特表 2024-504926 がんの処置のためのデオキシリボヌクレアーゼ酵素と細胞療法の組み合わせ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-02

(54)【発明の名称】がんの処置のためのデオキシリボヌクレアーゼ酵素と細胞療法の組み合わせ

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/46 20060101AFI20240126BHJP

   C12N 9/16 20060101ALI20240126BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240126BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240126BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240126BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20240126BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240126BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20240126BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20240126BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240126BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240126BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240126BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240126BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20240126BHJP

   C12N 15/864 20060101ALN20240126BHJP

【ＦＩ】

A61K38/46

C12N9/16 Z ZNA

C12N5/10

C12N5/0783

A61P35/00

A61K35/12

A61K48/00

A61K35/76

A61P35/04

A61K35/17

A61P43/00 121

C12N15/12

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/864 100Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023541722

(86)(22)【出願日】2022-01-07

(85)【翻訳文提出日】2023-08-22

(86)【国際出願番号】 US2022011648

(87)【国際公開番号】W WO2022150609

(87)【国際公開日】2022-07-14

(31)【優先権主張番号】63/135,438

(32)【優先日】2021-01-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/148,304

(32)【優先日】2021-02-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．プルロニック

(71)【出願人】

【識別番号】523260495

【氏名又は名称】シーエルエス セラピューティクス リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ゲンキン，ディミトリー ドミートリエヴィチ

(72)【発明者】

【氏名】テッツ，ゲオルギー ヴィクトロヴィチ

(72)【発明者】

【氏名】テッツ，ヴィクトール ヴェニアミノヴィチ

(72)【発明者】

【氏名】ステパノヴ，アレクセイ ヴャシェスラヴォヴィッチ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084DC22

4C084MA55

4C084MA66

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB65

4C087CA12

4C087MA55

4C087MA66

4C087NA05

4C087ZB26

(57)【要約】

本発明は、デオキシリボヌクレアーゼ酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する細胞とを含む養子細胞免疫療法の組み合わせを利用するがんの処置方法に関する。特定の実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素は、非経口的に与えられるか、又はベクターによってコードされるか、又はＴＣＲ若しくはＣＡＲを含む細胞によって分泌され得る。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

それを必要とする対象のがんを処置する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞とを前記対象に投与することを含む方法。

【請求項2】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、腫瘍組織における免疫抑制タンパク質の発現を低減させ、及び／又は腫瘍組織内のＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の含有量を増加させるのに有効な量で使用される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

それを必要とする対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法の１以上の副作用を防止する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素を前記対象に投与することを含み、前記ＤＮａｓｅ酵素が、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と同時に又は連続して投与される方法。

【請求項4】

前記ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の副作用が、神経系の副作用、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、好中球減少症、貧血、発熱、発熱性好中球減少症、及び血小板減少症から選択される、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法による前記疾患の処置後の疾患の再発を防止する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素を前記対象に投与することを含み、前記ＤＮａｓｅ酵素が、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と同時に又は連続して投与される方法。

【請求項6】

ＣＡＲ－Ｔ細胞療法を受けている対象の血液中のＣＡＲ－Ｔ細胞の存続を増大させる方法であって、前記対象にデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素を投与することを含み、前記ＤＮａｓｅ酵素が、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と同時に又は連続して投与される方法。

【請求項7】

それを必要とする対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法の有効性を増大させる方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素を前記対象に投与することを含み、前記ＤＮａｓｅ酵素が、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と同時に又は連続して投与される方法。

【請求項8】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質として投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、ベクターによってコードされる、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記ベクターが、（ｉ）キャプシドタンパク質と、（ｉｉ）前記ＤＮａｓｅ酵素をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む核酸とを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）発現ベクターである、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記プロモーターが肝臓特異的プロモーターである、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記プロモーターが、腫瘍発生組織又は転移標的組織に特異的である、請求項１０に記載の方法。

【請求項13】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、ｍＲＮＡ分子によってコードされる、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、非経口的に又は腫瘍の部位に投与される、請求項８～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む細胞によって同時発現される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞が、非経口的に又は腫瘍の部位に投与される、請求項１、２及び８～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞が、単一の標的又は複数の標的である、請求項１、２及び８～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記ＣＡＲが、（ｉ）ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１９、ＣＤ２８、メソテリン、ＣＤ１２３、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＦＲ－１、ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦＲ／ＣＤ１３３、ＩＬ１３Ｒａ２、ＨＥＲ２、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６，Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸内カルボキシルエステラーゼ、及びｍｕｔ ｈｓｐ７０－２から選択される腫瘍抗原；（ｉｉ）固形腫瘍に関連する抗原;（ｉｉｉ）メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＣＬＤＮ６、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマイン、ＣＤ１７１、ＰＳＣＡ、ＴＡＲＰ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ルイスＹ、ＣＤ２４、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＥＲＢＢｓ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原、ＳＳＥＡ－４、好中球エラスターゼ、ＣＡIＸ、ＨＰＶ Ｅ６ Ｅ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＮＡ１７、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体ポリシアル酸（ｐｌｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ）、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、精子タンパク質１７、ＨＭＷＭＡＡ、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、及びｍｕｔ ｈｓｐ ７０－２から選択される固形腫瘍関連抗原；（ｉｖ）中皮腫、肺がん、膵臓がん、食道腺癌、卵巣がん、乳がん、結腸直腸がん、膀胱がん、又はそれらの任意の組み合わせの内部／上部に存在する固形腫瘍関連抗原；（ｖ）血液のがんに関連する腫瘍抗原；（ｖｉ）急性白血病及び慢性白血病から選択される疾患に存在する腫瘍抗原、並びに（ｖｉｉ）治療抵抗性がんに存在する腫瘍抗原から選択される１以上の抗原に特異的に結合することが可能な抗原結合ドメインを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、配列番号４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、配列番号５３と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与と同日又はその前日に１回静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後から開始して週に１回静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後から開始して月に１回静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の１週間前に静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の１ヶ月前に静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の２１日前から投与の１４日後に１回静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後少なくとも１４日間静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後少なくとも１６日間静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与前少なくとも３日間、それと一緒に又は投与後３日間静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後少なくとも７日間静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与前少なくとも７日間静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与前又は後に少なくとも３日間静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、少なくとも２５０μｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される、請求項８及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、少なくとも６００μｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、少なくとも９００μｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、少なくとも２.５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記ＤＮａｓｅ酵素タンパク質が、少なくとも７.５ｍｇ／ｋｇ／日で静脈内注射される、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞が、免疫チェックポイント阻害剤分子を発現するようにさらに改変される、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、低酸素環境におけるＣＡＲ発現細胞の有効性を増大させる量で使用される、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターが、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の少なくとも１４日前に、静脈内及び／又は腫瘍部位に注射される、請求項９～１２及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターが、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の少なくとも３日前に、静脈内及び／又は腫瘍部位に注射される、請求項９～１２及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターが、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与と同時に静脈内及び／又は腫瘍部位に注射される、請求項９～１２及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターが、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の３日後に静脈内及び／又は腫瘍部位に注射される、請求項９～１２及び１６～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記ＣＡＲ発現細胞がＣＡＲ Ｔ細胞である、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

（ｉ）デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素と、（ｉｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び／又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とを発現する細胞。

【請求項47】

さらに、免疫チェックポイント阻害剤分子を発現する、請求項４６に記載の細胞。

【請求項48】

前記ＣＡＲ又はＴＣＲが、単一の標的又は複数の標的である、請求項４６又は請求項４７に記載の細胞。

【請求項49】

前記ＣＡＲが、（ｉ）ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１９、ＣＤ２８、メソテリン、ＣＤ１２３、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＦＲ－１、ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦＲ／ＣＤ１３３、ＩＬ１３Ｒａ２、ＨＥＲ２、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６，Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸内カルボキシルエステラーゼ、及びｍｕｔ ｈｓｐ７０－２から選択される腫瘍抗原；（ｉｉ）固形腫瘍に関連する抗原;（ｉｉｉ）メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＣＬＤＮ６、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマイン、ＣＤ１７１、ＰＳＣＡ、ＴＡＲＰ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ルイスＹ、ＣＤ２４、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＥＲＢＢｓ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原、ＳＳＥＡ－４、好中球エラスターゼ、ＣＡIＸ、ＨＰＶ Ｅ６ Ｅ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＮＡ１７、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体ポリシアル酸（ｐｌｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ）、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、精子タンパク質１７、ＨＭＷＭＡＡ、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、及びｍｕｔ ｈｓｐ ７０－２から選択される固形腫瘍関連抗原；（ｉｖ）中皮腫、肺がん、膵臓がん、食道腺癌、卵巣がん、乳がん、結腸直腸がん、膀胱がん、又はそれらの任意の組み合わせの中／上に存在する固形腫瘍関連抗原；（ｖ）血液のがんに関連する腫瘍抗原；（ｖｉ）急性白血病及び慢性白血病から選択される疾患に存在する腫瘍抗原、並びに（ｖｉｉ）治療抵抗性がんに存在する腫瘍抗原から選択される１以上の抗原に特異的に結合することが可能な抗原結合ドメインを含む、請求項４６～４８のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項50】

前記ＤＮａｓｅ酵素が、配列番号４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４６～４９のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項51】

前記デオキシリボヌクレアーゼ酵素が、配列番号５３と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４６～４９のいずれか一項に記載の細胞。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、２０２１年１月８日に出願された米国仮特許出願第６３／１３５，４３８号、及び２０２１年２月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／１４８，３０４号に対する優先権を主張し、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、これにより、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２２年１月７日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、２５２７３２＿００００２３＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは１１７，７７６バイトである。

【0003】

発明の分野
本発明は、デオキシリボヌクレアーゼ酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する細胞を含む養子細胞免疫療法との組み合わせを利用するがんを処置する方法に関する。

【背景技術】

【0004】

【発明の概要】

【0005】

本発明は、がんの新規かつより有効な処置に関する当技術分野の高いニーズに取り組む。

【発明の効果】

【0006】

一態様において、本発明は、それを必要とする対象のがんを処置する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素とキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞とを対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記ＤＮａｓｅ酵素は、腫瘍組織における免疫抑制タンパク質の発現を低減、及び／又は腫瘍組織内のＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の含有量を増加させるのに有効な量で使用される。

【0007】

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法の１以上の副作用を防止する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素を対象に投与することを含み、前記ＤＮａｓｅ酵素が、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と同時に又は連続して投与される方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の副作用は、神経系の副作用、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、好中球減少症、貧血、発熱、発熱性好中球減少症、及び血小板減少症から選択される。

【0008】

さらなる態様において、本発明は、対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法による前記疾患の処置後の疾患の再発を防止する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素を対象に投与することを含み、前記ＤＮａｓｅ酵素が、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と同時に又は連続して投与される方法を提供する。

【0009】

さらに別の態様において、本発明は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法を受けている対象の血液中のＣＡＲ－Ｔ細胞の存続を増大させる方法であって、対象にデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素を投与することを含み、前記ＤＮａｓｅ酵素が、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と同時に又は連続して投与される方法を提供する。

【0010】

さらなる態様において、本発明は、それを必要とする対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法の有効性を増大させる方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素を対象に投与することを含み、前記ＤＮａｓｅ酵素が、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と同時に又は連続して投与される方法を提供する。

【0011】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質として投与される。

【0012】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ベクターによってコードされる。いくつかの実施形態において、ベクターは、遺伝子治療ベクターである。いくつかの実施形態において、ベクターは、（ｉ）キャプシドタンパク質と（ｉｉ）ＤＮａｓｅ酵素をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む核酸と、を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは肝臓特異的プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、腫瘍発生組織又は転移標的組織に特異的である。

【0013】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ｍＲＮＡ分子によってコードされる。

【0014】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、非経口的に又は腫瘍の部位に投与される。

【0015】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む細胞によって同時発現される。

【0016】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞は、非経口的に又は腫瘍の部位に投与される。上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞は、単一の標的又は複数の標的である。

【0017】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１９、ＣＤ２８、メソテリン、ＣＤ１２３、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＦＲ－１、ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦＲ／ＣＤ１３３、ＩＬ１３Ｒａ２、ＨＥＲ２、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６，Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸内カルボキシルエステラーゼ、及びｍｕｔ ｈｓｐ７０－２から選択される腫瘍抗原；（ｉｉ）固形腫瘍に関連する抗原;（ｉｉｉ）メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＣＬＤＮ６、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマイン（leguman）、ＣＤ１７１、ＰＳＣＡ、ＴＡＲＰ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ルイスＹ、ＣＤ２４、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＥＲＢＢｓ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原、ＳＳＥＡ－４、好中球エラスターゼ、ＣＡIＸ、ＨＰＶ Ｅ６ Ｅ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＮＡ１７、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体ポリシアル酸（ｐｌｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ）、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、精子タンパク質１７、ＨＭＷＭＡＡ、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、及びｍｕｔ ｈｓｐ ７０－２から選択される固形腫瘍関連抗原；（ｉｖ）中皮腫、肺がん、膵臓がん、食道腺癌、卵巣がん、乳がん、結腸直腸がん、膀胱がん、又はそれらの任意の組み合わせの内部／上部に存在する固形腫瘍関連抗原；（ｖ）血液のがんに関連する腫瘍抗原；（ｖｉ）急性白血病（限定されないが、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞性急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を含む）、及び慢性白血病（限定されないが、慢性骨髄性白血病（ＣＩＶＩＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含む）から選択される疾患に存在する腫瘍抗原、並びに（ｖｉｉ）ミエロペルオキシダーゼ及び好中球エラスターゼを含むがこれらに限定されない治療抵抗性がんに存在する腫瘍抗原から選択される１以上の抗原に特異的に結合することが可能な抗原結合ドメインを含み、これらには、細胞株、ハイブリドーマによる発現、細菌、酵母若しくは他の宿主細胞によるインビトロでの発現、又は任意の他の合成方法によって産生されるかどうかにかかわらず、ＳｃＦｖ、Ｆａｂ、ＣＤＲループ、ＣＤＲ移植片、ｄＡｂ及びナノボディ断片の非物質的バリアント、変異、断片又は誘導体である任意のタンパク質又はペプチドが含まれる。

【0018】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、配列番号４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0019】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、配列番号５３と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0020】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与と同日又はその前日に１回静脈内注射される。

【0021】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後から開始して週に１回静脈内注射される。

【0022】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後から開始して月に１回静脈内注射される。

【0023】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の１週間前に静脈内注射される。

【0024】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の１ヶ月前に静脈内注射される。

【0025】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の２１日前から投与の１４日後に１回静脈内注射される。

【0026】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後少なくとも１４日間静脈内注射される。

【0027】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後少なくとも１６日間静脈内注射される。

【0028】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与前、、投与時、又は投与後少なくとも３日間静脈内注射される。

【0029】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与後少なくとも７日間静脈内注射される。

【0030】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与前少なくとも７日間静脈内注射される。

【0031】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与前又は投与後少なくとも３日間静脈内注射される。

【0032】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、少なくとも２５０μｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される。

【0033】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、少なくとも６００μｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される。

【0034】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、少なくとも９００μｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される。

【0035】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、少なくとも２.５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される。

【0036】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内注射される。

【0037】

ＤＮａｓｅ酵素タンパク質を用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素タンパク質は、少なくとも７.５ｍｇ／ｋｇ／日で静脈内注射される。

【0038】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞は、免疫チェックポイント阻害剤分子を発現するようにさらに改変される。

【0039】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、低酸素環境におけるＣＡＲ発現細胞の有効性を増大させる量で使用される。

【0040】

ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターを用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターは、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の少なくとも１４日前に、静脈内及び／又は腫瘍部位に注射される。

【0041】

ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターを用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターは、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の少なくとも３日前に、静脈内及び／又は腫瘍部位に注射される。

【0042】

ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターを用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターは、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与と同時に静脈内及び／又は腫瘍部位に注射される。

【0043】

ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターを用いる上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素をコードするベクターは、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の投与の３日後に静脈内及び／又は腫瘍部位に注射される。

【0044】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞である。

【0045】

別々の態様において、本発明は、（ｉ）デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素と、（ｉｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び／又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とを発現する細胞を提供する。いくつかの実施形態において、細胞はさらに、免疫チェックポイント阻害剤分子を発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ又はＴＣＲは、単一の標的又は複数の標的である。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１９、ＣＤ２８、メソテリン、ＣＤ１２３、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＦＲ－１、ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦＲ／ＣＤ１３３、ＩＬ１３Ｒａ２、ＨＥＲ２、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６，Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸内カルボキシルエステラーゼ、及びｍｕｔ ｈｓｐ７０－２から選択される腫瘍抗原；（ｉｉ）固形腫瘍に関連する抗原;（ｉｉｉ）メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＣＬＤＮ６、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマイン、ＣＤ１７１、ＰＳＣＡ、ＴＡＲＰ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ルイスＹ、ＣＤ２４、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＥＲＢＢｓ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原、ＳＳＥＡ－４、好中球エラスターゼ、ＣＡIＸ、ＨＰＶ Ｅ６ Ｅ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＮＡ１７、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体ポリシアル酸（ｐｌｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ）、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、精子タンパク質１７、ＨＭＷＭＡＡ、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、及びｍｕｔ ｈｓｐ ７０－２から選択される固形腫瘍関連抗原；（ｉｖ）中皮腫、肺がん、膵臓がん、食道腺癌、卵巣がん、乳がん、結腸直腸がん、膀胱がん、又はそれらの任意の組み合わせの内部／上部に存在する固形腫瘍関連抗原；（ｖ）血液のがんに関連する腫瘍抗原；（ｖｉ）急性白血病（限定されないが、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞性急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を含む）、及び慢性白血病（限定されないが、慢性骨髄性白血病（ＣＩＶＩＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含む）から選択される疾患に存在する腫瘍抗原、並びに（ｖｉｉ）ミエロペルオキシダーゼ及び好中球エラスターゼを含むがこれらに限定されない治療抵抗性がんに存在する腫瘍抗原から選択される１以上の抗原に特異的に結合することが可能な抗原結合ドメインを含み、これらには、細胞株、ハイブリドーマによる発現、細菌、酵母若しくは他の宿主細胞によるインビトロでの発現、又は任意の他の合成方法によって産生されるかどうかにかかわらず、ＳｃＦｖ、Ｆａｂ、ＣＤＲループ、ＣＤＲ移植片、ｄＡｂ及びナノボディ断片の非物質的バリアント、変異、断片又は誘導体である任意のタンパク質又はペプチドが含まれる。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、配列番号４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素は、配列番号５３と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0046】

本発明のこれら及び他の態様は、以下の説明、特許請求の範囲及び図面において当業者に明らかであろう。

【図面の簡単な説明】

【0047】

【図1】図１は、対照、ＣＡＲ１９とＤＮａｓｅ Ｉ、ＣＡＲ１９、及びＤＮａｓｅ Ｉの実験グループについてノギスで測定し、楕円体の式を使用して推定した腫瘍体積（ｍｍ^２）を示す。ヒト組換えＤＮａｓｅ Ｉ酵素の静脈内（ＩＶ）注射は、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞に実質的な有効性の強化を提供した。

【図2】図２は、対照、ＣＡＲ１９とＤＮａｓｅ Ｉ、ＣＡＲ１９、及びＤＮａｓｅ Ｉの実験グループの生存グラフを示し、ＣＡＲ Ｔ細胞とＡＡＶ ＤＮａｓｅ Ｉ遺伝子導入の組み合わせによる生存利益を実証する。

【図3A-C】図３Ａ～３Ｃは、ＰＤ－Ｌ１を発現する転移性ＭＣ３２ａ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリー分析を示す。対照（図３）と比較して、ＰＤ－Ｌ１発現は、ＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉ遺伝子導入（図３Ｂ）、及びＣＡＲ Ｔ細胞との組み合わせ（図３Ｃ）で処置したマウスの転移性病変からの転移性ＭＣ３２ａ細胞において抑制された。

【図4】図４は、ＭＣ３２ａ転移性病変の実質におけるがん胎児性抗原（ＣＥＡ）標的化ＣＡＲ Ｔ細胞のパーセンテージのグラフを示す。データは、ＣＡＲ Ｔ細胞とＡＡＶ ＤＮａｓｅ Ｉ遺伝子導入の組み合わせで処置したマウスからの転移性病変におけるＣＡＲ Ｔ細胞のパーセンテージの増加を示している。

【図5】図５Ａ～５Ｂは、例示的なウイルスベクターの構築の概略図を示す。図５Ａは、ＥＦ－１αプロモーター及びＣＤ３ζドメインを含むｍＤＮａｓｅＩ ｍｕｔ Ｐ２Ａ ４Ｄ５ ＩｇＧ４ ＣＡＲ（４，２３７ｂｐ）のダイアグラムを示す。図５Ｂは、ｍＤＮａｓｅ Ｉ Ｐ２Ａ ＩｇＧ４ ＣＡＲ（１２，１４６ｂｐ）を含むウイルスベクターの完全な配列マップを示す。

