特表 2024-502670 ＧＡＲＰタンパク質抗体及びその適用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-22

(54)【発明の名称】ＧＡＲＰタンパク質抗体及びその適用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240115BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240115BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240115BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240115BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240115BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240115BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240115BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20240115BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240115BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240115BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240115BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240115BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240115BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20240115BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

C07K16/18

A61K39/395 T

A61K45/00

A61P35/00

A61K39/395 D

A61K47/68

A61K31/7088

A61K35/12

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023542963

(86)(22)【出願日】2022-01-17

(85)【翻訳文提出日】2023-09-07

(86)【国際出願番号】 CN2022072265

(87)【国際公開番号】W WO2022152285

(87)【国際公開日】2022-07-21

(31)【優先権主張番号】202110065290.8

(32)【優先日】2021-01-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521155852

【氏名又は名称】シャンハイ ジェミンケア ファーマシューティカル カンパニー，リミティド

(71)【出願人】

【識別番号】521155863

【氏名又は名称】チアンシー ジェミンケア グループ カンパニー、リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(72)【発明者】

【氏名】チャン チエンチエン

(72)【発明者】

【氏名】パン チョンツォン

(72)【発明者】

【氏名】ヤン シンシウ

(72)【発明者】

【氏名】リウ シアオウー

(72)【発明者】

【氏名】ヤン ルー

(72)【発明者】

【氏名】リウ ペイペイ

(72)【発明者】

【氏名】ツァオ シアオタン

(72)【発明者】

【氏名】トン スーチュン

(72)【発明者】

【氏名】ワン シュエピン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZB26

4C084ZC751

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC23

4C085DD61

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA03

4C086MA05

4C086NA05

4C086NA13

4C086ZB26

4C086ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB63

4C087CA12

4C087MA02

4C087NA05

4C087NA13

4C087ZB26

4C087ZC75

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA72

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

ＧＡＲＰタンパク質抗体、及びＧＡＲＰタンパク質抗体を含むか又は発現する細胞が提供される。このＧＡＲＰタンパク質抗体は、ヒトＧＡＲＰ／ヒトＴＧＦ－β１複合体へ、Ｋ_Ｄ値約１．０Ｅ－１２以下で結合する。ＧＡＲＰタンパク質抗体及び免疫チェックポイント阻害剤を含む医薬品組合せ、並びにそれらの使用も、提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記の特性の１又は複数を有する、単離された抗原－結合タンパク質：
ａ）ＯｃｔｅｔアッセイにおいてＫ_Ｄ値約１．０Ｅ－１２以下でヒトＧＡＲＰ／ヒトＴＧＦ－β１複合体へ結合すること；
ｂ）ヒトＧＡＲＰのみを発現している細胞又はヒトＴＧＦ－β１のみを発現している細胞には結合しないこと；
ｃ）Ｔｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化を阻害すること；
ｄ）ヒトＧＡＲＰ／ヒトＴＧＦ－β１を発現しているＨＥＫ２９３Ｔ細胞からのＴＧＦ－β１の放出を阻害すること；
ｅ）Ｔｒｅｇ細胞が、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からのＩＬ－２及びＩＦＮ－γの放出を阻害することを妨げること；並びに
ｆ）ヒトＰＢＭＣ移植したマウスＧｖＨＤモデルにおいて、ヒトＰＢＭＣにより誘導されたＧｖＨＤに対するＴｒｅｇ細胞の阻害作用をブロックすること。

【請求項2】

配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項3】

配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含む、請求項１または２に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項4】

配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項5】

配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域ＶＨを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項6】

Ｈ－ＦＲ１のＣ－末端側が、ＨＣＤＲ１のＮ－末端側側に、直接又は間接に連結され、並びにＨ－ＦＲ１が、配列番号：４６に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｈ－ＦＲ１を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項7】

前記Ｈ－ＦＲ１が、配列番号：５及び配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項8】

Ｈ－ＦＲ２が、ＨＣＤＲ１とＨＣＤＲ２の間に配置され、並びにＨ－ＦＲ２が、配列番号：４７に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｈ－ＦＲ２を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項9】

前記Ｈ－ＦＲ２が、配列番号：６及び配列番号：２３のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項10】

Ｈ－ＦＲ３が、ＨＣＤＲ２とＨＣＤＲ３の間に配置され、並びにＨ－ＦＲ３が、配列番号：４８に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｈ－ＦＲ３を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項11】

前記Ｈ－ＦＲ３が、配列番号：７及び配列番号：２４のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項12】

Ｈ－ＦＲ４のＮ－末端側が、ＨＣＤＲ３のＣ－末端側に、直接又は間接に連結され、並びにＨ－ＦＲ４が、配列番号：４９に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｈ－ＦＲ４を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項13】

前記Ｈ－ＦＲ４が、配列番号：８及び配列番号：２５のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項14】

配列番号：４６に示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ１、配列番号：４７に示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ２、配列番号：４８に示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ３、及び配列番号：４９に示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ４を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項15】

配列番号：５及び配列番号：２２のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ１、配列番号：６及び配列番号：２３のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ２、配列番号：７及び配列番号：２４のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ３、並びに配列番号：８及び配列番号：２５のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ４を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項16】

前記Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、及びＨ－ＦＲ４が、以下からなる群のいずれか一つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の単離された抗原－結合タンパク質：
ａ）Ｈ－ＦＲ１：配列番号：５、Ｈ－ＦＲ２：配列番号：６、Ｈ－ＦＲ３：配列番号：７、及びＨ－ＦＲ４：配列番号：８；
ｂ）Ｈ－ＦＲ１：配列番号：２２、Ｈ－ＦＲ２：配列番号：２３、Ｈ－ＦＲ３：配列番号：２４、及びＨ－ＦＲ４：配列番号：２５。

【請求項17】

配列番号：５０に示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項18】

前記ＶＨが、配列番号：１及び配列番号：２１のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項19】

配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項20】

配列番号：４５に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項21】

配列番号：１１及び配列番号：２８のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項22】

配列番号：４４に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項23】

配列番号：１０及び配列番号：２７のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項24】

配列番号：４４に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号：４５に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項25】

配列番号：１０及び配列番号：２７のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号：１１及び配列番号：２８のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域ＶＬを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項26】

前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３が、以下からなる群のいずれか一つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の単離された抗原－結合タンパク質：
ａ）ＬＣＤＲ１：配列番号：１０、ＬＣＤＲ２：配列番号：１１、及びＬＣＤＲ３：配列番号：１２；
ｂ）ＬＣＤＲ１：配列番号：２７、ＬＣＤＲ２：配列番号：２８、及びＬＣＤＲ３：配列番号：１２。

【請求項27】

Ｌ－ＦＲ１のＣ－末端側が、ＬＣＤＲ１のＮ－末端側に、直接又は間接に連結され、並びにＬ－ＦＲｌが、配列番号：５２に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｌ－ＦＲ１を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項28】

前記Ｌ－ＦＲ１が、配列番号：１３及び配列番号：２９のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項29】

Ｌ－ＦＲ２が、ＬＣＤＲ１とＬＣＤＲ２の間に配置され、並びにＬ－ＦＲ２が、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｌ－ＦＲ２を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項30】

Ｌ－ＦＲ３が、ＬＣＤＲ２とＬＣＤＲ３の間に配置され、並びにＬ－ＦＲ３が、配列番号：５３に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｌ－ＦＲ３を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項31】

前記Ｌ－ＦＲ３が、配列番号：１５及び配列番号：３０のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項32】

Ｌ－ＦＲ４のＮ－末端側が、ＬＣＤＲ３のＣ－末端側に、直接又は間接に連結され、並びにＬ－ＦＲ４が、配列番号：５４に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｌ－ＦＲ４を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項33】

前記Ｌ－ＦＲ４が、配列番号：１６及び配列番号：３１のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項34】

配列番号：５２に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ１、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ２、配列番号：５３に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ３、並びに配列番号：５４に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ４を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項35】

配列番号：１３及び配列番号：２９のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ１、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ２、配列番号：１５及び配列番号：３０のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ３、並びに配列番号：１６及び配列番号：３１のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ４を含む、請求項１～３４のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項36】

前記Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、及びＬ－ＦＲ４が、以下からなる群のいずれか一つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の単離された抗原－結合タンパク質：
ａ）Ｌ－ＦＲ１：配列番号：１３、Ｌ－ＦＲ２：配列番号：１４、Ｌ－ＦＲ３：配列番号：１５、及びＨ－ＦＲ４：配列番号：１６；
ｂ）Ｌ－ＦＲ１：配列番号：２９、Ｌ－ＦＲ２：配列番号：１４、Ｌ－ＦＲ３：配列番号：３０、及びＨ－ＦＲ４：配列番号：３１。

【請求項37】

配列番号：５１に示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項38】

配列番号：９及び配列番号：２６のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項39】

ＩｇＧ－由来の定常領域又はＩｇＹ－由来の定常領域を含む重鎖定常領域を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項40】

前記重鎖定常領域が、ヒトＩｇＧ４－由来の定常領域を含む、請求項３９に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項41】

前記重鎖定常領域が、配列番号：１７に示されたアミノ酸配列を含む、請求項３９～４０のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項42】

軽鎖定常領域を含み、並びにこの抗体軽鎖定常領域が、Ｉｇκ－由来の定常領域又はＩｇλ－由来の定常領域を含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項43】

前記軽鎖定常領域が、ヒトＩｇκ－由来の定常領域を含む、請求項４２に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項44】

前記軽鎖定常領域が、配列番号：１８に示されたアミノ酸配列を含む、請求項４２～４３のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項45】

配列番号：１９及び配列番号：３２のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む重鎖ＨＣを含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項46】

配列番号：２０及び配列番号：３３のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む軽鎖ＬＣを含む、請求項１～４５のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項47】

配列番号：１９及び配列番号：３２のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨＣ、並びに配列番号：２０及び配列番号：３３のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬＣを含む、請求項１～４６のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項48】

前記ＨＣ及びＬＣが、以下からなる群のいずれか一つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の単離された抗原－結合タンパク質：
ａ）ＨＣ：配列番号：１９及びＬＣ：配列番号：２０；
ｂ）ＨＣ：配列番号：３２及びＬＣ：配列番号：３３。

【請求項49】

抗体又はその抗原－結合断片を含む、請求項１～４８のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項50】

前記抗原－結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ジ－ｓｃＦｖ、ＶＨＨ、及び／又はｄＡｂを含む、請求項４９に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項51】

前記抗体が、モノクローナル抗体、一本鎖抗体、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及び完全ヒト抗体からなる群から選択される、請求項４９～５０のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質。

【請求項52】

請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質を含む、ポリペプチド。

【請求項53】

請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質又は請求項５２に記載のポリペプチドを含む、イムノコンジュゲート。

【請求項54】

更に医薬として許容し得る治療薬を含む、請求項５３に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項55】

前記治療薬が、細胞傷害性薬剤及び細胞分裂阻害剤の群から選択される、請求項５４に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項56】

請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質又は請求項５２のポリペプチドをコードしている、単離された核酸分子。

【請求項57】

請求項５６に記載の単離された核酸分子を含む、ベクター。

【請求項58】

請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質、請求項５２に記載のポリペプチド、請求項５３～５５のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート、請求項５６に記載の単離された核酸分子、及び／又は請求項５７に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項59】

請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質又は請求項５２に記載のポリペプチドを発現することが可能である条件下で、請求項５８に記載の細胞を培養することを含む、請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質又は請求項５２に記載のポリペプチドを調製する方法。

【請求項60】

請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質、請求項５２に記載のポリペプチド、請求項５３～５５のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート、請求項５６に記載の単離された核酸分子、請求項５７に記載のベクター、請求項５８に記載の細胞、並びに／又は医薬として許容し得るアジュバント及び／もしくは賦形剤を含有する、医薬組成物。

【請求項61】

請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質及び免疫チェックポイント阻害剤を含む、医薬品組合せ。

【請求項62】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用を阻害する物質を含む、請求項６１記載の医薬品組合せ。

【請求項63】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断薬、ＰＤ－１拮抗剤、ＰＤ－Ｌ１拮抗剤、ＰＤ－１阻害剤、及びＰＤ－Ｌ１阻害剤からなる群から選択される、請求項６１～６２のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項64】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体を含む、請求項６１～６３のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項65】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：３７に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む、請求項６４記載の医薬品組合せ。

【請求項66】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：３６に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含む、請求項６４～６５のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項67】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：３５に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１を含む、請求項６４～６６のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項68】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：３５に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号：３６に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号：３７に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ＶＨを含む、請求項６４～６７のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項69】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：３４に示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを含む、請求項６４～６８のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項70】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：４１に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項６４～６９のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項71】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：４０に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２を含む、請求項６４～７０のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項72】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：３９に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１を含む、請求項６４～７１のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項73】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：３９に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号：４０に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号：４１に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む、請求項６４～７２のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項74】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号：３８に示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む、請求項６４～７３のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項75】

前記抗－ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブを包含する、請求項６４～７４のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項76】

医薬組成物であることができる、請求項６１～７５のいずれか一項に記載の医薬品組合せ。

【請求項77】

請求項６１～７６のいずれか一項に記載の医薬品組合せを含む、キット。

【請求項78】

腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための、請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質、請求項５２に記載のポリペプチド、請求項５３～５５のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート、請求項５６に記載の単離された核酸分子、請求項５７に記載のベクター、請求項５８に記載の細胞、及び／又は請求項６０に記載の医薬組成物。

【請求項79】

前記腫瘍が、充実性腫瘍を包含する、請求項７８に記載の使用。

【請求項80】

前記腫瘍が、ＧＡＲＰタンパク質の発現に関連した腫瘍を包含する、請求項７８～７９のいずれか一項に記載の使用。

【請求項81】

前記腫瘍が、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する、請求項７８～８０のいずれか一項に記載の使用。

【請求項82】

腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための、請求項６１～７６のいずれか一項に記載の医薬品組合せ、及び／又は請求項７７に記載のキット。

【請求項83】

前記腫瘍が、充実性腫瘍を包含する、請求項８２に記載の使用。

【請求項84】

前記腫瘍が、ＧＡＲＰの発現に関連した腫瘍を包含する、請求項８２～８３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項85】

前記腫瘍が、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する、請求項８２～８４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項86】

腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための医薬品の製造における、請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質、請求項５２に記載のポリペプチド、請求項５３～５５のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート、請求項５６に記載の単離された核酸分子、請求項５７に記載のベクター、請求項５８に記載の細胞、及び／又は請求項６０に記載の医薬組成物の使用。

【請求項87】

前記腫瘍が、充実性腫瘍を包含する、請求項８６に記載の使用。

【請求項88】

前記腫瘍が、ＧＡＲＰの発現に関連した腫瘍を包含する、請求項８６～８７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項89】

前記腫瘍が、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する、請求項８６～８８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項90】

腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための医薬品の調製における、請求項６１～７６のいずれか一項に記載の医薬品組合せ及び／又は請求項７７に記載のキットの使用。

【請求項91】

前記腫瘍が、充実性腫瘍を包含する、請求項９０に記載の使用。

【請求項92】

前記腫瘍が、ＧＡＲＰの発現に関連した腫瘍を包含する、請求項９０～９１のいずれか一項に記載の使用。

【請求項93】

前記腫瘍が、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する、請求項９０～９２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項94】

請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原－結合タンパク質、請求項５２に記載のポリペプチド、請求項５３～５５のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート、請求項５６に記載の単離された核酸分子、請求項５７に記載のベクター、請求項５８に記載の細胞、及び／又は請求項６０に記載の医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象へ投与することを含む、疾患又は障害の予防及び／又は治療のための方法であって、ここで該疾患又は障害が、腫瘍を包含する、方法。

【請求項95】

前記腫瘍が、充実性腫瘍を包含する、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

前記腫瘍が、ＧＡＲＰの発現に関連した腫瘍を包含する、請求項９４～９５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項97】

前記腫瘍が、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する、請求項９４～９６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項98】

請求項６１～７６のいずれか一項に記載の医薬品組合せの有効量を、それを必要とする対象へ投与することを含む、疾患又は障害の予防及び／又は治療のための方法であって、ここで該疾患又は障害が、腫瘍を包含する、方法。

【請求項99】

前記腫瘍が、充実性腫瘍を包含する、請求項９８に記載の方法。

【請求項100】

前記腫瘍が、ＧＡＲＰの発現に関連した腫瘍を包含する、請求項９８～９９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項101】

前記腫瘍が、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する、請求項９８～１００のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の技術分野
本願は、バイオ医薬の分野、特にＧＡＲＰタンパク質抗体及びその使用に関連している。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、自己免疫疾患及び腫瘍形成に密接に関連しており、その異常な活性は、自己免疫疾患又は腫瘍形成を引き起こし得る。免疫学の分野における最新研究の活発な分野としてのＴｒｅｇ細胞は、低い免疫応答及び免疫抑制作用の２つの特徴を有し、且つ「活性」モードで免疫系を阻害することにより、負の免疫調節において役割を果たしている。Ｔｒｅｇは、その起源及び作用機序に応じて、天然のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ（内在性制御性Ｔ細胞、ｎＴｒｅｇ）及び誘導型適応制御性Ｔ細胞（ａＴｒｅｇ又はｉＴｒｅｇ）に分類され得る。

【0003】

８０ｋＤａのＩ型膜糖タンパク質としての、ＧＡＲＰ（ヒト反復優位糖タンパク質Ａ）タンパク質は、巨核球、血小板、及び活性型制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）上に発現され、ロイシン－リッチ反復配列－含有タンパク質ファミリーに属する。ＴＧＦ－βは不活性状態で、不活性結合タンパク質ＬＡＰとケージ構造を形成し、これはＧＡＲＰ、インテグリン、プロテアーゼ又は他の基質により活性化され、活性型ＴＧＦ－βを形成することができ、これがオートクリン又はパラクリンを介して受容体に結合することにより、細胞のシグナル伝達を活性化する。ＴＧＦ－βシグナル伝達は、チェックポイント遮断療法に対し抵抗性の腫瘍の発達に主に関与していると考えられる。例えば、免疫抑制性細胞及び免疫抑制性因子は、腫瘍微小環境においてＴＧＦ－βにより増加される。

【0004】

免疫抑制性サイトカインとしてのＴＧＦ－βは、異なる機序を介して免疫応答を広範に阻害することができる。ＴＧＦ－βは、全て重要な抗－腫瘍作用を提供するＴｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、及び細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の分化及び機能を低減する。ＴＧＦ－βはまた、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の数及び機能を調節することにより、免疫寛容及び腫瘍免疫回避（ｔｕｍｏｒ ｅｖａｓｉｏｎ）を増強する。加えてＴＧＦ－βは、細胞増殖を阻害するか又は刺激することにより、免疫細胞の運命を制御し、これにより胸腺及び末梢のＴ細胞の発達に影響を及ぼす。

