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特表2024-501693ケストースを用いたアトピー皮膚炎の改善効能および腸内マイクロバイオーム調節
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-15
(54)【発明の名称】ケストースを用いたアトピー皮膚炎の改善効能および腸内マイクロバイオーム調節
(51)【国際特許分類】
A23L 33/125 20160101AFI20240105BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240105BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240105BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240105BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240105BHJP
A61K 35/745 20150101ALI20240105BHJP
A61K 35/747 20150101ALI20240105BHJP
A61K 35/741 20150101ALI20240105BHJP
A61K 31/702 20060101ALI20240105BHJP
A61K 31/19 20060101ALN20240105BHJP
【ＦＩ】
A23L33/125
A61P29/00
A61P1/04
A61P17/00
A61P43/00 121
A61K35/745
A61K35/747
A61K35/741
A61K31/702
A61K31/19
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023540103
(86)(22)【出願日】2021-12-30
(85)【翻訳文提出日】2023-06-29
(86)【国際出願番号】 KR2021020282
(87)【国際公開番号】W WO2022146077
(87)【国際公開日】2022-07-07
(31)【優先権主張番号】10-2020-0190020
(32)【優先日】2020-12-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500578515
【氏名又は名称】サムヤン コーポレイション
(74)【代理人】
【識別番号】110002837
【氏名又は名称】弁理士法人アスフィ国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】サ，スンオク
(72)【発明者】
【氏名】パク，ジウォン
(72)【発明者】
【氏名】キ，ミンジ
(72)【発明者】
【氏名】ナム，チュンウ
(72)【発明者】
【氏名】ハン，ジョンスク
(72)【発明者】
【氏名】キム，ウォンヨン
(72)【発明者】
【氏名】キム，ジョンファ
(72)【発明者】
【氏名】キム，キヨン
【テーマコード（参考）】
4B018
4C086
4C087
4C206
【Ｆターム（参考）】
4B018LB02
4B018LB05
4B018LB06
4B018LB07
4B018LB08
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4C086AA01
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4C087ZC75
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4C206AA02
4C206DA02
4C206ZA66
4C206ZA89
4C206ZB11
(57)【要約】
本発明は、ケストースを有効成分として含む組成物、そして、前記組成物の腸内短鎖脂肪酸（ｓｈｏｒｔ ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ、ＳＣＦＡ）の生産および／または含有量増進剤、短鎖脂肪酸の生産菌増進用途、炎症性疾患、例えば、アトピー皮膚炎または腸内炎症の予防、治療または改善用途、および腸内マイクロバイオーム調節用途に関し、前記組成物は、食品、医薬または健康機能性食品組成物であってもよい。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ケストースを有効成分として含有する腸内プロピオン酸の含有量増加用組成物。
【請求項2】
腸内プロピオン酸生産菌の増殖によるプロピオン酸の含有量増加である、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記腸内プロピオン酸生産菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物およびＡｌｉｓｔｉｐｅ属微生物からなる群より選択された１種以上の微生物である、請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
前記組成物は、糞便内または腸内のプロピオン酸含有量が、ケストースを摂取する前のレベルを基準として１０１～７００％に増加したことを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項5】
前記組成物は、糞便内または腸内のプロピオン酸含有量が１００±３０ｍｇ／Ｌ以上であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
前記組成物は、糞便内または腸内の酪酸（ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）とプロピオン酸（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）の重量比（ｗ／ｗ）が４：１～１：３である、請求項１に記載の組成物。
【請求項7】
ケストースを有効成分として含有する腸内微生物の生育増進用組成物であって、前記腸内微生物は、Ａｌｉｓｔｉｐｅ属微生物である、腸内微生物の生育増進用組成物。
【請求項8】
前記腸内微生物は、Ａｌｉｓｔｉｐｅ属微生物とＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物である、請求項７に記載の組成物。
【請求項9】
前記腸内微生物の相対豊富度（ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））が増加したものである、請求項７に記載の組成物。
【請求項10】
前記腸内微生物の相対豊富度は、前記有効成分を対象に摂取前のレベル１００％を基準として１０５％以上である、請求項７に記載の組成物。
【請求項11】
ケストースを有効成分として含有する、腸内微生物群集の調節による炎症性疾患の予防、改善または治療用組成物であって、前記腸内微生物群集の調節は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物およびＡｌｉｓｔｉｐｅ属微生物からなる群より選択された１種以上の微生物の生育増進によるものである、組成物。
【請求項12】
前記炎症性疾患は、免疫過敏反応による炎症性皮膚疾患または炎症性腸疾患である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項13】
前記炎症性腸疾患は、クローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項14】
前記炎症性皮膚疾患は、アトピー皮膚炎、接触皮膚炎、またはアレルギー性接触皮膚炎である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項15】
ケストースを有効成分として含有する腸内微生物の生育抑制用組成物であって、前記腸内微生物は、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ属微生物である、腸内微生物の生育抑制用組成物。
【請求項16】
前記腸内微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））が減少したものである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項17】
前記組成物は、前記腸内微生物の相対豊富度は、摂取前のレベルを基準として０．５～２．５％の減少分を有するものである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項18】
ケストースを有効成分として含有する、腸内微生物群集の調節による炎症性疾患の予防、改善または治療用組成物であって、前記腸内微生物群集の調節は、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ属微生物の生育抑制によるものである、組成物。
【請求項19】
前記ケストースは、糖類の固形分含有量を基準として５０重量％以上のケストースを含むフラクトオリゴ糖組成物として提供させるものである、請求項１～１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項20】
前記ケストースの１日投与量は、体重６０ｋｇの成人１人に１日あたり２～３０ｇの範囲で提供されるものである、請求項１～１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項21】
前記組成物は、プレバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項22】
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属微生物、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属微生物、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属微生物、ｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物、Ａｌｉｓｔｉｐｅ属微生物、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物からなる群より選択される１種以上のプロバイオティクス組成物を追加的に含むものである、請求項２１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ケストースを有効成分として含む組成物、そして、前記組成物の腸内短鎖脂肪酸（ｓｈｏｒｔ ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ、ＳＣＦＡ）の生産および／または含有量増進剤、短鎖脂肪酸の生産菌増進用途、炎症性疾患、例えば、皮膚炎症または腸内炎症の予防、治療または改善用途、および腸内マイクロバイオーム調節用途に関する。
【背景技術】
【0002】
最近、プロバイオティクスが、腸内有益菌を増殖し有害菌を抑制する効能により、アトピー症状緩和、免疫力強化などに効果が良いという研究結果により、健康補助食品として注目されている。
【0003】
しかし、プロバイオティクスは、一部の腸膜損傷、免疫低下患者などにおいては副作用が憂慮され、服用時に注意が必要という報告がある。
【0004】
最近は、プロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）という用語のほか、プロバイオティクスのエサになる栄養分を意味するもので、腸内プロバイオティクスを活性化することによってその機能を極大化させることができるプレバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ）に関する研究が活発に行われている。
【0005】
プレバイオティクスの大部分はオリゴ糖や多糖体の形態を呈するが、代表的なものは、過去にはｉｎｕｌｉｎ、ｌａｃｔｕｌｏｓｅ、ｌａｃｔｉｔｏｌなどがビフィダス菌などの有益菌のエサとして主に活用され、最近はさらに多様にＡＸ（ａｒａｂｉｎｏｘｙｌａｎ）などが活用されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明の一例は、ケストースを有効成分として含む腸内マイクロバイオーム調節用途に関し、さらに詳しくは、腸内有益微生物の生育増進／促進および／または障害有害微生物の生育抑制／減少用途に関する。
【0007】
本発明のさらなる一例は、ケストースを有効成分として含む組成物の腸内微生物、例えば、ラクトバチルス属微生物およびＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属微生物からなる群より選択される１種以上の微生物の生育増進／促進用途に関する。
【0008】
本発明のさらなる一例は、ケストースを有効成分として含む組成物の腸内微生物、例えば、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ属微生物の生育抑制／減少用途に関する。
【0009】
本発明のさらなる一例は、ケストースを有効成分として含む腸内短鎖脂肪酸、例えば、プロピオン酸を生産する腸内微生物の生育増進／促進用途に関する。
【0010】
本発明のさらなる一例は、ケストースを有効成分として含む、腸内短鎖脂肪酸、例えば、プロピオン酸の生産および／または含有量増進用組成物に関する。前記腸内短鎖脂肪酸、例えば、プロピオン酸の生産および／または含有量の増加は、腸内微生物によって達成されるものであってもよい。
【0011】
本発明のさらなる一例は、ケストースを有効成分として含む炎症性疾患、例えば、皮膚炎症（炎症性皮膚疾患）および／または腸内炎症（炎症性腸疾患）の予防、治療または改善用途に関する。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明の一例は、ケストースを有効成分として含む腸内マイクロバイオーム調節用途に関し、さらに詳しくは、腸内有益微生物の生育増進、腸内有害微生物の生育抑制、および／または腸内短鎖脂肪酸、例えば、プロピオン酸を生産する腸内微生物の生育増進用途に関する。
【0013】
本発明のさらに他の例は、ケストースを有効成分として含む腸内短鎖脂肪酸（ｓｈｏｒｔ ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ、ＳＣＦＡ）、例えば、プロピオン酸の生産および／または含有量増進用組成物に関する。
【0014】
本発明のさらなる一例は、ケストースを有効成分として含む炎症性疾患、例えば、皮膚炎症および／または腸内炎症の予防、治療または改善用途に関する。
【発明の効果】
【0015】
本発明は、副作用や安全性をほとんど心配せず、簡便でかつ効果的にヒトや動物の有益な腸内微生物を増加させ、有害な微生物を減少させることによって、腸内マイクロバイオームの不均衡を改善させるというメリットがある。
【0016】
また、本発明によれば、副作用や安全性をほとんど心配せず、簡便でかつ効果的にヒトや動物の腸内短鎖脂肪酸のうちプロピオン酸またはプロピオン酸生産菌株を増加させることによって、腸内環境を改善させるというメリットがある。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1】本発明の一例により、動物モデルを用いて腸内微生物に及ぼすケストース影響分析のための実験プロトコルである。
【図2】本発明の一例により、実験動物モデルの体重変化を測定した結果である。
【図3】本発明の一例により、実験動物モデルの腸内微生物に対するａｌｐｈａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ分析による腸内微生物の種（ｓｐｅｃｉｅｓ）の多様性を示すグラフである。
【図4】本発明の一例により、実験動物モデルの腸内微生物に対するｂｅｔａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ分析による腸内微生物のグループ間の差を示すグラフである。
【図5】本発明の一例により、研究期間８週、１２週、および１６週目に収集した動物モデルの糞便試料を用いて腸内微生物群集のｐｈｙｌｕｍ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ結果を示す。
【図6】本発明の一例により、研究期間１６週目に収集した動物モデルの糞便試料を用いて腸内微生物群集のｐｈｙｌｕｍ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ結果を示す。
【図7】本発明の一例により、研究期間８週、１２週、および１６週目に収集した動物モデルの糞便試料を用いて腸内微生物群集のｈｅａｔｍａｐ分析によるｔｏｐ３０ ｇｅｎｕｓ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ結果を示す。
【図8】本発明の一例により、研究期間１６週目に収集した動物モデルの糞便試料を用いて腸内微生物群集のｈｅａｔｍａｐ分析によるｔｏｐ３０ ｇｅｎｕｓ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ結果を示す。
【図9】本発明の一例により、実験群投与によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．の有意な増加を示す。
【図10】本発明の一例により、実験群投与によるＡｌｉｓｔｉｐｅ ｓｐｐ．の有意な増加を示す。
【図11】本発明の一例により、実験群投与によるＰｒｅｖｅｔｅｌｌａ ｓｐｐ．の有意な減少を示す。
【図12】本発明の一例により、研究期間１６週目に収集した動物モデルの糞便試料を用いて実験群投与による酪酸（Ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）含有量の変化を測定した結果である。
【図13】本発明の一例により、研究期間１６週目に収集した動物モデルの糞便試料を用いて実験群投与による酢酸（Ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）含有量の変化を測定した結果である。
【図14】本発明の一例により、研究期間１６週目に収集した動物モデルの糞便試料を用いて実験群投与によるプロピオン酸（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）含有量の変化を測定した結果である。
【図15】本発明の一例により、Ｔｏｔａｌ ｓｃｏｒｅ（ｉｔｃｈｉｎｇおよびｓｅｖｅｒｉｔｙ）によるアトピー皮膚炎の重症度改善評価の結果である。
【図16】本発明の一例により、実験動物の血清ＩｇＥの分泌量の分析結果である。
【図17】本発明の一例により、実験動物の血清ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、およびＩＬ－１２の分泌量の分析結果である。
【図18】本発明の一例により、実験動物の血清Ｌ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＴＡＲＣ、およびＥｏｔａｘｉｎの分泌量の分析結果である。
【図19】本発明の一例により、実験動物の血清ＩＬ－１βおよびＩＬ－１０の分泌量の分析結果である。
【図20】本発明の一例により、Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙで分析した脾臓細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ）のＣＤ８６の発現量を示す図である。
【図21】本発明の一例により、Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙで分析した脾臓細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ）のＣＤ２７４の発現量を示す図である。
