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▶ メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-01
(54)【発明の名称】テトラヒドロピロロ環化合物及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07D 403/14 20060101AFI20240125BHJP
A61P 25/20 20060101ALI20240125BHJP
A61P 25/24 20060101ALI20240125BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240125BHJP
A61K 31/4184 20060101ALI20240125BHJP
【ＦＩ】
C07D403/14 CSP
A61P25/20
A61P25/24
A61P43/00 111
A61K31/4184
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023547113
(86)(22)【出願日】2022-01-27
(85)【翻訳文提出日】2023-09-28
(86)【国際出願番号】 CN2022074381
(87)【国際公開番号】W WO2022166768
(87)【国際公開日】2022-08-11
(31)【優先権主張番号】202110146135.9
(32)【優先日】2021-02-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202110617562.0
(32)【優先日】2021-06-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202110906535.5
(32)【優先日】2021-08-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202111625215.9
(32)【優先日】2021-12-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516304780
【氏名又は名称】メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001519
【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ウェイ、ウェイ
(72)【発明者】
【氏名】リー、ポン
(72)【発明者】
【氏名】カオ、ナー
(72)【発明者】
【氏名】ホー、ハイイン
(72)【発明者】
【氏名】リー、チエン
(72)【発明者】
【氏名】チェン、シューホイ
【テーマコード（参考）】
4C063
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C063AA03
4C063BB06
4C063CC42
4C063DD08
4C063EE01
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BC60
4C086GA07
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA05
4C086ZA12
4C086ZC42
(57)【要約】
式（Ｉ）で表されるテトラヒドロピロロ環化合物、その薬学的に許容される塩、及び不眠症、うつ病から選択される、選択的オレキシン－２（ＯＸ－２）受容体アンタゴニストに関連する疾患を治療するための医薬の製造における使用を開示する。
【化１】
【選択図】なし
【化１】
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記から選択される、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。【化1】
（ただし、
各Ｒ１は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシから選択され、前記Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのハロゲン原子により任意選択で置換され、
各Ｒ２は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシから選択され、前記Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのハロゲン原子により任意選択で置換され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１－３アルキル及びＣ３－６シクロアルキルから選択され、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して０、１、２及び３から選択され、
環Ａは、
【化2】
から選択され、
環Ｂは、
【化3】
から選択される。）
【請求項2】
各Ｒ１は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、メチル及びメトキシから選択され、前記メチル及びメトキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのＦにより任意選択で置換される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
各Ｒ１は、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、メチル及びメトキシから選択される、請求項２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
各Ｒ２は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、メチル及びメトキシから選択され、前記メチル及びメトキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのＦにより任意選択で置換される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項5】
各Ｒ２は、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、メチル及びメトキシから選択される、請求項４に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
Ｒ３は、Ｈ、メチル及びシクロプロピルから選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項7】
化合物は、式（Ｉ－１）、（Ｉ－２）及び（Ｉ－３）で表される構造から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。【化4】
（ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ及びｎは、請求項１～６のいずれか一項で定義された通りである。）
【請求項8】
下記の式で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。【化5】
【請求項9】
化合物は下記の式から選択される、請求項８に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。【化6】
【請求項10】
選択的オレキシン－２受容体アンタゴニストに関連する疾患を治療するための医薬の製造における請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項11】
前記選択的オレキシン－２受容体アンタゴニストに関連する疾患は、不眠症及び／又はうつ病から選択される、請求項１０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は下記の優先権を主張する：
ＣＮ２０２１１０１４６１３５９、出願日は２０２１年２月２日であり、
ＣＮ２０２１１０６１７５６２０、出願日は２０２１年６月２日であり、
ＣＮ２０２１１０９０６５３５５、出願日は２０２１年８月１１日であり、
ＣＮ２０２１１１６２５２１５９、出願日は２０２１年１２月２７日である。
ＣＮ２０２１１０１４６１３５９、出願日は２０２１年２月２日であり、
ＣＮ２０２１１０６１７５６２０、出願日は２０２１年６月２日であり、
ＣＮ２０２１１０９０６５３５５、出願日は２０２１年８月１１日であり、
ＣＮ２０２１１１６２５２１５９、出願日は２０２１年１２月２７日である。
【0002】
本発明は、一類のテトラヒドロピロロ環化合物に関し、具体的には、式（Ｉ）で表される化合物及びその薬学的に許容される塩に関する。
【背景技術】
【0003】
オレキシン（Ｏｒｅｘｉｎ、Ｈｙｐｏｃｒｅｔｉｎ）シグナル伝達は、２つの受容体と２つのペプチドアゴニストによって媒介される。即ち、オレキシンＡとオレキシンＢは、オレキシン１受容体（ＯＸ－１受容体）とオレキシン２受容体（ＯＸ－２受容体）と呼ばれる２つの高親和性受容体に結合する。ＯＸ－１受容体はオレキシンＡとの親和性が高いが、ＯＸ－２受容体は同じ親和性でオレキシンＡとオレキシンＢに結合する。オレキシンを分泌するニューロンは、主に前頭前核、視床下部背側及び視床下部外側に分布している（Ｃ． Ｐｅｙｒｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．， １９９８， １８（２３）， ９９９６－ １００１５）。分泌されたオレキシンは、脳の多くの領域に影響を及ぼし、飲食、繁殖、覚醒システム、ストレスシステム、報償システムなどを含む多くの行動的及び生理学的機能に関与する（Ｔ． Ｓａｋｕｒａｉ， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ， ２００７， ８（３）， １７１ －１８１）。その中で、オレキシンシステムは睡眠－覚醒プロセスに対して有意な調節効果を有し、オレキシンを腹腔内投与されたげっ歯類は覚醒状態が長引く（Ｐｉｐｅｒら， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ２０００， １２， ７２６－７３０）。一方、突然変異又は機能不全のオレキシン－２受容体は、イヌにおいてナルコレプシンを引き起こし（Ｌｉｎら，Ｃｅｌｌ １９９９，９８，３６５－３７６）、ナルコレプシンを患うヒトの脳脊髄液におけるオレキシンシグナル伝達は不十分である（Ｎｉｓｈｉｎｏ ｅｔ ａｌ， Ｌａｎｃｅｔ ２０００， ３５５， ３９－４０）。これらすべては、オレキシンシステムが人々の覚醒を促進し、オレキシンシステムを阻害することが睡眠の促進に有益であることを示している。従って、オレキシン受容体アンタゴニストは、不眠症、うつ病、不安、薬物中毒、精神病、認知症、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、インスリン抵抗性、ＩＩ型糖尿病、高脂血症、胆石、狭心症、高血圧、呼吸困難、頻脈、不妊、睡眠時無呼吸、背中と関節の痛み、静脈瘤及び変形性関節症などの疾患の治療に使用できる。
【発明の概要】
【0004】
本発明は、下記の式から選択される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0005】
【化1】
【0006】
ただし、
各Ｒ１は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシから選択され、前記Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのハロゲン原子により任意選択で置換され、
各Ｒ２は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシから選択され、前記Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのハロゲン原子により任意選択で置換され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１－３アルキル及びＣ３－６シクロアルキルから選択され、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して０、１、２及び３から選択され、
環Ａは、
各Ｒ１は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシから選択され、前記Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのハロゲン原子により任意選択で置換され、
各Ｒ２は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシから選択され、前記Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのハロゲン原子により任意選択で置換され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１－３アルキル及びＣ３－６シクロアルキルから選択され、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して０、１、２及び３から選択され、
環Ａは、
【0007】
【化2】
【0008】
から選択され、
環Ｂは、
環Ｂは、
【0009】
【化3】
【0010】
から選択される。
【0011】
本発明の一部の実施形態において、上記各Ｒ１は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、メチル及びメトキシから選択され、前記メチル及びメトキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのＦにより任意選択で置換され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0012】
本発明の一部の実施形態において、上記各Ｒ１は、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、メチル及びメトキシから選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0013】
本発明の一部の実施形態において、上記各Ｒ２は、それぞれ独立してハロゲン、シアノ、メチル及びメトキシから選択され、前記メチル及びメトキシは、それぞれ独立して１、２又は３つのＦにより任意選択で置換され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0014】
本発明の一部の実施形態において、上記各Ｒ２は、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、メチル及びメトキシから選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0015】
本発明の一部の実施形態において、上記Ｒ３は、Ｈ、メチル及びシクロプロピルから選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0016】
本発明の一部の実施形態において、上記化合物は、式（Ｉ－１）、（Ｉ－２）及び（Ｉ－３）で表される構造から選択される。
【0017】
【化4】
【0018】
ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ及びｎは、本発明で定義された通りである。
本発明一部の実施形態は、更に上記の各変量の任意の組み合わせにより形成される。
本発明は、更に下記の式から選択される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
本発明一部の実施形態は、更に上記の各変量の任意の組み合わせにより形成される。
本発明は、更に下記の式から選択される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0019】
【化5】
【0020】
【化6】
【0021】
本発明の一部の実施形態において、上記化合物又はその薬学的に許容される塩において、化合物は下記の式から選択される。
【0022】
【化7】
【0023】
【化8】
【0024】
本発明は、更に選択的オレキシン－２受容体アンタゴニストに関連する疾患を治療するための医薬の製造における上記化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【0025】
本発明の一部の実施形態において、前記選択的オレキシン－２受容体アンタゴニストに関連する疾患は、不眠症及び／又はうつ病から選択される。
【0026】
本発明は、更に下記の試験方法を提供する。
【0027】
１．ラット血漿薬物動態パラメータの測定
６～９週齢の健康なＳＤラット４匹を選択し、各群に２匹ずつ、無作為に２つの群に分けた。１つの群には静脈内注射により２ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与し、もう１つの群には胃内投与により１０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与した。静脈内投与群及び胃内投与群の動物はいずれも投与した後の０．０８３、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０、６．０、８．０及び２４時間目に、血漿試料を採取された。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用してすべての生体試料の定量分析を実行し、ＷｉｎＮｏｎｌｉ（商標） Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態ソフトウェアを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法を使用して、関連薬物動態パラメーターを計算した。ＡＵＣ０－ｌａｓｔは、０時点から最後の検出可能な濃度時点までの血漿濃度－時間曲線下面積を表し；ｐ．ｏ．は経口投与を表し；ｉ．ｖ．は静脈注射を表し、Ｔ１／２は半減期を表し、ＣＬはクリアランスを表し、Ｖｄは見かけの分布容積を表し、Ｃｍａｘはピーク濃度を表し、Ｔｍａｘはピーク時間を表し、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティを表す。
６～９週齢の健康なＳＤラット４匹を選択し、各群に２匹ずつ、無作為に２つの群に分けた。１つの群には静脈内注射により２ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与し、もう１つの群には胃内投与により１０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与した。静脈内投与群及び胃内投与群の動物はいずれも投与した後の０．０８３、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０、６．０、８．０及び２４時間目に、血漿試料を採取された。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用してすべての生体試料の定量分析を実行し、ＷｉｎＮｏｎｌｉ（商標） Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態ソフトウェアを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法を使用して、関連薬物動態パラメーターを計算した。ＡＵＣ０－ｌａｓｔは、０時点から最後の検出可能な濃度時点までの血漿濃度－時間曲線下面積を表し；ｐ．ｏ．は経口投与を表し；ｉ．ｖ．は静脈注射を表し、Ｔ１／２は半減期を表し、ＣＬはクリアランスを表し、Ｖｄは見かけの分布容積を表し、Ｃｍａｘはピーク濃度を表し、Ｔｍａｘはピーク時間を表し、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティを表す。
【0028】
２．ラット脳組織における薬物濃度の測定
６～９週齢の健康なＳＤラット４匹を選択し、もう１つの群には胃内投与により１０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与した。投与後の０．５時間及び２時間でそれぞれ２匹の動物を無作為に選択し、血漿及び脳組織試料を収集し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用して、すべての生体試料を定量分析した。
（発明の効果）
