知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-17
(54)【発明の名称】ポリイオンコンプレックスミセル
(51)【国際特許分類】
C08G 81/00 20060101AFI20240110BHJP
A61K 9/51 20060101ALI20240110BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20240110BHJP
A61K 9/107 20060101ALI20240110BHJP
【ＦＩ】
C08G81/00
A61K9/51
A61K47/42
A61K9/107
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023539248
(86)(22)【出願日】2021-12-28
(85)【翻訳文提出日】2023-06-27
(86)【国際出願番号】 JP2021049002
(87)【国際公開番号】W WO2022145486
(87)【国際公開日】2022-07-07
(31)【優先権主張番号】63/130,861
(32)【優先日】2020-12-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２５年度、国立研究開発法人科学技術振興機構 研究成果展開事業 センター・オブ・イノベーションプログラム『スマートライフケア社会への変革を先導するものづくりオープンイノベーション拠点』委託研究開発、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願
(71)【出願人】
【識別番号】514299594
【氏名又は名称】公益財団法人川崎市産業振興財団
(74)【代理人】
【識別番号】100141139
【弁理士】
【氏名又は名称】及川 周
(74)【代理人】
【識別番号】100147267
【弁理士】
【氏名又は名称】大槻 真紀子
(74)【代理人】
【識別番号】100178847
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 映美
(74)【代理人】
【識別番号】100175824
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 淳一
(72)【発明者】
【氏名】片岡 一則
(72)【発明者】
【氏名】パライソ ウエスト クリスチャン ディゾン
(72)【発明者】
【氏名】カダール サビーナ
(72)【発明者】
【氏名】福島 重人
【テーマコード（参考）】
4C076
4J031
【Ｆターム（参考）】
4C076AA65
4C076CC26
4C076EE23
4C076EE41
4C076EE49
4J031AA15
4J031AA25
4J031AC07
4J031AC09
4J031AD01
(57)【要約】
親水性ブロック部分、カチオン性疎水性ブロック部分、および親水性ブロックとカチオン性疎水性ブロックとの間に位置する架橋ブロック部分を有するブロック共重合体と、ブロック共重合体に封入されたアニオン性分子薬物とを含むポリイオンコンプレックスミセル。ここで、架橋ブロックは、ヒドラゾン結合を有し、ブロック共重合体は、第１のブロック共重合体鎖と第２のブロック共重合体鎖を含み、第１のブロック共重合体鎖と第２のブロック共重合体鎖は架橋ブロック部分で互いに架橋されており、親水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックと第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックを含み、カチオン性疎水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１のカチオン性疎水性ブロックを含む。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
親水性ブロック部分、カチオン性疎水性ブロック部分、および前記親水性ブロックと前記カチオン性疎水性ブロックとの間に位置する架橋ブロック部分を有するブロック共重合体と、前記ブロック共重合体に封入されたアニオン性分子薬物とを含む、ポリイオンコンプレックスミセルであって、
前記架橋ブロックは、ヒドラゾン結合を有し、
前記ブロック共重合体は、前記第１のブロック共重合体鎖と前記第２のブロック共重合体鎖を含み、前記第１のブロック共重合体鎖と前記第２のブロック共重合体鎖は前記架橋ブロック部分で互いに架橋されており、
前記親水性ブロック部分は、前記第１のブロック共重合体鎖の前記第１の親水性ブロックと前記第２のブロック共重合体鎖の前記第２の親水性ブロックを含み、
前記カチオン性疎水性ブロック部分は、前記第１のブロック共重合体鎖の前記第１のカチオン性疎水性ブロックを含む、
ポリイオンコンプレックスミセル。
【請求項2】
前記カチオン性疎水性ブロック部分が、前記第２のブロック共重合体鎖の前記第２のカチオン性疎水性ブロックをさらに含む、請求項１に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
【請求項3】
前記ブロック共重合体が、式（Ｉ）：【化1】
で表される、請求項２に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
【請求項4】
前記ブロック共重合体が、式（ＩＩ）：【化2】
で表される、請求項１に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
【請求項5】
前記カチオン性疎水性ブロックが、ポリリジンに由来する繰り返し構造で構成されている、請求項１から４のいずれか一項に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
【請求項6】
粒径が２０～１００ｎｍであり、多分散指数が０．０５～０．３である、請求項１から５のいずれか一項に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
【請求項7】
前記アニオン性分子薬物の正味負電荷が、生理的ｐＨで－２５から－１である、請求項１から６のいずれか一項に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
【請求項8】
前記アニオン性分子薬物が核酸薬物である、請求項１から７のいずれか一項に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ポリイオンコンプレックスミセルに関する。
本出願は、２０２０年１２月２８日に出願された米国仮特許出願第６３／１３０，８６１号に基づく優先権を主張し、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年１２月２８日に出願された米国仮特許出願第６３／１３０，８６１号に基づく優先権を主張し、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
従来、ポリイオンコンプレックスミセル（以下、「ＰＩＣミセル」と呼ばれることもある）は、核酸（例えば、ｐＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＡＳＯ）、およびカチオン性ポリマーとイオン相互作用を有する負に荷電した大きな分子（例えば、ＰＥＧ－ポリリジン、ＰＥＧ－ポリ（Ｎ－［Ｎ－（２－アミノエチル）－２－アミノエチル］アスパルタミドに使用されてきた。例えば、非特許文献１および２には、ポリ（エチレングリコール）－ポリ（リジン）ジブロックコポリマーと、該ジブロックコポリマーに封入されたアニオン性薬物とを含むポリイオンコンプレックスミセルが記載されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0003】
【非特許文献1】Ｗａｎｇ Ｃ，Ｃｈｅｎ Ｑ，Ｗａｎｇ Ｚ，Ｚｈａｎｇ Ｘ．Ａｎ ｅｎｚｙｍｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｓｕｐｅｒａｍｐｈｉｐｈｉｌｅ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍｉｅ－Ｉｎｔ．Ｅｄ．４９（４６）、８６１２－８６１５（２０１０）。
【非特許文献2】Ｈ．Ｓ．Ｍｉｎ，Ｈ．Ｊ．Ｋｉｍ，Ｍ．Ｎａｉｔｏ，Ｓ．Ｏｇｕｒａ，Ｋ．Ｔｏｈ，Ｋ．Ｈａｙａｓｈｉ，Ｂ．Ｓ．Ｋｉｍ，Ｓ．Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ｙ．Ａｎｒａｋｕ，Ｋ．Ｍｉｙａｔａ，Ｋ．Ｋａｔａｏｋａ．Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｃｒｏｓｓ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ ｗｉｔｈ ａ ｇｌｕｃｏｓｅ－ｉｎｓｔａｌｌｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５９（２１），８１７３－８１８０（２０２０）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
非特許文献１に記載されているような従来のポリイオンポリイオンコンプレックスミセルでは、薬物とポリマーの単純なイオン相互作用により、疎水性の内核とＰＥＧの外層とを有するポリイオンコンプレックスミセルの形成が引き起こされる。しかし、従来のポリイオンコンプレックスミセルは、ポリマーと薬物のイオン相互作用が破壊されるために生理的条件で容易に崩壊する。さらに、遊離ポリマーは、遊離すると非選択的な細胞傷害性を引き起こす。したがって、負に荷電した小分子は、水溶性であるので送達系から容易に漏出し、早期放出を導くため、封入が困難であった。
【0005】
本発明は、上記事情を考慮してなされたものであり、その目的は、負に帯電した分子を安定に封入することを可能にするポリイオンコンプレックスミセルを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0006】
上記課題を解決するために、本発明は以下の構成を採用する。
（１）親水性ブロック部分、カチオン性疎水性ブロック部分、および親水性ブロック部分とカチオン性疎水性ブロック部分との間に位置する架橋ブロック部分を有するブロック共重合体と、
ブロック共重合体に封入されたアニオン性分子薬物と
を含む、ポリイオンコンプレックスミセルであって、
架橋ブロック部分は、ヒドラゾン結合を有し、
ブロック共重合体は、第１のブロック共重合体鎖と第２のブロック共重合体鎖を含み、第１のブロック共重合体鎖と第２のブロック共重合体鎖は架橋ブロック部分で互いに架橋されており、
親水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックおよび第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックを含み、
カチオン性疎水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１のカチオン性疎水性ブロックを含む、ポリイオンコンプレックスミセル。
（２）カチオン性疎水性ブロック部分が、第２のブロック共重合体鎖の第２のカチオン性疎水性ブロックをさらに含む、上記（１）に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
（３）ブロック共重合体が、式（Ｉ）
（１）親水性ブロック部分、カチオン性疎水性ブロック部分、および親水性ブロック部分とカチオン性疎水性ブロック部分との間に位置する架橋ブロック部分を有するブロック共重合体と、
ブロック共重合体に封入されたアニオン性分子薬物と
を含む、ポリイオンコンプレックスミセルであって、
架橋ブロック部分は、ヒドラゾン結合を有し、
ブロック共重合体は、第１のブロック共重合体鎖と第２のブロック共重合体鎖を含み、第１のブロック共重合体鎖と第２のブロック共重合体鎖は架橋ブロック部分で互いに架橋されており、
親水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックおよび第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックを含み、
カチオン性疎水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１のカチオン性疎水性ブロックを含む、ポリイオンコンプレックスミセル。
（２）カチオン性疎水性ブロック部分が、第２のブロック共重合体鎖の第２のカチオン性疎水性ブロックをさらに含む、上記（１）に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
（３）ブロック共重合体が、式（Ｉ）
【0007】
【化1】
で表される、上記（２）に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
（４）ブロック共重合体が、式（ＩＩ）
【0008】
【化2】
で表される、上記（１）に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
（５）第１のカチオン性疎水性ブロックが、ポリリジンに由来する繰り返し構造で構成されている、上記（１）から（４）のいずれか１つに記載のポリイオンコンプレックスミセル。
