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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-25
(54)【発明の名称】菌株、組成物および使用方法
(51)【国際特許分類】
A61K 35/747 20150101AFI20240118BHJP
A61K 35/744 20150101ALI20240118BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240118BHJP
A61P 15/02 20060101ALI20240118BHJP
C12N 1/20 20060101ALI20240118BHJP
A23L 33/135 20160101ALI20240118BHJP
C12Q 1/04 20060101ALI20240118BHJP
A01N 63/20 20200101ALI20240118BHJP
A01P 3/00 20060101ALI20240118BHJP
【ＦＩ】
A61K35/747
A61K35/744
A61P31/04
A61P15/02
C12N1/20 A
C12N1/20 E
C12N1/20 F
A23L33/135
C12Q1/04
A01N63/20
A01P3/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023540890
(86)(22)【出願日】2021-12-29
(85)【翻訳文提出日】2023-09-01
(86)【国際出願番号】 EP2021087816
(87)【国際公開番号】W WO2022148699
(87)【国際公開日】2022-07-14
(31)【優先権主張番号】PA202100014
(32)【優先日】2021-01-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】DK
(31)【優先権主張番号】PA202100429
(32)【優先日】2021-04-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】DK
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521292984
【氏名又は名称】ラクトバイオ アー／エス
【氏名又は名称原語表記】ＬＡＣＴＯＢＩＯ Ａ／Ｓ
【住所又は居所原語表記】Ｌｅｒｓｏ Ｐａｒｋａｌｌｅ ４２，２．，２１００ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ Ｏ（ＤＫ）
(74)【代理人】
【識別番号】110000659
【氏名又は名称】弁理士法人広江アソシエイツ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ヴェデル，シャーロット
(72)【発明者】
【氏名】ビレコップ オルセン，カーチャ
(72)【発明者】
【氏名】テスドルフ，ジェンス エドワード
(72)【発明者】
【氏名】ケアウルフ，ゾーレン
(72)【発明者】
【氏名】エルヴェバッケン，ヘレナ ファルホルト
【テーマコード（参考）】
4B018
4B063
4B065
4C087
4H011
【Ｆターム（参考）】
4B018MD86
4B018ME09
4B063QA01
4B063QA06
4B063QA18
4B063QQ02
4B063QQ06
4B063QQ16
4B063QR75
4B063QS10
4B063QS13
4B063QX01
4B065AA30X
4B065AC20
4B065BA21
4B065CA34
4B065CA41
4B065CA44
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BC55
4C087BC56
4C087CA09
4C087MA02
4C087MA13
4C087MA17
4C087MA28
4C087MA34
4C087MA38
4C087MA43
4C087MA52
4C087MA56
4C087NA05
4C087NA14
4C087ZA81
4C087ZB35
4H011AA01
4H011BB21
(57)【要約】
本発明は、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ、または受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒを含む組成物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ；受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ；または
受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ；
を含む、組成物。
【請求項2】
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ；受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ；または
受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒを特に含む、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓを含む膣マイクロバイオーム移植片。
【請求項3】
１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（例えば寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）および／または１つ以上のＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ株（例えば寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３１の下で寄託されたＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ６７９Ｒ）から選択される乳酸菌株をさらに含む、請求項２に記載の膣マイクロバイオーム移植片。
【請求項4】
懸濁液、スプレー、ゲル、クリーム、ローション、粉末、カプセル、油、洗浄液用溶液、卵形剤、膣用インサート、坐剤、ロゼンジ、錠剤、マイクロカプセル化製品として、または食品サプリメントもしくは食品の形態で製剤化される、請求項２から３のいずれか一項に記載の膣マイクロバイオーム移植片。
【請求項5】
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ；受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ；または
受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒを特に含む、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓから選択される単離された細菌株。
【請求項6】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉの種から選択される１つ以上の細菌株を含む、医薬として使用するための組成物。
【請求項7】
１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたは１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される細菌株を含む、ヒトまたは動物における膣感染症の予防および／または処置に使用するための組成物。
【請求項8】
１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたは１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される細菌株を含む、ヒトもしくは動物の妊孕性の改善および／またはヒトもしくは動物の早産のリスクを低減するのに使用するための組成物。
【請求項9】
１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ）、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒを含む）、または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒを含む）を含む、バイオフィルム形成の予防、阻害または処置に使用するための組成物。
【請求項10】
第１の乳酸菌株と第２の乳酸菌株の組み合わせを含む組成物であって、該第１の乳酸菌株がＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓの阻害を特徴とし、該第２の乳酸菌株がＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの阻害を特徴とする、組成物。
【請求項11】
請求項１もしくは６から１０のいずれか一項に記載の組成物、または請求項２から４に記載の膣マイクロバイオーム移植片、または請求項５に記載の単離された細菌株を含む医療機器。
【請求項12】
膣移植用の１つ以上の乳酸菌株を選択する方法であって、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第１の乳酸菌株を選択する工程；および
Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第２の株を選択する工程；
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、単独でまたは組み合わせてプロバイオティクスとして使用することができる新たな乳酸菌株に関する。本発明はまた、株を単独でまたは組み合わせて含む医薬組成物およびパーソナルケア用製品に関する。特に、本発明は、膣感染症または泌尿生殖器感染症の予防または処置のための株の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
性感染症（ＳＴＩ）を含む下部生殖管感染症は、妊娠可能年齢の女性において最も一般的な臨床問題の一部である。膣分泌物は、膣感染症（酵母、細菌性膣炎およびトリコモナス）または子宮頸部感染症（淋病またはクラミジア）に起因し得る。さらに、膣感染症を早産、低出生体重、および新生児死亡に結び付ける一連の証拠があり、これらは産科において直面する最も重要な問題の一部である。
【0003】
細菌性膣炎（ＢＶ）は、細菌Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ（Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ）によってしばしば引き起こされる妊娠中の最も一般的な生殖器感染症の１つである。細菌性膣炎はＳＴＩではないが、ＳＴＩになるリスクを高める可能性がある。妊娠中期に細菌性膣炎と診断された女性は、細菌性膣炎のない女性よりも未熟で低出生体重の乳児を出産する可能性が４０％高い。そのような出産のわずかな割合でさえも予防することは、大きな金銭的節約ならびに新生児の罹患率および死亡率の減少につながり得る。
【0004】
膣微生物叢、特に乳酸菌は、免疫の調節、病原体に対抗すること、およびｐＨを４．５未満に維持することによって、女性の健康において重要な役割を果たす。
【0005】
さらに、外陰膣カンジダ症の症例の約９０％は、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓが優勢であるＣａｎｄｉｄａ種に起因する（非特許文献１）。女性の７５％が生涯のうちに少なくとも１回のエピソードを経験すると推定される。さらに、症例の２５％は、年間４回以上のエピソードを伴って再発する。
【0006】
感染は、異なる処置目的で処方された抗生物質療法による処置後に起こることが多い。エストロゲンを含有する経口避妊薬を服用している女性、妊婦および糖尿病の女性においても一般的である。カンジダ感染は、トリアゾール薬（例えば、フルコナゾール、クロトリマゾール、ミコナゾール、イトラコナゾール）またはナイスタチンなどの抗真菌剤で処置される。しかしながら、臨床で単離されたＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの株の最大２０％が最も典型的な処置の１つであるフルコナゾールに対する耐性を示す一方で、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａの株がそのような処置に対して高い耐性を示す傾向があることは注目に値し、外陰膣カンジダ症の管理のための新たな処置ツールを見出すことの重要性を強調している。
【0007】
例えば、Ｇａｒｎｅｒｅｌｌａ種またはＣａｎｄｉｄａ種によって引き起こされる不健康な膣微生物叢または機能不全微生物叢は、不妊症に関連し得る。
【0008】
乳酸菌は、ヒトの腸、口、および膣の微生物フローラの一部である。膣乳酸菌は、過酸化水素Ｈ２Ｏ２、抗菌ペプチドまたはバイオサーファクタントなどの他の抗菌物質の産生による酸の産生および膣の酸性化を介する感染に対する耐性において、重要な役割を果たす。
【0009】
膣乳酸菌フローラが優勢である女性は、淋病およびクラミジア感染症、トリコモナス症および細菌性膣炎の頻度が５０％低いことが実証されている。膣におけるＨ２Ｏ２産生乳酸菌の存在は、細菌性膣炎、症候性酵母膣炎、およびＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、およびＴｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓを含む性感染病原体の頻度の低下に関連している。インビトロ試験により、Ｈ２Ｏ２産生乳酸菌が膣病原体に対して、さらにヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対しても強力な殺菌特性および殺ウイルス特性を有することが実証されている。
【0010】
妊娠可能年齢の多くの女性は、膣乳酸菌が欠乏している。膣の生態系および微生物叢は、医薬品、石鹸、衛生製品、一般的な健康状態、性的習慣および避妊によって動的に影響を受ける。一部の女性では、健康な微生物叢は、若年時には決して確立されなかった。したがって、機能不全または不均衡な微生物叢もまた、若年時に既に確立されており、問題のある感染症を若年女性および女性に引き起こし、妊孕性も低下させる可能性がある。
【0011】
多くの膣および全身薬は、膣乳酸菌を死滅させ得る。したがって、抗生物質による感染症の処置は、女性が感染症を反復獲得するかまたは抗生物質耐性感染症さえも発症するリスクを高め得る。
【0012】
膣内または経口使用のための乳酸菌は、健康食品店で入手可能なプロバイオティクス調製物の形態、および食料品店でアシドフィルス乳またはヨーグルトの形態で５０年以上にわたって利用可能である。これらの製品には、凍結乾燥Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種を含有する膣坐剤が含まれている。これらの製品は、膣に外因性Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉをコロニー形成させず、病原体のバイオフィルム形成を予防しないため、またはインビボでの抗菌活性が欠如しているために、感染症の処置においてほとんど効果がなかった。市販のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓは、病原体のバイオフィルム形成を予防することができず、また、市販のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓは、持続性Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓに対する抗菌活性を有さないことが示されている。
【0013】
ほとんどの市販のプロバイオティクス株は、抗菌活性のために体系的に選択されるのではなく、酸を産生し、アップスケーリングする能力（非特許文献２）のために選択される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0014】
【非特許文献1】Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｓ．Ｓ．ら、Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｃａｎｄｉｄａ Ｓｐｅｃｉｅｓ Ｃａｕｓｉｎｇ Ｖｕｌｖｏｖａｇｉｎｉｔｉｓ ａｎｄ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ Ｃａｓｅｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００５，Ｖｏｌ．４３，Ｎｏ．５，ｐａｇｅｓ ２１５５－２１６２
【非特許文献2】Ｋｗａｋ，Ｙ－Ｋ．ら、２０１７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0015】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓがバイオフィルムを形成する能力は、ＢＶに典型的であり、遺憾ながら抗生物質療法を繰り返さざるを得ない高い再発率に寄与する。
【0016】
したがって、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓによるバイオフィルムの発生を予防、阻害または低減することができる乳酸菌が有利であろう。
【0017】
さらに、膣を酸性化しＧ．ｖａｇｉｎｏｓｉｓおよび／またはＣａｎｄｉｄａ種のバイオフィルム形成を予防する能力である抗菌活性を維持する、膣感染症の処置のための乳酸菌が必要とされている。
【0018】
本発明は、膣内の病原性微生物を特異的に打ち負かし、それによって健康な微生物叢を再確立する能力について選択された新たな単離された細菌に関する。さらに、新たな単離された細菌は、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓおよび／またはＣａｎｄｉｄａ種に対するそれらの標的抗菌活性のために選択される。
【0019】
したがって、本発明の目的は、婦人科および泌尿器科における使用に適した新たな乳酸菌および局所組成物におけるその使用に関する。したがって、本発明の目的は、膣または泌尿生殖器の感染症を処置または予防し、再発性感染症を減少させ、ＳＴＩを減少させ、妊孕性を改善し、および／または早産を減少させることができる新たな単離された乳酸菌に関する。
【0020】
特に、本発明の目的は、病原体を標的制御し、それによって感染症を予防する能力を有する、先行技術の上述の問題を解決する新たな株を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0021】
本発明は、以下の株、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒの１つ以上を含む株および組成物に関する。
【0022】
