特表 2024-503279 ＰＢＭＣの凍結保存のための製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-25

(54)【発明の名称】ＰＢＭＣの凍結保存のための製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/12 20060101AFI20240118BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20240118BHJP

   A61K 47/20 20060101ALI20240118BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20240118BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240118BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20240118BHJP

   A61K 47/46 20060101ALI20240118BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240118BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240118BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240118BHJP

   C12N 5/078 20100101ALI20240118BHJP

   C12N 5/02 20060101ALI20240118BHJP

【ＦＩ】

A61K39/12

A61K47/42

A61K47/20

A61K47/22

A61K47/18

A61K47/12

A61K47/46

A61K35/17

A61P43/00 121

A61P37/04

C12N5/078 ZNA

C12N5/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023539811

(86)(22)【出願日】2021-12-28

(85)【翻訳文提出日】2023-08-08

(86)【国際出願番号】 US2021065352

(87)【国際公開番号】W WO2022147017

(87)【国際公開日】2022-07-07

(31)【優先権主張番号】63/131,454

(32)【優先日】2020-12-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518071763

【氏名又は名称】スクイーズ バイオテクノロジーズ カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】バーンスタイン， ハワード

(72)【発明者】

【氏名】ラフヘッド， スコット

(72)【発明者】

【氏名】ブーティー， マシュー

(72)【発明者】

【氏名】フラヴァティ， ケラン

(72)【発明者】

【氏名】アブデルジャワド， タレク

(72)【発明者】

【氏名】ダドガー， マイサム

(72)【発明者】

【氏名】マリー， ジェイソン

(72)【発明者】

【氏名】チャルグウィン， デイビッド

(72)【発明者】

【氏名】アン， ハリー

(72)【発明者】

【氏名】シャレイ， アーモン アール．

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA93X

4B065BA22

4B065BD09

4B065BD25

4B065BD39

4B065CA44

4C076BB11

4C076CC06

4C076CC07

4C076DD41

4C076DD51

4C076DD55

4C076DD59

4C076EE41

4C076EE56

4C076FF61

4C076FF68

4C076GG05

4C085AA06

4C085AA38

4C085BA51

4C085CC08

4C085DD62

4C085DD84

4C085DD86

4C085EE01

4C085EE06

4C085FF11

4C085GG01

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087CA04

4C087DA19

4C087MA02

4C087MA44

4C087MA66

4C087NA05

4C087NA10

4C087ZB09

4C087ZC75

(57)【要約】

本願は、改変された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の製剤を提供するものであり、ここで製剤は、少なくとも一の抗原（例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原）を含むＰＢＭＣと凍結保存培地とを含む。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、アジュバントの存在下でＰＢＭＣをインキュベートすることによって馴化される。いくつかの態様では、本発明は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む医薬製剤であって、ａ）ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣ、ｂ）凍結保存培地、およびｃ）ヒト血清アルブミンを含む、医薬製剤を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む医薬製剤であって、
ａ）ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣと、
ｂ）凍結保存培地と、
ｃ）ヒト血清アルブミンとを含む、医薬製剤。

【請求項2】

末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む医薬製剤であって、
ａ）ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣと、
ｂ）凍結保存培地と、
ｃ）低温保存培地と、
ｄ）ヒト血清アルブミンとを含む、医薬製剤。

【請求項3】

組成物が、約５×１０^６個のＰＢＭＣ～約５×１０^７個のＰＢＭＣを含む、請求項１または２に記載の医薬製剤。

【請求項4】

組成物が、約２×１０^７個のＰＢＭＣ～約３×１０^７個のＰＢＭＣを含む、請求項１または２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項5】

組成物が、約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項6】

組成物が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項7】

組成物が、約４×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約６×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項8】

組成物が、約５．０×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項9】

組成物中のＰＢＭＣのうち≧７０％、≧８０％、≧９０％、または≧９５％が生存可能である、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項10】

組成物が、約３×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬ～約７×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項11】

組成物が、約５×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項12】

組成物は、予め凍結されており、また組成物は、解凍後に、約４×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項13】

前記医薬製剤中のＰＢＭＣが、≦－１９６℃で少なくとも約１２カ月間保存した後、約≧７０％の生存率を維持する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項14】

前記医薬製剤中の前記凍結保存培地の百分率が、約４０％～約９５％（ｗ／ｗ）である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項15】

前記医薬製剤中の前記凍結保存培地の百分率が、約８０％（ｗ／ｗ）である、請求項１および請求項３から１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項16】

前記医薬製剤中の前記凍結保存培地の百分率が、約５０％（ｗ／ｗ）である、請求項２から１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項17】

前記凍結保存培地がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項18】

前記凍結保存培地であるＤＭＳＯの百分率が、約５％～約１５％（ｗ／ｗ）である、請求項１７に記載の医薬製剤。

【請求項19】

前記凍結保存培地であるＤＭＳＯの百分率が、約１０％のＤＭＳＯ（ｗ／ｗ）である、請求項１７または１８に記載の医薬製剤。

【請求項20】

前記凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項21】

前記医薬製剤中の前記低温保存培地の百分率が、約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）である、請求項２から１４および１６から２０のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項22】

前記医薬製剤中の前記低温保存培地の百分率が、約３０％（ｗ／ｗ）である、請求項２から１４および１６から２１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項23】

前記低温保存培地が、ビタミンＥの水溶性アナログを含む、請求項２～１４および１６～２２のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項24】

低温培地が、トロロックス（（±）－６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）を含む、請求項２から１４および１６から２３のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項25】

前記低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、請求項２から１４および１６から２４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項26】

前記ヒト血清アルブミンが、ヒト血清アルブミン溶液で提供される、請求項１から２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項27】

前記医薬製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約１５％～約２５％（ｗ／ｗ）である、請求項２６に記載の医薬製剤。

【請求項28】

前記医薬製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約２０％（ｗ／ｗ）である、請求項２６または２７に記載の医薬製剤。

【請求項29】

前記ヒト血清アルブミン溶液は、アルブミン濃度は約０．０８ｍｍｏｌ／ｇでカプリル酸ナトリウムおよび／またはアルブミン濃度は約０．０８ｍｍｏｌ／ｇでアセチルトリプトファンを含む、請求項２６から２８のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項30】

前記医薬製剤中のヒト血清アルブミンの百分率が、約２％～約８％（ｗ／ｗ）である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項31】

前記医薬製剤中のヒト血清アルブミンの百分率が、約５％（ｗ／ｗ）である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項32】

前記医薬製剤のｐＨが、約６．０～約８．５である、請求項１から３１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項33】

前記医薬製剤のｐＨが、約７．４である、請求項１から３２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項34】

末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、
ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、
ｃ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、
医薬製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、医薬製剤。

【請求項35】

末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、
ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、
ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の百分率でヒト血清アルブミンとを含むものであり、
医薬製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４である、医薬製剤。

【請求項36】

末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、
ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、
ｃ）約２５％～約３５％の百分率で低温保存培地と、
ｄ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、
医薬製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、医薬製剤。

【請求項37】

末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、
ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、
ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の百分率で低温保存培地と、
ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の百分率でヒト血清アルブミンとを含むものであり、
医薬製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４である、医薬製剤。

【請求項38】

前記凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、請求項３６から３７のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項39】

前記低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項40】

前記医薬製剤は、無菌である、請求項１から３９のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項41】

前記医薬製剤は、約２ＥＵ／ｍＬ未満のエンドトキシンを含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項42】

前記医薬製剤は、マイコプラズマを含まない、請求項１から４１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項43】

ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの二以上を含む、請求項１から４２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項44】

ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含む、請求項１から４３のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項45】

（ａ）ＰＢＭＣの約２５％～約８０％がＴ細胞であり、
（ｂ）ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％がＢ細胞であり、
（ｃ）ＰＢＭＣの約３．０％～約２０％がＮＫ細胞であり、または
（ｄ）ＰＢＭＣの約４．０％～約４５％が単球である、請求項１から４４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項46】

少なくとも一の抗原が、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である、請求項１から４５のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項47】

ＨＰＶが、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である、請求項４６に記載の医薬製剤。

【請求項48】

少なくとも一の抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む、請求項４６または４７に記載の医薬製剤。

【請求項49】

少なくとも一の抗原が、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドおよびＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項50】

少なくとも一の抗原が、配列番号１～３のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む、請求項４６から４９のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項51】

少なくとも一の抗原が、配列番号１８～２５のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む、請求項４６から５０のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項52】

ＰＢＭＣの集団は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原とを含む、請求項４６から５１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項53】

少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣは、
ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形用狭窄部であって、当該狭窄部の直径が懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数である細胞変形用狭窄部に通過させて、それによって入力ＰＢＭＣに対して少なくとも一の抗原が通過するのに十分な大きさの摂動を引き起こし、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣの集団を形成することと、
ｂ）摂動を与えられた入力ＰＢＭＣの集団を、少なくとも一の抗原とともに、当該抗原が摂動を与えられた入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間インキュベートし、それによって少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣの集団を生成することとによって調製される、請求項１から５２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項54】

前記狭窄部の直径が、約４．２μｍ～約６μｍ、または約４．２μｍ～約４．８μｍである、請求項５３に記載の医薬製剤。

【請求項55】

少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣは、馴化される、請求項１から５４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項56】

少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣの集団は、改変ＰＢＭＣを馴化するために、約３７℃で、アジュバントと共にＰＢＭＣを約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間の間、インキュベートすることを含む工程によって馴化される、請求項５５に記載の医薬製剤。

【請求項57】

前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、請求項５６に記載の医薬製剤。

【請求項58】

前記アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、請求項５７に記載の医薬製剤。

【請求項59】

請求項１から５８のいずれか一項に記載の医薬製剤を含む、バイアル。

【請求項60】

製剤を含むバイアルであって、製剤が、
ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ～約５×１０^７個のＰＢＭＣであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、
ｃ）約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンとを含むものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、製剤を含む、バイアル。

【請求項61】

製剤を含むバイアルであって、製剤が、
ａ）約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、
ｃ）約５％の濃度でヒト血清アルブミンとを含むものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４である、製剤を含む、バイアル。

【請求項62】

製剤を含むバイアルであって、製剤が、
ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、
ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の低温保存培地と、
ｄ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、製剤を含む、バイアル。

【請求項63】

製剤を含むバイアルであって、製剤が、
ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、
ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の濃度で低温保存培地と、
ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の濃度でヒト血清アルブミンとを含むものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４である、製剤を含む、バイアル。

【請求項64】

前記凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、請求項６０から６３のいずれか一項に記載のバイアル。

【請求項65】

前記低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、請求項６２から６４のいずれか一項に記載のバイアル。

【請求項66】

前記製剤は、無菌である、請求項５９から６５のいずれか一項に記載のバイアル。

【請求項67】

ＰＢＭＣの製剤を作製する方法であって、凍結保存培地およびヒト血清アルブミンを、ＰＢＭＣの集団であって、該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含むものであるＰＢＭＣの集団に添加することを含む、方法。

【請求項68】

ａ）前記製剤中のＰＢＭＣの集団が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであり、
ｂ）前記凍結保存培地が、約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）前記ヒト血清アルブミンが、約２％～約８％（ｗ／ｗ）の濃度で添加されるものであり、
前記製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５に調整される、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

ａ）前記製剤中のＰＢＭＣの集団が、約６×１０^６個のＰＢＭＣであり、
ｂ）前記凍結保存培地が、約８０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）前記ヒト血清アルブミンは、約５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、
前記製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４に調整される、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

ＰＢＭＣの製剤を作製する方法であって、凍結保存培地、低温保存培地およびヒト血清アルブミン溶液を、ＰＢＭＣの集団であって、該ＰＢＭＣは抗原を含むものであるＰＢＭＣの集団に添加することを含む、方法。

【請求項71】

ａ）前記製剤中のＰＢＭＣの集団が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ～約１×１０^７個のＰＢＭＣであり、
ｂ）前記凍結保存培地が、約４０％から約６０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）前記低温保存培地が、約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｄ）前記ヒト血清アルブミン溶液は、約１５％～約２５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、
前記製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５に調整される、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

ａ）前記製剤中のＰＢＭＣの集団が、約６×１０^６個のＰＢＭＣであり、
ｂ）前記凍結保存培地が、約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）前記低温保存培地が、約３０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）ヒト血清アルブミンは、約２０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、
前記製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４に調整される、請求項７０または７１に記載の方法。

【請求項73】

前記凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、請求項６７から７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

前記低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、請求項７０から７３のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、２０２０年１２月２９日に出願された米国仮出願第６３／１３１，４５４号の利益を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容であるコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５０３２２００３０４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年１２月２３日、サイズ：１２，９９４バイト）については、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

本開示は、概して、凍結保存培地中に少なくとも一の抗原を含む末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の製剤に関する。少なくとも一の抗原を含むこうしたＰＢＭＣを製造する方法、凍結保存可能な製剤を製剤化する方法、およびその製剤を凍結保存する方法も提供する。

【背景技術】

【0004】

パピローマウイルスは、直径約５５ｎｍのビリオンサイズを有する非エンベロープ型の小さなＤＮＡウイルスである。１００を超えるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）遺伝子型が完全に特徴付けられており、さらに多くの数が存在するものと推定されている。ＨＰＶは、子宮頸がん、ならびに一部の外陰部がん、膣がん、陰茎がん、中咽頭がん、肛門がん、および直腸がんの原因であることがわかっている。ほとんどのＨＰＶ感染は無症状であり自然に消失するが、腫瘍形成ＨＰＶの一つの型による持続感染は、前がん状態またはがんに進行し得る。他のＨＰＶ関連疾患としては、尋常性ゆうぜい、足底ゆうぜい、扁平ゆうぜい、肛門性器ゆうぜい、肛門病変、表皮異形成、局所性上皮肥厚、口腔パピローマ、ゆうぜい嚢胞（ｖｅｒｒｕｃｏｕｓ ｃｙｓｔ）、喉頭パピローマ、扁平上皮内病変（ＳＩＬ）、子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰上皮内腫瘍（ＶＩＮ）、および膣上皮内新生腫瘍（ＶＡＩＮ）が挙げられ得る。

【0005】

公知のＨＰＶ型の多くは、サブセットが発がん性である良性病変を引き起こす。疫学的および系統学的な関係に基づくと、ＨＰＶの型は、十五の「高リスク型」（ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２）と、三つの「潜在的な高リスク型」（ＨＰＶ２６、５３、および６６）とに分類され、これらはともに、低悪性度および高悪性度の子宮頸部の変化およびがんとして、ならびに他の肛門性器がん、例えば外陰部がん、膣がん、陰茎がん、肛門がんおよび肛門周囲がんなど、ならびに頭頸部がんとして現れることが知られている。最近では、高リスク型のＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８と乳がんとの関連も記述された。「低リスク型」に分類される十一種類のＨＰＶ型（ＨＰＶ６、１１、４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２、および８１）は、良性かつ低悪性度の子宮頸部の変化、性器ゆうぜい、および再発性呼吸器パピローマ症として現れることが知られている。皮膚ＨＰＶの５型、８型、および９２型は、皮膚がんと関連する。一部のＨＰＶ関連がんでは、免疫系が低下し、それに応じて抗腫瘍応答が著しく損なわれる。Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ ＡｍＪ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７（２０１７）を参照されたい。

【0006】

免疫療法は、概して、受動的介入と能動的介入いずれかの二つの主要なタイプに分けられ得る。受動的プロトコルには、予め活性化および／もしくは操作した細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）、疾患特異的な治療用抗体、ならびに／またはサイトカインの投与が含まれる。活性免疫療法戦略は、インビボで免疫系エフェクター機能を刺激することを目的としている。現在のいくつかの活性プロトコルには、疾患関連ペプチド、可溶化物、または同種異系の全細胞によるワクチン接種戦略、腫瘍抗原送達用のビヒクルとしての自己樹状細胞（ＤＣ）の注入、および免疫チェックポイント調節因子の注入が含まれる。Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ，Ｎｉｋｏｓ Ｅ．，ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４（２０１６）を参照されたい。免疫応答を調節し、抗腫瘍活性を増強し、そしてＨＰＶ関連のがんを治療または予防するという目標を達成するために、養子免疫療法を採用することができる。
疾患関連抗原によって刺激されるＣＤ８^＋細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）およびＣＤ４^＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞が、疾患細胞を標的として破壊する潜在性を有するものの、内因性Ｔ細胞応答を誘導する現行の方法は、課題に直面している。本明細書に記載する方法は、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣをハイスループットな様式で効率的に生成するために使用されるものであり、強固な抗原特異的Ｔ細胞応答を誘導する際に利用することができる。少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣ、凍結保存培地、ならびにＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する一以上の薬剤を含む製剤を開示する。少なくとも一の抗原を含むこうしたＰＢＭＣを製造する方法、凍結保存可能製剤を製剤化する方法、およびその製剤を凍結保存する方法も開示する。本明細書に記載する方法はまた、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントを含むＰＢＭＣを使用して、ＨＰＶ関連がんを有する個体を治療する方法、治療、用量およびレジメンについても記述する。
特許出願および公開公報を含め、本明細書で引用する全ての参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。特許文献である国際公開第２０１３／０５９３４３号、国際公開第２０１５／０２３９８２号、国際公開第２０１６／０７０１３６号、国際公開第２０１７０４１０５０号、国際公開第２０１７００８０６３号、国際公開第２０１７／１９２７８５号、国際公開第２０１７／１９２７８６号、国際公開第２０１９／１７８００５号、国際公開第２０１９／１７８００６号、国際公開第２０２０／０７２８３３号、国際公開第２０２０／１５４６９６号、および国際公開第２０２０／１７６７８９号、米国特許出願公開第２０１８０１４２１９８号および米国特許出願公開第２０１８０２０１８８９号は、参照によりその全体として明示的にここに組み込まれる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】国際公開第２０１３／０５９３４３号

