特表 2024-503278 修飾ＰＢＭＣを用いたがんの治療方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-25

(54)【発明の名称】修飾ＰＢＭＣを用いたがんの治療方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/15 20150101AFI20240118BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240118BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240118BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240118BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20240118BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20240118BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240118BHJP

【ＦＩ】

A61K35/15

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K39/395 T

A61K39/395 N

A61P35/04

A61P31/18

A61K35/17

A61K39/395 D ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023539810

(86)(22)【出願日】2021-12-28

(85)【翻訳文提出日】2023-08-24

(86)【国際出願番号】 US2021065362

(87)【国際公開番号】W WO2022147026

(87)【国際公開日】2022-07-07

(31)【優先権主張番号】63/131,504

(32)【優先日】2020-12-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/190,194

(32)【優先日】2021-05-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/249,739

(32)【優先日】2021-09-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/278,788

(32)【優先日】2021-11-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518071763

【氏名又は名称】スクイーズ バイオテクノロジーズ カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ローゼン， オリバー

(72)【発明者】

【氏名】ジー， ルイルー

【テーマコード（参考）】

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD61

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG04

4C085GG08

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB34

4C087BB63

4C087MA02

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZC75

(57)【要約】

本出願は、ＨＰＶ関連がんを治療するための修飾ＰＢＭＣを提供する。修飾ＰＢＭＣは、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が細胞内に送達される入力ＰＢＭＣに由来する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＣＴＬＡ４拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１作動薬などのチェックポイント阻害剤との組み合わせで投与される。一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを治療する方法を提供し、当該方法は、有効量の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む組成物を個体に投与することであって、ＰＢＭＣが細胞内送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む投与することと、ＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬の有効量を個体に投与することと、を含む。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを個体において治療する方法であって、
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む組成物の有効量を前記個体に投与することであって、前記ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む、投与することと、
有効量のＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬を前記個体に投与することと、を含む、方法。

【請求項2】

前記ＣＴＬＡ４の拮抗薬は、ＣＴＬＡ４に結合する抗体である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬は、ＰＤ－１に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体が、前記個体に投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、前記個体に投与され、およびＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、前記個体に投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブである、請求項２～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブである、請求項３、４および６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ペンブロリズマブである、請求項３、４および６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブである、請求項３、４および６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

個体においてＨＰＶ^＋再発性腫瘍、局所進行性腫瘍、または転移性腫瘍を治療する方法であって、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む組成物の有効量を前記個体に投与することを含み、前記ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む、方法。

【請求項11】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と併せて投与される、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記チェックポイント阻害剤は、前記個体に対するＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１に結合する抗体である、請求項１１または１２に記載の方法。

【請求項14】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体と併せて投与される、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブである、請求項１３に記載の方法。

【請求項16】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブである、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブである、請求項１３、１４および１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ペンブロリズマブである、請求項１３、１４および１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ－１６抗原またはＨＰＶ－１８抗原である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２－制限ペプチドを含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドが、配列番号１～４のいずれか一つのアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、配列番号１８～２５のいずれか一つのアミノ酸配列を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ＰＢＭＣが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原および配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記個体がヒトである、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記個体がＨＬＡ－Ａ^＊０２に陽性である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記ＰＢＭＣがＨＬＡ－Ａ^＊０２に陽性である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記ＰＢＭＣが、前記個体に対して自己由来である、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記個体が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に陽性である、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記ＨＰＶ関連がんが、頭頸部がん、子宮頸がん、肛門がん、または食道がんである、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、静脈内投与される、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記ＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬が、静脈内、経口、または皮下投与される、請求項１～９および１２～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、および／または前記ＰＤ－１に結合する抗体、および／または前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、静脈内投与される、請求項２～９および１３～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの有効量が、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ～約５．０×１０^６細胞／ｋｇである、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

イピリムマブの有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇである、請求項６～９および１６～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

ニボルマブの有効量が、約３６０ｍｇである、請求項７および１７～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

アテゾリズマブの有効量が約１２００ｍｇである、請求項９、１５、１６、および１９～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記ＰＢＭＣを含む前記組成物が、三週間のサイクルの１日目に送達される、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記ＰＢＭＣを含む前記組成物が、最初の三週間サイクルの２日目にさらに投与される、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、約５．０×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの１日目に投与される、請求項３８または３９に記載の方法。

【請求項41】

約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、または約５．０×１０^６細胞／ｋｇが、前記最初の三週間サイクルの２日目に投与される、請求項３９または４０に記載の方法。

【請求項42】

前記ＣＴＬＡ‐４に結合する抗体、および／または前記ＰＤ－１に結合する抗体、および／または前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、三週間サイクル当たり一回投与される、請求項２～９および１３～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、各三週間サイクルの１日目に投与される、請求項３８～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、二つの三週間サイクル当たり一回投与される、請求項３８～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体がイピリムマブであり、前記イピリムマブは約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記ＰＤ－１に結合する抗体が、前記最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される、請求項４２～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブであり、前記ニボルマブが、約３６０ｍｇの用量で投与される、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブであり、前記イピリムマブが、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、二つの三週間サイクルの前記最初の三週間のサイクルの１日目に投与され、前記ＰＤ－１に結合する抗体が、約３６０ｍｇの用量で、前記最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される、請求項３８～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、前記最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される、請求項３８～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブであり、前記アテゾリズマブが、約１２００ｍｇの用量で投与される、請求項４８または４９に記載の方法。

【請求項51】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、前記個体に少なくとも約三か月、六か月、九か月、または一年間投与される、請求項１～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ～約５×１０^７ＰＢＭＣ、
ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、および
ｄ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミン、を含み、
製剤のｐＨが、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約１×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７ＰＢＭＣ／ｍＬ、
ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、および
ｄ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
前記製剤のｐＨが、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項54】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約２．７５×１０^７ＰＢＭＣ、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、および
ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
前記製剤のｐＨは約ｐＨ７．４である、請求項１～５２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、および
ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
前記製剤のｐＨは約ｐＨ７．４である、請求項１～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ～約５×１０^７ＰＢＭＣ、
ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
前記製剤のｐＨが、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約１×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７ＰＢＭＣ／ｍＬ、
ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
前記製剤のｐＨが、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約２．５×１０^７ＰＢＭＣ、
ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
前記製剤のｐＨは約ｐＨ７．４である、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項59】

前記ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ、
ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
前記製剤のｐＨは約ｐＨ７．４である、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項60】

前記凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、請求項５２～５９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

前記低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、請求項５２～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項62】

前記ＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球の二つ以上を含む、請求項１～６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

前記ＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含む、請求項１～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

（ａ）前記ＰＢＭＣの約２５％～約８０％がＴ細胞である、
（ｂ）前記ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％がＢ細胞である、
（ｃ）前記ＰＢＭＣの約３．０％～約２０％がＮＫ細胞である、または
（ｄ）前記ＰＢＭＣの約４．０％～約４５％が単球である、請求項１～６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む前記ＰＢＭＣが、
ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通過させることであって、前記狭窄部の直径は、前記懸濁液中の前記入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原が通過するのに十分な大きさの前記入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こして、摂動入力ＰＢＭＣを形成する、通過させることと、
ｂ）前記摂動入力ＰＢＭＣの集団を、前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、前記抗原が前記摂動入力ＰＢＭＣに入るのを許容するのに十分な時間培養することであって、それによって、前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む前記ＰＢＭＣを生成する、培養することと、を含むプロセスによって調製される、請求項１～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

前記狭窄部の前記直径が、約４．２μｍ～約６μｍまたは約４．２μｍ～約４．８μｍである、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む前記ＰＢＭＣが馴化される、請求項１～６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項68】

前記少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む前記ＰＢＭＣが、前記ＰＢＭＣの馴化のために、前記ＰＢＭＣを、約３７℃で約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間、アジュバントと培養することを含むプロセスによって馴化される、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧ作動薬、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬である、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

前記アジュバントが、ＣｐＧ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、請求項６８または６９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１２月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／１３１，５０４号、２０２１年５月１８日に出願された米国仮特許出願第６３／１９０，１９４号、２０２１年９月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／２４９，７３９号、および２０２１年１１月１２日に出願された米国仮特許出願第６３／２７８，７８８号の利益を主張するものであり、それら各々の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）（ファイル名：７５０３２２００３１４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年１２月２３日、サイズ：１３，１４４バイト）。

【0003】

本開示は、概して、一つ以上のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原を含む末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用した、ＨＰＶ関連がんを有する個人を治療するための方法、ならびにその用量およびレジメンに関する。ＨＰＶ抗原を含むこのようなＰＢＭＣの製造方法、およびそれらの組成物も開示される。

【背景技術】

【0004】

パピローマウイルスは、直径約５５ｎｍのビリオンサイズを有する小さな非エンベロープＤＮＡウイルスである。１００を超えるＨＰＶ遺伝子型が完全に特徴付けられており、より多くの数が存在すると推定されている。ＨＰＶは、子宮頸がん、ならびに一部の外陰部がん、膣がん、陰茎がん、中咽頭がん、肛門がん、および直腸がんの公知の原因である。ほとんどのＨＰＶ感染は無症状であり自然に消失するが、発がん性ＨＰＶ型の一つによる持続性感染は、前がん状態またはがんに進行し得る。他のＨＰＶ関連疾患としては、一般的ないぼ、足底いぼ、扁平いぼ、肛門性器いぼ、肛門病変、表皮発育異常症、巣状上皮性過形成、口腔パピローマ、疣贅嚢胞、喉頭部パピローマ、扁平上皮内病変（ＳＩＬ）、子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰部上皮内腫瘍（ＶＩＮ）、および膣上皮内腫瘍（ＶＡＩＮ）が挙げられる。

【0005】

公知のＨＰＶ型の多くは、良性病変を引き起こし、サブセットは発がん性である。疫学的および系統発生学的関係に基づき、ＨＰＶ型は、十五の「高リスク型」（ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２）と、三つの「推定高リスク型」（ＨＰＶ２６、５３、および６６）とに分類され、これらはともに、低悪性度および高悪性度の子宮頸部の変化およびがん、ならびに他の肛門性器がん、例えば、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、および肛門周囲がんなど、ならびに頭頸部がんとして現れることが知られている。最近では、高リスク型のＨＰＶ１６および１８と乳がんとの関連も記述された。「低リスク型」に分類される十一種類のＨＰＶ型（ＨＰＶ６、１１、４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２、および８１型）は、良性かつ低悪性度の子宮頸部変化、生殖器いぼ、および再発性呼吸器パピローマとして現れることが知られている。皮膚ＨＰＶの５、８、および９２型は、皮膚がんに関連している。一部のＨＰＶ関連がんでは、免疫系が低下し、それに応じて抗腫瘍応答が著しく損なわれる。Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７（２０１７）を参照されたい。

【0006】

免疫療法は、概して受動的介入と能動的介入の二つの主なタイプに分けられる。受動的プロトコルには、予め活性化されたおよび／もしくは操作された細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）、疾患特異的な治療用抗体、ならびに／またはサイトカインの投与が含まれる。活性免疫療法戦略は、インビボで免疫系エフェクター機能を刺激することを目的としている。現在行われているいくつかのプロトコルには、疾患関連ペプチド、溶解物、または同種異系の全細胞を用いたワクチン接種戦略、腫瘍抗原送達用のビヒクルとしての自己由来樹状細胞（ＤＣ）の注入、および免疫チェックポイントモジュレータの注入が含まれる。Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ， Ｎｉｋｏｓ Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４（２０１６）を参照。養子免疫療法は、免疫応答を調節し、抗腫瘍活性を増強し、ＨＰＶ関連がんを治療または予防するという目標を達成するために利用することができる。

【0007】

疾患関連抗原によって刺激されるＣＤ８^＋細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）およびＣＤ４^＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞は、疾患細胞を標的とし、破壊する潜在性を有するが、内因性Ｔ細胞応答を誘導するための現在の方法は、課題に直面している。本明細書の開示はまた、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを使用して、ＨＰＶ関連がんを有する個体を治療するための方法、治療、用量、およびレジメンを含む。また、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントを含むＰＢＭＣを、高スループット様式で効率的に生成するために使用される方法が提供され、これは、ＨＰＶ抗原への頑強なＴ細胞応答の誘導に利用され得る。

【0008】

特許出願および刊行物を含む本明細書に引用される全ての参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。特許刊行物ＷＯ２０１３／０５９３４３、ＷＯ２０１５／０２３９８２、ＷＯ２０１６／０７０１３６、ＷＯ２０１７０４１０５０，ＷＯ２０１７００８０６３、ＷＯ２０１７／１９２７８５、ＷＯ２０１７／１９２７８６、ＷＯ２０１９／１７８００５、ＷＯ２０１９／１７８００６、ＷＯ２０２０／０７２８３３、ＷＯ２０２０／１５４６９６、およびＷＯ２０２０／１７６７８９、ＵＳ２０１８０１４２１９８、およびＵＳ２０１８０２０１８８９は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】国際公開第２０１３／０５９３４３号

【特許文献2】国際公開第２０１５／０２３９８２号

【特許文献3】国際公開第２０１６／０７０１３６号

【特許文献4】国際公開第２０１７／０４１０５０号

【特許文献5】国際公開第２０１７／００８０６３号

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７（２０１７）

【非特許文献2】Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ， Ｎｉｋｏｓ Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４（２０１６）

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0011】

一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを治療する方法を提供し、当該方法は、有効量の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む組成物を個体に投与することであって、ＰＢＭＣが細胞内送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む投与することと、ＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬の有効量を個体に投与することと、を含む。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ４の拮抗薬は、ＣＴＬＡ４に結合する抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬は、ＰＤ－１に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体は、個体に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、個体に投与され、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、個体に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ペンブロリズマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、アテゾリズマブである。

【0012】

一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ＋再発性腫瘍、局所進行性腫瘍、または転移性腫瘍を治療する方法を提供し、当該方法は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と併せて投与される。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、個体に対するＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬である。一部の実施形態では、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１に結合する抗体である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体と併せて投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、アテゾリズマブである。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ペンブロリズマブである。

【0013】

本発明の一部の実施形態では、本発明のＰＢＭＣは、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含み、当該一つのＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ－１６抗原またはＨＰＶ－１８抗原である。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドを含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２制限ペプチド制限ペプチドは、配列番号１～４のいずれか一つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか一つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原および配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む。

【0014】

本発明の治療方法の一部の実施形態では、個体はヒトである。一部の実施形態では、個体は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２について陽性である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＨＬＡ－Ａ^＊０２について陽性である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは個体に対して自己由来である。一部の実施形態では、個体はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）について陽性である。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんは、頭頸部がん、子宮頸がん、肛門がん、または食道がんである。

【0015】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌａの拮抗薬は、静脈内、経口、または皮下投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、および／またはＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、静脈内投与される。

【0016】

本発明の治療方法の一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの有効量は、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ～約５．０×１０^６細胞／ｋｇである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、ニボルマブの有効量は、約３６０ｍｇである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約１２００ｍｇである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、三週間のサイクルの１日目に送達される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、最初の三週間のサイクルの２日目にさらに投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、約５．０×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、または約５．０×１０^６細胞／ｋｇが、最初の三週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ４に結合する抗体、および／またはＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、三週間サイクル毎に一回投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、二つの三週間サイクル毎に一回投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブであり、イピリムマブは、約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブであり、ニボルマブは、約３６０ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブであり、イピリムマブは、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、二つの三週間サイクルの最初の三週間のサイクルの１日目に投与され、ＰＤ－１に結合する抗体は、約３６０ｍｇの用量で、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、アテゾリズマブであり、アテゾリズマブは、約１２００ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、少なくとも約三か月、六か月、九か月、または一年間、個体に投与される。

【0017】

本発明の一部の実施形態では、個体に投与されるＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ～約５×１０^７ＰＢＭＣ、ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、およびｄ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約１×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７ＰＢＭＣ／ｍＬ、ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、およびｄ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約２．７５×１０^７ＰＢＭＣ、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、およびｄ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．４である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、およびｄ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．４である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ～約５×１０^７ＰＢＭＣ、ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約１×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７ＰＢＭＣ／ｍＬ、ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約２．５×１０^７ＰＢＭＣ、ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．４である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ、ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．４である。一部の実施形態では、凍結保存培地は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。一部の実施形態では、低温保存培地は、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである。

【0018】

一部の実施形態では、本発明のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球の二つ以上を含む。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含む。一部の実施形態では、（ａ）ＰＢＭＣの約２５％～約８０％はＴ細胞であり、（ｂ）ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％はＢ細胞であり、（ｃ）ＰＢＭＣの約３．０％～約２０％はＮＫ細胞であり、または（ｄ）ＰＢＭＣの約４．０％～約４５％は単球である。

【0019】

本発明の一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、以下を含むプロセスにより調製される：ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過させること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣの集団を、少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを生成する、培養すること。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約４．２μｍ～約６μｍ、または約４．２μｍ～約４．８μｍである。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣが馴化される。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するために、約３７℃で約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間、ＰＢＭＣをアジュバントと培養するプロセスよって馴化される。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧ作動薬、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬である。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】図１は、コホート１～３の治療レジメンを示す。

【0021】

【図2】図２は、コホート４の治療レジメンを示す。

【0022】

【図3】図３は、コホート５の治療レジメンを示す。

【0023】

【図4】図４は、コホート６の治療レジメンを示す。

【0024】

【図5】図５は、コホート７の治療レジメンを示す。

【0025】

【図6】図６は、Ｃｅｌｌ Ｓｑｕｅｅｚｅ（登録商標）技術によって生成されたＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ－１０１治験薬の機序を示し、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶワクチンがＣＤ８ Ｔ細胞応答を直接刺激することを示す概略図である。

【0026】

【図7】図７は、臨床試験デザインの概略図である。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、指示用量（体重当たりの細胞数）で三週間毎（ｑ３ｗ）に単剤療法として単剤療法段階で投与されるか、またはチェックポイント阻害剤（アテゾリズマブ、イピリムマブ（Ｉｐｉ）、ニボルマブ（Ｎｉｖｏ））の指示用量と併せて、指示された間隔（ｑ３ｗ、ｑ３ｗ×４、ｑ６ｗ）で、投与される。

【0027】

【図8】図８Ａ～Ｃは、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの製造結果を示し、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの平均生存率、平均エンドツーエンドプロセス時間、およびＩＦＮ－γ分泌アッセイをそれぞれ示す。

【0028】

【図9】図９は、全コホートにわたる最良総合効果（ＢＯＲ）、試験での生存（日数）、およびＲｏｙａｌ Ｍａｒｓｄｅｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ（ＲＭＨ）１スコアの概要を示す。

【0029】

【図10A】図１０Ａ～Ｃは、治療後のケーススタディ患者２における、総腫瘍サイズ、中央腫瘍におけるＣＤ８ ＴＩＬの変化を示すＩＨＣ画像解析、およびＣＤ８ ＴＩＬを示す代表的なＩＨＣ画像をそれぞれ示す。

【図10B】同上。

【図10C】同上。

【0030】

【図11A】図１１Ａ～Ｃは、治療後のケーススタディ患者７における、総腫瘍サイズ、中央腫瘍におけるＣＤ８ ＴＩＬの変化を示すＩＨＣ画像解析、およびＣＤ８ ＴＩＬを示す代表的なＩＨＣ画像をそれぞれ示す。

【図11B】同上。

【図11C】同上。

【0031】

【図12】図１２は、コホート１、２、３および３ａの患者のスクリーニング時（投与前）およびサイクル２の８日目（Ｃ２Ｄ８、投与後）における腫瘍におけるＣＤ８＋細胞の密度を示す。

【0032】

【図13】図１３は、コホート１、２、３および３ａの患者のスクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における腫瘍におけるＣＤ８＋／グランザイムＢ＋（ＧＺＭＢ＋）細胞の密度を示す。

【0033】

【図14】図１４は、コホート１、２、３および３ａの患者のスクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における腫瘍におけるＣＤ８＋／Ｋｉ６７＋細胞の密度を示す。

【0034】

【図15】図１５は、コホート１、２、３および３ａの患者のスクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における腫瘍におけるＣＤ８＋／Ｋｉ６７－細胞の密度を示す。

【0035】

【図16】図１６は、Ｈ－スコアによって測定された、コホート１、２、３および３ａの患者のスクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）の腫瘍におけるＭＨＣ－１の発現を示す（上部パネル）。スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）におけるＭＨＣ－、ＭＨＣ－１低、ＭＨＣ－１中、およびＭＨＣ－１高細胞の相対比が、下部パネルに示される。

【0036】

【図17】図１７は、コホート１、２、３および３ａの患者のスクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）におけるＰＤ－Ｌ１膜染色を有する腫瘍細胞の％を示す。ＴＰＳは、腫瘍割合スコアを示す。

【0037】

【図18】図１８は、ＲＮＡ ＩＳＨ修飾Ｈ－スコアによって測定された、コホート１、２、３および３ａの患者のスクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）の腫瘍におけるＨＰＶ１６ Ｅ６の発現を示す（上部パネル）。スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における、ＨＰＶ１６陰性、ＨＰＶ１６＋１、ＨＰＶ１６＋２、ＨＰＶ１６＋３、およびＨＰＶ１６＋４細胞の相対比が、下部のパネルに示される。^＊は、細胞の形態がスコア化するのに適していなかったことを示す。

【0038】

【図19】図１９は、ＲＮＡ ＩＳＨ修飾Ｈ－スコアによって測定された、コホート１、２、３および３ａの患者のスクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）の腫瘍におけるＨＰＶ１６ Ｅ７の発現を示す（上部パネル）。スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における、ＨＰＶ１６陰性、ＨＰＶ１６＋１、ＨＰＶ１６＋２、ＨＰＶ１６＋３、およびＨＰＶ１６＋４細胞の相対比が、下部のパネルに示される。^＊は、細胞の形態がスコア化するのに適していなかったことを示す。

【0039】

【図20】図２０は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）におけるコホート１、２、３、および３ａの患者の腫瘍中央内の面積によるＰＤ－１細胞を有する腫瘍細胞の％を示す。^＊は、細胞の形態がスコア化するのに適していなかったことを示す。

【0040】

【図21】図２１は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における患者１１２－０６８に対する腫瘍のＣＤ８浸潤を示す。左のパネルは、中央腫瘍（ＣＮ）における腫瘍浸潤、ならびに間質および実質における浸潤を示す。中央パネルは、ＣＤ８、ＧＺＭＢおよびＦｏｘＰ３によって測定された腫瘍におけるＣＴＬ、ＴｒｅｇおよびＮＫ機能を示す。右のパネルは、ＧＺＭＢ＋細胞であるＣＤ８＋細胞の割合を示す。

【0041】

【図22】図２２は、図２１のデータが導出された免疫組織化学画像の例を示す。

【0042】

【図23】図２３は、ＣＤ８＋、ＣＤ８＋／Ｋｉ６７－、ＣＤ８－／Ｋｉ６７＋、およびＣＤ８＋／Ｋｉ６７＋である細胞の密度によって示される、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）の患者１１２－０６８からの腫瘍における増殖／活性化細胞密度を示す。免疫組織化学を右のパネルに示す。上部画像は低解像度、下部画像は高解像度である。

【0043】

【図24】図２４は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）のＰＤ－Ｌ１染色を有する患者１１２－０６８からの腫瘍細胞の％を示す。

【0044】

【図25】図２５は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における患者１１２－０６８からの腫瘍におけるＭＨＣ－１およびＨＰＶ１６ Ｅ６およびＥ７エピトープの発現を示す。左上のパネルは、スクリーニング時およびＣ２Ｄ８におけるＭＨＣ－１発現を示す。上部中央パネルは、スクリーニング時およびＣ２Ｄ８における腫瘍中の細胞におけるＭＨＣ－１の相対的発現を示す。左下のパネルは、ＨＰＶ１６ Ｅ６の発現を示す。下部中央パネルは、ＨＰＶ１６ Ｅ７の発現を示す。右パネルは、左および中央パネルのデータが取得された免疫組織化学の例を示す。

【0045】

【図26】図２６は、患者１１２－０６８の腫瘍増殖動態を示す。

【0046】

【図27】図２７は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における、患者１０３－０２７に対する腫瘍のＣＤ８浸潤を示す。左のパネルは、中央腫瘍（ＣＮ）における腫瘍浸潤、ならびに間質および実質における浸潤を示す。中央パネルは、ＣＤ８、ＧＺＭＢおよびＦｏｘＰ３によって測定された腫瘍におけるＣＴＬ、ＴｒｅｇおよびＮＫ機能を示す。右のパネルは、ＧＺＭＢ＋細胞であるＣＤ８＋細胞の割合を示す。

【0047】

【図28】図２８は、図２７の日付が導出された免疫組織化学画像の例を示す。

【0048】

【図29】図２９は、ＣＤ８＋、ＣＤ８＋／Ｋｉ６７－、ＣＤ８－／Ｋｉ６７＋、およびＣＤ８＋／Ｋｉ６７＋である細胞の密度によって示される、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における患者１０３－０２７からの腫瘍における増殖／活性化細胞密度を示す。免疫組織化学を右のパネルに示す。上部画像は低解像度、下部画像は高解像度である。

【0049】

【図30】図３０は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）のＰＤ－Ｌ１染色を有する患者１０３－０２７からの腫瘍細胞の％を示す。

【0050】

【図31】図３１は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における、患者１０３－０２７からの腫瘍におけるＭＨＣ－１ならびにＨＰＶ１６ Ｅ６およびＥ７エピトープの発現を示す。左上のパネルは、スクリーニング時およびＣ２Ｄ８におけるＭＨＣ－１発現を示す。上部中央パネルは、スクリーニング時およびＣ２Ｄ８における腫瘍中の細胞におけるＭＨＣ－１の相対的発現を示す。左下のパネルは、ＨＰＶ１６ Ｅ６の発現を示す。下部中央のパネルは、ＨＰＶ１６ Ｅ７の発現を示す。^＊は、細胞の形態がスコア化するのに適していなかったことを示す。右パネルは、左および中央パネルのデータが取得された免疫組織化学の例を示す。

【0051】

【図32】図３２は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における、患者１０３－００８に対する腫瘍のＣＤ８浸潤を示す。左のパネルは、中央腫瘍（ＣＮ）における腫瘍浸潤、ならびに間質および実質における浸潤を示す。中央パネルは、ＣＤ８、ＧＺＭＢおよびＦｏｘＰ３によって測定された腫瘍におけるＣＴＬ、ＴｒｅｇおよびＮＫ機能を示す。右のパネルは、ＧＺＭＢ＋細胞であるＣＤ８＋細胞の割合を示す。

【0052】

【図33】図３３は、図３２の日付が導出された免疫組織化学の例を示す。

【0053】

【図34】図３４は、ＣＤ８＋、ＣＤ８＋／Ｋｉ６７－、ＣＤ８－／Ｋｉ６７＋、およびＣＤ８＋／Ｋｉ６７＋である細胞の密度によって示される、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）の患者１０３－００８からの腫瘍における増殖／活性化細胞密度を示す。免疫組織化学を右のパネルに示す。上部画像は低解像度、下部画像は高解像度である。

【0054】

【図35】図３５は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における、ＰＤ－Ｌ１染色を有する患者１０３－００８からの腫瘍細胞の％を示す。

【0055】

【図36】図３６は、スクリーニング時（投与前）およびＣ２Ｄ８（投与後）における、患者１０３－００８からの腫瘍におけるＭＨＣ－１およびＨＰＶ１６ Ｅ６およびＥ７エピトープの発現を示す。左上のパネルは、スクリーニング時およびＣ２Ｄ８におけるＭＨＣ－１発現を示す。上部中央パネルは、スクリーニング時およびＣ２Ｄ８における腫瘍中の細胞におけるＭＨＣ－１の相対的発現を示す。左下のパネルは、ＨＰＶ１６ Ｅ６の発現を示す。下部中央パネルは、ＨＰＶ１６ Ｅ７の発現を示す。右パネルは、左および中央パネルのデータが取得された免疫組織化学の例を示す。

【0056】

特許または出願ファイルは、色付きで描かれた少なくとも一つの図面を含む。本特許または色付きの図を有する特許出願公報の写しは、要求に応じて、必要な料金の支払いがあった時点で、オフィスから提供される。

【発明を実施するための形態】

【0057】

一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを治療する方法を提供し、当該方法は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む。