６～９週齢の健康なＳＤラット４匹を選択し、もう１つの群には胃内投与により１０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与した。投与後の０．５時間及び２時間でそれぞれ２匹の動物を無作為に選択し、血漿及び脳組織試料を収集し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用して、すべての生体試料を定量分析した。
（発明の効果）
【0029】
ＯＸ－２受容体アンタゴニストとして、本発明の化合物はＯＸ－２受容体に対する選択的拮抗作用を有し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験において優れた活性を示し、不眠症、うつ病などのオレキシンシグナル経路に関連する精神疾患を治療するための薬物の開発に使用でき、本発明の化合物は、ラット体内で優れた薬物動態特性を示し、ラット体内で液脳関門を透過して脳組織に浸透することができ、より高い薬物濃度に達することができる。
【0030】
（定義及び説明）
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を含む。１つの特定の用語又は連語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を含む。１つの特定の用語又は連語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
【0031】
本明細書で用いられる「薬学的許容される」は、それらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形に対するもので、これらは信頼できる医学判断の範囲内にあり、ヒト及び動物の組織との接触に適し、毒性、刺激性、アレルギー反応又はほかの問題又は合併症があまりなく、合理的な利益／リスク比に合う。
【0032】
用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の塩で、本発明で発見された特定の置換基を有する化合物と比較的に無毒の酸又は塩基とで製造される。本発明の化合物に比較的に酸性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は適切な不活性溶媒において十分な量の塩基でこれらの化合物と接触することで塩基付加塩を得ることができる。薬学的許容される塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミン又はマグネシウム塩あるいは類似の塩を含む。本発明で化合物に比較的塩基性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は、適切な不活性溶媒において十分な量の酸でこれらの化合物と接触することで酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の実例は、無機酸塩及び有機酸塩、更にアミノ酸（例えばアルギニンなど）の塩、及びグルクロン酸のような有機酸の塩を含み、上記無機酸は、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸水素イオン、リン酸、リン酸一水素イオン、リン酸二水素イオン、硫酸、硫酸水素イオン、ヨウ化水素酸、亜リン酸などを含み、上記有機酸は、例えば酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸やメタンスルホン酸などの類似の酸を含む。本発明の一部の特定的の化合物は、塩基性及び酸性の官能基を含有するため、任意の塩基付加塩又は酸付加塩に転換することができる。
【0033】
本発明の薬学的許容される塩は、酸基又は塩基性基を含む母体化合物から通常の方法で合成することができる。通常の場合、このような塩の製造方法は、水又は有機溶媒あるいは両者の混合物において、遊離酸又は塩基の形態のこれらの化合物を化学量論量の適切な塩基又は酸と反応させて製造する。
【0034】
別途に定義しない限り、用語「Ｃ１－３アルキル」は直鎖又は分枝鎖の１～３個の炭素原子で構成された飽和炭化水素基を表す。前記Ｃ１－３アルキルにはＣ１－２とＣ２－３アルキルなどが含まれ、それは１価（例えばメチル）、２価（例えばメチレン）及び多価（例えばメチン）であってもよい。Ｃ１－３アルキルの実例は、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ－プロピル及びイソプロピルを含む）を含むが、これらに限定されない。
【0035】
別途に定義しない限り、用語「Ｃ１－３アルコキシ」は酸素原子を介して分子の残り部分に連結した１～３個の炭素原子を含むアルキルを表す。前記Ｃ１－３アルコキシは、Ｃ１－２、Ｃ２－３、Ｃ３及びＣ２アルコキシなどが含まれる。Ｃ１－３アルコキシの実例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ（ｎ―プロポキシ又はイソプロポキシを含む）などを含むが、これらに限定されない。
【0036】
別途に定義しない限り、「Ｃ３－６シクロアルキル」は３～６個の炭素原子から構成された飽和炭化水素基であり、それは単環式及び二環式環系を表し、上記Ｃ３－６シクロアルキルはＣ３－５、Ｃ４－５及びＣ５－６シクロアルキルなどが含まれ；それは一価、二価又は多価であってもよい。Ｃ３－６シクロアルキルの実例はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含むが、これらに限定されない。
【0037】
別途に定義しない限り、用語「ハロゲン」又は「ハロ」は、それ自体又は別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素原子を意味する。
【0038】
別途に説明しない限り、用語「異性体」とは、幾何異性体、シス－トランス異性体、立体異性体、エナンチオマー、光学異性体、エナンチオマー及び互変異性体を含むことを指す。
【0039】
本発明の化合物は、特定の幾何又は立体異性体の形態が存在してもよい。本発明は、全てのこのような化合物を想定し、シス及びトランス異性体、（－）－及び（＋）－エナンチオマー、（Ｒ）－及び（Ｓ）－エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）－異性体、（Ｌ）－異性体、及びそのラセミ混合物並びに他の混合物、例えばエナンチオマー又は非エナンチオマーを多く含有する混合物を含み、全てのこれらの混合物は本発明の範囲内に含まれる。アルキル等の置換基に他の不斉炭素原子が存在してもよい。全てのこれらの異性体及びこれらの混合物はいずれも本発明の範囲内に含まれる。
【0040】
別途に説明しない限り、用語「エナンチオマー」又は「光学異性体」とは互いに鏡像の関係にある立体異性体である。
【0041】
別途に説明しない限り、用語「シス－トランス異性体」又は「幾何異性体」とは二重結合又は環構成炭素原子の単結合が自由に回転できないことによるものである。
【0042】
別途に説明しない限り、用語「ジアステレオマー」とは分子が二つ又は複数のキラル中心を有し、かつ分子同士は非鏡像の関係にある立体異性体である。
【0043】
別途に説明しない限り、「（＋）」は右旋性を意味し、「（－）」は左旋性を意味し、「（±）」はラセミ体を意味する。
【0044】
【化9】
【0045】
別途に説明しない限り、用語「１つの異性体に富む」、「異性体豊富な」、「１つのエナンチオマーに富む」又は「エナンチオマー豊富な」とは、１つの異性体又はエナンチオマーの含有量が１００％未満で、且つこの異性体又はエナンチオマーの含有量が６０％以上、又は７０％以上、又は８０％以上、又は９０％以上、又は９５％以上、又は９６％以上、又は９７％以上、又は９８％以上、又は９９％以上、又は９９．５％以上、又は９９．６％以上、又は９９．７％以上、又は９９．８％以上、又は９９．９％以上であることを意味する。
【0046】
別途に説明しない限り、用語「異性体過剰率」又は「エナンチオマー過剰率」とは、２つの異性体又は２つのエナンチオマーの相対百分率の間の差を意味する。例えば、１つの異性体又はエナンチオマーの含有量が９０％であり、もう１つの異性体又はエナンチオマーの含有量が１０％である場合、異性体又はエナンチオマー過剰率（ｅｅ値）は８０％である。
【0047】
光学活性な（Ｒ）－及び（Ｓ）－異性体ならびにＤ及びＬ異性体は、不斉合成又はキラル試薬又はほかの通常の技術を用いて調製することができる。本発明のある化合物の１つの鏡像異性体を得るには、不斉合成又はキラル補助剤を有する誘導作用によって調製することができるが、ここで、得られたジアステレオマー混合物を分離し、かつ補助基を分解させて単離された所要の鏡像異体性を提供する。あるいは、分子に塩基性官能基（例えばアミノ）又は酸性官能基（例えばカルボキシル）が含まれる場合、適切な光学活性な酸又は塩基とジアステレオマーの塩を形成させ、更に本分野で公知の通常方式の方法によってジアステレオマーの分割を行った後、回収して単離された鏡像異体を得る。また、エナンチオマーとジアステレオマーの分離は、通常、クロマトグラフィー法によって行われ、上記クロマトグラフィーはキラル固定相を使用し、かつ任意の化学誘導法（例えば、アミンからカルバミン酸塩を生成させる）併用する。
【0048】
本発明の化合物は、化合物を構成する一つまた複数の原子には、非天然の原子同位元素が含まれてもよい。例えば三重水素（３Ｈ）、ヨウ素－１２５（１２５Ｉ）又はＣ－１４（１４Ｃ）のような放射性同位元素で化合物を標識することができる。又、例えば重水素を水素に置換して重水素化薬物を形成することができ、重水素と炭素で形成された結合は、通常の水素と炭素で形成された結合よりも強く、重水素化されていない薬物と比較して、重水素化された薬物には、毒性の副作用が軽減され、薬物の安定性が増し、治療効果が向上され、薬物の生物学的半減期が延ばされるという利点がある。本発明の化合物の同位体組成の変換は、放射性であるかいやかに関わらず、本発明の範囲に含まれる。
【0049】
用語「任意」また「任意に」は後記の事項又は状況によって可能であるが必ずしも現れるわけではなく、かつ当該記述はそれに記載される事項又は状況が生じる場合によってその事項又は状況が生じない場合を含むことを意味する。
【0050】
用語「置換された」は特定の原子における任意の一つ又は複数の水素原子が置換基で置換されたことで、特定の原子価状態が正常でかつ置換後の化合物が安定していれば、置換基は重水素及び水素の変形体を含んでもよい。置換基が酸素（即ち＝Ｏ）である場合、２つの水素原子が置換されたことを意味する。ケト基置換は、芳香族基で生じない。
【0051】
用語「任意に置換される」は、置換されてもよく、置換されなくてもよく、別途に定義しない限り、置換基の種類と数は化学的に安定して実現できれば任意である。
【0052】
変量（例えばＲ）のいずれかが化合物の組成又は構造に１回以上現れた場合、その定義はいずれの場合においても独立である。そのため、例えば、１つの基が０～２個のＲにより置換された場合、上記基は任意に２個以下のＲで置換され、かついずれの場合においてもＲは独立して選択肢を有する。また、置換基及び／又はその変形体の組み合わせは、このような組み合わせであれば安定した化合物になる場合のみ許容される。
【0053】
連結基の数が０の場合、例えば、－（ＣＲＲ）０－は、当該連結基が単結合であることを意味する。
【0054】
置換基の数が０の場合、当該置換基が存在しないことを表し、例えば、－Ａ－（Ｒ）０は当該構造が実際に－Ａとなることを表す。
【0055】
置換基がない場合、当該置換基が存在しないことを表し、例えば、Ａ－ＸのＸがない場合、当該構造が実際にＡとなることを表す。
【0056】
そのうち１つの変量が単結合の場合、それで連結する２つの基が直接連結し、例えばＡ－Ｌ－ＺにおけるＬが単結合を表す場合、この構造は実際にＡ－Ｚになる。
【0057】
置換基の結合が環上の２つ以上の原子に交差結合できる場合、置換基は環上の任意の原子を通して結合することができ、例えば、構造単位
【0058】
【化10】
【0059】
は、置換基Ｒがシクロヘキシルまたはシクロヘキサジエンの任意の位置で置換できることを示す。挙げられた置換基に対してどの原子を通して置換された置換基が明示しない場合、このような置換基はその任意の原子を通して結合することができ、例えば、置換基としてのピリジニルは、ピリジン環の任意の炭素原子を通して置換基に結合してもよい。
【0060】
挙げられた連結基がほかの連結方向を明示しない場合、その連結方向は任意であり、例えば、
【0061】
【化11】
【0062】
における連結基Ｌは－Ｍ－Ｗ－であり、この時－Ｍ－Ｗ－は左から右への読み取る順序と同じ方向に環Ａと環Ｂ
【0063】
【化12】
【0064】
を構成することができ、また、左から右への読み取る順序と逆方向に環Ａと環Ｂ
【0065】
【化13】
【0066】
を構成することもできる。上記連結基、置換基及び／又はその変形体の組み合わせは、このような組み合わせであれば安定した化合物になる場合のみ許容される。
【0067】
特に明記しない限り、ある基が一つ以上の結合可能な部位を有する場合、該基の任意の一つ以上の部位は、化学結合によって他の基に結合することができる。該化学結合の結合方式が非局在であり、且つ結合可能な部位にＨ原子が存在する場合、化学結合を結合すると、該部位のＨ原子の個数は、結合された化学結合の個数に応じて相応の価数の基に減少する。前記部位が他の基と結合する化学結合は、
【0068】
【化14】
【0069】
例えば、－ＯＣＨ３の直線実線結合は、該基の酸素原子を介して他の基に結合されていることを意味する。
【0070】
【化15】
【0071】
中の直線の破線結合は、該基内の窒素原子の両端が他の基に結合されていることを意味する。
【0072】
【化16】
【0073】
中の波線は、当該フェニル基の部位１と２の炭素原子を介して他の基に結合されていることを意味する。
【0074】
【化17】
【0075】
は、当該ピペリジニルの任意の結合可能な部位が１つの化学結合によって他の基に結合できることを意味し、少なくとも
【0076】
【化18】
【0077】
の四つの結合形態を含み、Ｈ原子が－Ｎ－に描かれていても、
【0078】
【化19】
【0079】
この結合形態の基が含まれるが、１つの化学結合が接続されると、その部位のＨは１つ減少して対応する一価ピペリジンになる。
【0080】
別途に説明しない限り、環内の原子数は一般に環員の数として定義され、例えば、「５～７員環」とは、その周囲に配置された５～７個の原子の「環」を指す。
【0081】
本発明の化合物は当業者に熟知の様々な合成方法によって製造することができ、以下に挙げられた具体的な実施形態、他の化学合成方法と合わせた実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好適な実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。
【0082】
本発明の化合物の構造は、当業者に周知の従来の方法によって確認することができ、本発明が化合物の絶対配置に関する場合、絶対配置は、当業者の従来の技術的手段によって確認することができる。例えば、単結晶Ｘ線回折（ＳＸＲＤ）、培養された単結晶はＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回折計によって収集され、光源はＣｕＫα放射線、走査方法：φ／ω走査、関連データを収集した後、更に直接法は（Ｓｈｅｌｘｓ９７）結晶構造解析により、絶対配置を確認できる。
【0083】
本発明は下記の略語を使用する。Ｈ２Ｏは水を表し；ｅｑは当量、等量を表し；ＰＥは石油エーテルを表し；ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを表し；ＥｔＯＨはエタノールを表し；ＭｅＯＨはメタノールを表し；ＨＯＡｃは酢酸を表し；ＨＣｌは塩酸を表し；ＨＰＬＣは高速液体クロマトグラフィーを表し；Ｈ２ＳＯ４は硫酸を表し；ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃは塩酸の酢酸エチル溶液を表し；ＨＡＴＵはＯ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを表し；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し；ＴＥＡはトリエチルアミンを表し；ＤＩＥＡ又はＤＩＰＥＡはＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを表し；ｍｐは融点を表し；℃は摂氏度を表し；ｈは時間を表し；ｍＬはミリリットルを表し；ｍＭはリットル当たりミリモルを表し；ｍｍｏｌはミリモルを表し；μｍｏｌはマイクロモルを表し；ＨＮＭＲは水素核磁気共鳴スペクトルを表し；ＭＳは質量スペクトルを表し；ｍｉｎは分を表し；ｐＨは水素イオンモル濃度の負の対数を表し；ＳＦＣは超臨界液体クロマトグラフィーを表す。
【0084】
本発明に使用されたすべての溶媒は市販品から得ることができる。
化合物は手動又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアによって名付けられ、市販化合物はメーカーのカタログの名称がされた。
化合物は手動又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアによって名付けられ、市販化合物はメーカーのカタログの名称がされた。
【発明を実施するための形態】
【0085】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明の不利な制限を意味するものではない。本発明は本明細書で詳細に説明されており、その特定の実施形態も開示されており、当業者にとって、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の特定の実施形態において様々な変更及び修正を行うことができることは明らかである。
【0086】
実施例１
【0087】
【化20】
【0088】
合成スキーム：
【0089】
【化21】
【0090】
ステップ１：化合物１－２の合成
予め乾燥させたフラスコに化合物１－１（２３３ｍｇ）、４－メトキシ－ｏ－フェニレンジアミン（１６９．９９ｍｇ）、ＨＡＴＵ（５８４．７６ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（２６７．８８μＬ）及び溶媒ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２５℃で、窒素ガスの保護下で、１５ｈ撹拌した。反応完了後、水（４０ｍＬ）を加えてクエンチングさせ、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝６０：４０）により精製して化合物１－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ６．９３ － ７．２０ （ｍ， １ Ｈ）， ６．３１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１２．３０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．４３ （ｓ， １ Ｈ）， ３．８０ － ４．０１ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．３７ － ３．７２ （ｍ， ２ Ｈ）， １．９２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １．６２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １．４６ （ｓ， ９ Ｈ）， ０．８２ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．０２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ０．２３ （ｑ， Ｊ＝４．２７ Ｈｚ， １ Ｈ）。
