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特表2024-503857保護されたＨＤＡＣ（ヒストン脱アセチル化酵素）阻害剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-29
(54)【発明の名称】保護されたＨＤＡＣ（ヒストン脱アセチル化酵素）阻害剤
(51)【国際特許分類】
C07D 307/54 20060101AFI20240122BHJP
C07D 417/06 20060101ALI20240122BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20240122BHJP
C07D 333/24 20060101ALI20240122BHJP
A61K 31/381 20060101ALI20240122BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240122BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240122BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240122BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20240122BHJP
A61K 41/00 20200101ALI20240122BHJP
【ＦＩ】
C07D307/54
C07D417/06 CSP
A61K31/496
C07D333/24
A61K31/381
A61P35/00
A61P25/00
A61P29/00
A61P25/28
A61K41/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023542741
(86)(22)【出願日】2022-01-20
(85)【翻訳文提出日】2023-09-11
(86)【国際出願番号】 GB2022050157
(87)【国際公開番号】W WO2022157499
(87)【国際公開日】2022-07-28
(31)【優先権主張番号】2100778.6
(32)【優先日】2021-01-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(31)【優先権主張番号】2100776.0
(32)【優先日】2021-01-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
２．ＴＷＥＥＮ
３．Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ
(71)【出願人】
【識別番号】522017173
【氏名又は名称】ライトックス リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＬＩＧＨＴＯＸ ＬＩＭＩＴＥＤ
(74)【代理人】
【識別番号】100147485
【弁理士】
【氏名又は名称】杉村 憲司
(74)【代理人】
【識別番号】230118913
【弁護士】
【氏名又は名称】杉村 光嗣
(74)【代理人】
【識別番号】100179866
【弁理士】
【氏名又は名称】加藤 正樹
(72)【発明者】
【氏名】アンドリュー ホワイティング
(72)【発明者】
【氏名】デイヴィッド チザム
(72)【発明者】
【氏名】アルバ プジョル
【テーマコード（参考）】
4C063
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C063AA01
4C063BB03
4C063CC62
4C063DD12
4C063EE01
4C084AA11
4C084NA05
4C084ZA01
4C084ZA15
4C084ZB11
4C084ZB26
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BB02
4C086BC50
4C086BC82
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZA01
4C086ZA15
4C086ZB11
4C086ZB26
(57)【要約】
本発明は、式Ｉの保護されたＨＤＡＣ阻害剤化合物に関し、Ｙ、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ、Ｒ１およびＲ２は本明細書で定義される通りである。態様では、本発明は、その化合物の使用およびその化合物を脱保護する方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉの化合物。【化1】
（式中、
Ｒ１は、Ｈまたは炭素数１～１０のアルキル基であり；
Ｒ２は、Ｐ－Ｚであり、Ｐは、炭素数１～１５のアルキル基であり、任意に１つ以上のＮ原子、－Ｃ＝Ｏおよび－ＮＨＣ＝Ｏで置換されており；
Ｚは、以下のとおりであり、
【化2】
式中、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ９アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｐｈ、－Ｃ６Ｈ４ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２ＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２または－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２であり；
または
Ｒ１およびＲ２は、５員または６員を有し、Ｐ－Ｚで置換されている複素環基Ｙの一部を形成し、Ｐは、上で定義したとおりであり、Ｚは、上で定義したとおりであり；
Ａｒ１およびＡｒ２は、それぞれ独立して、フェニル、ピリジン、ピリミジン、チオフェン、フラン、ベンゾフランまたはチアゾール基から選択され；
Ｘは、－Ｃ＝Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は、任意に１つ以上のＯ原子で置換されている、炭素数１～１０のアルキル基である。）
【請求項2】
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ３アルキルである、請求項１に記載の式Ｉの化合物。
【請求項3】
Ｒ３が、－ＣＨ３である、請求項２に記載の式Ｉの化合物。
【請求項4】
Ａｒ１が、チアゾールまたはフェニルである、いずれかの先行請求項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項5】
Ａｒ２が、ピリジン、チオフェンまたはフランである、いずれかの先行請求項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項6】
Ｒ１およびＲ２が複素環基Ｙの一部を形成し、任意に、Ｙがピペラジンである、いずれかの先行請求項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項7】
Ｐが、－Ｃ（＝Ｏ）で置換されたＣ１～Ｃ１５アルキル基である、請求項６に記載の式Ｉの化合物。
【請求項8】
－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）６、請求項７に記載の式Ｉの化合物。
【請求項9】
Ｒ４が、アルキル基である、いずれかの先行請求項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項10】
Ｒ４が、－ＣＨ３、－Ｃ（ＣＨ３）３または－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項９に記載の式Ｉの化合物。
【請求項11】
Ｒ１が、Ｃ１～Ｃ３アルキルであり、任意にＲ１が－ＣＨ３である、請求項１～５のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項12】
Ｒ２が、Ｐ－Ｚであり、Ｐが－ＮＨＣ（＝Ｏ）で置換されたＣ１～Ｃ１５アルキルである、請求項１～５のいずれかまたは請求項１１に記載の式Ｉの化合物。
【請求項13】
Ｐが、－（ＣＨ２）５ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）６である、請求項１２に記載の式Ｉの化合物。
【請求項14】
Ｒ４が、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ３であり、式中、ｎが、１～８の整数であり、任意に、Ｒ４が、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ３である、請求項１～５または１１～１３のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項15】
前記化合物が、以下の化合物９２、化合物９３、化合物１０１および化合物１０２から選択される、いずれかの先行請求項に記載の式Ｉの化合物。【化3-1】
【化3-2】
【請求項16】
光線力学的療法における、いずれかの先行請求項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項17】
請求項１～１５のいずれかに記載の式Ｉの化合物を、任意に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と組み合わせて含む、医薬組成物。
【請求項18】
式Ｉの化合物を脱保護する方法であって、前記式Ｉの化合物を酵素と接触させることを含む、式Ｉの化合物を脱保護する方法。
【請求項19】
前記酵素が、内因性酵素である、請求項１８に記載の式Ｉの化合物を脱保護する方法。
【請求項20】
式Ｉの化合物を脱保護する方法であって、溶媒の存在下で式Ｉの化合物を塩基と反応させることを含む、式Ｉの化合物を脱保護する方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
ヒストンのアセチル化／脱アセチル化は、真核細胞の転写制御において重要な役割を果たす。ヒストンおよび非ヒストンタンパク質のアセチル化状態は、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）およびヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）によって決定される。ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）は、ヒストンおよび非ヒストンタンパク質のリジン基のε－アミノ部分からアセチル基を除去する酵素のファミリーに属する。ＨＤＡＣ阻害剤（ＨＤＡＣｉ）は、ＨＤＡＣ酵素の活性を阻害する。ＨＤＡＣの生物学的重要性により、その阻害は臨床的に重要な意味を持ち、ＨＤＡＣ阻害はとりわけ、癌、神経変性疾患、炎症性疾患、および神経障害の治療における重要な治療戦略として浮上している。
【0002】
ＨＤＡＣ酵素は、酵母ヒストン脱アセチル化酵素に対するアクセサリードメインの相同性に基づいて分類されており、現在４つの主要なグループに分類されている。
・クラスＩ ＨＤＡＣ１、－２、－３、および－８を含むクラスＩは、酵母ＲＰＤ３脱アセチル化酵素に関連している；
・クラスＩＩＡ ＨＤＡＣ４、－５、－７、および－９が含まれ；クラスＩＩＢ－６および－１０は、酵母Ｈｄａ１（ヒストン脱アセチル化酵素１）遺伝子に関連している；
・クラスＩＩＩ（サーチュインとしても知られる）は、Ｓｉｒ２遺伝子に関連しており、ＳＩＲＴ１～７が含まれる；
・クラスＩＶ ＨＤＡＣ１１のみを含むクラスＩＶには、クラスＩとクラスＩＩの両方の機能を有する。
・クラスＩ ＨＤＡＣ１、－２、－３、および－８を含むクラスＩは、酵母ＲＰＤ３脱アセチル化酵素に関連している；
・クラスＩＩＡ ＨＤＡＣ４、－５、－７、および－９が含まれ；クラスＩＩＢ－６および－１０は、酵母Ｈｄａ１（ヒストン脱アセチル化酵素１）遺伝子に関連している；
・クラスＩＩＩ（サーチュインとしても知られる）は、Ｓｉｒ２遺伝子に関連しており、ＳＩＲＴ１～７が含まれる；
・クラスＩＶ ＨＤＡＣ１１のみを含むクラスＩＶには、クラスＩとクラスＩＩの両方の機能を有する。
【0003】
典型的なＨＤＡＣ阻害剤は、ＨＤＡＣの亜鉛含有触媒ドメインに結合することにより、クラスＩ、ＩＩ、およびＩＶのＨＤＡＣにのみ作用する。これらのＨＤＡＣ阻害剤は、亜鉛イオンに結合する化学部位に基づいてさらに分類できる（チオール基で亜鉛イオンに結合する環状テトラペプチドを除く）。例えば、トリコスタチンＡなどのヒドロキサム酸（またはヒドロキサム酸塩）；環状テトラペプチド（トラポキシンＢなど）およびデプシペプチド；ベンズアミド；求電子性ケトン、フェニル酪酸およびバルプロ酸などの脂肪酸化合物が挙げられる。
【0004】
ヒドロキサム酸は、ＨＤＡＣ阻害剤の最大のクラスを構成する。
【0005】
ヒドロキサム酸系のＨＤＡＣ阻害剤の例としては、ボリノスタット（スベロイルアニリドヒドロキサム酸、ＳＡＨＡ）、ベリノスタット、パノビノスタット、ジビノスタット、プラシノスタット、キシノスタットおよびアベキシノスタットが挙げられる。
【0006】
ＨＤＡＣ阻害剤は重要な治療的役割を果たすが、ヒドロキサム酸などのＨＤＡＣ阻害剤の不安定性は、保存安定性、溶解性、製剤および製造などの点で困難を生じる。
【0007】
本発明の一つの目的は、これらの課題の１つ以上に対処または軽減することである。本発明の一つの目的は、保護されたＨＤＡＣ阻害剤、特に保護されたヒドロキサム酸を提供することである。本発明の一つの目的は、改善された安定性を示し得る保護されたＨＤＡＣ阻害剤を提供することである。本発明の一つの目的は、改善された溶解性を示し得る保護されたＨＤＡＣ阻害剤を提供することである。本発明の実施形態は、ヒドロキサム酸系のＨＤＡＣ阻害剤などのＨＤＡＣ阻害剤を保護および／または脱保護する方法に関する。実施形態において、脱保護ステップは、細胞および組織内でｉｎ ｓｉｔｕで、すなわち内因性酵素によって実行され得る。
【発明の概要】
【0008】
本発明は、保護基としてのエステルの使用に関する。本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤の保護基としてのエステルの使用に関する。このプロセスでは、ＨＤＡＣ阻害剤のヒドロキサム基などの官能基がエステルとして保護される。次いで、そのエステルは、酵素の存在下で除去することができる。酵素は、内因性酵素であってもよい。エステルを除去すると、官能基が脱保護される。この脱保護はｉｎ ｓｉｔｕで起こる可能性があり、つまり、酵素は内因性酵素であり得、ＨＤＡＣ阻害剤が細胞に入ると脱保護が起こり得る。細胞は哺乳類細胞であってもよい。実施形態では、脱保護は、ＨＤＡＣ阻害剤が標的細胞に侵入するときに、保護エステル基に対する内因性酵素の作用を経て起こる。これにより、ｉｎ ｓｉｔｕでのＨＤＡＣ阻害の「きれいな」活性化になり得る。
【0009】
したがって、本発明は、保護されたＨＤＡＣ阻害剤を包含する。保護されたＨＤＡＣ阻害剤は、エステル基によって保護され得る。これはプロドラッグとして機能し得る。それは、ｉｎ ｓｉｔｕで脱保護可能なＨＤＡＣ阻害剤として機能し得る。この実施形態では、保護されたＨＤＡＣ阻害剤は、投与後にその活性形態に代謝される。これは、保存、製剤および製造などの点で大きな利点を有する。本明細書で使用する場合、用語「プロドラッグ」は、不活性形態で投与され、化学的、生化学的または生理学的プロセスを経て生体内でその活性形態に変換される化合物を意味する。
【0010】
有利には、エステルは、酵素による除去を通じて標的組織においてのみＨＤＡＣ阻害の活性化を可能にするように選択することができる。すなわち、酵素による除去が対象の身体の細胞、組織または領域においてのみ、すなわち、相補的な酵素を含む身体の細胞、組織または領域において起こるように保護基を選択することができる。当業者には理解されるように、保護基をさらに調整して、半減期、溶解性、標的化などの特性を調整して標的組織の特性に合わせることができる。
【0011】
適切な保護基としては、これらに限定されないが、アセテート（Ｃ１～Ｃ９）エステル、ヒドロキシアセテート（Ｃ１～Ｃ９）エステル、メトキシアセテート（Ｃ１～Ｃ９）エステル、フェニルアセテート、プロピオネート、ブチレート、サリチレート、ピルベート、ラクテートエステル、シトレートエステル、ＰＥＧエステル、グリセロールエステル、ペプチドエステル、例えば、モノ－、ジ－およびトリグリシンエステル、ホスフェートエステル、スルホネートエステル、カーボネート、例えば、テトラエチレングリコール、Ｏ－グリコシルエーテル、Ｏ－グリコシルエステルが挙げられる。
【0012】
一実施形態では、保護基は、アセテート（Ｃ１～Ｃ９）エステルである。一実施形態では、保護基は、アセテートＣ１エステルである。
【0013】
脱保護に適した酵素としては、これらに限定されないが、リパーゼ、ラクターゼ、エステラーゼ、アミラーゼ、シトクロムＰ４５０、グリコシダーゼ、例えば、β－グルクロニダーゼ、スクラーゼおよびヒアルロニダーゼ、ペプチダーゼ、ホスファターゼ、スルファターゼが挙げられる。
【0014】
一実施形態では、酵素は、リパーゼまたはラクターゼである。
【0015】
一実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は光活性ＨＤＡＣ阻害剤であり、本発明はこれに限定されず、本発明がより広範にＨＤＡＣ阻害剤およびＨＤＡＣ阻害薬に適用可能であることが理解されるであろう。
【0016】
一実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は、光活性ＨＤＡＣ阻害剤である。「光活性ＨＤＡＣ阻害剤」とは、二重の細胞調節活性、すなわち、生化学的影響および／または標的化などのＨＤＡＣ阻害活性と並行して、光活性化細胞殺傷を有するＨＤＡＣ阻害剤を意味する。
【0017】
このような化合物の例示的な形態を以下に示す。
【化1】
【0018】
このようなＨＤＡＣ阻害剤の例は、本明細書に開示される化合物である。本発明者らは、そのような光活性ＨＤＡＣ阻害剤が本発明に従って保護されると、細胞殺傷機能が維持されることを実証した。脱保護が行われる間、生物活性が遅れることが観察されている。
【0019】
本発明の一態様では、式Ｉの化合物が提供される。
式中、
Ｒ１は、Ｈまたは炭素数１～１０のアルキル基であり；
Ｒ２は、Ｐ－Ｚであり、Ｐは炭素数１～１５のアルキル基であり、任意に１つ以上のＮ原子、－Ｃ＝Ｏおよび－ＮＨＣ＝Ｏで置換されており；
