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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-15
(54)【発明の名称】ＢＬ－８０４０の組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 38/10 20060101AFI20240105BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240105BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240105BHJP
A61P 15/14 20060101ALI20240105BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20240105BHJP
A61P 7/04 20060101ALI20240105BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20240105BHJP
A61K 38/12 20060101ALI20240105BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240105BHJP
A61K 47/46 20060101ALI20240105BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20240105BHJP
C07K 1/04 20060101ALN20240105BHJP
C07K 7/64 20060101ALN20240105BHJP
【ＦＩ】
A61K38/10
A61P43/00 111
A61P35/00
A61P43/00 105
A61P15/14
A61P1/18
A61P7/04
A61P31/18
A61K38/12
A61K9/08
A61K47/46
A61K47/42
C07K1/04 ZNA
C07K7/64
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023540581
(86)(22)【出願日】2021-12-29
(85)【翻訳文提出日】2023-08-28
(86)【国際出願番号】 IL2021051548
(87)【国際公開番号】W WO2022144885
(87)【国際公開日】2022-07-07
(31)【優先権主張番号】63/131,871
(32)【優先日】2020-12-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】515264805
【氏名又は名称】バイオラインアールエックス・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＢｉｏＬｉｎｅＲｘ Ｌｔｄ．
【住所又は居所原語表記】２ ＨａＭａａｙａｎ Ｓｔｒｅｅｔ， ７１７７８７１ ＭｏｄｉＩｎ， Ｉｓｒａｅｌ
(71)【出願人】
【識別番号】511304383
【氏名又は名称】バイオカイン セラピューティックス リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001519
【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ハールブフィンガー、エフラット
(72)【発明者】
【氏名】ペレド、アムノン
(72)【発明者】
【氏名】ソラーニ、エラ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA11
4C076BB01
4C076BB11
4C076BB13
4C076BB14
4C076BB15
4C076BB16
4C076BB21
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4C076CC14
4C076CC15
4C076CC16
4C076CC17
4C076CC27
4C076CC29
4C076CC35
4C076EE41
4C076EE56
4C084AA01
4C084AA02
4C084AA03
4C084BA01
4C084BA09
4C084BA18
4C084BA23
4C084BA26
4C084CA59
4C084MA05
4C084MA13
4C084MA16
4C084MA17
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4C084MA23
4C084MA28
4C084MA35
4C084MA37
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4C084MA55
4C084MA56
4C084MA58
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4C084MA66
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4C084ZA531
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4C084ZA661
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4C084ZA811
4C084ZA812
4C084ZB211
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4C084ZB331
4C084ZB332
4C084ZC201
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4C084ZC551
4C084ZC552
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA30
4H045CA50
4H045EA20
4H045FA33
4H045GA25
(57)【要約】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）を含む組成物が本明細書に開示され、これは、ＢＬ－８０４０によって治療可能な状態の治療に使用するためのものであり得る。本組成物は、本明細書に記載の条件下において、０．８６～０．８８の相対保持時間、及び／又は０．７１～０．７３の相対保持時間を特徴とする（ＢＬ－８０４０の相対保持時間は１である）、少なくとも１つの化合物を更に含む。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）と、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物とを含む組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ－ｏｆ－ｍａｔｔｅｒ）であって、前記相対保持時間は、約３．０～約３．３の範囲内のｐＨの０．０１７Ｍの過塩素酸塩の水溶液である第１の移動相、アセトニトリルである第２の移動相、前記第２の移動相の濃度が約２０％の初期濃度から約５０分で約１０％増加する勾配、Ｃ１８逆相カラム、約５μＬ～約２０μＬの範囲内の注入体積、及び約１ｍＬ／分の流速を用いて、約４０℃の温度で決定され、前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）の相対保持時間が、１と定義される、
組成物。
【請求項2】
前記少なくとも１つの化合物が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、前記組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも２０％に相当する、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記少なくとも１つの化合物が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、前記組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも５０％に相当する、請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
前記少なくとも１つの化合物が、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と同じ分子量を有する化合物、及び／又はＢＬ－８０４０（配列番号１）の分子量よりも約８０Ｄａ大きい分子量を有する化合物を含む、請求項１～請求項３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、少なくとも約０．０１％である、請求項１～請求項４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項6】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、少なくとも約１％以下である、請求項１～請求項５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項7】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、約０．０７５％～約０．２２５％の範囲内である、請求項１～請求項６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物を更に含む、請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、前記組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも１０％に相当する、請求項８に記載の組成物。
【請求項10】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、少なくとも約０．０１％である、請求項８又は請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の前記総濃度比が、約０．０３％～約０．１５％の範囲内である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項12】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物及び０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、前記組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも５０％に相当する、請求項８～請求項１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項13】
前記組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度が、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度の５０％以下である、請求項１～請求項１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項14】
前記組成物中の環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度が、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度の５０％以下である、請求項１～請求項１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項15】
前記組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度が、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度の８０％以下である、請求項１～請求項１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項16】
前記逆相カラムが、長さ約２５０ｍｍ、内径約４．６ｍｍ、及び粒径約５μｍのうち少なくとも１つを特徴とする、請求項１～請求項１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項17】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）と、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物とを含む組成物であって、前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、０．０７５％～０．２２５％の範囲内であり、前記相対保持時間が、約３．０～約３．３の範囲内のｐＨの０．０１７Ｍの過塩素酸塩の水溶液である第１の移動相、アセトニトリルである第２の移動相、前記第２の移動相の濃度が約２０％の初期濃度から約５０分で約１０％増加する勾配、Ｃ１８逆相カラム、約５μＬ～約２０μＬの範囲内の注入体積、及び約１ｍＬ／分の流速を用いて、約４０℃の温度で決定され、前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）の相対保持時間が、１と定義される、
組成物。
【請求項18】
前記少なくとも１つの化合物が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、前記組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも２０％に相当する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項19】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物が、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と同じ分子量を有する化合物、及び／又はＢＬ－８０４０（配列番号１）の分子量よりも約８０Ｄａ大きい分子量を有する化合物を含む、請求項１７又は請求項１８に記載の組成物。
【請求項20】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、約０．１％～約０．２％の範囲内である、請求項１７～請求項１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項21】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物を更に含む、請求項１７～請求項２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項22】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、前記組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも１０％に相当する、請求項２１に記載の組成物。
【請求項23】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、少なくとも約０．０１％である、請求項２１又は請求項２２に記載の組成物。
【請求項24】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の前記総濃度比が、約０．０３％～約０．１５％の範囲内である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項25】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物及び０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、前記組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも５０％に相当する、請求項２１～請求項２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項26】
前記組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度が、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度の５０％以下である、請求項１７～請求項２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項27】
前記組成物中の環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度が、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度の５０％以下である、請求項１７～請求項２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項28】
前記組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度が、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度の８０％以下である、請求項１７～請求項２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項29】
前記逆相カラムが、長さ約２５０ｍｍ、内径約４．６ｍｍ、及び粒径約５μｍのうち少なくとも１つを特徴とする、請求項１７～請求項２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項30】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）と、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物とを含む組成物であって、前記少なくとも１つの化合物が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも１０％に相当し、前記相対保持時間が、約３．０～約３．３の範囲内のｐＨの０．０１７Ｍの過塩素酸塩の水溶液である第１の移動相、アセトニトリルである第２の移動相、前記第２の移動相の濃度が約２０％の初期濃度から約５０分で約１０％増加する勾配、Ｃ１８逆相カラム、約５μＬ～約２０μＬの範囲内の注入体積、及び約１ｍＬ／分の流速を用いて、約４０℃の温度で決定され、前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）の相対保持時間が、１と定義される、
組成物。
【請求項31】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、少なくとも約０．０１％である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項32】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、約０．５％以下である、請求項３０又は請求項３１に記載の組成物。
【請求項33】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、約０．０３％～約０．１５％の範囲内である、請求項３０～請求項３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項34】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物を更に含む、請求項３０～請求項３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項35】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、前記組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも２０％に相当する、請求項３４に記載の組成物。
【請求項36】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物が、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と同じ分子量を有する化合物、及び／又はＢＬ－８０４０（配列番号１）の分子量よりも約８０Ｄａ大きい分子量を有する化合物を含む、請求項３４又は請求項３５に記載の組成物。
【請求項37】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度比が、少なくとも約０．０１％である、請求項３４～請求項３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項38】
前記ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の前記総濃度比が、約０．０７５％～約０．２２５％の範囲内である、請求項３７に記載の組成物。
【請求項39】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物及び０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度が、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、前記組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも５０％に相当する、請求項３５～請求項３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項40】
前記組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度が、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度以下である、請求項３０～請求項３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項41】
前記組成物中の環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度が、０．７１～０．７３の範囲の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度以下である、請求項３０～請求項４０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項42】
前記組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度が、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前記少なくとも１つの化合物の総濃度の１５０％以下である、請求項３０～請求項４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項43】
前記逆相カラムが、長さ約２５０ｍｍ、内径約４．６ｍｍ、及び粒径約５μｍのうち少なくとも１つを特徴とする、請求項３０～請求項４２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項44】
（ａ）アミノ酸及び４－フルオロ安息香酸を固相ペプチド合成によって樹脂に順次カップリングさせ、それによって、前記樹脂にカップリングされた直鎖ペプチドを得ることと、（ｂ）前記直鎖ペプチドを前記樹脂から切断し、それによって、遊離直鎖ペプチドを得ることと、
（ｃ）前記直鎖ペプチドのシステイン残基を酸化させて分子内ジスルフィド結合を形成し、それによって、溶液中の配列番号１を有する環状ペプチドを得ることと、
（ｄ）配列番号１を有する前記環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩を単離することと、
を含むプロセスによって得ることができ、
ここで：
（ｉ）前記カップリングが、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）をシアノヒドロキシイミノ酢酸エチル及び／若しくはＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾールと組み合わせて用いることで引き起こされ；
（ｉｉ）前記切断が、前記樹脂にカップリングされた前記直鎖ペプチドを、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と、ジチオエリトリトール（ＤＴＥ）及びジチオトレイトール（ＤＴＴ）からなる群より選択されるスカベンジャと、を含む溶液と接触させることによって引き起こされ；
（ｉｉｉ）前記プロセスが、沈殿の前に蒸発によって前記遊離直鎖ペプチドを濃縮することなく、前記切断後に前記遊離直鎖ペプチドを沈殿させることを更に含み；