【図6】図６は、ＤＮａｓｅ Ｉ ＦＬ１－ＣＡＲ－Ｔ、ＦＬ１－ＣＡＲ－Ｔ、及び非形質導入対照Ｔ細胞の培地中の、蛍光プローブを用いて分析したＤＮａｓｅ活性のグラフを示す。活性をｐＭ／ｓ（ピコメートル／秒）として測定した。データは、ＤＮａｓｅ Ｉ ＦＬ１－ＣＡＲ－Ｔの培養培地におけるデオキシリボヌクレアーゼ活性の漸増を示している。

【図7】図７は、Ｒａｊｉ－ＦＬ１細胞と同時インキュベートしたＦＬ１－ＣＡＲ Ｔ、ＤＮａｓｅ Ｉ ＦＬ１－ＣＡＲ－Ｔ及び非形質導入（モック）対照Ｔ細胞についての乳酸（lactase）デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）放出アッセイによる細胞毒性の評価を示す。ＣＡＲとＤＮａｓｅ Ｉ酵素を同時に発現するようにＴ細胞をリプログラミングすると、標的リンパ腫細胞に対して優れた細胞毒性をもたらした。Ｅ：Ｔ比、エフェクター対標的細胞の比。

【図8】図８は、プラセボ対照（グループ１）、ＦＬ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（グループ２）及び高活性アクチン耐性変異体ＤＮａｓｅ Ｉ（配列番号５）を発現するＦＬ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（グループ３）の実験グループについてノギスで測定し、楕円体の式を使用して推定した腫瘍体積（ｍｍ^２）を示す。ＣＡＲとデオキシリボヌクレアーゼ酵素を同時に発現するようにＴ細胞をリプログラミングすると、そのような二重リプログラムＴ細胞に関して優れた有効性を提供した。

【図9】図９は、末梢血中のＣＡＲ－Ｔ細胞の数を示す（ビオチン化プロテインＬ及びＦＩＴＣとコンジュゲートしたストレプトアビジンを用いたフローサイトメトリー検出により決定した）。データは、ＤＮａｓｅとＣＡＲ－Ｔ細胞療法の組み合わせが血液中のＣＡＲ－Ｔ細胞の存続を有意に（全てについてｐ＜０.０５）増加させることを示している。

【図10】図１０は、ＤＮａｓｅとＣＡＲ－Ｔ細胞療法の組み合わせが動物の生存を高めることを実証する。

【図11】図１１は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を有する動物のパーセンテージを示し、ＤＮａｓｅの使用がＣＡＲ－Ｔ療法の安全性を高め、ＣＡＲ－Ｔ関連副作用から保護することを実証する。

【発明を実施するための形態】

【0048】

発明の詳細な説明
本発明は、デオキシリボヌクレアーゼ酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する細胞を含む養子細胞免疫療法との組み合わせを利用するがんの処置方法に関する。特定の実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素は、非経口的に与えられるか又はベクターによってコードされるか又はＴＣＲ若しくはＣＡＲを含む細胞によって分泌され得る。

【0049】

定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。

【0050】

単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、及び「その」は、文脈が特に明確に指示しない限り、複数形の言及を含む。そのため、例えば、「方法」という言及は、本明細書に記載の、及び／又は本開示を読んだ上で当業者に明らかになるであろうタイプの１以上の方法、及び／又は工程を含む。

【0051】

「約」又は「およそ」という用語は、値の統計的に意味のある範囲内にあることを含む。そのような範囲は、一桁以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、さらにより好ましくは１０％以内、さらにより好ましくは所与の値又は範囲内の５％以内であり得る。「約」又は「およそ」という用語に包含される、許容される変形形態は、研究中の特定のシステムに依存し、当業者なら容易に理解することができる。

【0052】

ＤＮａｓｅ酵素
ある態様において、本発明は、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞とを対象に投与することを含む方法を提供する。関連する態様において、本発明は、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、対象にＤＮａｓｅ酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞とを投与することを含み、前記ＤＮａｓｅ酵素が、腫瘍組織において免疫抑制タンパク質の発現を低減させるため、及び／又は腫瘍組織内のキメラ抗原受容体又はＴ細胞受容体を含む細胞の含量を増加させるために有効である方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質として非経口投与される。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ベクターによってコードされる。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む細胞によって同時発現される。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、低酸素環境におけるＣＡＲ発現細胞の有効性を増大させるために使用される。

【0053】

本発明のいずれかの方法において有用であり得るＤＮａｓｅ酵素の非限定的な例としては、例えば、ＤＮａｓｅ Ｉ、ＤＮａｓｅ Ｘ、ＤＮａｓｅ γ、ＤＮａｓｅ１Ｌ１、ＤＮａｓｅ１Ｌ２、ＤＮａｓｅ１Ｌ３、ＤＮａｓｅ ＩＩ、ＤＮａｓｅ ＩＩα、ＤＮａｓｅ ＩＩβ、カスパーゼ活性化ＤＮａｓｅ（ＣＡＤ）、エンドヌクレアーゼＧ（ＥＮＤＯＧ）、グランザイムＢ（ＧＺＭＢ）、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリン、アセチルコリンエステラーゼ、及びそれらの変異体又は誘導体、バリアント又は類似体が挙げられる。

【0054】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅは、ＤＮａｓｅ Ｉ又はその変異体若しくは誘導体であり得る。

【0055】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉは、ヒトＤＮａｓｅ Ｉ又はその変異体若しくは誘導体であり得る。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉは、非ヒトＤＮａｓｅ Ｉ又はその変異体若しくは誘導体、例えば、限定するものではないが、げっ歯類（例えば、マウス）ＤＮａｓｅ Ｉ又はその変異体若しくは誘導体であり得る。

【0056】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ヒトＤＮａｓｅ １酵素と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ヒトＤＮａｓｅ Ｉ酵素と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0057】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ１様３（Ｄ１Ｌ３）酵素（配列番号５１）のアミノ酸２１～３０５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ１様３（Ｄ１Ｌ３）酵素（配列番号５１）のアミノ酸２１～３０５と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0058】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉは、配列番号１の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉアミノ酸配列は、配列番号２２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉは、配列番号２２のヌクレオチド配列によってコードされる配列番号１のアミノ酸配列を含む。

【0059】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉは、配列番号４の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉアミノ酸配列は、配列番号２３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉは、配列番号２３のヌクレオチド配列によってコードされる配列番号４のアミノ酸配列を含む。

【0060】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、アクチン結合部位において１以上の変異を含み得る。いくつかの実施形態において、アクチン結合部位における１以上の変異は、Ｇｌｎ－９、Ｇｌｕ－１３、Ｔｈｒ－１４、Ｈｉｓ－４４、Ａｓｐ－５３、Ｔｙｒ－６５、Ｖａｌ－６６、Ｖａｌ－６７、Ｇｌｕ－６９、Ａｓｎ－７４、Ａｌａ－１１４における変異、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、アクチン結合部位における変異の１つは、Ａｌａ－１１４における変異である。

【0061】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、ＤＮａｓｅ活性を増加させる１以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ活性を増加させる１以上の変異は、Ｑ９Ｒ、Ｅ１３Ｒ、Ｅ１３Ｋ、Ｔ１４Ｒ、Ｔ１４Ｋ、Ｈ４４Ｒ、Ｈ４４Ｋ、Ｎ７４Ｋ、Ａ１１４Ｆ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ活性を増加させる１以上の変異は、Ｑ９Ｒ、Ｅ１３Ｒ、Ｎ７４Ｋ、及びＡ１１４Ｆからなる群から選択される。

【0062】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、Ｈ４４Ｃ、Ｈ４４Ｎ、Ｌ４５Ｃ、Ｖ４８Ｃ、Ｇ４９Ｃ、Ｌ５２Ｃ、Ｄ５３Ｃ、Ｄ５３Ｒ、Ｄ５３Ｋ、Ｄ５３Ｙ、Ｄ５３Ａ、Ｎ５６Ｃ、Ｄ５８Ｓ、Ｄ５８Ｔ、Ｙ６５Ａ、Ｙ６５Ｅ、Ｙ６５Ｒ、Ｙ６５Ｃ、Ｖ６６Ｎ、Ｖ６７Ｅ、Ｖ６７Ｋ、Ｖ６７Ｃ、Ｅ６９Ｒ、Ｅ６９Ｃ、Ａ１１４Ｃ、Ａ１１４Ｒ、Ｈ４４Ｎ：Ｔ４６Ｓ、Ｄ５３Ｒ：Ｙ６５Ａ、Ｄ５３Ｒ：Ｅ６９Ｒ、Ｈ４４Ａ：Ｄ５３Ｒ：Ｙ６５Ａ、Ｈ４４Ａ：Ｙ６５Ａ：Ｅ６９Ｒ、Ｈ６４Ｎ：Ｖ６６Ｓ、Ｈ６４Ｎ：Ｖ６６Ｔ、Ｙ６５Ｎ：Ｖ６７Ｓ、Ｙ６５Ｎ：Ｖ６７Ｔ、Ｖ６６Ｎ：Ｓ６８Ｔ、Ｖ６７Ｎ：Ｅ６９Ｓ、Ｖ６７Ｎ：Ｅ６９Ｔ、Ｓ６８Ｎ：Ｐ７０Ｓ、Ｓ６８Ｎ：Ｐ７０Ｔ、Ｓ９４Ｎ：Ｙ９６Ｓ、Ｓ９４Ｎ：Ｙ９６Ｔ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、ＤＮａｓｅの長時間作用型である。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、ＤＮａｓｅの高活性バリアント型である。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。

【0063】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号５の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体アミノ酸配列は、配列番号２１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、変異Ｑ９Ｒ、Ｅ１３Ｒ、Ｎ７４Ｋ及びＡ１１４Ｆを含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号５の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号２１のヌクレオチド配列によってコードされる配列番号５のアミノ酸配列を含む。

【0064】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号２の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体アミノ酸配列は、配列番号１９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、変異Ｑ９Ｒ、Ｅ１３Ｒ、Ｎ７４Ｋ及びＡ１１４Ｆを含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号２の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号１９のヌクレオチド配列によってコードされる配列番号２のアミノ酸配列を含む。

【0065】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号２又は配列番号５の配列からなる。

【0066】

本発明のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅをコードする配列は、分泌シグナル配列を含み、前記分泌シグナル配列は、対象へのベクターの投与時に、肝門脈類洞循環（ｈｅｐａｔｉｃ ｐｏｒｔｏ－ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）への酵素の有効な分泌を媒介する。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、ＤＮａｓｅ Ｉ分泌シグナル配列、ＩＬ２分泌シグナル配列、アルブミン分泌シグナル配列、β－グルクロニダーゼ分泌シグナル配列、アルカリプロテアーゼ分泌シグナル配列、及びフィブロネクチン分泌シグナル配列からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＲＧＭＫＬＬＧＡＬＬＡＬＡＡＬＬＱＧＡＶＳ（配列番号６）と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＲＧＭＫＬＬＧＡＬＬＡＬＡＡＬＬＱＧＡＶＳ（配列番号６）を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＲＧＭＫＬＬＧＡＬＬＡＬＡＡＬＬＱＧＡＶＳ（配列番号６）からなる。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号７）と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号７）を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号７）からなる。

【0067】

いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ Ｉ、ＤＮａｓｅ Ｘ、ＤＮａｓｅ γ、ＤＮａｓｅ１Ｌ１、ＤＮａｓｅ１Ｌ２、ＤＮａｓｅ１Ｌ３、ＤＮａｓｅ ＩＩ、ＤＮａｓｅ ＩＩα、ＤＮａｓｅ ＩＩβ、カスパーゼ活性化ＤＮａｓｅ（ＣＡＤ）、エンドヌクレアーゼＧ（ＥＮＤＯＧ）、グランザイムＢ（ＧＺＭＢ）、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリン、アセチルコリンエステラーゼ、及びそれらの変異体又は誘導体、バリアント又は類似体からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ Ｉ又はその変異体若しくは誘導体である。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉは、ヒトＤＮａｓｅ Ｉ又はその変異体若しくは誘導体である。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、アクチン結合部位において１以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、アクチン結合部位における１以上の変異は、Ｇｌｎ－９、Ｇｌｕ－１３、Ｔｈｒ－１４、Ｈｉｓ－４４、Ａｓｐ－５３、Ｔｙｒ－６５、Ｖａｌ－６６、Ｖａｌ－６７、Ｇｌｕ－６９、Ａｓｎ－７４、Ａｌａ－１１４における変異、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、アクチン結合部位における変異の１つは、Ａｌａ－１１４における変異である。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、ＤＮａｓｅ活性を増加させる１以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ活性を増加させる１以上の変異は、Ｑ９Ｒ、Ｅ１３Ｒ、Ｅ１３Ｋ、Ｔ１４Ｒ、Ｔ１４Ｋ、Ｈ４４Ｒ、Ｈ４４Ｋ、Ｎ７４Ｋ、Ａ１１４Ｆ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ活性を増加させる１以上の変異は、Ｑ９Ｒ、Ｅ１３Ｒ、Ｎ７４Ｋ、及びＡ１１４Ｆ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号５の配列と少なくとも８０％又は少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、変異Ｑ９Ｒ、Ｅ１３Ｒ、Ｎ７４Ｋ、及びＡ１１４Ｆを含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号５の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号５の配列からなる。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号２の配列と少なくとも８０％又は少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、変異Ｑ９Ｒ、Ｅ１３Ｒ、Ｎ７４Ｋ、及びＡ１１４Ｆを含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号２の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、配列番号２の配列からなる。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ Ｉ変異体は、Ｈ４４Ｃ、Ｈ４４Ｎ、Ｌ４５Ｃ、Ｖ４８Ｃ、Ｇ４９Ｃ、Ｌ５２Ｃ、Ｄ５３Ｃ、Ｄ５３Ｒ、Ｄ５３Ｋ、Ｄ５３Ｙ、Ｄ５３Ａ、Ｎ５６Ｃ、Ｄ５８Ｓ、Ｄ５８Ｔ、Ｙ６５Ａ、Ｙ６５Ｅ、Ｙ６５Ｒ、Ｙ６５Ｃ、Ｖ６６Ｎ、Ｖ６７Ｅ、Ｖ６７Ｋ、Ｖ６７Ｃ、Ｅ６９Ｒ、Ｅ６９Ｃ、Ａ１１４Ｃ、Ａ１１４Ｒ、Ｈ４４Ｎ：Ｔ４６Ｓ、Ｄ５３Ｒ：Ｙ６５Ａ、Ｄ５３Ｒ：Ｅ６９Ｒ、Ｈ４４Ａ：Ｄ５３Ｒ：Ｙ６５Ａ、Ｈ４４Ａ：Ｙ６５Ａ：Ｅ６９Ｒ、Ｈ６４Ｎ：Ｖ６６Ｓ、Ｈ６４Ｎ：Ｖ６６Ｔ、Ｙ６５Ｎ：Ｖ６７Ｓ、Ｙ６５Ｎ：Ｖ６７Ｔ、Ｖ６６Ｎ：Ｓ６８Ｔ、Ｖ６７Ｎ：Ｅ６９Ｓ、Ｖ６７Ｎ：Ｅ６９Ｔ、Ｓ６８Ｎ：Ｐ７０Ｓ、Ｓ６８Ｎ：Ｐ７０Ｔ、Ｓ９４Ｎ：Ｙ９６Ｓ、Ｓ９４Ｎ：Ｙ９６Ｔ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号４の配列を含むＤＮａｓｅ Ｉをコードする。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２３と少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号１の配列を含むＤＮａｓｅ Ｉをコードする。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２２と少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号３２と少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号３２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２４の配列を含むＤＮａｓｅ Ｉをコードする。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２９と少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２９のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２６の配列を含むＤＮａｓｅ Ｉをコードする。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２８と少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２８のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号５の配列を含むＤＮａｓｅ Ｉ変異体をコードする。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２１と少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２１のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号２の配列を含むＤＮａｓｅ Ｉ変異体をコードする。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号１９と少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号１９のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、（ｉｉ）アルブミン又はＦｃ又はその断片に連結された（ｉ）ＤＮａｓｅ酵素又はその断片を含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素をコードする配列は、分泌シグナル配列をコードする配列を含み、前記分泌シグナル配列は、酵素の効果的な分泌を媒介する。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、ＤＮａｓｅ Ｉ分泌シグナル配列、ＩＬ２分泌シグナル配列、アルブミン分泌シグナル配列、β－グルクロニダーゼ分泌シグナル配列、アルカリプロテアーゼ分泌シグナル配列、及びフィブロネクチン分泌シグナル配列からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＲＧＭＫＬＬＧＡＬＬＡＬＡＡＬＬＱＧＡＶＳ（配列番号６）又はＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号７）を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＲＧＭＫＬＬＧＡＬＬＡＬＡＡＬＬＱＧＡＶＳ（配列番号６）又はＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号７）からなる。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＲＧＭＫＬＬＧＡＬＬＡＬＡＡＬＬＱＧＡＶＳ（配列番号６）と少なくとも８０％又は少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列又はＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号７）と少なくとも８０％又は少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列をコードする配列は、配列番号２０と少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列をコードする配列は、配列番号２０のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＲＹＴＧＬＭＧＴＬＬＴＬＶＮＬＬＱＬＡＧＴ（配列番号２５）を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、配列ＭＲＹＴＧＬＭＧＴＬＬＴＬＶＮＬＬＱＬＡＧＴ（配列番号２５）からなる。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、ＭＲＹＴＧＬＭＧＴＬＬＴＬＶＮＬＬＱＬＡＧＴ（配列番号２５）の配列と少なくとも８０％又は少なくとも８５％若しくは少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列をコードする配列は、配列番号２７のヌクレオチド配列を含む。別の実施形態において、本発明の核酸は、配列番号３０又は配列番号３１の配列を含む。

【0068】

ＡＡＶベクター
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＤＮａｓｅ酵素は、ベクター（例えば、遺伝子治療ベクター）によってコードされ得る。いくつかの実施形態において、ベクターは、（ｉ）キャプシドタンパク質と、（ｉｉ）デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む核酸とを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）発現ベクターである。

【0069】

いくつかの実施形態において、ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクターの非限定的な例としては、例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）、及び肝指向性ウイルスベクター（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ベクター）が挙げられる。

【0070】

ある実施形態において、本発明のベクターは、パルボウイルスベクター、例えばアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。本明細書において使用される「パルボウイルス」という用語は、自己複製するパルボウイルス及びディペンドウイルスを含むパルボウイルス科を包含する。自律性パルボウイルスには、パルボウイルス属、エリスロウイルス属、デンソウイルス属、イテラウイルス属、及びコントラウイルス属のメンバーが含まれる。自律性パルボウイルスには、限定するものではないが、マウス微小ウイルス、ウシパルボウイルス、イヌパルボウイルス、ニワトリパルボウイルス、ネコ汎血球減少症ウイルス、ネコパルボウイルス、ガチョウパルボウイルス、Ｈ１パルボウイルス、バリケンパルボウイルス、Ｂ１９ウイルス、及び現在公知の又は後に発見された任意の他の自律性パルボウイルスが含まれる。他の自律性パルボウイルスは当業者に公知である。例えば、Ｂｅｒｎａｒｄ Ｎ． Ｆｉｅｌｄｓら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２巻、６９章（第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）を参照されたい。

【0071】

いくつかの実施形態において、パルボウイルスベクターは、ＡＡＶベクターなどの一本鎖パルボウイルスベクターである。ＡＡＶ（ディペンドウイルス属）は、通常、ヒト（例えば、血清型１、２、３Ａ、３Ｂ、４、５、及び６）又は霊長類（例えば、血清型１及び４）、又は他の温血動物（例えば、ウシ、イヌ、ウマ、及びヒツジのＡＡＶ）に感染する。パルボウイルス及びパルボウイルス科の他のメンバーに関するさらなる情報は、例えば、Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｉ．Ｂｅｒｎｓ、「パルボウイルス科:ウイルスとその複製（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ:Ｔｈｅ Ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）」、６９章、Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（第３版、１９９６）に提供されている。

【0072】

本明細書に開示されるＡＡＶベクターは、血清型（例えば、「偽型」ＡＡＶ）の組み合わせを含む任意のＡＡＶ血清型又は様々なゲノム（例えば、一本鎖又は自己相補的）から誘導され得る。「血清型」は伝統的に、あるウイルスに対する抗体と別のウイルスに対する抗体との間の交差反応性の欠如に基づいて定義される。そのような交差反応性の違いは、通常、キャプシドタンパク質配列／抗原決定基の違いによるものである（例えば、ＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３の配列の違いによる）。本発明のＡＡＶ発現ベクターを開発するために使用することができるＡＡＶ血清型の非限定的な例としては、例えば、ＡＡＶ血清型１（ＡＡＶ１）、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（３Ａ型及び３Ｂ型を含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶｒｈ１０（例えば、米国特許第９,７９０,４７２号、国際特許出願公開ＷＯ２０１７１８０８５７号及びＷＯ２０１７／１８０８６１に開示されているような）、ＡＡＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ－ＬＫ０６、ＡＡＶ－ＬＫ１２（例えば、Ｗａｎｇら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．,２０１５、２３（１２）:１８７７－１８８７に開示されているような）、ＡＡＶ－ＫＰ１（例えば、国際特許出願公開ＷＯ２０１９１９１７０１Ａ１号に開示されているような）、ＡＡＶｈｕ３７（例えば、国際特許出願公開ＷＯ２０１７１８０８５７に開示されているような）、ＡＡＶｒｈ６４Ｒ１（例えば、国際特許出願公開ＷＯ２０１７１８０８５７に開示されているような）、Ａｎｃ８０（血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９の予測される祖先に基づく;Ｚｉｎｎら、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．、２０１５、１２（６７）:１０５６－１０６８を参照されたい）、鳥類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、及びそれらの任意のキメラが挙げられる。例えば、Ｆｉｅｌｄｓら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２巻，６９章（第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）を参照されたい。

