特表 2024-503482 複製可能アデノウイルス４型ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２ワクチンおよびそれらの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-25

(54)【発明の名称】複製可能アデノウイルス４型ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２ワクチンおよびそれらの使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/861 20060101AFI20240118BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20240118BHJP

   C12N 15/50 20060101ALI20240118BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240118BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240118BHJP

   A61K 35/761 20150101ALI20240118BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240118BHJP

   A61K 39/215 20060101ALI20240118BHJP

【ＦＩ】

C12N15/861 Z

C12N7/01 ZNA

C12N15/50

A61P31/14

A61P37/04

A61K35/761

A61K48/00

A61K39/215

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023543164

(86)(22)【出願日】2022-01-14

(85)【翻訳文提出日】2023-08-10

(86)【国際出願番号】 US2022012530

(87)【国際公開番号】W WO2022155476

(87)【国際公開日】2022-07-21

(31)【優先権主張番号】63/138,221

(32)【優先日】2021-01-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】309004585

【氏名又は名称】ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ アズ リプリゼンテッド バイ ザ セクレタリー、デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ

【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ Ｕ．Ｓ．Ａ．ＡＳ ＲＥＰＲＥＳＥＮＴＥＤ ＢＹ ＴＨＥ ＳＥＣＲＥＴＡＲＹ，ＤＥＰＡＲＴＭＥＮＴ ＯＦ ＨＥＡＬＴＨ ＡＮＤ ＨＵＭＡＮ ＳＥＲＶＩＣＥＳ

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】コナーズ， マーク

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA95X

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA26

4B065CA45

4C084AA13

4C084MA59

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB09

4C084ZB33

4C085AA03

4C085BA71

4C085CC08

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG10

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087MA59

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB09

4C087ZB33

(57)【要約】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するように改変された複製可能アデノウイルス４型（Ａｄ４）が記載される。組換えＡｄ４のゲノムは、スパイクタンパク質コード配列の挿入に適合するために、アデノウイルスＥ３領域のうちの少なくとも一部の欠失を有するように改変される。上気道への組換えＡｄ４の投与は、粘膜免疫を誘発し、これは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染からの防御のためにおよび上記ウイルスの伝播を防止するために重要である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質を発現する組換えアデノウイルス４型（Ａｄ４）であって、ここで：
前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２と少なくとも９５％同一である；
前記組換えＡｄ４は、複製可能である；および
前記組換えＡｄ４のゲノムは、アデノウイルスＥ３領域における欠失および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のコード配列の挿入を含む、組換えＡｄ４。

【請求項2】

前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２と少なくとも９９％同一である、請求項１に記載の組換えＡｄ４。

【請求項3】

前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２を含むかまたはからなる、請求項１または請求項２に記載の組換えＡｄ４。

【請求項4】

前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、融合前コンホメーションにおいて前記タンパク質を安定化するために少なくとも１つの改変を含む、請求項１に記載の組換えＡｄ４。

【請求項5】

前記少なくとも１つの改変は、Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ置換を含む、請求項４に記載の組換えＡｄ４。

【請求項6】

前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２を含むかまたはからなる、請求項４または請求項５に記載の組換えＡｄ４。

【請求項7】

前記Ｅ３領域における前記欠失は、２３．３Ｋ、１９Ｋ、２４．８Ｋ、６．３Ｋ、２９．７Ｋ、１０．４Ｋ、１４．５Ｋおよび１４．７Ｋ オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の欠失を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４。

【請求項8】

前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の前記コード配列は、前記欠失されたＥ３領域の代わりに挿入される、請求項１～７のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４。

【請求項9】

前記Ｓタンパク質は、コドン最適化された核酸配列によってコードされる、請求項１～８のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４。

【請求項10】

前記コドン最適化された核酸配列は、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むかまたはからなる、請求項９に記載の組換えＡｄ４。

【請求項11】

前記ゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号１と少なくとも９５％同一である、請求項１～３のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４。

【請求項12】

前記ゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号１と少なくとも９９％同一である、請求項１～３のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４。

【請求項13】

前記ゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号１を含むかまたはからなる、請求項１～３のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４。

【請求項14】

アデノウイルスＥ３領域における欠失および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のコード配列の挿入を含み、ここで前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２と少なくとも９５％同一である、組換えアデノウイルス４型（Ａｄ４）ベクター。

【請求項15】

前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２と少なくとも９９％同一である、請求項１４に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項16】

前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２を含むかまたはからなる、請求項１４または請求項１５に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項17】

前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、前記融合前コンホメーションにおいて前記タンパク質を安定化するために、少なくとも１つの改変を含む、請求項１４に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項18】

前記少なくとも１つの改変は、Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ置換を含む、請求項１７に記載の組換えＡｄ４。

【請求項19】

前記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２を含むかまたはからなる、請求項１７または請求項１８に記載の組換えＡｄ４。

【請求項20】

前記Ｅ３領域における前記欠失は、２３．３Ｋ、１９Ｋ、２４．８Ｋ、６．３Ｋ、２９．７Ｋ、１０．４Ｋ、１４．５Ｋおよび１４．７Ｋ オープンリーディングフレーム（ＯＲＦｓ）の欠失を含む、請求項１４～１９のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項21】

前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の前記コード配列は、前記欠失されたＥ３領域の代わりに挿入される、請求項１４～２０のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項22】

前記Ｓタンパク質は、コドン最適化された核酸配列によってコードされる、請求項１４～２１のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項23】

前記コドン最適化された核酸配列は、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むかまたはからなる、請求項２２に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項24】

前記ベクターのヌクレオチド配列は、配列番号１と少なくとも９５％同一である、請求項１４～１６のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項25】

前記ベクターのヌクレオチド配列は、配列番号１と少なくとも９９％同一である、請求項１４～１６のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項26】

前記ベクターのヌクレオチド配列は、配列番号１を含むかまたはからなる、請求項１４～１６のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４ベクター。

【請求項27】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４または請求項１４～２６のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４ベクターおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む、免疫原性組成物。

【請求項28】

被験体においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫応答を誘発する方法であって、前記方法は、前記被験体に、治療上有効な量の請求項１～１３のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４、請求項１４～２６のいずれか１項に記載の組換え複製可能Ａｄ４ベクターまたは請求項２７に記載の免疫原性組成物を投与し、それによって、前記被験体においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫応答を誘発することを包含する方法。

【請求項29】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対して被験体を免疫する方法であって、前記方法は、前記被験体に、治療上有効な量の請求項１～１３のいずれか１項に記載の組換えＡｄ４、請求項１４～２６のいずれか１項に記載の組換え複製可能Ａｄ４ベクターまたは請求項２７に記載の免疫原性組成物を投与し、それによって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対して前記被験体を免疫することを包含する方法。

【請求項30】

投与は、鼻内投与を含む、請求項２８または２９に記載の方法。

【請求項31】

鼻内投与は、直径１０ミクロンより大きい粒子を含むエアロゾルの投与を含む、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

約１０^４～約１０^６ 組換えＡｄ４粒子の用量を投与することを包含する、請求項２８～３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

約１０^５ 組換えＡｄ４粒子の用量を投与することを包含する、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記組換えＡｄ４、前記組換えＡｄ４ベクター、または前記免疫原性組成物は、単一用量において投与される、請求項２８～３３のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１月１５日出願の米国仮特許出願第６３／１３８，２２１号（これは、その全体において本明細書に参考として援用される）の利益を主張する。

【0002】

分野
本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現する組換え複製可能アデノウイルス４型（Ａｄ４）ならびにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染および伝播を阻害するための免疫原性組成物としてのその使用に関する。

【背景技術】

【0003】

背景
コロナウイルスは、軽度から中程度の上気道疾患を代表的には引き起こすウイルスの大きなファミリーである；しかし、このファミリーのうちのいくつかのメンバーは、ヒトにおいて重篤な疾患および死を引き起こし得る。過去２０年間で、コロナウイルスには、ヒトにおいて、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２から生じる３つの大きなアウトブレイクがあり、その中でも後者は、２０１９年１２月に中国の武漢において初めて出現した。２０２１年１月当時、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、全世界で８４００万人超の人々に感染し、およそ２００万人の死亡をもたらした。いくつかのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンが米国および他の国々において使用が承認されているが、粘膜免疫を誘導し、迅速に大量に生産され得る効果的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンが依然として必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0004】

要旨
元の武漢株に由来するまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株（例えば、ベータ（Ｂ．１．３５１）変異株、デルタ（Ｂ．１．６１７．２）変異株、ガンマ（Ｐ．１）変異株、デルタプラス変異株、またはオミクロン（Ｂ．１．１．５２９）変異株）に由来する野生型または改変バージョンのＳタンパク質のようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質（「Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅ」）を発現する複製可能アデノウイルス４型（Ａｄ４）から構成される免疫原性組成物が、本明細書で開示される。本開示のＡｄ４ベクターにおいて、上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子は、Ａｄ４ワクチン株のＥ３領域にクローン化される。上記Ｓタンパク質の挿入に適合するために、Ｅ３領域のうちの少なくとも一部が、欠失される。本開示のＡｄ４－Ｓｐｉｋｅワクチンは、他の推奨されかつ認可されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンプラットフォームを超えるいくつかの重要な利点を有する。特に、複製ベクターとして、Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅは、粘膜免疫を含む永続性のある免疫応答を誘導し得る。これは、ウイルスの感染および伝播の両方を阻害するために重要な因子である。さらに、Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅワクチンは、比較低コストで高力価へと迅速に生成され得る。

【0005】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を発現する組換え複製可能Ａｄ４が本明細書で提供される。上記組換えＡｄ４のゲノムは、アデノウイルスＥ３領域において欠失および上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のコード配列の挿入を含む。上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、天然のＳタンパク質または改変されたＳタンパク質（例えば、安定化または短縮化Ｓタンパク質）であり得る。さらに、上記Ｓタンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の武漢株またはその変異株（例えば、懸念される変異株（ｖａｒｉａｎｔ ｏｆ ｃｏｎｃｅｒｎ）（ＶＯＣ））に由来し得る。

【0006】

アデノウイルスＥ３領域における欠失および上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のコード配列の挿入を有する組換え複製可能Ａｄ４ベクターがまた、提供される。上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、武漢株またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株（例えば、ＶＯＣ）のいずれかに由来する天然のＳタンパク質または改変されたＳタンパク質（例えば、安定化または短縮化Ｓタンパク質）であり得る。

【0007】

本明細書で開示される組換えＡｄ４または組換えＡｄ４ベクターおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む免疫原性組成物が、さらに提供される。

【0008】

被験体に、治療上有効な量の本明細書で開示される組換えＡｄ４、組換えＡｄ４ベクター、または免疫原性組成物を投与することによって、被験体においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘発する方法およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対して被験体を免疫する方法がまた、提供される。いくつかの実施形態において、上記組換えＡｄ４、組換えＡｄ４ベクターまたは免疫原性組成物は、上気道に（例えば、鼻内に）投与される。

【0009】

本開示の前述および他の目的および特徴は、添付の図面を参照しながら進められる以下の詳細な説明からより明らかになる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】図１：トランスフェクトしたＡ５４９細胞における安定化および短縮化設計のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク発現。Ａ５４９細胞を、武漢株（ｎＣｏＶ）に由来するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の遺伝子を含むシャトルベクタープラスミドでトランスフェクトした。４種のスパイクタンパク質構築物を作製した： 野生型（ＷＴ）、安定化（ＰＰ）、尾部短縮化（ＴＴ）、およびエンドサイトーシスモチーフ短縮化（ｎｏＥｎｄｏ）。コントロールは、トランスフェクトしていない（ｕｎＴＦ）細胞およびＨＩＶ－１エンベロープ（Ｅｎｖ）タンパク質（ＦＤＥ３）を発現するプラスミドでトランスフェクトした細胞を含んだ。スパイクおよびＥｎｖの発現を、それぞれ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質特異的抗体およびＨＩＶ－１ Ｅｎｖ特異的抗体（ＶＲＣ０１）を使用するフローサイトメトリーによって測定した。トランスフェクトしたＡ５４９細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質発現は、野生型スパイクタンパク質と比較して、変異の安定化、尾部の短縮、およびエンドサイトーシスモチーフ短縮に伴って減少した。