（ｉｖ）前記接触が、前記直鎖ペプチドを少なくとも５ｍｇ／ｍＬの濃度で含む水溶液を過酸化水素と接触させることによって引き起こされ；
（ｖ）前記単離することが、前記環状ペプチドを逆相クロマトグラフィカラムに前記カラム１ｋｇ当たり４０グラム以下の環状ペプチドの濃度でロードし、前記環状ペプチドを前記カラムから溶出させることを含み；
（ｖｉ）配列番号１を有する前記環状ペプチドの前記単離が、凍結乾燥を含み、かつ前記プロセスが、前記凍結乾燥後に前記環状ペプチドを粉砕することを更に含み；並びに／又は
（ｖｉｉ）前記樹脂の置換度が、少なくとも０．３ミリ当量／グラムであり、及び／若しくは前記樹脂がＲｉｎｋアミノメチルスチレン樹脂である、
請求項１～請求項４３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項45】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする化合物及び０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする化合物を欠く対応する組成物と比較して、末梢血液へのインビボ好中球遊走の促進が増強されていることを特徴とする、請求項１～請求項４４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項46】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする化合物及び０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする化合物を欠く対応する組成物と比較して、（ｉ）末梢血液へのインビボ好中球遊走の促進の増強；
（ｉｉ）乳がん細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害の増強；
（ｉｉｉ）Ｔ細胞由来白血病細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害の増強；
（ｉｖ）動物モデルにおける肺への転移性乳がん細胞遊走の阻害の増強；
（ｖ）動物モデルにおける遅延型過敏症の阻害の増強；
（ｖｉ）動物モデルにおけるコラーゲン誘発関節炎の阻害の増強；及び
（ｖｉｉ）インビトロでの細胞におけるＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との結合の阻害の増強、
のうち少なくとも２つを特徴とする、請求項１～請求項４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項47】
請求項１～請求項４６のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項48】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）によって治療可能な状態の治療に使用するための、請求項１～請求項４６のいずれか一項に記載の組成物又は請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項49】
ＣＸＣＲ４の阻害が有利である状態の治療に使用するための、請求項１～請求項４６のいずれか一項に記載の組成物又は請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項50】
網膜芽細胞腫、神経外胚葉由来腫瘍、大細胞肺がん、多発性骨髄腫、ミクログリオーマ、グリオーマ、乳がん、膵臓がん、血小板減少症、骨髄抑制のリスク、及びＨＩＶ感染症からなる群より選択される状態の治療に使用するための、請求項１～請求項４６のいずれか一項に記載の組成物又は請求項４７に記載の医薬組成物。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本出願は、２０２０年１２月３０日に出願された米国仮特許出願第６３／１３１，８７１号の優先権の利益を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年１２月３０日に出願された米国仮特許出願第６３／１３１，８７１号の優先権の利益を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表の記載
本出願の出願と同時に提出された、２，１１５バイトである、２０２１年１２月２７日に作成された９０１５９ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称のＡＳＣＩＩファイルが、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願の出願と同時に提出された、２，１１５バイトである、２０２１年１２月２７日に作成された９０１５９ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称のＡＳＣＩＩファイルが、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0003】
本発明は、そのいくつかの実施形態において医薬製品に関し、より具体的には、例えばがん及び／又は関節炎などの状態の治療において使用可能であるＢＬ－８０４０などのペプチドを含む新規な組成物、並びにその調製方法に関するが、これらに限定されない。
【0004】
ＢＬ－８０４０は、４Ｆ－ベンゾイル－ＴＮ１４００３（４－フルオロ－ベンゾイル－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｎａｌ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｃｉｔ－Ｌｙｓ－ＤＬｙｓ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ－Ｃｉｔ－Ｃｙｓ－Ａｒｇ－ＮＨ２、配列番号１）としてもまた知られるペプチドであり、その２つのＣｙｓ残基間にジスルフィド結合が形成されると環状になる。
【0005】
米国特許第７，４２３，００７号には、４Ｆ－ベンゾイル－ＴＮ１４００３を含む、ＣＸＣ４拮抗作用を有するペプチドが記載されている。米国特許第７，４２３，００７号の教示によれば、４Ｆ－ベンゾイル－ＴＮ１４００３は、カップリング剤としてＤＩＰＣＤＩ－ＨＯＢｔを用いて、ＤＭＦ（２．５当量でアミノ酸を添加）中において固相合成し、続いて、ｍ－クレゾール及びエタンジチオールと共に１Ｍ ＴＭＳＢｒ－チオアニソール／ＴＦＡを用いて脱保護及び切断し、空気酸化により環化することによって製造される。
【0006】
更なる背景技術としては、米国特許第７，１３８，４８８号及び同第８，４３５，９３９、並びに国際特許出願公開第ＷＯ２００８／０７５３６９号、同第ＷＯ２００８／０７５３７０号、同第ＷＯ２０１０／１４６５７８号、同第ＷＯ２０１２／０９５８４９号、及び同第ＷＯ２０１３／１６０８９５号、並びに米国仮特許出願第６２／９３８，９６２号が挙げられる。
【発明の概要】
【0007】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物とを含む組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ－ｏｆ－ｍａｔｔｅｒ）が提供され、ここで、相対保持時間は、約２．９～約３．３の範囲内のｐＨの０．０１７Ｍの過塩素酸塩の水溶液である第１の移動相、アセトニトリルである第２の移動相、第２の移動相の濃度が約２０％の初期濃度から約５０分で約１０％増加する勾配、Ｃ１８逆相カラム、約５μＬ～約２０μＬの範囲内の注入体積、及び約１ｍＬ／分の流速を用いて、約４０℃の温度で決定され、ＢＬ－８０４０（配列番号１）の相対保持時間は、１と定義される。
【0008】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物とを含む組成物が提供され、ここで、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する前記少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、０．０７５％～０．２２５％の範囲内であり、ここで、相対保持時間は、約２．９～約３．３の範囲内のｐＨの０．０１７Ｍの過塩素酸塩の水溶液である第１の移動相、アセトニトリルである第２の移動相、第２の移動相の濃度が約２０％の初期濃度から約５０分で約１０％増加する勾配、Ｃ１８逆相カラム、約５μＬ～約２０μＬの範囲内の注入体積、及び約１ｍＬ／分の流速を用いて、約４０℃の温度で決定され、ＢＬ－８０４０（配列番号１）の相対保持時間は、１と定義される。
【0009】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物とを含む組成物が提供され、前記少なくとも１つの化合物は、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも１０％に相当し、ここで、相対保持時間は、約２．９～約３．３の範囲内のｐＨにて０．０１７Ｍの過塩素酸塩の水溶液である第１の移動相、アセトニトリルである第２の移動相、第２の移動相の濃度が約２０％の初期濃度から約５０分で約１０％増加する勾配、Ｃ１８逆相カラム、約５μＬ～約２０μＬの範囲内の注入体積、及び約１ｍＬ／分の流速を用いて、約４０℃の温度で決定され、ＢＬ－８０４０（配列番号１）の相対保持時間は、１と定義される。
【0010】
本秘密のいくつかの実施形態の一態様によれば、本明細書中に記載されるそれぞれの実施形態のいずれか及びそれらの任意の組合せによるＢＬ－８０４０（配列番号１）を含む組成物と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物が提供される。
【0011】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも２０％に相当する。
【0012】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも５０％に相当する。
【0013】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と同じ分子量を有する化合物及び／又はＢＬ－８０４０（配列番号１）の分子量よりも約８０Ｄａ大きい分子量を有する化合物を含む。
【0014】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、少なくとも約０．０１％、所望により少なくとも約０．０５％である。
【0015】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約１％以下である。
【0016】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．０７５％～約０．２２５％の範囲内である。
【0017】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．１％～約０．２％の範囲内である。
【0018】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度の５０％以下である。
【0019】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、組成物中の環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度の５０％以下である。
【0020】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する任意の実施形態のいくつかによれば、組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度の８０％以下である。
【0021】
０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物を更に含む。
【0022】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも１０％に相当する。
【0023】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、少なくとも約０．０１％である。
【0024】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．５％以下である。
【0025】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．０３％～約０．１５％の範囲内である。
【0026】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度以下である。
【0027】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物中の環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度以下である。
【0028】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度の１５０％以下である。
【0029】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物を更に含む。
【0030】
０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物、及び／又は０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物、並びにそれらの任意の組合せに関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物及び０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度は、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも５０％に相当する。
【0031】
任意の実施形態のいくつかによれば、逆相カラムは、長さ約２５０ｍｍ、内径約４．６ｍｍ、及び粒径約５μｍのうち少なくとも１つを特徴とする。
【0032】
任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物及び０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物を欠く対応する組成物と比較して、
（ｉ）末梢血液へのインビボ好中球遊走の促進の増強；
（ｉｉ）乳がん細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害の増強；
（ｉｉｉ）Ｔ細胞由来白血病細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害の増強；
（ｉｖ）動物モデルにおける肺への転移性乳がん細胞遊走の阻害の増強；
（ｖ）動物モデルにおける遅延型過敏症の阻害の増強；
（ｖｉ）動物モデルにおけるコラーゲン誘発関節炎の阻害の増強；及び
（ｖｉｉ）インビトロでの細胞におけるＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との結合の阻害の増強、
のうち少なくとも２つ、所望により少なくとも３つを特徴とする。
（ｉ）末梢血液へのインビボ好中球遊走の促進の増強；
（ｉｉ）乳がん細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害の増強；
（ｉｉｉ）Ｔ細胞由来白血病細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害の増強；
（ｉｖ）動物モデルにおける肺への転移性乳がん細胞遊走の阻害の増強；
（ｖ）動物モデルにおける遅延型過敏症の阻害の増強；
（ｖｉ）動物モデルにおけるコラーゲン誘発関節炎の阻害の増強；及び
（ｖｉｉ）インビトロでの細胞におけるＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との結合の阻害の増強、
のうち少なくとも２つ、所望により少なくとも３つを特徴とする。
【0033】
任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物及び０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物を欠く対応する組成物と比較して、末梢血液へのインビボ好中球遊走の促進の増強を特徴とする。
【0034】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、
（ａ）アミノ酸及び４－フルオロ安息香酸を固相ペプチド合成によって樹脂に順次カップリングさせ、それによって、樹脂にカップリングされた直鎖ペプチドを得ることと、
（ｂ）直鎖ペプチドを樹脂から切断し、それによって、遊離直鎖ペプチドを得ることと、
（ｃ）直鎖ペプチドのシステイン残基を酸化させて分子内ジスルフィド結合を形成し、それによって、溶液中の配列番号１を有する環状ペプチドを得ることと、
（ｄ）配列番号１を有する環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩を単離することと、
を含むプロセスによって得ることができ、
ここで：
（ｉ）カップリングは、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）をシアノヒドロキシイミノ酢酸エチル及び／若しくはＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾールと組み合わせて用いることで引き起こされ；
（ｉｉ）切断は、樹脂にカップリングされた直鎖ペプチドを、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と、ジチオエリトリトール（ＤＴＥ）及びジチオトレイトール（ＤＴＴ）からなる群より選択されるスカベンジャと、を含む溶液と接触させることによって引き起こされ；
（ｉｉｉ）プロセスは、沈殿の前に蒸発によって遊離直鎖ペプチドを濃縮することなく、切断後に遊離直鎖ペプチドを沈殿させることを更に含み；
（ｉｖ）接触は、直鎖ペプチドを少なくとも５ｍｇ／ｍＬの濃度で含む水溶液を過酸化水素と接触させることによって引き起こされ；
（ｖ）単離することは、環状ペプチドを逆相クロマトグラフィカラムにカラム１ｋｇ当たり４０グラム以下の環状ペプチドの濃度でロードし、環状ペプチドをカラムから溶出させることを含み；
（ｖｉ）配列番号１を有する環状ペプチドの単離は、凍結乾燥を含み、かつ前記プロセスは、凍結乾燥後に環状ペプチドを粉砕することを更に含み；並びに／又は
（ｖｉｉ）樹脂の置換度は、少なくとも０．３ミリ当量／グラムであり、及び／若しくは樹脂がＲｉｎｋアミノメチルスチレン（ＡＭＳ）樹脂である。
（ａ）アミノ酸及び４－フルオロ安息香酸を固相ペプチド合成によって樹脂に順次カップリングさせ、それによって、樹脂にカップリングされた直鎖ペプチドを得ることと、
（ｂ）直鎖ペプチドを樹脂から切断し、それによって、遊離直鎖ペプチドを得ることと、
（ｃ）直鎖ペプチドのシステイン残基を酸化させて分子内ジスルフィド結合を形成し、それによって、溶液中の配列番号１を有する環状ペプチドを得ることと、
（ｄ）配列番号１を有する環状ペプチド又はその薬学的に許容される塩を単離することと、
を含むプロセスによって得ることができ、
ここで：
（ｉ）カップリングは、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）をシアノヒドロキシイミノ酢酸エチル及び／若しくはＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾールと組み合わせて用いることで引き起こされ；
（ｉｉ）切断は、樹脂にカップリングされた直鎖ペプチドを、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と、ジチオエリトリトール（ＤＴＥ）及びジチオトレイトール（ＤＴＴ）からなる群より選択されるスカベンジャと、を含む溶液と接触させることによって引き起こされ；
（ｉｉｉ）プロセスは、沈殿の前に蒸発によって遊離直鎖ペプチドを濃縮することなく、切断後に遊離直鎖ペプチドを沈殿させることを更に含み；
（ｉｖ）接触は、直鎖ペプチドを少なくとも５ｍｇ／ｍＬの濃度で含む水溶液を過酸化水素と接触させることによって引き起こされ；
（ｖ）単離することは、環状ペプチドを逆相クロマトグラフィカラムにカラム１ｋｇ当たり４０グラム以下の環状ペプチドの濃度でロードし、環状ペプチドをカラムから溶出させることを含み；
（ｖｉ）配列番号１を有する環状ペプチドの単離は、凍結乾燥を含み、かつ前記プロセスは、凍結乾燥後に環状ペプチドを粉砕することを更に含み；並びに／又は
（ｖｉｉ）樹脂の置換度は、少なくとも０．３ミリ当量／グラムであり、及び／若しくは樹脂がＲｉｎｋアミノメチルスチレン（ＡＭＳ）樹脂である。
【0035】
組成物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）によって治療可能な状態の治療に使用するためのものである。
【0036】
組成物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、ＣＸＣＲ４を阻害することが有利である状態の治療に使用するためのものである。
【0037】
組成物に関する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、本組成物は、網膜芽細胞腫、神経外胚葉由来腫瘍、大細胞肺がん、多発性骨髄腫、ミクログリオーマ、グリオーマ、乳がん、膵臓がん、血小板減少症、骨髄抑制のリスク、及びＨＩＶ感染症からなる群より選択される状態の治療に使用するためのものである。
【0038】
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び／又は科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法及び材料と類似するもの又は同等のものを、本発明の実施形態の実施又は試験で使用することができるが、例示的な方法及び／又は材料は以下に記載する。矛盾が生じる場合、定義を含む本特許明細書が優先される。加えて、材料、方法、及び実施例は例示にすぎず、必ずしも限定することを意図するものではない。
【発明を実施するための形態】
【0039】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、医薬製品に関し、より具体的には、例えばがん及び／又は関節炎などの状態の治療において使用可能であるＢＬ－８０４０（配列番号１）などのペプチドを含む新規な組成物、並びにその調製方法に関するが、これらに限定されない。
【0040】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、以下の説明に記載される詳細又は実施例によって例示される詳細に必ずしも限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施形態が可能であり、又は様々な方法で実施若しくは実行することができる。
【0041】
困難な実験の後、本発明者らは、有利な生物活性を有するＢＬ－８０４０（配列番号１）ペプチドを含む新規な組成物を発見した。この組成物は、ペプチドの大規模合成で有利に調製され得るが、一方で医薬投与のための調製製剤にもまた好適である。
【0042】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、相対保持時間に関して本明細書に記載される実施形態のいずれかに従って決定される場合、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物及び／又は０．７１～０．７３内の範囲の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物と、を含む組成物が提供される。
【0043】
本明細書の全体を通して、「ＢＬ－８０４０」という用語は、配列番号１を有する環状ペプチドを指す。
【0044】
本明細書では、「環状」ペプチドとは、ジスルフィド結合によって連結された一対のシステイン残基を含むペプチドを指す。例えば、「配列番号１を有する環状ペプチド」とは、その２つのシステイン残基がジスルフィド結合によって連結されている配列番号１を指す。
【0045】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかに従って（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる量で）、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物を含む。いくつかのこのような実施形態では、前記少なくとも１つの化合物の相対保持時間は、０．８６５～０．８８の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記相対保持時間は、０．８６８～０．８７８の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記相対保持時間は、０．８７０～０．８７６の範囲内である。