【特許文献2】国際公開第２０１５／０２３９８２号

【特許文献3】国際公開第２０１６／０７０１３６号

【特許文献4】国際公開第２０１７０４１０５０号

【特許文献5】国際公開第２０１７００８０６３号

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ ＡｍＪ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７（２０１７）

【非特許文献2】Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ，Ｎｉｋｏｓ Ｅ．，ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４（２０１６）

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0009】

いくつかの態様では、本発明は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む医薬製剤であって、ａ）ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣ、ｂ）凍結保存培地、およびｃ）ヒト血清アルブミンを含む、医薬製剤を提供する。いくつかの態様では、本発明は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む医薬製剤であって、ａ）ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣ、ｂ）凍結保存培地、ｃ）低温保存培地、およびｄ）ヒト血清アルブミンを含む、医薬製剤を提供する。いくつかの実施形態では、組成物が、約５×１０^６個のＰＢＭＣ～約５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、組成物が、約２×１０^７個のＰＢＭＣ～約３×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、組成物が、約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、組成物が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、組成物が、約４×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約６×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、組成物が、約５．０×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、組成物中のＰＢＭＣのうち≧７０％、≧８０％、≧９０％、または≧９５％が生存可能である。いくつかの実施形態では、組成物が、約３×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬ～約７×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、組成物が、約５×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、予め凍結されており、また該組成物は、解凍後に約４×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤中のＰＢＭＣが、≦－１９６℃で少なくとも約１２カ月間保存した後、約≧７０％の生存率を維持する。

【0010】

いくつかの実施形態では、製剤中の凍結保存培地の百分率が、約４０％～約９５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中の凍結保存培地の百分率が、約８０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中の凍結保存培地の百分率が、約５０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地であるＤＭＳＯの百分率が、約５％～約１５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、凍結保存培地であるＤＭＳＯの百分率が、約１０％のＤＭＳＯ（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。

【0011】

いくつかの実施形態では、製剤中の低温保存培地の百分率が、約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中の低温保存培地の百分率が、約３０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、低温保存培地が、ビタミンＥの水溶性アナログを含む。いくつかの実施形態では、低温培地が、トロロックス（（±）－６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）を含む。いくつかの実施形態では、低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである。

【0012】

いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンが、ヒト血清アルブミン溶液で提供される。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約１５％～約２５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約２０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミン溶液は、アルブミン濃度は約０．０８ｍｍｏｌ／ｇでカプリル酸ナトリウムおよび／またはアルブミン濃度は約０．０８ｍｍｏｌ／ｇでアセチルトリプトファンを含む。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミンの百分率が、約２％～約８％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミンの百分率が、約５％（ｗ／ｗ）である。

【0013】

いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約６．０～約８．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７．４である。

【0014】

いくつかの態様では、本発明は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、ｃ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含み、当該医薬製剤のｐＨがｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、医薬製剤を提供する。いくつかの態様では、本発明は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の百分率でヒト血清アルブミンとを含み、当該医薬製剤のｐＨがｐＨ約７．４である、医薬製剤を提供する。いくつかの態様では、本発明は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、ｃ）約２５％～約３５％の百分率で低温保存培地と、ｄ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含み、当該医薬製剤のｐＨがｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、医薬製剤を提供する。いくつかの態様では、本発明は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の百分率で低温保存培地と、ｄ）約５％の百分率のヒト血清アルブミンとを含み、当該医薬製剤のｐＨがｐＨ約７．４である、医薬製剤を提供する。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。いくつかの実施形態では、低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである。

【0015】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、無菌である。いくつかの実施形態では、この製剤は、約２ＥＵ／ｍＬ未満のエンドトキシンを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、マイコプラズマを含まない。

【0016】

本発明のいくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの二以上を含む。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含む。いくつかの実施形態では、（ａ）ＰＢＭＣのうち約２５％～約８０％がＴ細胞であり、（ｂ）ＰＢＭＣのうち約１．５％～約３０％がＢ細胞であり、（ｃ）ＰＢＭＣのうち約３．０％～約２０％がＮＫ細胞であり、または（ｄ）ＰＢＭＣのうち約４．０％～約４５％が単球である。

【0017】

本発明のいくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原が、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である。いくつかの実施形態では、ＨＰＶが、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である。いくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原は、ＨＰＶ Ｅ６由来のペプチドと、ＨＰＶ Ｅ７由来のペプチドとを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原は、配列番号１～３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原は、配列番号１８～２５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの集団は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原とを含む。

【0018】

本発明のいくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣは、ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形用狭窄部であって、当該狭窄部の直径が懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数である細胞変形用狭窄部に通過させて、それによって入力ＰＢＭＣに対して少なくとも一の抗原が通過するのに十分な大きさの摂動を引き起こし、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣの集団を形成することと、ｂ）摂動を与えられた入力ＰＢＭＣの集団を、少なくとも一の抗原とともに、抗原が摂動を与えられた入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間インキュベートし、それによって少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣの集団を生成することとを含む工程によって調製される。いくつかの実施形態では、狭窄部の直径が、約４．２μｍ～約６μｍ、または約４．２μｍ～約４．８μｍである。いくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣは、馴化される。いくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣの集団は、当該改変したＰＢＭＣの馴化のために、約３７℃で、アジュバントと共にＰＢＭＣを約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間の間、インキュベートすることを含む工程によって馴化される。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ ９アゴニストである。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。

【0019】

いくつかの態様では、本発明は、製剤を含むバイアルであって、該製剤がａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ～約５×１０^７個のＰＢＭＣであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、ｃ）約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンとを含み、当該製剤のｐＨがｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、製剤を含むバイアルを提供する。いくつかの態様では、本発明は、製剤を含むバイアルであって、該製剤がａ）約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、ｃ）約５％の濃度でヒト血清アルブミンとを含み、当該製剤のｐＨがｐＨ約７．４である、製剤を含むバイアルを提供する。いくつかの態様では、本発明は、製剤を含むバイアルであって、該製剤がａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の低温保存培地と、ｄ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含み、当該製剤のｐＨがｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、製剤を含むバイアルを提供する。いくつかの態様では、本発明は、製剤を含むバイアルであって、該製剤がａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の濃度で低温保存培地と、ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の濃度でヒト血清アルブミンとを含み、当該製剤のｐＨがｐＨ約７．４である、製剤を含むバイアルを提供する。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。いくつかの実施形態では、低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである。いくつかの実施形態では、製剤は、無菌である。

【0020】

いくつかの態様では、本発明は、ＰＢＭＣの製剤を作製する方法を提供し、この方法は、凍結保存培地およびヒト血清アルブミンを、ＰＢＭＣの集団であって、該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含むものであるＰＢＭＣの集団に添加することを含む。いくつかの実施形態では、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであり、ｂ）凍結保存培地が、約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｃ）ヒト血清アルブミンが、約２％～約８％（ｗ／ｗ）の濃度で添加されるものであり、該製剤のｐＨがｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５に調整される。いくつかの実施形態では、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約６×１０^６個のＰＢＭＣであり、ｂ）凍結保存培地が、約８０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｃ）ヒト血清アルブミンが、約５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、該製剤のｐＨがｐＨ約７．４に調整される。

【0021】

いくつかの態様では、本発明は、ＰＢＭＣの製剤を作製する方法を提供し、この方法は、凍結保存培地、低温保存培地およびヒト血清アルブミン溶液を、ＰＢＭＣの集団であって、該ＰＢＭＣは抗原を含むものであるＰＢＭＣの集団に添加することを含む。いくつかの実施形態では、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ～約１×１０^７個のＰＢＭＣであり、ｂ）凍結保存培地が、約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、ｃ）低温保存培地が、約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｄ）ヒト血清アルブミン溶液が、約１５％～約２５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、該製剤のｐＨがｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５に調整される。いくつかの実施形態では、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約６×１０^６個のＰＢＭＣであり、ｂ）凍結保存培地が、約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、ｃ）低温保存培地が、約３０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｄ）ヒト血清アルブミンが、約２０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、該製剤のｐＨがｐＨ約７．４に調整される。

【0022】

いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。いくつかの実施形態では、低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである。

【発明を実施するための形態】

【0023】

いくつかの態様では、本発明は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む医薬製剤であって、ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣと、凍結保存培地と、ヒト血清アルブミンとを含む、医薬製剤を提供する。いくつかの態様では、本発明は、ＰＢＭＣを含む医薬製剤であって、ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣと、凍結保存培地と、低温保存培地と、ヒト血清アルブミンとを含む、医薬製剤を提供する。本明細書に記載する製剤を含むバイアルも提供する。

【0024】

いくつかの態様では、本発明は、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。本明細書に記載する製剤を含むバイアルも提供する。

【0025】

いくつかの態様では、本発明は、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、約２５％～約３５％の百分率で低温保存培地と、約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。本明細書に記載する製剤を含むバイアルも提供する。

【0026】

いくつかの態様では、本発明は、医薬製剤を含むバイアルであって、凍結保存培地（例えば、これに限定されるものではないが、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０など）中の約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣ、ならびに／または該ＰＢＭＣの生存率および／もしくは機能を増強する一以上の薬剤を含む医薬製剤を含むバイアルを提供するものであり、当該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含み、当該製剤のｐＨはｐＨ約７．４である。

【0027】

いくつかの態様では、本発明は、医薬製剤を含むバイアルであって、凍結保存培地（例えば、これに限定されるものではないが、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０など）中の約４×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣ、ならびに／または該ＰＢＭＣの生存率および／もしくは機能を増強する一以上の薬剤を含む医薬製剤を含むバイアルを提供するものであり、当該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含み、当該製剤のｐＨはｐＨ約７．４である。

【0028】

少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣを含む製剤およびバイアル、ならびに少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣの製剤を調製する方法も提供する。いくつかの実施形態では、ＡＡＣは、ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形用狭窄部であって、当該狭窄部の直径が懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数である細胞変形用狭窄部に通過させて、それによって入力ＰＢＭＣに対して少なくとも一の抗原が通過するのに十分な大きさの摂動を引き起こし、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣの集団を形成することと、ｂ）摂動を与えられた入力ＰＢＭＣの集団を、少なくとも一の抗原とともに、抗原が摂動を与えられた入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間インキュベートし、それによって少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣの集団を生成することとを含む工程によって調製される。いくつかの実施形態では、抗原は、ＨＰＶ抗原である。また、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答の誘導の際に使用するため、またはＨＰＶ関連のがんを治療するための組成物も提供する。また、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激またはＨＰＶ関連のがんを治療する医薬の製造において、有効量のＰＢＭＣを含む製剤を使用することも提供する。

【0029】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＢＭＣの製剤のいずれかを作製する方法を提供するものであり、この方法は、凍結保存培地、低温保存培地および／またはヒト血清アルブミンを、ＰＢＭＣの集団であって、該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含むものであるＰＢＭＣの集団に添加することを含む。

【0030】

全般的な技術
本明細書で説明または参照する技術および手順は、通常十分に理解されており、また例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，４^ｔｈ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２０１２）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）、ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．，１９９５）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．，１９８８）、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ： Ａｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，６^ｔｈ ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，２０１０）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９８）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，１９９８）、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ： Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９３－８）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９６）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ： Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，２００２）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，２００４）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）、およびＣａｎｃｅｒ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，２０１１）、に記載される広範に利用されている方法論など、当業者によって従来の方法論を使用して通常採用されている。

【0031】

定義
本明細書を解釈する目的で、以下の定義が適用されるが、該当する場合には、単数形で使用した用語は複数形も含むこととなり、その逆も同様である。以下に記載するいずれかの定義が、参照により本明細書に組み込まれるいずれかの文書と矛盾する場合、上記に定める定義が優先するものとする。

【0032】

本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別段の指示がない限り、複数形を含む。

【0033】

本明細書で使用する場合、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、および「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、ならびに他の類似の形態、およびそれらの文法的等価物は、意味が同等であることと、これら用語のいずれか一つに続く項目が、かかる項目の包括的な列挙であることを意味するものではないか、または列挙された項目のみに限定されることを意味するという点でオープンエンドであることとを意図している。例えば、構成要素Ａ、Ｂ、およびＣを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」物品とは、構成要素Ａ、Ｂ、およびＣからなり得るか（すなわち、これらのみを含有する）、または構成要素Ａ、Ｂ、およびＣだけでなく、一以上の他の構成要素も含み得る。そのため、「～を含む」ならびにその類似の形態およびその文法的等価物は、「本質的に～から成る」または「～から成る」の実施形態の開示を含むということが意図され、理解される。

【0034】

値の範囲を提供する場合において、文脈が別段に明確に指示しない限り、その範囲の上限および下限とその記載された範囲内の他の記載された値またはその中間にある値との間にある、下限の単位の１０分の１までの中間にある各値は、記載された範囲内にある特段に除外されたあらゆる限界値に従うことを条件として、本開示内に包含されることが理解される。その記載された範囲が上限下限の一方または両方を含む場合、それら含まれた上限下限のいずれかまたは両方を除外する範囲もまた、開示に含まれる。

【0035】

本明細書で使用する場合「約」という用語は、当技術分野の当業者に容易に認識されるそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における値またはパラメータの「約」への言及は、その値またはパラメータ自体に向けられた実施形態を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」という記載は、「Ｘ」という記載を含む。

【0036】

本明細書で使用する場合、「末梢血単核細胞」または「ＰＢＭＣ」は、丸い核を有する血球の不均質な集団を指す。ＰＢＭＣの集団中で見られ得る細胞の例としては、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞（ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）およびサイトカイン誘導性キラー細胞（ＣＩＫ細胞）を含む）などのリンパ球、ならびに例えばマクロファージおよび樹状細胞などの単球が挙げられる。本明細書で使用する「複数のＰＢＭＣ」とは、少なくとも二種の血球の細胞を含むＰＢＭＣの調製物を指す。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの二以上を含む。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの三以上を含む。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの四以上を含む。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および樹状細胞を含む。

【0037】

ＰＢＭＣは、当技術分野で公知の手段によって単離することができる。例えば、ＰＢＭＣは、他の血球と比較したＰＢＭＣの比重に基づいて、個体の末梢血から得ることができる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、フィコール（例えば、フィコール勾配）を使用して個体の末梢血から得ることができる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＥＬＵＴＲＡ（登録商標）細胞分離システムを使用して個体の末梢血から得られる。ＰＢＭＣは、アフェレーシスを受けている個体から得ることができる。

【0038】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの集団は個体から単離される。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、自己ＰＢＭＣ集団であり、この集団は、特定の個体から得られ、本明細書に記載のいずれかの方法によって操作され、そしてその特定の個体に戻される。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、同種異系間ＰＢＭＣ集団であり、この集団は、ある個体から得られ、本明細書に記載のいずれかの方法によって操作され、そして第二の個体に投与される。

【0039】

いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣの再構成調製物である。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣ集団中で典型的に見られる細胞を混合することによって、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの二以上の集団を混合することによって、生成され得る。

【0040】

本明細書で使用する場合、「ペイロード」は、ＰＢＭＣに装填されるなど、ＰＢＭＣに送達されようとする材料を指す。「ペイロード」、「カーゴ」、「送達材料」、および「化合物」は、細胞内に送達される材料を指す場合に、本明細書において区別なく使用する。いくつかの実施形態では、ペイロードは、タンパク質、低分子、核酸（例えば、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡ）、脂質、炭水化物、巨大分子、ビタミン、ポリマー、蛍光色素およびフルオロフォア、カーボンナノチューブ、量子ドット、ナノ粒子、ならびにステロイドを指し得る。いくつかの実施形態では、ペイロードは、タンパク質または低分子薬剤を指し得る。いくつかの実施形態では、ペイロードは、一以上の化合物を含み得る。

【0041】

コード配列および制御配列などの核酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常は一緒に連結されないおよび／または通常は特定の細胞と結合しないものである配列を意味する。したがって、核酸構築物またはベクターの「異種」領域は、別の核酸分子内の核酸または別の核酸分子と結合した核酸のセグメントであって、この別の核酸分子はもう一方の核酸分子との結合が天然では見られないものである。例えば、核酸構築物の異種領域は、コード配列であって、該コード配列との結合が天然では見られない配列が隣接するコード配列を含み得る。異種コード配列の別の例としては、そのコード配列自体が天然に見られない構築物がある（例えば、天然遺伝子とは異なるコドンを有する合成配列）。同様に、細胞内に通常存在しない構築物で形質転換された細胞は、本発明の目的では異種と考えられるものとなる。対立遺伝子変異または天然に生じる変異事象は、本明細書で使用する場合、異種ＤＮＡを生じさせない。