【0058】

一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連がんを治療する方法を提供し、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含む投与することであって、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む投与することと、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤の有効量を投与することと、を含む。一部の実施形態では、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４の拮抗薬（例えば、限定されないが、イピリムマブ）、ＰＤ－１の拮抗薬（例えば、限定されないが、ニボルマブ）、および／またはＰＤ－Ｌ１の拮抗薬（例えば、限定されないが、アテゾリズマブ）を含む。

【0059】

一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連がんを治療する方法を提供し、当該方法は、活性ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することであって、ＰＢＭＣは、細胞内に送達された少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む投与すること、およびイピリムマブ、ニボルマブ、またはアテゾリズマブの一つ以上の有効量を投与することであって、ＰＢＭＣは、ＨＰＶ抗原を含み、および／または一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤は、三週間サイクルで投与される投与すること、を含み、ＰＢＭＣの有効量は、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ～約５×１０^６細胞／ｋｇであり、有効量のイピリムマブは、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇであり、ニボルマブの有効量は、約３６０ｍｇであり、およびアテゾリズマブの有効量は、約１２００ｍｇである。

【0060】

ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣの組成物、ならびにＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣを調製する方法も提供される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、以下を含むプロセスにより調製される：ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中のＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過させること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣの集団を、ＨＰＶ抗原およびアジュバントと、抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む修飾ＰＢＭＣを生成する、培養すること。また、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答の誘導に使用するための、またはＨＰＶ関連がんの治療のための組成物が提供される。また、ＨＰＶ抗原に対する免疫反応を刺激するため、またはＨＰＶ関連がんを治療するための、医薬品の製造におけるＰＢＭＣの有効量を含む組成物の使用が提供される。

【0061】

一般的な手法
本明細書で説明または参照される技術および手順は、一般的に十分に理解されており、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，４^ｔｈ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２０１２）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．，１９９５）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．，１９８８）；Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，６^ｔｈ ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，２０１０）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９８）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９９８）；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９３－８）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９６）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，２００２）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，２００４）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）、およびＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，２０１１）に記載される広範に利用されている方法論など、当業者によって従来の方法論を使用して一般的に利用される。

【0062】

定義
本明細書を解釈する目的で、以下の定義が適用されるが、適切な場合には、単数形で使用される用語は複数形を含み、その逆も同様である。以下に記載されるいずれかの定義が、参照により本明細書に組み込まれるいずれかの文書と矛盾する場合、上記に定める定義が優先するものとする。

【0063】

本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別段の指示がない限り、複数の参照を含む。

【0064】

本明細書で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、ならびにその他の類似の形態、およびそれらの文法的等価物は、意味が同等であり、これらの用語のいずれか一つに続く項目または複数の項目が、かかる項目または複数の項目の網羅的なリストであることを意味するものではなく、または列挙された項目または複数の項目のみに限定されることを意味するという点で、オープンエンドであることを意図している。例えば、成分Ａ、Ｂ、およびＣを含む物品は、成分Ａ、Ｂ、およびＣから成り得るか（すなわち、それのみを含む）、または成分Ａ、Ｂ、およびＣだけでなく、一つ以上の他の成分も含み得る。そのため、「含む」および同様の形態、ならびにその文法的等価物は、「から本質的になる」または「からなる」の実施形態の開示を含むことが意図され、理解される。

【0065】

値の範囲が提供される場合、文脈が別段に明確に指示しない限り、下限の単位の十分の一までの各介在する値は、その範囲の上限および下限、ならびにその範囲内の他の記載された値または介在する値の間の値が、記載された範囲内の特定の除外限界に従うことを条件として、本開示内に包含されることが理解される。記載された範囲が制限の一方または両方を含む場合、それらの含まれる制限のいずれかまたは両方を除外する範囲も開示に含まれる。

【0066】

本明細書で使用される「約」という用語は、当技術分野の当業者に容易に認識されるそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における値またはパラメータの「約」への言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（および説明する）。例えば、「約Ｘ」を参照する記載は、「Ｘ」の記載を含む。

【0067】

本明細書で使用される場合、「末梢血単核細胞」または「ＰＢＭＣ」は、丸い核を有する血液細胞の不均一な集団を指す。ＰＢＭＣの集団に見出され得る細胞の例には、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞（ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）およびサイトカイン誘導性キラー細胞（ＣＩＫ細胞）を含む）などのリンパ球、ならびにマクロファージおよび樹状細胞などの単球が含まれ得る。本明細書で使用される「複数のＰＢＭＣ」とは、少なくとも二種類の血液細胞の細胞を含むＰＢＭＣの調製物を指す。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞の二つ以上を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞の三つ以上を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞の四つ以上を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および樹状細胞を含む。

【0068】

ＰＢＭＣは、当技術分野で公知の手段によって単離することができる。例えば、ＰＢＭＣは、他の血液細胞と比較したＰＢＭＣの密度に基づいて、個体の末梢血から得ることができる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ勾配）を使用して個体の末梢血から得ることができる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＥＬＵＴＲＡ（登録商標）細胞分離システムを使用して個体の末梢血から得ることができる。ＰＢＭＣは、アフェレーシスを受けている個体から取得することができる。

【0069】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣの集団は個体から単離される。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、自己由来のＰＢＭＣ集団であり、この集団は、特定の個体に由来し、本明細書に記載のいずれかの方法によって操作され、その特定の個体に戻される。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、同種異系のＰＢＭＣの集団であり、この集団は、本明細書に記載のいずれかの方法によって操作された、ある個体に由来し、れ、第二の個体に投与される。

【0070】

一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣの再構成調製物である。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球の二つ以上の集団を混合することによって、ＰＢＭＣの集団に典型的に見出される細胞を混合することによって生成されてもよい。

【0071】

本明細書で使用する場合、「ペイロード」は、ＰＢＭＣに装填されるなど、ＰＢＭＣに送達されようとする材料を指す。「ペイロード」、「カーゴ」、「送達物質」、および「化合物」は、本明細書では互換的に使用される。一部の実施形態では、ペイロードは、タンパク質、低分子、核酸（例えば、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡ）、脂質、炭水化物、巨大分子、ビタミン、ポリマー、蛍光色素およびフルオロフォア、カーボンナノチューブ、量子ドット、ナノ粒子、ならびにステロイドを指し得る。一部の実施形態では、ペイロードは、タンパク質または低分子薬剤を指し得る。一部の実施形態では、ペイロードは、一つ以上の化合物を含み得る。

【0072】

コード配列および制御配列などの核酸配列に関連するような「異種」という用語は、通常は一緒に連結されていない、および／または特定の細胞と通常は関連しない配列を意味する。したがって、核酸構築物またはベクターの「異種」領域は、天然では他の分子と関連して見出されない、別の核酸分子内のまたは別の核酸分子と付着した核酸のセグメントである。例えば、核酸構築物の異種領域は、天然ではコード配列と関連して見出されない配列が隣接するコード配列を含み得る。異種コード配列の別の例は、コード配列自体が天然には見出されない構築物である（例えば、天然遺伝子とは異なるコドンを有する合成配列）。同様に、細胞内に通常存在しない構築物で形質転換された細胞は、本発明の目的では異種と考えられるものとなる。対立遺伝子変異または自然に発生する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ＤＮＡを生じさせない。

【0073】

ペプチド配列およびポリペプチド配列などのアミノ酸配列に関連するような「異種」という用語は、通常は一緒に連結されていない、および／または特定の細胞と通常は関連しない配列を意味する。したがって、ペプチド配列の「異種」領域は、天然では他の分子と関連して見出されない、別のアミノ酸分子内にあるかまたは別のアミノ酸分子に付加したアミノ酸のセグメントである。例えば、ペプチド構築物の異種領域は、天然ではペプチドのアミノ酸配列と関連して見出されない配列が隣接するペプチドのアミノ酸配列を含み得る。異種性ペプチド配列の別の例は、ペプチド配列自体が天然には見出されない構築物である（例えば、天然遺伝子とは異なるコードされたアミノ酸を有する合成配列）。同様に、細胞内に通常存在しないアミノ酸構築物を発現するベクターにより形質転換された細胞は、本発明の目的では異種と考えられるものとなる。対立遺伝子変異または自然に発生する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ペプチドを生じさせない。

【0074】

例えば、抗原またはアジュバントなどの、細胞に関連する剤に関して使用される場合の「外因性」という用語は、細胞の外側の剤または細胞の外側から細胞内に送達される剤を指す。細胞は、既に存在する剤を有してもよいし有しなくてもよく、外因性の剤が送達された後に剤を産生してもよいし産生しなくてもよい。

【0075】

本明細書で使用される「相同」という用語は、同じ生物に由来する分子を指す。一部の例では、用語は、所与の生物内で通常見出されるか、もしくは発現される、核酸またはタンパク質を指す。

【0076】

本明細書で使用される場合、「治療」または「治療する」は、臨床結果を含む、有益なまたは望ましい結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益または望ましい臨床結果には、疾患に起因する一つ以上の症状を緩和する、疾患の程度を軽減する、疾患を安定化する（例えば、疾患の悪化を予防するもしくは遅延する）、疾患の蔓延（例えば、転移）を予防するもしくは遅延する、疾患の再発を予防するもしくは遅延する、疾患の進行を遅延するもしくは遅らせる、疾患の状態を回復する、疾患を（部分的または完全に）寛解する、疾患を治療するために必要な一つ以上の他の薬物の用量を低減する、疾患の進行を遅延する、生活の質を増加するまたは改善する、体重増加が増加する、および／または生存期間が延長する、の一つ以上が含まれるが、これらに限定されない。また、「治療」には、がんの病理学的結果（例えば、腫瘍体積など）の減少も包含される。本発明の方法は、治療のこれらの態様のいずれか一つ以上を企図する。

【0077】

本明細書で使用される場合、「予防的治療」という用語は、個体が、障害を有することまたは障害を有するリスクがあることが知られているかまたは疑われるが、障害の症状を呈していないかまたは最小限の症状を呈している治療を指す。予防的治療を受ける個体は、症状の発症前に治療され得る。一部の実施形態では、個体は、それらが前がん病変、特にＨＰＶ感染に関連する前がん病変を有する場合に治療され得る。

【0078】

本明細書で使用される場合、「併用療法」とは、第一の薬剤が別の薬剤と併せて投与されることを意味する。「と併せて」とは、同じ個体への本明細書に記載の免疫コンジュゲートの投与に加えて本明細書に記載のＰＭＢＣの組成物を投与するなど、別の治療モダリティに加えてある一つの治療モダリティを投与することを指す。したがって、「と併せて」とは、この個体へ他の治療モダリティを送達する前、間、または後に、ある一つの治療モダリティを投与することを指す。

【0079】

本明細書で使用される「同時投与」という用語は、併用療法における第一の療法および第二の療法が、約１５分以内、例えば約１０分以内、５分以内、または１分以内のいずれかなどの時間間隔で投与されることを意味する。第一および第二の療法が同時に投与される場合、この第一および第二の療法は、同じ組成物中に含まれてもよいし（例えば、第一および第二の療法のどちらも含む組成物）、別の組成物に含まれてもよい（例えば、一方の組成物中に第一の療法が含まれ、他方の組成物中に第二の療法が含まれる）。

【0080】

本明細書で使用される場合、「連続投与」という用語は、併用療法における第一の療法および第二の療法が、約１５分超、例えば約２０分、３０分、４０分、５０分、６０分、またはそれ以上のいずれかなどの時間間隔で投与されることを意味する。第一の療法または第二の療法のいずれかが最初に投与され得る。第一および第二の療法は、同じまたは異なるパッケージまたはキットに含まれ得る、別々の組成物中に含まれる。

【0081】

本明細書で使用される場合、「同時投与」という用語は、併用療法における第一の療法および第二の療法の投与が互いに重複することを意味する。

【0082】

がんの文脈において、「治療する」という用語は、がん細胞を死滅させること、がん細胞の成長を阻害すること、がん細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍負荷を軽減すること、および疾患に関連する一つ以上の症状を回復することのいずれかまたは全てを含む。

【0083】

本明細書で使用される場合、「調節する」という用語は、特定の標的の存在または活性を変化させる、改変する、変更する、またはさもなければ修正する作用を指し得る。例えば、免疫応答を調節することは、免疫応答を変える、変化させる、変更する、またはその他改変することをもたらす任意の作用を指し得る。一部の例では、「調節」は、特定の標的の存在または活性を増強することを指す。一部の例では、「調節」は、特定の標的の存在または活性を抑制することを指す。他の例では、核酸の発現を調節することには、核酸の転写の変化、ｍＲＮＡ量の変化（例えば、ｍＲＮＡ転写の増加）、ｍＲＮＡの分解の対応する変化、ｍＲＮＡ翻訳の変化などを含み得るが、これらに限定されない。

【0084】

本明細書で使用される場合、「阻害する」という用語は、特定の標的の存在または活性を遮断、低減、排除、またはさもなければ拮抗する作用を指し得る。阻害は、部分的阻害または完全阻害を指し得る。例えば、免疫応答を阻害することは、免疫応答の遮断、低減、排除、または任意の他の拮抗作用をもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の阻害には、核酸の転写の低減、ｍＲＮＡ存在量の低減（例えば、ｍＲＮＡ転写のサイレンシング）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡ翻訳の阻害、遺伝子編集などが含まれるが、これらに限定されない。他の例では、タンパク質の発現の阻害は、タンパク質をコードする核酸の転写の減少、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の減少、タンパク質の翻訳の阻害、タンパク質の安定性の減少などを含み得るが、これらに限定されない。別の実施例では、阻害は、例えば、腫瘍細胞の成長を遅延させるか、もしくは防止するなど、成長を緩徐化させるか、または停止する作用を指し得る。

【0085】

本明細書で使用される場合、「抑制する」という用語は、特定の標的の存在または活性を減少、低減、妨害、制限、軽減、またはその他縮小する作用を指し得る。抑制は、部分的な抑制または完全な抑制を指し得る。例えば、免疫応答を抑制することは、免疫応答を減少、低減、妨害、制限、軽減、またはその他縮小することをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の抑制には、核酸の転写の低減、ｍＲＮＡ存在量の低減（例えば、ｍＲＮＡ転写のサイレンシング）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡ翻訳の阻害などが含まれるが、これらに限定されない。他の例では、タンパク質の発現の抑制は、タンパク質をコードする核酸の転写の減少、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の減少、タンパク質の翻訳の阻害、タンパク質の安定性の減少などを含み得るが、これらに限定されない。

【0086】

本明細書で使用される場合、「増強する」という用語は、特定の標的の存在または活性を向上する、ブーストする、高める、またはその他増加する作用を指し得る。例えば、免疫応答を増強することは、免疫応答を向上させる、ブーストする、高める、またはその他増加させることをもたらす任意の作用を指し得る。例示的な一例では、免疫応答を増強することは、抗原および／またはアジュバントを利用して、免疫応答を向上させる、ブーストする、高める、またはその他増加することを指し得る。他の例では、核酸の発現を増強することには、核酸の転写の増加、ｍＲＮＡ量の増加（例えば、ｍＲＮＡ転写の増加）、ｍＲＮＡの分解の低減、ｍＲＮＡ翻訳の増加などが含まれるが、これらに限定されない。他の例では、タンパク質の発現を増強することは、タンパク質をコードする核酸の転写の増加、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の増加、タンパク質の翻訳の増加、タンパク質の安定性の増加などを含み得るが、これらに限定されない。

【0087】

本明細書で使用される場合、「誘導する」という用語は、結果を開始する、促進する、刺激する、確立する、またはさもなければ産生する作用を指し得る。例えば、免疫応答を誘導することは、所望の免疫応答を開始、促進、刺激、確立、またはその他産生することをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現を誘導することには、核酸の転写の開始、ｍＲＮＡの翻訳の開始などが含まれるが、これらに限定されない。他の例では、タンパク質の発現を誘導することは、タンパク質をコードする核酸の転写の増加、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の増加、タンパク質の翻訳の増加、タンパク質の安定性の増加などを含み得るが、これらに限定されない。

【0088】

本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドを含む、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。したがって、この用語には、プリンおよびピリミジン塩基、または他の天然の、化学的もしくは生化学的に修飾された、非天然の、もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含む、一本鎖、二本鎖、もしくは複数鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、またはポリマーが含まれるが、これらに限定されない。ポリヌクレオチドの骨格は、糖およびリン酸基（典型的にはＲＮＡまたはＤＮＡに見出される）、または修飾もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含むことができる。ポリヌクレオチドの骨格は、ペプチド結合によって連結されたＮ－（２－アミノエチル）－グリシンなどの反復単位（すなわち、ペプチド核酸）を含むことができる。あるいは、ポリヌクレオチドの骨格は、ホスホルアミデートおよびホルフォルチオエートなどの合成サブユニットのポリマーを含むことができ、したがって、オリゴデオキシヌクレオシドホスホルアミデート（Ｐ－ＮＨ２）または混合ホスホロチオエート－ホスホロジエステルオリゴマーまたは混合ホスホルアミデート－ホスホジエステルオリゴマーであり得る。加えて、二本鎖ポリヌクレオチドは、相補鎖を合成し、適切な条件下で鎖をアニーリングするか、または適切なプライマーを用いてＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖をデノボ合成するかのいずれかにより化学合成の一本鎖ポリヌクレオチド産物から取得することができる。

【0089】

「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換的に使用され、最小の長さに限定されない。そのようなアミノ酸残基のポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含有していてもよく、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体、および多量体を含むがこれらに限定されない。完全長タンパク質およびその断片の両方が定義によって包含される。この用語には、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含まれる。さらに、本発明の目的のために、「ポリペプチド」とは、所望の活性を維持する限り、天然の配列に対して欠失、付加、および置換などの改変（一般に天然では保存されている）を含むタンパク質を指す。これらの改変は、部位特異的変異誘導を介してのように意図的であってもよいし、タンパク質を産生する宿主の変異またはＰＣＲ増幅によるエラーを介するなど偶発的であってもよい。

【0090】

本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答を調節および／または生成する物質を指す。概して、アジュバントは抗原と併せて投与されて、抗原単独と比較して抗原に対する免疫応答の増強をもたらす。様々なアジュバントが本明細書に記載される。

【0091】

本明細書における「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」および「ＣｐＧ ＯＤＮ」という用語は、リン酸によって分離されたシトシンおよびグアニンのジヌクレオチド（本明細書では「ＣｐＧ」ジヌクレオチド、または「ＣｐＧ」とも称される）を含有する、１０～３０ヌクレオチド長のＤＮＡ分子を指す。本開示のＣｐＧ ＯＤＮは、少なくとも一つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。すなわち、ＣｐＧジヌクレオチド中のシトシンはメチル化されない（すなわち、５－メチルシトシンではない）。ＣｐＧ ＯＤＮは、部分的または完全なホスホロチオエート（ＰＳ）骨格を有し得る。

【0092】

本明細書で使用される場合、「医薬的に許容可能な」または「薬理学的に適合する」とは、生物学的にまたはその他望ましくないものではない物質を意味し、例えば、その物質は、望ましくない重大な生物学的効果を引き起こすことなく、またはそれを含有する組成物の他の成分のいずれかと有害な様式で相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に組み込まれ得る。医薬的に許容可能な担体または賦形剤は、毒性および製造試験の必要な基準を満たしており、および／または米国食品医薬品局によって準備された不活性成分ガイドに含まれることが好ましい。

【0093】

本明細書に記載される構造的および機能的特徴のいずれについても、これらの特徴を決定する方法は当技術分野で公知である。

【0094】

本明細書で使用される場合、「マイクロ流体システム」は、少量（例えば、ｍＬ、ｎＬ、ｐＬ、ｆＬ）の流体が処理されて、少量の液体の個別の処理を達成するシステムを指す。本明細書に記載される特定の実施には、多重化、自動化、およびハイスループットスクリーニングが含まれる。流体（例えば、緩衝液、溶液、ペイロード含有溶液、または細胞懸濁液）は、移動、混合、分離、または別の方法で処理することができる。本明細書に記載される特定の実施形態では、マイクロ流体システムを使用して、緩衝液中に懸濁された細胞に機械的狭窄を適用し、細胞内に摂動を誘発し（例えば、穴）、それによってペイロードまたは化合物が細胞のサイトゾルに入ることを可能にする。

【0095】

本明細書で使用される場合、「狭窄部」は、入口部分、中心点、および出口部分によって画定されるマイクロ流体チャネルの部分を指し得、中心点は、幅、長さ、および深さによって画定される。他の実施例では、狭窄部は、細孔を指してもよく、または細孔の部分であってもよい。細孔は、表面（例えば、フィルタおよび／または膜）上に含まれ得る。

【0096】

本明細書に記載される構造的および機能的特徴のいずれについても、これらの特徴を決定する方法は当技術分野で公知である。

【0097】

治療方法
一部の態様では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、方法は、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤の有効量を個体に投与することをさらに含む。

【0098】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することであって、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む投与することと、ＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬の有効量を個体に投与することと、を含む。

【0099】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、有効量は、約０．５×１０^４細胞／ｋｇ～約５．０×１０^９細胞／ｋｇであり、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む。

【0100】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、有効量は、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ～約５．０×１０^６細胞／ｋｇであり、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む。

【0101】

一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患は、ＨＰＶ関連がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんは、子宮頸がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、唾液腺がん、中咽頭がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、皮膚がん、食道がん、または頭頸部がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患は、ＨＰＶ関連感染性疾患である。

【0102】

一部の実施形態では、有効量のＰＢＭＣは、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、および１．０×１０^９細胞／ｋｇのいずれか一つである。一部の実施形態では、有効量は、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９の細胞／ｋｇのいずれか一つである。一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連がんを治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、有効量は、約０．５×１０^６ｇ～約５×１０^６ＰＢＭＣ／ｋｇであり、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む。

【0103】

一部の実施形態では、方法は、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤の有効量を投与することをさらに含む。例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡの拮抗薬であるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡの一つ以上の拮抗薬である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１と結合する抗体、ＰＤ－Ｌ１と結合する抗体、ＣＴＬＡ－４と結合する抗体、ＬＡＧ３と結合する抗体、ＴＩＭ－３と結合する抗体、ＴＩＧＩＴと結合する抗体、ＶＩＳＴＡと結合する抗体、ＴＩＭ－１と結合する抗体、Ｂ７－Ｈ４と結合する抗体、またはＢＴＬＡと結合する抗体の一つ以上である。さらなる実施形態では、抗体は、完全長抗体または任意のバリアント、例えば、抗体断片、単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、または断片抗原結合（Ｆａｂ）であり得るが、これらに限定されない。さらなる実施形態では、抗体は、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡの一つ以上に結合および／または一つ以上を阻害する一つ以上の化学的な化合物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡの一つ以上に結合および／または一つ以上を阻害する一つ以上のペプチドである。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１を標的とする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１を標的とする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４を標的とする。

【0104】

一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連がんを治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することであって、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む投与することと、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤の有効量を投与することと、を含む。一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連がんを治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体へ投与することであって、有効量は約０．５×１０^６～約５×１０^６ＰＢＭＣであり、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む投与することと、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤の有効量を投与することと、を含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４の拮抗薬である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１の拮抗薬である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬である。一部の実施形態では、一つ以上のチェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４の拮抗薬、ＰＤ－１の拮抗薬、および／またはＰＤ－Ｌ１の拮抗薬を含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－１の拮抗薬は、ＰＤ－１に結合する抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬は、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である。一部の実施形態では、一つ以上のチェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、ＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体を含む。

【0105】

一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連がんを治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することであって、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む投与することと、ＣＴＬＡ－４の拮抗薬、ＰＤ－１の拮抗薬、および／またはＰＤ－Ｌ１の拮抗薬の有効量を投与することと、を含む。一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連がんを治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することであって、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む投与することと、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、ＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体の有効量を投与することと、を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ペンブロリズマブである。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、アテゾリズマブである。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブである。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、個体に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、個体に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、個体に投与される。

【0106】

一部の態様では、個体においてＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、ＰＢＭＣは、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含み、少なくとも一つのＨＰＶ抗原は、細胞内でＰＢＭＣに送達される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載される任意の組成物の有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、個体は、がんを有する。

【0107】

一部の態様では、個体において腫瘍の増殖を抑える方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、ＰＢＭＣは、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含み、少なくとも一つのＨＰＶ抗原は、細胞内でＰＢＭＣに送達される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載される任意の組成物の有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、個体は、がんを有する。

【0108】

一部の態様では、それを必要とする個体においてワクチンを接種する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、ＰＢＭＣは、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含み、少なくとも一つのＨＰＶ抗原は、細胞内でＰＢＭＣに送達される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載される任意の組成物の有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、個体は、がんを有する。

【0109】

一部の態様では、個体においてがんを治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、ＰＢＭＣは、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含み、少なくとも一つのＨＰＶ抗原は、細胞内でＰＢＭＣに送達される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載される任意の組成物の有効量を投与することを含む。

【0110】

一部の態様では、個体においてＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激するための方法が提供され、当該方法は、以下を含む：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントが、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、ｂ）摂動ＰＢＭＣを、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントと、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣを生成する、培養すること、ｃ）ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣの有効量を個体に投与すること。

【0111】

一部の態様では、個体において腫瘍の増殖を抑制するための方法が提供され、当該方法は、以下を含む：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントが、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、ｂ）摂動ＰＢＭＣを、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントと、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣを生成する、培養すること、ｃ）ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣの有効量を個体に投与すること。

【0112】

一部の態様では、それを必要とする個体においてワクチンを接種するための方法が提供され、当該方法は、以下を含む：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントが、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、ｂ）摂動ＰＢＭＣを、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントと、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣを生成する、培養すること、ｃ）ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣの有効量を個体に投与すること。

【0113】

一部の態様では、個体においてがんを治療するための方法が提供され、当該方法は、以下を含む：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントが、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、ｂ）摂動ＰＢＭＣを、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントと、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣを生成する、培養すること、ｃ）ＨＰＶ抗原またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣの有効量を個体に投与すること。

【0114】

本明細書に記載の任意の方法、使用または組成物による一部の実施形態では、当該方法は、以下を含む：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過させること、ｂ）摂動入力ＰＢＭＣを、ＨＰＶ抗原と、ＨＰＶ抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、ＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを生成する培養すること、およびｃ）個体にＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣの有効量を投与すること。

【0115】

一部の実施形態では、個体においてＨＰＶタンパク質に対する免疫応答を刺激するための組成物が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。一部の実施形態では、腫瘍の増殖を抑制するための組成物が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。一部の実施形態では、個体は、がんを有する。一部の実施形態では、個体においてがんを治療するための組成物が提供され、当該組成物は、本明細書に記載されるＨＰＶ抗原の少なくとも一つを含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つを含む。一部の実施形態では、がんは、子宮頸がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、唾液腺がん、中咽頭がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、皮膚がん、頭頸部がんまたは食道がんである。

【0116】

一部の実施形態では、個体においてＨＰＶタンパク質に対する免疫応答を刺激するための組成物が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。一部の実施形態では、腫瘍の増殖を抑制するための組成物が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。一部の実施形態では、個体は、がんを有する。一部の実施形態では、個体においてがんを治療するための組成物が提供され、当該組成物は、本明細書に記載されるＨＰＶ抗原の少なくとも一つを含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つを含む。

【0117】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激するための医薬品の製造におけるＰＢＭＣの有効量を含む組成物の使用が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。一部の実施形態では、個体における腫瘍の増殖を低減するための医薬品の製造におけるＰＢＭＣの有効量を含む組成物の使用が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。一部の実施形態では、個体は、がんを有する。一部の実施形態では、個体におけるがんの治療をするための医薬品の製造におけるＰＢＭＣの有効量を含む組成物の使用が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。

【0118】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原タンパク質に対する免疫応答を刺激するための医薬品の製造におけるＰＢＭＣの有効量を含む組成物の使用が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。一部の実施形態では、個体における腫瘍の増殖を低減するための医薬品の製造におけるＰＢＭＣの有効量を含む組成物の使用が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。一部の実施形態では、個体は、がんを有する。一部の実施形態では、個体におけるがんの治療をするための医薬品の製造におけるＰＢＭＣの有効量を含む組成物の使用が提供され、当該組成物は、本明細書に記載される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物のいずれか一つの有効量を含む。