【0005】

現在、全てのＴＧＦ－βアイソフォームは、ほとんどの臨床抗体により中和され、このことは大きな安全性の問題を有する。ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β１複合体を標的化する療法は、Ｔｒｅｇからの活性型ＴＧＦ－β１の放出を阻害することができ、これによりＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の抗－腫瘍活性を増大する。現時点で、全てのＴＧＦ－βアイソフォームを広範に遮断するよりも、より少ない副作用、高い安全性、及び腫瘍微小環境に対する少ない有害作用を有するＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β１複合体に対する新規抗体の緊急の必要性が存在する。

【発明の概要】

【0006】

発明の要約
本願は、１）ＯｃｔｅｔアッセイにおいてＫ_Ｄ値約１．０Ｅ－１２以下でヒトＧＡＲＰ／ヒトＴＧＦ－β１複合体へ結合すること；２）ヒトＧＡＲＰのみを発現している細胞又はヒトＴＧＦ－β１のみを発現している細胞には結合しないこと；３）Ｔｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化を阻害すること；４）ヒトＧＡＲＰ／ヒトＴＧＦ－β１を発現しているＨＥＫ２９３Ｔ細胞からのＴＧＦ－β１の放出を阻害すること；５）Ｔｒｅｇ細胞が、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からのＩＬ－２及びＩＦＮ－γの放出を阻害することを妨げること；並びに、６）ヒトＰＢＭＣ移植したマウスＧｖＨＤモデルにおいて、ヒトＰＢＭＣにより誘導されたＧｖＨＤに対するＴｒｅｇ細胞の阻害作用をブロックすること：の特性の１又は複数を有する、単離された抗原－結合タンパク質を提供する。一局面において、本願は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む、単離された抗原－結合タンパク質を提供する。

【0007】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含む。

【0008】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１を含む。

【0009】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域ＶＨを含む。

【0010】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ１のＣ－末端側が、ＨＣＤＲ１のＮ－末端側側に、直接又は間接に連結され、並びにＨ－ＦＲ１が、配列番号：４６に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｈ－ＦＲ１を含む。

【0011】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ１は、配列番号：５及び配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含む。

【0012】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ２が、ＨＣＤＲ１とＨＣＤＲ２の間に配置され、並びにＨ－ＦＲ２が、配列番号：４７に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｈ－ＦＲ２を含む。

【0013】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ２は、配列番号：６及び配列番号：２３のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む。

【0014】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ３が、ＨＣＤＲ２とＨＣＤＲ３の間に配置され、並びにＨ－ＦＲ３が、配列番号：４８に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｈ－ＦＲ３を含む。

【0015】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ３は、配列番号：７及び配列番号：２４のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む。

【0016】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ４のＮ－末端側が、ＨＣＤＲ３のＣ－末端側に、直接又は間接に連結され、並びにＨ－ＦＲ４が、配列番号：４９に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｈ－ＦＲ４を含む。

【0017】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ４は、配列番号：８及び配列番号：２５のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む。

【0018】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：４６に示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ１、配列番号：４７に示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ２、配列番号：４８に示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ３、及び配列番号：４９に示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ４を含む。

【0019】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：５及び配列番号：２２のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ１、配列番号：６及び配列番号：２３のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ２、配列番号：７及び配列番号：２４のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ３、並びに配列番号：８及び配列番号：２５のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨ－ＦＲ４を含む。

【0020】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、及びＨ－ＦＲ４は：
ａ）Ｈ－ＦＲ１：配列番号：５、Ｈ－ＦＲ２：配列番号：６、Ｈ－ＦＲ３：配列番号：７、及びＨ－ＦＲ４：配列番号：８；
ｂ）Ｈ－ＦＲ１：配列番号：２２、Ｈ－ＦＲ２：配列番号：２３、Ｈ－ＦＲ３：配列番号：２４、及びＨ－ＦＲ４：配列番号：２５：
からなる群のいずれか一つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0021】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：５０に示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを含む。

【0022】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＶＨは、配列番号：１及び配列番号：２１のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む。

【0023】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。

【0024】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：４５に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２を含む。

【0025】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：１１及び配列番号：２８のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２を含む。

【0026】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：４４に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１を含む。

【0027】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：１０及び配列番号：２７に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１を含む。

【0028】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：４４に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号：４５に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む。

【0029】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：１０及び配列番号：２７のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号：１１及び配列番号：２８のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域ＶＬを含む。

【0030】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３は：
ａ）ＬＣＤＲ１：配列番号：１０、ＬＣＤＲ２：配列番号：１１、及びＬＣＤＲ３：配列番号：１２；
ｂ）ＬＣＤＲ１：配列番号：２７、ＬＣＤＲ２：配列番号：２８、及びＬＣＤＲ３：配列番号：１２：
からなる群のいずれか一つから選択されるアミノ酸配列を有する。

【0031】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ１のＣ－末端側が、ＬＣＤＲ１のＮ－末端側に、直接又は間接に連結され、並びにＬ－ＦＲｌが、配列番号：５２に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｌ－ＦＲ１を含む。

【0032】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ１は、配列番号：１３及び配列番号：２９のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む。

【0033】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ２が、ＬＣＤＲ１とＬＣＤＲ２の間に配置され、並びにＬ－ＦＲ２が、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｌ－ＦＲ２を含む。

【0034】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ３が、ＬＣＤＲ２とＬＣＤＲ３の間に配置され、並びにＬ－ＦＲ３が、配列番号：５３に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｌ－ＦＲ３を含む。

【0035】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ３は、配列番号：１５及び配列番号：３０のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む。

【0036】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ４のＮ－末端側が、ＬＣＤＲ３のＣ－末端側に、直接又は間接に連結され、並びにＬ－ＦＲ４が、配列番号：５４に示されたアミノ酸配列を含むような、Ｌ－ＦＲ４を含む。

【0037】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ４は、配列番号：１６及び配列番号：３１のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む。

【0038】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：５２に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ１、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ２、配列番号：５３に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ３、並びに配列番号：５４に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ４を含む。

【0039】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：１３及び配列番号：２９のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ１、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ２、配列番号：１５及び配列番号：３０のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ３、並びに配列番号：１６及び配列番号：３１のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ４を含む。

【0040】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、及びＬ－ＦＲ４は：
ａ）Ｌ－ＦＲ１：配列番号：１３、Ｌ－ＦＲ２：配列番号：１４、Ｌ－ＦＲ３：配列番号：１５、及びＨ－ＦＲ４：配列番号：１６；
ｂ）Ｌ－ＦＲ１：配列番号：２９、Ｌ－ＦＲ２：配列番号：１４、Ｌ－ＦＲ３：配列番号：３０、及びＨ－ＦＲ４：配列番号：３１：
からなる群のいずれか一つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0041】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：５１に示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む。

【0042】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＶＬは、配列番号：９及び配列番号：２６のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む。

【0043】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、ＩｇＧ－由来の定常領域又はＩｇＹ－由来の定常領域を含む重鎖定常領域を含む。

【0044】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ４－由来の定常領域を含む。

【0045】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質重鎖定常領域は、配列番号：１７に示されたアミノ酸配列を含む。

【0046】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、軽鎖定常領域を含み、並びにこの抗体軽鎖定常領域は、Ｉｇκ－由来の定常領域又はＩｇλ－由来の定常領域を含む。

【0047】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質軽鎖定常領域は、ヒトＩｇκ－由来の定常領域を含む。

【0048】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質軽鎖定常領域は、配列番号：１８に示されたアミノ酸配列を含む。

【0049】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：１９及び配列番号：３２のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む重鎖ＨＣを含む。

【0050】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：２０及び配列番号：３３のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む軽鎖ＬＣを含む。

【0051】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、配列番号：１９及び配列番号：３２のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＨＣ、並びに配列番号：２０及び配列番号：３３のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含むＬＣを含む。

【0052】

一部の実施態様において、この抗原－結合タンパク質のＨＣ及びＬＣは：
ａ）ＨＣ：配列番号：１９及びＬＣ：配列番号：２０；
ｂ）ＨＣ：配列番号：３２及びＬＣ：配列番号：３３：
からなる群のいずれか一つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0053】

一部の実施態様において、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体又はその抗原－結合断片を含む。

【0054】

一部の実施態様において、この抗原－結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ジ－ｓｃＦｖ、ＶＨＨ、及び／又はｄＡｂを含む。

【0055】

一部の実施態様において、この抗体は、モノクローナル抗体、一本鎖抗体、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及び完全ヒト抗体からなる群から選択される。

【0056】

別の局面において、本願は、この単離された抗原－結合タンパク質を含むポリペプチドを提供する。

【0057】

別の局面において、本願は、この単離された抗原－結合タンパク質又はポリペプチドを含むイムノコンジュゲートを提供する。

【0058】

一部の実施態様において、このイムノコンジュゲートは、医薬として許容し得る治療薬も包含する。

【0059】

一部の実施態様において、この治療薬は、細胞傷害性薬剤及び細胞分裂阻害剤の群から選択される。

【0060】

別の局面において、本願は、この単離された抗原－結合タンパク質、又はポリペプチドをコードしている単離された核酸分子を提供する。

【0061】

別の局面において、本願は、この単離された核酸分子を含むベクターを提供する。

【0062】

別の局面において、本願は、この単離された抗原－結合タンパク質、ポリペプチド、イムノコンジュゲート、単離された核酸分子、及び／又はベクターを含む、細胞を提供する。

【0063】

別の局面において、本願は、この単離された抗原－結合タンパク質又はポリペプチドを発現することが可能である条件下で、細胞を培養することを含む、この単離された抗原－結合タンパク質又はポリペプチドを調製する方法を提供する。

【0064】

別の局面において、本願は、この単離された抗原－結合タンパク質、ポリペプチド、イムノコンジュゲート、単離された核酸分子、ベクター、細胞、並びに／又は医薬として許容し得るアジュバント及び／もしくは賦形剤を含有する、医薬組成物を提供する。

【0065】

別の局面において、本願は、この単離された抗原－結合タンパク質及び免疫チェックポイント阻害剤を含む、医薬品組合せを提供する。

【0066】

一部の実施態様において、この免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用を阻害する物質を含む。

【0067】

一部の実施態様において、この免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断薬、ＰＤ－１拮抗剤、ＰＤ－Ｌ１拮抗剤、ＰＤ－１阻害剤、及びＰＤ－Ｌ１阻害剤からなる群から選択される。

【0068】

一部の実施態様において、この免疫チェックポイント阻害剤は、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。

【0069】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３７に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む。

【0070】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３６に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含む。

【0071】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３５に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１を含む。

【0072】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３５に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号：３６に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号：３７に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ＶＨを含む。

【0073】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３４に示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを含む。

【0074】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：４１に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。

【0075】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：４０に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２を含む。

【0076】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３９に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１を含む。

【0077】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３９に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号：４０に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号：４１に示されたアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む。

【0078】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３８に示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む。

【0079】

一部の実施態様において、この抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブを包含する。

【0080】

一部の実施態様において、この医薬品組合せは、医薬組成物であることができる。

【0081】

別の局面において、本願は、この医薬品組合せを含むキットを提供する。

【0082】

別の局面において、本願は、腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための、この単離された抗原－結合タンパク質、ポリペプチド、イムノコンジュゲート、単離された核酸分子、ベクター、細胞、及び／又は医薬組成物を提供する。

【0083】

一部の実施態様において、この腫瘍は、充実性腫瘍を包含する。

【0084】

一部の実施態様において、この腫瘍は、ＧＡＲＰタンパク質の発現に関連した腫瘍を包含する。

【0085】

一部の実施態様において、この腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する。

【0086】

別の局面において、本願は、腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための、この医薬品組合せ及び／又はキットを提供する。

【0087】

一部の実施態様において、この腫瘍は、充実性腫瘍を包含する。

【0088】

一部の実施態様において、この腫瘍は、ＧＡＲＰタンパク質の発現に関連した腫瘍を包含する。

【0089】

一部の実施態様において、この腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する。

【0090】

別の局面において、本願は、腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための医薬品の製造における、この単離された抗原－結合タンパク質、ポリペプチド、イムノコンジュゲート、単離された核酸分子、ベクター、細胞、及び／又は医薬組成物の使用を提供する。

【0091】

一部の実施態様において、この腫瘍は、充実性腫瘍、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する。

【0092】

一部の実施態様において、この腫瘍は、ＧＡＲＰタンパク質の発現に関連した腫瘍を包含する。

【0093】

一部の実施態様において、この腫瘍は、メラノーマを包含する。

【0094】

別の局面において、本願は、腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための医薬品の製造における、この医薬品組合せ及び／又はキットの使用を提供する。

【0095】

一部の実施態様において、この腫瘍は、充実性腫瘍を包含する。

【0096】

一部の実施態様において、この腫瘍は、ＧＡＲＰタンパク質の発現に関連した腫瘍を包含する。

【0097】

一部の実施態様において、この腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する。

【0098】

別の局面において、本願は、この単離された抗原－結合タンパク質、単離された核酸分子、ベクター、細胞、及び／又は医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象へ投与することを含む、疾患又は障害の予防及び／又は治療のための方法であって、ここで該疾患又は障害が腫瘍を包含する方法を提供する。

【0099】

一部の実施態様において、この腫瘍は、充実性腫瘍を包含する。

【0100】

一部の実施態様において、この腫瘍は、ＧＡＲＰタンパク質の発現に関連した腫瘍を包含する。

【0101】

一部の実施態様において、この腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する。

【0102】

別の局面において、本願は、この医薬品組合せの有効量を、それを必要とする対象へ投与することを含む、疾患又は障害の予防及び／又は治療のための方法であって、ここで該疾患又は障害が腫瘍を包含する方法を提供する。

【0103】

一部の実施態様において、この腫瘍は、充実性腫瘍を包含する。

【0104】

一部の実施態様において、この腫瘍は、ＧＡＲＰタンパク質の発現に関連した腫瘍を包含する。

【0105】

一部の実施態様において、この腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍を包含する。

【0106】

本願の他の局面及び利点は、以下の詳細な説明から当業者には容易に明らかになるであろう。本願の例証的実施態様のみが、以下の詳細な説明において示され且つ説明されている。当業者により認められるように、本願の内容は、当業者が、本願が関係する本願の精神及び範囲から逸脱することなく、開示された具体的実施態様に改変を行うことを可能にする。従って、図面及びその説明は、限定としてではなく、事実上例証とみなされるべきである。

【図面の簡単な説明】

【0107】

図面の簡単な説明
本願が関連する本願の具体的特徴は、添付された請求項に示されている。本願が関連する本願の特徴及び利点は、以下に詳細に説明される例証的実施態様及び図面を参照し、より良く理解されるであろう。図面の簡単な説明は、以下のとおりである：

【0108】

【図1A】図１Ａ－１Ｄは、本明細書記載の抗原－結合タンパク質抗原－結合活性を示す。

【図1B】図１Ａ－１Ｄは、本明細書記載の抗原－結合タンパク質抗原－結合活性を示す。

【図1C】図１Ａ－１Ｄは、本明細書記載の抗原－結合タンパク質抗原－結合活性を示す。

【図1D】図１Ａ－１Ｄは、本明細書記載の抗原－結合タンパク質抗原－結合活性を示す。

【図2】図２は、本願の例証的マウス抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３による遮断実験の結果を示す。

【図3A】図３Ａ－３Ｂは、本願の例証的マウス抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３の、Ｔｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化に対する作用を示す。

【図3B】図３Ａ－３Ｂは、本願の例証的マウス抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３の、Ｔｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化に対する作用を示す。

【図4】図４は、本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の、Ｔｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化に対する作用を示す。

【図5】図５は、本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞からのＴＧＦ－β１の放出に対する作用を示す。

【図6A】図６Ａ－６Ｂは、本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の、ＰＢＭＣからのＩＬ－２及びＩＦＮ－γの放出に対する作用を示す。

【図6B】図６Ａ－６Ｂは、本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の、ＰＢＭＣからのＩＬ－２及びＩＦＮ－γの放出に対する作用を示す。

【図7A】図７Ａは、ヒト化ＦｃＲｎマウスモデルにおける本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示す。

【図7B】図７Ｂは、ヒト化ＦｃＲｎマウスモデルにおける本明細書記載のＭＨＧ８抗体の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示す。

【図8A】図８Ａ－８Ｂは、マウスＧｖＨＤモデルにおける本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体試験の結果を示す。

【図8B】図８Ａ－８Ｂは、マウスＧｖＨＤモデルにおける本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体試験の結果を示す。

【図9】図９は、マウスメラノーマモデルにおける本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の薬力学試験の結果を示す。

【図10】図１０は、マウス乳癌モデルにおける本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の薬力学試験の結果を示す。

【図11】図１１は、マウス肺扁平上皮癌モデルにおける本願の例証的ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の薬力学試験の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0109】

発明の詳細な説明
本願の発明の実施態様は、特定の実施例により例示されている。本願の他の利点及び効果は、本明細書の開示から、当業者には容易に明らかになるであろう。

【0110】

用語の定義
本願において、用語「単離された」は一般に、人工的手段により天然の状態から得られた生成物を指す。「単離された」物質又は成分が自然界に生じる場合、これは、その天然の環境から改変されないか、この物質はその天然の環境から単離されるか、又は両方であることができる。例えば、単離されないポリヌクレオチド又はポリペプチドは、生存動物中に自然に生じ、且つその天然の状態から高純度で単離された同じポリヌクレオチド又はポリペプチドは、単離されている。用語「単離された」は、人工物質又は合成物質の混合物も、その物質の活性に影響を及ぼさない他の不純物の存在も、排除しない。