【0042】

ペプチド配列およびポリペプチド配列などのアミノ酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常は一緒に連結されないおよび／または通常は特定の細胞と結合しない配列を意味する。したがって、ペプチド配列の「異種」領域は、別のアミノ酸分子内のアミノ酸または別のアミノ酸分子と結合したアミノ酸のセグメントであって、この別のアミノ酸分子はもう一方の分子との結合が天然では見られないものである。例えば、ペプチド構築物の異種領域は、ペプチドのアミノ酸配列であって、該ペプチドのアミノ酸配列との結合が天然では見られない配列が隣接するペプチドのアミノ酸配列を含み得る。異種ペプチド配列の別の例としては、そのペプチド配列自体が天然に見られない構築物がある（例えば、天然遺伝子とは異なるコードされたアミノ酸を有する合成配列）。同様に、細胞内に通常存在しないアミノ酸構築物を発現するベクターにより形質転換された細胞は、本発明の目的では異種と考えられるものとなる。対立遺伝子変異または天然に生じる変異事象は、本明細書で使用する場合、異種ペプチドを生じさせない。

【0043】

細胞に関連する例えば抗原またはアジュバントなどの薬剤に関して使用される場合の「外因性」という用語は、細胞の外側の薬剤または細胞の外側から細胞内に送達される薬剤を指す。当該細胞は、既に存在する薬剤を有してもよいし有しなくてもよく、また外因性の薬剤が送達された後にこの薬剤を産生してもよいし産生しなくてもよい。

【0044】

本明細書で使用する「相同」という用語は、同じ生物に由来する分子を指す。いくつかの例では、この用語は、所与の生物内で通常見られるかまたは発現される、核酸またはタンパク質を指す。

【0045】

本明細書で使用する場合、「治療」または「治療すること」は、臨床結果を含めた、有益または望ましい結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益または望ましい臨床結果としては、疾患に起因する一以上の症状を緩和すること、疾患の程度を軽減すること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を予防もしくは遅延する）、疾患の蔓延（例えば、転移）を予防もしくは遅延すること、疾患の再発を予防もしくは遅延すること、疾患の進行を遅延もしくは遅らせること、疾患の状態を改善すること、疾患を（部分的または完全に）寛解させること、疾患の治療に必要な一以上の他の医薬の用量を低減すること、疾患の進行を遅延すること、生活の質を高めるまたは向上すること、体重増加を高めること、ならびに／または生存を延長することのうちの一以上が挙げられるが、これらに限定されない。また、「治療」には、がんの病理学的結果（例えば、腫瘍体積など）の減少も包含される。本発明の方法は、治療のこれら態様のうちのいずれか一以上を企図する。

【0046】

本明細書で使用する場合、「予防的治療」という用語は、個体が、障害を有することまたは障害を有するリスクがあることがわかっているかまたは疑われるが、障害の症状を呈していないかまたは最小限の症状を呈している場合の治療を指す。予防的治療を受ける個体は、症状の発症前に治療され得る。いくつかの実施形態では、個体は、前がん病変、特にＨＰＶ感染に関連する前がん病変を有する場合に治療され得る。

【0047】

本明細書で使用する場合、「併用療法」とは、第一の薬剤が別の薬剤と併せて投与されることを意味する。「～と併せて」とは、一つの治療モダリティを、別の治療モダリティに加えて施与することを指し、例えば同じ個体への本明細書に記載の免疫コンジュゲートの投与に加えて、本明細書に記載のＰＢＭＣの組成物を投与することなどである。したがって、「～と併せて」とは、ある一つの治療モダリティを、当該個体にもう一方の治療モダリティを送達する前、その間、またはその後に、施与することを指す。

【0048】

本明細書で使用する場合「同時投与」という用語は、併用療法において第一の療法および第二の療法を、約１５分以内、例えば約１０分以内、５分以内、または１分以内のうちのいずれかなどの時間間隔で投与することを意味する。第一の療法および第二の療法が同時に施与される場合、この第一の療法および第二の療法は、同一組成物中に含有されてもよく（例えば、第一の療法および第二の療法の両者を含む組成物）、または別個の組成物に含有されてもよい（例えば、一の組成物中に第一の療法が含まれ、また別の組成物中に第二の療法が含まれる）。

【0049】

本明細書で使用する場合、「連続投与」という用語は、併用療法における第一の療法および第二の療法を、約１５分超、例えば約２０分以上、３０分以上、４０分以上、５０分以上、６０分以上、またはそれ以上のうちのいずれかなどの時間間隔で施与することを意味する。第一の療法または第二の療法のいずれかが最初に投与され得る。第一の療法および第二の療法は、同一または異なるパッケージまたはキット内に含有され得る別個の組成物中に含有される。

【0050】

本明細書で使用する場合、「同時投与」という用語は、併用療法における第一の療法および第二の療法の投与が互いに重複することを意味する。

【0051】

がんの文脈において、「治療する」という用語は、がん細胞を死滅させること、がん細胞の成長を阻害すること、がん細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍負荷を軽減すること、および疾患に付随する一以上の症状を改善することのうちのいずれかまたは全てを含む。

【0052】

本明細書で使用する場合、「調節する」という用語は、特定の標的の存在または活性を変える、変化させる、変動させる、またはそうでなければ改変するという作用を指し得る。例えば、免疫応答を調節することは、免疫応答を変える、変化させる、変動させる、またはそうでなければ改変することをもたらす任意の作用を指し得る。いくつかの例では、「調節する」は、特定の標的の存在または活性を増強することを指す。いくつかの例では、「調節する」は、特定の標的の存在または活性を抑制することを指す。他の例では、核酸の発現を調節することには、核酸の転写の変化、ｍＲＮＡ存在量の変化（例えば、ｍＲＮＡ転写の増加）、ｍＲＮＡの分解の対応する変化、ｍＲＮＡ翻訳の変化などを含み得るが、これらに限定されない。

【0053】

本明細書で使用する場合、「阻害する」という用語は、特定の標的の存在または活性を遮断、低減、除去、またはそうでなければ拮抗する作用を指し得る。阻害は、部分的阻害または完全阻害を指し得る。例えば、免疫応答を阻害することは、免疫応答の遮断、低減、除去、または任意の他の拮抗作用をもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の阻害には、核酸の転写の低減、ｍＲＮＡ存在量の低減（例えば、ｍＲＮＡ転写のサイレンシング）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡ翻訳の阻害、遺伝子編集などが含まれ得るが、これらに限定されない。他の例では、タンパク質の発現の阻害は、タンパク質をコードする核酸の転写の減少、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の減少、タンパク質の翻訳の阻害、タンパク質の安定性の減少などを含み得るが、これらに限定されない。別の例では、阻害は、例えば、腫瘍細胞の成長を遅延させるか、もしくは防止するなど、成長を緩徐化させるか、または停止する作用を指し得る。

【0054】

本明細書で使用する場合、「抑制する」という用語は、特定の標的の存在または活性を減少、低減、妨害、制限、軽減、またはそうでなければ縮小する作用を指し得る。抑制は、部分的な抑制または完全な抑制を指し得る。例えば、免疫応答を抑制することは、免疫応答を減少、低減、妨害、制限、軽減、またはそうでなければ縮小することをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の抑制には、核酸の転写の低減、ｍＲＮＡ存在量の低減（例えば、ｍＲＮＡ転写のサイレンシング）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡ翻訳の阻害などが含まれ得るが、これらに限定されない。他の例では、タンパク質の発現の抑制は、タンパク質をコードする核酸の転写の減少、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の減少、タンパク質の翻訳の阻害、タンパク質の安定性の低減などを含み得るが、これらに限定されない。

【0055】

本明細書で使用する場合、「増強する」という用語は、特定の標的の存在または活性を向上させる、押し上げる、高める、またはそうでなければ増加させるという作用を指し得る。例えば、免疫応答を増強することは、免疫応答を向上させる、押し上げる、高める、またはそうでなければ増加させることをもたらす任意の作用を指し得る。例示的な一例では、免疫応答を増強することは、抗原および／またはアジュバントを利用して、免疫応答を向上させる、押し上げる、高める、またはそうでなければ増加させることを指し得る。他の例では、核酸の発現を増強することには、核酸の転写の増加、ｍＲＮＡ量の増加（例えば、ｍＲＮＡ転写の増加）、ｍＲＮＡの分解の低減、ｍＲＮＡ翻訳の増加などが含まれ得るが、これらに限定されない。他の例では、タンパク質の発現を増強することは、タンパク質をコードする核酸の転写の増加、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の増加、タンパク質の翻訳の増加、タンパク質の安定性の増加などが含まれ得るが、これらに限定されない。

【0056】

本明細書で使用する場合、「誘導する」という用語は、ある結果を開始する、促進する、刺激する、確立する、またはそうでなければ生じさせるという作用を指し得る。例えば、免疫応答を誘導することは、所望の免疫応答を開始、促進、刺激、確立、またはそうでなければ生じさせることをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現を誘導することには、核酸の転写の開始、ｍＲＮＡの翻訳の開始などが含まれ得るが、これらに限定されない。他の例では、タンパク質の発現を誘導することは、タンパク質をコードする核酸の転写の増加、タンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性の増加、タンパク質の翻訳の増加、タンパク質の安定性の増加などを含み得るが、これらに限定されない。

【0057】

本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドを含む、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。したがって、この用語には、一本鎖、二本鎖または複数鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、またはプリン塩基およびピリミジン塩基、もしくは他の天然の、化学的に修飾もしくは生化学的に修飾された、非天然の、もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーが含まれるが、これらに限定されない。ポリヌクレオチドの骨格は、糖およびリン酸基（典型的にはＲＮＡまたはＤＮＡにおいて見られ得るような）、または修飾もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含み得る。ポリヌクレオチドの骨格は、ペプチド結合によって連結されたＮ－（２－アミノエチル）－グリシンなどの反復単位（すなわち、ペプチド核酸）を含み得る。あるいは、ポリヌクレオチドの骨格は、ホスホロアミダートおよびホスホロチオエートなどの合成サブユニットのポリマーを含み得、したがって、オリゴデオキシヌクレオシドホスホロアミダート（Ｐ－ＮＨ_２）またはホスホロチオエート－ホスホロジエステル混合オリゴマーまたはホスホルアミデート－ホスホジエステル混合オリゴマーであり得る。加えて、二本鎖ポリヌクレオチドは、相補鎖を合成し、当該鎖を適切な条件下でアニーリングすることによるか、または適切なプライマーでのＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖をデノボ合成することによるいずれかにより、化学合成の一本鎖ポリヌクレオチド産物から取得することができる。

【0058】

「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために区別なく使用され、また最小の長さに限定されない。こうしたアミノ酸残基のポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含有し得、またアミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体、および多量体を含むがこれらに限定されない。完全長タンパク質およびその断片の両方が定義によって包含される。この用語には、ポリペプチドの発現後修飾、例えばグリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含まれる。さらに、本発明の目的のために、「ポリペプチド」とは、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然の配列に対して例えば欠失、付加および置換などの修飾（概して事実上保存的である）を含んだタンパク質を指す。これら修飾は、部位特異的変異誘導を介するように意図的であってもよいし、またはタンパク質を産生する宿主の変異またはＰＣＲ増幅に起因したエラーを介するなど偶発的であってもよい。

【0059】

本明細書で使用する場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答を調節および／または生じさせる物質を指す。概して、アジュバントは抗原と併せて投与されて、抗原単独の場合と比較して抗原に対する免疫応答の増強をもたらす。様々なアジュバントを本明細書で記載する。

【0060】

本明細書における「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」および「ＣｐＧ ＯＤＮ」という用語は、リン酸によって分離されたシトシンおよびグアニンのジヌクレオチド（本明細書では「ＣｐＧ」ジヌクレオチド、または「ＣｐＧ」とも称される）を含有する、１０～３０ヌクレオチド長のＤＮＡ分子を指す。本開示のＣｐＧ ＯＤＮは、少なくとも一の非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する。すなわち、ＣｐＧジヌクレオチド中のシトシンはメチル化されていない（すなわち、５－メチルシトシンではない）。ＣｐＧ ＯＤＮは、部分的または完全なホスホロチオエート（ＰＳ）骨格を有し得る。

【0061】

本明細書で使用する場合、「医薬的に許容可能な」または「薬理学的に適合する」とは、生物学的でない物質またはそうでなければ望ましくない物質を意味するものであり、例えば当該物質は、望ましくない重大な生物学的効果をなんら引き起こすことなく、またはそれを含有する組成物の他の成分のいずれかと有害な様式で相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に組み込まれ得る。薬学的に許容される担体または賦形剤は、毒性試験および製造試験の要求される基準を満たしており、ならびに／または米国食品医薬品局によって準備された非活性成分ガイド（Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ）に含まれることが好ましい。

【0062】

本明細書に記載する構造的および機能的特徴のいずれについても、これらの特徴を決定する方法は当技術分野で公知である。

【0063】

本明細書で使用する場合、「マイクロ流体システム」は、少量（例えば、ｍ￥Ｌ、ｎＬ、ｐＬ、ｆＬ）の流体が処理されて、少量の液体の別個の処理を達成するシステムを指す。本明細書に記載する特定の実施には、多重化、自動化、およびハイスループットのスクリーニングが含まれる。この流体（例えば、緩衝液、溶液、ペイロード含有溶液、または細胞懸濁液）は、移動、混合、分離、またはそうでなければ処理され得る。本明細書に記載する特定の実施形態では、マイクロ流体システムを使用して、緩衝液中に懸濁された細胞に機械的な狭窄を与えて、細胞内に、ペイロードまたは化合物が細胞のサイトゾルに入ることを可能にさせる摂動（例えば、穴）を誘発する。

【0064】

本明細書で使用する場合、「狭窄部」は、入口部分、中心点、および出口部分によって画定されるマイクロ流体チャネルの一部分を指し得るものであり、この中心点は、幅、長さ、および深さによって画定される。他の例では、狭窄部は、細孔を指し得、または細孔の一部であり得る。細孔は、ある面（例えば、フィルタおよび／または膜）上に含有され得る。

【0065】

本明細書に記載する構造的および機能的特徴のいずれについても、これらの特徴を決定する方法は当技術分野で公知である。

【0066】

抗原を含むＰＢＭＣの製剤化
いくつかの態様では、ＰＢＭＣを含む医薬製剤であって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣ、凍結保存培地、低温保存培地、ならびに／またはＰＢＭＣの生存率および／もしくは機能を増強する一以上の薬剤を含む、医薬製剤を提供する。

【0067】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣを含む医薬製剤であって、ａ）ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣ、ｂ）凍結保存培地、およびｃ）ヒト血清アルブミンを含む、医薬製剤を提供する。

【0068】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣを含む医薬製剤であって、ａ）ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣ、ｂ）凍結保存培地、ｃ）低温保存培地、およびｄ）ヒト血清アルブミンを含む、医薬製剤を提供する。

【0069】

いくつかの実施形態では、この製剤は、約５×１０^４～約５×１０^９個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約５×１０^６～約５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、１．０×１０^９、および５．０×１０^９個のＰＢＭＣのうちのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、または約１．０×１０^９～約５×１０^９個のＰＢＭＣのうちのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８個のＰＢＭＣのうちのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２×１０^７のＰＢＭＣ～約３×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２．１×１０^７、２．２×１０^７、２．３×１０^７、２．４×１０^７、２．５×１０^７、２．６×１０^７、２．７×１０^７、２．８×１０^７、２．９×１０^７、および３．０×１０^７個のＰＢＭＣのうちのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。

【0070】

いくつかの実施形態では、製剤の量は、約２ｍＬ～約５０ｍＬである。いくつかの実施形態では、製剤の量は、約５ｍＬ～約２０ｍＬである。いくつかの実施形態では、製剤の量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、９．５、１０、１０．５、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０ｍＬまたはそれ以上のうちのいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤の量は、約１～約２、約２～約３、約３～約４、約４～約５、約５～約６、約６～約７、約７～約８、約８～約９、または約９～約１０、約１０～約１１、約１１～約１２、約１２～約１３、約１３～約１４、約１４～約１５、約１５～約１６、約１６～約１７、約１７～約１８、約１８～約１９または約１９～約２０ｍＬのいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤の量は、約１０ｍＬである。いくつかの実施形態では、製剤の量は、約５ｍＬである。

【0071】

いくつかの実施形態では、製剤は、約１×１０^４～約１×１０^９個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１×１０^６～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、および１．０×１０^９個のＰＢＭＣ／ｍＬのうちのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^４～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９個のＰＢＭＣ／ｍＬのうちのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、および１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬのうちのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約３×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約４×１０^６、４．２×１０^６、４．４×１０^６、４．６×１０^６、４．８×１０^６、５．０×１０^６、５．２×１０^６、５．４×１０^６、５．６×１０^６、５．８×１０^６および６×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬのうちのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む。

【0072】

いくつかの実施形態では、製剤は、無菌である。いくつかの実施形態では、製剤は、約２ＥＵ／ｍＬ未満のエンドトキシンを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ＥＵ／ｍＬのうちのいずれか一つ未満のエンドトキシンを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、マイコプラズマを含まない。