【図2A】図２Ａ～２Ｂ：感染したＡ５４９細胞における安定化および短縮化設計のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク発現。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質遺伝子を有する複製アデノウイルスを使用して、Ａ５４９細胞を感染させた。武漢株に基づく３種のスパイクタンパク質設計を、Ａ５４９細胞の表面での発現に関して試験した： 野生型（ｎＣｏＶ－ＷＴ）、ＰＰ安定化（ｎＣｏＶ－ＰＰ）、および尾部短縮化（ｎＣｏＶ－ＴＴ）スパイクタンパク質。ＨＩＶ－１ Ｅｎｖタンパク質（ＦＤＥ３）を発現する複製アデノウイルスを、感染の陽性コントロールとして使用し、感染していない（ｕｎＩＦ）細胞を、陰性コントロールとして使用した。スパイクタンパク質の発現を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質特異的抗体を使用するフローサイトメトリーによって測定した。抗体ＶＲＣ０１を使用して、ＨＩＶ Ｅｎｖの発現を検出した。ｎＣｏＶ－ＷＴによるスパイクの発現を、図２Ａに示す； ＦＤＥ３、ｎＣｏＶ－ＰＰおよびｎＣｏＶ－ＴＴによるスパイクの発現を、図２Ｂに示す。図２Ａ～２Ｂに示されるように、スパイクタンパク質の発現は、ｎＣｏＶ－ＷＴおよびｎＣｏＶ－ＰＰ構築物の両方で高かった。

【図2B】同上。

【図3】図３：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質遺伝子を含む複製Ａｄ４での免疫は、ウサギにおいて中和を誘導する。ニュージーランドホワイトウサギを、１．２９×１０^９ 感染単位（ＩＦＵ）の精製済みの複製Ａｄ４ ｎＣｏＶ－ＷＴで、０日目および２８日目（矢印で示した）に免疫した。ルシフェラーゼアッセイを使用して、武漢ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスに対する血清中和を、免疫の４週間後に（２回目の用量の前に）開始して検出したところ、免疫後１２週間まで増加し続けた。

【図4】図４：ｎＣｏＶ－ＰＰ、ｎＣｏＶ－ＷＴ、ｎＣｏＶ－尾部短縮化、およびｎＣｏＶ－Ｎｏ－Ｅｎｄｏスパイクタンパク質のアミノ酸アラインメント。アラインメントは、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２野生型（武漢）スパイクタンパク質に導入された３つの変異の位置を示す。ｎＣｏＶ－ＰＰは、アミノ酸位置９８６および９８７において二重プロリン安定化置換を含む； ｎＣｏＶ－尾部短縮化は、細胞質尾部における末端の２４個のアミノ酸の欠失を含む； ｎＣｏＶ－Ｎｏ－Ｅｎｄｏは、末端エンドサイトーシスシグナル伝達モチーフ（末端の５残基）の欠失を含む。アミノ酸の番号付けは、配列番号２として本明細書に示される野生型スパイクタンパク質を参照している。

【図5】図５Ａ～５Ｂ：ハムスターでの鼻内Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２_ＷｕＰＰの用量漸増における武漢シュードウイルスに対する血清中和。シリアンゴールデンハムスターに、１０^２～１０^７ 感染形成単位（ＩＦＵ）の、ＰＰ安定化（Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２_ＷｕＰＰ）を有するＡｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢スパイクを鼻内に投与した。武漢シュードウイルスに対する血清中和を、４週目（図５Ａ）および８週目（図５Ｂ）に測定した。Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２_ＷｕＰＰの最高用量に関しては両方の時点において強い中和が観察された。

【図6A-B】図６Ａ～６Ｅ：ハムスターにおける、示されたＶＯＣスパイクを発現する鼻内Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の血清中和。シリアンゴールデンハムスターに、武漢株（Ａｄ４－ＣｏＶ２－武漢）、ベータ変異株（Ａｄ４－ＣｏＶ２－ＳＡ）、デルタ変異株（Ａｄ４－ＣｏＶ２－インド）またはガンマ変異株（Ａｄ４－ＣｏＶ２－ブラジル）、またはベータ変異株ＲＢＤ（Ａｄ－ＣｏＶ２－Ｗｕ／ＲＢＤ－ＳＡ）を有する安定化キメラスパイクタンパク質のいずれかから安定化スパイクタンパク質を発現する鼻内Ａｄ４で免疫した。インフルエンザウイルスＨ５ヘマグルチニンを発現するＡｄ４（Ａｄ４－Ｈ５）および偽接種を、陰性コントロールとして含めた。武漢シュードウイルス（図６Ａ）またはデルタシュードウイルス（図６Ｂ）に対する血清中和は、鼻内投与後２８日で決定された。さらに、武漢シュードウイルス（図６Ｃ）、デルタシュードウイルス（図６Ｄ）およびオミクロンシュードウイルス（図６Ｅ）に対する血清中和は、鼻内投与後５６日で決定された。

【図6C】同上。

【図6D】同上。

【図6E】同上。

【発明を実施するための形態】

【0011】

配列表
添付の配列表において列挙される核酸配列およびアミノ酸配列は、米国特許法施行規則１．８２２に規定されるように、ヌクレオチド塩基に関する標準的な文字による略記、およびアミノ酸に関する三文字コードを使用して示される。各核酸配列の一方の鎖のみが示されるが、その相補鎖は、その示される鎖に対する任意の参照によって含まれると理解される。配列表は、ＡＳＣＩＩテキストファイル（２０２２年１月１４日作成、１９９ ＫＢ）として提出され、これは、本明細書において参考として援用される。添付の配列表は、以下である：

【0012】

配列番号１は、Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクベクターのヌクレオチド配列である。

【化1-1】

【化1-2】

【化1-3】

【化1-4】

【化1-5】

【化1-6】

【化1-7】

【化1-8】

【化1-9】

【0013】

配列番号２は、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＹＰ＿００９７２４３９０．１の下で寄託された野生型 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（武漢株）スパイクタンパク質のアミノ酸配列である。

【化2-1】

【化2-2】

【0014】

配列番号３は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（ｎＣｏＶ－ＰＰ）のアミノ酸配列である。

【化3】

【0015】

配列番号４は、尾部短縮化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（ｎＣｏＶ－ＴＴ）のアミノ酸配列である。

【化4】

【0016】

配列番号５は、Ｃ末端エンドサイトーシスモチーフを欠いているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（ｎＣｏＶ－ｎｏＥｎｄｏ）のアミノ酸配列である。

【化5-1】

【化5-2】

【0017】

配列番号６は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列である。

【化6】

【0018】

配列番号７は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ベータ変異株スパイクタンパク質のアミノ酸配列である。

【化7-1】

【化7-2】

【0019】

配列番号８は、ベータ変異株のＲＢＤおよび武漢株に由来する残りの配列を含む安定化二重プロリン置換キメラＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のアミノ酸配列である。

【化8】

【0020】

配列番号９は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ デルタ変異株スパイクタンパク質のアミノ酸配列である。

【化9】

【0021】

配列番号１０は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ガンマ変異株スパイクタンパク質のアミノ酸配列である。

【化10】

【0022】

配列番号１１は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ デルタプラス変異株スパイクタンパク質のアミノ酸配列である。

【化11】

【0023】

配列番号１２は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン変異株スパイクタンパク質のアミノ酸配列である。

【化12】

【0024】

配列番号１３は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ベータ変異株スパイクタンパク質をコードするコドン最適化された核酸配列である。

【化13】

【0025】

配列番号１４は、ベータ変異株のＲＢＤおよび武漢株に由来するその残りの配列を含む安定化二重プロリン置換キメラＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードするコドン最適化された核酸配列である。

【化14-1】

【化14-2】

【0026】

配列番号１５は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタ変異株スパイクタンパク質をコードするコドン最適化された核酸配列である。

【化15-1】

【化15-2】

【0027】

配列番号１６は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ガンマ変異株スパイクタンパク質をコードするコドン最適化された核酸配列である。

【化16-1】

【化16-2】

【0028】

配列番号１７は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタプラス変異株スパイクタンパク質をコードするコドン最適化された核酸配列である。

【化17-1】

【化17-2】

【0029】

配列番号１８は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン変異株スパイクタンパク質をコードするコドン最適化された核酸配列である。

【化18-1】

【化18-2】

【0030】

配列番号１９は、二重プロリン置換を有する安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株スパイクタンパク質をコードするコドン最適化された核酸配列である。

【化19】

【0031】

詳細な説明
Ｉ．略語
Ａｄ アデノウイルス
ＣｏＶ コロナウイルス
ＣＯＶＩＤ－１９ コロナウイルス感染症２０１９
Ｅｎｖ エンベロープ
ＧＩ 消化管の
ＨＩＶ ヒト免疫不全ウイルス
ＩＦＵ 感染形成単位
ＩＭ 筋肉内
ＩＮ 鼻内
ＯＰＶ 経口ポリオウイルス
ＰＰ 二重タンパク質置換
Ｓ スパイクタンパク質
ＳＡＲＳ 重症急性呼吸器症候群
ＴＴ 尾部短縮化
ＵＲＴ 上気道
ＶＯＣ 懸念される変異株
Ｗｕ 武漢株

【0032】

ＩＩ．用語
別段注記されなければ、技術用語は、従来の使用法に従って使用される。分子生物学における一般的な用語の定義は、以下において見出され得る：Ｊｏｎｅｓ ＆ Ｂａｒｔｌｅｔｔ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓによって２００９年に発行されたＢｅｎｊａｍｉｎ Ｌｅｗｉｎ， Ｇｅｎｅｓ Ｘ；および２００８年にＷｉｌｅｙ－ＶＣＨによって発行された全１６巻のＭｅｙｅｒｓら（編）， Ｔｈｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；ならびに他の類似の参考文献。

【0033】

本明細書で使用される場合、単数形「ａ（１つの、ある）」、「ａｎ（１つの、ある）」および「ｔｈｅ（この、その、上記）」は、文脈が別段明らかに示さなければ、単数形および複数形の両方に言及する。例えば、用語「抗原（ａｎ ａｎｔｉｇｅｎ）」とは、１つのまたは複数の抗原を含み、語句「少なくとも１つの抗原」に等しいと考えられ得る。本明細書で使用される場合、用語「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」とは、「含む、包含する、が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」を意味する。核酸またはポリペプチドに関して示される任意のおよび全ての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、および全ての分子量または分子質量の値は、別段示されなければ、概算値であり、説明目的で提供されることがさらに理解されるべきである。本明細書で記載されるものに類似または等しい多くの方法および材料が使用され得るが、特定の適した方法および材料が本明細書で記載される。矛盾する場合には、本明細書が、用語を含めて優先する。さらに、材料、方法および例は、例証目的に過ぎず、限定であることは意図されない。種々の実施形態の検討を容易にするために、以下の用語の説明が提供される：

【0034】

アデノウイルス： 直線状の２本鎖ＤＮＡゲノムおよび二十面体カプシドを有する、エンベロープのないウイルス。ヒトアデノウイルスの少なくとも６８の公知の血清型が存在し、これらは、７つの種（種Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧ）に分けられる。アデノウイルスの血清型が異なれば、関連する疾患のタイプも異なり、いくつかの血清型は、呼吸器疾患（主に種ＢおよびＣ）、結膜炎（種ＢおよびＤ）、および／または胃腸炎（種ＦおよびＧ）を引き起こす。アデノウイルス４型（Ａｄ４）は、急性呼吸器疾患および眼の疾患を引き起こし得る種Ｅのウイルスである。アデノウイルスベースのベクターは、種々の治療適用（ワクチンおよび遺伝子治療ベクターを含む）に一般に使用される。本明細書中のいくつかの実施形態において、上記アデノウイルスベクターは、Ｅ３領域における完全または部分的な欠失を有するヒト複製可能Ａｄ４である。

【0035】

アジュバント： 抗原性を増強するために使用される免疫原性組成物の成分。いくつかの実施形態において、アジュバントは、抗原が吸着される無機物（ミョウバン、水酸化アルミニウム、またはリン酸塩）の懸濁物；または油中水型エマルジョン（例えば、そこでは抗原溶液が、ミネラルオイル（フロイント不完全アジュバント）中に乳化され、時には、抗原性をさらに増強する（抗原の分解を阻害するおよび／またはマクロファージの流入を引き起こす）ために、殺滅したマイコバクテリアを含める（フロイント完全アジュバント）こともある）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の免疫原性組成物において使用されるアジュバントは、レシチンおよびカルボマーホモポリマー（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＢｉｏＡｄｊｕｖａｎｔｓ， ＬＬＣから市販されるＡＤＪＵＰＬＥＸ^ＴＭアジュバント；Ｗｅｇｍａｎｎ， Ｃｌｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２（９）： １００４－１０１２， ２０１５も参照のこと）の組み合わせである。本開示の免疫原性組成物において使用するためのさらなるアジュバントとしては、ＱＳ２１精製植物抽出物、Ｍａｔｒｉｘ Ｍ、ＡＳ０１、ＭＦ５９、およびＡＬＦＱアジュバントが挙げられる。免疫刺激性オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧモチーフを含むもの）はまた、アジュバントとして使用され得る。アジュバントは、共刺激分子のような生物学的分子（「生物学的アジュバント」）を含む。例示的なアジュバントとしては、ＩＬ－２、ＲＡＮＴＥＳ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、Ｇ－ＣＳＦ、ＬＦＡ－３、ＣＤ７２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＯＸ－４０Ｌ、４－１ＢＢＬおよびｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）アゴニスト（例えば、ＴＬＲ－９アゴニスト）が挙げられる。当業者は、アジュバントに精通している（例えば、Ｓｉｎｇｈ（編） Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ． Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， ２００７を参照のこと）。

