特表 2024-503597 ＶＥＧＦ調節ペプチド

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-26

(54)【発明の名称】ＶＥＧＦ調節ペプチド

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/54 20060101AFI20240119BHJP

   C07K 2/00 20060101ALI20240119BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240119BHJP

   A61K 47/55 20170101ALI20240119BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20240119BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20240119BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240119BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240119BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240119BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20240119BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20240119BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240119BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240119BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240119BHJP

   A61K 38/12 20060101ALI20240119BHJP

   C07K 14/47 20060101ALN20240119BHJP

【ＦＩ】

C07K7/54 ZNA

C07K2/00

C07K19/00

A61K47/55

A61K47/60

A61K47/64

A61P43/00 111

A61P27/02

A61P9/10

A61P27/06

A61P17/06

A61P11/00

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K38/12

C07K14/47

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023539989

(86)(22)【出願日】2021-12-29

(85)【翻訳文提出日】2023-08-09

(86)【国際出願番号】 EP2021087804

(87)【国際公開番号】W WO2022144401

(87)【国際公開日】2022-07-07

(31)【優先権主張番号】20383169.8

(32)【優先日】2020-12-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＢＲＩＪ

３．ＰＬＵＲＯＮＩＣ

４．ＷＩＮＤＯＷＳ

５．ＳＰＡＮ

６．ＭＹＲＪ

７．Ｖｅｅｇｕｍ

(71)【出願人】

【識別番号】518328508

【氏名又は名称】アイディーピー ディスカバリー ファーマ， エセ．エレ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】エステバン マルティン サンティアゴ

(72)【発明者】

【氏名】ネヴォラ ラウラ

(72)【発明者】

【氏名】モレノ ラヒャ ミゲル ラモン

(72)【発明者】

【氏名】モンテネグロ アルセ マリア フェルナンダ

(72)【発明者】

【氏名】ロドリゲス ロペス ホセ ネプトゥーノ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC10

4C076CC11

4C076CC15

4C076CC20

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE23

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA18

4C084BA25

4C084BA31

4C084BA41

4C084CA59

4C084DC50

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC411

4C084ZC412

4C084ZC751

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA16

4H045BA17

4H045BA18

4H045BA19

4H045BA31

4H045BA41

4H045BA57

4H045BA72

4H045CA40

4H045EA20

4H045FA20

(57)【要約】

本発明は、１４～５０の長さを有し、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含むペプチド又はその医薬塩を提供する。ここで「ｍ」、「ｎ」、「ｐ」及び「ｑ」は整数を表し、０及び１から選択され、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当し、ペプチドは、配列番号１のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子とを連結する式（Ｉ）のリンカービラジカル「Ｌ」を任意に含む。本発明はまた、本発明のペプチドを含む融合タンパク質及び医薬組成物、並びに療法、特にＶＥＧＦレベルの上昇又は低下に起因する疾患の治療におけるそれらの使用を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

１４～５０の長さを有し、配列番号１：
（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ
（ここで、
「ｍ」、「ｎ」、「ｐ」及び「ｑ」は整数を表し、０及び１から選択され、
Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、
Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する）を含むペプチド又はその医薬塩であって、
該ペプチドが、配列番号１のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子とを連結する、式（Ｉ）：
－［（Ｒ_１）_ａ－（Ｒ_２）－（Ｒ_３）_ｂ］_ｃ－ （Ｉ）
（式中、
「ａ」及び「ｂ」は同じか又は異なり、０又は１であり、
「ｃ」は１～１０で構成され、
Ｒ_１及びＲ_３は、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル；並びにハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より独立して選択されるビラジカルであり、
Ｒ_２は－Ｏ－、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_１３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、ＮＲ_１４、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、－ＮＲ_１５－ＮＲ_１６－、－Ｎ＝Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－、及び３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択され、
環系がハロゲン、－ＯＨ、－ＮＯ_２、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－Ｏ－からなる群より独立して選択される１つ以上のラジカルによって任意に置換される、既知の環系からなる群より選択されるビラジカルであり、
Ｒ_４は－ＯＨ及び－ＮＲ_１７Ｒ_１８からなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_５は－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_２０）アルキルからなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７及びＲ_１８は、－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルからなる群より独立して選択されるラジカルである）のリンカービラジカル「Ｌ」を含み、
前記リンカーによって連結される配列番号１中のアミノ酸が、式（ＩＩ）：

【化1】

（式中、
Ｒ_１９は（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、並びに３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択される、既知の環系からなる群より選択されるモノラジカルである）のアミノ酸に置き換えられる、ペプチド又はその医薬塩。

【請求項2】

請求項１に規定される配列番号１の配列のみからなる、請求項１に記載のペプチド。

【請求項3】

前記配列番号１のペプチド配列において前記位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と前記位置「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子との間に前記式（Ｉ）のリンカービラジカル「Ｌ」を含む、請求項１又は２に記載のペプチド。

【請求項4】

配列番号２：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号３：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号４：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号５：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号６：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号７：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号８：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号９：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号１０：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、
配列番号１１：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、及び、
配列番号１２：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、
からなる群より選択され、
ここで、太字及び下線で示したアミノ酸は、前記リンカービラジカル「Ｌ」の位置を指し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する、請求項１～３のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項5】

「ａ」、「ｂ」及び「ｃ」が１である、請求項１～４のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項6】

Ｒ_１及びＲ_３が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より独立して選択されるビラジカルである、請求項１～５のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項7】

Ｒ_２が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より選択されるビラジカルである、請求項１～６のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項8】

Ｒ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より選択されるモノラジカルである、請求項１～７のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項9】

Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」及び「ｎ」が同じであり、「ｐ」及び「ｑ」が同じであるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」及び「ｎ」が同じであり、「ｐ」及び「ｑ」が異なるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」、「ｎ」、「ｐ」及び「ｑ」が同じであるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」、「ｎ」、「ｑ」が同じであり、「ｑ」が異なる、請求項１～８のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項10】

Ｌが式（Ｉａ）：
－（ＣＨ_２）_ｙ－Ｐ－（ＣＨ_２）_ａ－（Ｑ）_ｂ－（ＣＨ_２）_ｃ－（Ｖ）_ｄ－（ＣＨ_２）_ｚ－ （Ｉａ）
（式中、
Ｐ、Ｑ及びＶは、それぞれ独立してＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＯＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ_１～Ｃ_６アルキレン、フェニレン等のアリーレン基、及びトリアゾーレン等のヘテロアリーレン基を含む群から選択され、ハロゲンによって任意に置換され、
ｙ及びｚは、それぞれ独立して１～１０から選択される整数値であり、
ａ及びｃは、それぞれ独立して０～１０から選択される整数値であり、
ｂ及びｄは、それぞれ独立して０～３から選択される整数値である）である、請求項１～５のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項11】

Ｌが式（Ｉｂ）：
－（ＣＨ_２）ｙ－ＣＨ＝ＣＨ－（ＣＨ_２）ｚ－ （Ｉｂ）
（式中、ｙ及びｚは同じか又は異なり、１～１０から選択され、好ましくは独立して３～６から選択され、より好ましくは独立して３及び６から選択される整数値である）のものである、請求項１～１０のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項12】

Ｒ_１９がメチル、又はフルオロメチル等のハロメチルである、請求項１～１１のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項13】

Ｃ末端が－Ｃ（Ｏ）ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、Ｎ末端が－ＮＨ_２に相当する、請求項１～１２のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項14】

配列番号１４～配列番号２１の配列からなる群より選択される配列を含むか又はそれからなり、好ましくは配列番号１６又は配列番号１７を含むか又はそれのみからなる、請求項１～１３のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項15】

標識、薬物、細胞膜透過ペプチド又はポリエチレングリコールにコンジュゲートしている、請求項１～１４のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項16】

請求項１～１５のいずれか一項に記載のペプチドを含む融合タンパク質。

【請求項17】

治療有効量の請求項１～１５のいずれか一項に記載のペプチド若しくはその医薬塩、又は請求項１６に記載の融合タンパク質を、許容可能な医薬添加剤及び／又は担体と共に含む医薬組成物。

【請求項18】

療法に使用される、１４～５０の長さを有し、配列番号１：
（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ
（ここで、
「ｍ」、「ｎ」、「ｐ」及び「ｑ」は整数を表し、０及び１から選択され、
Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、
Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当し、
Ｒ_４は－ＯＨ及び－ＮＲ_１７Ｒ_１８からなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_５は－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_２０）アルキルからなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_１７及びＲ_１８は、－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルからなる群より独立して選択されるラジカルである）の配列を含むペプチド若しくはその医薬塩であって、
該ペプチドが式（Ｉｂ）：
－（ＣＨ_２）ｙ－ＣＨ＝ＣＨ－（ＣＨ_２）ｚ－ （Ｉｂ）
（式中、ｙ及びｚは同じか又は異なり、１～１０から選択される整数値であり、好ましくは独立して３～６から選択され、より好ましくは独立して３及び６から選択される）のリンカービラジカル「Ｌ」を含み、
前記リンカービラジカル「Ｌ」が、配列番号１のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子とを連結し、
前記リンカーによって連結される配列番号１中のアミノ酸が、式（ＩＩ）：

【化2】

（式中、Ｒ_１９は（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より選択されるモノラジカルである）のアミノ酸に置き換えられる、ペプチド若しくはその医薬塩、
又はその融合タンパク質又はそれらのいずれかを許容可能な医薬添加剤及び／又は担体と共に含む医薬組成物。

【請求項19】

ＶＥＧＦレベルの上昇に起因する疾患の治療又は予防に使用される、請求項１８に記載のペプチド、その医薬塩、その融合タンパク質又はそれらのいずれかを含む医薬組成物。

【請求項20】

前記疾患が糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）又は緑内障等の失明障害；乾癬；慢性閉塞性肺疾患及び癌からなる群より選択される、請求項１９に記載の使用のためのペプチド、その医薬塩、その融合タンパク質又はそれらのいずれかを含む医薬組成物。

【請求項21】

１つ以上の他の治療剤、又はそれらのバイオアベイラビリティを改善する、それらの代謝を低減及び／又は変更する、それらの排出を阻害する、及び／又はそれらの体内での分布を変更することができる作用物質と組み合わせた、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の使用のためのペプチド、その医薬塩、融合タンパク質又は医薬組成物。

【請求項22】

前記ペプチドが、
配列番号２：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号３：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号４：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号５：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号６：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号７：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号８：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号９：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号１０：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、
配列番号１１：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、及び、
配列番号１２：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、
からなる群より選択され、
ここで、太字及び下線で示したアミノ酸は、前記リンカービラジカル「Ｌ」の位置を指し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の使用のためのペプチド、その医薬塩、融合タンパク質又は医薬組成物。

【請求項23】

Ｃ末端が－Ｃ（Ｏ）ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、Ｎ末端が－ＮＨ_２に相当する、請求項１８～２２のいずれか一項に記載の使用のためのペプチド、その医薬塩、融合タンパク質又は医薬組成物。

【請求項24】

前記ペプチドが、配列番号１４～配列番号２１の配列を含むか又はそれからなる群より選択され、好ましくは該ペプチドが配列番号１６又は配列番号１７を含むか又はそれのみからなる、請求項１８～２３のいずれか一項に記載の使用のためのペプチド、その医薬塩、融合タンパク質又は医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ペプチド及び療法の分野に関する。特に、本発明は、ＶＥＧＦタンパク質を調節する能力を有するペプチドを提供する。このため、血管新生等のＶＥＧＦが重要な役割を果たすプロセスの調節に有用である。本発明はまた、本発明のペプチドを含む融合タンパク質及び医薬組成物を提供する。

【背景技術】

【0002】

血管新生は、胚形成、体成長、及び神経系の分化を含む正常な個体における幅広い基本的な生理的プロセスに決定的な役割を果たす。女性生殖器系においては、血管新生が卵胞ではその発育時に、黄体では排卵後に、胎盤では妊娠を確立及び維持するために起こる。血管新生はさらに、創傷及び骨折の治癒等の身体の修復プロセスの一環としても起こる。このため、血管新生の促進は、脈管化（vascularization）の確立又は拡張が望ましい状況において有用であり得る。しかしながら、血管新生は多くの病理プロセス、おそらく最も注目すべきは、腫瘍成長及び転移においても重要な要素である。というのも、腫瘍が成長するには新たな毛細血管の持続的な刺激を必要とすることからである。血管新生の影響を受ける他の病理プロセスとしては、特に毛細管における血管増殖に関連する病態、例えば糖尿病性網膜症、黄斑変性、関節症、乾癬、関節リウマチ、肺高血圧、慢性閉塞性肺疾患、肝疾患、腎疾患等が挙げられる（非特許文献１）。

【0003】

最近の研究から、内皮細胞特異的成長因子のファミリーである血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）が、その同族受容体と共に、内皮細胞の成長及び分化の刺激に主に関与することが示されている。これらの因子は、ＰＤＧＦファミリーのメンバーであり、主に内皮受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を介して作用するようである。

【0004】

胚発生及び成人期の両方における血管形成の重要な様式である発芽型血管新生は既存の血管からの内皮細胞の伸長により新たな血管を形成する。内皮細胞は通常、静止状態であるため、ＶＥＧＦ等の刺激性サイトカインが血管新生の開始に必要とされる。ＶＥＧＦは、それ自体が血管新生の主要調節因子と考えられ、内皮細胞を親血管から剥離させ、隣接する間質に移動させる。ＶＥＧＦはＨＩＦ－１α及びＨＩＦ－２αの両方の直接的な転写標的であるため、低酸素がＶＥＧＦ発現の主な調節因子である。Ａｒｎｔ突然変異体血管障害は、ＶＥＧＦ発現の減少を伴い、外因性ＶＥＧＦがこれらの障害を救済することから、ＶＥＧＦ発現の減少が観察される血管異常の多くの原因である。

【0005】

血管閉塞性疾患は、依然として工業化社会における死亡及び罹患の最も重要な原因である。心筋梗塞、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）及び脳卒中等の終末期の治療は、通常は血管形成術等の緩和的介入、またＰＡＤの重症例における手足の切断に限られている。血管新生及び血管リモデリングを指示された形で誘導及び調節することができれば、虚血性血管疾患の治療における大きな進歩となる。

【0006】

一方、健康に劇的な影響を及ぼす無制御の血管新生の更なる例は、糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、緑内障及び未熟児網膜症（ＲＯＰ）を含む多くのヒト失明障害の中心的な病理学的要素となっている無制御の血管成長である。これらの疾患で観察される神経細胞死及び視力喪失は、病的新血管新生（neovascularization）を伴うことが多い、異常な漏出血管によって引き起こされる。総合すると、これらの疾患が視力喪失の最も一般的な原因であり、非常に効果的な血管新生抑制療法が工業化社会における失明の有病率に多大な影響を与えることが示唆される。実際に、ＶＥＧＦ阻害剤が臨床で首尾よく用いられ、滲出型（新生血管型）のＡＭＤの治療における有効性を示していることから、新生血管眼疾患が血管新生を阻害する治療的有用性の最も明らかな例である。

【0007】

上記を踏まえると、プラスの形（すなわち、ＶＥＧＦの刺激）又はマイナスの形（すなわち、ＶＥＧＦの阻害）のいずれかで血管新生を調整する能力を有する分子を見出すことに多くの努力が注がれている。