Ｚは、以下のとおりであり、
式中、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ９アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｐｈ、－Ｃ６Ｈ４ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２ＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨ２、ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２または－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２であり；
または
Ｒ１およびＲ２は、５員または６員を有し、Ｐ－Ｚで置換されている複素環基Ｙの一部を形成し、Ｐは、上で定義したとおりであり、Ｚは、上で定義したとおりであり；
Ａｒ１およびＡｒ２は、それぞれ独立して、フェニル、ピリジン、ピリミジン、チオフェン、フラン、ベンゾフランまたはチアゾール基から選択され；
Ｘは、－Ｃ＝Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は、任意に１つ以上のＯ原子で置換されていてもよい、炭素数１～１０のアルキル基である。
【化2】
式中、
Ｒ１は、Ｈまたは炭素数１～１０のアルキル基であり；
Ｒ２は、Ｐ－Ｚであり、Ｐは炭素数１～１５のアルキル基であり、任意に１つ以上のＮ原子、－Ｃ＝Ｏおよび－ＮＨＣ＝Ｏで置換されており；
Ｚは、以下のとおりであり、
【化3】
式中、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ９アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｐｈ、－Ｃ６Ｈ４ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２ＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨ２、ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２または－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２であり；
または
Ｒ１およびＲ２は、５員または６員を有し、Ｐ－Ｚで置換されている複素環基Ｙの一部を形成し、Ｐは、上で定義したとおりであり、Ｚは、上で定義したとおりであり；
Ａｒ１およびＡｒ２は、それぞれ独立して、フェニル、ピリジン、ピリミジン、チオフェン、フラン、ベンゾフランまたはチアゾール基から選択され；
Ｘは、－Ｃ＝Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は、任意に１つ以上のＯ原子で置換されていてもよい、炭素数１～１０のアルキル基である。
【0020】
本発明の化合物は、上記の式Ｉに示される一般構造を有する。
【0021】
５員または６員を有する複素環基という用語は、５環員または６環員を含み、式Ｉ窒素原子に加えて、Ｎ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、Ｏ２およびＯからなる群より選択される１つ以上のヘテロ原子を任意に含む、単環式環基を意味する。用語「複素環基」は、芳香族、部分的に不飽和および飽和の環系を含む。非芳香族基の例としては、これらに限定されないが、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジオキシドチオモルホリニル、ピロリジン－１－イルおよびピロリジン－３－イル基が挙げられる。芳香族（ヘテロアリール）基の例としては、これらに限定されないが、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、インドリルおよびベンゾチアジアゾリル基が挙げられる。一実施形態では、複素環基は、飽和環系である。式Ｉによれば、環系は、Ｐ－Ｚで置換されている。一実施形態では、Ｐ－Ｚは、式Ｉ窒素原子に対して４位にある。
【0022】
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」は、完全飽和、分岐、非分岐、または環状炭化水素部分、すなわち、第一級、第二級または第三級アルキル、または適切な場合には、シクロアルキルもしくはシクロアルキルで置換されたアルキルを指す。別段の記載がない限り、アルキル基は、１～１０個の炭素原子、好ましくは１～６個の炭素原子、より好ましくは１～４個の炭素原子を含む。代表的なアルキル基としては、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、３－メチルヘキシル；２，２－ジメチルペンチル；２，３－ジメチルペンチル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシルが挙げられる。
【0023】
一実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。
【0024】
一実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ３アルキルである。一実施形態では、Ｒ３は、－ＣＨ３である。
【0025】
一実施形態では、Ａｒ１は、チアゾールまたはフェニル基である。
【0026】
一実施形態では、Ａｒ２は、ピリジン、チオフェンまたはフラン基である。
【0027】
一実施形態では、Ａｒ１は、チアゾールまたはフェニル基から選択され、Ａｒ２は、ピリジン、チオフェンまたはフラン基から選択される。
【0028】
一実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、複素環基Ｙの一部を形成する。複素環基Ｙは、Ｐ－Ｚで置換されており、Ｐは、炭素数１～１５のアルキル基であり、任意に、１つ以上のＮ原子、－Ｃ＝Ｏおよび－ＮＨＣ＝Ｏで置換されており；
Ｚは、以下のとおりであり、
式中、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ９アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｐｈ、－Ｃ６Ｈ４ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２ＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２または－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２である。
Ｚは、以下のとおりであり、
【化4】
式中、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ９アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｐｈ、－Ｃ６Ｈ４ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２ＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２または－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２である。
【0029】
一実施形態では、置換基Ｐ－Ｚは、式Ｉ窒素原子に対して４位にある。
【0030】
Ｒ１およびＲ２が複素環基Ｙの一部を形成する実施形態では、Ｙは、ピペラジンである。
【0031】
Ｙは、以下のものでもよい。
【化5】
【0032】
Ｙがピペラジンである場合、Ｐは、－Ｃ（＝Ｏ）で置換されたＣ１～Ｃ１５アルキル基であってもよい。一実施形態では、Ｐは、－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）６である。
【0033】
式Ｉにおいて、Ｘは、－Ｃ＝Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は、任意に１つ以上のＯ原子で置換されている、１～１０個の炭素原子を含むアルキル基である。
【0034】
一実施形態では、Ｒ４は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基である。
【0035】
一実施形態では、Ｒ４は、－ＣＨ３、－Ｃ（ＣＨ３）３または－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である。
【0036】
任意に、Ｒ１およびＲ２は、複素環基Ｙを形成しない。この実施形態では、Ｒ１は、Ｈまたは炭素数１～１０のアルキル基であり；Ｒ２は、Ｐ－Ｚであり、Ｐは、任意に１つ以上のＮ原子、－Ｃ＝Ｏおよび－ＮＨＣ＝Ｏで置換されている、１～１５個の炭素原子を含むアルキル基であり；
Ｚは、以下のとおりであり、
式中、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ９アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｐｈ、－Ｃ６Ｈ４ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２ＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２または－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２である。この実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ３アルキルであってもよい。一実施形態では、Ｒ１は、－ＣＨ３である。
Ｚは、以下のとおりであり、
【化6】
式中、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ９アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｐｈ、－Ｃ６Ｈ４ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２ＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２または－ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２である。この実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ３アルキルであってもよい。一実施形態では、Ｒ１は、－ＣＨ３である。
【0037】
Ｒ２がＰ－Ｚである場合、Ｐは、－ＮＨＣ（＝Ｏ）で置換されたＣ１～Ｃ１５アルキルであってもよい。
【0038】
一実施形態では、Ｐは、－（ＣＨ２）５ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）６である。
【0039】
一実施形態では、Ｒ４は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ３であり、ｎは、１～８の整数である。一実施形態では、Ｒ４は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ３である。
【0040】
一実施形態では、Ｒ４は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ３であり、ｎは、１～８の整数であり、好ましくはＲ４は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ３であり、Ｒ１およびＲ２は、複素環基を形成しない。
【0041】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、化合物９２、９３、１０１および１０２から選択される。
【化7-1】
【化7-2】
【0042】
本発明による化合物は、本質的に蛍光性である。本発明によれば、化合物は、蛍光イメージングに使用することができる。
【0043】
一態様では、本発明は、式Ｉの化合物が光により活性化された場合の活性酸素種（ＲＯＳ）の生成における式Ｉの化合物の使用に関する。
【0044】
三重項状態光増感剤（ＰＳ）は、単一状態の電子が非放射的に三重項状態に移行する、集光と項間交差の二重機能を担う集光領域を通常、備えている。三重項励起状態が消失すると、活性酸素種（ＲＯＳ）の形成、基底状態の分子酸素からのラジカルまたは周囲の分子との直接的な化学反応をもたらし得る。局所的なＲＯＳ産生は、病原体の攻撃に応答して動物系と植物系の両方で採用される免疫防御戦略である。動物、植物、真菌および細菌の細胞内では、ＲＯＳは、その産生の速度と程度に応じてさまざまな調節効果を引き起こし；高濃度ではアポトーシスが観察されるが、低濃度では刺激応答がしばしば観察される（Ｇｕｏら、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｖ．２０１０，１９，１３２１－１３３１）。
【0045】
光線力学的療法（ＰＤＴ）は、光増感剤がＲＯＳを生成する能力を利用し、通常はアポトーシスによってがん細胞、病原性微生物および／または不要な組織を破壊する。通常、光増感化合物は、特定の標的組織または状態（例えば、微生物感染、新形成、腫瘍など）の近くまたは内部で励起され、大量のＲＯＳの生成とその後のその組織の破壊を引き起こす。低いＲＯＳレベルでは、細胞増殖が引き起こされ、創傷治癒またはより一般的な組織再生療法への応用につながる。
【0046】
したがって、ＰＤＴは、感光性化合物を標的にして患部組織の細胞などの所望の場所に蓄積し、局所的に光を送達してＲＯＳ生成を活性化することに依存している。ＰＤＴに使用する化合物は公知であるが、それらは多くの場合、小さな吸収ピーク、これは特に、光の透過が難しい大きな腫瘍の場合、光活性化が困難になり；治療後の長期間の皮膚の光過敏症につながる、長い生物学的半減期；水溶解度が低いなどの低い薬理学的特性；および低い標的化能力（すなわち、重大なオフターゲット損傷を引き起こす、特定の組織または細胞を標的にして蓄積する能力の低さ）を含む様々な欠点がある。
【0047】
有利には、本発明の化合物は、非活性状態では生物学的に不活性であるが、低～中エネルギーの短波長可視光で照射されるとＲＯＳを生成する。
【0048】
したがって、式Ｉの化合物を使用して、活性酸素種（ＲＯＳ）を生成し、それによって細胞の発達を制御する、すなわち、細胞の増殖、分化およびアポトーシスを制御することができ、様々な治療的および非治療的用途につながる。式Ｉの化合物は、それらが効率的なターゲティングを示し、オフターゲット効果を少なくすることができるため、ＲＯＳの制御によって影響される用途での使用に特に有利である。また、それらは異なる細胞タイプに合わせて調整することもできるため、選択的なターゲティング効果を実現できる。
【0049】
したがって、いくつかの態様では、本発明は、光線力学的療法（ＰＤＴ）における本発明の化合物またはコンジュゲートの使用に関する。
【0050】
ＲＯＳの生成は、治療上の必要性、例えば、細胞の切除のためにアポトーシスを誘導するため、創傷治癒において増殖を引き起こすため、またはこれらの組み合わせ、に基づいて制御できる。例えば、創傷ケアでは、最初に高レベルのＲＯＳが誘発され、細菌および／または真菌細胞のアポトーシスにつながり、その後、皮膚の再生を助けるために低レベルのＲＯＳが引き起こされ得る。
【0051】
したがって、本発明は、ＨＤＡＣ阻害から恩恵を受ける疾患または症状を有する患者の治療方法に関し、その方法は、治療有効量の式Ｉの化合物またはそのコンジュゲートを患者に投与することを含み、式Ｉの化合物が、生体内で活性形態に代謝される。
【0052】
一態様では、本発明は、任意に１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と組み合わせた、式Ｉの化合物を含む医薬組成物に関する。
【0053】
有利には、式Ｉの化合物はエステルとして保護され、これによって化合物に安定性が与えられる。保護された化合物はより簡単に保存される。保護された化合物は改善された溶解性を示し得る。化合物の活性化は、保護基の除去を含む。
【0054】
本発明の一態様は、式Ｉの化合物を脱保護する方法に関し、その方法は、式Ｉの化合物を酵素と接触させることを含む。
【0055】
酵素は内因性酵素であってもよい。脱保護に適した酵素としては、これらに限定されないが、リパーゼ、ラクターゼ、エステラーゼ、アミラーゼ、シトクロムＰ４５０、グリコシダーゼ、例えば、β－グルクロニダーゼ、スクラーゼおよびヒアルロニダーゼ、ペプチダーゼ、ホスファターゼ、スルファターゼが挙げられる。
【0056】
一実施形態では、酵素は、リパーゼまたはラクターゼである。
【0057】
有利には、エステル保護基は、酵素による除去によって標的組織においてのみＨＤＡＣ阻害の活性化を可能にするように選択することができ、すなわち、酵素による除去が対象の身体のそれらの細胞、組織または領域、すなわち、相補的な酵素を含む体の細胞、組織、または領域においてのみ起こるように保護基を選択することができる。当業者に理解されるように、保護基をさらに調整して、半減期、溶解性、標的化などの特性を調整して標的組織の特性に合わせることができる。
【0058】
適切な保護基としては、これらに限定されないが、アセテート（Ｃ１～Ｃ９）エステル、ヒドロキシアセテート（Ｃ１～Ｃ９）エステル、メトキシアセテート（Ｃ１～Ｃ９）エステル、フェニルアセテート、プロピオネート、ブチレート、サリチレート、ピルベート、ラクテートエステル、シトレートエステル、ＰＥＧエステル、グリセロールエステル、ペプチドエステル、例えば、モノ－、ジ－およびトリグリシンエステル、ホスフェートエステル、スルホネートエステル、カーボネート、例えば、テトラエチレングリコール、Ｏ－グリコシルエーテル、Ｏ－グリコシルエステルが挙げられる。
【0059】
一実施形態では、保護基は、アセテート（Ｃ１～Ｃ９）エステルである。エステル保護基がＣ１アセテートエステルである場合、式Ｉの化合物のＲ３は、－ＣＨ３である。
【0060】
本発明の一態様によれば、式Ｉの化合物を脱保護する方法が提供され、その方法は、溶媒の存在下で式Ｉの化合物を塩基と反応させることを含む。
【0061】
本発明の方法で使用するのに適した塩基としては、ＮａＯＨ、ＬｉＯＨ、ＫＯＨ、Ｌｉ２ＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、Ｃｓ２ＣＯ３、ＬｉＯＭｅ、ＮａＯＭｅ、ＫＯＭｅ、ＬｉＯＥｔ、ＮａＯＥｔ、ＫＯＥｔ、ＬｉＯｔＢｕおよびＫＯｔＢｕが挙げられる。
