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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-17
(54)【発明の名称】トレーサー化合物およびその調製方法
(51)【国際特許分類】
C07F 5/02 20060101AFI20240110BHJP
C07K 1/13 20060101ALI20240110BHJP
A61K 51/04 20060101ALI20240110BHJP
【ＦＩ】
C07F5/02 B CSP
C07K1/13
A61K51/04 200
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023538899
(86)(22)【出願日】2021-12-23
(85)【翻訳文提出日】2023-08-22
(86)【国際出願番号】 FI2021050912
(87)【国際公開番号】W WO2022144501
(87)【国際公開日】2022-07-07
(31)【優先権主張番号】20206373
(32)【優先日】2020-12-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】FI
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】506252772
【氏名又は名称】ツルン ユリオピスト
(74)【代理人】
【識別番号】110001896
【氏名又は名称】弁理士法人朝日奈特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】アイラクシネン、アヌ
(72)【発明者】
【氏名】オタル、ソフィア
(72)【発明者】
【氏名】パウルス、アンドレアス
(72)【発明者】
【氏名】サルパランタ、ミルッカ
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
4H048
【Ｆターム（参考）】
4C085HH03
4C085KB56
4C085LL18
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA50
4H045BA71
4H045EA50
4H045FA10
4H048AA01
4H048AA03
4H048AB20
4H048AC84
4H048VA32
4H048VA75
(57)【要約】
トレーサー化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物が開示され、トレーサー化合物は、テトラジン部分、双性イオン部分、およびリンカー部分を含む構造を有し、リンカー部分はテトラジン部分と双性イオン部分とを互いに連結し、リンカー部分は本明細書に開示される特異的な部分Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されている。さらに、該トレーサー化合物とトランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）誘導体化標的部分との付加物、および該トレーサー化合物および該付加物を製造するための方法が開示される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）のトレーサー化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物【化1】
各Ｒ１は、独立して水素（Ｈ）または式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり；
Ｌは、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されるリンカー部分であり、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、かつｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－であるか、またはＳ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、ここで、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｓ２は－ＣＨ2－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－であり、式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数であり；そして
Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである）。
【請求項2】
各Ｒ１が、独立して水素（Ｈ）または式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり；Ｌが、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されるリンカー部分であり、ここで：
Ｙが（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１が、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－、または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、かつＳ２が－ＣＨ2－であるか；または、
Ｙがポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xはポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、かつｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１が、－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－、または－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－であり、ここで、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｓ２が、－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－、または－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－であり、ここで、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数であり；そして
Ｒ２が、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである、請求項１記載のトレーサー化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項3】
－（ＰＥＧ）X－におけるｘが、１～１５の範囲からまたは１～１０の範囲から選択される整数である、請求項１または２に記載のトレーサー化合物。
【請求項4】
（ＢＦ3）-部分における少なくとも１つのＦが18Ｆである、請求項１～３のいずれか１項に記載のトレーサー化合物。
【請求項5】
－シクロオクテン（ＴＣＯ）誘導体化標的部分のＴＣＯ部分と請求項１～４のいずれか１項に記載のトレーサー化合物のテトラジン部分との逆電子要請型ディールス・アルダー反応（ＩＥＤＤＡ）によって得られる、請求項１～４のいずれか１項に記載のトレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分との付加物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項6】
前記トレーサー化合物の前記テトラジン部分のテトラジン環が、前記ＴＣＯ誘導体化標的部分の前記ＴＣＯ部分に化学的に結合されている、請求項５記載の付加物。
【請求項7】
前記標的部分が、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体フラグメント、またはナノ粒子である、請求項５または６に記載の付加物。
【請求項8】
（ＢＦ3）-部分における少なくとも１つのＦが18Ｆである、請求項５～７のいずれか１項に記載の付加物。
【請求項9】
放射性イメージング、好ましくは陽電子放射断層撮影による被験体における標的実体の検出における使用のための請求項５～８のいずれか１項に記載の付加物。
【請求項10】
請求項１～３のいずれか１項に記載のトレーサー化合物を製造するための方法であって、ａ．出発物質を極性非プロトン性溶媒に溶解し、前記出発物質を２－（ヨードメチル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロランと反応させて、中間生成物を提供する工程と；
ｂ．前記中間生成物を極性非プロトン性溶媒に溶解し、ＨＣｌなどの酸、水、および有機溶媒の存在下で前記中間生成物をＫＨＦ2と反応させて、前記トレーサー化合物を提供する工程と、を含み；
前記出発物質が、リンカー部分を介して第三級アミン（－Ｎ（ＣＨ3）2）に結合したテトラジン部分で構成され；ここで、
前記テトラジン部分が、１，２，４，５－テトラジン環、前記テトラジン環のＣ３に結合したフェニル環、および前記テトラジン環のＣ６に結合したＲ２で構成され、Ｒ２が、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかであり；かつ
前記リンカー部分がＳ１－Ｙ－Ｓ２で構成され、ここで：
Ｙが（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹがポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１が－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－であるか、またはＳ１が－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、ここで、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｓ２が－ＣＨ2－であるか、またはＳ２が－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f－であるか、またはＳ２が－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－であり、ここで、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である、方法。
【請求項11】
前記出発物質の前記リンカー部分が、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成され、ここで：Ｙが（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１が、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－、または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、そしてＳ２が－ＣＨ2－であるか；または、
Ｙがポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１が、－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－、または－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり；そして
Ｓ２が、－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－、または－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－（式中、各ｆは独立して０～４の範囲から選択される整数である）である、請求項１０記載の方法。
【請求項12】
請求項５～８のいずれか１項に記載の付加物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を製造するための方法であって、前記方法は、ＴＣＯ誘導体化標的部分を提供する工程；
請求項１～３のいずれか１項に記載のトレーサー化合物を提供する工程；
前記トレーサー化合物のテトラジン部分を前記ＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分と反応させる工程；および
前記付加物を少なくとも１つの18Ｆで放射性標識して付加物を得る工程を含むか；
または前記方法は、
前記ＴＣＯ誘導体化標的部分を提供する工程；
請求項１～３のいずれか１項に記載の前記トレーサー化合物を提供する工程；
請求項１～３のいずれか１項に記載の前記トレーサー化合物を少なくとも１つの18Ｆで放射性標識する工程；および
放射性標識された前記トレーサー化合物の前記テトラジン部分を前記ＴＣＯ誘導体化標的部分の前記ＴＣＯ部分と反応させて、前記付加物を得る工程を含む、方法。
【請求項13】
２０～８０℃の間の温度、好ましくは４０～７０℃の間の温度、より好ましくは５５～６５℃の間の温度、最も好ましくは６０℃の温度で、放射性標識された前記トレーサー化合物の前記テトラジン部分を前記ＴＣＯ誘導体化標的部分の前記ＴＣＯ部分と反応させる工程を含む、請求項１２記載の方法。
【請求項14】
被験体の放射性イメージングによる前記被験体における標的実体の検出における、請求項１～４に記載のトレーサー化合物および／または請求項５～８に記載の付加物の使用であって、前記標的実体が、放射性標識された前記トレーサー化合物および／または前記付加物で標的とされる、使用。
【請求項15】
放射性イメージングによる被験体における標的実体の検出のための18Ｆ標識された付加物の産生用のキットであって、請求項１～３に記載のトレーサー化合物を含む少なくとも１つのコンパートメントと、少なくとも１つのＴＣＯ誘導体化標的部分を含む少なくとも１つのコンパートメントと、前記トレーサー化合物を放射性標識するための18Ｆを含む少なくとも１つのコンパートメントと、随意に前記トレーサー化合物および／または前記付加物のＩＥＤＤＡ共役および放射性標識のための水性溶媒および有機溶媒と、を備える、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、概して、放射性標識された放射性医薬品に関する。本開示は、排他的ではないが、特に、トランス－シクロオクテンとテトラジン部分との逆電子要請型ディールス・アルダー環化付加反応（ＩＥＤＤＡ）によって得られる放射性標識された放射性医薬品に関する。
【背景技術】
【0002】
このセクションは、本明細書に記載されるどの技術もその技術水準を代表するものであると認めることなく、有用な背景情報を例示する。
【0003】
生体直交化学は、画像診断用の放射性医薬品の合成において大きな可能性を実証している。これまでのところ、テトラジンとジエノフィルとの間の逆電子要請型ディールス・アルダー環化付加反応（ＩＥＤＤＡ）は、生体直交化学において最も速い反応速度を示しており、小分子からペプチドおよび抗体フラグメントなどの高分子に至るまで、さまざまなフッ素－１８標識された放射性医薬品の放射合成に利用されている。ＩＥＤＤＡ反応は、18Ｆ、68Ｇａ、64Ｃｕなどの放射性核種を使用したプレターゲットＰＥＴ画像法にも利用されている。
【発明の概要】
【0004】
本発明者らは、驚くべきことに、本明細書に記載されるようなテトラジン部分と特異的な双性イオン部分およびそれらの間のリンカー部分を含む化合物を合成することによって、高いモジュール性を有するトレーサー化合物が得られることを見出した。さらに、トランス－シクロオクテンとトレーサー化合物のテトラジン部分との逆電子要請型ディールス・アルダー反応（ＩＥＤＤＡ）によって、トレーサー化合物とトランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）誘導体化標的部分とを含む付加物を得ることができる。トレーサー化合物中のリンカー部分のモジュール性によって、インビボおよびインビトロでの複数のさまざまな標的実体の標的化における付加物およびトレーサー化合物の使用が可能になる。トレーサー化合物および付加物に含まれる部分の特定の組み合わせによって、良好な安定性を有するトレーサー化合物が提供される。
【0005】
本開示の目的は、付加物の一部として、インビボおよびインビトロで多数の異なる標的実体を標的とすることに関して高いモジュール性を示すトレーサー化合物を提供することである。また、本開示の目的は、放射性標識および放射性イメージングの用途における使用を可能にする性能および／または安定性を有するトレーサー化合物を提供することである。本開示の別の目的は、インビボおよびインビトロで標的実体を標的とするために使用されるときの特性が改善されたトレーサー化合物を提供することである。本開示のさらに別の目的は、インビボおよびインビトロで実体を標的とするのに使用することができるトレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分との付加物を提供することである。
【0006】
本出願は、添付の独立請求項に定義される発明、および以下に開示されるそれらの実施形態に関する。添付の請求項は保護範囲を定義する。請求項に記載されていない明細書または図面に開示される方法、プロセス、製品または装置は、請求される発明の実施形態ではないが、請求される発明の理解に有用である例として提供される。
【0007】
本明細書には、トレーサー化合物、およびトレーサー化合物とトランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）誘導体化標的部分との付加物が記載され、これらは、放射性標識を介して、インビボおよびインビトロでの多くの診断用バイオマーカーの標的化に使用することができ、最終的には放射性イメージング法によって検出することができる。本発明者らは、驚くべきことに、テトラジン部分、特異的なリンカー部分および双性イオン部分の組み合わせによって、トレーサー化合物を合成することができ、これは迅速な合成と、標的部分がＴＣＯ部分を介してトレーサー化合物に共役可能であるという観点から高いモジュール性を有することを見出し、以下の実施例に示した。
【0008】
第１の態様によれば、式（Ｉ）のトレーサー化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物が提供される、
（式中、
各Ｒ１は、独立して水素（Ｈ）または式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり；
Ｌは、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されるリンカー部分であり、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－であるか、またはＳ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、ここで、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｓ２は－ＣＨ2－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－であり、ここで、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数であり；そして
Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル基置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【化1】
各Ｒ１は、独立して水素（Ｈ）または式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり；
Ｌは、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されるリンカー部分であり、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－であるか、またはＳ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、ここで、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｓ２は－ＣＨ2－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－であり、ここで、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数であり；そして
Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル基置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0009】
第２の態様によれば、トランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とトレーサー化合物のテトラジン部分との逆電子要請型ディールス・アルダー反応（ＩＥＤＤＡ）によって得られる、第１の態様のトレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分との付加物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物が提供される。
【0010】
第３の態様によれば、放射性イメージング、好ましくは陽電子放射断層撮影による被験体における標的実体の検出における使用のための第２の態様の付加物が提供される。
【0011】
第４の態様によれば、第１の態様のトレーサー化合物を製造するための方法が提供され、当該方法は：
ａ．出発物質を極性非プロトン性溶媒に溶解し、該出発物質を２－（ヨードメチル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロランと反応させて、中間生成物を提供する工程と；
ｂ．該中間生成物を極性非プロトン性溶媒に溶解し、ＨＣｌなどの酸、水および有機溶媒の存在下で中間生成物をＫＨＦ2と反応させて、トレーサー化合物を提供する工程と
を含み、
出発物質は、リンカー部分を介して第三級アミン（－Ｎ（ＣＨ3）2）に結合したテトラジン部分で構成され；ここで、
テトラジン部分は、１，２，４，５－テトラジン環、テトラジン環のＣ３に結合したフェニル環、およびテトラジン環のＣ６に結合したＲ２で構成され、Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかであり；かつ
リンカー部分はＳ１－Ｙ－Ｓ２で構成され、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－であるか、またはＳ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、ここで、各ｚは、独立して、０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｓ２は－ＣＨ2－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－であり、ここで、各ｆは、独立して、０～４の範囲から選択される整数である。
ａ．出発物質を極性非プロトン性溶媒に溶解し、該出発物質を２－（ヨードメチル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロランと反応させて、中間生成物を提供する工程と；
ｂ．該中間生成物を極性非プロトン性溶媒に溶解し、ＨＣｌなどの酸、水および有機溶媒の存在下で中間生成物をＫＨＦ2と反応させて、トレーサー化合物を提供する工程と
を含み、
出発物質は、リンカー部分を介して第三級アミン（－Ｎ（ＣＨ3）2）に結合したテトラジン部分で構成され；ここで、
テトラジン部分は、１，２，４，５－テトラジン環、テトラジン環のＣ３に結合したフェニル環、およびテトラジン環のＣ６に結合したＲ２で構成され、Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかであり；かつ
リンカー部分はＳ１－Ｙ－Ｓ２で構成され、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－であるか、またはＳ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、ここで、各ｚは、独立して、０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｓ２は－ＣＨ2－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－であり、ここで、各ｆは、独立して、０～４の範囲から選択される整数である。
【0012】
第５の態様によれば、第２の態様の付加物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を製造するための方法が提供され、当該方法は：
ＴＣＯ誘導体化標的部分を提供する工程；
第１の態様のトレーサー化合物を提供する工程；
トレーサー化合物のテトラジン部分をＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分と反応させる工程；および
付加物を少なくとも１つの18Ｆで放射性標識して付加物を得る工程、を含むか、
または当該方法は：
ＴＣＯ誘導体化標的部分を提供する工程；
第１の態様のトレーサー化合物を提供する工程；
第１の態様のトレーサー化合物を少なくとも１つの18Ｆで放射性標識する工程；および
放射性標識されたトレーサー化合物のテトラジン部分をＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分と反応させて、付加物を得る工程、を含む。
ＴＣＯ誘導体化標的部分を提供する工程；
第１の態様のトレーサー化合物を提供する工程；
トレーサー化合物のテトラジン部分をＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分と反応させる工程；および
付加物を少なくとも１つの18Ｆで放射性標識して付加物を得る工程、を含むか、
または当該方法は：
ＴＣＯ誘導体化標的部分を提供する工程；
第１の態様のトレーサー化合物を提供する工程；
第１の態様のトレーサー化合物を少なくとも１つの18Ｆで放射性標識する工程；および
放射性標識されたトレーサー化合物のテトラジン部分をＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分と反応させて、付加物を得る工程、を含む。
【0013】
第６の態様によれば、被験体の放射性イメージングによる被験体での標的実体の検出における、第１の態様のトレーサー化合物および／または第２の態様の付加物の使用が提供され、ここで、標的実体は、放射性標識されたトレーサー化合物および／または付加物で標的とされる。
【0014】
第７の態様によれば、放射性イメージングによる被験体における標的実体の検出のための18Ｆ標識された付加物の産生用のキットが提供され、当該キットは、第１の態様のトレーサー化合物を含む少なくとも１つのコンパートメントと、少なくとも１つのＴＣＯ誘導体化標的部分を含む少なくとも１つのコンパートメントと、トレーサー化合物を放射性標識するための18Ｆを含む少なくとも１つのコンパートメントと、随意にトレーサー化合物および／または付加物のＩＥＤＤＡ共役および放射性標識のための水性溶媒および有機溶媒と、を備える。
【0015】
さらなる態様によれば、被験体の放射性イメージングによる被験体での標的実体の検出における、第１の態様のトレーサー化合物および／または第２の態様の付加物の診断的および／または治療的使用が提供され、ここで、標的実体は、放射性標識されたトレーサー化合物および／または付加物で標的とされる。
【0016】
さらなる態様によれば、被験体の放射性イメージングによる被験体での標的実体の検出における、第１の態様のトレーサー化合物および／または第２の態様の付加物の非治療的使用が提供され、ここで、標的実体は、放射性標識されたトレーサー化合物および／または付加物で標的とされる。さらなる態様によれば、被験体の放射性イメージングによる被験体での標的実体の検出における、第１の態様のトレーサー化合物および／または第２の態様の付加物の非診断的使用が提供され、ここで、標的実体は、放射性標識されたトレーサー化合物および／または付加物で標的とされる。一実施形態では、非診断的および／または非治療的使用の例は、治療の標的とされる構造の評価における使用である。
【0017】
本発明のトレーサー化合物は、モジュール性のリンカー部分が要因で高いモジュール性を有するという利点があり、それによって、リンカー部分は、複数の異なる標的実体との最適化された共役を提供する。第１の態様の本発明のトレーサー化合物は、それにＴＣＯ誘導体化標的部分が共役していなくても、非特異的組織取り込みが低いという利点がある。第１の態様の本発明のトレーサー化合物は、プレターゲットＰＥＴ画像法において利点がある。
【0018】
