特表 2024-504340 癌の再発を予防する方法及び組合せ医薬

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-01-31

(54)【発明の名称】癌の再発を予防する方法及び組合せ医薬

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/21 20060101AFI20240124BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240124BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240124BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240124BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240124BHJP

   A61K 31/7068 20060101ALI20240124BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240124BHJP

   C07K 14/555 20060101ALN20240124BHJP

【ＦＩ】

A61K38/21 ZNA

A61K45/00

A61P35/00

A61K48/00

A61P35/02

A61K31/7068

A61P43/00 121

C07K14/555

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023544049

(86)(22)【出願日】2022-01-20

(85)【翻訳文提出日】2023-09-19

(86)【国際出願番号】 CN2022072921

(87)【国際公開番号】W WO2022156733

(87)【国際公開日】2022-07-28

(31)【優先権主張番号】202110084507.X

(32)【優先日】2021-01-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522030208

【氏名又は名称】シャーメン アモイトップ バイオテック カンパニー， リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＸＩＡＭＥＮ ＡＭＯＹＴＯＰ ＢＩＯＴＥＣＨ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(71)【出願人】

【識別番号】522030219

【氏名又は名称】バイオスティード ジーン トランスフォーメーション テック． カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＢＩＯＳＴＥＥＤ ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮ ＴＥＣＨ．ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】リャオ， シャオジン

(72)【発明者】

【氏名】ウー， ハンヂョウ

(72)【発明者】

【氏名】チュー， ホンラン

(72)【発明者】

【氏名】ジュー， ペイジュアン

(72)【発明者】

【氏名】シャオ， チンジァン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， ティンティン

(72)【発明者】

【氏名】イン， フェンホン

(72)【発明者】

【氏名】ウー， リンイン

(72)【発明者】

【氏名】チュワン， ル

(72)【発明者】

【氏名】チョウ， ウェイドン

(72)【発明者】

【氏名】スン， リー

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA01

4C084BA44

4C084DA21

4C084DA22

4C084DA23

4C084DA24

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB26

4C084ZB27

4C084ZC75

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA17

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC75

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA57

4H045DA15

4H045EA22

4H045EA28

(57)【要約】

本発明は、生物医学の分野に関する。本明細書において開示されるのは、ｉ）インターフェロンベースの治療剤を間欠的に投与すること、及びｉｉ）任意選択で追加の抗癌剤を投与することを含む、癌の再発を予防する方法である。本発明はまた、前記方法において使用するための組合せ医薬に関する。
【選択図】 なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象における癌の再発を予防する方法であって、前記対象に、
ｉ）インターフェロンベースの治療薬を投与するステップ；及び
ｉｉ）任意選択で、追加の抗癌剤を投与するステップ
を含む、方法。

【請求項2】

前記対象に少なくとも１つの連続的なコースで前記インターフェロンベースの治療剤を投与することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記対象に複数の連続的なコースで前記インターフェロンベースの治療剤を間欠的に投与することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記対象が癌を有すると診断されているが、抗癌治療を受けて寛解状態にある、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記抗癌治療が、外科手術、化学療法、放射線療法、免疫療法、又はその組合せである、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記寛解が完全寛解であり、例えば、前記対象において可視病変（腫瘍）が検出されない、請求項４に記載の方法。

【請求項7】

前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含むか、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子を含むか、又は内在性インターフェロンの生成を促進する物質を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記インターフェロンが、Ｉ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型のインターフェロン、例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンαである、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、インターフェロンλ、又はその変異体若しくは誘導体を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体がＰＥＧ化されている、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記インターフェロンベースの治療剤が、Ｐ１１０１、ペグベロン、ペガシス、ペギントロン、インファーゲン、ノバフェロン、イントロンＡ、ロフェロン－Ａ、ハプゲン、ペギンファー及びペグインターフェロンλからなる群から選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記インターフェロンベースの治療剤が、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル経路のアゴニストを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記インターフェロンベースの治療剤が、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、及びｄｉＡＢＺＩからなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記連続的な治療コースにおいて、実質的に全コースの間、前記対象におけるネオプテリンの濃度が、最初の投与前のネオプテリンの濃度よりも高くなるように、例えば、最初の投与前のネオプテリンの濃度の約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、約２５０％又はそれより高くなるように、前記インターフェロンベースの治療剤が投与される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記連続的な治療コースの期間が、最初の投与から最後の投与までの期間、プラス前記治療剤のインビボ半減期の約５倍である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記連続的な治療コースの期間が、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、なおさらに好ましくは約２週間～約６週間である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記連続的な治療コース間の間隔が、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、なおさらに好ましくは約２週間～約６週間である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記連続的な治療コースのそれぞれの期間が約１週間～約８週間であり、前記連続的な治療コース間の間隔が約１週間～約８週間である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記連続的な治療コースの各々の期間が約２週間～約６週間であり、前記連続的な治療コース間の間隔が約２週間～約６週間である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記インターフェロンベースの治療剤を２～２５以上の連続的な治療コースで投与する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記複数の連続的な治療コースの期間が実質的に同じである、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記連続的な治療コース間の間隔が実質的に同じである、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記追加の抗癌剤が、好ましくは前記対象における癌の再発を予防するためのものである、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記追加の抗癌剤が ｉ）化学療法剤、例えば、アルキル化剤、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；抗腫瘍性抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；化学療法の抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；抗腫瘍剤ホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、若しくはプロカルバジン；又は
ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤、例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４の阻害剤、例えばニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される抗体；又は
ｉｉｉ）低分子標的薬、例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カルフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブ；又は
ｉｖ）腫瘍関連抗原特異的抗体、例えばリツキサン、ハーセプチン、
好ましくは、前記抗癌剤が、オキサリプラチン、エピルビシン、パクリタキセル及びゲムシタビンから選択され、より好ましくはゲムシタビンである、請求項１～２３のいずれか一項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記癌が、白血病（例えば急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病、多毛性白血病）、肝臓癌、肺癌、結直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、喉頭乳頭腫、濾胞性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連のカポジ肉腫、及び腎細胞癌、好ましくは肝臓癌、肺癌、乳癌、結直腸癌、又はメラノーマから選択される、請求項１～２４のいずれか一項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

対象における癌の再発の予防に使用するための組合せ医薬であって、インターフェロンベースの治療剤及び追加の抗癌剤を含む、組合せ医薬。

【請求項27】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法によって対象における癌再発の予防に使用するためのものである、請求項２６に記載の組合せ医薬。

【請求項28】

前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロン若しくはその変異体若しくは誘導体を含むか、又はインターフェロン若しくはその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子を含むか、又は内在性インターフェロンの生成を促進する物質を含む、請求項２６又は２７に記載の組合せ医薬。

【請求項29】

前記インターフェロンが、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等のＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンである、請求項２６～２８のいずれか一項に記載の組合せ医薬。

【請求項30】

前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、インターフェロンλ、又はその変異体若しくは誘導体を含む、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の組合せ医薬。

【請求項31】

前記インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体がＰＥＧ化されている、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の組合せ医薬。

【請求項32】

前記インターフェロンベースの治療剤が、Ｐ１１０１、Ｐｅｇｂｅｒｏｎ、Ｐｅｇａｓｙｓ、Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ、Ｉｎｆｅｒｇｅｎ、Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ、ＩＮＴＲＯＮＡ、Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ、Ｈａｐｇｅｎ、ＰＥＧＩＮＦＥＲ及びＰｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ λからなる群から選択される、請求項２６～３１のいずれか一項に記載の組合せ医薬。