【0062】
溶媒は、極性溶媒であってもよい。適切な溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ｎ－アルコール、イソプロパノール、イソブタノール、ｓｅｃ－ブタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、水、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミドおよびジメチルスルホキシドが挙げられる。
【0063】
方法は、５℃～１００℃または１５℃～３０℃で実施することができる。有利には、この方法は室温で実施できる。
【0064】
反応は、３０分間～４８時間行うことができる。一実施形態では、反応は、１時間～１２時間または２時間～７時間行われる。
【0065】
反応が起こったら、当業者に公知の技術を使用して反応混合物を後処理することができる。例えば、反応混合物を希釈し、その合わせた有機物を洗浄し、乾燥させ、蒸発させて、脱保護された化合物を粗固体として得ることができる。
【0066】
したがって、本発明は、保護されたＨＤＡＣ阻害剤に関し、その例としては、以下の化合物が挙げられる。
【化8-1】
【化8-2】
【0067】
一実施形態では、保護されたＨＤＡＣ阻害剤は、化合物９２、化合物９３、化合物１０１または化合物１０２である。
【0068】
一実施形態では、保護されたＨＤＡＣ阻害剤は、化合物９２、化合物９３または化合物１０１である。
【0069】
対照化合物として有用な関連化合物としては、以下の化合物１２、１３および１４が挙げられる。
【化9】
【0070】
本発明の一態様は、式Ｉの化合物を脱保護する方法に関し、この方法は、溶媒の存在下で式Ｉの化合物を塩基と反応させることを含む。この方法は、任意に、精製ステップを含む。
【0071】
本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤をエステルとして保護し、エステラーゼでそのエステルを除去してＨＤＡＣ阻害を活性化する方法に関する。エステラーゼは、内因性エステラーゼであってもよい。エステラーゼによるエステルの除去は、生体内で実施することができる。
【0072】
本発明は、ＨＤＡＣ阻害によって媒介される障害または状態の治療方法に関し、その方法は、本明細書に記載の保護されたＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含み、ＨＤＡＣ阻害剤は、その後、ｉｎ ｓｉｔｕで脱保護される。
【0073】
式Ｉの化合物は、脱保護された対応物（図１）と比較して、増大した溶解性、向上した化学安定性および保存安定性ならびに製造の容易性を有利に示すことができる。
【0074】
次に、添付の図面を参照して、本発明を単なる例として説明する。
【図面の簡単な説明】
【0075】
【実施例】
【0076】
一般的な方法論：
すべての光照射は、４０５ｎｍで２９ｍＷ／ｃｍ２の出力で５分間発光する改良型ＰｈｏｔｏＲｅａｃｔ ３６５（商標）を使用して実行した。すべての画像分析は、ＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して実行し、すべてのグラフは、Ｐｒｉｓｍを使用して作成した。
すべての光照射は、４０５ｎｍで２９ｍＷ／ｃｍ２の出力で５分間発光する改良型ＰｈｏｔｏＲｅａｃｔ ３６５（商標）を使用して実行した。すべての画像分析は、ＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して実行し、すべてのグラフは、Ｐｒｉｓｍを使用して作成した。
【0077】
細胞生存率アッセイ：
不透明壁の９６ウェルプレートに、ウェルあたり２０，０００個のＳＣＣ－４細胞を播種した。翌日、その「光」処理したプレートを照射する前に、プレートを対象の化合物で一定範囲の濃度（１００ｐＭ～１μＭ）で１時間処理した。翌日、プレートを次のいずれかで処理した。
・ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）および二酢酸フルオレセイン（ＦＤＡ）で１０分間、、その後ＰＢＳで洗浄した後、ＰＩについては５３５／６１７ｎｍ、ＦＤＡについては４８５／５２０ｎｍで蛍光を測定した。
・１２ｍＭ ＭＴＴ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド）溶液で２時間処理した後、オービタルシェーカーでＤＭＳＯに溶解し、５４０ｎｍでの吸光度を測定する。
・ＸＴＴ（２，３－ビス－（２－メトキシ－４－ニトロ－５－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム－５－カルボキサニリド）標識試薬および電子カップリング試薬で４時間処理した後、ＰＢＳで洗浄し、６５０ｎｍで吸光度を測定。
・ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（商標）試薬をオービタルシェーカー上で１０分間細胞を溶解した後、発光を測定。
不透明壁の９６ウェルプレートに、ウェルあたり２０，０００個のＳＣＣ－４細胞を播種した。翌日、その「光」処理したプレートを照射する前に、プレートを対象の化合物で一定範囲の濃度（１００ｐＭ～１μＭ）で１時間処理した。翌日、プレートを次のいずれかで処理した。
・ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）および二酢酸フルオレセイン（ＦＤＡ）で１０分間、、その後ＰＢＳで洗浄した後、ＰＩについては５３５／６１７ｎｍ、ＦＤＡについては４８５／５２０ｎｍで蛍光を測定した。
・１２ｍＭ ＭＴＴ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド）溶液で２時間処理した後、オービタルシェーカーでＤＭＳＯに溶解し、５４０ｎｍでの吸光度を測定する。
・ＸＴＴ（２，３－ビス－（２－メトキシ－４－ニトロ－５－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム－５－カルボキサニリド）標識試薬および電子カップリング試薬で４時間処理した後、ＰＢＳで洗浄し、６５０ｎｍで吸光度を測定。
・ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（商標）試薬をオービタルシェーカー上で１０分間細胞を溶解した後、発光を測定。
【0078】
顕微鏡検査の手順：
【0079】
共局在化
ＳＣＣ－４細胞を８ウェルチャンバースライドにウェルあたり５０，０００細胞で播種し、翌日、１μＭの対象化合物で１時間処理した後、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定またはＬｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｉｍａｇｉｎｇ溶液への培地交換した。共染色（例えば、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ、Ｂｏｄｉｐｙ ＥＲ Ｔｒａｃｋｅｒ、ＬｉｐｉｄＳｐｏｔ ６１０）を３０分間適用した後、Ｚｅｉｓｓ ＬＳＣＭ ８８０でイメージングした。
ＳＣＣ－４細胞を８ウェルチャンバースライドにウェルあたり５０，０００細胞で播種し、翌日、１μＭの対象化合物で１時間処理した後、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定またはＬｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｉｍａｇｉｎｇ溶液への培地交換した。共染色（例えば、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ、Ｂｏｄｉｐｙ ＥＲ Ｔｒａｃｋｅｒ、ＬｉｐｉｄＳｐｏｔ ６１０）を３０分間適用した後、Ｚｅｉｓｓ ＬＳＣＭ ８８０でイメージングした。
【0080】
免疫蛍光
ＨａＣａＴ細胞またはＳＣＣ－４細胞を、６ウェルプレートを含む滅菌カバースリップにウェルあたり５０，０００細胞で播種した。翌日、細胞を対象の化合物で３０分間処理した後、「光」処理した細胞に照射した。翌日、４％ＰＦＡを使用して細胞を固定し、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００／Ｔｗｅｅｎ ２０を使用して透過処理し、ＢＳＡ／ヤギ血清（抗体に応じて）でブロックし、一次抗体、次に二次抗体で染色した後、カバーガラスをスライドにマウントしてＺｅｉｓｓ ＬＳＣＭ ８８０でイメージングした。
ＨａＣａＴ細胞またはＳＣＣ－４細胞を、６ウェルプレートを含む滅菌カバースリップにウェルあたり５０，０００細胞で播種した。翌日、細胞を対象の化合物で３０分間処理した後、「光」処理した細胞に照射した。翌日、４％ＰＦＡを使用して細胞を固定し、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００／Ｔｗｅｅｎ ２０を使用して透過処理し、ＢＳＡ／ヤギ血清（抗体に応じて）でブロックし、一次抗体、次に二次抗体で染色した後、カバーガラスをスライドにマウントしてＺｅｉｓｓ ＬＳＣＭ ８８０でイメージングした。
【0081】
免疫沈降
ＳＣＣ－４細胞を６ウェルプレートのウェルあたり３５０，０００細胞で播種し、翌日、細胞を対象の化合物で処理した。必要なインキュベーションの後、「光」処理した細胞に照射し、ＲＩＰＡ バッファーを使用してすべての細胞を溶解した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを実行し、タンパク質をニトロセルロース／ＰＶＤＦ膜に転写した後、ブロッキングおよび一次抗体染色、次に二次抗体染色を行った。化学発光シグナルは、ｉＢｒｉｇｈｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを使用してイメージングした。
ＳＣＣ－４細胞を６ウェルプレートのウェルあたり３５０，０００細胞で播種し、翌日、細胞を対象の化合物で処理した。必要なインキュベーションの後、「光」処理した細胞に照射し、ＲＩＰＡ バッファーを使用してすべての細胞を溶解した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを実行し、タンパク質をニトロセルロース／ＰＶＤＦ膜に転写した後、ブロッキングおよび一次抗体染色、次に二次抗体染色を行った。化学発光シグナルは、ｉＢｒｉｇｈｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを使用してイメージングした。
【0082】
例１：アセテート保護されたヒドロキサム酸８８の合成
例示的なアセテート保護ヒドロキサム酸８８の合成を図２に示し、以下の例１．１～１．４でさらに説明する。
例示的なアセテート保護ヒドロキサム酸８８の合成を図２に示し、以下の例１．１～１．４でさらに説明する。
【0083】
例１．１
１－ｔｅｒｔ－ブチル ８－オクタン二酸メチル８５の合成
化合物４７（３３．０ｇ、１７５ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ－ブタノール（２５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、その後、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート（５７．３ｇ、２６２．５ｍｍｏｌ）および４－ジメチルアミノピリジン（６．４ｇ、５２．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を室温で２時間急速に撹拌した。その溶液を５％ＨＣｌで希釈し、ジクロロメタン（ＤＣＭ）で抽出した（３回）。その有機物を飽和ＮＨ４ＣｌおよびＨ２Ｏで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて粗赤色油（５８．９ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ））、９：１）で精製して、化合物８５を無色の油状物として得た（２９．０６ｇ、６８％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.28 - 1.35 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.54 - 1.65 (m, 4H), 2.19 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.29 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.65 (s, 3H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 24.7, 24.9, 28.1, 28.7, 28.8, 34.0, 35.5, 51.4, 79.9, 173.1, 174.2.
１－ｔｅｒｔ－ブチル ８－オクタン二酸メチル８５の合成
化合物４７（３３．０ｇ、１７５ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ－ブタノール（２５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、その後、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート（５７．３ｇ、２６２．５ｍｍｏｌ）および４－ジメチルアミノピリジン（６．４ｇ、５２．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を室温で２時間急速に撹拌した。その溶液を５％ＨＣｌで希釈し、ジクロロメタン（ＤＣＭ）で抽出した（３回）。その有機物を飽和ＮＨ４ＣｌおよびＨ２Ｏで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて粗赤色油（５８．９ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ））、９：１）で精製して、化合物８５を無色の油状物として得た（２９．０６ｇ、６８％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.28 - 1.35 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.54 - 1.65 (m, 4H), 2.19 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.29 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.65 (s, 3H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 24.7, 24.9, 28.1, 28.7, 28.8, 34.0, 35.5, 51.4, 79.9, 173.1, 174.2.
【0084】
例１．２
７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタン酸ｔｅｒｔ－ブチル８６の合成
化合物８５（６．１ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ）（２１ｍＬ）に溶解し、その後、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（１１．２ｍＬ、７５．０ｍｍｏｌ）およびヒドロキシルアミン（ＮＨ２ＯＨ４）（５０％水溶液、１５．３ｍＬ、２５０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温（ＲＴ）で３時間撹拌した。その混合物をジクロロメタン（ＤＣＭ）で希釈し、その有機物を５％ＨＣｌおよびＨ２Ｏで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、粗黄色油（３．２３ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、９：１）で精製して、化合物８６を無色の油状物として得た（２．３４ｇ、３８％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.26 - 1.37 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.52 - 1.68 (m, 4H), 2.14 (s, 2H), 2.19 (t, J = 6.9 Hz, 2H)
７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタン酸ｔｅｒｔ－ブチル８６の合成
化合物８５（６．１ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ）（２１ｍＬ）に溶解し、その後、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（１１．２ｍＬ、７５．０ｍｍｏｌ）およびヒドロキシルアミン（ＮＨ２ＯＨ４）（５０％水溶液、１５．３ｍＬ、２５０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温（ＲＴ）で３時間撹拌した。その混合物をジクロロメタン（ＤＣＭ）で希釈し、その有機物を５％ＨＣｌおよびＨ２Ｏで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、粗黄色油（３．２３ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、９：１）で精製して、化合物８６を無色の油状物として得た（２．３４ｇ、３８％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.26 - 1.37 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.52 - 1.68 (m, 4H), 2.14 (s, 2H), 2.19 (t, J = 6.9 Hz, 2H)
【0085】
例１．３
７－［（アセチルオキシ）カルバモイル］ヘプタン酸ｔｅｒｔ－ブチル８７の合成
