含む。実施形態では、列挙されたビタミンＥ化合物のうちの１つ以上は、明示的に除外され得る。

【0085】

ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、その実施形態を含む、本明細書で提供される細胞培養培地中の濃度を指し得る。ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、完全培養培地（すなわち、本明細書で提供される細胞培養サプリメントが添加された基礎培地）中の前述のビタミンＥ又は類似体の最終濃度を指し得る。したがって、実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約４．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．５μｇ／ｍｌ～約４．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約４．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約１．５μｇ／ｍｌ～約４．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約２μｇ／ｍｌ～約４．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約２．５μｇ／ｍｌ～約４．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約３μｇ／ｍｌ～約４．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約３．５μｇ／ｍｌ～約４．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約４μｇ／ｍｌ～約４．５μｇ／ｍｌである。

【0086】

実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約４μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約３．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約３μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約２．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約２μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約１．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約１μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約０．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ、約０．５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ、約１．５μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約２．５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約３．５μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、又は約４．５μｇ／ｍｌである。ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、端点を含む、本明細書に列挙される任意の範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0087】

実施形態では、ビタミンＥの濃度は、０．５μｇ／ｍｌ、０．６μｇ／ｍｌ、０．７μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ、０．９μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌ、１．１μｇ／ｍｌ、１．２μｇ／ｍｌ、１．３μｇ／ｍｌ、１．４μｇ／ｍｌ、１．５μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ、１．７μｇ／ｍｌ、１．８μｇ／ｍｌ、１．９μｇ／ｍｌ、２．０μｇ／ｍｌ、２．１μｇ／ｍｌ、２．２μｇ／ｍｌ、２．３μｇ／ｍｌ、２．４μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、２．６μｇ／ｍｌ、２．７μｇ／ｍｌ、２．８μｇ／ｍｌ、２．９μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ、３．２μｇ／ｍｌ、３．３μｇ／ｍｌ、３．４μｇ／ｍｌ、３．５μｇ／ｍｌ、３．６μｇ／ｍｌ、３．７μｇ／ｍｌ、３．８μｇ／ｍｌ、３．９μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ、４．１μｇ／ｍｌ、４．２μｇ／ｍｌ、４．３μｇ／ｍｌ、４．４μｇ／ｍｌ、４．５μｇ／ｍｌ、４．６μｇ／ｍｌ、４．７μｇ／ｍｌ、４．８μｇ／ｍｌ、４．９μｇ／ｍｌ、又は５．０μｇ／ｍｌである。ビタミンＥ又はその類似体の濃度は、端点を含む、列挙される任意の範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0088】

実施形態では、ビタミンＥ類似体の濃度は、約２μＭ～約１００μＭである。例えば、いくつかの実施形態では、細胞培養培地又は細胞培養サプリメントは、約２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、１１μＭ、１２μＭ、１３μＭ、１４μＭ、１５μＭ、１６μＭ、１７μＭ、１８μＭ、１９μＭ、２０μＭ、２１μＭ、２２μＭ、２３μＭ、２４μＭ、２５μＭ、２６μＭ、２７μＭ、２８μＭ、２９μＭ、３０μＭ、３１μＭ、３２μＭ、３３μＭ、３４μＭ、３５μＭ、３６μＭ、３７μＭ、３８μＭ、３９μＭ、４０μＭ、４１μＭ、４２μＭ、４３μＭ、４４μＭ、４５μＭ，４６μＭ、４７μＭ、４８μＭ、４９μＭ、５０μＭ、５１μＭ、５２μＭ、５３μＭ、５４μＭ、５５μＭ、５６μＭ、５７μＭ、５８μＭ、５９μＭ、６０μＭ、６１μＭ、６２μＭ、６３μＭ、６４μＭ、６５μＭ、６６μＭ、６７μＭ、６８μＭ、６９μＭ、７０μＭ、７１μＭ、７２μＭ、７３μＭ、７４μＭ、７５μＭ、７６μＭ、７７μＭ、７８μＭ、７９μＭ、８０μＭ、若しくはそれ以上、又はその間の任意の量の最終濃度のビタミンＥ類似体を提供する。ビタミンＥ類似体の濃度は、端点を含む、列挙される任意の範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0089】

実施形態では、ビタミンＥ類似体は、水溶性である。実施形態では、ビタミンＥ類似体は、６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸（トロロックス）を含む。

【0090】

トロロックスの濃度は、その実施形態を含む、本明細書で提供される細胞培養培地中の濃度を指し得る。トロロックスの濃度は、完全培養培地（すなわち、本明細書で提供される細胞培養サプリメントが添加された基礎培地）中の濃度を指し得る。実施形態では、トロロックスの濃度は、少なくとも約２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、１１μＭ、１２μＭ、１３μＭ、１４μＭ、１５μＭ、１６μＭ、１７μＭ、１８μＭ、１９μＭ、２０μＭ、２１μＭ、２２μＭ、２３μＭ、２４μＭ、２５μＭ、２６μＭ、２７μＭ、２８μＭ、２９μＭ、３０μＭ、３１μＭ、３２μＭ、３３μＭ、３４μＭ、３５μＭ、３６μＭ、３７μＭ、３８μＭ、３９μＭ、４０μＭ、４１μＭ、４２μＭ、４３μＭ、４４μＭ、４５μＭ、４６μＭ、４７μＭ、４８μＭ、４９μＭ、５０μＭ、５１μＭ、５２μＭ、５３μＭ、５４μＭ、５５μＭ、５６μＭ、５７μＭ、５８μＭ、５９μＭ、６０μＭ、６１μＭ、６２μＭ、６３μＭ、６４μＭ、６５μＭ、６６μＭ、６７μＭ、６８μＭ、６９μＭ、７０μＭ、７１μＭ、７２μＭ、７３μＭ、７４μＭ、７５μＭ、７６μＭ、７７μＭ、７８μＭ、７９μＭ、８０μＭ、又はそれ以上である。トロロックスの濃度は、端点を含む、列挙される範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0091】

実施形態では、本明細書で提供される細胞培養培地又は細胞培養サプリメントは、過酸化水素還元試薬を更に含む。実施形態では、過酸化水素還元剤は、細胞透過性である。実施形態では、過酸化水素還元剤は、細胞透過性ではない。実施形態では、過酸化水素還元剤は、細胞透過性試薬と細胞非透過性試薬との混合物である。実施形態では、過酸化水素還元剤は、グルタチオン、Ｎ－アセチルシステイン、システイン、亜セレン酸ナトリウム、マンニトール、フラボノイド、リポ酸、又はそれらの任意の組み合わせを含む。実施形態では、過酸化水素還元剤は、グルタチオンを含む。実施形態では、過酸化水素還元剤は、Ｎ－アセチルシステインを含む。実施形態では、過酸化水素還元剤は、システインを含む。実施形態では、過酸化水素還元剤は、亜セレン酸ナトリウムを含む。実施形態では、過酸化水素還元剤は、マンニトールを含む。実施形態では、過酸化水素還元剤は、フラボノイドを含む。実施形態では、過酸化水素還元剤は、リポ酸を含む。実施形態では、過酸化水素還元剤は、本明細書で提供される２つ以上の過酸化水素還元剤の組み合わせを含む。実施形態では、列挙された過酸化水素還元試薬のうちの１つ以上は、明示的に除外され得る。

【0092】

過酸化水素還元剤の濃度は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養培地中の濃度を指し得る。過酸化水素還元剤の濃度は、完全培養培地（すなわち、細胞培養サプリメントが添加された基礎培地）中の濃度を指し得る。

