知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ 上海華奥泰生物藥業股▲フン▼有限公司の特許一覧 ▶ 華博生物医藥技術（上海）有限公司の特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-23
(54)【発明の名称】ＣＤ７３結合タンパク質及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20240116BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240116BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240116BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240116BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240116BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240116BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20240116BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240116BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240116BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240116BHJP
A61P 15/14 20060101ALI20240116BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240116BHJP
A61K 38/10 20060101ALI20240116BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240116BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20240116BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20240116BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240116BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20240116BHJP
G01N 33/573 20060101ALI20240116BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20240116BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20240116BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C07K16/28
A61P43/00 111
A61P35/00
A61P35/02
A61P15/14
A61K39/395 N
A61K39/395 T
A61K38/10
A61K48/00
A61K35/76
A61K35/12
A61K47/68
A61K38/16
G01N33/573 A
G01N33/531 A
C12P21/08
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023538013
(86)(22)【出願日】2022-01-12
(85)【翻訳文提出日】2023-06-21
(86)【国際出願番号】 CN2022071520
(87)【国際公開番号】W WO2022152144
(87)【国際公開日】2022-07-21
(31)【優先権主張番号】202110045071.3
(32)【優先日】2021-01-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522432620
【氏名又は名称】上海華奥泰生物藥業股▲フン▼有限公司
(71)【出願人】
【識別番号】522432619
【氏名又は名称】華博生物医藥技術（上海）有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】徐 錦根
(72)【発明者】
【氏名】朱 向陽
(72)【発明者】
【氏名】于 海佳
(72)【発明者】
【氏名】韋 小越
(72)【発明者】
【氏名】瞿 麗麗
(72)【発明者】
【氏名】任 曉▲チェン▼
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C076
4C084
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE12
4B064DA01
4B064DA13
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA88X
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4B065CA46
4C076BB11
4C076BB13
4C076BB15
4C076BB16
4C076CC17
4C076CC27
4C076CC29
4C076EE59
4C084AA01
4C084AA02
4C084AA07
4C084AA13
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA18
4C084BA19
4C084BA23
4C084MA16
4C084MA17
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA811
4C084ZA812
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZB271
4C084ZB272
4C084ZC021
4C084ZC022
4C084ZC201
4C084ZC202
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB36
4C085BB41
4C085BB43
4C085CC23
4C085EE01
4C085GG01
4C085GG02
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG05
4C085GG06
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB64
4C087BB65
4C087CA12
4C087MA16
4C087MA17
4C087MA66
4C087NA14
4C087ZA81
4C087ZB26
4C087ZB27
4C087ZC02
4C087ZC20
4H045AA11
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
【課題】ＣＤ７３結合タンパク質及びその使用を提供することを課題とする。
【解決手段】特異性結合ＣＤ７３に特異的に結合でき、重鎖可変領域ＶＨ内の少なくとも１つのＣＤＲを含み、前記ＶＨが配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含む単離された抗原結合タンパク質を提供し、前記単離された抗原結合タンパク質の調製方法及び使用も提供する。
【解決手段】特異性結合ＣＤ７３に特異的に結合でき、重鎖可変領域ＶＨ内の少なくとも１つのＣＤＲを含み、前記ＶＨが配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含む単離された抗原結合タンパク質を提供し、前記単離された抗原結合タンパク質の調製方法及び使用も提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
重鎖可変領域ＶＨ内の少なくとも１つのＣＤＲを含む単離された抗原結合タンパク質であって、前記ＶＨは配列番号：４９に示されるアミノ酸配列を含む単離された抗原結合タンパク質。
【請求項2】
ＨＣＤＲ３を含み、且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項3】
ＨＣＤＲ２を含み、且つ前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項4】
ＨＣＤＲ１を含み、且つ前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項5】
軽鎖可変領域ＶＬ内の少なくとも１つのＣＤＲを含み、前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項6】
ＬＣＤＲ３を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項7】
ＬＣＤＲ２を含み、且つ前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項8】
ＬＣＤＲ１を含み、且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項9】
Ｈ－ＦＲ１を含み、前記Ｈ－ＦＲ１のＣ末端は前記ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接的又は間接的に接続され、且つ前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号：４１で示されるアミノ酸配列を含む、請求項４～８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項10】
前記Ｈ－ＦＲ１は、配列番号：７、配列番号：１５及び配列番号：２３のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項11】
Ｈ－ＦＲ２を含み、前記Ｈ－ＦＲ２が前記ＨＣＤＲ１と前記ＨＣＤＲ２との間に位置し、且つ前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号：４２で示されるアミノ酸配列を含む、請求項４～１０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項12】
前記Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：８又は配列番号：１６で示されるアミノ酸配列を含む請求項１１に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項13】
Ｈ－ＦＲ３を含み、前記Ｈ－ＦＲ３が前記ＨＣＤＲ２と前記ＨＣＤＲ３との間に位置し、且つ前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号：４３で示されるアミノ酸配列を含む、請求項３～１２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項14】
前記Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：９、配列番号：１７、配列番号：27及び配列番号：２７のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項15】
Ｈ－ＦＲ４を含み、前記Ｈ－ＦＲ４のＮ末端は前記ＨＣＤＲ３のＣ末端に接続され、且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号：４４で示されるアミノ酸配列を含む、請求項２～１４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項16】
前記Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：１０又は配列番号：１８で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１５前記的単離された抗原結合タンパク質。
【請求項17】
Ｌ－ＦＲ１を含み、前記Ｌ－ＦＲ１のＣ末端は前記ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接的又は間接的に接続され、且つ前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号：４５で示されるアミノ酸配列を含む、請求項８～１６のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項18】
前記Ｌ－ＦＲ１は、配列番号：１１、配列番号：１９及び配列番号：２５のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項19】
Ｌ－ＦＲ２を含み、前記Ｌ－ＦＲ２が前記ＬＣＤＲ１と前記ＬＣＤＲ２との間に位置し、且つ前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号：４６で示されるアミノ酸配列を含む、請求項８～１８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項20】
前記Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１２又は配列番号：２０で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項21】
Ｌ－ＦＲ３を含み、前記Ｌ－ＦＲ３が前記ＬＣＤＲ２と前記ＬＣＤＲ３との間に位置し、且つ前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号：４７で示されるアミノ酸配列を含む、請求項７～２０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項22】
前記Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１３、配列番号：２１及び配列番号：２６のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項23】
Ｌ－ＦＲ４を含み、前記Ｌ－ＦＲ４のＮ末端は前記ＬＣＤＲ３のＣ末端に接続され、且つ前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号：４８で示されるアミノ酸配列を含む、請求項６～２２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項24】
前記Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１４又は配列番号：２２で示されるアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項25】
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項26】
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項27】
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項28】
ＶＨを含み、前記ＶＨが配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項29】
前記ＶＨは、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３２及び配列番号：３４のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項30】
ＶＬを含み、前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項31】
前記ＶＬは、配列番号：２９、配列番号：３１及び配列番号：３３のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項32】
ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨが配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項33】
以下の任意の群から選択されるＶＨ及びＶＬを含み、１）前記ＶＨが配列番号：２８で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：２９で示されるアミノ酸配列を含み、
２）前記ＶＨが配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み、
３）前記ＶＨが配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み、
４）前記ＶＨが配列番号：３２で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み、及び
５）前記ＶＨが配列番号：３４で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項１～３２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項34】
抗体重鎖定常領域を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項35】
前記抗体重鎖定常領域は、ヒト抗体重鎖定常領域に由来する、請求項３４に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項36】
前記抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域に由来する、請求項３４～３５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項37】
前記抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域に由来する、請求項３４～３６のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項38】
前記抗体重鎖定常領域は、配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含む、請求項３４～３７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項39】
抗体軽鎖定常領域を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項40】
前記抗体軽鎖定常領域は、人ＩｇＫ定常領域に由来する、請求項３９に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項41】
前記抗体軽鎖定常領域は、配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含む、請求項３９～４０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項42】
抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項43】
前記抗原結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ及び／又はｄＡｂが含まれる、請求項４２に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項44】
前記抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体及び完全ヒト抗体から成る群の１種又は複数種から選択される、請求項４２～４３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項45】
ＣＤ７３又はその機能的活性断片に特異的に結合することができる、請求項１～４４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項46】
前記ＣＤ７３は、ヒトＣＤ７３及び／又はサルＣＤ７３を含む、請求項４５に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項47】
ＣＤ７３の酵素活性を阻害できる、請求項１～４６のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項48】
細胞表面のＣＤ７３のエンドサイトーシスを誘導できる、請求項１～４７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項49】
融解温度（Ｔｍ）及び／又は凝集温度（Ｔａｇｇ）は、６５℃を超える、請求項１～４８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項50】
非特異的吸着の影響がない又は弱い、請求項１～４９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項51】
腫瘍増殖を抑制できる、請求項１～５０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項52】
請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を含む、ポリペプチド分子。
【請求項53】
融合タンパク質を含む、請求項５２に記載のポリペプチド分子。
【請求項54】
請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質又は請求項５２～５３のいずれか一項に記載のポリペプチド分子をコードする核酸分子。
【請求項55】
請求項５４に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項56】
請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を含む免疫複合体。
【請求項57】
請求項５４に記載の核酸分子、請求項５５に記載のベクター及び／又は請求項５６に記載の免疫複合体を含む細胞。
【請求項58】
請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項５２－５３のいずれか一項に記載のポリペプチド分子、請求項５４に記載の核酸分子、請求項５５に記載のベクター、請求項５６に記載の免疫複合体及び／又は請求項５７に記載の細胞、及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項59】
前記単離された抗原結合タンパク質が発現されるような条件下で、請求項５７に記載の細胞を培養することを含む、請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質の調製方法。
【請求項60】
疾患及び／又は病症を予防及び／又は治療するための医薬品の調製における請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質，請求項５２～５３のいずれか一項に記載のポリペプチド分子、請求項５４に記載の核酸分子、請求項５５に記載のベクター、請求項５６に記載の免疫複合体、請求項５７に記載の細胞及び／又は請求項５８に記載の医薬組成物の用途。
【請求項61】
前記疾患及び／又は病症は、ＣＤ７３によって媒介される、請求項６０に記載の用途。
【請求項62】
前記疾患及び／又は病症は、腫瘍を含む、請求項６０～６１のいずれか一項に記載の用途。
【請求項63】
前記腫瘍は、固形腫瘍及び／又は血液腫瘍を含む、請求項６２に記載の用途。
【請求項64】
前記疾患及び／又は病症は、乳癌を含む、請求項６０～６４のいずれか一項に記載の用途。
【請求項65】
請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項５２～５３のいずれか一項に記載のポリペプチド分子、請求項５４に記載の核酸分子、請求項５５に記載のベクター、請求項５６に記載の免疫複合体、請求項５７に記載の細胞及び／又は請求項５８に記載の医薬組成物を投与することを含む、サンプル中のＣＤ７３を検出するための方法。
【請求項66】
請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項５２～５３のいずれか一項に記載のポリペプチド分子、請求項５４に記載の核酸分子、請求項５５に記載のベクター、請求項５６に記載の免疫複合体、請求項５７に記載の細胞及び／又は請求項５８に記載の医薬組成物を含む、サンプル中のＣＤ７３を検出するための試薬又はキット。
【請求項67】
サンプル中のＣＤ７３の存在及び／又は含有量を検出するためのキットの調製における請求項１～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項５２～５３のいずれか一項に記載のポリペプチド分子、請求項５４に記載の核酸分子、請求項５５に記載のベクター、請求項５６に記載の免疫複合体、請求項５７に記載の細胞及び／又は請求項５８に記載の医薬組成物の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、バイオ医薬品分野に関し、特に、ＣＤ７３抗原結合タンパク質及びその使用に関する。
