特表2024-503076 | 知財ポータル「IP Force」

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特表2024-503076肺疾患の処置のための、肺胞２型細胞増殖の小分子制御因子

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-24

(54)【発明の名称】肺疾患の処置のための、肺胞２型細胞増殖の小分子制御因子

(51)【国際特許分類】

A61K 45/00 20060101AFI20240117BHJP

A61P 11/00 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/69 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/40 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/403 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/519 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/4985 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/513 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/496 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/4162 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/506 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/4545 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/4196 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/53 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/4375 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/426 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/407 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/5513 20060101ALI20240117BHJP

A61K 31/495 20060101ALI20240117BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20240117BHJP

A61P 11/16 20060101ALI20240117BHJP

A61P 37/08 20060101ALI20240117BHJP

A61P 31/14 20060101ALI20240117BHJP

A61P 31/12 20060101ALI20240117BHJP

A61P 31/16 20060101ALI20240117BHJP

A61P 31/04 20060101ALI20240117BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20240117BHJP

A61P 29/00 20060101ALI20240117BHJP

A61P 19/02 20060101ALI20240117BHJP

A61P 1/04 20060101ALI20240117BHJP

A61P 31/00 20060101ALI20240117BHJP

A61P 9/10 20060101ALI20240117BHJP

A61P 17/00 20060101ALI20240117BHJP

A61P 25/00 20060101ALI20240117BHJP

A61P 3/10 20060101ALI20240117BHJP

A61P 17/06 20060101ALI20240117BHJP

A61P 19/06 20060101ALI20240117BHJP

A61P 9/00 20060101ALI20240117BHJP

A61P 9/04 20060101ALI20240117BHJP

A61P 13/12 20060101ALI20240117BHJP

A61P 17/14 20060101ALI20240117BHJP

A61P 37/02 20060101ALI20240117BHJP

A61P 25/02 20060101ALI20240117BHJP

A61P 1/16 20060101ALI20240117BHJP

A61P 15/00 20060101ALI20240117BHJP

A61P 21/00 20060101ALI20240117BHJP

A61P 7/06 20060101ALI20240117BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P11/00

A61K31/69

A61K31/40

A61K31/403

A61K31/519

A61K31/4985

A61K31/513

A61K31/496

A61K31/4162

A61K31/506

A61K31/4545

A61K31/4196

A61K31/53

A61K31/4375

A61K31/426

A61K31/407

A61K31/5513

A61K31/495

A61P43/00 105

A61P11/16

A61P37/08

A61P31/14

A61P31/12

A61P31/16

A61P31/04

A61P35/00

A61P29/00 101

A61P19/02

A61P1/04

A61P31/00

A61P9/10

A61P17/00

A61P25/00

A61P3/10

A61P17/06

A61P19/06

A61P9/00

A61P9/04

A61P13/12

A61P17/14

A61P37/02

A61P25/02

A61P1/16

A61P15/00

A61P21/00

A61P7/06

A61P29/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023542796

(86)(22)【出願日】2022-01-14

(85)【翻訳文提出日】2023-09-12

(86)【国際出願番号】 US2022070198

(87)【国際公開番号】W WO2022155674

(87)【国際公開日】2022-07-21

(31)【優先権主張番号】63/138,131

(32)【優先日】2021-01-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】501244222

【氏名又は名称】ザスクリプスリサーチインスティテュート

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山康文

(72)【発明者】

【氏名】ボロング，マイケル

(72)【発明者】

【氏名】シュルツ，ピーター

(72)【発明者】

【氏名】シャオ，シダ

(72)【発明者】

【氏名】チャタジー，アルナブ

(72)【発明者】

【氏名】チェン，ジェン

(72)【発明者】

【氏名】チャン，ナン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA17

4C084MA13

4C084NA14

4C084ZA01

4C084ZA02

4C084ZA20

4C084ZA36

4C084ZA37

4C084ZA55

4C084ZA59

4C084ZA60

4C084ZA68

4C084ZA75

4C084ZA81

4C084ZA89

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4C084ZB07

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4C084ZB13

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4C084ZB26

4C084ZB32

4C084ZB33

4C084ZB35

4C084ZC20

4C084ZC31

4C084ZC35

4C086AA01

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4C086BC07

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4C086BC37

4C086BC42

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4C086BC60

4C086BC62

4C086BC82

4C086CB03

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4C086CB09

4C086DA43

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA13

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA01

4C086ZA02

4C086ZA20

4C086ZA36

4C086ZA37

4C086ZA55

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4C086ZA60

4C086ZA68

4C086ZA75

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4C086ZA89

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4C086ZB07

4C086ZB11

4C086ZB13

4C086ZB15

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZB32

4C086ZB33

4C086ZB35

4C086ZC20

4C086ZC31

4C086ZC35

(57)【要約】

本開示は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ４）を阻害する化合物およびその薬学的組成物に関する。これらの化合物は、肺胞２型細胞（ＡＥＣ２）の増殖を選択的に促進し、その病因が、例えば、特発性肺線維症（ＩＦＦ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）および乳児呼吸窮迫症候群（ＩＲＤＳ）のような肺疾患などの、上皮変性および不適応リモデリングに由来する疾患を処置する治療方法において有用である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

立方状肺胞２型（ＡＥＣ２）細胞の増殖を選択的に増加させることを必要とする対象において立方状肺胞２型（ＡＥＣ２）細胞の増殖を選択的に増加させるための、またはＡＥＣ２細胞の低下した増殖を回復させることを必要とする対象においてＡＥＣ２細胞の低下した増殖を回復させるための方法であって、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項2】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、前記対象における糖尿病を処置することにおいて有効であろう前記阻害剤の量の約５～約１０倍である量で投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、前記対象における糖尿病を処置することにおいて有効であろう前記阻害剤の量の約５～約７倍である量で投与される、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

疾患に罹患している対象における疾患を処置するための方法であって、疾患病因は上皮変性および／または不適応リモデリングに由来し、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項5】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、前記対象における糖尿病を処置することにおいて有効であろう前記阻害剤の量の約５～約１０倍である量で投与される、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、前記対象における糖尿病を処置することにおいて有効であろう前記阻害剤の量の約５～約７倍である量で投与される、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、以下の表：

【表1】

から選択されるものである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、サキサグリプチン（４）およびリナグリプチン（５）から選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩がサキサグリプチン（４）である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記対象に投与されるサキサグリプチン（４）の量が約５００ｍｇ１日２回である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩がリナグリプチン（５）である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記対象に投与されるリナグリプチン（５）の量が約５０ｍｇ～約１００ｍｇ１日１回である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、以下の表：

【表2】

から選択されるものである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、以下の表：

【表3】

から選択されるものである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記疾患が肺疾患または肺症状である、請求項２～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記疾患が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、珪肺症、石綿肺、塵肺症、アルミニウム肺症、ボーキサイト線維症、ベリリウム肺症、鉄沈着症、スズ肺、滑石肺、ラブラドール肺（混合粉塵性塵肺）、サルコイドーシス、過敏性肺臓炎（ＨＰ）／外因性アレルギー性肺胞炎（ＥＡＡ）、慢性気管支炎、剥離性間質性肺炎（ＤＩＰ）、呼吸細気管支炎間質性肺疾患（ＲＢＩＬＤ）、急性間質性肺炎（ＡＩＰ）、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、特発性器質化肺炎（ＣＯＰ＝特発性ＢＯＯＰ）、続発性器質化肺炎（ＢＯＯＰ）、リンパ球様間質性肺炎（ＬＩＰ）、特発性間質性肺炎：特定不能、好酸球増加性肺疾患、結核（ＴＢ）、肺水腫、間質性肺疾患、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）、コロナウイルス、ＣＯＶＩＤ－１９、特発性器質化肺炎（ＣＯＰ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、電子タバコまたはベイピング製品使用関連肺傷害（ＥＶＡＬＩ）、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、ヒストプラスマ症、インフルエンザ、レジオネラ病、ＭＡＣ肺疾患、アルファ－１アンチトリプシン欠損症、アスペルギルス症、リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、非結核性抗酸菌性肺疾患（ＮＴＭ）、肺癌、肺塞栓症、グッドパスチャー症候群、特発性肺ヘモシデリン沈着症、原因不明の肺胞出血症候群、原因が明らかな肺胞出血症候群、孤発性肺リンパ脈管筋腫症（Ｓ－ＬＡＭ）、結節性硬化症における肺リンパ脈管筋腫症（ＴＳＣ－ＬＡＭ）、肺胞蛋白症、肺アミロイドーシス、原発性肺リンパ腫、（内臓逆位を伴うまたは伴わない）原発性線毛機能不全症、過敏性肺臓炎のまれな原因（農夫肺疾患およびハト飼育者肺疾患以外の全ての原因）、遺伝性出血性末梢血管拡張症（ＨＨＴ）における肺動静脈奇形、全身性硬化症における間質性肺疾患、関節リウマチにおける間質性肺疾患、特発性炎症性筋症（多発性筋炎、皮膚筋炎、抗シンテターゼ症候群）における間質性肺疾患、シェーグレン症候群における間質性肺疾患、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）における間質性肺疾患、オーバーラップ症候群における間質性肺疾患、未分化結合組織病における間質性肺疾患および（非移植患者における）閉塞性細気管支炎から選択される、請求項２～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記疾患が炎症性疾患または障害である、請求項２～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記疾患が、感染性大腸炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、放射線大腸炎、消化性潰瘍、腸癌、腸閉塞、関節リウマチ、乾癬性関節炎、橋本甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、グレーブス病、１型糖尿病、乾癬、強直性脊椎炎、強皮症、筋炎、痛風、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、血管炎、拡張型心筋症、肥大型心筋症、拘束型心筋症、左心不全、右心不全、収縮期心不全、拡張期心不全（保持された駆出率を有する心不全）、心房中隔欠損症、房室中隔欠損症、大動脈縮窄、両大血管右室起始症、右旋性大血管転位、エブスタイン奇形、左心低形成症候群、大動脈弓離断症、肺動脈閉鎖、単心室、ファロー四徴症、総肺静脈還流異常症、三尖弁閉鎖症、総動脈幹、心室中隔欠損症、多発性嚢胞腎、尿崩症、グッドパスチャー病、ＩｇＡ血管炎、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、成人ネフローゼ症候群、小児ネフローゼ症候群、溶血性尿毒症症候群、海綿腎、腎異形成、腎動脈狭窄、腎血管性高血圧、尿細管性アシドーシス、アルポート症候群、ウェゲナー肉芽腫症、アラジール症候群、シスチン症、ファブリー病、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、糸球体腎炎、ａＨＵＳ（非典型溶血性尿毒症症候群）、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病、ＩｇＡ腎症（ベルジェ病）、間質性腎炎、微小変化群、ネフローゼ症候群、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）、湿疹、乾癬、蜂巣炎、膿痂疹、アトピー性皮膚炎、表皮水疱症、硬化性苔癬、魚鱗癬、白斑、末端剥離皮膚症候群、ブラウ症候群、原発性皮膚アミロイドーシス、皮膚膿瘍、褥瘡、眼瞼炎、フルンケル症、全層または部分層熱傷、毛細血管炎、蜂巣炎、角膜擦過傷、角膜びらん、乾燥症、扁平苔癬、慢性単純性苔癬、静脈性潰瘍（うっ血性潰瘍）、成人スチル病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、自己免疫性血管浮腫、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性蕁麻疹、軸索および神経細胞型ニューロパチー（ＡＭＡＮ）、バロー病、水疱性類天疱瘡、セリアック病、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群（ＣＳＳ）または好酸球性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ症候群、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、円板状ループス、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞性心筋炎、多発血管炎性肉芽腫症、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）、妊娠性疱疹または妊娠性類天疱瘡（ＰＧ）、低ガンマグロブリン血症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、ランバート・イートン症候群、白血球破壊性血管炎、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多巣性運動ニューロパチー（ＭＭＮ）またはＭＭＮＣＢ、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、新生児ループス、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ（ＰＲ）、ＰＡＮＤＡＳ、傍腫瘍性小脳変性症（ＰＣＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンバーグ症候群、毛様体扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、パーソネージ・ターナー症候群、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血（ＰＡ）、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、多腺性症候群Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、再発性多発軟骨炎、下肢静止不能症候群（ＲＬＳ）、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、全身硬直症候群（ＳＰＳ）、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎（ＳＯ）、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、甲状腺眼疾患（ＴＥＤ）、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、自己免疫性肝炎、胆道閉鎖症、肝硬変、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝癌、新生児黄疸、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、骨粗鬆症、パジェット病、骨壊死、骨関節炎、低骨密度、痛風、線維性骨異形成症、マルファン症候群および骨形成不全症から選択される、請求項２～１４および１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