したがって、本発明の一態様は、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ、または受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒを含む組成物に関する。
【0023】
本発明の別の態様は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓを含む、特に以下の株、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ株、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒのうちの少なくとも１つを含む膣マイクロバイオーム移植片に関する。
【0024】
本発明のさらなる態様は、膣マイクロバイオーム移植片を調製するための方法であって、女性（例えば、ヒト女性または動物の雌）からマイクロバイオーム試料を得る工程、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、または受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒを含む）、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒを含む）、または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒを含む）などの１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種を含むマイクロバイオーム試料から画分を単離する工程、増殖画分を提供する１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種を含む画分を増殖させる工程、および増殖画分を懸濁液、スプレー、ゲル、クリーム、ローション、粉末、カプセル、軟膏、油、洗浄液用溶液、卵形剤（ｏｖｕｌｅ）、膣インサート、坐剤、ロゼンジ、錠剤、マイクロカプセル化製品に製剤化する工程を含む、方法に関する。
【0025】
本発明のさらなる態様は、膣マイクロバイオーム移植片を調製する方法であって、健康な膣微生物叢を有する女性（ヒト女性または動物の雌など）からマイクロバイオーム試料を得る工程、マイクロバイオーム試料から乳酸菌を単離する工程（好ましくは、単離された乳酸菌は、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたは１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉなどの１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種を含み、最も好ましくは、単離された乳酸菌は、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓを含む）、病原性微生物に対して抗菌活性を有する単離された細菌を選択する工程を含む、方法に関する。
【0026】
本発明の一実施形態では、病原性微生物に対して抗菌活性を有する選択された単離された細菌を増殖させることができ、選択された単離された細菌は、懸濁液、スプレー、ゲル、クリーム、ローション、粉末、カプセル、軟膏、油、洗浄液用溶液、卵形剤、膣用インサート、坐剤、ロゼンジ、錠剤、マイクロカプセル化製品に製剤化され得る。
【0027】
本発明のさらに一態様は、女性における機能不全の微生物叢を処置または予防するための方法であって、以下の工程：
１．健康な膣微生物叢を有する女性（ヒト女性など）の膣から乳酸菌を単離する工程、
２．病原性微生物に対して抗菌活性を有する単離された細菌を選択する工程、
３．選択された単離された細菌の１つ以上を含む組成物を調製する工程、および
４．機能不全の膣微生物叢を有する女性の膣に組成物を移植する工程
を含む、方法に関する。
１．健康な膣微生物叢を有する女性（ヒト女性など）の膣から乳酸菌を単離する工程、
２．病原性微生物に対して抗菌活性を有する単離された細菌を選択する工程、
３．選択された単離された細菌の１つ以上を含む組成物を調製する工程、および
４．機能不全の膣微生物叢を有する女性の膣に組成物を移植する工程
を含む、方法に関する。
【0028】
本発明のさらなる態様は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅから選択される単離された細菌株、特に、以下の株、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ、または受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒのうちの少なくとも１つに関する。
【0029】
本発明のさらに一態様は、医薬品として使用するための、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉの種から選択される１つ以上の細菌株を含む組成物に関する。
【0030】
本発明のさらに一態様は、ヒトまたは動物における膣感染症の予防および／または処置に使用するための、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される１つ以上の株から選択される細菌株を含む組成物に関する。
【0031】
本発明の別の態様は、ヒトまたは動物の妊孕性の改善に使用するための、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたは１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される細菌株を含む組成物に関する。
【0032】
本発明のさらに一態様は、ヒトまたは動物の早産のリスクを低減するのに使用するための、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される１つ以上の株から選択される細菌株を含む組成物に関する。
【0033】
本発明のさらなる態様は、バイオフィルム形成の予防、阻害または処置に使用するための、１つ以上の膣単離株、特に受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒおよび／または受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒを含む組成物に関する。
【0034】
本発明のさらに一態様は、本発明による組成物、または本発明による膣マイクロバイオーム移植片、または本発明による単離された細菌株を含む医療機器に関する。
【0035】
本発明のさらに一態様は、本発明による組成物を含む食品成分、飼料成分、および／または個人向け衛生製品に関する。
【図面の簡単な説明】
【0036】
【図1】Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓと妊娠後期の女性の膣から単離されたＬＢ７１４Ｒとの共凝集を示す。
【図2】Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓを阻害することができる適切な乳酸菌、例えば、１つ以上の乳酸菌、例えば、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒまたは受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ）を含むＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種の同定を含む、本発明による組成物または膣微生物叢移植片の好ましい調製物を示す。この方法は、膣感染症または泌尿生殖器感染症の予防または処置のための株の単離および同定のための方法を含む膣微生物叢の移植を含む。特に、本方法は、（ｉ）健康な膣微生物叢を有する女性から乳酸菌を収集する工程、（ｉｉ）健康な膣微生物叢から個々の株を単離する工程、（ｉｉｉ）膣病原性微生物に対する抗菌活性に基づいて単離された株を選択する工程、（ｉｖ）選択された染色を単一培養物として増殖させ、膣移植に適した組成物に製剤化する工程、（ｖ）場合により、組成物に２つ以上の株を混合することによって組成物を増強する工程、および（ｖｉ）機能不全の膣微生物叢を有する女性へ組成物を移植する工程を含む。
【図3】本発明による、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒおよび受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒの共凝集スコアを、Ｃｉｓａｒ，Ｊ．Ｏ．ら（１９７９）に従って決定された薄い灰色の列によって示している。
【図4】Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒの生存細胞および死／不活性化細胞を使用してＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓと共凝集する、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒの能力の顕微鏡画像を示す。
【発明を実施するための形態】
【0037】
発明の詳細な説明
以下、本発明をより詳細に説明する。
以下、本発明をより詳細に説明する。
【0038】
したがって、本発明の発明者らは、ヒトもしくは動物における不健康もしくは機能不全の膣微生物叢を正常化するための抗菌活性、および／または例えば本明細書で定義される表面上のバイオフィルム形成の阻害を有する特定の乳酸菌を見出した。
【0039】
本発明の一実施形態では、動物は、霊長類、家畜、競技用動物、げっ歯類およびペットを含み得るが、これらに限定されない。より具体的には、動物は、マウス、ラット、ハムスターおよびモルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、豚、子豚、雌豚、家禽、七面鳥、ブロイラー、ミンク、ヤギ、ウシ、ウマ、および非ヒト霊長類、例えば類人猿およびサルを含み得る。
【0040】
乳酸菌は、好ましくはプロバイオティクス細菌であり得、好ましくは以前に同定されていないプロバイオティクス細菌であり得る。
【0041】
新たなプロバイオティクス細菌は、下部生殖管における感染数を減少させ、それによって妊孕性を改善し、早産のリスクを低下させ、ＳＴＩのリスクを低下させ得る。
【0042】
下部生殖管は、好ましくは尿路および／または膣を含み得る。膣は、女性生殖管の弾性の筋肉部分であり得る。ヒトでは、膣は外陰部から子宮頸部に延びる。
【0043】
本発明による１つ以上の乳酸菌は、抗菌活性を有していてもよい。
【0044】
本発明による乳酸菌は、粘膜にコロニー形成することができ、および／または病原性膣微生物によるバイオフィルム形成を予防することができ、および／または病原性膣微生物に対して抗菌活性を有することができる。
【0045】
「粘膜（ｍｕｃｏｕｓ ｍｅｍｂｒａｎｅ）」または「粘膜（ｍｕｃｏｓａ）」は、体内の様々な空洞を裏打ちし、内臓の表面を覆う膜である。これは、疎性結合組織の層を覆う上皮細胞の１つ以上の層からなる。それは主に内胚葉起源であり、眼、耳、鼻および口の内側、唇、膣、尿道開口ならびに肛門などの様々な身体開口部で皮膚と連続している。
【0046】
本発明による組成物は、本発明による少なくとも１つの乳酸菌を含む組成物を粘膜に適用することを含む、それを必要とするヒトまたは動物の粘膜状態を処置するために使用され得る。
【0047】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による乳酸菌は、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種、特に１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉもしくは１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ、特にＬ．ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ（ＤＳＭ ３３７３２）、Ｌ．ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ（ＤＳＭ ３４０９５）、Ｌ．ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ（ＤＳＭ ３４０９７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ（ＤＳＭ ３４０９４）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ（ＤＳＭ ３４０９６）、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ種、例えば１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ、例えばＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ（ＤＳＭ ３３７３０）、および／またはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ（ＤＳＭ ３３０９４）などの１つ以上のＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓからなる群から選択され得る。
【0048】
好ましくは、本発明による乳酸菌は、少なくとも１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ（ＤＳＭ ３３７３２）を含み得る。
【0049】
好ましくは、本発明による乳酸菌は、少なくとも１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ（ＤＳＭ ３４０９５）を含み得る。
【0050】
好ましくは、本発明による乳酸菌は、少なくとも１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ（ＤＳＭ ３４０９７）を含み得る。
【0051】
好ましくは、本発明による乳酸菌は、少なくとも１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ（ＤＳＭ ３４０９４）を含み得る。
【0052】
好ましくは、本発明による乳酸菌は、少なくとも１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ、特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ（ＤＳＭ ３４０９６）を含み得る。
【0053】
Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍは、以前はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍと命名されていたものであり、Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ属のメンバーであり、多くの発酵食品および嫌気性植物に一般的に見られる。
【0054】
本発明は、膣感染症を予防および／または処置するための医薬組成物を調製するための本発明による１つ以上の乳酸菌の使用に関する。
【0055】
さらに、本発明は、尿路感染症を予防および／または処置するための医薬組成物を調製するための本発明による１つ以上の乳酸菌の使用に関する。
【0056】
本発明は、ＳＴＩを予防および／または処置するための医薬組成物を調製するための本発明による１つ以上の乳酸菌の使用にも関する。
【0057】
さらに、本発明は、機能不全の膣微生物叢を回復させるための医薬組成物を調製するための本発明による１つ以上の乳酸菌の使用に関する。
【0058】
「機能不全の微生物叢」または「機能不全の膣微生物叢」は、Ｎｕｇｅｎｔスコア、またはｐＨ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ種もしくはＣａｎｄｉｄａ種からなる混合フローラに対するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種の存在を評価することによって、もしくはｐＨ、糸玉状細胞、白色分泌物およびＫＯＨと混合した後のアミンの臭気の存在を評価することを含む細菌性膣炎のＡｍｓｅｌ基準を使用することによって行われる診断のいずれかによって決定することができる。
【0059】
本発明による１つ以上の乳酸菌は、抗生物質処置と組み合わせて機能不全の膣微生物叢を回復させるための、または抗生物質処置後に不均衡な微生物叢を回復させるための組成物を調製するために使用され得る。
【0060】
本発明の一実施形態は、妊孕性を改善するための組成物を調製するための、および／または早産のリスクを低減するための組成物を調製するための、本発明による１つ以上の乳酸菌の使用に関する。
【0061】
本発明による組成物は、医療機器に配合することができる。したがって、本発明による１つ以上の乳酸菌を含む本発明による組成物は、医療機器として使用することができる。
【0062】
本発明による組成物は、有効量の本発明による乳酸菌をヒトまたは動物に投与することを含む、ヒトまたは動物の粘膜における微生物不均衡の処置または予防に使用することができる。
【0063】
本発明のさらに別の態様は、健康な女性の膣微生物叢から乳酸菌を単離する方法であって、以下の工程：
１．健康な膣微生物叢を有する女性から乳酸菌を単離する工程
２．Ｇａｒｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓおよび／またはＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓのいずれかに対して抗菌活性を有する単離された細菌を選択する工程
３．選択された単離された細菌の少なくとも１つを含む組成物を調製する工程、ならびに
４．本発明に従って調製された組成物を使用する工程
を含む、方法である。
１．健康な膣微生物叢を有する女性から乳酸菌を単離する工程
２．Ｇａｒｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓおよび／またはＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓのいずれかに対して抗菌活性を有する単離された細菌を選択する工程
３．選択された単離された細菌の少なくとも１つを含む組成物を調製する工程、ならびに
４．本発明に従って調製された組成物を使用する工程
を含む、方法である。
【0064】
「乳酸菌」という用語は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ科、Ａｅｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科、Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃａｃｅａｅ科およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科からの種を含む。これらの乳酸菌は非病原性であると考えられ、胃腸内フローラを改善するため、および胃腸症状の処置において一般にプロバイオティクス細菌として使用される。「プロバイオティクス」は、適切な量で投与または消費されるときに宿主に健康上の利益を与える、生きた微生物として定義され得る。
