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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-25
(54)【発明の名称】コンジュゲート連結部分を調製するための方法
(51)【国際特許分類】
C12P 41/00 20060101AFI20240118BHJP
C07C 323/17 20060101ALI20240118BHJP
C07C 319/06 20060101ALI20240118BHJP
C07B 57/00 20060101ALI20240118BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20240118BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240118BHJP
A61K 47/54 20170101ALI20240118BHJP
C12N 11/08 20200101ALI20240118BHJP
C12P 7/02 20060101ALI20240118BHJP
C12P 11/00 20060101ALI20240118BHJP
C12N 9/20 20060101ALN20240118BHJP
C07K 14/00 20060101ALN20240118BHJP
【ＦＩ】
C12P41/00 K ZNA
C07C323/17
C07C319/06
C07B57/00 380
A61K38/16
A61P35/00
A61K47/54
C12N11/08
C12P7/02
C12P11/00
C12N9/20
C07K14/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023541615
(86)(22)【出願日】2022-01-07
(85)【翻訳文提出日】2023-08-29
(86)【国際出願番号】 US2022011629
(87)【国際公開番号】W WO2022150596
(87)【国際公開日】2022-07-14
(31)【優先権主張番号】63/135,088
(32)【優先日】2021-01-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522010576
【氏名又は名称】サイブレクサ ２，インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｃｙｂｒｅｘａ ２， Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100156144
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 康
(72)【発明者】
【氏名】マグワイア，ロバート ジョン
(72)【発明者】
【氏名】ファン フリート，ミヒル クリスティアン アレクサンデル
(72)【発明者】
【氏名】スフーファールト．ウィレム ロベルト クラース
【テーマコード（参考）】
4B033
4B064
4C076
4C084
4H006
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B033NA27
4B033NB12
4B033NB36
4B033NB62
4B033ND02
4B033NG09
4B033NH09
4B064AC12
4B064AC13
4B064AE61
4B064CA21
4B064CA35
4B064CA38
4B064CB30
4B064CD06
4B064CD11
4B064DA16
4C076AA95
4C076CC27
4C076EE59
4C084AA02
4C084AA06
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA19
4C084BA23
4C084BA32
4C084CA59
4C084NA06
4C084NA13
4C084ZB262
4H006AA02
4H006AC63
4H006AC83
4H045AA20
4H045BA18
4H045BA50
4H045EA60
(57)【要約】
本発明は、治療用分子（例えば、細胞傷害性薬剤）と標的化部分（例えば、タンパク質、ペプチド、抗体、ナノ粒子、核酸）とのコンジュゲーションにおいて有用であるリンカーを調製するための方法に関する。該方法の間、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のリパーゼＢのようなリパーゼを使用して、アシル化剤の存在下で（Ｓ，Ｓ）－２－ベンジルチオシクロヘキサノールまたは（Ｓ，Ｓ）－２－ベンジルチオシクロヘプタノールのエナンチオ選択的分割を行い、これらを脱保護のために還元することにより、（Ｓ，Ｓ）－２－メルカプトシクロヘキサノールまたは（Ｓ，Ｓ）－２－メルカプトシクロペンタノールを得、次いでこれらを、治療薬を標的化部分に連結するために使用することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ａ１）の化合物【化1】
ａ）式（Ａ４）の化合物
【化2】
【化3】
ｂ）前記式（Ａ２）の化合物またはその塩を脱保護して、式（Ａ１）の化合物またはその塩を得ることと、を含む、前記方法。
【請求項2】
環Ａが、Ｃ５－７シクロアルキルである、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
環Ａが、シクロヘキシルである、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
前記式（Ａ１）の化合物が、化合物１：【化4】
【請求項5】
Ｚが、－ＣＨ２ＲＡ（式中、ＲＡは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、前記５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、前記Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から独立して選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）である、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
ＲＡが、フェニルである、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
Ａｋ１が、無水グルタル酸、無水コハク酸、または酢酸イソプロペニルである、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項8】
Ａｋ１が、無水グルタル酸である、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
ＲＢが、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、またはＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨである、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
ＲＢが、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨである、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記酵素が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａに由来するリパーゼ酵素である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
前記酵素が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａに由来するリパーゼＢである、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項13】
前記酵素が、固体支持体上に固定化される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項14】
前記固体支持体が、アクリルビーズを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での前記処理が、約１５℃～約２０℃の温度で実施される、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項16】
式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での前記処理が、室温で実施される、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での前記処理が、約６時間～約２４時間の期間にわたって実施される、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項18】
式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での前記処理が、約１６時間の期間にわたって実施される、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項19】
式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での前記処理が、Ｓ１の存在下で実施され、ここで、Ｓ１が溶媒である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項20】
Ｓ１が、エーテル溶媒である、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
Ｓ１が、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルである、請求項１９に記載の方法。
【請求項22】
Ｓ１が、２－メチルテトラヒドロフランである、請求項１９に記載の方法。
【請求項23】
前記式（Ａ３）の化合物から前記式（Ａ２）の化合物を分離するステップをさらに含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項24】
前記分離が、前記混合物を塩基水溶液で処理し、前記混合物から前記水層を分離することを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記塩基水溶液が、炭酸ナトリウム水溶液である、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
Ｚが、－ＣＨ２ＲＡであり、前記脱保護が、前記式（Ａ２）の化合物をＲＡ１で還元することを含み、ここで、ＲＡ１が還元剤である、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項27】
ＲＡ１が、リチウム金属、ナトリウム金属、またはカルシウム金属である、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
ＲＡ１が、リチウム金属である、請求項２６に記載の方法。
【請求項29】
前記還元が、Ｓ２の存在下で実行され、ここで、Ｓ２が溶媒である、請求項２６～２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項30】
Ｓ２が、エーテル溶媒である、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
Ｓ２が、２－メチルテトラヒドロフランである、請求項２９に記載の方法。
【請求項32】
化合物１が、７５％超のエナンチオマー過剰率で単離される、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項33】
化合物１が、９０％超のエナンチオマー過剰率で単離される、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項34】
化合物１が、９５％超のエナンチオマー過剰率で単離される、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項35】
前記式（Ａ４）の化合物が、式（Ａ５）の化合物【化5】
【請求項36】
前記式（Ａ５）の化合物またはその塩と、ＲＡＣＨ２ＳＨ（式（６））、またはその塩との前記反応が、Ｍ１の存在下で実施され、ここで、Ｍ１が金属触媒である、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
Ｍ１が、亜鉛塩である、請求項３６に記載の方法。
【請求項38】
Ｍ１が、（Ｄ）－酒石酸亜鉛である、請求項３６に記載の方法。
【請求項39】
前記式（Ａ５）の化合物またはその塩と、ＲＡＣＨ２ＳＨ（式（６））との前記反応が、Ｂ１の存在下で実施され、ここで、Ｂ１が塩基である、請求項３５～３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項40】
Ｂ１が、アルコキシド塩基である、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
Ｂ１が、ナトリウムエトキシドである、請求項３９に記載の方法。
【請求項42】
前記式（Ａ５）の化合物と前記式（６）の化合物との前記反応が、Ｓ３の存在下で実施され、ここで、Ｓ３が溶媒である、請求項３６～４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項43】
Ｓ３が、ハロゲン化溶媒またはエーテル溶媒である、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
Ｓ３が、ジクロロメタンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項45】
Ｓ３が、２－メチルテトラヒドロフランである、請求項４２に記載の方法。
【請求項46】
前記式（Ａ４）の化合物が、２５％超のエナンチオマー過剰率で単離される、請求項３５～４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項47】
前記式（Ａ４）の化合物が、５０％超のエナンチオマー過剰率で単離される、請求項３５～４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項48】
前記式（Ａ４）の化合物が、７０％超のエナンチオマー過剰率で単離される、請求項３５～４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項49】
式（１）の化合物【化6】
ａ）式（４）の化合物
【化7】
【化8】
ｂ）前記式（２）の化合物またはその塩を脱保護して、式（１）の化合物またはその塩を得ることと、を含む、前記方法。
【請求項50】
ｍが１である、請求項４９に記載の方法。
【請求項51】
式（８）の化合物：【化9】
式（７）の化合物
【化10】
【化11】
【請求項52】
式（Ａ－Ｉ）の化合物：【化12】
環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルまたは５～７員ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ１は、標的化部分であり、
Ｒ２は、治療部分である）、
を調製するための方法であって、
ａ）請求項１～４８のいずれか１項に記載の方法によって調製される式（Ａ１）の化合物またはその塩を、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣと反応させて、式（Ａ８）の化合物
【化13】
ｂ）式（Ａ８）の化合物またはその塩を、ＲＥＯＣ（Ｏ）ＲＦと反応させて、式（Ａ－１Ｂ）の化合物
【化14】
ＲＥは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、前記５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、前記Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換され、
ＲＦは、ハロまたはＯＲＦ１であり、ここで、ＯＲＦ１が、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、前記５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、前記Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を得ることと、
ｃ）前記式（Ａ－１Ｂ）の化合物またはその塩を、Ｒ２Ｈと反応させて、式（Ａ－１Ｃ）の化合物
【化15】
ｄ）式（Ａ－１Ｃ）の化合物またはその塩を、Ｒ１Ｈと反応させて、式（Ａ－Ｉ）の化合物を得ることと、を含む、前記方法。
【請求項53】
前記式（Ａ－Ｉ）の化合物が、式（Ａ－Ｉ）’：【化16】
【請求項54】
Ｒ１が、以下の配列：ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＣＧ（配列番号１；Ｐｖ１）、
ＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＣＧ（配列番号２；Ｐｖ２）、及び
ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＤＡＤＥＣＧ（配列番号３；Ｐｖ３）、
のうちの少なくとも１つを含むペプチドであり、Ｒ１が、Ｒ１のシステイン残基を介して前記式（Ｉ）の化合物のＳ原子に結合している、請求項５２または５３に記載の方法。
【請求項55】
Ｒ１が、ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＣＧ（配列番号１；Ｐｖ１）であり、Ｒ１が、Ｒ１のシステイン残基を介して前記式（Ｉ）の化合物のＳ原子に結合している、請求項５２または５３に記載の方法。
【請求項56】
Ｒ２が、トポイソメラーゼＩ標的化部分である、請求項５２～５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項57】
Ｒ２が、【化17】
【請求項58】
前記式（Ａ－Ｉ）の化合物が、【化18】
【請求項59】
請求項１～４８のいずれか１項に記載の方法によって調製される、式（Ａ１）の化合物またはその塩。
【請求項60】
請求項４９または５０に記載の方法によって調製される、式（１）の化合物またはその塩。
【請求項61】
請求項５１に記載の方法によって調製される、式（８）の化合物またはその塩。
【請求項62】
請求項５２～５８のいずれか１項に記載の方法によって調製される、式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、治療用分子（例えば、細胞傷害性薬剤）と標的化部分（例えば、タンパク質、ペプチド、抗体、ナノ粒子、核酸）とのコンジュゲーションにおいて有用であるリンカーを調製するための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
がんは、細胞増殖の異常な制御を特徴とする一群の疾患である。がんの年間発生率は、米国だけで１６０万人を超えると推定されている。がんは、外科手術、放射線、化学療法、及びホルモンを使用して治療されるが、それは米国における死亡原因の第２位にとどまり、追加の治療戦略が必要とされる。悪性腫瘍を標的とするための実現可能で継続的に探求されている方策として薬物コンジュゲートが台頭している。
【0003】
化学療法薬の選択性は過去数十年間にわたって前進しているにもかかわらず、慣習的な細胞傷害性化学療法薬は、多くの場合、十分な特異性及び標的化効果が欠如していることから、正常な非がん性細胞に対する損傷を引き起こし、これが重篤な有害反応につながり得る。標的化部分（例えば、ペプチド、タンパク質、または抗体）に連結された薬物（例えば、細胞傷害性薬剤）から構成される薬物コンジュゲートが、腫瘍標的療法における使用に向けて開発されてきた。薬物コンジュゲートは、病変組織への薬物の優先的な送達を可能にすることにより、非がん性組織に対する障害等の望まれない副作用を低減し得る。例えば、Ｖｒｅｔｔｏｓ，Ｖ．，“Ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｔｈｅ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｕｍｏｒ ｓｉｔｅ，”Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１８，１４：９３０－９５４を参照されたい。
【0004】
新たな薬物コンジュゲートの設計における重要な側面として、薬物を標的化部分に連結する基であるリンカーの開発が台頭している。リンカーは、望ましくは、標的とする病変細胞への薬物の送達を可能にするのに十分にインビボで安定している。さらに、リンカーは、標的化部分のその標的への結合親和性を撹乱すべきでない。最後に、薬物が標的に局在化した後に、リンカーは、放出された薬物がその標的に結合し得るように薬物を放出することができるべきである。Ｌｕ，Ｊ．，“Ｌｉｎｋｅｒｓ Ｈａｖｉｎｇ ａ Ｃｒｕｃｉａｌ Ｒｏｌｅ ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１６，１７，１－２２、及びＣｏｒｓｏ Ａ．Ｄ．，“Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｌｉｎｋｅｒ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｔｕｍｏｒ－Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２０１９，２５（６５）：１４７４０－１４７５７を参照されたい。故に、新たなリンカー及びそれらを作製するための方法の開発が必要とされている。
【発明の概要】
【0005】
本明細書では、式（Ａ１）の化合物
