特表 2024-504658 担体材料とコンジュゲートさせるための抗原前駆体を含む反応性炭水化物の合成プロセス

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-01

(54)【発明の名称】担体材料とコンジュゲートさせるための抗原前駆体を含む反応性炭水化物の合成プロセス

(51)【国際特許分類】

   C07H 15/10 20060101AFI20240125BHJP

   C07H 15/04 20060101ALI20240125BHJP

   C07K 14/765 20060101ALI20240125BHJP

   C07K 14/11 20060101ALI20240125BHJP

   C07K 14/33 20060101ALI20240125BHJP

   C07K 14/165 20060101ALI20240125BHJP

【ＦＩ】

C07H15/10 CSP

C07H15/04 C

C07H15/04 E

C07H15/04 B

C07K14/765 ZNA

C07K14/11

C07K14/33

C07K14/165

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023543005

(86)(22)【出願日】2022-01-14

(85)【翻訳文提出日】2023-08-30

(86)【国際出願番号】 CA2022050054

(87)【国際公開番号】W WO2022150924

(87)【国際公開日】2022-07-21

(31)【優先権主張番号】202121001963

(32)【優先日】2021-01-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520363915

【氏名又は名称】コラネックス・キャピタル

(74)【代理人】

【識別番号】100105957

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100068755

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 博宣

(74)【代理人】

【識別番号】100142907

【弁理士】

【氏名又は名称】本田 淳

(74)【代理人】

【識別番号】100152489

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 美樹

(72)【発明者】

【氏名】シャオ、ツェ チー

(72)【発明者】

【氏名】ミニャニ、セルジュ

(72)【発明者】

【氏名】モフェット、セルジュ

(72)【発明者】

【氏名】ヴィシュワカルマ、ラム

【テーマコード（参考）】

4C057

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C057AA18

4C057AA19

4C057CC03

4C057DD03

4C057JJ03

4C057JJ04

4C057JJ05

4C057JJ55

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA01

4H045CA40

4H045DA70

4H045DA86

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA10

(57)【要約】

式（Ａ）の炭水化物
【化１】

（式中、Ｒ^１がＨであり、ｎが１～５の整数である）は、化合物（Ａ_０）
【化２】

を、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２と、プロトンを遊離させることができる酸の存在下で加熱しながら反応させ、反応混合物を冷却して、化合物（Ａ）を含む冷却された混合物を得ることにより合成される。
式（ＡＡ_ＰＧ）の炭水化物
【化３】

（式中、Ｒ^２が一価の保護基であり、ＰＧが二価の保護基であり、ｎが１～５の整数である）は、金属含有ゼオライトの存在下で、式（Ａ_ＰＧ）の化合物
【化４】

を、式（Ａ_１）の化合物
【化５】

（式中、Ｘが、－Ｉ、－Ｂｒ、－Ｃｌ、－ＣＮ、－ＯＴｆ（トリフレート）、－ＯＭｓ（メシレート）、－ＯＴｓ（トシレート）、メチルスルフェート、又はトリクロロアセトイミデートである）と反応させることにより合成される。化合物（ＡＡ_ＰＧ）を脱保護することで、化合物（ＡＡ）
【化６】

が形成される。
炭水化物（Ａ）及び（ＡＡ）をチオール化リンカーとカップリングさせて、複合糖質前駆体を形成させることができ、これは次に、タンパク質、ペプチド、又はポリペプチドなどの担体材料とコンジュゲート可能である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ａ）の反応性炭水化物

【化1】

（式中、Ｒ^１がＨであり、ｎが１～５の整数である）を合成するためのプロセスであって、
加熱下で、式（Ａ_０）の化合物

【化2】

を、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２と、プロトンを遊離させることができる酸の存在下で反応させて、式（Ａ）の化合物を含む反応混合物を生じさせることと、
前記反応混合物を冷却して、前記式（Ａ）の化合物を含む冷却された混合物を得ることと、を含む、プロセス。

【請求項2】

前記酸が、塩化アセチル、酢酸、酸性カチオン交換樹脂、カンファースルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物、ＨＣｌ、又はそれらの任意の混合物を含む、請求項１に記載のプロセス。

【請求項3】

前記酸が塩化アセチルを含む、請求項１又は２に記載のプロセス。

【請求項4】

前記式（Ａ_０）の化合物を反応させることが、式（Ａ_０）の化合物を、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルを含む溶液に、約０℃～約２５℃の混合温度で加えて、式（Ａ_０）の化合物、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２、及びＨＣｌを含む低温の中間反応混合物を生じさせることを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項5】

前記混合温度が、約０℃、又は約０℃～約１０℃、又は約０℃～約２０℃、又は約１０℃～約２０℃、約１０℃～約２５℃である、請求項４に記載のプロセス。

【請求項6】

ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルを含む前記溶液が、不活性雰囲気下、約０℃の温度で調製される、請求項４又は５に記載のプロセス。

【請求項7】

前記式（Ａ_０）の化合物を反応させることが、前記中間反応混合物を、熱源と、約４０℃～約８０℃の温度で接触させることを含む、請求項４～６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項8】

前記加熱が、約４０℃～約８０℃の反応温度で、約３０分～５時間の反応時間にわたって行われる、請求項１～７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項9】

前記反応温度が約６０℃～約８０℃である、請求項８に記載のプロセス。

【請求項10】

前記反応温度が約７０℃である、請求項８又は９に記載のプロセス。

【請求項11】

前記反応時間が約３０分～約１時間である、請求項８～１０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項12】

前記反応時間が約３０分～約４５分である、請求項８～１１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項13】

前記反応時間が約３０分である、請求項８～１２のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項14】

前記酸が、酢酸、酸性カチオン交換樹脂、カンファースルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物、ＨＣｌ、又はそれらの任意の混合物を含む、請求項１又は２に記載のプロセス。

【請求項15】

前記式（Ａ_０）の化合物をＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２と反応させることが、前記式（Ａ_０）の化合物、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２、及び前記酸を含む溶液を加熱することを含む、請求項１４に記載のプロセス。

【請求項16】

前記溶液が、ジクロロメタン、クロロホルム、１，３－ジオキソラン、ジエトキシメタン、ジメトキシメタン、２，５，７，１０－テトラオキサウンデカン、ジプロポキシメタン、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される溶媒を更に含む、請求項１５に記載のプロセス。

【請求項17】

前記反応が、約３０℃～約７０℃の温度で行われる、請求項１５又は１６に記載のプロセス。

【請求項18】

前記反応が、約０．５時間～約１５時間、又は約０．５時間～約１０時間、又は約０．５時間～約５時間、又は約０．５時間～約２時間の反応時間で行われる、請求項１５～１７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項19】

前記冷却された混合物を中和することを更に含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項20】

前記式（Ａ）の化合物を単離することを更に含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項21】

式（ＡＡ_ＰＧ）の反応性炭水化物

【化3】

（式中、Ｒ^２が一価の保護基であり、ＰＧが二価の保護基であり、ｎが１～５の整数である）を合成するためのプロセスであって、
金属含有ゼオライトの存在下で、式（Ａ_ＰＧ）の化合物

【化4】

を、式（Ａ_１）の化合物

【化5】

（式中、Ｘが、－Ｉ、－Ｂｒ、－Ｃｌ、－ＣＮ、－ＯＴｆ（トリフレート）、－ＯＭｓ（メシレート）、－ＯＴｓ（トシレート）、メチルスルフェート、又はトリクロロアセトイミデートである）と反応させることを含む、プロセス。

【請求項22】

前記金属含有ゼオライト中の金属が、Ａｇ、Ａｌ、Ｃｄ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｍｏ、Ｐｄ、Ｐｔ、Ｓｎ、Ｓｂ、Ｖ、Ｚｒ、又はそれらの任意の混合物を含む、請求項２１に記載のプロセス。

【請求項23】

前記金属含有ゼオライトが、Ｓｎ－ベータ、Ｚｒ－ベータ、Ａｌ－ベータ（ＯＨ）、Ａｌ－ベータ（Ｆ）、Ｐｔ＠ＭＣＭ－２２、Ｋ－ＰｔＳｎ／ＭＦＩ、０．３Ｐｔ／０．５Ｓｎ－Ｓｉ－ベータ、Ｐｔ／Ｓｎ ２．０－ベータ、０．５ＣｏＳｉ－ベータ、Ｖ－ベータ、Ｈ－［Ｆｅ］ＺＳＭ－５、Ｆｅ－ＢＥＡ、Ｇａ－ベータ、Ｇａ－ベータ－２００、Ｍｏ／ＨＺＳＭ－５、又はそれらの任意の混合物からなる群から選択されるゼオライトを含む、請求項２１に記載のプロセス。

【請求項24】

前記金属含有ゼオライトが銀含有ゼオライトを含む、請求項２１に記載のプロセス。

【請求項25】

前記反応が、トルエン、ジクロロメタン－トルエン混合物、ＤＭＳＯ－トルエン混合物、及びＮ－メチルピロリドン－トルエン混合物からなる群から選択される有機溶媒中で行われる、請求項２１～２４のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項26】

前記反応が、トルエン中で行われる、請求項２１～２５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項27】

前記反応が、モレキュラーシーブの存在下で行われる、請求項２１～２６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項28】

前記反応が、タイプ３Å、タイプ４Å、タイプ５Å、タイプ１３Ｘ、又はそれらの任意の混合のモレキュラーシーブの存在下で行われる、請求項２１～２７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項29】

前記反応が、約２０℃～約８０℃の温度で行われる、請求項２１～２８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項30】

前記反応が、約２０℃～約５０℃の温度で行われる、請求項２１～２９のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項31】

前記反応が、約２０℃～約３０℃の温度で行われる、請求項２１～３０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項32】

前記反応が、約５時間～約５０時間行われる、請求項２１～３１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項33】

前記反応が、約５時間～約３０時間行われる、請求項２１～３２のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項34】

前記反応が、約６０～約８０℃で約１５時間～約２０時間行われる、請求項２１～３１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項35】

前記反応が、約２０℃～約２５℃で約２０時間～約３０時間行われる、請求項２１～３１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項36】

Ｒ^２が、Ａｃ、Ｂｚ、アリル、ベンゾエート、メトキシメチル（ＭＯＭ）、テトラヒドロプロピラニル（ＴＨＰ）、ｔ－ブチル、ピバレート、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、及びｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）からなる群から選択される、請求項２１～３５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項37】

Ｒ^２が、Ａｃ又はＢｚである、請求項２１～３６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項38】

ＰＧが、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂからなる群から選択される、請求項２１～３７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項39】

ＰＧが、ＰｈＣＨである、請求項２１～３８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項40】

Ｘが、Ｂｒである、請求項２１～３９のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項41】

前記反応が、不活性雰囲気下で行われる、請求項２１～４０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項42】

前記式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を単離することを更に含む、請求項２１～４１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項43】

前記（Ａ_ＰＧ）の化合物が、式（Ａ）の化合物

【化6】

（式中、Ｒ^１が、Ｈであり、保護基ＰＧを有する）を保護することにより形成される、請求項２１～４２のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項44】

前記式（Ａ）の化合物を保護することが、ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）_２、トリホスゲン、Ｍｅ_２ＳｉＣｌ_２、Ｍｅ_２Ｃ（ＯＭｅ）_２、２－メトキシプロペン、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸エステルからなる群から選択される化合物との反応により行われる、請求項４３に記載のプロセス。

【請求項45】

前記式（Ａ）の化合物を保護することが、ＤＭＦ、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、ジオキサン、１－３ジオキソラン、アセトニトリル、２，５－ジメチルテトラヒドロフラン（ＤＭＴＨＦ）、ガンマ－バテロラクトン（ＧＶＬ）、ジヒドロレボグルコセロン（Ｃｙｒｅｎｅ）、レブリン酸メチル（ＭＬ）、レブリン酸エチル（ＥＬ）、レブリン酸エチルプロピレングリコールケタール（ＥＬＰＫ）、グルタル酸ジメチル（ＤＭＧ）、ジメチルプロピレン尿素（ＤＭＰＵ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、グリコフロール（ＴＨＦＰ）、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムアセテート（［ｅｍｉｍ］［ＯＡｃ］）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される有機溶媒中で行われる、請求項４３又は４４に記載のプロセス。

【請求項46】

前記式（Ａ）の化合物が、請求項１～２０のいずれか一項に記載のプロセスにより得られる、請求項４３～４５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項47】

式（ＡＡ）の反応性炭水化物

【化7】

（式中、ｎが、１～５の整数である）を合成するためのプロセスであって、
請求項２１～４６のいずれか一項に記載のプロセスにより得られた前記式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を脱保護することを含む、プロセス。

【請求項48】

脱保護することが、前記式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を塩基性溶液と反応させて、中間生成物を形成させ、次いで前記中間生成物を酸性溶液で処理することを含む、請求項４７に記載のプロセス。

【請求項49】

前記塩基性溶液が、メトキシド、エトキシド、及び２－メチルプロパン－２－オレートからなる群から選択される塩基を含み、好ましくは、前記塩基がナトリウムメトキシドである、請求項４８に記載のプロセス。

【請求項50】

前記塩基性溶液が、メタノール、エタノール、及びイソプロパノールからなる群から選択される溶媒を含み、好ましくは、前記溶媒がメタノールである、請求項４８又は４９に記載のプロセス。

【請求項51】

前記酸性溶液が、酢酸－水混合物又はエタノール酸－水混合物を含み、好ましくは前記酸性溶液が酢酸水溶液である、請求項４８～５０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項52】

前記塩基性溶液と反応させることが、約０℃～約５０℃の温度、好ましくは室温で行われる、請求項４８～５１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項53】

前記塩基性溶液と反応させることが、約０．５時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間の期間にわたって行われる、請求項４８～５２のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項54】

前記酸性溶液で処理することが、約５０℃～約７０℃、好ましくは約６０℃の温度で行われる、請求項４８～５３のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項55】

前記酸性溶液による処理が、約１時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間の期間にわたって行われる、請求項４８～５４のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項56】

前記式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物と反応させた後に前記塩基性溶液を中和し、いずれの液体も蒸発させて、前記中間生成物を粗形態で得ることを更に含む、請求項４８～５５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項57】

前記中間生成物が、前記酸性溶液で処理されるとき、粗である、請求項４８～５６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項58】

式（ＡＡ）の反応性炭水化物

【化8】

を合成するためのプロセスであって、前記プロセスが、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物

【化9】

（式中、ｎが１～５の整数であり、Ｒ^２が一価の保護基であり、ＰＧが二価の保護基である）の脱保護を含み、
前記脱保護が、前記式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を塩基性溶液と反応させて中間粗生成物を形成させ、次いで、前記中間粗生成物を酸性溶液で処理することを含む、プロセス。

【請求項59】

前記塩基性溶液が、メトキシド、エトキシド、及び２－メチルプロパン－２－オレートからなる群から選択される塩基を含み、好ましくは、前記塩基がナトリウムメトキシドである、請求項５８に記載のプロセス。

【請求項60】

前記塩基性溶液が、メタノール、エタノール、及びイソプロパノールからなる群から選択される溶媒を含み、好ましくは、前記溶媒がメタノールである、請求項５８又は５９に記載のプロセス。

【請求項61】

前記酸性溶液が、酢酸－水混合物又はエタノール酸－水混合物を含み、好ましくは前記酸性溶液が酢酸水溶液である、請求項５８～６０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項62】

前記塩基性溶液と反応させることが、約０℃～約５０℃の温度、好ましくは室温で行われる、請求項５８～６１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項63】

前記塩基性溶液と反応させることが、約０．５時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間の期間にわたって行われる、請求項５８～６２のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項64】

前記酸性溶液で処理することが、約５０℃～約７０℃、好ましくは約６０℃の温度で行われる、請求項５８～６３のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項65】

前記酸性溶液による処理が、約１時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間の期間にわたって行われる、請求項５８～６４のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項66】

前記式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物と反応させた後に前記塩基性溶液を中和し、いずれの液体も蒸発させて、前記中間粗生成物を得ることを更に含む、請求項５８～６５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項67】

Ｒ^２が、Ａｃ又はＢｚ、好ましくはＢｚである、請求項５８～６６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項68】

ＰＧが、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂからなる群から選択される、請求項５８～６７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項69】

ＰＧがＰｈＣＨである、請求項５８～６８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項70】

式（Ｂ）又は式（ＢＢ）の反応性炭水化物

【化10】

（式中、ｎが１～５の整数であり、ｍが１～５の整数であり、ＬＧは、前記式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物がアミノ基と反応するときにアミド結合形成を可能にする脱離基である）を合成するためのプロセスであって、
式（Ｃ）の化合物

【化11】

を、式（Ａ）の化合物

【化12】

（式中、Ｒ^１がＨである）と反応させて、前記式（Ｂ）の化合物を形成させるか、
又は
式（ＡＡ）の化合物

【化13】

と反応させて、前記式（ＢＢ）の化合物を形成させること、を含む、プロセス。

【請求項71】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、光開始剤の存在下で行われる、請求項７０に記載のプロセス。

【請求項72】

前記光開始剤が、フリーラジカル生成アゾ化合物、フェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸リチウム（ＬＡＰ）、金属又は金属イオン系光開始剤、過酸化物、過硫酸アンモニウム、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項７１に記載のプロセス。

【請求項73】

前記フリーラジカル生成アゾ化合物が、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）、２，２’－アゾビス（２－メチルプロピオニトリル）、４，４’－アゾビス（４－シアノペンタン酸）（ＡＣＶＡ）、１，１’－アゾビス（シアノシクロヘキサン）（ＡＣＨＮ）、ジアゼンジカルボン酸ビス（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミド）（ＴＭＡＤ）、アゾジカルボン酸ジピペリジド（ＡＤＤ）、２，２’－アゾビス［２－（２－イミダゾリン－２－イル）プロパン］ジヒドロクロリド、２，２’－アゾビス（２－アミジノプロパン）ジヒドロクロリド（ＡＡＰＨ）、２，２’－アゾビス（２－メチルプロピオニトリル）、４，４’－（ジアゼン－１，２－ジイル）ビス（４－シアノペンタン酸）、２，２’－アゾジ（２－メチルブチロニトリル）、及びそれらの任意の組み合わせ、からなる群から選択される、請求項７２に記載のプロセス。

【請求項74】

前記過酸化物が、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシイソブチレート、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド、過酸化ベンゾイル、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項７２又は７３に記載のプロセス。

【請求項75】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、水又は有機溶媒中で行われる、請求項７０～７４のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項76】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、水、ジオキサン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジイソプロピルエーテル、イソプロパノール、クロロベンゼン、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル、メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、クロロホルム、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される溶媒中で行われる、請求項７０～７５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項77】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、約４０℃～約１１０℃の範囲の温度で行われる、請求項７０～７６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項78】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、約１時間～約１０時間の期間にわたって行われる、請求項７０～７７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項79】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、可視光吸収遷移金属光触媒の存在下、可視光下で行われる、請求項７０に記載のプロセス。