（６）第２のカチオン性疎水性ブロックが、ポリリジンに由来する繰り返し構造で構成されている、上記（２）または（３）に記載のポリイオンコンプレックスミセル。
（７）粒径が２０～１００ｎｍであり、多分散指数が０．０５～０．３である、上記（１）から（６）のいずれか１つに記載のポリイオンコンプレックスミセル。
（８）アニオン性分子薬物の正味負電荷が、生理的ｐＨで－２５～－１である、上記（１）から（７）のいずれか１つに記載のポリイオンコンプレックスミセル。
（９）アニオン性分子薬物が核酸薬物である、上記（１）から（８）のいずれか１つに記載のポリイオンコンプレックスミセル。
【発明の効果】
【0009】
本発明によれば、負に帯電した分子を安定に封入する能力のあるポリイオンコンプレックスミセルを提供することが可能である。特に、本発明は、負に荷電した小分子を封入するのに有用なポリイオンコンプレックスミセルを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【発明を実施するための形態】
【0011】
＜ポリイオンコンプレックスミセル＞
本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、親水性ブロック部分、カチオン性疎水性ブロック部分、および親水性ブロックとカチオン性疎水性ブロックとの間に位置する架橋ブロック部分を有するブロック共重合体と、ブロック共重合体に封入されたアニオン性分子薬物とを含む。架橋ブロック部分は、ヒドラゾン結合を有する。ブロック共重合体は、第１のブロック共重合体鎖および第２のブロック共重合体鎖を含む。第１のブロック共重合体鎖と第２のブロック共重合体鎖とは、架橋ブロック部分で互いに架橋されている。親水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックと、第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックとを含む。カチオン性疎水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１のカチオン性疎水性ブロックを含む。
本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、親水性ブロック部分、カチオン性疎水性ブロック部分、および親水性ブロックとカチオン性疎水性ブロックとの間に位置する架橋ブロック部分を有するブロック共重合体と、ブロック共重合体に封入されたアニオン性分子薬物とを含む。架橋ブロック部分は、ヒドラゾン結合を有する。ブロック共重合体は、第１のブロック共重合体鎖および第２のブロック共重合体鎖を含む。第１のブロック共重合体鎖と第２のブロック共重合体鎖とは、架橋ブロック部分で互いに架橋されている。親水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックと、第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックとを含む。カチオン性疎水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１のカチオン性疎水性ブロックを含む。
【0012】
第１の実施形態：
図１は、本発明のポリイオンコンプレックスミセルの一実施形態を示す模式図である。図１に示すように、ポリイオンコンプレックスミセル１は、ブロック共重合体２とアニオン性分子薬物３との自己組織化により形成される。具体的には、カチオン性疎水性ブロック部分Ｂとアニオン性分子薬物３との間のイオン相互作用により、アニオン性分子薬物３が担持されたコアＢ１が形成される。架橋ブロック部分Ｃは、コアＢ１を囲み、コアＢ１を安定化させる。親水性ブロック部分Ａがシェルを形成することにより、ポリイオンコンプレックスミセル１が形成される。
図１は、本発明のポリイオンコンプレックスミセルの一実施形態を示す模式図である。図１に示すように、ポリイオンコンプレックスミセル１は、ブロック共重合体２とアニオン性分子薬物３との自己組織化により形成される。具体的には、カチオン性疎水性ブロック部分Ｂとアニオン性分子薬物３との間のイオン相互作用により、アニオン性分子薬物３が担持されたコアＢ１が形成される。架橋ブロック部分Ｃは、コアＢ１を囲み、コアＢ１を安定化させる。親水性ブロック部分Ａがシェルを形成することにより、ポリイオンコンプレックスミセル１が形成される。
【0013】
架橋ブロックＣ部分がコアＢ１を取り囲んでいるため、細胞内のエンドソームのｐＨの低下のような生理学的誘因がない限り、アニオン性分子薬物３を漏出から防ぐことができる。
【0014】
ブロック共重合体２は、第１のブロック共重合体鎖４と第２のブロック共重合体鎖５で構成される。第１のブロック共重合体鎖４は、第１の親水性ブロック４Ａ、第１の架橋ブロック４Ｃ、第１のカチオン性疎水性ブロック４Ｂをこの順に含む。第２のブロック共重合体鎖５は、第２の親水性ブロック５Ａ、第２の架橋ブロック５Ｃ、第２のカチオン性疎水性ブロック５Ｂをこの順に含む。ブロック共重合体２は、第１のブロック共重合体鎖４の第１の架橋ブロック４Ｃと第２のブロック共重合体鎖５の第２の架橋ブロック５Ｃとの間の架橋によって形成される。親水性ブロック部分Ａは、第１の親水性ブロック４Ａと第２の親水性ブロック５Ａを含む。疎水性ブロック部分Ｂは、第１の疎水性ブロック４Ｂと第２の疎水性ブロック５Ｂを含む。
【0015】
本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルの粒径は、２０ｎｍ～１００ｎｍであることが好ましく、３５ｎｍ～５０ｎｍであることがより好ましい。さらに、ポリイオンコンプレックスミセルは、多分散指数が０．０５～０．３であることが好ましく、０．０５～０．１であることがより好ましい。
【0016】
（ブロック共重合体）
ブロック共重合体において、親水性ブロックと疎水性ブロックの「親水性」と「疎水性」は相対的なものである。親水性ブロックと疎水性ブロックの「親水性」と「疎水性」は、ｌｏｇＰ値によって定義されることがある。ｌｏｇＰ値は、オクタノール／水分配係数（Ｐｏｗ）の対数であり、広範囲の化合物についてその親水性／疎水性を特徴付けることができる有効なパラメータである。つまり、ｌｏｇＰ値が０より大きく、プラス側に増加すると疎水性が高くなり、マイナス側に向かって増加すると親水性が高くなる。
ブロック共重合体において、親水性ブロックと疎水性ブロックの「親水性」と「疎水性」は相対的なものである。親水性ブロックと疎水性ブロックの「親水性」と「疎水性」は、ｌｏｇＰ値によって定義されることがある。ｌｏｇＰ値は、オクタノール／水分配係数（Ｐｏｗ）の対数であり、広範囲の化合物についてその親水性／疎水性を特徴付けることができる有効なパラメータである。つまり、ｌｏｇＰ値が０より大きく、プラス側に増加すると疎水性が高くなり、マイナス側に向かって増加すると親水性が高くなる。
【0017】
第１の親水性ブロックおよび第１の疎水性ブロックの各々は、１種類の繰り返し単位を有していてもよいし、２種類以上の繰り返し単位を有していてもよい。
第２の親水性ブロックおよび第２の疎水性ブロックの各々は、１種類の繰り返し単位を有していてもよいし、２種類以上の繰り返し単位を有していてもよい。
以下、第１の親水性ブロックおよび第２の親水性ブロックは「親水性ブロック」と総称されることがあり、第１の疎水性ブロックおよび第２の疎水性ブロックは「疎水性ブロック」と総称されることがある。
第２の親水性ブロックおよび第２の疎水性ブロックの各々は、１種類の繰り返し単位を有していてもよいし、２種類以上の繰り返し単位を有していてもよい。
以下、第１の親水性ブロックおよび第２の親水性ブロックは「親水性ブロック」と総称されることがあり、第１の疎水性ブロックおよび第２の疎水性ブロックは「疎水性ブロック」と総称されることがある。
【0018】
親水性ブロックの繰り返し単位の数および分子量は、アニオン性分子薬物の分子量に応じて適切に制御することができる。
親水性ブロックの繰り返し単位の数は、例えば、１以上、５以上、１０以上、２０以上、または４５以上であってよい。さらに、親水性ブロックの繰り返し単位の数は、例えば、１０００以下、７００以下、または４５０以下であってよい。
親水性ブロックの分子量は、例えば、１，０００Ｄａ以上、２，０００Ｄａ以上、または５，０００Ｄａ以上であってよい。親水性ブロックの分子量は、例えば、４０，０００Ｄａ以下、３０，０００Ｄａ以下、または２０，０００Ｄａ以下であってよい。
親水性ブロックの繰り返し単位の数は、例えば、１以上、５以上、１０以上、２０以上、または４５以上であってよい。さらに、親水性ブロックの繰り返し単位の数は、例えば、１０００以下、７００以下、または４５０以下であってよい。
親水性ブロックの分子量は、例えば、１，０００Ｄａ以上、２，０００Ｄａ以上、または５，０００Ｄａ以上であってよい。親水性ブロックの分子量は、例えば、４０，０００Ｄａ以下、３０，０００Ｄａ以下、または２０，０００Ｄａ以下であってよい。
【0019】
疎水性ブロックの繰り返し単位の数および分子量は、アニオン性分子薬物の分子量に応じて適切に制御することができる。
疎水性ブロックの繰り返し単位の数は、例えば、５以上、１０以上、または２０以上であってよい。疎水性ブロックの繰り返し単位の数は、例えば、１０００以下、８００以下、６００以下、５００以下、３００以下、２００以下、１００以下、または６０以下であってよい。
疎水性ブロックの分子量は、例えば、１，０００Ｄａ以上、２，０００Ｄａ以上、３，０００Ｄａ以上、または５，０００Ｄａ以上であってよい。疎水性ブロックの分子量は、例えば、５０，０００Ｄａ以下、３０，０００Ｄａ以下、１６，０００Ｄａ以下、または１０，０００Ｄａ以下であってよい。
疎水性ブロックの繰り返し単位の数は、例えば、５以上、１０以上、または２０以上であってよい。疎水性ブロックの繰り返し単位の数は、例えば、１０００以下、８００以下、６００以下、５００以下、３００以下、２００以下、１００以下、または６０以下であってよい。
疎水性ブロックの分子量は、例えば、１，０００Ｄａ以上、２，０００Ｄａ以上、３，０００Ｄａ以上、または５，０００Ｄａ以上であってよい。疎水性ブロックの分子量は、例えば、５０，０００Ｄａ以下、３０，０００Ｄａ以下、１６，０００Ｄａ以下、または１０，０００Ｄａ以下であってよい。
【0020】
親水性ブロックの具体例としては、ポリエチレングリコール由来の繰り返し単位、ポリ（エチルエチレンホスフェート）由来の繰り返し単位、ポリビニルアルコール由来の繰り返し単位、ポリビニルピロリドン由来の繰り返し単位、ポリ（オキサゾリン）由来の繰り返し単位、およびポリ（Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）（ＰＨＰＭＡ）由来の繰り返し単位からなる群より選択される少なくとも１種の繰り返し単位を有するブロックが挙げられる。これらの例の中でも、親水性ブロックとしては、ポリエチレングリコール由来の繰り返し単位を有するブロックが好ましい。
【0021】
疎水性ブロックとしては、例えば、アミノ酸およびその誘導体に由来する繰り返し単位、好ましくはポリアミノ酸およびその誘導体に由来する繰り返し単位からなる群より選択される少なくとも１種の繰り返し単位を有するブロックが挙げられる。ポリアミノ酸の例としては、ポリリジン、ポリオルニチン、ポリ（２，６－ジアミノヘプタン酸）、ポリ（２，８－ジアミノオクタン酸）、ポリ（２，９－ジアミノノナン酸）、ポリアルギニンおよびポリヒスチジンが挙げられる。アミノ酸誘導体の例としては、ポリ［Ｎ－（２－アミノエチル）アスパルトアミド］（ＰＡｓｐ－（ＥＤＡ））、ポリ｛Ｎ－［Ｎ’－（２－アミノエチル）－２－アミノエチル］アスパルトアミド｝（ＰＡｓｐ（ＤＥＴ））、ポリ（Ｎ－｛Ｎ’－［Ｎ”－（２－アミノエチル）－２－アミノエチル］－２－アミノエチル｝アスパルトアミド）（ＰＡｓｐ（ＴＥＴ））およびポリ［Ｎ－（Ｎ’－｛Ｎ”－［Ｎ’’’－（２－アミノエチル）－２－アミノエチル］－２－アミノエチル｝－２－アミノエチル）アスパルトアミド］（ＰＡｓｐ（ＴＥＰ））が挙げられる。
これらの例の中でも、疎水性ブロックは、ポリリジンに由来する繰り返し構造で構成されていることが好ましい。
これらの例の中でも、疎水性ブロックは、ポリリジンに由来する繰り返し構造で構成されていることが好ましい。
【0022】
第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックと、第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックは、同じであっても異なっていてもよい。
第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックの繰り返し単位の数と、第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックの繰り返し単位の数は、同じであっても異なっていてもよい。
第１のブロック共重合体鎖の第１の疎水性ブロックと、第２のブロック共重合体鎖の第２の疎水性ブロックは、同じであっても異なっていてもよい。
第１のブロック共重合体鎖の第１の疎水性ブロックの繰り返し単位の数と、第２のブロック共重合体鎖の第２の疎水性ブロックの繰り返し単位の数は、同じであっても異なっていてもよい。
第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックの繰り返し単位の数と、第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックの繰り返し単位の数は、同じであっても異なっていてもよい。
