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特表2024-504452縮合三環系サイクリン依存性キナーゼ阻害剤及びその調製方法並びに医薬用途
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-31
(54)【発明の名称】縮合三環系サイクリン依存性キナーゼ阻害剤及びその調製方法並びに医薬用途
(51)【国際特許分類】
C07D 498/16 20060101AFI20240124BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240124BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240124BHJP
A61K 31/5383 20060101ALI20240124BHJP
【ＦＩ】
C07D498/16 CSP
A61P43/00 111
A61P35/00
A61K31/5383
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023545857
(86)(22)【出願日】2022-01-28
(85)【翻訳文提出日】2023-07-27
(86)【国際出願番号】 CN2022074509
(87)【国際公開番号】W WO2022166799
(87)【国際公開日】2022-08-11
(31)【優先権主張番号】202110152320.9
(32)【優先日】2021-02-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202110342800.1
(32)【優先日】2021-03-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202110485700.4
(32)【優先日】2021-04-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202110667137.2
(32)【優先日】2021-06-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＢＲＩＪ
２．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】521218294
【氏名又は名称】上海拓界生物医薬科技有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＴＵＯＪＩＥ ＢＩＯＴＥＣＨ（ＳＨＡＮＧＨＡＩ） ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ １０３， Ｎｏ．１４ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ， Ｎｏ．３７２８ Ｊｉｎｋｅ Ｒｏａｄ， Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｐｉｌｏｔ Ｚｏｎｅ， Ｐｕｄｏｎｇ Ｎｅｗ Ａｒｅａ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２０３， Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】李 云▲飛▼
(72)【発明者】
【氏名】▲劉▼ 浩▲ミアオ▼
(72)【発明者】
【氏名】鄒 ▲ハオ▼
(72)【発明者】
【氏名】▲張▼ ▲ゼン▼
(72)【発明者】
【氏名】▲パン▼ 夏明
(72)【発明者】
【氏名】▲ゴン▼ ▲紅▼▲龍▼
(72)【発明者】
【氏名】▲張▼ 超
(72)【発明者】
【氏名】▲張▼ 芳
【テーマコード（参考）】
4C072
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C072AA02
4C072AA06
4C072BB02
4C072BB06
4C072CC02
4C072CC11
4C072EE07
4C072FF05
4C072GG06
4C072HH05
4C072HH07
4C072JJ03
4C072UU01
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086CB22
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC20
(57)【要約】
縮合三環系サイクリン依存性キナーゼ阻害剤及びその調製方法並びに医薬用途を提供する。特に、上記縮合三環系サイクリン依存性キナーゼ阻害剤の構造は式Ｉで示され、そのうち、各置換基の定義は明細書に示されている。上記縮合三環系サイクリン依存性キナーゼ阻害剤は、サイクリン依存性キナーゼに関連する疾患、特にがんを予防及び／又は治療するために用いられる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、【化1】
Ｒ２は式ＩＩの構造：
【化2】
Ｒ１０は、それぞれ独立的にＯＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂで置換され、
ＱはＮＲ１１又はＯであり、
或いは、ＱはＣＲ１２Ｒ１３であり、そのうち、Ｒ１２、Ｒ１３は、それらに連結された炭素原子と共に、ＮＲ１１のＮ又はＯを環原子として含む３～１２員のヘテロシクロアルキル基を形成し、前記ヘテロシクロアルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲ１０で置換され、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、ＳＯ２Ｒｃ、ＳＯ２ＮＲｄＲｅ、ＣＯＲｆ、ＣＯＯＲｆとＣＯＮＲｇＲｈから選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６ハロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＲａ、Ｒｂ、ＳＯ２Ｒｃ、ＳＯ２ＮＲｄＲｅ、ＣＯＲｆ、ＣＯＯＲｆとＣＯＮＲｇＲｈから選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
ｍは０、１又は２であり、
ｎは０、１、２、３又は４であり、
ｐは１、２又は３であり、
ＸはＮ又はＣＨであり、
ＹはＮ又はＣＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基はそれぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲａで置換され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２とＣＦ３から選ばれ、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、
ＺはＯ又はＣＨＲ８であり、Ｒ８は水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれ、
Ｌは－（ＣＨ２）ｑ－であり、前記－（ＣＨ２）－は、任意選択的に重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、前記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、
ｑは１、２、３又は４であり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、
ＲａとＲｂは、それぞれ独立的にＨ、ＯＨ、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクロアルキル基とＮＲａ’Ｒａ’’から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒａ’とＲａ’’は、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
或いは、Ｒａ’、Ｒａ’’は、それらに連結されたＮ原子と共に３～１２員ヘテロシクロアルキル基を形成し、前記３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、任意選択的にハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒｃ、ＲｄとＲｅは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基とＣ１－６ハロアルキル基から選ばれ、
Ｒｆは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
ＲｇとＲｈは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲａ又はＲｂで置換される、
式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
Ｒ１はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、好ましくはＨである、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
Ｒ２は、【化3】
【化4】
請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｒ２は【化5】
【請求項5】
Ｒ９はＯＨ又はＮＨ２であり、前記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、Ｒａ’とＲａ’’はそれぞれ独立的にＣ１－６アルキル基である、請求項３又は４に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
ＸはＮである、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項7】
ＹはＣＲ７であり、Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、好ましくはＦ又はＣｌである、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項8】
Ｒ３はＨ、ＦとＣｌから選ばれ、好ましくはＦ又はＣｌである、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項9】
Ｒ４はＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＯＨ、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、好ましくは、Ｒ４はＣ１－６アルキル基であり、前記Ｃ１－６アルキル基は、任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＯＨ又はハロゲンである、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項10】
Ｌは－（ＣＨ２）ｑ－であり、ｑは１又は２から選ばれ、前記－（ＣＨ２）－は、任意選択的に重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、好ましくは、ｑは１から選ばれ、前記－（ＣＨ２）－は、任意選択的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
最も好ましくは、ｑは１から選ばれ、前記－（ＣＨ２）－は、任意選択的に１つ又は複数の重水素で置換される、
請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項11】
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれる、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項12】
式Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、【化6】
Ｒ１０は、それぞれ独立的にＯＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ１－６ハロアルコキシ基から選ばれ、
ｍは０、１又は２であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲンから選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、
ＺはＯ又はＣＨＲ８であり、Ｒ８は、水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれる、
請求項１～１１の何れか一項に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項13】
ＺはＯである、請求項１２に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項14】
ＺはＣＨＲ８であり、Ｒ８は水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれる、請求項１２に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項15】
Ｒ９はＯＨ又はＮＨ２であり、前記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、Ｒａ’とＲａ’’はそれぞれ独立的にＣ１－６アルキル基であり、ｍは０であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４はＨ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基から選ばれ、前記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲンから選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲンとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
好ましくは、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、前記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＯＨ、ＣＮとハロゲンから選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ又はＣ１－６アルキル基であり、
より好ましくは、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、前記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれ、
更に好ましくは、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれ、前記メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂで置換され、ＲｂはＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれ、
特に好ましくは、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれる、
請求項１３又は１４に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項16】
【化7A】
【化7B】
【化7C】
【請求項17】
請求項１～１６の何れか一項に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩の同位体置換体であって、好ましくは、前記同位体置換体は重水素原子置換体である、同位体置換体。
【請求項18】
請求項１～１６の何れか一項に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、式Ｉ－Ｂで示される化合物と式Ｉ－Ｃで示される化合物を反応させて式Ｉで示される化合物を形成するステップを含み、
【化8】
Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５とＲ６は、請求項１に定義された通りである、方法。
【請求項19】
請求項１～１６の何れか一項に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩、或いは請求項１７に記載の同位体置換体と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む医薬組成物。
【請求項20】
請求項１～１６の何れか一項に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩、或いは請求項１７に記載の同位体置換体、或いは請求項１９に記載の医薬組成物の、サイクリン依存性キナーゼに関連する疾患を予防及び／又は治療するための薬剤の調製における用途。
【請求項21】
請求項１～１６の何れか一項に記載の式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩、或いは請求項１７に記載の同位体置換体、或いは請求項１９に記載の医薬組成物の、がんを予防及び／又は治療するための薬剤の調製における用途であって、前記がんは、乳がん、卵巣がん、膀胱がん、子宮がん、前立腺がん、肺がん、食道がん、頭頚部がん、腸がん、腎がん、肝がん、膵臓がん、胃がんと甲状腺がんから選ばれる、用途。
【請求項22】
式Ｉ－Ｂで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、【化9】
式Ｉ－Ｂで示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は医薬分野に属し、縮合三環系サイクリン依存性キナーゼ阻害剤及びその調製方法、組成物並びに医薬用途に関する。
【背景技術】
【0002】
サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）は、真核細胞の分裂と増殖の調節に重要な役割を果たす重要な細胞酵素である。サイクリン依存性キナーゼの触媒単位は、サイクリンと呼ばれる調節サブユニットにより活性化される。少なくとも１６種の哺乳動物サイクリンが既に同定された（Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ． （１９９９） ３９：２９５－３１２）。サイクリンＢ／ＣＤＫ１、サイクリンＡ／ＣＤＫ２、サイクリンＥ／ＣＤＫ２、サイクリンＤ／ＣＤＫ４、サイクリンＤ／ＣＤＫ６及び可能な他のｈｅｔｅｒｏｄｙｎｅｓは、細胞周期の進行の重要な調節因子である。サイクリン／ＣＤＫ ｈｅｔｅｒｏｄｙｎｅｓの他の機能は、転写調節、ＤＮＡ修復、分化とアポトーシスを含む（Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｃｅｌｌ． Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ． （１９９７） １３：２６１－２９１）。
【0003】
近年、乳がんの治療分野で最大の進展は、疑いもなくホルモン受容体陽性進行性乳がんへのＣＤＫ４／６の単剤投与又は内分泌療法との併用であり、例えば、パルボシクリブ（ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ）、リボシクリブ（ｒｉｂｏｃｉｃｌｉｂ）及びアベマシクリブ（ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ）は、アロマターゼ阻害剤と組み合わせて閉経後女性のホルモン受容体（ＨＲ）－陽性、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）－陰性進行性又は転移性乳がんの治療に用いることが承認され、また、パルボシクリブ及びアベマシクリブ（ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ）は、フェソロデックスと組み合わせて内分泌療法後に疾患が進行した後の閉経後女性のホルモン受容体（ＨＲ）－陽性、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）－陰性進行性又は転移性乳がんの治療に用いることが承認された（Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ （２０１６） １３：４１７－４３０、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１７， ３５， ２８７５－２８８４）。ＣＤＫ４／６阻害剤は、エストロゲン受容体ＥＲ陽性転移性乳がんに顕著な臨床的効果が示されるにも拘らず、他のキナーゼと同様に、それらの作用が原発性または獲得耐性の発現により時間の経過と共に制限される恐れがある。
【0004】
ＣＤＫ４／６阻害剤による治療は、消化管及び／又は血液学的毒性などの有害事象を引き起こす上に、時間が経つにつれて獲得薬剤耐性が生じ得ることが臨床的に証明された。新たなデータによると、サイクリンＤ３～ＣＤＫ６は、認められた血液学的毒性に関わっている可能性がある。（Ｍａｌｕｍｂｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ Ｃｙｃｌｅ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｈｅ Ｄ－Ｔｙｐｅ Ｃｙｃｌｉｎ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｋｉｎａｓｅｓ Ｃｄｋ４ ａｎｄ Ｃｄｋ６，（２００４）Ｃｅｌｌ １１８（４）：４９３－５０４； Ｓｉｃｉｎｓｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｒｏｌｅ ｆｏｒ Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ３ ｉｎ Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ Ｃｏｌｏｎｙ－Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ－Ｄｒｉｖｅｎ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ（２００６），Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２６（２１）：８０５２－８０６０； Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａ ｕｎｉｑｕｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｙｃｌｉｎ Ｄ３ ｉｎ ｅａｒｌｙ Ｂ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，（２００６），Ｎａｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ５（７）：４８９－４９７）。ＣＤＫ４は、多くの乳がんにおける単一の発がん性ドライバー因子として確認された。従って、二重ＣＤＫ４／６阻害剤と比べて潜在的により高い及び／又は連続的な投与のため、ＣＤＫ４の選択的阻害剤が、改善された安全性又は向上した全体的有効性を提供可能であるので、ＣＤＫ４に対する選択性の高い分子の開発は臨床的に実用価値がある。ＷＯ２０１９／２０７４６３Ａには、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】ＷＯ２０１９／２０７４６３Ａ