【0065】
本発明による乳酸菌は、生存または非生存形態で提供され得る。
【0066】
本発明による非生存細胞は、溶解物として、画分として、発酵物として、代謝産物として、抽出物として、誘導体として、類似体として、ポストバイオティクスとして、パラプロバイオティクスとして、または本発明によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株もしくはＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ株の１つの変異体として提供され得る。好ましくは、本発明によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓである。
【0067】
「溶解物」、「誘導体」、「類似体」、「画分」、「ポストバイオティクス」、「パラプロバイオティクス」または「抽出物」は、死んだまたは死滅した乳酸菌から得ることができる。これらの溶解物、画分、誘導体、類似体、および抽出物は、好ましくは、病原性細菌と結合または共凝集することができ、それによって病原体の増殖および／またはバイオフィルム形成を予防することができるという特性を有し、「溶解物」および「抽出物」という用語は、特に、水性媒体中の本発明による微生物の細胞および／または代謝産物の溶液または懸濁液を指し、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、ペプチド、脂質、炭水化物、細胞壁物質などの巨大分子、ならびに細胞破片を含む。溶解物は、好ましくは、共凝集のための結合受容体を含む細胞壁または細胞壁構成成分を含む。溶解物を製造する方法は、当業者に十分に周知であり、例えば、フレンチプレスまたは酵素溶解、ガラスビーズまたは鉄ビーズを有するボールミルの使用を含む。細胞は、酵素的、物理的または化学的方法によって破壊することができる。酵素細胞溶解の例としては、個々の酵素ならびに酵素カクテル、例えばプロテアーゼ、プロテイナーゼＫ、リパーゼ、グリコシダーゼが挙げられ得る。化学的溶解は、イオノフォア、界面活性剤、例えばＳＤＳ、酸または塩基によって誘導され得る。物理的方法は、高圧、例えばフレンチプレス、オスモル濃度、温度、または交互に高温および低温とすることを使用することによって実施することもできる。さらに、化学的、物理的および酵素的方法を当然組み合わせることができる。「抽出物」は、これらの細胞成分、代謝産物、発酵物、または細胞画分のいずれかであり得る。
【0068】
別の態様では、本教示は、生存微生物を実質的に含まない組成物を開示する。組成物は、溶解物または発酵物の形態の死細胞を含む細胞材料を含むことができる。本発明の一態様では、組成物は、発酵からの上清およびさらなる機能的効果を有する細胞材料を含む。本発明の一態様では、細胞材料は、標的病原体と共凝集するか、または標的病原体を阻害することができる。
【0069】
本発明による微生物は、好ましくは単離または精製形態であり、「単離」という用語は、特に乳酸菌がそれらの天然培地を含むそれらの培地に由来することを意味する。
【0070】
本発明の一実施形態は、病原性微生物の増殖の処置、緩和、抑制、予防、および／または防止に使用するための、本発明による生きた乳酸菌を含む組成物に関する。
【0071】
好ましくは、本発明は、ヒトまたは動物における１つ以上の病原性細菌感染症の処置、緩和、抑制、予防および／または防止に使用するための本明細書で定義される組成物を提供し得る。
【0072】
好ましくは、本発明は、ヒトまたは動物における１つ以上の真菌または細菌感染症の処置、緩和、抑制、予防および／または防止に使用するための本明細書で定義される組成物を提供し得る。より好ましくは、本発明は、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓまたはその両方から選択される病原性微生物の増殖の処置、緩和、抑制、予防および／または防止に使用するための本明細書で定義される組成物を提供し得る。
【0073】
本発明の一実施形態では、増殖の処置、緩和、抑制、予防および／または防止は、少なくとも２５％の増殖の減少として決定され得る。好ましくは、成長の減少は少なくとも５０％であり得、より好ましくは成長の減少は少なくとも８０％であり得、より好ましくは成長の減少は少なくとも９０％であり得る。
【0074】
したがって、本発明の一態様は、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒを含む組成物に関する。
【0075】
したがって、本発明の一態様は、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒを含む組成物に関する。
【0076】
したがって、本発明の一態様は、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒを含む組成物に関する。
【0077】
したがって、本発明の一態様は、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒを含む組成物に関する。
【0078】
したがって、本発明の一態様は、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒを含む組成物に関する。
【0079】
本発明の一実施形態では、組成物は、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（例えば、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）、および／または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（好ましくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、例えばＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ（受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託）から選択される乳酸菌株をさらに含み得る。
【0080】
好ましくは、本発明による組成物は、受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒをさらに含み得る。
【0081】
したがって、本発明の一実施形態では、本発明による組成物は、
－１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｕｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（好ましくは、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ）、
－１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（好ましくは、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）、および
－１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（好ましくは受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ））
の組み合わせを含む。
－１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｕｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（好ましくは、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ）、
－１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（好ましくは、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）、および
－１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（好ましくは受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ））
の組み合わせを含む。
【0082】
本発明の一実施形態では、組成物はバイオフィルム形成を予防または阻害する。
【0083】
本発明のさらに一実施形態では、組成物はバイオフィルム形成を予防または阻害する。特に、本発明の組成物は、１つ以上の細菌のバイオフィルム形成を予防または阻害する。より具体的には、本発明の組成物は、病原性Ｇａｒｎｅｒｅｌｌａ種のバイオフィルム形成を予防または阻害する。さらにより具体的には、本発明の組成物は、Ｇａｒｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓのバイオフィルム形成を防止または阻害する。
【0084】
本文脈において、バイオフィルム形成の阻害は、少なくとも２５％のバイオフィルム阻害、例えば少なくとも５０％のバイオフィルム阻害、例えば少なくとも７５％のバイオフィルム阻害、例えば少なくとも８５％のバイオフィルム阻害、例えば少なくとも９０％のバイオフィルム阻害、例えば少なくとも９５％のバイオフィルム阻害、例えば少なくとも９８％のバイオフィルム阻害であり得る。
【0085】
「予防する」という用語は当技術分野で認識され、局所再発などの状態に関連して使用される場合、当技術分野で十分に理解され、組成物を受けていない対象と比較して、対象における医学的状態の症状の頻度を減少させるか、またはその発症を遅延させる組成物の投与を含む。したがって、感染の予防には、例えば、予防的処置を受けている患者の集団における検出可能な病原性微生物の数を未処置の対照集団と比較して減少させること、および／または未処置の対照集団と比較して、例えば統計的および／または臨床的に有意な量だけ、処置集団における検出可能な病変の出現を遅延させることが含まれる。
【0086】
本明細書で使用される「阻害」または「阻害する」という用語は、望ましくない微生物などの微生物の死滅または当該微生物の増殖の制御を意味する。微生物の初期付着の阻害またはバイオフィルム形成微生物の増殖阻害によるバイオフィルムのさらなる形成の阻害であり得るバイオフィルム形成の阻害を含む。
【0087】
本発明の発明者らは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（ＬＢ７１４Ｒ／ＤＳＭ ３３７３２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ（ＬＢ９０５Ｒ／ＤＳＭ ３４０９４）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（ＬＢ９１２Ｒ／ＤＳＭ ３４０９５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ（ＬＢ９１８Ｒ／ＤＳＭ ３４０９６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（ＬＢ９１９Ｒ／ＤＳＭ ３４０９７）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ（ＬＢ６０６Ｒ／ＤＳＭ ３３７３０）および Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＬＢ３５６Ｒ／ＤＳＭ ３３０９４）の特定の株を同定および単離し、バイオフィルム形成の阻害もしくは予防のような、および／または機能不全の膣微生物叢の処置のための、特定の株によって提供される１つ以上の特定の活性を同定した。
【0088】
本明細書で使用される場合、「処置する」または「処置」という用語は、対象の状態を改善または安定化する方法で、状態の症状、臨床徴候、および基礎病理を逆転、低減、または停止することを含む。
【0089】
本明細書で使用される場合、および当技術分野でよく理解されているように、「処置」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。この主題の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、１つ以上の症状の緩和もしくは改善、疾患の程度の縮小、疾患の安定化（すなわち、悪化しない）状態、疾患の予防、疾患の進行の遅延もしくは遅延、および／または疾患状態の改善もしくは軽減が含まれるが、これらに限定されない。
【0090】
減少は、合併症または症状の重症度の１０％の減少、合併症または症状の重症度の２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の減少であり得る。
【0091】
本発明の一実施形態では、本発明による組成物は、表面上のバイオフィルム形成を阻害または予防するために使用され得る。好ましくは、表面は、病院内の表面、および／または医療機器の表面であってもよい。
【0092】
本発明のさらに一実施形態では、本発明による組成物は、ヒトまたは動物の身体内または身体上のバイオフィルム形成を阻害するために使用され得る。
【0093】
本文脈において、バイオフィルム形成は、１つ以上の微生物によって産生され得る。特に、１つ以上の微生物は細菌であり得る。１つ以上の細菌は、１つ以上の病原性Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ種であり得る。１つ以上の病原性ガードネレラ種は、１つ以上のＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓであり得る。
【0094】
本発明の一実施形態では、組成物は、経口使用、局所使用、肛門での使用または生殖器での使用のために製剤化され得る。
【0095】
好ましくは、本発明による組成物は、経口または生殖器での使用のために製剤化される。さらにより好ましくは、本発明による組成物は、生殖器での使用のために製剤化される。
【0096】
本発明の一実施形態では、生殖器使用は、男性生殖器での使用、または女性生殖器での使用、例えば膣および／または泌尿器での使用であり得る。
【0097】
本発明の組成物の局所使用中、組成物は、ヒトまたは動物の皮膚、粘膜、または爪に使用され得る。
【0098】
組成物は、懸濁液、スプレー、ゲル、クリーム、ローション、粉末、カプセル、軟膏、油、洗浄液用溶液、卵形剤、膣用インサート、坐剤、ロゼンジ、錠剤、マイクロカプセル化製品、または食品サプリメントもしくは食品の形態に製剤化されてもよい。当業者は、そのような製剤を調製する方法を知っているであろう。
【0099】
本発明の一実施形態では、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株、特に１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（例えば、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）、および場合により、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（例えば寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）、および／または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（例えば、受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ）は、生存細胞として、非生存細胞として、溶解物として、画分として、発酵物として、代謝産物として、抽出物として、誘導体として、類似体として、または本発明によるＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株もしくはＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ株の１つの変異体として提供され得る。
【0100】
好ましくは、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（例えば、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）、および場合により、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（例えば寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）、および／または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（例えば、受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ）は、生存細胞、非生存細胞、細胞画分または溶解物として提供され得る。
【0101】
本発明によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および／またはＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ株のいずれかの変異体は、以下のいずれかの株：受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下でＧｅｒｍｅｎａ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓに寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ ６０６または受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒの１つの変異体を得る方法であって、寄託された株を出発材料として使用する工程と突然変異誘発を適用する工程とを含み、得られた突然変異体が、プロバイオティクスおよび／もしくは抗細菌および／もしくは抗真菌および／もしくは抗菌特性、ならびに／または細菌性および／もしくは真菌性膣炎を阻害、予防もしくは処置する能力を保持または増強する方法によって、提供され得る。
【0102】
本発明の一実施形態では、組成物は、１つ以上のプレバイオティクスをさらに含む。
【0103】
「プレバイオティクス」は、特定の微生物の増殖を増加させる非消化性食品成分である。「シンバイオティクス」は、少なくとも１つのプロバイオティクスおよび少なくとも１つのプレバイオティクスを含む組成物である。そのような組成物は、有益な細菌（例えば、プロバイオティクス）の増殖を促進すると理解される。したがって、強力なシンバイオティクスは、プロバイオティクス細菌の特定の株と慎重に選択されたプレバイオティクスとの組み合わせをベースとする。それらは、ヒトまたは動物に重要な健康上の利益をもたらすことができる。
【0104】
プレバイオティクスは、宿主の福祉に寄与する共生微生物（例えば、細菌および真菌）の増殖および／または活性を誘導する化学製品を指す。プレバイオティクスは、宿主によって消化されないかまたは部分的に消化されず、宿主にコロニー形成する有利な細菌の増殖および／または活性を刺激する、非消化性炭水化物である。
【0105】