【請求項33】

前記インターフェロンベースの治療剤が、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル伝達経路のアゴニストを含む、請求項２６～３２のいずれか一項に記載の組合せ医薬。

【請求項34】

前記インターフェロンベースの治療剤が、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、及びｄｉＡＢＺＩからなる群から選択される、請求項３３に記載の組合せ医薬。

【請求項35】

前記抗癌剤が、
ｉ）化学療法剤、例えば、アルキル化剤、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；抗腫瘍性抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；化学療法用抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；抗腫瘍剤ホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々雑多な化学療法剤：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、若しくはプロカルバジン；又は
ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤、例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４の阻害剤、例えばニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される抗体；又は
ｉｉｉ）低分子標的薬、例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カルフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブ；又は
ｉｖ）腫瘍関連抗原特異的抗体、例えばリツキサン、ハーセプチン、
好ましくは、前記抗癌剤が、オキサリプラチン、エピルビシン、パクリタキセル及びゲムシタビンから選択され、より好ましくはゲムシタビンである、請求項２６～３４のいずれか一項に記載の組合せ医薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、生物医学の分野に関する。本明細書において開示されるのは、対象にｉ）インターフェロンベースの治療剤を間欠的に投与すること、及び任意選択でｉｉ）追加の抗癌剤を投与することを含む、癌の再発を予防するための方法である。本発明はまた、前記方法において使用するための組合せ医薬に関する。

【背景技術】

【0002】

インターフェロン（ＩＦＮ）は、複数の機能を有する活性タンパク質であり、単球及びリンパ球から産生されるサイトカインである。広範囲抗ウイルス活性、細胞の増殖、分化への影響、及び免疫機能の調節等、種々の生物活性を有しており、インターフェロンは、現在、最も重要な抗ウイルス感染症及び抗腫瘍の生物学的製剤である。

【0003】

現在、インターフェロンはＩ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型インターフェロンに分類される。タイプＩインターフェロンは、ＩＦＮ－α、及びＩＦＮ－β等を含む。ＩＦＮ－αインターフェロンは、主に単球－マクロファージによって生成される。さらに、Ｂ細胞及び線維芽細胞もＩＦＮ－αインターフェロンを合成し得る。ＩＦＮ－βインターフェロンは、主に繊維芽細胞によって生成される。ＩＦＮ－αインターフェロン及びＩＦＮ－βインターフェロンは共に、例えば単球－マクロファージ、多形核白血球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、血小板、上皮細胞、内皮細胞、及び腫瘍細胞に広く分布する同じ受容体に結合する。ＩＦＮαには２３を超えるサブタイプがあることが知られている。ＩＦＮβには１つのサブタイプしかない。ＩＩ型インターフェロン、又はγインターフェロンは、主に活性化Ｔ細胞（Ｔｈ０、Ｔｈ１細胞、殆ど全てのＣＤ８＋Ｔ細胞を含む）及びＮＫ細胞によって生成され、いわゆるリンパカインに属する。ＩＦＮ－γは、細胞外マトリクスに結合した形で存在している場合もあり、バイスタンダー効果によって細胞の増殖を制御し得る。ＩＦＮ－γは、成熟した赤血球を除く殆ど全ての細胞の表面に分布し得る。ＩＦＮ－γには１つのサブタイプしかない。ＩＩＩ型インターフェロンは、主にインターフェロンλを指す。

【0004】

インターフェロン、インターフェロン変異体、及びインターフェロン誘導体は、種々の治療に広く使用することが承認されている。ヒトの臨床治療について承認されているインターフェロン及び変異体としては、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、化合物インターフェロン（インファーゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ））、及びインターフェロン変異体（例えばノバフェロン（Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ））、インターフェロンβ、及びインターフェロンγ（１ｂ）等が挙げられる。インターフェロン誘導体としては、ペグインターフェロンα２ａ、ペグインターフェロンα２ｂ、及び統合型インターフェロン等が挙げられる。

【0005】

また、近年、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧ等のシグナル経路の発見及び解明に伴い、上述のシグナル経路に作用してインターフェロンを生成する一連のアゴニストが発見及び解明され、その使用も今後のインターフェロンベースの治療の新たな方向性となっている。現在のところ、この種のアゴニストは、ＨＢＶ及び関連する腫瘍の治療に用いられている。

【0006】

Ｉ型ＩＦＮは、癌の臨床治療のためにＦＤＡが承認した最初の免疫療法薬剤のバッチである。ＩＦＮは、血液系腫瘍に最も優れた治癒効果を示し、次いでリンパ系腫瘍にも効果があるが、悪性黒色腫、卵巣腫瘍、結直腸癌等の固形腫瘍については治癒効果が２０％以下と最悪の結果となる。また、インターフェロンと化学療法、放射線療法、免疫療法との併用適用は、現在のところインターフェロンを用いた一般的な抗腫瘍療法である。例えば、肝臓癌及び結直腸癌の治療に対するインターフェロンと５－フルオロウラシルとの併用適用、肺癌を治療するためのインターフェロンとシスプラチン、カルボプラチン等との併用適用がある。これらの研究は一定の成果を上げているが、全体的な効果はそれほど満足できるものではなく、予後は不良である。

【0007】

抗癌剤治療に加えて、癌の死亡率を減少させる重要な方法は、癌の再発を予防することである。しかしながら、癌の再発を予防するためにインターフェロンを適用して成功したという報告は、当技術分野には存在しない。

【発明の概要】

【0008】

一局面において、本発明は、対象における癌の再発を予防するための方法であって、
対象に、
ｉ）インターフェロンベースの治療剤を投与すること；及び
ｉｉ）任意選択で、追加の抗癌剤を投与すること
を含む、方法を提供する。

【0009】

いくつかの実施形態において、本方法は、対象にインターフェロンベースの治療剤を少なくとも１コースで連続して投与することを含む。

【0010】

いくつかの実施形態において、本方法は、対象に、インターフェロンベースの治療剤を複数の連続的なコースで間欠的に投与することを含む。

【0011】

いくつかの実施形態において、対象は、癌を有すると診断されたが、抗癌治療を受け、寛解状態にある。いくつかの実施形態において、抗癌治療は、外科手術、化学療法、放射線療法、免疫療法、又はその組合せである。いくつかの実施形態において、寛解は完全寛解であり、例えば、対象において可視病変（腫瘍）が検出されない。

【0012】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含むか、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子を含むか、又は内在性インターフェロンの生成を促進する物質を含む。

【0013】

いくつかの実施形態において、インターフェロンは、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等のＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンである。

【0014】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、インターフェロンλ、又はその変異体若しくは誘導体を含む。

【0015】

いくつかの実施形態において、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体はＰＥＧ化されている。

【0016】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、Ｐ１１０１、ペグベロン（Ｐｅｇｂｅｒｏｎ）、ペガシス（Ｐｅｇａｓｙｓ）、ペギントロン（Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ）、インファーゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ）、ノバフェロン（Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ）、イントロンＡ（ＩＮＴＲＯＮＡ）、ロフェロン（Ｒｏｆｅｒｏｎ）－Ａ、ハプゲン（Ｈａｐｇｅｎ）、ペギンファー（ＰＥＧＩＮＦＥＲ）及びペグインターフェロンλからなる群から選択される。

【0017】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル経路のアゴニストを含む。

【0018】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、及びｄｉＡＢＺＩからなる群から選択される。