肺疾患または肺症状に罹患している対象における肺疾患または肺症状を処置するための方法であって、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を前記対象に肺投与することを含む、方法。

【請求項20】

【請求項21】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が吸入可能な組成物中に存在する、請求項１９または２０に記載の方法。

【請求項22】

前記吸入可能な組成物がエアロゾルまたは噴霧製剤である、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、前記対象における糖尿病を処置することにおいて有効であろう前記阻害剤の量の約０．１～約５倍である量で投与される、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、前記対象における糖尿病を処置することにおいて有効であろう前記阻害剤の量の約２～約５倍である量で投与される、請求項１９～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、前記対象における糖尿病を処置することにおいて有効であろう前記阻害剤の量の約０．３～約３倍である量で投与される、請求項２３に記載の方法。

【請求項26】

前記薬学的に許容され得る塩が、前記ＤＰＰ４阻害剤の酸付加塩であり、前記酸が、塩酸、硫酸、臭化水素酸、メタンスルホン酸、酒石酸、パルミチン酸、酢酸、リン酸、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、エタンスルホン酸およびフマル酸からなる群から選択される、請求項１９～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、以下の表：

【表4】

から選択されるものである、請求項１９～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が、以下の表：

【表5】

から選択されるものである、請求項１９～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩が化合物１５：

【表6】

である、請求項１～６または１４～２７のいずれか一項に記載の方法

【請求項30】

化合物１５またはその薬学的に許容され得る塩が吸入によって投与される、請求項２９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

下気道修復の薬理学的刺激は、肺胞破壊および不適応リモデリングが疾患の原因である様々な症状を処置するための大きな可能性を有する。哺乳動物のガス交換の基本単位である肺胞は、２つの上皮細胞型：ガス交換のための表面領域を提供する大きな扁平上皮肺胞１型細胞（ＡＥＣ１）および界面活性物質を分泌する立方状肺胞２型細胞（ＡＥＣ２）から構成される。^１さらに、ＡＥＣ２は、肺胞上皮を再配置させることに関与する一次前駆細胞型として同定されている。^２ＡＥＣ２は成体期を通じてクローン増殖し、非対称に分裂して、ＡＥＣ１およびＡＥＣ２を生じる。^２特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、ＡＥＣ２の幹細胞能力の消耗によって引き起こされることがさらに実証されている。^３減少したＡＥＣ２増殖は、裸出した肺胞基底膜をもたらし、これは最終的に、過形成性上気道由来上皮細胞および細胞外マトリックス分泌筋線維芽細胞による下気道のコロニー形成を促進する。^３さらに、外因性因子（ＩＬ－６またはヒアルロン酸）による処置を通じてＡＥＣ２増殖を回復させることは、ＩＰＦのマウスモデルにおいて疾患重症度を阻害することが実証されている。^４ＩＰＦに加えて、肺胞上皮のバリア機能の急性喪失である急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）が、ＡＥＣ２細胞に対する損傷およびＡＥＣ２細胞による不十分な修復成長によって引き起こされる。^５

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0002】

【非特許文献1】Ｈｏｇａｎ，Ｂ．Ｌ．，Ｂａｒｋａｕｓｋａｓ，Ｃ．Ｅ．，Ｃｈａｐｍａｎ，Ｈ．Ａ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ａ．，Ｊａｉｎ，Ｒ．，Ｈｓｉａ，Ｃ．Ｃ．，Ｎｉｋｌａｓｏｎ，Ｌ．，Ｃａｌｌｅ，Ｅ．，Ｌｅ，Ａ．，Ｒａｎｄｅｌｌ，Ｓ．Ｈ．，Ｒｏｃｋ，Ｊ．，Ｓｎｉｔｏｗ，Ｍ．，Ｋｒｕｍｍｅｌ，Ｍ．，Ｓｔｒｉｐｐ，Ｂ．Ｒ．，Ｖｕ，Ｔ．，Ｗｈｉｔｅ，Ｅ．Ｓ．，Ｗｈｉｔｓｅｔｔ，Ｊ．Ａ．，ａｎｄＭｏｒｒｉｓｅｙ，Ｅ．Ｅ．（２０１４）Ｒｅｐａｉｒａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｓｔｅｍ：ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ，ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ，ａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｌｕｎｇｓｔｅｍｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎ，ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ１５，１２３－１３８

【非特許文献2】Ｂａｒｋａｕｓｋａｓ，Ｃ．Ｅ．，Ｃｒｏｎｃｅ，Ｍ．Ｊ．，Ｒａｃｋｌｅｙ，Ｃ．Ｒ．，Ｂｏｗｉｅ，Ｅ．Ｊ．，Ｋｅｅｎｅ，Ｄ．Ｒ．，Ｓｔｒｉｐｐ，Ｂ．Ｒ．，Ｒａｎｄｅｌｌ，Ｓ．Ｈ．，Ｎｏｂｌｅ，Ｐ．Ｗ．，ａｎｄＨｏｇａｎ，Ｂ．Ｌ．（２０１３）Ｔｙｐｅ２ａｌｖｅｏｌａｒｃｅｌｌｓａｒｅｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎａｄｕｌｔｌｕｎｇ，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ１２３，３０２５－３０３６

【非特許文献3】Ｎｏｂｌｅ，Ｐ．Ｗ．，Ｂａｒｋａｕｓｋａｓ，Ｃ．Ｅ．，ａｎｄＪｉａｎｇ，Ｄ．（２０１２）Ｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓ：ｐａｔｔｅｒｎｓａｎｄｐｅｒｐｅｔｒａｔｏｒｓ，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ１２２，２７５６－２７６２

【非特許文献4】Ｌｉａｎｇ，Ｊ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｘｉｅ，Ｔ．，Ｌｉｕ，Ｎ．，Ｃｈｅｎ，Ｈ．，Ｇｅｎｇ，Ｙ．，Ｋｕｒｋｃｉｙａｎ，Ａ．，Ｍｅｎａ，Ｊ．Ｍ．，Ｓｔｒｉｐｐ，Ｂ．Ｒ．，Ｊｉａｎｇ，Ｄ．，ａｎｄＮｏｂｌｅ，Ｐ．Ｗ．（２０１６）ＨｙａｌｕｒｏｎａｎａｎｄＴＬＲ４ｐｒｏｍｏｔｅｓｕｒｆａｃｔａｎｔ－ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｃ－ｐｏｓｉｔｉｖｅａｌｖｅｏｌａｒｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｒｅｎｅｗａｌａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｓｅｖｅｒｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｉｃｅ，ＮａｔＭｅｄ２２，１２８５－１２９３

【非特許文献5】Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｂ．Ｔ．，Ｃｈａｍｂｅｒｓ，Ｒ．Ｃ．，ａｎｄＬｉｕ，Ｋ．Ｄ．（２０１７）ＡｃｕｔｅＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＤｉｓｔｒｅｓｓＳｙｎｄｒｏｍｅ，ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ３７７，１９０４－１９０５

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0003】

本開示は、様々な態様において、例えば、肺における他の細胞型と比較してＡＥＣ２の特異的増殖を促進する上で有用な化合物を提供する。したがって、様々な態様において、本開示は、立方状肺胞２型（ＡＥＣ２）細胞の増殖を選択的に増加させることを必要とする対象において立方状肺胞２型（ＡＥＣ２）細胞の増殖を選択的に増加させるための、またはＡＥＣ２細胞の低下した増殖を回復させることを必要とする対象においてＡＥＣ２細胞の低下した増殖を回復させるための方法を提供する。この方法は、本開示に記載されるように、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を対象に投与することを含む。

【0004】

さらなる態様において、本開示は、疾患に罹患している対象における疾患を処置するための方法であって、疾患病因が上皮変性および／または不適応リモデリングに由来する、方法を提供する。この方法は、本開示に記載されるように、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を対象に投与することを含む。

【0005】

別の態様において、本開示は、肺疾患または肺症状に罹患している対象における肺疾患または肺症状を処置するための方法を提供する。この方法は、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を対象に肺投与することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0006】

【図1A】ハイコンテンツな画像化スクリーニングは、ＤＰＰ４阻害剤およびＳ１Ｐ１Ｒ調節因子をＡＥＣ２細胞の小分子増殖因子として同定する。分裂促進の陽性対照であるインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）処理に応答したＫｉ６７ＡＥＣ２のパーセンテージの定量化および代表的な画像。