【請求項80】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、紫外線照射下で行われる、請求項７０に記載のプロセス。

【請求項81】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、光開始剤の存在下、紫外線照射下で行われる、請求項７０に記載のプロセス。

【請求項82】

前記光開始剤が、２，２’－アジドビス［２－イミダゾリン－２－イル）プロパン］ジヒドロクロリド、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、及びそれらの組み合わせ、からなる群から選択される、請求項８１に記載のプロセス。

【請求項83】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、メタノール、エタノール、イソプロパノール、又はそれらの任意の組み合わせなどのアルコール溶媒中で行われる、請求項８０～８２のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項84】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、約２０℃～約３０℃の範囲の温度で行われる、請求項８０～８３のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項85】

前記式（Ｃ）の化合物を前記式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、約１時間～約２４時間の期間にわたって行われる、請求項８０～８４のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項86】

前記紫外線照射が、短波長、中波長、又は長波長の紫外線照射である、請求項８０～８５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項87】

ｍが１～３の整数である、請求項７０～８６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項88】

ｍが２である、請求項７０～８７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項89】

ＬＧが、ＯＰｈＦ－_５若しくはＯＰｈＦ_４（ｐａｒａ ＳＯ_３Ｎａ）などのＯ－フルオロフェニル基、又はＯ－（Ｎ－スクシンイミジル）基である、請求項７０～８８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項90】

ＬＧがＯ－（Ｎ－スクシンイミジル）基である、請求項７０～８９のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項91】

前記式（Ａ）の化合物が、請求項１～２０のいずれか一項に記載のプロセスにより得られる、請求項７０～９０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項92】

前記式（ＡＡ）の化合物が、請求項４７～６９のいずれか一項に記載のプロセスにより得られる、請求項７０～９０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項93】

式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質

【化14】

（式中、ｎが１～５の整数であり、ｍが１～５の整数であり、ｐが１～５０の整数であり、

【化15】

が、コンジュゲーションに利用可能な少なくとも１つのアミノ基を含む担体材料である）を調製するためのプロセスであって、
前記担体材料の少なくとも１つの遊離アミノ基を、式（Ｂ）の化合物とコンジュゲートさせて、前記式（Ｉ）の複合糖質を形成させるか、又は式（ＢＢ）の化合物とコンジュゲートさせて、前記式（Ｉ）の複合糖質を形成させることを含み、前記式（Ｂ）及び（ＢＢ）の化合物が、請求項７０～９２のいずれか一項に記載のプロセスにより得られる、プロセス。

【請求項94】

前記担体材料が、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを含む、請求項９３に記載のプロセス。

【請求項95】

ｎが１～３の整数である、請求項１～９４のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項96】

ｎが１又は２である、請求項１～９５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項97】

ｎが１である、請求項１～９６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項98】

式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物

【化16】

であって、式中、ｎが１～５の整数であり、Ｒ^２がＡｃであり、ＰＧが、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂから選択される二価の保護基である、化合物。

【請求項99】

ＰＧがＰｈＣＨである、請求項９８に記載の化合物。

【請求項100】

ｎが１～３の整数である、請求項９８又は９９に記載の化合物。

【請求項101】

ｎが１又は２である、請求項９８～１００のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項102】

ｎが１である、請求項９８～１０１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項103】

式

【化17】

を有する、請求項９８に記載の化合物。

【請求項104】

式

【化18】

の化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本明細書は、担体材料（例えば、タンパク質）とのコンジュゲーションに有用な抗原前駆体などの反応性炭水化物の合成プロセス、並びに免疫原として及び治療／診断ツールとして有用な複合糖質を反応性炭水化物から調製するためのプロセスに関する。

【0002】

本明細書は、複数の文書に言及しており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。

【背景技術】

【0003】

免疫療法の最終的な目的は、免疫系の自然応答及び適応応答を調節して、細菌、ウイルス、及びがん細胞などの外来物質と戦うその能力を改善することによって、感染又はがんのような疾患を治療することである。先天性免疫は、病原体への曝露の初期段階で誘発される免疫防御の第一線と考えられている。役割を担う細胞には、ナチュラルキラー（natural killer、ＮＫ）細胞、樹状細胞（dendritic cell、ＤＣ）、マクロファージ、単球、γδＴ細胞、及びナチュラルキラーＴ（natural killer T、ＮＫＴ）細胞が含まれる。自然免疫系とは異なり、適応免疫は、外来抗原への最初の曝露時に発達するのがより遅いが、高度に特異的な応答を発達させ、長期にわたる防御のための免疫記憶を作り出す。これには、Ｔ細胞及びＢ細胞並びにそれらの体液性仲介物質及び細胞性仲介物質、サイトカイン、並びに抗体のクローン増殖が関与する。自然免疫応答と適応免疫応答との間の主要な界面は、プロフェッショナル抗原提示細胞（professional antigen-presenting cell、ｐＡＰＣ）；マクロファージ、Ｂ細胞、特に樹状細胞（ＤＣ）である。ｐＡＰＣは、内性源及び外性源からの抗原をプロセシングし、Ｔ細胞に提示することができる。これらは、Ｔｏｌｌ様受容体（Toll-like receptor、ＴＬＲ）などのパターン認識受容体（pattern recognition receptor、ＰＲＲ）を介して微生物を認識する。微生物表面決定基又は異常及び非天然抗原の認識において、微生物又は腫瘍及びそれらの関連抗原マーカーは、エンドサイトーシス経路を介してｐＡＰＣによって飲み込まれ得、ここで、典型的にはペプチド断片に分解され、放出された抗原が細胞内ＭＨＣクラスＩ又はクラスＩＩ分子（ｐＭＨＣ）上に結合される。ｐＡＰＣは成熟及び活性化を受け、細胞内区画から細胞表面へのｐＭＨＣ複合体の再分布、サイトカイン及びケモカインの分泌をもたらす。ｐＡＰＣに加えて、全ての有核細胞型は、細胞膜上に内因性ペプチドのみを提示する。ｐＡＰＣとは対照的に、ウイルス及び細胞内病原体を含む、細胞自体の内部から生じるペプチドは、ｂ２－ミクログロブリンにカップリングしたＭＨＣクラスＩ分子によって提示される。ＡＰＣは、典型的にはＭＨＣクラスＩＩを発現しない。

【0004】

ＭＨＣクラスＩＩ分子上に提示されたペプチドは、典型的には、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞上のＴ細胞抗原受容体（T cell antigen receptor、ＴＣＲ）によって認識され、これは次に、共刺激シグナルがｐＡＰＣから受け取られる際に、Ｔｈ１又はＴｈ２細胞などの異なるサブセットへの機能的成熟を受ける。Ｔｈ１細胞は、主にＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの分泌を伴う炎症促進性応答を引き起こす一方、Ｔｈ２細胞は典型的なサイトカインを分泌する。Ｔｈ１細胞は主に細胞媒介性応答と関連付けられるが、両方の型のＴｈ細胞が、Ｂ細胞による抗体の産生を支持し、これが今度は、抗体アイソタイプ及び機能に影響を及ぼす。例えば、ＩＬ－１２及びＴＮＦ－αは、Ｔｈ１細胞の分化及び１型ＩｇＧサブクラスの産生と関連付けられる一方、ＩＬ－６及び他のＴｈ２サイトカインは、２型ＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１）産生に寄与する。

【0005】

ＭＨＣクラスＩ分子上にペプチドを提示するＡＰＣは、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞のＴＣＲによって認識される。２つの細胞型によって発現される共刺激分子間のいくつかの更なる相互作用は、細胞傷害性Ｔ細胞のエフェクター細胞への活性化を誘発するが、樹状細胞が活性化されたＴヘルパー細胞及びＴ細胞傷害性細胞の両方と相互作用する場合、強力で長持ちする記憶Ｔ細胞が生成される。一旦活性化されると、Ｔ細胞は、サイトカインの助けを借りてクローン選択及び増殖を受ける。これにより、機能不全標的抗原に特異的な細胞の数が増加し、次いで機能不全抗原陽性体細胞を求めて身体全体を移動することができる。標的細胞にドッキングすると、活性化された細胞傷害性Ｔ細胞は、パーフォリン及びガンザイム（ganzyme）などの細胞毒素のペイロードを放出する。パーフォリンの作用により、グランザイムが標的細胞に浸透し、そのプロテアーゼにより細胞死が引き起こされる。細胞傷害性Ｔ細胞はまた、ＦＡＳシグナル伝達経路によって標的細胞死を誘発し得る。

【0006】

このため、目的の病原体又は腫瘍抗原に対処するために、ワクチン誘導性免疫を適切な応答に合わせることが可能であることが望ましい。

【0007】

炭水化物は、タンパク質及びペプチドとは対照的に、Ｔｈ細胞の関与を誘発するように適当に装備されていないＴ細胞非依存性抗原であり、したがって、免疫細胞増殖、抗体クラススイッチング、及び親和性／特異性成熟を誘導することができない。炭水化物ベースのワクチンで最初に得られた主要な初期の進歩は、Ｔ細胞依存性エピトープとして働く担体タンパク質に適当にコンジュゲートされた場合、細菌莢膜多糖類が、オプソニン食作用抗体を産生するために必要な免疫化学的能力を獲得できるようになったという発見によって支持されている。

【0008】

伝統的に、炭水化物抗原を担体タンパク質にコンジュゲートさせるための戦略は、リシン残基のε－アミノ基上へのアルデヒド由来の糖の還元的アミノ化、又は単にアミドカップリング反応のいずれかに依存している。両方の場合において、部分的及びランダムな炭水化物抗原コンジュゲーションが概して生じる。更に、全てのアミドパートナー（リシン由来のアミン又はグルタミン酸／アスパラギン酸由来の酸）が炭水化物コンジュゲーションに使用される場合、担体タンパク質に結合する炭水化物抗原があまりにも多くなり過ぎることで、免疫原性の内在の減少／排除を伴う、必須である可能性のあるＴ細胞ペプチドエピトープの遮蔽が生じる。このため、複合糖質ワクチンを調製するための現在の戦略は、調製物がそれらの炭水化物分布及び再現性の観点から必要な均一性を欠く（すなわち、タンパク質への糖の結合点がランダムに分布し、バッチごとに様々な密度である）ことを理由に、不十分であり、重大な規制及び／又は商業的障害に直面している。このため、より高い炭水化物抗原均質性、より正確に特徴付け可能な構造、及びバッチ間の再現性を有する複合糖質ワクチンが非常に望ましい。

【0009】

加えて、タンパク質とのコンジュゲーションのための抗原前駆体として有用な反応性炭水化物の合成は、様々な課題を提示し得る。現在の合成経路は、立体選択性制御に関して困難であり得、分離することが困難であり得る中間体立体異性体の獲得及び／又は収率が低い所望の立体異性体をもたらす。

【0010】

２０１９年後半に始まったＣＯＶＩＤ－１９パンデミックの原因病原体であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、世界経済も損なった、世界的なヒト健康に対する進行中の脅威である。初期のワクチン開発努力は、宿主細胞へのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の細胞進入及び膜融合を媒介するスパイク（Ｓ）糖タンパク質上に存在するタンパク質抗原及びエピトープに主に焦点を当てていた。しかしながら、世界中の保健専門家は、科学者が、タンパク質エピトープに向けられた現在のワクチン戦略を回避し得るウイルスにおける新しい突然変異を含む、単一の戦略について生じ得る失敗又は合併症の可能性を軽減するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する治療的介入を開発するための異なる戦略を並行して探索することを強く推奨している。このため、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質上に存在するタンパク質抗原に焦点を当てたものと並行して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するワクチン及び他の治療ツールを開発することが、依然として必要とされている。

【発明の概要】

【0011】

第１の態様では、式（Ａ）の反応性炭水化物

【0012】

【化1】

（式中、Ｒ^１がＨであり、ｎが１～５の整数である）を合成するためのプロセスであって、式（Ａ_０）の化合物

【0013】

【化2】

を、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２と、プロトンを遊離させることができる酸の存在下で加熱しながら反応させて、式（Ａ）の化合物を含む反応混合物を生じさせ、反応混合物を冷却して、式（Ａ）の化合物を含む冷却された混合物を得ることを含むプロセスが、本明細書に記載される。

【0014】

いくつかの実施形態では、式（Ａ_０）の化合物を反応させることは、式（Ａ_０）の化合物を、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルを含む溶液に、約０℃～約２５℃の混合温度で加えて、式（Ａ_０）の化合物、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２、及びＨＣｌを含む低温の中間反応混合物を生じさせることを含む。

【0015】

更なる態様では、式（ＡＡ_ＰＧ）の反応性炭水化物

【0016】

【化3】

（式中、Ｒ^２が一価の保護基であり、ＰＧが二価の保護基であり、ｎが１～５の整数である）を合成するためのプロセスであって、金属含有ゼオライトの存在下で、式（Ａ_ＰＧ）の化合物

【0017】

【化4】

を、式（Ａ_１）の化合物

【0018】

【化5】

（式中、Ｘが、－Ｉ、－Ｂｒ、－Ｃｌ、－ＣＮ、－ＯＴｆ（トリフレート）、－ＯＭｓ（メシレート）、－ＯＴｓ（トシレート）、メチルスルフェート、又はトリクロロアセトイミデートである）と反応させることを含むプロセスが本明細書に記載される。

【0019】

いくつかの実施形態では、式（Ａ_ＰＧ）の化合物と式（Ａ_１）の化合物との間の反応は、モレキュラーシーブの存在下で行われる。

【0020】

いくつかの実施形態では、式（Ａ_ＰＧ）の化合物は、式（Ａ）の化合物

【0021】

【化6】

（式中、Ｒ^１がＨであり、保護基ＰＧを有する）を保護することによって形成される。

【0022】

いくつかの実施形態では、式（Ａ）の化合物は、本明細書に定義されるプロセスによって得られる。

【0023】

更なる態様では、式（ＡＡ）の反応性炭水化物

【0024】

【化7】

（式中、ｎが１～５の整数である）を合成するためのプロセスであって、本明細書に定義されるプロセスによって得られる式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を脱保護することを含むプロセスが本明細書に記載される。

【0025】

いくつかの実施形態では、脱保護することは、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を塩基性溶液と反応させて、中間生成物を形成させ、次いで中間生成物を酸性溶液で処理することを含む。

【0026】

更なる態様では、式（ＡＡ）の反応性炭水化物

【0027】

【化8】

を合成するためのプロセスであって、式（ＡＡ_ＰＧ）

【0028】

【化9】

（式中、ｎが１～５の整数であり、Ｒ^２が一価の保護基であり、ＰＧが二価の保護基である）の脱保護を含み、脱保護が、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を塩基性溶液と反応させて中間粗生成物を形成させ、次いで中間粗生成物を酸性溶液で処理することを含むプロセスが本明細書に記載される。

【0029】

更なる態様では、式（Ｂ）又は式（ＢＢ）の反応性炭水化物

【0030】

【化10】

（式中、ｎが１～５の整数であり、ｍが１～５の整数であり、ＬＧは、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物がアミノ基と反応するときにアミド結合形成を可能にする脱離基である）を合成するためのプロセスがであって、式（Ｃ）の化合物

【0031】

【化11】

を、式（Ａ）の化合物

【0032】

【化12】

（式中、Ｒ^１がＨである）と反応させて、式（Ｂ）の化合物を形成させるか、又は式（ＡＡ）の化合物

【0033】

【化13】

と反応させて、式（ＢＢ）の化合物を形成させることを含むプロセスが本明細書に記載される。

【0034】

いくつかの実施形態では、式（Ａ）の化合物は、本明細書に定義されるプロセスによって得られる。

【0035】

いくつかの実施形態では、式（ＡＡ）の化合物は、本明細書に定義されるプロセスによって得られる。

【0036】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることは、光開始剤の存在下で行われる。

【0037】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることは、紫外線照射下で行われる。

【0038】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることは、光開始剤の存在下、紫外線照射下で行われる。

【0039】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることは、可視光吸収遷移金属光触媒の存在下、可視光下で行われる。

【0040】

いくつかの実施形態では、式（Ｂ）、（ＢＢ）、及び／又は（Ｃ）中のｍは、１～３の整数である。いくつかの実施形態では、ｍは２である。

【0041】

更なる態様では、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質

【0042】

【化14】

（式中、ｎが１～５の整数であり、ｍが１～５の整数であり、ｐが１～５０の整数であり、

【0043】

【化15】

が、コンジュゲーションに利用可能な少なくとも１つのアミノ基を含む担体材料である）を調製するためのプロセスであって、担体材料の少なくとも１つの遊離アミノ基を式（Ｂ）の化合物とコンジュゲートさせて式（Ｉ）の複合糖質を形成すること、又は式（ＢＢ）の化合物とコンジュゲートさせて式（Ｉ）の複合糖質を形成させることを含み、式（Ｂ）及び（ＢＢ）の化合物が本明細書に定義されるプロセスによって得られる、プロセスが本明細書に記載される。

【0044】

いくつかの実施形態では、担体材料は、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に定義されるプロセスにおいて、ｎは１～３の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは１又は２である。いくつかの実施形態では、ｎは１である。

【0045】

更なる態様では、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物

【0046】

【化16】

が本明細書に記載され、式中、ｎが１～５の整数であり、Ｒ^２がＡｃであり、ＰＧが、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂから選択される二価の保護基である。

【0047】

いくつかの実施形態では、化合物（ＡＡ_ＰＧ）中のＰＧは、ＰｈＣＨである。

【0048】

いくつかの実施形態では、化合物（ＡＡ_ＰＧ）中のｎは、１～３の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは１又は２である。いくつかの実施形態では、ｎは１である。

【0049】

いくつかの実施形態では、化合物（ＡＡ_ＰＧ）は、以下の式

【0050】

【化17】

を有する。

【0051】

更なる態様では、式

【0052】

【化18】

の化合物が本明細書に記載される。

【0053】

一般的定義
見出し及び他の識別子、例えば、（ａ）、（ｂ）、（ｉ）、（ｉｉ）などは、明細書及び特許請求の範囲を読みやすくするために提示されるにすぎない。明細書又は特許請求の範囲における見出し又は他の識別子の使用は、工程又は要素がアルファベット順若しくは数字順に、又はそれらが提示される順で実行されることを必ずしも必要とはしない。

【0054】

特許請求の範囲及び／又は明細書において用語「含む」と併せて使用される場合の単語「ａ」又は「ａｎ」の使用は、「１つ」を意味する場合もあるが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１つ又は２つ以上」の意味とも一致する。