プレバイオティクスとして使用されるいくつかのオリゴ糖は、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、キシロオリゴ糖（ＸＯＳ）、ポリデキストロース、ペクチン、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）またはヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）である。さらに、ラクツロースまたはラクトースのような二糖類、タガトースのようないくつかの単糖類もプレバイオティクスとして使用することができる。
【0106】
本発明の一実施形態では、プロバイオティクス微生物（例えば、本発明による乳酸菌）および少なくとももう１つの活性成分を含み、場合によりプレバイオティクス微生物と組み合わせた組成物を提供してもよい。
【0107】
他の活性成分（または他の成分）は、決して限定されない。
【0108】
好ましい態様では、少なくとも１つのプレバイオティクス化合物が、本発明の組成物中に、すなわち他の成分として含まれる。非常に広い概念では、プレバイオティクスは、プロバイオティクスによって代謝され得る全ての化合物である。好ましくは、プレバイオティクスは、ヒトまたは動物によって消化されないか、またはほとんど消化されない。プレバイオティクスは当技術分野で周知であり、本発明で使用される場合、プレバイオティクス自体に特に制限はない。しかしながら、好ましい実施形態では、組成物中の少なくとも１つのプレバイオティクス製品は、以下の化合物および組成物から選択される：非消化性炭水化物、β－グルカン、マンナンオリゴ糖、イヌリン、オリゴフルクトース、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、ラクツロース、ラクトスクロース、ガラクトトリオース、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、セロビオース、セロデキストリン、シロデキストリン（ｃｙｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ）、マルチトール、ラクチトール、グリコシルスクロース。場合により、マンナンオリゴ糖および／またはイヌリンが好ましい場合がある。
【0109】
ＨＭＯは、ラクト－Ｎ－テトラオース、ラクト－Ｎ－フコペンタオース、ラクト－Ｎ－トリオース、３´－シアリルラクトース、ラクト－Ｎ－ネオフコペンタオース、シアル酸、Ｌ－フコース、２－フコシルラクトース、６´－シアリルラクトース、ラクト－Ｎ－ネオテトラオースおよび３－フコシルラクトースを含む。
【0110】
Ｄ－フコースおよびＬ－フコースは、皮膚の自然防御を強化し、表皮免疫防御を刺激し、ならびに／または皮膚自己免疫疾患を予防および／もしくは処置する。本発明の好ましい一実施形態では、組成物はＤ－またはＬ－フコースを含む。
【0111】
本発明の一実施形態では、組成物は、１ｍＭ～１０００ｍＭの範囲、例えば１０ｍＭ～５００ｍＭの範囲、例えば２５ｍＭ～２５０ｍＭの範囲の濃度でＬ－フコースをさらに含む。
【0112】
好ましくは、本発明による組成物は、グラム当たり１０３～１０１３コロニー形成単位の本発明による乳酸菌を含む。より具体的には、グラム当たり１０６～１０１２コロニー形成単位の乳酸菌を含む医薬組成物。より具体的には、グラム当たり１０７～１０１１コロニー形成単位の乳酸菌を含む医薬組成物。
【0113】
微生物の数はコロニー形成単位ＣＦＵ／ｍｌとして測定され得る。
【0114】
本発明の一実施形態では、組成物は医薬組成物であり得る。好ましくは、本発明による１つ以上の乳酸菌を薬学的に許容される担体および／または希釈剤と共に含む医薬組成物。
【0115】
医薬組成物は、懸濁液、スプレー、ゲル、クリーム、ローション、粉末、カプセル、油、洗浄液用溶液、卵形剤、膣用インサート、坐剤、ロゼンジ、錠剤、マイクロカプセル化製品の形態であってもよい。
【0116】
組成物には、治療有効量の乳酸菌、特に１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、または受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ）、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ）、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）が提供され得る。
【0117】
本発明の文脈において、「処置有効量」または「有効量」という用語は、所望の投与レジメンの一部として投与された場合に、処置される障害もしくは状態または美容目的のための臨床的に許容される基準に従って、例えば任意の医療処置に適用可能な合理的な利益リスク比で、症状を緩和する、状態を改善する、または疾患状態の発症を遅らせる組成物または製剤中の化合物の量を指し得る。
【0118】
実際の使用のために、本発明の微生物は、ゲル、クリーム、カプセル、錠剤、洗浄液用溶液、小袋、任意の食品などの適切な投与形態で製剤化され得る。単位用量は、各単一株の１０～１０１３個の細胞を含み得、好ましい用量は単位用量あたり１０５個の細胞を超える。より好ましい投与量は、単位投与量当たり１０６個の細胞を超える。
【0119】
細菌培養物は、フリーズドライ、凍結乾燥またはマイクロカプセル化形態で安定化され得、従来の方法に従って調製され得る。
【0120】
洗浄および灌注のための水性製剤の調製には、二相系を使用することができる。例えば、使用前にボトルに収容された適切な液体担体に溶解される、凍結乾燥微生物を収容するリザーバを備えた小型ボトル。
【0121】
クリームおよびゲルの調製のために、乳酸菌は製剤中で安定化される。水分活性が低いか、またはマイクロカプセル化形態である製剤が好ましい。
【0122】
本発明のさらに一実施形態では、組成物は膣マイクロバイオーム移植片であり得る。
【0123】
膣マイクロバイオーム移植は、健康な女性から不健康な膣微生物叢または機能不全の膣微生物叢への微生物叢の移植であり得る。したがって、本発明の一実施形態では、膣マイクロバイオーム移植片は、健康な女性から、特に健康な女性の膣から得ることができ、別の女性に移され、特に別の女性、好ましくは不健康な膣微生物叢または機能不全の膣微生物叢を有する別の女性の膣に移される。
【0124】
本発明の一実施形態では、膣マイクロバイオーム移植片は、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒを特に含む、少なくとも１つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株を含み得る。
【0125】
膣マイクロバイオーム移植片は、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（例えば、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）から選択される乳酸菌株をさらに含み得る。
【0126】
膣マイクロバイオーム移植片は、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（例えば、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３１の下で寄託されたＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ６７９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３２９９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ、およびこの任意の組み合わせ）から選択される乳酸菌株をさらに含み得る。
【0127】
好ましくは、膣マイクロバイオーム移植片は、懸濁液、スプレー、ゲル、クリーム、ローション、粉末、カプセル、油、洗浄液用溶液、卵形剤、膣用インサート、坐剤、ロゼンジ、錠剤、マイクロカプセル化製品として、または食品サプリメントもしくは食品の形態で製剤化され得る。
【0128】
本発明の一実施形態では、本発明による組成物および／または膣マイクロバイオーム移植片は、抗生物質化合物を含まない。
【0129】
抗生物質化合物は、そのような化合物が健康な細菌および病原性細菌の両方を非特異的に死滅させる可能性があり、したがって所望の健康な微生物叢も破壊するので、本発明による組成物および／または膣マイクロバイオーム移植片に含まれないことが好ましい場合がある。
【0130】
抗生物質化合物は、細菌の増殖を阻害することによって、または細菌を死滅させることによって、細菌の増殖に対して活性である抗菌物質の一種である。
【0131】
本発明による膣マイクロバイオーム移植片は、膣マイクロバイオーム移植片を調製する方法であって、女性（例えば、ヒト女性または動物の雌）からマイクロバイオーム試料を得る工程、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、または受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒを含む）、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ）または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）などの１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種を含むマイクロバイオーム試料から画分を単離する工程、増殖画分を提供する１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種を含む画分を増殖させる工程、および増殖画分を懸濁液、スプレー、ゲル、クリーム、ローション、粉末、カプセル、軟膏、油、洗浄液用溶液、卵形剤、膣インサート、坐剤、ロゼンジ、錠剤、マイクロカプセル化製品に製剤化する工程とを含む方法によって調製することができる。
【0132】
本発明の一実施形態では、マイクロバイオーム試料を得ることができる女性は、好ましくは妊婦である。好ましくは、妊婦は、マイクロバイオーム試料を得ることができる場合、出産から７ヶ月以下、例えば５ヶ月以下、例えば３ヶ月以下、例えば１ヶ月以下、例えば２０日以下、例えば１０日以下、例えば５日以下である。
【0133】
本発明は、女性における機能不全の微生物叢を処置または予防するための方法であって、以下の工程：
１．健康な膣微生物叢を有する女性（ヒト女性など）の膣から乳酸菌を単離する工程、
２．病原性微生物に対して抗菌活性を有する単離された細菌を選択する工程、
３．選択された単離された細菌の１つ以上を含む組成物を調製する工程、および
４．機能不全の膣微生物叢を有する女性の膣に組成物を移植する工程
を含む、方法に関する。
１．健康な膣微生物叢を有する女性（ヒト女性など）の膣から乳酸菌を単離する工程、
２．病原性微生物に対して抗菌活性を有する単離された細菌を選択する工程、
３．選択された単離された細菌の１つ以上を含む組成物を調製する工程、および
４．機能不全の膣微生物叢を有する女性の膣に組成物を移植する工程
を含む、方法に関する。
【0134】
さらに、本発明は、第１の乳酸菌株および第２の乳酸菌株の組み合わせを含む（または本質的にそれらからなる）組成物に関し、第１の乳酸菌株はＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓの阻害を特徴とし得、第２の乳酸菌株はＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの阻害を特徴とし得る。
【0135】
本発明の一実施形態では、第１の株と第２の株の組み合わせを含む組成物は、膣マイクロバイオーム移植に使用される膣マイクロバイオーム移植片であり得る。
【0136】
本発明はまた、膣移植用の１つ以上の乳酸菌株を選択する方法であって、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第１の乳酸菌株を選択する工程、およびＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第２の株を選択する工程を含む、方法に関する。
【0137】
第１乳酸菌株および第２乳酸菌株は、同一の乳酸菌株であってもよいし、異なる乳酸菌株であってもよい。好ましくは、第１の乳酸菌株および第２の乳酸菌株は、異なる乳酸菌株であり得る。
【0138】
第１の株は、１つ以上の乳酸菌を含み得る（または本質的にそれからなり得る）。好ましくは、１つ以上の第１の株の乳酸菌は、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｕｌｌｕｓ株（好ましくは、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（好ましくは、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（好ましくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、例えばＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ（受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ（受託番号ＤＳＭ ３２９９６の下で寄託）、またはこれらの任意の組み合わせから選択され得る。第１の株は、好ましくは、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｕｌｌｕｓ株、好ましくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（例えば、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、または受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ（例えば、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ）またはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ（受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）から選択される１つ以上の乳酸菌を含み得る（または本質的にそれらからなり得る）。
【0139】
第２の株は、１つ以上の乳酸菌を含み得る（または本質的にそれからなり得る）。好ましくは、１つ以上の第２の株の乳酸菌は、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（好ましくは、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（好ましくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、例えばＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ（受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託）、またはこれらの任意の組み合わせから選択され得る。
【0140】
第２の株は、好ましくは、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株、特に寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒから選択される１つ以上の乳酸菌を含み得る（または本質的にそれらからなり得る）。
【0141】
好ましくは、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓおよび／またはＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの阻害は、本明細書に記載されるバイオフィルム形成の阻害減少によって決定され得る。
【0142】
本発明はまた、第１の乳酸菌株および第２の乳酸菌株の組み合わせを含む組成物を提供するための方法であって、
（ａ）Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第１の乳酸菌株を選択する工程、
（ｂ）Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第２の乳酸菌株を選択する工程、および
（ｃ）工程（ａ）で得られた選択された少なくとも１つの第１の乳酸菌株を工程（ｂ）で得られた選択された少なくとも１つの第２の乳酸菌株と混合し、第１の乳酸菌株と第２の乳酸菌株の組み合わせを含む組成物を提供する工程
を含む、方法に関する。
（ａ）Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第１の乳酸菌株を選択する工程、
（ｂ）Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第２の乳酸菌株を選択する工程、および
（ｃ）工程（ａ）で得られた選択された少なくとも１つの第１の乳酸菌株を工程（ｂ）で得られた選択された少なくとも１つの第２の乳酸菌株と混合し、第１の乳酸菌株と第２の乳酸菌株の組み合わせを含む組成物を提供する工程
を含む、方法に関する。
【0143】
本発明の一実施形態では、単離された細菌が上記方法の抗菌活性工程２を示す病原性微生物は、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓまたはその両方から選択され得る。
【0144】
本発明の好ましい実施形態は、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒを特に含む、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種から選択される単離された細菌株に関する。
【0145】
本発明による微生物は、好ましくは単離または精製形態であり得、「単離」という用語は、例えば、特に乳酸菌がそれらの天然培地を含むそれらの培地に由来することを意味する。「精製」という用語は、絶対純度に限定されない。
【0146】
本発明の好ましい実施形態は、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒを特に含むＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種から選択される単離された細菌株であって、抗菌活性を示す単離された細菌株に関する。
【0147】
抗菌活性は、ヒトもしくは動物における不健康または機能不全の膣微生物叢を正常化すること、および／または本明細書で定義される表面上のバイオフィルム形成の阻害であり得る。特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒを特に含むＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種から選択される単離された細菌株は、１つ以上の細菌のバイオフィルム形成を阻害し得る。より具体的には、単離された株は、病原性Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ種のバイオフィルム形成を阻害し得る。さらにより具体的には、単離された株はＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓのバイオフィルム形成を阻害し得る。