【0036】

投与： 選択された経路による被験体への組成物の導入。投与は、局所または全身であり得る。例えば、選択された経路が静脈内である場合、上記組成物は、被験体の静脈へと組成物を導入することによって投与される。例示的な投与経路としては、鼻内、吸入、経口、注射（例えば、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内、および静脈内）、舌下、直腸、経皮（例えば、局所）および膣経路が挙げられるが、これらに限定されない。

【0037】

コドン最適化された： コドンが特定のシステム（例えば、特定の種または種の群）での発現に最適であるように変化させた核酸配列。例えば、核酸配列は、哺乳動物細胞においてまたは特定の哺乳動物種（例えば、ヒト細胞）において発現するために最適化され得る。コドン最適化は、そのコードされるタンパク質のアミノ酸配列を変化させない。

【0038】

保存的改変体（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｖａｒｉａｎｔ）： タンパク質（例えば、コロナウイルススパイクタンパク質）の機能に実質的に影響を及ぼさず、減少させない保存的アミノ酸置換を含むタンパク質。「保存的」アミノ酸置換とは、タンパク質の機能（例えば、被験体に投与される場合に、タンパク質が免疫応答を誘発する能力）に実質的に影響を及ぼさず、減少させないそれらの置換である。保存的バリエーションという用語はまた、置換されていない親アミノ酸の代わりに、置換されたアミノ酸の使用を含む。さらに、コードされた配列において１個のアミノ酸またはアミノ酸の小さなパーセンテージ（例えば、５％未満、いくつかの実施形態においては１％未満）を変化させるか、付加するかまたは欠失させる個々の置換、欠失または付加は、その変化が、あるアミノ酸の化学的に類似のアミノ酸による置換をもたらす場合、保存的バリエーションである。

【0039】

以下の６個の群は、互いに対して保存的置換であると見做されるアミノ酸の例である：
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；
４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；および
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。

【0040】

非保存的置換は、組換えＥｎｖタンパク質のようなタンパク質の活性または機能（例えば、被験体に投与される場合に免疫応答を誘発する能力）を低減するものである。例えば、アミノ酸残基が上記タンパク質の機能に必須である場合、他の点で保存的な置換であっても、その活性を妨害し得る。従って、保存的置換は、目的のタンパク質の基本的な機能を変化させない。

【0041】

コロナウイルス： ヒトおよび非ヒト動物に感染し得るプラス鎖の１本鎖ＲＮＡウイルスの大きなファミリー。コロナウイルスは、それらの表面に王冠様のスパイクがあることからそれらの名称が付けられている。そのウイルスエンベロープは、ウイルス膜（Ｍ）、エンベロープ（Ｅ）およびスパイク（Ｓ）タンパク質を含む脂質二重層から構成される。大部分のコロナウイルスは、軽度から中程度の上気道の病気（例えば、風邪）を引き起こす。しかし、より重篤な病気および死亡を引き起こし得る３つのコロナウイルスが出現した： 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、および中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）。ヒトに感染する他のコロナウイルスとしては、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＫＵ１－ＣｏＶ）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＯＣ４３－ＣｏＶ）、ヒトコロナウルス２２９Ｅ（２２９Ｅ－ＣｏＶ）、およびヒトコロナウルス ＮＬ６３（ＮＬ６３－ＣｏＶ）が挙げられる。

【0042】

ＣＯＶＩＤ－１９： コロナウルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされる疾患。

【0043】

縮重改変体（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅ ｖａｒｉａｎｔ）： 遺伝コードの結果として縮重している配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。２０の天然アミノ酸が存在し、そのうちの大部分は、１より多くのコドンによって特定される。従って、全ての縮重ヌクレオチド配列は、上記ポリペプチドのアミノ酸配列が変化していない限りにおいて含まれる。

【0044】

Ｅ３領域： アデノウイルス初期領域３（Ｅ３）遺伝子をいう。これは、複数のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。ヒトアデノウイルス４型（Ａｄ４）のＥ３領域は、以下のＯＲＦを含む： １２．１Ｋ、２３．３Ｋ、１９Ｋ、２４．８Ｋ、６．３Ｋ、２９．７Ｋ、１０．４Ｋ、１４．５Ｋおよび１４．７Ｋ。本明細書中のいくつかの実施形態において、Ｅ３領域における欠失は、２３．３Ｋ、１９Ｋ、２４．８Ｋ、６．３Ｋ、２９．７Ｋ、１０．４Ｋ、１４．５Ｋおよび１４．７Ｋ ＯＲＦの欠失を含む。他の実施形態において、Ｅ３領域における欠失は、２４．８Ｋ、６．３Ｋおよび２９．７Ｋ ＯＲＦのみの欠失である。

【0045】

異種の： 別個の遺伝的供給源または種に由来すること。例えば、異種ポリペプチドまたはポリヌクレオチドとは、異なる供給源または種に由来するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。

【0046】

免疫応答： 刺激に対する免疫系の細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、または単球）の応答。いくつかの実施形態において、上記応答は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のような特定の抗原に対して特異的である（「抗原特異的応答」）。いくつかの実施形態において、上記免疫応答は、Ｔ細胞応答（例えば、ＣＤ４＋応答またはＣＤ８＋応答）である。他の実施形態において、上記応答は、Ｂ細胞応答であり、特異的抗体の生成を生じる。「免疫応答を感作する（ｐｒｉｍｉｎｇ ａｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」とは、免疫応答を誘導するために「感作（ｐｒｉｍｅ）」免疫原／免疫原性組成物での被験体の処置をいう。その免疫応答は、その後、ブースト免疫原／免疫原性組成物で「ブーストされ」る。まとめると、感作およびブースト免疫は、被験体において所望の免疫応答を生成する。

【0047】

免疫原性組成物： 免疫原または免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質）をコードする核酸分子またはベクターを含み、被験体に投与された場合に、上記免疫原に対して測定可能なＣＴＬ応答を誘発するおよび／または上記免疫原に対して測定可能なＢ細胞応答（例えば、抗体の生成）を誘発する組成物。それはさらに、免疫原をコードする単離された核酸（例えば、免疫原を発現するために使用され得る（従って、この免疫原に対する免疫応答を誘発するために使用され得る）核酸）をいう。インビボでの使用に関しては、上記免疫原性組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中に上記タンパク質または核酸分子を含み得、アジュバントのような他の剤をも含み得る。

【0048】

免疫する： 被験体を、特定の感染性因子（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）による感染から保護された状態にすること。免疫は、１００％保護を要求しない。いくつかの例では、免疫は、免疫の非存在下での感染と比較して、感染に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の保護を提供する。

【0049】

単離された： 「単離された」生物学的成分は、他の生物学的成分（例えば、その成分が天然に存在する他の生物学的成分（例えば、他の染色体のおよび染色体外のＤＮＡ、ＲＮＡ、およびタンパク質）から実質的に分離または精製されている。「単離され」ているタンパク質、ペプチド、核酸、およびウイルスとしては、標準的精製法によって精製されたものが挙げられる。単離されたは、絶対的な純度を要求せず、少なくとも５０％ 単離されている（例えば、少なくとも７５％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、またはさらには９９．９％ 単離されている）タンパク質、ペプチド、核酸、またはウイルス分子を含み得る。

【0050】

中和抗体： 感染性因子（例えば、ウイルス（例えば、コロナウルス））上の特定の抗原に結合することによって、その感染性因子の感染力価を低減する抗体。いくつかの実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に対して特異的な抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染力価を中和する。例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する抗体は、ウイルスを直接結合し、細胞への進入を制限することによって、ウイルスに干渉し得る。あるいは、中和抗体は、病原体とレセプターとの１またはこれより多くの結合後相互作用に、例えば、レセプターを使用するウイルス進入に干渉することによって、干渉し得る。いくつかの実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体は、コントロール抗体と比較して、細胞のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％阻害する。

【0051】

薬学的に受容可能なキャリア： 有用な、薬学的に受容可能なキャリアは、従来どおりである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ｂｙ Ｅ． Ｗ． Ｍａｒｔｉｎ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ， 第１９版， １９９５は、本開示の免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を発現する組換えＡｄ４）および免疫原性組成物の薬学的送達に適した組成物および製剤を記載する。

【0052】

概して、キャリアの性質は、使用される特定の投与様式に依存する。例えば、非経口的製剤は通常、薬学的にかつ生理学的に受容可能な流体（例えば、ビヒクルとしての水、生理食塩水、平衡化塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールなど）を含む注射可能な流体を含む。固体組成物（例えば、粉剤・散剤（powder）、丸剤、錠剤、またはカプセル剤の形態）に関しては、従来の非毒性固体キャリアとしては、例えば、製薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムが挙げられ得る。生物学的に中性のキャリアに加えて、投与される医薬組成物は、微量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、保存剤、およびｐＨ緩衝化剤など（例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレート））を含み得る。被験体への投与に適した特定の実施形態において、上記キャリアは、無菌であり得る、および／または懸濁され得る、もしくはそうでなければ、所望の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２免疫応答を誘発するために適した組成物の１またはこれより多くの測定された用量を含む単位剤形において含まれ得る。それはまた、処置目的のためのその使用のために、薬物療法が付随し得る。上記単位剤形は、例えば、無菌の内容物を含む密封されたバイアル、被験体への注射用のシリンジ、または後の可溶化および投与のための凍結乾燥されたもの、または固体もしくは放出制御投与量にあり得る。

【0053】

疾患防止すること、処置することまたは改善すること： 疾患を「防止すること」とは、疾患の完全な発生を阻害することをいう。「処置すること」とは、疾患または病的状態が発生し始めた後のその疾患または病的状態の徴候または症状を改善する治療介入（例えば、ウイルス負荷の低減）をいう。「改善すること」とは、疾患（例えば、コロナウルス感染）の徴候または症状の数または重篤度の低減をいう。

【0054】

組換え： 組換え核酸、ベクターまたはウイルスは、天然には存在しない配列を有するか、または配列の２つの他の方法で分離されたセグメントの人工的な組み合わせによって作製される配列を有するものである。この人工的な組み合わせは、例えば、遺伝子操作技術を使用する、例えば、核酸の単離されたセグメントの人工的な操作によって達成され得る。

【0055】

複製可能ウイルス（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ－ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｖｉｒｕｓ）： ゲノム複製およびタンパク質合成を受けて、子孫ウイルスを生成し得るウイルス。

【0056】

配列同一性： アミノ酸配列間またはヌクレオチド配列間の類似性は、その配列の間の類似性の観点で表現され、別段、配列同一性といわれる。配列同一性は頻繁に、パーセンテージ同一性の点で測定される； パーセンテージが高いほど、その２つの配列はより類似している。ポリペプチドまたはポリヌクレオチドのホモログ、オルソログ、または改変体は、標準的な方法を使用して整列させた場合に、比較的高い配列同一性の程度を有する。

【0057】

比較のための配列のアラインメントの方法は、公知である。種々のプログラムおよびアラインメントアルゴリズムが、以下において記載される： Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ， Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ． ２：４８２， １９８１； Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４３， １９７０； Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：２４４４， １９８８； Ｈｉｇｇｉｎｓ ＆ Ｓｈａｒｐ， Ｇｅｎｅ， ７３：２３７－４４， １９８８； Ｈｉｇｇｉｎｓ ＆ Ｓｈａｒｐ， ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１－３， １９８９； Ｃｏｒｐｅｔら， Ｎｕｃ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １６：１０８８１－９０， １９８８； Ｈｕａｎｇら Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｐｐｌｓ． Ｉｎ ｔｈｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ８， １５５－６５， １９９２；およびＰｅａｒｓｏｎら， Ｍｅｔｈ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏ． ２４：３０７－３１， １９９４。Ａｌｔｓｃｈｕｌら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３－１０， １９９０は、配列アラインメント方法および相同性計算の詳細な考慮事項を示す。