【発明の概要】
【0006】
本開示は、式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供し、
そのうち、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲａで置換され、
Ｒ２は式ＩＩの構造：
であり、Ｒ９はＨ、ＯＨとＮＨ２から選ばれ、上記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、
Ｒ１０は、それぞれ独立的にＯＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂで置換され、
ＱはＮＲ１１又はＯであり、
或いは、ＱはＣＲ１２Ｒ１３であり、そのうち、Ｒ１２、Ｒ１３は、それらに連結された炭素原子と共に、ＮＲ１１のＮ又はＯを環原子として含む３～１２員のヘテロシクロアルキル基を形成し、上記ヘテロシクロアルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲ１０で置換され、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、ＳＯ２Ｒｃ、ＳＯ２ＮＲｄＲｅ、ＣＯＲｆ、ＣＯＯＲｆとＣＯＮＲｇＲｈから選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６ハロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＲａ、Ｒｂ、ＳＯ２Ｒｃ、ＳＯ２ＮＲｄＲｅ、ＣＯＲｆ、ＣＯＯＲｆとＣＯＮＲｇＲｈから選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
ｍは０、１又は２であり、
ｎは０、１、２、３又は４であり、
ｐは１、２又は３であり、
ＸはＮ又はＣＨであり、
ＹはＮ又はＣＲ７であり、Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基はそれぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲａで置換され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２とＣＦ３から選ばれ、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、
ＺはＯ又はＣＨＲ８であり、Ｒ８は水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれ、
Ｌは－（ＣＨ２）ｑ－であり、上記－（ＣＨ２）－は、任意選択的に重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、
ｑは１、２、３又は４であり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、任意選択的にそれぞれ独立的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、
ＲａとＲｂは、それぞれ独立的にＨ、ＯＨ、ＣＮ、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクロアルキル基とＮＲａ’Ｒａ’’から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒａ’とＲａ’’は、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
或いは、Ｒａ’、Ｒａ’’は、それらに連結されたＮ原子と共に３～１２員ヘテロシクロアルキル基を形成し、上記３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、任意選択的にハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒｃ、ＲｄとＲｅは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基とＣ１－６ハロアルキル基から選ばれ、
Ｒｆは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
ＲｇとＲｈは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲａ又はＲｂで置換される。
【化1】
Ｒ２は式ＩＩの構造：
【化2】
Ｒ１０は、それぞれ独立的にＯＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂで置換され、
ＱはＮＲ１１又はＯであり、
或いは、ＱはＣＲ１２Ｒ１３であり、そのうち、Ｒ１２、Ｒ１３は、それらに連結された炭素原子と共に、ＮＲ１１のＮ又はＯを環原子として含む３～１２員のヘテロシクロアルキル基を形成し、上記ヘテロシクロアルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲ１０で置換され、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、ＳＯ２Ｒｃ、ＳＯ２ＮＲｄＲｅ、ＣＯＲｆ、ＣＯＯＲｆとＣＯＮＲｇＲｈから選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６ハロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＲａ、Ｒｂ、ＳＯ２Ｒｃ、ＳＯ２ＮＲｄＲｅ、ＣＯＲｆ、ＣＯＯＲｆとＣＯＮＲｇＲｈから選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
ｍは０、１又は２であり、
ｎは０、１、２、３又は４であり、
ｐは１、２又は３であり、
ＸはＮ又はＣＨであり、
ＹはＮ又はＣＲ７であり、Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基はそれぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲａで置換され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２とＣＦ３から選ばれ、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、
ＺはＯ又はＣＨＲ８であり、Ｒ８は水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれ、
Ｌは－（ＣＨ２）ｑ－であり、上記－（ＣＨ２）－は、任意選択的に重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、
ｑは１、２、３又は４であり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、任意選択的にそれぞれ独立的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、
ＲａとＲｂは、それぞれ独立的にＨ、ＯＨ、ＣＮ、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクロアルキル基とＮＲａ’Ｒａ’’から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒａ’とＲａ’’は、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
或いは、Ｒａ’、Ｒａ’’は、それらに連結されたＮ原子と共に３～１２員ヘテロシクロアルキル基を形成し、上記３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、任意選択的にハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒｃ、ＲｄとＲｅは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基とＣ１－６ハロアルキル基から選ばれ、
Ｒｆは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的にＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
ＲｇとＲｈは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲａ又はＲｂで置換される。
【0007】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ１はＨ又はＣ１－６アルキル基である。
【0008】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ１はＨである。
【0009】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ２は、
から選ばれ、
そのうち、Ｒ９、Ｒ１０、ｍとＱは、式Ｉで示される化合物に定義された通りである。
【化3】
から選ばれ、
そのうち、Ｒ９、Ｒ１０、ｍとＱは、式Ｉで示される化合物に定義された通りである。
【0010】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ２は
であり、そのうち、Ｒ９、Ｒ１０、ｍとＱは、式Ｉで示される化合物に定義された通りである。
【化4】
【0011】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ２は
であり、そのうち、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１とｍは、式Ｉで示される化合物に定義された通りである。
【化5】
【0012】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ９はＯＨ又はＮＨ２であり、上記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、Ｒａ’とＲａ’’はそれぞれ独立的にＣ１－６アルキル基である。
【0013】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ９はＯＨである。
【0014】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ９はＮＨ２である。
【0015】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、ＸはＨである。
【0016】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、ＹはＣＲ７であり、Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれる。
【0017】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ３はＨ、ＦとＣｌから選ばれる。
【0018】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基はそれぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮ、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれる。
【0019】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ４はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＯＨ、ＣＮ、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ１－６ハロアルコキシ基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれる。
【0020】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ４はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれる。
【0021】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｌは－（ＣＨ２）ｑ－であり、ｑは１又は２から選ばれ、上記－（ＣＨ２）－は、任意選択的に重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換される。
【0022】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、Ｌは－（ＣＨ２）ｑ－であり、ｑは１から選ばれ、上記－（ＣＨ２）－は任意選択的に重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換される。
【0023】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｌは－（ＣＨ２）ｑ－であり、ｑは１から選ばれ、上記－（ＣＨ２）－は、任意選択的に１つ又は複数の重水素の置換基で置換される。
【0024】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれる。
【0025】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－２で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨ又はＮＨ２であり、上記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、Ｒａ’とＲａ’’はそれぞれ独立的にＣ１－６アルキル基であり、
Ｒ１０は、それぞれ独立的にＨ、ＯＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ１－６ハロアルコキシ基から選ばれ、
ｍは０、１又は２であり、
Ｒ１１は、ＳＯ２Ｒｃ、ＳＯ２ＮＲｄＲｅ、ＣＯＲｆ、ＣＯＯＲｆとＣＯＮＲｇＲｈから選ばれ、
Ｒｃ、ＲｄとＲｅは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基とＣ１－６ハロアルキル基から選ばれ、
Ｒｆは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、
Ｒｇ、Ｒｈは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、
ＺはＯ又はＣＨＲ８であり、Ｒ８は、水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれる。
【化6】
Ｒ１０は、それぞれ独立的にＨ、ＯＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ１－６ハロアルコキシ基から選ばれ、
ｍは０、１又は２であり、
Ｒ１１は、ＳＯ２Ｒｃ、ＳＯ２ＮＲｄＲｅ、ＣＯＲｆ、ＣＯＯＲｆとＣＯＮＲｇＲｈから選ばれ、
Ｒｃ、ＲｄとＲｅは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基とＣ１－６ハロアルキル基から選ばれ、
Ｒｆは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６ハロアルキル基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、
Ｒｇ、Ｒｈは、それぞれ独立的にＨ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、
ＺはＯ又はＣＨＲ８であり、Ｒ８は、水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれる。
【0026】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－２で示される化合物又はその薬学的に許容される塩２であり、そのうち、ＺはＯである。
【0027】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－２で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、そのうち、ＺはＣＨＲ８であり、Ｒ８は水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれる。
【0028】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－２で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨ又はＮＨ２であり、上記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、Ｒａ’とＲａ’’はそれぞれ独立的にＣ１－６アルキル基であり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６ハロアルキル基から選ばれ、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４はＨ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲンとＣ１－６アルキル基から選ばれる。
そのうち、Ｒ９はＯＨ又はＮＨ２であり、上記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、Ｒａ’とＲａ’’はそれぞれ独立的にＣ１－６アルキル基であり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６ハロアルキル基から選ばれ、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４はＨ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲンとＣ１－６アルキル基から選ばれる。
【0029】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－２で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃは、Ｃ１－６アルキル基又はＣ１－６ハロアルキル基であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ又はＣ１－６アルキル基である。
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃは、Ｃ１－６アルキル基又はＣ１－６ハロアルキル基であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ又はＣ１－６アルキル基である。
【0030】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－２で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃは、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれ、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ又はＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれる。
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃは、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれ、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ又はＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれる。
【0031】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－２で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃは、メチル基、エチル基とｎ－プロピル基から選ばれ、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれ、上記メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂで置換され、ＲｂはＨ又はＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれる。
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃは、メチル基、エチル基とｎ－プロピル基から選ばれ、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれ、上記メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂで置換され、ＲｂはＨ又はＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれる。
【0032】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－２で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃはメチル基であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれる。
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ１１はＳＯ２Ｒｃであり、
Ｒｃはメチル基であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれる。
【0033】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨ又はＮＨ２であり、上記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、Ｒａ’とＲａ’’はそれぞれ独立的にＣ１－６アルキル基であり、
Ｒ１０は、それぞれ独立的にＯＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ１－６ハロアルコキシ基から選ばれ、
ｍは０、１又は２であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、
ＺはＯ又はＣＨＲ８であり、Ｒ８は、水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれる。
【化7】