【0093】

したがって、実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約２０μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約４０μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約６０μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約８０μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１００μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１２０μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１４０μｇ／ｍｌ～約１８０μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１６０μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１８０μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。

【0094】

実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約２００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約１８０μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約１６０μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約１４０μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約１２０μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約１００μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約８０μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約６０μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約４０μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約２０μｇ／ｍｌである。実施形態では、グルタチオンの濃度は、約１、２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、又は２００μｇ／ｍｌである。グルタチオンの濃度は、端点を含む、列挙される範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0095】

実施形態では、細胞培養培地又は細胞培養サプリメントは、完全培養培地（すなわち、サプリメントが添加された基礎培地）中、約１μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、６μｇ／ｍｌ、７μｇ／ｍｌ、８μｇ／ｍｌ、９μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１１μｇ／ｍｌ、１２μｇ／ｍｌ、１３μｇ／ｍｌ、１４μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、１６μｇ／ｍｌ、１７μｇ／ｍｌ、１８μｇ／ｍｌ、１９μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、２１μｇ／ｍｌ、２２μｇ／ｍｌ、２３μｇ／ｍｌ、２４μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、２６μｇ／ｍｌ、２７μｇ／ｍｌ、２８μｇ／ｍｌ、２９μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ、３１μｇ／ｍｌ、３２μｇ／ｍｌ、３３μｇ／ｍｌ、３４μｇ／ｍｌ、３５μｇ／ｍｌ、３６μｇ／ｍｌ、３７μｇ／ｍｌ、３８μｇ／ｍｌ、３９μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、４１μｇ／ｍｌ、４２μｇ／ｍｌ、４３μｇ／ｍｌ、４４μｇ／ｍｌ、４５μｇ／ｍｌ、４６μｇ／ｍｌ、４７μｇ／ｍｌ、４８μｇ／ｍｌ、４９μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、５１μｇ／ｍｌ、５２μｇ／ｍｌ、５３μｇ／ｍｌ、５４μｇ／ｍｌ、５５μｇ／ｍｌ、５６μｇ／ｍｌ、５７μｇ／ｍｌ、５８μｇ／ｍｌ、５９μｇ／ｍｌ、６０μｇ／ｍｌ、６１μｇ／ｍｌ、６２μｇ／ｍｌ、６３μｇ／ｍｌ、６４μｇ／ｍｌ、６５μｇ／ｍｌ、６６μｇ／ｍｌ、６７μｇ／ｍｌ、６８μｇ／ｍｌ、６９μｇ／ｍｌ、７０μｇ／ｍｌ、７１μｇ／ｍｌ、７２μｇ／ｍｌ、７３μｇ／ｍｌ、７４μｇ／ｍｌ、７５μｇ／ｍｌ、７６μｇ／ｍｌ、７７μｇ／ｍｌ、７８μｇ／ｍｌ、７９μｇ／ｍｌ、８０μｇ／ｍｌ、８１μｇ／ｍｌ、８２μｇ／ｍｌ、８３μｇ／ｍｌ、８４μｇ／ｍｌ、８５μｇ／ｍｌ、８６μｇ／ｍｌ、８７μｇ／ｍｌ、８８μｇ／ｍｌ、８９μｇ／ｍｌ、９０μｇ／ｍｌ、９１μｇ／ｍｌ、９２μｇ／ｍｌ、９３μｇ／ｍｌ、９４μｇ／ｍｌ、９５μｇ／ｍｌ、９６μｇ／ｍｌ、９７μｇ／ｍｌ、９８μｇ／ｍｌ、９９μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、１０５μｇ／ｍｌ、１１０μｇ／ｍｌ、１１５μｇ／ｍｌ、１２０μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌ、１３０μｇ／ｍｌ、１３５μｇ／ｍｌ、１４０μｇ／ｍｌ、１４５μｇ／ｍｌ、又は１５０μｇ／ｍｌのグルタチオンの最終濃度を提供する。グルタチオンの最終濃度は、端点を含む、列挙される範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0096】

実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約１μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約１．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約２μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約２．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約３μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約３．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約４μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約４．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約５．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約６μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約６．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約７μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約７．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約８μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約８．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約９μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約９．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約１０μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約１０．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約１１μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約１１．５μｇ／ｍｌ～約１２μｇ／ｍｌである。

【0097】

実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約１１．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約１１μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約１０．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約９．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約９μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約８．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ～約８μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約７．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約７μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約６．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約６μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約５．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約４μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約３．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約３μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約２．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約２μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約１．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約１μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約０．５μｇ／ｍｌである。実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ、約０．５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ、約１．５μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約２．５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約３．５μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、約４．５μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ、約５．５μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ、約６．５μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ、約７．５μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ、約８．５μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ、約９．５μｇ／ｍｌ、約１０μｇ／ｍｌ、約１０．５μｇ／ｍｌ、約１１μｇ／ｍｌ、約１１．５μｇ／ｍｌ、又は約１２μｇ／ｍｌである。

【0098】

実施形態では、リポ酸の濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ、０．０７５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．６μｇ／ｍｌ、０．７μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ、０．９μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌ、１．２５μｇ／ｍｌ、１．５０μｇ／ｍｌ、１．７５μｇ／ｍｌ、２．０μｇ／ｍｌ、２．２５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、２．７５μｇ／ｍｌ、３．０μｇ／ｍｌ、３．２５μｇ／ｍｌ、３．５μｇ／ｍｌ、３．７５μｇ／ｍｌ、４．０μｇ／ｍｌ、４．２５μｇ／ｍｌ、４．５μｇ／ｍｌ、４．７５μｇ／ｍｌ、５．０μｇ／ｍｌ、５．２５μｇ／ｍｌ、５．５μｇ／ｍｌ、５．７５μｇ／ｍｌ、６．０μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌ、６．５μｇ／ｍｌ、６．７５μｇ／ｍｌ、７．０μｇ／ｍｌ、７．２５μｇ／ｍｌ、７．５μｇ／ｍｌ、７．７５μｇ／ｍｌ、８．０μｇ／ｍｌ、８．２５μｇ／ｍｌ、８．５μｇ／ｍｌ、８．７５μｇ／ｍｌ、９．０μｇ／ｍｌ、９．２５μｇ／ｍｌ、９．５μｇ／ｍｌ、９．７５μｇ／ｍｌ、１０．０μｇ／ｍｌ、１１．０μｇ／ｍｌ、１２．０μｇ／ｍｌ、又はそれ以上である。リポ酸の濃度は、端点を含む、列挙される範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0099】

実施形態では、本明細書で提供される細胞培養培地又は細胞培養サプリメントは、安定化剤分子を更に含む。安定化剤分子は、環境ストレス、例えば酸化ストレスに対してタンパク質を安定化する。理論に束縛されることを望むものではないが、安定化剤分子は、脂質過酸化及び脂肪酸形成を軽減することができると考えられる。実施形態では、安定化剤分子は、糖又はポリオールである。実施形態では、安定化剤分子は、トレハロース、マンニトール、スクロース、マルトース、ラクトース、ソルビトール、又はグリセロールである。実施形態では、安定化剤分子は、マンニトールである。

【0100】

安定化剤の濃度は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養培地中の濃度を指し得る。安定化剤の濃度は、完全培養培地（すなわち、本明細書で提供される細胞培養サプリメントが添加された基礎培地）中の濃度を指し得る。