【0119】

本明細書に記載される方法、使用、または組成物による一部の実施形態では、個体は、がんを有する。一部の実施形態では、がんは、子宮頸がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、唾液腺がん、中咽頭がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、皮膚がん、頭頸部がんまたは食道がんである。一部の実施形態では、がんは、ＨＰＶと関連したがんである。一部の実施形態では、がんは、局在性がんである。一部の実施形態では、がんは、局在性がんである。一部の実施形態では、がんは、局在性進行がんである。一部の実施形態では、がんは、転移性がんである。一部の実施形態では、がんは、固形がんである。一部の実施形態では、がんは、液体がんである。

【0120】

一部の実施形態では、がんは、手術、放射線、および／または化学放射線療法による治療的処置を受け付けない。一部の実施形態では、がんは、アジュバントまたは再発の設定でのプラチナ系レジメンによる過去の全身化学療法後に進行している。一部の実施形態では、がんは、シスプラチン、パクリタキセル、カルボプラチン、および／または５ＦＵの一つ以上を用いた、以前の化学療法治療後に進行している。一部の実施形態では、がんは、以前の免疫チェックポイント阻害剤治療後に進行している。一部の実施形態では、がんは、ペンブロリズマブ、ベバシズマブ、および／またはペンブロリズマブの一つ以上による前治療後に進行している。一部の実施形態では、がんは、プラチナ製剤で治療された。一部の実施形態では、がんはプラチナ耐性を有する。一部の実施形態では、個体は、最近の前治療を受けている間、または最近の前治療完了後に進行性疾患を有する。一部の実施形態では、がんは、子宮頸がんである。一部の実施形態では、がんは、再発性または転移性子宮頸がんである。

【0121】

一部の実施形態では、がんは、手術、放射線、および／または化学放射線療法による治療的処置を受け付けない。一部の実施形態では、がんは、初回、アジュバント、または再発設定における少なくとも１回（例えば、１回、２回、３回、４回、５回、またはそれ以上）の以前のプラチナ系化学療法後に進行しており、チェックポイント免疫療法が提供されている。一部の実施形態では、がんは、シスプラチン、パクリタキセル、カルボプラチン、および／または５ＦＵの一つ以上を用いた、以前の化学療法治療後に進行している。一部の実施形態では、がんは、以前の免疫チェックポイント阻害剤治療後に進行している。一部の実施形態では、がんは、ペンブロリズマブ、ベバシズマブ、および／またはペンブロリズマブの一つ以上による前治療後に進行している。一部の実施形態では、がんは、プラチナ製剤で治療された。一部の実施形態では、がんはプラチナ耐性を有する。一部の実施形態では、個体は、プラチナ含有の確定的化学放射線療法後またはアジュバント化学放射線療法後に再発しており、再発時のプラチナ再チャレンジは、有益とみなされない。一部の実施形態では、がんは、頭頸部がんである。一部の実施形態では、がんは、再発性または転移性の頭頸部がんである。

【0122】

一部の実施形態では、狭窄部の幅は、ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、ＰＢＭＣの集団内で最小の直径を有する入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のいずれか一つである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約５μｍ、約３μｍ～約３．５μｍ、約３．５μｍ～約４μｍ、約４μｍ～約４．５μｍ、約３．２μｍ～約３．８μｍ、約３．８μｍ～約４．３μｍ、約４．２μｍ～約６μｍ、または約４．２μｍ～約４．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍ、または１５μｍ以下のいずれか一つまたはそれ未満である。一部の実施形態では、入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液は、複数の狭窄部を通過し、複数の狭窄部は、直列および／または並列に配置されている。

【0123】

一部の実施形態では、入力ＰＢＭＣは個体に対して自己由来である。一部の実施形態では、入力ＰＢＭＣは個体に対して同種異系である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣは個体に対して自己由来である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣは個体に対して同種異系である。

【0124】

本明細書に記載される方法、使用、または組成物のいずれか一つによる一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに十分な時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１～約２４時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約２～約１０時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約３～約６時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のいずれか一つの間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＨＰＶ抗原もしくはＨＰＶ抗原をコードする核酸をＰＢＭＣに導入する前に馴化される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＨＰＶ抗原もしくはＨＰＶ抗原をコードする核酸をＰＢＭＣに導入した後に馴化される。一部の実施形態では、馴化するのに使用されるアジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧ作動薬、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリイノシン－ポリシチジル（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬である。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ７９０９である。

【0125】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣはＢ細胞を含み、一つ以上の共刺激分子は、馴化されていないＰＢＭＣのＢ細胞と比較して、馴化されたＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される。一部の実施形態では、一つ以上の共刺激分子は、馴化されていない複数のＰＢＭＣのＢ細胞と比較して、馴化された複数のＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される。一部の実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６である。一部の実施形態では、馴化された複数のＰＢＭＣは、馴化されていない複数のＰＢＭＣと比較して、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αの一つ以上の発現が増加している。一部の実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αの一つ以上の発現が、馴化されていない複数のＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍、または１０倍を超えて増加している。

【0126】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ヒト細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＨＬＡ－Ａ^＊０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０３、ＨＬＡ－Ａ^＊２４、ＨＬＡ－Ａ^＊１１、ＨＬＡ－Ａ^＊２６、ＨＬＡ－Ａ^＊３２、ＨＬＡ－Ａ^＊３１、ＨＬＡ－Ａ^＊６８、ＨＬＡ－Ａ^＊２９、ＨＬＡ－Ａ^＊２３、ＨＬＡ－Ｂ^＊０７、ＨＬＡ－Ｂ^＊４４、ＨＬＡ－Ｂ^＊０８、ＨＬＡ－Ｂ^＊３５、ＨＬＡ－Ｂ^＊１５、ＨＬＡ－Ｂ^＊４０、ＨＬＡ－Ｂ^＊２７、ＨＬＡ－Ｂ^＊１８、ＨＬＡ－Ｂ^＊５１、ＨＬＡ－Ｂ^＊１４、ＨＬＡ－Ｂ^＊１３、ＨＬＡ－Ｂ^＊５７、ＨＬＡ－Ｂ^＊３８、ＨＬＡ－Ｃ^＊０７、ＨＬＡ－Ｃ^＊０４、ＨＬＡ－Ｃ^＊０３、ＨＬＡ－Ｃ^＊０６、ＨＬＡ－Ｃ^＊０５、ＨＬＡ－Ｃ^＊１２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０１、ＨＬＡ－Ｃ^＊０８、またはＨＬＡ－Ｃ^＊１６のハプロタイプを有するヒト細胞である。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞の二つ以上を含む。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、および／またはＮＫ－Ｔ細胞の一つ以上である。

【0127】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、一つ以上の共刺激分子の発現が増加するようにさらに修飾される。一部の実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣが、一つ以上のサイトカインの発現が増加するようにさらに修飾される。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、またはＩＬ２１である。

【0128】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を惹起する複数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、一つ以上の抗原性ＨＰＶエピトープと一つ以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、他の抗原またはアジュバントと複合体化する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドに処理されることが可能である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、ＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドに処理されることが可能である。

【0129】

一部の実施形態では、方法は、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの複数回の投与を含む。一部の実施形態では、方法は、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの約３回～約９回の投与を含む。一部の実施形態では、方法は、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５回のいずれか一つの投与を含む。一部の実施形態では、方法は、必要に応じてＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの連続的な投与を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの二回の連続した投与の間の時間間隔は、約１日～約３０日の間である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの二回の連続した投与の間の時間間隔は、約２１日である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの二回の連続した投与の間の時間間隔は、約１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、１４、１６、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１５０日のいずれか一つである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの最初の二回の連続した投与の間の時間間隔は、１日または２日である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの最初の二回の連続投与の間の時間間隔は、１日または２日であり、方法は、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの２回を超える（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５回、またはそれ以上の投与であるが、これらに限定されない）投与を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、静脈内、腫瘍内、経口および／または皮下投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、静脈内投与される。

【0130】

一部の実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧ作動薬、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリイノシン－ポリシチジル酸、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬である。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントは、ポリＩ：Ｃである。

【0131】

一部の実施形態では、個体は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０３、ＨＬＡ－Ａ^＊２４、ＨＬＡ－Ａ^＊１１、ＨＬＡ－Ａ^＊２６、ＨＬＡ－Ａ^＊３２、ＨＬＡ－Ａ^＊３１、ＨＬＡ－Ａ^＊６８、ＨＬＡ－Ａ^＊２９、ＨＬＡ－Ａ^＊２３、ＨＬＡ－Ｂ^＊０７、ＨＬＡ－Ｂ^＊４４、ＨＬＡ－Ｂ^＊０８、ＨＬＡ－Ｂ^＊３５、ＨＬＡ－Ｂ^＊１５、ＨＬＡ－Ｂ^＊４０、ＨＬＡ－Ｂ^＊２７、ＨＬＡ－Ｂ^＊１８、ＨＬＡ－Ｂ^＊５１、ＨＬＡ－Ｂ^＊１４、ＨＬＡ－Ｂ^＊１３、ＨＬＡ－Ｂ^＊５７、ＨＬＡ－Ｂ^＊３８、ＨＬＡ－Ｃ^＊０７、ＨＬＡ－Ｃ^＊０４、ＨＬＡ－Ｃ^＊０３、ＨＬＡ－Ｃ^＊０６、ＨＬＡ－Ｃ^＊０５、ＨＬＡ－Ｃ^＊１２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０２、ＨＬＡ－Ｃ^＊０１、ＨＬＡ－Ｃ^＊０８、またはＨＬＡ－Ｃ^＊１６の発現について陽性である。

【0132】

免疫チェックポイントは、免疫系の調節因子であり、免疫応答を抑制する。免疫チェックポイント阻害剤を使用して、免疫応答の増強を促進することができる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は、同時に投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は、連続して投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤および／またはＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、静脈内、腫瘍内、経口および／または皮下投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、静脈内投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、静脈内、腫瘍内、経口および／または皮下投与される。

【0133】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与前に投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。例えば、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の約１時間～約１週間で投与される。例えば、一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、または約７日間で投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日間、約３日間～約４日間、約４日間～約５日間、約５日間～約６日間、約６日間～約７日間で投与される。

【0134】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の約７日間、約１０日間、約１４日間、約１８日間、約２１日間、約２４日間、約２８日間、約３０日間、約３５日間、約４０日間、約４５日間、または約５０日間で投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の約７日間～約１０日間、約１０日間～約１４日間、約１４日間～約１８日間、約１８日間～約２１日間、約２１日間～約２４日間、約２４日間～約２８日間、約２８日間～約３０日間、約３０日間～約３５日間、約３５日間～約４０日間、約４０日間～約４５日間、または約４５日間～約５０日間で投与される。

【0135】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。例えば、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後の約１時間～約１週間で投与される。例えば、一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、または約７日間で投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日間、約３日間～約４日間、約４日間～約５日間、約５日間～約６日間、約６日間～約７日間で投与される。

【0136】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後の約７日間、約１０日間、約１４日間、約１８日間、約２１日間、約２４日間、約２８日間、約３０日間、約３５日間、約４０日間、約４５日間、または約５０日間で投与される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後の約７日間～約１０日間、約１０日間～約１４日間、約１４日間～約１８日間、約１８日間～約２１日間、約２１日間～約２４日間、約２４日間～約２８日間、約２８日間～約３０日間、約３０日間～約３５日間、約３５日間～約４０日間、約４０日間～約４５日間、または約４５日間～約５０日間で投与される。

【0137】

一部の実施形態では、方法は、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物の複数回の投与および／または免疫チェックポイント阻害剤の複数回の投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物および／または免疫チェックポイント阻害剤の二回の投与、三回の投与、四回の投与、五回の投与、六回の投与、七回の投与、八回の投与、九回の投与、十回の投与、十一回の投与、十二回の投与、十三回の投与、十四回の投与、または十五回の投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物および／または免疫チェックポイント阻害剤の五回未満の投与、十回未満の投与、十五回未満の投与、二十回未満の投与、二十五回未満の投与、三十回未満の投与、五十回未満の投与、七十五回未満の投与、百回未満の投与、または二百回未満の投与を含む。

【0138】

例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡを標的とするが、これらに限定されない。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡの一つ以上を標的とする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１と結合する抗体、ＰＤ－Ｌ１と結合する抗体、ＣＴＬＡ－４と結合する抗体、ＬＡＧ３と結合する抗体、またはＴＩＭ－３と結合する抗体、ＴＩＧＩＴと結合する抗体、ＶＩＳＴＡと結合する抗体、ＴＩＭ－１と結合する抗体、Ｂ７－Ｈ４と結合する抗体、またはＢＴＬＡと結合する抗体の一つ以上である。さらなる実施形態では、抗体は、完全長抗体または任意のバリアント、例えば、抗体断片、単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、または断片抗原結合（Ｆａｂ）であり得るが、これらに限定されない。さらなる実施形態では、抗体は、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡの一つ以上に結合および／または一つ以上を阻害する一つ以上の化学的な化合物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡの一つ以上に結合および／または一つ以上を阻害する一つ以上のペプチドである。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１を標的とする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１を標的とする。

【0139】

一部の実施形態では、本明細書に記載される方法のいずれか一つに従って、個体において免疫応答を刺激する方法で使用するための少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む複数のＰＢＭＣが提供される。

【0140】

本明細書に記載されるＨＰＶ関連がんの治療方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、治療は、がん細胞を死滅させること、がん細胞の成長を阻害すること、がん細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍負荷を軽減すること、および疾患に関連する一つ以上の症状を寛解させることのいずれかまたはすべてを含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんを治療する方法は、腫瘍負荷が高い患者よりも腫瘍負荷が低い患者において有効である。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんを治療する方法は、以下の一つ以上において、より高い率をもたらす：がん細胞を死滅させること、がん細胞の増殖を阻害すること、がん細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍負荷を軽減すること、および高い腫瘍負荷を有する患者と比べて、より低い腫瘍負荷を有する患者において、疾患に関連する一つ以上の症状を改善すること。

【0141】

ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物
本明細書に記載される治療方法の一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、細胞内に送達されるＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣが馴化される。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するために、約３７℃で約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間、ＰＢＭＣをアジュバントと培養するプロセスよって馴化される。

【0142】

一部の実施形態では、治療方法は、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの有効量を投与することを含み、少なくとも一つのＨＰＶ抗原ｔを含むＰＢＭＣは、以下により調製される：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過させること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣを、少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを生成する培養すること。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～４および１８～２５のいずれか一つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～４および１８～２５のいずれか一つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0143】

一部の実施形態では、方法は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣの有効量を投与することを含み、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣは、以下により調製される：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過させること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣを、ＨＰＶ抗原およびアジュバントと、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む修飾ＰＢＭＣを生成する培養すること。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～４および１８～２５のいずれか一つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～４および１８～２５のいずれか一つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0144】

一部の態様では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物が提供され、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、以下により調製される：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過させること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣを、少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを生成する培養すること。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～４および１８～２５のいずれか一つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～４および１８～２５のいずれか一つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0145】

一部の実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、ＰＢＭＣの集団内で最小の直径を有する入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のいずれか一つである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のいずれか一つである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約５μｍ、約３μｍ～約３．５μｍ、約３．５μｍ～約４μｍ、約４μｍ～約４．５μｍ、約３．２μｍ～約３．８μｍ、約３．８μｍ～約４．３μｍ、約４．２μｍ～約６μｍ、または約４．２μｍ～約４．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍ、または１５μｍ以下のいずれか一つまたはそれ未満である。一部の実施形態では、入力ＰＭＢＣを含む細胞懸濁液は、複数の狭窄部を通過し、複数の狭窄部は、直列および／または並列に配置されている。一部の実施形態では、入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液は、複数の狭窄部を通過し、複数の狭窄部は、直列および／または並列に配置されている。

【0146】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を惹起する複数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、一つ以上の抗原性ＨＰＶエピトープと一つ以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、他の抗原またはアジュバントと複合体化する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドに処理されることが可能である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、ＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドに処理されることが可能である。

【0147】

一部の実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧ作動薬、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリイノシン－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬である。一部の実施形態では、アジュバントは、ポリイノシン－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）である。

【0148】

用量およびレジメン
一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、有効量は、約０．５×１０^６ｇ～約５×１０^６細胞／ｋｇであり、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、方法は、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤の有効量を投与することをさらに含む。

【0149】

本明細書に記載の方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、ＰＢＭＣの有効量は、少なくとも一つのＨＰＶ抗原０．５×１０^６～約５×１０^６細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣ有効量は、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、および１．０×１０^９細胞／ｋｇのいずれか一つである。一部の実施形態では、有効量は、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９の細胞／ｋｇのいずれか一つである。一部の実施形態では、個体におけるＨＰＶ関連がんを治療する方法が提供され、当該方法は、ＰＢＭＣを含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、有効量は、約０．５×１０^６ｇ～約５×１０^６細胞／ｋｇであり、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む。

【0150】

一部の実施形態では、方法は、免疫チェックポイント阻害剤の有効量を投与することをさらに含み、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４を標的とする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４の拮抗薬である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、イピリムマブである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇのいずれかである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約０．１、０．２、０．５、１．０、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、または約３０ｍｇ／ｋｇのいずれか一つである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約０．１～０．２、０．２～０．５、０．５～１．０、１．０～１．２、１．２～１．４、１．４～１．６、１．６～１．８、１．８～２．０、２．０～２．２、２．２～２．４、２．４～２．６、２．６～２．８、２．８～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１２、１２～１４、１４～１６、１６～１８、１８～２０、２０～２５、または２５～３０ｍｇ／ｋｇのいずれか一つである。

【0151】

一部の実施形態では、方法は、免疫チェックポイント阻害剤の有効量を投与することをさらに含み、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１を標的とする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１の拮抗薬である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブである。一部の実施形態では、ニボルマブの有効量は、約３０ｍｇ～約１０００ｍｇである。一部の実施形態では、ニボルマブの有効量は、約３００ｍｇ～約４００ｍｇのいずれか一つである。一部の実施形態では、ニボルマブの有効量は、約３６０ｍｇである。一部の実施形態では、ニボルマブの有効量は、約３０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０、４００、４５０、５００、５５０、６００、７００、８００、９００または１０００ｍｇのいずれか一つである。一部の実施形態では、イピリムマブの有効量は、約３０～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、２００～２５０、２５０～３００、３００～３２０、３２０～３４０、３４０～３６０、３６０～３８０、３８０～４００、４００～４５０、５００～５５０、５５０～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、９００～１０００ｍｇのいずれか一つである。

【0152】

一部の実施形態では、方法は、免疫チェックポイント阻害剤の有効量を投与することをさらに含み、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１を標的とする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、アテゾリズマブである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約１００ｍｇ～約２５００ｍｇである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約９００ｍｇ～約１５００ｍｇである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約１２００ｍｇのいずれか一つである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１４００、１５００、１６００、１８００、２０００、２２００、または２５００ｍｇのいずれか一つである。一部の実施形態では、アテゾリズマブの有効量は、約１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、９００～１０００、１０００～１１００、１１００～１２００、１２００～１３００、１３００～１４００、１４００～１５００、１５００～１６００、１６００～１８００、１８００～２０００、２０００～２２００、２２００～２５００ｍｇのいずれか一つである。

【0153】

一部の実施形態では、治療方法は、本明細書に記載されるＰＢＭＣを個体に投与する複数の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のいずれか）サイクルを含む。例えば、一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原がＰＢＭＣに入るように、入力ＰＢＭＣを狭窄部を介して通過させて、摂動入力ＰＢＭＣを形成することによって産生された、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを、個体に２、３、４、５、６、７、８、９、１０回またはそれ以上の頻度で、投与することによって、抗原に対して個体にワクチン接種をする方法が提供される。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの任意の二回の連続投与の間の期間は、少なくとも約１日である（少なくとも約２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、またはこれら値の範囲を含むそれ以上のいずれか）。

【0154】

本明細書に記載の方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０週間のサイクルのいずれか一つで投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０週間のサイクルのいずれか一つの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、３週間のサイクルで投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、６週間のサイクルで投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、治療サイクルにおける１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日目の一つ以上で投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、治療サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、治療サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、治療サイクルの１日目および２日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、治療サイクルの１日目および３日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、治療サイクルの８日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、三週間のサイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、三週間のサイクルの２日目にさらに投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ＰＢＭＣ組成物供給が枯渇するまで、または一年間、３週間サイクルで投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、少なくとも約三か月、六か月、九か月、一年間、または二年間、個体に投与される。

【0155】

一部の実施形態では、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９，、および１．０×１０^９細胞／ｋｇ のＰＢＭＣのいずれか一つが、各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ～約５×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、または約５．０×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、および１．０×１０^９細胞／ｋｇのいずれか一つが、各三週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、および１．０×１０^９細胞／ｋｇのいずれか一つが、最初の三週間サイクルの１日目および２日目に投与され、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、および１．０×１０^９細胞／ｋｇのいずれか一つが、その後の三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、または約５．０×１０^６細胞／ｋｇは、最初の三週間サイクルの１日目および２日目に投与され、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、または約５．０×１０^６細胞／ｋｇは、その後の三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ～約５×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、または約５．０×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、０．５×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、０．５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの１日目に投与され、０．５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、０．５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの１日目に投与され、０．５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの３日目に投与される。一部の実施形態では、２．５×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、２．５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの１日目に投与され、２．５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、２．５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの１日目に投与され、２．５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの３日目に投与される。一部の実施形態では、２．５×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの１日目に投与され、５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの２日目に投与される。一部の実施形態では、５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの１日目に投与され、５×１０^６細胞／ｋｇは、各三週間サイクルの３日目に投与される。

【0156】

一部の実施形態では、方法は、免疫チェックポイント阻害剤の一つ以上の有効量を投与することをさらに含み、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４を標的とする。ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、および／またはＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、サイクル毎に１、２、３、４、５、６回またはそれ以上の回数で投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体、および／またはＰＤ－１に結合する抗体、および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、三週間サイクル毎に一回投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、三週間サイクル毎に一回投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、三週間サイクル毎に一回投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、三週間サイクル毎に一回投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、二つの三週間サイクル毎に一回投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、二つの三週間サイクル毎に一回投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、二つの三週間サイクル毎に一回投与される。

【0157】

本明細書に記載の方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０週間のサイクルのいずれか一つで投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１－、２－、３－、４－、５－、６－、７－、８－、９－、、または１０週間のサイクルのいずれか一つの１日目に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、治療サイクルの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日目のいずれか一日に、一回以上投与される。

【0158】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体であり、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、最大四用量にわたって投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体の有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブである。一部の実施形態では、イピリムマブは、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブであり、イピリムマブは、各三週間サイクルの１日目に約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0159】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体であり、ＰＤ－１に結合する抗体は、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブである。一部の実施形態では、ニボルマブは、約３６０ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブであり、ニボルマブは、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に、約３６０ｍｇの用量で投与される。

【0160】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤の一つ以上は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体を含み、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、隔三週間サイクルの１日目（すなわち、各６週間サイクルの１日目、または二つの三週間サイクルの最初の三週間サイクルの１日目）に投与され、ＰＤ－１に結合する抗体は、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体はイピリムマブであり、ＰＤ－１に結合する抗体はニボルマブである。一部の実施形態では、イピリムマブは、約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ニボルマブは、約３６０ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブであり、イピリムマブは、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、各隔三週間サイクルの１日目（すなわち、各６週間サイクルの１日目、または二つの三週間サイクルの最初の三週間サイクルの１日目）に投与され、ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブであり、ニボルマブは、約３６０ｍｇの用量で、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される。

【0161】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体であり、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各三週間サイクルの１日目に投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、アテゾリズマブである。一部の実施形態では、アテゾリズマブは、約１２００ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、アテゾリズマブであり、アテゾリズマブは、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に、約１２００ｍｇの用量で投与される。

【0162】

ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物を生成する方法
一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物を生成する方法であって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、細胞内でＰＢＭＣに送達される方法が、提供される。例えば、本明細書に記載される治療方法における使用のための組成物を生成するための方法。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣを含む組成物を生成する方法であって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが、細胞内でＰＢＭＣに送達される方法が、提供される。

【0163】

一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、以下を含むプロセスにより調製される：ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす、通過すること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣの集団を、少なくとも一つのＨＰＶ抗原およびアジュバントと、抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを生成する、培養すること。

【0164】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドを含む。

【0165】

一部の実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のいずれか一つである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約１５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約４．２μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約４．２μｍ～約４．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約３．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３．５μｍ～約４μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約４μｍ～約４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３．２μｍ～約３．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３．８μｍ～約４．３μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍ、または１５μｍ以下のいずれか一つまたはそれ未満である。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３．０μｍ、３．１μｍ、３．２μｍ、３．３μｍ、３．４μｍ、３．５μｍ、３．６μｍ、３．７μｍ、３．８μｍ、３．９μｍ、４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍ、または５．０μｍ以下のいずれか一つまたはそれ未満である。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、４．５μｍである。一部の実施形態では、入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液は、複数の狭窄部を通過し、複数の狭窄部は、直列および／または並列に配置されている。

【0166】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を惹起する複数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、一つ以上の抗原性ＨＰＶエピトープと一つ以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、他の抗原またはアジュバントと共に送達される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープと一つ以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと、複合体を形成する。一部の実施形態では、ＨＰＶは、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２－特異的エピトープから構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６抗原またはＨＰＶ Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドを含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドに処理されることが可能である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、ＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドに処理されることが可能である。

【0167】

一部の実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧ作動薬、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリイノシン－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬である。一部の実施形態では、アジュバントは、ポリイノシン－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）である。

【0168】

ＨＰＶ抗原
本明細書に記載の方法による一部の実施形態では、外因性抗原は、ＨＰＶ抗原である。パピローマウイルスは、直径約５５ｎｍのビリオンサイズを有する小さな非エンベロープＤＮＡウイルスである。１００を超えるＨＰＶ遺伝子型が完全に特徴付けられており、より多くの数が存在すると推定されている。ＨＰＶは、子宮頸がん、ならびに一部の外陰部がん、膣がん、陰茎がん、中咽頭がん、肛門がん、および直腸がんの公知の原因である。ほとんどのＨＰＶ感染は無症状であり自然に消失するが、発がん性ＨＰＶ型の一つによる持続性感染は、前がん状態またはがんに進行し得る。他のＨＰＶ関連疾患としては、一般的ないぼ、足底いぼ、扁平いぼ、肛門性器いぼ、肛門病変、表皮発育異常症、巣状上皮性過形成、口腔パピローマ、疣贅嚢胞、喉頭部パピローマ、扁平上皮内病変（ＳＩＬ）、子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰部上皮内腫瘍（ＶＩＮ）、および膣上皮内腫瘍（ＶＡＩＮ）が挙げられる。公知のＨＰＶ型の多くは、良性病変を引き起こし、サブセットは発がん性である。疫学的および系統的関係に基づき、ＨＰＶ型は、十五の「高リスク型」（ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２）と、三つの「推定高リスク型」（ＨＰＶ２６、５３、および６６）とに分類され、これらはともに、低悪性度および高悪性度の子宮頸部の変化およびがん、ならびに他の肛門性器がん、例えば、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、および肛門周囲がんなど、ならびに頭頸部がんとして現れることが知られている。最近では、高リスク型のＨＰＶ１６および１８と乳がんとの関連も記述された。「低リスク型」に分類される十一種類のＨＰＶ型（ＨＰＶ６、１１、４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２、および８１型）が、良性かつ低悪性度の子宮頸部変化、生殖器いぼ、および再発性呼吸器パピローマとして現れることが知られている。皮膚ＨＰＶの５、８、および９２型は、皮膚がんに関連している。一部のＨＰＶ関連がんでは、免疫系が低下し、それに応じて抗腫瘍応答が著しく損なわれる。Ｓｕｒｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ，Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７（２０１７）を参照されたい。一部の実施形態では、外因性抗原は、同じおよびまたは異なる抗原に対する応答を惹起する複数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、複数の抗原のプール中の抗原は、複数の抗原のプール中の他の抗原への免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープと一つ以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと、複合体を形成する。一部の実施形態では、ＨＰＶは、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２－特異的エピトープから構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６抗原またはＨＰＶ Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドを含み、ＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドは、配列番号１～４のいずれか一つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドは、配列番号１８～２５のいずれか一つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原が、配列番号１８～２５のいずれか一つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１９と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２１のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２３のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２４のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２５のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか一つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか一つのアミノ酸配列の少なくとも一つを含む複数の抗原である。一部の実施形態では、外因性抗原は、配列番号１８～２５のいずれか一つの２、３、４、５、６、７、または８のアミノ酸配列を含む複数の抗原である。一部の実施形態では、外因性抗原は、配列番号１９と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列、および配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む複数の抗原である。一部の実施形態では、外因性抗原は、配列番号１９のアミノ酸配列および配列番号２３のアミノ酸配列を含む複数の抗原である。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合したペプチドのプール内に含まれる。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合したペプチドのプール内に含まれ、各ペプチドは、一つ以下の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合で結合したペプチドのプール内に含まれるものであり、配列番号１９のアミノ酸配列と配列番号２５のアミノ酸配列とが、別個のペプチド内に含有される。