【0058】

ポリペプチドまたは核酸配列の改変体は、代表的には、目的のアミノ酸またはヌクレオチド配列との全長アラインメントにわたって計数して、少なくとも約７５％、例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％ 配列同一性を有することによって特徴づけられる。参照配列に対してさらにより高い類似性を有する配列は、この方法によって評価される場合にパーセンテージ同一性の増加を示す（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％ 配列同一性）。全体の配列より短いものが配列同一性に関して比較されている場合、ホモログおよび改変体は、代表的には、１０～２０アミノ酸（または３０～６０ヌクレオチド）の短い範囲（short window）にわたって少なくとも８０％ 配列同一性を有し、参照配列に対するそれらの類似性に依存して、少なくとも８５％または少なくとも９０％または９５％の配列同一性を有し得る。このような短い範囲にわたって配列同一性を決定するための方法は、インターネット上のＮＣＢＩウェブサイトにおいて利用可能である。

【0059】

本明細書で使用される場合、「少なくとも９０％同一性」（または類似の文言）への言及は、特定の参照配列と「少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはさらには１００％同一性」に言及する。

【0060】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２： ２０１９年にヒトにおいて初めて出現したベータコロナウルス属のコロナウルス。このウイルスは、武漢コロナウルス、２０１９－ｎＣｏＶ、または２０１９年新型コロナウルスとしても公知である。用語「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２」は、その変異株（例えば、アルファ（Ｂ．１．１．７およびＱ系統）；ベータ（Ｂ．１．３５１および子孫系統）；デルタ（Ｂ．１．６１７．２およびＡＹ系統）；ガンマ（Ｐ．１および子孫系統）；イプシロン（Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータ（Ｂ．１．５２５）；イオタ（Ｂ．１．５２６）；カッパ（Ｂ．１．６１７．１）；１．６１７．３；ミュー（Ｂ．１．６２１、Ｂ．１．６２１．１）、ゼータ（Ｐ．２）およびオミクロン（Ｂ．１．１．５２９およびＢＡ系統）が挙げられるが、これらに限定されない）を含む。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の症状としては、発熱、悪寒、乾性咳嗽、息切れ、疲労、筋／身体の疼痛、頭痛、味覚もしくは嗅覚の新たな喪失、喉の痛み、悪心もしくは嘔吐、および下痢が挙げられる。重篤な疾患を有する患者は、肺炎、多臓器不全、および死亡を生じ得る。曝露から症状の開始までの時間は、およそ２～１４日間である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ビリオンは、大きなスパイク糖タンパク質を有するウイルスエンベロープを含む。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ゲノムは、大部分のコロナウルスと同様に、共通のゲノム組織化を有し、ゲノムの５’側２／３にレプリカーゼ遺伝子が含まれ、ゲノムの３’側１／３に構造遺伝子が含まれる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ゲノムは、順に、５’－スパイク（Ｓ）－エンベロープ（Ｅ）－膜（Ｍ）およびヌクレオカプシド（Ｎ）－３’の構造タンパク質遺伝子の標準セットをコードする。

【0061】

ＳＡＲＳスパイク（Ｓ）タンパク質： ＳＡＲＳ－ＣｏＶについてはおよそ１２５６アミノ酸、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２については１２７３アミノ酸の前駆体タンパク質として最初に合成されるクラスＩ融合糖タンパク質。個々の前駆体Ｓポリペプチドは、ホモトリマーを形成し、ゴルジ装置内でグリコシル化を受け、ならびにプロセシングを受けて、シグナルペプチドを除去し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶに関してはおよそ位置６７９／６８０の間で、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関しては６８５／６８６の間で細胞プロテアーゼによって切断を受けて、別個のＳ１およびＳ２ポリペプチド鎖を生成する。これらは、上記ホモトリマー内でＳ１／Ｓ２プロトマーとして会合したままであり、それによって、ヘテロダイマーのトリマーを形成する。Ｓ１サブユニットは、ウイルス膜に対して遠位にあり、その宿主レセプターへのウイルス結合を媒介すると考えられるレセプター結合ドメイン（ＲＢＤ）を含む。Ｓ２サブユニットは、融合タンパク質装置（例えば、融合ペプチド）を含むと考えられる。Ｓ２はまた、融合糖タンパク質、膜貫通ドメイン、およびサイトゾル尾部ドメインの典型的な、２つのヘプタッドリピート配列（ＨＲ１およびＨＲ２）および中央ヘリックスを含む。例示的な野生型（武漢株）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質配列は、配列番号２として本明細書に示される。例示的な改変された武漢ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質配列は、配列番号３～５として本明細書に示される。さらに、例示的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株スパイクタンパク質配列は、配列番号７～１２として本明細書に示される。

【0062】

被験体： 生きている多細胞脊椎動物であって、ヒトおよび非ヒト哺乳動物を含むカテゴリー。いくつかの実施形態において、上記被験体はヒトである。いくつかの例では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を阻害または防止する必要性のある被験体が選択される。例えば、上記被験体は、感染しておらずかつＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のリスクにあり得る。

【0063】

治療上有効な量： 処置されている被験体において所望の効果（例えば、防御的免疫応答）を達成するために十分な特定の物質（例えば、本開示の免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を発現する組換えＡｄ４）または免疫原性組成物の分量。「治療上有効な量」は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製を阻害するか、または存在するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を有する被験体においてＣＯＶＩＤ－１９を処置するために必要な量であり得る。「予防上有効な量（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」とは、感染（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染）の確立を阻害または防止する薬剤または組成物の投与に言及する。それは、目的の抗原に対する防御的免疫応答を得るために、本開示の免疫原／免疫原性組成物の複数回の投与、および／またはブースト免疫原が感作免疫原性組成物とは異なり得る感作ブーストプロトコールにおける、「感作」として本開示の組成物の投与が必要とされ得ることは理解される。よって、本開示の免疫原／免疫原性組成物の有効量は、被験体において感作免疫応答を誘発するために十分な免疫原または免疫原性組成物の量であり得る。上記被験体は、防御的免疫応答を誘発するために同じかまたは異なる免疫原でその後ブーストされ得る。

【0064】

１つの例では、所望の応答は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を阻害または防止する免疫応答を誘発することである。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞は、上記組成物が有効であるために、完全に排除または防止される必要はない。例えば、免疫原または免疫原性組成物の有効量の投与は、免疫の非存在下でのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞の数と比較して、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、またはさらには少なくとも１００％（検出可能なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞の排除または防止）まで、所望の量によって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞の数を減少させる（または細胞の感染を防止する）免疫応答を誘発し得る。

【0065】

単位剤形： ヒト患者に対して単位投与量として適している物理的に別個の単位（例えば、カプセル剤、錠剤、または液剤）であって、各単位は、少なくとも１種の薬学的に受容可能な希釈剤もしくはキャリア、またはこれらの組み合わせと会合した状態で、治療効果を生じるために計算された１またはこれより多くの活性成分の所定の量を含むもの。

【0066】

ワクチン： 被験体において予防的または治療的免疫応答を誘発する医薬組成物。いくつかの場合では、上記免疫応答は、防御的免疫応答である。代表的には、ワクチンは、病原体（例えば、ウイルス病原体）の抗原に対して、または病的状態と相関する細胞成分に対して、抗原特異的免疫応答を誘発する。ワクチンは、ポリヌクレオチド（例えば、本開示の抗原をコードする核酸）、ペプチドもしくはポリペプチド（例えば、本開示の抗原）、ウイルス、細胞または１もしくはこれより多くの細胞成分を含み得る。１つの具体的な非限定的例では、ワクチンは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染と関連する症状の重篤度を低減する、および／またはコントロールと比較して、ウイルス負荷を減少させる。別の非限定的例では、ワクチンは、コントロールと比較して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染および／または伝播を低減する。

【0067】

ベクター： 目的のタンパク質（例えば、免疫原性タンパク質）のコード配列に作動可能に連結されたプロモーター（複数可）を有し、そのコード配列を発現し得るＤＮＡもしくはＲＮＡ分子を含む実体。非限定的例としては、裸のもしくはパッケージされた（脂質および／もしくはタンパク質）ＤＮＡ、裸のもしくはパッケージされたＲＮＡ、複製不能であり得るウイルスもしくは細菌もしくは他の微生物の副次成分、または複製可能であり得るウイルスもしくは細菌もしくは他の微生物を含む。ベクターはときおり、構築物といわれる。組換えＤＮＡベクターは、組換えＤＮＡを有するベクターである。ベクターは、宿主細胞において複製を可能にする核酸配列（例えば、複製起点）を含み得る。ベクターはまた、１またはこれより多くの選択マーカー遺伝子および他の遺伝的要素を含み得る。ウイルスベクターは、１またはこれより多くのウイルスに由来する少なくともいくつかの核酸配列を有する組換え核酸ベクターである。ウイルスベクターの非限定的例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、およびポックスウイルスベクター（例えば、ワクシニア、鶏痘）が挙げられる。

【0068】

ＩＩＩ．緒言
免疫系にウイルス糖タンパク質を提示するための利用可能なワクチンプラットフォームのうち、複製ベクターは、大部分の非複製ベクターを超えるいくつかの重要な利点を有する（Ｒｏｂｅｒｔ－Ｇｕｒｏｆｆ， Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １８（６）：５４６－５５６， ２００７）。複製可能ベクターは、ウイルス表面タンパク質を発現し得、その結果、抗原の合計用量は、非複製ベクターのものを遙かに超える。複製粘膜ワクチンは、粘膜免疫（ＩｇＡおよびＩｇＧ抗体を含む）、およびバランスのとれたＴ細胞応答（常在する記憶Ｔ細胞を含む）を誘導する。さらに、複製ベクター（例えば、複製可能アデノウイルス（Ａｄ）ベクター）は、生ウイルスの感染と同様に、長期間にわたってウイルス糖タンパク質を発現する。この特徴は、リンパ節中の樹状細胞の負荷および永続性のある抗体応答の誘導にとって重要であると考えられる（Ｃｉｒｅｌｌｉら， Ｃｅｌｌ １７７（５）： １１５３－１１７１， ２０１９； Ｔａｍら， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １１３（４３）： Ｅ６６３９－Ｅ６６４８， ２０１６； Ｍｕｅｌｌｅｒら， Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ １２（５）： １３５６－１３６５， ２０１５）。これらの特徴の各々は、複製ウイルスワクチン接種後に観察される免疫応答の規模および持続性に寄与する。

【0069】

本明細書で開示されるワクチン構築物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質をコードする複製可能Ａｄ４である。Ａｄ４ワクチン株に由来する本開示のＡｄ４ベクターでは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする遺伝子は、複数のＥ３ ＯＲＦの欠失を有するＥ３領域へとクローン化される。親Ａｄ４ワクチンベクターは、優れた安全性の記録とともに、１０００万人超の人々に与えられている。Ａｄ４組換え体は、インフルエンザウイルスＨ５およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）エンベロープ（Ｅｎｖ）およびＧａｇタンパク質の両方に関して開発された。これらのＡｄ４ベースのワクチンは、免疫原性に関するウサギでの前臨床試験およびフェーズＩ臨床試験におけるヒト試験を経ている。

【0070】

上記複製可能Ａｄ４ベースのワクチンプラットフォームは、他の提唱されかつ認可されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンと比較して、いくつかの別個の利点を有する。例えば、Ａｄ４ワクチンの有効性は、米国軍において単一用量腸溶カプセルとして慣用的に投与され、９５％超の有効性とともに呼吸器疾患を防止することが見出されていることから、既に確立されている。さらに、鼻内にまたは扁桃に投与される場合、複製可能Ａｄ４ベースのワクチンは、ヒト被験体において中和抗体応答を誘導する。上気道投与はまた、大部分の人々において、既存のＡｄ４免疫を回避する。粘膜免疫を誘導することによって、上記Ａｄ４ベースのワクチンプラットフォームは、ワクチン接種した被験体に防御を提供するのみならず、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の他への伝播を妨害する潜在的能力をも有する。非複製ウイルスワクチンとは対照的に、上記複製可能Ａｄ４ベースのシステムは、永続性のある免疫応答を生じる。さらに、ｍＲＮＡベースのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンとは異なり、Ａｄ４ワクチンは、４～８℃において長期間貯蔵され得る。さらに、本開示のワクチンプラットフォームは、拡張可能性およびコストの点において比類ないものである。本開示のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ワクチンが、１用量あたり１セント未満で生成され得ると予測される。