化合物８６（２．３ｇ、９．３７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解し、その後、塩化アセチル（０．８ｍＬ、１１．２４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．５６ｍＬ、１１．２４ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で３時間撹拌した。その溶液をジクロロメタンで希釈し、その有機物を飽和ＮＨ４ＣｌおよびＨ２Ｏで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗淡黄色油（２．７５ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、９９：１）で精製して、化合物８７を無色の油状物として得た（１．６５ｇ、６１％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.24 - 1.37 (m, 4H), 1.39 (s, 9H), 1.48 - 1.58 (m, 2H), 1.59 - 1.69 (m, 2H), 2.13 - 2.19 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.18 - 2.23 (m, 2H), 9.64 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 18.2, 24.7, 28.0, 28.4, 28.5, 32.6, 35.3, 80.1, 168.7, 173.3; MS(ES): m/z = 288.2 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C14H26NO5 [M+H]+: 288.1805, 実測値 288.1801
７－［（アセチルオキシ）カルバモイル］ヘプタン酸ｔｅｒｔ－ブチル８７の合成
化合物８６（２．３ｇ、９．３７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解し、その後、塩化アセチル（０．８ｍＬ、１１．２４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．５６ｍＬ、１１．２４ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で３時間撹拌した。その溶液をジクロロメタンで希釈し、その有機物を飽和ＮＨ４ＣｌおよびＨ２Ｏで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗淡黄色油（２．７５ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、９９：１）で精製して、化合物８７を無色の油状物として得た（１．６５ｇ、６１％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.24 - 1.37 (m, 4H), 1.39 (s, 9H), 1.48 - 1.58 (m, 2H), 1.59 - 1.69 (m, 2H), 2.13 - 2.19 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.18 - 2.23 (m, 2H), 9.64 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 18.2, 24.7, 28.0, 28.4, 28.5, 32.6, 35.3, 80.1, 168.7, 173.3; MS(ES): m/z = 288.2 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C14H26NO5 [M+H]+: 288.1805, 実測値 288.1801
【0086】
例１．４
７－［（アセチルオキシ）カルバモイル］ヘプタン酸８８の合成
化合物８７（１．６５ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６０ｍＬ）に溶解し、その後トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（５ｍＬ、６５ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。その溶液を蒸発させ、粗残渣をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、９５：５）で精製して、化合物８８を白色固体として得た（１．１０ｇ、８３％）：1H NMR (700 MHz, DMSO-d6) δ 1.23 - 1.28 (m, 4H), 1.45 - 1.52 (m, 4H), 2.09 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.13 (s, 3H), 2.18 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 11.53 (br, 1H), 11.95 (br, 1H); 13C NMR (176 MHz, DMSO-d6) δ 18.1, 24.3, 24.6, 28.1, 28.2, 31.8, 33.6, 168.5, 169.7, 174.4; MS(ES): m/z = 232.1 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C10H18NO5 [M+H]+: 232.1179, 実測値 232.1167
７－［（アセチルオキシ）カルバモイル］ヘプタン酸８８の合成
化合物８７（１．６５ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６０ｍＬ）に溶解し、その後トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（５ｍＬ、６５ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。その溶液を蒸発させ、粗残渣をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、９５：５）で精製して、化合物８８を白色固体として得た（１．１０ｇ、８３％）：1H NMR (700 MHz, DMSO-d6) δ 1.23 - 1.28 (m, 4H), 1.45 - 1.52 (m, 4H), 2.09 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.13 (s, 3H), 2.18 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 11.53 (br, 1H), 11.95 (br, 1H); 13C NMR (176 MHz, DMSO-d6) δ 18.1, 24.3, 24.6, 28.1, 28.2, 31.8, 33.6, 168.5, 169.7, 174.4; MS(ES): m/z = 232.1 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C10H18NO5 [M+H]+: 232.1179, 実測値 232.1167
【0087】
例２：保護されたＨＤＡＣ阻害剤９２の合成
光活性化細胞殺傷活性を有する例示的な保護されたＨＤＡＣ阻害剤９２の合成を図３に示し、以下の例２．１～２．４でさらに説明する。
光活性化細胞殺傷活性を有する例示的な保護されたＨＤＡＣ阻害剤９２の合成を図３に示し、以下の例２．１～２．４でさらに説明する。
【0088】
例２．１：
４－（５－ブロモ－１，３－チアゾール－２－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル８９の合成
２，５－ジブロモ－１，３－チアゾール（１０ｇ、４１．２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１００ｍＬ）に溶解し、１－Ｂｏｃ－ピペラジン（１０ｇ、５３．５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（７．４０ｇ、５３．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を７０℃で７２時間撹拌した。その混合物を冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、酢酸エチルで抽出した。その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて粗油を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル、８：２）で精製して、化合物８９を淡黄色固体として得た（１０．５ｇ、７４％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.46 (s, 9H), 3.38 - 3.41 (m, 4H), 3.52 - 3.55 (m, 4H), 7.06 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 28.3, 48.0, 80.4, 95.2, 140.4, 154.5, 171.5
４－（５－ブロモ－１，３－チアゾール－２－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル８９の合成
２，５－ジブロモ－１，３－チアゾール（１０ｇ、４１．２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１００ｍＬ）に溶解し、１－Ｂｏｃ－ピペラジン（１０ｇ、５３．５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（７．４０ｇ、５３．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を７０℃で７２時間撹拌した。その混合物を冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、酢酸エチルで抽出した。その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて粗油を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル、８：２）で精製して、化合物８９を淡黄色固体として得た（１０．５ｇ、７４％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.46 (s, 9H), 3.38 - 3.41 (m, 4H), 3.52 - 3.55 (m, 4H), 7.06 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 28.3, 48.0, 80.4, 95.2, 140.4, 154.5, 171.5
【0089】
例２．２：
１－（５－ブロモ－１，３－チアゾール－２－イル）ピペラジン９０の合成
化合物８９（１０．４５ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、その後トリフルオロ酢酸（９．２ｍＬ、１２０．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で一晩撹拌した。その溶液を蒸発させて、粗黄色油（２３ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、９５：５）で精製して、所望の化合物のトリフルオロ酢酸塩（１０．７ｇ）を得た。続いて、これをジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３で０．５時間急速に撹拌した。その有機物をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて化合物９０を白色固体として得た（６．１５ｇ、８３％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.73 - 2.77 (m, 4H), 3.24 - 3.27 (m, 4H), 7.18 (s, 1H); MS(ES): m/z = 248.0, 250.0 [M + H]+; HRMS (ES) 計算値 C7H11N3SBr [M + H]+: 247.9852, 実測値 247.9850
１－（５－ブロモ－１，３－チアゾール－２－イル）ピペラジン９０の合成
化合物８９（１０．４５ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、その後トリフルオロ酢酸（９．２ｍＬ、１２０．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で一晩撹拌した。その溶液を蒸発させて、粗黄色油（２３ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、９５：５）で精製して、所望の化合物のトリフルオロ酢酸塩（１０．７ｇ）を得た。続いて、これをジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３で０．５時間急速に撹拌した。その有機物をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて化合物９０を白色固体として得た（６．１５ｇ、８３％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.73 - 2.77 (m, 4H), 3.24 - 3.27 (m, 4H), 7.18 (s, 1H); MS(ES): m/z = 248.0, 250.0 [M + H]+; HRMS (ES) 計算値 C7H11N3SBr [M + H]+: 247.9852, 実測値 247.9850
【0090】
例２．３：
（２Ｅ）－３－（５－｛２－［２－（ピペラジン－１－イル）－１，３－チアゾール－５－イル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エン酸メチル９１の合成
トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（２００ｍＬ）を、Ａｒを１時間吹き込むことによって脱気した。次いで、化合物９０（２．８０ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）、化合物４２（２．３２ｇ、１２．４１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３９０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（１０７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をＡｒ下で添加し、得られた懸濁液を６０℃で７２時間撹拌した。次いで、その溶媒を蒸発させて粗固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５から９：１、ジクロロメタン／メタノール、１％トリエチルアミン）によって２回精製して、化合物９１を明るいオレンジ色の固体として得た（２．２８ｇ、５７％）。：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.75 - 2.82 (m, 4H), 3.35 - 3.41 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 6.91 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.69 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 8.1, 0.9 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 8.72 (dd, J = 2.2, 0.9 Hz, 1H); MS (ES) m/z = 355.1 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C18H19N4O2S [M+H]+: 355.1223, 実測値 355.1223
（２Ｅ）－３－（５－｛２－［２－（ピペラジン－１－イル）－１，３－チアゾール－５－イル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エン酸メチル９１の合成
トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（２００ｍＬ）を、Ａｒを１時間吹き込むことによって脱気した。次いで、化合物９０（２．８０ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）、化合物４２（２．３２ｇ、１２．４１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３９０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（１０７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をＡｒ下で添加し、得られた懸濁液を６０℃で７２時間撹拌した。次いで、その溶媒を蒸発させて粗固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５から９：１、ジクロロメタン／メタノール、１％トリエチルアミン）によって２回精製して、化合物９１を明るいオレンジ色の固体として得た（２．２８ｇ、５７％）。：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.75 - 2.82 (m, 4H), 3.35 - 3.41 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 6.91 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.69 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 8.1, 0.9 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 8.72 (dd, J = 2.2, 0.9 Hz, 1H); MS (ES) m/z = 355.1 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C18H19N4O2S [M+H]+: 355.1223, 実測値 355.1223