【0019】

いくつかの実施形態において、前記連続的な治療コースにおいて、実質的に全コースの間、対象におけるネオプテリンの濃度が、最初の投与前のネオプテリンの濃度よりも高くなるように、例えば、最初の投与前のネオプテリンの濃度の約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、約２５０％に又はそれより高くなるように、インターフェロンベースの治療剤が投与される。

【0020】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースの期間は、最初の投与から最後の投与までの期間、プラス治療剤のインビボ半減期の約５倍である。

【0021】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースの期間は、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、及びなおさらに好ましくは約２週間～約６週間である。

【0022】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、及びなおさらに好ましくは約２週間～約６週間である。

【0023】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約８週間であり、治療コース間の間隔は、約１週間～約８週間である。

【0024】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約２週間～約６週間であり、治療コース間の間隔は、約２週間～約６週間である。

【0025】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、２～２５の、又はそれより多い連続的な治療コースで投与される。

【0026】

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースの期間は実質的に同じである。

【0027】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は実質的に同じである。

【0028】

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、好ましくは、対象における癌の再発を予防するために使用される。

【0029】

いくつかの実施形態において、抗癌剤は、
ｉ）化学療法剤、例えば、アルキル化剤、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；抗腫瘍性抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；化学療法の抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；抗腫瘍剤ホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、プロカルバジン；又は
ｉｉ）ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４の阻害剤等の免疫チェックポイント阻害剤、例えば：ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される抗体；又は
ｉｉｉ）低分子標的薬、例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カルフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブ；又は
ｉｖ）リツキサン、ハーセプチン等の腫瘍関連抗原特異的抗体であり、
好ましくは、抗癌剤は、オキサリプラチン、エピルビシン、パクリタキセル及びゲムシタビンから選択され、より好ましくはゲムシタビンである。

【0030】

いくつかの実施形態において、癌は、白血病（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病、多毛性白血病（ｐｏｌｙｃａｐｉｌｌａｒｙ ｌｅｕｋｅｍｉａ）等）、肝臓癌、肺癌、結直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、喉頭乳頭腫、濾胞性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連のカポジ肉腫、及び腎細胞癌、好ましくは肝臓癌、肺癌、乳癌、結直腸癌、又はメラノーマから選択される。

【0031】

一態様において、本発明は、対象における癌の再発の予防に使用するための組合せ医薬であって、インターフェロンベースの治療剤及び追加の抗癌剤を含む、組合せ医薬を提供する。

【0032】

いくつかの実施形態において、組合せ医薬は、本発明の方法によって対象における癌の再発の予防に使用するためのものである。

【0033】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含むか、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子を含むか、又は内在性インターフェロンの生成を促進する物質を含む。

【0034】

いくつかの実施形態において、インターフェロンは、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等のＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンである。

【0035】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、インターフェロンλ、又はその変異体若しくは誘導体を含む。

【0036】

いくつかの実施形態において、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体はＰＥＧ化されている。

【0037】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、Ｐ１１０１、ペグベロン（Ｐｅｇｂｅｒｏｎ）、ペガシス（Ｐｅｇａｓｙｓ）、ペギントロン（Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ）、インファーゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ）、ノバフェロン（Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ）、イントロンＡ（ＩＮＴＲＯＮＡ）、ロフェロン（Ｒｏｆｅｒｏｎ）－Ａ、ハプゲン（Ｈａｐｇｅｎ）、ペギンファー（ＰＥＧＩＮＦＥＲ）及びペグインターフェロンλからなる群から選択される。

【0038】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル経路のアゴニストを含む。

【0039】

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、及びｄｉＡＢＺＩからなる群から選択される。

【0040】

いくつかの実施形態において、抗癌剤は、
ｉ）化学療法剤、例えば、アルキル化剤、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；抗腫瘍性抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；化学療法の抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；抗腫瘍剤ホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、プロカルバジン；又は
ｉｉ）ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４の阻害剤等の免疫チェックポイント阻害剤、例えば：ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される抗体；又は
ｉｉｉ）低分子標的薬、例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カルフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブ；又は
ｉｖ）リツキサン、ハーセプチン等の腫瘍関連抗原特異的抗体であり、
好ましくは、抗癌剤は、オキサリプラチン、エピルビシン、パクリタキセル及びゲムシタビンから選択され、より好ましくはゲムシタビンである。

【図面の簡単な説明】

【0041】

【図1】ｍＩＦＮ－α４発酵上清のＳＰ セファロースファーストフロー（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ）の溶出プロファイルを示す。

【図2】ＳＰセファロースファーストフロー精製標的ｍＩＦＮ－α４の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１４％分離ゲル、銀染色）電気泳動の結果を示す。

【図3】グリコシルを除去したｍＩＦＮ－α４のＱ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ精製溶出プロファイルを示す。

【図4】グリコシルを除去したｍＩＦＮ－α４のＱ セファロースファーストフロー精製原液の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１４％分離ゲル、銀染色）電気泳動の結果を示す。

【図5】ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４のＳＰ セファロースファーストフロー精製溶出プロファイルを示す。

【図6】ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４原液の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（銀染色）電気泳動の結果を示す。

【図7】１μｇ／マウスのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をＢＡＬＢ／ｃマウスに単回皮下注射したときの血漿濃度時間曲線を示す。

【図8】マウスにおける移植肝臓癌Ｈ２２の再発予防に関する、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独と、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用の比較実験の腫瘍発生率曲線である。

【図9】マウスにおける移植肝臓癌Ｈ２２の再発予防のためのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独と、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用の比較実験の生存曲線である。

【図10】マウスにおける移植結腸直腸癌ＣＴ２６の術後再発予防に関する、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独と、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用の比較実験の腫瘍発生率曲線である。

【図11】マウスにおける移植結腸直腸癌ＣＴ２６の術後再発予防に関する、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独と、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用の比較実験の生存曲線である。

【発明を実施するための形態】

【0042】

本発明者らは、インターフェロンを、例えば複数のコースでインターフェロンを間欠的に投与することにより、リスクのある患者において癌再発を予防し得ることを予期せず見出した。

【0043】

したがって、一態様において、本発明は、対象における癌の再発を予防する方法であって、対象にインターフェロンベースの治療剤を投与することを含む、方法を提供する。

【0044】

いくつかの実施形態において、本方法は、対象にインターフェロンベースの治療剤を少なくとも１コースで連続して投与することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、対象にインターフェロンベースの治療剤を複数の連続的なコースで間欠的に投与することを含む。

【0045】

本明細書で使用される場合、「対象」は、ヒト等の哺乳動物である。

【0046】

いくつかの実施形態において、対象は、癌を有すると診断されているが、抗癌治療を受け、寛解状態にある。いくつかの実施形態において、抗癌治療は、外科手術、化学療法、放射線療法、免疫療法、又はその組合せである。いくつかの実施形態において、寛解は完全寛解であり、例えば、対象において可視病変（腫瘍）が検出されない。

【0047】

本明細書で使用する「インターフェロン」は、ヒトインターフェロン、例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等のＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンであってもよい。

【0048】

本明細書で使用する「インターフェロンベースの治療剤」は、天然のインターフェロンの効果の少なくとも一部を生成することができる治療剤を指す。

【0049】

例えば、「インターフェロンベースの治療剤」は、自然に単離されたインターフェロン、又は組換え生成されたインターフェロン、例えばＩ型インターフェロン、好ましくはインターフェロンαを含み得る。好適なインターフェロンαとしては、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ又はインターフェロンα１ｂが挙げられるが、これらに限定されない。