【図1B】ハイコンテンツな画像化スクリーニングは、ＤＰＰ４阻害剤およびＳ１Ｐ１Ｒ調節因子をＡＥＣ２細胞の小分子増殖因子として同定する。確認されたスクリーニングの、化学構造、ＡＥＣ２細胞パーセンテージＫｉ６７陽性の定量およびパーセント肺線維芽細胞活性化は、ＮＶＰ－７２８にヒットする。

【図1C】ハイコンテンツな画像化スクリーニングは、ＤＰＰ４阻害剤およびＳ１Ｐ１Ｒ調節因子をＡＥＣ２細胞の小分子増殖因子として同定する。確認されたスクリーニングの、化学構造、ＡＥＣ２細胞パーセンテージＫｉ６７陽性の定量およびパーセント肺線維芽細胞活性化は、シポニモドにヒットする。

【図2A】ＤＰＰ４活性の薬理学的または遺伝的な減衰は、ＩＧＦ１によって駆動される自己分泌型フィードフォワードループによるＡＥＣ２の拡大増殖を促進する。

【図2B】表記濃度のＤＰＰ４阻害剤で、ウェルあたりのＫｉ６７陽性ＡＥＣ２を処理する（ｓｉＲＮＡによって媒介されるＤＰＰ４のノックダウンに応答した、Ｋｉ６７陽性（左）および総ＡＥＣ２数（右）。

【図2C】ＤＰＰ４阻害剤と組み合わせた表記濃度のＩＧＦで処理されたウェルあたりのＫｉ６７陽性ＡＥＣ２。

【図2D】外因性ＩＧＦと可溶性ＤＰＰ４での併用処理に応答したクリスタルバイオレット染色されたＡＥＣ２単層培養物の代表的な画像。

【図3】ＡＥＣ２増殖および毒性についてのアッセイにおける表記のＳ１Ｐ受容体サブタイプ調節因子の活性。

【図4A】高用量のＤＰＰ４阻害剤サキサグリプチンおよびシタグリプチンは、急性肺傷害モデルにおいて修復を促進する。表記濃度のサキサグリプチンおよびシタグリプチンで経口処置され、気管内ＬＰＳ投与でチャレンジされたマウスからの組織学的スコア。

【図4B】高用量のＤＰＰ４阻害剤サキサグリプチンおよびシタグリプチンは、急性肺傷害モデルにおいて修復を促進する。表記濃度のサキサグリプチンおよびシタグリプチンで経口処置され、気管内ＬＰＳ投与でチャレンジされたマウスからのＢＡＬＦタンパク質レベル。

【図4C】高用量のＤＰＰ４阻害剤サキサグリプチンおよびシタグリプチンは、急性肺傷害モデルにおいて修復を促進する。研究の３日目での、ＳＦＰＴＣおよびＫＩ－６７について共陽性に染色される細胞であるパーセント陽性ＡＥＣ２の定量化。

【図4D】高用量のＤＰＰ４阻害剤サキサグリプチンおよびシタグリプチンは、急性肺傷害モデルにおいて修復を促進する。研究の３日目での、ＳＦＰＴＣおよびＫＩ－６７について共陽性に染色される細胞であるパーセント陽性ＡＥＣ２の定量化。

【図5A】経口シタグリプチンは、ブレオマイシンによって誘発された肺線維症において改善効果を示す。線維化面積測定値。

【図5B】経口シタグリプチンは、ブレオマイシンによって誘発された肺線維症において改善効果を示す。ピクロシリウスレッド測定値。

【図5C】経口シタグリプチンは、ブレオマイシンによって誘発された肺線維症において改善効果を示す。修正アシュクロフトスコア。

【図5D】経口シタグリプチンは、ブレオマイシンによって誘発された肺線維症において改善効果を示す。パーセント体重。

【図5E】経口シタグリプチンは、ブレオマイシンによって誘発された肺線維症において改善効果を示す。シタグリプチンまたはピルフェニドン（いずれも１００ｍｇ／ｋｇ１日２回）で処置され、気管内ブレオマイシン投与でチャレンジされたマウスからの代表的なマッソントリコーム染色された組織切片。

【図6】４つのグリプチンの薬物動態プロファイリング。

【図7A】リナグリプチンはインビトロでリン脂質症を誘導する。

【図7B】リナグリプチンは、マウス急性肺傷害（ＡＬＩ）モデルにおいて狭い有効投薬範囲を示す。

【図8】デュトグリプチンボロナート（１５）は、ブレオマイシンによって誘発された線維症モデルにおいて、ＩＴを通じて４日に１回０．５ｍｇ／ｋｇを投与された場合にＢＡＬＦタンパク質レベルを低下させた。

【発明を実施するための形態】

【0007】

本開示は、肺の幹細胞集団および前駆細胞集団の修復的増殖を刺激する薬物様化合物に対する長年の要望を充足する。本開示の化合物は、肺における他の細胞型（例えば、肺線維芽細胞）と比較してＡＥＣ２の特異的増殖を促進し、それにより、多数の下気道疾患において疾患修飾効力を示す。さらに、本化合物は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ４）の阻害剤として有用である。

【0008】

定義
本明細書中に記載される化合物は、例えば、シス－またはトランス－立体構造を含む、立体配置異性体、幾何異性体および立体配座異性体を含む、様々な異性体形態で存在することができる。化合物は、単一の互変異性体および互変異性体の混合物の両方を含む１つ以上の互変異性形態でも存在し得る。「異性体」という用語は、本開示の化合物の互変異性体を含む、本開示の化合物の全ての異性体形態を包含することを意図している。本開示の化合物は、開鎖または環化形態でも存在し得る。いくつかの事例においては、環化形態の１つ以上は水の喪失から生じ得る。開鎖および環化形態の具体的な組成は、化合物がどのように単離され、保存され、または投与されるかに依存し得る。例えば、化合物は、酸性条件下では主に開鎖形態で存在し得るが、中性条件下では環化し得る。全ての形態が本開示に含まれる。

【0009】

本明細書に記載されるいくつかの化合物は、不斉中心を有することができ、したがって、異なるエナンチオマーおよびジアステレオマー形態で存在することができる。本明細書に記載されている化合物は、光学異性体またはジアステレオマーの形態であり得る。したがって、本開示は、ラセミ混合物を含む、本明細書に記載される化合物の光学異性体、ジアステレオ異性体およびこれらの混合物の形態の本明細書に記載される化合物およびそれらの使用を包含する。本開示の化合物の光学異性体は、不斉合成、キラルクロマトグラフィー、擬似移動床技術または光学活性分割剤の使用を通じた立体異性体の化学的分離などの公知の技術によって取得され得る。

【0010】

別段示されない限り、「立体異性体」という用語は、その化合物の他の立体異性体を実質的に含まない化合物の１つの立体異性体を意味する。したがって、１つのキラル中心を有する立体異性的に純粋な化合物は、該化合物の反対のエナンチオマーを実質的に含まない。２つのキラル中心を有する立体異性的に純粋な化合物は、該化合物の他のジアステレオマーを実質的に含まない。典型的な立体異性的に純粋な化合物は、約８０重量％を超える化合物の１つの立体異性体および約２０重量％未満の化合物の他の立体異性体、例えば、約９０重量％を超える化合物の１つの立体異性体および約１０重量％未満の化合物の他の立体異性体、または約９５重量％を超える化合物の１つの立体異性体および約５重量％未満の化合物の他の立体異性体、または約９７重量％を超える化合物の１つの立体異性体および約３重量％未満の化合物の他の立体異性体、または約９９重量％を超える化合物の１つの立体異性体および約１重量％未満の化合物の他の立体異性体を含む。上記の立体異性体は、ここに記載されているそれぞれの重量百分率で存在する２つの立体異性体を含む組成物と見ることができる。

【0011】

描かれた構造とその構造に与えられた名称との間に不一致が存在する場合には、描かれた構造が優越する。さらに、構造または構造の一部の立体化学が例えば太線または破線で表記されていない場合、構造または構造の一部は、その全ての立体異性体を包含すると解釈されるべきである。しかしながら、いくつかの事例においては、１つより多くのキラル中心が存在する場合には、相対的な立体化学を記載するのを助けるために、構造および名称は、単一のエナンチオマーとして表され得る。有機合成の当業者は、化合物が化合物を調製するために使用される方法から単一のエナンチオマーとして調製されるかどうかを知っているであろう。

【0012】

本明細書で使用される場合、反対の指示がない限り、「化合物」という用語は、化合物またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体および／もしくは互変異性体を包含するという点で包括的である。したがって、例えば、本開示の化合物は、該化合物の互変異性体の薬学的に許容され得る塩を含む。

【0013】

本明細書では、「薬学的に許容され得る塩」は、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容され得る有機または無機の酸または塩基塩である。代表的な薬学的に許容され得る塩としては、例えば、酢酸塩、アムソナート（４，４－ジアミノスチルベン－２，２－ジスルホナート）、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゾナート、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、酪酸塩、カルシウム、エデト酸カルシウム、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、クラブラン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストラート、エシラート、フィウナラート、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニラート、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチルブロミド、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ－メチルグルカミンアンモニウム塩、３－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩（１，１－メテン－ビス－２－ヒドロキシ－３－ナフトアート、アインボナート）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ピクリン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホサリチル酸塩（ｓｕｌｆｏｓａｌｉｃｕｌａｔｅ）、スラマート、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジドおよび吉草酸塩などのアルカリ金属塩、アルカリ土類塩、アンモニウム塩、水溶性および非水溶性塩が挙げられる。薬学的に許容され得る塩は、その構造中に１つより多くの荷電原子を有することができる。この例では、薬学的に許容され得る塩は複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容され得る塩は、１つ以上の荷電原子および／または１つ以上の対イオンを有することができる。

【0014】

「処置する」、「処置すること」および「処置」という用語は、疾患または疾患に関連する症候の改善または根絶を指す。ある態様において、このような用語は、そのような疾患を有する患者への１つ以上の予防剤または治療剤の投与から生じる疾患の拡散または悪化を最小限に抑えることを指す。

【0015】

「予防する」、「予防すること」および「予防」という用語は、予防剤または治療剤の投与に起因する患者における疾患の発症、再発または拡散の予防を指す。

【0016】

「有効量」という用語は、疾患の処置もしくは予防において治療上もしくは予防上の利益を提供するのに、または疾患に関連する症候を遅延させもしくは最小化するのに十分な、本明細書に記載される化合物またはその他の活性成分の量を指す。さらに、本明細書に記載される化合物に関する治療有効量は、疾患の処置または予防において治療上の利益を提供する、単独でのまたは他の治療と組み合わせた治療剤の量を意味する。本明細書に記載される化合物に関連して使用される場合、この用語は、全体的な治療を改善し、疾患の症候もしくは原因を軽減もしくは回避し、または別の治療剤の治療有効性を増強するか、もしくは別の治療剤と相乗的である量を包含することができる。

