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▶ トランスレイト バイオ， インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-01
(54)【発明の名称】ｍＲＮＡがコードする抗体を送達する方法および組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 48/00 20060101AFI20240125BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240125BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20240125BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20240125BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240125BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20240125BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240125BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20240125BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20240125BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240125BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240125BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240125BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240125BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240125BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20240125BHJP
A61K 9/51 20060101ALI20240125BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20240125BHJP
A61K 47/14 20170101ALI20240125BHJP
A61K 47/28 20060101ALI20240125BHJP
A61K 31/7125 20060101ALI20240125BHJP
C07K 16/24 20060101ALI20240125BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20240125BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240125BHJP
A61K 38/20 20060101ALN20240125BHJP
A61K 39/395 20060101ALN20240125BHJP
【ＦＩ】
A61K48/00 ZNA
A61P37/02
A61P11/06
A61P11/02
A61P11/00
A61P21/00
A61P43/00 105
A61P37/08
A61P17/04
A61P1/04
A61P17/00
A61P19/02
A61P29/00 101
A61P31/14
A61K31/7105
A61K9/51
A61K47/24
A61K47/14
A61K47/28
A61K31/7125
C07K16/24
C07K16/28
C12N15/13
A61K38/20
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K39/395 U
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023542664
(86)(22)【出願日】2022-01-14
(85)【翻訳文提出日】2023-08-31
(86)【国際出願番号】 US2022012416
(87)【国際公開番号】W WO2022155404
(87)【国際公開日】2022-07-21
(31)【優先権主張番号】63/137,528
(32)【優先日】2021-01-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517316797
【氏名又は名称】トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100140132
【弁理士】
【氏名又は名称】竹林 則幸
(74)【代理人】
【識別番号】100216105
【弁理士】
【氏名又は名称】守安 智
(72)【発明者】
【氏名】リアン・ボーグリン
(72)【発明者】
【氏名】クリストファー・ゲナール
(72)【発明者】
【氏名】カン・アン・トラン
(72)【発明者】
【氏名】アニュシャ・ディアス
(72)【発明者】
【氏名】フランク・デローザ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA24
4C076AA65
4C076BB13
4C076BB21
4C076CC03
4C076CC07
4C076CC09
4C076CC10
4C076CC15
4C076CC16
4C076CC18
4C076CC26
4C076DD44
4C076DD63
4C076DD70
4C076FF70
4C084AA13
4C084DA12
4C084DA16
4C084DA17
4C084DA18
4C084MA13
4C084MA56
4C084MA66
4C084NA13
4C084NA14
4C084ZA34
4C084ZA59
4C084ZA61
4C084ZA612
4C084ZA89
4C084ZA94
4C084ZA96
4C084ZB07
4C084ZB13
4C084ZB15
4C084ZB21
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB31
4C085CC22
4C085CC23
4C085EE01
4C085GG01
4C085GG10
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA16
4C086MA02
4C086MA03
4C086MA05
4C086MA13
4C086MA56
4C086MA66
4C086NA13
4C086NA14
4C086ZA34
4C086ZA59
4C086ZA61
4C086ZA89
4C086ZA94
4C086ZA96
4C086ZB07
4C086ZB13
4C086ZB15
4C086ZB21
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA09
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、とりわけ、対象における免疫疾患を処置する方法を提供し、それを必要とする対象に、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－２５ＲまたはＩＬ－３３Ｒから選択されるタンパク質標的に結合する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。本発明はまた、とりわけ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－２５ＲまたはＩＬ－３３Ｒから選択されるタンパク質標的に結合する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを含む組成物を提供し、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象における免疫疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３から選択されるタンパク質標的に結合する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている、方法。
【請求項2】
対象における免疫疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１）から選択されるタンパク質標的に結合する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている、方法。
【請求項3】
抗体が、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）から選択されるタンパク質標的を阻害し、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
抗体が抗ＩＬ６Ｒ抗体または抗ＩＬ４Ｒα抗体である、請求項１または２記載の方法。
【請求項5】
免疫疾患が、喘息、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性硬化症－間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、特発性肺線維症ＩＰＦ、サルコイドーシス、またはアレルギーから選択される、請求項１～４に記載の方法。
【請求項6】
免疫疾患が、アトピー性皮膚炎、好酸球性表現型を有する喘息、または経口コルチコステロイド依存性喘息、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎、小児アトピー性皮膚炎、小児喘息、好酸球性食道炎、ＣＯＰＤ、結節性そう痒症、慢性自然蕁麻疹および水疱性類天疱瘡、イネ科花粉アレルギー、およびピーナッツアレルギーから選択される、請求項１～４に記載の方法。
【請求項7】
免疫疾患が、関節リウマチ、多関節型若年性特発性関節炎、全身性若年性関節炎、または重度のＣｏｖｉｄ－１９疾患から選択される、請求項１～４に記載の方法。
【請求項8】
投与が、噴霧、気管内送達、または吸入によって行われる、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
投与が、肺組織へのｍＲＮＡの投与をもたらす、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
投与が、少なくとも約４８時間、７２時間、９６時間、または１２０時間の抗体発現をもたらす、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
ｍＲＮＡの少ない全身曝露が起こるかまたは全身曝露が全く起こらない、請求項９に記載の方法。
【請求項12】
免疫疾患が自己免疫性皮膚炎またはアトピー性皮膚炎から選択される、請求項１～４に記載の方法。
【請求項13】
投与が静脈内で行われる、請求項１～１２に記載の方法。
【請求項14】
投与が腹腔内で行われる、請求項１～１２に記載の方法。
【請求項15】
抗体が全身的に発現される、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項16】
ＬＮＰが、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、およびＰＥＧ修飾脂質うちの１つまたはそれ以上を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
ＬＮＰがコレステロールをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
ＬＮＰが、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とＰＥＧ修飾脂質のモル比を、それぞれ約３０～６０：２５～３５：１～１５で有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項19】
非カチオン性脂質が、１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン ４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、または１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）から選択される、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項20】
ＬＮＰが、ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項21】
ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥが約５：６０：３５の比で存在する、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
重鎖および軽鎖が単一のｍＲＮＡにコードされる、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項23】
重鎖および軽鎖が別々のｍＲＮＡにコードされる、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項24】
ＬＮＰが１５０ｎｍ以下のサイズを有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項25】
ＬＮＰが１００ｎｍ以下のサイズを有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項26】
ＬＮＰが７５ｎｍ以下のサイズを有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項27】
ＬＮＰが約６０ｎｍのサイズを有する、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項28】
１つかそれ以上のｍＲＮＡが安定性を高めるために修飾されている、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項29】
１つかそれ以上のｍＲＮＡが、修飾ヌクレオチド、キャップ構造、ポリＡテール、５’および／または３’非翻訳領域を含むように修飾されている、請求項２６に記載の方法。
【請求項30】
１つかそれ以上のｍＲＮＡが修飾されていない、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項31】
ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３から選択されるタンパク質標的に結合する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つかそれ以上のｍＲＮＡを含む組成物であって、１つかそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている、組成物。
【請求項32】
ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１）から選択されるタンパク質標的に結合する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つかそれ以上のｍＲＮＡを含む組成物であって、１つかそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている、組成物。
【請求項33】
抗体が、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１）から選択されるタンパク質標的を阻害し、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている、請求項３１または３２に記載の組成物。
【請求項34】
抗体が抗ＩＬ６Ｒ抗体または抗ＩＬ４Ｒα抗体である、請求項３１～３３に記載の組成物。
【請求項35】
ＬＮＰが、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、およびＰＥＧ修飾脂質のうち１つかそれ以上を含む、請求項３１～３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項36】
ＬＮＰがコレステロールをさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項37】
ＬＮＰが、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とＰＥＧ修飾脂質のモル比を、それぞれ約３０～６０：２５～３５：１～１５で有する、請求項３６に記載の組成物。
【請求項38】
非カチオン性脂質が、１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン ４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、または１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）から選択される、請求項３５～３７に記載の組成物。
【請求項39】
ＬＮＰがＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥを含む、請求項３１～３８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項40】
ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥが約５：６０：３５の比で存在する、請求項３９に記載の組成物。
【請求項41】
ｍＲＮＡが、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＲＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＳＧＲＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＳＬＦＬＱＭＮＧＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＧＲＤＳＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＴＹＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８）と少なくとも８０％同一の配列を含む抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードする、請求項３４に記載の組成物。
【請求項42】
ｍＲＮＡが、ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳ（配列番号２６）と少なくとも８０％同一の分泌配列をさらに含む、抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードする、請求項４１に記載の組成物。
【請求項43】
ｍＲＮＡが、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＳＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１９）と少なくとも８０％同一の配列を含む抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードする、請求項４１に記載の組成物。
【請求項44】
ｍＲＮＡが、ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳ（配列番号２６）と少なくとも８０％同一の分泌配列をさらに含む、抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードする、請求項４１に記載の組成物。
【請求項45】
抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードするｍＲＮＡがコドン最適化され、以下の配列：（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＡＣＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＧＣＡＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＣＴＣＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＣＡＧＡＴＣＣＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＣＴＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＡＣＧＡＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＣＧＧＣＡＴＴＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧＧＣＧＧＡＴＣＧＧＧＴＡＣＧＣＧＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＡＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＣＣＧＧＧＡＣＡＡＴＧＣＴＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＡＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＡＡＡＡＧＧＣＣＧＣＧＡＣＴＣＣＴＴＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＡＣＣＴＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＴＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＴＣＣＧＧＧＧＧＣＡＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＡＧＣＴＣＴＧＡＣＣＴＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＴＴＴＴＣＣＣＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＴＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＴＣＡＴＣＣＣＴＣＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＣＡＡＣＣＡＣＡＡＡＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＧＧＡＡＣＣＴＡＡＧＴＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＧＡＣＴＣＡＴＡＣＴＴＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＧＧＧＧＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＴＣＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＡＧＣＣＴＡＡＡＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＴＣＡＴＧＡＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＡＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＴＧＡＧＧＴＴＣＡＣＡＡＣＧＣＡＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＴＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＣＧＣＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＧＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＴＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＧＣＴＡＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＣＣＴＧＣＣＡＣＣＴＴＣＴＣＧＧＧＡＣＧＡＡＣＴＧＡＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＴＡＡＣＧＧＧＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＡＣＴＣＣＡＣＣＡＧＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＡＡＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＴＴＴＴＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＴＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＣＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡ（配列番号２）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＣＧＧＧＴＣＴＣＧＧＡＣＡＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＡＴＴＣＧＧＧＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＴＧＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＡＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＣＡＧＣＣＧＧＴＴＴＡＣＣＴＴＴＧＡＴＧＡＴＴＡＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＣＧＧＡＡＴＴＴＣＣＴＧＧＡＡＴＡＧＴＧＧＣＡＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＴＣＴＧＴＣＡＡＡＧＧＣＣＧＧＴＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＣＣＧＣＧＡＣＡＡＣＧＣＴＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＡＡＧＧＧＧＣＧＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＡＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＧＣＣＣＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣＣＡＧＴＡＡＡＴＣＣＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＡＣＴＣＡＣＣＡＧＴＧＧＡＧＴＣＣＡＣＡＣＴＴＴＴＣＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＡＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＡＣＴＣＡＧＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＣＧＴＴＡＡＴＣＡＴＡＡＧＣＣＴＴＣＴＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＡＧＴＧＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＡＣＡＣＡＣＴＴＧＣＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＡＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＴＣＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＴＡＧＧＡＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＡＣＧＴＣＴＣＣＣＡＴＧＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＡＡＴＴＴＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＡＡＡＧＡＣＣＡＡＡＣＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡＣＴＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＴＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＡＧＧＣＴＡＡＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＣＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＡＧＡＴＧＡＧＣＴＣＡＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＡＡＧＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＴＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＧＡＧＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＣＴＣＴＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＡＡＣＧＴＣＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＡＴＡＣＴＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＡＧＴＡＧ（配列番号３）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＡＡＣＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＣＧＣＴＴＴＣＣＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＣＣＴＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＴＴＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＡＣＣＡＧＧＡＣＧＣＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＴＴＴＴＧＡＣＧＡＴＴＡＴＧＣＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＧＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧＡＣＧＣＡＴＴＧＧＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＴＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＴＡＡＣＧＣＧＧＡＡＡＡＣＴＣＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＡＧＣＴＴＣＧＡＴＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＣＡＧＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＡＣＴＧＡＣＴＴＣＣＧＧＧＧＴＧＣＡＴＡＣＡＴＴＣＣＣＣＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＧＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＧＴＡＡＣＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＴＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＴＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＡＣＡＣＡＣＡＴＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＴＧＧＣＧＧＡＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＡＡＧＧＡＴＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＣＧＧＡＣＡＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＴＴＧＣＧＴＣＧＴＣＧＴＧＧＡＣＧＴＣＡＧＣＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＴＡＡＴＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＣＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＡＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡＣＴＴＡＴＣＧＣＧＴＧＧＴＴＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＧＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＡＴＧＣＡＡＡＧＴＧＴＣＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＡＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＴＡＴＴＴＣＡＡＡＧＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＣＣＴＣＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＣＴＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＴＴＴＴＡＴＣＣＴＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＴＡＡＡＡＣＡＡＣＡＣＣＡＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＡＣＧＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＡＧＣＴＧＴＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＴＡＡ（配列番号４）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＧＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＴＣＣＧＣＴＴＴＣＣＣＴＡＣＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＧＧＧＧＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＡＡＧＴＣＴＧＣＧＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＴＴＴＧＡＣＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＧＣＴＴＡＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＧＣＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＴＧＧＧＣＴＧＣＧＧＧＣＡＧＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＴＡＡＧＧＧＧＡＧＡＧＡＣＴＣＴＴＴＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＣＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＡＡＴＣＣＡＣＡＴＣＣＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＣＡＧＣＴＣＴＣＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＧＧＡＡＴＴＣＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＴＴＴＴＣＣＴＧＣＣＧＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＣＴＡＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＣＣＣＴＴＣＴＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＧＡＣＴＴＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＴＣＴＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＡＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＡＡＣＣＣＡＴＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＡＣＣＴＡＡＧＣＣＴＡＡＡＧＡＣＡＣＴＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＣＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＣＴＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＣＧＣＴＡＡＡＡＣＴＡＡＡＣＣＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＴＡＡＴＴＣＣＡＣＴＴＡＴＡＧＡＧＴＴＧＴＧＡＧＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＡＴＡＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＣＴＣＣＣＣＧＣＡＣＣＡＡＴＴＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＡＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＧＴＴＴＴＡＣＣＣＴＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＴＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＣＣＧＡＡＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＴＡＡＡＣＴＧＡＣＣＧＴＣＧＡＣＡＡＧＴＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＴＡＴＧＣＡＴＧＡＡＧＣＣＣＴＣＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＡＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＴＣＡＧＣＣＣＴＧＧＧＡＡＧＴＧＡ（配列番号５）のうちの１つと少なくとも８０％同一の配列を含む、請求項４２に記載の組成物。
【請求項46】
抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡがコドン最適化され、以下の配列：（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＡＣＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＧＣＡＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＣＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＣＡＴＣＡＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＣＴＡＴＣＡＣＡＴＧＴＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＧＡＡＴＴＡＧＣＴＣＴＴＧＧＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＡＧＣＴＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＴＧＣＣＡＴＣＴＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＴＧＣＣＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＡＡＡＴＡＧＣＴＴＴＣＣＣＴＡＴＡＣＴＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＧＣＧＧＡＣＣＧＴＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＣＴＡＴＣＣＣＣＧＴＧＡＡＧＣＣＡＡＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＴＣＴＣＣＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＴＴＣＴＡＡＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＡＣＡＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＣＣＣＣＡＧＴＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＴＡＡＴＡＧＡＧＧＧＧＡＧＴＧＣＴＧＡ（配列番号６）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＧＡＧＣＣＧＣＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＴＣＣＧＣＣＴＴＴＣＣＴＡＣＣＡＴＣＣＣＣＣＴＧＴＣＣＧＡＴＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＣＴＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＴＴＴＣＴＡＧＣＴＧＧＣＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＣＣＣＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＴＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＧＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＣＡＡＡＣＴＣＴＴＴＴＣＣＴＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＴＴＡＴＣＣＡＡＧＧＧＡＡＧＣＴＡＡＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＴＡＧＣＣＡＧＧＡＡＴＣＣＧＴＧＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＴＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＡＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＴＧＣＣＴＧＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＡＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＣＣＴＴＴＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＧＡ（配列番号７）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＴＴＴＴＣＣＴＡＣＴＡＴＣＣＣＣＣＴＧＴＣＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＴＣＴＧＴＧＴＣＣＧＣＡＡＧＣＧＴＧＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＣＡＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＧＧＡＡＴＣＴＣＣＴＣＴＴＧＧＣＴＧＧＣＡＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＴＧＧＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＡＡＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＡＴＣＣＣＧＧＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＣＴＣＣＴＡＴＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＣＡＡＣＡＧＣＴＴＴＣＣＴＴＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＴＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＣＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＣＴＡＡＧＧＴＣＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＴＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＡＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＴＣＡＴＣＡＧＧＧＡＣＴＧＡＧＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＴＡＧＧＧＧＡＧＡＡＴＧＴＴＡＧ（配列番号８）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＴＧＧＣＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＴＣＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＴＴＡＣＣＴＧＴＣＧＣＧＣＡＡＧＣＣＡＧＧＧＧＡＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＴＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＧＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＴＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＴＡＧＣＴＴＴＣＣＴＴＡＣＡＣＡＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＴＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＣＴＣＴＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＧＧＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＴＡＡＧＧＴＣＣＡＡＴＧＧＡＡＧＧＴＣＧＡＣＡＡＴＧＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＣＴＧＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＡＧＴＧＡＣＴＡＡＡＴＣＣＴＴＴＡＡＴＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＧＣＴＧＡ（配列番号９）のうちの１つと少なくとも８０％同一の配列を含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項47】
ｍＲＮＡが、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＥＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＧＳＧＦＴＦＲＤＹＡＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＬＳＩＴＩＲＰＲＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号２０）と少なくとも８０％同一の配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードする、請求項３４に記載の組成物。
【請求項48】
ｍＲＮＡが、ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳ（配列番号２６）と少なくとも８０％同一の分泌配列をさらに含む、抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードする、請求項４７に記載の組成物。
【請求項49】
ｍＲＮＡが、ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＹＳＩＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＳＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＦＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２１）と少なくとも８０％同一の配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする、請求項３４に記載の組成物。
【請求項50】
ｍＲＮＡが、ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳ（配列番号２６）と少なくとも８０％同一の分泌配列をさらに含む、抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする、請求項４９に記載の組成物。
【請求項51】
抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードするｍＲＮＡがコドン最適化され、以下の配列：（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＡＧＧＡＣＡＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＴＧＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＣＴＴＴＴＣＧＣＧＡＴＴＡＴＧＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＣＣＣＣＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＣＡＧＣＡＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＧＡＡＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＴＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＴＡＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＴＣＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＴＴＣＴＣＴＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧＣＡＡＡＧＧＡＴＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＡＴＣＣＧＣＣＣＡＣＧＣＴＡＣＴＡＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＣＣＧＴＴＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＣＣＧＣＣＡＧＣＡＣＡＡＡＧＧＧＡＣＣＴＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＡＴＣＣＡＣＣＴＣＴＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＴＴＣＡＧＧＣＧＣＡＣＴＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＴＴＣＴＣＴＣＴＣＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＴＡＡＡＡＣＡＴＡＴＡＣＣＴＧＴＡＡＣＧＴＧＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＧＧＧＴＣＧＡＧＡＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＡＣＣＣＣＣＡＴＧＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＣＣＣＴＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＣＧＡＣＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＴＡＡＧＣＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＴＡＡＴＴＣＣＡＣＴＴＡＣＡＧＧＧＴＧＧＴＣＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＧＴＣＴＡＡＴＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＡＡＴＣＴＣＴＡＡＧＧＣＴＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＡＡＡＴＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＧＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＡＡＣＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＧＣＧＡＣＧＧＧＡＧＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＡＣＴＧＴＧＧＡＴＡＡＡＴＣＴＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＡ（配列番号１０）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＡＧＧＣＴＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＧＣＴＣＴＴＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＡＴＧＣＧＣＣＧＧＧＴＣＣＧＧＡＴＴＴＡＣＣＴＴＴＣＧＣＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＡＧＣＧＧＧＴＣＣＧＧＣＧＧＣＡＡＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＧＣＡＧＡＴＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＧＣＧＣＴＴＣＡＣＴＡＴＴＡＧＣＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＣＴＡＡＡＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＡＡＧＡＧＣＣＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＴＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＡＧＡＣＡＧＡＣＴＣＴＣＣＡＴＴＡＣＡＡＴＣＣＧＣＣＣＡＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＧＣＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＣＡＣＴＡＡＧＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＡＴＧＣＴＣＣＣＧＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＧＡＧＴＣＴＡＣＣＧＣＣＧＣＡＣＴＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＴＡＧＣＧＧＧＧＣＣＣＴＧＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＣＣＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＣＣＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＡＴＧＴＡＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＴＣＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＴＣＣＡＡＧＴＡＴＧＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＡＧＧＧＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＴＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＴＣＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＴＡＡＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＡＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＴＣＡＧＴＧＣＴＧＡＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＣＣＡＴＣＴＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＴＡＡＧＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＴＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＴＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＣＧＡＣＡＴＴＧＣＴＧＴＣＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＡＡＴＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＴＣＣＡＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＡＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＧＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＴＴＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＴＡＡＴＣＡＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＡＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＧＡ（配列番号１１）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＧＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＣＣＴＧＴＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＴＣＴＧＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＴＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＡＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＴＴＧＣＧＣＡＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＴＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＧＴＣＡＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＣＡＧＣＡＴＴＴＣＣＧＧＡＴＣＣＧＧＧＧＧＣＡＡＣＡＣＡＴＡＴＴＡＣＧＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＡＴＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＡＧＡＴＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＴＣＣＧＣＣＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＴＧＧＧＣＴＣＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＣＡＡＡＧＧＣＣＣＣＴＣＣＧＴＴＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＡＧＣＣＧＣＴＣＴＡＣＴＴＣＴＧＡＧＡＧＴＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＴＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＣＣＣＣＧＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＣＴＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＴＡＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴＴＧＡＣＣＡＣＡＡＡＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＴＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＡＡＧＴＡＴＧＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＣＴＣＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＧＡＴＧＡＴＴＡＧＣＣＧＣＡＣＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＣＴＴＧＴＧＴＴＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＣＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＴＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＡＣＣＡＣＧＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＧＧＴＣＧＴＧＴＣＣＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＣＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＣＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＡＴＡＣＡＡＡＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＴＡＡＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＴＡＴＴＡＧＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＧＴＴＣＴＡＣＣＣＡＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＡＡＣＣＣＧＡＧＡＡＴＡＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＡＡＣＣＣＣＡＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＡＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＴＣＣＡＧＧＴＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＡＣＧＴＴＴＴＣＴＣＴＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＡＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＧＴＧＡ（配列番号１２）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＧＴＣＴＣＧＧＡＣＡＡＧＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＣＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＧＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＴＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＣＡＴＧＣＧＣＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＴＴＡＣＣＴＴＣＡＧＧＧＡＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＴＴＡＣＧＣＡＧＡＴＡＧＴＧＴＴＡＡＧＧＧＣＣＧＣＴＴＴＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＴＡＧＡＣＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴＧＣＴＣＣＡＧＧＴＣＴＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＴＧＣＡＣＴＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＴＡＡＡＧＡＴＴＡＣＴＴＴＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＡＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＡＧＣＴＣＴＧＡＣＣＴＣＣＧＧＡＧＴＴＣＡＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＴＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＴＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＴＣＡＣＡＡＡＣＣＴＡＧＣＡＡＴＡＣＡＡＡＧＧＴＣＧＡＴＡＡＡＣＧＧＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＡＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＣＣＣＴＧＡＡＴＴＣＣＴＧＧＧＣＧＧＡＣＣＣＴＣＣＧＴＴＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＣＴＡＧＧＡＣＴＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＣＧＴＧＧＡＴＧＴＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＡＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＴＡＡＣＴＣＴＡＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＣＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＣＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＣＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＴＴＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＡＣＣＴＣＡＧＧＴＣＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＡＧＣＣＴＣＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＣＧＡＣＡＴＴＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＴＣＴＡＡＣＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＴＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＧＣＧＡＣＧＧＧＴＣＴＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＣＴＴＴＴＣＴＴＧＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＴＡＡＣＣＡＣＴＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＡＣＴＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＧＧＧＴＧＡ（配列番号１３）のうちの１つと少なくとも８０％同一の配列を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項52】
抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡがコドン最適化され、以下の配列：（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＡＧＧＡＣＡＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＴＧＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＴＧＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＧＣＣＣＧＣＡＴＣＴＡＴＣＡＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＣＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＣＴＧＴＡＴＴＣＴＡＴＣＧＧＧＴＡＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＣＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＧＴＧＣＣＡＧＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＡＧＡＣＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＴＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＧＴＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＴＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＣＣＡＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＧＣＧＣＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＧＴＣＴＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＴＣＣＣＡＧＣＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＣＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＴＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＴＴＣＴＡＡＡＧＡＴＴＣＣＡＣＣＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＣＴＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＴＡＡＧＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＣＣＣＧＴＧＡＣＴＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＴＣＧＣＧＧＡＧＡＧＴＧＣＴＧＡ（配列番号１４）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＴＴＴＴＣＣＣＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＴＣＴＧＡＴＡＴＣＧＴＣＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＣＣＧＣＴＡＧＣＡＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＧＴＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＴＣＧＧＣＴＡＴＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＴＡＡＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＣＧＡＣＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＴＡＣＴＣＴＣＡＡＡＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＡＣＣＡＴＡＴＡＣＡＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＧＡＧＡＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＴＴＣＣＴＣＣＣＴＣＣＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＡＡＧＣＧＧＣＡＣＴＧＣＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＴＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＣＡＧＣＣＡＧＧＡＡＡＧＴＧＴＣＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＧＡＴＴＣＣＡＣＡＴＡＴＴＣＴＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡＧＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＴＡＡＧＴＣＴＴＴＴＡＡＴＡＧＧＧＧＧＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号１５）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＣＧＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＣＧＣＣＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＣＣＣＣＣＴＧＡＧＣＧＡＴＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＴＴＡＣＡＣＣＣＧＧＣＧＡＡＣＣＴＧＣＴＡＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＴＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＴＣＧＧＧＴＡＣＡＡＴＴＡＴＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＣＡＡＴＣＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＣＡＡＣＡＧＡＧＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＧＡＧＣＧＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡＧＡＴＧＴＧＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＣＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＴＴＡＣＡＣＡＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＣＧＴＧＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＣＴＴＣＡＴＴＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＴＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＡＧＣＴＴＣＣＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＡＡＡＧＧＴＧＣＡＡＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＡＡＣＡＧＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＴＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＴＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＴＧＣＧＡＧＧＴＣＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＣＴＣＴＴＣＴＣＣＣＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＴＧＣＴＧＡ（配列番号１６）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＧＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＣＴＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＴＣＡＣＣＣＣＡＧＧＣＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＣＴＡＴＴＴＣＴＴＧＴＣＧＧＴＣＣＴＣＴＣＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＡＴＴＡＴＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＡＡＴＣＣＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＧＣＴＣＣＡＡＣＣＧＧＧＣＴＡＧＣＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＣＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＧＴＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＣＣＧＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＡＡＣＣＣＣＡＴＡＴＡＣＴＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＡＡＧＧＧＡＡＧＣＡＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＣＧＡＣＡＡＣＧＣＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＴＧＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＣＴＡＡＡＧＣＴＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＴＧＴＧＡＡＧＴＧＡＣＴＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＣＣＴＧＴＴＡＣＡＡＡＧＴＣＣＴＴＣＡＡＴＡＧＡＧＧＡＧＡＡＴＧＴＴＡＡ（配列番号１７）のうちの１つと少なくとも８０％同一の配列を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項53】
ｍＲＮＡが５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲ配列を含む、請求項３１～５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項54】
５’ＵＴＲ配列が、ＧＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＣＴＧＧＡＧＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＣＴＣＣＡＴＡＧＡＡＧＡＣＡＣＣＧＧＧＡＣＣＧＡＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＡＡＣＧＧＴＧＣＡＴＴＧＧＡＡＣＧＣＧＧＡＴＴＣＣＣＣＧＴＧＣＣＡＡＧＡＧＴＧＡＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＴＧＡＣＡＣＧ（配列番号２７）と少なくとも８０％同一性を有する配列を含む、請求項５３に記載の組成物。
【請求項55】
３’ＵＴＲ配列が、ＣＧＧＧＴＧＧＣＡＴＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＧＴＧＣＣＴＣＴＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＡＡＧＴＴＧＣＣＡＣＴＣＣＡＧＴＧＣＣＣＡＣＣＡＧＣＣＴＴＧＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＴＡＡＧＴＴＧＣＡＴＣ（配列番号２８）と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む、請求項５３または５４のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願との相互参照
本出願は、２０２１年１月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／１３７，５２８号の優先権および利益を主張し、その内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。
本出願は、２０２１年１月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／１３７，５２８号の優先権および利益を主張し、その内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。
【0002】
配列表の参照による組み入れ
２０２２年１月１０日に作製され、サイズが６０６１４バイトである「ＭＲＴ－２２１０ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔ」という名称のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
２０２２年１月１０日に作製され、サイズが６０６１４バイトである「ＭＲＴ－２２１０ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔ」という名称のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【0003】
抗体は強力な治療効果を有し、現在、がん、免疫疾患、心血管疾患、および移植拒絶を含む一連の疾患の処置に使用されている。伝統的に、治療抗体は組換え技術によって生産され、製剤化され、次に抗体療法を必要とする患者に投与される。しかしながら、抗体の製造および製剤化は非常に高価である。さらに、多くの抗体はインビボでは非常に短い半減期しかもたないため、分解される前に標的抗原または標的組織に到達しない場合がある。所望の効果を達成するために、抗体療法はしばしば高用量および頻回の投与を必要とし、それは望ましくない標的外の効果をもたらすことがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0004】
本発明は、とりわけ、対象における疾患を処置する方法を提供する。一部の態様では、本発明は、対象における免疫疾患を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本方法は、２型炎症のドライバを標的とする抗体をコードするｍＲＮＡを含む組成物を対象に投与することを伴い、このような標的には、例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ）が含まれる。一部の実施形態では、本方法は、２型炎症のドライバに結合し、および／または阻害する抗体をコードするｍＲＮＡを含む組成物を対象に投与することを伴い、このような標的には、例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ）が含まれる。本発明者らは驚くべきことに、免疫疾患に関与する特異的サイトカインを標的とする脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入された抗体をコードするｍＲＮＡを送達するための頑強であり、効率的な手段を発見した。本明細書に開示される方法および組成物は、肺関連免疫疾患に関連するものなど、種々の疾患を処置するために使用することができる。このような肺関連免疫疾患の例には、喘息、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性硬化症－間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、特発性肺線維症ＩＰＦ、サルコイドーシス、またはアレルギーが含まれる。本発明者らはまた驚くべきことに、吸入または噴霧により本明細書中に記載された組成物を投与すると、全身曝露が少ないか全くなく、したがって、全身的な望ましくない副作用を回避できる可能性があることを発見した。
【0005】
一部の態様では、対象における免疫疾患を処置する方法であって、本方法は、それを必要とする対象に、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）から選択されるタンパク質標的に結合し、および／または阻害する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－４である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－５である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－６である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－９である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－１３である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－２５である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－３３である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）である。
【0006】
一部の態様では、本明細書では、対象における免疫疾患を処置する方法が提供され、本方法は、それを必要とする対象に、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）から選択されるタンパク質に結合し、および／または阻害する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－４に結合し、および／または阻害する。一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－５に結合し、および／または阻害する。一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－６に結合し、および／または阻害する。一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－９に結合し、および／または阻害する。一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－１３に結合し、および／または阻害する。一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－２５に結合し、および／または阻害する。一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－３３に結合し、および／または阻害する。一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）に結合し、および／または阻害する。一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）に結合し、および／または阻害する。
【0007】
一部の実施形態では、抗体は、抗ＩＬ６Ｒ抗体または抗ＩＬ４Ｒα抗体である。一部の実施形態では、抗体は、抗ＩＬ６Ｒ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、抗ＩＬ４Ｒα抗体である。
【0008】
一部の実施形態では、免疫疾患は、２型炎症関連サイトカインの増加と関連する。
【0009】
一部の実施形態では、免疫疾患は、喘息、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性硬化症－間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、特発性肺線維症ＩＰＦ、サルコイドーシス、またはアレルギーから選択される。一部の実施形態では、免疫疾患は喘息である。一部の実施形態では、免疫疾患は、鼻ポリープ（ＣＲＳｗＮＰ）を伴う慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態では、免疫疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。一部の実施形態では、免疫疾患は、全身性硬化症－間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）である。一部の実施形態では、免疫疾患は特発性肺線維症ＩＰＦである。一部の実施形態では、免疫疾患はサルコイドーシスである。一部の実施形態では、免疫疾患はアレルギーである。
【0010】
一部の実施形態では、投与は、噴霧、気管内送達、または吸入によって行われる。一部の実施形態では、投与は、噴霧によって行われる。一部の実施形態では、肺送達は、噴霧器、好ましくはメッシュ噴霧器を用いた化合物の噴霧器によるものである。一部の実施形態では、噴霧器は、エアロゾルの形態で化合物を肺細胞に送達する。一部の実施形態では、肺細胞は、肺上皮細胞である。一部の実施形態では、平均サイズが約５０～７０ｎｍである脂質ナノ粒子を有する組成物は、噴霧による肺送達に特に適している。
【0011】
一部の実施形態では、投与は、気管内送達によって行われる。一部の実施形態では、投与は、吸入によって行われる。
【0012】
一部の実施形態では、投与は、ｍＲＮＡの肺組織への投与をもたらす。
【0013】
一部の実施形態では、投与は、少なくとも約４８時間、７２時間、９６時間、または１２０時間の抗体発現をもたらす。したがって、一部の実施形態では、投与は、少なくとも約４８時間の抗体発現をもたらす。一部の実施形態では、投与は、少なくとも約７２時間の抗体発現をもたらす。一部の実施形態では、投与は、少なくとも約９６時間の抗体発現をもたらす。一部の実施形態では、投与は、少なくとも約１２０時間の抗体発現をもたらす。一部の実施形態では、投与は、約７２～１２０時間の抗体発現をもたらす。一部の実施形態では、投与は、９６～１２０時間の抗体発現をもたらす。
【0014】
一部の実施形態では、対象の肺への組成物の投与後に、ｍＲＮＡの少ない全身曝露が起こるかまたは全身曝露が全く起こらない。
【0015】
一部の実施形態では、免疫疾患は、自己免疫性皮膚炎またはアトピー性皮膚炎から選択される。したがって、一部の実施形態では、免疫疾患は自己免疫性皮膚炎である。一部の実施形態では、免疫疾患はアトピー性皮膚炎である。
【0016】
一部の実施形態では、投与は、静脈内に行われる。一部の実施形態では、投与は、腹腔内に行われる。一部の実施形態では、抗体は、例えば、静脈内または腹腔内に投与される場合に、全身に発現される。
【0017】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、およびＰＥＧ修飾脂質のうちの１つまたはそれ以上を含む。
【0018】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、コレステロールをさらに含む。
【0019】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とＰＥＧ修飾脂質のモル比を、それぞれ約３０～６０：２５～３５：１～１５で有する。
【0020】
一部の実施形態では、非カチオン性脂質は、１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン ４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、または１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）から選択される。
【0021】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰは、ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００を含む。一部の実施形態では、ＬＮＰは、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰは、ＤＯＰＥを含む。
【0022】
一部の実施形態では、ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥは、約１～１５：３０～６０：２５～３５の比で存在する。一部の実施形態では、ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥは、約５：６０：３５の比で存在する。
【0023】
一部の実施形態では、重鎖および軽鎖は、単一のｍＲＮＡにコードされる。
【0024】
一部の実施形態では、重鎖および軽鎖は、別々のｍＲＮＡにコードされる。
【0025】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、１５０ｎｍ以下のサイズを有する。
【0026】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、１００ｎｍ以下のサイズを有する。
【0027】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、７５ｎｍ以下のサイズを有する。
【0028】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、約６０ｎｍのサイズを有する。
【0029】
一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡは、安定性を高めるために修飾されている。
【0030】
一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡは、修飾ヌクレオチド、キャップ構造、ポリＡテール、５’および／または３’非翻訳領域を含むように修飾されている。
【0031】
一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡは修飾されていない。
【0032】
一部の態様では、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）から選択されるタンパク質標的に結合し、および／または阻害する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを含む組成物が提供され、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－４である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－５である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－６である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－９である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－１３である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－２５である。一部の実施形態では、タンパク質標的はＩＬ－３３である。一部の実施形態では、タンパク質標的は、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）である。一部の実施形態では、タンパク質標的は、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的は、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的は、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的は、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的は、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）である。一部の実施形態では、タンパク質標的は、ＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）である。
【0033】
一部の実施形態では、抗体は、抗ＩＬ６Ｒ抗体または抗ＩＬ４Ｒα抗体である。一部の実施形態では、抗体は、抗ＩＬ６Ｒ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、抗ＩＬ４Ｒα抗体である。
【0034】
一部の実施形態では、ＬＮＰが、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、およびＰＥＧ修飾脂質のうちの１つまたはそれ以上を含む。
【0035】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、コレステロールをさらに含む。
【0036】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とＰＥＧ修飾脂質のモル比を、それぞれ約３０～６０：２５～３５：１～１５で有する。
【0037】
一部の実施形態では、非カチオン性脂質は、１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン ４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、または１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）から選択される。
【0038】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥを含む。
【0039】
一部の実施形態では、ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥは、約１～１５：３０～６０：２５～３５の比で存在する。一部の実施形態では、ＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００、Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ、およびＤＯＰＥは、約５：６０：３５の比で存在する。
【0040】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＲＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＳＧＲＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＳＬＦＬＱＭＮＧＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＧＲＤＳＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＴＹＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８）と少なくとも８０％同一の配列を含む抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号１８と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号１８と同一の配列を含む抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードする。
【0041】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳ（配列番号２６）と少なくとも８０％同一の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２６と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上の同一の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２６の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードする。
【0042】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＳＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１９）と少なくとも８０％同一の配列を含む抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号１９と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号１９と同一の配列を含む抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードする。