第２の態様の本発明の付加物は、室温での容易に使用可能な付加物の迅速な調製を可能にするため利点がある。第２の態様の本発明の付加物は、インビボでの使用に生体適合性があるという利点がある。以下に提供する例に示されるように、第２の態様の付加物は、放射性標識されたトレーサー化合物を含むＩＥＤＤＡ環化付加生成物の標的部分の特異的結合を介して標的実体の視覚化を可能にする性能および特異性を有する。
【0019】
第２の態様の本発明の付加物は、標的組織特異的取り込み率が高く、非特異的組織取り込み率が低いという利点を有する。第２の態様の本発明の放射性標識された付加物は、良好な代謝安定性および主に腎臓を介した迅速なクリアランスを有するという利点がある。第２の態様の本発明の付加物は、高いモジュール性を有するという利点があり、付加物の薬物動態は、トレーサー化合物の構造成分の修飾を介して延性である。
【0020】
第２の態様の本発明の付加物は、高い腫瘍特異的取り込み率を有するという利点があり、付加物の利用された標的部分は、癌性増殖を示唆する生体分子を標的とする。
【図面の簡単な説明】
【0021】
いくつかの例示的な実施形態が、添付の図面を参照して説明される。
【0022】
【図1】例示的な実施形態によるトレーサー化合物ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（４）の合成経路および構造式を示す。
【図2】例示的な実施形態によるトレーサー化合物ＡｍＢＦ3－ＰＥＧ4－ＴＺ（８）の合成経路および構造式を示す。
【図3】例示的な実施形態によるトレーサー化合物ＡｍＢＦ3－ＰＥＧ9－Ｔｚ（１２）の合成経路および構造式を示す。
【図4】例示的な実施形態による、トランス－シクロオクテンアルデヒド（ＴＣＯ－ＣＨＯ）（１５）の合成経路および構造式、ならびにＴＣＯ－ＰＥＧ3－アルデヒド（１６）の構造式を示す。
【図5】例示的な実施形態によるＰＳＭＡ－トランス－シクロオクテン（ＰＳＭＡ－ＴＣＯ）（１８）の合成経路および構造式を示す。
【図6】例示的な実施形態によるＰＳＭＡ－トラネキサム酸－ＴＣＯ（２４）の合成経路および構造式を示す。
【図7】例示的な実施形態による、18Ｆ標識されたＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）を結果としてもたらす、ＩＥＤＤＡ共役前のＡｍＢＦ3－Ｔｚ（４）の放射性標識に対する反応を示す。
【図8a】例示的な実施形態による、トレーサー化合物ＡｍＢＦ3（４）とＴＣＯ誘導体化標的部分とのＩＥＤＤＡ環化付加生成物である放射性標識された付加物を得るための代替の合成経路を示し、標的部分はペプチドとして表される。
【図8b】例示的な実施形態による、トレーサー化合物ＡｍＢＦ3（４）とＴＣＯ誘導体化標的部分とのＩＥＤＤＡ環化付加生成物である放射性標識された付加物を得るための代替の合成経路を示し、標的部分はペプチドとして表される。
【図9】［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）によるＢ１６／Ｆ１０黒色腫細胞のインキュベーション後の、遊離した、細胞膜結合放射能または内部移行放射能－％としての異なる時点で観察された総放射能の％を示す。総放射能の９９％を超える放射能が、各時点で遊離画分に存在し、それによって、細胞膜への［18Ｆ］４の非特異的結合が低いことが示唆されている。
【図10】ＡＲ４２Ｊ細胞系における総添加放射能からの、ＡＲ４２Ｊ細胞の細胞内区画における放射能の％を示し、放射能は時間の関数として検出され、ベースライン条件（内部移行）で［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５）を形成する［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）と共役されたＴＯＯ官能化Ｔｙｒ3－オクトレオチド（ＴＯＣ）の特異的ＡＲ４２Ｊ細胞取り込みを示唆している。ベースライン条件での取り込みは、非修飾の遮断オクトレオチド（遮断（Blocked））とともに［18Ｆ］２５により細胞をコインキュベートすることによって阻害された。
【図11】［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）の投与の０～６０分後のＳＣＩＤマウスの加算ＰＥＴ／ＣＴ画像を示す。Ｂ．＝膀胱、Ｇ．Ｂ．＝胆嚢、Ｋ．＝腎臓、Ｌ．＝肝臓。
【図12a】対照ＳＣＩＤおよびＣ５７ＢＬ／６ＪＲｊマウス（ｎ＝２～３／株）における［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）の静脈内投与の２７０±２分後に示された組織における放射能を定量化する組織１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）を示し、放射性トレーサー化合物のクリアランスおよび排泄を示唆している。
【図12b】対照ＳＣＩＤおよびＣ５７ＢＬ／６ＪＲｊマウス（ｎ＝２～３／株）における［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）の静脈内投与の２７０±２分後に示された尿および糞便における放射能を定量化する組織１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）を示し、放射性トレーサー化合物のクリアランスおよび排泄を示唆している。
【図13a】雄ＳＣＩＤマウス（ｎ＝１）における［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）の投与後６０分間に示された組織で測定された標準取込値（ＳＵＶ）を示し、［18Ｆ］４の体内分布および排出を示唆している。
【図13b】雄ＳＣＩＤマウス（ｎ＝１）における［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）の投与後６０分間に示された尿で測定された標準取込値（ＳＵＶ）を示し、［18Ｆ］４の体内分布および排出を示唆している。
【図14】放射性標識された付加物［18Ｆ］２５の静脈内投与後のＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するＲｊ：ＮＭＲＩ－Ｆｏｘｎ１ ｎｕ／ｎｕマウス（ｎ＝２～４）の異なる組織で測定された［18Ｆ］２５の組織１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）を示し、さまざまな時点でその体内分布を示唆している。
【図15】［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５）の投与の２０～８０分後のＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するＲｊ：ＮＭＲＩ－Ｆｏｘｎ１ ｎｕ／ｎｕマウスの加算ＰＥＴ／ＣＴ画像を示す。左側の動物には、非修飾の遮断オクトレオチドおよび［18Ｆ］２５を静脈内に同時投与した。右側の動物には、遮断オクトレオチドなしで［18Ｆ］２５のみを投与して、右肩の皮下ＡＲ４２Ｊ腫瘍の視覚化を可能にした。Ｔ＝腫瘍。
【図16】時間（分）の関数としてＡＲ４２Ｊ腫瘍組織において測定された標準取込値（ＳＵＶ）を示す。ここで、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するマウス（ｎ＝２／群）には、静脈内に、［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５）を単独で投与したか（非遮断）、または［18Ｆ］２５および遮断オクトレオチドを同時投与した（遮断）。
【図17】時間（分）の関数として示された組織で測定された標準取込値（ＳＵＶ）を示し、腫瘍を有するＡＲ４２Ｊマウス（ｎ＝１）における［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５）の静脈内投与後の放射能のクリアランスを示唆している。
【図18】［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－トラネキサム酸－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２９）の注入の１５～９０分後のＰＥＴ／ＣＴの最大強度投影を示す。右側の動物には、２－ＰＭＰＡ（遮断）および［18Ｆ］２９を静脈内に同時投与した。左側の動物には、遮断２－ＰＭＰＡなしで［18Ｆ］２９のみを投与し、左肩の皮下Ｃ４－２腫瘍の視覚化を可能にした。Ｔ＝腫瘍、Ｇ＝胆嚢、Ｋ＝腎臓、Ｕ＝膀胱／尿。
【図19】放射性標識された付加物［18Ｆ］２９の静脈内投与後のＣ４－２腫瘍を有するＳＣＩＤマウス（ｎ＝３）の異なる組織で測定された［18Ｆ］２９の組織１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）を示し、注入の６０分後の体内分布を示唆している。
【発明を実施するための形態】
【0023】
本明細書で使用されるように、用語「トレーサー化合物」または「トレーサー」は、放射線検出器で追跡することができる化合物を意味する。実施形態では、トレーサー化合物は、放射性核種に置き換えられた１つまたは複数の原子を含む。一実施形態では、トレーサー化合物は、第１の態様によるトレーサー化合物である。
【0024】
本明細書で使用されるように、用語「ＩＥＤＤＡ」は、逆電子要請型ディールス・アルダー反応を意味する。
【0025】
本明細書で使用されるように、用語「部分」は、分子の構造において機能的または構造的に同定することができる分子の一部、たとえば全体としてのトレーサー化合物または付加物を意味する。したがって、部分に個別に名前を付けることができる。
【0026】
本明細書で使用されるように、用語「リンカー」または「リンカー部分」は、トレーサー化合物内または付加物内の２つの隣接する部分を接続するモジュール領域を意味する。一実施形態では、リンカー部分は、トレーサー化合物のテトラジン部分と双性イオン部分とを互いに連結する、第１の態様によるリンカー部分を意味する。一実施形態では、リンカー部分のＳ２は双性イオン部分のＮに結合され、リンカー部分のＳ１はトレーサー化合物のテトラジン部分のフェニルに結合される。代替の実施形態では、「リンカー」、または「連結部分」もしくは「リンカー部分」は、標的部分とＴＣＯ部分とを互いに連結する、ＴＣＯ誘導体化標的部分中のリンカー部分を意味する。
【0027】
本明細書で使用されるように、用語「テトラジン」は、４つの窒素原子を含む６員芳香族テトラジン環を意味する。本明細書で使用されるように、テトラジンという用語は、１，２，４，５－テトラジン異性体を指す。
【0028】
本明細書で使用されるように、用語「テトラジン部分」は、４つの窒素原子を含む６員芳香環を含む部分を意味する。テトラジン部分におけるテトラジン構造は、１，２，４，５－テトラジン異性体構造である。テトラジン部分はさらに、テトラジン環のＣ３に結合されている６員芳香族フェニル環を含む。テトラジン部分はさらに、テトラジン環のＣ６に結合されているＲ２を含み、ここで、Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。一実施形態では、式（Ｉ）によるトレーサー化合物のリンカー部分Ｌ、およびテトラジン部分の１，２，４，５－テトラジンは、式（Ｉ）に従って、互いに対してパラ位でテトラジン部分のフェニル環に結合されている。
【0029】
本明細書で使用されるように、用語「双性イオン」は、少なくとも２つの官能基を有し、同数の正および負に荷電された官能基を含む分子を示す。双性イオン分子の全体の電荷はゼロである。一実施形態では、双性イオンは、式（Ｉ）に従って有機トリフルオロボレート［ＡＢＦ3］-であり、ここで、Ａは［－ＣＨ2－Ｎ－（Ｒ１）2］+である。
【0030】
本明細書で使用されるように、用語「アルキル置換基」は、化学構造式に関連して、別の分子の一部であり、１つの水素を欠けている、一般的な（不特定の）アルカンを意味する。最小の「アルキル置換基」はメチル基であって、式はＣＨ3－である。
【0031】
本明細書で使用されるように、用語「ポリエチレングリコールリンカー（－（ＰＥＧ）X－）」は、トレーサー化合物内または付加物内の２つの他の隣接部分を接続するモジュール部分を意味し、ここで、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは整数である。リンカーの（ＰＥＧ）X部分は、リンカー部分をトレーサー化合物または付加物の残りの部分と連結する、本明細書ではＳ１およびＳ２と呼ばれる、別個の連結部分によって囲まれ得る。
【0032】
本明細書で使用されるように、用語「整数」は、正、負、またはゼロであり得る、分数ではない整数を意味する。
【0033】
本明細書で使用されるように、用語「18Ｆ」または「フッ素－１８」は、主に陽電子放射によって崩壊するフッ素放射性同位体を意味する。
【0034】
本明細書で使用されるように、用語「付加物」は、２つまたはそれ以上の別個の分子の付加によって得られる付加生成物であって、結果として単一の生成物となる、付加生成物を指す。一実施形態では、用語「付加物」は、トレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分との付加物を指す。
【0035】
本明細書で使用されるように、用語「トランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）」は、環状炭化水素を形成する８個の炭素の鎖を有するシクロアルケンのトランス異性体を指し、ここで、Ｃ＝Ｃ二重結合の両側の２つのＣ－Ｃ単結合は、Ｃ＝Ｃ二重結合の平面の対向する両側にある。
【0036】
本明細書で使用されるように、用語「ＴＣＯ部分」は、標的部分または連結部分などの少なくとも１つの他の部分を含む分子の一部であるＴＣＯを指し、少なくとも１つの他の部分は上記ＴＣＯに連結されている。本明細書で使用されるように、用語「ＴＣＯ部分」は、ＩＥＤＤＡ共役前のＴＣＯ誘導体化標的部分の環状ＴＣＯのトランス異性体を指す。
【0037】
本明細書で使用されるように、用語「ＴＣＯ誘導体化標的部分」は、トランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）部分で誘導体化された標的部分を意味する。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、標的部分とＴＣＯ部分との間に連結部分を含む。
【0038】
本明細書で使用されるように、用語「第三級アミン」は、炭素、水素、および窒素原子を含む化合物を指し、ここで、アミンの窒素に３つの炭素が結合されることで、３つの有機置換基が構成される。一実施形態では、第三級アミンはＮ－（Ｋ）3であり、ここで、各Ｋは、独立して、アルキルまたはアリールである。一実施形態では、第三級アミンは（－Ｎ（ＣＨ3）2）であり、ここで、窒素は、第三級アミンが一部である化合物の別の部分の一部である第３の炭素に結合されている。一実施形態では、第三級アミンは（－Ｎ（ＣＨ3）2）であり、ここで、窒素は、トレーサー化合物のリンカー部分の一部である第３の炭素に結合されている。
【0039】
本明細書で使用されるように、用語「標的部分」は、その配列および／または３Ｄ（表面）構造を介して、所望の標的実体を標的とする、ペプチド、抗体、抗体フラグメント、またはナノ粒子を意味する。一実施形態では、標的部分は、より大きな構造または化合物の一部であり、インビトロに加えてインビボでも上記化合物をそれぞれの標的実体に誘導する、またはその同じ場所に位置づけることができる。
【0040】
本明細書で使用されるように、用語「標的実体」は、配列および／または３Ｄ（表面）構造であって、インビトロおよび／またはインビボでの付加物のすなわち標的部分によって標的にされ、その配列および／または３Ｄ（表面）構造を介して認識され、それにより、結果として標的部分と標的実体が同じ場所に位置づけられる、配列および／または３Ｄ（表面）構造を指す。標的実体の例は生体分子である。
【0041】
本明細書で使用されるように、「ペプチド」は、複数の連続した重合アミノ酸残基を含むアミノ酸配列である。本開示の目的上、ペプチドは、最大５０個のアミノ酸残基を含む分子である。ペプチドは、修飾されたアミノ酸残基、コドンによってコードされない自然起源のアミノ酸残基、および非自然起源のアミノ酸残基を含み得る。
【0042】
本明細書で使用されるように、用語「抗体」は、そのフラグメント抗原結合（Ｆａｂ）可変領域を介して抗原のエピトープを認識し、それに結合する免疫グロブリンタンパク質を意味する。
【0043】
本明細書で使用されるように、用語「放射性イメージング」は、マクロまたはミクロの生物の内部の生理学的構造および活性を視覚化および測定するように放射性物質を利用する方法を指す。
【0044】
本明細書で使用されるように、用語「陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）」は、医療用シンチログラフィー（scintillography）技術とガンマカメラによるガンマ線の検出を利用して、生理学的構造および活性を可視化し測定するために放射性トレーサーを使用するイメージング技術を意味する。本明細書で使用されるように、用語「陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）」は、連続画像取得用のＸ線コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャナをさらに統合し、それによって、組み合わされた単一の重ね合わせ（同時位置合わせ）画像を形成する、陽電子放射断層撮影のコンピュータ断層撮影（ＰＥＴ－ＣＴ）も含む。
【0045】
本明細書で使用されるように、用語「プレターゲットＰＥＴ画像法」は、２段階のＰＥＴ標識プロセスを意味し、ここで、標的実体が、そこにトレーサー化合物が付着させられることなく、最初に標的にされ、標的部分と共役される。この後に第２の工程が続き、ここで、放射性標識されたトレーサー化合物は、標的部分と接触して送達され、標的部分に結合させられる。一実施形態では、標的部分はＴＣＯ誘導体化標的部分であり、トレーサー化合物へのＴＣＯ誘導体化標的部分の結合は、ＩＥＤＤＡ共役を介して行われる。
【0046】
本明細書で使用されるように、用語「標的組織特異的取り込み」は、標的組織内の特定の標的実体への付加物の標的部分の結合を介した、対象の標的組織へのトレーサー化合物または付加物の取り込みまたは結合を意味する。
【0047】
本明細書で使用されるように、用語「腫瘍特異的取り込み」は、標的組織内の標的実体への付加物の標的部分の結合を介した、対象の標的組織へのトレーサー化合物または付加物の取り込みまたは結合を意味し、ここで、標的組織は癌性組織である。
【0048】
本明細書で使用されるように、用語「備える（comprising）」は、「含む（including）」、「含有する（containing）」、および「包含する（comprehending）」という広義の意味の他に、より狭い表現「からなる（consisting of）」および「のみからなる（consisting only of）」も含む。
【0049】
用語「フッ素化」は、化合物にフッ素が導入される化学反応を指す。一実施形態では、フッ素は安定同位体フッ素－１９（19Ｆ）である。別の実施形態では、フッ素は放射性同位体18Ｆである。
【0050】
本明細書で使用されるように、用語「有機トリフルオロボレート」は、一般分子式［ＡＢＦ3］-を有する有機ホウ素化合物を意味する。有機トリフルオロボレートの一般式における「Ａ」は、正に荷電された官能基Ａ＋であり得、有機トリフルオロボレート部分を双性イオンにする。
【0051】
本明細書で使用されるように、用語「［18Ｆ］トリフルオロボレート」は、有機トリフルオロボレートを意味し、ここで、３つのフッ化物原子［Ｆ］の少なくとも１つが18Ｆ－フッ化物同位体に置き換えられる。
【0052】
本明細書で使用されるように、用語「生体分子」は、生体系と適合性があり得るか、または生物学的活性を保有し得るもしくは保有し得ない、医学的、生理学的または科学的に重要な任意の分子、その類似体または誘導体を指す。
【0053】
本明細書で使用されるように、用語「抗体フラグメント」は、抗体分子の抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）または抗体分子の結晶化可能なフラグメント（Ｆｃ、尾部領域）などの、抗体分子全体の一片を意味する。
【0054】
本明細書で使用されるように、ナノ粒子という用語は、直径１～３００ナノメートル（ｎｍ）の寸法を有する任意の形状の物質を意味する。例として、ナノ粒子は、有機ナノ結晶、無機ナノ結晶、またはリポソームである。
【0055】
本明細書で使用されるように、－（ＣＨ2）0－は示された位置にＣＨ2が存在しないことを意味し、－（ＣＨ2）1－は－ＣＨ2－を意味し、－（ＣＨ2）2－は－ＣＨ2－ＣＨ2－を意味し、－（ＣＨ2）3－は－ＣＨ2－ＣＨ2－ＣＨ2－を意味し、－（ＣＨ2）4－は－ＣＨ2－ＣＨ2－ＣＨ2－ＣＨ2－を意味する。
【0056】
本明細書で使用されるように、用語「Ｔｙｒ3－オクトレオチド」は、オクタペプチド、すなわち、８個のアミノ酸を有するオリゴペプチドを意味し、ここで、オクトレオチドの３番目の位置でのフェニルアラニンがチロシンと置換される。オクトレオチドとＴｙｒ3－オクトレオチドは両方とも、天然のソマトスタチンを薬理学的に模倣することができ、神経内分泌腫瘍で過剰発現されるソマトスタチン受容体に結合することができる。オクトレオチドまたはＴｙｒ3－オクトレオチドは、ソマトスタチン受容体に対する標的部分または標的部分のモデルとして使用され得る。
【0057】
本明細書で使用されるように、用語「ＰＳＭＡ」は、ＩＩ型膜糖タンパク質であり、前立腺癌で過剰発現される、前立腺特異的膜抗原を意味する。本出願に開示される化合物２８および２９に関連して、用語「ＰＳＭＡ」は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合するリガンドとして機能することができる、ＰＳＭＡ標的部分を指す。それによって、化合物２８および２９は、前立腺特異的膜抗原に対する標的部分または標的部分のモデルを含む。
【0058】
本明細書で使用されるように、用語「互変異性体」は、同時に存在することができ、分子内の原子または基の移動によって容易に交換可能である、化合物の少なくとも２つの構造異性体のいずれかを指す。
【0059】
本明細書で使用されるように、用語「非治療的使用」は、疾患管理のいかなる治療面も目的としない使用を指す。一実施形態では、用語「非治療的使用」は、診断目的での使用を指すことができる。本明細書で使用されるように、用語「非診断的使用」は、疾患の診断を目的としない使用を指す。
【0060】
一実施形態では、トレーサー化合物は、双性イオン部分、リンカー部分およびテトラジン部分を含む。特定の他の実施形態では、トレーサー化合物は、他の部分または側鎖基も含む。一実施形態では、リンカー部分は、双性イオン部分とテトラジン部分との間に位置づけられる。
【0061】
一実施形態では、トレーサー化合物の双性イオン部分は、有機トリフルオロボレートを含む。有機トリフルオロボレートは、正（+）に荷電された（カチオン性）基に結合された（ＢＦ3）-部分を含む。より具体的には、（ＢＦ3）-基は、－ＣＨ2を介して正（+）に荷電された（カチオン性）基（Ｎ（Ｒ１）2）+に結合される。
【0062】
一実施形態では、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基である。一実施形態では、各Ｒ１は、独立して、Ｃ２以下の炭素鎖長を有するアルキル置換基である。一実施形態では、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、式Ｃ1Ｈ3を有するアルキル置換基である。一実施形態では、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、式Ｃ2Ｈ5を有するアルキル置換基である。一実施形態では、各Ｒ１は、独立して、水素（Ｈ）である。一実施形態では、各Ｒ１は、独立して、メチル基である。一実施形態では、各Ｒ１は、独立して、エチル基である。
【0063】
一実施形態では、各アルキル置換基Ｒ１は、双性イオン部分内の窒素（Ｎ）とホウ素（Ｂ）との間の炭素に対する求核攻撃を個別に可能にする。一実施形態では、各アルキル置換基Ｒ１は、ホウ素（Ｂ）のフッ素化に関する非干渉基である。これに関連する非干渉とは、Ｒ１がホウ素（Ｂ）のフッ素化を十分にまたは実質的に防止しないことを意味する。
【0064】
一実施形態では、リンカー部分は単位Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成され、ここで、Ｙはリンカーのコア単位構造を表し、Ｓ１およびＳ２は、コア単位Ｙの両側の鎖を表し、Ｓ１側のリンカー部分をテトラジン部分に結合し、Ｓ２側のリンカー部分を双性イオン部分に結合する。
【0065】
一実施形態では、トレーサー化合物のＹは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１、２、３、または４である）である。一実施形態では、ｍは５未満の整数である。
【0066】
一実施形態では、リンカー部分のＹは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－ＣＨ2であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数）を有するアルキル置換基または水素（Ｈ）であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0067】
一実施形態では、リンカー部分のＹは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f－（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0068】
一実施形態では、リンカー部分のＹは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0069】
一実施形態では、リンカー部分のＹは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0070】
一実施形態では、リンカー部分のＹは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f－（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0071】
一実施形態では、リンカー部分のＹは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0072】
一実施形態では、リンカー部分のＹは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2である。一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）1であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2である。一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）2であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）3であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）4であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－である。一実施形態では、リンカー部分のＹは（－ＣＨ2－）1であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、Ｓ２は－ＣＨ2であり、両方のＲ１は、独立して、ＣＨ3であり、Ｒ２はＨである。
【0073】
一実施形態では、リンカー部分のＹは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2である。一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）1であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2である。一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）2であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）3であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）4であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－である。
【0074】
一実施形態では、リンカー部分のＹは－（ＰＥＧ）X－（式中、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0075】
一実施形態では、リンカー部分のＹは－（ＰＥＧ）X－（式中、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0076】
一実施形態では、リンカー部分のＹは－（ＰＥＧ）X－（式中、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0077】