Ｒ１０は、それぞれ独立的にＯＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ１－６ハロアルキル基とＣ１－６ハロアルコキシ基から選ばれ、
ｍは０、１又は２であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－８シクロアルキル基と３～１２員ヘテロシクロアルキル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基とＣ３－８シクロアルキル基から選ばれ、
ＺはＯ又はＣＨＲ８であり、Ｒ８は、水素原子、重水素原子とハロゲンから選ばれる。
【0034】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、そのうち、ＺはＯである。
【0035】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、そのうち、ＺはＣＨＲ８であり、Ｒ８は水素原子、重水素原子又はハロゲンである。
【0036】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨ又はＮＨ２であり、上記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、Ｒａ’とＲａ’’はそれぞれ独立的にＣ１－６アルキル基であり、
ｍは０であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４はＨ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲンとＣ１－６アルキル基から選ばれる。
そのうち、Ｒ９はＯＨ又はＮＨ２であり、上記ＮＨ２は任意選択的に１つ又は２つのＲａ’又はＲａ’’で置換され、Ｒａ’とＲａ’’はそれぞれ独立的にＣ１－６アルキル基であり、
ｍは０であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、ＣｌとＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ３は、Ｈ、ＦとＣｌから選ばれ、
Ｒ４はＨ、Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基から選ばれ、上記Ｃ１－６アルキル基とＣ１－６アルコキシ基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、重水素、ＣＮ、ハロゲンとＣ１－６アルキル基から選ばれる。
【0037】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ又はＣ１－６アルキル基である。
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ、ＯＨ、ＣＮとハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ又はＣ１－６アルキル基である。
【0038】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ又はＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれる。
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４はＨ又はＣ１－６アルキル基であり、上記Ｃ１－６アルキル基は任意選択的に１つ又は複数のＲｂ又は重水素で置換され、ＲｂはＨ又はＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれる。
【0039】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれ、上記メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂで置換され、ＲｂはＨ又はＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれる。
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれ、上記メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基は、それぞれ独立して任意選択的に１つ又は複数のＲｂで置換され、ＲｂはＨ又はＯＨであり、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基とｔｅｒｔ－ブチル基から選ばれる。
【0040】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれる。
そのうち、Ｒ９はＯＨであり、
ｍは０であり、
Ｒ７はＦ又はＣｌであり、
Ｒ３はＦ又はＣｌであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれ、
Ｒ５とＲ６は、それぞれ独立的にＨ、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基とイソプロピル基から選ばれる。
【0041】
選択的な実施形態において、本開示により提供される式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、
から選ばれる。
【化8A】
【化8B】
【化8C】
【0042】
本開示の別の態様は、上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩の同位体置換体を提供し、選択的な実施形態において、上記同位体置換体は重水素原子置換体である。
【0043】
選択的な実施形態において、式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、上記重水素原子の存在度は２０％よりも大きい。
【0044】
選択的な実施形態において、式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、上記重水素原子の存在度は５０％よりも大きい。
【0045】
選択的な実施形態において、式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、上記重水素原子の存在度は９０％よりも大きい。
【0046】
選択的な実施形態において、式Ｉで示される化合物又はその薬学的に許容される塩であって、上記重水素原子の存在度は９５％よりも大きい。
【0047】
本開示は、式Ｉで示される化合物を調製する方法を更に提供し、式Ｉ－Ｂで示される化合物と式Ｉ－Ｃで示される化合物を反応させて式Ｉの化合物を形成するステップを含み、
そのうち、ＬＧ１は脱離基であり、上記脱離基は、ハロゲン、スルホン酸エステル、ホウ酸とホウ酸エステルが好ましく、
Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５とＲ６は、式Ｉで示される化合物に定義された通りである。
【化9】
Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５とＲ６は、式Ｉで示される化合物に定義された通りである。
【0048】
幾つかの実施形態において、上記反応は触媒の存在下で行われ、上記触媒は金属パラジウム又は金属ニッケルである。
【0049】
幾つかの実施形態において、上記触媒は、パラジウム／炭素、ラネーニッケル、テトラキス－トリフェニルホスフィンパラジウム、ジクロロパラジウム、酢酸パラジウム、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム、１，１’－［１，１’－ビス（ジｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムと２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，６’－ジメトキシビフェニルから選ばれ、好ましくは、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウムと２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，６’－ジメトキシビフェニルである。
【0050】
本開示の別の態様は、式Ｉ－Ｂで示される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供し、
そのうち、ＬＧ１は脱離基であり、上記脱離基は、ハロゲン、スルホン酸エステル、ホウ酸とホウ酸エステルから選ばれ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｌ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、式Ｉで示される化合物に定義された通りである。
【化10】
【0051】
本開示は、少なくとも１種の治療有効量の上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む医薬組成物を更に提供する。
【0052】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物の単位用量は、０．００１～１０００ｍｇである。
【0053】
ある実施形態において、組成物の総重量に基づき、上記医薬組成物は、０．０１～９９．９９％の上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体を含む。
【0054】
ある実施形態において、上記医薬組成物は、０．１～９９．９％の上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体を含む。
【0055】
ある実施形態において、上記医薬組成物は、０．５～９９．５％の上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体を含む。
【0056】
ある実施形態において、上記医薬組成物は、１～９９％の上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体を含む。
【0057】
ある実施形態において、上記医薬組成物は、２～９８％の上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体を含む。
【0058】
ある実施形態において、組成物の総重量に基づき、上記医薬組成物は、０．０１～９９．９９％の薬学的に許容される賦形剤を含む。
【0059】
ある実施形態において、上記医薬組成物は、０．１～９９．９％の薬学的に許容される賦形剤を含む。
【0060】
ある実施形態において、上記医薬組成物は、０．５～９９．５％の薬学的に許容される賦形剤を含む。
【0061】
ある実施形態において、上記医薬組成物は、１～９９％の薬学的に許容される賦形剤を含む。
【0062】
ある実施形態において、上記医薬組成物は、２～９８％の薬学的に許容される賦形剤を含む。
【0063】
本開示は、サイクリン依存性キナーゼに関連する疾患を予防及び／又は治療する方法を更に提供し、それを必要とする患者に治療有効量の上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体、或いは上記医薬組成物を投与することを含む。
【0064】
本開示は、がんを予防及び／又は治療する方法を更に提供し、それを必要とする患者に治療有効量の上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体、或いは上記医薬組成物を投与することを含む。
【0065】
本開示は、上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体、或いは上記医薬組成物の、サイクリン依存性キナーゼに関連する疾患を予防及び／又は治療するための薬剤の調製における用途を更に提供する。
【0066】
本開示は、上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体、或いは上記医薬組成物の、がんを予防及び／又は治療するための薬剤の調製における用途を更に提供する。
【0067】
選択的な実施形態において、上記サイクリン依存性キナーゼに関連する疾患は、細胞増殖性疾患、がんと免疫性疾患から選ばれる。
【0068】
本開示に記載のがんは、乳がん、卵巣がん、膀胱がん、子宮がん、前立腺がん、肺がん（ＮＳＣＬＣ、ＳＣＬＣ、扁平上皮がん又は腺がんを含む）、食道がん、頭頚部がん、腸がん、腎がん（ＲＣＣを含む）、肝がん（ＨＣＣを含む）、膵臓がん、胃がんと甲状腺がんから選ばれる。
【0069】
選択的な実施形態において、本開示に記載のサイクリン依存性キナーゼはＣＤＫ４である。
【0070】
本開示の別の態様は、上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体の、薬剤として用いられる用途を提供する。
【0071】
本開示により提供される上記式Ｉ、Ｉ－２、Ｉ－３で示される化合物又はその薬学的に許容される塩或いは上記同位体置換体、或いは上記医薬組成物によれば、消化管及び／又は血液学的毒性が低減される。
【0072】
別の態様において、本開示に記載の化合物の薬用可能な塩は、無機塩又は有機塩である。
【0073】
本開示に係る化合物は、特定の幾何又は立体異性体の形態があってもよい。本開示は、シス・トランス異性体、（－）－と（＋）－エナンチオマー、（Ｒ）－と（Ｓ）－エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）－異性体、（Ｌ）－異性体、及びそのラセミ混合物と他の混合物、例えば、エナンチオマーやジアステレオマーに富む混合物のような混合物の全てを含め、このような化合物の全てが本開示の範囲に含まれることを意図する。アルキル基などの置換基には、他の不斉炭素原子があってもよい。このような異性体及びそれらの混合物の全ては、本開示の範囲に含まれる。本開示に係る不斉炭素原子を含む化合物は、光学活性純品の形態又はラセミ形態で単離されることができる。光学活性純品の形態は、ラセミ混合物から分割され、或いはキラル原料又はキラル試薬を使用することで合成されてもよい。
【0074】
キラル合成又はキラル試薬又は他の通常の技術により、光学活性の（Ｒ）－と（Ｓ）－異性体及びＤとＬ異性体を調製することができる。本開示のある化合物の１つのエナンチオマーを得るには、不斉合成又はキラル助剤を有する誘導作用により調製することができ、ここで、得られたジアステレオマー混合物を単離し、且つ基の分裂を補助することにより、必要なエナンチオマーの純品を提供する。或いは、分子に塩基性官能基（例えば、アミノ基）又は酸性官能基（例えば、カルボキシ基）が含まれる場合、適当な光学活性的な酸又は塩基と共にジアステレオマーの塩を形成し、そしてこの分野でよく知られている通常の方法によりジアステレオマー分割を行い、その後、回収してエナンチオマーの純品を得る。なお、エナンチオマーとジアステレオマーの単離は、一般的にクロマトグラフィーにより完成され、上記クロマトグラフィーはキラル固定相を採用し、且つ任意選択的に化学誘導法と組み合わせる（例えば、アミンからカルバミン酸塩を生成する）。
【0075】
本開示に記載される化合物の化学構造において、
という結合は配置が指定されていないことを示し、即ち、化学構造にキラル異性体が存在する場合、
という結合は
であってもよく、或いは
という２種類の配置を同時に含んでもよい。
という結合は配置が指定されていないことを示し、シス（Ｅ）又はトランス（Ｚ）配置を含む。
【化11】
【化12】
【化13】
【化14】
【化15】
【0076】
本開示に係る化合物と中間体は、異なる互変異性体形態で存在してもよく、且つ、このような形態の全ては本開示の範囲内に含まれる。「互変異性体」又は「互変異性体形態」という用語は、低いエネルギー障壁により相互変換可能な異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトン移動互変異性体ともいう）は、例えばケト－エノール及びイミン－エナミン、ラクタム－ラクチム異性化などのプロトリシスによる相互変換を含む。ラクタム－ラクチム平衡の実例は、以下に示すようなＡとＢの間である。
【化16】
【0077】
本開示における化合物の全ては、Ａ型又はＢ型に描かれることができる。全ての互変異性形態は本開示の範囲にある。化合物の命名は、何れの互変異性体も排除しない。
【0078】
本開示は更に、本明細書に記載されるものと同じであるが、１つ又は複数の原子が、自然界で通常見られる原子量又は質量数と異なる原子量又は質量数を有する原子で置換された同位体標識の幾つかの本開示の化合物を含む。本開示の化合物に結合可能な同位体の実例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素及び塩素の同位体を含み、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、１２３Ｉ、１２５Ｉ及び３６Ｃｌなどである。
【0079】
特に説明のない限り、１つの位置が特に重水素（Ｄ）と指定される場合、当該位置は、重水素の天然存在度（０．０１５％である）よりも少なくとも１０００倍高い存在度を有する重水素（即ち、少なくとも１０％の重水素が組み込まれた）であると理解すべきである。例における化合物の、重水素の天然存在度よりも高い存在度を有するものは、少なくとも１０００倍の存在度の重水素、少なくとも２０００倍の存在度の重水素、少なくとも３０００倍の存在度の重水素、少なくとも４０００倍の存在度の重水素、少なくとも５０００倍の存在度の重水素、少なくとも６０００倍の存在度の重水素又はそれ以上の存在度の重水素であってもよい。本開示は、種々の重水素化形態の式（Ｉ）の化合物を更に含む。炭素原子に連結されるそれぞれの利用可能な水素原子は、独立的に重水素原子で置換されてもよい。当業者は、関連文献を参照して重水素化形態の式（Ｉ）の化合物を合成することができる。重水素化形態の式（Ｉ）の化合物は、調製する場合、市販の重水素化出発物質を使用してもよく、或いは、通常の技術により重水素化試薬で合成されてもよく、重水素化試薬は、重水素化ボラン、三重水素化ボランテトラヒドロフラン溶液、重水素化水素化アルミニウムリチウム、重水素化ヨードエタン及び重水素化ヨードメタンなどを含むが、これらに限定されない。
【0080】
用語の説明：
「薬学的に許容される賦形剤」は、アメリカ食品医薬品局によって承認された、ヒト又は家畜動物への使用が許容される任意の助剤、ベクター、賦形剤、流動促進剤、甘味料、希釈剤、防腐剤、染料／着色剤、着香剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張化剤、溶媒又は乳化剤を含むが、これらに限定されない。
「薬学的に許容される賦形剤」は、アメリカ食品医薬品局によって承認された、ヒト又は家畜動物への使用が許容される任意の助剤、ベクター、賦形剤、流動促進剤、甘味料、希釈剤、防腐剤、染料／着色剤、着香剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張化剤、溶媒又は乳化剤を含むが、これらに限定されない。
【0081】
「アルキル基」という用語は、１～２０個の炭素原子の直鎖及び分岐鎖基を含む飽和脂肪族炭化水素基を指す。好ましくは、１～１２個の炭素原子を含むアルキル基であり、より好ましくは、１～６個の炭素原子を含むアルキル基である。非限定的な実施例は、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、２，２－ジメチルプロピル基、１－エチルプロピル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、及びその様々な分岐鎖異性体などを含む。アルキル基は、置換でも非置換でもよく、置換される場合に、置換基は、任意の利用可能な連結点で置換されてもよく、好ましくは、独立的にハロゲン、ヒドロキシ基、オキソ、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－７シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクリル基などから選ばれる１つ又は複数の基である。
【0082】
「アルケニル基」は、２～１２個の炭素原子を有する分岐鎖及び直鎖オレフィン又は脂肪族炭化水素基を有するオレフィンを含む。例えば、「Ｃ２－６アルケニル基」は、２、３、４、５又は６個の炭素原子を有するアルケニル基を表す。アルケニル基の実例は、ビニル基、アリル基、１－プロペニル基、１－ブテニル基、２－ブテニル基、３－ブテニル基、２－メチルブト－２－エニル基、３－メチルブト－１－エニル基、１－ペンテニル基、３－ペンテニル基及び４－ヘキセニル基を含むが、これらに限定されない。アルケニル基は、置換でも非置換でもよく、置換される場合に、置換基は、任意の利用可能な連結点で置換されてもよく、好ましくは、独立的にハロゲン、ヒドロキシ基、オキソ、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－７シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクリル基などから選ばれる１つ又は複数の基である。
【0083】
「アルキニル基」は、２～１２個の炭素原子を有する分岐鎖及び直鎖アルキニル基又は脂肪族炭化水素基を有するオレフィンを含み、或いは、指定される炭素原子数が規定される場合、当該特定の数を指す。例えば、エチニル基、プロピニル基（例えば、１－プロピニル基、２－プロピニル基）、３－ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基及び１－メチルペント－２－イニル基である。アルキニル基は、置換でも非置換でもよく、置換される場合に、置換基は、任意の利用可能な連結点で置換されてもよく、好ましくは、独立的にハロゲン、ヒドロキシ基、オキソ、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－７シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクリル基などから選ばれる１つ又は複数の基である。
【0084】
「シクロアルキル基」という用語は、飽和又は部分不飽和の単環式又は多環式環状炭化水素置換基を指し、シクロアルキル環は３～２０個の炭素原子を含み、好ましくは３～１２個の炭素原子を含み、より好ましくは３～６個の炭素原子を含む。単環式シクロアルキル基の非限定的な実例は、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロペンテニル基、シクロヘキシル基、シクロヘキセニル基、シクロヘキサジエニル基、シクロヘプチル基、シクロヘプタトリエニル基、シクロオクチル基などを含み、多環式シクロアルキル基は、スピロ環、縮合環及び架橋環のシクロアルキル基を含む。
【0085】
上記シクロアルキル環は、アリール基、ヘテロアリール基又はヘテロシクロアルキル環に縮合してもよく、そのうち、親構造に連結された環はシクロアルキル基であり、非限定的な実例は、インダニル基、テトラヒドロナフチル基、ベンゾシクロヘプタニル基などを含む。シクロアルキル基は、置換でも非置換でもよく、置換される場合に、置換基は、独立的にハロゲン、ヒドロキシ基、オキソ、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－７シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクリル基などから選ばれる１つ又は複数の基であることが好ましい。