【0043】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳ（配列番号２６）と少なくとも８０％同一の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２６と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２６の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードする。
【0044】
一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、以下の配列：
（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＡＣＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＧＣＡＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＣＴＣＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＣＡＧＡＴＣＣＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＣＴＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＡＣＧＡＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＣＧＧＣＡＴＴＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧＧＣＧＧＡＴＣＧＧＧＴＡＣＧＣＧＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＡＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＣＣＧＧＧＡＣＡＡＴＧＣＴＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＡＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＡＡＡＡＧＧＣＣＧＣＧＡＣＴＣＣＴＴＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＡＣＣＴＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＴＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＴＣＣＧＧＧＧＧＣＡＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＡＧＣＴＣＴＧＡＣＣＴＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＴＴＴＴＣＣＣＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＴＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＴＣＡＴＣＣＣＴＣＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＣＡＡＣＣＡＣＡＡＡＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＧＧＡＡＣＣＴＡＡＧＴＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＧＡＣＴＣＡＴＡＣＴＴＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＧＧＧＧＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＴＣＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＡＧＣＣＴＡＡＡＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＴＣＡＴＧＡＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＡＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＴＧＡＧＧＴＴＣＡＣＡＡＣＧＣＡＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＴＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＣＧＣＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＧＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＴＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＧＣＴＡＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＣＣＴＧＣＣＡＣＣＴＴＣＴＣＧＧＧＡＣＧＡＡＣＴＧＡＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＴＡＡＣＧＧＧＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＡＣＴＣＣＡＣＣＡＧＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＡＡＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＴＴＴＴＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＴＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＣＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡ（配列番号２）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＣＧＧＧＴＣＴＣＧＧＡＣＡＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＡＴＴＣＧＧＧＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＴＧＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＡＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＣＡＧＣＣＧＧＴＴＴＡＣＣＴＴＴＧＡＴＧＡＴＴＡＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＣＧＧＡＡＴＴＴＣＣＴＧＧＡＡＴＡＧＴＧＧＣＡＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＴＣＴＧＴＣＡＡＡＧＧＣＣＧＧＴＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＣＣＧＣＧＡＣＡＡＣＧＣＴＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＡＡＧＧＧＧＣＧＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＡＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＧＣＣＣＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣＣＡＧＴＡＡＡＴＣＣＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＡＣＴＣＡＣＣＡＧＴＧＧＡＧＴＣＣＡＣＡＣＴＴＴＴＣＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＡＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＡＣＴＣＡＧＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＣＧＴＴＡＡＴＣＡＴＡＡＧＣＣＴＴＣＴＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＡＧＴＧＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＡＣＡＣＡＣＴＴＧＣＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＡＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＴＣＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＴＡＧＧＡＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＡＣＧＴＣＴＣＣＣＡＴＧＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＡＡＴＴＴＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＡＡＡＧＡＣＣＡＡＡＣＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡＣＴＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＴＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＡＧＧＣＴＡＡＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＣＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＡＧＡＴＧＡＧＣＴＣＡＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＡＡＧＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＴＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＧＡＧＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＣＴＣＴＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＡＡＣＧＴＣＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＡＴＡＣＴＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＡＧＴＡＧ（配列番号３）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＡＡＣＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＣＧＣＴＴＴＣＣＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＣＣＴＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＴＴＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＡＣＣＡＧＧＡＣＧＣＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＴＴＴＴＧＡＣＧＡＴＴＡＴＧＣＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＧＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧＡＣＧＣＡＴＴＧＧＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＴＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＴＡＡＣＧＣＧＧＡＡＡＡＣＴＣＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＡＧＣＴＴＣＧＡＴＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＣＡＧＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＡＣＴＧＡＣＴＴＣＣＧＧＧＧＴＧＣＡＴＡＣＡＴＴＣＣＣＣＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＧＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＧＴＡＡＣＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＴＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＴＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＡＣＡＣＡＣＡＴＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＴＧＧＣＧＧＡＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＡＡＧＧＡＴＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＣＧＧＡＣＡＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＴＴＧＣＧＴＣＧＴＣＧＴＧＧＡＣＧＴＣＡＧＣＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＴＡＡＴＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＣＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＡＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡＣＴＴＡＴＣＧＣＧＴＧＧＴＴＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＧＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＡＴＧＣＡＡＡＧＴＧＴＣＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＡＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＴＡＴＴＴＣＡＡＡＧＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＣＣＴＣＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＣＴＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＴＴＴＴＡＴＣＣＴＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＴＡＡＡＡＣＡＡＣＡＣＣＡＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＡＣＧＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＡＧＣＴＧＴＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＴＡＡ（配列番号４）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＧＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＴＣＣＧＣＴＴＴＣＣＣＴＡＣＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＧＧＧＧＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＡＡＧＴＣＴＧＣＧＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＴＴＴＧＡＣＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＧＣＴＴＡＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＧＣＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＴＧＧＧＣＴＧＣＧＧＧＣＡＧＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＴＡＡＧＧＧＧＡＧＡＧＡＣＴＣＴＴＴＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＣＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＡＡＴＣＣＡＣＡＴＣＣＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＣＡＧＣＴＣＴＣＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＧＧＡＡＴＴＣＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＴＴＴＴＣＣＴＧＣＣＧＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＣＴＡＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＣＣＣＴＴＣＴＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＧＡＣＴＴＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＴＣＴＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＡＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＡＡＣＣＣＡＴＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＡＣＣＴＡＡＧＣＣＴＡＡＡＧＡＣＡＣＴＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＣＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＣＴＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＣＧＣＴＡＡＡＡＣＴＡＡＡＣＣＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＴＡＡＴＴＣＣＡＣＴＴＡＴＡＧＡＧＴＴＧＴＧＡＧＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＡＴＡＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＣＴＣＣＣＣＧＣＡＣＣＡＡＴＴＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＡＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＧＴＴＴＴＡＣＣＣＴＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＴＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＣＣＧＡＡＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＴＡＡＡＣＴＧＡＣＣＧＴＣＧＡＣＡＡＧＴＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＴＡＴＧＣＡＴＧＡＡＧＣＣＣＴＣＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＡＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＴＣＡＧＣＣＣＴＧＧＧＡＡＧＴＧＡ（配列番号５）のうちの１つと少なくとも８０％同一の配列を含む。
（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＡＣＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＧＣＡＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＣＴＣＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＣＡＧＡＴＣＣＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＣＴＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＡＣＧＡＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＣＧＧＣＡＴＴＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧＧＣＧＧＡＴＣＧＧＧＴＡＣＧＣＧＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＡＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＣＣＧＧＧＡＣＡＡＴＧＣＴＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＡＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＡＡＡＡＧＧＣＣＧＣＧＡＣＴＣＣＴＴＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＡＣＣＴＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＴＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＴＣＣＧＧＧＧＧＣＡＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＡＧＣＴＣＴＧＡＣＣＴＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＴＴＴＴＣＣＣＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＴＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＴＣＡＴＣＣＣＴＣＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＣＡＡＣＣＡＣＡＡＡＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＧＧＡＡＣＣＴＡＡＧＴＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＧＡＣＴＣＡＴＡＣＴＴＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＧＧＧＧＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＴＣＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＡＧＣＣＴＡＡＡＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＴＣＡＴＧＡＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＡＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＴＧＡＧＧＴＴＣＡＣＡＡＣＧＣＡＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＴＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＣＧＣＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＧＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＴＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＧＣＴＡＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＣＣＴＧＣＣＡＣＣＴＴＣＴＣＧＧＧＡＣＧＡＡＣＴＧＡＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＴＡＡＣＧＧＧＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＡＣＴＣＣＡＣＣＡＧＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＡＡＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＴＴＴＴＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＴＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＣＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡ（配列番号２）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＣＧＧＧＴＣＴＣＧＧＡＣＡＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＡＴＴＣＧＧＧＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＴＧＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＡＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＣＡＧＣＣＧＧＴＴＴＡＣＣＴＴＴＧＡＴＧＡＴＴＡＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＣＧＧＡＡＴＴＴＣＣＴＧＧＡＡＴＡＧＴＧＧＣＡＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＴＣＴＧＴＣＡＡＡＧＧＣＣＧＧＴＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＣＣＧＣＧＡＣＡＡＣＧＣＴＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＡＡＧＧＧＧＣＧＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＡＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＧＣＣＣＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣＣＡＧＴＡＡＡＴＣＣＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＡＣＴＣＡＣＣＡＧＴＧＧＡＧＴＣＣＡＣＡＣＴＴＴＴＣＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＡＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＡＣＴＣＡＧＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＣＧＴＴＡＡＴＣＡＴＡＡＧＣＣＴＴＣＴＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＡＧＴＧＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＡＣＡＣＡＣＴＴＧＣＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＡＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＴＣＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＴＡＧＧＡＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＡＣＧＴＣＴＣＣＣＡＴＧＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＡＡＴＴＴＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＡＡＡＧＡＣＣＡＡＡＣＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡＣＴＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＴＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＡＧＧＣＴＡＡＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＣＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＡＧＡＴＧＡＧＣＴＣＡＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＡＡＧＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＡＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＴＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＧＡＧＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＣＴＣＴＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＡＡＣＧＴＣＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＡＴＡＣＴＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＡＧＴＡＧ（配列番号３）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＡＡＣＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＣＧＣＴＴＴＣＣＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＣＣＴＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＴＴＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＡＣＣＡＧＧＡＣＧＣＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＴＴＴＴＧＡＣＧＡＴＴＡＴＧＣＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＧＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧＡＣＧＣＡＴＴＧＧＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＴＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＴＡＡＣＧＣＧＧＡＡＡＡＣＴＣＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＣＣＴＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＡＧＣＴＴＣＧＡＴＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＣＡＧＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＡＣＴＧＡＣＴＴＣＣＧＧＧＧＴＧＣＡＴＡＣＡＴＴＣＣＣＣＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＧＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＧＴＡＡＣＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＴＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＴＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＡＣＡＣＡＣＡＴＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＴＧＧＣＧＧＡＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＡＡＧＧＡＴＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＣＧＧＡＣＡＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＴＴＧＣＧＴＣＧＴＣＧＴＧＧＡＣＧＴＣＡＧＣＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＴＡＡＴＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＣＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＡＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡＣＴＴＡＴＣＧＣＧＴＧＧＴＴＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＧＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＡＴＧＣＡＡＡＧＴＧＴＣＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＡＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＴＡＴＴＴＣＡＡＡＧＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＣＣＴＣＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＣＴＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＴＴＴＴＡＴＣＣＴＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＴＡＡＡＡＣＡＡＣＡＣＣＡＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＡＣＧＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＡＧＣＴＧＴＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＴＡＡ（配列番号４）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＧＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＴＣＣＧＣＴＴＴＣＣＣＴＡＣＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＧＧＧＧＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＡＡＧＴＣＴＧＣＧＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＴＴＴＧＡＣＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＧＣＴＴＡＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＧＣＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＴＧＧＧＣＴＧＣＧＧＧＣＡＧＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＴＡＡＧＧＧＧＡＧＡＧＡＣＴＣＴＴＴＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＣＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＡＡＴＣＣＡＣＡＴＣＣＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＣＡＧＣＴＣＴＣＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＧＧＡＡＴＴＣＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＴＴＴＴＣＣＴＧＣＣＧＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＣＴＡＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＣＣＣＴＴＣＴＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＧＡＣＴＴＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＴＣＴＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＡＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＡＡＣＣＣＡＴＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＡＣＣＴＡＡＧＣＣＴＡＡＡＧＡＣＡＣＴＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＣＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＣＴＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＣＧＣＴＡＡＡＡＣＴＡＡＡＣＣＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＴＡＡＴＴＣＣＡＣＴＴＡＴＡＧＡＧＴＴＧＴＧＡＧＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＡＴＡＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＣＴＣＣＣＣＧＣＡＣＣＡＡＴＴＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＡＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＧＴＴＴＴＡＣＣＣＴＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＴＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＣＣＧＡＡＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＴＡＡＡＣＴＧＡＣＣＧＴＣＧＡＣＡＡＧＴＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＴＡＴＧＣＡＴＧＡＡＧＣＣＣＴＣＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＡＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＴＣＡＧＣＣＣＴＧＧＧＡＡＧＴＧＡ（配列番号５）のうちの１つと少なくとも８０％同一の配列を含む。
【0045】
一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、１つの配列番号２、３、４、または５と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、１つの配列番号２、３、４、または５と同一の配列を含む。したがって、一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号２と同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号３と同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号４と同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号５と同一の配列を含む。
【0046】
一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、以下の配列：
（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＡＣＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＧＣＡＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＣＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＣＡＴＣＡＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＣＴＡＴＣＡＣＡＴＧＴＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＧＡＡＴＴＡＧＣＴＣＴＴＧＧＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＡＧＣＴＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＴＧＣＣＡＴＣＴＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＴＧＣＣＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＡＡＡＴＡＧＣＴＴＴＣＣＣＴＡＴＡＣＴＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＧＣＧＧＡＣＣＧＴＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＣＴＡＴＣＣＣＣＧＴＧＡＡＧＣＣＡＡＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＴＣＴＣＣＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＴＴＣＴＡＡＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＡＣＡＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＣＣＣＣＡＧＴＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＴＡＡＴＡＧＡＧＧＧＧＡＧＴＧＣＴＧＡ（配列番号６）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＧＡＧＣＣＧＣＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＴＣＣＧＣＣＴＴＴＣＣＴＡＣＣＡＴＣＣＣＣＣＴＧＴＣＣＧＡＴＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＣＴＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＴＴＴＣＴＡＧＣＴＧＧＣＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＣＣＣＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＴＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＧＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＣＡＡＡＣＴＣＴＴＴＴＣＣＴＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＴＴＡＴＣＣＡＡＧＧＧＡＡＧＣＴＡＡＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＴＡＧＣＣＡＧＧＡＡＴＣＣＧＴＧＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＴＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＡＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＴＧＣＣＴＧＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＡＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＣＣＴＴＴＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＧＡ（配列番号７）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＴＴＴＴＣＣＴＡＣＴＡＴＣＣＣＣＣＴＧＴＣＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＴＣＴＧＴＧＴＣＣＧＣＡＡＧＣＧＴＧＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＣＡＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＧＧＡＡＴＣＴＣＣＴＣＴＴＧＧＣＴＧＧＣＡＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＴＧＧＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＡＡＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＡＴＣＣＣＧＧＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＣＴＣＣＴＡＴＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＣＡＡＣＡＧＣＴＴＴＣＣＴＴＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＴＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＣＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＣＴＡＡＧＧＴＣＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＴＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＡＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＴＣＡＴＣＡＧＧＧＡＣＴＧＡＧＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＴＡＧＧＧＧＡＧＡＡＴＧＴＴＡＧ（配列番号８）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＴＧＧＣＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＴＣＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＴＴＡＣＣＴＧＴＣＧＣＧＣＡＡＧＣＣＡＧＧＧＧＡＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＴＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＧＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＴＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＴＡＧＣＴＴＴＣＣＴＴＡＣＡＣＡＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＴＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＣＴＣＴＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＧＧＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＴＡＡＧＧＴＣＣＡＡＴＧＧＡＡＧＧＴＣＧＡＣＡＡＴＧＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＣＴＧＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＡＧＴＧＡＣＴＡＡＡＴＣＣＴＴＴＡＡＴＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＧＣＴＧＡ（配列番号９）のうちの１つと少なくとも８０％同一の配列を含む。