【0008】

低酸素誘導因子（ＨＩＦ）は、血管新生因子（例えば、ＶＥＧＦ及びＦＬＴ１）、グルコース輸送体（Ｇｌｕｔ－１及びＧｌｕｔ－３）、及びＯ_２の非存在下でのＡＴＰの産生に関与する解糖酵素を含む幾つかの遺伝子の転写活性化に関与する転写因子である（概要については、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４を参照されたい）。ＨＩＦ転写因子ヘテロ二量体は、ＨＩＦ－α及びＨＩＦ－βの２つのサブユニットから構成される。ＨＩＦ－βは構成的に発現されるが、ＨＩＦ－αの発現は、酸素レベルによって調節される。このため、正常酸素圧（すなわち、正常酸素）の存在下では、ＨＩＦ－１αは、プロリルヒドロキシラーゼタンパク質（ＰＨＤ）ファミリーのメンバー（ＰＨＤ－１、ＰＨＤ－２及びＰＨＤ－３）によって、２つの重要なプロリン残基（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１５２１の４０２及び５６４）でヒドロキシル化される。ヒドロキシル化－ＨＩＦ－１αは、続いてフォンヒッペルリンドウ（ＶＨＬ）腫瘍抑制タンパク質と結合することができ、これがＥ３ユビキチンリガーゼ複合体を動員し、ＨＩＦ－αタンパク質をプロテアソーム分解に導く。しかしながら、酸素がＰＨＤ酵素の律速補因子であるため、低酸素圧（すなわち、低酸素条件）では、プロリルヒドロキシラーゼは、ＨＩＦ－αをヒドロキシル化することができない。結果として、ＶＨＬ相互作用は起こらず、Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体は、ＨＩＦ－１αをプロテアソーム分解に導くことができず、ＨＩＦの安定化が生じる。安定化ＨＩＦ－１αは、続いてＨＩＦ－１βとヘテロ二量体を形成することができ、これが標的遺伝子中の低酸素応答因子（ＦＩＲＥ）の塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスドメインと相互作用する。加えて、ＨＩＦ－１阻害因子（ＦＩＨ－１）によるＨＩＦ－αのＣ末端トランス活性化ドメイン（ＴＡＤ）のアスパラギン残基（８０３位）のヒドロキシル化は、ｐ３００及びＣＢＰトランス活性化因子との相互作用を妨げることによりＨＩＦの転写活性を負に調節する。特許文献１は、本開示の配列番号３６に相当する１５アミノ酸の線状ペプチドを含むＨＩＦ－α由来のペプチドを開示しており、これがＶＥＧＦ減少活性及び抗癌特性を有することを提唱しているが、特許文献１には主張されたこれらの特性を支持するいかなる実験データも含まれていない。一方、特許文献２及び特許文献３は、ＨＩＦとｐ３００及びＣＢＰトランス活性化因子との相互作用を調整するとされる環状ペプチドを記載している。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】国際公開第２００６０３８２０８号

【特許文献2】国際公開第２０１００３４０２８号

【特許文献3】米国特許出願公開第２０１９２２５６５０号

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Carmeliet P., 2003

【非特許文献2】Semenza GL. 2003; Nat. Rev. Cancer 3: 721-732

【非特許文献3】Paul SA, Simons JW, Mabjeesh NJ. 2004; J. Cell Physiol. 200: 20-30

【非特許文献4】Wang Guang l et al 1995, PNAS, 92(12): 5510-5514

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

残念ながら、ＶＥＧＦに基づく療法は、血管新生を適切に調節するのに十分に効果的ではない。したがって、血管新生の調節に有効なＶＥＧＦ抑制療法が依然として必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0012】

本発明者らは、低酸素条件下でＶＥＧＦの発現を効率的に調節するペプチドを見出した。

【0013】

したがって、第１の態様において、本発明は、１４アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有し、配列番号１：
（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ
（ここで、
「ｍ」、「ｎ」、「ｐ」及び「ｑ」は整数を表し、０及び１から選択され、
Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、
Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含むペプチド又はその医薬塩であって、
該ペプチドが、任意に配列番号１のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子とを連結する、式（Ｉ）：
－［（Ｒ_１）_ａ－（Ｒ_２）－（Ｒ_３）_ｂ］_ｃ－ （Ｉ）
（式中、
「ａ」及び「ｂ」は同じか又は異なり、０又は１であり、
「ｃ」は１～１０で構成され、
Ｒ_１及びＲ_３は、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル；並びにハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より独立して選択されるビラジカルであり、
Ｒ_２は－Ｏ－、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_１３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、ＮＲ_１４、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、－ＮＲ_１５－ＮＲ_１６－、－Ｎ＝Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－、及び３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択され、
環系がハロゲン、－ＯＨ、－ＮＯ_２、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－Ｏ－からなる群より独立して選択される１つ以上のラジカルによって任意に置換される、既知の環系からなる群より選択されるビラジカルであり、
Ｒ_４は－ＯＨ及び－ＮＲ_１７Ｒ_１８からなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_５は－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_２０）アルキルからなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７及びＲ_１８は、－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルからなる群より独立して選択されるラジカルである）のリンカービラジカル「Ｌ」を含み、
リンカーによって連結されるアミノ酸が、式（ＩＩ）：

【化1】

（式中、
Ｒ_１９は（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、並びに３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択される、既知の環系からなる群より選択されるモノラジカルである）のものである、ペプチド又はその医薬塩を提供する。

【0014】

下記に示すように、本発明の第１の態様のペプチドは、正常酸素条件と比較して低酸素条件下でＶＥＧＦの発現を効率的に調節する。特に、本発明の第１の態様のペプチドが線状である（すなわち、リンカービラジカル「Ｌ」を含まない）場合、ＶＥＧＦ値の増加が得られたことが示される。より具体的には、実施例１に示すように、配列番号１３（１８アミノ酸）は、低酸素条件下でＶＥＧＦ発現を増加させることが示された（表２）。本発明者らは、それよりも短いバージョン、例えば配列番号３６（１５アミノ酸）及び配列番号３７（１４アミノ酸）の特性を更に調べ、サイズを小さくすることで線状ペプチドを不活性にするか、又はＶＥＧＦ発現の上方調節を保持し得ることを見出した（表３）。したがって、特許文献１における提唱に反して、配列番号３６がＶＥＧＦ発現の調整に影響を及ぼさないことが本発明者らによって示された。

【0015】

驚くべきことに、本発明者らは、リンカービラジカルが含まれる場合に、本発明の第１の態様のペプチドの挙動が著しく変化し、ＶＥＧＦ発現の劇的な、場合によっては約５０％の減少を引き起こすことを見出した。特に、実施例１に示すように、配列番号１４～配列番号２１等の本発明の第１の態様下の架橋ペプチドは、ヒト網膜色素上皮（すなわち、ＡＲＰＥ－１９）細胞においてｉｎ ｖｉｔｒｏで非処理細胞に対して低酸素誘導条件下でＶＥＧＦ発現の減少を誘導した。表２を参照されたい。さらに、かかる効果が他の２つの細胞株、すなわち乳癌細胞株及び不死化ケラチノサイト細胞株においても配列番号１６について得られることが更に示された。表４を参照されたい。

【0016】

加えて、本発明者らは、実施例２の乳癌異種移植片マウスモデルで示されるように、ＶＥＧＦ減少効果がｉｎ ｖｉｖｏで血管新生の減少をもたらすことを更に実証した。実際に、免疫組織化学（ＩＣＨ）によって決定されるように、配列番号１７のペプチドは、処理した腫瘍において対照と比較してＣＤ３１発現（血管の内皮細胞のマーカー）の統計的に有意な減少をもたらした。

【0017】

このため、本発明者らは、配列番号１の配列を含むペプチドが配列番号１の配列にリンカービラジカル「Ｌ」を含む又は含まないことでＶＥＧＦ発現、ひいては血管新生を調整し得ることを見出した。リンカーの非存在は、ＶＥＧＦ発現を増強し、ひいては血管新生を「増強」し得るペプチドをもたらし、リンカーの存在は、ＶＥＧＦ発現を減少させ、ひいては血管新生を「減少」させるペプチドをもたらす。

【0018】

上記ペプチド中のリンカービラジカルの存在によりＶＥＧＦ発現に対するペプチドの調節効果を調整する可能性が報告されるのは初めてである。

【0019】

第２の態様において、本発明は、１５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有し、配列番号２２：
（Ａｒｇ）ｒ－（Ｓｅｒ）ｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－（Ｌｅｕ）ｔ－（Ｐｒｏ）ｖ
（ここで、
「ｒ」、「ｓ」、「ｔ」及び「ｖ」は整数を表し、０及び１から選択され、
Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、
Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含むペプチド又はその医薬塩であって、
該ペプチドが、配列番号２２のペプチド配列において式（Ｉ）のペプチド配列の位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子とを連結する、式（Ｉ）：
－［（Ｒ_１）_ａ－（Ｒ_２）－（Ｒ_３）_ｂ］_ｃ－ （Ｉ）
（式中、
「ａ」及び「ｂ」は同じか又は異なり、０又は１であり、
「ｃ」は１～１０で構成され、
Ｒ_１及びＲ_３は、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル；並びにハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より独立して選択されるビラジカルであり、
Ｒ_２は－Ｏ－、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_１３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、ＮＲ_１４、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、－ＮＲ_１５－ＮＲ_１６－、－Ｎ＝Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－、及び３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択され、
環系がハロゲン、－ＯＨ、－ＮＯ_２、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－Ｏ－からなる群より独立して選択される１つ以上のラジカルによって任意に置換される、既知の環系からなる群より選択されるビラジカルであり、
Ｒ_４は－ＯＨ及び－ＮＲ_１７Ｒ_１８からなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_５は－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_２０）アルキルからなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７及びＲ_１８は、－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルからなる群より独立して選択されるラジカルである）のリンカービラジカル「Ｌ」を含み、
リンカーによって連結されるアミノ酸が、式（ＩＩ）：

【化2】

（式中、
Ｒ_１９は（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、並びに３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択される、既知の環系からなる群より選択されるモノラジカルである）のものである、ペプチド又はその医薬塩を提供する。

【0020】

下記に示すように、リンカービラジカルを組み込んだ本発明の第２の態様のペプチドは、血管新生を調節することもできる。特に、本発明の第２の態様のペプチドが、正常酸素条件下で得られるレベルに対して低酸素条件下でＶＥＧＦの発現を増加させ得ることが見出されている。

【0021】

このため、本発明の第２の態様のペプチドは、成長因子の減少が生じた状況においてＶＥＧＦのレベルを回復させるのに有用であり得る。また、その結果として、本発明の第２の態様のこれらのペプチドは、ＶＥＧＦレベルの低下による血管新生の調節異常に起因する疾患の予防又は治療に適用することができる。

【0022】

第３の態様において、本発明は、本発明の第１又は第２の態様において規定されるペプチドと、任意に細胞膜透過ペプチドとを含む融合タンパク質を提供する。

【0023】

第４の態様において、本発明は、治療有効量の本発明の第１若しくは第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質を、許容可能な医薬添加剤及び／又は担体と共に含む医薬組成物を提供する。

【0024】

上記で説明したように、本発明のペプチドは、ＶＥＧＦの発現を調節することができる。これによりＶＥＧＦの調節異常に関連する疾患の治療における本発明のペプチドの有用性が示される。ＶＥＧＦは、血管新生プロセスにおいて中心的役割を果たすことが広く報告されている。このため、本発明のペプチドは、ＶＥＧＦ発現の調節因子として、血管新生プロセスを調整することもできる。ＶＥＧＦの発現の増加により、血管新生が刺激され、ＶＥＧＦ発現が減少すると、血管新生プロセスが下方調節される。

【0025】

このため、第５の態様においては、本発明は、療法に使用される、本発明の第１若しくは第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質、又は本発明の第４の態様において規定される医薬組成物を提供する。

【0026】

第６の態様においては、本発明は、ＶＥＧＦ発現レベルの調節異常に起因する疾患の治療又は予防に使用される、本発明の第１若しくは第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質、又は本発明の第４の態様において規定される医薬組成物を提供する。本態様は代替的には、ＶＥＧＦ発現レベルの調節異常に起因する疾患を予防又は治療する方法であって、治療有効量の本発明の第１若しくは第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質、又は本発明の第４の態様において規定される医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与する工程を含む、方法として構築することができる。本態様は代替的には、ＶＥＧＦ発現レベルの調節異常に起因する疾患の治療又は予防のための薬剤の製造における本発明の第１若しくは第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質、又は本発明の第４の態様において規定される医薬組成物の使用として構築することができる。

【0027】

第７の態様においては、本発明は、特にＶＥＧＦ発現レベルを調節することによる血管新生の調節異常に起因する疾患の治療又は予防に使用される、本発明の第１若しくは第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質、又は本発明の第４の態様において規定される医薬組成物を提供する。本態様は代替的には、特にＶＥＧＦ発現レベルを調節することによる血管新生の調節異常に起因する疾患を治療又は予防する方法であって、治療有効量の本発明の第１若しくは第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質、又は本発明の第４の態様において規定される医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与する工程を含む、方法と言い換えることができる。本態様は代替的には、ＶＥＧＦ発現レベルを調節することによる血管新生の調節異常に起因する疾患の治療又は予防のための薬剤の製造における本発明の第１若しくは第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質、又は本発明の第４の態様において規定される医薬組成物の使用として構築することができる。

【図面の簡単な説明】

【0028】

【図1】非処理マウス（ビヒクル）及び皮下（ＳＣ）投与による配列番号１７での処理後の乳房腫瘍組織の抗ＣＤ３１抗体による免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を示す図である。

【図2】非処理マウス（ビヒクル）及び皮下（ＳＣ）投与による配列番号１７での処理後の乳房腫瘍組織の算出された相対ＣＤ３１染色強度を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0029】

本願の明細書で使用される全ての用語は、特に記載のない限り、当該技術分野で既知の通常の意味で理解されるものとする。本願で使用される或る特定の用語の他のより具体的な定義を下記に説明するが、本明細書及び特許請求の範囲の全体を通して一様に適用されることが意図され、特に明白に説明されない限り、定義はより広い定義を与えるものである。

【0030】

本発明の目的上、所与の任意の範囲は、範囲の下端点及び上端点の両方を含む。

【0031】

本発明は、上記したように、配列番号１又は配列番号２２と少なくとも８５％の程度の同一性を有する配列を含むペプチドを提供する。

【0032】

本発明において、「同一性」という用語は、配列を最適にアラインメントした場合に２つの配列中で同一の残基のパーセンテージを指す。最適アラインメントにおいて、第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基によって占められる場合、配列はその位置に関して同一性を示す。２つの配列間の同一性のレベル（又は「パーセント配列同一性」）は、配列のサイズに対する配列に共通する同一位置の数の比率として測定される（すなわち、パーセント配列同一性＝（同一位置の数／位置の総数）×１００）。

【0033】

２つ以上の配列間で最適アラインメントを迅速に得て、同一性を算出するための多数の数学アルゴリズムが既知であり、多数の利用可能なソフトウェアプログラムに組み込まれている。かかるプログラムの例としては、特にアミノ酸配列分析のためのＭＡＴＣＨ－ＢＯＸプログラム、ＭＵＬＴＡＩＮプログラム、ＧＣＧプログラム、ＦＡＳＴＡプログラム及びＲＯＢＵＳＴプログラムが挙げられる。好ましいソフトウェア分析プログラムとしては、ＡＬＩＧＮプログラム、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗプログラム及びＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ ２.１、ＢＬ２ＳＥＱ及びそれ以降のバージョン）が挙げられる。

【0034】

アミノ酸配列分析については、ウェイトマトリックス（weight matrix）、例えばＢＬＯＳＵＭマトリックス（例えば、ＢＬＯＳＵＭ４５マトリックス、ＢＬＯＳＵＭ５０マトリックス、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス及びＢＬＯＳＵＭ８０マトリックス）、Ｇｏｎｎｅｔマトリックス又はＰＡＭマトリックス（例えば、ＰＡＭ３０マトリックス、ＰＡＭ７０マトリックス、ＰＡＭ１２０マトリックス、ＰＡＭ１６０マトリックス、ＰＡＭ２５０マトリックス及びＰＡＭ３５０マトリックス）が同一性の決定に用いられる。

【0035】

ＢＬＡＳＴプログラムは、選択配列をデータベース（例えば、ＧｅｎＳｅｑ）中の複数の配列に対してアラインメントするか、又はＢＬ２ＳＥＱを用いて２つの選択配列間でアラインメントするかのいずれかによって少なくとも２つのアミノ酸配列の分析をもたらす。ＢＬＡＳＴプログラムは、好ましくはＢＬＡＳＴプログラム動作に組み込まれる、ＤＵＳＴプログラム又はＳＥＧプログラム等の低複雑性フィルタリング（low complexity filtering）プログラムによって修正するのが好ましい。ギャップ存在コスト（又はギャップスコア）を用いる場合、ギャップ存在コストは約－５～－１５に設定するのが好ましい。同様のギャップパラメーターを必要に応じて他のプログラムと共に用いることができる。ＢＬＡＳＴプログラム及びその基本原理は、例えばAltschul et al., "Basic local alignment search tool", 1990, J. Mol. Biol, v. 215, pages 403-410に更に記載されている。

【0036】

多重配列分析については、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗプログラムを用いることができる。ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗプログラムは、望ましくは「ダイナミック（dynamic）」（対「ファスト（fast）」）設定を用いて実行される。アミノ酸配列は、配列間の同一性のレベルに応じてＢＬＯＳＵＭマトリックスの可変セットを用いて評価される。ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗプログラム及び操作の基本原理は、例えばHiggins et al., "CLUSTAL V: improved software for multiple sequence alignment", 1992, CABIOS, 8(2), pages 189-191に更に記載されている。