【0086】
「ヘテロシクリル基」という用語は、ヘテロシクロアルキル基とも表され、３～２０個の環原子を含む飽和又は部分不飽和の単環式又は多環式環状炭化水素置換基を指し、そのうち、１つ又は複数の環原子は、窒素、酸素又はＳ（Ｏ）ｍ（そのうち、ｍは０～２の整数である）から選ばれるヘテロ原子であるが、－Ｏ－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ－又は－Ｓ－Ｓ－の環部分を含まず、残りの環原子は炭素である。好ましくは３～１２個の環原子を含み、そのうち、１～４個はヘテロ原子であり、より好ましくは３～８個の環原子を含む。単環式ヘテロシクリル基の非限定的な実例は、ピロリジニル基、イミダゾリジニル基、テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロチエニル基、ジヒドロイミダゾリル基、ジヒドロフラニル基、ジヒドロピラゾリル基、ジヒドロピロリル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ホモピペラジニル基などを含む。多環式ヘテロシクリル基は、スピロ環、縮合環及び架橋環のヘテロシクリル基を含む。「ヘテロシクリル基」の非限定的な実例は、
などを含む。
【化17】
【0087】
上記ヘテロシクリル環は、アリール基、ヘテロアリール基又はシクロアルキル環に縮合してもよく、そのうち、親構造に連結された環はヘテロシクリル基であり、その非限定的な実例は、
などを含む。
【化18】
【0088】
ヘテロシクリル基は、任意選択的に置換でも非置換でもよく、置換される場合に、置換基は、独立的にハロゲン、ヒドロキシ基、オキソ、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－７シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクリル基などから選ばれる１つ又は複数の基であることが好ましい。
【0089】
「アリール基」という用語は、共役したπ電子系を有する６～１４員の全炭素単環式又は縮合多環（つまり、隣接する炭素原子対を共有する環）式基を指し、好ましくは６～１２員であり、例えば、フェニル基及びナフチル基である。上記アリール環は、ヘテロアリール基、ヘテロシクリル基又はシクロアルキル環に縮合してもよく、そのうち、親構造に連結された環はアリール環であり、その非限定的な実例は、
を含む。
【化19】
【0090】
アリール基は、置換でも非置換でもよく、置換される場合に、置換基は、独立的にハロゲン、ヒドロキシ基、オキソ、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－７シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクリル基などから選ばれる１つ又は複数の基であることが好ましく、フェニル基が好ましい。
【0091】
「ヘテロアリール基」という用語は、１～４個のヘテロ原子、５～１４個の環原子を含む複素芳香族系を指し、そのうち、ヘテロ原子は酸素、硫黄及び窒素から選ばれる。ヘテロアリール基は、６～１２員が好ましく、５員又は６員がより好ましい。例えば。その非限定的な実例は、イミダゾリル基、フラニル基、チエニル基、チアゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、ピロリル基、テトラゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、チアジアゾリル基、ピラジニル基、
などを含む。
【化20】
【0092】
上記ヘテロアリール環は、アリール基、ヘテロシクリル基又はシクロアルキル環に縮合してもよく、そのうち、親構造に連結された環はヘテロアリール環であり、その非限定的な実例は、
を含む。
【化21】
【0093】
ヘテロアリール基は、任意選択的に置換でも非置換でもよく、置換される場合に、置換基は、独立的にハロゲン、ヒドロキシ基、オキソ、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－７シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクリル基などから選ばれる１つ又は複数の基であることが好ましい。
【0094】
「アルコキシ基」という用語は、－Ｏ－（アルキル基）及び－Ｏ－（非置換のシクロアルキル基）を指し、そのうち、アルキル基の定義は上記の通りである。アルコキシ基の非限定的な実例は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基を含む。アルコキシ基は、任意選択的に置換でも非置換でもよく、置換される場合に、置換基は、独立的にハロゲン、ヒドロキシ基、オキソ、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－７シクロアルキル基、３～１２員ヘテロシクリル基などから選ばれる１つ又は複数の基であることが好ましい。
【0095】
「ヒドロキシ基」という用語は、－ＯＨ基を指す。
【0096】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を指す。
【0097】
「アミノ基」という用語は、－ＮＨ２を指す。
【0098】
「シアノ基」という用語は、－ＣＮを指す。
【0099】
「ニトロ基」という用語は、－ＮＯ２を指す。
【0100】
「オキソ」という用語は、＝Ｏ置換基を指す。
【0101】
「任意選択的」又は「任意選択的に」は、その後に説明される事象又は状況が生じてもよいが、生じなくてもよいことを意味し、この説明は、当該事象又は状況が生じる場合と生じない場合を含む。例えば、「任意選択的にアルキル基で置換されるヘテロシクリル基」とは、アルキル基が存在してもよいが、存在しなくてもよいことを意味し、この説明は、ヘテロシクリル基がアルキル基で置換される場合と、ヘテロシクリル基がアルキル基で置換されない場合とを含む。
【0102】
「置換される」とは、基の中の１つ又は複数の水素原子、好ましくは５個以下、より好ましくは１～３個の水素原子が互いに独立的に対応する数の置換基で置換されることを指す。無論、置換基は、それらの化学的に可能な部位にしか位置せず、当業者はそれほど努力せずに（実験又は理論により）可能又は不可能な置換を決定することができる。例えば、遊離水素を有するアミノ基又はヒドロキシ基が不飽和（例えば、オレフィン）結合を有する炭素原子と結合する場合は、不安定になる可能性がある。
【0103】
「医薬組成物」は、１種又は複数種の本明細書に記載される化合物又はその生理学的／薬学的に許容される塩又はプロドラッグと他の化学成分の混合物、及び例えば生理学的／薬学的に許容されるベクターと賦形剤などの他の成分を含むものを示す。医薬組成物は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収に寄与して更に生物活性を発揮するためのものである。
【発明を実施するための形態】
【0104】
以下、実施例と合わせて本開示を更に説明するが、これらの実施例は本開示の範囲を限定するものではない。
【0105】
本開示の実施例において具体的な条件が明記されていない実験方法は、一般的に従来の条件に従い、又は原料や商品のメーカーにより勧められた条件に従う。具体的な供給源が明示されていない試薬は、市販される通常の試薬である。
【0106】
化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）又は／及び質量分析（ＭＳ）によって決定される。ＮＭＲシフト（δ）は、１０－６（ｐｐｍ）の単位で示される。ＮＭＲの測定には核磁気共鳴装置Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ－４００が使用され、測定溶媒は重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ－ｄ６）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）、重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）であり、内部標準はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）である。
【0107】
ＭＳの測定には、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ２０１０ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ又はＡｇｉｌｅｎｔ ６１１０Ａ ＭＳＤ質量分析装置が使用された。
【0108】
ＨＰＬＣの測定には、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－２０Ａ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－２０１０ＨＴ ｓｅｒｉｅｓ又はアジレントＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＬＣ高圧液体クロマトグラフ（Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ－Ｃ１８ ３．０×１５０ ｍｍカラム又はＸｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ ２．１×３０ ｍｍカラム）が使用された。
【0109】
キラルＨＰＬＣ分析及び測定には、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ－３ １００×４．６ ｍｍ Ｉ．Ｄ．、３ μｍ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３ １５０×４．６ ｍｍ Ｉ．Ｄ．、３ μｍ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３ ５０×４．６ ｍｍ Ｉ．Ｄ．、３ μｍ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ－３ １５０×４．６ ｍｍ Ｉ．Ｄ．、３ μｍ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ－３ １００×４．６ ｍｍ Ｉ．Ｄ．、３ μｍ、ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＤ－３ １５０×４．６ ｍｍ Ｉ．Ｄ．、３ μｍ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ－３ １００×４．６ ｍｍ Ｉ．Ｄ．、３ μｍ、ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＪ－Ｈ １５０×４．６ ｍｍ Ｉ．Ｄ．、５ μｍ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ－３ １５０×４．６ ｍｍ Ｉ．Ｄ．、３ μｍカラムが使用され、
薄層クロマトグラフィー用シリカゲルプレートとしては、煙台黄海ＨＳＧＦ２５４又は青島ＧＦ２５４シリカゲルプレートが使用され、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に使用されたシリカゲルプレートの仕様は、０．１５～０．２ ｍｍであり、薄層クロマトグラフィーによる生成物の分離精製用の仕様は０．４～０．５ ｍｍである。
薄層クロマトグラフィー用シリカゲルプレートとしては、煙台黄海ＨＳＧＦ２５４又は青島ＧＦ２５４シリカゲルプレートが使用され、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に使用されたシリカゲルプレートの仕様は、０．１５～０．２ ｍｍであり、薄層クロマトグラフィーによる生成物の分離精製用の仕様は０．４～０．５ ｍｍである。
【0110】
カラムクロマトグラフィーは、一般的に、煙台黄海シリカゲル１００～２００メッシュ、２００～３００メッシュ又は３００～４００メッシュのシリカゲルがベクターとして使用された。
【0111】
キラル分取カラムには、ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＣ（２５０×３０ ｍｍ、１０ μｍ）又はＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ－Ａｍｙｌｏｓｅ－１（２５０×３０ ｍｍ、５ μｍ）が使用された。
【0112】
ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ高速分取クロマトグラフには、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｒｆ１５０（ＴＥＬＥＤＹＮＥ ＩＳＣＯ）が使用された。
【0113】
キナーゼ平均阻害率及びＩＣ５０値の測定には、マイクロプレートリーダーＮｏｖｏＳｔａｒ（独ＢＭＧ社）が使用された。
【0114】
本開示に係る既知の出発原料は、この分野における既知の方法により、又はそれに従って合成されてもよく、或いはＡＢＣＲ ＧｍｂＨ ＆ Ｃｏ． ＫＧ、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、韶遠化学科技（Ａｃｃｅｌａ ＣｈｅｍＢｉｏ Ｉｎｃ）、達瑞化学品などの会社から購入されてもよい。
【0115】
実施例において、特に説明のない限り、反応は何れもアルゴン雰囲気又は窒素雰囲気において行うことができる。
【0116】
アルゴン雰囲気又は窒素雰囲気は、反応フラスコに容積が約１ Ｌのアルゴン又は窒素バルーンが接続されていることを指す。
【0117】
水素雰囲気は、反応フラスコに容積が約１ Ｌの水素バルーンが接続されていることを指す。
【0118】
加圧水素化反応には、Ｐａｒｒ ３９１６ＥＫＸ型水素化装置及び清藍ＱＬ－５００型水素発生器又はＨＣ２－ＳＳ型水素化装置が使用された。
【0119】
水素化反応は、一般的に、真空引きして水素を充填する操作を３回繰り返した。
【0120】
マイクロ波反応には、ＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒ－Ｓ ９０８８６０型マイクロ波反応器が使用された。
【0121】
実施例において、特に説明のない限り、溶液は水溶液を指す。
【0122】
実施例において、特に説明のない限り、反応温度は室温で、２０℃～３０℃である。
【0123】
実施例における反応プロセスの監視には、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）が採用され、
反応に使用された展開溶媒、化合物を精製するためのカラムクロマトグラフィーの溶離剤系及び薄層クロマトグラフィーの展開溶媒系は、溶媒の体積比が化合物の極性によって調整されてもよく、少量のトリエチルアミンと酢酸などの塩基性又は酸性試薬を加えて調整されてもよい。
反応に使用された展開溶媒、化合物を精製するためのカラムクロマトグラフィーの溶離剤系及び薄層クロマトグラフィーの展開溶媒系は、溶媒の体積比が化合物の極性によって調整されてもよく、少量のトリエチルアミンと酢酸などの塩基性又は酸性試薬を加えて調整されてもよい。
【0124】
実施例１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－フルオロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－フルオロ－４－（－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
ステップ１
６－ブロモ－４－フルオロ－２，３－ジニトロフェノール １ｂ
化合物１ａ（３．５ ｇ、１４．８ ｍｍｏｌ）を１６ ｍＬのジクロロメタンに溶解させた。硝酸のジクロロメタン溶液（２ ｍｏｌ／Ｌ、１６ ｍＬ）を加えた。室温で２０分間反応させた。反応液を５０ ｍＬの氷水に入れ、有機相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出し（５０ ｍＬ×２）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮して表題化合物１ｂ（３．８ ｇ、収率：９１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２７９．０， ２８１．０ ［Ｍ－Ｈ］－
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－フルオロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－フルオロ－４－（－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
【化22】
【化23】
６－ブロモ－４－フルオロ－２，３－ジニトロフェノール １ｂ
化合物１ａ（３．５ ｇ、１４．８ ｍｍｏｌ）を１６ ｍＬのジクロロメタンに溶解させた。硝酸のジクロロメタン溶液（２ ｍｏｌ／Ｌ、１６ ｍＬ）を加えた。室温で２０分間反応させた。反応液を５０ ｍＬの氷水に入れ、有機相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出し（５０ ｍＬ×２）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮して表題化合物１ｂ（３．８ ｇ、収率：９１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２７９．０， ２８１．０ ［Ｍ－Ｈ］－
【0125】
ステップ２
２－アミノ－６－ブロモ－４－フルオロ－３－ニトロフェノール １ｃ
化合物１ｂ（３．８ ｇ、１３．５ ｍｍｏｌ）を６０ ｍＬのメタノールに溶解させた。２５ ｍＬの濃塩酸を加え、塩化第一スズ二水和物（９．２ ｇ、４０．６ ｍｍｏｌ）を数回に分けて加えた。室温で２０分間反応させた。反応液を濃縮し、１００ ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加え、酢酸エチルで抽出し（１００ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより石油エーテル、酢酸エチルで溶離・精製し、表題化合物１ｃ（２．０ ｇ、収率：５９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２４９．１， ２５１．１ ［Ｍ－Ｈ］－
２－アミノ－６－ブロモ－４－フルオロ－３－ニトロフェノール １ｃ
化合物１ｂ（３．８ ｇ、１３．５ ｍｍｏｌ）を６０ ｍＬのメタノールに溶解させた。２５ ｍＬの濃塩酸を加え、塩化第一スズ二水和物（９．２ ｇ、４０．６ ｍｍｏｌ）を数回に分けて加えた。室温で２０分間反応させた。反応液を濃縮し、１００ ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加え、酢酸エチルで抽出し（１００ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより石油エーテル、酢酸エチルで溶離・精製し、表題化合物１ｃ（２．０ ｇ、収率：５９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２４９．１， ２５１．１ ［Ｍ－Ｈ］－
【0126】
ステップ３
８－ブロモ－６－フルオロ－３－メチル－５－ニトロ－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン １ｄ
化合物１ｃ（２００ ｍｇ、０．８ ｍｍｏｌ）を４ ｍＬのアセトンに溶けて０℃に降温した。０℃で炭酸カリウム（１２１ ｍｇ、０．９ ｍｍｏｌ）及びブロモアセトン（１２０ ｍｇ、０．９ ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応させた。２０ ｍＬの水を加え、酢酸エチルで抽出し（２０ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮して、残留物を５ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。０．５ ｍＬのトリフルオロ酢酸を加え、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（７５ ｍｇ、１．２ ｍｍｏｌ）を数回に分けて加えた。室温で２時間反応させた。反応液を２０ ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液に入れ、酢酸エチルで抽出し（２０ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより石油エーテル、酢酸エチルで溶離・精製し、表題化合物１ｄ（１６０ ｍｇ、収率：６９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２９１．２， ２９３．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋
８－ブロモ－６－フルオロ－３－メチル－５－ニトロ－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン １ｄ
化合物１ｃ（２００ ｍｇ、０．８ ｍｍｏｌ）を４ ｍＬのアセトンに溶けて０℃に降温した。０℃で炭酸カリウム（１２１ ｍｇ、０．９ ｍｍｏｌ）及びブロモアセトン（１２０ ｍｇ、０．９ ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応させた。２０ ｍＬの水を加え、酢酸エチルで抽出し（２０ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮して、残留物を５ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。０．５ ｍＬのトリフルオロ酢酸を加え、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（７５ ｍｇ、１．２ ｍｍｏｌ）を数回に分けて加えた。室温で２時間反応させた。反応液を２０ ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液に入れ、酢酸エチルで抽出し（２０ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより石油エーテル、酢酸エチルで溶離・精製し、表題化合物１ｄ（１６０ ｍｇ、収率：６９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２９１．２， ２９３．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋
【0127】
ステップ４
８－ブロモ－６－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－５－アミン １ｅ