【図22】本発明の一例により、実験動物の皮膚組織内の肥満細胞数（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ）を測定した結果である。
【図23】本発明の一例により、実験動物の皮膚組織内の好酸球数（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ ｃｏｕｎｔ）を測定した結果である。
【図24】本発明の一例により、実験動物の腸組織内の肥満細胞数（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ）を測定した結果である。
【発明を実施するための形態】
【0018】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明は、ケストースを有効成分として含む腸内マイクロバイオーム調節用途として腸内微生物の不均衡を改善する組成物、用途または方法に関し、詳しくは、腸内有害微生物の生育抑制、腸内有益微生物の生育増進およびプロピオン酸生産菌の生育増進からなる群より選択された１種以上の腸内マイクロバイオーム調節用途に使用するための組成物に関する。本発明の一例は、ケストースまたはケストースを含む組成物を、これを必要とする対象に投与する工程を含む、腸内マイクロバイオームの調節方法または腸内微生物の不均衡を改善する方法に関する。
本発明は、ケストースを有効成分として含む腸内マイクロバイオーム調節用途として腸内微生物の不均衡を改善する組成物、用途または方法に関し、詳しくは、腸内有害微生物の生育抑制、腸内有益微生物の生育増進およびプロピオン酸生産菌の生育増進からなる群より選択された１種以上の腸内マイクロバイオーム調節用途に使用するための組成物に関する。本発明の一例は、ケストースまたはケストースを含む組成物を、これを必要とする対象に投与する工程を含む、腸内マイクロバイオームの調節方法または腸内微生物の不均衡を改善する方法に関する。
【0019】
本発明によれば、有効成分の１－ケストースを医薬品または飲食品として、対象、例えば、ヒトを含む哺乳動物に経口で提供して、摂取者の腸内微生物群集を調節して腸内微生物の不均衡を改善することができる。具体的には、本発明に係る腸内微生物の不均衡の改善用組成物および腸内有益微生物の増殖剤を哺乳動物が経口摂取することによって、腸内で腸内有害微生物の生育抑制、腸内有益微生物の生育増進およびプロピオン酸生産菌の生育増進からなる群より選択された１種以上の腸内マイクロバイオームを調節することができる。
【0020】
本発明の一例は、ケストースを有効成分として含む組成物の腸内有益微生物、例えば、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属微生物およびラクトバチルス属微生物からなる群より選択された１種以上の微生物の生育増進用途または含有量増加用途に関する。
【0021】
本発明の一例は、ケストースを有効成分として含む組成物の有害微生物、例えば、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ属微生物の生育抑制用途または含有量減少用途に関する。
【0022】
本発明の一例は、ケストースを有効成分として含む組成物のプロピオン酸生産菌の生育増進用途に関する。前記組成物は、腸内プロピオン酸の含有量を増加させることができる。
【0023】
本発明の一例は、前記組成物が薬学的組成物または食品組成物であってもよい。前記組成物がプレバイオティクス組成物であってもよいし、追加的にプロバイオティクスを含めてシンバイオティクス（ｓｙｎｂｉｏｔｉｃｓ）として使用することができる。プロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）とは、体内で健康に良い影響を与える微生物を意味することができる。プレバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ）とは、有益菌を含む微生物により用いられて微生物の生育や活性を促進させることによって、腸内マイクロバイオームの不均衡を解消し、宿主の健康に良い効果を奏するようにする成分を意味することができる。前記プロバイオティクス菌株またはプロバイオティクス微生物（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ）は、生きた細胞であるか、非－生存性細胞の形態であってもよい。
【0024】
前記プロバイオティクス微生物として本発明に適用可能な微生物は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属微生物、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属微生物、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属微生物、ｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物、Ａｌｉｓｔｉｐｅ属微生物、およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物からなる群より選択される１種以上のプロバイオティクスを含むことができる。
【0025】
本発明における有効成分は、腸内マイクロバイオームの改善が必要な対象に対して腸内のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物およびＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属微生物からなる群より１種以上の微生物の増殖を促進して腸内で有益な作用をする細菌を増殖させ、その結果、腸内マイクロバイオームの改善効果をもたらすことができる。
【0026】
本発明に係る組成物は、ケストースを含み、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物とＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属微生物が増加し、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ属微生物が減少し、それによりＳＣＦＡの生産量を増加させることができる。したがって、本発明によれば、副作用や安全性をほとんど心配せず、簡便で効果的に対象の体内Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物および／またはＡｌｉｓｔｉｐｅ属微生物を増加させることができる。また、本発明によれば、ケストースは、対象の体内Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物および／またはＡｌｉｓｔｉｐｅ属微生物を増加させることによって、腸内環境を改善させるというメリットがある。また、ケストースは、ヒトや動物の体内のＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ属微生物を減少させることによって、腸内環境を改善させて腸内微生物のバランスを達成することができる。
【0027】
Ａｌｉｓｔｉｐｅ属微生物は、グラム陰性、棒状、嫌気性および非－胞子形成微生物に分類され、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｆｉｎｅｇｏｌｄｉｉ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｐｕｔｒｅｄｉｎｉｓ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｏｎｄｅｒｄｏｎｋｉｉ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｈａｈｉｉ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｉｎｄｉｓｔｉｎｃｔｕｓ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｏｂｅｓｉ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｉｈｕｍｉｉ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｉｎｏｐｓ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｍｅｇａｇｕｔｉおよびＡｌｉｓｔｉｐｅｓ ｐｒｏｖｅｎｃｅｎｓｉｓを含むが、これに限定されるものではない。
【0028】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物は、Ｌ．ｍｕｃｏｓａｅ、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌ．ｐｅｎｔｏｓｕｓ）、Ｌ．ａｒｉｚｏｎｅｎｓｉｓ、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ、Ｌ．ｃａｓｅｉｉ、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｃｋｉｉ、Ｌ．ａｒａｂｉｎｏｓｕｓ、Ｌ．ｃａｕｃａｓｉｃｕｓ、Ｌ．ｌｅｉｓｈｍａｎｎｉ、Ｌ．ｍｕｓｉｃｕｓ、Ｌ．ｔｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍおよびＬ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓなどを含むが、これに限定されるものではない。
【0029】
本明細書において、用語、「微生物叢」、「マイクロフローラ」および「マイクロバイオーム」は、通常、身体器官または一部、特に、対象、例えば、動物またはヒトの胃腸器官に生息する生きた微生物群集を意味する。
【0030】
前記微生物の生育増進または抑制は、腸内微生物の含有量、腸内微生物の代謝産物の含有量、および／または腸内微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））で表される。本明細書において、バクテリア種の「相対豊富度」は、ヒトの胃腸管微生物叢において特定のバクテリア種を除いた他のバクテリア種に対する特定のバクテリアの相対的な豊富度を意味する。
【0031】
本発明に係る組成物の腸内微生物の調節は、腸内のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属および／またはＡｌｉｓｔｉｐｅ属微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））の増加、腸内のＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ属微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））の減少を含むことができる。
【0032】
本発明に係る組成物は、糞便内または腸内のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物、または糞便内または腸内のＡｌｉｓｔｉｐｅ属微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））の増加分が５％以上、または７％以上、例えば、５％～１００％であってもよいし、これは、前記有効成分を対象に摂取前レベル１００％を基準として、１０５％以上または１０７％以上、例えば、１０５％～２００％であってもよい。
【0033】
詳しくは、発明による組成物は、糞便内または腸内のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））の増加分が、５０～７０％、５０～６５％、または５０～６０％、および／または糞便内または腸内のＡｌｉｓｔｉｐｅ属微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））の増加分が、５～２５％、５～２０％、または５～１５％に達成される、ケストースを有効成分として含む組成物であってもよい。前記糞便内または腸内のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））は、前記有効成分を対象に摂取前レベル１００％を基準として１５０～１７０％であり、前記糞便内または腸内のＡｌｉｓｔｉｐｅ属微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））は、前記有効成分を対象に摂取前レベル１００％を基準として１０５～１２５％であってもよい。
【0034】
本発明に係る組成物は、糞便がＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ属微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））の減少分を、０．５％～２．５％、０．５～２％、または０．５～１．５％に減少させるケストースを有効成分とする組成物であってもよい。前記糞便内または腸内のＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ属微生物の相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））は、前記有効成分を対象に摂取前レベル１００％を基準として９７．５～９９．５％であってもよい。
【0035】
本発明のさらに他の例は、ケストースを有効成分として含有する腸内短鎖脂肪酸、例えば、プロピオン酸の含有量を増加させる組成物、またはケストースを有効成分として含有する腸内プロピオン酸生産菌増殖用または増加用組成物に関する。
【0036】
また、本発明は、ケストースを含有する組成物を、これを必要とする対象に投与する工程を含む、腸内プロピオン酸の含有量を増加させる方法、または腸内プロピオン酸生産菌を増殖する方法に関する。
【0037】
前記組成物は、食品組成物、健康機能性食品、または薬学組成物であってもよい。
【0038】
前記糞便内または腸内のプロピオン酸の含有量増加は、腸内プロピオン酸生産微生物の増殖によるものであってもよい。前記微生物の増殖は、腸内微生物の含有量増加、プロピオン酸の含有量増加、および／または相対豊富度（％、ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ（％））の増加で表される。
【0039】
前記腸内プロピオン酸生産微生物は、本技術分野にて知られた微生物を含むことができ、例えば、腸内のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．およびＡｌｉｓｔｉｐｅ ｓｓｐｐ．からなる群より選択される１種以上の微生物を含むことができる。
【0040】
具体的には、本発明による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）投与グループでいずれも、ｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａであるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕ ｓｓｐｐ．とＡｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．が有意に増加し、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ－中濃度および高濃度）投与実験群でＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐｐ．が有意に減少することを確認した（試験例４参照）。Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐｐ．は、自己免疫疾患、インスリン抵抗性、糖尿、および腸内炎症誘発と関連性があり、ｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓの生成を減少させる役割を果たすことが知られている。
【0041】
本発明の一例は、糞便内のプロピオン酸含有量が１００±３０ｍｇ／Ｌ、１５０±３０ｍｇ／Ｌ、２００±３０ｍｇ／Ｌ、２５０±３０ｍｇ／Ｌまたは３００±３０ｍｇ／Ｌ以上であることを特徴とするケストース含有組成物を提供する。
【0042】
本発明の一例は、糞便内のプロピオン酸含有量が摂取前レベルを基準として１００～７００％、１００～５００％、１００～３００％、１３０～５００％、１３０～７００％、１５０～５００％、１５０～７００％、１５０～３００％または、１３０～３００％増加したことを特徴とするケストース含有組成物を提供する。
【0043】
本発明の一例は、糞便または腸内の酪酸：プロピオン酸の重量比が、４：１～１：３、３：１～１：３、３：１～１：２、２：１～１：２、さらに好ましくは１：１～１：２であることを特徴とするケストース含有組成物を提供する。当該比率で糞便または腸内酪酸に対するプロピオン酸の比率を増加させることにより、腸管内のｐＨを酸性環境に維持し、免疫細胞を落ち着かせて炎症改善効果の極大化を誘導することができる。
【0044】
本発明のさらなる一例は、ケストースを含有する腸疾患および／または炎症性疾患の予防、改善または治療用組成物に関する。また、前記疾患は、免疫過敏反応による疾患、例えば、免疫過敏反応による炎症性皮膚疾患および／または炎症性腸疾患であってもよい。前記組成物は、食品組成物、健康機能性食品、または薬学組成物であってもよい。
【0045】
本明細書に開示された組成物は、腸内有益菌の増殖または生長を促進し、腸内有害菌の増殖または生長を抑制して腸内菌叢を改善することによって、排便機能、腸機能を向上させるだけでなく、プレバイオティクスとして作用して、プロバイオティクスとの併用時にプロバイオティクスの効能を増強させるシナジー効果がある。例示的な一実施形態において、前記組成物は、例えば、便秘、下痢、または腸関連疾患の予防、改善または治療用組成物であってもよい。
【0046】
また、腸内微生物の不均衡（ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ）は、炎症性疾患、例えば、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ、ＩＢＤ）と炎症性皮膚疾患と高い関連性があることは知られている。このため、本発明に係るケストースを含む組成物は、炎症性疾患の予防、改善または治療用組成物を提供することができる。
【0047】
炎症性腸疾患の発病メカニズムについては、遺伝的要因や環境的要因など様々な可能性が議論されてきたが、最近、腸管免疫（消化管粘膜免疫）の異常が原因の可能性が大きくなっている。最近の研究では、ある種の常在菌に対する異常な免疫応答が慢性炎症反応になって現れている可能性も示唆されている。腸管免疫の異常による腸管での炎症やアレルギーの発症メカニズムは、患者のＴ細胞の機能および分化と病変部や血清中のサイトカインの生産パターンの解析によって裏付けられている。さらに、最近開発された各種炎症性腸疾患動物モデル（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１０９，ｐ．１３４４－１３６７，１９９５）の解析でも、この粘膜免疫の異常が腸管に慢性炎症を引き起こすことが明らかになった。
【0048】
本明細書において、用語「対象」、「個体」、「宿主」、および「患者」は、本願において相互交換して使われ、ヒト、実験室動物、家畜、および家庭のペットを含む任意の動物対象、好ましくは、ヒトを称する。対象は、多様な微生物をホスティングすることができる。対象は、疾患に対する高い危険があると診断されたりまたは疑われ、疾患に寄与するマイクロバイオーム状態（つまり、微生物の不均衡）を有することができる。
【0049】