【0037】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、配列番号１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するペプチドである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、配列番号１の配列のいずれかに対して１００％の同一性を有するペプチドである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた一実施形態においては、同一性の程度を確認するためにアラインメントを行って同一の位置を決定する際に、リンカーによって連結された２つのアミノ酸残基は考慮されない。本発明の第１の態様の一実施形態においては、ペプチド又はその塩は、上記で規定されるような配列番号１の配列からなるものであり、任意に式（Ｉ）の「Ｌ」ビラジカルを含む。

【0038】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、配列番号２２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するペプチドである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、配列番号２２の配列のいずれかに対して１００％の同一性を有するペプチドである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた一実施形態においては、同一性の程度を確認するためにアラインメントを行って同一の位置を決定する際に、リンカーによって連結された２つのアミノ酸残基は考慮されない。

【0039】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で過度の毒性、刺激、アレルギー応答等なしにヒト及び下等動物の組織と接触させた使用に好適であり、適切なベネフィット／リスク比に見合う塩を指す。薬学的に許容可能な塩は、当該技術分野で既知である。薬学的に許容可能な非毒性の酸付加塩の例は塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸及び過塩素酸等の無機酸、若しくは酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸若しくはマロン酸等の有機酸により、又はイオン交換等の当該技術分野で用いられている他の方法を用いて形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容可能な塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、クロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が挙げられる。適切な塩基に由来する塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属及びアンモニウムが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等が挙げられる。更なる薬学的に許容可能な塩としては、適切な場合に非毒性のアンモニウムカチオン、第四級アンモニウムカチオン及びアミンカチオンと、ハロゲン化物イオン、水酸化物イオン、カルボン酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、低級アルキルスルホン酸イオン及びアリールスルホン酸イオン等の対イオンを用いて形成されるものが挙げられる。

【0040】

（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルという用語は、１個～１０個の炭素原子を有する飽和直鎖又は分岐アルキル鎖を指す。例示的な非限定例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、ネオペンチル及びｎ－ヘキシルである。

【0041】

（Ｃ_１～Ｃ_２０）アルキルという用語は、１個～２０個の炭素原子を有する飽和直鎖又は分岐アルキル鎖を指す。

【0042】

（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルという用語は、２個～１０個の炭素原子を含有し、更に１つ以上の二重結合を含有する飽和直鎖又は分岐アルキル鎖を指す。例示的な非限定例はエテニル、プロペニル、ブテニル、１－メチル－２－ブテン－１－イル等である。

【0043】

（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルという用語は、２個～２０個の炭素原子を含有し、更に１つ以上の三重結合を含有する飽和直鎖又は分岐アルキル鎖を指す。例としては、特にエチニル、１－プロピニル、２－ブチニル、１，３－ブタジエニル、４－ペンチニル及び１－ヘキシニルが挙げられる。

【0044】

「ハロゲン」という用語は、５つの化学的に関連した元素：フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、ヨウ素（Ｉ）及びアスタチン（Ａｔ）からなる周期表中の群を指す。

【0045】

（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキルという用語は、同じであっても又は異なっていてもよい１個以上の、好ましくは１個～６個のハロゲン原子による（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル基の１個以上の水素原子の置換えによって生じる基を指す。例としては、特にトリフルオロメチル、フルオロメチル、１－クロロエチル、２－クロロエチル、１－フルオロエチル、２－フルオロエチル、２－ブロモエチル、２－ヨードエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、ペンタフルオロエチル、３－フルオロプロピル、３－クロロプロピル、２，２，３，３－テトラフルオロプロピル、２，２，３，３，３－ペンタフルオロプロピル、ヘプタフルオロプロピル、４－フルオロブチル及びノナフルオロブチルが挙げられる。

【0046】

本明細書で使用される「既知の」環系という用語は、化学的に実現可能であり、当該技術分野で既知である環系を指し、化学的に可能でない環系を除外することが意図される。

【0047】

本発明によると、環系が「独立した」環によって形成される場合、環系が２つ、３つ又は４つの環によって形成され、該環が１つの環の原子から他の環の原子への結合を介して結合することを意味する。「独立した」という用語は、環系が１つの環しか有しない実施形態も包含する。１つの環からなる既知の環系の例示的な非限定例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、フェニル及びシクロヘプテニルに由来するものである。

【0048】

本発明によると、環系が「完全に縮合した」環を有する場合、環系が２つ、３つ又は４つの環によって形成され、２個以上の原子が２つの隣接環に共通することを意味する。例示的な非限定例は１，２，３，４－テトラヒドロナフチル、１－ナフチル、２－ナフチル、アントリル又はフェナントリルである。

【0049】

本発明によると、環系が「部分的に縮合している」場合、環系が３つ又は４つの環によって形成され、該環の少なくとも２つが完全に縮合し（すなわち、２個以上の原子が２つの隣接環に共通する）、残りの環（複数の場合もある）が１つの環の原子から縮合環の１つの原子への結合を介して結合していることを意味する。

【0050】

特に記載のない限り、本発明のペプチドを形成するアミノ酸の１つ以上がＬ配置を有していても、又はＤ配置を有していてもよい。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の一実施形態においては、ペプチドを形成するアミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸である。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチドを形成するアミノ酸の１つがＤ－アミノ酸である。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、リンカーによって連結されるアミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸である。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、リンカーによって連結されるアミノ酸の一方がＤ－アミノ酸であり、他方がＬ－アミノ酸である。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、リンカーによって連結されるアミノ酸は、Ｎ末端に最も近いアミノ酸がＤ－アミノ酸であり、Ｃ末端に最も近いアミノ酸がＬ－アミノ酸であるようなものである。

【0051】

本発明のペプチドの構築に使用されるアミノ酸は有機合成によって調製するか、又は例えば天然源の分解若しくは天然源からの単離等の他の経路によって得ることができる。

【0052】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の一実施形態においては、ペプチドは、ｍ及びｎが同じであり、好ましくは１であるものである。代替的な実施形態においては、ペプチドは、ｍ及びｎが異なり、すなわちｍが０であり、ｎが１であるものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチドは、ｐ及びｑが同じであり、好ましくは１であるものである。代替的な実施形態においては、ペプチドは、ｐ及びｑが異なり、すなわちｐが１であり、ｑが０であるものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ｍ、ｎ、ｐ及びｑが同じであり、特に１であるものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ｍ、ｎ及びｑは同じである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ｍ、ｎ及びｑは０を表し、ｐは１を表す。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ｍ、ｎ及びｐは同じである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ｍ、ｎ及びｐは１を表し、ｑは０を表す。

【0053】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチドは線状ペプチドである。本発明において、「線状ペプチド」という用語は、それが「Ｌ」ビラジカルを含まないことを意味する。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた別の実施形態においては、線状ペプチドはｍ、ｎ、ｐ及びｑが同じであるものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた別の実施形態においては、線状ペプチドはｍ、ｎ、ｐ及びｑが同じであり、１を表すものである。

【0054】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第２の態様の一実施形態においては、ペプチドは、ｒ及びｓが同じであるものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第２の態様の別の実施形態においては、ペプチドは、ｔ及びｖが同じであるものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第２の態様の別の実施形態においては、ｒ及びｓは１を表し、ｔ及びｖは０を表す。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第２の態様の別の実施形態においては、ｒ及びｓは０を表し、ｔ及びｖは１を表す。

【0055】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、式（Ｉ）のリンカービラジカルは、配列番号１のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子との間にある。

【0056】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチドは、
配列番号２：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号３：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号４：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号５：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号６：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号７：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号８：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号９：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号１０：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、
配列番号１１：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、及び、
配列番号１２：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、
からなる群より選択され、
ここで、同じ（Ｌ－アミノ酸又はＤ－アミノ酸の両方）又は異なる配置を有する、太字及び下線のアミノ酸は、リンカービラジカル「Ｌ」の位置（ｉ、ｉ＋７）を指し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する。

【0057】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第２の態様の別の実施形態においては、式（Ｉ）のリンカービラジカルは、配列番号２２のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子との間にある。

【0058】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第２の態様の別の実施形態においては、ペプチドは、
配列番号２３：（Ａｒｇ）ｒ－（Ｓｅｒ）ｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－（Ｌｅｕ）ｔ－（Ｐｒｏ）ｖ、
配列番号２４：（Ａｒｇ）ｒ－（Ｓｅｒ）ｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－（Ｌｅｕ）－（Ｐｒｏ）ｖ、
配列番号２５：（Ａｒｇ）ｒ－（Ｓｅｒ）ｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－（Ｌｅｕ）ｔ－（Ｐｒｏ）ｖ、
配列番号２６：Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ、
配列番号２７：Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ、及び、
配列番号２８：Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ、
からなる群より選択され、
ここで、同じ（Ｌ－アミノ酸又はＤ－アミノ酸の両方）又は異なる配置を有する、太字及び下線のアミノ酸は、リンカービラジカル「Ｌ」の位置（ｉ、ｉ＋７）を指し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する。

【0059】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、ａ＝１である「Ｌ」リンカーを含むものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、ｂ＝１である「Ｌ」リンカーを含むものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、ｃ＝１である「Ｌ」リンカーを含むものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、ａ＝ｂ＝ｃ＝１である「Ｌ」リンカーを含むものである。

【0060】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_１及びＲ_３が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より独立して選択されるビラジカルである、「Ｌ」リンカーを含むものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_１及びＲ_３が同じか又は異なり、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルを表す、「Ｌ」リンカーを含むものである。

【0061】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_２が－Ｏ－、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_１３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、ＮＲ_１４、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、－ＮＲ_１５－ＮＲ_１６－、－Ｎ＝Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－、及び３員～６員の１つの環からなる既知の環系であって、環が飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択され、
環系がハロゲン、－ＯＨ、－ＮＯ_２、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－Ｏ－からなる群より独立して選択される１つ以上のラジカルによって任意に置換される、既知の環系からなる群より選択されるビラジカルである、「Ｌ」リンカーを含むものである。

【0062】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_２が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より選択されるビラジカルである、「Ｌ」リンカーを含むものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルである、「Ｌ」リンカーを含むものである。

【0063】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_１及びＲ_３が同じか又は異なり、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルを表し、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルである、「Ｌ」リンカーを含むものである。

【0064】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_１及びＲ_３が同じか又は異なり、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルを表し、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、ａ＝ｂ＝ｃ＝１である、「Ｌ」リンカーを含むものである。

【0065】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より選択されるものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルモノラジカル、好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル若しくはブチル等の（Ｃ_１～Ｃ_４）アルキルモノラジカル、又は（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル、好ましくはハロメチル、例えばフルオロメチル等の（Ｃ_１～Ｃ_４）ハロアルキルモノラジカルであるものである。好ましい実施形態においては、Ｒ_１９はメチル基である。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が同じか又は異なり、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルを表し、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであるものである。

【0066】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、Ｌはハロゲン、－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル及びＣ_１～Ｃ_６アルケニルからなる群より選択される１つ以上の置換基によって任意に置換される、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ－、ＮＨ－、－ＣＯ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＣＯ－、－ＣＯＮＨ－、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、直鎖又は分岐Ｃ_１～Ｃ_６－アルキレン基及び環状アルキレン基、並びにＮ、Ｏ及びＳからなる群より選択される最大４個のヘテロ原子を有する５員～１０員の複素環基から独立して選択される１つ以上の基によって１回又は２回以上中断されていてもよい、直鎖又は分岐Ｃ_３～Ｃ_３０炭化水素を有するビラジカルである。

【0067】

特定の実施形態においては、Ｌは式（Ｉａ）：
－（ＣＨ_２）_ｙ－Ｐ－（ＣＨ_２）_ａ－（Ｑ）_ｂ－（ＣＨ_２）_ｃ－（Ｖ）_ｄ－（ＣＨ_２）_ｚ－ （Ｉａ）
（式中、
Ｐ、Ｑ及びＶは、それぞれ独立してＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＯＮＨ、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ_１～Ｃ_６アルキレン、フェニレン等のアリーレン基、及びトリアゾーレン等のヘテロアリーレン基を含む群から選択され、ハロゲンによって任意に置換され、
ｙ及びｚは、それぞれ独立して１～１０から選択される整数値であり、
ａ及びｃは、それぞれ独立して０～１０から選択される整数値であり、
ｂ及びｄは、それぞれ独立して０～３から選択される整数値である）を有する。

【0068】

好ましい実施形態においては、このリガンドのリンカー（Ｌ）は、
－（ＣＨ_２）_ｙ－ＣＨ＝ＣＨ－（ＣＨ_２）_ｚ－ （Ｉｂ）
（式中、好ましくはｙ及びｚは同じか又は異なり、１、２、３、４、５、６、７、８、９及び１０を含む１～１０から選択される整数値である。好ましくは、ｙ及びｚは、独立して３～６から選択される整数値、より好ましくは独立して３及び６から選択される整数値である）、

【化3】

（式中、好ましくはＰ及びＶは、それぞれ独立してＯ及びＳからなる群より選択され、また好ましくは、ｙ及びｚは１であり、好ましくは、ａは１又は６～１０から選択され、好ましくは、ｂは０又は１であり、好ましくは、ｃは０又は１であり、
式（Ｉｃ）の幾つかの特定の実施形態は、
－（ＣＨ_２）_ｙ－Ｐ－（ＣＨ_２）_ａ－Ｖ－（ＣＨ_２）_ｚ－ （Ｉｄ１）
（式中、好ましくは、Ｐ及びＶは、それぞれ独立してＯ及びＳからなる群より選択され、また好ましくは、ｙ及びｚは１であり、ａは６～１０から選択され、好ましくは、ａは８であり、幾つかの好ましい実施形態においては、式（Ｉｄ１）のリガンドは、（Ｉｄ１．１）及び（Ｉｄ１．２）：
－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ （Ｉｄ１．１）
－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ （Ｉｄ１．２）
から選択される）、

【化4】

（式中、好ましくは、Ｐ及びＶは、それぞれ独立してＯ及びＳからなる群より選択され、また好ましくは、ｙ、ａ、ｃ及びｚは１であり、幾つかの好ましい実施形態においては、式（ＩＩＩｄ２）のリガンドは、（Ｉｄ２．１）及び（Ｉｄ２．２）：

【化5】

から選択される）である）、

【化6】

からなる群より選択され、式（Ｉｄ１．１）、（Ｉｄ１．２）、（Ｉｄ２．１）、（Ｉｄ２．２）、（Ｉｅ）及び（Ｉｆ）において、各ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９及び１０を含む１～１０から独立して選択される整数値である。幾つかの好ましい実施形態においては、各ｎは３～６から独立して選択される整数値である。式（Ｉｅ）又は（Ｉｆ）のリガンドについて、各ｎは３～６から独立して選択される整数値であるのが好ましい。他の好ましい実施形態においては、各ｎは独立して１又は２から選択される。式（Ｉｄ）のリガンドについて、各ｎは１であるのが好ましい。好ましい実施形態においては、リンカー（Ｌ）は、以上に規定される式：
－（ＣＨ_２）_ｙ－ＣＨ＝ＣＨ－（ＣＨ_２）_ｚ－ （Ｉｂ）
であり、
Ｒ_１９は以上に規定されるように、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルモノラジカルであり、Ｒ_１９はメチル基であるのが好ましい。

【0069】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の一実施形態においては、ペプチドは以下のものである：
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」及び「ｎ」が同じであり、「ｐ」及び「ｑ」が同じであるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」及び「ｎ」が同じであり、「ｐ」及び「ｑ」が異なるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」、「ｎ」、「ｐ」及び「ｑ」が同じであり、特に同じであり、１を表すか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」、「ｎ」、「ｑ」が同じであり、「ｑ」が異なり、特にｍ＝ｎ＝ｑ＝０及びｑ＝１である。

【0070】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第２の態様の一実施形態においては、ペプチドは以下のものである：
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｒ」及び「ｓ」が同じであり、「ｔ」及び「ｖ」が同じであるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｒ」及び「ｓ」が同じであり、１を表し、「ｔ」及び「ｖ」が同じであり、０を表すか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｒ」及び「ｓ」が同じであり、０を表し、「ｔ」及び「ｖ」が同じであり、１を表す。

【0071】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_４が－ＯＨである（すなわち、Ｃ末端が－Ｃ（Ｏ）ＯＨである）ものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_４が－ＮＲ_１７Ｒ_１８であり、Ｒ_１７及びＲ_１８が同じ意味であるものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当する。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、本発明のペプチドのＣ末端及びＮ末端は、それぞれ－Ｃ（Ｏ）ＯＨ及び－ＮＨ_２である。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、本発明のペプチドのＣ末端及びＮ末端は、それぞれ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２及び－ＮＨ_２である。