【0017】

「患者」または「対象」には、ヒト、ウシ、ウマ、ヒツジ、子ヒツジ、ブタ、ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギまたはモルモットなどの動物が含まれる。いくつかの態様によれば、動物は、非霊長類および霊長類（例えば、サルおよびヒト）などの哺乳動物である。一態様において、患者は、ヒト乳児、小児、青年または成人などのヒトである。本開示では、「患者」および「対象」という用語は互換的に使用される。

【0018】

「阻害剤」は、ＤＰＰ４の発現、触媒活性、および／または局在化（すなわち、局所的濃度）を防止または低減する化合物を意味する。

【0019】

使用方法
本開示は、とりわけ疾患および症状の中でも肺傷害および線維症における再生的修復での使用に活用される効果である、ＤＰＰ４阻害が肺胞２型細胞（ＡＥＣ２）の拡大増殖をもたらすという驚くべき発見に基づいている。本明細書に開示されているＤＰＰ４阻害剤は、典型的には、米国ＦＤＡによって確立されたように、ラベルに表示された用途に関して安全で、有効であるので、本開示は、肺疾患および他の疾患などのこれらの疾患および症状を処置する上で使用するための、グリプチンの直接的な転用にさらに基づいている。本明細書に記載され、実施例全体を通して例示されているように、マウスからの薬物動態および有効性データによって、ラベルに表示された用途のためのこれらの化合物の経口用量は、驚くべきことに、ヒト患者において有効性を示すために約１０倍の乗算を必要とすることが確立された。

【0020】

これらおよび他の発見に基づいて、本開示は、様々な態様において、立方状肺胞２型（ＡＥＣ２）細胞の増殖を選択的に増加させることを必要とする対象において立方状肺胞２型（ＡＥＣ２）細胞の増殖を選択的に増加させるための、またはＡＥＣ２細胞の低下した増殖を回復させることを必要とする対象においてＡＥＣ２細胞の低下した増殖を回復させるための方法を提供する。この方法は、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を対象に投与することを含む。

【0021】

さらなる態様において、本開示は、疾患に罹患している対象における疾患を処置するための方法であって、疾患病因が上皮変性および／または不適応リモデリングに由来する、方法を提供する。この方法は、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を対象に投与することを含む。

【0022】

様々な態様において、疾患は、肺疾患または肺症状である。例示的な態様には、前記疾患が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、珪肺症、石綿肺、塵肺症、アルミニウム肺症、ボーキサイト線維症、ベリリウム肺症、鉄沈着症、スズ肺、滑石肺、ラブラドール肺（混合粉塵性塵肺）、サルコイドーシス、過敏性肺臓炎（ＨＰ）／外因性アレルギー性肺胞炎（ＥＡＡ）、慢性気管支炎、剥離性間質性肺炎（ＤＩＰ）、呼吸細気管支炎間質性肺疾患（ＲＢＩＬＤ）、急性間質性肺炎（ＡＩＰ）、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、特発性器質化肺炎（ＣＯＰ＝特発性ＢＯＯＰ）、続発性器質化肺炎（ＢＯＯＰ）、リンパ球様間質性肺炎（ＬＩＰ）、特発性間質性肺炎：特定不能、好酸球増加性肺疾患、結核（ＴＢ）、肺水腫、間質性肺疾患、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）、コロナウイルス、ＣＯＶＩＤ－１９、特発性器質化肺炎（ＣＯＰ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、電子タバコまたはベイピング製品使用関連肺傷害（ＥＶＡＬＩ）、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、ヒストプラスマ症、インフルエンザ、レジオネラ病、ＭＡＣ肺疾患、アルファ－１アンチトリプシン欠損症、アスペルギルス症、リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、非結核性抗酸菌性肺疾患（ＮＴＭ）、肺癌、肺塞栓症、グッドパスチャー症候群、特発性肺ヘモシデリン沈着症、原因不明の肺胞出血症候群、原因が明らかな肺胞出血症候群、孤発性肺リンパ脈管筋腫症（Ｓ－ＬＡＭ）、結節性硬化症における肺リンパ脈管筋腫症（ＴＳＣ－ＬＡＭ）、肺胞蛋白症、肺アミロイドーシス、原発性肺リンパ腫、（内臓逆位を伴うまたは伴わない）原発性線毛機能不全症、過敏性肺臓炎のまれな原因（農夫肺疾患およびハト飼育者肺疾患以外の全ての原因）、遺伝性出血性末梢血管拡張症（ＨＨＴ）における肺動静脈奇形、全身性硬化症における間質性肺疾患、関節リウマチにおける間質性肺疾患、特発性炎症性筋症（多発性筋炎、皮膚筋炎、抗シンテターゼ症候群）における間質性肺疾患、シェーグレン症候群における間質性肺疾患、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）における間質性肺疾患、オーバーラップ症候群における間質性肺疾患、未分化結合組織病における間質性肺疾患および（非移植患者における）閉塞性細気管支炎から選択されるものが含まれる。

【0023】

さらなる態様において、疾患は炎症性疾患または障害である。例としては、感染性大腸炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、放射線大腸炎、消化性潰瘍、腸癌、腸閉塞、関節リウマチ、乾癬性関節炎、橋本甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、グレーブス病、１型糖尿病、乾癬、強直性脊椎炎、強皮症、筋炎、痛風、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、血管炎、拡張型心筋症、肥大型心筋症、拘束型心筋症、左心不全、右心不全、収縮期心不全、拡張期心不全（保持された駆出率を有する心不全）、心房中隔欠損症、房室中隔欠損症、大動脈縮窄、両大血管右室起始症、右旋性大血管転位、エブスタイン奇形、左心低形成症候群、大動脈弓離断症、肺動脈閉鎖、単心室、ファロー四徴症、総肺静脈還流異常症、三尖弁閉鎖症、総動脈幹、心室中隔欠損症、多発性嚢胞腎、尿崩症、グッドパスチャー病、ＩｇＡ血管炎、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、成人ネフローゼ症候群、小児ネフローゼ症候群、溶血性尿毒症症候群、海綿腎、腎異形成、腎動脈狭窄、腎血管性高血圧、尿細管性アシドーシス、アルポート症候群、ウェゲナー肉芽腫症、アラジール症候群、シスチン症、ファブリー病、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、糸球体腎炎、ａＨＵＳ（非典型溶血性尿毒症症候群）、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病、ＩｇＡ腎症（ベルジェ病）、間質性腎炎、微小変化群、ネフローゼ症候群、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）、湿疹、乾癬、蜂巣炎、膿痂疹、アトピー性皮膚炎、表皮水疱症、硬化性苔癬、魚鱗癬、白斑、末端剥離皮膚症候群、ブラウ症候群、原発性皮膚アミロイドーシス、皮膚膿瘍、褥瘡、眼瞼炎、フルンケル症、全層または部分層熱傷、毛細血管炎、蜂巣炎、角膜擦過傷、角膜びらん、乾燥症、扁平苔癬、慢性単純性苔癬、静脈性潰瘍（うっ血性潰瘍）、成人スチル病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、自己免疫性血管浮腫、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性蕁麻疹、軸索および神経細胞型ニューロパチー（ＡＭＡＮ）、バロー病、水疱性類天疱瘡、セリアック病、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群（ＣＳＳ）または好酸球性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ症候群、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、円板状ループス、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞性心筋炎、多発血管炎性肉芽腫症、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）、妊娠性疱疹または妊娠性類天疱瘡（ＰＧ）、低ガンマグロブリン血症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、ランバート・イートン症候群、白血球破壊性血管炎、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多巣性運動ニューロパチー（ＭＭＮ）またはＭＭＮＣＢ、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、新生児ループス、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ（ＰＲ）、ＰＡＮＤＡＳ、傍腫瘍性小脳変性症（ＰＣＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンバーグ症候群、毛様体扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、パーソネージ・ターナー症候群、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血（ＰＡ）、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、多腺性症候群Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、再発性多発軟骨炎、下肢静止不能症候群（ＲＬＳ）、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、全身硬直症候群（ＳＰＳ）、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎（ＳＯ）、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、甲状腺眼疾患（ＴＥＤ）、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、自己免疫性肝炎、胆道閉鎖症、肝硬変、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝癌、新生児黄疸、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、骨粗鬆症、パジェット病、骨壊死、骨関節炎、低骨密度、痛風、線維性骨異形成症、マルファン症候群および骨形成不全症から選択される疾患が挙げられるが、これらに限定されない。

【0024】

様々な態様において、ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩は、以下の表１から選択されるものである。

【表1】

さらなる態様において、ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩は、以下の表２から選択されるものである。

【表2】

さらなる態様において、ＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩は、以下の表３から選択されるものである。

【表3】

例示的な態様において、本開示は、肺疾患または肺症状に罹患している対象において肺疾患または肺症状を処置するための方法などの本明細書に開示される方法であって、化合物１５であるＤＰＰ４阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を前記対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの態様において、化合物１５は、吸入によって投与される。

【0025】

薬学的組成物
本開示は、様々な態様において、治療有効量の本明細書に記載される１つ以上の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体および／もしくは互変異性体を、薬学的に許容され得る担体と混合して含む薬学的組成物も提供する。いくつかの態様において、組成物は、薬学的配合の許容される慣行に従って、１つ以上の追加の治療剤、薬学的に許容され得る賦形剤、希釈剤、補助剤、安定剤、乳化剤、防腐剤、着色剤、緩衝剤、香味付与剤をさらに含有する。

【0026】

一態様において、薬学的組成物は、表１～３に示されるものから選択される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体および／もしくは互変異性体と、薬学的に許容され得る担体とを含む。

【0027】

本開示の薬学的組成物は、優良医療規範と一致する様式で製剤化され、投薬され、投与される。これに関連して考慮すべき因子には、処置されている特定の障害、処置されている特定の対象、対象の臨床症状、障害の原因、作用物質の送達の部位、投与の方法、投与のスケジュール、および医療従事者に公知の他の因子が含まれる。