【0091】
例２．４：
（２Ｅ）－３－（５－｛２－［２－（４－｛７－［（アセチルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）－１，３－チアゾール－５－イル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エン酸メチル９２の合成
化合物８８（０．３９ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）および２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（０．３２ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を０℃でジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解した。その後、４－メチルモルホリン（０．２０ｍＬ、１．８５ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下した。得られた混合物を０℃で２時間撹拌し、その後、化合物９１（０．５ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）および４－メチルモルホリン（０．１９ｍＬ、１．６８ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を室温で１８時間撹拌した。その混合物をジクロロメタンで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗黄色固体（１．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９９：１、ジクロロメタン／メタノール）で精製し、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）からさらに再結晶して、化合物９２を黄色固体として得た（０．５３ｇ、６６％）：1H NMR (700 MHz, CDCl3) δ 1.35 - 1.44 (m, 4H), 1.64 - 1.68 (m, 2H), 1.69 - 1.73 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.26 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.39 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.50 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.58 - 3.65 (m, 4H), 3.78 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 6.93 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 8.2, 0.9 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.66 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 8.69 (dd, J = 2.1, 0.8 Hz, 1H), 9.32 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 18.3, 24.7, 28.1, 28.3, 32.5, 32.8, 40.6, 44.7, 48.0, 48.4, 51.9, 85.4, 91.2, 106.6, 120.7, 122.5, 123.5, 138.3, 142.7, 146.0, 151.3, 151.9, 167.1, 171.5, 171.8; MS(ES): m/z = 568.2 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C28H34N5O6S [M+H]+: 568.2224, 実測値568.2220
（２Ｅ）－３－（５－｛２－［２－（４－｛７－［（アセチルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）－１，３－チアゾール－５－イル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エン酸メチル９２の合成
化合物８８（０．３９ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）および２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（０．３２ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を０℃でジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解した。その後、４－メチルモルホリン（０．２０ｍＬ、１．８５ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下した。得られた混合物を０℃で２時間撹拌し、その後、化合物９１（０．５ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）および４－メチルモルホリン（０．１９ｍＬ、１．６８ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を室温で１８時間撹拌した。その混合物をジクロロメタンで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗黄色固体（１．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９９：１、ジクロロメタン／メタノール）で精製し、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）からさらに再結晶して、化合物９２を黄色固体として得た（０．５３ｇ、６６％）：1H NMR (700 MHz, CDCl3) δ 1.35 - 1.44 (m, 4H), 1.64 - 1.68 (m, 2H), 1.69 - 1.73 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.26 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.39 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.50 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.58 - 3.65 (m, 4H), 3.78 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 6.93 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 8.2, 0.9 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.66 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 8.69 (dd, J = 2.1, 0.8 Hz, 1H), 9.32 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 18.3, 24.7, 28.1, 28.3, 32.5, 32.8, 40.6, 44.7, 48.0, 48.4, 51.9, 85.4, 91.2, 106.6, 120.7, 122.5, 123.5, 138.3, 142.7, 146.0, 151.3, 151.9, 167.1, 171.5, 171.8; MS(ES): m/z = 568.2 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C28H34N5O6S [M+H]+: 568.2224, 実測値568.2220
【0092】
例３：保護されたＨＤＡＣ阻害剤９３の合成
Ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－｛７－［（アセチルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝チオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエート９３の合成を図４に示し、以下で詳しく説明する。
Ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－｛７－［（アセチルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝チオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエート９３の合成を図４に示し、以下で詳しく説明する。
【0093】
化合物８８（２．８９ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）および２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（２．３９ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）を０℃でジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解した後、４－メチルモルホリン（１．５ｍＬ、１３．６ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下した。得られた混合物を０℃で２時間撹拌し、その後、化合物２７（４．１１ｇ、１０．４１ｍｍｏｌ）および４－メチルモルホリン（１．３６ｍＬ、１２．４ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を室温で１８時間撹拌した。その混合物をジクロロメタンで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗黄色固体（１．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９７：３、ジクロロメタン／メタノール）で精製し、さらにアセトニトリルから再結晶して、化合物９３を黄色固体として得た（２．５１ｇ、４０％）：1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 1.32 - 1.45 (m, 4H), 1.50 (s, 9H), 1.63 (p, J = 7.1 Hz, 2H), 1.69 (p, J = 7.1 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.25 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.37 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.21 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.24 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.55 - 3.66 (m, 2H), 3.75 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.11 (dd, J = 15.6, 1.1 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.03 - 7.14 (m, 2H), 7.36 - 7.44 (m, 2H), 7.58 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 9.91 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 18.3, 24.8, 28.1, 28.2, 28.4, 32.4, 32.7, 41.1, 45.2, 48.1, 48.4, 53.4, 80.6, 81.3, 96.0, 112.9, 115.3, 119.2, 126.1, 130.6, 132.0, 132.7, 135.4, 140.2, 150.6, 165.9, 168.7, 171.8
【0094】
例４：ビルディングブロック化合物９６の合成
Ｎ－（５－アミノペンチル）－４－ヨード－Ｎ－メチルアニリン９６の合成を図５に示し、以下で詳しく説明する。
Ｎ－（５－アミノペンチル）－４－ヨード－Ｎ－メチルアニリン９６の合成を図５に示し、以下で詳しく説明する。
【0095】
例４．１：
５－クロロ－Ｎ－（４－ヨードフェニル）－Ｎ－メチルペンタンアミド９４の合成
Ｎ－メチル－４－ヨードアニリン（２４．０４ｇ、１０３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３００ｍＬ）に溶解し、その溶液を０℃に冷却した。５－クロロバレリルクロリド（１４．６ｍＬ、１１３．３ｍｍｏｌ）、次いでピリジン（９．１６ｍＬ、１１３．３ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で１６時間撹拌した。その溶液をジクロロメタンで希釈し、その有機物を飽和ＮＨ４ＣｌおよびＨ２Ｏで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、粗褐色油（４０ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（７：３シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製して、化合物９４を黄色油状物として得た（３５．１６ｇ、９７％）：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.57 - 1.79 (m, 4H), 1.98 - 2.19 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 3.35 - 3.52 (m, 2H), 6.93 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 2H)
５－クロロ－Ｎ－（４－ヨードフェニル）－Ｎ－メチルペンタンアミド９４の合成
Ｎ－メチル－４－ヨードアニリン（２４．０４ｇ、１０３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３００ｍＬ）に溶解し、その溶液を０℃に冷却した。５－クロロバレリルクロリド（１４．６ｍＬ、１１３．３ｍｍｏｌ）、次いでピリジン（９．１６ｍＬ、１１３．３ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で１６時間撹拌した。その溶液をジクロロメタンで希釈し、その有機物を飽和ＮＨ４ＣｌおよびＨ２Ｏで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、粗褐色油（４０ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（７：３シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製して、化合物９４を黄色油状物として得た（３５．１６ｇ、９７％）：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.57 - 1.79 (m, 4H), 1.98 - 2.19 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 3.35 - 3.52 (m, 2H), 6.93 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 2H)
【0096】
例４．２：
５－アジド－Ｎ－（４－ヨードフェニル）－Ｎ－メチルペンタンアミド９５の合成
化合物９４（３５．０ｇ、９９．５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（１３．５３ｇ、２０８．９５ｍｍｏｌ）を加え、その溶液を８０℃で１８時間撹拌した。その懸濁液を冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗オレンジ色油（３７．６ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（７：３シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製して、化合物９５をオレンジ色の油として得た（３３．４ｇ、９４％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.45 - 1.59 (m, 2H), 1.61 - 1.69 (m, 2H), 1.91 - 2.20 (m, 2H), 3.10 - 3.36 (m, 5H), 6.85 - 7.02 (m, 2H), 7.67 - 7.84 (m, 2H)
５－アジド－Ｎ－（４－ヨードフェニル）－Ｎ－メチルペンタンアミド９５の合成