【0072】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、本発明のペプチドのＣ末端及びＮ末端は、それぞれ－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４及び－ＮＨ_２であり、ここで、Ｒ_４は－ＮＨＲ_１８を意味し、Ｒ_１８は（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、並びにハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルからなる群より選択されるラジカルである。

【0073】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、本発明のペプチドのＣ末端及びＮ末端は、それぞれ－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４及び－ＮＨ_２であり、ここで、Ｒ_４は－ＮＲ_１７Ｒ_１８を意味し、Ｒ_１７及びＲ_１８は（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、並びにハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルからなる群より独立して選択されるラジカルである。

【0074】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、本発明のペプチドのＣ末端及びＮ末端は、それぞれ－Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＮＨＲ_５であり、ここで、Ｒ_５は（Ｃ_１～Ｃ_２０）アルキル、並びにハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルから選択される。

【0075】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１及び第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が同じか又は異なり、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルを表し、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであるものである。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１及び第２の態様の別の実施形態においては、ペプチド又はその塩は、Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が同じか又は異なり、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルを表し、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、Ｃ末端が－Ｃ（Ｏ）ＯＨ及び－ＣＯＮＨ_２から選択され、Ｎ末端が－ＮＨ_２であるものである。

【0076】

本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチドは、配列番号１３～配列番号２１の配列からなる群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するものである：

【0077】

配列番号１３
Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ
ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当する。

【0078】

配列番号１から得られる他の線状ペプチド配列は、本明細書において以下に示す配列番号３６及び配列番号３７である：
配列番号３６：
Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ
配列番号３７：
Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ

【0079】

注目すべきことに、配列番号３７は、末端アルギニンを欠く点で配列番号３６とは異なる。

【0080】

配列番号１４

【化7】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、３位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0081】

配列番号１５

【化8】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、５位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0082】

配列番号１６

【化9】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、６位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0083】

配列番号１７

【化10】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＯＨに相当し、６位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0084】

注目すべきことに、配列番号１６及び配列番号１７は、配列番号１６では－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、配列番号１７では－Ｃ（Ｏ）ＯＨに相当するＣ末端の官能基においてのみ異なる。

【0085】

配列番号１８

【化11】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、８位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0086】

配列番号１９

【化12】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、５位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0087】

配列番号２０

【化13】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、７位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0088】

配列番号２１

【化14】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、８位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0089】

本発明の第１の態様の別の実施形態においては、ペプチドは、配列番号１４～配列番号２１等の配列番号１３～配列番号２１の配列のいずれかを含むか又はそれからなり、好ましくは配列番号１４、配列番号１６及び配列番号１７、並びに配列番号１９～配列番号２１の配列のいずれかを含むか又はそれからなる群より選択されるものである。本発明の第２の態様の別の実施形態においては、ペプチドは、配列番号２９～配列番号３１からなる群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するものである：

【0090】

配列番号２９

【化15】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、８位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0091】

配列番号３０

【化16】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、１０位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0092】

配列番号３１

【化17】

ここで、Ｎ末端は－ＮＨ_２に相当し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、３位のアミノ酸はＤ－アミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬ－アミノ酸である。

【0093】

上記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第２の態様の別の実施形態においては、ペプチドは配列番号２９～配列番号３１からなる群より選択される。

【0094】

本発明の第１の態様によるペプチドを調製するプロセスは、以下を含む：
（１．ａ）ペプチドの対応するアミノ酸と、「ｉ」及び「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」と称されるアミノ酸に相当する式（ＩＩＩ）の化合物及び式（ＩＶ）の化合物との縮合によるカップリング。化合物（ＩＩＩ）及び化合物（ＩＶ）は、「「Ｌ」ビラジカル」を生成するために後続の環化工程に供されるものである：

【化18】

（式中、Ｒ_１９は上記で規定される通りであり、Ｚ_１及びＺ_２は同じか又は異なり、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルを表す）；並びに、
（１．ｂ）グラブス（第１又は第２世代）触媒を用いて溶液中で行われるＺ_１及びＺ_２の閉環メタセシスを含む環化工程（Kim Young-Woo et al., "Synthesis of all-hydrocarbon stapled a-helical peptides by ring-closing olefin metathesis", Nature Protocols, 2011, 6(6), p. 761-771、Scott J. M. et al., "Application of Ring-Closing Metathesis to the Synthesis of Rigidified Amino Acids and Peptides", J. Am. Chem. Soc., 1996, v.118 (40), pp 9606-9614を参照されたい）；又は代替的には、
（２ａ）「ｉ」及び「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」と称されるアミノ酸に相当する式（Ｖ）の化合物及び式（ＶＩ）の化合物を含む所要のアミノ酸の縮合によるカップリング。化合物（Ｖ）及び化合物（ＶＩ）は、「「Ｌ」ビラジカル」を生成するために後続の環化工程に供されるものである：

【化19】

（式中、Ｒ_１９は上記で規定される通りであり、Ｚ_３及びＺ_４は同じか又は異なり、ハロゲン－ＳＨ、－ＮＨＲ_２０、－ＯＨ、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキル－ＳＨ、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－ＯＨ、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－ＮＨＲ_２１、Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、（Ｃ_１～Ｃ_１０）Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ_２２、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ_２３、ＯＲ_２４、Ｃ（＝Ｏ）－ハロゲン、Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ_２５、Ｓ（＝Ｏ）－ハロゲン、Ｓ（＝Ｏ）－ＯＲ_２６、Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ_２７からなる群より選択され、ここでＲ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６及びＲ_２７は、水素、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、３個～１４個の炭素原子を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択され、
環系はハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＳＨ、Ｃ（＝Ｏ）－ハロゲン（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－Ｏ－からなる群より独立して選択される１つ以上のラジカルによって任意に置換される、既知の環系からなる群より選択されるモノラジカルである）；並びに、
（２ｂ）Ｚ_３ラジカルとＺ_４ラジカルとの間のカップリング反応を含む環化工程；又は代替的には、
（３ａ）ペプチドの対応するアミノ酸と、「ｉ」及び「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」と称されるアミノ酸に相当する式（ＶＩＩ）の化合物及び式（ＶＩＩＩ）の化合物との縮合によるカップリング。化合物（ＶＩＩ）及び化合物（ＶＩＩＩ）は、「「Ｌ」ビラジカル」を生成するために後続の環化工程に供されるものである：

【化20】

（式中、Ｒ_１９は上記で規定される通りであり、Ｚ_５及びＺ_６の一方は（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルであり、他方は（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキルＮ_３である）；並びに、
（３．ｂ）１，４置換１，２，３－トリアゾール架橋を生成するＣｕ（Ｉ）媒介ヒュスゲン１，３－双極子環付加反応（別名「クリック」反応）等の既知のプロトコルによるＺ_５ラジカル及びＺ_６ラジカルの縮合を含む環化工程（Kolb H.C. et al., "The growing impact of click chemistry on drug discovery", 2003, Drug Discov Today, 8(24):1128-1137を参照されたい）。

【0095】

本発明の第２の態様によるペプチドを調製するプロセスは、１つのアミノ酸のカルボン酸基又はＣ末端と別のアミノ酸のアミノ基又はＮ末端との縮合によるカップリングを含み、このカップリング反応を所望のペプチドが得られるまで必要とされる回数繰り返す。

【0096】

式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、及び（ＶＩＩＩ）の化合物は市販されており、既に形成されたペプチド配列の部分に縮合によってカップリングされる。これらの化合物は、ペプチドの適切な固相合成のためのビーズ、並びにカルボキシ、アミノ又は側鎖の保護基を保有し得る。化合物の例示的な非限定例は、特に２－（２’－プロペニル）アラニン、２－（３’－ブテニル）グリシン、２－（４’－ペンテニル）アラニン、２－（６’－ヘプテニル）アラニン、２－（７’－オクテニル）アラニン、アリル－グリシン、５－アジド－ノルバリン、及びα－プロパルギル－アラニンである。

【0097】

「カップリング」工程は、固相中でプロトコル「脱保護－洗浄－カップリング－洗浄」に従い、１つのアミノ酸のカルボン酸基と別のアミノ酸残基のアミノ基との縮合により、上記で規定されるアミノ酸及び式（ＩＩＩ）～式（ＶＩＩＩ）のα－α二置換（di-substituted）アミノ酸を使用して行うことができる。

【0098】

固相ペプチド合成の一般原理は、脱保護－洗浄－カップリング－洗浄のサイクルを繰り返すことである。固相に付着させたペプチドの遊離Ｎ末端アミンを、単一のＮ保護アミノ酸単位にカップリングする。次いで、この単位を脱保護し、新たなＮ末端アミンを露出させ、これに更なるアミノ酸を付着させることができる。アミノ酸はＮ末端及びＣ末端に反応性部分を有し、これにより合成時のアミノ酸カップリングが容易となる。多くのアミノ酸は、合成及びペプチド伸長の際に遊離末端又は他の側鎖基と相互作用し、収率及び純度に悪影響を及ぼす可能性がある反応性側鎖官能基も有する。側鎖反応性を最小限にして適当なアミノ酸合成を容易にするために、特異的なアミノ酸官能基に結合し、官能基の非特異的反応を阻止する、又は官能基を保護する化学基が開発されている。これらの保護基は天然に膨大に見られるが、以下の３つの基：Ｎ末端保護基、Ｃ末端保護基（主として液相合成に用いられる）及び側鎖保護基に分けることができる。

【0099】

ペプチドのカップリングのために、カルボキシル基が通常は活性化される。これは反応を加速するために重要である。２つの主な種類の活性化基：カルボジイミド及びトリアゾールが存在する。しかしながら、ペンタフルオロフェニルエステル（ＦＤＰＰ、ＰＦＰＯＨ]）及びＢＯＰ－Ｃｌの使用がペプチドの環化に有用である。

【0100】

精製した個々のアミノ酸を合成前にこれらの保護基と反応させ、その後ペプチド合成の特定の工程において選択的に除去する。

【0101】

本発明に用いることができる例示的な樹脂としては、（１）アルケニル樹脂（例えば、ＲＥＭ樹脂、ビニルスルホンポリマー結合樹脂、ビニル－ポリスチレン樹脂）；（２）アミン官能化樹脂（例えば、アミジン樹脂、ポリマー結合型Ｎ－（４－ベンジルオキシベンジル）ヒドロキシルアミン、（アミノメチル）ポリスチレン、ポリマー結合型（Ｒ）－（＋）－ａ－メチルベンジルアミン、２－クロロトリチルＫｎｏｒｒ樹脂、２－Ｎ－Ｆｍｏｃ－アミノ－ジベンゾシクロヘプタ－１，４－ジエンポリマー結合樹脂、４－［４－（１－Ｆｍｏｃ－アミノエチル）－２－メトキシ－５－ニトロフェノキシ］ブチルアミドメチル－ポリスチレン樹脂、ポリマー結合型４－ベンジルオキシベンジルアミン、ポリマー結合型４－カルボキシベンゼンスルホンアミド、ポリマー結合型ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）チオプソイド尿素、ジメチルアミノメチル－ポリスチレン、ポリマー結合型Ｆｍｏｃ－３－アミノ－３－（２－ニトロフェニル）プロピオン酸、Ｎ－メチルアミノメチル化ポリスチレン、ＰＡＬ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂、ポリマー結合型ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－メルカプトエチル）カルバメート、ポリマー結合型トリフェニルクロロメタン－４－カルボキサミド）；（３）ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂（例えば、ポリマー結合型２－クロロベンズヒドリルクロリド、ポリマー結合型ＨＭＰＢ－ベンズヒドリルアミン、ポリマー結合型４－メチルベンズヒドロール、ポリマー結合型ベンズヒドリルクロリド、ポリマー結合型ベンズヒドリルアミン）；（４）Ｂｒ官能化樹脂（例えば、ポリマー結合型４－（ベンジルオキシ）ベンジルブロミド、４－ブロモポリスチレン、臭素化ＰＰＯＡ樹脂、臭素化Ｗａｎｇ樹脂、ポリマー結合型ブロモアセタール、ブロモポリスチレン、ＨｙｐｏＧｅｌ（商標） ２００ Ｂｒ、ペプチド合成用のポリスチレンＡ－Ｂｒ、ポリマー結合型臭化セレン、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＨＬ－Ｂｒ、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＭＢ－Ｂｒ、ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ－Ｂｒ）；（５）クロロメチル樹脂（例えば、ポリマー結合型５－［４－（クロロメチル）フェニル］ペンチル］スチレン、ポリマー結合型４－（ベンジルオキシ）ベンジルクロリド、ポリマー結合型４－メトキシベンズヒドリルクロリド）；（６）ＣＨＯ官能化樹脂（例えば、（４－ホルミル－３－メトキシフェノキシメチル）ポリスチレン、（４－ホルミル－３－メトキシフェノキシメチル）ポリスチレン、ポリマー結合型３－ベンジルオキシベンズアルデヒド、ポリマー結合型４－ベンジルオキシ－２，６－ジメトキシベンズアルデヒド、ホルミルポリスチレン、ＨｙｐｏＧｅｌ（商標） ２００ ＣＨＯ、インドール樹脂、ポリスチレンＡ－ＣＨ（ＯＥｔ）_２、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＨＬ－ＣＨ（ＯＥｔ）_２）；（７）Ｃｌ官能化樹脂（例えば、ポリマー結合型ベンゾイルクロリド、（クロロメチル）ポリスチレン、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂）；（８）ＣＯ_２Ｈ官能化樹脂（例えば、カルボキシエチルポリスチレン、ＨｙｐｏＧｅｌ（商標） ２００ ＣＯＯＨ、ポリスチレンＡＭ－ＣＯＯＨ、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＨＬ－ＣＯＯＨ、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＭＢ－ＣＯＯＨ、ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ－ＣＯＯＨ）；（９）Ｈｙｐｏ－Ｇｅｌ樹脂（例えば、ＨｙｐｏＧｅｌ（商標） ２００ ＦＭＰ、ＨｙｐｏＧｅｌ（商標） ２００ ＰＨＢ、ＨｙｐｏＧｅｌ（商標） ２００ Ｔｒｔ－ＯＨ、ＨｙｐｏＧｅｌ（商標） ２００ ＨＭＢ）；（１０）Ｉ官能化樹脂（例えば、ポリマー結合型４－ヨードフェノール、ヨードポリスチレン）；Ｊａｎｄａ－Ｊｅｌ（商標）（ＪａｎｄａＪｅｌ＜ａｕ＞－Ｒｉｎｋアミド、ＪａｎｄａＪｅｌ－ＮＨ_２、ＪａｎｄａＪｅｌ－Ｃｌ、ＪａｎｄａＪｅｌ－４－メルカプトフェノール、ＪａｎｄａＪｅｌ－ＯＨ、ＪａｎｄａＪｅｌ－１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド、ＪａｎｄａＪｅｌ－１，３，４，６，７，８－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリミド－［１，２－ａ］ピリミジン、ＪａｎｄａＪｅｌ－モルホリン、ＪａｎｄａＪｅｌ－ポリピリジン、ＪａｎｄａＪｅｌ－トリフェニルホスフィン、ＪａｎｄａＪｅｌ－Ｗａｎｇ）；（１１）ＭＢＨＡ樹脂（３［４’－（ヒドロキシメチル）フェノキシ］プロピオン酸－４－メチルベンズヒドリルアミン樹脂、ＭＢＨＡ樹脂に結合させた４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ酢酸ポリマー、ポリマー結合型ＨＭＢＡ－４－メチルベンズヒドリルアミン、ポリマー結合型４－メチルベンズヒドリルアミン塩酸塩Ｃａｐａｃｉｔｙ（アミン））；（１２）ＮＨ_２官能化樹脂（（アミノメチル）ポリスチレン、（アミノメチル）ポリスチレン、ＨｙｐｏＧｅｌ（商標） ２００ ＮＨ_２、ポリスチレンＡＭ－ＮＨ_２、２－アミノエチル化ポリスチレンミクロスフェア、２－ブロモエチル化ポリスチロールミクロスフェア、２－ヒドロキシエチル化ポリスチロールミクロスフェア、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＨＬ－ＮＨ_２、Ｔｅｎｔａｇｅｌ Ｍ Ｂｒ、Ｔｅｎｔａｇｅｌ Ｍ ＮＨ_２、Ｔｅｎｔａｇｅｌ Ｍ ＯＨ、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＭＢ－ＮＨ_２、ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ－ＮＨ_２、ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ－ＮＨ_２）；（１３）ＯＨ官能化樹脂（例えば、ポリマー結合型４－ヒドロキシメチル安息香酸、ヒドロキシメチル樹脂、ＯＨ官能化Ｗａｎｇ樹脂）；（１４）オキシム樹脂（例えば、ポリマー結合型４－クロロベンゾフェノンオキシム、ポリマー結合型ベンゾフェノンオキシム、ポリマー結合型４－メトキシベンゾフェノンオキシム）；（１５）ＰＥＧ樹脂（例えば、ポリマー結合型エチレングリコール）；（１６）Ｂｏｃ－／Ｂｌｚペプチド合成樹脂（例えば、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）］－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－ｂ－Ａｌａ－Ｏ－ＰＡＭ樹脂、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）］－ｂ－Ａｌａ－Ｏ－Ｐａｍ樹脂、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）］－Ｌｙｓ｛Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）］｝－ｂ－Ａｌａ－Ｏ－ＰＡＭ樹脂、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）］－Ｌｙｓ［Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－Ｌｙｓ｛Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）］｝－ｂ－Ａｌａ－Ｏ－ＰＡＭ樹脂、Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）］－Ｌｙｓ｛Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｂｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）］｝－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－ｂ－Ａｌａ－Ｏ－ＰＡＭ樹脂、プレロード型ＰＡＭ樹脂）；（１７）Ｆｍｏｃ－／ｔ－Ｂｕペプチド合成樹脂（例えば、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）］－ｂ－Ａｌａ－Ｏ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）］－Ｌｙｓ｛Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－Ｌｙｓ［Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）］｝－ｂ－Ａｌａ－Ｏ－Ｗａｎｇ樹脂、プレロード型ＴｅｎｔａＧｅｌ（商標） Ｓトリチル樹脂、プレロード型ＴｅｎｔａＧｅｌ（商標）樹脂、プレロード型トリチル樹脂、プレロード型Ｗａｎｇ樹脂、アミノアルコールプレロード型トリチル樹脂）；（１９）チオール官能化樹脂（例えば、ＨｙｐｏＧｅｌ（商標） ２００ Ｓ－Ｔｒｔ、ポリスチレンＡＭ－Ｓ－トリチル、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＨＬ－Ｓ－トリチル、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＭＢ－Ｓ－トリチル、ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ－Ｓ－トリチル）；及び（２０）Ｗａｎｇ樹脂（例えば、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｍｃ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（ＳｔＢｕ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｍｅｔ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（Ｔｒｔ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｗａｎｇ樹脂、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ｗａｎｇ樹脂）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0102】