【0169】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を惹起する複数のポリペプチドのプール内にある。一部の実施形態では、複数の抗原のプール中の抗原は、複数の抗原のプール中の他の抗原への免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶ抗原と一つ以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと、複合体を形成する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２－特異的エピトープから構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ１１－特異的エピトープから構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ｂ７－特異的エピトープから構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ｃ８－特異的エピトープから構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、完全長ＨＰＶタンパク質のＮ末端ドメインの一部または全てを含む。

【0170】

本明細書に記載の方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、複数の免疫原性エピトープを含む複数のＨＰＶ抗原を含む。さらなる実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含むＰＢＭＣを個体に投与した後、複数の免疫原性エピトープのいずれもが、他の免疫原性エピトープのいずれかに対する個体における免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ポリペプチドであり、また免疫原性エピトープは、免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドと融合されている。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、免疫原性ペプチドエピトープおよび一つ以上の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、Ｎ末端および／またはＣ末端で異種ペプチド配列に隣接する免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、隣接異種ペプチド配列は、疾患関連免疫原性ペプチドに由来する。一部の実施形態では、隣接異種ペプチド配列は、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、隣接異種ペプチド配列は、免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドに処理されることが可能である。

【0171】

アジュバント
本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答を直接的にまたは間接的のどちらかで調節するおよび／または生じる物質を指すことができる。本発明の一部の実施形態では、アジュバントは、ＰＢＭＣ集団に細胞内に送達され、アジュバントを含む修飾ＰＢＭＣを形成する。一部の例では、アジュバントは、ＨＰＶ抗原単独と比較して、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答を増強するＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣと併せて投与される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、狭窄部を介してＰＢＭＣが通過する前、通過中、または通過後にアジュバントと培養されて、ＰＢＭＣの馴化（例えば、これに限定されないが成熟）を促進する。アジュバントを使用して、ＨＰＶ抗原に対する免疫細胞応答（例えば、Ｔ細胞応答）の誘発を押し上げることができる。例示的なアジュバントとしては、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）作動薬、レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ－Ｉ）作動薬、ならびにＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、および／またはＴＬＲ９の作動薬が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアジュバントには、ＣｐＧ ＯＤＮ、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、ポリイノシン：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、イミキモド（Ｒ８３７）、レシキモド（Ｒ８４８）、またはリポ多糖（ＬＰＳ）が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、アジュバントは、ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧ作動薬、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリイノシン：ポリシチジル酸（ポリＩ： Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬である。特定の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ １０１８、ＣｐＧ ＯＤＮ １５８５、ＣｐＧ ＯＤＮ ２２１６、ＣｐＧ ＯＤＮ ２３３６、ＣｐＧ ＯＤＮ １６６８、ＣｐＧ ＯＤＮ １８２６、ＣＰＧ ＯＤＮ ２００６、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００７、ＣｐＧ ＯＤＮ ＢＷ００６、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｄ－ＳＬ０１、ＣｐＧ ＯＤＮ ２３９５、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｍ３６２、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｄ－ＳＬ０３の群からの選択を含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ １８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ（配列番号３０））、またはＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（ＣｐＧ ７９０９としても知られる）（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号３１））オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ７９０９である。一部の実施形態では、ＲＩＧ－Ｉ作動薬は、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）を含む。複数のアジュバントを、ＨＰＶ抗原との併用により、免疫応答の惹起を増強することもできる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、複数のアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、複数のアジュバントによって馴化される。複数のアジュバントを、ＨＰＶ抗原との併用により、免疫応答の惹起を増強することもできる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、複数のアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、アジュバントＣｐＧ ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧ作動薬、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリイノシン：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬の任意の組み合わせをさらに含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、アジュバントＣｐＧ ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧ作動薬、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリイノシン：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬の任意の組み合わせをさらに含む。

【0172】

ＰＢＭＣ内の構成細胞
一部の実施形態では、本明細書に開示する方法は、それを必要とする個体に少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物の有効量の投与を提供し、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、細胞内に送達される。一部の実施形態では、ＰＭＢＣの組成物は、免疫細胞の組成物である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの組成物は、複数のＰＢＭＣを含む。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、および／またはＮＫ－Ｔ細胞の一つ以上である。

【0173】

本発明の特定の実施形態では、組成物のＨＰＶ抗原を含む細胞は、ＰＢＭＣである。本明細書で使用される場合、ＰＢＭＣは、個体から取得される全血からの白血球アフェレーシスなどのアフェレーシスによって単離され得る。また、同じ個体または異なる個体由来の異なるプールのＰＢＭＣを混合することによって再構成されたＰＢＭＣ組成物も提供される。他の例では、ＰＢＭＣは、生成されたプロファイルを有する混合細胞組成物に異なる細胞集団を混合することによって再構成することもできる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを再構成するために使用される細胞集団は、混合された細胞集団（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球の一つ以上の混合物）である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを再構成するために使用される細胞集団は、精製された細胞集団（例えば、精製されたＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球）である。追加の例では、ＰＢＭＣ組成物の再構成に使用される異なる細胞集団は、同じ個体から（例えば、自己由来）単離するか、または異なる個体から（例えば、同種異系および／もしくは異種で）単離することができる。

【0174】

したがって、本明細書に記載される方法による一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞の一つ以上を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ２０＋Ｂ細胞、ＣＤ１４＋単球、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞の一つ以上を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率は、全血中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率と本質的に同じである。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率は、全血由来の白血球アフェレーシス産物中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率と本質的に同じである。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率は、全血中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率と１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、または５０％以下のいずれか一つで異なる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率は、全血中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率と１０％以下のいずれか一つで異なる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率は、全血由来の白血球アフェレーシス産物中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率と１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、または５０％以下のいずれか一つで異なる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率は、全血由来の白血球アフェレーシス産物中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比率と１０％以下のいずれか一つで異なる。

【0175】

本明細書に記載の方法による一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約２５％～約８０％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約３％～約３５％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約４％～約４５％は、ＮＫ細胞である。

【0176】

本明細書に記載される方法による一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％のいずれか一つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約２５％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、、または３０％のいずれか一つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約１．５％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、、または３０％のいずれか一つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％ 、または４５％のいずれか一つは、単球である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約４％は、単球である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約２５％はＴ細胞であり、ＰＢＭＣの少なくとも約１．５％はＢ細胞であり、ＰＢＭＣの少なくとも約３％はＮＫ細胞であり、およびＰＢＭＣの少なくとも約４％は単球である。

【0177】

本明細書に記載される方法による一部の実施形態では、ＰＢＭＣの約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、、または９０％以下のいずれか一つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの約８０％以下は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの約５％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２５％、３０％、３５％、４０％，、または５０％以下のいずれか一つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの約３０％以下は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、または６０％以下のいずれか一つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの約３５％以下は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの約５％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２５％、３０％、３５％、４０％、または５０％以下のいずれか一つは、単球である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの約４５％以下は、単球である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの約８０％以下はＴ細胞であり、ＰＢＭＣの約３０％以下はＢ細胞であり、ＰＢＭＣの約２０％以下はＮＫ細胞であり、ＰＢＭＣの約４５％以下は単球である。

【0178】

本明細書に記載される方法による一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、７０％～７５％、または７５％～８０％のいずれか一つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約２５％～約８０％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約１％～１．５％、１．５％～２．５％、２．５％～４％、４％～６％、６％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、２０％～２５％、または２５％～３０％のいずれか一つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約１％～２％、２％～３％、３％～５％、５％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、または３５％～４０％のいずれか一つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約３．０％～約３５％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約２％～４％、４％～６％、６％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、または３０％～４５％のいずれか一つは、単球である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約４％～約４５％は、単球である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約２５％～約８０％はＴ細胞であり、修飾ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％はＢ細胞であり、修飾ＰＢＭＣの約３％～約３５％はＮＫ細胞であり、および修飾ＰＢＭＣの約４％～約４５％は単球である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約２５％～約８０％はＴ細胞であり、修飾ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％はＢ細胞であり、修飾ＰＢＭＣの約３％～約２０％はＮＫ細胞であり、および修飾ＰＢＭＣの約４％～約４５％は単球である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの約２５％～約７０％はＴ細胞であり、修飾ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％はＢ細胞であり、修飾ＰＢＭＣの約３．５％～約２０％はＮＫ細胞であり、および修飾ＰＢＭＣの約４％～約２５％は単球である。

【0179】

本明細書で使用される場合、ＰＢＭＣは、単核血球（例えば、リンパ球および単球）の混合細胞集団の組成物を操作した後に生成することもできる。一部の事例では、ＰＢＭＣは、単核血球の混合細胞集団内の特定の亜集団（例えばＢ細胞）を低減（例えば枯渇）させた後に生成される。個体における単核血球の混合細胞集団中の組成物を操作して、細胞集団を同じ個体の全血由来の白血球アフェレーシス産物にいっそう厳密に類似させることができる。他の例では、単核血球（例えば、マウス脾細胞）の混合細胞集団中の組成物を操作して、細胞集団をヒト全血由来の白血球アフェレーシス産物から単離されたヒトＰＢＭＣにいっそう厳密に類似させることもできる。

【0180】

本発明の一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、ＰＢＭＣに見られる細胞の集団である。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣ組成物は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞の一つ以上を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ２０＋Ｂ細胞、ＣＤ１４＋単球、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞の一つ以上を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のＴ細胞のいずれかを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、１００％のＴ細胞を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のＢ細胞のいずれかを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、１００％のＢ細胞を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のＮＫ細胞のいずれかを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、１００％のＮＫ細胞を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の単球のいずれかを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、１００％の単球を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の樹状細胞のいずれかを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、１００％の樹状細胞を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のＮＫ－Ｔ細胞のいずれかを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＭＢＣの組成物は、１００％のＮＫ－Ｔ細胞を含む。

【0181】

少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの製造可能性
本明細書に記載される方法または組成物のいずれか一つによる一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの生存率は、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％のいずれか一つである。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの生存率は、少なくとも約９０％である。

【0182】

一部の実施形態では、治療方法は、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの有効量を投与することを含み、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む ＰＢＭＣは、以下により調製される：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣを、少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを生成し、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの生存率は、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％のいずれか一つである、培養すること。

【0183】

本明細書に記載される方法または組成物のいずれか一つによる一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣのエンドツーエンドの処理時間（例えば、以下の一つ以上を含む処理：患者のｌｅｕｋｏｐａｋの水簸、ＰＢＭＣの組成物の操作、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの生成および／または調整など）は、約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４時間のいずれか一つである。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣのエンドツーエンドの処理時間は、約１５時間である。

【0184】

一部の実施形態では、治療方法は、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの有効量を投与することを含み、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む ＰＢＭＣは、以下により調製される：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣを、少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを生成し、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣのエンドツーエンドの処理時間は、約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３ 、または２４時間のいずれか一つである、培養すること。

【0185】

一部の実施形態では、本明細書に記載される方法または組成物のいずれか一つによると、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣは、ＨＰＶ抗原特異的レスポンダーＴ細胞と共培養する場合、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬのＩＦＮγ－分泌を刺激することができる。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣは、ＨＰＶ抗原特異的レスポンダーＴ細胞と共培養する場合、少なくとも約３００、５００、７５０、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００，、または１００００ｐｇ／ｍＬのいずれか一つのＩＦＮγ－分泌を刺激することができる。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣの少なくとも約９０％のバッチは、ＨＰＶ抗原特異的レスポンダーＴ細胞と共培養する場合、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬのＩＦＮγ－分泌を刺激することができる。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％ または９８％のバッチのいずれか一つは、ＨＰＶ抗原特異的レスポンダーＴ細胞と共培養する場合、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬのＩＦＮγ－分泌を刺激することができる。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣの１００％のバッチは、ＨＰＶ抗原特異的レスポンダーＴ細胞と共培養する場合、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬのＩＦＮγ－分泌を刺激することができる。

【0186】

一部の実施形態では、治療方法は、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの有効量を投与することを含み、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含み、ＰＢＭＣは、以下により調製される：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣを、少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを生成し、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣは、ＨＰＶ抗原特異的レスポンダーＴ細胞と共培養する場合、少なくとも約３００、５００、７５０、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、または１００００ｐｇ／ｍＬのいずれか一つのＩＦＮγ－分泌を刺激することができる、培養すること。

【0187】

一部の実施形態では、治療方法は、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの有効量を投与することを含み、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、以下により調製される：ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、およびｂ）摂動入力ＰＢＭＣを、少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを生成し、修飾ＰＢＭＣの少なくとも二つ以上のバッチが調製され、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％のいずれか一つのバッチは、ＨＰＶ抗原特異的レスポンダーＴ細胞と共培養する場合、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬのＩＦＮγ－分泌を刺激することができる、培養すること。

【0188】

少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣのさらなる修飾
本明細書に記載する方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、ＰＢＭＣの組成物は、この薬剤を含まない対応するＰＭＢＣの組成物と比較して、ＰＭＢＣの生存率および／または機能を増強するある薬剤をさらに含む。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの組成物は、凍結融解サイクル時に、ＰＢＭＣの生存率および／または機能を、この薬剤を含まない対応するＰＢＭＣの組成物と比較して、ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強するある薬剤をさらに含む。一部の実施形態では、薬剤は、凍結保存剤および／または低温保存剤である。一部の実施形態では、凍結保存剤も低温保存剤も、薬剤を含むＰＢＭＣ組成物中で、任意の凍結融解サイクルの前にその薬剤を含まない対応するＰＢＭＣの組成物と比較して、１０％または２０％を超える細胞死を生じさせない。一部の実施形態では、凍結保存剤および／または低温保存剤を含むＰＢＭＣ組成物の凍結融解サイクルは、凍結保存剤および低温保存剤を含まない対応するＰＢＭＣ組成物の凍結融解サイクルと比較して、生存細胞の１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％減少した損失を生じる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、または９５％は、最大１回、２回、３回、４回、５回の凍結融解サイクル後に生存可能である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約７０％、約８０％、または９０％は、最大１回、２回、３回、４回、５回の凍結融解サイクル後に生存可能である。一部の実施形態では、薬剤は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定化剤、または補因子である。一部の実施形態では、薬剤は、アルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、薬剤は、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンの一つ以上である。一部の実施形態では、薬剤は、ヒトアルブミンである。一部の実施形態では、薬剤は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ－スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、またはＥＤＴＡの一つ以上である。一部の実施形態では、二価金属カチオンは、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、またはＣａ２＋の一つ以上である。一部の実施形態では、薬剤は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＤＭＳＯ、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、イノシン、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、ナトリウム金属イオン、カリウム金属イオン、マグネシウム金属イオン、塩化物、アセテート、グルコネート、スクロース、水酸化カリウム、または水酸化ナトリウムの一つ以上である。一部の実施形態では、薬剤は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）の一つ以上である。

【0189】

本明細書に記載される方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、ＰＢＭＣの組成物は、一つ以上の共刺激分子の発現を増加させるようにさらに改変された複数の修飾ＰＢＭＣを含む。一部の実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、、またはＣＤ１１２である。一部の実施形態では、複数の修飾ＰＢＭＣは、一つ以上の共刺激分子の発現の増加をもたらす核酸を含む。一部の実施形態では、複数の修飾ＰＢＭＣは、一つ以上の共刺激分子の発現の増加をもたらすｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、共刺激分子は、Ｔ細胞活性化の刺激におけるシグナル２エフェクターである。

【0190】

本明細書に記載の方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、一つ以上のサイトカインの発現を増加させるためにさらに修飾される。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、またはＩＦＮα２の一つ以上である。一部の実施形態では、複数の修飾ＰＢＭＣは、一つ以上のサイトカインの発現および／または分泌の増加をもたらす核酸を含む。一部の実施形態では、サイトカインは、Ｔ細胞活性化の刺激におけるシグナル３エフェクターである。

【0191】

本明細書に記載される方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、複数の修飾ＰＢＭＣ中の少なくとも一つの細胞は、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、ＭＨＣクラスＩ発現を調節するためのさらなる修飾を含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、ＨＬＡ－Ａ０２ ＭＨＣクラスＩの発現を調節するためのさらなる修飾を含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、ＨＬＡ－Ａ^＊１１ ＭＨＣクラスＩの発現を調節するためのさらなる修飾を含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、ＨＬＡ－Ｂ^＊０７ ＭＨＣクラスＩの発現を調節するためのさらなる修飾を含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、ＨＬＡ－Ｃ^＊０８ ＭＨＣクラスＩの発現を調節するためのさらなる修飾を含む。ＨＬＡ発現の上方制御をもたらすことができる薬剤には、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、および放射線が含まれるが、これらに限定されない。

【0192】

一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、ＭＨＣクラスＩＩ発現を調節するためのさらなる修飾を含む。一部の実施形態では、同種異系状況における修飾ＰＢＭＣの投与に応答して、個体で開始される自然免疫応答は、同種異系状況における対応するさらなる修飾を含まない修飾ＰＢＭＣの投与に応答して個体で開始される自然免疫応答と比較して減少する。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの投与された個体におけるそれらの循環半減期は、それらの投与された個体におけるさらなる修飾を含まない対応する修飾ＰＢＭＣの循環半減期と比較して増加する。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの投与された個体におけるそれらの循環半減期は、それらの投与された個体におけるさらなる修飾を含まない対応する修飾ＰＢＭＣの循環半減期と比較して、約１０％、２５％、５０％、７５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、２００倍、または５００倍以上のいずれか一つで増加する。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣの投与された個体におけるそれらの循環半減期は、それらの投与された個体におけるさらなる修飾を含まない対応する修飾ＰＢＭＣの循環半減期と本質的に同じである。

【0193】

本明細書に記載の方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、プロセスは、さらなる培養ステップを行わずに調製された対応するＰＢＭＣと比較して、ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する剤とＰＢＭＣの組成物を培養するステップをさらに含む。

【0194】

一部の実施形態では、組成物は、０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、１．０×１０^９、０．５×１０^１０、１．０×１０^１０ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一つを含む。一部の実施形態では、有効量は、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一つである。一部の実施形態では、組成物は、１×１０^４、１×１０^５、１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、１×１０^７、１×１０^８ ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一つを含む。一部の実施形態では、組成物は、約１×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。

【0195】

一部の実施形態では、組成物は、約５×１０^４～約５×１０^９ＰＢＭＣを含む。一部の実施形態では、組成物は、約５×１０^６～約５×１０^７ＰＢＭＣを含む。一部の実施形態では、組成物は、０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、１．０×１０^９ 、および５．０×１０^９ＰＢＭＣのいずれか一つを含む。一部の実施形態では、組成物は、０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、または約１．０×１０^９～約５×１０^９ＰＢＭＣのいずれか一つを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８のＰＢＭＣのいずれか一つを含む。一部の実施形態では、組成物は、約２×１０^７ＰＢＭＣ～約３×１０^７ＰＢＭＣを含む。一部の実施形態では、組成物は、２．１×１０^７、２．２×１０^７、２．３×１０^７、２．４×１０^７、２．５×１０^７、２．６×１０^７、２．７×１０^７、２．８×１０^７、２．９×１０^７、および３．０×１０^７ＰＢＭＣのいずれか一つを含む。一部の実施形態では、組成物は、約２．７５×１０^７ＰＢＭＣを含む。一部の実施形態では、組成物は、約２．５×１０^７ＰＢＭＣを含む。

【0196】

一部の実施形態では、組成物は、凍結保存培地を含む。一部の実施形態では、組成物は、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％，、または８５％（ｗ／ｗ）のいずれか一つの濃度の凍結保存培地を含む。一部の実施形態では、組成物は、約２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、７０％～７５％、７５％～８０％、または８０％～８５％（ｗ／ｗ）のいずれか一つの濃度の凍結保存培地を含む。

【0197】

一部の実施形態では、組成物は、低温保存培地を含む。一部の実施形態では、組成物は、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％（ｗ／ｗ）のいずれか一つの割合の低温保存培地を含む。一部の実施形態では、組成物は、約１０％～１５％、１５％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、または６５％～７０％（ｗ／ｗ）のいずれか一つの割合の低温保存培地を含む。

【0198】

一部の実施形態では、組成物は、約２％、３％、４％、５％、８％、または１０％（ｗ／ｗ）のいずれか一つの割合のヒト血清アルブミンを含む。一部の実施形態では、組成物は、約２％～３％、３％～５％、５％～８％、または８～１０％（ｗ／ｗ）のいずれか一つの割合のヒト血清アルブミンを含む。一部の実施形態では、ヒト血清アルブミンは、ヒト血清アルブミン製剤として製剤に加えられる。一部の実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミン溶液の割合は、約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％（ｗ／ｗ）のいずれか一つである。一部の実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミン溶液の割合は、約１０％～１５％、１５％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、または４５％～５０％（ｗ／ｗ）のいずれかである。

【0199】

一部の実施形態では、製剤のｐＨは、約５．０～約９．５である。一部の実施形態では、製剤のｐＨは、約６．０～約８．５である。一部の実施形態では、製剤のｐＨは、約７．４である。一部の実施形態では、製剤のｐＨは、約５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０のいずれか一つである。一部の実施形態では、製剤のｐＨは、約７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８．０のいずれか一つである。一部の実施形態では、製剤のｐＨは、約５～約６、約６～約７、約７～約８、約８～約９、または約９～約１０のいずれか一つである。一部の実施形態では、製剤のｐＨは、約７～約７．１、約７．１～約７．２、約７．２～約７．３、約７．３～約７．４、約７．４～約７．５、約７．５～約７．６、約７．６～約７．７、約７．７～約７．８、約７．８～約７．９、または約７．９～約８．０のいずれか一つである。

【0200】

一部の実施形態では、凍結保存培地は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含む。一部の実施形態では、組成物は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０中に約５×１０^６～約５×１０^７ＰＢＭＣを含むＰＢＭＣを含む。

【0201】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ～約５×１０^７ＰＢＭＣ、ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の低温保存培地、およびｄ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である。

【0202】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約１×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７ＰＢＭＣ／ｍＬ、ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の低温保存培地、およびｄ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である。

【0203】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約２．７５×１０^７ＰＢＭＣ、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、およびｄ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．４である。

【0204】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、およびｄ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．４である。

【0205】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ～約５×１０^７ＰＢＭＣ、ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である。

【0206】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約１×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７ＰＢＭＣ／ｍＬ、ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である。

【0207】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約２．７５×１０^７ＰＢＭＣ、ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．４である。

【0208】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ、ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミンを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．４である。

【0209】

ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物の生成に使用される狭窄部
一部の実施形態では、本発明は、免疫応答を刺激するＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物を提供する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、細胞内でＰＢＭＣに送達される。ペイロードをＰＢＭＣに導入する方法は、当技術分野で公知である。

【0210】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、細胞の膜に一過性の細孔が導入され、それによりＨＰＶ抗原が細胞に入ることができるように、細胞に狭窄部を通過させることによってＰＢＭＣに導入される。狭窄部による細胞内への化合物の送達の例は、ＷＯ２０１３／０５９３４３、ＷＯ２０１５／０２３９８２、ＷＯ２０１６／０７０１３６、ＷＯ２０１７０４１０５０、ＷＯ２０１７００８０６３、ＷＯ２０１７／１９２７８５、ＷＯ２０１７／１９２７８６、ＷＯ２０１９／１７８００５、ＷＯ２０１９／１７８００６、ＷＯ２０２０／０７２８３３、ＷＯ２０２０／１５４６９６，および国際公開第２０２０／１７６７８９号によって提供される。

【0211】

一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原およびアジュバントは、ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を狭窄部に通過させることによって、本発明のＰＢＭＣを産生するためにＰＢＭＣ内に送達され、狭窄部は、入力ＰＢＭＣを変形させ、それによってＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動入力ＰＢＭＣ内に入るように、入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす。一部の実施形態では、狭窄部は、マイクロ流体チャネル内に含まれる。一部の実施形態では、複数の狭窄部を、マイクロ流体チャネル内で並列および／または直列に配置することができる。

【0212】

一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部は、入口部分、中心点、および出口部分を含む。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部の長さ、深さ、および幅は変動し得る。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部の幅は、ＰＢＭＣ細胞の直径の関数である。ＰＢＭＣの直径を決定する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、ハイコンテンツイメージング、細胞カウンタ、またはフローサイトメトリーである。

【0213】

一部の実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、ＰＢＭＣの集団内で最小の直径を有する入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のいずれか一つである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のいずれか一つである。

【0214】

狭窄部によるＰＢＭＣへのＨＰＶ抗原の送達の一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約１５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約４．２μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約４．２μｍ～約４．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約３．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３．５μｍ～約４μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約４μｍ～約４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３．２μｍ～約３．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３．８μｍ～約４．３μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍ、または１５μｍ以下のいずれか一つまたはそれ未満である。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、約３．０μｍ、３．１μｍ、３．２μｍ、３．３μｍ、３．４μｍ、３．５μｍ、３．６μｍ、３．７μｍ、３．８μｍ、３．９μｍ、４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍ、または５．０μｍ以下のいずれか一つまたはそれ未満である。一部の実施形態では、狭窄部の幅は、４．５μｍである。

【0215】

ＰＢＭＣ内への化合物の送達に影響を与え得るパラメータの例としては、以下に限定されないが、狭窄部の寸法、狭窄部の入射角、狭窄部の表面特性（例えば、粗さ、化学的な変形、親水性、疎水性など）、動作時の流速（例えば、狭窄部を通過する細胞の通過時間）、細胞濃度、細胞懸濁液中の化合物の濃度、細胞懸濁液中の緩衝液、および狭窄部を通過した後にＰＢＭＣが回収または培養される時間の長さ、が挙げられ、これらは送達された化合物のＰＢＭＣ内への通過に影響を与え得る。ＰＢＭＣへの化合物の送達に影響を与えるさらなるパラメータとしては、狭窄部での入力ＰＢＭＣの速度、狭窄部でのせん断速度、細胞懸濁液の粘度、流速に垂直な速度成分、および狭窄部内での時間を挙げることができる。加えて、直列および／または並列でチャネルを含む複数のチップは、ＰＢＭＣへの送達に影響を与え得る。並列の複数のチップは、スループットを増強するために有用であり得る。このようなパラメータは、化合物の送達を制御するように設計することができる。一部の実施形態では、細胞濃度は、約１０から少なくとも約１０^１２細胞個／ｍＬの範囲、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度範囲である。一部の実施形態では、送達化合物濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬから約１ｇ／ｍＬの範囲、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度範囲であり得る。一部の実施形態では、送達化合物濃度は、約１ｐＭから少なくとも約２Ｍの範囲、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度範囲であり得る。

【0216】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣと培養されるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、ＰＢＭＣと培養されるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ未満、約０．１μＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満、または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣと培養されるＨＰＶ抗原の濃度は、約１０ｍＭを超える。一部の実施形態では、ＰＢＭＣと培養されるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または約１ｍＭ～約１０ｍＭのいずれかである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣと培養されるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣと培養されるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０ｍＭである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣと培養されるＨＰＶ抗原の濃度は、１μＭである。

【0217】

一部の実施形態では、摂動入力ＰＢＭＣと培養される抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１：１００００のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、摂動入力ＰＢＭＣと培養される抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、摂動入力Ｐと培養される抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１０００：１、約１０００：１～約１００：１、約１００：１～約１０：１、約１０：１～約１：１、約１：１～約１：１０、約１：１０～約１：１００、約１：１００～約１：１０００、約１：１０００～約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、摂動入力ＰＢＭＣと培養される抗原のアジュバントに対するモル比は、約２００：１である。一部の実施形態では、摂動入力ＰＢＭＣと培養される抗原のアジュバントに対するモル比は、約２０：１である。