【0028】

投与される化合物またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体および／もしくは互変異性体の「治療有効量」は、このような考慮事項によって規定され、ＡＥＣ２細胞増殖を再生するために、またはＤＰＰ４を阻害するため、またはその両方のために必要な最小量である。このような量は、正常細胞または対象全体に対して毒性である量を下回り得る。一般に、投与される本開示の化合物（またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体もしくは互変異性体）の初期治療有効量は、約０．０１～約２００ｍｇ／ｋｇの範囲である。典型的な用量範囲は、約０．１～約４００ｍｇ／ｋｇ患者体重／日であり、典型的な初期範囲は、約５０～約２００ｍｇ／ｋｇ／日である。錠剤およびカプセル剤などの経口単位剤形は、約０．１ｍｇ～約１０００ｍｇの本開示の化合物（またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体もしくは互変異性体）を含有し得る。別の態様では、このような剤形は、約５０ｍｇ～約５００ｍｇの本開示の化合物（またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体もしくは互変異性体）を含有する。さらに別の態様では、このような剤形は、約２５ｍｇ～約２００ｍｇの本開示の化合物（またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体もしくは互変異性体）を含有する。さらに別の態様では、このような剤形は、約１０ｍｇ～約１００ｍｇの本開示の化合物（またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体もしくは互変異性体）を含有する。さらなる態様では、このような剤形は、約５ｍｇ～約５０ｍｇの本開示の化合物（またはその薬学的に許容され得る塩、立体異性体もしくは互変異性体）を含有する。前述の態様のいずれにおいても、剤形は、１日に１、２、３または４回投与され得る。

【0029】

本開示の組成物は、経口的に、局所的に、非経口的に、吸入もしくはスプレーによって、例えば肺投与のために、または投与単位製剤で直腸に投与され得る。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または注入技術を含む。

【0030】

本明細書に記載される適切な経口組成物には、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、硬または軟カプセル、シロップまたはエリキシル剤が含まれるが、これらに限定されない。

【0031】

別の態様では、本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る立体異性体、塩もしくは互変異性体と、薬学的に許容され得る担体とを含む単一単位投与に適した薬学的組成物も包含される。

【0032】

経口使用に適した本開示の組成物は、薬学的組成物の製造のための当技術分野で公知の任意の方法に従って調製され得る。例えば、本開示の化合物の液体製剤は、化合物の薬学的に口当たりのよい調製物を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤および防腐剤からなる群から選択される１つ以上の作用物質を含有する。

【0033】

錠剤組成物については、非毒性の薬学的に許容され得る賦形剤と混合された本開示の化合物が錠剤の製造のために使用される。そのような賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；造粒剤および崩壊剤、例えば、コーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア、および潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクが挙げられるが、これらに限定されない。錠剤はコーティングされていなくてもよく、または胃腸管での崩壊および吸収を遅延させ、それによって所望の期間にわたって持続的な治療作用を提供するために公知のコーティング技術によってコーティングされていてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料が使用され得る。

【0034】

経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合される硬ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水もしくは油性媒体、例えば落花生油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合される軟ゼラチンカプセルとしても提供され得る。

【0035】

水性懸濁液の場合、本開示の化合物は、安定な懸濁液を維持するのに適した賦形剤と混合される。このような賦形剤の例としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴムが挙げられるが、これらに限定されない。

【0036】

経口懸濁液は、天然ホスファチド、例えばレシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えばポリオキシエチレンステアラート、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレアート、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレアートなどの分散剤または湿潤剤も含有することができる。水性懸濁液は、１つ以上の防腐剤、例えば、ｐ－ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｐ－ヒドロキシ安息香酸ｎ－プロピル、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味剤、および１つ以上の甘味剤、例えばスクロースまたはサッカリンも含有し得る。

【0037】

油性懸濁液は、本開示の化合物を植物油、例えば落花生油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油、または流動パラフィンなどの鉱油に懸濁することによって製剤化され得る。油性懸濁液は、増粘剤、例えば蜜蝋、硬質パラフィンまたはセチルアルコールを含有し得る。

【0038】

口当たりのよい経口調製物を提供するために、上記されているものなどの甘味剤、および香味剤が添加され得る。これらの組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤の添加によって保存され得る。

【0039】

水の添加による水性懸濁液の調製に適した分散性粉末および顆粒は、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１つ以上の防腐剤と混合された本開示の化合物を提供する。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤は、既に上述したものによって例示される。追加の賦形剤、例えば甘味剤、香味剤および着色剤も存在し得る。

【0040】

本開示の薬学的組成物は、水中油型エマルジョンの形態でもあり得る。油性相は、植物油、例えばオリーブ油もしくは落花生油、または鉱油、例えば流動パラフィン、またはこれらの混合物であり得る。適切な乳化剤は、天然に存在するガム、例えばアラビアガムまたはトラガカントガム、天然に存在するホスファチド、例えばダイズ、レシチン、ならびに脂肪酸およびヘキシトールに由来するエステルまたは部分エステル、無水物、例えばソルビタンモノオレアート、ならびに前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合反応生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートであり得る。エマルジョンは、甘味剤および香味剤も含有し得る。

【0041】

シロップおよびエリキシルは、甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースとともに製剤化され得る。そのような製剤は、粘滑剤、防腐剤、ならびに香味剤および着色剤も含有し得る。薬学的組成物は、無菌注射剤、水性懸濁液または油性懸濁液の形態であり得る。この懸濁液は、上記の適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、公知の技術に従って製剤化され得る。無菌注射用調製物はまた、非毒性の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒中の無菌注射用溶液または懸濁液、例えば１，３－ブタンジオール中の溶液であり得る。使用され得る許容され得るビヒクルおよび溶媒としては、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌固定油は、溶媒または懸濁媒体として従来から使用されている。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油が使用され得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製において使用される。

【0042】

本開示の化合物はまた、直腸投与のための坐剤の形態で投与され得る。これらの組成物は、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、したがって直腸内で融解して化合物を放出する適切な非刺激性賦形剤と化合物を混合することによって調製され得る。そのような材料は、カカオバターおよびポリエチレングリコールである。

【0043】

非経口投与のための組成物は、無菌媒体中で投与される。使用されるビヒクルおよび製剤中の化合物の濃度に応じて、非経口製剤は、溶解された化合物を含有する懸濁液または溶液のいずれかであり得る。局所麻酔薬、防腐剤および緩衝剤などの補助剤を非経口組成物に添加することもできる。

【0044】

グリプチンの経口送達、全身曝露
本開示はまた、様々な態様において、肺障害に罹患している対象を処置する方法であって、グリプチンの経口投与のために製剤化された本明細書に開示される化合物（すなわち、グリプチン）を前記対象に投与することを含む方法を提供する。例示的な態様において、化合物は、リナグリプチンおよびサキサグリプチンから選択される。様々な態様において、化合物は、１つ以上の賦形剤とともに、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、硬または軟カプセル、シロップまたはエリキシル剤を含む任意の経口剤形に製剤化される。

【0045】

本開示の利点は、糖尿病の治療的処置において使用するための、リナグリプチンおよびサキサグリプチンなどの、ＦＤＡによって承認されたグリプチン化合物の確立された安全性および有効性にある。しかしながら、以下の実施例が例示するように、ラベルに表示された用途のための、経口投与による承認されたグリプチン化合物の推奨用量は、急性肺傷害（ＡＬＩ）および急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）などの本明細書に開示される肺疾患を処置するために、肺において有効な曝露を提供しない。したがって、様々な態様において、本発明の方法において使用するためのグリプチン化合物の経口用量は、糖尿病に罹患している対象における糖尿病を処置するのに有効であろう用量の約５倍～約１５倍の範囲である。抗糖尿病経口用量の例は、抗糖尿病適応症について米国ＦＤＡによって承認されたグリプチン化合物の用量である。様々な態様において、経口用量は、有効な抗糖尿病用量、例えば、承認された経口用量の約２倍～約１２倍、約３倍～約１０倍、約５倍～約１０倍、約５倍～約７倍または約８倍～約１２倍である。例示的な用量には、承認された経口用量の約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、および約１０倍が含まれる。したがって、例示的な態様において、サキサグリプチンの１日経口用量は約５００ｍｇであり、承認された経口用量は２．５～５ｍｇ（１日１回）である。別の例示的な態様において、リナグリプチンの１日経口用量は約５０～約１００ｍｇであるが、承認された経口用量は５ｍｇ（１日１回）である。

【0046】

グリプチン塩、吸入可能な製剤の肺送達
いくつかの態様において、本開示は、肺送達のための本明細書に開示されるグリプチン化合物の塩またはプロドラッグを提供する。化合物は、一般に、塩形成に適した、２つおよび３つを含む少なくとも１つのイオン化可能な基、例えばアミンを有する。しかしながら、塩は肺組織と適合性でなければならず、肺組織に対して非毒性でなければならないので、任意の薬学的に許容され得る塩が肺送達に適しているとは限らない。これは、グリプチン塩が全身曝露ではなく局所曝露のために投与される態様において特に重要である。したがって、様々な態様において、本開示は、本明細書に開示される化合物のいずれかの酸付加塩を提供する。例示的な酸としては、塩酸、硫酸、臭化水素酸、メタンスルホン酸、酒石酸、パルミチン酸、酢酸、リン酸、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、エタンスルホン酸およびフマル酸が挙げられる。

【0047】

塩は、本明細書に開示されるような肺疾患または肺症状の処置など、対象への肺送達に適している。例えば、複数の態様において、局所肺症状としては、急性肺傷害（ＡＬＩ）および急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）によって例示される、一般に急性呼吸不全を共通して有する一連の臨床的症候群が挙げられる。さらなる態様において、局所肺症状は、間質性肺疾患（ＩＬＤ）または特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。

【0048】

確立された原理によれば、化合物の塩の形成は、化合物の水溶性を増加させ、肺送達に適した組成物の製剤化をより容易にする。肺薬物送達技術は、噴射剤、賦形剤および送達デバイスの選択を含めて、当業者に周知である。例えば、本明細書に開示される化合物の塩の低侵襲性肺送達は、いくつかの態様においては、当技術分野で公知の噴射剤、界面活性剤、非水性吸入器、乾燥粉末吸入器、定量吸入器、およびジェットまたは超音波噴霧器の任意の組み合わせを使用して達成される。様々な態様において、肺送達エアロゾル用の吸入可能な組成物および化合物の噴霧化製剤。

【0049】

様々な態様によれば、肺内への塩の効果的な堆積は、一般に、直径５μｍ未満の液滴を必要とする。肺への流体の送達は、装置からの排出を可能にするのに十分高いが、舌または咽喉の後部への堆積を防止するのに十分に低い運動量を付与するために液滴送達装置を一般に必要とする。直径５μｍ未満の液滴は、液滴を運ぶ空気中への同伴によってほぼ完全に輸送され、液滴自体の運動量によっては輸送されない。