【0073】

多数の推定される新しいＡＡＶ血清型及びクレードが同定されている（例えば、Ｇａｏら、（２００４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７８:６３８１－６３８８;Ｍｏｒｉｓら、（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３－:３７５－３８３）。ＡＡＶ及び自律性パルボウイルスの様々な血清型のゲノム配列、並びに末端反復、Ｒｅｐタンパク質、及びキャプシドサブユニットの配列は、当技術分野で公知であり、例として、Ｓｒｉｖｉｓｔａｖａら,（１９８３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４５:５５５；Ｃｈｉｏｒｉｎｉら,（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１:６８２３；Ｃｈｉｏｒｉｎｉら,（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３:１３０９；Ｂａｎｔｅｌ－Ｓｃｈａａｌら,（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３:９３９；Ｘｉａｏら,（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３:３９９４；Ｍｕｒａｍａｔｓｕら,（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２１:２０８；Ｓｈａｄｅら,（１９８６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ５８:９２１；Ｇａｏら,（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９:１１８５４；Ｍｏｒｉｓら,（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３－:３７５－３８３；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ８９７９０；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｊ０１９０１；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ０４３３０３；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ０８５７１６；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ００６１５２；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｙ１８０６５；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ ００６２６０；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００６２６１；国際特許公開ＷＯ００／２８０６１、ＷＯ９９／６１６０１、ＷＯ９８／１１２４４；及び米国特許第６,１５６,３０３号であり、その開示は、パルボウイルス及びＡＡＶの核酸及びアミノ酸配列を教示するために本明細書に参照により組み込まれる。

【0074】

全ての既知のＡＡＶ血清型のゲノム構成は、非常に類似している。ＡＡＶのゲノムは、長さが約５,０００ヌクレオチド（ｎｔ）未満の直鎖状の一本鎖ＤＮＡ分子である。逆位末端配列（ＩＴＲ）は、非構造複製（Ｒｅｐ）タンパク質及び構造（ＶＰ）タンパク質の固有のコードヌクレオチド配列に隣接している。ＶＰタンパク質（ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３）はキャプシドを形成する。末端１４５ヌクレオチドは自己相補的であり、Ｔ字型のヘアピンを形成するエネルギー的に安定な分子内二本鎖が形成され得るように構築されている。それらのヘアピン構造は、ウイルスＤＮＡ複製の起点として機能し、細胞ＤＮＡポリメラーゼ複合体のプライマーとして作用する。哺乳類細胞におけるｗｔＡＡＶ感染後に、Ｒｅｐ遺伝子（すなわちＲｅｐ７８及びＲｅｐ５２）は、それぞれＰ５プロモーター及びＰ１９プロモーターから発現され、両方のＲｅｐタンパク質はウイルスゲノムの複製において機能を有する。

【0075】

いくつかの実施形態において、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターは、少なくとも１つのパルボウイルス又はＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）が隣接する目的の１以上のヌクレオチド配列を含む。そのようなｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ ｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子産物（すなわち、ＡＡＶ Ｒｅｐ及びＣａｐタンパク質）を発現しているパッケージング細胞内で産生される場合に複製され、ウイルス粒子にパッケージングされ得る。「ＡＡＶ Ｃａｐタンパク質」又は「ＡＡＶキャプシドタンパク質」という用語は、本明細書で使用される場合、天然ＡＡＶ Ｃａｐタンパク質（例えば、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３）の少なくとも１つの機能的活性を有するポリペプチドを指す。Ｃａｐタンパク質（例えば、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３）の機能的活性の例としては、キャプシドの形成を誘導する能力、一本鎖ＤＮＡの蓄積を促進する能力、キャプシドへのＡＡＶ ＤＮＡパッケージング（すなわち、キャプシド化）を促進する能力、細胞受容体に結合する能力、及び宿主細胞へのビリオンの侵入を促進する能力が挙げられる。

【0076】

いくつかの実施形態において、ＡＡＶベクターは、所望のタンパク質又はタンパク質バリアントを含み得る。本明細書において使用される「バリアント」は、１以上のアミノ酸が変更されたアミノ酸配列を指す。バリアントは「保存的」変化を有してよく、置換アミノ酸は、類似の構造的又は化学的特性、例えば、ロイシンのイソロイシンによる置換を有する。よりまれに、バリアントは、「非保存的」変化、例えばグリシンのトリプトファンへの置換を有することがある。類似の軽微な多様性はまた、アミノ酸の欠失又は挿入、あるいはその両方も含み得る。

【0077】

ＡＡＶベクターは、ＡＡＶウイルスキャプシドにパッケージングされる。ＡＡＶウイルスキャプシドタンパク質の配列は、特定のＡＡＶベクターの多数の特徴を定義する。例えば、キャプシドタンパク質は、とりわけ、キャプシドの構造及びアセンブリ、Ｒｅｐ及びＡＡＰタンパク質などのＡＡＶ非構造タンパク質との相互作用、宿主の体液及び細胞外マトリックスとの相互作用、血液からのウイルスのクリアランス、血管透過性、抗原性、中和抗体に対する反応性、組織／器官／細胞型指向性、細胞接着及び内在化の効率、細胞内輸送経路、ビリオン非コーティング率に影響を及ぼす。キャプシドタンパク質（例えば、ＶＰ３）の配列は、肝臓への送達を増強するように変更され得る。

【0078】

ＡＡＶコンストラクトは、本明細書に開示されるポリヌクレオチド配列をパッケージングする１以上のキャプシドタンパク質（ＶＰ１及び／又はＶＰ２、及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質、好ましくは単にＶＰ３キャプシドタンパク質）をコードする配列を含み得る。本発明の文脈で使用するためのキャプシドタンパク質（複数可）をコードする配列は、既知の４２種の血清型、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０のいずれかから、又は例えば、キャプシドシャッフリング技術及び／若しくはＡＡＶキャプシドライブラリーの使用によって得られる新たに開発されたＡＡＶ様粒子から得られ得る。キャプシドタンパク質配列のいくつかの非限定的な例については、例えば、米国特許第９，７９０，４７２号；同第９，６７７，０８９号;同第７，２８２，１９９号；国際特許出願公開ＷＯ２０１５／０５４６５３、Ｗ０２０１７／１８０８５７（ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｈｕ３７、ＡＡＶｒｈ６４Ｒ１）、Ｗ０２０１７／１８０８６１（ＡＡＶｒｈ１０）、Ｗ０２０１７／１８０８５４（ＡＡＶ８変異体）、及びＷａｎｇら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．、２０１５，２３（１２）：１８７７－１８８７（ＡＡＶ８、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ３Ｂ、及びＡＡＶ－ＬＫ０３）を参照されたい。キャプシドタンパク質をコードする配列がＩＴＲとは異なるＡＡＶ血清型に由来する場合、ＡＡＶコンストラクトは、国際特許出願公開ＷＯ００／２８００４及びＣｈａｏら,（２０００）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ２:６１９に記載される「ハイブリッド」パルボウイルスゲノム（すなわち、ＡＡＶキャプシドとＡＡＶ末端反復（複数可）は異なるＡＡＶからのものである）として公知である。

【0079】

いくつかの実施形態において、キャプシドタンパク質（複数可）は、肝臓へのＡＡＶベクターの効率的な標的化を媒介する。いくつかの実施形態において、キャプシドタンパク質（複数可）は、肝臓に対するＡＡＶベクターの優先的標的化を媒介する。いくつかのキャプシドタンパク質（例えば、Ａｎｃ８０、ＡＡＶ８及びＡＡＶ３ＢのＶＰ３）は、天然では肝臓特異的である。本発明はまた、肝臓標的化及び／又は肝臓特異性を増強するＡＡＶキャプシド変異体の使用も包含する。ＡＡＶ８キャプシド配列に対するそのような点変異の非限定的な例としては、例えば、Ｓ２７９Ａ、Ｓ６７１Ａ、Ｋ１３７Ｒ、及びＴ２５２Ａ、並びに国際特許出願公開ＷＯ２０１７／１８０８５４に開示されているＡＡＶ８キャプシド変異（例えば、ＡＡＶ３Ｇ１、ＡＡＶＴ２０又はＡＡＶＴＲ１、アミノ酸２６３～２６７［例えば、２６３ＮＧＴＳＧ２６７→ＳＧＴＨ又は２６３ＮＧＴＳＧ２６７→ＳＤＴＨ（「ＮＧＴＳＧ」は配列番号５４として開示され；「ＳＧＴＨ」は配列番号５５として開示され、「ＳＤＴＨ」は配列番号５６として開示される）、及び／又はアミノ酸４５７～４５９［例えば、４５７ＴＡＮ４５９→ＳＲＰ］、及び／又はアミノ酸４５５～４５９［例えば、４５５ＧＧＴＡＮ４５９→ＤＧＳＧＬ］（「ＧＧＴＡＮ」は配列番号５７として開示され、「ＤＧＳＧＬ」は配列番号５８として開示される）、及び／又はアミノ酸５８３～５９７におけるＶＰ３変異）が挙げられる。

【0080】

いくつかの実施形態において、キャプシドタンパク質（複数可）は、神経系へのＡＡＶベクターの効率的な標的化を媒介する。いくつかの実施形態において、キャプシドタンパク質（複数可）は、肝臓と神経系の両方に対するＡＡＶベクターの優先的標的化を媒介する。いくつかのキャプシドタンパク質は、天然では肝臓と神経系の両方を標的にする。本発明はまた、肝臓及び／又は神経系への標的化を増強するＡＡＶキャプシド変異体の使用も包含する。

【0081】

いくつかの実施形態において、キャプシドタンパク質は、対応する野生型キャプシドタンパク質と比較して、肝臓及び／又は神経系へのベクターの送達の効率及び／又は特異性を改善する１以上の変異を含む。一実施形態において、肝臓へのベクターの送達の改善された効率及び／又は特異性は、他の組織及び器官と比較して肝臓における酵素の発現を実質的に高める。一実施形態において、神経系へのベクターの送達の改善された効率及び／又は特異性は、他の組織及び器官と比較して、神経系における酵素の発現を実質的に高める。一実施形態において、キャプシドタンパク質はＶＰ３を含む。一実施形態において、キャプシドタンパク質における１以上の変異は、Ｓ２７９Ａ、Ｓ６７１Ａ、Ｋ１３７Ｒ、Ｔ２５２Ａ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一実施形態において、キャプシドタンパク質における１以上の変異には、変異Ｋ１３７Ｒが含まれる。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号３４の配列を含む。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号３４の配列からなる。

【0082】

いくつかの実施形態において、キャプシドタンパク質は、Ｓ２７９Ａ、Ｓ６７１Ａ、Ｋ１３７Ｒ、Ｔ２５２Ａ、及びそれらの任意の組み合せからなる群から選択される１以上の変異を含む。一実施形態において、キャプシドタンパク質における１以上の変異には、変異Ｋ１３７Ｒが含まれる。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号３の配列［Ａｎｃ８０］を含む。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号３の配列［Ａｎｃ８０］からなる。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号９の配列［Ａｎｃ８０］を含む。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号９の配列［Ａｎｃ８０］からなる。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号３４の配列［Ａｎｃ８０Ｌ６５］を含む。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号３４の配列［Ａｎｃ８０Ｌ６５］からなる。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号３５の配列［Ａｎｃ８０Ｌ６５バリアント］を含む。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号３５の配列［Ａｎｃ８０Ｌ６５バリアント］からなる。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、変異体ＡＡＶ８キャプシドタンパク質、例えば、ＡＡＶ３Ｇ１、ＡＡＶＴ２０又はＡＡＶＴＲ１、又は国際特許出願公開ＷＯ２０１７／１８０８５４に開示される別の変異体キャプシドタンパク質（例えば、アミノ酸２６３～２６７［例えば、２６３ＮＧＴＳＧ２６７→ＳＧＴＨ又は２６３ＮＧＴＳＧ２６７→ＳＤＴＨ（「ＮＧＴＳＧ」は、配列番号５４として開示され:「ＳＧＴＨ」は配列番号５５として開示され、「ＳＤＴＨ」は配列番号５６として開示される）］、及び／又はアミノ酸４５７～４５９［例えば、４５７ＴＡＮ４５９→ＳＲＰ］、及び／又はアミノ酸４５５～４５９［例えば、４５５ＧＧＴＡＮ４５９→ＤＧＳＧＬ］（「ＧＧＴＡＮ」は配列番号５７として開示され、「ＤＧＳＧＬ」は配列番号５８として開示される）、及び／又はアミノ酸５８３～５９７におけるＶＰ３変異を含む）である。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号４７の配列［ＡＡＶ－ＬＫ０３］を含む。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号４７の配列［ＡＡＶ－ＬＫ０３］からなる。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号４９の配列［ＡＡＶ－ＫＰ１］を含む。一実施形態において、キャプシドタンパク質は、配列番号４９の配列［ＡＡＶ－ＫＰ１］からなる。

【0083】

本明細書に開示されるＡＡＶベクターには、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素をコードする核酸が含まれる。様々な実施形態において、核酸はまた、コードされた酵素の発現及び分泌を可能にする１以上の調節配列、例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、配列内リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）をコードする配列、分泌シグナル配列などを含み得る。そのため、いくつかの実施形態において、核酸は、トランスフェクトされた細胞において目的のタンパク質の発現を生じさせるか又は改善するためにコード配列に作動可能に連結されたプロモーター領域を含み得る。そのようなプロモーターは、例えば、肝臓及び／又は神経系におけるタンパク質の効率的及び安定な産生を可能にするために、遍在する、細胞又は組織特異的、強い、弱い、調節された、キメラなどのプロモーターであり得る。プロモーターは、コードされたタンパク質に相同であっても異種であってもよいが、一般的に、開示される方法で使用するプロモーターはヒト細胞で機能的である。調節プロモーターの例としては、限定するものではないが、Ｔｅｔオン／オフエレメント含有プロモーター、ラパマイシン誘導性プロモーター、タモキシフェン誘導性プロモーター、及びメタロチオネインプロモーターが挙げられる。使用され得る他のプロモーターには、例えば、肝臓、神経系及び／又は腸に対して組織特異的であるプロモーターが含まれる。肝臓特異的プロモーターの非限定的な例としては、例えば、アルブミンプロモーター（Ａｌｂ）、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーター、チロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）、アポリポタンパク質Ｅ肝制御領域プロモーター、アポリポタンパク質Ａ－ＩＩ（ＡＰＯＡ２）プロモーター、セルピンペプチダーゼ阻害剤、クレードＡ、メンバー１（ＳＥＲＰＩＮＡ１）（ｈＡＡＴ）プロモーター、シトクロムＰ４５０ファミリー３、サブファミリーＡポリペプチド４（ＣＹＰ３Ａ４）プロモーター、マイクロＲＮＡ１２２（ｍｉＲ－１２２）プロモーター、肝臓特異的ＩＧＦ－ＩＩプロモーターＰ１、マウストランスサイレチン（ＭＴＴＲ）プロモーター、及びアルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーターが挙げられる。神経系特異的プロモーターの非限定的な例としては、例えば、ミクログリア特異的プロモーター（例えば、Ｆ４／８０、ＣＤ６８、ＴＭＥＭ１１９、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＭＶ、Ｉｂａ１）、骨髄特異的プロモーター（例えば、ＴＴＲ、ＣＤ１１ｂ、ｃ－ｆｅｓ）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、ＣＭＶ、ＮＳＥ、シナプシン［ＳｙｎＩ、ＳｙｎＩＩ］、ＣａＭＫＩＩ、アルファ－ＣａＭＫＩＩ、ＶＧＬＵＴ１）、及び他の神経細胞及びグリア細胞（例えば、乏突起膠細胞星細胞）タイプ特異的プロモーター（例えば、ＧＦＡＰ）が挙げられる。腸特異的プロモーターの非限定的な例としては、ＭＵＣ２、ビリン、Ｔ３ｂ、ＣＢ／ＣＭＶ、ＧＦＡＰ、ｍｉＣＭＶ、ＣＭＶ＋Ｉ、ｔｅｔＯ－ＣＭＶ、及びβ－アクチン－ＣＭＶが挙げられる。ユビキタスプロモーターの非限定的な例としては、例えば、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーターなどのウイルスプロモーター、及び細胞プロモーター、例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ＣＭＶＥ／ＣＡＧプロモーター系、及びβ－アクチンプロモーターが挙げられる。いくつかの実施形態において、プロモーターは、腫瘍発生組織又は転移標的組織に特異的である。

【0084】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるいずれかのＡＡＶベクターは、プロモーターの上流又は下流に位置する１以上のエンハンサーを含み得る。いくつかの実施形態において、１以上のエンハンサーは、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）エンハンサー、アルファフェトプロテインエンハンサー、ＴＴＲエンハンサー、ＬＳＰエンハンサー、α１－ミクログロブリン／ビクニンエンハンサー、アルブミン遺伝子エンハンサー（Ｅａｌｂ）、ｎＰＥ２エンハンサー、Ｇａｌ４エンハンサー、ｆｏｘＰ２エンハンサー、ａＭｅｆ２エンハンサー、ＣＭＶエンハンサー、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。一実施形態において、エンハンサーは、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）エンハンサーである。いくつかの実施形態において、エンハンサーは、肝臓制御領域（ＨＣＲ）エンハンサーである。いくつかの実施形態において、エンハンサーは、配列番号１７と少なくとも８０％又は少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。一実施形態において、エンハンサーは、配列番号１７の配列を含む。一実施形態において、エンハンサーは、配列番号１７の配列からなる。

【0085】

上記のいずれかのベクターの一実施形態において、核酸は、ＤＮａｓｅ酵素をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたポリアデニル化シグナルをさらに含む。

【0086】

いくつかの実施形態において、核酸は、コザック配列をさらに含む。１つの具体的な実施形態において、コザック配列は、５'－ＧＣＣＧＣＣＡＣＣ－３'（配列番号３３）の配列を含む。一実施形態において、核酸は、配列番号３０と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。一実施形態において、核酸は、配列番号３０と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。一実施形態において、核酸は、配列番号３０と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。一実施形態において、核酸は、配列番号３０と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。一実施形態において、核酸は、配列番号３０のヌクレオチド配列を含む。

【0087】

上記のいずれかのベクターの一実施形態において、核酸は、転写後調節エレメントをさらに含む。一実施形態において、転写後調節エレメントは、ウッドチャック肝炎転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）である。一実施形態において、ＷＰＲＥは、機能的なＸタンパク質をコードしない。一実施形態において、転写後調節エレメントは、配列番号１６と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。一実施形態において、転写後調節エレメントは、配列番号１６の配列を含む。一実施形態において、転写後調節エレメントは、配列番号１６の配列からなる。

【0088】

本発明のＡＡＶベクターはまた、分解不可能な末端反復を含み得る。本明細書で使用される場合、「分解不可能な末端反復」という表現は、ＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質によって認識されず、かつ分解（すなわち、「ニック」）されず、その結果、末端反復の分解能が実質的に低減される（例えば、分解可能な末端反復と比較して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％又はそれ以上）か又は排除される末端反復に関する。そのような分解不可能な末端反復は、天然に存在する末端反復配列（その変更型を含む）であってよく、例えば、ＡＡＶを含むパルボウイルスに由来し得るか、又は別のウイルスに由来し得るか、又は、さらなる代替として、部分的若しくは完全に合成することができる。分解不可能な末端反復は、ＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質によって認識されない非ＡＡＶウイルス配列であり得るか、又はＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質によって認識されなくなるように（例えば、挿入、置換及び／又は欠失によって）改変されたＡＡＶ末端反復であり得る。さらに、分解不可能な末端反復は、ウイルスベクターを生成するために用いられる条件下で分解不可能な任意の末端反復であり得る。さらに、ＡＡＶ末端反復は、ＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質による分解能が実質的に低下又は排除されるように改変することができる。分解不可能な末端反復は、ヘアピン構造を形成し、ＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質がニッキングできない任意の逆反復配列であり得る。