第１のブロック共重合体鎖の第１の疎水性ブロックと、第２のブロック共重合体鎖の第２の疎水性ブロックは、同じであっても異なっていてもよい。
第１のブロック共重合体鎖の第１の疎水性ブロックの繰り返し単位の数と、第２のブロック共重合体鎖の第２の疎水性ブロックの繰り返し単位の数は、同じであっても異なっていてもよい。
【0023】
架橋ブロック部分は、ヒドラゾン結合を有するものであれば特に限定されない。架橋ブロック部分は、互いに架橋された第１の架橋ブロックと第２の架橋ブロックとで構成されていてもよい。第１の架橋ブロックと第２の架橋ブロックとを架橋する連結基は、ヒドラゾン結合を有する。以下、第１の架橋ブロックと第２の架橋ブロックは、「架橋ブロック」と総称されることがある。
典型的には、架橋ブロック部分は、第１の架橋ブロックの繰り返し単位と第２の架橋ブロックの繰り返し単位とがヒドラゾン結合によって連結された繰り返し単位を有する。アミノ酸およびその誘導体としては、例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、オルニチン、ベンジルアスパラギン酸、ベンジルグルタミン酸およびそれらの誘導体が挙げられる。架橋ブロックは、ポリアミノ酸またはその誘導体、例えば、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリリジン、ポリオルニチン、ポリ（ベンジルアスパラギン酸）およびポリ（ベンジルグルタミン酸）で構成されてもよい。
典型的には、架橋ブロック部分は、第１の架橋ブロックの繰り返し単位と第２の架橋ブロックの繰り返し単位とがヒドラゾン結合によって連結された繰り返し単位を有する。アミノ酸およびその誘導体としては、例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、オルニチン、ベンジルアスパラギン酸、ベンジルグルタミン酸およびそれらの誘導体が挙げられる。架橋ブロックは、ポリアミノ酸またはその誘導体、例えば、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリリジン、ポリオルニチン、ポリ（ベンジルアスパラギン酸）およびポリ（ベンジルグルタミン酸）で構成されてもよい。
【0024】
以下、第１の架橋ブロックの繰り返し単位と第２の架橋ブロックの繰り返し単位とがヒドラゾン結合によって連結された繰り返し単位は、「繰り返し単位（ｃ１）」と称されることがある。第２の架橋ブロックの繰り返し単位に架橋された第１の架橋ブロックの繰り返し単位は、「繰り返し単位（ｃ１－１）」と称されることがある。第１の架橋ブロックの繰り返し単位に架橋された第２の架橋ブロックの繰り返し単位は、「繰り返し単位（ｃ１－２）」と称されることがある。
一実施形態では、繰り返し単位（ｃ１）は、好ましくは式（ｃ１）で表される。架橋ブロック部分は、１種類の繰り返し単位（ｃ１）を有していてもよいし、２種類以上の繰り返し単位（ｃ１）を有していてもよい。
一実施形態では、繰り返し単位（ｃ１）は、好ましくは式（ｃ１）で表される。架橋ブロック部分は、１種類の繰り返し単位（ｃ１）を有していてもよいし、２種類以上の繰り返し単位（ｃ１）を有していてもよい。
【0025】
【化3】
【0026】
Ｌ１、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ２、ｍおよびｎは、下記式（Ｉ）中のＬ１、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ２、ｍおよびｎについて定義されるものと同じである。
【0027】
第１の架橋ブロックは、繰り返し単位（ｃ１－１）に加えて、第２の架橋ブロックの繰り返し単位と架橋していない繰り返し単位（ｃ２－１）を有していてもよい。第２の架橋ブロックは、繰り返し単位（ｃ１－２）に加えて、第１の架橋ブロックの繰り返し単位と架橋していない繰り返し単位（ｃ２－２）を有していてもよい。繰り返し単位（ｃ２－１）および繰り返し単位（ｃ２－２）は、アミノ酸またはその誘導体に由来し得る。アミノ酸およびその誘導体の例としては、上述したものと同じものが挙げられる。第１の架橋ブロックは、１種類の繰り返し単位（ｃ２－１）を有していてもよいし、２種類以上の繰り返し単位（ｃ２－１）を有していてもよい。第２の架橋ブロックは、１種類の繰り返し単位（ｃ２－２）を有していてもよいし、２種類以上の繰り返し単位（ｃ２－２）を有していてもよい。第１の架橋ブロックを構成するすべての繰り返し単位に対する繰り返し単位（ｃ１－１）の割合は、３０モル％以上、４０モル％以上、５０モル％以上、６０モル％以上であってよい。第２の架橋ブロックを構成するすべての繰り返し単位に対する繰り返し単位（ｃ１－２）の割合は、３０モル％以上、４０モル％以上、５０モル％以上、６０モル％以上であってよい。
【0028】
本実施形態では、ブロック共重合体は、式（Ｉ）で表されることが好ましい。
【0029】
【化4】
【0030】
式（Ｉ）中、Ａは親水性ブロックを構成する繰り返し単位を表し、親水性ブロックについて上述した繰り返し単位と同じ繰り返し単位を用いることができる。
式（Ｉ）中、Ｂはカチオン性疎水性ブロックを構成する繰り返し単位を表し、疎水性ブロックについて上述した繰り返し単位と同じ繰り返し単位を用いることができる。
ｍは、１または２、好ましくは１を表す。
ｎは、１または２、好ましくは１を表す。
式（Ｉ）中、Ｂはカチオン性疎水性ブロックを構成する繰り返し単位を表し、疎水性ブロックについて上述した繰り返し単位と同じ繰り返し単位を用いることができる。
ｍは、１または２、好ましくは１を表す。
ｎは、１または２、好ましくは１を表す。
【0031】
式（Ｉ）中、Ｌ１は２価の連結基を表す。２価の連結基は、特に制限されないが、その好ましい例としては、置換基を有していてもよい２価の炭化水素基、およびヘテロ原子を含有する２価の連結基が挙げられる。
【0032】
Ｌ１が置換基を有していてもよい２価の連結基である場合、炭化水素基は、脂肪族炭化水素基かまたは芳香族炭化水素基のいずれかであってよい。
【0033】
Ｌ１の脂肪族炭化水素基の例としては、直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基、およびその構造中に環を含有する脂肪族炭化水素基が挙げられる。
直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基は、好ましくは１～１０個の炭素原子、より好ましくは１～６個の炭素原子、さらに好ましくは１～４個の炭素原子、最も好ましくは１～３個の炭素原子を有する。
直鎖脂肪族炭化水素基としては、直鎖アルキレン基が好ましい。その具体例としては、メチレン基［－ＣＨ２－］、エチレン基［－（ＣＨ２）２－］、トリメチレン基［－（ＣＨ２）３－］、テトラメチレン基［－（ＣＨ２）４－］、ペンタメチレン基［－（ＣＨ２）５－］が挙げられる。
分枝脂肪族炭化水素基としては、分枝アルキレン基が好ましく、具体例としては、－ＣＨ（ＣＨ３）－、－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ３）２－、－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）２－などのアルキルメチレン基；－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２－、および－Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）２－ＣＨ２－などのアルキルエチレン基；－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２－、および－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－などのアルキルトリメチレン基；ならびに－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、および－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２－などのアルキルテトラメチレン基をはじめとする、さまざまなアルキルアルキレン基が挙げられる。アルキルアルキレン基内のアルキル基として、炭素原子数１～５の直鎖アルキル基が好ましい。
直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基は、置換基を有していても有していなくてもよい。置換基の例としては、フッ素原子、炭素原子数１～５のフッ素化アルキル基、カルボニル基が挙げられる。
直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基は、好ましくは１～１０個の炭素原子、より好ましくは１～６個の炭素原子、さらに好ましくは１～４個の炭素原子、最も好ましくは１～３個の炭素原子を有する。
直鎖脂肪族炭化水素基としては、直鎖アルキレン基が好ましい。その具体例としては、メチレン基［－ＣＨ２－］、エチレン基［－（ＣＨ２）２－］、トリメチレン基［－（ＣＨ２）３－］、テトラメチレン基［－（ＣＨ２）４－］、ペンタメチレン基［－（ＣＨ２）５－］が挙げられる。
分枝脂肪族炭化水素基としては、分枝アルキレン基が好ましく、具体例としては、－ＣＨ（ＣＨ３）－、－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ３）２－、－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）２－などのアルキルメチレン基；－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２－、および－Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）２－ＣＨ２－などのアルキルエチレン基；－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２－、および－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－などのアルキルトリメチレン基；ならびに－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、および－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２－などのアルキルテトラメチレン基をはじめとする、さまざまなアルキルアルキレン基が挙げられる。アルキルアルキレン基内のアルキル基として、炭素原子数１～５の直鎖アルキル基が好ましい。
直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基は、置換基を有していても有していなくてもよい。置換基の例としては、フッ素原子、炭素原子数１～５のフッ素化アルキル基、カルボニル基が挙げられる。
【0034】
Ｌ１の構造中に環を含む炭化水素基としては、例えば、その環構造中にヘテロ原子を含み、置換基（脂肪族炭化水素環から２個の水素原子が除去された基）を有していてもよい環状の脂肪族炭化水素基、上記鎖状の脂肪族炭化水素基の末端に環状の脂肪族炭化水素基が結合した基、上記直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基の内部に環状の脂肪族基が介在した基を挙げることができる。直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基として、上述した基と同じ基を使用することができる。
環状脂肪族炭化水素基は、好ましくは３～２０個の炭素原子、より好ましくは３～１２個の炭素原子を有する。
環状の脂肪族炭化水素基は、置換基を有していても有していなくてもよい。置換基の例としては、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシル基、カルボニル基が挙げられる。
環状脂肪族炭化水素基は、好ましくは３～２０個の炭素原子、より好ましくは３～１２個の炭素原子を有する。
環状の脂肪族炭化水素基は、置換基を有していても有していなくてもよい。置換基の例としては、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシル基、カルボニル基が挙げられる。
【0035】
Ｌ１の芳香族炭化水素基は、少なくとも１つの芳香環を有する炭化水素基である。
芳香環は、それが（４ｎ＋２）π電子を有する環状の共役化合物であれば特に限定されず、単環であっても多環であってもよい。芳香環は、好ましくは５～３０個の炭素原子、より好ましくは５～２０個の炭素原子、さらに好ましくは６～１５個の炭素原子、最も好ましくは６～１２個の炭素原子を有する。ここで、１または複数の置換基内の炭素原子の数は、芳香族炭化水素基の炭素原子の数に含められない。芳香環の例としては、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、フェナントレンなどの芳香族炭化水素環；および上記芳香族炭化水素環を構成する炭素原子の一部がヘテロ原子で置換された芳香族ヘテロ環が挙げられる。芳香族ヘテロ環内のヘテロ原子の例としては、酸素原子、硫黄原子、窒素原子が挙げられる。
芳香族ヘテロ環の具体例としては、ピリジン環およびチオフェン環が挙げられる。