一実施形態では、リンカー部分のＹは－（ＰＥＧ）X－（式中、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0078】
一実施形態では、リンカー部分のＹは－（ＰＥＧ）X－（式中、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）f（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0079】
一実施形態では、リンカー部分のＹは－（ＰＥＧ）X－（式中、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0080】
一実施形態では、式（Ｉ）によるトレーサー化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物が提供され、ここで：各Ｒ１は、独立して、水素（Ｈ）または式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり；Ｌは、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されるリンカー部分であり、式中：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は、－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－、または－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ２は、－（ＣＨ2）f、または－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－、または－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は、－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－、または－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ２は、－（ＣＨ2）f、または－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－、または－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0081】
一実施形態では、式（Ｉ）によるトレーサー化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物が提供され、式中：
各Ｒ１は、独立して水素（Ｈ）または式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり；かつ
Ｌは、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されるリンカー部分であり、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－、または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－であるか；または、
Ｙはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は、－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－、または－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ２は、－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－または－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
各Ｒ１は、独立して水素（Ｈ）または式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり；かつ
Ｌは、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されるリンカー部分であり、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－、または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－であるか；または、
Ｙはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は、－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－、または－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ２は、－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－または－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－（式中、各ｆは、独立して０～４の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0082】
一実施形態では、Ｙはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）である。一実施形態では、トレーサー化合物の－（ＰＥＧ）X－におけるｘは、１～１５の範囲または１～１０の範囲から選択される整数である。一実施形態では、－（ＰＥＧ）X－におけるｘは、１～９の範囲から、または１～８の範囲から、または１～７の範囲から、または１～６の範囲から、または１～５の範囲から、または１～４の範囲から、または１～３の範囲から、または１～２の範囲から選択される整数であるか、またはｘは１である。一実施形態では、トレーサー化合物の－（ＰＥＧ）X－におけるｘは、４または９である。一実施形態では、トレーサー化合物の－（ＰＥＧ）X－におけるｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。
【0083】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0084】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつトレーサー化合物のＲ２は、Ｈまたはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかである。
【0085】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）1であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２はフェニル置換基である。
【0086】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）1であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２はＨである。
【0087】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）1であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２は式Ｃ1Ｈ3を有するアルキル置換基である。
【0088】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）1であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２は式Ｃ2Ｈ5を有するアルキル置換基である。
【0089】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）2であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２はフェニル置換基である。
【0090】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）2であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２はＨである。
【0091】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）2であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２は式Ｃ1Ｈ3を有するアルキル置換基である。
【0092】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）2であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、Ｒ２は式Ｃ2Ｈ5を有するアルキル置換基である。
【0093】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）3であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２はフェニル置換基である。
【0094】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）3であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２はＨである。
【0095】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）3であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２は式Ｃ1Ｈ3を有するアルキル置換基である。
【0096】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）3であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２は式Ｃ2Ｈ5を有するアルキル置換基である。
【0097】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）4であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２はフェニル置換基である。
【0098】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）4であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２はＨである。
【0099】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）4であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２は式Ｃ1Ｈ3を有するアルキル置換基である。
【0100】
一実施形態では、Ｙは（－ＣＨ2－）4であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｈまたは式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり、かつＲ２は式Ｃ2Ｈ5を有するアルキル置換基である。
【0101】
一実施形態では、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、Ｃ1Ｈ3であり、Ｙは（－ＣＨ2－）1であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－であり、Ｓ２は－ＣＨ2－であり、かつＲ２はＨである。
【0102】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0103】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0104】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0105】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0106】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0107】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0108】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0109】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0110】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0111】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0112】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0113】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0114】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0115】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0116】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0117】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0118】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0119】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0120】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）3－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0121】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）3－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）X－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）4－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）4－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0122】
一実施形態では、Ｙはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－であり、ここで、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基の４つの繰り返し単位を含み、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－であり、ここで、ｚおよびｆは各々、独立して、０または２である。
【0123】
一実施形態では、Ｙはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－であり、ここで、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基の４つの繰り返し単位を含み、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－であり、ここで、ｚおよびｆは各々、独立して、０または２である。
【0124】
一実施形態では、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、メチル基であり、Ｙは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基の４つの繰り返し単位を含むポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－であり、かつＲ２はＨである。
【0125】
一実施形態では、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、メチル基であり、Ｙは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基の４つの繰り返し単位を含むポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－であり、かつＲ２はＨである。
【0126】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0127】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0128】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0129】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）4－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0130】
一実施形態では、Ｙはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－であり、ここで、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基の９つの繰り返し単位を含み、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－であり、ここで、ｚおよびｆは各々、独立して、０または２である。
【0131】
一実施形態では、Ｙはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－であり、ここで、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基の９つの繰り返し単位を含み、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－であり、ここで、ｚおよびｆは各々、独立して、０または２である。
【0132】
一実施形態では、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、メチル基であり、Ｙは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基の９つの繰り返し単位を含むポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－であり、ならびにＲ２はＨである。
【0133】
一実施形態では、トレーサー化合物の各Ｒ１は、独立して、メチル基であり、Ｙは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基の９つの繰り返し単位を含むポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－であり、ならびにＲ２はＨである。
【0134】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0135】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0136】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0137】
一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）0－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）1－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）0－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）1－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。一実施形態では、Ｙは－（ＰＥＧ）9－であり、Ｓ１は－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）2－であり、かつＳ２は－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－である。
【0138】
一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分のＲ２は、フェニル置換基である。一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分のＲ２は、式ＣnＨ2n+1を有するアルキル置換基であり、ここで、ｎは、０～２の範囲から選択される整数である。一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分のＲ２は、式Ｃ1Ｈ3を有するアルキル置換基である。一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分のＲ２は、式Ｃ2Ｈ5を有するアルキル置換基である。一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分のＲ２は、水素（Ｈ）である。
【0139】
一実施形態では、トレーサー化合物のＲ２置換基を含むテトラジン部分は、３－フェニル－１，２，４，５－テトラジンである。一実施形態では、トレーサー化合物のＲ２置換基を含むテトラジン部分は、３－フェニル－６－メチル－１，２，４，５－テトラジンである。一実施形態では、トレーサー化合物のＲ２置換基を含むテトラジン部分は、３－フェニル－６－エチル－１，２，４，５－テトラジンである。一実施形態では、トレーサー化合物のＲ２置換基を含むテトラジン部分は、３－フェニル－６－フェニル－１，２，４，５－テトラジンである。
【0140】
一実施形態では、置換基Ｒ２は、トレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分との間のＩＥＤＤＡ共役の反応性に関する非干渉基である。これに関連する非干渉とは、Ｒ２がＩＥＤＤＡ共役を十分にまたは実質的に防止しないことを意味する。
【0141】
一実施形態では、トレーサー化合物の（ＢＦ3）-部分における少なくとも１つのＦは18Ｆである。一実施形態では、トレーサー化合物の（ＢＦ3）-部分における１つのＦは18Ｆであり、残りの２つは19Ｆである。
【0142】
一実施形態では、付加物は、トランス－シクロオクテン誘導体化標的部分とトレーサー化合物のテトラジン部分との逆電子要請型ディールス・アルダー反応（ＩＥＤＤＡ）によって得られる。
【0143】
一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分のテトラジン環は、付加物においてＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分に化学的に結合させられる。
【0144】
一実施形態では、付加物の標的部分は、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体フラグメント、またはナノ粒子である。付加物の標的部分は、インビトロおよびインビボで特異的な生体分子を標的とし、その配列および／または３Ｄ（表面）構造を介してそれと共役する。
【0145】
一実施形態では、付加物の（ＢＦ3）-部分における少なくとも１つのＦは18Ｆである。一実施形態では、付加物の（ＢＦ3）-部分における１つのＦは18Ｆであり、残りの２つは19Ｆである。
【0146】
一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分は、標的部分に直接結合される。特定の他の実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分は、ＰＥＧＸ鎖またはポリリジン鎖などの連結部分を介して標的部分に間接的に結合される。一実施形態では、ポリリジン鎖はα－ポリリジン鎖である。一実施形態では、ポリリジン鎖はε－ポリリジン鎖である。一実施形態では、ポリリジン鎖はポリ－Ｉ－リジン鎖である。
【0147】
一実施形態では、付加物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物は、式（ＩＩ）に従った構造を有し：
式中、各Ｒ１は、独立して水素（Ｈ）または式ＣnＨ2n+1（式中、ｎは、０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基であり；かつ
Ｌは、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されるリンカー部分であり、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Zであるか、またはＳ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、ここで、各ｚは、独立して、０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｓ２は－ＣＨ2－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）fであるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－であり、ここで、各ｆは、独立して、０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかであり、かつ
Ｔは、付加物の標的部分、および随意に連結部分を含み、ここで、連結部分は、（ＰＥＧ）X－鎖またはポリリジン鎖である。
【化2】
Ｌは、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成されるリンカー部分であり、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であるか、またはＹはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり；かつ
Ｓ１は－（ＣＨ2）Z－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Zであるか、またはＳ１は－（ＣＨ2）Z－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－であり、ここで、各ｚは、独立して、０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｓ２は－ＣＨ2－であるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）fであるか、またはＳ２は－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）f－であり、ここで、各ｆは、独立して、０～４の範囲から選択される整数であり；かつ
Ｒ２は、水素（Ｈ）またはフェニル置換基または式ＣSＨ2S+1（式中、ｓは０～２の範囲から選択される整数である）を有するアルキル置換基のいずれかであり、かつ
Ｔは、付加物の標的部分、および随意に連結部分を含み、ここで、連結部分は、（ＰＥＧ）X－鎖またはポリリジン鎖である。
【0148】
一実施形態では、付加物は、ＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とトレーサー化合物のテトラジン環とのＩＥＤＤＡ環化付加生成物であり、式（ＩＩ）に従う構造を有する。
【0149】
一実施形態では、式（ＩＩ）において、基Ｒ１、Ｒ２、およびＬは、式（Ｉ）に対して本明細書で定義した意味と同じ意味を有する。
【0150】
一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、トランス－シクロオクテン部分および標的部分を含む。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、トランス－シクロオクテン部分および標的部分の他に、他の部分、または側鎖基／側鎖も含む。一実施形態では、１つを超える連結部分がＴＣＯ部分と標的部分との間に配置され、それによってＴＣＯ部分と標的部分が互いに連結される。
【0151】
一実施形態では、ＴＣＯ部分と標的部分との間の連結部分は、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基の繰り返し単位を含むポリエチレングリコールリンカーである。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分はＴＣＯ－（ＰＥＧ）X－アルデヒドを含み、ここで、ｘは、０～１０の範囲から選択される整数である。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）0－アルデヒドを含む。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）3－アルデヒドを含む。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）4－アルデヒドを含む。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）7－アルデヒドを含む。