【背景技術】
【0002】
ＣＤ７３は、ＮＴ５Ｅとも呼ばれ、分子量約７０Ｋｄの細胞外５－ヌクレアーゼ（ＮＴ５Ｅ）であり、グリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）を介して細胞表面に係留され、主に二量体の形で存在する。通常の生理学的状態においてＣＤ７３は、肝臓、大腸、腎臓、脾臓、肺、卵巣、リンパ節などの様々な組織又は器官で発現することができる。
【0003】
多数の前臨床研究結果では、ＣＤ７３が様々な腫瘍細胞の表面に異常に高発現していることが示され、臨床データからＣＤ７３の高発現が腫瘍患者の予後不良と密接に関連していることが示されるため、ＣＤ７３は様々な腫瘍の臨床治療と予後のための潜在的なターゲットとして使用できる。
【0004】
しかし、現在市場にはヒトＣＤ７３向け抗体又は低分子薬が出回っておらず、ＣＤ７３の異常発現を伴う癌の治療に新しい構想及び展望を提供するため、腫瘍ＣＤ７を標的とするより多くの医薬品を開発することが急務となっていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】米国特許第６，１５０，５８４号公報
【特許文献2】米国特許第６，４５８，５９２号公報
【特許文献3】米国特許第６，４２０，１４０号公報
【特許文献4】国際出願ＷＯ ０６／０３０２２０号公報
【特許文献5】国際出願ＷＯ ０６／００３３８８号公報
【特許文献6】国際出願ＷＯ ０６／００３３８８号公報
【特許文献6】国際出願ＷＯ２０１５／０３６５８３号公報
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒら，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，５３（１）：１２１－１２９（２００３）； Ｒｏｑｕｅら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｐｒｏｇ． ２０：６３９－６５４（２００４）。
【非特許文献2】Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８ （１９９３）； Ｓｈｅｒｉｆｆ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ３：７３３－７３６ （１９９６）
【非特許文献3】ＩＭＧＴ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ＠ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ；ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ；Ｌｅｆｒａｎｃら，１９９９，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２７：２０９－２１２；
【非特許文献4】Ｒｕｉｚら，２０００ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８： ２１９－２２１；Ｌｅｆｒａｎｃら， ２００１， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２９：２０７－２０９；
【非特許文献5】Ｌｅｆｒａｎｃら，２００３，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ３１： ３０７－３１０；
【非特許文献6】Ｌｅｆｒａｎｃら，２００５，ＤｅｖＣｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：１８５－２０３
【非特許文献7】Ｋａｂａｔ ＥＡ ＆Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ ＡｃａｄＳｃｉ １９０：３８２－３９１
【非特許文献8】Ｋａｂａｔ ＥＡｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２
【非特許文献9】Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ．（１９９１）
【非特許文献10】Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｄａｎｉｅｌ Ｐ． Ｓｔｉｅｓ， Ａｂｂａ Ｉ． Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ． Ｐａｒｓｏｌｗ （ｅｄｓ）， Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ， Ｎｏｒｗａｌｋ， Ｃｏｎｎ．，１９９４，７１頁目及び第６章
【非特許文献11】Ｗａｒｄら（Ｎａｔｕｒｅ，１９８９Ｏｃｔ １２；３４１（６２４２）：５４４－６）
【非特許文献12】Ｈｏｌｔら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００３，２１（１１）：４８４－４９０
【非特許文献13】Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ及びＤ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎの「生物学的配列比較のための改善されたツール」
【非特許文献14】全米科学アカデミーのジャーナル議事録（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．），８５：２４４４－２４４８，１９８８
【非特許文献15】Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ及びＷ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎの「高速かつ高感度のタンパク質類似性検索」、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２７：１４３５－１４４１，１９８９
【非特許文献16】Ｓ．Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｗ．Ｇｉｓｈ、Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ、Ｅ．Ｗ．Ｍｙｅｒｓ及びＤ．Ｌｉｐｍａｎの「基本的なローカルアラインメント（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）検索ツール」、分子生物学ジャーナル、２１５：４０３－４１０，１９９０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本出願は、１）ＣＤ７３又はその機能的活性断片に特異的に結合することができること、２）ヒトＣＤ７３及び／又はサルＣＤ７３に特異的に結合することができること、３）ＣＤ７３の酵素活性を阻害できること、４）細胞表面のＣＤ７３のエンドサイトーシスを誘導できること、５）Ｔｍ及び／又はＴａｇｇ値が６５℃を超えること、６）非特異的な静電結合がないか弱いこと、及び７）腫瘍増殖を抑制できることの特性のうち１種又は複数種を有する単離された抗原結合タンパク質を提供する。本出願は、単離された抗原結合タンパク質をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞及び前記単離された抗原結合タンパク質の調製方法も提供する。本出願に記載の単離された抗原結合タンパク質は、疾患及び／又は病症、例えば腫瘍の予防及び／又は治療に使用することができる。
【課題を解決するための手段】
【0008】
一態様において、本出願は、重鎖可変領域ＶＨ内の少なくとも１つのＣＤＲを含む単離された抗原結合タンパク質を提供し、前記ＶＨは配列番号：４９に示されるアミノ酸配列を含む。
【0009】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ３を含み、且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含む。
【0010】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ２を含み、且つ前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含む。
【0011】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１を含み、且つ前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含む。
【0012】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域ＶＬ内の少なくとも１つのＣＤＲを含み、前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含む。
【0013】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ３を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含む。
【0014】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ２を含み、且つ前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含む。
【0015】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ１を含み、且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含む。
【0016】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ１を含み、前記Ｈ－ＦＲ１のＣ末端は前記ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接的又は間接的に接続され、且つ前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号：４１で示されるアミノ酸配列を含む。
【0017】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記Ｈ－ＦＲ１は、配列番号：７、配列番号：１５及び配列番号：２３のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む。
【0018】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ２を含み、前記Ｈ－ＦＲ２が前記ＨＣＤＲ１と前記ＨＣＤＲ２との間に位置し、且つ前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号：４２で示されるアミノ酸配列を含む。
【0019】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：８又は配列番号：１６で示されるアミノ酸配列を含む。
【0020】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ３を含み、前記Ｈ－ＦＲ３が前記ＨＣＤＲ２と前記ＨＣＤＲ３との間に位置し、且つ前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号：４３で示されるアミノ酸配列を含む。
【0021】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：９、配列番号：１７、配列番号：２４及び配列番号：２７のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む。
【0022】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ４を含み、前記Ｈ－ＦＲ４のＮ末端は前記ＨＣＤＲ３のＣ末端に接続され、且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号：４４で示されるアミノ酸配列を含む。
【0023】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：１０又は配列番号：１８で示されるアミノ酸配列を含む。
【0024】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ１を含み、前記Ｌ－ＦＲ１のＣ末端は前記ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接的又は間接的に接続され、且つ前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号：４５で示されるアミノ酸配列を含む。
【0025】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記Ｌ－ＦＲ１は、配列番号：１１、配列番号：１９及び配列番号：２５のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む。
【0026】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ２を含み、前記Ｌ－ＦＲ２が前記ＬＣＤＲ１と前記ＬＣＤＲ２との間に位置し、且つ前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号：４６で示されるアミノ酸配列を含む。
【0027】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１２又は配列番号：２０で示されるアミノ酸配列を含む。
【0028】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ３を含み、前記Ｌ－ＦＲ３が前記ＬＣＤＲ２と前記ＬＣＤＲ３との間に位置し、且つ前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号：４７で示されるアミノ酸配列を含む。
【0029】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１３、配列番号：２１及び配列番号：２６のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む。
【0030】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ４を含み、前記Ｌ－ＦＲ４のＮ末端は前記ＬＣＤＲ３のＣ末端に接続され、且つ前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号：４８で示されるアミノ酸配列を含む。
【0031】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１４又は配列番号：２２で示されるアミノ酸配列を含む。
【0032】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含む。
【0033】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含む。
【0034】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含む。
【0035】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＶＨを含み、前記ＶＨが配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含む。
【0036】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記ＶＨは、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３２及び配列番号：３４のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む。
【0037】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＶＬを含み、前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含む。
【0038】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質の前記ＶＬは、配列番号：２９、配列番号：３１及び配列番号：３３のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む。
【0039】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、以下の任意の群から選択されるＶＨ及びＶＬを含み、
１）前記ＶＨが配列番号：２８で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：２９で示されるアミノ酸配列を含み、
２）前記ＶＨが配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み、
３）前記ＶＨが配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み、
４）前記ＶＨが配列番号：３２で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み、及び
５）前記ＶＨが配列番号：３４で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含む。
１）前記ＶＨが配列番号：２８で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：２９で示されるアミノ酸配列を含み、
２）前記ＶＨが配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み、
３）前記ＶＨが配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み、
４）前記ＶＨが配列番号：３２で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み、及び
５）前記ＶＨが配列番号：３４で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含む。
【0040】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、抗体重鎖定常領域を含む。
【0041】
いくつかの実施形態において、前記抗体重鎖定常領域は、ヒト抗体重鎖定常領域に由来する。
【0042】
いくつかの実施形態において、前記抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域に由来する。
【0043】
いくつかの実施形態において、前記抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域に由来する。
【0044】
いくつかの実施形態において、前記抗体重鎖定常領域は、配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含む。
【0045】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖定常領域を含む。
【0046】
いくつかの実施形態において、前記抗体軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＫ定常領域に由来する。
【0047】
いくつかの実施形態において、前記抗体軽鎖定常領域は、配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含む。
【0048】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、抗体又はその抗原結合断片を含む。
【0049】
いくつかの実施形態において、前記抗原結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ及び／又はｄＡｂが含まれる。
【0050】
いくつかの実施形態において、前記抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体及び完全ヒト抗体から成る群の１種又は複数種から選択される。
【0051】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３又はその機能的活性断片に特異的に結合することができる。
【0052】
いくつかの実施形態において、前記ＣＤ７３は、ヒトＣＤ７３及び／又はサルＣＤ７３を含む。
【0053】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３の酵素活性を阻害できる。
【0054】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、細胞表面のＣＤ７３のエンドサイトーシスを誘導できる。
【0055】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質のＴｍ及び／又はＴａｇｇ値は、６５℃を超える。
【0056】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、非特異的吸着の影響がない又は弱い。
【0057】
いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、腫瘍増殖を抑制できる。
【0058】
別の態様において、本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質を含むポリペプチド分子も提供する。
【0059】
いくつかの実施形態において、前記ポリペプチド分子は、融合タンパク質を含む。
【0060】
別の態様において、本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質又は前記ポリペプチド分子をコードする核酸分子も提供する。
【0061】
別の態様において、本出願は、前記核酸分子を含むベクターも提供する。
【0062】
別の態様において、本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質を含む免疫複合体も提供する。
【0063】
別の態様において、本出願は、前記核酸分子、前記ベクター及び／又は前記免疫複合体を含む細胞も提供する。
【0064】
別の態様において、本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体及び／又は前記細胞、及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。
【0065】
別の態様において、本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質が発現されるような条件下で、前記細胞を培養することを含む、前記単離された抗原結合タンパク質の調製方法も提供する。
【0066】
別の態様において、本出願は、疾患及び／又は病症を予防及び／又は治療するための医薬品の調製における前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物の用途も提供する。
【0067】
いくつかの実施形態において、前記疾患及び／又は病症は、ＣＤ７３によって媒介される。
【0068】
いくつかの実施形態において、前記疾患及び／又は病症は、腫瘍を含む。
【0069】
いくつかの実施形態において、前記腫瘍は、固形腫瘍及び／又は血液腫瘍を含む。
【0070】
いくつかの実施形態において、前記疾患及び／又は病症は、乳癌を含む。
【0071】
別の態様において、本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物の投与を含む、サンプル中のＣＤ７３を検出するための方法も提供する。
【0072】
別の態様において、本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物を含む、サンプル中のＣＤ７３を検出するための試薬又はキットも提供する。
【0073】
別の態様において、本出願は、サンプル中のＣＤ７３の存在及び／又は含有量を検出するためのキットの調製における前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物の用途も提供する。
【0074】
当業者は、下記の詳細な説明から本出願の他の態様及び利点を容易に理解することができる。下記の詳細な説明では、本出願の例示的な実施形態のみを示して説明する。当業者が理解するように、本出願の内容により、当業者は、本出願に係る発明の精神及び範囲から逸脱することなく、開示された具体的実施形態に変更を加えることができる。また、本出願の添付の図面及び明細書における説明は、すべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。