（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＡＣＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＧＣＡＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣＧＡＣＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＣＡＴＣＡＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＣＴＡＴＣＡＣＡＴＧＴＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＧＡＡＴＴＡＧＣＴＣＴＴＧＧＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＡＧＣＴＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＴＧＣＣＡＴＣＴＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＴＧＣＣＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＡＡＡＴＡＧＣＴＴＴＣＣＣＴＡＴＡＣＴＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＧＣＧＧＡＣＣＧＴＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＣＴＡＴＣＣＣＣＧＴＧＡＡＧＣＣＡＡＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＴＣＴＣＣＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＴＴＣＴＡＡＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＡＣＡＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＣＣＣＣＡＧＴＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＴＡＡＴＡＧＡＧＧＧＧＡＧＴＧＣＴＧＡ（配列番号６）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＧＡＧＣＣＧＣＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＴＣＣＧＣＣＴＴＴＣＣＴＡＣＣＡＴＣＣＣＣＣＴＧＴＣＣＧＡＴＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＣＴＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＴＴＴＣＴＡＧＣＴＧＧＣＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＣＣＣＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＴＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＧＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＣＡＡＡＣＴＣＴＴＴＴＣＣＴＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＴＴＡＴＣＣＡＡＧＧＧＡＡＧＣＴＡＡＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＴＡＧＣＣＡＧＧＡＡＴＣＣＧＴＧＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＴＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＡＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＴＧＣＣＴＧＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＡＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＣＣＴＴＴＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＧＡ（配列番号７）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＴＴＴＴＣＣＴＡＣＴＡＴＣＣＣＣＣＴＧＴＣＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＴＣＴＧＴＧＴＣＣＧＣＡＡＧＣＧＴＧＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＣＡＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＧＧＡＡＴＣＴＣＣＴＣＴＴＧＧＣＴＧＧＣＡＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＴＧＧＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＡＡＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＡＴＣＣＣＧＧＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＣＴＣＣＴＡＴＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＣＡＡＣＡＧＣＴＴＴＣＣＴＴＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＴＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＣＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＣＴＡＡＧＧＴＣＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＴＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＡＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＴＣＡＴＣＡＧＧＧＡＣＴＧＡＧＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＴＡＧＧＧＧＡＧＡＡＴＧＴＴＡＧ（配列番号８）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＴＧＧＣＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＴＣＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＴＴＡＣＣＴＧＴＣＧＣＧＣＡＡＧＣＣＡＧＧＧＧＡＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＴＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＧＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＴＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＴＴＣＡＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＴＡＧＣＴＴＴＣＣＴＴＡＣＡＣＡＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＴＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＣＴＣＴＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＧＧＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＴＡＡＧＧＴＣＣＡＡＴＧＧＡＡＧＧＴＣＧＡＣＡＡＴＧＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＣＴＧＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＡＧＴＧＡＣＴＡＡＡＴＣＣＴＴＴＡＡＴＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＧＣＴＧＡ（配列番号９）のうちの１つと少なくとも８０％同一の配列を含む。
【0047】
一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、以下の配列番号６、７、８、または９のうちの１つと７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、以下の配列番号６、７、８または９のうちの１つと同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号６と同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号７と同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号８と同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ６Ｒ抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号９と同一の配列を含む。
【0048】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＥＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＧＳＧＦＴＦＲＤＹＡＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＬＳＩＴＩＲＰＲＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号２０）と少なくとも８０％同一の配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードする。
【0049】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２０と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２０と同一の配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードする。
【0050】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳ（配列番号２６）と少なくとも８０％同一の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２６と７０％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２６と同一の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードする。
【0051】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、以下：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＹＳＩＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＳＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＦＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２１）と少なくとも８０％同一である配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２１と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２１と同一である配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする。
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＹＳＩＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＳＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＦＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２１）と少なくとも８０％同一である配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２１と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２１と同一である配列を含む抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする。
【0052】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳ（配列番号２６）と少なくとも８０％同一の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号２６と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の分泌配列をさらに含む抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードする。
【0053】
一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、以下の配列：
（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＡＧＧＡＣＡＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＴＧＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＣＴＴＴＴＣＧＣＧＡＴＴＡＴＧＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＣＣＣＣＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＣＡＧＣＡＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＧＡＡＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＴＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＴＡＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＴＣＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＴＴＣＴＣＴＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧＣＡＡＡＧＧＡＴＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＡＴＣＣＧＣＣＣＡＣＧＣＴＡＣＴＡＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＣＣＧＴＴＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＣＣＧＣＣＡＧＣＡＣＡＡＡＧＧＧＡＣＣＴＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＡＴＣＣＡＣＣＴＣＴＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＴＴＣＡＧＧＣＧＣＡＣＴＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＴＴＣＴＣＴＣＴＣＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＴＡＡＡＡＣＡＴＡＴＡＣＣＴＧＴＡＡＣＧＴＧＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＧＧＧＴＣＧＡＧＡＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＡＣＣＣＣＣＡＴＧＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＣＣＣＴＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＣＧＡＣＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＴＡＡＧＣＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＴＡＡＴＴＣＣＡＣＴＴＡＣＡＧＧＧＴＧＧＴＣＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＧＴＣＴＡＡＴＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＡＡＴＣＴＣＴＡＡＧＧＣＴＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＡＡＡＴＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＧＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＡＡＣＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＧＣＧＡＣＧＧＧＡＧＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＡＣＴＧＴＧＧＡＴＡＡＡＴＣＴＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＡ（配列番号１０）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＡＧＧＣＴＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＧＣＴＣＴＴＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＡＴＧＣＧＣＣＧＧＧＴＣＣＧＧＡＴＴＴＡＣＣＴＴＴＣＧＣＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＡＧＣＧＧＧＴＣＣＧＧＣＧＧＣＡＡＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＧＣＡＧＡＴＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＧＣＧＣＴＴＣＡＣＴＡＴＴＡＧＣＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＣＴＡＡＡＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＡＡＧＡＧＣＣＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＴＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＡＧＡＣＡＧＡＣＴＣＴＣＣＡＴＴＡＣＡＡＴＣＣＧＣＣＣＡＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＧＣＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＣＡＣＴＡＡＧＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＡＴＧＣＴＣＣＣＧＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＧＡＧＴＣＴＡＣＣＧＣＣＧＣＡＣＴＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＴＡＧＣＧＧＧＧＣＣＣＴＧＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＣＣＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＣＣＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＡＴＧＴＡＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＴＣＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＴＣＣＡＡＧＴＡＴＧＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＡＧＧＧＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＴＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＴＣＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＴＡＡＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＡＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＴＣＡＧＴＧＣＴＧＡＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＣＣＡＴＣＴＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＴＡＡＧＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＴＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＴＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＣＧＡＣＡＴＴＧＣＴＧＴＣＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＡＡＴＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＴＣＣＡＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＡＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＧＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＴＴＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＴＡＡＴＣＡＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＡＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＧＡ（配列番号１１）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＧＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＣＣＴＧＴＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＴＣＴＧＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＴＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＡＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＴＴＧＣＧＣＡＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＴＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＧＴＣＡＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＣＡＧＣＡＴＴＴＣＣＧＧＡＴＣＣＧＧＧＧＧＣＡＡＣＡＣＡＴＡＴＴＡＣＧＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＡＴＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＡＧＡＴＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＴＣＣＧＣＣＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＴＧＧＧＣＴＣＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＣＡＡＡＧＧＣＣＣＣＴＣＣＧＴＴＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＡＧＣＣＧＣＴＣＴＡＣＴＴＣＴＧＡＧＡＧＴＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＴＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＣＣＣＣＧＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＣＴＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＴＡＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴＴＧＡＣＣＡＣＡＡＡＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＴＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＡＡＧＴＡＴＧＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＣＴＣＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＧＡＴＧＡＴＴＡＧＣＣＧＣＡＣＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＣＴＴＧＴＧＴＴＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＣＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＴＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＡＣＣＡＣＧＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＧＧＴＣＧＴＧＴＣＣＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＣＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＣＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＡＴＡＣＡＡＡＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＴＡＡＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＴＡＴＴＡＧＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＧＴＴＣＴＡＣＣＣＡＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＡＡＣＣＣＧＡＧＡＡＴＡＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＡＡＣＣＣＣＡＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＡＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＴＣＣＡＧＧＴＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＡＣＧＴＴＴＴＣＴＣＴＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＡＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＧＴＧＡ（配列番号１２）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＧＴＣＴＣＧＧＡＣＡＡＧＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＣＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＧＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＴＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＣＡＴＧＣＧＣＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＴＴＡＣＣＴＴＣＡＧＧＧＡＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＴＴＡＣＧＣＡＧＡＴＡＧＴＧＴＴＡＡＧＧＧＣＣＧＣＴＴＴＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＴＡＧＡＣＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴＧＣＴＣＣＡＧＧＴＣＴＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＴＧＣＡＣＴＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＴＡＡＡＧＡＴＴＡＣＴＴＴＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＡＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＡＧＣＴＣＴＧＡＣＣＴＣＣＧＧＡＧＴＴＣＡＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＴＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＴＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＴＣＡＣＡＡＡＣＣＴＡＧＣＡＡＴＡＣＡＡＡＧＧＴＣＧＡＴＡＡＡＣＧＧＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＡＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＣＣＣＴＧＡＡＴＴＣＣＴＧＧＧＣＧＧＡＣＣＣＴＣＣＧＴＴＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＣＴＡＧＧＡＣＴＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＣＧＴＧＧＡＴＧＴＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＡＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＴＡＡＣＴＣＴＡＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＣＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＣＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＣＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＴＴＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＡＣＣＴＣＡＧＧＴＣＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＡＧＣＣＴＣＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＣＧＡＣＡＴＴＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＴＣＴＡＡＣＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＴＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＧＣＧＡＣＧＧＧＴＣＴＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＣＴＴＴＴＣＴＴＧＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＴＡＡＣＣＡＣＴＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＡＣＴＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＧＧＧＴＧＡ（配列番号１３）のうちの１つと少なくとも８０％同一である配列を含む。
（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＡＧＧＡＣＡＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＴＧＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＣＴＴＴＴＣＧＣＧＡＴＴＡＴＧＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＣＣＣＣＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＣＡＧＣＡＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＧＡＡＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＴＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＴＡＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＴＡＣＣＣＴＣＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＴＴＣＴＣＴＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧＣＡＡＡＧＧＡＴＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＡＴＣＣＧＣＣＣＡＣＧＣＴＡＣＴＡＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＣＣＧＴＴＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＣＣＧＣＣＡＧＣＡＣＡＡＡＧＧＧＡＣＣＴＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＡＴＣＣＡＣＣＴＣＴＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＴＴＣＡＧＧＣＧＣＡＣＴＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＴＴＣＴＣＴＣＴＣＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＴＡＡＡＡＣＡＴＡＴＡＣＣＴＧＴＡＡＣＧＴＧＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＧＧＧＴＣＧＡＧＡＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＡＣＣＣＣＣＡＴＧＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＣＣＣＴＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＣＧＡＣＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＴＡＡＧＣＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＴＡＡＴＴＣＣＡＣＴＴＡＣＡＧＧＧＴＧＧＴＣＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＧＴＣＴＡＡＴＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＡＡＴＣＴＣＴＡＡＧＧＣＴＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＡＡＡＴＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＧＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＡＡＣＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＧＣＧＡＣＧＧＧＡＧＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＡＣＴＧＴＧＧＡＴＡＡＡＴＣＴＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＡ（配列番号１０）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＡＧＧＣＴＣＡＧＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＧＣＴＣＴＴＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＡＴＧＣＧＣＣＧＧＧＴＣＣＧＧＡＴＴＴＡＣＣＴＴＴＣＧＣＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＡＧＣＧＧＧＴＣＣＧＧＣＧＧＣＡＡＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＧＣＡＧＡＴＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＧＣＧＣＴＴＣＡＣＴＡＴＴＡＧＣＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＣＴＡＡＡＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＡＡＧＡＧＣＣＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＴＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＡＧＡＣＡＧＡＣＴＣＴＣＣＡＴＴＡＣＡＡＴＣＣＧＣＣＣＡＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＧＣＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＣＡＣＴＡＡＧＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＡＴＧＣＴＣＣＣＧＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＧＡＧＴＣＴＡＣＣＧＣＣＧＣＡＣＴＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＴＡＧＣＧＧＧＧＣＣＣＴＧＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＣＣＣＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＣＣＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＡＴＧＴＡＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＴＣＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＴＣＣＡＡＧＴＡＴＧＧＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＡＧＧＧＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＴＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＴＣＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＴＡＡＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＡＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＴＣＡＧＴＧＣＴＧＡＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＧＣＡＡＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＣＣＡＴＣＴＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＴＡＡＧＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＴＣＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＴＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＣＧＡＣＡＴＴＧＣＴＧＴＣＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＡＡＴＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＴＣＣＡＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＡＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＧＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＴＴＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＴＡＡＴＣＡＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＡＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＧＡ（配列番号１１）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＧＡＣＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＣＣＴＧＴＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＴＣＴＧＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＴＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＡＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＴＴＧＣＧＣＡＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＴＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＧＴＣＡＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＣＡＧＣＡＴＴＴＣＣＧＧＡＴＣＣＧＧＧＧＧＣＡＡＣＡＣＡＴＡＴＴＡＣＧＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＡＴＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＡＧＡＴＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＴＣＣＧＣＣＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＴＧＧＧＣＴＣＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＣＡＡＡＧＧＣＣＣＣＴＣＣＧＴＴＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＡＧＣＣＧＣＴＣＴＡＣＴＴＣＴＧＡＧＡＧＴＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＴＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＣＣＣＣＧＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＣＴＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＴＡＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＣＴＧＴＡＡＴＧＴＴＧＡＣＣＡＣＡＡＡＣＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＴＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＡＡＧＴＡＴＧＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＣＴＣＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＧＡＴＧＡＴＴＡＧＣＣＧＣＡＣＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＣＴＴＧＴＧＴＴＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＣＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＴＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＡＣＣＡＣＧＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＧＧＴＣＧＴＧＴＣＣＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＣＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＣＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＡＴＡＣＡＡＡＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＴＡＡＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＴＡＴＴＡＧＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＧＴＴＣＴＡＣＣＣＡＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＡＡＣＣＣＧＡＧＡＡＴＡＡＣＴＡＣＡＡＡＡＣＡＡＣＣＣＣＡＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＡＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＴＣＣＡＧＧＴＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＡＣＧＴＴＴＴＣＴＣＴＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＡＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＧＴＧＡ（配列番号１２）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＧＴＣＴＣＧＧＡＣＡＡＧＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＣＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＧＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＴＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＣＡＴＧＣＧＣＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＴＴＡＣＣＴＴＣＡＧＧＧＡＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＴＴＡＣＧＣＡＧＡＴＡＧＴＧＴＴＡＡＧＧＧＣＣＧＣＴＴＴＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＴＡＧＡＣＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＧＧＣＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＧＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴＧＣＴＣＣＡＧＧＴＣＴＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＴＧＣＡＣＴＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＴＡＡＡＧＡＴＴＡＣＴＴＴＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＡＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＡＧＣＴＣＴＧＡＣＣＴＣＣＧＧＡＧＴＴＣＡＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＴＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＴＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＴＣＡＣＡＡＡＣＣＴＡＧＣＡＡＴＡＣＡＡＡＧＧＴＣＧＡＴＡＡＡＣＧＧＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＡＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＣＣＣＴＧＡＡＴＴＣＣＴＧＧＧＣＧＧＡＣＣＣＴＣＣＧＴＴＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＣＴＡＧＧＡＣＴＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＣＧＴＧＧＡＴＧＴＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＡＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＴＡＡＣＴＣＴＡＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＣＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＣＡＡＣＧＧＡＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＣＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＴＴＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＡＣＣＴＣＡＧＧＴＣＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＡＧＣＣＴＣＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＣＧＡＣＡＴＴＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＴＣＴＡＡＣＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＴＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＧＣＧＡＣＧＧＧＴＣＴＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＣＴＴＴＴＣＴＴＧＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＴＡＡＣＣＡＣＴＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＡＣＴＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＧＧＧＴＧＡ（配列番号１３）のうちの１つと少なくとも８０％同一である配列を含む。