【0055】

用語「約」は、値がその値を決定するために使用される装置又は方法の誤差の標準偏差を含むことを示すために使用される。概して、「約」という用語は、１０％までの可能性のある変動を示すことを意味する。したがって、値の１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０％の変動は、「約」という用語に含まれる。別途指示がない限り、範囲の前の「約」という用語の使用は、範囲の両端に適用される。

【0056】

本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」（並びに「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」などの任意の形態の「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」）、「ｈａｖｉｎｇ（有する）」（並びに「ｈａｖｅ」及び「ｈａｓ」などの任意の形態の「ｈａｖｉｎｇ」）「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」（並びに「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」及び「ｉｎｃｌｕｄｅ」などの任意の形態の「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」）又は「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（含有する）」（並びに「ｃｏｎｔａｉｎｓ」及び「ｃｏｎｔａｉｎ」などの任意の形態の「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」）は、包括的又はオープンエンドであり、追加の列挙されていない要素又は方法の工程を除外するものではない。

【0057】

表現「脱離基」又は「ＬＧ」は、本明細書で使用される場合、脱離基による置換前の対応する官能基と比較して、改善された反応効率及び／又は特異性（すなわち、ポリペプチド又はタンパク質の遊離アミン基への改善されたコンジュゲーション）を提供する脱離基を指す。いくつかの実施形態では、脱離基は、ＯＰｈＦ_５若しくはＯＰｈＦ_４（ｐａｒａ ＳＯ_３Ｎａ）などのＯ－フルオロフェニル基であっても、Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）基であってもよい。

【0058】

本明細書で使用される場合、用語「担体材料」は、炭水化物抗原（例えば、抗原性単糖、二糖、オリゴ糖、又は多糖、例えば、天然又は合成抗原）にコンジュゲートすることができる材料を指す。いくつかの態様では、担体材料は、担体材料上に存在する少なくとも１つのアミノと結合したアミドを形成することができる基で終結しているチオールリンカーを介して炭水化物抗原にコンジュゲート可能であり得る。いくつかの実施形態では、担体材料は担体タンパク質であり得る。他の実施形態では、担体材料は、数例を挙げると、アミノ基を担持する、センサチップ、マイクロアッセイ、又はビーズを含んでもよい。

【0059】

本明細書で使用される場合、用語「タンパク質」（例えば、「担体タンパク質」という表現において）は、修飾が本明細書に記載の複合糖質免疫原及び複合糖質ワクチンの免疫原性を破壊しない限り、任意の種類の修飾（例えば、アセチル化、リン酸化、グリコシル化、硫酸化、ＳＵＭＯ化、プレニル化、ユビキチン化などといった化学修飾又は翻訳後修飾）を含む場合も含まない場合もある、アミノ酸の任意のペプチド結合鎖を意味する。更に明確にするために、本明細書で使用される用語「タンパク質」及び「担体タンパク質」は、ペプチド及びポリペプチドの両方を包含するが、両方の実施形態が、「担体タンパク質又はペプチド」という表現などで一緒に列挙されてもよい。

【0060】

本明細書で使用される場合、用語「複合糖質」は、担体材料にカップリングされた炭水化物抗原（例えば、抗原性単糖、二糖、オリゴ糖、又は多糖、例えば、天然又は合成抗原）を指す。担体材料が担体タンパク質又はペプチドである場合、カップリングにより、目的の対象における炭水化物抗原の免疫原性が増強され得る。表現「炭水化物抗原」及び「糖抗原」は、本明細書で使用されるのと同じ意味を有する。用語「免疫原」は、免疫系の成分によって（例えば、抗体及び／又はリンパ球によって）特異的に結合され、目的の対象において体液性及び／又は細胞性免疫応答を生成することができる薬剤を指す。本明細書で使用される場合、「複合糖質免疫原」などの表現における用語「免疫原」は、複合糖質自体を特定の用途（例えば、対象において免疫応答を生成するための免疫原として）に限定することなく、複合糖質の能力（すなわち、物理的特徴又は特性）を指す。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される複合糖質免疫原は、生物学的試料（例えば、対象由来のもの）中の複合糖質免疫原に結合する抗体の存在又は非存在を検出するための診断アッセイ又は方法（例えば、インビトロ方法）に用いられてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される複合糖質免疫原は、複合糖質免疫原に特異的に結合する抗体（例えば、診断又は治療に適用可能なモノクローナル抗体）をスクリーニング、同定、又は評価するために使用されてもよい。

【0061】

本明細書で使用される場合、用語「合成」は、ヒトの介入によって産生される、天然の生成物ではない化合物を指す。

【0062】

本明細書で使用される場合、用語「コンジュゲート可能な」は、少なくとも２つの分子（例えば、炭水化物抗原とチオリンカー、又は炭水化物抗原とタンパク質若しくはペプチドなどの担体材料）が、分子が実際に互いに共有結合しているかどうかにかかわらず、化学反応を介して互いに共有結合する能力又は可能性を指す。対照的に、用語「コンジュゲートされた」は、互いに共有結合している少なくとも２つの分子（例えば、炭水化物抗原とチオリンカー、又は炭水化物抗原とタンパク質若しくはペプチドなどの担体材料）を指す。

【0063】

本明細書で使用される場合、用語「投与」は、投与経路が対象において免疫応答の生成を生じさせる限り、非経口（例えば、皮下、皮内、筋肉内、又は静脈内）、経口、経皮、鼻腔内などといった投与経路を含んでもよい。

【0064】

本明細書で使用される場合、用語「対象」は、概して、本明細書に記載される複合糖質に対して免疫応答を仕掛けることができ、好ましくは、複合糖質及び／又は複合糖質を提示する細胞に特異的に結合する抗体及び／又はリンパ球の産生をもたらす生物（例えば、動物又はヒト）を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される対象は、治療的に（例えば、本明細書に記載される複合糖質免疫原によるワクチン接種を介して）処置される患者であってもよく、研究、診断、及び／又は治療目的のツール（例えば、抗体）を生み出すための手段として用いられてもよい。

【0065】

本開示で使用される様々な略語の意味を以下の表１に提供する。

【0066】

【表1】

【0067】

本説明の他の目的、利点、及び特徴は、添付の図面を参照して単なる例として示される、その特定の実施形態の以下の非限定的な説明を読むことによって、より明らかになる。

【図面の簡単な説明】

【0068】

添付の図は以下のとおりである。

【図1】ＮＨＳ－ＴＦ（化合物１１ｂ）対タンパク質のリシン総数の３つの異なる比（０．２、０．６、３）での、０．０１μｇのコンジュゲートしていないＣＲＭ１９７及びＴＦにコンジュゲートしたＣＲＭ１９７（ＣＲＭ－ＴＦ：グリコンジュゲート（ＩＩ））に対する、ＴＦ特異的レクチンピーナッツ凝集素（ＰＮＡ）及び抗ＴＦモノクローナル抗体ＪＡＡ－Ｆ１１の反応性を示すＥＬＩＳＡの結果を示す。

【図2】ＮＨＳ－ＴＦ（化合物（１１ｂ））対タンパク質のリシン総数の３つの異なる比での、１μｇのコンジュゲートしていないＣＲＭ１９７及びＴＦにコンジュゲートしたＣＲＭ１９７（ＣＲＭ－ＴＦ：グリコンジュゲート（ＩＩ））のクマシー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。

【図3】ＴＦ特異的レクチンピーナッツ凝集素（ＰＮＡ）及び抗ＴＦモノクローナル抗体ＪＡＡ－Ｆ１１を使用して検出された、ＮＨＳ－ＴＦ（化合物（１１ｂ））対タンパク質のリシン総数の３つの異なる比での、１μｇのコンジュゲートしていないＣＲＭ１９７及びＴＦにコンジュゲートしたＣＲＭ１９７（ＣＲＭ－ＴＦ：グリコンジュゲート（ＩＩ））のウエスタンブロットを示す。

【図4】ＮＨＳ－ＴＦ（化合物（１１ｂ））対タンパク質のリシン総数の３つの異なる比での、コンジュゲートしていないＣＲＭ１９７及びＴＦにコンジュゲートしたＣＲＭ１９７（ＣＲＭ－ＴＦ：グリコンジュゲート（ＩＩ））のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦスペクトルの重ね合わせを示す。

【0069】

配列表
本出願は、サイズ約１５Ｋｂ、２０２２年１月１１日作成のコンピュータ可読形式の配列表を含む。コンピュータ可読形式は参照により本明細書に組み込まれる。

【発明を実施するための形態】

【0070】

本明細書は、抗原前駆体を含む反応性炭水化物、並びにワクチンにおいて、診断において、又は分析ツール若しくは治療ツールを生み出す（例えば、新規の抗複合糖質抗体を生み出す）ための免疫原などの使用に好適な複合糖質を合成するためのプロセスに関する。

【0071】

担体タンパク質のアミン基に末端酸官能基で終結する炭水化物抗原をコンジュゲートすることは、伝統的に、スクシンイミド又はカルボジイミド試薬を用いたランダム活性化を介して行われる。このような炭水化物抗原－担体タンパク質コンジュゲーション法の主な欠点の１つは、担体タンパク質自体の中で起こる制御されていない／望ましくない自己架橋であり、この自己架橋では、担体タンパク質のそれ自体のアスパラギン酸／グルタミン酸残基の側鎖が、担体タンパク質のそれ自体のリジン残基のε－アミン基にカップリングした状態になる。このアプローチは、担体タンパク質の天然構造の混乱又は破壊を招き、多くの場合、別様には高度に免疫原性である重要なペプチド配列の実質的な損失、並びに担体タンパク質の望ましくない架橋の可能性を生じる。加えて、当該分野で説明される炭水化物抗原－担体タンパク質コンジュゲーション法は、リンカー、例えばスクアリン酸などを用いる場合が多く、これは、リンカーがカップリングされる炭水化物抗原のみに対してではなく、リンカー自体に対する免疫応答を誘発し得る。更に、当該分野で説明される炭水化物抗原－担体タンパク質コンジュゲーション法は、担体タンパク質がグリコシル化される程度に対する適切な制御を可能にしないので、不均一な複合糖質種を生じる場合が多く、これは、ヒト治療のための産生に対する大きな障壁である。加えて、タンパク質とのコンジュゲーションのための抗原前駆体として有用な反応性炭水化物中間体の合成は、種々の課題を提示し得る。現在の合成経路は、立体選択性制御が課題であり得、このことにより、獲得した中間立体異性体が分離困難となり得る及び／又は所望の立体異性体の収率が低い結果となる。

【0072】

対照的に、本明細書は、現在知既知であるプロセスよりも少ない工程で、より良好な立体選択性制御を有する中間反応性炭水化物の合成を可能にし、担体タンパク質などの担体材料とのコンジュゲーションに好適な合成抗原をもたらすプロセスを提供する。本明細書はまた、単純かつ限定された合成工程を使用しながら、担体材料がグリコシル化される程度に対する適切な制御を依然として可能にする、複合糖質を合成するためのプロセスを提供する。

【0073】

第１の態様では、本明細書は、１つ以上の遊離アミン基を有する担体材料（例えば、担体タンパク質又はペプチド）とコンジュゲーションさせて、複合糖質を生じさせることができる反応性炭水化物を産生させるための改善されたプロセスに関する。この反応性炭水化物は、精製した後、１つ以上の遊離アミン基を有する担体材料とのカップリング反応において用いることができる。カップリング反応により、精製された反応性炭水化物のうちの１つ以上を、アミド結合を介して１つ以上の遊離アミン基で担体材料にコンジュゲートさせ、それにより複合糖質を産生させる。

【0074】

更なる態様では、本明細書に記載されるプロセスに従って調製された合成反応性炭水化物から複合糖質を産生させるためのプロセスが本明細書に記載される。

【0075】

別の態様では、コンジュゲーション可能な反応性炭水化物を得るために反応させことができる中間反応性炭水化物を産生させるためのプロセスが本明細書に記載される。

【0076】

以下のスキーム１は、これらの種々のプロセスに関与し得る合成工程を示す。

【0077】

【化19】

【0078】

プロセス反応１
いくつかの実施形態では、式（Ａ）の反応性炭水化物

【0079】

【化20】

の合成が最初に提供され、式中、Ｒ^１がＨであり、ｎが１～５の整数、例えば１～３、好ましくは１又は２、最も好ましくは１である。本プロセスは、式（Ａ_０）の化合物

【0080】

【化21】

と、式ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２のアルコールとの間の、酸の存在下での反応を含み得る。反応を加熱しながら行い、式（Ａ）の化合物を含む反応混合物を得て、次いでこれを冷却し得る。このため、式（Ａ）の化合物の合成には、アルコールＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２による酸性条件での炭水化物（Ａ_０）のＣ_１炭素上でのエーテル化が伴う。式（Ａ）の化合物の形成をもたらすことができる反応を触媒するために、いくつかの酸を反応の実施に使用することができるが、その酸が反応混合物中でプロトンＨ^＋を遊離させることができることが条件となる。いくつかの実施形態では、酸は、強酸又はルイス酸であり得る。いくつかの実施形態では、ルイス酸は、ＢＦ_３．Ｅｔ_２Ｏとは異なり得る。

【0081】

いくつかの実施形態では、化合物（Ａ_０）及びアルコールＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２から式（Ａ）の化合物を形成させるための反応に使用される酸は、塩化アセチル、酢酸、酸性カチオン交換樹脂、カンファースルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物、ＨＣｌ、又はそれらの任意の混合物であり得る。

【0082】

いくつかの実施形態では、式（Ａ_０）の化合物を、酸としての塩化アセチルの存在下でアルコールＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２と反応させる。ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルを含む溶液は、最初に、約０℃～約２５℃の温度などの低温で調製することができる。いくつかの実施態様では、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルは、約０℃の温度で調製することができる。他の実施形態では、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルの溶液を調製する温度は、約０℃～約１０℃、又は約０℃～約２０℃、又は約１０℃～約２０℃、又は約１０℃～約２５℃、又はこれらの範囲に含まれる任意の温度であり得る。ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルの溶液を調製する場合、過剰のアルコールを使用することができる。よって、アルコールは、反応物として使用することができ、同時に溶媒としても機能する。アルコールと塩化アセチルとを混合すると、いくらかのＡｃＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２と共にいくらかのＨＣｌが形成される。溶液は、アルコール中の溶液中にいくらかのＨＣｌを維持するために、低温で調製できることが好ましい。いくつかの実施形態では、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルは、アルゴン又はＮ_２などの不活性雰囲気下で調製することができる。ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルの溶液の調製が完了した後、式（Ａ_０）の化合物を、依然として低温、例えば、約０℃～約２５℃であり得る溶液に加えて、少なくとも式（Ａ_０）の化合物、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２、ＨＣｌ、及びいくらかのＡｃＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２を含む中間反応混合物を低温で形成させる。次に、この中間反応混合物を加熱して、式（Ａ）の化合物の形成を促進する。加熱すると、式（Ａ_０）の化合物とＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２との間の反応がプロトンＨ^＋の存在下で迅速に生じ、それにより、式（Ａ）のエーテルが形成され得る。化合物（Ａ_０）のＣ_１位の酸素原子を活性化することに加えて、プロトンは、糖の２位の炭素上のアセトアミド基も活性化することができ、アルファ立体配座に有利なアノマー効果を増加させる。このため、塩化アセチルなどの酸の存在下での反応により、同じ化合物を得るために保護－脱保護工程を必要とする今までの合成プロセスとは対照的に、単一の反応を使用して、アルファ立体配座を有する式（Ａ）の化合物の形成が促進され得る。いくつかの実施形態では、中間体混合物の加熱は、約４０℃～約８０℃の温度で行うことができる。いくつかの実施形態では、反応温度は、約６０℃～約８０℃、例えば、約７０℃であり得る。これらの温度範囲に含まれる任意の温度を加熱温度として使用することができる。反応時間は、約３０分～５時間で構成され得る。いくつかの実施形態では、反応時間は、約３０分～約１時間であり得る。酸として塩化アセチルを使用すると、約３０分～約４５分などの短い反応時間で足り得る。約３０分でさえ十分であり得る。いくつかの実施形態では、反応の進行を監視し、その結果として反応時間を調整することができる。更なる実施形態では、少なくとも式（Ａ_０）の化合物、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２、及びＨＣｌを低温で含む中間体混合物を、混合物を急速かつ即座に加熱するのに十分高い温度の熱源と接触させる。言い換えれば、いくつかの実施形態では、低温から加熱温度への段階的な加熱とは対照的に、低温の中間体混合物をすぐに熱源と接触させ得る。実験室規模では、これは、丸底フラスコを低温の油浴に入れた後、温度を上昇させて所望の加熱温度に達するように油浴を加熱するのとは対照的に、低温の中間体混合物を含む丸底フラスコを既に加熱温度にある油浴に入れることによって行うことができる。工業規模では、中間体混合物を熱源と「接触させる」ことを可能にする任意の従来の加熱手段を使用することができる。例えば、これらには、熱交換器が含まれ得る。いくつかの実施形態では、熱源は、約４０℃～約８０℃の温度であり得る。

【0083】

更なる実施形態では、式（Ａ）の化合物を得るための反応を触媒するためにプロトンを遊離させることができる酸源には、酢酸、酸性カチオン交換樹脂、カンファースルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物、ＨＣｌ、又はそれらの任意の混合物から選択される酸が含まれ得る。いくつかの実施形態では、これらの他の種類の酸との反応は、式（Ａ_０）の化合物、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２、及び酸を含む溶液を調製し、その後、溶液を加熱することにより行うことができる。溶液は有機溶媒も含み得る。いくつかの実施形態では、溶媒は、数例を挙げると、ジクロロメタン、クロロホルム、１，３－ジオキソラン、ジエトキシメタン、ジメトキシメタン、２，５，７，１０－テトラオキサウンデカン、ジプロポキシメタン、及びそれらの任意の組み合わせから選択され得る。いくつかの実施形態では、式（Ａ_０）の化合物、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２、及び酸を含む反応混合物を、約３０℃～約７０℃の温度で加熱することができる。この範囲内の任意の温度を使用することができる。反応時間は変えることができ、反応の進行をモニタリングすることにより、反応時間を調節することができる。いくつかの実施形態では、反応は、約０．５時間～約１５時間、又は約０．５時間～約１０時間、又は約０．５時間～約５時間、又は約０．５時間～約２時間の反応時間で行うことができる。