【0101】

実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約２０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約３０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約４０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約６０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約７０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約８０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約９０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１００ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１１０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１２０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１３０ｍＭ～約１５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１４０ｍＭ～約１５０ｍＭである。

【0102】

実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約１４０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約１３０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約１２０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約１１０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約１００ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約９０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約８０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約７０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約６０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約５０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約４０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約３０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約２０ｍＭである。実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ～約１０ｍＭである。

【0103】

実施形態では、マンニトールの濃度は、約１ｍＭ、２ｍＭ，３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２１ｍＭ、２２ｍＭ、２３ｍＭ、２４ｍＭ、２５ｍＭ、２６ｍＭ、２７ｍＭ、２８ｍＭ、２９ｍＭ、３０ｍＭ、３１ｍＭ、３２ｍＭ、３３ｍＭ、３４ｍＭ、３５ｍＭ、３６ｍＭ、３７ｍＭ、３８ｍＭ、３９ｍＭ、４０ｍＭ、４１ｍＭ、４２ｍＭ、４３ｍＭ、４４ｍＭ、４５ｍＭ、４６ｍＭ、４７ｍＭ、４８ｍＭ、４９ｍＭ、５０ｍＭ、５１ｍＭ、５２ｍＭ、５３ｍＭ、５４ｍＭ、５５ｍＭ、５６ｍＭ、５７ｍＭ、５８ｍＭ、５９ｍＭ、６０ｍＭ、６１ｍＭ、６２ｍＭ、６３ｍＭ、６４ｍＭ、６５ｍＭ、６６ｍＭ、６７ｍＭ、６８ｍＭ、６９ｍＭ、７０ｍＭ、７１ｍＭ、７２ｍＭ、７３ｍＭ、７４ｍＭ、７５ｍＭ、７６ｍＭ、７７ｍＭ、７８ｍＭ、７９ｍＭ、８０ｍＭ、８１ｍＭ、８２ｍＭ、８３ｍＭ、８４ｍＭ、８５ｍＭ、８６ｍＭ、８７ｍＭ、８８ｍＭ、８９ｍＭ、９０ｍＭ、９１ｍＭ、９２ｍＭ、９３ｍＭ、９４ｍＭ、９５ｍＭ、９６ｍＭ、９７ｍＭ、９８ｍＭ、９９ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、又は１５０ｍＭである。

【0104】

実施形態では、マンニトールの濃度は、約０．０５μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌである。マンニトールの濃度は、端点を含む、列挙される範囲内の任意の値又は部分範囲であり得る。

【0105】

実施形態では、細胞培養サプリメントは、血清を含まない。実施形態では、細胞培養サプリメントは、アルブミンを含まない。実施形態では、細胞培養サプリメントは、血清及びアルブミンを含まない。実施形態では、細胞培養サプリメントは、実質的に血清を含まない。実施形態では、細胞培養サプリメントは、実質的にアルブミンを含まない。実施形態では、細胞培養サプリメントは、実質的に血清及び実質的にアルブミンを含まない。実施形態では、サプリメントは、血清を含まない細胞培養培地に添加される。実施形態では、サプリメントは、アルブミンを含まない細胞培養培地に添加される。実施形態では、サプリメントは、血清及びアルブミンを含まない細胞培養培地に添加される。実施形態では、サプリメントは、実質的に血清及び／又は実質的にアルブミンを含まない細胞培養培地に添加される。

【0106】

実施形態では、本明細書で提供される細胞培養培地は、平衡塩類溶液、基礎培地、及び／又は複合培地のうちの少なくとも１つを含む。実施形態では、本明細書で提供される細胞培養培地は、平衡塩類溶液を含む。実施形態では、本明細書で提供される細胞培養培地は、基礎培地を含む。実施形態では、本明細書で提供される細胞培養培地は、複合培地を含む。

【0107】

実施形態では、本明細書で提供される細胞培養培地は、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ハンクス平衡塩類溶液、アール平衡塩類溶液、ＭＥＭ、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ、ＤＭＥＭ、ＣＴＳ ＫｎｏｃｋＯｕｔ ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ－１６４０、ＩＭＤＭ、ハムＦ１２、Ｆ－１２ Ｋ、Ｆ－１０、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ、マッコイ５Ａ培地、ライボビッツＬ－１５、Ｍｅｄｉｕｍ １９９、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａ、Ｂｒａｉｎｐｈｙｓ、ＧＭＥＭ、及び／又はウィリアムＥ培地のうちの少なくとも１つを含む。実施形態では、細胞培養培地は、生理食塩水を含む。実施形態では、細胞培養培地は、リン酸緩衝生理食塩水を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ハンクス平衡塩類溶液を含む。実施形態では、細胞培養培地は、アール平衡塩類溶液を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＭＥＭを含む。実施形態では、細胞培養培地は、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭを含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＤＭＥＭを含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＣＴＳ ＫｎｏｃｋＯｕｔ ＤＭＥＭを含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＲＰＭＩ－１６４０を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＩＭＤＭを含む。実施形態では、細胞培養培地は、ハムＦ１２を含む。実施形態では、細胞培養培地は、Ｆ－１２ Ｋを含む。実施形態では、細胞培養培地は、Ｆ－１０を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＤＭＥＭ／Ｆ１２を含む。実施形態では、細胞培養培地は、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地を含む。実施形態では、細胞培養培地は、マッコイ５Ａ培地を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ライボビッツＬ－１５を含む。実施形態では、細胞培養培地は、Ｍｅｄｉｕｍ １９９を含む。実施形態では、細胞培養培地は、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａを含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＢＲＡＩＮＰＨＹＳ（商標）培地を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＧＭＥＭを含む。実施形態では、細胞培養培地は、ウィリアムＥ培地を含む。実施形態では、細胞培養培地は、本明細書で提供される２つ以上の組成物の組み合わせを含む。実施形態では、列挙された培地のうちの１つ以上は、明示的に除外され得る。

【0108】

一態様では、（ｉ）スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチド、（ｉｉ）ビタミンＥ又はその類似体、並びに（ｉｉｉ）スーパーオキシドスカベンジャー、を含む、細胞培養サプリメントが提供される。例えば、本明細書で提供される細胞培養サプリメントは、例えば、ペプチドＣ（配列番号１）、Ｍｉｔｏ－ＴＥＭＰＯ、及び６－ヒドロキシ２，５，７，８，テトラメチルクロマンカルボン酸を含むことができる。

【0109】

一態様では、ペプチドＣ（配列番号１）、Ｍｉｔｏ－ＴＥＭＰＯ、及び６－ヒドロキシ２，５，７，８，テトラメチルクロマンカルボン酸を含む血清を含まない細胞培養培地が提供される。

【0110】

一態様では、ペプチドＣ（配列番号１）、Ｍｉｔｏ－ＴＥＭＰＯ、及び６－ヒドロキシ２，５，７，８，テトラメチルクロマンカルボン酸を含む、アルブミンを含まない細胞培養培地が提供される。
方法

【0111】

一態様では、培養中の細胞を成長させるための方法が提供される。本方法は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養培地中で細胞を成長させることを含む。

【0112】

別の態様では、培養中の細胞を成長させる方法が提供される。本方法は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントが補充された細胞培養培地中で細胞を成長させることを含む。

【0113】

一態様では、アルブミン誘導性毒性から細胞を救済する方法が提供される。本方法は、アルブミン誘導性毒性を示す細胞を、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメント又は細胞培養培地と接触させることを含む。