【0050】

ＩＰＦ、ＩＬＤ、ＡＬＩおよびＡＲＤＳなどの局所肺症状の治療的処置の場合、本明細書に開示されるグリプチン塩の用量は、基礎グリプチンの承認された治療のための、例えば、ＩＩ型糖尿病の処置における、対応する基礎グリプチンの経口送達製剤における用量よりもかなり高い。様々な態様において、本明細書に開示されるグリプチンは、本明細書に開示される肺疾患の処置などのために、肺送達を介して投与され、これは、総用量を減少させ、グリプチンの治療域を改善するという利点を有する。例示的な態様では、シタグリプチン、サキサグリプチン、ビルダグリプチンおよびリナグリプチンのマウス肺薬物動態パラメータは、同様の肺薬物曝露を達成するための肺送達のために、わずか１／５の用量が必要とされることを示した（図６参照）。さらなる態様において、投与頻度を１日１回から１日２回または３回に増加させることによって、総１日用量がさらに低減される。したがって、様々な態様において、本発明の方法における肺送達のためのグリプチン塩の用量は、承認された用途のための経口投与によって与えられる基礎グリプチンの用量の約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５または約５倍である。さらなる態様では、用量は、承認された用途のための経口投与によって与えられる基礎グリプチンの用量の約０．１～約５、０．１～約４、約０．３～約３、約０．５～約２．５または約０．９～約２倍である。例示的な態様において、吸入可能な製剤中のグリプチン塩の用量は、承認された経口剤形中の対応する基礎グリプチンの用量の約３倍である。

【0051】

ＡＥＣ２増殖を選択的に促進する化合物を同定するためのスクリーニング
本明細書に開示されるように、ＡＥＣ２を増殖させることができる小分子を同定するために、本発明者らは、まず、商業的供給源からの初代ヒト小気道上皮細胞（ＳＡＥＣ）を用いて培養系を確立した。ＳＡＥＣは、サーファクタントタンパク質Ｃ（ＳＦＰＴＣ）を含む多数のＡＥＣ２マーカーについて陽性に染色し（＞９０％）、中性脂質を貯蔵し（サーファクタント貯蔵体の存在を示す）、それらが主にＡＥＣ２であることを示す。マイトジェンを含まない条件でウェルあたりのＫｉ６７陽性ＡＥＣ２の総数を測定するハイコンテンツな画像化アッセイを最適化することによって、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）が生物学的に関連する陽性増殖対照として使用された場合に、高度に再現性のあるスクリーニングアッセイ（Ｚ’＞０．５５）が得られた（図１Ａ）。

【0052】

次いで、本発明者らは、Ｓ期ＡＥＣ２を増加させる小分子について、包括的なリパーパシングライブラリーであるＲｅＦＲＡＭＥをスクリーニングした。^６形質転換成長因子ベータ受容体（ＴＧＦＢＲ）阻害剤が、ＡＥＣ２増殖分子の以前に報告されたクラスとして同定され、これにより、アッセイおよび細胞供給源に対する信頼性が確立された。生物学的機構が報告されていない上位ヒットの中には、ＮＶＰ－７２８（治験中のＤＰＰ４阻害剤；ＥＣ_５０約５００ｎＭ；図１Ｂ）およびシポニモド（ＢＡＦ３１２；ＦＤＡによって承認されたＳ１Ｐ１Ｒ調節因子；ＥＣ_５０約１００ｎＭ、図１Ｃ）があった。これらの分子がヒト肺線維芽細胞の一次調製物に対して試験された場合、これらの分子は、これらの分子がＡＥＣ２増殖を促進する濃度で、これらの細胞の総数、Ｋｉ６７陽性百分率、または筋線維芽細胞分化状態を増加させなかった（図１Ｂおよび１Ｃ）。したがって、これらの分子は、筋線維芽細胞の活性化または増殖に影響を及ぼすことなく特異的なＡＥＣ２増殖を促進し、これはほとんどの疾患状況において望ましくない。

【0053】

ＮＶＰ－７２８およびシポニモドがそれらの報告された作用機序を介してＡＥＣ２増殖を促進することを確認して、本発明者らは、これらのシグナル伝達経路のさらなる薬理学的操作および遺伝子操作を用いてさらなる実験を行った。本発明者らは、２つのさらなるＦＤＡ承認ＤＰＰ４阻害剤であるサキサグリプチンおよびシタグリプチンが、ＮＶＰ－７２８と同じ規模までＡＥＣ２増殖を促進すること（図２Ａ）、ならびに細胞ＥＣ_５０値が、組換え酵素の阻害について報告されたＩＣ_５０値の後をたどることを見出した（０．６ｎＭ、サキサグリプチン；１８ｎＭ、シタグリプチン；１４ｎＭ、ＮＶＰ－７２８）。同様に、本発明者らは、ＤＰＰ４レベルのｓｉＲＮＡによって媒介されるノックダウンが総ＡＥＣ２細胞数およびＫｉ６７陽性ＡＥＣ２細胞数の増加を促進することを見出した（図２Ｂ）。

【0054】

ジペプチジルプロテアーゼであるＤＰＰ４は、タンパク質性シグナル伝達分子を分解して、その基質のシグナル伝達応答の持続時間および規模を制御する。ＡＥＣ２中で最も高度に発現されるＤＰＰ４基質の中にはＩＧＦ１があり、ＩＧＦ１はこの細胞型に対する自己分泌増殖因子として以前に報告されている。本発明者らは、ＤＰＰ４阻害剤によるＡＥＣ２の処理が、おそらくはシグナル伝達分子の分解を阻害することを介して、ＩＧＦ１の増殖効果に対して細胞を増感させることを見出した（図２Ｃ）。これに関連して、本発明者らは、ＡＥＣ２が外因性ＩＧＦ１で刺激された場合、この増殖効果が、漸増量の組換えＤＰＰ４によって阻害されることを見出した（図２Ｄ）。これらの結果は共に、ＤＰＰ４阻害が、ＡＥＣ２細胞拡大増殖を促進するための作動機構であることを実証している。

【0055】

シポニモドがＳ１ＰＲ１を標的とする機構を介してＡＥＣ２拡大増殖を促進することを確認して、本発明者らは、異なる受容体サブタイプに対して様々な親和性を有するＳ１ＰＲ調節因子のパネルを評価した（図３）。汎Ｓ１ＰＲ調節因子（例えば、ＦＴＹ－７２０）、Ｓ１ＰＲ１／Ｓ１ＰＲ５選択的（例えば、オザニモド）およびＳ１ＰＲ１選択的（例えば、ＳＥＷ－２８７１）調節因子は、ＡＥＣ２増殖アッセイにおいて活性であった（図３）。Ｓ１ＰＲ１とは対照的に、Ｓ１ＰＲ５は、ＡＥＣ２では発現されず（図示せず）、Ｓ１ＰＲ１活性を調節することが、この文脈において、ＡＥＣ２成長を促進するための共通の薬理学的に適切な標的であることを示している。文献は、成体生物においてＡＥＣ２および肺機能を保護する上でのＳ１ＰＲ１アゴニズムの役割も確認する。Ｓｔｏｎｅら^９およびＤｉａｂら^１０の研究は、虚血再灌流モデルまたは気腫モデルの状況において成体マウスがチャレンジされた場合、Ｓ１ＰＲ１リガンドであるＦＴＹ７２０およびＳＥＷ２８７１が肺胞上皮におけるアポトーシスおよび炎症性サイトカイン放出を阻害したことを示しており、Ｓ１Ｐ受容体アゴニズムが様々な疾患状態に介入するためのＡＥＣ２関連機構であり得ることを示している。

【0056】

例示的な態様では、リポ多糖（ＬＰＳ）肺傷害モデルにおける２つの広く使用されている薬物であるシタグリプチンおよびサキサグリプチンは、これらの薬物の増殖活性が肺損傷および線維症の小型げっ歯類モデルにおける保護的有効性につながることを実証した。ＬＰＳが肺胞の完全性の喪失およびＡＥＣ１／２細胞死を誘導するので、このモデルは、下気道への損傷をシミュレートするためにしばしば使用される。シタグリプチンおよびサキサグリプチン処置の両方の経口投与は、組織学的スコアリングならびにＢＡＬＦタンパク質および細胞内含有量（透過性および炎症の尺度）を含む全ての測定された測定指標において劇的な改善をもたらした。重要なことに、これらのモデルにおいて有効性を達成するためには、糖尿病の齧歯類モデルに対して使用される用量（経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）モデルにおける有効性は、シタグリプチンについては３～３０ｍｇ／ｋｇ、サキサグリプチンについては０．５～５ｍｇ／ｋｇで観察される）よりも有意に大きい用量が必要とされた（最小有効用量＝サキサグリプチンについて５０ｍｇ／ｋｇ；１００ｍｇ／ｋｇシタグリプチン）。

【0057】

ＬＰＳモデルにおいて、グリプチン誘発性のＡＥＣ２拡大増殖が薬物有効性の原因となる程度をさらに決定した。経時的研究により、高用量のシタグリプチンは、初期の時点でサイトカインまたは気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）レベルに影響を及ぼさないことが確立された。より後の時点においてのみ、シタグリプチンはサイトカインおよびＢＡＬＦタンパク質レベルの変化を促進する。さらに、シタグリプチンは、増殖性ＡＥＣ２（ＫＩ－６７ＳＦＰＴＣ二重陽性細胞）の実質的な増加を促進するが、肺内の細胞の総数（全ての核）またはＫｉ－６７陽性細胞（主に免疫細胞）を有意に増加させない。まとめると、これらのデータは、ＤＰＰ４阻害が増殖性再生を介して肺修復を促進することを実証している（図４Ａ～４Ｄ）。