【0218】

一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度のアジュバントを含む。例えば、一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のいずれかの濃度のアジュバントを含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度のアジュバントを含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭまたは約１ｍＭ～約１０ｍＭのいずれかの濃度のアジュバントを含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約０．１μＭ～約１ｍＭの濃度のアジュバントを含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約１μＭの濃度のアジュバントを含む。

【0219】

一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度の抗原を含む。例えば、一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のいずれかの濃度の抗原を含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度の抗原を含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭまたは約１ｍＭ～約１０ｍＭのいずれかの濃度の抗原を含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約０．１ｎＭ～約１ｍＭの濃度の抗原を含む。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣは、約１μＭの濃度の抗原を含む。

【0220】

一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１：１００００のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１０００：１、約１０００：１～約１００：１、約１００：１～約１０：１、約１０：１～約１：１、約１：１～約１：１０、約１：１０～約１：１００、約１：１００～約１：１０００、約１：１０００～約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約２００：１である。一部の実施形態では、修飾ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約２０：１である。

【0221】

ＰＢＭＣの馴化
本明細書に記載される方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣが、馴化される。さらなる実施形態では、ＰＢＭＣは成熟している。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、狭窄部媒介性の送達に続いて馴化される。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、狭窄部により送達されるＨＰＶ抗原を含む細胞が馴化するのに十分な時間の間、アジュバントと培養され、それにより、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化細胞の組成物を生成する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、狭窄部媒介性の送達の後に馴化される。一部の実施形態では、狭窄部により送達されるＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、狭窄部により送達される変異ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣが馴化するのに十分な時間の間、アジュバントと培養され、それにより、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣの組成物を生成する。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧ作動薬、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬である。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（ＣｐＧ ７９０９としても知られる）である（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号３１））。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ７９０９である。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。

【0222】

一部の態様では、以下のステップを含むプロセスにより調製された少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣの組成物を提供する：ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の幅は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、摂動入力ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、ｂ）摂動入力ＰＢＭＣを、少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が摂動ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを生成する培養すること、およびｃ）狭窄部により送達されるＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを、アジュバントと、狭窄部により送達されるＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを馴化するのに十分な時間培養することであって、それにより、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣの組成物を生成する培養すること。一部の実施形態では、プロセスは、ＨＰＶ抗原を含む修飾ＰＢＭＣを、修飾ＰＢＭＣを馴化するためにアジュバントと培養する前に、細胞懸濁液から単離することをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。

【0223】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、狭窄部媒介性の送達の前に馴化される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣが馴化されるのに十分な時間の間、アジュバントと培養され、それによってＰＢＭＣを馴化する。一部の実施形態では、以下のステップを含むプロセスにより調製された少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣの組成物を提供する：ａ）ＰＢＭＣを、ＰＢＭＣが馴化されるのに十分な時間の間、アジュバントと培養することであって、それにより、馴化ＰＢＭＣを生成する培養すること、ｂ）馴化ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の幅は、懸濁液中のＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、馴化摂動ＰＢＭＣを形成するために通過するのに十分な大きさのＰＢＭＣの摂動を引き起こす通過すること、およびｃ）馴化摂動ＰＢＭＣを、少なくとも一つのＨＰＶ抗原で、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が馴化摂動ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣを生成する、培養すること。一部の実施形態では、プロセスは、馴化ＰＢＭＣを細胞変形狭窄部に通過させる前に、馴化ＰＢＭＣをアジュバントから単離することをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。

【0224】

本明細書に記載の方法のいずれか一つによる一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１～約２４時間アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約２～約１０時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約３～約６時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のいずれか一つの間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、アジュバントと、約４、８、１２、１６、２０、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０℃のいずれか一つの温度で培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約３７℃でアジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約３７℃で約４時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間、ＣｐＧ ７９０９と培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約３７℃で約４時間、ＣｐＧ ７９０９と培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約０．２０ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍｇ／ｍＬ、０．３０ｍｇ／ｍＬ、０．３５ｍｇ／ｍＬ、０．４０ｍｇ／ｍＬ、０．４５ｍｇ／ｍＬ、または０．５０ｍｇ／ｍＬ、またはその間の任意の濃度でＣｐＧ ７９０９と培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約０．３５ｍｇ／ｍＬの濃度でＣｐＧ７９０９と培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＣｐＧ ７９０９と約０．３５ｍｇ／ｍＬの濃度で、および約３７℃で約４時間にわたって、ＰＢＭＣが馴化するために培養される。

【0225】

一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化された複数のＰＢＭＣが提供され、これは、ＰＢＭＣを馴化するのに十分な時間の間、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む複数のＰＢＭＣを、アジュバントと培養し、それにより、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化された複数のＰＢＭＣを生成することにより調製される。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化された複数のＰＢＭＣが提供され、これは、少なくとも一つのＨＰＶ抗原のＰＢＭＣへの導入の前に、ＰＢＭＣを馴化するのに十分な時間の間、複数のＰＢＭＣをアジュバントと培養し、それにより、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む馴化された複数のＰＢＭＣを生成することにより調製される。

【0226】

本明細書に記載される馴化された複数のＰＢＭＣのいずれかによる一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１～約２４時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約２～約１０時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約３～約６時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のいずれか一つの間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間、アジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約４、８、１２、１６、２０、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０℃のいずれか一つの温度でアジュバントと培養される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約３７℃でアジュバントと培養される。一部の実施形態では、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するために、約３７℃で約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間、ＰＢＭＣをアジュバントと培養することを含むプロセスによって馴化される。

【0227】

本明細書に記載される馴化された複数のＰＢＭＣのいずれか一つによる一部の実施形態では、一つ以上の共刺激分子は、馴化されていない複数の修飾ＰＢＭＣと比較して、馴化された複数の修飾ＰＢＭＣにおいて上方制御される。一部の実施形態では、一つ以上の共刺激分子は、馴化された複数の修飾ＰＢＭＣにおける細胞の亜集団では、馴化されていない複数の修飾ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団と比較して上方制御される。一部の実施形態では、一つ以上の共刺激分子は、馴化された複数の修飾ＰＢＭＣのＢ細胞では、馴化されていない複数の修飾ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して上方制御される。一部の実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６である。一部の実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８６である。一部の実施形態では、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、馴化された複数の修飾ＰＢＭＣのＢ細胞では、馴化されていない複数の修飾ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍を超えて、または１０倍を超えて上方制御される。一部の実施形態では、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、馴化された複数の修飾ＰＢＭＣのＢ細胞では、馴化されていない複数の修飾ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍～約１．５倍、約１．５倍～約１．８倍、約１．８倍～約２倍、約２倍～約３倍、約３倍～約４倍、約４倍～約５倍、約５倍～約８倍、約８倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約２００倍、約２００倍～約５００倍、または約５００倍超のいずれかで上方制御される。一部の実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのいずれか一つ以上の発現は、馴化された複数の修飾ＰＢＭＣでは、馴化されていない複数の修飾ＰＢＭＣと比較して増加する。一部の実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αの一つ以上の発現は、馴化された複数の修飾ＰＢＭＣでは、馴化されていない複数の修飾ＰＢＭＣ中の亜集団と比較して増加する。一部の実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αの一つ以上の発現は、馴化された複数の修飾ＰＢＭＣでは、馴化されていない複数の修飾ＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍、または１０倍を超えて増加する。一部の実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αの一つ以上の発現は、馴化された複数の修飾ＰＢＭＣでは、馴化されていない複数の修飾ＰＢＭＣと比較して、約１．２倍～約１．５倍、約１．５倍～約１．８倍、約１．８倍～約２倍、約２倍～約３倍、約３倍～約４倍、約４倍～約５倍、約５倍～約８倍、約８倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約２００倍、約２００倍～約５００倍、または約５００倍超のいずれかで増加する。

【0228】

システムおよびキット
一部の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法で使用するための、狭窄部、ＰＢＭＣ細胞懸濁液、ＨＰＶ抗原、またはアジュバントの一つ以上を含むシステムを提供する。システムは、上記で開示された方法について記載された任意の実施形態を含むことができ、そのようなものとしては、細胞変形狭窄部、細胞懸濁液、細胞摂動、送達パラメータ、化合物、および／またはアプリケーションなどを提供するためのマイクロ流体チャネルまたは細孔を有する表面が挙げられる。一部の実施形態では、細胞変形狭窄部は、ＰＢＭＣへの送達のためにサイズ設定される。一部の実施形態では、動作流速、細胞および化合物濃度、狭窄部内の細胞の速度、ならびに細胞懸濁液の組成（例えば、浸透圧、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）などの送達パラメータは、免疫応答を抑制するかまたは寛容を誘導するための化合物の応答が最大になるように最適化される。

【0229】

また、ＨＰＶに関連するがんを有する個体の治療において使用するためのキットまたは製品も提供する。一部の実施形態では、キットは、細胞内にＨＰＶ抗原および細胞内にアジュバントを含むＰＢＭＣを含む。一部の実施形態では、キットは、がんなどのＨＰＶに関連する疾患を有する個体の治療において使用するためのＰＢＭＣの生成において使用するための、狭窄部、ＰＢＭＣ懸濁液、ＨＰＶ抗原またはアジュバントの一つ以上を含む。一部の実施形態では、キットは、適したパッケージングに、本明細書に記載の組成物（例えば、細孔を含むマイクロ流体チャネルもしくは表面、細胞懸濁液、および／または化合物）を含む。適したパッケージング材料は当技術分野で公知であり、そのようなものとしては、例えば、バイアル（密閉バイアルなど）、容器、アンプル、ボトル、ジャー、柔軟なパッケージ（例えば、密閉マイラまたはビニールバッグ）などが挙げられる。これらの製品はさらに、滅菌および／または密封されてもよい。

【0230】

本発明はまた、本明細書に記載の方法の構成要素を含むキットを提供し、ＨＰＶに関連するがんを有する個体を治療する方法を実施するための指示、ならびに／または少なくとも一つのＨＰＶ抗原をＰＢＭＣに導入するための指示をさらに含み得る。本明細書に記載のキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、シリンジ、および本明細書に記載のいずれかの方法を実施するための指示が記載された添付文書、例えばＨＰＶに関連するがんを有する個体を治療するための指示、または細胞内に少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含有するＰＢＭＣを生成するための指示など、を含む他の材料をさらに含み得る。

【0231】

例示的な実施形態
実施形態１．
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連がんを個体において治療する方法であって、
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む組成物の有効量を個体に投与することであって、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む、投与することと、
有効量のＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬を個体に投与することと、を含む、方法。

【0232】

実施形態２．
ＣＴＬＡ４の拮抗薬が、ＣＴＬＡ４に結合する抗体である、実施形態１に記載の方法。

【0233】

実施形態３．
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬が、ＰＤ－１に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である、実施形態１または２に記載の方法。

【0234】

実施形態４．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体が、個体に投与される、実施形態１～３のいずれか一つに記載の方法。

【0235】

実施形態５．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、個体に投与され、およびＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、個体に投与される、実施形態１～３のいずれか一つに記載の方法。

【0236】

実施形態６．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブである、実施形態２～５のいずれか一つに記載の方法。

【0237】

実施形態７．
ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブである、実施形態３、４および６のいずれか一つに記載の方法。

【0238】

実施形態８．
ＰＤ－１に結合する抗体が、ペンブロリズマブである、実施形態３、４および６のいずれか一つに記載の方法。

【0239】

実施形態９．
ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブである、実施形態３、４および６のいずれか一つに記載の方法。

【0240】

実施形態１０．
個体においてＨＰＶ＋再発性腫瘍、局所進行性腫瘍、または転移性腫瘍を治療する方法であって、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む組成物の有効量を個体に投与することを含み、ＰＢＭＣは細胞内に送達される少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含む、方法。

【0241】

実施形態１１．
ＰＢＭＣを含む組成物が、一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と併せて投与される、実施形態１０に記載の方法。

【0242】

実施形態１２．
チェックポイント阻害剤が、個体に対するＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の拮抗薬である、実施形態１１に記載の方法。

【0243】

実施形態１３．
一つ以上の免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１に結合する抗体である、実施形態１１または１２に記載の方法。

【0244】

実施形態１４．
ＰＢＭＣを含む組成物が、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体およびＰＤ １に結合する抗体と併せて投与される、実施形態１１～１３のいずれか一つに記載の方法。

【0245】

実施形態１５．
ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、アテゾリズマブである、実施形態１３に記載の方法。

【0246】

実施形態１６．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、イピリムマブである、実施形態１３～１５のいずれか一つに記載の方法。

【0247】

実施形態１７．
ＰＤ－１に結合する抗体が、ニボルマブである、実施形態１３、１４および１６のいずれか一つに記載の方法。

【0248】

実施形態１８．
ＰＤ－１に結合する抗体が、ペンブロリズマブである、実施形態１３、１４および１６のいずれか一つに記載の方法。

【0249】

実施形態１９．
少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ－１６抗原またはＨＰＶ－１８抗原である、実施形態１～１８のいずれか一つに記載の方法。

【0250】

実施形態２０．
少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するペプチドを含む、実施形態１９に記載の方法。

【0251】

実施形態２１．
少なくとも一つのＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドを含む、実施形態１～２０のいずれか一つに記載の方法。

【0252】

実施形態２２．
ＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドが、配列番号１～４のいずれか一つのアミノ酸配列を含む、実施形態２１に記載の方法。

【0253】

実施形態２３．
少なくとも一つＨＰＶ抗原が、配列番号１８～２５のいずれか一つのアミノ酸配列を含む、実施形態１～２０のいずれか一つに記載の方法。

【0254】

実施形態２４．
ＰＢＭＣが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原および配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む、実施形態１～２３のいずれか一つに記載の方法。

【0255】

実施形態２５．
個体がヒトである、実施形態１～２４のいずれか一つに記載の方法。

【0256】

実施形態２６．
個体がＨＬＡ－Ａ^＊０２に陽性である、実施形態１～２５のいずれか一つに記載の方法。

【0257】

実施形態２７．
ＰＢＭＣがＨＬＡ－Ａ^＊０２に陽性である、実施形態１～２６のいずれか一つに記載の方法。

【0258】

実施形態２８．
ＰＢＭＣが、個体に対して自己由来である、実施形態１～２７のいずれか一つに記載の方法。

【0259】

実施形態２９．
個体が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に陽性である、実施形態１～２８のいずれか一つに記載の方法。

【0260】

実施形態３０．
ＨＰＶ関連がんは、頭頸部がん、子宮頸がん、肛門がん、または食道がんである、実施形態１～２９のいずれか一つに記載の方法。

【0261】

実施形態３１．
ＰＢＭＣを含む組成物が、静脈内投与される、実施形態１～３０のいずれか一つに記載の方法。

【0262】

実施形態３２．
ＣＴＬＡ－４の拮抗薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌａの拮抗薬が、静脈内、経口、または皮下投与される、実施形態１～９または１２～３１のいずれか一つに記載の方法。

【0263】

実施形態３３．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体および／またはＰＤ－１に結合する抗体および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、静脈内投与される、実施形態２～９または１３～３２のいずれか一つに記載の方法。

【0264】

実施形態３４．
少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの有効量が、約０．５×１０^６細胞／ｋｇ～約５．０×１０^６細胞／ｋｇである、実施形態１～３３のいずれか一つに記載の方法。

【0265】

実施形態３５．
イピリムマブの有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇである、実施形態６～９または１６～３４のいずれか一つに記載の方法。

【0266】

実施形態３６．
ニボルマブの有効量が、約３６０ｍｇ／ｋｇである、実施形態７または１７～３５のいずれか一つに記載の方法。

【0267】

実施形態３７．
アテゾリズマブの有効量が、約１２００ｍｇ／ｋｇである、実施形態９、１５、１６または１９～３６のいずれか一つに記載の方法。

【0268】

実施形態３８．
ＰＢＭＣを含む組成物が、三週間のサイクルの１日目に送達される、実施形態１～３７のいずれか一つに記載の方法。

【0269】

実施形態３９．
ＰＢＭＣを含む組成物が、最初の三週間のサイクルの２日目にさらに投与される、実施形態１～３８のいずれか一つに記載の方法。

【0270】

実施形態４０．
約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、約５．０×１０^６細胞／ｋｇが、各三週間サイクルの１日目に投与される、実施形態３８または３９に記載の方法。

【0271】

実施形態４１．
約０．５×１０^６細胞／ｋｇ、約２．５×１０^６細胞／ｋｇ、約５．０×１０^６細胞／ｋｇが、最初の三週間サイクルの２日目に投与される、実施形態３９または４０に記載の方法。

【0272】

実施形態４２．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体および／またはＰＤ－１に結合する抗体および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体が、三週間サイクル毎に一回投与される、実施形態２～９または１３～４１のいずれか一つに記載の方法。

【0273】

実施形態４３．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、各三週間サイクルの１日目に投与される、実施形態３８～４２のいずれか一つに記載の方法。

【0274】

実施形態４４．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体が、二つの三週間サイクル当たり一回投与される、実施形態３８～４２のいずれか一つに記載の方法。

【0275】

実施形態４５．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブであり、イピリムマブは、約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態３８～４４のいずれか一つに記載の方法。

【0276】

実施形態４６．
ＰＤ－１に結合する抗体が、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される、実施形態４２～４５のいずれか一つに記載の方法。

【0277】

実施形態４７．
ＰＤ－１に結合する抗体は、ニボルマブであり、ニボルマブは、約３６０ｍｇの用量で投与される、実施形態４６に記載の方法。

【0278】

実施形態４８．
ＣＴＬＡ－４に結合する抗体は、イピリムマブであり、イピリムマブは、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、二つの三週間サイクルの最初の三週間のサイクルの１日目に投与され、ＰＤ－１に結合する抗体は、約３６０ｍｇの用量で、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される、実施形態３８～４２のいずれか一つに記載の方法。

【0279】

実施形態４９．
ＰＤ－１に結合する抗体が、最初の三週間サイクルの８日目およびその後の各サイクルの１日目に投与される、実施形態３８～４５のいずれか一つに記載の方法。

【0280】

実施形態５０．
ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、アテゾリズマブであり、アテゾリズマブは、約１２００ｍｇの用量で投与される、実施形態４８に記載の方法。

【0281】

実施形態５１．
ＰＢＭＣを含む組成物が、少なくとも約三か月、六か月、九か月、または一年間、個体に投与される、実施形態１～４９のいずれか一つに記載の方法。

【0282】

実施形態５２．
ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ～約５×１０^７ＰＢＭＣ、
ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ） 約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、および
ｄ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミン、を含み、
製剤のｐＨが、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である、実施形態１～５１のいずれか一つに記載の方法。

【0283】

実施形態５３．
ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約２．７５×１０^７ＰＢＭＣ、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ） 約３０％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、および
ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
製剤のｐＨは約ｐＨ７．４である、実施形態１～５２のいずれか一つに記載の方法。

【0284】

実施形態５４．
ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約１×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７ＰＢＭＣ／ｍＬ、
ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ） 約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、および
ｄ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
製剤のｐＨが、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である、実施形態１～５３のいずれか一つに記載の方法。

【0285】

実施形態５５．
ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ） 約３０％（ｗ／ｗ）の割合の低温保存培地、および
ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
製剤のｐＨは約ｐＨ７．４である、実施形態１～５４のいずれか一つに記載の方法。

【0286】

実施形態５６．
ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ～約５×１０^７ＰＢＭＣ、
ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
製剤のｐＨが、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である、実施形態１～５１のいずれか一つに記載の方法。

【0287】

実施形態５７．
ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約１×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７ＰＢＭＣ／ｍＬ、
ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約３％～約８％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
製剤のｐＨが、約ｐＨ６．０～約ｐＨ８．５である、実施形態１～５１のいずれか一つに記載の方法。

【0288】

実施形態５８．
ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約２．５×１０^７ＰＢＭＣ、
ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
製剤のｐＨは約ｐＨ７．４である、実施形態１～５１のいずれか一つに記載の方法。

【0289】

実施形態５９．
ＰＢＭＣを含む組成物が、
ａ）約５×１０^６ＰＢＭＣ／ｍＬ、
ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の割合の凍結保存培地、
ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の割合のヒト血清アルブミン、を含み、
製剤のｐＨは約ｐＨ７．４である、実施形態１～５１のいずれか一つに記載の方法。

【0290】

実施形態６０．
凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、実施形態５２～５９のいずれか一つに記載の方法。

【0291】

実施形態６１．
低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、実施形態５２～５５のいずれか一つに記載の方法。

【0292】

実施形態６２．
ＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球の二つ以上を含む、実施形態１～６１のいずれか一つに記載の方法。

【0293】

実施形態６３．
ＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含む、実施形態１～６２のいずれか一つに記載の方法。

【0294】

実施形態６４．
（ａ）ＰＢＭＣの約２５％～約８０％がＴ細胞であり、
（ｂ）ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％がＢ細胞であり、
（ｃ）ＰＢＭＣの約３．０％～約２０％がＮＫ細胞であり、または
（ｄ）ＰＢＭＣの約４．０％～約４５％が単球である、実施形態１～６３のいずれか一つに記載の方法。

【0295】

実施形態６５．
少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣが、
ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の直径は、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原が通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こして、摂動入力ＰＢＭＣを形成する通過させることと、
ｂ）摂動入力ＰＢＭＣの集団を、少なくとも一つのＨＰＶ抗原と、抗原が摂動入力ＰＢＭＣに入るのを許容するのに十分な時間培養することであって、それによって、少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣを生成する培養することと、を含むプロセスによって調製される、実施形態１～６４のいずれか一つに記載の方法。

【0296】

実施形態６６．
狭窄部の直径が、約４．２μｍ～約６μｍまたは約４．２μｍ～約４．８μｍである、実施形態６５に記載の方法。

【0297】

実施形態６７．
少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣが馴化される、実施形態１～６６のいずれか一つに記載の方法。

【0298】

実施形態６８．
少なくとも一つのＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣが、ＰＢＭＣを馴化するために、約３７℃で約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間、ＰＢＭＣをアジュバントと培養することを含むプロセスよって馴化される、実施形態６７に記載の方法。

【0299】

実施形態６９．
アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧ作動薬、ＲＩＧ－Ｉ作動薬、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、またはＴＬＲ９作動薬である、実施形態６８に記載の方法。

【0300】

実施形態７０．
アジュバントが、ＣｐＧ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、実施形態６８または６９に記載の方法。

【実施例】

【0301】

当業者は、一部の実施形態が本発明の範囲および趣旨の範疇で可能であることを認識するものとなる。これより、以下の非限定的な実施例を参照して、本発明をより詳細に記述する。以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、当然のことながら、形はどうあれその範囲を制限しているものと解釈されるべきではない。
実施例１ ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの安全性および忍容性に関する第Ｉ相試験

【0302】

再発性、局所進行性、または転移性のＨＰＶ１６陽性固形腫瘍を有するＨＬＡ Ａ^＊０２＋患者において、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの単剤療法として、ならびに（１）アテゾリズマブ、（２）イピリムマブ、（３）ニボルマブ、および（４）ニボルマブ＋イピリムマブと組み合わせた、安全性および忍容性、抗腫瘍活性、ならびに免疫原性および薬力学的効果に関する第１相非盲検、多角的試験を実施する。

【0303】

ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶは、ＨＬＡ－Ａ血清型群陽性（ＨＬＡ－Ａ^＊０２＋）患者のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）血清型においてヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）株１６陽性（ＨＰＶ１６＋）がんの治療のための末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）製品を提示する抗原である。ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶは、ＨＰＶ１６のＥ６およびＥ７タンパク質の免疫原性エピトープを提示する自己由来ＰＢＭＣからなる。ＰＢＭＣは、主にＴ細胞、単球、ナチュラルキラー細胞、およびＢ細胞からなる。ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬は、凍結培地を含有するＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶに製剤化され、次いで凍結保存される。ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶは、凍結保存下で保存され、使用時に解凍される。

【0304】

ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬は、製造プロセス中にサイトゾル内で送達されたＨＰＶ１６のＨＬＡ－Ａ^＊０２制限Ｅ６およびＥ７エピトープを含有する合成長ペプチド（ＳＬＰ）を有する自己由来ＰＢＭＣからなる。

【化1】

【0305】

次いで、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ細胞を、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドであるＣｐＧ７９０９で成熟させる。製造プロセス中のＰＢＭＣ ＨＰＶのこの成熟は、内因性Ｔ細胞が適切な状況において抗原で刺激されることを容易にする。
概要

【0306】

治験対象母集団は、進行期ＨＰＶ１６＋固形腫瘍（頭頸部、子宮頸がん、および他の腫瘍型）を有するＨＬＡ－Ａ^＊０２＋である患者からなる。ＨＬＡ Ａ^＊０２＋状態およびＨＰＶ１６＋腫瘍状態は、実験報告書を介して確認する必要があり、患者の白血球アフェレーシスの前にすべての適格性基準を満たす必要がある。局所的にＨＰＶ１６＋状態が確認された患者は、実験室認証の文書がスポンサーによって不十分であると判断された場合、スクリーニング時に採取された新鮮腫瘍生検から中央確認が行われる場合がある。

【0307】

適格な患者は、試験施設において単一の白血球アフェレーシスを受ける。白血球アフェレーシス産物は、各患者のパーソナライズされた自己由来細胞療法の製造のために製造業者に送付される。次いで、ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの凍結バイアルを、投与のために試験施設に送付する。

【0308】

この試験は三つのパートで行われ、パート１は、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ単剤療法の安全性プロファイルおよびＲＰ２Ｄを決定するための用量漸増で構成される。試験のパート２では、免疫チェックポイント阻害剤と併用した場合のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの安全性および予備的有効性を評価する。パート３では、四つの用量拡大コホートにおいて、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ単剤療法ＲＰ２Ｄを評価する。パート３の各コホートには最大２９人の患者が登録される。

【0309】

四つの用量拡大コホートは、最適なＳｉｍｏｎの２段階設計を使用して評価される。第一段階では、ＨＩＶ陰性患者最大１０名が登録される。これらの１０人の患者に少なくとも一つの反応が観察される場合、さらに１９人の患者が登録され、合計で２９人となる。

【0310】

すべてのコホートにおいて、ＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶが、３週間間隔で最大１年間、またはＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの供給が枯渇するまで、または治療中止基準が満たされるまでの、いずれかが到来するまで投与される。

【0311】

パート１およびパート２のすべての患者は、ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの各投与後、少なくとも４時間にわたって観察される。さらに、各コホートの最初の２人の患者は、ＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶの初回投与後、少なくとも２３時間の観察を受ける。

【0312】

ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴにより、疾患進行、許容できない毒性、同意の撤回、死亡、またはＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの初回投与日から２年間の、いずれかが起こるまで、試験を通じて腫瘍評価を実施する。ＲＥＣＩＳＴ １．１による疾患進行を経験する患者は、治療を行う研究員よって最善の利益であると考慮された場合、疾患進行の確認を可能にするために、投与を継続することができる。すなわち、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＣＰＤ（Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ ，２０１７）である。

【0313】

治験薬の最終投与後、安全性および忍容性を監視し、全生存期間を評価するために、追跡来院が行われる。
パート１：漸増期（ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ単剤療法）

【0314】

漸増期のための計画された用量コホートを表１に示す。従来の３＋３デザインは、安全性および忍容性を評価することを意図しているが、コホート内の最大６人の追加の患者を治療して、安全性および忍容性、免疫原性効果、および抗腫瘍活性をさらに調査することが賢明であり得る。この修正された３＋３デザインでは、コホート当たり最大１２人の患者がいるであろう。

【0315】

単剤療法のＲＰ２Ｄレジメンについては、すべてのコホートにおけるＤＬＴ評価が完了する。ＲＰ２Ｄレジメンは、入手可能な全ての安全性、忍容性、免疫原性、および他の薬力学的および抗腫瘍データのレビューに基づいて選択される。

【0316】

ＲＰ２Ｄレジメンが定義されると、パート２（併用安全性期）およびパート３（単剤療法用量拡大期）が開始される。

【表1】

ＤＬＴ＝用量制限毒性、ｉＲＥＣＩＳＴ＝免疫療法の固形腫瘍試験への組み入れに関するＲＥＣＩＳＴ基準の修正、ＲＥＣＩＳＴ＝固形腫瘍に対する反応評価基準バージョン１．１
ａ．ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの投与は、治療中止基準が満たされるまで、またはＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの供給が枯渇するまで、または最大１年間、のいずれかが到来するまで、３週間毎に継続される。ＲＥＣＩＳＴ １．１による疾患進行を経験する患者は、治療を行う研究員よって最善の利益であると考慮された場合、疾患進行の確認を可能にするために、投与を継続することができる。すなわち、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＣＰＤ（Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ，２０１７）である。
ｂ．サイクル１では、患者は１日目および２日目にＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの投与を受
ける。