【0054】
一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１０、１１、１２、または１３のうちの１つと７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１０、１１、１２、または１３のうちの１つと同一である配列を含む。したがって、一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１０と同一である配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１１と同一である配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１２と同一である配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体重鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１３と同一である配列を含む。
【0055】
一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、以下の配列のうちの１つと少なくとも８０％同一の配列：
（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＡＧＧＡＣＡＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＴＧＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＴＧＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＧＣＣＣＧＣＡＴＣＴＡＴＣＡＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＣＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＣＴＧＴＡＴＴＣＴＡＴＣＧＧＧＴＡＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＣＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＧＴＧＣＣＡＧＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＡＧＡＣＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＴＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＧＴＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＴＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＣＣＡＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＧＣＧＣＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＧＴＣＴＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＴＣＣＣＡＧＣＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＣＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＴＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＴＴＣＴＡＡＡＧＡＴＴＣＣＡＣＣＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＣＴＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＴＡＡＧＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＣＣＣＧＴＧＡＣＴＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＴＣＧＣＧＧＡＧＡＧＴＧＣＴＧＡ（配列番号１４）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＴＴＴＴＣＣＣＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＴＣＴＧＡＴＡＴＣＧＴＣＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＣＣＧＣＴＡＧＣＡＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＧＴＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＴＣＧＧＣＴＡＴＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＴＡＡＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＣＧＡＣＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＴＡＣＴＣＴＣＡＡＡＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＡＣＣＡＴＡＴＡＣＡＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＧＡＧＡＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＴＴＣＣＴＣＣＣＴＣＣＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＡＡＧＣＧＧＣＡＣＴＧＣＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＴＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＣＡＧＣＣＡＧＧＡＡＡＧＴＧＴＣＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＧＡＴＴＣＣＡＣＡＴＡＴＴＣＴＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡＧＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＴＡＡＧＴＣＴＴＴＴＡＡＴＡＧＧＧＧＧＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号１５）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＣＧＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＣＧＣＣＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＣＣＣＣＣＴＧＡＧＣＧＡＴＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＴＴＡＣＡＣＣＣＧＧＣＧＡＡＣＣＴＧＣＴＡＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＴＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＴＣＧＧＧＴＡＣＡＡＴＴＡＴＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＣＡＡＴＣＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＣＡＡＣＡＧＡＧＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＧＡＧＣＧＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡＧＡＴＧＴＧＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＣＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＴＴＡＣＡＣＡＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＣＧＴＧＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＣＴＴＣＡＴＴＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＴＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＡＧＣＴＴＣＣＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＡＡＡＧＧＴＧＣＡＡＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＡＡＣＡＧＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＴＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＴＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＴＧＣＧＡＧＧＴＣＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＣＴＣＴＴＣＴＣＣＣＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＴＧＣＴＧＡ（配列番号１６）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＧＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＣＴＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＴＣＡＣＣＣＣＡＧＧＣＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＣＴＡＴＴＴＣＴＴＧＴＣＧＧＴＣＣＴＣＴＣＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＡＴＴＡＴＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＡＡＴＣＣＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＧＣＴＣＣＡＡＣＣＧＧＧＣＴＡＧＣＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＣＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＧＴＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＣＣＧＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＡＡＣＣＣＣＡＴＡＴＡＣＴＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＡＡＧＧＧＡＡＧＣＡＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＣＧＡＣＡＡＣＧＣＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＴＧＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＣＴＡＡＡＧＣＴＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＴＧＴＧＡＡＧＴＧＡＣＴＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＣＣＴＧＴＴＡＣＡＡＡＧＴＣＣＴＴＣＡＡＴＡＧＡＧＧＡＧＡＡＴＧＴＴＡＡ（配列番号１７）のうちの１つと少なくとも８０％同一である配列を含む。
（Ａ） ＡＴＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＴＣＴＡＧＧＡＣＡＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＴＧＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＴＧＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＧＣＣＣＧＣＡＴＣＴＡＴＣＡＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＣＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＣＴＧＴＡＴＴＣＴＡＴＣＧＧＧＴＡＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＣＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＧＴＧＣＣＡＧＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＡＧＡＣＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＴＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＧＴＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＴＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＣＣＡＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＧＣＧＣＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＧＴＣＴＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＴＣＣＣＡＧＣＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＣＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＴＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＴＴＣＴＡＡＡＧＡＴＴＣＣＡＣＣＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＣＴＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＴＡＡＧＧＴＧＴＡＣＧＣＡＴＧＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＣＣＣＧＴＧＡＣＴＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＴＣＧＣＧＧＡＧＡＧＴＧＣＴＧＡ（配列番号１４）；
（Ｂ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＴＴＴＴＣＣＣＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＴＣＴＧＡＴＡＴＣＧＴＣＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＣＣＧＣＴＡＧＣＡＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＧＴＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＴＣＧＧＣＴＡＴＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＴＡＡＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＣＧＡＣＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＴＡＣＴＣＴＣＡＡＡＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＡＣＣＡＴＡＴＡＣＡＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＧＡＧＡＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＴＴＣＣＴＣＣＣＴＣＣＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＡＡＧＣＧＧＣＡＣＴＧＣＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＴＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＣＡＧＣＣＡＧＧＡＡＡＧＴＧＴＣＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＴＴＣＣＡＡＧＧＡＴＴＣＣＡＣＡＴＡＴＴＣＴＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡＧＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＴＡＡＧＴＣＴＴＴＴＡＡＴＡＧＧＧＧＧＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号１５）；
（Ｃ） ＡＴＧＧＣＴＡＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＴＴＣＧＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＣＧＣＣＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＣＣＣＣＣＴＧＡＧＣＧＡＴＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＴＴＡＣＡＣＣＣＧＧＣＧＡＡＣＣＴＧＣＴＡＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＴＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＴＣＧＧＧＴＡＣＡＡＴＴＡＴＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＣＡＡＴＣＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＣＡＡＣＡＧＡＧＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＧＡＧＣＧＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡＧＡＴＧＴＧＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＣＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＴＴＡＣＡＣＡＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＴＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＣＧＴＧＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＣＴＴＣＡＴＴＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＴＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＡＧＣＴＴＣＣＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＡＡＡＧＧＴＧＣＡＡＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＡＡＣＡＧＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＴＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＴＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＴＧＣＧＡＧＧＴＣＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＣＴＣＴＴＣＴＣＣＣＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＴＧＣＴＧＡ（配列番号１６）；または
（Ｄ） ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＧＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＣＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＣＴＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＴＣＡＣＣＣＣＡＧＧＣＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＣＴＡＴＴＴＣＴＴＧＴＣＧＧＴＣＣＴＣＴＣＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＡＴＴＡＴＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＡＡＴＣＣＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＧＣＴＣＣＡＡＣＣＧＧＧＣＴＡＧＣＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＣＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＧＴＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＣＣＧＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＡＡＣＣＣＣＡＴＡＴＡＣＴＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＡＡＧＧＧＡＡＧＣＡＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＣＧＡＣＡＡＣＧＣＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＴＧＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＣＴＡＡＡＧＣＴＧＡＴＴＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＴＧＴＧＡＡＧＴＧＡＣＴＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＣＣＴＧＴＴＡＣＡＡＡＧＴＣＣＴＴＣＡＡＴＡＧＡＧＧＡＧＡＡＴＧＴＴＡＡ（配列番号１７）のうちの１つと少なくとも８０％同一である配列を含む。
【0056】
一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１４、１５、１６、または１７と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１４、１５、１６、または１７と同一である配列を含む。したがって、一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１４と同一である配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１５と同一である配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１６である同一の配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒα抗体軽鎖をコードするｍＲＮＡは、コドン最適化され、配列番号１７である同一の配列を含む。
【0057】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲ配列を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ配列は、ＧＧＡＣＡＧＡＴＣＧＣＣＴＧＧＡＧＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＣＴＣＣＡＴＡＧＡＡＧＡＣＡＣＣＧＧＧＡＣＣＧＡＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＡＡＣＧＧＴＧＣＡＴＴＧＧＡＡＣＧＣＧＧＡＴＴＣＣＣＣＧＴＧＣＣＡＡＧＡＧＴＧＡＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＴＧＡＣＡＣＧ（配列番号２７）と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ配列は、配列番号２７と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ配列は、配列番号２７と同一である配列を含む。
【0058】
一部の実施形態では、３’ＵＴＲ配列は、ＣＧＧＧＴＧＧＣＡＴＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＧＴＧＣＣＴＣＴＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＡＡＧＴＴＧＣＣＡＣＴＣＣＡＧＴＧＣＣＣＡＣＣＡＧＣＣＴＴＧＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＴＡＡＧＴＴＧＣＡＴＣ（配列番号２８）と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ配列は、配列番号２８と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲ配列は、配列番号２８と同一である配列を含む。
【0059】
本出願において、「または」の使用は、特に断らない限り、「および／または」を意味する。本開示において使用される場合、用語「含む（comprise）」および該用語の変形、例えば「含んでいる」および「含む（comprises）」は、他の添加剤、成分、整数または工程を除外することを意図しない。本出願で使用される場合、用語「約」および「およそ」は、同等物として使用される。両方の用語は、関連技術分野の当業者によって認識される任意の正常な変動をカバーすることを意味する。
【0060】
本発明の他の特徴、目的、および利点は、以下の詳細な説明、図面、および特許請求の範囲において明らかである。しかしながら、詳細な説明、図面、および特許請求の範囲は、本発明の実施形態を示しているが、限定ではなく、例示としてのみ示されていることを理解されたい。本発明の範囲内の種々の変更および修正は、当業者に明らかになる。
【0061】
図面は、限定のためではなく、例示的な目的のためである。
【図面の簡単な説明】
【0062】
【図1】抗ＩＬ６ＲをコードするｍＲＮＡの投与から７２時間後の気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中のヒトＩｇＧレベルを比較する例示的なグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0063】
定義
本発明がより容易に理解されるようにするために、ある特定の用語をまず以下に定義する。以下の用語および他の用語についての追加の定義は本明細書を通して示される。本発明の背景を説明し、その実施に関する追加の詳細を提供するために本明細書で参照される刊行物および他の参考資料は参照によって本明細書に組み入れる。
本発明がより容易に理解されるようにするために、ある特定の用語をまず以下に定義する。以下の用語および他の用語についての追加の定義は本明細書を通して示される。本発明の背景を説明し、その実施に関する追加の詳細を提供するために本明細書で参照される刊行物および他の参考資料は参照によって本明細書に組み入れる。
【0064】
抗体：本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、インタクト抗体と活性抗体フラグメントの両方を包含する。典型的には、インタクト「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合する免疫グロブリンである。抗体は、ヒトクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＤのいずれかを含む任意の免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。当該技術分野において理解されている典型的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含むことが公知である。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対で構成され、各対は、１つの「軽」鎖（およそ２５ｋＤ）および１つの「重」鎖（およそ５０～７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与する約１００～１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を規定する。用語「可変軽鎖」（ＶＬ）および「可変重鎖」（ＶＨ）は、それぞれ、これらの軽鎖および重鎖を指す。各可変領域は、超可変（ＨＶ）領域およびフレームワーク（ＦＲ）領域にさらに細分化される。超可変領域は、相補性決定領域と呼ばれる３つの超可変配列領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を含み、４つのフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ２およびＦＲ４）によって分離され、ベータ－シート構造を形成し、ＨＶ領域を位置に保持する足場として機能する。各重鎖および軽鎖のＣ末端は、軽鎖の１つのドメイン（ＣＬ）および重鎖の３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）からなる定常領域を規定する。一部の実施形態では、用語「インタクト抗体」または「完全に組み立てられた抗体」は、天然に産生された抗体と同様に、場合によりジスルフィド結合によって結合した２つの重鎖および２つの軽鎖を含有することを意味する抗体に関して使用される。一部の実施形態では、本発明による抗体は、抗体フラグメントである。本明細書で使用される場合、「抗体フラグメント」は、例えば抗体の抗原結合領域または可変領域などの、インタクト抗体の一部を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント；トリアボディ；テトラボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成される多特異的抗体が挙げられる。例えば、抗体フラグメントは、重鎖および軽鎖の可変領域からなる単離されたフラグメントである「Ｆｖ」フラグメント、軽鎖および重鎖可変領域がペプチドリンカー（「ＳｃＦｖタンパク質」）によって接続された組換え一本鎖ポリペプチド分子、ならびに超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位を含む。多数の実施形態では、抗体フラグメントは、親抗体と同じ抗原に結合するフラグメントである親抗体の十分な配列を含有する；一部の実施形態では、フラグメントは、親抗体のそれと同等の親和性で抗原と結合し、および／または抗原への結合について親抗体と競合する。抗体の抗原結合フラグメントの例としては、限定されないが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄｓＦｖダイアボディ、ｄＡｂフラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【0065】
およそまたは約：本明細書で使用される場合、「およそ」または「約」という用語は、目的の１つまたはそれ以上の値に適用される場合、言及される参照値に類似の値を指す。ある特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、別段の記載がない限り、または文脈から明らかでない限り（このような数が可能な値の１００％を超える場合を除き）、上述の参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以内の、いずれかの方向での（より大きいかまたはより小さい）、該当する値の範囲を指す。
【0066】
送達：本明細書で使用される場合、「送達」という用語は、局所送達と全身送達の両方を包含する。例えば、ｍＲＮＡの送達は、ｍＲＮＡが標的組織に送達され、コードされるタンパク質が発現されて標的組織内に保持される状況（「局所分配」または「局所送達」とも呼ばれる）、およびｍＲＮＡが標的組織に送達され、コードされるタンパク質が発現されて患者の循環系（例えば、血清）内に分泌され、全身に分配され、他の組織によって取り込まれる状況（「全身分配」または「全身送達」とも呼ばれる）を包含する。一部の実施形態では、送達は、例えば噴霧を含む、肺送達である。
【0067】
封入：本明細書で使用される場合、「封入」という用語、または文法上同等物は、ｍＲＮＡ分子をナノ粒子内に閉じ込めるプロセスを指す。
【0068】
操作されたまたは突然変異体：本明細書で使用される場合、「操作された」もしくは「突然変異体」という用語、または文法的同等物は、その天然に存在する配列と比較して１つまたはそれ以上の修飾を含むヌクレオチド配列またはタンパク質配列を指し、限定されないが、欠失、異種核酸もしくはアミノ酸の挿入、逆位、置換、またはそれらの組合せが含まれる。
【0069】
発現：本明細書で使用される場合、核酸配列の「発現」は、ｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳、複数のポリペプチド（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）のインタクトタンパク質（例えば、抗体）への組み立て、および／またはポリペプチドもしくは完全に組み立てられたタンパク質（例えば、抗体）の翻訳後修飾を指す。本出願において、「発現」および「産生」という用語、ならびに文法的同等物は、互換的に使用される。
【0070】
機能的：本明細書で使用される場合、「機能的」生物学的分子は、それによって特徴付けられる特性および／または活性を示す形態の生物学的分子である。
【0071】
半減期：本明細書で使用される場合、「半減期」という用語は、ある期間の開始時に測定した場合、核酸もしくはタンパク質濃度または活性のような含量がその値の半分に低下するのに必要とされる時間である。
【0072】
改善する、増加させる、または減少させる：本明細書で使用される場合、「改善する」、「増加させる」もしくは「減少させる」という用語、または文法上同等物は、本明細書に記載される処置の開始前の同じ個体における測定値、または本明細書に記載される処置の非存在下の対照となる対象（または複数の対照となる対象）における測定値などの、ベースライン測定値に対する値を示す。「対照となる対象」は、処置される対象とほぼ同じ年齢の、処置される対象と同じ形態の疾患に罹患している対象である。
【0073】
不純物：本明細書で使用される場合、「不純物」という用語は、標的材料または化合物の化学組成とは異なる、限られた量の液体、気体、または固体内部の物質を指す。不純物は、汚染物質とも呼ばれる。
【0074】
インビトロ：本明細書で使用される場合、「インビトロ」という用語は、多細胞生物内ではなく、人工的な環境、例えば、試験管または反応容器、細胞培養物等で起こるイベントを指す。
【0075】
インビボ：本明細書で使用される場合、「インビボ」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物などの多細胞生物内で起こるイベントを指す。細胞系の文脈においては、この用語は、生細胞内で起こるイベントを指すために使用される（例えば、インビトロ系と対照的に）。
【0076】
単離された：本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、（１）（天然および／または実験設定のいずれにせよ）最初に産生された際に会合していた成分の少なくとも一部から分離された、ならびに／または（２）人の手によって産生、製造、および／もしくは製作された、物質および／または実体を指す。単離された物質および／または実体は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超のこれらが最初に会合していた他の成分から分離される。一部の実施形態では、単離された薬剤が、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超純粋である。本明細書で使用される場合、物質は、他の成分を実質的に含まない場合に、「純粋」である。本明細書で使用される場合、単離された物質および／または実体のパーセント純度の計算は賦形剤（例えば、緩衝剤、溶媒、水等）を含むべきでない。
【0077】
メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）：本明細書で使用される場合、「メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）」という用語は、少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ｍＲＮＡは、本明細書で使用される場合、修飾ＲＮＡと未修飾ＲＮＡの両方を包含する。ｍＲＮＡは、１つまたはそれ以上のコード領域および非コード領域を含有する。ｍＲＮＡは、天然供給源から精製する、組換え発現系を使用して産生し、場合により精製する、化学的に合成すること等が可能である。適切な場合、例えば化学的に合成した分子の場合には、ｍＲＮＡは、化学修飾塩基または糖、骨格修飾等を有する類似体などのヌクレオシド類似体を含むことができる。特に断らない限り、ｍＲＮＡ配列は５’から３’方向に提示される。
【0078】
「噴霧」とは、典型的には噴霧器を用いて肺に吸入される微細なスプレーまたは分散懸濁液中の医薬組成物の送達を指す。
【0079】
「噴霧器」とは、液体または粒子を、典型的には直接吸入され得るエアロゾルの形態で、微細なスプレーもしくはミストまたは分散した懸濁液に変換するために、噴射剤、または酸素、圧縮空気、もしくは超音波などの他の適切なエネルギー源を使用する装置である。一部の実施形態では、本発明とともに使用される噴霧器は、メッシュの振動を生成するための圧電要素を含有する。振動は、メッシュを通して液体医薬組成物をポンプで送り出す。液体は、エアロゾルを生成する液滴中のメッシュから放出される。このような噴霧器は、一般に、（振動）メッシュ噴霧器と呼ばれる。一部の実施形態では、噴霧器は、肺送達のための医薬組成物をエアロゾル化するために使用される。噴霧器からの吸入は、対象が使用するマウスピースを介して行われる。
【0080】
核酸：本明細書で使用される場合、「核酸」という用語は、最も広義の意味で、ポリヌクレオチド鎖に組み込まれるか、または組み込むことができる任意の化合物および／または物質を指す。一部の実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合を介してポリヌクレオチド鎖に組み込まれるか、または組み込むことができる化合物および／または物質である。一部の実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）を指す。一部の実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基を含むポリヌクレオチド鎖を指す。一部の実施形態では、「核酸」は、ＲＮＡならびに一本鎖および／または二本鎖ＤＮＡおよび／またはｃＤＮＡを包含する。さらに、「核酸」、「ＤＮＡ」、「ＲＮＡ」という用語、および／または同様の用語は、核酸類似体、すなわち、ホスホジエステル骨格以外を有する類似体を含む。例えば、当技術分野で公知であり、骨格中にホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有する、いわゆる「ペプチド核酸」は本発明の範囲内にあると考えられる。「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」という用語は、互いの縮重バージョンである、および／または同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。タンパク質をコードするヌクレオチド配列および／またはＲＮＡはイントロンを含む。一部の実施形態では、核酸は、天然供給源から精製する、組換え発現系を使用して産生し、場合により精製する、化学合成等をする。適切な場合、例えば化学的に合成した分子の場合には、核酸は、化学修飾塩基または糖、骨格修飾等を有する類似体などのヌクレオシド類似体を含むことができる。核酸配列は、特に指示しない限り、５’から３’方向に提示される。一部の実施形態では、核酸は、天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、およびデオキシシチジン）；ヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ（６）－メチルグアニン、および２－チオシチジン）；化学修飾塩基；生物修飾塩基（例えば、メチル化塩基）；挿入塩基；修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、およびヘキソース）；および／または修飾リン酸基（例えば、ホスホロチオエートおよび５’－Ｎ－ホスホロアミダイト結合）であるか、またはこれらを含む。一部の実施形態では、本発明は、具体的には、送達を容易にするまたは達成するために化学的に修飾されていない核酸（例えば、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドを含む、ポリヌクレオチドおよび残基）を意味する「未修飾核酸」に関する。一部の実施形態では、ヌクレオチドＴおよびＵは、配列記載において互換的に使用される。
【0081】
患者：本明細書で使用される場合、「患者」または「対象」という用語は、提供される組成物を、例えば、実験、診断、予防、化粧、および／または治療目的で投与することができる任意の生物を指す。典型的な患者には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、および／またはヒトなどの哺乳動物）が含まれる。一部の実施形態では、患者がヒトである。ヒトには、出生前および出生後形態が含まれる。
【0082】
薬学的に許容される：「薬学的に許容される」という用語は、本明細書で使用される場合、信頼できる医学的判断の範囲内で、合理的なベネフィット／リスク比と釣り合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適した物質を指す。
【0083】
「肺送達」とは、本明細書に記載される医薬組成物を、肺に医薬組成物を送達することによってインビボで肺細胞に投与することを指す。肺送達の非限定的な方法には、噴霧および気管内投与／気管内注入が含まれる。
【0084】
安定な：本明細書で使用される場合、用語「安定な」タンパク質またはその文法的同等物は、その物理的安定性および／または生物学的活性を保持するタンパク質を指す。一実施形態では、タンパク質の安定性は、溶液中のモノマータンパク質のパーセンテージに基づいて、分解された（例えば、フラグメント化された）および／または凝集されたタンパク質の低いパーセンテージで決定される。一実施形態では、安定な操作されたタンパク質は、野生型タンパク質と比較して、増大した半減期を保持するかまたはそれを示す。一実施形態では、安定な操作されたタンパク質は、野生型タンパク質と比較して、タンパク質分解をもたらすユビキチン化を受けにくい。
【0085】
対象：本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマまたは霊長類）を指す。ヒトには、出生前および出生後形態が含まれる。多くの実施形態では、対象はヒトである。対象は、疾患の診断または処置のために医療提供者にかかっているヒトを指す患者であることができる。「対象」という用語は、本明細書において、「個体」または「患者」と互換的に使用される。対象は、疾患または障害に罹患することができるか、またはかかりやすいが、疾患または障害の症状を示していても、示していなくてもよい。
【0086】
実質的に：本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、目的の特徴または特性の全部または全部に近い程度または度合いを示す定量的状態を指す。生物分野の当業者であれば、生物および化学現象が、完了するおよび／または完了まで進行するまたは絶対的な結果を達成するもしくは回避することがあったとしても稀であることを理解するだろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物および化学現象に固有の完全性の潜在的な欠如をとらえるために本明細書で使用される。
【0087】
処置すること：本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置」、または「処置すること」という用語は、特定の疾患、障害、および／または状態の１つまたは複数の症状または機能を部分的または完全に軽減する、改善する、緩和する、阻害する、予防する、その発症を遅延させる、その重症度を減少させる、および／またはその発生を減少させるために使用される任意の方法を指す。処置は、疾患に関連する病態を発症するリスクを減らす目的で、疾患の徴候を示していない、および／または疾患の早期徴候のみを示す対象に投与することができる。
【0088】
詳細な説明
本発明は、とりわけ、脂質ナノ粒子内に封入されたｍＲＮＡの送達のための改善された方法および組成物を提供し、ｍＲＮＡは、ＩＩ型炎症のドライバを標的とする抗体をコードする。例えば、ＩＩ型炎症と関連付けられる適切なタンパク質標的には、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）が含まれる。例えば、本発明の抗体は、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）に結合し、および／または阻害する。本発明の種々の態様を以下にさらに説明する。
本発明は、とりわけ、脂質ナノ粒子内に封入されたｍＲＮＡの送達のための改善された方法および組成物を提供し、ｍＲＮＡは、ＩＩ型炎症のドライバを標的とする抗体をコードする。例えば、ＩＩ型炎症と関連付けられる適切なタンパク質標的には、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）が含まれる。例えば、本発明の抗体は、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）に結合し、および／または阻害する。本発明の種々の態様を以下にさらに説明する。
【0089】
ｍＲＮＡがコードする抗体
本開示は、例えば、免疫関連疾患を含む種々の疾患の処置に用いることができるｍＲＮＡがコードする抗体を提供する。種々の免疫関連疾患が当該技術分野において公知であり、一般に、肺の免疫関連疾患と肺に関連しない免疫関連疾患とに分けることができる。本明細書に提供されるｍＲＮＡがコードする抗体の方法および組成物は、肺関連または非肺関連の免疫疾患のいずれかの処置において使用することができる。肺関連免疫疾患の例としては、例えば、喘息、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性硬化症－間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、特発性肺線維症ＩＰＦ、サルコイドーシス、またはアレルギーが挙げられる。非肺関連疾患の例には、自己免疫性肝炎およびアトピー性皮膚炎が含まれる。
本開示は、例えば、免疫関連疾患を含む種々の疾患の処置に用いることができるｍＲＮＡがコードする抗体を提供する。種々の免疫関連疾患が当該技術分野において公知であり、一般に、肺の免疫関連疾患と肺に関連しない免疫関連疾患とに分けることができる。本明細書に提供されるｍＲＮＡがコードする抗体の方法および組成物は、肺関連または非肺関連の免疫疾患のいずれかの処置において使用することができる。肺関連免疫疾患の例としては、例えば、喘息、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性硬化症－間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、特発性肺線維症ＩＰＦ、サルコイドーシス、またはアレルギーが挙げられる。非肺関連疾患の例には、自己免疫性肝炎およびアトピー性皮膚炎が含まれる。
【0090】
対象における免疫疾患を処置する方法が提供され、それを必要とする対象に、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）から選択されるタンパク質標的に結合し、および／または阻害する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。
【0091】
対象における免疫疾患を処置する方法が提供され、それを必要とする対象に、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３から選択されるタンパク質標的に結合する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。
【0092】
対象における免疫疾患を処置する方法が提供され、それを必要とする対象に、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）から選択されるタンパク質標的に結合する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。
【0093】
対象における免疫疾患を処置する方法が提供され、それを必要とする対象に、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、またはＩＬ－３３から選択されるタンパク質標的を阻害する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。
【0094】
対象における免疫疾患を処置する方法が提供され、それを必要とする対象に、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）から選択されるタンパク質標的を阻害する抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたはそれ以上のｍＲＮＡを投与することを含み、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に封入されている。
【0095】
一部の態様では、ＬＮＰに封入された、ｍＲＮＡがコードする抗体は、肺関連免疫疾患を処置するために使用される。このシナリオでは、抗体をコードし、ＬＮＰ内に封入されたｍＲＮＡは、吸入、噴霧、または気管内注入によって肺組織に送達される。この投与方法の１つの利点は、肺関連疾患に対して、少ないか全くない全身曝露を可能にし、したがって、望ましくない全身性の副作用を回避することである。したがって、一部の実施形態では、吸入または噴霧によって抗体をコードするｍＲＮＡを投与しても、全身曝露は生じない。一部の実施形態では、吸入または噴霧による抗体をコードするｍＲＮＡの投与は、少ない全身曝露を有する。一部の実施形態では、吸入または噴霧により抗体をコードするｍＲＮＡの投与は、ＬＮＰに封入されたｍＲＮＡの肺組織への送達をもたらす。
【0096】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡがコードする抗体は、抗ＩＬ６Ｒ抗体である。種々の抗ＩＬ６Ｒ抗体が当該技術分野において公知であり、サリルマブおよびトシリズマブなどのものを含む。抗ＩＬ６Ｒ抗体は、関節リウマチ、多関節型若年性特発性関節炎、全身性若年性関節炎を含む種々の疾患の処置、および重度のコロナウイルス感染またはＣｏｖｉｄ－１９疾患の症例におけるサイトカインストームの処置に使用されてきた。
【0097】