【0152】
一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）X標的部分を含み、ここで、ｘは、０～１０の範囲から選択される整数である。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）0標的部分を含む。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）4標的部分を含む。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）7標的部分を含む。
【0153】
一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ部分および標的部分としてのＴｙｒ3－オクトレオチド（ＴＯＣ）を含む。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）X－ＴＯＣを含み、ここで、ｘは、０～１０の範囲から選択される整数である。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）4－ＴＯＣを含む。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分は、ＴＣＯ－（ＰＥＧ）7－ＴＯＣを含む。一実施形態では、ＴＣＯ誘導体化標的部分の－（ＰＥＧ）X連結部分は、ＴＣＯ部分およびＩＥＤＤＡ環化付加生成物（Ｔｚ＋ＴＣＯ）から生じる構築物の親油性を低下させるという利点を有する。一実施形態では、ＴＣＯ部分と標的部分との間のポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－連結部分は、最終付加物の薬物動態および代謝安定性を調節するのに有益である。一実施形態では、ＴＣＯ部分と標的部分との間の連結部分は、生体適合性および生分解性のリンカーであるポリリシンリンカーである。一実施形態では、ＴＣＯ部分と標的部分との間のポリリシン結合部分も、最終付加物の薬物動態および代謝安定性を調節するのに有益である。
【0154】
一実施形態では、トレーサー化合物のリンカー部分（Ｌ）の構造および長さは、放射性標識された付加物と特異的な標的実体との共役後の最適な薬物動態を確かなものとするために最適化される。トレーサー化合物のリンカー部分の最適な構造および長さによって、トレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分との付加物が、一度結合させられると最適な標的特異的構成を得ることが可能になり、標的実体への標的部分の特異的結合を可能にする。したがって、トレーサー化合物のリンカー部分のモジュール構造および長さは、インビトロおよびインビボでの細胞および組織における付加物の高い標的対非標的の取り込み比を促進する。一実施形態では、トレーサー化合物のリンカー部分のモジュール構造および長さによって、良好な信号対ノイズ比でのＰＥＴ画像法が可能になる。
【0155】
一実施形態では、トレーサー化合物または付加物のクリアランスは、主に腎臓を介して生じる。一実施形態では、リンカー部分または付加物は、ほとんどインビボでの腎臓排泄に向けられる。
【0156】
一実施形態では、トレーサー化合物を製造するための方法が開示され、ここで、出発物質のリンカー部分は、Ｓ１－Ｙ－Ｓ２で構成され、ここで：
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－、または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－であるか；または、
Ｙはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり、
Ｓ１は、－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－、または－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して、０～４の範囲から選択される整数である）であり、
Ｓ２は、－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－または－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－（式中、各ｆは、独立して、０～４の範囲から選択される整数である）である。
Ｙは（－ＣＨ2－）m（式中、ｍは１～４の範囲から選択される整数である）であり、Ｓ１は、－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－、または－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－であり、かつＳ２は－ＣＨ2－であるか；または、
Ｙはポリエチレングリコールリンカー－（ＰＥＧ）X－（式中、（ＰＥＧ）Xは、ポリエチレンオキシド－ＣＨ2－ＣＨ2－Ｏ－基のｘ個の繰り返し単位を含み、ｘは１～２０の範囲から選択される整数である）であり、
Ｓ１は、－ＣＨ2－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ2）Z－、または－ＣＨ2－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ2）Z－（式中、各ｚは、独立して、０～４の範囲から選択される整数である）であり、
Ｓ２は、－（ＣＨ2）f－ＣＯ－ＮＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－または－（ＣＨ2）f－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ2－ＣＨ2－（式中、各ｆは、独立して、０～４の範囲から選択される整数である）である。
【0157】
一実施形態では、ＩＥＤＤＡ反応速度は、一緒に共役するＩＥＤＤＡ反応パートナー、および反応条件に依存し、反応条件は、少なくとも試薬の濃度、反応温度、および反応ｐＨによって決定される。一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分とＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とのＩＥＤＤＡ共役は、３０分以下、好ましくは２０分以下、より好ましくは１５分以下、さらにより好ましくは１０分以下、さらにより好ましくは５分以下かかる。最も好ましい実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分とＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とのＩＥＤＤＡ共役は、テトラジン環とＴＣＯ部分との間のＩＥＤＤＡが数秒以内に生じる可能性が高いため、１分未満、好ましくは３０秒未満、より好ましくは１５秒未満かかる。それにもかかわらず、一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分とＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とのＩＥＤＤＡ共役は、結果として得られる付加物の互変異性の均一性および安定性を改善するために、＋２０℃を超える温度で２０～３０分間実行される。
【0158】
一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分とＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とのＩＥＤＤＡ共役は、周囲温度（室温）で実行される。一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分とＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とのＩＥＤＤＡ共役は、＋２０℃から＋８０℃の間の任意の温度で効率的に実行される。
【0159】
一実施形態では、付加物を製造するための方法は、２０～８０℃の間の温度、好ましくは４０～７０℃の間の温度、より好ましくは５５～６５℃の間の温度、最も好ましくは６０℃の温度で、放射性標識されたトレーサー化合物のテトラジン部分をＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分と反応させる工程を含む。一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分とＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とのＩＥＤＤＡ共役に対する最高反応温度は、８０℃である。プレターゲットＰＥＴ画像法が付加物を撮像するために利用される実施形態では、ＩＥＤＤＡ共役の反応温度はより低く、当該温度は被験体の（身体）温度によって判定される。
【0160】
一実施形態では、付加物が＋２０℃を超える温度で加熱されると、付加物の互変異性の均質性が改善され、中間互変異性体の量が減少させられる。一実施形態では、付加物が、２０～８０℃、好ましくは４０～７０℃、より好ましくは５５～６５℃、最も好ましくは６０℃で加熱されると、付加物の互変異性の均質性は改善される。一実施形態では、上記温度での付加物の加熱は、少なくとも５分間、好ましくは少なくとも１０分間、または少なくとも１５分間行われる。一実施形態では、付加物の加熱によって、付加物の互変異性の均質性が増加し、付加物の中間互変異性体の量が不可逆的に減少する。一実施形態では、付加物の加熱は、加熱後および＋２０℃の周囲室温での保存中に、付加物のその中間互変異性体への逆変換を防止する。一実施形態では、加熱による上記処理は、トレーサー化合物のテトラジン部分とＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とのＩＥＤＤＡ共役と同時に利用される。一実施形態では、加熱による上記処理は、トレーサー化合物のテトラジン部分とＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分とのＩＥＤＤＡ共役の後に利用される。
【0161】
一実施形態では、トレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分とのＩＥＤＤＡ共役における溶媒は、水、水性媒体、水性緩衝液、または有機溶液と水溶液の混合物であり、ここで、有機溶媒のパーセンテージは、５０％未満、好ましくは１０％未満であり、有機溶媒は、たとえば、ＤＭＳＯ、エタノール、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、またはメタノールを含む。
【0162】
一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分は、酸性条件下でＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分と反応し、ＩＥＤＤＡ共役して、付加物を得る。一実施形態では、トレーサー化合物のテトラジン部分は、ｐＨが２～７、好ましくは２～４、最も好ましくは２～３である条件で、ＴＣＯ誘導体化標的部分のＴＣＯ部分と共役する。
【0163】
一実施形態では、18Ｆ放射性同位体によるトレーサー化合物の放射性標識反応温度は、８０～１００℃の間、好ましくは８０～９０℃の間、より好ましくは８５～９０℃の間である。一実施形態では、18Ｆ放射性同位体によるトレーサー化合物の放射性標識反応温度は８５℃である。
【0164】
一実施形態では、18Ｆ放射性同位体によるトレーサー化合物の放射性標識は、２．０～３．０の間のｐＨで実行される。
【0165】
一実施形態では、18Ｆ放射性同位体によるトレーサー化合物の放射性標識反応は、トレーサーを溶解するのに十分な％の有機溶媒を含む酸性のｐＨ制御された緩衝液中で実行され、有機溶媒は、たとえばＭｅＣＮまたはＤＭＦである。一実施形態では、少なくとも１つの18Ｆ放射性同位体によるトレーサー化合物の放射性標識反応は、ＭｅＣＮまたはＤＭＦなどの有機溶媒を含むピリダジンＨＣｌ緩衝液中で実行される。
【0166】
一実施形態では、18Ｆ放射性同位体による付加物の放射性標識は、８０～１００℃の間、好ましくは８０～９０℃の間、より好ましくは８５～９０℃の間の温度で実行される。一実施形態では、18Ｆ放射性同位体による付加物の放射性標識は、８５℃の温度で実行される。
【0167】
一実施形態では、18Ｆ放射性同位体による付加物の放射性標識は、２．０～３．０の間のｐＨで実行される。
【0168】
一実施形態では、18Ｆ放射性同位体による付加物の放射性標識反応は、トレーサーを溶解するのに十分な％の有機溶媒を含む酸性のｐＨ制御された緩衝液中で実行され、有機溶媒は、たとえばＭｅＣＮまたはＤＭＦである。一実施形態では、18Ｆ放射性同位体による付加物の放射性標識反応は、ＭｅＣＮまたはＤＭＦなどの有機溶媒を含むピリダジンＨＣｌ緩衝液中で実行される。
【0169】
一実施形態では、付加物は、トレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分とのＩＥＤＤＡ共役後に放射性標識される。したがって、18Ｆ放射性同位体によるフッ化物Ｆの置換は、ＴＣＯ誘導体化標的部分へのトレーサー化合物のＩＥＤＤＡ共役後に、最初に実行される。放射性標識前に付加物全体が合成されることによって、使用直前に付加物を放射性標識することが可能になり、それによって、放射性標識の減衰を最小限に抑えることができる。特定の実施形態では、ＩＥＤＤＡ共役中に副生成物が作成され、これらは、反応混合物から除去するのに手間がかかるか、または不可能である。したがって、ＩＥＤＤＡ共役後の付加物を放射性標識することは、結果として得られる付加物の化学的純度を確保するのに有益である。
【0170】
別の実施形態では、トレーサー化合物の双性イオン部分は、18Ｆ放射性同位体を含む。したがって、トレーサー化合物の双性イオンのホウ素（Ｂ）に結合した３つのフッ化物（Ｆ）のうちの少なくとも１つは、18Ｆ放射性同位体である。一実施形態では、18Ｆ放射性同位体によるフッ化物Ｆの置換は、ＴＣＯ誘導体化標的部分へのトレーサー化合物のＩＥＤＤＡ共役前に実行される。特定の標的部分は、18Ｆ放射性標識に必要とされる条件に対して感受性である。このような実施形態では、トレーサー化合物の18Ｆ放射性標識は、ＴＣＯ誘導体化標的部分とのＩＥＤＤＡ共役前に実行される。したがって、付加物が感受性および／または脆弱性の標的部分を含む実施形態では、トレーサー分子の18Ｆ放射性標識は、ＩＥＤＤＡ共役前に実行される。一実施形態では、そのような感受性および／または脆弱性の標的部分は、抗体または酵素である。これは、上記プロセス順序によって放射性標識プロセス条件からの脆弱性の標的部分の生存が可能になるため、結果として得られる付加物における標的部分の完全性を確保するのに有益である。
【0171】
一実施形態では、トレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分との間のＩＥＤＤＡ共役がインビボまたはインビトロで被験体内に生じるときに、ＩＥＤＤＡ共役前のトレーサー化合物の放射性標識が利用される。この場合、トレーサー化合物は、ＴＣＯ誘導体化標的部分がその標的部位に到達した後、最初に被験体内のＴＣＯ誘導体化標的部分と接触させられる。この方法論を利用する放射性標識されたトレーサー化合物の放射性イメージングは、プレターゲットＰＥＴ画像法である。
【0172】
一実施形態では、被験体の放射性イメージングによる被験体での標的実体の検出における、第１の態様のトレーサー化合物および／または付加物の使用が提供され、ここで、標的実体は、放射性標識されたトレーサー化合物および／または付加物で標的とされる。一実施形態では、被験体の放射性イメージングによって被験体において標的実体を検出する方法が提供され、ここで、標的実体は、放射性標識されたトレーサー化合物および／または付加物で標的とされる。
【0173】
一実施形態では、トレーサー化合物および／または付加物は、被験体への付加物の全身投与を介した放射性イメージングにおいてインビボで使用される。一実施形態では、トレーサー化合物および／または付加物は、放射性標識された標的実体の撮像を介した、放射性イメージング、より具体的には陽電子放射断層撮影による被験体における標的実体の検出に使用される。一実施形態では、標的実体の撮像は、インビトロおよびインビボで選択された標的実体に結合することができる放射性標識されたトレーサー化合物および／または付加物の撮像を指す。
【0174】
一実施形態では、トレーサー化合物および／または付加物は、放射性イメージングを受ける被験体へのトレーサー化合物および／または付加物の陽電子放射に対して撮像有効量で投与される。
【0175】
一実施形態では、トレーサー化合物および／または付加物は、組織および／または細胞のインビトロでの放射性イメージングに使用される。一実施形態では、トレーサー化合物および／または付加物は、インビトロおよびインビボでの標的実体の標識化に使用される。
【0176】
一実施形態では、付加物の標的部分は、インビトロで標的実体に結合することができる。一実施形態では、付加物の標的部分は、インビボで標的実体に結合することができる。一実施形態では、標的実体は、受容体、酵素、またはナノ粒子などの生体分子である。一実施形態では、付加物の標的部分が結合することができる標的実体は、癌、神経変性、炎症、または感染症などの具体的な生理学的疾病の指標である。
【0177】
一実施形態では、標的部分を含まないか、または標的実体への標的部分の結合が遮断されている付加物は、インビトロでの標的実体または生体分子への結合が低いかまたは有意ではない。一実施形態では、標的部分を含まないか、または標的実体への標的部分の結合が遮断されている付加物は、インビボでの標的実体または生体分子への結合が低いかまたは有意ではない。
【0178】
一実施形態では、トレーサー化合物および付加物は、インビトロおよびインビボでの血漿中で良好な安定性を有する。一実施形態では、トレーサー化合物および付加物の骨取り込み率は低く、これは、トレーサー化合物および付加物の放射性標識の代謝安定性が良好であることを示唆している。一実施形態では、トレーサー化合物および付加物は、非標的組織において比較的低い蓄積を示す。
【0179】
一実施形態では、放射性標識されたトレーサー化合物は、さらに処理することができ、トレーサー化合物を放射性標識した最大８時間後まで、好ましくは最大５時間後まで、最も好ましくは最大２時間後まで放射性イメージングに使用することができる。一実施形態では、トレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分とのＩＥＤＤＡ環化付加生成物である放射性標識された付加物は、さらに処理することができ、付加物を放射性標識した最大８時間後まで、好ましくは最大５時間後まで、最も好ましくは最大２時間後まで放射性イメージングに使用することができる。
【0180】
一実施形態では、放射性イメージングによる被験体における標的実体の検出のためのキットは、トレーサー化合物を含む少なくとも１つのコンパートメントと、少なくとも１つのＴＣＯ誘導体化標的部分を含む少なくとも１つのコンパートメントと、トレーサー化合物を放射性標識するための18Ｆを含む少なくとも１つのコンパートメントと、を備える。一実施形態では、キットはまた、トレーサー化合物および／または付加物のＩＥＤＤＡ共役および放射性標識のための水性溶媒および有機溶媒を含む。一実施形態では、キットは、付加物のＩＥＤＤＡ共役前にトレーサー化合物を放射性標識するために必要な材料を提供する。一実施形態では、キットは、トレーサー化合物とＴＣＯ誘導体化標的部分とのＩＥＤＤＡ共役後に付加物を放射性標識するために必要な材料を提供する。一実施形態では、キットは、プレターゲットＰＥＴ画像法で使用されるように構成されている。一実施形態では、キットは、被験体における標的実体の検出のためのトレーサー化合物および／または付加物を調製するために必要なすべてのコンポーネントを提供する。一実施形態では、キットは、被験体における標的実体の検出のためのトレーサー化合物および／または付加物を調製するために必要な材料のほとんどを提供する。
【実施例】
【0181】
さまざまな実施形態が提示されてきた。本明細書では、「備える（comprise）」、「含む（include）」、および「含有する（contain）」という単語は各々、意図された排他性を有さない自由な表現として使用されることが理解されるべきである。
【0182】
概略
すべての試薬を、市販業者から購入し、さらに精製することなく受け取って使用した。テトラジンを、コンジュ－プローブ（Conju-Probe）、ブロードファーマ（BroadPharm）、またはジェナ バイオサイエンス（Jena Biosciences）から購入し、ヨードボロンピナコールエステルを、エナミン（Enamine）から購入した。Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｃ１８－Ｌｉｇｈｔカートリッジを、ウォーターズ（Waters）から購入し、ＰＳ－ＨＣＯ3カートリッジ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ（商標）Ｃｈｒｏｍａｆｉｘ（商標））を、フィッシャー サイエンティフィック（Fisher Scientific）から購入した。担体無添加の18Ｆフッ化物を、ロテム インダストリーズ社（Rotem Industries Limited）（アラバ、イスラエル）から購入したＨｙｏｘ－１８ １８Ｏ濃縮水からＩＢＡ １０／５医療用サイクロトロンを用いて社内で産生した。合成した前駆体を、高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）および核磁気共鳴分光（ＮＭＲ）分析で分析した。放射性標識されたトレーサーを、放射性高速液体クロマトグラフィー（放射性ＨＰＬＣ）で分析した。切除した臓器を計量し、Ｗｉｚａｒｄガンマカウンターで測定した。Ｍｏｌｅｃｕｂｅｓ ＰＥＴ（β－ＣＵＢＥ）をＣＴ（γ－ＣＵＢＥ）と連結させて、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）を用いた６０分間の動的陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）スキャンを取得した。
すべての試薬を、市販業者から購入し、さらに精製することなく受け取って使用した。テトラジンを、コンジュ－プローブ（Conju-Probe）、ブロードファーマ（BroadPharm）、またはジェナ バイオサイエンス（Jena Biosciences）から購入し、ヨードボロンピナコールエステルを、エナミン（Enamine）から購入した。Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｃ１８－Ｌｉｇｈｔカートリッジを、ウォーターズ（Waters）から購入し、ＰＳ－ＨＣＯ3カートリッジ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ（商標）Ｃｈｒｏｍａｆｉｘ（商標））を、フィッシャー サイエンティフィック（Fisher Scientific）から購入した。担体無添加の18Ｆフッ化物を、ロテム インダストリーズ社（Rotem Industries Limited）（アラバ、イスラエル）から購入したＨｙｏｘ－１８ １８Ｏ濃縮水からＩＢＡ １０／５医療用サイクロトロンを用いて社内で産生した。合成した前駆体を、高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）および核磁気共鳴分光（ＮＭＲ）分析で分析した。放射性標識されたトレーサーを、放射性高速液体クロマトグラフィー（放射性ＨＰＬＣ）で分析した。切除した臓器を計量し、Ｗｉｚａｒｄガンマカウンターで測定した。Ｍｏｌｅｃｕｂｅｓ ＰＥＴ（β－ＣＵＢＥ）をＣＴ（γ－ＣＵＢＥ）と連結させて、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）を用いた６０分間の動的陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）スキャンを取得した。
【0183】
実施例１．ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（図１の化合物４）の合成
２－［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］－Ｎ－［２－（ジメチルアミノ）エチル］アセトアミド（２）。Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン（１３μＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で２ｍＬのＤＣＭに溶解し、その後、３ｍＬのＤＣＭ中にテトラジンＮＨＳ－エステル（１）（２５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を加え、これを透明な溶液に滴下した。混合物を室温で１．５時間撹拌した後、粗反応混合物を、蒸発乾固し、１ｍＬの超純水（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ）で再懸濁し、ＳＥＰ－Ｐａｋシリカで精製し（ＭｅＯＨ：ＤＣＭを１：９として溶出）、ピンク色の固体を得た。収率は６８±２６％（ｎ＝３）（１１．５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）であった。1H NMR (300 MHz, アセトニトリル-d3) δ 10.26 (s, 1H), 8.50 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.26 (s, 2H), 2.40 (s, 2H), 2.21 (s, 6H).
２－［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］－Ｎ－［２－（ジメチルアミノ）エチル］アセトアミド（２）。Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン（１３μＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で２ｍＬのＤＣＭに溶解し、その後、３ｍＬのＤＣＭ中にテトラジンＮＨＳ－エステル（１）（２５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を加え、これを透明な溶液に滴下した。混合物を室温で１．５時間撹拌した後、粗反応混合物を、蒸発乾固し、１ｍＬの超純水（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ）で再懸濁し、ＳＥＰ－Ｐａｋシリカで精製し（ＭｅＯＨ：ＤＣＭを１：９として溶出）、ピンク色の固体を得た。収率は６８±２６％（ｎ＝３）（１１．５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）であった。1H NMR (300 MHz, アセトニトリル-d3) δ 10.26 (s, 1H), 8.50 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.26 (s, 2H), 2.40 (s, 2H), 2.21 (s, 6H).
【0184】
２－（２－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）アセトアミド）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）メチル）エタン－１－アミニウム（３）。化合物（２）（１１．５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で１ｍＬの乾燥アセトニトリルに溶解し、その後、２－（ヨードメチル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１０．８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を、３００μＬの乾燥アセトニトリルに溶解した。反応混合物を、一晩撹拌し、蒸発乾固した。収率は、５８±３１％（ｎ＝３）（１１．５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）であった。1H NMR (300 MHz, アセトニトリル-d3) δ 10.28 (s, 1H), 8.52 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.68 (s, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.48 (s, 2H), 3.13 (s, 6H), 2.14 (s, 2H), 1.28 (s, 12H).