芳香族炭化水素基の具体例としては、上記芳香族炭化水素環または芳香族ヘテロ環から２個の水素原子を除去した基（またはヘテロアリーレン基）；２個以上の芳香環を有する芳香族化合物（ビフェニル、フルオレンなど）から２個の水素原子を除去した基；および、上記芳香族炭化水素環または芳香族ヘテロ環の１個の水素原子がアルキレン基で置換された基（ベンジル基、フェネチル基、１－ナフチルメチル基、２－ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基、または２－ナフチルエチル基などの上記アリールアルキル基、またはヘテロアリールアルキル基の中のアリール基から１個の水素原子が除去された基）が挙げられる。上記アリール基またはヘテロアリール基に結合するアルキレン基は、好ましく１～４個の炭素原子、より好ましく１または２個の炭素原子、最も好ましくは１個の炭素原子を有する。
Ｌ１の芳香族炭化水素基に関して、芳香族炭化水素基内の水素原子は置換基で置換されていてもよい。例えば、芳香族炭化水素基内の芳香環に結合した水素原子は置換基で置換されていてもよい。置換基の例としては、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、およびヒドロキシル基が挙げられる。
芳香環は、それが（４ｎ＋２）π電子を有する環状の共役化合物であれば特に限定されず、単環であっても多環であってもよい。芳香環は、好ましくは５～３０個の炭素原子、より好ましくは５～２０個の炭素原子、さらに好ましくは６～１５個の炭素原子、最も好ましくは６～１２個の炭素原子を有する。ここで、１または複数の置換基内の炭素原子の数は、芳香族炭化水素基の炭素原子の数に含められない。芳香環の例としては、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、フェナントレンなどの芳香族炭化水素環；および上記芳香族炭化水素環を構成する炭素原子の一部がヘテロ原子で置換された芳香族ヘテロ環が挙げられる。芳香族ヘテロ環内のヘテロ原子の例としては、酸素原子、硫黄原子、窒素原子が挙げられる。
芳香族ヘテロ環の具体例としては、ピリジン環およびチオフェン環が挙げられる。
芳香族炭化水素基の具体例としては、上記芳香族炭化水素環または芳香族ヘテロ環から２個の水素原子を除去した基（またはヘテロアリーレン基）；２個以上の芳香環を有する芳香族化合物（ビフェニル、フルオレンなど）から２個の水素原子を除去した基；および、上記芳香族炭化水素環または芳香族ヘテロ環の１個の水素原子がアルキレン基で置換された基（ベンジル基、フェネチル基、１－ナフチルメチル基、２－ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基、または２－ナフチルエチル基などの上記アリールアルキル基、またはヘテロアリールアルキル基の中のアリール基から１個の水素原子が除去された基）が挙げられる。上記アリール基またはヘテロアリール基に結合するアルキレン基は、好ましく１～４個の炭素原子、より好ましく１または２個の炭素原子、最も好ましくは１個の炭素原子を有する。
Ｌ１の芳香族炭化水素基に関して、芳香族炭化水素基内の水素原子は置換基で置換されていてもよい。例えば、芳香族炭化水素基内の芳香環に結合した水素原子は置換基で置換されていてもよい。置換基の例としては、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、およびヒドロキシル基が挙げられる。
【0036】
Ｌ１がヘテロ原子を含有する２価の連結基を表す場合、連結基の好ましい例としては、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－（アルキル基、アシル基などの置換基で置換されていてもよい）、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｏ－、および、一般式：－Ｙ２１－Ｏ－Ｙ２２－、－Ｙ２１－Ｏ－、－Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｙ２１－、－［Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ］ｍ”－Ｙ２２－、－Ｙ２１－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｙ２２－または－Ｙ２１－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｏ－Ｙ２２－［式中、Ｙ２１およびＹ２２は、各々独立に、置換基を有していてもよい２価の炭化水素基を表し、Ｏは酸素原子を表し、ｍ’は０～３の整数を表す］で表される基が挙げられる。
ヘテロ原子を含有する２価の連結基が－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－または－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－である場合、Ｈはアルキル基、アシル基などの置換基で置換されていてもよい。置換基（アルキル基、アシル基など）は、好ましくは１～１０個の炭素原子、より好ましくは１～８個、最も好ましくは１～５個の炭素原子を有する。
一般式－Ｙ２１－Ｏ－Ｙ２２－、－Ｙ２１－Ｏ－、－Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｙ２１－、－［Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ］ｍ”－Ｙ２２－、－Ｙ２１－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｙ２２－または－Ｙ２１－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｏ－Ｙ２２－において、Ｙ２１およびＹ２２は各々独立に、置換基を有していてよい２価の炭化水素基を表す。２価の炭化水素基の例としては、上述の２価の連結基の説明において「置換基を有していてもよい２価の炭化水素基」として記載した基と同じ基が挙げられる。
Ｙ２１としては、直鎖脂肪族炭化水素基が好ましく、より好ましくは直鎖アルキレン基、さらに好ましくは炭素原子数１～５の直鎖アルキレン基であり、メチレン基またはエチレン基が特に望ましい。
Ｙ２２としては、直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基が好ましく、メチレン基、エチレン基またはアルキルメチレン基がより好ましい。アルキルメチレン基内のアルキル基は、炭素原子数１～５の直鎖アルキル基が好ましく、炭素原子数１～３直鎖アルキル基がより好ましく、メチル基が最も好ましい。
式－［Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ］ｍ”－Ｙ２２－で表される基では、ｍ”は、０～３の整数、好ましくは０～２の整数、より好ましくは０または１、最も好ましくは１を表す。すなわち、式－［Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ］ｍ”－Ｙ２２－で表される基は、式－Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｙ２２－で表される基であることが特に望ましい。これらの中でも、式－（ＣＨ２）ａ’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｂ’－で表される基が好ましい。式中、ａ’は、１～１０の整数、好ましくは１～８の整数、より好ましくは１～５の整数、さらに好ましくは１または２、最も好ましくは１である。ｂ’は、１～１０の整数、好ましくは１～８の整数、より好ましくは１～５の整数、さらに好ましくは１または２、最も好ましくは１である。
ヘテロ原子を含有する２価の連結基が－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－または－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－である場合、Ｈはアルキル基、アシル基などの置換基で置換されていてもよい。置換基（アルキル基、アシル基など）は、好ましくは１～１０個の炭素原子、より好ましくは１～８個、最も好ましくは１～５個の炭素原子を有する。
一般式－Ｙ２１－Ｏ－Ｙ２２－、－Ｙ２１－Ｏ－、－Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｙ２１－、－［Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ］ｍ”－Ｙ２２－、－Ｙ２１－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｙ２２－または－Ｙ２１－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｏ－Ｙ２２－において、Ｙ２１およびＹ２２は各々独立に、置換基を有していてよい２価の炭化水素基を表す。２価の炭化水素基の例としては、上述の２価の連結基の説明において「置換基を有していてもよい２価の炭化水素基」として記載した基と同じ基が挙げられる。
Ｙ２１としては、直鎖脂肪族炭化水素基が好ましく、より好ましくは直鎖アルキレン基、さらに好ましくは炭素原子数１～５の直鎖アルキレン基であり、メチレン基またはエチレン基が特に望ましい。
Ｙ２２としては、直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基が好ましく、メチレン基、エチレン基またはアルキルメチレン基がより好ましい。アルキルメチレン基内のアルキル基は、炭素原子数１～５の直鎖アルキル基が好ましく、炭素原子数１～３直鎖アルキル基がより好ましく、メチル基が最も好ましい。
式－［Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ］ｍ”－Ｙ２２－で表される基では、ｍ”は、０～３の整数、好ましくは０～２の整数、より好ましくは０または１、最も好ましくは１を表す。すなわち、式－［Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ］ｍ”－Ｙ２２－で表される基は、式－Ｙ２１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｙ２２－で表される基であることが特に望ましい。これらの中でも、式－（ＣＨ２）ａ’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｂ’－で表される基が好ましい。式中、ａ’は、１～１０の整数、好ましくは１～８の整数、より好ましくは１～５の整数、さらに好ましくは１または２、最も好ましくは１である。ｂ’は、１～１０の整数、好ましくは１～８の整数、より好ましくは１～５の整数、さらに好ましくは１または２、最も好ましくは１である。
【0037】
式（Ｉ）中、Ｌ１は、好ましくは２価の直鎖状または分枝状の炭化水素基または２価の芳香族炭化水素基、より好ましくは１個の水素原子がベンジル基から除去された基である。
【0038】
式（Ｉ）中、Ｒ１は、水素原子、脂肪族炭化水素基または芳香族炭化水素基を表す。
Ｒ１としての脂肪族炭化水素基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、およびペンチル基が挙げられる。Ｒ１としての脂肪族炭化水素基は、置換基を有していてもよい。置換基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、シクロヘキシル基、およびトリハロメチル基が挙げられる。
Ｒ１としての芳香族炭化水素基の例としては、フェニル基、ベンジル基、ピリジル基、ナフチル基、ヒドロキシフェニル基、メトキシフェニル基、エトキシフェニル基、キシリル基、メチルフェニル基、ニトロフェニル基、クロロフェニル基、フルオロフェニル基、ヨードフェニル基、およびブロモフェニル基が挙げられる。
これらの中でも、Ｒ１は、好ましくは水素原子または脂肪族炭化水素基であり、より好ましくは水素原子またはメチル基である。
Ｒ１としての脂肪族炭化水素基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、およびペンチル基が挙げられる。Ｒ１としての脂肪族炭化水素基は、置換基を有していてもよい。置換基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、シクロヘキシル基、およびトリハロメチル基が挙げられる。
Ｒ１としての芳香族炭化水素基の例としては、フェニル基、ベンジル基、ピリジル基、ナフチル基、ヒドロキシフェニル基、メトキシフェニル基、エトキシフェニル基、キシリル基、メチルフェニル基、ニトロフェニル基、クロロフェニル基、フルオロフェニル基、ヨードフェニル基、およびブロモフェニル基が挙げられる。
これらの中でも、Ｒ１は、好ましくは水素原子または脂肪族炭化水素基であり、より好ましくは水素原子またはメチル基である。
【0039】
式（Ｉ）中、Ｌ２の２価の連結基としては、Ｌ１について上述した基と同じの基が挙げられる。また、Ｌ２の２価の連結基は、式－ＬＲ－ＮＨ－Ｎ＝Ｃ（Ｒ１１）－Ｌ２１－ＮＨ－で表される基であってもよい。式中、Ｒ１１およびＬ２１は、それぞれ式（Ｉ）中のＲ１およびＬ１について上に定義したものと同じである。ＬＲはリンカーの２価の残基を表す。リンカーの例としては、ジヒドラジドリンカー、ジスルフィドリンカー、アセタールリンカー、およびケタールリンカーが挙げられる。
上記の例の中で、Ｌ２としては、単結合または式－ＬＲ－ＮＨ－Ｎ＝Ｃ（Ｒ１１）－Ｌ２１－ＮＨ－で表される基が好ましく、単結合がより好ましい。