【0075】
本出願に係る発明の具体的特徴は、添付の特許請求の範囲に記載されている。下記の詳細に説明する例示的な実施形態及び図面を参照して本出願に係る発明の特徴及び利点をさらに理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【0076】
【図1】本出願の抗原結合タンパク質と細胞表面のヒトＣＤ７３との結合活性を示すグラフである。
【図2】本出願の抗原結合タンパク質と組換えＣＤ７３との結合活性を示すグラフである。
【図3】本出願の抗原結合タンパク質によるＣＤ７３の酵素活性阻害の検出を示すグラフである。
【図4】本出願の抗原結合タンパク質によるＣＤ７３の酵素活性阻害の検出を示すグラフである。
【図5】本出願の抗原結合タンパク質による細胞表面のＣＤ７３のエンドサイトーシス誘導の検出を示すグラフである。
【図6】体内腫瘍に対する本出願の抗原結合タンパク質の治療効果を示すグラフである。
【図7】体内腫瘍に対する本出願の抗原結合タンパク質の治療効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0077】
以下、特定の具体的実施例を挙げて本出願の発明の実施形態を説明し、当業者は本明細書に開示された内容から本出願の発明その他の利点及び効果を容易に理解することができる。
【0078】
（用語定義）
本出願において、「ＣＤ７３」という用語は、「ＮＴ５Ｅ」、「分化クラスター７３」、「５’－ヌクレオチダーゼ（５’－ＮＴ）」又は「細胞外５’－ヌクレオチダーゼ」とも呼ばれる。この用語は、「完全長」、未プロセシングのＣＤ７３、及び細胞プロセシングによって産生される任意の形態のＣＤ７３をカバーする。本出願において、用語「ＣＤ７３」は、完全長の野生型ＣＤ７３及びその変異体、断片、バリアント、アイソフォーム及びホモログを含む。いくつかの実施形態において、前記ＣＤ７３はヒトＣＤ７３を含み得る。例えばヒトＣＤ７３の配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ２１５８９で見つけることができる。
本出願において、「ＣＤ７３」という用語は、「ＮＴ５Ｅ」、「分化クラスター７３」、「５’－ヌクレオチダーゼ（５’－ＮＴ）」又は「細胞外５’－ヌクレオチダーゼ」とも呼ばれる。この用語は、「完全長」、未プロセシングのＣＤ７３、及び細胞プロセシングによって産生される任意の形態のＣＤ７３をカバーする。本出願において、用語「ＣＤ７３」は、完全長の野生型ＣＤ７３及びその変異体、断片、バリアント、アイソフォーム及びホモログを含む。いくつかの実施形態において、前記ＣＤ７３はヒトＣＤ７３を含み得る。例えばヒトＣＤ７３の配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ２１５８９で見つけることができる。
【0079】
本出願において、「単離された」という用語は通常、人工的手段によって自然状態から得られることを意味する。自然界に「分離された」物質又は成分が存在する場合、「分離された」物質又は成分が位置する自然環境は変更されたか、自然環境から該物質が分離されたか、或いはその両方である可能性がある。例えば生きている動物には単離されていないポリヌクレオチド又はポリペプチドが自然に存在し、この自然状態から単離された高純度の同じポリヌクレオチド或いはポリペプチドを単離という。用語「単離された」は、人工又は合成物質の混合、物質の活性に影響を与えない他の不純物質の存在を排除するものではない。
【0080】
本出願において、「単離された抗原結合タンパク質」という用語は、一般に、その天然に存在する状態から取り除かれた抗原結合能を有するタンパク質を意味する。該「単離された抗原結合タンパク質」は、抗原結合部分と、任意選択で抗原への前記抗原結合部分の結合を促進するコンフォメーションを抗原結合部分がとることを可能にする枠組み或いは枠組み部分とを含み得る。抗原結合タンパク質は、例えば抗体由来タンパク質枠組み領域（ＦＲ）又はCDR或いはCDR誘導体が移植された代替タンパク質枠組み領域若しくは人工枠組み領域を含み得る。このような枠組みには、例えば抗原結合タンパク質の三次元構造を安定化するために導入された変異を含む抗体由来の枠組み領域、及び例えば生体適合性ポリマーを含む完全に合成された枠組み領域が含まれるが、これらに限定されない。例えば非特許文献１を参照する。抗原結合タンパク質の例として、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、一本鎖抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｄＡｂ、ＩｇＤ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、又はＩｇＧ４抗体及びその断片が挙げられる。
【0081】
本出願において、用語「ＣＤＲ」は、「相補性決定領域」とも呼ばれ、一般的に抗体の可変ドメイン内の領域を指し、その配列は超可変であり、及び／又は構造ループを形成する。一般的に抗体は、ＶＨにある３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）、ＶＬにある３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）という６つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、重鎖のみからなる天然に存在するラクダ科動物抗体は、軽鎖がない場合においてその機能も正常で安定化することができる。例えば非特許文献２を参照する。抗体のＣＤＲは、ＣＣＧ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、総合考慮Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａなどの複数の番号付けシステムによって決定できる。これらの番号付けシステムは、当技術分野で知られ、具体的には例えばｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ＃ｋａｂａｔｎｕｍを参照できる。例えば前記抗原結合タンパク質のアミノ酸配列番号は、ＩＭＧＴ番号付けスキームに従うことができる（特許文献３、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６）。例えば前記抗原結合タンパク質のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従い決定できる（例えば非特許文献７及び非特許文献８を参照）。
【0082】
本出願において、「ＦＲ」という用語は、一般的に抗体可変ドメインの中でより高度に保存された部分を指し、枠組み領域と呼ばれる。通常、天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ４つのＦＲ領域を含み、すなわちＶＨに４つ（Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、及びＨ－ＦＲ４）、ＶＬに４つ（Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４）がある。
【0083】
本出願において、「可変ドメイン」及び「可変領域」という用語は、交換可能に使用され、一般的に抗体の重鎖及び／又は軽鎖の一部を指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」及び「“ＶＬ」（或いはそれぞれ「ＶＨ」及び「ＶＬ」）と呼ぶことができる。これらのドメインは通常、（同じクラスの他の抗体と比較して）抗体の最も変化しやすい部分であり、抗原結合部位を含む。
【0084】
本出願において、「可変」という用語は、一般的に可変ドメインのある部分が抗体間の配列で非常に異なることを意味する。可変ドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を決定する。ただし、可変性は可変ドメイン全体に均等に分散されていない。通常、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメイン中の超可変領域（ＣＤＲ又はＨＶＲ）と呼ばれる３つの部分に集中している。可変ドメインの中でより高度に保存された部分は、枠組み領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは主としてβ－シート構造を持ち、３つのループ状連結を形成し、場合によりβ－シート構造の部分を形成するＣＤＲにより連結された４つのＦＲ領域を含む。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域により非常にもう一方の鎖のＣＤＲと近接して保持され、抗体の抗原結合部位の形成に一役買う（非特許文献９参照）。
【0085】
本出願において「抗体」という用語は、一般的にインビトロ又はインビボで産生されたかどうかにかかわらず、抗原結合部位を含む任意のポリペプチドをカバーする、免疫グロブリン或いはその断片若しくは誘導体を指す。この用語には、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異性、多重特異性、非特異性、ヒト化、一本鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、変異及び移植の抗体が含まれるが、これらに限定されない。「インタクト抗体」のように、「インタクト」という用語によって特に修飾されない限り、本発明の目的のため、「抗体」という用語は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂなどの抗体断片及び抗原結合機能を保持する他の抗体断片（例えばヒトＣＤ７３に特異的に結合する）を含む。このような断片は、抗原結合ドメインを含む。基本的な４鎖抗体ユニットは、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成されるヘテロ四量体糖タンパク質です。ＩｇＭ抗体は、５つの基本的なヘテロ四量体ユニットとＪ鎖と呼ばれる別のポリペプチドで構成され、１０個の抗原結合部位を含むが、ＩｇＡ抗体には、Ｊ鎖と結合・重合して多価組み合わせを形成する２～５個の基本的な４鎖ユニットを含む。ＩｇＧの場合、４鎖ユニットは一般的に約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は共有ジスルフィド結合によってＨ鎖につながっているが、２つのＨ鎖はＨ鎖のアイソタイプに応じて１つ又は複数のジスルフィド結合によって互いにつながっている。各Ｈ鎖及びＬ鎖はまた、規則正しく間隔が開いた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端において、可変ドメイン（ＶＨ）、続いてα鎖及びγ鎖のそれぞれに関する３個の定常ドメイン（ＣＨ）並びにμアイソタイプ及びεアイソタイプに関する４個のＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）、続いてＣ末端に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬはＶＨとアライメントされ、ＣＬは重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とアライメントされる。特定のアミノ酸残基は軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。ＶＨ及びＶＬの対合は、単一の抗原結合部位を共に形成する。様々なクラスの抗体の構造及び特性に関して、例えば非特許文献１０を参照する。任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖を、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ及びλと呼ばれる２種の明確に異なるタイプのうちの一方に帰属させることができる。重鎖（ＣＨ）の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを様々なクラス又はアイソタイプに帰属させることができる。５つのクラスの免疫グロブリン：それぞれα、δ、ε、γ及びμと命名された重鎖を有するＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭが存在する。
【0086】
本出願において「抗原結合断片」という用語は、一般的に抗原（例えばＣＤ７３）に特異的に結合する能力を有する１つ或いは複数の断片を指す。本出願において、抗原結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２，ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ及び／又はｄＡｂが含まれることができる。
【0087】
本出願において「Ｆａｂ」という用語は、一般的に抗体の抗原結合断片を指す。上記のようにパパインでインタクト抗体を消化できる。抗体は、パパイン消化により、２つの同一の抗原結合断片、すなわち「Ｆａｂ」断片、及び残りの「Ｆｃ」断片（すなわち、Ｆｃ領域、同上）を生成する。Ｆａｂ断片は、１本の完全なＬ鎖と重鎖の可変領域及びＨ鎖（ＶＨ）の第１の定常領域（ＣＨ１）からなり得る。
【0088】
本出願において「Ｆａｂ’断片」という用語は、一般的にＦａｂ断片よりわずかに大きい断片である、ヒトモノクローナル抗体の一価抗原結合断片を指す。例えばＦａｂ’断片は、軽鎖の全て、重鎖の可変ドメインの全て、及び重鎖の第１と第２の定常領域の全て又は一部を含み得る。例えばＦａｂ’断片は、重鎖の２２０～３３０個のアミノ酸残基の一部又は全部も含み得る。
【0089】
本出願において「Ｆ（ａｂ’）２」という用語は、一般的にペプシンでインタクト抗体を消化して生成される抗体断片を指す。Ｆ（ａｂ’）２断片には、ジスルフィド結合した２つのＦａｂ断片とヒンジ領域の一部が含まれる。Ｆ（ａｂ’）２断片は二価の抗原結合活性を持ち、抗原を架橋することができる。
【0090】
本出願において「Ｆｖ断片」という用語は、一般的に重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の全部又は一部を含み、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を欠くヒトモノクローナル抗体の一価の抗原結合断片を指す。重鎖可変領域及び軽鎖可変領域には、例えばCDRが含まれる。例えばＦｖ断片は、重鎖及び軽鎖の約１１０個のアミノ酸のアミノ末端可変領域の全部又は一部を含む。
【0091】
本出願において「ｓｃＦｖ」という用語は、一般的に軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片とを含む融合タンパク質を指し、前記軽鎖及び重鎖の可変領域は、隣接し（例えば短い柔軟なポリペプチドリンカーなどの合成リンカーを介して）、且つ単鎖ポリペプチドの形態で発現することができ、前記ｓｃＦｖが由来するインタクト抗体の特異性を保留する。特記しない限り、本出願で使用されるように、ｓｃＦｖは、任意の順序で（例えばポリペプチドのＮ末端及びＣ末端に対して）前記ＶＬ及びＶＨの可変領域を有し得、ｓｃＦｖはＶＬリンカー-ＶＨ或いはVH-リンカー-VLを含み得る。
【0092】
本出願において「ｄＡｂ」という用語は、一般的にＶＨドメイン、ＶＬドメインを有する或いはＶＨドメイン又はＶＬドメインを有する抗原結合断片を指す。例えば非特許文献１１、非特許文献１２、及び例えば特許文献４、特許文献５及びＤｏｍａｎｔｉｓＬｔｄの他の公開特許出願を参照する。
【0093】
本出願において「モノクローナル抗体」という用語は、一般的に単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して作用するものである。異なる抗原決定基(エピトープ)に対する異なる抗体を典型的には含む慣用な(ポリクローナル)抗体調製物と比べて、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の抗原決定基に向けられる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンにより汚染されていないハイブリドーマ培養により合成される点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体の集団より得られた抗体の特性を示唆するものであって、抗体が特定の方法により製造されることを要求するものではない。例えば本出願で使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ細胞で調製することができ、若しくは組換えＤＮＡ法によって調製することができる。
【0094】
本出願において「キメラ抗体」という用語は、一般的に可変領域が１つの物種に由来し、定常領域が別の物種に由来する抗体を指す。通常、可変領域は齧歯類などの実験動物の抗体（「親抗体」）に由来し、定常領域はヒト抗体に由来するため、得られるキメラ抗体は親（例：マウス由来）抗体に比べ、ヒト個体において有害な免疫反応を引き起こす可能性が低くなる。
【0095】
本出願において「ヒト化抗体」という用語は、一般的に非ヒト抗体（例：マウス抗体）のＣＤＲ領域以外のアミノ酸の一部又は全部が、ヒト免疫グロブリン由来の対応するアミノ酸で置換されている抗体を指す。ＣＤＲ領域において、アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換若しくは修飾もまた、それらが特定の抗原に結合する抗体の能力を保留している限り許容され得る。ヒト化抗体は、任意選択でヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含む。「ヒト化抗体」は、元の抗体に似ている抗原特異性を保留している。非ヒト（例：マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の配列のキメラ抗体を最低限で含み得る。場合により、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）のＣＤＲ領域残基を、所望の特性、親和性及び／又は能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）（例：マウス、ラット又は非ヒト霊長類）ＣＤＲ領域における残基に置き換えることができる。場合により、ヒト免疫グロブリンのＦＲ領域残基を対応する非ヒト残基で置換し得る。なお、ヒト化抗体は、レシピエント抗体或いはドナー抗体に存在しないアミノ酸修飾を含み得る。これらの修飾は、結合親和性などの抗体特性をさらに改良するために行うことができる。
【0096】
「完全ヒト抗体」という用語は、一般的にヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を指す。完全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、或いはマウス細胞由来のハイブリドーマで産生される場合、マウス糖鎖を含む可能性がある。同様に、「マウス抗体」或いは「ラット抗体」は、それぞれマウス或いはラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を指す。ファージディスプレイ又は他の分子生物学的方法により、ヒト、ヒト免疫グロブリン生殖系列配列を有するトランスジェニック動物において完全ヒト抗体を産生することができる。抗体を作製するために使用できる例示的な技術は、特許文献１、特許文献２、特許文献３に記載されている。ライブラリを使用するなどの他の技術は、当技術分野で知られている。
【0097】
本出願において「ポリペプチド分子」及び「ポリペプチド」、「ペプチド」という用語は交換可能に使用され、一般的にアミノ酸残基のポリマーを指す。「融合タンパク質」という用語は、一般的に互いに共有結合した少なくとも２つの部分を有するポリペプチドを指す。これらの部分のそれぞれは、異なる特性を有するポリペプチドであり得る。該特性は、インビトロ或いはインビボ活性などの生物学的特性であってもよい。この特性は、標的分子への結合、反応の触媒作用などの単純な化学的又は物理的特性でもある。この２つの部分は、単一のペプチド結合或いはペプチドリンカーを介して直接連結できる。
【0098】
本出願において「核酸分子」という用語は、一般的に単離された形態の任意の長さのヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド、或いはそれらの自然環境から単離された若しくは人工的に合成されたアナログを指す。
【0099】
本出願において「ベクター」という用語は、一般的にタンパク質をコードするポリヌクレオチドを挿入し、タンパク質を発現させることができる核酸送達ビヒクルを指す。ベクターは、宿主細胞を形質転換、形質導入、又はトランスフェクトすることで、ベクターによって運ばれる遺伝物質エレメントを宿主細胞で発現させることができる。例えばベクターには、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）或いはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、λファージ又はＭ１３ファージなどのファージ及び動物ウイルスなどが含まれる。ベクターとして使用される動物ウイルス種類には、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルスなど）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、及びパポバウイルス（ＳＶ４０など）が含まれる。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択エレメント、及びレポーター遺伝子を含む、発現を制御する多種エレメントを含む場合がある。なお、ベクターは複製起点を含んでいてもよい。ベクターには、ウイルス粒子、リポソーム、或いはカプシドなど、細胞への侵入を促進する成分も含まれる場合があるが、これらだけではない。
【0100】
本出願において「細胞」という用語は、一般的に本発明に記載の核酸分子又は本発明に記載のベクターを含む、被験者のプラスミド或いはベクターのレシピエントである若しくはあった単一の細胞、細胞系株若しくは細胞培養物を指す。細胞は、単一細胞の子孫を含み得る。自然、偶発的、又は意図的な変異により、子孫は元の親細胞と必ずしも同一であるとは限らない（全ＤＮＡ補体の形態又はゲノムで）。細胞は、本出願に記載のベクターを用いてインビトロでトランスフェクトされた細胞を含み得る。細胞は、細菌細胞（例：大腸菌）、酵母細胞、又はＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＬＮＣＡＰ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ－１細胞、ＮＳ０細胞などの他の真核細胞であり得る。いくつかの実施形態において、細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞はＨＥＫ２９３細胞である。
【0101】
本出願において「免疫複合体」という用語は、一般的にその他の試薬（例：化学療法剤、放射性元素、細胞増殖抑制剤及び細胞毒性剤）が抗体或いはその抗原結合断片にコンジュゲート（例えばリンカー分子によって共有結合）され、該複合体は、前記抗体又はその抗原結合断片を介して標的細胞上の抗原に特異的に結合して、他の薬剤を標的細胞（例えば腫瘍細胞）に送達することができる。
【0102】
本出願において「医薬組成物」という用語は、一般的に疾患又は病症を予防／治療するための組成物を指す。前記医薬組成物は、本出願に記載の単離された抗原結合タンパク質、本出願に記載の核酸分子、本出願に記載の担体及び／又は本出願に記載の細胞、及び任意選択の薬学的に許容されるアジュバントを含み得る。なお、前記医薬組成物は、１つ或いは複数の（薬学的に有効な）担体、安定剤、賦形剤、希釈剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤及び／又は防腐剤を含んでもよい。組成物の許容される成分は、好ましくは使用される投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒である。本発明の医薬組成物には、液体、凍結及び凍結乾燥組成物が含まれるが、これらに限定されない。
【0103】
本出願において「薬学的に許容される担体」という用語は、一般的に使用される投与量及び濃度で曝露される細胞或いは哺乳動物に対して無毒である、薬学的に許容されるベクター、賦形剤若しくは安定剤を含む。生理学的に許容される担体の例としては、緩衝剤、抗酸化剤、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、タンパク質、親水性ポリマー、アミノ酸、単糖類、二糖類及び他の炭水化物、キレート剤、糖アルコール、塩形成対立イオン（例：ナトリウム）及び／又は非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【0104】