【0185】
｛［（２－｛２－［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］アセトアミド｝エチル）ジメチルアンモニオ］メチル｝トリフルオロボレート（４）。化合物（３）（０，０４３ｍｍｏｌ、１８ｍｇ）を１５ｍＬのＦａｌｃｏｎ（ＬＤＰＥ）チューブに１１５３μＬのＤＭＦとともに溶解し、その後、３８７μＬのミリＱ水、５７７μＬの４Ｍ ＨＣｌ、および５７７μＬの３Ｍ ＫＨＦ2を加えた。Ｆａｌｃｏｎチューブを閉じ、反応混合物を７０℃で３０分間加熱し、フッ素化反応をＨＰＬＣによって密にモニターして（ＰＤＡ検出器 ５３４ｎｍ、０．１％のＴＦＡ－ＡＣＮ：０．１％のＴＦＡミリＱ水（８０：２０）の均一濃度の２．５ｍＬ／分 ｔR（ＡｍＢＦ3－Ｔｚ）＝１０．３分）、テトラジンの分解を回避した。当該反応によって、化合物（３）から化合物（４）への定量的変換が得られた。反応混合物を、６ｍＬのミリＱ水で希釈し、各々５ｍＬのＡＣＮおよび１０ｍＬのミリＱ水でプレコンディショニングした２つの並列ＳＰＥ Ｃ１８ ＰＬＵＳカートリッジに加えた。Ｃ１８カートリッジを、２０ｍＬのミリＱ水で洗浄し、空気乾燥し、１ｍＬのＡＣＮで溶出して、１３．９ｍｇの４を得た。1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ 10.30 (s, 1H), 8.54 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.68 - 3.56 (m, 4H), 3.34 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.01 (s, 6H), 2.38 (s, 2H). 11B NMR (128 MHz, CD3CN) δ 2.19, 1.80, 1.43, 1.03. 19F NMR (376 MHz, CD3CN) δ -138.77, -138.89, -139.04, -139.17. 13C NMR (101 MHz, CD3CN) δ 171.47, 167.25, 158.98, 141.95, 131.82, 131.42, 129.05, 118.30, 65.43, 54.32, 43.42, 34.75, 1.32. ＨＲＭＳ 計算値、Ｃ15Ｈ21ＢＦ3Ｎ6Ｏ+ ［Ｍ＋Ｈ］+ ３６９．１８１６５ｍ／ｚ、実測値、Ｃ15Ｈ21ＢＦ3Ｎ6Ｏ+ ［Ｍ＋Ｈ］+ ３６９．１８１３４ｍ／ｚ（質量誤差－０．８５ｐｐｍ）。
【0186】
実施例２．ＡｍＢＦ3－ＰＥＧ4－Ｔｚ（図２の化合物８）の合成
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－１－（３－（ジメチルアミノ）プロパンアミド）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（６）。アルゴン雰囲気下での０．３ｍＬのＤＭＦ中の３－（ジメチルアミノ）プロパン酸（４．８ｍｇ、３１μｍｏｌ）に、０．１ｍＬのＤＭＦ中のＨＡＴＵ（８．５ｍｇ、２３μｍｏｌ）を加え、室温で１０分間撹拌した。Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－１－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（１０ｍｇ、２１μｍｏｌ）（５）およびＤＩＰＥＡ（３０μＬ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、ＬＣ－ＭＳによる分析は９５％を超える純度を示した。ＬＣ－ＭＳ（＋） 計算値、Ｃ２５Ｈ４０Ｎ７Ｏ５に対して５３４ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］+、実測値、ｍ／ｚ（％）＝５３４（１００）［Ｍ＋Ｈ］+、ｔR＝８．５分。
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－１－（３－（ジメチルアミノ）プロパンアミド）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（６）。アルゴン雰囲気下での０．３ｍＬのＤＭＦ中の３－（ジメチルアミノ）プロパン酸（４．８ｍｇ、３１μｍｏｌ）に、０．１ｍＬのＤＭＦ中のＨＡＴＵ（８．５ｍｇ、２３μｍｏｌ）を加え、室温で１０分間撹拌した。Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－１－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（１０ｍｇ、２１μｍｏｌ）（５）およびＤＩＰＥＡ（３０μＬ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、ＬＣ－ＭＳによる分析は９５％を超える純度を示した。ＬＣ－ＭＳ（＋） 計算値、Ｃ２５Ｈ４０Ｎ７Ｏ５に対して５３４ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］+、実測値、ｍ／ｚ（％）＝５３４（１００）［Ｍ＋Ｈ］+、ｔR＝８．５分。
【0187】
１－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３，１９－ジオキソ－Ｎ－（（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）メチル）－６，９，１２，１５－テトラオキサ－２，１８－ジアザヘニコサン－２１－アミニウム（７）。化合物（６）（２ｍｇ、３．５６μｍｏｌ）を、アルゴン下で２００μＬの乾燥アセトニトリルに溶解し、その後、２－（ヨードメチル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１．０１ｍｇ、３．７μｍｏｌ）を、１００μＬの乾燥アセトニトリルに溶解した。反応混合物を、２０分間撹拌し、蒸発乾固した。
【0188】
２４－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）－１，１，１－トリフルオロ－３，３－ジメチル－６，２２－ジオキソ－１０，１３，１６，１９－テトラオキサ－３，７，２３－トリアザ－１－ボラテトラコサン－３－イウム－１－ウイド（８）。さらなる精製なしで、化合物（７）（３．５６μｍｏｌ）を、１５ｍＬのＦａｌｃｏｎ（ＬＤＰＥ）チューブ中で１４．９４μＬのＤＭＦとともに溶解し、その後、４．９３ＬのミリＱ水、７．４７μＬの４Ｍ ＨＣｌおよび７．４７μＬの３Ｍ ＫＨＦ2を加えた。Ｆａｌｃｏｎチューブを閉じ、反応混合物を８５℃で１０分間加熱した。反応混合物を、６ｍＬのミリＱで希釈し、各々５ｍＬのＡＣＮおよび１０ｍＬのミリＱでプレコンディショニングした２つの並列ＳＰＥ Ｃ１８ ＰＬＵＳカートリッジに加えた。Ｃ１８カートリッジを、２０ｍＬのミリＱで洗浄し、空気乾燥し、１ｍＬのＡＣＮで溶出して、１．２ｍｇ（１．９５μｍｏｌ）の化合物（８）を得た。溶媒を蒸発させ、ＬＣ－ＭＳによる分析は９５％を超える純度を示した。ＬＣ－ＭＳ（＋） 計算値、Ｃ26Ｈ41ＢＦ2Ｎ7Ｏ6に対して５９６ｍ／ｚ［Ｍ－Ｆ］+、実測値、ｍ／ｚ（％）＝５９６（１００）［Ｍ－Ｆ］+、ｔR＝１１．５分。1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 10.43 (s, 1H), 8.54 (s, 2H), 7.63 (s, 2H), 5.35 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.60 (s, 16H), 3.35 (s, 2H), 3.10 (s, 6H), 2.51 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.21 (s, 2H). 19F NMR (376 MHz, アセトニトリル-d3) δ -138.98, -139.12, -139.25.
【0189】
実施例３．ＡｍＢＦ3－ＰＥＧ9－Ｔｚ（図３の化合物１２）の合成。
Ｎ1－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－Ｎ31－（２－（ジメチルアミノ）エチル）－４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８－ノナオキサヘントリアコンタンジアミド（１０）。ジメチルエチレンジアミン（０．６７７ｍｇ、７．７μｍｏｌ）を、アルゴン下で４００μＬのＤＣＭに溶解し、その後、６００μＬのＤＣＭ中のテトラジン－ＰＥＧ9－ＮＨＳ－エステル（９）（５ｍｇ、６．４μｍｏｌ）を加えて、これを透明な溶液に滴下した。反応物を、ＴＬＣ（ＲＰ－ＴＬＣ、ＡＣＮ：ミリＱ水（８０：２０）、Ｒf＝テトラジン０．８３、Ｒf＝アミン０．００、Ｒf＝テトラジンアミン０．２８）でモニターした。混合物を室温で２０分間撹拌した後、粗反応混合物を、３×Ｃ１８カートリッジ上に積載し、空気乾燥し、３ｍＬのＡＣＮで４つの画分に溶出した。純粋な画分を、組み合わせ、蒸発乾固して、ピンク色の固体を得た。収率≧９８％（１．３ｍｇ、０．００１６ｍｍｏｌ）。1H NMR (400 MHz, アセトニトリル-d3) δ 10.28 (s, 1H), 8.53 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.36 (s, 1H), 4.50 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.67 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.59 (d, J = 0.9 Hz, 30H), 3.47 (q, J = 5.7 Hz, 2H), 3.29 (s, 1H), 3.04 (s, 2H), 2.73 (s, 6H), 2.48 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 2.39 (t, J = 6.0 Hz, 3H).
Ｎ1－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－Ｎ31－（２－（ジメチルアミノ）エチル）－４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８－ノナオキサヘントリアコンタンジアミド（１０）。ジメチルエチレンジアミン（０．６７７ｍｇ、７．７μｍｏｌ）を、アルゴン下で４００μＬのＤＣＭに溶解し、その後、６００μＬのＤＣＭ中のテトラジン－ＰＥＧ9－ＮＨＳ－エステル（９）（５ｍｇ、６．４μｍｏｌ）を加えて、これを透明な溶液に滴下した。反応物を、ＴＬＣ（ＲＰ－ＴＬＣ、ＡＣＮ：ミリＱ水（８０：２０）、Ｒf＝テトラジン０．８３、Ｒf＝アミン０．００、Ｒf＝テトラジンアミン０．２８）でモニターした。混合物を室温で２０分間撹拌した後、粗反応混合物を、３×Ｃ１８カートリッジ上に積載し、空気乾燥し、３ｍＬのＡＣＮで４つの画分に溶出した。純粋な画分を、組み合わせ、蒸発乾固して、ピンク色の固体を得た。収率≧９８％（１．３ｍｇ、０．００１６ｍｍｏｌ）。1H NMR (400 MHz, アセトニトリル-d3) δ 10.28 (s, 1H), 8.53 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.36 (s, 1H), 4.50 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.67 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.59 (d, J = 0.9 Hz, 30H), 3.47 (q, J = 5.7 Hz, 2H), 3.29 (s, 1H), 3.04 (s, 2H), 2.73 (s, 6H), 2.48 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 2.39 (t, J = 6.0 Hz, 3H).
【0190】
１－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３，３３－ジオキソ－Ｎ－（（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）メチル）－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－ノナオキサ－２，３４－ジアザヘキサトリアコンタン－３６－アミニウム（１１）。２－（ヨードメチル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（０．００１７ｍｍｏｌ、０．４６ｍｇ）を、乾燥アセトニトリルに溶解し、一晩アルゴン雰囲気下でＡＣＮ中の化合物（１０）（０．００１７ｍｍｏｌ、１．３ｍｇ）の撹拌溶液に滴下した。反応物をＨＰＬＣ（ＰＤＡ検出器、５３４ｎｍ）でモニターした。反応混合物を、蒸発乾固し、そのまま続くフッ素化反応に使用した。
【0191】
３９－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）－１，１，１－トリフルオロ－３，３－ジメチル－７，３７－ジオキソ－１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４－ノナオキサ－３，６，３８－トリアザ－１－ボラノナトリアコンタン－３－イウム－１－ウイド（１２）。化合物（１１）（０．００１７ｍｍｏｌ、１．７４ｍｇ）を１５ｍＬのＦａｌｃｏｎ（ＬＤＰＥ）チューブに４５．６μＬのＤＭＦとともに溶解し、その後、１５．５μＬのミリＱ水、２２．８μＬの４Ｍ ＨＣｌ、および２２．８μＬの３Ｍ ＫＨＦ2を加えた。Ｆａｌｃｏｎチューブを閉じ、反応混合物を７０℃で３０分間加熱し、フッ素化反応をＨＰＬＣによって密にモニターして（ＰＤＡ検出器 ５３４ｎｍ）、テトラジンの分解を回避した。当該反応によって、化合物（１１）から化合物（１２）への完全な変換が得られた。反応混合物を、１ｍＬのミリＱ水で希釈し、ＳＰＥ Ｃ１８ Ｌｉｇｈｔカートリッジに加えた（プレコンディショニング：５ｍＬのＡＣＮおよび１０ｍＬのミリＱ水）。Ｃ１８カートリッジを、１０ｍＬのミリＱで洗浄し、空気乾燥し、２００μＬのＡＣＮで溶出して、１．９ｍｇの化合物（１２）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ 10.29 (s, 1H), 8.56-8.54 (d, 2H), 7.60-7.58 (d, 2H), 7.22 (s, ブロード, 1H), 6.88 (s, ブロード, 1H), 4.53-4.51 (d, 2H), 3.75 (t, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.62-3.56 (m, 32H), 3.33 (t, 2H), 3.03 (s, 6H), 2.49 (t, 2H), 2.38 (t, 2H). 19F NMR (376 MHz, CD3CN) δ -138.80, -138.97, -139.08. 13C-NMR (101 MHz, CD3CN). ＨＲＭＳ 計算値、Ｃ36Ｈ62ＢＦ3Ｎ7Ｏ11
+ ［Ｍ＋Ｈ］+ ８３６．４５４７０ｍ／ｚ、実測値、Ｃ36Ｈ62ＢＦ3Ｎ7Ｏ11
+ ［Ｍ＋Ｈ］+ ８３６．４５５３８ｍ／ｚ（質量誤差０．８２ｐｐｍ）。
【0192】
実施例４．トランス－シクロオクテンアルデヒド（ＴＣＯ－ＣＨＯ）（図４の化合物１５）の合成。
図４に提示したような１５．６ｍｇ（９１ｎｍｏｌ、１．５当量）の化合物（１３）を、アルゴン下で５００μＬのＴＨＦおよび１５０μＬのＤＭＳＯに溶解し、その後、１００μＬのＴＨＦ中の９．７ｍｇのピリジン（１２２ｎｍｏｌ、２．０当量）を加え、溶液を１０分間混合した。１６．３ｍｇ（６１ｎｍｏｌ、１．０当量）の化合物（１４）を滴下し、溶液を室温で一晩撹拌した。反応物を、移動相としての酢酸エチル：シクロヘキサン（１：１）を用いた順相ＴＬＣでモニターし、ＫＭｎＯ４染色溶液で染色した（ｔR（ピリジン）＝０．００、ｔR（１）＝０．００、ｔR（２）＝０．９０、ＲT（３）＝０．８０）。ピリジンおよび未反応化合物（１４）を除去するために、粗混合物を、（５０ｍＬの超純水でプレコンディショニングした）Ｓｅｐ－Ｐａｋ ＳＰＥ－Ｓｉｌカートリッジで精製した。混合物を、ＳＰＥ－Ｓｉｌカートリッジに押し込み（画分１）、１ｍＬのＤＣＭで溶出した（画分２）。回収した画分を、セミ分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ａｌｌｔｉｍａ Ｃ１８カラム、８０％のＡＣＮ＋０．１％のＴＦＡの均一濃度３ｍＬ／分）によってさらに精製し、ここで、化合物（１５）をｔR＝６分で溶出した。ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝２８８．３６（２７）［Ｍ＋Ｈ］+、３１０．３０（１９）［Ｍ＋Ｎａ］+ ｔR＝９．３分。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm, 10.00, 7.86, 7.84, 7.45, 7.43, 5.53, 4.99, 4.41, 2.35, 1.97, 1.75, 1.57, 1.27, 1.26. 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ ppm, 191.81, 145.79, 135.64, 134.89, 133.01, 130.13, 127.77, 81.14, 44.70, 41.14, 38.67, 34.27, 32.50, 30.96.
図４に提示したような１５．６ｍｇ（９１ｎｍｏｌ、１．５当量）の化合物（１３）を、アルゴン下で５００μＬのＴＨＦおよび１５０μＬのＤＭＳＯに溶解し、その後、１００μＬのＴＨＦ中の９．７ｍｇのピリジン（１２２ｎｍｏｌ、２．０当量）を加え、溶液を１０分間混合した。１６．３ｍｇ（６１ｎｍｏｌ、１．０当量）の化合物（１４）を滴下し、溶液を室温で一晩撹拌した。反応物を、移動相としての酢酸エチル：シクロヘキサン（１：１）を用いた順相ＴＬＣでモニターし、ＫＭｎＯ４染色溶液で染色した（ｔR（ピリジン）＝０．００、ｔR（１）＝０．００、ｔR（２）＝０．９０、ＲT（３）＝０．８０）。ピリジンおよび未反応化合物（１４）を除去するために、粗混合物を、（５０ｍＬの超純水でプレコンディショニングした）Ｓｅｐ－Ｐａｋ ＳＰＥ－Ｓｉｌカートリッジで精製した。混合物を、ＳＰＥ－Ｓｉｌカートリッジに押し込み（画分１）、１ｍＬのＤＣＭで溶出した（画分２）。回収した画分を、セミ分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ａｌｌｔｉｍａ Ｃ１８カラム、８０％のＡＣＮ＋０．１％のＴＦＡの均一濃度３ｍＬ／分）によってさらに精製し、ここで、化合物（１５）をｔR＝６分で溶出した。ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝２８８．３６（２７）［Ｍ＋Ｈ］+、３１０．３０（１９）［Ｍ＋Ｎａ］+ ｔR＝９．３分。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm, 10.00, 7.86, 7.84, 7.45, 7.43, 5.53, 4.99, 4.41, 2.35, 1.97, 1.75, 1.57, 1.27, 1.26. 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ ppm, 191.81, 145.79, 135.64, 134.89, 133.01, 130.13, 127.77, 81.14, 44.70, 41.14, 38.67, 34.27, 32.50, 30.96.