予め乾燥させたフラスコに化合物１－１（２３３ｍｇ）、４－メトキシ－ｏ－フェニレンジアミン（１６９．９９ｍｇ）、ＨＡＴＵ（５８４．７６ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（２６７．８８μＬ）及び溶媒ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２５℃で、窒素ガスの保護下で、１５ｈ撹拌した。反応完了後、水（４０ｍＬ）を加えてクエンチングさせ、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝６０：４０）により精製して化合物１－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ６．９３ － ７．２０ （ｍ， １ Ｈ）， ６．３１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１２．３０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．４３ （ｓ， １ Ｈ）， ３．８０ － ４．０１ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．３７ － ３．７２ （ｍ， ２ Ｈ）， １．９２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １．６２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １．４６ （ｓ， ９ Ｈ）， ０．８２ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．０２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ０．２３ （ｑ， Ｊ＝４．２７ Ｈｚ， １ Ｈ）。
【0091】
ステップ２：化合物１－３の合成
予め乾燥させたフラスコに化合物１－２（１００ｍｇ）及び氷酢酸（５ｍＬ）を加え、１００℃で、５ｈ撹拌した。反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチングさせ、酢酸エチル（２０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物化合物１－３を得、精製せずに次のステップで直接に使用した。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ３３０．０［Ｍ＋Ｈ］＋
予め乾燥させたフラスコに化合物１－２（１００ｍｇ）及び氷酢酸（５ｍＬ）を加え、１００℃で、５ｈ撹拌した。反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチングさせ、酢酸エチル（２０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物化合物１－３を得、精製せずに次のステップで直接に使用した。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ３３０．０［Ｍ＋Ｈ］＋
【0092】
ステップ３：化合物１－４のトリフルオロ酢酸塩の合成
予め乾燥させたフラスコに化合物１－３（９０ｍｇ）及び溶媒ＤＣＭ（２ｍＬ）を加え、次に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を加え、２５℃で、窒素ガスの保護下で、１ｈ撹拌した。反応完了後、反応溶液を濃縮して乾燥させ、化合物１－４のトリフルオロ酢酸塩粗生成物を得、精製せずに次のステップで直接に使用した。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ２３０．０［Ｍ＋Ｈ］＋
予め乾燥させたフラスコに化合物１－３（９０ｍｇ）及び溶媒ＤＣＭ（２ｍＬ）を加え、次に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を加え、２５℃で、窒素ガスの保護下で、１ｈ撹拌した。反応完了後、反応溶液を濃縮して乾燥させ、化合物１－４のトリフルオロ酢酸塩粗生成物を得、精製せずに次のステップで直接に使用した。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ２３０．０［Ｍ＋Ｈ］＋
【0093】
ステップ４：化合物１の合成
予め乾燥させたフラスコに化合物１－４のトリフルオロ酢酸塩（６０ｍｇ）、２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（６４．３６ｍｇ）、ＨＡＴＵ（１４９．２５ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（６８．３７μＬ）及び溶媒ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２５℃で、１５ｈ撹拌し、反応完了後、酢酸エチル（１０ｍＬ）を加えて希釈し、水（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、Ｐｒｅ－ＨＰＬＣ（カラムタイプ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０×３０ｍｍ×３μｍ；移動相：［Ｈ２Ｏ（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］；ＡＣＮ％：３０％～６０％、９ｍｉｎ）により分離して化合物１を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ １２．０８ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ８．２４ － ８．００ （ｍ， １ Ｈ）， ７．９９ － ７．７０ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．６８ － ７．２５ （ｍ， ４ Ｈ）， ７．２１ － ６．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．９４ － ６．７２ （ｍ， １ Ｈ）， ５．３５ （ｓ， ０．６３Ｈ）， ４．６５ （ｓ， ０．３７Ｈ）， ３．９７ － ３．６０ （ｍ， ５Ｈ）， １．９５ － １．５２ （ｍ， ２ Ｈ）， ０．９１ － ０．４３ （ｍ， ２ Ｈ）。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ４０１．２［Ｍ＋Ｈ］＋
予め乾燥させたフラスコに化合物１－４のトリフルオロ酢酸塩（６０ｍｇ）、２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（６４．３６ｍｇ）、ＨＡＴＵ（１４９．２５ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（６８．３７μＬ）及び溶媒ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２５℃で、１５ｈ撹拌し、反応完了後、酢酸エチル（１０ｍＬ）を加えて希釈し、水（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、Ｐｒｅ－ＨＰＬＣ（カラムタイプ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０×３０ｍｍ×３μｍ；移動相：［Ｈ２Ｏ（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］；ＡＣＮ％：３０％～６０％、９ｍｉｎ）により分離して化合物１を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ １２．０８ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ８．２４ － ８．００ （ｍ， １ Ｈ）， ７．９９ － ７．７０ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．６８ － ７．２５ （ｍ， ４ Ｈ）， ７．２１ － ６．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．９４ － ６．７２ （ｍ， １ Ｈ）， ５．３５ （ｓ， ０．６３Ｈ）， ４．６５ （ｓ， ０．３７Ｈ）， ３．９７ － ３．６０ （ｍ， ５Ｈ）， １．９５ － １．５２ （ｍ， ２ Ｈ）， ０．９１ － ０．４３ （ｍ， ２ Ｈ）。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ４０１．２［Ｍ＋Ｈ］＋
【0094】
実施例２
【0095】
【化22】
【0096】
合成スキーム：
【0097】
【化23】
【0098】
ステップ１：化合物２－２の合成
予め乾燥させたフラスコに化合物２－１（５００ｍｇ）、ＨＡＴＵ（１．２５ｇ）及びＤＭＦ（１０ｍＬ）を加え、更に４－メトキシ－ｏ－フェニレンジアミン（３６４．７９ｍｇ）及びＤＩＰＥＡ（１．１５ｍＬ）を加え、１５℃で、１５ｈ撹拌した。反応完了後、酢酸エチル（８０ｍＬ）を加えて希釈し、水（１００ｍＬ）及び食塩水（１００ｍＬ×２）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝３０：７０）により精製して化合物２－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．０３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．７３－７．０６ （ｍ， １Ｈ）， ６．０４－６．３４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６８－５．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．６５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．３７ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ２．２２－２．３９ （ｍ， １Ｈ）， ２．０６－２．２０ （ｍ， １Ｈ）， １．５９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．２９－１．４７ （ｍ， ９Ｈ）， ０．７２ （ｔｄ， Ｊ＝５．５５， ８．４７ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．４２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）。
予め乾燥させたフラスコに化合物２－１（５００ｍｇ）、ＨＡＴＵ（１．２５ｇ）及びＤＭＦ（１０ｍＬ）を加え、更に４－メトキシ－ｏ－フェニレンジアミン（３６４．７９ｍｇ）及びＤＩＰＥＡ（１．１５ｍＬ）を加え、１５℃で、１５ｈ撹拌した。反応完了後、酢酸エチル（８０ｍＬ）を加えて希釈し、水（１００ｍＬ）及び食塩水（１００ｍＬ×２）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝３０：７０）により精製して化合物２－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．０３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．７３－７．０６ （ｍ， １Ｈ）， ６．０４－６．３４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６８－５．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．６５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．３７ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ２．２２－２．３９ （ｍ， １Ｈ）， ２．０６－２．２０ （ｍ， １Ｈ）， １．５９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．２９－１．４７ （ｍ， ９Ｈ）， ０．７２ （ｔｄ， Ｊ＝５．５５， ８．４７ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．４２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）。
【0099】
ステップ２：化合物２－３の合成
予め乾燥させたフラスコに化合物２－２（５００ｍｇ）及び氷酢酸（１０ｍＬ）を加え、１００℃で、１．５ｈ撹拌した。反応完了後、反応溶液を直接に減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物に飽和炭酸水素ナトリウム（８０ｍＬ）を加え、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（８０ｍＬ×２、１０／１）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝５０：５０）により精製して化合物２－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １０．４１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．８５－７．７４ （ｍ， ３Ｈ）， ４．９９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．８４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２４ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ２．４０ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．９２ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．５０ （ｂｒ ｓ， ９Ｈ）， ０．９１ （ｔｄ， Ｊ＝５．６２， ８．６０ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．５０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）。
予め乾燥させたフラスコに化合物２－２（５００ｍｇ）及び氷酢酸（１０ｍＬ）を加え、１００℃で、１．５ｈ撹拌した。反応完了後、反応溶液を直接に減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物に飽和炭酸水素ナトリウム（８０ｍＬ）を加え、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（８０ｍＬ×２、１０／１）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝５０：５０）により精製して化合物２－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １０．４１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．８５－７．７４ （ｍ， ３Ｈ）， ４．９９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．８４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２４ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ２．４０ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝１０．９２ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．５０ （ｂｒ ｓ， ９Ｈ）， ０．９１ （ｔｄ， Ｊ＝５．６２， ８．６０ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．５０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）。
【0100】
ステップ３：化合物２－４の塩酸塩の合成
予め乾燥させたフラスコに化合物２－３（３００ｍｇ）及び溶媒酢酸エチル（８ｍＬ）を加え、次に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、８ｍＬ）を加え、１５℃で、１５ｈ撹拌した。反応完了後、直接に濃縮してスピン乾燥させ、化合物２－４の塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．７１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．６４ （ｄ， Ｊ＝９．０３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ （ｄ， Ｊ＝２．２６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０３ （ｄｄ， Ｊ＝２．３８， ８．９１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７９－４．９３ （ｍ， １Ｈ）， ３．８３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．３７－３．４９ （ｍ， １Ｈ）， ２．５３－２．６７ （ｍ， ２Ｈ）， １．９５ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ＝４．２７， ８．５３ Ｈｚ， １Ｈ）， １．０９－１．２０ （ｍ， １Ｈ）， ０．８０－０．９２ （ｍ， １Ｈ）。
予め乾燥させたフラスコに化合物２－３（３００ｍｇ）及び溶媒酢酸エチル（８ｍＬ）を加え、次に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、８ｍＬ）を加え、１５℃で、１５ｈ撹拌した。反応完了後、直接に濃縮してスピン乾燥させ、化合物２－４の塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．７１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．６４ （ｄ， Ｊ＝９．０３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ （ｄ， Ｊ＝２．２６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０３ （ｄｄ， Ｊ＝２．３８， ８．９１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７９－４．９３ （ｍ， １Ｈ）， ３．８３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．３７－３．４９ （ｍ， １Ｈ）， ２．５３－２．６７ （ｍ， ２Ｈ）， １．９５ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ＝４．２７， ８．５３ Ｈｚ， １Ｈ）， １．０９－１．２０ （ｍ， １Ｈ）， ０．８０－０．９２ （ｍ， １Ｈ）。
【0101】
ステップ４：化合物２の合成
予め乾燥させたフラスコに２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（１２８．１４ｍｇ）、ＨＡＴＵ（３７２．０２ｍｇ）及びジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、更に化合物２－４の塩酸塩（２００ｍｇ）及びＤＩＥＡ（３９３．２７μＬ）を加え、１５℃で、１５ｈ撹拌した。反応完了後、ジクロロメタン（８０ｍＬ）を加えて希釈し、水（８０ｍＬ）及び食塩水（８０ｍＬ×２）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝３０：７０）により精製して化合物２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．０６ （ｄ， Ｊ＝８．２８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３－７．６４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４４－７．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０５ （ｄ， Ｊ＝２．０１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９４ （ｄｄ， Ｊ＝２．２６， ９．０３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．５８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．７７ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８１ （ｓ， ３Ｈ）， ２．９７－３．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４４ （ｄｄ， Ｊ＝９．６６， １３．１８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８９－２．００ （ｍ， １Ｈ）， ０．７３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ０．５３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）。 ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ４０１．１［Ｍ＋Ｈ］＋