【0046】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかに従って（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる量で）、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物を含む。いくつかのこのような実施形態では、前記少なくとも１つの化合物の相対保持時間は、０．７１５～０．７３の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記相対保持時間は、０．７１８～０．７２８の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記相対保持時間は、０．７１９～０．７２６の範囲内である。
【0047】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかによれば、組成物は、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかに従う（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる量の）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物と、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかに従う（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる量の）０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物と、の両方を含む。
【0048】
本明細書全体を通して、０．８６～０．８８の範囲又は０．７１～０．７３の範囲が示される場合はいつでも、当該範囲は、それぞれ０．８６０～０．８８０の範囲又は０．７１０～０．７３０の範囲、並びに任意の中間値（上限又は下限として機能し得る）及びそれらの間の部分的範囲を包含する。
【0049】
本明細書では、「相対保持時間」という用語は、参照化合物の保持時間（同一条件下における）に対する高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を行った場合の化合物（例えば、本明細書に記載の組成物の成分）の保持時間を指し、前記参照化合物は、本明細書ではＢＬ－８０４０（配列番号１）である。したがって、ＢＬ－８０４０（配列番号１）の相対保持時間は、定義により１に等しい。
【0050】
加えて、「相対保持時間」という用語は、化合物の最大濃度が保持される時間（例えば、モード）に従って決定される。したがって、例えば、０．８７の保持時間を有すると定義される化合物は、（例えば、ベルカーブ分布における）０．８４～０．９０の範囲内の保持時間でクロマトグラフィカラムを出る個々の分子を含み得る。しかしながら、そのような化合物の全ての分子の保持時間は、０．８７と考えられ、したがって「０．８６～０．８８の範囲内」であるものと考えられる。
【0051】
相対保持時間は、好ましくは、Ｃ１８逆相カラム、所望によりシリカ系Ｃ１８カラム（例えば、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｇｏｌｄ（商標）Ｃ１８カラム）を用いて決定される。本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、逆相カラムは、次の特徴：長さ約２５０ｍｍ長、内径約４．６ｍｍ、及び粒径約５μｍのうち、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全てを特徴とする。
【0052】
本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる相対保持時間は、好ましくは、第１の移動相として約３．０～約３．３の範囲内のｐＨの０．０１７Ｍの過塩素酸塩の水溶液（第２の移動相として、アセトニトリル）、及び第２の移動相の濃度が約２０％（例えば、１９．３％～２９．３％増加又は２０％～３０％増加）の初期濃度から約５０分で約１０％（例えば、１０．０％）増加する勾配を用いて決定される。
【0053】
相対保持時間は、好ましくは、約４０℃の温度、約５～約２０μＬの範囲内の注入体積、及び約１ｍＬ／分の流速で決定される。化合物の検出は、所望により、約２２６ｎｍの波長での吸収を決定することによって行われてもよい。例示的な実施形態では、Ａｇｉｌｅｎｔ（商標）１２００又はＡｇｉｌｅｎｔ（商標）１１００ ＨＰＬＣシステムが使用される。
【0054】
（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）示された相対保持時間を特徴とする組成物中の化合物は、約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、ＢＬ－８０４０（配列番号１）の濃度の少なくとも約０．０１％の濃度で所望により存在していてもよい。
【0055】
本明細書では、「吸収に従って決定される」という語句は、（例えば、本明細書に記載のパーセンテージの計算における）化合物の相対濃度が、所与の波長（例えば、２２６ｎｍ）での吸収（例えば、光学濃度）の定量化によって決定されることを意味する。したがって、例えば、２つの画分（例えば、組成物中の２つの異なる化合物を表す）は、それらが同じ濃度の化合物（又は化合物群）の分子を含有するかどうかにかかわらず、それらが同じ程度まで吸収する場合、同じ濃度の化合物を有するものと見なされる。示された波長では全く吸収しない化合物は、０の濃度を有するものと考えられる。
【0056】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、組成物は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の化合物の比較的少量と、（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）０．７１～０．７３の相対保持時間及び／又は０．８６～０．８８の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物とによって特徴付けられ、例えば、０．７１～０．７３の相対保持時間及び／又は０．８６～０．８８の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の比較的大きな割合（例えば、本明細書で定義されるように、約２２６ｎｍの波長での吸収によって決定される場合）に相当する。
【0057】
本明細書では、「ＢＬ－８０４０以外の全ての化合物」という用語は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）、その対イオン、又は溶媒（例えば、緩衝水溶液）ではない、本明細書に記載の組成物中の化合物の合計を指す。ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の化合物としては、例えば、化学組成及び／又は分子構成が異なる化合物（例えば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）の立体異性体）を挙げることができる。ＢＬ－８０４０（配列番号１）ではないいくつかの化合物は、示された波長で吸収できない場合があり、したがって、（本明細書に定義されるような）吸収に従って決定される場合、「ＢＬ－８０４０以外の全ての化合物」に実質的に寄与しない場合があることを理解されたい。
【0058】
本明細書に記載される任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、「ＢＬ－８０４０以外の全ての化合物」という用語は、本明細書に記載される条件下において決定される場合、少なくとも０．１の相対保持時間、所望により０．１～２の相対保持時間を有する化合物のみを含む。すなわち、示された範囲外の相対保持時間を有する化合物は、そのような実施形態では、それらが対イオン又は溶媒でない場合であっても、（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）「ＢＬ－８０４０以外の全ての化合物」の定義から（例えば、測定の便宜上のために）除外される。いくつかの実施形態では、「ＢＬ－８０４０以外の全ての化合物」という用語は、少なくとも０．５の相対保持時間、所望により０．５～１．５の相対保持時間を有する化合物のみを含む。
【0059】
本明細書に記載される任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、「ＢＬ－８０４０以外の全ての化合物」という用語は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外のペプチド化合物の合計を指す。すなわち、ペプチドではない化合物（すなわち、アミド結合によって連結された少なくとも２つのアミノ酸残基を含まない化合物）は、そのような実施形態では、示された相対保持時間を有する場合であっても、（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）「ＢＬ－８０４０以外の化合物」の定義から除外される。
【0060】
いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、ＢＬ－８０４０（配列番号１）にいくぶん類似しているペプチドは、その性質上、多種多様な変異体となることがあり（例えば、ペプチド中の１又は複数のアミノ酸残基（又は残基群）は、独立して、例えばその立体異性体などの別の残基によって、置換、分解及び／又は置換され得る）、その一部は有利な活性を提供し得るが、非ペプチド化合物は有利な活性を提供する可能性が低く、したがってあまり関心対象ではないものと考えられる。
【0061】
任意の実施形態のいくつかによれば、（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と同じ分子量を有する化合物、及び／又はＢＬ－８０４０（配列番号１）の分子量よりも１００Ｄａ以下、例えば、約８０Ｄａ高い分子量を有する化合物を含む。本明細書で例示されるように、化合物の分子量は、当技術分野で公知の技術に従って、質量分析によって、所望により液体クロマトグラフィ質量分析を用いて決定され得る。
【0062】
任意の実施形態のいくつかによれば、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と同じ分子量を有する１又は複数の化合物、及び／又はＢＬ－８０４０（配列番号１）の分子量よりも約８０Ｄａ大きい分子量を有する１又は複数の化合物からなる。すなわち、前述の分子量を有しない化合物は、そのような実施形態では、示された相対保持時間を有している場合であっても、（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）「０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物」の定義から除外される。いくつかのこのような実施形態では、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの少なくとも１つの化合物は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）と同じ分子量を有する１又は複数の化合物からなる。
【0063】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、少なくとも約０．０１％である。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．０２％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．０３％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．０５％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．０７５％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．１％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．２％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．３％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．４％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．５％である。
【0064】
本明細書では、「総濃度比」という用語は、（１又は複数の）化合物の総濃度（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる、示された範囲内の相対保持率を有する化合物）の、別の濃度（例えば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）の濃度）に対する比率を指し、前記別の濃度は、１（ｕｎｉｔｙ）を表す（又は比率をパーセンテージとして定義する場合は１００％）。ここで、濃度は、本明細書で定義される吸収によって決定される。
【0065】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約１％以下である。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、０．０１％～１％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０２％～１％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０３％～１％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０５％～１％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０７５％～１％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．１％～１％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．２％～１％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．３％～１％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．４％～１％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．５％～１％の範囲内である。
【0066】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．５％以下である。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、０．０１％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０２％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０３％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０５％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０７５％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．１％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．２％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．３％～０．５％の範囲内である。
【0067】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．３％以下である。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、０．０１％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０２％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０３％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０５％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０７５％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．１％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．２％～０．３％の範囲内である。
【0068】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．２５％以下である。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、０．０１％～０．２５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０２％～０．２５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０３％～０．２５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０５％～０．２５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０７５％～０．２５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．１％～０．２５％の範囲内である。
【0069】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．２％以下である。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、０．０１％～０．２％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０２％～０．２％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０３％～０．２％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０５％～０．２％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０７５％～０．２％の範囲内である。
【0070】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．０７５％～約０．２２５％の範囲内にある。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、０．１％～０．２％の範囲内である。
【0071】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に定義されるような）約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも２０％に相当し、すなわち、（本明細書に記載のように決定した）ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも２０％は、示された範囲内（例えば、０．８６～０．８８）の相対保持時間を特徴とする。いくつかのこのような実施形態では、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも３０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも４０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも５０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも６０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも７０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも８０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも９０％に相当する。
【0072】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の（本明細書に定義されるような）総濃度比は、少なくとも約０．０１％である。いくつかのこのような実施形態では、総濃度比は、少なくとも約０．０２％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．０３％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．０５％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．０７５％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．１％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．２％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．３％である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、少なくとも約０．４％である。
【0073】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．５％以下である。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、０．０１％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０２％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０３％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０５％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０７５％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．１％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．２％～０．５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．３％～０．５％の範囲内である。
【0074】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．３％以下である。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、０．０１％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０２％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０３％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０５％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０７５％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．１％～０．３％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．２％～０．３％の範囲内である。
【0075】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）に対する（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度比は、約０．１５％以下である。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度比は、０．０１％～０．１５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０２％～０．１５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０３％～０．１５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０５％～０．１５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．０７５％～０．１５％の範囲内である。いくつかの実施形態では、前記総濃度比は、０．１％～０．１５％の範囲内である。