本発明に係る炎症性疾患は、好ましくは、免疫過敏反応による炎症性皮膚疾患または炎症性腸疾患であってもよいし、前記炎症性皮膚疾患は、アトピー皮膚炎、接触皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎などがあり、前記炎症性腸疾患は、クローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ、ＣＤ）と潰瘍性大腸炎（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ、ＵＣ）を含み、ＵＣは、主に結腸を標的とする慢性炎症性疾患として知られている。
【0050】
前記炎症性疾患は、免疫過敏反応による炎症性皮膚疾患または炎症性腸疾患であってもよいし、実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度および高濃度）は、免疫反応で損傷した免疫体系を復旧するのに寄与し、過度な免疫細胞の活性を抑制してアトピー症状を改善したと見られた（試験例８参照）。
【0051】
前記炎症性皮膚疾患、例えば、アトピー皮膚炎は、腸内マイクロバイオームおよびＴｈ１／Ｔｈ２の不均衡によって発生するが、代表的にＩｇＥの発現に関与するＴｈ１のＩＦＮ－ｒの減少とＴｈ２のＩＬ－１３の増加によってＡＤの症状が悪化することが知られている。また、組織学的分析において好酸球（Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）と連関があるＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＴＡＲＣ、Ｅｏｔａｘｉｎは、好酸球数の増加、皮膚流入および脱顆粒化を誘導して炎症と組織損傷を招く。
【0052】
具体的には、本発明では、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓグループは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．とＡｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．が増加し、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐｐ．が減少し、これはＳＣＦＡの分泌量で増加と検証され、このような結果はアトピー皮膚炎を有する患者において増加するＴｈ２の発現量減少に影響を及ぼすことを確認した。また、血液だけでなく、腸と皮膚のＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを合わせるために、Ｔｈ１関連因子の発現を上方調節し、Ｔｈ２関連因子の発現を下方調節することによって、ＡＤ症状を改善する。
【0053】
本発明は、ケストースを含むフラクトオリゴ糖の剤形別（ｐｏｗｄｅｒ、ｓｙｒｕｐ）、濃度別実験において、アトピー皮膚炎（ＡＤ）の改善効能を確認した。
【0054】
具体的には、アトピー皮膚炎を誘発した動物モデルにおいて、本発明に係る組成物を投与した場合、血清ＩｇＥの含有量が減少し、ＩｇＥの生成に関与するＩＬ－１３の分泌量は減少し、好酸球（Ｅｏｓｉｎｉｐｈｉｌ）数の増加と関連があるＴＡＲＣの分泌量は減少し、好酸球（Ｅｏｓｉｎｉｐｈｉｌ）の皮膚流入および脱顆粒に関与するＥｏｔａｘｉｎの分泌量は減少し、Ｔｈ１／Ｔｈ２の不均衡をもたらすＩＬ－４およびＩＬ－５の分泌量は減少した。したがって、実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）の投与は、サイトカインの分泌を調節してＴｈ２の免疫反応を抑制してＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを回復することによって、アトピー症状を改善した。
【0055】
また、アトピー皮膚炎を誘発した動物モデルにおいて、本発明に係る組成物を投与した場合、ＴＮＦ－αの分泌量が相対的に増加、Ｔｈ１関連ＩＦＮ－γの分泌量が相対的に増加、Ｔｈ１関連ＩＬ－１２の分泌量が相対的に増加して、実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）の投与は、Ｔｈ１関連サイトカインの分泌を調節してＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを回復することによって、アトピー症状を改善した（図１７参照）。
【0056】
アトピー皮膚炎を誘発した動物モデルにおいて、本発明に係る組成物を投与した場合、Ｔｒｅｇ関連Ｃｙｔｏｋｉｎｅ、例えば、ＩＬ－１β分泌量の減少、Ｔｈ１／Ｔｈ２の不均衡をもたらすＩＬ－１０の分泌量の減少により、投与は、過度なＴｒｅｇ免疫反応を抑制して炎症反応を抑制し、Ｔｈ１／Ｔｈ２のバランスを回復させることによって、アトピー症状を改善した。
【0057】
また、本発明に係る組成物をアトピー皮膚炎を誘発した動物モデルに投与し、アトピー皮膚炎の重症度改善効果をｉｔｃｈｉｎｇ ｓｃｏｒｅおよびｓｅｖｅｒｉｔｙ ｓｃｏｒｅで評価した結果、実験群で皮膚炎が緩和されたことを確認した（図１５参照）。
【0058】
本発明に係るケストースは、ケストース単独またはこれを含む糖組成物として使用可能であり、液状または粉末形態で使用可能であり、前記粉末は、非結晶または結晶であってもよい。前記ケストースは、市販の製品を購入して使用するか、所定の原料を用いて製造したものを使用してもよい。
【0059】
本発明に使用可能なケストースは、液状または粉末形態をすべて使用することができ、多様な含有量で本発明に係る組成物に含まれる。
【0060】
前記ケストースは、単独成分として使用したり、他の糖類を共に含む混合組成物として使用されてもよい。
【0061】
前記ケストースを含有する組成物において、液状または粉末形態のケストースは、糖類の総固形分を基準として、５０（ｗ／ｗ）％以上、６０（ｗ／ｗ）％以上、７０（ｗ／ｗ）％以上、８０（ｗ／ｗ）％以上、または８５（ｗ／ｗ）％以上の含有量を有する組成物、例えば、フラクトオリゴ糖で提供される。また、結晶形態のケストースは、総固形分を基準として、９０％以上、９５％以上、または９８％以上の含有量を有する組成物であってもよい。
【0062】
前記ケストースを含有する組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）であってもよい。例えば、高含有量の１－ケストース（１－ｋｅｓｏｔｓｅ、ＧＦ２）を含み、ニストース（Ｎｙｓｔｏｓｅ、ＧＦ３）および１－Ｆ－フラクトシルニストース（１－Ｆ－Ｆｒｕｃｔｏｓｙｌ ｎｙｓｔｏｓｅ、ＧＦ４）からなる群より選択された１以上の糖類を追加的に含むことができる。ＦＯＳは、β２→１結合によってスクロース分子に連結された１～９個のフルクトース残基を有する線状鎖で構成されている。前記ケストース－含有フラクトオリゴ糖は、１－ケストース含有量が高いほど好ましく、１－ケストースが主成分（ｍａｉｎ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）であることがさらに好ましい。例えば、高含有量の１－ケストース（１－ｋｅｓｏｔｓｅ、ＧＦ２）を糖類の固形分含有量を基準として５０重量％以上で含むものであってもよい。
【0063】
市中に流通するＦＯＳには、ケストース（１－ケストース）が、総固形分を基準として、約２０～３５（ｗ／ｗ）％で少量含有されている製品もあるが、本発明では、有効効果を示す活性成分であるケストース（１－ケストース）を、糖類の総固形分を基準として、５０％（ｗ／ｗ）以上の含有量で含有させて、ケストースの１日摂取量（投与量）を効果的に調節することが可能であり、これによって、腸内微生物群集であるマイクロバイオームおよび微生物代謝物の調節により体内代謝のバランスを誘導することができる。低いケストース含有量を有する糖組成物、例えば、フラクトオリゴ糖を摂取する場合、本発明による有効含有量のケストースを摂取するためにフラクトオリゴ糖の摂取量が増加し、このため、消化器官（下痢、腹部膨張感、腹鳴など）の不快さが感じられて、むしろ好ましくない効果が発生しうる。したがって、高いケストース含有量を有する糖組成物、例えば、フラクトオリゴ糖を摂取して、フラクトオリゴ糖の過剰摂取による好ましくない問題を低減し、さらに、本発明による有効含有量のケストースの摂取を容易に達成して効能をさらに増大させることができる。
【0064】
本発明に使用可能なケストースまたはケストースを含む糖組成物は特に制限がなく、通常、ケストース転換活性を有する酵素または前記酵素を生産する微生物を用いて砂糖を基質として製造することができる。前記製造されたケストース含有産物をそのまま使用したり、抽出および精製する工程を行ってケストース含有量を増加させた糖組成物として使用してもよい。
【0065】
前記ケストース転換活性を有する酵素は、砂糖を含む基質からケストースを含有するフラクトオリゴ糖に転換する活性を有する酵素で、例えば、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）菌株、ピキア・ファリノサ（Ｐｉｃｈｉａ ｆａｒｉｎｏｓｅ）菌株、ヤロウィア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、ミレロジマ・ファリノサ（Ｍｉｌｌｅｒｏｚｙｍａ ｆａｒｉｎｏｓｅ）、およびアスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）菌株からなる群より選択された１種以上に由来する酵素であってもよい。
【0066】
ケストースを含有する医薬品や医薬部外品、サプリメントの剤形は特に限定されず、投与方法に適した剤形を適切に選択することができる。例えば、経口投与の場合には、粉薬、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、顆粒剤、ドライシロップ剤、液剤、シロップ剤、ドロップ剤、ドリンク剤などの固形または液状剤形にすればよい。
【0067】
前記ケストース組成物において有効成分としてケストースは、６０ｋｇの成人を基準として１日総摂取量が２～３０ｇ、２～２７ｇ、２～２６ｇ、２～２５ｇ、２～２４ｇ、２～２０ｇ、２～１５ｇ、２～１０ｇ、または２～８ｇであってもよい。このような摂取量は、１日１回に限らず、複数回に分割して摂取することができる。前記ケストースまたはこれを含むフラクトオリゴ糖の摂取による整腸作用、腸機能改善、カルシウム吸収の増進機能と「胃もたれ感」の副作用などを考慮して、適切な含有量に設定可能である。
【0068】
また、前記ケストース組成物は、ケストース、ニストース、およびフラクトフラノシルニストースを合わせた量で、４００ｍｇ／ｇ以上、５００ｍｇ／ｇ以上、８００ｍｇ／ｇ以上、または９００ｍｇ／ｇ以上含有する組成物であってもよい。前記ケストース組成物は、ニストース、およびフラクトフラノシルニストースの合計重量に対するケストースの含有量重量比が、１：１～１０：１、１：１～５：１、１：１～３：１、または１：１～２：１である組成物であってもよい。
【0069】
本発明に係るケストースを有効成分とする組成物を投与または摂取する対象または個体は、ヒトを含む動物であり、例えば、ヒト、マウス、ラット、サルなどを含む。
【0070】
本発明に係るケストースを有効成分とする組成物は、食前、食後または食事と同時に摂取することができ、特に摂取条件を限定するのではない。前記ケストースを有効成分とする組成物を、炎症性疾患の改善、腸機能改善または腸内微生物群集または環境変化を達成するのに有効な期間で摂取することができ、例えば、４週以上、８週以上、または１５週以上、例えば、４週～２０週（ｗｅｅｋｓ）の期間で摂取する方法であってもよい。本発明に係る組成物を単回摂取するだけでも有効な効果を導出することができるが、２回以上摂取すればよい。
【0071】
前記ケストースを有効成分とする組成物の摂取のための製剤単位は、例えば、個別摂取量の１、２、３または４倍を含有するか、または１／２、１／３または１／４倍を含有するように製造できる。個別摂取量は、好ましくは、有効成分の１日１回に投与される量を含有し、これは通常、１日投与量の全部、１／２、１／３または１／４倍に相当する量で製剤化されて分割投与可能である。
【0072】
本発明に係るケストースを含む組成物は、食品組成物または薬学組成物であってもよい。
【0073】
本発明に係る組成物の適した投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病的状態、飲食、投与時間、投与経路、排泄速度および反応感応性のような要因によって多様に処方可能である。
【0074】
本発明に係るケストースを有効成分とする組成物は、食品、食品添加剤、飲料、飲料添加剤、健康食品、または機能性食品であってもよい。本発明において、「健康機能食品」とは、健康機能食品に関する法律により人体に有用な機能性を有する原料や成分を用いて製造（加工を含む）した食品をいい、「機能性」とは、人体の正常な機能を維持したり生理機能の活性化により健康を維持し改善するなどといった保健用途に有用な効果を得ることをいう。前記ケストースを一般食品に添加したり、カプセル化、粉末化、懸濁液などで製造することができる。これを摂取する場合、健康上特定の効果をもたらし、一般薬品とは異なり、食品を原料としたため、薬品の長期服用時に発生しうる副作用などがないというメリットがある。
【0075】
本発明のケストースを食品添加物として使用する場合には、前記ケストースをそのまま添加したり、他の食品または食品成分と共に使用したり、その他の通常の方法により適切に使用可能である。有効成分の混合量は、その使用目的（予防、健康または治療的処置）に応じて好適に決定可能である。
【0076】
前記ケストースまたはケストースを含む組成物は、そのままあるいは飲食物や医薬品の形態で、対象、例えば、ヒトまたは動物に経口摂取させる方法で投与される。
【0077】
ケストース（１－ケストース）は、各種飲食物や食品添加物、動物飼料の通常の製造過程に添加して使用することができる。１－ケストースの甘美度は３０で、その味質（ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｔａｓｔｅ）・物性・加工性はショ糖に近いため、各種飲食物の製造過程において砂糖の一部または全部を１－ケストースに置換するなど、砂糖同様に取り扱って各種飲食物、飲料、食品添加物、医薬、または飼料に使用可能である。
【0078】
本発明に係る組成物の具体的な態様としては、例えば、飲料、乳製品、食用に提供する顆粒、ペースト、調味料、レトルト食品、ベビーフード（ｂａｂｙ ｆｏｏｄ）、発酵食品、保存食、水産加工品、食肉加工品、穀物加工品などの加工食品、食品添加物、健康食品、動物飼料などが挙げられる。
【実施例】
【0079】
本発明を下記の実施例を挙げてさらに詳細に説明するが、本発明の範囲が下記の実施例に限定される意図ではない。
【0080】
製造例１： 動物モデルの構築
本実験において動物モデルの構築および食餌投与実験の全般的なスケジュールを図１に示した。
具体的には、アトピー皮膚炎（Ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）を有する動物モデルを構築すべく、５週齢雌ｂａｌｂ／ｃマウスをグループ別に６匹ずつ分離し、１週間適応させた。陰性対照群（Ｎｅｇ）を除いたすべてのグループに対して、ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3混合液をＯＶＡとＡｌｕｍ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）をＰＢＳに溶かして製造し、アトピー誘導開始日から７、２１、３５、４９日目に計４回腹腔に投与（２週に１回、計４回を投与）して８週間誘導した。また、８週間持続的にＢａｌｂ／ｃマウスの背中を除毛し、背中皮膚に持続的にＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3を接触してＡＤを誘導した。これによって、前記アトピー皮膚炎が誘導された実験動物を後の実験で実験群動物モデルとして使用した。
陰性対照群は５週齢雌ｂａｌｂ／ｃマウスをグループ別に６匹ずつ分離し、１週間適応させた。以後、前記（１）アトピー動物モデルの構築と類似しているが、ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3混合液を用いた８週間のアトピーを誘導せず、後の投与期間で実験群と同一用量のＰＢＳを経口投与した。
陽性対照群は５週齢雌ｂａｌｂ／ｃマウスをグループ別に６匹ずつ分離し、１週間適応させた。以後、前記アトピー動物モデルの構築と類似に８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によりアトピーを誘導し、投与期間で実験群と同一用量のＰＢＳを経口投与した。
前記実験群、陰性対照群および陽性対照群に用いられる実験動物から、全体研究期間で８週、１２週、および１６週目に糞便試料を収集して、後のマイクロバイオームおよびＳＣＦＡ分析に活用した。また、実験終了時、盲腸大便試料を収集して微生物叢のプロファイリングおよび代謝体の分析に活用した。
本実験において動物モデルの構築および食餌投与実験の全般的なスケジュールを図１に示した。
具体的には、アトピー皮膚炎（Ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）を有する動物モデルを構築すべく、５週齢雌ｂａｌｂ／ｃマウスをグループ別に６匹ずつ分離し、１週間適応させた。陰性対照群（Ｎｅｇ）を除いたすべてのグループに対して、ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3混合液をＯＶＡとＡｌｕｍ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）をＰＢＳに溶かして製造し、アトピー誘導開始日から７、２１、３５、４９日目に計４回腹腔に投与（２週に１回、計４回を投与）して８週間誘導した。また、８週間持続的にＢａｌｂ／ｃマウスの背中を除毛し、背中皮膚に持続的にＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3を接触してＡＤを誘導した。これによって、前記アトピー皮膚炎が誘導された実験動物を後の実験で実験群動物モデルとして使用した。
陰性対照群は５週齢雌ｂａｌｂ／ｃマウスをグループ別に６匹ずつ分離し、１週間適応させた。以後、前記（１）アトピー動物モデルの構築と類似しているが、ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3混合液を用いた８週間のアトピーを誘導せず、後の投与期間で実験群と同一用量のＰＢＳを経口投与した。
陽性対照群は５週齢雌ｂａｌｂ／ｃマウスをグループ別に６匹ずつ分離し、１週間適応させた。以後、前記アトピー動物モデルの構築と類似に８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によりアトピーを誘導し、投与期間で実験群と同一用量のＰＢＳを経口投与した。
前記実験群、陰性対照群および陽性対照群に用いられる実験動物から、全体研究期間で８週、１２週、および１６週目に糞便試料を収集して、後のマイクロバイオームおよびＳＣＦＡ分析に活用した。また、実験終了時、盲腸大便試料を収集して微生物叢のプロファイリングおよび代謝体の分析に活用した。
【0081】
比較例１および２： ｍａｌｔｏｓｅ食餌実験
Ｍａｌｔｏｓｅ食餌動物モデルは、実施例１で８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によりアトピーを誘導した後、同一食餌で進行させた実験群動物モデルであり、Ｍａｌｔｏｓｅ食餌は投与期間でマルトース（（株）大象、製品名：マルトースＤ）をマウス１匹基準の濃度で２００μｌのＰＢＳに溶かして同一濃度で経口投与して使用した。
具体的には、比較例１－１はＭａｌｔｏｓｅ－中濃度８ｇ／ｄａｙの比率で適用し、比較例１－２はＭａｌｔｏｓｅ－高濃度１６ｇ／ｄａｙの比率で適用した。