予め乾燥させたフラスコに２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（１２８．１４ｍｇ）、ＨＡＴＵ（３７２．０２ｍｇ）及びジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、更に化合物２－４の塩酸塩（２００ｍｇ）及びＤＩＥＡ（３９３．２７μＬ）を加え、１５℃で、１５ｈ撹拌した。反応完了後、ジクロロメタン（８０ｍＬ）を加えて希釈し、水（８０ｍＬ）及び食塩水（８０ｍＬ×２）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝３０：７０）により精製して化合物２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．０６ （ｄ， Ｊ＝８．２８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３－７．６４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４４－７．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０５ （ｄ， Ｊ＝２．０１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９４ （ｄｄ， Ｊ＝２．２６， ９．０３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．５８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．７７ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８１ （ｓ， ３Ｈ）， ２．９７－３．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４４ （ｄｄ， Ｊ＝９．６６， １３．１８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８９－２．００ （ｍ， １Ｈ）， ０．７３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ０．５３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）。 ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ４０１．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【0102】
実施例３
【0103】
【化24】
【0104】
合成スキーム：
【0105】
【化25】
【0106】
ステップ１：化合物３－２の合成
１つの乾燥させたバイアルにＨ２ＳＯ４（５０．００ｍＬ）を加え、次に、０℃で、ＨＮＯ３（２．８４ｍＬ、６５％の濃度）をゆっくりと滴下し、次に、化合物３－１（５ｇ）をゆっくりと加え、反応系を１５℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液を１００ｍＬの氷水にゆっくりと注ぎ、次に、水相をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物に５０ｍＬの石油エーテルを加え、１ｈ均質化させた後濾過し、ケーキを収集して濃縮し、乾燥させて化合物３－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ８．０６ （ｄ， Ｊ＝８．８Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７０ （ｄ， Ｊ＝８．８Ｈｚ， １ Ｈ）， ２．４３ （ｓ， ３ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２３９［Ｍ＋２３］＋。
１つの乾燥させたバイアルにＨ２ＳＯ４（５０．００ｍＬ）を加え、次に、０℃で、ＨＮＯ３（２．８４ｍＬ、６５％の濃度）をゆっくりと滴下し、次に、化合物３－１（５ｇ）をゆっくりと加え、反応系を１５℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液を１００ｍＬの氷水にゆっくりと注ぎ、次に、水相をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物に５０ｍＬの石油エーテルを加え、１ｈ均質化させた後濾過し、ケーキを収集して濃縮し、乾燥させて化合物３－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ８．０６ （ｄ， Ｊ＝８．８Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７０ （ｄ， Ｊ＝８．８Ｈｚ， １ Ｈ）， ２．４３ （ｓ， ３ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２３９［Ｍ＋２３］＋。
【0107】
ステップ２：化合物３－３の合成
１つの一口フラスコの中で化合物３－２（４．６ｇ）をＥｔＯＨ（１００ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に溶解させ、Ｆｅ粉末（１１．８６ｇ）及びＮＨ４Ｃｌ（２２．７２ｇ）を加え、反応系を７５℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液に２００ｍＬのエタノールを加えて希釈した後、濾過し、ケーキをエタノール（２００ｍＬ×２）で洗浄し、濾液を濃縮した後、５００ｍＬの酢酸エチルを加えて溶解させ、３０分間均質化させた後、濾過し、濾液を濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１～１：１）により分離・精製して化合物３－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ６．７４ （ｄ， Ｊ＝８．４Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．５５ （ｄ， Ｊ＝８．４Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．４１ （ｂｒ ｓ， ４Ｈ）， ２．２６ （ｓ， ３ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： １５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
１つの一口フラスコの中で化合物３－２（４．６ｇ）をＥｔＯＨ（１００ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に溶解させ、Ｆｅ粉末（１１．８６ｇ）及びＮＨ４Ｃｌ（２２．７２ｇ）を加え、反応系を７５℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液に２００ｍＬのエタノールを加えて希釈した後、濾過し、ケーキをエタノール（２００ｍＬ×２）で洗浄し、濾液を濃縮した後、５００ｍＬの酢酸エチルを加えて溶解させ、３０分間均質化させた後、濾過し、濾液を濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１～１：１）により分離・精製して化合物３－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ６．７４ （ｄ， Ｊ＝８．４Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．５５ （ｄ， Ｊ＝８．４Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．４１ （ｂｒ ｓ， ４Ｈ）， ２．２６ （ｓ， ３ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： １５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0108】
ステップ３：化合物３－４の合成
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物３－３（２２７．４２ｍｇ）及び化合物１－１（３００ｍｇ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの保護下で、０℃でＤＩＥＡ（５１１．８３ｍｇ）及びトリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酸酢酸エチル溶液（７８５．１０μＬ、５０％の含有量）を加え、次に、反応系を１５℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液を５０ｍＬの水に注ぎ、水相を酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて水（２０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１～１：１）により分離・精製して化合物３－４を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ： ３１０［Ｍ＋Ｈ－５６］＋。
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物３－３（２２７．４２ｍｇ）及び化合物１－１（３００ｍｇ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの保護下で、０℃でＤＩＥＡ（５１１．８３ｍｇ）及びトリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酸酢酸エチル溶液（７８５．１０μＬ、５０％の含有量）を加え、次に、反応系を１５℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液を５０ｍＬの水に注ぎ、水相を酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて水（２０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１～１：１）により分離・精製して化合物３－４を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ： ３１０［Ｍ＋Ｈ－５６］＋。
【0109】
ステップ４：化合物３－５の合成
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物３－４（４５０ｍｇ）をＤＭＦ（８ｍＬ）に溶解させ、ＡｃＯＨ（７０３．４４μＬ）を加え、反応系を１３０℃で２ｈ撹拌した。反応溶液を５０ｍＬ水に注ぎ、水相を酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて水（２０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１～１：１）により分離・精製して化合物３－５を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ： ３４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物３－４（４５０ｍｇ）をＤＭＦ（８ｍＬ）に溶解させ、ＡｃＯＨ（７０３．４４μＬ）を加え、反応系を１３０℃で２ｈ撹拌した。反応溶液を５０ｍＬ水に注ぎ、水相を酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて水（２０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１～１：１）により分離・精製して化合物３－５を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ： ３４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0110】
ステップ５：化合物３－６の塩酸塩の合成
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物３－５（３１０ｍｇ）をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）に溶解させ、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、４．４６ｍＬ）を加え、反応系を１５℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液を減圧濃縮して粗生成物化合物３－６の塩酸塩を得、更に精製せず、次のステップで直接に使用した。ＭＳ ｍ／ｚ：２４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物３－５（３１０ｍｇ）をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）に溶解させ、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、４．４６ｍＬ）を加え、反応系を１５℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液を減圧濃縮して粗生成物化合物３－６の塩酸塩を得、更に精製せず、次のステップで直接に使用した。ＭＳ ｍ／ｚ：２４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0111】
ステップ６：化合物３の合成
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物３－６の塩酸塩（１００ｍｇ）及び２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（６６．５７ｍｇ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させ、ＴＥＡ（１４６．９３μＬ）及びトリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（４１８．５５μＬ、５０％の純度）を加え、反応系を窒素ガスの保護下で、５０℃で１６ｈ撹拌を続けた。反応完了後、反応溶液を２０ｍＬの水に注ぎ、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０×４０ｍｍ×３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：３５％～６５％、８ｍｉｎ）により分離・精製して化合物３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： ８．３０－７．８９ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．６６－７．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．３１ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．２４－７．２０ （ｍ， １ Ｈ）， ５．３９ （ｓ， １ Ｈ）， ４．１５－３．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ２．６７－２．５９ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．４３－２．３２ （ｍ， １ Ｈ）， １．８２－１．５８ （ｍ， ３ Ｈ）， ０．８０－０．５２ （ｍ， ３Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物３－６の塩酸塩（１００ｍｇ）及び２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（６６．５７ｍｇ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させ、ＴＥＡ（１４６．９３μＬ）及びトリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（４１８．５５μＬ、５０％の純度）を加え、反応系を窒素ガスの保護下で、５０℃で１６ｈ撹拌を続けた。反応完了後、反応溶液を２０ｍＬの水に注ぎ、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０×４０ｍｍ×３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：３５％～６５％、８ｍｉｎ）により分離・精製して化合物３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： ８．３０－７．８９ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．６６－７．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．３１ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．２４－７．２０ （ｍ， １ Ｈ）， ５．３９ （ｓ， １ Ｈ）， ４．１５－３．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ２．６７－２．５９ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．４３－２．３２ （ｍ， １ Ｈ）， １．８２－１．５８ （ｍ， ３ Ｈ）， ０．８０－０．５２ （ｍ， ３Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0112】
実施例４
【0113】
【化26】
【0114】
合成スキーム：
【0115】
【化27】
【0116】
ステップ１：化合物４の合成
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物１－４のトリフルオロ酢酸塩（１００ｍｇ）及び５－メトキシ－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（８２．４９ｍｇ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させ、ＴＥＡ（１５７．１３μＬ）及びトリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（４４７．６１μＬ、５０％の含有量）を加え、反応系を窒素ガスの保護下で、５０℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液を２０ｍＬの水に注ぎ、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０×４０ｍｍ×３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～５５％、８ｍｉｎ）により分離・精製して化合物４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：１２．１７－１２．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ８．０９－８．０８ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．７７－７．７０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４９－７．４７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４１－７．３２ （ｍ， １ Ｈ）， ７．２０－７．００ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．９３－６．７９ （ｍ， １ Ｈ）， ５．３１－４．７４ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９９－３．７６ （ｍ， ６ Ｈ）， ３．０７ （ｍ， １Ｈ）， ２．５１－２．４９ （ｍ， １Ｈ）， １．６６－１．６３ （ｍ， ２Ｈ）， ０．７７－０．５４ （ｍ， ２Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４３１［Ｍ＋Ｈ］＋。