化合物９４（３５．０ｇ、９９．５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（１３．５３ｇ、２０８．９５ｍｍｏｌ）を加え、その溶液を８０℃で１８時間撹拌した。その懸濁液を冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗オレンジ色油（３７．６ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（７：３シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製して、化合物９５をオレンジ色の油として得た（３３．４ｇ、９４％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.45 - 1.59 (m, 2H), 1.61 - 1.69 (m, 2H), 1.91 - 2.20 (m, 2H), 3.10 - 3.36 (m, 5H), 6.85 - 7.02 (m, 2H), 7.67 - 7.84 (m, 2H)
【0097】
例４．３：
Ｎ－（５－アミノペンチル）－４－ヨード－Ｎ－メチルアニリン９６の合成
化合物９５（５．２４ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）をトルエン（８０ｍＬ）に溶解し、ＢＨ３・Ｍｅ２Ｓ（トルエン中２．０Ｍ、１６．８ｍＬ、３３．６ｍｍｏｌ）を加え、その溶液を還流しながら１６時間撹拌した。その混合物を冷却し、次いで１０％ｗ／ｖのＮａ２ＣＯ３水溶液とともに０．５時間撹拌した。その混合物を酢酸エチルで希釈し、その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗黄色油（４．２１ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１ジクロロメタン／メタノール、２％トリエチルアミン）で精製して、化合物９６を透明な油状物（１．７６ｇ、３８％）として得て、それを直ちに次のステップに用いた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.28 - 1.39 (m, 2H), 1.43 - 1.53 (m, 2H), 1.53 - 1.61 (m, 2H), 1.97 (s, 2H), 2.70 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.88 (s, 3H), 3.21 -3.32 (m, 2H), 6.41 - 6.47 (m, 2H), 7.39 - 7.46 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 24.3, 26.4, 33.1, 38.2, 41.9, 52.5, 76.4, 114.3, 137.6, 148.7
Ｎ－（５－アミノペンチル）－４－ヨード－Ｎ－メチルアニリン９６の合成
化合物９５（５．２４ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）をトルエン（８０ｍＬ）に溶解し、ＢＨ３・Ｍｅ２Ｓ（トルエン中２．０Ｍ、１６．８ｍＬ、３３．６ｍｍｏｌ）を加え、その溶液を還流しながら１６時間撹拌した。その混合物を冷却し、次いで１０％ｗ／ｖのＮａ２ＣＯ３水溶液とともに０．５時間撹拌した。その混合物を酢酸エチルで希釈し、その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗黄色油（４．２１ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１ジクロロメタン／メタノール、２％トリエチルアミン）で精製して、化合物９６を透明な油状物（１．７６ｇ、３８％）として得て、それを直ちに次のステップに用いた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.28 - 1.39 (m, 2H), 1.43 - 1.53 (m, 2H), 1.53 - 1.61 (m, 2H), 1.97 (s, 2H), 2.70 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.88 (s, 3H), 3.21 -3.32 (m, 2H), 6.41 - 6.47 (m, 2H), 7.39 - 7.46 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 24.3, 26.4, 33.1, 38.2, 41.9, 52.5, 76.4, 114.3, 137.6, 148.7
【0098】
例５：ビルディングブロック化合物９９の合成
２－［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］エチル（２Ｅ）－３－（５－エチニルチオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエートの合成を図６に示し、以下で詳しく説明する。
２－［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］エチル（２Ｅ）－３－（５－エチニルチオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエートの合成を図６に示し、以下で詳しく説明する。
【0099】
例５．１：
５－ヨードチオフェン－２－カルバルデヒド２４の合成
２－チオフェンカルボキシアルデヒド（９．３４ｍＬ、１００．０ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍＬ）溶液に５０℃でＮ－ヨードスクシンイミド（２４．７５ｇ、１１０．０ｍｍｏｌ）およびパラトルエンスルホン酸一水和物（１．９０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を５０℃で１時間撹拌した。１．０Ｍ ＨＣｌ（８０ｍＬ）を加え、その混合物を酢酸エチルで抽出し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、化合物２４を黄色油状物（２５．２６ｇ、＞１００％）として得て、これをゆっくりと結晶化させた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (s, 2H), 9.77 (s, 1H)
５－ヨードチオフェン－２－カルバルデヒド２４の合成
２－チオフェンカルボキシアルデヒド（９．３４ｍＬ、１００．０ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍＬ）溶液に５０℃でＮ－ヨードスクシンイミド（２４．７５ｇ、１１０．０ｍｍｏｌ）およびパラトルエンスルホン酸一水和物（１．９０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を５０℃で１時間撹拌した。１．０Ｍ ＨＣｌ（８０ｍＬ）を加え、その混合物を酢酸エチルで抽出し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、化合物２４を黄色油状物（２５．２６ｇ、＞１００％）として得て、これをゆっくりと結晶化させた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (s, 2H), 9.77 (s, 1H)
【0100】
例５．２：
５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］チオフェン－２－カルバルデヒド９７の合成
トリエチルアミン（３００ｍＬ）を、アルゴンを１時間吹き込むことによって脱気した。次いで、化合物２４（２５ｇ、１０５ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルアセチレン（１６．０ｍＬ、１１５．５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（７４０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（２００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をアルゴン下で加え、得られた懸濁液を室温で１８時間撹拌した。その混合物をジエチルエーテルで希釈し、セライト／ＳｉＯ２に通して、粗褐色油（１７．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィーで精製して、化合物９７をオレンジ色の油状物（１２．７９ｇ、５８％）として得て、ゆっくり結晶化した：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.25 (s, 9H), 7.24 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 9.83 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ -0.5, 26.9, 96.3, 104.6, 132.5, 133.1, 135.7, 143.8, 182.4; IR (ATR) vmax/cm-1 2960w, 2899w, 2833w, 2148m, 1666s, 1438s, 1249s, 1223s, 1207s, 838s; MS (ES) m/z = 209.0 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C10H13SOSi [M+H]+: 209.0451, 実測値 209.0454
５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］チオフェン－２－カルバルデヒド９７の合成
トリエチルアミン（３００ｍＬ）を、アルゴンを１時間吹き込むことによって脱気した。次いで、化合物２４（２５ｇ、１０５ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルアセチレン（１６．０ｍＬ、１１５．５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（７４０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（２００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をアルゴン下で加え、得られた懸濁液を室温で１８時間撹拌した。その混合物をジエチルエーテルで希釈し、セライト／ＳｉＯ２に通して、粗褐色油（１７．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィーで精製して、化合物９７をオレンジ色の油状物（１２．７９ｇ、５８％）として得て、ゆっくり結晶化した：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.25 (s, 9H), 7.24 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 9.83 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ -0.5, 26.9, 96.3, 104.6, 132.5, 133.1, 135.7, 143.8, 182.4; IR (ATR) vmax/cm-1 2960w, 2899w, 2833w, 2148m, 1666s, 1438s, 1249s, 1223s, 1207s, 838s; MS (ES) m/z = 209.0 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C10H13SOSi [M+H]+: 209.0451, 実測値 209.0454
【0101】
例５．３：
（２Ｅ）－３－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］チオフェン－２－イル｝プロパ－２－エン酸メチル９８の合成
トリメチルホスホノアセテート（１４．０ｍＬ、８６．４ｍｍｏｌ）およびＬｉＣｌ（３．６６ｇ、８６．４ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）に０℃で加え、得られた溶液を１５分間撹拌した後、化合物９７（１５．０ｇ、７２ｍｍｏｌ）を追加した。この溶液に、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（１２．９ｍＬ、８６．４ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、得られたスラリーを室温で１６時間撹拌した。これを砕いた氷に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗褐色油（２１ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製して、化合物９８を淡黄色固体（１７．２３ｇ、９１％）として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.24 (s, 9H), 3.78 (s, 3H), 6.19 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.05 - 7.14 (m, 2H), 7.67 (d, J = 15.7 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ -0.3, 51.7, 97.0, 101.9, 117.3, 125.8, 130.6, 133.3, 136.5, 140.4, 166.9; IR (ATR) vmax/cm-1 2953w, 2899w, 2144m, 1715s, 1621s, 1516w, 1432m, 1391w, 1301s, 1269s, 1202s, 1161s, 838s; MS(ES): m/z = 265.1 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C13H17O2SSi [M+H]+: 265.0713, 実測値 265.0713
（２Ｅ）－３－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］チオフェン－２－イル｝プロパ－２－エン酸メチル９８の合成
トリメチルホスホノアセテート（１４．０ｍＬ、８６．４ｍｍｏｌ）およびＬｉＣｌ（３．６６ｇ、８６．４ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）に０℃で加え、得られた溶液を１５分間撹拌した後、化合物９７（１５．０ｇ、７２ｍｍｏｌ）を追加した。この溶液に、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（１２．９ｍＬ、８６．４ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、得られたスラリーを室温で１６時間撹拌した。これを砕いた氷に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗褐色油（２１ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製して、化合物９８を淡黄色固体（１７．２３ｇ、９１％）として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.24 (s, 9H), 3.78 (s, 3H), 6.19 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.05 - 7.14 (m, 2H), 7.67 (d, J = 15.7 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ -0.3, 51.7, 97.0, 101.9, 117.3, 125.8, 130.6, 133.3, 136.5, 140.4, 166.9; IR (ATR) vmax/cm-1 2953w, 2899w, 2144m, 1715s, 1621s, 1516w, 1432m, 1391w, 1301s, 1269s, 1202s, 1161s, 838s; MS(ES): m/z = 265.1 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C13H17O2SSi [M+H]+: 265.0713, 実測値 265.0713
【0102】
例５．４：
２－［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］エチル（２Ｅ）－３－（５－エチニルチオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエート９９の合成
化合物９８（１３．０３ｇ、４９．３ｍｍｏｌ）をトリエチレングリコールモノメチルエーテル（５０ｍＬ）に溶解し、２０％ｗ／ｖＮａＯＨ水溶液（１．３ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した後、その溶液を酢酸エチルで希釈した。その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗暗色油（１６ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（１：１シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製して、化合物９９を黄色油状物（８．１８ｇ、５１％）として得て、これは急速に暗色化した：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.36 (s, 3H), 3.46 (s, 1H), 3.50 - 3.56 (m, 2H), 3.61 - 3.69 (m, 6H), 3.72 - 3.79 (m, 2H), 4.26 - 4.38 (m, 2H), 6.24 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 15.7, 0.6 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 59.0, 63.8, 69.1, 70.5, 70.6, 71.9, 83.7, 117.7, 124.6, 130.5, 133.8, 136.5, 140.8, 166.3; IR (ATR) vmax/cm-13241br, 3089w, 2874br, 2098w, 1705s, 1622s, 1516m, 1445m, 1342m, 1301m, 1264s, 1165s, 1100s, 807s; MS(ES): m/z = 325.1 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C16H21O5S [M+H]+: 325.1104, 実測値325.1100