Ｍａｌｔｏｓｅ食餌動物モデルは、実施例１で８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によりアトピーを誘導した後、同一食餌で進行させた実験群動物モデルであり、Ｍａｌｔｏｓｅ食餌は投与期間でマルトース（（株）大象、製品名：マルトースＤ）をマウス１匹基準の濃度で２００μｌのＰＢＳに溶かして同一濃度で経口投与して使用した。
具体的には、比較例１－１はＭａｌｔｏｓｅ－中濃度８ｇ／ｄａｙの比率で適用し、比較例１－２はＭａｌｔｏｓｅ－高濃度１６ｇ／ｄａｙの比率で適用した。
【0082】
比較例３および４： 低含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末食餌実験
ＦＯＳを投与した実験群は、８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によるアトピーを誘導した後、投与期間でＦＯＳをケストース含有量（３３％）対比、マウス１匹基準で２００μｌのＰＢＳに溶かして経口投与のための試料として製造した。
前記低含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末は、総固形分を基準としてフラクトオリゴ糖含有量が９５％であり、前記フラクトオリゴ糖に含まれているケストース含有量は３３重量％であり、よって、前記食餌粉末は総固形分を基準として３１．３５重量％のケストースを含有したものである。
各試料をＰＢＳに溶解した溶解液を２つの投与量に分けて実験を行い、１日２回投与をし、成人基準（６０ｋｇ）で、比較例３は８ｇ／ｄａｙの中濃度グループ、および比較例４は１６ｇ／ｄａｙの高濃度グループをそれぞれ適用して８週間投与した。
高濃度および中濃度食餌は同一組成の食餌を１日投与量により区分したものであって、中濃度グループは８ｇ／ｄａｙの投与量、高濃度グループは１６ｇ／ｄａｙの投与量で適用した。
ＦＯＳを投与した実験群は、８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によるアトピーを誘導した後、投与期間でＦＯＳをケストース含有量（３３％）対比、マウス１匹基準で２００μｌのＰＢＳに溶かして経口投与のための試料として製造した。
前記低含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末は、総固形分を基準としてフラクトオリゴ糖含有量が９５％であり、前記フラクトオリゴ糖に含まれているケストース含有量は３３重量％であり、よって、前記食餌粉末は総固形分を基準として３１．３５重量％のケストースを含有したものである。
各試料をＰＢＳに溶解した溶解液を２つの投与量に分けて実験を行い、１日２回投与をし、成人基準（６０ｋｇ）で、比較例３は８ｇ／ｄａｙの中濃度グループ、および比較例４は１６ｇ／ｄａｙの高濃度グループをそれぞれ適用して８週間投与した。
高濃度および中濃度食餌は同一組成の食餌を１日投与量により区分したものであって、中濃度グループは８ｇ／ｄａｙの投与量、高濃度グループは１６ｇ／ｄａｙの投与量で適用した。
【0083】
【表1】
【0084】
実施例１および２： 高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末食餌実験
高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末を投与した実験群は、８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によりアトピーを誘導した後、投与期間でマウス１匹基準の濃度で２００μｌのＰＢＳに高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末を溶解して経口投与のための試料として製造した。
本実施例に使用した高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末は、総固形分を基準としてフラクトオリゴ糖含有量が９１．２％であり、前記フラクトオリゴ糖に含まれているケストース含有量は８５．５重量％であり、よって、前記食餌粉末は総固形分を基準として７７．９８重量％のケストースを含有したものである。
各試料をＰＢＳに溶かして投与し、２つの投与量に分けて実験を行い、１日２回投与をし、成人基準（６０ｋｇ）で、実施例１は中濃度グループの８ｇの投与量、および実施例２は高濃度グループの１６ｇの投与量をそれぞれ８週間投与した。
前記比較例３と実質的に同様の方法で動物モデルに食餌を給餌したが、ただし、比較例３のＦＯＳ粉末の代わりに、本発明で製造した高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末を給餌した。
高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末を投与した実験群は、８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によりアトピーを誘導した後、投与期間でマウス１匹基準の濃度で２００μｌのＰＢＳに高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末を溶解して経口投与のための試料として製造した。
本実施例に使用した高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末は、総固形分を基準としてフラクトオリゴ糖含有量が９１．２％であり、前記フラクトオリゴ糖に含まれているケストース含有量は８５．５重量％であり、よって、前記食餌粉末は総固形分を基準として７７．９８重量％のケストースを含有したものである。
各試料をＰＢＳに溶かして投与し、２つの投与量に分けて実験を行い、１日２回投与をし、成人基準（６０ｋｇ）で、実施例１は中濃度グループの８ｇの投与量、および実施例２は高濃度グループの１６ｇの投与量をそれぞれ８週間投与した。
前記比較例３と実質的に同様の方法で動物モデルに食餌を給餌したが、ただし、比較例３のＦＯＳ粉末の代わりに、本発明で製造した高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末を給餌した。
【0085】
実施例３および４： 高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップ食餌実験
高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップを投与した実験群は、８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によりアトピーを誘導した後、投与期間で高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップを総固形分（８９．９％）およびケストース含有量（８５．６％）、ＦＯＳシロップの固形分（７５．３％）対比、マウス１匹基準の濃度で２００μｌのＰＢＳに溶かして経口投与のための試料として製造した。
本実施例に使用した高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップは、総固形分を基準としてフラクトオリゴ糖含有量が９１．２％であり、前記フラクトオリゴ糖に含まれているケストース含有量は８９．９重量％であり、よって、前記食餌粉末は総固形分を基準として８１．９９８重量％のケストースを含有したものである。
各試料をＰＢＳに溶かして投与し、２つの投与量に分けて実験を行い、１日２回投与をし、成人基準（６０ｋｇ）で、実施例３は８ｇの投与量を有する中濃度グループ、および実施例４は１６ｇの高投与量を有する高濃度グループで８週間投与した。
前記比較例３と実質的に同様の方法で動物モデルに食餌を給餌したが、ただし、比較例３のＦＯＳ粉末の代わりに、本発明で製造した高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップを給餌した。
高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップを投与した実験群は、８週間ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3によりアトピーを誘導した後、投与期間で高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップを総固形分（８９．９％）およびケストース含有量（８５．６％）、ＦＯＳシロップの固形分（７５．３％）対比、マウス１匹基準の濃度で２００μｌのＰＢＳに溶かして経口投与のための試料として製造した。
本実施例に使用した高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップは、総固形分を基準としてフラクトオリゴ糖含有量が９１．２％であり、前記フラクトオリゴ糖に含まれているケストース含有量は８９．９重量％であり、よって、前記食餌粉末は総固形分を基準として８１．９９８重量％のケストースを含有したものである。
各試料をＰＢＳに溶かして投与し、２つの投与量に分けて実験を行い、１日２回投与をし、成人基準（６０ｋｇ）で、実施例３は８ｇの投与量を有する中濃度グループ、および実施例４は１６ｇの高投与量を有する高濃度グループで８週間投与した。
前記比較例３と実質的に同様の方法で動物モデルに食餌を給餌したが、ただし、比較例３のＦＯＳ粉末の代わりに、本発明で製造した高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップを給餌した。
【0086】
試験例１： マウスの体重増加量および食餌摂取量の確認
投与期間で各実験群投与によるマウスの体重変化を記録し、マウスの重量測定は毎週経口投与をする前の同じ時間帯に進行させた。
フラクトオリゴ糖の摂取による肥満の有無を確認するために、投与期間で各実験群投与によるマウスの食餌摂取量を確認し、毎週同じ時間帯に食餌摂取量を確認した。
図２は、実験群投与による実験動物モデルの体重変化についての結果であり、陽性対照群および比較例１および２によるＭａｌｔｏｓｅ投与群では、アトピーの誘発によって体重増加量が減少したことを示した。実施例１～４による実験群の場合、体重増加量が陰性対照群と類似の数値を示すので、アトピーに対する実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ ＦＯＳの改善効果により体重増加量を回復したのである。
投与期間で各実験群投与によるマウスの体重変化を記録し、マウスの重量測定は毎週経口投与をする前の同じ時間帯に進行させた。
フラクトオリゴ糖の摂取による肥満の有無を確認するために、投与期間で各実験群投与によるマウスの食餌摂取量を確認し、毎週同じ時間帯に食餌摂取量を確認した。
図２は、実験群投与による実験動物モデルの体重変化についての結果であり、陽性対照群および比較例１および２によるＭａｌｔｏｓｅ投与群では、アトピーの誘発によって体重増加量が減少したことを示した。実施例１～４による実験群の場合、体重増加量が陰性対照群と類似の数値を示すので、アトピーに対する実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ ＦＯＳの改善効果により体重増加量を回復したのである。
【0087】
試験例２： 腸内マイクロバイオームの種の多様性分析
（１）糞便試料の微生物群集分析
比較例１～４と実施例１～４の試料を、製造例１の実験動物に対して、全体研究期間で８週、１２週、および１６週目に糞便試料を収集した。前記収集された８週、１２週、１６週目の糞便サンプルを、ＤＮＡ ｓｏｉｌ ｋｉｔを用いてＤＮＡを抽出した。
１８０個のＤＮＡは、Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｍｉｓｅｑ ｐｌａｔｆｏｒｍにより塩基配列を分析し、計１３，１１７，８４５個の１６Ｓ ｒＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅａｄ ｃｏｕｎｔを得ており、サンプルあたり平均８５，７３７のｒｅａｄｓを読み出し、すべてのグループは２５００以上のｒｅａｄ数を得た。１６Ｓ ｒＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓは、ｑｉｉｍｅ２パイプラインを用いて分析し、５’や３’末側のシーケンスがなかったり不明なシーケンスは除去した。２５０ｂｐにならないトリムシーケンス（ｔｒｉｍｍｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）を除去し、キメラ（ｃｈｉｍｅｒａ）シーケンスはｑｉｉｍｅ２パイプラインのキメラを用いて除去した。これによって、サンプルの各シーケンシングリードを同定して微生物群集構造を確認できる。
シャノンインデックス（Ｓｈａｎｎｏｎ ｉｎｄｅｘ）、シンプソン（Ｓｉｍｐｓｏｎ ｉｎｄｅｘ）およびインバースシンプソン（ＩｎｖＳｉｍｐｓｏｎ ｉｎｄｅｘ）は、腸内マイクロバイオームの種の多様性分析（ａｌｐｈａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）のために計算された。種群集の多様性（ｂｅｔａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）分析のために、ブレイ・カーチス距離メトリクス（Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｍｅｔｒｉｃｓ）を用いたＡｄｏｎｉｓ分析により群集分析した。Ｒ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ４．０．３）によりグラフを視覚化した。
（１）糞便試料の微生物群集分析
比較例１～４と実施例１～４の試料を、製造例１の実験動物に対して、全体研究期間で８週、１２週、および１６週目に糞便試料を収集した。前記収集された８週、１２週、１６週目の糞便サンプルを、ＤＮＡ ｓｏｉｌ ｋｉｔを用いてＤＮＡを抽出した。
１８０個のＤＮＡは、Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｍｉｓｅｑ ｐｌａｔｆｏｒｍにより塩基配列を分析し、計１３，１１７，８４５個の１６Ｓ ｒＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅａｄ ｃｏｕｎｔを得ており、サンプルあたり平均８５，７３７のｒｅａｄｓを読み出し、すべてのグループは２５００以上のｒｅａｄ数を得た。１６Ｓ ｒＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓは、ｑｉｉｍｅ２パイプラインを用いて分析し、５’や３’末側のシーケンスがなかったり不明なシーケンスは除去した。２５０ｂｐにならないトリムシーケンス（ｔｒｉｍｍｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）を除去し、キメラ（ｃｈｉｍｅｒａ）シーケンスはｑｉｉｍｅ２パイプラインのキメラを用いて除去した。これによって、サンプルの各シーケンシングリードを同定して微生物群集構造を確認できる。
シャノンインデックス（Ｓｈａｎｎｏｎ ｉｎｄｅｘ）、シンプソン（Ｓｉｍｐｓｏｎ ｉｎｄｅｘ）およびインバースシンプソン（ＩｎｖＳｉｍｐｓｏｎ ｉｎｄｅｘ）は、腸内マイクロバイオームの種の多様性分析（ａｌｐｈａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）のために計算された。種群集の多様性（ｂｅｔａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）分析のために、ブレイ・カーチス距離メトリクス（Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｍｅｔｒｉｃｓ）を用いたＡｄｏｎｉｓ分析により群集分析した。Ｒ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ４．０．３）によりグラフを視覚化した。
【0088】
（２）腸内マイクロバイオームの種多様性およびグループ間の差分析
腸内マイクロバイオームの種多様性およびグループ間の差を分析すべく、比較例１～４と実施例１～４の実験動物に対して、研究期間の１６週目に得た糞便試料をロークォリティーシーケンスを除去して平均シーケンシングが８５，７３７であることを確認した。アトピー誘導マウスである陽性対照群と陰性対照群の類似性を検査するために、腸内微生物の種多様性（ａｌｐｈａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）を確認した。アルファ多様性の結果は、シャノン（Ｓｈａｎｎｏｎ）、シンプソン（Ｓｉｍｐｓｏｎ）、インバースシンプソン（ＩｎｖＳｉｍｐｓｏｎ）多様性指数がグループ間で差がないことを示した（図３）。
しかし、微生物のベータ多様性（Ｂｅｔａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）では、各グループ別の群集が分けられることを確認でき、特に、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅグループが右側にあるが、実験グループは陰性対照群と類似に変化することが分かった（図４）。
腸内マイクロバイオームの種多様性およびグループ間の差を分析すべく、比較例１～４と実施例１～４の実験動物に対して、研究期間の１６週目に得た糞便試料をロークォリティーシーケンスを除去して平均シーケンシングが８５，７３７であることを確認した。アトピー誘導マウスである陽性対照群と陰性対照群の類似性を検査するために、腸内微生物の種多様性（ａｌｐｈａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）を確認した。アルファ多様性の結果は、シャノン（Ｓｈａｎｎｏｎ）、シンプソン（Ｓｉｍｐｓｏｎ）、インバースシンプソン（ＩｎｖＳｉｍｐｓｏｎ）多様性指数がグループ間で差がないことを示した（図３）。
しかし、微生物のベータ多様性（Ｂｅｔａ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）では、各グループ別の群集が分けられることを確認でき、特に、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅグループが右側にあるが、実験グループは陰性対照群と類似に変化することが分かった（図４）。
【0089】
試験例３： 腸内マイクロバイオームのｐｒｏｆｉｌｉｎｇの確認
比較例１～４と実施例１～４の実験動物に対して、全体研究期間で８週、１２週、および１６週目に糞便試料を収集した。前記収集された８週、１２週、および１６週目の糞便サンプルから、ＤＮＡ ｓｏｉｌ ｋｉｔを用いてＤＮＡを抽出した。前記ＤＮＡ試料を用いて８週、１２週、１６週目に対する対照群と実験群投与グループとの間の腸内マイクロバイオームのプロファイリング（ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）分析を行った。
マイクロバイオームは生物の系統と従属を特定の基準に基づいてまとめる分類学（Ｔａｘｏｎｏｍｙ）で指定できる。グループ別に８週、１２週および１６週目の試料に対して門（Ｐｈｙｌｕｍ）レベルで確認した。８週、１２週、および１６週目の試料の門（Ｐｈｙｌｕｍ）レベルでバクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）およびファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）が全般的にすべてのグループで優勢であることを確認した（図５）。
比較例１～４と実施例１～４の実験動物に対して、全体研究期間で８週、１２週、および１６週目に糞便試料を収集した。前記収集された８週、１２週、および１６週目の糞便サンプルから、ＤＮＡ ｓｏｉｌ ｋｉｔを用いてＤＮＡを抽出した。前記ＤＮＡ試料を用いて８週、１２週、１６週目に対する対照群と実験群投与グループとの間の腸内マイクロバイオームのプロファイリング（ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）分析を行った。