上記の例の中で、Ｌ２としては、単結合または式－ＬＲ－ＮＨ－Ｎ＝Ｃ（Ｒ１１）－Ｌ２１－ＮＨ－で表される基が好ましく、単結合がより好ましい。
【0040】
（アニオン性分子薬物）
本明細書で使用される場合、「アニオン性分子薬物」とは、正味負電荷を有する薬物分子を指す。アニオン性分子薬物は、小分子薬物、中分子薬物、高分子薬物、または核酸薬物であり得る。核酸薬物の例としては、限定されるものではないが、アンチセンス核酸、低分子干渉核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、およびプラスミドＤＮＡが挙げられる。
アニオン性分子薬物は、分子量が２０，０００Ｄａ以下であることが好ましい。アニオン性分子薬物の分子量は、１５，０００Ｄａ以下、１０，０００Ｄａ以下、８，０００Ｄａ以下、５，０００Ｄａ以下、３，０００Ｄａ以下、２，０００Ｄａ以下、または１，０００Ｄａ以下であってよい。より具体的には、小分子薬物は、１，０００Ｄａ以下の分子量を有していてよい。核酸薬物は、２０，０００Ｄａ以下の分子量を有していてよい。
アニオン性分子薬物は、好ましくは、生理的ｐＨで－２５～－１の正味負電荷を有する。生理的ｐＨは、ｐＨ６．５～８、好ましくはｐＨ７～７．５であり得る。一実施形態では、生理的ｐＨは約ｐＨ７．４であり得る。
アニオン性分子薬物の例としては、シタラビン三リン酸、ゲムシタビン三リン酸、フルダラビン三リン酸、クラドリビン三リン酸、カペシタビン三リン酸、トロキサシタビン三リン酸、クロファラビン三リン酸、コンブレタスタチンＡ１二リン酸、アデノシン三リン酸、環状グアノシン一リン酸－アデノシン一リン酸、環状ジグアノシン一リン酸、パルミトイル補酵素Ａ、マロニル補酵素Ａが挙げられる。これらの例の中でも、シタラビン三リン酸、ゲムシタビン三リン酸が好ましい。
核酸薬物の具体例としては、限定されるものではあるが、ルシフェラーゼＡＳＯ、ホミビルセン、ミポメルセン、デフィブロチド、エテプリルセン、ペガプチニブ（ｐｅｇａｐｔｉｎｉｂ）、ヌシネルセンが挙げられる。これらの例の中で、ルシフェラーゼＡＳＯが好ましい。
本明細書で使用される場合、「アニオン性分子薬物」とは、正味負電荷を有する薬物分子を指す。アニオン性分子薬物は、小分子薬物、中分子薬物、高分子薬物、または核酸薬物であり得る。核酸薬物の例としては、限定されるものではないが、アンチセンス核酸、低分子干渉核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、およびプラスミドＤＮＡが挙げられる。
アニオン性分子薬物は、分子量が２０，０００Ｄａ以下であることが好ましい。アニオン性分子薬物の分子量は、１５，０００Ｄａ以下、１０，０００Ｄａ以下、８，０００Ｄａ以下、５，０００Ｄａ以下、３，０００Ｄａ以下、２，０００Ｄａ以下、または１，０００Ｄａ以下であってよい。より具体的には、小分子薬物は、１，０００Ｄａ以下の分子量を有していてよい。核酸薬物は、２０，０００Ｄａ以下の分子量を有していてよい。
アニオン性分子薬物は、好ましくは、生理的ｐＨで－２５～－１の正味負電荷を有する。生理的ｐＨは、ｐＨ６．５～８、好ましくはｐＨ７～７．５であり得る。一実施形態では、生理的ｐＨは約ｐＨ７．４であり得る。
アニオン性分子薬物の例としては、シタラビン三リン酸、ゲムシタビン三リン酸、フルダラビン三リン酸、クラドリビン三リン酸、カペシタビン三リン酸、トロキサシタビン三リン酸、クロファラビン三リン酸、コンブレタスタチンＡ１二リン酸、アデノシン三リン酸、環状グアノシン一リン酸－アデノシン一リン酸、環状ジグアノシン一リン酸、パルミトイル補酵素Ａ、マロニル補酵素Ａが挙げられる。これらの例の中でも、シタラビン三リン酸、ゲムシタビン三リン酸が好ましい。
核酸薬物の具体例としては、限定されるものではあるが、ルシフェラーゼＡＳＯ、ホミビルセン、ミポメルセン、デフィブロチド、エテプリルセン、ペガプチニブ（ｐｅｇａｐｔｉｎｉｂ）、ヌシネルセンが挙げられる。これらの例の中で、ルシフェラーゼＡＳＯが好ましい。
【0041】
第２の実施形態：
図２は、本発明のポリイオンコンプレックスミセルのもう一つの実施形態を示す模式図である。図２に示すように、ポリイオンコンプレックスミセル１’は、ブロック共重合体２’とアニオン性分子薬物３との自己組織化により形成される。具体的には、カチオン性疎水性ブロック部分Ｂとアニオン性分子薬物３との間のイオン相互作用により、アニオン性分子薬物３が担持されたコアＢ２が形成される。架橋ブロック部分Ｃは、コアＢ２を囲み、コアＢ２を安定化させる。親水性ブロック部分Ａがシェルを形成することにより、ポリイオンコンプレックスミセル１’が形成される。
図２は、本発明のポリイオンコンプレックスミセルのもう一つの実施形態を示す模式図である。図２に示すように、ポリイオンコンプレックスミセル１’は、ブロック共重合体２’とアニオン性分子薬物３との自己組織化により形成される。具体的には、カチオン性疎水性ブロック部分Ｂとアニオン性分子薬物３との間のイオン相互作用により、アニオン性分子薬物３が担持されたコアＢ２が形成される。架橋ブロック部分Ｃは、コアＢ２を囲み、コアＢ２を安定化させる。親水性ブロック部分Ａがシェルを形成することにより、ポリイオンコンプレックスミセル１’が形成される。
【0042】
架橋ブロック部分ＣがコアＢ２を取り囲んでいるため、細胞内のエンドソームのｐＨの低下のような生理学的誘因がない限り、アニオン性分子薬物３を漏出から防ぐことができる。
【0043】
ブロック共重合体２’は、第１のブロック共重合体鎖４と第２のブロック共重合体鎖５’で構成される。第１のブロック共重合体鎖４は、第１の親水性ブロック４Ａ、第１の架橋ブロック４Ｃ、第１のカチオン性疎水性ブロック４Ｂをこの順に含む。第２のブロック共重合体鎖５’は、第２の親水性ブロック５Ａ、および第２の架橋ブロック５Ｃを含む。ブロック共重合体２’は、第１のブロック共重合体鎖４の架橋ブロック４Ｃと第２のブロック共重合体鎖５’の架橋ブロック５Ｃとの間の架橋によって形成される。親水性ブロック部分Ａは、第１の親水性ブロック４Ａと第１の親水性ブロック５Ａを含む。疎水性ブロック部分Ｂは、第１の疎水性ブロック４Ｂを含む。
【0044】
本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルの粒径は、２０ｎｍ～１００ｎｍであることが好ましく、３５ｎｍ～５０ｎｍであることがより好ましい。さらに、ポリイオンコンプレックスミセルは、多分散指数が０．０５～０．３であることが好ましく、０．０５～０．１５であることがより好ましい。
【0045】
（ブロック共重合体）
親水性ブロック部分、第１の親水性ブロック、および第２の親水性ブロックは、上述したものと同じである。
架橋ブロック部分、第１の架橋ブロック、および第２の架橋ブロックは、上述したものと同じである。
本実施形態では、第２のブロック共重合体鎖は、疎水性ブロックを含まない。疎水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１の疎水性ブロックで構成されていてよい。第１の疎水性ブロックは、上記第１の実施形態の第１の疎水性ブロックと同じである。
親水性ブロック部分、第１の親水性ブロック、および第２の親水性ブロックは、上述したものと同じである。
架橋ブロック部分、第１の架橋ブロック、および第２の架橋ブロックは、上述したものと同じである。
本実施形態では、第２のブロック共重合体鎖は、疎水性ブロックを含まない。疎水性ブロック部分は、第１のブロック共重合体鎖の第１の疎水性ブロックで構成されていてよい。第１の疎水性ブロックは、上記第１の実施形態の第１の疎水性ブロックと同じである。
【0046】
第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックと、第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックは、同じであっても異なっていてもよい。
第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックの繰り返し単位の数と、第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックの繰り返し単位の数は、同じであっても異なっていてもよい。
第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックの繰り返し単位の数と、第２のブロック共重合体鎖の第２の親水性ブロックの繰り返し単位の数は、同じであっても異なっていてもよい。
【0047】
本実施形態では、ブロック共重合体は、式（ＩＩ）で表されることが好ましい。
【0048】
【化5】
【0049】
Ａ、Ｂ、ｍ、Ｌ１、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ２、およびｎは、それぞれ式（Ｉ）のＡ、Ｂ、ｍ、Ｌ１、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ２、およびｎについて定義したものと同じである。
【0050】
第２の架橋ブロックの末端基は特に限定されない。第２の架橋ブロックの末端基の例としては、限定されるものではないが、水素原子、１～５個の炭素原子を有するアシル基（例えば、アセチル基）、アミノ基、１～５個の炭素原子を有するアルキル基（例えば、メチル基）、１～５個の炭素原子を有するアルコキシ基（例えば、メトキシ基）が挙げられる。
【0051】
（アニオン性分子薬物）
アニオン性分子薬物は、上記の第１の実施形態のアニオン性分子薬物と同じである。
アニオン性分子薬物は、上記の第１の実施形態のアニオン性分子薬物と同じである。
【0052】
＜ポリイオンコンプレックスミセルの作製方法＞
第１の実施形態：
第１の実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、式（Ｉａ－１）で表される化合物（Ｉａ－１）と、式（Ｉａ－２）で表される化合物（Ｉａ－２）とを反応させて、式（Ｉ）で表されるブロック共重合体を得、このブロック共重合体をアニオン性分子薬物とともに自己組織化させることにより調製することができる。
第１の実施形態：
第１の実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、式（Ｉａ－１）で表される化合物（Ｉａ－１）と、式（Ｉａ－２）で表される化合物（Ｉａ－２）とを反応させて、式（Ｉ）で表されるブロック共重合体を得、このブロック共重合体をアニオン性分子薬物とともに自己組織化させることにより調製することができる。
【0053】
【化6】
【0054】
式（Ｉａ－１）中、Ｒａ１１は水素原子を表す。
式（Ｉａ－１）中、Ｒａ１２は、式（Ｉ）中のＲ１について定義したものと同じである。
Ｌａ１のアルキレン基、アリーレン基またはアラルキレン基として、式（Ｉ）のＬ１の２価の連結基について上述したのと同じアルキレン基、アリーレン基またはアラルキレン基が選択されてよい。
式（Ｉａ－１）中、Ｒａ１２は、式（Ｉ）中のＲ１について定義したものと同じである。
Ｌａ１のアルキレン基、アリーレン基またはアラルキレン基として、式（Ｉ）のＬ１の２価の連結基について上述したのと同じアルキレン基、アリーレン基またはアラルキレン基が選択されてよい。
【0055】
式（Ｉａ－２）中、Ｒａ２１は水素原子またはメチル基を、好ましくは水素原子を表す。
【0056】
本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルを作製するための反応スキームの一例を以下に示す。
【0057】
【化7】
【0058】
あるいは、式（Ｉ）中のＬ２が式－ＬＲ－ＮＨ－Ｎ＝Ｃ（Ｒ１）－Ｌ１－ＮＨ－で表される基である場合には、次式（Ｉｂ）で表されるブロック共重合体をリンカーで架橋して、式（Ｉ）で表されるブロック共重合体を得てもよい。
【0059】
【化8】
【0060】
本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルを作製するための代替反応スキームの一例を以下に示す。
【0061】
【化9】
【0062】
第２の実施形態：
第２の実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、式（ＩＩａ－１）で表される化合物（ＩＩａ－１）と、式（ＩＩａ－２）で表される化合物（ＩＩａ－２）とを反応させて、式（ＩＩ）で表されるブロック共重合体を得、このブロック共重合体をアニオン性分子薬物とともに自己集合させることにより調製することができる。
第２の実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、式（ＩＩａ－１）で表される化合物（ＩＩａ－１）と、式（ＩＩａ－２）で表される化合物（ＩＩａ－２）とを反応させて、式（ＩＩ）で表されるブロック共重合体を得、このブロック共重合体をアニオン性分子薬物とともに自己集合させることにより調製することができる。
【0063】
【化10】
【0064】
式（ＩＩａ－１）中のＲａ１１、Ｒａ１２およびＬａ１は、式（Ｉａ－１）中のＲａ１１、Ｒａ１２およびＬａ１について定義したものと同じである。
式（ＩＩａ－２）中のＲａ２１、Ｒａ２２およびＲａ２３は、式（Ｉａ－２）中のＲａ２１、Ｒａ２２およびＲａ２３について定義したものと同じである。
式（ＩＩａ－２）中のＲａ２１、Ｒａ２２およびＲａ２３は、式（Ｉａ－２）中のＲａ２１、Ｒａ２２およびＲａ２３について定義したものと同じである。
【0065】