本出願において「特異的に結合する」又は「特異的な」という用語は、一般的に標的と抗体との間の結合など、分子（生体分子を含む）の不均一な集団の存在下で標的の存在を決定できる、測定可能かつ再現可能な相互作用を指す。例えば標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体は、他の標的に結合するよりも高い親和性、結合力、容易さ、及び／又は長い持続時間で該標的に結合する抗体であり得る。いくつかの実施形態において、抗体は、異なる種のタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、特異的結合は排他的結合を含むが、これを必要としない。
【0105】
本出願において「被験者」という用語は、一般的にネコ、イヌ、ウマ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウサギ、マウス、ラット、又はサルを含むがこれらに限定されない、ヒト或いはヒト以外の動物を指す。
【0106】
「腫瘍」という用語は、一般的に組織の新たな病理学的増殖を指す。腫瘍細胞は、局所的に、或いは血流とリンパ系を介して体の他の部分に広がることがある。本出願において、前記腫瘍は良性腫瘍及び悪性腫瘍を含み得る。本出願において、前記腫瘍は、固形腫瘍及び／又は血液腫瘍を含み得る。本出願において、前記腫瘍は癌を含み得る。本出願において、前記腫瘍の例には、乳癌が含まれるが、これに限定されない。
【0107】
本出願において「非特異的な静電結合がない又は弱い」という用語は、一般的に前記単離された抗原結合タンパク質と非標的分子との間に非特異的吸着の影響がほぼないことを指す。例えばＳＰＲ法を用いて、前記単離された抗原結合タンパク質と非標的分子との間の非特異的吸着の影響を測定することができ、Ｂｕｆｆｅｒの影響を差し引いた後、本出願に記載の単離された抗原結合タンパク質のシグナル強度は２０ＲＵ未満或いはそれに近い。一般的にシグナル強度が約２０ＲＵ以下、例えば約２０ＲＵ、約１９ＲＵ、約１８ＲＵ、約１７ＲＵ、約１６ＲＵ、約１５ＲＵ、約１４ＲＵ、約１３ＲＵ、約１２ＲＵ、約１１ＲＵ、約１０ＲＵ、約９ＲＵ、約８ＲＵ、約７ＲＵ、約６ＲＵ、約５ＲＵ、約４ＲＵ、約３ＲＵ、約２ＲＵ又は約１ＲＵの場合、抗原結合タンパク質と非標的分子との相互作用は弱く、信号強度が約２０ＲＵを超える場合、抗原結合タンパク質と非標的分子間の相互作用が強いと考えられ、信号強度が約１００ＲＵを超える場合、抗原結合タンパク質と非標的分子の相互作用は非常に強い。
【0108】
本出願においてかかるタンパク質、ポリペプチド及び／又はアミノ酸配列は、該タンパク質又はポリペプチドと同一或いは類似の機能を有するバリアント又はホモログを少なくとも含むと理解されるべきである。
【0109】
本出願において前記バリアントは、例えば前記タンパク質及び／又は前記ポリペプチド（例えばＣＤ７３タンパク質に特異的に結合する抗体或いはその断片）のアミノ酸配列中の１つ或いは複数のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたタンパク質又はポリペプチドであり得る。例えば機能的バリアントは、１～３０個、１～２０個或いは１～１０個などの少なくとも１個、さらに例えば１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されることにより、アミノ酸改変を有するタンパク質又はポリペプチドを含み得る。前記機能的バリアントは、改変（例えば置換、欠失又は付加）前の前記タンパク質又は前記ポリペプチドの生物学的特性を実質的に維持し得る。例えば機能的バリアントは、改変前の前記タンパク質又は前記ポリペプチドの生物学的活性（例えば抗原結合能）の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、或いは１００％を維持し得る。例えば前記置換は、保存的置換であり得る。
【0110】
本出願において前記ホモログは、前記タンパク質及び／又は前記ポリペプチド（例えばＣＤ７３タンパク質に特異的に結合する抗体又はその断片）のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％（例えば少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はこれ以上を有する）の配列相同性を有するタンパク質又はポリペプチドであり得る。
【0111】
本出願において相同性は、一般的に２つ以上の配列間の近似性、類似性或いは関連性を意味する。次の方法により「配列相同性のパーセンテージ」を計算できる。比較ウィンドウでアラインされる２本の配列を比較し、２本の配列に同じ核酸塩基（例えばＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）或いは同じアミノ酸残基（例えばＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、及びＭｅｔ）が存在する位置の数を確認して一致する位置の数を得、一致する位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数（すなわち、ウィンドウの大きさ）で割り、その結果に１００を掛けて配列相同性のパーセンテージを求め。配列相同性のパーセンテージを確認するためのアラインメントは、当技術分野で知られている様々な方法で実現でき、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、若しくはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて実現できる。当業者は、配列をアラインメントさせるための適切なパラメータを確認することができ、これには、比較されている配列の全長にわたって、或いはターゲットする配列の領域にわたって、最大のアラインメントを実現するために必要な任意のアルゴリズムが含まれる。前記相同性は、ＦＡＳＴＡ及びＢＬＡＳＴの方法によっても確認できる。ＦＡＳＴＡアルゴリズムに関する説明は、非特許文献１３、非特許文献１４、非特許文献１５を参照する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムの説明については、非特許文献１６を参照する。
【0112】
本出願において「含む」という用語は、一般的に、含む、総括する、含有する、又は包含するという意味を指す。場合により、「のため」、「……からなる」を意味することもある。
【0113】
本出願において「約」という用語は、一般的に、所定値の上下０．５％～１０％の範囲内で変動することを意味し、例えば所定値の上下０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、又は１０％の範囲内で変動する。
【0114】
（詳細な説明）
単離された抗原結合タンパク質
抗体のＣＤＲは、相補性決定領域とも呼ばれ、可変領域の一部である。この領域のアミノ酸残基は、抗原又は抗原エピトープと接触することができる。抗体のＣＤＲは、ＣＣＧ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、総合考慮Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａなどの複数種の番号付けシステムによって決定できる。これらの番号付けシステムは、当技術分野で知られ、具体的にはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ＃ｋａｂａｔｎｕｍを参照できる。当業者は、抗体の配列及び構造に基づいて、異なる番号付けシステムでＣＤＲ領域を決定できる。異なる番号付けシステムを使用する場合、ＣＤＲ領域に違いが生じる場合がある。本出願において、前記ＣＤＲは、任意のＣＤＲ割り当て方法により割り当てて得られたＣＤＲ配列をカバーでき、そのバリアントをカバーしてもよい。前記バリアントは、１つ或いは複数のアミノ酸が置換、欠失及び／又は付加された前記ＣＤＲのアミノ酸配列を含む。例えば１～３０個、１～２０個又は１～１０個、また例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個或いは９個のアミノ酸が置換、欠失及び／又は挿入され、これらのホモログもカバーし、前記ホモログは、前記ＣＤＲのアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％（例えば少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はこれ以上を有する）の配列相同性を有するアミノ酸配列であり得る。いくつかの実施形態において、前記ＣＤＲは、ＩＭＧＴ番号付けスキームによって決定される。
単離された抗原結合タンパク質
抗体のＣＤＲは、相補性決定領域とも呼ばれ、可変領域の一部である。この領域のアミノ酸残基は、抗原又は抗原エピトープと接触することができる。抗体のＣＤＲは、ＣＣＧ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、総合考慮Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａなどの複数種の番号付けシステムによって決定できる。これらの番号付けシステムは、当技術分野で知られ、具体的にはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ＃ｋａｂａｔｎｕｍを参照できる。当業者は、抗体の配列及び構造に基づいて、異なる番号付けシステムでＣＤＲ領域を決定できる。異なる番号付けシステムを使用する場合、ＣＤＲ領域に違いが生じる場合がある。本出願において、前記ＣＤＲは、任意のＣＤＲ割り当て方法により割り当てて得られたＣＤＲ配列をカバーでき、そのバリアントをカバーしてもよい。前記バリアントは、１つ或いは複数のアミノ酸が置換、欠失及び／又は付加された前記ＣＤＲのアミノ酸配列を含む。例えば１～３０個、１～２０個又は１～１０個、また例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個或いは９個のアミノ酸が置換、欠失及び／又は挿入され、これらのホモログもカバーし、前記ホモログは、前記ＣＤＲのアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％（例えば少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はこれ以上を有する）の配列相同性を有するアミノ酸配列であり得る。いくつかの実施形態において、前記ＣＤＲは、ＩＭＧＴ番号付けスキームによって決定される。
【0115】
一態様において本出願は、重鎖可変領域ＶＨ内の少なくとも１つのＣＤＲを含む単離された抗原結合タンパク質を提供し、前記ＶＨは配列番号：４９に示されるアミノ酸配列を含む。本出願の抗原結合タンパク質は、配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を任意の方法で割り当てて得られたＣＤＲを含み得る。
【0116】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ３を含み得、且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0117】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ２を含み得、且つ前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0118】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１を含み得、且つ前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0119】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み得る。例えば前記単離された抗原結合タンパク質の前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0120】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域ＶＬ内の少なくとも１つのＣＤＲを含み得、前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0121】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ３を含み得、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0122】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ２を含み得、且つ前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0123】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ１を含み得、且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0124】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み得る。例えば前記単離された抗原結合タンパク質の前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0125】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み得る。例えば本出願の単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0126】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ１を含み得、前記Ｈ－ＦＲ１のＣ末端は前記ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接的又は間接的に接続され、且つ前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号：４１で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記Ｈ－ＦＲ１は、配列番号：７、配列番号：１５及び配列番号：２３のいずれかで示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0127】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ２を含み得、前記Ｈ－ＦＲ２が前記ＨＣＤＲ１と前記ＨＣＤＲ２との間に位置し、且つ前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号：４２で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記Ｈ－ＦＲ２は、配列番号：８又は配列番号：１６で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0128】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ３を含み得、前記Ｈ－ＦＲ３が前記ＨＣＤＲ２と前記ＨＣＤＲ３との間に位置し、且つ前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号：４３で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記Ｈ－ＦＲ３は、配列番号：９、配列番号：１７、配列番号：２４及び配列番号：２７のいずれかで示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0129】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ４を含み得、前記Ｈ－ＦＲ４のＮ末端は前記ＨＣＤＲ３のＣ末端に接続され、且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号：４４で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記Ｈ－ＦＲ４は、配列番号：１０又は配列番号：１８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0130】
本出願において前記抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４を含み得る。例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１，Ｈ－ＦＲ２，Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３及び配列番号：４４で示されるアミノ酸配列を順に含み得る。
【0131】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９及び配列番号：１０で示されるアミノ酸配列を順に含み得る。例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７及び配列番号：１８で示されるアミノ酸配列を順に含み得る。例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号：２３、配列番号：１６、配列番号：２４及び配列番号：１８で示されるアミノ酸配列を順に含み得る。例えば，前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号：２３、配列番号：１６、配列番号：２７及び配列番号：１８で示されるアミノ酸配列を順に含み得る。
【0132】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ１を含み得、前記Ｌ－ＦＲ１のＣ末端は前記ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接的又は間接的に接続され、且つ前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号：４５で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記Ｌ－ＦＲ１は、配列番号：１１、配列番号：１９及び配列番号：２５のいずれかで示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0133】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ２を含み得、前記Ｌ－ＦＲ２が前記ＬＣＤＲ１と前記ＬＣＤＲ２との間に位置し、且つ前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号：４６で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記Ｌ－ＦＲ２は、配列番号：１２又は配列番号：２０で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0134】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ３を含み得、前記Ｌ－ＦＲ３が前記ＬＣＤＲ２と前記ＬＣＤＲ３との間に位置し、且つ前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号：４７で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記Ｌ－ＦＲ３は、配列番号：１３、配列番号：２１及び配列番号：２６のいずれかで示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0135】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ４を含み得、前記Ｌ－ＦＲ４のＮ末端は前記ＬＣＤＲ３のＣ末端に接続され、且つ前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号：４８で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記Ｌ－ＦＲ４は、配列番号：１４又は配列番号：２２で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0136】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４を含み得る。例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号：４５、配列番号：４６、配列番号：４７及び配列番号：４８で示されるアミノ酸配列を順に含み得る。
【0137】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３及び配列番号：１４で示されるアミノ酸配列を順に含み得る。例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１及び配列番号：２２で示されるアミノ酸配列を順に含み得る。例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号：２５、配列番号：２０、配列番号：２６及び配列番号：２２で示されるアミノ酸配列を順に含み得る。
【0138】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＶＨを含み得、前記ＶＨが配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３２及び配列番号：３４のいずれかで示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0139】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＶＬを含み得、前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＬは、配列番号：２９、配列番号：３１及び配列番号：３３のいずれかで示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0140】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、前記ＶＨ及びＶＬを含み得る。例えば前記ＶＨが配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0141】