【0148】
抗菌活性は、性感染症（ＳＴＩ）、膣感染症（細菌性膣炎など）または子宮頸部感染症（淋病またはクラミジアなど）の処置を含み得る。細菌性膣炎であっても、性感染症と直接みなされない場合があり、性感染症の発生率を増加させる場合があり、細菌性膣炎の処置は、少なくとも性感染症の間接的な処置とみなされる場合がある。
【0149】
本発明の好ましい実施形態は、医薬品として使用するための、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ種から選択される１つ以上の細菌株を含む組成物に関する。
【0150】
本発明のさらに好ましい実施形態は、医薬品として使用するためのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ種から選択される１つ以上の細菌株を含む組成物に関する。
【0151】
本発明のさらに好ましい実施形態では、医薬品として使用するためのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ種から選択される１つ以上の細菌株を含む組成物に関する。
【0152】
本発明の一実施形態は、医薬品として使用するための、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、または受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒを含む組成物に関する。
【0153】
本発明のなおさらなる実施形態では、医薬品として使用するための、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される１つ以上の細菌株から本質的になる組成物。
【0154】
好ましくは、医薬品として使用するための、以下の株、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、または受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒの少なくとも１つから本質的になる組成物。
【0155】
本発明の文脈において、「から本質的になる」という用語は、特定の特徴または工程、および言及されておらず、特許請求される発明の基本的かつ新たな特徴に実質的に影響を及ぼさない特徴または工程に対する特許請求の範囲の限定に関する。
【0156】
本発明の好ましい実施形態は、ヒトまたは動物における膣感染症の予防および／または処置に使用するための、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓから選択される細菌株を含む組成物に関する。
【0157】
本発明の好ましい実施形態は、ヒトまたは動物における膣感染症の予防および／または処置に使用するための、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉから選択される細菌株を含む組成物に関する。
【0158】
本発明の好ましい実施形態は、ヒトまたは動物における膣感染症の予防および／または処置に使用するための、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される細菌株を含む組成物に関する。
【0159】
本発明による組成物は、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および／または１つ以上のＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ株から選択される１つ以上の細菌株をさらに補充することができる。１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および／または１つ以上のＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ株とのこの組み合わせは、ヒトまたは動物における膣感染症の予防および／または処置における組成物の効果をさらに改善し得る。
【0160】
本発明による組成物は、膣のｐＨ値を低下させ得る。本発明の一実施形態では、膣のｐＨは、ｐＨ６以下のｐＨ値、例えばｐＨ５以下のｐＨ値、例えばｐＨ４．５以下のｐＨ値、例えばｐＨ４以下のｐＨ値、例えばｐＨ３～５の範囲、例えばｐＨ３．５～４．５の範囲のｐＨ値に低下する。
【0161】
膣感染症は、細菌性膣炎、膣の微生物の不均衡、尿路感染症、妊孕性の低下、および／または早産のリスクの増加を含むか、またはこれらを引き起こし得る。
【0162】
本発明の一実施形態は、細菌性膣炎の予防および／または処置に使用するための組成物に関する。
【0163】
本発明のさらなる実施形態は、膣の微生物不均衡の予防および／または処置に使用するための組成物に関する。
【0164】
さらに、本発明の一実施形態は、尿路感染症の予防および／または処置に使用するための組成物に関する。
【0165】
本発明の好ましい実施形態は、ヒトまたは動物の妊孕性の改善に使用するための、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたは１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される細菌株を含む組成物に関する。
【0166】
本発明の更に好ましい実施形態は、ヒトまたは動物の早産のリスクを低減するのに使用するための、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたは１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される細菌株を含む組成物に関する。
【0167】
本発明の一実施形態では、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（特に、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）および／または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３２９９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒおよび／または）を含む組成物は、ヒトもしくは動物の妊孕性の改善および／またはヒトもしくは動物の早産のリスクを低減するのに使用され得る。
【0168】
好ましくは、ヒトまたは動物における細菌性膣炎の予防および／または処置は、細菌性膣炎の膣予防および／もしくは処置、細菌性膣炎の口腔予防および／もしくは処置、ならびに／または細菌性膣炎の腸内予防および／もしくは処置であり得る。
【0169】
本発明は、ヒトまたは動物における膣感染症の予防および／または処置に使用するための、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）および１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（特に、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ、および／または受託番号ＤＳＭ ３２９９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ）から本質的になる組成物に関し得る。
【0170】
本発明の好ましい実施形態は、バイオフィルム形成の予防、阻害または処置に使用するための、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）を含む組成物に関する。
【0171】
バイオフィルム形成は、細菌バイオフィルム形成または酵母もしくは真菌バイオフィルム形成、例えば病原性Ｇａｒｎｅｒｅｌｌａ種バイオフィルム形成、特にＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓバイオフィルム形成であり得る。
【0172】
本発明の一実施形態では、本発明による組成物は、細菌バイオフィルム形成、真菌バイオフィルム形成および／または酵母バイオフィルム形成の予防、阻害または処置に使用するための、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（特に、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ、および／または受託番号ＤＳＭ ３２９９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ）と組み合わせた、本発明による１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）を含み得る。
【0173】
そのような酵母バイオフィルム形成は、１つ以上の病原性Ｃａｎｄｉｄａ種、特にＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓによって提供される酵母バイオフィルム形成であり得る。
【0174】
本発明による組成物は、場合により１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（特に、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ、および／または受託番号ＤＳＭ ３２９９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ）と組み合わせた、本発明による１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）から本質的になり得る。
【0175】
本発明の一実施形態では、組成物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓに加えて、細菌、酵母またはカビからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるプロバイオティクス微生物を含む。
【0176】
少なくとも１つのさらなるプロバイオティクス微生物は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ ＤＳＭ１０１４０、Ｂ．ｌａｃｔｉｓ ＬＫＭ５１２、Ｂ．ｌａｃｔｉｓ ＤＳＭ ２０４５１、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ ＢＢ－２２５、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ＢＢ－１０２、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ＢＢ－３０８、財団法人日本ビフィズス菌センター（Ｊａｐａｎ Ｂｉｆｉｄｕｓ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｃｅｎｔｅｒ）からのＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＢＢ－５３６、欧州特許第２８２３８２２号に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＮＣＩＭＢ ４１６７５、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ ＢＢ－２２５、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ＢＢ－１０２、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ＢＢ－３０８、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ ＨＮ０１９（Ｈｏｗａｒｕ）、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ Ｂｂ－０２、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ Ｂｂ－０６、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＫＣ－１、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ９１３、Ｂ．ｌａｃｔｉｓ ＢＩ－０４、ＤｕＰｏｎｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡｐＳから入手可能なＢ．ｌａｃｔｉｓ Ｂｉ－０７、Ｇｒｏｕｐｅ Ｄａｎｏｎｅから入手可能なＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ ＤＮ １７３０１０、Ｃｈｒ Ｈａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから入手可能なＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ Ｂｂ－１２、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ Ｍ－１６Ｖ（Ｍｏｒｉｎａｇａ）および／またはプロバイオティクス効果を有し以下のいずれかの株であり得るＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＧＧ（Ｃｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＮ４０、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＥＢ０１ＴＭ、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＰＢ０１ＴＭ Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＮ１１３、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＬＮ９９、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＣＦＭ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ １２６０、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ Ｌｐｃ－３７、ＤｕＰｏｎｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡｐＳから入手可能なＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＨＮ００１、ＤｕＰｏｎｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡｐＳから入手可能なＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ７１５およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＴ２１、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ ＣＲＬ４３１（ＡＴＣＣ ５５５４４）、Ｍｅｄｉｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．からのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ株Ｆ－１９、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ ＬＡＦＴＩ Ｌ２６（（ＤＳＭ Ｆｏｏｄ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ、ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）およびＬ．ｐａｒａｃａｓｅｉ ＣＲＬ ４３１（Ｃｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＰＴＡ－４７９７、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ Ｌｓ－３３ およびＬ．ｃｕｒｖａｔｕｓ ８５３（ＤｕＰｏｎｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡｐＳ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ ＣＥＣＴ ７５０４、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ（Ｐｒｏｂｉ ＡＢ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＭＣ１（ＤＳＭ ３２２５２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＬＭＣ４（ＤＳＭ ３２２５４）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＭＣ６（ＤＳＭ ３２２５６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＭＣ７（ＤＳＭ ３２２５７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＬＭＣ８（ＤＳＭ ３２２５８）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｓｐ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＣ７０５は、フィンランド特許９２４９８、Ｖａｌｉｏ Ｏｙに記載されており、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＣ７０５（ＤＳＭ ７０６１）、プロピオン酸菌、例えばフィンランド特許９２４９８、Ｖａｌｉｏ Ｏｙに詳細に記載されているＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ｓｓｐ．ｓｈｅｒｍａｎｉｉ ＰＪＳ（ＤＳＭ ７０６７）、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｅｕｔｒｏｐｈａ Ｄ２３（ＡＢＩｏｍｅ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ株Ａ９、Ｃ２、ＡＭＴ２、ＡＭＴ３、ＡＭＴ４－Ｃ２、ＡＭＴ４－Ｇｌおよび／もしくはＡＭＴ４－Ｄ１２（全てＭａｔｒｉｓｙｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ 株Ｍ０３４、Ｍ０３８、Ａｌｌ、ＡＭＴ１、ＡＭＴ５－Ｃ５および／もしくはＡＭＴ５－Ｇ６（全てＭａｔｒｉｓｙｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから）、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＹＵＮ－Ｖ２．０（ＢＣＣＭ ＬＭＧ Ｐ－２９４５６）、Ｌ．ｐｅｎｔｏｓｕｓ ＹＵＮ－Ｖ１．０（ＢＣＣＮ ＬＭＧ Ｐ－２９４５５）、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＹＵＮ－Ｓ１．０（ＢＣＣＭ ＬＭＧ Ｐ－２９６１）ならびに／またはこの任意の組み合わせから選択され得るが、これらに限定されない。