本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルを作製するための反応スキームの一例を以下に示す。
【0066】
【化11】
【0067】
あるいは、式（ＩＩ）中のＬ２が式－ＬＲ－ＮＨ－Ｎ＝Ｃ（Ｒ１）－Ｌ１－ＮＨ－で表される基である場合には、式（ＩＩｂ－１）で表されるブロック共重合体と式（ＩＩｂ－２）で表されるブロック共重合体とを、リンカーを用いて架橋して、式（ＩＩ）で表されるブロック共重合体を得ることができる。
【0068】
【化12】
【0069】
式（ＩＩｂ－１）中のＲｂ１１、Ｒｂ１２およびＬｂ１は、それぞれ式（Ｉａ－１）のＲａ１１、Ｒａ１２およびＬａ１について定義したものと同じである。
式（ＩＩｂ－２）中のＲｂ２１、Ｒｂ２２およびＬｂ２は、それぞれ式（Ｉａ－１）のＲａ１１、Ｒａ１２およびＬａ１について定義したものと同じである。
式（ＩＩｂ－２）中のＲｂ２１、Ｒｂ２２およびＬｂ２は、それぞれ式（Ｉａ－１）のＲａ１１、Ｒａ１２およびＬａ１について定義したものと同じである。
【0070】
本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルを作製するための代替反応スキームの一例を以下に示す。
【0071】
【化13】
【0072】
ポリイオンコンプレックスミセルは、１種類のブロック共重合体または２種類以上のブロック共重合体を含んでいてよい。
ポリイオンコンプレックスミセルは、１種類のアニオン性分子薬物または２種類以上のアニオン性分子薬物を含んでいてよい。
ポリイオンコンプレックスミセルに含まれるブロック共重合体は、機能性分子と結合されていてもよい。機能性分子の例としては、例えば、標的部位にポリイオンコンプレックスミセルを送達するためのターゲティング分子が挙げられる。ターゲティング分子の例としては、特定の分子に特異的に結合することができる特異的結合分子、例えば、ペプチド、抗体またはその断片など、およびリガンド分子が挙げられる。機能性分子は、第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックの末端と、第２のブロック共重合体鎖第２の親水性ブロックの末端のいずれかまたは両方に結合されていてもよい。機能性分子は、クリックケミストリーなどの従来の方法によってブロック共重合体に結合させることができる。
ポリイオンコンプレックスミセルは、１種類のアニオン性分子薬物または２種類以上のアニオン性分子薬物を含んでいてよい。
ポリイオンコンプレックスミセルに含まれるブロック共重合体は、機能性分子と結合されていてもよい。機能性分子の例としては、例えば、標的部位にポリイオンコンプレックスミセルを送達するためのターゲティング分子が挙げられる。ターゲティング分子の例としては、特定の分子に特異的に結合することができる特異的結合分子、例えば、ペプチド、抗体またはその断片など、およびリガンド分子が挙げられる。機能性分子は、第１のブロック共重合体鎖の第１の親水性ブロックの末端と、第２のブロック共重合体鎖第２の親水性ブロックの末端のいずれかまたは両方に結合されていてもよい。機能性分子は、クリックケミストリーなどの従来の方法によってブロック共重合体に結合させることができる。
【0073】
上記の本発明によるポリイオンコンプレックスミセルは、親水性ブロック部分、カチオン性疎水性ブロック部分、および親水性ブロック部分とカチオン性疎水性ブロック部分との間に位置する架橋ブロック部分を有するブロック共重合体を含む。上記のように、アニオン性分子薬物が担持されたコアを架橋ブロック部分が取り囲み、親水性ブロック部分がシェルを形成するため、コアが安定化される。その結果、アニオン性分子薬物を安定に封入することが可能となる。特に、本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、従来の方法では安定に封入することができないアニオン性分子薬物に適用することができる。
さらに、本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、以下の利点を有する。サイズが約４０～５０ｎｍの単分散粒子が形成され、ほとんどの架橋ミセルは、従来の非架橋ミセルと比較して生理食塩水中で狭い多分散性を維持する。さらに、生理食塩水中での薬物の放出速度は、従来の非架橋ミセルよりも遅い。さらに、ポリマー構造を変更させて、さまざまな特性を付与することができる。
さらに、本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、優れた細胞膜透過性を有するため、細胞内への取り込みを効率的に行うことができる。
さらに、本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、以下の利点を有する。サイズが約４０～５０ｎｍの単分散粒子が形成され、ほとんどの架橋ミセルは、従来の非架橋ミセルと比較して生理食塩水中で狭い多分散性を維持する。さらに、生理食塩水中での薬物の放出速度は、従来の非架橋ミセルよりも遅い。さらに、ポリマー構造を変更させて、さまざまな特性を付与することができる。
さらに、本実施形態によるポリイオンコンプレックスミセルは、優れた細胞膜透過性を有するため、細胞内への取り込みを効率的に行うことができる。
【実施例】
【0074】
本発明を以下の実施例に基づいて詳細に説明する。しかし、本発明の実施形態は、これらの実施例の説明に限定されるものではない。
【0075】
［合成例１：トリブロック共重合体、ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）の合成］
トリブロックコポリマーＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）の合成は、以下のようにＮ－カルボキシ無水物（ＮＣＡ）開環重合（ＲＯＰ）によって行った。第１のＲＯＰステップの開始剤は、α－メトキシ－ω－アミノ－ポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ１２，０００；ＰＥＧ－ＮＨ２）であり、ＰＥＧ－ポリ（β－ベンジルＬ－アスパラギン酸）ジブロック共重合体（ＰＥＧ－ＰＢＬＡ）を生成した。ＰＥＧ－ＮＨ２を真空で一晩乾燥させ、ＤＭＦに溶解した。ＢＬＡ－ＮＣＡ（２２当量）もＤＭＦに溶解し、次に、Ａｒ雰囲気下でＰＥＧ－ＮＨ２溶液に添加し、その後、３５℃で７２時間反応させた。ポリマーを、ｎ－ヘキサンと酢酸エチル（６：４）の混合物中で沈殿させ、続いて濾過し、真空乾燥させることにより、反応混合物から分離した。
トリブロックコポリマーＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）の合成は、以下のようにＮ－カルボキシ無水物（ＮＣＡ）開環重合（ＲＯＰ）によって行った。第１のＲＯＰステップの開始剤は、α－メトキシ－ω－アミノ－ポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ１２，０００；ＰＥＧ－ＮＨ２）であり、ＰＥＧ－ポリ（β－ベンジルＬ－アスパラギン酸）ジブロック共重合体（ＰＥＧ－ＰＢＬＡ）を生成した。ＰＥＧ－ＮＨ２を真空で一晩乾燥させ、ＤＭＦに溶解した。ＢＬＡ－ＮＣＡ（２２当量）もＤＭＦに溶解し、次に、Ａｒ雰囲気下でＰＥＧ－ＮＨ２溶液に添加し、その後、３５℃で７２時間反応させた。ポリマーを、ｎ－ヘキサンと酢酸エチル（６：４）の混合物中で沈殿させ、続いて濾過し、真空乾燥させることにより、反応混合物から分離した。
【0076】
次に、得られたＰＥＧ－ＰＢＬＡをＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡの第２のＲＯＰの開始剤として使用して、ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）を得た。ＰＥＧ－ＰＢＬＡを真空で一晩乾燥させ、ＤＭＳＯに溶解した。Ｌｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ（４０当量）もＤＭＳＯに溶解した後、Ａｒ雰囲気下でＰＥＧ－ＰＢＬＡ溶液に添加し、その後、３５℃で７２時間反応させた。トリブロック共重合体を、ｎ－ヘキサンと酢酸エチル（６：４）の混合物中で沈殿させ、続いて濾過し、最後に真空乾燥させることにより、反応混合物から分離した。
【0077】
【化14】
【0078】
［合成例２：ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）のアミノリシスおよび脱保護］
ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）（５０ｍｇ）を、芳香族アミノアセタールリンカー、１－［４－（ジメトキシメチル）フェニル］メタンアミン（３０当量）を添加したＤＭＦに溶解した。反応混合物を４０℃で７２時間攪拌した。その後、３ｍＬのメタノールおよび１００μＬの５Ｎ ＮａＯＨを添加することにより、ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）鎖の脱保護を行った。反応を一晩進行させた。次に、透析液を５回交換した７５００Ｄａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）の透析バッグを使用して、混合物を希酸および水に対して４８時間透析した。酸に対して透析すると、アセタールはアルデヒド官能基に変換される。この溶液を真空下で凍結乾燥して、変性トリブロック共重合体（（ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ））を得た。
ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）（５０ｍｇ）を、芳香族アミノアセタールリンカー、１－［４－（ジメトキシメチル）フェニル］メタンアミン（３０当量）を添加したＤＭＦに溶解した。反応混合物を４０℃で７２時間攪拌した。その後、３ｍＬのメタノールおよび１００μＬの５Ｎ ＮａＯＨを添加することにより、ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）鎖の脱保護を行った。反応を一晩進行させた。次に、透析液を５回交換した７５００Ｄａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）の透析バッグを使用して、混合物を希酸および水に対して４８時間透析した。酸に対して透析すると、アセタールはアルデヒド官能基に変換される。この溶液を真空下で凍結乾燥して、変性トリブロック共重合体（（ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ））を得た。
【0079】
【化15】
【0080】
［合成例３：ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）のヒドラジン分解および脱保護］
ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）のヒドラジン分解は以下のように行った。ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）（５０ｍｇ）を、過剰量のヒドラジン一水和物（５０μＬ）を添加したＤＭＦに溶解した。反応混合物を４０℃で４時間攪拌した。その後、３ｍＬのメタノールおよび１００μＬの５Ｎ ＮａＯＨを添加することにより、ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）鎖の脱保護を行った。反応を一晩進行させた。次に、透析液を５回交換した７５００Ｄａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）の透析バッグを使用して、混合物を希酸および水に対して４８時間透析した。この溶液を真空下で凍結乾燥して、変性トリブロック共重合体（ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）－ＰＬｙｓ）を得た。
ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）のヒドラジン分解は以下のように行った。ＰＥＧ－ＰＢＬＡ－ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）（５０ｍｇ）を、過剰量のヒドラジン一水和物（５０μＬ）を添加したＤＭＦに溶解した。反応混合物を４０℃で４時間攪拌した。その後、３ｍＬのメタノールおよび１００μＬの５Ｎ ＮａＯＨを添加することにより、ＰＬｙｓ（ＴＦＡ）鎖の脱保護を行った。反応を一晩進行させた。次に、透析液を５回交換した７５００Ｄａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）の透析バッグを使用して、混合物を希酸および水に対して４８時間透析した。この溶液を真空下で凍結乾燥して、変性トリブロック共重合体（ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）－ＰＬｙｓ）を得た。
【0081】
【化16】
【0082】
［実施例１：ポリイオンコンプレックスミセル（１）の調製］
トリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ（１）およびトリブロック共重合体（ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）－ＰＬｙｓ）のポリマー溶液をそれぞれ１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に２ｍｇ／ｍＬの濃度で分散させた。得られた溶液を１ｍＭゲムシタビン三リン酸と単純に混合してカチオン対アニオン比を１：１にし、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。ミセルを４℃で４８時間架橋させた後、０．２２μＭシリンジフィルターに通した。図１に示されるように、架橋ミセル（ポリイオンコンプレックスミセル（１））が、アニオン性薬物カーゴをもつポリマーの自動的な自己組織化により形成され、以下の反応スキームに示されるように、ポリマー間でヒドラゾン結合の形成が起こった。
トリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ（１）およびトリブロック共重合体（ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）－ＰＬｙｓ）のポリマー溶液をそれぞれ１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に２ｍｇ／ｍＬの濃度で分散させた。得られた溶液を１ｍＭゲムシタビン三リン酸と単純に混合してカチオン対アニオン比を１：１にし、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。ミセルを４℃で４８時間架橋させた後、０．２２μＭシリンジフィルターに通した。図１に示されるように、架橋ミセル（ポリイオンコンプレックスミセル（１））が、アニオン性薬物カーゴをもつポリマーの自動的な自己組織化により形成され、以下の反応スキームに示されるように、ポリマー間でヒドラゾン結合の形成が起こった。
【0083】
【化17】
【0084】
［実施例２：ポリイオンコンプレックスミセル（２）の調製］
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ（１）の代わりに、ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）の鎖長が１２～２２繰り返し単位であるトリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ（２）を使用したことを除いて、実施例１と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（２）を得た。
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ（１）の代わりに、ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）の鎖長が１２～２２繰り返し単位であるトリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ（２）を使用したことを除いて、実施例１と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（２）を得た。
【0085】
［実施例３：ポリイオンコンプレックスミセル（３）の調製］
トリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓの代わりに、トリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（芳香族ケトン）－ＰＬｙｓ（ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＫｅｔ）－ＰＬｙｓ（１））を使用したことを除いて、実施例１と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（３）を得た。
トリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓの代わりに、トリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（芳香族ケトン）－ＰＬｙｓ（ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＫｅｔ）－ＰＬｙｓ（１））を使用したことを除いて、実施例１と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（３）を得た。
【0086】
［実施例４：ポリイオンコンプレックスミセル（４）の調製］
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＫｅｔ）－ＰＬｙｓ（１）の代わりに、ＰＡｓｐ（ＡｒＫｅｔ）の鎖長が１２～２２繰り返し単位であるトリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＫｅｔ）－ＰＬｙｓ（２）を使用したことを除いて、実施例３と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（４）を得た。
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＫｅｔ）－ＰＬｙｓ（１）の代わりに、ＰＡｓｐ（ＡｒＫｅｔ）の鎖長が１２～２２繰り返し単位であるトリブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＫｅｔ）－ＰＬｙｓ（２）を使用したことを除いて、実施例３と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（４）を得た。
【0087】
［実施例５：ポリイオンコンプレックスミセル（５）の調製］
ゲムシタビン三リン酸の代わりにシタラビン三リン酸を使用したことを除いて、実施例１と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（５）を得た。
ゲムシタビン三リン酸の代わりにシタラビン三リン酸を使用したことを除いて、実施例１と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（５）を得た。
【0088】
［比較例１：比較ポリイオンコンプレックスミセル（１）の調製］
ジブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＬｙｓのポリマー溶液を、１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に２ｍｇ／ｍＬの濃度で分散させた。これを１ｍＭゲムシタビン三リン酸と単純に混合してカチオン対アニオン比を１：１にし、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。ミセルは、アニオン性薬物カーゴをもつポリマーの自動自己組織化によって形成された。次に、溶液を０．２２μＭシリンジフィルターに通して、比較ポリイオンコンプレックスミセル（１）を得た。
ジブロック共重合体ＰＥＧ－ＰＬｙｓのポリマー溶液を、１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に２ｍｇ／ｍＬの濃度で分散させた。これを１ｍＭゲムシタビン三リン酸と単純に混合してカチオン対アニオン比を１：１にし、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。ミセルは、アニオン性薬物カーゴをもつポリマーの自動自己組織化によって形成された。次に、溶液を０．２２μＭシリンジフィルターに通して、比較ポリイオンコンプレックスミセル（１）を得た。
【0089】
［比較例２：比較ポリイオンコンプレックスミセル（２）の調製］
ゲムシタビン三リン酸の代わりにシタラビン三リン酸を使用したことを除いて、比較例１と同じ手順を行って、比較ポリイオンコンプレックスミセル（２）を得た。
ゲムシタビン三リン酸の代わりにシタラビン三リン酸を使用したことを除いて、比較例１と同じ手順を行って、比較ポリイオンコンプレックスミセル（２）を得た。
【0090】
［ミセル径および多分散指数の評価（１）］
ポリイオンコンプレックスミセル（１）、ポリイオンコンプレックスミセル（５）、比較ポリイオンコンプレックスミセル（１）および比較ポリイオンコンプレックスミセル（２）に関して、ミセル径と多分散指数（ＰＤＩ）を、動的光散乱（ＤＬＳ）技術を用いて取得した。測定条件は以下の通りであった。
温度：２５℃、測定角度：後方散乱１７３°、サンプルホルダー：石英キュベット、自動アテニュエータ検出、フィルタなし。
結果を表１に示す。
ポリイオンコンプレックスミセル（１）、ポリイオンコンプレックスミセル（５）、比較ポリイオンコンプレックスミセル（１）および比較ポリイオンコンプレックスミセル（２）に関して、ミセル径と多分散指数（ＰＤＩ）を、動的光散乱（ＤＬＳ）技術を用いて取得した。測定条件は以下の通りであった。
温度：２５℃、測定角度：後方散乱１７３°、サンプルホルダー：石英キュベット、自動アテニュエータ検出、フィルタなし。
結果を表１に示す。
【0091】
【表1】
【0092】
［薬物放出の評価］
ポリイオンコンプレックスミセル（１）および比較ポリイオンコンプレックスミセル（１）について、薬物放出を以下のように評価した。
ミセル溶液を、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ遠心フィルタ（ＭＷＣＯ１００００）にピペットで入れ、回転させた（１４０００ｇ、１５分、４℃）。次に、濾液を収集し、秤量した後、ＵＶ透過性９６ウェルプレートに移した。その２５９ｎｍでのＵＶ吸収をマイクロプレートリーダーを用いて測定した。薬物封入量は、ミセルを形成するために添加した元の（±）－Ｃ７５－ＣｏＡ溶液の吸光度に対する濾液の吸光度の比を得ることによって計算した。
結果を表２に示す。
ポリイオンコンプレックスミセル（１）および比較ポリイオンコンプレックスミセル（１）について、薬物放出を以下のように評価した。
ミセル溶液を、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ遠心フィルタ（ＭＷＣＯ１００００）にピペットで入れ、回転させた（１４０００ｇ、１５分、４℃）。次に、濾液を収集し、秤量した後、ＵＶ透過性９６ウェルプレートに移した。その２５９ｎｍでのＵＶ吸収をマイクロプレートリーダーを用いて測定した。薬物封入量は、ミセルを形成するために添加した元の（±）－Ｃ７５－ＣｏＡ溶液の吸光度に対する濾液の吸光度の比を得ることによって計算した。
結果を表２に示す。
【0093】
【表2】
【0094】
［実施例６：ポリイオンコンプレックスミセル（６）の調製］
ゲムシタビン三リン酸の代わりにルシフェラーゼＡＳＯを使用したことを除いて、実施例１と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（６）を得た。
ゲムシタビン三リン酸の代わりにルシフェラーゼＡＳＯを使用したことを除いて、実施例１と同じ手順を行って、ポリイオンコンプレックスミセル（６）を得た。
【0095】
［比較例３：比較ポリイオンコンプレックスミセル（３）の調製］
ゲムシタビン三リン酸の代わりにルシフェラーゼＡＳＯを使用したことを除いて、比較例１と同じ手順を行って、比較ポリイオンコンプレックスミセル（３）を得た。
［ミセル径および多分散指数の評価（２）］
ポリイオンコンプレックスミセル（６）および比較ポリイオンコンプレックスミセル（３）に関して、上記「ミセル径および多分散指数の評価（１）」と同様の方法で、ミセル径および多分散指数（ＰＤＩ）を評価した。
結果を表３に示す。
ゲムシタビン三リン酸の代わりにルシフェラーゼＡＳＯを使用したことを除いて、比較例１と同じ手順を行って、比較ポリイオンコンプレックスミセル（３）を得た。
［ミセル径および多分散指数の評価（２）］
ポリイオンコンプレックスミセル（６）および比較ポリイオンコンプレックスミセル（３）に関して、上記「ミセル径および多分散指数の評価（１）」と同様の方法で、ミセル径および多分散指数（ＰＤＩ）を評価した。
結果を表３に示す。
【0096】
【表3】
【0097】
［細胞取り込みの評価］
＜架橋ポリイオンコンプレックスミセルの調製＞
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ １２－２２（ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）の鎖長：１２～２２繰り返し単位）およびＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）－ＰＬｙｓ １２－２２（ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）の鎖長：１２～２２繰り返し単位）ポリマー溶液を、１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に１０ｍｇ／ｍＬの濃度でそれぞれ分散させた。これらの溶液を７．８８ｍＭのＦｌｕｏｒ－ＣｏＡ（Ｐａｒａｉｓｏ ＷＫＤら、Ｂｉｏｍａｔｅｒ．Ｓｃｉ．９（２１）、７０７６－７０９１（２０２１））と単純に混合して１：１のカチオン対アニオン比を達成し、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。ミセルを４℃で２４時間架橋させた後、０．２２μＭシリンジフィルターに通した。得られた架橋ポリイオンコンプレックスミセルのサイズは４４±０．４ｎｍ、多分散指数は０．０８３であった。
＜架橋ポリイオンコンプレックスミセルの調製＞