マイクロバイオームは生物の系統と従属を特定の基準に基づいてまとめる分類学（Ｔａｘｏｎｏｍｙ）で指定できる。グループ別に８週、１２週および１６週目の試料に対して門（Ｐｈｙｌｕｍ）レベルで確認した。８週、１２週、および１６週目の試料の門（Ｐｈｙｌｕｍ）レベルでバクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）およびファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）が全般的にすべてのグループで優勢であることを確認した（図５）。
【0090】
また、１６週目の試料の門（Ｐｈｙｌｕｍ）レベルで陽性対照群と比較した時、実施例２のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末高濃度投与グループと実施例４のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度および高濃度投与グループでファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）が増加し、バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）が減少した。
さらに詳しくは、陽性対照群（１．８３％±０．０５）と比較した時、Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ：Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓの相対豊富度比率（ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ ｒａｔｉｏ）が実施例２の高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末高濃度投与グループ（２．７２％±０．１５、ｐ＝０．００４８）と実施例３の高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップ中濃度投与グループおよび実施例４による高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップ高濃度投与グループ（中濃度；２．４２％±０．１５、ｐ＝０．０２４５、高濃度；３．３４％±０．１５、ｐ＜０．０００１）で有意に増加することを確認した。
陽性対照群と比較例１および２のｍａｌｔｏｓｅグループ（比較例１の中濃度；２．１１％±０．０７、ｐ＝０．２１８４、比較例２の高濃度；１．５８％±０．１０、ｐ＝０．２６）では有意な差がなかった（図６）。
要するに、ＰｈｙｌｕｍレベルではＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓとＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓが優点することを確認し、１６週目では、陽性対照群、比較例１および２のＭａｌｔｏｓｅグループと異なり、実施例１～実施例４の実験群投与グループではＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓがＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓより相対的に増加することを確認した。実施例１の高含有量のケストース含有Ｆｏｓ粉末中濃度グループは、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓの比率が減少しないことが確認されたが、ｇｅｎｕｓ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇによりＡｌｉｓｔｉｐｅｓなどの有意な増加に関連することを確認した。
さらに詳しくは、陽性対照群（１．８３％±０．０５）と比較した時、Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ：Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓの相対豊富度比率（ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ ｒａｔｉｏ）が実施例２の高含有量のケストース含有ＦＯＳ粉末高濃度投与グループ（２．７２％±０．１５、ｐ＝０．００４８）と実施例３の高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップ中濃度投与グループおよび実施例４による高含有量のケストース含有ＦＯＳシロップ高濃度投与グループ（中濃度；２．４２％±０．１５、ｐ＝０．０２４５、高濃度；３．３４％±０．１５、ｐ＜０．０００１）で有意に増加することを確認した。
陽性対照群と比較例１および２のｍａｌｔｏｓｅグループ（比較例１の中濃度；２．１１％±０．０７、ｐ＝０．２１８４、比較例２の高濃度；１．５８％±０．１０、ｐ＝０．２６）では有意な差がなかった（図６）。
要するに、ＰｈｙｌｕｍレベルではＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓとＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓが優点することを確認し、１６週目では、陽性対照群、比較例１および２のＭａｌｔｏｓｅグループと異なり、実施例１～実施例４の実験群投与グループではＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓがＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓより相対的に増加することを確認した。実施例１の高含有量のケストース含有Ｆｏｓ粉末中濃度グループは、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓの比率が減少しないことが確認されたが、ｇｅｎｕｓ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇによりＡｌｉｓｔｉｐｅｓなどの有意な増加に関連することを確認した。
【0091】
Ｔｏｐ３０による属（ｇｅｎｕｓ）レベルでｈｅａｔｍａｐ分析によりグループ別に１６週目の試料の腸内微生物を確認した。Ｇｅｎｕｓレベルでは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ、Ｍｕｒｉｂａｃｕｌｕｍ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓなどが腸内優占種であることを確認した。さらに詳しくは、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ムリバクルム（Ｍｕｒｉｂａｃｕｌｕｍ）、アリスティペス（Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）およびプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）の４属（Ｇｅｎｕｓ）が優勢であった。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓは正常対照群と実施例４のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ高濃度投与グループ（６３．７０％±２．３１、ｐ＝０．００２２）で高い占有率を確認した。これに対し、実施例２のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末中濃度投与グループは、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓで実施例３のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度および実施例４のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ高濃度投与グループより大きく増加することを視覚的に確認した（図７、および図８）。
【0092】
試験例４： ＳＣＦＡ生産バクテリア分析
（１）実験群投与によるＳＣＦＡ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａの増加
比較例１～４と実施例１～４の実験動物に対して、研究期間の１６週目に得た糞便試料で陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅグループと比較した時、実施例１～実施例４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）投与グループでいずれも、ｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａであるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．とＡｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．が有意に増加することを確認した。
（１）実験群投与によるＳＣＦＡ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａの増加
比較例１～４と実施例１～４の実験動物に対して、研究期間の１６週目に得た糞便試料で陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅグループと比較した時、実施例１～実施例４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）投与グループでいずれも、ｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａであるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．とＡｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．が有意に増加することを確認した。
【0093】
（２）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．は、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末高濃度と実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループで有意に大きく増加することを確認した。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．は、８週、１２週、１６週にわたって徐々に増加する様相を示すことを確認した。
特に、１６週では、陽性対照群（３９．６１％±４．６１）と比較した時、実施例２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末高濃度（６３．７０％±２．３１、ｐ＝０．００２２）と実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループ（中濃度；５８．９１％±３．２８、ｐ＝０．００４３、高濃度；６６．３１％±４．３５、ｐ＝０．００２２）は、有意に増加することを確認した。陽性対照群と比較例１および２によるｍａｌｔｏｓｅグループ（中濃度；４０．７１％±５．４８、ｐ＝０．８５７１、高濃度；３５．８５％±０．６１、ｐ＝０．０９０５）では、有意な差がなかった。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．（ｆａｍｉｌｙ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ、ｐｈｙｌｕｍ Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）は、ｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ生成ｂａｃｔｅｒｉａであって、腸に有益な菌株として知られている。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．は、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末高濃度と実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループで有意に大きく増加することを確認した。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．は、８週、１２週、１６週にわたって徐々に増加する様相を示すことを確認した。
特に、１６週では、陽性対照群（３９．６１％±４．６１）と比較した時、実施例２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末高濃度（６３．７０％±２．３１、ｐ＝０．００２２）と実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループ（中濃度；５８．９１％±３．２８、ｐ＝０．００４３、高濃度；６６．３１％±４．３５、ｐ＝０．００２２）は、有意に増加することを確認した。陽性対照群と比較例１および２によるｍａｌｔｏｓｅグループ（中濃度；４０．７１％±５．４８、ｐ＝０．８５７１、高濃度；３５．８５％±０．６１、ｐ＝０．０９０５）では、有意な差がなかった。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．（ｆａｍｉｌｙ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ、ｐｈｙｌｕｍ Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）は、ｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ生成ｂａｃｔｅｒｉａであって、腸に有益な菌株として知られている。
【0094】
（３）Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．
Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．は、８週と１２週で大差はなく、１６週目に有意に増加したことを確認した。実施例１によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末中濃度グループはＡｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．で実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループより大きく増加することを確認した。特に、１６週では、陽性対照群（３．４７％±０．９９）と比較した時、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末中濃度／高濃度（中濃度；１４．７３％±１．４３、ｐ＝０．００４３、高濃度；１４．３８％±１．９７、ｐ＝０．００４３）と実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループ（中濃度；８．７４％±０．４０、ｐ＝０．００９５、高濃度；６．５９％±０．２５、ｐ＝０．０１５２）は有意に増加することを確認した。陽性対照群と比較例１および２によるｍａｌｔｏｓｅグループ（比較例１の中濃度；４．２２％±１．５１、ｐ＝０．４４２９、比較例２の高濃度；１．７６％±０．４３、ｐ＝０．６０９５）では有意な差がなかった。Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．（ｆａｍｉｌｙ Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ、ｐｈｙｌｕｍ Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）はｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ生成ｂａｃｔｅｒｉａであって、腸に有益な菌株として知られている。
Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．は、８週と１２週で大差はなく、１６週目に有意に増加したことを確認した。実施例１によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末中濃度グループはＡｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．で実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループより大きく増加することを確認した。特に、１６週では、陽性対照群（３．４７％±０．９９）と比較した時、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末中濃度／高濃度（中濃度；１４．７３％±１．４３、ｐ＝０．００４３、高濃度；１４．３８％±１．９７、ｐ＝０．００４３）と実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループ（中濃度；８．７４％±０．４０、ｐ＝０．００９５、高濃度；６．５９％±０．２５、ｐ＝０．０１５２）は有意に増加することを確認した。陽性対照群と比較例１および２によるｍａｌｔｏｓｅグループ（比較例１の中濃度；４．２２％±１．５１、ｐ＝０．４４２９、比較例２の高濃度；１．７６％±０．４３、ｐ＝０．６０９５）では有意な差がなかった。Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐｐ．（ｆａｍｉｌｙ Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ、ｐｈｙｌｕｍ Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）はｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ生成ｂａｃｔｅｒｉａであって、腸に有益な菌株として知られている。
【0095】
（４）Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐｐ．
陽性対照群と比較例１および２のｍａｌｔｏｓｅグループと比較した時、実施例１～実施例４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ－中濃度および高濃度）投与実験群で、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐｐ．が有意に減少することを確認した。特に、１６週では、陽性対照群（５．３７％±１．４０）と比較した時、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末中濃度／高濃度（実施例１の中濃度；１．５６％±０．３７、ｐ＝０．００４３、実施例２の高濃度；０．９０％±０．３５、ｐ＝０．００４３）と実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループ（実施例３の中濃度；１．５８％±０．３６、ｐ＝０．００８７、実施例４の高濃度；１．６９％±０．３３、ｐ＝０．００４３）は有意に減少することを確認した。陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅグループ（中濃度；２．８０％±０．１６、ｐ＝０．１０７７、高濃度；４．３１％±０．４７、ｐ＝０．８５７１）では有意な差がなかった。Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐｐ．は自己免疫疾患、インスリン抵抗性、糖尿、腸内炎症誘発と関連性があり、ｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓの生成を減少させる役割を果たすことが知られている。