またはその塩（式中、環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルまたは５～７員ヘテロシクロアルキルである）を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）式（Ａ４）の化合物
またはその塩（式中、Ｚは保護基である）を、酵素の存在下で、Ａｋ１（ここで、Ａｋ１はアシル化試薬である）で処理して、式（Ａ２）の化合物及び式（Ａ３）の化合物、
またはそれらの塩の混合物（式中、ＲＢは、ＣＯＯＨにより任意選択で置換されるＣ１－６アルキルである）を得ることと、
ｂ）式（Ａ２）の化合物またはその塩を脱保護して、式（Ａ１）の化合物またはその塩を得ることと、を含む。
【化1】
ａ）式（Ａ４）の化合物
【化2】
【化3】
ｂ）式（Ａ２）の化合物またはその塩を脱保護して、式（Ａ１）の化合物またはその塩を得ることと、を含む。
【0006】
また、本明細書では、式（Ａ－Ｉ）の化合物：
またはその薬学的に許容される塩（式中、
環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルまたは５～７員ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ１は、標的化部分であり、
Ｒ２は、治療部分である）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）請求項１～４８のいずれか１項に記載の方法によって調製される式（Ａ１）の化合物またはその塩を、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣと反応させて、式（Ａ８）の化合物
またはその塩（式中、ＲＣは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を得ることと、
ｂ）式（Ａ８）の化合物またはその塩を、ＲＥＯＣ（Ｏ）ＯＲＥ（式中、ＲＥは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールは、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールは各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）と反応させて、式（Ａ－１Ｂ）の化合物
またはその塩を得ることと、
ｃ）式（Ａ－１Ｂ）の化合物またはその塩を、Ｒ２Ｈと反応させて、式（Ａ－１Ｃ）の化合物
またはその塩を得ることと、
式（Ａ－１Ｃ）の化合物またはその塩を、Ｒ１Ｈと反応させて、式（Ａ－Ｉ）の化合物を得ることと、を含む。
【化4】
環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルまたは５～７員ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ１は、標的化部分であり、
Ｒ２は、治療部分である）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）請求項１～４８のいずれか１項に記載の方法によって調製される式（Ａ１）の化合物またはその塩を、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣと反応させて、式（Ａ８）の化合物
【化5】
ｂ）式（Ａ８）の化合物またはその塩を、ＲＥＯＣ（Ｏ）ＯＲＥ（式中、ＲＥは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールは、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールは各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）と反応させて、式（Ａ－１Ｂ）の化合物
【化6】
ｃ）式（Ａ－１Ｂ）の化合物またはその塩を、Ｒ２Ｈと反応させて、式（Ａ－１Ｃ）の化合物
【化7】
式（Ａ－１Ｃ）の化合物またはその塩を、Ｒ１Ｈと反応させて、式（Ａ－Ｉ）の化合物を得ることと、を含む。
【発明を実施するための形態】
【0007】
式（Ａ１）の化合物の調製
本明細書では、例えば、細胞傷害性薬剤等の治療剤のコンジュゲートを調製するのに有用である、式（Ａ１）の化合物
またはその塩（式中、環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルまたは５～７員ヘテロシクロアルキルである）を調製するための方法が提供される。
本明細書では、例えば、細胞傷害性薬剤等の治療剤のコンジュゲートを調製するのに有用である、式（Ａ１）の化合物
【化8】
【0008】
式（Ａ１）の化合物を調製するための方法は、米国特許公開第ＵＳ２０１９／２０９５８０号、米国特許出願第１６／９２５，０９４号（米国公開第２０２１／０００９７１９号）、及び米国特許出願第１６／９２４，４４５号（米国公開第２０２１／０００９５３６号）に記載される。本開示は、より良い収量、拡張性を提示すると共に、精製のためにさほど徹底的な手順を必要としないことにより、式（Ａ１）の化合物を調製するための以前に開示された方法に勝る利点を提供する。特に、本開示は、式（Ａ１）の化合物のエナンチオマーの酵素触媒による分割を可能にする。本開示はさらに、式（Ａ１）の化合物の前駆体である式（Ａ４）の化合物のエナンチオ選択的合成を提供する。対照的に、以前に開示された方法は、本明細書で提供される方法よりも大規模な実施がより困難で、より費用がかかる、ＨＰＬＣを介したまたはキラルクロマトグラフィーを用いたエナンチオマーの分離に依存していた。
【0009】
本明細書では、式（Ａ１）の化合物
またはその塩（式中、環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルまたは５～７員ヘテロシクロアルキルである）を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）式（Ａ４）の化合物
またはその塩（式中、Ｚは保護基である）を、酵素の存在下で、Ａｋ１（ここで、Ａｋ１はアシル化試薬である）で処理して、式（Ａ２）の化合物及び式（Ａ３）の化合物、
またはそれらの塩の混合物（式中、ＲＢは、ＣＯＯＨにより任意選択で置換されるＣ１－６アルキルである）を得ることと、
ｂ）式（Ａ２）の化合物またはその塩を脱保護して、式（Ａ１）の化合物またはその塩を得ることと、を含む。
【化9】
ａ）式（Ａ４）の化合物
【化10】
【化11】
ｂ）式（Ａ２）の化合物またはその塩を脱保護して、式（Ａ１）の化合物またはその塩を得ることと、を含む。
【0010】
いくつかの実施形態では、環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、シクロペンチルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、シクロヘキシルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、シクロヘプチルである。
【0011】
いくつかの実施形態では、環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、シクロペンチルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、シクロヘキシルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、シクロヘプチルである。
【0012】
いくつかの実施形態では、環Ａは、５～７員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、５員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、６員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、７員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、テトラヒドロフラニルである。いくつかの実施形態では、環Ａは、テトラヒドロピラニルである。
【0013】
また、本明細書では、式（１）の化合物
またはその塩（式中、ｍは、０、１、または２である）を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）式（４）の化合物
またはその塩（式中、Ｚは保護基である）を、
酵素の存在下で、Ａｋ１（ここで、Ａｋ１はアシル化試薬である）で処理して、式（２）の化合物及び式（３）の化合物、
またはそれらの塩の混合物（式中、ＲＢは、ＣＯＯＨにより任意選択で置換されるＣ１－６アルキルである）を得ることと、
ｂ）式（２）の化合物またはその塩を脱保護して、式（１）の化合物またはその塩を得ることと、を含む。
【化12】
ａ）式（４）の化合物
【化13】
酵素の存在下で、Ａｋ１（ここで、Ａｋ１はアシル化試薬である）で処理して、式（２）の化合物及び式（３）の化合物、
【化14】
ｂ）式（２）の化合物またはその塩を脱保護して、式（１）の化合物またはその塩を得ることと、を含む。
【0014】
いくつかの実施形態では、ｍは０である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。いくつかの実施形態では、ｍは２である。
【0015】
いくつかの実施形態では、Ｚは、－ＣＨ２ＲＡ（式中、ＲＡは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から独立して選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）である。
【0016】
いくつかの実施形態では、ＲＡは、Ｃ６－１０アリールである。いくつかの実施形態では、ＲＡは、フェニルである。
【0017】
いくつかの実施形態では、Ａｋ１は、無水グルタル酸、無水コハク酸、または酢酸イソプロペニルである。いくつかの実施形態では、Ａｋ１は、無水グルタル酸である。いくつかの実施形態では、Ａｋ１は、無水コハク酸である。いくつかの実施形態では、Ａｋ１は、酢酸イソプロペニルである。
【0018】
いくつかの実施形態では、ＲＢは、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、またはＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨである。いくつかの実施形態では、ＲＢは、ＣＨ３である。いくつかの実施形態では、ＲＢは、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨである。いくつかの実施形態では、ＲＢは、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨである。
【0019】
本明細書で使用されるとき、「酵素」という用語は、化学反応を触媒するタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、酵素は、エステル化（例えば、アルコールからのエステルの形成）反応を触媒し得る。いくつかの実施形態では、酵素は、エナンチオ選択的様態で（例えば、反対のエナンチオマーよりも一方のエナンチオマーの形成に有利である）エステル化反応を触媒し得る。いくつかの実施形態では、酵素は、リパーゼ酵素である。
【0020】
本明細書で使用されるとき、「リパーゼ酵素」という用語は、自然条件で（例えば、水性媒体中で）脂質の加水分解を触媒する酵素を指す。非水性媒体（例えば、有機溶媒）中では、ある特定のリパーゼ酵素が、エステル化反応（例えば、アルコールのエステルへの変換）を触媒し得る。有機溶媒中で、エナンチオ選択的様態で（例えば、反対のエナンチオマーよりも一方のエナンチオマーの形成に有利である）エステル化反応を触媒することができるリパーゼ酵素は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｌｉｐａｓｅ ｃａｔａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ：ａｄｖａｎｔａｇｅｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ｂｉｏｌ．Ｐｒｏｃｅｄ．Ｏｎｌｉｎｅ ２０１６；１８：２、Ｄｕｃｒｅｔ，Ａ．，“Ｌｉｐａｓｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ｕｎｄｅｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ，”Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １９９８，２２（４）：２１２－２１６を参照されたい。
【0021】
いくつかの実施形態では、酵素は、固体支持体上に固定化される（すなわち、反応媒体に不溶性である固体に結合される）。酵素は、例えば、固体支持体上の官能基への共有結合、固体支持体上への吸着、及び固体支持体上の捕捉または封入により固体支持体に結合され得る。固体基板上に固定化することにより、酵素の安定性を増加させ、生成物の回収及び酵素の再利用を容易にすることができる。いくつかの実施形態では、固体支持体は、シリカまたは無機酸化物である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、活性炭または改質もしくは未改質木炭である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、合成ポリマー（例えば、アミノ及びカルボキシルプラズマ活性化ポリプロピレンフィルム、ならびにメタクリレートのコポリマー）である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、Ｉｍｍｏｂｅａｄである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、イオン交換樹脂（例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ及びＳｅｐａｂｅａｄｓ）である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、シリカゲルである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、ポリスチレンである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、セルロースナノクリスタルである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、キトサンである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、アクリルビーズである。酵素固定化技法は、当該技術分野で周知されている。Ｚｄａｒｔａ，Ｊ．，“Ａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｕｔｉｌｉｔｙ，”Ｃａｔａｌｙｓｔｓ ２０１８，８，９２，１－２７、及びＭｉｌｅｔｉｃ，Ｎ．，“Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ Ｂ ｏｎ ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，”Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０１０，３１（１）：７１－７４を参照されたい。
【0022】
いくつかの実施形態では、酵素は、細菌または真菌源に由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、真菌源に由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、細菌源に由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ、Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｍｕｃｏｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｎｉｖｅｕｓ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属菌、Ｒｅｓｉｎａｓｅ ＨＴ、Ｌｉｐｅｘ １００Ｌ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ｓｔｉｃｋａｗａｙ、Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ属菌、またはＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓに由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａに由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼＢである。酵素は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ、Ｇｅｎｅｎｃｏｒ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ｃ－Ｌｅｃｔａ、Ａｕｍ Ｅｎｚｙｍｅｓから入手することができ、例えば、Ｉｍｍｏｂｅａｄ ＣＯＶ－１等の固体基板上に固定化することができる。
【0023】
いくつかの実施形態では、酵素は、以下のうちの１つから選択される：
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のリパーゼＡ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のリパーゼＢ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のジェネリックリパーゼＢ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＴｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＭｕｃｏｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｐｕｓ ｎｉｖｅｕｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属菌由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたリパーゼＲｅｓｉｎａｓｅ ＨＴ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたリパーゼＬｉｐｅｘ １００Ｌ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＦｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ ｐｉｓｉ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ ５１０３２由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ属菌由来のリパーゼ、及び
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来のリパーゼ。
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のリパーゼＡ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のリパーゼＢ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のジェネリックリパーゼＢ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＴｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＭｕｃｏｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｐｕｓ ｎｉｖｅｕｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属菌由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたリパーゼＲｅｓｉｎａｓｅ ＨＴ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたリパーゼＬｉｐｅｘ １００Ｌ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＦｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ ｐｉｓｉ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ ５１０３２由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ属菌由来のリパーゼ、及び
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来のリパーゼ。
【0024】
いくつかの実施形態では、酵素は、以下のうちの１つから選択される：