【0058】

別の例示的な態様では、マウスにおけるブレオマイシン誘発線維症に対するその効果について、シタグリプチンを評価した。これに関連して、マウスへの気管内ブレオマイシン投与は、ＡＥＣ２集団に死を誘導し、これはヒト疾患で観察されるＡＥＣ２の喪失を模倣する可能性が高い特徴である^４。高用量のシタグリプチン（１００ｍｇ／ｋｇを１日１回または１日２回）は、体重減少、生存、ＢＡＬＦタンパク質含有量、ヒドロキシプロリン含有量およびパーセント線維化領域組織学的スコアリングを含む疾患進行の複数の測定指標に堅固な保護をもたらした（図５Ａ～５Ｅ）。重要なことに、本発明者らは、これらの効果が承認された薬物であるピルフェニドンと同等か、またはそれを超えることを見出した。ピルフェニドンに加えて、シタグリプチンと承認薬ニンテダニブ（Ｏｆｅｖ）の同時処置は、ブレオマイシンモデルにおいて相乗的保護をもたらした（Ｂｌｉｓｓ独立計算によって決定された薬理学的相乗作用）。ニンテダニブは筋線維芽細胞活性を阻害することが予想されるのみであるので、疾患進行に対するこの組み合わせの効果は、増殖を通じて修復を誘導することが疾患を処置するための相補的な機構であることを示唆する。このアプローチは肺胞の修復を促進するのみならず、さらなる疾患進行を減少させるので、この組み合わせ処置戦略は、増大した患者の利益をもたらす。インビボ有効性のためには、肺における標的カバレッジのために高用量が必要とされる（以下に記載されるＰＫによって実証される）。

【0059】

さらなる例示的な態様では、本明細書の実施例に詳述されているように、デュトグリプチンのプロドラッグとしてのデュトグリプチンボロナート（１５）は、吸入を通じて長期の肺保持を提供した。デュトグリプチン（１）は、第２／３相臨床試験で試験されたボロン酸ベースのＤＰＰ４阻害剤である。２００ｍｇおよび４００ｍｇの１日１回経口用量は、プラセボと比較してＨｂＡ１ｃを統計学的に低下させた。別のマウスＩＴ薬物動態研究では、ボロナート（１５）が血漿および肺の両方で活性な薬物デュトグリプチンに変換されることが示された。肺における活性薬物曝露は、投与されたデュトグリプチンそのものからのものよりもはるかに高く、はるかに長く持続した（表８Ａ／Ｂ参照）。ブレオマイシン誘発性肺線維症モデルでは、ボロナート（１５）は、４日に１回、ＩＴ投与された場合、ビヒクルと比較してＢＡＬＦタンパク質レベルを低下させた（図８参照）。

【0060】

前セクション中の番号が付された参考文献は、以下のとおりである。

【0061】

［１］Ｈｏｇａｎ，Ｂ．Ｌ．，Ｂａｒｋａｕｓｋａｓ，Ｃ．Ｅ．，Ｃｈａｐｍａｎ，Ｈ．Ａ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ａ．，Ｊａｉｎ，Ｒ．，Ｈｓｉａ，Ｃ．Ｃ．，Ｎｉｋｌａｓｏｎ，Ｌ．，Ｃａｌｌｅ，Ｅ．，Ｌｅ，Ａ．，Ｒａｎｄｅｌｌ，Ｓ．Ｈ．，Ｒｏｃｋ，Ｊ．，Ｓｎｉｔｏｗ，Ｍ．，Ｋｒｕｍｍｅｌ，Ｍ．，Ｓｔｒｉｐｐ，Ｂ．Ｒ．，Ｖｕ，Ｔ．，Ｗｈｉｔｅ，Ｅ．Ｓ．，Ｗｈｉｔｓｅｔｔ，Ｊ．Ａ．，ａｎｄＭｏｒｒｉｓｅｙ，Ｅ．Ｅ．（２０１４）Ｒｅｐａｉｒａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｓｔｅｍ：ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ，ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ，ａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｌｕｎｇｓｔｅｍｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎ，ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ１５，１２３－１３８。

【0062】

［２］Ｂａｒｋａｕｓｋａｓ，Ｃ．Ｅ．，Ｃｒｏｎｃｅ，Ｍ．Ｊ．，Ｒａｃｋｌｅｙ，Ｃ．Ｒ．，Ｂｏｗｉｅ，Ｅ．Ｊ．，Ｋｅｅｎｅ，Ｄ．Ｒ．，Ｓｔｒｉｐｐ，Ｂ．Ｒ．，Ｒａｎｄｅｌｌ，Ｓ．Ｈ．，Ｎｏｂｌｅ，Ｐ．Ｗ．，ａｎｄＨｏｇａｎ，Ｂ．Ｌ．（２０１３）Ｔｙｐｅ２ａｌｖｅｏｌａｒｃｅｌｌｓａｒｅｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎａｄｕｌｔｌｕｎｇ，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ１２３，３０２５－３０３６。

【0063】

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【0064】

［４］Ｌｉａｎｇ，Ｊ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｘｉｅ，Ｔ．，Ｌｉｕ，Ｎ．，Ｃｈｅｎ，Ｈ．，Ｇｅｎｇ，Ｙ．，Ｋｕｒｋｃｉｙａｎ，Ａ．，Ｍｅｎａ，Ｊ．Ｍ．，Ｓｔｒｉｐｐ，Ｂ．Ｒ．，Ｊｉａｎｇ，Ｄ．，ａｎｄＮｏｂｌｅ，Ｐ．Ｗ．（２０１６）ＨｙａｌｕｒｏｎａｎａｎｄＴＬＲ４ｐｒｏｍｏｔｅｓｕｒｆａｃｔａｎｔ－ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｃ－ｐｏｓｉｔｉｖｅａｌｖｅｏｌａｒｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｒｅｎｅｗａｌａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｓｅｖｅｒｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｉｃｅ，ＮａｔＭｅｄ２２，１２８５－１２９３。

【0065】

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【0066】

［６］Ｊａｎｅｓ，Ｊ．，Ｙｏｕｎｇ，Ｍ．Ｅ．，Ｃｈｅｎ，Ｅ．，Ｒｏｇｅｒｓ，Ｎ．Ｈ．，Ｂｕｒｇｓｔａｌｌｅｒ－Ｍｕｅｈｌｂａｃｈｅｒ，Ｓ．，Ｈｕｇｈｅｓ，Ｌ．Ｄ．，Ｌｏｖｅ，Ｍ．Ｓ．，Ｈｕｌｌ，Ｍ．Ｖ．，Ｋｕｈｅｎ，Ｋ．Ｌ．，Ｗｏｏｄｓ，Ａ．Ｋ．，Ｊｏｓｅｐｈ，Ｓ．Ｂ．，Ｐｅｔｒａｓｓｉ，Ｈ．Ｍ．，ＭｃＮａｍａｒａ，Ｃ．Ｗ．，Ｔｒｅｍｂｌａｙ，Ｍ．Ｓ．，Ｓｕ，Ａ．Ｉ．，Ｓｃｈｕｌｔｚ，Ｐ．Ｇ．，ａｎｄＣｈａｔｔｅｒｊｅｅ，Ａ．Ｋ．（２０１８）ＴｈｅＲｅＦＲＡＭＥｌｉｂｒａｒｙａｓａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｄｒｕｇｒｅｐｕｒｐｏｓｉｎｇｌｉｂｒａｒｙａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｏｓｉｓ，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１１５，１０７５０－１０７５５。

【0067】

［７］Ｘｕ，Ｊ．，Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｈｅ，Ｍ．，Ｈａｎ，Ｈ．，Ｘｉｅ，Ｗ．，Ｗａｎｇ，Ｈ．，ａｎｄＫｏｎｇ，Ｈ．（２０１８）ＤｉｐｅｐｔｉｄｙｌｐｅｐｔｉｄａｓｅＩＶ（ＤＰＰ－４）ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｌｌｅｖｉａｔｅｓｐｕｌｍｏｎａｒｙａｒｔｅｒｉａｌｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｐｕｌｍｏｎａｒｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ＬａｂＩｎｖｅｓｔ９８，１３３３－１３４６．
［８］Ｋａｗａｓａｋｉ，Ｔ．，Ｃｈｅｎ，Ｗ．，Ｈｔｗｅ，Ｙ．Ｍ．，Ｔａｔｓｕｍｉ，Ｋ．，ａｎｄＤｕｄｅｋ，Ｓ．Ｍ．（２０１８）ＤＰＰ４ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｂｙｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎａｔｔｅｎｕａｔｅｓＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｉｎｍｉｃｅ，ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＬｕｎｇＣｅｌｌＭｏｌＰｈｙｓｉｏｌ。

【0068】

［９］Ｓｔｏｎｅ，Ｍ．Ｌ．，Ｓｈａｒｍａ，Ａ．Ｋ．，Ｚｈａｏ，Ｙ．，Ｃｈａｒｌｅｓ，Ｅ．Ｊ．，Ｈｕｅｒｔｅｒ，Ｍ．Ｅ．，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｗ．Ｆ．，Ｋｒｏｎ，Ｉ．Ｌ．，Ｌｙｎｃｈ，Ｋ．Ｒ．，ａｎｄＬａｕｂａｃｈ，Ｖ．Ｅ．（２０１５）Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ－１－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒ１ａｇｏｎｉｓｍａｔｔｅｎｕａｔｅｓｌｕｎｇｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ，ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＬｕｎｇＣｅｌｌＭｏｌＰｈｙｓｉｏｌ３０８，Ｌ１２４５－１２５２。

【0069】

［１０］Ｄｉａｂ，Ｋ．Ｊ．，Ａｄａｍｏｗｉｃｚ，Ｊ．Ｊ．，Ｋａｍｏｃｋｉ，Ｋ．，Ｒｕｓｈ，Ｎ．Ｉ．，Ｇａｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．，Ｇｕ，Ｙ．，Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ，Ｋ．Ｓ．，Ｓｋｏｂｅｌｅｖａ，Ａ．，Ｒａｊａｓｈｅｋｈａｒ，Ｇ．，Ｈｕｂｂａｒｄ，Ｗ．Ｃ．，Ｂｅｒｄｙｓｈｅｖ，Ｅ．Ｖ．，ａｎｄＰｅｔｒａｃｈｅ，Ｉ．（２０１０）Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ１－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｉｇｎａｌｉｎｇａｓａｎａｌｖｅｏｌａｒｃｅｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｓｔｒａｔｅｇｙｉｎｅｍｐｈｙｓｅｍａ，ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ１８１，３４４－３５２。