陽性対照群と比較例１および２のｍａｌｔｏｓｅグループと比較した時、実施例１～実施例４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ－中濃度および高濃度）投与実験群で、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐｐ．が有意に減少することを確認した。特に、１６週では、陽性対照群（５．３７％±１．４０）と比較した時、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ粉末中濃度／高濃度（実施例１の中濃度；１．５６％±０．３７、ｐ＝０．００４３、実施例２の高濃度；０．９０％±０．３５、ｐ＝０．００４３）と実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップ中濃度／高濃度投与グループ（実施例３の中濃度；１．５８％±０．３６、ｐ＝０．００８７、実施例４の高濃度；１．６９％±０．３３、ｐ＝０．００４３）は有意に減少することを確認した。陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅグループ（中濃度；２．８０％±０．１６、ｐ＝０．１０７７、高濃度；４．３１％±０．４７、ｐ＝０．８５７１）では有意な差がなかった。Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐｐ．は自己免疫疾患、インスリン抵抗性、糖尿、腸内炎症誘発と関連性があり、ｓｈｏｒｔ－ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓの生成を減少させる役割を果たすことが知られている。
【0096】
試験例５： 腸内代謝産物（ＳＣＦＡ）分析
（１）糞便内酪酸（Ｂｕｔｙｒａｔｅ）含有量の測定
大便サンプル（１００ｍｇ）を５μｇ／ｍｌのｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）が含有されているＮａＯＨに均質化し、２０分間遠心分離（１２，０００ｇ、４℃）した。上層液をＴｕｂｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）に移し、ＨＰＬＣ分析前まで－８０℃で保管した。ＳＣＦＡはＡｍｉｎｅｘ ８７Ｈ ｃｏｌｕｍｎ（３００×１０ｍｍ；Ｂｉｏ－Ｒａｄ、ＵＳＡ）を活用して分析され、ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄはＲＩ－ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＥＲＣ、ＲｅｆｒａｃｔｏＭａｘ５２０、Ｊａｐａｎ）を用いて検出した。
比較例３および４による低含有量のケストース含有Ｆｏｓ（粉末）と実施例１および２による高含有量のケストース含有Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）、実施例３および４による高含有量のケストース含有Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップを投与した実験群で、１６週目に糞便内のｂｕｔｙｒａｔｅ含有量が高く測定され、陰性対照群（Ｎｅｇ）と類似の数値を示した。
図１２は、実験群投与によるマウス糞便サンプル内のＢｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ含有量を比較したグラフであり、その結果、１６週目で陽性対照群と比較例１および２のｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄの含有量はそれぞれ３２．２±４．９ｍｇ／Ｌ、４５．５±３．９ｍｇ／Ｌ、２９．５±３．５ｍｇ／Ｌであるのに対し、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）はそれぞれ１７２．８±５．８ｍｇ／Ｌ、２３２．６±４３．２ｍｇ／Ｌ、１８８．１±２７．４ｍｇ／Ｌ、または２２１．９±２３．９ｍｇ／Ｌで有意な増加を示した。Ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄは内在免疫および腸健康の維持に重要であり、炎症抑制に関与するので、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）の摂取は、免疫反応と腸健康を正常レベルまで回復することによって、アトピー疾患を改善した。
（１）糞便内酪酸（Ｂｕｔｙｒａｔｅ）含有量の測定
大便サンプル（１００ｍｇ）を５μｇ／ｍｌのｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）が含有されているＮａＯＨに均質化し、２０分間遠心分離（１２，０００ｇ、４℃）した。上層液をＴｕｂｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）に移し、ＨＰＬＣ分析前まで－８０℃で保管した。ＳＣＦＡはＡｍｉｎｅｘ ８７Ｈ ｃｏｌｕｍｎ（３００×１０ｍｍ；Ｂｉｏ－Ｒａｄ、ＵＳＡ）を活用して分析され、ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄはＲＩ－ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＥＲＣ、ＲｅｆｒａｃｔｏＭａｘ５２０、Ｊａｐａｎ）を用いて検出した。
比較例３および４による低含有量のケストース含有Ｆｏｓ（粉末）と実施例１および２による高含有量のケストース含有Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）、実施例３および４による高含有量のケストース含有Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓシロップを投与した実験群で、１６週目に糞便内のｂｕｔｙｒａｔｅ含有量が高く測定され、陰性対照群（Ｎｅｇ）と類似の数値を示した。
図１２は、実験群投与によるマウス糞便サンプル内のＢｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ含有量を比較したグラフであり、その結果、１６週目で陽性対照群と比較例１および２のｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄの含有量はそれぞれ３２．２±４．９ｍｇ／Ｌ、４５．５±３．９ｍｇ／Ｌ、２９．５±３．５ｍｇ／Ｌであるのに対し、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）はそれぞれ１７２．８±５．８ｍｇ／Ｌ、２３２．６±４３．２ｍｇ／Ｌ、１８８．１±２７．４ｍｇ／Ｌ、または２２１．９±２３．９ｍｇ／Ｌで有意な増加を示した。Ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄは内在免疫および腸健康の維持に重要であり、炎症抑制に関与するので、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）の摂取は、免疫反応と腸健康を正常レベルまで回復することによって、アトピー疾患を改善した。
【0097】
（２）糞便内酢酸（Ａｃｅｔａｔｅ）含有量の測定
前記試験例５－（１）と同様の方法により、大便サンプルからａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄの含有量を測定した。
図１３は、実験群投与によるマウス糞便サンプル内Ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ含有量を比較したグラフであり、比較した結果、１６週目で陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＡｃｅｔｉｃ ａｃｉｄの含有量はそれぞれ２９６．１±４０．４ｍｇ／Ｌ、３０４．９±４６．３ｍｇ／Ｌ、２７７．１±２０．８ｍｇ／Ｌであるのに対し、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）はそれぞれ４７１．１±３８．０ｍｇ／Ｌ、５６１．２±７５．４ｍｇ／Ｌ、５６１．０±２９．７ｍｇ／Ｌ、６５３．４±１０３．７ｍｇ／Ｌで有意な増加を示した。
前記試験例５－（１）と同様の方法により、大便サンプルからａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄの含有量を測定した。
図１３は、実験群投与によるマウス糞便サンプル内Ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ含有量を比較したグラフであり、比較した結果、１６週目で陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＡｃｅｔｉｃ ａｃｉｄの含有量はそれぞれ２９６．１±４０．４ｍｇ／Ｌ、３０４．９±４６．３ｍｇ／Ｌ、２７７．１±２０．８ｍｇ／Ｌであるのに対し、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）はそれぞれ４７１．１±３８．０ｍｇ／Ｌ、５６１．２±７５．４ｍｇ／Ｌ、５６１．０±２９．７ｍｇ／Ｌ、６５３．４±１０３．７ｍｇ／Ｌで有意な増加を示した。
【0098】
（３）糞便内プロピオン酸（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）含有量の測定
試験例５－（１）と同様の方法により、大便サンプルからｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄの含有量を測定した。
図１４は、実験群投与によるマウス糞便サンプル内Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ含有量を比較したグラフであり、その結果、１６週目で陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＰｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄの含有量はそれぞれ２８．１±２．７ｍｇ／Ｌ、９６．１±１７．２ｍｇ／Ｌ、４２．８±６．２ｍｇ／Ｌであるのに対し、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）はそれぞれ１１２．１±１９．２ｍｇ／Ｌ、１５８．２±３５．６ｍｇ／Ｌ、１４３．２±１２．７ｍｇ／Ｌ、２１１．５±１９．６ｍｇ／Ｌで有意な増加を示した。
試験例５－（１）と同様の方法により、大便サンプルからｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄの含有量を測定した。
図１４は、実験群投与によるマウス糞便サンプル内Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ含有量を比較したグラフであり、その結果、１６週目で陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＰｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄの含有量はそれぞれ２８．１±２．７ｍｇ／Ｌ、９６．１±１７．２ｍｇ／Ｌ、４２．８±６．２ｍｇ／Ｌであるのに対し、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）はそれぞれ１１２．１±１９．２ｍｇ／Ｌ、１５８．２±３５．６ｍｇ／Ｌ、１４３．２±１２．７ｍｇ／Ｌ、２１１．５±１９．６ｍｇ／Ｌで有意な増加を示した。
【0099】
試験例６： アトピー皮膚炎の重症度改善の評価
ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3でアトピー誘導を完了した時期（８週）と実験群投与を完了した時期（１６週）に、１５分間マウスの掻く回数を測定した。また、皮膚炎の重症度は乾燥、紅斑、角質の症状を基準として、０（なし）、１（軽度）、２（普通）、３（激しい）の深刻度点数を適用して数値化し、最終点数は掻く回数と重症度点数を合算した。
図１５は、実験群投与によるアトピー皮膚炎の重症度改善効果をｉｔｃｈｉｎｇ ｓｃｏｒｅおよびｓｅｖｅｒｉｔｙ ｓｃｏｒｅなどで数値化して比較したグラフであって、比較例３および４による低含有量のケストース含有Ｆｏｓ（粉末）に比べて、実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群で皮膚炎が緩和されたことを確認し、特に、実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓを投与した実験群で改善効果に優れていることを確認した。
ＯＶＡ／Ａｌ（ＯＨ）3でアトピー誘導を完了した時期（８週）と実験群投与を完了した時期（１６週）に、１５分間マウスの掻く回数を測定した。また、皮膚炎の重症度は乾燥、紅斑、角質の症状を基準として、０（なし）、１（軽度）、２（普通）、３（激しい）の深刻度点数を適用して数値化し、最終点数は掻く回数と重症度点数を合算した。
図１５は、実験群投与によるアトピー皮膚炎の重症度改善効果をｉｔｃｈｉｎｇ ｓｃｏｒｅおよびｓｅｖｅｒｉｔｙ ｓｃｏｒｅなどで数値化して比較したグラフであって、比較例３および４による低含有量のケストース含有Ｆｏｓ（粉末）に比べて、実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群で皮膚炎が緩和されたことを確認し、特に、実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓを投与した実験群で改善効果に優れていることを確認した。
【0100】
試験例７： 実験動物の血清学的分析
実験群投与終了日に犠牲にしたマウスから血液を得た。血液を４℃で１時間保管し、５，０００×ｇで１時間遠心分離して血清を分離した。
血清ＩｇＥおよびＣｙｔｏｋｉｎｅ（ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＴＡＲＣ、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＬ－１β、ＩＬ－１０）の分析は、ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）の製造業者の指針により行い、吸光度はｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ（Ｔｅｃａｎ、Ｍδｎｎｅｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて４５０ｎｍで測定した。
図１６は、ＡＤ誘発および実験群投与による血清ＩｇＥの分泌量を分析したグラフであって、肥満細胞を刺激してＡＤの症状を悪化するＩｇＥの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩｇＥの分泌量はそれぞれ１６．７±１．８ｐｇ／ｍｌ、１６．４±１．１ｐｇ／ｍｌ、１３．１３±１．３ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１０．９±１．１ｐｇ／ｍｌ、１０．７±０．６４ｐｇ／ｍｌのレベルを示し、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１０．６±１．１ｐｇ／ｍｌ、９．９±１．３ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ９．２±１．６ｐｇ／ｍｌ、８．３±０．６ｐｇ／ｍｌでＦｏｓ（粉末）およびＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩｇＥの分泌量が相対的に減少したことを確認した。
実験群投与終了日に犠牲にしたマウスから血液を得た。血液を４℃で１時間保管し、５，０００×ｇで１時間遠心分離して血清を分離した。
血清ＩｇＥおよびＣｙｔｏｋｉｎｅ（ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＴＡＲＣ、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＩＬ－１β、ＩＬ－１０）の分析は、ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）の製造業者の指針により行い、吸光度はｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ（Ｔｅｃａｎ、Ｍδｎｎｅｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて４５０ｎｍで測定した。
図１６は、ＡＤ誘発および実験群投与による血清ＩｇＥの分泌量を分析したグラフであって、肥満細胞を刺激してＡＤの症状を悪化するＩｇＥの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩｇＥの分泌量はそれぞれ１６．７±１．８ｐｇ／ｍｌ、１６．４±１．１ｐｇ／ｍｌ、１３．１３±１．３ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１０．９±１．１ｐｇ／ｍｌ、１０．７±０．６４ｐｇ／ｍｌのレベルを示し、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１０．６±１．１ｐｇ／ｍｌ、９．９±１．３ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ９．２±１．６ｐｇ／ｍｌ、８．３±０．６ｐｇ／ｍｌでＦｏｓ（粉末）およびＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩｇＥの分泌量が相対的に減少したことを確認した。
【0101】
図１７は、ＡＤ誘発および実験群投与によるＴｈ１関連Ｃｙｔｏｋｉｎｅの分泌量を分析した結果を示す。ＴＮＦ－αの分泌量を比較したグラフにおいて陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＴＮＦ－αの分泌量はそれぞれ２３．８±２．６ｐｇ／ｍｌ、２３．９±２．２２ｐｇ／ｍｌ、２３．１±１．３ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２９．８±１．２ｐｇ／ｍｌ、３１．７±０．９ｐｇ／ｍｌを示す。
また、実施例１～２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ３２．４±１．３ｐｇ／ｍｌ、３５．８±２．４ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ３２．３±１．１ｐｇ／ｍｌ、３４．９±２．８ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＴＮＦ－αの分泌量が相対的に増加したことを確認した。
Ｔｈ１関連ＩＦＮ－γの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＦＮ－γの分泌量はそれぞれ１２．７±０．９ｐｇ／ｍｌ、１３．１±０．３ｐｇ／ｍｌ、１３．７±０．３ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１６．４±０．６ｐｇ／ｍｌ、１７．３±０．７ｐｇ／ｍｌ、実施例２～３によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２１．１±１．４ｐｇ／ｍｌ、２３．３±０．９ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１７．３±０．５ｐｇ／ｍｌ、１８．３±１．３ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＦＮ－γの分泌量が相対的に増加したことを確認した。