１つの乾燥させたバイアルの中で化合物１－４のトリフルオロ酢酸塩（１００ｍｇ）及び５－メトキシ－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（８２．４９ｍｇ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させ、ＴＥＡ（１５７．１３μＬ）及びトリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（４４７．６１μＬ、５０％の含有量）を加え、反応系を窒素ガスの保護下で、５０℃で１６ｈ撹拌した。反応溶液を２０ｍＬの水に注ぎ、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０×４０ｍｍ×３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～５５％、８ｍｉｎ）により分離・精製して化合物４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：１２．１７－１２．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ８．０９－８．０８ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．７７－７．７０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４９－７．４７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４１－７．３２ （ｍ， １ Ｈ）， ７．２０－７．００ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．９３－６．７９ （ｍ， １ Ｈ）， ５．３１－４．７４ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９９－３．７６ （ｍ， ６ Ｈ）， ３．０７ （ｍ， １Ｈ）， ２．５１－２．４９ （ｍ， １Ｈ）， １．６６－１．６３ （ｍ， ２Ｈ）， ０．７７－０．５４ （ｍ， ２Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４３１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0117】
実施例５
【0118】
【化28】
【0119】
合成スキーム：
【0120】
【化29】
【0121】
反応フラスコに化合物１－４のトリフルオロ酢酸塩（５０ｍｇ）、５－メチル－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（４４．３１ｍｇ）及びＴＨＦ（１ｍＬ）を加え、撹拌下で、ＴＥＡ（１５１．７７μＬ）及びトリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（１９４．５４μＬ、５０％の含有量）を加え、５０℃で１６ｈ反応させた。反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得、分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５×３０ｍｍ×３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～４５％、８ｍｉｎ）により精製して化合物５を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １０．９７ － １２．９１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．８１ － ８．３９ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６７ － ７．８０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．２２ － ７．６５ （ｍ， ３ Ｈ）， ６．８７ － ７．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ６．７２ － ６．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ６．１５ － ６．５８ （ｍ， １ Ｈ）， ４．６１ － ５．３８ （ｍ， １ Ｈ）， ３．８２ － ４．０２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７５ － ３．８１ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．５６ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ２．３８ － ２．４４ （ｍ， ２ Ｈ）， １．５７ － １．８６ （ｍ， ３ Ｈ）， ０．７２ － ０．８０ （ｍ， １ Ｈ）， ０．５１ － ０．６１ （ｍ， １ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0122】
実施例６
【0123】
【化30】
【0124】
合成スキーム：
【0125】
【化31】
【0126】
反応フラスコに化合物１－４のトリフルオロ酢酸塩（１００ｍｇ）、２－フルオロ－６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（９９．３９ｍｇ）及びＴＨＦ（２ｍＬ）を加え、撹拌し、ＴＥＡ（３０３．５４μＬ）、トリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（３８９．０９μＬ、５０％の含有量）を加え、５０℃で１６ｈ反応させた。反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得、分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５×３０ｍｍ×３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～４５％、８ｍｉｎ）により分離・精製して化合物６を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １１．５３ － １２．３３ （ｍ， １ Ｈ）， ８．１５ － ８．２６ （ｍ， １ Ｈ）， ７．７４ － ７．９０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６０ － ７．７３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１１ － ７．６０ （ｍ， ３ Ｈ）， ６．５２ － ７．１０ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．５２ － ５．５０ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９０ － ４．２２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７９ （ｄ， Ｊ＝１３．１３ Ｈｚ， ３ Ｈ）， ３．２１ － ３．５０ （ｍ， １ Ｈ）， １．５３ － １．９４ （ｍ， ２ Ｈ）， ０．３３ － ０．８８ （ｍ， ２ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0127】
実施例７
【0128】
【化32】
【0129】
合成スキーム：
【0130】
【化33】
【0131】
反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（１００ｍｇ）、５－メチル－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（９７．４９ｍｇ）、ＴＨＦ（２ｍＬ）を加え、撹拌し、ＴＥＡ（６０７．０８μＬ）、トリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（７７８．１８μＬ、５０％の含有量）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２０％～５０％、８ｍｉｎ）により精製して化合物７を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １１．７５ － １２．０９ （ｍ， １ Ｈ）， ７．８７ － ８．１６ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．６３ － ７．８５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４１ － ７．５３ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．３８ － ７．４０ （ｍ， ３ Ｈ）， ４．６０ － ５．２０ （ｍ， １ Ｈ） ， ３．７３ － ３．７９ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．１１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．０２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ２．３０ － ２．４５ （ｍ， ４ Ｈ）， １．５２ － １．８１ （ｍ， ２ Ｈ）， ０．４６ － ０．９８ （ｍ， ２ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0132】
キラル純度はキラルＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ－３、５０×４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．， ３μｍ；移動相：［超臨界ＣＯ２－メタノール（０．１％のイソプロピルアミンを含む）］；メタノール（０．１％のイソプロピルアミンを含む）％：５％～５０％、３ｍｉｎ）により検出し、保持時間＝１．１６１ｍｉｎ、ｅｅ＝１００％であった。
【0133】
実施例８
【0134】
【化34】
【0135】
合成スキーム：
【0136】
【化35】
【0137】
反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（１００ｍｇ）、５－メトキシ－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）安息香酸（１０５．１６ｍｇ）、ＴＨＦ（２ｍＬ）を加え、撹拌し、ＴＥＡ（６０７．０８μＬ）、トリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（７７８．１８μＬ、５０％の含有量）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２０％～９５％、８ｍｉｎ）により精製して化合物８を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ： １１．７１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９９ － ８．１５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．８１ － ７．９１ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．３８ － ７．７２ （ｍ， １ Ｈ）， ７．０７ － ７．３６ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．４４ － ７．０３ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．７６ － ５．１８ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６３ － ３．９１ （ｍ， ６ Ｈ）， ３．１７ － ３．２０ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３４ － ２．３８ （ｍ， １ Ｈ）， １．７０ － １．８５ （ｍ， １ Ｈ）， １．１１ （ｓ， １ Ｈ）， ０．５５ － ０．８９ （ｍ， ２ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４３１ ［Ｍ＋Ｈ］＋。旋光度値：（＋）６０．９９°±０．１３°（１０．３８ｍｇ／ｍＬのクロロホルム溶液、長さ＝５０ｍｍ、温度＝２０℃、ｎ＝２）。キラル純度はキラルＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ－３、５０×４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．，３μｍ；移動相：［超臨界ＣＯ２－メタノール（０．１％のイソプロピルアミンを含む）］；メタノール（０．１％のイソプロピルアミンを含む）％：５％～５０％、３ｍｉｎ）により検出し、保持時間＝０．９８０ｍｉｎ、ｅｅ＝１００％であった。
【0138】
実施例９
【0139】
【化36】
【0140】
合成スキーム：
【0141】
【化37】
【0142】
ステップ１：化合物９－２の合成
反応フラスコに化合物９－１（４．５ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（１．２９ｇ）、１，１０－フェナントロリン（１５２．４３ｍｇ）、炭酸セシウム（８．２７ｇ）及び１，４－ジオキサン（４５ｍＬ）を加え、ヨウ化第一銅（３２２．１８ｍｇ）を加え、窒素ガスで３回置換し、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して化合物９－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：１３．１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．８５ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．８１－７．８３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６５－７．６８ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４６－７．６５（ｍ， １ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２０８ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
反応フラスコに化合物９－１（４．５ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（１．２９ｇ）、１，１０－フェナントロリン（１５２．４３ｍｇ）、炭酸セシウム（８．２７ｇ）及び１，４－ジオキサン（４５ｍＬ）を加え、ヨウ化第一銅（３２２．１８ｍｇ）を加え、窒素ガスで３回置換し、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して化合物９－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：１３．１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．８５ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．８１－７．８３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６５－７．６８ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４６－７．６５（ｍ， １ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２０８ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0143】
ステップ２：化合物９の合成
反応フラスコに化合物９－２（１００．００ｍｇ）、トルエン（１ｍＬ）を加え、撹拌し、塩化チオニル（３８．５２μＬ）を加え、５０℃で１ｈ反応させ、反応溶液を減圧濃縮して、０．５ｍＬのジクロロメタンに溶解させて準備した。反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（１００ｍｇ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）、トリエチルアミン（２６１．８９μＬ）を加え、撹拌し、０℃に冷却させ、上記ジクロロメタン溶液を滴下し、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～５５％、８ｍｉｎ）により精製して化合物９を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ： ９．５９ － １１．７５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．８２ （ｄ， Ｊ＝２．４， １ Ｈ）， ７．３５ － ７．６９ （ｍ， ４ Ｈ）， ７．０４ － ７．２３ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．９５ （ｄ， Ｊ＝４， １ Ｈ）， ５．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ３．８８（ｓ， ３ Ｈ）， ３．５３ （ｍ ， １ Ｈ）， ２．７２ － ２．８３ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３０ （ｍ， １ Ｈ）， １．９２ － ２．０８ （ｍ， １ Ｈ）， ０．７４ － ０．９１ （ｍ， １ Ｈ）， ０．３６ － ０．６２ （ｍ， １ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
反応フラスコに化合物９－２（１００．００ｍｇ）、トルエン（１ｍＬ）を加え、撹拌し、塩化チオニル（３８．５２μＬ）を加え、５０℃で１ｈ反応させ、反応溶液を減圧濃縮して、０．５ｍＬのジクロロメタンに溶解させて準備した。反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（１００ｍｇ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）、トリエチルアミン（２６１．８９μＬ）を加え、撹拌し、０℃に冷却させ、上記ジクロロメタン溶液を滴下し、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～５５％、８ｍｉｎ）により精製して化合物９を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ： ９．５９ － １１．７５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．８２ （ｄ， Ｊ＝２．４， １ Ｈ）， ７．３５ － ７．６９ （ｍ， ４ Ｈ）， ７．０４ － ７．２３ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．９５ （ｄ， Ｊ＝４， １ Ｈ）， ５．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ３．８８（ｓ， ３ Ｈ）， ３．５３ （ｍ ， １ Ｈ）， ２．７２ － ２．８３ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３０ （ｍ， １ Ｈ）， １．９２ － ２．０８ （ｍ， １ Ｈ）， ０．７４ － ０．９１ （ｍ， １ Ｈ）， ０．３６ － ０．６２ （ｍ， １ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0144】
実施例１０
【0145】
【化38】
【0146】
合成スキーム：
【0147】
【化39】
【0148】
ステップ１：化合物１０－２の合成