【0111】

本願において、用語「抗原－結合タンパク質」は一般に、特定の抗原を特異的に認識し及び／又は中和することが可能であるポリペプチド分子を指す。本願において、用語「抗原－結合タンパク質」は、「抗体」又は「抗原－結合断片」を包含してよい。例えば抗体は、ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖で構成される免疫グロブリンを含んでよく、並びにその抗原－結合部分を含む任意の分子を包含してよい。用語「抗体」は、非限定的に、マウス抗体、ヒト抗体（完全ヒト抗体）、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗原に結合する抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ）２断片）を包含する、モノクローナル抗体、抗体断片、又は抗体誘導体を包含してよい。用語「抗体」はまた、抗体の全ての組換え型、例えば原核細胞において発現された抗体、非－グリコシル化抗体、並びに本明細書記載の任意の抗原－結合する抗体断片及びそれらの誘導体なども包含する。各重鎖は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域で構成され得る。各軽鎖は、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域で構成され得る。このＶＨ領域及びＶＬ領域は更に、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が間に挟まれた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域として識別されることができる。ＶＨ及びＶＬは各々、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲにより構成されてよく、これらは、アミノ－末端側からカルボキシ－末端側へ、以下の順で配置されてよい：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原（例えば、ヒトＧＡＲＰ）と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第一成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織又は因子への、免疫グロブリンの結合を媒介することができる。ＣＤＲの厳密な境界は、異なるシステムに関して異なるよう規定されている。Ｋａｂａｔにより説明されたシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ．（１９８７）及び（１９９１））は、抗原－結合断片の任意の可変領域に適用可能な曖昧でない残基ナンバリングシステムを提供するのみではなく、ＣＤＲを規定する正確な残基境界も提供している。これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲと称されてもよい。Ｃｈｏｔｈｉａ及び同僚達（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６： ９０１－９１７（１９８７）、並びにＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２： ８７７－８８３（１９８９））は、ＫａｂａｔＣＤＲ内の特定のサブ部分は、アミノ酸配列レベルの大きい多様性にもかかわらず、ペプチド骨格内にはほぼ同一の立体配置をとることを発見した。これらのサブ部分は、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３、又はＨ１、Ｈ２、及びＨ３と指定され、ここで「Ｌ」及び「Ｈ」は、各々、軽鎖領域及び重鎖領域を指す。これらの領域は、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲと称されてよく、これは、ＫａｂａｔＣＤＲと重複する境界を有する。ＣＤＲを規定し且つＫａｂａｔＣＤＲと重複する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ Ｊ．９： １３３－１３９（１９９５））及びＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２（５）： ７３２－４５（１９９６））により説明されている。加えて他のＣＤＲ境界の規定は、前記システムの一つに厳密には従わないが、依然ＫａｂａｔＣＤＲと重複するにもかかわらず、これらは、特定の残基もしくは残基群又は全ＣＤＲでさえも、抗原結合に著しい影響を及ぼさないという予測又は実験的知見を考慮し、短縮又は延長され得る。本願においては、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングシステムが使用される。

【0112】

本願において、用語「抗原－結合断片」は一般に、抗原へ特異的に結合するように機能する抗体の１又は複数の断片を指す。抗体の抗原－結合機能は、その抗体の完全長断片により達成され得る。抗体の抗原－結合機能はまた、以下によっても達成されてよい：Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’もしくはＦ（ａｂ’）２の断片を含む重鎖、又はＦｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、もしくはＦ（ａｂ’）２の断片を含む軽鎖。（１）Ｆａｂ断片、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨドメインからなる、一価の断片；（２）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド結合により連結された２個のＦａｂ断片を含む、二価の断片；（３）ＶＨ及びＣＨドメインからなる、Ｆｄ断片；（４）抗体の単独アームのＶＬ及びＶＨドメインからなる、Ｆｖ断片；（５）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４１： ５４４－５４６）；（６）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、並びに（７）任意にリンカーにより結合されてよい、２個以上の単離されたＣＤＲの組合せ。例えば、ＶＬ及びＶＨの対形成により形成された一価の一本鎖分子Ｆｖ（ｓｃＦｖ）も、包含されてよい（Ｂｉｒｄら、（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２： ４２３－４２６；並びに、Ｈｕｓｔｏｎら、（１９８８） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ８５： ５８７９－５８８３参照）。例えば、抗体軽鎖を欠いている重鎖可変領域のみの抗体ＶＨＨのクラスも、包含されることができる（例えば、Ｋａｎｇ Ｘｉａｏｚｈｅｎら、Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２０１８， ３４（１２）： １９７４－１９８４参照）。「抗原－結合部分」はまた、以下からなる群から選択される結合ドメインを含む免疫グロブリン融合タンパク質も包含してよい：（１）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドへ融合された結合ドメインポリペプチド；（２）ヒンジ領域へ融合された免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域；並びに、（３）ＣＨ２定常領域へ融合された免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域。

【0113】

本願において、用語「モノクローナル抗体」は一般に、実質的に相同な抗体の集団を指し、すなわちその集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能性のある天然の変異以外は、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単独の抗原性部位に対し方向付けられている。例えばモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術により調製され得るか、又は組換えＤＮＡ法を使用し、細菌、真核動物もしくは植物の細胞において作出され得るか、又は例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ， ３５２：６２４－６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， ２２２：５８１－５９７（１９９１）において説明された技術を使用し、ファージ抗体ライブラリーから誘導され得る。

【0114】

本願において、用語「キメラ抗体」は一般に、重鎖又は軽鎖の各々のアミノ酸配列の一部が、特定の種由来の、又は特定のクラスに属する抗体の対応するアミノ酸配列と相同である一方で、その鎖の残りのセグメントは、別の種の対応する配列と相同であるような抗体を指す。例えば、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、一つの動物種（例えば、マウス、ラットなど）の抗体の可変領域に由来するのに対し、定常部分は、別の種（例えば、ヒト）由来の抗体配列と相同である。例えば、キメラ抗体を得るために、非－ヒト－由来Ｂ細胞又はハイブリドーマ細胞を使用し、可変領域を作製することができる一方で、それらと組合せた定常領域は、ヒト起源である。この可変領域は、容易に調製することができ、且つその特異性はそれが組み合わされた定常領域の起源により影響されないという利点を有する。同じく、キメラ抗体の定常領域は、ヒトに由来することもできるので、このキメラ抗体は、その定常領域が非－ヒト起源である抗体を使用するよりも、注入時に、恐らくより少ない免疫応答を誘起する。

【0115】

本願において、用語「ヒト化抗体」は一般に、非－ヒト免疫グロブリン由来のより少ない配列を含むキメラ抗体を指し、これによりヒトへ導入した場合に、外因性抗体の免疫原性を低減する一方で、その抗体の完全抗原－結合親和性及び特異性は維持する。例えば非－ヒト結合ドメインは、ＣＤＲ移植法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６））及びそれらの改変などの、技術的手段を用い、ヒト化されることができ；これは、「リシェーピング（ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）」（Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８ Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３３７；Ｔｅｍｐｅｓｔら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ １９９１ ９：２６６－２７１）、「超キメラ化」（Ｑｕｅｅｎら、１９８９ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３；Ｃｏら、１９９１ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：２８６９－２８７３；Ｃｏら、１９９２ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８：１１４９－１１５４）、及び「ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）」（Ｍａｒｋら、“Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ａｎｄ ｖｅｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉ－ＣＤ１８ ａｎｔｉｂｏｄｙ．”、Ｍｅｔｃａｌｆ Ｂ Ｗ， Ｄａｌｔｏｎ Ｂ Ｊ編集、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ： ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， １９９４： ２９１－３１２）、及びリサーフェシング（ＵＳ５６３９６４１）を含む。ヒンジドメイン及び定常領域ドメインなどの他の領域も、それらが非－ヒト給源に由来する場合に、ヒト化されてよい。

【0116】

本願において、用語「マウス抗体」は一般に、可変領域フレームワーク領域及びＣＤＲ領域が、マウス生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来している抗体を指す。加えてこの抗体が定常領域を含む場合、これも、マウス生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する。本願のマウス抗体は、インビトロにおけるランダム変異もしくは点変異により、又はインビボにおける体細胞変異により導入される変異などの、マウス生殖細胞系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基を含んでよい。しかし用語「マウス抗体」は、マウスのフレームワーク配列に挿入された他の哺乳動物種由来のＣＤＲ配列を有する抗体を含まない。

【0117】

本願において、用語「ＧＡＲＰタンパク質」又は「ＧＡＲＰ抗原」は、互換的に使用され、且つＧＡＲＰの任意のバリアント及び相同体を含む。ＧＡＲＰは、細胞により自然に発現されるか、又はＧＡＲＰ遺伝子によりトランスフェクションされた細胞により発現される。本願において、ＧＡＲＰは、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔにおいて寄託番号Ｑ１４３９２を有するヒトＧＡＲＰであることができる。本願において、ＧＡＲＰは、免疫細胞の表面に発現されることができる。例えば、これは、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の表面に発現されることができる。

【0118】

本願において、用語「ＴＧＦ－β１」及び「ＴＧＦ β１」は、互換的に使用され、且つ一般に細胞増殖の調節及び分化に関連している。本願において、ＴＧＦ－β１は、ＴＧＦ－βのアイソフォームである。本願において、「ＴＧＦ－β１」は、細胞により自然に又はＴＧＦ－β１遺伝子によりトランスフェクションされた細胞において発現される、ＴＧＦ－β１の任意のバリアント及び相同体を含んでよい。本願において、「ＴＧＦ－β１」は、ヒトＴＧＦ－β１であってよく、これはＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔにおける寄託番号Ｐ０１１３７を有する。本願において、「ＴＧＦ－β１」は、ＧＡＲＰにより活性化され、且つＣＤ８＋Ｔ細胞上のＴＧＦβ受容体へ結合し、腫瘍細胞に対するＣＤ８＋Ｔ細胞の殺傷機能を阻害することができる。

【0119】

本明細書において言及された具体的タンパク質及びヌクレオチドに加え、本願は、それらの機能性バリアント、誘導体、アナログ、相同体、及び断片も含んでよい。

【0120】

用語「機能性バリアント」は、天然の配列と実質的に同一であるアミノ酸配列又は実質的に同一であるヌクレオチド配列によりコードされ且つ天然の配列の１又は複数の活性を有することが可能であるポリペプチドを指す。本願の文脈において、いずれか所定の配列のバリアントは、その残基の特定の配列が、アミノ酸残基又はヌクレオチド残基のいずれであるかにかかわらず、そのポリペプチド又はポリヌクレオチドが、少なくとも１種の内在性機能を実質的に保持するように修飾されている配列を指す。バリアント配列は、当初の機能活性が維持される限りは、天然のタンパク質及び／又はポリヌクレオチドに存在する少なくとも１個のアミノ酸残基及び／又はヌクレオチド残基の付加、欠失、置換、修飾、置き換え及び／又は変動により得ることができる。

【0121】

本願において、用語「誘導体」は一般に、得られるポリペプチド又はポリヌクレオチドがその内在性機能の少なくとも１種を実質的に維持する限りは、配列由来／配列上の１個（又はそれよりも多い）アミノ酸残基の任意の置換、変動、修飾、置き換え、欠失及び／又は付加を含むような本願のポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。

【0122】

本願において、用語「アナログ」は一般に、ポリペプチド又はポリヌクレオチドの任意の模倣体、すなわち模倣体が模倣するポリペプチド又はポリヌクレオチドの少なくとも１種の内在性機能を有する化合物を包含する、ポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。

【0123】

一般に、アミノ酸置換、例えば少なくとも１個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は２０個もしくはそれよりも多い）アミノ酸置換が、修飾された配列が所望の活性又は能力を実質的に維持する限りは行われ得る。アミノ酸置換は、天然でないアナログの使用を包含することができる。

【0124】

本願において、用語「相同体」は一般に、天然の配列に対し特定の相同性を有するアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を指す。用語「相同性」は、配列「同一性」と同等であることができる。相同配列は、対象配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、又は９９．９％同一であってよいアミノ酸配列を包含してよい。典型的には相同体は、対象アミノ酸配列と同じ活性部位又は類似のものを含むであろう。相同性は、類似性（すなわち、類似の化学特性／機能を有するアミノ酸残基）に関して考慮されるか、或いは配列同一性に関して表現されてよい。本願において、言及されたアミノ酸配列又はヌクレオチド配列の配列番号のいずれか一つにおいて％同一性を有する配列は、言及された配列番号の全長にわたりその％同一性を有する配列を指す。配列同一性を決定するために、配列アラインメントを、当業者に公知の様々な方式により、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＮＥＥＤＬＥ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどを使用し、行うことができる。当業者は、比較される配列の完全長にわたり最適なアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントに関する好適なパラメータを決定することができる。

【0125】

本願において使用されるタンパク質又はポリペプチドはまた、サイレント変化を生じ且つ機能的に同等なタンパク質を生じるアミノ酸残基の欠失、挿入、又は置換も有してよい。意図されたアミノ酸置換は、内在性機能が維持される限りは、それらの残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、及び／又は両親媒性の性質における類似性を基に作製されてよい。例えば、負帯電したアミノ酸は、アスパラギン酸及びグルタミン酸を包含し；正帯電したアミノ酸は、リジン及びアルギニンを包含し；並びに、類似の親水値を持つ非帯電極性ヘッド基を含むアミノ酸は、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、及びチロシンを包含する。

【0126】

本願において、用語「腫瘍」は一般に、様々な腫瘍形成因子の活動下での、局所組織細胞の増殖により形成された新生物を指す。例えば腫瘍は、充実性腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、ＧＡＲＰのタンパク質発現に関連した腫瘍を包含してよい。用語「ＧＡＲＰのタンパク質発現に関連した腫瘍」とは一般に、ＧＡＲＰ発現が、疾患進行に繋がるか、又は免疫監視機構を回避するような腫瘍を指す。ＧＡＲＰのタンパク質発現に関連した腫瘍は、ＧＡＲＰ陽性腫瘍であることができる。ＧＡＲＰ陽性腫瘍において、腫瘍細胞表面上のＧＡＰＲのタンパク質の発現量は、正常細胞のそれよりも約１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％以上高い。例えば腫瘍は、転移性結腸癌であってよい。例えば腫瘍は、肝細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、進行性腎細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、非－小細胞肺腫瘍であってよい。例えば腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍であってよい。

【0127】

本願において、用語「メラノーマ」は一般に、メラニン形成細胞起源の高度な悪性腫瘍を指す。本願において、メラノーマは、皮膚に加え、粘膜及び内臓に発生し得る。

【0128】

本願において、用語「イムノコンジュゲート」は一般に、単離された抗原－結合タンパク質への別の物質（例えば、化学療法薬、放射性元素、細胞分裂阻害剤、及び細胞傷害性薬剤）の結合（例えば、連結分子の共有結合を介して）により形成されたコンジュゲートを指し、ここでこのコンジュゲートは、単離された抗原－結合タンパク質の標的細胞上の抗原への特異的結合を介して、この別の物質を標的細胞（例えば腫瘍細胞）へ送達することができる。次にこのイムノコンジュゲートは、そのような内部移行を受け、最終的に標的細胞の内部へ（例えばリソソームなどの小胞へ）侵入し、この時点でイムノコンジュゲート内のリンカー分子は切断され、この別の物質を放出し、これによりその細胞傷害性作用を発揮する。加えて、この抗原はまた、標的細胞により分泌され、且つ標的細胞の外側の空間に配置され得る。

【0129】

本願において、用語「医薬として許容し得る治療薬」は一般に、腫瘍及び／又は腫瘍細胞の増殖を阻害することができる薬剤を指す。本願において、この治療薬は、細胞傷害性薬剤又は細胞分裂阻害剤であってよい。例えばこの治療薬は、有糸分裂阻害剤、キナーゼ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、インターカレーション抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、抗－生存物質（ａｎｔｉ－ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｇｅｎｔｓ）、及び生体反応修飾物質からなる群から選択されてよい。

【0130】

本願において、用語「対象」は一般に、ヒト又は非－ヒト動物を指し、非限定的に、ネコ、イヌ、ウマ、ブタ、ウシ、ヤギ、ウサギ、マウス、ラット、又はサルを包含する。

【0131】

本願において、用語「核酸分子」は一般に、それらの天然の環境から単離されたか又は人工的に合成された、任意の長さの、ヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、又はリボヌクレオチド又はそれらのアナログの単離された形を指す。

【0132】

本願において、用語「ベクター」は一般に、好適な宿主において自己複製が可能である核酸分子を指す。ベクターは、挿入された核酸分子を、細胞へ及び／又は細胞間に導入することができる。ベクターは、主にＤＮＡ又はＲＮＡを細胞へ挿入するベクター、主にＤＮＡ又はＲＮＡを複製するベクター、並びに主にＤＮＡもしくはＲＮＡの転写及び／又は翻訳を発現するベクターを包含してよい。ベクターは、好適な細胞への導入時に、ポリペプチドへ転写又は翻訳されることが可能であるポリヌクレオチドであることができる。概してベクターは、ベクターを含む好適な細胞を培養することにより、所望の発現産物を生成してよい。本願において、ベクターは、レンチウイルスベクターを包含してよい。

【0133】

本願において、用語「細胞」は一般に、本明細書記載の核酸分子を含むプラスミド又はベクターを含んでよいか又は既に含んでよいか、或いは本明細書記載のポリペプチドもしくは本明細書記載の抗原－結合タンパク質を発現することが可能である、個別の細胞、細胞株又は細胞培養物を指す。この細胞は、単独の細胞の後代を包含してよい。自然の、偶発的、又は意図的な変異のために、この後代細胞は、形態学的に又はゲノムにおいて当初の親細胞に対し必ずしも同一でないことがあるが、本明細書記載のポリペプチド又は抗原－結合タンパク質を発現することは可能である。これらの細胞は、本明細書記載のベクターによる、細胞のインビトロにおけるトランスフェクションにより、得ることができる。これらの細胞は、原核細胞（例えば、大腸菌）又は真核細胞（例えば、酵母細胞、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ－１細胞、ＮＳ０細胞、又は骨髄腫細胞）であることができる。一部の実施態様において、これらの細胞は、免疫細胞であってよい。例えば、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロファージ、ＮＫＴ細胞、単球、樹状細胞、顆粒球、リンパ球、白血球及び／又は末梢血単核細胞からなる群から選択されてよい。例えば、免疫細胞は、Ｔ細胞であってよい。

【0134】

本願において、用語「治療」は一般に、（ｉ）疾患、障害、又は状態に易罹患性であるが、まだ診断されていない患者における、その疾患、障害、及び／又は状態の発症の予防；（ｉｉ）疾患、障害、又は状態の抑制、すなわち発症の阻止（ｃｕｒｂ）；並びに、（ｉｉｉ）疾患、障害、又は状態の寛解、すなわち疾患、障害、及び／もしくは状態の、並びに／又はこの疾患、障害、及び／もしくは状態に関連した症状の退行の引き起こし：を指す。

【0135】

本願において、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、互換的に使用され、且つ一般に任意の長さのアミノ酸の重合体を指す。この重合体は、線状又は分岐してよく、且つ修飾されたアミノ酸を含んでよく、並びに非－アミノ酸により隔てられてよい。これらの用語はまた、修飾されているアミノ酸重合体も網羅している。これらの修飾は、以下を含んでよい：ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作（例えば、標識成分への結合）。用語「アミノ酸」は、グリシン、並びにＤ及びＬ光学異性体、並びにアミノ酸アナログ及びペプチド模倣体を包含する、天然及び／又は非－天然又は合成のアミノ酸を含む。