化合物１ｄ（１６０ ｍｇ、０．５ ｍｍｏｌ）を４ ｍＬのメタノールに溶解させた。２ ｍＬの濃塩酸を加え、塩化第一スズ二水和物（４９６ ｍｇ、２．２ ｍｍｏｌ）を数回に分けて加えた。室温で２時間反応させた。反応液を２０ ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液に入れ、酢酸エチルで抽出し（２０ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより石油エーテル、酢酸エチルで溶離・精製し、表題化合物１ｅ（１０５ ｍｇ、収率：７３％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２６１．３， ２６３．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋
８－ブロモ－６－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－５－アミン １ｅ
化合物１ｄ（１６０ ｍｇ、０．５ ｍｍｏｌ）を４ ｍＬのメタノールに溶解させた。２ ｍＬの濃塩酸を加え、塩化第一スズ二水和物（４９６ ｍｇ、２．２ ｍｍｏｌ）を数回に分けて加えた。室温で２時間反応させた。反応液を２０ ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液に入れ、酢酸エチルで抽出し（２０ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより石油エーテル、酢酸エチルで溶離・精製し、表題化合物１ｅ（１０５ ｍｇ、収率：７３％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２６１．３， ２６３．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋
【0128】
ステップ５
６－ブロモ－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン １ｆ
化合物１ｅ（１０５ ｍｇ、０．４ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬの濃塩酸に溶解させた。０．５ ｍＬの酢酸を加え、１２０℃で２時間反応させた。反応液を濃縮し、３０ ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加え、酢酸エチルで抽出し（３０ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮し、残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物１ｆ（１７ ｍｇ、収率：１５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２４１．３， ２４３．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋
６－ブロモ－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン １ｆ
化合物１ｅ（１０５ ｍｇ、０．４ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬの濃塩酸に溶解させた。０．５ ｍＬの酢酸を加え、１２０℃で２時間反応させた。反応液を濃縮し、３０ ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加え、酢酸エチルで抽出し（３０ ｍＬ×３）、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を収集し、ろ液を減圧濃縮し、残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物１ｆ（１７ ｍｇ、収率：１５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２４１．３， ２４３．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋
【0129】
ステップ６
６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン１ｇ
窒素雰囲気で、順に化合物１ｆ（４０ ｍｇ、０．１４ ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（５７ ｍｇ、０．２２ ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２９ ｍｇ、０．２９ ｍｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（２１ ｍｇ、０．０３ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬの１，４－ジオキサンに溶解させた。１００℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、１，３，５，７－テトラメチル－６－フェニル－２，４，８－トリオキサ－６－ホスファアダマンタン（８ ｍｇ、０．０３ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４１ ｍｇ、０．２９ ｍｍｏｌ）、２，４－ジクロロ－５－フルオロピリミジン（３５ ｍｇ、０．２１ ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（２６ ｍｇ、０．０３ ｍｍｏｌ）と０．５ ｍＬの水を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物１ｇ（１８ ｍｇ、収率：３８％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３３７．２ ［Ｍ＋Ｈ］ ＋
６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン１ｇ
窒素雰囲気で、順に化合物１ｆ（４０ ｍｇ、０．１４ ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（５７ ｍｇ、０．２２ ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２９ ｍｇ、０．２９ ｍｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（２１ ｍｇ、０．０３ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬの１，４－ジオキサンに溶解させた。１００℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、１，３，５，７－テトラメチル－６－フェニル－２，４，８－トリオキサ－６－ホスファアダマンタン（８ ｍｇ、０．０３ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４１ ｍｇ、０．２９ ｍｍｏｌ）、２，４－ジクロロ－５－フルオロピリミジン（３５ ｍｇ、０．２１ ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（２６ ｍｇ、０．０３ ｍｍｏｌ）と０．５ ｍＬの水を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物１ｇ（１８ ｍｇ、収率：３８％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３３７．２ ［Ｍ＋Ｈ］ ＋
【0130】
ステップ７
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－フルオロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－フルオロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
窒素雰囲気で、順に化合物１ｇ（１８ ｍｇ、０．０５ ｍｍｏｌ）、（３Ｓ，４Ｒ）－４－アミノテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール（７．５ ｍｇ、０．０６ ｍｍｏｌ）、（Ｓ）－（－）－２，２’’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’’－ビナフチル（６．２ ｍｇ、０．０１ ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（２．２ ｍｇ、０．０１ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。炭酸セシウム（４１ ｍｇ、０．１３ ｍｍｏｌ）を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。
反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して粗生成物の混合物を得て、粗生成物をキラル分割することにより（カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ（２５０×３０ ｍｍ、１０ μｍ）、条件：ＣＯ２に４５％のＥｔＯＨ（０．１％のＮＨ３Ｈ２Ｏ）、流速：８０ ｍＬ／ｍｉｎ）異性体１（３．８ ｍｇ、収率：１７％）及び異性体２（４．４ ｍｇ、収率：２０％）を得た。
分析方法
カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ－３（１５０×４．６ ｍｍ、３ μｍ）、
条件：ＣＯ２条件で、４０％のＥｔＯＨ（０．０５％のＤＥＡ）、
流速：２．５ ｍＬ／ｍｉｎ
ＡＢＰＲ：１５００ ｐｓｉ；
温度： ３５℃。
保持時間が２．９０３ ｍｉｎである化合物を異性体１と定義し、ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４１８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
保持時間が３．９９７ ｍｉｎである化合物を異性体２と定義し、ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４１８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－フルオロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－フルオロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
窒素雰囲気で、順に化合物１ｇ（１８ ｍｇ、０．０５ ｍｍｏｌ）、（３Ｓ，４Ｒ）－４－アミノテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール（７．５ ｍｇ、０．０６ ｍｍｏｌ）、（Ｓ）－（－）－２，２’’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’’－ビナフチル（６．２ ｍｇ、０．０１ ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（２．２ ｍｇ、０．０１ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。炭酸セシウム（４１ ｍｇ、０．１３ ｍｍｏｌ）を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。
反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して粗生成物の混合物を得て、粗生成物をキラル分割することにより（カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ（２５０×３０ ｍｍ、１０ μｍ）、条件：ＣＯ２に４５％のＥｔＯＨ（０．１％のＮＨ３Ｈ２Ｏ）、流速：８０ ｍＬ／ｍｉｎ）異性体１（３．８ ｍｇ、収率：１７％）及び異性体２（４．４ ｍｇ、収率：２０％）を得た。
分析方法
カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ－３（１５０×４．６ ｍｍ、３ μｍ）、
条件：ＣＯ２条件で、４０％のＥｔＯＨ（０．０５％のＤＥＡ）、
流速：２．５ ｍＬ／ｍｉｎ
ＡＢＰＲ：１５００ ｐｓｉ；
温度： ３５℃。
保持時間が２．９０３ ｍｉｎである化合物を異性体１と定義し、ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４１８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
保持時間が３．９９７ ｍｉｎである化合物を異性体２と定義し、ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４１８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【0131】
実施例２
（３Ｒ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール 異性体１
（３Ｒ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール 異性体２
ステップ１
６－（２，５－ジクロロピリミジン－４－イル）－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン２ａ
窒素雰囲気で、順に化合物１ｆ（５０ ｍｇ、０．１８ ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（６７ ｍｇ、０．２６ ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３７ ｍｇ、０．３８ ｍｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（２６ ｍｇ、０．０４ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬの１，４－ジオキサンに溶解させた。１００℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、１，３，５，７－テトラメチル－６－フェニル－２，４，８－トリオキサ－６－ホスファアダマンタン（１０ ｍｇ、０．０４ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（５１ ｍｇ、０．３７ ｍｍｏｌ）、２，４－ジクロロ－５－フルオロピリミジン（５２ ｍｇ、０．２８ ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（３２ ｍｇ、０．０４ ｍｍｏｌ）と０．５ ｍＬの水を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物２ａ（３０ ｍｇ、収率：４８％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３５３．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋
（３Ｒ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール 異性体１
（３Ｒ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール 異性体２
【化24】
【化25】
６－（２，５－ジクロロピリミジン－４－イル）－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン２ａ
窒素雰囲気で、順に化合物１ｆ（５０ ｍｇ、０．１８ ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（６７ ｍｇ、０．２６ ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３７ ｍｇ、０．３８ ｍｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（２６ ｍｇ、０．０４ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬの１，４－ジオキサンに溶解させた。１００℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、１，３，５，７－テトラメチル－６－フェニル－２，４，８－トリオキサ－６－ホスファアダマンタン（１０ ｍｇ、０．０４ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（５１ ｍｇ、０．３７ ｍｍｏｌ）、２，４－ジクロロ－５－フルオロピリミジン（５２ ｍｇ、０．２８ ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（３２ ｍｇ、０．０４ ｍｍｏｌ）と０．５ ｍＬの水を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物２ａ（３０ ｍｇ、収率：４８％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３５３．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋
【0132】
ステップ２
（３Ｒ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール 異性体１
（３Ｒ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール 異性体２
窒素雰囲気で、順に化合物２ａ（３０ ｍｇ、０．０８ ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール（１９．４ ｍｇ、０．１０ ｍｍｏｌ、特許出願「ＷＯ ２０１９／２０７４６３ Ａ１」に開示された方法により調製して得た）、（Ｓ）－（－）－２，２’’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’’－ビナフチル（１０ ｍｇ、０．０２ ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（４．４ ｍｇ、０．０２ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。炭酸セシウム（５２ ｍｇ、０．１６ ｍｍｏｌ）を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して粗生成物の混合物を得て、粗生成物をキラル分割することにより（カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ－Ｈ（２５０×３０ ｍｍ、５ μｍ）、条件：ＣＯ２に５０％のＥｔＯＨ（０．１％のＮＨ３Ｈ２Ｏ）、流速：８０ ｍＬ／ｍｉｎ）異性体１（４．４ ｍｇ、収率：１０％）及び異性体２（３．３ ｍｇ、収率：８％）を得た。
分析方法
カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ－３（５０×４．６ ｍｍ、３ μｍ）、
移動相：Ａ：ＣＯ２ Ｂ：イソプロパノール（０．０５％のＤＥＡ）、勾配：２ ｍｉｎ以内に５％から４０％へのＢ、４０％のＢを１．２ ｍｉｎ、その後５％のＢを０．８ ｍｉｎ維持し、
流速：４ ｍＬ／ｍｉｎ、
ＡＢＰＲ： １５００ ｐｓｉ；
温度： ３５℃。
保持時間が２．０９４ ｍｉｎである化合物を異性体１と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ５１１．３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．４８ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．８６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５２ － ４．４４ （ｍ， １Ｈ）， ４．２４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７７ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．６４ － ３．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．８９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．６９ － ２．６３ （ｍ， １Ｈ）， ２．６０ （ｓ， ３Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ＝６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２４ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， １．１８ － １．０４ （ｍ， １Ｈ）。
保持時間が２．４９９ ｍｉｎである化合物を異性体２と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ５１１．３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４８ （ｄｄ， Ｊ＝１．８， １１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３６ （ｔ， Ｊ＝５．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．５９ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．６７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６０ （ｓ， ３Ｈ）， １．５８ － １．４６ （ｍ， １Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ＝６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２４ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）。
（３Ｒ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール 異性体１
（３Ｒ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール 異性体２