【0084】

いくつかの実施形態では、化合物（Ａ_０）から式（Ａ）の化合物を調製するための反応温度及び反応時間は、式（Ａ）の化合物の等価なベータ配座異性体の形成をモニタリングすることにより更に調整することができる。上述の反応条件（すなわち、酸の選択、温度、反応時間及び／又は中間混合物の調製）によりアルファ配座異性体化合物（Ａ）の形成が促進されるはずではあるものの、いくらかのベータ配座異性体が反応中に形成され得る。加熱中に反応混合物を分析することにより、ベータ配座異性体の形成を評価し、なんらかのベータ配座異性体が観察された場合、直ちに加熱を停止し、混合物を冷却することができる。

【0085】

加熱工程が完了し、反応混合物が冷却されたら、冷却された混合物を、任意の従来の方法（例えば、塩基を加え、約７のｐＨに達するまでｐＨをチェックすること）により中和することができる。次に、式（Ａ）の化合物を、任意の従来の方法により単離及び精製することができる。例えば、単離された粗生成物を、凍結乾燥させる、再沈殿させる、又はクロマトグラフィーにより精製することができる。いくつかの実施形態では、精製ステップにより、式（Ａ）の化合物を、一部が反応中に形成された等価なベータ配座異性体から分離することが可能になり得る。

【0086】

プロセス反応２
いくつかの実施形態では、式（Ａ_ＰＧ）の化合物

【0087】

【化22】

の合成も提供され、式中、ＰＧが保護基であり、ｎが１～５の整数である。反応は、式（Ａ）の化合物

【0088】

【化23】

を保護することを含み、式中、Ｒ^１がＨであり、二価の保護基ＰＧを有する。

【0089】

いくつかの実施形態では、ｎは、１～３の整数、好ましくは１又は２、最も好ましくは１である。

【0090】

いくつかの実施形態では、式（Ａ）の化合物は、上記のプロセス反応１により調製することができる。更なる実施形態では、式（Ａ）の化合物の保護は、ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）_２、トリホスゲン、Ｍｅ_２ＳｉＣｌ_２、Ｍｅ_２Ｃ（ＯＭｅ）_２、２－メトキシプロペン、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸エステルからなる群から選択される化合物との反応により行われる。よって、いくつかの実施形態では、この反応により、保護された式（Ａ_ＰＧ）の化合物（ＰＧは、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂからなる群から選択される）を調製することが可能になる。好ましい実施形態では、保護基はＰｈＣＨである。

【0091】

いくつかの実施形態では、保護反応は、ＤＭＦ、ジメチルアセトアミド（dimethyl acetamide、ＤＭＡＣ）、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、ジオキサン、１－３ジオキソラン、アセトニトリル、２，５－ジメチルテトラヒドロフラン（dimethyl tetrahydrofuran、ＤＭＴＨＦ）、ガンマ－バテロラクトン（gamma-vaterolactone、ＧＶＬ）、ジヒドロレボグルコセロン（Ｃｙｒｅｎｅ）、レブリン酸メチル（methyl levulinate、ＭＬ）、レブリン酸エチル（ethyl levulinate、ＥＬ）、レブリン酸エチルプロピレングリコールケタール（ethyl levulinate propyleneglycol ketal、ＥＬＰＫ）、グルタル酸ジメチル（dimethyl glutarate、ＤＭＧ）、ジメチルプロピレン尿素（dimethylpropylene urea、ＤＭＰＵ）、ポリ（プロピレングリコール）（poly(propyleneglycol)、ＰＰＧ）、グリコフロール（ＴＨＦＰ）、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムアセテート（［ｅｍｉｍ］［ＯＡｃ］）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される有機溶媒中で行われる。

【0092】

いくつかの実施形態では、式（Ａ_ＰＧ）の化合物は、触媒量のｐ－トルエンスルホン酸一水和物の存在下、ＤＭＦ中で式（Ａ）の化合物をＰｈＣＨ（ＯＭｅ）_２と反応させることにより調製することができる。

【0093】

いくつかの実施形態では、反応は室温で行うことができ、式（Ａ_ＰＧ）の化合物の形成を監視し、反応が実質的に完了したときに反応を停止することができる。いくつかの実施形態では、反応時間は、約５時間であり得る。次に、この化合物を従来の方法により単離することができる。

【0094】

プロセス反応３
いくつかの実施形態では、式（ＡＡ_ＰＧ）の反応性炭水化物化合物

【0095】

【化24】

の合成も提供され、式中、Ｒ^２が一価の保護基であり、ＰＧが二価の保護基であり、ｎが１～５の整数である。

【0096】

いくつかの実施形態では、合成には、金属含有ゼオライトの存在下で、式（Ａ_ＰＧ）の化合物

【0097】

【化25】

と、式（Ａ_１）の化合物

【0098】

【化26】

とをグリコシル化することが含まれ、式中、Ｘが、－Ｉ、－Ｂｒ、－Ｃｌ、－ＣＮ、－ＯＴｆ（トリフレート）、－ＯＭｓ（メシレート）、－ＯＴｓ（トシレート）、メチルスルフェート、又はトリクロロアセトイミデートである。

【0099】

いくつかの実施形態では、式（Ａ_ＰＧ）の化合物は、上記のプロセス反応２により調製することができる。

【0100】

いくつかの実施形態では、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を調製するための反応は、有機溶媒中で行うことができる。例えば、有機溶媒は、トルエン、ジクロロメタン（dichorometane）－トルエン混合物、ＤＭＳＯ－トルエン混合物、及びＮ－メチルピロリドン－トルエン混合物からなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、溶媒はトルエンであり得る。反応は、好ましくは不活性雰囲気下（例えば、アルゴン又はＮ_２下）で行うことができる。

【0101】

いくつかの実施形態では、一価の保護基Ｒ^２は、Ａｃ、Ｂｚ、アリル、ベンゾエート、メトキシメチル（methoxymethyl、ＭＯＭ）、テトラヒドロプロピラニル（tetrahydropropyranyl、ＴＨＰ）、ｔ－ブチル、ピバレート、ｔ－ブチルジメチルシリル（t-butyldimethylsilyl、ＴＢＤＭＳ）、及びｔ－ブチルジフェニルシリル（t-butyldiphenylsilyl、ＴＢＤＰＳ）からなる群から選択され得る。任意の他の可能なヒドロキシル保護基も使用することができる。好ましい実施形態では、Ｒ^２は、Ａｃ又はＢｚであり得る。

【0102】

前述のように、いくつかの実施形態では、二価の保護基ＰＧは、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂから選択することができ、好ましくはＰｈＣＨである。式（Ａ_１）の化合物中の脱離基Ｘは、好ましくは、Ｉ、Ｂｒ、又はＣｌから選択されるハロゲン、最も好ましくはＢｒであり得る。

【0103】

いくつかの実施形態では、ｎは、１～３の整数、好ましくは１又は２、最も好ましくは１である。

【0104】

いくつかの実施形態では、金属含有ゼオライトは、ゼオライト骨格自体の一部である少なくとも１つの金属を有するか、又はゼオライト細孔内及び／若しくはゼオライト表面に存在する少なくとも１つの金属を有するゼオライトであり得る。このため、いくつかの実施形態では、ゼオライトは、金属含浸ゼオライトであり得る。更なる実施形態では、金属含有ゼオライト中の金属は、Ａｇ、Ａｌ、Ｃｄ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｍｏ、Ｐｄ、Ｐｔ、Ｓｎ、Ｓｂ、Ｖ、Ｚｒ、又はそれらの任意の混合物を含み得る。いくつかの実施形態では、金属含有ゼオライトは、数例を挙げると、Ｓｎ－ベータ、Ｚｒ－ベータ、Ａｌ－ベータ（ＯＨ）、Ａｌ－ベータ（Ｆ）、Ｐｔ＠ＭＣＭ－２２、Ｋ－ＰｔＳｎ／ＭＦＩ、０．３Ｐｔ／０．５Ｓｎ－Ｓｉ－ベータ、Ｐｔ／Ｓｎ ２．０－ベータ、０．５ＣｏＳｉ－ベータ、Ｖ－ベータ、Ｈ－［Ｆｅ］ＺＳＭ－５、Ｆｅ－ＢＥＡ、Ｇａ－ベータ、Ｇａ－ベータ－２００、Ｍｏ／ＨＺＳＭ－５、又はそれらの任意の混合物からなる群から選択されるゼオライトであり得る。しかしながら、式（Ａ_ＰＧ）の化合物と式（Ａ_１）の化合物との間のエーテル結合反応を触媒することができる任意の種類の金属含有ゼオライトを使用して、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を調製することができる。好ましい実施形態では、金属含有ゼオライトは、例えば銀交換ゼオライトなどの銀含有ゼオライトを含み得る。このようなゼオライトは、概して市販されている。

【0105】

いくつかの実施形態では、金属含有ゼオライトの存在下で行われるグリコシル化反応は、室温で又は加熱しながら行うことができる。いくつかの実施形態では、グリコシル化温度は、約２０℃～約８０℃であり得る。他の実施形態では、反応は、約２０℃～約７０℃、約２０℃～約６０℃、約２０℃～約５０℃、約２０℃～約４０℃、又は約２０℃～約３０℃の温度で行う。このため、グリコシル化反応は、これらの範囲内に含まれる任意の温度で行うことができる。更なる実施形態では、グリコシル化は、約５時間～約５０時間の期間にわたって行うことができる。他の実施形態では、グリコシル化時間は、約５時間～約３０時間、又は約５時間～約２５時間、約５時間～約２０時間、又は約１０時間～約３０時間、又は約１０時間～約２５時間、又は約１０時間～約２０時間、又は約１５時間～約３０時間、又は約１５時間～約２５時間、又は約１５時間～約２０時間、又は約２０時間～約２５時間、又は約２０時間～約３０時間持続し得る。いくつかの実施形態では、グリコシル化反応は、約６０～約８０℃で約１５時間～約２０時間行うことができる。他の実施形態では、グリコシル化は、約２０℃～約２５℃で約２０時間～約３０時間行うことができる。

【0106】

式（Ａ_ＰＧ）及び（Ａ_１）の２つの炭水化物間の反応のための触媒として金属含有ゼオライトを使用することにより、驚くべきことに、２つの糖の間にベータ配座を有するグリコシル化生成物（ＡＡ_ＰＧ）を本質的に得ることが可能になった。これは、アルファ配座異性体とベータ配座異性体との混合物を生成する従来のグリコシル化反応（例えば、トリクロロアセトイミデート及びＢＦ_３．Ｅｔ_２Ｏ又はＴＭＳＯＴｆを使用する）と比較して重要な利点である。本明細書に記載のプロセスにおいて、得られた生成物（ＡＡ_ＰＧ）の精製は、反応の終わりに濾過を行ってゼオライトを除去することにより容易に行うことができる。更に、ゼオライトの存在下でのグリコシル化は、従来の反応よりも容易に制御することができる。例えば、トリクロロアセトイミデート及びＢＦ_３．Ｅｔ_２Ｏ又はＴＭＳＯＴｆの存在下でのグリコシル化は、反応温度を約－３０℃など非常に低く維持することを必要とする場合があり、これにより今度は反応が減速し得る。更に、金属含有ゼオライトの使用は、同様にグリコシル化を触媒することが知られているが、毒性の重金属を含み、したがって有毒であるＨｇ（ＣＮ）_２などの他の触媒の使用よりも好ましい。全体として、金属含有ゼオライトの使用により、高い立体選択性制御で、グリコシル化をより円滑に行うことが可能になる。

【0107】

いくつかの実施形態では、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物の調製、すなわち、式（Ａ_ＰＧ）及び（Ａ_１）の化合物間のカップリングは、モレキュラーシーブの存在下で更に行うことができる。使用することができるモレキュラーシーブの例としては、タイプ３Å、タイプ４Å、タイプ５Å、タイプ１３Ｘのモレキュラーシーブが挙げられる。これらの任意の混合を使用することもできる。モレキュラーシーブの存在下で反応を行うことで、水分／微量の水を捕捉することが可能になり、これにより今度は反応が促進され得る。

【0108】

上で説明したように、最終粗生成物（ＡＡ_ＰＧ）は、反応混合物を濾過し、その後溶媒を除去することにより容易に単離することができる。いくつかの実施形態では、次に、任意の従来の方法により粗生成物を精製することができる。

【0109】

プロセス反応４
いくつかの実施形態では、式（ＡＡ）の反応性炭水化物化合物

【0110】

【化27】

の合成も提供され、式中、ｎが１～５の整数である。

【0111】

この反応は、本明細書に記載される式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を脱保護することを含み得る。

【0112】

いくつかの実施形態では、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物は、本明細書に記載されるプロセスにより得ることができる。

【0113】

いくつかの実施形態では、ｎは、１～３の整数、好ましくは１又は２、最も好ましくは１である。

【0114】

いくつかの実施形態では、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物の脱保護は、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を塩基性溶液と反応させて中間生成物（ＡＡｉ）を形成させ、次に中間生成物（ＡＡｉ）を酸性溶液で処理することを含み得る。

【0115】

いくつかの実施形態では、中間生成物（ＡＡｉ）を得るために必要な塩基性溶液は、メトキシド、エトキシド、及び２－メチルプロパン－２－オレートからなる群から選択される塩基を含み得る。好ましい実施形態では、塩基はナトリウムメトキシドであり得る。いくつかの実施形態では、塩基性溶液は、メタノール、エタノール、及びイソプロパノールからなる群から選択される溶媒を含み得る。いくつかの実施形態では、溶媒は、好ましくはメタノールであり得る。いくつかの実施形態では、中間生成物（ＡＡｉ）を形成させるための（ＡＡ_ＰＧ）と塩基性溶液との反応は、約０℃～約５０℃の温度で、好ましくは室温で行うことができる。中間生成物（ＡＡｉ）を形成させるための塩基性溶液との反応は、約０．５時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間の期間にわたって行うことができる。

【0116】

いくつかの実施形態では、粗形態の中間生成物（ＡＡｉ）は、いかなる精製工程も必要とせずに、酸性溶液で直接処理することができる。これは、保護プロセスの工程の数を減らすことができるので、有利である。このため、いくつかの実施形態では、塩基処理とその後の酸処理との両方を同じ反応容器で行うことができる。いくつかの実施形態では、塩基処理が完了したら、溶液を中和することができ、液体を蒸発させて、中間生成物（（ＡＡｉ）を粗形態で得ることができる。次に、粗形態の中間生成物（ＡＡｉ）を、上述のように、いかなる精製工程も必要とせずに酸性溶液で直接処理することができる。

【0117】

いくつかの実施形態では、後続の酸処理は、中間生成物（ＡＡｉ）を、酢酸－水混合物又はエタノール酸－水混合物を含む酸性溶液と反応させることにより行うことができる。好ましい実施形態では、酸性溶液は酢酸水溶液であり得る。更なる実施形態では、中間生成物（ＡＡｉ）は、約５０℃～約７０℃、好ましくは約６０℃の温度で、酸性溶液で処理することができる。酸性溶液での処理を、約１時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間行って、式（ＡＡ）の化合物を含む溶液を得ることができる。

【0118】

いくつかの実施形態では、式（ＡＡ）の化合物は、次に、例えば、抽出、沈殿、結晶化、凍結乾燥、Ｃ－１８上の順相若しくは逆相下のシリカゲルでのクロマトグラフィー、擬似移動床（simulated moving bed、ＳＭＢ）クロマトグラフィー、及び／又は膜ナノ濾過などの膜技術による精製を含む従来の方法により単離することができる。

【0119】

プロセス反応５ａ及び５ｂ
いくつかの実施形態では、式（Ｂ）又は式（ＢＢ）の反応性炭水化物を合成するためのプロセスも提供され、

【0120】

【化28】

式中、ｎが１～５の整数であり、ｍが１～５の整数であり、ＬＧは、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物がアミノ基と反応するときにアミド結合形成を可能にする脱離基である。式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物は、本明細書において炭水化物抗原前駆体とも称される。式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物は、炭水化物抗原が連結されるチオール－リンカーを含む。

【0121】

いくつかの実施形態では、式（Ｂ）の化合物を得るためのプロセスは、式（Ｃ）の化合物

【0122】

【化29】

（式中、ｍ及びＬＧが上で定義したとおりである）を、
式（Ａ）の化合物

【0123】

【化30】

（式中、Ｒ^１がＨであり、ｎが上で定義したとおりである）と反応させることを含み得る。

【0124】

いくつかの実施形態では、式（Ａ）の化合物は、本明細書の上で定義したプロセスにより得ることができる。

【0125】

いくつかの実施形態では、式（ＢＢ）の化合物を得るためのプロセスは、式（Ｃ）の化合物を、式（ＡＡ）の化合物

【0126】

【化31】

（式中、ｎが上で定義したとおりである）と反応させることを含み得る。

【0127】

いくつかの実施形態では、式（ＡＡ）の化合物は、本明細書の上で定義したプロセスにより得ることができる。

【0128】

いくつかの実施形態では、式（Ａ）、（ＡＡ）、（Ｂ）、及び（ＢＢ）の化合物において、ｎは、１～３の整数、好ましくは１又は２、最も好ましくは１である。

【0129】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物において、ｍは１～３の整数である。好ましい実施形態では、ｍは２である。

【0130】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物において、ＬＧは、ＯＰｈＦ_５若しくはＯＰｈＦ_４（ｐａｒａ ＳＯ_３Ｎａ）などのＯ－フルオロフェニル基、又はＯ－（Ｎ－スクシンイミジル）基であり得る。好ましい実施形態では、式（Ｃ）の化合物中のＬＧは、Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）基である。

【0131】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）の化合物と反応させて式（Ｂ）の化合物を得ること、又は式（ＡＡ）の化合物と反応させて式（ＢＢ）の化合物を得ることは、光開始剤の存在下で行われる。いくつかの実施形態では、光開始剤は、フリーラジカル生成アゾ化合物、フェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸リチウム（ＬＡＰ）、金属又は金属イオン系光開始剤、過酸化物、過硫酸アンモニウム、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。

【0132】

いくつかの実施形態では、光開始剤がフリーラジカル生成アゾ化合物であるとき、これは、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）、２，２’－アゾビス（２－メチルプロピオニトリル）、４，４’－アゾビス（４－シアノペンタン酸）（ＡＣＶＡ）、１，１’－アゾビス（シアノシクロヘキサン）（ＡＣＨＮ）、ジアゼンジカルボン酸ビス（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミド）（ＴＭＡＤ）、アゾジカルボン酸ジピペリジド（ＡＤＤ）、２，２’－アゾビス［２－（２－イミダゾリン－２－イル）プロパン］ジヒドロクロリド、２，２’－アゾビス（２－アミジノプロパン）ジヒドロクロリド（ＡＡＰＨ）、２，２’－アゾビス（２－メチルプロピオニトリル）、４，４’－（ジアゼン－１，２－ジイル）ビス（４－シアノペンタン酸）、２，２’－アゾジ（２－メチルブチロニトリル）、又はそれらの任意の組み合わせであり得る。