【0136】

本願において、用語「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」、「核酸」、及び「オリゴヌクレオチド」は、互換的に使用され、且つ一般に、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチドなどの、任意の長さのヌクレオチド、又はそのアナログの多量体型を指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有してよく、且つ既知又は未知の任意の機能を発揮してよい。ポリヌクレオチドの非限定的例は、以下である：遺伝子又は遺伝子断片のコード領域又は非コード領域、ライゲーション分析により規定された複数の遺伝子座（１遺伝子座）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスポートＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロ－ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐型ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ、及びプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化されたヌクレオチド及びヌクレオチドアナログなどの、１又は複数の修飾されたヌクレオチドを含んでよい。存在するならば、ヌクレオチド構造の修飾は、ポリマーの集成の前又は後に実施されてよい。ヌクレオチドの配列は、非－ヌクレオチド成分により隔てられてよい。このポリヌクレオチドは更に、重合後に、例えば標識された成分への結合などにより、修飾されてよい。

【0137】

本願において、用語「Ｋ_Ｄ」（同様に、「Ｋ_Ｄ」又は「ＫＤ」）は一般に、「親和定数」又は「平衡解離定数」を指し、並びに滴定測定において平衡時に得られた値、又は解離速度定数（ｋ_ｄ）を結合速度定数（ｋ_ａ）により除算することにより得られた値を指す。抗原（例えば、ＧＡＲＰタンパク質）に関する結合タンパク質（例えば、本明細書記載の単離された抗原－結合タンパク質）の結合親和性は、会合速度定数（ｋ_ａ）、解離速度定数（ｋ_ｄ）、及び平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を用いて、表される。会合速度定数及び解離速度定数を決定する方法は、当該技術分野において周知である。蛍光－ベースの技術の使用は、高感度で及び生理的緩衝液中での平衡で試料を試験する能力を提供する。例えば、Ｋ_Ｄ値は、Ｏｃｔｅｔアッセイにより決定され得、並びにＢＩＡｃｏｒｅ（Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ）などの他の実験的方法及び装置（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＡＢ、ａＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅｃｏｍｐａｎｙ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎから入手可能な装置）が、使用され得る。或いは、Ｋ_Ｄ値は、ＳａｐｉｄｙｎｅＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ， Ｉｄａｈｏ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（動的排除アッセイ（ＫｉｎｅｔｉｃＥｘｃｌｕｓｉｏｎＡｓｓａｙ））を使用するか、又は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）装置を使用し、決定され得る。

【0138】

本願において、用語「及び／又は」は、選択肢のいずれか一方又は選択肢の両方を意味すると理解されるべきである。

【0139】

本願において、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は一般に、明白に特定された特徴の内包を指すが、他の要素を除外しない。特定の場合において、「含む」又は「含有する」はまた、特定された成分のみの内包も網羅している。

【0140】

本願において、用語「約」は一般に、特定された値を０．５％～１０％上回るか又は下回る範囲、例えば、特定された値を０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、又は１０％上回るか又は下回る範囲を指す。

【0141】

本願において、用語「包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は一般に、含む、総括する、網羅する又は対象とすることを意味する。特定の状況においては、「である」、「からなる」の意味も示されている。

【0142】

発明の詳細な説明
本願記載の単離された抗原－結合タンパク質
一局面において、本願は、Ｋ_Ｄ値約１．０Ｅ－１２Ｍ以下（例えば、Ｋ_Ｄは、約１．０Ｅ－１２Ｍよりも大きくない、約０．９Ｅ－１２Ｍよりも大きくない、約０．８Ｅ－１２Ｍよりも大きくない、約０．７Ｅ－１２Ｍよりも大きくない、約０．６Ｅ－１２Ｍよりも大きくない、０．５Ｅ－１２Ｍよりも大きくない、０．４Ｅ－１２Ｍよりも大きくない、０．３Ｅ－１２Ｍよりも大きくない、０．２Ｅ－１２Ｍよりも大きくない、又は０．１Ｅ－１２Ｍよりも大きくないかこれ以下）で、ヒトＧＡＲＰ／ヒトＴＧＦ－β１複合体に結合することができる単離された抗原－結合タンパク質を提供する。

【0143】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、ヒトＧＡＲＰ／ヒトＴＧＦ－β１複合体への結合について、参照抗体と競合することができ、この参照抗体は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の少なくとも１、２又は３を含むことができる、重鎖可変領域ＶＨを含むことができる。

【0144】

本願において、この参照抗体のＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を包含してよい。

【0145】

本願において、この参照抗体のＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を包含してよい。

【0146】

本願において、この参照抗体のＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を包含してよい。

【0147】

例えば、本明細書記載の参照抗体のＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＨＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0148】

例えば、本明細書記載の参照抗体のＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＨＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0149】

例えば、本明細書記載の参照抗体のＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＨＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0150】

例えば、この参照抗体のＶＨは、フレームワーク領域Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、及びＨ－ＦＲ４を含んでよい。

【0151】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ１は、配列番号：４６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＱＶＱＬＸ_１ＱＳＧＡＥＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＰＧＸ_５ＳＶＫＸ_６ＳＣＫＡＳ（配列番号：４６）、ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＶであってよく、Ｘ_２は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_３は、Ｋ又はＶであってよく、Ｘ_４は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_５は、Ａ又はＳであってよく、Ｘ_６は、Ｌ又はＶであってよい。

【0152】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ１は、配列番号：５又は配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0153】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ２は、配列番号：４７に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＷＭＹＷＶＸ_１ＱＸ_２ＰＸ_３ＱＧＬＥＷＩＧＳＩ（配列番号：４７）、ここで、Ｘ_１は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_２は、Ａ又はＲであってよく、及びＸ_３は、Ｇ又はＩであってよい。

【0154】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ２は、配列番号：６又は配列番号：２３に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0155】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ３は、配列番号：４８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＴＨＹＮＱＫＦＸ_１Ｘ_２ＲＸ_３ＴＶＴＶＤＫＳＸ_４ＲＩＶＹＭＸ_５ＬＳＳＬＸ_６ＳＥＤＸ_７ＡＶＹＦＣＡＲ（配列番号：４８）、ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＫであってよく、Ｘ_２は、Ｄ又はＧであってよく、Ｘ_３は、Ａ又はＶであってよく、Ｘ_４は、Ｓ又はＴであってよく、Ｘ_５は、Ｅ又はＱであってよく、Ｘ_６は、Ｒ又はＴであってよく、及びＸ_７は、Ｓ又はＴであってよい。

【0156】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ３は、配列番号：７又は配列番号：２４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0157】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ４は、配列番号：４９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＷＧＸ_１ＧＴＸ_２ＶＴＶＳＳ（配列番号：４９）、ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＴであってよく、及びＸ_２は、Ｍ又はＴであってよい。

【0158】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ４は、配列番号：８又は配列番号：２５に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0159】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ１は、配列番号：５又は配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：６又は配列番号：２３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：７又は配列番号：２４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：８又は配列番号：２５に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0160】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ１は、配列番号：５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：６に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＨ－ＦＲ１－４を有する抗体を含んでよい。

【0161】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ１は、配列番号：５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：６に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＨ－ＦＲ１－４を有する抗体を包含してよい。

【0162】

本願において、この参照抗体のＨ－ＦＲ１は、配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：２３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：２４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：２５に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＨ－ＦＲ１－４を有する抗体を包含してよい。

【0163】

本願において、この参照抗体は、配列番号：５０に示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含んでよい。
ＱＶＱＬＸ_１ＱＳＧＡＥＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＰＧＸ_５ＳＶＫＸ_６ＳＣＫＡＳＧＹＴＬＳＮＹＷＭＹＷＶＸ_７ＱＸ_８ＰＸ_９ＱＧＬＥＷＩＧＳＩＡＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＫＦＸ_１０Ｘ_１１ＲＸ_１２ＴＶＴＶＤＫＳＸ_１３ＲＩＶＹＭＸ_１４ＬＳＳＬＸ_１５ＳＥＤＸ_１６ＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＸ_１７ＧＴＸ_１８ＶＴＶＳＳ（配列番号：５０）、ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＶであってよく、Ｘ_２は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_３は、Ｋ又はＶであってよく、Ｘ_４は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_５は、Ａ又はＳであってよく、Ｘ_６は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_７は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_８は、Ａ又はＲであってよく、Ｘ_９は、Ｇ又はＩであってよく、Ｘ_１０は、Ｑ又はＫであってよく、Ｘ_１１は、Ｄ又はＧであってよく、Ｘ_１２は、Ａ又はＶであってよく、Ｘ_１３は、Ｓ又はＴであってよく、Ｘ_１４は、Ｅ又はＱであってよく、Ｘ_１５は、Ｒ又はＴであってよく、Ｘ_１６は、Ｓ又はＴであってよく、Ｘ_１７は、Ｑ又はＴであってよく、Ｘ_１８は、Ｍ又はＴであってよい。

【0164】

本願において、この参照抗体の重鎖可変領域は、配列番号：１及び配列番号：２１のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0165】

本願において、この参照抗体は、重鎖定常領域を含んでよく、これは、ＩｇＧ－由来の定常領域又はＩｇＹ－由来の定常領域を含んでよい。

【0166】

例えば、この参照抗体の重鎖定常領域は、配列番号：１７に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0167】

本願において、この参照抗体は、軽鎖可変領域ＶＬを含んでよく、これは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んでよい。

【0168】

本願において、この参照抗体のＨＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0169】

本願において、この参照抗体のＬＣＤＲ２は、配列番号：４５に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＧＡＴＳＬＥＸ_１（配列番号：４５）、ここで、Ｘ_１は、Ｓ又はＴであってよい。

【0170】

本願において、この参照抗体のＬＣＤＲ２は、配列番号：１１又は配列番号：２８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0171】

本願において、この参照抗体のＬＣＤＲ１は、配列番号：４４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
Ｘ_１ＡＳＤＨＩＮＫＷＬＡ（配列番号：４４）、ここで、Ｘ_１は、Ｋ又はＲであってよい。

【0172】

本願において、この参照抗体のＬＣＤＲ１は、配列番号：１０又は配列番号：２７に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0173】

例えば、本明細書記載の参照抗体のＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＬＣＤＲ１－３を有する抗体を含んでよい。

【0174】

例えば、本明細書記載の参照抗体のＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＬＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0175】

例えば、本明細書記載の参照抗体のＬＣＤＲ１は、配列番号：２７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：２８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＬＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0176】

例えば、この参照抗体のＶＬは、フレームワーク領域Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、及びＬ－ＦＲ４を含んでよい。

【0177】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ１は、配列番号：５２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＤＩＱＭＴＱＳＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＬＳＸ_４ＳＸ_５ＧＸ_６ＲＶＴＩＴＣ（配列番号：５２）、ここで、Ｘ_１は、Ｐ又はＳであってよく、Ｘ_２は、Ａ又はＳであってよく、Ｘ_３は、Ｔ又はＹであってよく、Ｘ_４は、Ａ又はＶであってよく、Ｘ_５は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_６は、Ｄ又はＧであってよい。

【0178】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ１は、配列番号：１３又は配列番号：２９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0179】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0180】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ３は、配列番号：５３に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＧＸ_１ＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＸ_２ＩＸ_３Ｘ_４ＬＱＸ_５Ｘ_６ＤＸ_７ＡＴＹＹＣ（配列番号：５３）、ここで、Ｘ_１は、Ｉ又はＶであってよく、Ｘ_２は、Ｔ又はＳであってよく、Ｘ_３は、Ｔ又はＳであってよく、Ｘ_４は、Ｇ又はＳであってよく、Ｘ_５は、Ｐ又はＴであってよく、Ｘ_６は、Ｄ又はＥであってよく、Ｘ_７は、Ｆ又はＶであってよい。

【0181】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ３は、配列番号：１５又は配列番号：３０に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0182】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ４は、配列番号：５４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＦＧＸ_１ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号：５４）、ここで、Ｘ_１は、Ｇ又はＱであってよい。

【0183】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ４は、配列番号：１６又は配列番号：３１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0184】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ１は、配列番号：１３又は配列番号：２９に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１５又は配列番号：３０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１６又は配列番号：３１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0185】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ１は、配列番号：１３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＬ－ＦＲ１－４を有する抗体を含んでよい。

【0186】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ１は、配列番号：１３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＨ－ＦＲ１－４を有する抗体を包含してよい。

【0187】

本願において、この参照抗体のＬ－ＦＲ１は、配列番号：２９に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：３０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：３１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＬ－ＦＲ１－４を有する抗体を包含してよい。

【0188】

本願において、この参照抗体は、軽鎖可変領域を含んでよく、これは配列番号：５１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＤＩＱＭＴＱＳＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＬＳＸ_４ＳＸ_５ＧＸ_６ＲＶＴＩＴＣＸ_７ＡＳＤＨＩＮＫＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＸ_８ＧＸ_９ＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＸ_１０ＩＸ_１１Ｘ_１２ＬＱＸ_１３Ｘ_１４ＤＸ_１５ＡＴＹＹＣＱＱＹＷＴＴＰＹＴＦＧＸ_１６ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号：５１）、ここで、Ｘ_１は、Ｐ又はＳであってよく、Ｘ_２は、Ａ又はＳであってよく、Ｘ_３は、Ｔ又はＹであってよく、Ｘ_４は、Ａ又はＶであってよく、Ｘ_５は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_６は、Ｄ又はＧであってよく、Ｘ_７は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_８は、Ｓ又はＴであってよく、Ｘ_９は、Ｉ又はＶであってよく、Ｘ_１０は、Ｔ又はＳであってよく、Ｘ_１１は、Ｔ又はＳであってよく、Ｘ_１２は、Ｇ又はＳであってよく、Ｘ_１３は、Ｐ又はＴであってよく、Ｘ_１４は、Ｄ又はＥであってよく、Ｘ_１５は、Ｆ又はＶであってよく、Ｘ_１６は、Ｇ又はＱであってよい。

【0189】

本願において、この参照抗体の軽鎖可変領域は、配列番号：９及び配列番号：２６のいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0190】

本願において、この参照抗体は、軽鎖定常領域を含んでよく、これは、Ｉｇκ－由来の定常領域又はＩｇλ－由来の定常領域を含んでよい。

【0191】

例えば、この参照抗体の軽鎖定常領域は、配列番号：１８に示されたアミノ酸配列を含む。

【0192】

本願において、この参照抗体は、ＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を有する抗原結合タンパク質を含んでよい。

【0193】

本願において、この参照抗体は、ＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を有する抗原結合タンパク質を包含してよい。

【0194】

本願において、この参照抗体は、ＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：２７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：２８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を有する抗原結合タンパク質を包含してよい。

【0195】

本願において、この参照抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含んでよく、ここで重鎖可変領域は、ＨＣＤＲ１－３及びＨ－ＦＲ１－４を含んでよく、並びに軽鎖可変領域は、ＬＣＤＲ１－３及びＬ－ＦＲ１－４を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、Ｈ－ＦＲ１は、配列番号：５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：６に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ１は、配列番号：１３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体の重鎖可変領域は、配列番号：１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗原－結合断片８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗原－結合断片８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じ重鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。例えば、この参照抗体の軽鎖可変領域は、配列番号：９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じ軽鎖可変領域を含む抗原－結合タンパク質を含んでよい。

【0196】

本願において、この参照抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、この参照抗体の重鎖は、配列番号：１９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じ重鎖を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。例えば、この参照抗体の軽鎖は、配列番号：２０に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じ軽鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0197】

本願において、この参照抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含んでよく、ここで重鎖可変領域は、ＨＣＤＲ１－３及びＨ－ＦＲ１－４を含んでよく、並びに軽鎖可変領域は、ＬＣＤＲ１－３及びＬ－ＦＲ１－４を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、Ｈ－ＦＲ１は、配列番号：５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：６に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ１は、配列番号：１３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体の重鎖可変領域は、配列番号：１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗原－結合断片ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗原－結合断片ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じ重鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。例えば、この参照抗体の軽鎖可変領域は、配列番号：９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じ軽鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0198】

本願において、この参照抗体は、重鎖及び軽鎖を含んでよく、参照抗体の重鎖は、配列番号：１９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じ重鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。例えば、参照抗体の軽鎖は、配列番号：２０に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じ軽鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0199】

本願において、この参照抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含んでよく、ここで重鎖可変領域は、ＨＣＤＲ１－３及びＨ－ＦＲ１－４を含んでよく、並びに軽鎖可変領域は、ＬＣＤＲ１－３及びＬ－ＦＲ１－４を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：２７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：２８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、Ｈ－ＦＲ１は、配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：２３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：２４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：２５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ１は、配列番号：２９に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：３０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：３１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この参照抗体の重鎖可変領域は、配列番号：２１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、参照抗体は、抗原－結合断片ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗原－結合断片ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じ重鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。例えば、参照抗体の軽鎖可変領域は、配列番号：２６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じ軽鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0200】

本願において、この参照抗体は、重鎖及び軽鎖を含んでよい。例えば、参照抗体の重鎖は、配列番号：３２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じ重鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。例えば、参照抗体の軽鎖は、配列番号：３３に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、参照抗体は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じ軽鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0201】

本願において、単離された抗原－結合タンパク質は、ヒトＧＡＲＰ／ヒトＴＧＦ－β１複合体へ結合することができる。

【0202】

本明細書記載の単離された抗原－結合タンパク質は、腫瘍を寛解又は治療することができ、ここで腫瘍は、充実性腫瘍を包含してよい。例えばＧＡＲＰの発現に関連した腫瘍が、包含されてよい。例えば腫瘍は、転移性結腸癌であってよい。例えば腫瘍は、肝細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、進行性腎細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、非－小細胞肺腫瘍であってよい。例えば腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍であってよい。例えば腫瘍は、メラノーマ、乳癌及び／又は肺扁平上皮癌であってよい。例えば腫瘍は、メラノーマであってよい。

【0203】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の少なくとも１、少なくとも２、又は少なくとも３を含んでよい、重鎖可変領域ＶＨを含んでよい。

【0204】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0205】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0206】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0207】

例えば、本明細書記載の単離された抗原－結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、単離された抗原－結合タンパク質は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＨＣＤＲ１－３を有する抗体を含んでよい。

【0208】

例えば、本明細書記載の単離された抗原－結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＨＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0209】

例えば、本明細書記載の単離された抗原－結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＨＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0210】

例えば、この抗原－結合タンパク質のＶＨは、フレームワーク領域Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、及びＨ－ＦＲ４を含んでよい。