【0050】

また、「インターフェロンベースの治療剤」は、インファーゲン（組換え統合型インターフェロン）等のインターフェロン変異体を含み得る。

【0051】

また、「インターフェロンベースの治療剤」は、インターフェロン誘導体、例えば、ＰＥＧ化インターフェロン又はその変異体、アルブミン化インターフェロン又はその変異体、及び他のタンパク質及び有機修飾されたインターフェロン及びその変異体等を含み得る。ＰＥＧ化修飾インターフェロン又はその変異体の例としては、ペグインターフェロンα２ａ（例えば、ペガシス、４０Ｋｄ二分枝ＵＰＥＧ－ＮＨＳ修飾）、ペグインターフェロンα２ｂ（例えば、ペギントロン（Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ）、１２Ｋｄ直鎖ＰＥＧ－ＳＣ修飾）、ペグインターフェロンα２ｂ（例えば、ペグベロン、Ｙ型４０Ｋｄ二分枝ＰＥＧ修飾）、培養インターフェロンα－２（例えば、ペギンファー（ＰＥＧＩＮＦＥＲ））、ペグインターフェロンλ、及びＰ１１０１等が挙げられる。

【0052】

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ＰＥＧ化インターフェロン又はその変異体等の長時間作用型インターフェロンを含む。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、短時間作用型インターフェロンを含む。

【0053】

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、複数の種類のインターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含む。

【0054】

「インターフェロンベースの治療剤」という用語は、販売が承認されているインターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含む種々の治療剤を網羅する。いくつかの実施形態では、「インターフェロンベースの治療剤」は、ペグベロン（ペグインターフェロンα２ｂ、アモイトプ（Ａｍｏｙｔｏｐ））である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ペガシス（ペグインターフェロンα２ａ、Ｒｏｃｈｅ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」はペギントロン（ペグインターフェロンα２ｂ注射薬、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」はインファーゲン（組換え統合型インターフェロン、Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（組換えヒトインターフェロンα２ｂ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ（インターフェロンα２ａ、Ｒｏｃｈｅ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ハプゲン（Ｈａｐｇｅｎ）（組換えヒトインターフェロンα１ｂ、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｓａｎｙｕａｎ Ｊｉｙｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＣＯ．，Ｌｔｄ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ＰＥＧＩＮＦＥＲ（ＰＥＧ化－統合型インターフェロンα－２注射薬、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋａｗｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ペグインターフェロンλ（Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ）である。

【0055】

いくつかの好ましい実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロンα２ｂを含む。いくつかの好ましい実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ポリエチレングリコール修飾インターフェロンα２ｂを含む。いくつかの好ましい実施形態において、インターフェロンベースの治療剤はペグベロンである。

【0056】

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含み、ここで、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体は、配列番号１～５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、又は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体は、配列番号１～５のいずれか１つに対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0057】

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子、例えば、組換え核酸発現ベクターも含む。適切な発現ベクター、特に治療用途に適した発現ベクターは、当技術分野の当業者によって容易に決定することができる。

【0058】

「インターフェロンベースの治療剤」には、また、内在性インターフェロンの生成を促進することができる物質、例えば、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル経路のアゴニスト等が含まれていてもよい。内在性インターフェロンの生成を促進することができる物質の例としては、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、ｄｉＡＢＺＩ等が挙げられるが、これらに限定されない^{［１］－［３４］}。

【0059】

本明細書において使用する用語「連続的な治療コース」は、治療コース中に治療剤を投与することにより、対象体内の（外因性又は内在性）インターフェロンのインビボ有効濃度（例えば、有効血中濃度）を連続的に維持すること、又は対象体内のインターフェロンの主要薬力学マーカーであるネオプテリン（ＮＰＴ）のインビボ濃度（例えば、血中濃度）を、治療剤を投与していない時の濃度（初期濃度又はベースライン濃度）よりも連続的に高く維持することが可能になることを意味する。インターフェロンの主要薬力学的マーカーであるネオプテリンとインターフェロンの投与との間には良好な相関関係があるため、ネオプテリンのインビボ濃度（血中濃度等）の変化を「連続的な治療コース」の指標として使用することが特に好ましい。例えば、「連続的な治療コース」は、インターフェロンベースの治療剤を１回又は複数回投与することにより、実質的に治療コース全体の間、対象のネオプテリン濃度を最初の投与前のネオプテリン濃度（ベースライン濃度）よりも高く、例えば、最初の投与前のネオプテリン濃度の約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、約２５０％又はそれより高く保つことができる治療コースと定義することができる。ネオプテリンのインビボ濃度は、当技術分野で知られている方法によって決定し得る。

【0060】

連続的な治療コースでは、インターフェロンベースの治療剤の投与スキームは、一般的には、インビボにおける半減期等、選択された治療剤の特性によって決定される。例えば、連続的治療コースにおいて、長時間作用型インターフェロン（インビボの半減期が概ね３０～１２０時間）は、１週間に１回程度、２週間に１回程度で投与しても、又は１ヶ月に１回程度若しくは投与量を増やす場合にはさらに長期間にわたって投与してもよく、短時間作用型インターフェロン（インビボの半減期が概ね２～５時間）は、１日１回、２日に１回、又は１週間に３回投与しても、又は投与量を増やす（例えば９～３６ＭＩＵ以上）の場合は１週間に１回投与しても、又は投与量を低下させる場合は１日に複数回投与してもよい。連続的な治療コースにおいて、インターフェロンベースの治療剤の投与回数は、上記の「連続的な治療コース」の定義を満たす限り、特に限定されるものではない。当技術分野の当業者であれば、インターフェロンベースの治療剤の、ネオプテリン等の薬力学的マーカーのインビボ濃度（血中濃度等）に基づいて連続的な治療コースを決定することができる。

【0061】

いくつかの実施形態において、「連続的な治療コース」で、「インターフェロンベースの治療剤」をその従来の投与スキームで投与してもよい。例えば、インファーゲン（組換え統合型インターフェロンα）、インターフェロンα２ｂ（イントロンＡ等）、インターフェロンα２ａ（ロフェロン－Ａ等）、インターフェロンα１ｂ（ハプゲン等）は、３～１８ＭＩＵの用量範囲で、１日１回、又は２日に１回、又は１週間に３回、投与してもよい。ペグインターフェロンα２ａ（例えば、ペガシス）、ペグインターフェロンα２ｂ（例えば、ペギントロン又はペグベロン）、ＰＥＧ化統合型インターフェロンα－２（例えば、ペギンファー）又はペグインターフェロンλは、４５～２７０μｇの投与量範囲で週に１回投与し得る。Ｐ１１０１は、約４００μｇを２週間に１回投与してもよい。アルブミン化インターフェロンα２ｂは、約９００～約１８００μｇを２週間に１回、又は約１２００μｇを４週間に１回投与してもよい。

【0062】

インターフェロンの有効性は免疫系に依存する。しかし、いかなる理論にも拘束されるものではないが、インターフェロンを長期間連続投与することによって、回復が困難な免疫細胞の枯渇がもたらされ、それによって、有効性が低下すると考えられている。したがって、連続的なコースの期間は、治療薬が一定の効果を達成するのを可能とすべきであるが、免疫細胞の過剰な枯渇は避けるべきである。治療コースにおける免疫細胞の枯渇は、通常、生理学的／生化学的指標の変化によって確認される。