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢＹ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＭＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＴＬＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＲＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＢＣ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＰＦ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＲＯ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＭＪ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＮＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＮＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＳＭＱ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＥＳ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＬＩＰＸ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＬ５１－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＣＭＯ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＵＬＩ－Ｔ２－１５０、及び
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＣａＬＢ－ＡＤＳ４。
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢＹ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＭＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＴＬＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＲＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＢＣ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＰＦ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＲＯ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＭＪ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＮＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＮＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＳＭＱ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＥＳ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＬＩＰＸ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＬ５１－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＣＭＯ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＵＬＩ－Ｔ２－１５０、及び
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＣａＬＢ－ＡＤＳ４。
【0025】
いくつかの実施形態では、酵素は、ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢ－Ｔ２－１５０である。いくつかの実施形態では、酵素は、ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＣａＬＢ－ＡＤＳ４である。
【0026】
式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での処理は、約１５℃～約２０℃の温度で実施され得る。いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での処理は、室温で実施される。
【0027】
式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での処理は、約６時間～約２４時間の期間にわたって実施され得る。いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での処理は、約１６時間の期間にわたって実施される。
【0028】
式（Ａ４）の化合物のＡｋ１での処理は、Ｓ１の存在下で実施され得、ここで、Ｓ１は溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ１は、エーテル溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ１は、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルである。いくつかの実施形態では、Ｓ１は、２－メチルテトラヒドロフランである。
【0029】
該方法は、式（Ａ３）の化合物から式（Ａ２）の化合物を分離するステップをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、分離は、混合物を塩基水溶液で処理し、混合物から水層を分離することを含む。いくつかの実施形態では、塩基水溶液は、炭酸ナトリウム水溶液である。
【0030】
いくつかの実施形態では、Ｚは、－ＣＨ２ＲＡであり、脱保護は、式（Ａ２）の化合物をＲＡ１で還元することを含み、ここで、ＲＡ１は、還元剤である。いくつかの実施形態では、ＲＡは、フェニルである。
【0031】
いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、リチウム金属、ナトリウム金属、またはカルシウム金属である。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、リチウム金属である。
【0032】
還元は、Ｓ２の存在下で実行され得、ここで、Ｓ２は溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ２は、エーテル溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ２は、２－メチルテトラヒドロフランである。
【0033】
いくつかの実施形態では、式（Ａ１）の化合物は、７５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ１）の化合物は、９０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ１）の化合物は、９５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ１）の化合物は、９９％超のエナンチオマー過剰率で単離される。
【0034】
いくつかの実施形態では、化合物１は、７５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、化合物１は、９０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、化合物１は、９５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、化合物１は、９９％超のエナンチオマー過剰率で単離される。
【0035】
式（Ａ４）の化合物は、式（Ａ５）の化合物
またはその塩を、ＲＡＣＨ２ＳＨ（式（６））、またはその塩と反応させて、式（Ａ４）の化合物またはその塩を得ることを含む方法によって調製され得、式中、ＲＡは、本明細書で定義される通りである。
【化15】
【0036】
いくつかの実施形態では、式（Ａ５）の化合物またはその塩と、ＲＡＣＨ２ＳＨ（式（６））、またはその塩との反応は、Ｍ１の存在下で実施され、ここで、Ｍ１は金属触媒である。いくつかの実施形態では、Ｍ１は、亜鉛塩である。いくつかの実施形態では、Ｍ１は、（Ｄ）－酒石酸亜鉛である。
【0037】
式（Ａ５）の化合物またはその塩と、ＲＡＣＨ２ＳＨ（式（６））との反応は、Ｂ１の存在下で実施され得、ここで、Ｂ１は塩基である。いくつかの実施形態では、Ｂ１は、アルコキシド塩基である。いくつかの実施形態では、Ｂ１は、ナトリウムエトキシドである。
【0038】
式（Ａ５）の化合物と式（Ａ６）の化合物との反応は、Ｓ３の存在下で実施され得、ここで、Ｓ３は溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ３は、ハロゲン化溶媒またはエーテル溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ３は、ジクロロメタンである。いくつかの実施形態では、Ｓ３は、２－メチルテトラヒドロフランである。
【0039】
いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物は、２５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物は、５０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物は、７０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物は、８０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物は、９０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物は、９５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物は、９９％超のエナンチオマー過剰率で単離される。
【0040】
式（４）の化合物は、式（５）の化合物
またはその塩を、ＲＡＣＨ２ＳＨ（式（６））、またはその塩と反応させて、式（４）の化合物またはその塩を得ることを含む方法によって調製され得、式中、ｍ及びＲＡは、本明細書で定義される通りである。
【化16】
【0041】
いくつかの実施形態では、ｍは０である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。いくつかの実施形態では、ｍは２である。
【0042】
いくつかの実施形態では、式（５）の化合物またはその塩と、ＲＡＣＨ２ＳＨ（式（６））、またはその塩との反応は、Ｍ１の存在下で実施され、ここで、Ｍ１は金属触媒である。いくつかの実施形態では、Ｍ１は、亜鉛塩である。いくつかの実施形態では、Ｍ１は、（Ｄ）－酒石酸亜鉛である。
【0043】
式（５）の化合物またはその塩と、ＲＡＣＨ２ＳＨ（式（６））との反応は、Ｂ１の存在下で実施され得、ここで、Ｂ１は塩基である。いくつかの実施形態では、Ｂ１は、アルコキシド塩基である。いくつかの実施形態では、Ｂ１は、ナトリウムエトキシドである。
【0044】
式（５）の化合物と式（６）の化合物との反応は、Ｓ３の存在下で実施され得、ここで、Ｓ３は溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ３は、ハロゲン化溶媒またはエーテル溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ３は、ジクロロメタンである。いくつかの実施形態では、Ｓ３は、２－メチルテトラヒドロフランである。
【0045】
いくつかの実施形態では、式（４）の化合物は、２５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（４）の化合物は、５０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（４）の化合物は、７０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（４）の化合物は、８０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（４）の化合物は、９０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（４）の化合物は、９５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（４）の化合物は、９９％超のエナンチオマー過剰率で単離される。
【0046】
いくつかの実施形態では、式（Ａ１）の化合物は、式（１）の化合物
またはその塩であり、式中、ｍは、０、１、または２である。
【化17】
【0047】
いくつかの実施形態では、式（Ａ２）の化合物は、式（２）の化合物
またはその塩であり、式中、ｍは、０、１、または２である。
【化18】
【0048】
いくつかの実施形態では、式（Ａ３）の化合物は、式（３）の化合物
またはその塩であり、式中、ｍは、０、１、または２である。
【化19】
【0049】
いくつかの実施形態では、式（Ａ４）の化合物は、式（４）の化合物
またはその塩であり、式中、ｍは、０、１、または２である。
【化20】
【0050】
いくつかの実施形態では、式（Ａ５）の化合物は、式（５）の化合物
またはその塩であり、式中、ｍは、０、１、または２である。
【化21】
【0051】
いくつかの実施形態では、ｍは０である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。いくつかの実施形態では、ｍは２である。
【0052】
いくつかの実施形態では、式（１）の化合物は、化合物１：
である。
【化22】
【0053】
いくつかの実施形態では、式（２）の化合物は、化合物２：
である。
【化23】
【0054】
いくつかの実施形態では、式（３）の化合物は、化合物３：
である。
【化24】
【0055】
いくつかの実施形態では、式（４）の化合物は、化合物４：
である。
【化25】
【0056】
いくつかの実施形態では、式（５）の化合物は、化合物５：
である。
【化26】
【0057】
いくつかの実施形態では、式（６）の化合物は、ベンジルメルカプタンである。
【0058】
また、本明細書では、下記式を有する化合物１：
またはその塩を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）下記式を有する化合物５：
またはその塩を、ベンジルメルカプタンと反応させて、下記式を有する化合物４：
またはその塩を得ることと、
ｂ）化合物４を、酵素の存在下で、無水グルタル酸で処理して、化合物２及び化合物３、
またはそれらの塩の混合物を得ることと、
ｃ）化合物２を還元して、化合物１を得ることと、を含む。
【化27】
ａ）下記式を有する化合物５：
【化28】
【化29】
ｂ）化合物４を、酵素の存在下で、無水グルタル酸で処理して、化合物２及び化合物３、
【化30】
ｃ）化合物２を還元して、化合物１を得ることと、を含む。
【0059】
いくつかの実施形態では、酵素は、リパーゼ酵素である。
【0060】
また、本明細書では、本明細書に記載の式（Ａ１）の化合物を調製するための方法のうちのいずれかによって調製される式（Ａ１）の化合物が提供される。
【0061】
化合物Ａ８及び化合物８の調製
本明細書では、治療薬としてのコンジュゲートを調製する上で有用であるコンジュゲートリンカーである、式Ａ８の化合物を調製するための方法が提供される。
本明細書では、治療薬としてのコンジュゲートを調製する上で有用であるコンジュゲートリンカーである、式Ａ８の化合物を調製するための方法が提供される。
【0062】
本明細書では、式（Ａ８）の化合物：
またはその塩（式中、
環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルまたは５～７員ヘテロシクロアルキルであり、
ＲＣは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から独立して選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、式（Ａ７）の化合物
またはその塩を、酵素の存在下でＡｋ２（ここで、Ａｋ２はアシル化試薬である）と反応させて、式（Ａ８）の化合物及び式（Ａ９）の化合物、
またはそれらの塩の混合物（式中、ＲＤは、ＣＯＯＨにより任意選択で置換されるＣ１－６アルキルである）を得ることを含む。
【化31】
環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキルまたは５～７員ヘテロシクロアルキルであり、
ＲＣは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から独立して選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、式（Ａ７）の化合物
【化32】
【化33】
【0063】
本明細書では、治療薬としてのコンジュゲートを調製する上で有用であるコンジュゲートリンカーである、化合物８を調製するための方法が提供される。
【0064】
本明細書では、式（８）の化合物：
またはその塩（式中、ｍは、０、１、または２であり、ＲＣは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から独立して選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を調製するための方法が提供され、該方法は、
式（７）の化合物
またはその塩を、酵素の存在下でＡｋ２（ここで、Ａｋ２はアシル化試薬である）と反応させて、式（８）の化合物及び式（９）の化合物、
またはそれらの塩の混合物（式中、ＲＤは、ＣＯＯＨにより任意選択で置換されるＣ１－６アルキルである）を得ることを含む。
【化34】
式（７）の化合物
【化35】
【化36】
【0065】
式（Ａ７）及び式（７）の化合物、ならびにそれらを調製するための方法は、米国特許公開第ＵＳ２０１９／２０９５８０号、米国特許出願第１６／９２５，０９４号、及び米国特許出願第１６／９２４，４４５号に記載される。
【0066】
いくつかの実施形態では、ｍは０である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。いくつかの実施形態では、ｍは２である。
【0067】
いくつかの実施形態では、Ａｋ２は、無水グルタル酸、無水コハク酸、または酢酸イソプロペニルである。いくつかの実施形態では、Ａｋ２は、無水グルタル酸である。いくつかの実施形態では、Ａｋ２は、無水コハク酸である。いくつかの実施形態では、Ａｋ２は、酢酸イソプロペニルである。
【0068】
いくつかの実施形態では、ＲＣは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される。いくつかの実施形態では、ＲＣは、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される５～１０員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ＲＣは、５～１０員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ＲＣは、ピリジニルである。
【0069】
いくつかの実施形態では、ＲＤは、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、またはＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨである。いくつかの実施形態では、ＲＤは、ＣＨ３である。いくつかの実施形態では、ＲＤは、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨである。いくつかの実施形態では、ＲＤは、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨである。
【0070】
いくつかの実施形態では、酵素は、リパーゼ酵素である。
【0071】
いくつかの実施形態では、酵素は、固体支持体上に固定化される（すなわち、反応媒体に不溶性である固体に結合される）。酵素は、例えば、固体支持体上の官能基への共有結合、固体支持体上への吸着、及び固体支持体上の捕捉または封入により固体支持体に結合され得る。固体基板上に固定化することにより、酵素の安定性を増加させ、生成物の回収及び酵素の再利用を容易にすることができる。いくつかの実施形態では、固体支持体は、シリカまたは無機酸化物である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、活性炭または改質もしくは未改質木炭である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、合成ポリマー（例えば、アミノ及びカルボキシルプラズマ活性化ポリプロピレンフィルム、ならびにメタクリレートのコポリマー）である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、Ｉｍｍｏｂｅａｄである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、イオン交換樹脂（例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ及びＳｅｐａｂｅａｄｓ）である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、シリカゲルである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、ポリスチレンである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、セルロースナノクリスタルである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、キトサンである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、アクリルビーズである。酵素固定化技法は、当該技術分野で周知されている。Ｚｄａｒｔａ，Ｊ．，“Ａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｕｔｉｌｉｔｙ，”Ｃａｔａｌｙｓｔｓ ２０１８，８，９２，１－２７、及びＭｉｌｅｔｉｃ，Ｎ．，“Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ Ｂ ｏｎ ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，”Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０１０，３１（１）：７１－７４を参照されたい。