【0071】

ＩＶ．実施形態の概説
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質を発現する組換えアデノウイルス４型（Ａｄ４）（いくつかの実施形態においては、「Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ｓｐｉｋｅ」または「Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅ」といわれる）、上記組換えＡｄ４－Ｓｐｉｋｅをコードする組換えＡｄ４核酸ベクター、およびその免疫原性組成物が、本明細書で開示される。

【0072】

１つの局面において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を発現する組換えＡｄ４が,本明細書で提供される。上記組換えＡｄ４は、複製可能であり、上記Ａｄ４のゲノムは、アデノウイルスＥ３領域における欠失および上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のコード配列の挿入を含む。いくつかの実施形態において、上記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、天然のＳタンパク質（例えば、配列番号２として本明細書に示される武漢ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株のＳタンパク質）のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。具体例では、上記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２を含むかまたはからなる。

【0073】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の残基に関して本明細書で使用されるアミノ酸番号付けは、配列番号２として提供される野生型武漢株ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ配列を参照して行われる。配列番号２として提供されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質配列を参照すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のエクトドメインは、約残基１６～１２０８を含む。残基１～１５は、シグナルペプチドであり、これは、細胞プロセシングの間に除去される。Ｓ１／Ｓ２切断部位は、位置６８５／６８６に位置する。ＨＲ１は、約残基９１５～９８３に位置する。中央ヘリックスは、約残基９８８～１０２９に位置する。ＨＲ２は、約１１６２～１１９４に位置する。Ｓ２エクトドメインのＣ末端は、約残基１２０８に位置する。Ｓタンパク質の位置の番号付けは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株間で変動し得るが、配列は、関連する構造ドメインおよび切断部位を決定するために整列され得る（例えば、図４を参照のこと）。

【0074】

いくつかの実施形態において、上記組換えＡｄ４は、ＨＲ１ドメインと中央ヘリックスドメインとの間の境界においてまたは境界付近において、融合前コンホメーションにおいてＳタンパク質を安定化する１またはこれより多くの（例えば、２個の、例えば、２個連続の）プロリン置換を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のコード配列を含む。いくつかのこのような実施形態において、融合前コンホメーションにおいてＳタンパク質を安定化する上記１またはこれより多くの（例えば、２個の、例えば、２個連続の）プロリン置換は、ＨＲ１のＣ末端残基のうちのＮ末端側にある位置１５のアミノ酸と、中央ヘリックスのＮ末端残基のうちのＣ末端側にある位置５のアミノ酸との間に位置する。いくつかの実施形態において、融合前コンホメーションにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を安定化する上記１またはこれより多くの（例えば、２個の、例えば、２個連続の）プロリン置換は、残基９７５～９９５（例えば、９８１～９９２）の間に位置する。いくつかの実施形態において、上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ置換（「ＰＰ」または「２Ｐ」）によって融合前コンホメーションにおいて安定化される。いくつかの実施形態において、上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、トリマーにあるＳエクトドメインプロトマーの位置Ｄ９８５、Ｋ９８６、またはＶ９８７において１または２個のプロリン置換によって、融合前コンホメーションにおいて安定化される。いくつかの例では、上記１またはこれより多くのプロリン置換（例えば、Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ置換）によって融合前コンホメーションにおいて安定化されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、融合前コンホメーションにおける安定化のための１またはこれより多くのさらなる改変を含む。

【0075】

いくつかの実施形態において、上記組換えＡｄ４ゲノムによってコードされるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、配列番号３（武漢－ＰＰ）と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一のアミノ酸配列を含み、ここで上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、本明細書で提供される改変（例えば、Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ置換）のうちの１またはこれより多くのもので、融合前コンホメーションにおいて安定化される。他の実施形態において、上記安定化されたプロリン置換Ｓタンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株に由来する。いくつかの例では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株に由来する安定化Ｓタンパク質は、配列番号７（ベータ－ＰＰ）、配列番号８（武漢／ＲＤＢ－ベータ－ＰＰ）、配列番号９（デルタ－ＰＰ）、配列番号１０（ガンマ－ＰＰ）、配列番号１１（デルタプラス－ＰＰ）または配列番号１２（オミクロン－ＰＰ）と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一のアミノ酸配列を含む。特定の例では、上記安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２を含むかまたはからなる。

【0076】

他の実施形態において、上記組換えＡｄ４ゲノムによってコードされるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、Ｃ末端短縮（例えば、細胞質尾部の短縮またはエンドサイトーシスモチーフの短縮）を含む。具体例では、短縮化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。

【0077】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする例示的な核酸配列は、配列番号６として提供される。いくつかの例では、上記Ｓタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。具体的な非限定的例では、上記Ｓタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６を含むかまたはからなる。

【0078】

上記で提供される例示的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＤＮＡ配列は、融合前安定化のために。本明細書で開示されるアミノ酸置換および欠失を導入するために改変され得る。いくつかの実施形態において、このＤＮＡ配列（アミノ酸置換を導入するための改変ありまたはなし）は、上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする配列として上記組換えＡｄ４ベクター中に含められ得る。いくつかの実施形態において、上記Ｓタンパク質は、コドン最適化された核酸配列によってコードされる。いくつかの例では、上記Ｓタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１３（ベータ－ＰＰ）、配列番号１４（武漢／ＲＢＤベータ－ＰＰ）、配列番号１５（デルタ－ＰＰ）、配列番号１６（ガンマ－ＰＰ）、配列番号１７（デルタプラス－ＰＰ）、配列番号１８（オミクロン－ＰＰ）または配列番号１９（武漢－ＰＰ）と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。具体例では、上記Ｓタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１３～１９のうちのいずれか１つを含むかまたはからなる。

【0079】

いくつかの実施形態において、上記Ｅ３領域における欠失は、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つのＥ３オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の欠失である。いくつかの例では、上記欠失は、２３．３Ｋ、１９Ｋ、２４．８Ｋ、６．３Ｋ、２９．７Ｋ、１０．４Ｋ、１４．５Ｋおよび１４．７Ｋ ＯＲＦのうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つを含む。特定の非限定的例では、上記Ｅ３領域における欠失は、２３．３Ｋ、１９Ｋ、２４．８Ｋ、６．３Ｋ、２９．７Ｋ、１０．４Ｋ、１４．５Ｋおよび１４．７Ｋ ＯＲＦの各々の欠失を含む。

【0080】

いくつかの実施形態において、上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のコード配列は、Ｅ３領域の欠失された部分の代わりに挿入される。

【0081】

いくつかの実施形態において、上記組換えＡｄ４のゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。いくつかの例では、上記組換えＡｄ４のゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号１を含むかまたはからなる。

【0082】

組換え複製可能Ａｄ４核酸ベクターがまた、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、上記組換えＡｄ４ベクターは、上記アデノウイルスＥ３領域における欠失および上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のコード配列の挿入を含む。いくつかの実施形態において、上記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、天然のＳタンパク質（例えば、配列番号２として本明細書で示される武漢ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株のＳタンパク質）のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。具体例では、上記Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２を含むかまたはからなる。

【0083】

いくつかの実施形態において、上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ置換（「ＰＰ」または「２Ｐ」）によって融合前コンホメーションにおいて安定化される。いくつかの実施形態において、上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、トリマーにあるＳエクトドメインプロトマーの位置Ｄ９８５、Ｋ９８６、またはＶ９８７における１個または２個のプロリン置換によって融合前コンホメーションにおいて安定化される。いくつかの例では、１またはこれより多くのプロリン置換（例えば、Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ置換）によって融合前コンホメーションにおいて安定化されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、上記融合前コンホメーションにおける安定化のために１またはこれより多くのさらなる改変を含む。

【0084】

いくつかの実施形態において、上記組換えＡｄ４核酸ベクターによってコードされるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、配列番号３（武漢－ＰＰ）と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一のアミノ酸配列を含み、ここで上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、本明細書で提供される改変のうちの１またはこれより多くのもの（例えば、Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ置換）で融合前コンホメーションにおいて安定化される。他の実施形態において、その安定化されたプロリン置換Ｓタンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株に由来する。いくつかの実施形態において、上記Ｓタンパク質は、コドン最適化された核酸配列によってコードされる。いくつかの例では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株に由来する安定化されたＳタンパク質は、配列番号７（ベータ－ＰＰ）、配列番号８（武漢／ＲＤＢ－ベータ－ＰＰ）、配列番号９（デルタ－ＰＰ）、配列番号１０（ガンマ－ＰＰ）、配列番号１１（デルタプラス－ＰＰ）または配列番号１２（オミクロン－ＰＰ）と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一のアミノ酸配列を含む。特定の例では、上記安定化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２を含むかまたはからなる。

【0085】

他の実施形態において、上記組換えＡｄ４核酸ベクターによってコードされるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、Ｃ末端短縮（例えば、細胞質尾部の短縮またはエンドサイトーシスモチーフの短縮）を含む。具体例では、上記短縮化されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。

【0086】

本開示のＡｄ４ベクターのいくつかの実施形態において、上記Ｅ３領域における欠失は、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つのＥ３ ＯＲＦの欠失である。いくつかの例では、上記欠失は、２３．３Ｋ、１９Ｋ、２４．８Ｋ、６．３Ｋ、２９．７Ｋ、１０．４Ｋ、１４．５Ｋおよび１４．７Ｋ ＯＲＦのうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つを含む。特定の非限定的例では、上記Ｅ３領域における欠失は、２３．３Ｋ、１９Ｋ、２４．８Ｋ、６．３Ｋ、２９．７Ｋ、１０．４Ｋ、１４．５Ｋおよび１４．７Ｋ ＯＲＦの各々の欠失を含む。

【0087】

本開示のＡｄ４ベクターのいくつかの実施形態において、上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のコード配列は、上記Ｅ３領域の欠失された部分の代わりに挿入される。いくつかの例では、上記Ｓタンパク質のコード配列は、配列番号２～５および７～１２のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。具体的な非限定的例では、上記Ｓタンパク質のコード配列は、配列番号２～５および７～１２のうちのいずれか１つを含むかまたはからなる。

【0088】

いくつかの実施形態において、上記Ａｄ４ベクターのヌクレオチド配列は、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。いくつかの例では、上記Ａｄ４ベクターのヌクレオチド配列は、配列番号１を含むかまたはからなる。

【0089】

組換えＡｄ４または組換えＡｄ４ベクター、および薬学的に受容可能なキャリアを含む免疫原性組成物がさらに、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、上記免疫原性組成物は、アジュバントをさらに含む。他の実施形態において、上記免疫原性組成物は、アジュバントを含まない。

【0090】

被験体においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫応答を誘発する方法がまた、提供される。いくつかの実施形態において、上記方法は、治療上有効な量の、本明細書で開示される組換えＡｄ４、組換えＡｄ４（核酸）ベクターまたは免疫原性組成物を上記被験体に投与することを包含する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対して被験体を免疫する方法がまた、提供される。いくつかの実施形態において、上記方法は、治療上有効な量の、本明細書で開示される組換えＡｄ４、組換えＡｄ４ベクターまたは免疫原性組成物を上記被験体に投与することを包含する。

【0091】

本開示の方法のいくつかの実施形態において、上記組換えＡｄ４、組換えＡｄ４ベクター、または免疫原性組成物は、鼻内にまたは扁桃に投与される。いくつかの例では、鼻内投与は、エアロゾルの投与を含む。上記エアロゾルの粒度は、上気道への送達を可能にするべきであるが、下気道へは可能にするべきではない。具体例では、上記エアロゾルは、直径が１０ミクロンより大きい（例えば、２０ミクロンより大きい、３０ミクロンより大きい、４０ミクロンより大きい、または５０ミクロンより大きい）粒子を含む。特定の例では、上記エアロゾルは、約１０～約１５０ミクロン（例えば、約２０～約１２５ミクロンまたは約３０～約１００ミクロン）の粒子を含む。当業者は、本開示の組換えＡｄ４、組換えＡｄ４ベクター、または免疫原性組成物の、上気道への鼻内送達のための適切なデバイスを選択し得る。デバイスの非限定的例としては、Ａｃｃｕｓｐｒａｙ^ＴＭ（Ｂｅｃｔｏｎ－Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）およびＭＡＤ Ｎａｓａｌ^ＴＭ（Ｔｅｌｅｆｌｅｘ（登録商標））アトマイザーが挙げられる。