【0133】

いくつかの実施形態では、光開始剤が過酸化物であるとき、過酸化物は、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシイソブチレート、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド、過酸化ベンゾイル、及びそれらの任意の組み合わせを含み得る。

【0134】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることは、水中又は有機溶媒中で行うことができる。いくつかの実施形態では、溶媒は、この溶媒への光開始剤の溶解度に応じて選択することができる。いくつかの実施形態では、光開始剤の溶解度を高めるために必要であれば、異なる溶媒の混合物を使用することができる。いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物と式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物との反応を行うために使用される溶媒は、水、ジオキサン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジイソプロピルエーテル、イソプロパノール、クロロベンゼン、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル、メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、クロロホルム、及びそれらの任意の組み合わせから選択することができる。

【0135】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）の化合物と反応させて式（Ｂ）の化合物を得ること、又は式（ＡＡ）の化合物と反応させて式（ＢＢ）の化合物を得ることは、約４０℃～約１１０℃の範囲の温度で行うことができる。いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることは、約１時間～約１０時間の期間にわたって行うことができる。

【0136】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）の化合物と反応させて式（Ｂ）の化合物を得ること、又は式（ＡＡ）の化合物と反応させて式（ＢＢ）の化合物を得ることは、紫外線照射下で行うことができる。いくつかの実施形態では、紫外線照射は、短波長、中波長、又は長波長の紫外線照射であり得る。いくつかの実施形態では、反応は、更に、光開始剤の存在下、紫外線照射下で行うことができる。そのような実施形態では、光開始剤は、好ましくは、２，２’－アジドビス［２－イミダゾリン－２－イル）プロパン］ジヒドロクロリド、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、及びそれらの組み合わせから選択することができる。いくつかの実施形態では、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物を得るための反応を、任意選択で光開始剤の存在下、紫外線照射下で行う場合、メタノール、エタノール、イソプロパノール、又はそれらの任意の組み合わせなどのアルコール溶媒中で反応を行うことができる。いくつかの実施形態では、紫外線照射下での式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物の合成は、約２０℃～約３０℃の範囲の温度で行うことができる。いくつかの実施形態では、照射は、約１時間～約２４時間の期間にわたって行うことができる。

【0137】

いくつかの実施形態では、式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）の化合物と反応させて式（Ｂ）の化合物を得ること、又は式（ＡＡ）の化合物と反応させて式（ＢＢ）の化合物を得ることは、可視光吸収遷移金属光触媒の存在下、可視光下で行うことができる。いくつかの実施形態では、可視光吸収遷移金属光触媒は、Ｒｕ（ｂｐｚ）_３（ＰＦ_６）_２などのルテニウムポリピリジル複合体であることができ、光源は青色ＬＥＤ光を含み得る。いくつかの実施形態では、可視光吸収遷移金属光触媒の存在下で行われる反応は、アセトニトリルなどの溶媒中、約２０℃～約３０℃の範囲の温度で行うことができる。

【0138】

いくつかの実施形態では、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物は、従来の方法を使用して単離することができる。いくつかの実施形態では、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物を含む反応混合物を処理し、溶媒及びいずれの未反応の式（Ｃ）の化合物も除去して、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物を回収することができる。次に、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物を、以下に更に詳述するように、少なくとも１つのアミノ基を担持する担体材料とのコンジュゲーションのために、粗形態で、すなわち、更に精製することなく、直接使用することができる。

【0139】

プロセス反応６ａ及び６ｂ
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質

【0140】

【化32】

【0141】

を調製するためのプロセスも提供され、式中、ｎが１～５の整数であり、ｍが１～５の整数であり、ｐが１～５０の整数（例えば、コンジュゲーションに利用可能な担体材料上の遊離アミノ基の総数を表す）であり、

【0142】

【化33】

が、少なくとも１つの遊離アミノ基を担持する担体材料である。本プロセスは、担体材料を、本明細書で定義するプロセスにより調製される式（Ｂ）の化合物とコンジュゲートさせて式（Ｉ）の複合糖質を形成させること、又は本明細書で定義するプロセスにより調製される式（ＢＢ）の化合物とコンジュゲートさせて式（Ｉ）の複合糖質を形成させることを含む。

【0143】

いくつかの実施形態では、担体材料は、コンジュゲーションに利用可能な少なくとも１つのアミノ基、すなわち、

【0144】

【化34】

結合を式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質中に形成するために式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物の活性化エステル基（ＣＯ）ＬＧと反応することができる少なくとも１つのアミノ基を含む。いくつかの実施形態では、担体材料は、１～５０個のアミノ基を含むことができ、１～５０個の

【0145】

【化35】

結合を式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質中に形成することを可能にする。

【0146】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物において、ｎは、１～３の整数、好ましくは１又は２、最も好ましくは１である。

【0147】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物において、ｍは１～３の整数である。好ましい実施形態では、ｍは２である。

【0148】

いくつかの実施形態は、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物と担体材料との間のコンジュゲーションには、任意の従来のコンジュゲーション法が伴い得る。

【0149】

いくつかの実施形態では、担体材料は、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを含み得る。他の実施形態では、担体材料は、数例を挙げると、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物とコンジュゲートすることができる遊離アミノ基を担持する、センサチップ、マイクロアッセイ、又はビーズを含んでもよい。

【0150】

いくつかの実施形態では、タンパク質、ペプチド、又はポリペプチドと、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物との間のコンジュゲーション反応により、アスパラギン酸／グルタミン酸残基の側鎖と担体タンパク質又はペプチド自体に存在するε－リジンアミンとの間の担体タンパク質又はペプチドの自己架橋が有利に最小化又は回避され得る。

【0151】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のコンジュゲーション反応により、担体タンパク質又はペプチドにコンジュゲートされる炭水化物抗原の数を、反応物の有効性及び／又は化学量論（例えば、担体タンパク質又はペプチドと式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物とのモル比）により制御することができるようになる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のコンジュゲーション反応は、担体タンパク質又はペプチド当たり１～５００、１～４００、１～３００、１～２００、５～５００、５～４００、５～３００、又は５～２００モル当量の式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物を反応させることを含んでもよい。

【0152】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の担体タンパク質又はペプチドは、１つ以上の遊離アミン基を含む。本明細書で使用する場合、「遊離アミン」又は「遊離アミン基」は、化学修飾及び／又はコンジュゲーション（例えば、担体タンパク質の周辺に曝露される傾向がある溶媒接触可能リジン残基などの本明細書中に記載されるような炭水化物抗原に対するもの）に利用可能な１つ以上のアミノ基を有する担体タンパク質又はペプチドを指す。いくつかの実施形態では、多すぎる数の複数の炭水化物抗原が担体タンパク質上の隣接する位置にコンジュゲートされることを回避することが有利であり得る。いくつかの実施形態では、担体タンパク質又はペプチドは、好ましくは、リシンリッチドメイン（例えば、少なくとも５０％のリシン残基を含む少なくとも４、５、６、７、８、９、又は１０個の連続したアミノ酸のセグメント）を欠き得る。

【0153】

いくつかの実施形態では、担体タンパク質は、少なくとも合計１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７ １８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００個のリシン残基を含んでもよい。いくつかの実施形態では、担体タンパク質は、合計１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０個の遊離アミノ酸残基を含んでもよい。

【0154】

いくつかの実施形態では、担体タンパク質又はペプチドは、１つ以上の遊離アミン基を有する１つ以上のリシン残基を含むか、又は任意選択で、例えば、担体タンパク質若しくはペプチドのアミノ末端、カルボキシ末端、又は溶媒接触可能位置に、１つ以上の更なるリシン残基を付加するように操作される。いくつかの実施形態では、担体タンパク質は、Ｔ細胞エピトープを含み、かつ／又は対象において細胞性免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態は、担体タンパク質又はペプチドは、Ｂ細胞エピトープを含み、かつ／又は対象において体液性免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態では、担体タンパク質は、Ｂ細胞エピトープ及びＴ細胞エピトープの両方を含み、かつ／又は対象において体液性免疫応答及び細胞性免疫応答の両方を誘導する。

【0155】

好ましくは、本明細書中に記載の担体タンパク質は、ヒト対象への投与について規制当局（例えば、ＦＤＡ）の承認を既に受けている（例えば、承認されたワクチンにおける）タンパク質であってもよい。いくつかの実施形態では、担体タンパク質は、破傷風トキソイド（Tetanus Toxoid、ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（Diphtheria Toxoid、ＤＴ）、交差反応性物質１９７（cross-reacting material 197、ＣＲＭ１９７）、髄膜炎菌外膜タンパク質複合体（Meningococcal Outer Membrane Protein Complex、ＯＭＰＣ）、Ｈ．ＩｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤ（H.Influenzae Protein D、ＨＩＤ）、ウイルス様粒子（virus-like particle、ＶＬＰ）、サイトカイン、免疫原性ペプチド、例えば、破傷風毒素８３１－８４４（配列番号１又は２）、破傷風毒素８３０－８４３（配列番号５）、アルブミン（ウシ血清アルブミン又はヒト血清アルブミンなど）、キーホールリンペットヘモシアニン（keyhole limpet hemocyanin、ＫＬＨ）、又はその免疫原性断片であるか、それに由来するか、又はそれを含む。

【0156】

いくつかの実施形態では、担体タンパク質又はペプチドは、投与される対象にとって外在性であり、好ましくは対象において（近い）オルソログを有しない。ヒトワクチン製造の背景において、本明細書に記載の担体タンパク質は、「ヒト使用に好適な担体タンパク質」又は単に「好適な担体タンパク質」を指し、これは、担体タンパク質がヒトにおいて「自己抗原」とみなされないように、ヒトタンパク質と抗原的に異なる担体タンパク質を意味する。対応するヒトタンパク質に抗原的にあまりにも類似している担体タンパク質を使用すると、担体タンパク質が「自己抗原」とみなされる可能性があり、これはヒトワクチンにおいて理想的ではない場合がある。例えば、ウシ血清アルブミン（bovine serum albumin、ＢＳＡ）のリシン残基のε－アミノ基にランダムにコンジュゲートされたＴＦ抗原からなる複合糖質免疫原は、以前に説明され、特徴付けられている（例えば、Ｄｅｍｉａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ－Ｄｉａｋｕｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｈｅｉｍｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ．，２００６；Ｔａｔｉ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。しかしながら、ＢＳＡの５９個のリシン残基上の炭水化物のレベルがランダムであり、非効率的であった（ＢＳＡ分子当たり４～６個以下のＴＦ抗原しかコンジュゲートされなかった）だけでなく、ＢＳＡは、ヒトアルブミンと抗原的にあまりにも類似しているため、ヒトワクチンにおける担体タンパク質として好適ではなかった。いくつかの実施形態では、担体タンパク質は、アルブミン（例えば、ウシ血清アルブミン）ではない。

【0157】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質は、複合糖質免疫原であってもよく、ここで、担体タンパク質又はペプチドは、対象に投与されたときに免疫原性であり、炭水化物抗原がチオリンカーを介して担体タンパク質又はペプチドにコンジュゲートすることで、コンジュゲートされていない炭水化物抗原の対応する投与と比較して、対象への投与時に炭水化物抗原の免疫原性を増加させる。

【0158】

いくつかの実施形態では、炭水化物抗原又は炭水化物抗原は、担体タンパク質又はペプチドへのカップリング後に、対象の内因性酵素によって担体タンパク質又はペプチドから切断可能ではない。

【0159】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の担体タンパク質又はペプチドは、Ｔ細胞エピトープを含んでもよく、かつ／又は投与時に対象において細胞性免疫応答を誘導してもよい。

【0160】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の式（Ｉ）又は（ＩＩ）の合成複合糖質は、対象への投与時に炭水化物抗原に対する細胞性免疫応答を誘導してもよい。

【0161】

更なる態様では、複合糖質ワクチン又は免疫応答誘発組成物を生成するための方法が本明細書に記載される。本方法は、本明細書に記載される方法により調製される式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質を、薬学的に許容される賦形剤及び／又はアジュバントと共に製剤化することを含んでもよい。いくつかの実施形態では、アジュバントは、無機化合物、鉱油、微生物誘導体、植物性誘導体、サイトカイン、スクアレン、ミョウバン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、水酸化リン灰石、ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、免疫刺激ポリヌクレオチド（例えば、ＣＰＧ）、免疫刺激脂質、フロイントアジュバント、ＲＩＢＩアジュバント、ＱＳ－２１、ムラミルジペプチド、ＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）、Ｓｔｅｖｉｕｎｅ（登録商標）、Ｓｔｉｍｕｎｅ（登録商標）、又はそれらの任意の組み合わせであるか、又はそれらを含む。

【0162】

ワクチン組成物は、レシピエント動物の年齢、性別、体重、種、及び状態、並びに投与経路などの因子を考慮して、医学又は獣医学の分野の当業者に周知の用量及び技法で投与することができる。投与経路は、経皮的であっても、粘膜投与（例えば、経口、経鼻、眼内）を介しても、非経口経路（例えば、皮内、筋肉内、皮下）を介してもよい。ワクチン組成物は、単独で投与されても、他の処置若しくは治療と同時投与又は連続投与されてもよい。投与形態は、滅菌懸濁液又はエマルジョンなど、非経口、皮下、皮内、又は筋肉内投与（例えば、注射投与）のための懸濁液及び調製物を含んでもよい。ワクチンは、スプレーとして投与されても、食物及び／又は水に混合されても、滅菌水、生理食塩水、グルコースなどといった、好適な担体、希釈剤、又は賦形剤と混合して送達されてもよい。組成物は、投与経路及び所望の調製物に応じて、補助物質、例えば、湿潤剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、アジュバント、ゲル化剤又は粘度増強添加剤、保存剤、香味剤、着色剤などを含み得る。「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，」１９９０などの標準的な薬学の教書を参考にして、過度の実験を行うことなく好適な調製物を調製することができる。

【0163】

更なる態様では、本明細書に記載の方法により調製された式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質並びに本明細書に記載される薬学的に許容される賦形剤及び／又はアジュバントを含む、複合糖質ワクチン又は適応免疫応答誘発組成物が本明細書に記載される。実施形態では、複合糖質ワクチンは、予防ワクチンであっても治療ワクチンであってもよい。実施形態では、本明細書に記載のワクチン組成物は、１つ以上のＴＡＣＡを含んでもよく、本ワクチン組成物は、ＴＡＣＡを発現するがんに対する抗がんワクチンであってもよい。実施形態では、がんは、Ｂ細胞リンパ腫、乳がん、結腸がん、非小細胞肺がん、黒色腫、神経芽細胞腫、卵巣、前立腺、肉腫、小細胞肺がん、又は胃がんであってもよい。

【0164】

いくつかの態様では、本明細書に記載される方法により産生される式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の複合糖質、本明細書に記載される式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の合成複合糖質、本明細書に記載される方法により産生される複合糖質ワクチン若しくは適応免疫応答誘発組成物、又は本明細書に記載される複合糖質ワクチンを対象に投与することを含む、対象に免疫化、ワクチン接種、又は処置を行う方法が本明細書に記載される。

【0165】

いくつかの実施形態では、疾患を有する対象に免疫化、ワクチン接種、若しくは処置を行うことに使用するための、又は式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の複合糖質に特異的に結合する抗体の存在を検出するための、又は該免疫化、ワクチン接種、若しくは処置を（例えば、対象由来の生体試料中で）検出するための、本明細書に記載される方法により産生される式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の複合糖質、本明細書に記載される式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の合成複合糖質、本明細書に記載される方法により産生される複合糖質ワクチン若しくは適応免疫応答誘発組成物、又は本明細書に記載される複合糖質ワクチンが本明細書に記載される。

【0166】

いくつかの実施形態では、疾患を有する対象に免疫化若しくは処置を行うためのワクチンを製造するための、又は式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の複合糖質に特異的に結合する抗体の存在を検出するための、又は該免疫化若しくは処置を（例えば、対象由来の生体試料中で）検出するための、本明細書に記載される方法により産生される式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の複合糖質、本明細書に記載される合成複合糖質、又は本明細書に記載される方法により産生される適応免疫応答誘発組成物が本明細書に記載される。

【0167】

いくつかの実施形態では、該炭水化物抗原の発現の増加と関連付けられる疾患を有する対象の処置に使用するための、本明細書に記載される方法により産生される式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の複合糖質、本明細書に記載される式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の合成複合糖質、本明細書に記載される方法により産生される複合糖質ワクチン若しくは適応免疫応答誘発組成物、又は本明細書に記載される複合糖質ワクチンが本明細書に記載される。

【0168】

いくつかの実施形態では、炭水化物抗原若しくは炭水化物抗原を含む腫瘍循環細胞に特異的に結合する抗体の存在を検出若しくはスクリーニングするための、又は本炭水化物抗原による免疫化若しくはワクチン接種から生じる抗体の存在を検出するための、本明細書に記載される方法により産生される式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の複合糖質、本明細書に記載される式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の合成複合糖質、本明細書に記載される方法により産生される複合糖質ワクチン若しくは適応免疫応答誘発組成物、又は本明細書に記載される複合糖質ワクチンが本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、検出又はスクリーニングは、免疫吸着アッセイ、ＥＬＩＳＡ、マイクロアレイ、又は免疫ブロット分析などの任意の好適な検出方法を介して行われ得る。

【0169】

更なる態様では、対象を処置する方法であって、本明細書に記載される方法により産生された式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質を投与して、該対象において炭水化物抗原に対する免疫応答を生じさせることと、任意選択で、該対象からの生体試料を、本炭水化物抗原に特異的に結合する抗体の存在についてスクリーニングすることとを含む方法が、本明細書に記載される。

【0170】

更なる態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関連する治療及び／又は診断ツールとして使用するための式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質が本明細書に記載される。より詳細には、対象をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫化することに使用するための、対象において抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体の産生を誘発することに使用するための、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する細胞性免疫応答を誘導することに使用するための、又はそれらの任意の組み合わせのための、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質が本明細書に記載される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関連する検出／診断ツールにおける使用のための式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質も本明細書に記載される。例えば、対象由来の試料中の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体の存在を検出することに使用するための式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質が本明細書に記載される。これに関して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質上の炭水化物抗原（例えば、ＴＦ、Ｔｎ、及びそのシアル化バリアント）の存在、並びに抗炭水化物リガンドによる結合へのそれらの利用可能性を示す結果が、ＰＣＴ／ＣＡ２０２０／０５１２５３に示されている。