【0072】
いくつかの実施形態では、酵素は、細菌または真菌源に由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、真菌源に由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、細菌源に由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ、Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｍｕｃｏｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｎｉｖｅｕｓ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属菌、Ｒｅｓｉｎａｓｅ ＨＴ、Ｌｉｐｅｘ １００Ｌ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ｓｔｉｃｋａｗａｙ、Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ属菌、またはＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓに由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａに由来するリパーゼ酵素である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼＢである。酵素は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ、Ｇｅｎｅｎｃｏｒ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ｃ－Ｌｅｃｔａ、Ａｕｍ Ｅｎｚｙｍｅｓから入手することができ、例えば、Ｉｍｍｏｂｅａｄ ＣＯＶ－１等の固体基板上に固定化することができる。
【0073】
いくつかの実施形態では、酵素は、以下のうちの１つから選択される：
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のリパーゼＡ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のリパーゼＢ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のジェネリックリパーゼＢ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＴｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＭｕｃｏｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｐｕｓ ｎｉｖｅｕｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属菌由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたリパーゼＲｅｓｉｎａｓｅ ＨＴ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたリパーゼＬｉｐｅｘ １００Ｌ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＦｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ ｐｉｓｉ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ ５１０３２由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ属菌由来のリパーゼ、及び
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来のリパーゼ。
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のリパーゼＡ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のリパーゼＢ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のジェネリックリパーゼＢ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＴｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＭｕｃｏｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＲｈｉｚｏｐｕｓ ｎｉｖｅｕｓ由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属菌由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたリパーゼＲｅｓｉｎａｓｅ ＨＴ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたリパーゼＬｉｐｅｘ １００Ｌ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＦｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ ｐｉｓｉ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ ５１０３２由来のリパーゼ、
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＣａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ属菌由来のリパーゼ、及び
乾燥アクリルビーズに共有結合させたＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来のリパーゼ。
【0074】
いくつかの実施形態では、酵素は、以下のうちの１つから選択される：
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢＹ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＭＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＴＬＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＲＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＢＣ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＰＦ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＲＯ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＭＪ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＮＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＮＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＳＭＱ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＥＳ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＬＩＰＸ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＬ５１－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＣＭＯ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＵＬＩ－Ｔ２－１５０、及び
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＣａＬＢ－ＡＤＳ４。
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢＹ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＭＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＴＬＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＲＬ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＢＣ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＰＦ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＲＯ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＭＪ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＮＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＮＡ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＳＭＱ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＲＥＳ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＬＩＰＸ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＬ５１－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＣＭＯ－Ｔ２－１５０、
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＡＵＬＩ－Ｔ２－１５０、及び
ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＣａＬＢ－ＡＤＳ４。
【0075】
いくつかの実施形態では、酵素は、ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＩＭＭＣＡＬＢ－Ｔ２－１５０である。いくつかの実施形態では、酵素は、ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製品番号ＣａＬＢ－ＡＤＳ４である。
【0076】
式（Ａ７）の化合物のＡｋ２での処理は、約１５℃～約２０℃の温度で実施され得る。いくつかの実施形態では、式（Ａ７）の化合物のＡｋ２での処理は、室温で実施される。
【0077】
式（Ａ７）の化合物のＡｋ２での処理は、約１２時間～約６０時間の期間にわたって実施され得る。いくつかの実施形態では、式（Ａ７）の化合物のＡｋ２での処理は、約２４時間～約４８時間の期間にわたって実施される。いくつかの実施形態では、式（Ａ７）の化合物のＡｋ２での処理は、約４８時間の期間にわたって実施される。いくつかの実施形態では、式（Ａ７）の化合物のＡｋ２での処理は、約４２時間の期間にわたって実施される。
【0078】
式（Ａ７）の化合物のＡｋ１での処理は、Ｓ４の存在下で実施され得、ここで、Ｓ４は溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ４は、エーテル溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ４は、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルである。いくつかの実施形態では、Ｓ４は、２－メチルテトラヒドロフランである。
【0079】
該方法は、式（Ａ９）の化合物から式（Ａ８）の化合物を分離するステップをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、分離は、混合物を塩基水溶液で処理し、混合物から水層を分離することを含む。いくつかの実施形態では、塩基水溶液は、炭酸ナトリウム水溶液である。
【0080】
いくつかの実施形態では、式（Ａ８）の化合物は、２５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ８）の化合物は、５０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ８）の化合物は、７０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ８）の化合物は、８０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ８）の化合物は、９０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ８）の化合物は、９５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（Ａ８）の化合物は、９９％超のエナンチオマー過剰率で単離される。
【0081】
式（７）の化合物のＡｋ２での処理は、約１５℃～約２０℃の温度で実施され得る。いくつかの実施形態では、式（７）の化合物のＡｋ２での処理は、室温で実施される。
【0082】
式（７）の化合物のＡｋ２での処理は、約１２時間～約６０時間の期間にわたって実施され得る。いくつかの実施形態では、式（７）の化合物のＡｋ２での処理は、約２４時間～約４８時間の期間にわたって実施される。いくつかの実施形態では、式（７）の化合物のＡｋ２での処理は、約４８時間の期間にわたって実施される。いくつかの実施形態では、式（７）の化合物のＡｋ２での処理は、約４２時間の期間にわたって実施される。
【0083】
式（７）の化合物のＡｋ１での処理は、Ｓ４の存在下で実施され得、ここで、Ｓ４は溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ４は、エーテル溶媒である。いくつかの実施形態では、Ｓ４は、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルである。いくつかの実施形態では、Ｓ４は、２－メチルテトラヒドロフランである。
【0084】
該方法は、式（９）の化合物から式（８）の化合物を分離するステップをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、分離は、混合物を塩基水溶液で処理し、混合物から水層を分離することを含む。いくつかの実施形態では、塩基水溶液は、炭酸ナトリウム水溶液である。
【0085】
いくつかの実施形態では、式（８）の化合物は、２５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（８）の化合物は、５０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（８）の化合物は、７０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（８）の化合物は、８０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（８）の化合物は、９０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（８）の化合物は、９５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、式（８）の化合物は、９９％超のエナンチオマー過剰率で単離される。
【0086】
いくつかの実施形態では、式（Ａ７）の化合物は、化合物７：
である。
【化37】
【0087】
いくつかの実施形態では、式（Ａ８）の化合物は、化合物８：
である。
【化38】
【0088】
いくつかの実施形態では、式（Ａ９）の化合物は、化合物９：
である。
【化39】
【0089】
別の実施形態では、本明細書では、下記式を有する化合物８：
またはその塩を調製するための方法が提供され、該方法は、下記式を有する化合物７：
またはその塩を、酵素の存在下で酢酸イソプロペニルと反応させて、化合物８及び化合物９、
またはその塩の混合物を得ることを含む。
【化40】
【化41】
【化42】
【0090】
いくつかの実施形態では、化合物８は、２５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、化合物８は、５０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、化合物８は、７０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、化合物８は、８０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、化合物８は、９０％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、化合物８は、９５％超のエナンチオマー過剰率で単離される。いくつかの実施形態では、化合物８は、９９％超のエナンチオマー過剰率で単離される。
【0091】
また、本明細書では、本明細書に記載の式（Ａ８）の化合物を調製するための方法のうちのいずれかによって調製される式（Ａ８）の化合物が提供される。
【0092】
式（Ｉ）の化合物の調製
本明細書では、式（Ａ－Ｉ）の化合物：
またはその薬学的に許容される塩（式中、
環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキル基または５～７員ヘテロシクロアルキル基であり、
Ｒ１は、標的化部分であり、
Ｒ２は、治療部分である）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）本明細書に開示される方法によって調製される式（Ａ１）の化合物またはその塩を、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣと反応させて、式（Ａ８）の化合物
またはその塩（式中、ＲＣは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を得ることと、
ｂ）式（Ａ８）の化合物またはその塩を、ＲＥＯＣ（Ｏ）ＲＦと反応させて、式（Ａ－１Ｂ）の化合物
またはその塩（式中、
ＲＥは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換され、
ＲＦは、ハロまたはＯＲＦ１であり、ここで、ＯＲＦ１が、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を得ることと、
ｃ）該式（Ａ－１Ｂ）の化合物またはその塩を、Ｒ２Ｈと反応させて、式（Ａ－１Ｃ）の化合物
またはその塩を得ることと、
ｄ）式（Ａ－１Ｃ）の化合物またはその塩を、Ｒ１Ｈと反応させて、式（Ａ－Ｉ）の化合物を得ることと、を含む。
本明細書では、式（Ａ－Ｉ）の化合物：
【化43】
環Ａは、Ｃ５－７シクロアルキル基または５～７員ヘテロシクロアルキル基であり、
Ｒ１は、標的化部分であり、
Ｒ２は、治療部分である）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）本明細書に開示される方法によって調製される式（Ａ１）の化合物またはその塩を、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣと反応させて、式（Ａ８）の化合物
【化44】
ｂ）式（Ａ８）の化合物またはその塩を、ＲＥＯＣ（Ｏ）ＲＦと反応させて、式（Ａ－１Ｂ）の化合物
【化45】
ＲＥは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換され、
ＲＦは、ハロまたはＯＲＦ１であり、ここで、ＯＲＦ１が、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を得ることと、
ｃ）該式（Ａ－１Ｂ）の化合物またはその塩を、Ｒ２Ｈと反応させて、式（Ａ－１Ｃ）の化合物
【化46】
ｄ）式（Ａ－１Ｃ）の化合物またはその塩を、Ｒ１Ｈと反応させて、式（Ａ－Ｉ）の化合物を得ることと、を含む。
【0093】
本明細書では、式（Ｉ）の化合物：
またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒ１は、標的化部分であり、
Ｒ２は、治療部分であり、
ｍは、０、１、または２である）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）本明細書に開示される方法によって調製される式（１）の化合物またはその塩を、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣと反応させて、式（８）の化合物
またはその塩（式中、ＲＣは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を得ることと、
ｂ）式（８）の化合物またはその塩を、ＲＥＯＣ（Ｏ）ＲＦと反応させて、式（１Ｂ）の化合物
またはその塩（式中、
ＲＥは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換され、