【0076】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に定義されるような）約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも１０％に相当する。いくつかのこのような実施形態では、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも２０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも３０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも４０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも５０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも６０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも７０％に相当する。いくつかの実施形態では、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも８０％に相当する。
【0077】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物、及び（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度は、（本明細書に定義されるような）約２２６ｎｍの波長での吸収に従って決定される場合、組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも５０％に相当する。いくつかのこのような実施形態では、前記総濃度は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも６０％に相当する。いくつかの実施形態では、前記総濃度は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも７０％に相当する。いくつかの実施形態では、前記総濃度は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも８０％に相当する。いくつかの実施形態では、前記総濃度は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも９０％に相当する。いくつかの実施形態では、前記総濃度は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも９５％に相当する。いくつかの実施形態では、前記総濃度は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも９８％に相当する。いくつかの実施形態では、前記総濃度は、（本明細書に記載のように決定した）組成物中のＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の少なくとも９９％に相当する。
【0078】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、組成物は、比較的少量の、脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）（ここで、Ｃ末端はアミドではなくカルボン酸である）、及び／又はＤ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）（ここで、Ｄ－Ｌｙｓ残基はアセチル化されている）を特徴とする。
【0079】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、本明細書に記載されるいずれかの実施形態による０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度の５０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の３０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の５％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の３％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１％以下である。
【0080】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、本明細書に記載されるいずれかの実施形態による０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の６０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の４０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の５％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１％以下である。
【0081】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、組成物中の環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、本明細書に記載されるいずれかの実施形態による０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度の５０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の３０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の５％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の３％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１％以下である。
【0082】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、組成物中の環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、本明細書に記載されるいずれかの実施形態による０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の６０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の４０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の５％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１％以下である。
【0083】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、本明細書に記載されるいずれかの実施形態による０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度の８０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の６０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の５０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の４０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の３０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の５％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．８６～０．８８の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２％以下である。
【0084】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、組成物中の環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、本明細書に記載されるいずれかの実施形態による０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする少なくとも１つの化合物の総濃度の１５０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１２０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の８０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の６０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の４０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の２０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の１０％以下である。いくつかのこのような実施形態では、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の総濃度は、０．７１～０．７３の範囲内の相対保持時間を特徴とする前述した少なくとも１つの化合物の総濃度の５％以下である。
【0085】
いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、配列番号２及び／又は配列番号３の環状形態は、対応する非環状形態よりも必ずしも有害ではなく、むしろ非環状形態は、典型的には（例えば、配列番号１を有するペプチドが主に環状形態である条件下において）かなり希少であり、したがって、所望により便宜的に無視してもよいものと考えられる。
【0086】
上述のペプチド（環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）及び／又は環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３））は、本明細書に記載の条件下における保持時間を決定することによって、例えば、ペプチドの参照試料を用いて（本明細書で定義されるＢＬ－８０４０（配列番号１）の保持時間に対する）相対保持時間を正確に同定することによって、所望により定量化されてもよい。例えば、本明細書に記載のＨＰＬＣ条件下において、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）の相対保持時間は典型的には約０．９１であり、環状Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｃ）ＢＬ－８０４０（配列番号３）の相対保持時間は約１．１０である。
【0087】
プロセス：
本明細書に例示されるように、本明細書に記載されたものなどの組成物は、ペプチド（保護された形態）が樹脂に付着して形成され、次いで（保護基を除去しながら）樹脂から切断される固相合成を用いて、所望により調製され得る。次いで、環状ペプチドを形成するための分子内ジスルフィド結合を、Ｃｙｓ残基の酸化によって形成してもよい。
本明細書に例示されるように、本明細書に記載されたものなどの組成物は、ペプチド（保護された形態）が樹脂に付着して形成され、次いで（保護基を除去しながら）樹脂から切断される固相合成を用いて、所望により調製され得る。次いで、環状ペプチドを形成するための分子内ジスルフィド結合を、Ｃｙｓ残基の酸化によって形成してもよい。
【0088】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、プロセスは、大規模プロセスである。
【0089】
本明細書では、「大規模プロセス」という用語は、（１回のプロセスにおいて）少なくとも１００グラムの最終生成物（ＢＬ－８０４０（配列番号１））を調製するためのプロセスを指す。
【0090】
大規模プロセスに関連する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、少なくとも２５０グラムのＢＬ－８０４０（配列番号１）ペプチドがプロセスによって調製され、又は少なくとも５００グラムの環状ペプチド、若しくは少なくとも１ｋｇの環状ペプチド、若しくは少なくとも３ｋｇの環状ペプチド、若しくは更に少なくとも１０ｋｇの環状ペプチドがプロセスによって調製される。
【0091】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の組成物は、本明細書に記載のプロセスによって得ることができる。
【0092】
プロセスに関連する本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、記載されたそれぞれの実施形態のいずれかに従って得られた組成物は、例えばプロセスの「シグナチュリオン（ｓｉｇｎａｔｕｒｉｏｎ）」を表す、ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の微量成分の特徴的なセットに関連付けられる。
【0093】
本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかに従って定義される場合、ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全ての化合物の合計は、本明細書ではまた、本明細書に記載のプロセスを特徴付ける「シグナトリー組成物（ｓｉｇｎａｔｏｒｙ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」と互換的に称される。
【0094】
いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、シグナトリー組成物は、（例えば、生物活性に関するセクションにおいて）本明細書に記載の生物活性の増強に関連するものと考えられる。
【0095】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本明細書中に記載されるようなプロセスは、それぞれの実施形態のいずれかにおいて本明細書中に記載されるような、ＢＬ－８０４０（配列番号１）、及びＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の化合物の有利なシグナトリー組成物を含む、シグナトリー組成物（本明細書中に記載されるようなシグナチュリオン）を提供する。
【0096】
本明細書に詳述されているように、前記プロセスは、好ましくは、（当技術分野で公知の一般的な手順に従った）固相ペプチド合成によってアミノ酸及び４－フルオロ－安息香酸を樹脂（例えば、Ｒｉｎｋ ＡＭＳ樹脂）に順次カップリングさせて、樹脂にカップリングされた直鎖ペプチドを得ることを含む。順次のカップリングの順序は、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｃｉｔ（シトルリン）、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、ＤＬｙｓ（Ｄ－リジン）、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｎａｌ（ナフチルアラニン）、Ａｒｇ、Ａｒｇ、４－フルオロ－安息香酸である。
【0097】
前記プロセスは、カップリングによって形成されたペプチドを樹脂から切断し、それによって非環状形態の配列番号１を有する遊離ペプチドを得ることと、その中のシステイン残基を酸化して分子内ジスルフィド結合を形成し、それによって環状形態（溶液中）を得ることと、を更に含む。
【0098】
カップリングは、（例えば、アミノ酸又はＮ末端カルボン酸の）カルボキシレート基と（例えば、第１の工程における樹脂又は後続の工程におけるＮ末端の）アミン基との間にアミド結合を形成することを含み、好ましくは、アミド結合形成に好適であることが当技術分野で公知の１又は複数のカップリング試薬、例えば、カルボジイミド（例えば、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ジシクロヘキシルカルボジイミド及び／又はジイソプロピルカルボジイミド）、アミニウム／ウロニウム（例えば、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＴＢＴＵ及び／又はＨＣＴＵ）又はホスホニウム塩（例えば、ＰｙＢＯＰ及び／又はＰｙＡＯＰ）、及び／又はプロパンホスホン酸無水物を用いて行われる。
【0099】
前記１又は複数のカップリング試薬は、所望により、カルボジイミド（例えば、ジイソプロピルカルボジイミド）、並びに追加の薬剤（例えば、カルボジイミドとほぼ同じモル濃度）、例えばヒドロキシトリアゾール（例えば、１－ヒドロキシ－ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）若しくは１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）及び／又はシアノヒドロキシイミノ酢酸エステル（例えばシアノヒドロキシイミノ酢酸エチル）などを含む。
【0100】
カップリングは、所望により、カルボジイミド及びシアノヒドロキシイミノ酢酸エステルを用いて行ってもよく、例えば、カルボジイミド及び／又はシアノヒドロキシイミノ酢酸エステルは、（カップリングされるアミノ酸又は他のカルボン酸と比較して）約２倍のモル過剰で使用される。
【0101】
カップリングは、所望により、カルボジイミドをシアノヒドロキシイミノ酢酸エチル及び／又はＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾールと共に用いて行ってもよく、例えば、カルボジイミド及び／又はシアノヒドロキシイミノ酢酸エチル及び／又はＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾールは、（カップリングされるアミノ酸又は他のカルボン酸と比較して）約２倍のモル過剰で使用される。
【0102】
カップリングは、所望により、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）をシアノヒドロキシイミノ酢酸エチル及び／又はＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾールと共に用いて行ってもよく、例えば、ＤＩＣ並びにシアノヒドロキシイミノ酢酸エチル及び／又はＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾールは、（カップリングされるアミノ酸又は他のカルボン酸と比較して）約２倍のモル過剰で使用される。
【0103】
各アミノ酸カップリング工程において、アミノ酸のＮ末端は、容易に除去可能な基、好ましくはフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）によって保護され、これは、所望によりピペリジン（例えば、ＤＭＦ中２０～５０％ピペリジン）などの弱い塩基によって切断され得る。ＤＭＦ中のピペリジンの例示的な濃度は約２０％である。
【0104】
例えば、Ｆｍｏｃ基は、所望により、（本明細書に記載される実施形態のいずれかによる）ピペリジン溶液中で２回、所望により５～１０分間で１回、次いで所望により２５～３０分間で１回洗浄し、その後、（例えば、ピペリジンを含まないＤＭＦ中で）樹脂を洗浄して塩基を除去することによって（これは、所望によりｐＨを決定することによって確認してもよい）、除去されてもよい。
【0105】
加えて、特定のアミノ酸の側鎖は、ｔ－ブトキシなどの容易に除去可能な基（前述の弱い塩基によって切断されない）によって保護されてもよい。したがって、Ｔｙｒ中の側鎖ヒドロキシ基は、好ましくは、（ｔ－ブトキシ基を形成するために）ｔ－ブチル（ｔ－Ｂｕ）によって保護されてもよく、（Ｌ又はＤ）Ｌｙｓ中の側鎖アミン基は、（ｔ－ブトキシ基を含む）ｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）によって保護されてもよい。両方の場合において、切断（例えば、酸性環境における）は、保護されていないヒドロキシ基又はアミン基を再生してもよい。同様に、Ｃｙｓの側鎖チオヒドロキシ基は、好ましくはトリチル（Ｔｒｔ）で保護されてもよく、及び／又はＡｒｇの側鎖グアニジニウム基は、好ましくは、２，２，４，６，７－ペンタメチル－２，３－ジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル（Ｐｂｆ）で保護されてもよい。これらの各々は、所望により、酸性環境中で切断され得る。前述の側鎖保護基は、Ｆｍｏｃの使用に特に適合することが知られている。当業者は、アミノ酸側鎖中の特定の基に好適な追加の保護基、並びにそれらの相互のＮ末端保護基及び様々なＮ末端保護基との適合性を認識しているであろう。
【0106】
アミノ酸が順次カップリングされる樹脂は、所望により、Ｒｉｎｋアミノメチルスチレン（ＡＭＳ）樹脂（Ｒｉｎｋリンカーで置換されたアミノメチルスチレン樹脂）である。Ｒｉｎｋ ＡＭＳ樹脂は、所望によりＦｍｏｃ基によって保護されており、このＦｍｏｃ基は、（１つ目のアミノ酸がカップリングする）アミン基を露出させるようにカップリングの前に除去され得る。
【0107】
アミノ酸が順次カップリングされる樹脂（所望により、Ｒｉｎｋ ＡＭＳ樹脂）の置換度は、所望により樹脂１グラム当たり少なくとも０．３ミリ当量（例えば、樹脂１グラム当たり０．３～０．１１ミリ当量）、所望により樹脂１グラム当たり少なくとも０．６ミリ当量、所望により樹脂１グラム当たり０．６～１．１ミリ当量、及び所望により樹脂１グラム当たり０．６～０．９ミリ当量である。
【0108】
各カップリング工程の前に、例えば樹脂の膨張を容易にするために、樹脂をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などの溶媒で所望により洗浄してもよい（例えば、１回又は２回）。いくつかの例示的実施形態では、樹脂は、樹脂の脱保護（例えば、本明細書中に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによるＦｍｏｃ基の除去）及び第１のアミノ酸のカップリングの前に２０～３０分間洗浄され、その後の各カップリング工程の前に約２分間洗浄（例えば、２回）される。
【0109】
樹脂からの（順次のカップリングによって形成された）ペプチドの切断、及びアミノ酸側鎖からの保護基の切断は、好ましくは、（樹脂にカップリングされた）ペプチドを、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）などの酸を含む液体と接触させることによって行われる。液体中のＴＦＡの濃度は、所望により、少なくとも約８０重量％、又は少なくとも約９０重量％、又は少なくとも約９５重量％である（例えば、残部は主に水である）。
【0110】
切断のために使用される液体（例えば、酸性液体）は、所望により、チオール（例えば、エタンジチオール、ジチオエリトリトール、ジチオトレイトール）、トリアルキルシラン（例えば、トリイソプロピルシラン）、フェノール（例えば、ｍ－クレゾール）及び／又は水などのスカベンジャ（例えば、切断中に形成し得る反応性カチオン種のスカベンジャ）を更に含む。
【0111】
ジチオトレイトール（ＤＴＴ）及び／又はジチオエリトリトール（ＤＴＥ）は、好適なスカベンジャの例であり、所望により、液体は、好ましくは水と組み合わせた、ＴＦＡ（例えば、本明細書中に記載される濃度）とＤＴＴ及び／又はＤＴＥとを含む溶液である。切断に使用される溶液中のＤＴＴ及び／又はＤＴＥの（総）濃度は、所望により少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１０～５００ｍｇ／ｍＬ、又は１０～２００ｍｇ／ｍＬ、又は１０～１００ｍｇ／ｍＬ、又は１０～５０ｍｇ／ｍＬ）、所望により少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ（例えば、２５～５００ｍｇ／ｍＬ、又は２５～２００ｍｇ／ｍＬ、又は２５～１００ｍｇ／ｍＬ、又は２５～５０ｍｇ／ｍＬ）、所望により少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ（例えば、５０～５００ｍｇ／ｍＬ、又は５０～２００ｍｇ／ｍＬ、又は５０～１００ｍｇ／ｍＬ）、及び所望により約５０ｍｇ／ｍＬである。
【0112】