【0089】

逆位末端配列（ＩＴＲ）は、典型的には、ＡＡＶベクター中に少なくとも２コピーで存在し、典型的には、ＤＮａｓｅ酵素をコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む発現カセットに隣接している。ＩＴＲは通常、ＤＮａｓｅ酵素をコードするヌクレオチド配列（複数可）の５'末端と３'末端に存在するが、それに隣接している必要はない。ＩＴＲは、互いに同じでも異なっていてもよい。「末端反復」という用語は、ヘアピン構造を形成し、Ｓａｍｕｌｓｋｉらの米国特許第５，４７８，７４５号に記載されている「ダブルＤ配列」などの逆位末端配列として機能する任意のウイルス末端反復及び／又は部分的若しくは完全な合成配列を含む。「ＡＡＶ末端反復」は、血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、Ａｎｃ８０、又は現在知られている若しくは後に発見される他の任意のＡＡＶを含むが、これらに限定されない任意のＡＡＶからのものであり得る。ＡＡＶ末端反復は、末端反復が所望の機能、例えば複製、ニッキング、ウイルスパッケージング、組み込み、及び／又はプロウイルスレスキューなどを媒介する限り、野生型配列を有する必要はない（例えば、野生型配列は挿入、欠失、切断又はミスセンス変異によって改変され得る）。ベクターコンストラクトは、同じでも異なっていてもよい１以上の（例えば、２つの）ＡＡＶ末端反復を含むことができる。さらに、１以上のＡＡＶ末端反復は、ＡＡＶキャプシドと同じＡＡＶ血清型からのものであり得るか、又は異なり得る。特定の実施形態において、ベクターコンストラクトは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、及び／又はＡｎｃ８０末端反復を含む。

【0090】

パルボウイルスＩＴＲヌクレオチド配列は、典型的には、「Ａ」、「Ｂ」、及び「Ｃ」領域とも呼ばれる、ほとんど相補的で対称的に配置された配列を含む回文配列である。ＩＴＲは、複製において「シス」の役割を有する部位、すなわち、例えば、回文及び回文内部の特異的配列を認識するＲｅｐ７８（又はＲｅｐ６８）などのトランス作用する複製タンパク質の認識部位である複製起点として機能する。ＩＴＲ配列の対称性に対する１つの例外は、ＩＴＲの「Ｄ」領域である。それは特有である（１つのＩＴＲ内に相補体がない）。一本鎖ＤＮＡのニッキングは、Ａ領域とＤ領域の間の接合部で発生する。それは新しいＤＮＡ合成が始まる領域である。Ｄ領域は通常、回文の片側に位置し、核酸複製工程に方向性を提供する。哺乳類細胞内で複製するパルボウイルスは、典型的には２つのＩＴＲ配列を有する。しかし、結合部位がＡ領域の両方の鎖にあり、Ｄ領域が回文の両側に１つずつ対称的に位置するようにＩＴＲを操作することは可能である。次いで、二本鎖環状ＤＮＡテンプレート（プラスミドなど）上で、Ｒｅｐ７８－又はＲｅｐ６８支援核酸複製は両方向に進行し、環状ベクターのパルボウイルス複製には単一のＩＴＲで十分である。そのため、１つのＩＴＲヌクレオチド配列を本発明の文脈で使用することができる。２つ又は別の偶数の通常のＩＴＲを使用することができる。

【0091】

機能的ＩＴＲ配列は、ＡＡＶビリオンの複製、レスキュー及びパッケージングに必要である。ＩＴＲ配列は、野生型配列であり得るか、又は野生型配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有し得る。ＩＴＲ配列は、それらが機能し続ける限り、例えばヌクレオチドの挿入、変異、欠失又は置換によって変更され得る。この文脈において、機能性とは、キャプシドシェルへのゲノムのパッケージングを指示し、次いで形質導入される宿主細胞又は標的細胞での発現を可能にする能力を指す。

【0092】

ＡＡＶベクターは、一本鎖又は二本鎖（自己相補的）ＤＮＡを含むことができる。両方の極性が等しく遺伝子発現を可能にするので、一本鎖核酸分子は、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかである。ＡＡＶベクターは、マーカー又はレポーター遺伝子、例えば抗生物質耐性遺伝子、蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ）をコードする遺伝子、又は当技術分野で公知の化学的、酵素的又は他の方法で検出可能及び／もしくは選択可能な生成物（例えば、ｌａｃＺ、ａｐｈなど）をコードする遺伝子をさらに含み得る。

【0093】

ＡＡＶ発現ベクターは、形質導入細胞からのコードされたＤＮａｓｅ酵素の分泌を可能にする分泌シグナル配列を含み得る核酸を含み得る。そのような分泌シグナル配列の非限定的な例としては、例えば、ＤＮａｓｅ Ｉ分泌シグナル配列、ＩＬ２分泌シグナル配列、アルブミン分泌シグナル配列、β－グルクロニダーゼ分泌シグナル配列、アルカリプロテアーゼ分泌シグナル配列、及びフィブロネクチン分泌シグナル配列が挙げられる。

【0094】

いくつかの実施形態において、ＡＡＶ８ベース又はＡｎｃ８０ベースのベクターが、発現ベクターとして使用される。ＡＡＶ８及びＡｎｃ８０ベクターは、肝臓の標的化及び発現に特に適している。例えば、ＡＡＶ８ベクターとＡｎｃ８０ベクターはどちらも、ＡＡＶ２ベクターと比較して、より高い効率で肝細胞にトランスフェクトすることができる。ＡＡＶ８及びＡｎｃ８０はどちらも、いくつかの他のＡＡＶベクターよりも少量の中和抗体を誘導する。

【0095】

ＤＮａｓｅ酵素をコードするヌクレオチドを含むＡＡＶ８ベクター又はＡｎｃ８０ベクターを、肝細胞にトランスフェクトし、コードされるＤＮａｓｅ酵素の有効な産生及び内皮周囲空間及びＤｉｓｓｅの空間におけるその分泌を媒介するのに有効なＡＡＶ８又はＡｎｃ８０ベクターと共に、肝臓内（例えば、直接臓器注射を介して）又は全身的に、例えば、静脈内注射によって投与することができる。いくつかの実施形態において、Ａｎｃ８０キャプシドタンパク質（例えば、配列番号３又は配列番号９の配列を含むＡｎｃ８０ ＶＰ１キャプシドタンパク質、又は配列番号３４の配列を含むＡｎｃ８０Ｌ６５ ＶＰ１キャプシドタンパク質、又は配列番号３５の配列を含むバリアントＡｎｃ８０Ｌ６５ ＶＰ１キャプシドタンパク質）は、発現ベクター内のヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、ＡＡＶ８キャプシドタンパク質（例えば、ＡＡＶ８ ＶＰ１又はＡＡＶ８ ＶＰ３）は、発現ベクター内のヌクレオチド配列によってコードされる。本発明のＡＡＶベクターの末梢投与は、全身注射、例えば、筋肉内、静脈内、腹腔内、及び動脈内注射を含み得る。

【0096】

いくつかの実施形態において、発現ベクターとして、ＡＡＶ３ベース、又はＡＡＶ－ＬＫ０３、又はＡＡＶ－ＫＰ１ベクターが使用される。ＡＡＶ３、ＡＡＶ－ＬＫ０３及びＡＡＶ－ＫＰ１ベクターは、肝臓の標的化及び発現に特に適している。例えば、ＡＡＶ３、ＡＡＶ－ＬＫ０３及びＡＡＶ－ＫＰ１ベクターは、ＡＡＶ２ベクターと比較してより高い効率で肝細胞をトランスフェクトすることができる。ＡＡＶ－ＬＫ０３及びＡＡＶ－ＫＰ１はどちらも、いくつかの他のＡＡＶベクターよりも少量の中和抗体を誘導する。

【0097】

本発明のＤＮａｓｅ酵素をコードするＡＡＶベクターの所望の用量は、例えば、疾患状態、対象、処置スケジュールなどに応じて、当業者が容易に適合させることができる。いくつかの実施形態において、用量当たり１０ｅ５～１０１ｅ４、例えば、１０ｅ６～１０ｅ１１、１０ｅ７～１０ｅ１１、又は１０８～１０１４の組換えウイルス粒子が投与される。他の実施形態において、処置効果を達成するための例示的な用量は、少なくとも約１０ｅ５、１０ｅ６、１０ｅ７、１０ｅ８、１０ｅ９、１０ｅ１０又は１０ｅ１１の組換えウイルス粒子又はそれ以上の力価を含み得る。

【0098】

外因性標的化配列（複数可）が、主要なキャプシドサブユニット（例えば、ＶＰ３）の一部又は全部を置き換えるか又は置き換えてもよい。さらなる代替として、２以上の外因性標的化配列、例えば、２、３、４、５以上の配列を、ビリオンキャプシドに導入してもよい。代替実施形態において、マイナーキャプシドサブユニット（例えば、ＶＰ１及びＶＰ２）内での挿入及び置換を行ってもよい。ＡＡＶキャプシドの場合、ＶＰ２又はＶＰ３への挿入又は置換を行ってもよい。

【0099】

天然ビリオンの指向性は、アミノ酸配列の挿入若しくは置換によって低下又は消失し得る。あるいは、外因性アミノ酸配列の挿入又は置換は、ビリオンを特定の細胞型（複数可）に標的化し得る。外因性標的化配列は、ビリオンの指向性を変更するタンパク質又はペプチドをコードする任意のアミノ酸配列であり得る。特定の実施形態において、標的化ペプチド又はタンパク質は、天然に存在するか、又は代わりに、完全に又は部分的に合成され得る。例示的なペプチド及びタンパク質には、肝細胞に存在する細胞表面受容体に結合するリガンド及び他のペプチド、アポリタンパク質Ｅに対するＳｒ－Ｂ１受容体に結合することができるリガンド、ガラクトース及びラクトース特異的レクチン、低密度リポタンパク質受容体リガンド、アシアロ糖タンパク質（ガラクトース末端）リガンドなどが含まれる。

【0100】

あるいは、外因性標的化配列は、抗体又はその抗原認識部分であり得る。本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを含む全ての種類の免疫グロブリンを指す。抗体は、モノクローナルであってもポリクローナルであってもよく、（例えば）マウス、ラット、ウサギ、ウマ、又はヒトを含む任意の起源の種の抗体であってもよく、又はキメラ抗体であってもよい。また、「抗体」という用語には、当業者に公知である二重特異性又は「架橋」抗体も包含される。本発明の範囲内での抗体断片には、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｃ断片、並びにＩｇＧ以外の抗体から得られる対応する断片が含まれる。そのような断片は、公知の技術により生成され得る。ビリオンキャプシドに挿入される外因性のアミノ酸配列は、ビリオンの精製又は検出を容易にする配列であり得る。例えば、外因性アミノ酸配列は、当業者に公知であるように、ニッケルカラム上でビリオンを精製するのに有用なポリヒスチジン配列、又は標準的な免疫精製技術によってビリオンを精製するために使用され得る抗原ペプチド又はタンパク質を含み得る。あるいは、アミノ酸配列は、受容体リガンド、又はアフィニティー精製若しくは当技術分野において公知の任意の他の技術（例えば、異なるサイズ、密度、電荷、若しくは等電点に基づく精製技術、イオン交換クロマトグラフィー、又はペプチドクロマトグラフィー）によって修飾ビリオンを精製するために使用され得る任意の他のペプチド若しくはタンパク質をコードし得る。

【0101】

あるいは、外因性標的化配列は、抗体又はその抗原認識部分であり得る。本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを含む全ての種類の免疫グロブリンを指す。抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得るか、（例えば）マウス、ラット、ウサギ、ウマ、又はヒトを含む任意の起源の種の抗体であってもよく、又はキメラ抗体であってもよい。また、「抗体」という用語には、当業者に公知である二重特異性又は「架橋」抗体も包含される。本発明の範囲内での抗体断片には、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｃ断片、並びにＩｇＧ以外の抗体から得られる対応する断片が含まれる。そのような断片は、公知の技術により生成され得る。

【0102】

ビリオンキャプシドに挿入される外因性アミノ酸配列は、ビリオンの精製又は検出を容易にするものであり得る。本発明のこの態様によると、外因性アミノ酸配列は、改変パルボウイルスのビリオンも変更する必要はない。例えば、外因性アミノ酸配列は、当業者に公知であるように、ニッケルカラム上でビリオンを精製するのに有用なポリヒスチジン配列、又は標準的な免疫精製技術によってビリオンを精製するために使用され得る抗原ペプチド又はタンパク質を含み得る。あるいは、アミノ酸配列は、受容体リガンド、又はアフィニティー精製若しくは当技術分野において公知の任意の他の技術（例えば、異なるサイズ、密度、電荷、若しくは等電点に基づく精製技術、イオン交換クロマトグラフィー、又はペプチドクロマトグラフィー）によって修飾ビリオンを精製するために使用され得る任意の他のペプチド若しくはタンパク質をコードし得る。

【0103】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＡＡＶベクターは、それを必要とする対象における神経変性疾患、神経発達疾患、精神疾患、腫瘍疾患、若しくは自己免疫疾患又は感染症を処置及び／又は防止するのに有用であり得、前記方法は、上記のｒＡＡＶベクター又はそのようなベクターを含む医薬組成物のいずれかの治療有効量を対象に投与することを含む。

【0104】

プロモーター
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるベクターは、（ｉ）キャプシドタンパク質と（ｉｉ）デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む核酸とを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）発現ベクターであり得る。いくつかの実施形態において、プロモーターは肝臓特異的プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、腫瘍発生組織又は転移標的組織に特異的である。いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、腫瘍発生組織又は転移標的組織に特異的である。

【0105】

本発明のベクターに使用され得るプロモーターの非限定的な例としては、例えば、アルブミンプロモーター、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーター、甲状腺ホルモン結合グロブリンプロモーター、アルファフェトプロテインプロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）プロモーター、ＨＢＶベーシックコアプロモーター（ＢＣＰ）、ＨＢＶ ＰｒｅＳ２プロモーター、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）プロモーター、チロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター、肝制御領域（ＨＣＲ）－ＡｐｏＣＩＩハイブリッドプロモーター、ＨＣＲ－ｈＡＡＴハイブリッドプロモーター、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）プロモーター、低密度リポタンパク質プロモーター、ピルビン酸キナーゼプロモーター、ホスフェノールピルビン酸カルボキシキナーゼプロモーター、フェニルアラニンヒドロキシラーゼプロモーター、レシチン－コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）プロモーター、アポリポタンパク質Ｈ（ＡｐｏＨ）プロモーター、アポリポタンパク質Ａ－ＩＩプロモーター（ＡＰＯＡ２）、トランスフェリンプロモーター、トランスサイレチンプロモーター、α－フィブリノーゲンプロモーター、β－フィブリノーゲンプロモーター、アルファ１－アンチキモトリプシンプロモーター、α２－ＨＳ糖タンパク質プロモーター、ハプトグロビンプロモーター、セルロプラスミンプロモーター、プラスミノーゲンプロモーター、補体タンパク質のプロモーター、α１－酸性糖タンパク質プロモーター、ＬＳＰ１プロモーター、セルピンペプチダーゼ阻害剤プロモーター、クレードＡメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＡ１）（ｈＡＡＴ）プロモーター、シトクロムＰ４５０ファミリー３サブファミリーＡポリペプチド４（ＣＹＰ３Ａ４）プロモーター、マイクロＲＮＡ１２２（ｍｉＲ－１２２）プロモーター、肝臓特異的ＩＧＦ－ＩＩプロモーターＰ１、トランスサイレチン（ＭＴＴＲ）プロモーター、及びαフェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーターが挙げられる。

【0106】

いくつかの実施形態において、プロモーターは、肝臓特異的／神経系特異的タンデムプロモーターである。いくつかの実施形態において、肝臓特異的／神経系特異的タンデムプロモーターは、他の組織及び器官と比較して、肝臓及び／又は神経系において酵素の実質的に増加した発現を媒介する。いくつかの実施形態において、肝臓特異的／神経系特異的タンデムプロモーターは、アルブミンプロモーター、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーター、甲状腺ホルモン結合グロブリンプロモーター、アルファフェトプロテインプロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）プロモーター、ＨＢＶベーシックコアプロモーター（ＢＣＰ）、ＨＢＶ ＰｒｅＳ２プロモーター、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）プロモーター、チロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター、肝制御領域（ＨＣＲ）－ＡｐｏＣＩＩハイブリッドプロモーター、ＨＣＲ－ｈＡＡＴハイブリッドプロモーター、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）プロモーター、低密度リポタンパク質プロモーター、ピルビン酸キナーゼプロモーター、ホスフェノールピルビン酸カルボキシキナーゼプロモーター、フェニルアラニンヒドロキシラーゼプロモーター、レシチン－コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）プロモーター、アポリポタンパク質Ｈ（ＡｐｏＨ）プロモーター、アポリポタンパク質Ａ－ＩＩプロモーター（ＡＰＯＡ２）、トランスフェリンプロモーター、トランスサイレチンプロモーター、α－フィブリノーゲンプロモーター、β－フィブリノーゲンプロモーター、アルファ１－アンチキモトリプシンプロモーター、α２－ＨＳ糖タンパク質プロモーター、ハプトグロビンプロモーター、セルロプラスミンプロモーター、プラスミノーゲンプロモーター、補体タンパク質のプロモーター、α１－酸性糖タンパク質プロモーター、ＬＳＰ１プロモーター、セルピンペプチダーゼ阻害剤プロモーター、クレードＡメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＡ１）（ｈＡＡＴ）プロモーター、シトクロムＰ４５０ファミリー３サブファミリーＡポリペプチド４（ＣＹＰ３Ａ４）プロモーター、マイクロＲＮＡ１２２（ｍｉＲ－１２２）プロモーター、肝臓特異的ＩＧＦ－ＩＩプロモーターＰ１、トランスサイレチン（ＭＴＴＲ）プロモーター、及びαフェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーターからなる群から選択される肝臓特異的プロモーターを含む。いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーターである。いくつかの実施形態において、ＡＡＴプロモーターは、ヒトα１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーターである。いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、配列番号１５の配列と少なくとも８０％又は少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、配列番号１５の配列を含む。いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、配列番号１５の配列からなる。いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターはアルブミンプロモーターである。いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、配列番号８の配列と少なくとも８０％又は少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、配列番号８の配列を含む。いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、配列番号８の配列からなる。いくつかの実施形態において、肝臓特異的／神経系特異的タンデムプロモーターは、Ｆ４／８０プロモーター、ＣＤ６８プロモーター、ＴＭＥＭ１１９プロモーター、ＣＸ３ＣＲ１プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＭＥＦ２プロモーター、ＦｏｘＰ２プロモーター、Ｉｂａ１プロモーター、ＴＴＲプロモーター、ＣＤ１１ｂプロモーター、ｃ－ｆｅｓプロモーター、ＮＳＥプロモーター、シナプシンプロモーター、ＣａｍＫＩＩプロモーター、α－ＣａｍＫＩＩプロモーター、ＶＧＬＵＴ１プロモーター、及びグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターからなる群から選択される神経系特異的プロモーターを含む。いくつかの実施形態において、神経系特異的プロモーターはシナプシンプロモーターである。いくつかの実施形態において、シナプシンプロモーターは、ヒトシナプシンプロモーターである。一実施形態において、神経系特異的プロモーターはＦ４／８０プロモーターである。いくつかの実施形態において、神経系特異的プロモーターはＣＭＶプロモーターである。いくつかの実施形態において、神経系特異的プロモーターはＴＭＥＭ１１９プロモーターである。いくつかの実施形態において、神経系特異的プロモーターはＭＥＦ２プロモーターである。いくつかの実施形態において、神経系特異的プロモーターは、ＦｏｘＰ２プロモーターである。いくつかの実施形態において、肝臓特異的／神経系特異的タンデムプロモーターは、配列番号３６及び３８～４２の配列のいずれか１つと少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む神経特異的プロモーターを含む。一実施形態において、神経系特異的プロモーターは、配列番号３６及び３８～４２の配列のいずれか１つを含む。一実施形態において、神経系特異的プロモーターは、配列番号３６及び３８～４２の配列のいずれか１つの配列からなる。

【0107】

本発明のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、プロモーターは肝臓特異的プロモーターである。本発明のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、他の組織及び器官と比較して、肝臓において酵素の実質的に増加した発現を媒介する。肝臓特異的プロモーターの非限定的な例としては、例えば、アルブミンプロモーター（Ａｌｂ）、ヒトα－１アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーター、チロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター、アポリポタンパク質Ｅ肝制御領域プロモーター、アポリポタンパク質Ａ－ＩＩ（ＡＰＯＡ２）プロモーター、セルピンペプチダーゼ阻害剤、クレードＡ、メンバー１（ＳＥＲＰＩＮＡ１）（ｈＡＡＴ）プロモーター、シトクロムＰ４５０ファミリー３、サブファミリーＡポリペプチド４（ＣＹＰ３Ａ４）プロモーター、マイクロＲＮＡ１２２（ｍｉＲ－１２２）プロモーター、肝臓特異的ＩＧＦ－ＩＩプロモーターＰ１、マウストランスサイレチン（ＭＴＴＲ）プロモーター、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーター、甲状腺ホルモン結合グロブリンプロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）プロモーター、ＨＢＶベーシックコアプロモーター（ＢＣＰ）及びＰｒｅＳ２プロモーター、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）プロモーター、肝制御領域（ＨＣＲ）－ＡｐｏＣＩＩハイブリッドプロモーター、マウスアルブミン遺伝子エンハンサー（Ｅａｌｂ）エレメントと組み合わせたＡＡＴプロモーター、低密度リポタンパク質プロモーター、ピルビン酸キナーゼプロモーター、ホスフェノールピルビン酸カルボキシキナーゼプロモーター、レシチン－コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）プロモーター、アポリポタンパク質Ｈ（ＡｐｏＨ）プロモーター、トランスフェリンプロモーター、トランスサイレチンプロモーター、アルファ－フィブリノーゲン及びベータ－フィブリノーゲンプロモーター、アルファ１－アンチキモトリプシンプロモーター、アルファ２－ＨＳ糖タンパク質プロモーター、ハプトグロビンプロモーター、セルロプラスミンプロモーター、プラスミノーゲンプロモーター、補体タンパク質のプロモーター（例えば、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ８、Ｃ９、補体Ｉ因子、及び補体Ｈ因子）、Ｃ３補体活性化因子及び［アルファ］１－酸性糖タンパク質プロモーターが挙げられる。さらなる組織特異的プロモーターは、組織特異的プロモーターデータベースＴｉＰｒｏＤ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｊ４：ＤＩ０４－ＤＩ０７（２００６)に見出され得る。