ＲＦは、ハロまたはＯＲＦ１であり、ここで、ＯＲＦ１が、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を得ることと、
ｃ）式（１Ｂ）の化合物またはその塩を、Ｒ２Ｈと反応させて、式（１Ｃ）の化合物
またはその塩を得ることと、
ｄ）式（１Ｃ）の化合物またはその塩を、Ｒ１Ｈと反応させて、式（Ｉ）の化合物を得ることと、を含む。
【化47】
Ｒ１は、標的化部分であり、
Ｒ２は、治療部分であり、
ｍは、０、１、または２である）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）本明細書に開示される方法によって調製される式（１）の化合物またはその塩を、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣと反応させて、式（８）の化合物
【化48】
ｂ）式（８）の化合物またはその塩を、ＲＥＯＣ（Ｏ）ＲＦと反応させて、式（１Ｂ）の化合物
【化49】
ＲＥは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換され、
ＲＦは、ハロまたはＯＲＦ１であり、ここで、ＯＲＦ１が、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を得ることと、
ｃ）式（１Ｂ）の化合物またはその塩を、Ｒ２Ｈと反応させて、式（１Ｃ）の化合物
【化50】
ｄ）式（１Ｃ）の化合物またはその塩を、Ｒ１Ｈと反応させて、式（Ｉ）の化合物を得ることと、を含む。
【0094】
いくつかの実施形態では、式（Ａ－Ｉ）の化合物は、式（Ａ－Ｉ）’：
を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
【化51】
【0095】
いくつかの実施形態では、ｍは０である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。いくつかの実施形態では、ｍは２である。
【0096】
いくつかの実施形態では、ＲＣは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ＲＣは、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される５～１０員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ＲＣは、５～１０員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ＲＣは、ピリジニルである。いくつかの実施形態では、ＲＣは、ピリジン－２－イルである。
【0097】
いくつかの実施形態では、ＲＥは、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換されるＣ６－１０アリールである。いくつかの実施形態では、ＲＥは、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換されるフェニルである。いくつかの実施形態では、ＲＥは、ＮＯ２で置換されたフェニルである。
【0098】
いくつかの実施形態では、ＲＦは、ハロである。いくつかの実施形態では、ＲＦは、クロロである。いくつかの実施形態では、ＲＦは、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換されるＣ６－１０アリールである。いくつかの実施形態では、ＲＦは、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換されるフェニルである。いくつかの実施形態では、ＲＦは、ＮＯ２で置換されたフェニルである。
【0099】
いくつかの実施形態では、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣは、炭酸ビス（５－ニトロフェニル）である。
【0100】
本明細書では、式（Ｉ）の化合物：
またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒ１は、標的化部分であり、
Ｒ２は、治療部分である）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）本明細書に開示される方法によって調製される式（１）の化合物またはその塩を、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣと反応させて、式（８）の化合物
またはその塩（式中、ＲＣは、Ｃ６－１０アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、該５～１０員ヘテロアリールが、少なくとも１個の環形成炭素原子ならびにＮ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個の環形成ヘテロ原子を有し、該Ｃ６－１０アリール及び５～１０員ヘテロアリールが各々、Ｃ１－４アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、及びＯＣＨ３から独立して選択される１、２、３、４、または５つの置換基により任意選択で置換される）を得ることと、
ｂ）化合物１Ａまたはその塩を、炭酸ビス（４－ニトロフェニル）と反応させて、下記式を有する化合物１Ｂ：
またはその塩を得ることと、
ｃ）化合物１Ｂまたはその塩を、Ｒ２Ｈと反応させて、下記式を有する化合物１Ｃ：
またはその塩を得ることと、
ｄ）化合物１Ｃまたはその塩を、Ｒ１Ｈと反応させて、式（Ｉ）の化合物を得ることと、を含む。
【化52】
Ｒ１は、標的化部分であり、
Ｒ２は、治療部分である）、
を調製するための方法が提供され、該方法は、
ａ）本明細書に開示される方法によって調製される式（１）の化合物またはその塩を、ＲＣ－Ｓ－Ｓ－ＲＣと反応させて、式（８）の化合物
【化53】
ｂ）化合物１Ａまたはその塩を、炭酸ビス（４－ニトロフェニル）と反応させて、下記式を有する化合物１Ｂ：
【化54】
ｃ）化合物１Ｂまたはその塩を、Ｒ２Ｈと反応させて、下記式を有する化合物１Ｃ：
【化55】
ｄ）化合物１Ｃまたはその塩を、Ｒ１Ｈと反応させて、式（Ｉ）の化合物を得ることと、を含む。
【0101】
標的化部分は、異常なレベルのバイオマーカーの存在が１つまたは複数の特定の疾患状態に関連付けられ得る、特定の細胞または組織の種類に対して親和性を有し得る。典型的なバイオマーカーには、トランスフェリン受容体；ＬＤＬ受容体；上皮成長因子受容体ファミリーメンバー（例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、Ｈｅｒ４）または血管内皮細胞成長因子受容体等の成長因子受容体、サイトカイン受容体、細胞接着分子、インテグリン、セレクチン、及びＣＤ分子を含むがこれらに限定されない細胞表面タンパク質（例えば、受容体）が含まれる。マーカーは、悪性細胞上で排他的にまたはより高い量で存在する分子、例えば、腫瘍抗原であり得る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、目的とする標的細胞上または標的部位に発現した抗原に対して特異性を有する抗体、または抗体断片である。多種多様な腫瘍特異的または他の疾患特異的抗原が同定されており、それらの抗原に対する抗体が、かかる腫瘍または他の疾患の処置において使用されているか、または使用が提案されている。当該技術分野で既知である抗体を、本発明の化合物において、特に標的抗原が関連付けられる疾患の処置のために使用することができる。
【0102】
いくつかの実施形態では、標的化部分は、抗体、抗体断片、二重特異性抗体、または他の抗体ベースの分子もしくは化合物である。さらなる実施形態では、標的化部分は、アプタマー、アビマー、受容体結合リガンド、核酸、ビオチン－アビジン結合対等であり得る。
【0103】
いくつかの実施形態では、標的化部分は、ペプチドである。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、１０～５０個のアミノ酸、２０～４０個のアミノ酸、１０～２０個のアミノ酸、２０～３０個のアミノ酸、または３０～４０個のアミノ酸を有する。
【0104】
いくつかの実施形態では、標的化部分は、立体構造的に制限されたペプチドである。立体構造的に制限されたペプチドには、例えば、大環状ペプチド及びステープルされたペプチドが含まれ得る。ステープルされたペプチドは、２つのアミノ酸側鎖間の共有結合性の連結によって拘束されて、ペプチド大環状化合物を形成するペプチドである。立体構造的に制限されたペプチドは、例えば、Ｇｕｅｒｌａｖａｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１４，４９，３３１－３４５、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ（２０１３），１１０（３６），Ｅ３４４５－Ｅ３４５４、Ｔｅｓａｕｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１９，２４，３５１－３７７、Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１９），６２（２２），１００９８－１０１０７、及びＤｏｕｇｈｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１９），１１９（１７），１０２４１－１０２８７に記載され、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。
【0105】
いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば、米国特許第８，０７６，４５１号及び同第９，２８９，５０８号ならびに米国特許公開第２０１９／２０９５８０号（同文献の各々は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される）に記載される環境感受性のペプチドであるが、かかる選択的挿入が可能な他のペプチドを使用することが可能である。他の好適なペプチドは、例えば、Ｗｅｅｒａｋｋｏｄｙ，ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１０（１５），５８３４－５８３９（２０１３年４月９日）に記載され、同文献もまた参照によりその全体が本明細書に援用される。理論に拘束されるものではないが、環境感受性のペプチドは、生理学的変化（例えば、ｐＨ）に応答して立体構造変化を経て、細胞膜を横切って挿入すると考えられる。該ペプチドは、酸性組織を標的とし、細胞外の低ｐＨに応答して細胞膜を横切って極性の細胞不透過性分子を選択的に移行させることができる。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、約６．０未満のｐＨを有する酸性または低酸素性マントルを有する細胞膜を横切って分子を選択的に送達することができる。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、約６．５未満のｐＨを有する酸性または低酸素性マントルを有する細胞膜を横切って分子を選択的に送達することができる。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、約５．５未満のｐＨを有する酸性または低酸素性マントルを有する細胞膜を横切って分子を選択的に送達することができる。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、約５．０～約６．０のｐＨを有する酸性または低酸素性マントルを有する細胞膜を横切って分子を選択的に送達することができる。
【0106】
「酸性及び／または低酸素性マントル」という用語は、７．０より低い、好ましくは６．５より低いｐＨを有する問題の病変組織における細胞の環境を指す。酸性または低酸素性マントルは、より好ましくは約５．５のｐＨを有し、最も好ましくは約５．０のｐＨを有する。式（Ｉ）の化合物は、ｐＨ依存的様式で酸性及び／または低酸素性マントルを有する細胞膜を横切って挿入して、Ｒ２－を細胞に挿入し、その後すぐにジスルフィドリンカーが切断されて、遊離Ｒ２Ｈを送達する。式（Ｉ）の化合物はｐＨ依存性であるため、それらは、細胞を取り巻く酸性または低酸素性マントルの存在下でのみ細胞膜を横切って優先的に挿入し、酸性または低酸素性マントルを有しない「正常」細胞の細胞膜を横切っては挿入しない。酸性または低酸素性マントルを有する細胞の例は、がん細胞である。
【0107】
ペプチドＲ１、または細胞膜を横切るペプチドＲ１もしくは本発明の化合物の挿入様式を指して本明細書で使用される「ｐＨ感受性」または「ｐＨ依存性」という用語は、ペプチドが、中性ｐＨの膜脂質二重層よりも酸性または低酸素性マントルを有する細胞膜脂質二重層に対してより高い親和性を有することを意味する。故に、本発明の化合物は、細胞膜脂質二重層が酸性または低酸素性マントルを有する場合（「病変」細胞）、細胞膜を通して優先的に挿入して、Ｒ２－を細胞の内部に挿入する（故に上述したようなＲ２Ｈを送達する）が、マントル（細胞膜脂質二重層の環境）が酸性または低酸素性でない場合は（「正常」細胞）、細胞膜を通して挿入しない。この優先的な挿入は、ペプチドＲ１がらせん構造を形成し、これにより膜挿入が容易になる結果として達成されると考えられる。
【0108】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、以下の配列のうちの少なくとも１つを含む：
ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＣＧ（配列番号１；Ｐｖ１）、
ＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＣＧ（配列番号２；Ｐｖ２）、
ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＤＡＤＥＣＧ（配列番号３；Ｐｖ３）、
Ａｃ－ＡＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＧＴＫＣＧ（配列番号４；Ｐｖ４）、及び
ＡＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＧＴＣ（配列番号５；Ｐｖ５）。
ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＣＧ（配列番号１；Ｐｖ１）、
ＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＣＧ（配列番号２；Ｐｖ２）、
ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＤＡＤＥＣＧ（配列番号３；Ｐｖ３）、
Ａｃ－ＡＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＧＴＫＣＧ（配列番号４；Ｐｖ４）、及び
ＡＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＧＴＣ（配列番号５；Ｐｖ５）。
【0109】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、以下の配列のうちの少なくとも１つを含む：
ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＣＧ（配列番号１；Ｐｖ１）、
ＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＣＧ（配列番号２；Ｐｖ２）、及び
ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＤＡＤＥＣＧ（配列番号３；Ｐｖ３）。
ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＣＧ（配列番号１；Ｐｖ１）、
ＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＣＧ（配列番号２；Ｐｖ２）、及び
ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＤＡＤＥＣＧ（配列番号３；Ｐｖ３）。
【0110】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＣＧ（配列番号１；Ｐｖ１）を含む。
【0111】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列ＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＣＧ（配列番号２；Ｐｖ２）を含む。
【0112】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＤＡＤＥＣＧ（配列番号３；Ｐｖ３）を含む。
【0113】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列Ａｃ－ＡＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＧＴＫＣＧ（配列番号４；Ｐｖ４）を含む。
【0114】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列ＡＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＧＴＣ（配列番号５；Ｐｖ５）を含む。
【0115】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＣＧ（配列番号１；Ｐｖ１）から本質的になる。
【0116】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列ＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＣＧ（配列番号２；Ｐｖ２）から本質的になる。
【0117】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列ＡＤＤＱＮＰＷＲＡＹＬＤＬＬＦＰＴＤＴＬＬＬＤＬＬＷＤＡＤＥＣＧ（配列番号３；Ｐｖ３）から本質的になる。
【0118】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列ＡＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＧＴＫＣＧ（配列番号４；Ｐｖ４）から本質的になる。
【0119】
いくつかの実施形態では、環境感受性のペプチドは、配列ＡＡＥＱＮＰＩＹＷＡＲＹＡＤＷＬＦＴＴＰＬＬＬＬＤＬＡＬＬＶＤＡＤＥＧＴＣ（配列番号５；Ｐｖ５）から本質的になる。
【0120】
追加の環境感受性のペプチドは、米国特許公開第ＵＳ２０１９／２０９５８０号、米国特許出願第１６／９２５，０９４号、及び米国特許出願第１６／９２４，４４５号に開示され、同文献の各々はその全体が本明細書に援用される。
【0121】
「治療部分」という用語は、治療用分子または薬剤に由来する部分（例えば、Ｒ２－）を指す。本発明における使用に好適な治療用分子（例えば、Ｒ２Ｈ）には、ＰＡＲＰ阻害剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、及び低分子微小管標的化部分が含まれ、これらは、正常組織に対するそれらの有害作用の可能性のため、全身送達される場合に望ましくない副作用を有し得る。
【0122】
３種のＰＡＲＰ阻害剤（オラパリブ、ルカパリブ、及びニラパリブ）が現在市販されており、ＡＧ－０１４６９９（Ａｇｏｕｒｏｎ／Ｐｆｉｚｅｒ）、ＫＵ－００５９４３６（ＫｕＤＯＳ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＩＮＯ－１００１（Ｉｎｏｔｅｋ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＮＴ－１２５（現在はＥ－７４４９；Ｅｉｓａｉ；３Ｈ－ピリダジノ［３，４，５－ｄｅ］キナゾリン－３－オン、８－［（１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）メチル］－１，２－ジヒドロ－）、２Ｘ－１２１（２Ｘ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；３Ｈ－ピリダジノ［３，４，５－ｄｅ］キナゾリン－３－オン、８－［（１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）メチル］－１，２－ジヒドロ－）、及びＡＢＴ－８８８（Ａｂｂｖｉｅ）等のその他が開発段階にある。ＰＡＲＰ阻害剤は、（例えば）米国特許６，１００，２８３、６，３１０，０８２、６，４９５，５４１、６，５４８，４９４、６，６９６，４３７、７，１５１，１０２、７，１９６，０８５、７，４４９，４６４、７，６９２，００６、７，７８１，５９６、８，０６７，６１３、８，０７１，６２３、及び８，６９７，７３６に開示され、これらの特許は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
【0123】
ＰＡＲＰ阻害剤部分を含有する式（Ｉ）の化合物は、米国特許公開第ＵＳ２０１９／２０９５８０号に記載される。
【0124】
「低分子トポイソメラーゼＩ標的化部分」または「トポイソメラーゼＩ阻害剤」という用語は、トポイソメラーゼＩに結合する化学基を指す。低分子トポイソメラーゼＩ標的化部分は、トポイソメラーゼＩの活性を阻害する化合物に由来する基であり得る。トポイソメラーゼ阻害剤には、カンプトテシンならびにその誘導体及び類似体、例えば、オポテカン（ｏｐｏｔｅｃａｎ）、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、シラテカン（ＤＢ－６７、ＡＲ－６７）、コシテカン（ＢＮＰ－１３５０）、ルルトテカン、ギマテカン（ＳＴ１４８１）、ベロテカン（ＣＫＤ－６０２）、ルビテカン、トポテカン、デルクステカン、及びエキサテカンが含まれる。トポイソメラーゼ阻害剤は、例えば、Ｏｇｉｔａｎｉ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２６（２０１６），５０６９－５０７２、Ｋｕｍａｚａｗａ，Ｅ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９８，４２：２１０－２２０、Ｔａｈａｒａ，Ｍ，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２０１４，１３（５）：１１７０－１１８０、Ｎａｋａｄａ，Ｔ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０１６，２６：１５４２－１５４５に記載される。