樹脂からペプチドが切断される際、遊離ペプチドは、好ましくは、例えばペプチドが不溶性である液体の添加によって沈殿させる。沈殿の前に、所望により、溶液の溶媒の一部を蒸発させることによって遊離ペプチドを濃縮して溶液の体積を減少（例えば、約６５％～約７０％減少）させてもよい。あるいは、沈殿前には遊離ペプチドの濃縮を行わない。
【0113】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、遊離ペプチドの沈殿は、沈殿前に遊離ペプチドを濃縮することなく行われる。
【0114】
ペプチドの沈殿は、所望により、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）などのジアルキルエーテルの添加によって行われる。
【0115】
ＭＴＢＥは所望によりヘキサンと混合される。いくつかの実施形態では、ＭＴＢＥとヘキサンとの混合物（所望により、例えば約５℃～約１５℃の範囲内の温度まで冷却される）は、樹脂１グラム当たり少なくとも４０ｍＬの混合物の体積、及び所望により樹脂１グラム当たり約４５ｍＬの混合物の体積でペプチドに添加される。ＭＴＢＥとヘキサンとの例示的な混合物は、６０：４０（ＭＴＢＥ：ヘキサン）の体積比のＭＴＢＥ及びヘキサンから構成される。
【0116】
沈殿したペプチドは、所望により、例えば凍結乾燥又は真空によって乾燥される。
【0117】
本明細書で論じるように、得られたペプチドのシステイン残基を酸化することによって、分子内ジスルフィド結合が形成され得る（これによりペプチドの環化が得られる）。当技術分野で公知の任意の好適な技術を、所望により使用してもよい。
【0118】
このような酸化は、所望により、ペプチドを過酸化水素と接触させることによって、例えば、過酸化水素溶液（例えば、水中約１．５重量％の過酸化水素）を徐々に（例えば、滴下）添加することによって行われる。Ｃｙｓ残基対に対する（例えば、配列番号１などの、正確に２個のＣｙｓ残基を含む、ペプチドに対する）過酸化水素のモル比は、好ましくは少なくとも１：１（すなわち、Ｃｙｓ残基対当たり少なくとも１つの過酸化水素分子が存在する）、所望により少なくとも２：１、所望により少なくとも３：１、及び所望により少なくとも４：１である。Ｃｙｓ残基対に対する（例えば、ペプチドに対する）過酸化水素の例示的なモル比は、約５：１である。代替的又は追加的に、過酸化水素は（例えば、エルマン試験などの好適なアッセイによって決定されるように）チオヒドロキシ基が残存しなくなるまで所望により添加してもよい。
【0119】
酸化は、所望により、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ（例えば、５～２０ｍｇ／ｍＬ、又は５～１５ｍｇ／ｍＬ、又は５～１０ｍｇ／ｍＬ、又は約１０ｍｇ／ｍＬ）の濃度のペプチドを含む水溶液を、（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかに従う）過酸化水素と接触させることによって行われる。所望により、ペプチド濃度は少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１０～２０ｍｇ／ｍＬ又は１０～１５ｍｇ／ｍＬ）である。水溶液は、所望により弱アルカリ性であり、例えば重炭酸アンモニウム（ＮＨ４ＨＣＯ３）の水溶液である。重炭酸アンモニウムの例示的な濃度は約０．１Ｍである。
【0120】
本プロセスは、好ましくは、得られたＢＬ－８０４０（配列番号１）を単離することを更に含む。単離手順は１００％完全ではないので、いくつかの追加的な化合物（本明細書に記載）が残る。当技術分野で公知の任意の好適な技術を、所望により使用してもよい。
【0121】
ペプチドの単離は、所望により、クロマトグラフィ、例えば、例としてＣ１８カラムを用いる分取高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）の少なくとも１つの工程（例えば、所望により１つ又は２つの工程）を含む。単離は、所望により、得られたペプチド（例えば、本明細書に記載のＨＰＬＣの少なくとも１つの工程における）を逆相クロマトグラフィカラム（例えば、Ｃ１８カラム）上に、カラム１ｋｇ当たり（カラムの樹脂の重量基準）４０グラム以下のペプチドの濃度で、及び／又は所望によりカラム１ｋｇ当たり少なくとも４グラム（例えば、４～４０グラム、又は４～３０グラム、又は４～２５グラム）のペプチドの濃度（カラムの樹脂の重量基準）で、所望によりカラム１ｋｇ当たり少なくとも１０グラム（例えば、１０～４０グラム、又は１０～３０グラム、又は１０～２５グラム）のペプチドで、及び所望によりカラム１ｋｇ当たり少なくとも２０グラム（例えば、２０～４０グラム、又は２０～３０グラム、又は２０～２５グラム）のペプチドでロードすることを含む。
【0122】
カラムにロードされたペプチド（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）は、例えば、緩衝溶液を用いて（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる、アセトニトリル勾配と組み合わせて）溶出される。緩衝溶液のｐＨは、所望により１．５～３の範囲内、所望により２．０～２．５の範囲内、所望により約２．２５である。トリエチルアンモニウムリン酸塩緩衝液を使用して、所望により、例えば、少なくとも約０．０１Ｍの濃度、又は少なくとも約０．０３Ｍの濃度、又は少なくとも約０．１Ｍの濃度で使用して、カラムからペプチドを溶出してもよい。例示的な実施形態では、トリエチルアンモニウムリン酸塩の濃度は、約０．１Ｍである。
【0123】
ＨＰＬＣカラムからの溶出は、所望により、アセトニトリル勾配を用いて行われる。勾配は、所望により、アセトニトリルの濃度を、０．１％アセトニトリル／分～２％アセトニトリル／分、例えば約１％／５～６分及び／又は約１％／分の範囲内の速度（所望により、経時的に変化する）で増加させることを含む。代替的又は追加的に、勾配は、所望により、アセトニトリルの濃度を、（例えば、０％から）１０％～４０％の範囲内、又は２０％～３０％の範囲内、又は約２５％の濃度まで増加させることを含む。
【0124】
例示的な勾配（例えば、本明細書中に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによる、トリエチルアンモニウムリン酸塩緩衝液を用いる）は、０％のアセトニトリルを約８分間、０％から約５％のアセトニトリルを約５分間（例えば、約１％／分の速度）、及び約５％から約２５％のアセトニトリルを約１２０分間含む（例えば、約０．１７％／分の速度）。
【0125】
所望により、溶出したペプチドを、（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかに従う）カラムへ２回目にロードし、例えば、（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる、アセトニトリル勾配と組み合わせた）緩衝溶液を用いて溶出する。所望により酢酸緩衝液（例えば、酢酸／酢酸アンモニウム）を使用して、例えば、少なくとも約５ｍＭの濃度、又は少なくとも約２０ｍＭの濃度、又は少なくとも約３５ｍＭの濃度で、（例えば、ペプチドを酢酸塩として得るために）カラムからペプチドを溶出させてもよい。例示的な実施形態では、酢酸塩の濃度は、約３５ｍＭである。
【0126】
２回目の溶出のための例示的な勾配（例えば、本明細書に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによる、酢酸緩衝液を用いる）は、０％のアセトニトリルを８分間、及び０％から２２％のアセトニトリルを１１０分間含む（０．２％／分の速度）。
【0127】
前記プロセスは、所望により、（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）クロマトグラフィによって得られた生成物を凍結乾燥することを更に含む。
【0128】
所望により、本プロセスは、以下の特徴（ｉ）～特徴（ｖｉｉ）のうち、少なくとも１つ、又は少なくとも２つ、又は少なくとも３つ、又は少なくとも４つ、又は少なくとも５つ、又は少なくとも６つを特徴とする：
（ｉ）カップリングは、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を、シアノヒドロキシイミノ酢酸エチル及び／又はＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾールと組み合わせて用いて行われる（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｉｉ）樹脂からのペプチドの切断は、樹脂にカップリングされた直鎖ペプチドを、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）及び／又はジチオエリトリトール（ＤＴＥ）であるスカベンジャと、を含む溶液と接触させることによって行われる（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｉｉｉ）前記プロセスは、ペプチドの沈殿前の蒸発によって遊離直鎖ペプチドを濃縮することなく、切断後に遊離直鎖ペプチドを沈殿させることを更に含む（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｉｖ）酸化は、少なくとも５ｍｇ／ｍＬの濃度の直鎖ペプチドを含む水溶液を過酸化水素と接触させることを含む（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｖ）ペプチドを単離することは、環状ペプチドを逆相クロマトグラフィカラムに、カラム１ｋｇ当たり４０グラム以下の環状ペプチドの濃度でロードし、かつ環状ペプチドをカラムから溶出させることを含む（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｖｉ）環状ペプチドを単離することは、凍結乾燥を含み、前記プロセスは、凍結乾燥後に環状ペプチドを粉砕することを更に含む（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；並びに／又は
（ｖｉｉ）ペプチド合成に使用される樹脂の置換度は、少なくとも０．３ミリ当量／グラムであり、及び／若しくは樹脂は、Ｒｉｎｋ ＡＭＳ樹脂である（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）。
（ｉ）カップリングは、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を、シアノヒドロキシイミノ酢酸エチル及び／又はＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾールと組み合わせて用いて行われる（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｉｉ）樹脂からのペプチドの切断は、樹脂にカップリングされた直鎖ペプチドを、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）及び／又はジチオエリトリトール（ＤＴＥ）であるスカベンジャと、を含む溶液と接触させることによって行われる（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｉｉｉ）前記プロセスは、ペプチドの沈殿前の蒸発によって遊離直鎖ペプチドを濃縮することなく、切断後に遊離直鎖ペプチドを沈殿させることを更に含む（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｉｖ）酸化は、少なくとも５ｍｇ／ｍＬの濃度の直鎖ペプチドを含む水溶液を過酸化水素と接触させることを含む（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｖ）ペプチドを単離することは、環状ペプチドを逆相クロマトグラフィカラムに、カラム１ｋｇ当たり４０グラム以下の環状ペプチドの濃度でロードし、かつ環状ペプチドをカラムから溶出させることを含む（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；
（ｖｉ）環状ペプチドを単離することは、凍結乾燥を含み、前記プロセスは、凍結乾燥後に環状ペプチドを粉砕することを更に含む（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）；並びに／又は
（ｖｉｉ）ペプチド合成に使用される樹脂の置換度は、少なくとも０．３ミリ当量／グラムであり、及び／若しくは樹脂は、Ｒｉｎｋ ＡＭＳ樹脂である（例えば、本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかよる）。
【0129】
生物活性：
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、本明細書中に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによるＢＬ－８０４０（配列番号１）含有組成物は、（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）０．７１～０．７３及び／又は０．８６～０．８８の相対保持率を有する化合物を有しない、対応するＢＬ－８０４０（配列番号１）含有組成物（例えば、同じＢＬ－８０４０（配列番号１）濃度、対イオン及び溶媒）と比較して、増強された生物活性を呈する。
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、本明細書中に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによるＢＬ－８０４０（配列番号１）含有組成物は、（本明細書に記載のそれぞれの実施形態のいずれかによる）０．７１～０．７３及び／又は０．８６～０．８８の相対保持率を有する化合物を有しない、対応するＢＬ－８０４０（配列番号１）含有組成物（例えば、同じＢＬ－８０４０（配列番号１）濃度、対イオン及び溶媒）と比較して、増強された生物活性を呈する。
【0130】
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、組成物の生物活性は、例えばマウスにおいて、末梢血へのインビボ好中球遊走の促進（これはまた、骨髄への遊走の阻害と見なされうる）を特徴とする。
【0131】
本明細書で例示するように、本発明の実施形態による組成物（例えば、約０．７２及び約０．８７の相対保持時間を有する化合物を含むシグナルトリー組成物を有する）は、前述の追加的な化合物を有しない同量のＢＬ－８０４０（配列番号１）を含む対照組成物と比較して、末梢血中の好中球の増加のほぼ２倍の増強に関連していた。
【0132】
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、末梢血へのインビボ好中球遊走の促進は、２００μＬのＰＢＳにおいて再構成した５ｍｇ／ｋｇのＢＬ－８０４０（配列番号１）をマウスに皮下注射し、その後、注射の２時間後にマウスから採血し（例えば、ヘパリンを用いたチューブへの心臓穿刺による）、対照（非処置）マウスと比較して末梢血における成熟好中球の数を定量化することによって（例えば、フローサイトメトリによって）決定される。
【0133】
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、組成物の生物活性は、以下のうち１又は複数によって特徴付けられる：
（ｉ）例えばマウスにおける、末梢血へのインビボ好中球遊走の促進（これはまた、骨髄への遊走の阻害とも見なされ得る）；
（ｉｉ）乳がん細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害；
（ｉｉｉ）Ｔ細胞由来白血病細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害；
（ｉｖ）動物（例えば、マウス）モデルにおける肺への転移性乳がん細胞遊走の阻害；
（ｖ）動物（例えば、マウス）モデルにおける遅延型過敏症の阻害；
（ｖｉ）動物（例えば、マウス）モデルにおけるコラーゲン誘発関節炎の阻害；及び
（ｖｉｉ）インビトロでの細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞）におけるＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との結合の阻害（例えば、ＣＸＣＬ１２のＩＣ５０を増加させること）。
（ｉ）例えばマウスにおける、末梢血へのインビボ好中球遊走の促進（これはまた、骨髄への遊走の阻害とも見なされ得る）；
（ｉｉ）乳がん細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害；
（ｉｉｉ）Ｔ細胞由来白血病細胞のインビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害；
（ｉｖ）動物（例えば、マウス）モデルにおける肺への転移性乳がん細胞遊走の阻害；
（ｖ）動物（例えば、マウス）モデルにおける遅延型過敏症の阻害；
（ｖｉ）動物（例えば、マウス）モデルにおけるコラーゲン誘発関節炎の阻害；及び
（ｖｉｉ）インビトロでの細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞）におけるＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との結合の阻害（例えば、ＣＸＣＬ１２のＩＣ５０を増加させること）。
【0134】
それぞれの実施形態のいくつかでは、組成物の生物活性は、活性（ｉ）～活性（ｖｉｉ）のうち少なくとも２つによって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、組成物の生物活性は、活性（ｉ）～活性（ｖｉｉ）のうち少なくとも３つによって特徴付けられる。
【0135】
本明細書に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによる増強された生物活性は、（例えば、本明細書に記載の手順に従って決定される場合）少なくとも１０％、所望により少なくとも２０％、所望により少なくとも３０％、及び所望により少なくとも５０％の関連する定量的パラメータの増加又は減少（例えば、対照に対するパラメータの倍率変化）を所望により特徴とする。例えば、本明細書に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによる末梢血へのインビボ好中球遊走の増強された促進は、（例えば、本明細書に記載の手順に従って決定される場合）少なくとも１０％、所望により少なくとも２０％、所望により少なくとも３０％、及び所望により少なくとも５０％の末梢血中の好中球レベルの増加を所望により特徴とする。
【0136】
活性（ｉ）～活性（ｖｉｉ）は、所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されたものなどの手順、及び／又は本明細書の実施例のセクションに記載されたものなど手順を用いて評価することができる。
【0137】
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、活性（ｉｉ）及び活性（ｉｉｉ）（インビトロＣＸＣＬ１２誘発遊走の阻害）は、２つの区画を分離する好適な微孔膜及び／又はインサート（例えば、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）プレート）を通る細胞の遊走を評価することによって決定される。ＣＸＣＬ１２（乳がん細胞については１００ｎＭ及び白血病細胞については３０ｎＭ）及び細胞増殖培地（所望により、０．１％ウシ血清アルブミンを含む６００μＬのＤＭＥＭ）を、ＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物とともに、第１の（例えば、上部）区画に添加し、試験されるＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳がん細胞又はＳＵＰ－Ｔ１白血病細胞（例えば、２×１０６細胞／ｍＬ）及び細胞増殖培地（所望により、０．１％ウシ血清アルブミンを含む１００μＬのＤＭＥＭ）を、第２の（例えば、下部）区画に添加する。細胞増殖及び活性に適した条件下（例えば、３７℃で）におけるインキュベーション（例えば、乳がん細胞については１５時間、白血病細胞については４時間）の際に膜及び／又はインサートを通って遊走した細胞の量を、所望により、フローサイトメトリによって、並びに／又は固定及び染色（例えば、２５％メタノール及び０．５％クリスタルバイオレット）によって定量化し、ＢＬ－８０４０（配列番号１）を有しない対照試料と比較する。
【0138】
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、活性（ｉｖ）（肺への転移性乳がん細胞遊走の阻害）は、１０６個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳がん細胞を、マウス（所望により、５週齢の雌ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウス）の尾部へと静脈内移植することによって決定される。８０ｍｇ／ｍＬのＢＬ－８０４０（配列番号１）の濃度に調整した生理食塩水を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物を、マウスへ４週間にわたって徐々に投与する（所望により、徐放性浸透圧ポンプを用いて）、約１８．２ｍｇ／ｋｇ／日を投与）。次いで、マウスの肺におけるがん細胞の量を、所望により気管を通じて注射したエバンズブルー溶液（例えば、０．２％、２ｍＬ）を用いて、続いて肺をブアン液に浸し、染色し、固定して、評価する。
【0139】
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、活性（ｖ）（遅延型過敏症の阻害）は、感作マウスの足首へのヒツジ赤血球の注射によって生じる炎症の程度（足首の厚さの変化によって表される）に従って決定される。マウスの感作のために、生理食塩水溶液に懸濁したヒツジ赤血球（５０μＬ当たり２×１０７細胞）を、マウス（所望により、６週齢の雄ＢＡＬＢ／ｃマウス）の左後肢の足首へと皮下投与し、５日後に、５０μＬ当たり１０８細胞のヒツジ赤血球を右後肢の足首へと皮下投与する。抗原の誘導の直前及び約２４時間後に、足首の厚さを決定する。ＰＢＳを含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物を、感作前日から開始して、約４μｇ／日、約８μｇ／日、約２４μｇ／日及び／又は約１２０μｇ／日のＢＬ－８０４０（配列番号１）を投与するように、マウスへ（所望により、徐放性浸透圧ポンプを用いて）徐々に投与する。
【0140】
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、活性（ｖｉ）（コラーゲン誘発関節炎の阻害）は、１ｍｇ／ｍＬのウシＩＩ型コラーゲン、０．０２５Ｍの酢酸、及び５０％（体積基準）のフロイント完全アジュバントを含むエマルジョンの（例えば、尾部の付け根への）皮内注射によって、マウス（所望により、６週齢の雄ＤＢＡ／１ＪＮマウス）にコラーゲン誘発関節炎を引き起こし、続いて、注射の２１日後に同様の免疫化を行うことによって決定される。第２の免疫化の２週間後、体重及び／又は後肢の厚さを所望により測定し、関節炎スコアリングを所望により行う。関節炎は、所望により、各肢０～３点でスコアリングされ、それらの合計によって評価される（１２点満点；０＝正常；１＝軽度の腫脹又は１桁の膨張；２＝中程度の膨張又は複数桁の膨張；３＝重度の膨張）。ＩＩ型コラーゲン特異的ＩｇＧ２ａ抗体は、所望により、任意の好適な技術を用いて、所望により本明細書の実施例セクションに記載の手順によって（２週間の期間の終わりに）定量化される。コラーゲン誘発関節炎の阻害は、所望により、体重減少の阻害、関節炎スコアの減少及び／又はＩＩ型コラーゲン特異的抗体の減少として顕在化し得る。
【0141】
任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、活性（ｖｉｉ）（細胞中のＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４への結合の阻害）は、所望により、ＪｕｒｋａｔヒトＴ細胞白血病細胞において放射性標識されたＣＸＣＬ１２を用いて（例えば、ＣＸＣＬ１２のＩＣ５０の増加により）、決定される。２００ｐＭの１２５Ｉ－ＣＸＣＬ１２を、約７のｐＨの緩衝液に懸濁したＪｕｒｋａｔ細胞（所望により、６×１０６細胞／ｍＬ）と共に、（例えば、０．５％ウシ血清アルブミン及び２０ｍＭ ＨＥＰＥＳを含有するダルベッコＰＢＳ溶液、ｐＨ７．０）でインキュベートし、試験されるＢＬ－８０４０（配列番号１）の物質組成物を、緩衝液によって１：２：１（例えば、緩衝液中の、２５μＬの放射性標識１２５Ｉ－ＣＸＣＬ１２、５０μＬのＪｕｒｋａｔ細胞溶液、及び２５μＬのＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物）の体積比で希釈する。試料を室温で１時間固定反応に供し、続いて、各試料の放射能を決定する。