【0108】

いくつかの態様において、例えば、肝臓標的化がキャプシドタンパク質によって媒介される場合、ＤＮａｓｅ酵素をコードする核酸を、効率的な全身発現を可能にするプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター、ニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢＡ）、ＥＦ１ａプロモーター）に作動可能に連結することができる。

【0109】

いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーターである。１つの具体的な実施形態において、アンチトリプシンプロモーターは、ヒトα１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、ヒトα１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーターである。いくつかの実施形態において、アンチトリプシンプロモーターは、配列番号１５の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ＡＡＴプロモーターは、配列番号１５の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＡＡＴプロモーターは、配列番号１５の配列からなる。

【0110】

いくつかの態様において、トランスフェクト細胞において目的のタンパク質の発現を生じさせるか又は改善させるために、プロモーター領域をコード配列に作動可能に連結してもよい。そのようなプロモーターは、例えば、肝臓及び／又は神経系におけるタンパク質の効率的かつ安定な生成を可能にするために、遍在する、細胞又は組織特異的、強い、弱い、調節された、キメラのプロモーターなどであり得る。プロモーターは、コードされたタンパク質に相同であるか、又は異種であり得るが、開示された方法で使用するプロモーターは一般にヒト細胞において機能的である。調節プロモーターの例としては、限定するものではないが、Ｔｅｔオン／オフエレメント含有プロモーター、ラパマイシン誘導性プロモーター、タモキシフェン誘導性プロモーター、及びメタロチオネインプロモーターが挙げられる。

【0111】

いくつかの実施形態において、本発明で使用され得るプロモーターは、例えば、肝臓及び／又は神経系に対して組織特異的であるプロモーターを含み得る。肝臓特異的プロモーターの非限定的な例としては、例えば、アルブミンプロモーター（Ａｌｂ）、ヒトアルファ－１アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーター、チロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）、アポリポタンパク質Ｅ肝臓制御領域プロモーター、アポリポタンパク質Ａ－ＩＩ（ＡＰＯＡ２）プロモーター、セルピンペプチダーゼ阻害剤、クレードＡ、メンバー１（ＳＥＲＰＩＮＡ１）（ｈＡＡＴ）プロモーター、シトクロムＰ４５０ファミリー３、サブファミリーＡポリペプチド４（ＣＹＰ３Ａ４）プロモーター、マイクロＲＮＡ１２２（ｍｉＲ－１２２）プロモーター、肝臓特異的ＩＧＦ－ＩＩプロモーターＰ１、マウストランスサイレチン（ＭＴＴＲ）プロモーター、及びアルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーターが挙げられる。神経系特異的プロモーターの非限定的な例としては、例えば、ミクログリア特異的プロモーター（例えば、Ｆ４／８０、ＣＤ６８、ＴＭＥＭ１１９、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＭＶ、Ｉｂａ１）、骨髄特異的プロモーター（例えば、ＴＴＲ、ＣＤ１１ｂ、ｃ－ｆｅｓ）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、ＣＭＶ、ＮＳＥ、シナプシン［ＳｙｎＩ、ＳｙｎＩＩ］、ＣａｍＫＩＩ、α－ＣａＭＫＩＩ、ＶＧＬＵＴ１）、及び他の神経細胞及びグリア細胞（例えば、乏突起膠細胞星細胞）タイプ特異的プロモーター（例えば、ＧＦＡＰ）が挙げられる。腸特異的プロモーターの非限定的な例としては、ＭＵＣ２、ビリン、Ｔ３ｂ、ＣＢ／ＣＭＶ、ＧＦＡＰ、ｍｉＣＭＶ、ＣＭＶ＋Ｉ、ｔｅｔＯ－ＣＭＶ、及びβ－アクチン－ＣＭＶが挙げられる。

【0112】

いくつかの実施形態において、本発明で使用され得るプロモーターは、ユビキタスプロモーターを含み得る。ユビキタスプロモーターの非限定的な例としては、例えば、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーターなどのウイルスプロモーター、及び細胞プロモーター、例えば、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ＣＭＶＥ／ＣＡＧプロモーター系、及びβ－アクチンプロモーターが挙げられる。

【0113】

ＤＮａｓｅ酵素の投与
一態様において、本発明は、それを必要とする対象のがんを処置する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞とを対象に投与することを含む方法を提供する。

【0114】

関連する態様において、本発明は、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞とを対象に投与することを含み、前記デオキシリボヌクレアーゼ酵素は、腫瘍組織における免疫抑制タンパク質の発現を低下させ、及び／又は腫瘍組織内のキメラ抗原受容体若しくはＴ細胞受容体を含む細胞の含量を増加させるのに有効である方法を提供する。免疫抑制タンパク質の非限定的な例としては、例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＭＨＣが挙げられる。

【0115】

本発明の方法によるＤＮａｓｅ酵素の投与は、全身投与及び疾患の部位（例えば、原発性腫瘍）への直接投与を含む任意の適切な経路によって行うことができる。有用な投与経路の具体的で非限定的な例としては、静脈内（ＩＶ）、皮下（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、及び筋肉内が挙げられる。

【0116】

上記のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、注射を介して投与される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、静脈内注射を介して投与される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、本明細書に開示されるＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の注入に続いて静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、本明細書に開示されるＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の注入前に静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、本明細書に開示されるＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の注入と共に静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の注入後少なくとも１４日間静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の注入後少なくとも１６日間静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の注入前、それと一緒に又は注入後少なくとも３日間静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の注入後少なくとも７日間静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の注入前少なくとも７日間静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、ＣＡＲ発現細胞又はＴＣＲ発現細胞の注入前又は注入後少なくとも３日間静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、少なくとも１４日間静脈内注射される。

【0117】

本発明の方法において有用なＤＮａｓｅ用量は、ＣＡＲ／ＴＣＲ療法の種類、患者の病歴及びＤＮａｓｅに対する応答、並びに主治医の裁量に依存する。有用な投与量範囲の非限定的な例としては、０.５～１００ｍｇ／ｋｇ／日又は１０００～２０００００ＫＵ／ｋｇ／日、好ましくは０.５～５０ｍｇ／ｋｇ／日又は１０００～１０００００クニッツ単位（ＫＵ）／ｋｇ／日、より好ましくは１.５～５０ｍｇ／ｋｇ／日又は３０００～１０００００ＫＵ／ｋｇ／日、最も好ましくは１０～５０ｍｇ／ｋｇ／日又は２００００～１０００００ＫＵ／ｋｇ／日が挙げられる。

【0118】

いくつかの態様において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、２５０μｇ／ｋｇ／日で静脈内注射される。いくつかの実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、２５０μｇ／ｋｇ／日で少なくとも１４日間静脈内注射される。

【0119】

いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４ｖ６、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ｃ－Ｍｅｔ（肝細胞増殖因子受容体）、ＥＧＦＲ（上皮成長因子）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（ＩＩＩ型バリアント上皮成長因子）、ＥＧＦＲＢ３、Ｅｐｃａｍ（上皮細胞接着分子）、ＥｐｈＡ２（エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２）、胎児アセチルコリン受容体、ＦＬＴ３、ＧＤ２（ガングリオシドＧＤ２）、ＧＰＣ３（グリピカン－３）、ＧＵＣＹ２Ｃ（グアニリルシクラーゼＣ）、ＨＥＲ１（ヒト上皮成長因子受容体１）、ＨＥＲ２（ヒト上皮成長因子受容体２）、ＩＣＡＭ－１（細胞間接着分子１）、ＩＬ３Ｒ－アルファ、ＩＬ１３Ｒα２（インターロイキン１３受容体α２）、ＩＬ１１Ｒα（インターロイキン１１受容体α）、Ｋｒａｓ（Ｋｒｉｓｔｅｎラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ）Ｋｒａｓ Ｇ１２Ｄ、Ｌ１ＣＡＭ（Ｌ１－細胞接着分子）、ＭＡＧＥ、ＭＥＴ、メソテリン、ＭＵＣ（ムチン１）、ＭＵＣ１６エクト（ムチン１６）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ）、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１及びＷＴ－１（ウィルムス腫瘍１）から選択される１以上の抗原に特異的に結合することが可能な固形腫瘍関連標的抗原結合ドメインを含む。

【0120】

本明細書で使用される場合、「有効量」は、臨床的に定義された障害を有する哺乳動物を処置するのに適した用量を含む。

【0121】

「類似体」、「バリアント」又は「誘導体」は、天然の分子に対して、構造が実質的に類似し、同じ生物学的活性を有するが、場合により異なる程度の活性を有する化合物である。例えば、ポリペプチドバリアントは、実質的に類似の構造を共有し、参照ポリペプチドと同じ生物学的活性を有するポリペプチドを指す。バリアント又は類似体は、（ｉ）ポリペプチドの１以上の末端及び／若しくは天然ポリペプチド配列の１以上の内部領域（例えば、断片）における１以上のアミノ酸残基の欠失、（ｉｉ）ポリペプチドの１以上の末端における１以上のアミノ酸の挿入若しくは付加（典型的には「付加」若しくは「融合」）及び／又は天然に存在するポリペプチド配列の１以上の内部領域における１以上のアミノ酸の挿入若しくは付加（典型的には「挿入」）あるいは（ｉｉｉ）天然に存在するポリペプチド配列における１以上のアミノ酸の他のアミノ酸への置換を伴う１以上の変異に基づいて、類似体が由来する天然に存在するポリペプチドと比較してそのアミノ酸配列の組成が異なる。例として、「誘導体」とは、例えば化学的に修飾されている参照ポリペプチドと同じ又は実質的に類似の構造を共有するポリペプチドを指す。

【0122】

バリアント又は類似体ポリペプチドは、１以上のアミノ酸残基が、本発明のタンパク質アミノ酸配列に付加される挿入バリアントを含む。挿入は、タンパク質のいずれか又は両方の末端に位置してもよく、及び／又はタンパク質アミノ酸配列の内部領域内に位置してもよい。いずれか又は両方の末端にさらなる残基を有する挿入バリアントは、例えば、融合タンパク質及びアミノ酸タグ又は他のアミノ酸標識を含むタンパク質を含む。一態様において、タンパク質分子は、場合により、特に、分子が、例えば酵母、昆虫細胞又は大腸菌などの細菌細胞において組換え発現される場合に、Ｎ末端にＭｅｔを含む。

【0123】

欠失バリアントにおいて、本明細書に記載のタンパク質又はポリペプチド中の１以上のアミノ酸残基が除去される。欠失は、タンパク質若しくはポリペプチドの一方又は両方の末端で、及び／又はタンパク質アミノ酸配列内の１以上の残基の除去によって影響を受ける可能性がある。したがって、欠失バリアントには、タンパク質又はポリペプチド配列の断片が含まれる。

【0124】

置換バリアントにおいて、タンパク質又はポリペプチドの１以上のアミノ酸残基が除去され、代替残基で置換される。一態様において、置換は本質的に保存的であり、この種類の保存的置換は当技術分野において周知である。あるいは、本発明は、これも非保存的である置換を包含する。例示的な保存的置換は、参照により本明細書に組み込まれるＬｅｈｎｉｎｇｅｒ，［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２版；Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５），ｐｐ．７１－７７］に記載されている。

【0125】

デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、経口、局所、経皮、非経口、吸入スプレーにより、膣内、直腸内、又は頭蓋内注入によって投与され得る。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、大槽内注射、又は注入の技術を含む。静脈内、皮内、筋肉内、乳腺内、腹腔内、髄腔内、眼球後、肺内注射及び又は特定の部位への外科的移植による投与も同様に企図される。一般に、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、基本的に発熱物質、並びにレシピエントに有害であり得る他の不純物を含まない。

【0126】

デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の単回投与又は複数回投与は、処置する医師によって選択される用量レベル及びパターンで行うことができる。がんの防止又は処置のために、適切な投与量は、上記のような処置される疾患の種類、がんの重篤度及び経過、薬物が防止目的又は処置目的で投与されるかどうか、以前の処置、患者の病歴及び薬物に対する応答、並びに主治医の裁量に依存する。

【0127】

本発明はまた、薬学的に許容される担体、希釈剤、塩、緩衝液、又は賦形剤を含む、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞に関する。医薬組成物は、臨床的に定義された障害を処置するために使用することができる。本発明の医薬組成物は、溶液又は凍結乾燥物であり得る。医薬組成物の溶液は、任意の適切な凍結乾燥プロセスに供され得る。

【0128】

この実施形態の他の態様において、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、がんの重篤度を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％低減する。この実施形態のさらに他の態様において、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質は、腫瘍の大きさを、例えば、約５％～約１００％、約１０％～約１００％、約２０％～約１００％、約３０％～約１００％、約４０％～約１００％、約５０％～約１００％、約６０％～約１００％、約７０％～約１００％、約８０％～約１００％、約１０％～約９０％、約２０％～約９０％、約３０～約９０％、約４０％～約９０％、約５０％～約９０％、約６０％～約９０％、約７０％～約９０％、約１０％～約８０％、約２０％～約８０％、約３０％～約８０％、約４０％～約８０％、約５０％～約８０％、又は約６０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約７０％、約３０％～約７０％、約４０％～約７０％、又は約５０％～約７０％低減する。

【0129】

この実施形態の態様において、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、例えば、少なくとも２５μｇ／ｋｇ、少なくとも５０μｇ／ｋｇ、少なくとも７５μｇ／ｋｇ、少なくとも１００μｇ／ｋｇ、少なくとも１２５μｇ／ｋｇ、少なくとも１５０μｇ／ｋｇ、少なくとも１７５μｇ／ｋｇ、少なくとも２００μｇ／ｋｇ、少なくとも２２５μｇ／ｋｇ、少なくとも２５０μｇ／ｋｇ、少なくとも２７５μｇ／ｋｇ、少なくとも３００μｇ／ｋｇ、少なくとも３２５μｇ／ｋｇ、少なくとも３５０μｇ／ｋｇ、少なくとも３７５μｇ／ｋｇ、少なくとも４００μｇ／ｋｇ、少なくとも４２５μｇ／ｋｇ、少なくとも４５０μｇ／ｋｇ、少なくとも４７５μｇ／ｋｇ、少なくとも５００μｇ／ｋｇ、少なくとも５２５μｇ／ｋｇ、少なくとも５５０μｇ／ｋｇ、少なくとも５７５μｇ／ｋｇ、少なくとも６００μｇ／ｋｇ、少なくとも６２５μｇ／ｋｇ、少なくとも６５０μｇ／ｋｇ、少なくとも６７５μｇ／ｋｇ、少なくとも７００μｇ／ｋｇ、少なくとも７２５μｇ／ｋｇ、少なくとも７５０μｇ／ｋｇ、少なくとも７７５μｇ／ｋｇ、少なくとも８００μｇ／ｋｇ、少なくとも８２５μｇ／ｋｇ、少なくとも８５０μｇ／ｋｇ、少なくとも８７５μｇ／ｋｇ、少なくとも９００μｇ／ｋｇ、少なくとも９２５μｇ／ｋｇ、少なくとも９５０μｇ／ｋｇ、少なくとも９７５μｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．２５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１１．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１２．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１３．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１４．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１６．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１７．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１８．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１９．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２１．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２２．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２３．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２４．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２６．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２７．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２８．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２９．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３５ｍｇ／ｋｇ、３６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、４１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４６ｍｇ／ｋｇ、少なくともｍｇ／ｋｇ、少なくとも４８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４９ｍｇ／ｋｇ少なくとも５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｇ／ｋｇ、少なくとも２ｇ／ｋｇ、少なくとも３ｇ／ｋｇ、少なくとも４ｇ／ｋｇ、少なくとも５ｇ／ｋｇ、少なくとも６ｇ／ｋｇ、少なくとも７ｇ／ｋｇ、少なくとも８ｇ／ｋｇ、少なくとも９ｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｇ／ｋｇ、少なくとも１５ｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｇ／ｋｇ、少なくとも５０ｇ／ｋｇ、少なくとも１００ｇ／ｋｇの用量であり得る。

【0130】

この実施形態の態様において、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、例えば、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２５μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１７５μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約２２５μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ／ｋｇ、約２７５μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２５μｇ／ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約３７５μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２５μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約４７５μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２５μｇ／ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇ、約５７５μｇ／ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２５μｇ／ｋｇ、約６５０μｇ／ｋｇ、約６７５μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２５μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約７７５μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２５μｇ／ｋｇ、約８５０μｇ／ｋｇ、約８７５μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２５μｇ／ｋｇ、約９５０μｇ／ｋｇ、約９７５μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．２５ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１０．５ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１１．５ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１２．５ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１３．５ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１４．５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１５．５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約１６．５ｍｇ／ｋｇ、約１７ｍｇ／ｋｇ、約１７．５ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、約１８．５ｍｇ／ｋｇ、約１９ｍｇ／ｋｇ、約１９．５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２０．５ｍｇ／ｋｇ、約２１ｍｇ／ｋｇ、約２１．５ｍｇ／ｋｇ、約２２ｍｇ／ｋｇ、約２２．５ｍｇ／ｋｇ、約２３ｍｇ／ｋｇ、約２３．５ｍｇ／ｋｇ、約２４ｍｇ／ｋｇ、約２４．５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約２５．５ｍｇ／ｋｇ、約２６ｍｇ／ｋｇ、約２６．５ｍｇ／ｋｇ、約２７ｍｇ／ｋｇ、約２７．５ｍｇ／ｋｇ、約２８ｍｇ／ｋｇ、約２８．５ｍｇ／ｋｇ、約２９ｍｇ／ｋｇ、約２９．５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３１ｍｇ／ｋｇ、約３２ｍｇ／ｋｇ、約３３ｍｇ／ｋｇ、約３４ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、３６ｍｇ／ｋｇ、約３７ｍｇ／ｋｇ、約３８ｍｇ／ｋｇ、約３９ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、４１ｍｇ／ｋｇ、約４２ｍｇ／ｋｇ、約４３ｍｇ／ｋｇ約４４ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約４６ｍｇ／ｋｇ、約ｍｇ／ｋｇ、約４８ｍｇ／ｋｇ、約４９ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５１ｍｇ／ｋｇ、約５２ｍｇ／ｋｇ、約５３ｍｇ／ｋｇ、約５４ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約５６ｍｇ／ｋｇ、約５７ｍｇ／ｋｇ、約５８ｍｇ／ｋｇ、約５９ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６１ｍｇ／ｋｇ、約６２ｍｇ／ｋｇ、約６３ｍｇ／ｋｇ、約６４ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約６６ｍｇ／ｋｇ、約６７ｍｇ／ｋｇ、約６８ｍｇ／ｋｇ、約６９ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７１ｍｇ／ｋｇ、約７２ｍｇ／ｋｇ、約７３ｍｇ／ｋｇ、約７４ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約７６ｍｇ／ｋｇ、約７７ｍｇ／ｋｇ、約７８ｍｇ／ｋｇ、約７９ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８１ｍｇ／ｋｇ、約８２ｍｇ／ｋｇ、約８３ｍｇ／ｋｇ、約８４ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約８６ｍｇ／ｋｇ、約８７ｍｇ／ｋｇ、約８８ｍｇ／ｋｇ、約８９ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９１ｍｇ／ｋｇ、約９２ｍｇ／ｋｇ、約９３ｍｇ／ｋｇ、約９４ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約９６ｍｇ／ｋｇ、約９７ｍｇ／ｋｇ、約９８ｍｇ／ｋｇ、約９９ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、約３００ｍｇ／ｋｇ、約３５０ｍｇ／ｋｇ、約４００ｍｇ／ｋｇ、約４５０ｍｇ／ｋｇ、約５００ｍｇ／ｋｇ、約５５０ｍｇ／ｋｇ、約６００ｍｇ／ｋｇ、約６５０ｍｇ／ｋｇ、約７００ｍｇ／ｋｇ、約７５０ｍｇ／ｋｇ、約８００ｍｇ／ｋｇ、約８５０ｍｇ／ｋｇ、約９００ｍｇ／ｋｇ、約９５０ｍｇ／ｋｇ、約１ｇ／ｋｇ、約２ｇ／ｋｇ、約３ｇ／ｋｇ、約４ｇ／ｋｇ、約５ｇ／ｋｇ、約６ｇ／ｋｇ、約７ｇ／ｋｇ、約８ｇ／ｋｇ、約９ｇ／ｋｇ、約１０ｇ／ｋｇ、約１５ｇ／ｋｇ、約２０ｇ／ｋｇ、約２５ｇ／ｋｇ、約５０ｇ／ｋｇ、約１００ｇ／ｋｇの用量であり得る。