窒素雰囲気で、順に化合物２ａ（３０ ｍｇ、０．０８ ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（メタンスルホニル）ピペリジン－３－オール（１９．４ ｍｇ、０．１０ ｍｍｏｌ、特許出願「ＷＯ ２０１９／２０７４６３ Ａ１」に開示された方法により調製して得た）、（Ｓ）－（－）－２，２’’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’’－ビナフチル（１０ ｍｇ、０．０２ ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（４．４ ｍｇ、０．０２ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。炭酸セシウム（５２ ｍｇ、０．１６ ｍｍｏｌ）を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して粗生成物の混合物を得て、粗生成物をキラル分割することにより（カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ－Ｈ（２５０×３０ ｍｍ、５ μｍ）、条件：ＣＯ２に５０％のＥｔＯＨ（０．１％のＮＨ３Ｈ２Ｏ）、流速：８０ ｍＬ／ｍｉｎ）異性体１（４．４ ｍｇ、収率：１０％）及び異性体２（３．３ ｍｇ、収率：８％）を得た。
分析方法
カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ－３（５０×４．６ ｍｍ、３ μｍ）、
移動相：Ａ：ＣＯ２ Ｂ：イソプロパノール（０．０５％のＤＥＡ）、勾配：２ ｍｉｎ以内に５％から４０％へのＢ、４０％のＢを１．２ ｍｉｎ、その後５％のＢを０．８ ｍｉｎ維持し、
流速：４ ｍＬ／ｍｉｎ、
ＡＢＰＲ： １５００ ｐｓｉ；
温度： ３５℃。
保持時間が２．０９４ ｍｉｎである化合物を異性体１と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ５１１．３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．４８ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．８６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５２ － ４．４４ （ｍ， １Ｈ）， ４．２４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７７ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．６４ － ３．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．８９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．６９ － ２．６３ （ｍ， １Ｈ）， ２．６０ （ｓ， ３Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ＝６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２４ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， １．１８ － １．０４ （ｍ， １Ｈ）。
保持時間が２．４９９ ｍｉｎである化合物を異性体２と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ５１１．３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４８ （ｄｄ， Ｊ＝１．８， １１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３６ （ｔ， Ｊ＝５．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．５９ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．６７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６０ （ｓ， ３Ｈ）， １．５８ － １．４６ （ｍ， １Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ＝６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２４ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）。
【0133】
実施例３
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｓ）－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｒ）－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
窒素雰囲気で、順に化合物２ａ（５５ ｍｇ、０．１６ ｍｍｏｌ）、（３Ｓ，４Ｒ）－４－アミノテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール（１８ ｍｇ、０．１６ ｍｍｏｌ）、（Ｓ）－（－）－２，２’’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’’－ビナフチル（２０ ｍｇ、０．０３ ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（６．７ ｍｇ、０．０３ ｍｍｏｌ）を３ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。炭酸セシウム（１０４ ｍｇ、０．３２ ｍｍｏｌ）を加え、８５℃の条件で３時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して粗生成物の混合物を得た。粗生成物をキラル分割することにより［カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ（２５０×３０ ｍｍ、１０ μｍ）、条件：０．１％のＮＨ３
．Ｈ２Ｏ ＩＰＡ、Ｂ：４５％で開始し、Ｂ：４５％で終了し、流速（ｍＬ／ｍｉｎ）：７０）］異性体１（６．２ ｍｇ、収率：９．２％）及び異性体２（７．７ ｍｇ、収率：１１％）を得た。
分析方法
カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ－３（１００×４．６ ｍｍ、３ μｍ）、
移動相：Ａ：ＣＯ２ Ｂ：エタノール（０．０５％のＤＥＡ）、勾配：４ ｍｉｎ以内に５％から４０％へのＢ、４０％のＢを２．５ ｍｉｎ、その後５％のＢを１．５ ｍｉｎ維持し、
流速：２．８ ｍＬ／ｍｉｎ、
ＡＢＰＲ： １５００ ｐｓｉ；
温度： ３５℃。
保持時間が３．５１８ ｍｉｎである化合物を異性体１と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４３４．３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９０ （ｄ， Ｊ＝１１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．９３ （ｄ， Ｊ＝５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４８ （ｄｄ， Ｊ＝１．６， １１．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８４ － ３．７４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５３ － ３．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０３ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６０ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０１ － １．９０ （ｍ， １Ｈ）， １．５４ － １．４４ （ｍ， １Ｈ）， １．３８ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）。
保持時間が４．１６５ ｍｉｎである化合物を異性体２と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４３４．３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．９３ （ｄ， Ｊ＝５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８６ － ３．７４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５４ － ３．４４ （ｍ， １Ｈ）， ３．３２ － ３．２７ （ｍ， １Ｈ）， ３．０３ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６０ （ｓ， ３Ｈ）， １．９５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１３．１ Ｈｚ， １Ｈ）， １．５４ － １．４３ （ｍ， １Ｈ）， １．３８ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）。
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｓ）－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｒ）－８－フルオロ－２，３－ジメチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
【化26】
【化27】
分析方法
カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ－３（１００×４．６ ｍｍ、３ μｍ）、
移動相：Ａ：ＣＯ２ Ｂ：エタノール（０．０５％のＤＥＡ）、勾配：４ ｍｉｎ以内に５％から４０％へのＢ、４０％のＢを２．５ ｍｉｎ、その後５％のＢを１．５ ｍｉｎ維持し、
流速：２．８ ｍＬ／ｍｉｎ、
ＡＢＰＲ： １５００ ｐｓｉ；
温度： ３５℃。
保持時間が３．５１８ ｍｉｎである化合物を異性体１と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４３４．３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９０ （ｄ， Ｊ＝１１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．９３ （ｄ， Ｊ＝５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４８ （ｄｄ， Ｊ＝１．６， １１．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８４ － ３．７４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５３ － ３．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０３ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６０ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０１ － １．９０ （ｍ， １Ｈ）， １．５４ － １．４４ （ｍ， １Ｈ）， １．３８ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）。
保持時間が４．１６５ ｍｉｎである化合物を異性体２と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４３４．３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．９３ （ｄ， Ｊ＝５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８６ － ３．７４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５４ － ３．４４ （ｍ， １Ｈ）， ３．３２ － ３．２７ （ｍ， １Ｈ）， ３．０３ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６０ （ｓ， ３Ｈ）， １．９５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１３．１ Ｈｚ， １Ｈ）， １．５４ － １．４３ （ｍ， １Ｈ）， １．３８ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）。
【0134】
実施例４
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｓ）－８－フルオロ－２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｒ）－８－フルオロ－２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
ステップ１
６－ブロモ－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－ホルムアルデヒド ４ａ
窒素雰囲気で、順に化合物１ｆ（２．０ ｇ、７ ｍｍｏｌ）、二酸化セレン（３．１ ｇ、２８ ｍｍｏｌ）を３０ ｍＬの１，４－ジオキサンに加えた。９５℃の条件で８時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ａ（９３０ ｍｇ、収率：４４％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２９９．１，３０１．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｓ）－８－フルオロ－２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｒ）－８－フルオロ－２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
【化28】
【化29】
６－ブロモ－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－ホルムアルデヒド ４ａ
窒素雰囲気で、順に化合物１ｆ（２．０ ｇ、７ ｍｍｏｌ）、二酸化セレン（３．１ ｇ、２８ ｍｍｏｌ）を３０ ｍＬの１，４－ジオキサンに加えた。９５℃の条件で８時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ａ（９３０ ｍｇ、収率：４４％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ２９９．１，３０１．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋
【0135】
ステップ２
１－（６－ブロモ－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－イル）エタン－１－オール ４ｂ
窒素雰囲気で、化合物４ａ（９３０ ｍｇ、３．１ ｍｍｏｌ）を２０ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。－２０℃に降温し、臭化メチルマグネシウムのテトラヒドロフラン溶液（３ ｍｏｌ／Ｌ、１．５ ｍＬ、４．５ ｍｍｏｌ）を滴下し、且つ－２０℃の条件で４時間反応させた。５ ｍＬの水を加えて反応をクエンチし、反応液を減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ｂ（８３０ ｍｇ、収率：８５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３１５．２，３１７．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋
１－（６－ブロモ－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－イル）エタン－１－オール ４ｂ
窒素雰囲気で、化合物４ａ（９３０ ｍｇ、３．１ ｍｍｏｌ）を２０ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。－２０℃に降温し、臭化メチルマグネシウムのテトラヒドロフラン溶液（３ ｍｏｌ／Ｌ、１．５ ｍＬ、４．５ ｍｍｏｌ）を滴下し、且つ－２０℃の条件で４時間反応させた。５ ｍＬの水を加えて反応をクエンチし、反応液を減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ｂ（８３０ ｍｇ、収率：８５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３１５．２，３１７．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋
【0136】
ステップ３
１－（６－ブロモ－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－イル）エタン－１－オン ４ｃ
室温で、化合物４ｂ（６００ ｍｇ、１．９ ｍｍｏｌ）を２０ ｍＬのテトラヒドロフランに溶け、デス・マーチンペルヨージナン（２．０ ｇ、４．８ ｍｍｏｌ）を加えた。８０℃に加熱して２時間反応させ、反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ｃ（３５０ ｍｇ、収率：５９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３１３．１， ３１５．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋
１－（６－ブロモ－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－イル）エタン－１－オン ４ｃ
室温で、化合物４ｂ（６００ ｍｇ、１．９ ｍｍｏｌ）を２０ ｍＬのテトラヒドロフランに溶け、デス・マーチンペルヨージナン（２．０ ｇ、４．８ ｍｍｏｌ）を加えた。８０℃に加熱して２時間反応させ、反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ｃ（３５０ ｍｇ、収率：５９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３１３．１， ３１５．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋
【0137】
ステップ４
２－（６－ブロモ－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－イル）プロパン－２－オール ４ｄ
窒素雰囲気で、化合物４ｃ（３５０ ｍｇ、１．１ ｍｍｏｌ）を２０ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。－２０℃に降温し、臭化メチルマグネシウムのテトラヒドロフラン溶液（３ ｍｏｌ／Ｌ、０．７ ｍＬ、２．１ ｍｍｏｌ）を滴下し、且つ－２０℃の条件で４時間反応させた。５ ｍＬの水を加えて反応をクエンチし、反応液を減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ｄ（２６０ ｍｇ、収率：７１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３２９．２，３３１．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋
２－（６－ブロモ－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－イル）プロパン－２－オール ４ｄ
窒素雰囲気で、化合物４ｃ（３５０ ｍｇ、１．１ ｍｍｏｌ）を２０ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。－２０℃に降温し、臭化メチルマグネシウムのテトラヒドロフラン溶液（３ ｍｏｌ／Ｌ、０．７ ｍＬ、２．１ ｍｍｏｌ）を滴下し、且つ－２０℃の条件で４時間反応させた。５ ｍＬの水を加えて反応をクエンチし、反応液を減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ｄ（２６０ ｍｇ、収率：７１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３２９．２，３３１．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋
【0138】
ステップ５
２－（６－（２，５－ジクロロピリミジン－４－イル）－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－イル）プロパン－２－オール ４ｅ
窒素雰囲気で、順に化合物４ｄ（２６０ ｍｇ、０．８ ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（３０５ ｍｇ、１．２ ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１５７ ｍｇ、１．６ ｍｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（１１７ ｍｇ、０．２ ｍｍｏｌ）を５ ｍＬの１，４－ジオキサンに溶解させた。１００℃の条件で２時間反応させた。反応液を室温に冷却し、１，３，５，７－テトラメチル－６－フェニル－２，４，８－トリオキサ－６－ホスファアダマンタン（５８ ｍｇ、０．２ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２２１ ｍｇ、１．６ ｍｍｏｌ）、２，４－ジクロロ－５－フルオロピリミジン（２２０ ｍｇ、１．２ ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１８３ ｍｇ、０．２ ｍｍｏｌ）と１ ｍＬの水を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ｅ（１２９ ｍｇ、収率：４１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３９７．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋
２－（６－（２，５－ジクロロピリミジン－４－イル）－８－フルオロ－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－２－イル）プロパン－２－オール ４ｅ