【0125】
トポイソメラーゼＩ標的化部分を有する式（Ｉ）の化合物は、米国特許出願第１６／９２５，０９４号に記載される。式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ２は、カンプトテシン、オポテカン（ｏｐｏｔｅｃａｎ）、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、シラテカン（ＤＢ－６７、ＡＲ－６７）、コシテカン（ＢＮＰ－１３５０）、ルルトテカン、ギマテカン（ＳＴ１４８１）、ベロテカン（ＣＫＤ－６０２）、ルビテカン、トポテカン、デルクステカン、またはエキサテカンである。式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ２は、エキサテカンである。
【0126】
好適な低分子微小管標的化部分（例えば、Ｒ２）は、正常組織に対するそれらの有害作用の可能性のため、全身送達される場合に望ましくない副作用を有し得る、マイタンシノイドのような細胞傷害性化合物であり得る。低分子微小管標的化剤には、マイタンシノイド、アクリタキセル（ａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ドセタキセル、エポチロン、ディスコデルモリド、ビンカアルカロイド、コルヒチン、コンブレタスタチン、ならびに前述のものの誘導体及び類似体が含まれるが、これらに限定されない。微小管標的化剤は、Ｔａｎｇｕｔｕｒ，Ａ．Ｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１７ １７（２２）：２５２３－２５３７に記載される。微小管標的化剤にはまた、マイタンシン（ＤＭ１）等のマイタンシノイドならびにその誘導体及び類似体も含まれ、これらはＬｏｐｕｓ，Ｍ，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．，２０１１，３０７（２）：１１３－１１８、及びＷｉｄｄｉｓｏｎ，Ｗ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００６，４９：４３９２－４４０８に記載される。
【0127】
微小管標的化部分を有する式（Ｉ）の化合物は、米国特許出願第１６／９２４，４４５号に記載される。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、マイタンシノイドである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、ＤＭ１またはＤＭ４である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、ＤＭ１である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、ＤＭ４である。
【0128】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
から選択される。
【化56】
【0129】
本発明の分子は、例えば、フルオロフォア、放射性同位体等といったプローブでタグ付けすることができる。いくつかの実施形態では、プローブは、ＬＩＣＯＲ等の蛍光プローブである。蛍光プローブは、光励起時に光を再放出することができる任意の部分（例えば、フルオロフォア）を含むことができる。
【0130】
明確にするために別個の実施形態の文脈で記載される、本発明のある特定の特徴はまた、単一の実施形態で組み合わせても提供され得る（一方で、それらの実施形態は、あたかも多項従属形式で記述されたかのように組み合わされることが意図される）ことがさらに理解される。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で記載される本発明の様々な特徴は、別個に、または任意の好適な部分組み合わせでも提供され得る。故に、それは式（Ｉ）の化合物の実施形態として記載される特徴は、任意の好適な組み合わせで組み合わされ得ることが企図される。
【0131】
本明細書で使用されるとき、「約」とは、指定される値の±２０％を意味し、より具体的には、指定される値の±１０％、±５％、±２％、及び±１％の値を含む。
【0132】
本明細書で使用されるとき、ある特定の方法を説明する場合の「反応させること」または「接触させること」という用語は、当該技術分野で既知のように使用され、一般に、化学試薬を、分子レベルでのそれらの相互作用が化学的変換または物理的変換を達成することを可能にするような様態で一緒にまとめることを指す。いくつかの実施形態では、反応は２つの試薬を伴い、第１の試薬に対して１当量以上の第２の試薬が使用される。本明細書に記載の方法の反応ステップは、特定される生成物を調製するのに好適な時間にわたって、かつそのような条件下で実施され得る。
【0133】
「塩基」という用語は、酸－塩基反応において電子対ドナーである化合物を指す。
【0134】
「酸」という用語は、酸－塩基反応において電子対アクセプターである化合物を指す。
【0135】
本明細書に記載の方法の反応は、有機合成の当業者によって容易に選択され得る好適な溶媒中で実行され得る。好適な溶媒は、反応が実行される温度（例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度の範囲であり得る温度）で出発物質（反応物）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１つの溶媒または１つよりも多くの溶媒の混合物中で実行され得る。特定の反応ステップに応じて、特定の反応ステップに好適な溶媒が選択され得る。いくつかの実施形態では、反応は、試薬のうちの少なくとも１つが液体または気体である場合等には、溶媒の不在下で実行され得る。
【0136】
好適な溶媒には、四塩化炭素、ブロモジクロロメタン、ジブロモクロロメタン、ブロモホルム、クロロホルム、ブロモクロロメタン、ジブロモメタン、塩化ブチル、ジクロロメタン（塩化メチレン）、テトラクロロエチレン、トリクロロエチレン、１，１，１－トリクロロエタン、１，１，２－トリクロロエタン、１，１－ジクロロエタン、２－クロロプロパン、１，１，１－トリフルオロトルエン、１，２－ジクロロエタン、１，２－ジブロモエタン、ヘキサフルオロベンゼン、１，２，４－トリクロロベンゼン、１，２－ジクロロベンゼン、クロロベンゼン、フルオロベンゼン、それらの混合物等といったハロゲン化溶媒が含まれ得る。
【0137】
好適なエーテル溶媒には、ジメトキシメタン、テトラヒドロフラン、シクロペンチルメチルエーテル、１，３－ジオキサン、１，４－ジオキサン、フラン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル（ジグリム）、ジエチレングリコールジエチルエーテル、トリエチレングリコールジメチルエーテル、アニソール、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、それらの混合物等が含まれる。
【0138】
「アシル化試薬」という用語は、反応体化合物の求核性位置にカルボニル基を与える化合物を指す。例えば、求電子性のカルボニル基は、求核性のＯまたはＮ原子と反応することができる。例となるアシル化試薬には、酢酸イソプロペニル、無水コハク酸、及び無水グルタル酸が挙げられる。
【0139】
「還元剤」という用語は、不飽和炭素（例えば、カルボニル部分またはイミン部分の炭素）等の反応体化合物の求電子性位置に水素化物を与える化合物を指す。例えば、還元剤は、反応体化合物に水素化物を与えて、アミド含有反応体化合物をアミン生成物化合物に変換するか、イミン含有反応体化合物をアミン生成物化合物に変換するか、ケトン含有反応体化合物をアルコール生成物化合物に変換するか、またはエステル含有反応体化合物をアルコール生成物化合物に変換することができる。
【0140】
本明細書に記載の方法の反応は、空気中でまたは不活性雰囲気下で実行され得る。典型的には、空気と実質的に反応性のある試薬または生成物を含有する反応は、当業者に周知される空気感受性の合成技法を使用して実行され得る。
【0141】
本明細書に記載の方法は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法に従って監視することができる。例えば、生成物の形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈまたは１３Ｃ）、赤外分光法、分光光度法（例えば、紫外可視）、もしくは質量分析法等の分光手段によって、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もしくは薄層クロマトグラフィーによって監視することができる。反応によって得られた化合物は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法によって精製することができる。例えば、好適な吸着剤（例えば、シリカゲル、アルミナ等）上のクロマトグラフィー（中圧）、ＨＰＬＣ、または分取薄層クロマトグラフィー；蒸留；昇華、トリチュレーション、または再結晶。化合物の純度は、一般に、融点を測定すること（固体の場合）、ＮＭＲスペクトルを得ること、またはＨＰＬＣ分離を実施すること等の物理的方法によって決定される。融点が減少する場合、ＮＭＲスペクトルにおける不要なシグナルが減少する場合、またはＨＰＬＣトレースにおける無関係なピークが除去される場合、化合物は、精製されたといわれ得る。いくつかの実施形態では、化合物は、実質的に精製される。
【0142】
本明細書で使用される「周囲温度」及び「室温」という表現は、当該技術分野で理解されており、温度、例えば、反応温度、すなわち、ほぼ反応が実行される部屋の温度、例えば、約２０℃～約３０℃の温度を一般に指す。
【0143】
本明細書の種々の箇所で、化合物のある特定の特徴が群または範囲で開示される。このような開示が、このような群及び範囲の成員のそれぞれ１つ１つの個別の部分的組み合わせを含むことが具体的に意図される。例えば、「Ｃ１－６アルキル」という用語は、メチル、エチル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル及びＣ６アルキルを個別に（限定されないが）開示することを特に意図している。
【0144】
「ｎ員」という用語は、ｎが整数であり、典型的には、環形成原子の数がｎである部分における環形成原子の数を表す。例えば、ピペリジニルは、６員ヘテロシクロアルキル環の例であり、ピラゾリルは、５員ヘテロアリール環の例であり、ピリジルは、６員ヘテロアリール環の例であり、１，２，３，４－テトラヒドロ－ナフタレンは、１０員シクロアルキル基の例である。
【0145】
「置換された」という用語は、原子または原子団が、別の基に結合した「置換基」として水素を形式的に置き換えることを意味する。「置換された」という用語は、別段の記載がない限り、任意のレベルの置換、例えば、そのような置換が許可される場合、一置換、二置換、三置換、四置換、または五置換を指す。置換基は独立して選択され、置換は化学的にアクセス可能な任意の位置にあり得る。所与の原子での置換は原子価によって制限されることを理解されたい。所与の原子での置換は、化学的に安定な分子をもたらすことを理解されたい。「任意選択で置換される」という語句は、非置換であるか、または置換されることを意味する。「置換された」という用語は、水素原子が除去され、置換基によって置き換えられることを意味する。単一の二価置換基、例えば、オキソは、２個の水素原子を置き換えることができる。
【0146】
「Ｃｎ－ｍ」という用語は、端点を含む範囲を示し、ここで、ｎ及びｍは整数であり、炭素の数を示す。例としては、Ｃ１－４、Ｃ１－６等が挙げられる。
【0147】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「アルキル」という用語は、直鎖または分岐状であり得る飽和炭化水素基を指す。「Ｃｎ－ｍアルキル」という用語は、ｎ～ｍ個の炭素原子を有するアルキル基を指す。アルキル基は、形式的に、化合物の残りの部分へのアルキル基の結合点で置き換えられた１つのＣ－Ｈ結合を持つアルカンに対応する。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１～６個の炭素原子、１～４個の炭素原子、１～３個の炭素原子、または１～２個の炭素原子を含有する。アルキル部分の例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル等の化学基、２－メチル－１－ブチル、ｎ－ペンチル、３－ペンチル、ｎ－ヘキシル、１，２，２－トリメチルプロピル等の高級同族体が挙げられるが、これらに限定されない。
【0148】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「アルケニル」という用語は、１つまたは複数の二重炭素－炭素結合を有するアルキル基に対応する直鎖または分岐炭化水素基を指す。アルケニル基は、形式的に、化合物の残りの部分へのアルケニル基の結合点で置き換えられた１つのＣ－Ｈ結合を持つアルケンに対応する。「Ｃｎ－ｍアルケニル」という用語は、ｎ～ｍ個の炭素を有するアルケニル基を指す。いくつかの実施形態では、アルケニル部分は、２～６、２～４、または２～３個の炭素原子を含む。例示的なアルケニル基には、エテニル、ｎ－プロペニル、イソプロペニル、ｎ－ブテニル、ｓｅｃ－ブテニル等が含まれるが、これらに限定されない。
【0149】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「アルキニル」という用語は、１つまたは複数の三重炭素－炭素結合を有するアルキル基に対応する直鎖または分岐炭化水素基を指す。アルキニル基は、形式的に、化合物の残りの部分へのアルキル基の結合点で置き換えられた１つのＣ－Ｈ結合を持つアルキンに対応する。「Ｃｎ－ｍアルキニル」という用語は、ｎ～ｍ個の炭素を有するアルキニル基を指す。アルキニル基の例としては、エチニル、プロピン－１－イル、プロピン－２－イル等を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルキニル部分は、２～６、２～４、または２～３個の炭素原子を含む。
【0150】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「アルキレン」という用語は、二価のアルキル結合基を指す。アルキレン基は、形式的に、化合物の残りの部分へのアルキレン基の結合点で置き換えられた２つのＣ－Ｈ結合を持つアルカンに対応する。「Ｃｎ－ｍアルキレン」という用語は、ｎ～ｍ個の炭素原子を有するアルキレン基を指す。アルキレン基の例としては、エタン－１，２－ジイル、エタン－１，１－ジイル、プロパン－１，３－ジイル、プロパン－１，２－ジイル、プロパン－１，１－ジイル、ブタン－１，４－ジイル、ブタン－１，３－ジイル、ブタン－１，２－ジイル、２－メチル－プロパン－１，３－ジイル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0151】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、及びヨードを指す。いくつかの実施形態では、「ハロ」は、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒから選択されるハロゲン原子を指す。いくつかの実施形態では、ハロ基は、Ｆである。
【0152】
「芳香族」という用語は、１つまたは複数の多価不飽和環を有し、芳香族の性質を有する（すなわち、（４ｎ＋２）個の非局在化π（パイ）電子を有し、ここで、ｎは整数である）、炭素環または複素環を指す。
【0153】
単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「アリール」という用語は、単環式または多環式（例えば、２つの縮合環を有する）であり得る芳香族炭化水素基を指す。「Ｃｎ－ｍアリール」という用語は、ｎ～ｍ個の環炭素原子を有するアリール基を指す。アリール基には、例えば、フェニル、ナフチル等が含まれる。いくつかの実施形態では、アリール基は、６～約１０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は、６個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は、１０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は、フェニルである。
【0154】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」という用語は、硫黄、酸素、及び窒素から独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子環員を有する、単環式または多環式芳香族複素環を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール環は、窒素、硫黄、及び酸素から独立して選択される１個、２個、３個、または４個のヘテロ原子環員を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール部分における任意の環形成Ｎは、Ｎ－オキシドであり得る。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール環は、炭素原子と、窒素、硫黄、及び酸素から独立して選択される１、２、３または４個のヘテロ原子環員とを含む５～１４個の環原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール環は、炭素原子と、窒素、硫黄、及び酸素から独立して選択される１、２、３または４個のヘテロ原子環員とを含む５～１０個の環原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール環は、５～６個の環原子と、窒素、硫黄、及び酸素から独立して選択される１または２個のヘテロ原子環員とを有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、５員または６員ヘテロアリール環である。他の実施形態では、ヘテロアリールは、８員、９員、または１０員の縮合二環式ヘテロアリール環である。
【0155】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「シクロアルキル」という用語は、環化アルキル及びアルケニル基を含む非芳香族炭化水素環系（単環式、二環式、または多環式）を指す。「Ｃｎ－ｍシクロアルキル」という用語は、ｎ～ｍ個の環員炭素原子を有するシクロアルキルを指す。シクロアルキル基は、単環式または多環式（例えば、２、３、または４個の縮合環を有する）基及び多環式を含み得る。シクロアルキル基は、３、４、５、６、または７個の環形成炭素（Ｃ３－７）を有することができる。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、３～６個の環員、３～５個の環員、または３～４個の環員を有する。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は単環式である。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は単環式または二環式である。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、Ｃ３－６単環式シクロアルキル基である。シクロアルキル基の環形成炭素原子は、任意選択で酸化されて、オキソまたはスルフィド基を形成することができる。シクロアルキル基には、シクロアルキルイデンも含まれる。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルである。シクロアルキルの定義には、ベンゾ、またはシクロペンタンやシクロヘキサン等のチエニル誘導体等、シクロアルキル環に縮合した（すなわち、それと共通の結合を有する）１つまたは複数の芳香環を有する部分も含まれる。縮合芳香環を含有するシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む任意の環形成原子を介して結合し得る。シクロアルキル基の例としては、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロヘプチルが挙げられる。
【0156】
単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「ヘテロシクロアルキル」という用語は、環構造の一部として１つまたは複数のアルケニレン基を任意選択で含有し得、窒素、硫黄、酸素、及びリンから独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子環員を有し、４～１０環員、４～７環員、または４～６環員を有する、非芳香環または環系を指す。「ヘテロシクロアルキル」という用語には、単環式の４、５、６、及び７員ヘテロシクロアルキル基が含まれる。ヘテロシクロアルキル基は、単環式または二環式（例えば、２つの縮合または架橋環を有する）またはスピロ環式環系を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、窒素、硫黄、及び酸素から独立して選択される１、２、または３個のヘテロ原子を有する単環式基である。ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子及びヘテロ原子は、任意選択で酸化されて、オキソもしくはスルフィド基を形成することができ、または他の酸化された結合（例えば、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）またはＳ（Ｏ）２、Ｎ－オキシド等）もしくは窒素原子を四級化することができる。ヘテロシクロアルキル基は、環形成炭素原子または環形成ヘテロ原子を介して結合することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０～３つの二重結合を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０～２つの二重結合を含む。ヘテロシクロアルキルの定義には、ベンゾ、またはピペリジン、モルホリン、アゼピン等のチエニル誘導体等、ヘテロシクロアルキル環に縮合した（すなわち、それと共通の結合を有する）１つまたは複数の芳香環を有する部分も含まれる。縮合芳香環を含有するヘテロシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む任意の環形成原子を介して結合することができる。ヘテロシクロアルキル基の例としては、テトラヒドロピラニルが挙げられる。