【0114】

一態様では、培養中の細胞を拡張するための方法が提供される。一実施形態では、本方法は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養培地中で、細胞を、血清及びアルブミンを含まない細胞培養培地と接触させることを含む。一実施形態では、本方法は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントが補充された細胞培養培地を接触させることを含む。一実施形態では、細胞培養培地は、血清及び／又はアルブミンを含まない。

【0115】

一態様では、酸化ストレスから細胞を回復させるための方法が提供される。本方法は、細胞を、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントと接触させることを含み得る。本方法は、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養培地中で細胞を成長させることを含み得る。実施形態では、酸化ストレスは、細胞の凍結によるものである。実施形態では、酸化ストレスは、脂質が豊富な条件への曝露である。

【0116】

本明細書で提供される方法について、実施形態では、細胞は治療用細胞である。実施形態では、細胞は、生物製剤の産生のために使用される細胞である。実施形態では、細胞は、治療用ペプチドの産生のために使用される細胞である。実施形態では、細胞は、真核細胞である。実施形態では、細胞は、細胞療法として使用される。実施形態では、細胞は、哺乳動物の細胞である。実施形態では、細胞は、げっ歯類の細胞である。実施形態では、細胞は、霊長類の細胞である。実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。実施形態では、細胞は、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞などの幹細胞である。実施形態では、細胞は、胚性幹細胞である。実施形態では、細胞は、人工多能性幹細胞である。実施形態では、細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞などの免疫細胞である。実施形態では、細胞は、Ｂ細胞である。実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。実施形態では、細胞は、ＮＫ細胞である。

【0117】

実施形態では、細胞は、幹細胞である。実施形態では、細胞は、胚性幹細胞である。実施形態では、細胞は、多能性幹細胞である。実施形態では、細胞は、ｉＰＳＣである。実施形態では、細胞は、前駆細胞である。実施形態では、細胞は、不死化細胞である。実施形態では、細胞は、初代細胞である。実施形態では、細胞は、細胞株である。実施形態では、細胞は、製造された細胞である。実施形態では、細胞は、間葉系幹細胞、ｉＰＳＣ、ｈＥＳＣ、神経前駆細胞、網膜色素上皮、膵臓ベータ細胞、心筋細胞、ＨＥＫ－２９３細胞、及びＣＨＯ細胞から選択される。実施形態では、細胞は、間葉系幹細胞である。実施形態では、細胞は、神経前駆細胞である。実施形態では、細胞は、網膜色素上皮細胞である。実施形態では、細胞は、膵臓ベータ細胞である。実施形態では、細胞は、心筋細胞である。実施形態では、細胞は、ＨＥＫ－２９３細胞である。実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞である。実施形態では、列挙された細胞型のうちの１つ以上は、明示的に除外され得る。
キット

【0118】

一態様では、血清を含まない細胞培養培地と、その実施形態を含む本明細書で提供される細胞培養サプリメントとを含む、細胞培養キットが提供される。実施形態では、細胞培養サプリメントは、（ｉ）スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を有するペプチド、（ｉｉ）ビタミンＥ又はその類似体、並びに（ｉｉｉ）スーパーオキシドスカベンジャー、を含み、（ｉ）～（ｉｉｉ）は、２つ以上の別々の容器で提供される。実施形態では、細胞培養サプリメントは、（ｉ）スーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を含むペプチド、（ｉｉ）ビタミンＥ又はその類似体、並びに（ｉｉｉ）スーパーオキシドスカベンジャー、を含み、（ｉ）～（ｉｉｉ）は、単一の容器で提供される。

【0119】

実施形態では、キットは、過酸化水素還元試薬を更に含む。実施形態では、過酸化水素還元試薬は、グルタチオン及び／若しくはリポ酸、又はそれらの変異体を含む。実施形態では、過酸化水素還元試薬は、グルタチオンを含む。実施形態では、過酸化水素還元試薬は、リポ酸を含む。実施形態では、過酸化水素還元試薬は、グルタチオンの変異体を含む。実施形態では、過酸化水素還元試薬は、リポ酸の変異体を含む。

【0120】

一態様では、その実施形態を含む本明細書で提供されるスーパーオキシドジスムターゼ活性及びＣｕ＋、Ｚｎ＋キレート活性を有するペプチドを含む細胞培養培地と、１つ以上の細胞培養サプリメントとを含む細胞培養キットが提供される。実施形態では、１つ以上の細胞培養サプリメントは、ビタミンＥ若しくはその類似体、スーパーオキシドスカベンジャー、又は過酸化水素還元試薬を含む。一実施形態では、１つ以上の細胞培養サプリメントは、単一の容器で提供される。一実施形態では、１つ以上の細胞培養サプリメントは、２つ以上の容器で提供される。

【0121】

本明細書に記載される実施例及び実施形態は、例示のみを目的としており、それに照らして様々な修正又は変更が当業者に提案され、本出願の趣旨及び範囲、並びに添付の特許請求の範囲内に含まれることが理解される。本明細書で引用された全ての刊行物、特許、及び特許出願は、全ての目的のためにそれら全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【実施例】

【0122】

当業者は、本明細書に記載の粒子を作製及び使用することの説明は、例示のみを目的とするものであり、本開示は、この例示によって限定されないことを理解するであろう。
実施例１．アルブミンの異なる成分は、細胞培養性能に影響を及ぼす

【0123】

市販のアルブミンを、細胞培養における性能について分析した。様々な供給源（異なる製造業者、ウシ、ヒト、組換えＨＳＡ（酵母又はイネで作製）、及びＦｒｅｅｓｔｙｌｅ ＣＨＯ ＭＡＸ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号Ｋ９０００２０）を含む）からのウシ血清アルブミン（Bovine serum albumin、ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（human serum albumin、ＨＳＡ）、及び組換えヒト血清アルブミン（recombinant human serum albumin、Ｒｅｃ ＨＳＡ）を分析した。マウス多能性幹細胞（pluripotent stem cells、ＰＳＣ）、初代ラットニューロン、又はヒト神経幹細胞（neural stem cells、ＮＳＣ）のためのＢ－２７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号１７５０４０４４）補充細胞培養物を調製した（培地中のＢ２７の最終濃度の約０．５～１倍）。培養物は、存在するアルブミンの供給源又は型のみが異なっていた。図１Ａに示す結果は、試験したアルブミン間に有意な性能差が存在し、更に、性能が細胞型に依存することを示す。実際、同じ細胞株を含み、ＢＳＡ１又はＢＳＡ２の添加のみが異なる２つの培養物は、性能が異なっていた。ＢＳＡ１は、マウスＰＳＣ及びヒトＮＳＣ培養物において支持特性を示したが、ＢＳＡ２の添加は、両方の細胞培養物において毒性を引き起こした。更に、試験した組換え（recombinant、ｒｅｃ）ＨＳＡ試料は、培養物に添加された特定の試料が初代ラットニューロン細胞に対して中立的な効果を有し、１つが支持的であり、そして２つが細胞において毒性を引き起こしたという点で異なっていた。これらの結果は、アルブミンの型及び供給源の両方が、細胞培養性能に対して有意に異なる効果を有すること、及びこれらの効果が細胞型によって異なることを示す。