【0177】
あるいは、組成物は、本発明によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓに加えて、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ（ＤＳＭ ３３７３０）、Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ６７９Ｒ（ＤＳＭ ３３７３１）、Ｗｅｉｓｅｌｌａ ｖｉｒｉｄｅｓｃｅｎｓ ＬＢ１０Ｇ（ＤＳＭ ３２９０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＬＢ１１３Ｒ（ＤＳＭ ３２９０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＬＢ１１６Ｒ（ＤＳＭ ３２９０８）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＬＢ２８Ｒ（ＤＳＭ ３２９９４）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ＬＢ１５２Ｇ（ＤＳＭ ３２９９５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ（ＤＳＭ ３２９９６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３１６Ｒ（ＤＳＭ ３３０９１）および Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ（ＤＳＭ ３３０９４）からなる群から選択される少なくとももう１つの乳酸菌を含み得る。
【0178】
好ましい実施形態では、組成物は、本発明によるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓに加えて、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ（特に、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ（ＤＳＭ ３３７３０））およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（特に、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ（ＤＳＭ ３３０９４）および／または受託番号ＤＳＭ ３２９９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ）を含む。
【0179】
本発明の好ましい実施形態は、本発明による組成物、または本発明による膣マイクロバイオーム移植片、または本発明による単離された細菌株を含む医療機器に関する。
【0180】
本発明による医療機器は、懸濁液、スプレー、ゲル、クリーム、ローション、粉末、カプセル、軟膏、油、洗浄液用溶液、卵形剤、膣用インサート、坐剤、ロゼンジ、錠剤、マイクロカプセル化製品に製剤化されてもよい。
【0181】
バイオフィルム形成は、環境中でのバイオフィルム形成を予防する方法であって、バイオフィルムがＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓなどのＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ種（および／または場合によりｃａｎｄｉｄａ種）を含み、抗菌活性を有する有効量の乳酸菌を環境に投与する工程を含み、環境が、家庭、職場、実験室、工業環境、水生環境、医療機器、歯科機器、上皮細胞、粘膜である、方法によって予防することができる。
【0182】
乳酸菌は、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ）、１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（特に、寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）および／または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ、および／または受託番号ＤＳＭ ３２９９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ）を含み得る。
【0183】
本発明による組成物および／または本発明の１つ以上の単離された細菌株は、外科的創傷、褥瘡性潰瘍、カテーテル、ステント、心臓循環装置、人工装具、人工装具挿入、耳鼻科、整形外科および歯科用人工装具、ねじおよび釘からの感染症、口腔感染症ならびに口腔粘膜および膣粘膜の感染症、局所感染症、耳炎、鼻洞炎、咽頭炎、喉頭炎および肺炎から生じた１つ以上の処置に使用され得る。
【0184】
本発明の一実施形態では、本発明による組成物および／または本発明の１つ以上の単離された細菌株は、抗生物質耐性微生物に対して有効であり得る。特に、抗生物質耐性感染症に対して有効である。
【0185】
本発明の一実施形態では、プロバイオティクス株は、安定化された形態の生きている単離された微生物として使用され得る。安定化のための適切な方法は当業者に公知であり、フリーズドライ、または異なる凍結保護剤を伴う凍結乾燥が挙げられる。
【0186】
本発明のさらなる実施形態では、株を生きている単離されたとして使用することができる。
【0187】
好ましくは、株は、生きている単離された安定化株として使用され得る。さらにより好ましくは、株は、凍結乾燥によって安定化された生きている単離された株として使用され得る。さらにより好ましくは、株は、凍結乾燥によって安定化され、凍結保護剤を含む生きている単離された株として使用され得る。
【0188】
生体物質の寄託
本発明による乳酸菌には、特に、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓに２０２０年１２月１４日に寄託された以下の微生物：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ（ＤＳＭ ３３７３２）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ（ＤＳＭ ３３７３０）、Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ６７９Ｒ（ＤＳＭ ３３７３１）を含む群から選択される微生物または類似体、断片、誘導体、発酵物、溶解物、変異体またはそれらの組み合わせが含まれる。２０２１年１１月２５日に寄託された以下の微生物：受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ。２０１９年４月１０日に寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ（ＤＳＭ ３３０９４）、および／または２０１８年１２月１３日に寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ（ＤＳＭ ３２９９６）、
本発明による乳酸菌には、特に、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓに２０２０年１２月１４日に寄託された以下の微生物：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ（ＤＳＭ ３３７３２）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ（ＤＳＭ ３３７３０）、Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ６７９Ｒ（ＤＳＭ ３３７３１）を含む群から選択される微生物または類似体、断片、誘導体、発酵物、溶解物、変異体またはそれらの組み合わせが含まれる。２０２１年１１月２５日に寄託された以下の微生物：受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ。２０１９年４月１０日に寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ３５６Ｒ（ＤＳＭ ３３０９４）、および／または２０１８年１２月１３日に寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ２４４Ｒ（ＤＳＭ ３２９９６）、
【0189】
本発明の態様の１つの文脈で説明された実施形態および特徴は、本発明の他の態様にも適用されることに留意されたい。
【0190】
本出願で引用された全ての特許および非特許文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0191】
本発明を、以下の非限定的な実施例においてさらに詳細に説明する。
【実施例】
【0192】
実施例１
株スクリーニング同定
試料
本発明による微生物の同定および選択のために、新たに単離された乳酸菌（ＬＡＢ）の株コレクションを確立した。少なくとも１２００種の新たな乳酸菌株を単離するために、自製のザワークラウト、キムチおよび健康なヒトドナー試料（膣、口腔、肛門、皮膚）などの異なる起源の試料を収集した。
株スクリーニング同定
試料
本発明による微生物の同定および選択のために、新たに単離された乳酸菌（ＬＡＢ）の株コレクションを確立した。少なくとも１２００種の新たな乳酸菌株を単離するために、自製のザワークラウト、キムチおよび健康なヒトドナー試料（膣、口腔、肛門、皮膚）などの異なる起源の試料を収集した。
【0193】
収集物の大部分は、健康な膣微生物叢を有する女性から単離された１５０を超える株を含み、妊娠後期に膣から単離された健康な妊婦からの単離株が含まれる。
【0194】
試料をＭａｎ Ｒｏｇｏｓａ Ｓｈａｒｐ（ＭＲＳ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）ブロスおよび寒天上に収集し、３７℃で終夜またはコロニー形成まで嫌気的に培養した。単離株を播種し、純粋なコロニーが得られるまで継代培養する。純粋なコロニーを、後の使用のために－８０℃で２５％グリセロールを含むＭＲＳブロスに保存する。１６Ｓ ｒＲＮＡサンガー配列決定標準法を使用して株を同定した。
【0195】
実施例２
スクリーニング
スクリーニング
【0196】
１２００種を超える単離されたＬＡＢ（実施例１）を、細菌性膣炎に関連する病原体であるＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎｉｔｉｓを増殖阻害する能力についてスクリーニングした。
【0197】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＪＣＰ ７２７５カタログ番号ＨＭ－１１０５は、ＢＥＩ ｒｅｓｏｕｒｃｅから入手した。ＨＭ－１１０５株ＪＣＰ ７２７５を、検査で細菌性膣炎陽性となった女性から単離した（１０のＮｕｇｅｎｔスコア）。
【0198】
Ｚｈａｎｇ Ｐ．ら（２０１５）およびＡｒｅｎａ，Ｍ．Ｐ．ら（２０１６）に記載されている方法を使用して、増殖阻害および抗菌代謝産物についての菌叢上のスポット試験を試験した。
【0199】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓを、嫌気性キャンバー中、３７℃で３～４日間、コロンビア寒天（ｓｉｇｍａ）上で増殖させた。コロニーを寒天プレートから回収し、ニューヨーク市（ＮＹＣ）ＩＩＩブロスに接種し、スポットアッセイおよびウェル拡散アッセイに直接使用した。
【0200】
無細胞上清補充脳心臓浸出液グルコース培地（ｓＢＨＩＧ）を用いたＭＩＣアッセイを使用した。これは、２％（ｗ／ｖ）のゼラチン、０．５％の酵母抽出物、０．１％のデンプンおよび１％を含有していた。ＨＭ－１１０５を、冷凍庫ストックから直接、ｓＢＨＩＧ中で終夜増殖させた。
【0201】
実施例１からの細菌株単離株を、保存試料から２４ウェルプレート中の２ｍＬのＭＲＳブロス中で培養した。
【0202】
ウェル拡散アッセイを、コロンビア寒天で行った。Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの終夜培養物をＯＤ ０．１に調整し、２００μｌを菌叢に使用した。直径０．５ｃｍのウェルを寒天に打ち抜いた。各ウェルにおいて、５０μｌの乳酸菌の終夜培養物を、嫌気性条件下、３７℃で終夜インキュベートした。ウェルの端部からＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの目に見える増殖までの阻害領域を測定した。
【0203】
スポットアッセイのために、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＨＭ－１１０５をＮＹＣＩＩＩブロス（ＡＴＣＣ培地：１６８５ ＮＹＣ ＩＩＩ）中で嫌気的に４８～７２時間培養した。ＬＡＢ単離株をＭＲＳブロス中で３７℃で終夜嫌気的に増殖させた。Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの終夜培養物の細胞密度を、ＮＹＣＩＩＩブロス中で６００ｎｍでの光学密度（ＯＤ ６００）が０．１になるように調整し、その後ＰＢＳ緩衝液で１０－２希釈に希釈する。２００マイクロリットルの細胞懸濁液を、コロンビア寒天プレート上に広げた。Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ菌叢を含むプレートを滅菌空気中で約１０～２０分間乾燥のために放置した。３連の２０μＬの単離ＬＡＢをＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ菌叢にスポットした。プレートを乾燥のために放置し、その後、３７℃で４８～７２時間嫌気的にインキュベートした。阻害領域を、スポットの周りのクリアリング領域としてｍｍで測定し、直径をスポットの全直径として測定する。増殖阻害を、ＬＡＢがスポット領域でＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ株を超えて増殖できることとして観察し、表２に（＋）として示す。Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ株がスポットされた細菌株を超えて増殖することができる場合、増殖阻害は検出されず、表２に（－）として示す。
【0204】
２つのＬＡＢ株は、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓに対して有意な増殖阻害効果を有し、スポットの周りに１ｍｍを超える阻害領域を有すると同定された。これら２つの株の両方を健康な女性の膣から単離した。
【0205】
【表1】
【0206】
【表2】
【0207】
実施例３
共凝集
共凝集
【0208】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＨＭ－１１０５をスクリーニングのための研究試験生物として使用した。
【0209】
共凝集を、公知の方法であるＣｉｓａｒ，Ｊ．Ｏ．ら（１９７９）´´Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｃｏａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｈｕｍａｎ Ｏｒａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ ａｎｄ Ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ Ｖｉｓｃｏｓｕｓ ｏｒ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ Ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ．´´Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２４（３）：７４２－５２に従って決定した。
【0210】
全ての乳酸菌（ＬＡＢ）の種菌をＭＲＳブロス中で嫌気的に終夜増殖させ、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓをチョコレート寒天プレート上で嫌気的に３７℃で４８～７２日間増殖させた。コロニーをすすぎ、掻き取り、ＰＢＳに懸濁して、それぞれ０．５および１のＯＤ（６００ｎｍ）にした。
【0211】
終夜のＬＡＢ細胞試料を遠心分離（６０００ｒｐｍ、２分間）によって回収し、上清をペレットから除去した。ペレットを１×ＰＢＳ緩衝液で２回洗浄した。
【0212】
細胞ペレットを１×ＰＢＳに再懸濁し、５００μｌのＬＡＢ株を２４ウェルプレートに分注し、５００μｌのＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＰＢＳ懸濁液を各ウェルに添加した。プレートをシェーカー（２００ｒｐｍ）上でインキュベートした。自発凝集および共凝集の形成を、１時間、２時間、３時間および２４時間後に視覚的に観察した。
【0213】
自己凝集（自発凝集）の対照として、各株を各ウェルで１５００ｕｌの最終体積でＰＢＳと混合した。
【0214】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ株とＬＡＢ株を混合することによって共凝集を決定した。各株をＰＢＳ緩衝液に懸濁し、各ウェルで１５００ｕｌの最終体積で１：１で混合した。
【0215】
プレートをシェーカー上で約２００ｒｐｍにて２４時間インキュベートした。共凝集形成を、１時間、２時間、３時間および２４時間後に観察する。
【0216】
共凝集の形成を、以下のスケールを使用して１～５で視覚的にスコア化した：
１：凝集なし
２：目視による初期の凝集
３：＜０．５ｍｍの凝集体の形成
４：＞０．５ｍｍかつ＜１ｍｍの凝集体の形成
５：＞１ｍｍの凝集体の形成
１：凝集なし
２：目視による初期の凝集
３：＜０．５ｍｍの凝集体の形成
４：＞０．５ｍｍかつ＜１ｍｍの凝集体の形成
５：＞１ｍｍの凝集体の形成
【0217】
５つのＬＡＢ株が、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓと共凝集することができると同定された。膣単離株（ＬＢ７１４Ｒ、ＬＢ９１８Ｒ、ＬＢ９１９Ｒ、ＬＢ９１２Ｒ、およびＬＢ９０５Ｒ）は、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓとの共凝集に優れていることが分かった。
【0218】
ＬＢ９１８Ｒ、ＬＢ９１９Ｒ、ＬＢ９１２ＲおよびＬＢ９０５Ｒを健康な女性の膣から単離した。ＬＢ９０５ＲはＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓと強く共凝集し、スコアは４であった（図１）。
【0219】
妊娠後期の女性の膣から単離されたＬＢ７１４Ｒは、共凝集にとって最良の株の１つであり、スコアは５であった（図１）。