２－［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］エチル（２Ｅ）－３－（５－エチニルチオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエート９９の合成
化合物９８（１３．０３ｇ、４９．３ｍｍｏｌ）をトリエチレングリコールモノメチルエーテル（５０ｍＬ）に溶解し、２０％ｗ／ｖＮａＯＨ水溶液（１．３ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した後、その溶液を酢酸エチルで希釈した。その有機物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗暗色油（１６ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（１：１シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製して、化合物９９を黄色油状物（８．１８ｇ、５１％）として得て、これは急速に暗色化した：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.36 (s, 3H), 3.46 (s, 1H), 3.50 - 3.56 (m, 2H), 3.61 - 3.69 (m, 6H), 3.72 - 3.79 (m, 2H), 4.26 - 4.38 (m, 2H), 6.24 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 15.7, 0.6 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 59.0, 63.8, 69.1, 70.5, 70.6, 71.9, 83.7, 117.7, 124.6, 130.5, 133.8, 136.5, 140.8, 166.3; IR (ATR) vmax/cm-13241br, 3089w, 2874br, 2098w, 1705s, 1622s, 1516m, 1445m, 1342m, 1301m, 1264s, 1165s, 1100s, 807s; MS(ES): m/z = 325.1 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C16H21O5S [M+H]+: 325.1104, 実測値325.1100
【0103】
例６：光活性化化合物１００の合成
光活性化化合物１００の合成を図７に示し、以下で詳しく説明する。
光活性化化合物１００の合成を図７に示し、以下で詳しく説明する。
【0104】
２－［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］エチル（２Ｅ）－３－［５－（２－｛４－［（５－アミノペンチル）（メチル）アミノ］フェニル｝エチニル）チオフェン－２－イル］プロパ－２－エノエート１００の合成
化合物９６（１．７０ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）および化合物９９（２．４２ｇ、７．４８ｍｍｏｌ）をトリエチルアミン（８０ｍＬ）に溶解し、その溶液をアルゴンを１時間吹き込むことによって脱気した。次いで、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３７２ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（１００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）をアルゴン下で加え、得られた懸濁液を６０℃で７２時間撹拌した。得られた懸濁液をジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３および水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗暗色油（３．７５ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５ジクロロメタン／メタノール、１％トリエチルアミン）で精製して、化合物１００を明るいオレンジ色の固体として得た（０．４７ｇ、１７％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.32 - 1.41 (m, 2H), 1.54 - 1.64 (m, 4H), 2.81 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.95 (s, 3H), 3.30 - 3.35 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.53 - 3.56 (m, 2H), 3.64 - 3.69 (m, 6H), 3.75 - 3.79 (m, 2H), 4.29 - 4.39 (m, 2H), 6.20 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.56 - 6.65 (m, 2H), 7.07 - 7.14 (m, 2H), 7.31 - 7.40 (m, 2H), 7.70 (dd, J = 15.7, 0.6 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 24.2, 26.5, 31.0, 38.3, 41.1, 52.2, 59.0, 63.7, 69.2, 70.6, 70.6, 71.9, 80.6, 97.7, 108.3, 111.4, 116.4, 127.6, 131.3, 131.5, 132.8, 137.0, 139.4, 149.2, 166.7; IR (ATR) vmax/cm-12925m, 2871m, 2189w, 1738m, 1712m, 1604s, 1530s, 1511m, 1376m, 1196m; MS(ASAP): m/z = 515.2 [M+H]+; HRMS (ASAP) 計算値 C28H39N2O5S [M+H]+: 515.2574, 実測値515.2569
化合物９６（１．７０ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）および化合物９９（２．４２ｇ、７．４８ｍｍｏｌ）をトリエチルアミン（８０ｍＬ）に溶解し、その溶液をアルゴンを１時間吹き込むことによって脱気した。次いで、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３７２ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（１００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）をアルゴン下で加え、得られた懸濁液を６０℃で７２時間撹拌した。得られた懸濁液をジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３および水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗暗色油（３．７５ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５ジクロロメタン／メタノール、１％トリエチルアミン）で精製して、化合物１００を明るいオレンジ色の固体として得た（０．４７ｇ、１７％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.32 - 1.41 (m, 2H), 1.54 - 1.64 (m, 4H), 2.81 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.95 (s, 3H), 3.30 - 3.35 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.53 - 3.56 (m, 2H), 3.64 - 3.69 (m, 6H), 3.75 - 3.79 (m, 2H), 4.29 - 4.39 (m, 2H), 6.20 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.56 - 6.65 (m, 2H), 7.07 - 7.14 (m, 2H), 7.31 - 7.40 (m, 2H), 7.70 (dd, J = 15.7, 0.6 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 24.2, 26.5, 31.0, 38.3, 41.1, 52.2, 59.0, 63.7, 69.2, 70.6, 70.6, 71.9, 80.6, 97.7, 108.3, 111.4, 116.4, 127.6, 131.3, 131.5, 132.8, 137.0, 139.4, 149.2, 166.7; IR (ATR) vmax/cm-12925m, 2871m, 2189w, 1738m, 1712m, 1604s, 1530s, 1511m, 1376m, 1196m; MS(ASAP): m/z = 515.2 [M+H]+; HRMS (ASAP) 計算値 C28H39N2O5S [M+H]+: 515.2574, 実測値515.2569
【0105】
例７：保護されたＨＤＡＣ阻害剤化合物１０１の合成
光活性化細胞殺傷活性を有する保護されたＨＤＡＣ阻害剤化合物１０１の合成を図８に示し、以下に詳述する。
光活性化細胞殺傷活性を有する保護されたＨＤＡＣ阻害剤化合物１０１の合成を図８に示し、以下に詳述する。
【0106】
２－［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］エチル（２Ｅ）－３－［５－（２－｛４－［（５－｛７－［（アセチルオキシ）カルバモイル］ヘプタンアミド｝ペンチル）（メチル）アミノ］フェニル｝エチニル）チオフェン－２－イル］プロパ－２－エノエート１０１の合成
化合物１００（１２８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、その溶液を０℃に冷却し、その後、４－メチルモルホリン（０．０５５ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）、化合物８８（７６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）およびプロピルホスホン酸無水物（酢酸エチル中５０重量％、０．３２ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。その混合物をジクロロメタンで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗黄色油を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５、ジクロロメタン／メタノール）で精製して、化合物１０１を黄色油（１４１ｍｇ、７７％）として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.30 - 1.42 (m, 6H), 1.46 - 1.55 (m, 2H), 1.55 - 1.63 (m, 4H), 1.64 - 1.72 (m, 2H), 2.11 - 2.17 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.23 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.95 (s, 3H), 3.17 -3.26 (m, 2H), 3.33 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.51 - 3.57 (m, 2H), 3.63 - 3.70 (m, 6H), 3.71 - 3.80 (m, 2H), 4.26 - 4.40 (m, 2H), 5.64 (s, 1H), 6.20 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.31 - 7.41 (m, 2H), 7.70 (dd, J = 15.7, 0.6 Hz, 1H), 9.55 (s, 1H);13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 18.3, 24.3, 24.7, 25.3, 26.5, 26.9, 28.0, 28.2, 29.5, 32.5, 36.2, 38.3, 39.3, 52.2, 53.4, 59.0, 63.7, 69.2, 70.5, 70.6, 70.6, 71.9, 77.0, 80.7, 97.6, 111.4, 116.4, 127.5, 131.3, 131.5, 132.8, 137.0, 139.4, 148.2, 166.7, 168.8, 173.3; IR (ATR) vmax/cm-1 3304br, 2927m, 2860m, 2189m, 1708m, 1645m, 1619s, 1603s, 1529s, 1512m, 1367m, 1242m, 1193s, 1137s, 1110m, 852m; MS(ES): m/z = 728.3 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C38H54N3O9S [M+H]+: 728.3575, 実測値728.3578
化合物１００（１２８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、その溶液を０℃に冷却し、その後、４－メチルモルホリン（０．０５５ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）、化合物８８（７６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）およびプロピルホスホン酸無水物（酢酸エチル中５０重量％、０．３２ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。その混合物をジクロロメタンで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗黄色油を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５、ジクロロメタン／メタノール）で精製して、化合物１０１を黄色油（１４１ｍｇ、７７％）として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.30 - 1.42 (m, 6H), 1.46 - 1.55 (m, 2H), 1.55 - 1.63 (m, 4H), 1.64 - 1.72 (m, 2H), 2.11 - 2.17 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.23 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.95 (s, 3H), 3.17 -3.26 (m, 2H), 3.33 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.51 - 3.57 (m, 2H), 3.63 - 3.70 (m, 6H), 3.71 - 3.80 (m, 2H), 4.26 - 4.40 (m, 2H), 5.64 (s, 1H), 6.20 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.31 - 7.41 (m, 2H), 7.70 (dd, J = 15.7, 0.6 Hz, 1H), 9.55 (s, 1H);13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 18.3, 24.3, 24.7, 25.3, 26.5, 26.9, 28.0, 28.2, 29.5, 32.5, 36.2, 38.3, 39.3, 52.2, 53.4, 59.0, 63.7, 69.2, 70.5, 70.6, 70.6, 71.9, 77.0, 80.7, 97.6, 111.4, 116.4, 127.5, 131.3, 131.5, 132.8, 137.0, 139.4, 148.2, 166.7, 168.8, 173.3; IR (ATR) vmax/cm-1 3304br, 2927m, 2860m, 2189m, 1708m, 1645m, 1619s, 1603s, 1529s, 1512m, 1367m, 1242m, 1193s, 1137s, 1110m, 852m; MS(ES): m/z = 728.3 [M+H]+; HRMS (ES) 計算値 C38H54N3O9S [M+H]+: 728.3575, 実測値728.3578
【0107】
例８：フルオレセインジアセテート細胞生存率アッセイ
照射なし（光なし）および照射時（光）での化合物９２による処理に応じたＨａＣａＴケラチノサイトの生存率を測定するフルオレセインジアセテート細胞生存率アッセイを以下のように実施した。
照射なし（光なし）および照射時（光）での化合物９２による処理に応じたＨａＣａＴケラチノサイトの生存率を測定するフルオレセインジアセテート細胞生存率アッセイを以下のように実施した。
【0108】