【0124】

次に、Ｂ２７サプリメントの異なる成分と様々なアルブミンとの間の相互作用を分析した（図１Ｂ～図１Ｊ）。これらの分子相互作用の効果を、細胞培養におけるニューロン細胞安定性に対するそれらの効果についても評価した。例えば、ＢＳＡ及びＨＳＡの両方は、Ｂ２７成分Ｘ１（トコフェロール）及びＸ２（酢酸トコフェロール）と相互作用し、これは、ニューロン細胞生存率に対して正の効果を示した。更に、Ｘ１及びＸ２とＢＳＡとの相互作用は、より高濃度のＢＳＡを培養物中に滴定した場合に飽和した。逆に、培養物に添加された同じ濃度のｒＨＳＡは、Ｘ１及びＸ２成分による飽和をもたらさなかった。更に、ＢＳＡとＸ３（リノール酸）及びＸ４（リノレン酸）成分との相互作用は、Ｂ２７補充培地中のニューロン生存率に正の影響を与えたが、ｒＨＳＡの添加は培養中の生存率に負の影響を与えた。結果を図１Ｂ～図１Ｅに示す。広範囲のｒＨＳＡをＢ２７補充培養物において試験した場合、ｒＨＳＡ結合について成分Ｘ１及び成分Ｘ２と競合することが示された。対照的に、成分Ｘ５は、図１Ｆ～図１Ｊに示すように、高濃度であってもｒＨＳＡと相互作用しなかった。これらの結果は、集合的に、様々なアルブミンが細胞培養培地成分と異なる相互作用を有し、それによって培養性能に変動を及ぼすことを示す。

【0125】

３つの供給源、ＢＳＡ１、ＢＳＡ２、及びＢＳＡ３からのＢＳＡの効果を、ラットニューロン生存におけるそれらの性能について分析した。ＢＳＡ１は、ＢＳＡ２及びＢＳＡ３と比較してより高い鉄含有量を含んでいたが、ＢＳＡ３は、他の２つのいずれかよりも高いコレステロール含有量を有していた（図２Ａ）。鉄及びコレステロール含有量のロット間変動（すなわち、同じ供給源からの異なるロット）は低かった。総タンパク質は、供給源及びロット間で変動した。これらのデータは、アルブミン中の汚染物質のタイプ及び量が供給源間で変動し、更にはロット間でも変動することを実証している。

【0126】

ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）カルセインＡＭ生細胞染色用色素を製造業者のプロトコルに従って使用して、細胞生存率に対する様々なＢＳＡの効果を試験した。簡潔に説明すると、ラットニューロンを、０．２５％の濃度でＩＴＳ及びＢＳＡ１又はＢＳＡ２を補充した神経基礎培地中で培養した。図２Ｂ（上パネル）に示すように、カルセインＡＭ生存率アッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、カタログ番号６５－０８５３－７８）は、ＢＳＡ１（ＢＳＡ２と比較してより高い鉄含有量を有する）が、ＢＳＡ２の存在下で成長させたラットニューロンと比較して、ラットニューロンの生存率を低下させたことを示した。ＢＳＡ２を含む培養物に鉄を添加した場合、図２Ｂ（下パネル）の結果に示されるように、ラットニューロン生存率は減少した。これらの結果は、より高い鉄含有量を含むアルブミンが、ニューロン細胞生存率に対して毒性効果を有することを示す。

【0127】

次に、抗酸化剤が鉄誘導性毒性を逆転させる能力を調べた。リーンサプリメント（インスリン－トランスフェリン－セレン、Ｉｎｓｕｌｉｎ－Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ－Ｓｅｌｅｎｉｕｍ、ＩＴＳ）を補充した神経基礎培地中の２μｇ／ｍＬの濃度のトコフェロールを、培養ラットニューロン細胞及びＢＳＡ１又はＢＳＡ２のいずれかに添加した。抗酸化剤の添加は、ＢＳＡ１（図２Ｃ、左）又は鉄（図２Ｃ、右）によるラットニューロン細胞の生存率の低下を逆転させた。これらの結果は、鉄によるニューロンストレスが抗酸化剤の添加によって逆転され得ることを示す。

【0128】

ＢＳＡ１及びＢＳＡ２を、幹細胞に対するそれらの効果について更に分析した。マウス胚性幹細胞（mouse embryonic stem cells、ｍＥＳＣ）又はヒト神経幹細胞（human neural stem cells、ｈＮＳＣ）を、ＢＳＡ１又はＢＳＡ２を含有する細胞培養培地中で成長させ、増殖を測定した。ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造業者のプロトコルに従って使用して、ｍＥＳＣの増殖を測定した。ＶＩ－ＣＥＬＬ（商標）ＸＲ細胞計数アッセイ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を製造業者のプロトコルに従って使用して、ｈＮＳＣの増殖を測定した。

【0129】

図２Ｄ及び図２Ｅに示されるように、ＢＳＡ２は、ＢＳＡ１の存在下で培養された同じ細胞の増殖と比較した場合、ｍＥＳＣ及びｈＮＳＣの両方の増殖を減少させる。これらの結果は、ＢＳＡ試料間の差異が、細胞培養におけるそれらの支持的役割の変動をもたらし、したがって培養性能に有意に影響を及ぼすことを示す。

【0130】

コレステロール濃度は、異なる供給源由来のＢＳＡ間で異なる（図２Ａを参照のこと）。理論に束縛されることを望むものではないが、コレステロールはＳｈｈ経路のアゴニストであるため、細胞分化に関与する遺伝子発現の変動は、コレステロールを含む培地中で培養された細胞において生じ得る。細胞をＥｓｓｅｎｔｉａｌ ６培地中で分化させ、フォークヘッドボックスタンパク質Ｇ１（ＦＯＸＧ１）及びペアードボックスタンパク質（ＰＡＸ－６）発現を調べて、遺伝子発現に対するアルブミンの効果を分析した。Ｓｈｈの下流にあるＦＯＸＧ１及びＰＡＸ－６の発現レベルを、ＢＳＡ１（脂肪酸フリー）、ＢＳＡ２（脂肪酸リッチ）、又はＢＳＡ３（脂肪酸リッチ）のいずれかとともに培養したｈＰＳＣ細胞においてｑＰＣＲによって測定した。結果を図２Ｆに示す。結果は、異なる供給源由来のＢＳＡが、Ｐａｘ６及びＦｏｘＧ１遺伝子発現に対して異なる効果を有することを示し、これはおそらく、試験したアルブミン試料間の混入コレステロールの変動に起因する。したがって、アルブミン中の脂質汚染物質のレベルは、多能性幹細胞分化に影響を及ぼし得る。

【0131】

これらの結果は、集合的に、定義されていない汚染物質がアルブミンに付随し、細胞培養性能に差次的に影響することを示す。したがって、細胞培養からアルブミンを除去することは、汚染物質、特に血液起源の汚染物質、及び他の未定義の因子のリスクを低減し得る。
実施例２：アルブミン及びその化学的に定義された抗酸化代替物の抗酸化特性

【0132】

本明細書に記載される実験は、アルブミンの生理学的機能を調査するため、及びアルブミンの化学的に定義された成分での置換を調査するために行われた。まず、アルブミンの抗酸化特性を分析した。様々なアルブミンの総抗酸化力を、第二鉄抗酸化状態測定キット（Ferric Antioxidant Status Detection Kit）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を製造業者のプロトコルに従って使用することによって測定した。図３に示す結果は、抗酸化活性が、試験したアルブミン間で有意に異なることを示している。結果は更に、ヒト血漿血清アルブミンが、組換えＨＳＡと比較して有意に高いレベルの還元力を有することを示す。培養培地における血漿の使用は、血液起源の汚染物質の供給源であるので、血清及び血漿の排除が非常に望ましい。