【0211】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ１は、配列番号：４６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＱＶＱＬＸ_１ＱＳＧＡＥＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＰＧＸ_５ＳＶＫＸ_６ＳＣＫＡＳ（配列番号：４６）、ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＶであってよく、Ｘ_２は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_３は、Ｋ又はＶであってよく、Ｘ_４は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_５は、Ａ又はＳであってよく、Ｘ_６は、Ｌ又はＶであってよい。

【0212】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ１は、配列番号：５又は配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0213】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ２は、配列番号：４７に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＷＭＹＷＶＸ_１ＱＸ_２ＰＸ_３ＱＧＬＥＷＩＧＳＩ（配列番号：４７）、ここで、Ｘ_１は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_２は、Ａ又はＲであってよく、及びＸ_３は、Ｇ又はＩであってよい。

【0214】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ２は、配列番号：６又は配列番号：２３に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0215】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ３は、配列番号：４８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＴＨＹＮＱＫＦＸ_１Ｘ_２ＲＸ_３ＴＶＴＶＤＫＳＸ_４ＲＩＶＹＭＸ_５ＬＳＳＬＸ_６ＳＥＤＸ_７ＡＶＹＦＣＡＲ（配列番号：４８）、ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＫであってよく、Ｘ_２は、Ｄ又はＧであってよく、Ｘ_３は、Ａ又はＶであってよく、Ｘ_４は、Ｓ又はＴであってよく、Ｘ_５は、Ｅ又はＱであってよく、Ｘ_６は、Ｒ又はＴであってよく、及びＸ_７は、Ｓ又はＴであってよい、

【0216】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ３は、配列番号：７又は配列番号：２４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0217】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ４は、配列番号：４９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＷＧＸ_１ＧＴＸ_２ＶＴＶＳＳ（配列番号：４９）、Ｘ_１は、Ｑ又はＴであってよく、及びＸ_２は、Ｍ又はＴであってよい。

【0218】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ４は、配列番号：８又は配列番号：２５に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0219】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ１は、配列番号：５又は配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ２は、配列番号：６又は配列番号：２３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ３は、配列番号：７又は配列番号：２４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ４は、配列番号：８又は配列番号：２５に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0220】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ１は、配列番号：５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ２は、配列番号：６に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ３は、配列番号：７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ４は、配列番号：８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、単離された抗原－結合タンパク質は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＨ－ＦＲ１－４を有する抗体を含んでよい。

【0221】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ１は、配列番号：５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ２は、配列番号：６に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ３は、配列番号：７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ４は、配列番号：８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＨ－ＦＲ１－４を有する抗体を包含してよい。

【0222】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ１は、配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ２は、配列番号：２３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ３は、配列番号：２４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＨ－ＦＲ４は、配列番号：２５に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＨ－ＦＲ１－４を有する抗体を包含してよい。

【0223】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、重鎖可変領域を含んでよく、これは、配列番号：５０に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＱＶＱＬＸ_１ＱＳＧＡＥＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＰＧＸ_５ＳＶＫＸ_６ＳＣＫＡＳＧＹＴＬＳＮＹＷＭＹＷＶＸ_７ＱＸ_８ＰＸ_９ＱＧＬＥＷＩＧＳＩＡＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＫＦＸ_１０Ｘ_１１ＲＸ_１２ＴＶＴＶＤＫＳＸ_１３ＲＩＶＹＭＸ_１４ＬＳＳＬＸ_１５ＳＥＤＸ_１６ＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＸ_１７ＧＴＸ_１８ＶＴＶＳＳ（配列番号：５０）、ここで、Ｘ_１は、Ｑ又はＶであってよく、Ｘ_２は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_３は、Ｋ又はＶであってよく、Ｘ_４は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_５は、Ａ又はＳであってよく、Ｘ_６は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_７は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_８は、Ａ又はＲであってよく、Ｘ_９は、Ｇ又はＩであってよく、Ｘ_１０は、Ｑ又はＫであってよく、Ｘ_１１は、Ｄ又はＧであってよく、Ｘ_１２は、Ａ又はＶであってよく、Ｘ_１３は、Ｓ又はＴであってよく、Ｘ_１４は、Ｅ又はＱであってよく、Ｘ_１５は、Ｒ又はＴであってよく、Ｘ_１６は、Ｓ又はＴであってよく、Ｘ_１７は、Ｑ又はＴであってよく、Ｘ_１８は、Ｍ又はＴであってよい。

【0224】

本願において、この抗原－結合タンパク質の重鎖可変領域は、配列番号：１又は配列番号：２１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0225】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、重鎖定常領域を含んでよく、これは、ＩｇＧ－由来の定常領域又はＩｇＹ－由来の定常領域を含んでよい。例えば、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１－由来の又はＩｇＧ４－由来の定常領域を含んでよい。

【0226】

例えば、この抗原－結合タンパク質の軽鎖定常領域は、配列番号：１７に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0227】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、軽鎖可変領域ＶＬを含んでよく、これは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んでよい。

【0228】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0229】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号：４５に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＧＡＴＳＬＥＸ_１（配列番号：４５）、ここで、Ｘ_１は、Ｓ又はＴであってよい。

【0230】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号：１１又は配列番号：２８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0231】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号：４４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
Ｘ_１ＡＳＤＨＩＮＫＷＬＡ（配列番号：４４）、ここで、Ｘ_１は、Ｋ又はＲであってよい。

【0232】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号：１０又は配列番号：２７に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0233】

例えば、この抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＬＣＤＲ１－３を有する抗体を含んでよい。

【0234】

例えば、この抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＬＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0235】

例えば、この抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号：２７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号：２８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＬＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0236】

例えば、この抗原－結合タンパク質のＶＬは、フレームワーク領域Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、及びＬ－ＦＲ４を含んでよい。

【0237】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ１は、配列番号：５２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＤＩＱＭＴＱＳＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＬＳＸ_４ＳＸ_５ＧＸ_６ＲＶＴＩＴＣ（配列番号：５２）、ここで、Ｘ_１は、Ｐ又はＳであってよく、Ｘ_２は、Ａ又はＳであってよく、Ｘ_３は、Ｔ又はＹであってよく、Ｘ_４は、Ａ又はＶであってよく、Ｘ_５は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_６は、Ｄ又はＧであってよい。

【0238】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ１は、配列番号：１３又は配列番号：２９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0239】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0240】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ３は、配列番号：５３に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＧＸ_１ＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＸ_２ＩＸ_３Ｘ_４ＬＱＸ_５Ｘ_６ＤＸ_７ＡＴＹＹＣ（配列番号：５３）、ここで、Ｘ_１は、Ｉ又はＶであってよく、Ｘ_２は、Ｔ又はＳであってよく、Ｘ_３は、Ｔ又はＳであってよく、Ｘ_４は、Ｇ又はＳであってよく、Ｘ_５は、Ｐ又はＴであってよく、Ｘ_６は、Ｄ又はＥであってよく、Ｘ_７は、Ｆ又はＶであってよい。

【0241】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ３は、配列番号：１５又は配列番号：３０に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0242】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ４は、配列番号：５４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＦＧＸ_１ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号：５４）、ここで、Ｘ_１は、Ｇ又はＱであってよい。

【0243】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ４は、配列番号：１６又は配列番号：３１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0244】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ１は、配列番号：１３又は配列番号：２９；に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ３は、配列番号：１５又は配列番号：３０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ４は、配列番号：１６又は配列番号：３１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0245】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ１は、配列番号：１３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ３は、配列番号：１５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ４は、配列番号：１６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＬ－ＦＲ１－４を有する抗体を含んでよい。

【0246】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ１は、配列番号：１３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ３は、配列番号：１５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ４は、配列番号：１６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＨ－ＦＲ１－４を有する抗体を包含してよい。

【0247】

本願において、この抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ１は、配列番号：２９に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ３は、配列番号：３０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、抗原－結合タンパク質のＬ－ＦＲ４は、配列番号：３１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＬ－ＦＲ１－４を有する抗体を包含してよい。

【0248】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、軽鎖可変領域を含んでよく、これは、配列番号：５１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。
ＤＩＱＭＴＱＳＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＬＳＸ_４ＳＸ_５ＧＸ_６ＲＶＴＩＴＣＸ_７ＡＳＤＨＩＮＫＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＸ_８ＧＸ_９ＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＸ_１０ＩＸ_１１Ｘ_１２ＬＱＸ_１３Ｘ_１４ＤＸ_１５ＡＴＹＹＣＱＱＹＷＴＴＰＹＴＦＧＸ_１６ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号：５１）、ここで、Ｘ_１は、Ｐ又はＳであってよく、Ｘ_２は、Ａ又はＳであってよく、Ｘ_３は、Ｔ又はＹであってよく、Ｘ_４は、Ａ又はＶであってよく、Ｘ_５は、Ｌ又はＶであってよく、Ｘ_６は、Ｄ又はＧであってよく、Ｘ_７は、Ｋ又はＲであってよく、Ｘ_８は、Ｓ又はＴであってよく、Ｘ_９は、Ｉ又はＶであってよく、Ｘ_１０は、Ｔ又はＳであってよく、Ｘ_１１は、Ｔ又はＳであってよく、Ｘ_１２は、Ｇ又はＳであってよく、Ｘ_１３は、Ｐ又はＴであってよく、Ｘ_１４は、Ｄ又はＥであってよく、Ｘ_１５は、Ｆ又はＶであってよく、Ｘ_１６は、Ｇ又はＱであってよい。

【0249】

本願において、この抗原－結合タンパク質の軽鎖可変領域は、配列番号：９及び配列番号：２６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0250】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、軽鎖定常領域を含んでよく、これは、Ｉｇκ－由来の定常領域又はＩｇλ－由来の定常領域を含む。

【0251】

例えば、この抗原－結合タンパク質の軽鎖定常領域は、配列番号：１８に示されたアミノ酸配列を含む。

【0252】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。

【0253】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0254】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：２７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：２８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0255】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含んでよく、ここで重鎖可変領域は、ＨＣＤＲ１－３及びＨ－ＦＲ１－４を含んでよく、並びに軽鎖可変領域は、ＬＣＤＲ１－３及びＬ－ＦＲ１－４を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、Ｈ－ＦＲ１は、配列番号：５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：６に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ１は、配列番号：１３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合断片の重鎖可変領域は、配列番号：１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗原－結合断片８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗原－結合断片８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じ重鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質の軽鎖可変領域は、配列番号：９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じ軽鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。

【0256】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、重鎖及び軽鎖を含んでよい。例えば、単離された抗原－結合タンパク質の重鎖は、配列番号：１９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じ重鎖を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。例えば、単離された抗原－結合タンパク質の軽鎖は、配列番号：２０に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３、又は抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と同じ軽鎖を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。

【0257】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含んでよく、ここで重鎖可変領域は、ＨＣＤＲ１－３及びＨ－ＦＲ１－４を含んでよく、並びに軽鎖可変領域は、ＬＣＤＲ１－３及びＬ－ＦＲ１－４を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：１０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：１１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、Ｈ－ＦＲ１は、配列番号：５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：６に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ１は、配列番号：１３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質の重鎖可変領域は、配列番号：１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗原－結合断片ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗原－結合断片ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じ重鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質の軽鎖可変領域は、配列番号：９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じ軽鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0258】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、重鎖及び軽鎖を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質の重鎖は、配列番号：１９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じ重鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質の軽鎖は、配列番号：２０に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と同じ軽鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0259】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含んでよく、ここで重鎖可変領域は、ＨＣＤＲ１－３及びＨ－ＦＲ１－４を含んでよく、並びに軽鎖可変領域は、ＬＣＤＲ１－３及びＬ－ＦＲ１－４を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：２７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：２８に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：１２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、Ｈ－ＦＲ１は、配列番号：２２に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：２３に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：２４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：２５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ１は、配列番号：２９に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１４に示されたアミノ酸配列を含んでよく；Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：３０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：３１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質の重鎖可変領域は、配列番号：２１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗原－結合断片ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗原－結合断片ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じ重鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質の軽鎖可変領域は、配列番号：２６に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じ軽鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0260】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質は、重鎖及び軽鎖を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質の重鎖は、配列番号：３２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じ重鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質の軽鎖は、配列番号：３３に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この単離された抗原－結合タンパク質は、抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８、又は抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と同じ軽鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0261】

ポリペプチド及びイムノコンジュゲート
別の局面において、本願は、本願の単離された抗原－結合タンパク質を含んでよい、１又は複数のポリペプチドを提供する。

【0262】

別の局面において、本願は、本願の単離された抗原－結合タンパク質を含んでよい、１又は複数のイムノコンジュゲートを提供する。一部の実施態様において、本イムノコンジュゲートはまた、医薬として許容し得る治療薬も含む。

【0263】

本願において、この治療薬は、細胞傷害性薬剤又は細胞分裂阻害剤であってよい。例えば、この治療薬は、有糸分裂阻害剤、キナーゼ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、インターカレーション抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、抗－生存物質、及び生体反応修飾物質からなる群から選択されてよい。

【0264】

核酸、ベクター、及び細胞
別の局面において、本願はまた、本明細書記載の単離された抗原－結合タンパク質をコードし得る１又は複数の単離された核酸分子も提供する。例えば、この１又は複数の核酸分子の各々は、この抗原－結合タンパク質の全体又はその一部（例えば、１又は複数のＨＣＤＲ１－３及び重鎖可変領域）をコードし得る。

【0265】

本明細書記載の核酸分子は、単離されてよい。例えば、これは、以下の方法により作出されるか又は合成されてよい：（ｉ）例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅による、インビトロ増幅、（ｉｉ）クローン性組換え、（ｉｉｉ）例えば消化及びゲル電気泳動分画による、精製、或いは、（ｉｖ）例えば化学合成による、合成。例えば、この単離された核酸は、組換えＤＮＡ技術により調製された核酸分子であってよい。

【0266】

本願において、この単離された抗原－結合タンパク質をコードしている核酸は、本明細書記載の単離された抗原－結合タンパク質の核酸分子を得るための、逆転写ＰＣＲ及びＰＣＲを使用することを含むが、これらに限定されるものではない、当該技術分野において公知の様々な方法により調製されてよい。

【0267】

別の局面において、本願は、本明細書記載の１又は複数の核酸分子を含む１又は複数のベクターを提供する。各ベクターは、１又は複数の核酸分子を含んでよい。加えてこのベクターはまた、好適な宿主細胞中及び好適な条件下でのベクター選択を可能にするマーカー遺伝子などの他の遺伝子も含んでよい。加えてこのベクターはまた、好適な宿主におけるコード領域の適切な発現を可能にする発現制御エレメントも含んでよい。そのような制御エレメントは、当業者に周知であり、且つ例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、エンハンサー、及び遺伝子転写又はｍＲＮＡ翻訳を調節する他の制御エレメントなどを包含してよい。一部の実施態様において、この発現制御配列は、調節可能なエレメントである。発現制御配列の具体的構造は、種又は細胞型の機能に応じて変動することができるが、典型的には、各々、転写及び翻訳の開始に関与する、５’非－転写配列並びに５’及び３’非－翻訳配列、例えばＴＡＴＡカセット、キャッピング配列、ＣＡＡＴ配列などを含む。例えば、５’非－転写発現制御配列は、プロモーター領域を含んでよく、これは、機能的に連結された核酸の転写制御のためのプロモーター配列を含んでよい。この発現制御配列はまた、エンハンサー配列又は上流アクチベーター配列も包含する。本願において、好適なプロモーターは、例えば、ＳＰ６、Ｔ３、及びＴ７ポリメラーゼのプロモーター、ヒトＵ６ＲＮＡプロモーター、ＣＭＶプロモーター、及びそれらの人工的なハイブリッドプロモーター（例えば、ＣＭＶ）を包含してよく、ここでこれらのプロモーターの一部は、他の細胞タンパク質（例えば、ヒトＧＡＰＤＨ、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼなど）の遺伝子のプロモーターの一部に融合されてよく、これは追加のイントロンを含んでも含まなくともよい。本明細書記載の１又は複数の核酸分子は、発現制御エレメントへ機能的に連結され得る。

【0268】

そのようなベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、ファージ、又は例えば遺伝子操作において通常使用される他のベクターを包含してよい。例えば、このベクターは、発現ベクターであってよい。例えば、このベクターは、ウイルスベクターであってよい。この患者は、ウイルスベクターと共に直接投与されてよい（インビボにおいて）か、或いは間接的に投与されてよく、例えば患者は、インビトロにおいて（エクスビボにおいて）そのウイルスにより処理された細胞と共に投与されてよい。ウイルスベクター技術は、当該技術分野において周知であり、且つ例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋらの文献（２００１， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）並びに他のウイルス学及び分子生物学のマニュアルにおいて説明されている。常用のウイルス－ベースのシステムは、遺伝子導入のためのレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルスベクターを包含してよい。場合によっては、レトロウイルス、レンチウイルス、及びアデノ随伴ウイルスの方法を使用し、挿入された遺伝子の長期発現のために、宿主ゲノムへ遺伝子を導入及び組込むことができる。レンチウイルスベクターは、非－分裂細胞に形質導入又は感染することが可能であるレトロウイルスベクターであり、典型的には比較的高いウイルス力価を生じる。レンチウイルスベクターは、末端反復配列５’ＬＴＲ及び切断型３’ＬＴＲ、ＲＲＥ、ｒｅｖ応答配列（ｃＰＰＴ）、セントラル終結配列（ＣＴＳ）、及び／又は翻訳後修飾配列（ＷＰＲＥ）を含んでよい。本明細書記載のベクターは、細胞へ導入されることができる。

【0269】

別の局面に従い、本願は、細胞を提供する。この細胞は、本明細書記載の単離された抗原－結合タンパク質、本明細書記載のポリペプチド、本明細書記載のイムノコンジュゲート、本明細書記載の１もしくは複数の核酸分子及び／又は１もしくは複数のベクターを含んでよい。例えば、それぞれ又は全ての細胞は、本明細書記載の核酸分子又はベクターを含んでよい。例えば、それぞれ又は全ての細胞は、多数（例えば２以上）又は複数（例えば２以上）の種類の本明細書記載の核酸分子又はベクターを含んでよい。例えば、本明細書記載のベクターは、該宿主細胞、例えば原核細胞（例えば、細菌細胞）、ＣＨＯ細胞、ＮＳ／０細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、２９３Ｆ細胞、もしくはＨＥＫ２９３Ａ細胞など、又は他の真核細胞、例えば植物由来の細胞、真菌もしくは酵母細胞などへ導入されることができる。本明細書記載のベクターは、当該技術分野において公知の方法、例えば、電気穿孔法、リポフェクチントランスフェクション、リポフェクタミントランスフェクションなどにより、宿主細胞へ導入されることができる。例えばこれらの細胞は、酵母細胞を包含してよい。例えば、これらの細胞は、大腸菌細胞を包含してよい。例えばこれらの細胞は、哺乳動物細胞を包含してよい。例えばこれらの細胞は、免疫細胞を包含してよい。