【0073】

凍結保存培地中の抗原を含むＰＢＭＣの製剤
本明細書に記載の方法のいずれか一つによるいくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの組成物は、ある薬剤を含むものであって、ＰＢＭＣの生存率および／または機能を、この薬剤を含まない対応するＰＢＭＣの組成物と比較して増強する薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの組成物は、ある薬剤を含むものであって、凍結－解凍サイクル時のＰＢＭＣの生存率および／または機能を、この薬剤を含まない対応するＰＢＭＣの組成物と比較して増強する薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、この薬剤は、凍結保存剤および／または低温保存剤である。いくつかの実施形態では、凍結保存剤も低温保存剤も、当該薬剤を含むＰＢＭＣの組成物中で、あらゆる凍結－解凍サイクルの前のその薬剤を含まないＰＢＭＣの対応する組成物と比較して、１０％または２０％を超える細胞死は生じない。いくつかの実施形態では、凍結保存剤および／または低温保存剤を含むＰＢＭＣ組成物の凍結－解凍サイクルは、凍結－解凍サイクル前の対応するＰＢＭＣ組成物と比較して、生存細胞の損失が１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％以下で生じる。いくつかの実施形態では、凍結保存剤および／または低温保存剤を含むＰＢＭＣ組成物の凍結－解凍サイクルは、凍結保存剤および／または低温保存剤を含まない対応するＰＢＭＣの凍結－解凍サイクルと比較して、生存細胞の損失が１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％より少なく生じる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％は、最大１回、２回、３回、４回、５回の凍結－解凍サイクル後に生存可能である。いくつかの実施形態では、当該薬剤は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定化剤、または補因子である。いくつかの実施形態では、当該薬剤は、アルブミンである。いくつかの実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトのアルブミンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、マウス、ウシ、またはヒトのアルブミンのうちの一または複数である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ヒトアルブミンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、二価の金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセリン、トレハロース、Ｄ－スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、またはＥＤＴＡのうちの一または複数である。いくつかの実施形態では、二価の金属カチオンは、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、またはＣａ２＋のうちの一以上である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ＨＥＰＥＳ、グリセリン、グルタチオン、イノシン、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、ナトリウム金属イオン、カリウム金属イオン、マグネシウム金属イオン、塩化物、酢酸塩、グルコン酸塩（ｇｌｕｏｃｏｎａｔｅ）、スクロース、水酸化カリウム、または水酸化ナトリウムのうちの一または複数である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセリン、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）のうちの一または複数である。

【0074】

本明細書に記載の方法のいずれか一つによるいくつかの実施形態では、その工程が、別のインキュベーションステップを行わずに調製された対応するＰＢＭＣと比較してＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する薬剤と共に、ＰＢＭＣの組成物をインキュベートするステップをさらに含む。

【0075】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９８％が生存可能である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９８％は、≦－１９６℃で少なくとも３、６、９、１２、１５、１８、２４、３０、３６、４２、または４８か月間保存した後に生存可能である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９８％は、≦－１２０℃で少なくとも３、６、９、１２、１５、１８、２４、３０、３６、４２、または４８か月間保存した後に生存可能である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９８％は、≦－２２０℃で少なくとも３、６、９、１２、１５、１８、２４、３０、３６、４２、または４８か月間保存した後に生存可能である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９８％は、最大１、２、３、４、５またはそれ以上の凍結－解凍サイクル後に生存可能である。

【0076】

いくつかの実施形態では、この製剤は、約１×１０^４～約１×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約１×１０^６～約１×１０^７個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、および１．０×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^４～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、および１×１０^７個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約２×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬ～約８×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約３×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬ～約７×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約３×１０^６、３．２×１０^６、３．４×１０^６、３．６×１０^６、３．８×１０^６、４．０×１０^６、４．２×１０^６、４．４×１０^６、４．６×１０^６、４．８×１０^６ および５×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約４×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。

【0077】

いくつかの実施形態では、製剤は、予め凍結した製剤の解凍後に約１×１０^４～約１×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に約１×１０^６～約１×１０^７個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に、約１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、および１．０×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に、０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^４～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、および１×１０^７個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に約２×１０^６～約８×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に約３×１０^６～約７×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に、約３×１０^６、３．２×１０^６、３．４×１０^６、３．６×１０^６、３．８×１０^６、４．０×１０^６、４．２×１０^６、４．４×１０^６、４．６×１０^６、４．８×１０^６ および５×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に約４×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。

【0078】

いくつかの実施形態では、この製剤は、約５×１０^４～約５×１０^９個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約１０ｍＬ中に、約５×１０^６～約５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約５ｍＬ中に、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、１．０×１０^９および５．０×１０^９個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１０ｍＬの凍結保存培地中に、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、または約１．０×１０^９～約５×１０^９個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約０．５×１０^７、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約２×１０^７個の生ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬのＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０中に、約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬのＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０中に、約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬのＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０中に、約２×１０^７個の生ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0079】

いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８個の生存ＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地凍結保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．０×１０^７個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０およびＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．０×１０^７個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤中のＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の百分率は約５０％（ｗ／ｗ）であり、また製剤中のＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）の百分率は約３０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0080】

いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、１．０×１０^９および５．０×１０^９個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、または約１．０×１０^９～約５×１０^９個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約２×１０^７個の生ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０およびＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０およびＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０およびＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）を含む約５ｍＬの溶液中に、約２×１０^７個の生ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤中のＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の百分率は約５０％（ｗ／ｗ）であり、また製剤中のＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）の百分率は約３０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0081】

いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８個の生存ＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．０×１０^７個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０およびＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．０×１０^７個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤中のＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の百分率は約５０％（ｗ／ｗ）であり、また製剤中のＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）の百分率は約３０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0082】

いくつかの実施形態では、製剤中のＰＢＭＣは、最大１回、２回、３回、４回、５回の凍結－解凍サイクルで、約５０％以上の生存率を維持する。いくつかの実施形態では、製剤中のＰＢＭＣは、最大１回、２回、３回、４回、５回の凍結－解凍サイクルで、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上の生存率を維持する。いくつかの実施形態では、製剤中のＰＢＭＣは、－１４０℃以下の温度で、少なくとも１２カ月間保存した後、約７０％以上の生存率を維持する。いくつかの実施形態では、製剤中のＰＢＭＣは、－１４０℃以下の温度で、少なくとも１２カ月間保存した後、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上の生存率を維持する。いくつかの実施形態では、製剤中のＰＢＭＣは、－１４０℃以下の温度で、少なくとも３、６、９、１２、１５、１８、２４、３０、または３６カ月間保存した後、約７０％以上の生存率を維持する。いくつかの実施形態では、製剤中のＰＢＭＣは、－１００℃、－１１０℃、－１２０℃、－１３０℃、－１４０℃、－１５０℃、－１６０℃、－１７０℃、－１８０℃、－１９０℃、または－２００℃以下の温度で、少なくとも３カ月間保存した後、約７０％以上の生存率を維持する。いくつかの実施形態では、製剤中のＰＢＭＣは、－１００℃、－１１０℃、－１２０℃、－１３０℃、－１４０℃、－１５０℃、－１６０℃、－１７０℃、－１８０℃、－１９０℃、または－２００℃以下の温度で少なくとも１２カ月間保存した後、約７０％以上の生存率を維持する。

【0083】

いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５．０～約９．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約６．０～約８．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７．４である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９または１０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８．０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５～約６、約６～約７、約７～約８、約８～約９、または約９～約１０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７～約７．１、約７．１～約７．２、約７．２～約７．３、約７．３～約７．４、約７．４～約７．５、約７．５～約７．６、約７．６～約７．７、約７．７～約７．８、約７．８～約７．９、または約７．９～約８．０のいずれか一である。

【0084】

本明細書に記載の方法のいずれか一つによるいくつかの実施形態では、その工程が、別のインキュベーションステップを行わずに調製された対応するＰＢＭＣと比較してＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する薬剤と共に、ＰＢＭＣの組成物をインキュベートするステップをさらに含む。

【0085】

いくつかの実施形態では、この製剤は、１ｍＬあたり約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、１．０×１０^９、０．５×１０^１０、１．０×１０^１０個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９個のＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、１×１０^１１個のＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態ではこの製剤は、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣを含む。

【0086】

いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地を含む。いくつかの実施形態では、製剤中の凍結保存培地の百分率は、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％（ｗ／ｗ）のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤中の凍結保存培地の百分率は、約２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、または９０％～９５％（ｗ／ｗ）のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤中の凍結保存培地の百分率が、約４０％～約９５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中の凍結保存培地の百分率が、約８０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中の凍結保存培地の百分率が、約５０％（ｗ／ｗ）である。

【0087】

いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約２％～約２５％のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約５％～約１５％のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２３％、２４％、および２５％のいずれか一のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約２％～約５％、約５％～約６％、約６％～約７％、約７％～約８％、約８％～約９％、約９％～約１０％、約１０％～約１１％、約１１％～約１２％、約１２％～約１３％、約１３％～約１４％、約１４％～約１５％、または約１５％～約２０％のいずれか一のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約１０％のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。

【0088】

いくつかの実施形態では、製剤は、低温保存培地を含む。いくつかの実施形態においては、製剤は、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％（ｗ／ｗ）のいずれか一の濃度で低温保存培地を含む。いくつかの実施形態では、製剤中の低温保存培地の百分率が、約１０％～１５％、１５％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、または６５％～７０％（ｗ／ｗ）のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤中の低温保存培地の百分率が、約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中の低温保存培地の百分率が、約３０％である。いくつかの実施形態では、低温保存培地は、ビタミンＥの水溶性アナログを含む。いくつかの実施形態では、低温保存培地は、トロロックス（（±）－６－ヒドロキシ－２、５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）を含む。いくつかの実施形態では、低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである。

【0089】

いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンが、ヒト血清アルブミン溶液で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％、３％、４％、５％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％（ｗ／ｗ）のうちのいずれか一つの濃度でヒト血清アルブミン溶液を含む。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約２％～３％、３％～５％、５％～８％、８％～１０％、１０％～１５％、１５％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、または４５％～５０％（ｗ／ｗ）のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約１５％～約２５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約２０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、ヒトアルブミン溶液は、アルブミン濃度は約０．００１、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．５、または１ｍｍｏｌ／ｇのいずれか一でカプリル酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、ヒトアルブミン溶液は、アルブミン濃度は約０．０８ｍｍｏｌ／ｇでカプリル酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、ヒトアルブミン溶液は、アルブミン濃度は約０．００１、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．５、または１ｍｍｏｌ／ｇのいずれか一でアセチルトリプトファンを含む。いくつかの実施形態では、ヒトアルブミン溶液は、アルブミン濃度は約０．０８ｍｍｏｌ／ｇでアセチルトリプトファンを含む。

【0090】

いくつかの実施形態では、製剤は、約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１５％、２０％、または２５％（ｗ／ｗ）のいずれか一つの濃度でヒト血清アルブミンを含む。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約０．５％～１％、１％～２％、２％～３％、３％～４％、４％～５％、５％～６％、６％～７％、７％～８％、８％～９％、９％～１０％、１０％～１２％、１２％～１５％、１５％～２０％、または２０％～２５％（ｗ／ｗ）のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミンの百分率が、約２％～約８％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミンの百分率が、約５％（ｗ／ｗ）である。

【0091】

いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５．０～約９．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約６．０～約８．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８．０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５～約６、約６～約７、約７～約８、約８～約９、または約９～約１０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７～約７．１、約７．１～約７．２、約７．２～約７．３、約７．３～約７．４、約７．４～約７．５、約７．５～約７．６、約７．６～約７．７、約７．７～約７．８、約７．８～約７．９、または約７．９～約８．０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７．４である。

【0092】

いくつかの実施形態では、凍結保存培地は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含む。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣを含む組成物は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０中に、約５×１０^６～約５×１０^７のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである。

【0093】

いくつかの実施形態では、製剤は、無菌である。いくつかの実施形態では、製剤は、約２ＥＵ／ｍＬ未満のエンドトキシンを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ＥＵ／ｍＬのうちのいずれか一つ未満のエンドトキシンを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、マイコプラズマを含まない。

【0094】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、ｃ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。

【0095】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の百分率でヒト血清アルブミンとを含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約７．４である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。

【0096】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、ｃ）約２５％～約３５％の百分率で低温保存培地と、ｄ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。

【0097】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬのＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の百分率で低温保存培地と、ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の百分率でヒト血清アルブミンとを含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約７．４である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。

【0098】

医薬製剤を含むバイアル
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬製剤のいずれか一を含むバイアルを提供する。

【0099】

いくつかの態様では、医薬製剤を含むバイアルであって、該医薬製剤が、ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ～約５×１０^７個のＰＢＭＣであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、ｃ）約２％～約８％（ｗ／ｗ）の濃度でヒト血清アルブミンとを含み、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、医薬製剤を含むバイアルを提供する。いくつかの実施形態では、医薬製剤を含むバイアルであって、該医薬製剤が、ａ）約２．５×１０^７個のＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、ｃ）約５％の濃度でヒト血清アルブミンとを含み、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約７．４である、医薬製剤を含むバイアルを提供する。

【0100】

いくつかの態様では、医薬製剤を含むバイアルであって、該医薬製剤が、ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の低温保存培地と、ｄ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含み、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、医薬製剤を含むバイアルを提供する。いくつかの実施形態では、医薬製剤を含むバイアルであって、該医薬製剤が、ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む該ＰＢＭＣと、ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の濃度で低温保存培地と、ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の濃度でヒト血清アルブミンとを含み、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約７．４である、医薬製剤を含むバイアルを提供する。

【0101】

本明細書に記載のバイアルのいずれかによるいくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、約２ｍＬ～約５０ｍＬの凍結保存培地中にある。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、約５ｍＬ～約２０ｍＬの凍結保存培地中にある。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、９．５、１０、１０．５、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０ｍＬまたはそれ以上のうちのいずれか一の凍結保存培地中にある。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、約１～約２ｍＬ、約２～約３ｍＬ、約３～約４ｍＬ、約４～約５ｍＬ、約５～約６ｍＬ、約６～約７ｍＬ、約７～約８ｍＬ、約８～約９ｍＬ、または約９～約１０ｍＬ、約１０～約１１ｍＬ、約１１～約１２ｍＬ、約１２～約１３ｍＬ、約１３～約１４ｍＬ、約１４～約１５ｍＬ、約１５～約１６ｍＬ、約１６～約１７ｍＬ、約１７～約１８ｍＬ、約１８～約１９ｍＬまたは約１９～約２０ｍＬのうちのいずれか一の凍結保存培地中にある。

【0102】

いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約２％～約２５％のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約５％～約１５％のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２３％、２４％、および２５％のいずれか一のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約２％～約５％、約５％～約６％、約６％～約７％、約７％～約８％、約８％～約９％、約９％～約１０％、約１０％～約１１％、約１１％～約１２％、約１２％～約１３％、約１３％～約１４％、約１４％～約１５％、または約１５％～約２０％のいずれか一のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約１０％のＤＭＳＯを含む。

【0103】

いくつかの実施形態では、バイアル中の製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0104】

本明細書に記載のバイアルのいずれかによるいくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、凍結保存培地および低温保存培地を含む約２ｍＬ～約５０ｍＬの溶液中にある。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬ～約２０ｍＬの溶液中にある。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、凍結保存培地および低温保存培地を含む約１、２、３、４、５、６、７、８、９、９．５、１０、１０．５、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０ｍＬまたはそれ以上のうちのいずれか一の溶液中にある。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、凍結保存培地および低温保存培地を含む約１～約２ｍＬ、約２～約３ｍＬ、約３～約４ｍＬ、約４～約５ｍＬ、約５～約６ｍＬ、約６～約７ｍＬ、約７～約８ｍＬ、約８～約９ｍＬ、または約９～約１０ｍＬ、約１０～約１１ｍＬ、約１１～約１２ｍＬ、約１２～約１３ｍＬ、約１３～約１４ｍＬ、約１４～約１５ｍＬ、約１５～約１６ｍＬ、約１６～約１７ｍＬ、約１７～約１８ｍＬ、約１８～約１９ｍＬまたは約１９～約２０ｍＬのうちのいずれか一の溶液中にある。いくつかの実施形態では、凍結保存培地および低温保存培地を含む溶液は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０およびＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）を含む。いくつかの実施形態では、製剤中のＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の百分率は約５０％（ｗ／ｗ）であり、また製剤中のＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）の百分率は約３０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0105】

いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５．０～約９．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約６．０～約８．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７．４である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、または１０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８．０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５～約６、約６～約７、約７～約８、約８～約９、または約９～約１０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７～約７．１、約７．１～約７．２、約７．２～約７．３、約７．３～約７．４、約７．４～約７．５、約７．５～約７．６、約７．６～約７．７、約７．７～約７．８、約７．８～約７．９、または約７．９～約８．０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７．４である。

【0106】

いくつかの実施形態では、バイアル中の製剤は、約５×１０^４～約５×１０^９個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約１ｍＬ～１０ｍＬ中に、約５×１０^６～約５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１ｍＬ、約２ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、約５ｍＬ、約６ｍＬ、約７ｍＬ、約８ｍＬ、約９ｍＬ、または約１０ｍＬ中に約５×１０^６～約５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬ中に、約０．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、１．０×１０^９および５．０×１０^９個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、または約１．０×１０^９～約５×１０^９個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約０．５×１０^７、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0107】