【0133】

アルブミンにおける様々なクラスの抗酸化活性を調査した。本出願人らは最初に、スーパーオキシドジスムターゼ（Superoxide Dismutase、ＳＯＤ）比色活性キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を製造業者のプロトコルに従って利用して、様々なアルブミンのスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性を分析した。簡潔に説明すると、ＳＯＤ活性は、基質とキサンチンオキシダーゼとを反応させてスーパーオキシド（Ｏ^- ₂）を形成することを含むアッセイを利用して評価され、そのレベルはＳＯＤ活性によって減少する。図４Ａに示すように、アルブミンはＳＯＤ活性を有することが確認され、更に、分析したアルブミンにおけるＳＯＤ活性は有意に異なっていた。特に、イネ由来の組換えＨＳＡは、最も高い抗酸化活性を示した。

【0134】

次に、化学的に定義された成分がＳＯＤ抗酸化活性を置換する能力を試験した。スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）比色活性キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を製造業者のプロトコルに従って使用して評価されるように、ミトコンドリア中のＯ２・^-を除去するＭｉｔｏ－Ｔｅｍｐｏを、スーパーオキシドを還元するその能力についてＨＳＡと比較した。図４Ｂに示すように、Ｍｉｔｏ－Ｔｅｍｐｏ濃度は、用量依存的にスーパーオキシドレベルを減少させる。したがって、この化合物は、アルブミンＳＯＤ様抗酸化機能を複製及び置換するために使用され得る。

【0135】

Ｍｉｔｏ－Ｔｅｍｐｏが培養細胞を酸化ストレスから救済する能力を試験した。初代ラットニューロン細胞は、ＲＯＳに対して特に脆弱であり、したがって、Ｍｉｔｏ－Ｔｅｍｐｏが細胞培養に対して有益な効果を提供するかどうかを評価するためのモデルとして機能した。初代ラットニューロン細胞を、０．１２μｇ／ｍＬの鉄の存在下で、ＩＴＳを補充した神経基礎培地中で培養した。６日目に、Ｍｉｔｏ－Ｔｅｍｐｏを、示された濃度で培養培地に滴定した。培養６日後、細胞生存率をカルセインＡＭ染色で測定した。図５に示すように、Ｍｉｔｏ－Ｔｅｍｐｏは、約１２．５～約２５μＭの濃度まで細胞を救済するのに有効であった。これらの結果は、Ｍｉｔｏ－Ｔｅｍｐｏが、ＲＯＳ関連ストレスから細胞を救済するためのアルブミンの機能性を置換できることを示す。

【0136】

次いで、アルブミンのカタラーゼ活性を同定し、製造業者のプロトコルに従ってＡｍｐｌｅｘ（商標）赤色過酸化水素／ペルオキシダーゼアッセイ（Red Hydrogen Peroxide/Peroxidase Assay）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって測定した。簡潔に説明すると、過酸化水素及びカタラーゼは、赤色Ａｍｐｌｅｘ及び西洋ワサビペルオキシダーゼと混合した場合に蛍光生成物レゾルフィンを形成する生成物を形成する。したがって、蛍光シグナルの強度を使用してカタラーゼ活性レベルを測定することができる。示されるように、ＢＳＡ、組換えＨＳＡ、又は血漿ＨＳＡの異なる供給源を、この方法を利用して評価した。試験したアルブミンの各々はカタラーゼ活性を有していたが、レベルはアルブミン試料間で異なっていた（図６）。特に、試験した２つのＢＳＡ試料は、還元活性において有意な変動を示した。

【0137】

アルブミンは３４位にシステイン残基を有し、これは遊離チオールとして存在するか、又はグルタチオン（ＧＳＨ）とジスルフィド結合を形成し得る。グルタチオンペルオキシダーゼは、還元剤としてＧＳＨを使用して、細胞に潜在的に損傷を与える強力な酸化剤であるＨ₂Ｏ₂を除去するので、アルブミンは、ＧＳＨの細胞内レベルの調節において極めて重要な役割を果たす。チオールの存在下で１，３，５－トリニトロベンゼン（Trinitrobenzene、ＴＮＢ）を生成するエルマン試薬（ＤＴＮＢ、５，５－ジチオ－ビス－（２－ニトロ安息香酸））を使用して、様々なアルブミンをチオールベースの抗酸化活性について試験した。結果は、ＧＳＨベースの抗酸化活性が血漿ＨＳＡにおいて最も高かったことを示す（図７）。更に、活性レベルは、分析したアルブミンのタイプ及び供給源の間で異なっていた。

【0138】

次に、本出願人らは、アルブミンのカタラーゼ及びチオール抗酸化活性を置換し得る化学的に定義された成分を試験した。ＧＳＨ及びリポ酸は、低濃度又は高濃度のいずれかのＧＳＨ又はリポ酸の存在下でラットニューロンを培養し、続いて細胞生存率をアッセイすることによって、カタラーゼ及びチオール抗酸化活性を提供するそれらの能力について評価した。リポ酸は、対照培養物と比較してラットニューロン細胞生存率を増強し（図８）、したがって、ＨＳＡのカタラーゼ及びチオール活性を置換するために使用することができる。逆に、試験したいずれの濃度のＧＳＨも、対照と比較して細胞生存率に対する有意な効果を示さなかった。
実施例３．アルブミン金属キレート特性及びその化学的に定義されたペプチド置換

【0139】

鉄及び銅を含む、遊離した酸化還元活性遷移金属イオンは、酸化促進剤であり得、フェントン反応及びハーバーワイス反応を含む反応に関与して、ヒドロキシルラジカルＯＨ^・を生成し得る。細胞培養物中のラジカルの存在は、細胞を損傷し、培養性能を低下させる。例えば、図９に示されるように、銅（１０μＭ又は５０μＭ、それぞれＣｕ１０及びＣｕ５０）の存在下で培養されたラットニューロン細胞は、金属の不在下（Ｃｕなし）で培養された細胞と比較して生存率の低下を示す。アルブミンは、金属に結合して反応性を制御し、利用可能性を制限し、それによって、ＯＨ^・ラジカルによって引き起こされる損傷を低減することができる。

【0140】

ＨＳＡのようなアルブミンは、ニューロン細胞に対して毒性である遷移金属のキレート剤として機能する、金属結合部位を有する。したがって、本出願人らは、ＨＳＡが、機能的金属結合部位の高親和性結合を模倣する合成ペプチドによって置換され得るかどうかを調査した。図１０に示される結果は、キレート化アミノ酸配列ＤＡＨＫ（ペプチドＣ；配列番号１）を含む、特定の濃度のＨＳＡ金属結合部位が、アルブミンを欠く培養培地中で成長させた場合にラットニューロン細胞生存率を増強し、ＨＳＡの支持的特徴を模倣したことを示す。驚くべきことに、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１０個の更なるＨＳＡ残基を含むように伸長されたペプチドＣ配列であるペプチドＡは、ＨＳＡ支持的特性を保持しなかった。いずれかの末端で５つの更なる隣接ＨＳＡ残基によって伸長されたペプチドＣ配列であるペプチドＢは、同様に非機能的であった。これらの結果は、ペプチドＣがそれ自体で金属キレート能力を保持するが、その機能は隣接するアミノ酸残基によって影響を受けることを示す。科学的理論に束縛されることを望むものではないが、追加のアミノ酸残基は、ペプチドＣ配列のキレート機能を遮断するか、又は他の方法で阻害する可能性がある。更に、これらのデータは、本明細書中に記載されるペプチド（ペプチドＣを含む）が、培養培地中のアルブミンを置換可能であることを示す（例えば、サプリメントとして、又は完全培養培地の一部として提供される場合）。