「保護基」（ＰＧ）は、分子中の反応性基に付着して、その反応性を遮断、低減又は阻止する原子団を指す。

【0103】

好適なアミノ保護基としては、メチルカルバメート、エチルカルバメート、９－フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、９－（２－スルホ）フルオレニルメチルカルバメート、９－（２，７－ジブロモ）フルオレニルメチルカルバメート、２，７－ジ－ｔ－ブチル－［９－（１０，１０－ジオキソ－１０，１０，１０，１０－テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバメート（ＤＢＤ－Ｔｍｏｃ）、４－メトキシフェナシルカルバメート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２－トリクロロエチルカルバメート（Ｔｒｏｃ）、２－トリメチルシリルエチルカルバメート（Ｔｅｏｃ）、２－フェニルエチルカルバメート（ｈＺ）、１－（１－アダマンチル）－１－メチルエチルカルバメート（Ａｄｐｏｃ）、１，１－ジメチル－２－ハロエチルカルバメート、１，１－ジメチル－２，２－ジブロモエチルカルバメート（ＤＢ－ｔ－ＢＯＣ）、１，１－ジメチル－２，２，２－トリクロロエチルカルバメート（ＴＣＢＯＣ）、１－メチル－１－（４－ビフェニリル）エチルカルバメート（Ｂｐｏｃ）、１－（３，５－ジ－ｔ－ブチルフェニル）－１－メチルエチルカルバメート（ｔ－Ｂｕｍｅｏｃ）、２－（２’－及び４’－ピリジル）エチルカルバメート（Ｐｙｏｃ）、２－（Ｎ，Ｎ－ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバメート、ｔ－ブチルカルバメート（ＢＯＣ）、１－アダマンチルカルバメート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバメート（Ｖｏｃ）、アリルカルバメート（Ａｌｌｏｃ）、１－イソプロピルアリルカルバメート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバメート（Ｃｏｃ）、４－ニトロシンナミルカルバメート（Ｎｏｃ）、８－キノリルカルバメート、Ｎ－ヒドロキシピペリジニルカルバメート、アルキルジチオカルバメート、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ）、ｐ－メトキシベンジルカルバメート（Ｍｏｚ）、ｐ－ニトロベンジルカルバメート、ｐ－ブロモベンジルカルバメート、ｐ－クロロベンジルカルバメート、２，４－ジクロロベンジルカルバメート、４－メチルスルフィニルベンジルカルバメート（Ｍｓｚ）、９－アントリルメチルカルバメート、ジフェニルメチルカルバメート、２－メチルチオエチルカルバメート、２－メチルスルホニルエチルカルバメート、２－（ｐ－トルエンスルホニル）エチルカルバメート、［２－（１，３－ジチアニル）］メチルカルバメート（Ｄｍｏｃ）、４－メチルチオフェニルカルバメート（Ｍｔｐｃ）、２，４－ジメチルチオフェニルカルバメート（Ｂｍｐｃ）、２－ホスホニオエチルカルバメート（Ｐｅｏｃ）、２－トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバメート（Ｐｐｏｃ）、１，１－ジメチル－２－シアノエチルカルバメート、ｍ－クロロ－ｐ－アシルオキシベンジルカルバメート、ｐ－（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバメート、５－ベンズイソオキサゾリルメチルカルバメート、２－（トリフルオロメチル）－６－クロモニルメチルカルバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ－ニトロフェニルカルバメート、３，５－ジメトキシベンジルカルバメート、ｏ－ニトロベンジルカルバメート、３，４－ジメトキシ－６－ニトロベンジルカルバメート、フェニル（ｏ－ニトロフェニル）メチルカルバメート、フェノチアジニル－（１０）－カルボニル誘導体、Ｎ’－ｐ－トルエンスルホニルアミノカルボニル誘導体、Ｎ’－フェニルアミノチオカルボニル誘導体、ｔ－アミルカルバメート、Ｓ－ベンジルチオカルバメート、ｐ－シアノベンジルカルバメート、シクロブチルカルバメート、シクロヘキシルカルバメート、シクロペンチルカルバメート、シクロプロピルメチルカルバメート、ｐ－デシルオキシベンジルカルバメート、２，２－ジメトキシカルボニルビニルカルバメート、ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバメート、１，１－ジメチル－３－（Ｎ，Ｎ－ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバメート、１，１－ジメチルプロピニルカルバメート、ジ（２－ピリジル）メチルカルバメート、２－フラニルメチルカルバメート、２－ヨードエチルカルバメート、イソボルニルカルバメート、イソブチルカルバメート、イソニコチニルカルバメート、ｐ－（ｐ’－メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバメート、１－メチルシクロブチルカルバメート、１－メチルシクロヘキシルカルバメート、１－メチル－１－シクロプロピルメチルカルバメート、１－メチル－１－（３，５－ジメトキシフェニル）エチルカルバメート、１－メチル－１－（ｐ－フェニルアゾフェニル）エチルカルバメート、１－メチル－１－フェニルエチルカルバメート、１－メチル－１－（４－ピリジル）エチルカルバメート、フェニルカルバメート、ｐ－（フェニルアゾ）ベンジルカルバメート、２，４，６－トリ－ｔ－ブチルフェニルカルバメート、４－（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバメート、２，４，６－トリメチルベンジルカルバメート、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３－フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３－ピリジルカルボキサミド、Ｎ－ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ－フェニルベンズアミド、ｏ－ニトロフェニルアセトアミド、ｏ－ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ’－ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ）アセトアミド、３－（ｐ－ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３－（ｏ－ニトロフェニル）プロパンアミド、２－メチル－２－（ｏ－ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２－メチル－２－（ｏ－フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４－クロロブタンアミド、３－メチル－３－ニトロブタンアミド、ｏ－ニトロシンナミド、Ｎ－アセチルメチオニン誘導体、ｏ－ニトロベンズアミド、ｏ－（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミド、４，５－ジフェニル－３－オキサゾリン－２－オン、Ｎ－フタルイミド、Ｎ－ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ－２，３－ジフェニルマレイミド、Ｎ－２，５－ジメチルピロール、Ｎ－１，１，４，４－テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５置換１，３－ジメチル－１，３，５－トリアザシクロヘキサン－２－オン、５置換１，３－ジベンジル－１，３，５－トリアザシクロヘキサン－２－オン、１置換３，５－ジニトロ－４－ピリドン、Ｎ－メチルアミン、Ｎ－アリルアミン、Ｎ－［２－トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ－３－アセトキシプロピルアミン、Ｎ－（１－イソプロピル－４－ニトロ－２－オキソ－３－ピロリン－３－イル）アミン、第四級アンモニウム塩、Ｎ－ベンジルアミン、Ｎ－ジ（４－メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ－５－ジベンゾスベリルアミン、Ｎトリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ－［（４－メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ－９－フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ－２，７－ジクロロ－９－フルオレニルメチレンアミン、Ｎ－フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ－２－ピコリルアミノＮ’－オキシド、Ｎ－１，１－ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ－ベンジリデンアミン、Ｎ－ｐ－メトキシベンジリデンアミン、Ｎ－ジフェニルメチレンアミン、Ｎ－［（２－ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’－イソプロピリデンジアミン、Ｎ－ｐ－ニトロベンジリデンアミン、Ｎ－サリチリデンアミン、Ｎ－５－クロロサリチリデンアミン、Ｎ－（５－クロロ－２－ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ－シクロヘキシリデンアミン、Ｎ－（５，５－ジメチル－３－オキソ－１－シクロヘキセニル）アミン、Ｎ－ボラン誘導体、Ｎ－ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ－［フェニル（ペンタカルボニルクロム－又はタングステン）カルボニル］アミン、Ｎ－銅キレート、Ｎ－亜鉛キレート、Ｎ－ニトロアミン、Ｎ－ニトロソアミン、アミンＮ－オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホロアミデート、ジベンジルホスホロアミデート、ジフェニルホスホロアミデート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ－ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４－ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２－ニトロ－４－メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、３－ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）、ｐ－トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６，－トリチメル－４－メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６－トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６－ジメチル－４－メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６－テトラメチル－４－メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４－メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６－トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６－ジメトキシ－４－メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８－ペンタメチルクロマン－６－スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β－トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９－アントラセンスルホンアミド、４－（４’，８’－ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド及びフェナシルスルホンアミドが挙げられる。

【0104】

適切に保護されたカルボン酸の例としては、シリル、アルキル、アルケニル、アリール及びアリールアルキルで保護されたカルボン酸が更に挙げられるが、これらに限定されない。好適なシリル基の例としては、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル、ｔ－ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリル等が挙げられる。好適なアルキル基の例としては、メチル、ベンジル、ｐ－メトキシベンジル、３，４－ジメトキシベンジル、トリチル、ｔ－ブチル、テトラヒドロピラン－２－イルが挙げられる。好適なアルケニル基の例としては、アリルが挙げられる。好適なアリール基の例としては、任意に置換されたフェニル、ビフェニル又はナフチルが挙げられる。好適なアリールアルキル基の例としては、任意に置換されたベンジル（例えば、ｐ－メトキシベンジル（ＭＰＭ）、３，４－ジメトキシベンジル、Ｏ－ニトロベンジル、ｐ－ニトロベンジル、ｐ－ハロベンジル、２，６－ジクロロベンジル、ｐ－シアノベンジル）、並びに２－及び４－ピコリルが挙げられる。

【0105】

第３の態様においては、本発明は、本発明の第１又は第２の態様において規定されるペプチドを含む融合タンパク質を提供する。

【0106】

本発明において、「融合タンパク質」という用語は、本発明のペプチドを本来他の別個のタンパク質（複数の場合もある）に属する１つ以上のペプチドに接合するタンパク質を指す。

【0107】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１、第２又は第３の態様の一実施形態においては、ペプチド又は融合タンパク質は標識、薬物、細胞膜透過ペプチド又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の部分にコンジュゲートしている。本発明のペプチド又は融合タンパク質に部分をコンジュゲートする日常的な合成プロトコルは既知である。

【0108】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１、第２又は第３の態様の別の実施形態においては、ペプチド又は融合タンパク質は、標識にコンジュゲートしている。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１、第２又は第３の態様の別の実施形態においては、標識はペプチド又は融合タンパク質のＮ末端又はＣ末端にコンジュゲートしている。

【0109】

本明細書で使用される「標識」は蛍光、電気伝導性、放射能、サイズ等を含む様々な方法によって検出することができる分子又は化合物である。標識は、例えば別のより低い特徴的な波長の光の励起に続いて特定の波長の光を発する蛍光標識のように、シグナルを発することが本質的に可能であり得る。代替的には、標識は本質的にシグナルを発することが可能ではないが、シグナルを発する別の化合物が結合することが可能なものであってもよい。この後者の状況の一例は、それ自体がシグナルを発しないが、標識されたアビジン又はストレプトアビジン分子に結合した場合に検出することができるビオチン等の標識である。この後者の種類の標識の他の例は、特定の受容体に特異的に結合するリガンドである。検出可能に標識された受容体をリガンドで標識されたユニット特異的マーカーに結合させ、かかるマーカーを可視化することが可能である。

【0110】

本発明に従って使用することができる標識としては、電子スピン共鳴分子、蛍光分子、化学発光分子、放射性同位体、酵素基質、酵素、ビオチン分子、アビジン分子、電荷移動分子、半導体ナノ結晶、半導体ナノ粒子、コロイド金ナノ結晶、リガンド、マイクロビーズ、磁性ビーズ、常磁性分子、量子ドット、色素原基質、親和性分子、タンパク質、ペプチド、核酸、炭水化物、ハプテン、抗原、抗体、抗体フラグメント及び脂質が挙げられるが、これらに限定されない。

【0111】

放射性同位体はフィルム又は電荷結合素子（ＣＣＤ）を用いて検出することができ、リガンドは蛍光、化学発光又は酵素タグを有する受容体の結合によって検出することができ、マイクロビーズは電子又は原子間力顕微鏡検査を用いて検出することができる。

【0112】

標識とペプチドとのコンジュゲーションは、当業者に既知の日常プロトコルに従って行うことができる。

【0113】

別の実施形態においては、上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１若しくは第２の態様のペプチド又は本発明の第３の態様の融合タンパク質は、薬物にコンジュゲートしている。一実施形態においては、薬物はペプチド又はタンパク質のＮ末端にコンジュゲートしている。

【0114】

別の実施形態においては、上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１若しくは第２の態様のペプチド又は本発明の第３の態様の融合タンパク質は、ＰＥＧにコンジュゲートしている。一実施形態においては、ＰＥＧはペプチド又はタンパク質のＮ末端にコンジュゲートしている。

【0115】

「ＰＥＧ」という用語は、ここではポリエチレングリコール及び１つのメトキシル化末端を有する誘導体等の誘導体、例えばメトキシ－ポリエチレングリコール／ポリエチレングリコールモノメチルエーテルについて同義的に使用される。これらの化合物をいずれも薬物の修飾に使用することができ、ＰＥＧ鎖の一端の末端基が異なり、ヒドロキシル基がメトキシ基で修飾されていてもよいことが当業者に既知である。さらに、ＰＥＧをペプチドに特異的にカップリングするために、ＰＥＧのもう一方の端を特定の「活性化基」で修飾する必要があることが当業者に既知である。かかる活性化基についての概要は、Zalipsky, Bioconjugate Chem. 1995, 6, 150-165に示されている。コンジュゲーションに使用されるＰＥＧの分子量は、得られるＰＥＧコンジュゲートペプチドに必要とされる持続的な有効性の程度に応じて適切に変更することができる。１つのＰＥＧ分子の分子量は、５ｋＤａ～４０ｋＤａ、例えば１０ｋＤａ～３０ｋＤａ又は２０ｋＤａ～３０ｋＤａである。コンジュゲーションに使用されるＰＥＧ分子は線状、分岐状又は星型の形態を有し得る。

【0116】

上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１又は第２の態様の別の実施形態においては、ペプチドは、細胞膜透過ペプチドにコンジュゲートしている。