例えば前記ＶＨは、配列番号：２８で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ＶＬが配列番号：２９で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：３２で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：３４で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0142】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、抗体重鎖定常領域を含み得る。前記抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域に由来できる。いくつかの実施形態において、前記単離された抗原結合タンパク質は、抗体重鎖定常領域を含み得、且つ前記抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域に由来する。本出願において、前記抗体重鎖定常領域は、バリアント、ホモログ、アナログもカバーする。例えば前記ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のＣＨ２には抗体ＡＤＣＣ ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ（ＫＯ）効果のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（Ｅｕ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）変異がある。例えば前記抗体重鎖定常領域は、配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0143】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：３、配列番号：２及び配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0144】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：３、配列番号：２及び配列番号：１で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４がそれぞれ配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３及び配列番号：４４で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0145】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：３、配列番号：２及び配列番号：１で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４がそれぞれ配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９及び配列番号：１０で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0146】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：３、配列番号：２及び配列番号：１で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４がそれぞれ配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７及び配列番号：１８で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0147】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：３、配列番号：２及び配列番号：１で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４がそれぞれ配列番号：２３、配列番号：１６、配列番号：２４及び配列番号：１８で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0148】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：３、配列番号：２及び配列番号：１で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３及びＨ－ＦＲ４がそれぞれ配列番号：２３、配列番号：１６、配列番号：２７及び配列番号：１８で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0149】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＨは、配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0150】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＨは、配列番号：２８で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0151】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＨは、配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0152】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＨは、配列番号：３２で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0153】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＨは、配列番号：３４で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0154】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖定常領域を含み得る。前記抗体軽鎖定常領域はヒトＩｇκ定常領域に由来できる。例えば前記抗体軽鎖定常領域は、配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0155】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：６、配列番号：５及び配列番号：４で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0156】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：６、配列番号：５及び配列番号：４で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４がそれぞれ配列番号：４５、配列番号：４６、配列番号：４７及び配列番号：４８で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0157】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：６、配列番号：５及び配列番号：４で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１，Ｌ－ＦＲ２，Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４がそれぞれ配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３及び配列番号：１４で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0158】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：６、配列番号：５及び配列番号：４で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４がそれぞれ配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１及び配列番号：２２で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0159】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、それぞれ配列番号：６、配列番号：５及び配列番号：４で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３及びＬ－ＦＲ４がそれぞれ配列番号：２５、配列番号：２０、配列番号：２６及び配列番号：２２で示されるアミノ酸配列を順に含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0160】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＬは、配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0161】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＬは、配列番号：２９で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0162】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＬは、配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0163】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＬは、配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0164】
例えば前記単離された抗原結合タンパク質のＶＬは、配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0165】
本出願において、前記単離された抗原結合タンパク質は、ＶＨ、ＶＬ、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含み得、前記重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：２８で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＶＬが配列番号：２９で示されるアミノ酸配列を含み得、前記重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み得、前記重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み得、前記重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：３２で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み得、前記重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。例えば前記ＶＨは、配列番号：３４で示されるアミノ酸配列を含み得、前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み得、前記重鎖定常領域が配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記軽鎖定常領域が配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0166】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、抗体又はその抗原結合断片を含み得る。
【0167】
いくつかの実施形態において前記抗原結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ及び／又はｄＡｂが含まれる。
【0168】
いくつかの実施形態において前記抗体には、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体及び／又は完全ヒト抗体が含まれる。
【0169】
例えば前記キメラ抗体のＶＨは、配列番号：２８で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記キメラ抗体のＶＬが配列番号：２９で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0170】
例えば前記ヒト化抗体のＶＨは、配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ヒト化抗体のＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0171】
例えば前記ヒト化抗体のＶＨは、配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ヒト化抗体のＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0172】
例えば前記ヒト化抗体のＶＨは、配列番号：３２で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ヒト化抗体のＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0173】
例えば前記ヒト化抗体のＶＨは、配列番号：３４で示されるアミノ酸配列を含み得、且つ前記ヒト化抗体のＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含み得る。
【0174】
なお特筆すべきことは、本出願の単離された抗原結合タンパク質は、１つ或いは複数の保存配列修飾を伴う重鏈及び／又は軽鎖配列を含み得る。いわゆる「保存配列修飾」とは、抗体の結合特性に大きな影響を与えないか、改変させないアミノ酸修飾を意味する。このような保存修飾には、アミノ酸の置換、付加及び欠失が含まれる。部位変異及びＰＣＲ媒介変異などの当技術分野で知られている標準的な技術を通じて、修飾を本明細書に記載の単離された抗原結合タンパク質に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、類似した側鎖を有するアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換である。類似した側鎖を有するアミノ酸残基群には、当技術分野で知られている。これらアミノ酸残基群には、塩基性側鎖（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン)、非極性側鎖(例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン)、β分岐側鎖(例えばスレオニン、バリン、イソロイシン)及び芳香族側鎖(例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン)を有するアミノ酸が含まれる。いくつかの実施形態において、本出願の単離された抗原結合タンパク質のＣＤＲ領域中の１つ或いは複数のアミノ酸残基は、同じ側鎖群の他のアミノ酸残基で置換することができる。当業者は、いくつかの保存配列修飾が抗原結合性を喪失しないことを知り、具体的には例えばＢｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， （１９９３） Ｂｉｏｃｈｅｍ ３２：１１８０－８； ｄｅ Ｗｉｌｄｔ ｅｔ ａｌ．， （１９９７） Ｐｒｏｔ． Ｅｎｇ． １０：８３５－４１； Ｋｏｍｉｓｓａｒｏｖ ｅｔ ａｌ．， （１９９７） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７２：２６８６４－２６８７０； Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．， （１９９２） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４９：１６０５－１２； Ｋｅｌｌｅｙ ａｎｄ Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ （１９９３） Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：６８６２－３５； Ａｄｉｂ－Ｃｏｎｑｕｙ ｅｔ ａｌ．， （１９９８） Ｉｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：３４１－６ ａｎｄ Ｂｅｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， （２０００） Ｃｌｉｎ． Ｃａｎ． Ｒｅｓ． ６：２８３５－４３を参照できる。
【0175】
当技術分野で知られている様々なアッセイによって、本出願のＣＤ７３抗原結合タンパク質の同定、スクリーニング又はキャラクタリゼーションを行うことができる。
【0176】
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫ブロッティング（例えばウエスタンブロット）、フローサイトメトリー（例えばＦＡＣＳ）、免疫組織化学、免疫蛍光などの既知の方法で本出願の抗原結合タンパク質又は融合タンパク質の抗原結合活性を測定できる。
【0177】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３又はその機能的活性断片に特異的に結合することができる。
【0178】
いくつかの実施形態において前記単離された抗原結合タンパク質は、Ｂｉａｃｏｒｅで親和性をスクリーニングする。前記単離された抗原結合タンパク質は、３×１０－９Ｍ以下のＫＤでＣＤ７３タンパク質に結合することができ、例えば本出願の抗原結合タンパク質は約３×１０－９Ｍ未満、約２×１０－９Ｍ未満、約１×１０－９Ｍ未満、約７×１０－１０Ｍ未満、約６×１０－１０Ｍ未満、約５×１０－１０Ｍ未満、約４×１０－１０Ｍ未満、約３×１０－１０Ｍ未満、約２×１０－１０Ｍ未満、約１×１０－１０Ｍ未満、約９×１０－１１Ｍ未満、約５×１０－１１Ｍ未満、約２×１０－１１Ｍ未満でＫＤＣＤ７３に結合することができる。いくつかの実施形態において、本出願は、ＦＡＣＳ方法で抗原結合タンパク質と抗原の結合活性を測定することも含む。例えば本出願の抗原結合タンパク質は、０．３μｇ／ｍＬ以下、約０．２μｇ／ｍＬ以下、約０．１μｇ／ｍＬ以下、約０．０９μｇ／ｍＬ以下、約０．０８μｇ／ｍＬ以下、約０．０７μｇ／ｍＬ以下、約０．０６μｇ／ｍＬ以下、約０．０５μｇ／ｍＬ以下、約０．０４μｇ／ｍＬ以下、約０．０３μｇ／ｍＬ以下、約０．０２μｇ／ｍＬ以下又は約０．０１μｇ／ｍＬ以下のＥＣ５０値で細胞表面のヒトＣＤ７３に結合することができる。
【0179】
例えば本出願の抗原結合タンパク質は、０．４μｇ／ｍＬ以下、０．３μｇ／ｍＬ以下、約０．２μｇ／ｍＬ以下、約０．１μｇ／ｍＬ以下、約０．０９μｇ／ｍＬ以下、約０．０８μｇ／ｍＬ以下、約０．０７μｇ／ｍＬ以下、約０．０６μｇ／ｍＬ以下、約０．０５μｇ／ｍＬ以下、約０．０４μｇ／ｍＬ以下、約０．０３μｇ／ｍＬ以下、約０．０２μｇ／ｍＬ以下又は約０．０１μｇ／ｍＬ以下のＥＣ５０値で組換えＣＤ７３タンパク質に結合することができる。
【0180】
いくつかの実施形態において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３に結合することができる。場合により、本出願の抗原結合タンパク質は、サルのＣＤ７３とも交差反応することができ、例えばＦＡＣＳで検出される。本出願において、「交差反応」とは、抗体が他の物種の相同タンパク質と反応する能力を意味する。
【0181】
いくつかの実施形態において本出願の単離された抗原結合タンパク質は、マウス及び／又はラットのＣＤ７３に結合しない。
【0182】
例えばＥＬＩＳＡ法で力価を検出することができる。例えばＦＡＣＳ法で前記単離された抗原結合タンパク質の結合活性又は機能活性を検出することができる。例えば前記単離された抗原結合タンパク質の親和性を検出することができる。
【0183】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３の酵素活性を阻害することができる。例えば前記単離された抗原結合タンパク質は、組換えＣＤ７３に対して酵素活性阻害効果を有し得る。例えば前記単離された抗原結合タンパク質は、ヒトＣＤ７３に対して酵素活性阻害効果を有し得る。本出願に記載の酵素活性は、当技術分野で一般的に使用される任意の方法で検出されることができる。前記酵素活性の検出には、ＣＤ７３抗原結合タンパク質と組換えＣＤ７３タンパク質を均一に混ぜて、ＡＭＰ及びＡＴＰを加え、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標）基質をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標）バッファーに添加し、よく混ぜて室温に平衡化して全波長検出を行うことが含まれる。例えば前記単離された抗原結合タンパク質は、約０．１μｇ／ｍＬ以下、約０．０９μｇ／ｍＬ以下、約０．０８μｇ／ｍＬ以下、約０．０７μｇ／ｍＬ以下、約０．０６μｇ／ｍＬ以下、約０．０５μｇ／ｍＬ以下、約０．０４μｇ／ｍＬ以下、約０．０３μｇ／ｍＬ以下、約０．０２μｇ／ｍＬ以下、約０．０１μｇ／ｍＬ以下のＥＣ５０値で組換えＣＤ７３タンパク質の酵素活性を阻害することができる。例えば前記単離された抗原結合タンパク質は、約０．２μｇ／ｍＬ以下、約０．１μｇ／ｍＬ以下、約０．０９μｇ／ｍＬ以下、約０．０８μｇ／ｍＬ以下、約０．０７μｇ／ｍＬ以下、約０．０６μｇ／ｍＬ以下、約０．０５μｇ／ｍＬ以下、約０．０４μｇ／ｍＬ以下、約０．０３μｇ／ｍＬ以下、約０．０２μｇ／ｍＬ以下、約０．０１μｇ／ｍＬ以下のＥＣ５０値で細胞膜上ＣＤ７３タンパク質の酵素活性を阻害することができる。
【0184】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、細胞表面のＣＤ７３のエンドサイトーシスを誘導することができる。いくつかの実施形態において、蛍光標識の方法によってタンパク質のエンドサイトーシス状況を判断することができる。例えばフローサイトメトリーで細胞の蛍光強度を検出して前記抗原結合タンパク質が細胞表面のＣＤ７３エンドサイトーシスを誘導する効率を検出することができる。場合により、前記単離された抗原結合タンパク質は、約５０％以上の効率でＣＤ７３のエンドサイトーシスを誘導することができる。
【0185】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、熱安定性を有し得る。例えばタンパク質安定性分析計で本出願の抗原結合タンパク質の融解温度（Ｔｍ）及び／又は凝集温度（Ｔａｇｇ）を検出することができ、本出願の単離された抗原結合タンパク質のＴｍ値は約６５℃以上、約６６℃以上、約６７℃以上、約６８℃以上、約６９℃以上、約６９．４℃以上、約７０℃以上又は約７０．２℃以上である。本出願の単離された抗原結合タンパク質のＴａｇｇ値は、約６５℃以上、約６６℃以上、約６６．４℃以上、約６７℃以上、約６８℃以上、約６９℃以上、約７０℃以上、約７１℃以上、約７２℃以上、約７３℃以上、約７４℃以上、約７４．１℃以上、約７５℃以上又は約７５．６℃以上である。
【0186】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、は、非特異的吸着の影響がない又は弱い可能性がある。例えばＳＰＲ法で前記単離された抗原結合タンパク質と非標的分子の非特異的吸着の影響を測定し、Ｂｕｆｆｅｒ影響を差し引いた後、本出願の単離された抗原結合タンパク質のシグナル強度は２０ＲＵ以下又はそれに近い。一般的にシグナル強度は、約２０ＲＵ、約１９ＲＵ、約１８ＲＵ、約１７ＲＵ、約１６ＲＵ、約１５ＲＵ、約１４ＲＵ、約１３ＲＵ、約１２ＲＵ、約１１ＲＵ、約１０ＲＵ、約９ＲＵ、約８ＲＵ、約７ＲＵ、約６ＲＵ、約５ＲＵ、約４ＲＵ、約３ＲＵ、約２ＲＵ又は約１ＲＵ以下であると考えられる。
【0187】
本出願において前記単離された抗原結合タンパク質は、腫瘍増殖抑制の効果を有し得る。
【0188】
ポリペプチド分子、核酸分子、ベクター、免疫複合体、細胞及び医薬組成物
別の態様において本出願は、本出願に記載の単離された抗原結合タンパク質を含み得るポリペプチド分子を提供する。
別の態様において本出願は、本出願に記載の単離された抗原結合タンパク質を含み得るポリペプチド分子を提供する。
【0189】
いくつかの実施形態において前記ポリペプチド分子は、融合タンパク質を含む。
【0190】
別の態様において本出願は、本出願に記載の単離された抗原結合タンパク質又は本出願に記載のポリペプチド分子をコードし得る単離された核酸分子を提供する。例えば単離された核酸分子は、（ｉ）インビトロでの増幅、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅により産生されること、（ｉｉ）組換えクローニングにより産生されること、（ｉｉｉ）例えば酵素的切断及びゲル電気泳動分画によって精製されること、或いは（ｉｖ）例えば化学合成によって合成されることといった方法で産生若しくは合成されることができる。
【0191】
別の態様において本出願は、本出願に記載の核酸分子を含み得るベクターを提供する。なお、前記ベクターには適切な宿主細胞及び適切な条件下での該ベクターの選択を可能にするマーカー遺伝子などの他の遺伝子を含めることもできる。また、前記ベクターは、適切な宿主におけるコード領域の適切な発現を可能にする発現制御エレメントも含み得る。このような制御エレメントは当業者にはよく知られ、例えばプロモーター、リボソーム結合部位、エンハンサー、及び遺伝子転写又はmRNA翻訳などを調節する他の制御エレメントも含み得る。ベクターは、宿主細胞を形質転換、形質導入、又はトランスフェクトすることで、ベクターによって運ばれる遺伝物質エレメントを宿主細胞で発現させることができる。前記ベクターとしては、プラスミド、コスミド、ウイルス、ファージ、或いは遺伝子工学で一般的に使用される他のベクターが挙げられる。例えばベクターは発現ベクターである。なお、前記ベクターは、例えばウイルス粒子、リポソーム、或いはカプシドなどであるがこれらに限定されない、細胞への侵入を促進する成分を含んでもよい。
【0192】
別の態様において本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質を含む免疫複合体も提供する。
【0193】