【0270】

これらの細胞は、免疫細胞を包含してよい、場合によっては、これらの細胞は、免疫細胞を包含してよい。例えばこれらの細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロファージ、ＮＫＴ細胞、単球、樹状細胞、顆粒球、リンパ球、白血球及び／又は末梢血単核細胞を包含してよい。

【0271】

医薬組成物及び医薬品組合せ
別の局面において、本願は、医薬組成物を提供する。この医薬組成物は、本明細書記載の単離された抗原－結合タンパク質、ポリペプチド、イムノコンジュゲート、単離された核酸分子、ベクター、細胞、並びに／又は医薬として許容し得るアジュバント及び／もしくは賦形剤を含んでよい。本願において、医薬として許容し得るアジュバントは、緩衝剤、抗酸化剤、保存剤、低分子量のポリペプチド、タンパク質、親水性ポリマー、アミノ酸、糖類、キレート剤、対イオン、金属複合体及び／又は非イオン性界面活性剤を包含してよい。任意の常用の媒体又は物質は、それらが本明細書記載の細胞と不適合でない限りは、本願の医薬組成物のために意図される。本願において、医薬として許容し得る賦形剤は、医薬調製品中の主薬以外の添加剤を包含してよく、これらは医薬必需品とも称される。例えば賦形剤は、錠剤中の結合剤、充填剤、崩壊剤、及び滑沢剤を包含してよい。例えば賦形剤は、伝統的漢方丸剤中の酒精、酢、薬液などを包含してよい。例えば賦形剤は、半固形製剤の軟膏及びクリームの基剤部分を包含してよい。例えば賦形剤は、液体製剤中の保存剤、抗酸化剤、香味剤、芳香剤、可溶化助剤、乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整剤、及び着色剤を包含してよい。

【0272】

別の局面において、本願は、単離された抗原－結合タンパク質及び免疫チェックポイント阻害剤を含有する医薬品組合せを提供する。

【0273】

本願において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用を阻害する物質を包含してよい。例えば免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断薬、ＰＤ－１拮抗剤、ＰＤ－Ｌ１拮抗剤、ＰＤ－１阻害剤、及びＰＤ－Ｌ１阻害剤からなる群から選択される。

【0274】

例えばＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断薬は、ＢＭＳ２０２（ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤２）、ＢＭＳ－１（ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤１）、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤３、ＢＭＳ－１１６６及びＢＭＳ－１００１からなる群から選択されてよい。

【0275】

例えばＰＤ－１阻害剤は、抗－ＰＤ－１抗体を包含してよい。例えば、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１抗体を包含してよい。

【0276】

例えば抗－ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、カムレリズマブ、トリパリマブ、シンチリマブ、及びチスレリズマブからなる群から選択されてよい。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択されてよい。

【0277】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択される抗体のＨＣＤＲ３を含んでよい。

【0278】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択される抗体のＨＣＤＲ２を含んでよい。

【0279】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択される抗体のＨＣＤＲ１を含んでよい。

【0280】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択される抗体のＬＣＤＲ３を含んでよい。

【0281】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択される抗体のＬＣＤＲ２を含んでよい。

【0282】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択される抗体のＬＣＤＲ１を含んでよい。

【0283】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択される抗体のＶＨを含んでよい。

【0284】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択される抗体のＶＬを含んでよい。本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＨＣＤＲ３を含んでよく、これは配列番号：３７に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0285】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３６に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含む。

【0286】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３５に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１を含む。

【0287】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号：３５に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号：３６に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号：３７に示されたアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域ＶＨを含む。例えば、この抗体は、アテゾリズマブ、又はアテゾリズマブと同じＨＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0288】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、重鎖可変領域ＶＨを含んでよく、これは、配列番号：３４に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0289】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＬＣＤＲ３を含んでよく、これは、配列番号：４１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0290】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＬＣＤＲ２を含んでよく、これは、配列番号：４０に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0291】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＬＣＤＲ１を含んでよく、これは、配列番号：３９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0292】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、軽鎖可変領域ＶＬを含んでよく、これは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んでよく、ここでＬＣＤＲ３は、配列番号：４１に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：４０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ１は、配列番号：３９に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、この抗体は、アテゾリズマブ、又はアテゾリズマブと同じＬＣＤＲ１－３を有する抗体を包含してよい。

【0293】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、軽鎖可変領域ＶＬを含んでよく、これは、配列番号：３８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。

【0294】

本願において、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、重鎖及び軽鎖を含んでよく、ここで重鎖は、ＨＣＤＲ１－３及びＨ－ＦＲ１－４を含んでよく、並びに軽鎖は、ＬＣＤＲ１－３及びＬ－ＦＲ１－４を含んでよい。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号：３５に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＨＣＤＲ２は、配列番号：３６に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＨＣＤＲ３は、配列番号：３７に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ１は、配列番号：３９に示されたアミノ酸配列を含んでよく；ＬＣＤＲ２は、配列番号：４０に示されたアミノ酸配列を含んでよく；並びに、ＬＣＤＲ３は、配列番号：４１に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、又はアテゾリズマブと同じＨＣＤＲ１－３及びＬＣＤＲ１－３を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体重鎖可変領域は、配列番号：３４に示されたアミノ酸配列を含むことができる。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、又はアテゾリズマブと同じ重鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体の軽鎖可変領域は、配列番号：３８に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、又はアテゾリズマブと同じ軽鎖可変領域を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖は、配列番号：４２に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、又はアテゾリズマブと同じ重鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体の軽鎖は、配列番号：４３に示されたアミノ酸配列を含んでよい。例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、又はアテゾリズマブと同じ軽鎖を有する抗原－結合タンパク質を包含してよい。

【0295】

キット、使用及び方法
別の局面において、本願は、本明細書記載の医薬品組合せを含むキットを提供する。

【0296】

別の局面において、本願は、腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための、単離された抗原－結合タンパク質、ポリペプチド、イムノコンジュゲート、単離された核酸分子、ベクター、及び医薬組成物を提供する。

【0297】

例えばこの腫瘍は、充実性腫瘍を包含してよい。例えば、腫瘍は、ＧＡＲＰのタンパク質発現に関連した腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、転移性結腸癌であってよい。例えば腫瘍は、肝細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、進行性腎細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、非－小細胞肺腫瘍であってよい。例えば腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍であってよい。

【0298】

別の局面において、本願において、キット及び／又は医薬品組合せは、腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のために使用される。

【0299】

例えばこの腫瘍は、充実性腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、ＧＡＲＰのタンパク質発現に関連した腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、転移性結腸癌であってよい。例えば腫瘍は、肝細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、進行性腎細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、非－小細胞肺腫瘍であってよい。例えば腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍であってよい。

【0300】

別の局面において、本願は、腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための医薬品の製造における、単離された抗原－結合タンパク質、ポリペプチド、イムノコンジュゲート、単離された核酸分子、ベクター、細胞、及び／又は医薬組成物の使用を提供する。

【0301】

例えばこの腫瘍は、充実性腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、ＧＡＲＰのタンパク質発現に関連した腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、転移性結腸癌であってよい。例えば腫瘍は、肝細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、進行性腎細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、非－小細胞肺腫瘍であってよい。例えば腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍であってよい。

【0302】

別の局面において、本願は、腫瘍の予防、寛解、及び／又は治療のための医薬品の製造における医薬品組合せ及び／又はキットの使用を提供する。

【0303】

例えばこの腫瘍は、充実性腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、ＧＡＲＰのタンパク質発現に関連した腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、転移性結腸癌であってよい。例えば腫瘍は、肝細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、進行性腎細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、非－小細胞肺腫瘍であってよい。例えば腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍であってよい。

【0304】

別の局面において、本願は、この単離された抗原－結合タンパク質、単離された核酸分子、ベクター、細胞、及び医薬組成物を、それを必要とする対象へ投与することを含む、疾患又は障害の予防及び／又は治療の方法を提供し、ここでこの疾患又は障害は、腫瘍を包含する。

【0305】

別の局面において、本願は、この医薬品組合せを、それを必要とする対象へ投与することを含む、疾患又は障害の予防及び／又は治療の方法を提供し、ここでこの疾患又は障害は、腫瘍を包含する。

【0306】

例えばこの腫瘍は、充実性腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、ＧＡＲＰのタンパク質発現に関連した腫瘍を包含してよい。例えば腫瘍は、転移性結腸癌であってよい。例えば腫瘍は、肝細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、進行性腎細胞癌であってよい。例えば腫瘍は、非－小細胞肺腫瘍であってよい。例えば腫瘍は、メラノーマ、乳房腫瘍、及び／又は肺腫瘍であってよい。

【0307】

本明細書記載の医薬組成物、医薬品組合せ、及び方法は、例えば化学療法、手術、放射線治療、及び遺伝子治療などの、癌療法の他の型と組合せて使用されることができる。本明細書記載の医薬組成物及び方法は、例えば炎症、免疫疾患、及び感染症などの、免疫応答を左右する他の疾患状態のために使用されることができる。

【0308】

本願において、対象は、ヒト又は非－ヒト動物を包含してよい。例えば、非－ヒト動物は、以下からなる群から選択されてよい：サル、ニワトリ、ガチョウ、ネコ、イヌ、マウス、及びラット。加えて、非－ヒト動物はまた、ヒト以外の任意の動物種、例えば家畜動物、又は齧歯類、又は霊長類、又は家庭内動物、又は家禽動物なども包含してよい。ヒトは、コーカサス系、アフリカ系、アジア系、シュメール系、又は他の民族、又は様々な民族の混血であることができる。別の例としては、ヒトは、高齢者、成人、青年、小児又は乳児であってよい。

【0309】

ヒトにおける有効量は、実験動物における有効量から外挿され得る。例えば、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈらは、動物及びヒトに関する用量の相関関係を説明している（体表面積１ｍ^３当たりのｍｇ数を基に）（Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． Ｒｅｐ． ５０， ２１９（１９６６））。体表面積は、患者の身長及び体重からおおまかに決定される。例えば、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｔａｂｌｅｓ， Ｇｅｉｇｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ａｒｄｓｌｅｙ， Ｎ．Ｙ．， ５３７（１９７０）を参照されたい。

【0310】

いずれかの理論に結びつけられることを意図するものではないが、下記実施例は、本願の融合タンパク質、調製方法、使用などの単なる例証を意図し、本願の範囲を限定することは意図していない。

【実施例】

【0311】

実施例
実施例１：組換えプラスミドの調製及び免疫細胞株の構築
ヒトＧＡＲＰ（ｈＧＡＲＰと称される）の完全長アミノ酸配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ＃Ｑ１４３９２）及びヒト潜在型ＴＧＦ－β（ｈＴＧＦ－β１と称される）の完全長アミノ酸配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ＃Ｐ０１１３７）を、ＤＮＡ配列を合成するために、コドン最適化し、これらを各々、ベクターｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ．ｐｕｒｏ及びｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ．Ｇ４１８へ、確立された分子生物学的方法に従い、クローニングし；構築された組換えプラスミドを、レンチウイルスによりパッケージングし、その後２９３Ｆ細胞へ感染させ、並びに抗生物質耐性によりスクリーニングし；モノクローナルコロニーをピッキングすることにより、ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１を過剰発現している２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１モノクローナル組換え細胞株を得、フロー抗－ヒトＧＡＲＰ抗体（Ｅｎｚｏ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ、ＡＬＸ－８０４－８６７ＦＩ－０１００）及び抗－ヒトＴＧＦ－β１抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＦＡＢ２４６３Ａ）により染色し、検出のためにフローサイトメーターに装加した。結果を、表１に示した。高発現を伴う２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１モノクローナル組換え細胞株を、免疫化のためにピッキングした。同様の方法を、モノクローナル抗体のスクリーニング及び同定のための、ＣＨＯＫ１－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１、２９３Ｔ－ｈＧＡＲＰ及び２９３Ｔ－ｈＴＧＦ－β１モノクローナル組換え細胞株の調製に使用した。

【0312】

【表1】

【0313】

実施例２：マウス抗－ヒトＧＡＲＰモノクローナル抗体の調製
２．１ 免疫化
Ｂａｌｂ／ｃ及びＳＪＬマウスを、２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１モノクローナル組換え細胞株２Ｆ４及び２Ｄ３で、各々、３～４回免疫化し、３～５×１０^６個細胞／マウスを２～３週間隔で注射し、並びに血液を、免疫化後血清として、３回目の免疫化後７日目に採取した。免疫化した血清の結合度を、フローサイトメトリーにおいて、ＣＨＯＫ１－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１及びブランク細胞ＣＨＯＫ１により検出し、ＣＨＯＫ１－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１及びブランク細胞ＣＨＯＫ１への結合に関する平均蛍光強度を、フローサイトメトリーにおいて算出し、より高い比を持つマウスを、融合に使用した。融合の３日前に、マウスを、２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１モノクローナル組換え細胞株の３～５×１０^６個細胞／マウスによる、ブースター免疫に供した。

【0314】

２．２ 融合
融合の当日、マウスを安楽死させた後、マウスを解剖し、脾臓を取りだし且つ粉砕し、細胞を採取し、これを１５００ｒｐｍで５分間の遠心分離により収集した。これらの細胞を、赤血球溶解液５ｍｌで懸濁させ、４℃で５分間静置し、反応をＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳにより停止させ、細胞をカウントした。遠心分離後、細胞を、４０ｍｌのＤＭＥＭで懸濁させた。２～３分間静置した後、上清を、別の５０ｍＬ遠心チューブに移した。ＳＰ２／０細胞を収集し、ＳＰ２／０細胞：脾臓細胞＝１：５の比で脾臓細胞と混合し、この混合物を、遠心分離し、上清を、十分にピペッティングし、遠心チューブを振り、細胞ペレットを混合し、これらの混合した細胞を、ＤＭＥＭで２回洗浄し、その後常法に従うＰＥＧ融合又は電気融合に供し、これらの細胞をＤＭＥＭ培地で洗浄し、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１×ＨＡＴの選択培地に再懸濁させた。融合した細胞を、９６－ウェル細胞培養プレートに添加し、３７℃、湿度７５％、５％ＣＯ_２のインキュベーターにおいて、９～１０日間培養した。

【0315】

２．３ 抗体のスクリーニング及びサブクローニング、精製
９６－ウェル細胞培養プレート由来のハイブリドーマ上清を、ＣＨＯＫ１－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１細胞への結合活性について、フローサイトメトリーによりアッセイした。

【0316】

このＣＨＯＫ１－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１モノクローナル組換え細胞株を、Ｔ－７５細胞培養フラスコ内で、集密度９０％まで増殖させ、この培養培地を、十分にピペッティングし、この培養物を、ＰＢＳ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能）により２回洗浄し、次に酵素－非含有細胞解離緩衝液（Ｖｅｒｓｅｎｅ溶液、１５０４００６６、Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手可能）により処理し、細胞を収集した。これらの細胞を、ＰＢＳ緩衝液により２回洗浄し、細胞をカウントした後、これらの細胞を、ＰＢＳ緩衝液により２×１０^６個細胞／ｍＬまで希釈し、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳを含有するＰＢＳ）を添加し、この混合物を、室温で１５分間インキュベーションし、その後遠心分離し、且つＰＢＳ緩衝液で２回洗浄した。収集した細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液により、３×１０^６個細胞／ｍＬとなるよう懸濁させた。この細胞懸濁液を、９６－ＦＡＣＳ反応プレートへ、１００μＬ／ウェルで添加し、９６－ウェル細胞培養プレートからのハイブリドーマ上清を、１００μＬ／ウェルで添加し、この混合物を、４℃で１ｈインキュベーションした。遠心分離後、上清を廃棄し、蛍光（Ａｌｅｘａ４８８）標識した二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能）を、１００μＬ／ウェルで添加し、この混合物を、４℃で１ｈインキュベーションした。これらの細胞を、遠心分離し、ＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、固定液［４％（ｖ／ｖ）パラホルムアルデヒド］の１００μＬ／ウェルの添加により懸濁させ、１０分後、細胞を遠心分離し、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。これらの細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液の３０μＬで懸濁させ、得られたものを、フローサイトメーターｉｎｔｅｌｌｙｃｉｔｅ ｐｌｕｓ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓから入手可能）により検出し且つ分析した。

【0317】

陽性ハイブリドーマ上清に対応する細胞クローンを、２～４日間の更なる培養のために、２４－ウェル細胞培養プレートに移し、この２４－ウェル細胞培養プレート内のハイブリドーマ上清（対応する細胞クローン名：８Ｈ２）を、ＣＨＯＫ１－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１細胞への結合活性のアッセイに使用し、結果を、下記表２に示した。陽性細胞を、２４－ウェル細胞培養プレートから取りだし、ＣＨＯＫ１－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１に結合することができるハイブリドーマモノクローナル抗体の選択が可能である安定した細胞株８Ｈ２Ｄ７Ｂ３を得るまで、サブクローニング及びサブクローニングスクリーニングを行い、その後この細胞株を、小規模生成のために５０ｍｌの常用の血清－非含有培地において培養し、常用のプロテインＡカラムにより精製し、後続の同定のための精製されたモノクローナル抗体を得た。

【0318】

【表2】

【0319】

２．４ 軽鎖及び重鎖可変領域アミノ酸配列の決定
５×１０^７個のハイブリドーマ細胞８Ｈ２Ｄ７Ｂ３を、遠心分離により収集し、総ＲＮＡを、トリゾール法により抽出した。逆転写反応後に得られたｃＤＮＡを、末端転移酵素によるＧ－付加反応に供し、可変領域配列を含むＤＮＡを、ＶＨ、ＶＫプライマー、及びポリＣプライマーにより増幅させ、Ｔ－Ａクローニング、その後シークエンシング及び抗体配列解析を行った。