【0317】

腫瘍評価は、ＲＥＣＩＳＴ １．１またはｉＲＥＣＩＳＴによる疾患進行まで、試験を通して実施される。治験薬の最終投与後、安全性および忍容性、免疫原性効果、ならびに腫瘍評価を観察するために、追跡来院が行われる。

【0318】

患者は、修正された３＋３用量漸増デザインで評価される。ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの少なくとも２用量レベル（０．５×１０^６生細胞／ｋｇおよび２．５×１０^６生細胞／ｋｇ）を単剤療法として評価する（コホート１、２、および３）。コホート１およびコホート２の患者は、各２１日サイクルの１日目にＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶを投与され（単一プライミング）、コホート３の患者は、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶを、サイクル１の１日目および２日目（ダブルプライミング）、およびその後の各サイクルの１日目に投与されるである（図１参照）。各コホートにおいて、最初の２名の患者は、コホート内の追加の患者をそのコホートで治療し得る前に、サイクル１の８日目を完了しなければならない。

【0319】

患者は、コホートで投与される少なくとも３回の完全なＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ用量投与を達成するのに十分な自己由来薬剤を有していなければならず、さもなくばより低い用量のコホートに割り当てられる。

【0320】

従来の３＋３デザインは、安全性および忍容性を評価することを意図しているが、コホート内の最大６人の追加の患者を治療して、安全性および忍容性、免疫原性効果、および抗腫瘍活性をさらに調査することが賢明であり得る。この修正された３＋３デザインでは、コホート当たり最大１２人の患者がいる。

【0321】

ＲＰ２Ｄレジメンは、入手可能な全ての安全性、忍容性、免疫原性、および他の薬力学的および抗腫瘍データのレビューに基づいて選択される。単剤療法のＲＰ２Ｄレジメンについては、すべてのコホートにおけるＤＬＴ評価が完了している。

【0322】

患者は、すべての研究施設にわたって段階的に登録される。すなわち、コホート内の２名以上の患者は、１週間以内にＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶの初回投与を受けない。

【0323】

患者は、単剤療法コホートにおいて、ＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶの初回投与後２８日間、ＤＬＴの発生について監視される。修正された３＋３ルールに従い、ＤＬＴに関してコホートの安全性を確認するために必要な最小患者数は、３名で０ ＤＬＴ、６名で１ ＤＬＴ以下、９名で２ ＤＬＴ以下、または１２名で３ ＤＬＴ以下である。

【0324】

用量レジメンは以下に列挙されるが、入手可能な安全性データのレビューに基づいて、必要に応じて中間用量レベルが選択されることがある。
５×１０^６生細胞／ｋｇ（単一プライム）
５×１０^６生細胞／ｋｇ（ダブルプライム）
より低い用量レベル（単一またはダブルプライム）

【0325】

所与の用量レベルで最初の３人の患者がＤＬＴ観察期間を完了した後に、６～１２人の患者に用量漸増または用量拡大を検討し、安全性データのレビューにより安全性について評価可能であることが判明した。ＤＬＴの観察期間は、パート１の２８日間と定義される。

【0326】

ＤＬＴ観察期間を通して、所定の用量レベルで最初の３人の登録患者のいずれかにＤＬＴが観察されない場合、次のより高い用量レベルのコホートを登録のために開放する。最初の３人の患者のうち１人がＤＬＴを経験する場合、さらに３人の患者が登録される（同じ用量レベルで合計６人の評価可能な患者）。最初の３人の患者のうち１人超または６人の患者のうち２人以上がＤＬＴを経験する場合、さらなる用量漸増は考慮されず、これを最大投与用量（ＭＡＤ）とする。ＲＰ２Ｄは、以前に評価された、より低い用量レベルであってもよく、またはさらなる評価のために代替的な中間用量レベルを選択してもよい。ＲＰ２Ｄ判定は、少なくとも６人の患者から得られた安全性データに基づいて行われる。ＲＰ２Ｄは、本試験のパート２（併用安全性期）およびパート３（単剤療法用量拡大期）でさらに評価される。代替的に、ＲＰ２Ｄは、薬力学的評価に基づいて宣言され、最大生物学的効果が達成され、患者がさらなる用量漸増から利益を得ることはないと決定される。

【0327】

安全性以外の任意の理由により、患者がＤＬＴ観察期間を完了できない場合、または薬力学的評価が試験療法の生物学的効果を定義するのに不十分である場合、患者は評価不可能であるとみなされる。評価不可能とみなされたパート１の患者は、研究員とスポンサーとの協議の上、交換することができる。

【0328】

任意の用量投与後に発生する有害事象は、その後の投与時にグレード２未満に改善したはずである。同様に、任意の用量投与後に発生するＡＥＳＩは、その後の投与時にグレード２未満に改善したはずである。コホート３で、これらの再治療基準が満たされた場合、二回目のＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶ投与は、２３時間以上の観察期間（すなわち、初回投与の１６～２４時間後）中に行われるべきである。患者は、二回目のプライミング投与後少なくとも４時間観察される。２回の投与の最小間隔は１６時間とする。
パート２： 併用安全性期（ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋チェックポイント阻害剤）

【0329】

ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ単剤療法ＲＰ２Ｄが定義されると、併用安全性期が開始される。併用安全性探索中に評価されたＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ用量は、入手可能な全ての安全性、忍容性、免疫原性、および他の薬力学的および抗腫瘍データのレビューに基づいて選択される。

【0330】

コホートは、ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶ ＲＰ２Ｄおよび併用パートナーによって定義される。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、コホート４、５、６、および７においてＲＰ２Ｄで投与される。
コホート４： ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ（ＲＰ２Ｄ）＋アテゾリズマブ（１２００ｍｇを３週間毎）
コホート５： ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ（ＲＰ２Ｄ）＋イピリムマブ（３週間毎に３ｍｇ／ｋｇ、忍容性が許す限り最大４用量）
コホート６： ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ（ＲＰ２Ｄ）＋ニボルマブ（３６０ｍｇを３週間毎）
コホート７（コホート５および６でそれぞれ治療を受けた６人の患者の安全性評価を条件として）： ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ（ＲＰ２Ｄ）＋ニボルマブ（３週間毎に３６０ｍｇ）およびイピリムマブ（６週間毎に１ｍｇ／ｋｇ）

【0331】

パート２への登録は、コホート４、５、および６で始まる。コホート５および６の６人の患者がそれぞれ登録され、４２日間のＤＬＴ評価期間を無事完了すると、すなわち、３３％未満の患者がＤＬＴを経験すると、コホート７が登録を開始する。両方のコホートからの入手可能な安全性データに基づいて、コホート５および６に対して選択されたＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの用量レジメンが、コホート７に対して選択されるか、またはより低い用量レジメンで開始するかが決定される。コホート７に対するより低い用量のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶが決定されると、６人の患者が最初に登録され、４２日間観察される。ＤＬＴを経験している患者の３３％未満であるため、ＳＳＣが併用を安全とみなす場合、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの用量を完全な単剤療法ＲＰ２Ｄに漸増し、最大１２人の患者が登録されるまで登録を継続することができる。

【0332】

すべての患者が、安全性および忍容性ならびに抗腫瘍反応の予備的証拠について評価される。
コホート４ － ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋アテゾリズマブ

【0333】

サイクル１では、パート１で決定されたＲＰ２Ｄに従って、すなわち、１日目および２日目にダブルプライミングとして、または１日目の単一プライム用量として、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶをＩＶ投与する。アテゾリズマブ１２００ｍｇを、サイクル１の８日目に６０分間かけてＩＶ投与する。その後のサイクルでは、アテゾリズマブが、ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの投与後、各３週間のサイクルの１日目に投与され、最大２年間、または治療中止基準の１つが満たされるまで継続される（図２）。ＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶが、３週間間隔で治療中止基準が満たされるまで、またはＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの供給が枯渇するまで、または最大１年間の、いずれかが到来するまで投与される。
コホート５ － ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋イピリムマブ

【0334】

サイクル１では、パート１で決定されたＲＰ２Ｄに従って、すなわち、１日目および２日目にダブルプライミングとして、または１日目の単一プライム用量として、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶをＩＶ投与する。イピリムマブ、３ｍｇ／ｋｇは、ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶが１日目に投与される前に、９０分間かけてＩＶ投与される。サイクル２、３、および４では、イピリムマブは、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの投与後に、１日目に投与される。イピリムマブは、最大４サイクルの間投与される。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶが、３週間間隔で治療中止基準が満たされるまで、またはＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの供給が枯渇するまで、または最大１年間の、いずれかが到来するまで投与される（図３）。
コホート６－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋ニボルマブ

【0335】

サイクル１では、パート１で決定されたＲＰ２Ｄに従って、すなわち、１日目および２日目にダブルプライミングとして、または１日目の単一プライム用量として、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶをＩＶ投与する。サイクル１の８日目に、ニボルマブは、３６０ｍｇの用量で、３０分間にわたってＩＶ投与される。その後のサイクルでは、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶに続いてニボルマブを１日目に３週間ごとに投与する。ニボルマブは、３週間ごとに最長２年間、または中止基準が満たされるまで投与することができる。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶが、３週間間隔で中止基準が満たされるまで、またはＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの供給が枯渇するまで、または最大１年間の、いずれかが到来するまで投与される（図４）。
コホート７ － ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋ニボルマブ＋イピリムマブ

【0336】

サイクル１では、パート１で決定されたＲＰ２Ｄに従って、すなわち、１日目および２日目にダブルプライミングとして、または１日目の単一プライム用量として、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶをＩＶ投与する。イピリムマブは、１ｍｇ／ｋｇの用量で、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの前に、１日目に３０分間かけてＩＶ投与される。サイクル１の８日目に、３０分間かけてニボルマブ３６０ｍｇ がＩＶ投与される。ニボルマブは、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの投与後、その後の３週間のサイクルの１日目に投与される。イピリムマブは、その後のサイクルにおけるＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶおよびニボルマブの投与後、６週間毎に投与される。ニボルマブおよびイピリムマブは、サイクル１の１日目から治療中止基準の１つが満たされるまで、２年間投与することができる。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、３週間間隔で中止基準が満たされるまで、またはＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの供給が枯渇するまで、または最大１年間の、いずれかが到来するまで投与される。

【0337】

免疫介在性ＡＥにより、患者がチェックポイント阻害剤の中止基準を満たし、かつ研究員が事象はニボルマブまたはイピリムマブに関連しているかどうかを判断できない場合、患者は両方の薬剤を中止すべきであるが、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは継続することができる。
コホート７ － ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋ニボルマブ＋イピリムマブ

【0338】

サイクル１では、パート１で決定されたＲＰ２Ｄに従って、すなわち、１日目および２日目にダブルプライミングとして、または１日目の単一プライム用量として、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶをＩＶ投与する。イピリムマブは、１ｍｇ／ｋｇの用量で、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの前に、１日目に３０分間かけてＩＶ投与される。サイクル１の８日目に、３０分間にわたってニボルマブ３６０ｍｇ がＩＶ投与される。ニボルマブは、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの投与後、その後の３週間のサイクルの１日目に投与される。イピリムマブは、その後のサイクルにおけるＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶおよびニボルマブの投与後、６週間毎に投与される。ニボルマブおよびイピリムマブは、サイクル１の１日目から治療中止基準の１つが満たされるまで、２年間投与することができる。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶが、３週間間隔で中止基準が満たされるまで、またはＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの供給が枯渇するまで、または最大１年間の、いずれかが到来するまで投与される。

【0339】

免疫介在性ＡＥにより、患者がチェックポイント阻害剤の中止基準を満たし、かつ研究員が事象はニボルマブまたはイピリムマブに関連しているかどうかを判断できない場合、患者は両方の薬剤を中止すべきであるが、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは継続することができる。

【0340】

パート２のすべてのコホートについて、サイクル１の２日目の第二のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ投与は、２３時間以上の観察中に行われる。任意の用量投与後に発生する有害事象は、その後の投与時にグレード２以下に改善する。同様に、任意の用量投与後に発生するＡＥＳＩは、その後の投与時にグレード２未満に改善する。これらの再治療基準が満たされた場合、二回目のＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶ投与は、２３時間以上の観察期間（すなわち、初回投与の１６～２４時間後）中に行われる。患者は、二回目のプライミング投与後少なくとも４時間観察される。２回の投与の間の最小間隔は１６時間である。各コホートにおいて、最初の２名の患者は、コホート内の追加の患者を治療し得る前に、サイクル１の１４日目を完了しなければならない。

【0341】

患者は、併用療法コホートにおいて、ＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶの初回投与後４２日間、ＤＬＴの発生について監視される。

【0342】

個々の患者においてＤＬＴまたは他の有意な毒性がある場合、より低いＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶ用量への漸減が起こる。個別併用安全性コホートの患者から得られた利用可能な安全性、有効性、および薬力学的データのレビュー後、ダブルプライミングは、１つ以上の用量の組合せのため推奨できないと決定され得る。この場合、二回目（サイクル１の２日目）のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの用量の取り止めが推奨される場合がある。代替的に、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶのより低い用量レベルを探索してもよい（用量漸減）。例えば、個別併用安全性コホートの患者の３３％超にＤＬＴが観察される場合、より低いＳＱＺ－ＰＴＭＣ－ＨＰＶレベルを評価するコホートを開き、探索する。
パート３： 単剤療法用量拡大

【0343】

ＲＰ２ＤレジメンがＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶ単剤療法に対して定義されると、単剤療法用量拡大期が開始される。患者は、安全性および忍容性、ならびに抗腫瘍反応の予備的証拠をさらに評価するために、疾患特異的コホートに登録される。ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶは、単剤療法のためにＲＰ２Ｄで投与される。パート３への登録は、パート２と並行して行うことができる。
コホート８：局所進行性または転移性のＨＰＶ１６＋頭頸部がん。
コホート９：局所進行性または転移性のＨＰＶ１６＋子宮頸がん。
コホート１０：局所進行性または転移性のＨＰＶ１６＋肛門がん。
コホート１１：局所進行性または転移性の他のＨＰＶ１６＋がん。

【0344】

コホート８、９、１０、および１１は並行して登録される。４つの用量拡大コホートのそれぞれを、最適なＳｉｍｏｎの２段階デザインを使用して登録する。第一段階では、最大１０名の患者が登録される。これらの１０人のＨＩＶ陰性の患者に少なくとも一つの反応が観察される場合、さらに１９人の患者が登録され、合計で２９人となる。

【0345】

投与スケジュールおよび試験期間
すべての患者は、治療開始前に単回の白血球アフェレーシスを受ける。患者は、試験施設において、典型的にはＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの初回投与の８～１４日前に、白血球アフェレーシスを受ける。ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの初回投与のスケジューリングは、施設の所在地および出荷物流を考慮する。

【0346】

サイクルは、２１日間の治療期間として定義される。

【0347】

患者は、治験薬が枯渇するまで、または治療中止基準が満たされるまでのいずれかが到来するまで、３週間間隔で最大１年間、ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの投与を受ける。

【0348】

累積的な臨床証拠は、免疫系刺激剤で治療された一部の対象が、臨床的客観的応答および／または安定した疾患を示す前に、（従来の応答基準によって）疾患の進行の徴候を明らかにしうることを示す。この現象を説明するために、二つの仮説が提示されている。第一に、腫瘍内の炎症の増強は、拡大した指標病変として、および新たに視認された小さな非指標病変として現れる腫瘍サイズの増加をもたらす可能性がある。経時的に、腫瘍の悪性および炎症性の部分の両方が減少し、臨床的な改善の明白な兆候につながる可能性がある（Ｗｏｌｃｈｏｋ ｅｔ ａｌ，２００９）。あるいは、一部の個体では、腫瘍の増殖の動態は、抗腫瘍免疫活性を当初は上回る場合がある。十分な時間があれば、抗腫瘍活性が優勢となり、臨床的に明らかになる。したがって、各時点で並行してＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴを評価することが、重要である。

【0349】

患者は、初回のＲＥＣＩＳＴ １．１で定義された進行の後に試験治療を継続することができ、したがって、以下の基準が満たされた場合、ｉＲＥＣＩＳＴ（Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ ， ２０１７）による疾患進行の確認を可能にする。
１．研究員が評価する臨床的有益性、および急速な疾患進行の欠如
２．研究員が定義する治験薬の耐性
３．安定した一般状態
４．進行を超えた治療は、急速に進行する疾患からの重篤な結果を防ぐために、差し迫った介入を遅らせることはない。
５．疾患進行の合併症の欠如（ＣＮＳ転移など）

【0350】

臨床的利益の評価は、対象が臨床的に悪化しており、継続治療からさらなる利益を受ける可能性が低いかどうかを考慮に入れる。

【0351】

単剤療法の用量拡大期（パート３）の治療期間は、選択されたＲＰ２Ｄレジメンに依存する。

【0352】

ＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、３週間間隔で、治療中止基準が満たされるまで、または治験薬が枯渇するまで、または最大１年間の、いずれかが到来するまで、投与される。コホート４、６、および７の免疫チェックポイント阻害剤を用いた治療は、サイクル１の１日目から２年間継続され得る。コホート５の患者は、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの供給を枯渇させる前に、４サイクルのイピリムマブを完了してもよく、この場合、患者は、治療中止基準が満たされるまで、または治験薬が消耗するまで、または最大１年間のいずれかが到来するまで、ＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶの単剤投与を継続することができる。

【0353】

用量制限毒性
患者は、１）受けた細胞用量に関わらず、ＤＬＴ評価期間中にＤＬＴを経験した場合、または２）ＤＬＴ評価期間中に、少なくとも７０％のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの意図される用量を受けた後に、ＤＬＴ評価期間中にＤＬＴを経験しなかった場合に、ＤＬＴ評価に対して評価可能とみなされる。ＤＬＴを経験していないが、ＤＬＴ評価期間中に意図されるＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ用量の７０％未満を投与された患者は、ＤＬＴの評価可能とはみなされず、置き換えられる。

【0354】

ＩＲＲではないＤＬＴを経験している患者は、試験を中止する。治験薬による治療の継続が患者の最善の利益となる場合、その後の治療は、研究員がスポンサーと協議の上決定される。ＩＲＲについては、前投薬または投与速度が調整され、患者が試験を継続できるように調整する。

【0355】

ＤＬＴは、疾患、疾患進行、併発性疾患、併用薬／処置、または環境要因に無関係であるが、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶに関連する（単独または併用のいずれか）と、主任研究員によって評価され、ＳＳＣによって確認されたＡＥまたは臨床検査値異常であり、単剤療法の最初の２８日間または併用療法の最初の４２日間のいずれかに発生し、および 国立がん研究所（ＮＣＩ）有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）バージョン５．０を用いて以下に列挙した所定の基準のいずれかを満たすもの、として定義される。ＣＲＳおよび神経毒性のグレード分けは、それぞれ６．２．２項および６．２．３項で言及される、米国移植細胞療法学会（ＡＳＴＣＴ）コンセンサスグレーディングを使用する。
非血液毒性
グレード４またはグレード５
最適な支持療法にもかかわらず７日以内にグレード１以下またはベースラインまで改善しないグレード３毒性。２４時間以内にグレード２以下まで改善しないグレード３のＣＲＳまたは神経毒性を除く。
７日間超持続し、医学的介入を必要とするグレード３の臨床検査値。
４８時間超持続するグレード３超の肝毒性は、以下の例外を除く。ベースラインでグレード２のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、および／またはアルカリホスファターゼ異常を有する患者については、４８時間超持続する８超×ＵＬＮへの増加のみがＤＬＴとみなされる。
Ｈｙ’ｓ ｌａｗ基準を満たす肝臓検査異常。
血液毒性
任意のグレード５の毒性。
任意のグレード４の貧血。
任意のグレード３以上の発熱性好中球減少。
７日間超持続するグレード４以上の好中球減少（絶対好中球数５００／μＬ未満）。
グレード４以上の血小板減少（＜２５，０００／μＬ）。
臨床的に有意な出血に関連する７日間超持続するグレード３以上の血小板減少（＜５０，０００／μＬ）。
少なくとも、予定されたＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶ投与のサイクル２の１日目での、恒久的な中止または１４日間超の遅延をもたらす、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶに関連する可能性があるＴＥＡＥ（単独または併用のいずれか）。
研究員およびスポンサーの判断において、ＤＬＴとみなされる任意の他の事象。

【0356】

以下の事象はＤＬＴとはみなされない。
グレード３以上のアミラーゼ値、または膵炎の臨床症状もしくはＸ線写真の証拠を伴わない、分離されたグレード３のリパーゼ値。
対症療法の有無に関わらず２４時間以内にグレード２以下まで改善するグレード３のＣＲＳ。
適切な支持療法の有無に関わらず、７日以内にグレード２以下まで改善するグレード３の皮膚発疹。
グレード２未満まで２４時間で可逆的である細胞産物の投与から２時間以内に発生する即時性過敏反応。
臨床的続発症なしに７２時間以内に是正される、グレード１またはグレード２の電解質異常。
脱毛症。

【0357】

前投薬の追加または投与速度の変更により適切に管理できるグレード３のＩＲＲは、これらの変更が試験に登録されたその後の全ての患者に適用されるとみなされない限り、ＤＬＴとはみなされない。変更がその後のすべての患者に適用される場合、コホートはＤＬＴ評価のために再開する。グレード３の注入反応を経験した患者は、前投薬または注入速度の変更により試験に留まり得る。

【0358】

どのコホートでもＭＴＤに達していない場合、追加の細胞用量レベルまたはレジメンが試験される。ＡＥが、ＤＬＴの定義に含まれるがＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶとは無関係な場合、所見はＳＳＣによって検討される。

【0359】

コホートの中止基準、コホートへの用量漸増または進行の中止、ならびに試験の終了

【0360】

変更された３＋３ルールは、コホートが安全であると宣言する最終的な決定を定義する。コホートが安全であると確認するために必要な最小患者数は、ＤＬＴが０で３名であり、コホートが安全であることを確認するために、最大１２名まで増やすことができる（すなわち、ＤＬＴの患者が３３％未満、例えば、患者６名でＤＬＴ２未満、患者９名でＤＬＴ３未満、または患者１２名でＤＬＴ４未満、いずれもがコホートの安全性を確認する）。どのコホートも、ＭＴＤに到達したことを示さない場合、追加の細胞用量レベルまたはレジメンを試験してもよい。ＡＥが、ＤＬＴの定義に含まれるがＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶとは無関係ない場合。

【0361】

ＤＬＴの定義を満たし、ＤＬＴ期間外で発生するＡＥは、ＤＬＴとしてカウントされず、代わりに、所与のコホートの全体的な安全性評価およびＲＰ２Ｄレジメンの選択において考慮される。

【0362】

コホート中止規則は、同じ用量コホート内で治験薬を受けている最大１２人の患者において３超のＤＬＴの発生（約３３％）である。中止規則が発動された場合、以下の推奨の一つが行われる。
以前の耐用量レベルをＭＴＤとして宣言する。
ＤＬＴを観察せずに用量レベルをＭＡＤレベルと宣言する。したがって、ＲＰ２ＤはＭＴＤではない。
中間用量レベルの試験を推奨する。
患者の安全性を高めるため、プロトコルの修正を推奨する。
登録および／または試験を中止する。

【0363】

患者の投与は、これらの一般的な安全性基準に基づいて、患者の安全性のために中止される場合がある。
生命を脅かす可能性があり、医療モニターによって治験薬に関連すると評価された任意のＳＡＥ。
研究員またはスポンサーに重大な忍容性の懸念を示す、任意の他の臨床的に有意な変化。

【0364】

治験対象母集団
進行期ＨＰＶ１６＋固形腫瘍（頭頸部、子宮頸がん、および他の腫瘍型）を有するＨＬＡ－Ａ^＊０２＋の患者。さらに、ＨＩＶ陽性は、併用安全性期への登録が許可される。漸増期では、ＨＩＶ陽性患者の登録は、スポンサーと話し合う必要がある。

【0365】

患者は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡ－４阻害剤（イピリムマブ、またはＴ細胞共刺激またはチェックポイント経路を特異的に標的化する任意の他の抗体または薬剤を含む）を用いた治療を以前に受けた場合がある。
患者数