【0193】
実施例５．アミノオキシ官能化ペプチド（α－ＭＳＨ－ＯＮＨ2、エキセンディン－４－ＯＮＨ2、Ｔｙｒ3－オクトレオチド－ＯＮＨ2）をトランスシクロオクテンで官能化するための一般的な手順。
アミノオキシ官能化カスタム合成ペプチド（１当量）を、６００μＬの０．３Ｍ酢酸アニリニウム緩衝液（ｐＨ４．６）中に溶解した。市販のトランス－シクロオクテン－ＰＥＧ3－アルデヒド（図４、化合物１６）（１．５当量）を、１７μＬのクロロホルムに溶解し、撹拌したペプチド溶液に滴下した。反応物をＨＰＬＣ（ＰＤＡ検出器、２８０ｎｍ）でモニターした。官能化ペプチドを、ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ（Ｂ）－Ｈ2Ｏ（Ａ）＋０．１％のＴＦＡ；２０－３０－２０％Ｂ、３０分）で精製した。ｔR＝α－ＭＳＨ－ＴＣＯ；２３分、ｔR ＴＯＣ－ＴＣＯ；２５分、ｔR＝エキセンディン－４－ＴＣＯ；１５．５分。ＨＰＬＣから回収した画分中のＭｅＣＮを加圧空気で蒸発させ、主に水を含有する画分を凍結した（－８０℃）。凍結した画分を、凍結乾燥して、その後そのまま使用した。必要に応じて、画分を、そのまま使用し、ＨＰＬＣから回収した直後に選択したテトラジンと混合した。このような場合、ＩＥＤＤＡ環化付加中に９５％以上の水が含まれるように溶液を希釈した。
アミノオキシ官能化カスタム合成ペプチド（１当量）を、６００μＬの０．３Ｍ酢酸アニリニウム緩衝液（ｐＨ４．６）中に溶解した。市販のトランス－シクロオクテン－ＰＥＧ3－アルデヒド（図４、化合物１６）（１．５当量）を、１７μＬのクロロホルムに溶解し、撹拌したペプチド溶液に滴下した。反応物をＨＰＬＣ（ＰＤＡ検出器、２８０ｎｍ）でモニターした。官能化ペプチドを、ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ（Ｂ）－Ｈ2Ｏ（Ａ）＋０．１％のＴＦＡ；２０－３０－２０％Ｂ、３０分）で精製した。ｔR＝α－ＭＳＨ－ＴＣＯ；２３分、ｔR ＴＯＣ－ＴＣＯ；２５分、ｔR＝エキセンディン－４－ＴＣＯ；１５．５分。ＨＰＬＣから回収した画分中のＭｅＣＮを加圧空気で蒸発させ、主に水を含有する画分を凍結した（－８０℃）。凍結した画分を、凍結乾燥して、その後そのまま使用した。必要に応じて、画分を、そのまま使用し、ＨＰＬＣから回収した直後に選択したテトラジンと混合した。このような場合、ＩＥＤＤＡ環化付加中に９５％以上の水が含まれるように溶液を希釈した。
【0194】
実施例６．ＰＳＭＡ－トランス－シクロオクテンの合成（化合物１８、図５）。
アルゴン雰囲気下での乾燥ＤＭＦ（３００μＬ）中のＴＣＯ－ＮＨＳ（４．５ｍｇ、１７μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３．２ｍｇ、２５μｍｏｌ）に、乾燥ＤＭＦ（２５０μＬ）中のＰＳＭＡ－アミン（１７）（５ｍｇ、１５．７μｍｏｌ）を滴下し、一晩撹拌した。ＰＳＭＡ－ＴＣＯ（１８）をＨＰＬＣによって精製して、５．３ｍｇ（７１％）を得た。ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝４７２．５（１００）［Ｍ＋Ｈ］+、３２０．３（９６）［Ｍ－ＴＣＯ－ギ酸塩］+ ｔR＝１０．３分。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ(ppm) = 5.59 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.31 (m, 1H), 4.25 (s, 1H), 3.31 (s, 2H), 3.06 (m, 2H), 2.41 (m, 2H), 2.33 (m, 2H), 2.33 (m, 2H), 2.15 (m, 2H), 1.94 (m, 6H), 1.68 (m, 4H), 1.40 (m, 4H), 1.29 (m, 2H), 13C NMR (101 MHz, CD3OD) δ (ppm) = 136.10, 133.76, 81.59, 54.07, 53.59, 42.23, 39.67, 35.18, 33.49, 33.25, 32.11, 31.15, 30.55, 29.03, 23.86.
アルゴン雰囲気下での乾燥ＤＭＦ（３００μＬ）中のＴＣＯ－ＮＨＳ（４．５ｍｇ、１７μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３．２ｍｇ、２５μｍｏｌ）に、乾燥ＤＭＦ（２５０μＬ）中のＰＳＭＡ－アミン（１７）（５ｍｇ、１５．７μｍｏｌ）を滴下し、一晩撹拌した。ＰＳＭＡ－ＴＣＯ（１８）をＨＰＬＣによって精製して、５．３ｍｇ（７１％）を得た。ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝４７２．５（１００）［Ｍ＋Ｈ］+、３２０．３（９６）［Ｍ－ＴＣＯ－ギ酸塩］+ ｔR＝１０．３分。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ(ppm) = 5.59 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.31 (m, 1H), 4.25 (s, 1H), 3.31 (s, 2H), 3.06 (m, 2H), 2.41 (m, 2H), 2.33 (m, 2H), 2.33 (m, 2H), 2.15 (m, 2H), 1.94 (m, 6H), 1.68 (m, 4H), 1.40 (m, 4H), 1.29 (m, 2H), 13C NMR (101 MHz, CD3OD) δ (ppm) = 136.10, 133.76, 81.59, 54.07, 53.59, 42.23, 39.67, 35.18, 33.49, 33.25, 32.11, 31.15, 30.55, 29.03, 23.86.
【0195】
実施例７．ＰＳＭＡ－トラネキサム酸－トランス－シクロオクテン（化合物２４、図６）の合成
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（（６－（４－（（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）グルタミン酸塩（２１）。乾燥ＤＭＦ（４００μｌ）中のＨＢＴＵ（７６．６ｍｇ、２０１．５μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２６．４ｍｇ、２０６μｍｏｌ）に、乾燥ＤＭＦ（６００μＬ）中のＦｍｏｃ－トラネキサム酸（１９）（７８ｍｇ、２０６μｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下で１０分間撹拌した。ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（（６－アミノ－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）グルタミン酸塩（２０）（２５ｍｇ、５１．５μｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（４００μＬ）に加え、アルゴン下で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝８５０．１（４）［Ｍ＋Ｈ］+、８７２．１（３）［Ｍ＋Ｎａ］+ ｔR＝１８．５分。
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（（６－（４－（（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）グルタミン酸塩（２１）。乾燥ＤＭＦ（４００μｌ）中のＨＢＴＵ（７６．６ｍｇ、２０１．５μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２６．４ｍｇ、２０６μｍｏｌ）に、乾燥ＤＭＦ（６００μＬ）中のＦｍｏｃ－トラネキサム酸（１９）（７８ｍｇ、２０６μｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下で１０分間撹拌した。ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（（６－アミノ－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）グルタミン酸塩（２０）（２５ｍｇ、５１．５μｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（４００μＬ）に加え、アルゴン下で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝８５０．１（４）［Ｍ＋Ｈ］+、８７２．１（３）［Ｍ＋Ｎａ］+ ｔR＝１８．５分。
【0196】
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（（６－（４－（アミノメチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）グルタミン酸塩（２２）。さらなる精製なしで、１．４ｍＬのピペリジンを、（２１）に加え、室温で１０分を超えて撹拌した。溶媒を蒸発させ、生成物を５ｍＬの酢酸エチルおよび３×２ｍＬのブライン溶液で抽出した。ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝６２８．０（１００）［Ｍ＋Ｈ］+ ｔR＝１１．３分。
【0197】
（（５－（４－（アミノメチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド）－１－カルボキシペンチル）カルバモイル）グルタミン酸（２３）。さらなる精製なしで、（２２）を、３ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2／ＴＦＡ（１：１）に溶解し、室温で９０分間撹拌した。生成物をＨＰＬＣ（ｔR＝７．２分）によって精製して、１０．２ｍｇ（４３％）を得た。ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝４５９（１００）［Ｍ＋Ｈ］+ ｔR＝２．６分。
【0198】
（Ｅ）－（（１－カルボキシ－５－（４－（（（（シクロオクト－４－エン－１－イルオキシ）カルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド）ペンチル）カルバモイル）グルタミン酸（２４）。乾燥ＤＭＦ（６００μＬ）中のＴＣＯ－ＮＨＳ（１３ｍｇ、４９μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（８．９ｍｇ、７０μｍｏｌ）（２３）に、２５０μＬの乾燥ＤＭＦ中で滴下し、アルゴン雰囲気下で一晩撹拌した。生成物をＨＰＬＣ（ｔR＝４．５分）によって精製して、５．６３ｍｇ（４１％）を得た。ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝６１１（１００）［Ｍ＋Ｈ］+ ｔR＝１１．４分。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ (ppm) = 5.61 (m, 1H), 5.52 (m, 1H), 4.32 (m, 2H), 4.26 (m, 1H), 3.17 (m, 2H), 3.01 (s, 1H), 2.92 (m, 2H), 2.88 (s, 1H), 2.43 (m, 2H), 2.34 (m, 2H), 2.15 (m, 2H), 1.98 (m, 4H), 1.80 (m, 5H), 1.70 (m, 4H), 1.51 (m, 2H), 1.44 (m, 5H), 0.98 (m, 2H), 13C NMR (101 MHz, CD3OD) δ (ppm) = 136.10, 133.77, 53.94, 53.50, 46.47, 42.24, 39.92, 39.65, 39.09, 35.18, 33.50, 33.19, 32.11, 30.95, 30.24, 29.97, 28.93, 26.45, 23.89.
【0199】
実施例８．手順ａ）ＥＤＤＡ共役前の［18Ｆ］４（ＡｍＢＦ3－Ｔｚ）、［18Ｆ］８および［18Ｆ］１２の放射性標識
［18Ｆ］フッ化物を、１５０μＬの０．９％ＮａＣｌを含む18Ｆ－ＮａＦとして反応バイアルに溶出し、アルゴンガス流下で１０分間１２５℃で濃縮して、１０～２５μＬの反応容量に達した。５μＬのアセトニトリル中のテトラジン（１００ｎｍｏｌ）を、１０μＬのピリダジンＨＣｌ緩衝液（ｐＨ２．０）を含むポリプロピレンチューブに加えた。反応混合物を、８３℃でさらに１０分間加熱し、６００μＬのミリＱ：ＥｔＯＨ（５０：５０）でクエンチした。代替的に、［18Ｆ］フッ化物を、ＰＳ－ＨＣＯ3カートリッジに捕捉し、テトラジンを含むチューブに溶出した（１００μＬ、ピリダジンＨＣｌ緩衝液、ｐＨ２．０）。混合物を、～１０－２０μＬに達するまでアルゴン流下において８５℃で濃縮し（ｔ＝１５分）、超純水（６００μＬ）でクエンチし、Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｃ１８カートリッジで精製して、トレーサーを得た。化合物４（ＡｍＢＦ3－Ｔｚ）を18Ｆ放射性同位体で放射性標識し、結果として［18Ｆ］４をもたらす手順が図７に提示される。手順ａ）の例が図８ａに示される。
［18Ｆ］フッ化物を、１５０μＬの０．９％ＮａＣｌを含む18Ｆ－ＮａＦとして反応バイアルに溶出し、アルゴンガス流下で１０分間１２５℃で濃縮して、１０～２５μＬの反応容量に達した。５μＬのアセトニトリル中のテトラジン（１００ｎｍｏｌ）を、１０μＬのピリダジンＨＣｌ緩衝液（ｐＨ２．０）を含むポリプロピレンチューブに加えた。反応混合物を、８３℃でさらに１０分間加熱し、６００μＬのミリＱ：ＥｔＯＨ（５０：５０）でクエンチした。代替的に、［18Ｆ］フッ化物を、ＰＳ－ＨＣＯ3カートリッジに捕捉し、テトラジンを含むチューブに溶出した（１００μＬ、ピリダジンＨＣｌ緩衝液、ｐＨ２．０）。混合物を、～１０－２０μＬに達するまでアルゴン流下において８５℃で濃縮し（ｔ＝１５分）、超純水（６００μＬ）でクエンチし、Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｃ１８カートリッジで精製して、トレーサーを得た。化合物４（ＡｍＢＦ3－Ｔｚ）を18Ｆ放射性同位体で放射性標識し、結果として［18Ｆ］４をもたらす手順が図７に提示される。手順ａ）の例が図８ａに示される。
【0200】
実施例９．手順ｂ）ＡｍＢＦ3－Ｔｚの放射性標識前のｐｒｅ－ＩＥＤＤＡ共役
２０μＬの乾燥アセトニトリル中のテトラジン－ＡｍＢＦ４、８または１２（１．８５μｍｏｌ）に、ミリＱ水（８００μＬ）中の等モル量のＴＣＯ官能化ペプチド１８または２４を加えた。反応物を、６０℃まで２０分間加熱した。生成物を、ＨＰＬＣにより精製して、（２８）（４９％）（ｔR＝７．９分）ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝８１１（１００）［Ｍ＋Ｈ］+ ｔR＝８．８分を得たか、または（２９）（４８％）（ｔR＝９．５分）ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝９５０（１００）［Ｍ＋Ｈ］+ ｔR＝９．５分を得た。手順ｂ）による合成経路の例が図８ｂに示される。
２０μＬの乾燥アセトニトリル中のテトラジン－ＡｍＢＦ４、８または１２（１．８５μｍｏｌ）に、ミリＱ水（８００μＬ）中の等モル量のＴＣＯ官能化ペプチド１８または２４を加えた。反応物を、６０℃まで２０分間加熱した。生成物を、ＨＰＬＣにより精製して、（２８）（４９％）（ｔR＝７．９分）ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝８１１（１００）［Ｍ＋Ｈ］+ ｔR＝８．８分を得たか、または（２９）（４８％）（ｔR＝９．５分）ＬＣ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ（％）＝９５０（１００）［Ｍ＋Ｈ］+ ｔR＝９．５分を得た。手順ｂ）による合成経路の例が図８ｂに示される。
【0201】
実施例１０．ＴＣＯ官能化ペプチドＴｙｒ3－オクトレオチド（２５）、α－ＭＳＨ、エキセンディン－４、ＰＳＭＡ（１８）およびＰＳＭＡ－トラネキサム酸（２４）と、［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）またはそのＰＥＧ化された誘導体［18Ｆ］８または［18Ｆ］１２とのＩＥＤＤＡ共役による、生成物［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５）、［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－α－ＭＳＨ（［18Ｆ］２６）、［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－エキセンディン－４（［18Ｆ］２７）および［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－ＰＥＧ9－エキセンディン－４（［18Ｆ］３０）、［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２８）および［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－ＰＳＭＡ－トラネキサム酸（［18Ｆ］２９）の産出。
トランス－シクロオクテンによるペプチド（α－ＭＳＨ－ＯＮＨ2、エキセンディン－４－ＯＮＨ2、Ｔｙｒ3－オクトレオチド－ＯＮＨ2）の官能化を、実施例５に記載されるように行った。トランスシクロオクテン官能化ペプチド（ミリＱ水中２０～５０μＬ、５０ｎｍｏｌ）を、放射性標識したテトラジンの反応混合物（２０μＬ）に加え、６０℃で１５分間加熱した。反応混合物を、ミリＱ水で希釈し、超純ミリＱ水（４５ｍＬ）で洗浄することによって２つのＣ１８カートリッジで精製し、１５０μＬのエタノールおよび２００μＬの０．０１Ｍ ＰＢＳで溶出した。精製したペプチド溶液を、静脈内投与のために５％未満のエタノールを含むように０．０１Ｍ ＰＢＳで希釈した。粗混合物を、３０分間、ＨＰＬＣ：ＭｅＣＮ（Ｂ）－Ｈ2Ｏ（Ａ）＋０．１％のＴＦＡ ２０－３０－２０％Ｂを用いて分析した。ＨＰＬＣでの保持時間：化合物［18Ｆ］２６（［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－α－ＭＳＨ）に対するｔR；１４．７分、化合物［18Ｆ］２５（［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド）に対するｔR；１７．５分、化合物［18Ｆ］２７（［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－エキセンディン－４）に対するｔR；１５．０～１６．０分、化合物［18Ｆ］３０（［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－ＰＥＧ9－エキセンディン－４）に対するｔR、１５．８～１６．５分。ＨＲＭＳ（Ｅ／Ｚ）－［18Ｆ］２５による実測値は、［Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ］2+ １０４８．４９２５５（－０．０８５５ｐｐｍ）であった。これらの結果は、トレーサー化合物を使用することによって、穏やかな条件下でさまざまな異なるペプチドを迅速に放射性標識することができることを実証している。
トランス－シクロオクテンによるペプチド（α－ＭＳＨ－ＯＮＨ2、エキセンディン－４－ＯＮＨ2、Ｔｙｒ3－オクトレオチド－ＯＮＨ2）の官能化を、実施例５に記載されるように行った。トランスシクロオクテン官能化ペプチド（ミリＱ水中２０～５０μＬ、５０ｎｍｏｌ）を、放射性標識したテトラジンの反応混合物（２０μＬ）に加え、６０℃で１５分間加熱した。反応混合物を、ミリＱ水で希釈し、超純ミリＱ水（４５ｍＬ）で洗浄することによって２つのＣ１８カートリッジで精製し、１５０μＬのエタノールおよび２００μＬの０．０１Ｍ ＰＢＳで溶出した。精製したペプチド溶液を、静脈内投与のために５％未満のエタノールを含むように０．０１Ｍ ＰＢＳで希釈した。粗混合物を、３０分間、ＨＰＬＣ：ＭｅＣＮ（Ｂ）－Ｈ2Ｏ（Ａ）＋０．１％のＴＦＡ ２０－３０－２０％Ｂを用いて分析した。ＨＰＬＣでの保持時間：化合物［18Ｆ］２６（［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－α－ＭＳＨ）に対するｔR；１４．７分、化合物［18Ｆ］２５（［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド）に対するｔR；１７．５分、化合物［18Ｆ］２７（［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－エキセンディン－４）に対するｔR；１５．０～１６．０分、化合物［18Ｆ］３０（［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－ＰＥＧ9－エキセンディン－４）に対するｔR、１５．８～１６．５分。ＨＲＭＳ（Ｅ／Ｚ）－［18Ｆ］２５による実測値は、［Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ］2+ １０４８．４９２５５（－０．０８５５ｐｐｍ）であった。これらの結果は、トレーサー化合物を使用することによって、穏やかな条件下でさまざまな異なるペプチドを迅速に放射性標識することができることを実証している。