例えば本出願の単離された抗原結合タンパク質又はその断片を化学療法剤、毒素、免疫療法剤、イメージングプローブ、分光プローブなどの別の試薬に連結することができる。該連結は、１つ或いは複数の共有結合又は非共有結合性相互作用によるものであり得、キレート作用を含み得る。複数種のリンカー（リンカーは、当技術分野で知られている）を使用して免疫複合体を形成することができる。なお、免疫複合体は、免疫複合体をコードするポリヌクレオチドから発現させることができる融合タンパク質の形態で提供することができる。前記免疫複合体は、例えば抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）を含んでもよい。適切な薬物としては、細胞毒素、アルキル化剤、ＤＮＡ副溝結合分子、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ架橋剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、核外輸送阻害剤、プロテアソーム阻害剤、I型又はII型トポイソメラーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗生物質及び抗有糸分裂剤が挙げられる。ＡＤＣにおいて、ペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、或いはヒドラゾンリンカーなどの切断可能なリンカーを介して抗体及び治療薬を架橋することができる。
【0194】
別の態様において本出願は、本出願に記載の核酸分子、本出願に記載のベクター及び／又は本出願に記載の免疫複合体を含み得る細胞を提供する。いくつかの実施形態において、各種宿主細胞又は各宿主細胞は、１つ個又は１種の本出願の核酸分子又はベクターを含む。いくつかの実施形態において、各種宿主細胞又は各宿主細胞は、複数（例えば２つ以上）或いは複数種（例えば２種以上）の本出願の核酸分子又はベクターを含む。例えば本出願のベクターを前記宿主細胞、例えば植物由来の細胞、真菌或いは酵母細胞などの真核細胞に導入することができる。いくつかの実施形態において、前記細胞は、細菌細胞（例えば大腸菌）、酵母細胞或いはその他の真核細胞、例えばＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＬＮＣＡＰ細胞、ＨｅＬａ細胞、２９３Ｔ細胞、ＣＯＳ－１細胞、ＳＰ２／０細胞、ＮＳ０細胞又はミエローマ細胞である。エレクトロポレーション、ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎｅトランスフェクション、ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎトランスフェクションなどの当技術分野で知られている方法で本出願のベクターを前記宿主細胞に導入することができる。
【0195】
別の態様において本出願は、本出願に記載の単離された抗原結合タンパク質、本出願に記載のポリペプチド分子、本出願に記載の免疫複合体、本出願に記載の核酸分子、本出願に記載のベクター及び／又は本出願に記載の細胞、及び任意選択の薬学的に許容される担体を含み得る医薬組成物も提供する。
【0196】
本出願において前記医薬組成物は、１種又は複数種（薬学的に有効な）アジュバント、安定剤、賦形剤、希釈剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤及び／又は防腐剤の適切な製剤を含み得る。組成物の許容される成分は、好ましくは使用される投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒である。本発明の医薬組成物には、液体、凍結及び凍結乾燥の組成物が含まれるが、これらに限定されない。
【0197】
本出願において前記医薬組成物は、１種以上の活性化合物、例えば一般的に互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性化合物を含み得る。このような薬物のタイプ及び有効量は、例えば製剤中に存在するアンタゴニストの量及びタイプ、ならびに被験者の臨床パラメータに取り決め得る。
【0198】
本出願において前記薬学的に許容される担体は、薬物投与に適合するあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、等張化剤及び吸収遅延剤を含み得、一般に安全で無毒である。
【0199】
本願において医薬組成物は、非経口、経皮、腔内、動脈内、くも膜下腔内及び／又は鼻腔内投与、或いは組織への直接注射を含み得る。例えば前記薬学的組成物は、注入又は注射を介して患者或いは被験者に投与することができる。いくつかの実施形態において、前記医薬組成物の投与は、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所或いは皮内投与などの異なる手段を介して行うことができる。いくつかの実施形態において、前記医薬組成物は、中断することなく投与することができる。特許文献７に記載されているように、患者の体内へ流入する治療薬を測定するために患者が装着する小さなポンプシステムによって、中断のない（又は連続的な）投与を実現することができる。
【0200】
調製方法
別の態様において本出願は、前記的抗原結合タンパク質の調製方法を提供する。前記方法は、前記単離された抗原結合タンパク質が発現されるような条件下で、本出願に記載の細胞を培養することを含む。例えば適切な培地の使用、適切な温度及び培養時間などを通じて実施でき、これらの方法は当業者には理解されている。
別の態様において本出願は、前記的抗原結合タンパク質の調製方法を提供する。前記方法は、前記単離された抗原結合タンパク質が発現されるような条件下で、本出願に記載の細胞を培養することを含む。例えば適切な培地の使用、適切な温度及び培養時間などを通じて実施でき、これらの方法は当業者には理解されている。
【0201】
モノクローナル抗体を産生するのに適した任意の方法は、本出願の抗原結合タンパク質を産生することができる。例えば結合した又は天然に存在するＣＤ７３或いはその断片で動物を免疫することができる。アジュバント、免疫刺激剤、反復ブースター免疫を含む適切な免疫接種方法を使用することができ、１つ或いは複数の経路を使用することができる。例えばハイブリドーマ調製法で免疫マウスから脾細胞を取得してＳＰ２／０ミエローマ細胞と融合し、ＨＡＴによりハイブリドーマ細胞株をスクリーニングすることができる。
【0202】
任意の適切な形態のＣＤ７３は、免疫原（抗原）としてＣＤ７３に特異的な非ヒト抗体を産生し、前記抗体の生物学的活性をスクリーニングするために使用することができる。例えばプライミング免疫原は、天然のホモ二量体を含む完全長の成熟ヒトCD73、或いは単一/複数のエピトープ含有ペプチドであり得る。免疫原は、単独で、若しくは当技術分野で知られている1つ或いは複数の免疫増強剤と組み合わせて使用することができる。
【0203】
キメラヒト抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意の種類から選択されることができる。本出願において、抗体はＩｇＧ抗体であってもよく、ＩｇＧ１サブタイプが使用されてもよい。以下の実施例に記載の生物学的アッセイを使用して抗体をスクリーニングすることによって、必要な定常ドメイン配列の最適化を実現して所望の生物学的活性を産生することができる。同様に、いずれのタイプの軽鎖も、本出願の化合物及び方法で使用することができる。例えば本出願の化合物及び方法において、κ鎖又はそのバリアントを使用することができる。
【0204】
方法及び用途
別の態様において本出願は、疾患及び／又は病症を予防及び／又は治療するための医薬品の調製における前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物の用途を提供する。
別の態様において本出願は、疾患及び／又は病症を予防及び／又は治療するための医薬品の調製における前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物の用途を提供する。
【0205】
別の態様において本出願は、疾患及び／又は病症を予防及び／又は治療するための方法も提供し、前記方法は本出願に記載の単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物を必要な被験者に投与することを含み得る。
【0206】
本出願において前記投与は、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所或いは皮内投与などの異なる手段を介して行うことができる。
【0207】
別の態様において本出願に記載の単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物は、疾患及び／又は病症を予防及び／又は治療するために使用することができる。
【0208】
本出願において前記疾患及び／又は病症は、ＣＤ７３により媒介される疾患及び／又は病症であり得る。
【0209】
本出願において前記疾患及び／又は病症は、腫瘍を含み得る。
【0210】
本出願において前記腫瘍は、固形腫瘍及び／又は血液腫瘍を含み得る。
【0211】
本出願において前記疾患及び／又は病症は、乳癌を含み得る。
【0212】
別の態様において本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記細胞、前記免疫複合体及び／又は前記医薬組成物の投与を含む、サンプル中のＣＤ７３を検出するための方法も提供する。
【0213】
本出願において前記サンプル中のＣＤ７３を検出するための方法は、インビトロ法であり得る。本出願において、前記サンプル中のＣＤ７３を検出するための方法は、非治療目的であり得る。本出願において、前記サンプル中のＣＤ７３を検出するための方法は、診断方法ではない。
【0214】
別の態様において本出願は、前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物を含む、サンプル中のＣＤ７３を検出するための試薬又はキットも提供する。
【0215】
別の態様において本出願は、サンプル中のＣＤ７３の存在及び／又は含有量を検出するためのキットの調製における前記単離された抗原結合タンパク質、前記ポリペプチド分子、前記核酸分子、前記ベクター、前記免疫複合体、前記細胞及び／又は前記医薬組成物の用途も提供する。
【0216】
いかなる理論にも拘束されることなく、以下の実施例は本出願の抗原結合タンパク質、調製方法及び用途などを説明するためのものであって、本出願の発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【0217】
（実施例１ 抗ヒトＣＤ７３のマウス由来抗原結合タンパク質の調製方法）
１．１マウス由来抗原結合タンパク質を産生するハイブリドーマ細胞の調製
マウス由来モノクローナル抗原結合タンパク質の調製方法は、１９７５年にＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎが発明したハイブリドーマ調製技術（Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５－４９７）を用いた。まず、免疫抗原として、Ｈｉｓタグ付きヒトＣＤ７３タンパク質（Ｍｅｔ １－Ｌｙｓ ５４７）を使用し、一部をフロイントアジュバント：Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ， Ｃｏｍｐｌｅｔｅ （Ｓｉｇｍａ ｃａｔ ｎｏ．Ｆ５８８１，別名：ＦＣＡ）及びＦｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ， Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ（Ｓｉｇｍａ ｃａｔ ｎｏ．Ｆ５５０６，別名：ＦＩＣＡ）で免疫し、他部分をＱｕｉｃｋ Ａｎｔｉｂｏｄｙ － Ｍｏｕｓｅ ５ｗ（Biodragon社製、ｃａｔ ｎｏ．ＫＸ０２１００４１）アジュバントで複数のＢＡＬＢ／ｃ、ＣＤ１マウスをそれぞれ皮下免疫した。經３回免疫後、血清を採取してＥＬＩＳＡ法で力価を検出し、結合活性及び機能活性をＦＡＣＳで検出した。最後に、最良のマウスを選択し、脾細胞及びＳＰ２／０骨髄腫細胞を取得して融合を行った。ハイブリドーマ細胞株をＨＡＴでスクリーニングし、細胞培養上清を取りＦＡＣＳ検出法でヒトＣＤ７３、サルＣＤ７３に特異的に結合するモノクローナルハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、次にＣＤ７３酵素活性阻害を有するモノクローナル細胞株をスクリーニングし、モノクローナル細胞株の親和性（Ｂｉａｃｏｒｅ）をスクリーニングし、最後にヒトＣＤ７３抗原結合タンパク質を発現するモノクローナルハイブリドーマ細胞株を得て配列を解析し、その機能活性及び親和性の結果を表１に示す。
１．１マウス由来抗原結合タンパク質を産生するハイブリドーマ細胞の調製
マウス由来モノクローナル抗原結合タンパク質の調製方法は、１９７５年にＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎが発明したハイブリドーマ調製技術（Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５－４９７）を用いた。まず、免疫抗原として、Ｈｉｓタグ付きヒトＣＤ７３タンパク質（Ｍｅｔ １－Ｌｙｓ ５４７）を使用し、一部をフロイントアジュバント：Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ， Ｃｏｍｐｌｅｔｅ （Ｓｉｇｍａ ｃａｔ ｎｏ．Ｆ５８８１，別名：ＦＣＡ）及びＦｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ， Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ（Ｓｉｇｍａ ｃａｔ ｎｏ．Ｆ５５０６，別名：ＦＩＣＡ）で免疫し、他部分をＱｕｉｃｋ Ａｎｔｉｂｏｄｙ － Ｍｏｕｓｅ ５ｗ（Biodragon社製、ｃａｔ ｎｏ．ＫＸ０２１００４１）アジュバントで複数のＢＡＬＢ／ｃ、ＣＤ１マウスをそれぞれ皮下免疫した。經３回免疫後、血清を採取してＥＬＩＳＡ法で力価を検出し、結合活性及び機能活性をＦＡＣＳで検出した。最後に、最良のマウスを選択し、脾細胞及びＳＰ２／０骨髄腫細胞を取得して融合を行った。ハイブリドーマ細胞株をＨＡＴでスクリーニングし、細胞培養上清を取りＦＡＣＳ検出法でヒトＣＤ７３、サルＣＤ７３に特異的に結合するモノクローナルハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、次にＣＤ７３酵素活性阻害を有するモノクローナル細胞株をスクリーニングし、モノクローナル細胞株の親和性（Ｂｉａｃｏｒｅ）をスクリーニングし、最後にヒトＣＤ７３抗原結合タンパク質を発現するモノクローナルハイブリドーマ細胞株を得て配列を解析し、その機能活性及び親和性の結果を表１に示す。
【0218】
【表1】
【0219】
ハイスループットスクリーニングを経た後、最後に得られたモノクローナルハイブリドーマ細胞株は高い親和性を持ち、ヒト及びサルの両方との結合活性を有すると共にＣＤ７３の酵素活性を阻害する機能もある。
【0220】
（実施例２ 抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の可変領域遺伝子シーケンシング及び各抗原結合タンパク質の調製）
２．１ハイブリドーマ細胞における抗原結合タンパク質の可変領域遺伝子シーケンシング及びクローニング
ＴＡＫＡＲＡの５’ＲＡＣＥ技術の原理に基づき、ハイブリドーマ細胞株１２４Ａ９が発現するマウス抗原結合タンパク質の可変領域のｃＤＮＡ配列をクローニングした。簡単に言えば、ＳＭＡＲＴｅｒ ５’ＲＡＣＥ合成キット（ＴＡＫＡＲＡ，＃６３４８５９）を使用して、説明書に従い重鎖及び軽鎖の可変領域遺伝子特異的ｃＤＮＡを合成した。ｃＤＮＡ配列の５’末端と３’末端をＰＣＲプライマーで修飾し、前記ＰＣＲプライマーは重鎖及び軽鎖の可変領域のｃＤＮＡにそれぞれ適切なリーダー配列を追加するように設計され、得られたＰＣＲ産物は、シームレスクローニング法を介して既存の組換え抗原結合タンパク質により発現される重鎖ベクターｐＨＢ－Ｆｃ及び軽鎖ベクターｐＨＢ－Ｃκにクローニングできるようにする。ｐＨＢ－Ｆｃ発現ベクターには、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域遺伝子配列が含まれ、ＣＨ２には抗原結合タンパク質ＡＤＣＣノックアウト（ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ，ＫＯ）効果のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（Ｅｕ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）変異がある。ｐＨＢ－Ｃκベクターにはκ軽鎖定常領域遺伝子配列が含まれる。重鎖及び軽鎖の可変領域ＰＣＲ増幅産物をＩｎ－ｆｕｓｉｏｎクローニング試薬（ＴＡＫＡＲＡ、＃６３９６５０）によって発現ベクターにクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α大腸菌コンピテントセル（YEASTERN BIOTECH社製、＃ＦＹＥ６０７－８０ＶＬ）に形質転換された。抗原結合タンパク質の可変領域の配列は、モノクローナルコロニーを選抜してＳａｎｇｅｒ及びＮＧＳシーケンシングを実施し、解析によって抗原結合タンパク質の可変領域の配列が得られた。１２４Ａ９が発現する抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の可変領域の配列は次のとおりであり、
１２４Ａ９ ＶＨ 配列番号： ２８
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＤＷＩＧＭＩＨＰＮＳＧＳＴＹＹＮＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＧＳＤＹＥＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ
１２４Ａ９ ＶＬ 配列番号： ２９
ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＶＷＹＱＱＮＰＧＱＳＰＫＡＬＩＹＬＡＳＮＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＨＳＥＤＬＡＤＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ここで、下線部がＣＤＲｓ（ＩＭＧＴ定義、各ＣＤＲ一覧は以下の通り）である。
２．１ハイブリドーマ細胞における抗原結合タンパク質の可変領域遺伝子シーケンシング及びクローニング
ＴＡＫＡＲＡの５’ＲＡＣＥ技術の原理に基づき、ハイブリドーマ細胞株１２４Ａ９が発現するマウス抗原結合タンパク質の可変領域のｃＤＮＡ配列をクローニングした。簡単に言えば、ＳＭＡＲＴｅｒ ５’ＲＡＣＥ合成キット（ＴＡＫＡＲＡ，＃６３４８５９）を使用して、説明書に従い重鎖及び軽鎖の可変領域遺伝子特異的ｃＤＮＡを合成した。ｃＤＮＡ配列の５’末端と３’末端をＰＣＲプライマーで修飾し、前記ＰＣＲプライマーは重鎖及び軽鎖の可変領域のｃＤＮＡにそれぞれ適切なリーダー配列を追加するように設計され、得られたＰＣＲ産物は、シームレスクローニング法を介して既存の組換え抗原結合タンパク質により発現される重鎖ベクターｐＨＢ－Ｆｃ及び軽鎖ベクターｐＨＢ－Ｃκにクローニングできるようにする。ｐＨＢ－Ｆｃ発現ベクターには、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域遺伝子配列が含まれ、ＣＨ２には抗原結合タンパク質ＡＤＣＣノックアウト（ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ，ＫＯ）効果のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（Ｅｕ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）変異がある。ｐＨＢ－Ｃκベクターにはκ軽鎖定常領域遺伝子配列が含まれる。重鎖及び軽鎖の可変領域ＰＣＲ増幅産物をＩｎ－ｆｕｓｉｏｎクローニング試薬（ＴＡＫＡＲＡ、＃６３９６５０）によって発現ベクターにクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α大腸菌コンピテントセル（YEASTERN BIOTECH社製、＃ＦＹＥ６０７－８０ＶＬ）に形質転換された。抗原結合タンパク質の可変領域の配列は、モノクローナルコロニーを選抜してＳａｎｇｅｒ及びＮＧＳシーケンシングを実施し、解析によって抗原結合タンパク質の可変領域の配列が得られた。１２４Ａ９が発現する抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の可変領域の配列は次のとおりであり、
１２４Ａ９ ＶＨ 配列番号： ２８
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＤＷＩＧＭＩＨＰＮＳＧＳＴＹＹＮＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＧＳＤＹＥＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ
１２４Ａ９ ＶＬ 配列番号： ２９
ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＶＷＹＱＱＮＰＧＱＳＰＫＡＬＩＹＬＡＳＮＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＨＳＥＤＬＡＤＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ここで、下線部がＣＤＲｓ（ＩＭＧＴ定義、各ＣＤＲ一覧は以下の通り）である。
【0221】
【表2】
【0222】
２．２ 抗原結合タンパク質の発現
実施例２．１で得られた発現ベクターを大腸菌で増幅し、エンドトキシンフリーのプラスミド抽出キット（天根生化科技（北京）有限会社製，＃ＤＰ１１７）を使用して、抗原結合タンパク質を発現するための一過性トランスフェクションに十分なプラスミドを調製した。発現に使用される宿主細胞は、ＣＨＯ－Ｓ細胞（Thermo Fisher Scientific社製、＃Ｒ８０００７）である。調製した２つの重鎖ベクターと軽鎖ベクターをポリエーテルイミド（ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃２４７６５－１）と混合してリポソーム複合体を形成した後、ＣＨＯ－Ｓ細胞にトランスフェクトし、インキュベーターに入れ、５～７日間培養した。細胞培養上清を遠心分離により回収し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティークロマトグラフィーにより精製し、ヒト－マウス抗原結合タンパク質を得た（１２４Ａ９が発現する抗原結合タンパク質の番号は９００５６７）。
実施例２．１で得られた発現ベクターを大腸菌で増幅し、エンドトキシンフリーのプラスミド抽出キット（天根生化科技（北京）有限会社製，＃ＤＰ１１７）を使用して、抗原結合タンパク質を発現するための一過性トランスフェクションに十分なプラスミドを調製した。発現に使用される宿主細胞は、ＣＨＯ－Ｓ細胞（Thermo Fisher Scientific社製、＃Ｒ８０００７）である。調製した２つの重鎖ベクターと軽鎖ベクターをポリエーテルイミド（ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃２４７６５－１）と混合してリポソーム複合体を形成した後、ＣＨＯ－Ｓ細胞にトランスフェクトし、インキュベーターに入れ、５～７日間培養した。細胞培養上清を遠心分離により回収し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティークロマトグラフィーにより精製し、ヒト－マウス抗原結合タンパク質を得た（１２４Ａ９が発現する抗原結合タンパク質の番号は９００５６７）。
【0223】
２．３抗原結合タンパク質９００７２５－９００７２８の調製
抗原結合タンパク質のヒト化は、３Ｄモデリング手法を用いた。まずマウス由来抗原結合タンパク質の三次元構造モデリングを行って最適な構造モデルを選択し、具体的にＤｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｔｕｄｉｏ及びＳｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｄｅｌｉｎｇをそれぞれ使用して、ホモロジー・モデリング法を用いて５～１０個の最適な構造解を選択し、Ｌｏｏｐ領域は通常、ホモロジー・モデリング法を使用してモデルを構築し、例えばＣＤＲアミノ酸配列アラインメントの結果、Ｉｄｅｎｔｉｔｙが５０％未満であることが示された場合、ａｂ ｉｎｉｔｉｏモデリング手法でＣＤＲ３構造モデルを構築した。ＰＤＢ ＢＬＡＳＴを使用して、最も近い配列を持つ１０個の抗体結晶構造モデルを取得し（構造分解能は２．５オングストローム以上）、自動モデリングモデルを比較し、最適な構造モデルを選択した。次に、抗原結合タンパク質の可変領域配列をＮＣＢＩ ＩｇＢｌａｓｔデータベース内の利用可能な配列と比較し、同定及び解析によってＣＤＲ移植重鎖及び軽鎖を構築するのに適したヒト枠組み領域（ＦＲ領域）を決定した。