【0117】

本発明において、「細胞膜透過ペプチド」（「ＣＰＰ」）という用語は、様々な分子カーゴ（ナノサイズの粒子から小化学分子及びＤＮＡの大フラグメントまで）の細胞取込みを容易にする短ペプチドを指す。「カーゴ」をＣ（ｔ）又はＮ（ｔ）末端を介して、共有結合による化学的連結又は非共有結合的相互作用のいずれかによりペプチドに会合する。ＣＰＰの機能はカーゴを細胞内に送達することであり、このプロセスは一般に、エンドサイトーシスによって生じる。現在の使用は、ＣＰＰを介したカーゴ送達における細胞特異性の欠如及びそれらの取込み様式の不十分な理解のために制限されている。ＣＰＰは通例、高い相対存在量のリシン若しくはアルギニン等の正荷電アミノ酸を含有するか、又は極性／荷電アミノ酸及び非極性疎水性アミノ酸の交互パターンを含有する配列のいずれかを有するアミノ酸組成を有する。これら２つのタイプの構造は、それぞれポリカチオン性又は両親媒性と称される。第３のＣＰＰ群は、正味電荷の低い無極性残基のみを含有する疎水性ペプチドであるか、又は細胞取込みに不可欠な疎水性アミノ酸基を有する。ＣＰＰと本発明において提供されるペプチドとのコンジュゲーションは、固相合成又は溶液選択的キャッピング等の既知の日常プロトコルに従って行うことができる（Copolovici D. M. et al., "Cell-Penetrating Peptides: Design, Synthesis, and Applications", 2014, ACS Nano, 2014, 8 (3), pp 1972-1994を参照されたい）。上記又は下記に提示する実施形態のいずれかと任意に組み合わせた本発明の第１の態様の別の実施形態においては、細胞膜透過ペプチドはポリカチオン性ＣＰＰ、ポリＡｒｇ又は代替的にはペネトラチン（penetratine）である。

【0118】

第４の態様において、本発明は、医薬組成物を提供する。

【0119】

本明細書で使用される「治療有効量」という表現は、投与した場合に血流に入り、対処される疾患の１つ以上の症状の発症を予防するか、又は或る程度軽減するのに十分な化合物（すなわち、ペプチド又はその薬学的に許容可能な塩）の量を指す。本発明に従って投与されるペプチドの特定の用量は当然ながら、投与される化合物、投与の経路、治療される特定の病態及び同様の考慮事項を含む、その事例を取り巻く特定の状況によって決まる。

【0120】

「薬学的に許容可能な」という用語は、医療用の組成物を調製するための製薬技術における使用に適した添加剤又は担体を指す。

【0121】

「添加剤及び／又は担体」という表現は、許容可能な材料、組成物又はビヒクルを指す。各構成成分は、組成物の他の成分に適合するという意味で薬学的に許容可能でなくてはならない。各構成成分はまた、過大な毒性、刺激、アレルギー応答、免疫原性又は他の問題若しくは合併症なしにヒト及び非ヒト動物の組織又は器官と接触させた使用に好適であり、適切なベネフィット／リスク比に見合う必要がある。好適な許容可能な添加剤の例は溶媒、分散媒、希釈剤、又は他の液体ビヒクル、分散助剤若しくは懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤若しくは乳化剤、防腐剤、固体結合剤、滑沢剤等である。任意の従来の添加剤媒体が、例えば任意の望ましくない生物学的作用を生じるか、又は医薬組成物の任意の他の構成成分（複数の場合もある）と他の形で有害に相互作用することによって物質又はその誘導体と適合しない場合を除き、その使用は本発明の範囲内であることが企図される。

【0122】

本明細書に記載の医薬組成物の配合物は、薬理学の技術分野で既知の又は将来開発される任意の方法によって調製することができる。概して、かかる調製方法は、活性成分（ペプチド）を添加剤及び／又は１つ以上の他の副成分と合わせる工程と、次いで必要及び／又は所望に応じて、生成物を所望の単回又は複数回投与単位に成形及び／又は包装する工程とを含む。

【0123】

本発明の医薬組成物は、単回単位用量及び／又は複数の単回単位用量として大量に調製、包装及び／又は販売することができる。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個々の量である。

【0124】

本発明の組成物中の活性成分（すなわち、前の態様及び実施形態のいずれかで定義されるペプチド）、許容可能な添加剤及び／又は任意の付加的な成分の相対量は、治療される被験体の個性、大きさ及び／又は状態に応じ、更には組成物を投与する経路に応じて異なる。

【0125】

これらの組成物の製造に使用される許容可能な添加剤としては、不活性希釈剤、分散剤及び／又は造粒剤、界面活性剤及び／又は乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、滑剤、及び／又は油が挙げられるが、これらに限定されない。かかる添加剤は、本発明の配合物に任意に含まれ得る。ココアバター及び坐剤蝋、着色料、コーティング剤、甘味剤、香味剤及び着香剤等の添加剤が配合者の判断に従って組成物中に存在していてもよい。

【0126】

例示的な希釈剤としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉糖及びそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0127】

例示的な造粒剤及び／又は分散剤としては、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、粘土、アルギン酸、グアーガム、柑橘類果肉（citrus pulp）、寒天、ベントナイト、セルロース及び木製品、天然海綿、陽イオン交換樹脂、炭酸カルシウム、シリケート、炭酸ナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン）（クロスポビドン）、ナトリウムカルボキシメチルデンプン（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（ｓｔａｒｃｈ １５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）、ラウリル硫酸ナトリウム、第四級アンモニウム化合物、並びにそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0128】

例示的な界面活性剤及び／又は乳化剤としては、天然乳化剤（例えば、アラビアゴム、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラックス（chondrux）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、蝋及びレシチン）、コロイド粘土（例えば、ベントナイト（ケイ酸アルミニウム）及びＶｅｅｇｕｍ（ケイ酸アルミニウムマグネシウム））、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、モノステアリン酸トリアセチン、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリル及びモノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー及びカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ ２０）、ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ ６０）、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ ８０）、モノパルミチン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ４０）、モノステアリン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ６０）、トリステアリン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ６５）、モノオレイン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ８０））、ポリオキシエチレンエステル（例えば、モノステアリン酸ポリオキシエチレン（Ｍｙｒｊ ４５）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシ化ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシメチレン及びＳｏｌｕｔｏｌ）、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ ３０））、ポリ（ビニル－ピロリドン）、モノラウリン酸ジエチレングリコール、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ ６８、ポロキサマー１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドクサートナトリウム等、及び／又はそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0129】

例示的な結合剤としては、デンプン（例えば、コーンスターチ及びデンプン糊）；ゼラチン；糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、モラセス、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然及び合成ゴム（例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモスの抽出物、パンワールゴム（panwar gum）、ガッチゴム、イサポール（isapol）外皮の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリビニルピロリドン）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）及びカラマツアラビノガラクタン；アルギネート；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート；蝋；水；アルコール；並びにそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0130】

例示的な防腐剤としては、酸化防止剤、キレート剤、抗微生物性防腐剤、抗真菌性防腐剤、アルコール防腐剤、酸性防腐剤及び他の防腐剤を挙げることができる。例示的な酸化防止剤としては、αトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム及び亜硫酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なキレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸及びエデト酸三ナトリウムが挙げられる。例示的な抗微生物性防腐剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール及びチメロサールが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な抗真菌性防腐剤としては、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム及びソルビン酸が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアルコール防腐剤としては、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエート及びフェニルエチルアルコールが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な酸性防腐剤としては、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β－カロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸及びフィチン酸が挙げられるが、これらに限定されない。他の防腐剤としては、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム（deteroxime mesylate）、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、Ｇｌｙｄａｎｔ Ｐｌｕｓ、Ｐｈｅｎｏｎｉｐ、メチルパラベン、Ｇｅｒｍａｌｌ １１５、Ｇｅｒｍａｂｅｎ ＩＩ、Ｎｅｏｌｏｎｅ、Ｋａｔｈｏｎ及びＥｕｘｙｌが挙げられるが、これらに限定されない。或る特定の実施形態において、防腐剤は酸化防止剤である。他の実施形態において、防腐剤はキレート剤である。

【0131】

例示的な緩衝剤としては、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、Ｄ－グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、第二リン酸カルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、リン酸水酸化カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、第二リン酸カリウム、第一リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱性物質除去水、等張食塩水、リンガー液、エチルアルコール及びそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0132】

例示的な滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル、硬化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0133】

例示的な油としては、アーモンド、杏仁、アボカド、ババス、ベルガモット、クロフサスグリ種子、ルリチシャ、カデ、カモミール、キャノーラ、カラウェー、カルナウバ、ヒマシ、桂皮、ココアバター、ヤシ、タラ肝、コーヒー、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユーカリ、月見草、魚、アマニ、ゲラニオール、ヒョウタン（gourd）、ブドウ種子、ヘーゼルナッツ、ヒソップ、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ、ククイナッツ、ラバンジン、ラベンダー、レモン、アオモジ、マカデミアナッツ、マロー、マンゴー種子、メドウフォーム種子、ミンク、ニクズク、オリーブ、オレンジ、オレンジラフィー、パーム、パーム核、モモ核、ピーナッツ、ケシ種子、カボチャ種子、ナタネ、ぬか、ローズマリー、ベニバナ、ビャクダン、サザンカ（sasquana）、セイバリー（savoury）、シーバックソーン、ゴマ、シアバター、シリコーン、ダイズ、ヒマワリ、ティーツリー、アザミ、ツバキ、ベチバー、クルミ及び小麦胚芽の油が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な油としては、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油及びそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0134】

非経口投与用の液体投薬形態としては、薬学的に許容可能なリポソームエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシルが挙げられるが、これらに限定されない。活性成分に加えて、液体投薬形態は当該技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、並びにそれらの混合物を含んでいてもよい。非経口投与のための或る特定の実施形態において、本発明のコンジュゲートを可溶化剤、例えばポリエトキシ化ヒマシ油（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（商標））、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー及びそれらの組合せと混合する。

【0135】

注射用調製物、例えば滅菌注射用水性又は油性懸濁液は、既知の技術に従い、好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を用いて配合することができる。滅菌注射用調製物は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒中の、例えば１，３－ブタンジオール溶液としての滅菌注射用溶液、懸濁液又はエマルションであり得る。用いることができる許容可能なビヒクル及び溶媒には、水、リンガー液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、滅菌不揮発性油が溶媒又は懸濁媒体として従来用いられている。この目的で、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の無刺激不揮発性油を用いることができる。加えて、オレイン酸等の脂肪酸が注射剤の調製に使用される。代替的には、調製物はリポソームの形態であってもよい。

【0136】

注射用配合物は、例えば細菌保持フィルターを通した濾過、又は使用前に滅菌水若しくは他の滅菌注射用媒体に溶解若しくは分散させることができる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって滅菌することができる。

【0137】

薬物の効果を持続させるために、皮下又は筋肉内注射からの薬物の吸収を遅らせることが望ましいことが多い。これは、水溶性が低い結晶性又は非晶質物質の液体懸濁液を使用することによって達成することができる。この場合、薬物の吸収速度はその溶解速度に応じて異なり、溶解速度は結晶サイズ及び結晶形態によって異なり得る。代替的には、非経口的に投与された薬物形態の遅延吸収は、薬物を油ビヒクルに溶解又は懸濁させることによって達成される。

【0138】

本発明のペプチドは、上記の１つ以上の添加剤とのマイクロカプセル化形態であってもよい。一実施形態においては、本発明のペプチドはリポソーム中に配合される。

【0139】

本発明のペプチド及び医薬組成物を併用療法に用いることができることが理解されよう。併用レジメンに用いられる療法（治療法又は処置）の特定の組合せには、所望の治療法及び／又は処置の適合性、並びに達成すべき所望の治療効果が考慮に入れられる。用いられる療法は、同じ目的で所望の効果を達成するものであっても、又は異なる効果（例えば、任意の有害作用の制御）を達成するものであってもよいことが理解されよう。

【0140】

本発明の医薬組成物は、単独で又は１つ以上の他の治療剤と組み合わせて投与することができる。「と組み合わせて」とは、作用物質を同時に投与するか、及び／又は共に送達されるように配合しなければならないことを意味することを意図するものではないが、これらの送達方法は本発明の範囲内である。組成物は１つ以上の他の所望の治療法又は医療処置と同時に、その前に又はその後に投与することができる。概して、各作用物質は、その作用物質について決定された用量及び／又はタイムスケジュールで投与される。付加的に、本発明は、ペプチド又は医薬組成物のバイオアベイラビリティを改善する、それらの代謝を低減及び／又は変更する、それらの排出を阻害する、及び／又はそれらの体内での分布を変更することができる作用物質と組み合わせたペプチド又は医薬組成物の送達を包含する。

【0141】

併用レジメンに用いられる療法の特定の組合せには、所望の治療法及び／又は処置の適合性、及び／又は達成すべき所望の治療効果が考慮に入れられる。用いられる療法は、同じ障害に対する所望の効果を達成するものであっても（例えば、本発明のペプチドを同じ障害の治療に使用される別の生物活性物質と同時に投与することができる）、及び／又は異なる効果（例えば、任意の有害作用の制御）を達成するものであってもよいことが理解されよう。この組合せで利用される生物活性物質を単一の組成物中で共に投与しても、又は異なる組成物中で別個に投与してもよいことが更に理解されよう。

【0142】

「と組み合わせて」という表現は、本発明のペプチドと、特に治療剤又はペプチドのプロファイル（バイオアベイラビリティ等）を改善する作用物質であり得る上述及び下述の更なる作用物質のいずれかとを（化学的－物理的相互作用により）コンジュゲートする可能性も包含する。

【0143】

第６及び第７の態様においては、本発明は、ＶＥＧＦ発現及び血管新生の調節異常に起因する疾患の予防又は治療に使用される、本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物をそれぞれ提供する。本態様は代替的には、ＶＥＧＦ発現又は血管新生の調節異常に起因する疾患を予防又は治療する方法であって、治療有効量の本発明の第１又は第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質、又は本発明の第４の態様において規定される医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与する工程を含む、方法として構築することができる。本態様は代替的には、ＶＥＧＦ発現又は血管新生の調節異常に起因する疾患の治療又は予防のための薬剤の製造における本発明の第１若しくは第２の態様において規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は本発明の第３の態様において規定される融合タンパク質、又は本発明の第４の態様において規定される医薬組成物の使用として構築することができる。「ＶＥＧＦ発現レベル」という用語は、ＶＥＧＦタンパク質又はｍＲＮＡのレベルのいずれかを指す。本発明の一実施形態においては、本発明のペプチドは、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡの調節を促進する。本発明の別の実施形態においては、本発明のペプチドは、ＶＥＧＦタンパク質の調節を促進する。タンパク質又はｍＲＮＡのレベルでＶＥＧＦの量を決定するための市販のキットがある。

【0144】

本発明の文脈において、血管新生の調節異常は、ＶＥＧＦ発現レベルの変化によるものである。このため、血管新生の調節異常がＶＥＧＦ発現の増加に起因する疾患が存在する。かかる状況においては、ビラジカル「Ｌ」を含む本発明の第１の態様のペプチドは、ＶＥＧＦ発現を減少させることができるため、有用であり得る（下記に提示するデータを参照されたい）。このため、本発明の第６及び第７の態様の一実施形態においては、ペプチドは第１の態様によるものであり、上記に提示する実施形態のいずれかで規定されるリンカービラジカル「Ｌ」を含み、ＶＥＧＦレベルの上昇に起因する疾患の治療又は予防に使用される。ＶＥＧＦレベルの上昇に起因する疾患の例示的な非限定例は、特に糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、緑内障等の失明障害、乾癬、慢性閉塞性肺疾患及び癌である（Cameliet P. 2003）。

【0145】

本発明の第６及び第７の態様の好ましい実施形態は、ペプチドが第１の態様によるものであり、上記に提示する実施形態のいずれかで規定されるリンカービラジカル「Ｌ」を含み、癌の予防又は治療に使用される、本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物に関する。本発明の第６及び第７の態様の関連の実施形態は、癌を治療又は予防する方法であって、治療有効量の本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含み、ペプチドが第１の態様によるものであり、上記に提示する実施形態のいずれかで規定されるリンカービラジカル「Ｌ」を含む、方法に関する。本発明の第６及び第７の態様の更なる関連の実施形態は、癌の予防又は治療のための薬剤の製造における本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物の使用に関し、ペプチドが第１の態様によるものであり、上記に提示する実施形態のいずれかで規定されるリンカービラジカル「Ｌ」を含む。

【0146】

本明細書で使用される「癌」という用語には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、骨髄腫（例えば多発性骨髄腫）及び白血病（例えば急性骨髄性白血病）が含まれる。かかる癌のより具体的な例としては、乳癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌、膵癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝腫、結腸癌、大腸癌、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、腎癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、胃癌、黒色腫及び様々なタイプの頭頸部癌が挙げられる。