【0063】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、少なくとも約１週間である。

【0064】

いくつかの実施形態では、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、最大で約２４週間である。

【0065】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約２４週間であり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、又は約２４週間である。

【0066】

いくつかの好ましい実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約１２週間である。いくつかのさらに好ましい実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約８週間である。いくつかのさらに好ましい実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約２週間～約６週間である。いくつかのさらに好ましい実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約２週間である。

【0067】

いくつかの実施形態において、それぞれの連続的な治療コースの終点（すなわち、連続的な治療コース間の間隔の開始点）は、連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療剤の最後の投与の時点、プラス治療剤のインビボ半減期の約５倍であってもよい。すなわち、連続的な治療コースの期間は、最初の投与から最後の投与までの期間、プラス治療剤のインビボ半減期の約５倍である。半減期の５倍を過ぎると、治療剤はもはや実質的な再発予防効果をもたらさないと考えられている。

【0068】

本発明の方法では、複数の連続的な治療コース間の間隔は、免疫細胞の再生サイクルに依存し得る。この間隔の期間は、薬剤の投与により減少した対象の免疫細胞が、再発予防を効果的に実施できるレベルまで回復するのを可能とすべきである。一般的に、免疫細胞が増殖するには約１～２週間かかると考えられている。したがって、複数の連続的な治療コースの最短の間隔は、約１週間とし得る。

【0069】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は、少なくとも約１週間である。

【0070】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は最大で約２４週間である。

【0071】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は、約１週間から約２４週間であり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、又は約２４週間である。

【0072】

いくつかの好ましい実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は、約１週間～約１２週間である。いくつかのより好ましい実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は、約１週間～約８週間である。さらにいくつかの好ましい実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は、約２週間～約６週間である。

【0073】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間から約２４週間であり、治療コース間の間隔は、約１週間から約２４週間である。

【0074】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約１週間～約１２週間であり、治療コース間の間隔は約１週間～約１２週間である。

【0075】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約８週間であり、治療コース間の間隔は、約１週間～約８週間である。

【0076】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約２週間～約６週間であり、治療コース間の間隔は約２週間～約６週間である。

【0077】

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約２週間であり、治療コース間の間隔は約２週間である。

【0078】

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５の、又はそれより多い連続的な治療コースで投与される。

【0079】

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースの期間は実質的に同じである。

【0080】

いくつかの実施形態において、治療コースの時間間隔は実質的に同じである。

【0081】

いくつかの具体的な実施形態において、インターフェロンベースの治療剤はペグベロンであり、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約５週間～約２４週間であり、連続的な治療コース間の間隔は約２週間～８週間である。

【0082】

いくつかの実施形態において、癌としては、白血病（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病、多毛性白血病等）、肝臓癌、肺癌、結直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、喉頭乳頭腫、濾胞性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫、及び腎細胞癌等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、疾患は骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）である。いくつかの好ましい実施形態において、疾患は、肝臓癌、肺癌、乳癌、結直腸癌又はメラノーマである。

【0083】

いくつかの実施形態において、本方法は、対象に追加の抗癌剤を投与することをさらに含む。追加の抗癌剤は、好ましくは、対象における癌の再発を予防するために使用される。

【0084】

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、化学療法剤であり、例えば、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；例えば、化学療法的な代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；例えば、化学療法的な抗腫瘍抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；例えば化学療法的な抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；例えば、抗腫瘍剤のホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤等：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、又はプロカルバジンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0085】

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は小分子標的薬剤であり、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カーフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ。セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブを含むがこれらに限定されない。

【0086】

また、追加の抗癌剤はリツキサン、ハーセプチン等の腫瘍関連抗原特異的抗体であってもよい。

【0087】

また、追加の抗癌剤は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４等の阻害剤等の免疫チェックポイント阻害剤であってもよく、例えば、特異的抗体等であってもよい。免疫チェックポイント阻害剤の例としては、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、及びアベルマブ等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0088】

いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤はオキサリプラチンである。いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤は、エピルビシンである。いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤はパクリタキセルである。

【0089】

いくつかの好ましい実施形態において、化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、及びアンシタビン等の抗代謝性化学療法剤である。いくつかの最も好ましい実施形態において、化学療法剤はゲムシタビンである。

【0090】

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」の投与は、追加の抗癌剤の投与とは重複しない。

【0091】

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、複数の連続的な治療コースの間に投与される。例えば、追加の抗癌剤は、「インターフェロンベースの治療剤」の投与間隔の間の期間に投与されてもよく、前記期間は、前記間隔よりも短いか又は等しい。

【0092】

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」の投与は、追加の抗癌剤の投与と重複している。

【0093】

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コース期間中及び間隔期間中に追加の抗癌剤が投与される、つまり、予防治療期間全体で追加の抗癌剤が投与される（完全に重複する）。

【0094】

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、従来のスキーム、例えば、治療される特定の癌に対するその従来の投与スキームに従って投与される。

【0095】

一局面において、本発明は、本発明の方法によって対象における癌の再発の予防に使用するための、インターフェロンベースの治療剤を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物はまた、追加の薬剤を含む。インターフェロンベースの治療剤及び抗癌剤は、上記で定義した通りである。

【0096】

一局面において、本発明は、本発明の方法によって対象における癌の再発の予防に使用するための組合せ医薬であって、インターフェロンベースの治療剤及び追加の抗癌剤を含む組合せ医薬を提供する。

【0097】

一局面において、本発明は、本発明の方法によって対象における癌の再発を予防するための医薬組成物の調製におけるインターフェロンベースの治療剤の使用を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物はまた、追加の抗癌剤を含む。インターフェロンベースの治療剤及び抗癌剤は、上記で定義した通りである。

【0098】

一態様において、本発明は、対象の癌の再発を防止するための医薬組成物の調製における、追加の抗癌剤と組み合わせたインターフェロンベースの治療剤の使用を提供する。インターフェロンベースの治療剤及び抗癌剤は、上記で定義した通りである。インターフェロンベースの治療剤及び／又は追加の抗癌剤は、本発明の方法に従って投与し得る。

【0099】

一態様において、本発明は、インターフェロンベースの治療剤及び使用説明書を含むキットを提供し、使用説明書は、インターフェロンベースの治療剤を対象における癌の再発を防止するために、本発明の方法に従って使用してもよい又は本発明の方法に従って投与してもよいとの説明を提供する。いくつかの実施形態において、キットは、追加の抗癌剤をさらに含む。インターフェロンベースの治療剤及び追加の抗癌剤は、上記で定義した通りである。

【実施例】

【0100】

以下の実施例は、本発明をよりよく説明するために提示するに過ぎず、本発明をいかなる形でも限定することを意図するものではない。

【0101】

実施例１．組換えマウスインターフェロンα４（ｍＩＦＮ－α４）の調製
インターフェロンは、癌治療にも広く用いられているが、その効果を改善する必要がある。そこで、インターフェロンの連続的投与によって、実際に部分的な免疫抑制及び免疫細胞の疲弊が起こり、その後の治療効果が悪くなるかどうかを検討するために、マウスにおいてインターフェロンの間欠的投与と連続的投与の効果を比較した。