【0202】
【化3】
【0203】
実施例１１．ｐｒｅ－ＩＥＤＤＡ生成物の放射性標識
フッ素－１８（１．８ＧＢｑ）を、ＰＳ－ＨＣＯ3カートリッジから１００μＬの０．９％ＮａＣｌ溶液またはピリダジンＨＣｌ緩衝液（ｐＨ２、１００μＬ）で溶出し、１００℃（０．９％ＮａＣｌ）またはピリダジンＨＣｌ緩衝液を使用したときには８０～８５℃で１０～１５μＬの容積になるまで蒸発させた。１０μＬのピリダジン緩衝液（ｐＨ＝２）中の２８または２９（１００ｎｍｏｌ）を外部ラインを介して加え、結果として得た溶液を８５℃で１０分間加熱した。１０ｍＬのミリＱ水で希釈した後、活性物質（activity）を、プレコンディショニングしたＣ１８カートリッジに積載し、追加の４０ｍＬのミリＱ水で洗浄した後、４００μＬの５０％ＥｔＯＨ／ＰＢＳで溶出して、（９．２±３．８ＧＢｑ／μｍｏｌ）の比活性を有する［18Ｆ］２８（ＲＣＹ：５．２±１％）および（１６．３±４．３ＧＢｑ／μｍｏｌ）の比活性を有する［18Ｆ］２９（ＲＣＹ：１１．８±３．１％）を得た。
フッ素－１８（１．８ＧＢｑ）を、ＰＳ－ＨＣＯ3カートリッジから１００μＬの０．９％ＮａＣｌ溶液またはピリダジンＨＣｌ緩衝液（ｐＨ２、１００μＬ）で溶出し、１００℃（０．９％ＮａＣｌ）またはピリダジンＨＣｌ緩衝液を使用したときには８０～８５℃で１０～１５μＬの容積になるまで蒸発させた。１０μＬのピリダジン緩衝液（ｐＨ＝２）中の２８または２９（１００ｎｍｏｌ）を外部ラインを介して加え、結果として得た溶液を８５℃で１０分間加熱した。１０ｍＬのミリＱ水で希釈した後、活性物質（activity）を、プレコンディショニングしたＣ１８カートリッジに積載し、追加の４０ｍＬのミリＱ水で洗浄した後、４００μＬの５０％ＥｔＯＨ／ＰＢＳで溶出して、（９．２±３．８ＧＢｑ／μｍｏｌ）の比活性を有する［18Ｆ］２８（ＲＣＹ：５．２±１％）および（１６．３±４．３ＧＢｑ／μｍｏｌ）の比活性を有する［18Ｆ］２９（ＲＣＹ：１１．８±３．１％）を得た。
【0204】
実施例１２．細胞および細胞培養
ＳＳＴＲを発現するラット膵臓腫瘍細胞株ＡＲ４２Ｊを、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（マナッサス、ＶＡ）から入手した。Ｃ４－２細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－３３１４（商標））を、１８％のＦ１２培地（シグマ）、１０％のＦＢＳ（ギブコ）、および１％のＴ培地を補足したＤＭＥＭ培地（ギブコ）中に培養した。両方の細胞株を、５％のＣＯ2を含む加湿インキュベータ内において３７℃で増殖させた。８０％～９０％のコンフルエンスまで増殖させた細胞を、インビトロまたはインビボでの実験に使用した。マウス皮膚黒色腫Ｂ１６／Ｆ１０細胞を、加湿インキュベータ内において３７℃でＧｌｕｔａＭａｘ（１×最終濃度、１０％のＦＢＳおよびＰｅｎ－Ｓｔｒｅｐ）を補足したＣＯ2独立培地（ライフ テクノロジーズ ギブコ、カタログ番号１８０４５０５４）で培養した。Ｂ１６／Ｆ１０細胞の生存率は９７％であった。Ｃ４－２細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－３３１４（商標））を、１８％のＦ１２培地（シグマ）、１０％のＦＢＳ（ギブコ）、および１％のＴ培地を補足したＤＭＥＭ培地（ギブコ）中に培養した。両方の細胞株を、５％のＣＯ２を含む加湿インキュベータ内において３７℃で増殖させた。８０％～９０％のコンフルエンスまで増殖させた細胞を、インビトロまたはインビボでの実験に使用した。
ＳＳＴＲを発現するラット膵臓腫瘍細胞株ＡＲ４２Ｊを、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（マナッサス、ＶＡ）から入手した。Ｃ４－２細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－３３１４（商標））を、１８％のＦ１２培地（シグマ）、１０％のＦＢＳ（ギブコ）、および１％のＴ培地を補足したＤＭＥＭ培地（ギブコ）中に培養した。両方の細胞株を、５％のＣＯ2を含む加湿インキュベータ内において３７℃で増殖させた。８０％～９０％のコンフルエンスまで増殖させた細胞を、インビトロまたはインビボでの実験に使用した。マウス皮膚黒色腫Ｂ１６／Ｆ１０細胞を、加湿インキュベータ内において３７℃でＧｌｕｔａＭａｘ（１×最終濃度、１０％のＦＢＳおよびＰｅｎ－Ｓｔｒｅｐ）を補足したＣＯ2独立培地（ライフ テクノロジーズ ギブコ、カタログ番号１８０４５０５４）で培養した。Ｂ１６／Ｆ１０細胞の生存率は９７％であった。Ｃ４－２細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－３３１４（商標））を、１８％のＦ１２培地（シグマ）、１０％のＦＢＳ（ギブコ）、および１％のＴ培地を補足したＤＭＥＭ培地（ギブコ）中に培養した。両方の細胞株を、５％のＣＯ２を含む加湿インキュベータ内において３７℃で増殖させた。８０％～９０％のコンフルエンスまで増殖させた細胞を、インビトロまたはインビボでの実験に使用した。
【0205】
実施例１３．［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）の非特異的Ｂ１６／Ｆ１０黒色腫細胞の取り込み。
５００，０００細胞／ウェルを、６ウェルプレート上で一晩播種した。増殖培地を除去し、放射性トレーサー［18Ｆ］４を含む反応培地を加えた。遊離画分中の放射性トレーサーの量を判定するために、指定された時点（１５、３０、６０および１２０分）で、反応培地を、除去して、マイクロチューブに回収し、その後、細胞を１ｍＬの低温の１×ＰＢＳで洗浄し、上清を同じマイクロチューブに回収した。細胞に低温のグリシン緩衝液（１ｍＬ）を加え、氷浴上で５分間インキュベートし、上清を除去し、当該手順を繰り返し、細胞を低温の１×ＰＢＳで洗浄し、すべての上清を同じマイクロチューブに回収することによって、膜結合画分を回収した。内部移行画分を判定するために、１ＭのＮａＯＨを細胞に加え、周囲温度で１０分間インキュベートしておいた。上清を除去し、細胞を低温の１×ＰＢＳで２回洗浄し、上清を同じマイクロチューブに回収した。各相で別々に回収した上清を、ガンマカウンターで測定して、各画分の放射能比（％）を判定した。遊離画分、膜結合画分、および内部移行画分の間で判定された放射能分布に基づいて、［18Ｆ］４が、Ｂ１６／Ｆ１０細胞における非特異的取り込みを実証しなかったが、研究全体を通して細胞外の遊離画分に留まったことが明確に示された（１５分での９９．３±０．０９％から２４０分での９９．３±０．０８％、ｎ＝３）。付加物［18Ｆ］４の非特異的細胞取り込みは、標的部分を放射性標識するために使用されるトレーサー化合物または付加物が、細胞膜上の実体に結合せず、ペプチドなどの標的部分がなければ細胞に内部移行しないことを実証している。前述の画分間の放射能分布が図９に示される。
５００，０００細胞／ウェルを、６ウェルプレート上で一晩播種した。増殖培地を除去し、放射性トレーサー［18Ｆ］４を含む反応培地を加えた。遊離画分中の放射性トレーサーの量を判定するために、指定された時点（１５、３０、６０および１２０分）で、反応培地を、除去して、マイクロチューブに回収し、その後、細胞を１ｍＬの低温の１×ＰＢＳで洗浄し、上清を同じマイクロチューブに回収した。細胞に低温のグリシン緩衝液（１ｍＬ）を加え、氷浴上で５分間インキュベートし、上清を除去し、当該手順を繰り返し、細胞を低温の１×ＰＢＳで洗浄し、すべての上清を同じマイクロチューブに回収することによって、膜結合画分を回収した。内部移行画分を判定するために、１ＭのＮａＯＨを細胞に加え、周囲温度で１０分間インキュベートしておいた。上清を除去し、細胞を低温の１×ＰＢＳで２回洗浄し、上清を同じマイクロチューブに回収した。各相で別々に回収した上清を、ガンマカウンターで測定して、各画分の放射能比（％）を判定した。遊離画分、膜結合画分、および内部移行画分の間で判定された放射能分布に基づいて、［18Ｆ］４が、Ｂ１６／Ｆ１０細胞における非特異的取り込みを実証しなかったが、研究全体を通して細胞外の遊離画分に留まったことが明確に示された（１５分での９９．３±０．０９％から２４０分での９９．３±０．０８％、ｎ＝３）。付加物［18Ｆ］４の非特異的細胞取り込みは、標的部分を放射性標識するために使用されるトレーサー化合物または付加物が、細胞膜上の実体に結合せず、ペプチドなどの標的部分がなければ細胞に内部移行しないことを実証している。前述の画分間の放射能分布が図９に示される。
【0206】
実施例１４．［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚと共役したＴＣＯ官能化Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド、［18Ｆ］２５）のＡＲ４２Ｊ細胞取り込み。
１００万細胞／ウェルを、６ウェルプレート上で一晩播種した。増殖培地を除去し、放射性トレーサー［18Ｆ］２５を含む反応培地を加えた。細胞取り込みの特異性を研究するために、一組の細胞を、非修飾オクトレオチドの１μＭの溶液の存在下でコインキュベートした。遮断オクトレオチドとして使用される非修飾オクトレオチドは、オクトレオチドペプチドのみを含み、これを、ＴＣＯ部分またはトレーサー化合物には共役させず、それによって、放射性標識させなかった。遊離画分中の放射性トレーサーの量を判定するために、指定された時点（１５、３０、６０および１２０分）で、反応培地を除去して、マイクロチューブに回収し、その後、細胞を１ｍＬの低温の１×ＰＢＳで洗浄し、上清を同じマイクロチューブに回収した。細胞に低温のグリシン緩衝液（１ｍＬ）を加え、氷上で５分間インキュベートし、上清を除去し、当該手順を繰り返し、細胞を低温の１×ＰＢＳで洗浄し、すべての上清を同じマイクロチューブに回収することによって、膜結合画分を回収した。内部移行画分を判定するために、１ＭのＮａＯＨを細胞に加え、周囲温度で１０分間インキュベートしておいた。上清を除去し、細胞を低温の１×ＰＢＳで２回洗浄し、上清を同じマイクロチューブに回収した。各相で別々に回収した上清を、ガンマカウンターで測定して、各画分の放射能％を判定した。遊離画分、膜結合画分、および内部移行画分間の判定された放射能分布に基づいて、［18Ｆ］２５の細胞取り込みが特異的であることは明らかであった。取り込み（内部移行）（１５分での３．２１±０．０６％から２４０分での６．１２±０．６３％、ｎ＝３）を、過剰な非修飾オクトレオチドによって効率的に遮断した（遮断：１５分での０．５８±０．１１％から２４０分での０．７３±０．０４％、ｎ＝３）。［18Ｆ］２５の細胞取り込みの遮断は研究全体を通じて効率的であったが、非遮断条件での取り込みは時間に応じて増加し続けた。非遮断（内部移行）状態と遮断状態における前述の画分間の放射能分布が図１０に示される。ＡＲ４２Ｊ細胞および化合物［18Ｆ］２５を用いたこれらの結果は、放射性標識された付加物の内部移行が、（本例ではソマトスタチン受容体に）標的特異的であり、それぞれの標的実体への付加物の標的部分のアクセスを遮断することによって防止され得ることを実証している。
１００万細胞／ウェルを、６ウェルプレート上で一晩播種した。増殖培地を除去し、放射性トレーサー［18Ｆ］２５を含む反応培地を加えた。細胞取り込みの特異性を研究するために、一組の細胞を、非修飾オクトレオチドの１μＭの溶液の存在下でコインキュベートした。遮断オクトレオチドとして使用される非修飾オクトレオチドは、オクトレオチドペプチドのみを含み、これを、ＴＣＯ部分またはトレーサー化合物には共役させず、それによって、放射性標識させなかった。遊離画分中の放射性トレーサーの量を判定するために、指定された時点（１５、３０、６０および１２０分）で、反応培地を除去して、マイクロチューブに回収し、その後、細胞を１ｍＬの低温の１×ＰＢＳで洗浄し、上清を同じマイクロチューブに回収した。細胞に低温のグリシン緩衝液（１ｍＬ）を加え、氷上で５分間インキュベートし、上清を除去し、当該手順を繰り返し、細胞を低温の１×ＰＢＳで洗浄し、すべての上清を同じマイクロチューブに回収することによって、膜結合画分を回収した。内部移行画分を判定するために、１ＭのＮａＯＨを細胞に加え、周囲温度で１０分間インキュベートしておいた。上清を除去し、細胞を低温の１×ＰＢＳで２回洗浄し、上清を同じマイクロチューブに回収した。各相で別々に回収した上清を、ガンマカウンターで測定して、各画分の放射能％を判定した。遊離画分、膜結合画分、および内部移行画分間の判定された放射能分布に基づいて、［18Ｆ］２５の細胞取り込みが特異的であることは明らかであった。取り込み（内部移行）（１５分での３．２１±０．０６％から２４０分での６．１２±０．６３％、ｎ＝３）を、過剰な非修飾オクトレオチドによって効率的に遮断した（遮断：１５分での０．５８±０．１１％から２４０分での０．７３±０．０４％、ｎ＝３）。［18Ｆ］２５の細胞取り込みの遮断は研究全体を通じて効率的であったが、非遮断条件での取り込みは時間に応じて増加し続けた。非遮断（内部移行）状態と遮断状態における前述の画分間の放射能分布が図１０に示される。ＡＲ４２Ｊ細胞および化合物［18Ｆ］２５を用いたこれらの結果は、放射性標識された付加物の内部移行が、（本例ではソマトスタチン受容体に）標的特異的であり、それぞれの標的実体への付加物の標的部分のアクセスを遮断することによって防止され得ることを実証している。
【0207】
実施例１５．対照ＳＣＩＤマウスにおける［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）のＰＥＴ／ＣＴスキャン。
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の１０％のエタノールに製剤し、ＳＣＩＤマウスに静脈内投与した。ＰＥＴ／ＣＴ画像を、Ｉｎｖｅｏｎ ＰＥＴ／ＣＴおよびＭｏｌｅｃｕｂｅｓ ＰＥＴおよびＣＴを使用して取得した。ＰＥＣ／ＣＴ（図１１）および体内分布研究（図１２ａおよび１２ｂ）において、トレーサー（［18Ｆ］４）は、骨取り込みの欠如によって証明された優れた安定性を実証した。トレーサーのための主な排出経路は腎臓を経由するものであったが、肝臓および胆嚢には少量の蓄積が見られ（図１１）、これは最適な補欠分子族のプロファイルを示している。
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の１０％のエタノールに製剤し、ＳＣＩＤマウスに静脈内投与した。ＰＥＴ／ＣＴ画像を、Ｉｎｖｅｏｎ ＰＥＴ／ＣＴおよびＭｏｌｅｃｕｂｅｓ ＰＥＴおよびＣＴを使用して取得した。ＰＥＣ／ＣＴ（図１１）および体内分布研究（図１２ａおよび１２ｂ）において、トレーサー（［18Ｆ］４）は、骨取り込みの欠如によって証明された優れた安定性を実証した。トレーサーのための主な排出経路は腎臓を経由するものであったが、肝臓および胆嚢には少量の蓄積が見られ（図１１）、これは最適な補欠分子族のプロファイルを示している。
【0208】
実施例１６．ＳＣＩＤマウスにおける［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）の静脈内投与後の放射能の排出および［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）の静脈内投与後の尿への放射能の排泄。
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の１０％のエタノールに製剤し、ＳＣＩＤマウスに静脈内投与した。選択した臓器（心臓、肝臓、腎臓、肺、筋肉、膀胱）の周囲の対象領域（ＲＯＩ）を描画し、そのＲＯＩの単位体積あたりの放射能の比率を測定することによって、排出プロファイルを提示する標準取込値（ＳＵＶ）（図１３ａおよび１３ｂ）をＰＥＴ画像から判定し、注入用量に対して標準化した。トレーサー（［18Ｆ］４）は、骨取り込みの欠如によって証明された優れた安定性を実証した。トレーサーのための主な排出経路は腎臓を経由するものであったが、肝臓および胆嚢にはごく微量の蓄積が見られ、これは最適な補欠分子族のプロファイルを示している。マウス組織における時間に応じた放射能の排出（図１３ａおよび１３ｂ）は、付加物が主に腎臓を介して迅速に排出されることを示唆している。
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｚ（［18Ｆ］４）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の１０％のエタノールに製剤し、ＳＣＩＤマウスに静脈内投与した。選択した臓器（心臓、肝臓、腎臓、肺、筋肉、膀胱）の周囲の対象領域（ＲＯＩ）を描画し、そのＲＯＩの単位体積あたりの放射能の比率を測定することによって、排出プロファイルを提示する標準取込値（ＳＵＶ）（図１３ａおよび１３ｂ）をＰＥＴ画像から判定し、注入用量に対して標準化した。トレーサー（［18Ｆ］４）は、骨取り込みの欠如によって証明された優れた安定性を実証した。トレーサーのための主な排出経路は腎臓を経由するものであったが、肝臓および胆嚢にはごく微量の蓄積が見られ、これは最適な補欠分子族のプロファイルを示している。マウス組織における時間に応じた放射能の排出（図１３ａおよび１３ｂ）は、付加物が主に腎臓を介して迅速に排出されることを示唆している。
【0209】
実施例１７．［18Ｆ］２５の体内分布
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５、０．２ｎｍｏｌ、１５０μＬ、～１ＭＢｑ）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の４％のエタノール中に製剤し、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するＲｊ：ＮＭＲＩ－Ｆｏｘｎ１ ｎｕ／ｎｕマウスに静脈内投与した。投与後の所定の時点（ｔ＝３０、６０、１２０および２４０分）で、選択した臓器を、抽出し、水で洗浄し、ブロット乾燥した後、ガンマカウントを行った。ガンマカウントしたデータに基づいて、組織１グラムあたりの注入用量（ＩＤ）のパーセンテージ（ＩＤ％／ｇ）値を、式［（観察したガンマカウント／ＩＤ）×１００］／組織の重量（ｇ）を用いて計算した。結果として得た値を、図１４に提示される体内分布グラフにプロットした。トレーサー［18Ｆ］２５は、主に腎臓経由での排出を伴う、腫瘍への蓄積および血液循環時間の延長を実証したが、一部の肝臓取り込みも実証した。骨取り込みは著しく低く、これは、トレーサーがインビボでの脱フッ素化に対して極めて安定していることを示唆していた。
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５、０．２ｎｍｏｌ、１５０μＬ、～１ＭＢｑ）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の４％のエタノール中に製剤し、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するＲｊ：ＮＭＲＩ－Ｆｏｘｎ１ ｎｕ／ｎｕマウスに静脈内投与した。投与後の所定の時点（ｔ＝３０、６０、１２０および２４０分）で、選択した臓器を、抽出し、水で洗浄し、ブロット乾燥した後、ガンマカウントを行った。ガンマカウントしたデータに基づいて、組織１グラムあたりの注入用量（ＩＤ）のパーセンテージ（ＩＤ％／ｇ）値を、式［（観察したガンマカウント／ＩＤ）×１００］／組織の重量（ｇ）を用いて計算した。結果として得た値を、図１４に提示される体内分布グラフにプロットした。トレーサー［18Ｆ］２５は、主に腎臓経由での排出を伴う、腫瘍への蓄積および血液循環時間の延長を実証したが、一部の肝臓取り込みも実証した。骨取り込みは著しく低く、これは、トレーサーがインビボでの脱フッ素化に対して極めて安定していることを示唆していた。
【0210】
実施例１８．ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するマウスにおける［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５）のＰＥＴ／ＣＴ。