【0141】

細胞培養物に増強特性を付与する際のペプチドＣイオン特性及び配列特異性の重要性を調査した。テトラペプチドＤＡＨＫ（配列番号１）は、負、中性、及び２個の正に荷電したアミノ酸（－Ｘ＋＋）を含む配列である。配列ＤＴＨＫ（配列番号２）を含む対応するＢＳＡペプチドは、特にペプチドＣと同じ順序の荷電アミノ酸を有する。ペプチドＣ（第１のロット及び第２のロット）と同様に、ＤＴＨＫ（配列番号２；ＢＳＡペプチド）は、図１１に示すように、培養ラットニューロン細胞の生存率を改善するのに機能的であることが示された。アミノ酸配列又は電荷特異性が有益な特性を与えるかどうかを評価するために、スクランブルペプチドＣ配列を調製し、試験した。配列ＡＫＤＨ（配列番号３、スクランブル）及びＸ＋－＋の電荷を含むスクランブルペプチドを試験し、結果を図１１に示す。結果は、テトラペプチドの培養支持的機能が荷電アミノ酸の特定の組み合わせに関連していることを示唆している。例えば、－Ｘ＋＋の電荷配列は、細胞培養増強特性を付与したが、電荷配列がスクランブルされた場合、ＨＳＡ様機能は消失した。

【0142】

本出願人らは更に、ＨＳＡペプチドＤＡＨＫ（配列番号１）の複数のロットを試験し、図１１に示される結果は、ペプチドが、溶液中でさえ、ロット間の一貫性及び良好な貯蔵寿命を実証したことを示す。これらの結果は、集合的に、合成ペプチドが支持的サプリメントとして細胞培養物中のヒト血清アルブミンを置換し得ることを示す。

【0143】

銅のレベルは、最適な細胞生存率のために調節されなければならず、銅を含む細胞培養物は、ラットニューロン細胞に対して一貫して毒性をもたらした。したがって、ペプチドＣを調査して、ＨＳＡ金属キレート活性を保持するその能力を確認した。初代ラットニューロン細胞を、ＩＴＳを補充した神経基礎培地中で、５０μＭの銅の存在下で培養したところ、細胞に対する毒性が生じた。しかしながら、培養におけるペプチドＣの添加は、図１２に示されるように、銅の存在下でさえ毒性を防止した。実際、銅及びペプチドＣの存在下で培養されたラットニューロン細胞は、銅を含まない培養物と比較して、同様のレベルの生きた健康な細胞を示した。結果は、ペプチドＣが遷移金属キレート剤としてのＨＳＡ機能性を保持することを示す。したがって、合成ペプチドは、細胞培養物及び他の生物学的アッセイでは、アルブミンの金属結合活性を複製及び置換し得る。

【0144】

金属及び合成ペプチドの効果を、マウス胚性幹細胞（ｍＥＳＣ）及びＨＥＫ２９３細胞増殖培養物において更に評価した。ｍＥＳＣ及びＨＥＫ２９３培養物に５０μＭの銅を添加し、それによって毒性培養環境を作り出し、細胞増殖を阻害した。培養物への１００μｇ／ｍＬ又は５０μｇ／ｍＬのいずれかのペプチドＣの添加は、特にｍＥＳＣ細胞について、ストレスを受けた細胞を濃度依存的に救済し、より少ない程度でＨＥＫ２９３細胞を救済した。製造業者のプロトコルに従ってＰＲＥＳＴＯＢＬＵＥ（商標）細胞生存率試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用して、生存率を評価した。生存率アッセイは、図１３及び図１４に示すように、ペプチドＣが銅誘導性ストレスを救済し、細胞増殖を増強することを示した。結果は、ペプチドＣが、培地の安定性及び質を改善するための血清を含まない及び脂肪の少ない培養物（例えば、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ８）に対するサプリメントであり得、金属キレート能力についてＨＳＡを置換し得ることを示す。

【0145】

ペプチドＣは、本明細書に記載されるように細胞培養において有益な特性を示すので、本出願人らは更に、様々なペプチドＣ由来合成ペプチドを、細胞培養においてアルブミンを置換するそれらの能力について試験した。ペプチド長の影響を決定するために、本出願人らは、ペプチドＣ ＤＡＨＫ配列（配列番号１）に隣接するアミノ酸残基の長さ及び同一性の両方が異なる様々なペプチドを評価した。更に、イオン特性の効果を評価するために、配列番号１のペプチドに対するアミノ酸置換を含むペプチドを試験した。アミノ酸置換は、配列番号１のイオン特性及び疎水性特性を保持するように、すなわち、負に荷電した残基、疎水性非荷電残基、及び正に荷電した残基の順序を保存することによって設計された。したがって、初代ラットニューロンを、ＩＴＳを補充した神経基礎培地中で培養した。培養物に、ｒＨＳＡ、又はペプチドＣ由来合成ペプチドのバリエーションを更に補充した。

【0146】

細胞培養物の第１のセットでは、合成ペプチドは、ＤＡＨＫ（配列番号１）アミノ酸配列、又は配列番号１のＮ末端及びＣ末端の一方又は両方に更なる残基を有するペプチドを含んだ。培養５日目に、細胞をカルセインＡＭで標識し、計数した。図２０に示す結果は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１６、及び配列番号１７の配列を有するペプチドが、細胞培養に有益な特性を伝達し、したがって、培養物中のアルブミン、例えばＨＳＡを置換又は部分的に置換し得ることを示す。結果は、ペプチドＣの活性コンホメーションが維持される場合、配列番号１の片側又は両側に更なる残基を有する合成ペプチドが、アルブミンを少なくとも部分的に置換するために培養物中で使用され得ることを示す。すなわち、ペプチドのＮ末端及びＣ末端上の隣接残基の長さは、コンホメーションが細胞培養においてその有益な特性を維持しないように影響を受けない限り、ペプチドＣの機能を維持するために重要ではない。

【0147】

培養物の第２のセットでは、ラットニューロン細胞を、ペプチドＤＡＨＫ（配列番号１）並びにＤＡＨＫペプチド（配列番号１）のイオン特性及び疎水性特性を保存する誘導体を含む合成ペプチドとともに培養した。図２１に示す結果は、イオン特性に加えて、第３のアミノ酸の同一性が特に重要であることを示す。例えば、第１のアミノ酸は、Ｄ又はＥの負に荷電したアミノ酸のいずれかで占有され得、第２のアミノ酸は、Ａ又はＴなどの非荷電アミノ酸であり得る。更に、第４のアミノ酸は、Ｋ又はＲなどの正に荷電したアミノ酸であり得る。しかしながら、第３のアミノ酸は、Ｈ残基でなければならず、他の正に荷電したアミノ酸、例えば、Ｋ又はＲによって置換することはできない。
実施例４．幹細胞培養物中のアルブミンについての合成ペプチド置換