窒素雰囲気で、順に化合物４ｄ（２６０ ｍｇ、０．８ ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（３０５ ｍｇ、１．２ ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１５７ ｍｇ、１．６ ｍｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（１１７ ｍｇ、０．２ ｍｍｏｌ）を５ ｍＬの１，４－ジオキサンに溶解させた。１００℃の条件で２時間反応させた。反応液を室温に冷却し、１，３，５，７－テトラメチル－６－フェニル－２，４，８－トリオキサ－６－ホスファアダマンタン（５８ ｍｇ、０．２ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２２１ ｍｇ、１．６ ｍｍｏｌ）、２，４－ジクロロ－５－フルオロピリミジン（２２０ ｍｇ、１．２ ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１８３ ｍｇ、０．２ ｍｍｏｌ）と１ ｍＬの水を加え、８０℃の条件で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して表題化合物４ｅ（１２９ ｍｇ、収率：４１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３９７．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋
【0139】
ステップ６
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｓ）－８－フルオロ－２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｒ）－８－フルオロ－２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
窒素雰囲気で、順に化合物４ｅ（１２４ ｍｇ、０．３１ ｍｍｏｌ）、（３Ｓ，４Ｒ）－４－アミノテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール（１９ ｍｇ、０．１６ ｍｍｏｌ）、（Ｓ）－（－）－２，２’’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’’－ビナフチル（１１８ ｍｇ、０．５ ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（１４ ｍｇ、０．０６ ｍｍｏｌ）を５ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。炭酸セシウム（２０２ ｍｇ、０．６２ ｍｍｏｌ）を加え、８５℃の条件で３時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して粗生成物の混合物４ｆを得て、粗生成物をキラル分割することにより［カラム：
ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ（２５０×３０ ｍｍ、１０ μｍ）、条件：０．１％のＮＨ３ ．Ｈ２Ｏ ＥＴＯＨ、Ｂｅｇｉｎ Ｂ：４０％、Ｅｎｄ Ｂ：４０％、流速（ｍＬ／ｍｉｎ）：６０）］表題化合物である異性体１（２５．２ ｍｇ、収率：１７％）及び表題化合物である異性体２（２２ ｍｇ、収率：１５％）を得た。
分析方法
カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＡＤ－３（１００×４．６ ｍｍ、３ μｍ）、
移動相：Ａ：ＣＯ２ Ｂ：エタノール（０．０５％のＤＥＡ）、勾配：２ ｍｉｎ以内に５％から４０％へのＢ、４０％のＢを１．２ ｍｉｎ、その後５％のＢを０．８ ｍｉｎ維持し、
流速：４ ｍＬ／ｍｉｎ、
ＡＢＰＲ： １５００ ｐｓｉ；
温度： ３５℃。
保持時間が１．８８７ ｍｉｎである化合物を異性体２と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４７８．１［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９２ （ｄ， Ｊ＝１１．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．２３ （ｑ， Ｊ＝６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．９３ （ｄ， Ｊ＝５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４７ （ｄ， Ｊ＝１１．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２２ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８９ － ３．６７ （ｍ， ３Ｈ）， ３．３９ － ３．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０３ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．２ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６８ （ｓ， ３Ｈ）， １．６２ （ｓ， ３Ｈ）， １．５４ － １．４７ （ｍ， １Ｈ）， １．４５ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）。
保持時間が２．０７８ ｍｉｎである化合物を異性体１と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４７８．１［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９２ （ｄ， Ｊ＝１１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８２ （ｓ， １Ｈ）， ５．２９ － ５．１９ （ｍ， １Ｈ）， ４．９３ （ｄ， Ｊ＝５．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４７ （ｄ， Ｊ＝１１．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８５ － ３．７５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５３ － ３．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０３ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９４ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．６７ （ｓ， ３Ｈ）， １．６２ （ｓ， ３Ｈ）， １．５３ － １．４７ （ｍ， １Ｈ）， １．４５ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）。
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｓ）－８－フルオロ－２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体１
（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（５－クロロ－４－（（Ｒ）－８－フルオロ－２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）－３－メチル－３，４－ジヒドロ－５－オキサ－１，２ａ－ジアザアセナフチレン－６－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール 異性体２
窒素雰囲気で、順に化合物４ｅ（１２４ ｍｇ、０．３１ ｍｍｏｌ）、（３Ｓ，４Ｒ）－４－アミノテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－オール（１９ ｍｇ、０．１６ ｍｍｏｌ）、（Ｓ）－（－）－２，２’’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’’－ビナフチル（１１８ ｍｇ、０．５ ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（１４ ｍｇ、０．０６ ｍｍｏｌ）を５ ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。炭酸セシウム（２０２ ｍｇ、０．６２ ｍｍｏｌ）を加え、８５℃の条件で３時間反応させた。反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、減圧濃縮した後に残留物をＣ－１８逆相クロマトグラフィーにより精製して粗生成物の混合物４ｆを得て、粗生成物をキラル分割することにより［カラム：
ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ（２５０×３０ ｍｍ、１０ μｍ）、条件：０．１％のＮＨ３ ．Ｈ２Ｏ ＥＴＯＨ、Ｂｅｇｉｎ Ｂ：４０％、Ｅｎｄ Ｂ：４０％、流速（ｍＬ／ｍｉｎ）：６０）］表題化合物である異性体１（２５．２ ｍｇ、収率：１７％）及び表題化合物である異性体２（２２ ｍｇ、収率：１５％）を得た。
分析方法
カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＡＤ－３（１００×４．６ ｍｍ、３ μｍ）、
移動相：Ａ：ＣＯ２ Ｂ：エタノール（０．０５％のＤＥＡ）、勾配：２ ｍｉｎ以内に５％から４０％へのＢ、４０％のＢを１．２ ｍｉｎ、その後５％のＢを０．８ ｍｉｎ維持し、
流速：４ ｍＬ／ｍｉｎ、
ＡＢＰＲ： １５００ ｐｓｉ；
温度： ３５℃。
保持時間が１．８８７ ｍｉｎである化合物を異性体２と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４７８．１［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９２ （ｄ， Ｊ＝１１．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．２３ （ｑ， Ｊ＝６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．９３ （ｄ， Ｊ＝５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４７ （ｄ， Ｊ＝１１．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２２ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８９ － ３．６７ （ｍ， ３Ｈ）， ３．３９ － ３．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０３ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．２ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６８ （ｓ， ３Ｈ）， １．６２ （ｓ， ３Ｈ）， １．５４ － １．４７ （ｍ， １Ｈ）， １．４５ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）。
保持時間が２．０７８ ｍｉｎである化合物を異性体１と定義し、
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４７８．１［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ＝ ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９２ （ｄ， Ｊ＝１１．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８２ （ｓ， １Ｈ）， ５．２９ － ５．１９ （ｍ， １Ｈ）， ４．９３ （ｄ， Ｊ＝５．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４７ （ｄ， Ｊ＝１１．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８５ － ３．７５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５３ － ３．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０３ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９４ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．６７ （ｓ， ３Ｈ）， １．６２ （ｓ， ３Ｈ）， １．５３ － １．４７ （ｍ， １Ｈ）， １．４５ （ｄ， Ｊ＝６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）。
【0140】
生物学的評価
以下、試験例と合わせて本発明を更に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
以下、試験例と合わせて本発明を更に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【0141】
試験例１、開示化合物によるサイクリン依存性キナーゼへの活性検出
１、実験の材料
化合物ＡはＷＯ ２０１９／２０７４６３Ａ１の実施例Ａ９４であり、当該特許出願に開示された方法を参照して合成して得た。
１、実験の材料
【表1A】
【表1B】
【0142】
２、キナーゼ活性試験（ＣＤＫ４／サイクリンＤ１、ＣＤＫ６／サイクリンＤ３）
体外ＣＤＫキナーゼ活性は、移動度シフトアッセイ（Ｍｏｂｉｌｉｔｙ Ｓｈｉｆｔ Ａｓｓａｙ）の方法により試験された。実験において、試験化合物によるＣＤＫ活性への阻害試験の初期濃度は３００ ｎＭで、３倍希釈し、合計１０個の濃度であり、平行ウェルで試験した。化合物であるスタウロスポリンを標準対照として採用した。
体外ＣＤＫキナーゼ活性は、移動度シフトアッセイ（Ｍｏｂｉｌｉｔｙ Ｓｈｉｆｔ Ａｓｓａｙ）の方法により試験された。実験において、試験化合物によるＣＤＫ活性への阻害試験の初期濃度は３００ ｎＭで、３倍希釈し、合計１０個の濃度であり、平行ウェルで試験した。化合物であるスタウロスポリンを標準対照として採用した。
【0143】
１倍キナーゼ緩衝液（ＣＤＫ２）（５０ ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．００１５％のＢｒｉｊ－３５）、１倍キナーゼ緩衝液（ＣＤＫ４）（２０ ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）、停止液（１００ ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１５％のＢｒｉｊ－３５、０．２％のＣｏａｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ ＃３、５０ ｍＭのＥＤＴＡ）を調製した。適量のキナーゼを１倍キナーゼ緩衝液に加えて２．５倍酵素溶液を調製し、化合物の試験濃度の５倍に対応する化合物希釈液（１倍キナーゼ緩衝液、１０％のＤＭＳＯ）を調製し、適量のＦＡＭ標識したポリペプチド及びＡＴＰを１倍キナーゼ緩衝液に加え、２．５倍基質溶液を調製した。３８４ウェル反応プレートの反応孔に５ μＬの５倍化合物希釈液及び１０ μＬの２．５倍酵素溶液を加え、均一に混合した後に室温で１０分間インキュベートし、そして３８４ウェルプレートに１０ μＬの２．５倍基質溶液を加え、１０００ ｒｐｍで１分間遠心分離し、反応プレートを２８℃で６０分間インキュベートし（生化学的インキュベーターの型番：ＳＰＸ－１００Ｂ－Ｚ）、３８４ウェル反応プレートに３０ μＬの停止液を加えて反応を停止させ、１０００ ｒｐｍで１分間遠心分離し、最後にＣａｌｉｐｅｒ ＥＺ Ｒｅａｄｅｒ IIで転換率データを読み取った（励起波長：４００ ｎｍ、発光波長：４４５ ｎｍと５２０ ｎｍ）。
【0144】
化合物のＩＣ５０値は、ＸＬＦｉｔ ｅｘｃｅｌ ａｄｄ－ｉｎ ｖｅｒｓｉｏｎ ５．４．０．８によりフィッティングした。フィッティング式：
Ｙ＝ Ｂｏｔｔｏｍ ＋ （Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）＊ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））。
Ｘ：化合物の濃度ｌｏｇ値、Ｙ：化合物の阻害百分率。
Ｙ＝ Ｂｏｔｔｏｍ ＋ （Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）＊ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））。
Ｘ：化合物の濃度ｌｏｇ値、Ｙ：化合物の阻害百分率。
【0145】
３、キナーゼ活性試験（ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ９／サイクリンＴ１）
体外ＣＤＫ（ＣＤＫ２、ＣＤＫ９）キナーゼ活性試験の初期濃度は１ μＭで、３倍希釈し、合計１０個の濃度であり、平行ウェルで試験した。化合物ＰＨＡ－７９３８８７を対照化合物として採用した。
体外ＣＤＫ（ＣＤＫ２、ＣＤＫ９）キナーゼ活性試験の初期濃度は１ μＭで、３倍希釈し、合計１０個の濃度であり、平行ウェルで試験した。化合物ＰＨＡ－７９３８８７を対照化合物として採用した。
【0146】
１×キナーゼ反応緩衝液（４０ ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．４、２０ ｍＭのＭｇ２Ｃｌ２、０．１ ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、５０ μＭのＤＴＴ）、１倍の体積の５×キナーゼ反応緩衝液及び４倍の体積の水を調製し、そしてＤＴＴ（最終濃度５０ μＭ）を加えた。Ｅｃｈｏ６５５で反応プレート（７８４０７５、Ｇｒｅｉｎｅｒ）の各ウェルに希釈した化合物作動液５０ ｎＬ（ＤＭＳＯの最終濃度が１％）を移した。プレートシーリングフィルムで反応プレートを封止し、１０００ ｇで１分間遠心分離した。１×キナーゼ反応緩衝液で２×酵素（０．３ ｎｇ／μＬのＣＤＫ２／サイクリンＥ１又はＣＤＫ９／サイクリンＴ１）を調製し、各ウェルに２．５ μＬの上記キナーゼ溶液を加え、プレートシーリングフィルムで反応プレートを封止し、１０００ ｇで１分間遠心分離し、室温で１０分間放置した。１×キナーゼ反応緩衝液で２×キナーゼ基質とＡＴＰの混合液を調製し、２×ＣＤＫ２／ＣｙｌｉｎＥ１キナーゼ基質は０．４ ｍｇ／ｍＬのヒストンＨ１と３０ μＭのＡＴＰであった。反応プレートに２．５ μＬの２×ヒストンＨ１とＡＴＰの混合液を加え、１０００ ｇで３０秒間遠心分離し、反応を開始させた。キナーゼ試験は室温で１２０分間反応させた後、４ μＬのＡＤＰ－Ｇｌｏ試薬を加え、室温で４０分間反応させた。その後、８ μＬのキナーゼ検出試薬を加え、室温で４０分間反応させ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０４により発光シグナルを読み取った。
【0147】
データの分析は以下の通りである
a) 阻害百分率：％阻害＝１００－（Ｓｉｇｎａｌｃｍｐｄ－ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＰＣ）／（ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＶＣ－ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＰＣ）×１００。
ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＰＣ：プレート全体の全ての陽性対照孔の平均値。
ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＶＣ：プレート全体の全ての陰性対照孔の平均値。
Ｓｉｇｎａｌｃｍｐｄ：試験化合物の対応ウェルの平均値。
ｂ）化合物のＩＣ５０：ＧｒａｐｈＰａｄ ８．０で、以下の非線形フィッティング式により算出して得た。
Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ ＋ （Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）×ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））
Ｘ：化合物の濃度ｌｏｇ値、Ｙ：化合物の阻害百分率。
本開示に係る化合物のＣＤＫ（ＣＤＫ１、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ９）キナーゼへの生化学的阻害活性は、以上の試験により測定され、測定されたＩＣ５０値は表１、表２と表３に示されている。
a) 阻害百分率：％阻害＝１００－（Ｓｉｇｎａｌｃｍｐｄ－ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＰＣ）／（ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＶＣ－ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＰＣ）×１００。
ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＰＣ：プレート全体の全ての陽性対照孔の平均値。
ＳｉｇｎａｌＡｖｅ＿ＶＣ：プレート全体の全ての陰性対照孔の平均値。
Ｓｉｇｎａｌｃｍｐｄ：試験化合物の対応ウェルの平均値。
ｂ）化合物のＩＣ５０：ＧｒａｐｈＰａｄ ８．０で、以下の非線形フィッティング式により算出して得た。
Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ ＋ （Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）×ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））
Ｘ：化合物の濃度ｌｏｇ値、Ｙ：化合物の阻害百分率。
本開示に係る化合物のＣＤＫ（ＣＤＫ１、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ９）キナーゼへの生化学的阻害活性は、以上の試験により測定され、測定されたＩＣ５０値は表１、表２と表３に示されている。
【0148】
【表2】
【0149】
【表3】
【0150】
【表4】
【0151】
試験例２、ＣＹＰ阻害実験
１５０個の供与体を利用してヒト肝臓ミクロソーム（Ｃｏｒｎｉｎｇから購入、製品番号４５２１１７）と混合し、ヒトの主な５つのＣＹＰアイソフォーム（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４）の代表的な基質代謝反応を評価した。液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）により、様々な濃度の測定待ちの化合物によるフェナセチン（ＣＹＰ１Ａ２）、ジクロフェナクナトリウム（ＣＹＰ２Ｃ９）、Ｓ－メフェニトイン（ＣＹＰ２Ｃ１９）、ブフラロール塩酸塩（ＣＹＰ２Ｄ６）、ミダゾラム（ＣＹＰ３Ａ４／５）代謝反応への影響を測定した。