【0102】

抗腫瘍効果に関する多くの研究は、ヌードマウス（正常な胸腺がない）を宿主として行われていた。ヌードマウスの免疫状態は正常なマウスに比べて弱いため、正常な状態での免疫反応を反映させることは困難である。正常マウスに基づいた抗腫瘍モデルでは、インターフェロンの免疫系への作用が部分的に実現されてもよく、これは、インターフェロンを投与する抗腫瘍療法の効果が反映されていると考えられる。機能実現の観点からは、インターフェロンがその抗ウイルス及び抗腫瘍効果を十分に発揮するためには、宿主の免疫系に依存する必要がある。インターフェロンには強い種特異性があるため、実施例で正常なマウスを研究対象として使用した場合、マウスのインターフェロン又はその誘導体を使用することで、その生理作用及び実施効果をよりよく反映させることができる。本発明のマウスを用いた研究モデルでは、インターフェロン治療薬剤及びその誘導体の代表として、ＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα４（ＰＥＧ－ｍＩＦＮα４）を用いた。

【0103】

ｍＩＦＮ－α４のアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ ＮＰ＿０３４６３４）に従い、ピキア・パストリスの好ましいコドンに合わせてｍＩＦＮ－α４のｃＤＮＡ配列を最適化して設計し、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．に委託してｃＤＮＡを合成した。ｍＩＦＮ－α４をコードするｃＤＮＡをｐＰＩＣ９Ｋプラスミドに組み換え、ＴＯＰ１０コンピテントセルに形質転換し、ＬＢ固体培地上にプレーティングし、３７℃で一晩培養した。単一のクローンを選んでＬＢ液体培地に接種し、次いでこれを３７℃で一晩培養した。プラスミドを抽出し、ＸｈｏＩ及びＮｏｔＩで二重消化を行った。陽性クローンは、核酸電気泳動で同定し、さらに核酸配列決定で確認した。陽性クローンのプラスミドをＳａｌＩで消化して線状化し、ピキア・パストリスＧＳ１１５に電気形質導入し、ＲＤプレートにプレーティングし、２８～３０℃で３日間培養した。陽性の形質転換体を選んでＹＰＤ液体培地に接種し、２８－３０℃で一晩培養し、ＯＤ６００ｎｍの最終濃度が約１になるようにＢＭＭＹ培地に移し、２８－３０℃で約２４時間インキュベートした。メタノールを最終濃度が約１％になるまで添加し、さらに２８～３０℃で約２４時間培養した。培養液を遠心分離して上清を回収し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動によりｍＩＦＮ－α４の発現を検出した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果によって、より高い発現及び安定した発現を有する操作株を選択し、その後、発酵槽で発酵させた。

【0104】

発酵槽は３０Ｌであった。発酵培養及びメタノール誘導については「Ｐｉｃｈｉａ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ」を参照し、誘導時間は約３０ｈであった。発酵上清を遠心分離で回収し、５Ｋの中空糸膜チューブで３～５回限外濾過して濃縮し、緩衝液系を２０ｍＭリン酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－５０ｍＭ塩化ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ６．５）に置き換えた。続いて、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗクロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ３８ｍｍ×１６０ｍｍ）に装填した後、２０ｍＭリン酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩（ｐＨ６．５）（溶液Ａ）を用いて、カラムの約３容量を洗浄した。溶液Ａ及び２０ｍＭリン酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１Ｍ塩化ナトリウム溶液（ｐＨ６．５）（溶液Ｂ）を使用して、勾配溶出を行った。ｍＩＦＮ－α４標的サンプルを回収し、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用サンプル（分離ゲル濃度１４％、銀染色）を採取した。溶出プロファイルを図１に、電気泳動の結果を図２に示す。

【0105】

ｍＩＦＮ－α４ ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ精製サンプルを５Ｋ限外濾過膜パッケージを用いた限外濾過によって濃縮し、２０ｍＭリン酸緩衝液－５０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン－２０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ７．０）に置換した後、その濃度を約１．０ｍｇ／ｍｌに調整した。ｍＩＦＮ－α４タンパク質と酵素の質量比が約２０：１になるようにグリコシダーゼを添加し、２５℃で約２０時間消化を行い、グリコシル基を除去した。消化したサンプルを５ｍＭホウ酸緩衝液－１０ｍＭアルギニン塩酸塩（ｐＨ９．０）で約６倍に希釈し、Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ クロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ５０ｍｍ×１５４ｍｍ）に装填した。２０ｍＭホウ酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン（ｐＨ９．０）（溶液Ｃ）を用いて、カラムの約３容量を洗浄した。溶液Ｃ及び２０ｍＭホウ酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭフォルマザンチオニン－０．３Ｍ塩化ナトリウム（ｐＨ９．０）（溶液Ｄ）を用いて勾配溶出を行った。目的の脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４サンプルを回収し、１０％酢酸でｐＨを約ｐＨ５．０に調整した。５Ｋ限外濾過膜を用いて限外濾過により濃縮し、緩衝液を５ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－５０ｍＭアルギニン塩酸塩－１００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．０）に置換した。得られたサンプルは、脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４のストック溶液であった。サンプルは検査に出すために採取して送られ、残りのサンプルは後で使用するために－７０℃で凍結した。溶出プロファイルを図３に示し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果を図４に示す。

【0106】

脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４ストック溶液の細菌性エンドトキシン含有量は、リムルス試薬法により６０ＥＵ／ｍｇ未満と決定した。特異的活性は、市販のｍＩＦＮ－α４（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号１２１１５－１）を標準として使用し、マウス線維芽細胞／脳心筋炎ウイルス（Ｌ９２９／ＥＭＣＶ）サイトパス阻害法を用いて５．４×１０^８Ｕ／ｍｇと決定した。

【0107】

実施例２．ＰＥＧ化組換えマウスインターフェロン（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）の調製
この脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４ストック溶液を、５Ｋ限外濾過膜パッケージを用いた５ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－５０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．０）の緩衝液による限外濾過によって置換した。約３３３ｍｌのサンプル（脱グリコシル化ｍＩＦＮα４含量約５００ｍｇ）を採取し、約２２ｍｌの０．８Ｍホウ酸／水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．４）を添加し、よく撹拌した。タンパク質と４０ｋＤのＹ型ポリエチレングリコールスクシンイミドエステル（ＹＰＥＧ－ＮＨＳ）の質量比が約１：８になるようにＹＰＥＧ－ＮＨＳを添加した後、これを素早く撹拌し、室温で１０分間反応させた。その後、約２０ｍｌの０．２Ｍメチオニンを添加して反応を停止させ、１０％酢酸でｐＨを５．０に調整した。その後、５５０ｍｌの純水を添加した後、さらに６００ｍｌの２０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン（ｐＨ５．１）（溶液Ｅ）を添加し、よく混合した。その後、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗクロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ５０ｍｍ×１９４ｍｍ）に装填し、溶液Ｅを用いてカラムの約５容量の洗浄を行った。その後、溶液Ｅ及び２０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン－６００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．１）（溶液Ｆ）を用いて勾配溶出を行い、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４標的サンプルを回収した。５Ｋ限外濾過膜パッケージを用いた限外濾過により緩衝液を２０ｍＭリン酸緩衝液－１２３ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）に置換した後、適当に濃縮し、０．５％のＴｗｅｅｎ８０をＴｗｅｅｎ８０の最終濃度が約０．００５％になるように添加した。得られたサンプルは、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４ストック溶液（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）であった。サンプルを採取してから検査に出し、残ったサンプルは後で使用するために凍結して－７０℃で保存した。溶出プロファイルを図５に示し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果を図６に示す。