抗原結合タンパク質のヒト化は、３Ｄモデリング手法を用いた。まずマウス由来抗原結合タンパク質の三次元構造モデリングを行って最適な構造モデルを選択し、具体的にＤｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｔｕｄｉｏ及びＳｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｄｅｌｉｎｇをそれぞれ使用して、ホモロジー・モデリング法を用いて５～１０個の最適な構造解を選択し、Ｌｏｏｐ領域は通常、ホモロジー・モデリング法を使用してモデルを構築し、例えばＣＤＲアミノ酸配列アラインメントの結果、Ｉｄｅｎｔｉｔｙが５０％未満であることが示された場合、ａｂ ｉｎｉｔｉｏモデリング手法でＣＤＲ３構造モデルを構築した。ＰＤＢ ＢＬＡＳＴを使用して、最も近い配列を持つ１０個の抗体結晶構造モデルを取得し（構造分解能は２．５オングストローム以上）、自動モデリングモデルを比較し、最適な構造モデルを選択した。次に、抗原結合タンパク質の可変領域配列をＮＣＢＩ ＩｇＢｌａｓｔデータベース内の利用可能な配列と比較し、同定及び解析によってＣＤＲ移植重鎖及び軽鎖を構築するのに適したヒト枠組み領域（ＦＲ領域）を決定した。
【0224】
改変時、ヒト抗体ＦＲ領域の保存アミノ酸残基及び抗体ＦＲ領域内の重要なアミノ酸残基に基づいて改変部位を設計し、本出願の抗原結合タンパク質９００５６７の重鎖・軽鎖の可変領域についてそれぞれヒト化変異ｗｐ設計し、設計されたヒト化配列は抗体の構造安定性に影響を与えない、抗原結合タンパク質と抗原の結合に影響を与えない、グリコシル化・リン酸化などのタンパク質修飾部位を導入しない、容易に酸化・アミノ化される部位を導入しない、構造安定性を高めるなどの要求を満たしなければならない。解析により今回９００５６７のマウス由来抗原結合タンパク質配列について合計３本のヒト化重鎖配列と３本のヒト化軽鎖配列を設計し、ヒト化点変異の抗原結合タンパク質発現プラスミドをそれぞれＣＨＯ－Ｓ細胞で発現させ、精製後ヒト化抗原結合タンパク質を得た。ＥＬＩＳＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ及びフローサイトメトリーなどの検出方法を使用して、ヒト化抗原結合タンパク質の受容体結合能、機能阻害活性及び非特異的結合特性、熱安定性などの指標をスクリーニングし、特性に優れた４つのヒト化抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質を得た。得られたヒト化抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質のタンパク質番号及び対応するＶＨとＶＬの配列を以下に示す。
９００７２５及び９００７２６ ＶＨ 配列番号：３０
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＨＰＮＳＧＳＴＹＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＧＳＤＹＥＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
９００７２５及び９００７２７ ＶＬ 配列番号：３１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＶＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹＬＡＳＮＲＨＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
９００７２７ ＶＨ 配列番号：３２
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＨＰＮＳＧＳＴＹＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＧＳＤＹＥＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
９００７２６及び９００７２８ ＶＬ 配列番号：３３
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＶＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹＬＡＳＮＲＨＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＷＮＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
９００７２８ ＶＨ 配列番号：３４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＨＰＮＳＧＳＴＹＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＧＳＤＹＥＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ここで、下線部は、ＣＤＲｓ（ＩＭＧＴ定義）で、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８がそれぞれ４個の抗ＣＤ７３ヒト化抗原結合タンパク質番号である。
９００７２５及び９００７２６ ＶＨ 配列番号：３０
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＨＰＮＳＧＳＴＹＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＧＳＤＹＥＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
９００７２５及び９００７２７ ＶＬ 配列番号：３１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＶＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹＬＡＳＮＲＨＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＬＱＨＷＮＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
９００７２７ ＶＨ 配列番号：３２
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＨＰＮＳＧＳＴＹＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＧＳＤＹＥＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
９００７２６及び９００７２８ ＶＬ 配列番号：３３
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＶＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹＬＡＳＮＲＨＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＷＮＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
９００７２８ ＶＨ 配列番号：３４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＨＰＮＳＧＳＴＹＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＧＳＤＹＥＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ここで、下線部は、ＣＤＲｓ（ＩＭＧＴ定義）で、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８がそれぞれ４個の抗ＣＤ７３ヒト化抗原結合タンパク質番号である。
【0225】
（実施例３ ヒトＣＤ７３を発現する細胞に対する抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の結合活性の検出）
抗原結合タンパク質９００５６７、９００５８４、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８とヒトＣＤ７３を発現する細胞（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４，華博生物社製）の結合活性を検出し、うち、９００５８４はＣＤ７３を標的とするスクリーニングされた抗原結合タンパク質であり、９００５８４のＶＨのアミノ酸配列は配列番号：３５に示され、９００５８４のＶＬのアミノ酸配列が配列番号：３６に示される。
抗原結合タンパク質９００５６７、９００５８４、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８とヒトＣＤ７３を発現する細胞（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４，華博生物社製）の結合活性を検出し、うち、９００５８４はＣＤ７３を標的とするスクリーニングされた抗原結合タンパク質であり、９００５８４のＶＨのアミノ酸配列は配列番号：３５に示され、９００５８４のＶＬのアミノ酸配列が配列番号：３６に示される。
【0226】
全ての抗原結合タンパク質は、１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ溶液（１％ＢＳＡ／ＰＢＳ）で３０μｇ／ｍｌに希釈してから１１つの濃度勾配に３倍希釈した。９６ウェル穴Ｕ字型プレートに１ウェルあたり２０μＬ添加し、同時に陰性対照をセットした（１％ＢＳＡ／ＰＢＳのみ添加）。対数増殖期のヒトＣＤ７３発現細胞（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４、Ｈｕａｂｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ）の懸濁液を採取し、遠心分離（１０００ｒｐｍ×５分）して培養液を捨て、生細胞の密度は１×１０６／ｍＬになるまで１％ＢＳＡ／ＰＢＳで再懸濁し、抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質を含む９６ウェルＵ字型プレートに１ウェルあたり２０μＬ（２×１０４細胞）を加え、室温で３０分間反応させた。反応後の９６ウェルＵ字型プレートを１％ＢＳＡ／ＰＢＳで再懸濁し、遠心分離（３００ｇ×３分）して上清を捨て、このように１回洗浄し、１：２００希釈のＰＥ－ヤギ抗ヒト－Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、＃１０９－１１５－０９８）を加え、暗所、室温で１５分間反応させた。反応後の９６ウェルＵ 字型プレートを１％ＢＳＡ／ＰＢＳで再懸濁し、遠心分離（３００ｇｘ３分）して上清を捨て、このように３回洗浄し、最後に１ウェルあたり１００μＬの１％ＢＳＡ／ＰＢＳで再懸濁し、ＰＥチャネルの蛍光強度をフローサイトメーター（ＢＤ、＃ＣａｎｔｏII）で検出した。
【0227】
９００５６７の結合活性結果を図１及び表３に、９００５６７、９００７２５、９００７２６、及び９００７２８の結合活性結果を表４に示す。この結果から、９００５６７は、ヒトＣＤ７３を発現する細胞（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４、華博生物社製）に対して良好な親和性を持ち、９００７２５及び９００７２８がヒトＣＤ７３を発現する細胞（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４、華博生物社製）の親和性はかなり良いことが分かる。
【0228】
【表3】
【0229】
【表4】
【0230】
（実施例４ 組換えＣＤ７３タンパク質に対する抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の結合活性の検出）
抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質９００５６７，９００７２５，９００７２６，９００７２７，９００７２８と組換えＣＤ７３タンパク質（ＡＣＲＯ，＃ ＣＤ３－Ｈ５２Ｈ７－１００μｇ）との結合活性を検出する。
抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質９００５６７，９００７２５，９００７２６，９００７２７，９００７２８と組換えＣＤ７３タンパク質（ＡＣＲＯ，＃ ＣＤ３－Ｈ５２Ｈ７－１００μｇ）との結合活性を検出する。
【0231】
ＥＬＩＳＡマイクロプレートを３０ｕｌの２ｕｇ／ｍｌＣＤ７３タンパク質（ＡＣＲＯ、＃ＣＤ３－Ｈ５２Ｈ７－１００μｇ）溶液でコーティングし、４℃で一晩放置した。次にＰＢＳＴで３回洗浄し、５％のＭＩＬＫ／ＰＢＳで室温にて１時間ブロッキングし、ブロッキング後にＰＢＳＴで３回洗浄した。９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８はいずれも１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ溶液（１％ＢＳＡ／ＰＢＳ）で１０μｇ／ｍｌに希釈してから７つの濃度勾配に４倍希釈した。そして希釈した抗原結合タンパク質溶液をＥＬＩＳＡマイクロプレートに１ウェルあたり３０ｕｌ添加し、室温で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＳＴで３回洗浄してからＡｎｔｉ－ｈｕｍａｎ－ＩｇＧ－Ｆｃ－ＨＲＰを加えて室温で５０分間インキュベートし、インキュベーション後にＢＳＴで３回洗浄した。ＴＭＢ溶液を加え、次に２Ｍ ＨＣｌを加えて反応を停止させ、ＯＤ４５０の読み取り値を確認した。
【0232】
９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７、９００７２８と組換えＣＤ７３タンパク質（ＡＣＲＯ，＃ ＣＤ３－Ｈ５２Ｈ７－１００μｇ）との結合活性を表５及び図２に示し、結果は組換えＣＤ７３タンパク質に対する本出願の抗原結合タンパク質の結合親和性がかなり良いことを示している。
【0233】
【表5】
【0234】
（実施例５ ＣＤ７３酵素活性の阻害に対する抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の効果の検出）
本出願に記載の抗原結合タンパク質をＰＢＳ溶液で３０μｇ／ｍｌに希釈してから６つの濃度勾配を５倍に比例して希釈した。対数増殖期のヒトＣＤ７３を発現する細胞（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４，華博生物社製）懸濁液を取り、培地で４Ｘ１０５／ｍｌの細胞懸濁液を調製し、１ウェルあたり１００ｕｌ（約４００００個の細胞）を９６９６ ウェルＵ字型プレートに入れ、１５００ｒｐｍ×５分で遠心分離し、上清を除去した。次に系列希釈をした抗体で細胞を再懸濁し、各ウェルに１００ｕｌを加え、よく混合し、３７℃で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を除去し、２００ｕｌ／ウェルのＰＢＳで１回洗浄してから１００ｕｌ／ウェルの１８０ｕＭ ＡＭＰで再懸濁し、３７℃で６０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５００ｒｐｍ×５分で遠心分離し、５０ｕｌ／ウェルの上清を取り、９６ウェルブラックプレートに移し、５０ｕｌ／ウェルの調製済みＡＴＰを加え、よく混合し、３７℃で１５分間反応させた。最後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標） ＳｕｂｓｔｒａｔｅをＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標） ｂｕｆｆｅｒに加え、よく混合し、室温に平衡化し、次に試験対象ウェルに１００ｕｌ／ウェルを加え、室温で１０分間反応させ、全波長で検出した。酵素活性のパーセンテージは次のように評価された。残留ＣＤ７３の活性：（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４細胞＋Ａｂ＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）－（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）／（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４細胞＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）－（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）×１００。
本出願に記載の抗原結合タンパク質をＰＢＳ溶液で３０μｇ／ｍｌに希釈してから６つの濃度勾配を５倍に比例して希釈した。対数増殖期のヒトＣＤ７３を発現する細胞（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４，華博生物社製）懸濁液を取り、培地で４Ｘ１０５／ｍｌの細胞懸濁液を調製し、１ウェルあたり１００ｕｌ（約４００００個の細胞）を９６９６ ウェルＵ字型プレートに入れ、１５００ｒｐｍ×５分で遠心分離し、上清を除去した。次に系列希釈をした抗体で細胞を再懸濁し、各ウェルに１００ｕｌを加え、よく混合し、３７℃で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を除去し、２００ｕｌ／ウェルのＰＢＳで１回洗浄してから１００ｕｌ／ウェルの１８０ｕＭ ＡＭＰで再懸濁し、３７℃で６０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５００ｒｐｍ×５分で遠心分離し、５０ｕｌ／ウェルの上清を取り、９６ウェルブラックプレートに移し、５０ｕｌ／ウェルの調製済みＡＴＰを加え、よく混合し、３７℃で１５分間反応させた。最後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標） ＳｕｂｓｔｒａｔｅをＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標） ｂｕｆｆｅｒに加え、よく混合し、室温に平衡化し、次に試験対象ウェルに１００ｕｌ／ウェルを加え、室温で１０分間反応させ、全波長で検出した。酵素活性のパーセンテージは次のように評価された。残留ＣＤ７３の活性：（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４細胞＋Ａｂ＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）－（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）／（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４細胞＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）－（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）×１００。
【0235】
ＣＤ７３の細胞（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４，華博生物社製）の酵素活性阻害に対する９００５６７、９００５８４の効果を図３及び表６に示す。ＣＤ７３の細胞（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ７３－３Ｆ４，華博生物社製）の酵素活性阻害に対する９００５６７、９００７２５、９００７２８及びＭｅｄＩｍｍｕｎｅ社由来のＯｌｅｃｌｕｍａｂ陽性対照抗体（Ｏｌｅｃｌｕｍａｂの重鏈配列は、配列番号：３９に示され、軽鎖配列は配列番号：４０に示され、本出願において、番号は９００７５９である）の効果を図４及び表７に示す。結果は、細胞膜上のＣＤ７３酵素活性阻害に対するヒト化抗体９００７２５、９００７２８とキメラ抗体９００５６７の効果は、基本的に同じであることを示している。
【0236】
【表6】
【0237】
【表7】
【0238】
（実施例６ 抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質とヒトＣＤ７３タンパク質の結合親和性の検出）
９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７、９００７２８とヒトＣＤ７３タンパク質（メーカー：ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番：ＣＤ３－Ｈ５２Ｈ７）の結合キネティックス実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ（ＧＥ，型番：Ｔ２００）で検出する。実験用バッファー：ＨＢＳ－ＥＰ＋（ｐＨ７．４）、ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップ（メーカー：ＧＥ、品番：２９－１２７５－５６）。
９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７、９００７２８とヒトＣＤ７３タンパク質（メーカー：ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番：ＣＤ３－Ｈ５２Ｈ７）の結合キネティックス実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ（ＧＥ，型番：Ｔ２００）で検出する。実験用バッファー：ＨＢＳ－ＥＰ＋（ｐＨ７．４）、ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップ（メーカー：ＧＥ、品番：２９－１２７５－５６）。
【0239】
サンプルチャンバーと流路の温度を２５℃に設定し、ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップにキメラ抗体又はヒト化抗体をリガンドとして捕捉し、約１００ＲＵ固定化した。ヒトＣＤ７３タンパク質を解析対象として 実験用バッファーで５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２ｎＭ、１．５７ｎＭの一連の濃度に希釈し、実験用バッファーを０濃度対照として３０μＬ／分の流速下で１２０秒間結合、６００秒間解離した。１０ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ ｐＨ １．５は、５０μＬ／分の流速下で、６０秒間再生してマルチサイクルキネティックス検出を実行した。１：１結合モデルを使用して、Ｆｉｔ ｌｏｃａｌモードを選択して、結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）、及び解離平衡速度定数（ＫＤ）を適合させた。フィッティング結果を表８に示す。本出願に記載の抗原結合タンパク質はヒトＣＤ７３タンパク質に結合し、大部分の抗原結合タンパク質とヒトＣＤ７３タンパク質との間の結合親和性に有意差がないことを示している。
【0240】
【表8】
【0241】
（実施例７ 抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質と異種（ヒト、マウス、ラット、サル）ＣＤ７３タンパク質との結合親和性の検出）
９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８とＨｕｍａｎ（ヒト）ＣＤ７３タンパク質（メーカー：ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番：ＣＤ３－Ｈ５２Ｈ７），Ｍｏｕｓｅ（マウス）ＣＤ７３／ＮＴ５Ｅ（メーカー：ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番：ＣＤ３－Ｍ５２Ｈ９）、Ｒａｔ（ラット）ＣＤ７３（メーカー：Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ、品番：ＣＢ１６）及びＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ（サル）ＣＤ７３（メーカー：Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ、品番：ＣＩ２１）の結合キネティックス実験をＢｉａｃｏｒｅ（ＧＥ、型番：Ｔ２００）で検出する。実験用バッファー：ＨＢＳ－ＥＰ＋（ｐＨ７．４）、 ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップ（メーカー：ＧＥ、品番：２９－１２７５－５６）。
９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８とＨｕｍａｎ（ヒト）ＣＤ７３タンパク質（メーカー：ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番：ＣＤ３－Ｈ５２Ｈ７），Ｍｏｕｓｅ（マウス）ＣＤ７３／ＮＴ５Ｅ（メーカー：ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番：ＣＤ３－Ｍ５２Ｈ９）、Ｒａｔ（ラット）ＣＤ７３（メーカー：Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ、品番：ＣＢ１６）及びＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ（サル）ＣＤ７３（メーカー：Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ、品番：ＣＩ２１）の結合キネティックス実験をＢｉａｃｏｒｅ（ＧＥ、型番：Ｔ２００）で検出する。実験用バッファー：ＨＢＳ－ＥＰ＋（ｐＨ７．４）、 ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップ（メーカー：ＧＥ、品番：２９－１２７５－５６）。