いくつかの実施形態では、バイアル中の製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、または約１．０×１０^９～約５×１０^９個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約０．５×１０^７、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0108】

いくつかの実施形態では、バイアル中の製剤は、約５×１０^４～約５×１０^８個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約１ｍＬ～１０ｍＬ中に、約５×１０^６～約５×１０^７個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１ｍＬ、約２ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、約５ｍＬ、約６ｍＬ、約７ｍＬ、約８ｍＬ、約９ｍＬ、または約１０ｍＬ量中に約５×１０^６～約５×１０^７個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬ中に、約．５×１０^４、１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、および０．５×１０^９個の生存ＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、または約１．０×１０^９～約５×１０^９個の生存ＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約０．５×１０^７、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８個の生存ＰＢＭＣのうちのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約２．７５×１０^７個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＬの凍結保存培地中に、約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0109】

いくつかの実施形態では、バイアル中の製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、約０．５×１０^９～約１．０×１０^９、または約１．０×１０^９～約５×１０^９個の生存ＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約０．５×１０^７、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、および１×１０^８個の生存ＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．７５×１０^７個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に、約２．５×１０^７個の生存ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0110】

いくつかの実施形態では、バイアル中の製剤は、約１×１０^４～約１×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約１×１０^６～約１×１０^７個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、および１．０×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^４～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、および１×１０^７個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約２×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬ～約８×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約３×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬ～約７×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約３×１０^６、３．２×１０^６、３．４×１０^６、３．６×１０^６、３．８×１０^６、４．０×１０^６、４．２×１０^６、４．４×１０^６、４．６×１０^６、４．８×１０^６ および５×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約４×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。

【0111】

いくつかの実施形態では、バイアル中のこの製剤は、予め凍結した製剤の解凍後に約１×１０^４～約１×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に約１×１０^６～約１×１０^７個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に、約１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９および１．０×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に、０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^４～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６および１×１０^７個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に約２×１０^６～約８×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に約３×１０^６～約７×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に、約３×１０^６、３．２×１０^６、３．４×１０^６、３．６×１０^６、３．８×１０^６、４．０×１０^６、４．２×１０^６、４．４×１０^６、４．６×１０^６、４．８×１０^６ および５×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、解凍後に約４×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む。

【0112】

いくつかの態様では、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、約５ｍＬの凍結保存培地中に約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含み、当該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約７．４である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。いくつかの態様では、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、約５ｍＬの凍結保存培地中に約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含み、当該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約７．４である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。

【0113】

いくつかの態様では、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に約２．５×１０^７個のＰＢＭＣを含み、当該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約７．４である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。いくつかの態様では、ＰＢＭＣの医薬製剤であって、凍結保存培地および低温保存培地を含む約５ｍＬの溶液中に約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含み、当該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含むものであり、当該医薬製剤のｐＨはｐＨ約７．４である、ＰＢＭＣの医薬製剤を提供する。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。いくつかの実施形態では、低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）である。いくつかの実施形態では、製剤中のＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の百分率は約５０％（ｗ／ｗ）であり、また製剤中のＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）の百分率は約３０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンをさらに含む。

【0114】

ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物
いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、細胞内に送達されるＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは馴化される。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、ＰＢＭＣの馴化のために、約３７℃で、アジュバントと共にＰＢＭＣを約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間の間、インキュベートすることを含む工程によって馴化される。

【0115】

いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む有効量のＰＢＭＣを投与することを含み、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形用狭窄部であって、当該狭窄部の直径が懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数である細胞変形用狭窄部に通過させて、それによって入力ＰＢＭＣに対して少なくとも一のＨＰＶ抗原が通過するのに十分な大きさの摂動を引き起こし、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣを形成することと、ｂ）摂動を与えられた入力ＰＢＭＣを、少なくとも一のＨＰＶ抗原とともに、少なくとも一のＨＰＶ抗原が摂動を与えられた入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間インキュベートし、それによって少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを生成することとによって調製される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～３および１８～２５のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～３および１８～２５のうちのいずれか一と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、方法は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む有効量のＰＢＭＣを投与することを含み、該ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣは、ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形用狭窄部であって、当該狭窄部の直径が懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数である細胞変形用狭窄部に通過させて、それによって入力ＰＢＭＣに対してＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分な大きさの摂動を引き起こし、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣを形成することと、ｂ）摂動を与えられた入力ＰＢＭＣを、ＨＰＶ抗原およびアジュバントとともに、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動を与えられた入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間インキュベートし、それによってＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む改変ＰＢＭＣを生成することとによって調製される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～３および１８～２５５のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～３および１８～２５のうちのいずれか一と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0117】

いくつかの態様では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物を提供するものであり、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、ａ）入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形用狭窄部であって、当該狭窄部の直径が懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数である細胞変形用狭窄部に通過させて、それによって入力ＰＢＭＣに対して少なくとも一のＨＰＶ抗原が通過するのに十分な大きさの摂動を引き起こし、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣを形成することと、ｂ）摂動を与えられた入力ＰＢＭＣを、少なくとも一のＨＰＶ抗原とともに、少なくとも一のＨＰＶ抗原が摂動を与えられた入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間インキュベートし、それによって少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを生成することとによって調製される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～３および１８～２５のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１～３および１８～２５のうちのいずれか一と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0118】

いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、ＰＢＭＣの集団内で最小の直径を有する入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のうちのいずれか一である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のうちのいずれか一である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約５μｍ、約３μｍ～約３．５μｍ、約３．５μｍ～約４μｍ、約４μｍ～約４．５μｍ、約３．２μｍ～約３．８μｍ、約３．８μｍ～約４．３μｍ、約４．２μｍ～約６μｍ、または約４．２μｍ～約４．８μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約４．５μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍもしくは１５μｍのいずれか一の幅、または当該いずれか一の幅未満である。いくつかの実施形態では、入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液は、複数の狭窄部を通過するものであり、該複数の狭窄部は、直列および／または並列で配置されている。いくつかの実施形態では、入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液は、複数の狭窄部を通過するものであり、該複数の狭窄部は、直列および／または並列で配置されている。

【0119】

いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよびまたは異なるＨＰＶ抗原に対する応答を惹起する複数のポリペプチドのプールである。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、一以上の抗原性ＨＰＶエピトープと一以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、他の抗原またはアジュバントと複合体化する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされることが可能である。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされることが可能である。

【0120】

いくつかの実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）である。

【0121】

抗原を含むＰＢＭＣの組成物を生成する方法
いくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣを含む組成物を生成する方法であって、当該少なくとも一の抗原が、ＰＢＭＣに細胞内に送達されるものである、当該組成物を生成する方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗原およびアジュバントを含むＰＢＭＣを含む組成物を生成する方法であって、当該抗原およびアジュバントが、ＰＢＭＣに細胞内に送達されるものである、当該組成物を生成する方法を提供する。

【0122】

いくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣは、ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形用狭窄部であって、当該狭窄部の直径が懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数である細胞変形用狭窄部に通過させて、それによって入力ＰＢＭＣに対して少なくとも一の抗原が通過するのに十分な大きさの摂動を引き起こし、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣを形成することと、ｂ）摂動を与えられた入力ＰＢＭＣの集団を、少なくとも一の抗原とアジュバントとともに、抗原が摂動を与えられた入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間インキュベートし、それによって少なくとも一の抗原を含む改変ＰＢＭＣを生成することとを含む工程によって調製される。

【0123】

いくつかの実施形態では、抗原は、ＨＰＶ抗原である。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドを含む。

【0124】

いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のうちのいずれか一である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約１５μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約１０μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約６μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約４．２μｍ～約６μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約４．２μｍ～約４．８μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約５μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約３．５μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３．５μｍ～約４μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約４μｍ～約４．５μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３．２μｍ～約３．８μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３．８μｍ～約４．３μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍもしくは１５μｍのいずれか一の幅、または当該いずれか一の幅未満である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３．０μｍ、３．１μｍ、３．２μｍ、３．３μｍ、３．４μｍ、３．５μｍ、３．６μｍ、３．７μｍ、３．８μｍ、３．９μｍ、４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍもしくは５．０μｍのいずれか一の幅、または当該いずれか一の幅未満である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約４．５μｍである。いくつかの実施形態では、入力ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液は、複数の狭窄部を通過するものであり、該複数の狭窄部は、直列および／または並列で配置されている。

【0125】

いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよびまたは異なるＨＰＶ抗原に対する応答を惹起する複数のポリペプチドのプールである。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、一以上の抗原性ＨＰＶエピトープと一以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、他の抗原またはアジュバントと共に送達される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープと一以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと、複合体を形成する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶが、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２－特異的エピトープから構成される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６抗原またはＨＰＶ Ｅ７抗原である。いくつかの実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＨＰＶ Ｅ７に由来するＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされることが可能である。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされることが可能である。

【0126】

いくつかの実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）である。

【0127】

いくつかの態様では、本明細書に記載のＰＢＭＣの製剤のいずれか一を作製する方法を提供する。いくつかの態様では、ＰＢＭＣの製剤を作製する方法であって、凍結保存培地およびヒト血清アルブミンを、ＰＢＭＣの集団であって、該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含むものであるＰＢＭＣの集団に添加することを含む、ＰＢＭＣの製剤を作製する方法を提供する。

【0128】

本明細書に記載の方法によるいくつかの実施形態では、ＰＢＣの製剤を作製することであって、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団は、約１×１０^４個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^１０個のＰＢＭＣ／ｍＬであり、ｂ）凍結保存培地は、約２０％～約９８％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｃ）ヒト血清アルブミンは、約０．５％～約２５％（ｗ／ｗ）の濃度で添加されるものであり、該製剤のｐＨはｐＨ約５．０～ｐＨ約９．５に調整される、該製剤を作製することに関する。いくつかの実施形態では、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであり、ｂ）凍結保存培地が、約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｃ）ヒト血清アルブミンが、約２％～約８％（ｗ／ｗ）の濃度で添加されるものであり、該製剤のｐＨがｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５に調整される。いくつかの実施形態では、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約６×１０^６個のＰＢＭＣであり、ｂ）凍結保存培地が、約８０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｃ）ヒト血清アルブミンが、約５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、該製剤のｐＨがｐＨ約７．４に調整される。

【0129】

本明細書に記載の方法によるいくつかの実施形態では、ＰＢＣの製剤を作製することであって、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団は、約１×１０^４個のＰＢＭＣ～約１×１０^１０個のＰＢＭＣであり、ｂ）凍結保存培地は、約２０％～約８０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、ｃ）低温保存培地は、約１５％～約４５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｄ）ヒト血清アルブミン溶液は、約５％～約３５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、該製剤のｐＨはｐＨ約５．０～ｐＨ約９．５に調整される、該製剤を作製することに関する。いくつかの実施形態では、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ～約１×１０^７個のＰＢＭＣであり、ｂ）凍結保存培地が、約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、ｃ）低温保存培地が、約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｄ）ヒト血清アルブミン溶液が、約１５％～約２５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、該製剤のｐＨがｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５に調整される。いくつかの実施形態では、ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団は、約６×１０^６個のＰＢＭＣであり、ｂ）凍結保存培地は、約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、ｃ）低温保存培地は、約３０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、またｄ）ヒト血清アルブミン溶液は、約２０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、該製剤のｐＨはｐＨ約７．４に調整される。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率（ヒト血清アルブミン溶液を介して添加）は、約２％～約８％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態では、製剤中のヒト血清アルブミンの百分率が、約５％（ｗ／ｗ）である。

【0130】

いくつかの実施形態では、この製剤は、１ｍＬあたり約１．０×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、０．５×１０^７、１．０×１０^７、０．５×１０^８、１．０×１０^８、０．５×１０^９、１．０×１０^９、０．５×１０^１０、１．０×１０^１０個のＰＢＭＣのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．５×１０^４～約１．０×１０^４、約１．０×１０^５～約０．５×１０^５、約０．５×１０^５～約１．０×１０^５、約１．０×１０^５～約０．５×１０^６、約０．５×１０^６～約１．０×１０^６、約１．０×１０^６～約０．５×１０^７、約０．５×１０^７～約１．０×１０^７、約１．０×１０^７～約０．５×１０^８、約０．５×１０^８～約１．０×１０^８、約１．０×１０^８～約０．５×１０^９、または約０．５×１０^９～約１．０×１０^９個のＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、１×１０^１１個のＰＢＭＣ／ｍＬのいずれか一を含む。いくつかの実施形態では、この製剤は、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約６×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約４×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣを含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、方法は、凍結保存培地を所定の百分率で添加することを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地は、約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％（ｗ／ｗ）のうちのいずれか一の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、凍結保存培地は、約２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、または９０％～９５％（ｗ／ｗ）のいずれか一の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、凍結保存培地は、約８０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、凍結保存培地は、約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である。

【0132】

ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０（ＢｉｏＬｉｆｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ社）は、１０％のＤＭＳＯを含有する、無血清、タンパク質不含の画成された凍結保存培地であり、これは凍結保護剤、浸透圧剤（ｏｓｍｏｌａｌｉｔｙ ａｇｅｎｔ）として、およびｐＨ制御のために使用される。ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０は、細胞内での氷の形成による細胞損傷を軽減するのに役立つ凍結保護剤であるＤＭＳＯで予め製剤化されている。

【0133】

いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約２％～約２５％のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約５％～約１５％のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２３％、２４％、および２５％のいずれか一のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約２％～約５％、約５％～約６％、約６％～約７％、約７％～約８％、約８％～約９％、約９％～約１０％、約１０％～約１１％、約１１％～約１２％、約１２％～約１３％、約１３％～約１４％、約１４％～約１５％、または約１５％～約２０％のいずれか一のＤＭＳＯを含む。いくつかの実施形態では、凍結保存培地が、約１０％のＤＭＳＯを含む。

【0134】

いくつかの実施形態では、方法は、低温保存培地を所定の百分率で添加することを含む。いくつかの実施形態では、低温保存培地は、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％（ｗ／ｗ）のうちのいずれか一の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、低温保存培地は、約１０％～１５％、１５％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、または６５％～７０％（ｗ／ｗ）のいずれか一の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、低温保存培地は、約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、低温保存培地は、約３０％の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、低温保存培地は、ビタミンＥの水溶性アナログを含む。いくつかの実施形態では、低温保存培地は、トロロックス（（±）－６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）を含む。いくつかの実施形態では、低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである。

【0135】

ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳ（ＢｉｏＬｉｆｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ社）は、血清を含まない、タンパク質を含まない、ＤＭＳＯを含まない低温保存培地であり、これは組成物中でＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０と類似している。これらは、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０がＤＭＳＯを含有し、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳではこのＤＭＳＯがトロロックス（ビタミンＥの水溶性アナログ）で置換される点で相違する。

【0136】

いくつかの実施形態では、方法は、ヒト血清アルブミンを所定の百分率で添加することを含む。いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンは、約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１５％、２０％、または２５％（ｗ／ｗ）のうちのいずれか一の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンは、約０．５％～１％、１％～２％、２％～３％、３％～４％、４％～５％、５％～６％、６％～７％、７％～８％、８％～９％、９％～１０％、１０％～１２％、１２％～１５％、１５％～２０％、または２０％～２５％（ｗ／ｗ）のいずれか一の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンは、約２％～約８％（ｗ／ｗ）の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンは、約５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンは、約１５％～約２５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加される。いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンは、約２０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加される。

【0137】

いくつかの実施形態では、製剤は、アルブミン溶液を製剤に添加することによって産生される。いくつかの実施形態では、このアルブミン溶液は、約１５％～約３５％の最終百分率で添加される。いくつかの実施形態では、このアルブミン溶液は、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、または約３５％の最終百分率で添加される。いくつかの実施形態では、アルブミン溶液は、アルブミン（ヒト）、ＵＳＰ、２５％溶液である。アルブミン（ヒト）、ＵＳＰ、２５％溶液は、静脈内投与用のアルブミンの滅菌調製物である。アルブミン（ヒト）は、水性希釈剤中のアルブミンの２５％滅菌溶液である。調製物は、カプリル酸ナトリウム（約０．０８ｍｍｏｌ／ｇのアルブミン）およびアセチルトリプトファン（約０．０８ｍｍｏｌ／ｇのアルブミン）で安定化される。これは透明でわずかに粘性のある液体であるが、ほぼ無色、黄色、琥珀色、または緑色の範囲にわたる可能性がある。いくつかの実施形態では、アルブミン溶液は防腐剤を含有しない。

【0138】

いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５．０～約９．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約６．０～約８．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７．４である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９または１０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８．０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約５～約６、約６～約７、約７～約８、約８～約９、または約９～約１０のいずれか一である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨが、約７～約７．１、約７．１～約７．２、約７．２～約７．３、約７．３～約７．４、約７．４～約７．５、約７．５～約７．６、約７．６～約７．７、約７．７～約７．８、約７．８～約７．９、または約７．９～約８．０のいずれか一である。