【0092】

いくつかの実施形態において、上記方法は、約１０^４～約１０^６ 組換えＡｄ４粒子（例えば、約５×１０^４～約５×１０^５ ウイルス粒子または約１×１０^５ ウイルス粒子）の用量を投与することを包含する。いくつかの例では、上記用量は、約１×１０^４、２×１０^４、３×１０^４、４×１０^４、５×１０^４、６×１０^４、７×１０^４、８×１０^４、９×１０^４、１×１０^５、２×１０^５、３×１０^５、４×１０^５、５×１０^５、６×１０^５、７×１０^５、８×１０^５、９×１０^５、または１×１０^６ 組換えＡｄ４粒子である。

【0093】

いくつかの実施形態において、上記組換えＡｄ４、組換えＡｄ４ベクター、または免疫原性組成物は、単一用量において投与される。

【0094】

いくつかの実施形態において、上記組換えＡｄ４、組換えＡｄ４ベクター、または免疫原性組成物は、感作－ブースト免疫プロトコールの一部として投与される。いくつかの例では、上記組換えＡｄ４、組換えＡｄ４ベクター、または免疫原性組成物は、感作用量である。他の例では、上記組換えＡｄ４、組換えＡｄ４ベクター、または免疫原性組成物は、ブースト用量である。

【0095】

Ｖ． ＣＯＶＩＤ－１９ワクチン開発に関連する前臨床試験および臨床試験
一連の経口生ポリオウイルス（ＯＰＶ）チャレンジ試験においてワクチン誘導性粘膜中和抗体応答を試験することによって、治験責任医師は、全身および粘膜抗体システムの顕著な分離を強く示した（Ｂｒｉｃｋｌｅｙら， Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ． ２０１８；６７（ｓｕｐｐｌ＿１）：Ｓ４２－Ｓ５０）。この研究は、高レベルの血清抗体を誘導し、麻痺性のポリオからの個体防御を提供するにもかかわらず、不活性化Ｓａｌｋワクチンは、経腸的ポリオウイルス複製を阻害し、糞口伝播を防止するために極めて重要な腸管ＩｇＡ応答を誘導できないことを明らかに示す。対照的に、弱毒化生Ｓａｂｉｎ ＯＰＶでの最初のワクチン接種は、生ＯＰＶでチャレンジすると、強い粘膜ＩｇＡ応答および殺菌免疫（ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）を誘導する。この観察は、粘膜免疫を誘導して、ＣＯＶＩＤ－１９の感染および伝播を防止するという極めて重要な性質を強調する。ＯＰＶで認められる粘膜免疫原性の欠如は、サブユニットまたは複製不能の全身投与されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンによって反復されると考えられる。

【0096】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンの前臨床試験において、感染をブロックするにあたって粘膜免疫に類似の利点が、観察された。フェレットにおいて、複製欠損Ａｄ５－ｓｐｉｋｅ組換えでのＩＭまたは粘膜免疫は、血清においてスパイク特異的抗体の類似のレベルを誘導したが、粘膜免疫のみが、上気道（ＵＲＴ）の殺菌防御を誘導した（Ｗｕら， Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ １１（１）： ４０８１， ２０２０）。ＵＲＴの粘膜免疫および殺菌防御を誘導するにあたって、筋肉内投与を超える鼻内投与の類似の利点が、レンチウイルスまたはチンパンジーアデノウイルススパイク組換え体を使用して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を寛容するマウスモデルにおいて観察された（Ｋｕら， Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｓ１９３１－３１２８（２０）３０６７２－７， ２０２０； Ｈａｓｓａｎら， Ｃｅｌｌ １８３（１）： １６９－１８４， ２０２０； Ｋｉｎｇら， Ｋｉｎｇら， ｂｉｏＲｘｉｖ ２０２０．１０．１０．３３１３４８， ２０２０）。局所特異的ＩｇＡが、コロナウルス２２９Ｅでのチャレンジ後のヒトにおいてウイルス排出を終えることと非常に関連することが観察された（Ｃａｌｌｏｗら， Ｊ Ｈｙｇ ９５（１）： １７３－１８９， １９８５）。

【0097】

非経口的に投与された非複製ワクチンを使用して、宿主がナイーブであるウイルス粘膜感染から防御しようとする以前の試みは、失敗したかまたは疾患の増強を生じた。例としては、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、パラインフルエンザウイルス（ＰＩＶ）－３、Ａｄ４、ロタウイルス、および麻疹ウイルスが挙げられる。これらの失敗の理由は、部分的に、ウイルスレセプターでそれらの尖端表面上が被覆された粘膜表面を防御することが困難であること、血清と比較してこれらの表面での１００～１０００倍低い抗体、および非複製ベクターによって生成されるゆがんで短命の（ｄｉｓｔｏｒｔｅｄ ａｎｄ ｓｈｏｒｔ－ｌｉｖｅｄ）免疫応答にある。本開示のＡｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ｓｐｉｋｅワクチンの臨床試験は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質およびアデノウイルスベクターに対する液性応答および粘膜応答を詳細に評価する。本開示のＡｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ｓｐｉｋｅワクチンは、気道において粘膜抗体を生じ、自然なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後に観察される免疫プロフィールに最も近く模倣すると予測される。さらに、本開示のワクチンが、ＣＯＶＩＤ－１９パンデミックの間に伝播を永続的に妨げる最良の可能性を提供すると考えられる。

【0098】

ヒト使用のために利用可能な組換えウイルスベクターの中で、複製アデノウイルスは、いくつかの重要な利点を提供する。複製Ａｄ４は、Ａｄ４呼吸器疾患に対するワクチンとして軍の１０００万人超の人々に与えられ、並外れた安全性および有効性の記録を有する（Ｇａｙｄｏｓ ａｎｄ Ｇａｙｄｏｓ， Ｍｉｌ Ｍｅｄ． １９９５；１６０（６）：３００－３０４）。この組換えＡｄ４は、腸溶性コーティング錠剤の形態において消化管へと投与することによって弱毒化され、呼吸器疾患を引き起こさない（Ｃｈｏｕｄｈｒｙら， Ｖａｃｃｉｎｅ ２０１６：３４（３８） ４５５８－４５６４）。腸溶カプセル剤送達を使用して、フェーズ３試験を、軍の基礎訓練に入っている４，０００名のボランティアで行った。その結果は、ワクチン有効性９９．３％およびＡｄ４によって引き起こされる呼吸器疾患に対してセロコンバージョン９４．５％を明らかに示した（Ｋｕｓｃｈｎｅｒら， Ｖａｃｃｉｎｅ ２０１３：３１ ２９６３－２９７１）。

【0099】

ヒトにおける１回の治験において、経腸的に送達したインフルエンザウイルスＨ５を発現する複製組換えアデノウイルスベクターは、中程度に免疫原性であるに過ぎなかった。これは、Ｅ３欠失と併せて、消化管への投与による複製の減弱化に関連する可能性が最も高い（Ｇｕｒｗｉｔｈら， Ｌａｎｃｅｔ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ． ２０１３；１３（３）：２３８－５０）。アデノウイルスベクターへの大きな遺伝子（例えばコロナウルススパイクタンパク質をコードする遺伝子）の導入は、最初期（この場合には、Ｅ３）遺伝子の除去を含み、組織培養物、チンパンジー、およびヒトにおいて親アデノウイルスに対して少なくとも１０倍の減弱化をもたらす（Ｌｕｂｅｃｋら， Ｎａｔ Ｍｅｄ． １９９７；３（６）：６５１－８）。

【0100】

別の臨床試験では、インフルエンザウイルスヘマグルチニン５型ベトナムを発現する複製可能Ａｄ４（Ａｄ４－Ｈ５－Ｖｔｎ）を消化管（ＧＩ）と比較してＵＲＴに投与した場合に、インフルエンザ特異的中和抗体の高くかつ顕著に永続性のあるレベルが観察された（Ｍａｔｓｕｄａら， Ｓｃｉ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１９；４（３４）：ｅａａｕ２７１０； Ｍａｔｓｕｄａら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １３１（５）：ｅ１４０７９４， ２０２１）。ＵＲＴへと送達されたワクチンは、１０^８の用量まで非常に安全であった（参加者のうちの２５％において鼻うっ血または喉の不快感、グレード２を上回るものはなし）。このレベルの反応性は、プラセボで認められるものとおよそ同じレベルであり、いくつかの非経口投与される非複製プラットフォームは現在、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して試験中であり、現在認可されている水痘帯状疱疹（Ｓｈｉｎｇｒｉｘ）ワクチンのものを下回る。Ａｄ４セロポジティブヒトへのアデノウイルスのＵＲＴ投与は、再感染を生じなかった。ＵＲＴ投与は、ベクター特異的免疫を克服するために、上気道を防御することにおける困難を有利に使用する。その一例は、以前にアデノ免疫動物におけるＥｂｏｌａ構築物のＩＭ投与後に防御が観察されなかった一方で、Ｅｂｏｌａ糖タンパク質を発現するアデノウイルスがアデノ免疫霊長類（adeno-immune primate）において鼻内経路によるＥｂｏｌａチャレンジの際に防御的免疫を誘導する能力である。

【0101】

Ａｄ４－Ｈ５－ＶｔｎおよびＡｄ４－ＨＩＶ組換え体での以前の結果は、ほぼ全てのヒト参加者が、導入遺伝子に対する応答を発生させることを示した。ワクチンの単一の鼻内または扁桃投与の後に、Ｈ５特異的Ｂ細胞、Ｈ５特異的抗体体細胞超変異、および効力における増大が観察された。上記ワクチンはまた、非常に永続性のある応答を誘導した。認可されたスプリットインフルエンザワクチンに対する応答は、代表的には、免疫後２～６ヶ月以内に５～１０倍程度衰える。しかし、Ａｄ４－Ｈ５－Ｖｔｎ参加者は、３～５年後にブーストするために戻るように求められたとき、中和抗体はなおも、認可されたワクチンでの免疫後にピークレベルで観察されるそのレベルにあった。本明細書で開示されるＡｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ｓｐｉｋｅワクチン構築物は、全身性のワクチン接種後に粘膜免疫を生成するために使用され得る。あるいは、サブユニットワクチンは、粘膜および全身性の抗体（これは、Ｈ５－Ｖｔｎワクチン構築物で起こることが示された）をブーストするために、本開示のワクチンでの免疫後に投与され得る。

【0102】

ＶＩ．免疫原性組成物
本開示の免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を発現する組換えＡｄ、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質コード配列を含む組換えＡｄ４核酸ベクター）および薬学的に受容可能なキャリアを含む免疫原性組成物がまた、提供される。このような組成物は、種々の投与様式（例えば、鼻内、扁桃上への、吸入、経口、筋肉内、皮下、静脈内、動脈内、関節内、腹腔内、または非経口の経路）によって被験体に投与され得る。投与可能な組成物を調製するための方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第１９版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ， １９９５）のような刊行物においてより詳細に記載される。

【0103】

従って、本明細書で記載される免疫原は、許容可能な温度範囲内での貯蔵の間に安定性の増加をも促進すると同時に、生物学的活性を保持することを助けるために、薬学的に受容可能なキャリアとともに製剤化され得る。潜在的なキャリアとしては、生理学的に平衡化された培養培地、リン酸緩衝液食塩液（phosphate buffer saline solution）、水、エマルジョン（例えば、油／水または水／油エマルジョン）、種々のタイプの湿潤剤、凍結保護添加剤または安定化剤（例えば、タンパク質、ペプチドもしくは水解（例えば、アルブミン、ゼラチン）、糖（例えば、スクロース、ラクトース、ソルビトール）、アミノ酸（例えば、グルタミン酸ナトリウム）、または他の保護剤）が挙げられるが、これらに限定されない。その得られる水性溶液は、そのまま使用するためにパッケージされてもよいし、凍結乾燥されてもよい。凍結乾燥された調製物は、１回または複数回のいずれかの投与のために、投与前に無菌溶液と合わされる。

【0104】

製剤化された組成物、特に液体組成物は、貯蔵中の分解を防止するかまたは最小限にするために静菌剤を含み得る（有効濃度（通常は≦１％ ｗ／ｖ）のベンジルアルコール、フェノール、ｍ－クレゾール、クロロブタノール、メチルパラベン、および／またはプロピルパラベンが挙げられるが、これらに限定されない）。静菌剤は、ある患者にとっては禁忌であり得る；従って、凍結乾燥された製剤は、このような成分含むかまたは含まないいずれかの溶液中で再構成され得る。

【0105】

本開示の免疫原性組成物は、生理学的条件に近づけるために必要な場合、薬学的に受容可能なビヒクル物質（例えば、ｐＨ調整剤および緩衝化剤、張度調整剤、湿潤剤など（例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、およびトリエタノールアミンオレエート）を含み得る。