反応フラスコに化合物１０－１（２．８ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（８１１．７８ｍｇ）、炭酸セシウム（５．２２ｇ）、１，１０－フェナントロリン（９６．２８ｍｇ）及び１，４－ジオキサン（２８ｍＬ）を加え、ヨウ化第一銅（２０３．５０ｍｇ）を加え、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して化合物１０－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １２．９ （ｓ， １ Ｈ），８．０６ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．６７ （ｄ， Ｊ＝８， １ Ｈ）， ７．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３９ （ｄ， Ｊ＝６．８， １ Ｈ）， ２．４３ （ｓ， ３ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２０４ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
反応フラスコに化合物１０－１（２．８ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（８１１．７８ｍｇ）、炭酸セシウム（５．２２ｇ）、１，１０－フェナントロリン（９６．２８ｍｇ）及び１，４－ジオキサン（２８ｍＬ）を加え、ヨウ化第一銅（２０３．５０ｍｇ）を加え、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して化合物１０－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １２．９ （ｓ， １ Ｈ），８．０６ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．６７ （ｄ， Ｊ＝８， １ Ｈ）， ７．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３９ （ｄ， Ｊ＝６．８， １ Ｈ）， ２．４３ （ｓ， ３ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２０４ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0149】
ステップ２：化合物１０の合成
反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（１００ｍｇ）、化合物１０－２（９７．４９ｍｇ）、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）を加え、撹拌し、トリエチルアミン（６０７．０８μＬ）、トリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（７７８．１８μＬ、５０％の含有量）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～４５％、８ｍｉｎ）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：４５％～７５％、１０ｍｉｎ）により精製して化合物１０を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １１．７２ － １２．２０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．８７ － ８．１９ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．７６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５６ － ７．６６ （ｍ， １ Ｈ）， ６．７１ － ７．４７ （ｍ， ４ Ｈ）， ４．５３ － ５．３２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６２ － ３．８１ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．３０ （ｓ， １ Ｈ）， ３．０２ － ３．１４ （ｍ， １ Ｈ）， ２．４４ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．２１ － ２．３１ （ｍ， １ Ｈ）， １．６６ － １．８０ （ｍ， １ Ｈ）， ０．４９ － １．０４ （ｍ， ２ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（１００ｍｇ）、化合物１０－２（９７．４９ｍｇ）、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）を加え、撹拌し、トリエチルアミン（６０７．０８μＬ）、トリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（７７８．１８μＬ、５０％の含有量）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～４５％、８ｍｉｎ）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：４５％～７５％、１０ｍｉｎ）により精製して化合物１０を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １１．７２ － １２．２０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．８７ － ８．１９ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．７６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５６ － ７．６６ （ｍ， １ Ｈ）， ６．７１ － ７．４７ （ｍ， ４ Ｈ）， ４．５３ － ５．３２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６２ － ３．８１ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．３０ （ｓ， １ Ｈ）， ３．０２ － ３．１４ （ｍ， １ Ｈ）， ２．４４ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．２１ － ２．３１ （ｍ， １ Ｈ）， １．６６ － １．８０ （ｍ， １ Ｈ）， ０．４９ － １．０４ （ｍ， ２ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0150】
実施例１１
【0151】
【化40】
【0152】
合成スキーム：
【0153】
【化41】
【0154】
ステップ１：化合物１１－２の合成
反応フラスコに化合物１１－１（３ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（８５６．８０ｍｇ）、炭酸セシウム（５．５１ｇ）、１，１０－フェナントロリン（１０１．６２ｍｇ）及び１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）を加え、ヨウ化第一銅（２１４．７９ｍｇ）を加え、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して得られた生成物を更に分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８（２５０×７０ｍｍ、１５μｍ）；移動相：［水（ＨＣｌを含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：８％～３８％、２０ｍｉｎ）により精製して化合物１１－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ： １３．３ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０８ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．７９－７．８２ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５７－７．６３ （ｍ， ２ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２０８ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
反応フラスコに化合物１１－１（３ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（８５６．８０ｍｇ）、炭酸セシウム（５．５１ｇ）、１，１０－フェナントロリン（１０１．６２ｍｇ）及び１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）を加え、ヨウ化第一銅（２１４．７９ｍｇ）を加え、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して得られた生成物を更に分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８（２５０×７０ｍｍ、１５μｍ）；移動相：［水（ＨＣｌを含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：８％～３８％、２０ｍｉｎ）により精製して化合物１１－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ： １３．３ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０８ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．７９－７．８２ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５７－７．６３ （ｍ， ２ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２０８ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0155】
ステップ２：化合物１１の合成
反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（５０ｍｇ）、化合物１１－２（４９．６９ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）を加え、撹拌し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１１３．９５μＬ）、ＨＡＴＵ（１６５．８４ｍｇ）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２０％～５０％、８ｍｉｎ）により精製して化合物１１を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ： １１．７５ － １２．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．８０ － ８．２４ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．６９ （ｄｄ， Ｊ＝８．１３， ３．２５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．１９ － ７．５６ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．６０ － ７．１４ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．６６ － ５．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６９ － ３．８１ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．３１ （ｓ， １ Ｈ）， ３．１９ （ｓ， １ Ｈ）， ２．３４ － ２．４２ （ｍ， １ Ｈ）， １．７２ － １．８４ （ｍ， １ Ｈ）， ０．５５ － １．０３ （ｍ， ２ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（５０ｍｇ）、化合物１１－２（４９．６９ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）を加え、撹拌し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１１３．９５μＬ）、ＨＡＴＵ（１６５．８４ｍｇ）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２０％～５０％、８ｍｉｎ）により精製して化合物１１を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ： １１．７５ － １２．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．８０ － ８．２４ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．６９ （ｄｄ， Ｊ＝８．１３， ３．２５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．１９ － ７．５６ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．６０ － ７．１４ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．６６ － ５．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６９ － ３．８１ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．３１ （ｓ， １ Ｈ）， ３．１９ （ｓ， １ Ｈ）， ２．３４ － ２．４２ （ｍ， １ Ｈ）， １．７２ － １．８４ （ｍ， １ Ｈ）， ０．５５ － １．０３ （ｍ， ２ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0156】
実施例１２
【0157】
【化42】
【0158】
合成スキーム：
【0159】
【化43】
【0160】
ステップ１：化合物１２－２の合成
反応フラスコに化合物１２－１（１ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（２８５．６０ｍｇ）、炭酸セシウム（１．８４ｇ）、１，１０－フェナントロリン（３３．８７ｍｇ）及び１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）を加え、ヨウ化第一銅（７１．６０ｍｇ）を加え、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して化合物１２－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １３．６７ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１６ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．７１－７．８０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６８－７．７０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４４－７．４７ （ｍ， １ Ｈ）。
反応フラスコに化合物１２－１（１ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（２８５．６０ｍｇ）、炭酸セシウム（１．８４ｇ）、１，１０－フェナントロリン（３３．８７ｍｇ）及び１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）を加え、ヨウ化第一銅（７１．６０ｍｇ）を加え、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して化合物１２－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １３．６７ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１６ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．７１－７．８０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６８－７．７０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４４－７．４７ （ｍ， １ Ｈ）。
【0161】
ステップ２：化合物１２の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物２－４の塩酸塩（５０ｍｇ）、化合物１２－２（３５．０８ｍｇ）及びアセトニトリル（１ｍＬ）を加え、撹拌し、次に、試薬Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６５．５５μＬ）、Ｎ－メチルイミダゾール（５２．４９μＬ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルクロロホルムアミジンヘキサフルオロホスフェート（６３．３５ｍｇ）を加え、反応系を１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２０％～５０％、８ｍｉｎ）により精製して化合物１２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １１．３４ － １２．１９ （ｍ， １ Ｈ）， ８．１０ － ８．２９ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６３ － ７．９２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．３９ － ７．５４ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．５９ － ７．３７ （ｍ， ３ Ｈ）， ４．５２ － ５．５２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７０ － ３．８７ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．１２ － ３．３１ （ｍ， １ Ｈ）， ２．７７ － ２．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３４ － ２．６３ （ｍ， １ Ｈ）， １．７４ － １．９７ （ｍ， １ Ｈ）， ０．７２ － １．１８ （ｍ， １．５ Ｈ）， ０．２４ － ０．５０ （ｍ， ０．５ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
予め乾燥させた一口フラスコに化合物２－４の塩酸塩（５０ｍｇ）、化合物１２－２（３５．０８ｍｇ）及びアセトニトリル（１ｍＬ）を加え、撹拌し、次に、試薬Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６５．５５μＬ）、Ｎ－メチルイミダゾール（５２．４９μＬ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルクロロホルムアミジンヘキサフルオロホスフェート（６３．３５ｍｇ）を加え、反応系を１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２０％～５０％、８ｍｉｎ）により精製して化合物１２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １１．３４ － １２．１９ （ｍ， １ Ｈ）， ８．１０ － ８．２９ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６３ － ７．９２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．３９ － ７．５４ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．５９ － ７．３７ （ｍ， ３ Ｈ）， ４．５２ － ５．５２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７０ － ３．８７ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．１２ － ３．３１ （ｍ， １ Ｈ）， ２．７７ － ２．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３４ － ２．６３ （ｍ， １ Ｈ）， １．７４ － １．９７ （ｍ， １ Ｈ）， ０．７２ － １．１８ （ｍ， １．５ Ｈ）， ０．２４ － ０．５０ （ｍ， ０．５ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４１９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0162】