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５、０．２ｎｍｏｌ、１５０μＬ、～１ＭＢｑ）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の４％のエタノール中に製剤し、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するＲｊ：ＮＭＲＩ－Ｆｏｘｎ１ ｎｕ／ｎｕマウスに静脈内投与した。ＡＲ４２Ｊ腫瘍における取り込みの特異性を調査するために、放射能の蓄積を遮断する遮断オクトレオチド（４４ｎｍｏｌ）をマウスに同時投与した。ＰＥＴ／ＣＴ画像を、Ｍｏｌｅｃｕｂｅｓ ＰＥＴおよびＣＴを用いて取得した。ＰＥＣ／ＣＴ（図１５）では、トレーサー（［18Ｆ］２５）は、骨取り込みの欠如によって証明された優れた安定性を実証した。トレーサーに対する主な排出経路は、腎臓を通って尿に入るものであったが、肝臓、胆嚢、および腸において微量の蓄積が検出され、これは、ＰＥＴ画像におけるいくつかのバックグラウンド放射能レベルを占めていた。第１の動物（図１５の左側の動物）には、遮断オクトレオチドおよび放射性標識した［18Ｆ］２５を静脈内に同時投与した。第２の動物（図１５の右側の動物）は、遮断オクトレオチド（４５μｇ、４４ｎｍｏｌ）なしで［18Ｆ］２５のみを受け、右肩の皮下腫瘍の視覚化を可能にした。放射性標識した［18Ｆ］２５の遮断は成功し、これは、図１５のＰＥＴ画像比較に見られるように、腫瘍における放射能の特異的取り込みを実証していた（Ｔ＝腫瘍）。
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５、０．２ｎｍｏｌ、１５０μＬ、～１ＭＢｑ）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の４％のエタノール中に製剤し、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するＲｊ：ＮＭＲＩ－Ｆｏｘｎ１ ｎｕ／ｎｕマウスに静脈内投与した。ＡＲ４２Ｊ腫瘍における取り込みの特異性を調査するために、放射能の蓄積を遮断する遮断オクトレオチド（４４ｎｍｏｌ）をマウスに同時投与した。ＰＥＴ／ＣＴ画像を、Ｍｏｌｅｃｕｂｅｓ ＰＥＴおよびＣＴを用いて取得した。ＰＥＣ／ＣＴ（図１５）では、トレーサー（［18Ｆ］２５）は、骨取り込みの欠如によって証明された優れた安定性を実証した。トレーサーに対する主な排出経路は、腎臓を通って尿に入るものであったが、肝臓、胆嚢、および腸において微量の蓄積が検出され、これは、ＰＥＴ画像におけるいくつかのバックグラウンド放射能レベルを占めていた。第１の動物（図１５の左側の動物）には、遮断オクトレオチドおよび放射性標識した［18Ｆ］２５を静脈内に同時投与した。第２の動物（図１５の右側の動物）は、遮断オクトレオチド（４５μｇ、４４ｎｍｏｌ）なしで［18Ｆ］２５のみを受け、右肩の皮下腫瘍の視覚化を可能にした。放射性標識した［18Ｆ］２５の遮断は成功し、これは、図１５のＰＥＴ画像比較に見られるように、腫瘍における放射能の特異的取り込みを実証していた（Ｔ＝腫瘍）。
【0211】
実施例１９．ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するマウスにおける［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５）の静脈内投与後の放射能の排出
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５、０．２ｎｍｏｌ、１５０μＬ、～１ＭＢｑ）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の４％のエタノール中に製剤し、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するＲｊ：ＮＭＲＩ－Ｆｏｘｎ１ ｎｕ／ｎｕマウスに静脈内投与した。排出プロファイルを提示する標準取込値（ＳＬＩＶ）（図１６および１７）を、選択した臓器（心臓、肝臓、腎臓、肺、筋肉、膀胱、腫瘍）の周囲のＲＯＩによってＰＥＴ画像（図１５）から判定し、ＳＵＶを、実施例１６に開示される通りに計算した。マウスの静脈内に［18Ｆ］２５単独（非遮断）を投与した後または［18Ｆ］２５および遮断オクトレオチド（遮断）を同時投与した後のさまざまな時点で腫瘍内のＳＵＶを比較することによって、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するマウス（ｎ＝２／群）における［18Ｆ］２５の結合特異性を判定した。結果は、ＡＲ４２Ｊ腫瘍における［18Ｆ］２５の結合が、特異的であり、遮断オクトレオチドの同時投与によって遮断することができること（遮断）を実証している（図１６）。トレーサー（［18Ｆ］２５）を、主に腎臓を介して排出し、時間に応じて減少した肝臓における蓄積はごく微量であった（図１７）。腫瘍内の放射能は、およそ４０分でピークに達し、それ以降は比較的安定したままであった。腫瘍における放射能の遮断は、ＳＵＶ比較データで成功したことが実証され（図１７）、これは、腫瘍取り込みが標的部分に特異的であることを証明していた。
［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－Ｔｙｒ3－オクトレオチド（［18Ｆ］２５、０．２ｎｍｏｌ、１５０μＬ、～１ＭＢｑ）を、０．０１ＭのＰＢＳ中の４％のエタノール中に製剤し、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するＲｊ：ＮＭＲＩ－Ｆｏｘｎ１ ｎｕ／ｎｕマウスに静脈内投与した。排出プロファイルを提示する標準取込値（ＳＬＩＶ）（図１６および１７）を、選択した臓器（心臓、肝臓、腎臓、肺、筋肉、膀胱、腫瘍）の周囲のＲＯＩによってＰＥＴ画像（図１５）から判定し、ＳＵＶを、実施例１６に開示される通りに計算した。マウスの静脈内に［18Ｆ］２５単独（非遮断）を投与した後または［18Ｆ］２５および遮断オクトレオチド（遮断）を同時投与した後のさまざまな時点で腫瘍内のＳＵＶを比較することによって、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するマウス（ｎ＝２／群）における［18Ｆ］２５の結合特異性を判定した。結果は、ＡＲ４２Ｊ腫瘍における［18Ｆ］２５の結合が、特異的であり、遮断オクトレオチドの同時投与によって遮断することができること（遮断）を実証している（図１６）。トレーサー（［18Ｆ］２５）を、主に腎臓を介して排出し、時間に応じて減少した肝臓における蓄積はごく微量であった（図１７）。腫瘍内の放射能は、およそ４０分でピークに達し、それ以降は比較的安定したままであった。腫瘍における放射能の遮断は、ＳＵＶ比較データで成功したことが実証され（図１７）、これは、腫瘍取り込みが標的部分に特異的であることを証明していた。
【0212】
実施例２０．［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２８）および［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－トラネキサム酸－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２９）のインビトロでの細胞内部移行
Ｃ４－２細胞またはＬＮＣａＰ細胞を、実験の２４時間前に６ウェルプレート（６×１０5／ウェル）に蒔き、培地を、実験の３０分前にＣＯ2非依存性培地に変更した。各ウェルにおける細胞を、［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９（１５～２０ＧＢｑ／ｍｍｏｌ）ＣＯ2非依存培地の１ｍＬの２５０ｎＭ溶液でインキュベートした。特異的な細胞取り込みを、２－（ホスホノメチル）ペンタン二酸（２－ＰＭＰＡ）（最終濃度、４００μＭ、Sigma）で遮断することによって判定した。すべての実験を３７℃で行った。１ｍＬの氷冷リン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄することによって、３０分、６０分および１２０分後にインキュベーションを終了した。続いて、細胞を、１ｍＬのグリシンＨＣｌ緩衝液（５０ｍＭ；ｐＨ２．８）で各５分間２回インキュベートして、表面結合画分を除去し、上清を回収した。１ｍＬの氷冷リン酸緩衝生理食塩水でのさらなる洗浄工程後に、細胞を、０．５ｍＬのＮａＯＨ（１Ｎ）で溶解して収集し、放射能をγカウンターで測定した。特異的な細胞取り込みを、１０5個の細胞に結合した最初に加えられた放射能のパーセンテージとして計算した（％ＩＡ／１０5細胞）。すべての実験を３回繰り返して行った。この実験の結果に基づくと、細胞へのトレーサー［18Ｆ］２８および［18Ｆ］２９の取り込みは、２－ＰＭＰＡの遮断でチャレンジしたときに、６０分で有意に遮断された（［18Ｆ］２８に対して２．０５±０．２８％対０．５８±０．０９％および［18Ｆ］２９に対して１．０５±０．０９％対０．３１±０．０３％）ため、特異的である。
Ｃ４－２細胞またはＬＮＣａＰ細胞を、実験の２４時間前に６ウェルプレート（６×１０5／ウェル）に蒔き、培地を、実験の３０分前にＣＯ2非依存性培地に変更した。各ウェルにおける細胞を、［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９（１５～２０ＧＢｑ／ｍｍｏｌ）ＣＯ2非依存培地の１ｍＬの２５０ｎＭ溶液でインキュベートした。特異的な細胞取り込みを、２－（ホスホノメチル）ペンタン二酸（２－ＰＭＰＡ）（最終濃度、４００μＭ、Sigma）で遮断することによって判定した。すべての実験を３７℃で行った。１ｍＬの氷冷リン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄することによって、３０分、６０分および１２０分後にインキュベーションを終了した。続いて、細胞を、１ｍＬのグリシンＨＣｌ緩衝液（５０ｍＭ；ｐＨ２．８）で各５分間２回インキュベートして、表面結合画分を除去し、上清を回収した。１ｍＬの氷冷リン酸緩衝生理食塩水でのさらなる洗浄工程後に、細胞を、０．５ｍＬのＮａＯＨ（１Ｎ）で溶解して収集し、放射能をγカウンターで測定した。特異的な細胞取り込みを、１０5個の細胞に結合した最初に加えられた放射能のパーセンテージとして計算した（％ＩＡ／１０5細胞）。すべての実験を３回繰り返して行った。この実験の結果に基づくと、細胞へのトレーサー［18Ｆ］２８および［18Ｆ］２９の取り込みは、２－ＰＭＰＡの遮断でチャレンジしたときに、６０分で有意に遮断された（［18Ｆ］２８に対して２．０５±０．２８％対０．５８±０．０９％および［18Ｆ］２９に対して１．０５±０．０９％対０．３１±０．０３％）ため、特異的である。
【0213】
実施例２１．［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２８）および［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－トラネキサム酸－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２９）のＰＥＴ／ＣＴ。
［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９のＰＥＴ／ＣＴ画像法を、Ｃ４－２腫瘍を有するマウス（ｎ＝３～４）において行い、取り込みの特異性を、２－ＰＭＰＡで遮断することによってチャレンジした。遮断するために、［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９の注入の３０分前に、マウスに、尾静脈注射により０．４ｍＭの２－ＰＭＰＡ（１００μＬ；４０ｎｍｏｌ）を注入した。放射性トレーサー、［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９を、０．０１ｍＭの溶液（１００μＬ；１ｎｍｏｌ）として尾静脈注射により投与した。ＰＥＴ／ＣＴ画像を、Ｉｎｖｅｏｎ ＰＥＴ／ＣＴおよびＭｏｌｅｃｕｂｅｓ ＰＥＴおよびＣＴを使用して取得した。ＰＥＴ／ＣＴでは、両方のトレーサー（［18Ｆ］２８と［18Ｆ］２９）が、骨取り込みの欠如によって証明された良好から優れた安定性を実証した。トレーサーに対する主な排出経路は、腎臓を通って尿に入るものであった。［18Ｆ］２９に関して図１８に示すように、トレーサー取り込みが腫瘍（Ｔ）において有意に減少した場合に２－ＰＭＰＡで取り込みを遮断することによって、特異的な腫瘍取り込みが実証された。
［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９のＰＥＴ／ＣＴ画像法を、Ｃ４－２腫瘍を有するマウス（ｎ＝３～４）において行い、取り込みの特異性を、２－ＰＭＰＡで遮断することによってチャレンジした。遮断するために、［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９の注入の３０分前に、マウスに、尾静脈注射により０．４ｍＭの２－ＰＭＰＡ（１００μＬ；４０ｎｍｏｌ）を注入した。放射性トレーサー、［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９を、０．０１ｍＭの溶液（１００μＬ；１ｎｍｏｌ）として尾静脈注射により投与した。ＰＥＴ／ＣＴ画像を、Ｉｎｖｅｏｎ ＰＥＴ／ＣＴおよびＭｏｌｅｃｕｂｅｓ ＰＥＴおよびＣＴを使用して取得した。ＰＥＴ／ＣＴでは、両方のトレーサー（［18Ｆ］２８と［18Ｆ］２９）が、骨取り込みの欠如によって証明された良好から優れた安定性を実証した。トレーサーに対する主な排出経路は、腎臓を通って尿に入るものであった。［18Ｆ］２９に関して図１８に示すように、トレーサー取り込みが腫瘍（Ｔ）において有意に減少した場合に２－ＰＭＰＡで取り込みを遮断することによって、特異的な腫瘍取り込みが実証された。
【0214】
実施例２２．［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２８）および［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－トラネキサム酸－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２９）の体内分布。
［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９の体内分布を、Ｃ４－２腫瘍を有するマウスにおいて判定し、取り込みの特異性を、２－ＰＭＰＡで遮断することによってチャレンジした。各実験を３回繰り返して行った。遮断するために、［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９の注入の３０分前に、ＳＣＩＤマウスに、尾静脈注射により０．４ｍＭの２－ＰＭＰＡ（１００μＬ；４０ｎｍｏｌ）を投与した。
［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９の体内分布を、Ｃ４－２腫瘍を有するマウスにおいて判定し、取り込みの特異性を、２－ＰＭＰＡで遮断することによってチャレンジした。各実験を３回繰り返して行った。遮断するために、［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９の注入の３０分前に、ＳＣＩＤマウスに、尾静脈注射により０．４ｍＭの２－ＰＭＰＡ（１００μＬ；４０ｎｍｏｌ）を投与した。
【0215】
放射性トレーサー、［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９を、０．０１ｍＭの溶液（１００μＬ；１ｎｍｏｌ）として尾静脈注射により投与した。注入の１時間後に、動物を屠殺し（ＣＯ2窒息）、対象の臓器を解剖し、ブロット乾燥し、計量した。放射能を、γカウンター（１４８０ Ｗｉｚａｒｄ、パーキンエルマー（PerkinElmer））で測定し、１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として計算した。トレーサー［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９に対する腫瘍関連取り込み（図１９）を、２－ＰＭＰＡの事前注入によって遮断した（［18Ｆ］２８に対して７．５１±０．６９％対１．１８±０．１９％および［18Ｆ］２９に対して１２．８７±４．８３％対１．９０±０．６６％）。高い取込値を示した他の臓器は、腎臓、脾臓、および胆嚢であり、ここで、遮断薬の適用によって取り込みも減少した。
【0216】
実施例２３．［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２８）、［18Ｆ］ＡｍＢＦ3－トラネキサム酸－ＰＳＭＡ（［18Ｆ］２９）の貯蔵寿命および血漿の安定性。
１×ＰＢＳ中で製剤した［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９の貯蔵寿命の安定性を判定するために、５μＬのサンプルを、室温で保存した後に、０．５、１、２、３、４、５、および６時間放射性ＴＬＣによって分析した（ｎ＝３）。［18Ｆ］２８および［18Ｆ］２９に対して、最大６時間までＰＢＳ中の安定性（＞９５％）が証明された。酵素安定性の測定のために、４００μＬのヒト血漿を、４００μＬの［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９製剤を用いて３７℃でインキュベートした（ｎ＝３）。０．５、１、２、３、および４時間後に、１００ｍＬのサンプルを混合物から除去し、タンパク質を、５０μＬのアセトニトリルを加えることによって沈殿させ、１３，０００ｒｐｍでの遠心分離によって上清から分離した。上清を放射性ＴＬＣで分析した。［18Ｆ］２８および［18Ｆ］２９に対して、最大４時間まで血漿中の安定性（＞９５％）が証明された。化合物［18Ｆ］２８および［18Ｆ］２９は、両方とも製剤溶液およびヒト血漿において、実験の観察期間全体にわたって有意な分解を示さなかった。
１×ＰＢＳ中で製剤した［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９の貯蔵寿命の安定性を判定するために、５μＬのサンプルを、室温で保存した後に、０．５、１、２、３、４、５、および６時間放射性ＴＬＣによって分析した（ｎ＝３）。［18Ｆ］２８および［18Ｆ］２９に対して、最大６時間までＰＢＳ中の安定性（＞９５％）が証明された。酵素安定性の測定のために、４００μＬのヒト血漿を、４００μＬの［18Ｆ］２８または［18Ｆ］２９製剤を用いて３７℃でインキュベートした（ｎ＝３）。０．５、１、２、３、および４時間後に、１００ｍＬのサンプルを混合物から除去し、タンパク質を、５０μＬのアセトニトリルを加えることによって沈殿させ、１３，０００ｒｐｍでの遠心分離によって上清から分離した。上清を放射性ＴＬＣで分析した。［18Ｆ］２８および［18Ｆ］２９に対して、最大４時間まで血漿中の安定性（＞９５％）が証明された。化合物［18Ｆ］２８および［18Ｆ］２９は、両方とも製剤溶液およびヒト血漿において、実験の観察期間全体にわたって有意な分解を示さなかった。
【0217】
前述の説明は、特定の実施および実施形態の非限定的な例として、本発明を実施するために発明者が現在熟考している最良のモードの完全かつ有益な説明を提供している。しかし、本発明が、上記に提示された実施形態の詳細に限定されるものではなく、本発明の特徴から逸脱することなく、同等の手段を使用する他の実施形態または実施形態の異なる組み合わせで実施することができることは当業者に明らかである。
【0218】
さらに、上記で開示した例示的な実施形態の特徴のいくつかは、他の特徴の対応する使用なしで利点として使用され得る。したがって、前述の説明は、本発明の原理を例示するものにすぎないとみなされるべきであり、本発明を限定するものではない。したがって、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ制限される。
【0219】
さまざまな拘束力のない例示的な態様および実施形態が上記で説明されてきた。前述の実施形態は、さまざまな実装で利用され得る選択された態様または工程を説明するためにのみ使用されている。いくつかの実施形態は、特定の例示的な態様のみを参照して提示され得る。対応する実施形態が、他の例示的な態様にも同様に適用され得ることが理解されるべきである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8a】
【図8b】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12a】
【図12b】
【図13a】
【図13b】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【国際調査報告】