【0139】

抗原
本明細書に記載の方法によるいくつかの実施形態では、外因性抗原は、ＨＰＶ抗原である。パピローマウイルスは、直径約５５ｎｍのビリオンサイズを有する非エンベロープ型の小さなＤＮＡウイルスである。１００を超えるＨＰＶ遺伝子型が完全に特徴決定されており、さらに多くの数が存在するものと推定されている。ＨＰＶは、子宮頸がん、ならびに一部の外陰部がん、膣がん、陰茎がん、中咽頭がん、肛門がん、および直腸がんの原因であることがわかっている。ほとんどのＨＰＶ感染は無症状であり自然に消失するが、腫瘍形成ＨＰＶの一つの型による持続感染は、前がん状態またはがんに進行し得る。他のＨＰＶ関連疾患としては、尋常性ゆうぜい、足底ゆうぜい、扁平ゆうぜい、肛門性器ゆうぜい、肛門病変、表皮異形成、局所性上皮肥厚、口腔パピローマ、ゆうぜい嚢胞（ｖｅｒｒｕｃｏｕｓ ｃｙｓｔ）、喉頭パピローマ、扁平上皮内病変（ＳＩＬ）、子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰上皮内腫瘍（ＶＩＮ）、および膣上皮内新生腫瘍（ＶＡＩＮ）が挙げられ得る。公知のＨＰＶ型の多くは、サブセットが発がん性である良性病変を引き起こす。疫学的および系統学的な関係に基づくと、ＨＰＶの型は、十五の「高リスク型」（ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２）と、三つの「潜在的な高リスク型」（ＨＰＶ２６、５３、および６６）とに分類され、これらはともに、低悪性度および高悪性度の子宮頸部の変化およびがんとして、ならびに他の肛門性器がん、例えば外陰部がん、膣がん、陰茎がん、肛門がんおよび肛門周囲がんなど、ならびに頭頸部がんとして現れることが知られている。最近では、高リスク型のＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８と乳がんとの関連も記述された。「低リスク型」に分類される十一種類のＨＰＶ型（ＨＰＶ６、１１、４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２、および８１）は、良性かつ低悪性度の子宮頸部の変化、性器ゆうぜい、および再発性呼吸器パピローマ症として現れることが知られている。皮膚ＨＰＶの５型、８型、および９２型は、皮膚がんと関連する。一部のＨＰＶ関連がんでは、免疫系が低下し、それに応じて抗腫瘍応答が著しく損なわれる。Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ，ＡｍＪ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７（２０１７）を参照されたい。いくつかの実施形態では、外因性抗原は、同じおよびまたは異なる抗原に対する応答を惹起する複数のポリペプチドのプールである。いくつかの実施形態では、複数の抗原のプール中の抗原は、複数の抗原のプール中の他の抗原に対して向けられる免疫応答を減少させない。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープと一以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと、複合体を形成する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶが、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２－特異的エピトープから構成される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６抗原またはＨＰＶ Ｅ７抗原である。いくつかの実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＨＰＶ Ｅ７に由来するＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１～４のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１８～２５のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原が、配列番号１８～２５のうちのいずれか一と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号４と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２１のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２２のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２３のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２４のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２５のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のうちのいずれか一のアミノ酸配列のうちの少なくとも一を含む複数の抗原である。いくつかの実施形態では、外因性抗原は、配列番号１８～２５のうちのいずれか一のアミノ酸配列のうちの２、３、４、５、６、７、または８を含む複数の抗原である。いくつかの実施形態では、外因性抗原は、配列番号１９と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列、および配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む複数の抗原である。いくつかの実施形態では、外因性抗原は、配列番号１９のアミノ酸配列、および配列番号２３のアミノ酸配列を含む複数の抗原である。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、非共有結合で結合したペプチドのプール内に含まれる。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、非共有結合で結合したペプチドのプール内に含まれるものであり、各ペプチドは、一以下の抗原を含む。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、非共有結合で結合したペプチドのプール内に含まれるものであり、配列番号１９のアミノ酸配列と配列番号２３のアミノ酸配列とが、別個のペプチド内に含有される。

【0140】

いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよびまたは異なるＨＰＶ抗原に対する応答を惹起する複数のポリペプチドのプール中にある。いくつかの実施形態では、複数の抗原のプール中の抗原は、複数の抗原のプール中の他の抗原に対して向けられる免疫応答を減少させない。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶ抗原と一以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと、複合体を形成する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２－特異的エピトープから構成される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ１１－特異的エピトープから構成される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ｂ７－特異的エピトープから構成される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ｃ８－特異的エピトープから構成される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、完全長ＨＰＶタンパク質のＮ末端ドメインの一部または全てを含む。

【0141】

本明細書に記載の方法のいずれか一によるいくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、複数の免疫原性エピトープを含む複数のＨＰＶ抗原を含む。さらなる実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含むＰＢＭＣを個体に投与した後、該複数の免疫原性エピトープのいずれによっても、他の免疫原性エピトープのいずれかに対する個体における免疫応答を減少させない。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ポリペプチドであり、また免疫原性エピトープは、免疫原性ペプチドエピトープである。いくつかの実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端の隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端の隣接ポリペプチドと縮合する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、免疫原性ペプチドエピトープと一以上の異種ペプチド配列とを含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、Ｎ末端および／またはＣ末端で異種ペプチド配列に隣接する免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、隣接異種ペプチド配列は、疾患関連免疫原性ペプチドに由来する。いくつかの実施形態では、隣接異種ペプチド配列は、天然に存在しない配列である。いくつかの実施形態では、隣接異種ペプチド配列は、免疫原性の合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされることが可能である。

【0142】

アジュバント
本明細書で使用する場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答を直接的または間接的のいずれかで調節および／または引き起こす物質を指し得る。本発明のいくつかの実施形態では、アジュバントは、ＰＢＭＣ集団に対して細胞内に送達され、該アジュバントを含む改変ＰＢＭＣを形成する。いくつかの例では、アジュバントは、ＨＰＶ抗原単独と比較して、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答を増強するＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣと併せて投与される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣが狭窄部を通過する前、通過中、または通過後にアジュバントと共にインキュベートされて、ＰＢＭＣの馴化（例えば、これに限定されないが成熟）を促進する。アジュバントを使用して、ＨＰＶ抗原に対する免疫細胞応答（例えば、Ｔ細胞応答）の誘発を押し上げることができる。例示的なアジュバントとしては、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ－Ｉ）アゴニスト、ならびにＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、および／またはＴＬＲ９のアゴニストが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアジュバントには、ＣｐＧ ＯＤＮ、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、イミキモド（Ｒ８３７）、レシキモド（Ｒ８４８）、またはリポ多糖（ＬＰＳ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。特定の実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮである。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮである。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮが、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ １０１８、ＣｐＧ ＯＤＮ １５８５、ＣｐＧ ＯＤＮ ２２１６、ＣｐＧ ＯＤＮ ２３３６、ＣｐＧ ＯＤＮ １６６８、ＣｐＧ ＯＤＮ １８２６、ＣＰＧ ＯＤＮ ２００６、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００７、ＣｐＧ ＯＤＮ ＢＷ００６、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｄ－ＳＬ０１、ＣｐＧ ＯＤＮ ２３９５、ＣｐＧ ＯＤＮｍ３６２、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｄ－ＳＬ０３の群からの選択から構成される。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮアジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮ １８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ（配列番号３０））オリゴヌクレオチドまたはＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（ＣｐＧ ７９０９としても知られる）（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号３１））オリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９である。いくつかの実施形態では、ＲＩＧ－Ｉアゴニストは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）を含む。複数のアジュバントを、ＨＰＶ抗原との併用で使用して、免疫応答の惹起を増強することもできる。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、複数のアジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、複数のアジュバントによって馴化される。複数のアジュバントを、ＨＰＶ抗原との併用で使用して、免疫応答の惹起を増強することもできる。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、複数のアジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、アジュバントＣｐＧ ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストの任意の組み合わせをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、アジュバントＣｐＧ ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、アルファ－ガラクトシルセラミド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリイノシン：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストの任意の組み合わせによって馴化される。

【0143】

ＰＢＭＣ内の構成細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、それを必要とする個体にＰＢＭＣの組成物であって少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣの組成物の有効量を投与することであって、少なくとも一の抗原は細胞内に送達されているものである、当該投与することを提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、それを必要とする個体にＰＢＭＣの組成物であって少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物の有効量を投与することであって、少なくとも一のＨＰＶ抗原は細胞内に送達されているものである、当該投与することを提供する。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの組成物は、複数のＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、および／またはＮＫ－Ｔ細胞のうちの一または複数である。

【0144】

本発明の特定の実施形態では、組成物のＨＰＶ抗原を含む細胞は、ＰＢＭＣである。本明細書で使用する場合、ＰＢＭＣは、ある個体から取得される全血からの白血球アフェレーシスなどのアフェレーシスによって単離され得る。また、同じ個体または異なる個体由来のＰＢＭＣの異なるプールを混合することによって再構成されたＰＢＭＣ組成物も提供する。他の例では、ＰＢＭＣは、生成されたプロファイルで混合細胞組成物に異なる細胞集団を混合することによって再構成することもできる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣを再構成するために使用する細胞集団は、混合細胞集団（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの一または複数の混合物など）である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣを再構成するために使用する細胞集団は、精製細胞集団（例えば、精製されたＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球など）である。さらなる例では、ＰＢＭＣ組成物の再構成に使用する異なる細胞集団は、同じ個体から単離（例えば、自己）するか、または異なる個体から単離（例えば、同種および／または異種）することができる。

【0145】

したがって、本明細書に記載する方法によるいくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞のうちの一または複数を含む。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ２０＋Ｂ細胞、ＣＤ１４＋単球、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞のうちの一または複数を含む。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、また複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比は、全血中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比と本質的に同じである。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、また複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比は、全血由来の白血球アフェレーシス産物中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比と本質的に同じである。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、また複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比は、全血中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比と１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、または５０％のうちのいずれか一つ以下だけ異なる。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、また複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比は、全血中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比と１０％以下だけ異なる。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、また複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比は、全血由来の白血球アフェレーシス産物中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比と１％、２％、５％、１０％１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、または５０％のうちのいずれか一つ以下だけ異なる。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、また複数のＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比は、全血由来の白血球アフェレーシス産物中のＰＢＭＣの総数に対するＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の比と１０％以下だけ異なる。

【0146】

本明細書に記載の方法によるいくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約７０％は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３．５％～約３５％は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約４％～約２５％は、ＮＫ細胞である。

【0147】

本明細書に記載する方法によるいくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％のうちのいずれか一は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約２５％は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のいずれか一は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約１．５％は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のいずれか一は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２５％、３０％、３５％または４０％のいずれか一は、単球である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約４％は、単球である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの少なくとも約２５％はＴ細胞であり、ＰＢＭＣの少なくとも約１．５％はＢ細胞であり、ＰＢＭＣの少なくとも約３％はＮＫ細胞であり、またＰＢＭＣの少なくとも約４％は単球である。

【0148】

本明細書に記載する方法によるいくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％のうちのいずれか一つ以下は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの約７０％以下は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの約５％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２５％、３０％、３５％、４０％、または５０％のいずれか一つ以下は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの約３０％以下は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％または６０％のいずれか一つ以下は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの約２０％以下は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの約５％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２５％、３０％、３５％、４０％、または５０％のうちのいずれか一つ以下は、単球である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの約４５％以下は、単球である。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの約８０％以下はＴ細胞であり、ＰＢＭＣの約３０％以下はＢ細胞であり、ＰＢＭＣの約２０％以下はＮＫ細胞であり、またＰＢＭＣの約４５％以下は単球である。

【0149】

本明細書に記載の方法によるいくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣのうちの約２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、７０％～７５％または７５％～８０％のうちのいずれか一つは、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約８０％は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣのうちの約１％～１．５％、１．５％～２．５％、２．５％～４％、４％～６％、６％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、２０％～２５％または２５％～３０％のうちのいずれか一つは、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１％～２％、２％～３％、３％～５％、５％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、または３５％～４０％のうちのいずれか一つは、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３．０％～約３５％は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２％～４％、４％～６％、６％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、または３０％～４５％のうちのいずれか一つは、単球である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約４％～約４５％は、単球である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約８０％はＴ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％はＢ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約３％～約３５％はＮＫ細胞であり、また改変ＰＢＭＣの約４％～約４５％は単球である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約８０％はＴ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％はＢ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約３％～約２０％はＮＫ細胞であり、また改変ＰＢＭＣの約４％～約４５％は単球である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約８０％はＴ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％はＢ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約３．０％～約２０％はＮＫ細胞であり、また改変ＰＢＭＣの約４％～約４５％は単球である。

【0150】

本明細書で使用する場合、ＰＢＭＣはまた、単核血球（例えば、リンパ球および単球）の混合細胞集団の組成物を操作した後にも生成し得る。いくつかの例では、ＰＢＭＣは、単核血球の混合細胞集団内の特定の亜集団（例えばＢ細胞）を低減（例えば枯渇）させた後で生成する。個体における単核血球の混合細胞集団中の組成物を操作して、この細胞集団を同じ個体の全血由来の白血球アフェレーシス産物に一層密接に類似させることができる。他の例では、単核血球（例えば、マウス脾細胞）の混合細胞集団中の組成物を操作して、この細胞集団をヒト全血由来の白血球アフェレーシス産物から単離されたヒトＰＢＭＣに一層密接に類似させることもできる。

【0151】

本発明のいくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、ＰＢＭＣに見られる細胞の集団である。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞のうちの一または複数を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ２０＋Ｂ細胞、ＣＤ１４＋単球、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞のうちの一または複数を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のいずれかのＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、１００％のＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のいずれかのＢ細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、１００％のＢ細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のいずれかのＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、１００％のＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のいずれかの単球を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、１００％の単球を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のいずれかの樹状細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、１００％の樹状細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のいずれかのＮＫ－Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物は、１００％のＮＫ－Ｔ細胞を含む。

【0152】

ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物の生成に使用される狭窄部
いくつかの実施形態では、本発明は、免疫応答を刺激するＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの組成物を提供する。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＰＢＭＣに細胞内に送達される。ペイロードをＰＢＭＣに導入する方法は、当該技術分野で公知である。

【0153】

いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原は、細胞の膜に一過性の細孔が導入され、それによりＨＰＶ抗原が細胞に入ることができるように、細胞を狭窄部に通過させることによってＰＢＭＣに導入される。狭窄部による細胞内への化合物の送達の例は、ＷＯ２０１３／０５９３４３、ＷＯ２０１５／０２３９８２、ＷＯ２０１６／０７０１３６、ＷＯ２０１７０４１０５０、ＷＯ２０１７００８０６３、ＷＯ２０１７／１９２７８５、ＷＯ２０１７／１９２７８６、ＷＯ２０１９／１７８００５、ＷＯ２０１９／１７８００６、ＷＯ２０２０／０７２８３３、ＷＯ２０２０／１５４６９６および国際公開第２０２０／１７６７８９号によって提供される。

【0154】

いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原およびアジュバントは、ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を狭窄部に通過させることによって、本発明のＰＢＭＣを産生するためにＰＢＭＣ内に送達されるものであり、該狭窄部は、入力されたＰＢＭＣを変形させ、それによってＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動を与えられた入力ＰＢＭＣ内に入るように、入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こす。いくつかの実施形態では、狭窄部は、マイクロ流体チャネル内に含有される。いくつかの実施形態では、複数の狭窄部を、マイクロ流体チャネル内に並列および／または直列で配置することができる。

【0155】

いくつかの実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部は、入口部分、中心点、および出口部分を含む。いくつかの実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部の長さ、深さ、および幅は変動し得る。いくつかの実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部の幅は、ＰＢＭＣ細胞の直径の関数である。ＰＢＭＣの直径を決定する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、ハイコンテンツイメージング、細胞カウンタ、またはフローサイトメトリーである。

【0156】

いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、ＰＢＭＣの集団内で最小の直径を有する入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のうちのいずれか一である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、入力ＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のうちのいずれか一である。

【0157】

狭窄部によるＰＢＭＣへのＨＰＶ抗原の送達のいくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約１５μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約１０μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約６μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約４．２μｍ～約６μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約４．２μｍ～約４．８μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約５μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３μｍ～約３．５μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３．５μｍ～約４μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約４μｍ～約４．５μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３．２μｍ～約３．８μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約３．８μｍ～約４．３μｍである。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍもしくは１５μｍのいずれか一の幅、または当該いずれか一の幅未満である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、およそ３．０μｍ、３．１μｍ、３．２μｍ、３．３μｍ、３．４μｍ、３．５μｍ、３．６μｍ、３．７μｍ、３．８μｍ、３．９μｍ、４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍ、もしくは５．０μｍのいずれか一の幅、または当該いずれか一の幅未満である。いくつかの実施形態では、狭窄部の幅は、約４．５μｍである。