実施例１３
【0163】
【化44】
【0164】
合成スキーム：
【0165】
【化45】
【0166】
ステップ１：化合物１３の合成
反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（３０ｍｇ）、５－メチル－２－（ピリミジン－２－イル）安息香酸（２５．２３ｍｇ）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）を加え、撹拌し、トリエチルアミン（９１．０６μＬ）、トリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（２３３．４５μＬ、５０％の濃度）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝１：１～０：１である）により分離・精製して得られた生成物を更に分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～５５％、８ｍｉｎ）により精製して化合物１３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ８．１８ － ８．３３ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．３３ － ７．６２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．０４ － ７．１９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．８９ － ７．００ （ｍ， ２ Ｈ）， ５．６４ （ｄｄ， Ｊ＝８．８２， ２．６９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．８８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ２．８１ － ２．９３ （ｍ， １ Ｈ）， ２．４７ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．２９ － ２．４１ （ｍ， １ Ｈ）， １．９４ － ２．０４ （ｍ， １ Ｈ）， ０．６９ － ０．８４ （ｍ， １ Ｈ）， ０．４８ － ０．６１ （ｍ， １ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４２６ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
反応フラスコに化合物２－４の塩酸塩（３０ｍｇ）、５－メチル－２－（ピリミジン－２－イル）安息香酸（２５．２３ｍｇ）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）を加え、撹拌し、トリエチルアミン（９１．０６μＬ）、トリ－ｎ－プロピルシクロリン酸無水物（ｔｒｉ－ｎ－ｐｒｏｐｙｌｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）の酢酸エチル溶液（２３３．４５μＬ、５０％の濃度）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝１：１～０：１である）により分離・精製して得られた生成物を更に分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％～５５％、８ｍｉｎ）により精製して化合物１３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ８．１８ － ８．３３ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．３３ － ７．６２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．０４ － ７．１９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．８９ － ７．００ （ｍ， ２ Ｈ）， ５．６４ （ｄｄ， Ｊ＝８．８２， ２．６９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．８８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ２．８１ － ２．９３ （ｍ， １ Ｈ）， ２．４７ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．２９ － ２．４１ （ｍ， １ Ｈ）， １．９４ － ２．０４ （ｍ， １ Ｈ）， ０．６９ － ０．８４ （ｍ， １ Ｈ）， ０．４８ － ０．６１ （ｍ， １ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ４２６ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0167】
実施例１４
【0168】
【化46】
【0169】
合成スキーム：
【0170】
【化47】
【0171】
ステップ１：化合物１４－２の合成
反応フラスコに化合物１４－１（９ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（２．４２ｇ）、１，４－ジオキサン（９０ｍＬ）を加え、撹拌し、炭酸セシウム（１５．５７ｇ）、１，１０－フェナントロリン（２８７．１０ｍｇ）、ヨウ化第一銅（６０６．８２ｍｇ）を加え、窒素ガスで３回置換し、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して化合物１４－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ： １３．４６ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．７７ － ７．８２ （ｍ， ３ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２２４ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
反応フラスコに化合物１４－１（９ｇ）、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（２．４２ｇ）、１，４－ジオキサン（９０ｍＬ）を加え、撹拌し、炭酸セシウム（１５．５７ｇ）、１，１０－フェナントロリン（２８７．１０ｍｇ）、ヨウ化第一銅（６０６．８２ｍｇ）を加え、窒素ガスで３回置換し、１００℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、ＨＣｌでｐＨ＝１～２に調節し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１～５０：１である）により分離・精製して化合物１４－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ： １３．４６ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．７７ － ７．８２ （ｍ， ３ Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ ： ２２４ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0172】
ステップ２：化合物１４の合成
反応フラスコにアセトニトリル（１ｍＬ）を加え、１５℃で撹拌下で化合物２－４の塩酸塩（５０ｍｇ）、化合物１４－２（４３．８９ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７５．９７μＬ）、Ｎ－メチルイミダゾール（６０．８４μＬ）及びＮ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルクロロホルムアミジンヘキサフルオロホスフェート（７３．４３ｍｇ）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：３０％～６０％、８ｍｉｎ）により精製して化合物１４を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ８．０３ （ｄ， Ｊ＝８．６３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．３８ － ７．６２ （ｍ， ５ Ｈ）， ７．０６ － ７．１８ （ｍ， １ Ｈ）， ６．９６ （ｄｄ， Ｊ＝８．８２， ２．３１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．６３ （ｄｄ， Ｊ＝８．５７， ２．１９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．８９ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．５３ （ｍ， １ Ｈ）， ２．８３ （ｔ， １ Ｈ）， ２．３３ （ｍ， １ Ｈ）， １．９８ － ２．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ０．７８ － ０．９１ （ｍ， １ Ｈ）， ０．５４ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ ： ４３５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
反応フラスコにアセトニトリル（１ｍＬ）を加え、１５℃で撹拌下で化合物２－４の塩酸塩（５０ｍｇ）、化合物１４－２（４３．８９ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７５．９７μＬ）、Ｎ－メチルイミダゾール（６０．８４μＬ）及びＮ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルクロロホルムアミジンヘキサフルオロホスフェート（７３．４３ｍｇ）を加え、１５℃で１６ｈ反応させた。反応完了後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を含む）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：３０％～６０％、８ｍｉｎ）により精製して化合物１４を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ８．０３ （ｄ， Ｊ＝８．６３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．３８ － ７．６２ （ｍ， ５ Ｈ）， ７．０６ － ７．１８ （ｍ， １ Ｈ）， ６．９６ （ｄｄ， Ｊ＝８．８２， ２．３１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．６３ （ｄｄ， Ｊ＝８．５７， ２．１９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．８９ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．５３ （ｍ， １ Ｈ）， ２．８３ （ｔ， １ Ｈ）， ２．３３ （ｍ， １ Ｈ）， １．９８ － ２．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ０．７８ － ０．９１ （ｍ， １ Ｈ）， ０．５４ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ ： ４３５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0173】
生物学的試験
実験例１：ＯＸ１及びＯＸ２受容体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性試験
実験目的：
ＦＬＩＰＲで細胞内カルシウムシグナルの変化を検出し、化合物のＩＣ５０値を指標としてＯＸ１Ｒ及びＯＸ２Ｒ受容体に対する化合物の拮抗作用を評価するためである。
実験例１：ＯＸ１及びＯＸ２受容体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性試験
実験目的：
ＦＬＩＰＲで細胞内カルシウムシグナルの変化を検出し、化合物のＩＣ５０値を指標としてＯＸ１Ｒ及びＯＸ２Ｒ受容体に対する化合物の拮抗作用を評価するためである。
【0174】
実験材料：
１．細胞株：ＨＥＫ２９３－ＯＸ１Ｒ及びＨＥＫ２９３－ＯＸ２Ｒを安定にトランスフェクトする細胞株
ＨＥＫ２９３－ＯＸ１Ｒ細胞培養培地（ＤＭＥＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１１９６０－０４４；１０％の血清、Ｇｉｂｃｏ＃１００９９１４１；Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ１×、Ｇｉｂｃｏ＃２５０３０；ピルビン酸ナトリウム１×、Ｇｉｂｃｏ＃１１３６０；Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ ３００μｇ／ｍＬ、Ｇｉｂｃｏ＃１０１３１）
ＨＥＫ２９３－ＯＸ２Ｒ細胞培養培地（ＤＭＥＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１１９６０－０４４；１０％の血清、Ｇｉｂｃｏ＃１００９９１４１；Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ１×、Ｇｉｂｃｏ＃２５０３０；ピルビン酸ナトリウム１×、Ｇｉｂｃｏ＃１１３６０；Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ ３００μｇ／ｍＬ、Ｇｉｂｃｏ＃１０１３１；Ｂｌａｓｔｉｃｉｎ ２μｇ／ｍＬ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ｒ２１００１）
１．細胞株：ＨＥＫ２９３－ＯＸ１Ｒ及びＨＥＫ２９３－ＯＸ２Ｒを安定にトランスフェクトする細胞株
ＨＥＫ２９３－ＯＸ１Ｒ細胞培養培地（ＤＭＥＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１１９６０－０４４；１０％の血清、Ｇｉｂｃｏ＃１００９９１４１；Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ１×、Ｇｉｂｃｏ＃２５０３０；ピルビン酸ナトリウム１×、Ｇｉｂｃｏ＃１１３６０；Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ ３００μｇ／ｍＬ、Ｇｉｂｃｏ＃１０１３１）
ＨＥＫ２９３－ＯＸ２Ｒ細胞培養培地（ＤＭＥＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１１９６０－０４４；１０％の血清、Ｇｉｂｃｏ＃１００９９１４１；Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ１×、Ｇｉｂｃｏ＃２５０３０；ピルビン酸ナトリウム１×、Ｇｉｂｃｏ＃１１３６０；Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ ３００μｇ／ｍＬ、Ｇｉｂｃｏ＃１０１３１；Ｂｌａｓｔｉｃｉｎ ２μｇ／ｍＬ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ｒ２１００１）
【0175】
【表1】
【0176】
実験ステップと方法：
ａ）細胞の接種（ＨＥＫ２９３－ＯＸ１Ｒ及びＨＥＫ２９３－ＯＸ２Ｒ細胞）
１）培地、トリプシン、ＤＰＢＳを３７℃のウォーターバスで予熱した。細胞培養培地を吸引し、１０ｍＬのＤＰＢＳで洗浄した；
２）予熱したトリプシンを培養フラスコに加え、トリプシンが培養フラスコを均等に覆うように培養フラスコを回転させ、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに入れて１～２分間消化させた；
３）各Ｔ１５０は、１０～１５ｍＬの培地で細胞を懸濁し、８００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１０ｍＬの培地で細胞を再懸濁し、１ｍＬの細胞懸濁液を吸引してＶｉ－ｃｅｌｌで計数した；
４）培養培地でＯＸ１Ｒ細胞を５×１０５／ｍＬに希釈し、ＯＸ２Ｒ細胞を４×１０５／ｍＬに希釈し、ピペットで希釈した細胞を３８４プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ．７８１９４６）（５０μＬ／ウェル、ＯＸ１Ｒ細胞：２５０００ｃｅｌｌｓ／ウェル、ＯＸ２Ｒ細胞：２００００ｃｅｌｌｓ／ウェル）に加えた。細胞プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで一晩放置した。
ａ）細胞の接種（ＨＥＫ２９３－ＯＸ１Ｒ及びＨＥＫ２９３－ＯＸ２Ｒ細胞）
１）培地、トリプシン、ＤＰＢＳを３７℃のウォーターバスで予熱した。細胞培養培地を吸引し、１０ｍＬのＤＰＢＳで洗浄した；
２）予熱したトリプシンを培養フラスコに加え、トリプシンが培養フラスコを均等に覆うように培養フラスコを回転させ、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに入れて１～２分間消化させた；
３）各Ｔ１５０は、１０～１５ｍＬの培地で細胞を懸濁し、８００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１０ｍＬの培地で細胞を再懸濁し、１ｍＬの細胞懸濁液を吸引してＶｉ－ｃｅｌｌで計数した；
４）培養培地でＯＸ１Ｒ細胞を５×１０５／ｍＬに希釈し、ＯＸ２Ｒ細胞を４×１０５／ｍＬに希釈し、ピペットで希釈した細胞を３８４プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ．７８１９４６）（５０μＬ／ウェル、ＯＸ１Ｒ細胞：２５０００ｃｅｌｌｓ／ウェル、ＯＸ２Ｒ細胞：２００００ｃｅｌｌｓ／ウェル）に加えた。細胞プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで一晩放置した。
【0177】
ｂ）化合物のローディング：
１）ＤＭＳＯで化合物を２０ｍＭに希釈し、８つの勾配に３倍希釈し、２つの複製ウェルであり、Ｅｃｈｏリキッドハンドラー（Ｅｃｈｏ ｌｉｑｕｉｄ ｈａｎｄｌｅｒ）を使用して化合物プレートに加えた。次に、２０μＬの緩衝液を追加し、ＤＭＳＯの最終濃度を０．１％に維持させた；
１）ＤＭＳＯで化合物を２０ｍＭに希釈し、８つの勾配に３倍希釈し、２つの複製ウェルであり、Ｅｃｈｏリキッドハンドラー（Ｅｃｈｏ ｌｉｑｕｉｄ ｈａｎｄｌｅｒ）を使用して化合物プレートに加えた。次に、２０μＬの緩衝液を追加し、ＤＭＳＯの最終濃度を０．１％に維持させた；
【0178】
ｃ）ＦＬＩＰＲ実験：
１）真空ポンプで３８４プレートの細胞培養培地を吸引して除去し、３０μＬのＦｌｕｏ－４ Ｄｉｒｅｃｔ蛍光色素を加え、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで１時間培養し、室温で再び１０分間平衡化させた。
２）ＥＣ５０試験：氷上でＯｒｅｘｉｎ Ａを手動で希釈し、８つの勾配に３倍希釈し、２つの複製ウェルであった。ＤＭＳＯの濃度が０．５％になるようにＤＭＳＯプレートを再び準備した。細胞プレート、ＯｒｅｘｉｎＡプレート、及びＤＭＳＯプレートをそれぞれＦＬＩＰＲに入れ、蛍光値を読み取った。
３）Ｏｒｅｘｉｎ ＡのＥＣ５０値でＥＣ７０値を計算し、５×ＥＣ７０溶液を準備し、ピペットで３８４化合物プレートに加え、氷上に保存した。
４）ＦＬＩＰＲの中に化合物プレート、５×ＥＣ７０プレート、細胞プレート、ＦＬＩＰＲチップを順次加え、プログラムを実行して蛍光値を読み取った。