【0220】
図１は、共凝集を、自発凝集についての対照の列の下に示す。左ウェルはＯＤ ０．５の濃度の細胞懸濁液中のＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓであり、右ウェルはＯＤ １である。
【0221】
図３は、Ｃｉｓａｒ，Ｊ．Ｏ．ら（１９７９）に従って決定された薄灰色の列によって示されたＬＢ７１４Ｒ、ＬＢ９１８Ｒ、ＬＢ９１９Ｒ、ＬＢ９１２Ｒ、およびＬＢ９０５Ｒの共凝集スコアを示す。実験から、ＬＢ７１４Ｒ、ＬＢ９１８Ｒ、およびＬＢ９１９Ｒは最大５の非常に強い共凝集スコアを示したが、ＬＢ９０５Ｒはわずかに弱く、４の共凝集スコアを示し、ＬＢ９１２Ｒは３の共凝集スコアを示したことが実証された。
【0222】
市販品からのプロバイオティクス：
製品Ａ：３つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｉｓ、Ｌ．ｃａｓｅｉ、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含むＶｉｔａｂａｌａｎｓによってデンマークで入手可能なＧｙｎｏＬａｃｔ。試験のための前培養物を、一錠をＭＲＳ培地中で分割し、３７℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
製品Ｂ：２つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＥＢ０１ＴＭおよびＬ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＰＢ０１ＴＭ）を含む、Ｏｒｋｌａ Ｃａｒｅ Ａ／Ｓによってデンマークで入手可能なＶｉｖａｇカプセル。試験のための前培養物を、一錠をＭＲＳ培地中で分割し、３７℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
製品Ｃ：３つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＬＮ４０、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＬＮ９９、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＮ１１３）を含むＥｌｌｅｎ ＡＢによってデンマークで入手可能なＥｌｌｅｎ。試験のための前培養物を、０．１ ｍｌをＭＲＳ培地に移し、３７℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
製品Ａ：３つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｉｓ、Ｌ．ｃａｓｅｉ、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含むＶｉｔａｂａｌａｎｓによってデンマークで入手可能なＧｙｎｏＬａｃｔ。試験のための前培養物を、一錠をＭＲＳ培地中で分割し、３７℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
製品Ｂ：２つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＥＢ０１ＴＭおよびＬ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＰＢ０１ＴＭ）を含む、Ｏｒｋｌａ Ｃａｒｅ Ａ／Ｓによってデンマークで入手可能なＶｉｖａｇカプセル。試験のための前培養物を、一錠をＭＲＳ培地中で分割し、３７℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
製品Ｃ：３つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＬＮ４０、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＬＮ９９、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＮ１１３）を含むＥｌｌｅｎ ＡＢによってデンマークで入手可能なＥｌｌｅｎ。試験のための前培養物を、０．１ ｍｌをＭＲＳ培地に移し、３７℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
【0223】
これら３つの市販品由来の株を共凝集について上記のようにＬＡＢ株として増殖させ、全て対照株として共凝集スクリーニングに含めた。しかしながら、これらの株はいずれも、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓと共凝集する能力を有さない。
【0224】
共凝集は、生物の成長を阻害し、バイオフィルムを作成する能力に影響を及ぼし得る。したがって、ＬＡＢがＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓと共凝集することができると、バイオフィルム形成を阻害し、株の病原性を減少させることができる。
【0225】
実施例４
病原体との共培養における競合
病原体との共培養における競合
【0226】
１２００種を超える単離されたＬＡＢ（実施例１）を、細菌性膣炎に関連する病原体であるＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎｉｔｉｓを増殖阻害する能力についてスクリーニングした。
【0227】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＨＭ－１１０５は、ＢＥＩリソースから得た。
【0228】
ＬＡＢとＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓとの間の競合は、以下の刊行物：Ｄｏｗａｒａｈ，Ｒ．ら、２０１８，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ，ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙ，ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｗｅａｎｅｄ ｐｉｇｌｅｔｓ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ，１３（３）、Ｋｈａｒｅ，Ａ．，＆Ｔａｖａｚｏｉｅ，Ｓ．（２０１５）．Ｍｕｌｔｉｆａｃｔｏｒｉａｌ Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ａ Ｔｗｏ－Ｓｐｅｃｉｅｓ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｓｙｓｔｅｍ．ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１１（１２），１－２１に記載されている方法に従って決定した。
【0229】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓをＮＹＣＩＩＩブロス（ＡＴＣＣ培地：１６８５ ＮＹＣ ＩＩＩ）中で嫌気的に４８時間培養した。Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓおよびＬＡＢ単離株の細胞密度を１の６００ｎｍでの光学密度（ＯＤ６００）に従って調整し、遠心分離（６．０００ｒｐｍで２分間）によって回収した。細胞ペレットをリン酸緩衝生理食塩水（１×ＰＢＳ）で２回洗浄し、１×ＰＢＳに再懸濁する。１ミリリットルの各細胞懸濁液を５０ｍＬのＮＹＣＩＩＩブロス中で混合し、３７℃で２４時間共インキュベートし、一方、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの単一培養物および各ＬＡＢを対照として使用する。時間０、２時間、６時間、１０時間および２４時間に、細胞溶液の連続希釈物を栄養寒天プレート上に播種して、形成コロニーを計数する。ＭＲＳ寒天をＬＡＢ単離株に使用し、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ選択的補助物質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣＭ０３３１およびＳＲ０１１９）を含む選択培地、コロンビア寒天ベース（Ｍｅｒｃｋ）をＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓに使用した。
【0230】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＧＧ（Ｃｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ）を、全ての実験において対照プロバイオティクス株として使用した。
【0231】
１２００株のコレクションからの２０株のＬＡＢは、試験株の増殖を少なくとも５０％低下させる能力として決定して、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの増殖を打ち負かすことができると同定された。６株が９０％を超えて増殖を減少させると判定された。対照プロバイオティクスとしてのＬ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＧＧは、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＨＭ－１１０５の増殖を打ち負かすことができなかった。
【0232】
両方とも健康な女性の膣から単離されている２つの株のみが、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓよりも優勢であり、その増殖を完全に阻害することができると特定された。
【0233】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの増殖を打ち負かすことができる実施例２で同定された２０株を、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの存在下で基質を酸性化する能力について評価した。
【0234】
共培養アッセイを実施例２に記載されるように行い、両方ともＮＹＣＩＩＩ基質をミューラーヒントンブロス（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）と交換した。接種時の初期ｐＨは７．４であった。
【0235】
２４時間の嫌気性インキュベーション後、ＭＨブロス中の増殖阻害を実施例２に記載のように決定し、各ＭＨブロス上清中のｐＨを測定した。
【0236】
実施例２からの２０株は全て、ｐＨを４．７未満に低下させることができた。
【0237】
実施例５
過酸化水素形成
過酸化水素形成
【0238】
過酸化水素の製造は、Ｍａｒｓｈａｌｌ（Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｖ．Ｍ．（１９７９）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．４７ ｐｐ ３２７－３２８．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１３６５－２６７２．１９７９．ｔｂ０１７６２．ｘ）の方法に従って行った。
【0239】
実施例６
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓバイオフィルムの予防
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓバイオフィルムの予防
【0240】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓのバイオフィルム形成の予防に対する乳酸菌の効果を、Ｇｏｔｔｓｃｈｉｃｋら（２０１６）Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ ｂｉｏｆｉｌｍｓ．ＰＬｏｓ Ｏｎｅ １１（４）．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５４０８６に記載されているように決定した。
【0241】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの前培養物をＮＹＣＩＩＩで調製し、３７℃で４８時間嫌気的にインキュベートした。この前培養物を、最終バイオフィルム培養のためにＮＹＣＩＩＩ（ｐＨ７．０）でＯＤ６００＝０．０５に希釈した。選択された乳酸菌を、前培養のためにＭＲＳを使用して同様に調製し、１：１に混合した後、Ｎｕｎｃ（商標）ＭｉｃｒｏＷｅｌｌ（商標）９６ウェルマイクロプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で培養した。３７℃で２４時間インキュベートした後、嫌気的に分析を行った。上清を除去し、バイオフィルムを滅菌ＰＢＳ緩衝液で２回洗浄した。バイオフィルムを有しない対照、および単一バイオフィルム培養物として増殖させた各微生物の対照バイオフィルムと比較して、ＯＤ６００を測定した。
【0242】
乳酸菌（ＬＡＢ）によるバイオフィルム形成の阻害を以下のように決定した：
（（ＯＤ６００［Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓのバイオフィルム］－ＯＤ６００［ＬＡＢ試験株とＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの混合バイオフィルム培養］）／ＯＤ６００［Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓのバイオフィルム］）×１００％
（（ＯＤ６００［Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓのバイオフィルム］－ＯＤ６００［ＬＡＢ試験株とＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓの混合バイオフィルム培養］）／ＯＤ６００［Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓのバイオフィルム］）×１００％
【0243】
選択した株を、細菌性膣炎に対する膣適用のための市販の消費者製品と比較した。
【0244】
製品Ａ：３つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｉｓ，Ｌ．ｃａｓｅｉ，Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含むＶｉｔａｂａｌａｎｓによってデンマークで入手可能なＧｙｎｏＬａｃｔ。試験のための前培養物を、一錠をＭＲＳ培地中で分割し、３７℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
製品Ｂ：２つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＥＢ０１ＴＭおよびＬ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＰＢ０１ＴＭ）を含む、Ｏｒｋｌａ Ｃａｒｅ Ａ／Ｓによってデンマークで入手可能なＶｉｖａｇカプセル。試験のための前培養物を、一錠をＭＲＳ培地中で分割し、３７℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
製品Ｃ：３つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＬＮ ４０、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＬＮ ９９、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＮ １１３）を含むＥｌｌｅｎ ＡＢによってデンマークで入手可能なＥｌｌｅｎ ｉｎｔｉｍｃｒｅｍｅ。試験のための前培養物を、０．１ ｍｌのｉｎｔｉｍｃｒｅｍｅをＭＲＳ培地に移し、３７℃で一晩嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
製品Ｂ：２つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＥＢ０１ＴＭおよびＬ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＰＢ０１ＴＭ）を含む、Ｏｒｋｌａ Ｃａｒｅ Ａ／Ｓによってデンマークで入手可能なＶｉｖａｇカプセル。試験のための前培養物を、一錠をＭＲＳ培地中で分割し、３７℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
製品Ｃ：３つのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ ＬＮ ４０、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＬＮ ９９、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＮ １１３）を含むＥｌｌｅｎ ＡＢによってデンマークで入手可能なＥｌｌｅｎ ｉｎｔｉｍｃｒｅｍｅ。試験のための前培養物を、０．１ ｍｌのｉｎｔｉｍｃｒｅｍｅをＭＲＳ培地に移し、３７℃で一晩嫌気的にインキュベートすることによって調製した。
【0245】
Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓおよびＬＡＢ株と同様に、実験のために各製品を調製した。
【数1】
【0246】
選択されたＬＡＢ株は、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓによるバイオフィルム形成を予防する有意により良好な能力を有する。
【0247】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒは、Ｌａｃｔｏｂｉｏ ＡｐＳ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋにより、受託番号３３７３２でＧｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に２０２０年１２月１４日に寄託された。
【0248】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８ＲおよびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒは、Ｌａｃｔｏｂｉｏ Ａ／Ｓ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋにより、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に２０２１年１１月２５日に、以下の通り寄託された。受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ、受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ。
【0249】
実施例７