【0320】

実施例３：マウス抗－ヒトＧＡＲＰモノクローナル抗体の同定
３．１ マウス抗－ヒトＧＡＲＰモノクローナル抗体の、２９３Ｆ細胞、２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ細胞、２９３Ｆ－ｈＴＧＦ－β１細胞、及び２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体への結合機能のフローサイトメトリー同定
前述の細胞を、カウントし、且つ３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し、細胞ペレットを、１×ＰＢＳで再懸濁及び洗浄し、次に３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し、その後細胞ペレットを、２％ＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液で再懸濁し、密度を１ｅ６個細胞／ｍＬに調節した。これらの細胞を、一定の容積１００μＬ／ウェルについて、密度１ｅ５個細胞／ウェル、４℃で０．５ｈ播種し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。被験抗体を、出発濃度１５μｇ／ｍＬで、２％ＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液中に調製し、引き続き希釈因子１：５で合計７勾配、連続希釈し、その後一定容積１００μＬ／ウェルとなるよう添加し、対照として０μｇ／ｍＬを伴い、この希釈物を、ピペッティングし、４℃で１ｈ十分に混合し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。１×ＰＢＳを、一定容積２００μＬ／ウェルとなるよう添加し、この細胞ペレットを、再懸濁させ十分に混合し、引き続き３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し、この工程を２回繰り返した。二次抗体Ａｌｅｘａ４８８（ロバ抗－マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、ロット番号：２０１８２９６、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を添加し、２％ＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液中に、一定容積１００μＬ／ウェルについて、比１：１０００となるよう、４℃で調製し、この混合物を、１ｈ遮光した。１×ＰＢＳを、一定容積２００μＬ／ウェルとなるよう添加し、細胞を再懸濁させ、十分に混合し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し、この工程を２回繰り返した。この細胞ペレットを、２％ＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、ＦＡＣＳ装置で測定した。ソフトウェアを使用し、マッピングし且つＥＣ５０を算出した。ここで、ＭＨＧ８を陽性対照として使用し、マウスＩｇＧ１（ｍＩｇＧ１）を、アイソタイプ対照として使用した。結果を、図１Ａ－１Ｄに示している：図１Ａは、被験抗体の２９３Ｆ細胞への結合を示し、図１Ｂは、被験抗体の２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ細胞への結合を示し、図１Ｃは、被験抗体の２９３Ｆ－ｈＴＧＦ－β１細胞への結合を示し、並びに図１Ｄは、被験抗体の２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体への結合を示し、マウス抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３は、２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体のみに結合することを指摘している。

【0321】

３．２ ＭＨＧ８（抗－ヒトＧＡＲＰ抗体）の２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体への結合機能を遮断するマウス抗－ヒトＧＡＲＰモノクローナル抗体のフローサイトメトリーアッセイ
前述の細胞を、カウントし、且つ３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し、細胞ペレットを、１×ＰＢＳで再懸濁及び洗浄し、次に３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し、その後細胞ペレットを、２％ＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液で再懸濁させ、密度を１ｅ６個細胞／ｍＬに調節した。これらの細胞を、一定の容積１００μＬ／ウェルについて、密度１ｅ５個細胞／ウェル、４℃で０．５ｈ播種し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。Ａｌｅｘａ４８８（ロット番号：１９０５１５１７０２、１．３９ｍｇ／ｍＬ）を伴う競合抗体を、一定容積５０μＬ／ウェルについて、最終濃度３０μｇ／ｍＬとなるよう添加し；被験抗体を、出発濃度３０μｇ／ｍＬで、２％ＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液中に調製し、引き続き希釈因子１：５で合計７勾配連続希釈し、その後一定容積１００μＬ／ウェルとなるよう添加し、対照として０μｇ／ｍＬを伴い、この混合物を、ピペッティングし、４℃で１ｈ十分に混合し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。１×ＰＢＳを、一定容積２００μＬ／ウェルとなるよう添加し、この細胞ペレットを、再懸濁させ十分に混合し、引き続き３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し、この工程を２回繰り返した。二次抗体Ａｌｅｘａ４８８（ロバ抗－マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、ロット番号：２０１８２９６、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を、２％ＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液中に、比１：１０００となるよう調製し、一定容積１００μＬ／ウェルになるよう、４℃で添加し、この混合物を、１ｈ遮光した。１×ＰＢＳを、一定容積２００μＬ／ウェルとなるよう添加し、細胞を再懸濁させ十分に混合し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し、この工程を２回繰り返した。この細胞ペレットを、２％ＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、ＦＡＣＳ装置上に装加し、実験データを測定し、これを、ソフトウェアによりマッピングし、ＥＣ５０を算出した。ここで、ＭＨＧ８を陽性対照として使用し、マウスＩｇＧ１（ｍＩｇＧ１）を、アイソタイプ対照として使用した。結果を、図２に示し、マウス抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３は、ＭＨＧ８の２９３Ｆ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体への結合を遮断することができた。

【0322】

３．３ 精製したマウス抗－ヒトＧＡＲＰモノクローナル抗体によるＴｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化の阻害のウェスタンブロット及びアルファＥｌｉｓａアッセイ
新鮮なＰＢＭＣ細胞を、ＡＬＬＣＥＬＬＳから購入し、最初にＰＢＭＣ細胞を、４００ｇで１０分間遠心分離し、次に１％ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１００９９－１４１）及び５０ｍｍｏｌ ＥＤＴＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１５４０００５４）を含有する１×ＰＢＳ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１００１００４９）中に再懸濁した。ＰＢＭＣを、Ｔｒｅｇ抽出キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、カタログ番号：１３０－０９１－３０１）プロトコールに従い、Ｔｒｅｇ細胞抽出に供した。Ｔｒｅｇ細胞抗体処理：Ｔｒｅｇを、インビトロにおいて１４日間増大させ、細胞を収集し且つカウントし、１．５×１０^６個Ｔｒｅｇ細胞を、磁気ビーズで枯渇し、陰性対照として使用した。これらの細胞を、２４－ウェルプレートに１ウェルにつき１×１０^６個／ｍＬで、一定容積１ｍＬ／ウェルとなるよう播種した。被験抗体を、濃度２５μｇ／ｍＬで、２４－ウェルプレートに添加した。細胞を、二酸化炭素インキュベーター内３７℃で、３６ｈ培養した。

【0323】

アルファＥｌｉｓａアッセイ：前述の細胞を、遠心分離により収集し、溶解緩衝液５０ｕＬを添加し、３０分間溶解した。この溶解液を、１３００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清１０ｕＬを、アルファＥｌｉｓａアッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＡＬＳＵ－ＰＳＭ２－Ａ５００）のために取りだした。

【0324】

ウェスタンブロットアッセイ：前述の細胞を、遠心分離により収集し、溶解緩衝液５０ｕＬを添加し、３０分間溶解した。この溶解液を、１３００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清１０ｕＬを、ウェスタンブロットアッセイのために取りだした。結果を、図３Ａ－３Ｂに示している：図３Ａは、被験抗体によるＴｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化阻害のウェスタンブロットアッセイ結果を示し、並びに図３Ｂは、被験抗体によるＴｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化阻害のアルファＥｌｉｓａアッセイシグナル値を示し、これはマウス抗体は、両方共Ｔｒｅｇ細胞においてＳＭＡＤ２リン酸化タンパク質を阻害することができる陽性対照抗－ＴＧＦ－β１及びＭＨＧ８に類似していることを指摘している。

【0325】

結合及び遮断などの機能性同定により、８Ｈ２Ｄ７Ｂ３が、マウスの候補抗体として選択され、且つヒト化された。

【0326】

マウス抗－ヒトＧＡＲＰモノクローナル抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３の可変領域の配列は、以下のように決定された：
＞８Ｈ２Ｄ７Ｂ３ ＶＨ
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＬＳＮＹＷＭＹＷＶＫＱＲＰＩＱＧＬＥＷＩＧＳＩＡＰＳＤＳＥＷＴＨＹＮＱＫＦＫＤＲＡＴＶＴＶＤＫＳＳＲＩＶＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ
＞８Ｈ２Ｄ７Ｂ３ ＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＳＡＹＬＳＶＳＬＧＧＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＮＫＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＴＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＳＩＴＧＬＱＴＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＷＴＴＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ。

【0327】

マウス抗－ヒトＧＡＲＰモノクローナル抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ領域を、表３に示した。

【0328】

【表3】

【0329】

実施例４：マウス抗－ヒトＧＡＲＰモノクローナル抗体のヒト化
４．１ マウス抗－ヒトＧＡＲＰモノクローナル抗体８Ｈ２Ｄ７Ｂ３と最も相同であるヒト生殖細胞系列抗体（データ源：ＩＭＧＴ）を、ヒト化デザインのためのフレームワークとして、配列アラインメントにより選択し（軽鎖は、ＩＧＫＶ３Ｄ－１５＊０１又はＩＧＫＶ１－５＊０３、ＩＧＫＪ２＊０２又はＩＧＫＪ４＊０２によりフレームとし、並びに重鎖は、ＩＧＨＶ３－７＊０３又はＩＧＨＶ１－４６＊０３、ＩＧＨＪ３＊０１によりフレームとした）、この抗体のＣＤＲ領域を、抗体軽鎖及び重鎖の可変領域のＣｈｏｔｈｉａナンバリング［Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、１９８７］により以下のように規定し：ＣＤＲＬ１（Ｌ２４－Ｌ３４）、ＣＤＲＬ２（Ｌ５０－Ｌ５６）、ＣＤＲＬ３（Ｌ８９－Ｌ９７）、ＣＤＲＨ１（Ｈ２６－Ｈ３２）、ＣＤＲＨ２（Ｈ５２－Ｈ５６）、及びＣＤＲＨ３（Ｈ９５－Ｈ９７）、抗体軽鎖及び重鎖の可変領域のアミノ酸を、可変領域の配列アラインメント及び構造情報に従うヒト化変異に供した。

【0330】

４．２ 生殖細胞系列抗体の配列情報
ＩＧＫＶ３Ｄ－１５＊０１：
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＴＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＮＮＷＰ
ＩＧＫＶ１－５＊０３：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＳ
ＩＧＨＶ３－７＊０３：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ
ＩＧＨＶ１－４６＊０３：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ
ＩＧＫＪ２＊０２：
ＣＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
ＩＧＫＪ４＊０２：
ＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＩＧＨＪ３＊０１：
ＤＡＦＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ。

【0331】

４．３ 発現ベクターを設計し、且つ遺伝子を合成した。次にこの組換え抗体を、哺乳動物細胞において発現させ、精製した。ヒト化抗体及びキメラ抗体を、活性及び物理化学特性に関して比較し、並びにヒト化最適化を１～２ラウンド実行し、ここで軽鎖及び重鎖は、フレームワークＣＤＲとして生殖細胞系列抗体によりグラフトされたヒト化配列を使用することにより、最適に設計した。得られるキメラ抗体は、ＪＹＢ１９０７ｈｚ０と称し、ヒト化抗体は、ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８と称した。

【0332】

４．４ ヒト化抗体の発現及び精製
抗体操作により設計した配列の最適化後、完全長ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８軽鎖及び重鎖タンパク質配列を、各々、コドン－最適化し、このコドン－最適化されたＤＮＡ断片（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を合成し、且つ合成された遺伝子断片を、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．４（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）へクローニングした。発現プラスミドの増幅及びプラスミドの抽出後、供給業者のＥｘｐｉＣＨＯ発現システム法に従い、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａ２９１３３）を、２種のプラスミドで同時－トランスフェクションし、一過性抗体発現を行った。おおまかな手順は、以下である：ＥｘｐｉＣＨＯ細胞を、密度６×１０^６個／ｍＬになるまで、総培養容積２５ｍｌの培養培地において、３６．５℃及び８％二酸化炭素濃度で培養した。抗体軽鎖及び重鎖発現プラスミド１０μｇを、各々、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅトランスフェクション試薬を使用し、細胞へ移入し；トランスフェクションの１日後、ＥｘｐｉＣＨＯエンハンサー１５０μＬ及びＥｘｐｉＣＨＯアジュバント４ｍＬを、培養した細胞へ添加し、培養を９日間継続した。上清を、３５００ｒｐｍ及び４℃での遠心分離により得た。ＡｍＭａｇ（商標）プロテインＡ磁気ビーズ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ｌ００６９５）と抗体発現上清を混合し、この混合物を、室温で２ｈインキュベーションし、ＰＢＳで２回洗浄し、上清を廃棄し；適量の溶出緩衝液であるプロテインＧ又はＡ用Ｓｅｆｉｎｏｓｅ（商標）溶出緩衝液（Ｓａｎｇｏｎ、Ｃ６００４８１）を添加し、この混合物を十分に混合し、その後５分間の静的インキュベーションのために試験管ラックに配置し；このインキュベーションの間に、磁気ビーズを、２～３回再懸濁させ、且つ溶出を２回繰り返した。溶出後、溶出液を、その直後の使用のために、適量の中和用１Ｍトリス－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）（Ｓａｎｇｏｎ、Ｂ５４８１２４）により中和した。

【0333】

４．５ 精製されたヒト化抗体の親和性アッセイ
４．５．１ ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８及びｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体（Ｋａｃｔｕｓ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号：ＧＡＲ－ＨＭ４ＴＧ）の親和性を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）により測定し、１９０７Ｈｚ１８及びｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体の両方を、１×ＰＢＳＴ（１×ＰＢＳ：Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂ５４８１１７－０５００；０．０２％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０：Ｓｉｇｍａ、Ｐ１３７９）により希釈し、ここでｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体は、出発濃度１００ｎＭから３倍勾配で希釈し、並びにＪＹＢ１９０７ｈｚ１８は、濃度３３．３ｎＭで使用した。

【0334】

４．５．２ 検出のための試料負荷（Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ １１．１．０．１１）：最初に、試料を、２００μＬ／ウェルのシステムにおいて、９６－ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ－ｏｎｅ、６５５２０９）へ添加した。次にソフトウェアパラメータを設定し、プレート温度を３０℃に設定し、標準キネティックシグナルを収集する振動数を、５．０Ｈｚとした。次にＡＨＣセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、カタログ番号：１８－００１５）を、１×ＰＢＳＴで１０分間予め湿らせ、その後試料を、検出のために装置上に負荷した。各サイクルは、以下の工程を含む：１）試料を緩衝液中に６０秒間含浸する工程；２）抗原（ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体）がセンサーに非特異的に結合するかどうか検出する工程；３）１．０ｍＭグリシン溶液、ｐＨ１．７中で再生する工程；４）緩衝液中に６０秒間含浸する工程；５）抗体（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）をセンサー上に２５秒間固定する工程；６）センサーを緩衝溶液中に１８０秒間含浸する工程；７）抗原（ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体）を抗体（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）へ１８０秒間結合させる工程；８）抗原（ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体）を抗体（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）と１０分間解離させる工程；９）センサーを再生する工程。

【0335】

４．５．３ データ解析
ＦｏｒｔｅｂｉｏのＤａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ １２．０ソフトウェアを使用し、１：１の結合様式での抗原（ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１複合体）－抗体（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）の会合定数（Ｋａ）及び解離定数（Ｋｄ）を測定することにより、抗体の平衡解離定数（ＫＤ）を算出した。結果を、表４に示し、ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８は、陽性対照抗体ＭＨＧ８よりもより大きい親和性で、ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１へ結合した。

【0336】

【表4】

【0337】

実施例５：ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８によるＴｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化の阻害
新鮮なＰＢＭＣ細胞を、ＡＬＬＣＥＬＬＳから購入し、最初にＰＢＭＣ細胞を、４００ｇで１０分間遠心分離し、次に１％ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１００９９－１４１）及び５０ｍｍｏｌ ＥＤＴＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１５４０００５４）を含有する１×ＰＢＳ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１００１００４９）中に再懸濁した。ＰＢＭＣを、Ｔｒｅｇ抽出キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、カタログ番号：１３０－０９１－３０１）プロトコールに従い、Ｔｒｅｇ細胞抽出に供した。Ｔｒｅｇ細胞抗体処理：Ｔｒｅｇを、インビトロにおいて１４日間増大させ、細胞を収集し且つカウントし、１．５×１０^６個Ｔｒｅｇ細胞を、磁気ビーズで枯渇し、陰性対照として使用した。これらの細胞を、２４－ウェルプレートに１ウェルにつき１×１０^６個／ｍＬで、一定容積１ｍＬ／ウェルとなるよう播種した。被験抗体を、濃度２５μｇ／ｍＬで、２４－ウェルプレートに添加した。細胞を、二酸化炭素インキュベーター内３７℃で、３６ｈ培養した。ここで、抗－ＴＧＦ－β１及びＭＨＧ８を陽性対照として使用し、並びにヒトＩｇＧ４をアイソタイプ対照として使用した。

【0338】

アルファＥｌｉｓａアッセイ：前述の細胞を、遠心分離により収集し、溶解緩衝液５０ｕＬを添加し、３０分間溶解した。この溶解液を、１３００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清１０ｕＬを、アルファＥｌｉｓａアッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＡＬＳＵ－ＰＳＭ２－Ａ５００）のために取りだした。

【0339】

ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８は、先に説明した方法により評価したところ、Ｔｒｅｇ細胞におけるＳＭＡＤ２リン酸化を阻害し、その結果は、図４に示している。

【0340】

実施例６：ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８によるＴＧＦβ１放出の阻害のアッセイ試験
２９３Ｔ－ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦ－β１細胞を、Ｓｈａｎｇｈａｉ ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ社により構築し、並びにＬＮ２２９細胞を、Ｎａｎｊｉｎｇ Ｃｏｂａｉ（カタログ番号：ＣＢＰ６０３０２）から購入した。これら２種の細胞が、密度７０％まで成長した時点で、これらを、各々、トリプシン（Ｔｈｅｒｍｏ、２５２０００５６）で消化し、１０％ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１００９９－１４１）及び１×Ｐｅｎ・Ｓｔｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１５１４０－１２２）を含有する新鮮なＤＭＥＭ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１１９６５０９２）を添加し、各細胞を再懸濁し、１ウェルにつき３×１０^６個細胞（５０μＬ／ウェル）を、９６－ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３５９９）へ逐次添加した。勾配様式で希釈したＪＹＢ１９０７ｈｚ１８の５０μＬ（最終濃度１０μｇ／ｍＬから連続２倍希釈し、合計１０勾配、最終ウェルについての抗体濃度０を含む）を、各ウェルに添加し、この混合物を、３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーターにおいて５～６ｈインキュベーションした。この培養物を遠心分離し、上清を取りだし、ＴＧＦ－β１ ＥＬＩＳＡキット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号：５８０７０９）による、ＴＧＦ－β１アッセイに供した。ここで、ＭＨＧ８を陽性対照として使用し、並びにヒトＩｇＧ４をアイソタイプ対照として使用した。

【0341】

ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８は、先に説明した方法により評価したところ、２９３Ｔ細胞からのＴＧＦ－β１の放出を阻害し、その結果は図５に示している。