【0157】
ある特定の箇所では、定義または実施形態は、具体的な環（例えば、アゼチジン環、ピリジン環等）に言及する。特に明記しない限り、これらの環は、原子の原子価を超えない限り、任意の環員に結合することができる。例えば、アゼチジン環は、環の任意の位置で結合していてもよいが、一方で、アゼチジン－３－イル環は、３位で結合している。
【0158】
化学反応において本明細書で使用される「保護すること」及び「脱保護すること」という用語は、方法における化学基の組み込みを指し、かかる基は、方法における後のステップで除去される。化合物１及びその塩の調製という用語は、種々の化学基の保護及び脱保護を伴い得る。保護及び脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者により容易に決定され得る。保護基の化学的性質については、例えば、Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ，（Ｔｈｉｅｍｅ，２００７）、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６ｔｈ Ｅｄ．（Ｗｉｌｅｙ，２００７）、Ｐｅｔｕｒｓｓｉｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｅｄｕｃ．，１９９７，７４（１１），１２９７、及びＷｕｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈ Ｅｄ．，（Ｗｉｌｅｙ，２００６）に記載される。保護基の例としては、チオ保護基が挙げられる。
【0159】
本明細書で使用される「周囲温度」及び「室温」という表現は、当該技術分野で理解されており、温度、例えば、反応温度、すなわち、ほぼ反応が実行される部屋の温度、例えば、約２０℃～約３０℃の温度を一般に指す。
【0160】
本発明の化合物はまた、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩を含む。「薬学的に許容される塩」という用語は、親化合物が既存の酸または塩基部分をその塩の形態に変換することによって修飾される、開示される化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、アミン等の塩基性残基の無機または有機酸性塩、カルボン酸等の酸性残基のアルカリまたは有機塩等が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学的に許容される塩には、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成された親化合物の非毒性の塩が含まれる。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、水中または有機溶媒中、あるいは２つの混合物中の化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製することができる。一般に、エーテル、酢酸エチル、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、またはブタノール）またはアセトニトリル（ＭｅＣＮ）のような非水性媒体が好ましい。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ Ｅｄ．，（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，１９８５），ｐ．１４１８、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６（１），１－１９、及びＳｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，（Ｗｉｌｅｙ，２００２）に見出される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、Ｎ－オキシド形態を含む。
【実施例】
【0161】
本明細書で使用されるとき、全ての略語、記号、及び規則は、現代の科学文献で使用されるものと一致している。例えば、Ｊａｎｅｔ Ｓ．Ｄｏｄｄ，ｅｄ．，Ｔｈｅ ＡＣＳ Ｓｔｙｌｅ Ｇｕｉｄｅ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ Ａｕｔｈｏｒｓ ａｎｄ Ｅｄｉｔｏｒｓ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９９７を参照されたい。
【0162】
出発物質及び酵素
酵素は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ、Ｇｅｎｅｎｃｏｒ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ａｍａｎｏ ｅｎｚｙｍｅｓを含む）、ｃ－Ｌｅｃｔａ、Ａｕｍ Ｅｎｚｙｍｅｓから入手し、Ｉｍｍｏｂｅａｄ ＣＯＶ－１上に固定化した。出発物質は、ＴＣＩ及びＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから入手した。
酵素は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ、Ｇｅｎｅｎｃｏｒ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ａｍａｎｏ ｅｎｚｙｍｅｓを含む）、ｃ－Ｌｅｃｔａ、Ａｕｍ Ｅｎｚｙｍｅｓから入手し、Ｉｍｍｏｂｅａｄ ＣＯＶ－１上に固定化した。出発物質は、ＴＣＩ及びＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから入手した。
【0163】
キラルガスクロマトグラフィー（ＧＣ）
キラルＧＣは、Ｓｕｐｅｌｃｏ ｂｅｔａＤＥＸ ３２５（３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ ｄｆ）を使用して、キャリアガスとして水素を０．５ｍ／秒の線速度で、及び温度勾配操作（２から１０℃／分の速度）を使用して実施した。
キラルＧＣは、Ｓｕｐｅｌｃｏ ｂｅｔａＤＥＸ ３２５（３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ ｄｆ）を使用して、キャリアガスとして水素を０．５ｍ／秒の線速度で、及び温度勾配操作（２から１０℃／分の速度）を使用して実施した。
【0164】
酢酸２－（アセチルチオ）シクロヘキシルの（Ｓ，Ｓ）－エナンチオマーが最初に溶出した。他の成分は、このカラムを使用したキラルＧＣでは分割されなかった。
保持時間：
保持時間：
【表1】
【0165】
アキラルＧＣ
いくつかの変換判定のために、及び高感度キラルカラムと不適合性の試料に対してはアキラルＧＣを使用した。Ｓｕｐｅｌｃｏ ＭＥＴｂｉｏｄｉｅｓｅｌカラムを、キャリアガスとして水素を０．５ｍ／秒の線速度で用いて使用した。２０℃／分で５０から２５０℃の高速勾配を使用した。
保持時間：
いくつかの変換判定のために、及び高感度キラルカラムと不適合性の試料に対してはアキラルＧＣを使用した。Ｓｕｐｅｌｃｏ ＭＥＴｂｉｏｄｉｅｓｅｌカラムを、キャリアガスとして水素を０．５ｍ／秒の線速度で用いて使用した。２０℃／分で５０から２５０℃の高速勾配を使用した。
保持時間：
【表2】
【0166】
キラルＨＰＬＣ
キラルＨＰＬＣは、ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ３カラム２５０×４．６ｍｍを使用して、ヘプタン／イソプロパノール／エタノール混合物を使用して実施した。ベンジルチオエーテル誘導体は、ヘプタン／イソプロパノール９０／１０混合物（溶離液Ａ）を使用して分析することが可能であり、より極性のピリジルジスルフィド誘導体は、ヘプタン／イソプロパノール／エタノール６３／７／３０（溶離液Ｂ）を必要とした。検出は２２０ｎｍで実施した。
保持時間：
キラルＨＰＬＣは、ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ３カラム２５０×４．６ｍｍを使用して、ヘプタン／イソプロパノール／エタノール混合物を使用して実施した。ベンジルチオエーテル誘導体は、ヘプタン／イソプロパノール９０／１０混合物（溶離液Ａ）を使用して分析することが可能であり、より極性のピリジルジスルフィド誘導体は、ヘプタン／イソプロパノール／エタノール６３／７／３０（溶離液Ｂ）を必要とした。検出は２２０ｎｍで実施した。
保持時間：
【表3】
【0167】
実施例１．（Ｄ）－酒石酸亜鉛の合成
（Ｄ）－酒石酸（１５０ｇ；１ｍｏｌ）を水（１．５Ｌ）に溶解させた。水（１Ｌ）及び２０ｍｌの３．５％ＨＣｌ（２０ｍＬ）中の塩化亜鉛（１３６ｇ；１ｍｏｌ）の溶液を機械的撹拌下で加えた。酸性の混合物を、３３％水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨ４へと中和した。沈殿物が形成され、混合物をさらに１時間撹拌した。混合物をＰ３ガラスフィルターで濾過した。固体を水、アセトン、及び酢酸エチルで洗浄した。固体を真空オーブン中で乾燥させて、所望の生成物を白色の高密度粉末（２７０ｇ）として得た。
（Ｄ）－酒石酸（１５０ｇ；１ｍｏｌ）を水（１．５Ｌ）に溶解させた。水（１Ｌ）及び２０ｍｌの３．５％ＨＣｌ（２０ｍＬ）中の塩化亜鉛（１３６ｇ；１ｍｏｌ）の溶液を機械的撹拌下で加えた。酸性の混合物を、３３％水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨ４へと中和した。沈殿物が形成され、混合物をさらに１時間撹拌した。混合物をＰ３ガラスフィルターで濾過した。固体を水、アセトン、及び酢酸エチルで洗浄した。固体を真空オーブン中で乾燥させて、所望の生成物を白色の高密度粉末（２７０ｇ）として得た。
【0168】
代替として、脱イオン水（０．１５Ｌ）に溶解させた（Ｄ）－酒石酸（１５ｇ；０．１ｍｏｌ）を、３３％ＮａＯＨ（２０ｍｌ；０．２ｍｏｌ）を使用してｐＨ１２に中和した。脱イオン水（５０ｍＬ）中の塩化亜鉛（１３．６ｇ）の溶液を機械的撹拌下で滴加した。最初はゲルが形成され、これが白濁した懸濁液に変化した。添加の終わりに、ｐＨは中性まで低下した。濾過は、Ｐ３ガラスフィルターを使用して（約１時間にわたって）実施し、固体を脱イオン水、アセトン、及び酢酸エチルで洗浄した。オーブン中で真空乾燥すると、白色の飛散性粉末（２２ｇ）が得られた。
【0169】
実施例２．ラセミ２－ベンジルチオシクロヘキサノールの合成
ベンジルメルカプタン（１．２４ｇ；１０ｍｍｏｌ）及びシクロヘキセンオキシド（１．９ｇ；１９ｍｍｏｌ）を２－メチルテトラヒドロフランに溶解させた。Ｎ－メチルモルホリン（０．５ｍｌ）を加えた。反応は一晩で何ら生じなかった。ナトリウムエトキシド溶液（１ｍｌの２０％）の添加により、迅速な反応（１時間で５０％、メルカプタンの完全な変換）がもたらされた。水性処理及び蒸発により、黄色の油（２．１８ｇ）が得られた。油を、Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（オーブン１４５℃／＜１ｍｂａｒ）を使用して減圧下で蒸留して、透明な油（１．８９ｇ；８．５ｍｍｏｌ；８５％）を得た。ＨＰＬＣ：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ３を使用して、ヘプタン／イソプロパノール９０／１０を用いて８．７ｍ（Ｒ，Ｒ）及び９．２ｍ（Ｓ，Ｓ）の２つのピーク。２２０ｎｍでのＵＶ検出。
【化57】
【0170】
実施例３．濃縮された２－ベンジルチオシクロヘキサノール
５Ｌ反応器に（Ｄ）－酒石酸亜鉛（２６３ｇ）、ジクロロメタン（２Ｌ）、ベンジルメルカプタン（１２４ｇ；１ｍｏｌ）、及びシクロヘキセンオキシド（１４７ｇ；１．５当量）を装入した。反応物をＡｒ雰囲気下に置いた。混合物を５日間撹拌し（＞９９％のメルカプタン変換がもたらされた）、７日間後に濾過した。濾液を蒸発させ、酢酸エチルを使用して小さなフラスコに移した。蒸発及び高真空蒸留により、無色透明の油（２１５ｇ）が得られた。ＨＰＬＣ：８７％（Ｓ，Ｓ）［７５％のエナンチオマー過剰率］及び１％の他の成分。
【化58】
【0171】
（Ｄ）－酒石酸亜鉛触媒は、再使用が可能であった。２Ｌ反応器に、回収した（Ｄ）－酒石酸亜鉛触媒（４６８ｇ）、ジクロロメタン（１Ｌ）、ベンジルメルカプタン（１２４ｇ；１ｍｏｌ）、及びシクロヘキセンオキシド（１４７ｇ；１．５当量）を装入した。反応物をＡｒ雰囲気下に置いた。混合物を１日撹拌し（＞９９％のメルカプタン変換がもたらされた）、濾過した。濾液を蒸発させ、酢酸エチルを使用して小さなフラスコに移した。蒸発により、無色透明の油（２２５ｇ）が得られた。ＨＰＬＣ：８５％（Ｓ，Ｓ）［７３％のエナンチオマー過剰率］及び１％の他の成分。
【0172】
実施例４．酵素スクリーニング実験
２０～２５ｍｇの量の酵素を２ｍＬバイアルに加えた。これに、５体積％の酢酸イソプロペニルを含有する１ｍＬの無水ＭＴＢＥに溶解させたラセミ２－ベンジルチオシクロヘキサノール（２２ｍｇ）を加えた。バイアルを密閉し、サーモスタット付きシェーカーで、２４℃で１６時間振とうした。インキュベーション後、キラルＨＰＬＣによる分析を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ３、移動相中１００倍希釈；ヘプタン／イソプロパノール（９０／１０）を使用して実施した。スクリーニングの結果を下記の表に示す。
２０～２５ｍｇの量の酵素を２ｍＬバイアルに加えた。これに、５体積％の酢酸イソプロペニルを含有する１ｍＬの無水ＭＴＢＥに溶解させたラセミ２－ベンジルチオシクロヘキサノール（２２ｍｇ）を加えた。バイアルを密閉し、サーモスタット付きシェーカーで、２４℃で１６時間振とうした。インキュベーション後、キラルＨＰＬＣによる分析を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ３、移動相中１００倍希釈；ヘプタン／イソプロパノール（９０／１０）を使用して実施した。スクリーニングの結果を下記の表に示す。
【化59】
【表4】
【0173】
環状無水物（例えば、無水グルタル酸及び無水コハク酸）を用いたさらなる研究もまた有効であった。
【化60】
【0174】
上記の酵素スクリーニング実験においては無水グルタル酸を酢酸イソプロペニルの代わりに使用した。酵素ＣａＬ－Ｂ－Ｔ２の使用によりＲ選択的除去を可能にして、化合物２及び化合物３の８５：１５混合物を得た。化合物３を、２ＭのＮＨ３での塩基抽出、続いて弱塩基洗浄（例えば、Ｎａ２ＣＯ３水溶液）を介して反応混合物から除去した。生成物をＡｒ下で乾燥させて、化合物２を得た。
【0175】
実施例５．濃縮された２－ベンジルチオシクロヘキサノールの酵素による分割
濃縮された２－ベンジルチオシクロヘキサノール（２２５ｇ；８６％のエナンチオマー過剰率；１ｍｏｌ）を２Ｌフラスコに入れた。ＭＴＢＥ（１．５Ｌ）、無水グルタル酸（３３ｇ；０．２９ｍｏｌ）、及び固定化した酵素（ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ製の製品番号ＣａＬＢ－ＡＤＳ４；５０ｇ）を加えた。混合物を、メカニカルスターラーを使用して１８０ｒｐｍで２日間撹拌した。１日後、主要でない（Ｒ，Ｒ）－エナンチオマーが完全に除去された。翌日、反応混合物を濾過し、酵素を酢酸イソプロピルで洗浄した。濾液をアンモニアの２Ｍ水溶液（０．５Ｌ）及び炭酸ナトリウムの１．２５Ｍ水溶液（０．５Ｌ）で洗浄した。有機相を単離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、化合物２をわずかに混濁した無色の油（１７２ｇ；７６％）として得た。
ＨＰＬＣ：９８．０％、１００．０％のエナンチオマー過剰率。約１．１％のジベンジルジスルフィドが検出された。
【化61】
ＨＰＬＣ：９８．０％、１００．０％のエナンチオマー過剰率。約１．１％のジベンジルジスルフィドが検出された。
【0176】
実施例６．化合物２の還元的切断
蒸留した（Ｓ，Ｓ）－２－ベンジルチオシクロヘキサノール（１１．１ｇ；５０ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で２５０ｍＬ乾燥丸底フラスコに入れ、１００ｍＬの無水２－メチルテトラヒドロフランに溶解させた。機械的撹拌下で、粒状リチウム（総計１．４ｇ；２００ｍｍｏｌ）を２回に分けて加えた。反応物を水浴中で冷却した。周囲温度で一晩撹拌すると、灰色のスラリーが得られた。未反応の過剰なリチウムを含有する、このスラリーを１００ｍｌの冷水に注いだ。リチウム金属の完全なクエンチ後、透明な溶液が相分離した。所望の生成物のリチウム塩を含有する水相（ｐＨ＞１１）を固体クエン酸（１０ｇ）でｐＨ５に酸性化した。１００ｍＬの酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、注意深く蒸発させると、（Ｓ，Ｓ）－２－メルカプトシクロヘキサノールが薄黄色の油（５ｇ；３８ｍｍｏｌ；７６％）として得られた。ＧＣ：＞９９％。［α］Ｄ：＋４２°（ＭｅＯＨ中ｃ＝１））。
【化62】
【0177】
実施例７．（Ｓ，Ｓ）－２－ピリジン－２－イルジスルファネイル（ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｅｙｌ））シクロヘキサノール
（Ｓ，Ｓ）－２－メルカプトシクロヘキサノール（７．０ｇ；５３ｍｍｏｌ）をアルゴン下で５０ｍＬのメタノールに溶解させ、メタノール（１００ｍＬ）中のジピリジルジスルフィド（１２ｇ；５５ｍｍｏｌ）の溶液に滴加した。１．５時間後、反応混合物を蒸発乾固し、残渣をＭＴＢＥ（１００ｍＬ）と混合した。沈殿した２－メルカプトピリジンを濾過によって除去し、透明な濾液を１Ｍの炭酸ナトリウム溶液（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、黄色の油（１３ｇ）を得た。油を１００ｍｌのｎ－ヘプタンでトリチュレーションして、薄茶色の固体（１１ｇ（８６％）；ＧＣ：９１％）を得た。
【化63】
【0178】
固体をＭＴＢＥ（２５ｍＬ）への溶解、５０ｍＬのヘプタンとの混合によって精製し、所望の生成物を播種した（種は、例えば、実施例９のステップ１から得た）。白色の結晶性粉末が形成された。混合物を氷浴中で冷却し、濾過した。固体をｎ－ヘプタン（２５ｍｌ）で洗浄した。注意深く真空乾燥すると、白色の粉末（７．６ｇ；３１．５ｍｍｏｌ；メルカプトシクロヘキサノールから収率５９％；２－ベンジルチオシクロヘキサノールから収率４４％）が得られた。ＧＣ：９９．０％；ＨＰＬＣ：９９．８％；キラルＨＰＬＣ：１００％のエナンチオマー過剰率；融点：７０～７２℃；［α］Ｄ：－１４６°（ＭｅＯＨ中ｃ＝１）。
【0179】
実施例８．４－ニトロフェニル（（Ｓ，Ｓ））－２－ピリジン－２－イルジスルファネイル（ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｅｙｌ））シクロヘキシル）カーボネート
（Ｓ，Ｓ）－２－ピリジン－２－イルジスルファネイル（ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｅｙｌ））シクロヘキサノール（４．８ｇ；２０ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で乾燥フラスコに入れ、８０ｍＬの無水ジクロロメタンに溶解させた。ピリジン（５ｍＬ；６０ｍｍｏｌ；３当量）を加えた。４０ｍＬの無水ジクロロメタン中のクロロギ酸４－ニトロフェニル（４．０８ｇ；２０．２ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン下で、周囲温度で約１時間で滴加した。ＨＰＬＣ試料は、２％の残留（Ｓ，Ｓ）－２－ピリジン－２－イルジスルファネイル（ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｅｙｌ））シクロヘキサノール、３％の炭酸ビス（４－ニトロフェニル）、及び９５％の所望の生成物を示した。１時間のさらなる撹拌で、変換率は増加しなかった。混合物を水（１０ｍＬ）でクエンチし、０．５Ｍの塩酸水溶液（１００ｍＬ）、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。蒸発により、黄色の油（８．４ｇ）が得られた。この油をＭＴＢＥ（３５ｍＬ）及びｎ－ヘプタン（５０ｍＬ）の混合物に溶解させた。撹拌下で５０℃まで加熱し、３０℃までゆっくりと冷却し、播種すると、濃厚な懸濁液が得られた。これをｎ－ヘプタン（２０ｍＬ）でさらに希釈し、氷浴中で冷却した。沈殿物を濾過し、ｎ－ヘプタン（３０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、所望の生成物を白色の粉末（１６．３ｍｍｏｌ；８１％）として得た。
ＨＰＬＣ：９９．４％；キラルＨＰＬＣ：純度９９．２％、１００％のエナンチオマー過剰率；融点：７７～７９℃；［α］Ｄ：＋１０４°（ＭｅＯＨ中ｃ＝１）。
【化64】
ＨＰＬＣ：９９．４％；キラルＨＰＬＣ：純度９９．２％、１００％のエナンチオマー過剰率；融点：７７～７９℃；［α］Ｄ：＋１０４°（ＭｅＯＨ中ｃ＝１）。
【0180】
実施例９．コンジュゲート１の合成