【0366】

患者の数は、安全性および観察された免疫原性効果に依存する。単剤療法の漸増期では、ＤＬＴ評価可能な約９～３６人の患者が登録され得ると予想される。どの予定されるコホートも、ＭＴＤに到達したことを示さない場合、追加の細胞用量レベルまたはレジメンを試験してもよい。合計で最大４８名の評価可能な患者が、併用安全性期に登録される（コホート当たりｎ＝１２）。すべてのコホートが開放され、所定の成功基準により各コホートの第二段階が開放される場合、合計で最大１１６人の患者が拡張期に登録される（コホート当たり最大ｎ＝２９）。コホート内の患者を置き換える必要性に応じて、約１７３～２００人の評価可能な患者が試験で治療されることが予想される。どの予定されるコホートも、ＭＴＤに到達したことを示さない場合、追加の細胞用量レベルまたはレジメンを試験してもよい。
試験対象患者基準
１．血液からの遺伝子型アッセイにより確認された、ＨＬＡ－Ａ^＊０２＋である、１８歳以上の男性または女性患者。
２．組織学的に確認された、ＨＰＶ１６＋である不治または転移性固形腫瘍（子宮頸部および頭頸部腫瘍を含むが、これらに限定されない）。
３．手術、放射線、および／または化学放射線療法による治療的処置に適さない子宮頸がんについては、アジュバントまたは再発設定におけるプラチナ系レジメンによる全身化学療法の過去の治療後に、がんが進行していなければならない。患者は、最近の前治療を受けている間、または最近の前治療完了後に進行性疾患を有する必要がある。
再発性疾患に対するプラチナ系全身化学療法治療に不耐性またはそれを拒否する患者については、理由を文書化しなければならない。
４．手術、放射線、および／または化学放射線療法による治療的処置に適さない再発性および転移性の頭頸部がんについては、がんは、初回、アジュバント、または再発の設定で少なくとも１回の以前のプラチナ系化学療法後に進行し、チェックポイント免疫療法が提案されていなければならない。再発時のプラチナ再チャレンジが、有益とみなされない場合、プラチナ含有の確定的化学放射線療法後またはアジュバント化学放射線療法後に再発した患者は、適格である。
再発性疾患に対するプラチナ系全身化学療法治療に不耐性またはそれを拒否する患者については、理由を文書化しなければならない。
５．子宮頸がんまたは頭頸部がん以外の不治または転移性のＨＰＶ１６＋がんを有する患者は、不治の疾患に対して少なくとも１つの利用可能な標準療法後に進行している必要があるか、または患者が標準療法に不耐性であるか、または標準療法を拒否しているか、または患者は標準療法が存在しない腫瘍を有する。
漸増期（パート１）および併用安全性期（パート２）
ａ．ＨＩＶ＋患者の登録は、スポンサーと話し合う必要がある。
拡張期（パート３）
ｂ．ＨＩＶ＋患者は、コホート当たり６人中１人の割合またはその倍数を超えないように、スポンサーと話し合う必要がある。ＨＩＶ＋患者は、以前に少なくとも１回以上の全身がん治療を受けているか、標準治療を受ける資格を有していない必要がある。ＨＩＶ＋患者は、適格となるには、以下の基準を満たす必要がある。
ＣＤ４＋Ｔ細胞数３５０細胞／ｍＬ超、および過去１２か月以内に免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を定義する日和見性感染の既往歴なし
予防的抗菌患者薬の投与を受けている患者の登録は、スポンサーと話し合う必要がある。
６．米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）の一般状態（ＰＳ）は０～１である。
７．患者は、白血球アフェレーシスのための静脈アクセスに同意し、静脈アクセスが問題の場合は、セントラルラインの挿入を希望する必要がある。
８．切除不能または転移性固形腫瘍を有する患者は、許容可能な臨床リスクでの生検が可能な病変を有し、スクリーニング時およびサイクル２の８日目（±２日）に新鮮な生検を受けることに同意する必要がある。
ａ．以前に放射線を照射された領域の病変は、試験の登録前に病変の進行の客観的証拠がある限り、生検され得る。
９．ＲＥＣＩＳＴ １．１による少なくとも１つの測定可能な病変。
ａ．以前に放射線を照射された領域の病変は、試験の登録前に病変の進行の客観的証拠がある場合、測定可能と見なされる資格がある。
１０．白血球アフェレーシス前の１４日以内に実施された以下の臨床検査評価により示された適切な臓器機能と骨髄予備能。
ａ．骨髄機能：絶対好中球数≧１０００／μＬ、ヘモグロビン≦９ｇ／ｄＬ、血小板数≧７５，０００／μＬ。注記：ヘモグロビン値が９ｇ／ｄＬ未満の安定した患者において、輸血を利用して、試験対象患者基準を満たすことができる。
ｂ．肝機能：血清総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ、血清ＡＳＴ／ＡＬＴ、≦２．５×ＵＬＮ（肝転移の存在下では≦５×ＵＬＮ）、アルカリホスファターゼ＜２．５×ＵＬＮ、ただし以下の例外：肝臓および骨の関与を有する患者：アルカリホスファターゼ≦５×ＵＬＮ。
ｉ．ビリルビン代謝の遺伝性障害を有する患者については、スポンサーと協議すべきである。
ｃ．腎機能：尿収集またはＣｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ推定のいずれかに基づいて、血清クレアチニン≦２．５×ＵＬＮまたはクレアチニンクリアランス≧３０ｍＬ／分。
ｄ．凝固プロファイル：プロトロンビン時間（ＰＴ）、国際標準化比（ＩＮＲ）／部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）≦１．５×ＵＬＮ。白血球アフェレーシス前に少なくとも３０日間、抗凝固療法の安定した、維持レジメンを受けている患者は、研究員が、患者が試験に適していると判断した場合、＞１．５×ＵＬＮのＰＴ／ＩＮＲ測定値を有し得る。登録前に、適切な根拠をスポンサーに提供しなければならない。
１１．ホルモン補充療法を必要とする免疫チェックポイント阻害剤による治療後に免疫介在性内分泌障害を有する患者は適格である。
ａ．ホルモン補充療法の一環としてプレドニゾンを必要とする患者は、一日用量が１０ｍｇを超えない場合に適格である。
１２．妊娠可能な女性患者は、以下でなければならない。
ａ．スクリーニング時に陰性の血清ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）妊娠検査を受け、
ｂ．インフォームドコンセントの時点から、免疫チェックポイント阻害剤またはＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶの最終投与から少なくとも５か月後まで、二重避妊を使用することに同意する。
１３．精管切除術を受けていない男性患者は、インフォームドコンセントの時点から、免疫チェックポイント阻害剤またはＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの最終投与から少なくとも５か月後まで、コンドームを使用する意思がなければならない。
１４．患者はプロトコルを理解し、遵守することができ、必要なインフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）に署名した。関連する試験手順を実施する前に、適切なＩＣＦに署名する必要がある。該当する場合、男性患者の女性パートナーは、妊娠パートナーＩＣＦを理解し、署名する。
除外基準
１．白血球アフェレーシス前の２週間以内に、研究療法を含む抗がん治療による治療。半減期が３日を超える前治療については、治療中止のタイミングをスポンサーと協議すべきである。
２．白血球アフェレーシスの少なくとも２週間前に改善しない（すなわち、グレード１以下）抗がん療法または研究療法を伴う前治療に関連するＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０によるグレード１超のＡＥ（グレード２の脱毛症を除く）を有する患者。
３．過去の免疫療法からの任意のグレード４のｉｒＡＥの既往歴（補充療法もしくは血清アミラーゼまたはリパーゼの無症候性上昇で管理された内分泌障害を有する患者が適格である）、以前の免疫療法の恒久的な中止に至った任意のｉｒＡＥ、または白血球アフェレーシスの前の６か月以内に発生した任意のグレード３のｉｒＡＥ。
４．過去６か月以内に非コルチコステロイド系免疫抑制剤で治療を受けた患者は、適格ではない可能性があり、スポンサーと協議すべきである。
５．活動性の自己免疫疾患、公知の自己免疫疾患、または自己免疫疾患が疑われる患者は、適格ではない可能性があり、スポンサーと協議すべきである。
６．同種異系骨髄移植または固形臓器移植の既往を有する患者は、適格ではない可能性があり、スポンサーと協議すべきである。
７．白血球アフェレーシス前の４週間以内の生ウイルス予防接種。
８．白血球アフェレーシス前の１４日以内のコルチコステロイド（プレドニゾン＞１０ｍｇまたは一日あたり同等のもの）または他の免疫抑制薬のいずれかによる全身治療。吸入ステロイド、鼻腔内ステロイド、関節内ステロイド、および局所（眼を含む）ステロイドは許容される。副腎機能不全を有する患者に対するステロイド補充の使用は許容される。副腎機能不全を有する患者における電解質コルチコイド補充のためのフルドロコルチゾンの使用は許容される。
９．活性の中枢神経系の転移および／またはがん性髄膜炎が知られている。以前に治療された脳転移を有する患者は、（治験薬の初回投与の前の少なくとも４週間の間に撮像による進行の証拠がなく、任意の神経学的症状がベースラインに戻った）安定しており、新たなまたは増大した脳転移の証拠がなく、白血球アフェレーシス前の少なくとも７日間ステロイドを使用していない場合に、参加することができる。この例外には、臨床状態にかかわらず除外されるがん性髄膜炎は含まれない。
１０．ステロイドを必要とする間質性肺疾患、特発性肺線維症、肺炎（薬剤誘発性を含む）、または器質化肺炎（例えば、閉塞性細気管支炎、クリプトジェニック器質化肺炎）の既往歴。
ａ．肺炎に対してステロイド療法を必要としない無症候性肺炎を有する患者は適格である。
１１．白血球アフェレーシス前の６か月以内の不安定性狭心症、急性心筋梗塞、ニューヨーク心臓協会のクラスＩＩＩまたはＩＶのうっ血性心不全、および治療を必要とする不整脈を含む、臨床的に重要な心疾患。
１２．白血球アフェレーシス前の１か月以内の、脳血管障害（虚血性発作を含む）などの全身性動脈血栓性または塞栓性事象。
１３．白血球アフェレーシス前の１か月以内の全身性静脈血栓性事象（例えば、深部静脈血栓）または肺動脈事象（例えば、肺塞栓）。
ａ．安定した抗凝固療法を受けている白血球アフェレーシス前に静脈血栓性事象を有する患者は適格である。
１４．研究員の意見において、臨床的に意義のある心電図異常（ＥＣＧ）の既往歴または存在。
１５．左室駆出分画率（ＬＶＥＦ）＜５０％。
１６．白血球アフェレーシスの２週間以内の大手術。白血球アフェレーシスの２週間を超え る以前の大手術の後は、すべての外科手術創傷は治癒し、感染または離開のない状態である必要がある。
１７．活動性感染、既知の精神医学的または神経学的障害などの、任意の他の臨床的に重要な併存疾患、もしくは研究員の判断において、プロトコルの遵守に支障を来す、研究結果の解釈を妨げる、または患者に安全性のリスクを生じさせる可能性がある他の状態。
１８．既知の活動性Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎、もしくは活動性マイコバクテリウム結核菌感染症。
１９．患者が、登録の１２か月以内にアルコールおよび／または違法薬物乱用の既往歴を有する。
２０．スクリーニング来院時または登録時に、授乳している、または血清妊娠検査が陽性である女性患者。
２１．ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの任意の成分に対するアレルギーまたは過敏症の既往歴がある患者。
２２．キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、または注入タンパク質に対する重度のアレルギー性アナフィラキシー反応の既往歴（併用コホートのみ）。
２３．アテゾリズマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、チャイニーズハムスター卵巣細胞製品、またはアテゾリズマブ、イピリムマブ、またはニボルマブ製剤の任意の成分に対する既知の過敏症（併用コホートのみ）。

【0367】

白血球アフェレーシス
白血球アフェレーシスの目標は、延長治療期間を支援するために、各患者に約１０～１４×１０^９個の細胞のＷＢＣの収率を提供することである。例えば、最大１５リットルの血液量を処理することによって、低い収率が予想される場合に手順を調整するよう努力が行われる。現地の手順に従い、可能であれば、処理された血液量が増加し得るように、白血球アフェレーシス中にＷＢＣまたは全血球数を測定する。白血球アフェレーシス中にＷＢＣまたは全血球数が測定できない場合、白血球アフェレーシスの終了時にサンプルを採取し、可能であれば、ｌｅｕｋｏｐａｋ中のＷＢＣ数を決定する。結果は可能な限り速やかに処理され、リアルタイムでスポンサーに提供される。

【0368】

腫瘍反応の評価およびスケジュール
腫瘍評価はスクリーニング時（ベースライン）に実施され、腫瘍応答は、研究員によって、ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの初回投与後１年間は９週間（±７日）ごとに、その後、１２週間（±７日）ごとに、ＲＥＣＩＳＴおよびｉＲＥＣＩＳＴによる病勢進行の確認、許容できない毒性、同意の撤回、死亡、またはＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶの初回投与日から２年の、いずれかが起こるまで評価される。

【0369】

疾患は、Ｘ線撮影を介して評価される。ＲＥＣＩＳＴ １．１による疾患進行を経験する患者は、治療を行う研究員よって最善の利益であると考慮された場合、疾患進行の確認を可能にするために、投与を継続することができる。すなわち、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＣＰＤ（Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ，２０１７）である。

【0370】

進行以外の理由で患者が治験薬を中止した場合、その患者は、先に概説したスケジュールに従って、引き続き撮像されるべきである。放射線学的評価を取得し、ＣＲＦに記録する必要がある。

【0371】

スクリーニング時およびその後のすべての時点で、子宮頸部、肛門／直腸、外陰部／膣、および陰茎がんは、胴体（胸部、腹部および骨盤）およびすべての既知の疾患の部位のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）を必要とし、中咽頭がんは、頭部、頸部、および胸部ならびに既知の関与する他の領域のＣＴを必要とする。正当な理由により、ＣＴスキャンを使用できない場合、またはＣＴによる適切な腫瘍評価が行えない場合、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）が許可され、スクリーニング時にスポンサーに通知されなければならない。スクリーニング時に疾患部位の評価に使用されるのと同じＸ線撮影手順が、試験全体を通して使用される。他のすべての進行固形腫瘍型については、研究員は、研究員がその腫瘍型に最良であると考える撮像モダリティを使用して、すべての既知の疾患部位を撮像する。

【0372】

脳転移の既往歴を有する全ての患者において、脳の磁気共鳴撮像がスクリーニング時に必要とされ、脳の磁気共鳴撮像は、脳転移の既往歴を有する任意の患者において、および／または脳転移を示唆する症状を発現する任意の患者において、その後の時点で繰り返されてもよい。患者がＭＲＩに耐えられないか、またはＭＲＩに対する禁忌がある場合、ＣＴスキャンを使用できる。

【0373】

同じ評価者が評価を行い、来院間の内部の整合性を確保する。研究員の裁量で、ＰＤが疑われる場合は、いつでもＣＴスキャンを繰り返す必要がある。部分奏功（ＰＲ）または完全奏功（ＣＲ）を達成した患者については、腫瘍評価を４週間後に繰り返し、反応を確認すべきである。

【0374】

免疫原性測定を含む薬力学的評価
サンプル収集スケジュール
腫瘍生検
白血球アフェレーシスの前に、患者はスクリーニング腫瘍生検（原発腫瘍または転移）を受けるが、この生検は、以前に放射線照射を受けた腫瘍の増殖が活発な部位からであり得る。すべての患者は、サイクル２の８日目（±２日）に、同じ原発腫瘍または転移の腫瘍生検を繰り返す必要がある。可能であれば、サイクル５の１日目（＋ ２日）に、追加の反復腫瘍生検（投与前）を得る。このサンプルは任意である。予備的データから、治療中の腫瘍生検時点の変更がより適切であることが示唆される場合、治療中の腫瘍生検時点の代替的時点を考慮してもよい。

【0375】

スクリーニング時に採取される新鮮な腫瘍生検は、原発腫瘍または転移部位から採取され、その後の生検は、スクリーニング時に生検された同じ原発腫瘍または転移から採取されるべきである。

【0376】

薬力学的評価
可能な限り、ベースラインサンプルは、四量体染色を含むフローサイトメトリーによる免疫表現型検査、ＨＰＶペプチドとの共培養後のサイトカインのＴ細胞産生の評価（ＩＦＮγ－およびグランザイムＢ酵素結合免疫スポット［ＥＬＩＳＰＯＴ］）、および循環細胞を含まないＨＰＶ１６ ＤＮＡ（ｃｆＨＰＶ ＤＮＡ）を含むが、これらに限定されない、細胞相関検査の長軸方向評価に使用される。ベースライン腫瘍生検および選択された血液サンプルは、治療後サンプルのみとの比較に使用される（表２）。

【表2】

略語：ＤＮＡ＝デオキシ核酸、ＨＰＶ１６＝ヒトパピローマウイルス株１６、ＩＦＮγ＝インターフェロンガンマ

【0377】

ＥＬＩＳＰＯＴを介して検出された内因性免疫反応に関する情報は、腫瘍生検の免疫組織化学的分析に情報を与える。

【0378】

サイトカイン評価
すべての患者から、サイトカイン用の血液サンプルを収集する。グレード２、３、または４のＣＲＳを有する患者は、グレード２、３、または４のＣＲＳ事象の間に実施される追加のサイトカイン血漿レベルを有する。ＣＲＳの診断時、重症度が増加した時（例えば、グレード２のＣＲＳがグレード３のＣＲＳに進行したとき）、神経学的症状の発症時、および退院時または回復時に、採血が行われる。

【0379】

サイトカインパネルの評価には、ＩＦＮガンマ（ＩＦＮ？）およびＩＬ６が含まれるが、これらに限定されない。ＣＲＳは遅発性の発症を有する可能性があるが、治療開始後１４日を超えて発現することはまれである。この期間の外側に現れるＣＲＳと一致する症状を呈する患者は、他の原因について注意深く評価される。

【0380】

サイトカインは、薬力学的評価のために観察される。ベースラインおよび治療後の血清サンプルは、薬剤炎症反応に関する情報を提供する可能性のあるサイトカインを測定することによって、抗腫瘍免疫応答を評価するために収集される。

【0381】

安全性評価
安全性は、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０に従って定義され、等級分けされた、すべてのＳＡＥおよび非重篤なＡＥおよび臨床検査異常の観察を通して、本試験で評価される。一般的な安全性評価には、身体検査、および血液性化学検査、凝固、および差を含む血球数を含む特定の臨床検査評価が含まれる。ＳＡＥおよびグレード２以上のＡＥＳＩは、安全性データベースへの登録のために、迅速化されて報告される。

【0382】

試験実施中、観察された安全性事象の総計（グレード２に改善したＣＲＳ事象を含む）がレビューされ、所定の事象が、この事象の後、患者の段階的登録の開始を必要とするかどうかについての、決定が行われる。潜在的な追加の単剤療法コホート（パート１）または併用安全性コホート（パート２）における段階的登録では、コホートのその後の新たに登録された患者すべてが１週間ずらされる必要がある。該当する場合、患者の半順次登録が一部のコホートで継続される場合がある。患者は、試験中にサイトカイン放出アッセイを実施される。グレード２、３、または４のＣＲＳを有する患者は、安全性臨床検査およびサイトカインパネルの評価のために追加の血液サンプルが採取される。

【0383】

免疫チェックポイント阻害剤への曝露は、ｉｒＡＥ、特に自己免疫性状態のリスクを増加させる可能性がある。そのため、ｉｒＡＥは早期に認識され、重大な合併症の可能性を避けるために速やかに治療される。

【0384】

すべての患者は、最後の治験薬投与後１５～４５日以内に、安全性追跡来院のためにクリニックに戻る。すべてのＡＥおよびＳＡＥは、治験薬（ＥＯＤ６Ｗ）の最終投与から６週間後まで、または脱落から４５日後まで、または別の抗がん療法の開始までのいずれかが起こるまで記録される。研究員によって、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ単剤療法または併用療法におそらく、多分、または間違いなく関連すると決定された継続中のＳＡＥのみが追跡される。

【0385】

身体検査、身長および体重
身体検査には、身長（スクリーニングのみ）、体重、全身の外見の評価、ならびに適応に応じて、皮膚、頭部、目、耳、鼻、口／喉／首、甲状腺、リンパ節、呼吸器、心血管、消化器、四肢、筋骨格、神経、および婦人科および泌尿生殖器系として示される系の評価が含まれる。白血球アフェレーシスの２４時間以内に患者の身体検査中に体重を捕捉することは、患者の用量が体重によって決定されるため、特に重要である。

【0386】

一般状態
Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐの尺度および基準は、患者の一般状態を評価し、疾患が患者の日常生活能力にどのように影響するかを評価し、適切な治療および予後を決定するために使用される。

【0387】

バイタルサイン
バイタルサインを収集し、バイタルサインは、患者が座わっている状態での収縮期および拡張期血圧、心拍数、体温、および呼吸数を含む。

【0388】

１２誘導心電図
１２誘導ＥＣＧは、ＱＴｃＢ（Ｂａｚｅｔｔの式で補正されたＱＴｃ）およびＱＴｃＦ（Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａの式で補正されたＱＴｃ）によって収集される心拍数、ＰＲ間隔、ＱＲＳ間隔、ＲＲ間隔、ＱＴ間隔、およびＱＴｃ間隔を決定するＥＣＧ装置を使用して、資格のある施設スタッフによって実施される。ＥＣＧの収集中、患者は、ＥＣＧの収集前の少なくとも１０分間、気を散らすもの（テレビ、携帯電話など）のない静かな環境で休息している。

【0389】

すべてのＥＣＧは、異常の有無について、資格を有する医師によって評価されなければならない。

【0390】

心エコー図
スクリーニング時にＬＶＥＦを測定するため、また臨床的な示唆があれば、心エコー図またはマルチゲート収集（ＭＵＧＡ）スキャンを実施する。

【0391】

臨床検査評価
臨床検査評価用のサンプルが収集される。表３に概説される臨床検査は、施設によって実施される。表３に概説する臨床検査用のサンプルは、適切な管に収集され、施設の標準手順に従って取り扱われる。

【0392】

臨床検査変数を表３に列挙する。

【表3】

ａ．これらの臨床検査の結果は、白血球アフェレーシスの前に、または白血球アフェレーシス当日に、白血球アフェレーシスの前に利用可能な結果と共に、取得されている必要がある。
ｂ．凝固パラメータの結果は、任意の腫瘍生検の当日または翌日に必要とされる。
ｃ．ベースラインおよびＣＲＳ症例で収集。
略語：ＣＲＳ＝サイトカイン放出症候群、Ｔ３＝トリヨードチロニン、Ｔ４＝チロキシン、ＴＳＨ＝甲状腺刺激ホルモン

【0393】

有害事象
定義
有害事象
ＡＥとは、投与された治験薬と必ずしも因果関係がない、患者における任意の望ましくない医学的事象である。したがって、ＡＥは、治験薬と関連しているか否かにかかわらず、治験薬の使用と一時的に関連のある任意の好ましくないまたは意図しない兆候（臨床検査所見の異常を含む）、症状、または疾患であり得る。有害事象は、新たな事象であってもよく、または重症度もしくは頻度が重くなったもしくは悪化した既存の状態であってもよい。

【0394】

有害事象は、身体検査、臨床検査、または他の診断的調査において、ベースラインから臨床的に有意な変化である可能性がある。

【0395】

本試験では、ＡＥは、発現時間が治験薬投与から治験薬の最終投与後６週間までである場合に、治療による発現とする。
重篤な有害事象

【0396】

ＳＡＥは、以下のいずれかをもたらす任意のＡＥである：
死亡。
直ちに生命を脅かす。
入院または既存の入院期間の延長を必要とする。
持続的または顕著な障害または無能力をもたらす。
先天性異常または先天性欠損が生じる。
患者を危険にさらす可能性がある、または上記の転帰の１つを防止するために医学的介入を必要とする可能性がある、重要な医療事象である。

【0397】

患者がＩＣＦに署名した後、治療前、治療中、または治療中止後３０日以内に発生したすべてのＳＡＥは、それらが試験に関連しているか否かにかかわらず、適切な臨床手順フォームに記録されなければならない。
特に注目すべき有害事象

【0398】

ＡＥＳＩは、治験薬に特有の科学的および医学的懸念のＡＥ（重篤または非重篤）であり、継続的な観察と研究員によるスポンサーへの即時通知が必要となる。このようなＡＥの特徴付けと理解には、さらなる調査が必要となる場合がある。特に注目すべき有害事象は、プロトコルの改訂により、試験中に追加または除去することができる。

【0399】

以下のＡＥがＡＥＳＩとみなされる：
過敏症、サイトカイン放出、全身性炎症反応症候群、全身性炎症活性化を示唆する事象。
インフルエンザ様疾患。
注入反応症候群。
心筋炎、神経学的ｉｒＡＥ、免疫関連病因の高トランスアミナーゼ血症、および腎炎などの、免疫療法に関連するｉｒＡＥ。

【0400】

さらに、以下のイベントがスポンサーに報告される。
ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの過剰投与の疑い。
Ｈｙ’ｓ Ｌａｗ基準を満たす肝臓検査異常、すなわち、プロトコルによって特定されたまたは予定外の臨床検査により決定される、≧３×ＵＬＮのＡＳＴまたはＡＬＴの臨床検査値、および≧２×ＵＬＮの総ビリルビンの臨床検査値、および同時に、＜２×ＵＬＮのアルカリホスファターゼの臨床検査値。
重症度の評価

【0401】

ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０は、ＡＥおよび臨床検査異常の重症度の評価およびグレード分けに使用される。ＡＳＴＣＴコンセンサスグレーディングは、ＣＲＳおよびＩＣＡＮＳに使用される。各ＡＥ用語は、最新バージョンの国際医薬用語集（ＭｅｄＤＲＡ）の用語およびコードにマッピングされる。

【0402】

事象がＣＴＣＡＥバージョン５．０で取り上げられていない場合、表４に示すガイドラインを使用して重症度を評価するべきである。

【表4】

出典：（ＮＩＡＩＤ、２００３年）
略語：ＣＴＣＡＥ＝有害事象共通用語規準

【0403】

因果関係の評価
治験薬との関連は、研究員によって評価される。したがって、ＡＥおよびＳＡＥ報告フォームには、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ、アテゾリズマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、またはそれらの組み合わせに因果関係を帰属させる選択肢が含まれる。ＳＱＺ ＰＢＭＣ－ＨＰＶおよび免疫チェックポイント阻害剤との併用療法を受けている患者については、因果関係を、各プロトコルに指定された療法について個別に評価する。合理的な因果関係の疑いは、事象が免疫チェックポイント阻害剤の標識と一致する場合、免疫チェックポイント阻害剤のみに起因する。

【0404】

ＡＥと治験薬（すなわち、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ、アテゾリズマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、またはこれらの組み合わせ）との関係は、以下のように文書化される：
明確である：ＡＥは明らかに治験薬に関連している。
推定される：ＡＥは治験薬に関連する可能し得る。
可能性がある：ＡＥは治験薬に関連する可能性し得る。
可能性が低い：ＡＥは治験薬に関連するか疑わしい。
関連なし：ＡＥは明らかに治験薬に関連していない。

【0405】

医学の資格を持った研究員は、各ＡＥについて治験薬との関連を判断する。研究員は、その医学的判断において、事象が治験薬によって引き起こされた合理的な可能性があるかどうかを判断する。関連性を示唆する正当な理由がない場合、ＡＥは「関連なし」として分類される。治験薬とＡＥの発現との間に因果関係の可能性を疑う正当な理由がある場合、たとえ判断されていなくても、ＡＥは「関連あり」とみなされる。

【0406】

ＡＥ／ＳＡＥと治験薬との関係が「明確である」、「可能性がある」、または「推定される」と判断された場合、事象は、規制上の報告を迅速に行うことを目的として、治験薬に関連するとみなされる。
予想度

【0407】

該当する製品情報（例えば、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶのＩＢ、またはアテゾリズマブ、イピリムマブ、またはニボルマブの承認された標識）に列挙されていない、または特異性または重症度と矛盾するＡＥは、予想外であるとみなされる。

【0408】

有効性解析
定義
無増悪生存期間（ＰＦＳ）は、サイクル１の１日目から、ＲＥＣＩＳＴ １．１による客観的腫瘍進行（ＰＤ、放射線学的）の最初の記録、または任意の原因による死亡のいずれかが到来するまでの時間として定義される。無増悪生存期間データは、客観的腫瘍進行を有しておらず、かつ解析の時点でまだ試験中である患者、治験薬以外の抗腫瘍治療を受ける患者、または客観的腫瘍進行の文書化の前に治療追跡から除去される患者について、ＰＤが存在しないことを文書化する最後の腫瘍評価の日にセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）される。登録後に腫瘍評価を受けておらず、死亡したことが知られていない患者は、サイクル１の１日目にＰＦＳがセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）される。参加施設間の異なる診療方法に対応するため、ＲＥＣＩＳＴ １．１基準およびｉＲＥＣＩＳＴ基準の両方により、ＰＦＳが評価される。

【0409】

全生存期間（ＯＳ）は、サイクル１の１日目から任意の原因による死亡日までの時間として定義される。死亡確認がない場合、生存時間は、患者が生存していることが知られている最後の日にセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）される。サイクル１の１日目以降のデータがない患者の、生存期間はサイクル１の１日目にセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）される。

【0410】

客観的奏効率（ＯＲＲ）は、ＲＥＣＩＳＴ １．１によるＣＲまたはＰＲを有する患者の割合として定義される。客観的奏効率は、未確認および確認されたＯＲＲとして提供される。確認された応答は、応答の当初の記録から少なくとも２８日後に、反復撮像研究で持続する応答である。同様に、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＯＲＲも要約され、報告される。

【0411】

奏功期間（ＤｏＲ）は、ＰＲまたはＣＲの最初の記録から、任意の原因による客観的腫瘍進行または死亡の最初の記録までの時間として定義される。奏功期間データは、腫瘍進行を有しておらず、かつ解析の時点でまだ試験中である患者、治験薬以外の抗腫瘍治療を受ける患者、または客観的腫瘍進行の文書化が最後の腫瘍評価においてセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）される前に研究追跡から除去される患者について、ＰＤが存在しないことを文書化する最後の腫瘍評価の日にセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）される。同様に、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＤｏＲも要約され、報告される。

【0412】

最良総合効果（ＢＯＲ）は、サイクル１の１日目から疾患進行または死亡までのすべての腫瘍評価が記録された後に決定される。一般的に、これはすべての評価にわたって最良の応答である。しかしながら、ＣＲ、ＰＲ、および安定した疾患（ＳＤ）の確認も、ＢＯＲ決定に使用される。ＣＲまたはＰＲを確認するために、腫瘍測定値の変化は、反応基準が最初に満たされた後の４週間（２８日）以上であるべき反復評価によって確認されなければならない。ＳＤを確認するためには、サイクル１の１日目から少なくとも１２週間経過している必要があり、そうでない場合、ＢＯＲはその後の評価に依存する。最良総合効果は、登録をアンカー日として使用して、最良の反応までのイベント変数までの時間または割合として、要約される。同様に、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＢＯＲも要約され、報告される。

【0413】

疾患制御率（ＤＣＲ）は、定義された時点でＲＥＣＩＳＴ １．１によりＢＯＲがＣＲ、ＰＲ、またはＳＤとして決定される患者の割合である。ベースライン時に測定可能な疾患を有し、腫瘍評価に適格である安全性集団中の全ての患者は、３、６、および１２か月時点での、ＤＣＲ割合の分母とみなされる。同様に、ｉＲＥＣＩＳＴによるｉＮＣＲも要約され、報告される。

【0414】

安定した疾患１２週間は、ＢＯＲがＲＥＣＩＳＴ １．１によりＣＲ、ＰＲ、またはＳＤとして決定され、少なくとも１２週間維持される患者の割合である。ベースライン時に測定可能な疾患を有し、腫瘍評価に適格である安全性集団中の全ての患者は、３、６、および１２か月時点での、割合の分母とみなされる。同様に、ｉＲＥＣＩＳＴによる１２週間のＳＤも要約され、報告される。
分析