【0142】
製剤化及び使用：
本明細書に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによるＢＬ－８０４０（配列番号１）（及び、ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の化合物）を含む組成物は、所望により、ＢＬ－８０４０（配列番号１）によって治療可能な状態の治療に使用するためのものであってもよい。
本明細書に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによるＢＬ－８０４０（配列番号１）（及び、ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の化合物）を含む組成物は、所望により、ＢＬ－８０４０（配列番号１）によって治療可能な状態の治療に使用するためのものであってもよい。
【0143】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）によって治療可能な状態を治療するための医薬品の製造における、本明細書中に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによる組成物の使用が提供される。
【0144】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）によって治療可能な状態を治療する方法であって、本明細書中に記載されるそれぞれの実施形態のいずれかによる組成物を、それを必要とする対象へ投与することを含む方法が提供される。
【0145】
治療に関する本明細書に記載される任意の実施形態のいくつかでは、治療は、ＣＸＣＲ４を阻害することが有利である任意の治療であり得る。
【0146】
本出願から出来る特許の存続期間中に、多くの関連する治療が開発されることが予想され、「状態」、「ＢＬ－８０４０によって治療可能」及び「ＣＸＣＲ４を阻害することが有利である治療」という用語の範囲は、全てのそのような新規技術を推測的に含むことが意図されている。
【0147】
本明細書に記載の任意の実施形態のいくつかでは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）によって治療可能な状態は、例えば、米国特許第７，４２３，００７号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる、特に前述のペプチドによる状態の治療に関する内容）に記載されるような、がん又は関節炎（例えば、慢性関節リウマチ）である。
【0148】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）によって治療可能な（本明細書に記載される態様のいずれかによる）状態の例としては、例えば、国際特許出願公開ＷＯ２０１２／０９５８４９（その内容は参照により本明細書に組み込まれる、特に前述のペプチドによる状態の治療に関する内容）に記載されているような、網膜芽細胞腫及び／又は神経外胚葉由来腫瘍；例えば、国際公開第ＷＯ２０１３／１６０８９５号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる、特に前述のペプチドによる状態の治療に関する内容）に記載されているような、大細胞肺がん；例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２００８／０７５３７０号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる、特に前述のペプチドによる状態の治療に関する内容）に記載されているような、多発性骨髄腫、ミクログリオーマ及び／又はグリオーマ；例えば、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような、乳がん及び／又は膵臓がん；例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／１４６５７８号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる、特に前述のペプチドによる状態の治療に関する内容）に記載されているような、血小板減少症；例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２００８／０７５３６９号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる、特に前述のペプチドによる状態の治療に関する内容）に記載されているような、骨髄抑制のリスク；例えば、米国特許第８，４３５，９３９号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる、特に前述のペプチドによる状態の治療に関する内容）に記載されているような、ＨＩＶ感染症が挙げられるが、これらに限定されない。
【0149】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）の好適な類似体及び誘導体は、米国特許第７，４２３，００７号及び同第８，４３５，９３９号、並びに国際特許出願公開第ＷＯ２００８／０７５３６９号、同第ＷＯ２００８／０７５３７０号、同第ＷＯ２０１０／１４６５７８号、同第ＷＯ２０１２／０９５８４９号及び同第ＷＯ２０１３／１６０８９５号（これら各々の内容が参照により本明細書に組み込まれる、特に、配列番号１の類似体及び誘導体に関する内容）に記載されている。
【0150】
本明細書に記載の実施形態のいずれかによるＢＬ－８０４０（配列番号１）及びＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の化合物を含む組成物は、それ自体で、又は好適な担体若しくは賦形剤と混合された医薬組成物中で、生物に投与することができる。
【0151】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」とは、生理学的に好適な担体及び賦形剤などの他の化学成分を含む、本明細書に記載の活性成分の１又は複数の調製物を指す。医薬組成物の目的は生物への化合物の投与を容易にすることである。
【0152】
本明細書では、「活性成分」という用語は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）を指し、かつ所望によりＢＬ－８０４０（配列番号１）と共に製剤化される任意の追加的な治療活性剤物質を更に含み得る。
【0153】
以下、互換的に使用され得る「生理学的に許容される担体」及び「薬学的に許容される担体」という語句は、生物に対して有意な刺激を引き起こさず、かつ投与された化合物の生物活性及び特性を無効にしない、担体又は希釈剤を指す。アジュバントはこれらの語句の下に含まれる。
【0154】
本明細書では、「賦形剤」という用語は、活性成分の投与を更に容易にするために医薬組成物へと添加される不活性物質を指す。賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な種類の糖及びデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油及びポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
【0155】
薬物の製剤化及び投与のための技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、最新版に見出すことができ、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【0156】
好適な投与経路としては、例えば、経口送達、直腸送達、経粘膜送達、特に経鼻送達、腸送達又は非経口送達（筋肉内注射、皮下注射及び髄内注射、並びに髄腔内注射、脳室内への直接の注射、心臓内注射（例えば右心室腔内注射又は左心室腔内注射）、一般的な冠動脈内注射（into the common coronary artery）、静脈内注射、腹腔内注射、鼻腔内注射、又は眼内注射）が挙げられ得る。
【0157】
あるいは、例えば、医薬組成物を患者の組織領域に直接注射することによって、全身的ではなく局所的に医薬組成物を投与してもよい。
【0158】
本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物は、当技術分野で公知のプロセス、例えば、従来の混合プロセス、溶解プロセス、造粒プロセス、糖衣錠作製プロセス、湿式粉砕プロセス、乳化プロセス、カプセル化プロセス、封入プロセス又は凍結乾燥プロセスによって製造してもよい。
【0159】
したがって、本発明のいくつかの実施形態に従って使用するための医薬組成物は、賦形剤及び補助剤を含む１又は複数の生理学的に許容される担体を用いて従来の様式で製剤化されてもよく、これは、薬学的に使用することができる調製物への活性成分（又は活性成分群）の加工を容易にする。適切な製剤は選択される投与経路に依存する。
【0160】
注射のために、医薬組成物の活性成分（又は活性成分群）は、水溶液中、好ましくは生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス溶液、リンゲル溶液又は生理食塩緩衝液などにおいて製剤化され得る。経粘膜投与の場合、浸透されるバリアに適切な浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は当技術分野で一般的に知られている。
【0161】
経口投与の場合、医薬組成物は、活性成分（又は活性成分群）を当技術分野で公知の薬学的に許容される担体と組み合わせることによって、容易に製剤化することができる。そのような担体は、患者による経口摂取のために、医薬組成物を、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁剤などとして製剤化することが可能である。経口使用のための薬理学的調製物は、必要であれば好適な補助剤を添加した後に、固体賦形剤を用いて、所望により得られた混合物を粉砕し、顆粒の混合物を加工して、錠剤又は糖衣錠コアを得ることにより作製することができる。好適な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、又はソルビトールを含む糖などの充填剤；トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、バレイショデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース調製物；及び／又は生理学的に許容されるポリマー、例えばポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはその塩（例えばアルギン酸ナトリウムなど）などの崩壊剤を添加してもよい。
【0162】
糖衣錠コアには好適なコーティングが施される。この目的のために、所望によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液、及び好適な有機溶媒又は溶媒混合物を含有し得る、濃縮糖溶液を使用してもよい。識別のために、又は活性化合物用量の異なる組合せを特徴付けるために、染料又は顔料を錠剤又は糖衣錠コーティングに添加してもよい。
【0163】
経口的に使用することができる医薬組成物には、ゼラチンで作られた押込み式カプセル（ｐｕｓｈ－ｆｉｔ ｃａｐｓｕｌｅ）、並びにゼラチン及び可塑剤、例えばグリセロール又はソルビトールなどで作られた密封ソフトカプセルが含まれる。押込み式カプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、タルク又はステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及び所望により安定剤と混合して、活性成分（又は活性成分群）を含有してもよい。ソフトカプセルでは、活性成分（又は活性成分群）は、脂肪油、流動パラフィン、又は液体ポリエチレングリコールなどの好適な液体に溶解又は懸濁されてもよい。加えて、安定剤を添加してもよい。経口投与のための全ての製剤は、選択された投与経路に適した投与量であるべきである。
【0164】
頬側投与の場合、組成物は、従来の様式で製剤化された錠剤又はトローチ剤の形態をとることができる。
【0165】
経鼻吸入による投与の場合、本発明のいくつかの実施形態による使用のための活性成分（又は活性成分群）を含む組成物は、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロ－テトラフルオロエタン又は二酸化炭素を使用して、加圧パック又はネブライザからエアロゾルスプレーの形態で都合よく送達される。加圧エアロゾルの場合、投薬単位は、計量された量を送達するための弁を用意することによって決定され得る。ディスペンサで使用するための、例えばゼラチンのカプセル及びカートリッジは、化合物と、ラクトース又はデンプンなどの好適な粉末基剤との粉末混合物を含有して製剤化され得る。
【0166】
本明細書に記載の医薬組成物は、例えばボーラス注射又は連続注入による非経口投与のために製剤化され得る。注射用製剤は、単位用量剤形、例えばアンプルで、又は所望により保存剤を添加した複数回用量の容器で提供され得る。組成物は、油性ビヒクル又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルジョンであってもよく、懸濁化剤、安定化剤及び／又は分散剤などの配合剤を含有してもよい。
【0167】
非経口投与のための医薬組成物は、水溶性形態の活性調製物の水溶液を含む。さらに、活性成分（又は活性成分群）の懸濁液は、適切な油性注射懸濁液又は水性注射懸濁液として調製してもよい。好適な親油性溶媒又はビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油、又はオレイン酸エチル、トリグリセリド若しくはリポソームなどの合成脂肪酸エステルが挙げられる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含有し得る。所望により、懸濁液はまた、高濃度溶液の調製を可能にするために活性成分（又は活性成分群）の溶解度を増加させる、好適な安定剤又は薬剤を含有してもよい。
【0168】
あるいは、活性成分は、使用前に好適なビヒクル、例えば滅菌パイロジェンフリーの水性溶液で構成するための粉末形態であってもよい。
【0169】
本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物はまた、例えば、カカオバター又は他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を用いて、坐剤又は滞留浣腸などの直腸組成物に製剤化され得る。
【0170】
本発明のいくつかの実施形態の状況での使用に適した医薬組成物は、意図された目的を達成するのに有効な量で活性成分が含有される、組成物を含む。より具体的には、ＢＬ－８０４０（配列番号１）ペプチドの治療有効量は、障害（例えば、本明細書中で論じられるようながん又は関節炎）の症状を予防、緩和若しくは改善するため、又は治療されている対象の生存を延長するために有効なペプチドの量を意味する。
【0171】
治療有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、充分に当業者の能力の範囲内である。正確な製剤、投与経路及び投与量は、患者の状態を考慮して、個々の医師が選択することができる。（例えば、Ｆｉｎｇｌ，ら（１９７５年）「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」第１章第１頁を参照されたい）。
【0172】
治療される状態の重症度及び応答性に応じて、投薬は、単回又は複数回の投与であってもよく、一連の治療は、数日～数週間、又は治癒がもたらされるまで、又は疾患状態の減少が達成されるまで続く。
【0173】
投与される組成物の量は、当然のことながら、治療される対象、苦痛の重症度、投与様式、処方医師の判断などに依存するであろう。
【0174】
本発明のいくつかの実施形態の組成物は、必要に応じて、活性成分を含有する１又は複数の単位用量剤形を含有し得る、例えばＦＤＡ承認キットなどのパック又はディスペンサ装置で提供され得る。パックは、例えばブリスターパックなどの金属箔又はプラスチック箔を含み得る。パック又はディスペンサ装置は、投与のための説明書を伴ってもよい。パック又はディスペンサにはまた、医薬品の製造、使用又は販売を規制する政府機関によって規定された形態の容器に関連した通知が提供されてもよく、この通知は、組成物の形態又はヒト投与若しくは獣医学的投与の機関による承認を反映している。そのような通知は、例えば、処方薬について米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認されたラベル、又は承認された製品添付文書のものであってもよい。適合する医薬担体中に製剤化された本発明の調製物を含む組成物もまた、上記で更に詳述されるように、調製され、適切な容器に入れられ、適応する状態の治療のためにラベリングされ得る。
【0175】
更なる定義：
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±１０％を指す。本明細書に記載される任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、「約」という用語は、±５％を指す。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±１０％を指す。本明細書に記載される任意のそれぞれの実施形態のいくつかでは、「約」という用語は、±５％を指す。
【0176】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語及びそれらの活用形は、「含むが、限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」ことを意味する。
【0177】
「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語は、「含み、限定される（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｎｄ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」ことを意味する。
【0178】
「から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語は、組成物、方法又は構造が追加的な成分、工程及び／又は部分を含み得るが、前記追加的な成分、工程及び／又は部分が、特許請求される組成物、方法又は構造の基本的かつ新規な特徴を実質的に変化させない場合に限ることを意味する。
【0179】
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「前記（ｔｈｅ）」という単数形は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「１つの化合物（a compound）」又は「少なくとも１つの化合物（at least one compound）」という用語は、それらの混合物を含む、複数の化合物を含み得る。
【0180】
本出願を通して、本発明の様々な実施形態は範囲形式で提示され得る。範囲形式での説明は、単に便宜及び簡潔さのためのものであって、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、全ての可能な部分範囲、及びその範囲内の個々の数値を具体的に開示しているものと見なされるべきである。例えば、１～６などの範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの部分範囲、並びにその範囲内の個々の数、例えば１、２、３、４、５、及び６を具体的に開示しているものと見なされるべきである。これは、範囲の幅に関係なく適用される。
【0181】
本明細書において数値範囲が示される場合はいつでも、示された範囲内の任意の引用された数字（分数又は整数）を含むことを意味する。第１の提示数と第２の提示数との「間の範囲内（ｒａｎｇｉｎｇ／ｒａｎｇｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ）」及び第１の提示数から第２の提示数までの「範囲内（ｒａｎｇｉｎｇ／ｒａｎｇｅｓ ｆｒｏｍ）」という語句は、本明細書では互換的に使用され、かつ第１の提示数及び第２の提示数並びにそれらの間の全ての分数及び整数を含むよう意図される。
【0182】
「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、病態（疾患、障害又は状態）の進行（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）を阻害、予防若しくは阻止すること、及び／又は病態の軽減、寛解若しくは退行を引き起こすことを指す。当業者は、様々な方法論及びアッセイを使用して病態の進行を評価することができ、同様に、様々な方法論及びアッセイを使用して病態の減少、寛解又は退行を評価することができることを理解するであろう。
【0183】
本明細書で使用される場合、「予防する」という用語は、疾患、障害又は状態が、疾患のリスクがあり得るが、疾患を有するとまだ診断されていない対象において発生するのを防ぐことを指す。
【0184】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物、好ましくは病態に罹患している任意の年齢の人間を含む。好ましくは、この用語は、病態を発症するリスクがある個体を包含する。
【0185】
本明細書で使用される場合、「方法」という用語は、所与のタスクを達成するための様式、手段、技術及び手順を指し、化学、薬理学、生物学、生化学及び医学の分野の専門職に知られているか、又は化学、薬理学、生物学、生化学及び医学の分野の専門職によって既知の様式、手段、技術及び手順から容易に開発されるかのいずれかである様式、手段、技術及び手順を含むが、これらに限定されない。
【0186】
特定の配列表を参照する場合、そのような参照は、例えば、シークエンシングエラー、クローニングエラー、又は塩基置換、塩基欠失若しくは塩基付加をもたらす他の変化から生じるマイナーな配列変化を含むものとして、その相補配列に実質的に対応する配列もまた包含すると理解されるべきであるが、ただし、そのような変化の頻度は、５０ヌクレオチド中１個未満、あるいは１００ヌクレオチド中１個未満、あるいは２００ヌクレオチド中１個未満、あるいは５００ヌクレオチド中１個未満、あるいは１０００ヌクレオチド中１個未満、あるいは５，０００ヌクレオチド中１個未満、あるいは１０，０００ヌクレオチド中１個未満である。
【0187】
明確にするために、別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴はまた、単一の実施形態において組み合わせて提供されてもよいことが理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈で説明されている本発明の様々な特徴はまた、別個に、又は任意の好適な部分的組合せで、又は本発明の任意の他の記載された実施形態で好適であるように提供されてもよい。様々な実施形態の文脈で説明される特定の特徴は、実施形態がそれらの要素なしでは動作不能でない限り、それらの実施形態の必須の特徴と見なされるべきではない。
【0188】
上記で描写され、かつ以下の特許請求の範囲のセクションで請求される本発明の様々な実施形態及び態様は、以下の実施例において実験的裏付けを見出す。
【実施例】
【0189】
ここで、上記の説明と共に本発明のいくつかの実施形態を非限定的に示す、以下の実施例を参照する。
【0190】
実施例１
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、大規模（８２５ｍｍｏｌ）固相合成によって調製し、ここで、固相合成反応工程を、Ｃ末端アミノ酸で開始し、Ｎ末端アミノ酸で終了するまで、ペプチド全体の構築のために１４回繰り返した。各アミノ酸付加は２つの工程で実施した：第１の工程は、ペプチド配列に付加された最後のアミノ酸のＮ末端から（又は、第１のアミノ酸を添加する場合、樹脂から）Ｆｍｏｃ保護基を除去し、続いて、樹脂上のペプチドの伸長に一連のアミノ酸を結合させることを含む。樹脂上のペプチドに付加される最後の残基は、Ｆｍｏｃ基を含有しない４－フルオロベンゾイル基であった。
最終収量は４６８グラム（２５％）であった。
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、大規模（８２５ｍｍｏｌ）固相合成によって調製し、ここで、固相合成反応工程を、Ｃ末端アミノ酸で開始し、Ｎ末端アミノ酸で終了するまで、ペプチド全体の構築のために１４回繰り返した。各アミノ酸付加は２つの工程で実施した：第１の工程は、ペプチド配列に付加された最後のアミノ酸のＮ末端から（又は、第１のアミノ酸を添加する場合、樹脂から）Ｆｍｏｃ保護基を除去し、続いて、樹脂上のペプチドの伸長に一連のアミノ酸を結合させることを含む。樹脂上のペプチドに付加される最後の残基は、Ｆｍｏｃ基を含有しない４－フルオロベンゾイル基であった。