１）真空ポンプで３８４プレートの細胞培養培地を吸引して除去し、３０μＬのＦｌｕｏ－４ Ｄｉｒｅｃｔ蛍光色素を加え、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで１時間培養し、室温で再び１０分間平衡化させた。
２）ＥＣ５０試験：氷上でＯｒｅｘｉｎ Ａを手動で希釈し、８つの勾配に３倍希釈し、２つの複製ウェルであった。ＤＭＳＯの濃度が０．５％になるようにＤＭＳＯプレートを再び準備した。細胞プレート、ＯｒｅｘｉｎＡプレート、及びＤＭＳＯプレートをそれぞれＦＬＩＰＲに入れ、蛍光値を読み取った。
３）Ｏｒｅｘｉｎ ＡのＥＣ５０値でＥＣ７０値を計算し、５×ＥＣ７０溶液を準備し、ピペットで３８４化合物プレートに加え、氷上に保存した。
４）ＦＬＩＰＲの中に化合物プレート、５×ＥＣ７０プレート、細胞プレート、ＦＬＩＰＲチップを順次加え、プログラムを実行して蛍光値を読み取った。
【0179】
ｄ）データ分析：Ｐｒｉｓｍ５．０を使用してデータを分析し、化合物のＩＣ５０値を計算した。
【0180】
実験結果は表２に示された通りである。
【0181】
【表2】
【0182】
結論：本発明の化合物は、ヒトＯｒｅｘｉｎ受容体に対して所定のアンタゴニスト活性を有し、ＯＸ２受容体に対してより高い活性を示した。
【0183】
実験例２：ＳＤラット血漿中の試験物質の薬物動態パラメータの測定
６～９週齢の健康なＳＤラット４匹を選択し、各群に２匹ずつ、無作為に２つの群に分けた。１つの群には静脈内注射により２ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与し、もう１つの群には胃内投与により１０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与した。静脈内投与群及び胃内投与群の動物はいずれも投与した後の０．０８３、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０、６．０、８．０及び２４時間目に、血漿試料を採取された。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用してすべての生物学的試料の定量分析を実行し、ＷｉｎＮｏｎｌｉ（商標） Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態ソフトウェアを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法を使用して、薬物動態パラメーターを計算した。ＡＵＣ０－ｌａｓｔは、０時点から最後の検出可能な濃度時点までの血漿濃度－時間曲線下面積を表し；ｐ．ｏ．は経口投与を表し；ｉ．ｖ．は静脈注射を表し、Ｔ１／２は半減期を表し、ＣＬはクリアランスを表し、Ｖｄは見かけの分布容積を表し、Ｃｍａｘはピーク濃度を表し、Ｔｍａｘはピーク時間を表し、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティを表す。実験結果は表３に示された通りである。
６～９週齢の健康なＳＤラット４匹を選択し、各群に２匹ずつ、無作為に２つの群に分けた。１つの群には静脈内注射により２ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与し、もう１つの群には胃内投与により１０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与した。静脈内投与群及び胃内投与群の動物はいずれも投与した後の０．０８３、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０、６．０、８．０及び２４時間目に、血漿試料を採取された。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用してすべての生物学的試料の定量分析を実行し、ＷｉｎＮｏｎｌｉ（商標） Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態ソフトウェアを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法を使用して、薬物動態パラメーターを計算した。ＡＵＣ０－ｌａｓｔは、０時点から最後の検出可能な濃度時点までの血漿濃度－時間曲線下面積を表し；ｐ．ｏ．は経口投与を表し；ｉ．ｖ．は静脈注射を表し、Ｔ１／２は半減期を表し、ＣＬはクリアランスを表し、Ｖｄは見かけの分布容積を表し、Ｃｍａｘはピーク濃度を表し、Ｔｍａｘはピーク時間を表し、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティを表す。実験結果は表３に示された通りである。
【0184】
【表3】
【0185】
結論：本発明の化合物はＳＤラットの体内において、良好な薬物動態特性を示した。
【0186】
実験例３：ＳＤラットの脳組織における試験物質の薬物濃度の測定
６～９週齢の健康なオスＳＤラット４匹を選択し、試験化合物を胃内投与した。投与後の０．５時間、２時間でそれぞれ２匹の動物を無作為に選択して安楽死させ、血漿及び脳組織試料を収集し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用して、すべての生体試料を定量分析した。実験結果は表４に示された通りである。
６～９週齢の健康なオスＳＤラット４匹を選択し、試験化合物を胃内投与した。投与後の０．５時間、２時間でそれぞれ２匹の動物を無作為に選択して安楽死させ、血漿及び脳組織試料を収集し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用して、すべての生体試料を定量分析した。実験結果は表４に示された通りである。
【0187】
【表4】
【0188】
結論：本発明の化合物は、ラットの体内で血液脳関門を透過して脳組織に浸透することができることを示した。
【0189】
実験例４：ＳＤラットの脳組織における試験物質の遊離薬物比率の測定
ＳＤラットの脳組織ホモジネート（即ち、マトリックス、ＢｉｏＩＶＴから購入した）を採取し、試験化合物のＤＭＳＯ作業溶液又は対照群（プロプラノロール）のＤＭＳＯ作業溶液を加え、血漿試料中の試験化合物及びプロプラノロールの最終濃度がいずれも２μＭになり、試料を完全に混合した。ＤＭＳＯの最終濃度を０．５％に制御し、５０μＬを試料受容プレートにピペッティングし、各試料ウェルの最終体積が１００μＬであり、マトリックス：透析緩衝液の体積比が１：１になるように直ちに対応するブランクマトリックス／緩衝液を対応する体積で加えた後、これらの試料に停止溶液を加え、この試料はＴ０試料として回収率及び安定性測定に使用された。試験化合物及びプロプラノロール試料を各透析ウェルの投与末端に加え、透析ウェルの対応する受容端にブランク透析緩衝液を加えた。次に、加湿した５％ＣＯ２インキュベーターに入れ、３７℃、１００ｒｐｍで４時間振とうしながら培養した。透析完了後、５０μＬの透析緩衝液試料及び透析後の脳組織ホモジネート試料を新しい試料受容プレートにピペッティングした。各試料ウェルの最終体積が１００μＬであり、血漿：透析緩衝液の体積比が１：１になるように試料に対応するブランクマトリックス／緩衝液を対応する体積で加えた。全ての試料は、タンパク質を沈殿させた後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析し、下記の式により化合物の遊離率（％Ｕｎｂｏｕｎｄ）、結合率（％Ｂｏｕｎｄ）及び回収率（％Ｒｅｃｏｖｅｒｙ）を計算した。
ＳＤラットの脳組織ホモジネート（即ち、マトリックス、ＢｉｏＩＶＴから購入した）を採取し、試験化合物のＤＭＳＯ作業溶液又は対照群（プロプラノロール）のＤＭＳＯ作業溶液を加え、血漿試料中の試験化合物及びプロプラノロールの最終濃度がいずれも２μＭになり、試料を完全に混合した。ＤＭＳＯの最終濃度を０．５％に制御し、５０μＬを試料受容プレートにピペッティングし、各試料ウェルの最終体積が１００μＬであり、マトリックス：透析緩衝液の体積比が１：１になるように直ちに対応するブランクマトリックス／緩衝液を対応する体積で加えた後、これらの試料に停止溶液を加え、この試料はＴ０試料として回収率及び安定性測定に使用された。試験化合物及びプロプラノロール試料を各透析ウェルの投与末端に加え、透析ウェルの対応する受容端にブランク透析緩衝液を加えた。次に、加湿した５％ＣＯ２インキュベーターに入れ、３７℃、１００ｒｐｍで４時間振とうしながら培養した。透析完了後、５０μＬの透析緩衝液試料及び透析後の脳組織ホモジネート試料を新しい試料受容プレートにピペッティングした。各試料ウェルの最終体積が１００μＬであり、血漿：透析緩衝液の体積比が１：１になるように試料に対応するブランクマトリックス／緩衝液を対応する体積で加えた。全ての試料は、タンパク質を沈殿させた後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析し、下記の式により化合物の遊離率（％Ｕｎｂｏｕｎｄ）、結合率（％Ｂｏｕｎｄ）及び回収率（％Ｒｅｃｏｖｅｒｙ）を計算した。
【0190】
％Ｕｎｂｏｕｎｄ＝１００＊ＦＣ／ＴＣ、
％Ｂｏｕｎｄ＝１００－％Ｕｎｂｏｕｎｄ、
％Ｒｅｃｏｖｅｒｙ＝１００＊（ＦＣ＋ＴＣ）／Ｔ０。
％Ｂｏｕｎｄ＝１００－％Ｕｎｂｏｕｎｄ、
％Ｒｅｃｏｖｅｒｙ＝１００＊（ＦＣ＋ＴＣ）／Ｔ０。
【0191】
ここで、ＦＣは、透析プレートの緩衝液末端における化合物の濃度を表し、ＴＣは、透析プレートのマトリックス末端における化合物の濃度を表し、Ｔ０は、ゼロ時点での血漿試料における化合物の濃度を表す。実験結果は表５に示された通りである。
【0192】
【表5】
【0193】
結論：本発明の化合物は、ＳＤラットの脳組織における非結合状態の薬物比率が比較的高いことを示した。
【0194】
実験例５：ビーグル血漿中の試験物質の薬物動態パラメータの測定
健康なオスビーグル４匹を選択し、各群に２匹ずつ、無作為に２つの群に分けた。１つの群には静脈内注射により１ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与し、もう１つの群には胃内投与により５ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与した。静脈内投与群及び胃内投与群の動物はいずれも投与した後の０．０３３、０．０８３、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０、６．０、８．０及び２４時間目に、血漿試料を採取された。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用してすべての生体試料の定量分析を実行し、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標）Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態ソフトウェアを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法を使用して、薬物動態パラメーターを計算した。ＡＵＣ０－ｌａｓｔは、０時点から最後の検出可能な濃度時点までの血漿濃度－時間曲線下面積を表し；ｐ．ｏ．は経口投与を表し；ｉ．ｖ．は静脈注射を表し、Ｔ１／２は半減期を表し、ＣＬはクリアランスを表し、Ｖｄは見かけの分布容積を表し、Ｃｍａｘはピーク濃度を表し、Ｔｍａｘはピーク時間を表し、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティを表す。実験結果は表６に示された通りである。
健康なオスビーグル４匹を選択し、各群に２匹ずつ、無作為に２つの群に分けた。１つの群には静脈内注射により１ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与し、もう１つの群には胃内投与により５ｍｇ／ｋｇの試験化合物を投与した。静脈内投与群及び胃内投与群の動物はいずれも投与した後の０．０３３、０．０８３、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０、６．０、８．０及び２４時間目に、血漿試料を採取された。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用してすべての生体試料の定量分析を実行し、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標）Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態ソフトウェアを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法を使用して、薬物動態パラメーターを計算した。ＡＵＣ０－ｌａｓｔは、０時点から最後の検出可能な濃度時点までの血漿濃度－時間曲線下面積を表し；ｐ．ｏ．は経口投与を表し；ｉ．ｖ．は静脈注射を表し、Ｔ１／２は半減期を表し、ＣＬはクリアランスを表し、Ｖｄは見かけの分布容積を表し、Ｃｍａｘはピーク濃度を表し、Ｔｍａｘはピーク時間を表し、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティを表す。実験結果は表６に示された通りである。
【0195】
【表6】
【0196】
結論：本発明の化合物はビーグルの体内において、良好な薬物動態特性を示した。
【0197】
実験例６：ビーグルの脳脊髄液における試験物質の薬物濃度の測定
健康なオスビーグル２匹を選択し、５ｍｇ／ｋｇの試験化合物を胃内投与した後、投与後それぞれ０．５時間目、２時間目及び６時間目に脳脊髄液試料を採取した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用してすべての生体試料の定量分析を実行し、ＷｉｎＮｏｎｌｉ（商標） Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態ソフトウェアを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法を使用し、薬物動態パラメーターを計算した。ＡＵＣ０－ｌａｓｔは、０時点から最後の検出可能な濃度時点までの血漿濃度－時間曲線下面積を表し；ｐ．ｏ．は経口投与を表し；ｉ．ｖ．は静脈注射を表し、Ｔ１／２は半減期を表し、ＣＬはクリアランスを表し、Ｖｄは見かけの分布容積を表し、Ｃｍａｘはピーク濃度を表し、Ｔｍａｘはピーク時間を表し、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティを表す。実験結果は表７に示された通りである。
健康なオスビーグル２匹を選択し、５ｍｇ／ｋｇの試験化合物を胃内投与した後、投与後それぞれ０．５時間目、２時間目及び６時間目に脳脊髄液試料を採取した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用してすべての生体試料の定量分析を実行し、ＷｉｎＮｏｎｌｉ（商標） Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態ソフトウェアを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法を使用し、薬物動態パラメーターを計算した。ＡＵＣ０－ｌａｓｔは、０時点から最後の検出可能な濃度時点までの血漿濃度－時間曲線下面積を表し；ｐ．ｏ．は経口投与を表し；ｉ．ｖ．は静脈注射を表し、Ｔ１／２は半減期を表し、ＣＬはクリアランスを表し、Ｖｄは見かけの分布容積を表し、Ｃｍａｘはピーク濃度を表し、Ｔｍａｘはピーク時間を表し、Ｆ％は経口バイオアベイラビリティを表す。実験結果は表７に示された通りである。
【0198】
【表7】
【0199】
結論：本発明の化合物はイヌのＣＳＦで検出することができ、これは化合物が血脳障壁を透過して脳に到達することができることを示した。
【0200】
実験例７：ＳＤラットの自発的活動に対する試験物質の影響
試験目的：一定期間のラットの自発的な活動距離を測定する方法で、ラットの活動性に対する試験化合物の影響を判断するためである。
試験目的：一定期間のラットの自発的な活動距離を測定する方法で、ラットの活動性に対する試験化合物の影響を判断するためである。
【0201】
試験スキーム：７週齢のオスＳＤラット１２匹を試験を開始する１日前に実験室で環境に適応させた。実験当日、体重に応じて群当たり６匹ずつ無作為に２つの群に分け、それぞれブランク溶媒及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物８を投与した。投与３０分後、動物を試験ボックスに入れ、Ａｎｙ－ｍａｚｅソフトウェアで５分間隔で動物の活動距離データを記録し、６０分間記録を続けた。記録時間内の動物の総移動距離を比較して、薬物が動物の自発的な活動に有意な影響を及ぼすか否かを判断した。実験データは平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で表され、統計的方法は一元分散分析とダネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ）の多重比較を用いて、ｐ＜０．０５に達すると＊で表し、ｐ＜０．０１に達すると＊＊で表し、ｐ＜０．００１に達すると＊＊＊で表した。実験結果は表８に示された通りである。
【0202】
【表8】
【0203】
結論：本発明の化合物は、ＳＤラットの自発的活動距離を有意に減少させることができることが示された。
【0204】
実験例８：脳波／筋電図テレメトリー技術によるＳＤラットの睡眠に対する試験物質の影響の評価
【0205】
試験目的：脳波／筋電図テレメトリー技術（ＥＥＧ）によりＳＤラットの睡眠に対する試験物質の影響を評価するためである。
【0206】
試験スキーム：５～６週齢のオスＳＤラット３６匹は施設に到着してから５～１５日間の適応期間が必要であり、この期間中に実験動物を１２時間の明暗交互環境（点灯：１９：００、消灯：０７：００）に配置してリズムタイムを調節し、動物の健康状態を毎日モニタリングした。その後の遠隔測定データの収集を実行するために、手術を通して動物に脳波電極及び筋電図電極を移植した。手術実験当日にゾレチル（Ｚｏｌｅｔｉｌ）（ｉ．ｐ．、２０ｍｇ／ｋｇ）をキシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｅ）（ｉ．ｐ．、８ｍｇ／ｋｇ）と併用して動物を麻酔し、麻酔後脳定位固定装置で固定し、頭部の毛を刈って消毒した後、頭の皮膚を切開し、頭蓋骨が完全に露出するように止血鉗子で四隅を固定し、骨膜を剥がし、表面が乾いてきれいになるまで乾いた脱脂綿で拭いた。インプラントモデルに従って穴を開け、電極を移植して硬膜と接触させ、歯科用セメントを使用して電極を頭蓋骨に固定し、同時に組織、皮膚に落ちるセメントをきれいに除去した。２つの筋電図電極をそれぞれ首の筋肉に平行に挿入し、両端が互いに接触しないように縫合糸で固定した。その後、インプラントを皮下に入れ、手術創傷を縫合して消毒した。手術後、ラットをきれいな回復ケージに慎重に入れ、気道がふさがらないように横にさせた。単一ケージで飼育し、遮蔽された回復室に配置し、自動的に１２時間明暗交代（点灯時間：１９：００、消灯時間：０７：００）し、温度は２０℃～２６℃で、相対湿度は４０％～７０％であった。手術後、動物を３日間看護し、手術切開部位に局所的にセプラジン粉末を投与して処理し、４～８ｍｇ／ｋｇのゲンタマイシンを皮下投与し、０．１ｍＬ／匹のメロキシカムを３日間連続的に皮下注射し、７～１０日間回復した後、実験を実行し、実験の１日前に動物を体重に応じて無作為に群を分けた。
【0207】
実験当日にまず基本的な脳波、筋電図を記録し、完了後に投与を開始し、投与期間及び投与後２４時間までに脳波及び筋電図を連続的に記録した。ローデータをＤＳＩシステムＰｏｎｅｍａｈソフトウェアで収集し、ＮｅｕｒｏＳｃｏｒｅソフトウェアで分析した。実験データは平均値±標準誤差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で表し、単一分散法を使用して統計分析を実行し、ブランク溶媒群と比較して、Ｐ＜０．０５は有意な差があることを示し、＊で表し；Ｐ＜０．０１は非常に有意な差があることを示し、＊＊で表さし；Ｐ＜０．００１は非常に大きな有意差があることを示し、＊＊＊で表した。実験結果は表９に示された通りである。
【0208】
【表9】
【0209】
結論：１０ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物は、ＳＤラットの睡眠潜時を有意に短縮することができ、３０ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物は、投与後７時間以内に覚醒時間を有意に減少させ、睡眠時間を増やすことができることを示した。従って、本発明の化合物は優れた睡眠促進効果を有している。
【国際調査報告】