【0131】

この実施形態の態様において、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、例えば、２５μｇ／ｋｇ以下、５０μｇ／ｋｇ以下、７５μｇ／ｋｇ以下、１００μｇ／ｋｇ以下、１２５μｇ／ｋｇ以下、１５０μｇ／ｋｇ以下、１７５μｇ／ｋｇ以下、２００μｇ／ｋｇ以下、２２５μｇ／ｋｇ以下、２５０μｇ／ｋｇ以下、２７５μｇ／ｋｇ以下、３００μｇ／ｋｇ以下、３２５μｇ／ｋｇ以下、３５０μｇ／ｋｇ以下、３７５μｇ／ｋｇ以下、４００μｇ／ｋｇ以下、４２５μｇ／ｋｇ以下、４５０μｇ／ｋｇ以下、４７５μｇ／ｋｇ以下、５００μｇ／ｋｇ以下、５２５μｇ／ｋｇ以下、５５０μｇ／ｋｇ以下、５７５μｇ／ｋｇ以下、６００μｇ／ｋｇ以下、６２５μｇ／ｋｇ以下、６５０μｇ／ｋｇ以下、６７５μｇ／ｋｇ以下、７００μｇ／ｋｇ以下、７２５μｇ／ｋｇ以下、７５０μｇ／ｋｇ以下、７７５μｇ／ｋｇ以下、８００μｇ／ｋｇ以下、８２５μｇ／ｋｇ以下、８５０μｇ／ｋｇ以下、８７５μｇ／ｋｇ以下、９００μｇ／ｋｇ以下、９２５μｇ／ｋｇ以下、９５０μｇ／ｋｇ以下、９７５μｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下、１．２５ｍｇ／ｋｇ以下、１．５ｍｇ／ｋｇ以下、２ｍｇ／ｋｇ以下、２．５ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、３．５ｍｇ／ｋｇ以下、４ｍｇ／ｋｇ以下、４．５ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、５．５ｍｇ／ｋｇ以下、６ｍｇ／ｋｇ以下、６．５ｍｇ／ｋｇ以下、７ｍｇ／ｋｇ以下、７．５ｍｇ／ｋｇ以下、８ｍｇ／ｋｇ以下、８．５ｍｇ／ｋｇ以下、９ｍｇ／ｋｇ以下、９．５ｍｇ／ｋｇ以下、１０ｍｇ／ｋｇ以下、１０．５ｍｇ／ｋｇ以下、１１ｍｇ／ｋｇ以下、１１．５ｍｇ／ｋｇ以下、１２ｍｇ／ｋｇ以下、１２．５ｍｇ／ｋｇ以下、１３ｍｇ／ｋｇ以下、１３．５ｍｇ／ｋｇ以下、１４ｍｇ／ｋｇ以下、１４．５ｍｇ／ｋｇ以下、１５ｍｇ／ｋｇ以下、１５．５ｍｇ／ｋｇ以下、１６ｍｇ／ｋｇ以下、１６．５ｍｇ／ｋｇ以下、１７ｍｇ／ｋｇ以下、１７．５ｍｇ／ｋｇ以下、１８ｍｇ／ｋｇ以下、１８．５ｍｇ／ｋｇ以下、１９ｍｇ／ｋｇ以下、１９．５ｍｇ／ｋｇ以下、２０ｍｇ／ｋｇ以下、２０．５ｍｇ／ｋｇ以下、２１ｍｇ／ｋｇ以下、２１．５ｍｇ／ｋｇ以下、２２ｍｇ／ｋｇ以下、２２．５ｍｇ／ｋｇ以下、２３ｍｇ／ｋｇ以下、２３．５ｍｇ／ｋｇ以下、２４ｍｇ／ｋｇ以下、２４．５ｍｇ／ｋｇ以下、２５ｍｇ／ｋｇ以下、２５．５ｍｇ／ｋｇ以下、２６ｍｇ／ｋｇ以下、２６．５ｍｇ／ｋｇ以下、２７ｍｇ／ｋｇ以下、２７．５ｍｇ／ｋｇ以下、２８ｍｇ／ｋｇ以下、２８．５ｍｇ／ｋｇ以下、２９ｍｇ／ｋｇ以下、２９．５ｍｇ／ｋｇ以下、３０ｍｇ／ｋｇ以下、３１ｍｇ／ｋｇ以下、３２ｍｇ／ｋｇ以下、３３ｍｇ／ｋｇ以下、３４ｍｇ／ｋｇ以下、３５ｍｇ／ｋｇ以下、３６ｍｇ／ｋｇ、３７ｍｇ／ｋｇ以下、３８ｍｇ／ｋｇ以下、３９ｍｇ／ｋｇ以下、４０ｍｇ／ｋｇ以下、４１ｍｇ／ｋｇ、４２ｍｇ／ｋｇ以下、４３ｍｇ／ｋｇ以下、４４ｍｇ／ｋｇ以下、４５ｍｇ／ｋｇ以下、４６ｍｇ／ｋｇ以下、ｍｇ／ｋｇ以下、４８ｍｇ／ｋｇ以下、４９ｍｇ／ｋｇ以下、５０ｍｇ／ｋｇ以下、５１ｍｇ／ｋｇ以下、５２ｍｇ／ｋｇ以下、５３ｍｇ／ｋｇ以下、５４ｍｇ／ｋｇ以下、５５ｍｇ／ｋｇ以下、５６ｍｇ／ｋｇ以下、５７ｍｇ／ｋｇ以下、５８ｍｇ／ｋｇ以下、５９ｍｇ／ｋｇ以下、６０ｍｇ／ｋｇ以下、６１ｍｇ／ｋｇ以下、６２ｍｇ／ｋｇ以下、６３ｍｇ／ｋｇ以下、６４ｍｇ／ｋｇ以下、６５ｍｇ／ｋｇ以下、６６ｍｇ／ｋｇ以下、６７ｍｇ／ｋｇ以下、６８ｍｇ／ｋｇ以下、６９ｍｇ／ｋｇ以下、７０ｍｇ／ｋｇ以下、７１ｍｇ／ｋｇ以下、７２ｍｇ／ｋｇ以下、７３ｍｇ／ｋｇ以下、７４ｍｇ／ｋｇ以下、７５ｍｇ／ｋｇ以下、７６ｍｇ／ｋｇ以下、７７ｍｇ／ｋｇ以下、７８ｍｇ／ｋｇ以下、７９ｍｇ／ｋｇ以下、８０ｍｇ／ｋｇ以下、８１ｍｇ／ｋｇ、８２ｍｇ／ｋｇ以下、８３ｍｇ／ｋｇ以下、８４ｍｇ／ｋｇ以下、８５ｍｇ／ｋｇ以下、８６ｍｇ／ｋｇ以下、８７ｍｇ／ｋｇ以下、８８ｍｇ／ｋｇ以下、８９ｍｇ／ｋｇ以下、９０ｍｇ／ｋｇ以下、９１ｍｇ／ｋｇ以下、９２ｍｇ／ｋｇ以下、９３ｍｇ／ｋｇ以下、９４ｍｇ／ｋｇ以下、９５ｍｇ／ｋｇ以下、９６ｍｇ／ｋｇ以下、９７ｍｇ／ｋｇ以下、９８ｍｇ／ｋｇ以下、９９ｍｇ／ｋｇ以下、１００ｍｇ／ｋｇ以下、１５０ｍｇ／ｋｇ以下、２００ｍｇ／ｋｇ以下、２５０ｍｇ／ｋｇ以下、３００ｍｇ／ｋｇ以下、３５０ｍｇ／ｋｇ以下、４００ｍｇ／ｋｇ以下、４５０ｍｇ／ｋｇ以下、５００ｍｇ／ｋｇ以下、５５０ｍｇ／ｋｇ以下、６００ｍｇ／ｋｇ以下、６５０ｍｇ／ｋｇ以下、７００ｍｇ／ｋｇ以下、７５０ｍｇ／ｋｇ以下、８００ｍｇ／ｋｇ以下、８５０ｍｇ／ｋｇ以下、９００ｍｇ／ｋｇ以下、９５０ｍｇ／ｋｇ以下、１ｇ／ｋｇ以下、２ｇ／ｋｇ以下、３ｇ／ｋｇ以下、４ｇ／ｋｇ以下、５ｇ／ｋｇ以下、６ｇ／ｋｇ以下、７ｇ／ｋｇ以下、８ｇ／ｋｇ以下、９ｇ／ｋｇ以下、１０ｇ／ｋｇ以下、１５ｇ／ｋｇ以下、２０ｇ／ｋｇ以下、２５ｇ／ｋｇ以下、５０ｇ／ｋｇ以下、１００ｇ／ｋｇ以下の用量であり得る。

【0132】

この実施形態のさらに他の態様において、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、例えば、約１μｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ～約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇ、約２５０μｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ～約１２ｍｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約２５０μｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、又は約１０μｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約７５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ～約６０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ～約７５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ～約６０ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約１２０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ～約６０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ～約７５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、又は約１０ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇの用量範囲であり得る。

【0133】

この実施形態の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、がんと関連する症状を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも１００％低減する。

【0134】

この実施形態の他の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、がんと関連する症状を、例えば、最大１０％、最大１５％、最大２０％、最大２５％、最大３０％、最大３５％、最大４０％、最大４５％、最大５０％、最大５５％、最大６０％、最大６５％、最大７０％、最大７５％、最大８０％、最大８５％、最大９０％、最大９５％又は最大１００％低減する。

【0135】

この実施形態のさらに他の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、がんと関連する症状を、例えば、約１０％～約１００％、約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約２０％～約１００％、約２０％～約９０％、約２０％～約８０％、約２０％～約２０％、約２０％～約６０％、約２０％～約５０％、約２０％～約４０％、約３０％～約１００％、約３０％～約９０％、約３０％～約８０％、約３０％～約７０％、約３０％～約６０％、又は約３０％～約５０％低減する。

【0136】

一実施形態において、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、がんに罹患している個体における疾患の重篤度を、同じ処置を受けていない患者と比較して、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％低減することが可能である。

【0137】

この実施形態の他の態様において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、がんに罹患している個体における疾患の重篤度を、同じ処置を受けていない患者と比較して、例えば、約１０％～約１００％、約２０％～約１００％、約３０％～約１００％、約４０％～約１００％、約５０％～約１００％、約６０％～約１００％、約７０％～約１００％、約８０％～約１００％、約１０％～約９０％、約２０％～約９０％、約３０％～約９０％、約４０％～約９０％、約５０％～約９０％、約６０％～約９０％、約７０％～約９０％、約１０％～約８０％、約２０％～約８０％、約３０％～約８０％、約４０％～約８０％、約５０％～約８０％、又は約６０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約７０％、約３０％～約７０％、約４０％～約７０％、又は約５０％～約７０％低減することが可能である。

【0138】

この実施形態の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、がんと関連する症状を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも１００％低減する。

【0139】

この実施形態の他の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、がんと関連する症状を、例えば、最大１０％、最大１５％、最大２０％、最大２５％、最大３０％、最大３５％、最大４０％、最大４５％、最大５０％、最大５５％、最大６０％、最大６５％、最大７０％、最大７５％、最大８０％、最大８５％、最大９０％、最大９５％又は１００％低減する。

【0140】

この実施形態のさらに他の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、がんと関連する症状を、例えば、約１０％～約１００％、約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約２０％～約１００％、約２０％～約９０％、約２０％～約８０％、約２０％～約２０％、約２０％～約６０％、約２０％～約５０％、約２０％～約４０％、約３０％～約１００％、約３０％～約９０％、約３０％～約８０％、約３０％～約７０％、約３０％～約６０％、又は約３０％～約５０％低減する。

【0141】

一実施形態において、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、がんに罹患している個体における疾患の重篤度を、同じ処置を受けていない患者と比較して、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％低減することが可能である。

【0142】

この実施形態の他の態様において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、がんに罹患している個体における疾患の重篤度を、同じ処置を受けていない患者と比較して、例えば、約１０％～約１００％、約２０％～約１００％、約３０％～約１００％、約４０％～約１００％、約５０％～約１００％、約６０％～約１００％、約７０％～約１００％、約８０％～約１００％、約１０％～約９０％、約２０％～約９０％、約３０％～約９０％、約４０％～約９０％、約５０％～約９０％、約６０％～約９０％、約７０％～約９０％、約１０％～約８０％、約２０％～約８０％、約３０％～約８０％、約４０％～約８０％、約５０％～約８０％、又は約６０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約７０％、約３０％～約７０％、約４０％～約７０％、又は約５０％～約７０％低減することが可能である。

【0143】

さらなる実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質の初回投与後１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１週、２週、３週、４週、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月又はそれ以上ごとに１回以上投与される。

【0144】

さらなる実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント又は類似体並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の初回投与後２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、１週、２週、３週、４週、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月又はそれ以上ごとに１回以上投与される。

【0145】

実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体の投与期間は、１０分間、２０分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0146】

実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、約１０分、約２０分、約３０分、約４５分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0147】

実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体の投与期間は、少なくとも１０分間、少なくとも２０分間、少なくとも３０分間、少なくとも４５分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１１時間、少なくとも１２時間、少なくとも１３時間、少なくとも１４時間、少なくとも１５時間、少なくとも１６時間、少なくとも１７時間、少なくとも１８時間、少なくとも１９時間、少なくとも２０時間、少なくとも２１時間、少なくとも２２時間、少なくとも２３時間、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１１週間、少なくとも１２週間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0148】

実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体の投与期間は、１０分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１１時間以内、１２時間以内、１３時間以内、１４時間以内、１５時間以内、１６時間以内、１７時間以内、１８時間以内、１９時間以内、２０時間以内、２１時間以内、２２時間以内、２３時間以内、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、７日以内、８日以内、９日以内、１０日以内、１１日以内、１２日以内、１３日以内、１４日以内、３週間以内、４週間以内、５週間以内、６週間以内、７週間以内、８週間以内、９週間以内、１０週間以内、１１週間以内、１２週間以内、４ヶ月以内、５ヶ月以内、６ヶ月以内、７ヶ月以内、８ヶ月以内、９ヶ月以内、１０ヶ月以内、１１ヶ月以内、１２ヶ月以内、又はそれ以上の間である。

【0149】

さらなる実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体の投与が停止される期間は、１０分間、２０分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、又はそれ以上の間である。

【0150】

さらなる実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体の投与が停止される期間は、約１０分間、約２０分間、約３０分間、約４５分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0151】

さらなる実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体の投与が停止されるのは、１０分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１１時間以内、１２時間以内、１３時間以内、１４時間以内、１５時間以内、１６時間以内、１７時間以内、１８時間以内、１９時間以内、２０時間以内、２１時間以内、２２時間以内、２３時間以内、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、７日以内、８日以内、９日以内、１０日以内、１１日以内、１２日以内、１３日以内、１４日以内、３週間以内、４週間以内、５週間以内、６週間以内、７週間以内、８週間以内、９週間以内、１０週間以内、１１週間以内、１２週間以内、４ヶ月以内、５ヶ月以内、６ヶ月以内、７ヶ月以内、８ヶ月以内、９ヶ月以内、１０ヶ月以内、１１ヶ月以内、１２ヶ月以内、又はそれ以上の間である。

【0152】

さらなる実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体の投与が停止されるのは、少なくとも１０分間、少なくとも２０分間、少なくとも３０分間、少なくとも４５分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１１時間、少なくとも１２時間、少なくとも１３時間、少なくとも１４時間、少なくとも１５時間、少なくとも１６時間、少なくとも１７時間、少なくとも１８時間、少なくとも１９時間、少なくとも２０時間、少なくとも２１時間、少なくとも２２時間、少なくとも２３時間、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１１週間、少なくとも１２週間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0153】

実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、１０分間、２０分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0154】

実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、約１０分、約２０分、約３０分、約４５分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0155】

実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、少なくとも１０分間、少なくとも２０分間、少なくとも３０分間、少なくとも４５分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１１時間、少なくとも１２時間、少なくとも１３時間、少なくとも１４時間、少なくとも１５時間、少なくとも１６時間、少なくとも１７時間、少なくとも１８時間、少なくとも１９時間、少なくとも２０時間、少なくとも２１時間、少なくとも２２時間、少なくとも２３時間、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１１週間、少なくとも１２週間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0156】

実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、１０分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１１時間以内、１２時間以内、１３時間以内、１４時間以内、１５時間以内、１６時間以内、１７時間以内、１８時間以内、１９時間以内、２０時間以内、２１時間以内、２２時間以内、２３時間以内、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、７日以内、８日以内、９日以内、１０日以内、１１日以内、１２日以内、１３日以内、１４日以内、３週間以内、４週間以内、５週間以内、６週間以内、７週間以内、８週間以内、９週間以内、１０週間以内、１１週間以内、１２週間以内、４ヶ月以内、５ヶ月以内、６ヶ月以内、７ヶ月以内、８ヶ月以内、９ヶ月以内、１０ヶ月以内、１１ヶ月以内、１２ヶ月以内、又はそれ以上の間である。

【0157】

さらなる実施形態において、投与が停止される間の、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、１０分間、２０分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0158】

実施形態において、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、１０分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１１時間以内、１２時間以内、１３時間以内、１４時間以内、１５時間以内、１６時間以内、１７時間以内、１８時間以内、１９時間以内、２０時間以内、２１時間以内、２２時間以内、２３時間以内、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、７日以内、８日以内、９日以内、１０日以内、１１日以内、１２日以内、１３日以内、１４日以内、３週間以内、４週間以内、５週間以内、６週間以内、７週間以内、８週間以内、９週間以内、１０週間以内、１１週間以内、１２週間以内、４ヶ月以内、５ヶ月以内、６ヶ月以内、７ヶ月以内、８ヶ月以内、９ヶ月以内、１０ヶ月以内、１１ヶ月以内、１２ヶ月以内、又はそれ以上の間である。

【0159】

デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与が停止される期間は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0160】

デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、少なくとも１０分間、少なくとも２０分間、少なくとも３０分間、少なくとも４５分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１１時間、少なくとも１２時間、少なくとも１３時間、少なくとも１４時間、少なくとも１５時間、少なくとも１６時間、少なくとも１７時間、少なくとも１８時間、少なくとも１９時間、少なくとも２０時間、少なくとも２１時間、少なくとも２２時間、少なくとも２３時間、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１１週間、少なくとも１２週間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0161】

さらなる実施形態において、投与が停止される間の、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、１０分間、２０分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0162】

さらなる実施形態において、投与が停止される間の、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、少なくとも１０分間、少なくとも２０分間、少なくとも３０分間、少なくとも４５分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１１時間、少なくとも１２時間、少なくとも１３時間、少なくとも１４時間、少なくとも１５時間、少なくとも１６時間、少なくとも１７時間、少なくとも１８時間、少なくとも１９時間、少なくとも２０時間、少なくとも２１時間、少なくとも２２時間、少なくとも２３時間、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１１週間、少なくとも１２週間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0163】

さらなる実施形態において、投与が停止される間の、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、１０分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１１時間以内、１２時間以内、１３時間以内、１４時間以内、１５時間以内、１６時間以内、１７時間以内、１８時間以内、１９時間以内、２０時間以内、２１時間以内、２２時間以内、２３時間以内、１日以内、２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内、７日以内、８日以内、９日以内、１０日以内、１１日以内、１２日以内、１３日以内、１４日以内、３週間以内、４週間以内、５週間以内、６週間以内、７週間以内、８週間以内、９週間以内、１０週間以内、１１週間以内、１２週間以内、４ヶ月以内、５ヶ月以内、６ヶ月以内、７ヶ月以内、８ヶ月以内、９ヶ月以内、１０ヶ月以内、１１ヶ月以内、１２ヶ月以内、又はそれ以上の間である。

【0164】

さらなる実施形態において、投与が停止される間の、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体並びに／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞の投与期間は、約１０分、約２０分、約３０分、約４５分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、又はそれ以上の間である。

【0165】

この実施形態の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、個体のがんの重篤度を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも１００％低減又は維持する。この実施形態の他の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、個体のがんの重篤度を、例えば、最大１０％、最大１５％、最大２０％、最大２５％、最大３０％、最大３５％、最大４０％、最大４５％、最大５０％、最大５５％、最大６０％、最大６５％、最大７０％、最大７５％、最大８０％、最大８５％、最大９０％、最大９５％若しくは最大１００％低減又は維持する。この実施形態のさらに他の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体は、個体の疾患の重篤度を、例えば、約１０％～約１００％、約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約２０％～約１００％、約２０％～約９０％、約２０％～約８０％、約２０％～約２０％、約２０％～約６０％、約２０％～約５０％、約２０％～約４０％、約３０％～約１００％、約３０％～約９０％、約３０％～約８０％、約３０％～約７０％、約３０％～約６０％、又は約３０％～約５０％低減又は維持する。