【0342】

実施例７：Ｔｒｅｇのヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からのＩＬ－２及びＩＦＮγ放出の阻害を妨げるＪＹＢ１９０７ｈｚ１８
新鮮なＰＢＭＣ細胞を、ＴＰＣＳから購入し、最初にＰＢＭＣ細胞を、４００ｇで１０分間遠心分離し、次に１％ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１００９９－１４１）及び５０ｍｍｏｌ ＥＤＴＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１５４０００５４）を含有する１×ＰＢＳ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１００１００４９）中に再懸濁した。少量のＰＢＭＣを、後続の実験のためにピペッティングし、残りのＰＢＭＣを、Ｔｒｅｇ抽出キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、カタログ番号：１３０－０９１－３０１）プロトコールに従い、Ｔｒｅｇ細胞抽出に供した。抽出したＴｒｅｇ細胞及びＰＢＭＣ細胞を、カウントし、濃度５ｅ５個／ｍＬに調節し、ＰＢＭＣ群には、ＰＢＭＣの５０μＬ、１％ＨＢＳ（ＴＰＣＳ、Ａ５１５）及び１×Ｐｅｎ・Ｓｔｒｅｐ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、１５１４０－１２２）を含有するＴｅｘＭＡＣＳ（商標）Ｍｅｄｉｕｍ培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、１７０－０７６－３０９）４８μＬ、及びＣＤ３／ＣＤ２８抗体磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、１３０－０９５－３４５）２μＬを補充した。ＰＢＭＣ＋Ｔｒｅｇ細胞群には、ＰＢＭＣの５０μＬ、１％ＨＢＳ（ＴＰＣＳ、Ａ５１５）及び１×Ｐｅｎ・Ｓｔｒｅｐ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、１５１４０－１２２）を含有するＴｅｘＭＡＣＳ（商標）Ｍｅｄｉｕｍ培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、１７０－０７６－３０９）４６μＬ、及びＣＤ３／ＣＤ２８抗体磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、１３０－０９５－３４５）４μＬを補充した。被験抗体ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８を、一定容積５０μＬ／ウェルについて最終濃度２５μｇ／ｍｌとなるよう添加した。この混合物を、３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーターにおいて、２０～２４ｈインキュベーションした。この培養物を遠心分離し、上清を取りだし、ＩＬ－２ ＥＬＩＳＡ及びＩＦＮ－γＥＬＩＳＡキットを使用し、ＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ、ＶＡＬ１１０）及びＩＦＮ－γ（Ｒ＆Ｄ、ＤＩＦ５０Ｃ）についてアッセイした。ここで、ＭＨＧ８を陽性対照として使用した。

【0343】

ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８は、先に説明した方法により評価したところ、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からの、インターロイキン－２（ＩＬ－２）及びインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）の放出を阻害し、その結果は、図６Ａ－６Ｂに示している：図６Ａは、被験抗体は、ＴｒｅｇがＰＢＭＣからのインターロイキン－２（ＩＬ－２）の放出を阻害することを妨げることを示し；図６Ｂは、被験抗体は、ＴｒｅｇがＰＢＭＣからのインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）の放出を阻害することを妨げることを示している。

【0344】

実施例８：ヒト化ＦｃＲｎマウスモデルにおける薬物動態（ＰＫ）試験
ヒト化ＦｃＲｎマウスを、試験動物として使用し、２種の被験薬物ＭＨＧ８及びＪＹＢ１９０７ｈｚ１８の、単回皮下投与後の薬物動態指数を、各々、試験した。全ての動物実験スキームは、ＩＡＣＵＣにより検証され及び承認を受けた。６～８週齢の雄のｈＦｃＲｎマウスを、Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社（北京）から購入し、体重は２３～２６ｇであり、ＳＰＦ－等級動物飼育室で飼育し、標準ペレット餌を給餌し、室温１８～２４℃及び相対湿度４０％～５０％で食餌及び水は自由摂取させ、毎日交互の明暗サイクル（すなわち１２時間シフト）に曝した。合計１２匹の実験動物を、３群に無作為に割当て、各群４匹の動物とした。これらの動物には、投与容積１０ｍＬ／ｋｇで、単回投与量１０ｍｇ／ｋｇを皮下投与した。血液を、薬物投与前、並びに薬物投与後２ｈ、６ｈ、２４ｈ（１日目）、２日目、３日目、４日目、７日目、１０日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目及び４２日目にサンプリングした。全血を、頬の穿刺により、ＥＰチューブに６０μＬ／チューブで収集し、室温で３０分間静置させ、その後遠心分離し（２０００ｇ、４℃、５分間）、血清を分離した。各試料を、１０μＬ／チューブで２つの部分に分離し（検出チューブ及びバックアップチューブ）、－８０℃で貯蔵した。

【0345】

３種の薬物の異なる時点での薬物動態を、間接ＥＬＩＳＡにより分析した。このプレートを、抗原、マウス抗－ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ（Ａｂｃａｍ、ロット番号：ＧＲ３２４８０９３－２、ａｂ９９８２０）の２μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェルで、一晩、４℃でコーティングし、その後洗浄し、ブロッキング緩衝液の２００μＬ／ウェルで、一晩、４℃でブロックした。血清試料を、一定容積５０μＬ／ウェルとなるよう、３７℃で１ｈ添加した。検出抗体ｈＧＡＲＰ／ｈＴＧＦβ１－ビオチン（０．７８ｍｇ／ｍｌ、ロット番号：０３０２０１）＋ストレプトアビジン－ペルオキシダーゼ（Ｓｉｇｍａ、ロット番号：ＳＬＣＢ５７８４）を、３７℃で０．５ｈ、一定容積１００μ／ウェルとなるよう添加した。ＴＭＢ呈色液（ＫＰＬ、カタログ番号：５２－００－０３）を、呈色のために添加し、ＯＤ４５０を、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ３）上で測定した。薬物濃度は、標準曲線に従い入手し、並びにＰＫパラメータは、ＰＫ Ｓｏｌｖｅｒノン－コンパートメントデータ処理により得た。

【0346】

ＭＨＧ８投与後の半減期（ｔ１／２）＝４．８日であり、最高濃度（Ｃｍａｘ）は、５００３６ｎｇ／ｍｌであり（図７Ｂに示す）；ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８投与後の半減期（ｔ１／２）＝８．８２日であり、最高濃度（Ｃｍａｘ）は、１３９４３７ｎｇ／ｍｌであった（図７Ａに示す）。

【0347】

実施例９：ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８の物理化学特性の試験
９．１ ＳＥＣ－ＨＰＬＣ純度分析
９．１．１ 試料（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）を、１ｍｇ／ｍＬに希釈し、十分に混合し、且つ１２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を、試料ボトルに移し、ＨＰＬＣ試料トレーに配置した。クロマトグラフィー条件は、表５に示したように設定した：

【0348】

【表5】

【0349】

９．１．２ クロマトグラフィーカラムは、移動相（２００ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ６．８）により平衡とし、試料を分析のために注入した。クロマトグラフィーソフトウェアを、データ解析に使用した。各ピークのピーク面積割合を、ピーク面積規準化法により計算した。

【0350】

９．２ ＨＩＣ－ＨＰＬＣ分析
９．２．１ 試料（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）を、１ｍｇ／ｍｌに希釈し、上清を、アッセイのために遠心分離した。クロマトグラフィー条件は、表６に示したように設定した。

【0351】

【表6】

【0352】

９．２．２ 勾配溶出は、移動相Ａ（５０ｍＭリン酸緩衝液／１Ｍ硫酸アンモニウム、ｐＨ７．０）及び移動相Ｂ（５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．０）で行い、主要ピーク保持時間を記録した。

【0353】

９．３ 融解温度（Ｔｍ）値の分析
試料（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）を、試料緩衝液により１ｍｇ／ｍＬに希釈し、次にＰｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ（商標）スターターキットの指示に従い、試料（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）溶液１３μＬを、ＰＣＲチューブに添加し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ ｓｈｉｆｔ（商標）緩衝液５μＬを添加し、１０×染色液２μＬを添加し、結果反応容積２０μＬとし、この混合物を十分に混合し、１２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、気泡を取り除いた。被験試料（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）を、試料分析のために、ＰＣＲ装置内に配置し、試料（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）のＴｍ値を記録した。

【0354】

９．４ ｉＣＩＥＦ分析
試料（ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８）溶液を、以下の十分に混合したシステムに添加した：１％メチルセルロース（ＭＣ）７０μＬ、５Ｍ尿素８０μＬ、両性電解質Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ（ｐＨ３～１０）の８μＬ、ｐＩマーカー５．５の２μＬ、ｐＩマーカー９．５の２μＬ。このシステムに、好適な容積の超純水を補充し、２００μｌとし、この混合物を十分に混合し、その後遠心分離し、上清を分析した。その分析後、結果のファイルを、スペクトル積分処理及び各ピークの等電点並びに各ピークの割合の計算のためのＣｈｒｏｍＰｅｒｆｅｃｔソフトウェアへ取込んだ。

【0355】

ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８の物理化学特性の分析の結果を、表７に示している。

【0356】

【表7】

【0357】

実施例１０：マウスＧｖＨＤモデルにおけるＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の試験
週齢７～８週の４０匹の雌のＮＯＧマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入し；凍結保存したＰＢＭＣを、Ｍｉａｏｔｏｎｇ（Ｓｈａｎｇｈａｉ） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入し；Ｔｒｅｇ細胞を、実施例５に説明したように、新鮮なＰＢＭＣから抽出し、インビトロにおいて増大した。ＮＯＧマウスを順応させた後、マウスを、ブスルファン２５ｍｇ／ｋｇ、予め３日間腹腔内で処置した。１０匹のマウスを無作為に選択し、同じバッチから凍結保存したＰＢＭＣを回収した。第１群として、各マウスに、３×１０^６個のＰＢＭＣを静脈内注射した。回収したＰＢＭＣを、Ｔｒｅｇ細胞と混合し、残りの３０匹のマウスは、３×１０^６個ＰＢＭＣ及び３×１０^６個Ｔｒｅｇ細胞を、尾静脈を介して静脈内注射した。注射の翌日、マウスを、体重に従い第２、３、及び４群に無作為に分割した。群別した後、第１群のマウスには、アイソタイプ対照を腹腔内注射し、第２群のマウスには、アイソタイプ対照を腹腔内注射し、第３群のマウスには、ＭＨＧ８（陽性対照）を投与量２０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射し、並びに第４群のマウスには、ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８を投与量２０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射し、投与頻度は毎週２回で、合計１２回であった。マウスは、毎週２回秤量し、ＧｖＨＤスコア化に供し、並びに生存数をカウントした。ＧｖＨＤスコア化判定は、表８に示している。マウスは、それらの体重が２５％より多く減少した場合、安楽死させた。

【0358】

【表8】

【0359】

４２日目の実験終了時までに、第１群の４匹のマウスが死亡したことがわかり、第２群の３匹のマウスが死亡したことがわかり、並びに第３及び４群の５匹のマウスは生存した。第２群において、Ｔｒｅｇ細胞を添加したので、インビボにおけるＰＢＭＣの増大は阻害され、ＧｖＨＤの出現時間は遅延されたのに対し、第３及び４群におけるＭＨＧ８及びＪＹＢ１９０７ｈｚ１８の投与は、Ｔｒｅｇの作用を阻害し、ＧｖＨＤのスコア及び死亡率は、第１群のものよりも高く、結果は図８Ａ－８Ｂに示している：図８Ａは、マウスにおける被験抗体のＧｖＨＤスコアを示し；図８Ｂは、マウスにおける被験抗体の生存率を示している。

【0360】

実施例１１：ヒトメラノーマＡ３７５マウス腫瘍モデルにおけるＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の薬力学試験
週齢７～８の４８匹の雌のＮＯＧ－ＤＫＯマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入し；凍結保存したＰＢＭＣを、Ｍｉａｏｔｏｎｇ（Ｓｈａｎｇｈａｉ） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入し；Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞を、ＡＴＣＣから購入した。ＰＢＭＣを回収し、且つＰＢＭＣを、各マウスへ、尾静脈を介して、６Ｅ６個の量で注射し、ヒト化マウスモデルを確立した。１週間後、増大し培養したＡ３７５細胞を収集し、マトリゲルと混合し、その後２Ｅ６個の量で、ＮＯＧ－ＤＫＯマウスへ皮下接種した。この腫瘍が容積１００ｍｍ^３まで成長した時点で、マウスを無作為に群別し、各群８匹のマウスとし、これらは同じ日に投与した。グループＧ１には、アイソタイプ対照を投与量２０ｍｇ／ｋｇで投与し；グループＧ２には、ＭＨＧ８（陽性対照）を投与量２０ｍｇ／ｋｇで投与し；グループＧ３には、ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８を投与量２０ｍｇ／ｋｇで投与し；グループＧ４には、テセントリクを投与量１０ｍｇ／ｋｇで投与し；グループＧ５には、ＭＨＧ８（投与量２０ｍｇ／ｋｇ）及びテセントリク（投与量１０ｍｇ／ｋｇ）を投与し；グループＧ６には、ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８（投与量２０ｍｇ／ｋｇ）及びテセントリク（投与量１０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。全てのマウスは、１週間に２回腹腔内投与し、合計８投与量を投与した。

【0361】

群別後２８日目に、Ｇ１グループの平均腫瘍容積は、１１１０±１０４ｍｍ^３であり、Ｇ２グループの平均腫瘍容積は、１０８８±１１６ｍｍ^３であり、Ｇ３グループの平均腫瘍容積は、１０００±２３３ｍｍ^３であり、Ｇ４グループの平均腫瘍容積は、８３４±１５５ｍｍ^３であり、Ｇ５グループの平均腫瘍重量（ｗｅｉｇｈｔ）は、６１１±１４６ｍｍ^３であり、Ｇ６グループの平均腫瘍容積は、４７１±８７ｍｍ^３であり、Ｇ５グループの腫瘍阻害率は、５０％であり、並びにＧ６グループの腫瘍阻害率は、６４％であった。Ｇ５及びＧ６の両グループは、Ｇ１グループと有意に異なり（Ｇ５対Ｇ１、Ｇ６対Ｇ１）、Ｇ５対Ｇ１はＰ＜０．０５；Ｇ６対Ｇ１はＰ＜０．００１であった。他のグループにおいては、統計学的差異は存在しなかった。ＭＨＧ８のテセントリク（抗－ＰＤ－Ｌ１抗体）との、及びＪＹＢ１９０７ｈｚ１８のテセントリク（抗－ＰＤ－Ｌ１抗体）との組合せは、腫瘍成長を阻害することは明らかであり、この結果は図９に示している。

【0362】

実施例１２：ヒト乳房腫瘍ＪＩＭＴ－１マウス腫瘍モデルにおけるＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の薬力学試験
週齢７～８の２４匹の雌のＮＯＧ－ＤＫＯマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入し；凍結保存したＰＢＭＣを、Ｍｉａｏｔｏｎｇ（Ｓｈａｎｇｈａｉ） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入し；ＪＩＭＴ－１ヒト乳房腫瘍細胞を、ＡＴＣＣから購入した。ＰＢＭＣを回収し、且つＰＢＭＣを、各マウスへ、尾静脈を介して、６Ｅ６個の量で注射し、ヒト化マウスモデルを確立した。１週間後、増大し培養したＪＩＭＴ－１細胞を収集し、マトリゲルと混合し、その後この混合物を、３Ｅ６個の量で、背中を介して、ＮＯＧ－ＤＫＯマウスへ皮下接種した。この腫瘍容積が約１００ｍｍ^３になった時点で、マウスを無作為に群別し、各群８匹の動物とし、これらは同じ日に投与した。グループＧ１には、アイソタイプ対照を投与量２０ｍｇ／ｋｇで投与し；グループＧ２には、ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８を投与量２０ｍｇ／ｋｇで投与し；グループＧ３には、テセントリクを投与量１０ｍｇ／ｋｇで投与した。全てのマウスは、１週間に２回腹腔内投与し、合計８投与量を投与した。

【0363】

群別後２８日目に、Ｇ１グループの平均腫瘍容積は、７４０±５７ｍｍ^３であり、Ｇ２グループの平均腫瘍容積は、４２６±４５ｍｍ^３であり、Ｇ３グループの平均腫瘍容積は、４６９±７２ｍｍ^３であり、Ｇ２グループの腫瘍阻害率は、５２％であり、並びにＧ３グループの腫瘍阻害率は、４５％であった。Ｇ２及びＧ３の両グループは、Ｇ１グループと有意に異なり（Ｇ２対Ｇ１、Ｇ３対Ｇ１）、Ｇ２対Ｇ１はＰ＜０．００１；Ｇ３対Ｇ１はＰ＜０．０１であった。ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８単独及びテセントリク（抗－ＰＤ－Ｌ１抗体）単独は両方共、腫瘍成長を阻害することが明らかであり、ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８は、テセントリク（抗－ＰＤ－Ｌ１抗体）よりも優れた腫瘍成長阻害作用を有し、この結果は図１０に示している。

【0364】

実施例１３：ヒト肺扁平上皮癌ＥＢＣ－１マウス腫瘍モデルにおけるＪＹＢ１９０７ｈｚ１８抗体の薬力学試験
週齢７～８の２４匹の雌のＮＯＧ－ＤＫＯマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入し；凍結保存したＰＢＭＣを、Ｍｉａｏｔｏｎｇ（Ｓｈａｎｇｈａｉ） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入し；ＥＢＣ－１ヒト乳房腫瘍細胞を、ＡＴＣＣから購入した。ＰＢＭＣを回収し、且つＰＢＭＣを、各マウスへ、尾静脈を介して、６Ｅ６個の量で注射し、ヒト化マウスモデルを確立した。１週間後、増大し培養したＥＢＣ－１細胞を収集し、マトリゲルと混合し、その後この混合物を、３Ｅ６個の量で、背中を介して、ＮＯＧ－ＤＫＯマウスへ皮下接種した。この腫瘍容積が約１００ｍｍ^３になった時点で、マウスを無作為に群別し、各群８匹のマウスとし、これらは同じ日に投与した。グループＧ１には、アイソタイプ対照を投与量２０ｍｇ／ｋｇで投与し；グループＧ２には、ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８を投与量２０ｍｇ／ｋｇで投与し；グループＧ３には、テセントリクを投与量１０ｍｇ／ｋｇで投与した。全てのマウスは、１週間に２回腹腔内投与し、合計８投与量を投与した。

【0365】

群別後２４日目に、Ｇ１グループの平均腫瘍容積は、１２７３±２１２ｍｍ^３であり、Ｇ２グループの平均腫瘍容積は、７９７±１１３ｍｍ^３であり、Ｇ３グループの平均腫瘍容積は、８４２±１１５ｍｍ^３であり、Ｇ２グループの腫瘍阻害率は、４２％であり、並びにＧ３グループの腫瘍阻害率は、３８％であった。腫瘍成長傾向のグラフから、ＪＹＢ１９０７ｈｚ１８単独及びテセントリク（抗－ＰＤ－Ｌ１抗体）単独は両方共、この癌種に対し腫瘍成長を阻害する傾向があり、この結果は図１１に示している。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10】

【図11】

【配列表】

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【国際調査報告】