【0147】

より具体的な実施形態においては、ペプチドが第１の態様によるものであり、上記に提示する実施形態のいずれかで規定されるリンカービラジカル「Ｌ」を含む、本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物は、１つ以上の抗癌剤と組み合わせて癌の治療又は予防に使用される。

【0148】

抗癌剤という用語は、化学療法剤、成長阻害剤、細胞毒性剤、抗ホルモン剤、放射線療法に使用される薬剤、抗血管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤等及びそれらの任意の組合せを含み得るが、これらに限定されない。上記の抗癌剤は、本明細書に記載される環状ペプチド、融合タンパク質又は医薬組成物の前、同時又は後に投与することができる。２つ以上の薬物は、同じ組成物の一部を形成してもよく、又は同時に若しくは異なる時点で投与される別個の組成物として提供してもよい。

【0149】

他の特定の実施形態においては、ペプチドが第１の態様によるものであり、上記に提示する実施形態のいずれかで規定されるリンカービラジカル「Ｌ」を含む、本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物は、抗ＶＥＧＦ治療又は光線力学的療法（ＰＤＴ）等の１つ以上の標準治療薬と組み合わせて糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）又は緑内障等の失明障害の治療又は予防に使用される。

【0150】

更なる特定の実施形態においては、ペプチドが第１の態様によるものであり、上記に提示する実施形態のいずれかで規定されるリンカービラジカル「Ｌ」を含む、本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物は、コルチコステロイド又は他の免疫系調節剤等の１つ以上の標準治療薬と組み合わせて乾癬の治療又は予防に使用される。

【0151】

更なる特定の実施形態においては、ペプチドが第１の態様によるものであり、上記に提示する実施形態のいずれかで規定されるリンカービラジカル「Ｌ」を含む、本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物は、気管支拡張剤又はコルチコステロイド等の１つ以上の標準治療薬と組み合わせて慢性閉塞性肺疾患の治療又は予防に使用される。

【0152】

他の状況においては、血管新生の調節異常は、ＶＥＧＦ発現の減少によるものである。このため、本発明の第６及び第７の態様の代替的な実施形態においては、ペプチドは、本発明の第１の態様下で提供される線状ペプチド又は本発明の第２の態様で提供されるもののいずれかであり、ＶＥＧＦレベルの低下に起因する疾患の治療又は予防に使用される。本発明の第６及び第７の態様の更なる実施形態においては、本発明は、ＶＥＧＦレベルの低下に起因する疾患を治療又は予防する方法であって、治療有効量の本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含み、ペプチドが本発明の第１の態様下で提供される線状ペプチド又は本発明の第２の態様で提供されるもののいずれかである、方法を提供する。更なる関連の実施形態においては、本発明は、ＶＥＧＦレベルの低下に起因する疾患の治療又は予防のための薬剤の製造における、本発明の第１及び第２の態様のペプチド、第３の態様の融合タンパク質又は本発明の第４の態様の医薬組成物の、それを必要とする被験体に対する使用であって、ペプチドが本発明の第１の態様下で提供される線状ペプチド又は本発明の第２の態様で提供されるもののいずれかである、使用に関する。

【0153】

本発明の第１の態様下で提供される線状ペプチド又は本発明の第２の態様で提供されるもののいずれかは、低いＶＥＧＦレベルを上昇させ、ＶＥＧＦ産生を刺激する（データも下記に提示する）。血管新生及びＶＥＧＦ発現レベルの低減に関連する疾患の例示的な非限定例は、特に肺線維症、虚血性組織傷害、胃潰瘍、腎症、骨量減少、運動ニューロン変性、慢性創傷、皮膚血管の脆弱性である（Manish B. et al., 2010）。

【0154】

本明細書及び特許請求の範囲全体を通して、「含む（comprise）」という単語及びこの単語の変化形は他の技術的特徴、添加物、構成成分又は工程を除外することを意図したものではない。さらに、「含む」という単語は、「のみからなる（consisting of）」という場合も包含する。本発明の付加的な目的、利点及び特徴が本明細書を検討することで当業者に明らかとなるか、又は本発明の実施によって理解され得る。以下の実施例は実例として提示され、本発明を限定することを意図したものではない。さらに、本発明は本明細書に記載される特定の好ましい実施形態の考え得る全ての組合せを包含する。

【実施例】

【0155】

実施例１：ヒト網膜色素上皮（ＲＰＥ）、ヒトケラチノサイト及びヒト乳癌細胞株における低酸素誘導条件での本発明のペプチドによるＶＥＧＦの調節
１． 材料及び方法
合成基本手順
材料は以下のように購入した：Ｆｍｏｃ保護α－アミノ酸（－－－）；ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂（Tianjin Nankai HECHENG S&T Co., Ltd）；ＨＢＴＵ（（２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、GL Biochem）；Ｎ－メチルモルホリン（Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.）；無水コハク酸（Aladdin）；アセトニトリル（Xingke Chemical）；ニンヒドリン（Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.）；ピペリジン（Vertellus）；ジメチルホルムアミド、ＤＭＦ（Zhejiang jiangshan chemical co., Ltd）；トリフルオロ酢酸、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸、Solvay）、ＴＩＳ（チオアニソール、Solvay）。

【0156】

簡潔に述べると、線状ポリペプチドを支持体としてのＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂上でＦｍｏｃベースＳＰＰＳ（固相ペプチド合成）を用いて手動合成した。

【0157】

以下のプロトコルを用いた：
１． Ｆｍｏｃ保護基をＤＭＦ中の２０％ピペリジンにより除去した。
２． 樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。
３． その後のＦｍｏｃ保護アミノ酸をＦｍｏｃ－ＡＡ（３当量）、ＨＢＴＵ（３当量）及びＮ－メチルモルホリン（６当量）を用いて４５分間カップリングした。
４． 樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。カップリングをニンヒドリン試験によって確認した。
５． 工程１から繰り返す。
６． Ｎ末端を、無水コハク酸（１０当量）及びＮ－メチルモルホリン（１０当量）と反応させることによってキャッピングした。

【0158】

ペプチドを樹脂から切断し、溶液Ｆ（９５％ＴＦＡ、２．５％水、２．５％ＴＩＳ）に曝露することによって脱保護し、凍結乾燥した。

【0159】

凍結乾燥したペプチドを、Ｃ１８カラムを用いた逆相ＨＰＬＣによって精製した（詳細については化合物の特性評価を参照されたい）。ペプチドをＬＣ－ＭＳ－ＥＳＩによって同定した。全化合物の全質量スペクトルデータを下記表１に示す。

【0160】

材料は以下のように購入した：Ｆｍｏｃ保護α－アミノ酸（オレフィンアミノ酸Ｆｍｏｃ－［（Ｓ）－２－（４ペンテニル）アラニン］ＯＨ、Ｆｍｏｃ－［（Ｒ）－２－（４ペンテニル）アラニン］ＯＨ、Ｆｍｏｃ－［（Ｓ）－２－（７オクテニル）アラニン］ＯＨ、Ｆｍｏｃ－［（Ｒ）－２－（４ペンテニル）アラニン］ＯＨを含む）、２－（６－クロロ－１－Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスフェート（ＴＢＴＵ）、樹脂、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１，２－ジクロロエタン（ＤＣＥ）、グラブスＲｕ（ＩＶ）触媒及びピペリジンは種々の供給業者から購入した。

【0161】

簡潔に述べると、線状ポリペプチドを、Ｆｍｏｃ固相ペプチド化学を用いて自動合成装置により合成した。オレフィンアミノ酸とのカップリングのみを、樹脂を反応器から取り出した後に前項に開示されるように手動で行った。

【0162】

閉環メタセシス反応を、Scott J. M.ら（Scott J. M. et al., "Application of Ring-Closing Metathesis to the Synthesis of Rigidified Amino Acids and Peptides", 1996, J. Am. Chem. Soc., 1996, 118 (40), pp 9606-9614）によって開示されるように、線状ペプチドを樹脂から切断した後に第１世代グラブス触媒により溶液中で行った。

【0163】

脱保護されたペプチドを、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルにより４℃で沈殿させ、凍結乾燥した。

【0164】

凍結乾燥したペプチドを、AgilentのＺＯＲＢＡＸ ３００ＳＢ－Ｃ１８ ５μｍ カラムを用いた逆相ＨＰＬＣによって精製した（詳細については化合物の特性評価を参照されたい）。ペプチドをＬＣ－ＭＳ－ＥＳＩによって同定した。全化合物の全質量スペクトルデータを下記表１に示す。

【0165】

ＨＰＬＣ条件：
配列番号１３．化合物を、２０分間で２９％→３９％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝１０．２）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ８０％：０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５．１６％；
配列番号１４．化合物を、２０分間で４０％→５０％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝６．５～７．８）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５％超；
配列番号１５．化合物を、２０分間で３６％→４６％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝９．２～１０．３）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５％超；
配列番号１６．化合物を、２０分間で５０％→６０％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝１０．３～１０．９）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５％超；
配列番号１７．化合物を、２０分間で３５％→５５％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝１２．５～１３．１）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５％超；
配列番号１８．化合物を、２０分間で５５％→７５％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝８．５～９．３）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５％超；
配列番号１９．化合物を、２０分間で３６％→４６％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝９．９～１０．４）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５％超；
配列番号２０．化合物を、２０分間で３５％→４５％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝９．８～１０．４）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５％超；
配列番号２１．化合物を、２０分間で４５％→５５％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝１３．２～１４．４）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５．７％；
配列番号２９．化合物を、２０分間で３８％→４８％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝８．９～９．３）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５．１３％；
配列番号３０．化合物を、２０分間で３６％→４６％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝１２．４）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５．１３％；
配列番号３１．化合物を、２０分間で２８％→４８％のＢの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝９．９～１０．２）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９５．１３％；
配列番号３６．化合物を、２５分間で２３％→４８％のＡの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝１１．２）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９６．６５％；
配列番号３７．化合物を、２５分間で２４％→４９％のＡの線形勾配（Ｒ．Ｔ．＝９．５４）を用いたＨＰＬＣ－ＲＰ（Ｃ－１８カラム；ポンプＢ：０．１％ＴＦＡを含む１００％Ｈ_２Ｏ；ポンプＡ：０．１％ＴＦＡを含む１００％アセトニトリル）によって精製した。ＨＰＬＣによる純度グレード９６．４２％；

【0166】

【表1】

【0167】

細胞株、細胞培養及び低酸素誘導条件
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞株、ＨａＣａｔ不死化ヒトケラチノサイト細胞株及びＡＲＰＥ－１９ヒト網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ、Manassas，VA，USA）から購入した。ヒト細胞はＡＴＣＣガイドラインに従い、遺伝子型プロファイリングを用いて慣例的に認証した。ＡＲＰＥ－１９細胞は、１０％ウシ胎仔血清及び抗生物質を添加したＨＥＰＥＳを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２培地中で維持した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びＨａＣａＴは、４．５グラム（gr）／Ｌグルコース、グルタミン及び２ｍＭピルビン酸塩を含み、１０％ウシ胎仔血清及び抗生物質を添加したＤＭＥＭ培地中で維持した。

【0168】

低酸素は、ＣｏＣｌ_２で処理したアッセイ細胞において効果的に誘導された。新鮮な０．４Ｍ ＣｏＣｌ_２ストック溶液を水中で調製し、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１については５０μＭ、ＨａＣａＴについては２００μＭ、ＡＲＰＥ－１９細胞については３００μＭの濃度が得られるように培地に添加した。低酸素条件を模倣するために細胞をそれぞれのＣｏＣｌ_２濃度で２４時間インキュベートした。

【0169】

ＶＥＧＦアッセイ
培養細胞の上清のＶＥＧＦ含量は、ＶＥＧＦ－ＥＬＩＳＡ（Abcam；ａｂ１００６６２；Cambridge，UK）により、製造業者の使用説明書に従って測定した。ＥＬＩＳＡの検出範囲は、８．２３ｐｇ／ｍｌ～６０００ｐｇ／ｍｌであった。ＥＬＩＳＡによりヒトＶＥＧＦ－Ａの全てのアイソフォームを検出する。アッセイを正常酸素条件及び低酸素条件にて非処理細胞で行い、２４時間の時点で低酸素でのＶＥＧＦ量と正常酸素でのＶＥＧＦ量との比率を決定及び算出したところ、試験した各細胞株において１超となった。同じ手順を本発明のペプチドの存在下で用いた。

【0170】

リアルタイム定量的ＲＴ－ＰＣＲ
指定の細胞からのＲＮＡの抽出を、ＮＺＹ全ＲＮＡ単離キット（Nzytech，Lisboa，Portugal）を用いて行い、ＮＺＹ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Nzytech）を用いてｃＤＮＡを調製した。プライマーは、Ｐｒｉｍｅｒ Ｂｌａｓｔソフトウェア（ＮＣＢＩ）を用いて設計し、Thermo-Fisherから入手した。ｍＲＮＡ発現レベルを、ＳＹＢＲグリーンマスターミックス（Applied Biosystems）を用いたｑＲＴ－ＰＣＲ（ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ５ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ、Applied Biosystems，Foster City，CA，USA）によって評価し、β－アクチンに対して正規化した。以下のプライマーを本研究に用いた：β－アクチン（フォワード：５’－ＡＧＡ ＡＡＡ ＴＣＴ ＧＧＣ ＡＣＣ ＡＣＡ ＣＣ－３’（配列番号３２）；リバース：５’－ＧＧＧ ＧＴＧ ＴＴＧ ＡＡＧ ＧＴＣ ＴＣＡ ＡＡ－３’（配列番号３３））；ＶＧＦＡ（フォワード：５’－ＴＡＣ ＴＧＣ ＣＡＴ ＣＣＡ ＡＴＣ ＧＡＧ ＡＣ－３’（配列番号３４）；リバース：５’－ＧＣＡ ＴＧＧ ＴＧＡ ＴＧＴ ＴＧＧ ＡＣＴ－３’（配列番号３５））。

【0171】

統計分析
ＲＴ－ＰＣＲ実験を少なくとも２回繰り返した。ＶＥＧＦアッセイについては、三連で行った３回の決定の平均±Ｓ．Ｄを算出した。統計的有意性は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｗｉｎｄｏｗｓ用のＳＰＰＳ統計ソフトウェア、リリース６．０（Professional Statistic，Chicago，IL，USA）にて平均の比較のためのマンホイットニー検定を用いて決定した。個々の比較は、スチューデントの対応のない両側ｔ検定を用いて行った。有意性の基準は、全ての比較についてＰ＜０．０５とした。

【0172】

２． 結果
本研究の目的は、ＡＲＰＥ－１９細胞株における低酸素誘導条件でのペプチドによるＶＥＧＦの調節を決定することであった。ＶＥＧＦタンパク質（ＥＬＩＳＡキットを使用）を非処理細胞において低酸素対正常酸素で算出し、活性の閾値を設定した。次いで、細胞を細胞培養培地に溶解した２０μＭの本発明の対応するペプチドの溶液単独（正常酸素条件）又はＣｏＣｌ_２の存在下（低酸素条件）で処理し、ＶＥＧＦタンパク質量の比率を算出した。表２に報告するように、非処理細胞での比率よりも高いＶＥＧＦ_ｈｙｐ／ＶＥＧＦ_ｎｏｒｍ比を示すペプチドをＶＥＧＦタンパク質の誘導剤とみなし、非処理細胞での比率よりも低いＶＥＧＦ_ｈｙｐ／ＶＥＧＦ_ｎｏｒｍ比をもたらすペプチドをＶＥＧＦタンパク質の低減剤とみなした。

【0173】

【表2】

【0174】

【表3】

【0175】

結果から、本発明のペプチドがＶＥＧＦレベルを顕著に調整し得ることが示される。

【0176】

特に、本発明の第１の態様の線状ペプチドは、低酸素条件下でＶＥＧＦ値を増加させた。驚くべきことに、本発明の第１の態様のペプチドがステープルを含む場合、ＶＥＧＦに対するその挙動は著しく変化し、ＶＥＧＦの約５０％という劇的な減少を生じた。このため、本発明者らは、配列番号１の配列を含むペプチドが配列番号１の配列にリンカービラジカル「Ｌ」を含む又は含まないことでＶＥＧＦ、ひいては血管新生を調整し得ることを見出した。リンカーの非存在は、ＶＥＧＦ発現を増強し、ひいては血管新生を「増強」するペプチドをもたらし、リンカーの存在は、ＶＥＧＦ発現を減少させ、ひいては血管新生を「減少」させるペプチドをもたらす。