【0166】

この実施形態の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、個体のがんの重篤度を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも１００％低減又は維持する。この実施形態の他の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、個体のがんの重篤度を、例えば、最大１０％、最大１５％、最大２０％、最大２５％、最大３０％、最大３５％、最大４０％、最大４５％、最大５０％、最大５５％、最大６０％、最大６５％、最大７０％、最大７５％、最大８０％、最大８５％、最大９０％、最大９５％若しくは最大１００％低減又は維持する。この実施形態のさらに他の態様において、本明細書に開示される治療有効量のデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞は、個体の疾患の重篤度を、例えば、約１０％～約１００％、約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約２０％～約１００％、約２０％～約９０％、約２０％～約８０％、約２０％～約２０％、約２０％～約６０％、約２０％～約５０％、約２０％～約４０％、約３０％～約１００％、約３０％～約９０％、約３０％～約８０％、約３０％～約７０％、約３０％～約６０％、若しくは約３０％～約５０％低減又は維持する。

【0167】

デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞が個体に投与される。典型的には、個体はヒトであるが、飼いならされているかどうかにかかわらず、イヌ、ネコ、トリ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、爬虫類及び他の動物を含むがこれらに限定されない動物であり得る。典型的には、処置の候補者である任意の個体は、その疾患が良性であろうと悪性であろうと、その個体が罹患している疾患に対する何らかの形態の療法の候補者である。がんに関しては、最も一般的な種類のがんには、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）、腎臓がん（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、白血病、肺がん、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、胃がん及び甲状腺がんが含まれるが、これらに限定されない。典型的には、術前の評価には、手順の全ての関連するリスクと利点を開示する十分なインフォームドコンセントに加えて、定期的な病歴と身体検査が含まれる。

【0168】

実施形態において、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質、又はそのような治療用化合物を含む組成物は、液体製剤にすることができる。実施形態において、経腸投与又は非経口投与に適する液体製剤には、限定するものではないが、溶液、シロップ剤、エリキシル剤、分散液、エマルジョン、及び懸濁液が含まれる。実施形態において、そのような投与が意図される本明細書に開示される治療用化合物又は組成物は、限定するものではないが、医薬組成物の製造に関して当技術分野で公知の任意の方法に従って調製され得る。実施形態において、そのような液体剤形において、本明細書で開示される治療用化合物又は組成物は、限定するものではないが、（ａ）適切な水性及び非水性担体、（ｂ）希釈剤、（ｃ）溶媒、例えば、限定するものではないが、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、植物油、例えば、限定するものではないが、菜種油及びオリーブ油、並びに注入可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチル；並びに／又は流動性剤、例えば、限定されないが、界面活性剤又はレシチンのようなコーティング剤と混合され得る。分散液及び懸濁液の場合には、流動性は、特定の粒子サイズを維持することによって制御することもできる。実施形態において、液体製剤において、本明細書で開示される治療用化合物の治療有効量は、典型的には、約０．０００１％（ｗ／ｖ）～約９０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約８０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約７０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約６０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約５０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約４０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）又は約０．０１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約５０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）約０．０１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）又は約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）であり得る。

【0169】

実施形態において、液体懸濁液は、限定するものではないが、水性懸濁液の製造に適する賦形剤と混合して、本明細書に開示されるデオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質を含むがこれらに限定されない治療用化合物を懸濁することによって製剤化され得る。実施形態において、そのような賦形剤は、懸濁化剤、例えば、限定するものではないが、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、天然ガム、寒天、トラガカントガム及びアカシアガムであり；分散剤又は湿潤剤は、天然のホスファチド、例えば、レシチン、又はアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、限定するものではないが、ポリオキシエチレンステアレート、又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、限定するものではないが、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、又はエチレンオキシドと脂肪酸、例えば、限定するものではないが、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートから誘導される部分エステルとの縮合生成物であり得る。

【0170】

追加の態様として、本発明は、対象への投与のためのその使用を容易にするように包装された本発明の組成物を含むキットを含む。一実施形態において、そのようなキットは、方法の実施における化合物又は組成物の使用を説明する、容器に貼付されるか又はパッケージに含まれるラベルと共に密封されたボトル又は入れ物などの容器に包装される、本明細書に記載の化合物又は組成物（例えば、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質及び／又はその誘導体、バリアント若しくは類似体、並びにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞を含む組成物）を含む。一実施形態において、キットは、デオキシリボヌクレアーゼ酵素タンパク質を含む組成物を有する第１の容器と、第１の容器内の組成物用の生理学的に許容される再構成溶液を有する第２の容器とを含有する。一態様において、化合物又は組成物は、単位剤形で包装される。キットは、特定の投与経路に従って組成物を投与するのに適するデバイスをさらに含み得る。好ましくは、キットは、治療用タンパク質又はペプチド組成物の使用を説明するラベルを含有する。

【0171】

ある実施形態において、ＤＮａｓｅ酵素は、薬学的に許容される担体又は賦形剤と共に医薬組成物中に製剤化される。

【0172】

本発明の方法で使用される製剤は、都合よく単位剤形で提示されてもよく、当技術分野で公知の方法によって調製され得る。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置される宿主及び特定の投与様式に応じて変化する。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般に、治療効果をもたらす化合物の量である。

【0173】

一般に、製剤は、液体担体、又は微粉化された固体担体、又はその両方を用いて調製することができ、次いで、必要に応じて、生成物を成形することができる。

【0174】

非経口投与に適する医薬組成物は、１以上の薬学的に許容される無菌で等張性の水溶液又は非水溶液、分散液、懸濁液若しくはエマルジョン、又は使用直前に滅菌注入溶液若しくは分散液に再構成され得る滅菌粉末と組み合わせて、１種以上の活性成分（ＤＮａｓｅ及び、場合により、別の化合物［例えば、抗がん化合物］）を含んでよく、それには、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、製剤を意図したレシピエントの血液と等張にする溶質、又は懸濁剤又は増粘剤が含まれ得る。本発明の医薬組成物に使用され得る適切な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、並びにそれらの適切な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、及び注入可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合に必要な粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。

【0175】

これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤を含有することができる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって確実にすることができる。等張化剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを組成物中に含めることも望ましい場合がある。加えて、注入可能な医薬形態の長期吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤の包含によってもたらされ得る。

【0176】

注入可能なデポー形態は、ポリラクチド－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に１種以上の活性成分のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製することができる。ポリマーに対する活性成分の比率、及び使用される特定のポリマーの性質に応じて、活性成分の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（酸無水物）が挙げられる。デポー注入用製剤はまた、身体組織に適合するリポソーム又はマイクロエマルジョン中に活性成分を封入することによって調製される。

【0177】

経口投与のための製剤は、カプセル、カシェ、丸剤、錠剤、粉末、顆粒、又は水性若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液として（例えば、うがい薬として、飲み込む組成物として、若しくは浣腸として）、又は水中油型若しくは油中水型液体エマルジョンとしてなどの、各々が所定量の１種以上の活性成分を含有する形態であり得る。

【0178】

経口投与のための固体剤形（カプセル、錠剤、丸剤、糖衣錠、粉末、顆粒など）において、１種以上の活性成分を、１種以上の薬学的に許容される担体、例えば、クエン酸ナトリウム若しくはリン酸二カルシウム、及び／又は以下のもの:（１）充填剤又は増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び／又はケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及び／又はアカシア；（３）保湿剤、例えば、グリセリン；（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム；（５）溶液遅延剤、例えば、パラフィン；（６）吸収促進剤、例えば、第４級アンモニウム化合物；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール；（８）吸収剤、例えば、カオリン及びベントナイト粘土；（９）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの混合物；並びに（１０）着色剤のいずれかと混合することができる。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合には、医薬組成物は緩衝剤も含み得る。同様の種類の固体組成物も、ラクトース又は乳糖、並びに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として使用され得る。

【0179】

懸濁液は、１種以上の活性成分に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天及びトラガカント、並びにそれらの混合物を含有することができる。

【0180】

粉末及びスプレーは、１種以上の活性成分に加えて、賦形剤、例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、及びポリアミド粉末、又はこれらの物質の混合物を含有することができる。スプレーは、通例の推進剤、例えば、クロロフルオロ炭化水素、並びに揮発性の非置換炭化水素、例えば、ブタン及びプロパンをさらに含有することができる。

【0181】

がん及び他の処置
一態様において、本発明は、それを必要とする対象のがんを処置する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞とを対象に投与することを含む方法を提供する。

【0182】

関連する態様において、本発明は、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、デオキシリボヌクレアーゼ酵素と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む少なくとも１つの細胞とを対象に投与することを含み、前記デオキシリボヌクレアーゼ酵素は、腫瘍組織における免疫抑制タンパク質の発現を低下させ、及び／又は腫瘍組織内のキメラ抗原受容体又はＴ細胞受容体を含む細胞の含有量を増加させるのに有効である方法を提供する。

【0183】

本発明の方法は、広範囲のがんに罹患している対象において使用することができる。関連するがんの非限定的な例としては、例えば、乳がん、前立腺がん、多発性骨髄腫、移行上皮癌、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、腎臓がん、甲状腺がん、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫）、頭頸部がん、食道がん、胃がん、大腸がん、腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、膵臓がん、肝臓がん、胆管がん、胆嚢がん、卵巣がん、子宮体がん、膣がん、子宮頸がん、膀胱がん、神経芽細胞腫、肉腫、骨肉腫、悪性黒色腫、扁平上皮がん、原発性骨がん（例えば、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、アダマンチノーマ、巨細胞腫、及び脊索腫）と続発性（転移性）骨がんの両方を含む骨がん、軟部組織肉腫、基底細胞癌、血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、粘液肉腫、脂肪肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、精巣がん、子宮がん、消化器がん、中皮腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、気管支原性癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、上皮癌、神経膠腫、膠芽腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経鞘腫、乏突起膠腫、髄膜腫、網膜芽細胞腫、髄様癌、胸腺腫、肉腫が挙げられる。

【0184】

本発明のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、対象はヒトである。

【0185】

実施例
本発明はまた、以下の実施例によって説明され、実証される。しかし、本明細書中の他所でのこれら及び他の実施例の使用は例示にすぎず、本発明又は任意の例示された用語の範囲及び意味を決して制限しない。同様に、本発明は、本明細書に記載の任意の特定の好ましい実施形態に限定されない。実際、本発明の多くの改変及び変形形態は、本明細書を読めば当業者には明らかであり得、そのような変形は、本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく行うことができる。したがって、本発明は、特許請求の範囲が権利を有する均等物の全範囲と共に、添付の特許請求の範囲によってのみ制限されるべきである。

【0186】

実施例１．デオキシリボヌクレアーゼ酵素は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）保有Ｔ細胞の治療有効性を高める
６～８週齢で、平均体重１６～２０ｇの雌性ＮＯＤ ＳＣＩＤ（ＣＢ１７＿Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ／ＮｃｒＣｒｌ）マウスを使用した。０．９％生理食塩水２００μｌ中５×１０^６個のＲａｊｉ細胞をマウスの左側に皮下接種することによって、リンパ腫を生着させた。腫瘍が少なくとも５０ｍｍ^３の触診可能な体積に達した後、マウスを４つの実験グループに無作為に割り当てた：
グループ「対照」：腫瘍接種後１０日目に３×１０^６個の非形質導入ヒトＣＤ８ Ｔ細胞の単回ＩＶ注射；
グループ「ＤＮａｓｅ Ｉ」：腫瘍接種後１０日目から始める４ｍｇ／ｋｇ用量のヒト組換えＤＮａｓｅ Ｉ酵素（Ｋｅｖｅｌｔ ＡＳ；配列番号４）の１０回の毎日のＩＶ注射；
グループ「ＣＡＲ１９」：腫瘍接種後１０日目に、ＣＤ１９ＣＡＲ［ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ／ＩｇＧ４ヒンジ／ＩｇＧ４ ＣＨ２－ＣＨ３／ＣＤ２８ＴＭ／ＯＸ－４０／ＣＤ３ｚ］（Ｓｔｅｐａｎｏｖ Ａ Ｖ，Ｍａｒｋｏｖ ＯＶ，Ｃｈｅｒｎｉｋｏｖ ＩＶ，Ｇｌａｄｋｉｋｈ ＤＶ，Ｚｈａｎｇ Ｈ，Ｊｏｎｅｓ Ｔ，Ｓｅｎ’ｋｏｖａ Ａ Ｖ，Ｃｈｅｒｎｏｌｏｖｓｋａｙａ ＥＬ，Ｚｅｎｋｏｖａ ＭＡ，Ｋａｌｉｎｉｎ ＲＳ，Ｒｕｂｔｓｏｖａ ＭＰ，Ｍｅｌｅｓｈｋｏ ＡＮ，Ｇｅｎｋｉｎ ＤＤ，Ｂｅｌｏｇｕｒｏｖ ＡＡ Ｊｒ，Ｘｉｅ Ｊ，Ｇａｂｉｂｏｖ ＡＧ，Ｌｅｒｎｅｒ ＲＡ．「リンパ腫の個別化ＣＡＲ－Ｔ療法用のリガンドの自己分泌に基づく選択（Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ＣＡＲ－Ｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆｉｙｍｐｈｏｍａ） Ｓｃｉ Ａｄｖ ２０１８ Ｎｏｖ １４；４（１１）：ｅａａｕ４５８０.ｄｏｉ：１０.１１２６／ｓｃｉａｄｖ.ａａｕ４５８０．ＰＭＩＤ：３０４４３５９７；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ６２３５５３８）をコードするレンチウイルスベクターを形質導入した３×１０^６個のヒトＣＤ８ Ｔ細胞の単回ＩＶ注射；
グループ「ＣＡＲ１９とＤＮａｓｅ Ｉ」：腫瘍接種後１０日目にＣＤ１９ ＣＡＲ［ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ／ＩｇＧ４ヒンジ／ＩｇＧ４ ＣＨ２－ ＣＨ３／ＣＤ２８ＴＭ／ＯＸ－４０／ＣＤ３ｚ］をコードするレンチウイルスベクターを形質導入した３×１０^６個の非形質導入ヒトＣＤ８ Ｔ細胞の単回ＩＶ注射と、腫瘍接種後１０日目から始める４ｍｇ／ｋｇ用量のヒト組換えＤＮａｓｅ Ｉ酵素の１０回の毎日のＩＶ注射。

【0187】

腫瘍体積をキャリパーで測定し、楕円体の式を用いて推定した。データを図１に示す。データは、ヒト組換えＤＮａｓｅ Ｉ酵素のＩＶ注射がＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞に対して統計的に有意な（ｐ＜０．０５）有効性の強化を提供することを明確に示している。

【0188】

実施例２．デオキシリボヌクレアーゼ酵素のＡＡＶ遺伝子導入は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）保有Ｔ細胞の腫瘍組織への動員を増加させ、局所免疫抑制を低減する
ＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉベクターを、Ｘｉａ Ｙ、Ｈｅ Ｊ、Ｚｈａｎｇ Ｈ，らに記載のように生成した。結腸直腸がんを有するマウスの肝臓におけるＤＮａｓｅ ＩのＡＡＶ媒介遺伝子導入は、肝転移を低減させ、局所的な自然免疫応答及び適応免疫応答を回復させる［印刷に先立ってオンラインで公開、２０２０年８月１９日］Ｍｏｌ Ｏｎｃｏｌ．２０２０；１４（１１）：２９２０－２９３５．ｄｏｉ：１０．１００２／１８７８－０２６１．１２７８７。簡単に説明すると、ＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉベクターを、ＨＥＫ２９３細胞においてＡｎｃ８０Ｌ６５キャプシドをコードするｒｅｐ／ｃａｐプラスミド、ｐＣＬＳ－０１４、及びアデノウイルスヘルパープラスミドのポリエチレンイミントリプルプラスミドトランスフェクションを用いて生成し、さらにイオジキサノール勾配で大規模に精製した。プラスミドｐＡＡＶ－ＡｐｏＥＨＣＲエンハンサー－ｈＡＡＴプロモーター－ｈＤＮａｓｅ Ｉ（高活性）－ＷＰＲＥ Ｘｉｎａｃｔ（ｐＣＬＳ－０１４）は、具体的には、（ａ）アポリポタンパク質Ｅ－肝制御領域（ＡＰＯＥ－ＨＣＲエンハンサー）及びヒトα－１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーター、（ｂ）コザック配列、（ｃ）天然のシグナル配列を含有するヒト高活性アクチン耐性のＤＮａｓｅ Ｉバリアント、（ｄ）開始コドンを変異させることにより不活化したＸタンパク質コード領域を有するウッドチャック肝炎ウイルス転写後エレメント（ＷＰＲＥ）からなる導入遺伝子発現カセットを含んでいた。精製したＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉベクターを、３５ｍＭ ＮａＣｌ及び０．００１％プルロニックＦ６８を補充したＰＢＳ中で再構築し、定量的ＰＣＲによって力価（ゲノムコピー［ＧＣ］／ｍＬ）を決定した。精製したＡＡＶベクターをＳＤＳ／ＰＡＧＥで解析したところ、ＶＰ１～３タンパク質に対応する６０、７２、及び９０ｋＤａの３つのバンドが約１：１：１０の比で観察された。ＡＡＶ－ｎｕｌｌは、ＤＮａｓｅ Ｉ ｃＤＮＡを含まないことを除いて、ＣＬＳ－０１４導入遺伝子発現カセットの全ての成分を含んでいた。

【0189】

ＣＥＡに特異的なモノクローナル抗体のｓｃＦｖは、専有のｓｃｆｖファージディスプレイライブラリーを用いて作製されている。ｓｃＦｖを、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、並びにＣＤ３ζ及びＣＤ２８シグナル伝達ドメインと共に、ｐＭＳ３レトロウイルスベクターにクローニングした。マウスＣＥＡ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞は、Ｗａｎｇ Ｌ，Ｍａ Ｎ，Ｏｋａｍｏｔｏ Ｓ,ら「軽度のサイトカイン放出症候群の症状と関連する養子移入ＣＥＡ特異的ＣＡＲ Ｔ細胞による効率的な腫瘍退縮（Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｄｏｐｔｉｖｅｌｙ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ＣＥＡ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｍｉｌｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｉｏｇｙ．２０１６；５（９）：ｅ１２１１２１８．２０１６年７月２５日発行．ｄｏｉ：１０．１０８０／２１６２４０２Ｘ．２０１６．１２１１２１８に記載のように作製されている。Ｃ５７ＢＬ／６（ＣＤ４５．１）同属マウスの全脾細胞（１．５×１０^７細胞／５ｍＬ）を、６ウェルプレートの１ウェル中で固定された抗ＣＤ３（１ｍｇ／ｍＬ；１４５－２Ｃ１１）及び可溶性抗ＣＤ２８（１ｍｇ／ｍＬ；３７．５１）によって刺激した。刺激の１日後（１日目）に、５×１０^５細胞に、１ｍＬの培地を含む２４ウェルプレートのレトロネクチン（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ）コーティングウェルにウイルス溶液をプレロードするレトロネクチン結合ウイルス感染法を使用してウイルスベクターを形質導入した。３日目に、増大させるために１０ｍＬ培養培地を含む５０ｍＬフラスコに細胞を移した。５日目に、細胞を回収し、実験に使用した。６０ＩＵ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－２（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を培養中に添加した。

【0190】

肝転移モデルを樹立するために、麻酔したＣ５７ＢＬ／６マウスを仰臥位に置いた。手術部位の皮膚を消毒した後、腹部正中切開を行い、続いて十二指腸を移動させて門脈を特定した。１００万個のＣＥＡ＋ＭＣ３２ａ細胞を、３０Ｇ針を用いて門脈に注射した。針を取り除いた後、綿棒で穿刺部位をそっと押すことで出血を止めた。注射後、腸を再配置し、腹壁を非吸収性縫合糸で閉じた。

【0191】

腫瘍負荷後５日目に、マウス（１グループ当たり７匹）を４グループ：
グループ「対照」：腫瘍担持対照マウス；
グループ「ＣＡＲ１９」：５×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞のＩＶ注射；
グループ「ＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉ」：マウスあたり１．５×１０^１２個のＧＣでのＡＡＶ－ＤＮａｓｅ ＩベクターのＩＶ注射；
グループ「ＣＡＲ１９とＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉ」：マウス投与あたり１．５×１０^１２個のＧＣでのＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉベクターと組み合わせた５×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞のＩＶ注射
に無作為に割り当てた。

【0192】

生存グラフを図２に提示する。図２のデータは、ＣＡＲ Ｔ細胞とＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉ遺伝子導入の組み合わせによる有意な生存（ｐ＜０．０５）利益を明確に示している。