【0158】

ＰＢＭＣ内への化合物の送達に影響を与え得るパラメータの例としては、以下に限定されないが、狭窄部の寸法、狭窄部の入射角、狭窄部の表面特性（例えば、粗さ、化学的な改変、親水性、疎水性など）、動作時の流速（例えば、狭窄部を通過する細胞の通過時間）、細胞濃度、細胞懸濁液中の化合物の濃度、細胞懸濁液中の緩衝液、および狭窄部を通過した後にＰＢＭＣが回収またはインキュベートされる時間の長さが挙げられ、これらは送達化合物のＰＢＭＣ内への通過に影響を与え得る。ＰＢＭＣへの化合物の送達に影響を与えるさらなるパラメータとしては、狭窄部での入力ＰＢＭＣの速度、狭窄部でのせん断速度、細胞懸濁液の粘度、流速に垂直な速度成分、および狭窄部内での時間を挙げることができる。加えて、直列および／または並列でチャネルを含む複数のチップは、ＰＢＭＣへの送達に影響を与え得る。並列での複数のチップは、スループットを増強するために有用であり得る。このようなパラメータは、化合物の送達を制御するように設計することができる。いくつかの実施形態では、細胞濃度は、約１０～少なくとも約１０^１２個の細胞／ｍＬの範囲、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度範囲である。いくつかの実施形態では、送達化合物の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬから約１ｇ／ｍＬの範囲、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度範囲であり得る。いくつかの実施形態では、送達化合物の濃度は、約１ｐＭから少なくとも約２Ｍの範囲、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度範囲であり得る。

【0159】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ未満、約０．１μＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約１０ｍＭを超える。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または約１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかである。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約１μＭである。

【0160】

いくつかの実施形態では、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１：１００００のいずれかである。例えばいくつかの実施形態では、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。いくつかの実施形態では、摂動を与えられた入力Ｐとインキュベートされる抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１０００：１、約１０００：１～約１００：１、約１００：１～約１０：１、約１０：１～約１：１、約１：１～約１：１０、約１：１０～約１：１００、約１：１００～約１：１０００、約１：１０００～約１：１００００のいずれかである。いくつかの実施形態では、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原のアジュバントに対するモル比は、約２００：１である。いくつかの実施形態では、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原のアジュバントに対するモル比は、約２０：１である。

【0161】

いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。例えば、いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．０１μＭ未満、約０．１μＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度でアジュバントを含む。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１μｍ～約１μｍ、約１μｍ～約１０μｍ、約１０μｍ～約１００μｍ、約１００μｍ～約１ｍＭまたは約１ｍＭ～約１０ｍＭのいずれかの濃度でアジュバントを含む。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．１μＭ～約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１μＭの濃度でアジュバントを含む。

【0162】

いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度で抗原を含む。例えば、いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．０１μＭ未満、約０．１μＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度で抗原を含む。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度で抗原を含む。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１μｍ～約１μｍ、約１μｍ～約１０μｍ、約１０μｍ～約１００μｍ、約１００μｍ～約１ｍＭまたは約１ｍＭ～約１０ｍＭのいずれかの濃度で抗原を含む。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．１μＭ～約１ｍＭの濃度で抗原を含む。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１μＭの濃度で抗原を含む。

【0163】

いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１：１００００のいずれかである。例えばいくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１０００：１、約１０００：１～約１００：１、約１００：１～約１０：１、約１０：１～約１：１、約１：１～約１：１０、約１：１０～約１：１００、約１：１００～約１：１０００、約１：１０００～約１：１００００のいずれかである。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約２００：１である。いくつかの実施形態では、改変ＰＢＭＣ中の抗原のアジュバントに対するモル比は、約２０：１である。

【0164】

ＰＢＭＣの馴化
本明細書に記載する方法のいずれか一によるいくつかの実施形態では、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣは、馴化される。本明細書に記載する方法のいずれか一によるいくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、馴化される。さらなる実施形態では、ＰＢＭＣは成熟される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、狭窄部による送達に続いて馴化される。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、狭窄部により送達されるＨＰＶ抗原を含む細胞が馴化されるのに十分な時間の間、アジュバントとインキュベートされ、それにより少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化細胞の組成物を生成する。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、狭窄部による送達に続いて馴化される。いくつかの実施形態では、狭窄部により送達されるＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、狭窄部により送達される変異ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣが馴化されるのに十分な時間の間、アジュバントとインキュベートされ、それにより少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣの組成物を生成する。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ ９アゴニストである。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（ＣｐＧ ７９０９としても公知）である（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号３１））。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９である。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。

【0165】

いくつかの態様では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣの組成物を提供するものであり、これはａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の幅が、懸濁液中の入力ＰＢＭＣの関数であり、それにより、少なくとも一のＨＰＶ抗原が通過するのに十分な大きさの入力ＰＢＭＣの摂動を引き起こして、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣを形成する、通過させるステップと、ｂ）少なくとも一のＨＰＶ抗原が摂動を与えられたＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣを、少なくとも一のＨＰＶ抗原とインキュベートし、それにより、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを生成するステップと、ｃ）狭窄部により送達されたＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣが馴化されるのに十分な時間の間、狭窄部により送達されたＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを、アジュバントとインキュベートし、それにより、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣの組成物を生成するステップと、を含む工程によって調製される。いくつかの実施形態では、この工程は、ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを、改変ＰＢＭＣを馴化するためのアジュバントとインキュベーションする前に、細胞懸濁液から単離することをさらに含む。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。

【0166】

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、狭窄部による送達の前に馴化される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣが馴化されるのに十分な時間の間、アジュバントとインキュベートされ、それによってＰＢＭＣが馴化される。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣの組成物が提供され、これはａ）ＰＢＭＣを馴化するのに十分な時間の間、アジュバントとＰＢＭＣをインキュベートし、それにより、馴化ＰＢＭＣを生成するステップと、ｂ）馴化ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通過させることであって、狭窄部の幅が、懸濁液中のＰＢＭＣの直径の関数であり、それにより、少なくとも一のＨＰＶ抗原が通過するのに十分な大きさのＰＢＭＣの摂動を引き起こして、摂動を与えられた馴化ＰＢＭＣを形成する、通過させるステップと、ｃ）少なくとも一のＨＰＶ抗原が摂動を与えられた馴化ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間、摂動を与えられた馴化ＰＢＭＣを少なくとも一のＨＰＶ抗原とインキュベートし、それにより、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化ＰＢＭＣを生成するステップと、を含む工程によって調製される。いくつかの実施形態では、この工程は、馴化ＰＢＭＣを細胞変形狭窄部に通過させる前に、馴化ＰＢＭＣをアジュバントから単離することをさらに含む。いくつかの実施形態では、アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。

【0167】

本明細書に記載の方法のいずれか一によるいくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１～約２４時間の間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約２～約１０時間の間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約３～約６時間の間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のうちのいずれか一つの間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間の間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間の間、約３７℃で、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間の間、ＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間の間、約３７℃で、ＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、約０．２０ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍｇ／ｍＬ、０．３０ｍｇ／ｍＬ、０．３５ｍｇ／ｍＬ、０．４０ｍｇ／ｍＬ、０．４５ｍｇ／ｍＬ、または０．５０ｍｇ／ｍＬ、またはその間の任意の濃度のいずれかの濃度で、ＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、約０．３５ｍｇ／ｍＬの濃度でＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間の間、約３７℃で、約０．３５ｍｇ／ｍＬの濃度でＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。

【0168】

いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化された複数のＰＢＭＣを提供するものであり、これはＰＢＭＣを馴化するのに十分な時間の間、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む複数のＰＢＭＣを、アジュバントとインキュベートし、それにより、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化された複数のＰＢＭＣを生成することにより調製される。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化された複数のＰＢＭＣを提供するものであり、これは少なくとも一のＨＰＶ抗原を複数のＰＢＭＣに導入する前に、複数のＰＢＭＣを馴化するのに十分な時間の間、複数のＰＢＭＣをアジュバントとインキュベートし、それにより、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含む馴化された複数のＰＢＭＣを生成することにより調製される。

【0169】

本明細書に記載の馴化された複数のＰＢＭＣのいずれかによるいくつかの実施形態では、当該複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１～約２４時間の間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約２～約１０時間の間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約３～約６時間の間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のうちのいずれか一つの間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間、アジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、アジュバントと、約４、８、１２、１６、２０、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０℃のうちのいずれか一の温度でインキュベートされる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、約３７℃でアジュバントとインキュベートする。いくつかの実施形態では、少なくとも一のＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間の間、約３７℃で、ＰＢＭＣをアジュバントとインキュベートすることを含む工程によって馴化する。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間の間、ＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間の間、約３７℃で、ＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、約０．２０ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍｇ／ｍＬ、０．３０ｍｇ／ｍＬ、０．３５ｍｇ／ｍＬ、０．４０ｍｇ／ｍＬ、０．４５ｍｇ／ｍＬ、または０．５０ｍｇ／ｍＬ、またはその間の任意の濃度のいずれかの濃度で、ＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、約０．３５ｍｇ／ｍＬの濃度でＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを馴化するのに約４時間の間、約３７℃で、約０．３５ｍｇ／ｍＬの濃度でＣｐＧ ７９０９とインキュベートする。

【0170】

本明細書に記載する馴化された複数のＰＢＭＣのいずれか一つによるいくつかの実施形態では、一または複数の共刺激分子が、未馴化の複数の改変ＰＢＭＣと比較して、馴化された複数の改変ＰＢＭＣで発現増加する。いくつかの実施形態では、一または複数の共刺激分子が、馴化された複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団において、未馴化の複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団と比較して発現増加する。いくつかの実施形態では、一または複数の共刺激分子が、馴化された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において、未馴化の複数の改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して発現増加する。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８６である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、馴化された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において、未馴化の複数の改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍または１０倍を超えて発現増加する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、馴化された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において、未馴化の複数の改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍～約１．５倍、約１．５倍～約１．８倍、約１．８倍～約２倍、約２倍～約３倍、約３倍～約４倍、約４倍～約５倍、約５倍～約８倍、約８倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約２００倍、約２００倍～約５００倍、または約５００倍超のうちのいずれかだけ発現増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの一または複数の発現が、馴化された複数の改変ＰＢＭＣにおいて、未馴化の複数の改変ＰＢＭＣと比較して増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの一または複数の発現が、馴化された複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団において、未馴化の複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団と比較して増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの一または複数の発現が、馴化された複数の改変ＰＢＭＣにおいて、未馴化の複数の改変ＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍だけ、または１０倍を超えて増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの一または複数の発現が、馴化された複数の改変ＰＢＭＣにおいて、未馴化の複数の改変ＰＢＭＣと比較して、約１．２倍～約１．５倍、約１．５倍～約１．８倍、約１．８倍～約２倍、約２倍～約３倍、約３倍～約４倍、約４倍～約５倍、約５倍～約８倍、約８倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約２００倍、約２００倍～約５００倍、または約５００倍超のうちのいずれかだけ増加する。

【0171】

システムおよびキット
いくつかの態様では、本発明は、本明細書に開示する方法で使用するための、狭窄部、ＰＢＭＣ細胞懸濁液、ＨＰＶ抗原、またはアジュバントのうちの一以上を含むシステムを提供する。このシステムは、上記において開示した方法で説明したあらゆる実施形態を含むことができ、これには、細胞変形狭窄部を提供するマイクロ流体チャネルもしくは細孔を有する面、細胞懸濁液、細胞摂動、送達パラメータ、化合物、および／またはアプリケーションなどが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞変形狭窄部は、ＰＢＭＣへの送達のためにサイズ設定される。いくつかの実施形態では、動作時の流速、細胞および化合物の濃度、狭窄部内の細胞の速度、ならびに細胞懸濁液の組成（例えば、浸透圧、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）などの送達パラメータは、免疫応答を抑制するかまたは寛容を誘導するための化合物の応答が最大になるように最適化される。

【0172】

また、ＨＰＶに関連するがんを有する個体の治療において使用するための製作のキットまたは物品も提供する。いくつかの実施形態では、キットは、細胞内にＨＰＶ抗原および細胞内にアジュバントを含むＰＢＭＣを含む。いくつかの実施形態では、キットは、がんなどのＨＰＶに関連する疾患を有する個体の治療において使用するためのＰＢＭＣの生成において使用するための、狭窄部、ＰＢＭＣ懸濁液、ＨＰＶ抗原、またはアジュバントのうちの一以上を含む。いくつかの実施形態では、キットは、適したパッケージ内に、本明細書に記載の組成物（例えば、細孔を含むマイクロ流体チャネルもしくは面、細胞懸濁液、および／または化合物）を含む。適したパッケージ材料は当技術分野で公知であり、そのようなものとしては例えば、バイアル（密閉バイアルなど）、容器、アンプル、ボトル、ジャー、柔軟なパッケージ（例えば、密閉のマイラーバッグまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。これら製品はさらに、滅菌および／または密閉されてもよい。

【0173】

本発明はまた、本明細書に記載の方法の構成要素を含むキットを提供し、ＨＰＶに関連するがんを有する個体を治療する当該方法を実施するための指示、ならびに／または少なくとも一のＨＰＶ抗原をＰＢＭＣに導入するための指示をさらに含み得る。本明細書に記載のキットは、本明細書に記載のいずれかの方法を実施するための指示、例えばＨＰＶに関連するがんを有する個体を治療するための指示、または細胞内に少なくとも一のＨＰＶ抗原を含有させるようにＰＢＭＣを生成するための指示を伴う、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、シリンジ、および添付文書をはじめとする他の材料をさらに含み得る。

【0174】

例示的な実施形態
実施形態１．
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む医薬製剤であって、
ａ）ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣと、
ｂ）凍結保存培地と、
ｃ）ヒト血清アルブミンとを含む、医薬製剤。

【0175】

実施形態２．
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む医薬製剤であって、
ａ）ＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣと、
ｂ）凍結保存培地と、
ｃ）低温保存培地と、
ｄ）ヒト血清アルブミンとを含む、医薬製剤。

【0176】

実施形態３．
組成物が、約５×１０^６個のＰＢＭＣ～約５×１０^７個のＰＢＭＣを含む、請求項１または２に記載の医薬製剤。

【0177】

実施形態４．
組成物が、約２×１０^７個のＰＢＭＣ～約３×１０^７個のＰＢＭＣを含む、請求項１または２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0178】

実施形態５．
組成物が、約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0179】

実施形態６．
組成物が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0180】

実施形態７．
組成物が、約４×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約６×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0181】

実施形態８．
組成物が、約５．０×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0182】

実施形態９．
組成物中のＰＢＭＣのうち≧７０％、≧８０％、≧９０％、または≧９５％が生存可能である、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0183】

実施形態１０．
組成物が、約３×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬ～約７×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0184】

実施形態１１．
組成物が、約５×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0185】

実施形態１２．
組成物は、予め凍結されており、また組成物は、解凍後に、約４×１０^６個の生存ＰＢＭＣ／ｍＬを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0186】

実施形態１３．
医薬製剤中のＰＢＭＣが、≦－１９６℃で少なくとも１２カ月間保存した後、約≧７０％の生存率を維持する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0187】

実施形態１４．
医薬製剤中の凍結保存培地の百分率が、約４０％～約９５％（ｗ／ｗ）である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0188】

実施形態１５．
医薬製剤中の凍結保存培地の百分率が、約８０％（ｗ／ｗ）である、請求項１および請求項３から１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0189】

実施形態１６．
医薬製剤中の凍結保存培地の百分率が、約５０％（ｗ／ｗ）である、請求項２から１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0190】

実施形態１７．
凍結保存培地がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0191】

実施形態１８．
凍結保存培地であるＤＭＳＯの百分率が、約５％～約１５％（ｗ／ｗ）である、請求項１７に記載の医薬製剤。

【0192】

実施形態１９．
凍結保存培地であるＤＭＳＯの百分率が、約１０％のＤＭＳＯ（ｗ／ｗ）である、請求項１７または１８に記載の医薬製剤。

【0193】

実施形態２０．
凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0194】

実施形態２１．
医薬製剤中の低温保存培地の百分率が、約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）である、請求項２から１４および１６から２０のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0195】

実施形態２２．
医薬製剤中の低温保存培地の百分率が、約３０％（ｗ／ｗ）である、請求項２から１４および１６から２１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0196】

実施形態２３．
低温保存培地が、ビタミンＥの水溶性アナログを含む、請求項２から１４および１６から２２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0197】

実施形態２４．
低温培地が、トロロックス（（±）－６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）を含む、請求項２から１４および１６から２３のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0198】

実施形態２５．
低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、請求項２から１４および１６から２４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0199】

実施形態２６．
ヒト血清アルブミンが、ヒト血清アルブミン溶液で提供される、請求項１から２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0200】

実施形態２７．
医薬製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約１５％～約２５％（ｗ／ｗ）である、請求項２６に記載の医薬製剤。

【0201】

実施形態２８．
医薬製剤中のヒト血清アルブミン溶液の百分率が、約２０％（ｗ／ｗ）である、請求項２６または２７に記載の医薬製剤。

【0202】

実施形態２９．
ヒト血清アルブミン溶液は、アルブミン濃度は約０．０８ｍｍｏｌ／ｇでカプリル酸ナトリウムおよび／またはアルブミン濃度は約０．０８ｍｍｏｌ／ｇでアセチルトリプトファンを含む、請求項２６から２８のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0203】

実施形態３０．
医薬製剤中のヒト血清アルブミンの百分率が、約２％～約８％（ｗ／ｗ）である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0204】