Ｔｈ１関連ＩＬ－１２の分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－１２の分泌量はそれぞれ１０３．３±５．５ｐｇ／ｍｌ、１０１．５±４．６ｐｇ／ｍｌ、１０６．３±９．６ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１１５．３±５．６ｐｇ／ｍｌ、１２２．５±１．６ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２８．５±２．９ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４による１２９．２±２．７ｐｇ／ｍｌ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２６．５±３．５ｐｇ／ｍｌ、１２５．８±３．０ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－１２の分泌量が相対的に増加したことを確認した。
したがって、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）の投与は、Ｔｈ１関連サイトカインの分泌を調節してＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを回復することによって、アトピー症状を改善した。
また、実施例１～２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ３２．４±１．３ｐｇ／ｍｌ、３５．８±２．４ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ３２．３±１．１ｐｇ／ｍｌ、３４．９±２．８ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＴＮＦ－αの分泌量が相対的に増加したことを確認した。
Ｔｈ１関連ＩＦＮ－γの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＦＮ－γの分泌量はそれぞれ１２．７±０．９ｐｇ／ｍｌ、１３．１±０．３ｐｇ／ｍｌ、１３．７±０．３ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１６．４±０．６ｐｇ／ｍｌ、１７．３±０．７ｐｇ／ｍｌ、実施例２～３によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２１．１±１．４ｐｇ／ｍｌ、２３．３±０．９ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１７．３±０．５ｐｇ／ｍｌ、１８．３±１．３ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＦＮ－γの分泌量が相対的に増加したことを確認した。
Ｔｈ１関連ＩＬ－１２の分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－１２の分泌量はそれぞれ１０３．３±５．５ｐｇ／ｍｌ、１０１．５±４．６ｐｇ／ｍｌ、１０６．３±９．６ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１１５．３±５．６ｐｇ／ｍｌ、１２２．５±１．６ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２８．５±２．９ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４による１２９．２±２．７ｐｇ／ｍｌ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２６．５±３．５ｐｇ／ｍｌ、１２５．８±３．０ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－１２の分泌量が相対的に増加したことを確認した。
したがって、実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）の投与は、Ｔｈ１関連サイトカインの分泌を調節してＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを回復することによって、アトピー症状を改善した。
【0102】
図１８は、ＡＤ誘発および実験群投与によるＴｈ２関連Ｃｙｔｏｋｉｎｅの分泌量を比較した結果である。具体的には、Ｔｈ１の細胞分化を抑制し、Ｔｈ２の細胞分化を促進させてＴｈ１／Ｔｈ２の不均衡をもたらすＩＬ－４の分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－４の分泌量はそれぞれ４６．９±１．０ｐｇ／ｍｌ、４３．５±１．６ｐｇ／ｍｌ、４２．１±２．２ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２６．５±１．７ｐｇ／ｍｌ、２３．１±３．５ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２．８±０．９ｐｇ／ｍｌ、９．３±０．６ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１３．１±２．５ｐｇ／ｍｌ、１１．３±１．１ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－４の分泌量が相対的に減少したことを確認した。
ＩＬ－４と同様に、Ｔｈ１／Ｔｈ２の不均衡をもたらすＩＬ－５の分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－５の分泌量はそれぞれ１３６．９±６．８ｐｇ／ｍｌ、１３０．９±８．３ｐｇ／ｍｌ、１３６．１±１４．７ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２２．５±１０．９ｐｇ／ｍｌ、７９．８±２０．３ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ５４．２±１７．１ｐｇ／ｍｌ、４４．７±１５．５ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ７６．３±１２．４ｐｇ／ｍｌ、６８．９±１２．７ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－５の分泌が相対的に減少したことを確認した。
ＩｇＥの生成に関与するＩＬ－１３の分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－１３の分泌量はそれぞれ３２４．８±３１．４ｐｇ／ｍｌ、３１６．６±５８．４ｐｇ／ｍｌ、３１６．６±３２．６ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２２５．６±５．７ｐｇ／ｍｌ、１６８．７±７．１ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１４３．０±１１．３ｐｇ／ｍｌ、１２８．４±１０．６ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１７８．４±１４．５ｐｇ／ｍｌ、１３８．８±６．９ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－１３の分泌量が相対的に減少したことを確認した。
好酸球（Ｅｏｓｉｎｉｐｈｉｌ）数の増加と関連があるＴＡＲＣの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＴＡＲＣの分泌量はそれぞれ２７．８±１．９５ｐｇ／ｍｌ、２６．６±１．１ｐｇ／ｍｌ、２２．８±１．２ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２２．４±１．５ｐｇ／ｍｌ、２１．２±２．０ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１８．０±０．９ｐｇ／ｍｌ、１７．７±１．８ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１９．７±１．１ｐｇ／ｍｌ、１９．１±０．４ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＴＡＲＣの分泌量が相対的に減少したことを確認した。
好酸球（Ｅｏｓｉｎｉｐｈｉｌ）の皮膚流入および脱顆粒に関与するＥｏｔａｘｉｎの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＥｏｔａｘｉｎの分泌量はそれぞれ１４４．７±３．７ｐｇ／ｍｌ、１４１．９±３．５ｐｇ／ｍｌ、１３７．０±５．８ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２５．３±６．１ｐｇ／ｍｌ、１２２．３±１．２ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１１７．９±５．７ｐｇ／ｍｌ、１１３．６±１．５ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２３．０±２．５ｐｇ／ｍｌ、１１８．６±７．４ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＥｏｔａｘｉｎの分泌量が相対的に減少したことを確認した。
ＩＬ－４と同様に、Ｔｈ１／Ｔｈ２の不均衡をもたらすＩＬ－５の分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－５の分泌量はそれぞれ１３６．９±６．８ｐｇ／ｍｌ、１３０．９±８．３ｐｇ／ｍｌ、１３６．１±１４．７ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２２．５±１０．９ｐｇ／ｍｌ、７９．８±２０．３ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ５４．２±１７．１ｐｇ／ｍｌ、４４．７±１５．５ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ７６．３±１２．４ｐｇ／ｍｌ、６８．９±１２．７ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－５の分泌が相対的に減少したことを確認した。
ＩｇＥの生成に関与するＩＬ－１３の分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－１３の分泌量はそれぞれ３２４．８±３１．４ｐｇ／ｍｌ、３１６．６±５８．４ｐｇ／ｍｌ、３１６．６±３２．６ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２２５．６±５．７ｐｇ／ｍｌ、１６８．７±７．１ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１４３．０±１１．３ｐｇ／ｍｌ、１２８．４±１０．６ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１７８．４±１４．５ｐｇ／ｍｌ、１３８．８±６．９ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－１３の分泌量が相対的に減少したことを確認した。
好酸球（Ｅｏｓｉｎｉｐｈｉｌ）数の増加と関連があるＴＡＲＣの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＴＡＲＣの分泌量はそれぞれ２７．８±１．９５ｐｇ／ｍｌ、２６．６±１．１ｐｇ／ｍｌ、２２．８±１．２ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２２．４±１．５ｐｇ／ｍｌ、２１．２±２．０ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１８．０±０．９ｐｇ／ｍｌ、１７．７±１．８ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１９．７±１．１ｐｇ／ｍｌ、１９．１±０．４ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＴＡＲＣの分泌量が相対的に減少したことを確認した。
好酸球（Ｅｏｓｉｎｉｐｈｉｌ）の皮膚流入および脱顆粒に関与するＥｏｔａｘｉｎの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＥｏｔａｘｉｎの分泌量はそれぞれ１４４．７±３．７ｐｇ／ｍｌ、１４１．９±３．５ｐｇ／ｍｌ、１３７．０±５．８ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２５．３±６．１ｐｇ／ｍｌ、１２２．３±１．２ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１１７．９±５．７ｐｇ／ｍｌ、１１３．６±１．５ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２３．０±２．５ｐｇ／ｍｌ、１１８．６±７．４ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＥｏｔａｘｉｎの分泌量が相対的に減少したことを確認した。
【0103】
実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）の投与はサイトカインの分泌を調節してＴｈ２の免疫反応を抑制してＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを回復することによって、アトピー症状を改善した。
図１９は、ＡＤ誘発および実験群投与によるＴｒｅｇ関連Ｃｙｔｏｋｉｎｅの分泌量を比較分析したグラフであって、まず、過発現により全身炎症を誘発するＩＬ－１βの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－１βの分泌量はそれぞれ５０．７±２．３ｐｇ／ｍｌ、４９．８±１．４ｐｇ／ｍｌ、４５．１±３．２ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ３４．２±４．２ｐｇ／ｍｌ、２１．１±３．０ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１４．０±３．８ｐｇ／ｍｌ、１１．１±２．６ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ７．３±２．３ｐｇ／ｍｌ、１０．３±３．６ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－１βの分泌量が相対的に減少したことを確認した。
Ｔｈ１／Ｔｈ２の不均衡をもたらすＩＬ－１０の分泌量の場合、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－１０の分泌量はそれぞれ１７３．７±２０．８ｐｇ／ｍｌ、１７１．８±２０．７ｐｇ／ｍｌ、１７０．４±１８．３ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２６．２±２５．９ｐｇ／ｍｌ、９０．９±８．７ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ３９．９±１２．８ｐｇ／ｍｌ、２７．６±４．０４ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ４１．７±１６．８ｐｇ／ｍｌ、３８．１±１０．４ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－１０の分泌量が相対的に減少したことを確認した。
実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）の投与は過度なＴｒｅｇ免疫反応を抑制して炎症反応を抑制し、Ｔｈ１／Ｔｈ２のバランスを回復させることによってアトピー症状を改善し、ケストース含有量が高くてさらに優れた効果を達成できるだけでなく、高いケストース含有量を摂取しながらもフラクトオリゴ糖の摂取量が減少してラクトオリゴ糖の過剰摂取による消化器官（下痢、腹部膨張感、腹鳴など）の不快さを低減可能でさらに好ましい。
図１９は、ＡＤ誘発および実験群投与によるＴｒｅｇ関連Ｃｙｔｏｋｉｎｅの分泌量を比較分析したグラフであって、まず、過発現により全身炎症を誘発するＩＬ－１βの分泌量を比較した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－１βの分泌量はそれぞれ５０．７±２．３ｐｇ／ｍｌ、４９．８±１．４ｐｇ／ｍｌ、４５．１±３．２ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ３４．２±４．２ｐｇ／ｍｌ、２１．１±３．０ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１４．０±３．８ｐｇ／ｍｌ、１１．１±２．６ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ７．３±２．３ｐｇ／ｍｌ、１０．３±３．６ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－１βの分泌量が相対的に減少したことを確認した。
Ｔｈ１／Ｔｈ２の不均衡をもたらすＩＬ－１０の分泌量の場合、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＩＬ－１０の分泌量はそれぞれ１７３．７±２０．８ｐｇ／ｍｌ、１７１．８±２０．７ｐｇ／ｍｌ、１７０．４±１８．３ｐｇ／ｍｌのレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１２６．２±２５．９ｐｇ／ｍｌ、９０．９±８．７ｐｇ／ｍｌ、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ３９．９±１２．８ｐｇ／ｍｌ、２７．６±４．０４ｐｇ／ｍｌ、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ４１．７±１６．８ｐｇ／ｍｌ、３８．１±１０．４ｐｇ／ｍｌで、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＩＬ－１０の分泌量が相対的に減少したことを確認した。
実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度／高濃度）の投与は過度なＴｒｅｇ免疫反応を抑制して炎症反応を抑制し、Ｔｈ１／Ｔｈ２のバランスを回復させることによってアトピー症状を改善し、ケストース含有量が高くてさらに優れた効果を達成できるだけでなく、高いケストース含有量を摂取しながらもフラクトオリゴ糖の摂取量が減少してラクトオリゴ糖の過剰摂取による消化器官（下痢、腹部膨張感、腹鳴など）の不快さを低減可能でさらに好ましい。
【0104】
試験例８： Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ分析
（１）分析方法