【0070】

本開示のさらなる態様は、以下の非限定的な実施例に記載されている。

【0071】

［実施例］
［実施例１］
ＤＰＰ４活性およびＡＥＣ２細胞増殖アッセイ
ＤＰＰ４活性アッセイ。製造者の説明書に従ってＤＰＰ４ＡｃｔｉｖｉｔｙＡｓｓａｙＫｉｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＭＡＫ０８８）を使用してヒトＤＰＰ４活性アッセイデータを得た。簡潔に記載すると、ＤＰＰ４アッセイ緩衝液中溶解された１０μＬの希釈された化合物を移す前に、低容量３８４ウェルプレート中に、ウェルあたり１０μＬのＤＰＰ４ＡｓｓａｙＢｕｆｆｅｒを移した。酵素によって切断されると蛍光性になる蛍光基質を含有する５μＬのＭａｓｔｅｒＲｅａｃｔｉｏｎＭｉｘ。ＥｎｖｉｓｉｏｎＭｕｌｔｉｍｏｄｅＰｌａｔｅＲｅａｄｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、２０分間にわたって、１分の時間間隔で蛍光強度測定を記録した。

【0072】

ＡＥＣ２増殖アッセイ。ＥＧＦ、レチノイン酸を含まず、５％ＢＰＥを含む５０μＬのＳｍａｌｌＡｉｒｗａｙＥｐｉｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌＧｒｏｗｔｈＭｅｄｉｕｍ（Ｌｏｎｚａ）中、１０ｕｇ／ｍＬのラミニン（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で被覆された黒色３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に、ウェルあたり１，５００細胞の密度で初代ヒトＡＥＣ２を蒔いた。次いで、ピンツールヘッド（Ｖ＆ＰＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が装着されたＢｉｏｍｅｋＦＸ機器（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ）を使用して、ＤＭＳＯ中に溶解された１００ｎＬの化合物を送達した。３７℃で９６時間成長させた後、４％パラホルムアルデヒドで細胞を固定し、ＰＢＳで３回洗浄し、次いで、４℃で一晩、ＫＩ－６７陽性について免疫染色した（１：１０００、Ａｂｃａｍ、ａｂ１５５８０）。さらに３回洗浄し、二次ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒコンジュゲート二次抗体と室温で１時間インキュベートし、１０μｇ／ｍＬのＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に曝露した後、プレートを密封し、次いでＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔＣＸ５ＨＣＳ機器（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で定量的なハイコンテンツな画像化を行った。

【0073】

アッセイに供された化合物および対応する結果を以下の表４に示す。

【表4】

［実施例２］
承認されたおよび治験中のＤＰＰ４阻害剤のインビトロ性質決定
ＲｅＦＲＡＭＥのハイコンテンツな画像化スクリーニングから同定された、「グリプチン」と呼ばれる薬物クラスからのジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）の阻害剤は、インビトロで肺胞２型細胞を有効に拡大増殖させることが見出された。この現象をこの化合物クラスにわたってよりよく性質決定するために、本発明者らは、表５に示されるように、承認されたグリプチンおよび後期段階の治験中のグリプチンの市販のバージョンおよび再合成されたバージョンを取得した。全ての物質が、文献に報告されている効力と同様の効力でＤＰＰ４酵素活性を阻害することが見出され、使用された物質の信頼性が高いことが示唆された。テネリグリプチンを除き、評価された全てのグリプチンは、細胞培養において、０．１～４μＭの効力で、ＡＥＣ２に増殖表現型を誘導することが見出された。グリプチンは肺線維芽細胞を増殖させない。自己分泌成長因子の分解の阻害を伴う機構が、観察された増殖表現型の原因であることが実証された。

【表5】

［実施例３］
肺傷害および線維症のマウスモデルにおけるグリプチンのインビボ有効性活性。

【0074】

急性肺傷害（ＡＬＩ）モデルの実験方法
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｉ１１１：Ｂ４（Ｓｉｇｍａ）由来のＬＰＳを使用して、マウスに急性肺傷害を誘導した。９～１１週齢の体重を合わせた（１９グラム～２２グラム）雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを選択して、ＡＬＩモデルにおいて使用した。

【0075】

経口送達されるＤＰＰ４阻害剤については、化合物をＰＢＳに溶解して透明な溶液を得た。ＰＫプロフィールに基づいて選択された１日１回または２回の経口胃管栄養法によって、ビヒクル対照またはＤＰＰ４阻害剤を１０ｍｌ／ｋｇで投与した。気管内送達されるＤＰＰ４阻害剤については、化合物をＰＢＳに溶解して透明な溶液を得た。２２ｇの柔軟なカテーテルを通して、ビヒクル対照またはＤＰＰ４阻害剤を２ｍｌ／ｋｇで１日おきに投与した。

【0076】

ＬＰＳ（経口送達されるＤＰＰ４阻害剤を試験する場合には１．５ｍｇ／ｋｇおよび気管内送達されたＤＰＰ４阻害剤を試験する場合には１．２ｍｇ／ｋｇ）またはシャム群においてはＰＢＳを０日目にマウスの肺に気管内注射した。ＬＰＳ注射の１日前（－１日目）から開始して、ＤＰＰ４阻害剤またはビヒクル対照をマウスに与えた。

【0077】

ＬＰＳ注射後３．５日目に、全ての動物を屠殺した。標準的な方法を使用して、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を回収した。１ｍｌの４％ホルマリンを使用して肺を膨張させ、その後、４％ホルマリンで２４時間固定し、組織学的過程まで７０％ＥｔＯＨ中で保存した。

【0078】

読み取りのために、ＢＣＡアッセイを使用してＢＡＬＦ中の総タンパク質含有量を定量し、Ｈ＆Ｅ染色を使用して肺の炎症および損傷を評価した。

【0079】

ブレオマイシンモデルの実験方法
ブレオマイシン（Ｈｏｓｐｉｒａ）を使用して、マウスに肺線維症を誘導した。１０～１２週齢の体重を合わせた（２４グラム～２８グラム）雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを選択して、ブレオマイシンモデルにおいて使用した。

【0080】

【0081】

０．５Ｕ／ｋｇブレオマイシンまたはシャム群においてはＰＢＳを０日目にマウス肺中に気管内注射した。ブレオマイシン注射の１日前（－１日目）から開始して、ＤＰＰ４阻害剤またはビヒクル対照をマウスに与えた。

【0082】

ブレオマイシン注射後２０日目に、全ての動物を屠殺した。標準的な方法を使用して、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を回収した。１ｍｌの４％ホルマリンを使用して肺を膨張させ、その後、４％ホルマリンで２４時間固定し、組織学的過程まで７０％ＥｔＯＨ中で保存した。

【0083】

読み取りのために、体重を毎日測定し、ＢＣＡアッセイを使用して、ＢＡＬＦ中の総タンパク質含有量を定量し、マッソントリクローム染色を使用して肺線維症を評価した。

【0084】

高経口用量の３つの承認されたグリプチン（シタグリプチン、サキサグリプチンおよびリナグリプチン）は、ＬＰＳによって誘導された急性肺傷害（体重保持、組織学的スコアリング、ＢＡＬＦタンパク質、炎症解消）のみならず、ブレオマイシンによって誘導された肺線維症（体重保持、組織学的スコアリング、コラーゲン含有量、パーセント線維化面積）のマウスモデルにおいて有効であることが見出された。

【0085】

３つの例示的なグリプチンは、経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）モデルにおける有効性のための有効用量を何倍も上回る用量を必要とした。用量予測は、これらの３つの例示的なグリプチンが患者において有効性を達成するためにヒト用量の約１０倍を必要とする可能性が高いことを示しており（表６）、マウス薬物動態データによって支持される結果である（実施例４参照）。

【表6】

［実施例４］
承認されたグリプチンの安全性および薬物動態プロファイリング。

【0086】

Ａ．安全性。グリプチンは、一般に安全で忍容性の高い医薬品である。公に入手可能な情報源からの関連する安全性情報が表７にまとめられている。

【表7】

Ｂ．薬物動態プロファイリング。本実施例の目的は、グリプチンの治療的肺曝露のために必要とされる驚くほど高い経口用量を実証することである。このため、米国ＦＤＡによって現在承認されている５つのグリプチンのうちの４つを、それぞれ経口的に（１００ｍｇ／ｋｇ）または気管内（ＩＴ）もしくは中咽頭（ＯＰ）経路（２０ｍｇ／ｋｇ）を通じてマウスに投与した。投与後、試験された各グリプチンの肺曝露は初期の時点で観察されたが、急速に低下した（図６）。ＩＴまたはＯＰの投与では、同様の肺曝露を達成するために経口用量の１／５のみが必要とされた。しかしながら、ＡＥＣ２増殖についてのＥＣ_５０を上回るトラフ値を達成するためには、高用量のグリプチンまたはより頻繁な投与レジメンが必要とされる。

【0087】

リナグリプチンは、評価された時間枠にわたってかなりより高い肺曝露を示した。その報告された安全性プロファイルとは対照的に、リナグリプチンはいくつかの望ましくない効果を示し、これは注意を示唆し、またはより高い用量でのその直接の経口投与を不可能にし得る。リナグリプチンは、カチオン性両親媒性物質であるので、優れた組織暴露および大量の分布を示す。この特性と一致して、リナグリプチンは、アッセイにおいて使用された陽性対照と同様に、低濃度で有意なリン脂質症を誘導することが見出された（図７Ａ）。さらに、リナグリプチンは肺疾患の動物モデルにおいて有効であるが、リナグリプチンの反復投与は最小の治療指数で「Ｖ字形」曲線を示すことが見出された。リナグリプチンは、１ｍｇ／ｋｇで有効であることが見出されているが、２ｍｇ／ｋｇ以上の用量で拮抗活性を示す（図７Ｂ）。これらのデータは、ＡＥＣ２にリン脂質症を誘導する上では、リナグリプチンは概ね安全であり得るのに対して、このグリプチンは、既にリスクのあるＩＰＦ集団にとっては潜在的な懸念となり得ることを示している。

【0088】

［実施例５］
吸入を通じて投与された場合に長期間にわたって肺において活性ボロン酸デュトグリプチンを放出するためのプロドラッグアプローチとしての、化合物（１５）などのデュトグリプチンボロナートの予期せぬ発見。

【0089】

他のグリプチンと同様、ＰＢＳ溶液とともにマウスにＩＴ投与されたデュトグリプチン（１）は、肺で急速に除去された（＜２４時間、表８Ａ）。その合成中間体であるピナコールボロナート（１５）がＩＴ経路によって投与された場合、デュトグリプチンボロナート（１５）の血漿レベルおよび肺レベルは極めて低く、０．２５時間後には存在しなかった（データは示さず）。親薬物のデュトグリプチンは、血漿および肺において検出された。肺曝露は、デュトグリプチン自体のＩＴ投与で観察されたよりも有意に高かった（表８Ｂ）。薬物は、４８時間にわたって肺に保持された。データは、ボロナートプロドラッグ１５の予想外の肺保持能力を明確に示した。

【表8】