【0193】

１５日目に、グループ「対照」、「ＣＡＲ１９」、及び「ＣＡＲ１９とＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉ」の各々からの１匹の動物を安楽死させ（１グループ当たり１匹のマウス）、検査のために肝臓を摘出した。転移組織を、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（クローン１０Ｆ．９Ｇ２，Ｍｅｒｃｋ）を用いるＰＤ Ｌ１発現、並びにビオチン化プロテインＬ及びＦＩＴＣとコンジュゲートしたストレプトアビジンを用いるＣＥＡ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の存在に関してフローサイトメトリーによって分析した［Ｘｉａ Ｙ，Ｈｅ Ｊ，Ｚｈａｎｇ Ｈ，ら「結腸直腸がんを有するマウスの肝臓におけるＤＮａｓｅ ＩのＡＡＶ媒介遺伝子導入は、肝転移を低下させ、局所的な自然免疫応答及び適応免疫応答を回復させる（ＡＡＶ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ＤＮａｓｅ Ｉ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｒｅｄｕｃｅｓ ｌｉｖｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｒｅｓｔｏｒｅｓ ｌｏｃａｌ ｉｎｎａｔｅ ａｎｄ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」 Ｍｏｌ Ｏｎｃｏｌ．２０２０；１４（１１）：２９２０－２９３５．ｄｏｉ：１０．１００２／１８７８－０２６１．１２７８７に記載のように］。

【0194】

図３は、ＰＤ－Ｌ１を発現する転移性ＭＣ３２ａ細胞のパーセンテージを示す。データは、ＣＡＲ Ｔ細胞とＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉ遺伝子導入の組み合わせで処置したマウスの転移性病変からの転移性ＭＣ３２ａ細胞におけるＰＤ－Ｌ１発現の有意な抑制（ｐ＜０．０５）を示している。

【0195】

図４は、ＭＣ３２ａ転移性病変の実質におけるＣＥＡ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞のパーセンテージを示す。データは、ＣＡＲ Ｔ細胞とＡＡＶ－ＤＮａｓｅ Ｉ遺伝子導入の組み合わせで処置したマウスの転移性病変におけるＣＡＲ Ｔ細胞の数の有意な増加（ｐ＜０．０５）を示している。

【0196】

実施例３．デオキシリボヌクレアーゼ酵素を発現するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）担持Ｔ細胞の開発
健常ドナーからのヒト末梢血Ｔ細胞を、自己切断ペプチドＰ２Ａを介して、全長ヒト高活性アクチン耐性変異体ＤＮａｓｅ Ｉ（配列番号５）の遺伝子を含む又は含まない、ＣＩＬＤＬＰＫＦＣ／ＩｇＧ１ Ｆｃスペーサードメイン（「ＣＩＬＤＬＰＫＦＣ」は配列番号５９として開示されている）、ＧＧＧＳリンカー（配列番号６０）、ＣＤ２８膜貫通及び細胞内領域、並びにＯＸ－４０及びＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含むＦＬ１ ＣＡＲによって操作した（Ｓｔｅｐａｎｏｖら、リンパ腫の個別化ＣＡＲ Ｔ療法のためのリガンドの自己分泌に基づく選択（Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ＣＡＲ－Ｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｍａ） Ｓｃｉ Ａｄｖ．２０１８，４（１１）：ｅａａｕ４５８０；ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉａｄｖ.ａａｕ４５８０）。図５を参照されたい。

【0197】

ヒトＩＬ－２（４０Ｕ／ｍＬ）を補充した完全ＲＰＭＩ １６４０培地中での細胞の６時間インキュベーション中に、ＦＬ１－ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＤＮａｓｅ Ｉ ＦＬ１－ＣＡＲ－Ｔ細胞及び非形質導入対照Ｔ細胞の培養培地中のＤＮａｓｅ活性を、蛍光プローブ（Ｔｅｒｅｋｈｏｖら、ＰＮＡＳ ２０１７，１１４（１０）：２５５０－２５５５）を用いて分析した。全ての実験は三連で行った。データを図６に提示する。データは、ＤＮａｓｅ Ｉ ＦＬ１－ＣＡＲ Ｔ細胞の培養培地中でのＤＮａｓｅ活性の漸増を示している。

【0198】

操作されたＴ細胞の細胞毒性及び特異性を、製造業者の推奨に従って標準的なＬＤＨ放出アッセイ（ＣｙｔｏＴｏｘ ９６非放射性細胞毒性アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ）で評価した。ＦＬ１－ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＤＮａｓｅ Ｉ ＦＬ１－ＣＡＲ－Ｔ細胞及び非形質導入対照Ｔ細胞を、ヒトＩＬ－２（４０Ｕ／ｍｌ）を補充した完全ＲＰＭＩ １６４０培地中で、１０^４個のＲａｊｉ－ＦＬ１細胞とともに６時間共にインキュベートした。全ての実験を三連で行った。

【0199】

データを図７に示す。データは、ＣＡＲとデオキシリボヌクレアーゼ酵素を同時に発現するようにＴ細胞をリプログラミングすると、標的リンパ腫細胞に対して優れた細胞毒性を提供することを明確に示している（ｐ＜０．０１）。

【0200】

実施例４．デオキシリボヌクレアーゼ酵素を発現するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）担持Ｔ細胞の生物活性
６～８週齢で、平均体重１６～２０ｇの雌性ＮＯＤ ＳＣＩＤ（ＣＢ１７＿Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ／ＮｃｒＣｒｌ）マウスを使用した。０．９％生理食塩水２００μｌ中５×１０^６個のＲａｊｉ－ＦＬ１ ＣＡＲ細胞をマウスの左側に皮下接種することによって腫瘍を生着させた。腫瘍が少なくとも５０ｍｍ^３の触診可能な体積に達した後、マウスを以下のように無作為に割り当て、処置した：１０日目及び１５日目に、担がんマウスに３×１０^６個のａＦＬ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（グループ２；６匹のマウス）、高活性アクチン耐性変異体ＤＮａｓｅ Ｉ（配列番号５）を発現する３×１０^６個のａＦＬ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（グループ３；６匹のマウス）及びプラセボ対照（グループ１；６匹のマウス）を静脈内注射した。腫瘍体積をキャリパーで測定し、楕円体の式を用いて推定した。動物を２０日目に安楽死させた。

【0201】

データを図８に示す。データは、ＣＡＲとＤＮａｓｅ酵素を同時に発現するようにＴ細胞をリプログラミングすると、そのような二重リプログラムＴ細胞に優れた有効性を提供することを明確に示している（ｐ＜０．０５）。

【0202】

実施例５．ＤＮａｓｅによる処置はＣＡＲ－Ｔ細胞療法の有効性を高める
健常ドナーからのヒト末梢血Ｔ細胞を、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ／ＩｇＧ４ヒンジ／ＩｇＧ４ ＣＨ２－ＣＨ３／ＣＤ２８ＴＭ／ＯＸ－４０／ＣＤ３ｚを含むＣＤ１９ ＣＡＲによって操作した（Ｓｔｅｐａｎｏｖら、リンパ腫の個別化ＣＡＲ－Ｔ療法のためのリガンドの自己分泌に基づく選択（Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ＣＡＲ－Ｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｍａ） Ｓｃｉ Ａｄｖ．２０１８，４（１１）：ｅａａｕ４５８０．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉａｄｖ.ａａｕ４５８０）に記載のように）。６～８週齢で、平均体重１６～２０ｇの雌性ＮＯＤ ＳＣＩＤ（ＣＢ１７＿Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ／ＮｃｒＣｒｌ）マウスを使用した。０．９％生理食塩水２００μｌ中５×１０^６個のＲａｊｉ－ＣＤ１９ ＣＡＲ細胞をマウスの左側に皮下接種することによって腫瘍を生着させた。腫瘍が少なくとも５０ｍｍ^３の触診可能な体積に達した後、マウスを以下のように無作為に割り当て、処置した：１０日目及び１５日目に、担がんマウスに０．５×１０^６個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇの用量を単独で、又は異なるＤＮａｓｅ Ｉレジメンと組み合わせて、担癌マウスにＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を静脈内注射した（ヒト組換えＤＮａｓｅ Ｉ酵素（Ｋｅｖｅｌｔ ＡＳ；配列番号４）をＩＶ注射により投与）。
動物を異なるグループに無作為化した：
グループ１（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置；
グループ２（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始２４時間前のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋５００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる１回の処置；
グループ３（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始の２４時間前と２４時間後のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋１０００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる２回の処置；
グループ４（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始７２時間前及び３０日後のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋１０００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる２回の処置；
グループ５（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始３日前のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋２５０μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる処置；
グループ６（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始１日前と開始から６日間毎日のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋２５００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる処置；
グループ７（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始７日前のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋５００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる１回の処置；
グループ８（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始７日前、及びＣＡＲ Ｔ細胞療法の開始後、次の８週間毎週のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋５００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる１回の処置；
グループ９（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始の２８日前のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋１５００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる１回の処置。
臨床効果と副作用をモニタリングした。

【0203】

図９は、ビオチン化プロテインＬ及びＦＩＴＣとコンジュゲートしたストレプトアビジンを用いた末梢血中のＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリー検出を示す（Ｓｔｅｐａｎｏｖら、リンパ腫の個別化ＣＡＲ Ｔ療法のためのリガンドの自己分泌に基づく選択（Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ＣＡＲ－Ｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｍａ） Ｓｃｉ Ａｄｖ．２０１８，４（１１）：ｅａａｕ４５８０；ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉａｄｖ.ａａｕ４５８０）。データは、ＤＮａｓｅとＣＡＲ－Ｔ細胞療法の組み合わせが有意に（全てについてｐ＜０．０５）血液中のＣＡＲ Ｔ細胞の存続を増加させることを実証する。

【0204】

図１０は、ＤＮａｓｅとＣＡＲ－Ｔ細胞療法の組み合わせが動物の生存を高めることを実証する。ＤＮａｓｅ ＩとＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置の試験した全ての組み合わせは、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置単独よりも有意に優れていることを示している。グループ９の高用量ＤＮａｓｅ Ｉによるマウスの前処置は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置前の腫瘍微小環境のより広範な事前の条件付けに関連し得る特定の利点をもたらした。

【0205】

実施例６．ＤＮａｓｅでの処置はＣＡＲ Ｔ細胞療法に関連するサイトカイン放出症候群を減少させる
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）をモデル化するために、６～８週齢の雌性Ｃ．Ｂ．Ｉｇｈ－１ｂ／ＧｂｍｓＴａｃ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＬｙｓｔ^ｂｇＮ７（ＳＣＩＤ）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を使用し、３×１０^６個のＲａｊｉ細胞を腹腔内注射した。３×１０^７個のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（実施例５と同じ）を腫瘍成長後２５日目に腹腔内注射した。ＣＡＲ－Ｔ細胞を単独で又は異なるＤＮａｓｅ Ｉレジメンと組み合わせて投与した（ヒト組換えＤＮａｓｅ Ｉ酵素（Ｋｅｖｅｌｔ ＡＳ；配列番号４）、ＩＶ注射により投与）。
動物は異なるグループに無作為化した：
グループ１（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置；
グループ２（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始２４時間前のＣＡＲ－Ｔ細胞＋５００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる１回の処置；
グループ３（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始２４時間後のＣＡＲ－Ｔ細胞＋１０００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる処置；
グループ４（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始７２時間前のＣＡＲ－Ｔ細胞＋１０００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる２回の処置；
グループ５（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始７日前のＣＡＲ－Ｔ細胞＋５００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる処置；
グループ６（ｎ＝５匹のマウス）－ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始２８日前のＣＡＲ－Ｔ細胞＋５００μｇ／ｋｇＤＮａｓｅ Ｉによる処置。

【0206】

図１１に示すＣＲＳを有する動物の％に関するデータは、ＤＮａｓｅの使用がＣＡＲ－Ｔ療法の安全性を高め、ＣＡＲ－Ｔ関連副作用から保護することを実証する。

【0207】

配列
配列番号１－ヒトＤＮａｓｅ Ｉ、野生型（ＷＴ）、前駆体；Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５２１４．２；分泌シグナル配列を下線で示す。

【化1】

配列番号２－ヒトＤＮＡｓｅ Ｉ変異体、前駆体；配列番号１と比較した変異残基を太字の下線で示す；分泌シグナル配列を下線で示す。

【化2】

配列番号３－Ａｎｃ８０ ＶＰ１キャプシドタンパク質：

【化3】

Ｘ^１＝Ｋ又はＲであり；Ｘ^２＝Ａ又はＳであり；Ｘ^３＝Ａ又はＧであり；Ｘ^４＝Ｒ又はＫであり；Ｘ^５＝Ｅ又はＱであり；Ｘ^６＝Ｔ又はＥであり；Ｘ^７＝Ａ又はＴであり；Ｘ^８＝Ｓ又はＮであり；Ｘ^１＝Ｑ又はＥであり；Ｘ^１０＝Ｓ又はＡであり、及びＸ^１１＝Ｎ又はＤである。
配列番号４－成熟野生型（ＷＴ）ヒトＤＮａｓｅ Ｉ（分泌シグナル配列なし；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号４ＡＷＮ＿Ａ：

【化4】

配列番号５－成熟ヒトＤＮＡｓｅ Ｉ変異体（分泌シグナル配列なし）；配列番号４と比較した変異残基を太字の下線で示す：

【化5】

配列番号６－ヒトＤＮａｓｅ Ｉの分泌シグナル配列：

【化6】

配列番号７－ＩＬ２の分泌シグナル配列：

【化7】

配列番号８－ヒトアルブミンプロモーター：

【化8】

配列番号９－Ａｎｃ８０ ＶＰ１キャプシドタンパク質：

【化9】

Ｘ^１＝Ｋ又はＲであり；Ｘ^２＝Ａ又はＳであり；Ｘ^３＝Ａ又はＧであり；Ｘ^４＝Ｒ又はＫであり；Ｘ^５＝Ｅ又はＱであり；Ｘ^６＝Ｔ又はＥであり；Ｘ^７＝Ａ又はＴであり；Ｘ^８＝Ｓ又はＮであり；Ｘ^１＝Ｑ又はＥであり；Ｘ^１０＝Ｓ又はＡであり、及びＸ^１１＝Ｎ又はＤである。
配列番号１０－ヒトベータグロビンプライマー：

【化10】

配列番号１１－フォワードＮＬＲＰ３プライマー：

【化11】

配列番号１２－リバースＮＬＲＰ３プライマー：

【化12】

配列番号１３－フォワード１６Ｓユニバーサル細菌ＲＮＡ遺伝子プライマー：

【化13】

配列番号１４－リバース１６Ｓユニバーサル細菌ＲＮＡ遺伝子プライマー：

【化14】

配列番号１５－ヒトアンチトリプシンプロモーター配列：

【化15】

配列番号１６－機能性タンパク質Ｘをコードしないウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント：

【化16】

配列番号１７－アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）エンハンサー、肝制御領域（ＨＣＲ）：

【化17】

配列番号１８－配列番号５のヒトＤＮａｓｅ Ｉ高活性バリアントをコードするポリヌクレオチド：

【化18】

配列番号１９－配列番号２のヒトＤＮＡｓｅ Ｉ変異体の前駆体をコードするポリヌクレオチド（分泌シグナル配列を下線で示す）：

【化19】

配列番号２０－ヒトＤＮａｓｅ Ｉの分泌シグナル配列（配列番号６）をコードするポリヌクレオチド：

【化20】

配列番号２１－配列番号５の成熟ヒトＤＮＡｓｅ Ｉ変異体（分泌シグナル配列なし）をコードするポリヌクレオチド：

【化21】

配列番号２２－配列番号１のヒトＤＮａｓｅ Ｉ野生型（ＷＴ）前駆体をコードするポリヌクレオチド：

【化22】

配列番号２３－配列番号４の成熟野生型（ＷＴ）ヒトＤＮａｓｅ Ｉをコードするポリヌクレオチド：

【化23】

配列番号２４－Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ野生型ＤＮａｓｅ Ｉ、前駆体；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０３４１９１．３；分泌シグナル配列を下線で示す：

【化24】

配列番号２５－Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ野生型ＤＮａｓｅ Ｉの分泌シグナル配列

【化25】

配列番号２６－成熟野生型（ＷＴ）Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ野生型ＤＮａｓｅ Ｉ

【化26】

配列番号２７－Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ野生型ＤＮａｓｅ Ｉの分泌シグナル配列をコードするポリヌクレオチド

【化27】

配列番号２８－成熟野生型（ＷＴ）Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ野生型ＤＮａｓｅ Ｉをコードするポリヌクレオチド

【化28】

配列番号２９－Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ野生型ＤＮａｓｅ Ｉの前駆体をコードするポリヌクレオチド

【化29】

配列番号３０－ＡｐｏＥＨＣＲエンハンサー－ｈＡＡＴプロモーター－ｈＤＮａｓｅ Ｉ（高活性）正確なリーダー－ＷＰＲＥ Ｘｉｎａｃｔ（ＶＲ－１８０１３ＡＤ）の完全な配列

【化30】

（ＡＰＯＥ ＨＣＲエンハンサー：塩基１～３２０；ヒトα－１－アンチトリプシンプロモーター：塩基３２１～７１７；コザック配列：塩基７１８～７２６；天然の完全に正確なリーダー配列を有するヒトＤＮａｓｅ Ｉ高活性バリアント：塩基７２７～１５７５；不活化されたＷＰＲＥ Ｘタンパク質：塩基１５７６～２２１２）
配列番号３１－ＡｐｏＥＨＣＲエンハンサー－ｈＡＡＴプロモーター－ｈＤＮａｓｅ Ｉ野生型－ＷＰＲＥ Ｘｉｎａｃｔ（ＶＲ－１８０１４ＡＤ）の完全な配列

【化31】

（ＡＰＯＥ ＨＣＲエンハンサー：塩基１～３２０；ヒトα－１－アンチトリプシンプロモーター：塩基３２１～７１７；コザック配列：塩基７１８～７２６；天然の完全に正確なリーダー配列を有するヒトＤＮａｓｅ Ｉ野生型：塩基７２７～１５７５；不活化されたＷＰＲＥ Ｘタンパク質：塩基１５７６～２２１２）
配列番号３２－終止コドンを有する配列番号１のヒトＤＮａｓｅ Ｉ野生型（ＷＴ）前駆体をコードするポリヌクレオチド：

【化32】

配列番号３３－コザック配列

【化33】

配列番号３４－Ａｎｃ８０Ｌ６５ ＶＰ１キャプシドタンパク質

【化34】

配列番号３５－バリアント型Ａｎｃ８０Ｌ６５ ＶＰ１キャプシドタンパク質

【化35】

配列番号３６－ヒトシナプシンプロモーター

【化36】

配列番号３７－ＣＭＶプロモーター

【化37】

配列番号３８－Ｆ４／８０プロモーター

【化38】

配列番号３９－ＴＭＥＭ１１９プロモーター

【化39】

配列番号４０－ＭＥＦ２プロモーター

【化40】

配列番号４１－ＦｏｘＰ２プロモーター

【化41】

配列番号４２－ｈＤＮａｓｅ Ｉ（高活性）正確なリーダー－ＷＰＲＥ．ｂＧＨ

【化42】

配列番号４３－ｈＤＮａｓｅ Ｉ（野生型）ＷＰＲＥ．ｂＧＨ

【化43】

配列番号４４－ヒトＤＮａｓｅ Ｉ変異体

【化44】

配列番号４５－ＡＡＶ５キャプシド配列（ＶＰ１）

【化45】

配列番号４６－ＡＡＶ９キャプシド配列（ＶＰ１）

【化46】

配列番号４７－ＡＡＶＬＫ０３ ＶＰ１キャプシドタンパク質：

【化47】

配列番号４８－ＡＡＶ－ＬＫ０３ ＶＰ１キャプシドタンパク質をコードするポリヌクレオチド：

【化48】

配列番号４９－ＡＡＶ－ＫＰ１ ＶＰ１キャプシドタンパク質：

【化49】

配列番号５０－ＡＡＶ－ＫＰ１ ＶＰ１キャプシドタンパク質をコードするポリヌクレオチド：

【化50】

配列番号５１－ヒトＤＮａｓｅ１Ｌ３（Ｑ１３６０９）の前駆体（シグナルペプチドを下線で示す）：

【化51】

配列番号５２－ヒトＤＮａｓｅ１Ｌ３（Ｑ１３６０９）の前駆体をコードするポリヌクレオチド：

【化52】

配列番号５３－成熟ＤＮａｓｅ１Ｌ３：

【化53】

NGTSG（配列番号５４）
SGTH（配列番号５５）
SDTH（配列番号５６）
GGTAN（配列番号５７）
DGSGL（配列番号５８）
CILDLPKFC（配列番号５９）、ＩｇＧ１ Ｆｃスペーサードメイン
GGGSリンカー（配列番号６０）

【0208】

本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際に、本明細書に記載のものに加えて本発明の様々な変更が、前述の説明から当業者に明らかになるであろう。そのような変更は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。

【0209】

本明細書で引用する全ての特許、出願、刊行物、試験方法、文献、及び他の材料は、あたかも本明細書中に物理的に存在するかのように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【手続補正書】

【提出日】2023-09-28

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2024504926000001.app

【国際調査報告】