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ １２－２２（ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）の鎖長：１２～２２繰り返し単位）およびＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）－ＰＬｙｓ １２－２２（ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）の鎖長：１２～２２繰り返し単位）ポリマー溶液を、１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に１０ｍｇ／ｍＬの濃度でそれぞれ分散させた。これらの溶液を７．８８ｍＭのＦｌｕｏｒ－ＣｏＡ（Ｐａｒａｉｓｏ ＷＫＤら、Ｂｉｏｍａｔｅｒ．Ｓｃｉ．９（２１）、７０７６－７０９１（２０２１））と単純に混合して１：１のカチオン対アニオン比を達成し、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。ミセルを４℃で２４時間架橋させた後、０．２２μＭシリンジフィルターに通した。得られた架橋ポリイオンコンプレックスミセルのサイズは４４±０．４ｎｍ、多分散指数は０．０８３であった。
【0098】
＜ＤＥＴミセルの調製＞
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＤＥＴ）１２－６９のポリマー溶液を、１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で分散させた。この溶液を７．８８ｍＭのＦｌｕｏｒ－ＣｏＡと単純に混合して１：１のカチオン対アニオン比を達成し、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。次に、溶液を０．２２μＭシリンジフィルターに通した。
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＤＥＴ）１２－６９のポリマー溶液を、１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で分散させた。この溶液を７．８８ｍＭのＦｌｕｏｒ－ＣｏＡと単純に混合して１：１のカチオン対アニオン比を達成し、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。次に、溶液を０．２２μＭシリンジフィルターに通した。
【0099】
＜評価方法＞
ポリイオンコンプレックスミセルの細胞取り込みをＲＰＭＩ２６５０透過モデル（Ｒｅｉｃｈｌ Ｓ，Ｂｅｃｋｅｒ Ｋ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６４（１１），１６２１－１６３０（２０１２））によって評価した。Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｃａｒｔｅｒ Ｄら（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２８（６）（２０１６））に報告されているように、ポリイオンコンプレックスミセルおよびＦｌｕｏｒ－ＣｏＡの透過係数の測定を行った。ＲＰＭＩ２６５０（ヒト鼻上皮癌、ムチン発現細胞）を細胞として使用した。
ポリイオンコンプレックスミセルの細胞取り込みをＲＰＭＩ２６５０透過モデル（Ｒｅｉｃｈｌ Ｓ，Ｂｅｃｋｅｒ Ｋ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６４（１１），１６２１－１６３０（２０１２））によって評価した。Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｃａｒｔｅｒ Ｄら（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２８（６）（２０１６））に報告されているように、ポリイオンコンプレックスミセルおよびＦｌｕｏｒ－ＣｏＡの透過係数の測定を行った。ＲＰＭＩ２６５０（ヒト鼻上皮癌、ムチン発現細胞）を細胞として使用した。
【0100】
【0101】
［トランスウェル透過性の評価］
＜架橋ポリイオンコンプレックスミセルの調製＞
Ｆｌｕｏｒ－ＣｏＡの代わりに４ｋＤａのＦＩＴＣ－デキストランを使用したことを除いて、［細胞取り込みの評価］に記載した手順と同じ手順を行った。
＜架橋ポリイオンコンプレックスミセルの調製＞
Ｆｌｕｏｒ－ＣｏＡの代わりに４ｋＤａのＦＩＴＣ－デキストランを使用したことを除いて、［細胞取り込みの評価］に記載した手順と同じ手順を行った。
【0102】
＜評価方法＞
トランスウェルを用いたＲＰＭＩ２６５０の培養は、図５に示すタイムラインに従って行った。トランスウェル透過性は、Ｒｅｉｃｈｌ Ｓら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６４（１１），１６２１－１６３０（２０１２））に記載されている方法によって測定した。
トランスウェルを用いたＲＰＭＩ２６５０の培養は、図５に示すタイムラインに従って行った。トランスウェル透過性は、Ｒｅｉｃｈｌ Ｓら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６４（１１），１６２１－１６３０（２０１２））に記載されている方法によって測定した。
【0103】
＜結果＞
結果を図６に示した。ＦＩＴＣ－デキストラン４ｋＤａは、透過性が低かったため、最小限の傍細胞輸送を示した。ＦＩＴＣ－デキストラン７０ｋＤａは膜を全く通過できなかった。対照的に、架橋ポリイオンコンプレックスミセルは良好なトランスウェル透過性を示した。
結果を図６に示した。ＦＩＴＣ－デキストラン４ｋＤａは、透過性が低かったため、最小限の傍細胞輸送を示した。ＦＩＴＣ－デキストラン７０ｋＤａは膜を全く通過できなかった。対照的に、架橋ポリイオンコンプレックスミセルは良好なトランスウェル透過性を示した。
【0104】
［脳細胞への細胞取り込みの評価］
＜架橋ポリイオンコンプレックスミセルの調製＞
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）１２－３８（ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）の鎖長：１２～３８繰り返し単位）の調製は、Ｓ，Ｃａｂｒａｌ Ｈら（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ １８８，６７－７７（２０１４））に記載の方法に従って行った。
＜架橋ポリイオンコンプレックスミセルの調製＞
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）１２－３８（ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）の鎖長：１２～３８繰り返し単位）の調製は、Ｓ，Ｃａｂｒａｌ Ｈら（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ １８８，６７－７７（２０１４））に記載の方法に従って行った。
【0105】
【化18】
【0106】
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ １２－２２およびＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）１２－３８のポリマー溶液をそれぞれ１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で分散させた。これらの溶液を７．８８ｍＭのＦｌｕｏｒ－ＣｏＡと単純に混合して１：１のカチオン対アニオン比を達成し、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。ミセルを４℃で２４時間架橋させた後、０．２２μＭシリンジフィルターに通した。得られた架橋ポリイオンコンプレックスミセルのサイズは４３±０．４３ｎｍ、多分散指数は０．１３であった。図２は、架橋ポリイオンコンプレックスミセルの模式図を示す。
【0107】
＜非架橋ポリイオンコンプレックスミセルの調製＞
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ １２－２２のポリマー溶液を、１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で分散させた。この溶液を７．８８ｍＭのＦｌｕｏｒ－ＣｏＡと単純に混合して１：１のカチオン対アニオン比を達成し、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。次に、溶液を０．２２μＭシリンジフィルターに通した。図７は、非架橋ポリイオンコンプレックスミセルの模式図を示す。得られた非架橋ポリイオンコンプレックスミセルのサイズは４３±０．９７ｎｍ、多分散指数は０．１３であった。
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（ＡｒＡｌｄ）－ＰＬｙｓ １２－２２のポリマー溶液を、１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）ｐＨ５に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で分散させた。この溶液を７．８８ｍＭのＦｌｕｏｒ－ＣｏＡと単純に混合して１：１のカチオン対アニオン比を達成し、１０ｍＭ ＰＢ ｐＨ７．４で所望の濃度に希釈した後、ボルテックスした。次に、溶液を０．２２μＭシリンジフィルターに通した。図７は、非架橋ポリイオンコンプレックスミセルの模式図を示す。得られた非架橋ポリイオンコンプレックスミセルのサイズは４３±０．９７ｎｍ、多分散指数は０．１３であった。
【0108】
＜評価方法＞
ＲＰＭＩ２６５０の代わりにＫＴ－５（星状細胞）、ＢＶ－２（ミクログリア）、ＧＴ１－７（神経細胞）、またはラット初代脳内皮細胞を使用したことを除いて、［細胞取り込みの評価］に記載した手順と同じ手順を使用した。
ＲＰＭＩ２６５０の代わりにＫＴ－５（星状細胞）、ＢＶ－２（ミクログリア）、ＧＴ１－７（神経細胞）、またはラット初代脳内皮細胞を使用したことを除いて、［細胞取り込みの評価］に記載した手順と同じ手順を使用した。
【0109】
＜結果＞
結果を図８～１１に示した。いずれの細胞においても、架橋ポリイオンコンプレックスミセルは、非架橋ポリイオンコンプレックスミセルよりも効率的に細胞に取り込まれた。
結果を図８～１１に示した。いずれの細胞においても、架橋ポリイオンコンプレックスミセルは、非架橋ポリイオンコンプレックスミセルよりも効率的に細胞に取り込まれた。
【0110】
［ペプチド結合ミセルの作製］
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）１２－３８（メトキシ末端を有する）の代わりにアジド末端ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）１２－３８を使用したことを除いて、［脳細胞への細胞取り込みの評価］に記載した手順と同じ手順を使用した。ＤＢＣＯ結合ペプチドのクリックコンジュゲーショは、Ｔａｋｅｍｏｔｏ Ｈら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．２３（８）、１５０３－１５０６（２０１２））に記載されるように、凍結融解法を用いて行った。手短に言えば、ＤＢＣＯペプチドとアジド末端ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）を等モル濃度で混合し、－３０℃で８時間凍結させた。結果として生じるペプチド結合ポリマーを４℃で２時間解凍させ、次に、重炭酸アンモニウム緩衝液に対して透析し、凍結乾燥させて、結果として生じるポリマーを得た。
ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）１２－３８（メトキシ末端を有する）の代わりにアジド末端ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）１２－３８を使用したことを除いて、［脳細胞への細胞取り込みの評価］に記載した手順と同じ手順を使用した。ＤＢＣＯ結合ペプチドのクリックコンジュゲーショは、Ｔａｋｅｍｏｔｏ Ｈら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．２３（８）、１５０３－１５０６（２０１２））に記載されるように、凍結融解法を用いて行った。手短に言えば、ＤＢＣＯペプチドとアジド末端ＰＥＧ－ＰＡｓｐ（Ｈｙｄ）を等モル濃度で混合し、－３０℃で８時間凍結させた。結果として生じるペプチド結合ポリマーを４℃で２時間解凍させ、次に、重炭酸アンモニウム緩衝液に対して透析し、凍結乾燥させて、結果として生じるポリマーを得た。
【0111】
本発明の好ましい実施形態を上記で説明および例示したが、これらは本発明の例示であり、限定するものと見なされるべきではないことを理解されたい。本発明の精神または範囲を逸脱することなく、追加、省略、置換、およびその他の変更を行うことができる。したがって、本発明は、前述の説明によって限定されると見なされるべきではなく、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【国際調査報告】