コンジュゲート１は、米国特許出願第１６／９２５，０９４号の実施例１１に開示される方法に従って、ラセミ２－メルカプトシクロヘキサン－１－オールの代わりに化合物１である（（１Ｓ，２Ｓ）－２－メルカプトシクロヘキサン－１－オール）を使用して調製することができる。米国特許出願第１６／９２５，０９４号の実施例１１は下記のように再現する。
コンジュゲート１は、米国特許出願第１６／９２５，０９４号の実施例１１に開示される方法に従って、ラセミ２－メルカプトシクロヘキサン－１－オールの代わりに化合物１である（（１Ｓ，２Ｓ）－２－メルカプトシクロヘキサン－１－オール）を使用して調製することができる。米国特許出願第１６／９２５，０９４号の実施例１１は下記のように再現する。
【化65】
【0181】
ステップ１． ２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）シクロヘキサン－１－オールの合成
ＭｅＯＨ（Ｎ２で脱気する）（３０ｍＬ）中の１，２－ジ（ピリジン－２－イル）ジスルファン（１５．２ｇ、６８．９ｍｍｏｌ）の溶液に、２－メルカプトシクロヘキサン－１－オール（１１．４ｇ、８６．２ｍｍｏｌ）（Ｎ２で脱気する）を滴加し、Ｎ２雰囲気下で、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮乾固した。得られた粗物質を、３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を黄色の液体として得た。１ＨＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．５４－８．５３（ｍ，１Ｈ），７．６０－７．５６（ｍ，１Ｈ），７．４０－７．３８（ｍ，１Ｈ），７．１７－７．１４（ｍ，１Ｈ），３．３８－３．３４（ｍ，１Ｈ），２．６２－２．５７（ｍ，１Ｈ），２．１１－２．０２（ｍ，１Ｈ），１．７５－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．６１－１．６０（ｍ，１Ｈ），１．４２－１．２４（ｍ，４Ｈ）。
【化66】
【0182】
表題化合物をキラル分取ＨＰＬＣ条件（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＧ：２５０ｍｍ×２０ｍｍ×５ｍｉｃ；ｎ－ヘキサン：０．１％ジエチルアミンを含むＩＰＡ（８０：２０）；１９ｍＬ／分；２５℃（室温）に供した。（１Ｒ，２Ｒ）－２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）シクロヘキサン－１－オール（４．５ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）が最初に溶出し（保持時間：３．９分）、続いて（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）シクロヘキサン－１－オールが溶出した（保持時間：１１．３分）。絶対立体化学は、ステップ２の生成物を、報告された絶対立体化学を有するキラル物質（Ｍｏｎａｃｏ，Ｍ．Ｒ．；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１４，１３６，４９，１６９８２－１６９８５を参照されたい）と比較することによって確認した。
【0183】
ステップ２：４－ニトロフェニル（（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）シクロヘキシル）カーボネートの合成
ＤＭＦ（９０．０ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｒ）－２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）シクロヘキサン－１－オール（４．５ｇ、１８．６ｍｍоｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（１０．３ｍＬ、５６．０ｍｍоｌ）及びビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（１１．３５ｇ、２７．３ｍｍоｌ）を室温で加えた。反応容器を密封し、室温で１２時間撹拌した。反応の進行はＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって監視した。反応の完了後、反応混合物を水（２０．０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２０．０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、この粗生成物を、２０～３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物を灰白色の固体として得た（５．０ｇ、収率６６％）。１ＨＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．４４（ｄ，Ｊ＝４ Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，２Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．６１－７．５７（ｔ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝９．６ Ｈｚ，２Ｈ），７．０８－７．０５（ｔ，Ｊ＝５．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．８５－４．７４（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．９２（ｍ，１Ｈ），２．２８（ｄ，Ｊ＝９．６ Ｈｚ，１Ｈ），２．２０－２．１２（ｍ，１Ｈ），１．８５－１．６２（ｍ，３Ｈ），１．４５－１．２５（ｍ，３Ｈ）。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ計算値：４０６．７；実測値：４０７．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【化67】
【0184】
ステップ３：［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（２－ピリジルジスルファニル）シクロヘキシル］Ｎ－［（１０Ｓ，２３Ｓ）－１０－エチル－１８－フルオロ－１０－ヒドロキシ－１９－メチル－５，９－ジオキソ－８－オキサ－４，１５－ジアザヘキサシクロ［１４．７．１．０２，１４．０４，１３．０６，１１．０２０，２４］テトラコサ－１，６（１１），１２，１４，１６（２４），１７，１９－ヘプタエン－２３－イル］カルバメートの合成。
１０ｍＬの脱水ＤＭＦ中の（１０Ｓ，２３Ｓ）－２３－アミノ－１０－エチル－１８－フルオロ－１０－ヒドロキシ－１９－メチル－８－オキサ－４，１５－ジアザヘキサシクロ［１４．７．１．０２，１４．０４，１３．０６，１１．０２０，２４］テトラコサ－１，６（１１），１２，１４，１６（２４），１７，１９－ヘプタエン－５，９－ジオンメタンスルホン酸（２５０ｍｇ、０．４７０ｍｍｏｌ）に、４－ニトロフェニル（（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）シクロヘキシル）カーボネート（ステップ２から；１９１ｍｇ、０．４７０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１２２ｍｇ、０．９４１ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（１１５ｍｇ、０．９４１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。ＬＣ－ＭＳにより、所望のカップリング生成物が形成されたことが示された。次に、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液、Ｈ２Ｏ、及びブラインで洗浄した。混合物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、０～５％ＭｅＯＨ／ジクロロメタンを使用したカラムクロマトグラフィーによって精製して、２４０ｍｇの所望の生成物を７２．６％の収率（２４０ｍｇ）で得た。
【化68】
【0185】
ステップ４：Ｐｖ１（化合物１１）とのカップリング
バイアル中、Ｐｖ１（２７５ｍｇ、．０８１１ｍｍｏｌ）、ステップ３の化合物（７４．１ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１０ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）を加え、ｎ－メチルモルホリン（０．３０３ｇ、．００３０ｍｏｌ）をこの混合物に加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。ＬＣ－ＭＳにより、所望のカップリング生成物が形成されたことが示された。
バイアル中、Ｐｖ１（２７５ｍｇ、．０８１１ｍｍｏｌ）、ステップ３の化合物（７４．１ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１０ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）を加え、ｎ－メチルモルホリン（０．３０３ｇ、．００３０ｍｏｌ）をこの混合物に加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。ＬＣ－ＭＳにより、所望のカップリング生成物が形成されたことが示された。
【0186】
反応混合物を逆相ＨＰＬＣ（Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｐｒｅｐ Ｃ１８カラム（１０μｍ、５０×１５０ｍｍ）での２０～８５％アセトニトリル／水、０．５％酢酸、保持時間：７．０２２分）によって直接精製して、所望の生成物を６８％の収率（２１３ｍｇ）で得た。ＥＳＩ（Ｍ＋３Ｈ／３）３＋：１２９１．６
【0187】
実施例１０：代替の基質の酵素スクリーニング
２０～２５ｍｇの量の酵素を２ｍＬバイアルに加えた。これに、５体積％の酢酸イソプロペニルを含有する１ｍＬの２－メチルテトラヒドロフランに溶解させたラセミ２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）シクロヘキサン－１－オール（１２ｍｇ）を加えた。バイアルを密閉し、サーモスタット付きシェーカーで、２１℃で２日間振とうした。インキュベーション後、キラルＨＰＬＣによる分析を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ３、移動相中１００倍希釈；ヘプタン／イソプロパノール／エタノール（６３／７／３０）を使用して実施した。スクリーニングの結果を下記の表に示す。
２０～２５ｍｇの量の酵素を２ｍＬバイアルに加えた。これに、５体積％の酢酸イソプロペニルを含有する１ｍＬの２－メチルテトラヒドロフランに溶解させたラセミ２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）シクロヘキサン－１－オール（１２ｍｇ）を加えた。バイアルを密閉し、サーモスタット付きシェーカーで、２１℃で２日間振とうした。インキュベーション後、キラルＨＰＬＣによる分析を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ３、移動相中１００倍希釈；ヘプタン／イソプロパノール／エタノール（６３／７／３０）を使用して実施した。スクリーニングの結果を下記の表に示す。
【化69】
【表5】
【0188】
実施例９のコンジュゲート１を得るために、実施例２、ステップ６におけるラセミ物質の代わりに、エナンチオ濃縮された２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）シクロヘキサン－１－オールを使用することができる。
【0189】
実施例１１：４－ニトロフェニル［（Ｓ，Ｓ）－２－（ピリジン－２－イルジスルファネイル（ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｅｙｌ））シクロペンチル］カーボネートの合成
ステップ１． ２－ベンジルチオシクロペンタノールの合成
５Ｌ反応器にＤ－酒石酸塩亜鉛（５００ｇ）、ジクロロメタン（２Ｌ）、ベンジルメルカプタン（１２７ｇ；１ｍｏｌ）、及びシクロペンテンオキシド（１００ｇ；１．１当量）を装入した。反応物をアルゴン雰囲気下に置いた。混合物を１５日間撹拌し（＞９９％のメルカプタン変換がもたらされた）、濾過した。濾液を蒸発させ、酢酸エチルを使用して小さなフラスコに移した。蒸発により、混濁した油（２１０ｇ；５８％のエナンチオマー過剰率）が得られた。標準的なＣｌａｉｓｅｎ蒸留設定を使用して、油を高真空下で蒸留した。１０２～１０８℃／０．０７～０．１５ｍｂａｒで４つの留分が得られた。
【化70】
【化71】
【0190】
ステップ２．（Ｓ，Ｓ）－２－ベンジルチオシクロペンタノールの合成
濃縮された２－ベンジルチオシクロペンタノール（８８ｇ；５８％のエナンチオマー過剰率；９５％純粋な前留分）を１Ｌフラスコに入れた。ＭＴＢＥ（０．６Ｌ）、無水グルタル酸（２３ｇ；０．２ｍｏｌ）、及び固定化した酵素（ＣａＬＢ－ＡＤＳ４；１０ｇ）を加えた。混合物を、メカニカルスターラーを使用して１８０ｒｐｍで１日撹拌した。１８時間後、主要でない（Ｒ，Ｒ）－エナンチオマーが完全に除去された。反応混合物をデカントし、酵素を次の手順で再使用した。デカントした溶液をアンモニア水溶液（０．２５Ｌ；２Ｍ）及び炭酸ナトリウム（０．１Ｌ；１．２５Ｍ）で洗浄した。有機相を単離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、わずかに混濁した無色の油（６４ｇ；７３％）を得た。この油をＫｕｇｅｌｒｏｈｒで２回に分けて蒸留して、９９．８％のエナンチオマー過剰率を示す、５４ｇのＧＣ純度９５％の油を得た。
【化72】
【0191】
代替として、濃縮された２－ベンジルチオシクロペンタノール（１０４ｇ；５７％のエナンチオマー過剰率；９７．６％純粋な主留分）を１Ｌフラスコに入れた。ＭＴＢＥ（０．５Ｌ）、無水グルタル酸（２３ｇ；０．２ｍｏｌ）、及び固定化した酵素（ＣａＬＢ－ＡＤＳ４；回収１０ｇ及び新鮮１０ｇ）を加えた。混合物を、メカニカルスターラーを使用して１８０ｒｐｍで１日撹拌した。２４時間後、主要でない（Ｒ，Ｒ）－エナンチオマーが完全に除去された。反応混合物を濾過した。濾液をアンモニア水溶液（０．２５＋０．０５Ｌ；２Ｍ）で洗浄した。有機相を単離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、わずかに混濁した無色の油（８０ｇ；７７％）を得た。この油をＫｕｇｅｌｒｏｈｒで３回に分けて蒸留して（オーブン１７５℃／０．０６ｍｂａｒ）、９９．８％超のエナンチオマー過剰率を示す、７４ｇのＧＣ純度９７．５％の油を得た。［α］Ｄ：＋１４°（ＤＣＭ中ｃ＝５）；［α］Ｄ：－１７°（ＭｅＯＨ中ｃ＝１）。
【0192】
ステップ３．（Ｓ，Ｓ）－２－メルカプトシクロペンタノールの合成
蒸留した（Ｓ，Ｓ）－２－ベンジルチオシクロペンタノール（２１ｇ；１００ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で２５０ｍｌ乾燥丸底フラスコに入れ、２００ｍＬの無水２－メチルテトラヒドロフランに溶解させた。機械的撹拌下で、粒状リチウム（総計２．８ｇ；０．４ｍｏｌ）を加えた。反応物を水浴中で冷却した。周囲温度で一晩撹拌すると、灰色のスラリーが得られた。試料のＧＣは、１５面積％の生成物を示した。混合物を、ＭｅＯＨ（２５ｍＬ）を２時間でゆっくりと加えることによってクエンチした。大量のガス放散が観察された。ＧＣ試料は、クエンチ後により高い変換率を示した。エタノール水溶液でさらにクエンチすると、さらなる起泡が生じた。
【化73】
【0193】
反応混合物を０．２５Ｌの水中で希釈した。有機相を除去し、水相をＥｔＯＡｃで洗浄した。洗浄した水相を３０ｇの固体クエン酸で酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２００＋１００ｍＬ）で抽出した。抽出物を減圧濃縮して、刺激臭のある油（８ｇ）を得た。Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ蒸留により、無色の油（１．３９ｇ＋３．９５ｇ）を得た。
【0194】
代替として、蒸留した（Ｓ，Ｓ）－２－ベンジルチオシクロペンタノール（２１ｇ；１００ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３．２ｇ；１００ｍｍｏｌ）と混合し、無水２－メチルテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）に溶解させた。この溶液を、アルゴン雰囲気下で１Ｌ乾燥丸底フラスコ中、無水２－メチルテトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）中の粒状リチウム（２．８ｇ；０．４ｍｏｌ）の懸濁液に機械的撹拌下で、２．５時間で滴加した。４時間後、２－メチルテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中のＭｅＯＨ（３．５ｍｌ）の溶液を１時間で滴加した。混合物を、２－ＭｅＴＨＦ（４０ｍＬ）中のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を１時間でゆっくりと加えることによってクエンチした。大量のガス放散が観察された。
【0195】
反応混合物を水（０．３Ｌ）中で希釈した。有機相を除去し、強塩基性水溶液を２－ＭｅＴＨＦで洗浄した。洗浄した水相を固体クエン酸（３０ｇ）で酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２５０＋１００ｍｌ）で抽出した。抽出物を減圧下で蒸発させて、刺激臭のある油（７．５ｇ）を得た。Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ蒸留［オーブン１２５～１３５℃／１８ｍｂａｒ］により、無色の油（７．０ｇ）を得た。ＧＣ９９．５％。［５９ｍｍｏｌ；５９％］；［α］Ｄ：＋４９°（ＭｅＯＨ中ｃ＝１）。
【0196】
ステップ４．（Ｓ，Ｓ）－２－（ピリジン－２－イルジスルファネイル（ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｅｙｌ））シクロペンタノールの合成
（Ｓ，Ｓ）－２－メルカプトシクロペンタノール（５．９ｇ；５０ｍｍｏｌ）をアルゴン下でメタノール（５０ｍＬ）に溶解させ、メタノール（７０ｍＬ）中のジピリジルジスルフィド（１０．９ｇ；４９ｍｍｏｌ）の溶液に１時間３０分にわたって滴加した。５時間のさらなる撹拌後、反応混合物を蒸発乾固し、残渣（１７ｇ）をＭＴＢＥ（２５０ｍｌ）及び水酸化ナトリウム溶液（０．２Ｌ；１Ｍ）と混合した。有機相を水酸化ナトリウム（５０ｍＬ、１Ｍ）、水（５０ｍＬ）、重炭酸ナトリウム溶液（２５ｍＬ）、及びブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、黄色の油（１１．１ｇ；定量的収率）を得た。ＨＰＬＣ：１００％のエナンチオマー過剰率、８．６面積％のＤＰＤＳ。
【化74】
【0197】
油の一部（４ｇ）を混濁するまでＭＴＢＥ（８ｍＬ）及びペンタンと混合した。この混合物を冷凍庫で－２５℃まで一晩冷却した。油の沈殿が観察され、ＨＰＬＣにより不純物の濃縮／除去はなかった。
【0198】
油を回収し、１００ｇのシリカでのカラムクロマトグラフィーによって精製した。カラムは、８：２ヘキサン／酢酸エチル、続いて７：３ヘキサン／酢酸エチルで溶出した。
【0199】
生成物がわずかに混濁した油として単離され、全体的な回収率は８０％であった。
ＧＣ：＞９９．５％；ＨＰＬＣ：９９．８％；キラルＨＰＬＣ：１００％のエナンチオマー過剰率；［α］Ｄ：－４６°（ＥｔＯＨ中ｃ＝１）。
ＧＣ：＞９９．５％；ＨＰＬＣ：９９．８％；キラルＨＰＬＣ：１００％のエナンチオマー過剰率；［α］Ｄ：－４６°（ＥｔＯＨ中ｃ＝１）。
【0200】
ステップ５． ４－ニトロフェニル［（Ｓ，Ｓ）－２－（ピリジン－２－イルジスルファネイル（ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｅｙｌ））シクロペンチル］カーボネートの合成
粗製（Ｓ，Ｓ）－２－（ピリジン－２－イルジスルファネイル（ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｅｙｌ））シクロペンタノール（７ｇ；約２５ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で乾燥フラスコに入れ、無水ジクロロメタン（８０ｍＬ）に溶解させた。ピリジン（５ｍｌ；６０ｍｍｏｌ；３当量）を加えた。無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のクロロギ酸４－ニトロフェニル（４．５ｇ；２３ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン下で、周囲温度で約１時間にわたって滴加した。混合物を水でクエンチし、希塩酸（１００＋５０ｍＬ；１Ｍ）、水、及び重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムのプラグで濾過し、減圧下で蒸発して、表題化合物を混濁した油（１０ｇ、定量的収率）として得た。ＨＰＬＣ：純度８５％。
【化75】
【0201】
シクロペンチルリンカー部分を含むコンジュゲートは、米国特許出願第１６／９２５，０９４号の実施例１１、ならびに本明細書の実施例９に開示される方法に従って調製することができる。
【0202】
本明細書に記載されるものに加えて、本発明の種々の修正形態が上述の説明から当業者に明らかとなろう。かかる修正形態もまた、添付の特許請求の範囲内に入ることが意図される。本出願において引用される全ての特許、特許出願、及び刊行物を含むが、これらに限定されない各参考文献は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【配列表】
【国際調査報告】