犠牲にしたマウスから脾臓を得て、５０－ｍｍ Ｐｅｔｒｉ ｄｉｓｈ（Ｎｕｎｃｌｏｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）とＡＣＫ ｂｕｆｆｅｒ（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を活用して均質化して赤血球を溶解させた。均質化されたサンプルをｃｅｌｌ ｓｔｒａｉｎｅｒ（ＳＰＬ、Ｋｏｒｅａ）でろ過し、２％ＲＰＭＩ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＵＳＡ）で洗浄する。２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離した後、上層液を捨てて２％ＲＰＭＩに再懸濁した。すべての細胞を同一に希釈し、抗－マウス抗体のＣＤ８６とＣＤ２７４（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ、ＵＳＡ）を処理して４℃で２０分間反応させた。細胞表面の発現量はフローサイトメーター（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ；Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＵＳＡ）を用いて確認した。平均蛍光強度（ＭＦＩ；Ｍｅａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）に対する分析はＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ機器のＣｅｌｌ Ｑｕｅｓｔ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ６．０）を活用した。
（１）分析方法
犠牲にしたマウスから脾臓を得て、５０－ｍｍ Ｐｅｔｒｉ ｄｉｓｈ（Ｎｕｎｃｌｏｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）とＡＣＫ ｂｕｆｆｅｒ（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を活用して均質化して赤血球を溶解させた。均質化されたサンプルをｃｅｌｌ ｓｔｒａｉｎｅｒ（ＳＰＬ、Ｋｏｒｅａ）でろ過し、２％ＲＰＭＩ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＵＳＡ）で洗浄する。２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離した後、上層液を捨てて２％ＲＰＭＩに再懸濁した。すべての細胞を同一に希釈し、抗－マウス抗体のＣＤ８６とＣＤ２７４（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ、ＵＳＡ）を処理して４℃で２０分間反応させた。細胞表面の発現量はフローサイトメーター（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ；Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＵＳＡ）を用いて確認した。平均蛍光強度（ＭＦＩ；Ｍｅａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）に対する分析はＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ機器のＣｅｌｌ Ｑｕｅｓｔ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ６．０）を活用した。
【0105】
（２）ＡＤ誘発および実験群投与によるＣＤ８６の発現量の確認
図２０は、Ｔ細胞とＢ細胞の活性化に関与するＣＤ８６の発現量を示すグラフであって、脾臓から分離した脾臓細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ）からアトピー誘発時、Ｔ細胞およびＢ細胞を活性化させるＣｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒであるＣＤ８６の発現量を確認した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＣＤ８６の発現量はそれぞれ２５．４±２．２％、２５．８±０．４％、２３．１±１．２％のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２１．７±１．９％、２０．９±１．１％、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１６．１±０．４％、１４．０±０．９％、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１６．９±１．０％、１７．７±０．８％で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＣＤ８６の発現量が相対的に減少した。
図２０は、Ｔ細胞とＢ細胞の活性化に関与するＣＤ８６の発現量を示すグラフであって、脾臓から分離した脾臓細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ）からアトピー誘発時、Ｔ細胞およびＢ細胞を活性化させるＣｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒであるＣＤ８６の発現量を確認した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＣＤ８６の発現量はそれぞれ２５．４±２．２％、２５．８±０．４％、２３．１±１．２％のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２１．７±１．９％、２０．９±１．１％、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１６．１±０．４％、１４．０±０．９％、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ１６．９±１．０％、１７．７±０．８％で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＣＤ８６の発現量が相対的に減少した。
【0106】
（３）ＡＤ誘発および実験群投与によるＣＤ２７４の発現量の確認
図２１は、ＡＤ誘発および実験群投与によるＣＤ２７４の発現量を示すグラフであって、脾臓から分離した脾臓細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ）から損傷した免疫調節機能に関与するｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒであるＣＤ２７４の発現量を確認した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＣＤ２７４の発現量はそれぞれ１４．１±１．５％、１４．９±０．２％、１４．８±１．６％のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１８．８±１．３％、２０．４±０．１％、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２２．１±１．２％、２３．１±０．２％、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ２０．９±１．０％、２１．０±０．９％で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＣＤ２７４の発現量が相対的に増加した。
実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度および高濃度）は免疫反応で損傷した免疫体系を復旧するのに寄与し、過度な免疫細胞の活性を抑制してアトピー症状を改善したと見られた。
図２１は、ＡＤ誘発および実験群投与によるＣＤ２７４の発現量を示すグラフであって、脾臓から分離した脾臓細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ）から損傷した免疫調節機能に関与するｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒであるＣＤ２７４の発現量を確認した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループのＣＤ２７４の発現量はそれぞれ１４．１±１．５％、１４．９±０．２％、１４．８±１．６％のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ１８．８±１．３％、２０．４±０．１％、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２２．１±１．２％、２３．１±０．２％、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ２０．９±１．０％、２１．０±０．９％で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群でＣＤ２７４の発現量が相対的に増加した。
実施例１～４による実験群（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ：粉末およびシロップ－中濃度および高濃度）は免疫反応で損傷した免疫体系を復旧するのに寄与し、過度な免疫細胞の活性を抑制してアトピー症状を改善したと見られた。
【0107】
試験例９： 動物モデルの組織分析
（１）実験方法
犠牲させたマウスの背中皮膚を１０％のホルマリン溶液で固定し、パラフィンに包埋させた。皮膚組織切片を４－５ｕｍの厚さに切断し、Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ ｂｌｕｅとＣｏｎｇｏ ｒｅｄ染色剤を用いて組織を染色した。ＤＭ ４０００Ｂ顕微鏡（Ｌｅｉｋａ）を用いて４００倍率で肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）および好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）の数を測定した。
（１）実験方法
犠牲させたマウスの背中皮膚を１０％のホルマリン溶液で固定し、パラフィンに包埋させた。皮膚組織切片を４－５ｕｍの厚さに切断し、Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ ｂｌｕｅとＣｏｎｇｏ ｒｅｄ染色剤を用いて組織を染色した。ＤＭ ４０００Ｂ顕微鏡（Ｌｅｉｋａ）を用いて４００倍率で肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）および好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）の数を測定した。
【0108】
（２）皮膚組織（ｄｏｒｓａｌ ｓｋｉｎ）内の肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）の測定
図２２は、皮膚組織（ｄｏｒｓａｌ ｓｋｉｎ）内の肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）を確認したグラフであって、ヒスタミンを生成して炎症とかゆみ症を誘発する肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数を皮膚組織で測定した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループの肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数はそれぞれ３２８±１９個、３６６±１３個、３５７±３１個のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２３４±１個、２２６±８個、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２１４±７個、２０６±１１個、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ２３１±９個、２２１±１８個で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群で肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数が相対的に減少した。
図２２は、皮膚組織（ｄｏｒｓａｌ ｓｋｉｎ）内の肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）を確認したグラフであって、ヒスタミンを生成して炎症とかゆみ症を誘発する肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数を皮膚組織で測定した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループの肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数はそれぞれ３２８±１９個、３６６±１３個、３５７±３１個のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２３４±１個、２２６±８個、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２１４±７個、２０６±１１個、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ２３１±９個、２２１±１８個で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群で肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数が相対的に減少した。
【0109】
（３）皮膚組織（ｄｏｒｓａｌ ｓｋｉｎ）内の好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）の測定
図２３は、皮膚組織（ｄｏｒｓａｌ ｓｋｉｎ）内の好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）を測定したグラフであって、過敏反応に作用し、アトピー症状を悪化させる好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）数を皮膚組織で確認した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループの好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）数はそれぞれ６．５±２．６個、６±２．５個、６．３±２．５個のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ４．３±１．７個、４．６±１．９個、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ４±１．６個、２．８±１．５個、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ３±１．２個、２．８±１．１個で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群で好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）数が相対的に減少した。
図２３は、皮膚組織（ｄｏｒｓａｌ ｓｋｉｎ）内の好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）を測定したグラフであって、過敏反応に作用し、アトピー症状を悪化させる好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）数を皮膚組織で確認した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループの好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）数はそれぞれ６．５±２．６個、６±２．５個、６．３±２．５個のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ４．３±１．７個、４．６±１．９個、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ４±１．６個、２．８±１．５個、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ３±１．２個、２．８±１．１個で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群で好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）数が相対的に減少した。
【0110】
（４）腸組織（ｉｌｅｕｍ）内の肥満細胞（ｍａｓｔｃｅｌｌ）の測定
図２４は、腸組織（ｉｌｅｕｍ）内の肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）を測定したグラフであって、肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数を確認した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループの肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数はそれぞれ４８±６個、５６±１２個、５９±１１個のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ３３±７個、３２±７個、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２３±６個、２４±４個、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ２５±６個、１９±８個で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群で肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数が相対的に減少した。
図２４は、腸組織（ｉｌｅｕｍ）内の肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）を測定したグラフであって、肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数を確認した結果、陽性対照群とｍａｌｔｏｓｅ（中濃度／高濃度）を投与したグループの肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数はそれぞれ４８±６個、５６±１２個、５９±１１個のレベルを示したのに対し、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ３３±７個、３２±７個、実施例１および２によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末）は中濃度／高濃度でそれぞれ２３±６個、２４±４個、実施例３および４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（シロップ）は中濃度／高濃度でそれぞれ２５±６個、１９±８個で、比較例３および４によるＦｏｓ（粉末）および実施例１～４によるＡｄｖａｎｃｅｄ Ｆｏｓ（粉末およびシロップ）を投与した実験群で肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）数が相対的に減少した。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【国際調査報告】