ＨａＣａＴケラチノサイト細胞を２枚の９６ウェルプレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。そのインキュベート培地を除去し、化合物９２をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）コントロールとともにさまざまな濃度で添加した後、その細胞を３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、その後、１枚のプレートを４０５ｎｍで５分間照射した（７２ｍＷ／ｃｍ２）。次に、両方のプレートを３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。その培地を除去し、細胞を１Ｘリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、次いでフルオレセイン二酢酸（ＦＤＡ）を添加し、その細胞を室温、暗所で１０分間インキュベートした。次いで、そのフルオレセインジアセテート染色を除去し、細胞を１Ｘリン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。そのプレートを４８５／５２０ｎｍで読み取り、光曝露の有りおよび無しで、化合物９２の異なる処理濃度での細胞生存率を測定した。その結果を図９に示す。これは、光活性化が低濃度で細胞死を引き起こすことを示している（ＩＣ５０＝０．６９μＭ）。光活性化がなければ、酵素代謝に応答したＨＤＡＣ阻害活性によって高濃度（ＩＣ５０＝５．５０μＭ）では、細胞生存率が低下する。
【0109】
例９：免疫蛍光イメージング
化合物９２（５μＭ）およびエタノール（ＥｔＯＨ）で処理し、アセチル化Ｈ３ヒストンの存在を検出する抗アセチルＨ３一次抗体で共処理したＨａＣａＴケラチノサイトの免疫蛍光イメージングを次のように実行した。
化合物９２（５μＭ）およびエタノール（ＥｔＯＨ）で処理し、アセチル化Ｈ３ヒストンの存在を検出する抗アセチルＨ３一次抗体で共処理したＨａＣａＴケラチノサイトの免疫蛍光イメージングを次のように実行した。
【0110】
５０，０００個のＨａＣａＴ細胞をカバースリップ上にプレーティングし、２日間増殖させた後、化合物９２（５μＭ）を添加し、室温で３０分間インキュベートした。細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、その後、４％ＰＦＡで固定した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水で再度洗浄した後、ブロッキングし、リン酸緩衝生理食塩水中の０．３％トリトン１００－Ｘ／５％ヤギ血清で６０分間透過処理した。次に細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、抗アセチルヒストン３抗体を添加し、４℃で一晩インキュベートした。二次抗体（Ａｌｅｘａ－５９４抗ウサギ）を４５分間添加した後、細胞を再度洗浄し、イメージングのためにマウントした。
【0111】
その結果を図１０に示す。このことから、化合物９２は１０分後には限られた活性を示すが、１時間後には、細胞は、ＨＤＡＣ酵素の阻害に応じてアセチル化Ｈ３の蓄積を示す特徴的な核環表現型を示すことがわかる。この遅れた挙動は、化合物９２が活性形態に酵素的に代謝されるときの初期の遅滞期の指標である。エタノール処理した細胞は、いずれの時点でもこの核環表現型を示さない。
【0112】
例１０：処理したＳＣＣ－４細胞におけるアセチルＨ３の存在量
ＳＣＣ－４細胞におけるアセチルＨ３タンパク質の存在量を測定するために、６ウェルプレートのウェルあたり３５０，０００細胞で細胞を播種した。翌日、細胞を化合物または対照で処理した。１５分および／または１時間の処理後、その細胞をＲＩＰＡバッファーで溶解した。Ａｎｙ ｋＤ（商標）Ｍｉｎｉ－ＰＲＯＴＥＡＮ（登録商標）ＴＧＸ（商標）Ｐｒｅｃａｓｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇｅｌｓを使用して細胞溶解物に対してＳＤＳ－ＰＡＧＥを実行し、タンパク質を分離した。続いてタンパク質をＰＶＤＦ膜（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ）に転写した後、５％牛乳および２．５％魚皮ゼラチンを含むＴＢＳＴでブロッキングした。一次抗体（アセチル－Ｈ３、９６７７Ｓ、ＣＳＴおよびα－チューブリン、Ｔ５１６８、Ｓｉｇｍａ）および二次抗体（ヤギ抗ウサギＩｇＧ、Ａ６１５４、Ｓｉｇｍａおよびヤギ抗マウス、ＳＡ００００１－１、Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ）をブロッキングバッファーで希釈し、ステップ間にＴＢＳＴ洗浄を行いながら室温でそれぞれ１時間染色した。化学発光シグナルは、ｉＢｒｉｇｈｔ ｉｍａｇｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して測定した。アセチル－Ｈ３レベルを正規化し、得られた濃度測定値（ＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して測定）を図１１～１３に示す。画像分析はＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して実行した。
ＳＣＣ－４細胞におけるアセチルＨ３タンパク質の存在量を測定するために、６ウェルプレートのウェルあたり３５０，０００細胞で細胞を播種した。翌日、細胞を化合物または対照で処理した。１５分および／または１時間の処理後、その細胞をＲＩＰＡバッファーで溶解した。Ａｎｙ ｋＤ（商標）Ｍｉｎｉ－ＰＲＯＴＥＡＮ（登録商標）ＴＧＸ（商標）Ｐｒｅｃａｓｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇｅｌｓを使用して細胞溶解物に対してＳＤＳ－ＰＡＧＥを実行し、タンパク質を分離した。続いてタンパク質をＰＶＤＦ膜（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ）に転写した後、５％牛乳および２．５％魚皮ゼラチンを含むＴＢＳＴでブロッキングした。一次抗体（アセチル－Ｈ３、９６７７Ｓ、ＣＳＴおよびα－チューブリン、Ｔ５１６８、Ｓｉｇｍａ）および二次抗体（ヤギ抗ウサギＩｇＧ、Ａ６１５４、Ｓｉｇｍａおよびヤギ抗マウス、ＳＡ００００１－１、Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ）をブロッキングバッファーで希釈し、ステップ間にＴＢＳＴ洗浄を行いながら室温でそれぞれ１時間染色した。化学発光シグナルは、ｉＢｒｉｇｈｔ ｉｍａｇｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して測定した。アセチル－Ｈ３レベルを正規化し、得られた濃度測定値（ＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して測定）を図１１～１３に示す。画像分析はＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して実行した。
【0113】
図１１は、培地、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＳＡＨＡ（スベロイルアニリドヒドロキサム酸）、化合物２７および化合物９３での１５分および１時間の処理後のアセチル－Ｈ３の濃度測定を示している。アセチル－Ｈ３レベルは、α－チューブリン（１５分）およびＡＣ－４０（１時間）に対して正規化した。
【0114】
図１２は、培地、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＳＡＨＡ（スベロイルアニリドヒドロキサム酸）、化合物２７、化合物９３および化合物１０１で１時間処理した後のアセチル－Ｈ３の濃度測定を示す。アセチル－Ｈ３レベルは、α－チューブリンに対して正規化した。
【0115】
図１３は、培地、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＳＡＨＡ（スベロイルアニリドヒドロキサム酸）、化合物２７および化合物９２で１５分間処理した後のアセチル－Ｈ３の濃度測定を示す。アセチル－Ｈ３レベルは、α－チューブリンに対して正規化した。
【0116】
例１１：処理されたＨａＣａＴ細胞におけるカスパーゼ－３の発現
ＨａＣａＴ細胞を６ウェルプレートのカバースリップ上に１ウェルあたり５０，０００細胞で播種した。翌日、細胞を５０ｎＭおよび１００ｎＭの化合物９３で３０分間処理した。ＤＭＳＯを対照として使用した。光活性化は、４０５ｎｍ、２９ｍＷ／ｃｍ２で５分間発光するように改造されたＰｈｏｔｏＲｅａｃｔ ３６５を用いた照射によって実行した。翌日、細胞を４％ＰＦＡを使用して固定し、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００／Ｔｗｅｅｎ２０を使用して透過処理し、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ中５％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）でブロックした。一次抗体（カスパーゼ－３、ａｂ１３８４７、Ａｂｃａｍ）および二次抗体（ヤギ抗ウサギＩｇＧ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４）を、５％ヤギ血清および０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで希釈した。スライドにカバースリップを追加し、Ｚｅｉｓｓ ＬＳＣＭ ８８０でイメージングした。画像分析は、ＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して実行した。図１４は、ＤＭＳＯ、５０ｎＭの化合物９３および１００ｎＭの化合物９３で処理したＨａＣａＴ細胞におけるカスパーゼ－３の発現と、発現レベルの定量を示す。
ＨａＣａＴ細胞を６ウェルプレートのカバースリップ上に１ウェルあたり５０，０００細胞で播種した。翌日、細胞を５０ｎＭおよび１００ｎＭの化合物９３で３０分間処理した。ＤＭＳＯを対照として使用した。光活性化は、４０５ｎｍ、２９ｍＷ／ｃｍ２で５分間発光するように改造されたＰｈｏｔｏＲｅａｃｔ ３６５を用いた照射によって実行した。翌日、細胞を４％ＰＦＡを使用して固定し、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００／Ｔｗｅｅｎ２０を使用して透過処理し、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ中５％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）でブロックした。一次抗体（カスパーゼ－３、ａｂ１３８４７、Ａｂｃａｍ）および二次抗体（ヤギ抗ウサギＩｇＧ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４）を、５％ヤギ血清および０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで希釈した。スライドにカバースリップを追加し、Ｚｅｉｓｓ ＬＳＣＭ ８８０でイメージングした。画像分析は、ＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して実行した。図１４は、ＤＭＳＯ、５０ｎＭの化合物９３および１００ｎＭの化合物９３で処理したＨａＣａＴ細胞におけるカスパーゼ－３の発現と、発現レベルの定量を示す。
【0117】
例１２：ＳＣＣ－４細胞における化合物の共局在化
ＳＣＣ－４細胞を８ウェルチャンバースライド上に５０，０００細胞／ウェルで播種した。翌日、細胞を１μＭの化合物１０１および１μＭの化合物９３で１時間処理した。細胞を生細胞イメージング溶液培地に交換した。共染色（ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ、Ｂｏｄｉｐｙ ＥＲ Ｔｒａｃｋｅｒ、ＬｉｐｉｄＳｐｏｔ ６１０、またはＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ）をイメージングの３０分前に細胞に添加した。Ｚｅｉｓｓ ＬＳＣＭ ８８０でイメージングし、画像分析は、ＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して実行した。
ＳＣＣ－４細胞を８ウェルチャンバースライド上に５０，０００細胞／ウェルで播種した。翌日、細胞を１μＭの化合物１０１および１μＭの化合物９３で１時間処理した。細胞を生細胞イメージング溶液培地に交換した。共染色（ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ、Ｂｏｄｉｐｙ ＥＲ Ｔｒａｃｋｅｒ、ＬｉｐｉｄＳｐｏｔ ６１０、またはＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ）をイメージングの３０分前に細胞に添加した。Ｚｅｉｓｓ ＬＳＣＭ ８８０でイメージングし、画像分析は、ＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを使用して実行した。
【0118】
図１５は、化合物１０１とＳＣＣ－４細胞のミトコンドリア（ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ）、脂肪滴（ＬｉｐｉｄＳｐｏｔ６１０）および酸性細胞小器官（ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ）との共局在を示す。ピアソン係数を計算して、化合物の局在化と共染色の局在化の間の相関関係を実証した。結果を表１に示す。
【0119】
【表1】
【0120】
図１６は、化合物９３と、ＳＣＣ－４細胞のミトコンドリア（ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ）、小胞体（Ｂｏｄｉｐｙ ＥＲ Ｔｒａｃｋｅｒ）、脂肪滴（ＬｉｐｉｄＳｐｏｔ６１０）および酸性細胞小器官（ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ）との共局在を示す。ピアソン係数を計算して、化合物の局在化と共染色の局在化の間の相関関係を実証した。結果を表２に示す。
【0121】
【表2】
【0122】
例１３：化合物９３の脱保護
図１７に示すように、化合物９３の脱保護により、Ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］チオフェン－２－イル｝プロパ－２－エノエート１０３を生じた。以下に説明する。
図１７に示すように、化合物９３の脱保護により、Ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］チオフェン－２－イル｝プロパ－２－エノエート１０３を生じた。以下に説明する。
【0123】
化合物９３（５００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）をメタノール（３０ｍＬ）に溶解し、その後、ＮａＯＨ（３２ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ、Ｈ２Ｏ中の溶液として、１ｍＬ）を加え、得られた溶液を室温で５時間撹拌した。その混合物をジクロロメタンで希釈し、その有機物をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗黄色固体を得た。これをアセトニトリルからの再結晶によって精製し、化合物１０３を黄色固体（１７０ｍｇ、３６％）として得た：1H NMR (700 MHz, ジメチルスルホキシド-d6) δ 1.22 - 1.29 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.47 - 1.52 (m, 4H), 1.94 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.32 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.20 - 3.25 (m, 2H), 3.25 - 3.29 (m, 2H), 3.55 - 3.60 (m, 4H), 6.18 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.91 - 7.00 (m, 2H), 7.31 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.37 - 7.44 (m, 2H), 7.48 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H), 10.32 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, ジメチルスルホキシド-d6) δ 24.6, 25.0, 27.8, 28.4, 28.5, 32.1, 32.2, 40.5, 44.4, 46.8, 47.2, 80.1, 80.9, 96.6, 110.2, 114.7, 118.9, 125.3, 132.1, 132.4, 132.7, 135.5, 139.6, 150.7, 165.0, 169.1, 170.7; IR (ATR) vmax/cm-1 3207br, 2977w, 2930w, 2858w, 2194w, 1698m, 1619s, 1603s, 1526m, 1508m, 1231s, 1145s, 754m; MS (ASAP) m/z = 566.2 [M+H]+; HRMS (ASAP) 計算値 C31H40N3O5S [M+H]+: 566.2683, 実測値566.2683
【0124】
本明細書（添付の特許請求の範囲、要約書および図面を含む）で開示されるすべての特徴、および／または開示される方法またはプロセスのすべてのステップは、そのような特徴および／またはステップの少なくとも一部が相互に排他的である組み合わせを除いて、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書（添付の特許請求の範囲、要約書および図面を含む）に開示される各特徴は、別段の記載のない限り、同じ、同等、または同様の目的を果たす代替の特徴によって置き換えら得る。したがって、別段の記載のない限り、開示される各特徴は、一連の同等または類似の特徴の一般的な一例にすぎない。本発明は、前述の実施形態の詳細に限定されない。本発明は、本明細書（添付の特許請求の範囲、要約書および図面を含む）に開示される特徴の新規なもの、または新規な組み合わせ、または本明細書に開示される方法またはプロセスのステップの新規なもの、または新規な組み合わせにまで及ぶ。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【国際調査報告】