【0106】

上記医薬組成物は必要に応じて、宿主の免疫応答を増強するためにアジュバントを含み得る。適切なアジュバントは、例えば、ｔｏｌｌ様レセプターアゴニスト、ミョウバン、ＡｌＰＯ_４、アルハイドロゲル（ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）、Ｌｉｐｉｄ－Ａおよびこれらの誘導体または改変体、油－エマルジョン、サポニン、中性リポソーム、ワクチンおよびサイトカインを含むリポソーム、非イオン性ブロックコポリマー、ならびにケモカインである。ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）およびポリオキシプロピレン（ＰＯＰ）を含む非イオン性ブロックコポリマー（例えば、ＰＯＥ－ＰＯＰ－ＰＯＥブロックコポリマー、ＭＰＬ^ＴＭ（３－Ｏ－脱アシル化モノホスホリルリピドＡ； Ｃｏｒｉｘａ， Ｈａｍｉｌｔｏｎ， ＩＮ）およびＩＬ－１２（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＭＡ））は、アジュバントとして使用され得る（Ｎｅｗｍａｎら， １９９８， Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １５：８９－１４２）。これらのアジュバントは、これらが非特異的様式において免疫系を刺激するように助け、従って、医薬製品に対する免疫応答を増強するという点において利点を有する。いくつかの実施形態において、アジュバントは、必要とされず、従って、Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅワクチンとともに投与されない。

【0107】

いくつかの実施形態において、上記組成物は、無菌組成物として提供され得る。上記医薬組成物は、代表的には、有効量の本開示の免疫原を含み、従来技術によって調製され得る。代表的には、上記免疫原性組成物の各用量における免疫原の量は、有意な有害副作用なしに免疫応答を誘発する量として選択される。いくつかの例では、上記用量は、約１×１０^４～約１０^６ ウイルス粒子（例えば、約５×１０^４～約５×１０^５ ウイルス粒子または約１×１０^５ ウイルス粒子）である。

【0108】

いくつかの実施形態において、上記組成物は、被験体において免疫応答を誘発するために、例えば、被験体においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を防止するために使用するための単位剤形において提供され得る。単位剤形は、被験体への投与に適した単一の事前選択した投与量、あるいは適切な印が付けられたまたは測定された、倍数の２もしくはこれより多くの事前選択した単位投与量、および／あるいはその単位用量もしくはその倍数を投与するための計量機構を含む。いくつかの例では、上記単位投与量は、約１×１０^４～約１０^６ ウイルス粒子（例えば、約５×１０^４～約５×１０^５ ウイルス粒子）である。具体例では、上記単位投与量は、約１×１０^５ ウイルス粒子である。

【0109】

ＶＩＩ． 免疫応答を誘発する方法
本開示の免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現する組換え複製可能アデノウイルス）、本開示の免疫原をコードするポリヌクレオチドおよびベクター、ならびにこれらを含む組成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫応答を誘導して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を防止、阻害（伝播の阻害を含む）、および／または処置する方法において使用され得る。

【0110】

被験体においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫応答を誘発する方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、上記方法は、有効量の、本明細書で開示される組換えアデノウイルス、アデノウイルスベクターまたは免疫原性組成物を上記被験体に投与することを包含する。いくつかの例では、上記組換えアデノウイルス、ベクターまたは免疫原性組成物は、鼻内に（例えば、スプレーにおいて）または経口的に（例えば、腸溶性コーティング錠剤を使用することによって）投与される。

【0111】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を阻害、処置、または防止する場合、上記方法は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２セロネガティブ被験体において（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染から防御する免疫応答を誘導することによって）感染を回避するか、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２セロポジティブ被験体において存在する感染を処置するかのいずれかのために、使用され得る。

【0112】

本開示の方法に従う予防または処置のための被験体を特定するために、受容されたスクリーニング方法が、標的化されたもしくは疑われた疾患もしくは状態と関連するリスク因子を決定するために、または被験体において存在する疾患もしくは状態の状況を決定するために、使用される。これらのスクリーニング方法としては、例えば、上記標的化されたもしくは疑われた疾患もしくは状態と関連し得る環境的、家族的、職業的、および他のこのようなリスク因子を決定する従来の後処理、ならびに診断方法（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を検出および／もしくは特徴づけるための種々のＥＬＩＳＡおよび他のイムノアッセイ方法）が挙げられる。これらのおよび他の慣用的方法は、臨床医が、本開示の方法および免疫原性組成物を使用する治療の必要性のある患者を選択することを可能にする。これらの方法および原理に従って、組成物は、無関係の予防もしくは処置プログラムとして、または他の処置に対する追跡、補助的もしくは調整処置（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）レジメンとして、本明細書中の教示、または他の従来の方法に従って投与され得る。

【0113】

本開示の免疫原は、調整（coordinate）（または感作－ブースト）免疫プロトコールまたは組み合わせ製剤において使用され得る。ある特定の実施形態において、新規な組み合わせ免疫原性組成物および調整免疫プロトコールは、別個の免疫原または製剤を使用する（各々、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２免疫応答（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に対する免疫応答）を誘発することに向けられている）。抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２免疫応答を誘発する別個の免疫原性組成物は、単回の免疫ステップにおいて被験体に投与される多価免疫原性組成物中に合わせられ得るか、またはそれらは、調整免疫プロトコールにおいて別個に（一価の免疫原性組成物において）投与され得る。

【0114】

１つの実施形態において、適切な免疫レジメンは、本開示のＡｄ４－Ｓｐｉｋｅを含む１またはこれより多くの免疫原性組成物による少なくとも２回の別個の接種を含む（２回目の接種は、１回目の接種後、約２週間を超えて、約３～８週間を超えて、または約４週間を超えて投与される）。３回目の接種は、２回目の接種後、数ヶ月を超えて投与され得、具体的実施形態では、１回目の接種後、約５ヶ月を超えて、１回目の接種後、約６ヶ月から約２年を超えて、または１回目の接種後、約８ヶ月から約１年を超えて投与され得る。３回目以降の定期接種はまた、被験体の「免疫記憶」を増強するために望ましい。選択されたワクチン接種パラメーター、例えば、製剤、用量、レジメンなどの妥当性は、上記被験体から血清のアリコートを採取し、免疫プログラムの過程の間の抗体力価をアッセイすることによって決定され得る。あるいは、Ｔ細胞集団が、従来の方法によってモニターされ得る。さらに、上記被験体の臨床状態は、所望の効果、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の防止、疾患状態の改善（例えば、ウイルス負荷の低減）、または伝播頻度の低減に関してモニターされ得る。このようなモニタリングが、ワクチン接種が最適に満たないことを示す場合、上記被験体は、免疫原性組成物のさらなる用量でブーストされ得、上記ワクチン接種パラメーターは、上記免疫応答を強化すると予測される様式で改変され得る。従って、例えば、本開示の免疫原の用量が増加され得るか、または投与経路が変更され得る。

【0115】

数回のブーストがあり得ること、および各ブーストが異なる免疫原であり得ることは、企図される。いくつかの例では、上記ブーストが別のブースト、または感作と同じ免疫原であり得ることがまた、企図される。

【0116】

上記感作および上記ブーストは、単一用量もしくは複数用量として投与され得る。例えば、２用量、３用量、４用量、５用量、６用量もしくはより多くの用量が、数日間、数週間または数カ月間にわたって被験体に投与され得る。複数のブーストがまた、与えられ得る（例えば、１～５回、またはより多い）。異なる投与量が、一連の逐次的接種において使用され得る。例えば、初回接種では比較的大きな用量であり、次いで、ブーストは、比較的小さな用量である。上記選択された抗原性表面に対する免疫応答は、被験体の１またはこれより多くの接種によって誘発され得る。

【0117】

いくつかの実施形態において、本開示の免疫原は、アジュバントの投与と同時に被験体に投与され得る。他の実施形態において、上記免疫原は、アジュバントの投与後に、および上記免疫応答を誘発するために十分な時間量内で、被験体に投与され得る。他の実施形態において、アジュバントは投与されない。

【0118】

上記方法が有効であるために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染が完全に阻害される必要はない。例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫応答の誘発は、免疫の非存在下でのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染と比較して、所望の量、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、またはさらには少なくとも１００％（検出可能なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞の排除または防止）まで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を低減または阻害し得る。さらなる例では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製は、本開示の方法によって低減または阻害され得る。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製は、上記方法が有効であるために、完全に排除される必要はない。例えば、本開示の免疫原のうちの１またはこれより多くのものを使用して誘発される免疫応答は、免疫応答の非存在下でのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製と比較して、所望の量、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、またはさらには少なくとも１００％（検出可能なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製の排除または防止）まで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製を低減し得る。

【0119】

被験体の免疫後、血清を適切な時点で上記被験体から集め、凍結し、中和試験のために貯蔵し得る。中和活性についてアッセイする方法としては、プラーク低減中和（ＰＲＮＴ）アッセイ、マイクロ中和アッセイ、フローサイトメトリーベースのアッセイ、単一サイクル感染アッセイ、およびシュードウイルス中和アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。

【0120】

いくつかの実施形態において、免疫は、組換えＡｄ４ベクターＤＮＡの投与によって達成される。核酸構築物による免疫は、例えば、米国特許第５，６４３，５７８号（これは、所望の抗原をコードするＤＮＡを導入して、細胞媒介性もしくは体液性応答を誘発することによって、脊椎動物を免疫する方法を記載する）、同第５，５９３，９７２号および同第５，８１７，６３７号（これは、抗原をコードする核酸配列を調節配列に作動可能に連結して、発現を可能にすることを記載する）に教示され、広くは、Ｊａｎｅｗａｙ ＆ Ｔｒａｖｅｒｓ， Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ： Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ， ｐａｇｅ １３．２５， Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９７；およびＭｃＤｏｎｎｅｌｌ ＆ Ａｓｋａｒｉ， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３３４：４２－４５， １９９６に記載される。

【0121】

以下の実施例は、ある特定の特徴および／または実施形態を例証するために提供される。これらの実施例は、本開示をその記載される特定の特徴または実施形態に限定すると解釈されるべきではない。

【実施例】

【0122】

実施例
実施例１： 野生型および改変されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の発現
以下の試験は、野生型武漢株ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（配列番号２）および武漢株スパイクタンパク質の３種の改変バージョン： 安定化（ＰＰ）、尾部短縮化（ＴＴ）、およびエンドサイトーシスモチーフ短縮化（ｎｏ－Ｅｎｄｏ）の細胞表面発現を評価した。ＰＰは、アミノ酸位置９８６および９８７において二重プロリン安定化置換を含む（配列番号３）； ＴＴは、細胞質尾部の末端２４アミノ酸の欠失を含む（配列番号４）； ｎｏ－Ｅｎｄｏは、Ｃ末端エンドサイトーシスシグナル伝達モチーフの欠失を含む（配列番号５）（図４を参照のこと）。

【0123】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＴ、ＰＰ、ＴＴおよびｎｏ－Ｅｎｄｏスパイクタンパク質の発現を、Ａ５４９細胞において評価した。細胞を、ＷＴまたは改変されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のための遺伝子を含むシャトルベクタープラスミドでトランスフェクトした。トランスフェクトしていない細胞を、陰性コントロールとして供し、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖタンパク質を発現するプラスミドでトランスフェクトした細胞を、トランスフェクションに関する陽性コントロールとして使用した。スパイクおよびＥｎｖの発現を、それぞれＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質特異的抗体およびＨＩＶ Ｅｎｖ特異的抗体（ＶＲＣ０１）を使用するフローサイトメトリーによって測定した。図１に示されるように、トランスフェクトしたＡ５４９細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質発現は、野生型スパイクタンパク質と比較して、尾部の短縮およびエンドサイトーシスモチーフの短縮に伴って減少した。