１５０個の供与体を利用してヒト肝臓ミクロソーム（Ｃｏｒｎｉｎｇから購入、製品番号４５２１１７）と混合し、ヒトの主な５つのＣＹＰアイソフォーム（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４）の代表的な基質代謝反応を評価した。液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）により、様々な濃度の測定待ちの化合物によるフェナセチン（ＣＹＰ１Ａ２）、ジクロフェナクナトリウム（ＣＹＰ２Ｃ９）、Ｓ－メフェニトイン（ＣＹＰ２Ｃ１９）、ブフラロール塩酸塩（ＣＹＰ２Ｄ６）、ミダゾラム（ＣＹＰ３Ａ４／５）代謝反応への影響を測定した。
【0152】
３０ μＭのフェナセチン、１０ μＭのジクロフェナクナトリウム、３５ μＭのＳ－メフェニトイン、５ μＭのブフラロール塩酸塩、３ μＭのミダゾラム、１ ｍＭのＮＡＤＰＨ、測定待ちの化合物（濃度はそれぞれ０．１、０．３、１、３、１０、３０ μｍｏｌ／Ｌである）又は陽性化合物又はブランク対照及びヒト肝臓ミクロソーム（０．２ ｍｇ／ｍＬ）と混合した反応系２００ μＬ（１００ ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．４、体積比がそれぞれ０．３％のＤＭＳＯ、０．６％のアセトニトリル、０．１％のメタノールを含む）を３７℃で５分間インキュベートした。その後、３％のギ酸及び４０ ｎＭの内部標準ベラパミルを含むアセトニトリル溶液２００ μＬを加え、４０００ ｒｐｍで５０分間遠心分離した。氷上に置いて２０分間冷却し、更に４０００ ｒｐｍで２０分間遠心分離してタンパク質を析出させた。２００ μＬの上清液を取ってＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を行った。
【0153】
ピーク面積をクロマトグラムによって算出した。残留活性比率（％）は、以下の式で算出した。
【0154】
ピーク面積比率＝代謝生成物のピーク面積／内部標準のピーク面積
残留活性比率（％）＝測定待ちの化合物群のピーク面積比率／ブランク群のピーク面積比率
残留活性比率（％）＝測定待ちの化合物群のピーク面積比率／ブランク群のピーク面積比率
【0155】
ＣＹＰ半阻害濃度（ＩＣ５０）は、Ｅｘｃｅｌ ＸＬｆｉｔ ５．３．１．３で算出して得た。
【0156】
測定されたＣＹＰ半阻害濃度（ＩＣ５０）の値は、下記の表４に示されている。
【0157】
【表5】
【0158】
試験例３、溶解度測定実験
化合物のｐＨ７．４のリン酸塩緩衝液における熱力学的溶解度を測定した。試料の上清液及び濃度が既知である標準品は、何れもＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより検出された。
化合物のｐＨ７．４のリン酸塩緩衝液における熱力学的溶解度を測定した。試料の上清液及び濃度が既知である標準品は、何れもＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより検出された。
【0159】
１、材料と試薬
化合物Ａ（化合物ＡはＷＯ ２０１９２０７４６３Ａの実施例Ａ９４であり、当該特許出願に開示された方法を参照して合成して得た）。
ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（分析的純品）、ＮａＨ２ＰＯ４（分析的純品）、ＮａＯＨ（分析的純品）。
１．５ ｍＬの平底ガラス管（ＢｉｏＴｅｃｈ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、成形されたポリテトラフルオロエチレンの蓋（ＢｉｏＴｅｃｈ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、ポリテトラフルオロエチレンで被覆した撹拌棒（ＢｉｏＴｅｃｈ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ快適型恒温ミキサー及び９６ウェルディープウェルプレート。
化合物Ａ（化合物ＡはＷＯ ２０１９２０７４６３Ａの実施例Ａ９４であり、当該特許出願に開示された方法を参照して合成して得た）。
ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（分析的純品）、ＮａＨ２ＰＯ４（分析的純品）、ＮａＯＨ（分析的純品）。
１．５ ｍＬの平底ガラス管（ＢｉｏＴｅｃｈ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、成形されたポリテトラフルオロエチレンの蓋（ＢｉｏＴｅｃｈ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、ポリテトラフルオロエチレンで被覆した撹拌棒（ＢｉｏＴｅｃｈ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ快適型恒温ミキサー及び９６ウェルディープウェルプレート。
【0160】
２、ｐＨ７．４の０．０１ Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液の調製
１５．６ ｇのＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏを秤量して１ Ｌのガラスフラスコに入れ、１ Ｌの脱イオン水を加えて溶解させた。溶液のＰＨは約４．７であり、その後、１０ ＭのＮａＯＨでＰＨ値を７．４に調整した。
１５．６ ｇのＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏを秤量して１ Ｌのガラスフラスコに入れ、１ Ｌの脱イオン水を加えて溶解させた。溶液のＰＨは約４．７であり、その後、１０ ＭのＮａＯＨでＰＨ値を７．４に調整した。
【0161】
３、溶解度の測定過程
それぞれの化合物は１ ｍｇの粉末を正確に秤量し、ガラス管に入れ、上記ガラス管にＰＨ７．４のリン酸塩緩衝液を加え、加入量が１ ｍｇあたり１ ｍＬであった。各ガラス管に１つの撹拌棒を入れてから、蓋をして、ガラス管が入った試料盤をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ快適型恒温ミキサーに置き、２５℃、１１００ ｒｐｍで２４時間インキュベートし、インキュベート終了後に蓋を開け、磁石で撹拌棒を吸引して取り出し、且つ各ガラス管内の現象を記録し、プレートを２５℃、４０００ ｒｐｍで３０分間遠心分離した。７５０ μＬの上清液を吸い取った。ピペットヘッドをアセトニトリルで５秒間洗い、更に純水で５秒間洗った。その後、前の５０ μＬの廃液を排出し、残りの７００ μＬをガラス管が入った別の９６ウェル試料盤に入れ、更に３０分間（２５℃、４０００ ｒｐｍ）遠心分離し、二次遠心分離した試料１０ μＬを吸い取って内部標準を含むアセトニトリルと水（１：１）の混合液９９０ μＬに入れ（１００倍の試料）、希釈溶液１０ μＬを吸い取って内部標準を含むアセトニトリルと水（１：１）の混合液９９０ μＬに加えた（１００００倍の試料）。試料の希釈倍数は、溶解度値とＬＣ／ＭＳシグナルの応答によって変わる可能性がある
それぞれの化合物は１ ｍｇの粉末を正確に秤量し、ガラス管に入れ、上記ガラス管にＰＨ７．４のリン酸塩緩衝液を加え、加入量が１ ｍｇあたり１ ｍＬであった。各ガラス管に１つの撹拌棒を入れてから、蓋をして、ガラス管が入った試料盤をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ快適型恒温ミキサーに置き、２５℃、１１００ ｒｐｍで２４時間インキュベートし、インキュベート終了後に蓋を開け、磁石で撹拌棒を吸引して取り出し、且つ各ガラス管内の現象を記録し、プレートを２５℃、４０００ ｒｐｍで３０分間遠心分離した。７５０ μＬの上清液を吸い取った。ピペットヘッドをアセトニトリルで５秒間洗い、更に純水で５秒間洗った。その後、前の５０ μＬの廃液を排出し、残りの７００ μＬをガラス管が入った別の９６ウェル試料盤に入れ、更に３０分間（２５℃、４０００ ｒｐｍ）遠心分離し、二次遠心分離した試料１０ μＬを吸い取って内部標準を含むアセトニトリルと水（１：１）の混合液９９０ μＬに入れ（１００倍の試料）、希釈溶液１０ μＬを吸い取って内部標準を含むアセトニトリルと水（１：１）の混合液９９０ μＬに加えた（１００００倍の試料）。試料の希釈倍数は、溶解度値とＬＣ／ＭＳシグナルの応答によって変わる可能性がある
【0162】
【表6】
【0163】
４、標準品の調製
１ ｍｇの化合物粉末を正確に秤量し、それぞれ１つのガラス管に入れ、各ガラス管にＤＭＳＯを加え、
加入量が１ ｍｇあたり１ ｍＬであった。各ガラス管に１つの撹拌棒を入れてから、蓋をして、標準品入りのガラス管が入った盤をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ快適型恒温ミキサーに置き、２５℃、１，１００回転で２時間インキュベートして粉末を十分に溶解させ、固体が完全に溶解されたか否かを観察し、化合物がＤＭＳＯ溶液に完全に溶解されないものを記録した。１ ｍｇ／ｍＬの標準品１０μＬを吸い取って内部標準を含むアセトニトリルと水（１：１）の混合液９９０ μＬに加え、１０ μｇ／ｍＬの標準品を得た。１０ μｇ／ｍＬの標準品１０ μＬを吸い取って内部標準を含むアセトニトリルと水（１：１）の混合液９９０ μＬに加え、０．１ μｇ／ｍＬの標準品を得た。試料の希釈倍数は、ＬＣ／ＭＳシグナルの応答によって変わる可能性がある。試料は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析された。全ての化合物も単独で試験された。
１ ｍｇの化合物粉末を正確に秤量し、それぞれ１つのガラス管に入れ、各ガラス管にＤＭＳＯを加え、
加入量が１ ｍｇあたり１ ｍＬであった。各ガラス管に１つの撹拌棒を入れてから、蓋をして、標準品入りのガラス管が入った盤をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ快適型恒温ミキサーに置き、２５℃、１，１００回転で２時間インキュベートして粉末を十分に溶解させ、固体が完全に溶解されたか否かを観察し、化合物がＤＭＳＯ溶液に完全に溶解されないものを記録した。１ ｍｇ／ｍＬの標準品１０μＬを吸い取って内部標準を含むアセトニトリルと水（１：１）の混合液９９０ μＬに加え、１０ μｇ／ｍＬの標準品を得た。１０ μｇ／ｍＬの標準品１０ μＬを吸い取って内部標準を含むアセトニトリルと水（１：１）の混合液９９０ μＬに加え、０．１ μｇ／ｍＬの標準品を得た。試料の希釈倍数は、ＬＣ／ＭＳシグナルの応答によって変わる可能性がある。試料は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析された。全ての化合物も単独で試験された。
【0164】
５、データの計算
全ての計算もＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにより行われた。
試料は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析され、濃度が既知である標準品によって定量された。以下の式で試験化合物の溶解度を算出した：［試料］＝面積比試料×ＤＦ試料×［ＳＴＤ］／面積比ＳＴＤ
ＤＦ：希釈倍数。
ＳＴＤ：試験化合物の標準品。
全ての計算もＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにより行われた。
試料は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析され、濃度が既知である標準品によって定量された。以下の式で試験化合物の溶解度を算出した：［試料］＝面積比試料×ＤＦ試料×［ＳＴＤ］／面積比ＳＴＤ
ＤＦ：希釈倍数。
ＳＴＤ：試験化合物の標準品。
【0165】
【表7】
【0166】
試験例４、ＰＸＲ誘導実験
１、試験化合物が体外でＰＸＲを活性化することにより薬物代謝酵素活性を誘導する潜在力を評価した。試験化合物は、体外でＰＸＲを活性化することにより様々な濃度の試験化合物（３０、１０、３．３３、１．１１、０．３７０及び０．１２３ μＭ）を測定してＥＣ５０値を得た。陽性対照であるリファンピンの濃度は２０、５、１．２５、０．３１２、０．０７８１及び０．１９５ μＭであった。
１、試験化合物が体外でＰＸＲを活性化することにより薬物代謝酵素活性を誘導する潜在力を評価した。試験化合物は、体外でＰＸＲを活性化することにより様々な濃度の試験化合物（３０、１０、３．３３、１．１１、０．３７０及び０．１２３ μＭ）を測定してＥＣ５０値を得た。陽性対照であるリファンピンの濃度は２０、５、１．２５、０．３１２、０．０７８１及び０．１９５ μＭであった。
【0167】
２、材料と試薬
１）ＤＰＸ２（ヒトＰＸＲ遺伝子及び蛍光レポーター遺伝子がＨｅｐＧ２細胞に安定的にトランスフェクションされた）細胞は、Ｐｕｒａｃｙｐ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）から購入された。
２）試験化合物は依頼元より提供され、対照薬（リファンピン）はＳｉｇｍａ（Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入された。
３）ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＦｌｕｏｒＴＭ細胞活性検出試薬キット及びＯｎｅ－Ｇｌｏ蛍光検出試薬キットはＰｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）はＣｏｒｎｉｎｇ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から、ＭＴＳ３シェーカーはＩＫＡ Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ（Ｓｔａｕｆｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から、ＤＭＥＭ、ペニシリン及びストレプトマイシンは地元の供給業者から、ハイグロマイシンＢ及びＧ４１８はＭｅｒｃｋ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から、細胞培地及びＤＰＸ２細胞はＰｕｒａｃｙｐ Ｉｎｃから購入された。
１）ＤＰＸ２（ヒトＰＸＲ遺伝子及び蛍光レポーター遺伝子がＨｅｐＧ２細胞に安定的にトランスフェクションされた）細胞は、Ｐｕｒａｃｙｐ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）から購入された。
２）試験化合物は依頼元より提供され、対照薬（リファンピン）はＳｉｇｍａ（Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入された。
３）ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＦｌｕｏｒＴＭ細胞活性検出試薬キット及びＯｎｅ－Ｇｌｏ蛍光検出試薬キットはＰｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）はＣｏｒｎｉｎｇ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から、ＭＴＳ３シェーカーはＩＫＡ Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ（Ｓｔａｕｆｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から、ＤＭＥＭ、ペニシリン及びストレプトマイシンは地元の供給業者から、ハイグロマイシンＢ及びＧ４１８はＭｅｒｃｋ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から、細胞培地及びＤＰＸ２細胞はＰｕｒａｃｙｐ Ｉｎｃから購入された。
【0168】
３、実験手順
３．１ シードプレートの準備
１）５０ ｍＬのＦＢＳを４５０ ｍＬの細胞培地に加えた。
２）ＤＰＸ２細胞をＴ－７５培養フラスコにより３７℃、５％のＣＯ２、９５％の相対湿度のインキュベーターにて培養し、細胞が培養フラスコの底の８０～９０％に増殖した時に細胞を消化した。
３）８ ｍＬのＰＢＳでＴ－７５培養フラスコの細胞表層を洗浄し、ＰＢＳを吸い捨て、３ ｍＬのパンクレアチンを加え、３７℃で５分間程度消化し、或いは、消化されるまで細胞をパンクレアチンに懸濁させ、過剰の血清含有培地１０ ｍＬを加えてパンクレアチンを中和した。
４）細胞懸濁液を円錐形底の遠心分離管に移し、１２０ ｇで１０分間遠心分離した。シードプレート培地で細胞を懸濁させて濃度を４×１０５細胞／ｍＬに調整した。９６ウェル細胞培養プレートにおいて各ウェルに希釈した細胞１００ μＬを加えた。培養プレートをインキュベーターに入れ、３７℃で２４時間インキュベートした後、ＰＸＲ活性化実験に備えた。
３．１ シードプレートの準備
１）５０ ｍＬのＦＢＳを４５０ ｍＬの細胞培地に加えた。
２）ＤＰＸ２細胞をＴ－７５培養フラスコにより３７℃、５％のＣＯ２、９５％の相対湿度のインキュベーターにて培養し、細胞が培養フラスコの底の８０～９０％に増殖した時に細胞を消化した。
３）８ ｍＬのＰＢＳでＴ－７５培養フラスコの細胞表層を洗浄し、ＰＢＳを吸い捨て、３ ｍＬのパンクレアチンを加え、３７℃で５分間程度消化し、或いは、消化されるまで細胞をパンクレアチンに懸濁させ、過剰の血清含有培地１０ ｍＬを加えてパンクレアチンを中和した。
４）細胞懸濁液を円錐形底の遠心分離管に移し、１２０ ｇで１０分間遠心分離した。シードプレート培地で細胞を懸濁させて濃度を４×１０５細胞／ｍＬに調整した。９６ウェル細胞培養プレートにおいて各ウェルに希釈した細胞１００ μＬを加えた。培養プレートをインキュベーターに入れ、３７℃で２４時間インキュベートした後、ＰＸＲ活性化実験に備えた。
【0169】
３．２ 投薬処理
１）ＤＭＳＯで試験化合物及び陽性化合物（リファンピン）を準備し、３７℃の血清無しの培地で化合物を希釈した。陽性対照であるリファンピンの最終濃度は２０、５、１．２５、０．３１２、０．０７８１及び０．１９５ μＭであり、試験化合物の最終濃度は３０、１０、３．３３、１．１１、０．３７０及び０．１２３ μＭであった。ＤＭＳＯの最終濃度は０．１％であった。１ ｍＬのプレインキュベートした培地に１ μＬのＤＭＳＯを加えて溶媒対照群とした。
２）インキュベーターから細胞培養プレートを取り出し、培地を捨て、適切なウェルに１００ μＬの試験化合物と陽性化合物を加え、各群に２つずつの平行ウェルがあり、細胞プレートをインキュベーターに入れて２４時間インキュベートした。
１）ＤＭＳＯで試験化合物及び陽性化合物（リファンピン）を準備し、３７℃の血清無しの培地で化合物を希釈した。陽性対照であるリファンピンの最終濃度は２０、５、１．２５、０．３１２、０．０７８１及び０．１９５ μＭであり、試験化合物の最終濃度は３０、１０、３．３３、１．１１、０．３７０及び０．１２３ μＭであった。ＤＭＳＯの最終濃度は０．１％であった。１ ｍＬのプレインキュベートした培地に１ μＬのＤＭＳＯを加えて溶媒対照群とした。
２）インキュベーターから細胞培養プレートを取り出し、培地を捨て、適切なウェルに１００ μＬの試験化合物と陽性化合物を加え、各群に２つずつの平行ウェルがあり、細胞プレートをインキュベーターに入れて２４時間インキュベートした。
【0170】
３．３ ＰＸＲ活性化の定量測定
１）薬剤で処理してから２日間後に、培養物はＰＸＲ活性化の定量検出を行うことができる。
２）ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＦｌｕｏｒＴＭ細胞活性検出試薬キット及びＯｎｅ－Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬を室温に平衡した。ＧＦ－ＡＦＣ（１０ μＬ）基質を検出緩衝液（１０ ｍＬ）に入れて２×試薬を形成し、そして１０ ｍＬのＰＢＳにより１×に希釈し、ＯＮＥ－Ｇｌｏ基質をＯＮＥ－Ｇｌｏルシフェラーゼ検出緩衝液に加えた。
３）インキュベーターから細胞培養プレートを取り出し、各ウェル中の培地を捨て、ＰＢＳで２回洗い、１×のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＦｌｕｏｒＴＭ試薬を滅菌した注入溝に入れ、マルチチャンネルピペットにより５０ μＬを吸い取って各ウェルに入れ、３７℃で３０分間インキュベートした。
４）インキュベーターから９６ウェル細胞プレートを移し出し、マイクロプレートリーダーにより励起波長４００ ｎｍ、発光波長５０５ ｎｍの蛍光モードで各ウェルの蛍光値を測定した。
５）ＯＮＥ－Ｇｌｏ試薬を注入溝に入れた後、マルチチャンネルピペットで５０ μＬを取って各ウェルに入れ、試薬を軽く均一に混合し、室温に置いて５分間インキュベートして均一に混合した。インキュベーション完了後、光度計により各ウェルの発光値を読み取った。
１）薬剤で処理してから２日間後に、培養物はＰＸＲ活性化の定量検出を行うことができる。
２）ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＦｌｕｏｒＴＭ細胞活性検出試薬キット及びＯｎｅ－Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬を室温に平衡した。ＧＦ－ＡＦＣ（１０ μＬ）基質を検出緩衝液（１０ ｍＬ）に入れて２×試薬を形成し、そして１０ ｍＬのＰＢＳにより１×に希釈し、ＯＮＥ－Ｇｌｏ基質をＯＮＥ－Ｇｌｏルシフェラーゼ検出緩衝液に加えた。
３）インキュベーターから細胞培養プレートを取り出し、各ウェル中の培地を捨て、ＰＢＳで２回洗い、１×のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＦｌｕｏｒＴＭ試薬を滅菌した注入溝に入れ、マルチチャンネルピペットにより５０ μＬを吸い取って各ウェルに入れ、３７℃で３０分間インキュベートした。
４）インキュベーターから９６ウェル細胞プレートを移し出し、マイクロプレートリーダーにより励起波長４００ ｎｍ、発光波長５０５ ｎｍの蛍光モードで各ウェルの蛍光値を測定した。
５）ＯＮＥ－Ｇｌｏ試薬を注入溝に入れた後、マルチチャンネルピペットで５０ μＬを取って各ウェルに入れ、試薬を軽く均一に混合し、室温に置いて５分間インキュベートして均一に混合した。インキュベーション完了後、光度計により各ウェルの発光値を読み取った。
【0171】
４、細胞誘導値の計算
４．１ 細胞活性
細胞生存率の計算式：
細胞活性百分率（％）＝Ｉ（試料）／（Ｉ（ベクター）×１００
Ｉ（試料）は試料の蛍光強度であり、Ｉ（ベクター）は０．１％のＤＭＳＯの細胞に対する蛍光強度を指す。
４．１ 細胞活性
細胞生存率の計算式：
細胞活性百分率（％）＝Ｉ（試料）／（Ｉ（ベクター）×１００
Ｉ（試料）は試料の蛍光強度であり、Ｉ（ベクター）は０．１％のＤＭＳＯの細胞に対する蛍光強度を指す。
【0172】
４．２ 細胞誘導値の計算
全てのデータも、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにより算出された。
ルシフェラーゼの活性はＲＦＵ／ＲＬＵで表され、ＲＬＵはそれぞれの化合物の各濃度の２つの平行ウェルでの平均発光強度値であり、ＲＦＵはそれぞれの化合物の各濃度の２つの平行ウェルでの平均蛍光強度である。
全てのデータも、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにより算出された。
ルシフェラーゼの活性はＲＦＵ／ＲＬＵで表され、ＲＬＵはそれぞれの化合物の各濃度の２つの平行ウェルでの平均発光強度値であり、ＲＦＵはそれぞれの化合物の各濃度の２つの平行ウェルでの平均蛍光強度である。
【0173】
誘導倍数の計算式：
【数1】
【0174】
【表8A】
【表8B】
【国際調査報告】