【0171】

本明細書で使用する場合、「抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体」という表現は、天然の組換えタンパク質上で発現される、及び／又はアセンブルされたビリオン粒子上に存在するような、それらの天然の立体配座の抗原（例えば、炭水化物抗原）に結合することができる抗体を指す。対照的に、変性抗原（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ後などの変性条件下）にのみ結合するが、それらの天然の立体配座の同じ抗原には結合しない抗体は、「抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体」という表現から除外される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の複合糖質又はワクチンは、中和活性を有する抗体の産生を誘導し得る。本明細書で使用する場合、「中和活性」という表現は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ビリオン粒子に結合し、感受性宿主細胞に感染するそれらの能力を阻害するリガンド（例えば、抗体）を指す。

【0172】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質は、好適な担体材料（例えば、担体タンパク質若しくはペプチド、又は非タンパク質性ポリマー材料）にコンジュゲートした炭水化物抗原を含んでもよく、これらの炭水化物抗原は、ＴＦ抗原、Ｔｎ抗原、又はそれらの任意の組み合わせを含むか、又はそれらからなる。

【0173】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の炭水化物抗原は、例えば、体液性免疫応答の誘発が所望されるのか細胞性免疫応答の誘発が所望されるのかどうかに応じて、Ｂ細胞エピトープ又はＴ細胞エピトープを含む担体材料にコンジュゲートされてもよい。いくつかの態様では、炭水化物抗原は、配列番号３又は４のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質断片に、例えば、配列番号３の４位及び／若しくは６位で、又は配列番号４の３２３位、３２５位、及び／若しくは６７８位で共有結合的にコンジュゲートされてもよい。特に、配列番号４の６７８位（Ｒ６８２におけるスパイクタンパク質のフューリン切断部位に近い）は、コア－１及びコア－２構造によりＯ－グリコシル化されることが報告されている。

【0174】

いくつかの態様では、担体タンパク質又はペプチドは、配列番号４のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質配列の免疫原性断片を含んでもよく、これらの断片は、配列番号４の３２３位、３２５位、及び／又は６７８位にコンジュゲートした１つ以上の炭水化物抗原を含む。いくつかの態様では、炭水化物抗原は、配列番号３のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質断片のバリアント、例えば、４位及び／又は６位の残基が、炭水化物抗原への化学的結合を容易にし得るリシン及び／又はシステイン残基で代置され得るバリアントに共有結合的にコンジュゲートされてもよい。いくつかの態様では、担体タンパク質又はペプチドは、３２３位、３２５位、及び／又は６７８位にリシン又はシステインを有する配列番号４のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質配列のバリアントの免疫原性断片を含んでもよく、この断片は、配列番号４の３２３位、３２５位、及び／又は６７８位のリシン又はシステイン残基にコンジュゲートした１つ以上の炭水化物抗原を含む。リシン残基の場合、炭水化物抗原は、本明細書に記載のコンジュゲーション方法を介して担体タンパク質にコンジュゲートさせてもよい。システイン残基の場合、炭水化物抗原は、記載のコンジュゲーション方法を介して担体タンパク質にコンジュゲートさせてもよい。このため、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の担体材料は、配列番号３のペプチド、又は４位及び／若しくは６位にシステイン若しくはリシンを含む配列番号３のペプチドのバリアントを含むか、又はそれからなってもよい。いくつかの実施形態では、配列番号３のペプチド又はペプチドバリアントは、担体材料に含まれても（例えば、アミノ酸配列に組換え操作される）、担体材料に融合されてもよい（例えば、融合タンパク質として）。

【0175】

いくつかの実施形態では、担体材料は、破傷風トキソイド（Tetanus Toxoid、ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（Diphtheria Toxoid、ＤＴ）、交差反応性物質１９７（cross-reacting material 197、ＣＲＭ１９７）、髄膜炎菌外膜タンパク質複合体（Meningococcal Outer Membrane Protein Complex、ＯＭＰＣ）、Ｈ．ＩｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤ（H.Influenzae Protein D、ＨＩＤ）、ウイルス様粒子（virus-like particle、ＶＬＰ）、サイトカイン、免疫原性ペプチド、例えば、破傷風毒素８３１－８４４（配列番号１又は２）、破傷風毒素８３０－８４３（配列番号５）、アルブミン（ウシ血清アルブミン又はヒト血清アルブミンなど）、キーホールリンペットヘモシアニン（keyhole limpet hemocyanin、ＫＬＨ）、又はその免疫原性断片であるか、それに由来するか、又はそれを含む。

【0176】

いくつかの態様では、本明細書で定義される式（Ｉ）又は（ＩＩ）の１つ以上の複合糖質と、薬学的に許容される賦形剤及び／又はアジュバントとを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２若しくはＣＯＶＩＤ－１９ワクチン又は適応免疫応答誘導組成物が本明細書に記載される。本複合糖質は、概して、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ（又はＳ１）タンパク質上に発現される炭水化物抗原など、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ビリオン上に発現される１つ以上の炭水化物抗原を含む。本明細書に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンに好適な炭水化物抗原は、ワクチンを投与される対象において自己免疫応答を誘発するリスクを低減するために、異常なグリコシル化パターンである炭水化物抗原、すなわち、対象の正常又は健康な細胞及び組織上では発現されない炭水化物抗原である。

【0177】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の複合糖質又は本明細書に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ビリオン粒子に結合する抗体の産生を誘導し、好ましくは、中和活性を有する（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ビリオン粒子が感受性宿主細胞に感染する能力を阻害する）。

【0178】

別の態様では、本明細書はまた、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物

【0179】

【化36】

（式中、ｎが１～５の整数であり、Ｒ^２がＡｃであり、ＰＧが、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂから選択される二価の保護基である）に関する。

【0180】

いくつかの実施形態では、二価のＰＧ保護基は、ＰｈＣＨである。

【0181】

いくつかの実施形態では、式（ＡＡ_ＰＧ）において、ｎは１～３の整数である。好ましい実施形態では、ｎは１又は２である。別の実施形態では、ｎは１である。

【0182】

いくつかの実施形態では、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物は、本明細書に記載の式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質の産生において中間体として使用することができる。いくつかの実施形態では、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物は、それ自体を、本明細書に記載のプロセスにより調製することができる。

【0183】

いくつかの実施形態では、化合物（ＡＡ_ＰＧ）は、以下の式

【0184】

【化37】

を有する。

【0185】

更なる態様では、本明細書はまた、式

【0186】

【化38】

の化合物に関する。

【0187】

項目
以下の項目のうちの１つ以上が本明細書に記載される。

【0188】

１．式（Ａ）の反応性炭水化物

【0189】

【化39】

（式中、Ｒ^１がＨであり、ｎが１～５の整数である）を合成するためのプロセスであって、
加熱下で、式（Ａ_０）の化合物

【0190】

【化40】

を、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２と、プロトンを遊離させることができる酸の存在下で反応させて、式（Ａ）の化合物を含む反応混合物を生じさせることと、
反応混合物を冷却して、式（Ａ）の化合物を含む冷却された混合物を得ることと、を含む、プロセス。

【0191】

２．酸が、塩化アセチル、酢酸、酸性カチオン交換樹脂、カンファースルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物、ＨＣｌ、又はそれらの任意の混合物を含む、条項１に記載のプロセス。

【0192】

３．酸が塩化アセチルを含む、条項１又は２に記載のプロセス。

【0193】

４．式（Ａ_０）の化合物を反応させることが、式（Ａ_０）の化合物を、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルを含む溶液に、約０℃～約２５℃の混合温度で加えて、式（Ａ_０）の化合物、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２、及びＨＣｌを含む低温の中間反応混合物を生じさせることを含む、条項１～３のいずれか一項に記載のプロセス。

【0194】

５．混合温度が、約０℃、又は約０℃～約１０℃、又は約０℃～約２０℃、又は約１０℃～約２０℃、約１０℃～約２５℃である、条項４に記載のプロセス。

【0195】

６．ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２及び塩化アセチルを含む溶液が、不活性雰囲気下、約０℃の温度で調製される、条項４又は５に記載のプロセス。

【0196】

７．式（Ａ_０）の化合物を反応させることが、中間反応混合物を、熱源と、約４０℃～約８０℃の温度で接触させることを含む、条項４～６のいずれか一項に記載のプロセス。

【0197】

８．加熱が、約４０℃～約８０℃の反応温度で、約３０分～５時間の反応時間にわたって行われる、条項１～７のいずれか一項に記載のプロセス。

【0198】

９．反応温度が約６０℃～約８０℃である、条項８に記載のプロセス。

【0199】

１０．反応温度が約７０℃である、条項８又は９に記載のプロセス。

【0200】

１１．反応時間が約３０分～約１時間である、条項８～１０のいずれか一項に記載のプロセス。

【0201】

１２．反応時間が約３０分～約４５分である、条項８～１１のいずれか一項に記載のプロセス。

【0202】

１３．反応時間が約３０分である、条項８～１２のいずれか一項に記載のプロセス。

【0203】

１４．酸が、酢酸、酸性カチオン交換樹脂、カンファースルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物、ＨＣｌ、又はそれらの任意の混合物を含む、条項１又は２に記載のプロセス。

【0204】

１５．式（Ａ_０）の化合物をＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２と反応させることが、式（Ａ_０）の化合物、ＨＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ＝ＣＨ_２、及び酸を含む溶液を加熱することを含む、条項１４に記載のプロセス。

【0205】

１６．溶液が、ジクロロメタン、クロロホルム、１，３－ジオキソラン、ジエトキシメタン、ジメトキシメタン、２，５，７，１０－テトラオキサウンデカン、ジプロポキシメタン、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される溶媒を更に含む、条項１５に記載のプロセス。

【0206】

１７．反応が、約３０℃～約７０℃の温度で行われる、条項１５又は１６に記載のプロセス。

【0207】

１８．反応が、約０．５時間～約１５時間、又は約０．５時間～約１０時間、又は約０．５時間～約５時間、又は約０．５時間～約２時間の反応時間で行われる、条項１５～１７のいずれか一項に記載のプロセス。

【0208】

１９．冷却された混合物を中和することを更に含む、条項１～１８のいずれか一項に記載のプロセス。

【0209】

２０．式（Ａ）の化合物を単離することを更に含む、条項１～１９のいずれか一項に記載のプロセス。

【0210】

２１．式（ＡＡ_ＰＧ）の反応性炭水化物

【0211】

【化41】

（式中、Ｒ^２が一価の保護基であり、ＰＧが二価の保護基であり、ｎが１～５の整数である）を合成するためのプロセスであって、
金属含有ゼオライトの存在下で、式（Ａ_ＰＧ）の化合物

【0212】

【化42】

を、式（Ａ_１）の化合物

【0213】

【化43】

（式中、Ｘが、－Ｉ、－Ｂｒ、－Ｃｌ、－ＣＮ、－ＯＴｆ（トリフレート）、－ＯＭｓ（メシレート）、－ＯＴｓ（トシレート）、メチルスルフェート、又はトリクロロアセトイミデートである）と反応させることを含む、プロセス。

【0214】

２２．金属含有ゼオライト中の金属が、Ａｇ、Ａｌ、Ｃｄ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｍｏ、Ｐｄ、Ｐｔ、Ｓｎ、Ｓｂ、Ｖ、Ｚｒ、又はそれらの任意の混合物を含む、条項２１に記載のプロセス。

【0215】

２３．金属含有ゼオライトが、Ｓｎ－ベータ、Ｚｒ－ベータ、Ａｌ－ベータ（ＯＨ）、Ａｌ－ベータ（Ｆ）、Ｐｔ＠ＭＣＭ－２２、Ｋ－ＰｔＳｎ／ＭＦＩ、０．３Ｐｔ／０．５ Ｓｎ－Ｓｉ－ベータ、Ｐｔ／Ｓｎ ２．０－ベータ、０．５ ＣｏＳｉ－ベータ、Ｖ－ベータ、Ｈ－［Ｆｅ］ＺＳＭ－５、Ｆｅ－ＢＥＡ、Ｇａ－ベータ、Ｇａ－ベータ－２００、Ｍｏ／ＨＺＳＭ－５、又はそれらの任意の混合物からなる群から選択されるゼオライトを含む、条項２１に記載のプロセス。

【0216】

２４．金属含有ゼオライトが銀含有ゼオライトを含む、条項２１に記載のプロセス。

【0217】

２５．反応が、トルエン、ジクロロメタン－トルエン混合物、ＤＭＳＯ－トルエン混合物、及びＮ－メチルピロリドン－トルエン混合物からなる群から選択される有機溶媒中で行われる、条項２１～２４のいずれか一項に記載のプロセス。

【0218】

２６．反応が、トルエン中で行われる、条項２１～２５のいずれか一項に記載のプロセス。

【0219】

２７．反応が、モレキュラーシーブの存在下で行われる、条項２１～２６のいずれか一項に記載のプロセス。

【0220】

２８．反応が、タイプ３Å、タイプ４Å、タイプ５Å、タイプ１３Ｘ、又はそれらの任意の混合のモレキュラーシーブの存在下で行われる、条項２１～２７のいずれか一項に記載のプロセス。

【0221】

２９．反応が、約２０℃～約８０℃の温度で行われる、条項２１～２８のいずれか一項に記載のプロセス。

【0222】

３０．反応が、約２０℃～約５０℃の温度で行われる、条項２１～２９のいずれか一項に記載のプロセス。

【0223】

３１．反応が、約２０℃～約３０℃の温度で行われる、条項２１～３０のいずれか一項に記載のプロセス。

【0224】

３２．反応が、約５時間～約５０時間行われる、条項２１～３１のいずれか一項に記載のプロセス。

【0225】

３３．反応が、約５時間～約３０時間行われる、条項２１～３２のいずれか一項に記載のプロセス。

【0226】

３４．反応が、約６０～約８０℃で約１５時間～約２０時間行われる、条項２１～３１のいずれか一項に記載のプロセス。

【0227】

３５．反応が、約２０℃～約２５℃で約２０時間～約３０時間行われる、条項２１～３１のいずれか一項に記載のプロセス。

【0228】

３６．Ｒ^２が、Ａｃ、Ｂｚ、アリル、ベンゾエート、メトキシメチル（ＭＯＭ）、テトラヒドロプロピラニル（ＴＨＰ）、ｔ－ブチル、ピバレート、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、及びｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）からなる群から選択される、条項２１～３５のいずれか一項に記載のプロセス。

【0229】

３７．Ｒ^２が、Ａｃ又はＢｚである、条項２１～３６のいずれか一項に記載のプロセス。

【0230】

３８．ＰＧが、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂからなる群から選択される、条項２１～３７のいずれか一項に記載のプロセス。

【0231】

３９．ＰＧが、ＰｈＣＨである、条項２１～３８のいずれか一項に記載のプロセス。

【0232】

４０．Ｘが、Ｂｒである、条項２１～３９のいずれか一項に記載のプロセス。

【0233】

４１．反応が、不活性雰囲気下で行われる、条項２１～４０のいずれか一項に記載のプロセス。

【0234】

４２．式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を単離することを更に含む、条項２１～４１のいずれか一項に記載のプロセス。

【0235】

４３．（Ａ_ＰＧ）の化合物が、式（Ａ）の化合物

【0236】

【化44】

（式中、Ｒ^１が、Ｈであり、保護基ＰＧを有する）を保護することにより形成される、条項２１～４２のいずれか一項に記載のプロセス。

【0237】

４４．式（Ａ）の化合物を保護することが、ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）_２、トリホスゲン、Ｍｅ_２ＳｉＣｌ_２、Ｍｅ_２Ｃ（ＯＭｅ）_２、２－メトキシプロペン、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸エステルからなる群から選択される化合物との反応により行われる、条項４３に記載のプロセス。

【0238】

４５．式（Ａ）の化合物を保護することが、ＤＭＦ、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、ジオキサン、１－３ジオキソラン、アセトニトリル、２，５－ジメチルテトラヒドロフラン（ＤＭＴＨＦ）、ガンマ－バテロラクトン（ＧＶＬ）、ジヒドロレボグルコセロン（Ｃｙｒｅｎｅ）、レブリン酸メチル（ＭＬ）、レブリン酸エチル（ＥＬ）、レブリン酸エチルプロピレングリコールケタール（ＥＬＰＫ）、グルタル酸ジメチル（ＤＭＧ）、ジメチルプロピレン尿素（ＤＭＰＵ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、グリコフロール（ＴＨＦＰ）、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムアセテート（［ｅｍｉｍ］［ＯＡｃ］）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される有機溶媒中で行われる、条項４３又は４４に記載のプロセス。

【0239】

４６．式（Ａ）の化合物が、条項１～２０のいずれか一項に記載のプロセスにより得られる、条項４３～４５のいずれか一項に記載のプロセス。

【0240】

４７．式（ＡＡ）の反応性炭水化物

【0241】

【化45】

（式中、ｎが１～５の整数である）を合成するためのプロセスであって、
プロセスが、条項２１～４６のいずれか一項に記載のプロセスにより得られた式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を脱保護することを含む、プロセス。

【0242】

４８．脱保護することが、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を塩基性溶液と反応させて、中間生成物を形成させ、次いで中間生成物を酸性溶液で処理することを含む、条項４７に記載のプロセス。

【0243】

４９．塩基性溶液が、メトキシド、エトキシド、及び２－メチルプロパン－２－オレートからなる群から選択される塩基を含み、好ましくは、塩基がナトリウムメトキシドである、条項４８に記載のプロセス。

【0244】

５０．塩基性溶液が、メタノール、エタノール、及びイソプロパノールからなる群から選択される溶媒を含み、好ましくは、溶媒がメタノールである、条項４８又は４９に記載のプロセス。

【0245】

５１．酸性溶液が、酢酸－水混合物又はエタノール酸－水混合物を含み、好ましくは酸性溶液が酢酸水溶液である、条項４８～５０のいずれか一項に記載のプロセス。

【0246】

５２．塩基性溶液と反応させることが、約０℃～約５０℃の温度、好ましくは室温で行われる、条項４８～５１のいずれか一項に記載のプロセス。

【0247】

５３．塩基性溶液と反応させることが、約０．５時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間の期間にわたって行われる、条項４８～５２のいずれか一項に記載のプロセス。

【0248】

５４．酸性溶液で処理することが、約５０℃～約７０℃、好ましくは約６０℃の温度で行われる、条項４８～５３のいずれか一項に記載のプロセス。

【0249】

５５．酸性溶液による処理が、約１時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間の期間にわたって行われる、条項４８～５４のいずれか一項に記載のプロセス。

【0250】

５６．式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物と反応させた後に塩基性溶液を中和し、いずれの液体も蒸発させて、中間生成物を粗形態で得ることを更に含む、条項４８～５５のいずれか一項に記載のプロセス。