【0148】

ペプチドＣ（配列番号１）を、細胞分化に対するその効果について評価した。本明細書中に記載されるように、種々の供給源由来のＢＳＡの存在は、培養細胞における細胞分化に関与する遺伝子の一貫しない発現レベルを生じた。理論に束縛されることを望むものではないが、これは、アルブミン試料内のコレステロールレベルの変動に起因する可能性が高い。細胞分化に対するテトラペプチドプロテインＣの効果を評価するために、多能性幹細胞（ＰＳＣ）を、ＢＳＡ１、ＢＳＡ２、又はペプチドＣのいずれかの存在下で培養した。ペプチドＣとともに培養されたＰＳＣは、免疫細胞化学（immunocytochemistry、ＩＣＣ）及びｑＰＣＲによって決定されるように、対照培養物（ＳＡなし）と比較して同様のＦｏｘＧ１の発現レベルをもたらした。結果をそれぞれ図１７Ａ及び図１７Ｂに示す。ペプチドＣの更なる分析により、ペプチドがコレステロール汚染物質を含まないことが確認された。分化の際に、細胞は、前脳、中脳、後脳などのそれらの位置同定を発達させる。特定化は、ＰＳＣがこの位置同定を発達させるステップである。本明細書中のデータは、ＰＳＣ分化の特定化が培養物中のＢＳＡ１又はＢＳＡ２の存在に影響を受けたが、ペプチドＣでは有意な影響は示されなかったことを示す。これらの結果は、合成ペプチドが、一貫性のない細胞分化をもたらす遺伝子発現の変動を防止するために、幹細胞培養物中のアルブミンを置換し得ることを示す。
実施例５．アルブミン及びその化学的に定義された代替物におけるビタミンＥ抗酸化活性

【0149】

本明細書に記載されるように、アルブミンは抗酸化活性を付与するが、その活性はアルブミン相同体、供給源、及びロット間で変動し、一貫性がない。更に、ＨＰＬＣによって確認され、図１５に示されるように、抗酸化成分は、アルブミン試料間でその濃度及び活性が異なる。抗酸化特性を有する脂溶性ビタミンはアルブミンに結合することが知られているので、２つのタイプのアルブミンをそれらのビタミンＥ含有量について評価した。試料中にビタミンＥを滴定することによって、低脂肪アルブミン（アルブミン１）及び高脂肪アルブミン（アルブミン２）を分析した。図１６Ａに示される結果は、ビタミンＥ飽和が、アルブミン１と比較してアルブミン２についてより低い濃度で生じたことを示す。これらのデータは、アルブミン２が、アルブミン１と比較してより高いレベルのビタミンＥ（又はビタミンＥのアゴニスト）を有していたことを示唆する。

【0150】

ビタミンＥは、ＲＯＳ及び脂質ラジカルの効率的なスカベンジャーである親油性抗酸化剤のクラスに属し、それらを生体膜の不可欠な保護剤及び必須成分にする。したがって、出願人らは、アルブミン中のビタミンＥの特性を再現することができる化学的に定義された成分を同定し、特徴付けることを試みた。

【0151】

ビタミンＥの水溶性誘導体であるトロロックス（６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）は、アルブミンの置換物として調査された。ラット皮質ニューロン（ＲＣＮ）細胞を、漸増濃度のビタミンＥ又はトロロックスの存在下で、ＩＴＳを補充した神経基礎培地中で培養した。抗酸化剤なしでは、老化したニューロンは約４日目に変性し始め、プレート上に生存ニューロンがほとんど残っていなかった。驚くべきことに、細胞培養物へのビタミンＥ（図１６Ｂ）又はトロロックス（図１６Ｃ）のいずれかの滴定は、６日目に評価されるように細胞死を逆転させた。更に、トロロックスは、ビタミンＥよりも高い水溶性及び広い作用範囲を有し、それをビタミンよりも好ましい培養サプリメントにする。これらの結果は、トロロックスが、細胞変性を防止するためのアルブミンのビタミンＥ活性の実行可能な代替物であることを示す。
実施例６．化学的に定義されたアルブミン代替物を含む組成物

【0152】

本明細書において提供される抗酸化剤は、アルブミンを含む組成物において評価された。本出願人らは、抗酸化剤が、組み合わせて使用された場合にアルブミンの毒性特徴を逆転させることに加えて、細胞培養物に有益な特性を付与し得るかどうかを調査した。培養中の細胞に対して毒性を示した、イネ由来の組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）を、抗酸化剤の存在下又は不在下のいずれかで、細胞培養物において試験した。製造業者のプロトコルに従ってＰＲＥＳＴＯＢＬＵＥ（商標）細胞生存率試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）で評価したとき、ＨＥＫ－２９３細胞。データは、図１８Ａに示すように、追加の抗酸化剤の不在下で培養した細胞と比較して、細胞をｒＨＳＡとともに培養した場合に、より高いレベルの増殖を示す。Ｈｅｌａ細胞は、図１８Ｂに示すように、同様の結果を示した。驚くべきことに、抗酸化剤は、ｒＨＳＡの不在下で培養された細胞の対照群と比較して、細胞増殖を改善した。これらの結果は、化学的に定義された抗酸化剤をアルブミンと組み合わせて、有益な特性を付与し、かつアルブミン汚染物質から毒性を救済することができることを示す。

【0153】

更に、ペプチドＣ及び抗酸化剤を含むカクテルを、培養中の細胞成長を支持するその能力について分析した。ニューロン細胞を、トランスフェリン（ホロ）を補充したＮ２培地中で培養した。細胞を、カクテルの存在下又は不在下のいずれかで培養した。続いて、生細胞をカルセインＡＭで標識し、計数した。図１９Ａに示される結果は、ペプチドＣ及び抗酸化剤の存在下で、神経細胞が、カクテルの不在下で培養された細胞よりも高い生存率を示したことを示す。更に、カルセインＡＭ標識細胞の画像及び神経突起長の分析は、図１９Ｂに示されるように、カクテルが神経突起成長及び形成を増強したことを示す。これらの結果は、ペプチドＣ及び他の化学的に定義されたアルブミン代替物を含む組成物が、細胞培養性能を改善するために使用され得ることを示す。
非公式の配列表

【0154】

配列番号１ ＤＡＨＫ

【0155】

配列番号２ ＤＴＨＫ

【0156】

配列番号３ ＡＫＤＨ

【0157】

配列番号４ ＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨ

【0158】

配列番号５ ＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤ

【0159】

配列番号６ ＶＦＲＲＥＡＨＫＳＥＩＡＨＲ

【0160】

配列番号７ ＥＡＨＫ

【0161】

配列番号８ ＤＡＨＲ

【0162】

配列番号９ ＤＡＲＫ

【0163】

配列番号１０ ＲＤＡＨＫ

【0164】

配列番号１１ ＲＤＡＨＫＳ

【0165】

配列番号１２ ＲＲＤＡＨＫ

【0166】

配列番号１３ ＲＲＤＡＨＫＳ

【0167】

配列番号１４ ＲＤＡＨＫＳＥ

【0168】

配列番号１５ ＲＲＤＡＨＫＳＥ

【0169】

配列番号１６ ＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶ

【0170】

配列番号１７ ＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡ

【0171】

配列番号１８（ＨＳＡ） ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬ ＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧ ＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥ ＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥ ＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡ ＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦ ＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶ ＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤ ＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬ ＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴ ＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥ ＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰ ＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫ ＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶ ＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡ ＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫ ＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨ ＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦ ＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴ ＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡ ＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲ ＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱ ＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦ ＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶ ＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡ ＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴ ＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣ ＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤ ＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥ ＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫ ＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫ ＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤ ＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡ ＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣ ＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦ ＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲ ＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬ ＬＲＬＡＫＴＹＥＴＴ ＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰ ＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥ ＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮ ＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥ ＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡ ＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰ ＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶ ＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫ ＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭ ＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶ ＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫ ＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣ ＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰ ＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴ ＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴ ＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬ ＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱ ＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫ ＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡ ＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥ ＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴ ＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶ ＡＡＳＱＡＡＬＧＬ

【0172】

配列番号１９ ＤＡＫＨ

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F】

【図1G】

【図1H】

【図1I】

【図1J】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図17A】

【図17B】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図20】

【図21】

【配列表】

2024501643000001.app

【国際調査報告】