【0108】

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４ストック溶液の細菌性エンドトキシン含有量は、リムルス試薬法により１５ＥＵ／ｍｇ未満と決定した。特異的活性は、市販のｍＩＦＮ－α４（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号１２１１５－１）を標準として使用し、マウス線維芽細胞／脳筋心筋炎ウイルス（Ｌ９２９／ＥＭＣＶ）のサイトパス阻害法を用いて、６．１×１０^６Ｕ／ｍｇと決定した。

【0109】

実施例３．健康なＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の皮下注射の薬物動態学的研究
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の血中濃度を二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡにより検出した。Ｍｏｕｓｅ ＩＦＮ ａｌｐｈａ Ｐｌａｔｉｎｕｍ ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＢＭＳ６０２７／ ＢＭＳ６０２７ＴＥＮ，Ｔｈｅｒｍｏ）の試験キットを使用したが、内在性ｍＩＦＮ－αの測定結果への干渉を避けるため、レポーター抗体を抗ＰＥＧ抗体３．３ビオチン（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ（ＩＢＭＳ），Ｔａｉｗａｎ，Ｃｈｉｎａ）に変更した。

【0110】

６～８週齢、ＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｎ＝６５）に、１μｇ／マウスのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を首後部の皮下に単回皮下注射した。注射前（０時間）と、注射後の１５時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、１６８時間、２１６時間、２６４時間、３１２時間に血漿サンプルを回収し、血中濃度を決定した。薬物動態パラメータの算出にはＰｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ６．４ソフトウェアを使用した。

【0111】

血中濃度決定の結果を表１に、血中濃度－投与時間曲線を図７に、及び薬物動態パラメータの結果を表２に示す。１μｇ／マウスのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をＢＡＬＢ／ｃマウスの首後部に単回皮下注射し、血漿濃度ピーク時間（Ｔ_ｍａｘ）は２４時間、ピーク濃度時間（Ｔ_ｍａｘ）は２６８ｎｇ／ｍｌ、排出半減期（Ｔ_１／２）は２８．３時間であった。

【0112】

【表1】

【0113】

【表2】

【0114】

実施例４．ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与、又はゲムシタビン投与と組み合わせたＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与による、マウスにおける移植肝臓癌Ｈ２２の再発予防に関する比較試験
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、マウス肝臓癌Ｈ_２２細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。

【0115】

腫瘍治療後、患者の体内の腫瘍負荷は比較的低いため、腫瘍治療後の状態を模倣するために低い腫瘍移植体積を使用する。６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスにＨ２２細胞（１×１０^４／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢脇下に皮下接種した。腫瘍接種３日後、無作為に以下の実験群に分けた：ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４群（Ｎ＝２８、雌１４匹、及び雄１４匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（Ｎ＝２８、雌１４匹、雄１４匹）、通常の生理食塩水対照群（Ｎ＝２８、雌１４匹、及び雄１４匹）、及びゲムシタビン単独群（Ｎ＝２８、雌１４匹、及び雄１４匹）。

【0116】

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４はマウス１匹あたり１マイクログラムの用量を頸部背面に皮下注射によって投与した。投与は群分けの翌日から開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４群では、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を週１回、９週間投与した後、１０３日間休薬した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群では、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４及びゲムシタビンを週１回、９週間投与した後、１０３日間休薬した。ゲムシタビン単独群では、ゲムシタビンを週１回、９週間投与した後、１０３日間休薬した。通常の生理食塩水対照群には同体積の通常の生理食塩水を投与した。ゲムシタビンは６０ｍｇ／ｋｇの用量を腹腔内注射した。

【0117】

各群の腫瘍発生率は、腫瘍体積が６２．５ｍｍ^３以上となった時点で算出し、腫瘍発生陽性と判定した。腫瘍発生率の変化を図８に示す。腫瘍接種後１６６日目までの腫瘍発生率は、生理食塩水対照群で８５．７％、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群で３２．１％、ゲムシタビン単独群で５７．１％、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群では０．０％であった。腫瘍発生陰性と判定されたマウスを解剖して確認したところ、腫瘍部位及びその周辺に固形腫瘍は認められなかった。各群の腫瘍発生率の比較結果を表３に示す。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群の腫瘍発生率は通常の生理食塩水対照群より低く；ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群の腫瘍発生率はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群及びゲムシタビン単独群より低かった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群及びゲムシタビン単独群よりも優れていた。

【0118】

生存曲線を図９に、各群の生存期間中央値の結果を表４に示す。腫瘍接種後１６６日目までの生存期間中央値は、通常生理食塩水対照群で３３．５日、ゲムシタビン単独群で９３．０日であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独投与群の生存率は６７．９％、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠投与とゲムシタビンとの併用群の生存率は１００．０％であった。ゲムシタビン単独投与群及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群と比較して、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群の生存期間は延長した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群及びゲムシタビン単独群よりも優れていた。

【0119】

その結果、低密度腫瘍接種により模倣したマウスにおけるＨ２２移植肝臓癌の再発に対しては、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαとゲムシタビンの間欠的投与、ゲムシタビン単独投与、及びＰＥＧ化マウスインターフェロンα単独投与は全て抗癌活性を有し、有効に腫瘍再発を予防することができ、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαとゲムシタビンとの併用群は、ゲムシタビン単独の投与群又はＰＥＧ化マウスインターフェロンα単独の投与よりも優れていた。

【0120】

【表3】

【0121】

【表4】

【0122】

実施例５．ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠投与、又はゲムシタビン投与と組み合わせたＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠投与による、マウス移植結腸直腸癌ＣＴ２６の再発予防に対する比較試験
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスをＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、マウス結腸直腸癌ＣＴ２６細胞株は、Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。

【0123】

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスにＣＴ２６細胞（１×１０^５細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢脇下に皮下接種した。腫瘍接種の翌日、無作為に以下の実験群に分けた：ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群（Ｎ＝２０、雌１０匹、及び雄１０匹）、生理食塩水対照群（Ｎ＝２０、雌１０匹、及び雄１０匹）、ゲムシタビン単独群（Ｎ＝２０、雌１０匹、及び雄１０匹）、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（Ｎ＝２０、雌１０匹、及び雄１０匹）。

【0124】

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４はマウス１匹あたり１マイクログラムの用量を頸部背面に皮下注射により投与した。投与は群分けの翌日から開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群では、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を週１回１２回投与した後、５６日間休薬した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群では、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４及びゲムシタビンの両方を週１回、１２回連続投与した後、５６日間休薬した。ゲムシタビン単独群では、ゲムシタビンを週１回、１２回投与した後、５６日間休薬した。生理食塩水対照群には同量の生理食塩水を投与した。ゲムシタビンは６０ｍｇ／ｋｇの用量を腹腔内注射によって投与した。

【0125】

各群の腫瘍発生率は、腫瘍体積が６２．５ｍｍ^３以上となった時点で算出し、腫瘍発生陽性と判定した。腫瘍発生率の変化を図１０に示す。腫瘍接種後１３４日目までの腫瘍発生率は、生理食塩水対照群では１００％、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群では９５％、ゲムシタビン単独群では５０％、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群では４５％であった。各群の腫瘍発生率の比較結果を表５に示す。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群の腫瘍発生率は、通常の生理食塩水対照群より低く；ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群の腫瘍発生率は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群及びゲムシタビン単独群より低かった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群及びゲムシタビン単独群よりも優れていた。