一部の実施形態では、本明細書に提供されるｍＲＮＡがコードする抗体は、関節リウマチの処置に使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ６Ｒ ｍＲＮＡがコードする抗体は、関節リウマチの処置に使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ６Ｒ ｍＲＮＡがコードする抗体は、多関節型若年性特発性関節炎の処置に使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ６Ｒ ｍＲＮＡがコードする抗体は、全身性若年性関節炎の処置に使用される。これらのシナリオにおいて、抗ＩＬ６Ｒ ｍＲＮＡがコードする抗体は、静脈内または腹腔内に送達される。
【0098】
一部の実施形態では、本明細書に提供されるｍＲＮＡがコードする抗体は、コロナウイルス感染またはＣｏｖｉｄ－１９疾患を有する対象におけるサイトカインストームを減少または処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供されるｍＲＮＡがコードする抗体は、コロナウイルス感染またはＣｏｖｉｄ－１９疾患を有する対象を処置するために使用することができる。このシナリオでは、ｍＲＮＡがコードする抗体は吸入または噴霧によって送達される。
【0099】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡがコードする抗体は、抗ＩＬ４α抗体である。種々の抗ＩＬ４α抗体が当該技術分野において公知であり、例えば、デュピルマブが含まれる。抗ＩＬ４α抗体は、例えば、アトピー性皮膚炎、好酸球表現型を有する喘息、または経口コルチコステロイド依存性喘息、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎の処置を含む種々の疾患の処置に使用されており、小児アトピー性皮膚炎、小児喘息、好酸球性食道炎、ＣＯＰＤ、結節性そう痒症、慢性自然蕁麻疹および水疱性類天疱瘡などの２型炎症によって引き起こされる疾患について評価されている。抗ＩＬ４α抗体は、イネ科花粉アレルギーおよびピーナッツアレルギーの処置にも使用されている。
【0100】
一部の実施形態では、本明細書に提供されるｍＲＮＡがコードする抗体は、好酸球性表現型を有するアトピー性皮膚炎、好酸球性表現型を有する喘息、または経口コルチコステロイド依存性喘息、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎、小児アトピー性皮膚炎、小児喘息、好酸球性食道炎、ＣＯＰＤ、結節性そう痒症、慢性自然蕁麻疹および水疱性類天疱瘡、イネ科花粉アレルギー、およびピーナッツアレルギーのうちの１つまたはそれ以上を処置するために使用することができる。
【0101】
したがって、一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、アトピー性皮膚炎を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、中等度のアトピー性皮膚炎を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、重度のアトピー性皮膚炎を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、喘息を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、重度の喘息を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、中等度の喘息を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、結節性そう痒症を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、好酸球性食道炎を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、水疱性類天疱瘡を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、慢性自然蕁麻疹を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、ＣＯＰＤを処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、イネ科花粉アレルギーを処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ４α ｍＲＮＡがコードする抗体は、ピーナッツアレルギーを処置するために使用される。
【0102】
本明細書に記載される抗体をコードするｍＲＮＡの例示的な配列は、下記の表に提供される。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、コドン最適化配列である。
【0103】
【表1-1】
【表1-2】
【表1-3】
【表1-4】
【表1-5】
【表1-6】
【表1-7】
【表1-8】
【表1-9】
【0104】
例示的な重鎖および軽鎖抗体配列は、下記の表に提供される。
【0105】
【表2-1】
【表2-2】
【表2-3】
【0106】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、インタクト抗体と抗体フラグメントの両方を包含する。典型的には、インタクト「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合する免疫グロブリンである。抗体は、ヒトクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、およびＩｇＤのいずれかを含む任意の免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。典型的には、インタクト抗体は四量体である。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対から構成され、各対は、１つの「軽」鎖（およそ２５ｋＤ）および１つの「重」鎖（およそ５０～７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与する約１００～１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を規定する。用語「可変軽鎖」（ＶＬ）および「可変重鎖」（ＶＨ）は、それぞれ軽鎖および重鎖上のこれらの対応する領域を指す。各可変領域はさらに超可変（ＨＶ）領域とフレームワーク（ＦＲ）領域に細分化することができる。超可変領域は、相補性決定領域と呼ばれる３つの超可変配列領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）からなり、４つのフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ２およびＦＲ４）によって分離され、ベータシート構造を形成し、ＨＶ領域を位置に保持する足場として機能する。各重鎖および軽鎖のＣ末端は、軽鎖の１つのドメイン（ＣＬ）および重鎖の３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）からなる定常領域を規定する。免疫グロブリンの軽鎖はさらにアイソタイプのカッパとラムダに分化することができる。
【0107】
一部の実施形態では、用語「インタクト抗体」または「完全に組み立てられた抗体」は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗体に関して使用され、場合により、天然に産生された抗体と同様に、ジスルフィド結合によって結合される。一部の実施形態では、本発明による抗体は、抗体フラグメントである。
【0108】
一部の実施形態では、本発明は、「抗体フラグメント」を送達するために使用することができる。本明細書で使用される場合、「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部、例えば、抗体の抗原結合または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント；トリアボディ；テトラボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成される多特異抗体が挙げられる。例えば、抗体フラグメントは、重鎖および軽鎖の可変領域からなる単離されたフラグメント、「Ｆｖ」フラグメント、軽鎖および重鎖可変領域がペプチドリンカー（「ＳｃＦｖタンパク質」）によって連結される組換え一本鎖ポリペプチド分子、ならびに超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位を含む。多くの実施形態において、抗体フラグメントは、親抗体と同じ抗原に結合するフラグメントである親抗体の十分な配列を含み；一部の実施形態では、フラグメントは、親抗体のそれと同等の親和性で抗原と結合し、および／または抗原への結合について親抗体と競合する。抗体の抗原結合フラグメントの例としては、限定されないが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄｓＦｖダイアボディ、ｄＡｂフラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【0109】
本発明は、当該技術分野において公知である任意の抗体、および標準的方法を用いて所望の抗原に対して産生され得る抗体を送達するために使用され得る。本発明は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体混合物またはカクテル、ヒトもしくはヒト化抗体、キメラ抗体、または二重特異的抗体を送達するために使用され得る。
【0110】
ｍＲＮＡの合成
本発明によるｍＲＮＡは、種々の公知である方法のいずれかに従って合成することができる。例えば、本発明によるｍＲＮＡはインビトロ転写（ＩＶＴ）を介して合成することができる。手短に言えば、ＩＶＴは、典型的にはプロモーターを含有する直鎖または環状ＤＮＡ鋳型、リボヌクレオチド三リン酸のプール、ＤＴＴおよびマグネシウムイオンを含むことができる緩衝系、ならびに適切なＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ３、Ｔ７、またはＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ）、ＤＮＡｓｅ Ｉ、ピロホスファターゼ、および／またはＲＮＡｓｅ阻害剤を用いて実施される。正確な条件は具体的な用途によって変化する。
本発明によるｍＲＮＡは、種々の公知である方法のいずれかに従って合成することができる。例えば、本発明によるｍＲＮＡはインビトロ転写（ＩＶＴ）を介して合成することができる。手短に言えば、ＩＶＴは、典型的にはプロモーターを含有する直鎖または環状ＤＮＡ鋳型、リボヌクレオチド三リン酸のプール、ＤＴＴおよびマグネシウムイオンを含むことができる緩衝系、ならびに適切なＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ３、Ｔ７、またはＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ）、ＤＮＡｓｅ Ｉ、ピロホスファターゼ、および／またはＲＮＡｓｅ阻害剤を用いて実施される。正確な条件は具体的な用途によって変化する。
【0111】
一部の実施形態では、本発明によるｍＲＮＡを調製するために、ＤＮＡ鋳型をインビトロで転写する。適切なＤＮＡ鋳型は、典型的には、インビトロ転写のためのプロモーター、例えば、Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６プロモーターを有し、続いて所望のｍＲＮＡおよび終止シグナルのための所望のヌクレオチド配列を有する。
【0112】
ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼを用いたｍＲＮＡの合成
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼを用いて産生される。ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは、ＳＰ６プロモーター配列に対して高い配列特異性を有するＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。ＳＰ６ポリメラーゼは、プロモーターから下流の一本鎖ＤＮＡまたは二本鎖ＤＮＡ上のＲＮＡの５’→３’インビトロ合成を触媒し、天然リボヌクレオチドおよび／または修飾リボヌクレオチドおよび／または標識リボヌクレオチドを重合転写産物に取り込む。このような標識されたリボヌクレオチドの例としては、ビオチン－、フルオレセイン－、ジゴキシゲニン－、アミノアリル－、および同位体標識ヌクレオチドが挙げられる。
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼを用いて産生される。ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは、ＳＰ６プロモーター配列に対して高い配列特異性を有するＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。ＳＰ６ポリメラーゼは、プロモーターから下流の一本鎖ＤＮＡまたは二本鎖ＤＮＡ上のＲＮＡの５’→３’インビトロ合成を触媒し、天然リボヌクレオチドおよび／または修飾リボヌクレオチドおよび／または標識リボヌクレオチドを重合転写産物に取り込む。このような標識されたリボヌクレオチドの例としては、ビオチン－、フルオレセイン－、ジゴキシゲニン－、アミノアリル－、および同位体標識ヌクレオチドが挙げられる。
【0113】
バクテリオファージＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼの配列は、初期には、以下のアミノ酸配列：
ＭＱＤＬＨＡＩＱＬＱＬＥＥＥＭＦＮＧＧＩＲＲＦＥＡＤＱＱＲＱＩＡＡＧＳＥＳＤＴＡＷＮＲＲＬＬＳＥＬＩＡＰＭＡＥＧＩＱＡＹＫＥＥＹＥＧＫＫＧＲＡＰＲＡＬＡＦＬＱＣＶＥＮＥＶＡＡＹＩＴＭＫＶＶＭＤＭＬＮＴＤＡＴＬＱＡＩＡＭＳＶＡＥＲＩＥＤＱＶＲＦＳＫＬＥＧＨＡＡＫＹＦＥＫＶＫＫＳＬＫＡＳＲＴＫＳＹＲＨＡＨＮＶＡＶＶＡＥＫＳＶＡＥＫＤＡＤＦＤＲＷＥＡＷＰＫＥＴＱＬＱＩＧＴＴＬＬＥＩＬＥＧＳＶＦＹＮＧＥＰＶＦＭＲＡＭＲＴＹＧＧＫＴＩＹＹＬＱＴＳＥＳＶＧＱＷＩＳＡＦＫＥＨＶＡＱＬＳＰＡＹＡＰＣＶＩＰＰＲＰＷＲＴＰＦＮＧＧＦＨＴＥＫＶＡＳＲＩＲＬＶＫＧＮＲＥＨＶＲＫＬＴＱＫＱＭＰＫＶＹＫＡＩＮＡＬＱＮＴＱＷＱＩＮＫＤＶＬＡＶＩＥＥＶＩＲＬＤＬＧＹＧＶＰＳＦＫＰＬＩＤＫＥＮＫＰＡＮＰＶＰＶＥＦＱＨＬＲＧＲＥＬＫＥＭＬＳＰＥＱＷＱＱＦＩＮＷＫＧＥＣＡＲＬＹＴＡＥＴＫＲＧＳＫＳＡＡＶＶＲＭＶＧＱＡＲＫＹＳＡＦＥＳＩＹＦＶＹＡＭＤＳＲＳＲＶＹＶＱＳＳＴＬＳＰＱＳＮＤＬＧＫＡＬＬＲＦＴＥＧＲＰＶＮＧＶＥＡＬＫＷＦＣＩＮＧＡＮＬＷＧＷＤＫＫＴＦＤＶＲＶＳＮＶＬＤＥＥＦＱＤＭＣＲＤＩＡＡＤＰＬＴＦＴＱＷＡＫＡＤＡＰＹＥＦＬＡＷＣＦＥＹＡＱＹＬＤＬＶＤＥＧＲＡＤＥＦＲＴＨＬＰＶＨＱＤＧＳＣＳＧＩＱＨＹＳＡＭＬＲＤＥＶＧＡＫＡＶＮＬＫＰＳＤＡＰＱＤＩＹＧＡＶＡＱＶＶＩＫＫＮＡＬＹＭＤＡＤＤＡＴＴＦＴＳＧＳＶＴＬＳＧＴＥＬＲＡＭＡＳＡＷＤＳＩＧＩＴＲＳＬＴＫＫＰＶＭＴＬＰＹＧＳＴＲＬＴＣＲＥＳＶＩＤＹＩＶＤＬＥＥＫＥＡＱＫＡＶＡＥＧＲＴＡＮＫＶＨＰＦＥＤＤＲＱＤＹＬＴＰＧＡＡＹＮＹＭＴＡＬＩＷＰＳＩＳＥＶＶＫＡＰＩＶＡＭＫＭＩＲＱＬＡＲＦＡＡＫＲＮＥＧＬＭＹＴＬＰＴＧＦＩＬＥＱＫＩＭＡＴＥＭＬＲＶＲＴＣＬＭＧＤＩＫＭＳＬＱＶＥＴＤＩＶＤＥＡＡＭＭＧＡＡＡＰＮＦＶＨＧＨＤＡＳＨＬＩＬＴＶＣＥＬＶＤＫＧＶＴＳＩＡＶＩＨＤＳＦＧＴＨＡＤＮＴＬＴＬＲＶＡＬＫＧＱＭＶＡＭＹＩＤＧＮＡＬＱＫＬＬＥＥＨＥＶＲＷＭＶＤＴＧＩＥＶＰＥＱＧＥＦＤＬＮＥＩＭＤＳＥＹＶＦＡ（配列番号１）
を有するものとして記載された（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｙ００１０５．１）。
ＭＱＤＬＨＡＩＱＬＱＬＥＥＥＭＦＮＧＧＩＲＲＦＥＡＤＱＱＲＱＩＡＡＧＳＥＳＤＴＡＷＮＲＲＬＬＳＥＬＩＡＰＭＡＥＧＩＱＡＹＫＥＥＹＥＧＫＫＧＲＡＰＲＡＬＡＦＬＱＣＶＥＮＥＶＡＡＹＩＴＭＫＶＶＭＤＭＬＮＴＤＡＴＬＱＡＩＡＭＳＶＡＥＲＩＥＤＱＶＲＦＳＫＬＥＧＨＡＡＫＹＦＥＫＶＫＫＳＬＫＡＳＲＴＫＳＹＲＨＡＨＮＶＡＶＶＡＥＫＳＶＡＥＫＤＡＤＦＤＲＷＥＡＷＰＫＥＴＱＬＱＩＧＴＴＬＬＥＩＬＥＧＳＶＦＹＮＧＥＰＶＦＭＲＡＭＲＴＹＧＧＫＴＩＹＹＬＱＴＳＥＳＶＧＱＷＩＳＡＦＫＥＨＶＡＱＬＳＰＡＹＡＰＣＶＩＰＰＲＰＷＲＴＰＦＮＧＧＦＨＴＥＫＶＡＳＲＩＲＬＶＫＧＮＲＥＨＶＲＫＬＴＱＫＱＭＰＫＶＹＫＡＩＮＡＬＱＮＴＱＷＱＩＮＫＤＶＬＡＶＩＥＥＶＩＲＬＤＬＧＹＧＶＰＳＦＫＰＬＩＤＫＥＮＫＰＡＮＰＶＰＶＥＦＱＨＬＲＧＲＥＬＫＥＭＬＳＰＥＱＷＱＱＦＩＮＷＫＧＥＣＡＲＬＹＴＡＥＴＫＲＧＳＫＳＡＡＶＶＲＭＶＧＱＡＲＫＹＳＡＦＥＳＩＹＦＶＹＡＭＤＳＲＳＲＶＹＶＱＳＳＴＬＳＰＱＳＮＤＬＧＫＡＬＬＲＦＴＥＧＲＰＶＮＧＶＥＡＬＫＷＦＣＩＮＧＡＮＬＷＧＷＤＫＫＴＦＤＶＲＶＳＮＶＬＤＥＥＦＱＤＭＣＲＤＩＡＡＤＰＬＴＦＴＱＷＡＫＡＤＡＰＹＥＦＬＡＷＣＦＥＹＡＱＹＬＤＬＶＤＥＧＲＡＤＥＦＲＴＨＬＰＶＨＱＤＧＳＣＳＧＩＱＨＹＳＡＭＬＲＤＥＶＧＡＫＡＶＮＬＫＰＳＤＡＰＱＤＩＹＧＡＶＡＱＶＶＩＫＫＮＡＬＹＭＤＡＤＤＡＴＴＦＴＳＧＳＶＴＬＳＧＴＥＬＲＡＭＡＳＡＷＤＳＩＧＩＴＲＳＬＴＫＫＰＶＭＴＬＰＹＧＳＴＲＬＴＣＲＥＳＶＩＤＹＩＶＤＬＥＥＫＥＡＱＫＡＶＡＥＧＲＴＡＮＫＶＨＰＦＥＤＤＲＱＤＹＬＴＰＧＡＡＹＮＹＭＴＡＬＩＷＰＳＩＳＥＶＶＫＡＰＩＶＡＭＫＭＩＲＱＬＡＲＦＡＡＫＲＮＥＧＬＭＹＴＬＰＴＧＦＩＬＥＱＫＩＭＡＴＥＭＬＲＶＲＴＣＬＭＧＤＩＫＭＳＬＱＶＥＴＤＩＶＤＥＡＡＭＭＧＡＡＡＰＮＦＶＨＧＨＤＡＳＨＬＩＬＴＶＣＥＬＶＤＫＧＶＴＳＩＡＶＩＨＤＳＦＧＴＨＡＤＮＴＬＴＬＲＶＡＬＫＧＱＭＶＡＭＹＩＤＧＮＡＬＱＫＬＬＥＥＨＥＶＲＷＭＶＤＴＧＩＥＶＰＥＱＧＥＦＤＬＮＥＩＭＤＳＥＹＶＦＡ（配列番号１）
を有するものとして記載された（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｙ００１０５．１）。
【0114】
本発明に適したＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは、バクテリオファージＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼと実質的に同じポリメラーゼ活性を有する任意の酵素である。したがって、一部の実施形態では、本発明に適したＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは、配列番号１から修飾される。例えば、適切なＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは、１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を含み得る。一部の実施形態では、適切なＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは、配列番号１と約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７５％、７０％、６５％、もしくは６０％同一または相同であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、適切なＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは、（Ｎ末端、Ｃ末端、または内部から）切断されたタンパク質であり得るが、ポリメラーゼ活性を保持する。一部の実施形態では、適切なＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは融合タンパク質である。
【0115】
本発明に適したＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは、例えば、Ａｌｄｅｖｒｏｎ、Ａｍｂｉｏｎ、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ（ＮＥＢ）、ＰｒｏｍｅｇａおよびＲｏｃｈｅから市販されている製品であり得る。ＳＰ６は、配列番号１のアミノ酸配列または本明細書に記載される配列番号１のバリアントに従って、商業的供給源または非商業的供給源から注文および／またはカスタム設計することができる。ＳＰ６は、標準忠実度ポリメラーゼであり得るか、またはＲＮＡポリメラーゼ活性、例えば、ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子における突然変異またはＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ自体の翻訳後修飾を促進するように修飾された高忠実度／高効率／高容量であり得る。このような修飾されたＳＰ６の例としては、ＡｍｂｉｏｎのＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ－Ｐｌｕｓ（商標）、ＮＥＢのＨｉＳｃｒｉｂｅ ＳＰ６、ならびにＰｒｏｍｅｇａのＲｉｂｏＭＡＸ（商標）およびＲｉｂｏｐｒｏｂｅ（登録商標）システムが挙げられる。
【0116】
一部の実施形態では、適切なＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは融合タンパク質である。例えば、ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼは、酵素の単離、精製、または溶解性を促進するために、１つまたはそれ以上のタグを含み得る。適切なタグは、Ｎ末端、Ｃ末端、および／または内部に位置することができる。適切なタグの非限定的な例としては、カルモジュリン結合タンパク質（ＣＢＰ）；ファシオラ肝臓８－ｋＤａ抗原（Ｆｈ８）；ＦＬＡＧタグペプチド；グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）；ヒスチジンタグ（例えば、ヘキサヒスチジンタグ（Ｈｉｓ６））；マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）；Ｎ－利用物質（ＮｕｓＡ）；小ユビキチン関連修飾因子（ＳＵＭＯ）融合タグ；ストレプトアビジン結合ペプチド（ＳＴＲＥＰ）；タンデム親和性精製（ＴＡＰ）；およびチオレドキシン（ＴｒｘＡ）が挙げられる。本発明では、他のタグを使用することができる。これらおよび他の融合タグは、例えば、Ｃｏｓｔａら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ５巻（２０１４）：６３頁およびＰＣＴ／ＵＳ１６／５７０４４号に記載され、その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み入れられる。ある特定の実施形態では、Ｈｉｓタグは、ＳＰ６のＮ末端に位置する。
【0117】
ＤＮＡ鋳型
典型的には、ＤＮＡ鋳型は、完全に二本鎖であるかまたは二本鎖ＳＰ６プロモーター配列を有するほとんどの一本鎖のいずれかである。
典型的には、ＤＮＡ鋳型は、完全に二本鎖であるかまたは二本鎖ＳＰ６プロモーター配列を有するほとんどの一本鎖のいずれかである。
【0118】
線状化プラスミドＤＮＡ（１つまたはそれ以上の制限酵素を介して線状化される）、線状化ゲノムＤＮＡフラグメント（制限酵素および／または物理的手段を介する）、ＰＣＲ産物、および／または合成ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、それらが転写されるＤＮＡ配列の上流（および正方向）に二本鎖ＳＰ６プロモーターを含むことを条件として、ＳＰ６を用いたインビトロ転写のための鋳型として用いることができる。
【0119】
一部の実施形態では、線状化ＤＮＡ鋳型は、平滑末端を有する。
【0120】
一部の実施形態では、転写されるＤＮＡ配列は、より効率的な転写および／または翻訳を促進するために最適化される。例えば、ＤＮＡ配列は、シス調節エレメント（例えば、ＴＡＴＡボックス、終止シグナルおよびタンパク質結合部位）、人工組換え部位、カイ部位、ＣｐＧジヌクレオチド含有量、ネガティブＣｐＧアイランド、ＧＣ含有量、ポリメラーゼスリップ部位、および／または転写に関連する他のエレメントに関して最適化される；ＤＮＡ配列は、潜在的スプライス部位、ｍＲＮＡ二次構造、ｍＲＮＡの安定な自由エネルギー、反復配列、ＲＮＡ不安定モチーフ、および／またはｍＲＮＡプロセシングおよび安定性に関連する他のエレメントに関して最適化される；ＤＮＡ配列は、コドン使用バイアス、コドン適合性、内部カイ部位、リボソーム結合部位（例えば、ＩＲＥＳ）、未成熟ポリＡ部位、シャイン－ダルガーノ（ＳＤ）配列、および／または翻訳に関連する他のエレメントに関して最適化される；および／またはＤＮＡ配列は、コドンコンテキスト、コドン－アンチコドン相互作用、翻訳休止部位、および／またはタンパク質折り畳みに関連する他のエレメントに関して最適化される。当技術分野において公知である最適化方法、例えば、その全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開第２０１１／００８１７０８号に記載されるＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒおよびＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）によるＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒを本発明で使用することができる。
【0121】
一部の実施形態では、ＤＮＡ鋳型は、５’および／または３’非翻訳領域を含む。一部の実施形態では、５’非翻訳領域は、ｍＲＮＡの安定性または翻訳に影響する１つまたはそれ以上のエレメント、例えば、鉄応答性エレメントを含む。一部の実施形態では、５’非翻訳領域は、長さが約５０～５００ヌクレオチドの間であり得る。
【0122】
一部の実施形態では、３’非翻訳領域は、ポリアデニル化シグナルのうちの１つもしくはそれ以上、細胞内での位置のｍＲＮＡの安定性に影響するタンパク質の結合部位、またはｍｉＲＮＡの１つもしくはそれ以上の結合部位を含む。一部の実施形態では、３’非翻訳領域は、長さが５０～５００ヌクレオチドの間またはそれ以上であり得る。
【0123】
例示的な３’および／または５’ＵＴＲ配列は、センスｍＲＮＡ分子の安定性を増加させるために、安定であるｍＲＮＡ分子（例えば、グロビン、アクチン、ＧＡＰＤＨ、チューブリン、ヒストン、またはクエン酸サイクル酵素）から誘導することができる。例えば、５’ＵＴＲ配列は、ヌクレアーゼ耐性を改善し、および／またはポリヌクレオチドの半減期を改善するために、ＣＭＶ前初期１（ＩＥ１）遺伝子の部分配列またはそのフラグメントを含み得る。また、ポリヌクレオチドをさらに安定化するために、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）をコードする配列またはそのフラグメントをポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の３’末端または非翻訳領域に含めることが考えられる。一般に、これらの修飾は、修飾されていない対応物と比較して、ポリヌクレオチドの安定性および／または薬物動態特性（例えば、半減期）を改善し、例えば、インビボヌクレアーゼ消化に対するこのようなポリヌクレオチドの抵抗性を改善するためになされる修飾を含む。
【0124】
大規模ｍＲＮＡ合成
一部の実施形態では、本発明は、安定なＬＮＰ封入ｍＲＮＡの大規模生産に用いることができる。一部の実施形態では、本発明に従う方法は、少なくとも１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１ｇ、５ｇ、１０ｇ、２５ｇ、５０ｇ、７５ｇ、１００ｇ、２５０ｇ、５００ｇ、７５０ｇ、１ｋｇ、５ｋｇ、１０ｋｇ、５０ｋｇ、１００ｋｇ、１０００ｋｇまたはそれ以上のｍＲＮＡを単一バッチで合成する。本明細書で使用される場合、「バッチ」という用語は、一度に合成されたｍＲＮＡの含量または量、例えば、単一の製造設定に従って製造されたｍＲＮＡの含量または量を指す。バッチとは、１セットの条件下で連続的に合成するために、酵素の単一アリコートおよび／またはＤＮＡ鋳型の単一アリコートを介して起こる１つの反応において合成されるｍＲＮＡの量を指すことができる。単一のバッチで合成されたｍＲＮＡは、所望の量を達成するために組み合わされる異なる時間に合成されたｍＲＮＡを含まない。一般に、反応混合物は、ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ、直鎖ＤＮＡ鋳型、およびＲＮＡポリメラーゼ反応緩衝液（リボヌクレオチドを含む場合があるかまたはリボヌクレオチドの添加を必要とする場合がある）を含む。
一部の実施形態では、本発明は、安定なＬＮＰ封入ｍＲＮＡの大規模生産に用いることができる。一部の実施形態では、本発明に従う方法は、少なくとも１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１ｇ、５ｇ、１０ｇ、２５ｇ、５０ｇ、７５ｇ、１００ｇ、２５０ｇ、５００ｇ、７５０ｇ、１ｋｇ、５ｋｇ、１０ｋｇ、５０ｋｇ、１００ｋｇ、１０００ｋｇまたはそれ以上のｍＲＮＡを単一バッチで合成する。本明細書で使用される場合、「バッチ」という用語は、一度に合成されたｍＲＮＡの含量または量、例えば、単一の製造設定に従って製造されたｍＲＮＡの含量または量を指す。バッチとは、１セットの条件下で連続的に合成するために、酵素の単一アリコートおよび／またはＤＮＡ鋳型の単一アリコートを介して起こる１つの反応において合成されるｍＲＮＡの量を指すことができる。単一のバッチで合成されたｍＲＮＡは、所望の量を達成するために組み合わされる異なる時間に合成されたｍＲＮＡを含まない。一般に、反応混合物は、ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ、直鎖ＤＮＡ鋳型、およびＲＮＡポリメラーゼ反応緩衝液（リボヌクレオチドを含む場合があるかまたはリボヌクレオチドの添加を必要とする場合がある）を含む。
【0125】
本発明によれば、１～１００ｍｇのＳＰ６ポリメラーゼが、典型的には、生成されたｍＲＮＡの１グラム（ｇ）あたり使用される。一部の実施形態では、生成されたｍＲＮＡの１ｇあたり約１～９０ｍｇ、１～８０ｍｇ、１～６０ｍｇ、１～５０ｍｇ、１～４０ｍｇ、１０～１００ｍｇ、１０～８０ｍｇ、１０～６０ｍｇ、１０～５０ｍｇのＳＰ６ポリメラーゼが使用される。一部の実施形態では、約５～２０ｍｇのＳＰ６ポリメラーゼを使用して、約１グラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、約０．５～２グラムのＳＰ６ポリメラーゼを使用して、約１００グラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、約５～２０グラムのＳＰ６ポリメラーゼを使用して、約１キログラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、少なくとも５ｍｇのＳＰ６ポリメラーゼを使用して、少なくとも１グラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、少なくとも５００ｍｇのＳＰ６ポリメラーゼを使用して、少なくとも１００グラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、少なくとも５グラムのＳＰ６ポリメラーゼを使用して、少なくとも１キログラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、生成されたｍＲＮＡ１ｇあたり約１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、または１００ｍｇのプラスミドＤＮＡが使用される。一部の実施形態では、約１０～３０ｍｇのプラスミドＤＮＡを使用して、約１グラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、約１～３グラムのプラスミドＤＮＡを使用して、約１００グラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、約１０～３０グラムのプラスミドＤＮＡを使用して、約１キログラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、少なくとも１０ｍｇのプラスミドＤＮＡを使用して、少なくとも１グラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、少なくとも１グラムのプラスミドＤＮＡを使用して、少なくとも１００グラムのｍＲＮＡを生成する。一部の実施形態では、少なくとも１０グラムのプラスミドＤＮＡを使用して、少なくとも１キログラムのｍＲＮＡを生成する。
【0126】
一部の実施形態では、反応混合物中のＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼの濃度は、約１～１００ｎＭ、１～９０ｎＭ、１～８０ｎＭ、１～７０ｎＭ、１～６０ｎＭ、１～５０ｎＭ、１～４０ｎＭ、１～３０ｎＭ、１～２０ｎＭ、または約１～１０ｎＭであり得る。ある特定の実施形態では、ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼの濃度は、約１０～５０ｎＭ、２０～５０ｎＭ、または３０～５０ｎＭである。ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼの１００～１００００単位／ｍｌの濃度、例として、１００～９０００単位／ｍｌ、１００～８０００単位／ｍｌ、１００～７０００単位／ｍｌ、１００～６０００単位／ｍｌ、１００～５０００単位／ｍｌ、１００～１０００単位／ｍｌ、２００～２０００単位／ｍｌ、５００～１０００単位／ｍｌ、５００～２０００単位／ｍｌ、５００～３０００単位／ｍｌ、５００～４０００単位／ｍｌ、５００～５０００単位／ｍｌ、５００～６０００単位／ｍｌ、１０００～７５００単位／ｍｌ、および２５００～５０００単位／ｍｌの濃度を用いることができる。
【0127】
反応混合物中の各リボヌクレオチド（例えば、ＡＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、およびＣＴＰ）の濃度は、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、例えば、約１ｍＭ～約１０ｍＭの間、約２ｍＭ～約１０ｍＭの間、約３ｍＭ～約１０ｍＭの間、約１ｍＭ～約８ｍＭの間、約１ｍＭ～約６ｍＭの間、約３ｍＭ～約１０ｍＭの間、約３ｍＭ～約８ｍＭの間、約３ｍＭ～約６ｍＭの間、約４ｍＭ～約５ｍＭの間である。一部の実施形態では、各リボヌクレオチドは、反応混合物中で約５ｍＭである。一部の実施形態では、反応において使用されるｒＮＴＰ（例えば、ＡＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰおよびＵＴＰの組合せ）の全濃度は、１ｍＭ～４０ｍＭの間の範囲である。一部の実施形態では、反応において使用されるｒＮＴＰ（例えば、ＡＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰおよびＵＴＰの組合せ）の全濃度は、１ｍＭ～３０ｍＭの間、または１ｍＭ～２８ｍＭの間、または１ｍＭ～２５ｍＭの間、または１ｍＭ～２０ｍＭの間の範囲である。一部の実施形態では、全ｒＮＴＰ濃度は３０ｍＭ未満である。一部の実施形態では、全ｒＮＴＰ濃度は２５ｍＭ未満である。一部の実施形態では、全ｒＮＴＰ濃度は２０ｍＭ未満である。一部の実施形態では、全ｒＮＴＰ濃度は１５ｍＭ未満である。一部の実施形態では、全ｒＮＴＰ濃度は１０ｍＭ未満である。
【0128】
ＲＮＡポリメラーゼ反応緩衝液には、典型的には、塩／緩衝剤、例えば、Ｔｒｉｓ、ＨＥＰＥＳ、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、および塩化マグネシウムが含まれる。
【0129】
反応混合物のｐＨは、約６～８．５、６．５～８．０、７．０～７．５であり得、一部の実施形態では、ｐＨは７．５である。
【0130】
直鎖または線状化のＤＮＡ鋳型（例えば、上記されるように、所望の量のＲＮＡを提供するのに十分な量／濃度で）、ＲＮＡポリメラーゼ反応緩衝液、およびＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼを組み合わせて、反応混合物を形成する。反応混合物を約３７℃～約４２℃で３０分～６時間、例えば約６０～約９０分間インキュベートする。
【0131】
一部の実施形態では、適切なＲＮＡポリメラーゼ反応緩衝液（最終反応混合物のｐＨは約７．５である）中の約５ｍＭ ＮＴＰ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ ＳＰ６ポリメラーゼ、および約０．１ｍｇ／ｍｌ ＤＮＡ鋳型を約３７℃～約４２℃で６０～９０分間インキュベートする。
【0132】
一部の実施形態では、反応混合物は、ＳＰ６ポリメラーゼ特異的プロモーター、ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ、ＲＮａｓｅ阻害剤、ピロホスファターゼ、２９ｍＭ ＮＴＰ、１０ｍＭ ＤＴＴおよび反応緩衝液（１０×の場合は８００ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２０ｍＭスペルミジン、２５０ｍＭ ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．７）および所望の反応体積に十分な含量（ＱＳ）をＲＮａｓｅフリー水とともに有する線状化二本鎖ＤＮＡ鋳型を含有する。次に、この反応混合物を３７℃で６０分間インキュベートする。次に、ポリメラーゼ反応を、ＤＮａｓｅ ＩおよびＤＮａｓｅ Ｉ緩衝液（１０×の場合は１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２および２５ｍＭ ＣａＣｌ２、ｐＨ７．６）の添加によってクエンチさせ、精製のための調製における二本鎖ＤＮＡ鋳型の消化を促進する。この実施形態は、１００グラムのｍＲＮＡを生成するのに十分であることが示されている。
【0133】
一部の実施形態では、反応混合物は、１～１０ｍＭの範囲の濃度のＮＴＰ、０．０１～０．５ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度のＤＮＡ鋳型、および０．０１～０．１ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度のＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼを含み、例えば、反応混合物は、５ｍＭの濃度のＮＴＰ、０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のＤＮＡ鋳型、および０．０５ｍｇ／ｍｌの濃度のＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼを含む。
【0134】
ヌクレオチド
種々の天然に存在するかまたは修飾されたヌクレオシドを用いて、本発明によるｍＲＮＡを生成することができる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、グアノシン、シチジン、ウリジン）；ヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ（６）－メチルグアニン、シュードウリジン、（例えば、Ｎ－１－メチル－シュードウリジン）、２－チオウリジン、および２－チオシチジン）；化学的に修飾された塩基；生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化塩基）；インターカレートされた塩基；修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、およびヘキソース）；および／または修飾されたリン酸基（例えば、ホスホロチオエートおよび５’－Ｎ－ホスホルアミダイト結合）であるかまたはそれを含む。
種々の天然に存在するかまたは修飾されたヌクレオシドを用いて、本発明によるｍＲＮＡを生成することができる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、グアノシン、シチジン、ウリジン）；ヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ（６）－メチルグアニン、シュードウリジン、（例えば、Ｎ－１－メチル－シュードウリジン）、２－チオウリジン、および２－チオシチジン）；化学的に修飾された塩基；生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化塩基）；インターカレートされた塩基；修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、およびヘキソース）；および／または修飾されたリン酸基（例えば、ホスホロチオエートおよび５’－Ｎ－ホスホルアミダイト結合）であるかまたはそれを含む。
【0135】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１つまたはそれ以上の非標準ヌクレオチド残基を含む。非標準ヌクレオチド残基は、例えば、５－メチル－シチジン（「５ｍＣ」）、シュードウリジン（「ψＵ」）、および／または２－チオ－ウリジン（「２ｓＵ」）を含み得る。このような残基の検討およびそれらのｍＲＮＡへの取り込みについては、例えば、米国特許第８，２７８，０３６号または国際公開第２０１１／０１２３１６号を参照されたい。ｍＲＮＡはＲＮＡであり得、Ｕ残基の２５％が２－チオ－ウリジンであり、Ｃ残基の２５％が５－メチルシチジンであるＲＮＡとして定義される。ＲＮＡの使用のための教示は、米国特許出願公開第２０１２／０１９５９３６号および国際公開第２０１１／０１２３１６号に開示され、いずれも参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。非標準ヌクレオチド残基の存在は、ｍＲＮＡを、同じ配列を有するが、標準残基のみを含有する対照ｍＲＮＡよりも安定におよび／またはあまり免疫原性ではなくすることができる。さらなる実施形態では、ｍＲＮＡは、イソシトシン、シュードイソシトシン、５－ブロモウラシル、５－プロピニルウラシル、６－アミノプリン、２－アミノプリン、イノシン、ジアミノプリンおよび２－クロロ－６－アミノプリンシトシン、ならびにこれらの修飾および他の核酸塩基修飾の組合せから選択される１つまたはそれ以上の非標準ヌクレオチド残基を含むことができる。一部の実施形態は、フラノース環または核酸塩基に対する追加の修飾をさらに含むことができる。追加の修飾には、例えば、糖修飾または置換（例えば、２’－Ｏ－アルキル修飾、ロック核酸（ＬＮＡ）の１つまたはそれ以上）が含まれる。一部の実施形態では、ＲＮＡは追加のポリヌクレオチドおよび／またはペプチドポリヌクレオチド（ＰＮＡ）と複合体化またはハイブリダイズされる。糖修飾が２’－Ｏ－アルキル修飾である一部の実施形態では、このような修飾には、それだけに限らないが、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾、２’－Ｏ－メチル修飾、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾および２’－デオキシ修飾が含まれる。一部の実施形態では、これらの修飾のいずれもヌクレオチドの０～１００％－例えば、個別にまたは組み合わせて構成ヌクレオチドの０％、１％、１０％、２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％超または１００％で存在することができる。
【0136】
合成後プロセシング
典型的には、５’キャップおよび／または３’テールを合成後に付加することができる。キャップの存在は、ほとんどの真核細胞に見られるヌクレアーゼに対する耐性を提供するのに重要である。「テール」の存在は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼ分解から保護するのに役立つ。
典型的には、５’キャップおよび／または３’テールを合成後に付加することができる。キャップの存在は、ほとんどの真核細胞に見られるヌクレアーゼに対する耐性を提供するのに重要である。「テール」の存在は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼ分解から保護するのに役立つ。
【0137】
５’キャップは、典型的には、以下のように付加される：第１に、ＲＮＡ末端ホスファターゼが５’ヌクレオチドから末端リン酸基のうちの１つを除去し、２つの末端リン酸を残す；次に、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）がグアニル基転移酵素を介して末端リン酸に付加され、５’５’５三リン酸結合を生成し；次に、グアニンの７－窒素がメチル基転移酵素によってメチル化される。キャップ構造の例としては、限定されないが、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’（Ａ，Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）ＡおよびＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇが挙げられる。追加のキャップ構造は、２０１７年２月２７日出願され、公開された米国特許出願公開第２０１６／００３２３５６号および米国仮特許出願第６２／４６４，３２７号に記載され、参照により本明細書に組み入れられる。
【0138】
典型的には、テール構造は、ポリ（Ａ）および／またはポリ（Ｃ）テールを含む。ｍＲＮＡの３’末端上のポリＡまたはポリＣテールは、典型的には、それぞれ少なくとも５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも１５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも２００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも２５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも３００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも３５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも４００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも４５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも５００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも５５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも６５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも７００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも７５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも８００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも８５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも９００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、少なくとも９５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、または少なくとも１ｋｂのアデノシンもしくはシトシンヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ポリＡまたはポリＣテールは、それぞれ約１０～８００個のアデノシンまたはシトシンヌクレオチド（例えば、約１０～２００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約１０～３００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約１０～４００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約１０～５００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約１０～５５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約１０～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約５０～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約１００～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約１５０～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約２００～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約２５０～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約３００～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約３５０～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約４００～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約４５０～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約５００～６００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約１０～１５０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約１０～１００個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、約２０～７０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド、または約２０～６０個のアデノシンもしくはシトシンヌクレオチド）であることができる。一部の実施形態では、テール構造は、本明細書に記載される様々な長さのポリ（Ａ）テールとポリ（Ｃ）テールの組合せを含む。一部の実施形態では、テール構造は、少なくとも５０％、５５％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアデノシンヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、テール構造は、少なくとも５０％、５５％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のシトシンヌクレオチドを含む。
【0139】
本明細書に記載されるように、キャッピングおよび／またはテーリングがないと、早期中断ｍＲＮＡ転写産物のサイズがあまりに小さすぎて検出することができないために、５’キャップおよび／または３’テールの付加によって、インビトロ合成中に産生される中断転写産物の検出が容易になる。よって、一部の実施形態では、ｍＲＮＡを純度（ｍＲＮＡ中に存在する中断転写産物のレベル）について試験する前に、５’キャップおよび／または３’テールを合成されたｍＲＮＡに付加する。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを本明細書に記載されるように精製する前に、５’キャップおよび／または３’テールを合成されたｍＲＮＡに付加する。他の実施形態では、ｍＲＮＡを本明細書に記載されるように精製した後に、５’キャップおよび／または３’テールを合成されたｍＲＮＡに付加する。
【0140】