【0251】

５７．中間生成物が、酸性溶液で処理されるとき、粗である、条項４８～５６のいずれか一項に記載のプロセス。

【0252】

５８．式（ＡＡ）の反応性炭水化物を合成するためのプロセスであって、

【0253】

【化46】

プロセスが、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物

【0254】

【化47】

（式中、ｎが１～５の整数であり、Ｒ^２が一価の保護基であり、ＰＧが二価の保護基である）の脱保護を含み、
脱保護が、式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物を塩基性溶液と反応させて中間粗生成物を形成させ、次いで、中間粗生成物を酸性溶液で処理することを含む、プロセス。

【0255】

５９．塩基性溶液が、メトキシド、エトキシド、及び２－メチルプロパン－２－オレートからなる群から選択される塩基を含み、好ましくは、塩基がナトリウムメトキシドである、条項５８に記載のプロセス。

【0256】

６０．塩基性溶液が、メタノール、エタノール、及びイソプロパノールからなる群から選択される溶媒を含み、好ましくは、溶媒がメタノールである、条項５８又は５９に記載のプロセス。

【0257】

６１．酸性溶液が、酢酸－水混合物又はエタノール酸－水混合物を含み、好ましくは酸性溶液が酢酸水溶液である、条項５８～６０のいずれか一項に記載のプロセス。

【0258】

６２．塩基性溶液と反応させることが、約０℃～約５０℃の温度、好ましくは室温で行われる、条項５８～６１のいずれか一項に記載のプロセス。

【0259】

６３．塩基性溶液と反応させることが、約０．５時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間の期間にわたって行われる、条項５８～６２のいずれか一項に記載のプロセス。

【0260】

６４．酸性溶液で処理することが、約５０℃～約７０℃、好ましくは約６０℃の温度で行われる、条項５８～６３のいずれか一項に記載のプロセス。

【0261】

６５．酸性溶液による処理が、約１時間～約５時間、好ましくは約１時間～約２時間の期間にわたって行われる、条項５８～６４のいずれか一項に記載のプロセス。

【0262】

６６．式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物と反応させた後に塩基性溶液を中和し、いずれの液体も蒸発させて、中間粗生成物を得ることを更に含む、条項５８～６５のいずれか一項に記載のプロセス。

【0263】

６７．Ｒ^２が、Ａｃ又はＢｚ、好ましくはＢｚである、条項５８～６６のいずれか一項に記載のプロセス。

【0264】

６８．ＰＧが、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂからなる群から選択される、条項５８～６７のいずれか一項に記載のプロセス。

【0265】

６９．ＰＧが、ＰｈＣＨである、条項５８～６８のいずれか一項に記載のプロセス。

【0266】

７０．式（Ｂ）又は式（ＢＢ）の反応性炭水化物

【0267】

【化48】

（式中、ｎが１～５の整数であり、ｍが１～５の整数であり、ＬＧは、式（Ｂ）又は（ＢＢ）の化合物がアミノ基と反応するときにアミド結合形成を可能にする脱離基である）を合成するためのプロセスであって、
式（Ｃ）の化合物

【0268】

【化49】

を、式（Ａ）の化合物

【0269】

【化50】

（式中、Ｒ^１がＨである）と反応させて、式（Ｂ）の化合物を形成するか、
又は
式（ＡＡ）の化合物

【0270】

【化51】

と反応させて、式（ＢＢ）の化合物を形成する、プロセス。

【0271】

７１．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、光開始剤の存在下で行われる、条項７０に記載のプロセス。

【0272】

７２．光開始剤が、フリーラジカル生成アゾ化合物、フェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸リチウム（ＬＡＰ）、金属又は金属イオン系光開始剤、過酸化物、過硫酸アンモニウム、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、条項７１に記載のプロセス。

【0273】

７３．フリーラジカル生成アゾ化合物が、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）、２，２’－アゾビス（２－メチルプロピオニトリル）、４，４’－アゾビス（４－シアノペンタン酸）（ＡＣＶＡ）、１，１’－アゾビス（シアノシクロヘキサン）（ＡＣＨＮ）、ジアゼンジカルボン酸ビス（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミド）（ＴＭＡＤ）、アゾジカルボン酸ジピペリジド（ＡＤＤ）、２，２’－アゾビス［２－（２－イミダゾリン－２－イル）プロパン］ジヒドロクロリド、２，２’－アゾビス（２－アミジノプロパン）ジヒドロクロリド（ＡＡＰＨ）、２，２’－アゾビス（２－メチルプロピオニトリル）、４，４’－（ジアゼン－１，２－ジイル）ビス（４－シアノペンタン酸）、２，２’－アゾジ（２－メチルブチロニトリル）、及びそれらの任意の組み合わせ、からなる群から選択される、条項７２に記載のプロセス。

【0274】

７４．過酸化物が、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシイソブチレート、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド、過酸化ベンゾイル、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、条項７２又は７３に記載のプロセス。

【0275】

７５．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、水又は有機溶媒中で行われる、条項７０～７４のいずれか一項に記載のプロセス。

【0276】

７６．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、水、ジオキサン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジイソプロピルエーテル、イソプロパノール、クロロベンゼン、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル、メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、クロロホルム、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される溶媒中で行われる、条項７０～７５のいずれか一項に記載のプロセス。

【0277】

７７．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、約４０℃～約１１０℃の範囲の温度で行われる、条項７０～７６のいずれか一項に記載のプロセス。

【0278】

７８．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、約１時間～約１０時間の期間にわたって行われる、条項７０～７７のいずれか一項に記載のプロセス。

【0279】

７９．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、可視光吸収遷移金属光触媒の存在下、可視光下で行われる、条項７０に記載のプロセス。

【0280】

８０．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、紫外線照射下で行われる、条項７０に記載のプロセス。

【0281】

８１．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、光開始剤の存在下、紫外線照射下で行われる、条項７０に記載のプロセス。

【0282】

８２．光開始剤が、２，２’－アジドビス［２－イミダゾリン－２－イル）プロパン］ジヒドロクロリド、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、及びそれらの組み合わせ、からなる群から選択される、条項８１に記載のプロセス。

【0283】

８３．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、メタノール、エタノール、イソプロパノール、又はそれらの任意の組み合わせなどのアルコール溶媒中で行われる、条項８０～８２のいずれか一項に記載のプロセス。

【0284】

８４．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、約２０℃～約３０℃の範囲の温度で行われる、条項８０～８３のいずれか一項に記載のプロセス。

【0285】

８５．式（Ｃ）の化合物を式（Ａ）又は（ＡＡ）の化合物と反応させることが、約１時間～約２４時間の期間にわたって行われる、条項８０～８４のいずれか一項に記載のプロセス。

【0286】

８６．紫外線照射が、短波長、中波長、又は長波長の紫外線照射である、条項８０～８５のいずれか一項に記載のプロセス。

【0287】

８７．ｍが１～３の整数である、条項７０～８６のいずれか一項に記載のプロセス。

【0288】

８８．ｍが２である、条項７０～８７のいずれか一項に記載のプロセス。

【0289】

８９．ＬＧが、ＯＰｈＦ－_５若しくはＯＰｈＦ_４（ｐａｒａ ＳＯ_３Ｎａ）などのＯ－フルオロフェニル基、又はＯ－（Ｎ－スクシンイミジル）基である、条項７０～８８のいずれか一項に記載のプロセス。

【0290】

９０．ＬＧがＯ－（Ｎ－スクシンイミジル）基である、条項７０～８９のいずれか一項に記載のプロセス。

【0291】

９１．式（Ａ）の化合物が、条項１～２０のいずれか一項に記載のプロセスにより得られる、条項７０～９０のいずれか一項に記載のプロセス。

【0292】

９２．式（Ａ）の化合物が、条項４７～６９のいずれか一項に記載のプロセスにより得られる、条項７０～９０のいずれか一項に記載のプロセス。

【0293】

９３．式（Ｉ）又は（ＩＩ）の複合糖質

【0294】

【化52】

（式中、ｎが１～５の整数であり、ｍが１～５の整数であり、ｐが１～５０の整数であり、

【0295】

【化53】

が、コンジュゲーションに利用可能な少なくとも１つのアミノ基を含む担体材料である）を調製するためのプロセスであって、
担体材料の少なくとも１つの遊離アミノ基を、式（Ｂ）の化合物とコンジュゲートさせて、式（Ｉ）の複合糖質を形成させるか、又は式（ＢＢ）の化合物とコンジュゲートさせて、式（Ｉ）の複合糖質を形成させることを含み、式（Ｂ）及び（ＢＢ）の化合物が、条項７０～９２のいずれか一項に記載のプロセスにより得られる、プロセス。

【0296】

９４．担体材料が、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを含む、条項９３に記載のプロセス。

【0297】

９５．ｎが１～３の整数である、条項１～９４のいずれか一項に記載のプロセス。

【0298】

９６．ｎが１又は２である、条項１～９５のいずれか一項に記載のプロセス。

【0299】

９７．ｎが１である、条項１～９６のいずれか一項に記載のプロセス。

【0300】

９８．式（ＡＡ_ＰＧ）の化合物であって、

【0301】

【化54】

式中、ｎが１～５の整数であり、Ｒ^２がＡｃであり、ＰＧが、ＰｈＣＨ、Ｍｅ_２Ｃ、Ｏ＝Ｃ、Ｍｅ_２Ｓｉ、及び２，６－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－Ｂから選択される二価の保護基である、化合物。

【0302】

９９．ＰＧがＰｈＣＨである、条項９８に記載の化合物。

【0303】

１００．ｎが１～３の整数である、条項９８又は９９に記載の化合物。

【0304】

１０１．ｎが１又は２である、条項９８～１００のいずれか一項に記載の化合物。

【0305】

１０２．ｎが１である、条項９８～１０１のいずれか一項に記載の化合物。

【0306】

１０３．式

【0307】

【化55】

を有する、条項９８に記載の化合物。

【0308】

１０４．式

【0309】

【化56】

の化合物。

【実施例】

【0310】

種々の反応性炭水化物を、反応スキーム２に従って、以下に更に詳述するように合成した。加えて、複合糖質（Ｉ）及び（ＩＩ）を形成させるためにタンパク質コンジュゲーションを行い、コンジュゲーションを、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ、及びＢｒａｄｆｏｒｄアッセイにより評価した。

【0311】

【化57】

【0312】

反応は、市販のＨＰＬＣグレードを使用してアルゴン雰囲気下で実行した。市販の試薬（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ ａｎｄ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｎａｄａ）を更に精製することなく使用した。Ｎ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミンは、Ｒｏｓｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｔｄ．、Ａｌｂｅｒｔａ，Ｃａｎａｄａから提供された。反応の進行は、シリカゲル６０ Ｆ_２５４被覆プレート（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ）を使用した薄層クロマトグラフィーによりモニタリングした。フラッシュクロマトグラフィーは、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ製のＺＥＯｐｒｅｐ（商標）シリカゲル６０（４０～６３μｍ）又はＢｕｃｈｉ製のＦｌａｓｕＰｕｒｅ（商標）システムを使用して行った。検出は、ＵＶ光下で、又は２０％エタノール硫酸若しくはモリブデン酸塩若しくはＫＭｎＯ_４溶液を噴霧した後、加熱することにより、実行したＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ ＵＬＴＲＡＳＨＩＥＬＤ（商標）３００ＭＨｚ並びにＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ（商標）ＩＩＩ ＨＤ ４００及び６００ＭＨｚ分光計で記録した。プロトン及び炭素の化学シフト（δ）は、７．２７ｐｐｍ（^１Ｈ）及び７７．００ｐｐｍ（^１３Ｃ）に設定した残留ＣＨＣｌ_３の化学シフトに対してｐｐｍで報告する。カップリング定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で報告し、ピーク多重度については以下の略語を使用する：一重項（ｓ）、二重項（ｄ）、二重項の二重項（ｄｄ）、等しいカップリング定数を有する二重項の二重項（ｔ_ａｐ）、三重項（ｔ）、多重項（ｍ）。分析及び代入は、ＣＯＳＹ（相関分光法）及びＨＳＱＣ（異核種単一量子コヒーレンス法）実験を使用して行った。高分解能質量スペクトル（high-resolution mass spectra、ＨＲＭＳ）は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のＬＣ－ＭＳ－ＴＯＦ（液体クロマトグラフィー質量分析飛行時間型）機器を正及び／又は負のエレクトロスプレーモードで用いて測定した。プロトン化イオン（Ｍ＋Ｈ）^＋又はナトリウム付加物（Ｍ＋Ｎａ）^＋のいずれかを実験式確認のために使用した。ＬＣ法：試料を、両方とも０．１％酢酸を含む水（Ａ）及びアセトニトリル（Ｂ）を伴うＤｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ（商標）３０００システム（Thermo Scientific）を使用する５μｍ粒子を有するＰｒｅＰｕｒｅ（商標）Ｃ１８ １５０×４，６ｍｍカラム上に、８００μＬ／分の流量で、室温で注入した（２μＬ）。勾配は５％Ｂで開始し、０，５分間保持した。これを１分間で１５％Ｂに、次いで１４，５分間で２７％Ｂに、次いで４分間で９５％Ｂに増加させた。勾配を９５％Ｂで２分間保持した後、これを１分間で５％Ｂに減少させた。最後に、勾配を５％Ｂで１分間保持した。合計時間は２４分である。ＭＳ法：ＭＳスペクトルは、４．５ｋＶのソース電圧、３２０℃のソース温度に設定した陽イオンモードのＨＥＳＩイオン源を装備したＴＳＱ Ｑｕａｎｔｕｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍａｘ（商標）（Thermo Scientific）で収集した。ＭＳ取得は、ＳＣＡＮモードでｍ／ｚ２００～１０００であった。データは、Ｔｈｅｒｍｏ ＸＣａｌｉｂｕｒ Ｑｕａｌ Ｂｒｏｗｓｅｒ（商標）を使用して分析した。

【0313】

実施例１：アリル２－アセトアミド－２－デオキシ－α－Ｄ－ガラクトピラノシド（２）の合成
塩化アセチル（４．８５ｍＬ、６８．０ｍｍｏｌ、３．４当量）を、Ｎ_２下０℃でアリルアルコール（８０ｍＬ）に加えた。溶液をこの温度で１時間撹拌した後、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ、（１）、４．４２ｇ、２０．０ｍｍｏｌ、１．０当量）を溶液に室温で加えた。混合物を７０℃で１時間撹拌した。溶液を室温まで冷却した後、０℃に保った。溶液をＭｅＯＨ（４０ｍＬ）で希釈し、ｐＨ７．０に達するまで固体ＮａＨＣＯ_３（８．０ｇ）で中和した。混合物をセライト（商標）のパッド下で濾過し、ＭｅＯＨで洗浄した。次に、溶媒を減圧除去した。乾燥粗生成物を、１）水（５０ｍＬ）に溶解させ、ＤＣＭ（４×２００ｍＬ）、続いてＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で洗浄し、水層を分離させた後、－８０℃に保ち、続いて凍結乾燥させるか、又は２）ＭｅＯＨ／ヘキサン若しくはＥｔＯＨ／ジイソプロピルエーテル中で沈殿させるか、又は３）勾配（ＥｔＯＡｃ １００％からＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ４：１）を使用するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物アリルＧａｌＮＡｃ（２）を白色固体として得た（４．１８ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、８０％）。Ｒｆ＝０．３０；ＡＣＮ／Ｈ_２Ｏ ９５：５；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，６００ＭＨｚ）：δ ５．９９－５．８８（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{ｔｒａｎｓ}＝１７．３，Ｊ_ｇｅｍ＝１．３Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_ｃｉｓ＝１０．５Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），４．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ_１，２＝３．８Ｈｚ，Ｈ－１），４．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_２，３＝１１．０Ｈｚ，Ｈ－２），４．２０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_２），４．００（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_２），３．８９（ｄｄ，Ｊ_３，４＝Ｊ_４，５＝２．６Ｈｚ，Ｈ－４），３．８５－３．７７（ｍ，２Ｈ，Ｈ－３及びＨ－５），３．７２（ｍ，２Ｈ，Ｈ－６ａ及びＨ－６ｂ）及び１．９９ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，１５０ＭＨｚ）：δ １７２．５（ＮＨＣＯ），１３４．２（ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１１６．１（ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），９６．６（Ｃ－１），７１．２（Ｃ－３），６９．０（Ｃ－４），６８．３（Ｃ－５）．６７．８（ＯＣＨ_２），６１．４（Ｃ－６），５０．２（Ｃ－２）及び２１．２ｐｐｍ（ＣＨ_３）．ＥＳＩ^＋－ＨＲＭＳ：Ｃ_１１Ｈ_２０Ｏ_６Ｎについての［Ｍ＋Ｈ］^＋計算値，２６２．１２８５；実測値，２６２．１２９４．ＬＣ－ＭＳ：ｒｔ＝４．９４分．

【0314】

実施例２：アリル２－アセトアミド－４，６－Ｏ－ベンジリデン－２－デオキシ－α－Ｄ－ガラクトピラノシド（３）の合成
乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のアリルＧａｌＮＡｃ（２）（２．３５ｇ、９．０ｍｍｏｌ、１．０当量）及びベンズアルデヒドジメチルアセタール（６．７５ｍＬ、４５．０ｍｍｏｌ、５．０当量）の溶液に、触媒量のｐ－トルエンスルホン酸一水和物を加えた。混合物を室温で撹拌した。５時間後、混合物をＣＨＣｌ_３で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。有機層を分離させ、水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して、白色固体を得た。ベンジリデンアセタール（化合物（３））を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中で沈殿させることにより白色固体として単離した（２．６４ｇ、７．５６、８４％）。Ｒｆ＝０．２１；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９．０：０．５；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ ７．５９－７．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ－ａｒ），７．４３－７．３１（ｍ，３Ｈ，Ｈ－ａｒ），５．９１（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ_{ＮＨ，Ｈ２}＝９．０Ｈｚ，ＮＨ），５．５８（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ），５．３４－５．１７（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ_１，２＝３．５Ｈｚ，Ｈ－１），４．５６－４．４２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ_２，３＝１０．９Ｈｚ，Ｊ_２，ＯＨ＝９．１Ｈｚ，Ｈ－２），４．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_５，６ａ＝１．５Ｈｚ，Ｊ_{６ａ，６ｂ}＝１２．５Ｈｚ，Ｈ－６ａ），４．１９（ｍ，２Ｈ，Ｈ－４及びＯＣＨ_２），４．０４（ｍ，１Ｈ，ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_５，６ｂ＝１．６Ｈｚ，Ｊ_{６ａ，６ｂ}＝１２．５Ｈｚ，Ｈ－６ｂ），４．０１（ｍ，ＯＣＨ_２），３．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_３，４＝１０．９Ｈｚ，Ｈ－３），３．７１（ｓｂ，１Ｈ，Ｈ－５），２．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ_３，ＯＨ＝１０．７Ｈｚ，ＯＨ－３）及び２．０５ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．ＥＳＩ^＋－ＨＲＭＳ：Ｃ_１８Ｈ_２４Ｏ_６Ｎについての［Ｍ＋Ｈ］^＋計算値，３５０．１５９８；実測値，３５０．１６０８．ＬＣ－ＭＳ：ｒｔ＝１９．７８分．