【0415】

有効性解析が、安全性集団に対して実施される。抗腫瘍活性（ＯＲＲ、ＰＦＳ、ＯＳ）は、ＨＬＡクラスＩ発現が記録された患者についても記載されている。プロトコル毎の集団が安全性集団と異なる場合、有効性解析もＰＰ集団を使用して実施される。

【0416】

カプランマイヤー法を使用して、ＰＦＳ中央値および両側９５％信頼区間を推定する。死因にかかわらず、死亡する患者は、死亡前に後続抗がん療法を受けていない限り、事象があったとみなされる。後続治療を受ける場合、患者は、後続治療前の、最後の評価可能な腫瘍評価の日付をセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）される。試験に対する同意を撤回した患者は、同意を撤回する前の、最後の評価可能な腫瘍評価の時点でセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）されたとみなされる。臨床データカットオフ日の時点でまだ生存している患者は、もっとも最近の評価可能な腫瘍評価でセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）される。臨床データのカットオフ日以前に追跡不能となったすべての患者も、追跡不能になる前の最後の評価可能な腫瘍評価の時点でセンサー（ｃｅｎｓｏｒ）されたとみなされる。

【0417】

奏功期間、最良総合効果までの時間、および全生存期間は、ＰＦＳと同じ方法を使用する。さらに、ｉＲＥＣＩＳＴを使用したｉＰＦＳ、ｉＢＯＲ、ｉＮＣＲ、およびｉＢＯＲまでの時間が、類似の方法を使用して分析され、報告される。

【0418】

客観的奏効率（ＯＲＲ）は、正確な二項分布に基づく９５％信頼区間を有する割合として提示される。ＯＲＲの点推定値および両側９５％信頼区間が提供される。少なくとも１２週間継続するＤＣＲおよびＳＤは、点推定値として報告される。
安全性解析

【0419】

すべての安全性パラメータは、安全性集団を使用して分析される。安全性パラメータには、以下が含まれる。ＡＥ、臨床検査評価、バイタルサイン、ＥＣＯＧ、曝露、ＥＣＧ、ＥＣＨＯ／ＭＵＧＡおよび身体検査。

【0420】

安全性の主要評価項目は、任意のＡＥを有し、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ投与に対する毒性が観察された患者数であり、重症度はＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０を使用して評価される。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの初回投与後に発症したすべてのＡＥを解析に含める。有害事象は、インフォームドコンセントへの署名から収集されるが、解析は、治療により発生したＡＥに焦点を当てて行われる。

【0421】

ＡＥは、記述統計量を使用して分析される。所定のＡＥが複数回発生する患者については、最も高い重症度が使用される。
有害事象

【0422】

ＡＥは、現在のバージョンのＭｅｄＤＲＡコーディング辞典を使用してコーディングされる。

【0423】

ＡＥは、サイクル１の１日目から治験薬の最終投与後６週までに発現した場合、治療による発現とする。部分的な発現時間を有するＡＥについては、ＡＥが治療により発現したかどうかを判定するために、日付が欠落していない部分が使用される。治験薬の投与に対してＡＥがいつ発生したかについて判断できない場合、ＡＥは治療により発生したと分類される。治療により発現したＡＥには、治験薬の初回投与前に存在し、投与後に毒性が悪化した任意のＡＥも含まれる。

【0424】

本項で説明する解析は、簡潔さのために本項で単にＡＥと呼称されるＴＥＡＥに基づく。

【0425】

研究員によって治験薬に関連する可能性がある、おそらく関連があると推定される、または明らかに関連があるとみなされる有害事象は、要約目的のために関連ありとして分類される。

【0426】

任意のＡＥ、任意の関連ＡＥ、任意のＳＡＥ、任意の関連ＳＡＥ、任意のグレード３以上のＡＥ、任意のグレード３以上のＡＥを有する患者の数および割合、ならびに各カテゴリーに対する事象の総数を要約する。ＡＥによる死亡数、ＡＥによる入院者数、およびＡＥによる治療中止数、ならびにＤＬＴ数およびＡＥＳＩ数を要約する。

【0427】

ＡＥを発現した患者の数および割合、ならびにＡＥの総数は、器官分類および優先用語別に要約される。この集計は、関連するＡＥ、ＡＥＳＩ、ＳＡＥ、関連するＳＡＥ、およびグレード３以上のＡＥ、ならびに関連するグレード３以上のＡＥに対して繰り返される。

【0428】

非ＴＥＡＥを含むすべてのＡＥは、患者リストに記載されている。治験薬の投与中止を引き起こすＡＥ、死亡につながるＡＥ、ＳＡＥ、関連ＡＥ、ＡＥＳＩ、ＤＬＴ、および重度のＡＥの患者リストが生成される。

【0429】

臨床検査評価
ベースラインは、治験薬への最初の曝露前の最後の非欠測値として定義される。これは通常、投与前のサイクル１日目であるが、より早い場合もある。ベースラインの臨床検査からの実際の値および変化は、治験来院ごとに要約される。

【0430】

臨床検査結果は、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン５．０および治験責任医師が決定する研究員に従って分類される。パラメータごとの治験来院ごとに、１つ以上の臨床検査結果を報告する場合、最も重篤な分類をもたらす結果が分析のために選択される。シフトテーブルは、グレード分けされた臨床検査パラメータのベースラインからの最大の変化を示すために作成される。

【0431】

すべての臨床検査評価は、リストに記載されている。

【0432】

臨床的に有意な臨床検査結果の異常を有する患者がリストされている。このリストには、治験来院中に研究員が患者について、異常であり、臨床的に有意であると判断した臨床検査パラメータのすべての結果が含まれる。

【0433】

バイタルサイン
ベースラインは、治験薬への最初の曝露前の最後の非欠測値として定義される。バイタルサインの実際の値およびベースラインからの変化は、治験来院および治験時点で要約される。すべてのバイタルサインデータは、患者リストに提示される。

【0434】

バイタルサイン値は、研究員が決定する臨床的有意性に従って分類される。非欠損結果を有する患者の数、非臨床的に有意な結果を有する患者の数および割合、ならびに臨床的に有意な結果は、治験来院および治験時点ごとに要約される。治験来院およびパラメータごとの治験時点ごとに、１つを超えるバイタルサイン結果を報告する場合、最も重篤な分類をもたらす結果が分析のために選択される。

【0435】

臨床的に有意なバイタルサイン値を有する患者がリストされている。このリストには、治験時点にわたって研究員が患者について、臨床的に有意であると判断したバイタルサインパラメータのすべての結果が含まれる。

【0436】

身体検査
異常な身体検査所見が列挙されている。
１２誘導ＥＣＧ

【0437】

ＥＣＧ結果は、シフトテーブル（正常、臨床的に有意ではない異常、異常、臨床的に有意な以上）に示され、ベースラインからの最大の変化を示す。すべてのＥＣＧ結果は患者リストに表示される。

【0438】

その他の安全性変数
２９Ｔ２Ａｌｌ安全性データはリストに記載されている。

【0439】

ＥＣＯＧ ＰＳおよびＥＣＯＧ ＰＳのベースラインからの変化は、それが収集される各予定される来院で要約される。ＥＣＯＧ ＰＳのベースラインからの変化は、連続変数および分類変数として要約される。ベースラインから１ポイント以上の減少は、ベースラインからの「改善」として分類される。ベースラインからの１ポイント以上の増加は、ベースラインからの「悪化」として分類される。ベースラインからの改善、悪化、および変化のないＥＣＯＧ ＰＳは、ＥＣＯＧ ＰＳが評価される各登録後の時点での治療による分類変数として要約される。

【0440】

薬力学的分析
バイオマーカーは、各時点、ベースラインからの変化およびベースラインからの変化％について要約される。薬力学的マーカーとＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶとの間の相関を、記述的およびグラフィカルな方法で探索する。

【0441】

各マーカーの記述統計値（平均、標準偏差、中央値、最小値、最大値、および幾何平均）が報告される。用量群による経時的な個々の値のグラフが提示される。

【0442】

実施例２ コホート１～３の分析
Ｃｅｌｌ Ｓｑｕｅｅｚｅ（登録商標）技術は、抗原をサイトゾルに直接送達する堅牢な能力を示しており、それによって、ほとんどのワクチンが依存するクロスプレゼンテーションプロセスを回避し、効率的なＭＨＣ－Ｉ提示および抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞活性化を可能にする。前臨床データは、インビトロおよびインビボでの、ＣＤ８ Ｔ細胞の活性化および抗腫瘍効果の優越性を実証している。

【0443】

図６は、Ｃｅｌｌ Ｓｑｕｅｅｚｅ（登録商標）技術によって生成されたＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ－１０１治験薬の予想される機序を示し、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶワクチンがＣＤ８ Ｔ細胞応答を直接刺激する：
１． 末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、白血球アフェレーシスによって患者から得られたもので、ＨＰＶ１６ Ｅ６およびＥ７合成長ペプチド（ＳＬＰ）と混合される
２． Ｃｅｌｌ Ｓｑｕｅｅｚｅ（登録商標）技術は、ＰＢＭＣの急速な機械的変形を使用して膜を一時的に破壊し、Ｅ６およびＥ７抗原カーゴを細胞質に直接送達する
３． 得られた抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、ＣｐＧ７９０９で成熟される
４． ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、このプロセスによって遺伝子改変されず、保存および患者への出荷のために凍結保存される
５． 前臨床データは、抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞活性化を駆動するために、マウスＳＱＺ（商標）ＡＰＣがリンパ器官を本拠地とすることを実証している
６． 前臨床モデルでは、腫瘍部位を本拠地とする活性化Ｔ細胞は、腫瘍細胞死を誘導し、長期保護を提供するメモリーを形成する。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、前臨床モデルにおいて他の技術と比較評価した場合、ワクチンの効力において劇的な改善を示した。

【0444】

図７に示されるように、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ－１０１臨床試験の主要研究目的は、単剤療法のための２８日間のＤＬＴ期間の安全性、およびチェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）との組み合わせのための４２日間のＤＬＴ期間の安全性を含む。二次的な試験目的には、安全性および忍容性、有効性（ＲＥＣＩＳＴ １．１によるＯＲＲなど）、ならびに薬力学的マーカーが含まれる。

【0445】

方法
ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ－１０１は、無制限の過去の治療後に進行する不治のＨＰＶ１６＋がんを有する患者を登録している（図７）。

【0446】

適格患者は、ＥＣＯＧ ０－１、十分な臓器機能、および許容可能な臨床リスクを伴う生検が可能な病変を有する必要がある。

【0447】

患者は、試験施設において単一の白血球アフェレーシスを受け、ニューハンプシャー州、Ｐｏｓｔｓｍｏｕｔｈ、ＬｏｎｚａでＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶバッチを製造した。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは遺伝子改変されなかった。静脈から静脈への所要時間は約１週間であった。

【0448】

バッチキャラクタリゼーションを、バッチ放出前に実施し、細胞生存率およびＩＦＮ－γ分泌の誘導を含んだ。

【0449】

外来患者のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、以前の馴化レジメンなしで３週間毎にＩＶ投与され、各コホートでは、最初のおよび二人目の患者が２３時間にわたって観察された。

【0450】

ダブル抗原プライミング（ＤＰ）をコホート３で導入し、サイクル１の１日目および２日目に実施した。

【0451】

ＤＬＴ期間は、単剤療法では２８日、併用期では４２日であった。

【0452】

単剤療法の用量漸増は、３＋３ルールに従って行われた。すべてのコホートにおいて、最大１２人の患者が登録される。

【0453】

腫瘍生検をベースラインおよびＣ２Ｄ８で収集し、ＦＦＰＥブロックに処理し、切片化し、適格なモノプレックスアッセイ、デュアルプレックスアッセイ、およびトリプレックスアッセイを使用して、自動免疫組織化学染色装置で染色した。

【0454】

各患者の治療期間は、それらの割り当てられた用量およびそれらの製造バッチにおけるバイアルの数によって決定された。

【0455】

反応は、ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴを介して評価された。

【0456】

患者の人口統計学的特性、疾患特性、治療による有害事象の発現（ＴＥＡＥ）
表５は、登録患者の人口統計学的特性および疾患特性を示す。

【表5】

【0457】

表６は、登録患者の配置を示す。

【表6】

＊プロトコルｖ１．２までは、３用量の制限があった。ｖ２．０が承認された後、患者は利用可能な用量だけ投与を受けることができた。
＾治療は、プロトコルバージョン２．０以前は３回の投与に限定された。
^１患者はホスピスに解放され、その後死亡した。

【0458】

表７は、２人以上の患者において報告された因果関係ＴＥＡＥの概要を示す。

【表7】

【0459】

ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの製造可能性
製造プロセスは、患者当たり＜２４時間であり、一回のランから複数回の用量を生産することを可能にした。製造および放出試験の劇的な改善は、約１週間の静脈間時間を支持する。

【0460】

図８ＡおよびＢで示すように、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの製造は、約９０％の平均生存率を示し、エンドツーエンドのプロセス時間の平均は２４時間未満であった。図８Ｃで示すように、すべての患者バッチから生成されたＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、応答性Ｔ細胞ＩＦＮ－γ分泌でアッセイされたＴ細胞活性を誘導する能力によって示されるように、ＨＰＶ抗原を提示した。

【0461】

治療結果
治療結果は、図９に要約され、全コホートにわたる、最良総合効果（ＢＯＲ）、試験における生存（日数）、およびロイヤルマースデン病院（ＲＭＨ）１スコアの概要を示す（スコアに基づく影付け）。図９に示されるように、全てのコホート３患者は、２のＲＭＨスコアを有し、ＣＤ８腫瘍浸潤リンパ球の有意な増加はなかった。

【0462】

患者のケーススタディ
異なる腫瘍負荷を有する患者を、さらなるケーススタディのために選択した。

【0463】

ケーススタディ患者２
６５歳の子宮頸がん女性は、（１）シスプラチン／パクリタキセル／ベバシズマブ［ＢＯＲ＝ＣＲ］および（２）ペンブロリズマブ［ＢＯＲ＝ＰＤ］による治療の後、コホート１に診断後３．５年で登録した（０．５ｅ６／ｋｇ ｑ３ｗ）。

【0464】

低腫瘍負荷、ベースラインで、０のＥＣＯＧおよび１のロイヤルマースデン病院（ＲＭＨ）１スコア、１０か月超の治験。

【0465】

腫瘍負荷１の標的病変（ＴＬ）（１５ｍｍのＳＯＤ）および３つのＮＴＬ（２つのリンパ節、肺）。ＲＥＣＩＳＴ １．１：ＳＤによる最良総合効果。

【0466】

図１０は、腫瘍増殖動態の減少を示す（図 １０Ａ）、ＩＨＣ画像解析の結果は、中央腫瘍におけるＣＤ８ ＴＩＬの２倍の増加を示し（図１０Ｂ、スクリーニングと比較したＣ２Ｄ８）、およびＩＨＣ画像の例は、ＣＤ８ ＴＩＬの増加をさらに示す（図１０Ｃ、矢印）。

【0467】

ケーススタディ患者７
頭頸部がんを有する６７歳の男性は、カルボプラチン／５ＦＵ／ペンブロリズマブ（ＢＯＲ＝ＰＲ）による治療後に診断後１年で、コホート２（２．５ｅ６／ｋｇ ｑ３ｗ）に登録された。

【0468】

高腫瘍負荷、ベースラインで、１のＥＣＯＧおよび０のロイヤルマースデン病院（ＲＭＨ）１スコア、３か月超の治験。

【0469】

腫瘍負荷２ ＴＬ：６９ｍｍ ＳＯＤ、１ＮＴＬ（リンパ節）。ＲＥＣＩＳＴ １．１：ＳＤによる最良総合効果。

【0470】

図１１は、腫瘍増殖動態の減少を示す（図 １１Ａ）、ＩＨＣ画像解析の結果は、治療中の中央腫瘍におけるＣＤ８ ＴＩＬの６倍の増加を示す（図１１Ｂ、Ｃ２Ｄ８スクリーニングと比較して）およびＩＨＣ画像の例は、ＣＤ８ ＴＩＬの有意な増加を示す（図 １１Ｃ、矢印）。

【0471】

結論
安全性および忍容性
・ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、２～１０回の用量投与を受けた患者において、すべての用量レベルで安全で忍容性十分であった。
・ＤＬＴまたはＧ＞２治療関連ＳＡＥは観察されなかった。

【0472】

製造可能性
・すべてのバッチを、仕様と一致するｃＧＭＰに基づいて製造し、２４時間未満で複数の凍結保存用量を得られ、約１週間の静脈間時間を許容した。
・Ｔ細胞活性（ＩＦＮ－γ分泌）に基づく製品キャラクタリゼーションアッセイは、既往歴または個々の患者のＲＭＨ第１相スコアとは無関係に、すべての患者のバッチにおける抗原提示を確認した。

【0473】

バイオマーカー
・ケーススタディでは、患者２および７などの患者に免疫活性の増加が観察された。高用量コホートの９人中六人の患者が、ベースラインでＲＭＨの第１相スコア２を有し、これは、進行性疾患および免疫不全患者を反映している。
・２つのケーススタディによると、患者２などの腫瘍負荷が少ない進行のより少ない患者は、臨床的利益の可能性が高くなる可能性がある。

【0474】

将来の開発：現在の用量レベルの評価が完了すると、免疫チェックポイント阻害剤との安全併用期の開始が予測される。

【0475】

実施例３ 腫瘍のバイオマーカー解析
実施例２に記載される臨床試験に登録された患者からの腫瘍サンプルを、バイオマーカーの発現について評価した。腫瘍生検を、ベースラインで、およびサイクル２の８日目（Ｃ２Ｄ８）に収集し、ＦＦＰＥブロックに処理し、切片化し、適格なモノプレックスアッセイ、デュアルプレックスアッセイ、およびトリプレックスアッセイを使用して、自動免疫組織化学染色装置でＩＨＣ染色した。

【0476】

本実施例に記載されるコホートを表８に示す。

【表8】

【0477】

結果
有害事象
ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは安全で十分な忍容性があると考えられる。バイオマーカー試験時の有害事象を表９に示す。

【表9】

＊ 一般的な関連ＡＥ（＞１患者）：疲労、低血圧、注入に伴う反応、悪心、掻痒。Ｍ＝百万、ＳＰ＝単一プライム、ＤＰ＝ダブルプライム、ＡＥ＝有害事象

【0478】

事前に特定されたＤＬＴ基準を満たした対象はいなかった

【0479】

２人の患者において三つのＡＥＳＩが報告された：

【0480】

グレード２のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）ならびにグレード１および２の免疫関連反応

【0481】

関連するグレード３以上のＳＡＥは報告されなかった：

【0482】

グレード２（関連）－ＣＲＳ（１ポイント）

【0483】

１患者における関連ＡＥ グレード３＋（貧血）

【0484】

鼻づまりのため一人の患者に一回の投薬遅延があった

【0485】

ＤＬＴ、中止につながる関連するＡＥ、致死的な関連ＡＥは、全て観察されなかった。

【0486】

バイオマーカー試験
全腫瘍組織におけるＣＤ８＋細胞密度を図１２に示す。腫瘍はまた、砂漠（免疫細胞の欠如）、除外された（周辺のみの免疫細胞）、または炎症として評価された。

【0487】

グランザイムＢ（ＧＺＭＢ＋）細胞間のＣＤ８＋細胞密度を図１３に示す。ＣＤ８＋／Ｋｉ６７＋細胞の密度を図１４に示し、ＣＤ８＋／Ｋｉ６７－細胞の密度を図１５に示す。ＭＨＣ－１発現は、Ｈ－スコアに基づいて図１６に示される。以下のＭＨＣカテゴリー、ＭＨＣ－、ＭＨＣ－１低、ＭＨＣ－１中、およびＭＨＣ－１高の％細胞も示されている。スコアリングには、染色の強度および各強度で陽性に染色される細胞の割合が含まれる。染色シグナルは、４つの異なる強度カテゴリーに分けられる：０：染色なし、１＋：弱い染色（高倍率で目に見える）、２＋：中間（または中程度）染色（低倍率で目に見える）、３＋：強い染色（低倍率でも目立つ）。

【0488】

ＰＤ－Ｌ１を発現する腫瘍細胞の割合を図１７に示す。

【0489】

ＨＰＶ Ｅ６の発現は、Ｈ－スコアに基づいて図１８に示される。以下のＨＰＶカテゴリー、ＨＰＶ－、ＨＰＶ１６ ＋１、ＨＰＶ１６ ＋２ ＨＰＶ１６ ＋３、およびＨＰＶ１６ ＋４の％細胞も示される。１～３個のプローブスポットを有する細胞＝＋１、４～９個のスポット＝＋２、１０～１３個のスポット＝＋３、および＞１４個のスポット＝＋４。

【0490】

ＨＰＶ Ｅ７の発現は、Ｈ－スコアに基づいて図１９に示される。以下のＨＰＶカテゴリー、ＨＰＶ－、ＨＰＶ１６ ＋１、ＨＰＶ１６ ＋２ ＨＰＶ１６ ＋３、およびＨＰＶ１６ ＋４の％細胞も示される。１～３個のプローブスポットを有する細胞＝＋１、４～９個のスポット＝＋２、１０～１３個のスポット＝＋３、および＞１４個のスポット＝＋４。コホート１～３の患者の生検を、ＰＤ１の発現について評価した（図２０）。

【0491】

選択された患者の概要
１１２－０６８（コホート３ａ）
中咽頭の扁平上皮細胞がんを有する５２歳の男性は、最高用量コホート（５．０Ｍ細胞／ｋｇ ＤＰ）に登録された。初期診断は３．７年前で、その後シスプラチン、カルボ／５ＦＵ／ぺンブロ（ｐｅｍｂｒｏ）（ＢＯＲ＝ＰＤ）、ドセタキセル、セツキシマブ、抗ＴＧＦβ／ぺンブロ（ｐｅｍｂｒｏ）（ＢＯＲ＝ＰＤ）、セツキシマブ／パクリタキセルの６つの全身療法を受けた。重大な症状負担を伴う大きな原発病変。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの７回の投与をすべて受け、グレードの低い関連ＡＥ（Ｇ１顔面紅潮、Ｇ１疲労）はほとんどなかった。２８日目の治療生検は、ＰＤ－Ｌ１発現の反射性増加を伴う、腫瘍を浸潤するＣＤ８の８倍の増加を示した。最後の腫瘍評価時に新しい皮膚病変を伴う標的病変（縦隔リンパ節（ＲＥＣＩＳＴ １．１））上の確認されたＣＲを含む、放射線学的応答。症候の改善（嚥下障害）および身体検査での病変の肉眼による改善。

【0492】

腫瘍は砂漠（免疫細胞なし）から炎症に移行した。患者は、最も高いＣＤ８浸潤（およびＣＤ８＋細胞上のエフェクター分子ＧＺＭＢ発現）を示した。増殖する（Ｋｉ６７＋）ＣＤ８＋細胞に変化はなかった。ＭＨＣ－ＩおよびＰＤ－Ｌ１の増加が観察された。患者は、ベースライン時に腫瘍の最も高いＥ６およびＥ７発現を示し、治療後の変化が最も大きかった。

【0493】

この患者の中央腫瘍の免疫表現型のより詳細な解析を図２１に示す。右のパネルは、腫瘍の間質および実質におけるＣＤ８＋細胞密度を示す。真ん中のパネルは、トリプレックスアッセイにおけるＣＤ８、ＧＺＭＢおよびＦｏｘＰ３の発現に基づく、腫瘍における免疫細胞のＣＴＬ、ＴｒｅｇおよびＮＫ機能の密度を示す。右のパネルは、ＣＤ８＋およびＧＺＭＢ＋である細胞の割合を示す。これらの結果は、免疫組織化学によってさらに実証される（図２２）。

【0494】

増殖／活性化ＣＤ８＋細胞の密度のより詳細な分析を図２３に示す。

【0495】

図２４に示すように、ＰＤ－Ｌ１の発現の増加が観察された。

【0496】

図２５に示すように、腫瘍内のＭＨＣ－１細胞の数は、ＭＨＣ－１高細胞の割合の増加を含め、Ｃ２Ｄ８により増加した（左のパネル、上）。対照的に、ＨＰＶ１６ Ｅ６およびＨＰＶ１６ Ｅ７を発現する細胞の数は、Ｃ２Ｄ８により減少した（左のパネル、下）。これらの結果は、免疫組織化学（右パネル）でも示される。

【0497】

腫瘍増殖動態を図２６に示す。

【0498】

１０３－０２７（コホート２）
この患者の腫瘍は、試験開始時に炎症を起こし、炎症はＣ２Ｄ８により増加した。ＣＤ８浸潤物に有意な増加があった（ＣＤ８＋細胞上のエフェクター分子ＧＺＭＢ発現に変化はなかった）。この患者は、ＣＤ８＋／Ｋｉ６７＋で測定されたＣＤ８＋細胞の最大増殖を有していた。ＭＨＣ－ＩおよびＰＤ－Ｌ１の発現に有意な変化はなかった。

【0499】

この患者の免疫表現型のより詳細な解析を図２７に示す。右のパネルは、腫瘍の間質および実質における中央腫瘍のＣＤ８＋細胞密度を示す。真ん中のパネルは、トリプレックスアッセイにおけるＣＤ８、ＧＺＭＢおよびＦｏｘＰ３の発現に基づく、腫瘍における免疫細胞のＣＴＬ、ＴｒｅｇおよびＮＫ機能の密度を示す。右のパネルは、ＣＤ８＋およびＧＺＭＢ＋である細胞の割合を示す。これらの結果は、免疫組織化学によってさらに実証される（図２８）。

【0500】

増殖／活性化ＣＤ８＋細胞の密度のより詳細な分析を図２９に示す。

【0501】

図３０に示すように、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１の発現はほぼ同じままであった。

【0502】

図３１に示すように、腫瘍内のＭＨＣ－１細胞の数は、ほぼ同じままであったが、ＭＨＣ－１高細胞の割合は増加した（左のパネル、上）。対照的に、ＨＰＶ１６ Ｅ６およびＨＰＶ１６ Ｅ７を発現する細胞の数は、Ｃ２Ｄ８により減少した（左のパネル、下）。これらの結果は、免疫組織化学（右パネル）でも示される。

【0503】

１０３－００８（コホート１）
この患者の腫瘍は、試験開始時に炎症を起こし、炎症はＣ２Ｄ８により増加した。ＣＤ８浸潤の増加傾向が観察されたが、ＣＤ８＋細胞上のエフェクター分子ＧＺＭＢ発現に変化はなかった。増殖する（Ｋｉ６７＋）ＣＤ８＋細胞に変化は観察されなかった。ＰＤ－Ｌ１に変化は観察されなかった。ベースラインまたは投与後の腫瘍におけるＥ６およびＥ７発現に変化はなかった。

【0504】

この患者の免疫表現型のより詳細な解析を図３２に示す。右のパネルは、腫瘍の間質および実質における中央腫瘍のＣＤ８＋細胞密度を示す。真ん中のパネルは、トリプレックスアッセイにおけるＣＤ８、ＧＺＭＢおよびＦｏｘＰ３ ＦｏｘＰ３の発現に基づく、腫瘍における免疫細胞のＣＴＬ、ＴｒｅｇおよびＮＫ機能の密度を示す。右のパネルは、ＣＤ８＋およびＧＺＭＢ＋である細胞の割合を示す。これらの結果は、免疫組織化学によってさらに実証される（図３３）。

【0505】

増殖／活性化ＣＤ８＋細胞の密度のより詳細な分析を図３４に示す。

【0506】

図３５に示すように、ＰＤ－１の発現は、Ｃ２Ｄ８でほぼ同じままであった。ＰＤ－Ｌ１は、初期スクリーニング時またはＣ２Ｄ８のいずれにおいても検出されなかった。

【0507】

図３６に示すように、腫瘍内のＭＨＣ－１細胞の数は、ＨＰＶ１６ Ｅ６およびＨＰＶ１６ Ｅ７を発現する細胞の数（左のパネル、下）がそうであるように、ほぼ同じであった（左のパネル、上）。これらの結果は、免疫組織化学（右パネル）でも示される。

【表10-1】

【表10-2】

【表10-3】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【配列表】

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【国際調査報告】