本発明に従って合成されたｍＲＮＡは、さらなる精製なしに使用することができる。特に、本発明に従って合成されたｍＲＮＡは、ショートマーを除去する工程なしで使用することができる。一部の実施形態では、本発明に従って合成されたｍＲＮＡをさらに精製することができる。種々の方法を用いて、本発明に従って合成されたｍＲＮＡを精製することができる。例えば、遠心分離、濾過および／またはクロマトグラフィー法を使用して、ｍＲＮＡの精製を実施することができる。一部の実施形態では、合成されたｍＲＮＡは、エタノール沈殿もしくは濾過もしくはクロマトグラフィー、もしくはゲル精製または任意の他の適切な手段によって精製される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡはＨＰＬＣによって精製される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、当業者に周知の、標準フェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール溶液中で抽出される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡはタンジェンシャルフローフィルトレーションを使用して精製される。適切な精製方法には、２０１８年２月２７日に出願された「ＭＥＴＨＯＤＳ ＦＯＲ ＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＭＥＳＳＥＮＧＥＲ ＲＮＡ」と題する米国特許出願第２０１６／００４０１５４号、米国特許出願第２０１５／０３７６２２０号、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１８／１９９５４号、および２０１８年２月２７日に出願された「ＭＥＴＨＯＤＳ ＦＯＲ ＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＭＥＳＳＥＮＧＥＲ ＲＮＡ」と題するＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１８／１９９７８号に記載されるものが含まれ、これらは全て参照により本明細書に組み入れられ、本発明を実施するために使用することができる。
【0141】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、キャッピングおよびテーリング前に精製される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、キャッピングおよびテーリング後に精製される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、キャッピングおよびテーリングの前と後の両方で精製される。
【0142】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、遠心分離によってキャッピングおよびテーリングの前もしくは後のいずれかまたは前と後の両方で精製される。
【0143】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、濾過によってキャッピングおよびテーリングの前もしくは後のいずれかまたは前と後の両方で精製される。
【0144】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、タンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）によってキャッピングおよびテーリングの前もしくは後のいずれかまたは前と後の両方で精製される。
【0145】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、クロマトグラフィーによってキャッピングおよびテーリングの前もしくは後のいずれかまたは前と後の両方で精製される。
【0146】
ｍＲＮＡの特徴付け
ｍＲＮＡの完全長または中断転写産物は、当技術分野において利用可能な任意の方法を用いて検出および定量することができる。一部の実施形態では、合成されたｍＲＮＡ分子は、ブロット法、キャピラリー電気泳動、クロマトグラフィー、蛍光、ゲル電気泳動、ＨＰＬＣ、銀染色、分光法、紫外線（ＵＶ）、もしくはＵＰＬＣ、またはそれらの組合せを用いて検出される。当技術分野において公知である他の検出方法が、本発明に含まれる。一部の実施形態では、合成されたｍＲＮＡ分子は、キャピラリー電気泳動による分離を伴うＵＶ吸収分光法を用いて検出される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを、ゲル電気泳動（「グリオキサールゲル電気泳動」）の前にまずグリオキサール色素によって変性させる。一部の実施形態では、合成されたｍＲＮＡをキャッピングまたはテーリング前に特性評価する。一部の実施形態では、合成されたｍＲＮＡをキャッピングおよびテーリング後に特性評価する。
ｍＲＮＡの完全長または中断転写産物は、当技術分野において利用可能な任意の方法を用いて検出および定量することができる。一部の実施形態では、合成されたｍＲＮＡ分子は、ブロット法、キャピラリー電気泳動、クロマトグラフィー、蛍光、ゲル電気泳動、ＨＰＬＣ、銀染色、分光法、紫外線（ＵＶ）、もしくはＵＰＬＣ、またはそれらの組合せを用いて検出される。当技術分野において公知である他の検出方法が、本発明に含まれる。一部の実施形態では、合成されたｍＲＮＡ分子は、キャピラリー電気泳動による分離を伴うＵＶ吸収分光法を用いて検出される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを、ゲル電気泳動（「グリオキサールゲル電気泳動」）の前にまずグリオキサール色素によって変性させる。一部の実施形態では、合成されたｍＲＮＡをキャッピングまたはテーリング前に特性評価する。一部の実施形態では、合成されたｍＲＮＡをキャッピングおよびテーリング後に特性評価する。
【0147】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法によって生成されたｍＲＮＡは、完全長ｍＲＮＡ以外の不純物を１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、０．１％未満で含む。不純物には、ＩＶＴ汚染物質、例えば、タンパク質、酵素、遊離ヌクレオチドおよび／またはショートマーが含まれる。
【0148】
一部の実施形態では、本発明に従って生成されたｍＲＮＡは、ショートマーおよび中断転写産物を実質的に含まない。特に、本発明に従って生成されたｍＲＮＡは、キャピラリー電気泳動またはグリオキサールゲル電気泳動により検出不能なレベルのショートマーまたは中断転写産物を含有する。本明細書で使用される場合、「ショートマー」または「中断転写産物」という用語は、完全長未満である任意の転写産物を指す。一部の実施形態では、「ショートマー」または「中断転写産物」は、長さが１００ヌクレオチド未満、９０未満、８０未満、７０未満、６０未満、５０未満、４０未満、３０未満、２０未満、または１０未満のヌクレオチドである。一部の実施形態では、ショートマーは、５’－キャップおよび／または３’－ポリＡテールを付加した後に検出または定量される。
【0149】
ｍＲＮＡ溶液
一部の実施形態では、ｍＲＮＡを脂質ナノ粒子に封入することができるように、ｍＲＮＡは脂質溶液と混合する溶液中に提供することができる。適切なｍＲＮＡ溶液は、種々の濃度で封入されるｍＲＮＡを含有する任意の水溶液であり得る。例えば、適切なｍＲＮＡ溶液は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．０６ｍｇ／ｍｌ、０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．１５ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、または１．０ｍｇ／ｍｌの濃度またはそれよりも大きい濃度でｍＲＮＡを含有し得る。一部の実施形態では、適切なｍＲＮＡ溶液は、約０．０１～１．０ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．９ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．８ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．７ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．６ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．５ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．４ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．３ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．２ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．１ｍｇ／ｍｌ、０．０５～１．０ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．９ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．８ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．７ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．６ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．５ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．４ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．３ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．２ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．１ｍｇ／ｍｌ、０．１～１．０ｍｇ／ｍｌ、０．２～０．９ｍｇ／ｍｌ、０．３～０．８ｍｇ／ｍｌ、０．４～０．７ｍｇ／ｍｌ、または０．５～０．６ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度でｍＲＮＡを含有し得る。一部の実施形態では、適切なｍＲＮＡ溶液は、最大約５．０ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、３．０ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０６ｍｇ／ｍｌ、または０．０５ｍｇ／ｍｌの濃度でｍＲＮＡを含有し得る。
一部の実施形態では、ｍＲＮＡを脂質ナノ粒子に封入することができるように、ｍＲＮＡは脂質溶液と混合する溶液中に提供することができる。適切なｍＲＮＡ溶液は、種々の濃度で封入されるｍＲＮＡを含有する任意の水溶液であり得る。例えば、適切なｍＲＮＡ溶液は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．０６ｍｇ／ｍｌ、０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．１５ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、または１．０ｍｇ／ｍｌの濃度またはそれよりも大きい濃度でｍＲＮＡを含有し得る。一部の実施形態では、適切なｍＲＮＡ溶液は、約０．０１～１．０ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．９ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．８ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．７ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．６ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．５ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．４ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．３ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．２ｍｇ／ｍｌ、０．０１～０．１ｍｇ／ｍｌ、０．０５～１．０ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．９ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．８ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．７ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．６ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．５ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．４ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．３ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．２ｍｇ／ｍｌ、０．０５～０．１ｍｇ／ｍｌ、０．１～１．０ｍｇ／ｍｌ、０．２～０．９ｍｇ／ｍｌ、０．３～０．８ｍｇ／ｍｌ、０．４～０．７ｍｇ／ｍｌ、または０．５～０．６ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度でｍＲＮＡを含有し得る。一部の実施形態では、適切なｍＲＮＡ溶液は、最大約５．０ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、３．０ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０６ｍｇ／ｍｌ、または０．０５ｍｇ／ｍｌの濃度でｍＲＮＡを含有し得る。
【0150】
典型的には、適切なｍＲＮＡ溶液は、緩衝剤および／または塩を含有することもできる。一般的に、緩衝剤は、ＨＥＰＥＳ、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウムおよびリン酸ナトリウムを含むことができる。一部の実施形態では、緩衝剤の適切な濃度は、約０．１ｍＭ～１００ｍＭ、０．５ｍＭ～９０ｍＭ、１．０ｍＭ～８０ｍＭ、２ｍＭ～７０ｍＭ、３ｍＭ～６０ｍＭ、４ｍＭ～５０ｍＭ、５ｍＭ～４０ｍＭ、６ｍＭ～３０ｍＭ、７ｍＭ～２０ｍＭ、８ｍＭ～１５ｍＭ、または９～１２ｍＭの範囲であることができる。一部の実施形態では、緩衝剤の適切な濃度は、約０．１ｍＭ、０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、４ｍＭ、６ｍＭ、８ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、もしくは５０ｍＭであるかまたはそれより大きい。
【0151】
例示的な塩には、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、および塩化カリウムが含まれる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ溶液中の塩の適切な濃度は、約１ｍＭ～５００ｍＭ、５ｍＭ～４００ｍＭ、１０ｍＭ～３５０ｍＭ、１５ｍＭ～３００ｍＭ、２０ｍＭ～２５０ｍＭ、３０ｍＭ～２００ｍＭ、４０ｍＭ～１９０ｍＭ、５０ｍＭ～１８０ｍＭ、５０ｍＭ～１７０ｍＭ、５０ｍＭ～１６０ｍＭ、５０ｍＭ～１５０ｍＭ、または５０ｍＭ～１００ｍＭの範囲であることができる。適切なｍＲＮＡ溶液中の塩濃度は、約１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、もしくは１００ｍＭである、またはそれを超える。
【0152】
一部の実施形態では、適切なｍＲＮＡ溶液は、約３．５～６．５、３．５～６．０、３．５～５．５、３．５～５．０、３．５～４．５、４．０～５．５、４．０～５．０、４．０～４．９、４．０～４．８、４．０～４．７、４．０～４．６、または４．０～４．５の範囲のｐＨを有することができる。一部の実施形態では、適切なｍＲＮＡ溶液は、約３．５、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．１、６．３、および６．５のｐＨまたはそれ以下を有することができる。
【0153】
様々な方法を使用して本発明に適したｍＲＮＡ溶液を製造することができる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを本明細書に記載される緩衝液に直接溶解することができる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ溶液は、ｍＲＮＡストック溶液を封入用の脂質溶液と混合する前に緩衝液と混合することによって作製することができる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ溶液は、ｍＲＮＡストック溶液を封入用の脂質溶液と混合する直前に緩衝液と混合することによって作製することができる。一部の実施形態では、適切なｍＲＮＡストック溶液は、約０．２ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１．２ｍｇ／ｍｌ、１．４ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、もしくは１．６ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ、３．０ｍｇ／ｍｌ、３．５ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、４．５ｍｇ／ｍｌ、もしくは５．０ｍｇ／ｍｌまたはそれを超える濃度で水中にｍＲＮＡを含有することができる。
【0154】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡストック溶液はポンプを使用して緩衝液と混合される。例示的なポンプには、それだけに限らないが、ギアポンプ、蠕動ポンプおよび遠心ポンプが含まれる。
【0155】
典型的には、緩衝液は、ｍＲＮＡストック溶液の流量を超える流量で混合される。例えば、緩衝液は、ｍＲＮＡストック溶液の流量より少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、または２０倍大きい流量で混合される。一部の実施形態では、緩衝液は、約１００～６０００ｍｌ／分（例えば、約１００～３００ｍｌ／分、３００～６００ｍｌ／分、６００～１２００ｍｌ／分、１２００～２４００ｍｌ／分、２４００～３６００ｍｌ／分、３６００～４８００ｍｌ／分、４８００～６０００ｍｌ／分、または６０～４２０ｍｌ／分）の間の範囲の流量で混合される。一部の実施形態では、緩衝液は、約６０ｍｌ／分、１００ｍｌ／分、１４０ｍｌ／分、１８０ｍｌ／分、２２０ｍｌ／分、２６０ｍｌ／分、３００ｍｌ／分、３４０ｍｌ／分、３８０ｍｌ／分、４２０ｍｌ／分、４８０ｍｌ／分、５４０ｍｌ／分、６００ｍｌ／分、１２００ｍｌ／分、２４００ｍｌ／分、３６００ｍｌ／分、４８００ｍｌ／分、もしくは６０００ｍｌ／分またはそれを超える流量で混合される。
【0156】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡストック溶液は、約１０～６００ｍｌ／分（例えば、約５～５０ｍｌ／分、約１０～３０ｍｌ／分、約３０～６０ｍｌ／分、約６０～１２０ｍｌ／分、約１２０～２４０ｍｌ／分、約２４０～３６０ｍｌ／分、約３６０～４８０ｍｌ／分、または約４８０～６００ｍｌ／分）の間の範囲の流量で混合される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡストック溶液は、約５ｍｌ／分、１０ｍｌ／分、１５ｍｌ／分、２０ｍｌ／分、２５ｍｌ／分、３０ｍｌ／分、３５ｍｌ／分、４０ｍｌ／分、４５ｍｌ／分、５０ｍｌ／分、６０ｍｌ／分、８０ｍｌ／分、１００ｍｌ／分、２００ｍｌ／分、３００ｍｌ／分、４００ｍｌ／分、５００ｍｌ／分、もしくは６００ｍｌ／分またはそれを超える流量で混合される。
【0157】
送達ビヒクル
本明細書に記載される安定な脂質ナノ粒子製剤は、ｍＲＮＡの送達ベヒクルとして適している。
本明細書に記載される安定な脂質ナノ粒子製剤は、ｍＲＮＡの送達ベヒクルとして適している。
【0158】
本明細書で使用される場合、「送達ビヒクル」、「導入ビヒクル」、「ナノ粒子」という用語または文法上同等物は互換的に使用される。
【0159】
送達ビヒクルは、１つもしくはそれ以上の追加の核酸、担体、標的化リガンドもしくは安定化試薬と組み合わせて、または適切な賦形剤と混合される薬理学的組成物に製剤化される。薬物を製剤化および投与するための技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、ペンシルバニア州イーストン、最新版に見られる。特定の送達ビヒクルは、標的細胞への核酸のトランスフェクションを容易にする能力に基づいて選択される。
【0160】
リポソーム送達ビヒクル
一部の実施形態では、適切な送達ビヒクルはリポソーム送達ビヒクル、例えば脂質ナノ粒子である。本明細書で使用される場合、リポソーム送達ビヒクル、例えば脂質ナノ粒子は、通常、１つまたはそれ以上の二重層の膜によって外側媒体から隔離された内部水空間を有する顕微鏡的小胞として特徴付けられる。リポソームの二重層膜は、典型的には空間的に分離された親水性ドメインおよび疎水性ドメインを含む合成または天然起源の脂質などの両親媒性分子によって形成される（Ｌａｓｉｃ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１６：３０７～３２１、１９９８）。リポソームの二重層膜はまた、両親媒性ポリマーおよび界面活性剤によっても形成される（例えば、ポリマーソーム、ニオソーム等）。本発明の文脈において、リポソーム送達ビヒクルは、典型的には所望のｍＲＮＡを標的細胞または組織に輸送するのに役立つ。一部の実施形態では、ナノ粒子送達ビヒクルはリポソームである。一部の実施形態では、リポソームは、１つまたはそれ以上のカチオン性脂質、１つまたはそれ以上の非カチオン性脂質、１つまたはそれ以上のコレステロール系脂質、および１つまたはそれ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の実施形態では、リポソームは３つ以下の別個の脂質成分を含む。一部の実施形態では、１つの別個の脂質成分はステロール系カチオン性脂質である。
一部の実施形態では、適切な送達ビヒクルはリポソーム送達ビヒクル、例えば脂質ナノ粒子である。本明細書で使用される場合、リポソーム送達ビヒクル、例えば脂質ナノ粒子は、通常、１つまたはそれ以上の二重層の膜によって外側媒体から隔離された内部水空間を有する顕微鏡的小胞として特徴付けられる。リポソームの二重層膜は、典型的には空間的に分離された親水性ドメインおよび疎水性ドメインを含む合成または天然起源の脂質などの両親媒性分子によって形成される（Ｌａｓｉｃ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１６：３０７～３２１、１９９８）。リポソームの二重層膜はまた、両親媒性ポリマーおよび界面活性剤によっても形成される（例えば、ポリマーソーム、ニオソーム等）。本発明の文脈において、リポソーム送達ビヒクルは、典型的には所望のｍＲＮＡを標的細胞または組織に輸送するのに役立つ。一部の実施形態では、ナノ粒子送達ビヒクルはリポソームである。一部の実施形態では、リポソームは、１つまたはそれ以上のカチオン性脂質、１つまたはそれ以上の非カチオン性脂質、１つまたはそれ以上のコレステロール系脂質、および１つまたはそれ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の実施形態では、リポソームは３つ以下の別個の脂質成分を含む。一部の実施形態では、１つの別個の脂質成分はステロール系カチオン性脂質である。
【0161】
カチオン性脂質
本明細書で使用される場合、「カチオン性脂質」という句は、生理学的ｐＨなどの選択されたｐＨで正味の正の電荷を有するいくつかの脂質種のいずれかを指す。
本明細書で使用される場合、「カチオン性脂質」という句は、生理学的ｐＨなどの選択されたｐＨで正味の正の電荷を有するいくつかの脂質種のいずれかを指す。
【0162】
本発明の組成物および方法に使用するのに適したカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１０／１４４７４０号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、カチオン性脂質、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート、およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化1】
【0163】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１３／１４９１４０号に記載されるイオン化可能なカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、以下の式：
の１つのカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩（式中、Ｒ１およびＲ２は、水素、場合により置換された、可変的に飽和または不飽和のＣ１～Ｃ２０アルキルおよび場合により置換された、可変的に飽和または不飽和のＣ６～Ｃ２０アシルからなる群からそれぞれ独立に選択され；Ｌ１およびＬ２は、水素、場合により置換されたＣ１～Ｃ３０アルキル、場合により置換された、可変的に不飽和のＣ１～Ｃ３０アルケニル、および場合により置換されたＣ１～Ｃ３０アルキニルからなる群からそれぞれ独立に選択され；ｍおよびｏは０および任意の正の整数からなる群からそれぞれ独立に選択され（例えば、ｍは３である）；ｎは０または任意の正の整数である（例えば、ｎは１である））を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、カチオン性脂質（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－６－（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）テトラコサ－１５，１８－ジエン－１－アミン（「ＨＧＴ５０００」）およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、カチオン性脂質（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－６－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）テトラコサ－４，１５，１８－トリエン－１－アミン（「ＨＧＴ５００１」）およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、カチオン性脂質および（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－６－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）テトラコサ－５，１５，１８－トリエン－１－アミン（「ＨＧＴ５００２」）およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【0164】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１０／０５３５７２号にアミノアルコールリピドイドとして記載されるカチオン性脂質が含まれる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化6】
【0165】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１６／１１８７２５号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化7】
【0166】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１６／１１８７２４号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化8】
【0167】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、１４，２５－ジトリデシル１５，１８，２１，２４－テトラアザ－オクタトリアコンタンの式を有するカチオン性脂質、およびその薬学的に許容される塩が含まれる。
【0168】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、その各々を参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１３／０６３４６８号および国際公開第２０１６／２０５６９１号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、以下の式：
のカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩（式中、ＲＬの各例は独立に、場合により置換されたＣ６～Ｃ４０アルケニルである）を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
【化13】
【0169】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１５／１８４２５６号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、以下の式：
のカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩（式中、各Ｘは独立に、ＯまたはＳであり；各Ｙは独立に、ＯまたはＳであり；各ｍは独立に、０～２０であり；各ｎは独立に、１～６であり；各ＲＡは独立に、水素、場合により置換されたＣ１～５０アルキル、場合により置換されたＣ２～５０アルケニル、場合により置換されたＣ２～５０アルキニル、場合により置換されたＣ３～１０カルボシクリル、場合により置換された３～１４員ヘテロシクリル、場合により置換されたＣ６～１４アリール、場合により置換された５～１４員ヘテロアリールまたはハロゲンであり；各ＲＢは独立に、水素、場合により置換されたＣ１～５０アルキル、場合により置換されたＣ２～５０アルケニル、場合により置換されたＣ２～５０アルキニル、場合により置換されたＣ３～１０カルボシクリル、場合により置換された３～１４員ヘテロシクリル、場合により置換されたＣ６～１４アリール、場合により置換された５～１４員ヘテロアリールまたはハロゲンである）を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、カチオン性脂質、「標的２３」およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化14】
【化15】
【0170】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１６／００４２０２号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩を含む。
【化16】
【化17】
【化18】
【0171】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、米国仮特許出願第６２／７５８，１７９号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、以下の式：
のカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩（式中、各Ｒ１およびＲ２は独立に、ＨまたはＣ１～Ｃ６脂肪族であり；各ｍは独立に、１～４の値を有する整数であり；各Ａは独立に、共有結合またはアリーレンであり；各Ｌ１は独立に、エステル、チオエステル、ジスルフィド、または無水物基であり；各Ｌ２は独立に、Ｃ２～Ｃ１０脂肪族であり；各Ｘ１は独立に、ＨまたはＯＨであり；各Ｒ３は独立に、Ｃ６～Ｃ２０脂肪族である）を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、以下の式：
のカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、以下の式：
のカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、以下の式：
のカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩を含む。
【化19】
【化20】
【化21】
【化22】
【0172】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、Ｊ．ＭｃＣｌｅｌｌａｎ、Ｍ．Ｃ．Ｋｉｎｇ、Ｃｅｌｌ ２０１０、１４１、２１０～２１７およびＷｈｉｔｅｈｅａｄら、Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（２０１４）５：４２７７に記載されるカチオン性脂質が含まれる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法のカチオン性脂質は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化23】
【0173】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１５／１９９９５２号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化24】
【化25】
【化26】
【化27】
【化28】
【化29】
【化30】
【化31】
【化32】
【化33】
【化34】
【化35】
【化36】
【0174】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１７／００４１４３号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化37】
【化38】
【化39】
【化40】
【化41】
【化42】
【化43】
【化44】
【化45】
【化46】
【化47】
【化48】
【化49】
【化50】
【化51】
【化52】
【化53】
【0175】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１７／０７５５３１号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、以下の式：
のカチオン性脂質またはその薬学的に許容される塩（式中、Ｌ１またはＬ２の一方は－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ－、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、または－ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ－であり；Ｌ１またはＬ２の他方は－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ－、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－または－ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ－または直接結合であり；Ｇ１およびＧ２はそれぞれ独立に、非置換Ｃ１～Ｃ１２アルキレンまたはＣ１～Ｃ１２アルケニレンであり；Ｇ３はＣ１～Ｃ２４アルキレン、Ｃ１～Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ３～Ｃ８シクロアルケニレンであり；ＲａはＨまたはＣ１～Ｃ１２アルキルであり；Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｃ６～Ｃ２４アルキルまたはＣ６～Ｃ２４アルケニルであり；Ｒ３はＨ、ＯＲ５、ＣＮ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４または－ＮＲ５Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４であり；Ｒ４はＣ１～Ｃ１２アルキルであり；Ｒ５はＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり；ｘは０、１または２である）を含む。
【化54】
【0176】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１７／１１７５２８号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、化合物構造：
を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化55】
【化56】
【化57】
【0177】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１７／０４９２４５号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法のカチオン性脂質は、以下の式：
の１つの化合物およびその薬学的に許容される塩を含む。これらの４つの式のいずれか１つについて、Ｒ４は－（ＣＨ２）ｎＱおよび－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから独立に選択され；Ｑは－ＯＲ、－ＯＨ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、および複素環からなる群から選択され；ｎは１、２、または３である。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化58】
【化59】
【化60】
【化61】
【化62】
【0178】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、その各々を参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１７／１７３０５４号および国際公開第２０１５／０９５３４０号に記載されるカチオン性脂質が含まれる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化63】
【化64】
【化65】
【化66】
【0179】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１２／１７０８８９号に記載される切断可能なカチオン性脂質が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、以下の式：
のカチオン性脂質
（式中、Ｒ１はイミダゾール、グアニジニウム、アミノ、イミン、エナミン、場合により置換されたアルキルアミノ（例えば、ジメチルアミノなどのアルキルアミノ）およびピリジルからなる群から選択され；Ｒ２は以下の２つの式：
の１つからなる群から選択され、Ｒ３およびＲ４は、場合により置換された、可変的に飽和または不飽和のＣ６～Ｃ２０アルキルおよび場合により置換された、可変的に飽和または不飽和のＣ６～Ｃ２０アシルからなる群からそれぞれ独立に選択され；ｎは０または任意の正の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上）である）を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、カチオン性脂質、「ＨＧＴ４００１」およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有するカチオン性脂質「ＨＧＴ４００２」（本明細書では「Ｇｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌ」とも称する）およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、カチオン性脂質、「ＨＧＴ４００３」およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、カチオン性脂質、「ＨＧＴ４００４」およびその薬学的に許容される塩を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、カチオン性脂質「ＨＧＴ４００５」およびその薬学的に許容される塩を含む。
【化67】
（式中、Ｒ１はイミダゾール、グアニジニウム、アミノ、イミン、エナミン、場合により置換されたアルキルアミノ（例えば、ジメチルアミノなどのアルキルアミノ）およびピリジルからなる群から選択され；Ｒ２は以下の２つの式：
【化68】
【化69】
【化70】
【化71】
【化72】
【化73】
【0180】
本発明の組成物および方法に使用するのに適した他のカチオン性脂質には、２０１８年５月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／６７２，１９４号に記載され、参照によって本明細書に組み入れる、切断可能なカチオン性脂質が含まれる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、米国仮特許出願第６２／６７２，１９４号に記載される一般式のいずれかまたは構造（１ａ）～（２１ａ）および（１ｂ）～（２１ｂ）および（２２）～（２３７）のいずれかであるカチオン性脂質を含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、式（Ｉ’）による構造を有するカチオン性脂質
（式中、
ＲＸは独立に、－Ｈ、－Ｌ１－Ｒ１、または－Ｌ５Ａ－Ｌ５Ｂ－Ｂ’であり；
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３の各々は独立に、共有結合、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＲＬ－であり；
各Ｌ４ＡおよびＬ５Ａは独立に、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＲＬ－であり；
各Ｌ４ＢおよびＬ５Ｂは独立に、Ｃ１～Ｃ２０アルキレン；Ｃ２～Ｃ２０アルケニレン；またはＣ２～Ｃ２０アルキニレンであり；
各ＢおよびＢ’はＮＲ４Ｒ５または５～１０員窒素含有ヘテロアリールであり；
各Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は独立に、Ｃ６～Ｃ３０アルキル、Ｃ６～Ｃ３０アルケニル、またはＣ６～Ｃ３０アルキニルであり；
各Ｒ４およびＲ５は独立に、水素、Ｃ１～Ｃ１０アルキル；Ｃ２～Ｃ１０アルケニル；またはＣ２～Ｃ１０アルキニルであり；
各ＲＬは独立に、水素、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、またはＣ２～Ｃ２０アルキニルである）
を含む。
【化74】
ＲＸは独立に、－Ｈ、－Ｌ１－Ｒ１、または－Ｌ５Ａ－Ｌ５Ｂ－Ｂ’であり；
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３の各々は独立に、共有結合、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＲＬ－であり；
各Ｌ４ＡおよびＬ５Ａは独立に、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＲＬ－であり；
各Ｌ４ＢおよびＬ５Ｂは独立に、Ｃ１～Ｃ２０アルキレン；Ｃ２～Ｃ２０アルケニレン；またはＣ２～Ｃ２０アルキニレンであり；
各ＢおよびＢ’はＮＲ４Ｒ５または５～１０員窒素含有ヘテロアリールであり；
各Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は独立に、Ｃ６～Ｃ３０アルキル、Ｃ６～Ｃ３０アルケニル、またはＣ６～Ｃ３０アルキニルであり；
各Ｒ４およびＲ５は独立に、水素、Ｃ１～Ｃ１０アルキル；Ｃ２～Ｃ１０アルケニル；またはＣ２～Ｃ１０アルキニルであり；
各ＲＬは独立に、水素、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、またはＣ２～Ｃ２０アルキニルである）
を含む。
【0181】
ある特定の実施形態では、本発明の組成物および方法は、
の化合物構造を有する、６２／６７２，１９４の化合物（１３９）であるカチオン性脂質を含む。
【化75】
【0182】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法は、カチオン性脂質、Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（「ＤＯＴＭＡ」）を含む（参照によって本明細書に組み入れる、Ｆｅｉｇｎｅｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４、７４１３（１９８７）；米国特許第４，８９７，３５５号）。本発明の組成物および方法に適した他のカチオン性脂質には、例えば、５－カルボキシスペルミルグリシンジオクタデシルアミド（「ＤＯＧＳ」）；２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２－（スペルミン－カルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウム（「ＤＯＳＰＡ」）（Ｂｅｈｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６、６９８２（１９８９）、米国特許第５，１７１，６７８号；米国特許第５，３３４，７６１号）；１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（「ＤＯＤＡＰ」）；１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（「ＤＯＴＡＰ」）が含まれる。
【0183】
本発明の組成物および方法に適した追加の例示的なカチオン性脂質には、１，２－ジステアリルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（「ＤＳＤＭＡ」）；１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（「ＤＯＤＭＡ」）；１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（「ＤＬｉｎＤＭＡ」）；１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（「ＤＬｅｎＤＭＡ」）；Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（「ＤＯＤＡＣ」）；Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（「ＤＤＡＢ」）；Ｎ－（１，２－ジミリスチルオキシプロパ－３－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（「ＤＭＲＩＥ」）；３－ジメチルアミノ－２－（コレスタ－５－エン－３－ベータ－オキシブタン－４－オキシ）－１－（シス，シス－９，１２－オクタデカジエノキシ）プロパン（「ＣＬｉｎＤＭＡ」）；２－［５’－（コレスタ－５－エン－３－ベータ－オキシ）－３’－オキサペントキシ）－３－ジメチル－１－（シス，シス－９’，１－２’－オクタデカジエノキシ）プロパン（「ＣｐＬｉｎＤＭＡ」）；Ｎ，Ｎ－ジメチル－３，４－ジオレイルオキシベンジルアミン（「ＤＭＯＢＡ」）；１，２－Ｎ，Ｎ’－ジオレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（「ＤＯｃａｒｂＤＡＰ」）；２，３－ジリノレオイルオキシ－Ν，Ν－ジメチルプロピルアミン（「ＤＬｉｎＤＡＰ」）；１，２－Ｎ，Ｎ’－ジリノレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（「ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ」）；１，２－ジリノレオイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（「ＤＬｉｎＣＤＡＰ」）；２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（「ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ」）；２－（（８－［（３Ｐ）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル）オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（「オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ」）；（２Ｒ）－２－（（８－［（３ベータ）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル）オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（「オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ）」）；（２Ｓ）－２－（（８－［（３Ｐ）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル）オキシ）－Ｎ，ｆｓｌ－ｄｉｍｅｔｈｙｈ３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（「オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ）」）；２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（「ＤＬｉｎ－Ｋ－ＸＴＣ２－ＤＭＡ」）；および２－（２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）－１，３－ジオキソラン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルエタンアミン（「ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ」）（参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２０１０／０４２８７７号；Ｓｅｍｐｌｅら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２８：１７２～１７６（２０１０）参照）が含まれる（Ｈｅｙｅｓ，Ｊ．ら、Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １０７：２７６～２８７（２００５）；Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，ＤＶ．ら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（８）：１００３～１００７（２００５）；国際公開第２００５／１２１３４８号）。一部の実施形態では、カチオン性脂質の１つまたはそれ以上は、イミダゾール、ジアルキルアミノ、またはグアニジニウム部分の少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、本発明の組成物および方法に適した１つまたはそれ以上のカチオン性脂質には、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（「ＸＴＣ」）；（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニル）テトラヒドロ－３ａＨ－シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－アミン（「ＡＬＮＹ－１００」）および／または４，７，１３－トリス（３－オキソ－３－（ウンデシルアミノ）プロピル）－Ｎ１，Ｎ１６－ジウンデシル－４，７，１０，１３－テトラアザヘキサデカン－１，１６－ジアミド（「ＮＣ９８－５」）が含まれる。
【0184】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法に適した１種またはそれ以上のカチオン性脂質は、
の化合物構造を有するＴＬ１－０４Ｄ－ＤＭＡであるカチオン性脂質を含む。
【化76】
【0185】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法に適した１種またはそれ以上のカチオン性脂質は、
の化合物構造を有するＧＬ－ＴＥＳ－ＳＡ－ＤＭＥ－Ｅ１８－２であるカチオン性脂質を含む。
【化77】
【0186】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法に適した１種またはそれ以上のカチオン性脂質は、
の化合物構造を有するＳＹ－３－Ｅ１４－ＤＭＡＰｒであるカチオン性脂質を含む。
【化78】
【0187】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法に適した１つまたはそれ以上のカチオン性脂質は、