実施形態３１．
医薬製剤中のヒト血清アルブミンの百分率が、約５％（ｗ／ｗ）である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0205】

実施形態３２．
医薬製剤のｐＨが、約６．０～約８．５である、請求項１から３１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0206】

実施形態３３．
医薬製剤のｐＨが、約７．４である、請求項１から３２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0207】

実施形態３４．
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、
ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、
ｃ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、
医薬製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、医薬製剤。

【0208】

実施形態３５．
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、
ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、
ｃ）約５％（ｗ／ｗ）の百分率でヒト血清アルブミンとを含むものであり、
医薬製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４である、医薬製剤。

【0209】

実施形態３６．
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、
ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、
ｃ）約２５％～約３５％の百分率で低温保存培地と、
ｄ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、
医薬製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、医薬製剤。

【0210】

実施形態３７．
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の医薬製剤であって、
ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で凍結保存培地と、
ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の百分率で低温保存培地と、
ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の百分率でヒト血清アルブミンとを含むものであり、
医薬製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４である、医薬製剤。

【0211】

実施形態３８．
凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、請求項３６から３７のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0212】

実施形態３９．
低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0213】

実施形態４０．
医薬製剤は、無菌である、請求項１から３９のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0214】

実施形態４１．
医薬製剤は、約２ＥＵ／ｍＬ未満のエンドトキシンを含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載の製剤。

【0215】

実施形態４２．
医薬製剤は、マイコプラズマを含まない、請求項１から４１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0216】

実施形態４３．
ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの二以上を含む、請求項１から４２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0217】

実施形態４４．
ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含む、請求項１から４３のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0218】

実施形態４５．
（ａ）ＰＢＭＣの約２５％～約８０％がＴ細胞であり、
（ｂ）ＰＢＭＣの約１．５％～約３０％がＢ細胞であり、
（ｃ）ＰＢＭＣの約３．０％～約２０％がＮＫ細胞であり、または
（ｄ）ＰＢＭＣの約４．０％～約４５％が単球である、請求項１から４４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0219】

実施形態４６．
少なくとも一の抗原が、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である、請求項１から４５のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0220】

実施形態４７．
ＨＰＶが、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である、請求項４６に記載の医薬製剤。

【0221】

実施形態４８．
少なくとも一の抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む、請求項４６または４７に記載の医薬製剤。

【0222】

実施形態４９．
少なくとも一の抗原が、ＨＰＶ Ｅ６に由来するペプチドおよびＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含む、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0223】

実施形態５０．
少なくとも一の抗原が、配列番号１～３のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む、請求項４６から４９のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0224】

実施形態５１．
少なくとも一の抗原が、配列番号１８～２５のうちのいずれか一のアミノ酸配列を含む、請求項４６から５０のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0225】

実施形態５２．
ＰＢＭＣの集団は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原とを含む、請求項４６から５１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0226】

実施形態５３．
少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣは、
ａ）入力ＰＢＭＣの集団を含む細胞懸濁液を、細胞変形用狭窄部であって、当該狭窄部の直径が懸濁液中の入力ＰＢＭＣの直径の関数である細胞変形用狭窄部に通過させて、それによって入力ＰＢＭＣに対して少なくとも一の抗原が通過するのに十分な大きさの摂動を引き起こし、摂動を与えられた入力ＰＢＭＣの集団を形成することと、
ｂ）摂動を与えられた入力ＰＢＭＣの集団を、少なくとも一の抗原とともに、当該抗原が摂動を与えられた入力ＰＢＭＣに入ることを可能にするのに十分な時間の間インキュベートし、それによって少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣの集団を生成することとによって調製される、請求項１から５２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0227】

実施形態５４．
狭窄部の直径が、約４．２μｍ～約６μｍ、または約４．２μｍ～約４．８μｍである、請求項５３に記載の医薬製剤。

【0228】

実施形態５５．
少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣは、馴化される、請求項１から５４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【0229】

実施形態５６．
少なくとも一の抗原を含むＰＢＭＣの集団は、改変ＰＢＭＣを馴化するために、約３７℃で、アジュバントと共にＰＢＭＣを約２時間～約１０時間、約３時間～約６時間、または約４時間の間、インキュベートすることを含む工程によって馴化される、請求項５５に記載の医薬製剤。

【0230】

実施形態５７．
アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、請求項５６に記載の医薬製剤。

【0231】

実施形態５８．
アジュバントが、ＣｐＧ ７９０９オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、請求項４７に記載の医薬製剤。

【0232】

実施形態５９．
請求項１から５８のいずれか一項に記載の医薬製剤を含む、バイアル。

【0233】

実施形態６０．
製剤を含むバイアルであって、製剤が、
ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ～約５×１０^７個のＰＢＭＣであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、
ｃ）約２％～約８％（ｗ／ｗ）のヒト血清アルブミンとを含むものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、製剤を含む、バイアル。

【0234】

実施形態６１．
製剤を含むバイアルであって、製剤が、
ａ）約２．７５×１０^７個のＰＢＭＣであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約８０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、
ｃ）約５％の濃度でヒト血清アルブミンとを含むものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４である、製剤を含む、バイアル。

【0235】

実施形態６２．
製剤を含むバイアルであって、製剤が、
ａ）約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約４０％～約６０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、
ｃ）約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の低温保存培地と、
ｄ）約２％～約８％のヒト血清アルブミンとを含むものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５である、製剤を含む、バイアル。

【0236】

実施形態６３．
製剤を含むバイアルであって、製剤が、
ａ）約５×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬであるＰＢＭＣであって、少なくとも一の抗原を含む当該ＰＢＭＣと、
ｂ）約５０％（ｗ／ｗ）の濃度で凍結保存培地と、
ｃ）約３０％（ｗ／ｗ）の濃度で低温保存培地と、
ｄ）約５％（ｗ／ｗ）の濃度でヒト血清アルブミンとを含むものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４である、製剤を含む、バイアル。

【0237】

実施形態６４．
凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、請求項６０から６３のいずれか一項に記載のバイアル。

【0238】

実施形態６５．
低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、請求項６２から６４のいずれか一項に記載のバイアル。

【0239】

実施形態６６．
製剤は、無菌である、請求項５９から６５のいずれか一項に記載のバイアル。

【0240】

実施形態６７．
ＰＢＭＣの製剤を作製する方法であって、凍結保存培地およびヒト血清アルブミンを、ＰＢＭＣの集団であって、該ＰＢＭＣは少なくとも一の抗原を含むものであるＰＢＭＣの集団に添加することを含む、方法。

【0241】

実施形態６８．
ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ／ｍＬ～約１×１０^７個のＰＢＭＣ／ｍＬであり、
ｂ）凍結保存培地が、約６５％～約９５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）ヒト血清アルブミンが、約２％～約８％（ｗ／ｗ）の濃度で添加されるものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５に調整される、請求項６７に記載の方法。

【0242】

実施形態６９．
ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約６×１０^６個のＰＢＭＣであり、
ｂ）凍結保存培地が、約８０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）ヒト血清アルブミンは、約５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４に調整される、請求項６８に記載の方法。

【0243】

実施形態７０．
ＰＢＭＣの製剤を作製する方法であって、凍結保存培地、低温保存培地およびヒト血清アルブミン溶液を、ＰＢＭＣの集団であって、該ＰＢＭＣは抗原を含むものであるＰＢＭＣの集団に添加することを含む、方法。

【0244】

実施形態７１．
ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約１×１０^６個のＰＢＭＣ～約１×１０^７個のＰＢＭＣであり、
ｂ）凍結保存培地が、約４０％から約６０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）低温保存培地が、約２５％～約３５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｄ）ヒト血清アルブミン溶液は、約１５％～約２５％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約６．０～ｐＨ約８．５に調整される、請求項７０に記載の方法。

【0245】

実施形態７２．
ａ）製剤中のＰＢＭＣの集団が、約６×１０^６個のＰＢＭＣであり、
ｂ）凍結保存培地が、約５０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）低温保存培地が、約３０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加され、
ｃ）ヒト血清アルブミンは、約２０％（ｗ／ｗ）の百分率で添加されるものであり、
製剤のｐＨが、ｐＨ約７．４に調整される、請求項７０または７１に記載の方法。

【0246】

実施形態７３．
凍結保存培地が、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０である、請求項６７から７２のいずれか一項に記載の方法。

【0247】

実施形態７４．
低温保存培地が、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍａｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳである、請求項７０から７３のいずれか一項に記載の方法。

【実施例】

【0248】

当業者は、一部の実施形態が本発明の範囲および趣旨の範疇で可能であることを認識するものとなる。これより、以下の非限定的な実施例を参照して、本発明をより詳細に記述する。以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、当然のことながら、形はどうあれその範囲を制限するものと解釈されるべきではない。

【0249】

実施例１ ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの開発
ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬は、主要な組織適合性複合体クラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）上のＨＰＶ１６のＨＬＡ－Ａ＊０２拘束性のＥ６エピトープおよびＥ７エピトープを提示する自己ＰＢＭＣからなる。ＰＢＭＣの大部分（＞９０％）は、Ｔ細胞、単球、ＮＫ細胞、およびＢ細胞からなる。

【0250】

ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬の製造において出発物質として使用されるＥ６ ＳＬＰおよびＥ７ ＳＬＰを以下に示す。これらペプチドは、ＨＰＶ１６の抗原エピトープ（太字で示されている）を含有する。

【化1】

【0251】

これらペプチドは、製造工程中に細胞サイトゾルに送達された後、細胞によってプロセシングされて、その結果生じる抗原エピトープ含有セグメントが、様々なＰＢＭＣ細胞のＭＨＣ－Ｉ上で提示される。

【0252】

ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬製造工程の一部として、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ細胞は、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）であるＣｐＧ７９０９で成熟される（または馴化される）。この成熟が、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ細胞による炎症性サイトカインの産生、ならびにＢ細胞上の共刺激性分子（例えば、ＣＤ８６）およびＭＨＣ－Ｉの発現上昇をもたらす。成熟期間後、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬を二回洗浄し、その後製剤化して、薬剤産物ＳＱＺ ＰＢＭＣ ＨＰＶとなる。

【0253】

ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬プロセスの開発のために実施したすべての試験は、健常ドナーのｌｅｕｋｏｐａｋ物質を使用して実施した。

【0254】

ＰＢＭＣの精製
ｌｅｕｋｏｐａｋからのＰＢＭＣの精製に使用する工程としては、溶出法（ｅｌｕｔｒｉａｔｉｏｎ）がある。主要な溶出工程パラメータの使用、溶出培地（１％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含むハンク平衡塩溶液（ＨＢＳＳ））の選択、および出発物質の希釈に関する推奨事項は、装置ベンダー（Ｔｅｒｕｍｏ ＢＣＴ社）によって提供された。
ペプチド（Ｅ６ ＳＬＰおよびＥ７ ＳＬＰ）の導入

【0255】

溶出後、精製したＰＢＭＣを、ＬＯＶＯシステムを使用して、Ｇｉｂｃｏ（商標）ＲＰＭＩ １６４０培地で二回洗浄し、続いて送達培地（Ｇｉｂｃｏ（商標）ＲＰＭＩ １６４０培地中の５０μＭのＥ６および５０μＭのＥ７の溶液）で再懸濁する。ＬＯＶＯシステムで、送達培地を用いてＰＢＭＣを洗浄および製剤化するために使用した処理パラメータは、機器ベンダー（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ社）によって提供された。
ペプチド（Ｅ６ ＳＬＰおよびＥ７ ＳＬＰ）の送達

【0256】

送達培地でのＰＢＭＣの再懸濁後、合わせた混合物をＳＱＺシステムを使用して２～８℃に冷却し、その後二つの平行するシリコンマイクロ流体チップに通して流すが、この際細胞は、クエンチ培地（Ｇｉｂｃｏ（商標）ＲＰＭＩ １６４０培地および１０％ヒト血清）を含有する滅菌単回使用バッグに回収される。
ＣｐＧ ７９０９を用いたＰＢＭＣの成熟

【0257】

Ｅ６ ＳＬＰおよびＥ７ ＳＬＰのＰＢＭＣへの送達後、０．３５ｍｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳ中に製剤化されたＣｐＧ ７９０９の滅菌濾過溶液を細胞懸濁液に無菌的に添加し、そして細胞を３７℃±１℃で四時間成熟させ、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬を得た。

【0258】

単位操作ごとの細胞回収率を、五つのプロセス展開ロットにわたって計算した（表１）。

【表1】

【0259】

ｌｅｕｋｏｐａｋから医薬品までの平均プロセス回収率（３０．１％）に基づき、ｌｅｕｋｏｐａｋ中での提案される最小ＷＢＣは、合計で４×１０^９であると推定され、４３バイアルが得られることとなる（４×１０^９×３０．１％／２．７５×１０^７細胞／バイアル）。

【0260】

実施例２ ＰＢＭＣ－ＨＰＶ製剤の開発
ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、ヒトパピローマウイルス１６（ＨＰＶ１６）のＥ６タンパク質およびＥ７タンパク質の免疫原性エピトープを標的とするＰＢＭＣを提示する自己抗原である、製剤化されたＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬からなる。ＰＢＭＣは、主に単球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞からなる。

【0261】

ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、５０％（ｗ／ｗ）のＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、３０％（ｗ／ｗ）のＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳ、および２０％（ｗ／ｗ）の２５％ヒト血清アルブミンを含有する溶液中で、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬を５×１０^６生細胞／ｍＬの濃度に調製し、バイアルに充填することによって調製される。このバイアルは、チャンバー温度≦－１７０℃を使用して凍結保存されるが、この際バイアルは、製造、保管および出荷中に≦－１４０℃の温度に到達し、かつ維持されるようにする。

【0262】

ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ製剤の開発については、異なるＤＭＳＯ濃度（５、７．５、および１０％）でのＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）塩基培地の評価を完了した。生細胞を、各クライオ培地製剤に製剤化し、クライオバイアルに分注し、温度制御フリーザーを使用してチャンバー温度≦－１７０℃に凍結した。解凍後、各製剤の細胞数および生存率について評価した。最終ＤＭＳＯ濃度５％では、試験した条件の中で、解凍後の生細胞回収率および生存率が最も高いことを示したので、医薬品製剤の最終濃度として選択された。

【0263】

解凍後の細胞回収率および生存率を最適化するため、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を、異なる濃度（０、５、および１０％）でＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）塩基培地（最終ＤＭＳＯ濃度５％）に組み入れた。次いで細胞を、各培地製剤への再懸濁を介して組み合わせて、クライオバイアルに分注し、温度制御フリーザーを使用してチャンバー温度≦－１７０℃に凍結した。解凍後、各製剤の細胞数および生存率について評価し、最終ＨＳＡ濃度５％がＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶに最適であると見なした。これら評価に基づき、５％のＤＭＳＯと５％のＨＳＡを含有する最終医薬品製剤をＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ用に選択した。

【0264】

最終医薬品の製剤の前に、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬を製剤用培地で二回洗浄し、次いで同じ培地に再懸濁した。ＰＢＭＣ－ＨＰＶ原薬を洗浄および次いでＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶを製剤化するためにＬＯＶＯシステムで使用した処理パラメータは、機器ベンダー（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ社）によって提供された。

【0265】

バイアルへの充填は、ＩＳＯ ５バイオセーフティキャビネット内で行う。バイアルは、滅菌され、完全に栓をされ、すぐに使用できる状態で供給される。充填に関して、各バイアルは５．７８ｇ±５％の生成物（すなわち、５ｍＬの送達容量を可能にする、臨界プロセスパラメータ、すなわち５．５ｍＬ）で充填する。充填後、各バイアルは封止され、重量が確認され、その後キャップが付けられる。バイアル充填が完了すると、照明付きの白黒の背景を備えた検査ブースを使用して、視認される欠陥（粒子状物質を含む）がないか各充填バイアルを目視で検査する。その後、各バイアルは、低温貯蔵ラベルが付与される。

【0266】

ラベル付与後、すべてのバイアルは温度制御フリーザーに入れ、バイアルが≦－１４０℃（臨界プロセスパラメータ）の温度に達した状態で、チャンバー温度≦－１７０℃で最終医薬品を凍結保存する。凍結保存培地のＴｇは、－１２０～１３０℃である。凍結保存されるバイアルは、長期保存のために等温ＬＮ_２タンクに入れられる。

【0267】

開発された凍結保存プロファイルのプロトコルを表２に示す。

【表2】

【0268】

健常対象よりのｌｅｕｋｏｐａｋを含むバッチのセットを、一貫性を確保するように作製した。各バッチからのデータを表３に示す。

【表3】

【0269】

安定性
ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ医薬品の長期安定性試験の概要を表４に示す。無菌試験およびエンドトキシン試験は、各バッチの出荷時に実施した。マイコプラズマに関しては、医薬品を試験する代わりに、医薬品の製造中に生成された工程内洗浄サンプルをマイコプラズマについて試験した。これら洗浄サンプルの試験は、最終医薬品に対する試験よりもマイコプラズマの検出への感度がより高い。

【表4】

ＮＡ＝該当なし
^ａ５つのバッチすべてにＴ＝０および１か月、３つのバッチに２か月、および２つのバッチに３か月のデータが利用可能である。

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【配列表】

2024503279000001.app

【国際調査報告】