【0242】
サンプルチャンバーと流路の温度を２５℃に設定し、ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップにそれぞれ抗原結合タンパク質をリガンドとして捕捉し、約１００ＲＵ固定化した。Ｈｕｍａｎ ＣＤ７３タンパク質／Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ＣＤ７３／Ｒａｔ ＣＤ７３／Ｍｏｕｓｅ ＣＤ７３は、それぞれ実験用バッファーで５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２ｎＭ、１．５７ｎＭの一連の濃度に希釈し、実験用バッファーを０濃度対照として３０μＬ／分の流速下で１２０秒間結合、６００秒間解離した。１０ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ ｐＨ １．５は、５０μＬ／分の流速下で、６０秒間再生してマルチサイクルキネティックス検出を実行した。１：１結合モデルを使用して、Ｆｉｔ ｌｏｃａｌモードを選択して、結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）、及び解離平衡速度定数（ＫＤ）を適合させた。フィッティング結果を表９に示す。本出願に記載の抗原結合タンパク質はヒトＣＤ７３、サルＣＤ７３（メーカー：Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ、品番：ＣＩ２１）に結合し、大部分の抗原結合タンパク質とヒトＣＤ７３タンパク質との間の結合親和性に有意差がなく、同時に全ての抗原結合タンパク質はマウス（メーカー：ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番：ＣＤ３－Ｍ５２Ｈ９）及びラット（メーカー：Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ、品番：ＣＢ１６）のＣＤ７３タンパク質と結合しなかったことを示している。
【0243】
【表9】
【0244】
（実施例８ 抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質による細胞表面のＣＤ７３エンドサイトーシス誘導能力の検出）
本実施例は、本出願に記載の抗原結合タンパク質がＣＤ７３酵素活性を阻害し、細胞表面のＣＤ７３細胞内移行を誘導するという二重の作用機序を持っていることを示している。具体的な操作は以下の通りである。ＣＤ７３系抗原結合タンパク質をＰＢＳ溶液で１μｇ／ｍｌに希釈し、各濃度を２ウェルで繰り返した。対数増殖期のＣａｌｕ６細胞を採取し、２×１０５／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、９６ウェルＵ字型プレートに１ウェルあたり１００μＬ（約２０，０００個の細胞）を加え、３００ｇ×３分間で遠心分離し、上清を除去した。次に希釈した抗原結合タンパク質で細胞を再懸濁し、１００μＬ／ウェルでよく混合し、４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、３００ｇ×３分間で遠心分離し、上清を除去し、１％ＢＳＡで再懸濁し、半分を３７℃でインキュベートし、残りの半分を４℃で５時間インキュベートした。インキュベーション後、相応時間のウェルを取り出し、３００ｇ×３分間で遠心分離して上清を除去し、ＰＥ ａｎｔｉ－ｈｕＩｇＧ Ｆｃ（１：２００）を５０μＬ／ウェル加え、よく混ぜ、４℃で３０分間反応させた。インキュベーション後、３００ｇ×３ｍｉｎで２回洗浄し、フローサイトメトリーで蛍光強度を測定した。
本実施例は、本出願に記載の抗原結合タンパク質がＣＤ７３酵素活性を阻害し、細胞表面のＣＤ７３細胞内移行を誘導するという二重の作用機序を持っていることを示している。具体的な操作は以下の通りである。ＣＤ７３系抗原結合タンパク質をＰＢＳ溶液で１μｇ／ｍｌに希釈し、各濃度を２ウェルで繰り返した。対数増殖期のＣａｌｕ６細胞を採取し、２×１０５／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、９６ウェルＵ字型プレートに１ウェルあたり１００μＬ（約２０，０００個の細胞）を加え、３００ｇ×３分間で遠心分離し、上清を除去した。次に希釈した抗原結合タンパク質で細胞を再懸濁し、１００μＬ／ウェルでよく混合し、４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、３００ｇ×３分間で遠心分離し、上清を除去し、１％ＢＳＡで再懸濁し、半分を３７℃でインキュベートし、残りの半分を４℃で５時間インキュベートした。インキュベーション後、相応時間のウェルを取り出し、３００ｇ×３分間で遠心分離して上清を除去し、ＰＥ ａｎｔｉ－ｈｕＩｇＧ Ｆｃ（１：２００）を５０μＬ／ウェル加え、よく混ぜ、４℃で３０分間反応させた。インキュベーション後、３００ｇ×３ｍｉｎで２回洗浄し、フローサイトメトリーで蛍光強度を測定した。
【0245】
抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質による細胞表面のＣＤ７３エンドサイトーシス誘導の検出結果を表１０及び図５に示す。結果は、抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質９００５６７、９００７２５及び９００７２８がいずれも細胞表面のＣＤ７３受容体のエンドサイトーシスを誘導できることを示している。
【0246】
【表10】
【0247】
（実施例９ 抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の熱安定性の検出）
抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の熱安定性の実験ステップは、次の通りである。タンパク質安定性解析装置（ＵＮｃｌｅ，ＵＮＣＨＡＩＮＥＤ ＬＡＢＳ，ＵＳ）で抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８の融解温度（Ｔｍ）、凝集温度（Ｔａｇｇ）を測定し、Ｔｍ及びＴａｇｇの昇温範囲は２５℃～９５℃で、昇温速度は０．３℃であった。
抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の熱安定性の実験ステップは、次の通りである。タンパク質安定性解析装置（ＵＮｃｌｅ，ＵＮＣＨＡＩＮＥＤ ＬＡＢＳ，ＵＳ）で抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８の融解温度（Ｔｍ）、凝集温度（Ｔａｇｇ）を測定し、Ｔｍ及びＴａｇｇの昇温範囲は２５℃～９５℃で、昇温速度は０．３℃であった。
【0248】
抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の熱安定性の検出結果を表１１に示す。結果は、抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７及び９００７２８の熱安定性データのＴｍ及びＴａｇｇ値は、どちらも６５℃を超え、且つ９００７２５、９００７２６及び９００７２８の３つのヒト化タンパク質の熱安定性は優れたことを示している。
【0249】
【表11】
【0250】
（実施例１０ 抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質の非特異的吸着の影響の検出）
ＳＰＲ法で抗原結合タンパク質と非標的分子の非特異的吸着の影響を測定した。
ＳＰＲ法で抗原結合タンパク質と非標的分子の非特異的吸着の影響を測定した。
【0251】
【表12】
【0252】
【表13】
【0253】
シリーズセンサーチップＣＭ５（ＧＥ，＃ＢＲ－１００５－３０）を室温に置いて２０～３０分間平衡化し、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（ＧＥ）機器に取り付けした。鶏卵由来のリゾチーム溶液（Ｓｉｇｍａ，＃Ｌ３７９０）及び大豆由来のトリプシンインヒビタータイプ１－Ｓ（Ｓｉｇｍａ，＃Ｔ－２３２７）をアミンカップリングキット（ＧＥ，＃ＢＲ－１０００－５０）でＣＭ５チップにそれぞれ固定した。ローディングバッファーはＨＢＳ－ＥＰ（１Ｘ）（ＧＥ，＃ＢＲ－１００６－６９）であり、４つの平衡化サイクルを設定した。ポリクローナルウサギ抗リゾチーム（ＡＢｃａｍ、Ａｂ３９１）、抗トリプシン阻害剤の抗体（ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃ＬＳ－Ｃ７６６０９）、キメラ抗体及びヒト化抗体を平衡バッファーで１０００ｎＭに希釈し、流速５μＬ／分、注入チャネル１、２及び３、Ｆｌｏｗ Ｃｅｌｌ１及び２、結合時間１０分、解離時間１５分を設定した。再生流速は５０μＬ／分で、まず０．８５％リン酸溶液（ＰｒｏｔｅＯｎ、１７６－２２６０）で６０秒間再生してから５０ｍＭ水酸化ナトリウム溶液で３０秒間再生した。
【0254】
カルボキシメチルデキストラン（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ Ｄｅｘｔｒａｎ）のＰＩは３．５、トリプシン阻害剤のＰＩは４．５、リゾチームのＰＩは１１．３で、ｐＨ７．４のＨＢＳ－ＥＰバッファーにおいて、カルボキシメチルデキストラン及びトリプシン阻害剤は強い負電荷を持ち、リゾチームが強い正電荷を持っている。検出結果を表１２に示す。９００５６７、９００７２５、９００７２６、９００７２７、９００７２８のシグナル強度はいずれも２０Ｕ未満又はそれに近いため、非特異的静電相互作用はないと考えられる。
【0255】
【表14】
【0256】
（実施例１１ 抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質のインビボにおける腫瘍治療効果の検出）
（１）ＣＤ７３ヒト化マウスを使用して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ トリプルネガティブ乳癌動物モデルを確立し、被験抗体の有効性をテストする。まず、１００μＬのＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＡＴＣＣライブラリ）細胞（２Ｅ６細胞）をＣＤ７３ヒト化マウスに接種して、ＣＤ７３ヒト化マウスＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳癌動物モデルを確立し、腫瘍形成マウスをマウス腫瘍の体積及び体重に応じて４つの実験群に均等に分配し、各群に６匹のマウスを、週に２回、合計６回、腹腔内注射で投与した。具体的な投薬レジメンを下表に示す。９００７５９はＭｅｄＩｍｍｕｎｅ社のＯｌｅｃｌｕｍａｂ（ＭＥＤＩ ９４４７）由来の抗体であり、陰性対照の９００２０１はＴＮＰを標的とする抗体であり、９００２０１の重鎖アミノ酸配列を配列番号：５１に示し、軽鎖アミノ酸配列を配列番号５２に示す。結果は、本出願に記載の抗原結合タンパク質９００７２５、９００７２８及び陽性対照抗体９００７５９は、いずれもＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳癌の増殖を効果的に抑制でき、且つ効果が同じで、陰性対照抗体９００２０１は。腫瘍の増殖を抑制できないことを示している。
（１）ＣＤ７３ヒト化マウスを使用して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ トリプルネガティブ乳癌動物モデルを確立し、被験抗体の有効性をテストする。まず、１００μＬのＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＡＴＣＣライブラリ）細胞（２Ｅ６細胞）をＣＤ７３ヒト化マウスに接種して、ＣＤ７３ヒト化マウスＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳癌動物モデルを確立し、腫瘍形成マウスをマウス腫瘍の体積及び体重に応じて４つの実験群に均等に分配し、各群に６匹のマウスを、週に２回、合計６回、腹腔内注射で投与した。具体的な投薬レジメンを下表に示す。９００７５９はＭｅｄＩｍｍｕｎｅ社のＯｌｅｃｌｕｍａｂ（ＭＥＤＩ ９４４７）由来の抗体であり、陰性対照の９００２０１はＴＮＰを標的とする抗体であり、９００２０１の重鎖アミノ酸配列を配列番号：５１に示し、軽鎖アミノ酸配列を配列番号５２に示す。結果は、本出願に記載の抗原結合タンパク質９００７２５、９００７２８及び陽性対照抗体９００７５９は、いずれもＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳癌の増殖を効果的に抑制でき、且つ効果が同じで、陰性対照抗体９００２０１は。腫瘍の増殖を抑制できないことを示している。
【0257】
【表15】
【0258】
（２）ＮＰＧマウスを使用して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳癌動物モデルを確立し、被験抗体の有効性をテストした。この実験で使用したヒト乳癌細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１は、１０％ＦＢＳを添加したＬ－１５培地を、ＣＯ２を含まない３７℃のインキュベーターに入れて培養した。細胞を１０世代連続培養する前に、約５．０×１０６ ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を１００μＬのＰＢＳに懸濁し、同量のＭａｔｒｉｇｅｌとよく混合し、ＮＰＧヒト化マウスの背中右側脇の下に皮下注射により接種し、接種量は約２００μＬであった。接種前に２～５％のイソフルランでマウスを麻酔した。接種当日、１．０×１０７ ＰＢＭＣ（１００μＬ）を尾静脈から注射し、腫瘍が平均約５０～８０ｍｍ３に成長した時、１８匹の荷瘤マウスを腫瘍体積及び体重に応じて無作為に１群６匹、３群に分けた。投薬は群分けの日に行い、具体的な投薬レジメンを下表に示す。９００２０１はＣＤ７３抗原に結合しない陰性対照抗体である。Ｏｌｅｃｌｕｍａｂは、アストラゼネカ社が開発した抗ＣＤ７３モノクローナル抗体で、現在第ＩＩ相臨床試験中である。Ｏｌｅｃｌｕｍａｂの重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を配列番号：５３に示し、Ｏｌｅｃｌｕｍａｂの軽鎖（ＬＣ）のアミノ酸配列を配列番号：５４に示す。
【0259】
結果を下表１４及び図６に示し、ｏｌｅｃｌｕｍａｂ及び９００７２５はＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳癌の増殖を有意に抑制することができ、且つ９００７２５の腫瘍抑制効果は陽性対照ｏｌｅｃｕｌｕｍａｂよりも優れ、陰性対照抗体９００２０１が腫瘍の増殖を抑制できない。
【0260】
【表16】
【0261】
（実施例１２ 抗ＣＤ７３抗原結合タンパク質のインビボにおける膵臓癌治療効果の検出）
この実験で使用したヒト膵臓癌細胞ＢｘＰＣ－３は、１０％ ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ－１６４０培地を５％ＣＯ２ を含む３７℃のインキュベーターに入れて培養した。細胞を１０世代連続培養する前に、約１×１０７ ＢｘＰＣ－３細胞を含む１００μＬのＰＢＳと等量のＭａｔｒｉｇｅｌをよく混合し、１８匹のＮＰＧマウスの背中右側脇の下に皮下注射により接種し、接種量は約２００μＬであった。接種前に２～５％のイソフルランでマウスを麻酔した。接種当日、１．０×１０７ ＰＢＭＣ（１００ μＬ）を尾静脈から注射し、腫瘍が平均約５０～８０ｍｍ３に成長した時、１８匹の荷瘤マウスを腫瘍体積及び体重に応じて無作為に１群６匹、３群に分けた。投薬は群分けの日に行い、具体的な投薬レジメンを下表に示す。９００５４３はＣＤ７３抗原に結合しない陰性対照抗体（９００５４３は９００２０１のＡＤＣＣノックアウト型、その重鎖のアミノ酸配列を配列番号：５５に示す）である。Ｏｌｅｃｌｕｍａｂは、アストラゼネカ社が開発した抗ＣＤ７３モノクローナル抗体で、現在第ＩＩ相臨床試験中である。
この実験で使用したヒト膵臓癌細胞ＢｘＰＣ－３は、１０％ ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ－１６４０培地を５％ＣＯ２ を含む３７℃のインキュベーターに入れて培養した。細胞を１０世代連続培養する前に、約１×１０７ ＢｘＰＣ－３細胞を含む１００μＬのＰＢＳと等量のＭａｔｒｉｇｅｌをよく混合し、１８匹のＮＰＧマウスの背中右側脇の下に皮下注射により接種し、接種量は約２００μＬであった。接種前に２～５％のイソフルランでマウスを麻酔した。接種当日、１．０×１０７ ＰＢＭＣ（１００ μＬ）を尾静脈から注射し、腫瘍が平均約５０～８０ｍｍ３に成長した時、１８匹の荷瘤マウスを腫瘍体積及び体重に応じて無作為に１群６匹、３群に分けた。投薬は群分けの日に行い、具体的な投薬レジメンを下表に示す。９００５４３はＣＤ７３抗原に結合しない陰性対照抗体（９００５４３は９００２０１のＡＤＣＣノックアウト型、その重鎖のアミノ酸配列を配列番号：５５に示す）である。Ｏｌｅｃｌｕｍａｂは、アストラゼネカ社が開発した抗ＣＤ７３モノクローナル抗体で、現在第ＩＩ相臨床試験中である。
【0262】
結果を図７に示し、ｏｌｅｃｌｕｍａｂ及び９００７２５は、ＢｘＰＣ－３膵臓癌の増殖を有意に抑制することができ、かつ９００７２５の腫瘍増殖抑制効果は陽性対照ｏｌｅｃｕｌｕｍａｂよりも優れ、陰性対照抗体９００５４３が腫瘍の増殖を抑制できない。
【0263】
【表17】
【0264】
本出願で言及された全ての文献は、あたかも個々の文書が参照により組み込まれることが個別に示されているかのように、参照により本出願に組み込まれる。なお、本出願の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本出願に多種多様な変更又は修正を加えることができ、かかる均等な形態も本出願の添付の特許請求の範囲によって限定される範囲内に収まることを理解されたい。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-07-20
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＣＤ７３又はその機能的活性断片に特異的に結合することができ、ＨＣＤＲ３を含み、且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗原結合タンパク質。
【請求項2】
ＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ１を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項3】
ＬＣＤＲ３を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項4】
ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ１を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項5】
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号：３で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号：２で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号：６で示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号：５で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項6】
ＶＨを含み、前記ＶＨが配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項7】
前記ＶＨは、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３２及び配列番号：３４のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項8】
ＶＬを含み、前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項9】
前記ＶＬは、配列番号：２９、配列番号：３１及び配列番号：３３のいずれかで示されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項10】
ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨが配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：５０で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項11】
以下アミノ酸配列の組合せ：
１）前記ＶＨが配列番号：２８で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：２９で示されるアミノ酸配列を含む、
２）前記ＶＨが配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含む、
３）前記ＶＨが配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含む、
４）前記ＶＨが配列番号：３２で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を含む、及び
５）前記ＶＨが配列番号：３４で示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬが配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を含む、
からなる群より選択される１つ以上を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項12】
抗体重鎖定常領域及び抗体軽鎖定常領域を含み、前記抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域に由来し、前記抗体軽鎖定常領域は、ヒトＩｇ
Ｋ
定常領域に由来する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項13】
ＣＤ７３の酵素活性を阻害できる、細胞表面のＣＤ７３のエンドサイトーシスを誘導できる、融解温度（Ｔｍ）及び／もしくは凝集温度（Ｔａｇｇ）が６５℃を超える、非特異的吸着の影響がないもしくは弱い、並びに／又は腫瘍増殖を抑制できる、請求項１～１２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
【請求項14】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を含む、ポリペプチド分子。
【請求項15】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質又は請求項１４に記載のポリペプチド分子をコードする核酸分子。
【請求項16】
請求項１５に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項17】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を含む免疫複合体。
【請求項18】
請求項１５に記載の核酸分子、請求項１６に記載のベクター及び／又は請求項１７に記載の免疫複合体を含む細胞。
【請求項19】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項１４に記載のポリペプチド分子、請求項１５に記載の核酸分子、請求項１６に記載のベクター、請求項１７に記載の免疫複合体及び／又は請求項１８に記載の細胞、並びに薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項20】
疾患及び／又は病症を予防及び／又は治療するために使用される医薬組成物であって、前記疾患及び／又は病症は、ＣＤ７３によって媒介される、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項21】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項１４に記載のポリペプチド分子、請求項１５に記載の核酸分子、請求項１６に記載のベクター、請求項１７に記載の免疫複合体、請求項１８に記載の細胞及び／又は請求項１９に記載の医薬組成物を投与することを含む、サンプル中のＣＤ７３を検出するための方法。【国際調査報告】