の化合物構造を有するＴＬ１－０１Ｄ－ＤＭＡであるカチオン性脂質を含む。
【化79】
【0188】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法に適した１つまたはそれ以上のカチオン性脂質は、
の化合物構造を有するＴＬ１－１０Ｄ－ＤＭＡであるカチオン性脂質を含む。
【化80】
【0189】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法に適した１つまたはそれ以上のカチオン性脂質は、
の化合物構造を有するＧＬ－ＴＥＳ－ＳＡ－ＤＭＰ－Ｅ１８－２であるカチオン性脂質を含む。
【化81】
【0190】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法に適した１つまたはそれ以上のカチオン性脂質は、
の化合物構造を有するＨＥＰ－Ｅ４－Ｅ１０であるカチオン性脂質を含む。
【化82】
【0191】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法に適した１つまたはそれ以上のカチオン性脂質は、
の化合物構造を有するＨＥＰ－Ｅ３－Ｅ１０であるカチオン性脂質を含む。
【化83】
【0192】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、組成物、例えば脂質ナノ粒子中の総脂質含有量の、重量によって測定される、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％を構成する１つまたはそれ以上のカチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物は、組成物、例えば脂質ナノ粒子中の総脂質含有量の、ｍｏｌ％として測定される、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％を構成する１つまたはそれ以上のカチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物は、組成物、例えば脂質ナノ粒子中の総脂質含有量の、重量によって測定される、約３０～７０％（例えば、約３０～６５％、約３０～６０％、約３０～５５％、約３０～５０％、約３０～４５％、約３０～４０％、約３５～５０％、約３５～４５％、または約３５～４０％）を構成する１つまたはそれ以上のカチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物は、組成物、例えば脂質ナノ粒子中の総脂質含有量の、ｍｏｌ％として測定される、約３０～７０％（例えば、約３０～６５％、約３０～６０％、約３０～５５％、約３０～５０％、約３０～４５％、約３０～４０％、約３５～５０％、約３５～４５％、または約３５～４０％）を構成する１つまたはそれ以上のカチオン性脂質を含む。
【0193】
非カチオン性／ヘルパー脂質
一部の実施形態では、提供されるリポソームは１つまたはそれ以上の非カチオン性（「ヘルパー」）脂質を含有する。本明細書で使用される場合、「非カチオン性脂質」という句は、任意の中性、双性イオン性またはアニオン性脂質を指す。本明細書で使用される場合、「アニオン性脂質」という句は、生理学的ｐＨなどの選択されたＨで正味の負の電荷を有するいくつかの脂質種のいずれかを指す。非カチオン性脂質には、それだけに限らないが、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－ｌ－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ホスファチジルセリン、スフィンゴ脂質、セレブロシド、ガングリオシド、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、ｌ－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、またはこれらの混合物が含まれる。
一部の実施形態では、提供されるリポソームは１つまたはそれ以上の非カチオン性（「ヘルパー」）脂質を含有する。本明細書で使用される場合、「非カチオン性脂質」という句は、任意の中性、双性イオン性またはアニオン性脂質を指す。本明細書で使用される場合、「アニオン性脂質」という句は、生理学的ｐＨなどの選択されたＨで正味の負の電荷を有するいくつかの脂質種のいずれかを指す。非カチオン性脂質には、それだけに限らないが、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－ｌ－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ホスファチジルセリン、スフィンゴ脂質、セレブロシド、ガングリオシド、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、ｌ－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、またはこれらの混合物が含まれる。
【0194】
一部の実施形態では、このような非カチオン性脂質は単独で使用されるが、好ましくは他の脂質、例えばカチオン性脂質と組み合わせて使用される。一部の実施形態では、非カチオン性脂質は、リポソーム中に存在する総脂質の約５％～約９０％、または約１０％～約７０％のモル比を含み得る。一部の実施形態では、非カチオン性脂質は中性脂質、すなわち、組成物が製剤化および／または投与される条件で正味の電荷を有さない脂質である。一部の実施形態では、リポソーム中の非カチオン性脂質のパーセンテージは、５％超、１０％超、２０％超、３０％超、または４０％超であることができる。
【0195】
コレステロール系脂質
一部の実施形態では、提供されるリポソームは、１つまたはそれ以上のコレステロール系脂質を含む。例えば、適切なコレステロール系カチオン性脂質は、例えば、ＤＣ－Ｃｈｏｉ（Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－エチルカルボキサミドコレステロール）、１，４－ビス（３－Ｎ－オレイルアミノ－プロピル）ピペラジン（Ｇａｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７９、２８０頁（１９９１）；Ｗｏｌｆら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２３巻、１３９頁（１９９７）；米国特許第５，７４４，３３５号）、またはＩＣＥを含む。一部の実施形態では、コレステロール系脂質は、リポソーム中に存在する総脂質の約２％～約３０％、または約５％～約２０％のモル比を含み得る。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中のコレステロール系脂質のパーセンテージは、５％超、１０％超、２０％超、３０％超、または４０％超であることができる。
一部の実施形態では、提供されるリポソームは、１つまたはそれ以上のコレステロール系脂質を含む。例えば、適切なコレステロール系カチオン性脂質は、例えば、ＤＣ－Ｃｈｏｉ（Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－エチルカルボキサミドコレステロール）、１，４－ビス（３－Ｎ－オレイルアミノ－プロピル）ピペラジン（Ｇａｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７９、２８０頁（１９９１）；Ｗｏｌｆら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２３巻、１３９頁（１９９７）；米国特許第５，７４４，３３５号）、またはＩＣＥを含む。一部の実施形態では、コレステロール系脂質は、リポソーム中に存在する総脂質の約２％～約３０％、または約５％～約２０％のモル比を含み得る。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中のコレステロール系脂質のパーセンテージは、５％超、１０％超、２０％超、３０％超、または４０％超であることができる。
【0196】
ＰＥＧ修飾脂質
例えば、Ｎ－オクタノイル－スフィンゴシン－１－［スクシニル（メトキシポリエチレングリコール）－２０００］（Ｃ８ ＰＥＧ－２０００セラミド）を含む、誘導体化セラミド（ＰＥＧ－ＣＥＲ）などの、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾リン脂質および誘導体化脂質の使用も、単独でまたは好ましくは導入ビヒクルを含む他の脂質製剤と組み合わせて（例えば、脂質ナノ粒子）、本発明によって企図される。企図されるＰＥＧ修飾脂質には、それだけに限らないが、Ｃ６～Ｃ２０長のアルキル鎖を有する脂質に共有結合した最大ＳｋＤａ長のポリエチレングリコール鎖が含まれる。このような成分の添加は複雑な凝集を防ぎ、循環寿命を増加させ、脂質－核酸組成物の標的組織への送達を増加させる手段を提供することもできる（Ｋｌｉｂａｎｏｖら（１９９０）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、２６８（１）：２３５～２３７）、またはこれらはインビボで製剤から迅速に交換するよう選択される（米国特許第５，８８５，６１３号参照）。特に有用な交換可能な脂質は、より短いアシル鎖（例えば、Ｃ１４またはＣ１８）を有するＰＥＧ－セラミドである。本発明のＰＥＧ修飾リン脂質および誘導体化脂質は、リポソーム導入ビヒクル中に存在する全脂質の約０％～約２０％、約０．５％～約２０％、約１％～約１５％、約４％～約１０％、または約２％のモル比を構成することができる。
例えば、Ｎ－オクタノイル－スフィンゴシン－１－［スクシニル（メトキシポリエチレングリコール）－２０００］（Ｃ８ ＰＥＧ－２０００セラミド）を含む、誘導体化セラミド（ＰＥＧ－ＣＥＲ）などの、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾リン脂質および誘導体化脂質の使用も、単独でまたは好ましくは導入ビヒクルを含む他の脂質製剤と組み合わせて（例えば、脂質ナノ粒子）、本発明によって企図される。企図されるＰＥＧ修飾脂質には、それだけに限らないが、Ｃ６～Ｃ２０長のアルキル鎖を有する脂質に共有結合した最大ＳｋＤａ長のポリエチレングリコール鎖が含まれる。このような成分の添加は複雑な凝集を防ぎ、循環寿命を増加させ、脂質－核酸組成物の標的組織への送達を増加させる手段を提供することもできる（Ｋｌｉｂａｎｏｖら（１９９０）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、２６８（１）：２３５～２３７）、またはこれらはインビボで製剤から迅速に交換するよう選択される（米国特許第５，８８５，６１３号参照）。特に有用な交換可能な脂質は、より短いアシル鎖（例えば、Ｃ１４またはＣ１８）を有するＰＥＧ－セラミドである。本発明のＰＥＧ修飾リン脂質および誘導体化脂質は、リポソーム導入ビヒクル中に存在する全脂質の約０％～約２０％、約０．５％～約２０％、約１％～約１５％、約４％～約１０％、または約２％のモル比を構成することができる。
【0197】
様々な実施形態によると、脂質ナノ粒子を構成するカチオン性脂質、非カチオン性脂質、および／またはＰＥＧ修飾脂質の選択、ならびにこのような脂質の互いに対する相対モル比は、選択される脂質の特徴、意図した標的細胞の性質、送達されるＭＣＮＡの特徴に基づく。追加の考慮事項には、例えば、アルキル鎖の飽和、ならびに選択される脂質のサイズ、電荷、ｐＨ、ｐＫａ、膜融合性および毒性が含まれる。よって、それに応じてモル比を調整することができる。
【0198】
ポリマー
一部の実施形態では、適切な送達ビヒクルは、担体としてのポリマーを単独で、または本明細書に記載される様々な脂質を含む他の担体と組み合わせて使用して製剤化される。よって、一部の実施形態では、リポソーム送達ビヒクルは、本明細書で使用される場合、ポリマーを含むナノ粒子も包含する。適切なポリマーには、例えば、ポリアクリレート、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリラクチド、ポリラクチド－ポリグリコリドコポリマー、ポリカプロラクトン、デキストラン、アルブミン、ゼラチン、アルギネート、コラーゲン、キトサン、シクロデキストリン、プロタミン、ＰＥＧ化プロタミン、ＰＬＬ、ＰＥＧ化ＰＬＬおよびポリエチレンイミン（ＰＥＩ）が含まれる。ＰＥＩが存在する場合、これは１０～４０ｋＤａの範囲の分子量の分枝ＰＥＩ、例えば２５ｋＤａ分枝ＰＥＩ（Ｓｉｇｍａ 番号４０８７２７）であることができる。
一部の実施形態では、適切な送達ビヒクルは、担体としてのポリマーを単独で、または本明細書に記載される様々な脂質を含む他の担体と組み合わせて使用して製剤化される。よって、一部の実施形態では、リポソーム送達ビヒクルは、本明細書で使用される場合、ポリマーを含むナノ粒子も包含する。適切なポリマーには、例えば、ポリアクリレート、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリラクチド、ポリラクチド－ポリグリコリドコポリマー、ポリカプロラクトン、デキストラン、アルブミン、ゼラチン、アルギネート、コラーゲン、キトサン、シクロデキストリン、プロタミン、ＰＥＧ化プロタミン、ＰＬＬ、ＰＥＧ化ＰＬＬおよびポリエチレンイミン（ＰＥＩ）が含まれる。ＰＥＩが存在する場合、これは１０～４０ｋＤａの範囲の分子量の分枝ＰＥＩ、例えば２５ｋＤａ分枝ＰＥＩ（Ｓｉｇｍａ 番号４０８７２７）であることができる。
【0199】
本発明による使用に適したリポソーム
本発明に適したリポソームは、本明細書に記載されるカチオン性脂質、非カチオン性脂質、コレステロール脂質、ＰＥＧ修飾脂質および／またはポリマーのいずれか１つまたはそれ以上を種々の比率で含むことができる。非限定的な例として、適切なリポソーム製剤は、ｃＫＫ－Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロールおよびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；Ｃ１２－２００、ＤＯＰＥ、コレステロールおよびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；ＨＧＴ４００３、ＤＯＰＥ、コレステロールおよびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；ＩＣＥ、ＤＯＰＥ、コレステロールおよびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；またはＩＣＥ、ＤＯＰＥ、およびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋから選択される組合せを含むことができる。
本発明に適したリポソームは、本明細書に記載されるカチオン性脂質、非カチオン性脂質、コレステロール脂質、ＰＥＧ修飾脂質および／またはポリマーのいずれか１つまたはそれ以上を種々の比率で含むことができる。非限定的な例として、適切なリポソーム製剤は、ｃＫＫ－Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロールおよびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；Ｃ１２－２００、ＤＯＰＥ、コレステロールおよびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；ＨＧＴ４００３、ＤＯＰＥ、コレステロールおよびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；ＩＣＥ、ＤＯＰＥ、コレステロールおよびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；またはＩＣＥ、ＤＯＰＥ、およびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋから選択される組合せを含むことができる。
【0200】
様々な実施形態では、カチオン性脂質（例えば、ｃＫＫ－Ｅ１２、Ｃ１２－２００、ＩＣＥ、および／またはＨＧＴ４００３）は、モル比でリポソームの約３０～６０％（例えば、約３０～５５％、約３０～５０％、約３０～４５％、約３０～４０％、約３５～５０％、約３５～４５％、または約３５～４０％）を構成する。一部の実施形態では、カチオン性脂質（例えば、ｃＫＫ－Ｅ１２、Ｃ１２－２００、ＩＣＥ、および／またはＨＧＴ４００３）のパーセンテージは、モル比でリポソームの約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、もしくは約６０％であるかまたはこれらを超える。
【0201】
一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロール系脂質とＰＥＧ修飾脂質の比はそれぞれ約３０～６０：２５～３５：２０～３０：１～１５の間である。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロール系脂質とＰＥＧ修飾脂質の比はそれぞれおよそ４０：３０：２０：１０である。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロール系脂質とＰＥＧ修飾脂質の比はそれぞれおよそ４０：３０：２５：５である。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロール系脂質とＰＥＧ修飾脂質の比はそれぞれおよそ４０：３２：２５：３である。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロール系脂質とＰＥＧ修飾脂質の比はおよそ５０：２５：２０：５である。
【0202】
特定の実施形態では、本発明により使用するためのリポソームは、カチオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、ＤＯＰＥまたはＤＥＰＥ）、ＰＥＧ修飾脂質（例えば、ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ）、および場合によりコレステロールからなる脂質成分を含む。このようなリポソームに包含するのに特に適したカチオン性脂質には、ＧＬ－ＴＥＳ－ＳＡ－ＤＭＥ－Ｅ１８－２、ＴＬ１－０１Ｄ－ＤＭＡ、ＳＹ－３－Ｅ１４－ＤＭＡＰｒ、ＴＬ１－１０Ｄ－ＤＭＡ、ＨＧＴ４００２（本明細書ではＧｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌとも称される）、ＧＬ－ＴＥＳ－ＳＡ－ＤＭＰ－Ｅ１８－２、ＨＥＰ－Ｅ４－Ｅ１０、ＨＥＰ－Ｅ３－Ｅ１０、およびＴＬ１－０４Ｄ－ＤＭＡが含まれる。これらのカチオン性脂質は、噴霧を介して肺送達を通じて投与されるリポソームにおける使用に特に適していることが見出されている。これらの中で、ＨＥＰ－Ｅ４－Ｅ１０、ＨＥＰ－Ｅ３－Ｅ１０、ＧＬ－ＴＥＳ－ＳＡ－ＤＭＥ－Ｅ１８－２、ＧＬ－ＴＥＳ－ＳＡ－ＤＭＰ－Ｅ１８－２、ＴＬ１－０１Ｄ－ＤＭＡおよびＴＬ１－０４Ｄ－ＤＭＡは特に良好に機能した。
【0203】
リポソームの例には、カチオン性脂質成分としてのＧＬ－ＴＥＳ－ＳＡ－ＤＭＥ－Ｅ１８－２、ＴＬ１－０１Ｄ－ＤＭＡ、ＳＹ－３－Ｅ１４－ＤＭＡＰｒ、ＴＬ１－１０Ｄ－ＤＭＡ、ＧＬ－ＴＥＳ－ＳＡ－ＤＭＰ－Ｅ１８－２、ＨＥＰ－Ｅ４－Ｅ１０、ＨＥＰ－Ｅ３－Ｅ１０およびＴＬ１－０４Ｄ－ＤＭＡ、非カチオン性脂質成分としてのＤＯＰＥ、ヘルパー脂質成分としてのコレステロール、ならびにＰＥＧ修飾脂質成分としてのＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋのうちの１つが含まれる。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロールとＰＥＧ修飾脂質のモル比は、それぞれ約３０～６０：２５～３５：２０～３０：１～１５の間であり得る。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロールとＰＥＧ修飾脂質のモル比は、それぞれ、およそ４０：３０：２０：１０である。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロールとＰＥＧ修飾脂質のモル比は、それぞれ、およそ４０：３０：２５：５である。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロールとＰＥＧ修飾脂質のモル比は、それぞれ、およそ４０：３２：２５：３である。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とコレステロールとＰＥＧ修飾脂質のモル比は、およそ５０：２５：２０：５である。
【0204】
一部の実施形態では、肺送達に特に適したリポソームの脂質成分は、ＨＧＴ４００２（本明細書ではＧｕａｎ－ＳＳ－Ｃｈｏｌとも称される）、ＤＯＰＥおよびＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋからなる。一部の実施形態では、カチオン性脂質と非カチオン性脂質とＰＥＧ修飾脂質のモル比は、およそ６０：３５：５である。
【0205】
別個の脂質成分の比
脂質ナノ粒子が３つまたは３つ以下の別個の脂質の成分を含む実施形態では、全脂質含有量の比（すなわち、脂質成分（１）：脂質成分（２）：脂質成分（３）の比）をｘ：ｙ：ｚとして表すことができ、ここでは、
（ｙ＋ｚ）＝１００－ｘ
である。
脂質ナノ粒子が３つまたは３つ以下の別個の脂質の成分を含む実施形態では、全脂質含有量の比（すなわち、脂質成分（１）：脂質成分（２）：脂質成分（３）の比）をｘ：ｙ：ｚとして表すことができ、ここでは、
（ｙ＋ｚ）＝１００－ｘ
である。
【0206】
一部の実施形態では、「ｘ」、「ｙ」、および「ｚ」の各々は脂質の３つの別個の成分のモルパーセンテージを表し、比はモル比である。
【0207】
一部の実施形態では、「ｘ」、「ｙ」、および「ｚ」の各々は脂質の３つの別個の成分の重量パーセンテージを表し、比は重量比である。
【0208】
一部の実施形態では、変数「ｘ」によって表される、脂質成分（１）はステロール系カチオン性脂質である。
【0209】
一部の実施形態では、変数「ｙ」によって表される、脂質成分（２）はヘルパー脂質である。
【0210】
一部の実施形態では、変数「ｚ」によって表される、脂質成分（３）はＰＥＧ脂質である。
【0211】
一部の実施形態では、脂質成分（１）（例えば、ステロール系カチオン性脂質）のモルパーセンテージを表す変数「ｘ」は、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％である。
【0212】
一部の実施形態では、脂質成分（１）（例えば、ステロール系カチオン性脂質）のモルパーセンテージを表す変数「ｘ」は、約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、または約１０％以下である。実施形態では、変数「ｘ」は約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４０％以下である。
【0213】
一部の実施形態では、脂質成分（１）（例えば、ステロール系カチオン性脂質）のモルパーセンテージを表す変数「ｘ」は、少なくとも約５０％であるが約９５％未満；少なくとも約５０％であるが約９０％未満；少なくとも約５０％であるが約８５％未満；少なくとも約５０％であるが約８０％未満；少なくとも約５０％であるが約７５％未満；少なくとも約５０％であるが約７０％未満；少なくとも約５０％であるが約６５％未満；または少なくとも約５０％であるが約６０％未満である。実施形態では、変数「ｘ」は少なくとも約５０％であるが約７０％未満；少なくとも約５０％であるが約６５％未満；または少なくとも約５０％であるが約６０％未満である。
【0214】
一部の実施形態では、脂質成分（１）（例えば、ステロール系カチオン性脂質）の重量パーセンテージを表す変数「ｘ」は、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％である。
【0215】
一部の実施形態では、脂質成分（１）（例えば、ステロール系カチオン性脂質）の重量パーセンテージを表す変数「ｘ」は、約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、または約１０％以下である。実施形態では、変数「ｘ」は約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４０％以下である。
【0216】
一部の実施形態では、脂質成分（１）（例えば、ステロール系カチオン性脂質）の重量パーセンテージを表す変数「ｘ」は：少なくとも約５０％であるが約９５％未満；少なくとも約５０％であるが約９０％未満；少なくとも約５０％であるが約８５％未満；少なくとも約５０％であるが約８０％未満；少なくとも約５０％であるが約７５％未満；少なくとも約５０％であるが約７０％未満；少なくとも約５０％であるが約６５％未満；または少なくとも約５０％であるが約６０％未満である。実施形態では、変数「ｘ」は少なくとも約５０％であるが約７０％未満；少なくとも約５０％であるが約６５％未満；または少なくとも約５０％であるが約６０％未満である。
【0217】
一部の実施形態では、脂質成分（３）（例えば、ＰＥＧ脂質）のモルパーセンテージを表す変数「ｚ」は、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、または２５％以下である。実施形態では、脂質成分（３）（例えば、ＰＥＧ脂質）のモルパーセンテージを表す変数「ｚ」は、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％である。実施形態では、脂質成分（３）（例えば、ＰＥＧ脂質）のモルパーセンテージを表す変数「ｚ」は、約１％～約１０％、約２％～約１０％、約３％～約１０％、約４％～約１０％、約１％～約７．５％、約２．５％～約１０％、約２．５％～約７．５％、約２．５％～約５％、約５％～約７．５％、または約５％～約１０％である。
【0218】
一部の実施形態では、脂質成分（３）（例えば、ＰＥＧ脂質）の重量パーセンテージを表す変数「ｚ」は、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、または２５％以下である。実施形態では、脂質成分（３）（例えば、ＰＥＧ脂質）の重量パーセンテージを表す変数「ｚ」は、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％である。実施形態では、脂質成分（３）（例えば、ＰＥＧ脂質）の重量パーセンテージを表す変数「ｚ」は、約１％～約１０％、約２％～約１０％、約３％～約１０％、約４％～約１０％、約１％～約７．５％、約２．５％～約１０％、約２．５％～約７．５％、約２．５％～約５％、約５％～約７．５％、または約５％～約１０％である。
【0219】
３つおよび３つのみの別個の脂質の成分を有する組成物について、変数「ｘ」、「ｙ」、および「ｚ」は、３つの変数の和が合計して総脂質含有量の１００％になる限り、任意の組合せであることができる。
【0220】
ｍＲＮＡを封入するリポソームの形成
本発明の組成物に使用するためのリポソーム導入ビヒクルは、当技術分野において現在公知である種々の技術によって調製することができる。提供される組成物に使用するためのリポソームは、当技術分野において現在公知である種々の技術によって調製することができる。例えば、適切な容器（ｃｏｎｔａｉｎｅｒ）または容器（ｖｅｓｓｅｌ）の内壁に選択された脂質を、適切な溶媒に溶解することによって、沈着させ、次に、溶媒を蒸発させて容器内に薄膜を残すかまたは噴霧乾燥させるような従来技術に従って、多層小胞（ＭＬＶ）を調製することができる。次に、水相を、ＭＬＶの形成をもたらす渦運動で容器に添加することができる。次に、単層小胞（ＵＬＶ）は、多層小胞の均質化、超音波処理または押し出しによって形成される。さらに、界面活性剤除去技術によって単層小胞を形成することができる。
本発明の組成物に使用するためのリポソーム導入ビヒクルは、当技術分野において現在公知である種々の技術によって調製することができる。提供される組成物に使用するためのリポソームは、当技術分野において現在公知である種々の技術によって調製することができる。例えば、適切な容器（ｃｏｎｔａｉｎｅｒ）または容器（ｖｅｓｓｅｌ）の内壁に選択された脂質を、適切な溶媒に溶解することによって、沈着させ、次に、溶媒を蒸発させて容器内に薄膜を残すかまたは噴霧乾燥させるような従来技術に従って、多層小胞（ＭＬＶ）を調製することができる。次に、水相を、ＭＬＶの形成をもたらす渦運動で容器に添加することができる。次に、単層小胞（ＵＬＶ）は、多層小胞の均質化、超音波処理または押し出しによって形成される。さらに、界面活性剤除去技術によって単層小胞を形成することができる。
【0221】
ある特定の実施形態では、提供される組成物は、ｍＲＮＡがリポソームの両表面上に会合されており、同リポソーム内に封入されているリポソームを含む。例えば、本発明の組成物の製造中、カチオン性リポソームは、静電的相互作用を通してｍＲＮＡと会合することができる。例えば、本発明の組成物の調製中に、カチオン性リポソームは、静電的相互作用を介してｍＲＮＡと会合し得る。
【0222】
一部の実施形態では、本発明の組成物および方法はリポソームに封入されたｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡ種は同じリポソームに封入される。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のｍＲＮＡ種は異なるリポソームに封入される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、その脂質組成、脂質成分のモル比、径、電荷（ゼータ電位）、標的化リガンドおよび／またはこれらの組合せが異なる１つまたはそれ以上のリポソームに封入される。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のリポソームは、ステロール系カチオン性脂質、中性脂質、ＰＥＧ修飾脂質および／またはこれらの組合せの異なる組成を有することができる。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のリポソームは、リポソームを作製するために使用されるコレステロール系カチオン性脂質、中性脂質、およびＰＥＧ修飾脂質の異なるモル比を有することができる。
【0223】
所望のｍＲＮＡをリポソームに取り込む方法は、しばしば「搭載」と称される。例示的な方法は、参照により本明細書に組み入れられるＬａｓｉｃら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．、３１２巻：２５５～２５８頁、１９９２に記載されている。リポソームを取り込んだ核酸は、リポソームの内部空間内、リポソームの二重層膜内に完全にもしくは部分的に位置されるか、またはリポソーム膜の外表面に完全にもしくは部分的に会合することができる。核酸のリポソームへの取り込みはまた、本明細書において「封入」とも称され、核酸はリポソームの内部空間内に完全に含有される。リポソームのような導入ビヒクルにｍＲＮＡを取り込む目的は、しばしば、核酸の迅速な排出を引き起こす、核酸および／またはシステムもしくは受容体を分解する酵素または化学物質を含有し得る環境から核酸を保護することである。したがって、一部の実施形態では、適切な送達ビヒクルは、その中に含有されるｍＲＮＡの安定性を増強することができ、および／または標的細胞もしくは組織へのｍＲＮＡの送達を促進することができる。
【0224】
本発明による適切なリポソームは、種々のサイズで作製することができる。一部の実施形態では、提供されたリポソームは、公知のｍＲＮＡを封入するリポソームよりも小さくすることができる。一部の実施形態では、リポソームのサイズの減少は、ｍＲＮＡのより効率的な送達と関連する。適切なリポソームサイズの選択は、標的細胞または組織の部位、およびある程度、リポソームが作製されている用途を考慮に入れることができる。
【0225】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡによりコードされる抗体の全身的分布を促進するために、適切なサイズのリポソームが選択される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡのトランスフェクションをある特定の細胞または組織に制限することが望ましい場合がある。例えば、肝細胞を標的とするために、リポソームは、その寸法が、肝臓内の肝類洞を裏打ちする内皮層の有窓部よりも小さくなるようなサイズであり得る。このような場合に、リポソームは、標的肝細胞に到達するために、このような内皮有窓部を容易に貫通することができる。
【0226】
あるいはまたはさらに、リポソームは、リポソームの寸法が、ある特定の細胞または組織への分布を制限または明示的に回避するのに十分な直径を有するようなサイズであり得る。
【0227】
当技術分野において公知である種々の代替方法が、リポソーム集団のサイズ決定に利用可能である。このようなサイズ決定方法の１つは、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，７３７，３２３号に記載されている。浴またはプローブ超音波処理のいずれかによりリポソーム懸濁液を超音波処理することによって、直径約０．０５ミクロン未満の小さなＵＬＶまで漸進的なサイズ減少が生じる。均質化は、大きなリポソームをより小さなリポソームにフラグメント化するためのせん断エネルギーに依存する別の方法である。典型的な均質化手順では、典型的には約０．１～０．５ミクロンの間の選択されたリポソームサイズが観察されるまで、ＭＬＶを標準エマルジョンホモジナイザーを介して再循環させる。リポソームのサイズは、参照により本明細書に組み入れられるＢｌｏｏｍｆｉｅｌｄ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．、１０巻：４２１～１５０頁（１９８１）に記載されているように、準電光散乱（ＱＥＬＳ）によって決定することができる。形成されたリポソームの超音波処理によって、平均リポソーム直径を減少させることができる。効率的なリポソーム合成を導くために、間欠的超音波処理サイクルをＱＥＬＳ評価と交互に行うことができる。
【0228】
組成物の治療的使用
一態様では、本発明は、とりわけ、治療目的に有用なｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を提供する。例えば、一部の実施形態では、ＬＮＰ封入ｍＲＮＡは、免疫疾患などの対象における疾患の処置のための抗体をコードする。
一態様では、本発明は、とりわけ、治療目的に有用なｍＲＮＡを封入したＬＮＰ製剤を提供する。例えば、一部の実施形態では、ＬＮＰ封入ｍＲＮＡは、免疫疾患などの対象における疾患の処置のための抗体をコードする。
【0229】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡはコドン最適化されている。種々のコドン最適化方法が当該技術分野において公知である。
【0230】
噴霧
肺送達のための医薬組成物を噴霧する有効性は、小エアロゾル液滴のサイズに依存する。一般に、液滴のサイズが小さいほど、肺への浸透および肺への保持の可能性が大きくなる。大きな液滴（直径１０μｍを超える）は口腔と咽喉に沈着する可能性が最も高く、中程度の液滴（直径５～１０μｍ）は口と気道の間に沈着する可能性が最も高く、小さい液滴（直径５μｍ未満）は肺に沈着して残存する可能性が最も高い。
肺送達のための医薬組成物を噴霧する有効性は、小エアロゾル液滴のサイズに依存する。一般に、液滴のサイズが小さいほど、肺への浸透および肺への保持の可能性が大きくなる。大きな液滴（直径１０μｍを超える）は口腔と咽喉に沈着する可能性が最も高く、中程度の液滴（直径５～１０μｍ）は口と気道の間に沈着する可能性が最も高く、小さい液滴（直径５μｍ未満）は肺に沈着して残存する可能性が最も高い。
【0231】
粒子サイズ１～５μｍの吸入エアロゾル液滴は、下気道の狭い枝に侵入することがある。より大きな径のエアロゾル液滴は、典型的には、口腔を覆う上皮細胞によって吸収され、下気道上皮および深部肺胞組織に到達する可能性は低い。
【0232】
エアロゾル中の粒子サイズは、一般に、空気力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）を参照して記載される。ＭＭＡＤは、幾何標準偏差（ＧＳＤ）とともに、粒子の重量およびサイズに基づいて、任意のエアロゾルの粒子サイズ分布を統計的に記載する。エアロゾルのＭＭＡＤを計算する手段は、当該技術分野において周知である。
【0233】
カスケード式衝突体を用いてＭＭＡＤを計算する具体的な方法は、Ｍｉｔｃｈｅｌｌらによって１９５９年に最初に報告された。粒子サイズを測定するためのカスケード式衝突体は、一連の噴流、各々のその後の衝突スライドから構成され、移動する空気流中の粒子は、それらの運動量が、スライドの周囲を移動する際に空気流が及ぼす抗力を克服するのに十分である場合、それらの経路内に配置されたスライド上に衝突するという原理に基づいている。各噴流が前の噴流よりも小さいため、エアロゾルが衝突体を通過するにつれて、空気流の速度、したがって分散粒子の速度が増加する。その結果、最終的には、より小さい粒子がスライドに衝撃を与えるのに十分な運動量を獲得し、エアロゾルの完全な粒子サイズ分類が達成される。本発明の医薬組成物のＭＭＡＤを測定するために本明細書において使用される改善された次世代衝突体は、２００３年にＭａｒｐｌｅらによって最初に報告され、薬局方で広く使用されている。
【0234】
エアロゾル中の粒子サイズを記載するための別のパラメータは、体積中央径（ＶＭＤ）である。ＶＭＤはまた、粒子の体積に基づくエアロゾルの粒子サイズ分布を記載する。エアロゾルのＶＭＤを計算する手段は、当該技術分野において周知である。ＶＭＤを決定するために使用される具体的な方法は、本発明の医薬組成物のＶＭＤを測定するために本明細書において使用されるレーザー回折である（例えば、Ｃｌａｒｋ， １９９５， Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ． １１５：６９～７８を参照されたい）。
【0235】
一部の実施形態では、噴霧された医薬組成物の平均粒子サイズは、約４μｍ～６μｍ、例えば、約４μｍ、約４．５μｍ、約５μｍ、約５．５μｍ、または約６μｍである。
【0236】
微粒子画分（ＦＰＦ）は、特定値より小さいＭＭＡＤまたはＶＭＤを有するエアロゾル中の粒子の比率として定義される。一部の実施形態では、粒子サイズ５μｍ未満を有する噴霧される医薬組成物のＦＰＦは、少なくとも約３０％、より典型的には少なくとも約４０％、例えば少なくとも約５０％、より典型的には少なくとも約６０％である。
【0237】
一部の実施形態では、噴霧は、平均吸入可能放出用量（すなわち、粒子サイズが５μｍ未満のＦＰＦのパーセンテージ；例えば、１５Ｌ／分抽出を伴う次世代衝突体によって決定した場合）が、放出された用量の少なくとも約３０％、例えば、少なくとも約３１％、少なくとも約３２％、少なくとも約３３％、少なくとも約３４％、または少なくとも約３５％であるように行われる。一部の実施形態では、噴霧は、平均吸入可能送達用量（すなわち、粒子サイズが５μｍ未満のＦＰＦのパーセンテージ；例えば、１５Ｌ／分抽出を伴う次世代衝突体によって決定した場合）が、放出された用量の少なくとも約１５％、例えば、放出された用量の少なくとも１６％または１６．５％であるように行われる。
【0238】
噴霧器
噴霧は、当該技術分野において公知である任意の噴霧器によって達成することができる。噴霧器は、液体をミストに変換し、肺により容易に吸入できるようにする。噴霧器は、乳児、小児および成人に有効である。噴霧器は大用量の吸入薬を噴霧することができる。典型的には、本発明とともに使用するための噴霧器は、着脱可能なマウスピースを含む。これは、本発明の医薬組成物を投与する場合に、ＲＮａｓｅを含まない清澄なマウスピースのみを使用すべきであるため重要である。
噴霧は、当該技術分野において公知である任意の噴霧器によって達成することができる。噴霧器は、液体をミストに変換し、肺により容易に吸入できるようにする。噴霧器は、乳児、小児および成人に有効である。噴霧器は大用量の吸入薬を噴霧することができる。典型的には、本発明とともに使用するための噴霧器は、着脱可能なマウスピースを含む。これは、本発明の医薬組成物を投与する場合に、ＲＮａｓｅを含まない清澄なマウスピースのみを使用すべきであるため重要である。
【0239】
一部の実施形態では、噴霧器のリザーバ体積は、約５．０ｍＬ～約８．０ｍＬの範囲である。一部の実施形態では、噴霧器のリザーバ体積は、約５．０ｍＬである。一部の実施形態では、噴霧器のリザーバ体積は、約６．０ｍＬである。一部の実施形態では、噴霧器のリザーバ体積は、約７．０ｍＬである。一部の実施形態では、噴霧器のリザーバ体積は、約８．０ｍＬである。
【0240】
１つのタイプの噴霧器はジェット噴霧器であり、これはコンプレッサに接続された管を含み、圧縮された空気または酸素を液体薬品を通して高速で流し、エアロゾルに変え、次に、患者によって吸入される。
【0241】
別のタイプの噴霧器は、超音波噴霧器であり、これは、液体リザーバに接触する圧電素子の機械的振動を引き起こす高周波超音波を発生する電子発振器を備える。液体の高周波振動は、蒸気ミストを生成するのに十分である。例示的な超音波噴霧器は、Ｏｍｒｏｎ ＮＥ－Ｕ１７およびＢｅｕｒｅｒ噴霧器ＩＨ３０である。
【0242】
第３のタイプの噴霧器は、振動メッシュ技術（ＶＭＴ）を含む振動メッシュ噴霧器などのメッシュ噴霧器である。ＶＭＴ噴霧器は、典型的には、液体リザーバの頂部で振動し、それによってメッシュ／膜の孔を通して非常に微細なエアロゾル液滴のミストを押し出す１０００～７０００孔を有するメッシュ／膜を含む。本発明の医薬組成物の送達に適したＶＭＴ噴霧器には、以下：ｅＦｌｏｗ（ＰＡＲＩ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｔｄ．）、ｉ－Ｎｅｂ（Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｌｔｄ）、Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ ＩＨ５０（Ｂｅｕｒｅｒ Ｌｔｄ．）、ＡｅｒｏＮｅｂ Ｇｏ（Ａｅｒｏｇｅｎ Ｌｔｄ．）、ＩｎｎｏＳｐｉｒｅ Ｇｏ（Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｌｔｄ）、Ｍｅｓｈ Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ（Ｓｈｅｎｚｈｅｎ Ｈｏｍｅｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｖｉｃｅ Ｃｏ，Ｌｔｄ．）、Ｐｏｒｔａｂｌｅ Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ（Ｍｉｃｒｏｂａｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびＡｉｒｗｏｒｋｓ（Ｃｏｎｖｅｘｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＬＬＣ）のうちのいずれかが含まれる。一部の実施形態では、ＶＭＴ噴霧器のメッシュまたは膜は、圧電素子によって振動するように作製される。一部の実施形態では、ＶＭＴ噴霧器のメッシュまたは膜は、超音波によって振動するように作製される。
【0243】
ＶＭＴ噴霧器は、本発明の医薬組成物中のオリゴヌクレオチドの完全性に影響しないため、本発明を実施するのに特に適していることが判明している。典型的には、本発明の医薬組成物中のオリゴヌクレオチドの少なくとも約５０％、例えば少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％が、噴霧後にその完全性を維持する。
【0244】
一部の実施形態では、噴霧は、吸入および呼気中に連続的である。より典型的には、噴霧は、呼吸作動される。本発明とともに使用するのに適した噴霧器は、０．２ｍＬ／分超の噴霧速度を有する。一部の実施形態では、噴霧速度は０．２５ｍＬ／分超である。他の実施形態では、噴霧速度は０．３ｍＬ／分超である。一部の実施形態では、噴霧速度は０．４５ｍＬ／分超である。典型的な態様では、噴霧速度は、０．２ｍＬ／分～０．５ｍＬ／分の範囲である。
【0245】
噴霧体積が１０ｍＬを超える場合、処置中にヒト対象に有害作用が現れることがある。特に、２０ｍＬを超える体積を投与する場合、このような有害作用がより一般的である。一部の実施形態では、噴霧体積は、２０ｍＬを超えない。
【0246】
一部の実施形態では、本発明の医薬組成物の単回用量は、噴霧処置あたり１回または２回の補充でのみ投与することができる。例えば、患者に投与される医薬組成物の全体積が１３ｍＬである場合、８ｍＬリザーバを有する噴霧器を使用するときには、全体積を投与するためには１回の補充のみが必要であるが、５ｍＬリザーバを有する噴霧器を使用するときには、２回の補充が同じ体積を投与するために必要である。別の実施形態では、噴霧処置毎に、例えば２６ｍＬの体積を投与するために、少なくとも３回の補充が必要とされ、８ｍＬリザーバを有する噴霧器を使用する場合には、少なくとも３回の補充が必要とされる。さらに別の実施形態では、少なくとも４回の補充が必要である。例えば、５ｍＬリザーバを有する噴霧器で４２ｍＬを送達するためには、少なくとも８回の補充が必要である。典型的には、本発明の医薬組成物を投与するために必要とされる補充は１～３回以下である。
【0247】
本発明の医薬組成物は、典型的には、０．２ｍＬ／分から０．５ｍＬ／分の範囲の速度で噴霧される。オリゴヌクレオチドの０．５ｍｇ／ｍｌ～０．８ｍｇ／ｍｌの濃度（例えば、約０．６ｍｇ／ｍｌ）が、特に振動メッシュ噴霧器とともに投与される場合に、特に適切であることが見出されている。
【0248】
一部の実施形態では、単一の噴霧セッション中に使用される噴霧器の数は、２～８の範囲である。一部の実施形態では、単一の噴霧セッション中に使用される噴霧器の数は、１～８の範囲である。一部の実施形態では、１つの噴霧器は、単一の噴霧セッション中に使用される。一部の実施形態では、２つの噴霧器が、単一の噴霧セッション中に使用される。一部の実施形態では、３つの噴霧器が、単一の噴霧セッション中に使用される。一部の実施形態では、４つの噴霧器が、単一の噴霧セッション中に使用される。一部の実施形態では、５つの噴霧器が、単一の噴霧セッション中に使用される。一部の実施形態では、６つの噴霧器が、単一の噴霧セッション中に使用される。一部の実施形態では、７つの噴霧器が、単一の噴霧セッション中に使用される。一部の実施形態では、８つの噴霧器が、単一の噴霧セッション中に使用される。
【実施例】
【0249】
本発明のある特定の化合物、組成物および方法は、ある特定の実施形態に従って特異性をもって記載されてきたが、以下の実施例は、本発明の化合物を例示するためにのみ役立ち、本発明の化合物を限定することを意図するものではない。
【実施例1】
【0250】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）への抗体をコードするｍＲＮＡの封入
この実施例は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）におけるｍＲＮＡがコードする抗体の封入、および抗体をコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤の調製を例示する。
この実施例は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）におけるｍＲＮＡがコードする抗体の封入、および抗体をコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰ製剤の調製を例示する。
【0251】
例示的なＬＮＰ製剤は、米国特許出願公開第２０１６／００３８４３２号（プロセスＡ）に記載されるように、最初に脂質を脂質ナノ粒子に予備形成することなく、オリゴヌクレオチドを脂質の混合物と混合することによってオリゴヌクレオチドを封入する従来のプロセスによって調製された。
【0252】
１０％トレハロース（ｗ／ｖ）、および５：６０：０：３５のＤＭＧ－ＰＥＧ＿２０００（ＰＥＧ）：Ｇｕａｎ－ＳＳ－ｃｈｏｌ（カチオン性脂質）：コレステロール：ＤＯＰＥ（ヘルパー脂質）の例示的ＬＮＰ組成物を含む、例示的な抗ＩＬ６ＲをコードするｍＲＮＡのＬＮＰ製剤を調製した。９９．３６％の高い封入効率を達成した。約５８ｎｍの粒子サイズが得られ、多分散指数は０．１６であった。
【0253】
別の例示的な抗ＩＬ４ＲαをコードするｍＲＮＡのＬＮＰ製剤は、５：６０：０：３５のＤＭＧ－ＰＥＧ＿２０００（ＰＥＧ）：Ｇｕａｎ－ＳＳ－ｃｈｏｌ（カチオン性脂質）：コレステロール：ＤＯＰＥ（ヘルパー脂質）の例示的なＬＮＰ組成物を用いて調製され、同様に、９８％の高い封入効率を達成した。約６０ｎｍの粒子サイズが０．１８の多分散指数で得られた。ＬＮＰ製剤は下記の表３に記載される。
【0254】
【表3】
【0255】
この実施例は、高い封入効率を有する脂質ナノ粒子が、抗ＩＬ６Ｒおよび抗ＩＬ４Ｒαのような抗体をコードするｍＲＮＡを含むことを示した。
【実施例2】
【0256】
マウスにおけるｍＲＮＡがコードする抗体の薬力学的研究
この実施例は、ｍＲＮＡがコードする抗体を投与されたマウスにおける薬力学的研究を例示する。その後、生理食塩水を投与した対照マウスと比較して、ｍＲＮＡがコードする抗体を投与したマウスにおいて抗体レベルを評価した。研究設計を以下の表４に概説する。
この実施例は、ｍＲＮＡがコードする抗体を投与されたマウスにおける薬力学的研究を例示する。その後、生理食塩水を投与した対照マウスと比較して、ｍＲＮＡがコードする抗体を投与したマウスにおいて抗体レベルを評価した。研究設計を以下の表４に概説する。
【0257】
【表4】
【0258】
種々の免疫標的に対して指向性を有するＬＮＰに封入された抗体をコードするメッセンジャーＲＮＡをマウスに投与した。例示的な標的には、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、ＩＬ－３３、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ、例えばＩＬ－４Ｒα）、ＩＬ－５受容体（ＩＬ－５Ｒ）、ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－９受容体（ＩＬ－９Ｒ）、ＩＬ－１３受容体（ＩＬ－１３Ｒ）、ＩＬ－２５受容体（ＩＬ－２５Ｒ）またはＩＬ－３３受容体（ＩＬ－３３Ｒ、例えばＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１としても公知である）、２型炎症の他のドライバ、ならびに追加の標的が含まれる。この実施例では、抗ＩＬ６Ｒおよび抗ＩＬ４Ｒαを封入したｍＲＮＡ－ＬＮＰを試験した。
【0259】
約８～１０週齢のＣＤ１マウスに、抗ＩＬ６Ｒまたは抗ＩＬ４Ｒαを封入したｍＲＮＡ－ＬＮＰを、約１５マイクログラム／動物の用量で気管内投与により投与した。対照マウスには生理食塩水を投与した。４日目に、血清調製のために血液を収集した。マウスを屠殺し、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）、肺および肝臓を含む組織サンプルを収集した。ＢＡＬＦサンプルは、５回の連続的な流体プランジで収集された。最初に収集されたＢＡＬＦ画分は、サイトカインに富むＢＡＬＦとＢＡＬ細胞ペレットである。左右の全肺および肝臓からの８ｍｍ生検パンチ２本を液体窒素で凍結した。
【0260】
抗ＩＬ６Ｒ抗体または抗ＩＬ４Ｒα抗体を用いて処理されたマウスからのＢＡＬＦにおけるｍＲＮＡ療法の投与の７２時間後に、生理食塩水対照を受けたマウスと比較して、ヒトＩｇＧのレベルを測定した。抗体レベルを定量し、データを図１および表５に示す。
【0261】
【表5】
【0262】
この実施例は、抗体をコードするｍＲＮＡが送達され、ヒト抗体が標的肺組織において発現されることを示した。本明細書に記載される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み入れられる。さらに、材料、方法、および実施例は、単に例示であり、限定することを意図しない。別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似または同等の方法および材料が、本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および材料が、本明細書に記載される。
【0263】
等価物
当業者であれば、日常的な実験でしかないものを使用して、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの等価物を認識するか、または確認することができるだろう。本発明の範囲は、上記の明細書に限定されることを意図するものではなく、むしろ以下の特許請求の範囲に示される通りである。
当業者であれば、日常的な実験でしかないものを使用して、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの等価物を認識するか、または確認することができるだろう。本発明の範囲は、上記の明細書に限定されることを意図するものではなく、むしろ以下の特許請求の範囲に示される通りである。
【図1】
【配列表】
【国際調査報告】