最終収量は４６８グラム（２５％）であった。
【0191】
樹脂：
樹脂は、０．３～０．６ミリ当量／グラムの範囲内の置換を有するＦｍｏｃ－Ｒｉｎｋ ＡＭＳ樹脂であった。
樹脂は、０．３～０．６ミリ当量／グラムの範囲内の置換を有するＦｍｏｃ－Ｒｉｎｋ ＡＭＳ樹脂であった。
【0192】
Ｆｍｏｃ保護基の除去：
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％ピペリジン溶液（初期樹脂１グラム当たり１０ｍＬ）を用いて、（ペプチド配列に付加された最後のアミノ酸の）Ｎ末端又は樹脂からＦｍｏｃ保護基を除去した。ＤＭＦによる洗浄により、次のアミノ酸反応の前にピペリジン溶液を除去して、洗浄物のｐＨを試験することによって確認した。
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％ピペリジン溶液（初期樹脂１グラム当たり１０ｍＬ）を用いて、（ペプチド配列に付加された最後のアミノ酸の）Ｎ末端又は樹脂からＦｍｏｃ保護基を除去した。ＤＭＦによる洗浄により、次のアミノ酸反応の前にピペリジン溶液を除去して、洗浄物のｐＨを試験することによって確認した。
【0193】
アミノ酸の結合：
活性化剤としてＨＯＢｔ（Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール）と組み合わせたジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を用いて、適切なアミノ酸誘導体の形態でアミノ酸をカップリングした。Ｃｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ及びＬｙｓ（Ｄ－Ｌｙｓ又はＬ－Ｌｙｓ）を、それぞれ、Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）、Ａｒｇ（Ｐｂｆ）、Ｔｙｒ（ｔ－Ｂｕ）及びＬｙｓ（Ｂｏｃ）（Ｄ－又はＬ－）として保護した。最終工程では、アミノ酸の代わりに４－フルオロ安息香酸をカップリングさせた。アミノ酸（又は４－フルオロ安息香酸）分量、ＤＩＣ分量及びＨＯＢｔ分量の計算は、２倍過剰の置換及びバッチサイズに基づいた。
活性化剤としてＨＯＢｔ（Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール）と組み合わせたジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を用いて、適切なアミノ酸誘導体の形態でアミノ酸をカップリングした。Ｃｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ及びＬｙｓ（Ｄ－Ｌｙｓ又はＬ－Ｌｙｓ）を、それぞれ、Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）、Ａｒｇ（Ｐｂｆ）、Ｔｙｒ（ｔ－Ｂｕ）及びＬｙｓ（Ｂｏｃ）（Ｄ－又はＬ－）として保護した。最終工程では、アミノ酸の代わりに４－フルオロ安息香酸をカップリングさせた。アミノ酸（又は４－フルオロ安息香酸）分量、ＤＩＣ分量及びＨＯＢｔ分量の計算は、２倍過剰の置換及びバッチサイズに基づいた。
【0194】
カップリング工程の評価のために、各サイクルの最後に、ニンヒドリン試験及びクロラニル試験を用いたインプロセスモニタリングを行った。陰性の試験結果は、遊離アミノ基の非存在（完全なカップリング）を示す。試験が陽性であり、未反応のアミノ基（不完全なカップリング）を示す場合、カップリング反応を延長してもよく、又は保護アミノ酸誘導体の再カップリングを行ってもよい。
【0195】
合成サイクルが完了した後、樹脂－ペプチドをＤＭＦ／イソプロパノール（１：１）の溶液で洗浄し、窒素で乾燥させた。
【0196】
切断及び脱保護：
切断を行って、ペプチド分子をその支持樹脂から分離し、保護基を除去した。酸分解反応を、５％の水及びスカベンジャとしての５０ｍｇ／ｍＬのジチオエリトリトール（ＤＴＥ）を含む９５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（樹脂１グラム当たり１０ｍＬのＴＦＡ系切断溶液）を用いて、例えば、周囲温度で３．２５～３．５時間行った。
次いで、樹脂を濾過し、ペプチドの抽出を完了するためにＴＦＡで２回すすいだ。
ペプチド溶液の体積を、ロータリエバポレータ（約３５℃）中で真空下において、元の体積の約３０～３５％の体積まで減少させた。
次いで、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）／ヘキサン（６０：４０ｖ／ｖ）の冷却混合物（－１０±５℃）を用いて、樹脂１グラム当たり３２ｍＬの体積で、ペプチドを沈殿させた。
粗生成物を濾過によって単離し、ＭＴＢＥで洗浄し、フィルタ上で窒素流下において乾燥させて、溶媒の大部分を除去した。
次いで、得られた粗（直鎖）ペプチドを９０％酢酸に可溶化し、得られた溶液を凍結乾燥フラスコに分配し、シェル凍結し、マニホールド凍結乾燥機で凍結乾燥乾固した。
このペプチドを、純度についてＲＰ－ＨＰＬＣによって分析し、同一性の確認について質量スペクトル分析によって分析した。
切断を行って、ペプチド分子をその支持樹脂から分離し、保護基を除去した。酸分解反応を、５％の水及びスカベンジャとしての５０ｍｇ／ｍＬのジチオエリトリトール（ＤＴＥ）を含む９５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（樹脂１グラム当たり１０ｍＬのＴＦＡ系切断溶液）を用いて、例えば、周囲温度で３．２５～３．５時間行った。
次いで、樹脂を濾過し、ペプチドの抽出を完了するためにＴＦＡで２回すすいだ。
ペプチド溶液の体積を、ロータリエバポレータ（約３５℃）中で真空下において、元の体積の約３０～３５％の体積まで減少させた。
次いで、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）／ヘキサン（６０：４０ｖ／ｖ）の冷却混合物（－１０±５℃）を用いて、樹脂１グラム当たり３２ｍＬの体積で、ペプチドを沈殿させた。
粗生成物を濾過によって単離し、ＭＴＢＥで洗浄し、フィルタ上で窒素流下において乾燥させて、溶媒の大部分を除去した。
次いで、得られた粗（直鎖）ペプチドを９０％酢酸に可溶化し、得られた溶液を凍結乾燥フラスコに分配し、シェル凍結し、マニホールド凍結乾燥機で凍結乾燥乾固した。
このペプチドを、純度についてＲＰ－ＨＰＬＣによって分析し、同一性の確認について質量スペクトル分析によって分析した。
【0197】
酸化的環化：
粗直鎖ペプチドを、以下の通り、０．１Ｍ重炭酸アンモニウム（ＮＨ４ＨＣＯ３）溶液中、過酸化水素による酸化によって環化した：
粗直鎖ペプチドを０．１Ｍ ＮＨ４ＨＣＯ３中に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、等体積の０．１Ｍ ＮＨ４ＨＣＯ３を加えてペプチドを５ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。
次いで、１．５％過酸化水素の水溶液（５倍過剰）を、ペプチド溶液へと２５～３０分間かけて滴加した。反応を、遊離スルフヒドリル基の非存在を確認するためにエルマン試験を用いてモニタリングした。
反応の完了後、反応混合物をＴＦＡ原液（ｎｅａｔ ＴＦＡ）の添加によってｐＨ２～３まで酸性化し、得られた溶液を、ＴＥＡＰ（トリエチルアンモニウムリン酸塩）精製工程で「そのまま」使用した。
粗直鎖ペプチドを、以下の通り、０．１Ｍ重炭酸アンモニウム（ＮＨ４ＨＣＯ３）溶液中、過酸化水素による酸化によって環化した：
粗直鎖ペプチドを０．１Ｍ ＮＨ４ＨＣＯ３中に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、等体積の０．１Ｍ ＮＨ４ＨＣＯ３を加えてペプチドを５ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。
次いで、１．５％過酸化水素の水溶液（５倍過剰）を、ペプチド溶液へと２５～３０分間かけて滴加した。反応を、遊離スルフヒドリル基の非存在を確認するためにエルマン試験を用いてモニタリングした。
反応の完了後、反応混合物をＴＦＡ原液（ｎｅａｔ ＴＦＡ）の添加によってｐＨ２～３まで酸性化し、得られた溶液を、ＴＥＡＰ（トリエチルアンモニウムリン酸塩）精製工程で「そのまま」使用した。
【0198】
第１の分取ＨＰＬＣカラム（ＴＥＡＰ精製）：
環化工程の完了時に得られた溶液を、樹脂１ｋｇ当たり約１１．７グラムの粗ペプチドを含有する、約２．４Ｌの溶液を充填した分取ＲＰ－ＨＰＬＣ Ｃ１８カラム、１０μｍ、１２０Å Ｄａｉｓｏｇｅｌ（商標）での分離によって精製した。
ペプチドを０．１Ｍトリエチルアンモニウムリン酸塩（ＴＥＡＰ）緩衝液（ｐＨ２．２５）及びアセトニトリル（ＡＣＮ）勾配で溶出させた。勾配は以下の通りであった：０％アセトニトリルを８分間、０％から５％のアセトニトリルを５分間（１％／分の速度）、及び５％から２５％のアセトニトリルを１２０分間（０．１７％／分の速度）。
溶出画分を収集し、サンプリングし、ＨＰＬＣによって試験して、どの画分が第２のクロマトグラフィ精製工程のためにプールされるのに充分純粋（≧９５％）であるかを決定した。純度許容基準を満たさない第１のＲＰ－ＨＰＬＣ精製の親水性画分及び疎水性画分は保持され、全体的な収率を最大にするために再処理されてもよい。
環化工程の完了時に得られた溶液を、樹脂１ｋｇ当たり約１１．７グラムの粗ペプチドを含有する、約２．４Ｌの溶液を充填した分取ＲＰ－ＨＰＬＣ Ｃ１８カラム、１０μｍ、１２０Å Ｄａｉｓｏｇｅｌ（商標）での分離によって精製した。
ペプチドを０．１Ｍトリエチルアンモニウムリン酸塩（ＴＥＡＰ）緩衝液（ｐＨ２．２５）及びアセトニトリル（ＡＣＮ）勾配で溶出させた。勾配は以下の通りであった：０％アセトニトリルを８分間、０％から５％のアセトニトリルを５分間（１％／分の速度）、及び５％から２５％のアセトニトリルを１２０分間（０．１７％／分の速度）。
溶出画分を収集し、サンプリングし、ＨＰＬＣによって試験して、どの画分が第２のクロマトグラフィ精製工程のためにプールされるのに充分純粋（≧９５％）であるかを決定した。純度許容基準を満たさない第１のＲＰ－ＨＰＬＣ精製の親水性画分及び疎水性画分は保持され、全体的な収率を最大にするために再処理されてもよい。
【0199】
第２の分取ＨＰＬＣカラム（酢酸精製）：
ＴＥＡＰ注入から得られた精製画分をプールし、水で１：１に希釈し、ペプチドを１０μｍ、１２０Å Ｄａｉｓｏｇｅｌ（商標）Ｃ１８カラムで分離し、樹脂１ｋｇ当たり約２．７Ｌの体積でロードし、３５ｍＭ酢酸系緩衝液及びアセトニトリル勾配で溶出させた。勾配は以下の通りであった：０％アセトニトリルを８分間、及び０％から２２％のアセトニトリルを１１０分間（０．２％／分の速度）。ペプチドをロードした後、溶出勾配の開始前に、カラムを４カラム体積の０．１Ｍ酢酸アンモニウムで洗浄して、酢酸塩としてペプチドを得た。画分収集を２３０ｎｍでのＵＶ吸収によってモニタリングした。
得られた組成物は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）を９９．５８％の純度（すなわち、全てのピーク面積の合計と比較したピーク面積）で含有していた。３つの追加的なピークが検出された：相対保持時間０．７２及び濃度０．１０５％でのピーク；相対保持時間０．８７、濃度０．１０８％の別のピーク；及び相対保持時間０．９１、環状Ｃ末端脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）として同定された、濃度０．０５５％の第三のピーク。少なくとも０．０５％の他のピークは観察されなかった。
ＴＥＡＰ注入から得られた精製画分をプールし、水で１：１に希釈し、ペプチドを１０μｍ、１２０Å Ｄａｉｓｏｇｅｌ（商標）Ｃ１８カラムで分離し、樹脂１ｋｇ当たり約２．７Ｌの体積でロードし、３５ｍＭ酢酸系緩衝液及びアセトニトリル勾配で溶出させた。勾配は以下の通りであった：０％アセトニトリルを８分間、及び０％から２２％のアセトニトリルを１１０分間（０．２％／分の速度）。ペプチドをロードした後、溶出勾配の開始前に、カラムを４カラム体積の０．１Ｍ酢酸アンモニウムで洗浄して、酢酸塩としてペプチドを得た。画分収集を２３０ｎｍでのＵＶ吸収によってモニタリングした。
得られた組成物は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）を９９．５８％の純度（すなわち、全てのピーク面積の合計と比較したピーク面積）で含有していた。３つの追加的なピークが検出された：相対保持時間０．７２及び濃度０．１０５％でのピーク；相対保持時間０．８７、濃度０．１０８％の別のピーク；及び相対保持時間０．９１、環状Ｃ末端脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）として同定された、濃度０．０５５％の第三のピーク。少なくとも０．０５％の他のピークは観察されなかった。
【0200】
実施例２
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載される手順に従って調製した。ペプチド純度を、Ａｇｉｌｅｎｔ（商標）１２００ ＨＰＬＣシステム及びＨｙｐｅｒｓｉｌ Ｇｏｌｄ（商標）Ｃ１８逆相カラム（長さ２５０ｍｍ、内径４．６ｍｍ、粒径５μｍ）を用いて、逆相高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によって評価した。移動相Ａは０．０１７Ｍ過塩素酸（ＨＣｌＯ４）（ｐＨ３）、移動相Ｂはアセトニトリル（１００％）であり、移動相Ｂの勾配は５０分で１９．４％から２９．４％であった。温度は４０℃であり、注入体積は２０μＬであり、流速は１ｍＬ／分であり、検出は波長２２６ｎｍでの吸収によるものであった。
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載される手順に従って調製した。ペプチド純度を、Ａｇｉｌｅｎｔ（商標）１２００ ＨＰＬＣシステム及びＨｙｐｅｒｓｉｌ Ｇｏｌｄ（商標）Ｃ１８逆相カラム（長さ２５０ｍｍ、内径４．６ｍｍ、粒径５μｍ）を用いて、逆相高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によって評価した。移動相Ａは０．０１７Ｍ過塩素酸（ＨＣｌＯ４）（ｐＨ３）、移動相Ｂはアセトニトリル（１００％）であり、移動相Ｂの勾配は５０分で１９．４％から２９．４％であった。温度は４０℃であり、注入体積は２０μＬであり、流速は１ｍＬ／分であり、検出は波長２２６ｎｍでの吸収によるものであった。
【0201】
生成物であるＢＬ－８０４０（配列番号１）は２１．１６５分の保持時間（相対保持時間＝１．００として定義）に検出された。１８．４８１分の保持時間、すなわち、０．８７３の相対保持時間、及び０．１４８％の濃度（すなわち、全てのピーク面積の合計と比較したピーク面積）で追加のピークが検出された。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0202】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）の同一性は、ＢＬ－８０４０（配列番号１）の参照試料と実質的に同じＨＰＬＣ保持時間を有することによって、並びにフーリエ変換型赤外（ＦＴＩＲ）分光法及びアミノ酸分析によって確認した。
【0203】
質量分析による分析により、１０８０．３のｍ／ｚ値を有する主要なイオンピークの存在が明らかになり、これは、［Ｍ＋２Ｈ］２＋に対応するものと同定された。ここで、Ｍは２１５８．６Ｄａであり、これはＢＬ－８０４０（配列番号１）の予測分子量と一致する。
【0204】
実施例３
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。移動相ＡのｐＨを３．３とし、移動相Ｂの勾配を５０分で１９．８％から２９．８％としたこと以外は、実施例２に記載したように逆相ＨＰＬＣによってペプチド純度を評価した。
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。移動相ＡのｐＨを３．３とし、移動相Ｂの勾配を５０分で１９．８％から２９．８％としたこと以外は、実施例２に記載したように逆相ＨＰＬＣによってペプチド純度を評価した。
【0205】
生成物であるＢＬ－８０４０（配列番号１）は２０．８６６分の保持時間（相対保持時間＝１．００として定義）に検出された。２つの追加的なピークが観察された：保持時間１８．１６８分、すなわち、相対保持時間０．８７１、及び濃度０．１５６％のピーク；並びに、保持時間１５．００８分、すなわち、相対保持時間０．７１９、及び濃度０．０６２％の小さいピーク。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0206】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）の同一性は、参照試料と実質的に同じＨＰＬＣ保持時間を有することによって、並びにフーリエ変換型赤外（ＦＴＩＲ）分光法及びアミノ酸分析によって確認した。
【0207】
質量分析による分析により、１０８０．４及び７２０．８のｍ／ｚ値を有する２つの主要なイオンピークの存在が明らかになり、これらは、［Ｍ＋２Ｈ］２＋及び［Ｍ＋３Ｈ］３＋に対応するものと同定された。ここで、Ｍは２１５９Ｄａであり、これはＢＬ－８０４０（配列番号１）の予測分子量と一致する。
【0208】
ペプチドを（賦形剤としてのマンニトールと共に）緩衝水溶液（ｐＨ７）中に溶解した。ペプチド純度を、本明細書に記載されるような手順（注入体積２０μＬ）に従って逆相ＨＰＬＣによって評価し、５±３℃で溶液を１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月及び３６ヶ月保存した後に再評価した。前述の追加的な化合物は、相対保持時間０．８８（濃度０．１５％）及び相対保持時間０．７２（濃度０．０６％）で観察された。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0209】
前述の化合物の各々の濃度は、３６ヶ月間にわたって本質的に変化しないままであった。３６ヶ月後、０．７２でのピーク濃度は０．１４％までごくわずかに減少し、相対保持時間０．９７で濃度０．０５％の追加的なピークが現れた。
【0210】
保存中に本質的な変化がないことは、約０．７２及び約０．８７の相対保持時間を特徴とする追加的な化合物が、溶液中での分解ではなく、ＢＬ－８０４０（配列番号１）化合物を調製するプロセスに関連することを示す。
【0211】
実施例４
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。移動相Ｂの勾配を５０分で１９．３％から２９．３％としたこと以外は、実施例２に記載したように逆相ＨＰＬＣによってペプチド純度を評価した。
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。移動相Ｂの勾配を５０分で１９．３％から２９．３％としたこと以外は、実施例２に記載したように逆相ＨＰＬＣによってペプチド純度を評価した。
【0212】
生成物であるＢＬ－８０４０（配列番号１）は２０．６７５分の保持時間（相対保持時間＝１．００として定義）に検出された。３つの追加的なピークが観察された：保持時間が１７．９１１分及び１７．９９９分、すなわち、それぞれ相対保持時間が０．８６６及び０．８７１であり、それぞれ濃度が０．１０及び０．１３である２つの重複するピーク；並びに、保持時間２２．２２３分、すなわち、相対保持時間１．０７５、及び濃度０．０５％の第３のピーク。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0213】
質量分析による分析により、１０８０．３及び７２０．８のｍ／ｚ値を有する２つの主要なイオンピークの存在が明らかになり、これらは、［Ｍ＋２Ｈ］２＋及び［Ｍ＋３Ｈ］３＋に対応するものと同定された。ここで、Ｍは２１５９Ｄａであり、これはＢＬ－８０４０（配列番号１）の予測分子量と一致する。
【0214】
ペプチドを（賦形剤としてのマンニトールと共に）緩衝水溶液（ｐＨ７）中に溶解した。ペプチド純度を、本明細書に記載されるような手順（注入体積２０μＬ）に従って逆相ＨＰＬＣによって評価し、５±３℃で溶液を１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月及び２４ヶ月保存した後に再評価した。前述の追加的な化合物は、前述の重複ピークに対応する相対保持時間０．８７（濃度０．２３％）及び相対保持時間１．０９（濃度０．０５％）として、相対保持時間０．７２及び濃度０．０５％、及び相対保持時間１．９６及び濃度０．０６％の２つの追加的なピークと共に観察された。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0215】
相対保持時間０．７２及び０．８７を特徴とする追加的な化合物の濃度は、２４ヶ月の経過にわたって変化しないままであったが、一方で、相対保持時間１．０９及び１．９６を特徴とする追加的な化合物の濃度は、０．０５％未満にまで減少した。
【0216】
保存中に本質的な変化がないことは、約０．７２及び約０．８７の相対保持時間を特徴とする追加的な化合物が、溶液中での分解ではなく、ＢＬ－８０４０（配列番号１）化合物を調製するプロセスに関連することを示す。
【0217】
実施例５
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。移動相Ｂの勾配を５０分で１９．３％から２９．３％としたこと以外は、実施例２に記載したように逆相ＨＰＬＣによってペプチド純度を評価した。
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。移動相Ｂの勾配を５０分で１９．３％から２９．３％としたこと以外は、実施例２に記載したように逆相ＨＰＬＣによってペプチド純度を評価した。
【0218】
生成物であるＢＬ－８０４０（配列番号１）は２１．０００分の保持時間（相対保持時間＝１．００として定義）に検出された。２つの追加的なピークが観察された：保持時間１８．２６８分、すなわち、相対保持時間０．８７０、及び濃度０．２２％のピーク；並びに、保持時間１５．２５２分、すなわち、相対保持時間０．７２６、及び濃度０．０５％の小さいピーク。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0219】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）の同一性は、参照試料と実質的に同じＨＰＬＣ保持時間を有することによって、並びにフーリエ変換型赤外（ＦＴＩＲ）分光法及びアミノ酸分析によって確認した。
【0220】
質量分析による分析により、１０８０．４及び７２０．８のｍ／ｚ値を有する２つの主要なイオンピークの存在が明らかになり、これらは、［Ｍ＋２Ｈ］２＋及び［Ｍ＋３Ｈ］３＋に対応するものと同定された。ここで、Ｍは２１５９Ｄａであり、これはＢＬ－８０４０（配列番号１）の予測分子量と一致する。
【0221】
追加のピークの更なる液体クロマトグラフィ質量分析（ＬＣ／ＭＳ）分析により、２つの重複するピークの存在が示され、一方の化合物は２１５９Ｄａの分子量を特徴とし（ＢＬ－８０４０（配列番号１）の異性体の可能性）、もう一方の化合物は２２３９Ｄａの分子量を特徴とした（ＢＬ－８０４０（配列番号１）の分子量より約８０Ｄａ大きい）。
【0222】
以上より、相対保持時間０．８７０のピークは、保持時間１８．２６分及び濃度０．１０％のピークと、保持時間１８．２７分及び濃度０．１２％のもう一方のピークとの２つの重複するピークを含むものと決定された。
【0223】
ペプチドを（賦形剤としてのマンニトールと共に）緩衝水溶液（ｐＨ７）中に溶解した。溶液のペプチド純度を、本明細書に記載される手順（注入体積２０μＬ）に従って逆相ＨＰＬＣによって評価し、５±３℃で溶液を６ヶ月、１２ヶ月及び２４ヶ月保存した後に再評価した。前述の追加的な化合物は、前述の重複ピークに対応する相対保持時間０．８７（濃度０．２１％）及び相対保持時間０．７２（濃度０．０５％）で観察された。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。前記追加的な化合物の濃度は、２４ヶ月間にわたって変化しないままであった。
【0224】
保存中に本質的な変化がないことは、約０．７２及び約０．８７の相対保持時間を特徴とする化合物が、溶液中での分解ではなく、ＢＬ－８０４０（配列番号１）化合物を調製するプロセスに関連することを示す。
【0225】
実施例６
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。移動相Ｂの勾配を５０分で２０％から３０％とし、注入体積を５μＬとし、Ａｇｉｌｅｎｔ（商標）１１００ ＨＰＬＣシステムを使用したこと以外は、実施例２に記載した逆相ＨＰＬＣによってペプチド純度を評価した。