【0124】

ＷＴ、ＰＰまたはＴＴ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードする核酸配列を、上記Ｅ３ ２３．３Ｋ、１９Ｋ、２４．８Ｋ、６．３Ｋ、２９．７Ｋ、１０．４Ｋ、１４．５Ｋおよび１４．７Ｋ ＯＲＦの欠失を有する複製可能Ａｄ４ベクターのＥ３領域へと挿入した。ＷＴスパイクタンパク質コード配列を含む組換えＡｄ４のヌクレオチド配列は、配列番号１として本明細書に示される。組換えＡｄ４感染Ａ５４９細胞におけるＷＴ、安定化および短縮化スパイクタンパク質の発現を評価した。ＷＴスパイク核酸配列（ｎＣｏＶ－ＷＴ）、ＰＰ安定化スパイク核酸配列（ｎＣｏｖ－ＰＰ）または尾部短縮化スパイク核酸配列（ｎＣｏｖ－ＴＴ）を有する複製Ａｄ４を、Ａ５４９細胞に感染させるために使用した。ＨＩＶ－１ Ｅｎｖタンパク質（ＦＤＥ３）を発現する複製アデノウイルスを、感染の陽性コントロールとして使用し、感染させていない（ｕｎＩＦ）細胞を、陰性コントロールとして使用した。スパイクタンパク質の発現を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質特異的抗体を使用するフローサイトメトリーによって測定した。抗体ＶＲＣ０１を使用して、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖの発現を検出した。感染の２日後のＡｄ４－Ｓｐｉｋｅからのスパイクタンパク質発現を、図２Ａに示す。図２Ｂでは、ＰＰ安定化および短縮化スパイクタンパク質の発現を示す。図２Ａ～２Ｂに示されるように、ｎＣｏＶ－ＷＴおよびｎＣｏＶ－ＰＰ構築物の両方からのスパイクタンパク質の発現は高かった。

【0125】

実施例２： ウサギにおけるＡｄ４－Ｓｐｉｋｅ（ＷＴ）の免疫原性
Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅ（配列番号２のＷＴスパイクタンパク質配列を発現する）の免疫原性を、ニュージーランドホワイトウサギで試験した。ウサギおよび他の実験動物は、Ａｄ４ウイルスを複製しないが、筋肉内投与（ＩＭ）が、免疫原性についてのスクリーニングとして一般に使用される。ウサギに、精製された複製Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅの１．２９×１０^９ 感染単位（ＩＦＵ）を０日目および２８日目にＩＭで免疫した。ルシフェラーゼアッセイを使用して、武漢ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスに対する血清中和を４週間（２回目の免疫の前）で検出し、該血清中和は、１２週間の試験期間を通して増加し続けた。

【0126】

実施例３： ハムスターにおける免疫原性試験
ヒトアデノウイルスは、シリアンゴールデンハムスターに感染する能力がある（ｖａｎ ｄｅｒ Ｌｕｂｂｅら， ＮＰＪ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ６（１）：３９， ２０２１）。従って、免疫原性試験を。これらの動物において行った。ＰＰ安定化を有する鼻内Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢スパイク（Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２_ＷｕＰＰ）の１０^２～１０^７ 感染形成単位（ＩＦＵ）の用量漸増を行った。強い血清中和が、Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２_ＷｕＰＰの最高用量において、レンチウイルスシュードタイプアッセイにおいて４週目（図５Ａ）および８週目（図５Ｂ）で観察された。

【0127】

これらの結果は、ハムスターがＡｄ４に関して半許容性（ｓｅｍｉ－ｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅ）であるが、血清中和抗体を誘導するために十分にウイルスを複製することを示唆した。スパイク特異的ＩｇＡおよびＩｇＧはまた、６０日目に鼻洗浄物中で観察された。

【0128】

次いで、ハムスターを、懸念される変異株（ＶＯＣ）に由来する安定化（二重プロリン置換－ＰＰ）スパイクタンパク質を発現する鼻内Ａｄ４で免疫した。Ａｄ４－ＣｏＶ２－武漢、Ａｄ４－ＣｏＶ２－ＳＡ（ベータ）、Ａｄ－ＣｏＶ２－Ｗｕ／ＲＢＤ－ＳＡ、Ａｄ４－ＣｏＶ２－インド（デルタ）およびＡｄ４－ＣｏＶ２－ブラジル（ガンマ）を、この試験に含めた。インフルエンザウイルスＨ５ヘマグルチニンを発現するＡｄ４（Ａｄ４－Ｈ５）および偽接種を、陰性コントロールとして含めた。

【0129】

武漢、デルタおよびオミクロンシュードウイルスに対する血清中和を、鼻内投与の２８日後および５６日後に決定した。その結果を図６Ａ～６Ｅに示す。武漢－ＰＰ（配列番号３）またはデルタ－ＰＰ（配列番号９）を発現するＡｄ４が、最も免疫原性であった。

【0130】

実施例４： ハムスターにおけるチャレンジ試験
この実施例は、シリアンゴールデンハムスターモデルにおける候補ワクチンを試験する試験を記載する。

【0131】

この試験において、シリアンゴールデンハムスターに、実施例３において特定された免疫原性候補（候補１または候補２）を１０^７ ＩＦＵの用量で鼻内に投与し、その後、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタ感染動物またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ オミクロン感染動物と同居させることによってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２でチャレンジする（ｖａｎ Ｄｏｒｅｍａｌｅｎら， Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ １３（６０７）：ｅａｂｈ０７５５， ２０２１）。表１は、使用される動物の群を示す。群Ａにおける動物を、免疫後６０日目にチャレンジする一方で、群Ｂにおける動物を、免疫の６ヶ月後にチャレンジする。Ａｄ４－Ｈ５－Ｖｔｎの鼻内投与を受けるハムスターを、陰性コントロールとして含める。Ｐｆｉｚｅｒ ｍＲＮＡまたはＡｄ２６－Ｓｐｉｋｅを、比較するものとして筋肉内に投与する。

【表1】

【0132】

鼻内Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅワクチンは、ｍＲＮＡまたはＡｄ２６と同じ桁の全身性の中和抗体を与えるが、より永続性があると予測される。Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅが、非経口投与されるワクチンと比較して、チャレンジウイルスのより大きな制限を引き起こすことが同様に予測される。

【0133】

実施例４： ヒト臨床試験
健常ボランティアにおける単一用量の鼻内投与Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅのフェーズ１／２オープンラベル試験を行う。登録を、コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）に罹ったことがある若しくは罹ったことがない、またはワクチン接種を受けたことがある若しくは受けたことがないボランティアで始める。選択された国際環境は、ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンの供給が限られており、かつＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に罹っていないボランティアがより容易に登録され得る環境である。全てのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に罹っていない参加者に、試験完了時または６ヶ月の時点後で彼らの中和力価が約４０を下回る（これは、Ｍｏｄｅｒｎａ ｍＲＮＡ １２７２ワクチンの四分位範囲の下限である）場合に、緊急使用許可（ＥＵＡ）ワクチンを提供する。各試験参加者は、鼻内Ａｄ４－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンの単一用量、または許可もしくは認可されたブースターによる筋肉内（ＩＭ）免疫を受ける。試験参加者を有害事象（ＡＥ）に関してモニターし、血液および呼吸器分泌物を、免疫原性および安全性試験のために、試験期間の間中定期的に集める。鼻スワブを集めて、アデノウイルス排出をモニターし、鼻洗浄物を集めて、粘膜免疫応答をモニターする。参加を希望する家庭内接触者および密接接触者をまた登録し、血清学によってワクチンウイルスの伝播についてモニターする。

【0134】

一次エンドポイントは、ワクチン接種後最初の２８日間での非自発的な（ｓｏｌｉｃｉｔｅｄ）および自発的な（ｕｎｓｏｌｉｃｉｔｅｄ）有害事象の頻度およびグレードによって測定した安全性に関する。安全性を、追跡の継続期間にわたる治験の候補ワクチンアームにおける発生率、重篤度、および有害事象のタイプを別個に評価することによって評価する。ワクチンレシピエントのうちの２１％（Ｎ＝１０／４８）が、ワクチン関連徴候および症状（例えば、頭痛疲労、筋肉痛、鼻漏、悪心、下痢）を経験し得ると予測される。ワクチンウイルス排出は、系列的に集められた鼻洗浄物サンプル中の排出されたウイルスの存在、分量、および継続期間を記載することによって評価する。

【0135】

二次的エンドポイントは、免疫原性である。免疫原性を、系列的に集められた血清、鼻および糞便のサンプルにおいて評価する。免疫原性を、レンチウイルスベースのシュードウイルス中和アッセイによって決定する。そのアッセイは、Ｂ細胞クローン、補体増強および抗体依存性増強、粘膜およびＴ細胞免疫の特徴付けによって測定される場合の機能的抗体を含む。呼吸器粘膜応答は、ＣＯＶＩＤ－１９感染後に認められつつあり、従って、Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅワクチンの区別できる顕著な特徴であると予測される。Ａｄ４－ベクター化したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンがレシピエントのうちの９５％において「摂取」され、かつこれらのレシピエントのうちの９０％においてアデノウイルス４およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に対して免疫原性である場合、全身性の免疫応答がワクチンレシピエントのうちの８５％（Ｎ＝４４／５２）において誘導され、粘膜応答がボランティアのうちの９０～１００％において誘導されると予測される。

【0136】

ワクチンの証拠が３０日でとれないという希な場合には、６０日での第２の用量を投与する。しかし、一次分析は、１用量後である。なぜならこのワクチンは、単一用量レジメンであると予測されるからである。以前のＡｄ４ベースのワクチン治験における大部分の参加者は、２回目の免疫後により高い応答を発生させなかった。第２の用量は、参加者が第１の用量に感染していないという希な場合において応答を誘導するに過ぎない。

【0137】

ボランティアは、血清抗体に関して予めスクリーニングされていないことから、そのボランティアのサブセットは、循環している野生型アデノウイルスに対する曝露の結果として、Ａｄ４のベースラインにおいてセロポジティブである（約３０％、Ｎ＝２０／６０）。以前のベクター化ワクチン治験において既存のＡｄ４免疫を有する者の応答は、Ａｄ４免疫が上記ベクターへの応答をモジュレートしてウイルス排出を制限し得るが、ベクター特異的免疫はなおも誘導されることが示唆されている。

【0138】

参加者を、１年間にわたって安全性および免疫原性に関してモニターする。フェーズ１治験は、必要に応じて、他のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ免疫原（例えば、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはタンパク質ワクチン）とともにＡｄ４－Ｓｐｉｋｅを使用することが許容される臨床試験へと設計された並行探索アームを含む。Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅは、非複製非経口投与タンパク質または核酸ワクチンと比較して、より大きな永続性ならびに粘膜ＴおよびＢ細胞応答を与えると予測される。

【0139】

標的試験集団は、呼吸器ウイルス感染症によって悪影響を受ける可能性がある者（例えば、妊婦または重篤な免疫不全を有する者）のみを排除する。組換えＡｄ４ワクチン接種の症状は、それらが起こる場合、軽度および自己限定される傾向がある。上気道感染症に対応するにあたって困難がないそれらの人々は、Ａｄ４－Ｓｐｉｋｅワクチンで重篤な症状を経験しないはずである。Ａｄ４に対する既存の免疫は珍しくもない（３０％）が、それは、鼻内ワクチン接種により大きく克服される。ベクター特異的免疫が克服される程度は、評価され、ワクチンウイルスの複製および上記スパイクタンパク質の免疫原性の関数であると予測される。１６歳未満の個人におけるＡｄ４抗体の保有率は極めて低く、このことは、このワクチンを就学年齢の小児（ｓｃｈｏｏｌ ａｇｅｄ ｃｈｉｌｄｒｅｎ）において永続性のある免疫を誘導する非常に魅力的な様式にしている。一次エンドポイントは、安全性および免疫原性である。安全性は、一次エンドポイントが達成される場合に、治験のフェーズ２において最終的に対処される。

【0140】

以前のＡｄ４組換えウイルスワクチンが鼻内に与えられた場合、そのウイルスは、２～４週間にわたって低レベルで複製した。しかし、ウイルス培養によって検出されるウイルスの排出は、非常に低レベルであり、メジアンが１日であった。参加者に、ワクチン接種後１４日間は密接な接触を回避するように助言する。これらの理由から、家庭内接触者および密接接触者へのワクチンウイルスの伝播は、観察されていない。大部分のワクチンは、無症候性である。しかし、最も一般的な有害事象（ＡＥ）は、参加者のうちの２５％における喉の不快感および鼻うっ血であり、グレード２を上回るものはない。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を含む組換えＡｄ４は、以前のＡｄ４ベースの鼻内投与ワクチンに類似の結果を生じると予測される。

【0141】

フェーズ３試験および／またはチャレンジ試験を、フェーズ２の後に行う。

【0142】

本開示の主題の原理が適用され得る多くの可能な実施形態に鑑みて、例証される実施形態が、本開示の好ましい例に過ぎず、本開示の範囲を限定すると理解されるべきではないことが認識されるべきである。むしろ、本開示の範囲は、以下の特許請求の範囲によって規定される。従って、本発明者らは、これら請求項の範囲および趣旨の範囲内にある全てのものを特許請求する。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A-B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【配列表】

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【国際調査報告】