【0315】

実施例３：アリル（２，３，４，６－テトラ－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１→３）－２－アセトアミド－４，６－Ｏ－ベンジリデン－２－デオキシ－α－Ｄ－ガラクトピラノシド（５ａ）の合成
化合物３（６５７ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ、１．０当量）及び２，３，４，６－テトラ－Ｏ－ベンゾイル－α－Ｄ－ガラクトピラノシルブロミド（化合物（４ｂ）、３．４８ｇ、８．４６ｍｍｏｌ、４．５当量）を、４Åモレキュラーシーブ（８００ｍｇ）を含む無水トルエン（６０ｍＬ）中の銀交換ゼオライト（２．５６ｇ）と共に、アルゴン雰囲気下７０℃で１８時間撹拌した。次に、混合物をセライト（商標）のパッド下で濾別した。溶媒を減圧除去した。粗生成物を、１００％ヘキサンからヘキサン／ＥｔＯＡｃ １：４の勾配を使用するシリカゲルでのクロマトグラフィーにより精製して、所望の二糖化合物（５ａ）を白色固体として得た（８１７ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ、６４％）。Ｒｆ＝０．２４；ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １：４；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ ７．５７－７．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ－ａｒ），７．４２－７．３０（ｍ，３Ｈ，Ｈ－ａｒ），５．９７－５．８０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．６３－５．５４５（ｍ，３Ｈ），５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_３，４’＝３．３Ｈｚ，Ｊ_４，５’＝１．０Ｈｚ，Ｈ－４^ＩＩ），５．３３－５．１４（ｍ，４Ｈ），５．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ－１），５．１１－５．００（ｍ，１Ｈ，Ｈ－２），４．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｈ－１’），４．６８（ｍ，１Ｈ），４．３０－３．８０（ｍ，７Ｈ），３．６５（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，６Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ）及び１．９７ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＩ^＋－ＨＲＭＳ：Ｃ_３２Ｈ_４２Ｏ_１５Ｎについての［Ｍ＋Ｈ］^＋計算値，６８０．２５４９；実測値，６８０．２５４９（０．０ｐｐｍ）．ＬＣ－ＭＳ：ｒｔ＝１３．１１分．

【0316】

実施例４：アリル（２，３，４，６－テトラ－Ｏ－ベンゾイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１→３）－２－アセトアミド－４，６－Ｏ－ベンジリデン－２－デオキシ－α－Ｄ－ガラクトピラノシド（５ｂ）の合成
化合物３（１０１ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、１．０当量）及び２，３，４，６－テトラ－Ｏ－ベンゾイル－α－Ｄ－ガラクトピラノシルブロミド（化合物（４ｂ）、２３９ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、２．０当量）を、４Åモレキュラーシーブを含む無水トルエン（１０ｍＬ）中の銀交換ゼオライト（４３０ｍｇ）と共に、アルゴン雰囲気下７０℃で１８時間撹拌した。次に、混合物をセライト（商標）のパッド下で濾別した。溶媒を減圧除去した。粗生成物を、１００％ヘキサンからヘキサン／ＥｔＯＡｃ １：２の勾配を使用するシリカゲルでのクロマトグラフィーにより精製して、所望の二糖化合物（５ｂ）を白色固体として得た（２５０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、９４％）。ｍｐ：１１０～１１１℃；Ｒｆ＝０．２０；ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １：２；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，６００ＭＨｚ）：δ ８．０６－７．１９（ｍ，２５Ｈ，Ｈ－ａｒ），５．９８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_３，４’＝３．３Ｈｚ，Ｊ_４，５’＝１．０Ｈｚ，Ｈ－４^ＩＩ），５．８５－５．７８（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２ ａｎｄ Ｈ－２^ＩＩ），５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_２，３’＝１０．２Ｈｚ，Ｊ_３，４’＝３．４Ｈｚ，Ｈ－３^ＩＩ），５．４８（ｓｂ，１Ｈ，ＮＨ），５．２３（ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２ ａｎｄ Ｈ－１），４．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{５’，６ａ’}＝６．９Ｈｚ，Ｊ_{６ａ’，６ｂ’}＝１１．４Ｈｚ，Ｈ－６ａ^Ｉ），４．６３－４．５８（ｍ，１Ｈ，Ｈ－２），４．４６－４．３６（ｍ，３Ｈ，Ｈ－４．Ｈ－５ ａｎｄ Ｈ－６ｂ^ＩＩ），４．１４－４．０７（ｍ，３Ｈ，Ｈ－６ａ，ＯＣＨ_２ ａｎｄ Ｈ－３），３．９６（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_２），３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｈ－６ｂ），３．５１（ｍ，１Ｈ，Ｈ－５）及び１．４０ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣ_１３，１５０ＭＨｚ）：δ １７０．０（ＮＨＣＯ），１６６．０，１６５．５，１６５．４，１６５．２（ＣＯ），１３７．６－１２６．２（多重，３０ Ｃ－ａｒｏｍ），１３３．２（ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１１７．８（ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１０２．０（Ｃ－１^ＩＩ），１００．９（ＣＰｈＣＨ），９７，３（Ｃ－１^Ｉ），７６．１（Ｃ－３），７５．４（Ｃ－４），７１．７（Ｃ－３^ＩＩ及びＣ－５^ＩＩ），７０．２（Ｃ－２^ＩＩ），６９．１（Ｃ－６），６８．６（ＯＣＨ_２），６８．１（Ｃ－４^ＩＩ），６２．９（Ｃ－５），６２．６（Ｃ－６^Ｉ），４８．２（Ｃ－２）及び２２．５ｐｐｍ（ＣＨ_３）．ＥＳＩ^＋－ＨＲＭＳ：Ｃ_５２Ｈ_５０Ｏ_１５Ｎについての［Ｍ＋Ｈ］^＋計算値，９２８．３１７５；実測値，９２８．３１３３．

【0317】

実施例５：アリル（β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１→３）－２－アセトアミド－２－デオキシ－α－Ｄ－ガラクトピラノシド（６）の合成
メタノール中１Ｍナトリウムメトキシド（１２ｍＬ、ｐＨ８～９）中の化合物（５ｂ）（１．１２ｇ、１．２０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、出発物質が消費されるまで室温で撹拌した。１．５時間後、溶液をイオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（商標）ＩＲ １２０、Ｈ^＋）を加えることにより中和し、濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、溶媒を減圧除去して、中間体を白色固体として得た。次に、白色固体中間体を１０ｍＬの６０％酢酸水溶液に溶解させ、得られた溶液を６０℃で１．５時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、残留物を水に溶解させ、ジクロロメタンで数回、ＥｔＯＡｃで２回洗浄した。次に、水層を凍結乾燥させて、脱保護したアリル化合物（６）を白色固体として得た（４００ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ、７９％）。ｍｐ＝２３０～２３２℃；Ｒｆ＝０．５３；ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ １１：６：１；^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，６００ＭＨｚ）：δ ５．８０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．１９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{ｔｒａｎｓ}＝１７．３Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．０９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_ｃｉｓ＝１０．４Ｈｚ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），４．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ_１，２＝３．７Ｈｚ，Ｈ－１），４．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ_１，２＝３．７Ｈｚ，Ｈ－１），４．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ_１，２＝７．８Ｈｚ，Ｈ－１^ＩＩ），４．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_２，３＝１１．２Ｈｚ，Ｊ_１，２＝３．７Ｈｚ，Ｈ－２），４．０８－４．０１（ｍ，２Ｈ，Ｈ－４ ａｎｄ ＯＣＨ_２），３．９２－３．８２（ｍ，３Ｈ，Ｈ－３，Ｈ－５ ａｎｄ ＯＣＨ_２），３．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ－４^ＩＩ），３．６３－３．５２（ｍ，４Ｈ，Ｈ－６ａ，ｂ及びＨ－６’ａ，ｂ），３．４７（ｍ，２Ｈ，Ｈ－３^ＩＩ ａｎｄ Ｈ－５^ＩＩ），３．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{２’，３’}＝１０．０Ｈｚ，Ｊ_{１’，２’}＝７．７Ｈｚ，Ｈ－２^ＩＩ）及び１．８５ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，１５０ＭＨｚ）：δ １７４．６（ＮＨＣＯ），１３３．７（ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１１７．９（ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１０４．７（Ｃ－１^ＩＩ），９６．４（Ｃ－１），７７．２（Ｃ－３），７５．０（Ｃ－５^ＩＩ），７２．５（Ｃ－３^ＩＩ），７０．７（Ｃ－５），７０．６（Ｃ－２^ＩＩ），６８．８（Ｃ－４），６８．６（Ｃ－４^ＩＩ），６８．４（ＯＣＨ_２），６１．２（Ｃ－６^ＩＩ），６１．０（Ｃ－６），４８．６（Ｃ－２）及び２２．０ｐｐｍ（ＣＨ_３）．ＥＳＩ^＋－ＨＲＭＳ：Ｃ_１７Ｈ_２９Ｏ_１１ＮＮａについての［Ｍ＋Ｎａ］^＋計算値，４４６．１６３３；実測値，４４６．１６１３．ＬＣ－ＭＳ：ｒｔ＝４．７７分．

【0318】

実施例６：Ｎ－スクシンイミジル－３－｛［３－（β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１→３）－２－アセトアミド－２－デオキシ－α－Ｄ－ガラクトピラノシル）オキシプロピル］チオ｝プロパノエート（１１ｂ）及びタンパク質ＣＲＭ１９７とのコンジュゲーションによる複合糖質（ＩＩ）の形成
化合物（６）（１３８ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．０当量）、化合物（７）（５３８ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ、５当量－Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから市販）、及び４，４’－アゾビス（４－シアノ吉草酸）（ＡＣＶＡ、１．５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、０．１当量）を、脱気したアセトニトリル（５ｍＬ）中、還流（７０℃）で２時間撹拌した。室温に戻した後、溶媒を減圧除去した。化合物（６）及び化合物（７）はまた、ＴＨＦ／水（１：１；ｖ／ｖ）中のＤＭＰＡ（０．１当量）を用いて、ＵＶ照射（２８０～３２０ｎｍ）下２５℃で２０分間再活性化することができる。粗生成物を水に懸濁させ、ジクロロメタンで数回、ＥｔＯＡｃで２回洗浄することにより抽出して、スクシンイミド試薬を除去した。粗化合物（１１ｂ；ＮＨＳ－ＴＦ）を含む最終水層を－８０℃まで冷却して凍結乾燥させた。次に、粗化合物（１１ｂ）を、いかなる精製も更に行うことなく、タンパク質ＣＲＭ１９７とのコンジュゲーション工程に直接使用して、複合糖質（ＩＩ；ＣＲＭ－ＴＦ）を得た。また、粗白色固体を同様にＣ－１８上の逆分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体１１ｂを得た。純粋な化合物（１１ｂ）をタンパク質ＣＲＭ１９７とのコンジュゲーション工程に使用して、複合糖質ＩＩ；ＣＲＭ－ＴＦ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，４００ＭＨｚ）：δ ４．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，Ｈ－１），４．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｈ－１^ＩＩ），４．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．０，６．９Ｈｚ），４．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），４．０２－３．９０（ｍ，２Ｈ），３．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．１Ｈｚ），３．８０－３．６２（ｍ，５Ｈ），３．６２－３．４０（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），２．９６－２．８３（ｍ，５Ｈ），２．７９－２．５５（ｍ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ）及び１．８７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．９，６．４Ｈｚ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，１００ＭＨｚ，）：δ １７６．６，１７４．６，１７３．３，１６９．２，１０４．８，９７．２，７７．３，７５．０，７２．６，７０．６，６８．８，６８．６，６６．４，６６．３，６１．２，６１．０，４８．７，３４．３，３１．４，２８．４，２８．２，２６．３，２５．７，２５．６，２５．２，及び２２．０ｐｐｍ（ＣＨ_３）．ＥＳＩ^＋－ＨＲＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_３８Ｏ_１５Ｎ_２ＳＮａについての［Ｍ＋Ｎａ］^＋計算値，６４９．１８８５１；実測値，６４９．１８８３８，０．２ｐｐｍ．ＨＰＬＣ：Ｔｒ＝１０．７４７．

【0319】

コンジュゲーション工程のために、担体タンパク質を、遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ（商標）ＭＷＣＯ；１０又は３０Ｋ）によりｐＨ８のＰＢＳに緩衝液交換し、その濃度を２ｍｇ／ｍｌに調整した。標準としてＢＳＡを用いるＢｒａｄｆｏｒｄアッセイを使用して、タンパク質濃度を測定した。水中の化合物（１１ｂ）の新鮮な２０ｍＭ溶液を、１ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質濃度に達するようにタンパク質に加えることにより、タンパク質へのコンジュゲーションを開始した。タンパク質に加える化合物（１１ｂ）の量は、タンパク質の表面接近可能リシンの数及び意図されるコンジュゲーションの最終比に応じて調整することができる。次に、溶液を９０分間ボルテックスした後、ｐＨ７．４のＰＢＳを使用する遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ（商標）ＭＷＣＯ；１０又は３０Ｋ）、又はゲル濾過により洗浄した。

【0320】

タンパク質の化合物（１１ｂ）へのコンジュゲーション、すなわち、複合糖質（ＩＩ）の取得を、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ、及びＢｒａｄｆｏｒｄアッセイにより実証した。

【0321】

ＮＨＳ－ＴＦ（化合物（１１ｂ））対タンパク質のリシン総数の３つの異なる比（０．２、０．６、３）での、０．０１μｇのコンジュゲートしていないＣＲＭ１９７及びＴＦにコンジュゲートしたＣＲＭ１９７（ＣＲＭ－ＴＦ：複合糖質（ＩＩ））に対する、ＴＦ特異的レクチンピーナッツ凝集素（ＰＮＡ）及び抗ＴＦモノクローナル抗体ＪＡＡＦ１１の反応性を、ＥＬＩＳＡにより決定した。図１に示すように、ＥＬＩＳＡは、コンジュゲーション条件と得られた複合糖質の反応性との間の相関を示す。

【0322】

図２は、ＮＨＳ－ＴＦ（化合物（１１ｂ））対タンパク質のリシン総数の３つの異なる比での、１μｇのコンジュゲートしていないＣＲＭ１９７及びＴＦにコンジュゲートしたＣＲＭ１９７（ＣＲＭ－ＴＦ：グリコンジュゲート（ＩＩ））のクマシー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。コンジュゲートしていないＣＲＭと比べて、コンジュゲーションの条件の関数としての複合糖質バンドの移動度の減少が観察され、これは、ＣＲＭがコンジュゲートされていることを示す。

【0323】

検出されたＮＨＳ－ＴＦ（化合物（１１ｂ））対タンパク質のリシン総数の３つの異なる比での、１μｇのコンジュゲートしていないＣＲＭ１９７及びＴＦにコンジュゲートしたＣＲＭ１９７（ＣＲＭ－ＴＦ：グリコンジュゲート（ＩＩ））のウエスタンブロットを、ＴＦ特異的レクチンピーナッツ凝集素（ＰＮＡ）及び抗ＴＦモノクローナル抗体ＪＡＡＦ１１を使用して記録した。図３に示すように、ウエスタンブロットにより、コンジュゲーション条件に関連して増加する分子量のＰＮＡ及びＪＡＡＦ１１の両方に対する反応性バンドが明らかになり、これは、ＣＲＭがコンジュゲートしていること、及びコンジュゲートしていないＣＲＭに対する反応性の非存在を示す。

【0324】

ＮＨＳ－ＴＦ（化合物（１１ｂ））対タンパク質のリシン総数の３つの異なる比での、コンジュゲートしていないＣＲＭ１９７及びＴＦにコンジュゲートしたＣＲＭ１９７（ＣＲＭ－ＴＦ：グリコンジュゲート（ＩＩ））のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦスペクトルを記録した。図４に示すように、スペクトルにより、コンジュゲーションの条件の関数として質量の増加が示される。挿入図中の表は、質量増加及びＴＦへのコンジュゲーションの平均モル比を示す。

【0325】

実施例７：Ｎ－スクシンイミジル－３－［３－（２－アセトアミド－２－デオキシ－α－Ｄ－ガラクトピラノシルオキシプロピル）チオ］－プロパノエート（１１ａ）及びタンパク質ＣＲＭ１９７とのコンジュゲーションによる複合糖質（Ｉ）の形成
化合物（２）（２００ｍｇ、０．７６５ｍｍｏｌ、１．０当量）、化合物（７）（９３３ｍｇ、４．５９ｍｍｏｌ、６．０当量）、及び４，４’－アゾビス（４－シアノ吉草酸）（ＡＣＶＡ、２ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、０．０１当量）を、脱気したアセトニトリル及びイソプロピルアルコール（４．０ｍＬ、１：１）中、還流（７０℃）で２時間撹拌した。室温に戻した後、溶媒を減圧除去した。粗生成物を水に懸濁させ、Ａ）Ｃ１８シリカゲル又はＣ１８ ＨＰＬＣでのクロマトグラフィー、又はＢ）ジクロロメタンで数回、ＥｔＯＡｃで２回洗浄することによる抽出により精製して、スクシンイミド試薬を除去した。粗化合物（１１ａ；ＮＨＳ－ＴＮ）を含む最終水層を－８０℃まで冷却して凍結乾燥させた。次に、粗化合物（１１ａ）を、いかなる精製も更に行うことなく、タンパク質ＣＲＭ１９７とのコンジュゲーション工程に直接使用して、複合糖質（Ｉ；ＣＲＭ－ＴＮ）を得た。

【0326】

コンジュゲーション工程のために、担体タンパク質を、遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ（商標）ＭＷＣＯ；１０又は３０Ｋ）によりｐＨ８のＰＢＳに緩衝液交換し、その濃度を２ｍｇ／ｍｌに調整した。標準としてＢＳＡを用いるＢｒａｄｆｏｒｄアッセイを使用して、タンパク質濃度を測定した。水中の化合物（１１ａ）の新鮮な２０ｍＭ溶液を、１ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質濃度に達するようにタンパク質に加えることにより、タンパク質へのコンジュゲーションを開始した。タンパク質に加える化合物（１１ａ）の量は、タンパク質の表面接近可能リシンの数及び意図されるコンジュゲーションの最終比に応じて調整することができる。次に、溶液を９０分間ボルテックスした後、ｐＨ７．４のＰＢＳを使用する遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ（商標）ＭＷＣＯ；１０又は３０Ｋ）、又はゲル濾過により洗浄した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

2024504658000001.app

【国際調査報告】