試験生物としてＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓを使用して、上記の実施例２、３および４に記載されるようなスクリーニング方法を繰り返した。
試験生物としてＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓを使用して、上記の実施例２、３および４に記載されるようなスクリーニング方法を繰り返した。
【0250】
寒天アッセイでのスポット
Ｃａｎｄｉｄａ株をＢＥＩ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓから得た。
Ｃａｎｄｉｄａ株をＢＥＩ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓから得た。
【0251】
Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｐ５７０５５株、カタログ番号２９４３９（血液単離株）
Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｌ２６株、カタログ番号２９４４５（膣単離株）
Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、１９Ｆ株、カタログ番号２９４４９（膣単離株）
Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｌ２６株、カタログ番号２９４４５（膣単離株）
Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、１９Ｆ株、カタログ番号２９４４９（膣単離株）
【0252】
乳酸菌（ＬＡＢ）株をＭａｎ Ｒｏｇｏｓａ Ｓｈａｒｐ（ＭＲＳ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）ブロス中で３７℃で終夜インキュベートした。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓをＹＰＤブロス（２０ｇ／Ｌペプトン、１０ｇ／Ｌ酵母抽出物、２０ｇ／Ｌグルコース）中３７℃で終夜インキュベートした。約０．５のＯＤ６００を有するＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ培養物を１０＾－１または１０＾－２に希釈し、１ｍＬをミューラーヒントン寒天プレートに播種して菌叢を作製した。ＬＡＢ培養物から、２０μＬをミューラーヒントンプレートの上部にスポットした。３７℃、好気的条件で終夜インキュベートした後、阻害領域を測定した。
【0253】
ウェル拡散アッセイのために、ＬＡＢおよびＣ．ａｌｂｉｃａｎｓの終夜培養物を調製した。ＬＡＢをＭＲＳブロス中で増殖させ、ＣａｎｄｉｄａをＹＰＤブロス中で３７℃で増殖させた。約０．５のＯＤ６００を有するＣａｎｄｉｄａ培養物の各々から、１０＾－１希釈物を調製し、１ｍＬをミューラーヒントン寒天プレートの上に播種した。プレートにウェルを作製し、５０μＬのＬＡＢ培養物をウェルに移した。３７℃で終夜インキュベートした後、ウェル周囲の阻害領域を調べた。
【0254】
さらに２つの株がＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓに対して活性であると同定された。
【0255】
同定された２株は、Ｌａｃｔｏｂｉｏ ＡｐＳ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋにより、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に２０２０年１２月１４日に寄託された。株を以下のように寄託した：
【0256】
ＤＳＭ ３３７３０として寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ
【0257】
ＤＳＭ ３３７３１として寄託されたＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ６７９Ｒ
【0258】
Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙによって２０２０年４月１５日に発表された分類法の変更に従って命名された。以前はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍとして知られていた。
【0259】
【数2】
【0260】
共凝集は、ＬＢ６０６Ｒ株とＬＢ６７９Ｒ株の両方について、３～４であると決定された。
【0261】
実施例８
膣感染症または泌尿生殖器感染症の予防または処置のための株の単離および同定のための方法を含む膣微生物叢の移植。
膣感染症または泌尿生殖器感染症の予防または処置のための株の単離および同定のための方法を含む膣微生物叢の移植。
【0262】
１１０人の健康な女性が膣から採取したスワップを提供した。
【0263】
この方法は、図２に示されており、健康な膣微生物叢を有するドナーから機能不全の膣微生物叢を有する患者への乳酸菌の膣移植を含む。
【0264】
この方法は、移植される乳酸菌の単離、選択および増殖の工程を含む。
【0265】
この方法は、健康な女性の膣微生物叢から乳酸菌を単離することを含み、以下の工程を含む：
１．健康な膣微生物叢を有する女性から採取した膣スワップから乳酸菌を単離し、スワップをＭＲＳ寒天プレート上でインキュベートし、３７℃で２４～４８時間嫌気的にインキュベートする。コロニーを新たなＭＲＳプレートに打つことによってコロニーをさらに単離し、３７℃で２４～４８時間嫌気的にインキュベートし、単離した各コロニーを、２０％グリセロールを含む１ｍｌのＭＲＳブロスに接種し、－８０℃で保存する。
２．工程１からの株コレクションを、前述の実施例に記載された方法を使用して、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓおよび／またはＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓのいずれかに対する抗菌活性についてスクリーニングする。少なくとも１つの抗菌活性を有する株が選択され、少なくとも１つの抗菌活性は、増殖阻害、共凝集またはバイオフィルム形成の阻害から選択される。
３．工程２で同定された株は、単離された個々の株として増殖され、好ましい実施形態では、株は、１０５から１０１３ＣＦＵ／ｍｌを含み、ｐＨが３から７である組成物中の個々の株として安定化される。組成物は、少なくとも１つの単離された株を含む。一実施形態では、組成物は、少なくとももう１つの単離された株の混合物である。混合物は、異なるドナーから単離された株を含むことができる。
組成物は、膣の上皮に局所適用するための溶液、油、洗浄液、ゲルもしくは軟膏、または膣に挿入するためのカプセルもしくは錠剤のいずれかであり得る。組成物は、プレバイオティクスをさらに含むことができる。
４．健康な女性の膣から単離された、単離された株の調製された組成物を、機能不全の膣微生物叢、膣感染症、尿路感染症、ＳＴＩを有する女性に、または妊婦もしくは不妊症処置中の女性に移す。
１．健康な膣微生物叢を有する女性から採取した膣スワップから乳酸菌を単離し、スワップをＭＲＳ寒天プレート上でインキュベートし、３７℃で２４～４８時間嫌気的にインキュベートする。コロニーを新たなＭＲＳプレートに打つことによってコロニーをさらに単離し、３７℃で２４～４８時間嫌気的にインキュベートし、単離した各コロニーを、２０％グリセロールを含む１ｍｌのＭＲＳブロスに接種し、－８０℃で保存する。
２．工程１からの株コレクションを、前述の実施例に記載された方法を使用して、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓおよび／またはＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓのいずれかに対する抗菌活性についてスクリーニングする。少なくとも１つの抗菌活性を有する株が選択され、少なくとも１つの抗菌活性は、増殖阻害、共凝集またはバイオフィルム形成の阻害から選択される。
３．工程２で同定された株は、単離された個々の株として増殖され、好ましい実施形態では、株は、１０５から１０１３ＣＦＵ／ｍｌを含み、ｐＨが３から７である組成物中の個々の株として安定化される。組成物は、少なくとも１つの単離された株を含む。一実施形態では、組成物は、少なくとももう１つの単離された株の混合物である。混合物は、異なるドナーから単離された株を含むことができる。
組成物は、膣の上皮に局所適用するための溶液、油、洗浄液、ゲルもしくは軟膏、または膣に挿入するためのカプセルもしくは錠剤のいずれかであり得る。組成物は、プレバイオティクスをさらに含むことができる。
４．健康な女性の膣から単離された、単離された株の調製された組成物を、機能不全の膣微生物叢、膣感染症、尿路感染症、ＳＴＩを有する女性に、または妊婦もしくは不妊症処置中の女性に移す。
【0266】
実施例９
【0267】
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒを、ＭＲＳブロス中、３７℃で終夜、三連で増殖させた。増殖した細胞を２つの画分に分け、１つの画分はＬＢ７１４Ｒの生存細胞を含み、これは実施例３と同じ共凝集手順に従ってＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓと共凝集する能力について評価し、第２の画分は遠心分離し、細胞を培地から除去した。細胞をｐＨ２、２のＰＢＳ緩衝液に３日間可溶化した。細胞をＭＲＳ寒天上にスポットして、それらの生存率を確認して、細胞が死滅／不活性化されたことを確実にした。死細胞（パラプロバイオティクス）を、実施例３と同じ共凝集手順に従ってＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓと共凝集する能力について評価した。
【0268】
ＬＢ７１４Ｒの生存細胞は、５の共凝集スコアで強い共凝集を示し、ＬＢ７１４Ｒの死細胞は、４．５の平均スコアで共凝集した（図４に示す）。
【0269】
参照文献
Arena, M. P. et al.(2016) Use of Lactobacillus plantarum Strains as a Bio-Control Strategy against Food-Borne Pathogenic Microorganisms. Frontiers in Microbiology 7 (APR): 1-10. doi.org/10.3389/fmicb.2016.00464.
Dowarah, R., et al. (2018) Selection and characterization of probiotic lactic acid bacteria and its impact on growth, nutrient digestibility, health and antioxidant status in weaned piglets. PLoS ONE, 13(3)
Gottschick et al. (2016) Screening of compounds against Gardnerella vaginalis biofilms. PLos One 11(4). doi.org/10.1371/journal.pone.0154086
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【0270】
【数3】
【0271】
【数4】
【0272】
【数5】
【0273】
【数6】
【0274】
【数7】
【0275】
【数8】
【0276】
【数9】
【0277】
【数10】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【手続補正書】
【提出日】2023-09-05
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
病原体のバイオフィルム形成を予防、阻害または処置することができる菌株を含み、前記菌株は、
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ；または
受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ；
から選択される、組成物。
【請求項2】
病原体のバイオフィルム形成を予防、阻害または処置することができる菌株を含み、前記菌株は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓから選択され、特に、
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ；または
受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ；
を含む、膣マイクロバイオーム移植片。
【請求項3】
１つ以上のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株（例えば寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３０の下で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＬＢ６０６Ｒ）および／または１つ以上のＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ株（例えば寄託受託番号ＤＳＭ ３３７３１の下で寄託されたＬａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＢ６７９Ｒ）から選択される乳酸菌株をさらに含む、請求項２に記載の膣マイクロバイオーム移植片。
【請求項4】
懸濁液、スプレー、ゲル、クリーム、ローション、粉末、カプセル、油、洗浄液用溶液、卵形剤、膣用インサート、坐剤、ロゼンジ、錠剤、マイクロカプセル化製品として、または食品サプリメントもしくは食品の形態で製剤化される、請求項２から３のいずれか一項に記載の膣マイクロバイオーム移植片。
【請求項5】
病原体のバイオフィルム形成を予防、阻害または処置することができる、単離された細菌株であって、前記菌株は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓから選択され、特に、
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９７の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１９Ｒを特に含む、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒ；
受託番号ＤＳＭ ３４０９５の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ９１２Ｒ；または
受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒ；
を含む、単離された細菌株。
【請求項6】
病原体のバイオフィルム形成を予防、阻害または処置することができる１つ以上の菌株を含み、前記菌株は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉの種から選択される、医薬として使用するための組成物。
【請求項7】
病原体のバイオフィルム形成を予防、阻害または処置することができる菌株を含み、前記菌株は、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたは１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される細菌株を含む、ヒトまたは動物における膣感染症の予防および／または処置に使用するための組成物。
【請求項8】
病原体のバイオフィルム形成を予防、阻害または処置することができる菌株を含み、前記菌株は、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉまたは１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉから選択される細菌株を含む、ヒトもしくは動物の妊孕性の改善および／またはヒトもしくは動物の早産のリスクを低減するのに使用するための組成物。
【請求項9】
１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉを含む、バイオフィルム形成の予防、阻害または処置に使用するための組成物。
【請求項10】
１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ（特に、受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒ）、１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９６の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ ＬＢ９１８Ｒを含む）、または１つ以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ（特に、受託番号ＤＳＭ ３４０９４の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＢ９０５Ｒを含む）を含む、バイオフィルム形成の予防、阻害または処置に使用するための組成物。
【請求項11】
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒを含む、医薬として使用するための組成物。
【請求項12】
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒを含む、ヒトまたは動物における膣感染症の予防および／または処置に使用するための組成物。
【請求項13】
受託番号ＤＳＭ ３３７３２の下で寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＬＢ７１４Ｒを含む、ヒトもしくは動物の妊孕性の改善および／またはヒトもしくは動物の早産のリスクを低減するのに使用するための組成物。
【請求項14】
請求項１もしくは６から１３のいずれか一項に記載の組成物、または請求項２から４に記載の膣マイクロバイオーム移植片、または請求項５に記載の単離された細菌株を含む、医療機器。
【請求項15】
膣移植用の１つ以上の乳酸菌株を選択する方法であって、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第１の乳酸菌株を選択する工程；および
Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの阻害を特徴とする少なくとも１つの第２の株を選択する工程；
を含み、
前記Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓおよび／またはＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの阻害は、病原体のバイオフィルム形成の減少もしくは阻害、又は病原体のバイオフィルム形成を予防、阻害または処置することができることにより提供される、方法。
【国際調査報告】