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。移動相Ｂの勾配を５０分で２０％から３０％とし、注入体積を５μＬとし、Ａｇｉｌｅｎｔ（商標）１１００ ＨＰＬＣシステムを使用したこと以外は、実施例２に記載した逆相ＨＰＬＣによってペプチド純度を評価した。
【0226】
生成物であるＢＬ－８０４０（配列番号１）は２２．４２１分の保持時間（相対保持時間＝１．００として定義）に検出された。保持時間１９．６３５分、すなわち、相対保持時間０．８７６、及び濃度０．１０％で追加的なピークが観察された。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0227】
ペプチドを（賦形剤としてのマンニトールと共に）緩衝水溶液（ｐＨ７）中に２バッチで溶解した。溶液のペプチド純度は、本明細書に記載される手順（注入体積２０μＬ）に従って逆相ＨＰＬＣによって評価した。１つのバッチでは、前述の追加的な化合物が、相対保持時間０．８７、濃度０．１０％にて観察された。もう一つのバッチでは、前述の化合物が、相対保持時間０．８７、濃度０．１１％にて；相対保持時間０．９２及び濃度０．０５％の追加のピークと共に観察された。これは、環状脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）に帰属された。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0228】
実施例７
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。ペプチド純度を実施例６に記載の逆相ＨＰＬＣによって評価した。
いくつかの実施形態によるＢＬ－８０４０の大規模相合成
環状ペプチドＢＬ－８０４０（配列番号１）を、実施例１に記載の手順に従って調製した。ペプチド純度を実施例６に記載の逆相ＨＰＬＣによって評価した。
【0229】
生成物であるＢＬ－８０４０（配列番号１）は２２．０３５分の保持時間（相対保持時間＝１．００として定義）で検出された。２つの追加的なピークが観察された：保持時間１９．２５９分、すなわち、相対保持時間０．８７４、及び濃度０．０８％でのピーク；並びに、保持時間１５．８４５分、すなわち、相対保持時間０．７１９、及び濃度０．１１％でのもう一つの小さいピーク。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0230】
ペプチドを（賦形剤としてのマンニトールと共に）緩衝水溶液（ｐＨ７）中に２バッチで溶解した。溶液のペプチド純度は、本明細書に記載される手順（注入体積２０μＬ）に従って逆相ＨＰＬＣによって評価した。前述の追加的な化合物は、相対保持時間０．８７（濃度０．０８％）及び相対保持時間０．７２（濃度０．１１％）で観察された。他の有意な（すなわち、≧０．０５％）ピークは観察されなかった。
【0231】
バッチのうち１つのペプチド純度を、５±３℃での３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月及び１２ヶ月の保存後に再評価した。前述の追加的な化合物の各々の濃度は、１２ヶ月間にわたって本質的に変化しないままであった。
【0232】
保存中に本質的な変化がないことは、約０．７２及び約０．８７の相対保持時間を特徴とする化合物が、溶液中での分解ではなく、ＢＬ－８０４０（配列番号１）化合物を調製するプロセスに関連することを示す。
【0233】
参考例
ＢＬ－８０４０の固相合成
ＢＬ－８０４０（配列番号１）を、Ｒｉｎｋアミド樹脂上での固相ペプチド合成によって、５つの異なるロットで調製した。ＤＭＦ中の有機塩基（ＤＩＰＥＡ又はコリジン）を含むＨＯＢｔ／ＴＢＴＵ（ヒドロキシベンゾトリアゾールのテトラフルオロボラートベンゾトリアゾールウロニウム誘導体）をカップリング試薬として使用し、アセチル化によるキャッピングには無水酢酸を使用した。合成したペプチドを、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ドデシルメルカプタン（ＤＤＭ）、水及びトリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）を用いて樹脂から切断し、ＭＴＢＥ（メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル）中に沈殿させた。次いで、得られた直鎖ペプチドを、０．１％トリフルオロ酢酸及びアセトニトリルの勾配を用いた逆相ＨＰＬＣによって精製した。収集した画分を濃縮し、次いで、酢酸中でヨウ素を用いた酸化によってペプチドの環化を行った。
ＢＬ－８０４０の固相合成
ＢＬ－８０４０（配列番号１）を、Ｒｉｎｋアミド樹脂上での固相ペプチド合成によって、５つの異なるロットで調製した。ＤＭＦ中の有機塩基（ＤＩＰＥＡ又はコリジン）を含むＨＯＢｔ／ＴＢＴＵ（ヒドロキシベンゾトリアゾールのテトラフルオロボラートベンゾトリアゾールウロニウム誘導体）をカップリング試薬として使用し、アセチル化によるキャッピングには無水酢酸を使用した。合成したペプチドを、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ドデシルメルカプタン（ＤＤＭ）、水及びトリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）を用いて樹脂から切断し、ＭＴＢＥ（メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル）中に沈殿させた。次いで、得られた直鎖ペプチドを、０．１％トリフルオロ酢酸及びアセトニトリルの勾配を用いた逆相ＨＰＬＣによって精製した。収集した画分を濃縮し、次いで、酢酸中でヨウ素を用いた酸化によってペプチドの環化を行った。
【0234】
ペプチド純度（５ロットの各々について）を、０．１％トリフルオロ酢酸及びアセトニトリルの勾配を用いた逆相ＨＰＬＣ、続いて酢酸緩衝液を用いた逆相ＨＰＬＣによって評価した。
【0235】
各ロットのＢＬ－８０４０（配列番号１）の純度は９６．７０％～９９．２８％の範囲内であった。顕著な追加的な化合物としては、環状Ｃ末端脱アミド化ＢＬ－８０４０（配列番号２）（相対保持時間０．９１を特徴とし、５つのロットのうち４つにおいて０．２５９％～０．３７３％の範囲内の濃度で存在した）；及びアセチル化Ｄ－Ｌｙｓを有する環状ＢＬ－８０４０（配列番号３）（相対保持時間１．１０を特徴とし、５ロットのうち４ロットにおいて０．０５４％～０．２２３％の範囲内の濃度で存在した）が挙げられた。
【0236】
相対保持時間０．８６～０．８８を特徴とする追加的な化合物は、５つのロットのうち３つにおいて、ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全化合物の４％～１５％に相当する濃度で検出された。相対保持時間０．７１～０．７３を特徴とする追加的な化合物は、５つのロットのうちの１つのみにおいて、ＢＬ－８０４０（配列番号１）以外の全化合物のわずか２％に相当する濃度で検出された。
【0237】
実施例８
ＢＬ－８０４０を含む組成物のインビボ好中球遊走に対する効果
ＢＬ－８０４０（配列番号１）は、ＣＸＣＲ４ケモカイン受容体のアンタゴニストである。ＣＸＣＲ４によって媒介される細胞活性の誘導は、白血球細胞の骨髄間質細胞への付着に関与する。したがって、（例えば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）による）ＣＸＣＲ４活性の阻害は、骨髄間質からの白血球細胞（好中球を含むが、これに限定されない）の脱離、及びその後の末梢血への細胞の遊走を誘導するものと予想される。
ＢＬ－８０４０を含む組成物のインビボ好中球遊走に対する効果
ＢＬ－８０４０（配列番号１）は、ＣＸＣＲ４ケモカイン受容体のアンタゴニストである。ＣＸＣＲ４によって媒介される細胞活性の誘導は、白血球細胞の骨髄間質細胞への付着に関与する。したがって、（例えば、ＢＬ－８０４０（配列番号１）による）ＣＸＣＲ４活性の阻害は、骨髄間質からの白血球細胞（好中球を含むが、これに限定されない）の脱離、及びその後の末梢血への細胞の遊走を誘導するものと予想される。
【0238】
実施例１及び参考例１に記載したように調製したＢＬ－８０４０（配列番号１）を含む組成物の生物活性を、注射後の末梢血への好中球の遊走を評価することによって比較した。
【0239】
マウスへ、２００μＬのＰＢＳ中で再構成した、５ｍｇ／ｋｇのＢＬ－８０４０（配列番号１）の単回用量を皮下注射した。マウスは、ＢＬ－８０４０（配列番号１）注射の２時間後に、心臓穿刺によってヘパリンを含むチューブへ採血した。フローサイトメトリを使用して、末梢血中の成熟好中球の数を評価し、対照マウスと比較した増加分を計算した。
【0240】
表１に示すように、約０．８７及び約０．７２の保持時間を有する化合物の存在（ＢＬ－８０４０（配列番号１）と並ぶ）は、好中球遊走を評価することによって決定されるように、より強い生物活性と相関していた。
【0241】
【表1】
【0242】
実施例９
ＢＬ－８０４０を含む組成物によるＣＸＣＬ１２誘発乳がん細胞遊走の阻害
ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４の天然リガンドであるので、ＣＸＣＬ１２誘発乳がん細胞遊走に対するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の阻害活性を評価する（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いる）。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
ＢＬ－８０４０を含む組成物によるＣＸＣＬ１２誘発乳がん細胞遊走の阻害
ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４の天然リガンドであるので、ＣＸＣＬ１２誘発乳がん細胞遊走に対するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の阻害活性を評価する（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いる）。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
【0243】
Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）インサートを、フィブロネクチン溶液（所望により、約１０μｇ／ｍＬ）で処理（所望により、３７℃で６時間）し、乾燥させ、次いで、ＣＸＣＬ１２（所望により、１００ｎＭ）及び細胞増殖培地（場合により、０．１％ウシ血清アルブミンを含む６００μＬのＤＭＥＭ）を、ＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物とともに、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）プレートの下部チャンバに添加する。試験されるＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物、及び乳がん細胞（所望により、２×１０６細胞／ｍＬのＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞）、及び細胞増殖培地（所望により、０．１％ウシ血清アルブミンを含む１００μＬのＤＭＥＭ）を、上部チャンバに添加する。インキュベーション（所望により、５％ＣＯ２の存在下において３７℃で約１５時間）後、ウェルの下面上の細胞を、所望により固定及び染色によって（例えば、２５％メタノール及び０．５％クリスタルバイオレットによって）定量化し、ＢＬ－８０４０（配列番号１）を有しない対照試料と比較する。
【0244】
実施例１０
ＢＬ－８０４０を含む組成物によるＣＸＣＬ１２誘発白血病細胞遊走の阻害
ＣＸＣＬ１２誘発Ｔ細胞由来白血病細胞遊走に対するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の阻害活性を評価する（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いる）。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
ＢＬ－８０４０を含む組成物によるＣＸＣＬ１２誘発白血病細胞遊走の阻害
ＣＸＣＬ１２誘発Ｔ細胞由来白血病細胞遊走に対するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の阻害活性を評価する（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いる）。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
【0245】
ＣＸＣＬ１２（所望により、３０ｎＭ）及び細胞増殖培地（所望により、０．１％ウシ血清アルブミンを含む６００μＬのＤＭＥＭ）を、ＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物とともに、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）プレートの下部チャンバに添加する。試験されるＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物、及び白血病細胞（所望により、２×１０６細胞／ｍＬのＳＵＰ－Ｔ１細胞）、及び細胞増殖培地（所望により、０．１％ウシ血清アルブミンを含む１００μＬのＤＭＥＭ）を、上部チャンバに添加する。インキュベーション（所望により、５％ＣＯ２の存在下において３７℃で約４時間）後、所望によりコールターカウンタを用いて、下部チャンバに移動した細胞の量を定量化し、ＢＬ－８０４０（配列番号１）を有しない対照試料と比較する。
【0246】
実施例１１
動物モデルにおけるＢＬ－８０４０を含む組成物の抗転移活性
転移性乳がん細胞遊走を阻害するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の能力を、動物モデルにおいて（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いて）評価する。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
動物モデルにおけるＢＬ－８０４０を含む組成物の抗転移活性
転移性乳がん細胞遊走を阻害するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の能力を、動物モデルにおいて（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いて）評価する。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
【0247】
乳がん細胞（所望により、１０６個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳がん細胞）をマウス（所望により、５週齢の雌ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウス）の尾部に静脈内移植する。生理食塩水を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、８０ｍｇ／ｍＬのＢＬ－８０４０（配列番号１）の濃度に調整）を、マウスへ徐々に（所望により、４週間にわたって）投与する（所望により、徐放性浸透圧ポンプを用いて、約１８．２ｍｇ／ｋｇ／日を投与）。
【0248】
次いで、マウスの肺におけるがん細胞の量を、所望により気管を通じて注射したエバンズブルー溶液（例えば、０．２％、２ｍＬ）を用いて、続いて肺をブアン液に浸し、染色し、固定し、転移巣（黄色染色部分）を観察して評価し、ＢＬ－８０４０（配列番号１）を有しない対照試料と比較する。
【0249】
実施例１２
動物モデルにおける遅延型過敏（ＤＴＨ）反応に対するＢＬ－８０４０を含む組成物の効果
遅延型過敏（ＤＴＨ）反応を阻害するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の能力を、動物モデルにおいて（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いて）評価する。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
動物モデルにおける遅延型過敏（ＤＴＨ）反応に対するＢＬ－８０４０を含む組成物の効果
遅延型過敏（ＤＴＨ）反応を阻害するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の能力を、動物モデルにおいて（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いて）評価する。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
【0250】
生理食塩水溶液に懸濁したヒツジ赤血球（所望により、５０μＬ当たり２×１０７個細胞）を、マウス（所望により、６週齢の雄ＢＡＬＢ／ｃマウス）の皮下（所望により、左後肢の足首に）に投与する。５日後、より大量のヒツジ赤血球（所望により、５０μＬ当たり１０８個の細胞）を、マウスの第２部位（所望により、右後肢の足首に）に皮下投与し、ＤＴＨ反応を誘導する。抗原の誘導の直前及び約２４時間後に、第２部位の炎症を定量化し（例えば、足首の厚さを決定することによる）、ＤＴＨの定量的指標として使用する。
【0251】
ＰＢＳを含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物を、感作前日から開始して、マウスへ（所望により、徐放性浸透圧ポンプを用いて、約４μｇ／日、約８μｇ／日、約２４μｇ／日及び／又は約１２０μｇ／日のＢＬ－８０４０（配列番号１）を投与するように）徐々に投与する。次いで、ＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物とのＤＴＨ反応を、ＢＬ－８０４０（配列番号１）が投与されていない対照マウスのＤＴＨ反応と比較する。
【0252】
実施例１３
動物モデルにおけるコラーゲン誘発関節炎に対するＢＬ－８０４０を含む組成物の効果
コラーゲン誘発関節炎の発症を阻害するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の能力を、動物モデルにおいて（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いて）評価する。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
動物モデルにおけるコラーゲン誘発関節炎に対するＢＬ－８０４０を含む組成物の効果
コラーゲン誘発関節炎の発症を阻害するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の能力を、動物モデルにおいて（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いて）評価する。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
【0253】
ウシＩＩ型コラーゲンを酢酸（所望により、０．０５Ｍ）溶液中に（所望により、２ｍｇ／ｍＬで）溶解し、等体積のＦＣＡ（フロイント完全アジュバント；Freund's complete adjuvant）によりエマルジョンを調製する。エマルジョン（所望により、５０μＬ）をマウス（所望により、６週齢の雄ＤＢＡ／１ＪＮマウス）の皮内に（皮内尾の付け根に）注射し、その後（所望により、注射の約２１日後に）、同様の免疫化によって感作する。第２の免疫化（所望により、約２週間）の後、体重及び／又は後肢の厚さを測定し、関節炎スコアリングを行う。関節炎は、所望により、各肢０～３点でスコアリングされ、それらの合計によって評価される（１２点満点；０＝正常；１＝軽度の腫脹又は１桁の膨張；２＝中程度の膨張又は複数桁の膨張；３＝重度の膨張）。この期間（所望により、２週間）の終わりに、四肢及び血清を採取する。
【0254】
次いで、任意の好適な技術を用いて、所望により以下の手順によって、ＩＩ型コラーゲン特異的抗体（例えば、ＩｇＧ２ａ抗体）を定量化する：イムノプレート上でウシＩＩ型コラーゲン（例えば、ＰＢＳ溶液中１０μｇ／ｍＬ）をコートブロッキングした後、１０００倍希釈マウス血清（例えば、１００μＬ）を添加し、室温に保つ（例えば、約２時間）；洗浄後、抗マウスＩｇＧ２ａ抗体（１０００倍希釈）を添加する；洗浄後、ＴＭＢを添加し、室温に保ち（例えば、約３０分間）、等量のＨ２ＳＯ４を添加し、約４５０ｎｍで吸収を決定する。
【0255】
ＰＢＳを含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物を、２回目の免疫化の前日から開始して、マウスへ徐々に（所望により、２週間にわたって）投与する（所望により、徐放性浸透圧ポンプを用いて、約０．５μＬ／時を投与）。
【0256】
次いで、ＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の投与時の関節炎スコア、体重減少及び／又はコラーゲン特異的抗体レベルを、ＢＬ－８０４０（配列番号１）が投与されていない対照マウスのものと比較する。
【0257】
実施例１４
ＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４への結合に対するＢＬ－８０４０を含む組成物の効果
ＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４への結合を阻害するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の能力を、インビトロの細胞において（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いて）評価する。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
ＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４への結合に対するＢＬ－８０４０を含む組成物の効果
ＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４への結合を阻害するＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物の能力を、インビトロの細胞において（所望により、米国特許第７，４２３，００７号に記載されているような手順を用いて）評価する。約０．８７及び０．７２の保持時間の化合物を含むＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、実施例１～実施例７のいずれかに記載のように調製されていてもよい）の阻害活性を、約０．８７及び０．７２の保持時間のこのような化合物を欠くＢＬ－８０４０（配列番号１）組成物（所望により、参考例１に記載のように調製されていてもよい）の阻害活性と比較する。
【0258】
放射性標識されたＣＸＣＬ１２（所望により、２００ｐＭの１２５Ｉ－ＣＸＣＬ１２０）を、ＣＸＣＲ４を発現する細胞（所望により、ＪｕｒｋａｔヒトＴ細胞白血病細胞）におけるＣＸＣ１２のＣＸＣＲ４への結合を定量化するために使用する。所望により、５０μＬのＪｕｒｋａｔ細胞（６×１０６細胞／ｍＬ）を緩衝液（０．５％ウシ血清アルブミン及び２０ｍＭ ＨＥＰＥＳを含有する、ダルベッコＰＢＳ溶液、ｐＨ７．０）に懸濁し、緩衝液で希釈した２５μＬの試験ＢＬ－８０４０組成物及び２５μＬの放射性標識ＣＸＣＬ１２の溶液を、それぞれプレートの様々なウェルに分注し、室温で１時間固定反応に供し、続いて各ウェルの放射能を決定する。
【0259】
ＢＬ－８０４０（配列番号１）を有しない対照試料は、結合阻害を示さないように機能し得、非放射性標識ＣＸＣＬ１２を含む対照試料（所望により、１００ｎＭ）は、完全な結合阻害を表すように機能し得る。
【0260】
本発明をその特定の実施形態と併せて説明してきたが、多くの代替形態、修正形態及び変形形態が当業者には明らかだということは明白である。したがって、添付の特許請求の範囲の趣旨及び広い範囲に含まれる全てのそのような代替形態、修正形態及び変形形態を包含することが意図されている。
【0261】
本明細書中で言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、あたかも各個々の刊行物、特許又は特許出願が、参照により本明細書中に組み込まれることが言及される場合、具体的かつ個別に言及されたかのように、その全体が参照により本明細書中に組み込まれることが本出願人らの意図である。加えて、本出願における任意の参考文献の引用又は特定は、そのような参考文献が本発明の先行技術として利用可能であることの承認として解釈されるべきではない。セクションの見出しが使用される限り、それらは必ずしも限定的であると解釈されるべきではない。加えて、本出願の任意の優先権書類（又は複数の優先権書類）は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【配列表】
【国際調査報告】