【0126】

生存曲線を図１１に、各群の生存期間中央値の結果を表６に示す。腫瘍接種後１３４日目までの生存期間中央値は、通常生理食塩水対照群で４８．０日、ゲムシタビン単独群の生存率は５５．０％であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独投与群の生存期間中央値は６８．５日、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠投与とゲムシタビンとの併用投与群の生存率は７０．０％であった。ゲムシタビン単独群及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群と比較して、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群の生存期間は延長された。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群及びゲムシタビン単独群よりも優れていた。

【0127】

その結果、低密度腫瘍接種によって模倣したマウスにおけるＣＴ２６移植結腸直腸癌の再発に対しては、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαとゲムシタビンの間欠投与、ゲムシタビン単独投与、及びＰＥＧ化マウスインターフェロンα単独は全て抗癌活性を有し、腫瘍再発を有効に予防することができ、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαとゲムシタビンとの併用群は、ゲムシタビン単独又はＰＥＧ化マウスインターフェロンα単独の投与よりも優れていた。

【0128】

【表5】

【0129】

【表6】

【0130】

配列及び説明
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１は、インターフェノンα２ａのアミノ酸配列である（例えばロフェロン－Ａ又はペガシス）
CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTEPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２は、インターフェノンα２ｂのアミノ酸配列である（例えばイントロンＡ又はペギントロン又はペグベロン）
CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRRISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３は、組換え統合インターフェロンのアミノ酸配列である（例えばインファーゲン）
MCDLPQTHSLGNRRALILLAQMRRISPFSCLKDRHDFGFPQEEFDGNQFQKAQAISVLHEMIQQTFNLFSTKDSSAAWDESLLEKFYTELYQQLNDLEACVIQEVGVEETPLMNVDSILAVKKYFQRITLYLTEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQERLRRKE
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４は、統合インターフェロンα－２のアミノ酸配列である（例えばペギンファー）。
GSGGGCDLPQTHSLGNRRALILLAQMRRISPFSCLKDRHDFGFPQEEFDGNQFQKAQAISVLHEMIQQTFNLFSTKDSSAAWDESLLEKFYTELYQQLNDLEACVIQEVGVEETPLMNVDSILAVRKYFQRITLYLTEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQERLRRKD
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５は、インターフェロンλのアミノ酸配列である。
MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADGNLCLRTSTHPEST
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６は、マウスインターフェロンα４のアミノ酸配列である。
CDLPHTYNLGNKRALTVLEEMRRLPPLSCLKDRKDFGFPLEKVDNQQIQKAQAILVLRDLTQQILNLFTSKDLSATWNATLLDSFCNDLHQQLNDLKACVMQEPPLTQEDSLLAVRTYFHRITVYLRKKKHSLCAWEVIRAEVWRALSSSTNLLARLSEEKE

【0131】

参考文献：
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［１５］ Ｒａｍａｎｊｕｌｕ ＪＭ， ｅｔ． ａｌ． Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａｍｉｄｏｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ ＳＴＩＮＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｗｉｔｈ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｎａｔｕｒｅ． ２０１８ Ｄｅｃ；５６４（７７３６）：４３９－４４３． ｄｏｉ： １０．１０３８／ｓ４１５８６－０１８－０７０５－ｙ． Ｅｐｕｂ ２０１８ Ｎｏｖ ７．
［１６］ Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＭＩＷ８１５ （ＡＤＵ－Ｓ１００） ＋／－ Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ａｄｖａｎｃｅｄ／Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ ｏｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｄｕｒｏ．ｃｏｍ／ｆｉｌｅ．ｃｆｍ／１３／ｄｏｃｓ／ＳＩＴＣ１８＿ＭＩＷ８１５Ｘ２１０１＿ＳＩＴＣ％２０Ｐｏｓｔｅｒ（ｅ＿ｖｅｒｓｉｏｎ）＿０８Ｎｏｖ２０１８．ｐｄｆ
［１７］Ｌａｒａ ＰＮ Ｊｒ， ｅｔ． ａｌ． Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｐｌａｃｅｂｏ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ ａｎｄ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ ｖａｄｉｍｅｚａｎ （ＡＳＡ４０４） ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１１ Ａｕｇ １；２９（２２）：２９６５－７１． ｄｏｉ： １０．１２００／ＪＣＯ．２０１１．３５．０６６０． Ｅｐｕｂ ２０１１ Ｊｕｎ ２７．
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［３０］ Ｈｅｉｎｚ Ｇｉｓｓｌｉｎｇｅｒ， ｅｔ． ａｌ． Ｒｏｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｆａ－２ｂ， ａ ｎｏｖｅｌ ＩＦＮα－２ｂ， ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ ｖｅｒａ．Ｂｌｏｏｄ． ２０１５ Ｏｃｔ ８； １２６（１５）： １７６２－１７６９．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ ２０１５ Ａｕｇ １０．
［３１］ Ｍｏｎｋａｒｓｈ ＳＰ， ｅｔ． ａｌ． Ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｏｎｏｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－２ａ： ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９９７ Ｍａｙ １；２４７（２）：４３４－４０．
［３２］ Ｇｒａｃｅ Ｍ， ｅｔ． ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＩＦＮ－ａｌｐｈａ２ｂ． Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ． ２００１ Ｄｅｃ；２１（１２）：１１０３－１５．
［３３］ Ｆｏｓｅｒ Ｓ， ｅｔ． ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｏｎｏｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－２ａ （ＰＥＧＡＳＹＳ）． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ． ２００３ Ｊｕｌ；３０（１）：７８－８７．
［３４］ Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ．ＰＥＧ－ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ ＬＡＭＢＤＡ １ ＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳ．ＷＯ２０１３／０２８２３３ Ａ１． ２８．０２．２０１３．
［３５］ Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ．ＰＥＧ－ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ ＬＡＭＢＤＡ １ ＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳ．ＵＳ ８４５４９４７ Ｂ１．Ｊｕｎ．４．２０１３．
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ．ｅｓｐａｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ／ｓｅａｒｃｈＲｅｓｕｌｔｓ？ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ＝ｔｒｕｅ＆ｌｏｃａｌｅ＝ｅｎ＿ＥＰ＆ＤＢ＝ＥＰＯＤＯＣ＆ＳＴ＝ａｄｖａｎｃｅｄ＆ＴＩ＝＆ＡＢ＝ｐｅｇ－ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＋ｌａｍｂｄａ＆ＰＮ＝＆ＡＰ＝＆ＰＲ＝＆ＰＤ＝＆ＰＡ＝＆ＩＮ＝＆ＣＰＣ＝＆ＩＣ＝
［３６］ Ｗａｎｇ Ｊｕｎｚｈｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｄｒｕｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ． ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ． Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓ， ２００７： ５４０．
［３７］ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－４ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ＮＰ＿０３４６３４．
［３８］ Ｐｉｃｈｉａ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ， Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｃｏｎｎｅｃｔ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｃｏｎｎｅｃｔ．ｈｔｍｌ？ｕｒｌ＝ｈｔｔｐｓ％ ３Ａ％２Ｆ％２Ｆａｓｓｅｔｓ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ％２ＦＴＦＳ－Ａｓｓｅｔｓ％２ＦＬＳＧ％２Ｆｍａｎｕａｌｓ％２ Ｆｐｉｃｈｉａｆｅｒｍ＿ｐｒｏｔ．ｐｄｆ＆ｔｉｔｌｅ＝ＵＧｌｊａＧｌｈＩＥＺｌｃｍ１ｌｂｎＲｈｄＧｌｖｂｉＢＨｄＷｌｋＺＷｘｐｂｍＶｚ．

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【配列表】

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【国際調査報告】