【0177】

本発明の第２の態様のペプチドの場合、正常酸素条件下で得られるレベルに対して低酸素条件下でＶＥＧＦの発現を増加させ得ることが見出された。このため、本発明の第２の態様のペプチドは、成長因子の減少が生じた状況においてＶＥＧＦのレベルを回復させるのにも有用であり得る。

【0178】

この結果を確認するために、低酸素条件の誘導が正常酸素と比較してＶＥＧＦタンパク質発現の増加を誘導する細胞株であるヒト角膜実質細胞株及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞株において、配列番号１６のペプチドを試験した。細胞を細胞培養培地に溶解した１０μＭの本発明のペプチドの溶液単独（正常酸素条件）又はＣｏＣｌ_２の存在下（低酸素条件）で処理し、ＶＥＧＦ量の比率を算出した。結果を表４に報告する。

【0179】

【表4】

【0180】

結果から、ＡＲＰＥ－１９細胞で得られた結果と一致して、本発明のペプチドがＶＥＧＦ比を減少させたことが示される。

【0181】

また、ＶＥＧＦ発現調節を正常酸素条件及び低酸素条件にて１０μＭの配列番号１７のペプチドで２４時間処理したＡＲＰＥ－１９細胞においてＲＰ－ＰＣＲによって決定した。結果を表５に報告する。

【0182】

【表5】

【0183】

細胞が低酸素条件にある場合、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡのレベルの明らかな増大が検出された。結果から、配列番号１７のペプチドでの処理により、低酸素での非処理細胞と比較してｍＲＮＡレベルが顕著に低下したが、正常酸素においては僅かな低下しか検出されなかったことが示される。

【0184】

実施例２：ｉｎ ｖｉｖｏでの血管新生の減少
１． 材料及び方法
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を１００μｌのＤＭＥＭ中にて胸腺欠損マウスの乳腺脂肪体に接種した（２．５×１０^６細胞／動物）。腫瘍が１００ｍｍ^３の体積に達した時点で、動物を群に分け、ｓ．ｃ．投与によりビヒクルで週２回処理し（０．９％滅菌ＮａＣｌ中の２％Ｔｗｅｅｎ－２０、対照群）、ｓ．ｃ．投与により配列番号１７で週２回処理した（処理群）。屠殺時に腫瘍を採取し、秤量し、ホルマリン固定した（２４時間）。ホルマリン固定した腫瘍をパラフィン包埋組織ブロック用に処理し、分析のためにムルシア大学獣医学部生化学・分子生物学科Ａ（Dept. Bioquimica y Biologia Molecular A, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia）に送った。

【0185】

組織学及び免疫組織化学
ヘマトキシリン、エオシン、ジアミノベンジジン四塩酸塩及び過酸化水素は、Merck（Madrid，Spain）から入手した。マウスモノクローナル抗ＣＤ３１抗体は、Novusから入手した。免疫組織化学においては、ＣＤ３１が主に組織学的組織切片中の内皮細胞の存在を実証し、腫瘍における血管新生の程度を評価するために使用される。

【0186】

腫瘍をＰＢＳで洗浄し、１０％ホルマリン中で固定し、パラフィンに包埋した。

【0187】

パラフィン包埋組織の連続切片に対してヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を行った。免疫組織化学のために、パラフィン切片を脱パラフィンし、クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）中で抗原賦活化に供した。組織の内因性ペルオキシダーゼを５％過酸化水素で不活性化した。スライドをブロッキングし、一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。次に、スライドをペルオキシダーゼとコンジュゲートした二次抗体と共にインキュベートし、特異的反応を０．２％ジアミノベンジジン四塩酸塩及び過酸化水素で発色させた。染色したスライドを、ＳＣＮ４００Ｆ Ｌｅｉｃａスキャナーを用いてスキャンし、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて画像を分析した。

【0188】

２． 結果
ＣＤ３１染色画像（図１）及び算出したＣＤ３１の相対強度（図２）から、処理した腫瘍において対照と比較して血管（血管新生）の有意な減少が示される。

【0189】

引用文献
Altschul et al., "Basic local alignment search tool", 1990, J. Mol. Biol, v. 215, pages 403-410.
Carmeliet P., "Angiogenesis in health and disease", Nature Medicine, 2003, 9, 653-660.
Copolovici D. M. et al., "Cell-Penetrating Peptides: Design, Synthesis, and Applications", 2014, ACS Nano, 2014, 8 (3), pp 1972-1994.
Higgins et al., "CLUSTAL V: improved software for multiple sequence alignment", 1992, CABIOS, 8(2), pages 189-191.
Kim Young-Woo et al., "Synthesis of all-hydrocarbon stapled a-helical peptides by ring-closing olefin metathesis", Nature Protocols, 2011, 6(6), p. 761-771.
Kolb H.C. et al., "The growing impact of click chemistry on drug discovery", 2003, Drug Discov Today, 8(24):1128-1137.
Manisha B. et al., "Angiogenesis: Future of pharmacological modulation", Indian J. Pharmacol., 2010, 42(1), pages 2-8.
Scott J. M. et al., "Application of Ring-Closing Metathesis to the Synthesis of Rigidified Amino Acids and Peptides", J. Am. Chem. Soc., 1996, v.118 (40), pp 9606-9614.
Zalipsky S., "Functionalized Poly(ethylene glycols) for Preparation of Biologically Relevant Conjugates", Bioconjugate Chemistry, 1995, 6 (2), 150-165.

【0190】

項目（Clauses）
完全を期すため、本発明の様々な態様を以下の番号付き項目に記載する。
項目１． １４～５０の長さを有し、配列番号１：
（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ
（ここで、
「ｍ」、「ｎ」、「ｐ」及び「ｑ」は整数を表し、０及び１から選択され、
Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、
Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含むペプチド又はその医薬塩であって、
該ペプチドが、任意に配列番号１のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子とを連結する、式（Ｉ）：
－［（Ｒ_１）_ａ－（Ｒ_２）－（Ｒ_３）_ｂ］_ｃ－ （Ｉ）
（式中、
「ａ」及び「ｂ」は同じか又は異なり、０又は１であり、
「ｃ」は１～１０で構成され、
Ｒ_１及びＲ_３は、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル；並びにハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より独立して選択されるビラジカルであり、
Ｒ_２は－Ｏ－、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_１３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、ＮＲ_１４、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、－ＮＲ_１５－ＮＲ_１６－、－Ｎ＝Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－、及び３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択され、
環系がハロゲン、－ＯＨ、－ＮＯ_２、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－Ｏ－からなる群より独立して選択される１つ以上のラジカルによって任意に置換される、既知の環系からなる群より選択されるビラジカルであり、
Ｒ_４は－ＯＨ及び－ＮＲ_１７Ｒ_１８からなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_５は－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_２０）アルキルからなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７及びＲ_１８は、－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルからなる群より独立して選択されるラジカルである）のリンカービラジカル「Ｌ」を含み、
リンカーによって連結されるアミノ酸が、式（ＩＩ）：

【化21】

（式中、
Ｒ_１９は（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、並びに３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択される、既知の環系からなる群より選択されるモノラジカルである）のものである、ペプチド又はその医薬塩。
項目２． 項目１に規定される式（Ｉ）のリンカービラジカル「Ｌ」を任意に含む、配列番号１の配列のみからなる、項目１によるペプチド。
項目３． 配列番号１のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子との間に式（Ｉ）のリンカービラジカル「Ｌ」を含む、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目４． 配列番号２：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号３：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号４：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（Ａｒｇ）ｐ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号５：（Ｌｅｕ）ｍ－（Ａｓｐ）ｎ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－（Ｌｙｓ）ｑ、
配列番号６：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号７：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号８：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号９：Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、
配列番号１０：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、
配列番号１１：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、及び、
配列番号１２：Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ、
からなる群より選択され、
ここで、同じ（Ｌ－アミノ酸又はＤ－アミノ酸の両方）又は異なる配置を有する、太字及び下線で示したアミノ酸は、リンカービラジカル「Ｌ」の位置を指し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目５． 「ａ」、「ｂ」及び「ｃ」が１である、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目６． Ｒ_１及びＲ_３が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より独立して選択されるビラジカルである、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目７． Ｒ_２が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より選択されるビラジカルである、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目８． Ｒ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より選択されるモノラジカルである、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目９． Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」及び「ｎ」が同じであり、「ｐ」及び「ｑ」が同じであるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」及び「ｎ」が同じであり、「ｐ」及び「ｑ」が異なるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」、「ｎ」、「ｐ」及び「ｑ」が同じであり、特に１であるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｍ」、「ｎ」、「ｑ」が同じであり、「ｐ」が異なり、特にｍ＝ｎ＝ｑ＝０及びｐ＝１である、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目１０． Ｃ末端が－Ｃ（Ｏ）ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、Ｎ末端が－ＮＨ_２に相当する、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目１１． 配列番号１３～配列番号２１の配列からなる群より選択されるペプチドに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目１２． 標識、薬物、細胞膜透過ペプチド又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートしている、先の項目のいずれか１つによるペプチド。
項目１３． 先の項目のいずれか１つに規定されるペプチドを含む融合タンパク質。
項目１４． 治療有効量の項目１～１２のいずれか１つに規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は項目１３に規定される融合タンパク質を、許容可能な医薬添加剤及び／又は担体と共に含む医薬組成物。
項目１５． 療法に使用される、項目１～１２のいずれか１つに規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は項目１３に規定される融合タンパク質、又は項目１４に規定される医薬組成物。
項目１６． ＶＥＧＦの発現の調節異常に起因し、特にＶＥＧＦの発現の増加又は減少に起因する疾患の治療又は予防に使用される、項目１～１２のいずれか１つに規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は項目１３に規定される融合タンパク質、又は項目１４に規定される医薬組成物。
項目１７． ＶＥＧＦの発現に基づく血管新生の調節異常に関連する疾患の治療又は予防に使用される、項目１～１２のいずれか１つに規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は項目１３に規定される融合タンパク質、又は項目１４に規定される医薬組成物。
項目１８． １５～５０の長さを有し、配列番号２２：
（Ａｒｇ）ｒ－（Ｓｅｒ）ｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－（Ｌｅｕ）ｔ－（Ｐｒｏ）ｖ
（ここで、
「ｒ」、「ｓ」、「ｔ」及び「ｖ」は整数を表し、０及び１から選択され、
Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、
Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含むペプチド又はその医薬塩であって、
ペプチドが任意に、配列番号２１のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋４」又は「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子とを連結する式（Ｉ）：
－［（Ｒ_１）_ａ－（Ｒ_２）－（Ｒ_３）_ｂ］_ｃ－ （Ｉ）
（式中、
「ａ」及び「ｂ」は同じか又は異なり、０又は１であり、
「ｃ」は１～１０で構成され、
Ｒ_１及びＲ_３は、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；ハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル；（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル；並びにハロゲン、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、－ＯＲ_６、－ＮＲ_７Ｒ_８、－ＳＲ_９、－ＳＯＲ_１０、－ＳＯ_２Ｒ_１１及び－ＣＯ_２Ｒ_１２からなる群より選択される１つ以上のラジカルによって置換された（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より独立して選択されるビラジカルであり、
Ｒ_２は－Ｏ－、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_１３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）_２、ＮＲ_１４、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、－ＮＲ_１５－ＮＲ_１６－、－Ｎ＝Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－、及び３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択され、
環系がハロゲン、－ＯＨ、－ＮＯ_２、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_１０）ハロアルキル及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル－Ｏ－からなる群より独立して選択される１つ以上のラジカルによって任意に置換される、既知の環系からなる群より選択されるビラジカルであり、
Ｒ_４は－ＯＨ及び－ＮＲ_１７Ｒ_１８からなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_５は－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_２０）アルキルからなる群より選択されるラジカルであり、
Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７及びＲ_１８は－Ｈ及び（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルからなる群より独立して選択されるラジカルである）のリンカービラジカル「Ｌ」を含み、
リンカーによって連結されるアミノ酸が式（ＩＩ）：

【化22】

（式中、
Ｒ_１９は（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニル、及び３個～１４個の成員を含む既知の環系であって、該系が１つ～３つの環を含み、
環のそれぞれが飽和、部分不飽和又は芳香族であり、
環が独立しているか、部分的又は完全に縮合しており、
既知の環系を形成する成員のそれぞれが－ＣＨ－、－ＣＨ_２－、－ＮＨ－、－Ｎ－、－ＳＨ－、－Ｓ－及び－Ｏ－からなる群より選択される、既知の環系からなる群より選択されるモノラジカルである）のものである、ペプチド又はその医薬塩。
項目１９． 配列番号２１の配列からなり、任意に項目１８に規定される式（Ｉ）のリンカービラジカル「Ｌ」を含む、項目１８によるペプチド。
項目２０． 配列番号２１のペプチド配列において位置「ｉ」に位置するアミノ酸のα炭素原子と位置「ｉ＋７」に位置するアミノ酸のα炭素原子との間に式（Ｉ）のリンカービラジカル「Ｌ」を含む、先の項目１８又は１９によるペプチド。
項目２１． 配列番号２３：（Ａｒｇ）ｒ－（Ｓｅｒ）ｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－（Ｌｅｕ）ｔ－（Ｐｒｏ）ｖ、
配列番号２４：（Ａｒｇ）ｒ－（Ｓｅｒ）ｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－（Ｌｅｕ）－（Ｐｒｏ）ｖ、
配列番号２５：（Ａｒｇ）ｒ－（Ｓｅｒ）ｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－（Ｌｅｕ）ｔ－（Ｐｒｏ）ｖ、
配列番号２６：Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ、
配列番号２７：Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ、及び、
配列番号２８：Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ、
からなる群より選択され、
ここで、同じ（Ｌ－アミノ酸又はＤ－アミノ酸の両方）又は異なる配置を有する、太字及び下線で示したアミノ酸は、リンカービラジカル「Ｌ」の位置を指し、Ｃ末端は－Ｃ（Ｏ）Ｒ_４に相当し、Ｎ末端は－ＮＨＲ_５に相当する、先の項目１８～２０のいずれか１つによるペプチド。
項目２２． 「ａ」、「ｂ」及び「ｃ」が１である、先の項目１８～２１のいずれか１つによるペプチド。
項目２３． Ｒ_１及びＲ_３が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より独立して選択されるビラジカルである、先の項目１８～２２のいずれか１つによるペプチド。
項目２４． Ｒ_２が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より選択されるビラジカルである、先の項目１８～２３のいずれか１つによるペプチド。
項目２５． Ｒ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニル及び（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルキニルからなる群より選択されるモノラジカルである、先の項目１８～２４のいずれか１つによるペプチド。
項目２６． Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｒ」及び「ｓ」が同じであり、「ｔ」及び「ｖ」が同じであるか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｒ」及び「ｓ」が同じであり、１を表し、「ｔ」及び「ｖ」が同じであり、０を表すか、又は代替的には、
Ｒ_１、Ｒ_３及びＲ_１９が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルであり、Ｒ_２が（Ｃ_２～Ｃ_１０）アルケニルであり、「ｒ」及び「ｓ」が同じであり、０を表し、「ｔ」及び「ｖ」が同じであり、１を表す、先の項目１８～２５のいずれか１つによるペプチド。
項目２７． Ｃ末端が－Ｃ（Ｏ）ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、特に－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２に相当し、Ｎ末端が－ＮＨ_２に相当する、先の項目１８～２６のいずれか１つによるペプチド。
項目２８． 配列番号２９～配列番号３１の配列からなる群より選択されるペプチドに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する、先の項目１８～２７のいずれか１つによるペプチド。
項目２９． 標識、薬物、細胞膜透過ペプチド又はＰＥＧにコンジュゲートしている、先の項目１８～２８のいずれか１つによるペプチド。
項目３０． 先の項目１８～２９のいずれか１つに規定されるペプチドを含む融合タンパク質。
項目３１． 治療有効量の項目１８～２９のいずれか１つに規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は項目３０に規定される融合タンパク質を、許容可能な医薬添加剤及び／又は担体と共に含む医薬組成物。
項目３２． 療法に使用される、項目１８～２９のいずれか１つに規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は項目３０に規定される融合タンパク質、又は項目３１に規定される医薬組成物。
項目３３． ＶＥＧＦの発現の調節異常に起因する疾患の治療又は予防に使用される、項目１８～２９のいずれか１つに規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は項目３０に規定される融合タンパク質、又は項目３１に規定される医薬組成物。
項目３４． ＶＥＧＦの発現レベルに基づく血管新生の調節異常に関連する疾患の治療又は予防に使用される、項目１８～２９のいずれか１つに規定されるペプチド若しくはその医薬塩、又は項目３０に規定される融合タンパク質、又は項目３１に規定される医薬組成物。

【図1】

【図2】

【配列表】

2024503597000001.app

【国際調査報告】